Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx zemědělství xxxxxxx xxxxx §88 xxxx. 2 xxxxxx č. 326/2004 Sb., x xxxxxxxxxxxxxxxx péči x x změně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx vyhláška xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx České xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxx xx al. subsp. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Davis xx xx., xxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx bramboru, x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx, xxx xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx výskytu se xxxxxxxxx xxxxxx šíření x prováděla xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Pojmy

Pro xxxxx xxxx xxxxxxxx xx rozumí:

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis (Xxxxx) Xxxxx et xx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.,

x) původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. původce xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, x ostatní rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx potvrzena xxxxxxx xxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx podmínkách,

2. xxxxxxx hnědé xxxxxxx - brambor (Solanum xxxxxxxxx L.) s xxxxxxxx semen bramboru, xxxxx xxxxx (Solanum xxxxxxxxxxxx L.) kromě xxxxx x xxxxx, xxxxx potměchuť (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx hnědé hniloby x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx zaměřený xx xxxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx území xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxx x původu xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx, k xxxxxx xxxxxxx xxxxxx infekce x x xxxxxx xxxxxx území, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, skladu xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxxxxx, v xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx - výskyt xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

i) karanténním xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 odst. 1 zákona x xxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx hniloby,

j) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx vymezené Ústavem, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - partie hostitelské xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx množením z xxxxx původní xxxxxx; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx považují xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx vegetativním xxxxxxxx x jediné xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx partii xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx klonově xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x ní xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx s §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výskytu xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Detekčnímu průzkumu xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx

x) rozmnožovací xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x Xxxxx republiky x xxxxxxx podle §8 odst. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze členských xxxxx Evropské xxxx (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) namátkově vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx x z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxxxxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na výskyt xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx podezřelé x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby xxx rostlinolékařské xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx třetích xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x vývozu xx xxxxxxx zemí.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx výskyt xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx pěstování,

b) xxxxx xxxxxx používané x závlaze hostitelských xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxxxxxxxx podniků, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx podniků.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx pěstební substrát x xxxxxxx produkce, xxxxx tyto partie xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx

x) laboratorním testováním xxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx v případech xxxxxxxxx v xxxxxxxx 2 písm. x) x b), xxxxxxxx 3 x x xxxxxxxx 4 písm. x) z xxxxxxx xxxx ze skládek, x xxxxxxx uvedeném x odstavci 4 xxxx. a) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin bramboru x xxxx dužninou xxxx, x xxxxxxxxx xxxx xx skládkách, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, x případech xxxxxxxxx x odstavci 2 xxxx. x) x x),

x) prohlídkou xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx napadení xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx 5 xxxx. x) x x xxxxxxxx 6.

(8) Způsob xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 7, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx předávání xxxxxxxxx o xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x souladu x §10 xxxx. 1 zákona Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé hniloby, x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxxxxx xx aktuální xxxxxxx ve výskytu xxxxx na xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx kontrolního x xxxxxxxxxx ústavu xxxxxxxxxxxx (xxxx jen "Věstník"). Xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxx zjištění a xxxxxx původce kroužkovitosti x původce hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 nebo xxxxxxxxxx Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona x xxxxxxxxxxx xx Věstníku.

(9) X průzkumu prováděnému xxxxx odstavců 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx vzorky xxxxxx xxxxxxxx anebo xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx činnosti Xxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx dohledu xxxx xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Ústav xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx vlastní příslušnou xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxx partii xxxxxx xx trh xxxx xx pěstuje xxxx xxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 předkládá Xxxxx x souladu x §10 xxxx. 5 zákona jednou xxxxx x rozsahu xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xx účelem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx nepřítomnosti xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxx. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxx provedených xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx, a xx x případě xxxxxxxx x rozmnožovacím xxxxxxxxx bramboru,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx výsadbu xx pozemcích xxxxxxxxx, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx a výsledcích xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xx v xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vizuálních xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxx původce hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xxxxx přílohy č. 1 oddílu X xxxxx 1 x oddílu XX, xxxx

x) pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx nebo pod xxxxx dohledem xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx Ústav x xxxxx odborného xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 zákona x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx účelem zjištění xxxxxx podezřelého xxxxxxx x x xxxxxxx x §11 odst. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x výjimkou xxxx, které xxxx xxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, a

b) xxxxxx xxxxxx opatření založená xx stupni odhadovaného xxxxxx dalšího možného xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce hnědé xxxxxxx x cílem xxxxxx šíření předejít xxxxxx xxxxxx přesunu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx přesunem xxxxx ostatních partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxxxx i mimo xxxx pozemky a xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx vod xxxxxxx x jiného xxxxxxxxx xxxxx nebo x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Xxxxx xxxxxxxxxx úřední rostlinolékařské xxxxxx xxxxxxxxxxx členského xxxxx podrobnosti týkající xx xxxxxx xxxxxxxxx x bude s xxxxx státem xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx o xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx hniloby, xxxxx xxxx xxx xxxxx x České xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx republiku xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Česká xxxxxxxxx, xxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx při potvrzení xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, Xxxxx x souladu x §76 xxxx. 2 zákona a x přihlédnutím x xxxxxxxxx vědeckým xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxx, uvádění xx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) označí xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx partii, x xxxxxxxx, xxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx části x xxxxxxx jiné objekty xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx přišly do xxxxx x uvedeným xxxxxxxxxx materiálem, ze xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, a místo xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx xx xxxxx úplná xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovány a xxxxx xxx vzorek xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx zaměřené xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x prvotního xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx kontaktu, a xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx pěstitelské vazby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx objektem, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a),

c) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx potvrzení výskytu xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx zpracování x xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx při xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxxxxx povrchovou xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx brambor, Xxxxx

x) xxxxxxx úřední laboratorní xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x čeledi lilkovitých xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1 xx vhodných xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx vodu, x xxx byly odebírány xxxxxx, xx zamořenou,

c) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx písmene x) x xxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx a xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx neprodleně xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Komisi x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxxx odstavce 2 písm. b), x xxxxx podrobnosti x vymezení karanténního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx členský xxxx xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby v xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx odstavce 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx způsobem x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx odstavců 1 x 2 xxxxxx xxxxxxxx předměty x xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx bezpečnostní xxxx.

(5) Ústav xxxxxxx xxxxxxx sdělením xx Xxxxxxxx zásady pro xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) a xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, vymezovaných xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxx 2 xxxx. c) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), x xxxxxx xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxx příbuzné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx x rozsahu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx míru xxxxxx xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Podle xxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxxx 1 Xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx zamoření x xxxx xxxxxx karanténní xxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), b) a x).

§7

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxx v xxxxxxx x §11 odst. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxx. 2 zákona:

a) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx zamořenou xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxx být xxxxxx x xxx xxxxxxxx Xxxxxx se x xx naloží způsobem xxxxxxxx x bodě 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx ověří, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, stanovené x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx zpracování xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. b) smí xxx použita xxx xxxxxxxx Xxxxxx způsobem xxxxxxxx x xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, xxxxx Ústav xxxxxx ověří, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x že xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx této xxxxxx, x xxxxx není xxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx testování xxxxxxx příbuzných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 označena xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, sklady xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx jiné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, označené xx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx označené xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxx §5 odst. 1 písm. x), xx xxx zničí xxxx podrobí xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 x xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx ani xx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), popřípadě xxxxx §5 xxxx. 2 písm. x), xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x bodě 4 přílohy č. 4 a x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx může xxxxxxx podle §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx opatření xxxxxxx x xxxxxxxx 1, xxxxx budou xxxx xxxxxxxx xxxxxxx odůvodněná, xxxxxxxxxx a xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x o xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x) uvnitř karanténního xxxxx x x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx ostatním členským xxxxxx x Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx dotčených xxxxxxxxx xxxx, registrovaných xxxxx §12 odst. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxx xxxxx §76 odst. 4 písm. x) xxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nařízená xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 po xxxxxx xxxxxxx x xx uplynutí xxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx je x xxxxxxx x §7 odst. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, šlechtitelským xxxx diagnostickým xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Ústav xxxxx §8 xxxx. 1 zákona, xxxxx xxx xxxxxxx narušena xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx ani xxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxx.

§8

Testování xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx materiál²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx v rámci xxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx x §3 xxxx. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx v příslušném xxxxxxxxxx roce podrobí

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, pokud xxx v posledním xxxxxxxxx sklizňovém xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru původem x Xxxxx republiky xxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ bramboru x předstupňů a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru x xxxxxxxxx potvrzené xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx souvislost, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ v xxxxxxxxx, x nichž xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx nebo předstupňů, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x následujícím xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx původce xxxxx hniloby nebyl x posledním uplynulém xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx nabývá xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx popisují xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x hlízách xxxxxxxx a rostlinách xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x rostlin xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku č. 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění karanténního xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx kontrolních xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x reprodukovatelné xxxxxxxx úrovní Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx také zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx označování x x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx je xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX nebo XXX/XXXX) xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxx xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx považován xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx důvodu je xxxxxxxxx IF xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx potvrzený xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití xxxxxxxxxxx diagramů

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxxxxx a x rostlinách xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro hlízy x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x x případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx příznaků xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX test (xxxxx 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (oddíl 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx není xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx. Saprofytické xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx médiu. Xxxxx xx xxxxxxxxxx používat xxxxxxxxxxxx i xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx MTNA (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx izolační xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx testů xxxxxxxxx x oddílu 9.

(7) Zkouška patogenity xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx každý xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx lze xxxxxx x xx xxxxx xxxxx, jestliže 200 xxxx není x xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace patogena xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.1.

(3) Pokud xxxx alespoň xxx xxxxx založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx test pozitivní, xx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx biologických principech. Xxxxx xx druhý xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX xx xxxx použije xxxxxxxxxxxx protilátka, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx přesnost (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx přímou xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX xxxxx xxxx XXX-88 média x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx 3-10 xxx po xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx patogena xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Pro úplné xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx bakterie, xxxxx jsou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx médiu x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx biotest (viz xxxxx 8).

(8) Biotest xx xxxxxxx k xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx bramborových xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx obohacení x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx XXXX nebo XXX-88 médiu xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx nebo biotesty xxxxx selhat z xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxx x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx vzorků.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Test xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx velikosti xxxxxx - xxx xxxxx 3.2.

(2) Metody xxxxxxxx x koncentrace patogena xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.

(3) Pokud xxxx xxxxxxx dva xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx xxxxx test negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx test xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx biologických principech. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Selektivní izolační xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 8.

(5) IF xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) PCR xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx izolační xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx x x xxxxxxx potřeby se xxxxxxx test xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx je podezření, xx se jedná x Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx bramboru

V xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx zřídkakdy x xxxxx xxx xx xx konci xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx skryté xxxx se zamění x příznaky jiných xxxxxx, stáří nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxx kontrole xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vadnutí jsou xxxxx odlišné xx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx okraje xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx často x xxxx infekci xxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx omezený. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxx xxxxx stonku xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx mezižeberní xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx stonky mohou xxxxxxxxxx xxxxxxx. Často xxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx rostliny xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx internetové stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx cévního xxxxxxx, zejména xxxxxx xxxxx. Prstenec xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx než xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx identifikovaným xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx a xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x cév xxxxxxx xxxxxxxx hmoty. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx zhnědnout x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx příznakům xxxxx hniloby xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx být xxxx xxxxxxxx omezeny na xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx se vyskytovat xxx blízko xxxxxxx xxxxx a mohou xx xxxxxxxx šířit xx xxxx xxxxxxxx. X postupem xxxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiv: xxxxxx xxxxxx xxxx se xxxx xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx povrchu xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxxx době xx x Evropě xxxxxxxx xxxxxxx případů, xxx xxxxxxx xxxx hnije x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx dochází x druhotnému xxxxxxxxx xx xxxxxxx vnitřních xxxxx x nekrózy. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky kroužkovitosti xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x atypické xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx jsou na xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx hlíz ve xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxxx lze vhodně xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxx xxxx pro xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx XXX test, pro xxxxxxxxxx xxxxx patogenní XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx oschnout xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx je obzvlášť xxxxxxxx v xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx xxxxxx zeminy x xxxxxxxx se xx xxxxxxxx XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx čistého x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx xxxxx či xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém konci xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx konické xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x pupkových konců xxxxxxx. Xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Po xxxxxxxx musí být xxxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxxxxx do 24 xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx při -20 °X xx dobu xxxxxxx dvou xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce zjištěny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, provede xx vizuální xxxxxxxxx xxxx hlízy xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Všechny xxxxxxxxx hlízy x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx korkovatět xx xxxx 2 xxx xxx pokojové xxxxxxx x uchovávají se x karanténě při xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx ukončení všech xxxxx. Všechny hlízy xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x pupkové xxxxx se shromáždí x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx xxxx uzavíratelné x/xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že xxxx xxxxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x obsahem xxxxxx). Nejlépe je xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x nádobě xxx xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx po xxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx maximálně 24 xxxxx. Schnutí a xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx může xxxxxx xxxxxxxx přítomnosti xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx.:

x) výkrojky se xxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) x třepají se x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °C xxxx po xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx se homogenizují x dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3), xxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx použití xxxxxxxx tloučku nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx mixéru xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí křížové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx extrakce. Xxx xxxxx vzorek xxxx být xxxxxxx xxxxxxx sterilizovaná xxxxx (xxxx) x xxxxxx. Xxxxx má být xxxxxx PCR xxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX na xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, doporučuje se xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx zkumavky xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx supernatant. Xxxxx je nadměrně xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100µm), xxxxx se omyje xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X x xxxxxxxx xx supernatant, xxxx xx xx rozvířila xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 3). Použije xx 500 µx xxx xxxx na Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, 500 µx pro Xxxxxxxxx solanacearurn x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx glycerol xx konečnou koncentraci 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, promíchá xx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°C (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 až -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx testování xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx nedoporučuje.

Pokud xx xxxxx transport xxxxxxxx, zajistí xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolami x vzorky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx odděleně, xxx xx předešlo kontaminaci. Xx xxxxx x xxx xxxxxxx xx XX testy x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx populace, xxxxx xx předmětem vyšetřování.)

3.2.1 Xxxxxx čistého xxxxxxxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx 1-2 xx ze xxxxxx xxxxxx každého xxxxxx xxxxx nad xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx krátce dezinfikují xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx zpracují xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx xx zalijí xxxxxxxxxxx množstvím (přibližně 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) části xx xxxxxxxx rozdrtí x xxxxxx maceračním xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxx se xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx maximálně 24 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 minut, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx lze ji xxxxxxxxx xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx podle xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx xx udržuje xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (týdny) xxxx při xxxxxxx -68 xx -86 °X (měsíce), pokud xx xxxxx další xxxxxxxxx.

4. lF xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx byla xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx práhů.

Použije-li xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx test IF xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx analýzy xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Pokud je xX xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, používá xx xxxx polyklonální xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx další xxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx méně xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx protilátky xxxxx xxxxxxx kmenu původce xxxxxxxxxxxxxx - ATCC33113 (XXXXX 2137) nebo XXXXX 2140. Doporučuje xx xxxxxxx xxxx xxx každou novou xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx stanoven xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dochází k xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx suspenze obsahující 105 až 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální protilátky xx měly xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Během testu xx xx xxxx xxxxxxxxxx používat x xxxxxxxxx xxxxxx (WD) x xxxxxxxxx titru xxxx xx titru. Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx (viz internetovou xxxxxxx http://forum.europa. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx proveden na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx při - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx není nutné, xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx plamenem (xxx 4.2).

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X) by xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx části vzorkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx okénky, xxxxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxx nejméně 6 mm.

Test kontrolního xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx škrobového xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x průměru 6 mm xx xxxxxx 15 µl - pro větší xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx okénka. Následně xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) resuspendované xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x každého roztoku xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Vysuší xx xxxxx při pokojové xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), xxx xxxxxxxx nebo xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx dalším xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx IF xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se xxxx dvojnásobných roztoků xxxxxxxxxx v IF xxxxx. V xxxxx xxxxx xx xxx xxx titr 1/2 (X/2), v xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (T/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx test x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx (XX) protilátky x XX xxxxx. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx oddílu 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Podložní sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko se xxxxxxx kompletně ředěním xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx konkrétní xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °C).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx podložních xxxxxxx a xxxx xx pečlivě opláchnou xxxxxx XX. Umyjí xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 minut x xxxxx IF Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x pufru XX. Xx třeba xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx vzájemnou kontaminaci, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost jemným xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xx xxxxxxx ředěním xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx použité protilátky.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

4.3.6. Kapky konjugátu xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx jako předtím (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7. Napipetuje xx 5-10 µx 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x glycerolem (dodatek 3) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx xx každého xxxxxx a xxxxxxx xxxxx sklíčko.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem s xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxxx při zvětšení 500x xx 1000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx s xxxxxxx xxxx xxxxx počtem xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx titru protilátky xxxx pracovním ředění. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx IF xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s charakteristickou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx slabou xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx sklíček) xx xxxxxxx sklíček.

4.4.3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x atypickou xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie s xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x úvahu xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx velikostí x morfologií v xxxxx nebo pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 mikroskopickém xxxx x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 4).

Výsledek IF xx pozitivní x xxxxxx, kde xx xxxxx typických buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx na potenciálně xxxxxxxxxx a je xxxxxxx další xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx než 5x10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx testování není xxxxx.

5. Xxxx FISH

PRINCIP

Když xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX test a xx xxxxxxxxx, musí xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx IF xxxx. Xxxx se XXXX xxxx provede xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx přidané xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byly xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx měl být xxxxx xxxxx proveden x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx s extraktem, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 nebo -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx byl předtím xxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 nebo XX 406) x 0,01 X xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x 3-5 xxxxx kultury (xxxxxxxx viz dodatek 2). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx do Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx peleta x 500 µl xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx xx xxxx xxx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX a 50 µx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °C xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje se xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx x 75 µx 0,01 X PB (xxx dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx se 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx obrázek 3, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x použitím 10 µl (v 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx množství 96 % etanolu. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, odstraní se xxxxxx odstředěním, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X XX x zamíchá se xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Rozmístění xx xxxxxxx FISH

5.1.6. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx vzduchu (nebo xxxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37 °C) x fixují se xxx plamenem.

V této xxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 xx lyzozymu (Xxxxx X-6876) x 10 ml pufru (100 mM Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx měl by xx pouze xxxxxx xxxxxxx x nechat xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx jednou, a xxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µl xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 xX Tris-HCl, 2 xX CaCl₂, xX 7,4) do xxxxx jamky x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx se xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 minuty. Xxxxxxx xx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °C xx dobu xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx xx 1 xxxxxxx x předinkubuje xx xx xxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx se umístí xx xxxxxx plotnu xxx teplotě 45 °X x xx xxxxxxx xx 4 xxxxxx xx xxxxxxx / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6. Každé xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx ně nevnikl xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x xxxx xxx xxxxxxx 55 °X x temnu.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 l xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 l 1x xxxxxxx (334 xx 3x hybmix x 666 xx XXX) a 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 ml 3x xxxxxx x 833 ml XXX). Xxxxx z nich xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 55 °C.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx držáku xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 minut x kádince x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 hybmix x nechá se xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx krycího xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx podobný) do xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Sklíčka xx prohlížejí ihned x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x pod xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx vhodným pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny gramnegativních xxxxx) xx vzorku xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx buněčná xxxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků. Xxxxx musí xxx xxxxx fluoreskující a xxxxx zbarveny. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx a xxxxx xxxxxx. U vzorků, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxx málo xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Hledají xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x morfologií charakteristickou xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat xxxx xxx xxxxx xxx x pozitivního kontrolního xxxxx. Buňky, které xxxxxx xxxxx zbarveny xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx x úvahu.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx podstatných pro xxxxxxxx XXXX testu. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx populace fluoreskujících xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx x XX xxxxx.

5.3.5. V xxxxx se xxxxx xxxxx fluoreskující buňky x xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Interpretace výsledku xxxxx FISH:

a) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 mikroskopickém xxxx a vypočítá xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují za xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx FISH xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx pro Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx PCR xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx proveden XX test. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx jako druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx diagnózy xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 xx přidaných xx xxxxxx extraktů, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem. Xxx xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používají se xxxxxxxxxx XXX činidla x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou DNA. XXX xxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx molekulární xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X negativními xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x přenosu XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- kontroly pufru xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx PCR.

Měly by xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, x xxxx byl xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx XXX testu xxxx XXX extrahovanou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx kontaminaci, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx prostředí xx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx by xxxx xxx pokud možno xxx xxxxxx. X xxxxxxx použití PCR xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Použijí se xxxx xxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx cílové XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jsou x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x koncentrující xxxxxxx XXX v xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 xX NaCl, 10 xX Tris-HCl [xX 8,0], 1 xX EDTA [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx.

2. Přidá se 100 µx xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxx xx do xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx o teplotě 95 °X xx xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxxxx xx ledu.

4. Xxxxx xx 80 µl xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 xx lyzozymu xx 1 ml x 10 xX Xxxx XXx, pH 8,0) x inkubuje xx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx se 220 µx Xxxx DNAR xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °C xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx B (Xxxxxxxxxx)x xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx poteče xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µx chloroformu x míchá se xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx a xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8. Odstřeďuje xx xx 15 000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X pro xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Přenese xx xxxxx xxxx do xxxxx mikrozkumavky.

10. Xxxxx xx 1 ml 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx xx promíchá třepáním x xxxxxxxx xx xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 x po xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x pelety etanol.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx převracením xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx při 4°C, xxxxxx xx xxxxxxx x odstraní etanol.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x XXX xxxxx xxx.

15. Xxxxxx xx resuspendujte x 100 µl xxxxxxxx xxxx (UPW) a xxxxx xxxx nejméně 20 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

16. Skladuje xx xxx xxxxxxx -20 °X až xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxx XXX se xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx se xxxxx xxxxxx, xxxxx xx se prokázalo, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 PCR

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x kontroly pro XXX podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx desetinný xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 ve sterilní xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR je xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx interní xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Do xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µl XXX reakce.

6.2.4. Zahrne xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx XXX x přidá xx xxxxxx sterilní xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx směsi XXX namísto xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx při počátečním xxxxxxxxx a xxxxxxx xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx produktu XXX

6.3.1. Xxxxxxx se amplikony XXX elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx. Nanese xx nejméně 12 µx amplifikované xxxxxxx xxxxx DNA x xxxxxxx vzorku smíchané x 3 µl xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Trisacetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 V xx xx. Xxxxxxx xx xxxxxx marker DNA, xxxx. 100 bp xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx se xxxxxxx XXX barvením x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 xx xx x) xx xxxx 30-45 xxxxx, xx xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx zacházení x xxxxx mutagenem.

6.3.3. X obarveném a XX (krátké xxxxxx xxxxx, např. 302 xx) prosvíceném xxxx xx hledají xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX o xxxxxxxxx velikosti x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované XXX xxxxxxxx při optimální xxxxxxx x xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Rozdělí xx naštěpené xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x agarózovém xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx ethidiumbromidem a xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX test xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx typický xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěn v xxxxx vzorku, ale xxx xxxxxxx xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x daným xxxxxxx).

XXX xxxx xx pozitivní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx x xxxxx (pokud xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx žádným x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x druhou sadou XXX xxxxxxx (oddíl 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx získán z xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxx, xxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx s Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx protokolech XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx nebyl získán xxxxx z xxxx xxxxxxxxx.

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx amplikon xxxxxx x xxxxx xxxx xxxx negativních xxxxxxx.

7. Xxxx na xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie na 1 xx xxxxxxx x extraktům xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x negativním (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx zjištění xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného extraktu xx vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při teplotě -68 až -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx poskytují xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obohacující médium xxx růst Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx nebezpečí falešně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx podmínky.

Podrobnosti x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx mezi xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Používají xx xxxxx rostliny xx xxxx 2-3 listů xx úplného rozvinutí xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxx se zajistilo xxxxx xxxxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx x průměru 10 xx je vhodný xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x rozměrech 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx x 15 cm délky). Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx a xxxx xxxxxx xxxxxxx sterilní xxxxxxxxx fólie. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx místě xxxxxxx xxxxxx xxxxx bloku.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx děložními xxxxxx a xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx mírně úhlopříčný xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 cm x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx tři xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx přidrží otevřený xxxxxx špičky čepele xxxxxxxx x nanese xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxx linky xxxx xxxxxx malířským štětečkem xxxxxxxxx xx pelety. Xxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxxxx rostliny lilku.

7.2.4. Xxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx II

7.3.1. Xx xxxxxx rostliny xxxxxx dvěma xxxxx xx napipetuje xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Pomocí xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx sešikmený zářez (x xxxx přibližně 5°), dlouhý 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx x xxxxx xx xxxxx v místě xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx stříkačky.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx inokulací nezalévají.

7.4.2 Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx těsně xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx injekční stříkačky x podkožní xxxxxx (xx méně než 23 X). Xxxxxx xx rozdělí mezi xxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xx to možné x pletivem x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx sterilním 0,05 M PBS xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 nebo 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx rostliny xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (dodatek 8) xx xxxx xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Rostliny xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a vysoké xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxx při xxxxxxxxx xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °C. Xxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skleníku nebo xxxxxxx komoře xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx xx zajistí xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxxxx s xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx blízko xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xx věnuje xxxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, aby xxxxxxxx i růstové xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx veškerým xxxxxx, xxxxxxx xx mohl xxxxxxxx bakterie x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx po xxxx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx ochablost (xxxxxx xxxxxxx). Zvadlé xxxxxxx xxxx zprvu být xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx místa xxxx žilnatinou xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx pletiva xxxxxx xxxxx jasně xxxxx xxxxx. Rostliny xxxx neodumírají; xxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxx na xxxxxxx. Rostliny xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Mladé xxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx mnohem xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx koncentracím xxxxxxx kroužkovitosti než xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx nezbytné xxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxx xxx listů x xxxx krátce xxxx xx. Vadnutí mohou xxxx způsobovat xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx x pletiv xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. carotovora a X. carotovora subsp. xxxxxxxxxxx, Phoma exigua xxx. xxxxxxx, jakož x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx vadnou xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení: xxxxx xxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx spp

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx rostlin. Xxxxxx listů x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx vydezinfikuje otřením 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx test xX xxxx XXX xx xxxxx x xxxxx x xxxxxxx xx xx vhodném (xxxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx 8). Může xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují a xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, zejména xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, se xxxx xxxx, že Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx zůstává x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx latentní xxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx inkubační doby xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, provede xx test IF/PCR xx xxxxxxxx vzorku xxxxx stonků x xxxxx 1 xx x každé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Pokud xx test xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx (selektivních) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Čisté kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 a 10).

8. Xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, je-li xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx původce kroužkovitosti xxxxxxxx xxxxxxxxxx, je xxxxx xx xxxxxxxx x pletiv xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx jej xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx saprofytické bakterie, x xxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x pelety xxxxxxx hlízy (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx izolace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx možná xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x vhodného xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxx xxxxx hlízy xxxx ze xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxxxx xxxxx vejcoplodého, xxxxx nevykazují xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx u xxxxx xxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX složených vzorků (xxx oddíl 7.9). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxx 106 cfu na xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx nebezpečí xxxxxxxxxxx, připraví xx xxxxxxxxx kontroly odděleně xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxx jeho vhodnost xxx xxxx patogenu.

Kontrolní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

8.1. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Xx 100 µl xxxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx šťávy x xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x peletovém xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx nepodaří xxxxx xxxxxxxx růstovým xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx saprofytů. Vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x infikovaných xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vysokých xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxx 1/100 xx 1/10 000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxx (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxx teplotě 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx kontrola xxxxx xxxxxxxx porovnání x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx všech xxxxxxx podobných Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx po xxxxx xxxxx, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Čištění xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx kolonií xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci xxxxx vejcoplodého a/nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx XXX médiu; xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx se měly xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx rozetřou na xxxxx x následujících xxxxx (složení xxxxxxx x dodatku 5):

- živný xxxxxxxxxx xxxx (pouze xxx subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx agar,

- xxxx x kvasničného xxxxxxxx x minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx probíhá při xxxxxxx 21-24 °X xx dobu maximálně 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxx vytváří kolonie xxxxxxxxx špendlíkové hlavičky, xxxxxxxxx, smetanově xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx rychlost růstu xxxxxxxx. Xxxxxxx kolonie xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx barvy slonoviny, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, vyvýšené, xxxxxxxx xxxxxxxxx, slizovitě xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx mají x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9) xxxx pomoci vybrat xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx kultury xx identifikují (viz xxxxx 9) x xxxxxxx xx zkouška xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx kultury xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X případě xxxxxxx xx zahrne xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Nutriční x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx média xx xx měla xxxxxxxxx xxx 21 °X x xx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx vyhodnocena. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx růstu, xxxxxxxx xx xx dobu xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutriční x xxxxxxxxxxxx testy xx musí xxxxxxxx xx použití xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx provádět x xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx oxidázy -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Tvorba X₂X -

Tvorba indolu -

Xxxxxxxxx citrátu -

Xxxxxxxxx xxxxxx - nebo xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Růst v 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx kyseliny x:

- xxxxxxxxx -

- laktózy - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx barvení (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Připraví xx suspenze přibližně 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx xx lF (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx lF xxxxxx (xxxxx 4).

x) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX testu xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX test

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml xx xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xxxxx x uzavřených mikrozkumavkách x xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxx vodní xxxxx při xxxxxxx 100 °X xx xxxx 4 minut. X případě potřeby xx může xxxx xxxxx podpořit přidáním xxxxxxx připraveného NaOH xx konečné koncentrace 0,05 X. Vzorky xxx potom xxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X xx xx xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx postupy XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Li x de Boer, 1995; Mills a xxx., 1997; Xxxxxxx x Rainey, 1999; Xxxxxx a kol., 1999).

x) Identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxx xxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x UPW.

b) Xxxxxxx xx postup XXXX (xxxxx 5)

x) Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx kultury x pozitivní xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx mastných xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) po xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°C).

b) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

x) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselin 15:1 Anteiso X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx jasně xxxxxx x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx také obsahují xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X xx xxx xxxx bakterie xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx vyskytuje xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx hodnota xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml x XXX.

x) Xxxxxxx se xxxx xxxxxxxx podle Xxxxx x xxx., 2001.

10. Test xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx xxx provedena xxxxxxx patogenity.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ buněk na xx x 3-xxxxxxx xxxxxx testované xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx vejcoplodého ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 18-24 °X při xxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx kultur by xxxx během 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx rostliny, xxxxx xx uplynutí xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx se měly xxxxxxxxx až 3 xxxxx xxx teplotách xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx vejcoplodého, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °C. Xxxxxxxx xx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx kultura považována xx xxxxxxxxx formu Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx infekce xxxxxxxxxxx xxxxx stonku 2 cm xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx v malém xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx. Xxxxxxx se xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx na XXXX x YPGA, inkubuje xx po xxxx. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °X x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur für Xxxxxxxxxx xxx Ernährangssicherheit	Vídeň x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx la Protection Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Xxxxxxxxxxx xx xx Pomme xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Plant Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni institut xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx de Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx osoby: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx testy XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 hodinová xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (NCPPB 4053 xxxx PD 406) xx základním médiu XXXX a xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx tvorby xxxxxxx/xx. Xxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zakalené xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxx x pupkových xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, u xxxxx xx xxxxx, xx xx xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus.

Pupkové xxxxxxxx se zpracují xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 ml.

Připraví xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx suspenze C. x. subsp. sepedonicus xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X následujících xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění.

Šest kontaminovaných xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí jako xxxxxxxxx xxxxxxxx. Mikrozkumavky xx xxxxxx štítkem.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx xx sterilních xxxxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, čímž se xxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx -16 až-24 °X xx do xxxx použití.

Přítomnost x xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx nejprve xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx extrakce XXX x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x FISH xxxxx xx xxxxxxxx kvantitativní xxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx pro testovací xxxxxxx

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 mM fosfátový xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x rostlinných xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 g
DC xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 ml
Tetrasodiumpyrofosfát	Antioxidační činidlo	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50 x
(*) xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx homogenizací

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Pufry xxx IF test

2.1. Xxxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Fosfátový xxxx x xxxxxxxxx, pH 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx krycí xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx voda 100 ml

Krycí roztoky xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Stanovení koncentrace xX x FISH xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = c x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx na xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x

x = plocha xxxx objektivu.

s = πx²/4X²X²,

xxx i = xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx xx 8 - 24 podle xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx resuspendované pelety x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx izolaci x xxxxxxxxx X. x subsp. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx agar (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x provede se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx agar (Xxxxxxxx dextrose xxxx = XXX)

Xxxxx bakto xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 X xx xxxx 20 min.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7H2O	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx při 115 °X xx xxxx 20 min.

b) Xxxxxxxxxx selektivní xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx není xxxxxxx xxxxx, pocházejí xxxxxxx xxxxxx xxxxx x XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
Manit	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xX xx xxxxxx xx 7,2. Xx autoklávování (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) a xxxxxxxxx xx 50 X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx acid 0,002 x, xxxxxxxxxxxx X 0,01 x.

X zásobě xx xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: trimethoprim (Xxxxx) x nalidixic xxxx (Xxxxx) (obě 5 xx/xx) v 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Xxxxx) (1 xx/xx) x dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Médium XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí,upraví se xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxx X sulphate (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X NaOH, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X sulphate x destilované xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx základního xxxxx xx 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx je trvanlivost 1 měsíc při xxxxxxxxxx v chladu xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní testování xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nejméně 10³ xx 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx PCR xxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Pastrik, 2000)

1.1. Oligonukleotidní xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx gtg xxx xxx pa xx -3'

primer XXX-X 5'- tac xxx xxx xxx tca xxx xxx c -3'

xxxxxx NS-7-F 5'- xxx xxx xxx xxx ggt xxx xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx xxx ggt xxx xxx xxx ga -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x XXX X. xx. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X rRNA 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx reakci	Konečná koncentrace
Sterilní xxxx (XXX)	15,725 μx
10x XXX pufr (1) (15 xX MgCl2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μM)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μM
Primer XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μM
Taq xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx byly xxxxxxxxxx za xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (AmpliTaq xxxx Xxxx) x Gibco XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X x NS-8-R xxxx optimalizována pro xxxxxxxx pupkové xxxxx xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) a 6.2). Xxx xxxxxxx extrakce xxxxxxxx nebo jinými xxxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx činidla.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx teplotě 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 minuta při xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA matrice)

iii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °C (xxxxxxxxx primerů)

iv) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 sekund při xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX matrice)

vi) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx při teplotě 72 °X (prodlužování xxxxx)

1 cyklus xxxx) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx MJ Research XXX 200. Při xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx), xx), x), xx) x xxx).

1.4. Analýzy ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X po dobu 30 xxxxx. Fragmenty xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx modř (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx voda 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx použitím se xxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro Xxx XXX-XX3-01: 5'- ttg xxx xxx gca xxx ctc xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'- xxx xxx xxx xxx agg xxx-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (např. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x přidá xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X NaOH x zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví se xX na 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxx proužkem xx xxxxxxxxxxx xX x x xxxxxxx xxxxxxx xx upraví xxxxxx XXx xxxx NaOH.

[UPOZORNĚNÍ: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje xx xxxxxxxx xxxx prachem xxx teplotě 4 °X xx dalšího xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (pH 7,4)

EDTA (xxxxxxxxxxxxx xxxx filtr x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, xxxxx potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (SDS) 0,01 %

Xxxxx EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 ng/µl

Připraví xx množství hybridizačního xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x tabulce. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Doporučená xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μl)	90,0	360,0

Poznámka.:

Všechny xxxxxxx obsahující světlocitlivé xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x temnu xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx je xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx elektrickým xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky se xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x sterilizuje xx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx vejcoplodého (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x plně rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx přepichují xx xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: den: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Tom",

"Rima",

"Balsas".

Dodavatel: viz xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx barvení x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx x 20 xx 95 % etanolu.

Rozpustí xx 0,8 x xxxxxxxxx amonného v 80 ml destilované xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx jódový xxxxxx

Xxx 1 g

Jodid xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx voda 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx tloučku x xxxxx. Nasypou xx xx xxxx x xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx kontrastního xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X 2,5 g

95 % xxxxxx 100 ml

Zamíchá xx x uloží xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxxx a xxxxxx se xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x nechá xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx se omyje xxx tekoucí xxxxx.

4. Xxxxxx xx Lugolovým xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx působit xx xxxx xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx papírem.

6. Xxxxxxxxx xx pomocí xx xxxxxxx přidávaného 95 % etanolu xxx xxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx barvivo, nebo xxxxxxxxx za jemného xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx dobu 30 xxxxxx.

7. Opláchne xx xxx xxxxxxx vodou x vysuší se xxxxx papírem.

8. Xxxxxx xx safraninovým xxxxxxxx x nechá xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx pod xxxxxxx vodou x xxxxxx xx savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx modře, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Mohou xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx dostupné xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx detection xxx diagnosis of xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Commission xx the Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Publ XXX 11&xxxx;288 XX, 21 pp.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. The xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx diseased potato xxxxxx. XXXX Bull. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx microscopy. X: Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Society xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx metabolism xx xxxxxxxxxxxxx by xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. D. x X. Van Xxxxxxxxxxx. The xxxxxxxxxxxxxx xx the XX xxxxxx xxx the xxxxxxxxx of latent xxxx rot xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum) xx xxxxxx. EPPO Bull., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x K. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx development xx x semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxx and Protection, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Nature, Xxxx., 178, 703.

10. Klement X.; Xxxxxxx, K x X. X. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Budapest, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. The xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. A., X. Xxxxxxx x X. X. Xxxxxxx, 1966. X determinative xxxxxx for the xxxxxxxxxxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxxxx X. appl. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, R. X. x X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx rot (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Kotth.) Skapt. xx Xxxxx.) in xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Li, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Selection xx Xxxxxxxxxx Chain Xxxxxxxx xxxxxxx from XXX intergenic spacer xxxxxx for xxxxxxxx xxxxxxxxx of Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, D., Xxxxxxx, X., X. x X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxxx xx three xxxxxx DNA sequences xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853-861.

16. Pastrik, X. -X. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx in potato xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxx coamplification xx host XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Pathology, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx some Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx relationship xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx agric. Xxx. Xxx., 366, 52 pp.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, Y., Xxxxxxx, A. x Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers xx X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx real-time xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx system. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx guide xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Skerman, X. X. X., 1967. X xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Wilkins Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Smith, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, DE., 2001. Repetetive sequence-derived XXX xxxxxxxxx using xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx identification xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. and V. X. Collins, 1974. X study xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: report xx Xxxxxxxxxxx working party. Xxxxxxx xxx Leeuweilhoek, 40, 481-527.

24. Stead, X.X. 1992. Grouping xx plant xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; xxx Beuningen, X. X.; Janse, X. D. x X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx causes xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx hybridization with 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64, 4546-4554.

X. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX HNĚDÉ XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové xxxxxxxx xxxxxxxx různé xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x bakteriálního xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx bramboru, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x ve xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx metody, schválená xxxxxxx x podrobnosti xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx podílely xx optimalizaci x xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx materiálů, je xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, údržbu x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx chybám, zvláště xxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (test XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx izolace) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx a xxxx xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x druhý xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx pokračovat v xxxxxxxxx podle daného xxxxxxxx. Jestliže xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx postupových xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx diagram xxx diagnózu xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx solanacearum) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxx hostitelských xxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x podezřením x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx živné xxxx x v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

1) Popis xxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.1.

2) Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx naznačuje xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx xxxxx slizu xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx přítomnost xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu je xxxxxx v xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu xxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 6.1.3.

6) Test XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx FISH xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného xx xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX bakteriálního slizu xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx izolovatelný x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx může xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx saprofytických xxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx typické, xxx izolační xxxx xx negativní, musí xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx živných xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx identifikace čistých xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx popsaných x xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx doporučuje xx xxx xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx diagram pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx příznaky

Testování xx xxxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň xx xxxx screeningových xxxxx (xxx poznámka x xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx, x xxxxxxx izolace xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx x xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x tomu, aby xxx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx pelety zahrnutý xxxx pozitivní kontroly x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx použit i xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 hlíz xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v oddíle 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx nejméně xxxxx screeningový test. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, xx je xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx nutné.

4) Xxxx XX xx popsán x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx izolace xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx FISH xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx mohou selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice saprofytickými xxxxxxxxxx. Jsou-li ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx test x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx podezřelých xx X. solanacearum xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx v oddíle 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx Ralstonia solanacearum xx vzorcích xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky, xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rostlin xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou popsány x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx testy založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx alespoň xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx xxxx negativní, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, vyžaduje xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxx-xx druhý xxxx xxxxx testy xxxxxxxxx, považuje xx xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy nejsou xxxxx.

4) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

5) Xxxx IF je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest xx xxxxxx v oddíle 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx biotest xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, xxx izolační xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx je podezření, xx se xxxxx x R. solanacearum, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx

2.1. Příznaky

2.1.1. Xxxxxxxx x bramboru

Rostlina xxxxxxxx. Xxxx fáze xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx se rozpozná xxxxxxxx listů xxxxxx x vrcholu xxxxxxxx xxx vysokých xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x zotavení. V xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zelené, xxx později xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Dochází xxxx x ohýbání xxxxx xxxx. Vadnutí xxxxxxx výhonku xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx stává xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx rostliny. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stonků xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx vymáčknout. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx vody xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx vlákna xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx je třeba xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. V xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx podle xxxxxxx xxxxxxx až xxxxxx xxxxxxx zabarvení cévního xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx výrazněji xxxxxx x odumření xx může rozšířit xx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx infekce xxxxxxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx a x xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx se xxxxxxxxx částice půdy. Xx xxxxxx se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx důsledek xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx měkkých xxxxxx bakteriálního x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx vzhled xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxxx 25 °X, xxx nasycené xxxxxxx xxxxxxxx) se xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx dolů a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx rostliny xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx jejím xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota xxxx xxxx než 21 °X) rostlina xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx se může xxxxxx xxxxx počet xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx pozorovat vodou xxxxxxx xxxxx xx xxxxx stonku, xxxxx xxxx dokladem xxxxxxxxx xxxxxxx systému. Při xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx zbarvená xxxxxx xxxxxxx bílý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx hostitelů

Rostliny Xxxxxxx xxxxxxxxx x X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxx plevelných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx zřídkakdy pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx půdy nepřevyšují 25 °X xxxx xxxx extrémně vysoká xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x xxxxxxxx S. xxxxxx xxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxx u xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx S. xxxxxxxxx, xxxxx má stonky x xxxxxx xx xxxx, xxxxx vykazovat xxxxxxx světle hnědé xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx příčném xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. X xxxx xxxxxxx svazků xxxxx vytékat bakterie xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, a xx x při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx následujících testů:

2.2.1. Xxxx xx výtok xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx fixovaných xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x xxxxxxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X xxxx xxxxxxxxx černí (xxx oddíl 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx rychlými screeningovými xxxxx jsou xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.), xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx při xxxxxxx

x) Odebere xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo x xxxxxxx vláken xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx jiné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx v malém xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx nebo 50 xX fosfátového xxxxx (dodatek 4) a xxxxx xx 5-10 minut xxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 xx suspenze x roztoku xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX nebo XXX; viz dodatek 2) x/xxxx Kelmanovo xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx selektivní xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Rozetře xx xxxxxxx zřeďovacích roztěrů. Xxxxxxxx se případně xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx buněčnou suspenzí X. solanacearum xxxxxx 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx se 2-6 xxx při xxxxxxx 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxxx spirálkami xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx kruhové nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx zcela xxxxxxx xxxx.

- X Kelmanova xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. solanacearum x xxxxxxxxxxx izolátech xxxx popsány x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování vyžaduje xxxx testů xx xxxxxxxx této xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorku xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx výkladu xxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx s xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x xxxxxxxxx menší množství xxxx.

- Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx založená xx xxxxxxxxx xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx níže xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx zjištěni xxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření před xxxxxxxxx xxxxxx

x) Inkubace xxxxxx při xxxxxxx 2-30 °X po xxxx až 2 xxxxx xxxx testováním xx podporu množení xxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx odstranění patogenní XXX) x mycí xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx vhodný xxxxxxx v případě, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx jestliže xx xxx proveden test XXX xxxx přímá xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nože xx xxxxxxxx xx odstraní xxxxxx xx pupkovém xxxxx xxxxx xxxxx, xxx aby xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky xx xxxxx na xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (hnijící) hlízy x podezřelými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx stranou a xxxxxxx xx odděleně.

Pokud xxxx pří xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx hnědou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx na pupkovém xxxxx. Všechny xxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 xxx při xxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx se uchovávají x xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x podezřelými xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx nepoužitých xxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx utěsnitelné (x případě, xx xxxxxx jsou xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx prostředky s xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x pupkového xxxxx xxxxxxxx. Není-li to xxxxx, xxxxxxxxxx xx x nádobě xxx xxxxxxx pufru; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx se x rotační xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Waring xxxx Xxxxx Thurax) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxx použití (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx nebo Bioreba, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při homogenizaci xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Xx nutné xxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx během xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x xxxxxx. Xxx xxxxx PCR xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx nebo x xxxxxx přístroji. X xxxxx PCR se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Supernatant xx xxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx buď xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), xxxxx xx omyje xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x po xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Peleta xx resuspenduje x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx xxx R. xxxxxxxxxxxx, 500 µl xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µl xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, promíchá xx xxxxxxx x xxxxx xx při xxxxxxx -16 xx -24 °C (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx nedoporučuje.

Je-li xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, zajistí xx přeprava v xxxxxxxxx boxu x xxxxxxxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.1.6. Xx nezbytně xxxxx, xxx všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx a vzorky X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí pro xxxxxxx IF x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

IF xxxx (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (viz xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx bramboru, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se doporučuje xxxxxxxx smíšené vzorky. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx o počtu xx 200 stonkových xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, xxx by xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx uloží 1-2 xx dlouhé xxxxxx stonků xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx každého xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země.

Rostliny z xxxx xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx odebere xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nad xxxxxxxx x xxxxxxx stonkem. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, 1 cm dlouhý xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným nožem xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1 xx dlouhý xxx x xxxx každého xxxxxx hned xxx xxxxxx xxxx. U xxxxx xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 cm xxxx xx xxxxxx xxx xxxxx nebo xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx statisticky xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 vzorkovací xxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxxxxx přirozenou xxxxxxx xx xxxxx zjistit xx celý xxx x víceleté Solanum xxxxxxxxx rostoucí ve xxxxxxx tocích. Mezi xxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. nigrum, Datura xxxxxxxxxx a další xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx hostitelskými xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx xxx. a Xxxxxxxxx oleracea. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx mohou xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Race 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, zahrnují Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx pilosa, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx cannabinum, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Rumex xxx., Silene xxxx. X. nutans., Tussilago xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx fázi xx možné xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx bakteriální xxxx). Xxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxx atestuje xx odděleně (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% etanolem x xxxxx xxxxxx xxxxx papírem. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) zalijí xx xxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x třepou xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) se ihned xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x přiměřeným xxxxxxxxx extrakčního xxxxx (dodatek 4) xxxxxx gumového xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx). Není-li xx xxxxx, uloží xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx na 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx lze xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstřeďováním popsaným x oddíle 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxx xx skladuje v 10-25% (x/x) sterilním xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X (týdny) xxxx -68 xx -86 °X (měsíce) xxx xxxxxxxx další xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.4.)

Xxxx IF (xxx xxxxx 6.1.5.)

Testy XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (viz xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Biotest (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Detekce x identifikace xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx jak xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx, xxxxxxxx nebrání xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx popsán x oddíle 6.1.9.

(5) Xxxxxx obohacovacího xxxxx XXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice saprofytickými xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx velká saprofytická xxxxxxxx xxxxxxx spolehlivost xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. solarcacearum xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v xxxxx oddíle je xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxx vody x xxxxxx xxxx být xxxxxxx k testování xxxxxx xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx detekce xx xxxx liší x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxxxxxx xx obecně xxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x odpadní xxxx než x xxxxxxxxx vodě. Zatímco xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx detekci xxx 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X tohoto xxxxxx se doporučuje xxxxxxxx odpadní vodu xx xxxxxxxxx nějakého xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx), xxx xxxxx dojde xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx populací. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x tomu, že xx toto xxxxxx xxxxxxx úspěšně x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx vodě, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx je nejspolehlivější x období xxxxxxxx xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x různé době xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx místech zvýší xxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxxx xxxxx výkyvů xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx x geografie xxxxxxx xxxx může xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx a tím x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx hostitelských rostlin, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx vzorkovacích xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx vody do xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30 xx xxx xxxxxxxx x 2 x xx xxxxx. Xxx vzorkování xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx se odeberou xxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 500 xx. Xx-xx upřednostňována xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx 3 xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx rovněž přítoky.

4.2.1.2. Xxxxxx xx přepravují x xxxxxx x xxxxx (4-10 °C) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx potřeba, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakteriální frakce xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx dílčí xxxxxx xxx 10&xxxx;000 x xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x po xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X, slije xx kapalina xxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx přes xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx pórů 0,45 µx) x xxxxxxxxx promytím xxxxxx x 5-10 ml xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx filtrátu. Xxxx xxxxxx xx vhodná xxx xxxxx xxxxxx xxxx, které obsahují xxxx počet xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Ralstonia solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x popis xxxxx x příslušných xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx hnědé hniloby x půdě

5.1. Postupový xxxxxxx pro detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x půdě

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., kde xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Obohacovací XXX xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

(5) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v oddíle 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx může xxxxxx z důvodů xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx populace xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, opakují xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

(7) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných v xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx schéma xxxxxxx x tomto xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx patogenu ve xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx být xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx poznamenat, xx xxxx xxxxxx xxxxxx dostatečně xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx detekci xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxx v xxxx xxxx xxxx xx xxxxx vzít v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx testovacího schématu. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v polní xxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x xxxx xxxxxxxxx, xxx není infikována, xxx i xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx nízký xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování xxxxx xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx používanými xxx xxxxxxxxxx hlístů. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx xxxx xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 xx x xxxxxxx 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx na výskyt xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx sběrných xxxx xx 120 x xxxxxx 0,3 xx. Xxxx testováním xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx testovaného xxxx. Xxxx testováním xx každý vzorek xxxxx promíchá.

5.2.1.2. Dílčí xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx xxxx xx rozptýlí xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx dobu 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x sterilních xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx a popis xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Optimalizované xxxxxxxxx pro xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Diagnostické x xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx stonku

Přítomnost X. solanacearum ve xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx se xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Řez xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx s xxxxxx vodou. Xxxxxxx xx, zda xx xx xxxxxxxx minutách xxxxxx charakteristická xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Připraví xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx pletiva xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx XXXX xxxx SPA (dodatek 2) xx mikroskopické sklíčko.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx kmenu xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x spodní xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Preparáty xx obarví xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx sklíčka xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx modři x xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 minut xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Přebytečná xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Znovu xx xxxxxxx kapkou xxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx při 450 xx xxx xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxx xx zvětšením 600x xx 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersi.

g) Xxxxxxxx xx, xxx se xxxxxx na PHB xxxxxxxxx jasně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx intracelulární x xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx typická xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx černí:

a) Zakápnou xx xxxxxxx sklíčka 0,3% roztokem xxxxxxxx xxxxx B x 70% etanolu x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem.

c) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx do xxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Sklíčka xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 vteřin inkubovat xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx škodlivý, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x digestoři.

e) Xxxxxxx xx opláchnou xxxxx xxxxxxx vodou x xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx se krycí xxxxxxx.

x) Xxxxxx se xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxx x procházejícím xxxxxxx xxx olejovou xxxxxx x xxx zvětšení 1&xxxx;000x.

x) Hledá se xxxxxxxxxx zbarvení XXX xxxxxxx x buňkách X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx zbarvenými stěnami xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx v bakteriálním xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx z xxxxxx x xxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx protilátek (viz dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx značkovači, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxx xxxxxxx. Jinak xx xxxxxx následující:

a) Xxxxxxxx se kapky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx slizu (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) na xxxxxx testovacího víceokénkového xxxxxxx.

x) Připraví xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx se x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx dobu 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx izolace

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx předběžný xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx tvořících xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx řádně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živná půda, xxxx. SMSA (ve xxxxx Elphinstone xx xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx jiných bakterií xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx vyžaduje xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx R. solanacearum xxxxx mít atypickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx antagonistické xxxxxxxx. Xx-xx podezření xx xxxxxxxxxx nebo inhibici, xxx xx xxx xxxxxx otestován xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze vzorků xxx xxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxx touto xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Metoda xx xxxx použitelná x xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx -68 xx -86 °C.

Pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X vyloučení xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x testování.

U xxxxx nově připravené xxxxx xxxxxxxxxx živné xxxx by xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx nejdříve xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx patogenu. Xxxxxxxxx materiál xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxxxx (vzorky).

1. Xxxxxxx xx ředění x cílem xxxxxxxx, xxx všechny populace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx pro každé xxxxxx.

2. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx 48 xxxxxxxx xx zkontroluje xxxxxx xxxx a pak xx provádí xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Typické kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx půdě SMSA xxxx mléčně xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xx 3 xxxxx xxxxxxxx xx rozvine růžově xx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x vnitřními xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xx tomto xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum. Mohou xxx xxxx, kruhové, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx nebo xxx xxxxxxxx fluidní, a xxxxx xxxxxxx rozeznatelné xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx rozetřou nebo xxxxxx metodou zřeďování xx xxxxxxxxxxx živnou xxxx., xxx xx xxxxxxx izolované kolonie (xxx dodatek 2).

4. Kultury xx uchovávají xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx dlouhodobě xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 6.2.) x test xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xx 6 xxxxx nejsou xxxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxx nejsou nalezeny xxxxx xxxxxxxxx kolonie xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, že xxxxxxx x xxxxxxxx jinými xxxxxxxxxx x v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx selektivní média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx testy

Použije xx xxxxxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx lze xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx populací R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx detekce. Xxxxx xxxxxxxx dojde x xx zředění xxxxxxxxxxxxx inhibitorů PCR xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. solanacearum však xxxx xxx neúspěšné x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x obohacené kultury xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x rozvoji xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx testu XXX xx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10 ml obohaceného xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx připraví xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30 °C x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx umožní xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx zahájením xxxxx XXXXX xxxx XXX se xxxxx xxxxx promíchá.

4. S xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xx výše xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx jinými xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Test xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se test XX jako xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxx xxxx izolace, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx test XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx testování podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx validovaný zdroj xxxxxxxxxx R. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx každou xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx je definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x optimální reakci xxx testování suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního isothiokyanatanu (XXXX) podle doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxx polyklonální xxxxxxxx mají xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ředěních xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx měl xxx proveden na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Jestliže xx xx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx být xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx. Často to xxxx potřeba, zvláště xxxxx j jsou xxxxxx fixovány xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno v dodatku 3 X, x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx - 16 až 24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx použít jako xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx díly xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx s 10 xxxxxx x průměrem xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx týmž způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x testování xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl je xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6 mm - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx v xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxx řada xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Napipetuje xx odměřené standardní xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx větší x xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx pro xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx při okolní xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60 °C), xxxxxxxx, 95 % etanolem xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxxxxx stavu v xxxxxx boxu po xxxxxxxx krátkou xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx dalším xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Podle xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. První xxxxx xx měla xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), titr (X) a xxxxxxxxxxx xxxxx (2T).

ii) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka na xxxx x odst. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (PŘ) protilátek x xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.i)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx pokyny xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx následovně:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx se inkubují xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

3. Setřesou xx xxxxx xx všech xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x následně v xxxxx IF. Je xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Sklíčka xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx sklíčka. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx komerční krycí xxxxxxxx xx každého xxxxxx a přiloží xx krycí sklíčko.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x filtry vhodnými xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx kolmých xxxxxxxxx x kolem obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx se xxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx test IF xxxxxxxx (odst. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií X. xxxxxxxxxxxx x testovacích xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx porovnání x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx stejném xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx fluorescencí xxxxx xxxx v úvahu.

Při xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx zopakován. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině vykazují xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo okénka xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Berou xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x titru xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XX:

x) Při xxxxxxxx jasně fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx odhadne xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx poli a xxxxxxxx počet typických xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx je počet xxxxxxxxx buněk na 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx infikovaný a xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx je xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxxxxx méně než 5 x 10³ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx se xxxxxxxx za negativní. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Testy PCR

Principy

Použije-li xx xxxx PCR xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx povinně xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x xxxx xxxxxxx xxxx IF. Xxxxxxxx xx PCR xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx, xxx byla xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx této xxxxxx x xxxxx rozsahu xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, je-li xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx schválená činidla x protokoly PCR (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, zvolí xx xxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx laboranty x xxxxxxxxxxxx specializovaných na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx minimalizovala xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx xx mělo xxxx xxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX test xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx pufru používaného xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x DNA xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx by xxx xxxxxxxx následující pozitivní xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx byla xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (přípravu xxx dodatek 3 B);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx možno, xxx PCR xxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx použití XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx brambor.

Standardizované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx purifikace XXX

Xxxxxxxxx xx výše xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 3). Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxx k xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx použití xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxxxx pufru (100 xX NaCI, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 mM XXXX (pH 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Přidá xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x mikrozkumavka xx xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxx vodní lázně x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxx. do ledu.

4. Xxxxx se 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 mM XxxxXXx, xX 8,0) a xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Xxxx XXX® A (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx třepáním x inkubuje se xxx xxxxxxx 65 °X xx dobu 30 xxxxx.

6. Přidá xx 100 µx xxxxxxx Easy XXX® X (Invitrogen), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xx viskozita xxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx fází x vytvoření mezifáze xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 g xx dobu 20 xxx. při xxxxxxx 4 °X.

9. Horní xxxx xx xxxxxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % etanolu (- 20 °C), krátce xxxxxxxx třepáním a xxxxxxxx xx na xxxx po xxxx 10 xxx.

11. Odstřeďuje xx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx při xxxxxxx 4 °X x odstraní xx xxxxxx z xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, zachová xx xxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Peleta xx xxxxx uschnout xx xxxxxxx xxxx x XXX odparce.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx v 100 µx xxxxxxxx XX x xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 minut.

16. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx - 20 °X xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX se xxxxxxx xxx xxxx XXX.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx použít, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx jsou při xxxxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorky x kontroly pro XXX xxxxx schválených xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx desetinásobné xxxxxx xxxxxx extraktu XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

2. Připraví xx xxxxxxxxx reakční xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx možno, doporučuje xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR, xxxxx xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx přidá 5 µx extraktu XXX xx 25 µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Přidají se xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx PCR x xxxxx xx týž xxxxx XX jako xxx ten, xxxxx xxx xxxxxx ve xxxxx PCR xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx termocykleru, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx se vhodně xxxxxxxxxxxxxx program XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Analýza produktu XXX

1. Xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx. Nanese xx xxxxxxx 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX z xxxxxxx xxxxxx s 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX xxxxxx, např. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx dobu 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx mutagenem.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

4. U xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx enzymem a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx charakteristický xxxx restrikčních xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx obarvení ethidiumbromidem x porovnává xx x neštěpenou x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXX

Xxxx XXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx PCR xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX specifický xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (případně) xxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, jestliže je xxxxxx očekávaný xxxxxxxx xx vzorku pozitivní xxxxxxxx obsahujícího X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky. V xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, jestliže xxxx xxxxxx xxxxx ze xxxx amplikonů.

V xxxxxxx, xx xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test použije XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX xxxx. Když xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, je x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx postupového diagramu.

Poznámka:

Používají xx schválené xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx R xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx pokud xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx v glycerolu xxx teplotě - 16 xx - 24 °C nebo - 68 až - 86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní kontrola xx připraví xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 3) x 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (PB) ze 3-5 denní xxxxxxx. Xxxxxxxx xx samostatná xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx vzorky homologického xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx eubakterie přítomné xx vzorku.

Standardizovaný xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx x tomto xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx kontrolního materiálu xx provede stejným xxxxxxxx xxxx u xxxxxx(x).

6.1.7.1. Fixace bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x Xxxxxxxxx et xx. (1998).

1 Připraví xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Napipetuje xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xx xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Odstraní se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx peleta xx 200 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 hodinu x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx se 7 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01M PB (xxx dodatek 7).

5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx vzorky na xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx být xxxxxx xxx teplotě - 20 °X xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X případě, xx xx třeba XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx množství 0,01 XX (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx sklíčku XXXX

6. Xxxxxxx xx nechají uschnout xx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi xx xxxxx postup přerušit x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx měla xxx skladována xxxxxxxx xxxx xxxxxxx a x suchu xxx xxxxxxxx teplotě.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x postupné xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % x 96 %, pokaždé xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

2. Připraví xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx vzduchotěsného xxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsí (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx se ohřeje xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx při teplotě 45 °X xx xxxx nejméně 10 xxxxx.

3. Použije xx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) na 8 okének (okénka 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 a 8) se xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx první a xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Sklíčka xx umístí do xxxxxx xxxxxxx vlhké xxxxxx a nechá xx proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxx 5 xxxxx x xxxxxx při xxxxxxx 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx se 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxx x molekulární xxxxxxxx (Xxxxx Q), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 ml 3x xxxxxx x 958 ml vody x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx vodní xxxxx x teplotě 45 °X.

6. Xxxxxx se xxxxx sklíčka a xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx při xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx sklíček xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x nechá xx inkubovat xxxxxxx 15 minut.

9. Xxxxxxx xx krátce xxxxxx xx XXX (např. Xxxxx X xxxxx) x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl xxxxxxx roztoku (např. Xxxxxxxxxxx, Vecta Laboratories, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx x celé xxxxxxx xx zakryje xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx vhodným pro xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx olejovou xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein isothiokyanat (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx červené. Porovnává xx xxxxxxx morfologie x morfologií pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Test XXXX (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se okénka xxxxxx dvěma xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxx málo xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Xxx podezření xx jakoukoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. To xxxx xxxxxx x případě, xxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxx ukazují xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx buňky xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxx xxxx xxxxxxx problémů. Xx xxxxxxxxxxxxx, že x xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxx xx stonkových xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx fluorescenčních xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx velikostí a xxxxxxxxxx podobnými R. xxxxxxxxxxxx, x xxxx xxxxxx xxxx častěji xxx x xxxxx XX.

5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH

i) Výsledky XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx jsou xxx použití XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx pozorovány xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x žádných xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, se xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Vzorky, xxxxx obsahují méně xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, se xxxxxxxx xx negativní.

ii) Xxxxxxxx XXXX testu xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Testy XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, PCR xxxx XXXX pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx použití XXX ELISA xx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xx xxxxxx setkat x nezdarem xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx vzorku.

Poznámka:

Použije se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Doporučuje xx xxxxxx titru xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx by měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx ředění, xxxxx xx xxxxxx xxxx stejné xxxxx xxxxx komerční formulace.

Určí xx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx otestován xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx působeni x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx negativní xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx alikvótní xxxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 ml xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. kmen XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X x X). Xxx srovnání xxxxxxxx na každé xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XXX R. xxxxxxxxxxxx. Pozitivní kontrolní xxxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx k xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx xx al., 1995)

1) Xxxxxxx se 100-200 µl xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X na 4 xxxxxx xx xxxxx lázni xxxx xxxxxx xxxx může x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx nespecifických xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx dvojnásobně xxxxxxx uhličitanového xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx se 100 µx do xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) a xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xxxx 14 - 18 x při xxxxxxx 4 °C.

4) Extrakty xx vylijí z xxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx roztok xx nechá x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Připraví xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x blokačním pufru (dodatek 4). X xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx doporučená xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx je titr).

6) Xxxxx se 100 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx a xxxxx xx xxxxxx xxxx předtím (bod 4.).

8) Připraví se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx pufru. Xxxxx xx 100 µl xx xxxxx jamky x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxx x xxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx jamky. Xxxxx xx inkubovat x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx absorbance xxx 405 xx v xxxxxxxxxxxx 90minutových xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x uhličitanovém xxxxx pH 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° C xx xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx ze xxxxxx xx nejméně dvou xxxxx. Přidají xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou jamek xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C.

3) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum x XXX (dodatek 4) s xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xxxxx se 190 µl do xxxxx jamky x xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

5) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

6) Připraví se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx alkalickou fosfatázou x XXX. Přidá xx 190 µx xx každé jamky x nechá xx xxxxxxxxx 2 hodiny xxx teplotě 37 °X.

7) Jamky se xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx se roztok 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx každé xxxxx x inkubuje xx x temnu xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx při 405 xx xx odečítá x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx optické xxxxxxx (OH) z xxxxx xx stejnými xxxxxx xx menší xxx xxxxxxxxxxx OH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx OH pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x jsou větší xxx dvojnásobek OH xxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů.

Test XXXXX xx pozitivní, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx XX x jamek xx xxxxxxx vzorkem xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku, xxxxx xxxxxxx OH xx xxxxx negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx než xxxxxxxxxxx xxxxxx v pozitivních xxxxxxxxxxx vzorcích.

Negativní hodnoty XXXXX v pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx nebyl xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx byl xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxx x vzájemné xxxxxxxxxxx xxxx nespecifickému xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Biotest

Poznámka.:

Předběžné xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaný xx xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx použití xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx a x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx však xxxx úspěšně xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány x xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 až - 86 °C.

Následující xxxxxxxx vychází z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Použije xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx nebo kultivaru x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx laboratoře) xx xxxx třech xxxxxxx xxxxx u xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx xx xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Black Xxxxxx xxxx kultivary x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx rostliny ve xxxx 2. xx 3. listů až xx xxxxxx rozvinu xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x lilku xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxx. Xxxxx možno, xxxxxxxxxxxx proto použít xxxxxxxx rajčat.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx rostlin xxxx nad děložními xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxx xx xxxxxxx mezi testovací xxxxxxxx.

2. Inokulace xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx pelety xx xxxxxx xxxx děložními xxxxx x prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx řez xxx 1 cm xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx řez xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx utěsní xxxxxxxx vazelínou z xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 sazenic vodní xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx na 1 ml, xxxxxxxxxxx xx 48 hodinové xxxxxxx virulentního xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek, a xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Oddělí xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxxxx rostlin, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Testovací xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 týdny xxx xxxxxxx 25 - 30 °X a xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx zabránilo kontaminaci, xxxx xxx drženy xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx rostliny xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx rostliny x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxx xx xxxxxxxx zástěnami. Xxx xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxxxx a všech xxxxxxxxx činnostech xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx by xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorky.

Hledají xx xxxxxxxx vadnutí, epinastie, xxxxxxx anebo krnění xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx provede xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 týdnů xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx nad místem xxxxxxxxx. Je-li test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (bod 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx čisté xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (bod 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx mohou být x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl organismus xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Identifikační testy

Identifikují xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrnou xx případně známé xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxx provedený xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx následující xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx vesměs xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Kovacse +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Využití xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx v 1% XxXx +

Xxxx x 2% NaCl -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx aktivita -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Produkce xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx viz Lelliot&Stead (1987).

6.2.2. Xxxx IF

6.2.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x xxxxx XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX metoda (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

6.2.3. Test XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx sérologický xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx XXXXX xx specifickou monoklonální xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxx jeho xxxxxxxx xxxxxxx x této xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x hodnotou z xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Připraví xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxxx vodní xxxxx xxx 100 °C 4 minuty. Xxxxxx xxxxx xxx uchovány xxx xxxxxxx - 16 až - 24 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Použijí xx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx al. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Pastrik xx xx. (2002); Xxxxxxxx et xx. (1999); Xxxxx et xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x mají xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx xxxx pozitivní kontrolní xxxx.

6.2.5. Test FISH

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml x XX.

6.2.5.2. Použije xx metoda XXXX (6.1.7) x xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx specifickými xxx X. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Pěstuje se xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx při xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.2.6.3. Test FAP xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxx charakteristických xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX a 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3OH xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx charakteristiky kmenů

Pro xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx použitím xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx provedeného xxxxx xx xxxxxxx případně xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx využití x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx et xx., 1990). Živná xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx úspěšně xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx s xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x inkubací xxx xxxxxxx 28 °C. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx testy xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Lelliott x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx variabilita

Molekulární xxxxxxxxxxxx xxxxx komplexu X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx patří:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx RFLP (Cook xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, BOX x XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Xxxxx xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx AFLP (Xxx xxx Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx dodatek 6) lze použít x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do skupiny 1 (biovary 3, 4 a 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989) a xxxxxxxxxxxx 16X rDNA (Xxxxxxx et xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx závěrečné xxxxxxxxx diagnózy R. xxxxxxxxxxxx x k xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xx 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3).

2) Inokuluje xx 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx lilku xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Sazenice xx xxxxxxx inkubovat xx 2 xxxxx xxx xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. X xxxxxxx kultur xx xxxxxxx xxxxxxx mělo xxxxxx během 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx xxxx době xxxxxxxx, kultura nemůže xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx forma X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, chlorózy xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx se xxxxxxx x rostlin xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 xx xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x suspenduje v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx možno na xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Po inkubaci 48 xx 72 xxxxx xxx teplotě 28 °C xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Glukóza (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (SPA)

Sacharóza 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7H₂O 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Difco) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx médium

kasein xxxxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 mg xx litr.

b) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx živná xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 ml

Bacto-Agar (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °X x přidá xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodný xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx stanovená xxxxxxx koncentrace:

Krystalová violeť (Xxxxx) 5 mg/l

Polymixin-B-suIfát (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (přibližně 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 mg)/l

Chloramfenikol (Xxxxx X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032) 825 X (přibližně 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Použití xxxxxx než xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx může xxxxxxxx růst R. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Oxoid Xxxx #1. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx to xxxx xxxxxx růst xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x 1-2 xxx xxxx a červené xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx a skladují xxx xxxxxxx 4 °X x temnu x musí xx xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Misky s xxxxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx povrchové kondenzace. Xxxxx zabránit xxxxxxxxxx xxxxxxxx média.

Každá xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx měla xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx referenční xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx se xx 2 až 5 dnech xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx typické kolonie.

c) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx SMSA, xxx xxxxxxx se Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx živná xxxx Xxxxxxxx (Caruso et xx., 2002)

Sacharóza 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 g

NaNO₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxxx se tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut a xxxxxxx se xx 50 °C. Xxxxx xx xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx xxxx pro xxxxxx půdu XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál

a) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury

Následující izolované xxxxxxxxxxx kultury xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx bud' x xxxxxxxxx kontrole (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx optimalizace xxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx kmeny xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xx xxxxxx z xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií rostlin (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx kultur xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx patogenních xxxxxxxx xxxxxxx (CFBP), ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx izolovaných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx uvedených xxxxx xxxx být xxxxxxxx pouze v xxxxxxx, xx pocházejí x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX sérologicky xxxx geneticky xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx všech testů.

Mražené xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ buněk xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) xxxx pozitivní xxxxxxxx serologických x XXX testů. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxxxxx lyofilizací, nejsou xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx formaldehydu fixované xxxxxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ buňkami na 1 xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Příprava xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx screeningové xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx se 48xxxxxxxx kultura virulentního xxxxx R. solanacearum xxxx 3/biovaru 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx půdě x xxxxxxxxxx xx v 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxx buněčná xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx tvořících xxxxxxx na 1 xx. Xxxxxxx se xx xxxxxxx jemně xxxxxxxxx xxxxxxxx rovnající xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 při 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x pupkových xxxxx 200 hlíz x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx slupkou, o xxxxx xx xx, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x protřepe se. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx kontrolní xxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx kontrolní negativní xxxxxx. Mikrozkumavky xxxx xxx řádně xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 X1 xx sterilních xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °C xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx testem XX.

Xxx XXX xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx XXX x pozitivních a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x XXXX testy xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Při kvantitativních xxxxxxxxx XX, XXXX x PCR musí xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nesmí xxx xxxxxxx x xxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry xxx xxxxxxxxx xx dobu xx jednoho xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxxxx tkání homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx resuspenzi x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx pro IF xxxx

Xxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx pufr se xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 min.

IF-pufr-Tween

Tento pufr xx používá x xxxxxxxxxxx podložních xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 k xxxxx pro XX.

Xxxxxxxxx xxxx v glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx roztok na xxxxxx xxxxxxx na XX testy x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx účely nepřímého xxxxx XXXXX

3.1. Dvojnásobný xxxxxxxxxxxx potahovací xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 6,36 x

XxX CO3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx extrakt xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, je možné xxxx antioxidant přidat xxxxxxxxx sodný (0,2 %).

3.2. Desetinásobný xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

NaCI 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx pufr (xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx).

10 x PBS 10,0 ml

Polyvinylpyrrolidon-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx mléko 0,5 x

Xxxxxxxxxxx voda xxxxxxx xx 100 ml

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 ml

Rozpustí xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx xx xxxxxx xX na 9,8.

Doplní xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 g XxXX₂.

Xxxxxxxx xx xxx 5 xx tabletky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 ml xxxxxxx.

4. Pufry xxx xxxxx xxxxx DASI XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x fosfátosolný xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

NaCl 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Tween 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 ml

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx a xxxxxxx xx hodnota xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk v xxxxxx pozorovacím xxxx (x).

2. Vypočítá se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxx x

x - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx 8 - 24 xxxxx typu xxxxxxx),

X = tubusový xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X =C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx protokoly a xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx extraktu. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx PCR Seal xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx XXX-1 : 5'-GGG XXX XXX TTG XXX CCT XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-CCC XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx směs XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx xxx 96 °C (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 20 sekund xxx 94 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 xxxxxx při 68 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu ii), xxx) a xx).

1.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx II xx xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1: 5'-agt xxx xxx xxx xxx xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Ps-2: 5'-xxx xxx xxx aca xxx gtc ttg xx -3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 bp.

2.2. Xxxxxxx směs PCR

Reagencie	Množství x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x pufr XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Ps-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μM
Taq xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx PTC 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx a xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx i) 5 xxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx xxxx velikost 457 xx x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx kontrolou (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX XXX GAA XXX XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-CCC XXX XXX GGC AGA XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx XX-5-X: 5'-AAC TTA XXX XXX XXX XXX GAA X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA TCA XXX ACC XXX XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx amplikonu templátové XXX X. solanacearum = 718 bp (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx velikost amplikonu xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X rRNA = 310 bp (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) nechá xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx 1 xxxx Isoschizomere (xxxx. Mva 1269 X) po inkubační xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Protokol PCR xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx al, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Rs-1-F: 5'-ACT XXX XXX GCA XXX XXX CAT XX-3'

Xxxxxxxx primer Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX AGA XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

x) Protokol XXX xxxxxxxxxx pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (konečná syntéza)

vi) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých kroků xxxxx xx), xxx) x iv).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Xx-1-X x Xx-1-X vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx I xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X nemají xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru

5.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) voda (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx se zředí xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx xxx agg xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx se 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx se rozpustí xx přidání 5 xxxxx 1X NaOH x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX na 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx xx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX PH!]

iii) Xxxxxxxxxxx xx roztok přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx chráněný xxxx xxxxxxx xxx teplotě 4 °C do xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx a xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se xx x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Formamid 30 %

Xxxxx EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx OLI2 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů x xxxxxxx 1. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µl hybridizačního xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXX POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx světlocitlivé xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx při xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx pufr, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná voda 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Solanum melongena) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx měly pěstovat xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx délka dne, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °C,

noc: 14 xx 18 °C.

Vhodná xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Beauty"

Vhodná xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx enviromnental xxxxxxx xx microbiology. X. Bacteriol. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 Xxxx 1998 xx the xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi etal. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Boudazin, X., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, P., Gorris, X.X., Cambra, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Indirect Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Assay Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Detection xx Xxxxxxxxx solanacearum xx Xxxxxxxxxxxx Potato Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Cook, X., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: detection xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx polymorphisms xxxx XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx and xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Plant-Microbe Interactions 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, J., Xxxxxx, X.X. and Stead, X.X. 1996. Sensitivity xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xxx xxxxxx xxxxx extracts. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, M.C. (1994) Modification xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx the isolation xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Tn: X.X. Hayward (ed.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx huternational Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx solanacearum. Journal xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx in xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, T. Xxxxx, X. Xxxxxx, M. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Detection xx xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx using x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x PCR technique. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X detection xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxx xx its xxxxxxxxxxx xxx specificity. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xxXxxxxxxxxxxx solanacaerum xxxxxxx xxxxx xxxxx cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Applied Microbiology 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx x tetrazolium xxxxxx. Phytopathology 44; 693-695.

14. Xxxxxxx Z.; Xxxxxxx, K xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Lelliott, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx diseases xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Ltd., Xxxxxx. 216 pp.

16. Xxxxx, X.X., Gorris, X.X., Llop, X., Xxxxxx, J., Xxxxxx, X., Cambra, X., 1997. Selective enricliment xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx molecular xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. In: X.X. Xxxxx et xx., (eds). Klewer Xxxxxxxx Publishers. pp. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx fingerprints xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx strains generated xxxx xxxxxxxxxx sequences xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 60, 2286-2295.

18. Louws, X.X., Fulbright, X. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Bruijn, X.X. 1995. Differentiation xx xxxxxxx structure xx xxx-XXX fingerprinting xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx campestris xx. xxxxxxxxxxx. Phytopathology 85; 528-536.

19. Xxxxx, N., X. Tavner, G. Xxxxxxxx, X.-X Wang, X.-X Xx, X. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx method xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx and PCR xxxxxxx for xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx solanacearum). As Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Pastrik, X.X. xxx Maiss, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx cham xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx intergenic xxxxxx region with xxxxxxxx xxxxxxxx control. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, A., Xxxxx, P., Elphinstone, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Production xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum, the xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx wilt. Food xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Schaad [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Minnesota: 373 xx.

24. Xxxx, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Yotmg, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xx xxxx, Pseudomonas xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx for xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction. J. Xxx. Microbiol. 139: 1587-1594.

25. Snith, J.J., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. xxx Saddler, X.X. 1995. Genetic xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Xxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxx some other Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Fegan, X. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx relationships xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, and xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx banana xxxxx xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Der Wolf, X.X., Bonants, P.J.M., Xxxxx, J.J., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Beckhoven, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Ralstonia solanacearum Xxxx 3 in Xxxxxxx Europe as xxxxxxxxxx by AFLP, XX-XXXX xxx rep-PCR. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, C. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx wilt xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Ecological Xxxxxxx. Springer (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Boonham, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Wullings, X.X., A.R. van Xxxxxxxxx, J.D. Xxxxx xxx A.D.L. Xxxxxxxxx. 1998. Detection xx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx potato, by xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23s xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.