Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 xxxx. 2 zákona x. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx péči x x xxxxx některých xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "zákon") k xxxxxxxxx §71 odst. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Předmět úpravy

Tato vyhláška xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx předpisy Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx¹⁾ x xxxxxxxx opatření, která xx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx šíření Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxx xx xx. subsp. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx et xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx se

a) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsah xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x prováděla se xxxxxxxx opatření x xxxxx jejich xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx účely xxxx xxxxxxxx se rozumí:

a) xxxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxx. sepedonicus (Xxxxxxxxxxxx et Kotthoff) Xxxxx et al.,

b) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. původce xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx tuberosum X.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Solanaceae), u xxxxx byla xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx hnědé xxxxxxx - brambor (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, rajče xxxxx (Xxxxxxxxxxxx lycopersicum X.) xxxxx semen a xxxxx, xxxxx potměchuť (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx rostliny x čeledi xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx potvrzena možnost xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

x) detekčním průzkumem - průzkum xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx území xxxx v určité xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx x xxxxxx rozsahu x xxxxxx zamoření xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx hniloby, x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a x xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - podezření x xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rostlině, xxxxxxx, partii, xxxxxxxx, xxxxxx, dopravním xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx jejich xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx - podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx na pozemku, x xxxxxxx xxxxx x xxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

i) xxxxxxxxxxx územím - xxxxx vymezené Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dále xxx "rostlinolékařská správa"), xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) bezpečnostní xxxxx - území vymezené xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx se vztahují xxxxxxxxx rostlinolékařská opatření xxxxx §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) klonově xxxxxxxxx xxxxxx - xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vznikla xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x jedné xxxxxxx partie; xxxxxx xx xx:

1. sesterské xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx, které vznikly x témže xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx považuje xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx příbuzným xxxxxxx, xxxxx z xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx každoročně x souladu s §10 odst. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx xxxxxxx podléhají

a) xxxxxxxxxxxx materiál xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx v rozsahu xxxxx §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx rozmnožovacího materiálu xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze xxxxxxxxx států Xxxxxxxx xxxx (xxxx jen "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxx xxxxxxx původem z Xxxxx xxxxxxxxx x x ostatních členských xxxxx,

x) všechny xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. c).

(3) Xxxxxxxxxxxx průzkumu xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx podléhají xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako podezřelé x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby x xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx území xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x vyvážených xx xxxxxxx zemí xxxxxxxxx

x) xxxxxxx dovážené xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu bramboru²⁾ x namátkově xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx partie bramboru xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx rostlin rajčete xxxxxxxx x dalšímu xxxxxxxxx,

x) xxxxx zdroje xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin původce xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x xxxxxxx xxxx xx zpracovatelských xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx pevné xxxxxx x těchto xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx výskytu xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx výskytu vodní xxxxxx používané x xxxxxxx xxxxxx podezřelých x xxxxxxx x xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, odkud xxxx xxxxxx pocházejí.

(7) Xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx zjišťuje

a) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx odebraných x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x), xxxxxxxx 3 x x xxxxxxxx 4 xxxx. b) z xxxxxxx xxxx ze xxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx partií,

b) xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxxxxxxx xxxx, x xxxxxxxxx nebo ve xxxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx, v xxxxxxxxx uvedených x xxxxxxxx 2 xxxx. x) a x),

x) xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxx x xxxxxxxx napadení xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odstavci 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx substrátu, xxxxxxx xxxxxx xxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx vegetace x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x) x x odstavci 6.

(8) Xxxxxx prohlídky xxxxxx x xxxxx, původ, xxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxx při xxxxxxxx, prováděném xxxxx xxxxxxxx 2 až 7, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx o xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxxxxxxxxx správa xx xxxxxxx uznávaných xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zásad x biologie xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx brambor a xxxxxxx hostitelských xxxxxxx x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx výskytu xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xx Věstníku Státní xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxx "Věstník"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x souladu x §10 odst. 1 xxxxxx a xxxxxxxxxxx ve Věstníku.

(9) X průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 lze xxxxxx rovněž xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx fyzickou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x této činnosti Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxxx xxxx rostlinolékařskou xxxxxxx xxxxx §72 xxxx. 5 písm. x) xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx této xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx odebírány x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx prováděného xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx rostlinolékařská xxxxxx xxx xxxxxxxxxx odkladu xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx partii xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx xx oprávněna xxxx partii uvádět xx trh xxxx xx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru x rajčete xxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx x provádění xxxxxxxx podle odstavců 2 xx 8 xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxx x xxxxxxx s §10 xxxx. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 části X xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce hnědé xxxxxxx mezi členskými xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx provedených xxxxx xxxxxxxx 2 až 6 xxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxx jednou xxxxx xxxxxxxx členským státům x Komisi, a xx x případě xxxxxxxx x rozmnožovacím xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ množeném xxxxx xxx xxxxxxx xx pozemcích xxxxxxxxx, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx případech xx 1. června. Xxxxx xxxxxxxx o xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxx vždy x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

§4

Opatření při xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xx podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx se x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vizuálních xxxxxxxx xxxxxxxx těmito xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx podle přílohy č. 1 xxxxxx X číslo 1 a xxxxxx XX, xxxx

x) pozitivní xxxxxxxx screeningového xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx správou xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx podezření z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa x xxxxx odborného xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování, x to způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 a xxx dodržení podmínek xxxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx B, s xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx vyvrátit.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 odst. 2 xxxxxx xx účelem xxxxxxxx xxxxxx podezřelého xxxxxxx x x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx přesun xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx byly xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx těch, které xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x

x) xxxxxx vhodná xxxxxxxx založená xx xxxxxx odhadovaného xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx včetně xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx úředního xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx x v xxxxxxxxx xxxxxxxxx s podezřením x xxxxxxx, xxxxxxxxx x mimo xxxx xxxxxxx x objekty.

(4) Xxx podezření xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo, x případě xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxxxxxxxx xxx původem z xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx členském státě, xxxxx rostlinolékařská xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx příslušného členského xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx s xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx spolupracovat.

(5) Xxxxx xxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx mít xxxxx x České xxxxxxxxx xxxx které xxxx Xxxxxx republiku ohrozit, xxxxxxxxxxx Česká xxxxxxxxx, xxxxxx rostlinolékařská xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Opatření při potvrzení xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx

(1) Pokud úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx výskyt xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxx správa x xxxxxxx s §76 xxxx. 2 xxxxxx x s přihlédnutím x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, biologii xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby a xx způsobu xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) označí xx zamořené rostliny, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx prostředky, xxxxxx xxxx jejich xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx přišly xx xxxxx s xxxxxxxx rostlinným xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx byl xxxxxx odebrán, a xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx včetně xxxx, xxx je xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx, xx nichž xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovány x xxxxx byl xxxxxx xxxxxxx,

x) provede xxxxxxx šetření xxxxxxxx xx zjištění rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx nákazy x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx bodu 1 přílohy č. 3 včetně xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx x souladu x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx posklizňového xxxxxxxx, x na xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxx xxxx pěstitelské xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx podle xxxxxxx x),

x) vymezí xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a) a xxxxxxxxxxxx zónu na xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx zamoření podle xxxxxxx b) x xxxxxxx rozšíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x ohledem xx xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx vodu xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx brambor x x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x doprovodné xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx mohlo být xxxxxxxx pěstování xxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx testování xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x xxxxxx xxxxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xx vhodných xxxxxxxxx x xxxxx určit xxxxxx zamoření,

b) xxxxxx x souladu s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování podle xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xx zamořenou,

c) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx označení xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx neprodleně xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Komisi v xxxxxxx x ustanovením xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 písm. b), x xxxxx xxxxxxxxxxx x vymezení xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. c). Xxxxxxxxxxx x tomto oznámení xxxx xxxxxxx.

(4) Pokud xxxx xxxxxxx stát xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx, zásilce xxxxx xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx obdobně xxxxx xxxxxxxx 3, xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a v xxxxxxx s ustanovením xxxxxxxx 1 a 2 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x vymezí xxxxxxxxxx území, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Rostlinolékařská xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx šetření xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) x xxx xxxxxxxxx rozsahu karanténního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxx 2 xxxx. c) x xxxxxxxx 4.

§6

Testování klonově příbuzných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx testování xxxxx §4 odst. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx k partiím, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx zamořené podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), x xxxxxx xxxxxxx však xxxxxxx klonově příbuzné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx x xxxxxxx potřebném ke xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Xxxxx xxxxxxxx testování xxxxx odstavce 1 xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx možného xxxxxxxx a xxxx xxxxxx karanténní xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. a), x) a x).

§7

Xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx správa x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxx tato xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) nesmí xxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx x xx xxxxxx způsobem uvedeným x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx rozšíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx splněny xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, stanovené x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx zpracování této xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x) smí xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx rostlinolékařské správy xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, pokud xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx partie, x xxxxx není tato xxxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 xxxxxxxx xxxx zamořená xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx jiné objekty xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 písm. x) xxxx označené xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx pomocí vhodných xxxxx xxxxxxxxx v příloze č. 6 x tím, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xx tyto xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx ani xx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx území x xxxxxxxxxxxx zóně, xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx podle §5 odst. 2 xxxx. x), musí xxx xxxxxxxxx opatření xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 a x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx může xxxxxxx podle §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx opatření uvedená x xxxxxxxx 1, xxxxx budou xxxx xxxxxxxx odborně odůvodněná, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x těchto xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx nařízených podle xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a x xxxxxxxxxxxx xxxx sděluje xxxxxxxxxxxxxxxx správa ostatním xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx spolu x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Rostlinolékařská xxxxxx xxxxx xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 x odstavce 2 xx xxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxx splnění.

(4) Xxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce hnědé xxxxxxx je x xxxxxxx x §7 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx přechovávání x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx §8 odst. 1 xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx opatření při xxxxxx výskytu ani xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx

(1) Rozmnožovací materiál²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx republiky x xxxxxxx na xxx, xxxx xxx xxxxxxxx laboratornímu testování, xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 odst. 2, x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 x x souladu s §3 odst. 8 x 9, x xxxxxxx prostým původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx v příslušném xxxxxxxxxx xxxx podrobí

a) xxxxxxxx šlechtitelského rozmnožovacího xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx x xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, a nebo

b) xxxxx byl v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx potvrzené klonové xxxxxxxxxxx se zaměřením xx tuto xxxxxxxxxx, xxxx

2. reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ v xxxxxxxxx, x xxxxx prokazatelně xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, nebo

c) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxxxxxx x množení x xxxxxxxxxxxx roce, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebyl x posledním uplynulém xxxxxxxxxx roce xxxxxxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Příloha č. 1 x xxxxxxxx č. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX XXXXXXX KROUŽKOVITOSTI

Předložené xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xxxx součástí:

i) diagnózy xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x rostlinách xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus.

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku č. 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxxxx podmínek s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx rostlinolékařskou xxxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry musí xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx stanovené xxxxx xxxxxxxxx metod.

Zcela xxxxxxxx xx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx prahů xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, pečlivé xxxxxxxxx x činidly a xxxxxx uchovávání x xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx od xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxx xxx uplatněno xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx administrativním x jiným xxxxxx, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek x diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx je první xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx původcem kroužkovitosti x musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx druhý screeningový xxxx negativní, pak xxxxxx není xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx důvodu xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX testu xxxxxxxxx xxxxxx screeningovým xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx diagram pro xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxx vykazujících příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx a rostliny xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxxxxxx příznaky kroužkovitosti. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx a x xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx v oddíle 2.

(2) Xxxxxx testy xxxx:

- IF test (xxxxx 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (oddíl 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx z rostlinného xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx roztíráním suspenzí xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, kultivace v xxxxxxxxxxx stádiích infekce xx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, mohou přerůst xxxx potlačovat xxxxxxxx xx xxxxxxxxx médiu. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx neselektivní i xxxxxxxxxx média, nejlépe XXXX (oddíl 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx typické xxxxxxxxxx kolonie xx x oddíle 8.

(5) Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx znovu.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Zkouška xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 10.

1.2. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxx bramboru

Postup xxxxxxxxx xx určen xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, z xxxxx xxxxx je založen xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx izolací xxxxxxxx, x následně, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, potvrzením, xx xxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxx detekční xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz, xxxxxx postup xxx xxxxxx x na xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x dispozici.

(2) Metody xxxxxxxx a koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx jsou xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Provede xx nejméně jeden xxxxxxxxxxxx test. Pokud xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx tento xxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx prvního pozitivního xxxxxxxx nezbytný xxxxx xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých biologických xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (IF).

Pro xxxxxxxxx XX se vždy xxxxxxx polyklonální xxxxxxxxxx, xxxxx monoklonální protilátky xxxxxx větší xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx validovaná XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx oddíl 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx (viz xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx izolace.

Toto xxxx xxx v xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx XXXX xxxxx xxxx XXX-88 xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Typické xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx 3-10 dní xx xxxxxxxxx na xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx opatrnou xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x které xxxxx patogena xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx takto nepodaří, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx pro biotest (xxx oddíl 8).

(8) Xxxxxxx xx používá x izolaci Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxx bramborových xxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínky xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx. Bakteriální inhibitory Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx XXXX xxxx XXX-88 médiu xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx nebudou (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx stejné xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx stejného xxxxxx x x případě xxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx se dosáhne xxxxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Xxxx patogenity xx xxxxxx v xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx

(1) Doporučené velikosti xxxxxx - viz xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddílu 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx provedena xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx test xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx za negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxxx test xxxxxxxxx, je pro xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx nezbytné xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) IF xxxx xx popsán x xxxxxx 4.

(6) XXX test je xxxxxx v xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx xx popsán v xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 7.

(9) Kultivace xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx se xxxxx x Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xx dosáhne pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx příznaků kroužkovitosti

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx příznaky na xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xx xx xxxxx sezóny. Xxxxx xxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx nebo xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, stáří xxxx xxxxxxxxxxxx poškození. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx kontrole xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Příznaky xxxxxxx xxxx velmi xxxxxxx xx příznaků xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx xx xxxxxxx pomalé x xxxxxxxx omezené xx xxxxxx xxxxx. Mladé xxxxxxxxxx listy xxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx místech xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx tvarované xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx až xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx lístky, listy x dokonce xxxxxx xxxxx eventuálně xxxxxxx. Xxxxx xxxx listy x xxxxx pouze xxxxx. Příležitostně xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx systému, zejména xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hlízy xxxx mít xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx dobře xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxx zabarvení xxxxxxxx xxxxxxx svazků x xxxx, kdy xxx xxxxxx xxxxxxxxx hlízy xxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx hmoty. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Vodivá xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearurn. Xxxxxxxx mohou xxx xxxx příznaky xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx blízko xxxxxxx xxxxx x xxxxx xx postupně xxxxx xx celý xxxxxxxx. X postupem xxxxxxx dochází x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx korová xxxx xx xxxx oddělit xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx infekce xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx praskliny, xxxxx x červenohnědými okraji. X poslední xxxx xx v Xxxxxx xxxxxxxx několik případů, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x druhotnému xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx dutin a xxxxxxx. Druhotná houbová xxxx bakteriální infekce xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x může xxx xxxxxxx, ne-li xxxxxxx, xxxxxxxx pokročilé xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx od jiných xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx internetové stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Public/irc/sanco/Home/main.

3. Příprava xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx 1 test. xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx testů xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx však xxx xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx s xxxx než 200 xxxxxxx, pokud xx x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx metod xx xxxxxxxx xx testování xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Níže xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku:

Hlízy xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx dezinfekční prostředky (x obsahem chlóru, xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx XXX test, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx DNA) a xxxx prostředky mezi xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Tento xxxxxx mytí xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xx xx xx vzorku xxxxxx xxxxxx x jestliže xx má xxxxxxxx XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x dezinfikovaného xxxxxxxx nebo xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx se odstraní xxxxxx na pupkovém xxxxx xxxxx hlízy. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vodivého xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °C xx xxxx nejdéle dvou xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx výkrojku x pupkového konce xxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx xx vizuální xxxxxxxxx xxxx hlízy xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx naříznuté hlízy x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx nechají korkovatět xx dobu 2 xxx při xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx x karanténě xxx teplotě 4 - 10 °X xx xx ukončení xxxxx xxxxx. Všechny xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx podle přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx části xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx vyčištěny x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, pokud xx xxxx xxxxx, uchovávají xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx, x chladu xx xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Schnutí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx saprofytů x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakterie xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Výkrojky x xxxxxxxxx konce se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) a třepají xx v xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot/min) xx dobu 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3), buď x xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx použití xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx rozlití během xxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxx sterilizovaná xxxxx (xxxx) a xxxxxx. Xxxxx má xxx xxxxxx PCR xxxx, xx nutno xxxxxxx xxxxxxx DNA xx nádoby xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x použití xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx buď pomalým xxxxxxxxxxx (xxx maximálně 180 g xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Bakteriální xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx (nebo 10 000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°C a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx peleta.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µx xxx xxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx solanacearurn x 500 µx xxx referenční xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx při xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) xxxx xxx teplotě -68 xx -86°C (xxxxxx). Xxxxxxxx xx během xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x rozmrazení se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx přeprava v xxxxxxxxx boxu xx 24 až 48 xxxxx.

3.1.7. Je xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odděleně, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. To xxxxx x pro sklíčka xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx bramboru

Poznámka.

Pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx vzorky až 200 xxxxx stonků. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx rostlinné populace, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx 1-2 xx xx spodní xxxxxx xxxxxxx stonku xxxxx xxx povrchem xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx x uzavřené xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 hodin xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx dobu 16-24 xxxxx chlazené,

nebo

b) části xx okamžitě xxxxxxx x pevném xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) za použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx to není xxxxx, skladují xx xxxxx stonků x xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx maximálně 24 hodin xxx xxxxxxxx teplotě.

3.2.3. Xx xxxxxxx, které xx xxxxx 15 minut, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx extraktu xxxx koncentrace bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx lze xx dosáhnout xxxxxxxx x/xxxx odstředěním xxxxx xxxxxx x oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Čistý xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx xxxxxxx na 2 stejné xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx během xxxxxxxxx xxx teplotě 4-10 °X x xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx je xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

PRINCIP

Doporučuje xx xxxxxx xX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx schopnost xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx práhů.

Použije-li xx xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx test a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, musí být xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx proveden test XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX xxxx xxxxxxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx x polyklonální xxxxxxxxxxx může xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx méně xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx NCPPB 2140. Xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx pro každou xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx je stanoven xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx reakci xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk na 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx použití xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx měly xxx IF xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx. Používají xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxxx stránku http://forum.europa. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx se provádí xx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktech. X xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx skladovaných xxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx odstranit přidáním 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 g x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xx xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx fixována xxxxxxxx (xxx 4.2).

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx s xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxxxxxxxx xx výluhu x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx v xxxxx.

Xxxxxxx infikované xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx zmrazením xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X) by xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx kontroly se xxxxxxx alikvotní části xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

4.1. Xxxxxxx na xxxx xx xxxxxxxx jedním x následujících xxxxxxx:

x) Xxx pelety x xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx o xxxxxxx 6 xx xx vhodné 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) roztoku xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety 1/100 xx prvního okénka. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x xxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx pelety:

Připraví xx xxxxxxxxx ředění (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x peletovém xxxxx. Napipetuje xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx okénka x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Druhou xxxx xxx použít xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 40 až 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx fixují na xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °C), xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx dodavatelů xxxxxxxxxx.

X případě potřeby xxx xxxxx fixovaná xxxxxxx před dalším xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x suchém xxxx xx co xxxxx xxxxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Postup XX xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx v xxxxxx 4.1 písm. a):

Připraví xx sada xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx protilátky v XX xxxxx. X xxxxx jamce xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), titr (X) x xxxxxxxxxxx titr (2X).

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. b):

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxx (WD) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Pracovní ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. a) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx testovací okénko xx pokryje xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx stejné xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx protilátek, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx IF. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Tween (dodatek 3) x xxxxxxxx x xxxxx IF. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Sklíčka xx xxxxxx na xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx setřesou xx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx jako xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx přebytečná xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx (dodatek 3) nebo komerční xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx IF xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1000x. Zkoumají xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx kolmých xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx buněk xx xxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x zcela xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx okénkách xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx porovnání s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Buňky x xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx fluorescencí nelze xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Xx xx xxxx xxxx, xxxx všechna xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X peletách x xxxxxxx části xxxxxxxx x xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx podobnou Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx pouze fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x morfologií x titru xxxx xxxxxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx oddílu 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx zjištění xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií xx xxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx x xxxxxx, kde xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx xx považován xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx méně než 5x10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx a xxxxxx xx považuje xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Test XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx IF xxxx. Když se XXXX test provede xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používají xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx měl xxx pokud možno xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 nebo -68 až -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx použije xxxxxxxxx xxxx extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (např. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 X xxxxxxxxxxx pufru (PB) x 3-5 xxxxx xxxxxxx (příprava xxx dodatek 2). Připraví xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx referenčního kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx FITC poskytuje xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx všechny xxxxxxxxxx přítomné xx xxxxxx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx.

5.1. Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx se 100 µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxxxxx xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 g.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx x 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Protřepe xx x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % etanol. Xxx jeho xxxxxxx xx xxxxxxxx peleta x xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 M XX x 50 µl 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X po xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje xx xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µx 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 3, přičemž xx xxxxxxx 2 xxxxx vzorky xx xxxxx xxxxxxx, x xx neředěný x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx být xxxxxx xxx teplotě -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx třeba XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx etanol xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X XX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx na sklíčku XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx na xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx sklíček xxx teplotě 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx je xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x pokračovat x xxxxxxxxxxx další den. Xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx prachem x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 mg xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx pouze xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx roztát. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx x inkubuje po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, pouze xxxxxx, x xxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx se přidá xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx K 40-400 µg.ml^-1 v xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) xx každé xxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 37 °X po dobu 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx ve xxxxxxxxxxxx sériích 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx vlhká xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx namočeným x 1x hybmixu (dodatek 7). Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) s 45 µx xx 1 xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx 5 minut xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Sklíčka se xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx při teplotě 45 °X x xx xxxxxxx xx 4 okének na xxxxxxx / xxxxxxxxx xx přidá 10 µx hybridizačního xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 mm) xxx, xxx xxx ně xxxxxxx vzduch. Xxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxxxx vlhké xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x xxxx xxx teplotě 55 °X v xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx obsahující 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = UM), 1 x 1x hybmixu (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) a 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x xxxxxx x 833 ml XXX). Xxxxx x xxxx se xxxxxxxxxxx xx xxxxx lázni xxx teplotě 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx sklíčka x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx v kádince x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x xxxxx xx inkubovat dalších 15 xxxxx.

5.2.11. Sklíčka xx xxxxxx xxxxxx xx XXX x xxxxxx xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx lehkým xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX xxxx xxxxxxx) xx každé xxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx velkým xxxxxx sklíčkem (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx FISH xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein isothiokyanat (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx obarvené Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx morfologie x xxxxxxxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) musí být xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx okénka napříč xxxxx průměry v xxxxxxx xxxxxx a xxxxx obvodu. X xxxxxx, kde xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat xxxx xxx xxxxx xxx x pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx x úvahu.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx zopakován. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx kontaminace musí xxx test xxxxxxxxx. Xx xx může xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx kontaminaci xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a částí xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx x XX xxxxx.

5.3.5. X úvahu xx xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx FISH xxxxx xxxx platné, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx typickou pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx pozorovány ve xxxxx pozitivních kontrolách x nejsou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus. Xxxxx xx další xxxxxxxxx. Vzorky, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XXXX testu je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x velikostí a xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxx typické jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolách.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx PCR xxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx test x xx pozitivní, musí xxx jako druhý xxxxxxx screeningový test xxxxxxxx XX test. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx podle postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se doporučuje xxx xxxxx , xx-xx požadována specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ až 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx validovaná XXX xxxxxxx x protokoly. Xxxxxxxxxx xx používá xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. XXX xxxx xx měli xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx biologii, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx cílovou XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX test xx xxx zahrnovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxx xx vzorku, který xxx xxxxxxx testován xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx výsledkem,

- kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx směs PCR.

Měly xx být zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx části xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, k xxxx xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx použít xxx provádění XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků.

Aby xx xxxxxxxxx xxxxx kontaminaci, xxxxxxxx se pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx od xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx vzorků by xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x umytých xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Použijí xx xxxx popsané xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx způsobem jako xxxxxx.

X purifkaci cílové XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jsou x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx odstraňující xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx reakcí x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla xxxxxxxxxxxxxx xxx použití s xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx v dodatku. 6.

6.1.

a) Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1. Napipetuje xx 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [pH 8,0], 1 xX EDTA [xX 8,0]) do xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx se xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx lázně x xxxxxxx 95 °X xx xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Xxxxx se 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx na 1 xx x 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xx při xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µl Xxxx XXXX roztok X (Xxxxxxxxxx), dobře se xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Přidá xx 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx)x silně xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx sama xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µx xxxxxxxxxxx x míchá xx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx sníží x xxxx se xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15 000 x xx xxxx 20 xxxxx při 4 °C xxx xxxxxxxx xxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xx xxxxx mikrozkumavky.

10. Xxxxx se 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °C), xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11. Odstředí xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx.

12. Přidá xx 500 µl 80 % etanolu (-20 °X) a promíchá xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Odstřeďuje xx xx 15&xxxx;000 x po dobu 10 xxxxx při 4°X, peleta xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx uschnout na xxxxxxx nebo x XXX xxxxx xxx.

15. Xxxxxx se xxxxxxxxxxxxx x 100 µl xxxxxxxx vody (UPW) x xxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx se při xxxxxxx -20 °X xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxx PCR se xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX.

6.1.

x) Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX xx xx mohly xxxxxx, xxxxx xx se xxxxxxxxx, že xxxx xxx purifikaci DNA x kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 PCR

6.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx PCR xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolu (dodatek 6). Xxxxxxxx xx jeden xxxxxxxxx roztok vzorku XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx pro XXX x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx kontaminace, podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xx multiplexová reakce, xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx se přidá 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx PCR xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x přidá xx stejná xxxxxxxx xxxx XXX, která xxxx xxxxxxx do xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx produktu XXX

6.3.1. Rozdělí xx xxxxxxxxx PCR elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x xxxxxxx vzorku xxxxxxxx s 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X xx xx. Xxxxxxx xx vhodný marker XXX, xxxx. 100 xx ladder.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 xx xx x) xx xxxx 30-45 minut, xx xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. X obarveném x UV (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx se hledají xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x očekávané xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X všech xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx s vhodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx naštěpené xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentu xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx negativní, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěn x daném xxxxxx, xxx byl xxxxxxx xx všech pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery: xxxxx xxxxxxx XXX očekávané xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx s xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx je xxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxx amplikon xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx amplifikován xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vodě, xxx x pozitivní xxxxxxxx x Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxx reakce xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx z xxxx xxxxxxxxx.

Xxx mít xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx získán x xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie xx 1 xx xxxxxxx x extraktům xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (příprava viz dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx očekávat xxx xxxxxxx čerstvě připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x optimálních růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx však xxx úspěšně xxxxxx x na extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x glycerolu xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx pro růst Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx příznaků x poskytují také xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků xx měly xxx xxxxxxxxx optimální růstové xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx o pěstování xxxx uvedeny x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx podle 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx lilku xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx třetího pravého xxxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx využití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx uvedené xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx zářezem I

7.2.1. Xxxxx květináč xx xxxxxxxxxxxx podepře (xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xx je xxxxxx blok xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxx 5 xx hloubky, 10 cm xxxxx x 15 xx xxxxx). Xxx xxxxx xxxxxxxxx vzorek se xxxx xxxxxx x xxxx umístí proužek xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx na místě xxxxxxx xxxxxx kolem xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx skalpelu xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxx řez xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx a xxxxxxx xxxxxxxxx jako xxx xxxxxxxx průměru stonku.

7.2.3. Xxxxx se přidrží xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx skalpelu a xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx xxxxxx malířským xxxxxxxxx namočeným do xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx rozdělí xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Řez xx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx zářezem XX

7.3.1. Xx xxxxxx xxxxxxxx držené dvěma xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx pravý xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx (v xxxx xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx jako 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx xx začne x xxxxx xxxxx suspendované xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

7.4.1 Xxx snížení xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx se inokulují xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx pomocí injekční xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Xxxxxx xx rozdělí xxxx testovací xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx infikovaných xxxx xxxxxxxx.

7.6. Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx inokulační xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Po xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (dodatek 8) xx xxxx xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Rostliny xx inkubují xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx vlhkosti (70-80%) x zalévají se xxx, xxx xxxxxxx x nasávání vody xxxx xxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxx. Buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx odumírají xxx xxxxxxxxx nad 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx je 21 °X. Xxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skleníku xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx zacházení s xxxx. Pokud musí xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx sebe, oddělí xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxx x jiné xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x xxxxxxx komory xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx bakterie x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Pravidelně xx xxxx xxxxx xx spočítají xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, které xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx může zprvu xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Povadlá xxxxx mezi žilnatinou xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx neodumírají; xxx déle trvá xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx větší naděje xx xxxxxxx. Rostliny xxxxx infekci odrůst. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx mnohem xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx původce kroužkovitosti xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx tří xxxxx x xxxx xxxxxx xxxx xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. carotovora xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x velké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx odlišit xx xxxxxxx způsobených původcem xxxxxxxxxxxxxx, jelikož xxxxxx xxxxxx celé listy xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx se také xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx rozliší Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx

7.9. Xxxxxxx se xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx být xxxxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x stonků xxxxx xxxxxxxxxxxx xx vydezinfikuje xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx lF xxxx XXX xx xxxxx x xxxxx a xxxxxxx se xx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx 8). Xxxx se také xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9). Xxxxx kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (viz oddíl 9 a 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx podmínky xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx latentní xxxxxxx xxxxxxx x xx uplynutí xxxxxxxxx xxxx až 4 xxxxx. Pokud xxxxxx xx 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxx XX/XXX na xxxxxxxx xxxxxx částí xxxxxx x xxxxx 1 xx x každé xxxxxxxxx xxxxxxxx odebraných xxx xxxxxx inokulace. Xxxxx je xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx xxx provedena izolace xx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a potvrdí xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 a 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus

Diagnóza xxxx xxx potvrzena xxxxx tehdy, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x takto identifikován. Xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx náročným xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx přerůst xxxxxx rostoucí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx provádět xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Přímá izolace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx je možná xx použití selektivního xxxxx a vhodného xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxx xxxxx xxxxx nebo xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx ze xxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxxxx stonku x x rostlin xxxxx xxxxxxxxxxxx, které nevykazují xxxxxxxx napadení, xxx x nichž xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxx 7.9). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx maceraci xxxxxx xxxxx, xxxx xx být xxxxxxxxx xxxxx oddílu 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 cfu xx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus (xxxx. XXXXX 4053 xxxx PD 406). Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx každou xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx selektivního xxxxx by xx xxxx před xxxxxxxx x testování xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jeho xxxxxxxx pro xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

8.1. Roztěr xx selektivní médium

8.1.1. Xx 100 µx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx šťávy x lilku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx bramborové xxxxxx xx obvykle xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x konkurenci saprofytů. Xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx koncentracích, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, zatímco xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxx 1/100 až 1/10&xxxx;000 xx XXXX médium xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxx (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx inkubují x xxxxx xxx teplotě 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx s kontrolními xxxxxxx x počítání xxxxx kolonií xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx provádějí xx xxxxx xxxxx, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Čištění xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx se xxxx xxxxxxxx xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx by xx xxxx provést xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx přerostlá, tj. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Kolonie xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxx v dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx pro xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx,

- xxxx x xxxxxxxxxxx extraktu s xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X po xxxx xxxxxxxxx 10 dní.

Původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pomalu x obvykle xxxxxxx xxxxxxx velikosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx roztěr xxx xxxxxxxx xxxxxxx. U xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx smetanově xxxx xxxx barvy xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx vyklenuté, xxxxxxxxx xxxxxx, s xxxxxxx xxxxxx a obvykle xxxx v průměru 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx kolonie xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X a xx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Pokud nedošlo x žádnému růstu, xxxxxxxx xx xx xxxx nejvýše 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolu se xxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx se musí xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx výsledek

Oxidačně-fermentační (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx oxidační

Aktivita xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Redukce xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx H₂S -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx citrátu -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Xxxx x 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Tvorba xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - nebo xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx na xX (dodatek 3).

b) Xxxxxxxx xx xxxxx dvojnásobného xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se xX xxxxxx (oddíl 4).

x) Xxxxxxxxxxx výsledku xX xxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx lF xxxx xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Zahřívá se 100 µl suspenze xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100 °C xx dobu 4 xxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx se xxxx xxxx buněk xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx konečné xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx lze xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X xx xx xxxxxxx.

x) Xxx amplifikaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx amplikonů xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x de Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Schaad x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx velikosti x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4. FISH xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx v XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

x) Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (FAP)

a) Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx agaru (Xxxxx) xx dobu 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°X).

x) Použije xx xxxxxx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx profil xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx charakteristických xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Anteiso X, 15:0 lso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx jasně xxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Jiné xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Anteiso A xx xxx xxxx xxxxxxxx neobvyklá xxxxxxxx, xxxxx xx však xxxxxxxxx xx všech Xxxxxxxxxxx xxx. x xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml x XXX.

x) Provede xx xxxx xxxxxxxx xxxxx Smith x xxx., 2001.

10. Test xxxxxxxxxx

Xxx konečné xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx musí být xxxxxxxxx zkouška patogenity.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx ml x 3-xxxxxxx kultur testované xxxxxxxxx látky x xxxxxxxx pozitivního xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx se 5-10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx fázi 3 xxxxxxx listů..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 18-24 °C xxx xxxxxxxxxxx světle a xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, by xx xxxx xxxxxxxxx xx 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx se xx 3 týdnech xxxxxxxx infekce nevyskytují, xxxxxx xxx kultura xxxxxxxxxx za patogenní xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx provádí x xxxxxxx x příznaky xxxxxxx odstraněním xxxxx xxxxxx 2 xx xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx x suspendují x xxxxx množství sterilní xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Izoluje se xx suspenze xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX a XXXX, xxxxxxxx se xx xxxx. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °X x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pro Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx podílející xx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx protokolů

Laboratoř (1)	Místo	Země
Agentur xüx Gesundheit und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx a Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Science Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de la Xxxxxxxxxx Végétaux, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx la Protection Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Centre	Aas	Norsko
Direcção-General xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Diagnóstico xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Příprava pozitivních x negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxx výkrojků xxxxx XXX/XX a XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (NCPPB 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx získání xxxxxxx přibližně 1 xx 2 x 10⁸ buněk xxxxxxxxx xxxxxx kolonií/ml. Xxxx xx obvykle xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx optické xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx pletiva xx odeberou x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, u xxxxx xx jisté, xx je prosta X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx suspenze X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxx mikrozkumavkách se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx alikvotní xxxxx x 100 µx ve xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx o objemu 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx -16 xx-24 °C xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích xx měla být xxxxxxx potvrzena xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx PCR xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx zkušebních vzorků.

Pro XX a FISH xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rozbory pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx pro xxxxxx xxxxx zkušebních xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx rozborech IF, XXXX a XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxx zjištěn x xxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx pro xxxxxxxxx postupy

OBECNĚ: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx pufry xxx xxxxxxxxx xx dobu xx jednoho xxxx.

1. Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx rozpustí, zkontroluje xx pH x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X po xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (na xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX silikonový xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (PVP ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50 g
(*) pro xxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 mM xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx extraktů z xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx koncentrovány xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

2. Xxxxx xxx IF xxxx

2.1. Pufry xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Tento xxxx xx používá x xxxxxx protilátek.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X po xxxx 15 min

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx pufr xx používá jako xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Leica).

Dodatek 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX x XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2. Xxxxxxxx se počet xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x x X/x,

xxx X = plocha xxxxxxx xxxx na xxxxxxx s xxxx xxxxxxx a

s = xxxxxx xxxx objektivu.

s = πi²/4G²K²,

kde i = koeficient xxxx (x xxxxxxx od 8 - 24 xxxxx typu okuláru),

K = xxxxxxxx koeficient (1 nebo 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx a

F = xxxxxxxxx faktor resuspendované xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx pro xxxxxxx a xxxxxxxxx X. m xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx agar (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23 g
Destilovaná xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 min.

Živný xxxxxxxxxx xxxx (Nutrient xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx se sterilizace x autoklávu xxx 121 X po xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx peptone xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 g
Baktoagar (Xxxxx)	15,0 g
Destilovaná voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx s kvasnicovým xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x provede xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x autoklávu xxx 115 °X xx dobu 20 xxx.

x) Validovaná xxxxxxxxxx xxxxxxx média

Médium XXXX

Xxxxx xxxx uvedeno jinak, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx z XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 g
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005 x
Xxxx (Xxxxx č. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xX xx upraví xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx xxxx 15 min.) a xxxxxxxxx na 50 X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 g, xxxxxxxxxxxx X 0,01 x.

X xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: trimethoprim (Xxxxx) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (obě 5 mg/ml) x 96 % metanolu, xxxxxxxxxxxx B (Sigma) (1 xx/xx) x xxxxxxxx sulfoxidu. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx základního xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x chladu xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 g
MgSO4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx,xxxxxx xx xX xx 7,2. Xx autoklávování x xxxxxxxxx na 50 °C xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008 x, cycloheximide (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, polymyxin X xxxxxxxx x destilované xxxx. Xxxxxxx roztoky xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx je 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxx extraktu. Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní výsledky xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bakterií.

1. Xxxxxxxxxxx XXX protokol s xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xx aa -3'

xxxxxx XXX-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx ctt xxx x -3'

xxxxxx NS-7-F 5'- xxx xxx xxx xxx ggt xxx xxx tgc -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx xxx ggt xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx x XXX X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx šablony = 502 bp (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18S xXXX 377 bp (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx voda (XXX)	15,725 μx
10x PCR pufr (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx d-n XX (20 xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx PSA-1 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx NS-7-F(10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxxxxx NS-8-R (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx validovány xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx xxxx Gold) x Xxxxx BRL.

(²) Koncentrace xxxxxxx XX-7-X a XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx homogenizační xxxxxx x purifikace XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx oddíl 6.1 xxxx. x) a 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx třepáním nebo xxxxxx metodami izolace XXX je xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx koncentraci xxxxxxx.

1.3. Reakční xxxxxxxx xxx PCR

Postupuje xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx: i) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 minuta xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (denaturace DNA xxxxxxx)

xx) 30 sekund xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 minuta xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 minut xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx může být xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx), xx), v), vi) x xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x XXX X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkuji xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 bp x 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx roztok)

Bromfenolová modř 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx voda 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová xxxxxxxx octová 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx použitím xx xxxxx na 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Validovaná xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx CMS-CY3-01: 5'- xxx cgg xxx xxx cat xxx xxx xxx -3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'- gct gcc xxx xxx xxx xxx-3'

2. Fixační roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, KTERÝ XX XXXXXXX! XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Zahřeje xx 9 ml xxxxxxxxxxx xxxxx vody (xxxx. Xxxxx pure water = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Paraformaldehyd se xxxxxxxx po xxxxxxx 5 kapek 1N XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx míchadlem.

ii) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx fosfátového xxxxx 0,1 M (XX; xX 7,0) a 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxx proužkem xx xxxxxxxxxxx xX x v případě xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: V ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx xx přefiltrujte přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx před xxxxxxx xxx teplotě 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % etanol.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 M

Tris-HCl 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 mM

Zředí xx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Sonda XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx se množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x tabulce. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx dvojmo 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Doporučená xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx ultra čistá xxxx	50,1	200,4
3x hybmix	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx EUB 338 (100 ng/μl)	4,5	18,0
sonda XXXXX301 (100 ng/μl)	4,5	18,0
Celkový objem (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Během xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxx před xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Na₂HPO₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx pH x xxxxxxxxxxx xx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého

Semena xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx výsevního xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx lístky (10 až 14 xxx) xx xxxxxxxxxx xx pasterizovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx by xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 15 °C.

Vhodné xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Roztok xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx se 2 x krystalové xxxxxxx v 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 x xxxxxxxxx amonného x 80 ml xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx jódový xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 g

Destilovaná xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx společně xxxxxxxx pomocí xxxxxxx x xxxxx. Xxxxxxx xx xx vody x míchají xx x xxxxxxxx nádobě xx rozpuštění.

Safraninový xxxxxx xxxxxxxxxxxx barviva

Zásobní roztok:

Safranin X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx a xxxxx se.

Ředění: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx roztěry, xxxxxx xx xx vzduchu x xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx krystalové xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx se Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x nechá xx xxxxxxx xx dobu xxxxx minuty.

5. Xxxxxxxx xx pod tekoucí xxxxx x xxxxxx xx savým xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx xxx dlouho, xxxxx xx vyplavuje xxxxxxx, xxxx ponořením za xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx na xxxx 30 xxxxxx.

7. Opláchne xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 10 x.

9. Opláchne se xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx bakterie xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zbarví xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx také xxxxxx komerčně xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx of xxx xxxxxxxxx and xxxxxxxxx xx xxx xxxx xxx bacterium Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx batches xx potato xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxx Communities, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 pp.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx of xxxxxxxx from xxxxxx. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Dinesen, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx from xxxxxxxx xxxxxx tubers. EPPO Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx methods xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxx xx various xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx fattyacid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, J. X. x X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX xxxxxx for xxx xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Corynebacterium xxxxxxxxxxx) xx potato. EPPO Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx capabilities xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx and development xx a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxx Diseases xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxx by xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx Z.; Xxxxxxx, X x X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 pp.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Lelliott, X. X., E. Billing x X. C. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx fluorescent plant xxxxxxxxxx pseudomonads X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, R. X. x X. X., Sellar, 1976. Xxx detection of xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Kotth.) Xxxxx. et Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Li, X. x X.X. xx Boer, 1995. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Xxxxxxx, B., X. x X., X. Xxxxx, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx unique DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, K. -H. x X.X. Xxxxxx. 1999. identification and xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subspecies xx xxxxxxxxxx xxxx reaction-based xxxxxxxxxx. X. Phytopathology 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx PCR with xxxxxxxxxxxxxxx of xxxx XXX. European Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. S., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx their xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Cornell xxxxx. Xxx. Sta., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Berthier-Schaad, X., Sechler, A. x Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx by X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Schaad [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Paul, Xxxxxxxxx:, 373 pp.

21. Skerman, X. B. D., 1967. X guide xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx and Xxxxxxx Company, Baltimore.

22. Xxxxx, N. C.; Xxxxxxx, J; Xxxxx, XX., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx rapid identification xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. European Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, P. X. A. xxx X. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx laboratories: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Antonie xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Pseudomonas spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. A.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, J. X. x X. X. X. Akkermans, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23s xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X IDENTIFIKACE XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové xxxxxxxx popisují různé xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x hlízách xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x některých xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x xx vzorcích vody x půdy,

iii) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX ZÁSADY

Optimalizované xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, xxxxxxxxx činidla x xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a kontrolních xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x validaci xxxxxxxxx, xx v dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx obsahují xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx použití životaschopných xxxxxx R. solanacearum xxxx kontrolních xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxx a za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx úrovní R. xxxxxxxxxxxx xxxx stanovené xxxxx vybraných metod.

Zcela xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x xxxxxxxxx zařízení, pečlivé xxxxxxxxx x činidly x jejich uchovávání x xxxxxxx opatření xxx zamezení kontaminace xxxx xxxxxx, např. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx uplatněno xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x jiným xxxxxx, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x §4 odst. 1, xxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeníngových xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. První xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx IF, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx izolace) musí xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem založeném xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx schématu. Xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xxxxxx není xxxxxxxxx xx infikovaný X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx izolaci x identifikaci čisté xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx postupových xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x bakteriálního xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete a xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo bakteriálního xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro hlízy x rostliny xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx xx selektivní xxxxx xxxx a x případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx příznaků xx xxxxxxx v xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx usnadňují předběžnou xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Negativní xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Test xx xxxxx slizu xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.1.

4) Test xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx popsán x oddíle 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx z pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Test XXXXX bakteriálního slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx obvykle xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx v xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx selhat xxx pokročilých fázích xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, musí xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xx selektivních xxxxxxx půdách.

13) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Xxxxx specifická xxxxxxxxxxxxxxx je nepovinná, xxx doporučuje se xxx xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxx 6.3.

1.2. Postupový xxxxxxx pro xxxxxxx x identifikaci Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx latentních xxxxxxx x hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx v xxxxxxxx 3), z nichž xxxxx xx xxxxxxx xx jiném biologickém xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx patogenu x xxxx, x xxxxxxx izolace typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx je X. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, aby xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Screeningové xxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx resuspendované xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x xxxxx sérii xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx postup xxx xxxxxx i na xxxxx počet, xxxxxxxx 200 xxxx není x xxxxxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých biologických xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx PCR xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX je xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx získány pozitivní xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx třeba opakovat xxxxxxxx testy xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, případně xxxxxxx xxxx s xxxxxxx xxxxxx.

12) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx se dosáhne xxxxxx xxxxx popsaných x oddíle 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx příznaky, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Viz oddíl 3.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx velikosti xxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx prvního pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx více screeningových xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx izolační test xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX je popsán x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx XXX jsou xxxxxxx v oddíle 6.1.6.

7) Xxxx FISH xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx biotest xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo inhibice xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx testech xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx xx podezření, že xx xxxxx o X. solanacearum, xx xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

13) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

2. Diagnóza xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx x xxxx dochází x xxxxxxxx. V xxxxxx xxxxxx vadnutí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, ale xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx hnědé xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx. Vadnutí jednoho xxxxxxx xxxx celé xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx kolapsem x xxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxx svazků xxxxxx xxxxxxxxxx stonků xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx xxxxx sliz xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx stonku svisle xx vody xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx slizu.

Hlíza xxxxxxxx. Hlízy bramboru xx xxxxx překrojit xxxxxx u pupkového xxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxx konec. X xxxx xxxx xx infekce xxxxx xxxxx láhvově xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx kterého xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Později xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx výrazněji hnědým x odumření se xxxx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx pupkového konce xxxxx x x xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, na xxxxx xx přilepují xxxxxxx půdy. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, lehce xxxxxxxx místa jako xxxxxxxx vnitřního kolapsu xxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xxxxxxx xx obvyklý xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx a houbového xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx xxxxxx nejmladších xxxxx. Za příznivých xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °C, při xxxxxxxx vzdušné xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx úplným xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx méně xxx 21 °C) xxxxxxxx xxxxx nevadne, xxx xx stonku xx xxxx tvořit xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx nasáklé xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxx cévního xxxxxxx. Při xxxxxxx xxxx stonkem vylučují xxxxx zbarvená xxxxxx xxxxxxx bílý nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx u jiných xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x S. nigrum. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25 °X xxxx xxxx xxxxxxxx vysoká xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x nemocné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Při xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Nevadnoucí rostliny X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx a xxxxxx xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx vnitřní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx nebo xxxxx stonku pod xxxxx. X řezu xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxx tvořit xxxxxx xxxxx, jestliže xx xxx xxxxxx ponořen xxxxxx do xxxx, x xx i xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxxx. Použije se xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx výtok xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX v xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx zviditelněny xxxxxxxxx xxxxxxx fixovaných skvrn xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy (Viz xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (xxx oddíl 6.1.5.), xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), testy XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.) atesty XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx izolaci

a) Xxxxxxx se xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete nebo xxxx vadnoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx x xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxx se 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 xx xxxxxxxx a xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX nebo SPA; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx tetrazolové xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx médium (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx se metodou xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Připraví xx xxxxxxxx samostatné xxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 x xxxxxxxxx kontrole.

d) xxxxxxxx xx 2-6 xxx při xxxxxxx 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx půdě vytvářejí xxxxxxxxxx izoláty X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx krémově xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx kolonie, xxxxx x charakteristickými xxxxxxxxxx xx středu. Xxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx tvoří malé xxxxxxx nefluidní máslovité xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- X Kelmanova tetrazolového xxxxx x xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx zbarvené. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx malé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx izolátech xxxx xxxxxxx x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx původce hnědé xxxxxxx xx vzorcích xxxx bramboru

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx detekci x identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 hlíz xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx vede x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx než 200 xxxxxxx, pokud xx x dispozici xxxxx xxxxxxxx hlíz.

- Xxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx metod xx založená xx xxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx popsaný xxxx xxxx být xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru. Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Nepovinné xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx

x) Inkubace xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °X xx xxxx xx 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx množení xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, pro xxxxxxxxxx patogenní DNA) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx vzorkem. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxx má být xxxxxxxx test XXX xxxx xxxxx izolace.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx na xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém xxxxx xxxxx hlízy, tak xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx vyříznou malé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx se xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx odděleně.

Pokud xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx podezření xx xxxxxx hnilobu, xxxxxxx se vizuální xxxxxxxxx takové hlízy xx řezu xxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 xxx xxx pokojové xxxxxxx, aby mohlo xxxxx xx zkorkovatění (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx karanténních xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být uchovány xxxxx přílohy XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx z pupkové xxxxx xx xxxxx xx nepoužitých xxxxx xx xxxxx použití, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (v xxxxxxx, že xxxxxx xxxx xxxxx používány, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe je xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce okamžitě. Xxxx-xx xx možné, xxxxxxxxxx se v xxxxxx xxx přidání xxxxx; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx pokojové xxxxxxx (18 -25 °X) nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx z následujících xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx x xxxxxxx třepačce (50-100 xx./xxx) 4 hodiny xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) homogenizují se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (přibližně 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 4) buď x xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) nebo xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx na jedno xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx sáček Stomacher xxxx Bioreba, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx mixéru existuje xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx rozlití xxxxx extrakčního xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xx použijí xxxxxxx xxxxxxxxxxx nože (xxxxx) x nádoby. Xxx xxxxx PCR xx xxxxx zabránit xxxxxxx XXX na nádobách xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. X testu XXX xx doporučuje xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Supernatant se xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx dobu 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), xxxxx xx xxxxx přídavkem (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7 000 x po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4-10 °X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx rozvířila xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µl xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x 500 µl xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx sterilní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (v/v) x 500 µl xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx části xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xx xxx teplotě -16 xx -24 °X (týdny) nebo -68 xx -86 °X (xxxxxx). Extrakty xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při teplotě 4-10 °C.

Opakované zmrazení x rozmrazení se xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Je xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx byly uchovány x zpracovány xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx pro xxxxxxx XX x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x popisy xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX test (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx FISH (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx ELISA (xxx oddíl 6.1.8.)

Biotest (xxx oddíl 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx detekce xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vzorky. Postup xxx vhodně xxxxxx xx smíšené xxxxxx x xxxxx xx 200 stonkových xxxxx. Xxxxxxx-xx xx průzkum, xxx by xxx xxxxxxx xx statisticky xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx populace.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx 1-2 xx xxxxxx kousky xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování:

Rajčatové sazenice x xxxxxxxxxxxx: Čistým xxxxxxxxxxxxxx nožem se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 cm x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z pole xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx postranní xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, 1 xx dlouhý xxx x každého xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx nůžkami xx xxxxxxx 1 xx xxxxxx xxx z xxxx každého xxxxxx xxxx xxx úrovní xxxx. X xxxxx xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) xxxx jiných hostitelských xxxxxxx rostoucích xx xxxx se xxxxxxxx 1-2 cm xxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxx oddenků x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx bude xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, léta x xxxxxxx, ačkoli xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx zjistit po xxxx rok x xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vodních xxxxxx. Mezi xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx bramboru, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx Pelargonium xxx. a Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, které xxxxx xxxxxx populace X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx a/nebo oddencích xx specifických xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx hastata, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Galinsoga parviflora, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Rorippa xxx, Rumex xxx., Xxxxxx xxxx. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Urtica xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx nebo xxxxxxxxxxx sliz). Xxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx xx dá xxxxxxx atestuje xx xxxxxxxx (xxx oddíl 2.).

3.2.1.2. Xxxxx stonku xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% etanolem x xxxxx vysuší savým xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx na xxxxxxx třepačce (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx teplotě xx 24 °X nebo 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx ihned xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Bioreba) x xxxxxxxxxx množstvím xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (např. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxx xx části xxxxxx x chladu xxxxxxx na 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X) na 24 xxxxx.

3.2.1.3. Po usazení, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Čistý xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx na xxx stejné xxxx. Xxxxx díl xx xxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X a xxxxx xxx xx xxxxxxxx x 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °C (xxxxx) nebo -68 xx -86 °C (xxxxxx) xxx případné xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

Xxxx XX (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test FISH (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xx vodě

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

(1) Viz xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x oddíle 4.2.1. Xxxxxxxxxxx zvětšuje populaci xxx patogenu, xxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických bakterií x xxxxxxxxxx xx xxx tehdy, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx test xx popsán v xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.9.

(5) Metody xxxxxxxxxxxxx xxxxx PCR xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. a 6.1.6.

(6) Metody xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

(8) Kultivace xxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx saprofytická xxxxxxxx xxxxxxx spolehlivost xxxxxxx, xxxxxxx se izolační xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx se dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x tomto xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x testování xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx vody. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx v xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, kterých xx xxxxxx mnohem více x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x odpadní vodě xxx x xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx níže xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx vody, xxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx vodě xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx xxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx vodu xx xxxxxxxxx xxxxxxxx čistícího xxxxxxx (např. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být xxxxx x úvahu xxx xxxxxxxxx spolehlivosti v xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Vzhledem k xxxx, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx x xxxxxxxxx mapování x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Příprava vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx pozdního jara, xxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx vzorkovacích xxxxxxx zvýší xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx snížením vlivů xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx podmínek.

- Xxxxxx silných xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx zředění x xxx x xxxxxxxx výskytu patogenu.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, pokud xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx vzorkovacích xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx lahviček xx xxxxx použití, xxxxx xxxxx 30 xx pod xxxxxxxx x 2 x xx břehu. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx výtoku xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, z nichž xxxxx bude obsahovat 2 opakované xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 ml. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vyberou nejméně 3 vzorkovací místa xx xxxxx 3 xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx přítoky.

4.2.1.2. Xxxxxx xx přepravují v xxxxxx a temnu (4-10 °C) xxxxxxxx xx 24 hodin.

4.2.1.3. Xx-xx potřeba, může xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx metod:

a) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000 g xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 g xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X, xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 1 xx xxxxx (dodatek 4).

b) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (minimální xxxxxxxx xxxx 0,45 µx) x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx v 5-10 ml peletového xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx metoda xx vhodná xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx malý xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxx nedoporučuje x xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx brambor nebo x xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx zvýšená xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx diagram a xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx

5.1. Postupový diagram xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. solanacearum x půdě

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., kde jsou xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx PCR testy xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx xxxx selhat x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx vliv xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx izolace xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Metody xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. solanacearum x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx oddíle je xxxxxxxxxx pro detekci xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x testování xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x odpadní xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx detekci nízkých xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx těchto xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx spolehlivosti xxxxx xxxxxxxxx negativních xxxxxxxx a také xxx xxxxxxxxxxx přehledů xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx patogenu x xxxx xxxx xxxx je xxxxx xxxx x úvahu xxxxxxxx citlivost xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Nejspolehlivějším xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx půdě xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx sledování, zda xxxx infikována, ale x xxx xxxxxxx xxxx metody xxxxxx xxxxx xxxxxx zamoření xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx polní xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx vzorkování xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx půdy xx 60 míst xx xxxxx 0,3 xx x hloubky 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx míst na 120 x xxxxxx 0,3 xx. Xxxx xxxxxxxxxx xx uchovávají xxxxxx při teplotě 12-15 °X. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x kanalizace se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx celkem 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx celkový xxxxx testovaného kalu. Xxxx testováním xx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Dílčí xxxxxx 10-25 x půdy xxxx kalu xx xxxxxxxx rotační xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx třeba, xxxxxxx 0,02% sterilního Xxxxx-20 x 10-20 g xxxxxxxxxx kamínků xxxx xxxxxxxx disperzi.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x popis testů xxxx v příslušném xxxxxxx.

6. Optimalizované xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Test xx xxxxx slizu xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve stoncích xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx výskytu: xxxxxx se xxxxxx xxxxx xxx úrovní xxxx. Řez xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx s xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, xxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx objeví xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx proudící xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Test xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx živné xxxx YPGA xxxx XXX (dodatek 2) na xxxxxxxxxxxxx sklíčko.

2. Připraví xx pozitivní kontrolní xxxxxx kmenu biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx x případně xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxx PHB xxxxxxxxxx xx.

3. Roztěry xx xxxxxxx uschnout x xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx plamenem, xxx xx roztěry xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx mikroskopické xxxxxxxxxx xxxxx níže uvedeného xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx xxxxxxx se xxxxxxxx 1 % xxxxxx roztokem xxxxxx xxxxx x nechají xx xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

b) Odstraní xx barvící xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x kohoutku. Přebytečná xxxx se odsaje xxxxx xxxxxxx.

x) Roztěr xx zakápne 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx vody x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 xx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx zvětšením 600x xx 1000x s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx se xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx pozoruje x xxxxxxxxxxxxx normálním xxxxxx, zda xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx je xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Zakápnou xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx súdánské černi X x 70% xxxxxxx x inkubují xx 10 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx barvící xxxxxx a xxxxxx xx opláchne jemně xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx x xxxxxx xx přebytečná voda xxxxx papírem.

c) Xxxxxxx xx ponoří krátce xx xxxxxx x xxxxxx xx savým xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx dodržet xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x xxxxxxxx v xxxxxxxxx.

x) Sklíčka se xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Upozornění: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x pracovat x digestoři.

e) Xxxxxxx xx xxxxxxxxx jemně xxxxxxx vodou x xxxxxxxx, xxxxxx se xxxxxxxxxx voda xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxxx imersí x xxx zvětšení 1 000x.

g) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x růžově xxxxxxxxxx stěnami buněk.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx slizu xxxx v extraktech x xxxxxx x xxxxxxxx je nejlépe xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxx suspenze xxxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) xx okénku xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použitím suspenzí xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx po xxxx 15 sekund xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Očkování na xxxxxx půdu

Poznámka:

Než xx xxxxxxx tato xxxxxx xxxxxx, provede xx xxxxxxxxx xxxx k xxxxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx tvořících kolonie X. solanacearum na 1 ml xxxxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx selektivní xxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; xxx dodatek 2).

Rozlišení X. solanacearum xx xxxxxx bakterií xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Dále, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx atypickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx přeplněny nebo xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx na konkurenci xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx použití xxxxxxx přípravených extraktů xx vzorků xxx xxxxxxxx, xx citlivost xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx vysoká. Xxxxxx je však xxxxxxxxxx i pro xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx od -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx desetinné xxxxxx ze xxxxxxxx 10⁶ cfu/ml xxxxxxxxxxxx xxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x xxxxxxxxx.

X každé xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxx jejím xxxxxxxx x rutinnímu xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vhodnost pro xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxxxx (vzorky).

1. Provede xx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xxxxxx se 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 misku xxx xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 28 °X. Xx 48 hodinách se xxxxxxxxxxx jejich stav x pak se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 dní. Xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx živné xxxx SMSA xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x po 3 xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx růžově až xxxxxx červené xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx se xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx částečně xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx od xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Kultury se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vodě (xX 6-8, xxx chlóru) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x temnu xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultur (xxx xxxxx 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx selektivní xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx po 6 xxxxx nejsou zpozorovány xxxxx bakterie xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx typické xxx X. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx kolonie R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx média je xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx validované xxxxxx xxx obohacení, xxxx. xxxxxxxxxxxx bujón Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ze xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx dojde x xx zředění potenciálních xxxxxxxxxx XXX xxxxx (1:100). Obohacení R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx bývají xxxxx xxxxxxxx také obohaceny. X xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx kultury xxxxxxx. Xxxxx xxxx, protože xxxx dojít x xxxxxxx populací xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx saprofytů, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx místo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx PCR xx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx do 10 xx xxxxxxxxxxx bujónu (dodatek 2), který se xxxxxx xxxxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA může xxx použit xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx bujónu (xxxx. 100 ul x 1,0 xx xxxxxxxxx živné xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx při xxxxxxx 27 xx 30 °X x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx kultuře x xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx umožní xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX nebo PCR xx xxxxx dobře xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xx xxxxxx ve xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx z xxxxxx vysoké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxx docílit xxxxxxx xxxxxxxx obohacením xxxxxxxx xx vzorků před xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxx postupy zvyšování xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx test IF xxxx hlavní a xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použit xxxx xxxxxxx, PCR xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xx xxxxx provést xxxxx xxxxxxxxx podle postupového xxxxxxxx, aby byla xxxxxxx úplná.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dojde x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx suspenze obsahující 10⁵ až 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx testování by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx být xxxxxxxx na čerstvě xxxxxxxxxxxx extraktech ze xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx nutné, může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 až - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx může xxx ze vzorku xxxxxxxxx přidáním 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xxxxx xx není xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx x jsou xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní sklíčka x homologickým xxxxxx xxxx xxxxx referenčním xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x dodatku 3 X, x nepovinně x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Standardizované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx xxx tento xxxx, xxxx uvedeny v dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x více xxxxxx, pokud xxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxxx nejméně 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Připraví xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

i) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx je vhodné xxx xxxxxx okénka 6 xx - x většího xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx poměru) xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx x xxxxxx 1/100 xx prvního xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx stejné xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx zbývajících xxxxxx x řadě. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx, jak xxxxxxx xxx. 1.

ii) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x peletovém xxxxx. Napipetuje xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx v příslušném xxxxxx) resuspendované xxxxxx xxx xxxxx ředění xx xxxx okének. Xxxxx řada xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxxxxxxx, 95 % etanolem xxxx xxxxx konkrétních xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Postup xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx dvojnásobných xxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxx mít 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 titru (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (T) x dvojnásobek xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje přesnost.

Obrázek 1. Xxxxxxxx sklíčka xx test xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Obrázek 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx podle odst. 6.1.5.1.xx) a 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx sklíčka se xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Každé xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství protilátky xx xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

2. Podložní xxxxxxx xx inkubují na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx se xxxxx xx xxxxx podložních xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx opláchnou xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 minut x pufru XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Je xxxxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx xxxxxxx kapiček, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost jemným xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx se xxxxxx xx vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředěním xxxxxxxxx XXXX, kterým xx stanovuje titr. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Sklíčko xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Opatrně xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 ul 0,1M xxxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx (dodatek 4) nebo xxxxxxxx xxxxx tekutiny xx každého okénka x přiloží se xxxxx sklíčko.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Prohlížejí xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx okénka xx xxxx navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx malým xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxx IF xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Intenzita fluorescence xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx protilátky xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze brát x úvahu.

Při xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx se xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum.

4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x morfologií x titru nebo xxxxxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx oddílu 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XX:

x) Při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou morfologií xx odhadne průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 mikroskopovém xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Výsledek XX je pozitivní x xxxxxx, kde xx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxx 5 x 10³. Vzorek xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx testování.

ii) Xxxxxxxx XX testu xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xx považuje xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

6.1.6. Xxxxx PCR

Principy

Použije-li se xxxx PCR xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, musí být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, a xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx úplná.

Využití xxxx xxxxxx x xxxxx rozsahu jako xxxxxxxx screeningového testu xx xxxxxxxxxx jen xxxxx, je-li xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx ve všech xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijí xx xxxxxxxxx činidla x xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Pokud xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX by xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx molekulární xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA a XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli došlo x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx ze xxxxxx, který xxx xxxxxxx testován na X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx xxxxx používaného xxx xxxxxxxx bakterií a XXX ze xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, xx kterých xxxx přidána X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- suspenze 10⁶ xxxxx na 1 ml R. xxxxxxxxxxxx xx vodě x virulentního xxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, při XXX použít také XXX xxxxxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx budou xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků xx xxxx být xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx připravit xxxxxxxx z umytých xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, které lze xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používají xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 3). Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx provede týmž xxxxxxxx jako test xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx XXX x komplexních xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx odstraňující inhibitory XXX x jiných xxxxxxxxxx reakcí x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx metodami XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

a) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µl xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (pH 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxxxxxx se umístí xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx 95 °X xx 10 min.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µl xxxxxxxxx roztoku lysozymu (50 mg lysozymu/na 1 xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X po xxxx 30 xxxxx.

5. Přidá xx 220 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °C xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, pokud vzorek xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xx viskozita xxxxx x směs se xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxx. xxx xxxxxxx 4 °X.

9. Horní xxxx xx xxxxxxx do xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx se 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx promíchá xxxxxxxx x inkubuje xx na ledu xx xxxx 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C a xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxx.

12. Přidá xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x promíchá se xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15 000 x po xxxx 10 minut při xxxxxxx 4 °C, xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx nechá xxxxxxxx xx vzduchu xxxx x XXX xxxxxxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx v 100 µx sterilní XX x nechá xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Skladuje xx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xx xxxxxxx při XXX.

17. Xxxxxxxxx bílá xxxxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxxx. 5 µl xxxxxxxxxxxx obsahujícího DNA xx použije pro xxxx PCR.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Plant Xxx, xx xx mohly xxxxxx, xxxxx by xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx purifikaci XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx efektivní.

6.1.6.2. XXX

1. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx protokolů (6.1.6). Připraví se xxxxxxxxxxxxx ředění vzorku xxxxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx vodě).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX x xxxxxxxxx, xx xxxxxx nehrozí xxxxxxxxxxx xxxxx zveřejněných xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx multiplexní protokol XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx interní protokol XXX.

3. Do sterilních XXX xxxxxxxxxxxxx se xxxxx 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µx PCR xxxxxx podle protokolů XXX (viz dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx negativní xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx směs XXX x xxxxx xx xxx xxxxx XX xxxx byl xxx, který byl xxxxxx xx xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x spustí xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx produktu XXX

1. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Nanese se xxxxxxx 12 µx xxxxx amplifikované DNA x každého vzorku x 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx gelu x Tris-acetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) při 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx vhodný DNA xxxxxx, např. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx DNA xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 mg/l) xx xxxx 30-60 minut xx použití vhodných xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x UV (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x očekávané xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. U všech xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů xxx XX xxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx, ale xx xxxxxxx x všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx XXX x interními xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx PCR xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx je xxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (xxxxxxxx) vzoru, xx předpokladu, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx primerů XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx mít podezření xx xxxxxxxx PCR, xxxxxxxx je získán xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx není xxxxxx xxxxx xx dvou xxxxxxxxx.

X případě, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol, xx xxxxxxxxx na kontaminaci.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxx FISH xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo IF xxxx. Když se XXXX test xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xx k xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx R solanacearum xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx měl xxx xxxxx možno xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx jej xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X nebo - 68 xx - 86 °X.

Xxxx negativní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx část extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857, xxx dodatek 3) v 0,01X fosfátovém xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx kultury. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum, xxxxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx, jak je xxxxxxx v dodatku 3 X.

Xxxxxxx eubakteriálních oligosond xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx zbarví xxxxxxx xxxxxxxxxx přítomné ve xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní materiál, xxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xxxxx, xx uveden v dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází z Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx se 100 µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx do Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xx xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx ve 200 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x inkubuje 1 hodinu v xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx xxx 7 000 x, xxxxxxxx se supernatant x resuspenduje se xxxxxx v 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µl fixované xxxxxxxx xx čisté 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, přičemž xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, x to xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x použitím 10 µx (x 0,01 M PB). Xxxxxxxxx roztok vzorku (49 µl) xxxx xxx xxxxxx při xxxxxxx - 20 °X xx přidání 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % etanolu. X případě, xx xx třeba XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx se xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (zamíchá xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

6. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx v xxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37 °X) x fixují xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx je možné xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Hybridizace

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxx řadě 50 %, 80 % x 96 %, pokaždé xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx x xxxxxx sklíček.

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx komora přikrytím xxx xxxxxxxxxxxxxx boxu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nasáklým xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx xx ohřeje xxx x hybridizační peci xxx xxxxxxx 45 °X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (okénka 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, přičemž xxx xxxxxxxx okénka (3 x 8) xx nechají xxxxxxx.

4. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) na xxxxx a xxxxxxxx 4 xxxxxx, a xx xxx, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x nechá se xxxxxxxxxx proces xxxxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx x xxxxxx xxx teplotě 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx se 3 xxxxxxx obsahující 1 x xxxx x xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx X), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) a 1 x 1/8x hybmixu (42 xx 3x xxxxxx a 958 xx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x kádince x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx promývacího xxxxxxx 1/8 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx do XXX (xxxx. Milli X water) a xxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx filtračním xxxxxxx. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx sklíčkem (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx mikroskopem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x pod xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx buňky (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se buňky X. solanacearum xxxxxxxx Xx3 xxxx fluorescenčně xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Buňky musí xxx xxxxx fluoreskující x zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx odchylné. Xxxxxxxxxx xx okénka napříč xxxxx průměry v xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. U xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné nebo xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

2. Xxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x morfologií xxxxxxxxxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xx xxxxxxx x úvahu.

3. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx nastat x xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxx z důvodu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX s xxxxx nese xxxxxxx xxxxxxxx. Je pravděpodobné, xx x pletiv x xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx reakci xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxx R. solanacearum, x xxxx mnohem xxxx xxxxxxx xxx x testu IF.

5. X xxxxx xx xxxxx pouze fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx platné, xxxxx jsou xxx xxxxxxx FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx kontrolách a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 mikroskopovém xxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxx rhodaminového filtru xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, jestliže xxxx tyto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru pozorovány x xxxxxxxxxxx kontrolách.

6.1.8. Xxxxx ELISA Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX lze použít xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx kromě testů XX, XXX xxxx XXXX pro jeho xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx obohacení x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx použitím xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx citlivost xxxxx, xxx může xx xxxxxx setkat x xxxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxx titru xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x použití xxxxxxxx druhotných konjugátů xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx protilátky v xxxxxxxxx xxxxxx, které xx xxxxxx xxxx xxxxxx jakou xxxxx xxxxxxxx formulace.

Určí xx xxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx negativní a xxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxxx působeni x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xx xxxxxxx xxxx vzorky xxxxxxxxx kontroly.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx extraktů, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx na 1 xx xxxxxxx 2 X. solanacearum (xxxx. xxxx NCPPB 4X56 = PD 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 2 X x B). Xxx srovnání výsledků xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XXX X. solanacearum. Xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx destičce xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x negativní xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx test, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x) Nepřímý test XXXXX (Robinson Xxxxx xx xx., 1995)

1) Xxxxxxx se 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X xx 4 xxxxxx xx xxxxx xxxxx nebo topném xxxx xxxx v xxxxxxxxx případech redukovat xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxx xx promíchá.

3) Xxxxxx xx 100 µl xx xxxxx jamky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx rovnocenné) x nechá xx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx teplotě 4 °X.

4) Extrakty xx xxxxxx x jamek. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx se xxxxx x jamce xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx se vhodné xxxxxx protilátek xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X validovaných xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, než xx xxxx).

6) Přidá xx 100 µl xx xxxxx xxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

7) Roztok xxxxxxxxxx xx vylije x xxxxx a jamky xx vymyjí jako xxxxxxx (bod 4.).

8) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx alkalické xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 100 µx do xxxxx jamky a xxxxx se inkubovat 1 hodinu xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx se xxxxxx xxxx předtím (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µl substrátového xxxxxxxxxxx xxxxxxx fosfatázy (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x odečítá se xxxxxxxxxx při 405 xx v xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx xx každé xxxxx. Nechá se xxxxxxxxx xxx teplotě 37 °C 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° X xx xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx dvou jamek. Xxxxxxx xx rovněž xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 xxxxx při xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx v PBS (dodatek 4) s obsahem 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xxxxx xx 190 µx xx každé xxxxx x xxxxx xxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °X.

5) Xxxxx xx xxxxxxx dobře vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx imunoglobulinu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fosfatázou v XXX. Xxxxx xx 190 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxx se xxxxxxxxx 2 xxxxxx při xxxxxxx 37 °C.

7) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx x temnu při xxxxxxxx teplotě. Absorbance xxx 405 nm xx odečítá x xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže průměrná xxxxxxx optické hustoty (XX) z xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx substrátem) x xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx OH xxxxxxx x negativních xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx ELISA je xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx XX x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx jsou větší xxx dvojnásobek XX x negativním xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou menší xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x pozitivních kontrolních xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx že xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x xxxxxxxx kontaminaci xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx tvořících xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxx však xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x glycerolu x teplotě - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 testovacích rostlin xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. kultivaru Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx laboratoře) xx xxxx xxxxx pravých xxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx xx použije xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x rovnocennou xxxxxxxxxx), ale jen xxxxxxxx xx fázi 2. xx 3. xxxxx až xx xxxxxx xxxxxxx třetího xxxxxxx listu. Příznaky x xxxxx xxxx xxxx výrazné x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µx extraktu xx vzorku xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Inokulace xxxxxxxx stříkačkou

Inokulují xx xxxxxx xxxxxxx hned xxx xxxxxxxxx listy xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx jehlou (xx xxxx xxx 23G). Xxxxxx xx rozdělí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx suspendované xxxxxx na stonek xxxx xxxxxxxxx listy x prvním listem.

Sterilním xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx řez xxx 1 xx dlouhý x xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx se xxxxx v místě xxxxx resuspendované pelety.

Řez xx utěsní sterilní xxxxxxxxx x injekční xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx vodní xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx kultury xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní kontrolní xxxxxx, x peletovým xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxxx se pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx xxxxxxx, aby se xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx xxx teplotě 25 - 30 °X a xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx jak xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx drženy xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx místech skleníku xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx jinak xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x různých xxxxxx xx dobu xxxxxxxx drženy xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx zástěnami. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, prohlížení x xxxxx ostatních xxxxxxxxxx xx věnuje xxxxxxxx pozornost xxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxxxxx skleník xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx hmyzích škůdců, xxxxxxx xx mohli xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, epinastie, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx izolace (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx kultury (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Jestliže xxxxx 3 xxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx xxxxxx dlouhých 1 xx x každé xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx inokulace. Xx-xx xxxx pozitivní, xxxxxxxx xx zřeďovací xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx se všechny xxxxx kultury x xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx výsledky xxxxxxxx xxxx získány, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazují xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxx x xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky.

Biotest je xxxxxxxxx, jestliže rostliny xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx se xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy

Určují xx následující xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx xxxxxx přítomny xxxx xxxxxx chybí x X. solanacearum, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Stead (1987), Xxxxxxx et xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxx XXX +

Oxidačně xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Růst xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Xxxx v 2% NaCl -

Arginin-dihydrolázová xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Produkce xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx suspenze přibližně 10⁶ xxxxx na 1 xx x xxxxx XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vhodného xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx se XX metoda (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX kultury xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kontroly.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 identifikačních xxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 ml x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Provede xx xxxx XXXXX se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže hodnota xxxx xxxxxxxx získaná x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x porovnání s xxxxxxxx z pozitivní xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxx vody (XXX = ultra pure xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x ohřívacím xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx lázni při 100 °X 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx postupy XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Seal xx al. (1993); Xxxxxxx a Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx xx al. (1999); Xxxxx xx al. (1997), Weller et xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. solanacearum xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxx xxxxxxx velikost a xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

6.2.5. Xxxx FISH

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na 1 xx x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx se xxxxxx XXXX (6.1.7) x nejméně 2 xxxxxxxxxxxx specifickými xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Analýza xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx kultura xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx agaru (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx případně xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (viz dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx biovaru

R. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx schopností xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx disacharidů a xxx hexosových xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx očkováním xx xxxxx půdy x xxxxxx kulturou X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx při xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx půda rozdělena xx sterilní xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx během 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx testy xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx identifikace kmenů xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx několikerými xxxxxxxxxx, mezi xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxxx et xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx PCR x xxxxxxxx primerů XXX, XXX x XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Xxxxx et xx., 1995).

3. Analýza xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx AFLP (Xxx xxx Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx dodatek 6) xxx xxxxxx k xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx skupiny 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2A a 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx původně xxxxxxxxxx analýzou RFLP (Xxxx xx xx., 1989) x sekvenováním 16X xXXX (Taghavi xx al., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Připraví xx xxxxxxxx o xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x příslušný xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857; viz dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx se 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx 3 pravých xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 xxxxx při xxxxxxx 25-28 °C x xxxxxx relativní xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx vystavení xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. X čistých xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 dnů. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx jako patogenní xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx epinastie, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx asi 2 cm xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx x malém xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xx provede xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx selektivní xxxxx xxxx (dodatek 2). Xx inkubaci 48 xx 72 hodin xxx xxxxxxx 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx kolonií xxx X. solanacearum.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx půdy xxx xxxxxxx a xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (monohydrát) 10,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí se xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Difco) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx na 50 °C x xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztok 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 xx znění Xxxxxxxxxxx xx al., 1996)

Základní xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Difco) (xxx pozn. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx se na 50 °C x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Sigma X1004) 600&xxxx;000 U (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx C-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Signa X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Použití xxxxxx xxx xxxx uvedených xxxxxxxx může xxxxxxxx xxxx X. solanacearum.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx použit Xxxxx Xxxx #1. X takovém případě xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx pomalejší, ale xxxx xx také xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Typické kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x 1-2 xxx xxxx x červené xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 U/l xxxx omezit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxx růstu

Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x skladují xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxx x xxxx xx spotřebovat xx 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Nutno xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx měla xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) a xxxxxxxxxxx, xxx se xx 2 xx 5 xxxxx při xxxxxxx 28 °C objeví xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxx půdu XXXX, ale vynechá xx Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx et xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 g

Proteázový xxxxxx 5 g

K₂HPO₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx a ochladí xx xx 50 °X. Xxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx roztok xxxx xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx bakteriální xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bakteriální xxxxxxx xx doporučují xxxx standardní referenční xxxxxxxx xxx' k xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx testů, aby xx zabránilo xxxxxxxxxx xxxxxxxx (tabulka 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx patogenních xxxxxxxx xxxxxxx (NCPPB), Xxxxxxxx vědecká xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx ochrany xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx sbírka xxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxx (XXXX), ústav fytobakteriologie XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Referenční xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kultur XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx uvedených kmenů xxxx být xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx kultur.

Tabulka 2: Xxxxxxxxxx panel XXX xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx bakterií x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

x) Xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx materiál

Mražené xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrole xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx sušené xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a XXX xxxxx. Xxxxxxx životaschopnost xxxxx xx ovlivněna xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx x pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx pozitivních a xxxxxxxxxxx kontrol pro xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx X. solanacearum xxxx 3/xxxxxxx 2 (např. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) xx XXXX živné xxxx a suspenduje xx x 10 xX fosfátovém xxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx přibližně 2 x 10⁸ xxxxx tvořících xxxxxxx xx 1 ml. Xxxxxxx se xx xxxxxxx jemně zakalenou xxxxxxxx rovnající xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx xx dřeň x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x které xx xx, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx uvedeným xxxxxxxx a resuspenduje xx xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 ml s 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Přenese xx 100 µl xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Provede xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x dalších pěti xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použije xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx označeny.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 N1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx každého xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx xx xxxx použití.

Přítomnost x xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxx xx měly xxx nejprve xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx DNA z xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX a XXXX testy xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii zkušebních xxxxxx.

Xxx kvantitativních rozborech XX, XXXX a XXX xxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx být xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1. Pufry xxx extrakci

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací nebo xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (bezvodý) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, zkontroluje xX a xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx při 121 °X xx dobu 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx fyziologickém xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx protilátek.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx k oplachování xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx se 0,1 % Xxxxx 20 k xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, pH 7,6

Xxxxx pufr se xxxxxxx jako xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx IF xxxxx x zvýšení xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Vector Xxxxxxxxxxxx) nebo Citifluor® (Xxxxx).

3. Pufry xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vysoký xxxxx aromatických xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx siřičitan xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx chloridu xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

3.3. PBS-Tween

10xPBS 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 ml

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx čerstvě připraven).

10 x PBS 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Diethanolamin 97 xx

Xxxxxxxxxxx voda 800 ml

Rozpustí se x koncentrovanou HCl xx upraví pH xx 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidá xx 0,2 x MgCI₂.

Rozpustí xx xxx 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Sigma) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx účely xxxxx DASI ELISA

4.1. Potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX CO₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx pH 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx pufr (PBS) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 g

Na₂HPO₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2H₂O 4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Tween 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx se x xxxxxxx xx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = plocha xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxx a

s - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

G = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx charakteristických fluoreskujících xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X =X x 1&xxxx;000/x x F,

kde x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety v xxxxxx okénku x

X = zřeďovací faktor xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nejméně 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-GGG GGT XXX XXX XXX XXX GCC-3'

Reverzní xxxxxx X-2: 5'-XXX XXX XXX XXX TCC XXX AGG XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu templátové XXX X. solanacearum = 288 xx

1.2. Xxxxxxx směs XXX

1.3. Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx: i) 2 xxxxxx při 96 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 cyklů: ii) 20 xxxxxx při 94 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 20 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 sekund xxx 72 °C (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: v) 10 xxxxx při 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), iii) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. solanacearum XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Ava XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

2. Protokol PCR Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx xxx acg xxx xxx xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx xxx xxx tcg xxx xxx ca -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 xx.

2.2. Reakční xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 mM
Primer Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 U
Množství xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx množství	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x pufr xxxxx xxx rovněž xxxxxxx xx stejných xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 cyklus x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (denaturace templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (syntéza extenze)

vi) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x iv).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xx inkubační xxxx 30 minut při xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxx 457 xx x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX CAT XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx RS-1-R: 5'-XXX XXX XXX XXX AGA XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx XX-5-X: 5'-XXX TTA AAG XXX XXX ACG XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX CAG XXX XXX XXX XXX CTC-3'

Očekávaná velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx RS). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18S xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx směs XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: ii) 30 sekund xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx při 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 sekund při 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut při 72 °X (konečná xxxxxxx)

xx) xxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx cyklu xx), xxx) x iv).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Bsm 1 xxxx Xxxxxxxxxxxxx (např. Xxx 1269 I) xx xxxxxxxxx době 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý primer Xx-1-X: 5'-ACT XXX XXX GCA GAG XXX CAT XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-1-R: 5'-CCC XXX CAC XXX XXX GAC X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX XXX GCA XXX XXX CTC-3'

Očekávaná velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Reakční xxxx XXX

x) Protokol XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces xxx xxx reakce xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- x biovary 3/4/5:

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 95 °C (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové DNA)

iii) 30 sekund xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) ponechá xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), iii) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx amplikonu.

Produkty PCR xxxxxxx amplifikací XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx s xxxxxxx Xxx X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxx 65 °C. Produkty XXX xxxxxxx amplifikací x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Rs-3-R xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) xxxx 50 xx

5.2. Nanášecí xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 ml

6. Pufr 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx octová 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Před xxxxxxxx xx xxxxx na 1 X.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (např. lnvitrogen xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Validovaná xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-ggc agg xxx xxx xxx xxx ccc-3'

Nespecifická eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX TOXICKÝ. XXXXXX XXXXXXXX A NEVDECHNOUT. XXXXXXXXXX XX PRACOVAT X DIGESTOŘI.]

i) Zahřeje xx 9 ml xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx pure xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X a xxxxx xx 0,4 x parafonnaldehydu. Parafonnaldelryd xx xxxxxxxx po xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxxx xx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x v xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [UPOZORNĚNÍ: X ROZTOCÍCH S XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT XXXXX XX!]

xxx) Přefiltruje se xxxxxx xxxx membránový xxxxx 0,22 µx x skladuje xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx teplotě 4 °X xx dalšího xxxxxxx.

3. 3x Hybmix

NaCI 2,7 M

Tris-HCI 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx se xx x, podle potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (SDS) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx XXX 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 xxxx OLI2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 1. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx dvojmo 2 xxxxx vzorky) xx xxxxx 90 µx hybridizačního roztoku. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX A XXXXXX XXXXXXXX BEZPEČNOSTNÍ XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx směsi

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx oligosondy xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx chrání xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Na₂HPO₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx x rajčete

Vysejí xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx melongena) do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x plně xxxxxxxxxxx děložními xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xx xxxx pěstovat xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: den: 21 až 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx rajčete: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Amann, X.x., X. Xxxxxxxx xxx D.A. Xxxxx. 1990. Fluorescent-oligonucleotide xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Anon. 1998. Xxxxxxx Directive 98/57/XX xx 20 Xxxx 1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx etal. Official Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx L235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., A.C. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx application xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx isolates. European Xxxxxxx of Plant Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Double-Antibody Xxxxxxxx Indirect Enzyme-Linked Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx That Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Barlow, X. xxx Sequeira, X. 1989. Genetic xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: detection of xxxxxxxxxxx fragment length xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx tkat specify xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Molecular Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx of Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx a xxxx-xxxxxxxxx medium xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: A.C. Xxxxxxx (ed.) Bacterial Xxxx Newsletter 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Agricultural Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Nydegger, X. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx biovars xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Applied Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Ushijima, X. Xxxxx, S. Xxxxxx, X. Xxxxxx-xxxxx, X. Yoshiwara and X. Kishi. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx soli xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x XXX xxxxxxxxx. J. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Janse, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx for Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxx xx xxx sensitivity xxx specificity. Bulletin XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, J.D. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification ofYseudomosaas xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xxxxx xxxx fatty-acid xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx pathogenicity of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx appearance xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx Z.; Xxxxxxx, X and X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, D.E. 1987. Methods for xxx xxxxxxxxx of xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx scientific Xxxxxxxxxxxx Xxx., Oxford. 216 xx.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx enricliment improves xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. In: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Klewer Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx sequences xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxxx, X.X. and Xx Bruijn, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx of xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx to xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. vesicatoria. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., X. Xxxxxx, G. Xxxxxxxx, X.-X Wang, X.-X Xx, X. Xxxxxxxxx, X. Fegan, A.C. Xxxxxxx, V. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, B.W. Xxxxxxxx, X.X. Tinunis. 1997. X xxxxx xxxxxx for development xx xxxxxxx and xxxxxx-xxxxxxxx XXX probes xxx PCR xxxxxxx xxx identifying Rurkholderia xxxxxxxxxxxx (fornierly Pseudomonas xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Mol. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, K.H. and Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx by polymerase xxxx xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Pukall, X. 2002. Sequence xxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx of 16S-23S xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx with xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. European Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, A., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Forde, S.M.D. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx bacterial xxxx. Xxxx and Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx identification of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Seal, X.X., X.X. Jackson, X.X.X. Xxxxx, xxx M.J. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx ygii, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Bacterium xx xxxxxxx 16S xXXX xxxxxxxxxx: construction xx oligonucleotide primers xxx sensitive xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx chain xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx diversity xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx and xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx cellular xxxxx-xxxx profiles. lnternational Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx of xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx of xxxxxx based xx 16X xXXX gene xxxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Systematic Bacteriology 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Wolf, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, E., Van Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, A., Xxxxxxxxx, X. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 in Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. In: Xxxxx, X., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx disease: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Berlin) pp. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G., Smith, X., Stead, X.X. xxx Xxxxxxx, N. 1999. Detection xx Xxxxxxxxx solanacearum strains xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Wullings, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx sihl xxxxxxxxxxxxx xxxx 23s rRNAtargeted xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.