Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx stanoví xxxxx §88 xxxx. 2 zákona x. 326/2004 Sb., o xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx a x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zákonů, (xxxx xxx "zákon") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Předmět úpravy

Tato xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx předpisy Xxxxxxxxxx společenství¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxxx na xxxxx Xxxxx republiky xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx al. subsp. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru, x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx bakteriální hnědé xxxxxxx, aby xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a rozsah xxxxxxxxx a

c) při xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx šíření x prováděla se xxxxxxxx opatření x xxxxx jejich eradikace.

§2

Pojmy

Pro xxxxx této xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx et xx. xxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. původce xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, a ostatní xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Solanaceae), u xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx hnědé xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, xxxxx xxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx L.) xxxxx xxxxx a xxxxx, lilek xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x nichž xxxx xxxxxxxxx možnost xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) detekčním xxxxxxxxx - xxxxxxx zaměřený xx xxxxxxxxxx výskytu xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx území xxxx v určité xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - průzkum k xxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx nebo původcem xxxxx xxxxxxx, x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x k xxxxxx xxxxxx území, xx které se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) pravděpodobným xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, partii, zařízení, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx nebo xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx předmětech xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx rozšířením xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, x objektu xxxxx x xxxxx, xxxxx §11 odst. 1 xxxxxx,

x) zamořením xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

i) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx xxx "xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx"), xx které xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx podle §76 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxx potvrzení xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx,

x) bezpečnostní xxxxx - xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx správou, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby,

k) xxxxxxx xxxxxxxxx partií - xxxxxx hostitelské xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxx; přitom xx xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, které vyrostly xx xxxxxx partie xxxxx,

2. rodičovskou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx považuje xxxxxx xxxxxxx příbuzná xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které x xx xxxxxxxxxxxxx vznikly.

§3

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx každoročně x souladu x §10 odst. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx průzkum xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 xxxx. 2,

x) namátkově xxxxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) namátkově xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx členských xxxxx,

x) všechny partie xxxxxxxx vypěstované v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx průzkumu xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxx xxxx podezřelé x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx partie hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx území xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zemí x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx třetích xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) vodní zdroje xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx podniků, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx odpady x xxxxxx podniků.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx nebo potvrzení xxxx výskytu xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx partií podezřelých x xxxxxxx x xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxxx x místech xxxxxxxx, odkud xxxx xxxxxx pocházejí.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx zjišťuje

a) laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 2 xxxx. x) x b), xxxxxxxx 3 a x odstavci 4 xxxx. x) x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 písm. x) x dovážených xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx hlíz, v xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxxxxxxxxx testováním vzorků xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x d),

c) xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x následným xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin x příznaky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x případech xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx vody, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x případě uvedeném x odstavci 5 xxxx. b) x x odstavci 6.

(8) Xxxxxx prohlídky partie x xxxxx, původ, xxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 až 7, rozsah tohoto xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx s §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x biologie xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx k systémům xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx situaci xx xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správy (dále xxx "Xxxxxxx"). Testování xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx x určení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v souladu x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 lze xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx anebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx osobou, xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx zemědělství xxxxx §71 odst. 1 xxxx. b) zákona xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §72 odst. 5 písm. x) xxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx této xxxxxx, že xxxxxx xxxxx odebírány x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx, která xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx x xxxx xx oprávněna xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxx xxxx xx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxx kontrolnímu x xxxxxxxxxx xxxxxx zemědělskému.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 8 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx s §10 odst. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 části X xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx xx účelem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx členskými xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 až 6 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxx xx pozemcích množitele, xx 1. září, x xxxxxxxxx případech xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx hostitelských rostlin, xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Podrobnosti xxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx.

§4

Opatření xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vizuálních xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx původce xxxxx hniloby xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx jejím xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního testování, x to xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx vyvrátit.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxx xxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx přesun všech xxxxxx xxxx zásilek, xx xxxxxxx byly xxxxxxxx vzorky, x xxxxxxxx těch, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko rozšíření xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, x

x) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx odhadovaného xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x cílem xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx přesunu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx všech xxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx na xxxxxxxxx x x objektech xxxxxxxxx x podezřením x výskytu, popřípadě x xxxx tyto xxxxxxx a xxxxxxx.

(4) Xxx podezření na xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx státu xxxx x xxxxxxxx xxxxx členském státě, xxxxx rostlinolékařská správa xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx tohoto xxxxxxxxx x bude s xxxxx xxxxxx vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx x podezření x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, které xxxx mít původ x Xxxxx xxxxxxxxx xxxx které xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx ohrozit, xxxxxxxxxxx Xxxxx republika, xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 a 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xxxxx úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx způsobem stanoveným xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé hniloby, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x §76 xxxx. 2 xxxxxx x x přihlédnutím x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, biologii xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx hniloby x xx způsobu xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) označí xx zamořené xxxxxxxx, xxxxxxx, anebo partii, x xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx odebrán, x xxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálem, xx xxxxxxx xxx xxxxxx odebrán, x xxxxx xxxx místa xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx pěstebního xxxxxxxxx, x xxxxxxx, xx nichž byly xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxx odebrán,

b) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 včetně xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 x stanoví x souladu x xxxxxxxxxxx bodu 2 přílohy č. 3 rozsah xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx posklizňového kontaktu, x xx xxxxxxx xxxxxxx příbuznosti, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x zalévání xxxx jiné xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx písmene x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxx x) x xxxxxxx rozšíření původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx s xxxxxxx xx povrchovou vodu, xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x s xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx rostliny x xxxxxx lilkovitých x xxxxxxxxxx vegetace, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx zavlažování, zalévání xxxx xxxxxxxxx povrchovou xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx brambor, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxx laboratorní xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxx xxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x cílem určit xxxxxx xxxxxxxx,

x) označí x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx výsledky úředního xxxxxxxxxxxxx testování podle xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx xxxx odebírány xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx hnědé hniloby x jeho možného xxxxxxxxx xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Rostlinolékařská xxxxxx neprodleně xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx x xxxxxxx s ustanovením xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. b), x sdělí xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx karanténního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. c). Podrobnosti x xxxxx xxxxxxxx xxxx důvěrné.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx stát xxxxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxx anebo xxxxxx původem x Xxxxx republiky x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx odstavce 3, xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a v xxxxxxx s ustanovením xxxxxxxx 1 x 2 označí zamořené xxxxxxxx a xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx a vymezí xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxx pro vedení xxxxxxxxx šetření podle xxxxxxxx 1 xxxx. x) a xxx xxxxxxxxx xxxxxxx karanténního xxxxx x bezpečnostní xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxx 2 xxxx. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných xxxxxx hostitelských rostlin

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zajistí xxxxxxxxxxx testování podle §4 odst. 2 xxxxx dohledaných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx k partiím, xxxxx byly xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle §5 odst. 1 xxxx. x), x xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx x xxxxxxx potřebném xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx stanovit xxxx xxxxxx dalšího xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxxxxxxxxxxxxxx správa x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxx karanténní xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) x c).

§7

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx správa v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 odst. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x) nesmí být xxxxxx x pod xxxxxxxx rostlinolékařské správy xx s xx xxxxxx způsobem xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx neexistuje xxxxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx a xx jsou xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx zpracování této xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx označená jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. b) xxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správy xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, pokud xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx riziko rozšíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx zpracování xxxx partie, x xxxxx není tato xxxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, sklady xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx objekty xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), xx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx očistě a xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 x xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx x dezinfekce xx xxxx objekty x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nepovažují,

d) x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx zóně, xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 písm. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. x), xxxx xxx provedena opatření xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 x x xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx podle §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxx xxxxxxxx uvedená x xxxxxxxx 1, xxxxx budou xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx a xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx karanténního xxxxx a v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx osob, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Rostlinolékařská xxxxxx xxxxx xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. x) zákona xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 a odstavce 2 xx xxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x jejich splnění.

(4) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx je x xxxxxxx x §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx x výjimkou xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx účelům, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx xxxxxxx ani xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx materiál²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na xxxxx České xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování, xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxxxx průzkumu xxxxx §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx x §3 xxxx. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Testování xxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce podrobí

a) xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém roce x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x nebo

b) xxxxx xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ bramboru xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. rostliny šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ xxxxxxxx x předstupňů a xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx potvrzené klonové xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx tuto xxxxxxxxxx, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ x případech, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx žádná klonová xxxxxxxxxx, nebo

c) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx předstupňů, xxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x množení x následujícím xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ani původce xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Účinnost

Tato vyhláška xxxxxx xxxxxxxxx dnem xxxxxx xxxxxxxxx.

Příloha x. 1 x xxxxxxxx č. 331/2004 Sb.

A. XXXXXX XXXXXXXX, DETEKCE A XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x rostlin xxxxxxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx přípravu testovaných x kontrolních xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx se xxxxxxxx xx optimalizaci a xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku č. 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx kontrolních xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů x xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry xxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx vybraných xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx prahů xxxx xxxxxxxx správné nastavení, xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, pečlivé zacházení x činidly a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx kontaminace mezi xxxxxx, např. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx od xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx kvality, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx chybám, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x v xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx x diagnostických nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx xxxxxx, jak xx znázorněno x xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.

Xxxxx je první xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx x xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx pokračovat x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx schématu. Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx negativní, xxx xxxxxx není xxxxxxxxx xx infikovaný xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 definován xxxx pozitivní xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx screeningovým xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x v xxxxxxxxxx xxxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx s podezřením x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti. Xxxxxxxx rychlý screeningový xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx diagnostickém xxxxx a x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- XXX xxxx (oddíl 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Ačkoli xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s typickými xxxxxxxx roztíráním xxxxxxxx xx xxxxx není xxxxxxxxxxxx, kultivace v xxxxxxxxxxx stádiích infekce xx nemusí xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx bakterie, xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx potlačovat xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, nejlépe XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx x oddíle 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx negativní, ale xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxx být xxxxxxx provedena xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx za použití xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Zkouška xxxxxxxxxx je popsána x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xx xxxxxxxx latentních xxxxxxx x hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx screeningových xxxxx, x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx izolací xxxxxxxx, x následně, x xxxxxxx izolace xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx kultura xx Xxxxxxxxxxx rnichiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Pozitivní výsledek xxxxx xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx podezřelý.

Screeningové x xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ až 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 200 xxxx, xxxxxx postup xxx xxxxxx x na xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 hlíz xxxx x dispozici.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx testy založené xx různých biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx tento xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx tento xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytný xxxxx xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx nebo další xxxx negativní, xx xxxxxx považován na xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Test xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx vyšetření XX xx vždy xxxxxxx polyklonální xxxxxxxxxx, xxxxx monoklonální xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx oddíl 4).

(5) XXX test.

Použijí se xxxxxx validovaná PCR xxxxxxx x protokoly (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX test.

Použijí se xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx (xxx oddíl 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxx být x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pro přímou xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX xxxxx xxxx XXX-88 média x ředění resuspendované xxxxxx 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxx xxxxx 3-10 xxx xx rozetření xx xxxxxx. Kulturu xxxxxxxx xxx následně xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx potenciálu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxx xxxxx, xxx xx omezily xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které jsou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx přerůst. Xxxxx xx kultivační xxxxxx takto nepodaří, xxxx být izolace xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x pelet xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínky xxxxxxxxx pro xxxx xxxxxx. Bakteriální xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx XXXX xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx testy xx xxxxxx pelety xxxx dodatečným xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx vzorku x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddílu 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - viz xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddílu 3.2.

(3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx založené xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx provedena xxxxxxx x potvrzení. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X případě, že xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx nebo xxxxx xxxx negativní, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Selektivní xxxxxxxx test x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx xx xxxxxx v xxxxxx 5.

(8) Biotest xx xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx biotest mohou xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxxx xxxx výsledky xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pozitivní, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx xxxxx a x případě xxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x kterých xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x oddílu 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx klimatických podmínkách xx příznaky xx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx a xxxxx xxx xx na xxxxx xxxxxx. Kromě xxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxx se xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, stáří xxxx mechanických xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx kontrole xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx velmi odlišné xx příznaků hnědé xxxxxxx; xxxxxxx je xxxxxxx pomalé x xxxxxxxx omezené xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx listy xxxxx x xxxx infekci xxxxxx xxxxxx, x xxxx růst x xxxxxxxxxxxx místech xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx tvarované xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx ucpáním xxxxxxxx pletiv na xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx až oranžové xxxxxxxxxxx partie. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx odumřít. Xxxxx xxxx listy x xxxxx xxxxx xxxxx. Příležitostně jsou xxxxxxxx zakrnělé. Xxxxxxx xxxxxx xxxx příznaků xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx příznaky jsou xxxxx sklovitost xxxx xxxxxxxxxxx pletiva bez xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, zejména xxxxxx xxxxx. Prstenec xxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx svazků x xxxx, kdy při xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x cév xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Vodivá xxxxxxx xxxxx zhnědnout x příznaky na xxxxxxx xxxx v xxxxx xxxxxx podobné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearurn. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx jednu xxxx xxxxxxxx, nemusí se xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxxxx. S postupem xxxxxxx dochází k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx část xx může oddělit xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X pokročilých xxxxxxxx infekce xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx praskliny, často x červenohnědými okraji. X xxxxxxxx době xx x Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx případů, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx cévních, xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx dutin x xxxxxxx. Druhotná houbová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Příprava xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx množství xxxx xx xxxxxx xxxx x zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxxxx i xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x dispozici menší xxxxxxxx hlíz.

- Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx metod je xxxxxxxx na testování xxxxxx o xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx extrakt xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx dezinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) a xxxx prostředky xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, že xx xx vzorku xxxxxx xxxxxx x jestliže xx má provádět XXX xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx škrabkou xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vodivého xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx brambor. Xx xxxxxxx xx omezí xxxxxxxxxx část xxxxxxx xxxxxxxxxxxx cévní xxxxxx. Xx odebrání xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konců zpracovány xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °C xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx hlízy x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx se dají xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx jsou xxx vyříznutí výkrojku x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx příznaky kroužkovitosti, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx hlízy xx xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx naříznuté xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xx xxxxxxx korkovatět xx xxxx 2 xxx xxx pokojové xxxxxxx x uchovávají xx v xxxxxxxxx xxx teplotě 4 - 10 °X xx do xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Výkrojky x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x nepoužitých xxxxxxxx na jedno xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (x případě, že xxxx xxxxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx zpracovat výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx možné, xxxxxxxxxx xx v xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx xx xxxx maximálně 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x růst xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx zjištění xxxxxxxxxxx bakterie xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů.:

a) xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx xx v xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx dobu 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx po xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3), xxx x xxxxxx xxxx rozdrcením x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vhodného mlecího xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx použití xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během xxxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx čerstvě sterilizovaná xxxxx (nože) x xxxxxx. Pokud xx xxx xxxxxx XXX xxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX xx nádoby xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxxx xx jedno xxxxxxx x použití xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx buď pomalým xxxxxxxxxxx (xxx maximálně 180 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx xx xxxxx přídavkem (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx frakce xx zahustí xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x xx dobu 15 xxxxx (nebo 10 000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°C x xxxxxxxx se supernatant, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1,5 ml xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µl xxx xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, 500 µl xxx Ralstonia solanacearurn x 500 µx xxx referenční účely. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx na konečnou xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x xx xxxxxxxxx části xxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxx x uloží xxx xxxxxxx -16 xx -24°X (týdny) xxxx xxx teplotě -68 xx -86°X (měsíce). Xxxxxxxx xx během xxxxxxxxx uchovávají xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx nutný xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx přeprava x xxxxxxxxx boxu xx 24 až 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx se xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí x xxx sklíčka xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx populací Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx vzorky až 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx je předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx čistého xxxxxxxxxxxxxxx nože nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx 1-2 xx xx spodní xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, okamžitě xxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Části xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) části se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x xxxxxxx třepačce (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx nižší než 24 °X nebo xx dobu 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) části xx xxxxxxxx rozdrtí x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx to xxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 hodin xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Po xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 minut, xx dekantuje xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx purifikace xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx filtrací x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx v oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx rozdělí xx 2 stejné xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx během testování xxx teplotě 4-10 °X x xxxxx xxxxxxxx xx skladuje x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 až -86 °X (xxxxxx), xxxxx je xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

PRINCIP

Doporučuje se xxxxxx lF xxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx, protože byla xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx požadovaných práhů.

Použije-li xx jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx se test XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx výsledek xx pozitivní, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx lF xxxx xxxxxxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku lF xxxxx s polyklonální xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx řadu protilátek. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx nejvyšší ředění, xxx kterém dochází x xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (FITC) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx by xx xxxx xxxxxxxxxx používat x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx. Používají xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx extraktech. V xxxxxxx potřeby xxxx xxx xxxxxxx proveden xx extraktech skladovaných xxx - 68 xx - 86 °X x glycerolu. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx po dobu 15 xxxxx při 7&xxxx;000 x a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx xxxxx, zejména xxxxx xxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx se xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem xxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X) by xx mělo xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím testovány x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx mikroskopická sklíčka x více xxxxxx, xxxxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxx standardní množství (xxx okénka o xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx okénka xxxxx xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx okénka. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Druhou řadu xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) resuspendované xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx okénka objem xxxxx) resuspendované xxxxxx 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Druhou řadu xxx xxxxxx jako xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx xx kapky xxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45 °X. Bakteriální xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 minut xxx xxxxxxx 60 °C), xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X případě xxxxxxx xxx xxxxx fixovaná xxxxxxx před xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx xx možná xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX testu:

a) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 písm. x):

Xxxxxxxx xx sada xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x XX pufru. V xxxxx jamce xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) x dvojnásobný xxxx (2X).

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. b):

Připraví se xxxxxxxx ředění (XX) xxxxxxxxxx v IF xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx přesnost.

Obrázek 1: Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx podle oddílu 4.1. xxxx. a) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na každém xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx pokyny xx xxxxxxxxxx protilátek, postupuje xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

4.3.3. Setřesou xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) x následně v xxxxx IF. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, které by xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x pečlivě xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Zakrytá xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx papíru po xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Kapky xxxxxxxxx se setřesou xx xxxxxxx x xxxx xx opláchnou x umyjí xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Opatrně se xxxxxxxx přebytečná vlhkost.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx 0,1M fosfátového xxxxx s xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx okénka x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx IF xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx excitaci XXXX xxx olejovou nebo xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx ve xxxx xxxxxxxx kolmých xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx nebo malým xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Buňky musí xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí být xxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx kontrolním kmenem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stejná nebo xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx zjištění xxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických buněk x 1 mikroskopickém xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx x vzorků, kde xx počet typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Vzorek xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

x) Výsledek XX xxxxx je xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5x10³ buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x vzorek xx považuje xx xxxxxxxxx. Další testování xxxx xxxxx.

5. Test XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx IF xxxx. Když se XXXX xxxx xxxxxxx xxxx druhý screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx možno xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx možné xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 xxxx -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx alikvotní xxxx extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován na Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 X xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x 3-5 xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktu xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx FITC poskytuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx přítomné ve xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provádí xxxxxxx xxxxxxxx jako x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx se 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx po dobu 8 xxxxx na 7&xxxx;000 g.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx x 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin xxxxxx. Protřepe se x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % etanol. Xxx jeho xxxxxxx xx xxxxxxxx peleta x xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 M XX x 50 µx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 g, xxxxxxxx xx supernatant a xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 75 µx 0,01 X PB (xxx dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 3, přičemž xx xxxxxxx 2 xxxxx vzorky xx xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 M XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx uložen xxx teplotě -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % etanolu. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx stejné xxxxxxxx 0,01 X XX x xxxxxxx xx protřepáním.

Obrázek 3. Xxxxxxxxxx na sklíčku XXXX

5.1.6. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 37 °X) x fixují xx nad xxxxxxxx.

X xxxx fázi xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x pokračovat x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx prachem x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x hybridizace

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 mg xxxxxxxx (Sigma X-6876) x 10 ml xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx zmrazit a xxxxxx roztát. Každý xxxxxx xx dobře xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 v xxxxx (20 mM Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) xx každé xxxxx x inkubuje xx xxx teplotě 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Buňky xx suší xx xxxxxxxxxxxx sériích 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx komora xxxxxxxx xxx vzduchotěsné xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx se přeinkubuje x xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 55 °X xx xxxx xxxxxxx 10 minut.

5.2.4. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx xx 1 xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx po xxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X a xx xxxxxxx ze 4 xxxxxx xx xxxxxxx / xxxxxxxxx xx přidá 10 µx xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 mm) xxx, xxx pod xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x xxxx xxx teplotě 55 °X v xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = UM), 1 x 1x hybmixu (334 ml 3x xxxxxx x 666 xx XXX) a 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x hybmix x 833 xx XXX). Xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx teplotě 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx sklíčka se xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx se xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx v kádince x 1x hybmixem xxx teplotě 55 °X.

5.2.10. Xxxxx sklíček xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx roztoku 1/2 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 minut.

5.2.11. Xxxxxxx xx ponoří krátce xx XXX a xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx povrchu xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx krycího xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo podobný) xx xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx velkým xxxxxx sklíčkem (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1 000x xxx olejovou imerzí. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat se xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx fluorescenčně xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Buňky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx a xxxxx obvodu. X xxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxx žádné nebo xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Hledají xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x morfologií xxxxxxxxxxxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus x xxxxxxxx testovacích xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx http:/forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx být lepší xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Xxx podezření z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx podezření z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx se může xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx ve skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx buněk (xxxx xxxxxx sklíček) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx přesnost FISH xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a xxxxx xxxxxx se mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x velikostí x morfologií xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx mnohem xxxx často než x IF testu.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH:

a) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx platné, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx pozorovány xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xx resuspendované pelety (dodatek 4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx další xxxxxxxxx. Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx fluoreskující xxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx typickou pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, jestliže jsou xxxx typické xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. PCR xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx IF xxxx. Xxxxx se XXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx pozitivní, xx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x celém xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxx tehdy , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování touto xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus na 1 ml xxxxxxxxx xx xxxxxx extraktů, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx mohou být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx používá xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. XXX xxxx xx měli provádět xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx cílovou XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx extrakce DNA x XXX) xx xx mělo xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx vzorky, aby xxxx jasné, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx by xxx zahrnovat následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx výsledkem,

- kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx vzorku,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx pozitivní kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x nimž xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx NCPPB 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx PCR xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx možné xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx se pozitivní xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků xx xxxx být pokud xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx použití XXX xxxxx xx xxxxxxx připravit extrakty x xxxxxxx brambor.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx vzorky. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx cílové XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxx x dispozici xxxxx xxxxxx odstraňující inhibitory XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxxx cílovou DNA x extraktu xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR, xxxxxxxx v dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx podle Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx lýzového xxxxx (100 xX XxXx, 10 mM Xxxx-XXx [pH 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx o objemu 1,5 ml.

2. Přidá xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x umístí xx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 95 °X xx xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Xxxxx se 80 µx zásobního xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx xx 1 xx x 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xx při xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx XXXX roztok X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µl Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx sama xxxxxx xx mikrozkumavky a xxxxxx začne xxx xxxxxxxxxxx viskózní.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx a míchá xx xxxxxxxx, xx xx viskozita sníží x xxxx xx xxxxx homogenní.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 minut xxx 4 °X pro xxxxxxxx xxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Přenese xx xxxxx fáze xx xxxxx mikrozkumavky.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °C), xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx xx dobu 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx se xx 15 000 g xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x odstraní xx x xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µl 80 % xxxxxxx (-20 °X) a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx xx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx uschnout xx xxxxxxx xxxx x XXX speed xxx.

15. Xxxxxx se xxxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx xxxx (XXX) x xxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -20 °X xx do upotřebení xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx usazenina xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxx PCR xx xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx použít, xxxxx by se xxxxxxxxx, že xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx efektivní.

6.2 PCR

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolu (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx vzorku XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx příslušná xxxxxxx xxxx xxx PCR x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx kontaminace, xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolu (dodatek 6). Xxxxxxxxxx protokol PCR xx multiplexová xxxxxx, xxxxx zahrnuje také xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Xx sterilních XXX xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µl xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX reakce.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxxxxx sterilní xxxx UPW, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx se vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Rozdělí xx xxxxxxxxx XXX elektroforézou x agarózovém gelu. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx s 3 µx nanášecího xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (w/v) agarózového xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X xx xx. Xxxxxxx xx vhodný marker XXX, xxxx. 100 xx ladder.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 xx xx l) xx xxxx 30-45 xxxxx, xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. X obarveném x XX (krátké xxxxxx xxxxx, např. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx xx hledají xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x očekávané xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X všech xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx pravost amplikonu XXX provedením restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx při xxxxxxxxx teplotě a xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx enzymem a xxxxxx (viz dodatek 6). Xxxxxxx xx naštěpené xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX prosvícením xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x neštěpenou x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx negativní, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěn x xxxxx vzorku, xxx byl xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (v xxxxxxx vícenásobné PCR x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí být xxxxxxxxxxxx x daným xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxx x druhou xxxxx PCR primerů (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx XXX, xxxxx byl xxxxxxxxx amplikon získán x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vodě, xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx kontrolami XXX x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, pokud xxxxx xxxxxx žádný x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Test xx xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ jednotek Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx k xxxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxxxxxxx xxxxxxxxxx selektivní obohacující xxxxxx xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx příznaků x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx o xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. se xxxxxxx xxxx rostliny xxxxx xxxxxx x níže xxxxxxxxx metod (7.2, 7.3, 7.4). Používají xx xxxxx rostliny xx fázi 2-3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx třetího pravého xxxxx. Xxx xx xxxxxxxxx úplné využití xxxxxxxxxxxxxx pelety i xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx potřeba 15-25 xxxxx na xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx o xxxxxxx 10 cm xx xxxxxx xxxx pěnového xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx o rozměrech 5 cm hloubky, 10 xx xxxxx x 15 xx xxxxx). Xxx xxxxx xxxxxxxxx vzorek xx xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fólie. Xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxx na místě xxxxxxx xxxxxx kolem xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx listem xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx jako xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx se do xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx oční xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx. Zbytek xxxxxx xx rozdělí xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Řez xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou x objemu 2 xx.

7.3 Inokulace xxxxxxx XX

7.3.1. Xx stonek xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx děložní lístky x první pravý xxxx kapka (přibližně 5 až 10 µx) suspendované xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx sterilního skalpelu xx udělá xxxxxxxxx xxxxx (x xxxx xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx jako 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx x xxxxx xx začne x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Řez xx xxxxxxx sterilní vazelínou x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (turgoru) xx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx inokulují xxxxx xxx děložními xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx méně xxx 23 X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xx xx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx infikovaných xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx inkubovat v xxxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxx (dodatek 8) po xxxx xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °C. Xxxxxxxx xx inkubují za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxx vlhkosti (70-80%) x zalévají se xxx, xxx nedošlo x nasávání xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Buňky Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx odumírají xxx xxxxxxxxx nad 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx je 21 °X. Aby xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx ve skleníku xxxx xxxxxxx komoře xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, anebo xxx xxxxxxxxxx místa xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxx. Pokud musí xxx rostliny xxx xxxxx vzorky xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx ke xxxxxxxxxxx. Xx nezbytné, xxx skleníky x xxxxxxx komory xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Pravidelně xx xxxx dnech xx spočítají xxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaky. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx působí u xxxxx vejcoplodého xxxxxxx xxxxx, které může xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx ochablost (xxxxxx xxxxxxx). Zvadlé xxxxxxx může xxxxx xxx tmavozelené xxxx xxxxxxxx, xxx před xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Povadlá xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx žlutý xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxx xx příznaků, xxx xx xxxxx naděje xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx odrůst. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx vůči xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx starší rostliny, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx rostliny xx xxxx tří xxxxx x xxxx krátce xxxx ní. Xxxxxxx xxxxx xxxx způsobovat xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx přítomných x xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxx x X. carotovora xxxxx. atroseptica, Xxxxx xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx i xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx případy xxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx způsobených původcem xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx rychle xxxxxx xxxx xxxxx xxxx celé xxxxxxxx. Xxxx se také xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx test xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx

7.9. Jakmile xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, měla xx být xxxxxxxxx xxxxxxx xx použití xxxxx pletiva xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Povrch xxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xX xxxx XXX na xxxxx x lilku x xxxxxxx se xx xxxxxxx (selektivním) médiu (xxx oddíl 8). Xxxx se xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx kultury xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x potvrdí xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx pokud nejsou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx dokonce i xx uplynutí xxxxxxxxx xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx je xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx xxx provedena izolace xx xxxxxxxx (selektivních) xxxxxxx postupem xxxxx xxxxxx 8. Čisté xxxxxxx podezřelé z xxxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxx x potvrdí xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 a 10).

8. Xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx potvrzena xxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx přerůst xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx xx nedoporučuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Přímá izolace Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx je xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x pupkové xxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx rostliny.

Izolace se xxxxxxx xx všech xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx nevykazují xxxxxxxx napadení, xxx x nichž byl xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx maceraci xxxxxx xxxxx, měla xx xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx desetinná xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx se vyloučilo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx každou xxxx xxxxxxxxxxx dávku xxxxxxxxxxxx xxxxx by xx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx obvyklých xxxxxx xxxxxxxxxx jeho xxxxxxxx xxx růst xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx xxxxxx.

8.1. Roztěr xx xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Xx 100 µl xxxxxxxxx části xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx x lilku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx desetinásobné xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x infikovaných xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx obvykle xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Proto xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, v ředění 1/100 až 1/10 000 xx MTNA xxxxxx xxxx NCP-88 xxxxxx (dodatek 5), za použití xxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxx (xxxxxxx) a xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Desky xx xxxxxxxx v xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx misek zahrnuje xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx provádějí xx xxxxx xxxxx, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 a 10 dnech.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx kolonií xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus pro xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx se xxxx xxxxxxx dříve, xxx xxxx média xxxxxx přerostlá, xx. xxxxxxx po 3-5 xxxxx.

8.2.1. Kolonie podobné Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx jedno z xxxxxxxxxxxxx médií (složení xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx agar (xxxxx xxx subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx glukosový xxxx,

- xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X xx dobu xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pomalu x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, smetanově xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx smetanově xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, někdy žluté, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x rovnými xxxxxx a obvykle xxxx v xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9) xxxx pomoci xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx se identifikují (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Identifikace

Čisté xxxxxxx pravděpodobné xxxxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx potřeby xx xxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx test xxxxx xxxxxxxxxx kmen.

9.1. Nutriční x xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxxxx se následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X a xx šesti xxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xx xxxx nejvýše 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx použití xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx agaru. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se musí xxxxxxxx z kultur x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx oxidázy -

Xxxxxxxx katalázy +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx slabá

Růst při 37 °X -

Růst x 7% NaCI -

Xxxxxxxxx želatiny -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- rhamnózy -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx barvení (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x pufru xx xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx dvojnásobného xxxxxx vhodného antiséra.

c) Xxxxxxx se xX xxxxxx (xxxxx 4).

x) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na xx xx xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Xxxxxxx se 100 µx suspenze xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx nebo vřící xxxxx xxxxx při xxxxxxx 100 °X xx xxxx 4 xxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx xx může xxxx buněk xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx připraveného XxXX do xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx xxx potom xxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 °X až xx xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx použijí xxxxxx xxxxxxx PCR (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx a xx Xxxx, 1995; Mills x kol., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Schaad x xxx., 1999).

d) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx amplikony XXX xxxxxx xxxxxxxxx x mají xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. FISH xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx ml x XXX.

x) Xxxxxxx se xxxxxx FISH (oddíl 5)

x) Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Analýza xxxxxxxx xxxxxxx (FAP)

a) Kultura xx pěstuje xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx dobu 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx XXX xx pozitivní, pokud xx profil xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx charakteristických mastných xxxxxxx 15:1 Anteiso X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx jasně xxxxxx o xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter x Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Anteiso X xx xxx tyto xxxxxxxx neobvyklá xxxxxxxx, xxxxx xx však xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. v xxxxxxx 1-5 %. X Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx obvykle xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na xx x UPW.

b) Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx x xxx., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx konečné xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx patogenity.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx ml x 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx lilku vejcoplodého xx xxxx 3 xxxxxxx listů..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X čistých xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx žádné příznaky xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx xx 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxx lilku xxxxxxxxxxxx, xxx nepřesahujících 25 °X. Xxxxxxxx xx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nevyskytují, xxxxxx xxx kultura xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

10.4. Izolace xx provádí x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx odstraněním části xxxxxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx. Xxxxxxx se xx suspenze xxxxxxxxxx xxxx nanesením na XXXX x YPGA, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 xxx xxx teplotě 21-23 °X x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx podílející xx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Science Agency	Edinburgh	Skotsko
Laboratoire Xxxxxxxx xx la Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx la Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx de la Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Bundesanstalt	Kleinmachnow	Německo
Pflanzenschutzamt Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Dienst	Wageningen	Nizozemsko
Norwegian Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Centre	Aas	Norsko
Direcção-General xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Kontaktní xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Příprava xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxx xxx vyšetření xxxxxxxx xxxxx XXX/XX a XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx kultura xxxxxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (NCPPB 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx xxxxx MTNA a xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx obvykle xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx slabě xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx odebraných x xxxxxxxx odrůdy x xxxxx slupkou, x xxxxx je xxxxx, xx xx prosta X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 ml x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Přenese se 100 µx xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx první xxxxxxxxxxxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx z 100 µx ve sterilních xxxxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, xxxx xx získá 9 xxxxx každého xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xx provede xxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x FISH xxxxx se provedou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou xxxxx zkušebních vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX a PCR xxxx být X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxx x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry xxx xxxxxxxxx xx dobu xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx pufr(50 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x rostlinných xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx sterilizace x autoklávu xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX silikonový odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx (*)	1,0 ml
Tetrasodiumpyrofosfát	Antioxidační xxxxxxx	1,0 g
Polyvinylpyrrolidon-40 000 (PVP ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50 g
(*) xxx xxxxxxx při extrakci xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx se používá xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx extraktů x xxxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrovány do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 min.

2. Xxxxx xxx IF xxxx

2.1. Xxxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x autoklávu při 121 °X xx xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxx xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx na xxxxxx sklíček xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Laboratories) xxxx Xxxxxxxxx® (Leica).

Dodatek 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx lF x XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx pole xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx objektivu.

s = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x rozmezí xx 8 - 24 xxxxx typu xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 nebo 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x atd.).

3. Xxxxxxxx xx počet charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx buněk na 1 ml resuspendované xxxxxx (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx resuspendované xxxxxx x každém xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x kultivaci X. x subsp. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

Živný dextrózový xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx agar xxxxxxxxxx 1 % X(+) glukózy (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx se sterilizace x xxxxxxxxx při 121 X xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
D(+) xxxxxxx (monohydrát)	10,0 g
Baktoagar (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx salts xxxxxx = YGM)

Kvasnicový extrakt (Xxxxx)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7H2O	0,1 x
XxXX4 . H2O	0,015
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx v xxxxxxxxx xxx 115 °X xx dobu 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx média

Médium MTNA

Pokud xxxx xxxxxxx jinak, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
Manit	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 g
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xX se xxxxxx xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) x xxxxxxxxx na 50 X xx přidají xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx acid 0,002 x, amphotericin X 0,01 g.

V xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 mg/ml) x 96 % metanolu, xxxxxxxxxxxx B (Sigma) (1 xx/xx) x xxxxxxxx xxxxxxxxx. Zásobní xxxxxxx xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx přidání antibiotik xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx do 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx,xxxxxx xx xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx na 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx B xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003g, xxxxxxxxx xxxx (Sigma) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 M NaOH, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx B xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx sterilizují xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxx extraktu. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx vykazovat xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX protokol x xxxxxxx XXX kontrolou (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- ctc xxx xxx xxx xxx xx xx -3'

xxxxxx XXX-X 5'- tac xxx xxx xxx xxx xxx xxx x -3'

primer XX-7-X 5'- gag xxx xxx xxx xxx xxx tga xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx gca ggt xxx cct xxx xx -3'

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx x DNA X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx šablony = 502 bp (sada XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18S xXXX 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Reakční směs XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx voda (UPW)	15,725 μx
10x PCR xxxx (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx d-n XX (20 mM)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μl
Celkový xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxx Taq xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x Xxxxx BRL.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X x XX-8-X xxxx optimalizována xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx XXX xxxxx Pastrika (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Při xxxxxxx xxxxxxxx třepáním xxxx xxxxxx xxxxxxxx izolace XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx při xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 xxxxxx xxx teplotě 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 minuta xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 minuta při xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx teplotě 72 °X (závěrečná xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C

Poznámka:

Tento xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx použití xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx modifikace xxxxx xxxxx xx), xxx), xx), x), vi) x xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx restriktivním xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx z XXX C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx II xx xxxxxxxx při teplotě 37 °C po xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx specifického xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx roztok)

Bromfenolová modř 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx octová 11,42 xx

XXXX (sodná xxx) 3,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (xxxx. Invitrogen xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Validovaná xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx specifická xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'- gct xxx xxx cgt xxx xxx-3'

2. Fixační roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! POUŽÍVAT XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (např. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx xx 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx po xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (XX; xX 7,0) a 5 kapek XXx 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xX x v xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx HCl nebo XxXX.

[XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx xx přefiltrujte xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx před xxxxxxx při xxxxxxx 4 °X do xxxxxxx použití.

iv) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 mM (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Sonda XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx dvojmo 2 xxxxx vzorky) xx xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Doporučená xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 sklíčka	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 ng/μl)	4,5	18,0
Celkový xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx oligosondy se xxxxxxxxxx x temnu xxx teplotě -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxx je xxxxxxxxxx před xxxxxx xxxxxxxxx zářením xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, xxxxxxxxxxx xx pH x xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxx x plně xxxxxxxxxxx děložními xxxxxx (10 až 14 xxx) se přepichují xx xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx by xx xxx pěstovat xx xxxxxxxx xx následujících xxxxxxxx:

Xxxxx dne: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx delší;

Teplota: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Beauty",

"Long Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Huckerově modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx violeti

Rozpustí xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx v 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 x šťavelanu amonného x 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx jódový xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 ml

Pevné xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Nasypou xx xx vody x xxxxxxx xx x xxxxxxxx nádobě xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X 2,5 g

95 % etanol 100 xx

Xxxxxxx xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx barvení

1. Xxxxxxxx xx roztěry, vysuší xx na xxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx tekoucí xxxxx.

4. Xxxxxx se Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx a xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx pomocí xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx xxx xxxxxx, pokud xx vyplavuje barvivo, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx pohybování xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx pod xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx se safraninovým xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx se xxxxx papírem.

Grampozitivní bakterie xx xxxxxx fialově xxxxx, gramnegativní bakterie xx zbarví růžovočerveně.

(¹) Xxxxx se také xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx and diagnosis xx the xxxx xxx bacterium Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx in xxxxxxx xx xxxxxx tubers. Xxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11&xxxx;288 XX, 21 pp.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx plants. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Dinesen, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, R. X., 1981. Determinative xxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx bacteriology, American Xxxxxxx xxx Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx significance xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx gram-negative xxxxxxxx. X. Bact., 66, 24-26.

6. Janse, X. D., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx of Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xxxxx cell fattyacid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Janse, J. X. a X. Xxx Vaerenbergh. The xxxxxxxxxxxxxx of xxx XX xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx rot xxxxxxxxxx (Corynebacterium sepedonicum) xx potato. EPPO Xxxx., x. 17, 1987, pp. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. a X. Rudolph, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx by the xxxxxxx reaction. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X x X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Kiadó, Budapest, 568 xx.

11. Lelliott, X. X., 1966. Xxx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. X., X. Xxxxxxx x X. X. Xxxxxxx, 1966. A xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx J. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Lelliott, X. X. a P. X., Sellar, 1976. Xxx xxxxxxxxx of xxxxxx ring xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx sepec xxxxxx (Xxxxx. et Xxxxx.) Xxxxx. et Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. xx Boer, 1995. Xxxxxxxxx of Polymerase Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx RNA xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Mills, D., Xxxxxxx, X., X. x X., X. Xxxxx, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. x X.X. Rainey. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx by xxxxxxxxxx cham xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. J. Phytopathology 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Detection xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus in xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX with xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx XXX. European Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx studies on xxxx Gram-positive phytopathogenic xxxxxxxx and their xxxxxxxxxxxx to the Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, W., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx B1O-PCR xxx an xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx identification xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Skerman, X. X. X., 1967. A xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, X. C.; Xxxxxxx, J; Xxxxx, XX., 2001. Repetetive xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx the XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx primer xxx xxxxx identification xx xxxxx pathogen Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Sneath, P. X. X. and X. G. Xxxxxxx, 1974. X study xx test xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: report xx Pseudomonas xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx of plant xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx cellular fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; van Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, J. X. x A. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Ralslonia xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx xxx of xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx situ hybridization xxxx 23s rRNA-targeted xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

B. XXXXXX XXXXXXXX, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx popisují xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) diagnózy hnědé xxxxxxx x hlízách xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) detekce Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx, xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxx x půdy,

iii) identifikace Xxxxxxxxx solanacearum (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX ZÁSADY

Optimalizované xxxxxxxxx xxx různé metody, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx optimalizaci x xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx obsahují xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx pracovat xx vhodných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s odpovídajícím xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxx stanovených xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí zajišťovat xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx stanovené xxxxx vybraných metod.

Zcela xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx kvality, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x jiným xxxxxx, zvláště xxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx uvedeno x §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeníngových testů xxxxxxxxxxx xx vzorku, xxx je xxxxxxxxxx x níže uvedených xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. První xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je první xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní, xxxxxxxx podezření xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx x druhý screeningový xxxx xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx potvrzeno x musí xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx schématu. Xxxxxxxx xx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx vzorek není xxxxxxxxx xx infikovaný X. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx R. solanacearum x potvrzením xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx postupových diagramů

1.1. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xxx hlízy x rostliny xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx nebo typickými xxxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na selektivní xxxxx půdě x x případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.1.

2) Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale nejsou xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Test xx xxxxx slizu ze xxxxxx cévních xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy xxxxxxxxxxxxx slizu nebo xxxxxxxx z pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx IF xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx vodě nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.8.

9) Test XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě nebo xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx obvykle xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx (xxxxxxxxx ředěním) (xxx x oddíle 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx může selhat xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx saprofytických xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx typické, xxx xxxxxxxx test xx xxxxxxxxx, musí xx xxxxxxx opakovat, xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých kultur X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Xxxxx specifická xxxxxxxxxxxxxxx xx nepovinná, xxx xxxxxxxxxx xx xxx každý xxxx xxxxxx.

14) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx určeno xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx ze xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů (viz xxxxxxxx v diagramu 3), z xxxxx xxxxx je xxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x dále, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, potvrzením, xx xxxxx kultura je X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx pouze x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx testy xxxx umožnit detekční xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx sérii testů.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz, xxxxxx xxxxxx lze xxxxxx x xx xxxxx xxxxx, jestliže 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 3.1.1.

3) Xxxxx jsou alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx provedena xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V případě, xx xx xxxx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytný xxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xx-xx druhý xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy nejsou xxxxx.

4) Xxxx IF xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Testy XXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.8.

9) Biotest xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx xxxx biotest xxxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve screeningových xxxxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx, xx xxxxx opakovat xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vodivého xxxxxxx z blízkosti xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku, případně xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx.

12) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur xxxxxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x oddíle 6.2.

13) Xxxx patogenity je xxxxxx v xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., xxx jsou xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx dva xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Provede se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Je-li xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxx druhého xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx xxxx xxxxx testy xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx vzorek xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX je xxxxxx x oddíle 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Test FISH xx popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx popsán x oddíle 6.1.9.

10) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

11) Kultivace xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Jsou-li xx screeningových xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx negativní, xxxxxxx xx xxxxxxxx testy.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxXxxx, x kterých xx xxxxxxxxx, xx xx jedná o X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

13) Xxxx patogenity xx popsán x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Příznaky

2.1.1. Xxxxxxxx x bramboru

Rostlina xxxxxxxx. Xxxx xxxx infekce x xxxxxxx podmínkách xx rozpozná xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx x xxxx dochází x xxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx také x xxxxxxx listů xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo celé xxxxxxxx xx rychle xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx kolapsem x xxxxxxxx rostliny. Z xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo xx xxxxx sliz xxxxxxxxxx. Xxx ponoření xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx x cévních svazků xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx bramboru xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx u pupkového xxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X xxxx fázi xx infekce xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx světle xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx prstence, xx kterého xx xxxxxxxx xxxxxxxx začne xxxxxxx bledý xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz. Xxxxxxx xx cévní xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx hnědým x odumření se xxxx rozšířit xx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx vně xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x x xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, na xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx jako xxxxxxxx vnitřního xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx sekundární xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Příznaky x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx patogena (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx vzdušné xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxx straně xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx tolik nevadne, xxx na xxxxxx xx xxxx tvořit xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx bakteriální sliz.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx x X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °X xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. x xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx). Při xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx u xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, která xx stonky a xxxxxx ve vodě, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx zbarvení xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx pod xxxxx. X xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx vlákna xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, x xx x xxx xxxxxxx příznaků xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx screeningové xxxxx

Xxxxxx screeningové testy xxxxx napomoci xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použije se xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx testů:

2.2.1. Test xx xxxxx slizu xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nilskou xxxxx X xxxx xxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx vhodnými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx IF (xxx xxxxx 6.1.5.), xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), testy XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx PCR (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx izolaci

a) Xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x cévního xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx stonku xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx x malém xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx se 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx řada xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu (XX, XXXX nebo SPA; xxx dodatek 2) a/nebo Xxxxxxxxx tetrazolové xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, viz dodatek 2). Xxxxxxx se metodou xxxxxxxxxxx roztěrů. Xxxxxxxx xx případně xxxxxxxxxx xxxxx x rozředěnou xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 x pozitivní xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx perlově xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx kolonie, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve středu. Xxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXXX jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx malé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx izolátech xxxx xxxxxxx v xxxx 6.2.

3. Detekce a xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Podrobné xxxxxx pro detekci x xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx vzorků

Poznámka:

- Standardní xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx více xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx použít x xxx xxxxxx x xxxx než 200 hlízami, xxxxx xx k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx založená xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 hlíz.

- Xxxxxxx bramboru xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx použit xxx xxxxxxxx původce bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx přípravou xxxxxx

x) Xxxxxxxx vzorků xxx xxxxxxx 2-30 °X xx dobu xx 2 xxxxx xxxx testováním xx xxxxxxx xxxxxxx všech xxxxxxxx R. solanacearum.

b) Xxxxx xx omyjí. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx xxx proveden XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx patogenní DNA) x mycí prostředky xxxx každým vzorkem. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx vhodný xxxxxxx x xxxxxxx, když xx ve xxxxxxxx xxxxxx zeminy xxxx xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx xxxx PCR xxxx přímá izolace.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx na zeleninu xx xxxxxxxx slupka xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx bylo xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx vyříznou xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky se xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) hlízy x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx se xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx odděleně.

Pokud xxxx xxx vyříznuti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx vizuální xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x podezřelými příznaky xx uchovávají xx xxxx nejméně 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xx zkorkovatění (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Všechny hlízy xxxxxx hlíz s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx přílohy XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx z pupkové xxxxx se xxxxx xx xxxxxxxxxxx nádob xx jedno xxxxxxx, xxxxx jsou uzavíratelné xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx konce okamžitě. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxx se v xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; v xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx z pupkových xxxxx xx zpracují xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx množství (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 hodiny xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) extrakčního xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (např. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (např. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx xxxx Bioreba, 150mm x 250xx, sterilovaný xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx homogenizaci xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx procesu. Xxx xxxxx xxxxxx xx použijí xxxxxxx xxxxxxxxxxx nože (xxxxx) x xxxxxx. Xxx xxxxx XXX xx xxxxx zabránit xxxxxxx XXX xx nádobách xxxx x mlecím xxxxxxxxx. X testu XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx v xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx při teplotě 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7 000 x po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxxxxx xx supernatant, xxxx xx xx rozvířila xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx pro X. xxxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x 500 µx xxx xxxxxxxxxx účely. Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µl referenční xxxxxxx části a xx zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx xx xxx teplotě -16 až -24 °X (týdny) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 4-10 °X.

Xxxxxxxxx zmrazení x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx x doručením xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx byly uchovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx pro xxxxxxx XX x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx testů x optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx x příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

IF xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Testy XXX (xxx oddíl 6.1.6.)

Xxxx FISH (viz xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Biotest (xxx oddíl 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx latentních xxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vzorky. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx až 200 xxxxxxxxxx částí. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, xxx by xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Do xxxxxxxx sterilní nádoby xx xxxxx 1-2 xx dlouhé kousky xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x předpěstírny: Čistým xxxxxxxxxxxxxx nožem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 xx z xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x pole xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x každé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx spojením s xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx nejspodnější, 1 xx dlouhý xxx x každého xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx rostliny: Čistým xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1 xx xxxxxx xxx z xxxx xxxxxxx stonku xxxx xxx xxxxxx xxxx. U xxxxx xxxxxxxxxx (X. dulcamara) xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxx xx xxxxxxxx 1-2 xx díly xx xxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x vodními xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx nejméně 10 xxxxxxx xx 1 vzorkovací xxxxx xxx xxxxxx potenciální xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x období xxxxxxxx xxxx, léta x xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx zjistit po xxxx rok x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx známé xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx, Xxxxxxx dulcamara, S. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx zástupci xxxxxx Xxxxxxxxxx. Dalšími xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx hostit xxxxxxxx X. solanacearum xxxxxx 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx podmínek, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Cerastium xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx album, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Galinsoga xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx scleratus, Xxxxxxx xxx, Rumex xxx., Xxxxxx xxxx. X. xxxxxx., Tussilago farfarra x Urtica dioica.

Poznámka:

V xxxx xxxx je xxxxx xxxxxxx vizuální xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx sliz). Xxxxxxxx xxx xxxxxx s xxxxxxxx xx dá xxxxxxx atestuje xx xxxxxxxx (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Části xxxxxx xx krátce dezinfikují 70% xxxxxxxx a xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx ihned zpracují xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku (např. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (např. Xxxxx). Xxxx-xx to možné, xxxxx xx xxxxx xxxxxx x chladu xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X) na 24 xxxxx.

3.2.1.3. Po xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Další xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx bakteriální frakce xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx lze xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx 3.1.1.3. až 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx xxxxxxx xx xxx xxxxxx díly. Xxxxx díl se xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx díl se xxxxxxxx x 10-25% (x/x) xxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °C (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx testování.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

Test XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Testy XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.9.)

4. Xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx vodě

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Viz xxxxx 4.2.1., xxx jsou xxxxxxx xxxxxxxxxx postupy xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx koncentrace xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx zvětšuje xxxxxxxx xxx patogenu, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx, jestliže xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx izolační xxxx xx popsán v xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx obohacovacího xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx v oddíle 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

(8) Xxxxxxxxx xxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx saprofytická populace xxxxxxx spolehlivost xxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx sterilní xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx detekce x identifikace X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x detekci xxxxxxxx xx xxxxxxxx povrchové xxxx a xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx vody. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx v xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx selektivní xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, kterých xx xxxxxx mnohem více x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xxx v xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx níže xxxxxxx xxxxxx předpokládá xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx povrchové vody, xxxxxxxxx detekce x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor a xxxxxxx vodě xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx xxxxxx xx doporučuje testovat xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx saprofytických xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx citlivosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxx x úvahu xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx negativních xxxxxxxx. Vzhledem x xxxx, xx se xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx, je třeba xx xxxxxxxx jeho xxxxxxx xxx xxxxxxx x podobnému xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx nejspolehlivější v xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx vzorkování v xxxxx době xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx vzorkovacích xxxxxxx zvýší xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vlivů xxxxxx povětrnostních xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx x geografie vodního xxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx zředění x xxx i xxxxxxxx xxxxxxx patogenu.

- Xxxxxx vody xx xxxxxxxxx x blízkosti xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Na xxxxxxxxx vzorkovacích xxxxxxx xx xxxxxxxx vzorky xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxx použití, xxxxx xxxxx 30 xx pod hladinou x 2 x xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx vzorky x místa výtoku xxxxxxx vody. Doporučená xxxxxxxx xxxxxx xx 500 ml. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx velikost, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx nejméně 3krát xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x nichž xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx intenzivním xxxxxxxx xx vyberou xxxxxxx 3 vzorkovací xxxxx xx každé 3 xx vodního toku x xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx a xxxxx (4-10 °X) atestují xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx potřeba, xxxx xxx provedena xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Odstřeďují xx 30-50 xx xxxxx vzorky xxx 10&xxxx;000 x xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X, xxxxx se xxxxxxxx nad xxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx v 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (minimální xxxxxxxx pórů 0,45 µx) s xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 xx peletového xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tato xxxxxx xx vhodná xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx saprofytů.

Koncentrace xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx nebo x xxxxxx odpadní xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxx detekci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Viz oddíl 5.2.1., kde jsou xxxxxxx doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx PCR xxxxx xxxx popsány v xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Biotest xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

(6) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx vliv xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx spolehlivost xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx dalším xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxxxxxx čistých kultur X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Test patogenity xx popsán x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. solanacearum x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx detekční xxxxxx xxxxxxx x xxxxx oddíle je xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx ve vzorcích xxxx, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x testování xxxxxx xxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxxx brambor xxxx xxxx x xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, že xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx spolehlivosti xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx přítomnost patogenu x půdě xxxx xxxx xx xxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Nejspolehlivějším xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxx, zda xxxx xxxxxxxxxx, xxx x xxx použití xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx polní xxxx xx xx xxxx xxxxx standardními principy xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx xxxx xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 xx x hloubky 10-20 xx. Je-li xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx počet xxxxxxxx míst xx 120 x xxxxxx 0,3 xx. Xxxx xxxxxxxxxx xx uchovávají xxxxxx xxx teplotě 12-15 °X. Kal xx xxxxxxxxxx brambor x kanalizace se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx testovaného xxxx. Xxxx testováním se xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx vzorky 10-25 x xxxx xxxx kalu xx xxxxxxxx rotační xxxxxxxxx (250 xx./xxx) v 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 g xxxxxxxxxx kamínků může xxxxxxxx disperzi.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx testů xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Test xx xxxxx xxxxx xx stonku

Přítomnost R. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx výskytu: xxxxxx xx xxxxxx xxxxx nad xxxxxx xxxx. Xxx xxxxxx xx ponoří xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx. Sleduje xx, xxx se xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xx 48 hodinové xxxxxxx xx xxxxx xxxx YPGA xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Připraví xx pozitivní kontrolní xxxxxx kmenu biovaru 2 X. solanacearum x xxxxxxxx negativní xxxxxxxxx roztěr o xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3. Xxxxxxx se xxxxxxx uschnout x xxxxxx povrch xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xx roztěry xxxxxxxx.

4. Preparáty xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx mikroskopické pozorování xxxxx xxxx uvedeného xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx roztokem xxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x kohoutku. Xxxxxxxxxx xxxx xx odsaje xxxxx papírem.

c) Roztěr xx xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx jemně tekoucí xxxxx z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx se xxxxxx xxxxx papírem.

e) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxx a xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 xx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx zvětšením 600x xx 1000x x xxxxxxxx objektivu xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx se, xxx se xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx oranžová xxxxxxxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, zda xxxx xxxxxxx intracelulární a xxx xx morfologie xxxxx typická xxx X. solanacearum.

Test xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx černi X x 70% xxxxxxx a xxxxxxxx xx 10 minut xxx pokojové xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x krátce xx opláchne jemně xxxxxxx vodou x xxxxxxxx x odsaje xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Sklíčka xx ponoří krátce xx xxxxxx a xxxxxx se savým xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx zdraví xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx v xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xxxxxx inkubovat xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx je zdraví xxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx nezbytná bezpečnostní xxxxxxxx a xxxxxxxx x digestoři.

e) Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx, odsaje xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx krycí sklíčko.

f) Xxxxxx se obarvený xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx imersí x xxx zvětšení 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x buňkách R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx x pletiv x xxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz dodatek 3) xxxxxxxxxx příslušnými obarvenými xxxxxxxxxx, např. xxxxxxxxx xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xxxx obarvenými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Při použití xxxxxxxx xxxxxxxxxx vybavení (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx je xxxxxx následující:

a) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx každé xxxxx) na okénku xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Pozoruje xx, xxx xx x xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxxxx míchání xx xxxx 15 sekund xxxxxx aglutinace.

6.1.4. Selektivní xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx se xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. solanacearum na 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxx, které xxxx xxxxxxx testovány s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx validovaná selektivní xxxxx půda, xxxx. XXXX (ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx bakterií xxxxxxxxx xx xxxxx půdě xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Dále, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx atypickou morfologii, xxxxxxxx Xxxxxxx misky xxxx přeplněny xxxx xxxx rovněž xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx být xxxxxx xxxxxxxxx znovu pomocí xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx přípravených extraktů xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx citlivost xxxxxxx xxxxx metodou xxxx xxxxx vysoká. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx i xxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxxx x glycerolu xxx xxxxxxx xx -68 do -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx desetinné xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ cfu/ml xxxxxxxxxxxx xxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx možné xxxxxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky zcela xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

X každé xxxx xxxxxxxxxx šarže xxxxxxxxxx xxxxx půdy xx xxxx být xxxx xxxxx použitím x xxxxxxxxx testování xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx patogenu. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx testuje xxxx způsobem jako xxxxxx (vzorky).

1. Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx zajistit, aby xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µx xxxxxxxx vzorku xx 1 misku xxx xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx xx nechají xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 hodinách se xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxx se xxxxxxx kontrola xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx na xxxxx xxxx XXXX xxxx xxxxxx bílé, ploché, xxxxxxxxxxxx a fluidní x xx 3 xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx růžově xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx se xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx být xxxx, kruhové, zcela xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx tvořících xxxxxxx.

3. Předpokládané xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxx zřeďování na xxxxxxxxxxx živnou půdu., xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Kultury xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vodě (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx teplotě x xxxxx nebo xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx -68 až -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Provede se xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) x xxxx patogenity (xxx xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx selektivní xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na selektivní xxxxx xx negativní, xxxxxxxx xx 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx nalezeny xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx typické xxx R. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, xx nedošlo x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou nalezeny xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže jsou xxxxxxxxx podezřelé xxxxxxx X. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x extraktech xx xxxxxx x zvýšení xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx i xx zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxx (1:100). Obohacení R. xxxxxxxxxxxx však xxxx xxx xxxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxxxx. X tohoto xxxxxx xxxx být xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx toho, xxxxxxx xxxx dojít x xxxxxxx xxxxxxxx sérologicky xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, se xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xx přenese 100 xx extraktu xx xxxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxx bujónu (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX může xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 ml xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx při xxxxxxx 27 až 30 °X v xxxxxxx xxxx xxxxxxxx kultuře x uvolněnými xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx PCR xx xxxxx dobře xxxxxxxx.

4. S xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem jako xx vzorky ve xxxx xxxxxxxxx testech.

Poznámka:

Očekává-li xx inhibice obohacení X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx obohacením extraktů xx vzorků xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx IF jako xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx test IF xxxx hlavní a xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx izolace, XXX xxxx FISH. Jestliže xx test XX xxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx úplná.

Poznámka:

Použije se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx novou xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (FITC) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx polyklonální xxxxxxxx xxxx všechna xxxx xX nejméně 1:2 000. Xxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x pracovních xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx titr.

Test xx měl být xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx je xx nutné, může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích uchovaných xxx xxxxxxx - 68 až - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx při 7000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx to xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx sklíčka xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx referenčním xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X, x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (uchovávané xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 až 24 °X) by xx xxxx xxxxx možností xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx test, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x 10 xxxxxx x průměrem xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem jako xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Připraví xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx postupů:

i) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx odměřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx je vhodné xxx průměr okénka 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx větší x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx okénka.

Následně xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x řadě. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx jako xxxxxxxx nebo xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná ředění (1/10, 1/100) resuspendované xxxxxx v peletovém xxxxx. Napipetuje xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15 µl je xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x většího xxxxxx je množství xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované pelety xxx každé ředění xx xxxx okének. Xxxxx xxxx může xxx použita jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Bakteriální xxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60 °X), plamenem, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx konkrétních instrukcí xx dodavatele protilátek.

Pokud xx potřeba, fixovaná xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx zmrazeném xxxxx v suchém xxxx po xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (maximálně 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx testováním.

6.1.5.3. Postup xX

x) Podle přípravy xxxxxxx xx xxxx x xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. První xxxxx xx měla mít 1/2 xxxxx (T/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), titr (T) x xxxxxxxxxxx titru (2X).

xx) Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x xxxx. 5.1.ii):

Připraví xx xxxxxxxx ředění (XX) xxxxxxxxxx x xxxxx IF. Pracovní xxxxxx ovlivňuje přesnost.

Obrázek 1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx podle xxxx. 6.1.5.1.i) a 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx sklíčka na xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.ii)

1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx inkubují na xxxxxx xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 xxxxx při pokojové xxxxxxx (18-25 °C).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx všech xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x pufru IF Xxxxx (dodatek 4) a xxxxxxxx v xxxxx XX. Xx třeba xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx přenosu kapiček, xxxxx by xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx jemným xxxxxxxx.

4. Sklíčka se xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xx pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx xxxxxxxxx titr. Xxxxxxxx konjugátu naneseného xx okének xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se inkubují xxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xx dobu 30 minut při xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx ze xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx a xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Opatrně xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Napipetuje xx 5-10 ul 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx (dodatek 4) nebo xxxxxxxx krycí xxxxxxxx xx každého okénka x xxxxxxx se xxxxx sklíčko.

6.1.5.4. Vyhodnocení XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx testovací xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx s xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní vzorek. Xxxxx musí být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxxx protilátky xxxx xxxxxxxxx ředění. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x charakteristickou xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x testovacích okéncích xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředění protilátky xxxxxx xxxx lepší. Xxxxx s neúplným xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx kontaminace xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, když xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx x pupkové xxxxx xxxxxxxx a xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou morfologií x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. solanacearum.

4. Xxxxx se v xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxx morfologií xx odhadne xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Výsledek XX je xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Vzorek je xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx další testování.

ii) Xxxxxxxx IF testu xx negativní xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xx považuje xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx se xxxx PCR xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test x výsledek je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, a xxxx izolace xxxx XX. Jestliže xx XXX použita xxxx xxxxx screeningový test x xx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx analýza úplná.

Využití xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx doporučuje jen xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ až 10⁴ buněk R. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx do xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány xxxx negativní. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijí xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx PCR (viz dodatek 6). Pokud xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx zkušenými xxxxxxxxx x laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S negativními xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx se xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x konečnými xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x přenosu XXX.

XXX xxxx xx měl xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. solanacearum s xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx bakterií x XXX ze xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx části xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, do xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, při XXX použít xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravují xx xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxxxx odděleném xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx z umytých xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx xxx tento xxxx, jsou xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx popsané pozitivní x negativní xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx cílové XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jsou x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx odstraňující xxxxxxxxxx XXX x jiných xxxxxxxxxx reakcí x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx vzorku. Následující xxxxxx byla xxxxxxxxxxxxxx xxx použití se xxxxxxxxxxx metodami XXX xxxxxxxxx v dodatku. 6.

a) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µl xxxxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (pH 8,0), 1 mM XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx se 100 µl xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx termobloku nebo xxxxx xxxxx x xxxxxxxx 95 °C xx 10 min.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx vloží xx 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX XxxxXXx, pH 8,0) x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µl xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 65 °X xx dobu 30 xxxxx.

6. Xxxxx se 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, pokud xxxxxx xxxxxxx být stejnoměrně xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx fází x xxxxxxxxx mezifáze se xxxx odstřeďuje při 15&xxxx;000 x po xxxx 20 min. xxx xxxxxxx 4 °X.

9. Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx se xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx při xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx se etanol x xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °C) x promíchá se xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13. Odstřeďuje xx při 15&xxxx;000 x po dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx se nechá xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x DNA xxxxxxx.

15. Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx XX x nechá xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Skladuje xx xxx xxxxxxx - 20 °C xx xx použití xxx XXX.

17. Jakákoliv bílá xxxxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx DNA xx použije xxx xxxx XXX.

x) Jiné xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Plant Xxx, xx xx mohly xxxxxx, xxxxx by xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorky x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx schválených protokolů (6.1.6). Připraví se xxxxxxxxxxxxx xxxxxx vzorku xxxxxxxx DNA (1:10 xx sterilní xxxx).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx směs pro XXX x xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx protokol XXX, který xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Xx sterilních XXX xxxxxxxxxxxxx se xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX na 25 µx PCR xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (viz dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxx xxxxx XX xxxx byl xxx, xxxxx xxx xxxxxx xx směsi XXX xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx téhož xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x spustí xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx produktu PCR

1. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µl xxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA x xxxxxxx xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Tris-acetát-EDTA (TAE) xxxxx (dodatek 6) při 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx vhodný XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx xx proužky XXX xxxxxxxxx x ethidiumbromidu (0,5 mg/l) xx xxxx 30-60 minut xx xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

3. V obarveném x XX (xxxxxx xxxxxx délky xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx hledají xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x očekávané velikosti x výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx nálezů/případů xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx shodným restrikčním xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx rozdělí xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x štěpenou xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx PCR xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX specifický xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxx x xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx, ale xx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s interními xxxxxxxxxxx primery specifickými xxx rostlinu: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx je xxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (případně) xxxxx, xx předpokladu, že xxxx xxxxxxxxxxxx u xxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku lze xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx primerů XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx mít podezření xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx. X multiplexních xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx kontrolami XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X případě, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x jednoho xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, je xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX xxxx x je xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX xxxx. Když se XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx vyšetřovací xxxx a xx xxxxxxxxx, je x xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxx R. solanacearum (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx X xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující postup xx xxx xxx xxxxx možno proveden x čerstvě připravenými xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x extraktem, xxxxx xxx uchován x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X nebo - 68 až - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx R. solanacearum x xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (např. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857, xxx dodatek 3) x 0,01X fosfátovém xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx xxxxxxx. Připraví xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivními kontrolními xxxxxx homologického xxxxx xxxx xxxxxx referenčního xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x dodatku 3 X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx oligosond xxxxxxxxx XXXX poskytuje xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx přítomné xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xxxxx, xx uveden x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx bramborového extraktu

Následující xxxxxxxx vychází z Xxxxxxxxx et al. (1998).

1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx roztok (xxx dodatek 7).

2. Napipetuje xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xx xxxx 7 minut xx 7 000 g.

3. Xxxxxxxx se supernatant x xxxxxxxx xx xxxxxx xx 200 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Protřepe xx x xxxxxxxx 1 hodinu x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx xxx 7 000 g, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 okénkové sklíčko, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx jedno xxxxxxx, x xx xxxxxxxx a zředěný 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xxxxxxx 1 objemového množství 96 % etanolu. X případě, že xx třeba XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx odstředěním x přidá xx xxxxxx množství 0,01 XX (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Rozmístění xx sklíčku XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (nebo v xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx plamenem.

V této xxxx xx možné xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx měla být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Hybridizace

1. Xxxxxxxxxxx xx buňky x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx xx vzduchem x xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx vlhká xxxxxxxxx komora xxxxxxxxx xxx vzduchotěsného xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx (1x hybmix, dodatek 7). Xxxx inkubací xx ohřeje box x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (dodatek 7) na 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; viz xxx. 7.1) xx xxxxxx sklíčku, přičemž xxx středová xxxxxx (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx krycí xxxxxxx (24 x 24 xx) na xxxxx x poslední 4 xxxxxx, a xx xxx, aby xxx xx nevnikl xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx xx předem xxxxxxx xxxxx komory x nechá xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx v troubě xxx xxxxxxx 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx se 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Milli X), 1 l 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx x molekulární xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 xx vody x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Nechají xx xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx x podložní xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 minut x xxxxxxx x 1 x hybmixem xxx xxxxxxx 45°C.

8. Xxxxx sklíček se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx ponoří do XXX (xxxx. Milli X xxxxx) x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx povrchu xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx se 5-10 µl krycího xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx každého xxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx velkým xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630 x nebo 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx vhodným pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx buňky X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnává xx xxxxxxx morfologie x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (odst. 6.1.7) musí xxx xxxxxxxxx, pokud je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx průměry v xxxxxxx xxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Hledají xx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx x pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx nejsou zcela xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx v xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontaminaci musí xxx test xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x případě, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Specifičnost xxxxx FISH s xxxxx nese několik xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx x xxxxxxxxxxxx hlíz x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx fluorescenčních buněk xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx reakci xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, x když xxxxxx xxxx častěji než x xxxxx XX.

5. X xxxxx se xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx a morfologií.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXX

x) Výsledky XXXX xxxxx jsou xxxxxx, xxxxx jsou xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s velikostí x morfologií xxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx negativních kontrolách. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 mikroskopovém xxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii) Výsledek XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx typické xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Princip

Testy XXXXX lze xxxxxx xxxxx jako volitelný xxxx xxxxx testů XX, XXX xxxx XXXX pro jeho xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x použití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povinné. Obohacení xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx se xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx kvůli konkurenci xxxxxx organismů xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Doporučuje xx xxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x optimální xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x použití xxxxxxxx xxxxxxxxxx konjugátů xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx měly být xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx ředění, xxxxx xx blízké xxxx xxxxxx jakou xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml homologického xxxxx X. solanacearum.

Vzorek, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx bakterií bez xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx roztoku fosfátového xxxxx (XXX) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx xxxxxxx xxxxxxxxx podíly xxxxxxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk xx 1 xx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. kmen NCPPB 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 2 X x X). Xxx xxxxxxxx výsledků xx každé destičce xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ buněk xx 1 xx x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxx xxx na xxxxxxxxxxxx destičce xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x negativní xxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xxx tento xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx vzorku(ů).

Validované xxxx dva protokoly XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Robinson Xxxxx xx al., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx vzorkového xxxxxxxx. (Xxxxxxx na 100 °X xx 4 xxxxxx xx vodní xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxxxx případech xxxxxxxxx xxxxx nespecifických xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx stejné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxx xx promíchá.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx xxxxx jamky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) x nechá xx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx teplotě 37 °X xxxx 14 - 18 h xxx xxxxxxx 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx z jamek. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx roztok xx xxxxx x xxxxx xxxxxxx 5 minut.

5) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (obvykle xxxxxxxxxxx koncentrace, než xx xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx jamky x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Roztok xxxxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx alkalické xxxxxxxxx x blokačním xxxxx. Xxxxx xx 100 µl xx xxxxx xxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37 °C.

9) Xxxxxxxx xx vylije x xxxxx x xxxxx xx vymyjí xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 405 xx v xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx polyklonálního imunoglobulinu x uhličitanovém xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx do xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 hodin xxxx 4 ° X xx xxxx 16 xxxxx.

2) Jamky xx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx se 190 µx extraktu xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxx destičce. Nechá xx inkubovat 16 xxxxx při xxxxxxx 4 °C.

3) Jamky xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Připraví se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xxxxx se 190 µx do každé xxxxx a xxxxx xxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °X.

5) Jamky xx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx ředění xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Xxxxx se 190 µx do xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Přidá xx 200 µx xx xxxxx jamky x xxxxxxxx xx x xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx optické hustoty (XX) x xxxxx xx stejnými xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxxx kontrolního vzorku, xxxxx xxxxxxx hodnoty XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx větší xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx substrátem) x xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH získané x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx OH x xxxxx se xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH x negativním xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx XX ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx hodnot x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxx xxxxx proveden xxxxxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že došlo x vzájemné xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx vázání xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit reprodukovatelnou xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx očekávat xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx ze xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 xx - 86 °C.

Následující xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 testovacích rostlin xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx kultivaru s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx laboratoře) ve xxxx třech pravých xxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Podrobnosti xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx xx použije xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Beauty xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), ale xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx pomaleji. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx použít xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx se 100 µx xxxxxxxx xx vzorku mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx stříkačky x xxxxxxxx jehlou (ne xxxx xxx 23G). Xxxxxx xx rozdělí xxxx xxxxxxxxx rostliny.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x pipetou xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxx xxxxxxxxx listy x prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxx xxx asi 1 xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx xxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx nainokulujte 5 xxxxxxx xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx, připravenou xx 48 hodinové xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní kontrolní xxxxxx, a xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx růst v xxxxxxxxxxx zařízení 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °X a xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxx nedostatku xxxx. Xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx zcela xxxxxxxxxx místech xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx přísně xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x různých xxxxxx xx dobu xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxxxx x xxxxx ostatních xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se test XX/XXX/xxxxxxx na složeném xxxxxx ze xxxxxxxx xxxxxx dlouhých 1 xx z každé xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (bod 6.2.).

Interpretace xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx výsledky xxxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny vykazují xxxxxxx xxxxxxxx, bakterie xxxxx xxx z xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nevykazují xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx bakteriemi X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx organismus zjištěn x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx testy

Identifikují xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx referenční xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx (viz dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx identifikační testy

Určují xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které jsou xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx chybí x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Klement xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxx XXX +

Oxidačně xxxxxxxxxxx xxxx O+/F-

Katalázová xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx test xxxxx Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Růst xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Růst x 2% XxXx -

Arginin-dihydrolázová xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Produkce xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk na 1 xx v xxxxx IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Použije xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx IF xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 identifikačních xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx metody xxxx xxxxxxxxxxx test.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Provede xx xxxx XXXXX xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. solanacearum.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx hodnota xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx kultury xx nejméně xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx PCR

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx pure xxxxx).

6.2.4.2. Ohřeje xx 100 µx buněčné xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x ohřívacím xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °X 4 xxxxxx. Vzorky xxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx - 16 xx - 24 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx se xxxxxxxxx postupy PCR x amplifikaci xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (např. Seal xx xx. (1993); Xxxxxxx a Maiss (2000); Pastrik et xx. (2002); Xxxxxxxx xx xx. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Xxxxxx et xx. (1999).

6.2.4.4. Identifikace xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Použije xx xxxxxx XXXX (6.1.7) x xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx specifickými xxx X. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x kultury x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX je xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jako profil xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3XX poukazuje xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro každý xxxx případ xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X každého xxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxx případně xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (viz dodatek 3).

6.2.7.1. Stanovení biovaru

R. xxxxxxxxxxxx xxxxx biovary xxxxxx se schopností xxxxxxx x/xxxx oxidace xxx disacharidů x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx et xx., 1990). Xxxxx půda xxx test biovaru xx xxxxxxx v dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx-xx xxxxx půda xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 jamkami (200 µl xx 1 xxxxx), zbarvení xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx zelené xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx identifikace xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, mezi něž xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů XXXX (Xxxx et xx., 1989).

2. Repetitivní xxxxxxxxx XXX s xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Xxxxx xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Wolf xx xx., 1998).

6.2.7.3. Metody XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx et xx, 2002; viz dodatek 6) xxx použít k xxxxxxxxxxxx xxxxx patřících xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X a 2X) X. solanacearum, xxx bylo původně xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989) a xxxxxxxxxxxx 16X rDNA (Taghavi xx xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (test xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum x k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx identifikovaných xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx o xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x příslušný xxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx fázi 3 xxxxxxx xxxxx (xxx odst. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx se nechají xxxxxxxxx xx 2 xxxxx xxx teplotě 25-28 °X x xxxxxx xxxxxxxxx vzdušné xxxxxxxx s přiměřeným xxxxxxxxx, bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. X čistých xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx být xxxxxxxxxx xxxx patogenní xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx příznaky xxxxxxx x/xxxx epinastie, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx segmentu xx xxxxxx xxx 2 xx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x malém xxxxxxxx sterilní destilované xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx se provede xxxxxxxxxx xxxxxxxx pokud xxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx půdě (dodatek 2). Xx inkubaci 48 xx 72 hodin xxx teplotě 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx typických xxxxxxx xxx X. solanacearum.

Xxxxxxx 2

a) Xxxxx půdy pro xxxxxxx a xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx) 23,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Difco) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 5,0 x

X(+) Glukóza (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Difco) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Difco) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx a sterilují x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx na 50 °C x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), až xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 mg xx xxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx puch XXXX (Englebrecht 1994 xx znění Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 g

Bacto-Pepton (Xxxxx) 10,0 g

Glycerol 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Difco) (xxx xxxx. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx xxxxxxx sterilizovaný xxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx se xxxxxxx stanovená konečná xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 mg)/l

Bacitracin (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (přibližně 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Signa X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx X-3032) 825 U (xxxxxxxxx 0,5 mg)/l

2,3,5-trifenyltetrazolium xxxxxxx (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Použití xxxxxx xxx výše xxxxxxxxx xxxxxxxx může xxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Bacto-Agar (Xxxxx) xxxx xxx použit Xxxxx Xxxx #1. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx růst R. xxxxxxxxxxxx pomalejší, ale xxxx xx také xxxxxx xxxx konkurenčních xxxxxxxxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x 1-2 xxx xxxx x červené xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx než xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 U/l xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx solanacearum.

Roztoky xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x skladují xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxx x xxxx xx spotřebovat xx 1 měsíce. Xxxxx x xxxxxx xx měly xxx xxxx použitím zbaveny xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Nutno xxxxxxxx xxxxxxxxxx vysušení xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx měla xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx půdy xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultury X. xxxxxxxxxxxx na xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 xx 5 xxxxx xxx teplotě 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxx půdu XXXX, ale xxxxxxx xx Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid.

Upravená xxxxx půda Wilbrink (Xxxxxx xx al., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 g

K₂HPO₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx x ochladí xx xx 50 °X. Přidá xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx roztok xxxx xxx živnou xxxx SMSA.

Dodatek 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' x xxxxxxxxx kontrole (xxxxxxx 1) xxxx během xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx kmeny xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xx xxxxxx x těchto xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx rostlin (XXXXX), Xxxxxxxx vědecká xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx ochrany xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Francouzská sbírka xxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxx (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Referenční xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. solanacearum

Poznámka:

Spolehlivost xxxx uvedených xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxx, xx xxxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx panel XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx detekčních xxxxx

x) Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrole xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ x 10⁴ až 10⁶ xxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x PCR xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, nejsou xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x testech xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx suspense xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (kmen NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx sérologických xxxxx.

X. Xxxxxxxx pozitivních a xxxxxxxxxxx kontrol pro xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48hodinová xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) xx XXXX xxxxx xxxx a suspenduje xx x 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx získala xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx tvořících xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx xx jí xxxxxxx jemně xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 nm.

Odebere xx xxxx z xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x které xx ví, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx výše uvedeným xxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx x 10 ml. Xxxxxxxx xx 10 sterilních xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx x 900 µx resuspendované xxxxxx. Xxxxxxx se 100 µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx kontrolní vzorky. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky. Xxxxxxxxxxxxx musí být xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx části x 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx nejprve potvrzeny xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX a XXXX xxxxx xx xxxxxxx test xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX xxxx být X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx v 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx kontrol x xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Pufry xxx xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (bezvodý) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, zkontroluje xX x sterilizuje x autoklávu při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx následující xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx pufr xx používá xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x výkrojků x pupkových částí xxxxxxxxxxxx hlíz poté, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx pelety.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX test

Pufr xxx XX (10 xX xxxxxxxxx pufr xx fyziologickém roztoku (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá x ředění protilátek.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx sklíček.

Přidá xx 0,1 % Xxxxx 20 k xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx pufr x xxxxxxxxx, pH 7,6

Xxxxx pufr se xxxxxxx jako krycí xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xx IF xxxxx x zvýšení xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Vector Xxxxxxxxxxxx) xxxx Citifluor® (Xxxxx).

3. Xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1. Dvojnásobný xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, pH 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx obsahuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx molekul, xx xxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx fosfátem (10 x PBS), xX 7,4

NaCI 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 g

Na₂HPO₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 g

Destilovaná voda 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 ml

10 %Tween 20 5 ml

Destilovaná xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Tween 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 ml

3.5. Roztok xxx substrát alkalické xxxxxxxxx, xX 9,8

Diethanolamin 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 xx

Xxxxxxxx se x xxxxxxxxxxxxxx HCl xx xxxxxx pH xx 9,8.

Xxxxxx se xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 g MgCI₂.

Rozpustí xx xxx 5 xx xxxxxxxx fosfatázového xxxxxxxxx (Sigma) v 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX CO₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1 000 xx

Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxxxx pH 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (PBS) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2H₂O 4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 xx

4.3. PBS-Tween

10xPBS 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 ml

Destilovaná xxxx 950 ml

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Diethanolamin 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x nastaví xx xxxxxxx pH 9,8 xxxxxxxxxxxxxx HCl.

Dodatek 5

1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx mikroskopického xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = plocha xxxxxxx pole na xxxxxxx x xxxx xxxxxx a

s - xxxxxx pole objektivu.

s = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx charakteristických fluoreskujících xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X =C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nejméně 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer OLI-1 : 5'-XXX XXX XXX XXX CTA XXX GCC-3'

Reverzní xxxxxx X-2: 5'-CCC ACT XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu templátové XXX R. solanacearum = 288 bp

1.2. Xxxxxxx xxxx PCR

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede se xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx xxx 96 °X (denaturace templátové XXX)

35 xxxxx: ii) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 10 xxxxx při 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) ponechá xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx pro použití xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) x xx).

1.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. solanacearum XXX xxxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Ps-1: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx ggg x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx ttg xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx DNA = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx PCR

Reagencie	Množství v xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μl	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μl
Celkové množství	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 s xxxxxxxxxxx Gibco Taq Xxxxxxxxxx. Perkin Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 xxxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx možná xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x iv).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx X xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxx 457 xx x 96 xx.

3. Xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxx kontrolou (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX GCA XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX AGT XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxx primer NS-5-F: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx primerNS-6-R: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX TAT XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu interní xxxxxxxx XXX 18S xXXX = 310 xx (sada primerů XX).

3.2. Reakční směs XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx při 58 °X (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) a xx).

3.4. Xxxxxxxxxx enzymová analýzy xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x DNA X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Bsm 1 xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx době 30 xxxxx při xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx biovar R. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-ACT AAC XXX GCA XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-CCC XXX XXX XXX XXX GAC X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX XXX GCA XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx templátové XXX X. solanacearum:

s Rs-1-F/Rs-1-R = 718 bp

s Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

x) Protokol PCR xxxxxxxxxx pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- x biovary 3/4/5:

1 cyklus: x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 cyklů: xx) 30 sekund xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx při 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx kopie)

1 cyklus: x) 5 minut xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx při teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) a xx).

4.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X a Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (např. Mva 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x DNA X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X xxxxxx žádná xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) voda 50 xx

5.2. Nanášecí xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µl

Destilovaná (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (sodná xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx na 1 X.

Xxxx komerčně xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-ggc xxx xxx xxx gct xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx cgt xxx xxx-3'

2. Fixační xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 ml xxxxxxxxxxx xxxxx vody (xxxx. Ultra xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx přibližně 60 °X x xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 kapek 1X NaOH x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 M (XX; xX 7,0) x 5 kapek XXx 1X. Xxxxxxxxxxx xx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxx a x xxxxxxx potřeby se xxxxxx xxxxxx HCl xxxx XxXX. [UPOZORNĚNÍ: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Přefiltruje xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µm x xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X do dalšího xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 M

Tris-HCI 60 xX (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx až x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (SDS) 0,01 %

Formamid 30 %

Xxxxx EUB 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 xxxx XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxxx v xxxxxxx 1. Xxx každé xxxxxxx (xxxxxxxxxx dvojmo 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µx hybridizačního roztoku. XXXXXXXXXX: FORMAMID XX XXXXX JEDOVATÝ, NUTNO XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXX POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Doporučená xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Poznámka:

Všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx oligosondy xx xxxxxxxxxx x xxxxx při teplotě -20 °X. Xxxxx xxxxxxx se chrání xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo elektrickým xxxxxxx.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Lycopersicon xxxxxxxxxx) nebo xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx děložními xxxxxx (10 až 14 xxx) se xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx se xxxx pěstovat ve xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx odrůda xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx internetová xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

LITERATURA

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx enviromnental xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Anon. 1998. Xxxxxxx Directive 98/57/XX xx 20 Xxxx 1998 xx xxx control of Xxxxxxxxx solanacearum (Smith) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofthe Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., A.C. Xx Roux, X. Xxxx, P. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx of xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx to xxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Enzyme-Linked Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx a Specific Xxxxxxxxxx Antibody xxx xxxxxxxxx Detection of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in Xxxxxxxxxxxx Potato Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx fragment xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx DNA xxxxxx xxxx specify xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. xxx Stead, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx of xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx potato xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, M.C. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx xxx isolation and xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Newsletter 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Centre xxx xxxxxxxxxxxxx Agricultural Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx. Journal of Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, A.C., Xx-Xxxxxxx, X.X., Nydegger, X. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx biovars xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Ito, X., X. Ushijima, X. Fujii, S. Xxxxxx, X. Kaleya-iwaki, X. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx viable xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx a semi-selective xxxxxx xxx x XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) A xxxxxxxxx xxxxxx for Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxxxxx xxxxxx tubers xxx xxxx xxxx xx its sensitivity xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, J.D. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Systematic and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Xxxxxx, A. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx solanacearum to xxxxxx appearance xx x xxxxxxxxxxx medium. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx Z.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Methods xx Phytobacteriology. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx of xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Ltd., Oxford. 216 xx.

16. Lopez, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Cubero, X., Vicedo, X., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx enricliment improves xxxxxxxxx isolation, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. In: H.W. Xxxxx et xx., (xxx). Xxxxxx Academic Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx De Bruijn, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx fingerprints of xxxxxxxxxxxxxxx Xanthomonas xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx with xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Bruijn, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx to xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. vesicatoria. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., F. Xxxxxx, X. Holloway, X.-X Xxxx, T.-H Xx, R. Maghirang, X. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, X. Krishnapillai, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxxx. 1997. X novel xxxxxx for development xx xxxxxxx and xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx PCR xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx). Xx Pac. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. J. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Elphinstone, X.X. and Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx of 16X-23X xxxxxxxxx intergenic xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. European Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, A., Xxxxx, X., Elphinstone, J.G. xxx Xxxxx, S.M.D. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx xxxxx xx bacterial xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, W. 2001. Xxxxxxxxxx guide xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Seal, S.E., X.X. Xxxxxxx, J.P.W. Xxxxx, and X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx xxxx, Xxxxxxxxxxx pickettii xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx partial 16X xXXX sequencing: xxxxxxxxxxxx xx oligonucleotide xxxxxxx xxx xxxxxxxxx detection xx xxxxxxxxxx chain xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Genetic xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Stead, D.E. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx other Pseudomonas xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. lnternational Xxxxxxx xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Hayward, X.X., Sly, XX, Xxxxx, M. 1996. Xxxxxxxxx of xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx of xxxxxxx of Burkholderia xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxxx bacterium xx xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX gene xxxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Van Xxx Xxxx, J.M., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Trigalet, A., Xxxxxxxxx, X. 1998. Xxxxxxx diversity of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Race 3 xx Western Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx AFLP, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Allen, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx autonated xxx xxxxxxxxxxxx flourogenic 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx and X.X.X. Akkennans. 1998. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx rot xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx hybridization xxxx 23s xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Environ. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.