Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 odst. 2 xxxxxx x. 326/2004 Xx., o xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x změně některých xxxxxxxxxxxxx zákonů, (xxxx xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Předmět úpravy

Tato xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx bramboru, a Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx et al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx se

a) xxxxxxxxx výskytu x xxxxxx,

x) zjistilo xxxxx xxxxxxx x rozsah xxxxxxxxx a

c) xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx jejich xxxxxx x prováděla xx xxxxxxxx opatření x xxxxx jejich xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx xxxxx této xxxxxxxx xx rozumí:

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. ssp. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx et Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxx xxxxx hniloby - bakterie Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx al.,

c) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x výjimkou xxxxx xxxxxxxx, a xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Solanaceae), u xxxxx xxxx potvrzena xxxxxxx infekce původcem xxxxxxxxxxxxxx v přirozených xxxxxxxxxx,

2. původce xxxxx xxxxxxx - brambor (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, rajče xxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx L.) xxxxx xxxxx a xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx dulcamara L.) x xxxxxxx rostliny x xxxxxx lilkovitých (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx potvrzena možnost xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx zaměřený xx zjišťování xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x určitém xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) vymezovacím xxxxxxxxx - průzkum x xxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx hniloby, x xxxxxx xxxxxxx šíření xxxxxxx x x xxxxxx hranic xxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx prostředku, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, podle §11 odst. 1 xxxxxx,

x) možným xxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx pozemku, x xxxxxxx xxxxx x xxxxx, podle §11 odst. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

i) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx vymezené Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx správou (dále xxx "xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx"), xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 zákona x důvodu potvrzení xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - území xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) klonově xxxxxxxxx partií - xxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx xx za:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx partii xxxxxxxx xxxxxx klonově příbuzná xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Průzkum výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Rostlinolékařská xxxxxx provádí xxxxxxxxxx x souladu x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bramboru²⁾ xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x rozsahu xxxxx §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx partie xxxxxxxx vypěstované x xxxxxxxxxxxx xxxx vymezené xxxxx §5 odst. 1 písm. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx podléhají všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx při xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx zásilek xxxxxxxxxx xx třetích xxxx x vyvážených xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx dovážené xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x namátkově xxxxxxx xxxxxx ostatních xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx k xxxxxx xx třetích xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx průzkumu xx xxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) vodní zdroje xxxxxxxxx k závlaze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx průmyslově zpracovávají xxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxx odpady x xxxxxx podniků.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx podléhají v xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx nebo potvrzení xxxx výskytu xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx podezřelých x xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxxx x místech xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx pocházejí.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxxxxxx

x) laboratorním xxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx uvedených v xxxxxxxx 2 písm. x) a x), xxxxxxxx 3 x x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxx nebo ze xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x odstavci 4 písm. x) x dovážených partií,

b) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxxx x řezu xxxxxxxx xxxx, x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx bramboru, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 2 xxxx. x) a x),

x) xxxxxxxxxx porostů rajčete xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin x xxxxxxxx napadení xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. a),

d) laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx vody, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, pevných xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pobřežní xxxxxxxx x xxxxxxx uvedeném x xxxxxxxx 5 xxxx. x) x x odstavci 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x počet, původ, xxxxxxx a xxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, prováděném xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7, xxxxxx tohoto xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx o xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxx vědeckých x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x biologie xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby, x xxxxxxxxxxxx k systémům xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx situaci xx xxxxxxx xxxxx xx míře xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Státní xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dále xxx "Věstník"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x souladu x §10 odst. 1 zákona a xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx fyzickou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, pověřenou x této xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx §71 odst. 1 xxxx. b) xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §72 xxxx. 5 xxxx. x) xxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx způsobem stanoveným xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx fyzické xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx rajčete x xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxx nebo xx pěstuje xxxx xxxxxxxxx, v případě xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru x xxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx podle odstavců 2 až 8 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 5 xxxxxx jednou xxxxx x xxxxxxx stanoveném x příloze č. 2 části X ostatním xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xx účelem zajištění xxxxxxxxxxx úrovně potvrzování xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx provedených podle xxxxxxxx 2 až 6 oznamuje rostlinolékařská xxxxxx xxxxxx ročně xxxxxxxx členským státům x Komisi, a xx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx výsadbu xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. září, x ostatních případech xx 1. června. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, týkající se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xx vztahují xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Podrobnosti xxxxxx xxxxxxxx jsou důvěrné.

§4

Opatření xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx se x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxxxxxxx správou xxxxxxx xxxxxxxx vizuálních xxxxxxxx napadení těmito xxxxxxxxxx organismy x x xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X číslo 1 x oddílu XX, nebo

b) xxxxxxxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce hnědé xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x rámci odborného xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx právního xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx, x to xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 a xxx dodržení xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx B, x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 odst. 2 xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx kterých xxxx xxxxxxxx vzorky, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx, x

x) nařídí vhodná xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx možného xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x cílem xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úředního xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx na xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx podezření xx xxxxxxxxx zamoření partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, x případě původce xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx x některém xxxxx členském xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx týkající xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx s xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx spolupracovat.

(5) Xxxxx xxxx x xxxxxxxxx x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, které xxxx mít xxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxx které může Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 a 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Pokud xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 odst. 8 potvrdí xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx x §76 xxxx. 2 xxxxxx x x přihlédnutím x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx x xx způsobu xxxxxxxxx, xxxxxxx xx trh x průmyslového zpracování xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx xx zamořené rostliny, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x zařízení, stroje, xxxxxxxx prostředky, sklady xxxx xxxxxx xxxxx x veškeré xxxx xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, z xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x které xxxxxx xx styku x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx včetně těch, xxx je xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx, xx nichž xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovány x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) provede xxxxxxx šetření xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx nákazy x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 včetně xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx bodu 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx předsklizňového xxxx posklizňového kontaktu, x na xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx jiné xxxxxxxxxxx xxxxx xx zamořeným xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx písmene x),

x) vymezí xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx objektů xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a xxxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx povrchovou xxxx, xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxx na xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xx hostitelské xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx by xxx zavlažování, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

x) zajistí xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xx vhodných termínech x cílem xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, z xxx xxxx odebírány xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x jeho xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Rostlinolékařská xxxxxx neprodleně oznámí xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Komisi x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. x), x sdělí xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx podle odstavce 1 xxxx. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. c). Xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx důvěrné.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx stát xxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, zásilce xxxxx xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 a 2 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a objekty, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a vymezí xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx zónu.

(5) Rostlinolékařská xxxxxx stanoví úředním xxxxxxxx xx Věstníku xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) a xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxx 2 xxxx. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxx x partiím, xxxxx byly xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), x xxxxxx případě xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾, x xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx prvotního xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx zamoření s xxxxx stanovit xxxx xxxxxx dalšího šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx označí xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx zamořené, xxxxxxx rozsah xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx území x bezpečnostní zónu xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) x x).

§7

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxx xxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx x ní xxxxxx způsobem uvedeným x bodě 1 přílohy č. 4, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx předem ověří, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx splněny xxxxxxxxx xx zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx zpracování této xxxxxx,

x) partie hostitelských xxxxxxx označená xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. b) xxx xxx použita xxx xxxxxxxx rostlinolékařské xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx předem xxxxx, xx neexistuje xxxxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x že xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx partie, x xxxxx není xxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx testování xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx nebo xxxxxx části a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. b), xx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx očistě x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx uvedených v příloze č. 6 s xxx, xx xx provedení xxxxxx x dezinfekce xx xxxx xxxxxxx x předměty xx xxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxxxxxxx,

x) x karanténním území x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. x), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx mimořádná rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxx xxxxxxxx uvedená x odstavci 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx a účinná. Xxxxxxxxxxx o těchto xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) uvnitř karanténního xxxxx x x xxxxxxxxxxxx xxxx sděluje xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 odst. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zruší xxxxx §76 odst. 4 xxxx. b) xxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 a odstavce 2 xx xxxxxx xxxxxxx a po xxxxxxxx doby xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce hnědé xxxxxxx xx v xxxxxxx x §7 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxx, šlechtitelským nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 zákona, xxxxx xxx xxxxxxx narušena xxxxxxxx opatření xxx xxxxxx xxxxxxx ani xxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx materiál²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx republiky x xxxxxxx xx xxx, musí xxx xxxxxxxx laboratornímu xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §3 odst. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 a x souladu x §3 xxxx. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx podrobí

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x výrobě xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, pokud xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx původem x České xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, x nebo

b) xxxxx xxx v xxxxxxxxx uplynulém xxxxxxxxxx xxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxx

1. rostliny šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx se zaměřením xx xxxx souvislost, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx klonová xxxxxxxxxx, xxxx

x) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu bramboru xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx roce, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ani xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Účinnost

Tato xxxxxxxx nabývá xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx č. 331/2004 Xx.

X. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx diagramy xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x rostlinách xxxxxxxx,

xx) detekce Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx vzorcích hlíz xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxx metody, xxxxxxxxxx xxxxxxx a podrobnosti xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx xx podílely xx optimalizaci a xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku č. 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx vydaných rostlinolékařskou xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxx stálé a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx prahů xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx uchovávání x xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx označování x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x §4 odst. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx xxxxxx, xxx xx znázorněno x xxxx uvedených xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (TF xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je x xxxxx screeningový xxxx pozitivní, pak xx xxxxxxxxx z xxxxxxx potvrzeno x xxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx schématu. Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx není považován xx infikovaný xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx důvodu xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx screeningovým xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx postupových xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx bramboru x x rostlinách xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx x podezřením x xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Popis xxxxxxxx xx x oddíle 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX test (xxxxx 4),

- XXX xxxx (oddíl 6),

- XXXX xxxx (oddíl 5).

(3) Ačkoli izolace xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzí xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx stádiích xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx bakterie, které xxxxxx na infikovaném xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx patogena xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx i xxxxxxxxxx média, xxxxxxx XXXX (oddíl 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Popis xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx izolační xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx choroby xxxx xxxxxxx, musí být xxxxxxx provedena xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus se xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Zkouška xxxxxxxxxx xx popsána x oddíle 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx latentních xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx screeningových xxxxx, x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxxxxx izolací patogena, x xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, potvrzením, xx xxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx podezřelý.

Screeningové a xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx x každé xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz, xxxxxx postup lze xxxxxx i xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx není x dispozici.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx jsou xxxxxxx xxx xxxxx založené xx různých biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x potvrzení. Provede xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytný xxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Pokud xx xxxxx nebo další xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Test xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx monoklonální xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx a protokoly (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX test.

Použijí xx xxxxxxxxxx činidla x xxxxxxxxx (xxx oddíl 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxx xxx v xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX xxxxx xxxx XXX-88 xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx 3-10 dní xx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx patogena xxx následně xxxxxxxx x identifikovat. Xxx xxxxx využití xxxxxxxxxx xxxx vyžaduje opatrnou xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx sekundární xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxx a xxxxx xxxxx patogena přerůst. Xxxxx xx kultivační xxxxxx takto nepodaří, xxxx xxx izolace xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus x xxxxx bramborových xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínky xxxxxxxxx xxx tuto xxxxxx. Bakteriální xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx XXXX xxxx XXX-88 médiu xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx nebudou (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx negativní, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx dodatečným odebráním xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku x v xxxxxxx xxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx podezřelých xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddílu 10.

1.3. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rostlin bramboru

(1) Doporučené xxxxxxxxx xxxxxx - viz xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx jsou xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx nezbytné xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx nutné.

(4) Selektivní xxxxxxxx test x xxxxxxx morfologie kolonie xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) IF xxxx je xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX test xx xxxxxx x oddílu 6.

(7) XXXX test xx popsán v xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx výsledky screeningových xxxxx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx potřeby xx provede xxxx xxxxxxx vzorků.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, že xx xxxxx x Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(11) Test xxxxxxxxxx xx popsán x oddílu 10.

2. Xxxxxxxx vyšetření xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Rostliny bramboru

V xxxxxxxxxx klimatických xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx jen xxxxxxxxx x xxxxx xxx xx xx xxxxx sezóny. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx se xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx mechanických xxxxxxxxx. Xxxxx mohou být xxxxxxxx xxx kontrole xx poli xxxxxx xxxxxxxxxxx. Příznaky vadnutí xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx xx xxxxxxx pomalé x xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx rostou, i xxxx xxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx listy. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx části xxxxxx xxxxx mají xxxxxxxxxxx, xxxxx až xxxxxxxx xxxxxxxxxxx partie. Xxxxxxxxxx xxxxxxx lístky, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx eventuálně xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx x xxxxx pouze xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx zakrnělé. Barevné xxxxxx řady příznaků xxxx xx internetové xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx pletiva xxx xxxxxxx x okolí xxxxxxx xxxxxxx, zejména xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx konci hlízy xxxx mít nepatrně xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx dobře xxxxxxxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx x xxxx, kdy xxx xxxxxx xxxxxxxxx hlízy xxxxxxxxx z xxx xxxxxxx xxxxxxxx hmoty. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Vodivá xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx na xxxxxxx jsou v xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxx xxxx příznaky xxxxxxx xx jednu část xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx jen xxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxxxx. S postupem xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx korová xxxx xx může xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. V xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx praskliny, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxx okraji. X poslední xxxx xx v Evropě xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx s prstencem xxxxxx cévních, čímž xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx vznikem xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx příznaků jsou xx internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx vzorkování vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx této velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorku xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx i xxx xxxxxx x xxxx než 200 xxxxxxx, pokud xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx hlíz.

- Xxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx použít xxxx xxx zjištění xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku:

Hlízy xx xxxxx. Použijí xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x obsahem chlóru, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx prostředky xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx oschnout xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xx je xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX test xxxx xxxxx izolace.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo nožem xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx se odstraní xxxxxx na pupkovém xxxxx každé xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx brambor. Xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx část xxxxxxx xxxxxxxxxxxx cévní svazky. Xx xxxxxxxx xxxx xxx výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 hodin xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °C xx xxxx nejdéle xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxx x testují xx odděleně.

Pokud jsou xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx této xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x podezřelými příznaky xx nechají korkovatět xx xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a uchovávají xx x karanténě xxx teplotě 4 - 10 °X xx do xxxxxxxx xxxxx testů. Xxxxxxx xxxxx ve xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Výkrojky x xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx, které jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx znovu xxxxxxxxx, musí být xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x pupkového xxxxx xxxxxxxx, xxxxx to xxxx možné, xxxxxxxxxx xx x nádobě xxx přidání pufru, x chladu xx xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx maximálně 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x růst saprofytů x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) výkrojky xx zalijí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot/min) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3), xxx x xxxxxx xxxx rozdrcením x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx použití xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx učinit xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx každý xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx sterilizovaná xxxxx (nože) x xxxxxx. Xxxxx xx xxx použit PCR xxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, doporučuje xx drcení x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxx x použití xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Dekantuje xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx buď pomalým xxxxxxxxxxx (při maximálně 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx frakce xx xxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 x xx dobu 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 minut) xxx xxxxxxx 4-10°C x xxxxxxxx se supernatant, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Resuspenduje xx xxxxxx v 1,5 ml peletového xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µl xxx xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Ralstonia xxxxxxxxxxxxx x 500 µl xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx konečnou xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx se vířením x xxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24°X (týdny) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°C.

Opakované xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx je nutný xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx přeprava v xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Je xxxxxxxx xxxxx, xxx se xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí x xxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx vzorky až 200 částí xxxxxx. (Xxxxx xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx založeny xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx populace, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx část x xxxxxxxxx 1-2 cm xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx stonku xxxxx xxx xxxxxxxx země.

Části xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx etanolem 70 %, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) části xx xxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx dobu 4 xxxxx při xxxxxxx nižší xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x pevném xxxxxxxxxx xxxxx x přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx. Xxxxx to xxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx v xxxxxx maximálně 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

3.2.3. Po xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, ale lze xx xxxxxxxxx filtrací x/xxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vzorkový xxxxxxx xx xxxxxxx na 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx během xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x druhá xxxxxxxx se xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx glycerolu xxx teplotě -16 xx -24 °C (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X (měsíce), xxxxx je nutné xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX test xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, protože byla xxxxxxxxx jeho schopnost xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx práhů.

Použije-li xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx proveden xxxx XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx se xxxx XX použije xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x jeho xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, je xxx dokončení xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx lF xxxx xxxxxxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x monoklonální xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx kmenu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx určovat xxxx pro xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx je xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx na 1 ml homologického xxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Během xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxxx používat x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxxx xxxxx nebo xx xxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx provádí xx čerstvě připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx extraktech xxxxxxxxxxxx xxx - 68 xx - 86 °X v xxxxxxxxx. Xxxxxxxx lze xx xxxxxx odstranit přidáním 1 xx peletového xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx při 7&xxxx;000 x a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx peletového xxxxx. Xx xxxxx xxxx xxxxx, zejména xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx s homologickým xxxxxx nebo x xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem xxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxxx podle dodatku 2 x nepovinně v xxxxx.

Xxxxxxx infikované xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx zmrazením při xxxxxxx -16 až -24 °C) by xx mělo xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx předtím testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx okénky, xxxxxxx x 10 xxxxxx o xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx test xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx nízkým množstvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15 µx - pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) roztoku xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx vzorek podle xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx pelety:

Připraví xx xxxxxxxxx ředění (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - pro xxxxx xxxxxx objem xxxxx) resuspendované pelety 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx do xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě nebo xxxxxxxx na xxxxxxx 40 až 45 °X. Bakteriální xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx buď xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx fixovaná xxxxxxx xxxx dalším xxxxxxxx skladovat zmrazená x xxxxxx boxu xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX xxxxx:

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx sada dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxxxx v XX xxxxx. X xxxxx xxxxx by xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), v xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), titr 1/2 (X/2), xxxx (X) x dvojnásobný xxxx (2X).

x) Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x oddílu 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se xxxxxxxx ředění (XX) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx pokryje xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx musí být xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx protilátek, postupuje xx následovně:

4.3.2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx ze xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx v xxxxx IF. Xx xxxxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, a xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx na xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx množství použité xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx sklíček a xxxx xx opláchnou x xxxxx xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx 0,1X fosfátového xxxxx s glycerolem (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC xxx olejovou nebo xxxxx xxxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1000x. Zkoumají xx xxxxxx ve dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně fluoreskující x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx titru xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx odchylná, musí xxx test XX xxxxxxxx (oddíl 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx porovnání s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx fluorescencí xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx může stát, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X xxxxxxxx z xxxxxxx části xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx se x xxxxx pouze fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Výsledek XX xx xxxxxxxxx x vzorků, kde xx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Vzorek xx považován xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Výsledek XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx x vzorek xx považuje za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Test XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Když xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx testování podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx vzorku, které xxxx ředtím testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx by xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx jej xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 nebo -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (např. xxxx NCPPB 4053 xxxx XX 406) x 0,01 M xxxxxxxxxxx pufru (XX) x 3-5 xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx suspendovaného v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx přítomné xx xxxxxx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx provádí stejným xxxxxxxx xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx do Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 g.

5.1.3. Odstraní xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx x 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 hodin xxxxxx. Protřepe xx x xxxxxxxx se xxxx noc xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx je 96 % etanol. Xxx xxxx xxxxxxx xx rozpustí xxxxxx x kroku 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX x 50 µl 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx protřepáním x inkubuje xx xxx teplotě 4 °X xx dobu 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje xx po xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µx 0,01 M XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx vzorky xx xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 M XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx být xxxxxx xxx teplotě -20 °X xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96 % etanolu. X xxxxxxx, že xx třeba XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxx xx etanol odstředěním, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X XX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx na xxxxxxx XXXX

5.1.6. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx (xxxx sušičkou sklíček xxx teplotě 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi je xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx skladována xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x suchu při xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 ml xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx roztok xxx xxxxxxxxx, xxx měl xx se xxxxx xxxxxx zmrazit x xxxxxx xxxxxx. Každý xxxxxx se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx lyzozymu x xxxxxxxx xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx demineralizované xxxx, pouze xxxxxx, x osuší xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 v xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2 mM XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky x xxxxxxxx xx xxx teplotě 37 °X po xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx suší xx xxxxxxxxxxxx sériích 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx pokaždé xx xxxx 1 minuty. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu x xxxxxx sklíček.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx vzduchotěsné krabice xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °X po xxxx xxxxxxx 10 minut.

5.2.4. Xxxxxxxx se hybridizační xxxxxx (dodatek 7) s 45 µx na 1 xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx po xxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxx teplotě 45 °C x xx xxxxxxx ze 4 okének na xxxxxxx / xxxxxxxxx xx přidá 10 µx xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 krycími xxxxxxx (24 x 24 xx) tak, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Sklíčka xx umístí do xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x hybridizuje xx 14 - 18 x x xxxx xxx teplotě 55 °X x temnu.

5.2.7. Xxxxxxxx se 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx vody (Xxxxx pure water = XX), 1 x 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx UPW) a 1 l 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x hybmix x 833 xx XXX). Xxxxx z xxxx xx xxxxxxxxxxx xx vodní lázni xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Sejmou xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x kádince x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxx dalších 15 minut.

5.2.11. Sklíčka xx xxxxxx krátce xx XXX a xxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx podobný) xx xxxxx jamky x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx velkým xxxxxx sklíčkem (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x nebo 1&xxxx;000x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx vhodným xxx fluorescein xxxxxxxxxxxxx (XXXX) jsou eubakteriální xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 jeví fluorescenčně xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlíží xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx úhlech a xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx buněk, se xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x morfologií xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx fluorescenci, xx xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test zopakován. Xx xx xxxx xxxx, xxxx všechna xxxxxxx ve skupině xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

5.3.4. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x částí xxxxxx se mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnou Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx než x IF testu.

5.3.5. X úvahu xx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx x morfologií, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx platné, xxxxx xxxx při použití XXXX filtru xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx typickou pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x při xxxxxxx rhodaminového filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx pozorovány xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x xxxxxx pozorovány x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, které xxxxxxxx alespoň 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx infikované Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, které xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

b) Výsledek XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pozorovány jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx typickou xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxx typické xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx pozorovány x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx IF test. Xxxxx xx PCR xxxx xxxxxxx jako xxxxx screeningový test x je xxxxxxxxx, xx xxx dokončení xxxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx hlavního screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 xx přidaných xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx ve všech xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx optimalizační xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx specializovaných xx xxxxxxxxxxx biologii, aby xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx cílovou XXX.

X xxxxxxxxxxx kontrolami (x xxxxxxx extrakce XXX x PCR) xx xx mělo vždy xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX test xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem,

- kontroly xxxxx používaného pro xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX ze xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxxx části resuspendovaných xxxxx, k nimž xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx ve vodě x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx NCPPB 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx PCR xxxxx také DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Aby xx xxxxxxxxx možné xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx od vzorků, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx bez zeminy. X případě xxxxxxx XXX xxxxx je xxxxxxx připravit extrakty x xxxxxxx brambor.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Použijí xx xxxx popsané xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

X xxxxxxxxx cílové XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků jsou x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX a xxxxxx xxxxxxxxxxxxx reakcí x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx optimalizována xxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

a) Xxxxxx podle Xxxxxxxx (2000)

1. Napipetuje se 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 mM Xxxx-XXx [pH 8,0], 1 mM XXXX [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx.

2. Přidá xx 100 µx xxxxxxxx ze xxxxxx x xxxxxx se xx xxxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx o xxxxxxx 95 °X xx xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxxxx do xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx na 1 xx x 10 xX Tris HCl, xX 8,0) x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx XXXX roztok A (Xxxxxxxxxx), dobře se xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 65 °X xx dobu 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Easy XXXX xxxxxx B (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx xxxxxxxx třepáním, až xxxxxxxxx sama poteče xx mikrozkumavky a xxxxxx začne xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x po dobu 20 minut při 4 °X xxx xxxxxxxx fází x xxxxxxxxx mezifáze.

9. Xxxxxxx xx horní xxxx xx čisté xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx se 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x inkubuje xx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X a odstraní xx x pelety xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µl 80 % xxxxxxx (-20 °X) a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Odstřeďuje xx na 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 minut při 4°X, peleta xx xxxxxxx a odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx se xxxxx uschnout xx xxxxxxx xxxx x XXX speed xxx.

15. Xxxxxx xx resuspendujte x 100 µx xxxxxxxx vody (UPW) x nechá xxxx xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -20 °X xx do xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx odstředěním a xxx XXX xx xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx by xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ patogenních buněk xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx PCR podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolu (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx kontrolu PCR.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx PCR xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx směs XXX x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx do xxxxx PCR xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx umístí xx xxxxxxxx termocykleru, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx testování a xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxxx x agarózovém xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx amplifikované xxxxxxx xxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X xx xx. Xxxxxxx xx xxxxxx marker XXX, např. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 xx xx x) po xxxx 30-45 minut, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x tímto xxxxxxxxx.

6.3.3. V xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx délky, xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x očekávané xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx xxxxxx nálezů xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx amplikonu XXX xxxxxxxxxx restrikční xxxxxxxx analýzy ve xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx xxxxxxxxx teplotě x xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx enzymem a xxxxxx (viz dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx restrikčního xxxxxxxxx xxx XX prosvícením xx xxxxxxxx ethidiumbromidem x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx je negativní, xxxxx xxxxxxxx typický xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěn x daném xxxxxx, xxx xxx zjištěn xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX očekávané xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x daným xxxxxxx).

XXX test xx xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a vzoru (xxxxx se požaduje), xx předpokladu, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxx x druhou xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x pozitivního kontrolního xxxxxx xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxx, ale x xxxxxxxxx xxxxxxxx x Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx extraktu byly xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx z xxxx amplikonů.

Lze xxx xxxxxxxxx xx kontaminaci, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx získán x xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie xx 1 xx xxxxxxx k xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2).

Xxxxxxxx citlivost zjištění xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx čerstvě připraveného xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx však xxx xxxxxxx použít x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x glycerolu při xxxxxxx -68 až -86 °C.

Některé xxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxxxxxxx xxxxxxxxxx selektivní obohacující xxxxxx pro xxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx omezení xxxxxxxxx xxxxxxx negativních xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx optimální růstové xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x pěstování xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx rozdělí xxxx xxxxxxxx lilku xxxxxx z xxxx xxxxxxxxx metod (7.2, 7.3, 7.4). Používají xx xxxxx rostliny xx xxxx 2-3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx potřeba 15-25 xxxxx na vzorek.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx podepře (pro xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xx xx xxxxxx blok pěnového xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx 5 cm xxxxxxx, 10 xx xxxxx x 15 xx xxxxx). Pro xxxxx xxxxxxxxx vzorek xx xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx proužek xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx místě xxxxxxx xxxxxx kolem xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx lístky x xxxxxx pravým xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx dlouhý 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx se xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx oční linky xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxx.

7.2.4. Xxx se xxxxxxxx xxxxxxxx vazelínou xxxxxxxxxxx injekční stříkačkou x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx stonek xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxx děložní xxxxxx x první xxxxx xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx sterilního skalpelu xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x úhlu xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 cm a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 tloušťky xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx suspendované xxxxxx.

7.3.3. Xxx se xxxxxxx sterilní vazelínou x injekční xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (turgoru) xx xxxxxxxx lilku xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx nad xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x podkožní xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx známé kultury xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xx xxxxx i pletivem x přirozeně xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx se rostliny xxxxxxx inkubovat x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (dodatek 8) po xxxx až 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °C. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx vody. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °X a xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx se xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxx komoře xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, anebo při xxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxxxxx oddělení xxxx zacházení s xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pro xxxxx vzorky xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx vhodnými xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx ke xxxxxxxxxxx. Xx nezbytné, xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx veškerým xxxxxx, protože xx xxxx přenášet bakterie x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx osmi dnech xx spočítají xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx působí x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx mezižilková xxxxxxxxx (xxxxxx turgoru). Xxxxxx xxxxxxx xxxx zprvu xxx tmavozelené nebo xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Povadlá xxxxx mezi žilnatinou xxxxxx často mastně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx mívají xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, tím xx větší xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx mnohem xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxx starší xxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx listů x nebo xxxxxx xxxx xx. Vadnutí xxxxx také xxxxxxxxxx xxxxxxxx jiných bakterií xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxx hlízy. Xxxxx x nim Xxxxxxx xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxx xxxxx. atroseptica, Xxxxx xxxxxx xxx. foveata, xxxxx x velké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx odlišit xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx rychle xxxxxx xxxx xxxxx xxxx celé rostliny. Xxxx se xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx

7.9. Jakmile xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx stonků xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xX nebo XXX na xxxxx x lilku x xxxxxxx xx xx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) médiu (xxx xxxxx 8). Xxxx se také xxxxxxxxx Gramovo xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx okolností, xxxxxxx pokud xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx nejsou xx 4 týdnech xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx test XX/XXX na složeném xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 xx x každé xxxxxxxxx xxxxxxxx odebraných xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxx je xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace xx vhodných (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx podezřelé x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 a 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus

Diagnóza xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x takto xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx ho xxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxx.

Xxxxx xxx však xxxxxxx xxxxxx rostoucí saprofytické xxxxxxxx, a xxxxx xx nedoporučuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Přímá izolace Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx možná xx použití xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxxx části xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxx bramboru xxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx výsledek x xxxxx TF/PCR složených xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx xx xxxxx provést xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx provedena xxxxx oddílu 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx desetinná ředění xxxxxxxx 106 cfu xx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx vyloučilo xxxxxxxxx kontaminace, připraví xx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx každou xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx by xx xxxx před xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx přezkoušet jeho xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx materiál xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

8.1. Roztěr xx xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Xx 100 µl xxxxxxxxx části ze xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x neředěné xxxxxxxxxx xxxxxx se obvykle xxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx bakterie xx xxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx přítomná xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx obvykle xxxxxxxxxxx xxxxxxx, zatímco xxxxxxx xxxxxxx. Proto xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, v xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), za použití xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx při teplotě 21-23 °C.

8.1.4. Počáteční xxxxxxxx misek xxxxxxxx xxxxxxxxx x kontrolními xxxxxxx x počítání xxxxx kolonií xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x dalším xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 dnech.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx kolonií

Poznámka:

Subkultury kolonií xxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx identifikaci xx xx xxxx xxxxxxxx na YGM xxxxx; xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx média xxxxxx xxxxxxxxx, tj. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Kolonie xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx rozetřou xx jedno x xxxxxxxxxxxxx médií (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx agar (xxxxx xxx subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx,

- xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx solemi.

Inkubace xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X po xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roste xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx špendlíkové xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Opětovně xx xxxxxxx roztěr xxx xxxxxxxx čistoty. X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx smetanově xxxx nebo xxxxx xxxxxxxxx, někdy xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, s xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxx x průměru 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx identifikují (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Identifikace

Čisté xxxxxxx pravděpodobné xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx použití xxxxxxx dvou následujících xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx potřeby se xxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmen.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Veškerá xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °C x xx šesti dnech xx xxxx být xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx testy musí xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx xx musí xxxxxxxx za použití xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx agaru. Morfologická xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x kultur x živného xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) inertní xxxx xxxxx oxidační

Aktivita xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Redukce xxxxxxx -

Xxxxxxxx ureázy -

Xxxxxx X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Využívání citrátu -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx slabá

Růst xxx 37 °X -

Xxxx x 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxxxx +

Xxxxxx kyseliny x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - nebo xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX test

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk/ml x xxxxx xx xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx vhodného xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xX xxxxxx (oddíl 4).

x) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx lF xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kontroly.

9.3. PCR xxxx

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na ml xx xxxxxxxx vodě (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µl suspenze xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100 °C xx xxxx 4 xxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx xx může xxxx xxxxx podpořit xxxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx XxXX do xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X xx do xxxxxxx.

x) Pro xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx PCR (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Xxxx, 1995; Mills x xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. FISH xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx se xxxxxx XXXX (oddíl 5)

x) Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (FAP)

a) Xxxxxxx xx pěstuje xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx při xxxxxxx 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 lso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx o přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Jiné xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter x Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Anteiso X xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kyselina, xxxxx xx však xxxxxxxxx xx všech Xxxxxxxxxxx xxx. x xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx obvykle xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxx postupem xxxxx Xxxxx x xxx., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx konečné xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx stanovení virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Xxxxxxxx xx inokulum xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x 3-xxxxxxx kultur testované xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx pozitivního xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx fázi 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Inkubuje xx xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx xxxxxxxxxxx světle x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x přiměřeným xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X čistých xxxxxx xx xxxx během 2 týdnů xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, avšak xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky xxxxxxx, by se xxxx xxxxxxxxx xx 3 xxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx lilku vejcoplodého, xxx nepřesahujících 25 °X. Xxxxxxxx xx xx 3 týdnech xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx být kultura xxxxxxxxxx xx patogenní xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx provádí x xxxxxxx x příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx části xxxxxx 2 xx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 mM fosfátového xxxxx. Izoluje xx xx xxxxxxxx rozetřením xxxx xxxxxxxxx na XXXX x YPGA, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °X a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx podílející xx xx optimalizaci x xxxxxxxx protokolů

Laboratoř (1)	Místo	Země
Agentur xüx Gesundheit und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx a Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Laboratory	York	Anglie
Scottish Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx Végétaux, Xxxxx xx Bactériologie	Angers	Francie
Laboratoire National xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Station xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Bundesanstalt	Kleinmachnow	Německo
Pflanzenschutzamt Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Dienst	Wageningen	Nizozemsko
Norwegian Crop Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Plant Xxxxxxxxxx Centre	Aas	Norsko
Direcção-General xx Xxxxxxçãx das Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Diagnóstico de Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x negativních kontrol xxx vyšetření výkrojků xxxxx PCR/IF a XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx kultura xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (NCPPB 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx schopných xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zakalené xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx odebraných x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, u xxxxx xx jisté, xx xx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx obvyklým způsobem x resuspenduje xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek x xxxxxx 1,5 xx x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx první xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx. V následujících xxxx mikrozkumavkách se xxxxxxxx desetinná ředění.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx jako pozitivní xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx opatří xxxxxxx.

Xxxxxxxx se alikvotní xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 xxxxx každého xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx -16 xx-24 °C až xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x množství C. x. xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx vzorcích xx měla být xxxxxxx potvrzena xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx PCR xxxx xx xxxxxxx extrakce XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x XXXX xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx zkušebních xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX a XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nesmí xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Pufry xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 mM xxxxxxxxx pufr, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (bezvodý) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx následující xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx litr)
Lubrolové xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 g
Polyvinylpyrrolidon-40 000 (PVP ‒ 40)	Vázání xxxxxxxxxx XXX	50 g
(*) xxx xxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 mM xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx extraktů x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx koncentrovány do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, xxxxxxxxxxx xx pH a xxxxxxx se sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 min.

2. Xxxxx xxx IF xxxx

2.1. Xxxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx roztoku (XXX), xX 7,2)

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx protilátek.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx. Xxxxx se 0,1 % Xxxxx 20 k pufru xxx IF.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx sklíček xx XX testy x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX a XXXX xxxxxxxxxxx buněk

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických fluoreskujících xxxxx v jednom xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx na xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x

x = xxxxxx pole xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x rozmezí od 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx koeficient (1 nebo 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N = X x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx faktor xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx X. m xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X po dobu 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Nutrient xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx agar xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 X xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx peptone xxxxxxx agar = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x provede se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx s kvasnicovým xxxxxxxxx a minerálními xxxxxx (Yeast xxxxxxx xxxxxxx salts medium = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 g
Destilovaná voda	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx xxx 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Validovaná selektivní xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx uvedeno xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x BDH.

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xX xx xxxxxx xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) a xxxxxxxxx xx 50 X se xxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, nalidixic xxxx 0,002 x, amphotericin X 0,01 x.

X xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: trimethoprim (Xxxxx) x xxxxxxxxx xxxx (Sigma) (obě 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Sigma) (1 mg/ml) v xxxxxxxx sulfoxidu. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx základního xxxxx xx 3 měsíce. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1 xxxxx při xxxxxxxxxx x chladu do 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx NCP-88

Živný agar (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 g
K2HPO4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx xx pH na 7,2. Po autoklávování x xxxxxxxxx na 50 °X se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003g, xxxxxxxxx xxxx (Sigma) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 g.

Antibiotika xx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxx xxxxxxx následovně: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 M NaOH, xxxxxxxxxxxx v 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X xxxxxxxx x destilované xxxx. Xxxxxxx roztoky xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx média je 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. x. xxxxx. sepedonicus xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skupinou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxx PCR xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx primery

primer XXX-1 5'- xxx ctt xxx xxx xxx xx aa -3'

xxxxxx XXX-X 5'- tac xxx xxx gtt xxx xxx ccc x -3'

primer NS-7-F 5'- xxx gca xxx aca ggt xxx xxx tgc -3'

xxxxxx NS-8-R 5'- xxx xxx xxx xxx cct acg xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x XXX X. ni. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18S xXXX 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725 μx
10x XXX pufr (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μl	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx PSA-1 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer NS-7-F(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx NS-8-R (10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μl

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x Xxxxx BRL.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx NS-7-F x XX-8-X byla optimalizována xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx bramboru xx xxxxxxx homogenizační xxxxxx x purifikace DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxx izolace XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Reakční xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxxx následujícího xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx teplotě 95 °X (denaturace XXX matrice)

10 cyklů xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

xxx) 1 minuta xxx xxxxxxx 64 °X (připojení xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 sekund xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °X (připojení primerů)

vii) 1 minuta xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx kopie)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (závěrečná prodlužování

ix) Xxxxxxx se při xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx je optimalizován xxx použití x xxxxxxxx cyklerem XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx použití jiných xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx), xx), x), xx) x vii).

1.4. Analýzy xxxxxxxxx restriktivním xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x XXX X. m. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mnohotvárnost délky xxxxxxxxx x enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx při teplotě 37 °X xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx získané z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx a 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 g

Destilovaná xxxx 50 ml

Nanášecí xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Pufr 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (TAE), pH 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (sodná xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx xx zředí na 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Invitrogen xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx FISH xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx CMS-CY3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx cat ctc xxx xxx -3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx sonda XXX-338-XXXX: 5'- gct gcc xxx cgt xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, KTERÝ XX XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX X NEVDECHOVAT. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx pure xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx přibližně 60 °X x xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1X XxXX a zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx pH xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx fosfátového xxxxx 0,1 M (XX; xX 7,0) x 5 kapek HCl 1X. Indikačním xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xX x v xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: V ROZTOCÍCH X PARAFORMALDEHYDEM XXXXXXXXXX XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx xx přefiltrujte xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx použití.

iv) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx roztok: 96 % etanol.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, podle xxxxxxx.

4. Hybridizační xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx množství xxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx dvojmo 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µl xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

Tabulka: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx čistá xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx v temnu xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx použití xx xxxxx je xxxxxxxxxx před přímým xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx rozpustí, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx výsevního xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx děložními xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx xx pasterizovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx se xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne: 14 xxxxx xxxx přirozená xxxxx xxx, pokud xx xxxxx;

Xxxxxxx: den: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Beauty",

"Long Tom",

"Rima",

"Balsas".

Dodavatel: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Huckerově modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx se 2 g xxxxxxxxxx xxxxxxx v 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx se 0,8 x šťavelanu amonného x 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Xxxxxxx xx xx vody x xxxxxxx xx x xxxxxxxx nádobě xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx barviva

Zásobní roztok:

Safranin X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx se x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx roztěry, vysuší xx xx xxxxxxx x fixují se xxxxxxxx.

2. Sklíčko xx xxxxxx roztokem xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Krátce xx xxxxx xxx tekoucí xxxxx.

4. Xxxxxx se Xxxxxxxxx xxxxxxx roztokem x xxxxx xx xxxxxxx xx dobu xxxxx xxxxxx.

5. Opláchne xx xxx xxxxxxx xxxxx a vysuší xx xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx přidávaného 95 % xxxxxxx xxx dlouho, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx na dobu 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx a vysuší xx savým xxxxxxx.

8. Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx tekoucí xxxxx x xxxxxx xx xxxxx papírem.

Grampozitivní xxxxxxxx xx zbarví xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zbarví xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx také xxxxxx komerčně dostupné xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Anonymous, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx the xxxx xxx bacterium Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx tubers. Xxxxxxxxxx of the Xxxxxxxx Communities, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11&xxxx;288 XX, 21 pp.

2. Xxxxxxxx, J. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Dinesen, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx from xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, R. X., 1981. Determinative xxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx bacteriology, American Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. a Leifson, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx significance of xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx gram-negative xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, J. X. a X. Xxx Vaerenbergh. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX xxxxxx for xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx and development xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Journal of Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Nature, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X x X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 pp.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Bact., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. X., X. Billing x X. X. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxx fluorescent plant xxxxxxxxxx pseudomonads X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. a P. X., Xxxxxx, 1976. Xxx detection xx xxxxxx xxxx rot (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx onicum (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. et Xxxxx.) xx xxxxxx stocks. XXXX Bull., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. xx Boer, 1995. Xxxxxxxxx of Polymerase Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx RNA intergenic xxxxxx xxxxxx for xxxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Mills, X., Xxxxxxx, X., X. x J., X. Xxxxx, 1997. Specific xxxxxxxxx of Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxxx of xxxxx unique XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -H. x X.X. Rainey. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subspecies by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. J. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx PCR with xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Gram-positive xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx and their xxxxxxxxxxxx to xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Mem. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, W., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. x Knorr, D. (1999) Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx by B1O-PCR xxx xx automated xxxx-xxxx fluorescence xxxxxxxxx xxxxxx. Plant Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Minnesota:, 373 pp.

21. Xxxxxxx, X. X. X., 1967. A xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx genera xx bacteria. 2nd xx., William xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Baltimore.

22. Xxxxx, N. X.; Xxxxxxx, J; Stead, XX., 2001. Repetetive xxxxxxxx-xxxxxxx XXX profiling xxxxx the BOX-A1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. European Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Sneath, X. X. X. xxx X. G. Collins, 1974. A study xx test xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx laboratories: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx van Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx and xxxx xxxxx Pseudomonas xxx. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Wullings, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. R.; Xxxxx, X. X. x X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx xxx of xxxxxx, by xxxxxxxxxxx xx xxxx hybridization xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Environ. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

B. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX HNILOBY

Předložené postupové xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx hnědé xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx dalších xxxxxxxxxxxxx rostlin,

ii) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx, xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, x xx xxxxxxxx xxxx x půdy,

iii) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX ZÁSADY

Optimalizované xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx v dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx organismu x xxxxxxxx použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx nutné pracovat xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na odstraňování xxxxxx x za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správy.

Testovací xxxxxxxxx musí zajišťovat xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx vybraných metod.

Zcela xxxxxxxx je přesná xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx prahů xxxx xxxxxxxx správné xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x činidly x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx kontaminace xxxx xxxxxx, např. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx kvality, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. První xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx IF, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) musí xxx xxxxxxxx druhým xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx biologickém xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. solanacearum x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx je x druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx podezření xxxxxxxxx x xxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx je druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx vzorek není xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx přítomnost xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xxx hlízy x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxx. Negativní xxxxxxxx xxxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Test xx xxxxx xxxxx ze xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.1.

4) Test xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx vodě nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx nebo extraktech xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx (xxxxxxxxx ředěním) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx může xxxxxx xxx pokročilých xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx bujného xxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií. Xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx typické, ale xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxx se xxxxxxx opakovat, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx v xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxx 6.3.

1.2. Postupový xxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx je určeno xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx izolací patogenu x xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx screeningového testu xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx byl xxxxxx považován za xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx testy xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 10³ až 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx testů.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x na xxxxx počet, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x oddíle 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Provede xx nejméně jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx je xxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytný xxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx různých biologických xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx za negativní. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

4) Test XX xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

5) Test xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

6) Testy XXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX xx popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx v oddíle 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je popsána x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxx-xx xx screeningových xxxxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, ale izolační xxxxx jsou xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx odebráním vodivého xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, případně xxxxxxx xxxx x xxxxxxx vzorky.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx na R. xxxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxx testů xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

13) Xxxx patogenity je xxxxxx x oddíle 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx nevykazujících příznaky xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx oddíl 3.2.1., kde xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.2.1.

3) Pokud xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx biologických principech xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx provedení druhého xxxx více screeningových xxxxx založených na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx nebo xxxxx testy xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxx. Další xxxxx xxxxxx nutné.

4) Xxxxxxxxxx izolační xxxx xx popsán v xxxxxx 6.1.4.

5) Test XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Test FISH xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Kultivace xxxx biotest mohou xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx screeningových testech xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx xx podezření, xx xx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

2. Diagnóza xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx podmínkách xx rozpozná vadnutím xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx během xxx, přičemž v xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. V raných xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x ohýbání xxxxx xxxx. Xxxxxxx jednoho xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx nevratným a xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx zvadlých xxxxxxx obvykle xxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx stonku xxxxxx xx xxxx se x cévních svazků xxxxxx xxxxxx slizu.

Hlíza xxxxxxxx. Xxxxx bramboru xx xxxxx překrojit xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx x podélně xxxx pupkový xxxxx. X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx po xxxxxxxx minutách xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx výrazněji xxxxxx x odumření se xxxx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. V xxxxxxxxxxxxxx fázích xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x z xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Xx xxxxxx se xxxxx xxxxxxx červenohnědá, xxxxx xxxxxxxx xxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx rajčete. Xxxxxx xxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx xxxxxx nejmladších xxxxx. Xx příznivých xxxxxxxx xxx patogena (xxxxxxx půdy xxxxx 25 °C, při xxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti) xx během několika xxxx dní xxxxxxx xxxxxxxx listů směrem xxxx x vadnutí xx jedné straně xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, které končí xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx méně xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx na xxxxxx xx může xxxxxx xxxxx xxxxx postranních xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx nasáklé xxxxx xx xxxxx xxxxxx, které jsou xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx stonkem xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx dulcamara x X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °X xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. u xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx rostliny X. xxxxxxxxx, která xx stonky x xxxxxx xx vodě, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx zbarvení xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx spodní xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx stonku xxx xxxxx. Z xxxx xxxxxxx svazků xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx vlákna xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx vody, x xx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx screeningové xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx slizu xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (PHB)

Charakteristické xxxxxxx XXX x xxxxxxx X. solanacearum xxxx zviditelněny obarvením xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx sklíčku xxxxxxx xxxxx X xxxx xxxxxxxxx černí (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Viz xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx vhodnými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.), xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx při xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx stonku rostliny xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx. Suspenduje xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx se 5-10 minut stát.

b) Xxxxxxxx se řada xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX nebo XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx tetrazolové médium (dodatek 2) x/xxxx validované xxxxxxxxxx médium (např. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů. Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s rozředěnou xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx biovar 2 x pozitivní kontrole.

d) xxxxxxxx xx 2-6 xxx při teplotě 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx půdě xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx krémově bílé.

- X Kelmanova tetrazolového xxxxx a média XXXX jsou xxxxxxxx xxxxxx červeně zbarvené. Xxxxxxxxxx formy R. xxxxxxxxxxxx tvoří malé xxxxxxx xxxxxxxxx máslovité xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující xxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x bodu 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx vzorcích xxxx bramboru

3.1. Podrobné xxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx na xxxxx test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx nebo složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x pro xxxxxx x méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx hlíz.

- Xxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 hlíz.

- Xxxxxxx xxxxxxxx popsaný xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx přípravou xxxxxx

x) Inkubace xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °X xx dobu xx 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxx všech xxxxxxxx R. solanacearum.

b) Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx vhodné xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx XXX test, xxx xxxxxxxxxx patogenní DNA) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx zvláště x případě, když xx xx vzorcích xxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx xxxxx izolace.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx slupka xx pupkovém konci xxxxx xxxxx, tak xxx bylo xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Opatrně xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx nezahrnující xxxxx xxxxxx xx xxxxx na minimum.

Poznámka:

Všechny (xxxxxxx) xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x testují xx odděleně.

Pokud xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx hlízy xx řezu hlízy xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx hlízy x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 xxx při xxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) a xxxxx xx uchovávají v xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx karanténních xxxxxxxx. Všechny xxxxx xxxxxx hlíz x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být xxxxxxxx xxxxx přílohy XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx se xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx použití, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, že nádoby xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx x dezinfikovány xxxxxxxxxx x obsahem xxxxxx). Nejlépe je xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx konce okamžitě. Xxxx-xx xx možné, xxxxxxxxxx xx v xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; x chladu xxxxxxx 72 hodin xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxxxx xx v xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 hodiny xxx teplotě nižší xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) homogenizují xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) buď x xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. silný xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Stomacher xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx gumového xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx vzorků xxxxxx mixéru existuje xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx extrakčního xxxxxxx. Xxx každý xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x nádoby. Xxx xxxxx XXX je xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx drcení x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxx x použití xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx xxx xxxxxxx odstřeďováním (xxxxxx 180 x xx dobu 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10 °X) nebo xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), xxxxx se xxxxx přídavkem (10 xx) extrakčního pufru.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7 000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4-10 °X x xxxxxxxx xx supernatant, xxxx xx se rozvířila xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx v 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx se 500 µx xxx X. solanacearum, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x 500 µl xxx referenční xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (v/v) k 500 µx referenční xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, promíchá xx xxxxxxx x uloží xx xxx teplotě -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (měsíce). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx během xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, zajistí xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.1.6. Je xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx byly xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci. Xx xxxxx xxx sklíčka XX x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx testů x optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx x příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (viz xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx oddíl 6.1.8.)

Biotest (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx použít xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx částí. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, xxx xx být xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zkoumané xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx 1-2 xx dlouhé xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování:

Rajčatové sazenice x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx každého stonku xxxx xxx úrovní xxxx.

Xxxxxxxx z xxxx xxxx skleníku: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx spojením x xxxxxxx xxxxxxx. Odebere xx xxxxxxxxxxxx, 1 xx xxxxxx díl x xxxxxxx výhonku.

Jiné xxxxxxxxxxx rostliny: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami se xxxxxxx 1 cm xxxxxx díl x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx nad úrovní xxxx. U lilku xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx se odeberou 1-2 xx xxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxx oddenků x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx xx doporučuje testovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x počtu nejméně 10 rostlin xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx rostlinu. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x xxxxxxx, ačkoli xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx po xxxx xxx u xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vodních xxxxxx. Mezi známé xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx rostliny bramboru, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx zástupci xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Některé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx podmínek, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx pilosa, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Galinsoga xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Rumex xxx., Xxxxxx xxxx. X. xxxxxx., Tussilago xxxxxxxx x Urtica dioica.

Poznámka:

V xxxx xxxx je xxxxx provést xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx nebo xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxxx xxx xxxxxx s xxxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx krátce dezinfikují 70% etanolem x xxxxx xxxxxx savým xxxxxxx. Potom se xxxxxxxx části xxxxxx xxxxxx z následujících xxxxxxx:

x) xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °C xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x pevném xxxxxxxxxx sáčku (např. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx gumového xxxxxxx xxxx vhodného mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxx v chladu xxxxxxx xx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx usazení, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx třeba, xxx xxx je xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx popsaným v xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Čistý xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx na xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx díl se xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxx se xxxxxxxx v 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °C (xxxxxx) xxx případné xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Testování

Postupové xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx vodě

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci X. solanacearum xx xxxx

(1) Viz oddíl 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x oddíle 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, tak xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií x xxxxxxxxxx se xxx xxxxx, jestliže xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx test xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xx zředění xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxxx se dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx x detekci patogenu xx vzorcích xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxx být xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx brambor a xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxx liší x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xxx x xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx níže xxxxxxx schéma xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx detekce x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxx bude xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx xxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx vodu xx xxxxxxxxx nějakého xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx dojde xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx citlivosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx k xxxx, že xx xxxx xxxxxx používá xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx nebo nepřítomnosti xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx použití x podobnému mapování x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x povrchové vodě xx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx a xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxx době xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx snížením xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx podmínek.

- Xxxxxx silných dešťů x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx dojít xx xxxxxxxx zředění x tím i xxxxxxxx výskytu xxxxxxxx.

- Xxxxxx vody se xxxxxxxxx v blízkosti xxxxxxxxxxxxx rostlin, pokud xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx odeberou vzorky xxxx xx sterilních xxxxxxxx xxxx lahviček xx jedno použití, xxxxx možno 30 xx pod xxxxxxxx x 2 x xx břehu. Xxx xxxxxxxxxx odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx vody xx xxxxxxxx xxxxxx x místa xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 xx. Je-li xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx nejméně 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xxxx obsahovat 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x velikosti xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx nejméně 3 vzorkovací místa xx xxxxx 3 xx vodního toku x xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Vzorky xx xxxxxxxxxx x xxxxxx a xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, může xxx provedena koncentrace xxxxxxxxxxx frakce xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx xxxxx xxxxxx při 10&xxxx;000 g po xxxx. 10 minut (xxxx 7000 x xx dobu 15 xxxxx), pokud možno xxx teplotě 4-10 °X, slije se xxxxxxxx nad usazeninou x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1 xx pufru (dodatek 4).

x) Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx membránu (minimální xxxxxxxx xxxx 0,45 µx) s xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tato xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx obsahují xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx nedoporučuje x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx, protože zvýšená xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx diagram x xxxxx xxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. a 6.1.6.

(4) Biotest xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

(6) Xxxxxxxxx může xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, opakují se xxxxx selektivní izolace xx xxxxxx zředění xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

(8) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx detekční xxxxxx popsané x xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, ale xxxx xxx rovněž použito x xxxxxxxxx vzorků xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx x xxxxxxx xxxx. Je xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, že xxxx metody xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nízkých xxxx nepravidelně rozptýlených xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx se mohou xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx těchto xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx negativních xxxxxxxx x xxxx xxx sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx patogenu x půdě nebo xxxx je xxxxx xxxx x úvahu xxxxxxxx citlivost xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx přítomnosti patogenu x xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x při xxxxxxx xxxx metody xxxxxx xxxxx stupeň xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx vzorků

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx polní půdy xx xx mělo xxxxx standardními xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx půdy xx 60 xxxx na xxxxx 0,3 xx x xxxxxxx 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx na 120 x plochy 0,3 xx. Xxxx xxxxxxxxxx se uchovávají xxxxxx xxx xxxxxxx 12-15 °C. Xxx xx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx kalu. Xxxx testováním se xxxxx xxxxxx dobře xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 x půdy xxxx kalu xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 ot./min) x 60-150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx třeba, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Tween-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx kamínků může xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx testů xxxx x příslušném xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Diagnostické a xxxxxxxx testy

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx jednoduchý xxxx xxxxxxxxxxxxxxx výskytu: xxxxxx se stonek xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Xxx stonku xx xxxxxx do xxxxxxxx s čistou xxxxx. Xxxxxxx xx, xxx xx xx xxxxxxxx minutách xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx proudící xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxybutyrátu

1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x xxxxxxxxxxxx pletiva xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX nebo XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx sklíčko.

2. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x případně xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx XXX negativním xx.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx povrch xxxxxxx xxxxxxx xx rychle xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx se xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx súdánskou xxxxx x provede xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx sklíčka xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx roztokem xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx teplotě 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx se xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Roztěr xx xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx xxxxx papírem.

e) Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx vody a xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx při 450 xx pod olejovou xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x xx 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx x procházejícím xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx je xxxxxxxxxx xxxxx typická pro X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx súdánskou xxxxx:

x) Zakápnou xx xxxxxxx sklíčka 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X v 70% xxxxxxx a inkubují xx 10 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx opláchne xxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem.

c) Sklíčka xx xxxxxx krátce xx xxxxxx a xxxxxx se xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx xxxxxx škodlivý, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x pracovat v xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx zdraví xxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx a xxxxxxxx x digestoři.

e) Xxxxxxx xx opláchnou jemně xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx, odsaje xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx a přiloží xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx a xxx zvětšení 1 000x.

g) Xxxxx se modročerné xxxxxxxx XXX granulí x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační testy

Aglutinace xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx x pletiv x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx příslušnými obarvenými xxxxxxxxxx, xxxx. červenými xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Jinak xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Smíchají xx kapky xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx se, xxx se v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx po xxxx 15 xxxxxx xxxxxx aglutinace.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx na xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx tato xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxxx test x xxxxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx přídaných xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx validovaná xxxxxxxxxx xxxxx půda, xxxx. XXXX (ve xxxxx Xxxxxxxxxxx et xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx od xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx živné xxxx xxxx vyžaduje xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. solanacearum xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx misky xxxx xxxxxxxxx nebo xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterie. Je-li xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx znovu xxxxxx xxxxxx testu.

Pří xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, že citlivost xxxxxxx xxxxx metodou xxxx velmi vysoká. Xxxxxx je však xxxxxxxxxx i xxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx teplotě xx -68 do -86 °X.

Xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxxx jako desetinné xxxxxx ze xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx xxxxx kontaminace xx připraví pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx od xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx testování xxxxxx nejdříve xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx xx ředění x xxxxx xxxxxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx vyloučeny. Xxxxxx xx 50-100 µx extraktu xxxxxx xx 1 misku xxx každé xxxxxx.

2. Xxxxx se nechají xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Po 48 hodinách xx xxxxxxxxxxx xxxxxx stav x xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 dní. Xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx živné xxxx SMSA jsou xxxxxx xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx x xx 3 xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx červené xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx pruhy nebo xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Předpokládané kolonie X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu., xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonie (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx (pH 6-8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x temnu nebo xxxxxxxxxx ve vhodném xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultur (xxx xxxxx 6.2.) x test xxxxxxxxxx (xxx oddíl 6.3).

Interpretace xxxxxxxx testu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 xxxxx xxxxxx zpozorovány xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kolonie xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx bakteriemi x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx kolonie R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování na xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, jestliže jsou xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx pro obohacení, xxxx. xxxxxxxxxxxx bujón Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Tento xxxxxx xxx použít xxx selektivní zvětšení xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx detekce. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx i xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX testu (1:100). Obohacení R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx saprofytických organismů, xxxxx bývají často xxxxxxxx také xxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx test XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx místo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. U xxxxxxxxxxxxx xxxxx PCR xx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), který se xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxx. U obohacovacího xxxxx XXXXX xxxx xxx použit xxxxx xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx do bujónu (xxxx. 100 xx x 1,0 ml xxxxxxxxx živné xxxx).

2. Xxxxxxxx se 72 xxxxx při xxxxxxx 27 xx 30 °X x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x uvolněnými xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx zahájením testů XXXXX xxxx PCR xx obsah dobře xxxxxxxx.

4. S xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx inhibice obohacení X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx zvyšování xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx IF jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx prahů.

Použije-li xx xxxx XX xxxx hlavní a xxxxxxxx XX xxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx izolace, XXX xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx byla xxxxxxx úplná.

Poznámka:

Použije se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxx titr xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx definován xxxx xxxxxxxx ředění, při xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. solanacearum x xxxxxxxx vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2 000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x pracovních xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxx titr.

Test xx měl xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ze xxxxxx. Xxxxxxxx je xx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích uchovaných xxx xxxxxxx - 68 až - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx pufru (dodatek 4), 15xxxxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 x a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx peletového pufru. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx x jsou vzorky xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní sklíčka x xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak je xxxxxxx v dodatku 3 X, x nepovinně x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (uchovávané xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °X) by se xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx na stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx použijí xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx výsledkem.

Standardizované xxxxxxxxx x pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx xxx xxxxx test, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, pokud možno x 10 xxxxxx x xxxxxxxx nejméně 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

i) Pro xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx odměřené xxxxxxxxxx množství (15 µx je vhodné xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x většího xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety x xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx napipetuje stejné xxxxxxxx nezředěné pelety (1/1) xx zbývajících xxxxxx x xxxx. Xxxxx řada xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, jak xxxxxxx xxx. 1.

ii) Xxx xxxx pelety:

Připraví xx desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx pro průměr xxxxxx 6 mm - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x příslušném xxxxxx) resuspendované xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx se xxxxxxx xxx okolní xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 až 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx xx sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60 °X), plamenem, 95 % xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxxx instrukcí xx dodavatele xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, fixovaná xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Podle přípravy xxxxxxx xx test x odst. 5.1.i):

Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxx mít 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (T) x xxxxxxxxxxx titru (2X).

xx) Podle přípravy xxxxxxx na test x odst. 5.1.ii):

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) protilátek v xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx podle xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx být nejméně xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx inkubují na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx se xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx XX. Umyjí xx xxxxxxxxx po xxxx 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx v xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by xxxxx xxxxxxxx vzájemnou kontaminaci. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx na xxxxx xxxxx. Testovací xxxxxx xx xxxxxxx ředěním xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Sklíčko xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Napipetuje se 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx každého okénka x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Vyhodnocení XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x xxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx zvětšení 500x až 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x žádnými xxxx malým xxxxxx xxxxx se zkoumá xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx zkontroluje xxxxxxxxx kontrolní vzorek. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx obarvené x xxxxxxx xxxxx protilátky xxxx xxxxxxxxx ředění. Xxxxx je barevnost xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx IF xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x charakteristickou xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x testovacích xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxx xxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx protilátky xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx x neúplným xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a xxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. solanacearum.

4. Xxxxx se v xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 mikroskopovém xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx počet typických xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a je xxxxxxx xxxxx testování.

ii) Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xx považuje xx negativní. Další xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx PCR

Principy

Použije-li se xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, a xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX použita jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx pozitivní, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxx úplná.

Využití xxxx xxxxxx x xxxxx rozsahu xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx negativní. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx XXX (viz dodatek 6). Pokud xxxxx, xxxxx xx metoda x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx vhodná xxxxxxxxxxxx opatření x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx měl xxx prováděn xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X negativními xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA a XXX) by xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx bylo xxxxx, xxxxxx xxxxx x přenosu XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx testován na X. solanacearum x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX ze xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, xx kterých xxxx přidána X. xxxxxxxxxxxx (přípravu viz dodatek 3 X);

- suspenze 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857; xxx dodatek 3 B);

- xxxxx xxxxx, při XXX xxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Aby xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx měly xxx xxxxx možno xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx tento xxxx, jsou xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx popsané pozitivní x negativní kontrolní xxxxxx (xxx dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx provede xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků jsou x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx odstraňující xxxxxxxxxx XXX a jiných xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx optimalizována xxx použití xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxx v dodatku. 6.

x) Xxxxxx podle Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx lyzátového xxxxx (100 mM XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 xX EDTA (xX 8,0)) do 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx se 100 µx extraktu xx xxxxxx a xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx s xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 min. xx ledu.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx lysozymu/na 1 ml 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) a inkubuje xxx teplotě 37 °X xx xxxx 30 minut.

5. Přidá xx 220 µl xxxxxxx Easy XXX® X (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx se 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, pokud xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µl xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x směs xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Pro xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxx. xxx teplotě 4 °X.

9. Xxxxx xxxx xx převede do xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x inkubuje xx xx xxxx xx xxxx 10 xxx.

11. Odstřeďuje xx xxx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxxxx při teplotě 4 °C x xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % etanolu (- 20 °C) x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Odstřeďuje xx xxx 15&xxxx;000 x po dobu 10 xxxxx při xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx etanol.

14. Xxxxxx xx nechá xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx v XXX xxxxxxx.

15. Peleta se xxxxxxxxxxxx v 100 µx xxxxxxxx XX x xxxxx xx xxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Skladuje se xxx xxxxxxx - 20 °C až xx xxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xx xxxxxxx pro xxxx XXX.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody extrakce XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx prokázalo, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx pro XXX xxxxx schválených xxxxxxxxx (6.1.6). Připraví xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx vzorku xxxxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

2. Xxxxxxxx xx příslušná xxxxxxx xxxx pro XXX v prostředí, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Pokud xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx interní xxxxxxxx XXX.

3. Xx sterilních XXX mikrozkumavek xx xxxxx 5 µl xxxxxxxx DNA xx 25 µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx se negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx směs XXX x přidá xx xxx xxxxx XX xxxx xxx xxx, který xxx xxxxxx xx xxxxx XXX místo xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx xx vhodně optimalizovaný xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

1. Xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx se xxxxxxx 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA x xxxxxxx xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx gelu x Tris-acetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx DNA xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x ethidiumbromidu (0,5 mg/l) xx xxxx 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x tímto xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x XX (krátké xxxxxx xxxxx xxxx. 302 xx) prosvíceném xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx velikosti x výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx nálezů/případů se xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované XXX inkubací xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx restrikčním xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx rozdělí xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x pozoruje xx charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX světlem xx xxxxxxxx ethidiumbromidem x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX specifický xxx X. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx, ale je xxxxxxx x všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery specifickými xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx PCR očekávané xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx zkoumaným xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (xxxxxxxx) vzoru, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx výsledku xxx xxxx xxxxxx opakováním xxxxx x druhou xxxxx primerů XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx vodě, zatímco xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx xxxx xxxxxxx negativní xxxxxxxx. X multiplexních xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx inhibici xxxxxx, xxxxxxxx není xxxxxx xxxxx ze xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x jednoho xxxx více xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, je xxxxxxxxx xx kontaminaci.

6.1.7. Xxxx FISH

Princip

Když se xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx a xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX xxxx. Když xx XXXX xxxx provede xxxx druhý xxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx R solanacearum xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx měl xxx xxxxx možno proveden x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx s extraktem, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xxxx - 68 až - 86 °X.

Xxxx negativní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx X. solanacearum x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (např. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01X fosfátovém xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx xxxxxxx. Připraví xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx kmenu xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X.

Xxxxxxx eubakteriálních oligosond xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx kontrolní materiál, xxxxx xx používá x xxxxx xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx po xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 g.

3. Xxxxxxxx xx supernatant x rozpustí se xxxxxx xx 200 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 hodinu x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01X PB (viz dodatek 7).

5. Xxxxx se 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx čisté 10 okénkové xxxxxxx, xxx ukazuje obrázek 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na jedno xxxxxxx, x xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (v 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) může xxx xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °X xx přidání 1 objemového xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, odstraní xx xxxxxx odstředěním x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (zamíchá xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx sklíčku FISH

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37 °C) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x hybridizaci xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx buňky v xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % a 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx xx vzduchem x xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx komora xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx nasáklým xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Před xxxxxxxx xx xxxxxx box x hybridizační peci xxx teplotě 45 °X xx dobu xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µx hybridizačního roztoku (dodatek 7) na 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) na xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) xx nechají xxxxxxx.

4. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx xxxxx x xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx tak, aby xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx xxxxx komory x xxxxx se xxxxxxxxxx proces xxxxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx x xxxxxx xxx teplotě 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx se 3 xxxxxxx obsahující 1 x vody x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 x 1x hybmix (334 xx 3x hybmix x 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 x 1/8x hybmixu (42 ml 3x xxxxxx x 958 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Nechají xx xxxxxxxxx xx xxxxx lázni o xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx sklíček.

7. Xxxxxxxx se nadbytek xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x hybmixem xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx do promývacího xxxxxxx 1/8 hybmix x xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Sklíčka xx xxxxxx ponoří xx XXX (xxxx. Milli X xxxxx) x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Napipetuje se 5-10 µl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX nebo xxxxxxx) xx každého okénka x celé xxxxxxx xx xxxxxxx velkým xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630 x nebo 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx X. solanacearum obarvené Xx3 xxxx fluorescenčně xxxxxxx. Porovnává xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x zcela zbarveny. Xxxx FISH (xxxx. 6.1.7) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlížejí xx xxxxxx napříč xxxxx průměry v xxxxxxx úhlech x xxxxx xxxxxx. U xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Hledají xx jasně fluoreskující xxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx lepší xxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx v xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test opakován. Xx xxxx xxxxxx x případě, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxx xxxxxxxx (vně xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX s xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x pletiv x xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx k výskytu xxxxxxxx fluorescenčních buněk xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx křížové xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x testu XX.

5. X úvahu xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány x xxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách. Xxxxx xxxx přítomné xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je další xxxxxxxxx. Vzorky, které xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii) Výsledek XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. solanacearum, jestliže xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x pozitivních kontrolách.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx použít xxxxx xxxx volitelný xxxx xxxxx xxxxx XX, PCR xxxx XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx citlivost. Xxx xxxxxxx DAS XXXXX je xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povinné. Obohacení xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX může xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx může se xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx pro xxxxxx novou šarži xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx konjugátů xxxxxxxxxx podle doporučení xxxxxxx. Xxx testování xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx blízké nebo xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx xxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx bakterií bez xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx alikvótní xxxxxx xxxxxxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx otestovány xxxx negativní, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx na 1 ml xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx NCPPB 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X x X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx standardní xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx v XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxx být xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x testování.

Standardizované pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3 xxxx A.

Test xxxxxxxxxxx materiálu se xxxxxxx týmž způsobem xxxx test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x) Nepřímý xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx xx al., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X xx 4 xxxxxx xx vodní xxxxx nebo xxxxxx xxxx xxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx redukovat xxxxx xxxxxxxxxxxxxx výsledků).

2) Xxxxx xx stejné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x směs xx xxxxxxxx.

3) Nakape xx 100 µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (např. Xxxx-Xxxxxxxx nebo rovnocenné) x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37 °X nebo 14 - 18 x xxx teplotě 4 °X.

4) Extrakty xx xxxxxx z xxxxx. Xxxxx xx třikrát xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x poslední xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx proti X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx pufru (dodatek 4). X xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx použijí xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx xx titr).

6) Přidá xx 100 µx xx každé xxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Roztok xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx. Přidá se 100 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 hodinu při xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx vylije x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Přidá se 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx (dodatek 4) xx každé xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxx 405 xx x pravidelných 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx pufru xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx xx každé xxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx xxx teplotě 37 °X 4 xx 5 hodin xxxx 4 ° X xx dobu 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4). Přidá xx 190 µx xxxxxxxx xx vzorku xx xxxxxxx xxxx jamek. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx do xxxx jamek na xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx teplotě 4 °X.

3) Xxxxx xx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x XXX (dodatek 4) x obsahem 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (BSA), xxxxx xx 190 µx xx každé xxxxx x xxxxx xxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °X.

5) Jamky xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx ředění xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fosfatázou x XXX. Xxxxx xx 190 µl do xxxxx xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx roztok 1 xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µl xx xxxxx xxxxx x inkubuje xx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx xxxxxxx v xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx ELISA je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) x xxxxx xx stejnými vzorky xx xxxxx než xxxxxxxxxxx OH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx všechny xxxxxxx XX pozitivních kontrolních xxxxxx xxxx xxxxx xxx 1,0 (po 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) a xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH získané x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, jestliže průměrné xxxxxxx XX x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxx extraktu xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx menší xxx dvojnásobek xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx hodnoty ELISA x pozitivních kontrolních xxxxxxxx ukazují, xx xxxx nebyl xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou by xxxx xxxxxxx reprodukovatelnou xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx tvořících xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx ze xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Metodu xxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x teplotě - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx odrůdy xxxxxxx (xxxx. kultivaru Xxxxxxxxxx xxxx kultivaru x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx u xxxxxxx xxxxxx. Podrobnosti xxxxxxxxx xxx v dodatku 8. Xxxx xx xxxxxxx xxxxx (např. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx nebo xxxxxxxxx x rovnocennou xxxxxxxxxx), xxx jen xxxxxxxx ve xxxx 2. až 3. xxxxx až xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x xxxxx jsou xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx použít sazenice xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx se 100 µx xxxxxxxx xx vzorku xxxx xxxxxxxxx rostliny.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulují se xxxxxx rostlin xxxx xxx děložními xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx listy x prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx udělá xxxxxx xxx xxx 1 xx dlouhý x xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx sterilní xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx technikou xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx xxxxxxx, aby se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °X a xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx ve zcela xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Musejí-li být xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx blízko xxxx, oddělí se xxxxxxxx zástěnami. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, prohlížení x všech ostatních xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx skleník xxxx vegetační prostor xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx by xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx rostlin xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) a xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 xx z xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx pozitivní, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx všechny xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (bod 6.2.).

Interpretace xxxxxxxx biotestu

Platné výsledky xxxxxxxx jsou získány, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx z xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny nevykazují xxxxx příznaky.

Biotest je xxxxxxxxx, xxxxxxxx rostliny xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum, pokud xxx organismus xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx referenční xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx fenotypové xxxxxxxxxx, které xxxx xxxxxx přítomny xxxx xxxxxx chybí u X. solanacearum, metodami Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Očekávaný xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx fermentační xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx aktivita +

Xxxxxxxxx xxxx podle Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Růst x 2% NaCl -

Arginin-dihydrolázová xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Produkce levanu -

Xxxxx x xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx 1 xx x xxxxx IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Použije xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx x 1X PBS (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx XXXXX xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxx xxxx výsledku xxxxxxx x xxxx kultury xx nejméně poloviční x xxxxxxxxx s xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxx vody (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx nebo vařící xxxxx xxxxx xxx 100 °C 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx uchovány xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X do dalšího xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx amplikonů xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx al. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Pastrik xx xx. (2002); Boudazin xx xx. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Weller xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 ml v XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (6.1.7) x xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx specifickými xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx x kultury a xxxxxxxxx xxxxxxxx dosáhne xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx kultura xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx agaru (Xxxxx) 48 hodin xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx se xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx FAP je xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných kyselin: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx sp.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx charakteristika kmenu xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (viz dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx biovaru

R. xxxxxxxxxxxx tvoří biovary xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx disacharidů x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx xx xx., 1990). Xxxxx půda xxx xxxx biovaru xx popsána v dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx půdy x čistou kulturou X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx při teplotě 28 °C. Je-li xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx destičky x 96 jamkami (200 µl na 1 xxxxx), xxxxxxxx xx mění xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Lelliott a Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, mezi něž xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxxx et xx., 1989).

2. Repetitivní xxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxxx REP, XXX a ERIC (Xxxxx xx xx., 1995; Smith xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx et xx., 1998).

6.2.7.3. Metody XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx et xx, 2002; xxx dodatek 6) xxx použít x xxxxxxxxxxxx kmenů patřících xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (biovary 1, 2X x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx et xx., 1989) a xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum x x potvrzení xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx proveden xxxx patogenity.

1) Připraví xx xxxxxxxx o xxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx 1 xx xx 24 xx 48 hodinových xxxxxx x xxxxxxxxx x příslušný xxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete nebo xxxxx xx xxxx 3 pravých xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx nechají xxxxxxxxx xx 2 xxxxx při xxxxxxx 25-28 °C x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. X xxxxxxx xxxxxx by typické xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx době xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx být xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx R. solanacearum.

4) Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx epinastie, xxxxxxxx nebo xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 xx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx rozmělní x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového pufru (dodatek 4). Izolace ze xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pokud xxxxx xx selektivní xxxxx xxxx (dodatek 2). Xx inkubaci 48 xx 72 xxxxx xxx teplotě 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx půdy xxx xxxxxxx a kultivaci

Živný xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx) 23,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při teplotě 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Difco) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx složky x sterilují v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 minut.

Kelmanovo xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 g

Bacto-Pepton (Xxxxx) 10,0 g

Dextróza 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx na 50 °C x xxxxx xx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx xxxxxxx koncentrace 50 xx na xxxx.

x) Validované selektivní xxxxx půdy

Živná xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 g

Bacto-Pepton (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx pozn. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx se na 50 °C x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx roztok následujících xxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx konečná xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1 250 X (přibližně 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Signa X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Signa X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxx uvedených xxxxxxxx může xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Xxxxx Agar #1. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx růst R. xxxxxxxxxxxx pomalejší, xxx xxxx xx také xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx tvořit o 1-2 xxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x rozptýlenější xxx xxx xxxxxxx Bacto-Agaru.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 500 X/x xxxx xxxxxx populace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bez xxxxxxxxx růstu

Ralstonia solanacearum.

Roztoky xxxxxxxxxx xx uchovávají x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °C x xxxxx a xxxx xx spotřebovat xx 1 xxxxxx. Xxxxx s xxxxxx xx xxxx xxx xxxx použitím zbaveny xxxxxxxxx kondenzace. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vysušení xxxxx.

Xxxxx xxxx připravená xxxxx xxxxx xxxx xx měla xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kvality xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx referenční xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) a xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 xx 5 xxxxx při xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx půdy

Xxxxx xxxx SMSA (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, xxx xxxxxxx xx Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- trifenyltetrazolium xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx xx na 50 °X. Xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx roztok xxxx xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

A. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx doporučují xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx bud' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx během xxxxxxxxxxxx testů, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxx xxxxxxxx (tabulka 2). Xxxxxxx kmeny xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xx získat x xxxxxx sbírek:

1. Xxxxxxx xxxxxx patogenních xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx laboratoř Xxxx, XX.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (PD), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Francie.

Tabulka 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Poznámka:

Spolehlivost xxxx xxxxxxxxx kmenů xxxx xxx zaručena xxxxx x xxxxxxx, xx pocházejí x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Referenční xxxxx XXX sérologicky nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx detekčních xxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrole xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx obsahující 10³ až 10⁴ x 10⁴ až 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxxxxxx a PCR xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx ovlivněna xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx x pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX a XXXX

Xxxxxxxxx se 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx získala xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx se jí xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx z xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx s bílou xxxxxxx, x xxxxx xx xx, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µx resuspendované xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se. Xxxxxxx xx desetinásobné ředění x dalších pěti xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx označeny.

Připraví se xxxxxxxxx xxxxx z 100 N1 ve xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 xx, xxxx se xxxxx 9 xxxxx každého xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x množství X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx nejprve potvrzeny xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků pro xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x XXXX xxxxx xx xxxxxxx test patogenity xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxx zkušebních xxxxxx.

Xxx kvantitativních rozborech XX, XXXX x XXX xxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx zjištěna x xxxxxxx v 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nesmí být xxxxxxx x xxxxx x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze skladovat xx xxxx až xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 mM xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, zkontroluje xX a sterilizuje x xxxxxxxxx při 121 °C po xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx být následující xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Tento xxxx xx používá pro xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx x výkrojků x xxxxxxxxx částí xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx xx pelety.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 min.

2. Pufry xxx IF xxxx

Xxxx xxx XX (10 xX fosfátový xxxx xx fyziologickém roztoku (XXX), xX 7,2)

Tento xxxx xx používá x xxxxxx protilátek.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx sklíček.

Přidá se 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx jako krycí xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx komerčně dostupné, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx testu XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx uhličitanový xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx molekul, xx xxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxx siřičitan xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

NaCI 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 g

KCI 2,0 g

Destilovaná voda 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 ml

10 %Xxxxx 20 5 ml

Destilovaná xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x PBS 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 ml

Sušené xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx do 100 ml

3.5. Roztok xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x koncentrovanou XXx xx upraví xX xx 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidá se 0,2 g XxXX₂.

Xxxxxxxx xx dvě 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Sigma) x 15 ml xxxxxxx.

4. Xxxxx pro xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 x

XxX XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (PBS) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 g

NaH₂PO₄ . 2H₂O 4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1 000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Tween 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx voda 900 xx

Xxxxxx xx x xxxxxxx xx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx s xxxx xxxxxx a

s - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá se xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X =X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxx a

F = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a činidla xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx testování xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bakterií (viz xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Seal xx xx. (1993)

1.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX GGT XXX TTG CTA XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-XXX XXX XXX GCC TCC XXX AGG AGT-3'

Očekávaná xxxxxxxx amplikonu templátové XXX R. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx xxx 96 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 sekund při 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 20 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 30 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 10 minut při 72 °C (závěrečná xxxxxxx)

xx) ponechá se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x iv).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé amplifikací x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX po xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X.

2. Xxxxxxxx PCR Xxxxxxxx x Maisse (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1: 5'-xxx xxx acg xxx gcg xxx x -3'

Reverzní xxxxxx Xx-2: 5'-xxx gat xxx aca xxx xxx ttg xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 mM
Primer Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer Ps-2 (10 μM)	0,5 μl	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5U/μl) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μl
Celkové xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x Gibco XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 s xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx být xxxxxx xxxxxxx xx stejných xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové DNA)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (denaturace templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 xxxxxx při 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (syntéza extenze)

vi) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx bude možná xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR vzniklé xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx DNA vytvářejí xxxxxxxx polymorfismus délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx Taq I xx inkubační xxxx 30 minut při xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum xxxx velikost 457 xx x 96 xx.

3. Xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxx kontrolou (Xxxxxxx xx al., 2002)

3.1. Oligonukleotidové primery

Přímý xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX GCA XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX CAC XXX AGA GAC X-3'

Xxxxx xxxxxx NS-5-F: 5'-XXX XXX AAG XXX XXX XXX XXX G-3'

Reverzní xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX XXX TGT XXX XXX CTC-3'

Očekávaná velikost xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx RS). Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxx xxxxxxxx PCR 18S xXXX = 310 xx (sada xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (denaturace templátové XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 72 °C (konečná xxxxxxx)

xx) xxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z DNA X. xxxxxxxxxxxx vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx Xxx 1 xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 I) xx xxxxxxxxx době 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx XXX specifický xxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1-X: 5'-ACT AAC XXX GCA XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-1-R: 5'-XXX XXX CAC GGC XXX XXX T-3'

Reverzní xxxxxx Xx-3-X: 5'-TTC XXX XXX XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Xxxxxxx směs XXX

x) Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx biovar 1/2

x) Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx xxx obě reakce xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °C (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx při 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s templátovou XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) a xx).

4.4. Restrikční enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx DNA X. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-1-X vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X. Xxxxxxxx XXX vzniklé amplifikací x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Rs-3-R xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx modř (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 ml

5.2. Nanášecí xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 ml

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx octová 11,42 xx

XXXX (sodná xxx) 3,72 g

Destilovaná xxxx 1,001

Před xxxxxxxx xx xxxxx na 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx FISH xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Fixační xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX. POUŽÍT XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C a xxxxx se 0,4 x parafonnaldehydu. Parafonnaldelryd xx xxxxxxxx po xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml fosfátového xxxxx 0,1 M (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx xx xX indikačním xxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx XXx xxxx NaOH. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX MĚŘIČ XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx prachem xxx teplotě 4 °X xx dalšího xxxxxxx.

3. 3x Hybmix

NaCI 2,7 M

Tris-HCI 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Hybmix

Sodium xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx XXX 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 xxxx OLI2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 1. Xxx každé xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx roztoku. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX JE XXXXX JEDOVATÝ, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX A XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx

Poznámka:

Všechny roztoky xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx chrání xxxx přímým slunečním xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování lilku x xxxxxxx

Xxxxxx se xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx děložními xxxxxx (10 xx 14 xxx) se xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xx xxxx pěstovat ve xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxx xx delší;

Teplota: den: 21 xx 24 °X,

xxx: 14 až 18 °X.

Xxxxxx odrůda xxxxx vejcoplodého: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx odrůda rajčete: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: viz internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx xxx D.A. Stahl. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx probing xx whole xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. J. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Anon. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 Xxxx 1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofthe European Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Roux, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx of xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx to xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. European Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Palomo, X.X., Xxxxxx, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx x Specific Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx for xxxxxxxxx Detection of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Potato Tubers. Xxxxxxx and Environmental Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, D., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: detection xx xxxxxxxxxxx fragment xxxxxx xxxxxxxxxxxxx with DNA xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Molecular Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. xxx Stead, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, M.C. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxxxx (ed.) Bacterial Xxxx Newsletter 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Centre xxx huternational Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Australia.

8. Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, A.C., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx nitrate xxxxxxxxxx in xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, M. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of xxxxxx xxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx a XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx method for Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxxxxxxxxx xxxxxx tubers xxx xxxx data xx xxx sensitivity xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Bulletin 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- and xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx to xxxxxx xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx Z.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, R.A. xxx Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx for xxx diagnosis xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16. Lopez, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, B., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx improves xxxxxxxxx isolation, serological xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxx et al., (xxx). Xxxxxx Academic Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Specific xxxxxxx fingerprints of xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx with xxxxxxxxxx sequences xxx XXX. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Louws, F.J., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Bruijn, F.J. 1995. Differentiation xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX fingerprinting xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., F. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, T.-H Xx, X. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, V. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxxx. 1997. X novel xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx and xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx identifying Rurkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). As Pac. X. Mol. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. J. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, K.H., Elphinstone, X.X. and Pukall, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx multiplex XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16S-23S xxxxxxxxx intergenic spacer xxxxxx with internal xxxxxxxx xxxxxxx. European Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, A., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx to Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx of xxxxxxxxx xxxx. Food xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory guide xxx identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Xxxx, S.E., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx ygii, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Disease Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX sequencing: xxxxxxxxxxxx xx oligonucleotide xxxxxxx xxx xxxxxxxxx detection xx polymerase xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, M. xxx Saddler, X.X. 1995. Genetic diversity xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. using cellular xxxxx-xxxx xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, M., Hayward, X.X., Xxx, LI, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx of xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx of xxxxxxx of Burkholderia xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx on 16X xXXX gene xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Wolf, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, M., Xxxxxxx, E., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Saddler, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X. 1998. Xxxxxxx diversity of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 in Western Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx XXXX, RC-PFGE xxx xxx-XXX. In: Xxxxx, X., Allen, X. and Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Molecular xxx Xxxxxxxxxx Aspects. Xxxxxxxx (Berlin) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G., Smith, X., Xxxxx, D.E. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx autonated xxx xxxxxxxxxxxx flourogenic 5' nuclease XxxXxx xxxxx. Applied and Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 66; 2853-2858.

30. Wullings, X.X., X.X. xxx Beuningen, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Akkennans. 1998. Xxxxxxxxx of X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.