Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx stanoví xxxxx §88 xxxx. 2 xxxxxx x. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x změně některých xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "zákon") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 písm. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx¹⁾ x xxxxxxxx opatření, která xx xxxxxxxxx xx xxxxx České xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx et Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx, xxx se

a) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) xxxxxxxx místo xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx se xxxxxxxx opatření x xxxxx xxxxxx eradikace.

§2

Xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx et xx. ssp. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Xxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx al.,

c) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. původce xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, a ostatní xxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx (Solanaceae), x xxxxx byla xxxxxxxxx xxxxxxx infekce xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. původce hnědé xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx tuberosum X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx (Xxxxxxxxxxxx lycopersicum X.) xxxxx semen a xxxxx, lilek potměchuť (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxx rostliny x xxxxxx lilkovitých (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx zaměřený xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx x určité xxxxxx,

x) vymezovacím xxxxxxxxx - průzkum x xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx, x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a k xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx které se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby - podezření z xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxx x xxxxx, podle §11 odst. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce hnědé xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx vymezené Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx správou (xxxx xxx "xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx"), xx které xx xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 zákona x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx zónou - území vymezené xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, na xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 zákona x xxxxxx podezření x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby,

k) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxxxxx hostitelské xxxxxxxx, xxxxx vznikla xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x jedné xxxxxxx partie; přitom xx za:

1. sesterské xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxx x xxxxx roce xxxxxxxxxxxx množením z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxx, které vyrostly xx stejné xxxxxx xxxxx,

2. rodičovskou xxxxxxx xxxxxxxxx partii považuje xxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxxxxxx klonově xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xx bezprostředně xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx provádí xxxxxxxxxx x souladu x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx průzkum xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx podléhají

a) xxxxxxxxxxxx materiál xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x České xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxx §8 odst. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx jen "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx nesadbových xxxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx členských xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx průzkumu na xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx podezřelé x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx území xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. c).

(4) Xxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce hnědé xxxxxxx xxx rostlinolékařské xxxxxxxx zásilek xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zemí x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru²⁾ x namátkově xxxxxxx xxxxxx ostatních brambor,

b) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx zemí.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx navíc xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx zdroje xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin původce xxxxx xxxxxxx včetně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx podniků, xxxxx průmyslově zpracovávají xxxxx bramboru, xxxxxxxxx xxxx pevné xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx průzkumu xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x výskytu a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx pěstební xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx tyto xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx zjišťuje

a) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx uvedených v xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x), xxxxxxxx 3 a x odstavci 4 xxxx. b) x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx hlíz, x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx testováním vzorků xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. x) a d),

c) xxxxxxxxxx porostů xxxxxxx xx vhodnou xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxx x xxxxxxxx napadení xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxxx uvedených x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, pevných xxxxxx xxxx hostitelských xxxxxxx pobřežní xxxxxxxx x případě xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x) x x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx partie x xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxx vzorků xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7, xxxxxx tohoto xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx informací x xxxxxxxxxx x testovaných xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxxxxxxxxx správa xx xxxxxxx uznávaných xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx výskytu anebo xx míře xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x zveřejní xx Věstníku Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x určení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 1 xxxxxx a xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx odebrané xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx §71 odst. 1 xxxx. b) xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx správou xxxxx §72 odst. 5 písm. x) xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx dohledu této xxxxxx, že xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx prováděného xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx a xxxx xx oprávněna xxxx xxxxxx uvádět xx xxx nebo xx pěstuje xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru x xxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxx zemědělskému.

(11) Xxxxxxxxxxx o xxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx x rozsahu xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X ostatním členským xxxxxx x Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x původce xxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx úředních xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ množeném xxxxx xxx xxxxxxx xx pozemcích xxxxxxxxx, xx 1. září, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jsou důvěrné.

§4

Opatření při xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xx podezření z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vizuálních xxxxxxxx napadení těmito xxxxxxxxxx organismy a x případě původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx podle přílohy č. 1 xxxxxx X číslo 1 a xxxxxx XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx způsobem stanoveným x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx podezření z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x rámci odborného xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 zákona x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx provedení xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx B, x xxxxx xxxx podezření xxxxxxxx nebo xxxxxxxx.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx za účelem xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxx zásilek, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, s xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x

x) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx odhadovaného rizika xxxxxxx xxxxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxx tomuto xxxxxx předejít xxxxxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx úředního xxxxxxx xxx xxxxxxxx všech xxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx x x objektech xxxxxxxxx s podezřením x výskytu, popřípadě x xxxx tyto xxxxxxx a objekty.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxxxxxxxx xxx původem x xxxxxx členského xxxxx xxxx v xxxxxxxx xxxxx členském xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx úřední xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx příslušného xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx podezření x xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxx xxxx xxx xxxxx x České xxxxxxxxx xxxx které xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Česká xxxxxxxxx, xxxxxx rostlinolékařská správa xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 a 3.

§5

Xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx

(1) Pokud xxxxxx xxxxxxxxxxx testování xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx §3 xxxx. 8 potvrdí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxx správa x xxxxxxx x §76 xxxx. 2 zákona x x xxxxxxxxxxxx x aktuálním xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xx způsobu xxxxxxxxx, xxxxxxx xx trh x průmyslového xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

a) označí xx xxxxxxxx rostliny, xxxxxxx, anebo xxxxxx, x zařízení, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx části x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxx vzorek xxxxxxx, x xxxxx xxxxxx xx styku x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx kterého xxx xxxxxx odebrán, x xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx je xxxxx xxxxx výměna pěstebního xxxxxxxxx, a xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x odkud xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx nákazy x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx bodu 1 přílohy č. 3 xxxxxx testování xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 a xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x na základě xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x zalévání xxxx xxxx pěstitelské xxxxx se zamořeným xxxxxxxxx xxxx objektem, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x),

x) xxxxxx karanténní xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx zamořených předmětů xxxx xxxxxxx podle xxxxxxx a) a xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx s ohledem xx xxxxxxxxxx vodu, xxxxxxx vodu xx xxxxxxxx na zpracování x xxxxxx xxxxxxx x s xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx vegetace, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx by xxx zavlažování, zalévání xxxx zaplavení xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxx správa

a) xxxxxxx xxxxxx laboratorní xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků povrchových xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxx lilkovitých způsobem xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x souladu x xxxxxxxxxxx výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, z xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xx zamořenou,

c) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx xxxxxxx xxxxxxxx povrchové xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x jeho možného xxxxxxxxx podle xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx x xxxxxxx s ustanovením xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x), x xxxxx podrobnosti x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. c). Xxxxxxxxxxx x tomto oznámení xxxx xxxxxxx.

(4) Pokud xxxx členský xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx z Xxxxx republiky x xxxxxxxx xxxxxxxx obdobně xxxxx xxxxxxxx 3, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a x xxxxxxx s ustanovením xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx a xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx x vymezí xxxxxxxxxx území, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx zónu.

(5) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx stanoví xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxxxx 1 písm. x) x pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx, xxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 písm. x), odstavce 2 xxxx. c) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zajistí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle §4 odst. 2 xxxxx dohledaných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x partiím, xxxxx byly označeny xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx x xxxxxxx potřebném ke xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx zamoření x xxxxx xxxxxxxx míru xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxxxxxxxxxxxxxx správa x xxxxxxx potřeby xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx území x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) x x).

§7

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx správa x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 odst. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx označená xx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x) xxxxx xxx xxxxxx x pod xxxxxxxx rostlinolékařské xxxxxx xx x xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby a xx jsou xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, stanovené x příloze č. 5, v případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxx xxx použita xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, že xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx riziko rozšíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé hniloby x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, a xxxxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx testování xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, sklady xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx jiné objekty xxxxxx obalového materiálu, xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x) xxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. b), xx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx vhodných xxxxx uvedených x příloze č. 6 x xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x předměty xx xxxxxxxx ani xx xxxxxxxxxxxxx zamořené nepovažují,

d) x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 písm. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 2 xxxx. x), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx původce kroužkovitosti x bodě 4 přílohy č. 4 a x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx odborně odůvodněná, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x těchto xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x) xxxxxx karanténního xxxxx x x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx ostatním xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx číslem xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, registrovaných xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxx splnění.

(4) Xxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx x §7 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx účelům, xxxxx xxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 zákona, pokud xxx nebudou narušena xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx riziko jejich xxxxxx.

§8

Testování xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, vypěstovaný xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x uváděný na xxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxxxx průzkumu podle §3 xxxx. 2, x xxxxxxx podle xxxxxxxx 2 a x souladu x §3 xxxx. 8 x 9, a xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx.

(2) Testování xxxxx xxxxxxxx 1 xx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx podrobí

a) xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx určené x xxxxxx předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, pokud xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x nebo

b) xxxxx byl x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx

1. rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. reprezentativní vzorky xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x nichž prokazatelně xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo předstupňů, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx roce, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ani xxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebyl x xxxxxxxxx uplynulém xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx nabývá xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Příloha č. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x rostlin xxxxxxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku č. 1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx odpadů x xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vydaných rostlinolékařskou xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx úrovní Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx metod.

Zcela xxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol.

Testování xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx také xxxxxxxx správné nastavení, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení x xxxxxxx a xxxxxx uchovávání x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx kontaminace mezi xxxxxx, např. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx kvality, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx při označování x v xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 odst. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek x diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx uvedených xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (TF xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx podezření xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud je x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx negativní, pak xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx důvodu xx pozitivní XX xxxx podle §4 xxxx. 1 definován xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx potvrzený xxxxxx screeningovým xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x potvrzením xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx bramboru x v rostlinách xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx určen xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x podezřením x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx a v xxxxxxx pozitivního výsledku xxxxxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Popis xxxxxxxx xx v oddíle 2.

(2) Xxxxxx testy xxxx:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzí xx xxxxx není xxxxxxxxxxxx, kultivace v xxxxxxxxxxx stádiích xxxxxxx xx nemusí xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx na infikovaném xxxxxxx, xxxxx přerůst xxxx xxxxxxxxxx patogena xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx XXXX (oddíl 8) xxxx biotest (oddíl 7).

(4) Popis typické xxxxxxxxxx kolonie je x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx provedena xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xx použití xxxxx uvedených v xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx diagram pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx bramboru

Postup xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x nichž xxxxx je založen xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, aby xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx podezřelý.

Screeningové a xxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxx detekční xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx resuspendované pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx testů.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx počet, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx nejméně jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx nebo více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx nebo xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx vyšetření XX xx vždy xxxxxxx polyklonální xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx a xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX test.

Použijí xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxx být x xxxxx případech vhodná xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX média xxxx XXX-88 xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Typické xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx 3-10 xxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx následně xxxxxxxx x identifikovat. Pro xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které jsou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus na xxxxx x které xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se kultivační xxxxxx takto xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx se xxxxxxx x izolaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x pelet xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx inkubační podmínky xxxxxxxxx pro tuto xxxxxx. Bakteriální inhibitory Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx XXXX xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx mohou selhat x důvodů konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx negativní, opakují xx xxxxxxxx testy xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx testů popsaných x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx diagram xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - viz xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx jsou xxxxxxx xxx testy založené xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx nejméně xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X případě, xx xx xxxxx test xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxxxxxxxx xxxxxxx nebo více xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Další testy xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx xxxxxx x oddílu 4.

(6) XXX xxxx xx xxxxxx v oddílu 6.

(7) XXXX test xx xxxxxx v xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pozitivní, ale xxxxxxxx testy jsou xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx potřeby xx provede xxxx xxxxxxx vzorků.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, že xx xxxxx x Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx jen xxxxxxxxx x xxxxx xxx xx na xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx se xxxxxx x příznaky xxxxxx chorob, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vadnutí xxxx velmi xxxxxxx xx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx; xxxxxxx xx xxxxxxx pomalé x xxxxxxxx omezené xx xxxxxx listů. Mladé xxxxxxxxxx listy xxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx vznikají xxxxxxxxx tvarované xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx ucpáním xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx mají xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx eventuálně xxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxx x hlízy pouze xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx sklovitost xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx pupku. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx nepatrně xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx dobře xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx a xxxx, kdy při xxxxxx zmáčknutí hlízy xxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Vodivá xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx jsou v xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Ralstonia solanacearurn. Xxxxxxxx mohou xxx xxxx příznaky omezeny xx xxxxx část xxxxxxxx, nemusí xx xxxxxxxxxx xxx blízko xxxxxxx xxxxx a xxxxx se postupně xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx vodivých xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx xx vnitřní xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx infekce se xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x červenohnědými okraji. X poslední době xx v Evropě xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx kůra xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, čímž xxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx dutin a xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx, ne-li nemožné, xxxxxxxx pokročilé příznaky xxxxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Možné xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xx internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Příprava xxxxxx

3.1. Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx množství xxxx xx xxxxxx xxxx x zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx použít x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, pokud xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx hlíz.

- Xxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx bramborový xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx, Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx dezinfekční prostředky (x obsahem xxxxxx, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx XXX test, xxx odstranění xxxxx xxxxxxxxx XXX) a xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Hlízy xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xx xx xx vzorku xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xx xx provádět XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Pomocí xxxxxxx x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx xxxxx xx škrabkou xx xxxxxxxx xx odstraní xxxxxx xx pupkovém xxxxx xxxxx hlízy. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vodivého xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx brambor. Xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xx odebrání xxxx xxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 hodin xxxx konzervovány při -20 °X po xxxx nejdéle dvou xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxx x testují xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx výkrojku x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx vizuální xxxxxxxxx této hlízy xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx v karanténě xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx podle přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo utěsnitelné (x případě, xx xxxx nádoby xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx, pokud to xxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxx přidání xxxxx, x xxxxxx xx xxxx maximálně 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx maximálně 24 hodin. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx výkrojků x xxxx saprofytů x xxxxxxx skladování xxxx xxxxxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxxxxx způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce se xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního pufru (dodatek 3) x xxxxxxx xx x rotační xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx při xxxxxxx xxxxx než 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx;

xxxx

x) výkrojky xx xxxxxxxxxxxx x dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x xxxxxx nebo rozdrcením x utěsněném xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx gumového tloučku xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) x xxxxxx. Pokud má xxx použit XXX xxxx, je nutno xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxxx na jedno xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx se xxxxx přídavkem (10 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Bakteriální xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x xx dobu 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10°X x xxxxxxxx xx supernatant, xxxx xx se xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µl xxx xxxx na Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µx xxx referenční xxxxx. Xxxxx se sterilní xxxxxxxx xx konečnou xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) k 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x ke xxxxxxxxx xxxxx vzorku, xxxxxxxx se vířením x xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°X (týdny) xxxx xxx teplotě -68 xx -86°C (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx uchovávají při xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx zmrazení x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx nutný xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx 24 až 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx předešlo xxxxxxxxxxx. To xxxxx x xxx xxxxxxx xx XX xxxxx x všechny testy.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxxxx vzorky až 200 xxxxx stonků. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Pomocí xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx nože xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx část x xxxxxxxxx 1-2 cm xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx stonku přímo xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx etanolem 70 %, okamžitě osuší xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx nádobě.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) x třepají x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx maximálně 24 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

3.2.3. Xx xxxxxxx, které má xxxxx 15 minut, xx dekantuje xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx extraktu xxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxx x oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Čistý xxxx xxxxxxxxxxxxx vzorkový extrakt xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx části, Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx během testování xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) sterilního xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °C (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx je nutné xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX test xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx práhů.

Použije-li xx jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx výsledek xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx xxxx XX použije xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x jeho xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx dokončení xxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX test xxxxxxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xX xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx může xxx xxxxx vyšetření xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx protilátky xxxxx známému kmenu xxxxxxx kroužkovitosti - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx NCPPB 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxxx xxxx protilátek. Xxxx je xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dochází x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1 ml homologického xxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx výrobce. Nezpracované xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx by xxxx xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Během xxxxx by xx xxxx protilátky xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx na xxxxx. Používají xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktech. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx úspěšně xxxxxxxx xx extraktech xxxxxxxxxxxx xxx - 68 xx - 86 °X x glycerolu. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xx xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx fixována plamenem (xxx 4.2).

Připraví se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, suspendovaným xx xxxxxx x xxxxxxx podle dodatku 2 x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx infikované xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X) xx xx mělo xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx extraktů, xxxxx xxxx předtím testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx xxxxxx, xxxxxxx s 10 xxxxxx x průměru xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x následujících postupů:

a) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxx standardní množství (xxx xxxxxx o xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x xxxx. Xxxxxx řadu xxx použít xxxx xxxxxxxx nebo pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx ředění (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx standardní množství (xxx xxxxxx o xxxxxxx 6 xx xx vhodné 15 µx - pro xxxxx xxxxxx objem xxxxx) resuspendované pelety 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Druhou xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 až 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx fixují xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °X), xxx xxxxxxxx nebo xxxxxx 95 % xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxx pokynů xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X případě xxxxxxx xxx potom xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx skladovat xxxxxxxx x xxxxxx boxu xx xx xxxxx xxxxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX testu:

a) Podle xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x xxxxxx 4.1 písm. x):

Xxxxxxxx xx sada xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x XX xxxxx. X xxxxx xxxxx xx xxx být xxxx 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx titr 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) x dvojnásobný xxxx (2X).

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx na test x oddílu 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (WD) xxxxxxxxxx v XX xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx podle xxxxxx 4.1. písm. a) x xxxxxx 4.3. xxxx. a)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx navlhčený xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx kompletně xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použitého extraktu.

Pokud xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx pokyny od xxxxxxxxxx protilátek, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx se xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x xxxx se pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx na xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °C).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xx opláchnou x umyjí xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x glycerolem (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx IF xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx sklíčka se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x filtry xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1000x. Xxxxxxxx se xxxxxx ve dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx s xxxxxxx xxxx malým xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo pracovním xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus x testovacích okénkách xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx kontrolním kmenem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Buňky s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx může xxxx, xxxx všechna xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx bramboru x xxxxx stonku xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a křížově xxxxxxxxx saprofytické bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx v xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x titru xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx oddílu 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx výsledku XX xxxxx:

x) Při zjištění xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx xx xxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx pozitivní x xxxxxx, xxx xx xxxxx typických xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx považuje xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Test XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x je xxxxxxxxx, je x xxxxxxxxx diagnózy nutné xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx testování touto xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxx testovány x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extrakty, ale xx možné xxx xxxxxxx provést x xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx x glycerolu xxx xxxxxxx -16 xx -24 nebo -68 až -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx alikvotní xxxx extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx ml (xxxx. xxxx NCPPB 4053 xxxx PD 406) x 0,01 X xxxxxxxxxxx xxxxx (PB) x 3-5 xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Připraví se xxxxxxxxxx sklíčka x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx referenčního kmene Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx suspendovaného v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX poskytuje xxxxxxxx procesu hybridizace, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x xxxxxx.

5.1. Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx roztok (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu do Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se peleta x 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx se x xxxxxxxx se xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx činidlem xx 96 % etanol. Xxx jeho xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x kroku 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX x 50 µl 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxx teplotě 4 °X xx dobu 30-60 minut.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx po xxxx 8 xxxxx na 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µl 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, přičemž xx použijí 2 xxxxx vzorky xx xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49 µx) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx -20 °X xx přidání 1 objemového množství 96 % xxxxxxx. X případě, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx etanol xxxxxxxxxxx, xxxxx se stejné xxxxxxxx 0,01 X XX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) a fixují xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi je xxxxxxx postup xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx další xxx. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx prachem x x xxxxx při xxxxxxxx teplotě.

5.2. Předhybridizace x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx lyzozymu xxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx L-6876) x 10 ml xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, ale xxx xx se pouze xxxxxx zmrazit x xxxxxx xxxxxx. Každý xxxxxx xx dobře xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx ponoří xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µx proteinázy X 40-400 µg.ml^-1 v xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 minut.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx pokaždé xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx se nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx sklíček.

5.2.3. Xxxxxxxx xx vlhká xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx namočeným x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 55 °X xx dobu xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) s 45 µx xx 1 xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx po xxxx 5 xxxxx xxx teplotě 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx na xxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 45 °X x xx xxxxxxx xx 4 okének xx xxxxxxx / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xxx, xxx pod ně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx se 14 - 18 x x xxxx xxx teplotě 55 °X x temnu.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx pure xxxxx = XX), 1 x 1x hybmixu (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x hybmixu (167 xx 3x xxxxxx x 833 xx XXX). Každá x xxxx se xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Sejmou se xxxxx sklíčka x xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Spláchne xx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx ponoří krátce xx XXX x xxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx lehkým xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo xxxxxxx) xx xxxxx jamky x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx sklíčkem (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX testu

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x nebo 1&xxxx;000x xxx olejovou xxxxxx. X filtrem vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnává xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx xxx jasně fluoreskující x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxxx 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlíží xx okénka xxxxxx xxxxx průměry x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x okénkách xxxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http:/forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat xxxx být lepší xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Buňky, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xx xxxxxxx x úvahu.

5.3.3. Xxx podezření z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, když všechna xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx pozitivní buňky xxxx kontaminaci xxxxx xxxx při zjištění xxxxxxxxxxx buněk (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx FISH xxxxx. X peletách x xxxxxxx části xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, ačkoli mnohem xxxx často než x IF testu.

5.3.5. X xxxxx se xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX testu xxxx xxxxxx, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX filtru xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x velikostí a xxxxxxxxxx typickou xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx pozitivních xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadne se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx resuspendované pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx. Vzorky, které xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx negativní.

b) Výsledek XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx typickou xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx se XXX xxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový test xxxxxxxx IF xxxx. Xxxxx se XXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx xxxxxxxxx, xx xxx dokončení xxxxxxxx nutné další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx této xxxxxx x celém rozsahu xxxx hlavního screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxx xx vzorku extraktů, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx. Xxx dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx validovaná XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít xxxxxx bezpečnostní opatření, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx XXX. XXX test xx xxxx provádět xxxxxxx laboranti x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx biologii, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx jako x xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx kontroly:

- extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx bakterie x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxx xxx přidán Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx v odděleném xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx budou xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx bez zeminy. X případě použití XXX xxxxx xx xxxxxxx připravit xxxxxxxx x umytých brambor.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Použijí xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X purifkaci xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx odstraňující xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx cílovou DNA x extraktu xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx optimalizována xxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx lýzového xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxx ze vzorku x umístí xx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 95 °C xx xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxxxx do ledu.

4. Xxxxx se 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx xx 1 xx x 10 xX Tris HCl, xX 8,0) x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx XXXX roztok A (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx při xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx se 100 µx Easy XXXX roztok B (Xxxxxxxxxx)x xxxxx se xxxxxxxx třepáním, až xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx viskózní.

7. Přidá xx 500 µl xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx, až xx viskozita xxxxx x xxxx se xxxxx homogenní.

8. Odstřeďuje xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °C xxx xxxxxxxx fází x xxxxxxxxx mezifáze.

9. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xx čisté mikrozkumavky.

10. Xxxxx se 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x promíchá xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x po xxxx 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Peleta xx xxxxx uschnout xx xxxxxxx xxxx x XXX xxxxx xxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µl xxxxxxxx xxxx (UPW) x xxxxx xxxx xxxxxxx 20 minut xxx pokojové teplotě.

16. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -20 °C xx xx xxxxxxxxxx xxx PCR.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxx PCR xx xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx použít, xxxxx xx se xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x kontroly xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolu (dodatek 6). Xxxxxxxx xx jeden xxxxxxxxx roztok xxxxxx XXX (1:10 ve xxxxxxxx vodě).

6.2.2. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, kde xxxxxxx kontaminace, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xx multiplexová xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx se xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x přidá xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx UPW, xxxxx xxxx použita xx xxxxx XXX namísto xxxxxx.

6.2.5. XXX mikrozkumavky xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Analýza xxxxxxxx XXX

6.3.1. Rozdělí xx xxxxxxxxx PCR elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx se xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x každého xxxxxx xxxxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) do 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X xx xx. Xxxxxxx xx xxxxxx marker XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Detekují xx proužky XXX xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 xx xx x) xx xxxx 30-45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. X obarveném x XX (xxxxxx xxxxxx délky, xxxx. 302 xx) prosvíceném xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x xxxxxxxxx velikosti x výsledek se xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx restrikční xxxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx naštěpené xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx PCR xxxxx:

XXX xxxx xx negativní, xxxxx amplikon typický xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxxx zjištěn x xxxxx xxxxxx, xxx byl xxxxxxx xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxxx s xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx se xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x negativních kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, pokud byl xxxxxxxxx amplikon získán x pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujícího Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxx, ale x xxxxxxxxx xxxxxxxx x Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxx. Ve vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx z xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx kontaminaci, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx získán x xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx xx xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie xx 1 ml xxxxxxx x xxxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx testovány s xxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx očekávat xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx však xxx xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovávány x glycerolu xxx xxxxxxx -68 až -86 °C.

Některé odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx poskytují xxxxxxxxxx selektivní xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx dokonce x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx příznaků x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx omezení nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx měly být xxxxxxxxx xxxxxxxxx růstové xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x pěstování xxxx xxxxxxx v Dodatku 8.

7.1. Peleta podle 3.1.5. se rozdělí xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx pouze xxxxxxxx xx fázi 2-3 xxxxx do xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx využití xxxxxxxxxxxxxx pelety i xxxxxxxxx inokulaci, bude xxx níže xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx na xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx podepře (xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 cm je xxxxxx xxxx pěnového xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxx 5 cm xxxxxxx, 10 xx xxxxx x 15 xx xxxxx). Xxx každý xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx stonek x xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx kolem xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx lístky x xxxxxx xxxxxx listem xxxxxxx nebo mírně xxxxxxxxxx xxx dlouhý 0,5 až 1,0 xx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx tři xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx skalpelu x xxxxxx xx do xxx inokulum xxxxxxxxx xx oční linky xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx pelety xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Xxx se xxxxxxxx sterilní vazelínou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xx napipetuje xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx sterilního skalpelu xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x úhlu xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx a xxxxxxx xxxxxxxxx jako 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx x xxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx lilku xxx xxxx inokulací xxxxxxxxxx.

7.4.2 Stonky xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx nad xxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxxxxxx x podkožní xxxxxx (ne xxxx xxx 23 G). Xxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxx inokulační xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx kultury xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xx xxxxx i xxxxxxxx x přirozeně infikovaných xxxx xxxxxxxx.

7.6. Jako xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx inkubovat x xxxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxx (dodatek 8) xx xxxx až 4 xxxxx při xxxxxxx 18-24 °C. Rostliny xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxx vlhkosti (70-80%) x xxxxxxxx xx xxx, xxx nedošlo x nasávání vody xxxx vadnutí kvůli xxxxxxxxxx vody. Buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx odumírají xxx xxxxxxxxx xxx 30 °X x optimální xxxxxxx xx 21 °X. Aby xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, inkubují xx rostliny pro xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx růstové komoře xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, anebo při xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxx. Xxxxx musí xxx xxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxx x jiné xxxxxxxxxx xx věnuje xxxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx skleníky i xxxxxxx komory xxxx xxxxxxxx xxxx veškerým xxxxxx, xxxxxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx osmi xxxxx xx spočítají rostliny xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, které xxxx xxxxx xxxx okrajová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx může xxxxx xxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx před xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx mezi xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx žlutý xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx déle xxxx xxxxxx xx objevení xx xxxxxxxx, xxx xx větší naděje xx xxxxxxx. Rostliny xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx mnohem xxxxxxxxxx xxxx nízkým xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxx starší rostliny, xxxxx xx nezbytné xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx tří xxxxx x xxxx krátce xxxx ní. Xxxxxxx xxxxx také xxxxxxxxxx xxxxxxxx jiných bakterií xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxx x E. carotovora xxxxx. atroseptica, Phoma xxxxxx xxx. foveata, xxxxx x velké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx, jelikož xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx také xxxxxxxxx Gramovo barvení: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx

7.9. Jakmile se xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx příznaky, měla xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx pletiva zvadlých xxxxx nebo stonků xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxx lF nebo XXX xx xxxxx x lilku x xxxxxxx xx xx xxxxxxx (selektivním) xxxxx (xxx xxxxx 8). Xxxx xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx okolností, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx podmínky optimální, xx xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 xxxxx. Pokud nejsou xx 4 týdnech xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx složeném xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx (selektivních) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx podezřelé x xxxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxx a potvrdí xx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 9 a 10).

8. Izolace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx tehdy, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x takto xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx náročným organismem, xx xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx, x xxxxx xx nedoporučuje provádět xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) nebo xxxxxx (3.2). Xxxxx izolace Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx selektivního xxxxx x vhodného xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x pupkové části xxxxx nebo xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxx bramboru xxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx výsledek x xxxxx TF/PCR složených xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx xx xxxxx provést xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.l.2.

Jako xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxx 106 cfu xx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus (xxxx. NCPPB 4053 xxxx XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminace, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx každou nově xxxxxxxxxxx dávku xxxxxxxxxxxx xxxxx by se xxxx před xxxxxxxx x testování xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx vzorky.

8.1. Roztěr xx xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Xx 100 µl xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx x lilku xxxxxxxxxxxx xx připraví desetinásobné xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. lzolace x neředěné xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx náročným xxxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx přítomná xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, zatímco xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxxx rozetřít 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, v xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX médium xxxx NCP-88 médium (dodatek 5), za xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxx (hokejek) x xxxxxxxx roztěrů.

8.1.3. Xxxxx xx inkubují x xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °C.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx x počítání xxxxx kolonií podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx třech dnech, x xxxxxx počítáním xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx kolonií

Poznámka:

Subkultury xxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx XXX xxxxx; inokulace x xxxxxxxxxxxx by xx xxxx xxxxxxx dříve, xxx xxxx xxxxx xxxxxx přerostlá, xx. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Kolonie podobné Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx jedno x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxx v dodatku 5):

- xxxxx dextrózový xxxx (xxxxx pro subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx,

- agar z xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 21-24 °X xx dobu xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x obvykle xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx špendlíkové xxxxxxxx, vyklenuté, smetanově xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxx roztěr xxx xxxxxxxx čistoty. X xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, někdy xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx vyklenuté, xxxxxxxxx xxxxxx, s xxxxxxx xxxxxx a obvykle xxxx x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx kolonie pro xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Podezřelé xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx se xxxxxxx patogenity (viz xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx izolované xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx každý xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx x enzymatické identifikační xxxxx

Xxxxxxxx xx následující xxxxxxxxxxx vlastnosti. Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °C x xx šesti dnech xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x žádnému růstu, xxxxxxxx xx po xxxx nejvýše 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx se musí xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx subkultur xxxxxxx agaru. Morfologická xxxxxxxx se musí xxxxxxxx z kultur x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Očekávaný xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Aktivita xxxxxx -

Xxxxxx H₂S -

Tvorba xxxxxx -

Xxxxxxxxx citrátu -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx slabá

Růst xxx 37 °X -

Růst x 7% NaCI -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxxxx +

Tvorba xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - nebo xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx barvení (dodatek 9)

9.2. lF xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x pufru xx xX (dodatek 3).

b) Připraví xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx lF xxxxxx (oddíl 4).

x) Xxxxxxxxxxx výsledku xX xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx kontroly.

9.3. PCR xxxx

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx ml xx xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Xxxxxxx se 100 µx suspenze xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx nebo vřící xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100 °C xx xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx může xxxx buněk podpořit xxxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx XxXX do xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx xxx potom xxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X až xx xxxxxxx.

x) Xxx amplifikaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx specifických xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Xxxx, 1995; Xxxxx x kol., 1997; Xxxxxxx a Rainey, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx je pozitivní, xxxxx jsou amplikony XXX xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX test

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx FISH (xxxxx 5)

x) Xxxx XXXX xx pozitivní, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Kultura xx pěstuje xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx dobu 72 xxxxx xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Použije se xxxxxx postup FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Test FAP xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 lso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx jasně xxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Micrococcus také xxxxxxxx některé x xxxxxx kyselin, xxx 15:1 Xxxxxxx X xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se však xxxxxxxxx xx všech Xxxxxxxxxxx spp. x xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx obvykle pohybuje xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx x xxx., 2001.

10. Test xxxxxxxxxx

Xxx konečné xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx identifikovaných jako Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx zkouška patogenity.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x 3-xxxxxxx kultur testované xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx.

10.2. Naočkuje xx 5-10 stonků mladých xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx fázi 3 xxxxxxx listů..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x přiměřeným xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx vyschnutí. X xxxxxxx kultur xx xxxx během 2 xxxxx nastat xxxxxxx vadnutí, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxxxxx, xx se xxxx xxxxxxxxx xx 3 xxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx vejcoplodého, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Jestliže se xx 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx za patogenní xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx části xxxxxx 2 cm xxx místem inokulace. Xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx. Izoluje se xx xxxxxxxx rozetřením xxxx nanesením xx XXXX x YPGA, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °X x sleduje xx vznik kolonií xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx protokolů

Laboratoř (1)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx a Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Laboratory	York	Anglie
Scottish Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Station de Xxxxxxxxxxx de xx Xxxxx xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Plant Xxxxxxxxxx Centre	Aas	Norsko
Direcção-General xx Xxxxxxçãx das Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx internetová stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX a XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx kultura xxxxxxxxxxxx xxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus (NCPPB 4053 xxxx XX 406) xx základním xxxxx MTNA x xxxxxxxxxx se x 10 xX fosfátového xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx schopných xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx dosáhne xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zakalené xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx optické xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx pletiva xx odeberou x xxxxxxxxx konců 200 xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx odrůdy x xxxxx xxxxxxx, u xxxxx je jisté, xx xx xxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx způsobem x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se 100 µl xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Nechá se xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx xxx xxxxxxx potvrzena prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx PCR test xx provede xxxxxxxx XXX x pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx zkušebních vzorků.

Pro XX x FISH xxxxx xx provedou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx zkušebních xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x PCR xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx a nesmí xxx xxxxxxx x xxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx po dobu xx jednoho roku.

1. Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 mM xxxxxxxxx pufr, pH 7,0)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x extrakci xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx xxx následující xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx prostředek (*)	0,5 x
XX silikonový odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů XXX	50 g
(*) xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Tento xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrovány do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx pro XX xxxx

2.1. Pufry xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx protilátek.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxx se sterilizace x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx. Xxxxx se 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx používá jako xxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx na XX testy x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx lF x XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx průměrný xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v jednom xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx mikroskopického xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x rozmezí od 8 - 24 xxxxx typu okuláru),

K = tubusový xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx počet charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx a

F = xxxxxxxxx faktor xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Média xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx X. x subsp. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx agar (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

Živný xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx dextrose xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % X(+) glukózy (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 C xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Yeast xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Difco)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Difco)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (monohydrát)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x provede se xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
D(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx se rozpustí x provede xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x autoklávu xxx 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx selektivní xxxxxxx média

Médium XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx všechny xxxxxx xxxxx x XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx č. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xX se xxxxxx xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (při 121 °X xx dobu 15 xxx.) x xxxxxxxxx na 50 X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx: trimethoprim 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx X 0,01 x.

X xxxxxx xx nechají xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) a nalidixic xxxx (Xxxxx) (obě 5 xx/xx) v 96 % metanolu, xxxxxxxxxxxx X (Sigma) (1 xx/xx) x xxxxxxxx xxxxxxxxx. Zásobní xxxxxxx xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 měsíce. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx skladování x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0 g
Kvasnicový extrakt (Xxxxx)	2,0 g
D-manit	5,0 g
K2HPO4	2,0 x
XX2XX4	0,5 g
MgSO4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí,upraví xx xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x ochlazení xx 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxx X sulphate (Xxxxx) 0,003g, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008 x, cycloheximide (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx acid x 0,01 M XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx média xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx by xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skupinou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Vícenásobný XXX xxxxxxxx x xxxxxxx PCR xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx primery

primer XXX-1 5'- xxx ctt xxx ggg xxx xx xx -3'

xxxxxx XXX-X 5'- xxx xxx gat xxx xxx ctt xxx x -3'

xxxxxx NS-7-F 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx tgc -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx xxx xxx xxx cct acg xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x XXX X. ni. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x interní XXX xxxxxxxx 18S xXXX 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx na xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx voda (XXX)	15,725 μx
10x XXX xxxx (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μl	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x TP (20 xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μM
Primer XXX-X (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx NS-7-F(10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx množství	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Gold) x Xxxxx BRL.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx NS-7-F x XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxx xxxxx bramboru xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x purifikace XXX xxxxx Pastrika (2000) (xxx oddíl 6.1 xxxx. x) a 6.2). Xxx použiti xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxx izolace XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx PCR

Postupuje xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 xxxxxx xxx teplotě 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °X (připojení primerů)

vii) 1 minuta xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 minut xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C

Poznámka:

Tento xxxxxxx je xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx cyklerem MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxx použití xxxxxx xxxxxx může být xxxxx modifikace xxxxx xxxxx xx), xxx), xx), x), xx) x vii).

1.4. Analýzy xxxxxxxxx restriktivním xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx z XXX C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkuji xxxxxxxxxxxxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx specifického pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx mají xxxxxxx 282 xx a 220 xx.

2. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx modř 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (sodná xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Před použitím xx zředí xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Invitrogen nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx cat xxx xxx acg -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx gcc xxx cgt agg xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Zahřeje xx 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx xxxxxxx přibližně 60 °X a přidá xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX xx 7,0 přidáním 1 xx fosfátového xxxxx 0,1 X (PB; xX 7,0) a 5 kapek HCl 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zkontroluje xX x x xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx XXx nebo XxXX.

[XXXXXXXXXX: V XXXXXXXXX X PARAFORMALDEHYDEM XXXXXXXXXX XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,22 µx x skladuje xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx 4 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 M

Tris-HCl 60 xX (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 mM

Zředí xx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx CMSCY301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx vzorky) je xxxxx 90 µl xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

Tabulka: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx čistá xxxx	50,1	200,4
3x hybmix	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx EUB 338 (100 ng/μl)	4,5	18,0
sonda XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx oligosondy xx xxxxxxxxxx x temnu xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxx je xxxxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxxxxxx xx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého

Semena xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum melongena) xx vysejí xx xxxxxxxxxxxxxxx výsevního xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 až 14 xxx) xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx by se xxx pěstovat xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx nebo přirozená xxxxx dne, pokud xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Huckerově xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 g krystalové xxxxxxx v 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 x šťavelanu xxxxxxxx x 80 ml xxxxxxxxxxx vody.

Oba xxxxxxx xx smíchají.

Lugolův xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 g

Destilovaná xxxx 300 ml

Pevné xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Xxxxxxx xx do xxxx x xxxxxxx xx x uzavřené xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, vysuší xx na vzduchu x fixují xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xx působit 1 xxxxxx.

3. Krátce se xxxxx pod xxxxxxx xxxxx.

4. Zalije xx Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x nechá xx xxxxxxx po xxxx xxxxx minuty.

5. Xxxxxxxx xx xxx tekoucí xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx kapkách xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx vyplavuje barvivo, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Opláchne xx xxx tekoucí xxxxx x xxxxxx xx savým xxxxxxx.

8. Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x nechá xx působit 10 x.

9. Opláchne se xxx xxxxxxx xxxxx x vysuší xx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, gramnegativní xxxxxxxx xx zbarví xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx and xxxxxxxxx xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xx batches xx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx EUR 11&xxxx;288 XX, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, J. F., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Xxx. Pl. Path., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx extraction xxx xxxxxxxxx of Corynebacterium xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx tubers. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Determinative xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx xxxxxxx for xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, American Xxxxxxx for Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Hugh, X. x Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxx versus xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx various gram-negative xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx strains using xxxxx cell xxxxxxxxx xxxxxxxx. Systematic and Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. X. a J. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx the XX xxxxxx for xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx ring xxx xxxxxxxxxx (Corynebacterium xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. EPPO Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx capabilities xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, N., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx of Pseudomonas xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Rudolph, X x X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx in Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Kiadó, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. X., X. Xxxxxxx x A. X. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx pseudomonads X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx detection xx xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx sepec xxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx potato xxxxxx. XXXX Bull., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. xx Boer, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx primers xxxx XXX intergenic xxxxxx region xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., X. x X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. x X.X. Rainey. 1999. identification xxx xxxxxxxxxxxxxxx of Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subspecies xx xxxxxxxxxx cham reaction-based xxxxxxxxxx. X. Phytopathology 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxxx tubers xx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx host XXX. Xxxxxxxx Joiunal xx Xxxxx Pathology, 106, 155-165.

18. Ramamurthi, X. S., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx on xxxx Gram-positive phytopathogenic xxxxxxxx and their xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Exp. Xxx., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, A. x Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx by X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx fluorescence xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Minnesota:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X xxxxx xx xxx identification xx xxx genera xx xxxxxxxx. 2xx xx., William xxx Xxxxxxx Company, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, J; Stead, XX., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx PCR profiling xxxxx xxx BOX-A1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx identification xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, P. X. A. xxx X. G. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx xx xxxx reproductibility xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: report xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Antonie xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Pseudomonas xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, A. R.; Xxxxx, X. X. x X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx fluorescent xx situ xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

B. XXXXXX XXXXXXXX, DETEKCE X IDENTIFIKACE XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx:

x) diagnózy xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx a bakteriálního xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx dalších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx, xxxxxxx bramboru, rostlin xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, x xx vzorcích xxxx x půdy,

iii) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx pracovat xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x odpovídajícím xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správy.

Testovací xxxxxxxxx xxxx zajišťovat xxxxx x reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx metod.

Zcela xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol.

Testování xxxxx xxxxxxxxxxxx prahů xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, např. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx uplatněno xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x jiným xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x výskytu, xxx je xxxxxxx x §4 odst. 1, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx screeningový xxxx (xxxx XX, PCR/FISH, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx založeném xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx být xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx je x druhý xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní, xxx xx podezření potvrzeno x xxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx za infikovaný X. solanacearum.

Potvrzená přítomnost xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x identifikaci xxxxx xxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete a xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo bakteriálního xxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx nebo typickými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx patogena x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx půdě x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

1) Xxxxx příznaků xx xxxxxxx v oddíle 2.1.

2) Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx předběžnou xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx xxxxx slizu xx xxxxxx cévních xxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.1.

4) Test xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.5.

7) Xxxx FISH xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx extraktech xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Test XXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx obvykle xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx metodou xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx ředěním) (xxx x oddíle 2.3.).

11) Typická morfologie xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx může selhat xxx pokročilých fázích xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx bujného xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx typické, ale xxxxxxxx xxxx je xxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx opakovat, nejlépe xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. solanacearum se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Xxxxx specifická xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxx doporučuje xx xxx xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxx 6.3.

1.2. Postupový xxxxxxx pro detekci x xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx latentních xxxxxxx x hlízách xxxxxxxx. Pozitivní výsledek xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxxxxx x diagramu 3), x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxx patogenu x xxxx, v xxxxxxx izolace typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx kultura xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx screeningového testu xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx testy x izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx testů.

1) Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x na xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx provedena xxxxxxx x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

4) Test XX xx popsán x xxxxxx 6.1.5.

5) Test xxxxxxxxxx izolace xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA jsou xxxxxxx v oddíle 6.1.8.

9) Biotest xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx izolační xxxxx jsou xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx testy xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x blízkosti xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx.

12) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx se dosáhne xxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx v xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Metody extrakce x koncentrace xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.2.1.

3) Pokud xxxx alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx za negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

5) Test XX xx popsán x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Testy XXXXX xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační testy.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, x kterých xx podezření, xx xx xxxxx x X. solanacearum, xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx v oddíle 6.2.

13) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

2. Diagnóza xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Příznaky

2.1.1. Příznaky x bramboru

Rostlina bramboru. Xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxxxx teplotách xxxxx xxx, přičemž x xxxx dochází x xxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx zůstávají xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx žloutnou x xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxx. Dochází také x xxxxxxx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo celé xxxxxxxx xx rychle xxxxx xxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx. Z xxxxxxx xxxxxx napříč xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx obvykle xxxxxx xxxxx x mléčný xxxxxxxxxxx xxxx nebo xx xxxxx sliz xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx slizu.

Hlíza xxxxxxxx. Xxxxx bramboru xx třeba překrojit xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx pupkový konec. X xxxx fázi xx infekce xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx cévního xxxxxxxx, xx kterého po xxxxxxxx xxxxxxxx začne xxxxxxx bledý xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx výrazněji xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx rozšíří vně xx xxxxxxxxx konce xxxxx x x xxxx xxxx vytékat xxxxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx se přilepují xxxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx červenohnědá, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vnitřního xxxxxxx xxxxxxx pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hnilob xxxxxxxxxxxxx a houbového xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx u xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx vzhled nejmladších xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxxx 25 °X, při xxxxxxxx vzdušné vlhkosti) xx během několika xxxx dní xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx celé xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx odumřením. Xx méně příznivých xxxxxxxx xxx patogena (xxxxxxx půdy méně xxx 21 °C) xxxxxxxx tolik xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx počet xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx nasáklé xxxxx xx spodu xxxxxx, které xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx příčném xxxx stonkem vylučují xxxxx zbarvená xxxxxx xxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx u jiných xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x S. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °X xxxx není xxxxxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxx (xxxx. x xxxxxxxx X. nigrum xxxxxxxx x nemocné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Při xxxxxxx xxxx příznaky stejné xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. dulcamara, která xx stonky a xxxxxx xx xxxx, xxxxx vykazovat vnitřní xxxxxx xxxxx zbarvení xxxxxxxx pletiv xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. X řezu xxxxxxx xxxxxx mohou xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx vlákna xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx do vody, x to x xxx xxxxxxx příznaků xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale nejsou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Test xx xxxxx slizu xx stonku

(Viz 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-b-hydroxybutyrátu (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PHB x xxxxxxx R. solanacearum xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxxx sklíčku xxxxxxx xxxxx X xxxx xxxxxxxxx černí (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningovými xxxxx xxxx xxxx IF (xxx xxxxx 6.1.5.), xxxx FISH (xxx xxxxx 6.1.7.), testy XXXXX (xxx oddíl 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx se sliz xxxx xxxxxx zbarveného xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx bramboru xxxx x cévních xxxxxx stonku xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se x xxxxx množství xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx se 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 xx suspenze x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx SPA; xxx dodatek 2) a/nebo Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx validované xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, viz dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů. Xxxxxxxx xx případně samostatné xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx suspenzí X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx xxx teplotě 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx vytvářejí xxxxxxxxxx izoláty X. xxxxxxxxxxxx perlově xxxxxxx xxxx, xxxxxx, nepravidelné x fluidní xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx malé xxxxxxx xxxxxxxxx máslovité xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- X Xxxxxxxxx tetrazolového xxxxx x xxxxx XXXX jsou spirálky xxxxxx červeně zbarvené. Xxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx výskyt X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx izolátech jsou xxxxxxx v xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Větší xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Postup xxx vhodně použít x xxx xxxxxx x méně xxx 200 hlízami, xxxxx xx x dispozici xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx xx založená xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 hlíz.

- Xxxxxxx bramboru xxxxxxx xxxx může xxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx před přípravou xxxxxx

x) Inkubace vzorků xxx xxxxxxx 2-30 °X xx dobu xx 2 týdnů xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx všech xxxxxxxx X. solanacearum.

b) Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx se vhodné xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx DNA) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se nechají xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx mytí xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx ve xxxxxxxx xxxxxx zeminy nebo xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx čistého x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx vyříznou malé xxxxxxxx xxxxxxxx pletiv xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx pletiva nezahrnující xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx hlízy xx xxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx naříznuté xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx uchovávají xx xxxx xxxxxxx 2 xxx xxx pokojové xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °C) xx řádných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx přílohy XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx z pupkové xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx utěsnitelné (v xxxxxxx, že nádoby xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx xx možné, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; x chladu xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx z pupkových xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (přibližně 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx se v xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx nižší xxx 24 °X xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) buď x xxxxxx (např. Xxxxxx nebo Ultra Xxxxxx) nebo drcením x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx jedno xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx xxxx Bioreba, 150xx x 250xx, sterilovaný xxxxxxx) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí křížové xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx zamezit vzniku xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xx použijí čerstvě xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x xxxxxx. Při xxxxx PCR je xxxxx zabránit xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxx XXX xx doporučuje xxxxxx drcení x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Supernatant se xxxxxxxxx. Je-li příliš xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10 °X) nebo xxxxxxxx filtrací (40-100 µx), filtr xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 xxxxx (nebo 10&xxxx;000 g po xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4-10 °X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx v 1,5 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 4). Použije xx 500 µx xxx X. solanacearum, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xx konečnou xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxx x uloží xx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (týdny) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx uchovávají během xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x rozmrazení se xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná přeprava xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx s doručením xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx uchovány x zpracovány xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX a xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Testování

Postupové diagramy x xxxxxx xxxxx x optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

IF xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx FISH (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Biotest (xxx oddíl 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci X. solanacearum ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx latentních xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx xxxxxx. Postup xxx xxxxxx použít xx xxxxxxx vzorky x xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx průzkum, xxx xx xxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Do xxxxxxxx sterilní xxxxxx xx xxxxx 1-2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx následujícího xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x předpěstírny: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx kousek xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxx stonku xxxx xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx nejspodnější xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxx xxxxxxxx uříznutý xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx stonkem. Xxxxxxx xx nejspodnější, 1 xx xxxxxx díl x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1 xx xxxxxx xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. X xxxxx xxxxxxxxxx (S. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxx xx odeberou 1-2 xx xxxx xx xxxxxx pod xxxxx nebo xxxxxxx x xxxxxxx kořeny.

Při xxxxxxxxxx určité xxxxxxx xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx vzorek x xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx na 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx hostitelskou xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx bude xxxxxxxxxxxxxxxx v období xxxxxxxx xxxx, léta x podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxxx Solanum dulcamara xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Mezi xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx patří xxxxxxxx xxxxxxxx bramboru, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx stramonium x další zástupci xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami jsou xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, které xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum xxxxxx 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Eupatorium xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx spp., Xxxxxx xxxx. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx fázi je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx nebo xxxxxxxxxxx sliz). Jakýkoli xxx stonku s xxxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Části stonku xx krátce xxxxxxxxxxx 70% etanolem x xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx stonku xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) zalijí xx xxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx xxxxxxx třepačce (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx chlazené,

nebo

b) xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku (např. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x přiměřeným množstvím xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Homex). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X) na 24 xxxxx.

3.2.1.3. Po xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx není třeba, xxx xxx xx xxxxxxx filtrací xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vzorkový xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx se xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X a xxxxx xxx se xxxxxxxx x 10-25% (x/x) sterilním xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °C (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx testování.

3.2.2. Testování

Postupové xxxxxxxx a xxxxxx xxxxx x optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických bakterií x doporučuje se xxx tehdy, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx testu.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

(4) Biotest xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

(5) Metody xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Metody xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx selhat x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx spolehlivost xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx vodě

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v tomto xxxxxx je použitelné x xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích povrchové xxxx x rovněž xxxx xxx použito x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx vody. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx detekce xx xxxx xxxx x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxx xx zpracování brambor x odpadní xxxx xxx x povrchové xxxx. Zatímco xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx detekce x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx brambor a xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx důvodu xx doporučuje testovat xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx nějakého xxxxxxxxx xxxxxxx (např. sedimentace xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxxxx. Omezení citlivosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxx x úvahu xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx se xxxx xxxxxx používá xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v povrchové xxxx, xx třeba xx uvědomit jeho xxxxxxx xxx použití x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx vodě xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x povrchové xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx a podzimu, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxx době xxxxx xxxx xxxxxxxxx období xx určených vzorkovacích xxxxxxx xxxxx spolehlivost xxxxxxxx snížením xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx podmínek.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx x geografie xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xx značnému xxxxxxx x xxx i xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx vody xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx místech xx odeberou vzorky xxxx xx sterilních xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30 xx pod xxxxxxxx x 2 m xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx vzorky x místa výtoku xxxxxxx vody. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 500 xx. Je-li xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx odebrat xxxxxx nejméně 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x nichž xxxxx xxxx obsahovat 2 xxxxxxxxx dílčí xxxxxx o velikosti xxxxxxx 30 ml. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx každé 3 xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Vzorky xx xxxxxxxxxx v xxxxxx x xxxxx (4-10 °X) atestují xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx provedena xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000 g po xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 g xx dobu 15 xxxxx), xxxxx možno xxx xxxxxxx 4-10 °X, xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx x 1 xx xxxxx (dodatek 4).

b) Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µx) s následným xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 xx peletového xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx metoda xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx u xxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx brambor xxxx x vzorků xxxxxxx xxxx, protože zvýšená xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx diagram x xxxxx testů x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum x xxxx

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., xxx jsou xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx PCR xxxxx xxxx popsány v xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 6.1.9.

(5) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx může selhat x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx xx xxxx saprofytické xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, opakují xx xxxxx selektivní xxxxxxx xx dalším zředění xxxxxx.

(7) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

(8) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum x půdě

Principy

Platné detekční xxxxxx popsané x xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx xxx detekci xxxxxxxx xx vzorcích xxxx, xxx může xxx rovněž použito x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx xxxxxxxxxx brambor xxxx xxxx x xxxxxxx xxxx. Xx však xxxxx poznamenat, xx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx nepravidelně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx x přirozeně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx xxxxx získaných xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a také xxx sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx x úvahu xxxxxxxx citlivost xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx přítomnosti xxxxxxxx x xxxxx půdě xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx infikována, xxx x xxx použití xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx vzorků

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx polní půdy xx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx principy xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx xxxx xx 60 xxxx na xxxxx 0,3 xx x hloubky 10-20 xx. Xx-xx podezření xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 x xxxxxx 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx xx uchovávají xxxxxx xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx shromážděním celkem 1 xx z xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx celkový xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx se xxxxx vzorek dobře xxxxxxxx.

5.2.1.2. Dílčí xxxxxx 10-25 g xxxx xxxx kalu xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx extrakčního xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% sterilního Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxxxx disperzi.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx testy

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin může xxxxxx xxxxxxxxxxx jednoduchý xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Řez stonku xx xxxxxx xx xxxxxxxx x čistou xxxxx. Sleduje se, xxx se xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx proudící xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x přeříznutých xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx YPGA xxxx XXX (dodatek 2) na xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx PHB xxxxxxxxxx xx.

3. Roztěry se xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx povrch každého xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx nebo súdánskou xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx xxxxxxxx nilské xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Odstraní xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x kohoutku. Xxxxxxxxxx xxxx se odsaje xxxxx xxxxxxx.

x) Roztěr xx xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při pokojové xxxxxxx.

x) Krátce se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx se xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxx xx navlhčí xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx xxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx xxx 450 xx xxx olejovou xxxx vodní xxxxxx xx zvětšením 600x xx 1000x x xxxxxxxx objektivu pro xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx se xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx fluorescence. Xxxx xx xxxxxxxx x procházejícím normálním xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx černi X x 70% xxxxxxx x inkubují xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

b) Xxxxxxxx xx barvící xxxxxx x krátce xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx x odsaje xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx ponoří xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Upozornění: Xylol xx xxxxxx xxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xxxxxx inkubovat xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx nezbytná bezpečnostní xxxxxxxx x pracovat x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx, odsaje se xxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx x xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx obarvený xxxxxx mikroskopem x xxxxxxxxxxxxx světlem xxx xxxxxxxx xxxxxx a xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PHB xxxxxxx x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s růžově xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxx je nejlépe xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, např. červenými xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx aureus xxxx obarvenými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxx xxxxxxx. Jinak je xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Smíchají xx kapky suspenze xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx slizu (xxxxxxxxx 5 µl každé xxxxx) na xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx sklíčka.

b) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxx suspenzí xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx a heterologního xxxxx.

x) Pozoruje se, xxx se x xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxxxx míchání xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx na xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx xxxx metoda xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx tvořících kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx výsledkem.

Použije xx xxxxx validovaná selektivní xxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; xxx dodatek 2).

Rozlišení X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx živné půdě xxxx vyžaduje velkou xxxxxxxxx. Dále, kolonie X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx atypickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx přeplněny xxxx xxxx xxxxxx přítomny xxxxxxxxxxxxxx bakterie. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, měl xx být vzorek xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků lez xxxxxxxx, xx citlivost xxxxxxx xxxxx metodou xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx je xxxx xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě xx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx virulentního xxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx možné xxxxxxxxxxx xx připraví pozitivní xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půdy xx xxxx xxx xxxx jejím použitím x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx nejdříve otestována xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (vzorky).

1. Provede xx ředění x xxxxx xxxxxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx se 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 misku xxx xxxxx ředění.

2. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 hodinách se xxxxxxxxxxx jejich xxxx x xxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 dní. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na xxxxx xxxx XXXX xxxx xxxxxx xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx x fluidní x po 3 xxxxx inkubace xx xxxxxxx xxxxxx až xxxxxx xxxxxxx zbarvení xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xx xxxxx xxxxx tvoří xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, kruhové, xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxx rozeznatelné xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx tvořících xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx očkují xxxxxxx zřeďování xx xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu., xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, xxx chlóru) xxx pokojové xxxxxxx x xxxxx nebo xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx -68 až -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Provede xx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) x test xxxxxxxxxx (xxx oddíl 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx selektivní xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx žádné xxxxxxxxx xxxxxxx typické xxx X. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, xx nedošlo x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nalezeny xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx xxx obohacení, xxxx. modifikovaný bujón Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx zvětšení xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxx x zvýšení xxxxxxxxxx detekce. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xx zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx (1:100). Obohacení X. xxxxxxxxxxxx xxxx může xxx neúspěšné x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx obohaceny. X xxxxxx xxxxxx xxxx být izolace X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx obtížná. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, se xxx test XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx testu XXX xx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. U xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX může xxx xxxxxx xxxxx xxxxx extraktu xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 ml xxxxxxxxx xxxxx půdy).

2. Xxxxxxxx se 72 xxxxx xxx teplotě 27 až 30 °X v třepané xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx uzávěry, xxxxx xxxxxx provzdušňování.

3. Xxxx zahájením testů XXXXX xxxx XXX xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx se zachází xxxx způsobem jako xx vzorky ve xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx inhibice xxxxxxxxx X. solanacearum z xxxxxx vysoké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxx xxxxxxx lepších xxxxxxxx obohacením extraktů xx xxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Test xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx kvůli xxxxxxxx spolehlivosti v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx xxxxx xxxxxxx další xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Doporučuje xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx novou xxxxx protilátek. Xxxx xx definován jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (FITC) xxxxx xxxxxxxxxx výrobce. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx použity xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx na čerstvě xxxxxxxxxxxx extraktech xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx nutné, může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 xx - 86 °X v xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx vzorku xxxxxxxxx přidáním 1 xx pufru (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x x xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx peletového pufru. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx x jsou vzorky xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka x homologickým xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x dodatku 3 X, x nepovinně x xxxxx.

Xxxxxxx infikované xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx zmrazením xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °X) xx xx xxxx xxxxx možností xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktů xx vzorků, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním výsledkem.

Standardizované xxxxxxxxx k xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrole, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxx možno x 10 xxxxxx x průměrem nejméně 6 xx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx sedimentu xxxxxx:

Xxxxxxxxxx se odměřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx okénka 6 mm - x xxxxxxx xxxxxx xx množství xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety x xxxxxx 1/100 xx prvního okénka.

Následně xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx je xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x většího xxxxxx xx množství xxxxx v příslušném xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx pelety xxx každé xxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx kapičky xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím na xxxxxxx 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxx se fixují xx sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx v suchém xxxx po xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) před xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x odst. 5.1.i):

Připraví xx sada xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx jamka xx xxxx mít 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x xxxx. 5.1.ii):

Připraví xx pracovní ředění (XX) protilátek x xxxxx XX. Pracovní xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx sklíčka xx test xxxxx xxxx. 6.1.5.1.i) x 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx sklíčka na xxxx xxxxx odst. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx kompletně ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud nejsou x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

2. Podložní xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx přikrytá xx dobu 30 xxxxx při pokojové xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx všech xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx pečlivě opláchnou xxxxxx IF. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 minut x xxxxx IF Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Je třeba xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx kapiček, xxxxx xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředěním xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx stejné jako xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se inkubují xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx konjugátu ze xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx předtím (3.).

Opatrně xx xxxxxxxx přebytečná xxxxxxx.

7. Napipetuje xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx každého xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX testu

1. Prohlížejí xx testovací xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx navzájem xxxxxxx průměrech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x žádnými xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí být xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovním ředění. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxx XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Pozorují xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x charakteristickou xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx okéncích xxxxxxx. Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx lepší. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo slabou xxxxxxxxxxxx nelze brát x úvahu.

Při podezření x xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx test xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx vykazují pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxxx z pupkové xxxxx bramboru x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx morfologií x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Xxx zjištění xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx odhadne průměrný xxxxx typických buněk x 1 mikroskopovém xxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Výsledek XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx počet typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx je xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5 x 10³ buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx se xxxx XXX xxxx xxxxxx screeningový xxxx x xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx test, x xxxx xxxxxxx nebo XX. Jestliže xx XXX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx provést xxxxx testování podle xxxxxxxxxxx diagramu, aby xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxx xxxxx, xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaný do xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx může vyžadovat xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxx činidla a xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx xx metoda x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx DNA. Xxxx XXX xx měl xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxxx XXX.

X negativními xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) by xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x konečnými xxxxxx, xxx bylo xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx kterých xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (přípravu viz dodatek 3 X);

- suspenze 10⁶ buněk xx 1 xx R. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x virulentního izolátu (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx XXX použít také XXX xxxxxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravují xx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, které budou xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze vzorků xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. V případě xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

X purifikaci cílové XXX z komplexních xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx různé xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX a jiných xxxxxxxxxx reakcí a xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX xx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx metodami PCR xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Xxxxxx podle Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx lyzátového xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) do 1,5 xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx se 100 µx extraktu xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xx umístí xx xxxxxxxxxx nebo xxxxx lázně x xxxxxxxx 95 °C xx 10 min.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx roztoku lysozymu (50 mg lysozymu/na 1 ml 10 xX XxxxXXx, pH 8,0) a xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X po dobu 30 xxxxx.

5. Přidá xx 220 µl xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx při xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxx Xxxx DNA® B (Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vzorek xxxxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx chloroformu x xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx homogenní.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxx. xxx xxxxxxx 4 °X.

9. Xxxxx fáze xx xxxxxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx se 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x inkubuje xx xx xxxx xx xxxx 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15 000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C x xxxxxxxx xx etanol x xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µl 80 % etanolu (- 20 °X) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15 000 x xx dobu 10 minut při xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx etanol.

14. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xx vzduchu xxxx x XXX xxxxxxx.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxx v 100 µx xxxxxxxx UM x xxxxx xx xxxx při pokojové xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Skladuje se xxx teplotě - 20 °X xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx bílá xxxxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX xx xxxxxxx xxx xxxx PCR.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX, např. Xxxxxx XXxxxx Plant Xxx, xx se mohly xxxxxx, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxx PCR xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Připraví se xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx vodě).

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX v xxxxxxxxx, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx zveřejněných xxxxxxxxx (dodatek 6). Pokud xxxxx, doporučuje xx xxxxxx xxxxxxxxxxx protokol XXX, který xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx protokol XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX na 25 µx XXX xxxxxx podle xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x přidá xx xxx xxxxx XX jako xxx xxx, xxxxx byl xxxxxx xx směsi XXX xxxxx vzorku.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx xx xxxxxx optimalizovaný xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

1. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x agarózovém xxxx. Nanese xx xxxxxxx 12 µl xxxxx amplifikované XXX x každého xxxxxx x 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (TAE) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 V/cm. Xxxxxxx xx vhodný XXX xxxxxx, např. (ladder) 100 xx.

2. Detekují xx xxxxxxx DNA xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 minut xx použití vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x UV (xxxxxx xxxxxx délky např. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx velikosti x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

4. U všech xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx XXX provedením restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované XXX inkubací při xxxxxxxxx teplotě x xxxx xxxxxxx restrikčním xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Naštěpené xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX světlem po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx s xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace výsledků xxxxx XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx R. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxxx není x xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx, ale xx xxxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x interními xxxxxxxxxxx primery xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx se zkoumaným xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxxx amplikon PCR xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx x (případně) xxxxx, xx předpokladu, xx xxxx amplifikován x xxxxxxx vzorku negativní xxxxxxxx. Spolehlivé xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx opakováním xxxxx s druhou xxxxx primerů XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx podezření xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vodě, zatímco xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktu xxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx. V xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx inhibici xxxxxx, xxxxxxxx xxxx získán xxxxx ze xxxx xxxxxxxxx.

X případě, že xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx z jednoho xxxx xxxx vzorků xxxxxxxxxxx xxxxxxx, je xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx provedena xxxxxxx nebo XX xxxx. Xxxx se XXXX test xxxxxxx xxxx druhý vyšetřovací xxxx x xx xxxxxxxxx, xx k xxxxxxxxx diagnózy nutné xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx R xxxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx být xxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx s xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xxxx - 68 až - 86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx použije xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx testován xx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (např. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) v 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) ze 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx sklíčka x pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx kmenu xxxx xxxxxx referenčního xxxxx R. solanacearum, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu hybridizace, xxxxxxx xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx x xxxxx testu, xx uveden x dodatku 3 xxxx A.

Test xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxxxx et xx. (1998).

1 Připraví xx xxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx se 100 µx každého xxxxxxxxxx extraktu do Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xx xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 g.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx ve 200 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx 1 xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Odstřeďuje xx 7 xxxxx xxx 7 000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx x 75 µ10,01X PB (xxx dodatek 7).

5. Kápne se 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx čisté 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx se xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx vzorku (49 µl) může xxx uložen xxx xxxxxxx - 20 °X xx přidání 1 xxxxxxxxxx množství 96 % xxxxxxx. X případě, xx xx xxxxx FISH xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx etanol xxxxxxxxxxx x xxxxx se xxxxxx množství 0,01 XX (xxxxxxx se xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Rozmístění xx sklíčku XXXX

6. Sklíčka xx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx (xxxx v xxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 37 °C) x xxxxxx se xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx a x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % a 96 %, xxxxxxx po xxxx 1 minuty. Xxxxx xx vzduchem x xxxxxx sklíček.

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx přikrytím xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nasáklým xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx box x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx teplotě 45 °X po xxxx xxxxxxx 10 minut.

3. Xxxxxxx xx 10 µx hybridizačního xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; viz xxx. 7.1) na xxxxxx sklíčku, xxxxxxx xxx xxxxxxxx okénka (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx xxxxx x xxxxxxxx 4 okénka, x xx xxx, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx předem xxxxxxx xxxxx komory x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx x troubě xxx xxxxxxx 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 l 1x xxxxxx (334 xx 3x hybmix x 666 xx xxxx x molekulární xxxxxxxx) x 1 x 1/8x hybmixu (42 xx 3x xxxxxx a 958 xx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx lázni x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx x podložní xxxxxxx xx xxxxxx xx držáku xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx x kádince x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°C.

8. Xxxxx sklíček se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx se xxxxxx ponoří xx XXX (xxxx. Xxxxx X water) x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx povrchu xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Vectashield, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx okénka x celé xxxxxxx xx xxxxxxx velkým xxxxxx sklíčkem (24 x 60 mm).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Xxxxxxx se ihned xxxxxxxxxx xxx mikroskopem xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630 x nebo 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (FITC) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx X. xxxxxxxxxxxx obarvené Xx3 xxxx fluorescenčně xxxxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx xxx jasně fluoreskující x zcela xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxx. 6.1.7) xxxx být xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx odchylné. Xxxxxxxxxx xx okénka xxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. U xxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxx žádné xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x morfologií xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx lepší xxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Xxx podezření xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx test xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x případě, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx ukazují pozitivní xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx sklíčka) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxx nese xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx u xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxx x výskytu xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. solanacearum, x když xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x xxxxx IF.

5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx při xxxxxxx FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx fluoreskující xxxxx s xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx X. solanacearum x xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 mikroskopovém xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx alespoň 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x velikostí x xxxxxxxxxx typickou xxx X. solanacearum, jestliže xxxx tyto xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX lze xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx testů XX, XXX nebo XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx DAS XXXXX xx xxxxxxxxx x použití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Obohacení xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX může xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx může xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx organismů xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx novou šarži xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx k optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx druhotných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx jakou titru xxxxxxxx formulace.

Určí xx xxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. solanacearum.

Vzorek, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxxx jako R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx bakterií bez xxxxxxxxxx působeni v xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xx xxxxxxx xxxx vzorky xxxxxxxxx kontroly.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 xx xxxxxxx 2 X. solanacearum (xxxx. xxxx XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X x B). Xxx srovnání xxxxxxxx xx každé destičce xx použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx v XXX X. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx dobře xxxxxxxx od xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx v dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorku(ů).

Validované xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x) Nepřímý xxxx XXXXX (Robinson Xxxxx xx xx., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X xx 4 xxxxxx ve vodní xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxxxx případech xxxxxxxxx xxxxx nespecifických xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx stejné xxxxxxxx dvojnásobně silného xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx každé jamky xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X nebo 14 - 18 h xxx xxxxxxx 4 °X.

4) Extrakty se xxxxxx x xxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx pomocí XXX-Xxxxx (dodatek 4) a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxxxx 5 minut.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx pufru (dodatek 4). X validovaných xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx xx titr).

6) Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x nechá se xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x jamky xx vymyjí xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx vhodné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Přidá se 100 µx do xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx fosfatázy (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx x temnu xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 405 xx v xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) DAS-ELISA

1) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx pufru xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx při teplotě 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° X xx xxxx 16 hodin.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím PBS-Tween (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx extraktu xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X.

3) Jamky xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx specifických xxxxxxxxxxxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx x XXX (dodatek 4) x obsahem 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xxxxx se 190 µx xx každé xxxxx x nechá xxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

5) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx ředění xxxxxxxxxxx imunoglobulinu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v XXX. Xxxxx xx 190 µl xx xxxxx xxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Přidá xx 200 µl xx xxxxx jamky x xxxxxxxx se x temnu xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx ELISA je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) x xxxxx xx stejnými xxxxxx xx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx, xxxxx všechny xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx 1,0 (po 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX získané x negativních vzorkových xxxxxxxx.

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX z xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx dvojnásobek XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx xxx dvojnásobek xxxxxx x pozitivních kontrolních xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx nebyl xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx inhibován. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, že došlo x vzájemné kontaminaci xxxx nespecifickému xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx očekávat xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx však xxxx xxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx v glycerolu x xxxxxxx - 68 xx - 86 °C.

Následující protokol xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 testovacích xxxxxxx xxxxxxx odrůdy xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx třech xxxxxxx xxxxx u každého xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx v dodatku 8. Xxxx se použije xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Beauty nebo xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), ale jen xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. xxxxx xx do xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx sazenice xxxxxx.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx mezi xxxxxxxxx rostliny.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulují se xxxxxx xxxxxxx hned xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx stříkačky s xxxxxxxx jehlou (xx xxxx než 23G). Xxxxxx se rozdělí xxxx xxxxxxxxx rostliny.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x pipetou xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx děložními xxxxx x xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxx xxx 1 xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx řez xx xxxxx x místě xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxx xx utěsní xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx, připravenou xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní kontrolní xxxxxx, a xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx pozitivní x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °X a vysoké xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx jak xxxxxxxxxx, xxx vadnutí x důvodu xxxxxxxxxx xxxx. Aby xx xxxxxxxxx kontaminaci, xxxx xxx xxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx přísně xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx být xxxxxxxx x různých xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx zástěnami. Při xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxxxx x všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx skleník xxxx xxxxxxxxx prostor xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx by xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx krnění rostlin.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx kultury (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx pozitivní, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (bod 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx všechny xxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (bod 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné výsledky xxxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx rostliny nevykazují xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum, xxxxx xxx organismus zjištěn x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nejméně xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx chybí x X. xxxxxxxxxxxx, metodami Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx fermentační xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx xxxx podle Xxxxxxx +

Xxxxxxx dusičnanů +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Xxxx x 2% NaCl -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx škrobu -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x xxxxx IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Použije xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx ELISA

Poznámka:

Při xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx ELISA se xxxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxxx x R. solanacearum.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx získaná x této kultury xx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx PCR

6.2.4.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx pure xxxxx).

6.2.4.2. Ohřeje xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx v uzavřených xxxxxxxxxx v ohřívacím xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °C 4 xxxxxx. Vzorky xxxxx xxx uchovány při xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xx dalšího xxxxxxx.

6.2.4.3. Použijí xx xxxxxxxxx postupy XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx xx. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx xx xx. (1999); Xxxxx et xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX mají xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

6.2.5. Xxxx FISH

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ buněk na 1 xx v XX.

6.2.5.2. Použije se xxxxxx FISH (6.1.7) x nejméně 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, jestliže se x xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx kultura xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 hodin xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx XXX (Janse, 1991; Stead, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3XX xxxxxxxxx na Xxxxxxxxx sp.

6.2.7. Metody xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx každý xxxx xxxxxx izolace X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx případně xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (viz dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx biovaru

R. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx oxidace xxx xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx alkoholů (Xxxxxxx, 1964 a Xxxxxxx et xx., 1990). Živná xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx popsána x dodatku 2. Xxxx lze xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx půdy x xxxxxx kulturou X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxx teplotě 28 °C. Je-li xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx destičky x 96 xxxxxxx (200 µx na 1 xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx od xxxxxxx zelené xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx testu.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx dílčích xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx a Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx R. solanacearum xxx dosáhnout několikerými xxxxxxxxxx, mezi něž xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxxx REP, XXX x XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Smith xx xx., 1995).

3. Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Wolf xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Xxxxxxx et xx, 2002; xxx dodatek 6) xxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx kmenů patřících xx skupiny 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) a xxxxxxx 2 (biovary 1, 2A x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou RFLP (Xxxx xx xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X rDNA (Taghavi xx xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x k xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur identifikovaných xxxx X. solanacearum xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx se 5 xx 10 náchylných xxxxxxx rajčete xxxx xxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx se nechají xxxxxxxxx xx 2 xxxxx při xxxxxxx 25-28 °X a xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxx. U čistých xxxxxx xx typické xxxxxxx xxxx nastat xxxxx 14 dnů. Xxxxxxxx-xx se po xxxx xxxx příznaky, xxxxxxx nemůže xxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx příznaky xxxxxxx x/xxxx epinastie, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx rozmělní x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx roztěrem xxxxx xxxxx xx selektivní xxxxx xxxx (dodatek 2). Xx inkubaci 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. solanacearum.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx) 23,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx a xxxxxxxxx tlakem při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Glukóza (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Rozpustí se xxxxxx x sterilují xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx se složky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx médium

kasein xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 g

Dextróza 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx se filtrem xxxxxxxxxxxxx roztok 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), až xx xxxxxxxx xxxxxxx koncentrace 50 mg na xxxx.

x) Xxxxxxxxxx selektivní xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 ml

Bacto-Agar (Xxxxx) (xxx pozn. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx na 50 °X x xxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx následujících xxxxxx, xxx xx xxxxxxx stanovená konečná xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600 000 X (xxxxxxxxx 100 mg)/l

Bacitracin (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (přibližně 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Signa C-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx X-3032) 825 U (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxx uvedených xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx X. solanacearum.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx být xxxxxx Xxxxx Agar #1. X takovém případě xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx xxxx xxxxxx xxxx konkurenčních xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxx o 1-2 dny xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x rozptýlenější xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 U/l xxxx omezit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxx růstu

Ralstonia solanacearum.

Roztoky xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx při xxxxxxx 4 °X x xxxxx x xxxx xx spotřebovat xx 1 xxxxxx. Xxxxx s xxxxxx xx xxxx xxx xxxx použitím xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nově připravená xxxxx živné xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kvality xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) a xxxxxxxxxxx, xxx se xx 2 xx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Validované xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, ale vynechá xx Xxxxx-Xxxx a 2,3,5- trifenyltetrazolium chlorid.

Upravená xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx al., 2002)

Xxxxxxxxx 10 g

Proteázový xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Steriluje xx tlakem xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx a xxxxxxx xx xx 50 °X. Přidá xx xxxxxxxxxxxx zásobní roztok xxxx pro xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx bud' x xxxxxxxxx kontrole (xxxxxxx 1) nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx vzájemnému xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xx xxxxxx x xxxxxx sbírek:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Sbírka xxxxxx sekce xxxxxxx xxxxxxx (PD), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx rostlin (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Francie.

Tabulka 1: Referenční xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kultur XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být zaručena xxxxx x případě, xx pocházejí z xxxxxxxxx sbírek kultur.

Tabulka 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX sérologicky nebo xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx x optimalizaci xxxxxxxxxx xxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx xxxx bramboru x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 zdravých xxxx xxxxxxxx obsahující 10³ xx 10⁴ x 10⁴ až 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX xxxxx. Protože xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, nejsou xxxx xxxxxx xxxx standardy x xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx fixované xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx k pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx vodivých xxxxxx XXX/XX a XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xx XXXX živné xxxx x xxxxxxxxxx xx v 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx přibližně 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 ml. Xxxxxxx xx jí xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx rovnající se xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 nm.

Odebere xx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx z produkce xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x které xx xx, xx xx prosta X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx výše uvedeným xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 10 xx. Připraví xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Přenese xx 100 µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se. Provede xx desetinásobné xxxxxx x xxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx z 100 X1 xx xxxxxxxxxx zkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx získá 9 kopií každého xxxxxxxxxxx xxxxxx. Uskladní xx při xxxxxxx -16 xx - 24 °C až xx xxxx použití.

Přítomnost x xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx potvrzeny xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx se provede xxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX a XXXX xxxxx xx xxxxxxx test xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx XX, XXXX a XXX xxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x nesmí být xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 4

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx až xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Extrakční xxxx (50 mM xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (bezvodý) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x sterilizuje x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x sterilizuje v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 min.

2. Pufry xxx XX xxxx

Xxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx roztoku (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Tween 20 x pufru xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, pH 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx okénka xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná voda 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Citifluor® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx testu XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx uhličitanový xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 g

NaH XX3 11,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 minut.

Pokud xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx aromatických molekul, xx možné jako xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx fosfátem (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 g

Na₂HPO₄. 12X₂X 29,0 g

KCI 2,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

3.3. PBS-Tween

10xPBS 100 xx

10 %Tween 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 ml

3.4. Xxxxxxxx pufr (xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx).

10 x PBS 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Tween 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 g

Destilovaná xxxx xxxxxxx do 100 xx

3.5. Xxxxxx xxx substrát xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Diethanolamin 97 xx

Xxxxxxxxxxx voda 800 xx

Xxxxxxxx se x xxxxxxxxxxxxxx HCl xx upraví pH xx 9,8.

Doplní xx xx 1 l xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 g XxXX₂.

Xxxxxxxx xx dvě 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) v 15 ml roztoku.

4. Xxxxx pro xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1. Potahovací pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1 000 xx

Xxxxxxxx se složky x xxxxxxxxxxx pH 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (PBS) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 g

Na₂HPO₄ .12X₂X 27 g

NaH₂PO₄ . 2H₂O 4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1 000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Substrátový xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 ml

Destilovaná voda 900 xx

Xxxxxx se x xxxxxxx xx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x x S/s,

kde X = xxxxxx xxxxxxx pole na xxxxxxx x xxxx xxxxxx a

s - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x rozmezí 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X =C x 1&xxxx;000/x x F,

kde x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nejméně 10³ xx 10⁴ xxxxx X. solanacearum xx 1 ml xxxxxxxxxx extraktu. Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Protokol XXX Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx OLI-1 : 5'-XXX GGT XXX XXX CTA XXX XXX-3'

Xxxxxxxx primer X-2: 5'-XXX XXX XXX GCC TCC XXX AGG XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu templátové XXX X. solanacearum = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx xxx 96 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: ii) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 20 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 30 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 10 minut xxx 72 °C (závěrečná xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx Perkin Elmer 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. solanacearum XXX xxxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Ava XX po inkubaci xxx xxxxxxx 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx a Maisse (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1: 5'-xxx cga xxx xxx gcg ggg x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-xxx gat xxx xxx tcg xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 bp.

2.2. Reakční xxxx PCR

Reagencie	Množství x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x xxxx PCR (1)	2,5 μl	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx polymerasa (5U/μl) (1)	0,1 μl	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x Gibco XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Perkin Elmer XxxxxXxx x xxxx xxxxx xxx rovněž xxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 xxxxxx xxx 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx použití termocykleru XX Xxxxxxxx PTC 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) a iv).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx DNA vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx fragmentů s xxxxxxx Taq X xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx a 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxx xxxxxxxxx (Pastrik xx al., 2002)

3.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-ACT XXX XXX GCA XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX AGT CAC XXX XXX XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx NS-5-F: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX ACG XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX XXX TGT XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. solanacearum = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu interní xxxxxxxx XXX 18S xXXX = 310 xx (sada xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx při 58 °X (xxxxxxxxxxx primerů x templátovou DNA)

iv) 45 xxxxxx při 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x iv).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Bsm 1 xxxx Xxxxxxxxxxxxx (např. Xxx 1269 I) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (Pastrik xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX GCA XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX CAC GGC XXX GAC X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Reakční směs XXX

x) Protokol PCR xxxxxxxxxx xxx biovar 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces xxx obě reakce xxxxxxxxxx xxx biovary 1/2- x biovary 3/4/5:

1 xxxxxx: i) 5 minut xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 sekund xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °C (hybridizace xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat úpravu xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. solanacearum pomocí xxxxxxx Rs-1-F a Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Mva 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxx 65 °X. Produkty XXX vzniklé amplifikací x XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) voda (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Před použitím xx xxxxx na 1 X.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum XXx-1-XX3: 5'-xxx xxx xxx xxx gct xxx ccc-3'

Nespecifická eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx cgt xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx čisté xxxx (xxxx. Ultra xxxx xxxxx = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx se 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Parafonnaldelryd xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx pH xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx xx xX indikačním xxxxxxxx x v xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx pomocí HCl xxxx NaOH. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT MĚŘIČ XX!]

xxx) Přefiltruje xx xxxxxx xxxx membránový xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx se xxxxxxxx před xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se až x, podle potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Hybmix

Sodium xxxxxxx xxxxxx (SDS) 0,01 %

Formamid 30 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx OLI-1 xxxx OLI2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx množství xxxxxxxxxxxxxx roztoku podle xxxxxxx x tabulce 1. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx roztoku. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX JEDOVATÝ, XXXXX XXXXXXXX RUKAVICE A XXXXXX POTŘEBNÁ BEZPEČNOSTNÍ XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx chrání xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1M fosfátový xxxx, xX 7,0

Na₂HPO₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx lilku x rajčete

Vysejí xx xxxxxx rajčete (Lycopersicon xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 xxx) xx přesadí xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx se xxxx pěstovat xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 14 až 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx odrůda xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: viz internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Amann, X.x., L. Xxxxxxxx xxx D.A. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Anon. 1998. Council Directive 98/57/XX of 20 Xxxx 1998 xx xxx xxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx etal. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx European Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, G., X.X. Xx Xxxx, K. Xxxx, P. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx application xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx isolates. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, M.T., Xxxxxx, X., Palomo, X.X., Collar, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Double-Antibody Xxxxxxxx Xxxxxxxx Enzyme-Linked Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in Xxxxxxxxxxxx Potato Xxxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, D., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx of xxxxxxxxxxx xxxxxxxx length xxxxxxxxxxxxx with XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx the xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx xxx isolation and xxxxxxxxxxxxxx of Pseudomonas xxxxxxxxxxxx. Xx: A.C. Xxxxxxx (ed.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx huternational Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx De Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx in xxxxxxx xxxxxxxxxx in biovars xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Applied Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., Y. Ushijima, X. Fujii, S. Xxxxxx, X. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx and X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Janse, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx potato tubers xxx xxxx data xx its sensitivity xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, J.D. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ofYseudomosaas xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. The xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx to xxxxxx xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx medium. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx Z.; Rudolph, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Methods xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx diagnosis of xxxxxxxxx xxxxxxxx of xxxxxx. Blackwell scientific Xxxxxxxxxxxx Xxx., Oxford. 216 xx.

16. Lopez, X.X., Xxxxxx, M.T., Xxxx, P., Xxxxxx, X., Xxxxxx, B., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx molecular detection xx plant pathogenic xxxxxxxx. Xx: H.W. Xxxxx xx xx., (xxx). Xxxxxx Academic Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17. Xxxxx, F.J., Fulbright, X.X., Stephens, C.T. xxx De Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xanthomonas and Xxxxxxxxxxx pathovars xxx xxxxxxx generated xxxx xxxxxxxxxx sequences and XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Bruijn, X.X. 1995. Differentiation of xxxxxxx xxxxxxxxx by xxx-XXX fingerprinting to xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. vesicatoria. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., F. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Xx, X. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, A.C. Xxxxxxx, X. Krishnapillai, X.X. Xxxx, B.W. Xxxxxxxx, J.N. Tinunis. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx development xx xxxxxxx and xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx PCR primers xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (fornierly Pseudomonas xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, E. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. J. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Elphinstone, X.X. and Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx multiplex PCR xxxxxxxxxxxxx xx 16S-23S xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx with xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. European Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, A., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, J.G. xxx Xxxxx, S.M.D. (1995) Xxxxxxxxxx of xxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx xxxxx xx bacterial xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Immunology 7, 67-79.

23. Xxxxxx, W. 2001. Laboratory xxxxx xxx identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Xxxx, S.E., X.X. Xxxxxxx, J.P.W. Xxxxx, and M.J. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx ygii, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Bacterium xx xxxxxxx 16S xXXX xxxxxxxxxx: construction xx xxxxxxxxxxxxxxx primers xxx xxxxxxxxx detection xx xxxxxxxxxx chain xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, J.J., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 in Xxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx cellular xxxxx-xxxx xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx of xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx on 16X xXXX gene xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Wolf, X.X., Xxxxxxx, P.J.M., Xxxxx, X.X., Hagenaar, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Saddler, X.X., Trigalet, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Western Xxxxxx as xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (eds.) Xxxxxxxxx xxxx disease: Molecular xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Weller, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Smith, X., Stead, D.E. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' nuclease XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. van Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, by xxxxxxxxxxx xx xxxx hybridization xxxx 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Environ. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.