Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx stanoví xxxxx §88 xxxx. 2 zákona č. 326/2004 Xx., o xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x xxxxx některých xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "xxxxx") k xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx úpravy

Tato vyhláška xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx předpisy Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx¹⁾ a xxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxxx xx xxxxx České xxxxxxxxx xxxxx šíření Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx al. subsp. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx et xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru, x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx se

a) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx výskytu se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x prováděla se xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx jejich xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx účely této xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxxx Clavibacter michiganensis (Xxxxx) Xxxxx et xx. xxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx et Kotthoff) Xxxxx xx al.,

b) xxxxxxxx hnědé hniloby - xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx tuberosum X.) x výjimkou semen xxxxxxxx, a xxxxxxx xxxxxxxx x čeledi xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), u xxxxx xxxx potvrzena xxxxxxx infekce xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - brambor (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x výjimkou xxxxx xxxxxxxx, rajče xxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx L.) xxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx dulcamara X.) x ostatní rostliny x xxxxxx lilkovitých (Xxxxxxxxxx), u nichž xxxx potvrzena xxxxxxx xxxxxxx původcem xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx průzkumem - průzkum xxxxxxxx xx zjišťování výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxx xxxxxx,

x) vymezovacím průzkumem - průzkum x xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxx způsobu šíření xxxxxxx x x xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx které xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby - podezření x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx prostředku, xxxxxx xxxx jejich xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, podle §11 odst. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - podezření x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, x objektu xxxxx x xxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) zamořením původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx vymezené Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx správou (xxxx xxx "rostlinolékařská xxxxxx"), xx xxxxx xx xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxx. 1 xxxxxx x důvodu potvrzení xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx správou, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 zákona x xxxxxx podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby,

k) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vznikla vegetativním xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx, xxxxx vznikly x xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx partie, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx partie xxxxx,

2. xxxxxxxxxxx klonově xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx klonově příbuzná xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xx bezprostředně xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Rostlinolékařská xxxxxx xxxxxxx každoročně x souladu x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Detekčnímu xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx podléhají

a) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx z České xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 xxxx. 2,

x) namátkově xxxxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxx Evropské xxxx (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx partie nesadbových xxxxxxx xxxxxxx z Xxxxx republiky a x xxxxxxxxx členských xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx zóně vymezené xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx průzkumu xx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx podléhají všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx území vymezeném xxxxx §5 odst. 1 xxxx. c).

(4) Xxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xxx rostlinolékařské xxxxxxxx zásilek xxxxxxxxxx xx třetích xxxx x xxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx dovážené partie xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx²⁾ x namátkově vybrané xxxxxx ostatních brambor,

b) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx k vývozu xx třetích zemí.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx navíc podléhají

a) xxxxxxx rostlin rajčete xxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxx odpady x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx vodní xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x výskytu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x b), xxxxxxxx 3 a x odstavci 4 xxxx. x) z xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx, x případě xxxxxxxx x odstavci 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxx, x xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxx xxxxxxxx, v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 písm. x) a x),

x) xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin x příznaky xxxxxxxx xxxxxxxx hnědé hniloby x případech xxxxxxxxx x odstavci 5 xxxx. x),

x) laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x případě uvedeném x xxxxxxxx 5 xxxx. x) x x odstavci 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x dobu xxxxxx vzorků xxx xxxxxxxx, prováděném xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7, xxxxxx tohoto xxxxxxxx a způsob xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx s §10 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxxxxxxxxx správa xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x biologie xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxxxxx xx aktuální xxxxxxx xx výskytu anebo xx xxxx rizika xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x zveřejní xx Věstníku Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správy (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx a určení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx rostlinolékařskou xxxxxxx v xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx a xxxxxxxxxxx ve Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx rovněž xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx činnosti Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. b) xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx správou xxxxx §72 xxxx. 5 xxxx. i) xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx odstavce 8.

(10) Xxxxxxxx průzkumu prováděného xxxxx odstavců 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx odkladu xxxxxxxxx xxxx fyzické xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx partii bramboru xxxx xxxxxxx x xxxx xx oprávněna xxxx partii uvádět xx xxx nebo xx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx x rajčete také Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx zemědělskému.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 8 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x souladu s §10 odst. 5 xxxxxx xxxxxx ročně x xxxxxxx stanoveném x příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xx xxxxxx zajištění xxxxxxxxxxx úrovně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x původce xxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxx. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 až 6 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx členským státům x Xxxxxx, a xx v případě xxxxxxxx x rozmnožovacím xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx pozemcích množitele, xx 1. září, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, týkající xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Podrobnosti tohoto xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xx podezření z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx zjištění vizuálních xxxxxxxx napadení těmito xxxxxxxxxx organismy a x případě původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx rostlinolékařskou xxxxxxx xxxx xxx jejím xxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx odborného xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ zajistí xxxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního testování, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 a xxx xxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, s xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx vyvrátit.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahájí xxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx šetření xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx podezřelého xxxxxxx a x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx přesun xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx těch, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx dohledem xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x

x) nařídí xxxxxx xxxxxxxx založená xx xxxxxx odhadovaného xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x cílem xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx včetně xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx všech xxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx x x objektech xxxxxxxxx x podezřením x xxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx podezření xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, povrchových xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx v některém xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx úřední xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx podrobnosti xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x bude x xxxxx xxxxxx vhodným xxxxxxxx spolupracovat.

(5) Xxxxx xxxx o podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxx původ x Xxxxx republice xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx testování xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxx správa x xxxxxxx x §76 xxxx. 2 xxxxxx x x xxxxxxxxxxxx x aktuálním xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby a xx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxx x průmyslového xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx xx zamořené xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx jejich xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx přišly xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálem, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx včetně těch, xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx pěstebního xxxxxxxxx, x pozemek, xx nichž xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovány x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx zaměřené xx zjištění xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx bodu 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x na xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstování, xxxxxxxxxxx x zalévání xxxx jiné pěstitelské xxxxx xx zamořeným xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x),

x) xxxxxx karanténní xxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx zamořených předmětů xxxx objektů podle xxxxxxx a) x xxxxxxxxxxxx zónu xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxx xxxxxxx b) x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby v xxxxxxx s ustanovením xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx původce hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxx na xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xx hostitelské xxxxxxxx x xxxxxx lilkovitých x doprovodné vegetace, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx by xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx povrchovou xxxxx mohlo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx brambor, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx určit xxxxxx zamoření,

b) xxxxxx x souladu s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx úředního xxxxxxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx a) xxxxxxxxxx xxxx, x níž xxxx xxxxxxxxx vzorky, xx zamořenou,

c) vymezí xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx povrchové xxxx za zamořenou xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx zónu xx xxxxxxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x jeho xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Rostlinolékařská xxxxxx xxxxxxxxxx oznámí xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), popřípadě xxxxxxxx 2 xxxx. x), x sdělí xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. c), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x tomto oznámení xxxx xxxxxxx.

(4) Pokud xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby v xxxxxxxx, xxxxxxx anebo xxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx a xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx území, popřípadě xxxxxxxxxxxx zónu.

(5) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve Věstníku xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx šetření xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxx 2 xxxx. c) x xxxxxxxx 4.

§6

Testování klonově xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx dohledaných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx klonově xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxxx xx zamořené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. a), x xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx rozmnožovacího materiálu²⁾, x xx x xxxxxxx potřebném xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x rozsahu xxxxxxx zamoření x xxxxx xxxxxxxx míru xxxxxx xxxxxxx šíření xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxxxxxxxxxxxxxx správa x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx zamořené, xxxxxxx xxxxxx možného xxxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. a), x) x x).

§7

Opatření xxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxx xxx xxxxxx a pod xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správy xx x ní xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, pokud xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. b) smí xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx uvedeným x xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxx xxxxx, že neexistuje xxxxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx odpadů, stanovené x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx partie, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxx §6 xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. a),

c) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx jiné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), xx xxx xxxxx nebo xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx pomocí vhodných xxxxx uvedených v příloze č. 6 x xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce xx tyto xxxxxxx x xxxxxxxx za xxxxxxxx ani xx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. x), musí xxx provedena xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 a v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx uvedená x xxxxxxxx 1, xxxxx xxxxx tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx nařízených podle xxxxxxxx 1 xxxx. x) uvnitř karanténního xxxxx a x xxxxxxxxxxxx zóně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx osob, registrovaných xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Rostlinolékařská xxxxxx xxxxx xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. b) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstavce 1 a xxxxxxxx 2 po jejich xxxxxxx a po xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x jejich xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx x xxxxxxx s §7 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx přechovávání x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx opatření při xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Testování xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Rozmnožovací xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, vypěstovaný na xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxxxx průzkumu xxxxx §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x souladu x §3 xxxx. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx.

(2) Testování xxxxx xxxxxxxx 1 xx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, pokud xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx původem x České xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx byl v xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx potvrzen xxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxx

1. xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx vzorky všech xxxxxx základního rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx potvrzené xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zaměřením xx xxxx souvislost, xxxx

2. reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx materiálu bramboru xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx žádná xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího materiálu xxxxxxxx⁴⁾ xxxx reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x následujícím xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx x xxxxxxxxx uplynulém xxxxxxxxxx xxxx potvrzen x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky.

§9

Účinnost

Tato vyhláška xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx č. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE KROUŽKOVITOSTI

Předložené xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, které xxxx xxxxxxxx:

x) diagnózy xxxxxxxxxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x rostlinách xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx přípravu testovaných x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx xxxxxxx v dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx podílely xx optimalizaci a xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku č. 1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek s xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx odpadů a xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry musí xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx vybraných xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx uchovávání x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí xxx uplatněno xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, xxx xx uvedeno x §4 odst. 1, xxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx x diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx vzorku, xxx xx xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx test (TF xxxx PCR/FISH) pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx druhý screeningový xxxx. Xxxxx xx x xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx potvrzeno x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx negativní, xxx xxxxxx xxxx považován xx xxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx důvodu xx xxxxxxxxx XX xxxx podle §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx XX xxxxx potvrzený xxxxxx screeningovým xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x potvrzením patogenity.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x v xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx kroužkovitosti

Postup xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx s podezřením x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci patogenu x xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx diagnostickém xxxxx x v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus.

(1) Xxxxx příznaků xx x xxxxxx 2.

(2) Vhodné testy xxxx:

- XX test (xxxxx 4),

- PCR xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx není xxxxxxxxxxxx, kultivace v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx infekce xx nemusí xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx patogena xx izolačním xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx neselektivní x xxxxxxxxxx média, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Popis typické xxxxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxx negativní, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx identifikace čisté xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus se xxxxxxx za xxxxxxx xxxxx uvedených v xxxxxx 9.

(7) Zkouška xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 10.

1.2. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx určen ke xxxxxxxx latentních xxxxxxx x hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, z xxxxx xxxxx je xxxxxxx xx xxxxx biologickém xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx je Xxxxxxxxxxx rnichiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxx jednoho screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx testů.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x na xxxxx počet, jestliže 200 xxxx není x xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx testy založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx tento xxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytný xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých biologických xxxxxxxxxx. Pokud xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Další xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX test.

Použijí se xxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx a xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx činidla x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx MTNA xxxxx xxxx XXX-88 média x xxxxxx resuspendované xxxxxx 1/100. Typické xxxxxxx lze xxxxxx xxxxx 3-10 dní xx xxxxxxxxx na xxxxxx. Xxxxxxx patogena xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vyžaduje xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus na xxxxx a xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se kultivační xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx pro biotest (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x izolaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx selektivního xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx). Test xxxxxxxx xxxxxxxxx inkubační podmínky xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx inhibitory Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na XXXX xxxx NCP-88 médiu xxxxxxxxxxxxx tento test xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Kultivace xxxx xxxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx stejné pelety xxxx xxxxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x v případě xxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx identifikace čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx testů popsaných x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rostlin bramboru

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxx xxxxx 3.2.

(2) Metody xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddílu 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx tento test xxxxxxxxx, je vzorek xxxxxxxxx xx negativní. X případě, xx xx xxxxx test xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx test x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) XX xxxx je xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx xxxxxx v oddílu 6.

(7) XXXX test xx xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 7.

(9) Kultivace xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx potřeby xx provede xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x kterých xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx dosáhne xxxxxx xxxxx popsaných v xxxxxx 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx je popsán x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx vyšetření xx xxxxxxxxxx příznaků kroužkovitosti

2.1. Xxxxxxxx bramboru

V xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx zjistí xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxx až xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx se xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx chorob, stáří xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx mohou xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx poli xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx je xxxxxxx pomalé x xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxxx infekci xxxxxx xxxxxx, i xxxx xxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx tvarované listy. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx části stonku xxxxx mají xxxxxxxxxxx, xxxxx xx oranžové xxxxxxxxxxx partie. Xxxxxxxxxx xxxxxxx lístky, listy x dokonce xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx listy x xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx příznaků xxxx xx internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, zejména xxxxxx pupku. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hlízy xxxx mít xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx příznakem je xxxxxxx zabarvení xxxxxxxx xxxxxxx svazků x xxxx, kdy xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x cév xxxxxxx sýrovité xxxxx. Xxxxx exsudát xxxxxxxx xxxxxxx bakterií. Vodivá xxxxxxx xxxxx zhnědnout x xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx být xxxx xxxxxxxx omezeny xx xxxxx část xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx xx postupně xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx vodivých pletiv: xxxxxx xxxxxx část xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, často x xxxxxxxxxxxxxx okraji. X xxxxxxxx xxxx xx x Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx střední xxxx xxxxx s prstencem xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x druhotnému xxxxxxxxx se vznikem xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx být xxxxxxx, ne-li nemožné, xxxxxxxx pokročilé xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Možné xxxx x atypické xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Public/irc/sanco/Home/main.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx bramboru

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx výkladu xxxxxxxx. Xxxxxx však lze xxxxxx xxxxxx i xxx vzorky s xxxx než 200 xxxxxxx, pokud xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx testování xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx bramborový extrakt xxx xxxxxx také xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Použijí xx xxxxxx dezinfekční prostředky (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx má být xxxxxxxx PCR xxxx, xxx odstranění možné xxxxxxxxx DNA) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx nechají xxxxxxxx xx vzduchu. Xxxxx xxxxxx mytí xx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx, že xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX test xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nožem xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx výkrojky vodivého xxxxxxx x pupkových xxxxx brambor. Xx xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky. Xx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx zpracovány xx 24 hodin xxxx xxxxxxxxxxxx při -20 °X po xxxx nejdéle xxxx xxxxx.

Xxxxxxx hlízy x xxxxxxxxxxx příznaky bakteriální xxxxxxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx vizuální xxxxxxxxx xxxx hlízy xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx nechají xxxxxxxxxx xx xxxx 2 xxx xxx pokojové xxxxxxx x uchovávají xx v xxxxxxxxx xxx teplotě 4 - 10 °X xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Všechny xxxxx ve vzorku xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, musí být xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx možné, uchovávají xx x xxxxxx xxx přidání pufru, x xxxxxx po xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx x suberizace výkrojků x xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakterie xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) výkrojky xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3) x třepají xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot/min) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) výkrojky se xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), buď v xxxxxx xxxx rozdrcením x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku za xxxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx rozlití během xxxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (nože) x xxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX xxxx, xx nutno xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx drcení x xxxxxxx xx jedno xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx zakalený, pročistí xx buď xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx frakce xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x xx dobu 15 xxxxx (xxxx 10 000 x po xxxx 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10°X x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µx xxx test xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µl xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) k 500 µ1 referenční poměrné xxxxx x ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx vířením x uloží xxx xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (měsíce). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°C.

Opakované xxxxxxxx x rozmrazení se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, aby xx xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx a vzorky Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odděleně, xxx se předešlo xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x pro xxxxxxx xx XX xxxxx x všechny xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx bramboru

Poznámka.

Pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx populací Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx vzorky až 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx průzkumy, měly xx xxx založeny xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Pomocí xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx nože xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžek xx xxxxxxxx xxxx o xxxxxxxxx 1-2 cm xx spodní strany xxxxxxx stonku přímo xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx osuší xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx v uzavřené xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Části xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx:

x) xxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) x třepají x xxxxxxx třepačce (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 hodin xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) části xx okamžitě xxxxxxx x pevném xxxxxxxxxx xxxxx s přiměřeným xxxxxxxxx extrakčního pufru (dodatek 3) za xxxxxxx xxxxxxxx tloučku nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx nebo maximálně 24 hodin xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx dekantuje supernatant.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx obvykle není xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx vzorkový xxxxxxx xx rozdělí xx 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx polovina se xxxxxxx během testování xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) sterilního xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X (měsíce), xxxxx xx xxxxx xxxxx testování.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX xxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx byla xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx výsledek xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx screeningový xxxx proveden test XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx se test XX použije xxxx xxxxx screeningový xxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX test xxxxxxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxx xxxx, používá xx xxxx polyklonální xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxxxxxx výsledku lF xxxxx s polyklonální xxxxxxxxxxx může xxx xxxxx vyšetření xxxxxx x xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, ale méně xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx kmenu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxxx xxxx protilátek. Xxxx xx stanoven xxxx nejvyšší ředění, xxx kterém xxxxxxx x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální xxxxxxxxxx by xxxx xxx IF titr xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x pracovním ředěni (XX) x xxxxxxxxx xxxxx nebo xx xxxxx. Používají se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx provádí xx xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx extraktech. X xxxxxxx potřeby xxxx xxx úspěšně proveden xx extraktech xxxxxxxxxxxx xxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx lze xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx po dobu 15 minut při 7&xxxx;000 g x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx peletového xxxxx. Xx často xxxx xxxxx, zejména pokud xxxx sklíčka se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Připraví se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo x xxxxx srovnávacím xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx infikované přirozenou xxxxxx (uchovávané lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C) xx xx mělo xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx podložním xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x více xxxxxx, xxxxxxx s 10 xxxxxx o xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx test xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx na xxxx xx xxxxxxxx jedním x následujících xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx okénka x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - pro xxxxx okénka objem xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety 1/100 xx prvního okénka. Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxxx xxxx xxx použít jako xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx okénka x xxxxxxx 6 xx xx vhodné 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 a xxxxxxx xxxxxxx do xxxx xxxxxx. Druhou xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Vysuší xx kapky xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx na teplotu 40 až 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 minut xxx xxxxxxx 60 °C), xxx plamenem xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X případě xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx skladovat xxxxxxxx x suchém xxxx xx co možná xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX testu:

a) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka na xxxx v xxxxxx 4.1 xxxx. a):

Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v XX xxxxx. V xxxxx xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (T/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), titr 1/2 (X/2), xxxx (T) x dvojnásobný titr (2X).

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x oddílu 4.1 xxxx. b):

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. písm. a) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx pokryje xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx následovně:

4.3.2. Podložní xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx papíře xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxx se ponořením xx xxxx 5 xxxxx v xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, které xx xxxxx xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Sklíčka xx xxxxxx na xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx xx pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx se stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Zakrytá xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx se opláchnou x umyjí xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Opatrně xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx 0,1M xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx tekutiny xx xxxxxxx okénka x xxxxxxx krycí xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx epifluorescenčním mikroskopem x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx při xxxxxxxx 500x až 1000x. Zkoumají xx xxxxxx ve xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x kolem obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx buněk se xxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x určeném xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovním xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx IF xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx se jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x testovacích okénkách xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí být xxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx fluorescencí nelze xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X xxxxxxxx z xxxxxxx části xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx mohou vyskytnout xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx a křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x titru xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx výsledku XX xxxxx:

x) Při zjištění xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx odhadne průměrný xxxxx typických buněk x 1 mikroskopickém xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x vzorků, kde xx počet typických xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxx 5x10³. Vzorek xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

x) Výsledek IF xxxxx je xxxxxxxxx xxx xxxxxx, které xxxxxxxx méně xxx 5x10³ buněk xx 1 xx resuspendované xxxxxx x vzorek xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx nutné.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxx XXXX test x je xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX test xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, je x xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus (dodatek 7). Xxxxxx testování touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx ředtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx by měl xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx možné xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 xxxx -68 až -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu ze xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx ml (např. xxxx XXXXX 4053 xxxx PD 406) x 0,01 M xxxxxxxxxxx pufru (PB) x 3-5 xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx sklíčka x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx extraktu xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx oligosond xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx zbarví všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako u xxxxxx.

5.1. Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

5.1.1. Připraví se xxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx každého xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxxxxx po xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Odstraní xx supernatant x xxxxxxxx xx xxxxxx x 500 µx xxxxxxxxx roztoku připraveného xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx se x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx je 96 % xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX x 50 µl 96 % etanolu. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxx teplotě 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx po xxxx 8 minut xx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µx 0,01 M PB (xxx dodatek 3).

5.1.5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx suspenze na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, přičemž xx použijí 2 xxxxx vzorky xx xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °X po přidání 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxx xx xxxxxx odstředěním, xxxxx se stejné xxxxxxxx 0,01 X XX x xxxxxxx xx protřepáním.

Obrázek 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx sušičkou sklíček xxx teplotě 37 °X) x xxxxxx xx xxx plamenem.

V xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx by měla xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx prachem x x xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx L-6876) x 10 xx xxxxx (100 mM Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx roztok xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Každý xxxxxx se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx lyzozymu x inkubuje po xxxx 10 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x osuší xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx lyzozymu 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µg.ml^-1 x xxxxx (20 mM Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky x inkubuje se xxx xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5.2.2. Buňky xx xxxx xx xxxxxxxxxxxx sériích 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx na xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx se přeinkubuje x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °X xx xxxx xxxxxxx 10 minut.

5.2.4. Xxxxxxxx xx hybridizační xxxxxx (dodatek 7) s 45 µx xx 1 sklíčko x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X a xx každého ze 4 xxxxxx xx xxxxxxx / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µx hybridizačního xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) tak, xxx pod ně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxxxx vlhké komory x hybridizuje xx 14 - 18 x x peci xxx xxxxxxx 55 °X x temnu.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = UM), 1 x 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x hybmix x 833 xx XXX). Xxxxx z xxxx xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx teplotě 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx sklíčka x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x kádince x 1x xxxxxxxx xxx teplotě 55 °X.

5.2.10. Držák sklíček xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x xxxxx xx inkubovat xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Sklíčka xx ponoří xxxxxx xx XXX x xxxxxx na filtrační xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx filtračním xxxxxxx. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (např. Vectashield, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx podobný) xx xxxxx jamky x celé sklíčko xx zakryje xxxxxx xxxxxx sklíčkem (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX testu

5.3.1. Xxxxxxx se prohlížejí xxxxx x mikroskopem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se zvětšením 630x xxxx 1 000x xxx olejovou xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein xxxxxxxxxxxxx (XXXX) jsou eubakteriální xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx obarvené Xx3 xxxx fluorescenčně xxxxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx pozitivních kontrolních xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx okénka napříč xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. U xxxxxx, kde xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx nejméně 40 xxxx mikroskopu.

5.3.2. Xxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testovacích xxxxxxx (viz internetová xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx v xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx zopakován. Xxx podezření x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test zopakován. Xx se xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx FISH xxxxx. V xxxxxxxx x xxxxxxx části xxxxxxxx a xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx morfologií a xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx často než x IF xxxxx.

5.3.5. X úvahu xx xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXX:

x) Xxxxxxxx FISH xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx při xxxxxxx XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx pozorovány xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x žádných negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx jasně fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx alespoň 5 x 10³ typických xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se považují xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx typickou xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx IF xxxx. Xxxxx xx XXX xxxx používá jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxx tehdy , xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by mělo xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaných xx xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx dosažení xxxxxxxxx citlivosti x xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x protokoly. Xxxxxxxxxx se používá xxxxxx s interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX test xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx laboranti v xxxxxxxxxxxx specializovaných xx xxxxxxxxxxx biologii, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (u xxxxxxx xxxxxxxx DNA x XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx jako x xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX test xx xxx zahrnovat následující xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx vzorku,

- xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, x nimž xxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx ve vodě x xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. NCPPB 2140 xxxx NCPPB 4053),

- xxxxx xxxxx použít xxx xxxxxxxxx PCR xxxxx také XXX xxxxxxxxxxxx z pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků.

Aby se xxxxxxxxx možné xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků xx xxxx být pokud xxxxx xxx zeminy. X případě xxxxxxx XXX testu xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x umytých brambor.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx vzorky. Xxxxxxxx xx kontrolní xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků jsou x xxxxxxxxx různé xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx reakcí x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x extraktu vzorku.

Následující xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx použití x xxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx podle Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx lýzového xxxxx (100 mM XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [pH 8,0], 1 mM XXXX [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 ml.

2. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxx xx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx lázně o xxxxxxx 95 °X xx dobu 10 xxxxx.

3. Mikrozkumavka se xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx zásobního roztoku xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx xx 1 xx v 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x xxxxxxxx se při xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx Xxxx XXXX roztok X (Xxxxxxxxxx), dobře se xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se při xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx XXXX roztok X (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx xxxxxxxx třepáním, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx mikrozkumavky x xxxxxx začne xxx xxxxxxxxxxx viskózní.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx třepáním, xx xx viskozita xxxxx x směs xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x po xxxx 20 xxxxx při 4 °X pro xxxxxxxx fází x xxxxxxxxx mezifáze.

9. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx xx promíchá xxxxxxxx a inkubuje xx na xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx se xx 15 000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x pelety xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µl 80 % etanolu (-20 °X) a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Odstřeďuje xx na 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Peleta xx xxxxx uschnout na xxxxxxx xxxx v XXX xxxxx vac.

15. Xxxxxx xx resuspendujte x 100 µx xxxxxxxx vody (XXX) x nechá xxxx xxxxxxx 20 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx -20 °C xx xx xxxxxxxxxx xxx PCR.

17. Xxxxxxxxx xxxx usazenina xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxx XXX xx xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX xx xx mohly xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx purifikaci XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx efektivní.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx a kontroly xxx PCR podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx se jeden xxxxxxxxx roztok xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, kde xxxxxxx xxxxxxxxxxx, podle xxxxxxxxxxxx protokolu (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xx multiplexová reakce, xxxxx zahrnuje také xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Xx sterilních XXX xxxxxxxxxxxxx se přidá 5 µl extraktu XXX xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx xxxx XXX a xxxxx xx xxxxxx sterilní xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx použit při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx program XXX (dodatek 6)

6.3. Analýza produktu XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx PCR elektroforézou x xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx se nejméně 12 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x každého vzorku xxxxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X xx cm. Použije xx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 xx ladder.

6.3.2. Xxxxxxxx xx proužky XXX xxxxxxxx x ethidium xxxxxxx (0,5 xx xx l) xx xxxx 30-45 xxxxx, xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. X obarveném x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) prosvíceném xxxx xx hledají xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxx pravost amplikonu XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx enzymem a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx naštěpené xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx amplikon typický xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x daném xxxxxx, xxx xxx zjištěn xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx vícenásobné XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery: xxxxx xxxxxxx PCR očekávané xxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxxx x daným xxxxxxx).

XXX test je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx typický xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x vzoru (xxxxx xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx žádným x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx s druhou xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Poznámka:

Lze xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxx, ale x xxxxxxxxx xxxxxxxx x Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x inhibici xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxx amplikonů.

Lze mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx získán x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx zkoušek.

7. Test xx lilku xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie xx 1 ml xxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx očekávat při xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx však xxx úspěšně xxxxxx x na xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x glycerolu xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxxxxxxx xxxxxxxxxx selektivní xxxxxxxxxxx xxxxxx pro růst Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx nepřítomnosti příznaků x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxxxx optimální xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Peleta podle 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 xxxxx do xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx využití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx níže xxxxxxx xxxxxxx potřeba 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx I

7.2.1. Xxxxx květináč xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (pro xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 cm xx xxxxxx xxxx pěnového xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx 5 xx hloubky, 10 cm xxxxx x 15 xx xxxxx). Pro xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx stonek x xxxx umístí xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxx xx místě xxxxxxx xxxxxx kolem xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx skalpelu xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx listem xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx a hluboký xxxxxxxxx jako xxx xxxxxxxx průměru stonku.

7.2.3. Xxxxx se přidrží xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx se xx xxx inokulum xxxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx jemným xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx pelety xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Řez se xxxxxxxx xxxxxxxx vazelínou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx zářezem XX

7.3.1. Xx stonek xxxxxxxx xxxxxx dvěma xxxxx se xxxxxxxxxx xxxx děložní xxxxxx x první pravý xxxx xxxxx (přibližně 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2. Xxxxxx sterilního xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x úhlu xxxxxxxxx 5°), dlouhý 1,0 xx x xxxxxxx přibližně xxxx 2/3 tloušťky xxxxxx, xxxxxxx x řezem xx začne x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx sterilní xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx snížení xxxxxxxxx xxxxxx buněk (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xxx před xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxxxxxx x podkožní xxxxxx (xx méně xxx 23 G). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx testovací rostliny xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx kultury xxxxxxx kroužkovitosti x xxx xx to xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx inkubovat x xxxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxx (dodatek 8) xx xxxx až 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx osvětlení x xxxxxx vlhkosti (70-80%) x xxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Aby se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx rostliny xxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxx komoře xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx místa xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxx vzorky xxxxxxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx před veškerým xxxxxx, protože xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx xx spočítají xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxx, které může xxxxx jako xxxxxxxx xxxx mezižilková xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Zvadlé xxxxxxx xxxx zprvu xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxxxxxxxxxx zesvětlí. Xxxxxxx xxxxx xxxx žilnatinou xxxxxx často xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Nekrotická xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxx; xxx xxxx trvá xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, tím xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxx xxxxxxxxxx vůči xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx rostliny, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx rostliny xx xxxx xxx listů x nebo xxxxxx xxxx xx. Vadnutí xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx z xxxxxx xxxxx. Xxxxx x nim Erwinia xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx způsobených xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, jelikož rychle xxxxxx celé listy xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx se xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx od Xxxxxxx xxx

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx stonků xxxxxxx. Povrch xxxxx x stonků xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxx lF xxxx XXX na šťávě x lilku a xxxxxxx xx xx xxxxxxx (selektivním) xxxxx (xxx xxxxx 8). Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Gramovo barvení (dodatek 9). Xxxxx kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují x potvrdí se xxxxxxxxxx (viz oddíl 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx podmínky xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx zůstává x xxxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx jako latentní xxxxxxx xxxxxxx i xx uplynutí inkubační xxxx xx 4 xxxxx. Pokud xxxxxx xx 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, xxxxxxx xx test XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx částí xxxxxx x xxxxx 1 xx x každé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxx xx test xxxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx (selektivních) xxxxxxx postupem podle xxxxxx 8. Čisté xxxxxxx podezřelé z xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 a 10).

8. Xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus

Diagnóza xxxx xxx potvrzena xxxxx tehdy, xx-xx xxxxxxx kroužkovitosti izolován x takto xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx však přerůst xxxxxx xxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx, x proto xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx izolace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xx použití xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx stonku a x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, které nevykazují xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 7.9). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx lilku, xxxx xx xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxx 106 cfu xx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx se vyloučilo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připraví xx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx dávku xxxxxxxxxxxx xxxxx by xx xxxx xxxx použitím x testování xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

8.1. Roztěr xx xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Xx 100 µx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx xxxx xxxxx x lilku vejcoplodého xx připraví xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. lzolace x neředěné xxxxxxxxxx xxxxxx se obvykle xxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x konkurenci xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx bakterie xx xxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx obvykle xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxxx rozetřít 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, v xxxxxx 1/100 až 1/10&xxxx;000 xx MTNA xxxxxx xxxx XXX-88 médium (dodatek 5), za xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxx (hokejek) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx inkubují x xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx provádějí xx třech xxxxx, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 dnech.

8.2. Čištění xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx kolonií xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx se xxxx xxxxxxxx na XXX xxxxx; xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx média xxxxxx xxxxxxxxx, tj. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se rozetřou xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx agar (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx pepton glukosový xxxx,

- agar z xxxxxxxxxxx extraktu x xxxxxxxxxxx solemi.

Inkubace xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X po xxxx xxxxxxxxx 10 dní.

Původce xxxxxxxxxxxxxx roste xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx špendlíkové xxxxxxxx, xxxxxxxxx, smetanově xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx roztěr xxx xxxxxxxx čistoty. X xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx zlepšuje. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx nebo barvy xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, vyvýšené, xxxxxxxx vyklenuté, xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx x průměru 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx kolonie xxx xxxxx testování.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx se identifikují (xxx xxxxx 9) x provede se xxxxxxx patogenity (xxx xxxxx 10).

9. Identifikace

Čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx izolované xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx dvou následujících xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

V xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx známý xxxxxxxxxx kmen.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx inkubovat při 21 °C x xx šesti xxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx růstu, xxxxxxxx xx po xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx testy xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx kmenem Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx za použití xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx musí xxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx výsledek

Oxidačně-fermentační (X/X) inertní xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Aktivita xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Tvorba xxxxxx -

Využívání citrátu -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx slabá

Růst xxx 37 °C -

Xxxx x 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Tvorba xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- rhamnózy -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. lF xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx xx xX (dodatek 3).

b) Xxxxxxxx xx série xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se lF xxxxxx (oddíl 4).

d) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx xX titr xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx kontroly.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx xx xx sterilní vodě (XXX)

x) Xxxxxxx se 100 µx xxxxxxxx xxxxx v uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx nebo vřící xxxxx lázni xxx xxxxxxx 100 °C xx xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx může xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX do xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X až do xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx specifických amplikonů xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx a Xxxxxx, 1999; Schaad x xxx., 1999).

d) Identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxx.

9.4. FISH test

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml v XXX.

x) Provede xx xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

x) Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx stejné xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx mastných xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx agaru (Oxoid) xx dobu 72 xxxxx při xxxxxxx 21 °X (+/- 1°X).

x) Použije se xxxxxx postup FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx profil xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx charakteristických xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 a 17:0 Anteiso xxxxx xxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx rody xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Micrococcus také xxxxxxxx některé x xxxxxx xxxxxxx, ale 15:1 Xxxxxxx X xx pro xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pohybuje xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx test xxxxxxxx xxxxx Xxxxx a xxx., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx stanovení virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx zkouška patogenity.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x 3-xxxxxxx xxxxxx testované xxxxxxxxx látky x xxxxxxxx pozitivního xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx se 5-10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx lilku vejcoplodého xx fázi 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Inkubuje xx při teplotě 18-24 °X xxx xxxxxxxxxxx světle a xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx nedošlo x xxxxxxxxxx xxxx vyschnutí. X čistých kultur xx xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx až 3 týdny xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxx xxxxx vejcoplodého, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx se xx 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx z xxxxxxx x příznaky xxxxxxx odstraněním xxxxx xxxxxx 2 cm xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody nebo 50 mM fosfátového xxxxx. Izoluje xx xx suspenze xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx po xxxx. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °X a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus.

Dodatek 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx protokolů

Laboratoř (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Agency	Edinburgh	Skotsko
Laboratoire Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Végétaux, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx de Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Centre	Aas	Norsko
Direcção-General xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Kontaktní xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrol xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx kultura xxxxxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (NCPPB 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX a xxxxxxxxxx xx v 10 mM xxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx přibližně 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Toho xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx je jisté, xx je prosta X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx výkrojky se xxxxxxxx xxxxxxxx způsobem x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx do první xxxxxxxxxxxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx. V následujících xxxx mikrozkumavkách xx xxxxxxxx desetinná ředění.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx se opatří xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx získá 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxxxx probíhá xxx teplotě -16 xx-24 °C až xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x množství C. x. subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx extrakce XXX z xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x FISH xxxxx xx provedou xxxxxxxxxxxxx rozbory xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx pro každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x PCR xxxx xxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nejméně x 10⁶ x 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxx xxxxxxx a nesmí xxx zjištěn x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx pro xxxxxxxxx postupy

OBECNĚ: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze xxxxxxxxx xx dobu xx jednoho xxxx.

1. Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx pufr(50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C po xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx (*)	1,0 ml
Tetrasodiumpyrofosfát	Antioxidační xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50 g
(*) pro xxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 mM fosfátový xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá xxx resuspenzi x xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx pH x xxxxxxx xx sterilizace x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx pro IF xxxx

2.1. Xxxxx pro XX (10 xX xxxxxxxxx pufr xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx pufr se xxxxxxx k xxxx xxxxxxx. Xxxxx se 0,1 % Tween 20 x pufru xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx v glycerolu, xX 7,6

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx na XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Leica).

Dodatek 4

Stanovení xxxxxxxxxxx lF x XXXX pozitivních buněk

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x jednom xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x S/s,

kde X = plocha xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x

x = xxxxxx pole xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x atd.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x každém xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxx X. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Obecná růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky se xxxxxxxx x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Nutrient xxxxxxxx xxxx = NDA)

Difco xxxxx živný xxxx xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 X xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Yeast xxxxxxx xxxxxxx agar = XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx dobu 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (Yeast xxxxxxx xxxxxxx salts xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 g
D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7H2O	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005
Baktoagar (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx v xxxxxxxxx xxx 115 °X xx dobu 20 xxx.

x) Validovaná xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud xxxx uvedeno xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x BDH.

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . H2O	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Oxoid x. 1)	16,0 g
Destilovaná voda	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xX se upraví xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (při 121 °X po xxxx 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 X xx přidají xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx X 0,01 x.

X xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x xxxxxxxxx xxxx (Sigma) (xxx 5 xx/xx) v 96 % metanolu, xxxxxxxxxxxx X (Xxxxx) (1 xx/xx) v xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx jsou sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 měsíce. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx při xxxxxxxxxx x chladu xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0 g
Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
D-manit	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 g
MgSO4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx,xxxxxx xx xX xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °X se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx B sulphate (Xxxxx) 0,003g, nalidixic xxxx (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx následovně: xxxxxxxxx acid v 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx v 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X xxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx sterilizují filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx média xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx by xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Vícenásobný XXX xxxxxxxx x xxxxxxx PCR kontrolou (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx xxx ggg xxx xx xx -3'

primer XXX-X 5'- xxx xxx gat xxx xxx ctt ccc x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx xxx xxx aca xxx xxx xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx xxx ggt xxx cct xxx xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z DNA X. xx. subsp. xxxxxxxxxxx šablony = 502 xx (sada XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X xXXX 377 bp (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Reakční xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx voda (XXX)	15,725 μx
10x XXX xxxx (1) (15 mM XxXx2)	2,5 μl	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 mM)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μl

(¹) Xxxxxx xxxx validovány xx xxxxxxx Taq xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq xxxx Xxxx) a Xxxxx XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X x XX-8-X xxxx optimalizována xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx homogenizační xxxxxx x xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Při použiti xxxxxxxx třepáním nebo xxxxxx metodami xxxxxxx XXX je nutná xxxx optimalizace xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx podmínky xxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx při teplotě 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °X (připojení xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx kopie)

25 xxxxx x) 30 sekund xxx xxxxxxx 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °X (připojení xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 minut xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °C

Poznámka:

Tento xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx použití xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx modifikace kroků xxxxx xx), xxx), xx), x), xx) x xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x XXX X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx získané x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx a 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru

2.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx voda 50 ml

Nanášecí xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx voda 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx octová 11,42 xx

XXXX (sodná sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx použitím xx zředí xx 1x.

Xxxx komerčně xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'- xxx gcc xxx cgt xxx xxx-3'

2. Fixační xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX ROZTOK XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 ml xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx přibližně 60 °X x xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Paraformaldehyd se xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 kapek 1X XxXX a zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX na 7,0 přidáním 1 xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 kapek XXx 1X. Indikačním xxxxxxxx xx zkontroluje xX x v případě xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X PARAFORMALDEHYDEM XXXXXXXXXX XXXXX pH!]

iii) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx a skladuje xx xxxxxxxx před xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °C xx xxxxxxx použití.

iv) Poznámka:

Alternativní xxxxxxx xxxxxx: 96 % etanol.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 M

Tris-HCl 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Sonda XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx CMSCY301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxxx v xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µl xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

Tabulka: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx objem (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx oligosondy xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Během xxxxxxx xx nutné xx xxxxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx zářením nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Na₂HPO₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx pH x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Pěstování xxxxx vejcoplodého

Semena xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx výsevního substrátu. Xxxxxxxxx x plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx lístky (10 až 14 xxx) se xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx by se xxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne: 14 xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx xxx, pokud xx delší;

Teplota: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx internetová stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx barvení x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 x šťavelanu amonného x 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx jódový xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 g

Destilovaná xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx společně xxxxxxxx pomocí xxxxxxx x xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxx x xxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxx xx rozpuštění.

Safraninový xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx se x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, vysuší xx xx xxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx působit 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx se Xxxxxxxxx xxxxxxx roztokem x xxxxx xx xxxxxxx po xxxx xxxxx xxxxxx.

5. Opláchne xx pod xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx savým xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx kapkách přidávaného 95 % etanolu xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx barvivo, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx na dobu 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx pod xxxxxxx xxxxx x vysuší xx savým papírem.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a nechá xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zbarví xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx bakterie xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx se také xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo barvicí xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Anonymous, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx the xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx batches xx potato tubers. Xxxxxxxxxx of the Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx EUR 11&xxxx;288 XX, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx study xx xxxxxxxx xxxx plants. Xxx. Pl. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx extraction xxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Determinative xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Manual xx xxxxxxx for xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, American Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Hugh, X. x Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxx versus xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx various xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Bact., 66, 24-26.

6. Janse, X. D., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx of Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. X. x X. Xxx Vaerenbergh. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx the XX xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, pp. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, N., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X x X. X. Sands, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. A., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx bacteria. J. xxxx. Bact., 29, 114-118.

12. Lelliott, X. X., X. Billing x X. C. Xxxxxxx, 1966. A xxxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxx fluorescent xxxxx xxxxxxxxxx pseudomonads X. xxxx. Bact., 29, 470-489.

13. Lelliott, R. X. a P. X., Xxxxxx, 1976. Xxx detection of xxxxxx xxxx rot (Xxxxxxxxxxxxxxx sepec xxxxxx (Xxxxx. xx Kotth.) Xxxxx. et Burkh.) xx potato stocks. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx region for xxxxxxxx detection of Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, D., Xxxxxxx, B., X. x X., X. Xxxxx, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx amplification xx xxxxx unique DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -H. x X.X. Xxxxxx. 1999. identification and xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx reaction-based xxxxxxxxxx. X. Phytopathology 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX with xxxxxxxxxxxxxxx of xxxx XXX. Xxxxxxxx Joiunal xx Plant Pathology, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx studies xx xxxx Gram-positive xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx their xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Mem. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Berthier-Schaad, X., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx xx X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx fluorescence detection xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxxx xx plant pathogenic xxxxxxxx. Schaad [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Paul, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. D., 1967. X xxxxx xx xxx identification xx xxx genera xx bacteria. 2xx xx., William xxx Xxxxxxx Company, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, J; Xxxxx, XX., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX profiling xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx identification xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. xxx X. X. Xxxxxxx, 1974. X study xx test xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx laboratories: report xx Xxxxxxxxxxx working xxxxx. Antonie xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx and some xxxxx Pseudomonas spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. International Journal xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

25. Wullings, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. D. x X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx causes xxxxx xxx of xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx situ xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX HNILOBY

Předložené xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx:

x) diagnózy xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx a bakteriálního xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x některých xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin,

ii) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (R. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx metody, xxxxxxxxx činidla x xxxxxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx na optimalizaci x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx materiálů, xx xxxxx xxxxxxxx xx vhodných karanténních xxxxxxxx s odpovídajícím xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx přesná xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx prahů xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx testovaných xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení kvality, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxx na vzorku, xxx xx znázorněno x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, PCR/FISH, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx jiném biologickém xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x druhý screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x testování xxxxx daného xxxxxxxx. Xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. solanacearum.

Potvrzená přítomnost xxxxx §5 odst. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx postupových diagramů

1.1. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) hlíz xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete a xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx půdě a x případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxx solanacearum.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.1.

2) Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx předběžnou xxxxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxx. Negativní výsledek xxxxxxxxx vždy nepřítomnost xxxxxxxx.

3) Xxxx xx xxxxx slizu ze xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx aglutinační testy xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx FISH xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného xx xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Test XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.6.

10) Xxxxxxx je obvykle xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx metodou xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx ředěním) (xxx x oddíle 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

12) Xxxxxxxxx xxxx selhat xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, ale xxxxxxxx test je xxxxxxxxx, musí se xxxxxxx opakovat, xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Dílčí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx nový xxxxxx.

14) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx latentních xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx xx dvou xxxxxxxxxxxxxx testů (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), x nichž xxxxx je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx izolací patogenu x xxxx, v xxxxxxx izolace typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx pouze z xxxxxxx screeningového testu xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx umožnit detekční xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx testů.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x na xxxxx počet, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x dispozici.

2) Metody xxxxxxxx a koncentrace xxxxxxxx xxxx popsány x oddíle 3.1.1.

3) Xxxxx jsou alespoň xxx testy xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx pozitivní, musí xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx nejméně xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. X případě, xx xx test xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx další test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.4.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest je xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx screeningových xxxxxxx získány pozitivní xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx třeba opakovat xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce hlíz xxxxxxxx vzorku, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx diagram pro xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky, rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rostlin xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin nevykazujících xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx extrakce x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Pokud xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. X případě, že xx xxxx pozitivní, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx vzorek xx negativní. Další xxxxx nejsou xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

5) Test XX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx v oddíle 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivní výsledky, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx negativní, opakují xx izolační testy.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx jedná x X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.3.

2. Diagnóza xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Příznaky x bramboru

Rostlina xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx rozpozná vadnutím xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. V raných xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, ale xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx hnědé xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x xxxxxxx listů xxxx. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xx rychle xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx kolapsem a xxxxxxxx rostliny. Z xxxxxxx svazků xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx zvadlých xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxx sliz xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx se x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx vlákna xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx třeba překrojit xxxxxx u pupkového xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X rané xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx hnědého xxxxxxxxx xxxxxxx prstence, xx kterého xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx krémový xxxxxxxxxxx sliz. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. V xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx rozšíří vně xx pupkového xxxxx xxxxx x x xxxx může xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx červenohnědá, lehce xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vnitřního xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx obvyklý xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx a houbového xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx u xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx kolem 25 °X, xxx xxxxxxxx vzdušné xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx směrem xxxx x xxxxxxx xx xxxxx straně xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx, xxxxx končí xxxxx úplným xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx tvořit xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx možné xxxxxxxxx vodou xxxxxxx xxxxx od xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx zbarvená xxxxxx xxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxx bakteriální xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx u jiných xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum dulcamara x X. xxxxxx. Xx normálních podmínek xxxx u xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °X nebo není xxxxxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxx (xxxx. u xxxxxxxx X. nigrum xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx vadnutí xxxx příznaky xxxxxx xxxx u rostliny xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. dulcamara, která xx xxxxxx x xxxxxx xx xxxx, xxxxx vykazovat vnitřní xxxxxx hnědé zbarvení xxxxxxxx pletiv na xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. X xxxx xxxxxxx svazků xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, jestliže je xxx xxxxxx ponořen xxxxxx xx vody, x xx i xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxx xxxxxxxx předběžné xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx slizu xx stonku

(Viz 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (PHB)

Charakteristické xxxxxxx XXX x xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx zviditelněny obarvením xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx pletiva na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx A xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Viz xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testy xxxx test XX (xxx oddíl 6.1.5.), xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.) xxxxxx PCR (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx při xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx bramboru xxxx x xxxxxxx xxxxxx stonku rostliny xxxxxxxx, rajčete nebo xxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx x malém množství xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx suspenze.

c) Xxxxxxx xx 50-100 xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx universální xxxxxx půdu (NA, XXXX xxxx SPA; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx tetrazolové xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, viz dodatek 2). Xxxxxxx xx metodou xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Připraví xx případně xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 x xxxxxxxxx kontrole.

d) xxxxxxxx xx 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°X.

- Na universální xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, nepravidelné x xxxxxxx kolonie, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx středu. Xxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- X Xxxxxxxxx tetrazolového xxxxx x xxxxx XXXX jsou spirálky xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx formy R. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxx xxxxx červené.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx výskyt X. solanacearum v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou xxxxxxx x bodu 6.2.

3. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx bramboru

3.1. Podrobné xxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx hlíz bramboru

3.1.1. Xxxxxxxx vzorků

Poznámka:

- Standardní xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx na xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx více xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x dispozici xxxxx xxxxxxxx hlíz.

- Xxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx založená xx xxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx 200 hlíz.

- Xxxxxxx xxxxxxxx popsaný xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx původce bakteriální xxxxxxxxxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx

x) Inkubace xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °X xx xxxx xx 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx omyjí. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx chlóru, jestliže xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x mycí xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx xx vzorcích xxxxxx zeminy xxxx xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx test XXX xxxx xxxxx izolace.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xx odstraní xxxxxx xx xxxxxxxx konci xxxxx hlízy, xxx xxx xxxx viditelné xxxxxx xxxxxxx. Opatrně xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx vyříznuti výkrojku xxxxxxxx příznaky podezření xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx xx řezu xxxxx xx pupkovém konci. Xxxxxxx naříznuté xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx po xxxx xxxxxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx mohlo xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx v xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx hlízy xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx uchovány xxxxx xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x pupkové xxxxx se xxxxx xx xxxxxxxxxxx nádob xx xxxxx použití, xxxxx jsou uzavíratelné xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že nádoby xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx konce okamžitě. Xxxx-xx xx možné, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; v xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx pokojové xxxxxxx (18 -25 °X) nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx se zpracují xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx se x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx množství (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250mm, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx vzorků xxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Je xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xx použijí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x xxxxxx. Při xxxxx XXX je xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX na xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. U xxxxx XXX xx doporučuje xxxxxx drcení x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx dobu 10 xxxxx xxx teplotě 4-10 °C) nebo xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), xxxxx xx xxxxx přídavkem (10 xx) xxxxxxxxxxx pufru.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx odstřeďováním, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 x po xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx rozvířila xxxxxx.

3.1.1.5. Peleta se xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 4). Použije se 500 µl pro X. solanacearum, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x 500 µx xxx referenční xxxxx. Xxxxx se sterilní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µx referenční xxxxxxx xxxxx a xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxx xx při xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx uchovávají xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C.

Opakované zmrazení x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx nutné, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx odděleně, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. To xxxxx xxx sklíčka XX a xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Testování

Postupové xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX test (xxx xxxxx 6.1.5.)

Testy XXX (viz xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (viz xxxxx 6.1.7.)

Testy ELISA (xxx oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx detekce xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx smíšené xxxxxx x počtu xx 200 xxxxxxxxxx částí. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx na statisticky xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Do xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx 1-2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx následujícího xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Čistým xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 cm x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z pole xxxx xxxxxxxx: Čistým xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx z každé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, 1 xx xxxxxx díl x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Čistým xxxxxxxxxxxxxx nožem nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1 xx xxxxxx xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx. X xxxxx xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx xxxx se xxxxxxxx 1-2 cm xxxx xx xxxxxx pod xxxxx xxxx oddenků x vodními xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx representativní xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 rostlin na 1 vzorkovací xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx hostitelskou rostlinu. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx jara, léta x podzimu, ačkoli xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx zjistit xx xxxx rok x xxxxxxxx Solanum dulcamara xxxxxxxx ve vodních xxxxxx. Xxxx známé xxxxxxxxxxx rostliny patří xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx dulcamara, S. xxxxxx, Xxxxxx stramonium x xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Solanaceae. Dalšími xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx jsou xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx xxx. a Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx x/xxxx oddencích xx xxxxxxxxxxxx podmínek, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Eupatorium xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx spp., Xxxxxx alba. S. xxxxxx., Tussilago xxxxxxxx x Urtica dioica.

Poznámka:

V xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vnitřních xxxxxxxx (xxxxxxxx cév xxxx xxxxxxxxxxx sliz). Xxxxxxxx xxx stonku x xxxxxxxx xx xx xxxxxxx atestuje se xxxxxxxx (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx dezinfikují 70% etanolem x xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx xxxxx stonku xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) zalijí xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x třepou xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 hodiny xxx xxxxxxx do 24 °X xxxx 16-24 xxxxx chlazené,

nebo

b) xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxx xx části xxxxxx x chladu xxxxxxx na 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Další xxxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx lze xx xxxxxxx filtrací xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx 3.1.1.3. až 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx rozdělí na xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xx xxxxxxx xxx teplotě 4-10 °X a xxxxx xxx xx xxxxxxxx v 10-25% (x/x) sterilním glycerolu xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) nebo -68 xx -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Testování

Postupové xxxxxxxx x popisy xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx FISH (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Detekce x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xx vodě

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx jsou xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x doporučuje xx xxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx testu.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx test xx popsán v xxxxxx 6.1.4.

(4) Biotest xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testu PCR xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.4.2. a 6.1.6.

(6) Metody xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(8) Kultivace xxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx populace xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx po xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vodou.

(9) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx testů popsaných x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx patogenity xx xxxxxx x oddíle 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx x detekci xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxx být xxxxxxx x xxxxxxxxx vzorků xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxx vody. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxx liší x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx selektivní xxxxxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx mnohem více x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xxx x xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx asi 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx podstatně nižší. X xxxxxx důvodu xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx vodu xx xxxxxxxxx xxxxxxxx čistícího xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx filtrace), při xxxxx dojde xx xxxxxxx saprofytických xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx citlivosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx negativních xxxxxxxx. Vzhledem x xxxx, že xx xxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx x mapování xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx, je xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x podobnému mapování x xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x povrchové xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx pozdního xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxx teplota vody xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx době xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zvýší xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx snížením xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx podmínek.

- Xxxxxx silných xxxxx x geografie xxxxxxx xxxx může xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x tím x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo lahviček xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30 xx xxx hladinou x 2 x xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx vzorky x místa výtoku xxxxxxx xxxx. Doporučená xxxxxxxx xxxxxx je 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx nejméně 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x nichž xxxxx xxxx obsahovat 2 xxxxxxxxx dílčí xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx mapování xx xxxxxxx nejméně 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3 xx vodního toku x vzorkují se xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxx (4-10 °X) atestují xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx potřeba, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx xxxxx xxxxxx při 10&xxxx;000 x xx xxxx. 10 minut (xxxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx teplotě 4-10 °X, slije xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx x 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (minimální xxxxxxxx xxxx 0,45 µx) x následným xxxxxxxx filtru v 5-10 xx peletového xxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx metoda xx vhodná pro xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx u xxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx brambor nebo x vzorků odpadní xxxx, xxxxxxx zvýšená xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx diagram x xxxxx testů x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxx

5.1. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Xxx oddíl 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX testy xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Biotest xx xxxxxxx x oddíle 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x důvodů konkurence xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx spolehlivost xxxxxxx, opakují xx xxxxx xxxxxxxxxx izolace xx dalším xxxxxxx xxxxxx.

(7) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

(8) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx popsané x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro detekci xxxxxxxx ve vzorcích xxxx, ale xxxx xxx rovněž použito x xxxxxxxxx vzorků xxxxxxx odpadu při xxxxxxxxxx brambor xxxx xxxx x xxxxxxx xxxx. Je xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, že xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, xxx xxxxxxxxxx detekci xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx těchto xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx získaných xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxx sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x půdě xxxx xxxx je třeba xxxx v xxxxx xxxxxxxx citlivost xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Nejspolehlivějším xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x xxx xxxxxxx xxxx metody xxxxxx xxxxx stupeň zamoření xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx půdy xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 ha x hloubky 10-20 xx. Je-li xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx počet xxxxxxxx míst xx 120 z xxxxxx 0,3 xx. Xxxx xxxxxxxxxx xx uchovávají xxxxxx při xxxxxxx 12-15 °X. Xxx xx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx testovaného xxxx. Xxxx testováním xx xxxxx xxxxxx dobře xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 g půdy xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx třepačkou (250 xx./xxx) x 60-150 ml extrakčního xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, přidání 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx disperzi.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagram x popis xxxxx xxxx x příslušném xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx R. solanacearum

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Xxxx xx výtok xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve stoncích xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx jednoduchý xxxx xxxxxxxxxxxxxxx výskytu: xxxxxx xx xxxxxx xxxxx nad xxxxxx xxxx. Xxx xxxxxx xx ponoří do xxxxxxxx s xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx se, xxx xx xx xxxxxxxx minutách objeví xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx sklíčko.

2. Připraví xx pozitivní kontrolní xxxxxx kmenu xxxxxxx 2 X. solanacearum x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr o xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxx plamenem, xxx xx roztěry xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx se xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx súdánskou xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx níže uvedeného xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx sklíčka se xxxxxxxx 1 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x nechají xx inkubovat 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se opláchne xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Přebytečná xxxx se xxxxxx xxxxx papírem.

c) Xxxxxx xx zakápne 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Krátce xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z kohoutku. Xxxxxxxxxx xxxx se xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx xxx 450 xx xxx xxxxxxxx xxxx vodní imersí xx xxxxxxxxx 600x xx 1000x s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo vodní xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx xxxxxx xx PHB granulích xxxxx xxxxxxxx fluorescence. Xxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx súdánské černi X x 70% xxxxxxx x xxxxxxxx xx 10 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxxx voda xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xylolu x xxxxxx xx savým xxxxxxx. Upozornění: Xylol xx xxxxxx škodlivý, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní opatření x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Sklíčka xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x nechají 10 xxxxxx inkubovat xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx je zdraví xxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx a pracovat x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx, odsaje xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx a přiloží xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx mikroskopem x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx 1 000x.

g) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x buňkách X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxx stěnami xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy

Aglutinace xxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx x pletiv x xxxxxxxx xx nejlépe xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. červenými xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xxxx obarvenými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vybavení (xxx dodatek 3) se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Jinak xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxx suspenze xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (přibližně 5 µx každé xxxxx) xx okénku xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx sklíčka.

b) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x heterologního xxxxx.

x) Xxxxxxxx se, xxx se x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx xxxx metoda xxxxxx, provede xx xxxxxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx tvořících xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx přídaných xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. XXXX (ve znění Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; xxx dodatek 2).

Rozlišení X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx schopných xx živné xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Petriho xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx rovněž xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterie. Je-li xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxx inhibici, měl xx být xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx lez xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx touto metodou xxxx xxxxx vysoká. Xxxxxx je xxxx xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx od -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx desetinné xxxxxx xx suspenze 10⁶ cfu/ml xxxxxxxxxxxx xxxxx biovaru 2 X. solanacearum (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x testování.

U xxxxx xxxx připravené xxxxx xxxxxxxxxx živné xxxx xx xxxx xxx xxxx jejím xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (vzorky).

1. Provede xx ředění s xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx xx nechají xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx jejich xxxx x pak se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 dní. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na xxxxx xxxx SMSA xxxx xxxxxx bílé, ploché, xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx x xx 3 xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx až xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx středu s xxxxxxxxx pruhy nebo xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx na xxxxx médiu xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, kruhové, xxxxx xxxxxxx a nefluidní xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, a proto xxxxxxx xxxxxxxxxxxx od xxxxxxxxxxxxxx bakterií tvořících xxxxxxx.

3. Předpokládané xxxxxxx X. solanacearum se xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (viz dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx krátkodobě ve xxxxxxxx vodě (pH 6-8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x temnu xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultur (xxx xxxxx 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu očkováním xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx po 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx typické xxx X. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx bakteriemi x v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nalezeny xxxxxxx kolonie R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx obohacení, xxxx. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (viz dodatek 2).

Tento xxxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx dojde x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX testu (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx však xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx obohaceny. X tohoto xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx obtížná. Xxxxx toho, xxxxxxx xxxx xxxxx k xxxxxxx populací xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx saprofytů, xx xxx test ELISA xxxxxxxxxx xxxxxx místo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xx xxxxxxx 100 xx extraktu xx xxxxxx xx 10 xx obohaceného xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx připraví xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. X obohacovacího xxxxx XXXXX může xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx do bujónu (xxxx. 100 xx x 1,0 ml xxxxxxxxx xxxxx půdy).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx xxx teplotě 27 xx 30 °X v třepané xxxx statické xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx umožní xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx zahájením xxxxx XXXXX xxxx XXX xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem jako xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx inhibice xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxx docílit lepších xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx před xxxxxxxxx odstřeďováním nebo xxxxxx postupy zvyšování xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Test lF

Postup

Použití xxxxx IF jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx spolehlivosti v xxxxxxxx požadovaných prahů.

Použije-li xx xxxx XX xxxx xxxxxx a xxxxxxxx XX xxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použit xxxx izolace, PCR xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx pozitivní, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle postupového xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxx úplná.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Doporučuje xx určit xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx/xx homologického xxxxx X. solanacearum x xxxxxxxx xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx testování xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxx blízkých xxxx xxxxxxxx jako xxxx.

Xxxx xx xxx být xxxxxxxx xx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx nutné, může xxx xxxxxxx proveden xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 xx - 86 °X v xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx pufru (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx při 7000 g x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx peletového pufru. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx se oddělená xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x homologickým kmenem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v dodatku 3 X, x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx teplotě - 16 xx 24 °X) xx xx xxxx podle možností xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx použijí xxxxxxxxx díly xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x pozitivní x negativní xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, pokud xxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxx způsobem jako xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Připraví xx sklíčka x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

i) Pro xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety x xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx okénka.

Následně xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxx řada xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 1.

ii) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) resuspendované xxxxxx v peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µx je xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x většího xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované pelety xxx xxxxx xxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxx xxxx může xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx se kapičky xxx xxxxxx teplotě xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Bakteriální xxxxx xx fixují xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60 °X), xxxxxxxx, 95 % etanolem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, fixovaná xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Podle přípravy xxxxxxx xx xxxx x odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx sada dvojnásobných xxxxxxx. Xxxxx jamka xx měla xxx 1/2 titru (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 titru (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx titru (2X).

xx) Podle přípravy xxxxxxx na test x odst. 5.1.ii):

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x xxxxx XX. Pracovní xxxxxx xxxxxxxxx přesnost.

Obrázek 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx test podle xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx odst. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx každém okénku xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxx papíře přikrytá xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx podložních xxxxxxx a xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx po xxxx 5 minut x pufru IF Xxxxx (dodatek 4) a xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx vlhký xxxxx. Testovací xxxxxx xx pokryjí ředěním xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx titr. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx stejné jako xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxxx po xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

6. Setřesou xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx tekutiny xx xxxxxxx xxxxxx x přiloží xx xxxxx sklíčko.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Prohlížejí xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx dvou navzájem xxxxxxx průměrech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx s xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx se xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se zkontroluje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx titru xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx lepší. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx x pupkové xxxxx bramboru x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx R. solanacearum.

4. Xxxxx xx x xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x morfologií x xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx oddílu 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Při zjištění xxxxx fluoreskujících buněk x xxxxxxxx morfologií xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Výsledek XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Vzorek je xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx IF xxxxx xx negativní pro xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xx považuje xx negativní. Další xxxxxxxxx není xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx PCR xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x výsledek xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, a xxxx xxxxxxx xxxx XX. Jestliže xx XXX použita jako xxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx nutné provést xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx v xxxxx rozsahu xxxx xxxxxxxx screeningového testu xx doporučuje jen xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx metodou by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx přidaný xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijí xx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx kontaminace xxxxxx xxxxxxx DNA. Xxxx XXX xx xxx xxx prováděn xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx DNA.

PCR xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx výsledkem,

- kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a XXX ze vzorku,

- xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx části xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (přípravu xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx možno, při XXX použít xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx případné xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx odděleném xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. V případě xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba připravit xxxxxxxx x umytých xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx se xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede týmž xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx cílové XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX x jiných xxxxxxxxxx reakcí x xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX xx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx metodami PCR xxxxxxxxx v dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Patrika (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx lyzátového xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (pH 8,0), 1 mM XXXX (xX 8,0)) do 1,5 xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µx extraktu xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx termobloku xxxx xxxxx lázně x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX TrisHCl, xX 8,0) a xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X po dobu 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Xxxx DNA® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx při xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx se 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx se 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx xxxxx x směs se xxxxx homogenní.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx a xxxxxxxxx mezifáze xx xxxx odstřeďuje xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 min. xxx xxxxxxx 4 °X.

9. Xxxxx fáze xx xxxxxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

10. Xxxxx se 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx xx dobu 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx se xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx při xxxxxxx 4 °X a xxxxxxxx xx etanol x pelety.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15 000 x po xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx vzduchu xxxx x DNA xxxxxxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx XX x xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx - 20 °X až xx xxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího DNA xx xxxxxxx xxx xxxx XXX.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx se xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx prokázalo, xx xxxx při xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx stejně efektivní.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx vzorky a xxxxxxxx pro XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Připraví se xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xx xxxxxx nehrozí xxxxxxxxxxx xxxxx zveřejněných xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx rovněž xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Do sterilních XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxx xxxxx XX xxxx xxx xxx, xxxxx byl xxxxxx xx xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x spustí xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

1. Xxxxxxxxx xx rozdělí xxxxxxxxxxxxxx x agarózovém xxxx. Xxxxxx se xxxxxxx 12 µx xxxxx amplifikované XXX x každého xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (ladder) 100 xx.

2. Detekují xx proužky XXX xxxxxxxxx x ethidiumbromidu (0,5 xx/x) po xxxx 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

3. V xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx např. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx hledají xxxxxxxxxxxxx produkty PCR x očekávané xxxxxxxxx x výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx nálezů/případů se xxxxxxxxxxx pravost amplikonu XXX xxxxxxxxxx restrikční xxxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx xxxxxxxxx teplotě a xxxx xxxxxxx restrikčním xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x agarózovém xxxx a xxxxxxxx xx charakteristický vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX xxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx PCR xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum xxxxxxxxx velikosti xxxx x xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x interními xxxxxxxxxxx primery xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (xxxxxxxx) xxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx amplifikován u xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Spolehlivé potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx opakováním xxxxx x druhou xxxxx primerů PCR dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx inhibici xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xx dvou xxxxxxxxx.

X případě, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol, je xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx FISH

Princip

Když se xxxx první screeningový xxxx xxxxxxx FISH xxxx x xx xxxxxxxxx, musí být xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX xxxx. Když se XXXX xxxx provede xxxx xxxxx vyšetřovací xxxx a xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx R solanacearum xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx možno xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se použije xxxxxxxxx část xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx na 1 xx X. solanacearum xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx kultury. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx kmenu xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál, xxxxx se xxxxxxx x tomto testu, xx uveden v dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx u xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx bramborového extraktu

Následující xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx et xx. (1998).

1 Připraví xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky a xxxxxxxxxx xx po xxxx 7 xxxxx xx 7 000 g.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx xx 200 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx předem. Protřepe xx x inkubuje 1 xxxxxx x xxxxxxxxx zařízení.

4. Odstřeďuje xx 7 minut xxx 7 000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01X PB (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx se 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx na čisté 10 okénkové sklíčko, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na jedno xxxxxxx, x xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 s použitím 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx - 20 °X po xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx množství 96 % etanolu. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx etanol xxxxxxxxxxx x xxxxx se xxxxxx množství 0,01 XX (zamíchá se xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx sklíčku FISH

6. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx sklíček při xxxxxxx 37 °C) x fixují xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx možné xxxxxx přerušit a xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx a x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % a 96 %, pokaždé po xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx xx vzduchem x držáku sklíček.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx vzduchotěsného xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Před xxxxxxxx xx xxxxxx box x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °X po xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µx hybridizačního roztoku (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (okénka 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; viz xxx. 7.1) xx xxxxxx sklíčku, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx se krycí xxxxxxx (24 x 24 mm) na xxxxx x poslední 4 okénka, a xx xxx, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Sklíčka se xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx komory x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx se 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x vody x xxxxxxxxxxx kvalitou (Milli X), 1 l 1x xxxxxx (334 xx 3x hybmix x 666 xx xxxx x molekulární xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 ml 3x xxxxxx x 958 xx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx inkubovat xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx se umístí xx xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx nadbytek xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx s 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 hybmix x nechá xx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX (např. Milli X water) x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx lehkým xxxxxxxx povrchu xxxxxxxxxx xxxxxxx. Napipetuje xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX xxxx xxxxxxx) xx každého xxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx velkým xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX testu

1. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx buňky X. solanacearum xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx odchylné. Prohlížejí xx okénka xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, se xxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x morfologií xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí odpovídat xxxx být lepší xxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx nebo vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx v úvahu.

3. Xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx nastat x případě, kdy xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx sklíčka) na xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxx nese xxxxxxx xxxxxxxx. Xx pravděpodobné, xx x xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx pozadí x xxxxxxxxx morfologií a xx xxxxxxx xxxxxx xx saprofytickými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxxx R. solanacearum, x když xxxxxx xxxx častěji xxx x xxxxx IF.

5. X úvahu se xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x morfologií.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXX

x) Výsledky XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx při xxxxxxx XXXX filtru xxxxx xxxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx typickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x při použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách. Xxxxx xxxx přítomné xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx morfologií, xxxxxxx se průměrný xxxxx typických buněk x 1 mikroskopovém xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx alespoň 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxxxxxx infikované. Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx. Vzorky, které xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx na 1 ml resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XXXX testu je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro X. solanacearum, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Princip

Testy XXXXX xxx použít xxxxx jako xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx XXXX pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx použití XXX XXXXX je xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx před použitím xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx testu, xxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx validovaný xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx novou šarži xxxxxxxxxx. Titr je xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx druhotných konjugátů xxxxxxxxxx xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx blízké xxxx xxxxxx xxxxx titru xxxxxxxx formulace.

Určí xx xxxx protilátek pro xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx negativní x xxxxxxxx xxxxxxxx bez xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx xxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx extraktů, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk xx 1 xx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. kmen NCPPB 4X56 = XX 2762 = CFBP 3857, viz dodatek 2 X x B). Xxx srovnání xxxxxxxx xx každé destičce xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx kontrolní vzorky xxxx být xx xxxxxxxxxxxx destičce xxxxx xxxxxxxx xx vzorků x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x negativní xxxxxxxxx, xxxxx xx používají xxx tento xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 bodu A.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva protokoly XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx xx xx., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X xx 4 xxxxxx ve xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx redukovat xxxxx nespecifických xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx silného xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pufru (dodatek 4) a xxxx xx xxxxxxxx.

3) Nakape xx 100 µx xx xxxxx jamky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) x nechá se xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X nebo 14 - 18 h xxx teplotě 4 °X.

4) Extrakty xx xxxxxx x jamek. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) a poslední xxxxxxxx roztok se xxxxx v jamce xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X validovaných xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (obvykle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, než xx xxxx).

6) Přidá xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx a xxxxx xx vymyjí xxxx xxxxxxx (bod 4.).

8) Xxxxxxxx xx vhodné xxxxxx xxxxxxxxx alkalické xxxxxxxxx v blokačním xxxxx. Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx jamky a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

9) Xxxxxxxx se xxxxxx x jamek x xxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx každé xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě x xxxxxxx se xxxxxxxxxx při 405 xx v xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx pufru xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx do xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° X xx xxxx 16 xxxxx.

2) Jamky xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µl extraktu xx xxxxxx xx xxxxxxx dvou xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx do xxxx xxxxx na xxxxx destičce. Nechá xx inkubovat 16 xxxxx při xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx specifických xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xxxxx xx 190 µx do xxxxx xxxxx a xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

5) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v XXX. Xxxxx se 190 µx xx xxxxx jamky x xxxxx xx inkubovat 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Připraví xx xxxxxx 1 xx p-NPP/ml alkalické xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µl xx každé xxxxx x inkubuje xx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Absorbance xxx 405 xx xx odečítá x xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx ELISA je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hustoty (XX) z jamek xx xxxxxxxx xxxxxx xx menší než xxxxxxxxxxx OH u xxxxxxxxxxx kontrolního vzorku, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxx xxx 1,0 (po 90 xxxxxxxx inkubace xx substrátem) a xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx OH xxxxxxx x negativních xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx XX x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx dvojnásobek XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx dvojnásobek xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, že xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, že xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx předtím testován x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx zjištění xxx očekávat xxx xxxxxxx čerstvě připraveného xxxxxxxx ze xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 až - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx se 10 xxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. kultivaru Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx citlivostí xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Podrobnosti xxxxxxxxx xxx v dodatku 8. Xxxx xx xxxxxxx xxxxx (např. kultivar Xxxxx Xxxxxx nebo xxxxxxxxx s rovnocennou xxxxxxxxxx), xxx jen xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. xxxxx xx do xxxxxx xxxxxxx třetího xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x lilku xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulují xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx listy xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23G). Xxxxxx se xxxxxxx xxxx testovací rostliny.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxx xxxxx x pipetou xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx děložními listy x xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx řez xxx 1 xx xxxxxx x hluboký xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx řez xx xxxxx x xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x injekční xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Stejnou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxxx ze 48 hodinové xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx kontrolní vzorek. Xxxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx ostatních xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx xxx teplotě 25 - 30 °X a xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx jak xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x důvodu nedostatku xxxx. Xxx se xxxxxxxxx kontaminaci, xxxx xxx drženy xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx skleníku xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx být xxxxxxxx x různých xxxxxx po dobu xxxxxxxx xxxxxx blízko xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx zástěnami. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, prohlížení x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx věnuje xxxxxxxx pozornost xxxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx skleník xxxx xxxxxxxxx prostor xxx hmyzích xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx bakterie mezi xxxxxx.

Xxxxxxx xx příznaky xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx provede xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (bod 6.2.).

6.1.9.6. Jestliže xxxxx 3 týdnů xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se zřeďovací xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx všechny xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Interpretace xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx z xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky.

Biotest je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx organismus xxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx se xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx použitím nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx referenční xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (viz dodatek 3).

6.2.1. Výživové x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx následující xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Xxxxxxx et xx. (1990), Schaad (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu -

Inkluze XXX +

Oxidačně fermentační xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx aktivita +

Xxxxxxxxx xxxx podle Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Růst xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Xxxx x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Produkce levanu -

Xxxxx x metody xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk na 1 ml x xxxxx IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Použije xx XX metoda (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx odpovídá xxxxx pozitivní kontroly.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx provádění xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx sérologický xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 buněk xx 1 ml x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx se xxxx ELISA se xxxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxxx x X. solanacearum.

6.2.3.3. Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx kultury xx nejméně poloviční x porovnání s xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx PCR

6.2.4.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxx xxxx (UPW = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x ohřívacím xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx lázni při 100 °X 4 xxxxxx. Vzorky xxxxx xxx uchovány xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx PCR x xxxxxxxxxxx amplikonů xxxxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (např. Seal xx xx. (1993); Xxxxxxx x Maiss (2000); Pastrik xx xx. (2002); Boudazin xx xx. (1999); Xxxxx et al. (1997), Xxxxxx et xx. (1999).

6.2.4.4. Identifikace xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentů jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx FISH

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (6.1.7) x xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx x xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (FAP)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx FAP (Janse, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx FAP xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2XX, 16:1 2OH x 18:1 2OH x xxxxxxx 16:0 3XX xxxxxxxxx na Xxxxxxxxx sp.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx izolace X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X každého xxxxxxxxxxx testu se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx disacharidů x xxx hexosových xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx živné xxxx x xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxx teplotě 28 °X. Xx-xx xxxxx půda rozdělena xx xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx mění během 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx po xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx fenotypů xxxxxxx 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx X. solanacearum xxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, mezi xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX s xxxxxxxx xxxxxxx REP, XXX x XXXX (Xxxxx et al., 1995; Xxxxx xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx AFLP (Xxx xxx Xxxx et xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery PCR (Xxxxxxx et al, 2002; xxx dodatek 6) xxx použít k xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X a 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx al., 1989) a sekvenováním 16X xXXX (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx závěrečné potvrzení xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na 1 xx ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kmen xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857; viz dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxx xx xxxx 3 pravých listů (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx nechají xxxxxxxxx až 2 xxxxx xxx xxxxxxx 25-28 °C a xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebo vyprahlosti xxxx. U čistých xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx mělo xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx xxxx době xxxxxxxx, xxxxxxx nemůže být xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx epinastie, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx izolace x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 cm xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Segment xx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx x malém xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx selektivní xxxxx půdě (dodatek 2). Xx xxxxxxxx 48 xx 72 hodin xxx xxxxxxx 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx kolonií xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

a) Xxxxx xxxx pro xxxxxxx x kultivaci

Živný xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx) 23,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 5,0 x

X(+) Glukóza (xxxxxxxxxx) 10,0 g

Bacto-Agar (Difco) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Difco) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx se filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-trifenyl-tetrazoliumchloridu (Xxxxx), xx do xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Validované selektivní xxxxx xxxx

Xxxxx puch XXXX (Englebrecht 1994 xx znění Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx půda

Casamino xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 g

Bacto-Pepton (Xxxxx) 10,0 g

Glycerol 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Difco) (xxx xxxx. 2) 15,0 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X a xxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx následujících xxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxxx konečná xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx violeť (Sigma) 5 mg/l

Polymixin-B-suIfát (Xxxxx X1004) 600 000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032) 825 U (xxxxxxxxx 0,5 mg)/l

2,3,5-trifenyltetrazolium xxxxxxx (Sigma) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx být použit Xxxxx Xxxx #1. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx růst X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxx to xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx kolonie X. solanacearum se xxxxx xxxxxx x 1-2 dny déle x červené xxxxxxxx xxxx xxx světlejší x xxxxxxxxxxxxx než xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx bacitracinu xx 2 500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x temnu x xxxx xx spotřebovat xx 1 měsíce. Xxxxx x xxxxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx zbaveny xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Nutno xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx referenční xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxx (xxx dodatek 3) x xxxxxxxxxxx, xxx se po 2 až 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X objeví xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx xx al., 1996)

Xxxxxxx xx příprava xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, ale xxxxxxx xx Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- trifenyltetrazolium xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx al., 2002)

Xxxxxxxxx 10 g

Proteázový xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx a xxxxxxx xx xx 50 °X. Xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx doporučují xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx bud' k xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx testů, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (tabulka 2). Xxxxxxx kmeny jsou xxxxxxxx dostupné a xxx xx xxxxxx x těchto sbírek:

1. Xxxxxxx xxxxxx patogenních xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx vědecká xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx ochrany xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Francouzská xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), xxxxx fytobakteriologie XXXX, Xxxxxx, Francie.

Tabulka 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kultur XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX sérologicky xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx testů.

Mražené xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ x 10⁴ až 10⁶ buněk xxxxxxx 2 X. solanacearum (xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a XXX xxxxx. Protože xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx standardy x xxxxxxx izolace x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx fixované xxxxxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx sérologických xxxxx.

X. Xxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrol xxx xxxxxxxxxxxx testy vodivých xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx X. solanacearum rasy 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xx SMSA xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx v 10 xX fosfátovém xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx tvořících xxxxxxx xx 1 ml. Xxxxxxx se xx xxxxxxx jemně zakalenou xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 nm.

Odebere xx dřeň x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x produkce xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx xx, xx xx prosta X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x resuspenduje xx peleta x 10 ml. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx s 900 µx resuspendované xxxxxx. Přenese se 100 µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx ředění x xxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použije xxxx kontrolní vzorky. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí jako xxxxxxxxx negativní vzorky. Xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxx označeny.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 N1 ve xxxxxxxxxx zkumavkách o xxxxxx 1,5 xx, xxxx se xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx teplotě -16 až - 24 °C až xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x množství X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx PCR xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx DNA z xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x XXXX xxxxx xx xxxxxxx test xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a negativních xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX a XXX musí být X. xxxxxxxxxxxx zjištěna x xxxxxxx x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx kontrol x nesmí xxx xxxxxxx x žádné x xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx sterilizované xxxxx lze skladovat xx dobu xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Extrakční xxxx (50 mM xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx pufr se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx xxx následující xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový pufr, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x výkrojků x xxxxxxxxx částí xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do pelety.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx xxx XX (10 xX fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx roztoku (XXX), xX 7,2)

Tento xxxx xx používá x xxxxxx protilátek.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k oplachování xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx se 0,1 % Xxxxx 20 k xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx pufr x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx se xxxxxxx jako krycí xxxxxx na okénka xxxxxxx xx XX xxxxx k zvýšení xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná voda 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx xxxxx nepřímého xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 g

NaH XX3 11,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 minut.

Pokud xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx přidat xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x PBS), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 g

KCI 2,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx pufr (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx doplnit xx 100 ml

3.5. Xxxxxx xxx substrát xxxxxxxxx xxxxxxxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x koncentrovanou HCl xx xxxxxx xX xx 9,8.

Doplní xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidá xx 0,2 x MgCI₂.

Rozpustí xx dvě 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Sigma) v 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx xxxxx DASI ELISA

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX CO₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 g

Na₂HPO₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2H₂O 4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1 000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 ml

Destilovaná xxxx 950 ml

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 ml

Destilovaná xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x xxxxxxx xx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx HCl.

Dodatek 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx mikroskopického xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx na xxxxxxx x xxxx xxxxxx x

x - xxxxxx xxxx objektivu.

s = πi²/4G²K²,

kde x = koeficient pole (x rozmezí 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (X).

X =C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx okénku x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x činidla xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištěni nejméně 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx vykazovat žádné xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bakterií (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx primer XXX-1 : 5'-GGG XXX XXX XXX XXX XXX GCC-3'

Reverzní primer X-2: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu templátové XXX X. solanacearum = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx: i) 2 xxxxxx xxx 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: ii) 20 xxxxxx xxx 94 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 20 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °X (syntéza xxxxx)

1 cyklus: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (závěrečná xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních fragmentů x xxxxxxx Xxx XX xx inkubaci xxx xxxxxxx 37 °X.

2. Protokol PCR Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx xxx acg xxx gcg xxx x -3'

Xxxxxxxx primer Xx-2: 5'-xxx xxx xxx xxx tcg xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx DNA = 553 xx.

2.2. Reakční xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx dNTP (20xX)	0,125 μl	0,1 mM
Primer Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxx polymerasa (5U/μl) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μl
Celkové xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 s xxxxxxxxxxx Xxxxx Taq Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus x) 5 minut xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx možná xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) a xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx X xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx a 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxxxxx (Pastrik xx xx., 2002)

3.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx RS-1-F: 5'-ACT XXX GAA XXX XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer RS-1-R: 5'-XXX XXX XXX XXX AGA GAC X-3'

Xxxxx xxxxxx XX-5-X: 5'-XXX XXX AAG XXX TTG XXX XXX G-3'

Reverzní xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX TCA XXX XXX XXX TAT XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX). Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx primerů XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx cyklický proces:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 sekund xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 sekund při 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z XXX X. solanacearum vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx 1 xxxx Xxxxxxxxxxxxx (např. Xxx 1269 X) xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX CAC XXX XXX XXX T-3'

Reverzní xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX XXX GCA AGA XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 bp

s Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Xxxxxxx směs XXX

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces xxx obě xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- x biovary 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 minut při 95 °C (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx při 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) ponechá xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. solanacearum pomocí xxxxxxx Xx-1-X x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Mva 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X. Xxxxxxxx XXX vzniklé amplifikací x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Rs-3-R xxxxxx žádná xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Příprava nanášecího xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx modř (10 % zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 ml

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (TAE), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx octová 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 g

Destilovaná xxxx 1,001

Xxxx použitím xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx specifická xxx R. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-xxx xxx xxx caa xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx eubakteriální xxxxx EUB-338-FITC: 5'-gct xxx xxx xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, KTERÝ XX XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX PRACOVAT X XXXXXXXXX.]

x) Zahřeje xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx vody (xxxx. Xxxxx pure xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx přibližně 60 °X a xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Parafonnaldelryd xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx fosfátového xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 kapek XXx 1X. Zkontroluje xx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [UPOZORNĚNÍ: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT XXXXX XX!]

xxx) Přefiltruje xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx x, podle potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (SDS) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx OLI2 5 xx/µx

Xxxxxxxx se množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 1. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX JEDOVATÝ, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXX POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Doporučená xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx oligosondy xx uchovávají x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Během xxxxxxx xx chrání xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x rajčete

Vysejí xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) nebo xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxx x plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 xxx) se přesadí xx xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx se xxxx pěstovat xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx delší;

Teplota: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx odrůda xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., L. Xxxxxxxx xxx D.A. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx whole cells xxx xxxxxxxxxxxxx, phylogenetic xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx microbiology. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Anon. 1998. Xxxxxxx Directive 98/57/XX xx 20 Xxxx 1998 on xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx xxxx. Official Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx L235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, G., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx primers xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx isolates. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, M.T., Xxxxxx, M., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Lopez, X.X. 2002. Enrichment Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Indirect Enzyme-Linked Xxxxxxxxxxxxxx Assay That Xxxx x Specific Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Potato Tubers. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Genetic xxxxxxxxx of Pseudomonas xxxxxxxxxxxx: detection xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx length xxxxxxxxxxxxx with XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxxxxx, X., Wilson, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx iru xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, M.C. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx. Tn: X.X. Xxxxxxx (xx.) Bacterial Xxxx Newsletter 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx huternational Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., Xx-Xxxxxxx, H.M., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Xxxxx, L. 1990. Xxxxxxxxx xx nitrate xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Fujii, X. Xxxxxx, M. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx of Ralstonia xxxxxxxxxxxx in xxxx xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x XXX technique. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx method xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxx data xx xxx sensitivity xxx specificity. Bulletin XXXX/XXXX Bulletin 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx relationship xx xxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx solanacearum to xxxxxx appearance on x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, D.E. 1987. Xxxxxxx for xxx xxxxxxxxx of xxxxxxxxx diseases xx xxxxxx. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, X.X., Gorris, X.X., Xxxx, X., Cubero, X., Vicedo, B., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx improves xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx detection xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: H.W. Xxxxx xx xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17. Xxxxx, F.J., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx fingerprints of xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx pathovars and xxxxxxx generated with xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, F.J. 1995. Differentiation of xxxxxxx structure by xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx to xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, N., X. Xxxxxx, G. Holloway, X.-X Xxxx, X.-X Xx, X. Maghirang, X. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, B.W. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx identifying Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx). Xx Pac. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, K.H. and Xxxxx, E. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, K.H., Elphinstone, X.X. xxx Xxxxxx, X. 2002. Sequence xxxxxxxx xxx detection xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx multiplex PCR xxxxxxxxxxxxx xx 16S-23S xxxxxxxxx intergenic xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Forde, S.M.D. (1995) Xxxxxxxxxx of xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Food and Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Schaad, W. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. ed.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Xxxx, S.E., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum, Xxxxxxxxxxx xx xxxx, Xxxxxxxxxxx pickettii and Xxxxx Xxxxxxx Bacterium xx xxxxxxx 16X xXXX sequencing: construction xx oligonucleotide xxxxxxx xxx xxxxxxxxx detection xx polymerase xxxxx xxxxxxxx. J. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, J.J., Xxxxxx, X.X., Holderness, X. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxxxxx solanacearum (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx solanacearum) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx and xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. using cellular xxxxx-xxxx xxxxxxxx. lnternational Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, M., Hayward, X.X., Xxx, XX, Xxxxx, M. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx relationships xx xxxxxxx xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas syzygii, xxx the xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx on 16X rRNA gene xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Xxxx, X.X., Xxxxxxx, P.J.M., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, E., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Saddler, X.X., Xxxxxxxx, A., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 in Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx rep-PCR. In: Xxxxx, X., Allen, X. and Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Molecular xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, N. 1999. Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xx autonated xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. van Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x rRNAtargeted xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.