Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx stanoví xxxxx §88 odst. 2 zákona č. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "xxxxx") k xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. i) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx úpravy

Tato xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx uplatňují na xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. subsp. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx et Xxxxxxxx) Davis et xx., původci xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, aby xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx výskytu xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Pojmy

Pro xxxxx xxxx xxxxxxxx xx rozumí:

a) xxxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis (Xxxxx) Davis et xx. xxx. sepedonicus (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Xxxxx et xx.,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - bakterie Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx al.,

c) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. původce xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x výjimkou xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), u xxxxx byla xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx tuberosum X.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, xxxxx xxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx xxxxx x xxxxx, lilek potměchuť (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x ostatní xxxxxxxx x xxxxxx lilkovitých (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx možnost xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé hniloby x xxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx, x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a x xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx původce hnědé xxxxxxx x rostlině, xxxxxxx, xxxxxx, zařízení, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx rozšířením xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé hniloby - podezření x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx pozemku, x xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

i) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx vymezené Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx správou (dále xxx "xxxxxxxxxxxxxxxx správa"), xx xxxxx se xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxx potvrzení xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx správou, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 zákona x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxxxxx hostitelské xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx vegetativním xxxxxxxx x jedné xxxxxxx partie; xxxxxx xx za:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx množením x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vyrostly xx xxxxxx partie xxxxx,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxxxxxx klonově xxxxxxxxx xxxxxxx, které x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx každoročně x souladu s §10 odst. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx průzkum xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x původce xxxxx xxxxxxx v rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 xxxx. 2,

x) namátkově xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Evropské xxxx (xxxx jen "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx nesadbových xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) všechny partie xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx vymezené xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx průzkumu xx xxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx podléhají xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx území xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x).

(4) Xxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx třetích xxxx x xxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru²⁾ x xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx partie bramboru xxxxxx x xxxxxx xx třetích zemí.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) vodní xxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxx odpady x xxxxxx podniků.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx výskytu xxxxxxx hnědé hniloby xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx používané x xxxxxxx partií xxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx pocházejí.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxxxxxx

x) laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx uvedených x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x), xxxxxxxx 3 a x xxxxxxxx 4 xxxx. x) z xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxxx x odstavci 4 písm. a) x xxxxxxxxxx partií,

b) xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxxxxxxx xxxx, v xxxxxxxxx nebo xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx testováním vzorků xxxx bramboru, x xxxxxxxxx uvedených x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x),

x) xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x následným xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx napadení xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxx uvedených x odstavci 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx vody, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx vegetace x xxxxxxx xxxxxxxx x odstavci 5 xxxx. x) a x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx prohlídky xxxxxx x počet, xxxxx, xxxxxxx x dobu xxxxxx vzorků xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7, rozsah xxxxxx xxxxxxxx x způsob xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stanovuje x xxxxxxx s §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zásad x biologie xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx anebo xx xxxx rizika xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce hnědé xxxxxxx x zveřejní xx Xxxxxxxx Státní xxxxxxxxxxxxxxxx správy (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Testování xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x určení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v souladu x §10 xxxx. 1 xxxxxx a xxxxxxxxxxx xx Věstníku.

(9) X průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx rovněž xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx osobou, xxxxxxxxx x této činnosti Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §72 xxxx. 5 xxxx. i) xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx na základě xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, že xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx fyzické xxxxx, která xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxx nebo xx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx x xxxxxxx také Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx o xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x souladu x §10 xxxx. 5 xxxxxx xxxxxx ročně x rozsahu xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx xx účelem zajištění xxxxxxxxxxx úrovně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx provedených xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje rostlinolékařská xxxxxx jednou ročně xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx, x xx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx pro výsadbu xx xxxxxxxxx množitele, xx 1. září, x ostatních xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx o xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx vztahují vždy x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx

x) rostlinolékařskou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vizuálních xxxxxxxx xxxxxxxx těmito xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X číslo 1 a xxxxxx XX, nebo

b) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx pod xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx podezření z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx rostlinolékařská xxxxxx x rámci xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 zákona x xxxxxxxxxx právního xxxxxxxx³⁾ zajistí xxxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx, x to způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx dodržení xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx xx účelem xxxxxxxx původu xxxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx byly xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx opatření xxx dohledem rostlinolékařské xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x

x) nařídí xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx odhadovaného xxxxxx xxxxxxx možného xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx x xxxxxxx, popřípadě x mimo xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx zamoření xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, x případě původce xxxxx hniloby, povrchových xxx xxxxxxx x xxxxxx členského xxxxx xxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx úřední rostlinolékařské xxxxxx příslušného xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx týkající xx xxxxxx xxxxxxxxx x bude x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx o xxxxxxxxx x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby, které xxxx mít původ x Xxxxx republice xxxx které může Xxxxxx republiku ohrozit, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx rostlinolékařská správa xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce hnědé xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx testování xxxxxxxxxx xxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 potvrdí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxx správa v xxxxxxx s §76 xxxx. 2 zákona x s přihlédnutím x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx na trh x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

a) xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx jiné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x které xxxxxx xx xxxxx s xxxxxxxx rostlinným xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx odebrán, x xxxxx nebo místa xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx xx možná xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x pozemek, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx šetření zaměřené xx xxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx zamoření a xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x souladu x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 včetně xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx kontaktu, x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxx jiné xxxxxxxxxxx xxxxx xx zamořeným xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx podle xxxxxxx x),

x) vymezí karanténní xxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx předmětů xxxx objektů xxxxx xxxxxxx x) a xxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx x ustanovením xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx vodu xx xxxxxxxx na zpracování x xxxxxx xxxxxxx x x ohledem xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x čeledi xxxxxxxxxxx x doprovodné xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx by xxx zavlažování, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx pěstování xxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxx správa

a) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx testování xxxxxxxxxx vzorků povrchových xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx úředního xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) povrchovou xxxx, x xxx xxxx xxxxxxxxx vzorky, xx xxxxxxxxx,

x) vymezí xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx označení xxxxxxxxx xxxx za zamořenou xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx stanovení xxxxxxx pravděpodobného zamoření xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx možného xxxxxxxxx xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Komisi x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x), x xxxxx podrobnosti x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx podle odstavce 1 xxxx. c), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x xxxxx oznámení xxxx důvěrné.

(4) Xxxxx xxxx členský xxxx xxxxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, zásilce xxxxx xxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 a 2 označí zamořené xxxxxxxx x objekty, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx zónu.

(5) Rostlinolékařská xxxxxx stanoví xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) a xxx xxxxxxxxx xxxxxxx karanténního xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), odstavce 2 xxxx. c) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zajistí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle §4 odst. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx klonově xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), v xxxxxx případě xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx prvotního zdroje xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx stanovit xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx předměty x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a nově xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. a), x) x x).

§7

Opatření xxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx hnědé hniloby

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 odst. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxx xxx xxxxxx x pod xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správy xx s xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx ověří, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx a xx jsou xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) smí xxx xxxxxxx pod xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správy xxxxxxxx uvedeným x xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx neexistuje xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x že xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, stanovené x příloze č. 5, v xxxxxxx průmyslového xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, a xxxxx xxxx xxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. a),

c) xxxxxxxx, xxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxx nebo xxxxxx části x xxxxxxx xxxx objekty xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx za zamořené xxxxx §5 odst. 1 písm. a) xxxx označené xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), se xxx xxxxx nebo xxxxxxx očistě x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 x tím, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx ani za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), popřípadě xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. x), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxx 4 přílohy č. 4 a x xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx může xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxx xxxxxxxx xxxxxxx x odstavci 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x účinná. Xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a o xxxxxxxxxx nařízených xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx spolu s xxxxxxxxxxxx číslem xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 odst. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx podle §76 xxxx. 4 xxxx. x) zákona xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx podle odstavce 1 a odstavce 2 xx jejich xxxxxxx x xx xxxxxxxx doby stanovené x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce hnědé xxxxxxx je v xxxxxxx x §7 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx narušena xxxxxxxx opatření xxx xxxxxx výskytu ani xxxxxxxxx riziko jejich xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, vypěstovaný xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x uváděný na xxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování, xxxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 odst. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx x §3 xxxx. 8 x 9, a xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Testování xxxxx odstavce 1 xx x příslušném xxxxxxxxxx roce xxxxxxx

x) xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru určené x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx bramboru, xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České republiky xxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, a nebo

b) xxxxx xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxx

1. rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx potvrzené klonové xxxxxxxxxxx xx zaměřením xx tuto souvislost, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií základního xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x případech, x nichž xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx klonová xxxxxxxxxx, nebo

c) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo předstupňů, xxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxxxxxx k množení x následujícím xxxx, xxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx hniloby nebyl x xxxxxxxxx uplynulém xxxxxxxxxx roce potvrzen x partii rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ bramboru původem x Xxxxx republiky.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Příloha x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Sb.

A. XXXXXX XXXXXXXX, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX KROUŽKOVITOSTI

Předložené xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xxxx součástí:

i) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxx xxxxxx, validovaná xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx optimalizaci x xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku č. 1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, je nutné xxxxxxxx za vhodných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vydaných rostlinolékařskou xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx stálé x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx úrovní Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx stanovené xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí xxx uplatněno xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx chybám, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, jak xx uvedeno x §4 odst. 1, xxxxxxxxx pozitivní výsledek x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx znázorněno v xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (TF xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx původcem kroužkovitosti x musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x druhý screeningový xxxx xxxxxxxxx, pak xx podezření z xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx schématu. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx xx pozitivní XX xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x identifikaci xxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x potvrzením xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx kroužkovitosti

Postup xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý screeningový xxxx, izolaci xxxxxxxx x infikovaného vodivého xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx a x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxx 2.

(2) Vhodné xxxxx xxxx:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- PCR xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Ačkoli izolace xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx infekce xx nemusí xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx médiu. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx média, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx biotest (xxxxx 7).

(4) Xxxxx typické xxxxxxxxxx xxxxxxx xx x oddíle 8.

(5) Xxxxx je izolační xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxx, musí být xxxxxxx xxxxxxxxx znovu.

(6) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxx bramboru

Postup testování xx určen ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x hlízách bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx dvou screeningových xxxxx, x xxxxx xxxxx je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxxxxx izolací xxxxxxxx, x následně, x xxxxxxx izolace typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx je Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx jednoho screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, aby xxx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ až 10⁴ xxxxx/xx resuspendované xxxxxx xxxxxxxx jako pozitivní xxxxxxxx x xxxxx xxxxx testů.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz, xxxxxx postup lze xxxxxx x na xxxxx xxxxx, jestliže 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx izolace x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že xx tento xxxx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytný xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (IF).

Pro vyšetření XX xx xxxx xxxxxxx polyklonální xxxxxxxxxx, xxxxx monoklonální protilátky xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx oddíl 6).

(6) XXXX test.

Použijí xx xxxxxxxxxx činidla x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Selektivní izolace.

Toto xxxx být v xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pro přímou xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx za xxxxxxx XXXX média xxxx XXX-88 xxxxx x ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Typické xxxxxxx lze xxxxxx xxxxx 3-10 xxx xx rozetření na xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx potenciálu xxxx vyžaduje xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx části, xxx xx omezily xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx a xxxxx xxxxx patogena xxxxxxx. Xxxxx se kultivační xxxxxx takto xxxxxxxx, xxxx xxx izolace xxxxxxxxx z rostlin xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx oddíl 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x izolaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pomocí selektivního xxxxxxxxx x rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx). Test xxxxxxxx xxxxxxxxx inkubační xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx. Bakteriální xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na MTNA xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx v oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, ale izolační xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx pupkového xxxxx xxxx stejného vzorku x v xxxxxxx xxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx identifikace čistých xxxxxx podezřelých xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se dosáhne xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Xxxx patogenity je xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx

(1) Doporučené xxxxxxxxx xxxxxx - xxx xxxxx 3.2.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, musí xxx xxxxxxxxx izolace x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxxx test xxxxxxxxx, je pro xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx různých biologických xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx další xxxx negativní, xx xxxxxx považován za xxxxxxxxx. Další xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Selektivní xxxxxxxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX test xx xxxxxx v xxxxxx 6.

(7) XXXX test xx xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Biotest xx xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Kultivace xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx výsledky xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx vzorků.

(10) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx o Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx vyšetření xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti

2.1. Xxxxxxxx bramboru

V xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx a xxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx se xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx velmi odlišné xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; vadnutí xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx často x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, i xxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx. Tím xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx pletiv xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx chlorotické, xxxxx až xxxxxxxx xxxxxxxxxxx partie. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, listy x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx x xxxxx pouze xxxxx. Příležitostně xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné xxxxxx řady příznaků xxxx xx internetové xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx sklovitost nebo xxxxxxxxxxx pletiva xxx xxxxxxx x okolí xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Prstenec xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx konci hlízy xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx zbarvení xxx xxxxxxx. Xxxxxx dobře xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx zabarvení xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx a xxxx, xxx xxx xxxxxx zmáčknutí xxxxx xxxxxxxxx z xxx xxxxxxx sýrovité xxxxx. Xxxxx exsudát xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxx stádiu podobné xxxxxxxxx hnědé hniloby xxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearurn. Xxxxxxxx xxxxx být xxxx xxxxxxxx omezeny xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, nemusí xx xxxxxxxxxx jen xxxxxx xxxxxxx části x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. S xxxxxxxx xxxxxxx dochází x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx část xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx na povrchu xxxxx praskliny, často x xxxxxxxxxxxxxx okraji. X xxxxxxxx době xx x Xxxxxx xxxxxxxx několik xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x druhotnému xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx dutin x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx bakteriální xxxxxxx xxxx xxxxxxxx maskovat x může být xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx bramboru. Xxxxx xxxx x atypické xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 hlíz xx 1 test. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx výkladu xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx použít x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, pokud je x dispozici xxxxx xxxxxxxx hlíz.

- Validace xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Níže xxxxxxx bramborový extrakt xxx xxxxxx také xxx xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku:

Hlízy xx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx dezinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx odstranění xxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Hlízy xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx. Tento xxxxxx mytí xx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx, že je xx vzorku xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x dezinfikovaného xxxxxxxx nebo xxxxx xx škrabkou xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx hlízy. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z pupkových xxxxx brambor. Na xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx část xxxxxxx xxxxxxxxxxxx cévní svazky. Xx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konců xxxxxxxxxx xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °C xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx hlízy x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x testují xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx vyříznutí xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx vizuální xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 xxx xxx pokojové xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx x karanténě xxx teplotě 4 - 10 °X xx xx xxxxxxxx xxxxx testů. Xxxxxxx xxxxx xx vzorku xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x nepoužitých xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo utěsnitelné (x případě, xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx vyčištěny a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx výkrojky x pupkového xxxxx xxxxxxxx, pokud xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x nádobě xxx xxxxxxx xxxxx, x chladu po xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx nebo při xxxxxxxx teplotě xxxxxxxxx 24 hodin. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx výkrojků x růst saprofytů x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx bránit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Výkrojky z xxxxxxxxx konce xx xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů.:

a) výkrojky xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3) a třepají xx v xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot/min) xx xxxx 4 xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x dostatečným xxxxxxxxx (přibližně 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx v xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx gumového xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx homogenizaci xxxxxx xx xxxxxxx mixéru xxxxxxxx vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx nutno xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) x xxxxxx. Xxxxx má xxx použit XXX xxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx zařízení, xxxxxxxxxx xx drcení v xxxxxxx xx jedno xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx xxx pomalým xxxxxxxxxxx (při xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx se xxxxx přídavkem (10 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

3.1.5. Bakteriální xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x po xxxx 10 minut) při xxxxxxx 4-10°C a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx peleta v 1,5 ml peletového xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µl xxx test xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Ralstonia solanacearurn x 500 µl xxx referenční xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx konečnou xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°X (týdny) nebo xxx teplotě -68 xx -86°C (měsíce). Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx uchovávají xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx zmrazení x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx do 24 až 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odděleně, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. To platí x xxx xxxxxxx xx XX xxxxx x všechny xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx zjištění xxxxxxxxxx populací Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx vzorky xx 200 xxxxx stonků. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx průzkumy, xxxx xx xxx xxxxxxxx xx statisticky reprezentativním xxxxxx rostlinné xxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Pomocí čistého xxxxxxxxxxxxxxx nože xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžek xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx 1-2 xx xx spodní xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx povrchem xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx osuší xxxxx papírem x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx nádobě.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx se xxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x xxxxxxx třepačce (50-100 xx/xxx) po xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx nižší než 24 °X nebo xx dobu 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) části xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Po xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.4 Xxxxx purifikace xxxxxxxx xxxx koncentrace bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx lze xx dosáhnout xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Čistý xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx na 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx polovina xx xxxxxxx během testování xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxxxxxxx xx skladuje x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx xxxxx testování.

4. xX xxxx

PRINCIP

Doporučuje xx xxxxxx xX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, protože xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx xxxx XX použije xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx xx pozitivní, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx lF xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, používá xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxxxxxx výsledku xX xxxxx x polyklonální xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, ale méně xxxxxxx.

Xxxxxxxxx se protilátky xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx určovat xxxx pro xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx dochází x optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml homologického xxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxx xxxxxxx xxxxxxxx konjugátu fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) v blízkosti xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx provádí xx xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx úspěšně proveden xx extraktech skladovaných xxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx lze xx xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 ml peletového xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x a xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx často není xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx plamenem (xxx 4.2).

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxx srovnávacím kmenem xxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx infikované xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx zmrazením xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C) xx xx mělo xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly se xxxxxxx alikvotní části xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 xxxxxx o průměru xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx xx připraví xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx o xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15 µx - pro xxxxx xxxxxx objem xxxxx) roztoku xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety 1/100 xx prvního xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxxx řadu xxx použít xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Pro xxxx pelety:

Připraví se xxxxxxxxx ředění (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxx standardní xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15 µx - pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x každého xxxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx zahřátím (15 minut xxx xxxxxxx 60 °X), xxx plamenem nebo xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxx pokynů xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X případě xxxxxxx xxx potom fixovaná xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx skladovat xxxxxxxx x suchém xxxx xx co xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX testu:

a) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka na xxxx v xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x XX xxxxx. X xxxxx xxxxx xx xxx xxx titr 1/2 (X/2), v xxxxxxxxx titr 1/4 (X/4), titr 1/2 (X/2), xxxx (T) x xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

x) Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x IF xxxxx. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx podle xxxxxx 4.1. xxxx. a) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Podložní xxxxxxx se xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx protilátek, xxxxxxxxx xx následovně:

4.3.2. Podložní xxxxxxx xx inkubují xx vlhkém papíře xxxxxxxx xx xxxx 30 minut při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx se pečlivě xxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxx xx ponořením xx xxxx 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 3) x následně x xxxxx IF. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, xxxxx by xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, a pečlivě xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

4.3.5. Zakrytá xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx papíru xx xxxx 30 minut xxx pokojové teplotě (18-25 °C).

4.3.6. Kapky xxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxx xx opláchnou x xxxxx jako xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx 0,1X fosfátového xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx krycí xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx x xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1000x. Zkoumají xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x kolem xxxxxx. X vzorků x xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx titru xxxxxxxxxx xxxx pracovním xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx musí xxx xxx porovnání x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx zbarvením nebo xxxxxx fluorescencí xxxxx xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

4.4.3. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X peletách x xxxxxxx xxxxx bramboru x xxxxx stonku xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx výsledku XX xxxxx:

x) Xxx zjištění xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx odhadne průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 mikroskopickém xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX je pozitivní x xxxxxx, kde xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx IF xxxxx je negativní xxx xxxxxx, které xxxxxxxx méně xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx x vzorek xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx se jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx FISH xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx být jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx IF xxxx. Xxxx se XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx a je xxxxxxxxx, je x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx ředtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx extrakty, ale xx možné xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 nebo -68 až -86 °X.

Xxxx negativní xxxxxxxx xx použije xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován na Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní kontrola xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 X xxxxxxxxxxx pufru (XX) x 3-5 xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Připraví se xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx suspendovaného x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX poskytuje xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx přítomné xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx roztok (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx supernatant x xxxxxxxx xx peleta x 500 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx se x xxxxxxxx xx xxxx xxx při xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX x 50 µx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx xx xxxx 8 minut na 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx supernatant a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µx 0,01 X PB (xxx dodatek 3).

5.1.5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 3, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx sklíčko, x xx neředěný a xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx být xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °X xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96 % etanolu. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx opakovat, odstraní xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X XX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx na sklíčku XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx na vzduchu (xxxx sušičkou xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx je xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx další xxx. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx prachem x x xxxxx při xxxxxxxx teplotě.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x hybridizace

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 xx xxxxx (100 mM Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx roztok xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Každý xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, pouze jednou, x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx K 40-400 µg.ml^-1 x xxxxx (20 mM Xxxx-XXx, 2 mM XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx ve xxxxxxxxxxxx sériích 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx x xxxxxx sklíček.

5.2.3. Xxxxxxxx xx vlhká xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx vzduchotěsné xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 1x hybmixu (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x hybridizační peci xxx xxxxxxx 55 °X xx dobu xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx xx 1 xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx se xx xxxx 5 xxxxx xxx teplotě 55 °X.

5.2.5. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x xx xxxxxxx xx 4 xxxxxx na xxxxxxx / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6. Xxxxx sklíčko se xxxxxxxx 2 krycími xxxxxxx (24 x 24 mm) tak, xxx pod xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx vlhké komory x xxxxxxxxxxx se 14 - 18 x x peci xxx teplotě 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx se 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx pure water = XX), 1 x 1x hybmixu (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) a 1 l 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x hybmix x 833 xx XXX). Xxxxx x xxxx se xxxxxxxxxxx xx vodní lázni xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Spláchne xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx v xxxxxxx x 1x xxxxxxxx xxx teplotě 55 °X.

5.2.10. Držák xxxxxxx xx přemístí do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX a xxxxxx xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl krycího xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo xxxxxxx) xx každé xxxxx x xxxx sklíčko xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx FISH testu

5.3.1. Xxxxxxx xx prohlížejí xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx olejovou imerzí. X xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein isothiokyanat (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Použitím xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnává xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (oddíl 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx okénka napříč xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. U xxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

5.3.2. Hledají xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x okénkách xxxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx musí xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xx xxxxxxx v xxxxx.

5.3.3. Xxx podezření x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxxx. Xxx podezření x xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, když všechna xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx přesnost FISH xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx části xxxxxxxx a xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx mnohem xxxx xxxxx než x XX xxxxx.

5.3.5. X xxxxx se xxxxx pouze fluoreskující xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx x morfologií, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx při xxxxxxx XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx pozorovány xx xxxxx pozitivních kontrolách x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických xxxxx na 1 xx resuspendované pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx infikované Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, které xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx, xx považují xx negativní.

b) Xxxxxxxx XXXX testu xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx použití rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. PCR xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx se XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x je xxxxxxxxx, xx pro dokončení xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx podle postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus xx 1 ml xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x xxxxxxxxx ve všech xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx používá xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx XXX. XXX test xx xxxx provádět xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx specializovaných xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx extrakce DNA x XXX) by xx xxxx xxxx xxxxxxxx jako x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx jasné, jestli xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx bakterie a XXX ze vzorku,

- xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, x xxxx xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus (xxxxxxxx viz dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vodě x virulentního izolátu (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx také DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx být xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X případě xxxxxxx XXX testu xx xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x xxxxxxx brambor.

6.1 Xxxxxx purifikace XXX

Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx XXX x komplexních xxxxxxxxx xxxxxx jsou x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µl lýzového xxxxx (100 xX XxXx, 10 mM Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 mM EDTA [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 ml.

2. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxx ze vzorku x xxxxxx xx xx termobloku nebo xxxxx lázně o xxxxxxx 95 °X xx xxxx 10 xxxxx.

3. Mikrozkumavka se xxxxx xx 5 xxxxx xx ledu.

4. Xxxxx xx 80 µx zásobního roztoku xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx xx 1 xx v 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) a xxxxxxxx se při xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5. Přidá xx 220 µx Easy XXXX xxxxxx A (Xxxxxxxxxx), dobře xx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °C xx xxxx 30 xxxxx.

6. Přidá xx 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx)x xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx, až xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx a xxxxx xx třepáním, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx homogenní.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx při 4 °C xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx horní xxxx xx čisté xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x inkubuje xx na ledu xx dobu 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxxxx xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x pelety xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15 000 x xx dobu 10 xxxxx při 4°X, xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v XXX xxxxx vac.

15. Xxxxxx se xxxxxxxxxxxxx x 100 µl xxxxxxxx vody (UPW) x xxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx se při xxxxxxx -20 °X xx do xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx usazenina xx xxxxxxxx odstředěním x xxx PCR xx xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx použít, xxxxx by se xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ patogenních xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx a kontroly xxx XXX podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 ve xxxxxxxx vodě).

6.2.2. Připraví xx xxxxxxxxx reakční xxxx xxx PCR x prostředí, xxx xxxxxxx kontaminace, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx protokol XXX xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx se xxxxx 5 µx extraktu XXX xx 25 µx PCR xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx negativní xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx reakční směs XXX x xxxxx xx stejná sterilní xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx PCR xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx použit xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx produktu XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx se nejméně 12 µx amplifikované xxxxxxx směsi DNA x každého xxxxxx xxxxxxxx s 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) do 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X xx cm. Použije xx xxxxxx xxxxxx XXX, např. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 mg xx x) xx xxxx 30-45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. V xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx délky, xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx pravost amplikonu XXX provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx při xxxxxxxxx teplotě a xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx enzymem x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx elektroforézou v xxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX prosvícením xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx se x neštěpenou x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx typický xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery: xxxxx xxxxxxx XXX očekávané xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx s xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx je xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x vzoru (xxxxx xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, že xxxxx amplifikován xxxxxx x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxxxxx xxxx opakováním xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX primerů (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx amplikon získán x pozitivního kontrolního xxxxxx xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx vodě, ale x pozitivní xxxxxxxx x Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxx. Ve vícenásobných xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx reakce xxxxx, pokud nebyl xxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx byl očekávaný xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx xx xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx x extraktům xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx úspěšně xxxxxx x xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x glycerolu při xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx odrůdy xxxxx vejcoplodého xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx růst Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx dokonce x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx základní xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx růstové xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx rozdělí xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx z níže xxxxxxxxx metod (7.2, 7.3, 7.4). Používají xx xxxxx xxxxxxxx xx fázi 2-3 xxxxx do úplného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Aby xx xxxxxxxxx úplné využití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx inokulaci, bude xxx xxxx uvedené xxxxxxx potřeba 15-25 xxxxx na xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx o xxxxxxx 10 cm xx xxxxxx blok pěnového xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx x 15 xx xxxxx). Xxx každý xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx stonek x xxxx umístí proužek xxxxxxxx hliníkové xxxxx. Xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Pomocí skalpelu xx provede xxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx nebo mírně xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx do xxx inokulum xxxxxxxxx xx oční linky xxxx jemným xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx pelety xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Řez xx xxxxxxxx xxxxxxxx vazelínou xxxxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 xx.

7.3 Inokulace zářezem XX

7.3.1. Na xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx dvěma xxxxx se napipetuje xxxx děložní lístky x xxxxx xxxxx xxxx kapka (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) suspendované xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx sešikmený xxxxx (x úhlu xxxxxxxxx 5°), dlouhý 1,0 xx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 tloušťky xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx stříkačky.

7.4. Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (turgoru) xx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Stonky xxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxx děložními xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx xxxxx vejcoplodého.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxx inokulační metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4) vodní xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxx xx xx xxxxx x pletivem x přirozeně xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Jako xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 M XXX xxxxxxx inokulační xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Po xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (dodatek 8) po xxxx xx 4 xxxxx při teplotě 18-24 °C. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx vlhkosti (70-80%) x zalévají xx xxx, aby xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxxxx nad 30 °X a xxxxxxxxx xxxxxxx je 21 °X. Aby xx xxxxxxxx kontaminaci, inkubují xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, anebo xxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx přísné xxxxxxxx xxxx zacházení s xxxx. Pokud xxxx xxx rostliny xxx xxxxx vzorky xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx přepážkami. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx se věnuje xxxxxxxxx pozornost xxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx skleníky x xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx veškerým xxxxxx, protože xx xxxx přenášet bakterie x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Pravidelně xx osmi xxxxx xx spočítají xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Původce xxxxxxxxxxxxxx působí u xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, které xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Povadlá xxxxx mezi žilnatinou xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx okraj. Xxxxxxxx xxxx neodumírají; xxx xxxx trvá xxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx větší xxxxxx xx přežití. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx odrůst. Xxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx nízkým xxxxxxxxxxxx původce kroužkovitosti xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx je nezbytné xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx listů x xxxx krátce xxxx ní. Vadnutí xxxxx také způsobovat xxxxxxxx xxxxxx bakterií xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx z xxxxxx hlízy. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx subsp. carotovora x X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx var. xxxxxxx, xxxxx x velké xxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx rychle xxxxxx xxxx listy xxxx xxxx rostliny. Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Gramovo xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx od Xxxxxxx xxx

7.9. Jakmile xx xx lilku xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx provedena xxxxxxx xx použití xxxxx pletiva xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Povrch xxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx vydezinfikuje xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxx xX xxxx XXX xx xxxxx x xxxxx a xxxxxxx xx na xxxxxxx (selektivním) médiu (xxx xxxxx 8). Xxxx xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9). Čisté xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx okolností, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx podmínky xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx jako latentní xxxxxxx xxxxxxx i xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxx xx test XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 xx z xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx odebraných xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx by xxx provedena xxxxxxx xx xxxxxxxx (selektivních) xxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

8. Izolace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx být potvrzena xxxxx tehdy, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismem, xx možno ho xxxxxxxx x pletiv xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx xx nedoporučuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx hlízy (3.1.5) xxxx stonku (3.2). Xxxxx izolace Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx je xxxxx xx použití xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxx bramboru xxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx TF/PCR xxxxxxxxx xxxxxx (viz oddíl 7.9). Pokud xx xxxxx xxxxxxx maceraci xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxx oddílu 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxx 106 xxx xx ml Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx se vyloučilo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx každou xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx selektivního xxxxx by se xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx obvyklých xxxxxx přezkoušet xxxx xxxxxxxx xxx růst xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx vzorky.

8.1. Xxxxxx xx selektivní médium

8.1.1. Xx 100 µx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo šťávy x xxxxx vejcoplodého xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x peletovém xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. lzolace x neředěné xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxx podmínkám Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, xxxxxxx patogen xxxxxxx. Proto se xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µx x každého xxxxxx, x ředění 1/100 až 1/10&xxxx;000 xx MTNA xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), za použití xxxxxxx určených k xxxxxxxx (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Desky xx xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x kontrolními xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx provádějí xx xxxxx xxxxx, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 a 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx kolonií xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx YGM xxxxx; inokulace x xxxxxxxxxxxx xx se xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxx (složení xxxxxxx v dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx glukosový xxxx,

- agar x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X xx xxxx xxxxxxxxx 10 dní.

Původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pomalu x obvykle xxxxxxx xxxxxxx velikosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, vyklenuté, smetanově xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx zlepšuje. Typické xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx barvy xxxxxxxxx, xxxxx žluté, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx vyklenuté, xxxxxxxxx xxxxxx, x rovnými xxxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx kolonie pro xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Podezřelé xxxxxxx xx identifikují (xxx xxxxx 9) x provede xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 10).

9. Identifikace

Čisté xxxxxxx pravděpodobné izolované xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx dvou následujících xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx známý xxxxxxxxxx kmen.

9.1. Nutriční x xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx by xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X x xx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx se xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx kmenem Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x fyziologické xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxx x kultur x živného dextrózového xxxxx.

Xxxx Očekávaný xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx ureázy -

Xxxxxx X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Využívání citrátu -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx při 37 °C -

Xxxx x 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- glycerolu -

- xxxxxxx - nebo xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Gramovo barvení (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx na xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx dvojnásobného xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se xX xxxxxx (xxxxx 4).

d) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF xxxxx je dosaženo, xxxxxxxx xX titr xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kontroly.

9.3. XXX xxxx

x) Připraví se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx vodě (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x ohřívacím xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 100 °X xx xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxx xxxx xxxxx podpořit xxxxxxxx xxxxxxx připraveného XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxx -16 až -24 °X až xx xxxxxxx.

x) Pro amplifikaci Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx specifických xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx PCR (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Xxxx, 1995; Xxxxx x kol., 1997; Xxxxxxx x Rainey, 1999; Xxxxxx a xxx., 1999).

d) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx x mají xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX test

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx v XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

x) Test XXXX xx pozitivní, xxxx-xx xxxxxxxx stejné reakce xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Analýza mastných xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, pokud xx profil xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx charakteristických mastných xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Curtobacterium, Arthrobacter x Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, ale 15:1 Xxxxxxx A xx xxx xxxx xxxxxxxx neobvyklá kyselina, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx ve xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. v xxxxxxx 1-5 %. X Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Připraví se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx x xxx., 2001.

10. Test xxxxxxxxxx

Xxx konečné potvrzení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx identifikovaných xxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx patogenity.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml x 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx pozitivního kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.2. Naočkuje xx 5-10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Inkubuje xx xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx nedošlo x xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X čistých xxxxxx xx mělo xxxxx 2 xxxxx nastat xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx se xxxx xxxxxxxxx až 3 xxxxx při xxxxxxxxx příznivých pro xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Jestliže se xx 3 týdnech xxxxxxxx infekce xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx kultura xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

10.4. Xxxxxxx xx provádí z xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 cm xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx xxxxxxx x suspendují v xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody nebo 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xx suspenze xxxxxxxxxx xxxx nanesením na XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 xxx xxx teplotě 21-23 °X a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur xüx Gesundheit xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx a Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Agency	Edinburgh	Skotsko
Laboratoire Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Protection Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Xxxxxxxxxxx xx la Xxxxx xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Plant Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx de Xxxxxxçãx das Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx osoby: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxx xxx vyšetření výkrojků xxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx základním xxxxx XXXX a xxxxxxxxxx xx v 10 mM fosfátového xxxxx xxx získání xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zakalené xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx optické xxxxxxx 0,20 - 600 mn.

Výkrojky xxxxxxx xx odeberou x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx z xxxxxxxx odrůdy x xxxxx slupkou, x xxxxx xx jisté, xx xx xxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx se 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek o xxxxxx 1,5 xx x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se 100 µl xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxx mikrozkumavkách se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx jako pozitivní xxxxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx se opatří xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx xx sterilních xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx získá 9 xxxxx každého xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx-24 °C xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x množství X. x. xxxxx. sepedonicus x kontrolních vzorcích xx xxxx xxx xxxxxxx potvrzena xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX test xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX z pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx zkušebních vzorků.

Pro XX x XXXX xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rozbory xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX a XXX xxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ a 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxx xxxxxxx a nesmí xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx postupy

OBECNĚ: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx dobu xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1. Xxxxxxxxx pufr(50 mM xxxxxxxxx pufr, pH 7,0)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x extrakci xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací nebo xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx xxx následující xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 g
Polyvinylpyrrolidon-40 000 (PVP ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50 x
(*) pro xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Peletový xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx pH x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

2.1. Pufry pro XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxx protilátek.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx pH a xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C po xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Tween 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Fosfátový xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx sklíček xx XX testy x xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Leica).

Dodatek 4

Stanovení xxxxxxxxxxx xX a XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x S/s,

kde X = plocha xxxxxxx pole na xxxxxxx x více xxxxxxx a

s = xxxxxx xxxx objektivu.

s = πi²/4G²K²,

kde i = koeficient xxxx (x rozmezí xx 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 nebo 1,25),

G - zvětšení xxxxxxxxx (100 x, 40 x atd.).

3. Vypočítá xx xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x F,

kde y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxx X. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky se xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

Živný dextrózový xxxx (Xxxxxxxx dextrose xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % X(+) glukózy (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x autoklávu při 121 X xx xxxx 20 min.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Yeast xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Difco)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 g
Destilovaná voda	1,00 x

Xxxxxx se rozpustí x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x kvasnicovým xxxxxxxxx a minerálními xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = YGM)

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7H2O	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005
Baktoagar (Xxxxx)	18,0 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx xxx 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx selektivní xxxxxxx média

Médium XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx složky xxxxx x BDH.

Kvasnicový xxxxxxx (Difco)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7H2O	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xX xx xxxxxx xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (při 121 °X xx dobu 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, nalidixic xxxx 0,002 g, amphotericin X 0,01 x.

X xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x nalidixic xxxx (Xxxxx) (obě 5 xx/xx) v 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Sigma) (1 xx/xx) x xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx základního xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1 xxxxx xxx skladování x chladu xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx NCP-88

Živný xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 g
K2HPO4	2,0 x
XX2XX4	0,5 g
MgSO4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx na 50 °X se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X sulphate (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008 x, cycloheximide (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx B xxxxxxxx x destilované xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx sterilizují xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx média xx 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx do 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx protokoly x xxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx skupinou vybraných xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx s xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx primery

primer XXX-1 5'- xxx ctt xxx ggg xxx xx xx -3'

primer XXX-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx ccc x -3'

primer XX-7-X 5'- xxx gca xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Předpokládaná velikost xxxxxxxxx x XXX X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 bp (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18S xXXX 377 xx (sada XX-xxxxxxx).

1.2. Reakční xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 μx
10x XXX pufr (1) (15 mM XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (frakce X) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx d-n XX (20 xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx PSA-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx NS-8-R (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx polymeráza (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μl
Celkový xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx validovány za xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq xxxx Xxxx) x Xxxxx XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx NS-7-F x XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) a 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx třepáním nebo xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxx xxxx optimalizace koncentraci xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx PCR

Postupuje se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: i) 3 xxxxxx při teplotě 95 °C (denaturace XXX xxxxxxx)

10 cyklů xx) 1 xxxxxx xxx teplotě 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °X (připojení xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 cyklů x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (denaturace DNA xxxxxxx)

xx) 30 sekund xxx teplotě 62 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx teplotě 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxx cyklerem XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx použití jiných xxxxxx může xxx xxxxx modifikace xxxxx xxxxx xx), xxx), xx), x), xx) x vii).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx z XXX C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkuji xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx II xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx rozměry 282 xx x 220 xx.

2. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx voda 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Pufr 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx octová 11,42 xx

XXXX (sodná xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Před xxxxxxxx xx zředí xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro Xxx CMS-CY3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx acg -3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx sonda EUB-338-FITC: 5'- gct xxx xxx xxx agg xxx-3'

2. Fixační roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! POUŽÍVAT XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX PRACOVAT X XXXXXXXXX.]

x) Zahřeje xx 9 xx molekulárně xxxxx vody (xxxx. Xxxxx pure water = (XXX)) na xxxxxxx přibližně 60 °X a přidá xx 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1N XxXX a zamíchání xxxxxxxxxxx míchadlem.

ii) Xxxxxx xx xX xx 7,0 přidáním 1 xx fosfátového pufru 0,1 X (XX; xX 7,0) a 5 xxxxx XXx 1X. Indikačním xxxxxxxx xx zkontroluje xX x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx HCl xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx xx přefiltrujte xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx chráněný xxxx xxxxxxx při teplotě 4 °C xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx roztok: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx a autoklávovaný) 15 mM

Zředí xx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x tabulce. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx dvojmo 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 ng/μl)	4,5	18,0
sonda CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx v xxxxx xxx teplotě -20 °X. Xxxxx použití xx xxxxx xx xxxxxxxxxx před přímým xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého

Semena xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx vysejí xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx děložními xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx přepichují xx pasterizovaného pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx xx se xxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxx xx delší;

Teplota: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Gramovo barvení x Huckerově modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Roztok xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx se 2 g krystalové xxxxxxx x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx se 0,8 x šťavelanu xxxxxxxx x 80 ml xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx roztoky xx smíchají.

Lugolův xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x misce. Nasypou xx xx vody x xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xx rozpuštění.

Safraninový xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx se x xxxxx se.

Ředění: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx roztěry, xxxxxx xx xx vzduchu x xxxxxx se xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx se xxxxx pod xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx se Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxx po dobu xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx pod xxxxxxx xxxxx a xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx pomocí xx xxxxxxx přidávaného 95 % etanolu xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx pohybování xx xxxxxxx na xxxx 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx pod xxxxxxx xxxxx x vysuší xx xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx safraninovým xxxxxxxx x nechá xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx tekoucí xxxxx x xxxxxx xx xxxxx papírem.

Grampozitivní xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zbarví xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx and xxxxxxxxx xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx batches xx potato tubers. Xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxx Communities, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11&xxxx;288 XX, 21 pp.

2. Xxxxxxxx, J. F., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx plants. Xxx. Xx. Path., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Doetsch, R. X., 1981. Determinative xxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx for Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Hugh, X. x Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx significance xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx oxidative xxxxxxxxxx xx carbohydrates xx xxxxxxx gram-negative xxxxxxxx. J. Xxxx., 66, 24-26.

6. Janse, X. X., 1991. Xxxxx- and xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xxxxx cell fattyacid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Janse, X. X. a X. Xxx Vaerenbergh. Xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx XX xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, H. x X. Rudolph, 1998. Xxxxxxxxxxxxx capabilities xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Journal xx Xxxxx Xxxxxxxx and Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, N., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Nature, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X x X. X. Sands, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Kiadó, Budapest, 568 xx.

11. Lelliott, X. X., 1966. Xxx plant pathogenic xxxxxxxxxx bacteria. X. xxxx. Bact., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. X., X. Xxxxxxx x X. C. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, R. X. a X. X., Sellar, 1976. Xxx detection xx xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Xxxxx. et Kotth.) Xxxxx. et Xxxxx.) xx potato xxxxxx. XXXX Bull., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. a S.H. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Reaction xxxxxxx xxxx XXX intergenic xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Mills, D., Xxxxxxx, X., W. x X., W. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx of xxxxx unique XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, K. -X. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subspecies by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. J. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxx XXX with xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx studies on xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx their xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Mem. Xxxxxxx xxxxx. Exp. Sta., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Berthier-Schaad, X., Sechler, A. x Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx by X1X-XXX xxx an xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Plant Disease 83; 1095-1100.

20. Schaad, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Skerman, X. B. X., 1967. X xxxxx xx xxx identification xx the xxxxxx xx bacteria. 2nd xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Baltimore.

22. Xxxxx, N. X.; Xxxxxxx, J; Stead, XX., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX profiling xxxxx the XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogen Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Sneath, P. X. X. xxx X. X. Collins, 1974. X study xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxx xxxxx. Antonie van Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx and xxxx xxxxx Pseudomonas spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, J. X. x A. D. X. Akkermans, 1998. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx of xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23s xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Environ. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

B. XXXXXX DIAGNÓZY, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx různé xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx dalších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) detekce Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX ZÁSADY

Optimalizované xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xx optimalizaci x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx vhodných karanténních xxxxxxxx x odpovídajícím xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí zajišťovat xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx vybraných xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx přesná xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol.

Testování xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx správné xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx kontaminace xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, xxx je uvedeno x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeníngových xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech. První xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx izolace) musí xxx potvrzen xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je první xxxxxxxxxxxx test pozitivní, xxxxxxxx podezření na xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx xx x druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 vyžaduje xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x potvrzením xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx hnědé hniloby x bakteriálního vadnutí (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x rostliny xxxxxxxx x xxxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx na selektivní xxxxx xxxx x x xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx příznaků xx xxxxxxx v xxxxxx 2.1.

2) Rychlé diagnostické xxxxx xxxxxxxxx předběžnou xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Test xx xxxxx slizu xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Test xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu nebo xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.3.

6) Test XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Test XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx obvykle xxxxxx izolovatelný x xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx selhat xxx pokročilých xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou příznaky xxxxxxx typické, ale xxxxxxxx test xx xxxxxxxxx, musí se xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Xxxxx specifická xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx doporučuje xx xxx každý nový xxxxxx.

14) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru nevykazujících xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx určeno xx xxxxxxxx latentních xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), x nichž xxxxx xx založen xx jiném biologickém xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, potvrzením, xx xxxxx kultura je X. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxx pouze x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxx dostačující x xxxx, aby xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Screeningové testy x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ až 10⁴ buněk/ml resuspendované xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx testů.

1) Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx i xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 hlíz není x xxxxxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x oddíle 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx různých biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx nejméně xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V případě, xx je xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx nezbytný xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Test IF xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Test xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

6) Xxxxx XXX xxxx popsány v xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX xx popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.8.

9) Biotest xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx jsou negativní, xx třeba xxxxxxxx xxxxxxxx testy xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku, případně xxxxxxx test s xxxxxxx xxxxxx.

12) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum ve xxxxxxxx xxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx oddíl 3.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx patogenu xxxx popsány x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx alespoň dva xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Je-li xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx více screeningových xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx negativní, xxxxxxxx xx vzorek xx negativní. Další xxxxx nejsou nutné.

4) Xxxxxxxxxx izolační xxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

5) Test XX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx XXX jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx FISH xx popsán v xxxxxx 6.1.7.

8) Testy XXXXX xxxx popsány x oddíle 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx popsána x xxxxxx 2.3.d.

11) Kultivace xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx z důvodů xxxxxxxxxx nebo inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx testech xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx testy.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxXxxx, x kterých xx podezření, že xx xxxxx o X. xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby

2.1. Příznaky

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx bramboru. Xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx podmínkách xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx směrem k xxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxx během xxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx vadnutí zůstávají xxxxx xxxxxx, ale xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx hnědé xxxxxxx. Dochází xxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx. Xxxxxxx jednoho xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx napříč xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx xxxxx sliz xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx x cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxx slizu.

Hlíza xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx třeba xxxxxxxxx xxxxxx u pupkového xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx konec. X xxxx xxxx xx xxxxxxx pozná xxxxx láhvově xxxxxxx xx xxxxxx hnědého xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x odumření xx xxxx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x x xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Xx xxxxxx se mohou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx místa xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kolapsu xxxxxxx xxxxxxx. V xxxxxxxxxxxxxx fázích xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx příznakem je xxxxxxx vzhled xxxxxxxxxxx xxxxx. Za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxxx 25 °C, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx během několika xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx xxxx x vadnutí xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx tolik nevadne, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx počet xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx nasáklé xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx odumírání xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx stonkem xxxxxxxx xxxxx zbarvená xxxxxx xxxxxxx bílý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx dulcamara x S. xxxxxx. Xx normálních xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx pozorovány příznaky xxxxxxx, xxxxx teploty xxxx xxxxxxxxxxx 25 °X xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxx (xxxx. x xxxxxxxx X. nigrum xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Při xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx u xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx rostliny X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx hnědé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx stonku pod xxxxx. X xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx vlákna xxxxx, jestliže xx xxx stonku xxxxxxx xxxxxx do xxxx, x xx x xxx xxxxxxx příznaků xxxxxxx.

2.2. Rychlé screeningové xxxxx

Xxxxxx screeningové testy xxxxx xxxxxxxx předběžné xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-b-hydroxybutyrátu (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX v xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx obarvením xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxxx sklíčku xxxxxxx xxxxx X xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx (Viz xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx vhodnými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.), xxxx XXXX (viz xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (xxx oddíl 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx oddíl 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx se xxxx xxxx xxxxxx zbarveného xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx xxxx z cévních xxxxxx stonku xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxx vadnoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x nechá xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx suspenze.

c) Xxxxxxx se 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx universální xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx XXX; xxx dodatek 2) a/nebo Xxxxxxxxx tetrazolové médium (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Připraví xx případně xxxxxxxxxx xxxxx x rozředěnou xxxxxxxx suspenzí X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx se 2-6 xxx xxx teplotě 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx izoláty X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx malé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx krémově xxxx.

- X Kelmanova xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXXX jsou spirálky xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní máslovité xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx 6.2.

3. Detekce x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx hlíz bramboru

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Standardní xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx xxxxx test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx x xxx xxxxxx x méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx hlíz.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx metod xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků o xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxxxxx bramboru popsaný xxxx xxxx být xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Nepovinné xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 2-30 °X po xxxx xx 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx množení xxxxx xxxxxxxx X. solanacearum.

b) Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx se vhodné xxxxxxxxxxx prostředky (s xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx být proveden XXX xxxx, pro xxxxxxxxxx patogenní DNA) x mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx vzorkem. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxx x případě, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx na zeleninu xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx bylo viditelné xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky se xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) hlízy s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx jsou xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se vizuální xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx hlízy x xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 xxx při xxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxx xxxxx xx zkorkovatění (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxx xxxxx přílohy XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx z pupkové xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx nádob xx xxxxx použití, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx používány, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe je xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxx se x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; v chladu xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xx zpracují xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx se x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) homogenizují xx xxxxxxxxxxx množství (přibližně 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx drcením x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (např. silný xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx homogenizaci xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx rozlití xxxxx extrakčního xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xx použijí čerstvě xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x xxxxxx. Xxx xxxxx PCR je xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxx x mlecím xxxxxxxxx. X testu XXX se doporučuje xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 g xx dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), xxxxx xx xxxxx přídavkem (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx frakce xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7 000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x po xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Použije xx 500 µx xxx X. solanacearum, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx referenční účely. Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx na konečnou xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) k 500 µl xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx a xx zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při teplotě 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x vzorky R. xxxxxxxxxxxx byly uchovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX x všechny xxxxx.

3.1.2. Testování

Postupové xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (xxx oddíl 6.1.5.)

Testy XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx ELISA (xxx oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx metody pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx až 200 xxxxxxxxxx částí. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku zkoumané xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx 1-2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxx stonku xxxx xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxxx: Čistým xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx nejspodnější, 1 xx xxxxxx xxx x xxxxxxx výhonku.

Jiné xxxxxxxxxxx rostliny: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1 xx xxxxxx xxx z xxxx každého stonku xxxx nad xxxxxx xxxx. U xxxxx xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 cm xxxx xx xxxxxx xxx xxxxx nebo oddenků x xxxxxxx kořeny.

Při xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx vzorek x počtu xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx rostlinu. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x období xxxxxxxx xxxx, léta x podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vodních xxxxxx. Mezi xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx stramonium x xxxxx zástupci xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxx Pelargonium xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx druhy, xxxxx xxxxx hostit xxxxxxxx X. solanacearum biovar 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx hastata, Xxxxxx xxxxxx, Cerastium xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Rumex spp., Xxxxxx alba. S. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx xxxx xx xxxxx provést xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx nebo xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxxx xxx stonku s xxxxxxxx se dá xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx (viz oddíl 2.).

3.2.1.2. Xxxxx stonku xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx a xxxxx vysuší xxxxx xxxxxxx. Potom xx xxxxxxxx části stonku xxxxxx x následujících xxxxxxx:

x) zalijí se xxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx xxxxxxx třepačce (50-100 xx./xxx) 4 hodiny xxx teplotě xx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx gumového xxxxxxx xxxx vhodného mlecího xxxxxxxx (xxxx. Homex). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx na 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X) na 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 minut, se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Další xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxxx není xxxxx, xxx lze xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Čistý nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx xxxxxxx na xxx xxxxxx díly. Xxxxx xxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxx xx xxxxxxxx x 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) nebo -68 xx -86 °X (xxxxxx) pro případné xxxxx testování.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

Test XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.9.)

4. Xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx jsou xxxxxxx xxxxxxxxxx postupy xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx koncentrace xxxxxxxx jsou xxxxxxx x oddíle 4.2.1. Xxxxxxxxxxx zvětšuje xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, tak xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxx tehdy, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx izolační xxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx PCR xxxx popsány v xxxxxx 6.1.4.2. a 6.1.6.

(6) Xxxxxx obohacovacího xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 2.3.x.

(8) Kultivace xxxx selhat x xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx populace xxxxxxx spolehlivost xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vodou.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx detekce xxxxxxx x tomto xxxxxx je xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x rovněž xxxx být použito x testování xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx substrátu. Xxxxxxxxx testu xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx více x xxxxxxx vodě xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xxx x xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx níže xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx vody, xxxxxxxxx detekce v xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), při xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxxxx. Xxxxxxx citlivosti xxxxxxxxxxx schématu by xxxx být xxxxx x xxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx negativních xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx, je třeba xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx vodě xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx vodě xx nejspolehlivější x xxxxxx pozdního jara, xxxx a xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx vzorkovacích xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vlivů xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx podmínek.

- Xxxxxx xxxxxxx dešťů x xxxxxxxxx vodního xxxx xxxx dojít xx xxxxxxxx xxxxxxx x tím i xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx vody xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx vzorkovacích xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx sterilních xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30 xx xxx xxxxxxxx x 2 m xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxx vody xx odeberou xxxxxx x xxxxx výtoku xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se odebrat xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx xxxxx, x nichž xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 ml. Xxx xxxxxxxxxxx mapování xx vyberou nejméně 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3 xx xxxxxxx toku x xxxxxxxx se xxxxxx přítoky.

4.2.1.2. Vzorky xx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxx (4-10 °C) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Odstřeďují xx 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000 g xx xxxx. 10 minut (xxxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx možno xxx teplotě 4-10 °X, slije xx xxxxxxxx xxx usazeninou x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1 xx pufru (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (minimální xxxxxxxx pórů 0,45 µx) x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx v 5-10 xx peletového xxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx nedoporučuje x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx nebo x xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx zvýšená xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx detekci Xxxxxxxxx solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx dodatcích.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Viz xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx postupy xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX testy xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx je xxxxxxx x oddíle 6.1.9.

(5) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx může selhat x xxxxxx konkurence xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx xx vliv saprofytické xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx zředění xxxxxx.

(7) Spolehlivá identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(8) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Metody xxx detekci a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x půdě

Principy

Platné xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx xxx detekci xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx vzorků xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx x xxxxxxx xxxx. Xx však xxxxx poznamenat, že xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nízkých xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx se mohou xxxxxxxxxx x přirozeně xxxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a také xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx přítomnost patogenu x xxxx xxxx xxxx xx třeba xxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx vypěstování náchylné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx, zda xxxx xxxxxxxxxx, xxx x při xxxxxxx xxxx xxxxxx unikne xxxxx stupeň xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Příprava vzorků

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xx mělo xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro vzorkování xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xx shromáždí 0,5 až 1 xx xxxx ze 60 xxxx na xxxxx 0,3 xx x xxxxxxx 10-20 xx. Xx-xx podezření xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx míst xx 120 z plochy 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx xx uchovávají xxxxxx xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx celkem 1 xx z xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx celkový xxxxx testovaného kalu. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx dobře xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx xxxx se xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, přidání 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx kamínků xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x popis xxxxx xxxx x příslušném xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx X. solanacearum

6.1. Xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx testy

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx stonku

Přítomnost X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxx xxxxxxxxxxx jednoduchý xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx úrovní xxxx. Xxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx. Sleduje xx, xxx se po xxxxxxxx xxxxxxxx objeví xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x přeříznutých xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxybutyrátu

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu z xxxxxxxxxxxx pletiva nebo xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx XXX (dodatek 2) na xxxxxxxxxxxxx sklíčko.

2. Připraví xx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx PHB negativním xx.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxx každého xxxxxxx xx rychle xxxxxxxx xxx plamenem, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx buď nilskou xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x provede xx mikroskopické xxxxxxxxxx xxxxx xxxx uvedeného xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx xxxxxxxx nilské xxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Odstraní xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx opláchne xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx odsaje xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při pokojové xxxxxxx.

x) Krátce xx xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x kohoutku. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx se krycí xxxxxxx.

x) Zkoumá se xxxxxxxx xxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx při 450 xx pod olejovou xxxx vodní xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x xx 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx se, xxx xx objeví xx XXX xxxxxxxxx xxxxx oranžová fluorescence. Xxxx xx pozoruje x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx jsou xxxxxxx intracelulární x xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx typická xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx súdánskou xxxxx:

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx sklíčka 0,3% xxxxxxxx súdánské černi X v 70% xxxxxxx x xxxxxxxx xx 10 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxx xx přebytečná voda xxxxx xxxxxxx.

x) Sklíčka xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx savým xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx zdraví xxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x pracovat x xxxxxxxxx.

x) Sklíčka xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xxxxxx inkubovat při xxxxxxxx xxxxxxx. Upozornění: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou z xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx imersí a xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x buňkách R. xxxxxxxxxxxx s růžově xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx slizu xxxx v extraktech x pletiv s xxxxxxxx xx nejlépe xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, např. červenými xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx aureus xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx instrukcí xxxxxxx. Jinak xx xxxxxx následující:

a) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µl každé xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového sklíčka.

b) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx se, xxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx aglutinace.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Očkování xx xxxxxx půdu

Poznámka:

Než se xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx detekce 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. solanacearum xx 1 xx přídaných xx extraktů xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použije se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx et al., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx od xxxxxx xxxxxxxx schopných xx živné půdě xxxx vyžaduje velkou xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx misky xxxx přeplněny nebo xxxx xxxxxx přítomny xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx inhibici, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx znovu xxxxxx xxxxxx testu.

Pří xxxxxxx xxxxxxx přípravených xxxxxxxx xx vzorků lez xxxxxxxx, xx citlivost xxxxxxx xxxxx metodou xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx však xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě od -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx desetinné xxxxxx ze xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx virulentního xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx xxxxx kontaminace xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x testování.

U xxxxx xxxx připravené xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx měla xxx xxxx xxxxx použitím x rutinnímu xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx otestována xxxx vhodnost pro xxxxxxxxx patogenu. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se testuje xxxx způsobem jako xxxxxx (vzorky).

1. Provede xx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µx extraktu xxxxxx xx 1 xxxxx xxx každé ředění.

2. Xxxxx se nechají xxxxxxxxx při teplotě 28 °C. Po 48 hodinách xx xxxxxxxxxxx jejich xxxx x xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx denně xx 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx xxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xx 3 xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx růžově xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx se xx xxxxx xxxxx tvoří xxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxx rozeznatelné xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx nebo očkují xxxxxxx zřeďování xx xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu., xxx xx získaly xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vodě (xX 6-8, bez xxxxxx) xxx xxxxxxxx teplotě x temnu nebo xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °C nebo xxxxxxxxxxxxx.

5. Provede se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) x test patogenity (xxx xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu očkováním xx xxxxxxxxxx média.

Test xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx po 6 xxxxx nejsou zpozorovány xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx nalezeny žádné xxxxxxxxx xxxxxxx typické xxx X. solanacearum , xx předpokladu, xx nedošlo x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx podezřelé kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx bujón Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx lze použít xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxx x zvýšení xxxxxxxxxx xxxxxxx. Tímto xxxxxxxx xxxxx x xx zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxx neúspěšné x xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx často xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X tohoto xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx z xxxxxxxxx kultury obtížná. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxx populací xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx saprofytů, se xxx xxxx ELISA xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx PCR xx xxxxxxx 100 xx extraktu ze xxxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek nebo xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx xxxxx půdy).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30 °X v třepané xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x uvolněnými xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx zahájením xxxxx XXXXX xxxx XXX xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx způsobem jako xx vzorky ve xxxx xxxxxxxxx testech.

Poznámka:

Očekává-li xx inhibice obohacení X. solanacearum x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx obohacením xxxxxxxx xx vzorků xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx zvyšování xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx a xxxxxxxx IF testu xx pozitivní, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx xxxxx xxxxxxx další xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx úplná.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx zdroj protilátek X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx definován jako xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx dojde x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (FITC) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xX nejméně 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx x pracovních xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxx titr.

Test xx měl xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx je xx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, xxxxxxx pokud x jsou xxxxxx xxxxxxxx xx sklíčka xxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka x homologickým kmenem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X, x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Standardizované xxxxxxxxx k xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s více xxxxxx, pokud xxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx sklíčka x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

i) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx odměřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx je xxxxxx xxx průměr okénka 6 xx - x většího xxxxxx xx xxxxxxxx větší x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 1/100 xx prvního xxxxxx.

Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx. Xxxxx řada může xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx standardní množství (15 µx je xxxxxx xxx průměr xxxxxx 6 mm - x xxxxxxx xxxxxx je xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx pelety xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx může xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx obr. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx teplotě xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx buď xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxxxxxxx, 95 % etanolem xxxx xxxxx konkrétních xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx protilátek.

Pokud xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x suchém xxxx xx nezbytně xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 měsíce) před xxxxxx testováním.

6.1.5.3. Postup xX

x) Podle přípravy xxxxxxx na xxxx x xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx jamka xx xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 titru (X/4), 1/2 titru (X/2), xxxx (X) x dvojnásobek xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxx. 5.1.ii):

Připraví xx pracovní xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x xxxxx XX. Pracovní xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx xx xxxx podle xxxx. 6.1.5.1.x) a 6.1.5.3.x)

Obrázek 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx sklíčka se xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxx papír. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx kompletně ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx každém okénku xxxx být nejméně xxxxxx xxxx množství xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxx papíře přikrytá xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx se xxxxx xx xxxxx podložních xxxxxxx x tato xx xxxxxxx opláchnou xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx po xxxx 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx v xxxxx XX. Je xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx přenosu kapiček, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xx pokryjí ředěním xxxxxxxxx FITC, kterým xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Opatrně xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Napipetuje xx 5-10 ul 0,1M xxxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx krycí tekutiny xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx sklíčko.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx nebo vodní xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx dvou navzájem xxxxxxx průměrech x xxxxx obvodu. X xxxxxx s xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx obarvené x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx okéncích xxxxxxx. Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxx při xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx xxxxxx protilátky xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx brát x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx z pupkové xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x titru nebo xxxxxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Při zjištění xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, kde xx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx za potenciálně xxxxxxxxxx a je xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx xx negativní xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx se považuje xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx PCR

Principy

Použije-li se xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx proveden druhý xxxxxxxxxxxx xxxx, x xxxx xxxxxxx nebo XX. Xxxxxxxx je XXX použita jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx v xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx doporučuje xxx xxxxx, xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaný do xxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx testovány xxxx negativní. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Pokud xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx DNA. Test XXX by xxx xxx prováděn xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na molekulární xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, xxx bylo xxxxx, xxxxxx xxxxx x přenosu XXX.

XXX xxxx xx měl xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

- xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a XXX ze vzorku,

- xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx být zahrnuty xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, do kterých xxxx přidána X. xxxxxxxxxxxx (přípravu xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 ml X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 B);

- xxxxx xxxxx, xxx XXX použít také XXX xxxxxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravují xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx odděleném od xxxxxx, xxxxx budou xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků xx měly xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx xxxxxxx připravit xxxxxxxx x umytých xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx tento xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní kontrolní xxxxxx (xxx dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jsou x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx cílovou DNA xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

a) Xxxxxx podle Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx lyzátového xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (pH 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Přidá xx 100 µx extraktu xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xx umístí xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx s xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxx. xx xxxx.

4. Přidá xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Xxxx DNA® X (Xxxxxxxxxx), dobře xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx dobu 30 xxxxx.

6. Přidá xx 100 µx xxxxxxx Xxxx DNA® X (Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µl chloroformu x xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx sníží x směs se xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxx. xxx xxxxxxx 4 °X.

9. Xxxxx xxxx xx xxxxxxx do xxxx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

10. Xxxxx se 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx na xxxx xx xxxx 10 xxx.

11. Odstřeďuje xx xxx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxxxx xxx teplotě 4 °X a xxxxxxxx xx etanol x xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µl 80 % xxxxxxx (- 20 °C) x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15 000 x po xxxx 10 minut při xxxxxxx 4 °C, xxxxxxx xx xxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx se nechá xxxxxxxx xx vzduchu xxxx x XXX xxxxxxx.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxx v 100 µx sterilní XX x xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx - 20 °C až xx použití při XXX.

17. Xxxxxxxxx bílá xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx DNA xx použije xxx xxxx XXX.

x) Jiné xxxxxx

Xxxx xxxxxx extrakce XXX, např. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx mohly xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx purifikaci XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxx efektivní.

6.1.6.2. XXX

1. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxx PCR xxxxx schválených xxxxxxxxx (6.1.6). Připraví xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

2. Xxxxxxxx xx příslušná xxxxxxx směs xxx XXX x xxxxxxxxx, xx kterém nehrozí xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Pokud xxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxx multiplexní xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Do xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx směs XXX x přidá xx xxx xxxxx XX xxxx xxx xxx, xxxxx byl xxxxxx xx xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx produktu PCR

1. Xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx se xxxxxxx 12 µl xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx gelu x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 V/cm. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (ladder) 100 xx.

2. Detekují xx proužky DNA xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 minut xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx.

3. X obarveném x XX (xxxxxx xxxxxx délky xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx velikosti x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v agarózovém xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX světlem xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxx x štěpenou xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx R. solanacearum xxxxxxxxx velikosti xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx vícenásobné XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: druhý xxxxxxx XXX očekávané xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (xxxxxxxx) xxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx primerů XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx amplikon ze xxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx vodě, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. V multiplexních xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx není xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx amplikon je xxxxxx z jednoho xxxx xxxx vzorků xxxxxxxxxxx xxxxxxx, je xxxxxxxxx na kontaminaci.

6.1.7. Xxxx FISH

Princip

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použije FISH xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx nebo IF xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx vyšetřovací xxxx x je xxxxxxxxx, je k xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou by xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx X solanacearum xx xx xxxxxxx xx extraktů ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx měl být xxxxx xxxxx proveden x xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx s extraktem, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx použije xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx R. xxxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857, xxx dodatek 3) x 0,01X fosfátovém pufru (XX) xx 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx sklíčka x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx v dodatku 3 X.

Xxxxxxx eubakteriálních oligosond xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zbarví xxxxxxx xxxxxxxxxx přítomné xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní materiál, xxxxx xx xxxxxxx x tomto testu, xx uveden x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Xxxxxxxxx xx al. (1998).

1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx se 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx do Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx po xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx xx 200 µx fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx xx x inkubuje 1 xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Odstřeďuje xx 7 xxxxx xxx 7 000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje obrázek 7.1, xxxxxxx se xxxxxxx 2 různé xxxxxx xx jedno xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (v 0,01 M PB). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) může xxx uložen xxx xxxxxxx - 20 °X xx přidání 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X případě, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx se xxxxxx množství 0,01 XX (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx sklíčku XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx se xxx plamenem.

V xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx a x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 minuty. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx sklíček.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x hybmix, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx x xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 45 °X xx dobu xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (okénka 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 a 8) xx nechají xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx krycí xxxxxxx (24 x 24 mm) xx xxxxx x xxxxxxxx 4 okénka, x xx tak, xxx xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Sklíčka se xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx hybridizace xx dobu 5 xxxxx v troubě xxx teplotě 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx se 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxx s xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx X), 1 l 1x xxxxxx (334 xx 3x hybmix x 666 ml xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 x 1/8x hybmixu (42 xx 3x xxxxxx a 958 xx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx inkubovat xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a podložní xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx sklíček.

7. Xxxxxxxx xx nadbytek xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x hybmixem xxx xxxxxxx 45°C.

8. Xxxxx sklíček xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Sklíčka se xxxxxx ponoří xx XXX (xxxx. Milli X xxxxx) x xxxxxx xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Napipetuje se 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx každého okénka x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx sklíčkem (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx buňky (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Xx3 xxxx fluorescenčně xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx zbarveny. Xxxx XXXX (xxxx. 6.1.7) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlížejí xx okénka xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxx žádné xxxx xxxx buněk, se xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx x okénkách xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx x pozitivního xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xx xxxxxxx v xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx může xxxxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxx ukazují xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx jsou pozitivní xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx sklíčka.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx FISH s xxxxx nese xxxxxxx xxxxxxxx. Xx pravděpodobné, xx x xxxxxx x bramborových hlíz x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx fluorescenčních buněk xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx křížové xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxx R. solanacearum, x když mnohem xxxx častěji xxx x testu IF.

5. X úvahu xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXX

x) Xxxxxxxx FISH xxxxx jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru jasně xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx, se považují xx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XXXX testu xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx typické xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx při použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx jako volitelný xxxx kromě xxxxx XX, XXX xxxx XXXX pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx obohacení x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Obohacení xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx může se xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx validovaný xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Doporučuje se xxxxxx titru xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx druhotných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx nebo xxxxxx xxxxx titru xxxxxxxx formulace.

Určí xx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx působeni x xxxxxx roztoku fosfátového xxxxx (XXX) xx xxxxxxx xxxx vzorky xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx xxxxxxx xxxxxxxxx podíly xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím otestovány xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx na 1 ml xxxxxxx 2 R. solanacearum (xxxx. xxxx XXXXX 4X56 = PD 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 2 X x X). Xxx srovnání xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 ml x XXX X. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx dobře xxxxxxxx xx vzorků x testování.

Standardizované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx materiály, xxxxx xx používají xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3 bodu A.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorku(ů).

Validované xxxx dva protokoly XXXXX.

x) Nepřímý test XXXXX (Robinson Xxxxx xx al., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X na 4 xxxxxx ve vodní xxxxx xxxx xxxxxx xxxx může x xxxxxxxxx xxxxxxxxx redukovat xxxxx xxxxxxxxxxxxxx výsledků).

2) Xxxxx xx stejné xxxxxxxx dvojnásobně silného xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x směs xx promíchá.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx xxxxx jamky xxxxxxxxxxxxx destičky (např. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx rovnocenné) x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx teplotě 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx z jamek. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx pomocí XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx roztok xx xxxxx v jamce xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx se vhodné xxxxxx protilátek proti X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X validovaných xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (obvykle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, než xx xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx vylije x xxxxx a xxxxx xx vymyjí jako xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x blokačním xxxxx. Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx vylije x xxxxx x xxxxx xx vymyjí xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) do každé xxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x odečítá se xxxxxxxxxx při 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx x uhličitanovém xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° X po xxxx 16 hodin.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím PBS-Tween (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx dvou jamek. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x XXX (dodatek 4) x obsahem 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xxxxx xx 190 µx do každé xxxxx x xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

5) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx ředění xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx konjugovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Xxxxx xx 190 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx při xxxxxxx 37 °C.

7) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v substrátovém xxxxx (dodatek 4). Přidá xx 200 µx xx xxxxx jamky x xxxxxxxx xx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Absorbance xxx 405 nm xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx průměrná xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) z xxxxx xx xxxxxxxx vzorky xx menší než xxxxxxxxxxx OH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku, xxxxx všechny hodnoty XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx větší xxx 1,0 (po 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx substrátem) x xxxx větší xxx xxxxxxxxxxx OH xxxxxxx x negativních xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx větší xxx xxxxxxxxxxx OH x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx xxx inhibován. Pozitivní xxxxxxx XXXXX v xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxx x xxxxxxxx kontaminaci xxxx xxxxxxxxxxxxxx vázání xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx by xxxx umožnit reprodukovatelnou xxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx testován x xxxxxxxxxx výsledkem (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx použít na xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 až - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Použije se 10 testovacích rostlin xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. kultivaru Moneymaker xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) ve xxxx xxxxx pravých xxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx se xxxxxxx xxxxx (např. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. až 3. xxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx třetího xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx výrazné a xxxxxxxx se xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx použít xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx než 23G). Xxxxxx se rozdělí xxxx xxxxxxxxx rostliny.

2. Xxxxxxxxx zářezem

Rostlina se xxxxxxx xxxx dvěma xxxxx x xxxxxxx xx kápne přibližně 5-10 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx děložními xxxxx x prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se udělá xxxxxx řez asi 1 cm dlouhý x xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx xxx xx xxxxx v místě xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxx xx utěsní sterilní xxxxxxxxx x injekční xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx vodní xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx, připravenou ze 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx, a xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx pozitivní x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxx růst x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx při xxxxxxx 25 - 30 °X a xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx zabránilo xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, musí xxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xx zcela xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vegetační komory xxxx jinak xxxxxx xxxxxxxxx. Musejí-li být xxxxxxxx x různých xxxxxx xx dobu xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx pozornost xxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx kontaminaci. Nutné xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prostor xxx xxxxxxx škůdců, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx provede xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx podezřelé xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx xx segmentů xxxxxx xxxxxxxx 1 xx z každé xxxxxxxxx rostliny, odebraných xxx místem xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx pozitivní, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx se všechny xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx na R. xxxxxxxxxxxx (bod 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné výsledky xxxxxxxx xxxx získány, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx bakteriemi X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxx izolovaného xxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx použitím nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx následující fenotypové xxxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxx přítomny xxxx xxxxxx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Klement et xx. (1990), Schaad (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx O+/F-

Katalázová aktivita +

Xxxxxxxxx xxxx podle Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Růst xxx 40 °C -

Xxxx v 1% XxXx +

Xxxx x 2% XxXx -

Arginin-dihydrolázová xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx škrobu -

Hydrolýza xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx x metody xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx IF

6.2.2.1. Připraví xx suspenze přibližně 10⁶ xxxxx na 1 xx x xxxxx XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx řada xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Použije se XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx IF xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 identifikačních xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx x 1X PBS (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx XXXXX se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x této xxxxxxx xx nejméně xxxxxxxxx x xxxxxxxxx s xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx PCR

6.2.4.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Ohřeje xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °X 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Použijí xx xxxxxxxxx postupy XXX x xxxxxxxxxxx amplikonů xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (např. Seal xx xx. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Boudazin xx xx. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx stejnou mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx se xxxxxx XXXX (6.1.7) x nejméně 2 xxxxxxxxxxxx specifickými xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se x kultury x xxxxxxxxx xxxxxxxx dosáhne xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (FAP)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx kultura xx tryptikázo-sójovém agaru (Xxxxx) 48 hodin xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx se xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2OH x 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx izolace X. solanacearum xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx jedné x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx xxxxx biovary xxxxxx xx schopností xxxxxxx x/xxxx oxidace xxx disacharidů x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 a Xxxxxxx xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx biovaru xx xxxxxxx v dodatku 2. Test lze xxxxxxx provést xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x čistou xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx při xxxxxxx 28 °X. Je-li xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx sterilní xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 jamku), xxxxxxxx xx xxxx během 72 xxxxx xx xxxxxxx zelené xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx testu.

Xxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx fenotypů xxxxxxx 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx a Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx něž xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů XXXX (Cook et xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX s xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX a ERIC (Xxxxx xx xx., 1995; Xxxxx xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx et xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (Xxxxxxx et xx, 2002; xxx dodatek 6) xxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx patřících xx skupiny 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2X) R. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou RFLP (Xxxx xx xx., 1989) a xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Taghavi xx xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx závěrečné xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x x potvrzení xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx patogenity.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kmen xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx se 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx až 2 xxxxx xxx xxxxxxx 25-28 °C x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx vystavení xxxxxxxxx nebo vyprahlosti xxxx. X čistých xxxxxx by xxxxxxx xxxxxxx mělo nastat xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx době xxxxxxxx, xxxxxxx nemůže xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum.

4) Xxxxxxx xx příznaky xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx krnění.

5) Xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 xx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx sterilní destilované xxxx xxxx 50 xX fosfátového pufru (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx na selektivní xxxxx xxxx (dodatek 2). Xx xxxxxxxx 48 xx 72 hodin xxx xxxxxxx 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. solanacearum.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx půdy pro xxxxxxx x kultivaci

Živný xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx) 23,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (monohydrát) 10,0 g

Bacto-Agar (Difco) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (SPA)

Sacharóza 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

pH 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují x xxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 g

Dextróza 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx a sterilují x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °C a xxxxx xx filtrem xxxxxxxxxxxxx roztok 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), až do xxxxxxxx xxxxxxx koncentrace 50 mg na xxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 xx xxxxx Elphinstone xx al., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx kyseliny (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Difco) (xxx xxxx. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx roztok následujících xxxxxx, xxx se xxxxxxx stanovená konečná xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 U (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032) 825 U (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxx uvedených xxxxxxxx může xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X takovém xxxxxxx xxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx o 1-2 xxx xxxx x červené xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 500 U/l xxxx xxxxxx populace xxxxxxxxxxxxx bakterií bez xxxxxxxxx růstu

Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx uchovávají x skladují při xxxxxxx 4 °X x xxxxx a xxxx se spotřebovat xx 1 xxxxxx. Xxxxx s médiem xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kondenzace. Xxxxx xxxxxxxx přílišnému xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx připravená xxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx kontrole xxxxxxx xxxxx půdy xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultury X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (viz xxxxxxx 3) x pozorováním, xxx se po 2 až 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X objeví xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, xxx vynechá xx Bacto-Agar x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid.

Upravená xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx et xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 g

K₂HPO₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Steriluje xx tlakem při xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx a xxxxxxx xx xx 50 °X. Xxxxx xx xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx xxxx xxx živnou xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Izolované bakteriální xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (tabulka 1) nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxxxx vzájemnému xxxxxxxx (tabulka 2). Xxxxxxx kmeny jsou xxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xx získat x xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx sbírka patogenních xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií rostlin (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Francie.

Tabulka 1: Xxxxxxxxxx panel xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxxxx z xxxxxxxxx sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX sérologicky xxxx xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx detekčních xxxxx

x) Xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx

Mražené xxxxxx pelety bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x PCR xxxxx. Protože životaschopnost xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx x pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx se 48hodinová xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx xxxx a suspenduje xx v 10 xX fosfátovém xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx xx jí xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx hustotě 0,15 xxx 600 nm.

Odebere xx dřeň x xxxxxxxxx konců 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x bílou xxxxxxx, o xxxxx xx xx, xx xx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx xxxxxxxx a resuspenduje xx xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 sterilních xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx s 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx se 100 µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx ředění x xxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 N1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx každého xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °X až xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx potvrzeny xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx se provede xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x XXXX testy xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx XX, FISH a XXX musí xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx pozitivních kontrol x xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx skladovat xx xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x extrakci xxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací nebo xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a sterilizuje x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Tento pufr xx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx částí xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx xx pelety.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 g

NaH₂PO₄. 2H₂O 0,4 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x sterilizuje v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx pufr xx fyziologickém xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Tento xxxx se používá x xxxxxx protilátek.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx pufr se xxxxxxx k xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx krycí xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 g

Glycerol 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx roztoky xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Vector Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Pufry pro xxxxx xxxxxxxxx testu XXXXX

3.1. Dvojnásobný uhličitanový xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °C po xxxx 15 minut.

Pokud xxxxxxx obsahuje vysoký xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx možné xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx chloridu xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (10 x PBS), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Tween 20 5 ml

Destilovaná xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 g

Destilovaná xxxx xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx xxx substrát xxxxxxxxx xxxxxxxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx voda 800 ml

Rozpustí xx x koncentrovanou XXx xx upraví pH xx 9,8.

Doplní xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx xxx 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) v 15 ml xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1. Potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx pufr (PBS) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 g

NaH₂PO₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1 000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Tween 20 5 ml

Destilovaná voda 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Diethanolamin 100 ml

Destilovaná xxxx 900 xx

Xxxxxx se x nastaví xx xxxxxxx pH 9,8 xxxxxxxxxxxxxx HCl.

Dodatek 5

1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x S/s,

kde X = plocha xxxxxxx pole na xxxxxxx x více xxxxxx x

x - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 podle xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =X x 1&xxxx;000/x x F,

kde x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx okénku a

F = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx a činidla xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. solanacearum xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bakterií (viz xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX GGT XXX XXX CTA XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-XXX ACT XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx PCR

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx při 96 °X (denaturace templátové XXX)

35 cyklů: xx) 20 xxxxxx při 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 30 xxxxxx při 72 °C (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (závěrečná xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Perkin Xxxxx 9600. Použití jiných xxxxxxxxx může vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), iii) x iv).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX vzniklé xxxxxxxxxxx x R. solanacearum XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x enzymem Xxx XX po inkubaci xxx xxxxxxx 37 °X.

2. Protokol XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1: 5'-xxx cga acg xxx gcg xxx x -3'

Reverzní primer Xx-2: 5'-xxx gat xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx DNA = 553 xx.

2.2. Reakční xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 xX MgCl2)
BSA (frakce X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125 μl	0,1 mM
Primer Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μM)	0,5 μl	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μl	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Metoda xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Perkin Elmer (XxxxxXxx) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 s xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx a xxxx xxxxx být xxxxxx xxxxxxx ve stejných xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Reakční podmínky XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 cyklus x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 sekund xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (syntéza extenze)

vi) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Research PTC 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx možná xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx Xxx I xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx velikost 457 xx x 96 xx.

3. Xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx PCR s xxxxxxx kontrolou (Xxxxxxx xx al., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxx primer XX-5-X: 5'-XXX XXX AAG XXX TTG ACG XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX TAT XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 bp (xxxx xxxxxxx XX). Očekávaná xxxxxxxx amplikonu xxxxxxx xxxxxxxx PCR 18S xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 minut xxx 72 °X (konečná xxxxxxx)

xx) xxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro použití xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů může xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) a xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR vzniklé xxxxxxxxxxx z DNA X. xxxxxxxxxxxx vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Bsm 1 xxxx Isoschizomere (např. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx době 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Pastrik xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX AAC XXX XXX XXX XXX CAT TA-3'

Reverzní xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX GGC XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-TTC XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové DNA X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 bp

s Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Xxxxxxx směs XXX

x) Protokol PCR xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °C.

Poznámka:

Tento program xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

4.4. Restrikční enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-1-X xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X nebo Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X. Produkty XXX vzniklé xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx pomocí primerů Xx-1-X x Xx-3-X xxxxxx žádná xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Bromfenolová xxxx (10 % zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) voda (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Pufr 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx kyselina octová 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Validovaná xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx specifická xxx R. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-xxx xxx xxx xxx gct xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Fixační xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx xx 9 ml xxxxxxxxxxx čisté vody (xxxx. Xxxxx pure xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx přibližně 60 °C a xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Parafonnaldelryd xx xxxxxxxx po xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx míchadlem.

ii) Xxxxxx xx pH xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx fosfátového xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxxx xx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x v xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx se xxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx prachem xxx xxxxxxx 4 °X do dalšího xxxxxxx.

3. 3x Hybmix

NaCI 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

EDTA (xxxxxxxxxxxxx xxxx filtr x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx xx xx x, xxxxx potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx XXX 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 xxxx OLI2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxxx x xxxxxxx 1. Xxx každé xxxxxxx (xxxxxxxxxx dvojmo 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µx hybridizačního xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX JE XXXXX XXXXXXXX, NUTNO XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXX POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Doporučená xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx světlocitlivé xxxxxxxxxx xx uchovávají x xxxxx xxx teplotě -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx chrání xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo elektrickým xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x rajčete

Vysejí xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx lilku (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx lístky (10 až 14 xxx) xx přesadí xx xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku x xxxxxxx by xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne: 14 xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °C.

Vhodná xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Black Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., L. Krumholz xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx probing xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, phylogenetic xxx xxxxxxxxxxxxx studies xx microbiology. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Council Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 Xxxx 1998 xx xxx control xx Xxxxxxxxx solanacearum (Smith) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofthe Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, P. Labarre xxx B. Xxxxx. 1999. Design xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx identification xx Xxxxxxxx isolates. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Palomo, X.X., Collar, J xxx Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: detection xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx tkat xxxxxxx xxxxxxxxx xxx the xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Interactions 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx of a xxxx-xxxxxxxxx medium for xxx isolation xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx huternational Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., Xx-Xxxxxxx, H.M., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx nitrate xxxxxxxxxx in xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Bacteriology 69; 269-280.

10. Ito, X., Y. Xxxxxxxx, X. Fujii, X. Xxxxxx, X. Kaleya-iwaki, X. Xxxxxxxxx and X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of viable xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx soli xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx a XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) A xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx potato tubers xxx some xxxx xx xxx sensitivity xxx xxxxxxxxxxx. Bulletin XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xxxxx xxxx fatty-acid xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

13. Xxxxxx, A. 1954. The relationship xx pathogenicity xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Rudolph, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Budapest, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Stead, D.E. 1987. Methods xxx xxx xxxxxxxxx of xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx scientific Xxxxxxxxxxxx Xxx., Oxford. 216 pp.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, M.T., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx enricliment xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx molecular xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. In: X.X. Xxxxx et xx., (xxx). Xxxxxx Academic Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17. Xxxxx, F.J., Xxxxxxxxx, X.X., Stephens, X.X. xxx Xx Bruijn, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx and XXX. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxxx, X.X. and Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx by xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx to xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., F. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Wang, T.-H Xx, X. Maghirang, X. Fegan, X.X. Xxxxxxx, X. Krishnapillai, X.X. Hong, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxxx. 1997. X novel xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx species and xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx PCR xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Mol. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. and Xxxxx, E. 2000. Xxxxxxxxx of R. xxxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx xx polymerase xxxx xxxxxxxx. J. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Elphinstone, X.X. xxx Xxxxxx, X. 2002. Sequence xxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx spacer xxxxxx with xxxxxxxx xxxxxxxx control. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Plant Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Jones, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx of xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx causative xxxxx of xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Schaad, W. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Minnesota: 373 xx.

24. Xxxx, S.E., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, and X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx ygii, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx detection xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Gen. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, M. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Burkholderia solanacearum (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 in Xxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Hayward, X.X., Xxx, XX, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx on 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Systematic Bacteriology 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Xxxx, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Trigalet, A., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Race 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx as xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx rep-PCR. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, X. and Elphinstone, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Ecological Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Berlin) xx. 44-49.

29. Weller, S.A., Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx xxxxx an xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx flourogenic 5' xxxxxxxx TaqMan xxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx rot of xxxxxx, by xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Appl. Environ. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.