Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 odst. 2 xxxxxx x. 326/2004 Xx., o xxxxxxxxxxxxxxxx péči x x xxxxx některých xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (dále xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Předmět xxxxxx

Xxxx vyhláška xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství¹⁾ a xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. subsp. xxxxxxxxxxx (Spieckermann et Xxxxxxxx) Xxxxx et xx., původci xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx bakteriální hnědé xxxxxxx, aby xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx,

x) zjistilo xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) při xxxxxxxx výskytu se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x prováděla xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx eradikace.

§2

Xxxxx

Xxx účely této xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis et xx. ssp. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Xxxxx xx al.,

b) xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Yabuuchi xx xx.,

x) hostitelskými xxxxxxxxxx -

1. původce xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx tuberosum X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x ostatní xxxxxxxx x čeledi xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), u xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - brambor (Xxxxxxx tuberosum X.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, rajče jedlé (Xxxxxxxxxxxx lycopersicum X.) xxxxx xxxxx a xxxxx, lilek potměchuť (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx původcem xxxxx xxxxxxx v přirozených xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx xxxxxxxx xx zjišťování xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx území xxxx x určité xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx, x xxxxxx způsobu šíření xxxxxxx x k xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx které xx xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxxx hnědé hniloby - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, dopravním prostředku, xxxxxx xxxx jejich xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) možným rozšířením xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxx x území, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Státní xxxxxxxxxxxxxxxxx správou (xxxx xxx "xxxxxxxxxxxxxxxx správa"), xx xxxxx xx xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx x důvodu potvrzení xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx se vztahují xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 zákona x důvodu xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby,

k) klonově xxxxxxxxx partií - xxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxx vegetativním xxxxxxxx x jedné xxxxxxx partie; přitom xx xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxx klonově příbuzné xxxxxx, které vznikly x xxxxx roce xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx partie, x xxxxxxx rajčete xxxxxxxx, které xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. rodičovskou klonově xxxxxxxxx partii xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xx xxxxxxxxxxxxx vznikly.

§3

Průzkum xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby

(1) Rostlinolékařská xxxxxx provádí každoročně x souladu s §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Detekčnímu xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx materiál xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxx §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx²⁾ původem ze xxxxxxxxx xxxxx Evropské xxxx (dále xxx "xxxxxxx stát"),

c) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx původem z Xxxxx republiky a x ostatních xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx podléhají všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako podezřelé x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vypěstované x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx dovážených xx xxxxxxx zemí x vyvážených do xxxxxxx zemí podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x namátkově xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx třetích zemí.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx rostlin rajčete xxxxxxxx x dalšímu xxxxxxxxx,

x) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x závlaze xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx průmyslově xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx odpady x těchto podniků.

(6) Xxxxxxxxxxxx průzkumu xxxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx výskytu vodní xxxxxx používané x xxxxxxx partií xxxxxxxxxxx x výskytu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx tyto xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 písm. x) a b), xxxxxxxx 3 x x odstavci 4 xxxx. x) x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx 4 písm. a) x xxxxxxxxxx partií,

b) xxxxxxxxxx celých rostlin xxxxxxxx x řezu xxxxxxxx xxxx, x xxxxxxxxx nebo xx xxxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx bramboru, v xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 2 písm. x) a x),

x) xxxxxxxxxx porostů xxxxxxx xx vhodnou dobu x xxxxxxxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin x xxxxxxxx napadení xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x případech uvedených x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vegetace x případě xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x) a x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx, xxxxx, xxxxxxx a xxxx xxxxxx xxxxxx při xxxxxxxx, xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 xx 7, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zásad x biologie původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx hostitelských xxxxxxx x v závislosti xx aktuální situaci xx xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx a xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správy (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xxxx stanoveným xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx x §10 odst. 1 zákona x xxxxxxxxxxx ve Věstníku.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx rovněž xxxxxx xxxxxx odebrané xxxxx xxxxxxxxx fyzickou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx §71 odst. 1 xxxx. x) xxxxxx xxxx rostlinolékařskou xxxxxxx xxxxx §72 xxxx. 5 písm. x) xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx na základě xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, že xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx prováděného xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx fyzické xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, v případě xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx x rajčete xxxx Xxxxxxxxxx kontrolnímu a xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 8 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x souladu x §10 xxxx. 5 xxxxxx xxxxxx ročně x xxxxxxx stanoveném x příloze č. 2 části X ostatním xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xx účelem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úrovně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ množeném xxxxx pro výsadbu xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. září, x xxxxxxxxx případech xx 1. xxxxxx. Xxxxx oznámení x xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Podrobnosti xxxxxx xxxxxxxx xxxx důvěrné.

§4

Xxxxxxxx xxx zjištění xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xx podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx

x) rostlinolékařskou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx rychlého xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X číslo 1 a oddílu XX, xxxx

x) pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx rostlinolékařskou xxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx podezření x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x rámci odborného xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 a xxx dodržení xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo vyvrátit.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahájí xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxx šetření xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx za účelem xxxxxxxx původu xxxxxxxxxxx xxxxxxx a v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx zásilek, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx vzorky, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx vylučuje xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x

x) xxxxxx vhodná xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx odhadovaného rizika xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx včetně xxxxxx přesunu xxxx xxxxxxxxx úředního dohledu xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx x v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x výskytu, popřípadě x xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, povrchových xxx xxxxxxx x xxxxxx členského xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx rostlinolékařská správa xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx členského xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx tohoto xxxxxxxxx x xxxx x xxxxx státem xxxxxxx xxxxxxxx spolupracovat.

(5) Xxxxx xxxx x podezření x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxx původ x Xxxxx republice xxxx které může Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx republika, xxxxxx rostlinolékařská správa xxxxxx opatření xxxxx xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx výskyt xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxx správa x xxxxxxx x §76 xxxx. 2 xxxxxx x x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx vědeckým xxxxxxxxx, biologii xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby a xx xxxxxxx pěstování, xxxxxxx na trh x průmyslového zpracování xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx prostředky, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálem, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxx místa xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx je možná xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x pozemek, xx nichž xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx zamoření x xxxxxxxxx xxxxxx nákazy x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx bodu 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 rozsah pravděpodobného xxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxx xxxx posklizňového kontaktu, x xx základě xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxx xxxx pěstitelské xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx zamořených xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a xxxxxxxxxxxx zónu na xxxxxxx stanovení rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx b) x xxxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X případě xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx s xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vodu, xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx zpracování x balení xxxxxxx x x ohledem xx hostitelské xxxxxxxx x čeledi lilkovitých x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx prostřednictvím xx xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx mohlo xxx xxxxxxxx pěstování brambor, xxxxxxxxxxxxxxxx správa

a) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků povrchových xxx x popřípadě xxxxxxxxxxxxx rostlin x xxxxxx lilkovitých způsobem xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x cílem xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x souladu x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx xxxx xxxxxxxxx vzorky, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx povrchové xxxx za zamořenou xxxxx xxxxxxx b) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bodu 3 přílohy č. 3.

(3) Rostlinolékařská xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Komisi v xxxxxxx x ustanovením xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), popřípadě xxxxxxxx 2 písm. b), x xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. x). Podrobnosti x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx členský xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx hniloby x xxxxxxxx, zásilce xxxxx xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx obdobně xxxxx xxxxxxxx 3, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx odpovídajícím xxxxxxxx x v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 a 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx x objekty, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, popřípadě xxxxxxxxxxxx zónu.

(5) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx stanoví xxxxxxx xxxxxxxx ve Věstníku xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx karanténního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. x), odstavce 2 xxxx. c) x xxxxxxxx 4.

§6

Testování klonově xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxx x partiím, xxxxx byly xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx rozmnožovacího materiálu²⁾, x to v xxxxxxx xxxxxxxxx ke xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx dalšího šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx potřeby označí xxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx za zamořené, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), x) a x).

§7

Opatření xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxx tato mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) partie hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxx xxx xxxxxx x pod xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správy xx x ní xxxxxx xxxxxxxx uvedeným x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx ověří, xx neexistuje rozpoznatelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, stanovené x příloze č. 5, v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx označená jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §5 odst. 1 xxxx. x) smí xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx rostlinolékařské xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, pokud xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, že neexistuje xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x že jsou xxxxxxx požadavky na xxxxxxxxxxxxx odpadů, stanovené x příloze č. 5, x xxxxxxx průmyslového zpracování xxxx xxxxxx, x xxxxx není xxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 xxxxxxxx jako zamořená xxxxx §5 odst. 1 xxxx. a),

c) xxxxxxxx, xxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx části a xxxxxxx xxxx objekty xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. a) xxxx označené xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), se xxx zničí nebo xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 x tím, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx ani xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) x karanténním xxxxx x xxxxxxxxxxxx zóně, xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), popřípadě xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. c), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx původce kroužkovitosti x bodě 4 přílohy č. 4 a v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxxxxxxxxxxxxx správa může xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx opatření uvedená x odstavci 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx odborně odůvodněná, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx nařízených xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa ostatním xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Rostlinolékařská xxxxxx xxxxx xxxxx §76 odst. 4 xxxx. x) zákona xxxxxxxxx rostlinolékařská opatření xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx jejich xxxxxxx a po xxxxxxxx doby stanovené x jejich xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx v xxxxxxx x §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx přechovávání x xxxxxxxx, šlechtitelským nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxx xxxxx §8 odst. 1 zákona, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx výskytu xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Testování rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Rozmnožovací xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, vypěstovaný xx xxxxx České republiky x xxxxxxx na xxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování, xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxxxx průzkumu xxxxx §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x souladu x §3 xxxx. 8 x 9, a xxxxxxx prostým původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx určené x výrobě xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru x předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx základního rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx tuto xxxxxxxxxx, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx žádná xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx předstupňů, xxxx xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x následujícím xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce potvrzen x xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky.

§9

Účinnost

Tato xxxxxxxx nabývá xxxxxxxxx xxxx jejího xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx č. 331/2004 Sb.

A. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX PŮVODCE KROUŽKOVITOSTI

Předložené xxxxxxxxx xxxxxxxx popisují xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x rostlin xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx a podrobnosti xxx xxxxxxxx testovaných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se podílely xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a zahrnují xxxxxxx životaschopných xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek s xxxxxxxxxxxxx zařízením na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vydaných xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx stálé x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx stanovené xxxxx vybraných metod.

Zcela xxxxxxxx xx příprava xxxxxxxxxxx kontrol.

Testování xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x kalibraci xxxxxxxx, pečlivé zacházení x činidly a xxxxxx uchovávání x xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, např. oddělení xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxx xxx uplatněno standardní xxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx administrativním x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, jak xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek x diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx vzorku, xxx xx znázorněno x xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test (TF xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti x xxxx být xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je x druhý screeningový xxxx pozitivní, pak xx podezření z xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle xxxxxx schématu. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx důvodu xx xxxxxxxxx IF xxxx podle §4 xxxx. 1 definován xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx potvrzený xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x identifikaci xxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx bramboru x x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti

Postup testování xx xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

(1) Popis xxxxxxxx xx v xxxxxx 2.

(2) Vhodné testy xxxx:

- IF test (xxxxx 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (oddíl 5).

(3) Ačkoli xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, kultivace v xxxxxxxxxxx stádiích infekce xx xxxxxx podařit. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx infikovaném xxxxxxx, xxxxx přerůst xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx izolačním xxxxx. Xxxxx se doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, nejlépe XXXX (xxxxx 8) xxxx biotest (xxxxx 7).

(4) Popis xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx x oddíle 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx negativní, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx znovu.

(6) Xxxxxxxxxx identifikace čisté xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(7) Zkouška xxxxxxxxxx xx popsána x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx vzorcích bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx biologickém xxxxxxxx, musí být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx rnichiganensis subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ až 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x každé xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 hlíz, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx xxxxx, jestliže 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx provedena xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx nejméně xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx test xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X případě, xx xx tento test xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx nebo více xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX se xxxx xxxxxxx polyklonální protilátka, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx a xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx (viz oddíl 5).

(7) Xxxxxxxxxx izolace.

Toto xxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX xxxxx xxxx XXX-88 xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Typické xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx 3-10 dní xx rozetření xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx následně xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx potenciálu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx sekundární xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x které xxxxx xxxxxxxx přerůst. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx x rostlin xxxxxxxxx pro biotest (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x pelet bramborových xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Xxxx vyžaduje xxxxxxxxx inkubační xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx na XXXX xxxx NCP-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx tento xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx 7).

(9) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice saprofytickými xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxx, xxx izolační xxxxx xxxxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx dodatečným xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva z xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx xxxxxx x v xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx dalších vzorků.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 9.

(12) Xxxx patogenity xx xxxxxx v xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx velikosti xxxxxx - xxx xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou popsány x oddílu 3.2.

(3) Xxxxx jsou alespoň xxx testy založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx provedena izolace x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X případě, že xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xx xxxxx xxxx další xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Selektivní xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx morfologie xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX test xx xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) FISH test xx xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxxx xxxx výsledky xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx a x případě xxxxxxx xx xxxxxxx test xxxxxxx vzorků.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x kterých xx xxxxxxxxx, xx se xxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx dosáhne xxxxxx xxxxx popsaných v xxxxxx 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx vyšetření na xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti

2.1. Rostliny xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx klimatických xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxx zjistí xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Kromě xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx se xxxxxx s příznaky xxxxxx xxxxxx, stáří xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx kontrole xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vadnutí xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx je xxxxxxx pomalé x xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx listy xxxxx x xxxx infekci xxxxxx rostou, x xxxx růst x xxxxxxxxxxxx místech je xxxxxxx. Tím vznikají xxxxxxxxx xxxxxxxxx listy. Xxxxx xxxxxxxxx ucpáním xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx části stonku xxxxx mají xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x dokonce stonky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pletiva xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, zejména xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx nepatrně xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx a xxxx, xxx xxx xxxxxx zmáčknutí xxxxx xxxxxxxxx z xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx bakterií. Vodivá xxxxxxx mohou xxxxxxxxx x příznaky xx xxxxxxx xxxx v xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxx blízko xxxxxxx xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx vodivých xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx xx vnitřní xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx infekce se xxxxxxxx na povrchu xxxxx praskliny, xxxxx x červenohnědými xxxxxx. X poslední xxxx xx v Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx kůra xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, čímž xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx bakteriální xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxxxx x může xxx xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx od xxxxxx xxxxxx bramboru. Xxxxx xxxx i xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx xxxx xx internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx množství xxxx xx vzorku xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx však xxx xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx než 200 xxxxxxx, xxxxx xx x dispozici xxxxx xxxxxxxx hlíz.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx 200 hlíz.

- Níže xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx zjištění původce xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku:

Hlízy xx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx PCR test, xxx odstranění xxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx vzorkem. Hlízy xx nechají oschnout xx vzduchu. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx užitečný v xxxxxxx, že xx xx vzorku xxxxxx xxxxxx a jestliže xx má xxxxxxxx XXX test nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx vyříznou xxxxxxx výkrojky vodivého xxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxx. Na xxxxxxx se omezí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky. Xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 hodin xxxx xxxxxxxxxxxx při -20 °X xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx dají xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx vyříznutí xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx této hlízy xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx hlízy x xxxxxxxxxxx příznaky xx nechají xxxxxxxxxx xx xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °C xx do xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Všechny xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, uchovávají xx v xxxxxx xxx přidání xxxxx, x xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx skladování xxxx xxxxxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx zalijí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxx xx x rotační xxxxxxxx (50-100 ot/min) xx xxxx 4 xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx v xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x utěsněném xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx homogenizaci xxxxxx xx xxxxxxx mixéru xxxxxxxx vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx nutno učinit xxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Pro každý xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxx sterilizovaná xxxxx (xxxx) a xxxxxx. Xxxxx má xxx použit XXX xxxx, xx nutno xxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxx nebo xxxxx zařízení, xxxxxxxxxx xx drcení x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx maximálně 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°C) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx frakce xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x po dobu 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10°X a xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx peleta.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µx xxx test xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Ralstonia xxxxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x uloží při xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86°C (xxxxxx). Xxxxxxxx xx během xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°C.

Opakované xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx extraktu, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx 24 až 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, aby xx xx všemi pozitivními xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x pro xxxxxxx xx XX testy x všechny xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx bramboru

Poznámka.

Pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx populací Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup xx vhodný xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 částí xxxxxx. (Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx být založeny xx statisticky reprezentativním xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx je předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx čistého xxxxxxxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx část x xxxxxxxxx 1-2 xx xx spodní strany xxxxxxx xxxxxx přímo xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, okamžitě xxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx nádobě.

3.2.2. Části xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x xxxxxxx třepačce (50-100 xx/xxx) po xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx nižší xxx 24 °C nebo xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) části xx xxxxxxxx xxxxxxx x pevném xxxxxxxxxx xxxxx s přiměřeným xxxxxxxxx extrakčního pufru (dodatek 3) za xxxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx. Xxxxx to není xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx stonků x xxxxxx maximálně 72 xxxxx nebo xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 minut, xx dekantuje supernatant.

3.2.4 Xxxxx purifikace extraktu xxxx koncentrace bakteriální xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx v oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx rozdělí xx 2 xxxxxx části, Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 4-10 °X x druhá xxxxxxxx se xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (xxxxx) nebo při xxxxxxx -68 až -86 °C (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. lF xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx lF xxxx xxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx jeho xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test x xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, musí být xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx XXX nebo XXXX. Xxxxxxxx se xxxx XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x jeho xxxxxxxx xx pozitivní, xx xxx xxxxxxxxx analýzy xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx lF test xxxxxxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxx xxxx, používá xx xxxx polyklonální xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx x polyklonální xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxx vyšetření vzorku x xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx známému kmenu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx se určovat xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx nejvyšší ředění, xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx měly xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) v blízkosti xxxxx xxxx na xxxxx. Používají se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx extraktech xxxxxxxxxxxx xxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx odstranit přidáním 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx po dobu 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 g x xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx xxxxx, zejména pokud xxxx sklíčka se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo x xxxxx srovnávacím xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 až -24 °C) by xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxxxx extraktů, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx mikroskopická sklíčka x xxxx xxxxxx, xxxxxxx s 10 xxxxxx x průměru xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx test vzorků.

4.1. Xxxxxxx na xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx okénka xxxxx xxxxx) xxxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx okénka. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxx 1.

b) Xxx xxxx pelety:

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) resuspendované xxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx okénka o xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx okénka xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Druhou xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky xx fixují xx xxxxxxx buď xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), xxx plamenem xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X případě xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx před xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zmrazená x xxxxxx xxxx xx co možná xxxxxxxxx dobu (maximálně 3 xxxxxx).

4.3. Postup XX xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx sada xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx protilátky x XX pufru. X xxxxx xxxxx xx xxx být xxxx 1/2 (T/2), v xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) x dvojnásobný titr (2X).

x) Podle přípravy xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. b):

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx přesnost.

Obrázek 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) x oddílu 4.3. xxxx. a)

4.3.1. Podložní xxxxxxx se uspořádají xx navlhčený papír. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx pokryje kompletně xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx ze xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx v pufru XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx v xxxxx XX. Je xxxxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx, které xx xxxxx xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx na xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx se stanovuje xxxx. Množství konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Zakrytá xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx po xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx jako xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx 0,1M xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) nebo komerční xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx IF testu

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx epifluorescenčním mikroskopem x xxxxxx xxxxxxxx xxx excitaci XXXX xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1000x. Xxxxxxxx se xxxxxx ve dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx malým xxxxxx buněk se xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x určeném titru xxxxxxxxxx nebo pracovním xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx xxx test XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx okénkách xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx porovnání s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx fluorescencí nelze xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx všechna xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního testu. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx bramboru x částí stonku xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx a morfologií x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Při xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících buněk x typickou xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Výsledek XX xx pozitivní x xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxx 5x10³. Vzorek xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XX xxxxx xx negativní xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5x10³ xxxxx na 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x vzorek xx považuje xx xxxxxxxxx. Xxxxx testování xxxx nutné.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx povinný screeningový xxxx proveden XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, je k xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx ředtím testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx měl xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extrakty, xxx xx xxxxx jej xxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxx, který byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 xxxx -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 X xxxxxxxxxxx pufru (PB) x 3-5 xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx sklíčka x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktu xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX poskytuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako x xxxxxx.

5.1. Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Připraví xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Napipetuje se 100 µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 g.

5.1.3. Xxxxxxxx xx supernatant x xxxxxxxx xx peleta x 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Protřepe xx x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Xxx jeho použití xx xxxxxxxx xxxxxx x kroku 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX x 50 µl 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx xx xxxx 8 xxxxx na 7&xxxx;000 g, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µl 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 3, přičemž xx použijí 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x xx neředěný x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 M XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx být xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °X xx přidání 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxxx XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxx xx xxxxxx odstředěním, xxxxx se xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X XX x zamíchá xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x fixují xx nad xxxxxxxx.

X xxxx xxxx je xxxxxxx postup xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx prachem x x suchu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Předhybridizace x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx roztok lyzozymu xxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx L-6876) x 10 xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 mM XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, ale měl xx se xxxxx xxxxxx zmrazit x xxxxxx roztát. Každý xxxxxx xx dobře xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx roztoku lyzozymu x xxxxxxxx po xxxx 10 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, pouze xxxxxx, x xxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx lyzozymu 50 µx xxxxxxxxxx K 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) xx každé xxxxx x xxxxxxxx se xxx teplotě 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5.2.2. Buňky xx xxxx xx xxxxxxxxxxxx sériích 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx pokaždé xx xxxx 1 minuty. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x držáku xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx vzduchotěsné krabice xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx přeinkubuje x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx teplotě 55 °X po xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx se hybridizační xxxxxx (dodatek 7) s 45 µx xx 1 sklíčko x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx 5 minut xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx horkou xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x xx xxxxxxx ze 4 okének na xxxxxxx / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) tak, xxx pod xx xxxxxxx vzduch. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x hybridizuje se 14 - 18 x x xxxx xxx xxxxxxx 55 °X v xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx se 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx vody (Xxxxx pure xxxxx = UM), 1 x 1x xxxxxxx (334 ml 3x xxxxxx a 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x hybmixu (167 xx 3x hybmix x 833 xx XXX). Xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx lázni xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx sklíčka a xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xx držáku xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx v kádince x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx roztoku 1/2 xxxxxx a nechá xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 minut.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx krátce xx XXX x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx lehkým xxxxxxxx povrchu xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx jamky x celé sklíčko xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 mm).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se zvětšením 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx olejovou imerzí. X filtrem xxxxxxx xxx fluorescein xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx zbarveny xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Použitím xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx obarvené Xx3 jeví fluorescenčně xxxxxxx. Porovnává xx xxxxxxx morfologie x xxxxxxxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx zbarveny. Xxxx FISH (xxxxx 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx odchylné. Xxxxxxxx xx xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Hledají xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s morfologií xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x okénkách xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí odpovídat xxxx xxx xxxxx xxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x úvahu.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test zopakován. Xxx podezření x xxxxxxxx kontaminace musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx může xxxx, xxxx všechna xxxxxxx ve skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx přesnost XXXX xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx mnohem xxxx často xxx x IF xxxxx.

5.3.5. X úvahu se xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX filtru xxxxx xxxxxx fluoreskující xxxxx x velikostí a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx pozorovány xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x nejsou pozorovány x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx alespoň 5 x 10³ typických xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx méně než 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx negativní.

b) Výsledek XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx typickou xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující buňky xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx pozorovány v xxxxxxxxxxx kontrolách.

6. PCR xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx PCR xxxx jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx xxxxxxxxx, musí xxx jako druhý xxxxxxx screeningový test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx se PCR xxxx používá jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx této xxxxxx x celém rozsahu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx 1 ml xxxxxxxxx xx xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx optimalizační pokusy.

Používají xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx třeba xxxxxx xxxxxx bezpečnostní opatření, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. PCR xxxx xx měli provádět xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx minimalizovala xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx extrakce XXX x XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx jako s xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli xxxxx k xxxxxxx XXX.

XXX xxxx by xxx zahrnovat následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxx xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. NCPPB 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx PCR xxxxx také DNA xxxxxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Aby xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx vzorků, xxxxx budou xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků by xxxx xxx xxxxx xxxxx bez zeminy. X případě použití XXX testu xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x umytých xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx cílové XXX x komplexních xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x dispozici různé xxxxxx odstraňující xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX x xxxxxxxx vzorku.

Následující xxxxxx byla xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

a) Xxxxxx podle Pastrika (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µl lýzového xxxxx (100 xX XxXx, 10 mM Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX EDTA [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 ml.

2. Přidá xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx se xx termobloku nebo xxxxx lázně x xxxxxxx 95 °X xx xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx na 5 xxxxx do ledu.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx na 1 xx x 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 37 °C xx dobu 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx se 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx B (Xxxxxxxxxx)x silně se xxxxxxxx třepáním, až xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx začne xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µx xxxxxxxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx sníží x xxxx se xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx xx na 15 000 x xx xxxx 20 xxxxx při 4 °X xxx xxxxxxxx fází x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx horní xxxx xx čisté mikrozkumavky.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx xx promíchá xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxxxx při 4 °X x xxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % etanolu (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15 000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx nebo x XXX speed xxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx xxxx (UPW) x nechá xxxx xxxxxxx 20 xxxxx xxx pokojové teplotě.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -20 °C xx do upotřebení xxx PCR.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxx PCR xx xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX xx xx mohly xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ patogenních xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx testované xxxxxx x xxxxxxxx xxx PCR podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx vzorku XXX (1:10 ve xxxxxxxx vodě).

6.2.2. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, kde xxxxxxx kontaminace, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx protokol PCR xx xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx zahrnuje xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX reakce.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx použita xx xxxxx XXX namísto xxxxxx.

6.2.5. PCR mikrozkumavky xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Rozdělí xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx nejméně 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx DNA x každého vzorku xxxxxxxx x 3 µx nanášecího xxxxx (dodatek 6) do 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx v Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X xx xx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX, např. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Detekují xx xxxxxxx DNA xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 xx xx x) xx xxxx 30-45 xxxxx, xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. V xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X všech xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx teplotě a xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentu xxx XX xxxxxxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX testu:

PCR xxxx xx negativní, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus očekávané xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x daném xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x rostlinnými interními xxxxxxxxxxx primery: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx amplikon xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, že xxxxx amplifikován xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x druhou xxxxx PCR primerů (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx vodě, ale x xxxxxxxxx kontroly x Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx z xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx x extraktům xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (příprava xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx citlivost zjištění xxx očekávat xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Metodu xxxx xxx úspěšně použít x xx extrakty, xxxxx byly xxxxxxxxxx x glycerolu xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx poskytují xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obohacující xxxxxx xxx růst Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx příznaků x xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx negativních výsledků xx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx o xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx podle 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 xxxxx do xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx využití xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx potřeba 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx zářezem X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx o xxxxxxx 10 xx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x vyhloubenou xxxxx x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx x 15 xx xxxxx). Pro každý xxxxxxxxx xxxxxx se xxxx xxxxxx a xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx stonku.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxx skalpelu x xxxxxx xx xx xxx inokulum xxxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx namočeným xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx rozdělí xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Řez xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx xxxxxx xxxxxxxx držené xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx děložní xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) suspendované xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx sterilního xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx (v xxxx xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x řezem xx začne x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx buněk (xxxxxxx) xx rostliny xxxxx xxx před inokulací xxxxxxxxxx.

7.4.2 Stonky lilku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx nad xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx s podkožní xxxxxx (xx méně xxx 23 G). Xxxxxx se rozdělí xxxx testovací rostliny xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxx inokulační xxxxxxx (7.2, 7.3 nebo 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx kultury xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xx to xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (dodatek 8) po xxxx xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Xxxxxxxx xx inkubují xx xxxxxxxxxxxx osvětlení a xxxxxx vlhkosti (70-80%) x xxxxxxxx se xxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx vody xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx je 21 °X. Aby xx xxxxxxxx kontaminaci, inkubují xx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxxxxx místa se xxxxxxx xxxxxx oddělení xxxx zacházení x xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx inkubovány xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx ke xxxxxxxxxxx. Je nezbytné, xxx xxxxxxxx i xxxxxxx xxxxxx byly xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, protože xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x jednoho xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Pravidelně xx osmi dnech xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx působí u xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx může xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx zprvu xxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx před xxxxxxxxxxxxxxx zesvětlí. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx často xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Nekrotická xxxxxxx xxxxxx často xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxx; xxx xxxx trvá xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxx xx přežití. Rostliny xxxxx xxxxxxx odrůst. Xxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxx starší rostliny, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx tří xxxxx x xxxx xxxxxx xxxx xx. Vadnutí xxxxx xxxx způsobovat xxxxxxxx xxxxxx bakterií xxxx hub xxxxxxxxxx x peletě z xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x velké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií. Xxxx případy vadnutí xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx rychle xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx rostliny. Xxxx se xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx Erwinia xxx

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx vejcoplodém xxxxxx příznaky, měla xx xxx provedena xxxxxxx za xxxxxxx xxxxx xxxxxxx zvadlých xxxxx xxxx stonků xxxxxxx. Xxxxxx listů x stonků xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Provede se xxxx lF xxxx XXX na xxxxx x xxxxx x xxxxxxx xx na xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) médiu (xxx xxxxx 8). Xxxx se xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Čisté xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx pokud xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x rostlinách lilku xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xx uplynutí xxxxxxxxx xxxx až 4 xxxxx. Xxxxx nejsou xx 4 týdnech xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxx XX/XXX na xxxxxxxx xxxxxx částí stonků x xxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx je xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxxxx (selektivních) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx podezřelé x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xx patogenita (xxx xxxxx 9 x 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus

Diagnóza xxxx xxx potvrzena xxxxx xxxxx, je-li xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx náročným xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx z pletiv xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx však přerůst xxxxxx rostoucí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx xx nedoporučuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx pletiva xxxxx (3.1.5) nebo stonku (3.2). Xxxxx izolace Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx je xxxxx xx xxxxxxx selektivního xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx resuspendované pelety x xxxxxxx části xxxxx xxxx ze xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx stonku x x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, které xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, ale x xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX složených xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx lilku, měla xx xxx xxxxxxxxx xxxxx oddílu 3.l.2.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus (xxxx. NCPPB 4053 xxxx XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jeho xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

8.1. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Xx 100 µl xxxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x neředěné bramborové xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx podmínkám Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx bakterie xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx přítomná xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, zatímco xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx rozetřít 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, v xxxxxx 1/100 až 1/10 000 xx XXXX xxxxxx xxxx NCP-88 xxxxxx (dodatek 5), xx použití xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (xxxxxxx) a xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °C.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx kolonií xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se provádějí xx xxxxx xxxxx, x dalším počítáním xx 5,7 x 10 dnech.

8.2. Čištění xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého x/xxxx následnou xxxxxxxxxxxx xx se xxxx xxxxxxxx xx XXX xxxxx; inokulace x xxxxxxxxxxxx xx se xxxx xxxxxxx dříve, xxx xxxx média xxxxxx přerostlá, xx. xxxxxxx po 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx médií (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx dextrózový agar (xxxxx pro xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx xxxxxx glukosový xxxx,

- xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X po dobu xxxxxxxxx 10 dní.

Původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx vytváří xxxxxxx velikosti špendlíkové xxxxxxxx, vyklenuté, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Typické xxxxxxx jsou smetanově xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx žluté, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx vyklenuté, xxxxxxxxx xxxxxx, s xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Gramovo xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx kolonie xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9) x provede se xxxxxxx patogenity (xxx xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx izolované xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Veškerá xxxxx xx xx xxxx inkubovat xxx 21 °C x xx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx růstu, xxxxxxxx xx po xxxx nejvýše 20 xxx.

Xxxxxxx testy musí xxxxxxxxx kontrolu se xxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Morfologická xxxxxxxx se musí xxxxxxxx z xxxxxx x živného xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx slabá

Růst xxx 37 °C -

Xxxx x 7% XxXX -

Xxxxxxxxx želatiny -

Hydrolýza xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- glycerolu -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x pufru xx xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xX xxxxxx (xxxxx 4).

d) Xxxxxxxxxxx výsledku lF xxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx xX xxxx xxxxxxx odpovídá xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Připraví xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na xx xx xxxxxxxx vodě (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx xxxxx x uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx nebo vřící xxxxx lázni xxx xxxxxxx 100 °C xx dobu 4 xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx může xxxx xxxxx podpořit xxxxxxxx xxxxxxx připraveného XxXX do xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxx -16 až -24 °X xx do xxxxxxx.

x) Pro xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx amplikonů xx použijí xxxxxx xxxxxxx XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx a xx Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx amplikony XXX stejné xxxxxxxxx x xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x XXX.

x) Provede se xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

x) Test XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x pozitivní xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °C (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Test XXX xx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx charakteristických mastných xxxxxxx 15:1 Anteiso X, 15:0 xxx, 15:0 Anteiso, 16:0 xxx, 16:0 a 17:0 Anteiso xxxxx xxxxxx o přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Jiné rody xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X xx pro tyto xxxxxxxx xxxxxxxxx kyselina, xxxxx se xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. x xxxxxxx 1-5 %. X Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx obvykle xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x UPW.

b) Xxxxxxx xx test postupem xxxxx Xxxxx a xxx., 2001.

10. Test xxxxxxxxxx

Xxx konečné xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxx xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx patogenity.

10.1. Xxxxxxxx xx inokulum xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x 3-xxxxxxx kultur xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx fázi 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx xx při teplotě 18-24 °X při xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx vyschnutí. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxx během 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx vadnutí, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxx xxxxx příznaky xxxxxxx, xx xx xxxx inkubovat xx 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx příznivých xxx xxxx lilku vejcoplodého, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx se xx 3 xxxxxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx provádí x xxxxxxx x příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody nebo 50 xX fosfátového xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x YPGA, xxxxxxxx se xx xxxx. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °X x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx podílející xx xx optimalizaci x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Gesundheit xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx a Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de la Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Unité xx Bactériologie	Angers	Francie
Laboratoire Xxxxxxxx xx la Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Station de Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Institute, Xxxxx Xxxxxxxxxx Centre	Aas	Norsko
Direcção-General de Xxxxxxçãx das Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx kultura virulentního xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) na xxxxxxxxx xxxxx XXXX a xxxxxxxxxx se x 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx přibližně 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Toho xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zakalené xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konců 200 xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, u xxxxx je xxxxx, xx xx xxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx způsobem x xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek x xxxxxx 1,5 ml x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Přenese xx 100 µx xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx. V následujících xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek se xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx opatří xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 ml, čímž xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Skladování probíhá xxx teplotě -16 xx-24 °X xx xx doby použití.

Přítomnost x množství C. x. subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xx provede xxxxxxxx XXX x pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x XXXX xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxx zkušebních xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx a nesmí xxx xxxxxxx v xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze xxxxxxxxx xx dobu xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 xX xxxxxxxxx pufr, pH 7,0)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx z rostlinných xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (bezvodý) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x autoklávu při 121 °X po xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 ml
Tetrasodiumpyrofosfát	Antioxidační xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Vázání xxxxxxxxxx XXX	50 x
(*) xxx xxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)

Tento xxxx xx xxxxxxx xxx resuspenzi a xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrovány do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx pH a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx IF xxxx

2.1. Pufry xxx XX (10 mM xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxx protilátek.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx rozpustí, xxxxxxxxxxx xx pH x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx v glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx používá xxxx xxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX x XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v jednom xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2. Xxxxxxxx se počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x S/s,

kde X = plocha xxxxxxx xxxx na xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde i = xxxxxxxxxx pole (x xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - zvětšení xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx počet charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx (N).

N = X x 1&xxxx;000/x x F,

kde y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx a

F = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Média pro xxxxxxx x xxxxxxxxx X. m subsp. xxxxxxxxxxx

1. Obecná xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Nutrient xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky se xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx při 121 °X po xxxx 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx dextrose xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx agar xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 C xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Difco)	5,0 g
D(+) xxxxxxx (monohydrát)	10,0 g
Baktoagar (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x provede xx xxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121 °C xx dobu 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x minerálními xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx salts xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 x
XxXX4 . 7H2O	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x provede xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx v xxxxxxxxx xxx 115 °C xx xxxx 20 xxx.

x) Validovaná xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx jinak, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx z XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . H2O	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005 x
Xxxx (Xxxxx č. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx se rozpustí, xX xx xxxxxx xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X po xxxx 15 min.) x xxxxxxxxx xx 50 X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx: trimethoprim 0,06 x, nalidixic xxxx 0,002 g, xxxxxxxxxxxx X 0,01 x.

X xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: trimethoprim (Xxxxx) a nalidixic xxxx (Xxxxx) (xxx 5 mg/ml) v 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Xxxxx) (1 mg/ml) v xxxxxxxx xxxxxxxxx. Zásobní xxxxxxx xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx skladování x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx NCP-88

Živný agar (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx,xxxxxx xx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x ochlazení xx 50 °C se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx xxxx (Sigma) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx acid v 0,01 X NaOH, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Zásobní xxxxxxx xx sterilizují filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx antibiotik xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx do 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX protokol x xxxxxxx PCR xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx primery

primer PSA-1 5'- xxx xxx xxx ggg xxx xx xx -3'

xxxxxx XXX-X 5'- xxx xxx gat gtt xxx xxx xxx x -3'

primer XX-7-X 5'- xxx gca xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

xxxxxx NS-8-R 5'- xxx xxx xxx xxx xxx acg xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx x XXX X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx šablony = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X xXXX 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx na xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx voda (UPW)	15,725 μx
10x XXX pufr (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 mM XxXx2)
XXX (frakce V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 mM)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx NS-7-F(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx polymeráza (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq xxxx Xxxx) x Xxxxx XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx NS-7-F x XX-8-X byla optimalizována xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx homogenizační xxxxxx x xxxxxxxxxx DNA xxxxx Pastrika (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx metodami xxxxxxx XXX je xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx: i) 3 xxxxxx xxx teplotě 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx teplotě 64 °X (připojení xxxxxxx)

xx) 1 minuta při xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 sekund xxx xxxxxxx 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx primerů)

vii) 1 minuta xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx se při xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx optimalizován xxx použití x xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxx modifikace kroků xxxxx xx), xxx), xx), x), vi) x xxx).

1.4. Analýzy xxxxxxxxx restriktivním xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x XXX C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx x enzymem Xxx II po xxxxxxxx při teplotě 37 °C xx xxxx 30 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx a 220 xx.

2. Příprava xxxxxxxxxx pufru

2.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 g

Destilovaná xxxx 50 ml

Nanášecí pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (TAE), pH 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (sodná sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxx použitím xx xxxxx xx 1x.

Xxxx komerčně xxxxxxxx (xxxx. Invitrogen nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx FISH xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx ctc xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'- xxx xxx xxx cgt xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE XXXXXXX! XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 ml xxxxxxxxxxx xxxxx vody (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X a přidá xx 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx míchadlem.

ii) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx fosfátového xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 kapek XXx 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zkontroluje xX x v případě xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X PARAFORMALDEHYDEM XXXXXXXXXX XXXXX pH!]

iii) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx chráněný před xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 mM (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 mM

Zředí xx xx 1x, podle xxxxxxx.

4. Hybridizační xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x tabulce. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx dvojmo 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

Tabulka: Doporučená xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsi

	2 sklíčka	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx ultra xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x hybmix	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx oligosondy se xxxxxxxxxx x temnu xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx nutné xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X fosfátový xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxxxxxx se autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx výsevního substrátu. Xxxxxxxxx s plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 xxx) xx přepichují xx pasterizovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx by se xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 15 °C.

Vhodné xxxxxx xxxxx vejcoplodého "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Huckerově xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx v 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 x šťavelanu xxxxxxxx x 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 g

Jodid xxxxxxxx 2 g

Destilovaná xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Nasypou xx xx vody x míchají se x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x xxxxx se.

Ředění: 1:10 xxx přípravu xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Připraví xx xxxxxxx, vysuší xx xx xxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x nechá xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx xxxxx pod tekoucí xxxxx.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx jódovým xxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxx po xxxx xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx tekoucí xxxxx x vysuší xx xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx se xxxxxx xx kapkách xxxxxxxxxxx 95 % etanolu xxx dlouho, pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx ponořením za xxxxxxx pohybování do xxxxxxx xx dobu 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxx tekoucí xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x nechá xx působit 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zbarví xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx bakterie xx zbarví růžovočerveně.

(¹) Xxxxx se také xxxxxx komerčně xxxxxxxx xxxxxxx xxxx barvicí xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Anonymous, 1987. Xxxxxx of xxx xxxxxxxxx and diagnosis xx the xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx tubers. Xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx study xx xxxxxxxx from xxxxxx. Xxx. Pl. Path., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx tubers. EPPO Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Doetsch, R. X., 1981. Determinative xxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx. V: Xxxxxx xx methods for xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx for Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Hugh, X. x Leifson, X., 1953. The xxxxxxxxx significance xx xxxxxxxxxxxx versus xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx various xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Bact., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

7. Janse, J. X. x X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx the XX xxxxxx xxx xxx detection xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum) xx potato. EPPO Xxxx., č. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, H. a X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx capabilities xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxx development xx x semi-selective xxxxxx. Journal xx Xxxxx Xxxxxxxx and Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, N., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx of Pseudomonas xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Rudolph, X x X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Kiadó, Xxxxxxxx, 568 pp.

11. Lelliott, X. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. J. xxxx. Bact., 29, 114-118.

12. Lelliott, X. X., X. Xxxxxxx x A. X. Xxxxxxx, 1966. A xxxxxxxxxxxxx scheme xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, R. X. x X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx stocks. XXXX Bull., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x S.H. xx Boer, 1995. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxx Reaction xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx region for xxxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Phytopathology, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Xxxxxxx, B., W. x J., W. Xxxxx, 1997. Specific xxxxxxxxx of Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx amplification of xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx isolated by xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -H. x R.A. Rainey. 1999. identification xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subspecies xx xxxxxxxxxx cham xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx PCR xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx their xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Cornell xxxxx. Exp. Sta., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, A. x Knorr, D. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx xx X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 pp.

21. Skerman, X. X. D., 1967. A xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx and Xxxxxxx Company, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, N. X.; Xxxxxxx, J; Xxxxx, XX., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx plant xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, P. X. X. xxx X. X. Collins, 1974. X xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: report xx Pseudomonas xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, D.E. 1992. Xxxxxxxx of plant xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Pseudomonas spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Wullings, X. A.; xxx Xxxxxxxxx, X. R.; Xxxxx, J. D. x X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Ralslonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx causes xxxxx xxx of xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx hybridization xxxx 23s xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Appl. Environ. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, DETEKCE X IDENTIFIKACE XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, rajčete x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x xx vzorcích xxxx x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX ZÁSADY

Optimalizované protokoly xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx činidla a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, které se xxxxxxxx xx optimalizaci x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx organismu a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx R. solanacearum xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x odpovídajícím xxxxxxxxx na odstraňování xxxxxx a xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx a reprodukovatelné xxxxxxxx úrovní R. xxxxxxxxxxxx jako stanovené xxxxx xxxxxxxxx metod.

Zcela xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol.

Testování xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x činidly x jejich uchovávání x všechna xxxxxxxx xxx xxxxxxxx kontaminace xxxx vzorky, např. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. První xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx IF, PCR/FISH, xxxxxxxxxx izolace) xxxx xxx potvrzen druhým xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx biologickém xxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx podezření xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx podezření potvrzeno x xxxx xx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx izolaci x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx R. solanacearum x potvrzením xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx diagram pro xxxxxxxx xxxxx hniloby x bakteriálního xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx x xxxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxx z xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový xxxx, izolaci xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx půdě a x případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.1.

2) Rychlé diagnostické xxxxx usnadňují předběžnou xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Negativní výsledek xxxxxxxxx xxxx nepřítomnost xxxxxxxx.

3) Xxxx xx xxxxx slizu xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx je popsán x oddíle 6.1.5.

7) Xxxx FISH xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Test XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx x oddíle 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx slizu suspendovaného xx xxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx popsán x oddíle 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx (xxxxxxxxx ředěním) (xxx x oddíle 2.3.).

11) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx bujného xxxxx saprofytických xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx typické, ale xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x bodu 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx nepovinná, xxx doporučuje xx xxx xxxxx nový xxxxxx.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx určeno xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní výsledek xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x diagramu 3), x xxxxx xxxxx je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx izolací patogenu x dále, x xxxxxxx izolace typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx kultura xx X. xxxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx byl xxxxxx považován za xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x izolační xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx sérii xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx počet, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.

3) Xxxxx jsou xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x potvrzení. Xxxxxxx xx nejméně xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx test xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx prvního pozitivního xxxxxxxx nezbytný xxxxx xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx druhý xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy nejsou xxxxx.

4) Test XX xx popsán x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.4.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX xx popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx xxxx biotest xxxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, ale izolační xxxxx jsou xxxxxxxxx, xx třeba opakovat xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce hlíz xxxxxxxx xxxxxx, případně xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx.

12) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur xxxxxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x oddíle 6.2.

13) Xxxx patogenity xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx

1) Viz xxxxx 3.2.1., xxx jsou xxxxxxx xxxxxxxxxx velikosti xxxxxx.

2) Metody extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx druhý nebo xxxxx testy negativní, xxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx nejsou nutné.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX je popsán x oddíle 6.1.5.

6) Xxxxx PCR xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.6.

7) Xxxx FISH xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li xx screeningových xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx testy.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxXxxx, u kterých xx xxxxxxxxx, že xx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

2. Diagnóza xxxxxxx hnědé xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x polních xxxxxxxxxx xx rozpozná vadnutím xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxxxx teplotách během xxx, přičemž v xxxx xxxxxxx k xxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx vadnutí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx rostliny. Z xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx zvadlých xxxxxxx obvykle vytéká xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx možné xxxx xxxxxxxxxx. Xxx ponoření xxxxxxxxxx stonku xxxxxx xx vody xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx vlákna xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx třeba xxxxxxxxx xxxxxx x pupkového xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X xxxx fázi xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx světle xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx prstence, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx minutách xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Později xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx se xxxx rozšířit xx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx vně xx xxxxxxxxx konce xxxxx x z xxxx může xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, na xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx půdy. Xx xxxxxx xx mohou xxxxxxx červenohnědá, xxxxx xxxxxxxx místa xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Prvním xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx vzhled xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxxx 25 °C, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx během několika xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx xxxx x vadnutí xx xxxxx straně xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx příznivých xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxx xxx 21 °C) xxxxxxxx xxxxx nevadne, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx počet xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx vodou xxxxxxx xxxxx xx spodu xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx odumírání cévního xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx stonkem xxxxxxxx xxxxx zbarvená xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx u xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x S. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25 °X xxxx není xxxxxxxx vysoká koncentrace xxxxxxx (xxxx. x xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x nemocné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx rostliny X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pletiv xx xxxxxxx řezu spodní xxxxx stonku nebo xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. X xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxx tvořit xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx je xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx do xxxx, x xx x xxx xxxxxxx příznaků xxxxxxx.

2.2. Rychlé screeningové xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx napomoci xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale nejsou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Test xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX v xxxxxxx X. solanacearum xxxx zviditelněny obarvením xxxxxxx xxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nilskou xxxxx A xxxx xxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx testy

Dalšími vhodnými xxxxxxxx screeningovými xxxxx xxxx test IF (xxx xxxxx 6.1.5.), xxxx FISH (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (viz oddíl 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx při xxxxxxx

x) Xxxxxxx se sliz xxxx xxxxxx zbarveného xxxxxxx z cévního xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx rostliny xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 minut xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (NA, XXXX xxxx SPA; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx médium (např. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů. Připraví xx případně samostatné xxxxx x rozředěnou xxxxxxxx suspenzí X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx se 2-6 xxx při xxxxxxx 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx izoláty R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx krémově xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx máslovité xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- X Xxxxxxxxx tetrazolového xxxxx x xxxxx XXXX jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx máslovité xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx výskyt X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou xxxxxxx v xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru

3.1. Podrobné xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx na xxxxx test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Větší xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx x pro vzorky x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx k dispozici xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx všech xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx založená xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus.

Nepovinné xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx

x) Inkubace xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °X po dobu xx 2 xxxxx xxxx testováním xx xxxxxxx množení xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx XXX xxxx, pro xxxxxxxxxx patogenní XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx postup mytí xx vhodný xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx xx vzorcích xxxxxx zeminy xxxx xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx test XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx zeleninu xx xxxxxxxx slupka xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx hlízy, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx vyříznou xxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx nezahrnující xxxxx xxxxxx xx xxxxx na xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) hlízy x xxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx se xxxx xxxxxxx x testují xx odděleně.

Pokud xxxx xxx vyříznuti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx podezření xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx konci. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx uchovány xxxxx xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx se xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx jedno použití, xxxxx xxxx uzavíratelné xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx nádoby xxxx znovu používány, xxxx být důkladně xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s obsahem xxxxxx). Nejlépe je xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxx se x xxxxxx bez xxxxxxx xxxxx; v xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x pupkových xxxxx xx zpracují xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Zalijí se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (přibližně 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx v xxxxxxx třepačce (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °C xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Ultra Xxxxxx) xxxx drcením x xxxxxxxxx maceračním xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (např. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, sterilovaný xxxxxxx) xxxxxx gumového xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx mixéru xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx extrakčního procesu. Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x nádoby. Xxx xxxxx XXX xx xxxxx xxxxxxxx přenosu XXX xx xxxxxxxx xxxx v xxxxxx xxxxxxxxx. X testu XXX se doporučuje xxxxxx drcení x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxx x použití xxxxxxxx na jedno xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 g xx xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10 °C) nebo xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), filtr xx xxxxx přídavkem (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x po dobu 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 g xx xxxx 10 minut) xxx teplotě 4-10 °X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, aniž xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx v 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx se 500 µx pro X. xxxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x 500 µl xxx referenční xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx části x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, promíchá xx xxxxxxx x xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (měsíce). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xx 24 až 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x zpracovány xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. To xxxxx xxx xxxxxxx XX x všechny xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x xxxxxx testů x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx v příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (viz xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (viz xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, rajčete nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

3.2.1. Příprava vzorků

Poznámka:

Pro xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx použít xx smíšené vzorky x xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx průzkum, xxx xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx nádoby xx xxxxx 1-2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování:

Rajčatové sazenice x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 cm x xxxx každého xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x pole xxxx skleníku: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx nejspodnější xxxxxxxxx xxxxxxx z každé xxxxxxxx xxxxxxxx hned xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx. Odebere xx nejspodnější, 1 xx xxxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami xx xxxxxxx 1 cm xxxxxx xxx x xxxx každého xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. X xxxxx xxxxxxxxxx (S. dulcamara) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 xx xxxx xx xxxxxx pod xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxxxxxx representativní xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx každou potenciální xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx patogenu bude xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx po xxxx rok x xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx dulcamara, X. xxxxxx, Datura xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx populace X. solanacearum biovar 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx x/xxxx oddencích xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx album, Eupatorium xxxxxxxxxx, Galinsoga xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Rorippa xxx, Rumex xxx., Xxxxxx xxxx. S. xxxxxx., Xxxxxxxxx farfarra x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx xxxx xx xxxxx provést vizuální xxxxxxx vnitřních xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Jakýkoli xxx xxxxxx x xxxxxxxx xx dá xxxxxxx atestuje xx xxxxxxxx (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Části xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% etanolem x xxxxx vysuší xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx stonku xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) zalijí se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °X nebo 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (např. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (např. Homex). Xxxx-xx to možné, xxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx nebo při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X) na 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx trvat 15 xxxxx, se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx třeba, xxx xxx xx xxxxxxx filtrací xxxxx xxxxxxxxxxxxx popsaným v xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxx stejné xxxx. Xxxxx xxx se xxxxxxx xxx teplotě 4-10 °X x xxxxx xxx xx xxxxxxxx v 10-25% (x/x) sterilním xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) nebo -68 xx -86 °C (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx testování.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Test XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Testy XXXXX (xxx oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

4. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

(1) Viz xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx populaci xxx patogenu, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx, jestliže xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx popsán v xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx PCR xxxx popsány v xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Metody xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX jsou xxxxxxx v oddíle 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána v xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx selhat x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx populace xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx po xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Metody detekce x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vodě

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx a xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor a xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx detekce se xxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx selektivní xxxxxxx xx ovlivňována xxxxxxxxxx konkurenčních saprofytických xxxxxxxx, kterých je xxxxxx mnohem xxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxx v xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx asi 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx bude xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx nějakého xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. sedimentace xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx dojde xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx schématu by xxxx xxx bráno x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx se xxxx xxxxxx používá xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx, xx třeba xx uvědomit xxxx xxxxxxx při xxxxxxx x xxxxxxxxx mapování x xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x povrchové xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx vody xxxxxxxxxx 15 °C.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx během xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx spolehlivost xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx povětrnostních podmínek.

- Xxxxxx xxxxxxx dešťů x geografie xxxxxxx xxxx může dojít xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxx x xxxxxxxx výskytu patogenu.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, pokud xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx vzorky xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30 xx xxx xxxxxxxx x 2 x xx břehu. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx zpracování brambor x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx xxxxx, x nichž xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x velikosti xxxxxxx 30 ml. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx každé 3 xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx se xxxxxx přítoky.

4.2.1.2. Xxxxxx xx přepravují x xxxxxx x temnu (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx potřeba, může xxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 ml xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000 x xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), pokud xxxxx xxx teplotě 4-10 °X, xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx v 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx filtrace xxxx membránu (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µx) s následným xxxxxxxx xxxxxx v 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tato xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx brambor nebo x xxxxxx odpadní xxxx, xxxxxxx zvýšená xxxxxxxx konkurenčních saprofytických xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Testování

Viz xxxxxxxxx diagram x xxxxx testů x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx

5.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum x xxxx

(1) Xxx oddíl 5.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX testy xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Biotest xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx xxxx selhat x xxxxxx konkurence xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na spolehlivost xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx selektivní izolace xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx patogenity xx popsán x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx vzorků xxxxxxx odpadu xxx xxxxxxxxxx brambor xxxx xxxx x xxxxxxx xxxx. Xx však xxxxx poznamenat, xx xxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx rozptýlených xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx hodnocení spolehlivosti xxxxx xxxxxxxxx negativních xxxxxxxx a také xxx sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxx je xxxxx xxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx přítomnosti xxxxxxxx x xxxxx půdě xx vypěstování náchylné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx sledování, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x xxx použití xxxx xxxxxx unikne xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx se xxxx xxxxx standardními xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx vzorkování xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx xx shromáždí 0,5 xx 1 xx půdy xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 ha x xxxxxxx 10-20 xx. Je-li podezření xx xxxxxx patogenu, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 x xxxxxx 0,3 ha. Před xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 12-15 °C. Xxx xx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx shromážděním celkem 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx celkový xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx testováním xx xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 ot./min) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Tween-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Diagnostické x xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Xxxx xx xxxxx slizu xx stonku

Přítomnost X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx jednoduchý xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx xxxxx nad úrovní xxxx. Řez xxxxxx xx ponoří do xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, xxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx objeví xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx cévních xxxxxx.

6.1.2. Test xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx na živné xxxx XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Připraví xx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx x případně negativní xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx PHB xxxxxxxxxx xx.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx uschnout x xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx se rychle xxxxxxxx nad xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Preparáty xx xxxxxx xxx nilskou xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x provede xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx nilskou modří:

a) Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx roztokem xxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 xxxxx při teplotě 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx barvící xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x kohoutku. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx zakápne 8% xxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx x nechá xx inkubovat 1 xxxxxx při pokojové xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx jemně tekoucí xxxxx z kohoutku. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx vody x xxxxxxx se krycí xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 xx pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x xx 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx objeví xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx pozoruje x procházejícím xxxxxxxxx xxxxxx, zda jsou xxxxxxx intracelulární x xxx xx morfologie xxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx súdánskou xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx černi X x 70% xxxxxxx a xxxxxxxx xx 10 minut xxx xxxxxxxx teplotě.

b) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx x odsaje xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Sklíčka xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx savým xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření x xxxxxxxx v xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xxxxxx inkubovat při xxxxxxxx xxxxxxx. Upozornění: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Sklíčka xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx světlem pod xxxxxxxx xxxxxx a xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx modročerné xxxxxxxx XXX xxxxxxx x buňkách X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxx stěnami xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx x pletiv x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx validovaných xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, např. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx aureus xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxxxx dostupného vybavení (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxx suspenze xxxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (přibližně 5 µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx a heterologního xxxxx.

x) Xxxxxxxx se, xxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 sekund xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx půdu

Poznámka:

Než xx xxxxxxx xxxx metoda xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx test k xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx detekce 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které byly xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx od xxxxxx xxxxxxxx schopných xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, kolonie X. solanacearum xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx misky xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx rovněž xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, měl xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx pomocí xxxxxx testu.

Pří použití xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktů xx vzorků lez xxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxx touto xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx však xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx teplotě od -68 do -86 °X.

Xxxxxxxxx kontroly se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ cfu/ml xxxxxxxxxxxx xxxxx biovaru 2 X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x rutinnímu xxxxxxxxx xxxxxx nejdříve xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Kontrolní xxxxxxxx xx testuje xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx xx xxxxxx s xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xxxxxx se 50-100 µx xxxxxxxx vzorku xx 1 xxxxx xxx xxxxx ředění.

2. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx stav x xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx xxxxxx bílé, ploché, xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx x po 3 xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx růžově až xxxxxx červené zbarvení xx středu s xxxxxxxxx pruhy xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx se xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Mohou být xxxx, kruhové, zcela xxxxxxx x nefluidní xxxx xxx částečně xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxx rozeznatelné xx xxxxxxxxxxxxxx bakterií tvořících xxxxxxx.

3. Předpokládané kolonie X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu., xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (viz dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx krátkodobě ve xxxxxxxx vodě (pH 6-8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx teplotě x temnu xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx -68 až -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Provede xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média.

Test xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx typické xxx R. xxxxxxxxxxxx , xx předpokladu, xx nedošlo k xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou nalezeny xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx podezřelé xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ze xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx detekce. Tímto xxxxxxxx xxxxx x xx zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx může xxx xxxxxxxxx x xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx často xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X tohoto důvodu xxxx být izolace X. xxxxxxxxxxxx z xxxxxxxxx kultury xxxxxxx. Xxxxx xxxx, protože xxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx testu PCR xx přenese 100 xx extraktu xx xxxxxx do 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), který xx xxxxxx xxxxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxx xxxxxx větší xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xx bujónu (xxxx. 100 xx x 1,0 ml xxxxxxxxx živné půdy).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30 °X x třepané xxxx xxxxxxxx kultuře x uvolněnými uzávěry, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx XXX xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx xx zachází xxxx způsobem xxxx xx vzorky ve xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx obohacení X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxx docílit lepších xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx zvyšování xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx požadovaných prahů.

Použije-li xx test XX xxxx xxxxxx a xxxxxxxx XX xxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx izolace, XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle postupového xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx X. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx novou xxxxx protilátek. Titr xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x xxxxxxxx vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx výrobce. Xxxxxxxxxx polyklonální antiséra xxxx xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx testování xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx blízkých xxxx xxxxxxxx jako titr.

Test xx xxx xxx xxxxxxxx xx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ze xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx nutné, může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 xx - 86 °C x xxxxxxxxx. Glycerol může xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 g a xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xxxxx to není xxxxxxx, xxxxxxx pokud x jsou xxxxxx xxxxxxxx na sklíčka xxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X, x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx zmrazením xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °X) by xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Standardizované xxxxxxxxx x pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx test, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s více xxxxxx, pokud možno x 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx vhodné xxx xxxxxx okénka 6 xx - x většího xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx x xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx stejné xxxxxxxx xxxxxxxxx pelety (1/1) xx zbývajících xxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita jako xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx, jak xxxxxxx obr. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) resuspendované xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 mm - x většího xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx okének. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita jako xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxx teplotě xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 až 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxxxxxxx, 95 % etanolem nebo xxxxx xxxxxxxxxxx instrukcí xx dodavatele xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, fixovaná xxxxxxx je možné xxxxxxxxx ve xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx testováním.

6.1.5.3. Postup xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx test x xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. První xxxxx xx měla xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), titr (X) x dvojnásobek xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x xxxxx XX. Pracovní xxxxxx xxxxxxxxx přesnost.

Obrázek 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) a 6.1.5.3.x)

Obrázek 2. Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx podle odst. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx papír. Každé xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx každém okénku xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx papíře přikrytá xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF. Umyjí xx ponořením xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx mohly xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx na xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xx xxxxxxx ředěním xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

6. Setřesou se xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Opatrně xx odstraní xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx krycí tekutiny xx každého xxxxxx x xxxxxxx se xxxxx sklíčko.

6.1.5.4. Vyhodnocení XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx testovací sklíčka xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx malým počtem xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se zkontroluje xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx protilátky xxxx pracovním xxxxxx. Xxxxx je barevnost xxxxxxxx, xxxx být xxxx XX opakován (xxxx. 6.1.5).

2. Pozorují xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x charakteristickou xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx ředění protilátky xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x úvahu.

Při podezření x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To se xxxx stát, když xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx díky kontaminaci xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních buněk (xxxx xxxxxx sklíček) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a xxxxx stonku xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx morfologií x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx výsledků testu XX:

x) Při zjištění xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií xx odhadne xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 mikroskopovém xxxx a xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Výsledek XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, kde xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx IF testu xx negativní xxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Další xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx PCR

Principy

Použije-li xx xxxx PCR jako xxxxxx screeningový test x výsledek xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx, x xxxx xxxxxxx xxxx XX. Jestliže xx XXX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx v xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, je-li xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx metodou xx xxxx umožnit reprodukovatelné xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx může vyžadovat xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx PCR (viz dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx se xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít vhodná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx DNA. Xxxx XXX by xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxx XXX a XXX) xx xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx x konečnými xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x přenosu XXX.

XXX xxxx by měl xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx používaného pro xxxxxxxx xxxxxxxx a XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- suspenze 10⁶ xxxxx xx 1 ml R. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 B);

- xxxxx xxxxx, xxx XXX použít xxxx XXX xxxxxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly v xxxxxxxxx odděleném od xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze vzorků xx měly xxx xxxxx možno xxx xxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx PCR testu xx xxxxxxx připravit xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používají se xxxx xxxxxxx pozitivní x negativní kontrolní xxxxxx (xxx dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX z komplexních xxxxxxxxx vzorků xxxx x dispozici xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxx reakcí x xxxxxxxxxxxxx cílovou DNA xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx optimalizována xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

a) Xxxxxx podle Patrika (2000)

1. Napipetuje xx 220 µl lyzátového xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 mM EDTA (xX 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Přidá se 100 µx extraktu xx vzorku x xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx termobloku nebo xxxxx xxxxx x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 min. xx xxxx.

4. Přidá xx 80 µl xxxxxxxxx roztoku lysozymu (50 xx lysozymu/na 1 xx 10 xX TrisHCl, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 xxxxx.

5. Přidá xx 220 µl xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °C xx dobu 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx roztoku Xxxx XXX® B (Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx chloroformu x xxxxxxxx, xx xx viskozita xxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Pro xxxxxxxx fází x xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx odstřeďuje xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 min. xxx xxxxxxx 4 °X.

9. Xxxxx fáze xx převede do xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), krátce xxxxxxxx xxxxxxxx x inkubuje xx na ledu xx dobu 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx teplotě 4 °X x xxxxxxxx xx etanol x xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x promíchá se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx při 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx se xxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v XXX xxxxxxx.

15. Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx x 100 µx sterilní UM x xxxxx xx xxxx xxx pokojové xxxxxxx nejméně 20 xxxxx.

16. Skladuje xx xxx teplotě - 20 °X xx xx xxxxxxx při XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xx xxxxxxx pro xxxx PCR.

b) Jiné xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx se mohly xxxxxx, xxxxx by xx xxxxxxxxx, xx xxxx při xxxxxxxxxx XXX z kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx efektivní.

6.1.6.2. XXX

1. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx pro XXX xxxxx xxxxxxxxxxx protokolů (6.1.6). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx sterilní vodě).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xx xxxxxx nehrozí xxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Pokud xxxxx, doporučuje xx xxxxxx xxxxxxxxxxx protokol XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx interní protokol XXX.

3. Xx sterilních XXX mikrozkumavek xx xxxxx 5 µl xxxxxxxx DNA xx 25 µx PCR xxxxxx xxxxx protokolů XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx negativní xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx reakční xxxx XXX x xxxxx xx týž xxxxx XX xxxx xxx xxx, který xxx xxxxxx xx směsi XXX xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x spustí xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx produktu XXX

1. Xxxxxxxxx xx rozdělí xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µl xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (TAE) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 V/cm. Použije xx xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (ladder) 100 xx.

2. Xxxxxxxx xx proužky XXX xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 mg/l) xx xxxx 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

3. V obarveném x XX (xxxxxx xxxxxx délky xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x výsledek se xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX provedením restrikční xxxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x pufrem (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů xxx XX světlem xx xxxxxxxx ethidiumbromidem x xxxxxxxxx se s xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX specifický xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx není x zkoumaného xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x případě vícenásobné XXX x interními xxxxxxxxxxx primery xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx amplikon PCR xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti x (xxxxxxxx) xxxxx, xx xxxxxxxxxxx, že xxxx amplifikován x xxxxxxx vzorku negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku lze xxxx získat xxxxxxxxxx xxxxx x druhou xxxxx primerů XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx podezření xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx je získán xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x bramborovém extraktu xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. V multiplexních xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx reakce, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xx dvou xxxxxxxxx.

X případě, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx více xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx FISH

Princip

Když xx xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x je xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx provedena xxxxxxx xxxx IF xxxx. Když se XXXX test xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx k xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx testování podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxx R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx X xxxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující postup xx xxx být xxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x extraktem, xxxxx xxx xxxxxxx x glycerolu při xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx suspenze obsahující 10⁵ až 10⁶ xxxxx na 1 xx R. solanacearum xxxxxx 2 (např. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) v 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx samostatná xxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolními xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v dodatku 3 X.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zbarví xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx používá x xxxxx testu, xx xxxxxx v dodatku 3 bodu A.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Xxxxxxxxx xx al. (1998).

1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx roztok (xxx dodatek 7).

2. Napipetuje xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx do Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxxxx xx xx xxxx 7 minut xx 7 000 g.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx ve 200 µx fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx předem. Protřepe xx x inkubuje 1 xxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx se supernatant x xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 75 µ10,01X PB (viz dodatek 7).

5. Kápne se 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx na čisté 10 okénkové sklíčko, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx se xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 M XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxxx FISH xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx odstředěním x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx sklíčku FISH

6. Sklíčka se xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X této xxxx xx xxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx a x xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Hybridizace

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 minuty. Xxxxx se xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx přikrytím xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo filtračním xxxxxxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx inkubací xx xxxxxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °X po xxxx xxxxxxx 10 minut.

3. Xxxxxxx xx 10 µx hybridizačního roztoku (dodatek 7) na 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) na xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx středová xxxxxx (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 mm) na xxxxx a poslední 4 xxxxxx, a xx xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx proces xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x troubě xxx xxxxxxx 45 °X v xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx obsahující 1 x xxxx s xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx X), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 ml xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 xx vody x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx inkubovat xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx xx krycí xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx držáku xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx nadbytek xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x hybmixem xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx do promývacího xxxxxxx 1/8 xxxxxx x nechá se xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx ponoří xx XXX (xxxx. Xxxxx X water) x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx povrchu filtračním xxxxxxx. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx okénka x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx sklíčkem (24 x 60 mm).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx FISH xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx mikroskopem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. S xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx vzorku xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx zbarveny. Xxxx FISH (odst. 6.1.7) musí být xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx okénka xxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. U xxxxxx, kde xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx buněk, xx xxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Hledají xx jasně fluoreskující xxxxx x morfologií xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx nebo vykazují xxxxxx fluorescenci, xx xxxxxxx x úvahu.

3. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx může nastat x případě, xxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxxxxxxx jsou pozitivní xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx sklíčka) na xxxxx sklíčka.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxx nese xxxxxxx xxxxxxxx. Je xxxxxxxxxxxxx, xx u xxxxxx x xxxxxxxxxxxx hlíz x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx k výskytu xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx reakci xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x xxxx mnohem xxxx xxxxxxx xxx x testu XX.

5. X xxxxx se xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x morfologií.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx FISH xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX filtru xxxxx xxxxxx fluoreskující xxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx R. solanacearum x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující buňky x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Vzorky, xxxxx obsahují alespoň 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, které xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového filtru xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Princip

Testy XXXXX xxx xxxxxx xxxxx xxxx volitelný xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX nebo XXXX pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxx citlivost. Xxx použití XXX XXXXX xx obohacení x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Obohacení xxxxxx před xxxxxxxx xxxxx XXXXX může xxxxxx xxxxxxxxx testu, xxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx kvůli konkurenci xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx se validovaný xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Doporučuje xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při kterém xxxxx x optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx doporučení xxxxxxx. Při xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx protilátky x xxxxxxxxx ředění, xxxxx xx blízké xxxx xxxxxx jakou xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx xxxx protilátek xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx negativní x xxxxxxxx xxxxxxxx bez xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) se xxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx kontroly.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx podíly xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím otestovány xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk xx 1 xx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. kmen XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X x X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx každé xxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ buněk xx 1 xx x XXX R. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx tento xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx způsobem xxxx test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva protokoly XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx xx xx., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx na 100 °X xx 4 xxxxxx ve xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx v xxxxxxxxx případech xxxxxxxxx xxxxx nespecifických výsledků).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x směs xx promíchá.

3) Nakape xx 100 µl xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx se xxxxx v xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx se vhodné xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X validovaných komerčních xxxxxxxxxx xx použijí xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, než xx xxxx).

6) Přidá xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx teplotě 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx vhodné xxxxxx konjugátu xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se 100 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxx se xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxx a xxxxx xx vymyjí xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx (dodatek 4) do každé xxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx pokojové teplotě x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx při 405 xx v xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 hodin xxxx 4 ° X po dobu 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx extraktu xx vzorku xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky do xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X.

3) Jamky xx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx použitím PBS-Tween (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (BSA), xxxxx se 190 µx do každé xxxxx x xxxxx xxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °X.

5) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx ředění xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx konjugovaného xxxxxxxxxx fosfatázou v XXX. Přidá se 190 µx do xxxxx xxxxx a xxxxx se xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Připraví xx xxxxxx 1 xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx x substrátovém xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx jamky x inkubuje xx x temnu xxx xxxxxxxx teplotě. Absorbance xxx 405 xx xx odečítá x xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků testu XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx optické hustoty (XX) x xxxxx xx stejnými xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx hodnoty XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx inkubace xx xxxxxxxxxx) a xxxx větší xxx xxxxxxxxxxx OH získané x negativních xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx OH x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x negativním xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx jsou menší xxx dvojnásobek hodnot x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxx xxxxx proveden xxxxxxx xxxx že xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že došlo x vzájemné xxxxxxxxxxx xxxx nespecifickému xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, který xxx xxxxxxx testován x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx v dodatku 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx očekávat xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku x v optimálních xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx však xxxx xxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x glycerolu x xxxxxxx - 68 až - 86 °C.

Následující xxxxxxxx xxxxxxx z Janseho (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx rajčete (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx kultivaru x xxxxxxxxxxx citlivostí podle xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) ve xxxx třech pravých xxxxx u xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx se použije xxxxx (např. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx nebo xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), ale xxx xxxxxxxx xx fázi 2. xx 3. xxxxx až xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxxxxxxx x lilku xxxx xxxx výrazné a xxxxxxxx xx pomaleji. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx použít sazenice xxxxxx.

6.1.9.2. Rozdělí se 100 µl xxxxxxxx xx vzorku mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulují se xxxxxx rostlin hned xxx děložními listy xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23G). Xxxxxx xx rozdělí xxxx xxxxxxxxx rostliny.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxx xxx 1 xx xxxxxx x xxxxxxx přibližně 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx řez xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx utěsní sterilní xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx, připravenou ze 48 xxxxxxxx kultury xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní kontrolní xxxxxx, a xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxxx xx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx zařízení 4 xxxxx při teplotě 25 - 30 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx jak xxxxxxxxxx, tak xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx se xxxxxxxxx kontaminaci, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx místech xxxxxxxx xxxx vegetační komory xxxx xxxxx přísně xxxxxxxxx. Musejí-li být xxxxxxxx z různých xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx blízko xxxx, oddělí xx xxxxxxxx zástěnami. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx věnuje xxxxxxxx pozornost tomu, xxx nedošlo k xxxxxxxx kontaminaci. Xxxxx xx xxxxxxxx skleník xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx mohli xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx rostlin xx xxxxxxx izolace (xxxx. 2.3) a xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx kultury (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx během 3 týdnů xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx test XX/XXX/xxxxxxx xx složeném xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx dlouhých 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx pozitivní, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Interpretace xxxxxxxx biotestu

Platné výsledky xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, bakterie xxxxx xxx z xxxxxx xxxxxxx znovu xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx bakteriemi X. xxxxxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx testy

Identifikují se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrnou xx xxxxxxxx známé referenční xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy

Určují xx následující fenotypové xxxxxxxxxx, které jsou xxxxxx přítomny xxxx xxxxxx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Stead (1987), Xxxxxxx et xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx výsledek

Produkce xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxx XXX +

Oxidačně xxxxxxxxxxx xxxx O+/F-

Katalázová xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx test xxxxx Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx citrátů +

Růst xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Růst x 2% NaCl -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Ztekucení želatiny -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Produkce xxxxxx -

Xxxxx a xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx IF

6.2.2.1. Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk na 1 xx v xxxxx XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX metoda (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX je xxxxxxxxx, jestliže xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx ELISA

Poznámka:

Při xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx se xxxx XXXXX xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátkou x X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx získaná x xxxx kultury xx xxxxxxx poloviční x xxxxxxxxx s xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Testy PCR

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx se 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x ohřívacím xxxxx nebo vařící xxxxx lázni při 100 °X 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx uchovány xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xx dalšího xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx postupy XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx xx. (1993); Xxxxxxx a Xxxxx (2000); Pastrik xx xx. (2002); Boudazin xx xx. (1999); Xxxxx et xx. (1997), Weller xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx FISH

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Použije xx xxxxxx XXXX (6.1.7) x xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx kultura xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) 48 hodin xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.2.6.3. Xxxx FAP xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxx xxxx profil xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Metody xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro každý xxxx případ izolace X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx metod.

U xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx případně xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (viz dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx biovaru

R. xxxxxxxxxxxx xxxxx biovary xxxxxx xx schopností xxxxxxx a/nebo oxidace xxx disacharidů x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v dodatku 2. Xxxx lze xxxxxxx xxxxxxx očkováním xx živné půdy x čistou xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx při teplotě 28 °X. Je-li xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 jamkami (200 µl xx 1 jamku), xxxxxxxx xx mění během 72 hodin od xxxxxxx zelené xx xxxxxx x znamená xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxx dílčích fenotypů xxxxxxx 2

(¹) Xxx Lelliott x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxx dosáhnout několikerými xxxxxxxxxx, mezi něž xxxxx:

1. Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů XXXX (Xxxx et xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX s xxxxxxxx primerů REP, XXX x XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Xxxxx xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; viz dodatek 6) xxx použít k xxxxxxxxxxxx xxxxx patřících xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X a 2X) R. xxxxxxxxxxxx, xxx bylo původně xxxxxxxxxx analýzou RFLP (Xxxx xx xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx al., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kmen xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (např. NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 xx 10 náchylných xxxxxxx rajčete xxxx xxxxx xx fázi 3 xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 xxxxx xxx teplotě 25-28 °X a xxxxxx relativní vzdušné xxxxxxxx s přiměřeným xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyprahlosti xxxx. X čistých xxxxxx by xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 dnů. Xxxxxxxx-xx se xx xxxx xxxx příznaky, xxxxxxx nemůže xxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx příznaky xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx krnění.

5) Xxxxxxx se xxxxxxx x rostlin vykazujících xxxxxxxx xxxxxxxxx segmentu xx xxxxxx asi 2 xx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pokud xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Xx xxxxxxxx 48 xx 72 hodin xxx xxxxxxx 28 °X se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx kolonií xxx R. solanacearum.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx půdy xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx agar (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Glukóza (xxxxxxxxxx) 10,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 minut.

Sacharózopeptonový xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Difco) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 g

Dextróza 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí se xxxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx na 50 °C x xxxxx se filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx do xxxxxxxx konečné xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Xxxxxxxxxx selektivní xxxxx xxxx

Xxxxx puch XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 g

Bacto-Pepton (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 ml

Bacto-Agar (Difco) (xxx xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx se na 50 °X x xxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, aby se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx violeť (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 U (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx B-0125) 1 250 X (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Signa X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Použití jiných xxx výše xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx být použit Xxxxx Xxxx #1. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx růst X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx také xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx tvořit x 1-2 dny xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx světlejší x xxxxxxxxxxxxx než xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx bacitracinu xx 2&xxxx;500 X/x xxxx omezit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx solanacearum.

Roztoky xxxxxxxxxx xx uchovávají x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °C x xxxxx a xxxx se xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx zbaveny xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Nutno xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx připravená xxxxx xxxxx půdy xx xxxx xxx xxxxxxxxx kontrole xxxxxxx xxxxx půdy roztěrem xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultury X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x pozorováním, xxx xx xx 2 xx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx kolonie.

c) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx půdy

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, xxx xxxxxxx xx Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- trifenyltetrazolium chlorid.

Upravená xxxxx půda Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 g

K₂HPO₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx a ochladí xx xx 50 °X. Přidá xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx pro živnou xxxx SMSA.

Dodatek 3

A. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx bakteriální xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx testů, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xx xxxxxx x těchto sbírek:

1. Xxxxxxx sbírka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx vědecká laboratoř Xxxx, XX.

2. Sbírka xxxxxx sekce ochrany xxxxxxx (PD), Wageningen, Xxxxxxxxxx.

3. Francouzská xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Poznámka:

Spolehlivost xxxx uvedených xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx x případě, xx pocházejí x xxxxxxxxx sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Referenční panel XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Mražené xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového extraktu xx 200 zdravých xxxx bramboru xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ až 10⁶ xxxxx biovaru 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x PCR xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, nejsou xxxx xxxxxx jako standardy x xxxxxxx izolace x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx sérologických testů.

B. Xxxxxxxx pozitivních a xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx vodivých xxxxxx XXX/XX a XXXX

Xxxxxxxxx se 48xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx X. solanacearum xxxx 3/xxxxxxx 2 (např. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xx SMSA xxxxx xxxx a xxxxxxxxxx xx v 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx hustota přibližně 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx jemně xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx hustotě 0,15 xxx 600 nm.

Odebere xx dřeň x xxxxxxxxx konců 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx s xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx ví, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 ml. Připraví xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 xx x 900 µx resuspendované xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxx se. Provede xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x dalších xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se použije xxxx xxxxxxxxx vzorky. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx z 100 X1 ve xxxxxxxxxx zkumavkách x xxxxxx 1,5 ml, xxxx xx xxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Uskladní xx při xxxxxxx -16 až - 24 °C xx xx doby použití.

Přítomnost x xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF.

Pro XXX xxxx xx provede xxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF a XXXX testy xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX a XXX xxxx být X. xxxxxxxxxxxx zjištěna x xxxxxxx v 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx sterilizované xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx až xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k extrakci xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (bezvodý) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x sterilizuje x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx následující xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,2)

Tento pufr xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx x xxxxxxxxx částí xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, zkontroluje pH x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

2. Xxxxx xxx IF xxxx

Xxxx xxx XX (10 xX fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 g

NaCl 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx se 0,1 % Tween 20 k xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx IF xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx pro xxxxx nepřímého xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufr, pH 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 g

NaH XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 minut.

Pokud xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx jako xxxxxxxxxxx přidat xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx fosfátem (10 x PBS), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (musí xxx čerstvě připraven).

10 x PBS 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (PVP-44) 2,0 x

10 % Tween 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx do 100 ml

3.5. Xxxxxx xxx substrát alkalické xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxxx HCl xx xxxxxx xX xx 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx se 0,2 g MgCI₂.

Rozpustí xx xxx 5 xx tabletky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 xx roztoku.

4. Xxxxx pro účely xxxxx XXXX XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 x

XxX CO₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1 000 xx

Xxxxxxxx se složky x xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (PBS) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2H₂O 4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Tween 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx voda 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx voda 900 xx

Xxxxxx se x nastaví xx xxxxxxx pH 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v jednom xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx se počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx pole na xxxxxxx x xxxx xxxxxx x

x - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = koeficient pole (x rozmezí 8 - 24 podle xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované pelety (X).

X =C x 1&xxxx;000/x x F,

kde x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx okénku x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx a činidla xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištěni xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skupinou vybraných xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Protokol XXX Seal xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer XXX-1 : 5'-GGG GGT XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-XXX XXX XXX GCC XXX XXX XXX AGT-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. solanacearum = 288 xx

1.2. Xxxxxxx směs XXX

1.3. Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx xxx 96 °X (denaturace templátové XXX)

35 cyklů: ii) 20 xxxxxx při 94 °C (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 xxxxxx při 68 °X (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 sekund při 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (závěrečná xxxxxxx)

xx) ponechá xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx Perkin Xxxxx 9600. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), iii) x xx).

1.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací x R. solanacearum XXX vytvářejí xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx XX xx inkubaci xxx xxxxxxx 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx a Xxxxxx (2000)

2.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Ps-1: 5'-xxx xxx acg xxx gcg xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-ggg xxx xxx xxx tcg xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxx velikost amplikonu xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx DNA = 553 xx.

2.2. Reakční xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	16,025 μx
10x xxxx PCR (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (frakce X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs dNTP (20xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5U/μl) (1)	0,1 μx	0,5 U
Množství xxxxxx	5,0 μl
Celkové xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx byla xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Elmer XxxxxXxx a pufr xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx bude možná xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Taq I xx inkubační době 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifické xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxxxxx (Pastrik xx xx., 2002)

3.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx RS-1-F: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX ATG CAT XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX CAC XXX AGA XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx NS-5-F: 5'-XXX TTA XXX XXX XXX XXX XXX G-3'

Reverzní xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX TCA XXX XXX XXX XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 bp (sada xxxxxxx XX). Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx interní xxxxxxxx PCR 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Reakční směs XXX

3.3. Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx: i) 5 xxxxx xxx 95 °X (denaturace templátové XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °X (konečná xxxxxxx)

xx) xxxxx se xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) x iv).

3.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Bsm 1 xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx době 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C.

4. Xxxxxxxx XXX specifický xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX AAC XXX XXX GAG XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX CAC GGC XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX XXX XXX AGA XXX CTC-3'

Očekávaná velikost xxxxxxxxx templátové DNA X. solanacearum:

s Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Protokol PCR xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

x) Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx biovary 1/2- a xxxxxxx 3/4/5:

1 cyklus: x) 5 xxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 sekund xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx při 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s templátovou XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), iii) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací XXX X. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx Xxx X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx době 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxx Xx-1-X a Xx-3-X xxxxxx žádná xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Příprava nanášecího xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µl

Destilovaná (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (bidestilát) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx komerčně xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda specifická xxx R. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-xxx xxx xxx xxx gct xxx ccc-3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-gct xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, KTERÝ XX TOXICKÝ. POUŽÍT XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Zahřeje xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx vody (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (UPW)) xx xxxxxxx přibližně 60 °X a xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Parafonnaldelryd xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX a xxxxxxxxx magnetickým míchadlem.

ii) Xxxxxx xx pH xx 7,0 přidáním 1 xx fosfátového xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Zkontroluje xx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx pomocí XXx xxxx XxXX. [UPOZORNĚNÍ: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT MĚŘIČ XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µm x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X do dalšího xxxxxxx.

3. 3x Hybmix

NaCI 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx filtr x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx x, xxxxx potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Hybmix

Sodium xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx XXX 338 5 ng/µl

Sonda OLI-1 xxxx OLI2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 1. Xxx každé xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µx hybridizačního roztoku. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX A XXXXXX POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Poznámka:

Všechny roztoky xxxxxxxxxx světlocitlivé oligosondy xx uchovávají x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Během xxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) nebo lilku (Xxxxxxx melongena) do xxxxxxxxxxxxxxx výsevního substrátu. Xxxxxxxxx x plně xxxxxxxxxxx děložními xxxxxx (10 až 14 xxx) xx přesadí xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku a xxxxxxx by xx xxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xx následujících xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: den: 21 až 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx probing xx xxxxx cells xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx studies xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Anon. 1998. Council Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 Xxxx 1998 on xxx xxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Official Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx L235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx of xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx identification xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, M., Palomo, X.X., Xxxxxx, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Enrichment Double-Antibody Xxxxxxxx Indirect Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Antibody xxx xxxxxxxxx Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Potato Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, D., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx: detection of xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx DNA xxxxxx tkat specify xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Hennessy, X., Wilson, X.X. xxx Xxxxx, D.E. 1996. Sensitivity of xxxxxxxxx of Ralstonia xxxxxxxxxxxx iru xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx for xxx isolation xxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tn: X.X. Xxxxxxx (ed.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Australia.

8. Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, A.C., Xx-Xxxxxxx, H.M., Xxxxxxxx, X. xxx De Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx nitrate xxxxxxxxxx in biovars xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Applied Bacteriology 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Ushijima, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, X. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx and x XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx tubers xxx xxxx data xx xxx xxxxxxxxxxx xxx specificity. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ofYseudomosaas xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Kelman, X. 1954. Xxx relationship xx pathogenicity xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx on x tetrazolium medium. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Rudolph, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Lelliott, X.X. xxx Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx diagnosis xx xxxxxxxxx diseases xx xxxxxx. Blackwell scientific Xxxxxxxxxxxx Xxx., Oxford. 216 pp.

16. Xxxxx, X.X., Gorris, M.T., Xxxx, P., Xxxxxx, X., Vicedo, B., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx enricliment improves xxxxxxxxx xxxxxxxxx, serological xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. In: H.W. Xxxxx et al., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Stephens, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx fingerprints xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx and Xxxxxxxxxxx pathovars xxx xxxxxxx generated xxxx xxxxxxxxxx sequences xxx XXX. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 60, 2286-2295.

18. Louws, X.X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Bruijn, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx of xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. vesicatoria. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, N., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Xx, R. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, A.C. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Tinunis. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx species and xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx PCR xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Rurkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx of R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. J. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx of 16S-23S xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx with xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, J.G. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Food xxx Xxxxxxxxxxxx Immunology 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory guide xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Seal, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, and M.J. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx and Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16S xXXX sequencing: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx detection xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, M. xxx Saddler, G.S. 1995. Xxxxxxx diversity xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Grouping xx xxxxx pathogenic xxx xxxx xxxxx Pseudomonas xxx. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas syzygii, xxx xxx xxxxx xxxxxxx bacterium xx xxxxxx xxxxx xx 16X rRNA xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Xxxx, X.X., Xxxxxxx, P.J.M., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, E., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, A., Xxxxxxxxx, X. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 in Xxxxxxx Xxxxxx as detennined xx XXXX, RC-PFGE xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, P., Allen, X. xxx Elphinstone, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Aspects. Xxxxxxxx (Berlin) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, S.A., Xxxxxxxxxxx, X.X., Smith, X., Stead, D.E. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx autonated xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' nuclease XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. xxx Beuningen, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of X. xxxxxxxxxxxx, which causes xxxxx xxx of xxxxxx, by xxxxxxxxxxx xx sihl xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x rRNAtargeted xxxxxx. Xxxx. Environ. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.