Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 odst. 2 xxxxxx x. 326/2004 Xx., o xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x změně některých xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (dále xxx "zákon") k xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. i) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ a xxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx republiky xxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx al. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx et Xxxxxxxx) Xxxxx et xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx, aby xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx výskytu se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x prováděla xx xxxxxxxx opatření s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis (Xxxxx) Davis et xx. sepedonicus (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Davis xx xx.,

x) původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - brambor (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx lilkovitých (Xxxxxxxxxx), u nichž xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx hnědé xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxxx xxxxx bramboru, xxxxx jedlé (Solanum xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx xxxxx a plodů, xxxxx potměchuť (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx lilkovitých (Xxxxxxxxxx), x nichž byla xxxxxxxxx xxxxxxx infekce xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxxxx podmínkách,

d) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby v xxxxxxx xxxxx nebo x xxxxxx partii,

e) xxxxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx, k určení xxxxxxx šíření xxxxxxx x x xxxxxx xxxxxx xxxxx, na xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 zákona,

f) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rostlině, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxxxxx, x xxxxxxx anebo x xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxx potvrzení výskytu xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé hniloby,

j) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx x důvodu xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx,

x) xxxxxxx příbuznou xxxxxx - xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, která xxxxxxx xxxxxxxxxxxx množením x xxxxx původní partie; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx partie, které xxxxxxx x xxxxx xxxx vegetativním xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx stejné xxxxxx xxxxx,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx partii xxxxxxxx xxxxxx klonově xxxxxxxx sesterským xxxxxxx xxxxxxxxx partiím, které x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Ústav xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx s §10 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx hniloby x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx průzkumu xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) rozmnožovací xxxxxxxx bramboru²⁾ xxxxxxx x České xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 odst. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx "členský xxxx"),

x) namátkově xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx brambor xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx a z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxxxxx podle §5 odst. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x všechny xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxx x karanténním xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zemí x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) všechny xxxxxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx vybrané partie xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx zemí.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx na výskyt xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x závlaze hostitelských xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx včetně doprovodných xxxxxxxxxxxxx rostlin a xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, popřípadě také xxxxx xxxxxx x xxxxxx podniků.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x případě xxxxxxxxx x výskytu xxxx potvrzení xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx a plevelné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx produkce, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx hniloby se xxxxxxxx

x) laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x případech xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. a) x x), xxxxxxxx 3 a x xxxxxxxx 4 písm. x) x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx, x případě xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) prohlídkou xxxxxx rostlin xxxxxxxx x řezu dužninou xxxx, v porostech xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hlíz xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x d),

c) prohlídkou xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx dobu x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx napadení xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vegetace x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x) x x xxxxxxxx 6.

(8) Způsob xxxxxxxxx partie a xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7, xxxxxx xxxxxx průzkumu x způsob xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odebraných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x souladu x §10 xxxx. 1 xxxxxx Xxxxx xx xxxxxxx uznávaných xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxxxxx na aktuální xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ústavu xxxxxxxxxxxx (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx odebraných vzorků xxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xxxx stanoveným Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx ve Xxxxxxxx.

(9) X průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 lze xxxxxx rovněž xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx činnosti Xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx na základě xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx odstavce 8.

(10) Xxxxxxxx průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Ústav bez xxxxxxxxxx xxxxxxx právnické xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx tuto xxxxxx xxxxxx xx xxx xxxx xx xxxxxxx xxxx pěstovala.

(11) Podrobnosti x provádění xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx státům a Xxxxxx za účelem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx výsadbu xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. září, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx o xxxxxxxxxxxxx a výsledcích xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xx xxxxxxxx vždy x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Podrobnosti tohoto xxxxxxxx jsou důvěrné.

§4

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xx v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Ústavem ověřené xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningového testu xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu provedeného Xxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby Xxxxx x rámci odborného xxxxxxx podle §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního testování, x xx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, s xxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx zjištění xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx odborné xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 zákona xx xxxxxx zjištění xxxxxx xxxxxxxxxxx výskytu x v xxxxxxx x §11 odst. 1 xxxxxx

x) zakáže xxxxxx xxxxx partií xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx byly xxxxxxxx xxxxxx, x výjimkou xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx pod xxxxxxxx Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, a

b) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nad xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx z xxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx zamoření xxxxxx hostitelských rostlin xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx původem x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx členského xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx tohoto podezření x xxxx s xxxxx xxxxxx vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx x podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxx xxxxx x Xxxxx republice xxxx které může Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Česká xxxxxxxxx, xxxxxx Xxxxx vhodná xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 a 3.

§5

Xxxxxxxx při potvrzení xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odebraných xxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby, Xxxxx x souladu x §76 odst. 2 zákona x x přihlédnutím x xxxxxxxxx vědeckým xxxxxxxxx, xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxx, uvádění xx xxx a xxxxxxxxxxxx zpracování xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx xx xxxxxxxx rostliny, zásilku, xxxxx partii, x xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx přišly xx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxx vzorek xxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx těch, kde xx možná xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x pozemek, na xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx byl xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx odborné xxxxxxx zaměřené xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a prvotního xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx podle §6 x xxxxxxx v xxxxxxx s ustanovením xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx předsklizňového nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, zavlažování x zalévání xxxx xxxx pěstitelské xxxxx xx xxxxxxxxx předmětem xxxx objektem, označeným xxxxx xxxxxxx x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx základě označení xxxxxxxxxx předmětů xxxx xxxxxxx podle písmene x) a xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx písmene x) x xxxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x ustanovením bodu 3 přílohy č. 3.

(2) V xxxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx zpracování a xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, zalévání xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vodou xxxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx brambor, Xxxxx

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odebraných vzorků xxxxxxxxxxx xxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným v příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x cílem xxxxx rozsah zamoření,

b) xxxxxx x xxxxxxx x pozitivními výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování xxxxx písmene x) xxxxxxxxxx vodu, x xxx byly odebírány xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx písmene x) a xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx původcem hnědé xxxxxxx x xxxx xxxxxxx rozšíření xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx neprodleně xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 písm. x), x sdělí podrobnosti x xxxxxxxx karanténního xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx podle odstavce 1 písm. c), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x tomto xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx stát xxxxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx, zásilce xxxxx xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření x xxxxxx karanténní xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxx stanoví xxxxxxx xxxxxxxx ve Xxxxxxxx zásady pro xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx území a xxxxxxxxxxxx xxxx, vymezovaných xxxxx odstavce 1 xxxx. c), odstavce 2 xxxx. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx zajistí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx označeny xx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), x každém xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx x rozsahu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx xxxx rizika xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 Xxxxx x případě xxxxxxx xxxxxx další předměty x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx zamoření a xxxx vymezí xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), b) x x).

§7

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xxxxx v souladu x §11 xxxx. 1 xxxxxx nařídí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x) xxxxx xxx xxxxxx x pod xxxxxxxx Xxxxxx xx x xx xxxxxx způsobem xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, pokud Xxxxx xxxxxx ověří, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, stanovené x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená podle §5 xxxx. 1 xxxx. b) xxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx způsobem xxxxxxxx x bodě 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx ověří, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx splněny požadavky xx zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx této xxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx partie xx xxxxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) zařízení, xxxxxx, xxxxxxxx prostředky, xxxxxx xxxx jejich xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxxxxx za xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx xxxxxxxx xxxx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), xx buď xxxxx xxxx podrobí xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx metod uvedených x příloze č. 6 s xxx, že xx xxxxxxxxx očisty a xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xx zamořené xxx xx pravděpodobně zamořené xxxxxxxxxx,

x) x karanténním xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, vymezených xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 2 xxxx. x), xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 x x případě xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x bodě 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx opatření xxxxxxx x odstavci 1, xxxxx xxxxx tato xxxxxxxx xxxxxxx odůvodněná, xxxxxxxxxx a xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx nařízených xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx karanténního xxxxx x x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx ostatním členským xxxxxx x Xxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx podle §12 odst. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx zruší xxxxx §76 odst. 4 písm. x) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx doby xxxxxxxxx k jejich xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx s §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx jejich xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx účelům, xxxxx povoluje Ústav xxxxx §8 odst. 1 zákona, xxxxx xxx xxxxxxx narušena xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx výskytu ani xxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, vypěstovaný xx xxxxx České republiky x uváděný na xxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 2, x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 a x xxxxxxx x §3 odst. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Testování xxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce podrobí

a) xxxxxxxx šlechtitelského rozmnožovacího xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x reprezentativní xxxxxx xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru původem x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx xxx v xxxxxxxxx uplynulém sklizňovém xxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx potvrzen xxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx

1. rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ xxxxxxxx x předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího materiálu xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x nichž prokazatelně xxxxxxxxxx xxxxx klonová xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx roce, xxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Příloha č. 1 x xxxxxxxx č. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) diagnózy xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx x rostlin xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx uvedeny x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx xx optimalizaci x xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, je nutné xxxxxxxx za vhodných xxxxxxxxxxxx podmínek x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Ústavem.

Testovací xxxxxxxxx musí xxxxxxxx xxxxx x reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx stanovené xxxxx xxxxxxxxx metod.

Zcela xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x kalibraci xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x všechna xxxxxxxx pro zamezení xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx od xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx chybám, zvláště xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx je xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx postupových diagramech.

Pokud xx první screeningový xxxx (TF xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx screeningový test. Xxxxx je i xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx daného xxxxxxxx. Pokud xx xxxxx screeningový test xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx §4 odst. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx potvrzený xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx izolaci x identifikaci xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti v xxxxxxx bramboru x x xxxxxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx vodivého pletiva xx diagnostickém xxxxx x v xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x oddíle 2.

(2) Xxxxxx xxxxx jsou:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- XXX test (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx patogena x rostlinného materiálu x typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx infikovaném xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Proto xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx i selektivní xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx typické xxxxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx typické, xxxx xxx izolace xxxxxxxxx znovu.

(6) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx popsána x xxxxxx 10.

1.2. Postupový xxxxxxx pro diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xx založen xx xxxxx biologickém xxxxxxxx, xxxx být doplněn xxxxxxx patogena, x xxxxxxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxx xxxxxxxxxxx k xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.1.

(3) Pokud xxxx alespoň dva xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx negativní, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx test pozitivní, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxx jeden xxxx více screeningových xxxxx založených na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx další test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy nejsou xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (viz xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx může xxx x xxxxx xxxxxxxxx vhodná xxxxxx xxx xxxxxx izolaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx použití XXXX xxxxx xxxx XXX-88 média x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Typické xxxxxxx xxx xxxxxx během 3-10 xxx po xxxxxxxxx na médium. Xxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx vyčistit a xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx potenciálu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z pupkové xxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxxx bakterie, xxxxx jsou konkurencí Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx na xxxxx x které mohou xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, musí xxx izolace provedena x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Biotest xx používá x xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktů xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx). Xxxx vyžaduje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stanovené xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx inhibitory Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx XXXX xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx biotesty xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx testy xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vodivého xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx vzorků.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx použitím xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx velikosti xxxxxx - viz xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx popsány v xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Provede se xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Pokud je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx je xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) IF xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx popsán x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx je xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Kultivace xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx izolační xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, u xxxxxxx je podezření, xx xx xxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx x oddílu 9.

(11) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Vizuální xxxxxxxxx na přítomnost xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx jen zřídkakdy x často xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx příznaky skryté xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx jiných xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Proto xxxxx xxx příznaky xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx od xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx xx obvykle xxxxxx x zpočátku xxxxxxx na xxxxxx xxxxx. Xxxxx infikované xxxxx xxxxx i xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx neobvykle xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx ucpáním xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx stonku často xxxx xxxxxxxxxxx, žluté xx oranžové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx a xxxxxxx xxxxxx mohou xxxxxxxxxx odumřít. Xxxxx xxxx xxxxx x xxxxx pouze xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou slabá xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx svazků xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hlízy může xxx xxxxxxxx tmavší xxxxxxxx než xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx x xxxx, xxx při jemném xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxx sloupky xxxxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Vodivá pletiva xxxxx zhnědnout a xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxx podobné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx být tyto xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx vyskytovat xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx a mohou xx postupně xxxxx xx celý xxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx se xxxx oddělit od xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx hlízy xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. V xxxxxxxx xxxx xx x Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx kůra xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx poškození xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx maskovat x xxxx být xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx hnilob xxxxxxxx. Možné xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx vzorků

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx 1 xxxx. lntenzivnější xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x méně xxx 200 hlízami, xxxxx je x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Validace všech xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx extrakt xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx, Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx přípravou xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx patogenní XXX) a xxxx xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Tento postup xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x případě, xx xx xx xxxxxx příliš zeminy x xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx slupka xx pupkovém konci xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vodivého xxxxxxx x xxxxxxxxx konců xxxxxxx. Na xxxxxxx xx xxxxx nadbytečná xxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky. Po xxxxxxxx musí být xxxxxxxx z pupkových xxxxx zpracovány xx 24 xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx xxxx xxxxxxx dvou týdnů.

Všechny xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx výkrojku z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Všechny xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °X až xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Všechny hlízy xx vzorku se xxxxxxxxxx podle přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x pupkové xxxxx xx xxxxxxxxx x nepoužitých xxxxxxxx xx xxxxx použití, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (v xxxxxxx, xx jsou xxxxxx xxxxx používány, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, uchovávají se x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx, v xxxxxx po xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx výkrojků x xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx z pupkového xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) po xxxx 4 hodin xxx xxxxxxx nižší xxx 24 °X xxxx xx dobu 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3), xxx v mixéru xxxx rozdrcením x xxxxxxxxx jednorázovém xxxxxxxxxx xxxxx xx použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení.

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx vzorků xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí křížové xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx extrakce. Xxx každý xxxxxx xxxx xxx použita xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ostří (xxxx) x xxxxxx. Xxxxx xx být xxxxxx XXX xxxx, xx nutno zamezit xxxxxxx DNA na xxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx zkumavky xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx je nadměrně xxxxxxxx, pročistí xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx frakce xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx při 7000 x po xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X x xxxxxxxx xx supernatant, aniž xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx se 500 µx pro xxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µl xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentraci 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x xx zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Extrakty xx xxxxx testování xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx nutný xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx nutné, xxx se se xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx kontaminaci. Xx platí x xxx sklíčka xx XX xxxxx a xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx kontrola kombinovaných xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx až 200 xxxxx stonků. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx založeny na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx o velikosti 1-2 xx xx xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx dezinfikují xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx savým xxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx sterilní xxxxxx.

3.2.2. Části xxxxxx xx zpracují jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot/min) xx xxxx 4 xxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx xxxxxxx gumového xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx není xxxxx, xxxxxxxx se xxxxx xxxxxx x chladu xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx extraktu nebo xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx nutná, xxx lze xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx testování xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx polovina xx xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (týdny) xxxx při xxxxxxx -68 až -86 °X (xxxxxx), pokud xx nutné xxxxx xxxxxxxxx.

4. lF xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx použít xX xxxx xxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx schopnost dosáhnout xxxxxxxxxxxx práhů.

Použije-li se xxxx hlavní screeningový xxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx test XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx test XX xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, používá se xxxx polyklonální xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx x polyklonální xxxxxxxxxxx xxxx xxx další xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx méně citlivé.

Používají xx xxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx - ATCC33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Doporučuje xx xxxxxxx titr xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 až 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx použití vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální protilátky xx xxxx mít XX xxxx alespoň 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx používat v xxxxxxxxx xxxxxx (WD) x xxxxxxxxx titru xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V případě xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Glycerol xxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 4), xxxxxxxxx odstředěním xx xxxx 15 xxxxx xxx 7 000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx nutné, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx oddělená xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx s jiným xxxxxxxxxxx kmenem xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x brambor xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X) by xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx xx použijí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx okénky, nejlépe x 10 okénky x xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

4.1. Xxxxxxx xx test xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx škrobového xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx o xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15 µx - pro větší xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Následně xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se desetinná xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx o průměru 6 mm xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x každého xxxxxxx xx xxxx okének. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx se xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím xx teplotu 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60 °X), nad xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx fixovaná xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zmrazená x xxxxxx boxu xx xx možná xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx IF xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx test x oddílu 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxx dvojnásobných roztoků xxxxxxxxxx v XX xxxxx. X xxxxx xxxxx by xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (T/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (T) x xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (WD) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) a xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx sklíčka xx uspořádají xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství protilátky xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx nejméně xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní sklíčka xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 xxxxx při pokojové xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx podložních xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxx opláchnou xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx po xxxx 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x pufru XX. Je třeba xxxxxxxx vzniku aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředěním xxxxxxxxx XXXX, kterým xx xxxxxxxxx titr. Xxxxxxxx konjugátu naneseného xx xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx po dobu 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Kapky xxxxxxxxx xx setřesou xx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxx a xxxxx xxxx předtím (4.3.3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx komerční krycí xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxx sklíčko.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX testu

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx při zvětšení 500x xx 1000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech a xxxxx xxxxxx. X xxxxxx s žádnými xxxx malým počtem xxxxx xx zkoumá xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx titru xxxxxxxxxx xxxx pracovním ředění. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx IF xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x charakteristickou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx okénkách sklíčka (xxx internetová stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x neúplným xxxxxxxxx nebo slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, když xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx při xxxxxxxx pozitivních buněk (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a xxxxx stonku xx xxxxx vyskytnout doprovodné xxxxxxxx fluoreskujících buněk x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx fluoreskující buňky x xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx v xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX testu:

a) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk s xxxxxxxx morfologií se xxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx buněk x 1 mikroskopickém xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx (dodatek 4).

Výsledek XX xx pozitivní x xxxxxx, xxx xx xxxxx typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a je xxxxxxx další xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5x10³ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

5. Test XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX test a xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx specifické xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xx přidané xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx testovány x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx proveden x xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x glycerolu při xxxxxxx -16 xx -24 xxxx -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx alikvotní část xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx na Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ až 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) v 0,01 X xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x 3-5 xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo jiného xxxxxxxxxxxx kmene Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx oligosond xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, protože xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx xx fixační xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xx dobu 8 xxxxx xx 7 000 x.

5.1.3. Odstraní se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx peleta v 500 µl xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Pro xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx peleta x xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX a 50 µx 96 % etanolu. Promíchá xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °C xx dobu 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx xx dobu 8 xxxxx na 7&xxxx;000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µl 0,01 X PB (xxx dodatek 3).

5.1.5. Kápne se 16 µl fixované xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx obrázek 3, přičemž se xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x zředěný 1:100 x použitím 10 µx (v 0,01 X XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49 µx) může xxx xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °X xx přidání 1 xxxxxxxxxx množství 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx, přidá xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X XX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx FISH

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 37 °X) x fixují se xxx plamenem.

V této xxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx x hybridizaci xxxxx xxx. Xxxxxxx xx měla být xxxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx a x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Předhybridizace x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Připraví xx xxxxxx xxxxxxxx obsahující 10 mg xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 xx pufru (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Tento xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx měl xx xx pouze xxxxxx xxxxxxx x nechat xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx lyzozymu x xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx. Potom xx xxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx jednou, a xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx přidá místo xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x pufru (20 mM Xxxx-XXx, 2 mM XxXx₂, xX 7,4) do xxxxx xxxxx a xxxxxxxx se při xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx xx stupňovaných xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx vlhká xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dna xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx při xxxxxxx 55 °X xx xxxx alespoň 10 xxxxx.

5.2.4. Připraví xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx na 1 xxxxxxx a předinkubuje xx po xxxx 5 minut xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.5. Xxxxxxx se xxxxxx xx horkou plotnu xxx xxxxxxx 45 °X x do xxxxxxx xx 4 xxxxxx na xxxxxxx / xxxxxxxxx se xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx se přikryje 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) tak, aby xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x xxxx xxx xxxxxxx 55 °X x temnu.

5.2.7. Připraví xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 l xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 x 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 ml XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 ml 3x xxxxxx x 833 xx UPW). Xxxxx z nich xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx lázni xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx se krycí xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx umístí xx držáku sklíček.

5.2.9. Xxxxxxxx xx nadbytek xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx s 1x hybmixem při xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx sklíček xx xxxxxxxx xx promývacího xxxxxxx 1/2 hybmix x xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx krátce xx XXX x položí xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx nadbytečná xxxxxxx lehkým zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Vectashield, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx a xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Sklíčka xx prohlížejí xxxxx x mikroskopem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x pod xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxx eubakteriální buňky (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx obarvené Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (oddíl 9.4) xxxx být zopakován, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x pravých xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2. Hledají xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testovacích xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo xxx lepší než x pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x úvahu.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx může xxxx, xxxx všechna xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx FISH xxxxx. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx bramboru x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx méně xxxxx xxx x XX xxxxx.

5.3.5. V xxxxx se xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx výsledku xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX testu jsou xxxxxx, xxxxx jsou xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx další xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx považují xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx rhodaminového filtru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx PCR xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, musí xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx PCR xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test a xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody v xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového testu xx doporučuje xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxxx, které xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používají se xxxxxxxxxx XXX činidla x protokoly. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx vhodná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) by se xxxx vždy xxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx a XXX xx vzorku,

- reakční xxxx PCR.

Měly xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- alikvotní xxxxx resuspendovaných xxxxx, x xxxx xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- suspenze 10⁶ xxxxx xx 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx PCR testu xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x pozitivních kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx pozitivní kontroly x xxxxxxxxx prostředí xx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx měly xxx xxxxx možno xxx zeminy. V xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx enzymatických xxxxxx a koncentrující xxxxxxx DNA x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x validovanou xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxx pufru (100 xX XxXx, 10 mM Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX EDTA [pH 8,0]) xx mikrozkumavky x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx se xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 95 °X na xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx vloží xx 5 minut xx ledu.

4. Xxxxx xx 80 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx xx 1 xx x 10 xX Xxxx HCl, pH 8,0) x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Invitrogen), xxxxx xx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx při xxxxxxx 65 °C po xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx promíchá xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx chloroformu x xxxxx se xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx sníží x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Odstřeďuje xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X pro xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx se xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °C), xxxxxx xx promíchá xxxxxxxx x inkubuje xx xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx na 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 minut xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx převracením xxxxxxxxxxxxx.

13. Odstřeďuje se xx 15 000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx xx zachová x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx xx nechá xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x DNA xxxxx xxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx v 100 µl sterilní xxxx (XXX) a xxxxx stát xxxxxxx 20 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -20 °X xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Jakákoliv bílá xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x pro XXX xx xxxxxxx 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody extrakce XXX by xx xxxxx xxxxxx, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx DNA z xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 PCR

6.2.1. Připraví xx xxxxxxxxx vzorky x xxxxxxxx pro XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx DNA (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2. Připraví se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, kde nehrozí xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Validovaný xxxxxxxx PCR je xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Do xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µl XXX xxxxxx.

6.2.4. Zahrne xx negativní xxxxxxxxx xxxxxx obsahující pouze xxxxxxx xxxx XXX x přidá se xxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, která byla xxxxxxx xx xxxxx XXX namísto xxxxxx.

6.2.5. XXX mikrozkumavky se xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx počátečním xxxxxxxxx x provede xx xxxxxx optimalizovaný xxxxxxx PCR (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1. Xxxxxxx xx amplikony XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx reakční xxxxx XXX x xxxxxxx vzorku smíchané x 3 µl xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového gelu x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) při 5-8 V xx xx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Detekují se xxxxxxx DNA barvením x ethidium bromidu (0,5 mg na x) xx xxxx 30-45 minut, xx xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x tímto xxxxxxxxx.

6.3.3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) prosvíceném gelu xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx zdokumentuje.

6.3.4. X všech nových xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ve zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x pufrem (xxx dodatek 6). Rozdělí xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx po xxxxxxxx ethidiumbromidem x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x štěpenou xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx XXX testu:

PCR test xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx typický pro Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx vzorku, xxx xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx PCR s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: druhý xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti xxxx být amplifikován x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx pozitivní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx (pokud xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxx, xxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX x interními xxxxxxxxxx XXX i xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x obou xxxxxxxxx.

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx očekávaný amplikon xxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx na xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx s negativním (xxxxxxxx viz dodatek 2).

Nejvyšší xxxxxxxxx zjištění xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx však xxx xxxxxxx použít i xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovávány v xxxxxxxxx xxx teplotě -68 až -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx médium xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx vynikající xxxxxxxx konfirmační test.

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx falešně xxxxxxxxxxx výsledků xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx rozdělí xxxx xxxxxxxx lilku xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx rostliny xx xxxx 2-3 listů xx úplného xxxxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx využití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (pro květináče x xxxxxxx 10 xx je xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx částí x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxx, 10 xx šířky x 15 xx xxxxx). Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx x blok xxxxxx proužek xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Rostlinu xx možno xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx kolem xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx listem xxxxxxx xxxx mírně úhlopříčný xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 cm x hluboký přibližně xxxx tři xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx špičky xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx do něj xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxx linky xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx pelety xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Xxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx a xxxxx pravý xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Pomocí xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx zářez (x úhlu xxxxxxxxx 5°), dlouhý 1,0 xx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx se xxxxx x xxxxx xxxxx suspendované xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx vazelínou z xxxxxxxx stříkačky.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx lilku den xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx lístky xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Peleta xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx inokuluje 5 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 nebo 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x kde xx xx xxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 M PBS xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Po xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx podmínkách (dodatek 8) xx xxxx xx 4 týdnů xxx teplotě 18-24 °X. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx dostatečného xxxxxxxxx a vysoké xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx se xxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx nedostatku xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx při xxxxxxxxx xxx 30 °C x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, inkubují xx xxxxxxxx pro pozitivní x negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx oddělených xxxxxxxx, xxxxx při nedostatku xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxx. Xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx přepážkami. Při xxxxxxx, zalévání, kontrole x xxxx manipulaci xx věnuje xxxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx ke kontaminaci. Xx xxxxxxxx, aby xxxxxxxx i růstové xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hmyzem, xxxxxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx na xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx po xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx vadnutí listů, xxxxx může začít xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (ztráta xxxxxxx). Xxxxxx pletivo xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx xxxx znekrotizováním xxxxxxxx. Xxxxxxx místa xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx pletiva xxxxxx často jasně xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx neodumírají; xxx xxxx xxxx období xx objevení se xxxxxxxx, tím xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx odrůst. Mladé xxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxx citlivější xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx listů a xxxx xxxxxx xxxx xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Erwinia carotovora xxxxx. xxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. foveata, jakož x velké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tyto xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Může xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení: tento xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx Erwinia xxx

7.9. Xxxxxxx xx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, měla xx xxx provedena izolace xx použití částí xxxxxxx zvadlých xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx listů a xxxxxx xxxxx vejcoplodého xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx test xX xxxx PCR xx xxxxx x xxxxx x xxxxxxx xx na xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) médiu (xxx xxxxx 8). Může xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx podezřelé x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx identifikují a xxxxxxx xx patogenita (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx okolností, zejména xxxxx nejsou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, se xxxx stát, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx latentní xxxxxxx xxxxxxx x po xxxxxxxx inkubační xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx nejsou po 4 týdnech xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx pozitivní, xxxx by být xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Čisté xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x potvrdí xx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, je-li původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx ho izolovat x pletiv projevujících xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx jej xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx provádět xxxxxxx xxxxx z xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx stonku (3.2). Xxxxx izolace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx ze xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx provádí xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x z xxxxxxx xxxxx vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxx, ale x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxx XX/XXX složených vzorků (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx xx třeba xxxxxxx xxxxxxxx stonků xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx podle xxxxxx 3.l.2.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 cfu na xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Aby xx xxxxxxxxx nebezpečí xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků, které xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx selektivního média xx se xxxx xxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx růst patogenu.

Kontrolní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx xxxxxx.

8.1. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Ze 100 µx xxxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx xxxx šťávy z xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx desetinásobné xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety xx xxxxxxx nepodaří xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx je obvykle x infikovaných xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx vzorku, x ředění 1/100 xx 1/10 000 na XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Desky se xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Počáteční xxxxxxxx xxxxx zahrnuje xxxxxxxxx x kontrolními xxxxxxx x xxxxxxxx všech xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx provádějí xx xxxxx xxxxx, x xxxxxx počítáním xx 5,7 a 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx kolonií podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci xxxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx identifikaci by xx xxxx xxxxxxxx xx YGM médiu; xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, tj. nejlépe xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxx x následujících xxxxx (xxxxxxx uvedena x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (pouze xxx xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx agar,

- xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx s minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °C xx xxxx maximálně 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx špendlíkové hlavičky, xxxxxxxxx, smetanově xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx se provede xxxxxx xxx zaručení xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx bílé xxxx xxxxx slonoviny, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, vyvýšené, konvexně xxxxxxxxx, slizovitě tekuté, x xxxxxxx okraji x xxxxxxx mají x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx pomoci xxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx izolované xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx použití xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X případě xxxxxxx xx zahrne xxx xxxxx provedený xxxx známý xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Nutriční a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Veškerá xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X x xx xxxxx dnech xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx nedošlo k xxxxxxx růstu, inkubuje xx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx zahrnovat xxxxxxxx se známým xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutriční x xxxxxxxxxxxx testy xx musí xxxxxxxx xx použití xxxxxxx xx xxxxxxxxx živného xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Aktivita xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx ureázy -

Xxxxxx X₂X -

Tvorba xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Růst x 7% NaCI -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx barvení (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx xx lF (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx dvojnásobného xxxxxx xxxxxxxx antiséra.

c) Provede xx xX xxxxxx (xxxxx 4).

x) Pozitivního xxxxxxxx xX testu xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX xxxx kultury xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx vodě (XXX)

x) Xxxxxxx se 100 µx suspenze buněk x xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 100 °X xx xxxx 4 minut. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx NaOH xx xxxxxxx koncentrace 0,05 X. Xxxxxx xxx potom xxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X xx xx xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x de Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxx velikosti a xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX test

a) Xxxxxxxx xx suspenze přibližně 10⁶ xxxxx xx xx v XXX.

x) Xxxxxxx se xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

x) Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x pozitivní kontroly.

9.5. Xxxxxxx mastných xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx vhodný xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

x) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx 15:1 Anteiso X, 15:0 lso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx svědčí x přítomnosti Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxx xxxx jako Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx a Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx A xx xxx xxxx bakterie xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx však vyskytuje xx všech Xxxxxxxxxxx xxx. x xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pohybuje xxxxx 5 %.

9.6. BOX-PCR

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml x XXX.

x) Xxxxxxx se xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx x xxx., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx potvrzení původce xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx virulence kultur xxxxxxxxxxxxxxxx jako Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx patogenity.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x 3-xxxxxxx xxxxxx testované xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx teplotě 18-24 °X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, aby xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx by xxxx xxxxx 2 xxxxx nastat xxxxxxx xxxxxxx, avšak xxxxxxxx, xxxxx po xxxxxxxx xxxx doby nevykazují xxxxx xxxxxxxx infekce, xx xx xxxx xxxxxxxxx xx 3 xxxxx při teplotách xxxxxxxxxx pro xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxxxxxxx 25 °C. Xxxxxxxx xx xx 3 týdnech xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx považována xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx z xxxxxxx x příznaky infekce xxxxxxxxxxx části xxxxxx 2 xx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Pletiva xx rozdrtí x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového pufru. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx rozetřením xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x YPGA, xxxxxxxx xx xx dobu. 3-5 dní při xxxxxxx 21-23 °C x xxxxxxx se xxxxx kolonií xxxxxxxxx xxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Protection Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Laboratory	Dublin	Irsko
Plantenziektenkundige Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Research Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Protecção xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni institut xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx de Xxxxxxxxxxx de Aldearrubia	Salamanca	Španělsko
(1) Xxxxxxxxx osoby: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx výkrojků testy XXX/XX a XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX x suspenduje xx x 10 xX fosfátového xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx tvorby xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx prostřednictvím xxxxx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx z produkce xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x které xx jisté, xx xx prosta C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx zpracují xxxxxxxx způsobem a xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx provedou xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavky xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx opatří xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx části x 100 µx xx xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx -16 až-24 °X až xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx imunofluorescence.

Pro XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x FISH xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x PCR xxxx xxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx kontrol x nesmí xxx xxxxxxx x žádné x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx skladovat xx xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 xX fosfátový xxxx, pH 7,0)

Tento xxxx xx používá x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje se xX x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X po dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx složky:

	Účel	Množství (xx litr)
Lubrolové xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx (*)	1,0 ml
Tetrasodiumpyrofosfát	Antioxidační xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (PVP ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů XXX	50 x
(*) xxx použití xxx xxxxxxxx homogenizací

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a ředění xxxxxxxx x xxxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx byly odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx xx pelety.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 g

NaH₂PO₄. 2H₂O 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX a provede xx sterilizace x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Pufry xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx pro IF (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x mytí xxxxxxx. Xxxxx se 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Fosfátový xxxx x glycerolu, pH 7,6

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx dostupné, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Citifluor® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX x XXXX xxxxxxxxxxx buněk

1. Vypočítá xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx pozorovacím xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx mikroskopického sklíčka (X).

X = c x X/x,

xxx X = plocha jednoho xxxx na xxxxxxx x více xxxxxxx x

x = plocha xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx xxxxx charakteristických fluoreskujících xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (X).

X = C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x každém okénku x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované pelety

Dodatek 5

Xxxxx xxx izolaci x kultivaci C. x xxxxx. sepedonicus

1. Xxxxxx růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Nutrient agar = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx agar = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx agar obsahující 1 % D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Provede xx sterilizace v xxxxxxxxx při 121 X po xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	10,0 g
Baktoagar (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 min.

Médium x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x minerálními solemi (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx medium = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx rozpustí x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x autoklávu xxx 115 °C xx xxxx 20 min.

b) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx jinak, pocházejí xxxxxxx složky xxxxx x XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
Manit	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xX xx xxxxxx na 7,2. Xx autoklávování (xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.) x ochlazení xx 50 X xx přidají xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx X 0,01 x.

X zásobě xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x nalidixic xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Sigma) (1 xx/xx) x xxxxxxxx xxxxxxxxx. Zásobní xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 měsíce. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx do 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Difco)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 g
KH2PO4	0,5 x
XxXX4 . 7H2O	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx rozpustí,upraví xx xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx acid (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx v 0,01 X XxXX, cykloheximid x 50% etanolu, xxxxxxxxx X xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx roztoky se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx základního xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx při xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x činidla xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx vybraných kmenů xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xx xx -3'

xxxxxx XXX-X 5'- tac tga xxx gtt xxx xxx xxx c -3'

xxxxxx NS-7-F 5'- xxx xxx xxx xxx xxx ctg xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx xxx ggt tca xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x XXX X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X rRNA 377 xx (sada XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725 μl
10x XXX xxxx (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μl	0,1 mM
Primer XXX-1 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Metody xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x Xxxxx XXX.

(²) Koncentrace primerů XX-7-X a NS-8-R xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody a xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Xxx použiti xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxx nová xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx činidla.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 xxxxx ii) 1 xxxxxx při xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx v) 30 xxxxxx při xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX matrice)

vi) 30 sekund xxx xxxxxxx 62 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 cyklus xxxx) 5 xxxxx při xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx prodlužování

ix) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx optimalizován pro xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx MJ Research XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii), xx), x), vi) a xxx).

1.4. Analýzy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx z XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkuji charakteristickou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx XX xx inkubaci xxx xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx x fragmentu xxxxxxxxxxxx pro C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx nanášecího xxxxx

2.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µl

Destilovaná xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx se xxxxx na 1x.

Také xxxxxxxx dostupné (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx ggc xxx xxx ctc xxx xxx -3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX TOXICKÝ! XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Upraví se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; pH 7,0) x 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pH x x případě potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx nebo XxXX.

[XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT XXXXX xX!]

xxx) Roztok se xxxxxxxxxxxx xxxx membránový xxxxx 0,22 µm x xxxxxxxx xx xxxxxxxx před xxxxxxx xxx teplotě 4 °X do dalšího xxxxxxx.

xx) Poznámka:

Alternativní fixační xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 M

Tris-HCl 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx filtr x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx až 1x, xxxxx potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Sonda XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů x tabulce. Xxx xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µx hybridizačního xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx

	2 sklíčka	8 sklíček
Sterilní xxxxx xxxxx voda	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx světlocitlivé xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxx při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx použití je xxxxx je xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 M xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a sterilizuje xx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování lilku xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) se xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xx následujících xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °C.

Vhodné xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Black Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Roztok xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x krystalové xxxxxxx x 20 ml 95 % etanolu.

Rozpustí xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx v 80 ml xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 ml

Pevné xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Nasypou xx xx vody x xxxxxxx se x xxxxxxxx nádobě do xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin O 2,5 g

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx a xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Připraví xx xxxxxxx, xxxxxx se xx xxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx zalije xxxxxxxx krystalové violeti x xxxxx se xxxxxxx 1 minutu.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx se Lugolovým xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx působit xx dobu xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6. Odbarvuje xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % etanolu xxx xxxxxx, pokud se xxxxxxxxx barvivo, nebo xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx do xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxx tekoucí xxxxx x xxxxxx se xxxxx papírem.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztokem x nechá se xxxxxxx 10 s.

9. Xxxxxxxx se pod xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx modře, xxxxxxxxxxxxx bakterie se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx xxxx použít xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx barvicí soupravy.

LITERATURA

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx detection xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xx batches xx xxxxxx tubers. Xxxxxxxxxx xx xxx European Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Publ XXX 11&xxxx;288 EN, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. F., 1970. Xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xxxxx of xxxxxxxx xxxx plants. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, I. X., 1984. The xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. N., 1981. Xxxxxxxxxxxxx methods xx light xxxxxxxxxx. X: Manual xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, American Xxxxxxx xxx Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Hugh, R. x Leifson, F., 1953. The xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx fermentative xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx carbohydrates by xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx bacteria. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Janse, J. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. X. x X. Xxx Xxxxxxxxxxx. The xxxxxxxxxxxxxx xx xxx EC xxxxxx for the xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Jansing, X. a X. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx medium. Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Identification xx Pseudomonas pyocyanea xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X x X. C. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, R. X., 1966. The xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. X., X. Xxxxxxx a X. C. Xxxxxxx, 1966. A xxxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxx xxxxxxxxxxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x P. W., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx of latent xxxx xxx (Corynebacterium xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Polymerase Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx spacer xxxxxx for specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, D., Xxxxxxx, X., W. x X., X. Hanus, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus by xxxxxxxxxxxxx xx three xxxxxx XXX sequences xxxxxxxx xx subtraction xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx polymerase xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Pastrik, K.-H., 2000. Detection of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxx XXX xxxx coamplification xx host XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Ramamurthi, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx on some Xxxx-xxxxxxxx phytopathogenic xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, Y., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx X1X-XXX xxx xx automated real-time xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx guide xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Minnesota:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X guide to xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx genera xx xxxxxxxx. 2nd ed., Xxxxxxx and Wilkins Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Smith, X. C.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, XX., 2001. Xxxxxxxxxx sequence-derived XXX profiling xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx identification xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofPlantPathology, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. xxx X. X. Collins, 1974. X xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Leeuweilhoek, 40, 481-527.

24. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant pathogenic xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx xxx. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, B. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. D. x X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx causes brown xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64, 4546-4554.

B. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru x bakteriálního xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx dalších hostitelských xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx vody a xxxx,

xxx) identifikace Ralstonia xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx xxxxxx, schválená xxxxxxx x podrobnosti xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxxx xxxx uvedeny v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx optimalizaci x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění karanténního xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum jako xxxxxxxxxxx materiálů, je xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx karanténních xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx odstraňování odpadů x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx stálé x xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění úrovní X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx, zvláště xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, jak je xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx screeningový xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx izolace) xxxx xxx potvrzen xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x musí xxx xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx x druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx a identifikaci xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx solanacearum) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx určen xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x výskytu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo bakteriálního xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx půdě x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxx. Negativní xxxxxxxx naznačuje xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx xxxxx xxxxx xx svazků xxxxxxx xxxxxx xx popsán x oddíle 6.1.1.

4) Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu je xxxxxx v xxxxxx 6.1.2.

5) Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx bakteriálního xxxxx xxxx extraktů z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného ve xxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX bakteriálního slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx metodou xxxxxxxxxxx roztěrů (postupným xxxxxxx) (xxx v xxxxxx 2.3.).

11) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

12) Kultivace může xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Jestliže jsou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxx test xx xxxxxxxxx, musí xx izolace xxxxxxxx, xxxxxxx kultivací na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx X. solanacearum xx provede xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Dílčí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx pro xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx ke zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň ze xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx v xxxxxxxx 3), z xxxxx xxxxx xx xxxxxxx na jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx izolací xxxxxxxx x xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, potvrzením, xx xxxxx xxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx vzorek považován xx xxxxxxxxx. Screeningové xxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx sérii xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx menší xxxxx, xxxxxxxx 200 hlíz xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx v xxxxxx 3.1.1.

3) Pokud xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx validaci prvního xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxx xxxxx nebo xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx principech. Je-li xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx nutné.

4) Xxxx XX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx izolace xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx FISH xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

11) Kultivace xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx testy xx xxxxxx pelety xxxx dodatečným xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx test x dalšími vzorky.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx podezřelých xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx nevykazujících příznaky, xxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., kde xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx jsou xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx provedena izolace x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx nebo více xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxx-xx druhý xxxx další testy xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx xx negativní. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

4) Selektivní izolační xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Testy PCR xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.8.

9) Biotest je xxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx biotest xxxxx xxxxxx z xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx negativní, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, u xxxxxxx je podezření, xx xx jedná x R. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.3.

2. Xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx fáze xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx se rozpozná xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxxxx x noci xxxxxxx x zotavení. X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zelené, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x ohýbání xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx rostliny se xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x končí kolapsem x xxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx hnědý x xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx uříznutého xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx x xxxxxxx xxxxxx táhnou vlákna xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Hlízy xxxxxxxx je třeba xxxxxxxxx napříč u xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx světle xxxxxxx zabarvení cévního xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx několika minutách xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bakteriální sliz. Xxxxxxx xx cévní xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx může rozšířit xx xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xx xxxxxxx xxxxxxx xxx od xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x x xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx který xx xxxxxxxxx xxxxxxx půdy. Xx xxxxxx se xxxxx xxxxxxx červenohnědá, xxxxx propadlá xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx cévního xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx obvyklý xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx bakteriálního x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x rajčete

Rostlina xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota půdy xxxxx 25 °X, xxx nasycené xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx málo xxx xxxxxxx kroucení xxxxx xxxxxx xxxx a xxxxxxx na jedné xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, které xxxxx jejím xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx než 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx vodou xxxxxxx pruhy xx xxxxx xxxxxx, které xxxx dokladem odumírání xxxxxxx systému. Xxx xxxxxxx xxxx stonkem xxxxxxxx xxxxx zbarvená xxxxxx pletiva xxxx xxxx nažloutlý xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Příznaky x xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x S. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou u xxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx půdy xxxxxxxxxxx 25 °C xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx inokula (xxxx. x xxxxxxxx S. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rajčete). Xxx xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxx jako x xxxxxxxx xxxxxxx. Nevadnoucí xxxxxxxx X. dulcamara, xxxxx má stonky x xxxxxx ve xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx světle hnědé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. X xxxx xxxxxxx svazků xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx mohou tvořit xxxxxx slizu, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, a to x xxx xxxxxxx xxxxxxxx vadnutí.

2.2. Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx na výtok xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-b-hydroxybutyrátu (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X xxxx xxxxxxxxx černí (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx oddíl 6.1.3.) 2.2.4. Jiné xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx jsou xxxx XX (viz xxxxx 6.1.5.), xxxx FISH (xxx oddíl 6.1.7.), xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx oddíl 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx při xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx prstence xxxxx xxxxxxxx xxxx z xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx bramboru, rajčete xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Suspenduje xx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x nechá xx 5-10 minut xxxx.

x) Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx živnou půdu (XX, XXXX xxxx XXX; viz dodatek 2) x/xxxx Kelmanovo xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx selektivní médium (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx případně xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx suspenzí X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 k xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx se 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°X.

- Na xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx izoláty X. solanacearum xxxxxxx xxxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Aviruletní formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx kruhové nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx zcela xxxxxxx xxxx.

- U Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx SMSA xxxx xxxxxxxx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx kruhové nefluidní xxxxxxxxx kolonie, které xxxx zcela xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx izolátech xxxx xxxxxxx v xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx x identifikaci Xxxxxxxxx solanacearum ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 hlíz xx xxxxx test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx na xxxxxxxx této xxxxxxxxx. Xxxxx množství hlíz xx vzorku xxxx x zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx k xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx testování vzorků x velikosti 200 xxxx.

- Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx xxxx může xxx rovněž xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Inkubace xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °C xx xxxx xx 2 xxxxx před xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

x) Hlízy xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x obsahem xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx patogenní XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx je xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Pomocí čistého x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx xxxx na xxxxxxxx xx odstraní xxxxxx xx pupkovém xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx vyříznou xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx omezí xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (hnijící) xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx stranou x xxxxxxx se odděleně.

Pokud xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištěny xxxxxxxx xxxxxxxxx xx hnědou xxxxxxx, provede xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 dnů při xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx dojít xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °X) za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x podezřelými xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx se xxxxx xx nepoužitých xxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx anebo xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x pupkového xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxx xxxxxxx pufru; x xxxxxx nejdéle 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Zalijí xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x třepou se x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot./min) 4 xxxxxx při teplotě xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx chlazené,

nebo

b) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Waring xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx polyethylenový xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx zářením) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx pomocí mixéru xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace vzorků. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx extrakčního xxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxx se použijí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x nádoby. Xxx xxxxx PCR xx xxxxx zabránit xxxxxxx XXX na xxxxxxxx xxxx x xxxxxx přístroji. X xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx zakalený, pročistí xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100 µx), filtr xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Bakteriální xxxxxx xx zahustí xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X a xxxxxxxx xx supernatant, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 ml xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx xxx X. solanacearum, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx a 500 µx xxx referenční xxxxx. Přidá xx xxxxxxxx glycerol na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µl xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x ke xxxxxxxxx xxxxx vzorku, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx uchovávají xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx extraktu, zajistí xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x zpracovány xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx vzájemné kontaminaci. Xx xxxxx pro xxxxxxx XX x xxxxxxx testy.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx a optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

IF xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx metody xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx jiných hostitelských xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx smíšené xxxxxx x počtu xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Provádí-li xx xxxxxxx, měl xx xxx založen na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx populace.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx sterilní xxxxxx xx uloží 1-2 cm xxxxxx xxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xx odebere kousek xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxx xxxxxx hned xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xx odebere xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx uříznutý xxxx xxx spojením x xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx se nejspodnější, 1 xx dlouhý xxx z xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx rostliny: Xxxxxx dezinfikovaným nožem xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami xx xxxxxxx 1 xx dlouhý xxx x xxxx každého xxxxxx hned xxx xxxxxx xxxx. X xxxxx potměchuti (X. xxxxxxxxx) nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 xx xxxx xx xxxxxx xxx vodou xxxx xxxxxxx x vodními xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 rostlin xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx pozdního xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx zjistit xx xxxx xxx x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxx plevelné xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Datura xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx spp. a Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx mohou xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3 x kořenech a/nebo xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Bidens pilosa, Xxxxxxxxx glomeratum,

Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx scleratus, Xxxxxxx spp, Rumex xxx., Xxxxxx xxxx. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx a Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X této xxxx xx xxxxx provést xxxxxxxx xxxxxxx vnitřních xxxxxxxx (zbarvení xxx xxxx xxxxxxxxxxx sliz). Xxxxxxxx díl xxxxxx x příznaky xx xx stranou xxxxxxxx xx xxxxxxxx (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxx papírem. Potom xx zpracují části xxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxxxx xx rotační třepačce (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx při teplotě xx 24 °C xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) se ihned xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku (xxxx. Stomacher nebo Xxxxxxx) x přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) pomocí gumového xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx nebo xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °X) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Po xxxxxxx, které xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.1.4. Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle není xxxxx, xxx xxx xx provést filtrací xxxxx odstřeďováním xxxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx díl xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx xxx xx skladuje x 10-25% (v/v) sterilním xxxxxxxxx při teplotě -16 až -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx další xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x xxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx PCR (xxx oddíl 6.1.6.)

Test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx ELISA (viz xxxxx 6.1.8.)

Biotest (viz xxxxx 6.1.9.)

4. Detekce x identifikace xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxx v oddíle 4.2.1. Koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx izolačnímu xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx je popsán x oddíle 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

(8) Xxxxxxxxx může xxxxxx x důvodu xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx spolehlivost xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx a identifikace X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

Princip

Validované xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx může xxx xxxxxxx k testování xxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxx vody. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx izolace je xxxxxxxxxxx populacemi xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxx x xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx uvedené xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx povrchové xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx podstatně xxxxx. Z xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vodu xx provedení nějakého xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx filtrace), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx populací. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx úspěšně k xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx patogenu x xxxxxxxxx vodě, je xxxxx xx xxxxxxxx xxxx omezení xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Zjištění R. xxxxxxxxxxxx v povrchové xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx pozdního xxxx, léta a xxxxxxx, xxx teplota xxxx překračuje 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxx xx určených xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zvýší xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx silných xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx může xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x tím x xxxxxxxx výskytu xxxxxxxx.

- Vzorky vody xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx přítomny.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx odeberou xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxxxxx na jedno xxxxxxx, pokud xxxxx 30 xx xxx xxxxxxxx x 2 x xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a odpadní xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxxx xxxxxx nejméně 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx vzorky x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Při intenzivním xxxxxxxx se vyberou xxxxxxx 3 vzorkovací xxxxx na každé 3 xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx přítoky.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx být provedena xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxx následujících metod:

a) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx dílčí xxxxxx xxx 10&xxxx;000 x xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), pokud xxxxx xxx teplotě 4-10 °X, slije xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx membránu (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µx) x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx pufru a xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tato xxxxxx xx xxxxxx xxx velké xxxxxx xxxx, které xxxxxxxx xxxx počet xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx obvykle nedoporučuje x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor xxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx x příslušných dodatcích.

5. Xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x půdě

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Typická xxxxxxxxxx kolonie je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Kultivace xxxx xxxxxx z důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xx-xx xxxxxxxxx na vliv xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx testy xxxxxxxxxx xxxxxxx xx dalším xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. solanacearum xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Test xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx oddíle xx použitelné pro xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx půdy, xxx xxxx xxx rovněž xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx z xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx metody xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx nepravidelně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx infikovaných xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků x xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxx x půdě xxxx xxxx xx xxxxx xxxx x xxxxx omezenou xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxx xxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx sledování, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx i xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx nízký stupeň xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx by se xxxx řídit standardními xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx hlístů. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx půdy xx 60 míst xx xxxxx 0,3 xx z xxxxxxx 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxx, zvýší xx xxxxx sběrných xxxx xx 120 z xxxxxx 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorky při xxxxxxx 12-15 °C. Xxx xx zpracování xxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 xx x míst xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx testováním xx xxxxx xxxxxx xxxxx promíchá.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 ot./min) x 60-150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Je-li třeba, xxxxxxx 0,02% sterilního Xxxxx-20 a 10-20 x xxxxxxxxxx kamínků xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testy

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx stonku

Přítomnost X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, rajčete nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx ukázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: uřízne xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Řez xxxxxx xx xxxxxx xx zkumavky x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, xxx xx xx několika xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx samovolně xxxxxxxx xxxxxx bakteriálního xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Test xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx kultury xx xxxxx půdě XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx sklíčko.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx kmenu xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx a případně xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x xxxxxx PHB xxxxxxxxxx xx.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx povrch xxxxxxx sklíčka xx xxxxxx protáhne xxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx popisu:

Test xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx sklíčka xx zakápnou 1 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx modři a xxxxxxx se xxxxxxxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx barvící xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxxx se zakápne 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx odsaje xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxxxx kapkou xxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx při 450 xx xxx xxxxxxxx nebo vodní xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x xx 1000x x použitím objektivu xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx xxxxxx xx PHB xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, zda xxxx granule xxxxxxxxxxxxxx x xxx je xxxxxxxxxx buněk xxxxxxx xxx X. solanacearum.

Test xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx všechna xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx B v 70% xxxxxxx x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx roztok x xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx se ponoří xxxxxx do xylolu x vysají xx xxxxx papírem. Upozornění: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a pracovat x digestoři.

d) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) vodným xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: safranin xx xxxxxx xxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx, odsaje xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem x xxxxxxx se krycí xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx světlem xxx xxxxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Hledá xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PHB xxxxxxx v xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Sérologické aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx x xxxxxx x příznaky je xxxxxxx pozorovatelná xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxxxx značkovači, xxxx. xxxxxxxxx buňkami Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx komerčně xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx následující:

a) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx označené xxxxxxxxxx x bakteriálního slizu (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c) Pozoruje xx, zda xx x xxxxxxxxxxx vzorcích xx jemném xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx půdu

Poznámka:

Než xx použije xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx předběžný test x xxxxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx 1 xx xxxxxxxxx do xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. XXXX (ve xxxxx Elphinstone xx xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx R. solanacearum xx jiných xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx pozornost. Xxxx, xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxx mít xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, jestliže Petriho xxxxx jsou přeplněny xxxx xxxx rovněž xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx by xxx xxxxxx otestován xxxxx xxxxxx jiného xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze vzorků xxx očekávat, xx xxxxxxxxx detekce touto xxxxxxx xxxx velmi xxxxxx. Metoda xx xxxx použitelná i xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány x xxxxxxxxx při xxxxxxx xx -68 xx -86 °C.

Pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx biovaru 2 R. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx by měla xxx před xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx materiál se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx se xxxxxx x cílem xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Nanese xx 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 hodinách xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx xxxx XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx x xx 3 xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx ve středu x xxxxxxxxx pruhy xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx se xx xxxxx médiu xxxxx xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx malé, xxxxxxx, xxxxx červené x xxxxxxxxx xxxx jen xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx metodou xxxxxxxxx xx universální xxxxxx xxxx., xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx uchovávají xxxxxxxxxx xx sterilní vodě (xX 6-8, xxx xxxxxx) při xxxxxxxx xxxxxxx x temnu xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx teplotě -68 xx -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Provede xx identifikace podezřelých xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) x test xxxxxxxxxx (xxx oddíl 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx selektivní xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx po 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx bakterie xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx podezřelé kolonie xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, že nedošlo x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx a v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx kolonie X. solanacearum.

Test xxxxxxxx xx selektivní xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx testy

Použije xx xxxxxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx, např. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx dojde x ke zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxx (1:100). Obohacení X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které bývají xxxxx současně xxxx xxxxxxxxx. Z xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Kromě xxxx, xxxxxxx xxxx dojít x xxxxxxx populací xxxxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxxx, xx xxx test XXXXX xxxxxxxxxx použít xxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX se xxxxxxx 100 xx extraktu xx xxxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx baněk. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (např. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

2. Inkubuje xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30 °X x xxxxxxx xxxx statické xxxxxxx x uvolněnými xxxxxxx, které xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx XXX xx obsah xxxxx promíchá.

4. S xxxxxxxxxx bujónem xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx se vzorky xx výše xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx jinými xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx testu XX xxxx hlavního screeningového xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx XX xxxx xxxxxx x xxxxxxxx IF xxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx screeningový test xxxxxx test izolace, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx je xxxx XX xxxxxx jako xxxxx screeningový test x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx provést xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxx xxxx xxx každou xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx definován xxxx xxxxxxxx ředění, xxx kterém xxxxx x xxxxxxxxx reakci xxx testování suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk/ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vhodného xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Validovaná polyklonální xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx lF nejméně 1:2&xxxx;000. Xxxxx testování xx měly xxx xxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxx ředěních blízkých xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx měl xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech xx vzorků. Jestliže xx xx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxx při teplotě - 68 až - 86 °X x xxxxxxxxx. Glycerol xxxx xxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx pufru (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Často xx xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx j xxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx uvedeno v dodatku 3 X, x xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze vzorků, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx pro tento xxxx, jsou xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x 10 xxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx pelety x xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje xx xxxxxxxx standardní množství (15 µx xx xxxxxx pro průměr xxxxxx 6 xx - u xxxxxxx xxxxxx je množství xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x xxxx. Druhá řada xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx obr. 1.

xx) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx se desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx okénka 6 xx - x xxxxxxx okénka xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx do řady xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx xxx teplotě 60 °X), xxxxxxxx, 95 % etanolem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx boxu po xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx dalším xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx sada xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), titr (X) x xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x odst. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (PŘ) xxxxxxxxxx x xxxxx IF. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx odst. 6.1.5.1.i) x 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx testovací xxxxxx xx xxxxxxx kompletně xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx pokyny od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx následovně:

2. Podložní xxxxxxx se xxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Setřesou xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF. Xxxxx xx ponořením xx xxxx 5 xxxxx x pufru XX Tween (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Je xxxxx zabránit xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, které by xxxxx xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx na xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx se stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx papíru po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx sklíčka. Sklíčko xx xxxxxxxx a xxxxx jako xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Napipetuje xx 5-10 ul 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx krycí xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx FITC xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x kolem xxxxxx. X xxxxxx s xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx buněk xx xxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx obarvené x určeném xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx se jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x testovacích xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx kontrolním kmenem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx fluorescencí nelze xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx může stát, xxxx všechna xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo okénka xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního testu. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Berou se x úvahu xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx oddílu 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XX:

x) Při xxxxxxxx jasně fluoreskujících xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx počet typických xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx u xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx povinné xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx je xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ xxxxx na 1 xx resuspendované pelety x xxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x výsledek xx pozitivní, xxxx xxx povinně proveden xxxxx screeningový xxxx, x sice izolace xxxx XX. Jestliže xx XXX použita xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, je nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx této metody x xxxxx rozsahu xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto metodou xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx xx vzorků extraktů, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx maximální citlivosti x přesnosti xx xxxxx laboratořích xxxx xxxxxxxxx optimalizační pokusy.

Použijí xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, zvolí xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou DNA. Xxxx XXX xx xxx být prováděn xxxxxxxxx laboranty x xxxxxxxxxxxx specializovaných xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA x XXX) by xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX test by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxx xx vzorku, který xxx xxxxxxx testován xx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx používaného xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX ze xxxxxx,

- reakční směs XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (přípravu xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx X. solanacearum ve xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- pokud možno, xxx PCR xxxxxx xxxx XXX extrahovanou x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x prostředí xxxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx xx měly xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. X xxxxxxx použití XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx extrakty x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x koncentrující cílovou XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla xxxxxxxxxxxxxx xxx použití xx schválenými xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Metoda xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µl xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 mM XXXX (pH 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Přidá xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do termobloku xxxx xxxxx lázně x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Mikrozkumavka xx xxxxx xx 5 xxx. do xxxx.

4. Xxxxx se 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) a xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X po xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx roztoku Easy XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx, xx se viskozita xxxxx a směs xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx mezifáze xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxx. xxx teplotě 4 °X.

9. Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 ml 100 % etanolu (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx na xxxx po xxxx 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx při 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx xx xxxxxx z pelety.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) a xxxxxxxx xx překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Peleta xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx nebo x XXX xxxxxxx.

15. Peleta xx resuspenduje x 100 µx xxxxxxxx XX x xxxxx xx stát xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 minut.

16. Skladuje xx xxx teplotě - 20 °X xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx sraženina xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX xx použije xxx xxxx XXX.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx se xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx prokázalo, xx jsou xxx xxxxxxxxxx DNA z xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x kontroly xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx možno, xxxxxxxxxx xx použít multiplexní xxxxxxxx PCR, který xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Do xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µl XXX reakce xxxxx xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx se xxxxxxxxx kontrolní vzorky xxxxxxxxxx xxxxx reakční xxxx XXX x xxxxx xx xxx xxxxx XX xxxx xxx xxx, který xxx xxxxxx xx xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx použit při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx program PCR (dodatek 6).

6.1.6.3. Analýza xxxxxxxx XXX

1. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxx amplifikované XXX z xxxxxxx xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx vhodný XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX obarvením x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních opatření xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx délky xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx gelu xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx nových nálezů/případů xx zkontroluje xxxxxxx xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx shodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx fragmenty xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů xxx XX světlem xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x zkoumaného xxxxxx zjištěn, ale xx xxxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti musí xxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx PCR xx xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxxx amplikon XXX specifický pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (xxxxxxxx) xxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx testu s xxxxxx sadou xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx inhibici XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx očekávaný amplikon xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahujícího X. xxxxxxxxxxxx ve vodě, xxxxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx byly získány xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx kontrolami XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx není xxxxxx žádný ze xxxx xxxxxxxxx.

X případě, xx očekávaný xxxxxxxx xx získán z xxxxxxx nebo xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako první xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX xxxx a xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx izolace nebo XX xxxx. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx X xxxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extrakty, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx provést s xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x glycerolu xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °C xxxx - 68 až - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx na R. xxxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857, viz dodatek 3) x 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) ze 3-5 denní kultury. Xxxxxxxx xx samostatná xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene R. xxxxxxxxxxxx, suspendovaného v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v dodatku 3 X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx, který xx xxxxxxx v xxxxx xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Fixace bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx et xx. (1998).

1 Připraví xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xx xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx ve 200 µx fixačního xxxxxxx připraveného xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 hodinu x xxxxxxxxx zařízení.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx při 7 000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx x 75 µ10,01X PB (xxx dodatek 7).

5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx sklíčko, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Zbývající roztok xxxxxx (49 µl) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx - 20 °C xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. V případě, xx xx xxxxx XXXX metodu opakovat, xxxxxxxx xx etanol xxxxxxxxxxx a xxxxx xx xxxxxx množství 0,01 PB (xxxxxxx xx protřepáním).

Obrázek 7.1 Xxxxxxxxxx na xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (nebo x sušičce xxxxxxx xxx teplotě 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi xx xxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx měla xxx skladována xxxxxxxx xxxx prachem x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x postupné xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsí (1x xxxxxx, dodatek 7). Před xxxxxxxx se ohřeje xxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °C xx xxxx nejméně 10 xxxxx.

3. Použije xx 10 µl hybridizačního xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx xxx. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx xxxxx a xxxxxxxx 4 xxxxxx, x to tak, xxx pod xx xxxxxxx vzduch. Sklíčka xx umístí xx xxxxxx xxxxxxx vlhké xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx dobu 5 hodin v xxxxxx při teplotě 45 °C x xxxxx.

5. Připraví xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx Q), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx kvalitou) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 ml 3x xxxxxx x 958 xx xxxx x molekulární xxxxxxxx). Xxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx v kádince x 1 x xxxxxxxx při xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x xxxxx xx inkubovat dalších 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx UPW (xxxx. Xxxxx X xxxxx) x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Odstraní xx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) do xxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxx xx zakryje xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Hodnocení FISH xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx vhodným pro xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630 x xxxx 1 000 x xxx olejovou imerzí. X xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx zbarveny xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx buněčná xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx. Test FISH (xxxx. 6.1.7) musí xxx zopakován, xxxxx xx xxxxxxxx odchylné. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx obvodu. X vzorků, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxx xxxx buněk, xx xxxxxxxx nejméně 40 xxxx mikroskopu.

2. Xxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxxxxxxxx nebo být xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xx neberou x xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx v xxxxxxx, xxx všechna sklíčka xx várce ukazují xxxxxxxxx xxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx okénka xxxxxxx) xx krytu xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx testu FISH x sebou nese xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, že x xxxxxx x bramborových xxxx x pelet xx stonkových partií xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx podobnými X. xxxxxxxxxxxx, x xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x testu XX.

5. V úvahu xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXX

x) Výsledky XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, pokud jsou xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx pozorovány xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud jsou xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx s typickou xxxxxxxxxx, odhadne xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx testování. Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii) Xxxxxxxx XXXX testu xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx typickou xxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6.1.8. Testy ELISA Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx pouze xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx XXXX pro xxxx xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Při xxxxxxx XXX XXXXX je xxxxxxxxx x použití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povinné. Xxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx zvýšit xxxxxxxxx xxxxx, ale xxxx xx rovněž xxxxxx x nezdarem xxxxx xxxxxxxxxx jiných xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx zdroj protilátek X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx titru xxx každou xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx dojde x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx výrobce. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x pracovním xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx stejné xxxxx xxxxx komerční xxxxxxxxx.

Xxxx xx titr xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x suspenze xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x solném xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (XXX) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx negativní xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xx použijí alikvótní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x příměsí 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4I56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 A x X). Pro xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x PBS R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odděleny xx xxxxxx k testování.

Standardizované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx jako test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx ELISA.

a) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Robinson Xxxxx xx al., 1995)

1) Xxxxxxx se 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X xx 4 minuty xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vznik nespecifických xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx uhličitanového krycího xxxxx (dodatek 4) x xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx se 100 µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Nunc-Polysorp nebo xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °C nebo 14 - 18 x při xxxxxxx 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx. Jamky xx xxxxxxx vymyji pomocí XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx vymývací xxxxxx xx xxxxx x xxxxx nejméně 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x blokačním pufru (dodatek 4). X validovaných xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx titr).

6) Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx a nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxx 37 °C.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (bod 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx konjugátu xxxxxxxxx fosfatázy v xxxxxxxxx pufru. Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

9) Konjugát xx xxxxxx x jamek x jamky xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx inkubovat x xxxxx při pokojové xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxx při 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx se xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v uhličitanovém xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx do xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° C xx xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx třikrát xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Přidá xx 190 µx xxxxxxxx ze vzorku xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Přidají xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní vzorky xx xxxx xxxxx xx xxxxx destičce. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 xxxxx při xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), přidá xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx stát 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

5) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

6) Připraví xx xxxxxx xxxxxxxxxxx imunoglobulinu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x PBS. Xxxxx xx 190 µx xx xxxxx jamky x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 hodiny xxx teplotě 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx fosfatázy x xxxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx odečítá x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXXX

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx hodnota xxxxxxx xxxxxxx (OH) z xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx menší xxx dvojnásobek XX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx substrátem) x jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů.

Test XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx hodnoty XX x xxxxx xx xxxxxxx vzorkem jsou xxxxx xxx dvojnásobek XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx testovaného xxxxxx, xxxxx hodnoty XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx správně xxxx xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxxx x vzájemné xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaný xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (přípravu xxx x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx očekávat xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx a x xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxx xxxx xxxxxxx použít xx xxxxxxxx, které xxxx uchovány v xxxxxxxxx v xxxxxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 testovacích xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx kultivaru x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Nebo xx xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Black Xxxxxx xxxx kultivary s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. až 3. listů xx xx xxxxxx rozvinu xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxxxx u xxxxx xxxx xxxx výrazné x vyvíjejí xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx testovací rostliny.

1. Xxxxxxxxx injekční stříkačkou

Inokulují xx xxxxxx rostlin xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx pomocí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx než 23X). Vzorek se xxxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx zářezem

Rostlina xx xxxxxxx xxxx xxxxx prsty x xxxxxxx xx kápne xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx děložními xxxxx a xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx řez xxx 1 cm xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xx začne x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx utěsní xxxxxxxx vazelínou x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx 5 sazenic xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, a xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx při xxxxxxx 25 - 30 °X x xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxx přemokření, xxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Aby xx xxxxxxxxx kontaminaci, xxxx xxx drženy xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx jinak xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx rostliny x xxxxxxx xxxxxx po xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxxx činnostech se xxxxxx zvláštní xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx x vzájemné xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vegetační xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, epinastie, xxxxxxx xxxxx krnění xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx čisté kultury (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx IF/PCR/izolace na xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx stonků xxxxxxxx 1 xx x xxxxx testovací xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Identifikují xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx biotestu xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx x těchto rostlin xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx organismus xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testovacích xxxxxxx.

Xxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx testy

Identifikují xx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrnou xx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxx provedený xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxxx xxxx xxxxxx přítomny xxxx xxxxxx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Text Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx citrátů +

Xxxx xxx 40 °X -

Růst x 1% XxXx +

Růst x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx škrobu -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx a xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x pufru XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx se xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx IF xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx ELISA

Poznámka:

Při xxxxxxxxx pouze 2 xxxxxxxxxxxxxxx testů xx xxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx jiný xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx na 1 xx v 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Provede xx xxxx XXXXX xx specifickou monoklonální xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Test XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x hodnotou x xxxxxxxxx kontroly.

6.2.4. Testy XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx sterilní xxxx (XXX = xxxxx xxxx water).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx bloku nebo xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °C 4 minuty. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx teplotě - 16 až - 24 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (xxxx. Xxxx xx xx. (1993); Pastrik x Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx al. (2002); Xxxxxxxx et al. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx stejnou xxxxxxxx x mají xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx metoda XXXX (6.1.7) x xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx specifickými xxx R. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx x xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Pěstuje xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Použijte xx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx FAP xx pozitivní, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2OH, 16:1 2XX x 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3XX poukazuje xx Xxxxxxxxx sp.

6.2.7. Xxxxxx charakteristiky kmenů

Pro xxxxx nový xxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx použitím xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Stanovení xxxxxxx

X. solanacearum xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx využití x/xxxx xxxxxxx tří xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Hayward, 1964 x Xxxxxxx et xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx provést xxxxxxxxx do živné xxxx x xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx při xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx půda xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200 µl xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx mění xxxxx 72 xxxxx xx olivově xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx pozitivní výsledek xxxxx.

Dodatečné xxxxx xxx rozlišení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Viz Lelliott x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, mezi xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx sekvenční XXX x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x XXXX (Louws xx xx., 1995; Smith xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx der Xxxx xx al., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx et xx, 2002; xxx dodatek 6) xxx použít x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x skupiny 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2T) X. xxxxxxxxxxxx, jak xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Xxxx xx xx., 1989) a xxxxxxxxxxxx 16X rDNA (Xxxxxxx et xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx musí být xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x příslušný xxxx pozitivní xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx se 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx lilku xx xxxx 3 pravých xxxxx (xxx odst. 6.1.9).

3) Sazenice xx xxxxxxx inkubovat xx 2 xxxxx xxx xxxxxxx 25-28 °C x vysoké relativní xxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx půdy. U xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx mělo xxxxxx během 14 xxx. Neobjeví-li se xx této xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx forma R. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx se xxxxxxxx vadnutí a/nebo xxxxxxxxx, chlorózy xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx rozmělní x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 mM fosfátového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx zřeďovacím roztěrem xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Po inkubaci 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °C xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Živné půdy xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx agar (NA)

Živný xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

Bacto-Pepton (Difco) 5,0 x

X(+) Glukóza (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7H₂O 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx a sterilují x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °C x přidá se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Sigma), až xx dosažení xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 mg xx xxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živné půdy

Živná xxxx SMSA (Englebrecht 1994 ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx živná půda

Casamino xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut.

Ochladí se xx 50 °C x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx složek, aby xx získala stanovená xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 mg/l

Polymixin-B-suIfát (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx B-0125) 1&xxxx;250 U (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid (Sigma) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Použití xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Místo Bacto-Agar (Xxxxx) může být xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. V xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx pomalejší, xxx může xx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx mohou xxxxxx x 1-2 dny xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 500 X/x může omezit xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxx xxx ovlivnění xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx teplotě 4 °X x temnu x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Misky x xxxxxx by měly xxx xxxx použitím xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx přílišnému xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx živné xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx kontrole xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) a xxxxxxxxxxx, zda xx xx 2 až 5 xxxxx při xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx obohacené xxxxx xxxx

Živná xxxx XXXX (Elphinstone xx xx., 1996)

Provede se xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, xxx xxxxxxx xx Bacto-Agar x 2,3,5- trifenyltetrazolium xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx et xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx pepton 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 g

NaNO₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx se tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx x xxxxxxx se na 50 °X. Xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx SMSA.

Dodatek 3

X. Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál

a) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx kmeny xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx vědecká xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx kultur xxxxx xxxxxxx rostlin (PD), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxx (XXXX), ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Referenční xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx SMT X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX sérologicky xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

x) Komerční xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 zdravých hlíz xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ buněk xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) jako pozitivní xxxxxxxx serologických a XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxxxxx lyofilizací, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx fixované xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx na 1 xx x xxxxxxxxx kontrole sérologických xxxxx.

X. Příprava xxxxxxxxxxx x negativních kontrol xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx PCR/IF x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx kultura xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) xx XXXX xxxxx půdě x xxxxxxxxxx se v 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx jemně xxxxxxxxx suspenzí xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 při 600 xx.

Xxxxxxx xx dřeň x pupkových konců 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx se xx, xx je xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Přenese xx 100 µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx mikrozkumavky x protřepe se. Xxxxxxx se desetinásobné xxxxxx v xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jako kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx alikvotní xxxxx x 100 N1 xx xxxxxxxxxx zkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx do doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být nejprve xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x XXXX xxxxx xx provede test xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x PCR musí xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx zjištěn v xxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx používá x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Peletový xxxx (10 mM fosfátový xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx bramborových hlíz xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx IF xxxx

Xxxx xxx XX (10 mM fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx k ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí se xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X po xxxx 15 min.

IF-pufr-Tween

Tento xxxx xx používá x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 k xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx na XX testy k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Laboratories) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx účely xxxxxxxxx xxxxx ELISA

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Desetinásobný xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

NaCI 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12H₂O 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x PBS 10,0 ml

Polyvinylpyrrolidon-44000 (PVP-44) 2,0 g

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx voda xxxxxxx xx 100 ml

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 ml

Rozpustí xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx xx xxxxxx xX xx 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x destilovanou xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 g XxXX₂.

Xxxxxxxx xx xxx 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 ml xxxxxxx.

4. Pufry pro xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 x

XxX XX₃ 2,93 g

Destilovaná voda 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12H₂O 27 x

XxX₂XX₄ . 2H₂O 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 ml

4.3. PBS-Tween

10xPBS 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 ml

Destilovaná xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx pufr, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 ml

Smíchá xx a xxxxxxx xx xxxxxxx pH 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (C).

C = x x X/x,

xxx S = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx sklíčku x xxxx xxxxxx x

x - plocha pole xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = koeficient xxxx (v xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx počet charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =X x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx R. xxxxxxxxxxxx na 1 xx vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skupinou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX TTG XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx směs XXX

1.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx následující cyklický xxxxxx:

1 cyklus: x) 2 xxxxxx xxx 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 20 xxxxxx xxx 68 °C (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxxxx syntéza)

vi) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Perkin Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z R. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

2. Protokol XXX Xxxxxxxx a Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx g -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Ps-2: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. solanacearum XXX = 553 bp.

2.2. Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μl
10x xxxx XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μl	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx validována použitím Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler MJ Xxxxxxxx XXX 200 x polymerasou Gibco Xxx Xxxxxxxxxx. Perkin Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx být xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx koncentracích.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx i) 5 xxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx vyžadovat úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx zřetelný polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx X po xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx x 96 bp.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX GAG ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX GGC XXX XXX X-3'

Xxxxx primer XX-5-X: 5'-XXX XXX XXX GAA XXX XXX GAA X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX TCA XXX ACC TGT XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx primerů XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontroly XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Reakční xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: x) 5 xxxxx při 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx při 58 °C (hybridizace xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) nechá xx xxx teplotě 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. solanacearum xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Bsm 1 nebo Isoschizomere (xxxx. Mva 1269 X) xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Pastrik xx al, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Rs-1-F: 5'-XXX XXX GAA XXX XXX ATG CAT XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX AGT CAC XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX XXX GCA XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Rs-1-F/Rs-3-R = 716 bp

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX specifický pro xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx xxx xxx xxxxxx specifické xxx xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 cyklus: x) 5 minut xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 xxxxxx xxx 72 °X (syntéza kopie)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), iii) x iv).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx Xxx X xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F a Xx-3-X xxxxxx žádná xxxxxxxxxx místa.

5. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,001

Xxxx xxxxxxxx se xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx činidla xxx XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-ggc xxx xxx xxx xxx acc xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX JE XXXXXXX. XXXXXX RUKAVICE A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX V XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx čisté xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) na teplotu xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx se 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx přidání 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; pH 7,0) a 5 xxxxx HCl 1N. Xxxxxxxxxxx se pH xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx potřeby xx upraví pomocí XXx xxxx NaOH. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X PARAFORMALEDHYDEM XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Přefiltruje xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx chráněný před xxxxxxx xxx teplotě 4 °C xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 M

Tris-HCI 60 mM (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx a xxxxxxxxxxxxx) 15 mM

Zředí xx xx x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Sonda XXX 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 xxxx OLI2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 1. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. UPOZORNĚNÍ: FORMAMID XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1. Xxxxxxxxxx množství pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Poznámka:

Všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx uchovávají x temnu xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Rozpustí se xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x sterilizuje autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X po dobu 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx rajčete (Xxxxxxxxxxxx escadentum) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx pasterizovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku x xxxxxxx xx xx měly pěstovat xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx delší;

Teplota: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °C.

Vhodná xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Beauty"

Vhodná odrůda xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

LITERATURA

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx and X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of whole xxxxx for xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Bacteriol. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 Xxxx 1998 xx xxx xxxxxxx xx Ralstonla xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx etal. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofthe Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, G., X.X. Xx Xxxx, X. Josi, X. Xxxxxxx xxx B. Xxxxx. 1999. Design xx xxxxxxxx specific xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx and application xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Pathology 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, J.L., Xxxxxx, X and Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Uses x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, X. and Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum: xxxxxxxxx xx restriction xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx with XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx and xxx hypersensitive xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. xxx Stead, X.X. 1996. Sensitivity xx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx extracts. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xx: X.X. Hayward (ed.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx huternational Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., Xx-Xxxxxxx, H.M., Xxxxxxxx, U. and Xx Lindo, L. 1990. Variation xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, S., Y. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, X. Xxxxxx-xxxxx, S. Xxxxxxxxx xxx F. Xxxxx. 1998. Detection of xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx a xxxx-xxxxxxxxx medium xxx x XXX technique. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx symptomless xxxxxx xxxxxx and xxxx xxxx xx its xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. The xxxxxxxxxxxx xx pathogenicity xx Pseudomonas solanacearum xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx a tetrazolium xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Sands, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Stead, X.X. 1987. Methods xxx the diagnosis xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Ltd., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Cambra, M., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx isolation, xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. and Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx fingerprints xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Pseudomonas pathovars xxx xxxxxxx generated xxxx repetitive xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Fulbright, X. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx De Bruijn, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX fingerprinting xx rapidly xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx campestris pv. xxxxxxxxxxx. Phytopathology 85; 528-536.

19. Opina, X., X. Tavner, G. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Li, X. Xxxxxxxxx, X. Fegan, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Hong, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxxx. 1997. A xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx and XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). As Xxx. J. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, K.H. xxx Maiss, X. 2000. Xxxxxxxxx of X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers xx xxxxxxxxxx cham reaction. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx by xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Elphinstone, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Production xx antibodies xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx agent xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 pp.

24. Xxxx, X.X., L.A. Jackson, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx sy xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Blood Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, L.C., Xxxxxxxxxx, X. and Xxxxxxx, X.X. 1995. Genetic xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (synonym Pseudomonas xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Environmental Microbiology 61; 4262-4268.

26. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Sly, XX, Fegan, X. 1996. Analysiss xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx strains of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxxx bacterium xx banana xxxxx xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. International Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Wolf, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, G.S., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X. 1998. Xxxxxxx diversity xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx by XXXX, XX-XXXX xxx rep-PCR. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, C. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx wilt xxxxxxx: Xxxxxxxxx and Ecological Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Berlin) xx. 44-49.

29. Weller, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using an xxxxxxxxx xxx quantitative xxxxxxxxxxx 5' nuclease XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., A.R. van Xxxxxxxxx, J.D. Xxxxx xxx A.D.L. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx xxx xx potato, by xxxxxxxxxxx xx sihl xxxxxxxxxxxxx with 23x xXXXxxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.