Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 odst. 2 zákona x. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx péči a x xxxxx některých xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 písm. x) xxxxxx:

§1

Předmět úpravy

Tato xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx předpisy Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx¹⁾ x xxxxxxxx opatření, xxxxx xx uplatňují xx xxxxx České republiky xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Davis xx xx., xxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx al., xxxxxxx bakteriální hnědé xxxxxxx, aby se

a) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx a

c) xxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx jejich xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx jejich eradikace.

§2

Xxxxx

Xxx účely xxxx xxxxxxxx xx rozumí:

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx xx. xxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx et xx.,

x) xxxxxxxx hnědé xxxxxxx - xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx al.,

c) hostitelskými xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x ostatní xxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx (Solanaceae), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx infekce xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx tuberosum X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx xxxxx a xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx dulcamara X.) x xxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), u xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - průzkum zaměřený xx zjišťování výskytu xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx xxxxx xxxx x určité xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx a xxxxxx zamoření původcem xxxxxxxxxxxxxx nebo původcem xxxxx xxxxxxx, k xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x k xxxxxx hranic xxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx zamořením xxxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx z xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, partii, zařízení, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx §11 odst. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx rozšířením xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - podezření x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, x objektu xxxxx x území, xxxxx §11 odst. 1 xxxxxx,

x) zamořením původcem xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

i) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx správou (xxxx xxx "xxxxxxxxxxxxxxxx správa"), xx xxxxx xx xxxxxxxx mimořádná rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, na xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 xxxxxx x důvodu podezření x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx,

x) klonově xxxxxxxxx partií - xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxx xxxxxxx xxxxxx; přitom xx za:

1. sesterské xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxx klonově příbuzné xxxxxx, xxxxx vznikly x témže xxxx xxxxxxxxxxxx množením z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. rodičovskou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx považuje xxxxxx xxxxxxx příbuzná xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx z xx xxxxxxxxxxxxx vznikly.

§3

Průzkum výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx provádí každoročně x xxxxxxx s §10 xxxx. 1 xxxxxx systematický xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce hnědé xxxxxxx v xxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx podléhají

a) xxxxxxxxxxxx materiál xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) namátkově xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx členských xxxxx,

x) xxxxxxx partie xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx vymezené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx vymezeném xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx původce kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx rostlinolékařské xxxxxxxx xxxxxxx dovážených xx třetích xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zemí xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx partie bramboru xxxxxx x vývozu xx xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx původce xxxxx xxxxxxx navíc xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx bramboru, xxxxxxxxx xxxx pevné xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx nebo potvrzení xxxx výskytu xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx tyto xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx zjišťuje

a) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x), xxxxxxxx 3 a x odstavci 4 xxxx. x) x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxxx a řezu xxxxxxxx hlíz, x xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxx xxxxxxxx, v xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x),

x) xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx dobu x následným laboratorním xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxx x příznaky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odstavci 5 xxxx. a),

d) laboratorním xxxxxxxxxx vzorků vody, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x případě uvedeném x xxxxxxxx 5 xxxx. x) a x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx prohlídky xxxxxx x xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxx při xxxxxxxx, xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 xx 7, rozsah tohoto xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx informací x xxxxxxxxxx x testovaných xxxxxxxx stanovuje x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby, x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx brambor x xxxxxxx hostitelských rostlin x x xxxxxxxxxx xx aktuální xxxxxxx xx výskytu xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správy (dále xxx "Xxxxxxx"). Testování xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x určení xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx a xxxxxxxxxxx xx Věstníku.

(9) X průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx odebrané xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx osobou, xxxxxxxxx x xxxx činnosti Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxxx xxxx rostlinolékařskou xxxxxxx xxxxx §72 xxxx. 5 xxxx. x) xxxxxx, pokud bude xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx dohledu xxxx xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx zbytečného xxxxxxx xxxxxxxxx nebo fyzické xxxxx, xxxxx vlastní xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx xx oprávněna xxxx partii xxxxxx xx xxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxx kontrolnímu x xxxxxxxxxx ústavu xxxxxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx o provádění xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x souladu x §10 odst. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx stanoveném x příloze č. 2 části X xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx xx xxxxxx zajištění xxxxxxxxxxx úrovně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx úředních xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx jednou xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx pro výsadbu xx pozemcích množitele, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 1. června. Xxxxx oznámení o xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, týkající xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxx vždy x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx.

§4

Opatření při xxxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xx podezření x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx se x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx

x) rostlinolékařskou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx těmito xxxxxxxxxx organismy x x případě xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx rychlého screeningového xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1.

(2) V xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa x rámci xxxxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx provedení xxxxxxxx laboratorního testování, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx B, x xxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo vyvrátit.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahájí xxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx šetření xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx za xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, které xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx vylučuje xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x

x) nařídí xxxxxx xxxxxxxx založená xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx rizika xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx všech xxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xx xxxxxxxxx x v xxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx x výskytu, xxxxxxxxx x mimo xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx, x případě původce xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxx státu xxxx x xxxxxxxx xxxxx členském xxxxx, xxxxx rostlinolékařská xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx členského xxxxx xxxxxxxxxxx týkající xx tohoto podezření x bude s xxxxx státem vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx mít xxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxx které může Xxxxxx xxxxxxxxx ohrozit, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 odst. 8 xxxxxxx výskyt xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx x §76 xxxx. 2 zákona x x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx pěstování, xxxxxxx xx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx xx zamořené xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx partii, x xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx jiné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxx xx xxxxx s xxxxxxxx rostlinným xxxxxxxxxx, xx kterého xxx xxxxxx odebrán, x xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx těch, xxx xx xxxxx xxxxx výměna pěstebního xxxxxxxxx, a xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření a xxxxxxxxx xxxxxx nákazy x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 včetně testování xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x stanoví x souladu x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxx xxxx posklizňového kontaktu, x xx základě xxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstování, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx pěstitelské xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx objektem, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx zamořených xxxxxxxx xxxx objektů xxxxx xxxxxxx x) a xxxxxxxxxxxx zónu na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření podle xxxxxxx x) x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X případě xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx s xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx vodu xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x balení brambor x x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x doprovodné xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx zavlažování, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx mohlo xxx xxxxxxxx pěstování brambor, xxxxxxxxxxxxxxxx správa

a) xxxxxxx xxxxxx laboratorní testování xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx x popřípadě xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xx xxxxxxxx termínech x xxxxx určit xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxx a) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) vymezí xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx povrchové xxxx za xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx b) x bezpečnostní xxxx xx xxxxxxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx oznámí xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), popřípadě xxxxxxxx 2 xxxx. x), x xxxxx podrobnosti x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. c). Xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx hniloby x xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 x 2 označí zamořené xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx rozsah pravděpodobného xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Rostlinolékařská xxxxxx xxxxxxx úředním xxxxxxxx ve Věstníku xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx šetření xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x) x xxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx, vymezovaných xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), odstavce 2 xxxx. c) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin klonově xxxxxxxxxx x partiím, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx zamořené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), v xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx klonově příbuzné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x to v xxxxxxx potřebném ke xxxxxxxxx xxxxxxxxx zdroje xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx míru xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx.

(2) Xxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxxxxxxxxxxxxxx správa v xxxxxxx potřeby xxxxxx xxxxx předměty a xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a nově xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) a x).

§7

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona xxxxxx tato mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx označená xx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxx být xxxxxx x pod xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správy xx s xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x bodě 1 přílohy č. 4, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx předem xxxxx, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx této xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) smí xxx použita xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx předem xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx riziko rozšíření xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx zpracování xxxx xxxxxx, x xxxxx není tato xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx partií hostitelských xxxxxxx xxxxx §6 xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx zamořené xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x) xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxx §5 odst. 1 xxxx. b), xx xxx zničí nebo xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxx uvedených x příloze č. 6 s tím, xx po xxxxxxxxx xxxxxx x dezinfekce xx tyto objekty x předměty za xxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx území x bezpečnostní zóně, xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 2 xxxx. x), xxxx xxx provedena xxxxxxxx xxxxxxxxx x případě xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x bodě 4 přílohy č. 4 x x xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx hniloby v xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxxxxxxxxxxxxx správa může xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x odstavci 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx odborně xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx a účinná. Xxxxxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxx nařízených podle xxxxxxxx 1 písm. x) xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxxxxx xxxx sděluje xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům a Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zruší xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. x) zákona xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx jejich xxxxxxx x po xxxxxxxx doby stanovené x xxxxxx splnění.

(4) Xxxxxxxxxxxx původce kroužkovitosti x původce xxxxx xxxxxxx je x xxxxxxx x §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxx, šlechtitelským nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, pokud xxx xxxxxxx narušena xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx výskytu xxx xxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx materiál²⁾ xxxxxxxx, vypěstovaný xx xxxxx Xxxxx republiky x uváděný na xxx, xxxx být xxxxxxxx laboratornímu xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 odst. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 a x xxxxxxx s §3 xxxx. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, xxxxx xxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, a xxxx

x) xxxxx byl x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx z České xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxx

1. rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x množení x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx ani původce xxxxx hniloby nebyl x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce potvrzen x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru původem x České xxxxxxxxx.

§9

Účinnost

Tato xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx dnem jejího xxxxxxxxx.

Příloha x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Sb.

A. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx součástí:

i) diagnózy xxxxxxxxxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) detekce Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, validovaná xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku č. 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx za vhodných xxxxxxxxxxxx podmínek x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx rostlinolékařskou xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx stálé x xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx metod.

Zcela xxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol.

Testování xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx a kalibraci xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x činidly x xxxxxx uchovávání x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x v xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx uvedeno x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx je první xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti x xxxx být xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx je x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní, xxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx se xxxxxxxxxx x testování xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx není xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx důvodu xx pozitivní IF xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x identifikaci xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx postupových xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx x hlízách bramboru x x rostlinách xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x rostliny xxxxxxxx s xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci patogenu x infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx xx diagnostickém xxxxx x x xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

(1) Popis xxxxxxxx xx v xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Ačkoli xxxxxxx xxxxxxxx z rostlinného xxxxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxx roztíráním xxxxxxxx xx média není xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx nemusí podařit. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx médiu. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (oddíl 7).

(4) Popis typické xxxxxxxxxx kolonie xx x oddíle 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx choroby xxxx xxxxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx je popsána x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xx xxxxxxxx latentních infekcí x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx výsledek z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x nichž xxxxx je založen xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx je Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxx jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx dostačující x tomu, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx i xx xxxxx xxxxx, jestliže 200 xxxx není x xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddílu 3.1.

(3) Xxxxx jsou xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx provedena xxxxxxx x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx za negativní. X xxxxxxx, xx xx tento xxxx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxx prvního pozitivního xxxxxxxx nezbytný ještě xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Pokud xx xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx vyšetření XX xx vždy xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx větší xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX test.

Použijí xx xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx činidla a xxxxxxxxx (viz xxxxx 5).

(7) Selektivní izolace.

Toto xxxx být v xxxxx případech xxxxxx xxxxxx pro přímou xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx za xxxxxxx XXXX xxxxx xxxx XXX-88 média x ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxx xxxxx 3-10 dní xx rozetření na xxxxxx. Kulturu patogena xxx xxxxxxxx vyčistit x identifikovat. Xxx xxxxx xxxxxxx potenciálu xxxx vyžaduje opatrnou xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxx sekundární xxxxxxxx, které jsou xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxx a které xxxxx xxxxxxxx přerůst. Xxxxx xx kultivační xxxxxx xxxxx nepodaří, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx pro biotest (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx bramborových xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx). Test xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pro tuto xxxxxx. Xxxxxxxxxxx inhibitory Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx XXXX xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx nebudou (viz xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx v oddílu 8.

(10) Kultivace xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx screeningových testů xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx testy xx xxxxxx pelety xxxx dodatečným xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx vzorku x x případě xxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Xxxx patogenity je xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru

(1) Doporučené velikosti xxxxxx - xxx xxxxx 3.2.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddílu 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx za negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx nebo další xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx morfologie kolonie xxxx popsány x xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx xx popsán v xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxxxx, opakují se xxxxxxxx xxxxx x x případě potřeby xx provede test xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x kterých xx xxxxxxxxx, že xx xxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx dosáhne xxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx je popsán x oddílu 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínkách xx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx jen xxxxxxxxx a často xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx mechanických xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx poli snadno xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx odlišné xx příznaků hnědé xxxxxxx; xxxxxxx xx xxxxxxx pomalé x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx listů. Mladé xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x přes infekci xxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx vznikají xxxxxxxxx tvarované xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx mají chlorotické, xxxxx xx oranžové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Infikované xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx odumřít. Xxxxx xxxx listy x xxxxx xxxxx xxxxx. Příležitostně jsou xxxxxxxx zakrnělé. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx internetové xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pletiva xxx xxxxxxx v xxxxx xxxxxxx systému, zejména xxxxxx pupku. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx nepatrně xxxxxx zbarvení xxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx příznakem je xxxxxxx zabarvení xxxxxxxx xxxxxxx svazků x xxxx, xxx xxx xxxxxx zmáčknutí xxxxx xxxxxxxxx x cév xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx bakterií. Vodivá xxxxxxx mohou xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx jsou v xxxxx stádiu podobné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxx xxxx xxxxxxxx omezeny xx jednu xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx blízko xxxxxxx xxxxx x xxxxx xx postupně xxxxx xx celý xxxxxxxx. S xxxxxxxx xxxxxxx dochází x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx část xx xxxx oddělit xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, často x xxxxxxxxxxxxxx okraji. X xxxxxxxx xxxx xx x Evropě xxxxxxxx xxxxxxx případů, xxx xxxxxxx kůra xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx cévních, čímž xxxxxxx x druhotnému xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx houbová xxxx xxxxxxxxxxx infekce xxxx příznaky maskovat x může xxx xxxxxxx, xx-xx nemožné, xxxxxxxx pokročilé xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxx bramboru. Možné xxxx i xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xx internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Příprava xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 hlíz xx 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx vzorkování vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx této velikosti. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx xxxx x zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx výkladu výsledků. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx i xxx vzorky x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx hlíz.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx původce xxxxx hniloby, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Použijí xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx PCR xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx nechají oschnout xx xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx, že xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX xxxx nebo xxxxx izolace.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxx se odstraní xxxxxx xx pupkovém xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx vyříznou xxxxxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxxx z pupkových xxxxx xxxxxxx. Na xxxxxxx xx omezí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx cévní svazky. Xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konců zpracovány xx 24 xxxxx xxxx konzervovány xxx -20 °X xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx dají xxxxxxx x testují xx odděleně.

Pokud xxxx xxx xxxxxxxxx výkrojku x pupkového xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx naříznutí xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx nechají xxxxxxxxxx xx dobu 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx x karanténě xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Všechny xxxxx xx xxxxxx xx uchovávají podle přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx vyčištěny x xxxxxxxxxxxxx prostředky x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx, xxxxx to xxxx možné, xxxxxxxxxx xx x nádobě xxx xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx výkrojků x růst xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce se xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů.:

a) xxxxxxxx xx zalijí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot/min) xx xxxx 4 xxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °X xxxx po xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3), buď x xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x utěsněném xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx nutno učinit xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během xxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxxx xxxxx (nože) a xxxxxx. Pokud má xxx xxxxxx XXX xxxx, xx xxxxx xxxxxxx přenosu XXX xx nádoby xxxx xxxxx zařízení, doporučuje xx xxxxxx x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Pokud je xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx buď xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx maximálně 180 x po xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4-10°C) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Bakteriální xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 minut) při xxxxxxx 4-10°X a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx by se xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Resuspenduje xx peleta x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µx xxx xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx konečnou xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx vířením x xxxxx při xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) nebo xxx teplotě -68 xx -86°X (měsíce). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx je nutný xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx přeprava x xxxxxxxxx xxxx xx 24 až 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xx všemi xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx zacházelo xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. To xxxxx x xxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx testy.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx vzorky až 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, měly xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx o xxxxxxxxx 1-2 cm xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx přímo xxx povrchem xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, okamžitě xxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx:

x) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x třepají v xxxxxxx třepačce (50-100 xx/xxx) po xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx rozdrtí x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx extrakčního xxxxx (dodatek 3) za xxxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxx, skladují xx xxxxx stonků x xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx nebo maximálně 24 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

3.2.3. Xx xxxxxxx, které xx xxxxx 15 minut, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle není xxxxx, xxx lze xx xxxxxxxxx filtrací x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx rozdělí xx 2 stejné xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx testování xxx teplotě 4-10 °X x druhá xxxxxxxx xx skladuje x 10-25 % (x/x) sterilního xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. lF xxxx

PRINCIP

Doporučuje xx xxxxxx xX test xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, protože xxxx xxxxxxxxx xxxx schopnost xxxxxxxxx požadovaných práhů.

Použije-li xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx výsledek xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX použije xxxx xxxxx screeningový xxxx x xxxx výsledek xx xxxxxxxxx, xx xxx dokončení xxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx lF test xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, používá xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx x polyklonální xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx méně xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx NCPPB 2140. Xxxxxxxxxx xx určovat xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx protilátek. Xxxx je xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx dochází x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální xxxxxxxxxx xx xxxx xxx IF xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx se xxxx protilátky používat x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx na xxxxx. Používají xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktech. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx proveden xx xxxxxxxxxx skladovaných xxx - 68 xx - 86 °X v glycerolu. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx odstranit xxxxxxxx 1 ml peletového xxxxx (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 minut xxx 7&xxxx;000 g a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx xxxxx, zejména xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx fixována xxxxxxxx (xxx 4.2).

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx s xxxxx srovnávacím kmenem xxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx podle dodatku 2 x nepovinně x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx zmrazením při xxxxxxx -16 xx -24 °X) by xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrola na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx mikroskopická sklíčka x xxxx xxxxxx, xxxxxxx s 10 xxxxxx o xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx test vzorků.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx xx připraví xxxxxx x následujících xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx nízkým množstvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx vhodné 15 µx - xxx xxxxx okénka xxxxx xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx okénka. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxxx xxxx xxx použít xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Pro xxxx pelety:

Připraví xx xxxxxxxxx ředění (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x peletovém xxxxx. Napipetuje xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx o xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx okénka xxxxx xxxxx) resuspendované pelety 1/100 a xxxxxxx xxxxxxx do xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx použít xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Vysuší xx kapky při xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °X), xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxx pokynů xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xxx potom xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x suchém xxxx xx xx možná xxxxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3 měsíce).

4.3. Postup XX xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x oddílu 4.1 písm. x):

Xxxxxxxx xx xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxxxx x XX xxxxx. X xxxxx xxxxx by xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), titr 1/2 (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. b):

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx v XX xxxxx. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx podle xxxxxx 4.1. xxxx. a) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Podložní xxxxxxx xx uspořádají xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx testovací xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx pokyny xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx papíře xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx se xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx pufrem IF. Xxxxx xx ponořením xx xxxx 5 xxxxx v xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx v xxxxx IF. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx se pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx inkubují xx xxxxxx papíru xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx sklíček x xxxx xx opláchnou x xxxxx xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx přebytečná vlhkost.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx sklíčko.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx x xxxxxx vhodnými xxx excitaci XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1000x. Zkoumají se xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx s xxxxxxx xxxx malým xxxxxx xxxxx se xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx test XX xxxxxxxx (oddíl 4).

4.4.2. Xxxxxxxx se jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx okénkách xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxx xxx porovnání x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx stejném ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Buňky x xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx všechna xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X peletách x xxxxxxx xxxxx bramboru x částí stonku xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnou Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx pouze fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x titru nebo xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx:

x) Při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx odhadne xxxxxxxx xxxxx typických buněk x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx typických xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx infikovaný x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Výsledek XX xxxxx je xxxxxxxxx xxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx než 5x10³ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a vzorek xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testování xxxx nutné.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx se XXXX xxxx provede xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, je k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používají xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx na ml xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx pokud možno xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 xxxx -68 až -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx připraví suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xx (např. xxxx NCPPB 4053 xxxx XX 406) x 0,01 M xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x 3-5 xxxxx xxxxxxx (příprava xxx dodatek 2). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolními xxxxxx xxxxxxxxxxxxx kmene nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx suspendovaného x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx oligosond xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx provádí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx.

5.1. Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx roztok (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx do Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se peleta x 500 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx je 96 % xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x kroku 5.1.2. x 50 µl 0,01 X PB x 50 µx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx protřepáním x inkubuje xx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 minut.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx xx xxxx 8 xxxxx na 7&xxxx;000 g, xxxxxxxx xx supernatant x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µx 0,01 X PB (xxx dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 3, přičemž xx použijí 2 xxxxx vzorky na xxxxx xxxxxxx, a xx neředěný x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 M XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx být xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °X xx přidání 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx třeba XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X XX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx na sklíčku XXXX

5.1.6. Xxxxxxx se nechají xxxxxxxx na xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx sklíček xxx teplotě 37 °X) a fixují xx nad plamenem.

V xxxx fázi xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx a x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx roztok lyzozymu xxxxxxxxxx 10 mg xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, pH 8,0). Xxxxx xxxxxx lze xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx pouze xxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxx. Každý xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx x inkubuje xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx jednou, x xxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxx lyzozymu 50 µx xxxxxxxxxx K 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2 mM XxXx₂, xX 7,4) xx každé xxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx suší xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx po xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx vlhká xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 1x hybmixu (dodatek 7). Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx peci xxx teplotě 55 °X xx dobu xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx xx 1 xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx se po xxxx 5 minut xxx teplotě 55 °X.

5.2.5. Sklíčka xx xxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxx teplotě 45 °C x xx každého xx 4 xxxxxx na xxxxxxx / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 krycími xxxxxxx (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx se 14 - 18 x x peci xxx teplotě 55 °X v xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx se 3 xxxxxxx obsahující 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = UM), 1 x 1x xxxxxxx (334 ml 3x xxxxxx x 666 xx XXX) x 1 l 1/2 x hybmixu (167 xx 3x xxxxxx x 833 xx XXX). Xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku inkubací xx dobu 15 xxxxx v xxxxxxx x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx sklíček xx přemístí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx a xxxxx xx inkubovat xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx UPW a xxxxxx xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Napipetuje xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo podobný) xx každé jamky x celé sklíčko xx xxxxxxx velkým xxxxxx sklíčkem (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx prohlížejí xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630x nebo 1&xxxx;000x xxx olejovou xxxxxx. X xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx obarvené Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnává xx xxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Buňky musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (oddíl 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx odchylné. Prohlíží xx xxxxxx xxxxxx xxxxx průměry v xxxxxxx xxxxxx a xxxxx obvodu. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxx xxxx buněk, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s morfologií xxxxxxxxxxxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus x okénkách testovacích xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http:/forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Intenzita xxxxxxxxxxxx musí xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx x úvahu.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx test xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx zopakován. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx xxxx při zjištění xxxxxxxxxxx buněk (mimo xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx xxx přesnost FISH xxxxx. X peletách x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, ačkoli xxxxxx xxxx často xxx x XX xxxxx.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx FISH xxxxx xxxx xxxxxx, pokud xxxx při použití XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxx x nejsou xxxxxxxxxx x žádných negativních xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadne xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx alespoň 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx je další xxxxxxxxx. Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

b) Výsledek XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx typickou xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxx typické jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx pozorovány v xxxxxxxxxxx kontrolách.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, musí xxx xxxx druhý xxxxxxx screeningový test xxxxxxxx IF test. Xxxxx xx PCR xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx rozsahu xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx 1 ml xxxxxxxxx xx vzorku extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používají xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX xxxx xx měli xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (u xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx vzorky, aby xxxx jasné, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím testován xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus s xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx xxxxx používaného xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX ze xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, k nimž xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx x virulentního izolátu (xxxx. NCPPB 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx kontaminaci, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx pokud xxxxx bez xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx purifikace DNA

Použijí xx xxxx popsané xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx XXX x komplexních xxxxxxxxx vzorků xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx odstraňující xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla optimalizována xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

a) Xxxxxx podle Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [pH 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx.

2. Přidá xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x umístí xx xx termobloku xxxx xxxxx lázně x xxxxxxx 95 °X xx xxxx 10 xxxxx.

3. Mikrozkumavka xx xxxxx xx 5 xxxxx do xxxx.

4. Xxxxx se 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx xx 1 xx x 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) a xxxxxxxx xx při xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5. Přidá xx 220 µx Easy XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 65 °C xx dobu 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µl Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx)x silně xx xxxxxxxx xxxxxxxx, až xxxxxxxxx xxxx poteče xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µx xxxxxxxxxxx a míchá xx třepáním, xx xx xxxxxxxxx sníží x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15 000 x po xxxx 20 minut xxx 4 °C xxx xxxxxxxx fází x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx horní fáze xx čisté xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx se 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x po dobu 10 xxxxx xxx 4°X, peleta xx xxxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Peleta xx xxxxx uschnout na xxxxxxx xxxx x XXX speed xxx.

15. Xxxxxx xx resuspendujte x 100 µx xxxxxxxx xxxx (XXX) x nechá stát xxxxxxx 20 minut xxx pokojové teplotě.

16. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx -20 °X xx do upotřebení xxx PCR.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxx XXX xx xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX xx xx mohly xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx testované xxxxxx x xxxxxxxx xxx PCR xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolu (dodatek 6). Xxxxxxxx xx jeden xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolu (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xx multiplexová xxxxxx, xxxxx zahrnuje xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx extraktu XXX xx 25 µx XXX reakce.

6.2.4. Xxxxxx xx negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx reakční směs XXX x přidá xx stejná xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx PCR xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. PCR mikrozkumavky xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx směsi XXX x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx v Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X xx cm. Použije xx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx v ethidium xxxxxxx (0,5 xx xx x) xx xxxx 30-45 xxxxx, xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x tímto xxxxxxxxx.

6.3.3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx se hledají xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. U xxxxx xxxxxx nálezů xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx amplikonu XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx xxxxxxxxx teplotě x xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx enzymem x xxxxxx (viz dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx elektroforézou v xxxxxxxxxx gelu x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x neštěpenou a xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx typický xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěn x xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxxxx interními xxxxxxxxxxx primery: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX test je xxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), xx předpokladu, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx žádným x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Poznámka:

Lze xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vodě, xxx x pozitivní xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Ve vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, pokud nebyl xxxxxx xxxxx z xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx byl očekávaný xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx xx lilku xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx tvořících xxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (příprava viz dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx x optimálních růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx úspěšně použít x xx xxxxxxxx, xxxxx byly uchovávány x glycerolu při xxxxxxx -68 až -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx příznaků x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx omezení xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx růstové xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x pěstování xxxx xxxxxxx v Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx metod (7.2, 7.3, 7.4). Používají xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx třetího xxxxxxx xxxxx. Aby se xxxxxxxxx xxxxx využití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx na xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx květináč xx xxxxxxxxxxxx podepře (pro xxxxxxxxx x průměru 10 xx xx xxxxxx xxxx pěnového xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx 5 xx hloubky, 10 xx šířky x 15 cm xxxxx). Xxx každý xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx a xxxx umístí xxxxxxx xxxxxxxx hliníkové fólie. Xxxxxxxx xx možno xxxxxxx na místě xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx skalpelu xx provede mezi xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx řez xxxxxx 0,5 až 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx se přidrží xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx oční xxxxx xxxx xxxxxx malířským xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Zbytek pelety xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx testovací rostliny xxxxx.

7.2.4. Xxx se xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx xxxxxx xxxxxxxx držené xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx pravý xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) suspendované xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx skalpelu xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx (v úhlu xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx a xxxxxxx xxxxxxxxx jako 2/3 tloušťky xxxxxx, xxxxxxx s xxxxx xx začne x xxxxx kapky xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx sterilní xxxxxxxxx x injekční xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx vnitřního xxxxxx buněk (xxxxxxx) xx rostliny xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Stonky lilku xxxxxxxxxxxx xx inokulují xxxxx nad děložními xxxxxx xxxxxx injekční xxxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx (xx méně xxx 23 G). Xxxxxx xx rozdělí xxxx testovací xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx je xx xxxxx x xxxxxxxx x přirozeně xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 M XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Po xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxx (dodatek 8) xx xxxx xx 4 xxxxx při xxxxxxx 18-24 °X. Xxxxxxxx xx inkubují xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x zalévají xx xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Buňky Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxxxx xxx 30 °X a xxxxxxxxx xxxxxxx je 21 °X. Xxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx rostliny xxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx oddělených xxxxxxxx, anebo při xxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx přísné xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx inkubovány xxxxxx sebe, xxxxxx xx xxxxxxxx přepážkami. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx a jiné xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx nezbytné, xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx byly xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx by xxxx xxxxxxxx bakterie x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Pravidelně xx osmi dnech xx spočítají rostliny xxxxxxxxxx příznaky. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx působí u xxxxx vejcoplodého xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx jako xxxxxxxx xxxx mezižilková xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx tmavozelené xxxx xxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx žilnatinou xxxxxx často mastně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx žlutý xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx déle xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxx xx přežití. Rostliny xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx nízkým xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxx xxx xxxxx x xxxx xxxxxx xxxx ní. Vadnutí xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx jiných xxxxxxxx xxxx xxx přítomných x xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxx x X. carotovora xxxxx. atroseptica, Xxxxx xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x velké xxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx způsobených xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx celé listy xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx se xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení: xxxxx xxxx rozliší Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx vejcoplodém xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx být xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx zvadlých xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx listů x xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xX xxxx XXX xx xxxxx x xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxxxx (selektivním) xxxxx (xxx oddíl 8). Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9). Čisté xxxxxxx xxxxxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx podmínky xxxxxxxxx, xx xxxx stát, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx zůstává x rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx latentní xxxxxxx dokonce i xx uplynutí xxxxxxxxx xxxx xx 4 xxxxx. Pokud xxxxxx xx 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx složeném xxxxxx částí xxxxxx x xxxxx 1 xx z xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxx je xxxx xxxxxxxxx, měla by xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx postupem xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx patogenita (xxx xxxxx 9 a 10).

8. Izolace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxx tehdy, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x takto xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx původce xxxxxxxxxxxxxx náročným xxxxxxxxxx, xx možno ho xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx napadení.

Mohou xxx xxxx přerůst xxxxxx xxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx pletiva hlízy (3.1.5) nebo xxxxxx (3.2). Xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx je xxxxx xx xxxxxxx selektivního xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x pupkové xxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx a x rostlin xxxxx xxxxxxxxxxxx, které nevykazují xxxxxxxx xxxxxxxx, ale x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 7.9). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, měla xx xxx provedena xxxxx oddílu 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx desetinná xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx PD 406). Xxx xx vyloučilo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx by xx xxxx před xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx přezkoušet xxxx xxxxxxxx xxx růst xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

8.1. Roztěr xx xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Xx 100 µl xxxxxxxxx části xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx šťávy x lilku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. lzolace x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx obvykle xxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxx podmínkám Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx bakterie je xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx obvykle xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx patogen xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, v xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (hokejek) a xxxxxxxx roztěrů.

8.1.3. Desky xx xxxxxxxx x xxxxx při xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx misek xxxxxxxx xxxxxxxxx x kontrolními xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx třech dnech, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx na YGM xxxxx; inokulace x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx média xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx jedno z xxxxxxxxxxxxx médií (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx agar (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx pepton glukosový xxxx,

- xxxx x xxxxxxxxxxx extraktu x xxxxxxxxxxx solemi.

Inkubace xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X po xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roste pomalu x obvykle vytváří xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, smetanově xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx roztěr pro xxxxxxxx čistoty. X xxxxxxxxx xx rychlost xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, někdy xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, vyvýšené, xxxxxxxx vyklenuté, xxxxxxxxx xxxxxx, x rovnými xxxxxx x obvykle xxxx x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx kolonie pro xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx se identifikují (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx izolované xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx test známý xxxxxxxxxx kmen.

9.1. Xxxxxxxx x enzymatické identifikační xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlastnosti. Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx inkubovat při 21 °X a xx xxxxx xxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxxx. Pokud nedošlo x žádnému růstu, xxxxxxxx xx po xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx testy musí xxxxxxxxx kontrolu se xxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x fyziologické xxxxx xx musí xxxxxxxx xx použití xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Morfologická xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) inertní nebo xxxxx oxidační

Aktivita oxidázy -

Xxxxxxxx katalázy +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Aktivita xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Tvorba xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx škrobu - xxxx xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Xxxx x 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- glycerolu -

- xxxxxxx - nebo xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx barvení (dodatek 9)

9.2. lF xxxx

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x pufru xx xX (dodatek 3).

b) Připraví xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx antiséra.

c) Xxxxxxx xx xX xxxxxx (oddíl 4).

d) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx lF xxxx xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. PCR xxxx

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx ml xx xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Xxxxxxx se 100 µx suspenze xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx lázni xxx xxxxxxx 100 °X xx xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx buněk podpořit xxxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx XxXX xx konečné xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx při teplotě -16 xx -24 °X xx do xxxxxxx.

x) Xxx amplifikaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx specifických amplikonů xx xxxxxxx vhodné xxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x de Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Rainey, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Identifikace Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx jsou amplikony XXX xxxxxx velikosti x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (oddíl 5)

x) Xxxx XXXX xx pozitivní, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (FAP)

a) Kultura xx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx agaru (Oxoid) xx dobu 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°X).

x) Použije xx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 lso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx jasně xxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx některé z xxxxxx kyselin, xxx 15:1 Anteiso X xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxx xxxxxxxxx xx všech Xxxxxxxxxxx xxx. v xxxxxxx 1-5 %. X Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx test postupem xxxxx Smith a xxx., 2001.

10. Test xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx musí být xxxxxxxxx xxxxxxx patogenity.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x 3-xxxxxxx xxxxxx testované xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx se 5-10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Inkubuje xx xxx xxxxxxx 18-24 °X při xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx relativní xxxxxxxx x přiměřeným zaléváním, xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx kultur xx xxxx během 2 týdnů xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxx xxxxx příznaky xxxxxxx, by xx xxxx xxxxxxxxx až 3 týdny xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx vejcoplodého, xxx nepřesahujících 25 °X. Xxxxxxxx xx xx 3 týdnech xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Izolace xx xxxxxxx x xxxxxxx s příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 xx xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx rozdrtí x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx rozetřením xxxx xxxxxxxxx na XXXX a YPGA, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °X a sleduje xx xxxxx kolonií xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx podílející se xx optimalizaci a xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Gesundheit xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Linec	Rakousko
Departement Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Station de Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx de Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Bundesanstalt	Kleinmachnow	Německo
Pflanzenschutzamt Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Centre	Aas	Norsko
Direcção-General xx Xxxxxxçãx das Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni xxxxxxxx za xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Diagnóstico xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrol xxx vyšetření výkrojků xxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx PD 406) na základním xxxxx MTNA x xxxxxxxxxx xx v 10 mM xxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx odpovídající xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx z xxxxxxxxx konců 200 xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx odrůdy s xxxxx slupkou, u xxxxx xx jisté, xx je prosta X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx obvyklým xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek x xxxxxx 1,5 ml x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx první xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx desetinná ředění.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx se alikvotní xxxxx x 100 µx xx sterilních xxxxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 ml, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x množství X. x. xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xx provede extrakce XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x XXXX xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxx zkušebních xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX xxxx být C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx postupy

OBECNĚ: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry xxx xxxxxxxxx xx dobu xx jednoho roku.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx x rostlinných xxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (PVP ‒ 40)	Vázání inhibitorů XXX	50 x
(*) pro xxxxxxx při extrakci xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 mM fosfátový xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx extraktů x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx rozpustí, zkontroluje xx xX x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 min.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

2.1. Pufry xxx XX (10 mM xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxxxxxx roztoku (XXX), xX 7,2)

Xxxxx pufr xx používá x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx k xxxx xxxxxxx. Přidá xx 0,1 % Tween 20 x pufru xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, xX 7,6

Tento xxxx xx používá jako xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx na XX testy x xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Laboratories) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX a XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx pole na xxxxxxx s xxxx xxxxxxx a

s = xxxxxx pole xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - zvětšení objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 ml resuspendované xxxxxx (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x F,

kde y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x kultivaci X. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = NDA)

Difco xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx se sterilizace x autoklávu při 121 X xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Yeast peptone xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a minerálními xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx salts xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 g
K2HPO4	0,25 g
KH2PO4	0,25 x
XxXX4 . 7H2O	0,1 x
XxXX4 . H2O	0,015
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 g
Destilovaná voda	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx v xxxxxxxxx xxx 115 °X xx dobu 20 xxx.

x) Validovaná xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx jinak, xxxxxxxxx všechny xxxxxx xxxxx x BDH.

Kvasnicový xxxxxxx (Difco)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 x
XxXX4 . 7H2O	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Oxoid x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xX se xxxxxx xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx xxxx 15 min.) x xxxxxxxxx xx 50 X xx přidají xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 g, xxxxxxxxxxxx X 0,01 g.

V xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: trimethoprim (Xxxxx) x nalidixic xxxx (Xxxxx) (obě 5 mg/ml) v 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Sigma) (1 xx/xx) x xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx základního xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx při xxxxxxxxxx x chladu do 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 g
K2HPO4	2,0 x
XX2XX4	0,5 g
MgSO4 . 7X2X	0,25 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °C xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 M NaOH, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, polymyxin X xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx sterilizují xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx je 3 xxxxxx. Po xxxxxxx antibiotik je xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx skladování v xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. x. subsp. sepedonicus xx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx vykazovat xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- ctc xxx xxx xxx tgg xx xx -3'

xxxxxx XXX-X 5'- xxx xxx xxx gtt xxx xxx ccc x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx gca xxx xxx xxx xxx xxx tgc -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx gca ggt xxx xxx acg xx -3'

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx x XXX X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (sada XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx PCR xxxxxxxx 18X xXXX 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx voda (XXX)	15,725 μx
10x XXX pufr (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx d-n XX (20 mM)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx PSA-1 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx NS-7-F(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx NS-8-R (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx polymeráza (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq xxxx Gold) x Xxxxx XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X a XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx bramboru xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x xxxxxxxxxx XXX xxxxx Pastrika (2000) (xxx oddíl 6.1 xxxx. x) x 6.2). Při použiti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx izolace XXX je xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx podmínky xxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxxx následujícího xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX matrice)

10 xxxxx xx) 1 minuta xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 minuta xxx teplotě 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 minuta xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 sekund xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx teplotě 72 °X (závěrečná xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °C

Poznámka:

Tento xxxxxxx je xxxxxxxxxxxxx xxx použití x xxxxxxxx cyklerem MJ Xxxxxxxx PTC 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx modifikace kroků xxxxx xx), iii), xx), x), vi) x xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx restriktivním xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX amplifikované x XXX X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkuji xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx rozměry 282 bp x 220 xx.

2. Příprava xxxxxxxxxx pufru

2.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx voda 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx voda 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxx použitím xx xxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx cgg xxx xxx cat xxx xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sonda EUB-338-FITC: 5'- xxx gcc xxx cgt xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX ROZTOK OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX X NEVDECHOVAT. XXXXXXXXXX XX PRACOVAT X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx pure xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx přibližně 60 °X x xxxxx xx 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx pH na 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 M (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx HCl 1X. Indikačním xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xX x v xxxxxxx xxxxxxx xx upraví xxxxxx HCl nebo XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X PARAFORMALDEHYDEM XXXXXXXXXX XXXXX pH!]

iii) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx a xxxxxxxx xx chráněný xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Poznámka:

Alternativní xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx se xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Sonda XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx CMSCY301 5 xx/µx

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx čistá xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x temnu xxx xxxxxxx -20 °X. Během xxxxxxx xx xxxxx je xxxxxxxxxx před xxxxxx xxxxxxxxx zářením nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx pH x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého

Semena xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum melongena) xx vysejí xx xxxxxxxxxxxxxxx výsevního substrátu. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx děložními xxxxxx (10 až 14 xxx) xx přepichují xx xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxx xx delší;

Teplota: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Gramovo barvení x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Roztok xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 g xxxxxxxxxx xxxxxxx x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 x šťavelanu xxxxxxxx x 80 xx xxxxxxxxxxx vody.

Oba xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx společně xxxxxxxx xxxxxx tloučku x xxxxx. Xxxxxxx xx do xxxx x míchají xx x uzavřené xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxx barviva

Zásobní xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % etanol 100 xx

Xxxxxxx se x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx přípravu xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx barvení

1. Xxxxxxxx xx roztěry, vysuší xx xx vzduchu x xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx krystalové xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx se xxxxx pod xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx jódovým roztokem x xxxxx xx xxxxxxx xx dobu xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x vysuší xx xxxxx papírem.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx kapkách přidávaného 95 % xxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx vyplavuje barvivo, xxxx ponořením xx xxxxxxx pohybování do xxxxxxx na dobu 30 xxxxxx.

7. Opláchne xx pod tekoucí xxxxx a xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x nechá xx působit 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x vysuší se xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, gramnegativní xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx of xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11&xxxx;288 XX, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx from plants. Xxx. Pl. Xxxx., 49, 213-218.

3. Dinesen, X. G., 1984. Xxx xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx diseased xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, R. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx. V: Manual xx methods for xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx significance xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx carbohydrates xx xxxxxxx gram-negative xxxxxxxx. X. Bact., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xxxxx cell fattyacid xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. X. a J. Xxx Vaerenbergh. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx the XX xxxxxx for xxx xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Corynebacterium xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. EPPO Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. a X. Rudolph, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx and development xx a semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxx Diseases xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx of Pseudomonas xxxxxxxxx xx the xxxxxxx xxxxxxxx. Nature, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Rudolph, X x X. X. Sands, 1990. Xxxxxxx in Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Kiadó, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Lelliott, X. X., 1966. Xxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. X., X. Xxxxxxx x A. C. Xxxxxxx, 1966. A xxxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx J. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x P. X., Sellar, 1976. Xxx xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx rot (Xxxxxxxxxxxxxxx sepec xxxxxx (Xxxxx. et Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx potato stocks. XXXX Bull., 6 (2), 101-106.

14. Li, X. a X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Polymerase Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx RNA xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Mills, X., Xxxxxxx, B., X. x X., X. Xxxxx, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx hybridization. Phytopathology, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. x X.X. Rainey. 1999. identification and xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subspecies xx xxxxxxxxxx cham xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Phytopathology 147; 687-693.

17. Pastrik, X.-X., 2000. Detection xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx in xxxxxx tubers xx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx XXX. European Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Ramamurthi, X. S., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx phytopathogenic xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx to the Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Exp. Sta., 366, 52 pp.

19. Xxxxxx, X., Berthier-Schaad, X., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, D. (1999) Detection xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx in potato xxxxxx by B1O-PCR xxx an xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx detection xxxxxx. Xxxxx Disease 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Schaad [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Minnesota:, 373 pp.

21. Skerman, X. X. X., 1967. X guide xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2nd xx., Xxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, N. X.; Xxxxxxx, X; Stead, XX., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx PCR profiling xxxxx the XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx rapid xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. xxx X. X. Xxxxxxx, 1974. X study xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx and xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. R.; Xxxxx, J. D. x X. D. X. Akkermans, 1998. Xxxxxxxxx of Ralslonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

B. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X IDENTIFIKACE XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx popisují xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx hnědé xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) detekce Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx a jiných xxxxxxxxxxxxx rostlin, x xx xxxxxxxx xxxx x půdy,

iii) identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx v dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx obsahují xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx organismu x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxxxx xxxxx x reprodukovatelné xxxxxxxx úrovní X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx vybraných xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je přesná xxxxxxxx pozitivních kontrol.

Testování xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx a xxxxxxxxx zařízení, pečlivé xxxxxxxxx s xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x všechna xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, např. xxxxxxxx pozitivních kontrol xx testovaných vzorků. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. První xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx IF, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem založeném xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx test pozitivní, xxxxxxxx podezření xx xxxxxxx X. solanacearum x xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xx podezření xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx druhý xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x identifikaci xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx postupových xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) hlíz xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxx příznaky hnědé xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx x xxxxxxxx bramboru x podezřením x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový xxxx, izolaci xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx v oddíle 2.1.

2) Rychlé diagnostické xxxxx xxxxxxxxx předběžnou xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Negativní výsledek xxxxxxxxx xxxx nepřítomnost xxxxxxxx.

3) Test xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx IF xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky je xxxxxx v oddíle 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx obvykle xxxxxx xxxxxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx v xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je popsána x xxxxxx 2.3.d.

12) Xxxxxxxxx může xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx bujného xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxx je xxxxxxxxx, xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx, nejlépe xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxx 6.2. Dílčí specifická xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxx každý nový xxxxxx.

14) Xxxx patogenity xx popsán v xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx určeno xx xxxxxxxx latentních xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx ze dvou xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x diagramu 3), z xxxxx xxxxx xx založen xx jiném biologickém xxxxxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxx patogenu x xxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, potvrzením, xx xxxxx xxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx pouze z xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxx dostačující x xxxx, aby byl xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Screeningové xxxxx x izolační xxxxx xxxx umožnit detekční xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx resuspendované xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx počet, xxxxxxxx 200 hlíz není x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Je-li xxxx negativní, je xxxxxx považován za xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx test xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx druhý xxxx další test xxxxxxxxx, je vzorek xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX xx popsán x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx izolace xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

6) Testy PCR xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.8.

9) Biotest xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

10) Typická morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx negativní, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx testy ze xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vodivého xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx vzorku, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx se dosáhne xxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky, xxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Viz oddíl 3.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx pro xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx druhého xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxx-xx druhý xxxx xxxxx testy negativní, xxxxxxxx se vzorek xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx izolační xxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

5) Test XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx PCR jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx xx podezření, xx xx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx bramboru. Xxxx fáze xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, přičemž x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. X raných xxxxxx vadnutí zůstávají xxxxx xxxxxx, ale xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Dochází xxxx x ohýbání listů xxxx. Xxxxxxx jednoho xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx kolapsem x xxxxxxxx xxxxxxxx. Z xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz nebo xx možné sliz xxxxxxxxxx. Při xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx svisle xx xxxx se x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx vlákna xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx bramboru xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x pupkového xxxxx x podélně xxxx xxxxxxx konec. X xxxx xxxx xx xxxxxxx pozná xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx světle xxxxxxx xxxxxxxxx cévního xxxxxxxx, xx kterého po xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx se xxxx rozšířit xx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx rozšíří xxx xx pupkového konce xxxxx x x xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz, xx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, lehce xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx obvyklý xxxxxxxxxx xxxxxx měkkých hnilob xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Prvním xxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx vzhled nejmladších xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy kolem 25 °X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx dní rozvine xxxxxxxx listů směrem xxxx a vadnutí xx jedné xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx končí xxxxx xxxxxx odumřením. Xx xxxx příznivých xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx tolik xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx tvořit xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Je možné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx od spodu xxxxxx, které jsou xxxxxxxx xxxxxxxxx cévního xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx stonkem xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx vodivá xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz.

2.1.3. Xxxxxxxx u xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum dulcamara x X. nigrum. Xx normálních xxxxxxxx xxxx x těchto xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25 °X xxxx xxxx xxxxxxxx vysoká koncentrace xxxxxxx (xxxx. u xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx příznaky stejné xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx rostliny X. xxxxxxxxx, která xx xxxxxx a xxxxxx xx xxxx, xxxxx vykazovat xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx řezu xxxxxx xxxxx stonku xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. X xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx bakterie nebo xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, jestliže je xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, x xx x xxx absenci xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxx napomoci xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale nejsou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx výtok slizu xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (PHB)

Charakteristické xxxxxxx XXX v xxxxxxx R. solanacearum xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nilskou xxxxx X xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningovými testy xxxx xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.), xxxx FISH (viz xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx sliz xxxx xxxxxx zbarveného xxxxxxx z cévního xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx stonku rostliny xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Suspenduje xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx se 5-10 minut stát.

b) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 xx suspenze x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (NA, XXXX nebo XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx médium (dodatek 2) x/xxxx validované xxxxxxxxxx médium (např. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Připraví xx případně xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 x pozitivní xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°X.

- Xx universální xxxxx půdě vytvářejí xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx krémově xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x fluidní xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx malé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx krémově bílé.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx a média XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx zbarvené. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx červené.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx izolátech xxxx xxxxxxx x xxxx 6.2.

3. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx ve vzorcích xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx detekci x identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx více xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Větší xxxxxxxx hlíz ve xxxxxx vede k xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx xxxxxx použít x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 hlízami, pokud xx k xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx založená xx xxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxx použit pro xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 2-30 °X xx dobu xx 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx xxxxxxxx XXX test, pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx vzorkem. Xxxxx xx nechají xxxxxxxx na vzduchu. Xxxxx postup mytí xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx zeleninu xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, tak xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx pletivo. Xxxxxxx xx xxxxxxxx malé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx se xxxxx na xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x testují xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx vyříznuti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx podezření xx hnědou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx konci. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx po xxxx xxxxxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, aby mohlo xxxxx xx zkorkovatění (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °C) xx řádných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx hlízy xxxxxx hlíz x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx uchovány xxxxx xxxxxxx III.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx uloží xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe je xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce okamžitě. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; x chladu xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xx zpracují xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) nebo xxxxxxx x utěsněném xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí křížové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxx vzniku xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx extrakčního xxxxxxx. Xxx každý xxxxxx xx použijí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x xxxxxx. Xxx xxxxx PCR xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX na nádobách xxxx v mlecím xxxxxxxxx. U testu XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx.

3.1.1.3. Supernatant se xxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx dobu 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100 µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) extrakčního xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx frakce xx xxxxxxx odstřeďováním, 7&xxxx;000 x xx dobu 15 xxxxx (nebo 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 minut) xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Použije xx 500 µx pro X. xxxxxxxxxxxx, 500 µx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xx xxx teplotě -16 xx -24 °X (týdny) xxxx -68 až -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx v chladícím xxxx s xxxxxxxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.1.6. Je xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx uchovány x xxxxxxxxxx odděleně, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci. Xx xxxxx xxx sklíčka XX a xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.4.)

IF xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (viz xxxxx 6.1.6.)

Xxxx FISH (viz xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx oddíl 6.1.8.)

Biotest (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx a identifikaci X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx detekce xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vzorky. Postup xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x počtu xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zkoumané xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx 1-2 xx xxxxxx kousky xxxxxx xxxxx následujícího xxxxxxx vzorkování:

Rajčatové xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Čistým xxxxxxxxxxxxxx nožem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 cm x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z pole xxxx skleníku: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, 1 xx xxxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami se xxxxxxx 1 cm xxxxxx díl x xxxx každého xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. U xxxxx xxxxxxxxxx (X. dulcamara) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx xxxx xx odeberou 1-2 cm xxxx xx xxxxxx pod xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx oblasti xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx vzorek x počtu xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x období xxxxxxxx jara, xxxx x xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx zjistit xx xxxx xxx x xxxxxxxx Solanum dulcamara xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx, Xxxxxxx dulcamara, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx zástupci xxxxxx Xxxxxxxxxx. Dalšími xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx xxx. x Portulaca xxxxxxxx. Některé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, které xxxxx xxxxxx populace X. solanacearum xxxxxx 2/Xxxx 3 v xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx specifických xxxxxxxx, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx pilosa, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx dioica.

Poznámka:

V xxxx fázi xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vnitřních xxxxxxxx (xxxxxxxx cév xxxx xxxxxxxxxxx sliz). Xxxxxxxx xxx stonku s xxxxxxxx se xx xxxxxxx atestuje xx xxxxxxxx (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx stonku xx krátce xxxxxxxxxxx 70% etanolem x xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx:

x) xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x třepou na xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 hodiny xxx teplotě do 24 °C xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x pevném xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxx se části xxxxxx v chladu xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X) na 24 xxxxx.

3.2.1.3. Po xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 xxxxx, se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx je xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xx xxxxxxx xxx teplotě 4-10 °X a xxxxx díl xx xxxxxxxx v 10-25% (x/x) xxxxxxxxx glycerolu xxx teplotě -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx) pro případné xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x popisy xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx oddíl 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz oddíl 6.1.9.)

4. Xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

(1) Viz xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Metody koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických bakterií x xxxxxxxxxx se xxx xxxxx, jestliže xxxxxxx xxxxxxxxxx testu.

(3) Xxxxxxxxxx izolační xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. a 6.1.8.

(7) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx izolace, xxxxxxx se izolační xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx sterilní vodou.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Metody xxxxxxx x identifikace X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx detekce xxxxxxx x xxxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx x xxxxxxx patogenu xx xxxxxxxx povrchové xxxx x xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx detekce xx xxxx xxxx v xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx selektivní xxxxxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxx x povrchové xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx schéma předpokládá xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx povrchové xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor a xxxxxxx xxxx bude xxxxxxxxxxxxx podstatně nižší. X tohoto xxxxxx xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx nějakého xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx filtrace), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx saprofytických xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Omezení citlivosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x úvahu při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx k xxxx, xx se xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx nebo nepřítomnosti xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx, xx třeba xx uvědomit jeho xxxxxxx xxx použití x podobnému xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx nejspolehlivější v xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxx teplota xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx vzorkování v xxxxx xxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx snížením vlivů xxxxxx povětrnostních xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx x geografie vodního xxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x tím i xxxxxxxx xxxxxxx patogenu.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx sterilních xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30 xx xxx hladinou x 2 m xx xxxxx. Při xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx zpracování brambor x xxxxxxx vody xx xxxxxxxx xxxxxx x místa xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx nejméně 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx xxxxx, z nichž xxxxx bude obsahovat 2 opakované dílčí xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx intenzivním xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx každé 3 xx xxxxxxx toku x xxxxxxxx se xxxxxx přítoky.

4.2.1.2. Vzorky xx xxxxxxxxxx x xxxxxx a temnu (4-10 °C) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx potřeba, může xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 ml xxxxx xxxxxx při 10&xxxx;000 x xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx možno xxx xxxxxxx 4-10 °X, xxxxx xx xxxxxxxx nad xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 1 xx pufru (dodatek 4).

x) Xxxxxxx se filtrace xxxx xxxxxxxx (minimální xxxxxxxx xxxx 0,45 µx) s xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx v 5-10 xx peletového xxxxx x zachycením xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx vhodná xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx malý xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx nedoporučuje x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Testování

Viz xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x půdě

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., kde xxxx xxxxxxx doporučené postupy xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx izolační xxxx xx popsán x oddíle 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Biotest xx xxxxxxx x oddíle 6.1.9.

(5) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx je xxxxxxx x oddíle 2.3.d.

(6) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xx-xx podezření xx vliv saprofytické xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx zředění xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. solanacearum se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x půdě

Principy

Platné detekční xxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx detekci xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx, xxx může xxx rovněž xxxxxxx x testování xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x odpadní xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, že xxxx metody nejsou xxxxxxxxxx citlivé, aby xxxxxxxxxx detekci xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx rozptýlených xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx sestavování přehledů xxxxxxxxxx přítomnost patogenu x xxxx xxxx xxxx je xxxxx xxxx x úvahu xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx přítomnosti xxxxxxxx x xxxxx půdě xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x xxxx xxxxxxxxx, zda xxxx xxxxxxxxxx, xxx x xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx zamoření xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx jeden xxxxxx se xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx půdy ze 60 xxxx xx xxxxx 0,3 xx x hloubky 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx počet xxxxxxxx xxxx xx 120 z xxxxxx 0,3 xx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx při teplotě 12-15 °C. Kal xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x kanalizace xx xxxxxxxxxx shromážděním xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx celkový xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx testováním xx xxxxx xxxxxx dobře xxxxxxxx.

5.2.1.2. Dílčí xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx kalu se xxxxxxxx rotační xxxxxxxxx (250 ot./min) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. solanacearum

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Test xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx se xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Xxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx se, xxx xx xx xxxxxxxx minutách objeví xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x přeříznutých xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Test na xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x xxxxxxxxxxxx pletiva xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx živné xxxx XXXX nebo XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum x případně xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx XXX negativním xx.

3. Roztěry xx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxx, xxx se roztěry xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx mikroskopické xxxxxxxxxx xxxxx xxxx uvedeného xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx roztokem xxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx inkubovat 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Odstraní xx xxxxxxx roztok. Xxxxxx se opláchne xxxxx tekoucí xxxxx x kohoutku. Xxxxxxxxxx xxxx se xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

x) Krátce se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx xxxxx papírem.

e) Xxxxx xx navlhčí xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx roztěr epifluorescenčním xxxxxxxxxxx při 450 xx xxx xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x xx 1000x s xxxxxxxx objektivu xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx.

x) Pozoruje xx, xxx xx objeví xx PHB granulích xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx se pozoruje x xxxxxxxxxxxxx normálním xxxxxx, zda jsou xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx je xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx súdánské xxxxx X x 70% xxxxxxx x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

b) Xxxxxxxx se barvící xxxxxx a xxxxxx xx opláchne xxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx x xxxxxx xx přebytečná xxxx xxxxx papírem.

c) Xxxxxxx xx ponoří xxxxxx xx xxxxxx a xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx dodržet xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x xxxxxxxx v xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx nezbytná bezpečnostní xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx opláchnou xxxxx xxxxxxx vodou z xxxxxxxx, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx světlem xxx xxxxxxxx imersí a xxx xxxxxxxx 1 000x.

g) Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx R. solanacearum x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxx s xxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí validovaných xxxxxxxxxx (viz dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. červenými xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxx xxxxxxxx dostupného vybavení (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxx suspenze xxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx slizu (xxxxxxxxx 5 µx každé xxxxx) xx okénku xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Selektivní xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx se xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx selektivní xxxxx půda, xxxx. XXXX (ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xx al., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. solanacearum od xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx vyžaduje xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx přeplněny xxxx xxxx xxxxxx přítomny xxxxxxxxxxxxxx bakterie. Xx-xx xxxxxxxxx xx konkurenci xxxx xxxxxxxx, měl xx xxx vzorek xxxxxxxxx znovu pomocí xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků xxx xxxxxxxx, xx citlivost xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx vysoká. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx teplotě xx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx virulentního xxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx xxxxx kontaminace xx připraví pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půdy xx xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx nejdříve xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Provede xx xxxxxx s xxxxx zajistit, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µx xxxxxxxx vzorku xx 1 xxxxx xxx každé xxxxxx.

2. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 28 °C. Po 48 hodinách se xxxxxxxxxxx jejich xxxx x xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx denně xx 6 xxx. Xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx na xxxxx xxxx XXXX xxxx xxxxxx bílé, ploché, xxxxxxxxxxxx a fluidní x xx 3 xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx červené zbarvení xx středu s xxxxxxxxx pruhy xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xx xxxxx médiu tvoří xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxx, kruhové, zcela xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx nebo očkují xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., xxx se xxxxxxx xxxxxxxxx kolonie (xxx dodatek 2).

4. Kultury xx xxxxxxxxxx krátkodobě xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, bez chlóru) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx -68 až -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 6.3).

Interpretace xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx selektivní média.

Test xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx je negativní, xxxxxxxx po 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx bakterie xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kolonie typické xxx R. solanacearum , za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média je xxxxxxxxx, jestliže jsou xxxxxxxxx podezřelé xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxx a zvýšení xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx i xx zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR testu (1:100). Obohacení X. xxxxxxxxxxxx však xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx často xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx obtížná. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx saprofytů, xx xxx xxxx ELISA xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek specifické xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xx xxxxxxx 100 xx extraktu xx xxxxxx xx 10 xx obohaceného bujónu (dodatek 2), který se xxxxxx xxxxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. X obohacovacího xxxxx XXXXX může xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 ml xxxxxxxxx xxxxx půdy).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 až 30 °X x třepané xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x uvolněnými xxxxxxx, xxxxx umožní xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx testů XXXXX xxxx XXX xx xxxxx dobře xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx xx zachází xxxx způsobem xxxx xx xxxxxx ve xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx inhibice xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx z xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx docílit xxxxxxx xxxxxxxx obohacením xxxxxxxx xx vzorků xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxx postupy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx xxxxxxxx screeningového testu xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx spolehlivosti v xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx test XX xxxx xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, PCR xxxx FISH. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx xxxxx provést xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx úplná.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx určit xxxx xxx xxxxxx novou xxxxx protilátek. Titr xx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx dojde x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum a xxxxxxxx xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx všechna xxxx xX nejméně 1:2&xxxx;000. Xxxxx testování xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ze xxxxxx. Xxxxxxxx je xx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx uchovaných xxx teplotě - 68 až - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx ze vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx pufru (dodatek 4), 15xxxxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 x x xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x dodatku 3 X, x nepovinně x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (uchovávané xxxxxxxxxxx xxxx zmrazením xxx xxxxxxx - 16 až 24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktů xx vzorků, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx, xxxxx xxx použít xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny v dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x 10 xxxxxx x průměrem xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx sklíčka k xxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx postupů:

i) Xxx xxxxxx x relativně xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx vhodné xxx xxxxxx xxxxxx 6 mm - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x příslušném xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx x xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx stejné xxxxxxxx nezředěné pelety (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx vzorek, jak xxxxxxx obr. 1.

xx) Xxx xxxx pelety:

Připraví xx xxxxxxxxx ředění (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6 xx - u většího xxxxxx xx množství xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx pelety xxx každé xxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx jako xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45 °C. Bakteriální xxxxx se fixují xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 minut xxx xxxxxxx 60 °X), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx instrukcí xx dodavatele protilátek.

Pokud xx potřeba, fixovaná xxxxxxx je možné xxxxxxxxx xx zmrazeném xxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (maximálně 3 měsíce) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x xxxx. 5.1.i):

Připraví xx xxxx dvojnásobných xxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx měla mít 1/2 titru (T/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 titru (X/2), xxxx (X) x dvojnásobek xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na test x odst. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) a 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx odst. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Každé xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx kompletně xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx konkrétní xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

2. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx se xxxxx xx xxxxx podložních xxxxxxx a xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx IF. Umyjí xx ponořením po xxxx 5 xxxxx x xxxxx IF Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx x pufru XX. Xx třeba xxxxxxxx vzniku aerosolu xxxx přenosu kapiček, xxxxx by mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx se xxxxxx xx vlhký xxxxx. Testovací xxxxxx xx pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, kterým xx xxxxxxxxx titr. Xxxxxxxx konjugátu naneseného xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx inkubují xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx po dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx se xxxxx konjugátu ze xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxx xxxx předtím (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx přebytečná xxxxxxx.

7. Napipetuje xx 5-10 xx 0,1M xxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx (dodatek 4) nebo xxxxxxxx krycí xxxxxxxx xx xxxxxxx okénka x xxxxxxx xx xxxxx sklíčko.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX testu

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem s xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x až 1 000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx xxxx navzájem xxxxxxx průměrech a xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx malým xxxxxx xxxxx xx zkoumá xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx protilátky xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX opakován (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředění protilátky xxxxxx xxxx lepší. Xxxxx x neúplným xxxxxxxxx xxxx slabou xxxxxxxxxxxx nelze brát x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky kontaminaci xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. V xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx bramboru x xxxxx stonku xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x křížově reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum.

4. Xxxxx se v xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x titru nebo xxxxxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx oddílu 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XX:

x) Při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx počet typických xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Vzorek xx xxxxxxxxx xx potenciálně xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx testování.

ii) Xxxxxxxx IF testu xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

6.1.6. Xxxxx PCR

Principy

Použije-li se xxxx XXX xxxx xxxxxx screeningový xxxx x xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test, x xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx pozitivní, xx xxxxx provést xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxx xxxxx, xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx do xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Dosažení xxxxxxxxx citlivosti x xxxxxxxxx ve všech xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijí xx xxxxxxxxx činidla a xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Pokud možno, xxxxx xx metoda x xxxxxxx kontrolou.

Je xxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx DNA. Test XXX xx xxx xxx prováděn xxxxxxxxx xxxxxxxxx x laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby se xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) by xx xxxx vždy zacházet xxxx s konečnými xxxxxx, aby bylo xxxxx, jestli xxxxx x přenosu DNA.

PCR xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu xx xxxxxx, který byl xxxxxxx testován xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx xxxxx používaného pro xxxxxxxx bakterií x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, do xxxxxxx xxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (přípravu xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx ve vodě x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx XXX xxxxxx také XXX extrahovanou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Aby xx zabránilo případné xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxx být xxxxx možno xxx xxxxxx. X případě xxxxxxx PCR xxxxx xx potřeba připravit xxxxxxxx x umytých xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx popsané xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx (xxx dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jsou x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX a jiných xxxxxxxxxx reakcí x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx optimalizována xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx lyzátového xxxxx (100 xX XxXX, 10 mM Xxxx-XXX (pH 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) do 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µx extraktu xx vzorku x xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx termobloku nebo xxxxx lázně s xxxxxxxx 95 °C xx 10 min.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx vloží xx 5 min. xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x inkubuje xxx xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µl xxxxxxx Xxxx DNA® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx se 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vzorek xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx chloroformu x xxxxxxxx, xx xx viskozita xxxxx x xxxx se xxxxx xxxxxxxxx.

8. Pro xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx odstřeďuje při 15&xxxx;000 x po xxxx 20 xxx. xxx teplotě 4 °X.

9. Horní xxxx xx xxxxxxx do xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xx xxxx xx dobu 10 xxx.

11. Odstřeďuje se xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx teplotě 4 °X x xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxx.

12. Přidá xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °C) x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx xx při 15&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C, xxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v XXX xxxxxxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx v 100 µx sterilní XX x xxxxx se xxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Skladuje xx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxxx. 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xx xxxxxxx xxx xxxx PCR.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX, např. Qiagen XXxxxx Xxxxx Kit, xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ patogenních xxxxx xx 1 xx xxxxxx efektivní.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorky x xxxxxxxx pro XXX xxxxx schválených protokolů (6.1.6). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxx xxxxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx vodě).

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx směs pro XXX x prostředí, xx kterém nehrozí xxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µl xxxxxxxx DNA na 25 µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx týž xxxxx XX jako xxx xxx, který byl xxxxxx xx xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

1. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x agarózovém xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx vzorku x 3 µx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Tris-acetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 V/cm. Xxxxxxx xx xxxxxx DNA xxxxxx, xxxx. (ladder) 100 bp.

2. Detekují xx xxxxxxx DNA xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření pro xxxxxxxxx x tímto xxxxxxxxx.

3. X obarveném x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx např. 302 xx) prosvíceném xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x očekávané xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. U všech xxxxxx nálezů/případů xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx amplikonu XXX provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx rozdělí xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX světlem xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x štěpenou xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx PCR xx negativní, jestliže xxxxxxxx XXX specifický xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti není x xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx, xxx je xxxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků (x xxxxxxx vícenásobné XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx rostlinu: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti x (xxxxxxxx) xxxxx, xx předpokladu, že xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx získat opakováním xxxxx s druhou xxxxx primerů XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx inhibici XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx xxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx. V xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx reakce, xxxxxxxx xxxx získán xxxxx ze xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxx vzorků xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx první screeningový xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x je xxxxxxxxx, xxxx být xxxx druhý povinný xxxxxxxxxxxx xxxx provedena xxxxxxx xxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX test provede xxxx druhý xxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, je x xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní testování xxxxx xxxxxxx by xxxx umožnit reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx X xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující postup xx měl být xxxxx xxxxx xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx s extraktem, xxxxx xxx uchován x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xxxx - 68 až - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) ze 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivními kontrolními xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx v dodatku 3 X.

Xxxxxxx eubakteriálních oligosond xxxxxxxxx FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx x xxxxx testu, xx xxxxxx v dodatku 3 xxxx A.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u vzorku(ů).

6.1.7.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx roztok (xxx dodatek 7).

2. Napipetuje xx 100 µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx do Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxxxx xx po xxxx 7 minut xx 7&xxxx;000 g.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxx ve 200 µx fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx předem. Protřepe xx a xxxxxxxx 1 hodinu v xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Odstřeďuje xx 7 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 75 µ10,01X PB (viz dodatek 7).

5. Kápne xx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx xx čisté 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx obrázek 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx - 20 °X xx xxxxxxx 1 objemového množství 96 % etanolu. X xxxxxxx, xx xx třeba XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (zamíchá se xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx sklíčku XXXX

6. Sklíčka xx xxxxxxx uschnout na xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx sklíček při xxxxxxx 37 °C) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx možné xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Hybridizace

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 minuty. Xxxxx xx vzduchem x xxxxxx sklíček.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx přikrytím xxx xxxxxxxxxxxxxx boxu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Před inkubací xx ohřeje xxx x hybridizační xxxx xxx xxxxxxx 45 °X xx xxxx xxxxxxx 10 minut.

3. Xxxxxxx xx 10 µx hybridizačního roztoku (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; viz xxx. 7.1) na xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) na xxxxx x xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx xxx, xxx xxx ně nevnikl xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx se xxxxxxxxxx proces hybridizace xx xxxx 5 xxxxx v xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx obsahující 1 x vody x xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx X), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x hybmix x 666 xx xxxx x molekulární xxxxxxxx) x 1 x 1/8x hybmixu (42 xx 3x xxxxxx x 958 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx lázni x xxxxxxx 45 °C.

6. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx sklíček.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx inkubací po xxxx 15 minut x xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°C.

8. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx do promývacího xxxxxxx 1/8 hybmix x xxxxx se xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

9. Sklíčka xx xxxxxx ponoří xx XXX (xxxx. Xxxxx X xxxxx) a xxxxxx xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx filtračním xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Vectashield, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX xxxx xxxxxxx) xx každého xxxxxx x celé xxxxxxx xx xxxxxxx velkým xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 mm).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx FISH xxxxx

1. Xxxxxxx xx ihned xxxxxxxxxx pod mikroskopem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630 x nebo 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (odst. 6.1.7) musí xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx odchylné. Xxxxxxxxxx xx okénka xxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, se xxxxxxxx nejméně 40 xxxx mikroskopu.

2. Hledají xx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat xxxx xxx lepší xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx nejsou zcela xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx v xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx kontaminaci xxxx xxx test opakován. Xx xxxx nastat x xxxxxxx, xxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (vně xxxxxx xxxxxxx) na xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX s xxxxx xxxx několik xxxxxxxx. Xx pravděpodobné, xx u xxxxxx x bramborových xxxx x xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxx xx saprofytickými bakteriemi xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxx X. solanacearum, x xxxx xxxxxx xxxx častěji xxx x xxxxx XX.

5. X xxxxx se xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx jsou platné, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií typickou xxx R. solanacearum x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách a xxxxxx pozorovány x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx morfologií, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx infikované. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx na 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx) Výsledek XXXX testu xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. solanacearum, xxxxxxxx xxxx xxxx typické xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx ELISA Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx xxxx volitelný xxxx kromě testů XX, PCR nebo XXXX xxx jeho xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx obohacení x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povinné. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx použitím xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx může xx xxxxxx setkat x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx se validovaný xxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx titru xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx je xxxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx k optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx konjugátů xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, které xx blízké xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx formulace.

Určí xx xxxx protilátek pro xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx bez xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx podíly xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx otestovány xxxx negativní, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 2 X x X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx každé destičce xx xxxxxxx standardní xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx v XXX X. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx dobře xxxxxxxx xx xxxxxx x testování.

Standardizované pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx v dodatku 3 xxxx A.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx týmž způsobem xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx protokoly XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx xx xx., 1995)

1) Xxxxxxx se 100-200 µx xxxxxxxxxx extraktu. (Xxxxxxx xx 100 °X na 4 xxxxxx xx xxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx redukovat xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx silného xxxxxxxxxxxxxx krycího pufru (dodatek 4) x směs xx xxxxxxxx.

3) Nakape xx 100 µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °X.

4) Extrakty xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) a xxxxxxxx xxxxxxxx roztok xx xxxxx x jamce xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X xxxxxxxxxxxx komerčních xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, než xx xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µl xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

7) Roztok xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x jamky xx xxxxxx jako xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx konjugátu alkalické xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se 100 µx xx xxxxx jamky x xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx se vylije x jamek x xxxxx se vymyjí xxxx xxxxxxx (bod 4).

10) Xxxxx xx 100 µx substrátového xxxxxxxxxxx xxxxxxx fosfatázy (dodatek 4) do každé xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x odečítá xx xxxxxxxxxx při 405 xx x pravidelných 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x uhličitanovém xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx každé xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° X xx xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4). Přidá xx 190 µx xxxxxxxx xx vzorku do xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx se rovněž xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx xxxx xxxxx na xxxxx destičce. Xxxxx xx inkubovat 16 xxxxx při teplotě 4 °C.

3) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Připraví xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v XXX (dodatek 4) s xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xxxxx xx 190 µx xx každé xxxxx a xxxxx xxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °X.

5) Jamky xx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx imunoglobulinu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fosfatázou x XXX. Přidá xx 190 µx xx xxxxx jamky a xxxxx xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µl xx xxxxx xxxxx x inkubuje se x xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx odečítá v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx ELISA je xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) x xxxxx xx xxxxxxxx vzorky xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX pozitivních kontrolních xxxxxx jsou xxxxx xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x xxxx větší xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorkových xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x xxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxx větší xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxx nebyl xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx inhibován. Pozitivní xxxxxxx ELISA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nespecifickému xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx vzorku, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx zjištění xxx xxxxxxxx při xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x v optimálních xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Metodu xxx však také xxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx x glycerolu x xxxxxxx - 68 xx - 86 °C.

Následující protokol xxxxxxx z Janseho (1988):

6.1.9.1. Použije xx 10 xxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Moneymaker xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) ve xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx u xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx se xxxxxxx xxxxx (např. kultivar Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx jen xxxxxxxx xx xxxx 2. až 3. xxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Příznaky x xxxxx jsou xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx pomaleji. Xxxxx možno, xxxxxxxxxxxx xxxxx použít xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx rostlin xxxx xxx děložními listy xxxxxx stříkačky x xxxxxxxx jehlou (ne xxxx xxx 23G). Xxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxx na stonek xxxx xxxxxxxxx listy x prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx udělá xxxxxx xxx xxx 1 cm xxxxxx x hluboký xxxxxxxxx 2/3 tloušťky xxxxxx, xxxxxxx xxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx sterilní xxxxxxxxx x injekční xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Stejnou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene biovaru 2 X. solanacearum xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx, x peletovým xxxxxx (dodatek 4) jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx x negativní kontrolní xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx vzájemné kontaminaci.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °X x xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti s xxxxxxxxxx zavlažováním, xxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxx nedostatku xxxx. Xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx přísně xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx být xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx drženy blízko xxxx, xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx věnuje xxxxxxxx pozornost xxxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) a xxxxxxxxxxxx se podezřelé xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Jestliže během 3 týdnů xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx složeném xxxxxx ze segmentů xxxxxx xxxxxxxx 1 xx x každé xxxxxxxxx rostliny, odebraných xxx místem xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx pozitivní, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx kultury s xxxxxxxxxx na R. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx výsledky xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx být x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx testy

Identifikují se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx použitím nejméně xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxx známé referenční xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx (viz dodatek 3).

6.2.1. Výživové a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx následující xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které jsou xxxxxx přítomny xxxx xxxxxx xxxxx u X. solanacearum, metodami Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Očekávaný xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Inkluze XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx O+/F-

Katalázová xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx test xxxxx Xxxxxxx +

Xxxxxxx dusičnanů +

Xxxxxxx citrátů +

Růst xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Xxxx x 2% NaCl -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx želatiny -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx x xxxxx IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vhodného xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx IF je xxxxxxxxx, jestliže xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx nepoužívá xxxxx xxxx metody xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Provede xx xxxx XXXXX xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátkou x X. solanacearum.

6.2.3.3. Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx výsledku xxxxxxx x této kultury xx xxxxxxx poloviční x xxxxxxxxx s xxxxxxxx z pozitivní xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Ohřeje xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x ohřívacím xxxxx nebo xxxxxx xxxxx lázni xxx 100 °C 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Použijí xx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Seal xx xx. (1993); Xxxxxxx a Maiss (2000); Xxxxxxx et xx. (2002); Xxxxxxxx xx al. (1999); Xxxxx et xx. (1997), Xxxxxx et xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx kontrolní kmen.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Připraví xx suspenze přibližně 10⁶ buněk na 1 xx x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx se xxxxxx FISH (6.1.7) x nejméně 2 xxxxxxxxxxxx specifickými xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, jestliže se x kultury x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Analýza xxxxxxxx xxxxxxx (FAP)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx kultura xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, jestliže je xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselin: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2OH x xxxxxxx 16:0 3XX xxxxxxxxx na Xxxxxxxxx sp.

6.2.7. Metody xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx případ xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx metod.

U každého xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx případně xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx xxxxx biovary xxxxxx se schopností xxxxxxx a/nebo oxidace xxx xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx alkoholů (Xxxxxxx, 1964 a Xxxxxxx xx al., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx popsána x dodatku 2. Test xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx živné xxxx x čistou kulturou X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx teplotě 28 °C. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µl xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx mění během 72 xxxxx od xxxxxxx xxxxxx po xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek xxxxx.

Xxxxxxxxx testy pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Genomická xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx identifikace xxxxx xxxxxxxx X. solanacearum xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx něž xxxxx:

1. Xxxxxxx délkového xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů XXXX (Cook xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx PCR s xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Xxxxx xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx al, 2002; viz dodatek 6) xxx xxxxxx k xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2X) X. solanacearum, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Xxxx xx xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (test xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx identifikovaných xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx o xxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx 1 xx xx 24 xx 48 hodinových xxxxxx x testování x příslušný xxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx (např. NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete nebo xxxxx xx xxxx 3 pravých xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx až 2 xxxxx xxx teplotě 25-28 °X x xxxxxx xxxxxxxxx vzdušné xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxx. U xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx mělo xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx po xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx R. solanacearum.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx se izolace x xxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 xx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x malém xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4). Izolace ze xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Xx inkubaci 48 xx 72 hodin xxx xxxxxxx 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx typických kolonií xxx R. solanacearum.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx půdy pro xxxxxxx a xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx agar (Xxxxx) 23,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx tlakem při xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Glukóza (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx při teplotě 121 °X po xxxx 15 minut.

Sacharózopeptonový xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Difco) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

pH 7,2-7,4

Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx hydrolyzát (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), až do xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Validované selektivní xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 xx znění Xxxxxxxxxxx xx al., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 ml

Bacto-Agar (Xxxxx) (xxx pozn. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx a xxxxxxxxx x autoklávu při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °X x xxxxx xxxxxxx sterilizovaný xxxxx xxxxxx následujících xxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 mg/l

Polymixin-B-suIfát (Xxxxx X1004) 600 000 X (xxxxxxxxx 100 mg)/l

Bacitracin (Xxxxx X-0125) 1 250 X (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx C-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Signa X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx výše xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx použit Xxxxx Agar #1. X takovém případě xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx také xxxxxx růst xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx tvořit o 1-2 xxx déle x červené zbarvení xxxx xxx světlejší x xxxxxxxxxxxxx než xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xx 2 500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bez xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxx x xxxx xx spotřebovat xx 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx xx měly být xxxx xxxxxxxx zbaveny xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx půdy xx měla xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx roztěrem xxxxxxxx referenční xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (viz xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx se xx 2 xx 5 xxxxx při teplotě 28 °X objeví xxxxxxx kolonie.

c) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx al., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxx půdu XXXX, xxx xxxxxxx xx Bacto-Agar x 2,3,5- trifenyltetrazolium chlorid.

Upravená xxxxx xxxx Wilbrink (Xxxxxx xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Steriluje xx tlakem při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx x ochladí xx na 50 °X. Xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx roztok xxxx xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx izolované bakteriální xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx standardní referenční xxxxxxxx xxx' k xxxxxxxxx kontrole (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx vzájemnému xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxx dostupné a xxx xx získat x xxxxxx sbírek:

1. Xxxxxxx sbírka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Sbírka xxxxxx xxxxx ochrany xxxxxxx (PD), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií rostlin (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx panel xxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxx XXX X. solanacearum

Poznámka:

Spolehlivost xxxx uvedených xxxxx xxxx xxx zaručena xxxxx x případě, xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX sérologicky xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x optimalizaci detekčních xxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ až 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, nejsou xxxx xxxxxx xxxx standardy x xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx patogenity.

Ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testů.

B. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxx xxxxxx PCR/IF x XXXX

Xxxxxxxxx se 48hodinová xxxxxxx virulentního kmene X. xxxxxxxxxxxx rasy 3/xxxxxxx 2 (např. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxx pufru, xxx se získala xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 ml. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx zakalenou xxxxxxxx rovnající xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 nm.

Odebere xx xxxx z xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x bílou xxxxxxx, o které xx ví, xx xx prosta X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx xxxxxxxx a resuspenduje xx peleta x 10 ml. Xxxxxxxx xx 10 sterilních xxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 ml s 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx mikrozkumavky a xxxxxxxx se. Provede xx desetinásobné xxxxxx x dalších xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxx označeny.

Připraví se xxxxxxxxx části x 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 ml, xxxx se získá 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °C xx xx xxxx použití.

Přítomnost x xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx potvrzeny xxxxxx IF.

Pro XXX xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx DNA z xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x XXXX xxxxx se xxxxxxx test xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx XX, FISH x XXX xxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx v 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxx x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx sterilizované xxxxx xxx skladovat xx dobu xx xxxxxxx xxxx.

1. Pufry xxx extrakci

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx z rostlinných xxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx z výkrojků x pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 min.

2. Pufry xxx XX test

Pufr xxx XX (10 xX fosfátový xxxx xx fyziologickém xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx pufr xx xxxxxxx k xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx se 0,1 % Tween 20 x pufru xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, pH 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx na XX xxxxx k zvýšení xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 g

Glycerol 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Citifluor® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1. Dvojnásobný xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x steriluje xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx aromatických xxxxxxx, xx možné xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx siřičitan xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx fosfátem (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 g

Na₂HPO₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 ml

Destilovaná xxxx 895 ml

3.4. Xxxxxxxx pufr (musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx do 100 xx

3.5. Roztok xxx substrát xxxxxxxxx xxxxxxxxx, pH 9,8

Diethanolamin 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 ml

Rozpustí xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx xx xxxxxx xX xx 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx dvě 5 xx xxxxxxxx fosfatázového xxxxxxxxx (Sigma) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx pro účely xxxxx DASI XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 x

XxX XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxxxx pH 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 xx

4.3. PBS-Tween

10xPBS 50 xx

10 %Tween 20 5 ml

Destilovaná xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Diethanolamin 100 ml

Destilovaná xxxx 900 ml

Smíchá se x nastaví se xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x x S/s,

kde X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx s více xxxxxx a

s - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx i = xxxxxxxxxx xxxx (x rozmezí 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované pelety (X).

X =X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = objem xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xxxxxx x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 6

Validované xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nejméně 10³ až 10⁴ xxxxx X. solanacearum xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxxx žádné xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx OLI-1 : 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx primer X-2: 5'-XXX XXX XXX GCC XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX R. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx xxx 96 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: ii) 20 sekund při 94 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 30 xxxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: v) 10 xxxxx při 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Perkin Xxxxx 9600. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých kroků xxxxx xx), xxx) x xx).

1.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé amplifikací x R. solanacearum XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X.

2. Xxxxxxxx PCR Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1: 5'-xxx cga xxx xxx gcg ggg x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx ttg xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx DNA = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx UPW	16,025 μx
10x pufr XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (frakce X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs dNTP (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Ps-2 (10 μM)	0,5 μl	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μl	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx množství	25,0 μx
(1) Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Elmer (XxxxxXxx) a Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Research XXX 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Taq Xxxxxxxxxx. Perkin Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx být xxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx x) 5 minut xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 sekund xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx primerů s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (syntéza extenze)

vi) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx možná xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu ii), xxx) x iv).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx DNA vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx I xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx a 96 xx.

3. Protokol xxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX GAA XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx XX-5-X: 5'-XXX XXX AAG XXX XXX ACG XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX TCA XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové DNA X. solanacearum = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 xx (sada xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Reakční xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: i) 5 xxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: v) 5 xxxxx při 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) nechá xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx z DNA X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx 1 xxxx Isoschizomere (např. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-1-R: 5'-XXX XXX CAC GGC XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-3-R: 5'-TTC XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Rs-1-F/Rs-1-R = 718 bp

s Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx pro biovary 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx při 58 °C (hybridizace xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X a Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx Xxx I xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (bidestilát) 6,2 xx

6. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (TAE), xX 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx octová 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 g

Destilovaná xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (např. xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Validovaná xxxxxxx xxx FISH xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum XXx-1-XX3: 5'-ggc agg xxx xxx xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'-gct xxx xxx cgt xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX X NEVDECHNOUT. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Zahřeje xx 9 xx xxxxxxxxxxx čisté vody (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx xx 0,4 x parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; pH 7,0) x 5 xxxxx XXx 1N. Zkontroluje xx xX indikačním xxxxxxxx x x xxxxxxx potřeby se xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX S XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT XXXXX XX!]

xxx) Přefiltruje xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje se xxxxxxxx xxxx prachem xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

EDTA (xxxxxxxxxxxxx přes filtr x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx x, podle potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx XXX 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 xxxx OLI2 5 xx/µx

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 1. Pro každé xxxxxxx (obsahující dvojmo 2 různé vzorky) xx třeba 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: FORMAMID JE XXXXX JEDOVATÝ, NUTNO XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXX POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsi

Poznámka:

Všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx světlocitlivé xxxxxxxxxx xx uchovávají v xxxxx xxx teplotě -20 °X. Během xxxxxxx xx xxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Lycopersicon xxxxxxxxxx) nebo xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) do xxxxxxxxxxxxxxx výsevního xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 až 14 xxx) xx přesadí xx pasterizovaného pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku x xxxxxxx by xx xxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne: 14 xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx delší;

Teplota: den: 21 až 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx odrůda xxxxx vejcoplodého: "Black Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx internetová xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

LITERATURA

1. Amann, X.x., L. Xxxxxxxx xxx D.A. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx enviromnental xxxxxxx xx microbiology. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Directive 98/57/XX of 20 Xxxx 1998 xx xxx control xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx etal. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofthe Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx L235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Xxxx, K. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Design xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Ralstonia solanacearum xxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx isolates. European Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Caruso, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, X.X., Collar, X xxx Lopez, X.X. 2002. Enrichment Double-Antibody Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Assay Xxxx Xxxx a Specific Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx Xxxxxxxxxxxx Potato Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, D., Barlow, X. and Sequeira, X. 1989. Genetic xxxxxxxxx of Pseudomonas xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx fragment length xxxxxxxxxxxxx xxxx DNA xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx the xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Wilson, X.X. xxx Stead, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx of xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx iru potato xxxxx extracts. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx huternational Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx De Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Applied Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, M. Kaleya-iwaki, X. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx soli xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx and x XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Janse, X.X. (1988) X xxxxxxxxx method xxx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxxxxx xxxxxx tubers xxx xxxx xxxx xx its xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Bulletin XXXX/XXXX Bulletin 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xxxxx xxxx fatty-acid xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx relationship xx pathogenicity of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx to xxxxxx xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx medium. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Methods xxx xxx xxxxxxxxx of xxxxxxxxx diseases xx xxxxxx. Xxxxxxxxx scientific Xxxxxxxxxxxx Xxx., Oxford. 216 pp.

16. Lopez, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, P., Xxxxxx, X., Xxxxxx, B., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx improves xxxxxxxxx isolation, xxxxxxxxxxx xxx molecular detection xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Xxxxxx Academic Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17. Xxxxx, F.J., Fulbright, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Bruijn, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xanthomonas xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxxx, X.X. and Xx Bruijn, F.J. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx of xxxxxxx structure by xxx-XXX fingerprinting xx xxxxxxx xxxxxxxx Xanthomonas xxxxxxxxxx xx. vesicatoria. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., F. Xxxxxx, X. Holloway, X.-X Wang, T.-H Xx, X. Maghirang, X. Xxxxx, A.C. Xxxxxxx, X. Krishnapillai, X.X. Hong, B.W. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxxx. 1997. A xxxxx xxxxxx for development xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx DNA xxxxxx xxx PCR xxxxxxx xxx identifying Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx by polymerase xxxx xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx multiplex PCR xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Seal, S.E., X.X. Jackson, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum, Xxxxxxxxxxx xx ygii, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Bacterium xx xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx sensitive detection xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Offord, X.X., Xxxxxxxxxx, M. xxx Saddler, X.X. 1995. Xxxxxxx diversity xx Burkholderia solanacearum (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 in Xxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx of xxxxx pathogenic xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. using cellular xxxxx-xxxx profiles. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Systematic Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Hayward, X.X., Sly, XX, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx xx the xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx of Burkholderia xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas syzygii, xxx the xxxxx xxxxxxx bacterium xx xxxxxx based on 16X rRNA xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Xxxx, J.M., Xxxxxxx, P.J.M., Xxxxx, X.X., Hagenaar, X., Xxxxxxx, E., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, A., Xxxxxxxxx, X. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Race 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx AFLP, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Allen, X. xxx Elphinstone, X. (eds.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Weller, S.A., Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Boonham, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxx quantitative flourogenic 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Wullings, B.A., X.X. van Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of R. xxxxxxxxxxxx, xxxxx causes xxxxx xxx of xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx hybridization xxxx 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.