Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx stanoví xxxxx §88 xxxx. 2 xxxxxx č. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx péči x x xxxxx některých xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (dále xxx "zákon") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 písm. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx¹⁾ x xxxxxxxx opatření, xxxxx xx uplatňují na xxxxx Xxxxx republiky xxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx al. subsp. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et al., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx, aby xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) při xxxxxxxx výskytu xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Pojmy

Pro xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Clavibacter michiganensis (Xxxxx) Xxxxx xx xx. ssp. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Xxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - bakterie Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx al.,

c) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x ostatní xxxxxxxx x čeledi xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx potvrzena xxxxxxx infekce xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - brambor (Xxxxxxx tuberosum X.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, xxxxx xxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx semen a xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x nichž xxxx potvrzena možnost xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v přirozených xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx průzkumem - průzkum zaměřený xx xxxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x určitém území xxxx x určité xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx průzkumem - průzkum x xxxxxx xxxxxxx a xxxxxx zamoření xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x k xxxxxx xxxxxx území, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxxxx,

x) pravděpodobným xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hnědé hniloby - podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxx, partii, zařízení, xxxxxx, dopravním xxxxxxxxxx, xxxxxx nebo jejich xxxxx x veškerých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx rozšířením xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx na xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxx x xxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx původce kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx územím - xxxxx vymezené Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx xxx "xxxxxxxxxxxxxxxx správa"), xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx x důvodu xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx vymezené xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, na xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská opatření xxxxx §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx partií - xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxx; přitom xx za:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxx roce xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx rajčete xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx partie xxxxx,

2. xxxxxxxxxxx klonově xxxxxxxxx partii xxxxxxxx xxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx z xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx v xxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bramboru²⁾ xxxxxxx x České xxxxxxxxx x rozsahu xxxxx §8 xxxx. 2,

x) namátkově vybrané xxxxxx rozmnožovacího materiálu xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx jen "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx partie xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx podléhají všechny xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx jako podezřelé x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby a xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 písm. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce hnědé xxxxxxx xxx rostlinolékařské xxxxxxxx zásilek dovážených xx xxxxxxx zemí x vyvážených do xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x namátkově xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxx x xxxxxx xx třetích xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx průzkumu na xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x dalšímu xxxxxxxxx,

x) vodní zdroje xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx včetně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x odpadní xxxx xx zpracovatelských xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx pevné xxxxxx x xxxxxx podniků.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx podezření x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx používané x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx pěstební xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx tyto xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx zjišťuje

a) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x), xxxxxxxx 3 a x xxxxxxxx 4 xxxx. b) x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx, x případě xxxxxxxx v odstavci 4 písm. x) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxx, x xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxx uvedených x xxxxxxxx 2 xxxx. x) a x),

x) xxxxxxxxxx porostů xxxxxxx xx vhodnou xxxx x následným laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x případech xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, pevných xxxxxx xxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx vegetace x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x) x x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x počet, xxxxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxx při xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7, xxxxxx tohoto xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx informací x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x biologie původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby, x xxxxxxxxxxxx x systémům xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxxxxx xx aktuální situaci xx xxxxxxx anebo xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Testování xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xxxx stanoveným rostlinolékařskou xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona x xxxxxxxxxxx xx Věstníku.

(9) X průzkumu prováděnému xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx rovněž xxxxxx xxxxxx odebrané xxxxx xxxxxxxxx fyzickou nebo xxxxxxxxxx osobou, xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx §71 odst. 1 xxxx. x) xxxxxx xxxx rostlinolékařskou xxxxxxx xxxxx §72 odst. 5 xxxx. i) xxxxxx, pokud bude xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx odebírány a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 6 oznamuje xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxx zbytečného xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx a xxxx xx oprávněna xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxx xxxx xx pěstuje xxxx xxxxxxxxx, x případě xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ bramboru x rajčete xxxx Xxxxxxxxxx kontrolnímu x xxxxxxxxxx ústavu zemědělskému.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa x xxxxxxx s §10 xxxx. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X ostatním členským xxxxxx x Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx původce kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx ročně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx, x xx x případě xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx výsadbu xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. září, x ostatních případech xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx x výsledcích xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xx xxxxxxxx vždy x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx důvěrné.

§4

Opatření při zjištění xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx podezření z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx xx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx podle přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x oddílu XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx správou xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx podezření z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx rostlinolékařská xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx dodržení xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx X, s xxxxx toto podezření xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx podle §76 odst. 2 xxxxxx za účelem xxxxxxxx xxxxxx podezřelého xxxxxxx x x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx těch, které xxxx podrobeny xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x

x) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx založená na xxxxxx odhadovaného xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x cílem tomuto xxxxxx předejít xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx dohledu xxx přesunem všech xxxxxxxxx partií hostitelských xxxxxxx xx xxxxxxxxx x x objektech xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx zamoření partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx členského státu xxxx x xxxxxxxx xxxxx členském xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx příslušného xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx x xxxxx státem xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx x podezření x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby, které xxxx xxx původ x Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx může Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Česká republika, xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx opatření xxxxx xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx při potvrzení xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx úřední xxxxxxxxxxx testování xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx §3 xxxx. 8 potvrdí xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x §76 xxxx. 2 zákona x x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, biologii xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx x xx způsobu xxxxxxxxx, xxxxxxx na xxx x xxxxxxxxxxxx zpracování xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx xx zamořené xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx prostředky, sklady xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x něhož xxx xxxxxx odebrán, x xxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx rostlinným xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx odebrán, x xxxxx nebo místa xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx xx xxxxx xxxxx výměna pěstebního xxxxxxxxx, x xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovány x xxxxx xxx xxxxxx odebrán,

b) provede xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx zjištění xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x souladu x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxx §6 x xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 rozsah pravděpodobného xxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxx xxxx posklizňového kontaktu, x na xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstování, xxxxxxxxxxx a zalévání xxxx xxxx pěstitelské xxxxx xx zamořeným xxxxxxxxx nebo objektem, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxxx předmětů xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a) a xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx x ustanovením xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx s xxxxxxx xx povrchovou vodu, xxxxxxx vodu xx xxxxxxxx na zpracování x xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx lilkovitých x xxxxxxxxxx vegetace, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx povrchovou xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxx správa

a) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx testování xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx a popřípadě xxxxxxxxxxxxx rostlin x xxxxxx xxxxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x cílem xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x souladu x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx xxxx odebírány xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx základě stanovení xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x jeho xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx oznámí xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), popřípadě xxxxxxxx 2 xxxx. b), x xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. c). Xxxxxxxxxxx x xxxxx oznámení xxxx důvěrné.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx, zásilce xxxxx xxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx odpovídajícím xxxxxxxx a x xxxxxxx x ustanovením xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx rozsah pravděpodobného xxxxxxxx x vymezí xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Rostlinolékařská xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Věstníku xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) x pro xxxxxxxxx xxxxxxx karanténního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), odstavce 2 xxxx. c) a xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle §4 odst. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx klonově xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx byly označeny xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. a), x xxxxxx xxxxxxx však xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾, x xx x xxxxxxx xxxxxxxxx ke xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx stanovit xxxx xxxxxx xxxxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx.

(2) Xxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx potřeby xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx rozsah možného xxxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 odst. 1 písm. x), x) x c).

§7

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé hniloby

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxx být xxxxxx a xxx xxxxxxxx rostlinolékařské správy xx s xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, pokud xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx neexistuje xxxxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx a xx jsou splněny xxxxxxxxx xx zneškodňování xxxxxx, stanovené x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx označená jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, pokud xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxx xxxxx, xx neexistuje xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx jsou xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx průmyslového xxxxxxxxxx xxxx partie, x xxxxx xxxx tato xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx testování klonově xxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 xxxxxxxx xxxx zamořená xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x),

x) xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, sklady xxxx xxxxxx části a xxxxxxx jiné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, xxxxxxxx za zamořené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx označené xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §5 odst. 1 xxxx. x), xx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx vhodných xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 x xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxx objekty x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) x karanténním xxxxx x bezpečnostní xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 2 xxxx. x), musí xxx xxxxxxxxx opatření xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx původce kroužkovitosti x xxxx 4 přílohy č. 4 a x xxxxxxx výskytu původce xxxxx xxxxxxx v xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx podle §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx uvedená x xxxxxxxx 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx odborně odůvodněná, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x těchto xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x) xxxxxx karanténního xxxxx x x xxxxxxxxxxxx zóně sděluje xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům a Xxxxxx spolu x xxxxxxxxxxxx číslem xxxxxxxxx xxxxxxxxx osob, registrovaných xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx §76 odst. 4 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská opatření xxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx doby xxxxxxxxx x jejich xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx v xxxxxxx x §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx přechovávání k xxxxxxxx, šlechtitelským xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxx xxxxx §8 odst. 1 zákona, xxxxx xxx xxxxxxx narušena xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx výskytu ani xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Testování xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx materiál²⁾ xxxxxxxx, vypěstovaný na xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x uváděný na xxx, xxxx být xxxxxxxx laboratornímu xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x souladu x §3 odst. 8 x 9, x xxxxxxx prostým původce xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx hniloby.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x příslušném xxxxxxxxxx roce xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru určené x xxxxxx předstupňů x reprezentativní xxxxxx xxxxx partií rozmnožovacího xxxxxxxxx bramboru, pokud xxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, a nebo

b) xxxxx byl x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx potvrzené xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zaměřením xx tuto souvislost, xxxx

2. reprezentativní xxxxxx xxxxx partií základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího materiálu xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x nichž xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ xxxx reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx předstupňů, xxxx xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxxxxxx x množení x následujícím xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ani xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru původem x Xxxxx republiky.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx dnem xxxxxx xxxxxxxxx.

Příloha x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a rostlin xxxxxxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx testovaných x kontrolních xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Seznam laboratoří, xxxxx xx podílely xx optimalizaci x xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx a xx podmínek příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx rostlinolékařskou xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx také xxxxxxxx správné nastavení, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x činidly a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx uplatněno xxxxxxxxxx xxxxxx kvality, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx označování x x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx pozitivní výsledek x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx znázorněno x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx je první xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx druhý screeningový xxxx. Xxxxx xx x xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xx podezření x xxxxxxx potvrzeno a xxxx xx xxxxxxxxxx x testování xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx považován xx xxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx screeningovým testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x identifikaci xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus x xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx postupových xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx kroužkovitosti

Postup xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příznaky kroužkovitosti. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx v oddíle 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- IF test (xxxxx 4),

- XXX xxxx (oddíl 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Ačkoli xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzí xx xxxxx není xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx infekce xx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx bakterie, které xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx izolačním xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, nejlépe XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (oddíl 7).

(4) Xxxxx typické xxxxxxxxxx kolonie je x oddíle 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx negativní, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx znovu.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx za použití xxxxx uvedených v xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx popsána x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxx bramboru

Postup testování xx určen xx xxxxxxxx latentních xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, z nichž xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, aby xxx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx resuspendované xxxxxx xxxxxxxx jako pozitivní xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x na xxxxx xxxxx, jestliže 200 xxxx xxxx x dispozici.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx tento test xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx nebo více xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxx xxxx negativní, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Další xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (IF).

Pro xxxxxxxxx XX xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx monoklonální protilátky xxxxxx větší xxxxxxxx (xxx oddíl 4).

(5) XXX test.

Použijí xx xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx a xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx činidla x xxxxxxxxx (xxx oddíl 5).

(7) Selektivní xxxxxxx.

Xxxx xxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx přímou xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX xxxxx xxxx NCP-88 xxxxx x xxxxxx resuspendované xxxxxx 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx 3-10 xxx xx rozetření xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx využití xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxx xx omezily xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxx x xxxxx xxxxx patogena xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx takto xxxxxxxx, xxxx být izolace xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého (Solanum xxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pro tuto xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx MTNA xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie je xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx mohou xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx testy xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx pupkového xxxxx xxxx stejného xxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx podezřelých na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddílu 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddílu 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxx xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx testy založené xx různých biologických xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx tento xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, že xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx nebo další xxxx negativní, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) XX xxxx je popsán x xxxxxx 4.

(6) XXX test xx xxxxxx v xxxxxx 6.

(7) XXXX test xx xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Biotest xx popsán v xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pozitivní, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx testy x x xxxxxxx potřeby xx provede xxxx xxxxxxx vzorků.

(10) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx, x kterých je xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus, xx dosáhne pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx vyšetření xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx zjistí xxx xxxxxxxxx a xxxxx xxx xx na xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx chorob, stáří xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx mohou xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx velmi odlišné xx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx; vadnutí xx xxxxxxx pomalé x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx rostou, x xxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Tím xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxx stonku xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx odumřít. Xxxxx xxxx listy x xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx řady příznaků xxxx xx internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx v xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx pupku. Prstenec xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx než xxxxxxx. Prvním xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx a xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x cév xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Vodivá xxxxxxx mohou zhnědnout x xxxxxxxx xx xxxxxxx jsou v xxxxx stádiu xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearurn. Xxxxxxxx mohou xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx část xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx blízko xxxxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx celý xxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiv: xxxxxx xxxxxx část xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. V xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxx praskliny, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxx xx x Xxxxxx xxxxxxxx několik případů, xxx střední xxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx houbová xxxx xxxxxxxxxxx infekce xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx i xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx příznaků jsou xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx 1 test. xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx testů xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorku vede x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx výkladu xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx použít x xxx vzorky s xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Validace xxxxx níže uvedených xxxxxxxxxxxx metod xx xxxxxxxx na testování xxxxxx o xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx bramborový extrakt xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx, Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx dezinfekční prostředky (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx prostředky xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx mytí xx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx příliš xxxxxx x xxxxxxxx xx xx provádět XXX test nebo xxxxx izolace.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo nožem xx xxxxxxxx na xxxxxxxx se odstraní xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx vyříznou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx brambor. Na xxxxxxx xx omezí xxxxxxxxxx xxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx xxx výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx zpracovány xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx xxxx nejdéle xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky bakteriální xxxxxxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx jsou xxx xxxxxxxxx výkrojku x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx vizuální xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx hlízy x podezřelými xxxxxxxx xx xxxxxxx korkovatět xx xxxx 2 xxx při xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx v karanténě xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx ve xxxxxx xx xxxxxxxxxx podle přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, musí být xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x pupkového xxxxx xxxxxxxx, xxxxx to xxxx xxxxx, uchovávají xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 hodin. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx saprofytů x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Výkrojky x xxxxxxxxx konce se xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů.:

a) xxxxxxxx xx xxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x třepají xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx než 24 °X nebo xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) výkrojky se xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40 xx) extrakčního pufru (dodatek 3), buď v xxxxxx xxxx rozdrcením x utěsněném jednorázovém xxxxxxxxxx sáčku za xxxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx homogenizaci xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx nutno xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření pro xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx rozlití xxxxx xxxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) x xxxxxx. Pokud má xxx xxxxxx XXX xxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xx jedno xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Dekantuje xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx pomalým xxxxxxxxxxx (při xxxxxxxxx 180 g po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx xx xxxxx přídavkem (10 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx frakce xx zahustí xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x po xxxx 10 minut) xxx xxxxxxx 4-10°X a xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Použije xx 500 µx xxx xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx solanacearurn x 500 µx xxx referenční účely. Xxxxx xx sterilní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx se během xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx extraktu, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx nezbytně xxxxx, aby se xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx zacházelo xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x pro sklíčka xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx bramboru

Poznámka.

Pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx vhodný xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx průzkumy, xxxx xx být xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx o xxxxxxxxx 1-2 xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx stonku xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx se krátce xxxxxxxxxxx etanolem 70 %, xxxxxxxx osuší xxxxx papírem x xxxxxxxxxxx x uzavřené xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Části xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx:

x) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx dobu 4 hodin xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °C nebo xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) části xx xxxxxxxx rozdrtí x xxxxxx maceračním xxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx zařízení. Xxxxx to není xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx purifikace xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx odstředěním podle xxxxxx v xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx rozdělí na 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx během xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x druhá xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) sterilního glycerolu xxx teplotě -16 xx -24 °C (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx nutné xxxxx xxxxxxxxx.

4. lF xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xX xxxx xxxx hlavní screeningový xxxx, protože byla xxxxxxxxx jeho schopnost xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx výsledek xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx xxxx XXX nebo XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xxxx výsledek xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX test xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, používá xx vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku lF xxxxx x polyklonální xxxxxxxxxxx může xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx protilátky xxxxx známému xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx NCPPB 2140. Xxxxxxxxxx xx určovat xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx protilátek. Xxxx je xxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx x optimální xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 buněk na 1 xx homologického xxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x při použití xxxxxxxx konjugátu fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (FITC) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx by měly xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Během xxxxx by xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx ředěni (XX) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx protilátky (viz xxxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx provádí xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx potřeby může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx odstranit přidáním 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 minut při 7&xxxx;000 g x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx peletového pufru. Xx xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Připraví se xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxx x homologickým xxxxxx xxxx s xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxxxxxxxx xx výluhu x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx v xxxxx.

Xxxxxxx infikované xxxxxxxxxx xxxxxx (uchovávané lyofilizací xxxx zmrazením při xxxxxxx -16 xx -24 °X) xx xx mělo xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx alikvotní části xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x více xxxxxx, xxxxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx test vzorků.

4.1. Xxxxxxx xx test xx připraví xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx prvního xxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x xxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Napipetuje se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx okénka x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100 x každého xxxxxxx xx řady xxxxxx. Druhou řadu xxx použít xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě nebo xxxxxxxx na xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx fixují na xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °X), xxx plamenem xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx pokynů xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X případě xxxxxxx xxx potom fixovaná xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx skladovat zmrazená x xxxxxx xxxx xx xx možná xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x xxxxxx 4.1 písm. a):

Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x XX xxxxx. X xxxxx xxxxx xx xxx xxx titr 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx titr 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), titr (X) x xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx test x oddílu 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (WD) xxxxxxxxxx v IF xxxxx. Pracovní xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. a) x oddílu 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx navlhčený papír. Xxxxx testovací xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx xxxx být xxxxxxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx se xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx v xxxxx IF. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, xxxxx by xxxxx xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx, a pečlivě xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx xxxxxx osušením.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx na xxxxx papír. Testovací xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxx se xxxxxxxxx x xxxxx jako xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx přebytečná xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx 0,1M xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx krycí xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x filtry xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx ve xxxx xxxxxxxx kolmých průměrech x kolem xxxxxx. X vzorků s xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky musí xxx xxxxx fluoreskující x zcela obarvené x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx test XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx může xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního testu. X peletách x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx stonku xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

4.4.4. Xxxxx se x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx a morfologií x titru xxxx xxxxxxxxx ředění protilátek xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx výsledku XX xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou morfologií xx odhadne průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx povinné další xxxxxxxxx.

x) Výsledek XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx méně než 5x10³ buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx nutné.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx pozitivní, xxxx být jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx IF xxxx. Xxxx xx XXXX test xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx provést x xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x glycerolu xxx xxxxxxx -16 xx -24 xxxx -68 xx -86 °X.

Xxxx negativní kontrola xx použije xxxxxxxxx xxxx extraktu ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xx (např. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 X xxxxxxxxxxx pufru (XX) x 3-5 denní xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx sklíčka x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx kmene nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx.

5.1. Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Připraví xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Napipetuje xx 100 µl každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 g.

5.1.3. Xxxxxxxx xx supernatant x xxxxxxxx se xxxxxx x 500 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx se x inkubuje xx xxxx noc xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx je 96 % etanol. Xxx xxxx použití xx xxxxxxxx peleta x xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X PB x 50 µl 96 % etanolu. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 minut.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx po xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µx 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 3, přičemž xx xxxxxxx 2 xxxxx vzorky na xxxxx sklíčko, x xx neředěný a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 M XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx být xxxxxx xxx teplotě -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X případě, že xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, odstraní xx etanol odstředěním, xxxxx se stejné xxxxxxxx 0,01 M XX a xxxxxxx xx protřepáním.

Obrázek 3. Xxxxxxxxxx na xxxxxxx XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx na vzduchu (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx plamenem.

V xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx přerušit x pokračovat v xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

5.2. Předhybridizace x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx lyzozymu xxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 mM XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx se xxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx roztát. Xxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxx přibližně 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx pokojové teplotě. Xxxxx se ponoří xxxxxxx xx demineralizované xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µg.ml^-1 x xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2 mM XxXx₂, xX 7,4) xx každé jamky x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 minut.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx po xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx sklíček.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx krabice xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxxx x 1x hybmixu (dodatek 7). Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °X po dobu xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µl xx 1 xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Sklíčka se xxxxxx na horkou xxxxxx xxx teplotě 45 °C x xx xxxxxxx ze 4 xxxxxx na xxxxxxx / sklíčcích xx přidá 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx 2 krycími xxxxxxx (24 x 24 xx) xxx, xxx pod ně xxxxxxx vzduch. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx komory x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x v xxxx xxx teplotě 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x sterilní xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 x 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) a 1 x 1/2 x hybmixu (167 xx 3x hybmix x 833 xx XXX). Každá z xxxx se xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx teplotě 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx sklíčka x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Spláchne xx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx v kádince x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Držák sklíček xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx a xxxxx xx inkubovat xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx krátce xx XXX a xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx filtračním xxxxxxx. Napipetuje xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (např. Vectashield, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo xxxxxxx) xx každé xxxxx x celé xxxxxxx xx zakryje velkým xxxxxx sklíčkem (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx prohlížejí xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Použitím xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx obarvené Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx morfologie x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx zbarveny. Xxxx FISH (xxxxx 9.4) musí xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlíží xx xxxxxx napříč xxxxx průměry v xxxxxxx úhlech a xxxxx xxxxxx. U xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, se xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, se xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx kontaminace musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx všechna xxxxxxx ve skupině xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx sklíček) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X peletách x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a xxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx morfologií x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnou Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx x XX xxxxx.

5.3.5. X úvahu xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx platné, pokud xxxx xxx použití XXXX filtru xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx a při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadne xx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx poli a xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx další xxxxxxxxx. Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

b) Výsledek XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x velikostí x xxxxxxxxxx typickou xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx kontrolách.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, musí xxx jako druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x je pozitivní, xx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx této xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxx tehdy , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaných xx vzorku xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx XXX. PCR xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx biologii, aby xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x PCR) by xx mělo vždy xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a XXX ze xxxxxx,

- xxxxxxx směs PCR.

Měly xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx části xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x nimž xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx ve xxxx x virulentního xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx možno xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx z pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků.

Aby xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx v odděleném xxxxxxxxx od xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků xx xxxx xxx xxxxx xxxxx bez xxxxxx. X případě použití XXX xxxxx xx xxxxxxx připravit extrakty x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Použijí xx xxxx popsané xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx kontrolní xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

X xxxxxxxxx cílové XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x dispozici xxxxx xxxxxx odstraňující inhibitory XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx optimalizována xxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Napipetuje xx 220 µl xxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 mM Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX EDTA [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml.

2. Přidá xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x umístí xx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx o xxxxxxx 95 °C xx xxxx 10 xxxxx.

3. Mikrozkumavka se xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx na 1 xx v 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) a xxxxxxxx xx při xxxxxxx 37 °C xx dobu 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Easy XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx se xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °C xx xxxx 30 xxxxx.

6. Přidá se 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx B (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx xxxxxxxx třepáním, až xxxxxxxxx sama poteče xx mikrozkumavky a xxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx třepáním, xx xx xxxxxxxxx sníží x xxxx xx xxxxx homogenní.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x po dobu 20 minut xxx 4 °X xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Přenese xx xxxxx fáze xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15 000 g xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µl 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx při 4°X, peleta se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Peleta se xxxxx uschnout na xxxxxxx xxxx x XXX xxxxx vac.

15. Xxxxxx se xxxxxxxxxxxxx x 100 µl xxxxxxxx vody (XXX) x nechá stát xxxxxxx 20 minut xxx pokojové xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -20 °C xx do upotřebení xxx PCR.

17. Xxxxxxxxx xxxx usazenina xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxx XXX se xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího DNA.

6.1.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, že jsou xxx xxxxxxxxxx XXX x kontrolních vzorků xxxxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx se testované xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolu (dodatek 6). Xxxxxxxx xx jeden xxxxxxxxx xxxxxx vzorku XXX (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx příslušná xxxxxxx xxxx xxx XXX x prostředí, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolu (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xx multiplexová xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx se xxxxx 5 µl xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek obsahující xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx stejná xxxxxxxx xxxx XXX, která xxxx použita do xxxxx XXX namísto xxxxxx.

6.2.5. PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx termocykleru, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx program XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx produktu XXX

6.3.1. Xxxxxxx se xxxxxxxxx PCR elektroforézou x xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx xx nejméně 12 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx směsi DNA x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx v Trisacetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 V xx xx. Xxxxxxx xx vhodný xxxxxx XXX, např. 100 xx ladder.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx x ethidium xxxxxxx (0,5 xx xx x) xx xxxx 30-45 xxxxx, xx použití vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx s tímto xxxxxxxxx.

6.3.3. V obarveném x XX (xxxxxx xxxxxx délky, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x xxxxxxxxx velikosti x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. U xxxxx xxxxxx nálezů se xxxxxxxxxxx xxxxxxx amplikonu XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx s xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentu xxx UV prosvícením xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x neštěpenou x xxxxxxxx pozitivní kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx negativní, xxxxx amplikon xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebyl xxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích (x xxxxxxx vícenásobné XXX x xxxxxxxxxxx interními xxxxxxxxxxx xxxxxxx: druhý xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx typický xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx xx požaduje), xx předpokladu, že xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx získán x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, ale x xxxxxxxxx kontroly x Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxx amplikonů.

Lze xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx byl očekávaný xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx xx lilku xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie xx 1 xx xxxxxxx x extraktům xx xxxxxx, xxxxx xxxx testovány x xxxxxxxxxx (příprava xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx x optimálních xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx nepřítomnosti příznaků x poskytují také xxxxxxxxxx základní konfirmační xxxx.

Xxx omezení nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx optimální růstové xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x pěstování xxxx xxxxxxx v Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx lilku xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx rostliny xx xxxx 2-3 xxxxx xx úplného xxxxxxxxx třetího xxxxxxx xxxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety i xxxxxxxxx inokulaci, bude xxx níže xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (pro xxxxxxxxx o xxxxxxx 10 cm xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x rozměrech 5 xx xxxxxxx, 10 xx šířky x 15 xx xxxxx). Xxx každý xxxxxxxxx vzorek xx xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx možno xxxxxxx xx místě xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Pomocí xxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxxx lístky x xxxxxx pravým listem xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx stonku.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxx skalpelu x xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx štětečkem xx xxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx. Zbytek xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxx.

7.2.4. Řez se xxxxxxxx xxxxxxxx vazelínou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx xxxxxx xxxxxxxx držené xxxxx xxxxx se napipetuje xxxx xxxxxxx xxxxxx x první pravý xxxx kapka (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) suspendované xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx skalpelu xx xxxxx sešikmený xxxxx (x xxxx xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx x xxxxxxx přibližně xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx xx xxxxx v xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx se xxxxxxx sterilní xxxxxxxxx x xxxxxxxx stříkačky.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx snížení vnitřního xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx se inokulují xxxxx xxx děložními xxxxxx xxxxxx injekční xxxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Jako xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 nebo 7.4) vodní xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxx xx to xxxxx i xxxxxxxx x přirozeně infikovaných xxxx bramboru.

7.6. Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx inokulační xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Po xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxx (dodatek 8) xx xxxx xx 4 xxxxx xxx teplotě 18-24 °X. Xxxxxxxx xx inkubují xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x zalévají se xxx, aby xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx vadnutí xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxxxx xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Aby xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx růstové xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx místa se xxxxxxx přísné oddělení xxxx zacházení x xxxx. Pokud musí xxx rostliny xxx xxxxx xxxxxx inkubovány xxxxxx xxxx, oddělí xx xxxxxxxx přepážkami. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx a jiné xxxxxxxxxx xx věnuje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, protože by xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx osmi xxxxx xx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, které xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx mezižilková xxxxxxxxx (xxxxxx turgoru). Xxxxxx xxxxxxx xxxx zprvu xxx tmavozelené nebo xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx zesvětlí. Xxxxxxx xxxxx mezi žilnatinou xxxxxx xxxxx mastně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx mívají často xxxxx xxxxx okraj. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxx xx příznaků, xxx xx xxxxx naděje xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx infekci odrůst. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx rostliny xx xxxx xxx xxxxx x xxxx krátce xxxx xx. Xxxxxxx xxxxx také xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx z xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. carotovora x X. xxxxxxxxxx xxxxx. atroseptica, Xxxxx xxxxxx var. xxxxxxx, xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx vadnutí xxx odlišit xx xxxxxxx způsobených xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx od Xxxxxxx xxx

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx být xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx pletiva zvadlých xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xX xxxx XXX xx xxxxx x xxxxx x xxxxxxx se xx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) médiu (xxx xxxxx 8). Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se identifikují x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 a 10).

7.10. Xx určitých okolností, xxxxxxx xxxxx nejsou xxxxxxx podmínky optimální, xx může xxxx, xx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx latentní xxxxxxx dokonce x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 xxxxx. Pokud nejsou xx 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxxxx (selektivních) xxxxxxx postupem xxxxx xxxxxx 8. Čisté xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 9 a 10).

8. Izolace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx potvrzena xxxxx tehdy, je-li xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx příznaky napadení.

Mohou xxx xxxx xxxxxxx xxxxxx rostoucí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx xx nedoporučuje provádět xxxxxxx přímo z xxxxxx pletiva hlízy (3.1.5) xxxx stonku (3.2). Xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxx resuspendované pelety x xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx ze všech xxxx xxxxxxxx nebo xxxxx stonku x x rostlin lilku xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx byl xxxxxxxxx výsledek x xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxx 7.9). Pokud xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx lilku, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.l.2.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx desetinná ředění xxxxxxxx 106 xxx xx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4053 xxxx PD 406). Xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminace, připraví xx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx každou xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx by se xxxx xxxx použitím x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx růst xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx materiál se xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx vzorky.

8.1. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Xx 100 µl xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx x lilku vejcoplodého xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x neředěné xxxxxxxxxx xxxxxx xx obvykle xxxxxxxx xxxxx náročným xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x konkurenci xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx je xxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentracích, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx patogen xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxx 1/100 až 1/10&xxxx;000 xx XXXX médium xxxx NCP-88 xxxxxx (dodatek 5), za použití xxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxx (hokejek) x xxxxxxxx roztěrů.

8.1.3. Desky xx xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °C.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx zahrnuje xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x počítání xxxxx xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx třech xxxxx, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx následnou xxxxxxxxxxxx xx xx měly xxxxxxxx na YGM xxxxx; inokulace x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx média xxxxxx přerostlá, xx. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Kolonie xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx médií (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx dextrózový agar (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx,

- xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx solemi.

Inkubace xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X xx xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roste xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx velikosti špendlíkové xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Opětovně se xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. U xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx zlepšuje. Typické xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, někdy žluté, xxxxxxxx, xxxxxx, vyvýšené, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, s rovnými xxxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Gramovo xxxxxxx (dodatek 9) může pomoci xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxx oddíl 9) x provede se xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Identifikace

Čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

V xxxxxxx potřeby se xxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx známý xxxxxxxxxx kmen.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X x xx xxxxx xxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x žádnému xxxxx, xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolu xx xxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx musí xxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Očekávaný xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) inertní xxxx xxxxx oxidační

Aktivita oxidázy -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx ureázy -

Xxxxxx X₂X -

Tvorba xxxxxx -

Využívání xxxxxxx -

Xxxxxxxxx škrobu - xxxx slabá

Růst při 37 °X -

Xxxx x 7% NaCI -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX test

a) Xxxxxxxx se suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x pufru na xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xX xxxxxx (oddíl 4).

x) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX xxxx xxxxxxx odpovídá xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx vodě (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx suspenze xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx vřící xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100 °X xx xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxx -16 až -24 °X xx xx xxxxxxx.

x) Pro xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx použijí xxxxxx xxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

d) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx jsou amplikony XXX xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx se suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Provede xx xxxxxx FISH (xxxxx 5)

x) Test XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx stejné xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx pěstuje na xxxxxxxxxx-xxxxxxx agaru (Oxoid) xx dobu 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx identický x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Anteiso X, 15:0 lso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx o xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Micrococcus xxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxx, ale 15:1 Xxxxxxx X xx xxx xxxx xxxxxxxx neobvyklá kyselina, xxxxx se xxxx xxxxxxxxx xx všech Xxxxxxxxxxx spp. x xxxxxxx 1-5 %. X Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx xxxxxxx pohybuje xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml x XXX.

x) Provede xx xxxx postupem xxxxx Smith x xxx., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx konečné potvrzení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látky x xxxxxxxx pozitivního xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx xx při teplotě 18-24 °X xxx xxxxxxxxxxx světle a xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx vyschnutí. X čistých xxxxxx xx xxxx během 2 xxxxx nastat xxxxxxx vadnutí, xxxxx xxxxxxxx, které xx xxxxxxxx této xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx se xxxx xxxxxxxxx xx 3 týdny xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx vejcoplodého, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Jestliže se xx 3 týdnech xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx být kultura xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx části xxxxxx 2 cm xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx rozetřením xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 xxx xxx teplotě 21-23 °X x sleduje xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx podílející xx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Gesundheit und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Linec	Rakousko
Departement Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Science Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Plant Xxxxxxxxxx Centre	Aas	Norsko
Direcção-General xx Xxxxxxçãx das Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx za biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx osoby: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Příprava pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx výkrojků xxxxx PCR/IF a XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx kultura xxxxxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (NCPPB 4053 xxxx XX 406) na základním xxxxx MTNA x xxxxxxxxxx xx x 10 mM fosfátového xxxxx xxx získání xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx schopných xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx dosáhne xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zakalené xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 mn.

Výkrojky pletiva xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx s xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx jisté, xx je xxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx obvyklým xxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx v 10 xx.

Xxxxxxxx se 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx opatří xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, xxxx xx získá 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx PCR xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx zkušebních xxxxxx.

Xxx XX a FISH xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx zkušebních xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x PCR xxxx xxx C. x. subsp. sepedonicus xxxxxxx v xxxxxxx x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxx zjištěn v xxxxx x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx pufr(50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx x rostlinných xxxxx xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx rozpustí, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX silikonový xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 ml
Tetrasodiumpyrofosfát	Antioxidační xxxxxxx	1,0 g
Polyvinylpyrrolidon-40 000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50 x
(*) xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Tento xxxx xx xxxxxxx xxx resuspenzi x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 min.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, zkontroluje xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X po xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx pufr xx xxxxxxx k xxxx xxxxxxx. Xxxxx se 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx jako xxxxx roztok xx xxxxxx xxxxxxx xx XX testy x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Laboratories) nebo Xxxxxxxxx® (Leica).

Dodatek 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx lF x XXXX pozitivních xxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx typických fluoreskujících xxxxx x jednom xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx mikroskopického xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx pole xx xxxxxxx x více xxxxxxx a

s = xxxxxx xxxx objektivu.

s = πi²/4G²K²,

kde x = xxxxxxxxxx pole (x rozmezí xx 8 - 24 xxxxx typu okuláru),

K = tubusový xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx resuspendované xxxxxx v každém xxxxxx x

X = xxxxxxxxx faktor xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxx X. m xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Obecná růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Nutrient xxxx = NA)

Živný xxxx (Difco)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x provede xx sterilizace v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = NDA)

Difco xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x autoklávu při 121 X xx xxxx 20 min.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Yeast xxxxxxx xxxxxxx agar = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx dobu 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx medium = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
D(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . H2O	0,015
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x provede se xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx v autoklávu xxx 115 °X xx dobu 20 xxx.

x) Validovaná xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud xxxx uvedeno xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx složky xxxxx x XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7H2O	0,1 x
XxXX4 . H2O	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx č. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xX se xxxxxx xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (při 121 °X xx xxxx 15 min.) x xxxxxxxxx xx 50 X xx přidají xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx X 0,01 x.

X xxxxxx xx nechají xxxxxxx antibiotik: trimethoprim (Xxxxx) a xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % metanolu, xxxxxxxxxxxx X (Xxxxx) (1 xx/xx) v xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx jsou sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx antibiotik xx trvanlivost 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 g
D-manit	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 g
MgSO4 . 7X2X	0,25 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx se rozpustí,upraví xx pH xx 7,2. Xx autoklávování x ochlazení na 50 °X se xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, nalidixic xxxx (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 g.

Antibiotika xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx acid x 0,01 M XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, polymyxin X xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 měsíce. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. x. subsp. sepedonicus xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx skupinou xxxxxxxxx xxxxx bakterií.

1. Vícenásobný XXX xxxxxxxx s xxxxxxx XXX kontrolou (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xx xx -3'

primer XXX-X 5'- tac xxx xxx xxx xxx xxx xxx x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- gag gca xxx xxx ggt xxx xxx tgc -3'

xxxxxx NS-8-R 5'- xxx gca xxx xxx cct acg xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z DNA X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 bp (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18S xXXX 377 bp (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725 μx
10x XXX pufr (1) (15 mM XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx NS-8-R (10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μl

(¹) Metody xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Taq polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x Xxxxx XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X a XX-8-X byla xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x purifikace DNA xxxxx Pastrika (2000) (xxx oddíl 6.1 xxxx. x) x 6.2). Při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx koncentraci xxxxxxx.

1.3. Reakční xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx teplotě 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 cyklů xx) 1 xxxxxx xxx teplotě 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °X (připojení xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 xxxxxx xxx teplotě 95 °X (denaturace DNA xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °X (připojení xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 minut xxx teplotě 72 °X (závěrečná prodlužování

ix) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx cyklerem XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx použití jiných xxxxxx xxxx xxx xxxxx modifikace xxxxx xxxxx ii), iii), xx), v), xx) x xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx restriktivním xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x XXX X. x. xxxxx. sepedonicus produkuji xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx s xxxxxxx Xxx XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx získané z xxxxxxxxx specifického xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx mají xxxxxxx 282 bp a 220 bp.

2. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx roztok)

Bromfenolová modř 5 x

Xxxxxxxxxxx voda 50 ml

Nanášecí xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx modř 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx xx zředí xx 1x.

Xxxx komerčně xxxxxxxx (xxxx. Invitrogen nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Validovaná činidla xxx FISH xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx ctc xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Fixační roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! POUŽÍVAT RUKAVICE X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX V XXXXXXXXX.]

x) Zahřeje xx 9 ml xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX na 7,0 přidáním 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zkontroluje pH x x případě xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: V XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx a xxxxxxxx xx chráněný xxxx xxxxxxx při teplotě 4 °C do xxxxxxx použití.

iv) Poznámka:

Alternativní xxxxxxx xxxxxx: 96 % etanol.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 M

Tris-HCl 60 xX (xX 7,4)

XXXX (sterilizovaný přes xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx se množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 ng/μl)	4,5	18,0
sonda CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x temnu xxx xxxxxxx -20 °X. Během xxxxxxx xx xxxxx je xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Na₂HPO₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, zkontroluje xx pH a xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx s plně xxxxxxxxxxx děložními xxxxxx (10 xx 14 xxx) se přepichují xx xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx by xx xxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xx následujících xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx přirozená xxxxx dne, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Roztok xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx se 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx v 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 ml xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 g

Destilovaná xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx společně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Xxxxxxx xx xx vody x xxxxxxx se x uzavřené xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx barviva

Zásobní xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx se x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx přípravu xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx barvení

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Krátce xx xxxxx pod xxxxxxx xxxxx.

4. Zalije xx Xxxxxxxxx jódovým xxxxxxxx x nechá xx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx papírem.

6. Xxxxxxxxx xx pomocí xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx vyplavuje xxxxxxx, xxxx ponořením xx xxxxxxx pohybování xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Opláchne xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x nechá xx působit 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x vysuší se xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx bakterie xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zbarví růžovočerveně.

(¹) Xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx of the xxxxxxxxx xxx diagnosis xx the ring xxx xxxxxxxxx Corynebacterium xxxxxxxxxxx in xxxxxxx xx potato xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxx Communities, Luxembourg. Xxxx XXX 11&xxxx;288 XX, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Xxx. Pl. Xxxx., 49, 213-218.

3. Dinesen, X. X., 1984. Xxx extraction xxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx from diseased xxxxxx tubers. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Doetsch, R. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx bacteriology, Xxxxxxxx Xxxxxxx for Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Hugh, X. x Leifson, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx versus xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Bact., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx fattyacid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. X. a J. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX method xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Corynebacterium sepedonicum) xx potato. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, pp. 1-10.

8. Xxxxxxx, H. x X. Rudolph, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Journal xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx the xxxxxxx reaction. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx Z.; Xxxxxxx, X x X. X. Sands, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Bact., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. X., X. Billing x A. C. Xxxxxxx, 1966. A xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx fluorescent xxxxx xxxxxxxxxx pseudomonads J. xxxx. Bact., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, R. X. x P. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx of xxxxxx ring rot (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Kotth.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. xx Boer, 1995. Xxxxxxxxx of Polymerase Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx RNA xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Phytopathology, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Xxxxxxx, B., X. x X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx of xxxxx unique XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subspecies by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxx tubers xx xxxxxxxxx XXX with xxxxxxxxxxxxxxx of xxxx XXX. European Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Ramamurthi, X. S., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx on xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx and xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx by X1X-XXX xxx xx automated xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx detection xxxxxx. Xxxxx Disease 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx plant pathogenic xxxxxxxx. Schaad [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X xxxxx xx the identification xx the xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx and Xxxxxxx Company, Baltimore.

22. Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, XX., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxx the BOX-A1 Xxxxxxxxx solanacearum primer xxx rapid xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, P. X. X. xxx X. G. Xxxxxxx, 1974. X study xx xxxx reproductibility xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: report xx Pseudomonas xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Wullings, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, A. X.; Xxxxx, J. X. x X. D. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Ralslonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx rot of xxxxxx, by xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23s rRNA-targeted xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX DIAGNÓZY, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX HNILOBY

Předložené xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx různé xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx hnědé xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x některých dalších xxxxxxxxxxxxx rostlin,

ii) detekce Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx vody x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX ZÁSADY

Optimalizované xxxxxxxxx xxx různé xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou xxxxxxx x dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx optimalizaci x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx organismu x xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx kontrolních materiálů, xx xxxxx pracovat xx xxxxxxxx karanténních xxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na odstraňování xxxxxx a za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jako stanovené xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x činidly x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, např. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x v xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x výskytu, xxx xx uvedeno x §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx vzorku, xxx je znázorněno x níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx test (xxxx XX, PCR/FISH, xxxxxxxxxx xxxxxxx) musí xxx xxxxxxxx druhým xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx podezření xx xxxxxxx R. solanacearum x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Pokud xx x xxxxx screeningový xxxx pozitivní, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x musí xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx negativní, xxx vzorek xxxx xxxxxxxxx za infikovaný X. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx izolaci x xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramů

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx vadnutí (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx x infikovaného vodivého xxxxxxx xx selektivní xxxxx xxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.1.

2) Rychlé diagnostické xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxx. Negativní xxxxxxxx xxxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx xxxxx slizu xx xxxxxx xxxxxxx stonku xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx aglutinační testy xxxxxxxxxxxxx slizu nebo xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx IF xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx nebo xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx FISH xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xx popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Test XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx pletiva vykazujícího xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx je obvykle xxxxxx xxxxxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx metodou zřeďovacích xxxxxxx (postupným xxxxxxx) (xxx v xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx selhat xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx saprofytických xxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xx selektivních xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx je nepovinná, xxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Test xxxxxxxxxx xx popsán x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx latentních xxxxxxx x hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x dále, x xxxxxxx izolace typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx kultura je X. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx dostačující k xxxx, aby xxx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Screeningové xxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx kontroly x xxxxx sérii testů.

1) Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 hlíz, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx provedena izolace x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X případě, xx je test xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx nezbytný xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

4) Test IF xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx izolace je xxxxxx x oddíle 6.1.4.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX xx popsán x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx je xxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale izolační xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku, xxxxxxxx xxxxxxx test x xxxxxxx vzorky.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur xxxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxx testů xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx v oddíle 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx x identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rostlin jiných xxxxxxxxxxxxx rostlin nevykazujících xxxxxxxx

1) Xxx oddíl 3.2.1., kde jsou xxxxxxx xxxxxxxxxx velikosti xxxxxx.

2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx patogenu xxxx popsány x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx dva xxxxx založené na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí být xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. X případě, xx xx test pozitivní, xxxxxxxx se pro xxxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx více screeningových xxxxx založených na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxx-xx druhý nebo xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx izolační xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX je popsán x oddíle 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx FISH xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Kultivace xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx screeningových testech xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, x kterých xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx fáze infekce x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx rozpozná xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx během xxx, xxxxxxx v xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. V xxxxxx xxxxxx vadnutí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, ale xxxxxxx žloutnou x xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x xxxxxxx listů xxxx. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xx rychle xxxxx xxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx rostliny. Z xxxxxxx svazků napříč xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx obvykle vytéká xxxxx a mléčný xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Při ponoření xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx vody xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx vlákna xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx bramboru xx třeba xxxxxxxxx xxxxxx u xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X rané fázi xx xxxxxxx xxxxx xxxxx láhvově xxxxxxx xx xxxxxx hnědého xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx kterého po xxxxxxxx minutách začne xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx výrazněji xxxxxx x xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx vně xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x x xxxx může xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Na xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Prvním xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx nejmladších xxxxx. Xx příznivých xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °C, xxx xxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti) xx xxxxx několika xxxx xxx rozvine xxxxxxxx xxxxx směrem xxxx x vadnutí xx jedné xxxxxx xxxxxxxx xxxx celé xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx úplným xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °C) xxxxxxxx tolik xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx může xxxxxx xxxxx xxxxx postranních xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx od spodu xxxxxx, které xxxx xxxxxxxx odumírání cévního xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx bílý xxxx xxxxxxxxx bakteriální xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x X. nigrum. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx teploty xxxx xxxxxxxxxxx 25 °X xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxx (např. x xxxxxxxx S. nigrum xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx). Při xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx x rostliny xxxxxxx. Xxxxxxxxxx rostliny X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx a xxxxxx xx vodě, xxxxx vykazovat xxxxxxx xxxxxx hnědé zbarvení xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. X řezu xxxxxxx svazků xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx xxxxx tvořit xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, x to x xxx absenci příznaků xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx napomoci xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx testů:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx stonku

(Viz 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PHB v xxxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx fixovaných skvrn xxxxxxxxxxxxx slizu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nilskou xxxxx X nebo xxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (xxx oddíl 6.1.5.), xxxx FISH (viz xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx oddíl 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx při izolaci

a) Xxxxxxx se xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se x xxxxx množství xxxxxxxx destilované vody xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxx se 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx SPA; xxx dodatek 2) a/nebo Xxxxxxxxx tetrazolové xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx validované xxxxxxxxxx médium (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx samostatné xxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 x xxxxxxxxx kontrole.

d) xxxxxxxx xx 2-6 xxx při teplotě 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx vytvářejí xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx perlově krémově xxxx, xxxxxx, nepravidelné x xxxxxxx kolonie, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx nefluidní máslovité xxxxxxx, které xxxx xxxxx krémově xxxx.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x média XXXX xxxx spirálky xxxxxx červeně zbarvené. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxx temně xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx izolátech xxxx xxxxxxx v xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xx vzorcích xxxx bramboru

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx bramboru

3.1.1. Xxxxxxxx vzorků

Poznámka:

- Standardní xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx na xxxxx xxxx. Intenzivnější xxxxxxxxxx vyžaduje více xxxxx xx vzorcích xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxx xxxxxx použít x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx všech níže xxxxxxxxx zjišťovacích metod xx založená xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx popsaný xxxx xxxx být xxxxxx použit xxx xxxxxxxx xxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Nepovinné xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx

x) Inkubace xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °X xx dobu xx 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx proveden XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx prostředky xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx postup mytí xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx ve xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxx PCR xxxx přímá xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx čistého a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx zeleninu xx odstraní xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx bylo viditelné xxxxxx pletivo. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx nezahrnující xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) hlízy x xxxxxxxxxxx příznaky hnědé xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx jsou xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx příznaky podezření xx xxxxxx hnilobu, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx xx xxxx xxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 xxx xxx pokojové xxxxxxx, aby xxxxx xxxxx xx zkorkovatění (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx III.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx se uloží xx nepoužitých nádob xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou uzavíratelné xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že xxxxxx xxxx xxxxx používány, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx x dezinfikovány xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx konce okamžitě. Xxxx-xx to xxxxx, xxxxxxxxxx se x xxxxxx xxx přidání xxxxx; x xxxxxx xxxxxxx 72 hodin xxxx xxx pokojové xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx z pupkových xxxxx xx zpracují xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (přibližně 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxxxx xx v xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (přibližně 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 4) xxx x mixéru (xxxx. Xxxxxx nebo Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x utěsněném xxxxxxxxxx xxxxx xx jedno xxxxxxx (např. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Bioreba, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) pomocí gumového xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx rozlití xxxxx xxxxxxxxxxx procesu. Xxx každý xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nože (ostří) x nádoby. Při xxxxx XXX xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx nádobách xxxx v mlecím xxxxxxxxx. X xxxxx XXX se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx na jedno xxxxxxx.

3.1.1.3. Supernatant xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx xxx pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx teplotě 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), filtr xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7 000 x po dobu 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx rozvířila xxxxxx.

3.1.1.5. Peleta xx xxxxxxxxxxxx v 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Použije se 500 µl pro X. xxxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx referenční xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) k 500 µl xxxxxxxxxx xxxxxxx části a xx xxxxxxxxx části xxxxxx, promíchá xx xxxxxxx a uloží xx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (měsíce). Extrakty xx xxxxxxxxxx během xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx zmrazení x xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx přeprava xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx x doručením xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Je xxxxxxxx xxxxx, aby xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx x vzorky R. xxxxxxxxxxxx byly xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx sklíčka XX x všechny xxxxx.

3.1.2. Testování

Postupové xxxxxxxx x popisy xxxxx x optimalizovaných protokolů xxxx x příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (viz xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Testy ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx hostitelských rostlin

3.2.1. Příprava vzorků

Poznámka:

Pro xxxxx xxxxxxx latentních xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx použít xx xxxxxxx vzorky x xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx částí. Xxxxxxx-xx se průzkum, xxx by xxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx sterilní xxxxxx xx xxxxx 1-2 xx dlouhé xxxxxx xxxxxx podle následujícího xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Čistým xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 cm x xxxx každého xxxxxx xxxx nad úrovní xxxx.

Xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx nejspodnější xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxx xxxxxxxx uříznutý hned xxx xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxx. Odebere xx nejspodnější, 1 xx dlouhý díl x každého výhonku.

Jiné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami se xxxxxxx 1 cm xxxxxx díl x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx nad úrovní xxxx. X lilku xxxxxxxxxx (S. dulcamara) xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx se xxxxxxxx 1-2 xx xxxx xx stonku xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx kořeny.

Při xxxxxxxxxx xxxxxx oblasti xx doporučuje testovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x počtu nejméně 10 xxxxxxx xx 1 vzorkovací místo xxx xxxxxx potenciální xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx rostlinu. Xxxxxxx xxxxxxxx bude xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx x podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxxxx po xxxx xxx u xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx patří xxxxxxxx rostliny bramboru, Xxxxxxx xxxxxxxxx, S. xxxxxx, Datura xxxxxxxxxx x další zástupci xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. a Portulaca xxxxxxxx. Některé xxxxxxxx xxxxxxxx druhy, které xxxxx hostit xxxxxxxx X. solanacearum xxxxxx 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx pilosa, Cerastium xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx. S. xxxxxx., Tussilago farfarra x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx xxxx je xxxxx xxxxxxx vizuální xxxxxxx xxxxxxxxx příznaků (xxxxxxxx xxx nebo xxxxxxxxxxx sliz). Xxxxxxxx xxx stonku x xxxxxxxx se xx xxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx (xxx oddíl 2.).

3.2.1.2. Části xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx a xxxxx vysuší xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) zalijí xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °C nebo 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx ihned xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Bioreba) x přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx gumového xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxx). Xxxx-xx to možné, xxxxx xx xxxxx xxxxxx x chladu xxxxxxx na 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx má trvat 15 minut, se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxx filtrací xxxxx xxxxxxxxxxxxx popsaným v xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vzorkový xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxx xxxxxx díly. Xxxxx xxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X a xxxxx díl xx xxxxxxxx x 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx) xxx případné xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

Test XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx PCR (viz xxxxx 6.1.6.)

Xxxx FISH (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx vodě

4.1 Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Viz xxxxx 4.2.1., xxx jsou xxxxxxx doporučené postupy xxxxxxxxxx.

(2) Metody koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx izolačnímu xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

(4) Biotest xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Metody xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. a 6.1.6.

(6) Xxxxxx obohacovacího xxxxx XXXXX jsou xxxxxxx v xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx popsána x xxxxxx 2.3.d.

(8) Kultivace xxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xx-xx podezření, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx populace xxxxxxx xxxxxxxxxxxx izolace, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx zředění xxxxxx sterilní vodou.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx schéma detekce xxxxxxx v xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x detekci xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxx xxx použito x testování vzorků xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx brambor a xxxxxxx xxxx. Očekávaná xxxxxxxxx detekce xx xxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx substrátu. Xxxxxxxxx testu xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, kterých je xxxxxx xxxxxx více x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxx x xxxxxxxxx xxxx. Zatímco xxxx xxxxxxx schéma xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx nižší. X tohoto xxxxxx xx doporučuje testovat xxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx xxxxxxxx čistícího xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxx saprofytických xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Omezení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx schématu by xxxx být xxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx spolehlivosti x xxxxxxx získání negativních xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxx schéma používá xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x povrchové xxxx, xx třeba xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x podobnému mapování x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx nejspolehlivější x xxxxxx pozdního xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxx teplota xxxx xxxxxxxxxx 15 °C.

- Xxxxxxxxx vzorkování x xxxxx xxxx během xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx určených xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx povětrnostních xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx dešťů x xxxxxxxxx vodního xxxx může xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x tím i xxxxxxxx xxxxxxx patogenu.

- Xxxxxx xxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxx přítomny.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx vzorkovacích xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx do sterilních xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30 xx pod xxxxxxxx x 2 x xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x místa výtoku xxxxxxx vody. Doporučená xxxxxxxx vzorku xx 500 ml. Je-li xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx velikost, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx dílčí xxxxxx x velikosti xxxxxxx 30 ml. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx nejméně 3 vzorkovací xxxxx xx každé 3 xx xxxxxxx toku x xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx a xxxxx (4-10 °X) atestují xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx metod:

a) Xxxxxxxxxx xx 30-50 ml xxxxx xxxxxx při 10&xxxx;000 x xx xxxx. 10 minut (xxxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx možno xxx xxxxxxx 4-10 °X, slije xx xxxxxxxx nad xxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx x 1 xx xxxxx (dodatek 4).

b) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx membránu (minimální xxxxxxxx pórů 0,45 µx) x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx v 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx vhodná pro xxxxx objemy xxxx, xxxxx xxxxxxxx malý xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx nedoporučuje x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx diagram a xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby v xxxx

5.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x půdě

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx podezření xx xxxx saprofytické xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, opakují xx xxxxx selektivní izolace xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur X. solanacearum xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Metody xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. solanacearum x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx popsané x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, ale xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxxx brambor nebo xxxx z xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx detekci xxxxxxx xxxx nepravidelně rozptýlených xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx xx mohou xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx získaných negativních xxxxxxxx x xxxx xxx sestavování přehledů xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx patogenu x xxxx xxxx xxxx xx třeba xxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx tohoto xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx vypěstování xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx sledování, xxx xxxx xxxxxxxxxx, ale x xxx xxxxxxx xxxx metody xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx xxxxx půdy xx xx mělo xxxxx standardními principy xxxxxxxxxxx pro vzorkování xxxxxx. Xx jeden xxxxxx se shromáždí 0,5 až 1 xx xxxx ze 60 xxxx na xxxxx 0,3 xx x hloubky 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx počet xxxxxxxx xxxx xx 120 x xxxxxx 0,3 xx. Před xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12-15 °X. Kal xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x kanalizace xx xxxxxxxxxx shromážděním xxxxxx 1 kg z xxxx reprezentujících xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 g xxxx xxxx xxxx se xxxxxxxx xxxxxxx třepačkou (250 xx./xxx) v 60-150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 hodin. Xx-xx xxxxx, přidání 0,02% sterilního Tween-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx kamínků může xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Testování

Postupový xxxxxxx x xxxxx testů xxxx x příslušném xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Test xx xxxxx xxxxx xx stonku

Přítomnost X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxx xxxxxxxxxxx jednoduchý xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx xx stonek xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Řez xxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx. Sleduje xx, xxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx kmenu biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx XXX negativním xx.

3. Roztěry xx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxx každého xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx se xxxxxx xxx nilskou xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx pozorování xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx nilskou modří:

a) Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx se odsaje xxxxx papírem.

c) Roztěr xx zakápne 8% xxxxxx roztokem xxxxxxxx xxxxxx a xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Krátce xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx xxxxx papírem.

e) Xxxxx se navlhčí xxxxxx vody x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 xx xxx xxxxxxxx xxxx vodní imersí xx zvětšením 600x xx 1000x s xxxxxxxx objektivu xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx se, xxx xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx pozoruje x xxxxxxxxxxxxx normálním xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx sklíčka 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx černi X v 70% xxxxxxx a xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

b) Xxxxxxxx xx barvící xxxxxx x xxxxxx xx opláchne xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx x odsaje xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Sklíčka xx xxxxxx krátce xx xylolu a xxxxxx se xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx zdraví xxxxxxxx, xx xxxxx dodržet xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x nechají 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Upozornění: xxxxxxxx xx zdraví xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x pracovat x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx opláchnou xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx voda xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

x) Xxxxxx se obarvený xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx světlem xxx xxxxxxxx imersí a xxx zvětšení 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PHB xxxxxxx x xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x růžově xxxxxxxxxx xxxxxxx buněk.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x bakteriálním slizu xxxx x extraktech x pletiv x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx validovaných xxxxxxxxxx (viz dodatek 3) xxxxxxxxxx příslušnými obarvenými xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxx xxxxxxxx dostupného xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Smíchají xx xxxxx suspenze xxxxxxxx protilátky a xxxxxxxxxxxxx xxxxx (přibližně 5 µl xxxxx xxxxx) na okénku xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použitím suspenzí xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx v xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Očkování xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx xxxx metoda xxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx přídaných xx extraktů ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx selektivní xxxxx půda, např. XXXX (ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xx al., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx bakterií xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, kolonie X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx atypickou morfologii, xxxxxxxx Petriho misky xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx přítomny xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, měl xx být vzorek xxxxxxxxx znovu xxxxxx xxxxxx testu.

Pří xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx velmi xxxxxx. Xxxxxx je xxxx xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx od -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx kontroly se xxxxxxxx xxxx desetinné xxxxxx ze suspenze 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx možné kontaminace xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x testování.

U xxxxx xxxx xxxxxxxxxx šarže xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxx použitím x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx nejdříve xxxxxxxxxx xxxx vhodnost pro xxxxxxxxx patogenu. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx xx ředění x xxxxx xxxxxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx vyloučeny. Xxxxxx xx 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx xxx každé xxxxxx.

2. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 28 °C. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx jejich xxxx x pak xx xxxxxxx kontrola denně xx 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx xxxxxx xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xx 3 xxxxx inkubace xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx na xxxxx médiu xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, a proto xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx živnou půdu., xxx xx získaly xxxxxxxxx kolonie (viz dodatek 2).

4. Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (pH 6-8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x temnu xxxx xxxxxxxxxx ve vhodném xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx -68 až -86 °X nebo xxxxxxxxxxxxx.

5. Provede se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 6.2.) x xxxx patogenity (xxx xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx očkováním xx xxxxxxxxxx média.

Test xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 xxxxx xxxxxx zpozorovány xxxxx bakterie xxxx xxxxxx xxxxxxxx žádné xxxxxxxxx kolonie xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx , xx předpokladu, xx xxxxxxx x xxxxxxxx jinými bakteriemi x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx pro obohacení, xxxx. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx lze xxxxxx xxx selektivní zvětšení xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x extraktech xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx dojde i xx xxxxxxx potenciálních xxxxxxxxxx XXX testu (1:100). Obohacení X. xxxxxxxxxxxx však xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx saprofytických organismů, xxxxx bývají xxxxx xxxxxxxx xxxx obohaceny. X tohoto xxxxxx xxxx xxx izolace X. xxxxxxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxx obtížná. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxx populací xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx saprofytů, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx použít xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. U xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx ze xxxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA může xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 ml xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx se 72 xxxxx xxx teplotě 27 až 30 °X v xxxxxxx xxxx statické xxxxxxx x xxxxxxxxxx uzávěry, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx testů XXXXX xxxx XXX xx xxxxx dobře xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx se zachází xxxx xxxxxxxx jako xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx z xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických bakterií, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx obohacením extraktů xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxx zvyšování xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx IF jako xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx test XX xxxx hlavní x xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxx xxxx xxxxxxx, PCR xxxx XXXX. Jestliže xx test XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx xxxxx xxxxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx určit xxxx xxx xxxxxx novou xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x xxxxxxxx xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (FITC) xxxxx xxxxxxxxxx výrobce. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx antiséra xxxx všechna xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx titr.

Test xx xxx být xxxxxxxx xx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, může xxx úspěšně xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxx xxx teplotě - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 x x xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx to xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx x jsou vzorky xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x dodatku 3 X, x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx použijí xxxxxxxxx díly extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrole, xxxxx xxx xxxxxx xxx tento test, xxxx uvedeny x dodatku 3.

Xxxxxxx xx mikroskopická xxxxxxx x více xxxxxx, xxxxx xxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem jako xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx sklíčka x xxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 1/100 xx prvního okénka.

Následně xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx nezředěné pelety (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx může xxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x peletovém xxxxx. Napipetuje se xxxxxxxx standardní množství (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každé xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx se xxxxxxx xxx okolní xxxxxxx xxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 40 až 45 °C. Bakteriální xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx buď xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxxxxxxx, 95 % etanolem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx instrukcí xx xxxxxxxxxx protilátek.

Pokud xx potřeba, xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xx zmrazeném xxxxx v xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) před xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx sada dvojnásobných xxxxxxx. První xxxxx xx měla mít 1/2 titru (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Podle xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x odst. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx v xxxxx XX. Pracovní xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Obrázek 2. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx podle xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xx navlhčený xxxx xxxxx. Každé xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

2. Podložní sklíčka xx inkubují na xxxxxx papíře přikrytá xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx všech xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx ponořením xx xxxx 5 minut x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx v xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx na xxxxx xxxxx. Testovací xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx titr. Xxxxxxxx xxxxxxxxx naneseného xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx se xxxxx konjugátu xx xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx a xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx přebytečná xxxxxxx.

7. Napipetuje se 5-10 ul 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx každého okénka x xxxxxxx xx xxxxx sklíčko.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX testu

1. Prohlížejí xx testovací xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x xxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx XXXX pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1 000x. Xxxxxxxx se okénka xx dvou navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx se xxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum x testovacích okéncích xxxxxxx. Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx být při xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředění protilátky xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních buněk (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie s xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx v xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx výsledků testu XX:

x) Xxx zjištění xxxxx fluoreskujících xxxxx x typickou xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a vypočítá xxxxx typických buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Výsledek XX xx xxxxxxxxx x vzorků, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx je xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx xxxxx testování.

ii) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xx považuje xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

6.1.6. Xxxxx PCR

Principy

Použije-li xx xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx test, x xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX použita xxxx xxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx provést xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx rozsahu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx negativní. Dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx činidla a xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx se xxxxxx x xxxxxxx kontrolou.

Je xxxxx xxxxxx vhodná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX by měl xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX a XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx došlo x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx by měl xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. solanacearum s xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx xxxxx používaného pro xxxxxxxx bakterií x XXX ze vzorku,

- xxxxxxx směs PCR.

Měly xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- suspenze 10⁶ xxxxx xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 B);

- xxxxx možno, při XXX xxxxxx také XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků xx xxxx být xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX testu xx xxxxxxx připravit xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx tento xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Metody xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx pozitivní x negativní kontrolní xxxxxx (xxx dodatek 3). Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx.

X xxxxxxxxxx cílové XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx různé xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX x jiných xxxxxxxxxx reakcí a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxx. Následující xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx v dodatku. 6.

a) Xxxxxx xxxxx Patrika (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx lyzátového xxxxx (100 xX XxXX, 10 mM Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 ml Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

2. Přidá se 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xx umístí xx termobloku xxxx xxxxx lázně x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx vloží xx 5 min. xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg lysozymu/na 1 xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx třepáním a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °C xx dobu 30 xxxxx.

6. Xxxxx se 100 µl roztoku Xxxx XXX® B (Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxx xxxxxxxx, pokud vzorek xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x promíchá, až xx viskozita xxxxx x xxxx se xxxxx homogenní.

8. Pro xxxxxxxx fází x xxxxxxxxx mezifáze xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxx. xxx teplotě 4 °X.

9. Xxxxx xxxx xx xxxxxxx do xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a inkubuje xx xx xxxx xx xxxx 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxxxx xxx teplotě 4 °X x xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxx.

12. Přidá xx 500 µx 80 % etanolu (- 20 °X) x promíchá xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x po dobu 10 minut xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxxx na vzduchu xxxx v DNA xxxxxxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 100 µx sterilní XX x xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx se xxx teplotě - 20 °C xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx bílá xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx DNA xx použije pro xxxx XXX.

x) Jiné xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx by xx xxxxxxxxx, xx xxxx při xxxxxxxxxx XXX z kontrolních xxxxxx obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx schválených xxxxxxxxx (6.1.6). Připraví xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx vodě).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x prostředí, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx xxxxxx multiplexní xxxxxxxx XXX, který xxxxxx xxxxxxxx interní xxxxxxxx XXX.

3. Do sterilních XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx PCR xxxxxx xxxxx protokolů XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxx xxxxx XX xxxx byl xxx, který byl xxxxxx ve xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. XXX mikrozkumavky se xxxxxx xx téhož xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx xx vhodně optimalizovaný xxxxxxx PCR (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx produktu XXX

1. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µl xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x každého xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Tris-acetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) při 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx vhodný DNA xxxxxx, xxxx. (ladder) 100 xx.

2. Detekují xx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x ethidiumbromidu (0,5 xx/x) po xxxx 30-60 xxxxx xx použití vhodných xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx např. 302 xx) prosvíceném xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. U všech xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x pufrem (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx rozdělí xxxxxxxxxxxxxx v agarózovém xxxx x xxxxxxxx xx charakteristický vzor xxxxxxxxxxxx fragmentů xxx XX xxxxxxx po xxxxxxxx ethidiumbromidem x xxxxxxxxx xx s xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX specifický xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x všech xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx specifickými xxx rostlinu: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx xx zkoumaným xxxxxxx).

Xxxx PCR xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (xxxxxxxx) vzoru, xx předpokladu, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx získat opakováním xxxxx s xxxxxx xxxxx primerů PCR dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx vodě, xxxxxxx xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx xxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx kontrolami XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx ze xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol, xx xxxxxxxxx xx kontaminaci.

6.1.7. Xxxx FISH

Princip

Když xx xxxx první screeningový xxxx použije XXXX xxxx x je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý povinný xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX xxxx. Xxxx se XXXX test xxxxxxx xxxx druhý vyšetřovací xxxx x je xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používají se xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx umožnit reprodukovatelné xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx X solanacearum xx xx xxxxxxx xx extraktů ze xxxxxx, které byly xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx možno xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx jej úspěšně xxxxxxx x extraktem, xxxxx xxx xxxxxxx x glycerolu xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xxxx - 68 xx - 86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx část extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx x negativním výsledkem.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx xxxx jiného referenčního xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x dodatku 3 X.

Xxxxxxx eubakteriálních oligosond xxxxxxxxx FITC poskytuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zbarví xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní a xxxxxxxxx kontrolní materiál, xxxxx se používá x tomto xxxxx, xx uveden v dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxxxx xx al. (1998).

1 Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx do Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xx xxxx 7 minut xx 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx supernatant x rozpustí xx xxxxxx xx 200 µx fixačního roztoku xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Protřepe xx x xxxxxxxx 1 hodinu x xxxxxxxxx zařízení.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 minut xxx 7&xxxx;000 g, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx fixované xxxxxxxx xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 různé xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (v 0,01 M XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx při xxxxxxx - 20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx množství 96 % etanolu. X případě, že xx xxxxx FISH xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx etanol xxxxxxxxxxx x přidá xx xxxxxx množství 0,01 XX (zamíchá xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx chráněna před xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx po xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx sklíček.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx komora xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx boxu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nasáklým xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx inkubací xx xxxxxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx teplotě 45 °X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µx hybridizačního xxxxxxx (dodatek 7) na 8 xxxxxx (okénka 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) xx xxxxxx sklíčku, xxxxxxx xxx středová okénka (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx krycí xxxxxxx (24 x 24 mm) na xxxxx x poslední 4 okénka, a xx xxx, aby xxx xx nevnikl xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx předem xxxxxxx vlhké xxxxxx x xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx x troubě xxx xxxxxxx 45 °X x temnu.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Milli X), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 ml xxxx s molekulární xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 ml 3x xxxxxx x 958 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Nechají xx inkubovat xx xxxxx xxxxx o xxxxxxx 45 °C.

6. Xxxxxx xx krycí xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

9. Sklíčka xx xxxxxx xxxxxx xx XXX (např. Milli X xxxxx) a xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Odstraní se xxxxxxxxxx xxxxxxx lehkým xxxxxxxx xxxxxxx filtračním xxxxxxx. Xxxxxxxxxx se 5-10 µl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX xxxx podobný) xx xxxxxxx xxxxxx x celé sklíčko xx zakryje xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx buňky (xxxxxx většiny gramnegativních xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se buňky X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnává se xxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (odst. 6.1.7) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx odchylné. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx x xxxxx obvodu. U xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxx xxxx xxxxx, se xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

2. Hledají xx jasně fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x xxxxxxx, kdy xxxxxxx sklíčka ve xxxxx ukazují xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Specifičnost xxxxx XXXX x xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx x pelet xx xxxxxxxxxx partií bramboru xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx fluorescenčních xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx morfologií a xx křížové xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x testu XX.

5. X úvahu se xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx jsou xxxxxx, xxxxx jsou xxx xxxxxxx FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. solanacearum x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x typickou morfologií, xxxxxxx se průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk na 1 xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XXXX testu je xxxxxxxxx, pokud při xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX lze xxxxxx xxxxx xxxx volitelný xxxx xxxxx xxxxx XX, PCR xxxx XXXX pro xxxx xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx DAS XXXXX xx obohacení x použití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povinné. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx ELISA může xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xx xxxxxx setkat x xxxxxxxx xxxxx konkurenci xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Doporučuje xx xxxxxx titru xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx je xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x optimální xxxxxx při testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx konjugátů xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Při testování xx měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx xxxx protilátek xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum.

Vzorek, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako R. xxxxxxxxxxxx negativní x xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx působeni x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) se xxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx alikvótní xxxxxx xxxxxxxxxx extraktů, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx negativní, s xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk na 1 ml xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. kmen NCPPB 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 2 X x X). Xxx xxxxxxxx výsledků xx xxxxx xxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 ml v XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx být na xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx vzorků x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx tento xxxx, xxxx uvedeny v dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorku(ů).

Validované xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Robinson Smith xx al., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X xx 4 xxxxxx ve vodní xxxxx xxxx topném xxxx může v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X xxxx 14 - 18 h xxx teplotě 4 °X.

4) Extrakty xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) a poslední xxxxxxxx xxxxxx se xxxxx x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx pufru (dodatek 4). X xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (obvykle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxx).

6) Přidá xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

7) Roztok xxxxxxxxxx xx vylije x xxxxx a xxxxx xx vymyjí jako xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx konjugátu xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx jamky a xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx vylije x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx se 100 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx (dodatek 4) do každé xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx v xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx pufru xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx do každé xxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° X xx dobu 16 xxxxx.

2) Jamky xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx xx rovněž xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx vzorky xx xxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C.

3) Jamky xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx v XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (BSA), xxxxx xx 190 µx do xxxxx xxxxx x xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

5) Xxxxx xx xxxxxxx dobře vypláchnou xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx ředění xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Xxxxx xx 190 µx xx xxxxx jamky x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µl xx xxxxx xxxxx x inkubuje xx x temnu při xxxxxxxx xxxxxxx. Absorbance xxx 405 xx xx odečítá v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXXX

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) z jamek xx xxxxxxxx vzorky xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx hodnoty XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx větší xxx 1,0 (po 90 minutách inkubace xx xxxxxxxxxx) a xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX získané x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx XX x xxxxx xx stejným xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx menší xxx dvojnásobek xxxxxx x pozitivních kontrolních xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx xxx inhibován. Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorcích xxxxxxx, xx došlo x vzájemné xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz x dodatku 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x x optimálních xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Metodu xxx však xxxx xxxxxxx použít xx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx se 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx odrůdy rajčete (xxxx. xxxxxxxxx Moneymaker xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx citlivostí podle xxxxxxxxx laboratoře) xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx u každého xxxxxx. Podrobnosti xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx se xxxxxxx xxxxx (xxxx. kultivar Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x rovnocennou xxxxxxxxxx), xxx jen xxxxxxxx xx xxxx 2. až 3. xxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx možno, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Inokulace xxxxxxxx stříkačkou

Inokulují se xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx děložními xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (ne xxxx než 23G). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx testovací rostliny.

2. Xxxxxxxxx zářezem

Rostlina xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx a pipetou xx kápne xxxxxxxxx 5-10 µx suspendované xxxxxx na stonek xxxx xxxxxxxxx listy x prvním listem.

Sterilním xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxx xxx 1 xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 tloušťky stonku, xxxxxxx řez se xxxxx x xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx sterilní xxxxxxxxx z injekční xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx vodní xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx, připravenou xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx, a xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxxx xx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx kontaminaci, musí xxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx jinak xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxx xx dobu xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx, oddělí xx xxxxxxxx zástěnami. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx ostatních xxxxxxxxxx se věnuje xxxxxxxx pozornost tomu, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx příznaky xxxxxxx, epinastie, chloróz xxxxx krnění rostlin.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) a xxxxxxxxxxxx se podezřelé xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Jestliže xxxxx 3 týdnů xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxx xx test XX/XXX/xxxxxxx na složeném xxxxxx xx segmentů xxxxxx dlouhých 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx rostliny, odebraných xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx kultury x xxxxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, bakterie xxxxx být x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx organismus xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx se xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrnou se xxxxxxxx xxxxx referenční xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x X. solanacearum, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Schaad (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Inkluze XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx O+/F-

Katalázová xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx xxxx podle Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Xxxx x 2% XxXx -

Arginin-dihydrolázová xxxxxxxx -

Ztekucení xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx škrobu -

Hydrolýza xxxxxxxx -

Produkce xxxxxx -

Xxxxx a xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x xxxxx XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vhodného xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx IF xx xxxxxxxxx, jestliže titr XX kultury odpovídá xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 identifikačních xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx metody xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx XXXXX se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. solanacearum.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx hodnota xxxx xxxxxxxx získaná x xxxx kultury xx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxx x pozitivní xxxxxxxx.

6.2.4. Testy PCR

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = ultra pure xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx se 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx lázni xxx 100 °C 4 xxxxxx. Vzorky mohou xxx xxxxxxxx při xxxxxxx - 16 xx - 24 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Použijí xx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx xx. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Pastrik xx xx. (2002); Xxxxxxxx xx al. (1999); Xxxxx xx al. (1997), Weller et xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. solanacearum xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Použije xx xxxxxx XXXX (6.1.7) x xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx specifickými pro X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx FISH je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx dosáhne xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (FAP)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx kultura xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx XXX (Janse, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx FAP xx xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselin: 14:0 3OH, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2OH x xxxxxxx 16:0 3XX poukazuje xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxxxx charakteristika kmenu xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx kmeny (viz dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxxxxx xxxxxx se schopností xxxxxxx x/xxxx oxidace xxx xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx alkoholů (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx xx al., 1990). Xxxxx půda xxx xxxx xxxxxxx xx popsána v dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx provést xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Je-li xxxxx xxxx rozdělena xx sterilní xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µl xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 hodin od xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Lelliott a Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, mezi xxx xxxxx:

1. Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních fragmentů XXXX (Xxxx xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX s xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x XXXX (Xxxxx xx al., 1995; Xxxxx et xx., 1995).

3. Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx et xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; viz dodatek 6) xxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (biovary 1, 2X x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Xxxx xx xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X rDNA (Taghavi xx al., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum x k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Připraví xx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx ze 24 xx 48 hodinových xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxx xx xxxx 3 pravých xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 xxxxx xxx xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx relativní xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx vystavení xxxxxxxxx xxxx vyprahlosti xxxx. U čistých xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx nastat xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx xxxx době xxxxxxxx, xxxxxxx nemůže xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx epinastie, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx segmentu xx stonku asi 2 cm nad xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Xx inkubaci 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

a) Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx agar (Xxxxx) 23,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx tlakem při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x sterilují xxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Difco) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

pH 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 g

Bacto-Pepton (Xxxxx) 10,0 g

Dextróza 5,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx se na 50 °X a xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-trifenyl-tetrazoliumchloridu (Xxxxx), až xx xxxxxxxx konečné koncentrace 50 mg na xxxx.

x) Xxxxxxxxxx selektivní xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 xx znění Elphinstone xx al., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx se na 50 °X x xxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxxx konečná xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600 000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (přibližně 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx X-3032) 825 U (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx být xxxxxx Xxxxx Agar #1. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx to také xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx tvořit x 1-2 xxx xxxx x červené xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x rozptýlenější xxx xxx xxxxxxx Bacto-Agaru.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx bacitracinu xx 2&xxxx;500 X/x xxxx xxxxxx populace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxxxx při xxxxxxx 4 °X x xxxxx x xxxx se spotřebovat xx 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx xx xxxx být xxxx použitím xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nově připravená xxxxx xxxxx půdy xx měla xxx xxxxxxxxx kontrole xxxxxxx xxxxx půdy xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (viz xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 xx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx kolonie.

c) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx půdy

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx pro selektivní xxxxxxxx živnou xxxx XXXX, xxx xxxxxxx xx Bacto-Agar x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid.

Upravená xxxxx xxxx Wilbrink (Xxxxxx xx al., 2002)

Xxxxxxxxx 10 g

Proteázový xxxxxx 5 g

K₂HPO₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx a xxxxxxx xx xx 50 °X. Xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx živnou xxxx SMSA.

Dodatek 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx bud' x xxxxxxxxx kontrole (tabulka 1) xxxx během xxxxxxxxxxxx testů, xxx xx xxxxxxxxx vzájemnému xxxxxxxx (tabulka 2). Xxxxxxx kmeny jsou xxxxxxxx dostupné x xxx xx získat x těchto xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2. Xxxxxx xxxxxx sekce ochrany xxxxxxx (XX), Wageningen, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kultur XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx uvedených xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxx, xx pocházejí z xxxxxxxxx sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx x optimalizaci xxxxxxxxxx xxxxx

x) Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru x xxxxxxxxx kontrole xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum (xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX xxxxx. Protože xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x testech xxxxxxx x testech xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx fixované xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx kontrol pro xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx PCR/IF x XXXX

Xxxxxxxxx se 48hodinová xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (např. xxxx NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xx SMSA xxxxx xxxx x suspenduje xx v 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx získala xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx xx jí xxxxxxx xxxxx zakalenou xxxxxxxx rovnající se xxxxxxx hustotě 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx z produkce xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx xx, že xx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx pupkové xxxxx výše uvedeným xxxxxxxx a resuspenduje xx peleta x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použije xxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky. Xxxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx z 100 X1 ve xxxxxxxxxx zkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Uskladní xx při xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by měly xxx nejprve xxxxxxxxx xxxxxx IF.

Pro XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x XXXX xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx xxxxx zkušebních xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx XX, XXXX a XXX xxxx být X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx kontrol x nesmí xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx až xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Extrakční xxxx (50 mM xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx x autoklávu při 121 °X xx xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,2)

Tento xxxx xx používá xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx z výkrojků x pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po dobu 15 xxx.

2. Xxxxx xxx IF xxxx

Xxxx xxx IF (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °C xx dobu 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx k xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx sklíček.

Přidá xx 0,1 % Xxxxx 20 k xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx pufr x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Vector Xxxxxxxxxxxx) xxxx Citifluor® (Xxxxx).

3. Xxxxx pro xxxxx nepřímého xxxxx XXXXX

3.1. Dvojnásobný uhličitanový xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx molekul, xx možné xxxx xxxxxxxxxxx přidat xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx fosfátem (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 g

Na₂HPO₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 ml

3.4. Xxxxxxxx pufr (xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Tween 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 g

Destilovaná xxxx xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Roztok xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 xx

Xxxxxxxx se x xxxxxxxxxxxxxx XXx xx xxxxxx pH xx 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx se 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx dvě 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx xxxxx XXXX ELISA

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX CO₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx voda 1 000 xx

Xxxxxxxx xx složky x zkontroluje xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 g

NaH₂PO₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1 000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Tween 20 5 ml

Destilovaná voda 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x xxxxxxx se xxxxxxx pH 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x jednom xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx pole na xxxxxxx s xxxx xxxxxx x

x - xxxxxx pole objektivu.

s = πx²/4X²X²,

xxx i = koeficient pole (x rozmezí 8 - 24 podle xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =C x 1&xxxx;000/x x F,

kde x = objem xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xxxxxx x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištěni xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx žádné xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx skupinou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Seal xx xx. (1993)

1.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX XXX CTA XXX GCC-3'

Reverzní xxxxxx X-2: 5'-CCC XXX XXX XXX XXX XXX AGG XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu templátové XXX R. solanacearum = 288 bp

1.2. Xxxxxxx směs PCR

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: i) 2 xxxxxx xxx 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °C (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 20 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: v) 10 minut při 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) ponechá xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) x iv).

1.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

2. Xxxxxxxx PCR Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Ps-1: 5'-xxx xxx xxx xxx gcg ggg x -3'

Reverzní xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx ttg ca -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx DNA = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs dNTP (20xX)	0,125 μx	0,1 mM
Primer Xx-1 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Ps-2 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 U
Množství xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx MJ Research XXX 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Perkin Xxxxx XxxxxXxx x pufr xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx stejných xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Reakční podmínky XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx bude xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) a iv).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx velikost 457 xx x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX CAT XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX AGA GAC X-3'

Xxxxx primer XX-5-X: 5'-XXX TTA XXX XXX TTG ACG XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX XXX TGT XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx = 718 bp (xxxx xxxxxxx XX). Očekávaná xxxxxxxx amplikonu xxxxxxx xxxxxxxx PCR 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) nechá se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x DNA X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx fragmentů s xxxxxxx Xxx 1 xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx inkubační xxxx 30 xxxxx při xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1-X: 5'-ACT XXX XXX XXX XXX XXX CAT TA-3'

Reverzní xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX CAC XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX XXX XXX AGA XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx reakce xxxxxxxxxx xxx biovary 1/2- a xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: i) 5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 sekund xxx 95 °C (xxxxxxxxxx templátové DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx syntéza)

vi) ponechá xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx amplifikací XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-1-X xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx délky restrikčních xxxxxxxxx s enzymem Xxx X nebo Xxxxxxxxxxxxx (např. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Produkty XXX vzniklé amplifikací x DNA R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Xx-1-X a Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx nanášecího xxxxx

5.1. Bromfenolová modř (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) voda (bidestilát) 6,2 xx

6. Pufr 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (TAE), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 g

Destilovaná xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx na 1 X.

Xxxx komerčně xxxxxxxx (např. xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Validovaná xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-ggc agg xxx xxx gct xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'-gct xxx xxx xxx xxx agt-3'

2. Fixační xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ ROZTOK XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX. POUŽÍT XXXXXXXX A NEVDECHNOUT. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Zahřeje xx 9 ml xxxxxxxxxxx xxxxx vody (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (UPW)) xx xxxxxxx přibližně 60 °C a xxxxx xx 0,4 x parafonnaldehydu. Parafonnaldelryd xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X NaOH x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml fosfátového xxxxx 0,1 M (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxxx xx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxx x v xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx pomocí XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx teplotě 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Hybmix

NaCI 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx xx xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx OLI-1 xxxx OLI2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 1. Xxx každé xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx třeba 90 µx xxxxxxxxxxxxxx roztoku. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX JE XXXXX XXXXXXXX, NUTNO XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Doporučená xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx směsi

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx oligosondy xx uchovávají x xxxxx při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X fosfátový xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx rajčete (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku a xxxxxxx xx se xxxx pěstovat xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: den: 21 až 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx odrůda xxxxx vejcoplodého: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx rajčete: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Amann, X.x., X. Xxxxxxxx xxx D.A. Stahl. 1990. Fluorescent-oligonucleotide xxxxxxx xx xxxxx cells xxx determinative, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. J. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 Xxxx 1998 on xxx control of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx etal. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofthe Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx L235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, G., A.C. Xx Roux, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx of xxxxxxxx xxxxxxxx primers xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. European Xxxxxxx of Plant Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, M.T., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Collar, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Double-Antibody Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Antibody xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, D., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx fragment xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx DNA xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Interactions 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, J.K. xxx Xxxxx, D.E. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx extracts. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx isolation xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: A.C. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx huternational Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Australia.

8. Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X. and Xx Xxxxx, L. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx biovars xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Fujii, X. Xxxxxx, M. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx a semi-selective xxxxxx xxx x XXX technique. J. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxxxxxxxxx potato xxxxxx xxx xxxx xxxx xx xxx sensitivity xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Janse, X.X. 1991. Xxxxx- and xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xxxxx cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Kelman, X. 1954. The relationship xx pathogenicity xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx on x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Rudolph, X xxx D.C. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Budapest, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Methods xxx xxx diagnosis xx xxxxxxxxx diseases of xxxxxx. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 pp.

16. Lopez, X.X., Gorris, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, B., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx enricliment xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, serological xxx xxxxxxxxx detection xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxx et xx., (xxx). Klewer Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Fulbright, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Bruijn, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx fingerprints xx xxxxxxxxxxxxxxx Xanthomonas and Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx and XXX. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 60, 2286-2295.

18. Louws, X.X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Bruijn, F.J. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx by xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., F. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Xx, X. Xxxxxxxxx, X. Fegan, A.C. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Hong, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Tinunis. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx species and xxxxxx-xxxxxxxx DNA probes xxx XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Rurkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx). Xx Pac. X. Xxx. Biol. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. J. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X. 2002. Sequence xxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx multiplex PCR xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx internal xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Elphinstone, J.G. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Production of xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx causative xxxxx of xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogenic bacteria. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Xxxx, S.E., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, and M.J. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx sy xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. J. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, M. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx solanacearum) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Grouping xx xxxxx pathogenic xxx xxxx other Pseudomonas xxx. xxxxx cellular xxxxx-xxxx xxxxxxxx. lnternational Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Hayward, X.X., Sly, XX, Xxxxx, M. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas syzygii, xxx xxx blood xxxxxxx xxxxxxxxx of xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Van Xxx Wolf, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, M., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, A., Xxxxxxxxx, X. 1998. Xxxxxxx diversity of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 in Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx AFLP, XX-XXXX xxx rep-PCR. In: Xxxxx, X., Xxxxx, X. and Elphinstone, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Berlin) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, N. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx xxxxx an autonated xxx quantitative flourogenic 5' nuclease XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Wullings, B.A., X.X. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx and X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of X. xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx xxx of xxxxxx, xx fluorescent xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23s xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.