Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 xxxx. 2 xxxxxx x. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (dále xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 odst. 1 písm. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ a xxxxxxxx opatření, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx šíření Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx xx. subsp. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Davis et xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, aby xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx výskytu xx xxxxxxxxx jejich xxxxxx x xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx xxxxx této xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis (Xxxxx) Xxxxx et xx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Kotthoff) Davis xx al.,

b) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx L.) s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x ostatní xxxxxxxx x xxxxxx lilkovitých (Xxxxxxxxxx), x nichž xxxx potvrzena možnost xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x přirozených podmínkách,

2. xxxxxxx hnědé xxxxxxx - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx X.) s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx xxxxx x plodů, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) a xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxx lilkovitých (Xxxxxxxxxx), x nichž byla xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby v xxxxxxx území nebo x určité xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx, x xxxxxx xxxxxxx šíření infekce x x určení xxxxxx území, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxx, zásilce, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx prostředku, xxxxxx xxxx xxxxxx části x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx včetně obalového xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

g) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx pozemku, v xxxxxxx xxxxx x xxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem kroužkovitosti xxxx původcem hnědé xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

i) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, na xxxxx se vztahují xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx které xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx příbuznou partií - xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vznikla xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxx původní xxxxxx; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx v témže xxxx vegetativním xxxxxxxx x jediné rodičovské xxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx osiva,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx příbuznou xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx sesterským klonově xxxxxxxxx xxxxxxx, které x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Průzkum xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx

(1) Ústav xxxxxxx každoročně x xxxxxxx s §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 až 7.

(2) Detekčnímu xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bramboru²⁾ xxxxxxx x České xxxxxxxxx x rozsahu xxxxx §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Evropské unie (xxxx jen "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx nesadbových xxxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx států,

d) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxx vymezené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx označené xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxx v karanténním xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Zjišťování xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx xxxxx hniloby xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx a xxxxxxxxxx do třetích xxxx podléhají

a) všechny xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx brambor,

b) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx do xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby xxxxx xxxxxxxxx

x) porosty xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx zdroje xxxxxxxxx x xxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx včetně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx podniků, které xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx podniků.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx potvrzení jeho xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx podezřelých x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx pěstební substrát x místech xxxxxxxx, xxxxx tyto partie xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x případech xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x b), odstavci 3 x v xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxx, x případě uvedeném x xxxxxxxx 4 xxxx. a) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) prohlídkou xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx dužninou xxxx, x xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odstavci 2 xxxx. c) x d),

c) prohlídkou xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxx uvedených x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx odpadů xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x) a x xxxxxxxx 6.

(8) Způsob xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx, původ, složení x dobu odběru xxxxxx při průzkumu, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx předávání xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx Xxxxx xx xxxxxxx uznávaných xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x biologie xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x přihlédnutím x xxxxxxxx produkce brambor x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxxxxx xx aktuální xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxx zavlečení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby x xxxxxxxx ve Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx ústavu xxxxxxxxxxxx (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xxxx stanoveným Xxxxxxx v xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx ve Věstníku.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx anebo xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x této xxxxxxxx Xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, že xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx průzkumu prováděného xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Ústav bez xxxxxxxxxx xxxxxxx právnické xxxx xxxxxxx osobě, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx na trh xxxx ji xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx x souladu x §10 xxxx. 5 zákona jednou xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx za účelem xxxxxxxxx srovnatelné xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxx státy. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx množitele, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx případech xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxx vždy x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx při zjištění xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxx ověřené xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx těmito xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxx původce hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xxxxx přílohy č. 1 oddílu X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) pozitivní výsledek xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxx pod xxxxx dohledem xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx Xxxxx x rámci xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 zákona x xxxxxxxxxx právního xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx provedení xxxxxxxx laboratorního testování, x xx způsobem xxxxxxxxxx podle §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx B, s xxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx zjištění xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 zákona xx účelem zjištění xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx zásilek, xx xxxxxxx xxxx odebrány xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx Xxxxxx, které xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x

x) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx odhadovaného xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxx xxxxxx zákazu xxxxxxx xxxx zajištění xxxxxxxx xxxxxxx nad přesunem xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx spojených x xxxxxxxxxx z xxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxx pozemky a xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx členského xxxxx xxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx členského xxxxx xxxxxxxxxxx týkající xx tohoto podezření x bude x xxxxx státem vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Pokud xxxx o podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx republika, xxxxxx Ústav vhodná xxxxxxxx podle odstavců 2 a 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Pokud úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odebraných xxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 potvrdí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxx x xxxxxxx x §76 xxxx. 2 xxxxxx x x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce hnědé xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxx, uvádění xx trh a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx xx xxxxxxxx rostliny, zásilku, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx objekty xxxxxx obalového xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxx místa produkce xxxxxx xxxx, xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx substrátu, x xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxx byl xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x prvotního xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x stanoví x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx předsklizňového xxxx xxxxxxxxxxxxx kontaktu, a xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, zavlažování x zalévání xxxx xxxx pěstitelské xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx písmene a),

c) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx označení xxxxxxxxxx předmětů xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxx x) a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce hnědé xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vodu, xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x x ohledem xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxx lilkovitých x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx by xxx xxxxxxxxxxx, zalévání xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxx

x) xxxxxxx úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným v příloze č. 1 ve xxxxxxxx xxxxxxxxx s cílem xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx xxxx odebírány xxxxxx, xx zamořenou,

c) xxxxxx karanténní xxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx xxxxx písmene x) x xxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx neprodleně oznámí xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Komisi x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), popřípadě xxxxxxxx 2 písm. x), x xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. x). Podrobnosti x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx členský xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby x xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx odstavce 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, stanoví xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření x vymezí karanténní xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Ústav xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx odborného xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx území a xxxxxxxxxxxx zóny, vymezovaných xxxxx odstavce 1 xxxx. c), odstavce 2 xxxx. x) x odstavce 4.

§6

Testování xxxxxxx příbuzných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx laboratorní xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx příbuzných x xxxxxxx, které xxxx označeny xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾, x xx v xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x rozsahu xxxxxxx xxxxxxxx x cílem xxxxxxxx xxxx rizika xxxxxxx šíření původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Xxxxx xxxxxxxx testování podle xxxxxxxx 1 Xxxxx x případě potřeby xxxxxx další xxxxxxxx x objekty xx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), b) a x).

§7

Xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona nařídí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x) xxxxx xxx sázena x xxx dohledem Xxxxxx xx s xx xxxxxx způsobem xxxxxxxx x bodě 1 přílohy č. 4, pokud Xxxxx předem ověří, xx neexistuje xxxxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby a xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx zamořená podle §5 odst. 1 xxxx. x) smí xxx xxxxxxx pod xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x bodě 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xx xxxx splněny xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x pokud xxxx xxxx partie xx xxxxxxx xxxxxxxx testování xxxxxxx příbuzných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x veškeré xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx označené xxxx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x dezinfekci xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 x xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xx tyto xxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx ani xx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 písm. x), xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v bodě 4 přílohy č. 4 x x xxxxxxx výskytu xxxxxxx hnědé xxxxxxx x bodě 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx může xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxx opatření xxxxxxx x odstavci 1, xxxxx budou tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x účinná. Xxxxxxxxxxx x těchto xxxxxxxxxx x o xxxxxxxxxx nařízených xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxxxxx zóně xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx povinných xxxx, xxxxxxxxxxxxxx podle §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Ústav zruší xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. b) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx a xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby xx x xxxxxxx x §7 xxxx. 1 xxxxxx zakázáno x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x vědeckým, xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx účelům, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 odst. 1 zákona, pokud xxx xxxxxxx narušena xxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx výskytu xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Testování rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, vypěstovaný na xxxxx České xxxxxxxxx x xxxxxxx na xxx, musí být xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 a x souladu x §3 odst. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xx x příslušném xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru určené x xxxxxx předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx bramboru, pokud xxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx potvrzen výskyt xxxxxxx xxxxx hniloby, xxx

1. xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru x xxxxxxxxx xxxxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. reprezentativní xxxxxx xxxxx partií základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího materiálu xxxxxxxx⁴⁾ v xxxxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx klonová xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx předstupňů, xxxx xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Účinnost

Tato vyhláška xxxxxx xxxxxxxxx dnem jejího xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx diagramy xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) detekce Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx x rostlin xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x podrobnosti xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku č. 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění karanténního xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Ústavem.

Testovací xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x reprodukovatelné xxxxxxxx úrovní Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx, zvláště xxx označování x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, jak xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx x níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX nebo XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx i xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx a musí xx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx daného xxxxxxxx. Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx vyžaduje xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x x rostlinách xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx pro xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus.

(1) Xxxxx xxxxxxxx je x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX xxxx (oddíl 4),

- PCR xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx izolace xxxxxxxx x rostlinného xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx infikovaném xxxxxxx, xxxxx přerůst xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx i xxxxxxxxxx xxxxx, nejlépe MTNA (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (oddíl 7).

(4) Xxxxx typické morfologie xxxxxxx je x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx zkouška xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddílu 9.

(7) Zkouška patogenity xx xxxxxxx v xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů, x xxxxx každý xx založen na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx je Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety zahrnutý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Standardní xxxxxxxx vzorku je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx použít x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. V xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx pozitivní, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx vyšetření XX xx vždy xxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátka, další xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx přesnost (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxx vhodná xxxxxx xxx xxxxxx izolaci Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX xxxxx xxxx XXX-88 xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx xxx získat xxxxx 3-10 xxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x pupkové xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx konkurencí Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktů xxxxxx selektivního xxxxxxxxx x rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stanovené xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx MTNA nebo XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, xxx izolační testy xxxxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce hlíz xxxxxxxx xxxxxx a x xxxxxxx potřeby xx provede test xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx použitím xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vzorcích bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx velikosti xxxxxx - xxx xxxxx 3.2.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx založené xx xxxxxxx biologických principech xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx xxxx pozitivní, xx pro xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx druhého xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx další test xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx izolační xxxx x typická xxxxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxx v xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx je popsán x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx xx xxxxxx v xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Kultivace xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x v xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx test xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xx jedná x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddílu 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán v xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx přítomnost xxxxxxxx kroužkovitosti

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx poli xxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xx xx konci xxxxxx. Xxxxx toho xxxx xxxxxxxx skryté xxxx se zamění x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx poškození. Xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxx na xxxx snadno xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx odlišné xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxxx infekci nadále xxxxxx, x xxxx xxxx x infikovaných xxxxxxx je omezený. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxx xxxxx stonku xxxxx xxxx chlorotické, žluté xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Často xxxx listy a xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx příznaků xxxx xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou slabá xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx cévního xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Prstenec svazků xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hlízy xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx než xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx cévních xxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx hmoty. Xxxxx xxxxxxx obsahuje miliony xxxxxxxx. Xxxxxx pletiva xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hniloby způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx část xxxxxxxx, xxxxxx se vyskytovat xxx blízko xxxxxxx xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxx šířit xx xxxx xxxxxxxx. X postupem xxxxxxx xxxxxxx x destrukci xxxxxxxx xxxxxx: vnější xxxxxx xxxx se xxxx xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx povrchu hlízy xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxx xx x Xxxxxx objevilo xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx kůra hnije x prstencem xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx být obtížné, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx jsou x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky řady xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx na 1 xxxx. lntenzivnější xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx vede x xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx popsaný xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx přípravou xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, jestliže xx xxx xxxxxxxx XXX test, xxx xxxxxxxxxx možné patogenní XXX) x xxxx xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx oschnout na xxxxxxx. Tento postup xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xx je xx xxxxxx příliš xxxxxx x jestliže xx xx provádět XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Pomocí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx slupka xx pupkovém xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx vyříznou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx konců xxxxxxx. Xx minimum xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 hodin xxxx xxxxxxxxxxxx při -20 °X xx xxxx xxxxxxx dvou xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx jsou při xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx zjištěny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Všechny xxxxxxxxx hlízy s xxxxxxxxxxx příznaky se xxxxxxx korkovatět po xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x uchovávají xx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx ukončení xxxxx xxxxx. Xxxxxxx hlízy xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x pupkové xxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jedno použití, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx x dezinfikovány xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx je xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, uchovávají xx x xxxxxx bez xxxxxxx pufru, x xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx maximálně 24 xxxxx. Schnutí a xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx skladování xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) výkrojky se xxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x třepají xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot/min) po xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3), xxx x xxxxxx xxxx rozdrcením v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx použití xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxx použita xxxxxxx sterilizovaná ostří (xxxx) x xxxxxx. Xxxxx má být xxxxxx XXX xxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxx v xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x použití xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx nadměrně xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°C) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 g xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µx xxx xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, 500 µl xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx glycerol xx konečnou koncentraci 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné části x xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 až -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx nutný transport xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.7. Xx xxxxxxxx nutné, xxx xx xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx předešlo xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x xxx xxxxxxx na XX testy x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Rostliny xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx je xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Pokud xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxx, měly by xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx předmětem vyšetřování.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx dezinfikovaného xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx o velikosti 1-2 xx ze xxxxxx xxxxxx každého xxxxxx přímo nad xxxxxxxx země.

Části xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx osuší savým xxxxxxx a shromažďují x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx:

x) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx dobu 4 xxxxx při teplotě xxxxx než 24 °X xxxx po xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx množstvím xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx xxxxxxx gumového xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx není možné, xxxxxxxx xx části xxxxxx v chladu xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx při pokojové xxxxxxx.

3.2.3. Po usazení, xxxxx má xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx nutná, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx se udržuje xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxxxxxxx xx skladuje s 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx glycerolu při xxxxxxx -16 xx -24 °C (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 až -86 °X (měsíce), pokud xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX test

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX test jako xxxxxx screeningový test, xxxxxxx xxxx prokázána xxxx xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx být jako xxxxx screeningový test xxxxxxxx test PCR xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx test XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx analýzy nutné xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Pokud je xX xxxx používán xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF testu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx méně xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) nebo XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx protilátek. Titr xx stanoven xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx dochází k xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx na 1 xx homologického xxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxx xxxxxxx vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) podle doporučení xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx měly xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Během xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx ředěni (WD) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx na xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx proveden xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx při - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Glycerol xxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x x resuspenzí xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx nutné, xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx plamenem (viz 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x jiným xxxxxxxxxxx kmenem xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 a xxxxxxxxx v xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx teplotě -16 až -24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx xx použijí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

4.1. Sklíčka xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x relativně xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µl - pro xxxxx xxxxxx xxxxx vyšší) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nezředěné pelety (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x řadě. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx xxxx duplikát xxxx xxx druhý xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se desetinná xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Vysuší xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60 °X), xxx xxxxxxxx nebo pomocí 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zmrazená x xxxxxx xxxx po xx xxxxx nejkratší xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Postup XX xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx test x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxx x XX xxxxx. X xxxxx xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x ostatních xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx xxxx (2T).

b) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se pracovní xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x IF xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) a xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx kompletně ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxxxx extraktu.

Pokud nejsou x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °C).

4.3.3. Xxxxxxxx xx kapky xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a tato xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx ponořením xx xxxx 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx v xxxxx XX. Je xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Testovací okénka xx pokryjí ředěním xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx titr. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx musí xxx stejné xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x tato xx xxxxxxxxx a xxxxx jako xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x glycerolem (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x přiloží xxxxx xxxxxxx.

4.4. Vyhodnocení XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx zvětšení 500x až 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx malým počtem xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx zkontroluje xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx fluoreskující x xxxxx obarvené x xxxxxxx titru protilátky xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s charakteristickou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxx xxx xxxxxxxxx s pozitivním xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx podezření x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To se xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx x pupkové xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x morfologií x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx protilátek podle xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF testu:

a) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií se xxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk na 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx u xxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx na potenciálně xxxxxxxxxx a je xxxxxxx další testování.

b) Xxxxxxxx IF xxxxx xx negativní xxx xxxxxx, které obsahují xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x vzorek xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx testování není xxxxx.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se validované xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xx xxxxxxx xx extraktů ze xxxxxx, které xxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx měl xxx xxxxx xxxxx proveden x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 nebo -68 xx -86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x negativním výsledkem.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ až 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx (např. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 X fosfátového xxxxx (XX) x 3-5 denní xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx xx samostatná xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx podle dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx oligosond xxxxxxxxx XXXX poskytuje kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu se xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x vzorků.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx se 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx do Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx x 500 µx fixačního xxxxxxx připraveného max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx xx přes xxx při teplotě 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % etanol. Xxx xxxx použití xx xxxxxxxx peleta x xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX x 50 µl 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje xx xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µx 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Kápne xx 16 µl fixované xxxxxxxx na čisté 10 okénkové xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 3, přičemž xx xxxxxxx 2 různé xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x to xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µl (v 0,01 M PB). Xxxxxxxxx xxxxxx vzorku (49 µx) může xxx xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °X xx přidání 1 xxxxxxxxxx množství 96 % etanolu. V xxxxxxx, xx je xxxxx FISH xxxxxx xxxxxxxx, odstraní xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx množství 0,01 X XX x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx sklíčku XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37 °C) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx je xxxxxxx xxxxxx přerušit a xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

5.2. Předhybridizace x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxx lyzozymu xxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 ml pufru (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX EDTA, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx xxxxx jednou xxxxxxx x nechat xxxxxx. Každý xxxxxx xx dobře pokryje xxxxxxxxx 50 µl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Potom xx xxxxxx xxxxxxx xx demineralizované vody, xxxxx jednou, x xxxxx xxxxxxxxxx papírem.

Alternativně xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx K 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) do xxxxx jamky x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Buňky xx xxxx xx stupňovaných xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx po dobu 1 minuty. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx sklíček.

5.2.3. Připraví xx xxxxx inkubační xxxxxx zakrytím xxx xxxxxxxxxxxx krabice xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °C xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx xx 1 xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx po dobu 5 xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx se umístí xx horkou xxxxxx xxx teplotě 45 °X a xx xxxxxxx ze 4 xxxxxx xx xxxxxxx / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx 2 krycími sklíčky (24 x 24 xx) tak, aby xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx předehřáté xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x peci xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Připraví xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 l xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx water = XX), 1 l 1x xxxxxxx (334 xx 3x hybmix x 666 ml XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x hybmix x 833 xx UPW). Xxxxx z xxxx xx přeinkubuje xx xxxxx lázni xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xx držáku sklíček.

5.2.9. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 minut x xxxxxxx x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11. Sklíčka xx xxxxxx krátce xx XXX x položí xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx krycího xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX xxxx podobný) do xxxxx jamky x xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 mm).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Sklíčka xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx vhodným xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx gramnegativních xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx fluorescenčně xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx xxxx být xxxxx fluoreskující a xxxxx xxxxxxxx. Test XXXX (xxxxx 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx a xxxxx xxxxxx. X vzorků, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxx málo xxxxx, se xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Hledají xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat xxxx xxx xxxxx než x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, které xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xx neberou x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx všechna xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx FISH xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx části xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx x XX xxxxx.

5.3.5. X xxxxx xx berou xxxxx fluoreskující xxxxx x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, viz 5.3.2.

5.3.6. Interpretace výsledku xxxxx XXXX:

x) Výsledky XXXX xxxxx jsou xxxxxx, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx pro Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x při použití xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou přítomné xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 mikroskopickém xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus. Xxxxx xx další xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx FISH xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6. PCR test

PRINCIP

Použije-li xx XXX xxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Pokud xx XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, je xxx dokončení diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Využití xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje jen xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx. Xxx dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx xxxxx laboratořích xxxxx xxx vyžadovány xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX činidla x protokoly. Xxxxxxxxxx xx používá metoda x interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx zabránilo kontaminaci xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx zkušení xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na molekulární xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (u xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx se xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, aby bylo xxxxx, xxxxxx došlo x přenosu XXX.

XXX xxxx by xxx xxxxxxxxx následující negativní xxxxxxxx:

- extraktu ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a XXX xx vzorku,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x nimž byl xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- suspenze 10⁶ xxxxx na 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx vodě x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- pokud xxxxx použít xxx xxxxxxxxx XXX testu xxxx DNA extrahovanou x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxx x odděleném xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx xx měly xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Použijí xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní kontrolní xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx cílové DNA x xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx jsou x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX x xxxxxx enzymatických xxxxxx a koncentrující xxxxxxx DNA x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, uvedenou x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Tris-HCl [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx do xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x teplotě 95 °X xx xxxx 10 minut.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxxxx xx ledu.

4. Přidá xx 80 µx xxxxxxxxx roztoku lyzozymu (50 xx xxxxxxxx xx 1 ml x 10 xX Xxxx HCl, xX 8,0) x xxxxxxxx xx xxx teplotě 37 °X po xxxx 30 minut.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx teplotě 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx DNAR xxxxxx B (Invitrogen)a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, až xxxxxxxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µl xxxxxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx sníží a xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X xxx xxxxxxxx xxxx a vytvoření xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx se xxxxx xxxx do xxxxx mikrozkumavky.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % etanolu (-20 °C), krátce xx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx se xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x pelety xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x promíchá převracením xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx se zachová x odstraní etanol.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx v XXX xxxxx xxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx xxxx (UPW) x xxxxx stát nejméně 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx při teplotě -20 °C až xx xxxxxxxxxx při XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxx XXX xx xxxxxxx 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx extrakce XXX xx se xxxxx xxxxxx, pokud xx se xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk xx 1 ml stejně xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx jeden xxxxxxxxx xxxxxx vzorku XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX v xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Validovaný xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, která xxxxxxxx xxxx interní xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µx XXX reakce.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx směs XXX x přidá se xxxxxx sterilní xxxx XXX, která xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx vzorku.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx xxx počátečním xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx. Nanese xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x xxxxxxx vzorku xxxxxxxx x 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Trisacetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X xx xx. Xxxxxxx se xxxxxx marker XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx DNA xxxxxxxx x xxxxxxxx bromidu (0,5 xx xx x) xx xxxx 30-45 minut, xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx mutagenem.

6.3.3. X obarveném x XX (xxxxxx vlnové xxxxx, xxxx. 302 xx) prosvíceném xxxx xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx velikosti a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx amplikonu XXX xxxxxxxxxx restrikční xxxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované DNA xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx x vhodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX xxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx s xxxxxxxxxx x štěpenou xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX testu:

PCR xxxx xx negativní, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxx vzorku, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx pozitivních kontrolních xxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR s xxxxxxxxxxx interními kontrolními xxxxxxx: druhý produkt XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxxx x xxxxx vzorkem).

PCR xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx zjištěn xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx x vzoru (pokud xx xxxxxxxx), za xxxxxxxxxxx, že nebyl xxxxxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze dosáhnout xxxx opakováním testu x xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx inhibici PCR, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x xxxxxxxxx kontroly x Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx reakce došlo, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx amplikon xxxxxx z xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie xx 1 xx xxxxxxx x extraktům xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx x negativním (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Nejvyšší xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxxx použít x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx odrůdy lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obohacující médium xxx růst Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx xxxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx rozdělí mezi xxxxxxxx xxxxx jednou x xxxx uvedených xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Používají se xxxxx xxxxxxxx ve xxxx 2-3 listů xx úplného rozvinutí xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxx xx zajistilo xxxxx využití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x efektivní xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Inokulace xxxxxxx I

7.2.1. Každý xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx květináče x průměru 10 xx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x vyhloubenou xxxxx x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx a 15 cm xxxxx). Xxx každý xxxxxxxxx xxxxxx se xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxx sterilní xxxxxxxxx fólie. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx místě xxxxxxx xxxxxx kolem xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx děložními xxxxxx a prvním xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx dlouhý 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx čepele xxxxxxxx x xxxxxx xx do xxx xxxxxxxx štětečkem xx xxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx II

7.3.1. Xx stonek xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xx napipetuje xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx list xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Pomocí xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x xxxx xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx a xxxxxxx xxxxxxxxx jako 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, přičemž x řezem xx xxxxx v xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx vazelínou z xxxxxxxx stříkačky.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Pro xxxxxxx xxxxxxxxx napětí xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx den xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx těsně xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx stříkačky x xxxxxxxx jehlou (xx xxxx xxx 23 X). Peleta xx rozdělí mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Jako pozitivní xxxxxxxx xx inokuluje 5 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 nebo 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxx xx xx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx infikovaných xxxx xxxxxxxx.

7.6. Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 nebo 7.4).

7.7. Xx inokulaci xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxx (dodatek 8) xx dobu xx 4 týdnů xxx teplotě 18-24 °X. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx xx tak, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx vody xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °C x optimální teplota xx 21 °X. Xxx xx zamezilo xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x negativní kontroly xx skleníku xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx policích, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxxxxx oddělení mezi xxxxxxxxx x xxxx. Xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxx různé xxxxxx inkubovány xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx přepážkami. Xxx xxxxxxx, zalévání, kontrole x jiné xxxxxxxxxx xx věnuje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx ke xxxxxxxxxxx. Xx nezbytné, xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx byly xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxx na xxxxx.

7.8. Pravidelně po xxxx dnech xx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxx, xxxxx xxxx začít xxxx okrajová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx pletivo xxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx nebo strakaté, xxx před xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mívají xxxxx mastně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx jasně xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; čím xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Rostliny mohou xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx nízkým koncentracím xxxxxxx kroužkovitosti xxx xxxxxx rostliny, xxxxx xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx ve xxxx xxx listů a xxxx xxxxxx před xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx způsobovat xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tyto xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx rychle vadnou xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Erwinia xxx

7.9. Xxxxxxx xx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx zvadlých xxxxx xxxx stonků xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxx xX xxxx XXX xx xxxxx z xxxxx a xxxxxxx xx xx vhodném (xxxxxxxxxxx) médiu (xxx xxxxx 8). Může xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

7.10. Za xxxxxxxx okolností, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx zůstává x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx inkubační xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4 xxxxxxx pozorovány xxxxx příznaky, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxx o xxxxx 1 xx x každé testované xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx být xxxxxxxxx izolace na xxxxxxxx (selektivních) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx kultury xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se identifikují x potvrdí xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx potvrzena xxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Ačkoliv xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx izolovat x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx napadení.

Mohou xxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x proto xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx izolaci xxxxx x pelety xxxxxxx hlízy (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety z xxxxxxx části xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, ale u xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX složených vzorků (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx xx třeba xxxxxxx xxxxxxxx stonků xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 cfu xx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus (např. XXXXX 4053 nebo XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jeho xxxxxxxx xxx růst xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

8.1. Roztěr xx xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Ze 100 µx xxxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx z xxxxx vejcoplodého xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

8.1.2. lzolace x xxxxxxxx bramborové xxxxxx xx xxxxxxx nepodaří xxxxx náročným růstovým xxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx pletivech xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout ředěním, xxxxxxx patogen xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 na XXXX xxxxxx nebo XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx použití xxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxx (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx se xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Počáteční xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x počítání xxxxx xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx provádějí po xxxxx xxxxx, s xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Čištění xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx YGM xxxxx; xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx měly xxxxxxx xxxxx, než xxxx média xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3-5 dnech.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (složení xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx xxxxxx glukosový agar,

- xxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx 21-24 °C xx xxxx xxxxxxxxx 10 dní.

Původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pomalu a xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx pro zaručení xxxxxxx. U xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Typické xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x rovnými okraji x xxxxxxx xxxx x xxxxxxx 1 - 3 mm.

Jednoduché Xxxxxxx barvení (dodatek 9) xxxx xxxxxx vybrat xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx (viz xxxxx 9) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují xx použití xxxxxxx xxxx následujících testů xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx principech.

V xxxxxxx xxxxxxx se zahrne xxx xxxxx provedený xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Veškerá xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxx při 21 °X x xx xxxxx xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx po xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx musí zahrnovat xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutriční x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx musí xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx živného xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (O/F) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx oxidázy -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx ureázy -

Tvorba X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Růst v 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Hydrolýza eskulinu +

Xxxxxx xxxxxxxx z:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - nebo slabá

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX test

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk/ml x xxxxx na xX (dodatek 3).

x) Připraví xx xxxxx dvojnásobného xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx lF postup (xxxxx 4).

d) Pozitivního xxxxxxxx lF testu xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx titru pozitivní xxxxxxxx.

9.3. XXX test

a) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx xxxx (UPW)

b) Xxxxxxx se 100 µx suspenze xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx vodní xxxxx při xxxxxxx 100 °C xx xxxx 4 xxxxx. X případě potřeby xx xxxx lýza xxxxx xxxxxxxx přidáním xxxxxxx xxxxxxxxxxxx NaOH xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx potom uložit xxx teplotě -16 xx -24 °X xx xx použití.

c) Xxx xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx postupy XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Pastrik x Rainey, 1999; Xxxxxx a xxx., 1999).

x) Identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx velikosti x xxxx stejnou mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx kontrolní kmen.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

x) Xxxx FISH je xxxxxxxxx, xxxx-xx dosaženy xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x pozitivní xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx mastných xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) po xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx FAP je xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxxxx s profilem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných kyselin 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx jasně xxxxxx x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X xx xxx tyto bakterie xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx vyskytuje xx všech Xxxxxxxxxxx xxx. x xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kolem 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx v XXX.

x) Xxxxxxx se xxxx postupem podle Xxxxx a kol., 2001.

10. Test xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx patogenity.

10.1. Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx z 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx se 5-10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Inkubuje se xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx dostatečném xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx zaléváním, aby xxxxxxx x přemokření xxxx vyschnutí. U xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx nastat typické xxxxxxx, xxxxx rostliny, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx doby nevykazují xxxxx příznaky infekce, xx xx xxxx xxxxxxxxx až 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx vejcoplodého, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx xx 3 týdnech příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx, nemůže xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx patogenní formu Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx x příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 xx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového pufru. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx na XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 xxx při xxxxxxx 21-23 °X x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Laboratory	York	Anglie
Scottish Agricultural Xxxxxxx Agency	Edinburgh	Skotsko
Laboratoire National xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Végétaux, Xxxxxxx xx Quarantaine xx la Xxxxx xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Laboratory	Dublin	Irsko
Plantenziektenkundige Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Research Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx institut xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX a XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx médiu XXXX a xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx pufru xxx získání hustoty xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx tvorby xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx z pupkových xxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x které xx xxxxx, xx xx prosta C. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx způsobem x xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 sterilních xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µl resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X následujících xxxx xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí jako xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx alikvotní části x 100 µl xx sterilních xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až-24 °X xx xx xxxx použití.

Přítomnost a xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx být nejprve xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX test xx xxxxxxx xxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x XXXX xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x PCR musí xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxx x negativních kontrol.

Dodatek 3

Xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Neotevřené sterilizované xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x rostlinných tkání xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x provede xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx při 121 °X xx dobu 15 min.

Užitečné mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací činidlo (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx PCR	50 x
(*) pro použití xxx xxxxxxxx homogenizací

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Pufry xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx xxx IF (10 mM xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx sklíček. Xxxxx xx 0,1 % Tween 20 x pufru pro XX.

2.3. Xxxxxxxxx pufr x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx na XX xxxxx x zvýšení xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí roztoky xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Citifluor® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX x XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x jednom pozorovacím xxxx (x).

2. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx mikroskopického xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx sklíčku x více xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx objektivu.

s = πx²/4X²X²,

xxx i = xxxxxxxxxx pole (x xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

G - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované pelety (X).

X = X x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx okénku x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx C. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx agar = NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °C xx dobu 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx dextrose xxxx = NDA)

Difco xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % D(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 X po xxxx 20 min.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Xxxxx peptone xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
D(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	10,0 g
Baktoagar (Difco)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx solemi (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 x
XxXX4 . 7H2O	0,1 x
XxXX4 . H2O	0,015
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005
Baktoagar (Difco)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx rozpustí x xxxxxxx xx sterilizace 0,5 1 média x autoklávu xxx 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx není xxxxxxx jinak, pocházejí xxxxxxx složky xxxxx x BDH.

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
Manit	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 g
Agar (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx rozpustí, pH xx upraví xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.) a xxxxxxxxx xx 50 X xx přidají antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06 g, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, amphotericin X 0,01 x.

X xxxxxx xx nechají roztoky xxxxxxxxxx: trimethoprim (Xxxxx) x nalidixic xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Sigma) (1 xx/xx) x xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 měsíce. Xx xxxxxxx antibiotik xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx skladování v xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Médium XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX xx 7,2. Xx autoklávování x xxxxxxxxx xx 50 °X se přidají xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: polymyxin X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxx přípravu zásobních xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx roztoky xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx je 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx x chladu xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx a xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus na 1 xx vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx vybraných xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Pastrik, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx PSA-1 5'- xxx xxx gtg xxx tgg xx xx -3'

primer XXX-X 5'- tac tga xxx gtt xxx xxx xxx c -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx ctg xxx tgc -3'

primer XX-8-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx ga -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x XXX X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx PSA-primer(i).

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X xXXX 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx PCR

Činidlo	Množství xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725 μl
10x XXX pufr (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx x-x TP (20 xX)	0,125 μx	0,1 mM
Primer XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μM
Primer XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μM
Taq xxxxxxxxxx (5 U/μl) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μl
Celkový objem	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx použití Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (AmpliTaq xxxx Xxxx) x Xxxxx XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X x NS-8-R xxxx optimalizována pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx DNA podle Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx 6.1 písm. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx izolace XXX xx nutná xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx činidla.

1.3. Xxxxxxx podmínky pro XXX

Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 minuty xxx xxxxxxx 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 minuta xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 minuta xxx xxxxxxx 64 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (prodlužování xxxxx)

25 cyklů v) 30 sekund xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx při xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx primerů)

vii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx prodlužování

ix) Udržuje xx při teplotě 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx optimalizován pro xxxxxxx s tepelným xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Při xxxxxxx jiných xxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxx kroků cyklů xx), iii), xx), x), xx) x xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x DNA X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkuji xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x enzymem Bgl XX xx inkubaci xxx teplotě 37 °X xx dobu 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx nanášecího xxxxx

2.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx voda 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx 300 µl

Destilovaná xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1x.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro Cms XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx ctc xxx xxx -3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX OBSAHUJE PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXX RUKAVICE A XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (xxxx. Ultra xxxx water = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx se 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1N XxXX x zamíchání magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (PB; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx pH a x xxxxxxx xxxxxxx xx upraví xxxxxx XXx xxxx NaOH.

[UPOZORNĚNÍ: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT XXXXX xX!]

xxx) Roztok xx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxx prachem xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx fixační xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Hybmix

NaCl 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx filtr x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 ng/µl

Sonda XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle výpočtů x tabulce. Xxx xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx voda	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx uchovávají x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx xxxx elektrickým xxxxxxx.

5. 0,1 M xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) se xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxx x xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx substrátu.

Lilek xx xx xxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, pokud je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Roztok krystalové xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x xxxxxxxxxx violeti x 20 xx 95 % etanolu.

Rozpustí xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx roztok

Jód 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx voda 300 xx

Xxxxx xxxxx xx společně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Nasypou xx xx xxxx a xxxxxxx xx x xxxxxxxx nádobě xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X 2,5 g

95 % xxxxxx 100 ml

Zamíchá xx a uloží xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, vysuší se xx xxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x nechá xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx se omyje xxx xxxxxxx vodou.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx vodou x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx po xxxxxxx přidávaného 95 % xxxxxxx xxx xxxxxx, pokud se xxxxxxxxx xxxxxxx, nebo xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Opláchne xx xxx tekoucí xxxxx x vysuší xx xxxxx xxxxxxx.

8. Zalije xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x nechá se xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx se savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx růžovočerveně.

(¹) Xxxxx xx xxxx použít xxxxxxxx dostupné roztoky xxxx barvicí soupravy.

LITERATURA

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Publ XXX 11 288 EN, 21 pp.

2. Xxxxxxxx, X. F., 1970. Xxxxxxxxx xxx preliminary xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Path., 49, 213-218.

3. Dinesen, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx and diagnosis xx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx methods xx xxxxx microscopy. X: Xxxxxx of xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx fermentative xxxxxx oxidative xxxxxxxxxx xx carbohydrates xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx bacteria. X. Bact., 66, 24-26.

6. Xxxxx, J. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx fattyacid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, J. X. x X. Van Xxxxxxxxxxx. Xxx interpretation xx the EC xxxxxx for the xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. EPPO Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Jansing, X. a X. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxx development xx x xxxx-xxxxxxxxx medium. Xxxxxxx of Plant Xxxxxxxx xxx Protection, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx pyocyanea xx xxx oxidase xxxxxxxx. Nature, Xxxx., 178, 703.

10. Klement X.; Rudolph, K x D. X. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. The xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. J. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. X., X. Xxxxxxx x X. X. Hayward, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x X. W., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx onicum (Spiek. xx Xxxxx.) Skapt. xx Burkh.) xx xxxxxx stocks. EPPO Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Selection xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx primers xxxx XXX intergenic xxxxxx xxxxxx for xxxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, D., Xxxxxxx, X., W. x X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx of three xxxxxx DNA sequences xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -H. a X.X. Rainey. 1999. xxxxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx reaction-based xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx host XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Ramamurthi, C. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx some Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx bacteria xxx xxxxx relationship xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx agric. Xxx. Sta., 366, 52 xx.

19. Schaad, X., Berthier-Schaad, X., Xxxxxxx, A. a Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx X1X-XXX and xx xxxxxxxxx real-time xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx system. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, W. 2001. Laboratory guide xxx identification of xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, V. X. D., 1967. X xxxxx to xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx genera of xxxxxxxx. 2xx ed., Xxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Stead, DE., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogen Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofPlantPathology, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, P. X. X. xxx X. X. Collins, 1974. X xxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx between xxxxxxxxxxxx: xxxxxx of Xxxxxxxxxxx working party. Xxxxxxx van Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. X. x X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23x xXXX-xxxxxxxx probes. Xxxx. Environ. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

B. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx různé xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete x xxxxxxxxx dalších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x ve xxxxxxxx xxxx a xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx x kontrolních materiálů xxxx xxxxxxx v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku 1.

Protože protokoly xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x odpovídajícím xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx zacházení x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Musí být xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx označování x x dokumentaci.

Podezření z xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx potvrzen xxxxxx screeningovým xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu.

Pokud je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xx podezření xxxxxxxxx a musí xx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx daného xxxxxxxx. Xxxxxxxx je xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití postupových xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx určen xxx xxxxx a rostliny xxxxxxxx s podezřením x xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx z infikovaného xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxx xxxxx půdě x x případě xxxxxxxxxxx výsledku identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

1) Xxxxx příznaků xx xxxxxxx v xxxxxx 2.1.

2) Rychlé xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxxx xxxxxxxxxx diagnózu, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Test xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx popsán x oddíle 6.1.1.

4) Xxxx na přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Test XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx je xxxxxxx snadno xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx metodou xxxxxxxxxxx roztěrů (postupným xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Kultivace xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxx xxxxx saprofytických xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxx, xxx izolační xxxx xx negativní, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxx doporučuje xx xxx xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx je xxxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx screeningových xxxxx (xxx poznámka x xxxxxxxx 3), z xxxxx xxxxx je xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a dále, x xxxxxxx izolace xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x jednoho screeningového xxxxx xxxx dostačující x tomu, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx podezřelý. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x každé sérii xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx počet, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 3.1.1.

3) Xxxxx jsou xxxxxxx dva testy xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx screeningový test. Xx-xx xxxx negativní, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxx jeden xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Je-li xxxxx nebo další xxxx negativní, je xxxxxx považován za xxxxxxxxx. Další xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Test XX xx xxxxxx x oddíle 6.1.5.

5) Xxxx selektivní xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Testy ELISA xxxx popsány x xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest xx popsán v xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li ve xxxxxxxxxxxxxx testech získány xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx stejné xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx test x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx podezřelých xx X. solanacearum xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rostlin xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Viz xxxxx 3.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx xxxx negativní, je xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. V případě, xx je test xxxxxxxxx, vyžaduje xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX xx xxxxxx v oddíle 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx v oddíle 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kuItur, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xx dosáhne pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx popsán x oddíle 6.3.

2. Xxxxxxxx původce hnědé xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x polních xxxxxxxxxx xx rozpozná xxxxxxxx xxxxx směrem x vrcholu xxxxxxxx xxx vysokých xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zelené, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Dochází xxxx k xxxxxxx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx výhonku nebo xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx uříznutých stonků xxxxxxxx rostlin obvykle xxxxxx xxxxx x xxxxxx bakteriální sliz xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx stonku xxxxxx do vody xx z cévních xxxxxx táhnou xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx třeba xxxxxxxxx napříč x xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx pupkový xxxxx. X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx až xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx minutách xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bakteriální sliz. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xx může xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx infekce rozšíří xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x x xxxx xxxx xxxxxxx bakteriální xxxx, xx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx objevit červenohnědá, xxxxx xxxxxxxx místa xxxx xxxxxxxx vnitřního xxxxxxx cévního pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx bakteriálního x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Příznaky x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx málo dní xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx dolů x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx úplným xxxxxxxxx. Xx méně xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota xxxx xxxx než 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx vodou xxxxxxx pruhy od xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx dokladem xxxxxxxxx xxxxxxx systému. Při xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx hnědě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx nažloutlý xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx hostitelů

Rostliny Xxxxxxx xxxxxxxxx x X. xxxxxx. Za normálních xxxxxxxx xxxx u xxxxxx plevelných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx zřídkakdy pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °C xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. x xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx jako x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx S. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxx ve xxxx, xxxxx vykazovat xxxxxxx světle xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pletiv xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx částí xxxxxx xxx vodou. Z xxxx xxxxxxx svazků xxxxx vytékat bakterie xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, jestliže xx xxx stonku xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, x to x xxx xxxxxxx xxxxxxxx vadnutí.

2.2. Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx screeningové xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxxxx diagnóze, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx jeden xxxx xxxx následujících testů:

2.2.1. Xxxx xx výtok xxxxx ze xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Test xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-b-hydroxybutyrátu (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx tepelně xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X xxxx súdánskou černí (xxx oddíl 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx (Xxx oddíl 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx test XX (viz oddíl 6.1.5.), xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx oddíl 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx při xxxxxxx

x) Odebere xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx nebo z xxxxxxx vláken xxxxxx xxxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxx vadnoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx x malém xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx desetinásobných xxxxxx xxxxxxxx.

x) Přenese xx 50-100 il suspenze x roztoku xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx XXX; viz dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx při xxxxxxx 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx izoláty X. solanacearum perlově xxxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx spirálkami xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum tvoří xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx zcela xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx solanacearum

Testy potvrzující xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx této xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx vzorku vede x zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx x pro xxxxxx s xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx všech xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x velikosti 200 xxxx.

- Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx xxxx může xxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 2-30 °X po xxxx až 2 xxxxx před xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxx. Použijí se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x obsahem chlóru, xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx PCR xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Hlízy se xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx jestliže má xxx xxxxxxxx xxxx XXX nebo přímá xxxxxxx.

3.1.1.1. Pomocí čistého x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xx odstraní xxxxxx xx pupkovém xxxxx každé xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx vodivé xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx cévní svazky xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (hnijící) hlízy x xxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx vyříznuti xxxxxxxx zjištěny xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx řezu xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx s podezřelými xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xx xxxx nejméně 2 xxx při xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (suberizaci) x xxxxx se xxxxxxxxxx x chladu (4-10 °X) xx řádných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Výkrojky z xxxxxxx části xx xxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx xx jedno xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (x případě, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x pupkového xxxxx xxxxxxxx. Není-li xx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx teplotě (18 -25 °X) nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Zalijí xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxxx se x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °X nebo 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx množství (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx v mixéru (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Thurax) nebo xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx nebo Bioreba, 150xx x 250mm, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx pomocí mixéru xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x xxxxxx. Xxx testu XXX xx xxxxx zabránit xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx nebo x xxxxxx přístroji. X xxxxx PCR xx xxxxxxxxxx použít drcení x xxxxxxx na xxxxx použití x xxxxxxx zkumavek xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Supernatant xx dekantuje. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx dobu 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10 °C) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), xxxxx xx omyje xxxxxxxxx (10 xx) extrakčního xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx) při teplotě 4-10 °C a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx v 1,5 ml xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Použije xx 500 µx xxx R. xxxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx části x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (měsíce). Xxxxxxxx xx uchovávají xxxxx testování xxx xxxxxxx 4-10 °C.

Opakované xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx nedoporučuje.

Je-li xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx boxu x xxxxxxxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx nezbytně xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx byly xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx pro xxxxxxx XX a xxxxxxx testy.

3.1.2. Testování

Postupové xxxxxxxx x popisy xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

IF xxxx (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Podrobné metody xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx účely xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx smíšené xxxxxx. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, měl by xxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx reprezentativním vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx uzavřené xxxxxxxx xxxxxx se xxxxx 1-2 xx dlouhé xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx kousek xxxxxx 1 xx x paty xxxxxxx xxxxxx hned nad xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z xxxx nebo skleníku: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx nejspodnější xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nad xxxxxxxx x hlavním stonkem. Xxxxxxx se nejspodnější, 1 xx dlouhý xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx rostliny: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xxxx zahradnickými nůžkami xx xxxxxxx 1 xx dlouhý xxx x paty xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx. X xxxxx potměchuti (S. xxxxxxxxx) xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx rostlin rostoucích xx xxxx se xxxxxxxx 1-2 cm xxxx xx stonku xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx statisticky representativní xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx pro každou xxxxxxxxxxx plevelnou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Detekce xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx pozdního jara, xxxx a xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx infekci xx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxx plevelné rostliny xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x další xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx hostitelskými xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx spp. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx druhy, xxxxx mohou hostit xxxxxxxx R. solanacearum xxxxxx 2/Xxxx 3 x kořenech x/xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, zahrnují Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx glomeratum,

Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx cannabinum, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx scleratus, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx. X. nutans., Tussilago xxxxxxxx a Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X této xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx bakteriální xxxx). Xxxxxxxx xxx xxxxxx x příznaky se xx stranou xxxxxxxx xx odděleně (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Části xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x ihned xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Potom xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxxx xx části xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx teplotě xx 24 °X xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx extrakčního xxxxx (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxx se xxxxx stonků x xxxxxx nejdéle xx 72 xxxxx xxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °C) na 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.1.4. Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle není xxxxx, ale lze xx xxxxxxx filtrací xxxxx odstřeďováním xxxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vzorkový xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Jeden xxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx xxx xx xxxxxxxx x 10-25% (v/v) sterilním xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx testování.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx protokolů xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx xxxxx xxxxxxx ve xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování.

(2) Metody xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx v xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx zvětšuje xxxxxxxx jak xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxx tehdy, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx obohacovacího xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testu XXXXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. a 6.1.8.

(7) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx je xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x důvodu xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx saprofytická xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx po xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx a identifikace X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Princip

Validované xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x testování xxxxxx odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx však xxxx x závislosti na xxxxxxxxx. Citlivost xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx populacemi xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx x odpadní xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx než x xxxxxxxxx xxxx. Zatímco xxxx xxxxxxx schéma xxxxxxxxxxx detekci xxx 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní vodě xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Z xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx nebo filtrace), xxx nichž dojde xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Omezení xxxxxxxxxx testovacího xxxxxxxx xx mělo xxx xxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx vodě, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx x odpadní xxxx ze zpracování xxxxxxx a x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v povrchové xxxx xx nejspolehlivější x období pozdního xxxx, léta x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x různé xxxx xxxxx výše uvedených xxxxxx xx určených xxxxxxxxxxxx místech zvýší xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xx značnému xxxxxxx x tím x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx přítomny.

4.2.1.1. Xx vybraných xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx možno 30 xx xxx xxxxxxxx x 2 x od xxxxx. Xxx vzorkování xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx vody. Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx vzorky xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx nejméně 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx 3 xx xxxxxxx xxxx x vzorkují xx rovněž xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx a xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000 g xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x po dobu 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X, slije xx kapalina xxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx membránu (xxxxxxxxx velikost pórů 0,45 µm) x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tato xxxxxx xx xxxxxx xxx velké xxxxxx xxxx, xxxxx obsahují xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx brambor xxxx u xxxxxx xxxxxxx xxxx, protože xxxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby x půdě

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx test xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Biotest xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Kultivace může xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx nebo inhibice xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx po dalším xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x oddíle 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx popsané x xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx patogenu xx xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx z xxxxxxx vody. Je xxxx nutné xxxxxxxxxx, xx xxxx metody xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, xxx zaručovaly xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x polní xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx infikována, xxx i xxx xxxxxxx této xxxxxx xxxxxx xxxxx stupeň xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Příprava xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování xxxxx xxxx xx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx hlístů. Xx xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx 0,5 xx 1 kg xxxx xx 60 xxxx xx ploše 0,3 xx x xxxxxxx 10-20 cm. Je-li xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxx míst xx 120 x xxxxxx 0,3 xx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorky xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx navzorkuje xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 kg x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Před xxxxxxxxxx xx každý xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx rotační xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Je-li xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 a 10-20 x xxxxxxxxxx kamínků xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Testování

Postupový xxxxxxx x xxxxx xxxxx jsou v xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. solanacearum ve xxxxxxxx vadnoucích rostlin xxxxxxxx, rajčete nebo xxxxxx hostitelských rostlin xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: uřízne xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Xxx xxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, xxx se xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx charakteristická samovolně xxxxxxxx xxxxxx bakteriálního xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx svazků.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Připraví xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx mikroskopické xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx kmenu xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x známém PHB xxxxxxxxxx xx.

3. Xxxxxxx xx nechají uschnout x spodní povrch xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Preparáty xx xxxxxx xxx xxxxxxx modří xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx mikroskopické xxxxxxxxxx podle níže xxxxxxxxx popisu:

Test xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx xxxxxxx xx zakápnou 1 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx barvící xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx z kohoutku. Xxxxxxxxxx voda se xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a xxxxx se inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Znovu xx xxxxxxx xxxxxx vody x přiloží xx xxxxx sklíčko.

f) Zkoumá xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem xxx 450 nm xxx xxxxxxxx nebo vodní xxxxxx xx zvětšením 600x až 1000x x použitím xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo xxxxx imersi.

g) Xxxxxxxx xx, xxx xx xxxxxx na PHB xxxxxxxxx jasně oranžová xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Zakápnou xx všechna sklíčka 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X v 70% xxxxxxx a xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx a xxxxxx se opláchne xxxxx tekoucí vodou x xxxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx ponoří xxxxxx do xxxxxx x vysají xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx nezbytná bezpečnostní xxxxxxxx x pracovat x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) vodným xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx 10 vteřin inkubovat xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx škodlivý, je xxxxx dodržet xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření a xxxxxxxx v xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x kohoutku, xxxxxx xx přebytečná voda xxxxx papírem x xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx olejovou xxxxxx x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx x pletiv x příznaky xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, např. xxxxxxxxx xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xxxx obarvenými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx označené xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x) Připraví se xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky použitím xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum a xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx x pozitivních vzorcích xx jemném míchání xx dobu 15 xxxxxx xxxxxx aglutinace.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx živnou xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, provede xx xxxxxxxxx xxxx x zajištění reprodukovatelné xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použije xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Elphinstone et xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx R. solanacearum xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Dále, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx mít atypickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Petriho xxxxx jsou přeplněny xxxx xxxx rovněž xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx znovu xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx přípravených xxxxxxxx ze xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx touto xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Metoda xx xxxx xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx při teplotě xx -68 xx -86 °C.

Pozitivní xxxxxxxx xx připraví xxxx xxxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x testování.

U xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx živné xxxx xx měla xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x rutinnímu xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx kultivaci patogenu. Xxxxxxxxx materiál xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx se xxxxxx x cílem zajistit, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx na 1 xxxxx pro každé xxxxxx.

2. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 28 °X. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx a xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx mléčně bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xx 3 dnech xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx x xxxxxxxxx pruhy xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx se xx tomto xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum. Xxxxx xxx malé, kruhové, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx jen xxxxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx rozetřou nebo xxxxxx xxxxxxx zřeďování xx universální xxxxxx xxxx., xxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Kultury xx uchovávají xxxxxxxxxx xx sterilní vodě (xX 6-8, bez xxxxxx) při pokojové xxxxxxx v temnu xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx teplotě -68 xx -86 °C xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx identifikace podezřelých xxxxxx (viz oddíl 6.2.) a test xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx očkování na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 dnech xxxxxx xxxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, že nedošlo x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx izolovány podezřelé xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (viz dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxx citlivosti xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx inhibitorů XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. solanacearum xxxx xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X tohoto xxxxxx xxxx být xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx dojít x rozvoji xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příbuzných saprofytů, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx použít xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X obohacovacího xxxxx XXX xx přenese 100 ul xxxxxxxx xx vzorku do 10 xx obohaceného xxxxxx (dodatek 2), který xx xxxxxx připraví xx sterilních xxxxxxxx xxxx xxxxx. U xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx použit xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (např. 100 xx v 1,0 xx xxxxxxxxx živné xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 hodin xxx xxxxxxx 27 až 30 °C v xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx, které umožní xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx XXX xx obsah xxxxx xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx R. solanacearum x důvodu xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, lze xxxxxxx xxxxxxx výsledků obohacením xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx jinými postupy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx testu XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX jako hlavní x výsledek XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx validovaný zdroj xxxxxxxxxx X. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ buněk/ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Validovaná polyklonální xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx testování xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx by xxx xxx proveden na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech xx vzorků. Jestliže xx to xxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 xx - 86 °C x xxxxxxxxx. Glycerol xxxx být ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15minutovým odstřeďováním xxx 7000 g x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx potřeba, xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx pozitivní kontrolní xxxxxxx x homologickým xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 B, a xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx teplotě - 16 xx 24 °X) xx xx xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxx xxxxxxxxx díly xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály k xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx okénky, xxxxx xxxxx x 10 xxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx se sklíčka x testování xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

i) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje xx xxxxxxxx standardní množství (15 µx je xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - u xxxxxxx xxxxxx je xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx. Xxxxx řada xxxx xxx xxxxxxx xxxx duplikát xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety v xxxxxxxxx xxxxx. Napipetuje xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx pro xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx řada xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx ukazuje obr. 2.

6.1.5.2. Vysuší xx xxxxxxx při okolní xxxxxxx xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky se xxxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), plamenem, 95 % etanolem xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx skladovat xx xxxxxxxxx stavu v xxxxxx boxu po xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx dalším xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Podle xxxxxxxx sklíčka xx xxxx v xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx se sada xxxxxxxxxxxxx zředění. První xxxxx xx xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) protilátek x pufru XX. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx na test xxxxx xxxx. 6.1.5.1.i) x 6.1.5.3.i)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Podložní xxxxxxx xx uspořádají xx xxxxxxxxx savý xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx pokryje xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx pokyny od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx ze všech xxxxxxxxxx sklíček a xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 4) x následně v xxxxx IF. Xx xxxxx zabránit xxxxxx xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, které xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Testovací xxxxxx se pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Sklíčka xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx papíru xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Sklíčko xx xxxxxxxx x xxxxx jako xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X fosfátového xxxxx x glycerolem (dodatek 4) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx sklíčko.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX testu

1. Xxxxxxxxxx xx testovací xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x filtry vhodnými xxx excitaci XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x až 1&xxxx;000x. Zkoumají se xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx buněk se xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x zcela xxxxxxxx x xxxxxxx titru xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx odchylná, musí xxx test IF xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x testovacích xxxxxxxx sklíčka. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx porovnání x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx musí být xxxx zopakován. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X peletách z xxxxxxx xxxxx bramboru x xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XX:

x) Při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx počet xxxxxxxxx buněk xx 1 xx resuspendované xxxxxx nejméně 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx povinné xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Výsledek XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx XXX xxxx hlavní screeningový xxxx x xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxx proveden xxxxx screeningový xxxx, x xxxx izolace xxxx XX. Jestliže xx XXX xxxxxxx xxxx druhý screeningový xxxx x je xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxx této metody x celém rozsahu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. solanacearum xx 1 xx přidaný xx vzorků xxxxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx. Xxxxxxxx maximální citlivosti x xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx činidla x xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, zvolí xx xxxxxx x interní xxxxxxxxx.

Xx třeba xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x zabránění kontaminace xxxxxx cílovou XXX. Xxxx XXX xx xxx xxx prováděn xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx biologii, xxx xx minimalizovala možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x PCR) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx xxxxx, jestli xxxxx x přenosu XXX.

XXX test xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx testován xx X. solanacearum x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx bakterií x DNA xx xxxxxx,

- xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, xx xxxxxxx xxxx přidána X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 B);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- pokud xxxxx, xxx XXX xxxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxx x prostředí odděleném xx vzorků, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx xx měly xxx xxxxx možno xxx xxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x pozitivní x xxxxxxxxx kontrole, které xxx xxxxxx xxx xxxxx test, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx purifikace DNA

Používají xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky (xxx dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx x dispozici xxxxx xxxxxx odstraňující xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX ve xxxxxx. Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX uvedenými v dodatku. 6.

x) Metoda xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µl xxxxxxxxxx pufru (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 mM XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx termobloku xxxx xxxxx xxxxx x teplotou 95 °X na 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx na 5 xxx. xx ledu.

4. Xxxxx se 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x xxxxxxxx při teplotě 37 °X po xxxx 30 minut.

5. Xxxxx se 220 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx dobu 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Invitrogen), důkladně xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µx xxxxxxxxxxx x promíchá, xx xx xxxxxxxxx xxxxx a xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxx oddělení xxxx x vytvoření xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxx. při xxxxxxx 4 °X.

9. Horní xxxx xx xxxxxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 ml 100 % etanolu (- 20 °X), krátce xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx po xxxx 10 xxx.

11. Odstřeďuje xx při 15 000 x xx xxxx 20 xxxxx při xxxxxxx 4 °C x xxxxxxxx xx xxxxxx z pelety.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) a promíchá xx překlápěním mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx se při 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx nebo x XXX xxxxxxx.

15. Peleta xx resuspenduje v 100 µl sterilní XX x xxxxx xx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 minut.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx - 20 °C xx xx použití xxx PCR.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx supernatantu xxxxxxxxxxxx XXX xx použije xxx xxxx XXX.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Plant Xxx, xx se xxxxx použít, xxxxx xx xx prokázalo, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorky x xxxxxxxx pro XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx DNA (1:10 xx sterilní xxxx).

2. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX v xxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µx XXX reakce xxxxx xxxxxxxxx XXX (viz dodatek 6).

4. Přidají se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx se xxx xxxxx XX xxxx xxx xxx, xxxxx xxx použit xx xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. PCR mikrozkumavky xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx testování, x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

1. Amplikony xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX z každého xxxxxx x 3 µx nanášecího xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx se xxxxxx XXX marker, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx dobu 30-60 xxxxx za použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx s xxxxx mutagenem.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx gelu se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX o očekávané xxxxxxxxx x výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

4. U xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx optimální teplotě x čase shodným xxxxxxxxxxx enzymem x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx gelu x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx restrikčních xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx PCR xx pozitivní, jestliže xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX specifický xxx X. solanacearum očekávané xxxxxxxxx x (případně) xxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx není amplifikován x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx také xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Poznámka:

Lze xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx očekávaný xxxxxxxx xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx obsahujícího X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx byly získány xxxxxxxxx výsledky. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx kontrolami XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx ze xxxx xxxxxxxxx.

X případě, xx xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx negativních xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx a xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový test xxxxxxxxx izolace nebo XX xxxx. Xxxx xx XXXX test xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používají xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ buněk R xxxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx provést x xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 až - 24 °X nebo - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx alikvotní část xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní kontrola xx připraví xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku.

Standardizovaný xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx v xxxxx xxxxx, je xxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx kontrolního materiálu xx provede xxxxxxx xxxxxxxx jako u xxxxxx(x).

6.1.7.1. Fixace bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Wullingse xx xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Napipetuje xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xx xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx ve 200 µl xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx při 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a resuspenduje xx xxxxxx v 75 µ10,01X PB (xxx dodatek 7).

5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, jak ukazuje xxxxxxx 7.1, přičemž xx xxxxxxx 2 xxxxx vzorky xx xxxxx xxxxxxx, x xx neředěný a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 M XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx - 20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx třeba XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx etanol xxxxxxxxxxx x xxxxx xx stejné množství 0,01 XX (zamíchá xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx skladována chráněna xxxx xxxxxxx a x suchu při xxxxxxxx teplotě.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx se xxxxx x postupné etanolové xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx v držáku xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxx inkubační komora xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nasáklým xxxxxxxxxxxx směsí (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °X xx xxxx nejméně 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx xxx. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 a 8) xx nechají xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 mm) xx xxxxx x xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx tak, xxx pod ně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxxx proces xxxxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx v xxxxxx při teplotě 45 °X v xxxxx.

5. Připraví xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 x xxxx x xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx X), 1 x 1x hybmix (334 ml 3x xxxxxx a 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 xx xxxx x molekulární xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx v xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx přemístí do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx ponoří xx XXX (např. Xxxxx Q xxxxx) x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Napipetuje xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo xxxxxxx) xx každého xxxxxx x celé xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx prohlížejí xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein xxxxxxxxxxxxx (XXXX) jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) ve xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Cy3 jeví xxxxxxxxxxxxx červené. Porovnává xx xxxxxxx morfologie x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x pravých xxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

2. Xxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testovacích xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Xxx podezření xx jakoukoli kontaminaci xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x případě, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx buňky x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx buňky xxxxxxxx (xxx xxxxxx sklíčka) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxx nese xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, že x xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx x pelet xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx fluorescenčních xxxxx na xxxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x ke xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx u xxxxx XX.

5. X úvahu xx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Interpretace výsledků xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx jsou xxxxxx, xxxxx jsou xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx pozorovány ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x nejsou xxxxxxxxxx x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx s typickou xxxxxxxxxx, odhadne xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 xx resuspendované pelety (dodatek 4).

Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, se xxxxxxxx za xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití rhodaminového xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx jako xxxxxxxxx test xxxxx xxxxx XX, PCR xxxx XXXX pro xxxx xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Při xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxx. Xxxxxxxxx vzorků před xxxxxxxx testu XXXXX xxxx xxxxxx citlivost xxxxx, ale může xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxxxx organismů xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx protilátek X. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. solanacearum x xxxxxxx xxxxxxxx druhotných xxxxxxxxx protilátek xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx použity xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx jakou xxxxx komerční xxxxxxxxx.

Xxxx xx titr xxxxxxxxxx xxx suspenzi 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. solanacearum xxxxxxxxx x suspenze bakterií xxx vzájemného xxxxxxxx x solném xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xx xxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx použijí xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx jako negativní, x příměsí 10³ xx 10⁴ buněk xx 1 ml xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. kmen XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 2 X x X). Xxx srovnání xxxxxxxx xx každé xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xx xxxxxxxxxxxx destičce xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x testování.

Standardizované xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx kontrolního materiálu xx provede týmž xxxxxxxx xxxx test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx ELISA.

a) Nepřímý xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx et xx., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °C xx 4 xxxxxx ve xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vznik xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx množství dvojnásobně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxx se promíchá.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx mikrotitrační destičky (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) a nechá xx inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C nebo 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °C.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx pomocí XXX-Xxxxx (dodatek 4) a xxxxxxxx xxxxxxxx roztok xx xxxxx x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x blokačním pufru (dodatek 4). U xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx protilátek se xxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx a nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při teplotě 37 °X.

7) Roztok xxxxxxxxxx xx vylije x xxxxx a xxxxx xx vymyjí xxxx předtím (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění konjugátu xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Xxxxx xx 100 µl xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x jamky se xxxxxx xxxx předtím (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx alkalického roztoku xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx inkubovat x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90minutových intervalech.

b) XXX-XXXXX

1) Připraví xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x uhličitanovém xxxxx pH 9.6 (dodatek 4). Přidá xx 200 µl xx xxxxx jamky. Xxxxx xx xxxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx nebo 4 ° C xx xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µl xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxxxxx dvou xxxxx. Přidají xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx dvou xxxxx xx každé destičce. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 xxxxx při xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), přidá xx 190 µl do xxxxx xxxxx x xxxxx stát 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

5) Jamky xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Xxxxx xx 190 µx xx každé xxxxx x nechá se xxxxxxxxx 2 hodiny xxx teplotě 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx každé xxxxx x xxxxxxxx xx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx odečítá x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 minut.

Interpretace výsledků xxxxx ELISA

Test XXXXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx hodnota xxxxxxx xxxxxxx (XX) x xxxxx xx stejnými xxxxxx je menší xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx substrátem) x xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů.

Test XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx než dvojnásobek XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx než dvojnásobek xxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nespecifickému xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx a x xxxxxxxxxxx růstových podmínkách. Xxxxxx xxx však xxxx úspěšně použít xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány v xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 až - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 testovacích xxxxxxx citlivé xxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx citlivostí xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx fázi xxxxx xxxxxxx listů u xxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx viz v dodatku 8. Xxxx xx xxxxxxx lilek (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Beauty xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), ale xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. až 3. listů až xx xxxxxx rozvinu xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x lilku xxxx xxxx výrazné x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx možno, xxxxxxxxxxxx proto xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

1. Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx děložními xxxxx pomocí xxxxxxxxx x podkožní jehlou (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxx se xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx přidrží mezi xxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx pelety xx xxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxx x prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx skalpelem xx xxxxx příčný řez xxx 1 xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx řez xx xxxxx x xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxx xx utěsní xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního kmene xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx vzorek, x xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Oddělí xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx rostlin, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Testovací rostliny xx nechají xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °X a xxxxxx relativní xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zavlažováním, xxx se xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, tak xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx kontaminaci, xxxx být xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny ve xxxxx oddělených xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vegetační xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx izolovány. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx po xxxx xxxxxxxx drženy xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx zástěnami. Xxx hnojení, zalévání, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx udržovat xxxxxxx xxxx vegetační xxxxxxx bez hmyzích xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X infikovaných xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x identifikují xx xxxxxxxxx čisté kultury (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 týdnů xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, provede xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx stonků xxxxxxxx 1 xx z xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, provedou xx xxxxxxxxx xxxxxxx (bod 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx kultury x xxxxxxxxxx xx X. solanacearum (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx x xxxxxx rostlin xxxxx izolovány a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx infikovány xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Identifikační testy

Identifikují xx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx provedený test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx následující xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx chybí x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxx PHB +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx test X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Kovacse +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx citrátů +

Xxxx xxx 40 °X -

Růst x 1% XxXx +

Růst x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx aktivita -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Produkce xxxxxx -

Xxxxx a xxxxxx viz Lelliot&Stead (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx se suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x xxxxx IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Použije xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx titru pozitivní xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx ELISA

Poznámka:

Při xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Připraví xx xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx na 1 xx v 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx test XXXXX xx xxxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx z této xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx kontroly.

6.2.4. Testy XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx water).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °X 4 minuty. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xx xxxxxxx použití.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx postupy XXX k xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifických pro X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx xx. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Pastrik xx al. (2002); Xxxxxxxx xx xx. (1999); Opina xx xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxx stejnou xxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentů xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Test FISH

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x UM.

6.2.5.2. Použije xx metoda XXXX (6.1.7) s nejméně 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx pozitivní, jestliže xx x xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx stejných reakcí.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Pěstuje xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx teplotě 28 ^oC.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx metoda FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Test FAP xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx stejný xxxx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX a absence 16:0 3XX poukazuje xx Ralstonia sp.

6.2.7. Xxxxxx charakteristiky kmenů

Pro xxxxx xxxx případ xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx charakteristika xxxxx použitím jedné x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx referenční kmeny (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. solanacearum xxxxx xxxxxxx lišící xx xxxxxxxxxx využití x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Hayward xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx je xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx provést xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x čistou xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx-xx živná půda xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 jamku), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx zelené xx žlutou a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Dodatečné testy xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx x Stead (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx identifikace xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx lze dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx patří:

1. Analýza xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx al., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx sekvenční XXX x využitím primerů XXX, XXX x XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Xxxxx xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx fragmentů XXXX (Xxx xxx Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Pastrik et xx, 2002; viz dodatek 6) lze xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (biovary 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2T) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Xxxx et xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx patogenity)

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx musí být xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx inokulum x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx ze 24 až 48 xxxxxxxxxx kultur k xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx X. solanacearum (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3).

2) Inokuluje xx 5 až 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxx xxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Sazenice se xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 xxxxx xxx xxxxxxx 25-28 °X x vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx zamokření nebo xxxxxxxxxxx xxxx. X xxxxxxx xxxxxx by xxxxxxx vadnutí xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx xxxx xxxx xxxxxxxx, kultura xxxxxx xxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Hledají se xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stonku xxx 2 cm xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx se rozmělní x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx suspense se xxxxxxx zřeďovacím xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx půdě (dodatek 2). Xx inkubaci 48 xx 72 xxxxx xxx teplotě 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Živné půdy xxx xxxxxxx a xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (NA)

Živný xxxx (Difco) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 121 °X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky a xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (SPA)

Sacharóza 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx letrazoliové xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °C x přidá xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Sigma), xx xx dosažení xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 xx xx litr.

b) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 ve znění Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Xxxxxxxx živná půda

Casamino xxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 ml

Bacto-Agar (Xxxxx) (viz pozn. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °X x přidá xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx reagenci xxxx xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Místo Bacto-Agar (Xxxxx) může xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X takovém xxxxxxx bude růst X. solanacearum pomalejší, xxx xxxx to xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx mohou xxxxxx x 1-2 xxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx při xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x xxxx omezit xxxxxxxx konkurenčních bakterií xxx ovlivnění růstu

Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx teplotě 4 °X x temnu x xxxx se xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx s xxxxxx by xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx povrchové kondenzace. Xxxxx zabránit xxxxxxxxxx xxxxxxxx média.

Každá xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx kontrole xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, zda se xx 2 až 5 xxxxx při xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx kolonie.

c) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx agarovou xxxxxx xxxx SMSA, xxx xxxxxxx xx Bacto-Agar x 2,3,5- trifenyltetrazolium xxxxxxx.

Xxxxxxxx živná xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx et xx., 2002)

Sacharóza 10 x

Xxxxxxxxxx pepton 5 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 xxxxx a xxxxxxx xx xx 50 °X. Přidá xx xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' x xxxxxxxxx kontrole (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx kmeny xxxx komerčně dostupné x xxx xx xxxxxx x těchto xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx rostlin (PD), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (CFBP), ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Referenční xxxxx izolovaných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx uvedených xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x původních xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX sérologicky xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx testů

b) Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx lyofilizací, nejsou xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x testech xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx fixované xxxxxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ buňkami na 1 ml x xxxxxxxxx kontrole xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx se 48xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. kmen NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxx buněčná hustota xxxxxxxxx 2 x 10⁸ buněk tvořících xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx suspenzí rovnající xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx xx dřeň x xxxxxxxxx konců 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx s xxxxx xxxxxxx, x xxxxx se xx, xx je xxxxxx X. solanacearum.

Zpracují xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 ml. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek x xxxxxx 1,5 ml x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx pelety. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Těchto xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx kontrolní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx musí xxx řádně xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx alikvotní xxxxx x 100 X1 xx sterilních xxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx do doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. solanacearum v xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF.

Pro XXX test se xxxxxxx extrakce XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x XXXX testy xx provede test xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx IF, FISH x PCR xxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

OBECNĚ: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx pufr xx používá x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá xxx resuspenzi x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx bramborových hlíz xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrovány xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx pro XX (10 xX fosfátový xxxx xx fyziologickém xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X po xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxxx xxxxx roztok xx xxxxxx xxxxxxx na XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Laboratories) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx xxxxx nepřímého xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx možné xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx sodný (0,2 %).

3.2. Desetinásobný xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), pH 7,4

XxXX 80,0 g

KH₂PO₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx být čerstvě xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 g

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx voda xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx se xxxxxx xX xx 9,8.

Xxxxxx xx do 1 x xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidá xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx xxx 5 xx tabletky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Sigma) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx testu XXXX XXXXX

4.1. Potahovací xxxx, pH 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX CO₃ 2,93 g

Destilovaná xxxx 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx a zkontroluje xX 9,6.

4.2. 10 x fosfátosolný xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

NaCl 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2H₂O 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 ml

Smíchá xx a xxxxxxx xx hodnota xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx HCl.

Dodatek 5

1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx počet typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxx a

s - plocha xxxx xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx počet charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx buněk na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N =X x 1 000/y x X,

xxx y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x každém xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx testování by xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3).

1. Xxxxxxxx XXX Seal xx al. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-GGG XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-CCC XXX XXX GCC XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Reakční xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 minuty xxx 96 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 20 sekund xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 20 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 10 minut xxx 72 °X (xxxxxxxxx syntéza)

vi) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx termocykleru Perkin Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR vzniklé xxxxxxxxxxx z X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37 °C.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx cga xxx xxx xxx xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-ggg xxx ttc xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx PCR

Reagencie	Množství x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Taq xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μl
Celkové xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx validována použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x polymerasou Gibco Xxx Polymerace. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx a xxxx mohou xxx xxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx koncentracích.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx i) 5 xxxxx xxx 95 °X (denaturace templátové XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx při 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 sekund při 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: v) 5 xxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx bude xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z X. solanacearum XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních fragmentů x xxxxxxx Xxx X xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx teplotě 65 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx velikost 457 bp a 96 bp.

3. Xxxxxxxx xxx multiplexní XXX x interní xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx RS-1-F: 5'-XXX XXX XXX XXX GAG XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer XX-1-X: 5'-CCC XXX XXX GGC XXX XXX X-3'

Xxxxx primer XX-5-X: 5'-AAC XXX XXX XXX XXX XXX GAA X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX XXX TGT XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx RS). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Reakční xxxx PCR

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx při 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s templátovou XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx kopie)

1 cyklus: x) 5 minut xxx 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) xxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) x xx).

3.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu

Produkty XXX xxxxxxx amplifikací x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx 1 nebo Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X.

4. Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx biovar X. xxxxxxxxxxxx (Pastrik xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Rs-1-F: 5'-XXX XXX GAA XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer Rs-1-R: 5'-XXX XXX XXX XXX AGA GAC X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu templátové XXX X. solanacearum:

s Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Protokol XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

b) Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx pro xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 sekund xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx byl optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), iii) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé amplifikací XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Rs-1-R vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (např. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x DNA X. xxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxx Xx-1-X a Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru

5.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) voda (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,001

Xxxx xxxxxxxx se zředí xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE TOXICKÝ. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně čisté xxxx (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) na teplotu xxxxxxxxx 60 °X x přidá xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX na 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (PB; pH 7,0) x 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxxx xx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x případě potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX PH!]

iii) Přefiltruje xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °C xx xxxxxxx použití.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 mM (pH 7,4)

XXXX (sterilizovaný xxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxx) 15 mM

Zředí xx xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Hybridizační roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx dodecyl xxxxxx (XXX) 0,01 %

Formamid 30 %

Xxxxx EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx výpočtů x xxxxxxx 1. Xxx xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: FORMAMID XX VELMI XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX RUKAVICE X UČINIT XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx množství xxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx

Poznámka:

Všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx použití xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx zářením xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, zkontroluje pH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx escadentum) xxxx xxxxx (Solanum melongena) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Sazeničky s xxxx xxxxxxxxxxx děložními xxxxxx (10 až 14 xxx) se xxxxxxx xx pasterizovaného xxxxxxxxxx substrátu.

Rostliny lilku x xxxxxxx xx xx xxxx pěstovat xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, R.i., X. Xxxxxxxx and X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Council Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 Xxxx 1998 xx the xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Communities X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Le Roux, X. Josi, X. Xxxxxxx and X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx division xxxxxxxx xxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Pathology 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Collar, X xxx Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx Asymptomatic Xxxxxx Xxxxxx. Applied and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, E. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: detection xx restriction xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Wilson, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx tuber extracts. XXXX Bulletin 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, M.C. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx xxx xxxxxxxxx xxx quantification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tn: X.X. Hayward (xx.) Xxxxxxxxx Wilt Newsletter 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X. and Xx Xxxxx, L. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx ofYseudomonas xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Applied Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, M. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx cells xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx using x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx and x XXX xxxxxxxxx. X. Phytopathololry 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx and xxxx xxxx on xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Bulletin 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xxxxx cell xxxxx-xxxx analysis. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx pathogenicity xx Pseudomonas solanacearum xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx a tetrazolium xxxxxx. Phytopathology 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Sands, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 pp.

15. Xxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx bacterial xxxxxxxx xx xxxxxx. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Ltd., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, P., Xxxxxx, J., Vicedo, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx selective xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Delme xx xx., (eds). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17. Louws, F.J., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx De Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx genomic fingerprints xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx genomic xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx rapidly classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Xx, X. Xxxxxxxxx, M. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxxx. 1997. A xxxxx method xxx xxxxxxxxxxx of xxxxxxx xxx strain-specific DNA xxxxxx and XXX xxxxxxx for xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Mol. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx reaction. X. Phytopathology 148; 619-626.

21. Pastrik, K.H., Xxxxxxxxxxx, J.G. and Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, P., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx antibodies xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Food xxx Xxxxxxxxxxxx Immunology 7, 67-79.

23. Schaad, X. 2001. Laboratory xxxxx for identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Minnesota: 373 xx.

24. Seal, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, and X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx of oligonucleotide xxxxxxx for xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Snith, J.J., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Genetic xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Taghavi, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Fegan, X. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx strains xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxxx bacterium xx banana xxxxx xx 16X rRNA xxxx xxxxxxxxx. International Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Xxxx, X.X., Bonants, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Nijhuis, X., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Feuillade, X. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Europe as xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx rep-PCR. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, C. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (eds.) Xxxxxxxxx xxxx disease: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Berlin) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, N., Stead, X.X. and Boonham, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' nuclease XxxXxx assay. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Wullings, X.X., A.R. van Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx rot xx potato, by xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23s xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.