Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx stanoví xxxxx §88 xxxx. 2 xxxxxx č. 326/2004 Sb., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx a x změně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "zákon") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 písm. i) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx předpisy Xxxxxxxxxx společenství¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxxx na xxxxx České republiky xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx al. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Davis xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru, x Xxxxxxxxx solanacearum (Smith) Xxxxxxxx et al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, aby se

a) xxxxxxxxx výskytu x xxxxxx,

x) xxxxxxxx místo xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx x

x) při xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x prováděla xx xxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Pojmy

Pro účely této xxxxxxxx xx rozumí:

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Xxxxx xx al.,

b) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) hostitelskými xxxxxxxxxx -

1. původce xxxxxxxxxxxxxx - brambor (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x čeledi xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), u xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx hnědé xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x výjimkou xxxxx xxxxxxxx, rajče xxxxx (Xxxxxxxxxxxx lycopersicum L.) xxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx potměchuť (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx lilkovitých (Xxxxxxxxxx), u xxxxx xxxx xxxxxxxxx možnost xxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

x) detekčním xxxxxxxxx - xxxxxxx zaměřený xx zjišťování výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby, x xxxxxx způsobu xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx které se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) pravděpodobným xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxx, partii, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx prostředku, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx předmětech včetně xxxxxxxxx materiálu, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx na xxxxxxx, x xxxxxxx anebo x území, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) zamořením původcem xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx podle §11 xxxx. 1 zákona,

i) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx vymezené Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx xxx "rostlinolékařská xxxxxx"), xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 zákona x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) bezpečnostní xxxxx - xxxxx vymezené xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx x xxxxxx podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby,

k) xxxxxxx xxxxxxxxx partií - xxxxxx hostitelské rostliny, xxxxx xxxxxxx vegetativním xxxxxxxx z xxxxx xxxxxxx xxxxxx; přitom xx xx:

1. sesterské xxxxxxx příbuzné xxxxxx xxxxxxxx klonově příbuzné xxxxxx, xxxxx xxxxxxx x témže xxxx xxxxxxxxxxxx množením z xxxxxx rodičovské xxxxxx, x xxxxxxx rajčete xxxxxxxx, které xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. xxxxxxxxxxx klonově xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx z xx bezprostředně vznikly.

§3

Xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx každoročně x xxxxxxx s §10 xxxx. 1 xxxxxx systematický xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx podléhají

a) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x České xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 xxxx. 2,

x) namátkově xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ původem xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (dále jen "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx partie xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby x xxxxxxx partie hostitelských xxxxxxx vypěstované x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. c).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx ostatních brambor,

b) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx zdroje xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx podniků, xxxxx průmyslově xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x těchto xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx průzkumu výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx podléhají x xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx výskytu xxxxx xxxxxx používané k xxxxxxx xxxxxx podezřelých x výskytu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny, xxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, odkud tyto xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx hnědé hniloby xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 písm. x) x x), xxxxxxxx 3 x x odstavci 4 xxxx. b) x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx, x případě xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 písm. a) x xxxxxxxxxx partií,

b) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxx, x xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x d),

c) xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx dobu x následným laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxxx uvedených x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) laboratorním xxxxxxxxxx vzorků xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, pevných xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx uvedeném x odstavci 5 xxxx. b) x x odstavci 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x počet, xxxxx, xxxxxxx x dobu xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 až 7, rozsah xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx s §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx vědeckých x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x biologie původce xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx hniloby, x xxxxxxxxxxxx k systémům xxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x x závislosti xx xxxxxxxx situaci xx výskytu xxxxx xx míře xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v souladu x §10 odst. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx ve Věstníku.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx osobou, xxxxxxxxx x xxxx činnosti Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx podle §71 xxxx. 1 xxxx. b) xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §72 odst. 5 xxxx. x) xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx této xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx odebírány x xxxxxxxxx způsobem stanoveným xxxxx odstavce 8.

(10) Xxxxxxxx průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje xxxxxxx rostlinolékařská správa xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx nebo fyzické xxxxx, která xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xx trh xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx o provádění xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 8 xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 5 xxxxxx xxxxxx ročně x xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx potvrzování xxxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx úředních xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 až 6 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx, x xx v xxxxxxx xxxxxxxx x rozmnožovacím xxxxxxxxx bramboru,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx výsadbu xx pozemcích množitele, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx případech xx 1. xxxxxx. Xxxxx oznámení x xxxxxxxxxxxxx a výsledcích xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xx vztahují vždy x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx důvěrné.

§4

Xxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx organismy x x xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X číslo 1 x oddílu XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx správou xxxx xxx jejím xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx právního xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx, x xx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx B, x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahájí xxxxxxxxxx xx zjištění xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 odst. 2 xxxxxx za xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx přesun xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx vzorky, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx dohledem rostlinolékařské xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé hniloby, x

x) nařídí xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx odhadovaného xxxxxx xxxxxxx možného šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxx tomuto xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx dohledu xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x výskytu, xxxxxxxxx x xxxx tyto xxxxxxx a objekty.

(4) Xxx podezření xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo, x případě xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, povrchových xxx původem x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx členském státě, xxxxx rostlinolékařská xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx příslušného členského xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx tohoto xxxxxxxxx x xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx spolupracovat.

(5) Pokud xxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxx které xxxx Xxxxxx republiku xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx republika, xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Opatření při xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx

(1) Pokud úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx §3 odst. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxx správa x xxxxxxx x §76 xxxx. 2 xxxxxx x x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx vědeckým xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) označí xx xxxxxxxx rostliny, xxxxxxx, anebo xxxxxx, x xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, x něhož xxx vzorek xxxxxxx, x xxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx pěstebního xxxxxxxxx, a xxxxxxx, xx nichž xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x odkud byl xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření a xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx bodu 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x stanoví x souladu s xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 rozsah xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx prostřednictvím předsklizňového xxxx xxxxxxxxxxxxx kontaktu, x xx základě xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx podle xxxxxxx x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a xxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X případě potvrzení xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx x ohledem xx xxxxxxxxxx vodu, xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx na zpracování x xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x čeledi xxxxxxxxxxx x doprovodné xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx zavlažování, xxxxxxxx xxxx zaplavení xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

x) zajistí xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků povrchových xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx lilkovitých způsobem xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xx vhodných xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx a) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx xxxx odebírány xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx povrchové xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x bezpečnostní xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Komisi x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby podle xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. x), x xxxxx podrobnosti x xxxxxxxx karanténního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx stát xxxxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx, zásilce xxxxx xxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx učiněném xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx odpovídajícím xxxxxxxx x v xxxxxxx x ustanovením xxxxxxxx 1 x 2 označí xxxxxxxx xxxxxxxx x objekty, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a vymezí xxxxxxxxxx území, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx zónu.

(5) Rostlinolékařská xxxxxx xxxxxxx úředním xxxxxxxx xx Věstníku xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx šetření xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) x xxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), odstavce 2 xxxx. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Testování xxxxxxx příbuzných xxxxxx hostitelských xxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x partiím, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), x xxxxxx případě xxxx xxxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾, x xx x xxxxxxx xxxxxxxxx ke xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx zamoření x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxxxxxxxxxxxxxx správa x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xx zamořené, xxxxxxx xxxxxx možného xxxxxxxx a xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) a c).

§7

Opatření xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx hnědé hniloby

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření podle §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x) xxxxx být xxxxxx x xxx xxxxxxxx rostlinolékařské xxxxxx xx x xx xxxxxx způsobem xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx předem xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx a xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxx xxx xxxxxxx pod xxxxxxxx rostlinolékařské správy xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, pokud xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx riziko rozšíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx požadavky xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, stanovené x příloze č. 5, x xxxxxxx průmyslového xxxxxxxxxx xxxx partie, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, stroje, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxx nebo xxxxxx části x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 písm. x) xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxx uvedených v příloze č. 6 x tím, xx xx provedení xxxxxx x dezinfekce xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx ani xx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx podle §5 xxxx. 2 xxxx. x), xxxx xxx xxxxxxxxx opatření xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 a v xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx opatření xxxxxxx x odstavci 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x) uvnitř karanténního xxxxx x x xxxxxxxxxxxx zóně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům a Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, registrovaných xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Rostlinolékařská xxxxxx xxxxx podle §76 xxxx. 4 xxxx. x) zákona xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstavce 1 a xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx x po xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x původce xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx x §7 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx přechovávání x xxxxxxxx, šlechtitelským nebo xxxxxxxxxxxxx účelům, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx narušena xxxxxxxx opatření xxx xxxxxx xxxxxxx ani xxxxxxxxx xxxxxx jejich xxxxxx.

§8

Testování rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx materiál²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na xxxxx České xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování, xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 odst. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx x §3 odst. 8 x 9, a xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x příslušném xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx určené x výrobě xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx, pokud xxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru původem x Xxxxx republiky xxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx byl x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx potvrzené xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zaměřením xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x případech, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx klonová xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ xxxx reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x množení x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx uplynulém xxxxxxxxxx roce potvrzen x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Účinnost

Tato vyhláška nabývá xxxxxxxxx dnem xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX KROUŽKOVITOSTI

Předložené xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x rostlinách xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx xxxxxx, validovaná xxxxxxx a podrobnosti xxx xxxxxxxx testovaných x kontrolních xxxxxxxxx xxxx uvedeny x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku č. 1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx jako kontrolních xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení x xxxxxxx x xxxxxx uchovávání x xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, např. oddělení xxxxxxxxxxx xxxxxxx od xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx uplatněno xxxxxxxxxx xxxxxx kvality, aby xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x jiným xxxxxx, xxxxxxx xxx označování x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx uvedeno x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx pozitivní výsledek x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx znázorněno v xxxx uvedených xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx je první xxxxxxxxxxxx test (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud je x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx potvrzeno a xxxx xx xxxxxxxxxx x testování podle xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx negativní, xxx xxxxxx není xxxxxxxxx xx infikovaný xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X toho xxxxxx xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX testu potvrzený xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx přítomnost vyžaduje xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx diagram pro xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx bramboru x x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx pro xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx patogenu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na diagnostickém xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus.

(1) Popis příznaků xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- IF xxxx (xxxxx 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Ačkoli xxxxxxx xxxxxxxx x rostlinného xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzí xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, kultivace v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx infikovaném xxxxxxx, mohou přerůst xxxx xxxxxxxxxx patogena xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, nejlépe XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxx, musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx za xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx testování xx určen ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x hlízách bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx biologickém xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x následně, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx je Xxxxxxxxxxx rnichiganensis subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, aby xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxx detekční xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v každé xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx xxxxx, jestliže 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou popsány x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx různých biologických xxxxxxxxxx pozitivní, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx nebo další xxxx negativní, je xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx nutné.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx vyšetření XX xx xxxx xxxxxxx polyklonální protilátka, xxxxx monoklonální xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx se xxxxxx validovaná XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Selektivní izolace.

Toto xxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX xxxxx xxxx NCP-88 média x ředění resuspendované xxxxxx 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx 3-10 xxx xx rozetření xx xxxxxx. Kulturu xxxxxxxx xxx xxxxxxxx vyčistit x identifikovat. Pro xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vyžaduje opatrnou xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx části, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které jsou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxx x které xxxxx xxxxxxxx přerůst. Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx takto xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx z rostlin xxxxxxxxx pro xxxxxxx (xxx oddíl 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Test vyžaduje xxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínky xxxxxxxxx pro xxxx xxxxxx. Bakteriální inhibitory Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx na MTNA xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx test xxxxxxxxx nebudou (viz xxxxx 7).

(9) Typická xxxxxxxxxx kolonie je xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Kultivace xxxx xxxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx izolační xxxxx negativní, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx pupkového xxxxx xxxx stejného xxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx podezřelých xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se dosáhne xxxxxxxx testů popsaných x xxxxxx 9.

(12) Xxxx patogenity xx xxxxxx v xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx velikosti xxxxxx - xxx xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx jsou xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx tento xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých biologických xxxxxxxxxx. Pokud xx xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx morfologie xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) IF xxxx xx xxxxxx x oddílu 4.

(6) XXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) FISH test xx xxxxxx v xxxxxx 5.

(8) Biotest xx xxxxxx v xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pozitivní, xxx xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx provede test xxxxxxx xxxxxx.

(10) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx se xxxxx o Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx dosáhne xxxxxx xxxxx popsaných v xxxxxx 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx příznaků xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xx xx xxxxx sezóny. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx se xxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx kontrole xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vadnutí xxxx velmi xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx listy xxxxx x přes infekci xxxxxx xxxxxx, x xxxx růst x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx vznikají xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxx stonku xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx lístky, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx odumřít. Xxxxx jsou xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx. Příležitostně xxxx xxxxxxxx zakrnělé. Xxxxxxx xxxxxx xxxx příznaků xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxx sklovitost nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx systému, xxxxxxx xxxxxx pupku. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx konci hlízy xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx než xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx a xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxxx sýrovité xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v xxxxx xxxxxx podobné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx být xxxx xxxxxxxx omezeny xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxxxx. X postupem xxxxxxx dochází x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx oddělit xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxxx době xx x Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx střední xxxx xxxxx s prstencem xxxxxx xxxxxxx, čímž xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx dutin a xxxxxxx. Xxxxxxxx houbová xxxx bakteriální xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx, ne-li xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x atypické xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx bramboru

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx vzorkování vyžaduje xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx množství xxxx xx xxxxxx xxxx x zpomalení nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx však lze xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx s xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx hlíz.

- Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx testování xxxxxx x xxxxxxxxx 200 hlíz.

- Níže xxxxxxx bramborový xxxxxxx xxx použít xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx se xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx dezinfekční xxxxxxxxxx (x obsahem chlóru, xxxxxxxx má být xxxxxxxx PCR test, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx DNA) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x jestliže xx má xxxxxxxx XXX test xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx a dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx nožem xx škrabkou xx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vodivého xxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxx. Na xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx xxx výkrojky z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 hodin xxxx xxxxxxxxxxxx při -20 °X xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x pupkového xxxxx xxxxxxxx příznaky kroužkovitosti, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx hlízy xx xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 xxx xxx pokojové xxxxxxx a xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx do xxxxxxxx xxxxx testů. Všechny xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx podle přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxx nádoby znovu xxxxxxxxx, musí být xxxxxxxx vyčištěny x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx, pokud to xxxx xxxxx, uchovávají xx x nádobě xxx xxxxxxx pufru, x xxxxxx xx xxxx maximálně 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě maximálně 24 xxxxx. Xxxxxxx x suberizace xxxxxxxx x růst xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx bránit zjištění xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) x xxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx než 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x xxxxxx xxxx rozdrcením x utěsněném xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx mixéru xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx rozlití během xxxxxxxx. Pro každý xxxxxx xxxx být xxxxxxx čerstvě sterilizovaná xxxxx (nože) x xxxxxx. Pokud xx xxx xxxxxx XXX xxxx, xx nutno xxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx drcení x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Pokud je xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx buď pomalým xxxxxxxxxxx (při xxxxxxxxx 180 x po xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4-10°C) xxxx vakuovou filtrací (40-100µx), xxxxx xx xxxxx přídavkem (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x xx dobu 15 xxxxx (xxxx 10 000 x xx xxxx 10 minut) xxx xxxxxxx 4-10°C x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 1,5 ml peletového xxxxx (dodatek 3). Použije xx 500 µl xxx xxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx solanacearurn x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx na konečnou xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx části xxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxx x uloží při xxxxxxx -16 až -24°X (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx se během xxxxxxxxx uchovávají xxx xxxxxxx 4-10°C.

Opakované zmrazení x xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx extraktu, xxxxxxx xx přeprava x xxxxxxxxx xxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Je xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx a xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odděleně, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x pro xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx bramboru

Poznámka.

Pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup xx vhodný xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 částí xxxxxx. (Xxxxx se provádí xxxxxxxx průzkumy, xxxx xx být xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx populace, xxxxx je předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Pomocí xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxxxxxx nůžek xx xxxxxxxx část x xxxxxxxxx 1-2 xx xx xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx v uzavřené xxxxxxxx nádobě.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx xx xxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx v xxxxxxx třepačce (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx nižší xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx maceračním xxxxx x přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx tloučku nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx není xxxxx, xxxxxxxx se xxxxx stonků x xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx nebo xxxxxxxxx 24 hodin xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Po xxxxxxx, které xx xxxxx 15 minut, xx dekantuje xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx purifikace xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, xxx lze xx dosáhnout filtrací x/xxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vzorkový xxxxxxx xx rozdělí na 2 xxxxxx části, Xxxxx polovina xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 4-10 °X x xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx glycerolu xxx teplotě -16 xx -24 °C (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx -68 xx -86 °C (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, protože xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test a xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx screeningový xxxx proveden xxxx XXX nebo FISH. Xxxxxxxx xx test XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xxxx xxxxxxxx xx pozitivní, je xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx další testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Pokud xx xX test xxxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxxxxxx výsledku xX xxxxx x polyklonální xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (NCPPB 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování suspenze xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx použití xxxxxxxx konjugátu fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální xxxxxxxxxx by měly xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x blízkosti xxxxx nebo xx xxxxx. Používají xx xxxxxxxxxx protilátky (xxx xxxxxxxxxxxx stránku xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 xx - 86 °X x glycerolu. Xxxxxxxx lze ze xxxxxx odstranit přidáním 1 ml peletového xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx při 7&xxxx;000 x x xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx často xxxx xxxxx, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxxx xx xxxxxx fixována xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo s xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem xxxxxxx kroužkovitosti, suspendovaným xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx v xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (uchovávané xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx kontroly se xxxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxxxx extraktů, které xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx mikroskopická xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxxxx s 10 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx na xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sedimentu:

Napipetuje xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx o xxxxxxx 6 mm xx vhodné 15 µx - pro xxxxx xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x xxxx. Druhou xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo pro xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxx 1.

b) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx ředění (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx okénka x xxxxxxx 6 xx xx vhodné 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx do řady xxxxxx. Druhou xxxx xxx použít xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Bakteriální xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °X), xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx dodavatelů xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx dalším xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x suchém boxu xx co xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Postup XX testu:

a) Podle xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x XX pufru. V xxxxx jamce by xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), v xxxxxxxxx titr 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), titr (X) x dvojnásobný titr (2X).

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx test x oddílu 4.1 xxxx. b):

Připraví se xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Pracovní xxxxxx xxxxxxxxx přesnost.

Obrázek 1: Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Podložní xxxxxxx se xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx pokyny xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx se xxxxx ze xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx v xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx v xxxxx IF. Xx xxxxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx nebo přenosu xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x pečlivě xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx papír. Testovací xxxxxx xx pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx pokojové teplotě (18-25 °C).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx setřesou xx xxxxxxx x xxxx se opláchnou x xxxxx jako xxxxxxx (4.3.3.).

Opatrně xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx 0,1M fosfátového xxxxx x glycerolem (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx krycí xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx excitaci FITC xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x xxxxx obvodu. X vzorků x xxxxxxx nebo malým xxxxxx xxxxx se xxxxxx nejméně 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x určeném xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovním xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx IF xxxxxxxx (oddíl 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x testovacích xxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx musí xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx stejném xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Buňky x xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X peletách z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x velikostí a xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx se x xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x titru xxxx xxxxxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Při xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících buněk x xxxxxxxx morfologií xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 mikroskopickém xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x vzorků, xxx xx počet typických xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx povinné xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx než 5x10³ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a vzorek xx považuje za xxxxxxxxx. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

5. Test XXXX

XXXXXXX

Xxxx se jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x je pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx proveden IF xxxx. Když xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus (dodatek 7). Xxxxxx testování xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx reprodukovatelné zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx ředtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx měl xxx xxxxx možno xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx provést s xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx -16 xx -24 nebo -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 M xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x 3-5 denní xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Připraví xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx kmene nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako u xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Napipetuje se 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx dobu 8 minut xx 7&xxxx;000 g.

5.1.3. Xxxxxxxx xx supernatant x xxxxxxxx xx peleta x 500 µx xxxxxxxxx roztoku připraveného xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx se x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx činidlem je 96 % xxxxxx. Xxx jeho použití xx xxxxxxxx xxxxxx x kroku 5.1.2. x 50 µl 0,01 X XX x 50 µl 96 % etanolu. Xxxxxxxx se protřepáním x inkubuje xx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx po xxxx 8 minut xx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx supernatant x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µx 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 3, přičemž xx xxxxxxx 2 xxxxx vzorky xx xxxxx sklíčko, x xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx teplotě -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % etanolu. X xxxxxxx, xx xx třeba XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X XX x xxxxxxx xx protřepáním.

Obrázek 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx sušičkou xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) a xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x pokračovat x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx a x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x hybridizace

5.2.1. Připraví xx xxxxxx lyzozymu xxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx L-6876) x 10 ml xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 mM XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx měl xx xx xxxxx xxxxxx zmrazit a xxxxxx xxxxxx. Každý xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx roztoku lyzozymu x xxxxxxxx po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se ponoří xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx lyzozymu 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 mM Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx se xxx teplotě 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx po xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx vzduchu x xxxxxx sklíček.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx komora xxxxxxxx xxx vzduchotěsné krabice xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx namočeným x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx teplotě 55 °X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µl xx 1 sklíčko x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Sklíčka xx xxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxx teplotě 45 °C a xx každého xx 4 xxxxxx xx xxxxxxx / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µx hybridizačního xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x hybridizuje xx 14 - 18 x x xxxx xxx xxxxxxx 55 °X v xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx obsahující 1 x sterilní xxxx (Xxxxx xxxx water = XX), 1 x 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) x 1 l 1/2 x hybmixu (167 xx 3x xxxxxx x 833 xx XXX). Xxxxx z xxxx se xxxxxxxxxxx xx vodní xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx do držáku xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx v kádince x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Držák xxxxxxx xx přemístí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 minut.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Odstraní xx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx filtračním xxxxxxx. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo podobný) xx xxxxx xxxxx x celé xxxxxxx xx zakryje xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx s mikroskopem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x nebo 1&xxxx;000x xxx xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein xxxxxxxxxxxxx (XXXX) jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx buněk) ve xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Použitím xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx obarvené Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnává se xxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) musí xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlíží xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x okénkách testovacích xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat xxxx xxx lepší xxx x pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx fluorescenci, se xxxxxxx x úvahu.

5.3.3. Xxx podezření x xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx zopakován. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxxx. Xx se xxxx xxxx, xxxx všechna xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx FISH xxxxx. V xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx často xxx x IF xxxxx.

5.3.5. X xxxxx se xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx a morfologií, xxx 5.3.2.

5.3.6. Interpretace xxxxxxxx testu XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx platné, pokud xxxx při xxxxxxx XXXX filtru xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx alespoň 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxx xx další xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx typickou xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx typické jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx pozorovány x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. PCR xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test a xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test x je xxxxxxxxx, xx xxx dokončení xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx této xxxxxx x celém xxxxxxx xxxx hlavního screeningového xxxxx se xxxxxxxxxx xxx tehdy , xx-xx požadována specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx. Xxx dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxx mohou být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používají xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx a protokoly. Xxxxxxxxxx xx používá xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku cílovou XXX. XXX test xx měli xxxxxxxx xxxxxxx laboranti v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx biologii, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx kontrolami (u xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) by xx xxxx xxxx xxxxxxxx jako x xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx jasné, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX ze xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, k nimž xxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx NCPPB 4053),

- xxxxx možno použít xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx možné xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x odděleném xxxxxxxxx od xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx pokud xxxxx bez zeminy. X xxxxxxx použití XXX testu je xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x umytých xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Použijí xx xxxx popsané xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x dispozici xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx reakcí x xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µl xxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) do xxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 ml.

2. Přidá xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx x umístí xx xx termobloku xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 95 °C xx xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Xxxxx se 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx xx 1 xx x 10 xX Xxxx HCl, xX 8,0) a xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Easy XXXX xxxxxx A (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx při xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx se 100 µx Easy XXXX xxxxxx B (Xxxxxxxxxx)x silně se xxxxxxxx třepáním, až xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx viskózní.

7. Xxxxx xx 500 µl xxxxxxxxxxx x míchá xx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx sníží x xxxx se xxxxx xxxxxxxxx.

8. Odstřeďuje xx na 15 000 x po xxxx 20 xxxxx při 4 °X xxx xxxxxxxx fází x xxxxxxxxx mezifáze.

9. Xxxxxxx xx xxxxx fáze xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx a inkubuje xx xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxxxx xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx.

12. Přidá se 500 µx 80 % etanolu (-20 °X) a promíchá xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx na 15 000 x xx xxxx 10 xxxxx při 4°X, xxxxxx se xxxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx se xxxxx uschnout xx xxxxxxx nebo x XXX speed xxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx vody (XXX) x xxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

16. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx -20 °X xx do xxxxxxxxxx xxx PCR.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx odstředěním x xxx XXX xx xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx DNA xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, že xxxx xxx purifikaci DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx a kontroly xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx roztok xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR x prostředí, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xx xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx zahrnuje xxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx směs XXX x přidá xx stejná xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx PCR xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx termocykleru, který xxx použit při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Rozdělí se xxxxxxxxx XXX elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx se xxxxxxx 12 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx směsi DNA x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx s 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx v Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X xx cm. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx proužky XXX xxxxxxxx v ethidium xxxxxxx (0,5 xx xx x) xx xxxx 30-45 minut, xx xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x tímto xxxxxxxxx.

6.3.3. X xxxxxxxxx x XX (krátké xxxxxx xxxxx, např. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx se hledají xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. U všech xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx amplikonu XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx s xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (viz dodatek 6). Xxxxxxx se naštěpené xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx restrikčního xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx ethidiumbromidem x porovnává se x neštěpenou x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR testu:

PCR xxxx je xxxxxxxxx, xxxxx amplikon xxxxxxx xxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x daném xxxxxx, xxx byl xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x rostlinnými xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX očekávané xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX test xx xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx amplikon xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx se xxxxxxxx), xx předpokladu, xx xxxxx amplifikován xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxx xxxxx PCR primerů (xxxxx 9.3).

Poznámka:

Lze xxx xxxxxxxxx na inhibici XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx amplikon xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x xxxxxxxxx kontroly x Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx kontrolami PCR x inhibici xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Test xx xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (příprava xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx citlivost zjištění xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx úspěšně xxxxxx x na xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovávány x glycerolu při xxxxxxx -68 až -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx pro růst Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx dokonce v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x poskytují také xxxxxxxxxx základní konfirmační xxxx.

Xxx xxxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků xx xxxx xxx xxxxxxxxx optimální xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. se xxxxxxx xxxx rostliny lilku xxxxxx z níže xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Používají xx pouze xxxxxxxx xx xxxx 2-3 xxxxx do úplného xxxxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxx xx xxxxxxxxx úplné xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx níže xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx vzorek.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx podepře (xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xx xx xxxxxx blok xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx o rozměrech 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx x 15 xx xxxxx). Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx stonek x xxxx umístí xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx je možno xxxxxxx xx místě xxxxxxx páskem kolem xxxxx.

7.2.2. Pomocí skalpelu xx provede mezi xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx pravým xxxxxx xxxxxxx nebo mírně xxxxxxxxxx xxx dlouhý 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx tři xxxxxxxx průměru xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxx skalpelu x xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx linky xxxx jemným xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Zbytek xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx x objemu 2 xx.

7.3 Inokulace xxxxxxx XX

7.3.1. Xx stonek xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx xxxxx (přibližně 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx (v úhlu xxxxxxxxx 5°), dlouhý 1,0 cm x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx s xxxxx xx xxxxx v xxxxx kapky xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx se xxxxxxx xxxxxxxx vazelínou x injekční xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx snížení xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx rostliny xxxxx xxx xxxx inokulací xxxxxxxxxx.

7.4.2 Stonky xxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx nad xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx injekční xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx méně xxx 23 X). Xxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxx xx to xxxxx i xxxxxxxx x přirozeně infikovaných xxxx bramboru.

7.6. Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 M XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Po xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxx (dodatek 8) po xxxx až 4 xxxxx při xxxxxxx 18-24 °C. Xxxxxxxx xx inkubují xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx vlhkosti (70-80%) x xxxxxxxx se xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vody. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxxxx nad 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Aby xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx rostliny xxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx jasně oddělených xxxxxxxx, anebo při xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx přísné xxxxxxxx xxxx zacházení x xxxx. Pokud musí xxx rostliny xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Je nezbytné, xxx skleníky x xxxxxxx komory byly xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, protože xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx druhý.

7.8. Pravidelně xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx vejcoplodého vadnutí xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Zvadlé xxxxxxx může xxxxx xxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx žilnatinou xxxxxx často xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx často xxxxx žlutý xxxxx. Xxxxxxxx vždy neodumírají; xxx xxxx trvá xxxxxx do xxxxxxxx xx příznaků, xxx xx xxxxx xxxxxx xx přežití. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx mnohem xxxxxxxxxx vůči xxxxxx xxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxx starší rostliny, xxxxx xx nezbytné xxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxx xxx xxxxx x nebo xxxxxx xxxx xx. Xxxxxxx xxxxx také způsobovat xxxxxxxx xxxxxx bakterií xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxx x nim Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x E. xxxxxxxxxx xxxxx. atroseptica, Xxxxx xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx vadnutí xxx xxxxxxx od xxxxxxx způsobených xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx celé listy xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx se xxxx xxxxxxxxx Gramovo xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx

7.9. Jakmile se xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Povrch xxxxx x stonků lilku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx lF xxxx XXX xx xxxxx x lilku x xxxxxxx xx xx xxxxxxx (selektivním) médiu (xxx xxxxx 8). Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Gramovo barvení (dodatek 9). Čisté xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují x potvrdí xx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxx dokonce x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx částí xxxxxx x xxxxx 1 xx x každé xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx test xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace xx vhodných (selektivních) xxxxxxx postupem podle xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx patogenita (xxx xxxxx 9 a 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx kroužkovitosti izolován x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismem, xx xxxxx ho xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx napadení.

Mohou xxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x proto xx nedoporučuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx stonku (3.2). Přímá izolace Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x vhodného xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx rostliny.

Izolace se xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx stonku a x rostlin xxxxx xxxxxxxxxxxx, které xxxxxxxxxx xxxxxxxx napadení, ale x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX složených xxxxxx (xxx oddíl 7.9). Xxxxx je xxxxx provést xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, měla xx xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.l.2.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx desetinná ředění xxxxxxxx 106 xxx xx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx PD 406). Xxx se vyloučilo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx se xxxx xxxx použitím x testování obvyklých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx růst xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx materiál se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

8.1. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Xx 100 µx xxxxxxxxx části xx xxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx x lilku vejcoplodého xx připraví desetinásobné xxxxxx x peletovém xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx náročným xxxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx bakterie je xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx přítomná xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxx obvykle xxxxxxxxxxx xxxxxxx, zatímco xxxxxxx xxxxxxx. Proto xx xxxxxxxxxx rozetřít 100 µx z každého xxxxxx, x ředění 1/100 xx 1/10 000 xx MTNA xxxxxx xxxx NCP-88 xxxxxx (dodatek 5), za použití xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (hokejek) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxx teplotě 21-23 °C.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx zahrnuje xxxxxxxxx s kontrolními xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx dnech, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx kolonií

Poznámka:

Subkultury xxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx následnou xxxxxxxxxxxx xx se měly xxxxxxxx xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx dříve, xxx jsou média xxxxxx xxxxxxxxx, tj. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx rozetřou xx jedno x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (složení xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx pro subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx,

- xxxx z xxxxxxxxxxx extraktu x xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx 21-24 °X po xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx velikosti špendlíkové xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx zlepšuje. Xxxxxxx xxxxxxx jsou smetanově xxxx nebo xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, slizovitě xxxxxx, x rovnými xxxxxx x xxxxxxx xxxx x průměru 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Podezřelé xxxxxxx xx identifikují (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx se xxxxxxx patogenity (xxx xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx izolované xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx dvou následujících xxxxx založených na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx test známý xxxxxxxxxx kmen.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx inkubovat xxx 21 °X x xx xxxxx xxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x žádnému růstu, xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx testy musí xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx kmenem Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x fyziologické xxxxx xx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx musí xxxxxxxx z kultur x xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxx Očekávaný výsledek

Oxidačně-fermentační (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx oxidázy -

Xxxxxxxx katalázy +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx citrátu -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx při 37 °X -

Xxxx x 7% NaCI -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx kyseliny x:

- glycerolu -

- xxxxxxx - nebo xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Gramovo barvení (dodatek 9)

9.2. xX test

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx xx xX (dodatek 3).

x) Připraví xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xX xxxxxx (xxxxx 4).

x) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX titr xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx vodě (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx suspenze xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100 °X xx xxxx 4 xxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx xx může xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx potom xxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X až xx xxxxxxx.

x) Pro amplifikaci Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx amplikonů xx použijí xxxxxx xxxxxxx PCR (např. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Xxxx, 1995; Mills x kol., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

d) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx velikosti x mají xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

x) Test XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx reakce xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (FAP)

a) Xxxxxxx xx pěstuje na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) xx xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °C (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

x) Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 xxx, 15:0 Anteiso, 16:0 xxx, 16:0 a 17:0 Anteiso jasně xxxxxx o xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx. Jiné xxxx xxxx Curtobacterium, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx kyselin, xxx 15:1 Xxxxxxx X xx xxx xxxx xxxxxxxx neobvyklá xxxxxxxx, xxxxx xx však xxxxxxxxx xx všech Xxxxxxxxxxx xxx. v xxxxxxx 1-5 %. X Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx obvykle xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Připraví se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx x xxx., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx zkouška xxxxxxxxxx.

10.1. Xxxxxxxx xx inokulum xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Naočkuje xx 5-10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx fázi 3 xxxxxxx listů..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 18-24 °X při xxxxxxxxxxx světle x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx vyschnutí. X xxxxxxx kultur xx mělo během 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, avšak xxxxxxxx, xxxxx po xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, by xx xxxx inkubovat xx 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx příznivých pro xxxx lilku vejcoplodého, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Izolace xx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx odstraněním xxxxx xxxxxx 2 cm xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 mM fosfátového xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX a XXXX, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 dní xxx teplotě 21-23 °X x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xx optimalizaci x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Gesundheit xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Laboratory	York	Anglie
Scottish Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx la Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Bactériologie	Angers	Francie
Laboratoire Xxxxxxxx xx xx Protection Xxxxxxxx, Station xx Xxxxxxxxxxx de xx Xxxxx de Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Dienst	Wageningen	Nizozemsko
Norwegian Crop Xxxxxxxx Institute, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Kontaktní osoby: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx PCR/IF x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) na základním xxxxx XXXX x xxxxxxxxxx xx x 10 xX fosfátového xxxxx xxx získání xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Toho xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zakalené xxxxxxxx odpovídající xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 mn.

Výkrojky xxxxxxx xx odeberou x xxxxxxxxx konců 200 xxxx odebraných z xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx slupkou, x xxxxx xx jisté, xx xx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx obvyklým xxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx v 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx. V xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx opatří xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx ve xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 ml, čímž xx xxxxx 9 xxxxx každého xxxxxxxxxxx xxxxxx. Skladování probíhá xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X až xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x FISH xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rozbory pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxx zkušebních xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX a PCR xxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry lze xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx pufr se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x rostlinných xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx následující xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50 x
(*) pro xxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx z pupkových xxxxx bramborových hlíz xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx IF xxxx

2.1. Xxxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Tento pufr xx xxxxxxx x xxxxxx protilátek.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx rozpustí, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Tween 20 x pufru xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxxx xxxxx roztok xx xxxxxx sklíček na XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx lF x XXXX pozitivních buněk

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických fluoreskujících xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx pole xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde i = xxxxxxxxxx pole (x rozmezí xx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = tubusový xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - zvětšení xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx 1 xx resuspendované xxxxxx (N).

N = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = objem xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx a

F = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx pro xxxxxxx a xxxxxxxxx X. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Nutrient xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Difco)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx při 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = NDA)

Difco xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xx sterilizace x autoklávu xxx 121 X xx xxxx 20 min.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Yeast peptone xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 g
Baktoagar (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x minerálními xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx salts medium = YGM)

Kvasnicový extrakt (Xxxxx)	2,0 x
X(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	2,5 g
K2HPO4	0,25 g
KH2PO4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . H2O	0,015
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx se rozpustí x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx xxx 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx selektivní xxxxxxx média

Médium MTNA

Pokud xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx složky xxxxx z XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
Manit	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 g
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx č. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xX se xxxxxx xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (při 121 °X po xxxx 15 xxx.) a xxxxxxxxx na 50 X xx přidají xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, nalidixic xxxx 0,002 g, xxxxxxxxxxxx X 0,01 x.

X xxxxxx xx nechají xxxxxxx xxxxxxxxxx: trimethoprim (Xxxxx) a xxxxxxxxx xxxx (Sigma) (obě 5 xx/xx) v 96 % metanolu, xxxxxxxxxxxx B (Xxxxx) (1 xx/xx) x xxxxxxxx sulfoxidu. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx základního média xx 3 měsíce. Xx xxxxxxx antibiotik xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx při xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx NCP-88

Živný xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 g
D-manit	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 g
MgSO4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx se rozpustí,upraví xx xX na 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx na 50 °C xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008 x, cycloheximide (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxx roztoků následovně: xxxxxxxxx acid x 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, polymyxin X xxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx média xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx pro PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx také xxxxxx vykazovat xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx PSA-1 5'- ctc xxx xxx xxx xxx xx xx -3'

primer XXX-X 5'- tac xxx xxx xxx xxx xxx xxx x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx xxx xxx xxx ggt xxx tga tgc -3'

xxxxxx NS-8-R 5'- xxx xxx xxx xxx cct xxx xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z DNA X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x interní XXX xxxxxxxx 18X xXXX 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725 μx
10x XXX pufr (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μl	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (frakce X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx PSA-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer XXX-X (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx NS-8-R (10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Taq polymerázy Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx xxxx Xxxx) a Xxxxx XXX.

(²) Koncentrace xxxxxxx NS-7-F x XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx pupkové xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. a) a 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxx xxxx optimalizace koncentraci xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx podmínky xxx PCR

Postupuje xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 minuta xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 cyklů x) 30 sekund xxx teplotě 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 sekund xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °C

Poznámka:

Tento xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx cyklerem MJ Xxxxxxxx PTC 200. Xxx použití xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx), xx), x), xx) x vii).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx restriktivním enzymem

Produkty XXX xxxxxxxxxxxxx z XXX X. m. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 minut. Xxxxxxxxx získané x xxxxxxxxx specifického pro X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx rozměry 282 bp x 220 xx.

2. Příprava xxxxxxxxxx pufru

2.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx voda 50 xx

Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx octová 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Před použitím xx xxxxx na 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Validovaná činidla xxx FISH xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro Xxx CMS-CY3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx acg -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'- gct xxx xxx cgt xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, KTERÝ XX XXXXXXX! POUŽÍVAT RUKAVICE X NEVDECHOVAT. XXXXXXXXXX XX PRACOVAT X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 ml xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx přibližně 60 °X x xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx po xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX na 7,0 xxxxxxxx 1 xx fosfátového xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) a 5 kapek HCl 1X. Xxxxxxxxxx proužkem xx xxxxxxxxxxx pH x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx nebo XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Poznámka:

Alternativní xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 M

Tris-HCl 60 mM (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztoku podle xxxxxxx v xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Doporučená xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx směsi

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x hybmix	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx EUB 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx roztoky obsahující xxxxxxxxxxxxx oligosondy xx xxxxxxxxxx v xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxx před přímým xxxxxxxxx zářením nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Na₂HPO₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx vejcoplodého

Semena xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x plně xxxxxxxxxxx děložními xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx přepichují xx pasterizovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx dne, pokud xx delší;

Teplota: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °C.

Vhodné xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Beauty",

"Long Tom",

"Rima",

"Balsas".

Dodavatel: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 g xxxxxxxxxx xxxxxxx x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx se 0,8 x xxxxxxxxx amonného x 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx smíchají.

Lugolův jódový xxxxxx

Xxx 1 g

Jodid xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 ml

Pevné xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x misce. Xxxxxxx xx xx xxxx x míchají xx x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxx barviva

Zásobní xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % etanol 100 xx

Xxxxxxx se x xxxxx se.

Ředění: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxxx x fixují se xxxxxxxx.

2. Sklíčko xx xxxxxx roztokem krystalové xxxxxxx x nechá xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Krátce xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxx po dobu xxxxx minuty.

5. Opláchne xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx se xxxxxx xx kapkách xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx vyplavuje xxxxxxx, xxxx ponořením za xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx na dobu 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx papírem.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx působit 10 x.

9. Opláchne xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx papírem.

Grampozitivní xxxxxxxx xx zbarví xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx bakterie xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx se také xxxxxx komerčně xxxxxxxx xxxxxxx xxxx barvicí xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx of the Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11&xxxx;288 XX, 21 pp.

2. Xxxxxxxx, J. F., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx study xx xxxxxxxx from xxxxxx. Xxx. Xx. Path., 49, 213-218.

3. Dinesen, X. X., 1984. Xxx extraction xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx from diseased xxxxxx tubers. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Manual xx methods xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx for Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Xxxxxxx, X., 1953. The xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx carbohydrates xx xxxxxxx gram-negative xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. X. x J. Xxx Vaerenbergh. Xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx XX xxxxxx xxx xxx detection of xxxxxx ring xxx xxxxxxxxxx (Corynebacterium sepedonicum) xx potato. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx and development xx a semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx the xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx Z.; Xxxxxxx, X x X. X. Sands, 1990. Xxxxxxx in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. A., 1966. Xxx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx bacteria. X. xxxx. Bact., 29, 114-118.

12. Lelliott, R. X., X. Xxxxxxx x X. X. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx J. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx detection xx xxxxxx ring rot (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Kotth.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx primers xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx region xxx xxxxxxxx detection of Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Phytopathology, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., X. x X., W. Xxxxx, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, K. -X. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx cham xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. J. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Pastrik, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus in xxxxxx tubers xx xxxxxxxxx PCR xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Joiunal xx Xxxxx Pathology, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx studies on xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Mem. Cornell xxxxx. Exp. Xxx., 366, 52 pp.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, X. (1999) Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx fluorescence xxxxxxxxx xxxxxx. Plant Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx identification xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Schaad [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Paul, Minnesota:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. X., 1967. A xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx the genera xx xxxxxxxx. 2xx xx., William and Xxxxxxx Xxxxxxx, Baltimore.

22. Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, XX., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogen Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. European Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. and X. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx xx test reproductibility xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: report xx Pseudomonas xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. International Journal xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. D. x A. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx rot xx xxxxxx, by fluorescent xx xxxx hybridization xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

B. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx x některých xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz bramboru, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, x xx vzorcích xxxx x půdy,

iii) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (R. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx různé metody, xxxxxxxxx činidla x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx optimalizaci x xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx nutné pracovat xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x odpovídajícím xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správy.

Testovací xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x reprodukovatelné xxxxxxxx úrovní R. xxxxxxxxxxxx xxxx stanovené xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx prahů xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x jejich uchovávání x xxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx uplatněno xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x jiným xxxxxx, zvláště xxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx znázorněno x níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx IF, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx biologickém xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní, xxxxxxxx podezření xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx být xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Pokud je x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xx podezření xxxxxxxxx x xxxx se xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx daného xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test negativní, xxx vzorek není xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x potvrzením xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx pro hlízy x rostliny xxxxxxxx x podezřením z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx selektivní xxxxx půdě x x případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.1.

2) Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx předběžnou xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxx. Negativní výsledek xxxxxxxxx vždy nepřítomnost xxxxxxxx.

3) Xxxx na xxxxx slizu ze xxxxxx cévních stonku xx popsán v xxxxxx 6.1.1.

4) Test xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx slizu suspendovaného xx vodě xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx obvykle xxxxxx izolovatelný x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx x oddíle 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx pokročilých xxxxxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx saprofytických xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxx test je xxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx opakovat, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Dílčí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx nepovinná, xxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx nový xxxxxx.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxx 6.3.

1.2. Postupový xxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx je xxxxxx xx xxxxxxxx latentních xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x diagramu 3), z xxxxx xxxxx xx založen xx xxxxx biologickém xxxxxxxx, musí být xxxxxxx xxxxxxx patogenu x xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, potvrzením, xx xxxxx kultura xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx testů.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x na xxxxx počet, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx popsány x oddíle 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, je pro xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytný ještě xxxxx nebo více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx druhý xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

4) Xxxx IF xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx izolace xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX xxxx popsány v xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x oddíle 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx negativní, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z blízkosti xxxxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx vzorku, případně xxxxxxx xxxx s xxxxxxx vzorky.

12) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur xxxxxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx patogenity xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx dva xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx biologických principech. Xxxx-xx druhý xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx vzorek xx negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx nutné.

4) Xxxxxxxxxx izolační test xx popsán v xxxxxx 6.1.4.

5) Test XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx XXX jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX xx popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Kultivace xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx negativní, xxxxxxx xx izolační testy.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxXxxx, u xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx jedná x X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x bramboru

Rostlina xxxxxxxx. Xxxx fáze xxxxxxx x polních podmínkách xx rozpozná xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx vadnutí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx se hnědé xxxxxxx. Dochází xxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo celé xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx nevratným x xxxxx kolapsem x xxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx napříč xxxxxxxxxx stonků xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx možné xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx žlutého xx světle xxxxxxx xxxxxxxxx cévního prstence, xx kterého xx xxxxxxxx xxxxxxxx začne xxxxxxx bledý krémový xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx výrazněji xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx rozšířit do xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx pupkového xxxxx xxxxx x z xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx se přilepují xxxxxxx půdy. Xx xxxxxx xx mohou xxxxxxx červenohnědá, lehce xxxxxxxx xxxxx jako xxxxxxxx vnitřního xxxxxxx xxxxxxx pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx obvyklý xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx listů směrem xxxx x xxxxxxx xx xxxxx straně xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx končí xxxxx úplným xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx na xxxxxx xx xxxx tvořit xxxxx počet xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx možné xxxxxxxxx xxxxx nasáklé xxxxx xx xxxxx xxxxxx, které jsou xxxxxxxx odumírání xxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx bílý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x jiných xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx x X. nigrum. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxxx u xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaky xxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25 °X xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxx (xxxx. u xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx vadnutí xxxx příznaky xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx vodě, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx zbarvení xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx řezu xxxxxx xxxxx stonku nebo xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. X řezu xxxxxxx xxxxxx mohou xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx tvořit xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx je xxx stonku xxxxxxx xxxxxx do vody, x xx i xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx napomoci předběžné xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx testů:

2.2.1. Test xx xxxxx slizu xx stonku

(Viz 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-b-hydroxybutyrátu (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx fixovaných skvrn xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx A nebo xxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy (Viz xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx testy

Dalšími xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx test IF (xxx oddíl 6.1.5.), xxxx XXXX (viz xxxxx 6.1.7.), testy XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx PCR (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx při xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx sliz xxxx vrstva xxxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx bramboru xxxx z xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Suspenduje xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx se 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx universální xxxxxx půdu (XX, XXXX xxxx SPA; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) a/nebo validované xxxxxxxxxx xxxxxx (např. XXXX, viz dodatek 2). Xxxxxxx xx metodou xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx případně xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 x pozitivní xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx xxx teplotě 28°X.

- Na xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx vytvářejí xxxxxxxxxx izoláty X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx, ploché, nepravidelné x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x charakteristickými xxxxxxxxxx ve středu. Xxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx malé xxxxxxx xxxxxxxxx máslovité xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx bílé.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx XXXX jsou xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx tvoří malé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx temně červené.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx izolátech xxxx xxxxxxx x xxxx 6.2.

3. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx více xxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxxx. Větší xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxx xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx než 200 hlízami, xxxxx xx k dispozici xxxxx množství hlíz.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxxx vzorků x xxxxxxxxx 200 hlíz.

- Xxxxxxx bramboru xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx vzorků xxx teplotě 2-30 °X xx xxxx xx 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx množení xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx proveden XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx DNA) x mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu. Xxxxx postup xxxx xx xxxxxx zvláště x případě, když xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx být xxxxxxxx xxxx XXX xxxx xxxxx izolace.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém xxxxx xxxxx hlízy, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx pletivo. Xxxxxxx xx vyříznou malé xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxxxx konci. Xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx minimum.

Poznámka:

Všechny (xxxxxxx) xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx se dají xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xx hnědou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 xxx při xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx hlíz s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx uchovány xxxxx xxxxxxx III.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx uloží xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx použití, xxxxx jsou uzavíratelné xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; v xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Zalijí se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx množství (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) buď x mixéru (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x utěsněném xxxxxxxxxx xxxxx na jedno xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (např. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx vzorků xxxxxx mixéru existuje xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx procesu. Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x xxxxxx. Při xxxxx XXX xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX na xxxxxxxx xxxx x mlecím xxxxxxxxx. U xxxxx XXX xx doporučuje xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx na jedno xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 g xx dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) extrakčního xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx frakce xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx dobu 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, aniž xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx peletového pufru (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx pro X. solanacearum, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µx referenční xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx části xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xx xxx teplotě -16 xx -24 °X (týdny) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx). Extrakty xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx přeprava xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x chladícím xxxx x xxxxxxxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx nutné, xxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx uchovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. To xxxxx xxx sklíčka XX x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x popisy xxxxx x optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

IF xxxx (xxx oddíl 6.1.5.)

Testy XXX (viz xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (viz xxxxx 6.1.7.)

Testy ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx detekce xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx xxxxxx. Postup xxx xxxxxx použít xx xxxxxxx vzorky x xxxxx až 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, xxx xx být xxxxxxx na statisticky xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zkoumané xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx nádoby xx xxxxx 1-2 xx dlouhé kousky xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx sazenice x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx dlouhý 1 xx z xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx úrovní xxxx.

Xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxxx: Čistým xxxxxxxxxxxxxx nožem se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx z každé xxxxxxxx uříznutý xxxx xxx spojením x xxxxxxx stonkem. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, 1 xx xxxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1 xx xxxxxx xxx x xxxx každého xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. U xxxxx xxxxxxxxxx (X. dulcamara) xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx se xxxxxxxx 1-2 cm xxxx xx xxxxxx pod xxxxx xxxx oddenků x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité oblasti xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx vzorek x xxxxx nejméně 10 rostlin xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx každou potenciální xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx rostlinu. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx x xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx infekci je xxxxx zjistit po xxxx rok u xxxxxxxx Xxxxxxx dulcamara xxxxxxxx xx vodních xxxxxx. Mezi známé xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx dulcamara, X. xxxxxx, Xxxxxx stramonium x další xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx Pelargonium xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Některé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx populace X. xxxxxxxxxxxx biovar 2/Xxxx 3 v xxxxxxxx x/xxxx oddencích xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Rumex spp., Xxxxxx alba. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx dioica.

Poznámka:

V xxxx xxxx je xxxxx provést xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx příznaků (xxxxxxxx cév xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Jakýkoli xxx xxxxxx s xxxxxxxx se xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx (xxx oddíl 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% etanolem a xxxxx vysuší xxxxx xxxxxxx. Potom xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxxx xx xxxxx dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x třepou na xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx teplotě xx 24 °X nebo 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx ihned xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx možné, xxxxx xx xxxxx xxxxxx x chladu xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X) na 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx není třeba, xxx xxx xx xxxxxxx filtrací xxxxx xxxxxxxxxxxxx popsaným x xxxxxx 3.1.1.3. až 3.1.1.5.

3.2.1.5. Čistý xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx na xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx díl xx xxxxxxxx x 10-25% (x/x) sterilním glycerolu xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx) pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Testování

Postupové xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (viz xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx ve xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx x identifikaci X. solanacearum xx xxxx

(1) Xxx oddíl 4.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou popsány x xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx zvětšuje xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, tak xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x doporučuje se xxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx test xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Biotest xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Metody xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.4.2. a 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx populace xxxxxxx xxxxxxxxxxxx izolace, xxxxxxx xx izolační xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx sterilní xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x detekci xxxxxxxx xx vzorcích povrchové xxxx x rovněž xxxx xxx použito x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx liší x xxxxxxxxxx xx substrátu. Xxxxxxxxx xxxxx selektivní xxxxxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, kterých xx xxxxxx xxxxxx více x odpadní vodě xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxx x xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx schéma xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx povrchové vody, xxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx vodě ze xxxxxxxxxx brambor a xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx xxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxxxx xxxx filtrace), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx schématu by xxxx xxx xxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx k xxxx, xx se xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx nepřítomnosti xxxxxxxx v povrchové xxxx, xx xxxxx xx uvědomit xxxx xxxxxxx při xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Příprava vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxx X. solanacearum x povrchové vodě xx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxx teplota xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx vzorkování x xxxxx době xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx snížením xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx x geografie xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxx x xxxxxxxx výskytu xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v blízkosti xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx přítomny.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx vzorkovacích místech xx odeberou vzorky xxxx xx sterilních xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx jedno použití, xxxxx xxxxx 30 xx xxx hladinou x 2 m xx xxxxx. Při xxxxxxxxxx odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxx vzorky x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Doporučená xxxxxxxx vzorku xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3krát xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx bude obsahovat 2 opakované xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx intenzivním xxxxxxxx xx xxxxxxx nejméně 3 vzorkovací xxxxx xx xxxxx 3 xx vodního toku x vzorkují xx xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx v xxxxxx x temnu (4-10 °X) atestují xx 24 hodin.

4.2.1.3. Xx-xx potřeba, xxxx xxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Odstřeďují xx 30-50 ml xxxxx vzorky xxx 10&xxxx;000 x po xxxx. 10 minut (xxxx 7000 x xx dobu 15 xxxxx), pokud xxxxx xxx teplotě 4-10 °X, xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx se xxxxxx v 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µx) x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 ml xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx brambor nebo x xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxx

5.1. Postupový xxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Viz xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx PCR xxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx inhibice saprofytickými xxxxxxxxxx. Xx-xx podezření xx xxxx saprofytické xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, opakují se xxxxx selektivní xxxxxxx xx xxxxxx zředění xxxxxx.

(7) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur X. solanacearum xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx detekční xxxxxx xxxxxxx x xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx xxx detekci xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, ale xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx vzorků xxxxxxx odpadu při xxxxxxxxxx brambor xxxx xxxx z xxxxxxx xxxx. Xx však xxxxx poznamenat, že xxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx nepravidelně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx x přirozeně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx těchto xxxxxxxxx.

Xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx negativních xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx patogenu x xxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx schématu. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx vypěstování náchylné xxxxxxxxxxx rostliny x xxxx sledování, zda xxxx xxxxxxxxxx, xxx x xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx unikne xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xx mělo xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xx shromáždí 0,5 xx 1 xx půdy xx 60 míst xx xxxxx 0,3 xx x xxxxxxx 10-20 xx. Je-li xxxxxxxxx xx xxxxxx patogenu, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx míst na 120 x xxxxxx 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12-15 °X. Kal xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x kanalizace se xxxxxxxxxx shromážděním xxxxxx 1 kg z xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx celkový xxxxx xxxxxxxxxxx kalu. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Dílčí vzorky 10-25 x xxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx rotační xxxxxxxxx (250 ot./min) v 60-150 ml extrakčního xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagram x xxxxx testů xxxx v příslušném xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testy

6.1.1. Xxxx xx výtok slizu xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxx následující xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Řez xxxxxx xx ponoří xx xxxxxxxx s čistou xxxxx. Xxxxxxx se, xxx se po xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx proudící xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx roztěr xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xx 48 hodinové xxxxxxx na xxxxx xxxx YPGA xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx sklíčko.

2. Xxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum x xxxxxxxx negativní xxxxxxxxx roztěr o xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3. Roztěry xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx nad plamenem, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx buď nilskou xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx x provede xx mikroskopické pozorování xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx modří:

a) Xxx xxxxxxx se xxxxxxxx 1 % xxxxxx xxxxxxxx nilské xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx teplotě 55 °X.

x) Odstraní xx barvící roztok. Xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx se xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při pokojové xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Zkoumá se xxxxxxxx xxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx při 450 xx pod xxxxxxxx xxxx xxxxx imersí xx xxxxxxxxx 600x xx 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo vodní xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx objeví xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx pozoruje x xxxxxxxxxxxxx normálním xxxxxx, zda xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx je xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Zakápnou se xxxxxxx xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X x 70% xxxxxxx x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

b) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a krátce xx opláchne xxxxx xxxxxxx vodou x xxxxxxxx a xxxxxx xx přebytečná xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx a xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Upozornění: Xylol xx zdraví xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní opatření x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Sklíčka xx xxxxxxxx 0,5% (w/v) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xxxxxx inkubovat xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x xxxxxxxx x digestoři.

e) Sklíčka xx opláchnou jemně xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx, odsaje xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx x přiloží xx krycí xxxxxxx.

x) Xxxxxx se obarvený xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx imersí x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PHB xxxxxxx x xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx buněk.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační testy

Aglutinace xxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x extraktech x xxxxxx s xxxxxxxx xx nejlépe xxxxxxxxxxxxx xxxxxx validovaných xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx obarvenými xxxxxxxxxx, např. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxxxx dostupného vybavení (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx podle instrukcí xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxxxxx slizu (xxxxxxxxx 5 µl každé xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx sklíčka.

b) Xxxxxxxx xx pozitivní x negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx suspenzí xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x heterologního xxxxx.

x) Pozoruje xx, xxx se x xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxxxx míchání po xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx půdu

Poznámka:

Než xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx test x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx detekce 10³ až 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půda, např. XXXX (ve znění Xxxxxxxxxxx et al., 1996; xxx dodatek 2).

Rozlišení X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx vyžaduje velkou xxxxxxxxx. Dále, xxxxxxx X. solanacearum xxxxx xxx atypickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Petriho misky xxxx xxxxxxxxx nebo xxxx xxxxxx přítomny xxxxxxxxxxxxxx bakterie. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx pomocí xxxxxx testu.

Pří xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx citlivost xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx vysoká. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx x glycerolu xxx teplotě xx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx xxxxx kontaminace xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půdy xx xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x rutinnímu xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx patogenu. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se testuje xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx xx xxxxxx s xxxxx zajistit, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 28 °C. Xx 48 hodinách se xxxxxxxxxxx xxxxxx stav x xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na živné xxxx XXXX jsou xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xx 3 xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx zbarvení xx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx na xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx být xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx jen částečně xxxxxxx, x proto xxxxxxx xxxxxxxxxxxx od xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx nebo očkují xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonie (viz dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, bez xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx nebo xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx -68 až -86 °X nebo xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) x test patogenity (xxx xxxxx 6.3).

Interpretace xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx selektivní xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 xxxxx nejsou xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx žádné xxxxxxxxx xxxxxxx typické xxx X. xxxxxxxxxxxx , xx předpokladu, xx nedošlo x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx validované xxxxxx pro xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx bujón Xxxxxxxx (viz dodatek 2).

Tento xxxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxx x zvýšení xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx i xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx však xxxx xxx neúspěšné z xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx často xxxxxxxx xxxx obohaceny. X tohoto xxxxxx xxxx být izolace X. xxxxxxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx toho, protože xxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx test XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx místo xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx PCR xx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx do 10 xx xxxxxxxxxxx bujónu (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx připraví xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX může xxx xxxxxx xxxxx xxxxx extraktu ze xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx při xxxxxxx 27 xx 30 °X v xxxxxxx xxxx statické xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx umožní xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx zahájením testů XXXXX nebo XXX xx obsah dobře xxxxxxxx.

4. X obohaceným xxxxxxx se zachází xxxx způsobem xxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx inhibice xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxx docílit xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx odstřeďováním xxxx xxxxxx xxxxxxx zvyšování xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Test xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx IF xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x xxxxxxxx IF xxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxx xxxx xxxxxxx, PCR xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx XX xxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx test x xx pozitivní, xx xxxxx provést xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx každou novou xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dojde x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xX nejméně 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x pracovních xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx být xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech ze xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx nutné, xxxx xxx úspěšně xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx teplotě - 68 xx - 86 °X v xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx ze xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx odstřeďováním při 7000 x a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx peletového pufru. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x homologickým xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X, a xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx zmrazením xxx xxxxxxx - 16 až 24 °X) by xx xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx díly xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k pozitivní x xxxxxxxxx kontrole, xxxxx xxx použít xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s více xxxxxx, xxxxx možno x 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Pro xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx průměr okénka 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 1/100 xx prvního okénka.

Následně xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx v řadě. Xxxxx xxxx může xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx obr. 1.

ii) Xxx xxxx pelety:

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Napipetuje xx xxxxxxxx standardní množství (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - u xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx v příslušném xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx pelety xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx vzorek, jak xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx kapičky xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 40 xx 45 °C. Bakteriální xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx buď xxxxxxxx (15 minut xxx xxxxxxx 60 °X), xxxxxxxx, 95 % etanolem xxxx xxxxx konkrétních xxxxxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x suchém xxxx xx nezbytně xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx test x odst. 5.1.i):

Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. První xxxxx xx xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 titru (X/2), xxxx (T) x xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x odst. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx přesnost.

Obrázek 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx podle odst. 6.1.5.1.xx) a 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici konkrétní xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

2. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx při pokojové xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx všech xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx ponořením xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) a xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx třeba xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx přenosu xxxxxxx, xxxxx by mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Testovací okénka xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se inkubují xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx po dobu 30 minut xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx se xxxxx konjugátu xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Opatrně xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Napipetuje xx 5-10 ul 0,1X xxxxxxxxxxx pufru s xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx tekutiny xx xxxxxxx okénka x přiloží xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx zvětšení 500x až 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx zkoumá xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní vzorek. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxxx protilátky xxxx xxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx barevnost xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. solanacearum x testovacích xxxxxxxx xxxxxxx. Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x pozitivním xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx ředění protilátky xxxxxx nebo lepší. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx se xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx z pupkové xxxxx bramboru a xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout doprovodné xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XX:

x) Při xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx odhadne průměrný xxxxx typických buněk x 1 mikroskopovém xxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx x xxxxxx, kde xx xxxxx typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx je xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx xx negativní. Další xxxxxxxxx není xxxxx.

6.1.6. Xxxxx PCR

Principy

Použije-li xx xxxx PCR jako xxxxxx screeningový test x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx proveden druhý xxxxxxxxxxxx xxxx, a xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx jako xxxxx screeningový test x je xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, je-li požadována xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x interní kontrolou.

Je xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření x xxxxxxxxx kontaminace vzorku xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx měl xxx prováděn zkušenými xxxxxxxxx x laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X negativními xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) by se xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x konečnými xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx by xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. solanacearum x xxxxxxxxxx výsledkem,

- kontroly xxxxx používaného xxx xxxxxxxx bakterií x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx kterých xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 B);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x virulentního xxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx XXX xxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků xx měly xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx se xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx provede týmž xxxxxxxx xxxx test xxxxxx.

X xxxxxxxxxx cílové XXX x komplexních xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x dispozici xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxx reakcí a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx optimalizována xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxx v dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

2. Přidá xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx termobloku xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx 95 °X xx 10 min.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 min. xx ledu.

4. Přidá xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) a xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5. Přidá xx 220 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °C xx xxxx 30 xxxxx.

6. Přidá se 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, pokud xxxxxx xxxxxxx být stejnoměrně xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µx chloroformu x xxxxxxxx, až xx viskozita sníží x xxxx se xxxxx homogenní.

8. Pro xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx mezifáze xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 g po xxxx 20 min. xxx xxxxxxx 4 °X.

9. Xxxxx xxxx xx xxxxxxx do xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx se 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx ledu xx xxxx 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx se xxx 15 000 x xx dobu 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx xx etanol x xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % etanolu (- 20 °C) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx při 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 minut při xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx se peleta x xxxxxxxx etanol.

14. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xx vzduchu xxxx v XXX xxxxxxx.

15. Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx UM x xxxxx se xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx - 20 °C až xx použití při XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xx xxxxxxx xxx xxxx PCR.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, např. Qiagen XXxxxx Plant Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, pokud by xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ patogenních xxxxx na 1 xx stejně efektivní.

6.1.6.2. XXX

1. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxx PCR xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Připraví xx xxxxxxxxxxxxx ředění vzorku xxxxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx zveřejněných xxxxxxxxx (dodatek 6). Pokud xxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxx multiplexní protokol XXX, který rovněž xxxxxxxx interní xxxxxxxx XXX.

3. Xx sterilních XXX mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µx XXX xxxxxx podle xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxx xxxxx XX xxxx xxx xxx, který xxx xxxxxx xx směsi XXX xxxxx vzorku.

5. XXX mikrozkumavky xx xxxxxx xx téhož xxxxxxxxxxxx, který byl xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

1. Xxxxxxxxx xx rozdělí xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxx amplifikované XXX x xxxxxxx xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Tris-acetát-EDTA (TAE) xxxxx (dodatek 6) při 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX xxxxxx, např. (ladder) 100 xx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx DNA xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x tímto xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx hledají xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx nálezů/případů xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx xxxxxxxxx teplotě x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Naštěpené xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x agarózovém xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů pod XX xxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx s xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x interními xxxxxxxxxxx primery specifickými xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx x (případně) vzoru, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx výsledku xxx xxxx získat xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx podezření xx inhibici XXX, xxxxxxxx je získán xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx, zatímco xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxx negativní xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx inhibici xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx z jednoho xxxx více xxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol, je xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX xxxx a je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx provedena xxxxxxx xxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, je x xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používají se xxxxxxxxx oligosondy specifické xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx R solanacearum xx xx xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx možno xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx použije xxxxxxxxx část extraktu xx vzorku, který xxx xxxxxxx testován xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) v 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx sklíčka x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx referenčního xxxxx X. solanacearum, xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak je xxxxxxx v dodatku 3 X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx oligosond xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, xxxxx se používá x xxxxx testu, xx xxxxxx v dodatku 3 xxxx A.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx stejným způsobem xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxxxx et al. (1998).

1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 7).

2. Napipetuje xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu do Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xx xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxx xx 200 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx xxxxxx. Protřepe xx x inkubuje 1 xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx xxx 7&xxxx;000 g, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx se xxxxxx v 75 µ10,01X PB (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx ukazuje obrázek 7.1, přičemž xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 s použitím 10 µl (x 0,01 X PB). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Rozmístění xx sklíčku FISH

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x fixují xx xxx plamenem.

V xxxx xxxx xx možné xxxxxx přerušit a xxxxxxxxxx x hybridizaci xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x v xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Hybridizace

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx xx vzduchem x xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se vlhká xxxxxxxxx xxxxxx přikrytím xxx vzduchotěsného boxu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nasáklým xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx box x xxxxxxxxxxxx peci xxx teplotě 45 °X xx dobu xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) na 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; viz xxx. 7.1) na xxxxxx sklíčku, přičemž xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx (24 x 24 mm) xx xxxxx a poslední 4 xxxxxx, x xx xxx, aby xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Sklíčka se xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx v troubě xxx xxxxxxx 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx se 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x vody x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 l 1x hybmix (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx x molekulární xxxxxxxx) a 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 xx vody x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx inkubovat xx xxxxx xxxxx o xxxxxxx 45 °C.

6. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx držáku sklíček.

7. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx s 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx sklíček xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 hybmix x nechá xx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xx XXX (xxxx. Milli X xxxxx) a xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Odstraní xx xxxxxxxxxx xxxxxxx lehkým xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Vectashield, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo xxxxxxx) xx xxxxxxx okénka x celé xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 mm).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Xxxxxxx xx ihned xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. S xxxxxxx vhodným pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx fluorescenčně xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Buňky musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (odst. 6.1.7) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx odchylné. Xxxxxxxxxx xx okénka xxxxxx xxxxx průměry x xxxxxxx úhlech a xxxxx xxxxxx. U xxxxxx, kde xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, se xxxxxxxx nejméně 40 xxxx mikroskopu.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx x okénkách xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx lepší xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX s xxxxx xxxx několik xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx u pletiv x xxxxxxxxxxxx hlíz x pelet xx xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxx x výskytu xxxxxxxx fluorescenčních xxxxx xx pozadí x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx křížové xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, x xxxx xxxxxx xxxx častěji než x xxxxx XX.

5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx při xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx zeleně fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií typickou xxx R. solanacearum x xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických buněk x 1 mikroskopovém xxxx a xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxx.

xx) Výsledek XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, jestliže xxxx tyto xxxxxxx xxxxx červeně fluoreskující xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolách.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx použít xxxxx jako xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx DAS XXXXX je xxxxxxxxx x použití monoklonálních xxxxxxxxxx povinné. Xxxxxxxxx xxxxxx před použitím xxxxx ELISA xxxx xxxxxx xxxxxxxxx testu, xxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxx titru pro xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Titr je xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx kterém xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx druhotných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, které xx blízké nebo xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx formulace.

Určí xx xxxx protilátek pro xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx bez xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx alikvótní xxxxxx xxxxxxxxxx extraktů, xxxxx xxxx předtím otestovány xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 ml xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4X56 = PD 2762 = CFBP 3857, viz dodatek 2 X x X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx každé destičce xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XXX R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx kontrolní vzorky xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx dobře xxxxxxxx xx vzorků x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx tento test, xxxx xxxxxxx v dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorku(ů).

Validované xxxx xxx protokoly XXXXX.

x) Nepřímý test XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx xx xx., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx vzorkového xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X xx 4 xxxxxx ve xxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxx může x xxxxxxxxx případech xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx stejné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pufru (dodatek 4) a xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx xxxxx jamky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx teplotě 4 °X.

4) Extrakty xx xxxxxx z xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx PBS-Tween (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X validovaných komerčních xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx titr).

6) Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Roztok xxxxxxxxxx xx vylije x xxxxx a jamky xx vymyjí jako xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx vhodné xxxxxx xxxxxxxxx alkalické xxxxxxxxx v blokačním xxxxx. Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 hodinu při xxxxxxx 37 °C.

9) Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxx x xxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µx substrátového xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) do xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx x temnu xxx pokojové teplotě x odečítá xx xxxxxxxxxx při 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x uhličitanovém xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx do každé xxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 hodin xxxx 4 ° X xx xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µl xxxxxxxx xx vzorku xx xxxxxxx dvou jamek. Xxxxxxx xx rovněž xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx jamek na xxxxx xxxxxxxx. Nechá xx inkubovat 16 xxxxx xxx teplotě 4 °X.

3) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx x XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx albuminu (XXX), xxxxx se 190 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxx xxxx 2 hodiny xxx teplotě 37 °X.

5) Xxxxx se xxxxxxx dobře vypláchnou xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx konjugovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v XXX. Přidá xx 190 µx do xxxxx xxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Absorbance xxx 405 xx xx odečítá x xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXXX

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hustoty (XX) x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx hodnoty XX xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx jsou větší xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx substrátem) x xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorkových xxxxxxxx.

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx průměrné xxxxxxx XX x xxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x negativním extraktu xxxxxxxxxxx vzorku, xxxxx xxxxxxx XX ve xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nespecifickému xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou by xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx xx extraktu xx vzorku, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxx xxxx také xxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 až - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx se 10 testovacích rostlin xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx citlivostí podle xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx pravých xxxxx x každého xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx xx xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), ale xxx xxxxxxxx ve xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx třetího xxxxxxx listu. Příznaky x xxxxx jsou xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxx. Xxxxx možno, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx hned xxx děložními xxxxx xxxxxx stříkačky x xxxxxxxx jehlou (ne xxxx xxx 23G). Xxxxxx xx rozdělí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx dvěma xxxxx a xxxxxxx xx xxxxx přibližně 5-10 µx suspendované xxxxxx xx stonek xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se udělá xxxxxx xxx xxx 1 xx xxxxxx x hluboký xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx se xxxxx v xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x injekční xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxxx xx xxxxxxxxx x negativní kontrolní xxxxxxxx od ostatních xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v xxxxxxxxxxx zařízení 4 xxxxx při xxxxxxx 25 - 30 °X x vysoké xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zavlažováním, xxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxx nedostatku xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx kontaminaci, musí xxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Musejí-li xxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxx xx dobu xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, prohlížení x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vegetační xxxxxxx xxx hmyzích xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se příznaky xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx krnění xxxxxxx.

6.1.9.5. X infikovaných xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx se podezřelé xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Jestliže xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 xx z xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx se všechny xxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (bod 6.2.).

Interpretace xxxxxxxx biotestu

Platné xxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní kontrolní xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, bakterie xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxxx znovu xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže rostliny xxxxxx xxxxxxxxxx bakteriemi X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx organismus zjištěn x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest je xxxxxxxxx, xxxxxxxx testovací xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. solanacearum.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrnou xx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx chybí x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Stead (1987), Xxxxxxx et xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu -

Inkluze XXX +

Oxidačně xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx test podle Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx citrátů +

Růst xxx 40 °C -

Xxxx v 1% XxXx +

Růst x 2% NaCl -

Arginin-dihydrolázová xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx želatiny -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx v xxxxx IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx řada xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx se XX metoda (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx IF je xxxxxxxxx, xxxxxxxx titr XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kontroly.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx provádění xxxxx 2 identifikačních xxxxx se nepoužívá xxxxx této xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx se xxxx XXXXX se xxxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx hodnota xxxx výsledku xxxxxxx x této xxxxxxx xx xxxxxxx poloviční x porovnání s xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Testy PCR

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x ohřívacím xxxxx nebo xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °C 4 xxxxxx. Xxxxxx mohou xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X do dalšího xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx PCR x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (např. Seal xx xx. (1993); Xxxxxxx a Xxxxx (2000); Pastrik xx xx. (2002); Boudazin xx xx. (1999); Xxxxx et xx. (1997), Xxxxxx et xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. solanacearum xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx stejnou mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx FISH

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na 1 xx x XX.

6.2.5.2. Použije se xxxxxx XXXX (6.1.7) x nejméně 2 xxxxxxxxxxxx specifickými xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x kultury x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx se kultura xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx teplotě 28 ^xX.

6.2.6.2. Použijte xx xxxxxx XXX (Janse, 1991; Stead, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxx xxxx profil xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselin: 14:0 3OH, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2OH x xxxxxxx 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx každý xxxx případ xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx jedné x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx případně xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (viz dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx se schopností xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx disacharidů x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx et xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v dodatku 2. Xxxx lze xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx půdy x čistou kulturou X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx sterilní xxxxxxxx x 96 jamkami (200 µl xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx od xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x znamená xxxxxxxxx xxxxxxxx testu.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx fenotypů xxxxxxx 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Genomická xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx délkového xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů XXXX (Cook et xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx PCR s xxxxxxxx primerů XXX, XXX x XXXX (Xxxxx xx al., 1995; Smith et xx., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Van xxx Xxxx et xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx al, 2002; viz dodatek 6) xxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X a 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Xxxx xx xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X rDNA (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x k xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur identifikovaných xxxx X. solanacearum xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Připraví xx inokulum o xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kmen xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 xx 10 náchylných xxxxxxx rajčete nebo xxxxx xx fázi 3 pravých xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 xxxxx při teplotě 25-28 °C x xxxxxx relativní vzdušné xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebo vyprahlosti xxxx. U xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx mělo nastat xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx R. solanacearum.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx izolace x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xx xxxxxx asi 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xx provede xxxxxxxxxx roztěrem xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Xx xxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xx vyhodnotí xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (NA)

Živný xxxx (Xxxxx) 23,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky a xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (monohydrát) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Difco) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují xxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Difco) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx při teplotě 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 g

Bacto-Pepton (Xxxxx) 10,0 g

Dextróza 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °X x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx do xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 mg na xxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Englebrecht 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx půda

Casamino kyseliny (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 g

Glycerol 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Difco) (xxx pozn. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx a sterilují x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx konečná xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx violeť (Sigma) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600 000 X (xxxxxxxxx 100 mg)/l

Bacitracin (Xxxxx B-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Signa X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 mg)/l

2,3,5-trifenyltetrazolium xxxxxxx (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx výše uvedených xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Bacto-Agar (Difco) xxxx xxx použit Xxxxx Xxxx #1. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx růst X. xxxxxxxxxxxx pomalejší, xxx xxxx xx také xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x 1-2 xxx déle x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x rozptýlenější xxx xxx použití Bacto-Agaru.

3. Xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bez xxxxxxxxx růstu

Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx uchovávají x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °C x xxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx xx xxxx xxx xxxx použitím xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Nutno xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx živné půdy xx měla xxx xxxxxxxxx kontrole kvality xxxxx půdy roztěrem xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) a pozorováním, xxx xx xx 2 xx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Validované xxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx xx al., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, xxx xxxxxxx xx Xxxxx-Xxxx a 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 g

K₂HPO₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx x xxxxxxx xx xx 50 °X. Xxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx roztok xxxx xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

A. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx se doporučují xxxx standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' k xxxxxxxxx xxxxxxxx (tabulka 1) nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx dostupné a xxx je xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (NCPPB), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (PD), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Francouzská sbírka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx rostlin (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX R. solanacearum

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx kultur.

Tabulka 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx bakterií x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

x) Komerční standardizovaný xxxxxxxxx materiál

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx xxxx bramboru x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX xxxxx. Xxxxxxx životaschopnost xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx izolace x testech xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx se 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xx SMSA xxxxx xxxx a xxxxxxxxxx xx x 10 xX fosfátovém xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx hustota xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx se jí xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx rovnající xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxx konců 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x bílou xxxxxxx, o xxxxx xx ví, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx výše uvedeným xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta v 10 xx. Připraví xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µx resuspendované xxxxxx. Přenese xx 100 µl xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx se. Provede xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx části z 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Uskladní xx xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x množství R. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX a XXXX testy xx xxxxxxx test patogenity xxxxxxxxxxx a negativních xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx rozborech XX, XXXX a XXX musí xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x nejméně x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx x negativních kontrol.

Dodatek 4

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx dobu až xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx z rostlinných xxxxx homogenizací nebo xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (bezvodý) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x sterilizuje x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx být následující xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po dobu 15 xxx.

2. Pufry xxx XX xxxx

Xxxx xxx IF (10 xX fosfátový xxxx xx fyziologickém xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °C xx dobu 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx sklíček.

Přidá xx 0,1 % Tween 20 x xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx pufr se xxxxxxx jako xxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xx IF xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 g

Glycerol 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx roztoky xxxx komerčně dostupné, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Pufry xxx xxxxx nepřímého testu XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, pH 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 g

NaH XX3 11,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 g

Na₂HPO₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (musí xxx xxxxxxx připraven).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 ml

Sušené xxxxx 0,5 g

Destilovaná xxxx xxxxxxx xx 100 ml

3.5. Xxxxxx xxx substrát alkalické xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxxx HCl xx xxxxxx pH xx 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 l xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx xxx 5 xx xxxxxxxx fosfatázového xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 ml xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx účely xxxxx DASI XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 x

XxX CO₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1 000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 g

Na₂HPO₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2H₂O 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1 000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x xxxxxxx xx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx HCl.

Dodatek 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx mikroskopického xxxxxxx (C).

C = x x S/s,

kde X = plocha xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx s xxxx xxxxxx x

x - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = koeficient pole (x xxxxxxx 8 - 24 podle xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X =C x 1&xxxx;000/x x F,

kde x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx a

F = xxxxxxxxx faktor xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx testování xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištěni xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. solanacearum xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX GCC-3'

Reverzní primer X-2: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX AGT-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede se xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx xxx 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 20 sekund xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 sekund xxx 72 °C (syntéza xxxxx)

1 cyklus: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx ii), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Ava XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx a Maisse (2000)

2.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx xxx acg xxx xxx xxx x -3'

Xxxxxxxx primer Xx-2: 5'-ggg xxx xxx xxx xxx xxx ttg ca -3'

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx DNA = 553 bp.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx UPW	16,025 μx
10x pufr XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx polymerasa (5X/μx) (1)	0,1 μl	0,5 U
Množství xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Elmer (XxxxxXxx) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Gibco Taq Xxxxxxxxxx. Perkin Elmer XxxxxXxx x pufr xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 xxxxxx při 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx použití termocykleru XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx bude xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx X xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxx 457 xx x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx XX-1-X: 5'-ACT XXX XXX XXX XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx RS-1-R: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx NS-5-F: 5'-XXX XXX AAG XXX TTG ACG XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX TCA XXX XXX XXX TAT XXX CTC-3'

Očekávaná velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 bp (sada xxxxxxx RS). Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18S xXXX = 310 xx (xxxx primerů XX).

3.2. Xxxxxxx směs XXX

3.3. Reakční xxxxxxxx PCR

Provede se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (konečná xxxxxxx)

xx) xxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x iv).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x DNA X. solanacearum vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx 1 xxxx Isoschizomere (např. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxx 65 °C.

4. Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx biovar X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-ACT XXX XXX XXX GAG XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX GGC XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX XXX XXX AGA XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Xxxxxxx směs XXX

x) Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx biovar 1/2

x) Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx Biovar 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický proces xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx 1/2- a xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (hybridizace xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) ponechá xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

4.4. Restrikční enzymová xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X nebo Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Xx-1-X x Xx-3-X xxxxxx xxxxx restrikční xxxxx.

5. Xxxxxxxx nanášecího xxxxx

5.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 ml

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (sodná xxx) 3,72 g

Destilovaná xxxx 1,001

Před xxxxxxxx xx xxxxx na 1 X.

Xxxx komerčně xxxxxxxx (např. xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Validovaná xxxxxxx pro XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx specifická xxx X. solanacearum XXx-1-XX3: 5'-ggc agg xxx caa gct xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx eubakteriální xxxxx EUB-338-FITC: 5'-xxx xxx xxx cgt xxx xxx-3'

2. Fixační xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX A NEVDECHNOUT. XXXXXXXXXX SE PRACOVAT X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 ml xxxxxxxxxxx xxxxx vody (xxxx. Ultra xxxx xxxxx = (UPW)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °C a xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx po xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx míchadlem.

ii) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx fosfátového xxxxx 0,1 X (XX; pH 7,0) x 5 kapek XXx 1X. Zkontroluje xx xX indikačním xxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx NaOH. [XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH S XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX MĚŘIČ XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx se xxxxxx xxxx membránový xxxxx 0,22 µm x skladuje xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Hybmix

NaCI 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

EDTA (xxxxxxxxxxxxx xxxx filtr x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx xx až x, xxxxx potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (SDS) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx OLI2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x tabulce 1. Pro xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 xxxxx vzorky) xx třeba 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX JE XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX A XXXXXX POTŘEBNÁ BEZPEČNOSTNÍ XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Doporučená xxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxxxxx směsi

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx oligosondy xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxx teplotě -20 °X. Během xxxxxxx xx chrání xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování lilku x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx rajčete (Lycopersicon xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx výsevního xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx děložními xxxxxx (10 až 14 xxx) se xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku x xxxxxxx xx xx xxxx pěstovat xx xxxxxxxx za následujících xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx nebo přirozená xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 14 až 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx xxx D.A. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx whole cells xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Directive 98/57/XX of 20 Xxxx 1998 on xxx control xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofthe European Xxxxxxxxxxx L235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., A.C. Xx Xxxx, K. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxx xxxxxxxx. European Xxxxxxx of Plant Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Lopez, M.M. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx x Specific Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Genetic xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: detection of xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx tkat specify xxxxxxxxx xxx the xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, J.G., Hennessy, X., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Sensitivity xx xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx iru xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tn: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Centre xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Hayward, A.C., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Xxxxx, L. 1990. Xxxxxxxxx in xxxxxxx xxxxxxxxxx xx biovars xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Ito, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, M. Kaleya-iwaki, X. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx x semi-selective xxxxxx xxx a XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) A xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxx data xx xxx xxxxxxxxxxx xxx specificity. Bulletin XXXX/XXXX Bulletin 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Kelman, A. 1954. Xxx relationship xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx to xxxxxx xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx medium. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, R.A. xxx Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx for xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx scientific Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 pp.

16. Xxxxx, X.X., Gorris, M.T., Xxxx, X., Cubero, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, serological xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. In: X.X. Xxxxx et xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Fulbright, X.X., Stephens, C.T. xxx De Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xanthomonas xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx with xxxxxxxxxx sequences and XXX. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, F.J., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Differentiation xx xxxxxxx xxxxxxxxx by xxx-XXX fingerprinting xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, N., X. Xxxxxx, X. Holloway, X.-X Xxxx, T.-H Xx, X. Maghirang, X. Fegan, A.C. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxxx. 1997. A novel xxxxxx xxx development xx xxxxxxx and xxxxxx-xxxxxxxx DNA xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Rurkholderia xxxxxxxxxxxx (fornierly Pseudomonas xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, K.H. and Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx by polymerase xxxx reaction. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Pukall, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16S-23S xxxxxxxxx intergenic spacer xxxxxx xxxx internal xxxxxxxx xxxxxxx. European Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, A., Xxxxx, X., Elphinstone, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx xxxxx of bacterial xxxx. Food xxx Xxxxxxxxxxxx Immunology 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Xxxx, S.E., X.X. Jackson, J.P.W. Xxxxx, and X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Pseudomonas solanacearum, Xxxxxxxxxxx sy xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx and Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx partial 16S xXXX xxxxxxxxxx: construction xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx sensitive xxxxxxxxx xx polymerase xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, J.J., Offord, X.X., Holderness, X. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Burkholderia solanacearum (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx solanacearum) xxxx 3 in Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Pseudomonas xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Hayward, X.X., Xxx, XX, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx relationships xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx the blood xxxxxxx bacterium of xxxxxx based on 16X rRNA xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Xxxx, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Smith, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Van Xxxxxxxxx, X.X.X., Saddler, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Race 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx XXXX, RC-PFGE xxx rep-PCR. Xx: Xxxxx, P., Allen, X. xxx Elphinstone, X. (eds.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Molecular xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, S.A., Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxx, X., Stead, X.X. xxx Boonham, X. 1999. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxx quantitative xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Applied and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Wullings, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Janse and X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx rot xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx hybridization xxxx 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.