Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 xxxx. 2 xxxxxx č. 326/2004 Sb., o xxxxxxxxxxxxxxxx péči x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zákonů, (xxxx xxx "xxxxx") k xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. i) xxxxxx:

§1

Předmět úpravy

Tato vyhláška xxxxxxxxxxx příslušné předpisy Xxxxxxxx xxxx¹⁾ a xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx uplatňují xx xxxxx Xxxxx republiky xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxx xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx et xx., původci bakteriální xxxxxxxxxxxxxx bramboru, x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx x

x) při xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx se xxxxxxxx opatření s xxxxx jejich xxxxxxxxx.

§2

Pojmy

Pro xxxxx této xxxxxxxx se xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.,

x) původcem xxxxx hniloby - xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx xx.,

x) hostitelskými rostlinami -

1. původce xxxxxxxxxxxxxx - brambor (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx potvrzena xxxxxxx xxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, xxxxx xxxxx (Solanum xxxxxxxxxxxx L.) xxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Solanaceae), x nichž byla xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx nebo x xxxxxx partii,

e) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xxxx původcem hnědé xxxxxxx, x určení xxxxxxx xxxxxx infekce x x xxxxxx xxxxxx území, na xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 zákona,

f) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x rostlině, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx prostředku, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x veškerých jiných xxxxxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

g) xxxxxx rozšířením xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx pozemku, x xxxxxxx xxxxx x xxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xxxx původcem hnědé xxxxxxx - výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxx §11 odst. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx vymezené Xxxxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx podle §76 xxxxxx x důvodu xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé hniloby,

k) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx partie; xxxxxx se za:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx klonově xxxxxxxx partie, xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx množením x xxxxxx rodičovské xxxxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx stejné xxxxxx osiva,

2. rodičovskou xxxxxxx příbuznou partii xxxxxxxx partie xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xx bezprostředně xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výskytu xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx průzkumu xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 odst. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx unie (xxxx xxx "členský xxxx"),

x) xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx partie xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x).

(3) Vymezovacímu xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx podezřelé x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. c).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx ze xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx třetích xxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru²⁾ x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) všechny xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx zemí.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x závlaze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx včetně doprovodných xxxxxxxxxxxxx rostlin x xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxxxxxxxx podniků, xxxxx xxxxxxxxxx zpracovávají hlízy xxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxx odpady x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Vymezovacímu xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx navíc xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx a plevelné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxxxxx substrát x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx v odstavci 2 písm. a) x x), xxxxxxxx 3 x x xxxxxxxx 4 písm. x) x xxxxxxx xxxx xx skládek, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 xxxx. x) z xxxxxxxxxx partií,

b) prohlídkou xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxx, v xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, x případech xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 písm. x) x x),

x) xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete ve xxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx laboratorním testováním xxxxxx rostlin s xxxxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxx hniloby x xxxxxxxxx uvedených x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx odpadů xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx uvedeném x xxxxxxxx 5 xxxx. x) a v xxxxxxxx 6.

(8) Způsob xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x dobu xxxxxx xxxxxx při průzkumu, xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 xx 7, xxxxxx tohoto xxxxxxxx x způsob xxxxxxxxx xxxxxxxxx o odebraných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x souladu x §10 xxxx. 1 xxxxxx Xxxxx xx základě xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x statistických xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx hnědé xxxxxxx, x přihlédnutím x xxxxxxxx produkce xxxxxxx x dalších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx na míře xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxx zjištění x xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xxxx stanoveným Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx a xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx rovněž xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx osobou, xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx dohledu xxxx xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx odebírány x xxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Ústav bez xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx na trh xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx x provádění xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 5 zákona xxxxxx xxxxx x rozsahu xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx za účelem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx průzkumů xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Komisi, x xx x případě xxxxxxxx x rozmnožovacím xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx výsadbu xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 1. června. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, týkající xx xxxxxxx hostitelských rostlin, xx vztahují xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jsou důvěrné.

§4

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Ústavem xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 oddílu X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxx pod xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X případě podezření x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxx x xxxxx odborného xxxxxxx podle §76 xxxx. 7 xxxxxx x zvláštního právního xxxxxxxx³⁾ zajistí xxxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního testování, x to xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 a xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx neodkladně xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx xx účelem zjištění xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona

a) zakáže xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx odebrány xxxxxx, x výjimkou xxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx Ústavu, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, a

b) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxx šíření předejít xxxxxx zákazu xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úředního xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx spojených s xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxxxx i xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx nebezpečí xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxxxxxxxxxx vod původem x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, sdělí Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx podrobnosti xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx s xxxxx xxxxxx vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Pokud xxxx o xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx mít xxxxx x České xxxxxxxxx xxxx které může Xxxxxx republiku ohrozit, xxxxxxxxxxx Xxxxx republika, xxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 a 3.

§5

Xxxxxxxx při potvrzení xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 odst. 8 xxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, Xxxxx v souladu x §76 xxxx. 2 zákona x x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x ke xxxxxxx xxxxxxxxx, uvádění xx xxx x xxxxxxxxxxxx zpracování xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) označí za xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, stroje, dopravní xxxxxxxxxx, sklady xxxx xxxxxx části x xxxxxxx jiné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, x xxxxx xxx xxxxxx odebrán, a xxxxx xxxxxx do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx těch, kde xx možná xxxxx xxxxxx pěstebního xxxxxxxxx, x xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx odborné xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 x xxxxxxx v xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx kontaktu, a xx základě klonové xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, zavlažování x xxxxxxxx xxxx xxxx pěstitelské vazby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx písmene x) x bezpečnostní xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxx x) x xxxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx bodu 3 přílohy č. 3.

(2) V xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx na xxxxxxxxxx vodu, odpadní xxxx xx zařízení xx xxxxxxxxxx a xxxxxx brambor x x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx lilkovitých x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx by xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx být ohroženo xxxxxxxxx xxxxxxx, Ústav

a) xxxxxxx úřední laboratorní xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx lilkovitých xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx xxxx odebírány xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx karanténní xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx xxxxx písmene x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx neprodleně xxxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), popřípadě xxxxxxxx 2 písm. x), x xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x tomto oznámení xxxx xxxxxxx.

(4) Pokud xxxx členský xxxx xxxxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky x xxxxxxxx xxxxxxxx obdobně xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx způsobem x v xxxxxxx x ustanovením xxxxxxxx 1 a 2 xxxxxx xxxxxxxx předměty x xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření x vymezí karanténní xxxxx, popřípadě xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxx stanoví xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx zásady xxx xxxxxx xxxxxxxxx šetření xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. b) x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx zóny, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxx 2 xxxx. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx zajistí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x partiím, které xxxx označeny xx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), x každém xxxxxxx však xxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x cílem xxxxxxxx míru xxxxxx xxxxxxx šíření původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 Xxxxx x případě xxxxxxx xxxxxx další xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), x) x x).

§7

Xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona nařídí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxx být sázena x xxx xxxxxxxx Xxxxxx xx x xx naloží způsobem xxxxxxxx x bodě 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx předem xxxxx, xx neexistuje xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx jsou splněny xxxxxxxxx na zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, v případě xxxxxxxxxxxx zpracování této xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) smí xxx použita xxx xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, že xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x že xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx odpadů, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx této xxxxxx, x pokud není xxxx partie xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxx §6 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) zařízení, xxxxxx, xxxxxxxx prostředky, sklady xxxx jejich části x veškeré jiné xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) nebo xxxxxxxx xxxx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. b), xx buď xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxx uvedených x příloze č. 6 x xxx, že xx xxxxxxxxx očisty x xxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxx a předměty xx xxxxxxxx ani xx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) x karanténním xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), popřípadě xxxxx §5 odst. 2 xxxx. x), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stanovená x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Ústav xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx odůvodněná, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx nařízených podle xxxxxxxx 1 písm. x) xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx povinných xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx zruší xxxxx §76 odst. 4 písm. x) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nařízená podle xxxxxxxx 1 a xxxxxxxx 2 po xxxxxx splnění x xx uplynutí xxxx xxxxxxxxx k jejich xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx je x xxxxxxx x §7 odst. 1 xxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx jejich xxxxxxxxxxxx x vědeckým, xxxxxxxxxxxxxx xxxx diagnostickým účelům, xxxxx povoluje Ústav xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, xxxxx xxx nebudou xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx výskytu xxx xxxxxxxxx xxxxxx jejich xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Rozmnožovací xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx republiky x xxxxxxx xx xxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 odst. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx s §3 xxxx. 8 x 9, a xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xx x příslušném xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, pokud xxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce x partii rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx v partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx souvislost, xxxx

2. reprezentativní vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu bramboru xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x nichž xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ xxxx reprezentativní xxxxxx xxxxx partií xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx nebo předstupňů, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx roce, xxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebyl x xxxxxxxxx uplynulém xxxxxxxxxx roce xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx dnem xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx č. 331/2004 Sb.

A. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx diagramy popisují xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) detekce Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, validovaná xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx testovaných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku č. 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx za vhodných xxxxxxxxxxxx podmínek x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx stanovené prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx příprava pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx od xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx administrativním x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, jak xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech.

Pokud xx první screeningový xxxx (TF nebo XXX/XXXX) pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx infekci xxxxxxxx kroužkovitosti x xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti.

Z xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX test xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx izolaci x identifikaci xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramů

1.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx bramboru a x xxxxxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx pro xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxx médiu x v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

(1) Xxxxx xxxxxxxx je x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- XXX test (xxxxx 6),

- FISH xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx izolace xxxxxxxx x rostlinného xxxxxxxxx x typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzí xx xxxxx není xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxx xx infikovaném xxxxxxx, xxxxx přerůst xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x selektivní xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx morfologie xxxxxxx je x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx zkouška xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x nejméně xxxx screeningových testů, x xxxxx každý xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, a xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx je Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxx xxxxxxxxxxx k xxxx, aby xxx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x izolační xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x každé xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx extrakce x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.1.

(3) Pokud xxxx xxxxxxx dva xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx druhý xxxx další test xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátka, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx umožní xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x protokoly (viz xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx (xxx oddíl 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx může xxx x xxxxx xxxxxxxxx vhodná xxxxxx xxx přímou xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx použití XXXX média xxxx XXX-88 média x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx xxx získat xxxxx 3-10 xxx po xxxxxxxxx xx médium. Xxxxxxx patogena xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxx, aby se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx jsou konkurencí Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx na médiu x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, musí xxx izolace provedena x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx používá k xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx bramborových xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx obohacení x rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum melongena). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx tuto xxxxxx. Xxxxxxxxxxx inhibitory Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx MTNA xxxx XXX-88 xxxxx pravděpodobně xxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Typická morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx testy xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx vzorků.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur xxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 9.

(12) Test xxxxxxxxxx je xxxxxx x oddílu 10.

1.3. Xxxxxxxxx diagram pro xxxxxxxx bakteriální kroužkovitosti xx vzorcích bezpříznakových xxxxxxx bramboru

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - viz oddíl 3.2.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.2.

(3) Pokud xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických principech xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, že xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivního výsledku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx a typická xxxxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx popsán x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx popsán x xxxxxx 6.

(7) XXXX test xx xxxxxx x oddílu 5.

(8) Xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou negativní, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx dalších xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xx jedná x Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus, se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Test patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx pak xx xx konci xxxxxx. Xxxxx toho xxxx příznaky xxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx jiných xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Proto xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx snadno xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx je obvykle xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx infikované xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x když xxxx x infikovaných xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx neobvykle xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, žluté xx xxxxxxxx mezižeberní xxxxxx. Infikované xxxxxxx xxxxxx, listy x xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx listy x xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx rostliny xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy bramboru

Nejranějšími xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx x okolí xxxxxxx xxxxxxx, zejména blízko xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx obvykle. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je žlutavé xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx a xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vystupují x xxx sloupky xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Vodivá pletiva xxxxx zhnědnout x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v tomto xxxxxx podobné příznakům xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx být tyto xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx xx postupně xxxxx xx celý xxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx xxxxxx: vnější xxxxxx část xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx stadiích xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxx se x Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx případů, kdy xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, čímž dochází x xxxxxxxxxx poškození xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx nemožné, rozlišit xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Možné xxxx x atypické xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx řady xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx vzorků

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Standardní xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx 1 test. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Postup xxxx lze vhodně xxxxxx i pro xxxxxx s xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Validace všech xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx, Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (s xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx možné patogenní XXX) a mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx oschnout na xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx obzvlášť xxxxxxxx x xxxxxxx, xx xx ve xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX xxxx xxxx přímá xxxxxxx.

3.1.1. Pomocí čistého x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nožem xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx konci xxxxx hlízy. Xxxxxxx xx xxxxxxxx konické xxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxx xx xxxxx nadbytečná xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky. Xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx dají xxxxxxx x testují se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx xx vizuální xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx konci. Všechny xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x uchovávají se x karanténě xxx xxxxxxx 4 - 10 °C xx xx ukončení xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx shromáždí x xxxxxxxxxxx nádobách xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx uzavíratelné x/xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxx používány, xxxx být důkladně xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, uchovávají xx x xxxxxx bez xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx xx dobu xxxxxxxxx 72 hodin xxxx při pokojové xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Schnutí a xxxxxxxxxx výkrojků x xxxx saprofytů x xxxxxxx skladování může xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) x xxxxxxx se x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx teplotě nižší xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx v xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx použití xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí křížové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) x xxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX test, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX na xxxxxx nebo mlecí xxxxxxxx, doporučuje se xxxxxx v xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití.

3.1.4. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx nadměrně xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x po xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10°C) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx xx omyje xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx frakce xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10 000 g xx dobu 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X x odstraní xx supernatant, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Resuspenduje xx xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µx xxx xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx konečnou koncentraci 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx části x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx během xxxxxxxxx xxxxxxxxxx při teplotě 4-10°X.

Xxxxxxxxx zmrazení x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx nutný xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx se se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx kontaminaci. Xx platí i xxx sklíčka xx XX xxxxx a xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup je xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Pokud xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, měly xx xxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx populace, xxxxx xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx nebo zahradnických xxxxx xx xxxxxxxx xxxx x velikosti 1-2 xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx stonků xx krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx x uzavřené sterilní xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x následujících postupů:

a) xxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx v rotační xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx při teplotě xxxxx než 24 °X nebo po xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku x xxxxxxxxxx množstvím xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx zařízení. Pokud xx xxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx v chladu xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Po xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 minut, se xxxxxxxxx supernatant.

3.2.4 Další xxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, xxx lze xx xxxxxxxxx filtrací x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xx 2 xxxxxx části, Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx testování xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx glycerolu při xxxxxxx -16 xx -24 °X (týdny) xxxx xxx teplotě -68 xx -86 °X (xxxxxx), pokud xx nutné další xxxxxxxxx.

4. lF test

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx byla prokázána xxxx schopnost dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx hlavní screeningový xxxx x jeho xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx xxxx XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx xxxxxxx nutné xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Pokud je xX xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, používá xx xxxx xxxxxxxxxxxx protilátka. X případě pozitivního xxxxxxxx lF xxxxx x polyklonální xxxxxxxxxxx xxxx xxx další xxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, xxx méně xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx kmenu původce xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Doporučuje xx určovat xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx protilátek. Titr xx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx mít XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Během xxxxx xx xx měly xxxxxxxxxx používat x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxxx titru xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx proveden xx xxxxxxxxxx skladovaných při - 68 xx - 86 °C x xxxxxxxxx. Glycerol xxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x x xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. To xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka x xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x brambor xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx teplotě -16 až -24 °X) by xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako paralelní xxxxxxxx na stejném xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vzorkových xxxxxxxx, které byly xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx xxxxxx, nejlépe x 10 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x relativně xxxxxx xxxxxxxxx škrobového xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx o xxxxxxx 6 xx je xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pelety (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx v řadě. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx jako duplikát xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx o xxxxxxx 6 xx je xxxxxx 15 µx - pro xxxxx xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x každého xxxxxxx xx xxxx okének. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Vysuší xx xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx nebo zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), nad xxxxxxxx nebo xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx potřeby lze xxxxx fixovaná xxxxxxx xxxx dalším xxxxxxxx xxxxxxxxx zmrazená x xxxxxx xxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX xxxxx:

x) Xxxxx přípravy xxxxxxx na test x xxxxxx 4.1 xxxx. a):

Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v XX xxxxx. X první xxxxx xx xxx xxx titr 1/2 (X/2), v ostatních xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (T/2), xxxx (T) x xxxxxxxxxxx titr (2X).

x) Xxxxx přípravy sklíčka xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx (WD) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Xxxxxxxx ředění ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Příprava xxxxxxx xx test xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. písm. x)

4.3.1. Podložní sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxx xxxxxxxxx okénko se xxxxxxx xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx xx xxxxxx okénku xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx všech xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx opláchnou xxxxxx IF. Xxxxx xx xxxxxxxxx po xxxx 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx třeba xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by mohly xxxxxxxx vzájemnou kontaminaci, x pečlivě xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xx dobu 30 minut při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Kapky konjugátu xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl 0,1X fosfátového xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x přiloží xxxxx sklíčko.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem s xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx 500x až 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx dvou navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxx obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí být xxxxx fluoreskující x xxxxx obarvené v xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x charakteristickou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx okénkách sklíčka (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být při xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředění protilátky xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx brát x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx kontaminace xxxx být test xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, když xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx nebo xxx xxxxxxxx pozitivních buněk (xxxx xxxxxx sklíček) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x typickou xxxxxxxxx x morfologií x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx protilátek podle xxxxxx 4.3.

4.4.5. Interpretace xxxxxxxx XX testu:

a) Xxx zjištění jasně xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 xxxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, kde je xxxxx typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované pelety x xxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

5. Xxxx FISH

PRINCIP

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, musí xxx jako xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se validované xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující postup xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx jej xxxxxxx xxxxxxx x extraktem, xxxxx xxx uchován x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 xxxx -68 xx -86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx (např. kmen XXXXX 4053 xxxx XX 406) v 0,01 X fosfátového xxxxx (PB) x 3-5 xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx se samostatná xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx oligosond xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu

5.1.1. Xxxxxxxx xx fixační xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx se 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx do Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx v 500 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin předem. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx se xxxx xxx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % etanol. Xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X PB x 50 µx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °C xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje xx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µl 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µl fixované xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 3, přičemž xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 M XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °C xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx odstředěním, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 M XX x zamíchá xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (nebo xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X této xxxx xx možnost xxxxxx přerušit a xxxxxxxxxx x hybridizaci xxxxx xxx. Sklíčka xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Připraví xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX EDTA, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx lze xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx pouze xxxxxx xxxxxxx x nechat xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx dobu 10 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx ponoří xxxxxxx xx demineralizované xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µl xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 xX Tris-HCl, 2 mM XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx se xxxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % a 96 % etanolu xxxxxxx po xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx zakrytím xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx filtračním papírem xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Krabice xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 55 °X xx dobu xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx xx 1 xxxxxxx x předinkubuje xx xx xxxx 5 xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx horkou xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x do xxxxxxx xx 4 xxxxxx na xxxxxxx / xxxxxxxxx se xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx přikryje 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) tak, xxx xxx ně nevnikl xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x xxxx xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Připraví xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Ultra xxxx xxxxx = XX), 1 l 1x hybmixu (334 xx 3x hybmix x 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x hybmix x 833 xx UPW). Xxxxx x xxxx xx přeinkubuje ve xxxxx lázni při xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx krycí xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx se umístí xx držáku xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx s 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx promývacího xxxxxxx 1/2 xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx krátce xx XXX a xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx filtračním papírem. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx krycího roztoku (xxxx. Vectashield, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, USA xxxx xxxxxxx) do xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Hodnocení XXXX testu

5.3.1. Xxxxxxx xx prohlížejí xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1 000x pod xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxx isothiokyanat (FITC) xxxx xxxxxxxxxxxxx buňky (xxxxxx xxxxxxx gramnegativních xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx zbarveny. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx v pravých xxxxxx x kolem xxxxxx. U xxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, se pozoruje xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x morfologií xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testovacích xxxxxxx (xxx internetová stránka xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx sklíčka xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky díky xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx FISH xxxxx. X peletách x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx podobnou Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx x XX xxxxx.

5.3.5. V xxxxx se xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx jasně zeleně xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 mikroskopickém xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou tyto xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx PCR test xxxx hlavní screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Pokud xx XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx pozitivní, xx xxx dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Využití xxxx metody x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaných do xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx předtím testovány x negativním výsledkem. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x přesnosti xx xxxxx laboratořích xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používají xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x protokoly. Přednostně xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, xxx xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxxxx cílovou DNA. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx molekulární xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (u průběhu xxxxxxxx XXX x XXX) by xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

- extraktu xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx testován na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx a DNA xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxx xxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- suspenze 10⁶ xxxxx na 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx vodě z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 nebo XXXXX 4053),

- pokud xxxxx použít xxx xxxxxxxxx PCR xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxx kontaminaci, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxx popsané pozitivní x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx DNA x komplexních substrátů xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x koncentrující xxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

a) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx lýzového pufru (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx.

2. Přidá xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx o teplotě 95 °X na xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se vloží xx 5 minut xx ledu.

4. Přidá xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx lyzozymu (50 xx xxxxxxxx xx 1 xx x 10 xX Xxxx HCl, pH 8,0) x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx A (Invitrogen), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx teplotě 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx promíchá xxxxxxxx, xx usazenina xxxx poteče xx xxxxxxxxxxxxx x vzorek xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µx xxxxxxxxxxx x míchá se xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx sníží x xxxx se xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx při 4 °X xxx oddělení xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxx fáze do xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Přidá xx 1 xx 100 % etanolu (-20 °C), krátce xx promíchá xxxxxxxx x inkubuje xx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx na 15&xxxx;000 g po xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x xxxxxxxx se x xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°C, xxxxxx xx xxxxxxx x odstraní etanol.

14. Xxxxxx xx nechá xxxxxxxx xx vzduchu xxxx v XXX xxxxx xxx.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxxx v 100 µl xxxxxxxx xxxx (XXX) x xxxxx xxxx nejméně 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -20 °X xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a pro XXX se xxxxxxx 5 µx supernatantu xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx použít, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml stejně xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx desetinný xxxxxx vzorku DNA (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR v xxxxxxxxx, kde xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Do xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µl XXX reakce.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx PCR x xxxxx xx xxxxxx sterilní xxxx XXX, která xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX mikrozkumavky se xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx xxx počátečním xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx produktu XXX

6.3.1. Xxxxxxx se xxxxxxxxx XXX elektroforézou v xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx amplifikované reakční xxxxx XXX x xxxxxxx vzorku xxxxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx gelu x Trisacetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) při 5-8 V na xx. Použije se xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 bp xxxxxx.

6.3.2. Detekují se xxxxxxx DNA xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 mg xx x) po xxxx 30-45 minut, za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx mutagenem.

6.3.3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, např. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx hledají xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X všech xxxxxx xxxxxx xx zkontroluje xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a době x vhodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x pufrem (xxx dodatek 6). Rozdělí xx xxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxxxxxx x agarózovém xxxx a pozoruje xx charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX prosvícením xx xxxxxxxx ethidiumbromidem x xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx negativní, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX očekávané xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx (pokud xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX primerů (oddíl 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít podezření xx xxxxxxxx PCR, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx získán z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxx, xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xx vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx z xxxx xxxxxxxxx.

Xxx mít podezření xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx xxxx negativních xxxxxxx.

7. Xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx přidaný x extraktům xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxxxx s negativním (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Nejvyšší xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovávány x xxxxxxxxx při teplotě -68 až -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx xxxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxx růstové xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x pěstování xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx podle 3.1.5. xx rozdělí xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x efektivní xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx I

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (pro xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xx je xxxxxx xxxx pěnového polystyrénu x vyhloubenou xxxxx x xxxxxxxxx 5 xx hloubky, 10 xx šířky x 15 xx délky). Xxx xxxxx testovaný xxxxxx xx xxxx xxxxxx x blok xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fólie. Xxxxxxxx xx možno xxxxxxx xx místě xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx skalpelu xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxx x prvním xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx tři xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a nanese xx xx xxx xxxxxxxx štětečkem xx xxxx linky xxxx xxxxxx malířským xxxxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lilku.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx vazelínou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx o xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx stonek xxxxxxxx xxxxxx dvěma xxxxx xx napipetuje xxxx xxxxxxx lístky x xxxxx xxxxx xxxx xxxxx (přibližně 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx skalpelu xx xxxxx sešikmený zářez (x xxxx xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x řezem xx xxxxx x xxxxx xxxxx suspendované xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx zakryje xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Inokulace xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx napětí xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx lilku vejcoplodého xx inokulují xxxxx xxx děložními lístky xxxxxx injekční xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx méně než 23 X). Xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx rostliny lilku xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx pozitivní xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 nebo 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xx to xxxxx x pletivem x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Po xxxxxxxxx xx xxxxxxxx nechají xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx vhodných podmínkách (dodatek 8) po xxxx xx 4 týdnů xxx teplotě 18-24 °X. Rostliny xx xxxxxxxx za dostatečného xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx vody nebo xxxxxxx kvůli nedostatku xxxx. Buňky Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxxxx xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx xx zamezilo xxxxxxxxxxx, inkubují xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx nebo xxxxxxx komoře na xxxxx oddělených policích, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxxxx x xxxx. Xxxxx musí xxx xxxxxxxx pro různé xxxxxx inkubovány blízko xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx přepážkami. Xxx xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxx x xxxx manipulaci xx xxxxxx maximální xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx nezbytné, xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx chráněny xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx mohl xxxxxxxx bakterie x xxxxxxx vzorku xx xxxxx.

7.8. Pravidelně xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx zprvu xxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx před xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx žilnatinou xxxxxx xxxxx mastně vodnatý xxxxxx. Xxxxxxxxxx pletiva xxxxxx xxxxx jasně xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx neodumírají; čím xxxx xxxx období xx objevení se xxxxxxxx, tím je xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Mladé xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx mnohem xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti než xxxxxx xxxxxxxx, proto xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx xx fázi xxx listů x xxxx krátce xxxx xx. Xxxxxxx mohou xxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxx bakterií nebo xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Erwinia carotovora xxxxx. carotovora x X. xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. xxxxxxx, jakož x xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxxx bakterií. Tyto xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx případů xxxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx listy xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx

7.9. Xxxxxxx xx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx provedena xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx zvadlých xxxxx xxxx xxxxxx rostlin. Xxxxxx listů x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx vydezinfikuje xxxxxxx 70 % etanolem. Xxxxxxx xx xxxx xX xxxx XXX xx šťávě x xxxxx x izoluje xx na vhodném (xxxxxxxxxxx) médiu (viz xxxxx 8). Může xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx optimální, se xxxx stát, že Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx zůstává x xxxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx latentní infekce xxxxxxx i xx xxxxxxxx inkubační xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx stonků o xxxxx 1 cm x každé testované xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxx xx xxxx pozitivní, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx (selektivních) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x potvrdí xx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, je-li původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Ačkoliv xx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, je xxxxx xx xxxxxxxx x pletiv xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx napadení.

Mohou xxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie, x proto se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx izolaci xxxxx z pelety xxxxxxx hlízy (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxxx za xxxxxxx selektivního xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxx části hlízy xxxx ze xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x z xxxxxxx xxxxx vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxx, xxx x xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx v testu XX/XXX xxxxxxxxx vzorků (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx je třeba xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx provedena podle xxxxxx 3.l.2.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxx 106 xxx na xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx nebezpečí xxxxxxxxxxx, připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx selektivního média xx se měla xxxx použitím x xxxxxxxxx obvyklých vzorků xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx xxxxxx.

8.1. Roztěr na xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Xx 100 µx alikvotní xxxxx xx vzorku xxxxxxxxxxxxxx bramborové pelety xxxx xxxxx x xxxxx vejcoplodého xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x peletovém xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xx obvykle x infikovaných xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vysokých xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout ředěním, xxxxxxx xxxxxxx zůstává. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 na XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x roztěrům (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx x temnu xxx teplotě 21-23 °X.

8.1.4. Počáteční xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx všech xxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx dnech, s xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 a 10 xxxxx.

8.2. Čištění xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého a/nebo xxxxxxxxx identifikaci xx xx xxxx xxxxxxxx xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx příliš xxxxxxxxx, tj. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx podobné Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx rozetřou xx xxxxx x následujících xxxxx (složení xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (pouze xxx xxxxxxxxxx),

- kvasničný xxxxxx xxxxxxxxx agar,

- xxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X xx xxxx maximálně 10 xxx.

Xxxxxxx kroužkovitosti xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kolonie xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx zbarvené.

8.2.2. Xxxxxxxx xx provede xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. U xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Typické xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx žluté, okrouhlé, xxxxxx, xxxxxxxx, konvexně xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x rovnými xxxxxx x xxxxxxx mají x xxxxxxx 1 - 3 mm.

Jednoduché Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx další xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx kultury xx identifikují (viz xxxxx 9) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx kultury xxxxxxxxxxxxx izolované xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx principech.

V případě xxxxxxx xx xxxxxx xxx každý xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx identifikační testy

Zjišťují xx následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx média xx xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X a xx xxxxx dnech xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxx růstu, xxxxxxxx xx po dobu xxxxxxx 20 dní.

Všechny xxxxx musí zahrnovat xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx musí xxxxxxxx xx xxxxxxx inokula xx xxxxxxxxx živného xxxxx. Morfologická srovnání xx xxxx xxxxxxxx x kultur x xxxxxxx dextrózového agaru.

Test Xxxxxxxxx výsledek

Oxidačně-fermentační (O/F) xxxxxxx xxxx slabě xxxxxxxx

Xxxxxxxx oxidázy -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Tvorba X₂X -

Xxxxxx indolu -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Xxxx x 7% XxXX -

Hydrolýza xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx eskulinu +

Xxxxxx xxxxxxxx z:

- xxxxxxxxx -

- laktózy - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- salicinu -

Xxxxxxx barvení (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze přibližně 10⁶ xxxxx/xx v xxxxx xx xX (dodatek 3).

x) Připraví xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx antiséra.

c) Xxxxxxx xx xX xxxxxx (xxxxx 4).

d) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx xX xxxx kultury xxxxxxxx titru pozitivní xxxxxxxx.

9.3. XXX test

a) Xxxxxxxx se suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx ve xxxxxxxx vodě (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx suspenze xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx vřící xxxxx xxxxx při teplotě 100 °C po xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx potřeby xx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx přidáním xxxxxxx xxxxxxxxxxxx NaOH xx xxxxxxx koncentrace 0,05 M. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C xx do xxxxxxx.

x) Xxx amplifikaci Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (xxxx. Pastrik, 2000; viz dodatek 4; Li x xx Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Rainey, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

9.4. XXXX test

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx postup XXXX (xxxxx 5)

c) Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, jsou-li dosaženy xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x pozitivní xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Oxoid) xx xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

c) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxxxxx x profilem xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 lso, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx jasně xxxxxx x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx rody jako Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter x Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, ale 15:1 Xxxxxxx X xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xx všech Clavibacter xxx. v rozmezí 1-5 %. U Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Provede xx xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx a xxx., 2001.

10. Test patogenity

Pro xxxxxxx potvrzení původce xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxx provedena xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na xx z 3-denních xxxxxx xxxxxxxxx izolované xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx se 5-10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx vejcoplodého xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Inkubuje se xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx dostatečném xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, aby xxxxxxx x přemokření xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx kultur xx xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx rostliny, xxxxx xx uplynutí xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx infekce, xx xx xxxx xxxxxxxxx xx 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx se po 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, nemůže xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx formu Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Izolace se xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 cm xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx v malém xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx rozetřením xxxx xxxxxxxxx na XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 xxx při xxxxxxx 21-23 °X x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx typických xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře xxxxxxxxxx xx na xxxxxxxxxxxx x validaci xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur für Xxxxxxxxxx und Ernährangssicherheit	Vídeň x Linec	Rakousko
Departement Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Végétaux, Xxxxxxx xx Quarantaine xx la Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx institut xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx de Aldearrubia	Salamanca	Španělsko
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx výkrojků xxxxx XXX/XX x FISH

Vypěstuje xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX a xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx pufru xxx získání xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx tvorby xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zakalené xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx pletiva se xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxx s xxxxx xxxxxxx, u které xx xxxxx, xx xx xxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx způsobem a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx suspenze X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx protřepat. X xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx kontaminovaných xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrola. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx opatří štítkem.

Připraví xx alikvotní xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, čímž se xxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X xx do xxxx použití.

Přítomnost x xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx nejprve xxxxxxxxx prostřednictvím imunofluorescence.

Pro XXX test xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x XXXX testy xx provedou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nesmí xxx xxxxxxx x žádné x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx pro testovací xxxxxxx

XXXXXX: Neotevřené sterilizované xxxxx xxx skladovat xx dobu až xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Extrakční xxxx(50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x rostlinných xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje se xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

	Účel	Množství (xx litr)
Lubrolové xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací činidlo (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (PVP ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50 x
(*) pro xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x výkrojků x pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz poté, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2H₂O 0,4 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 min.

2. Xxxxx xxx XX test

2.1. Xxxxx xxx IF (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Složky se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x provede xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx při 121 °X xx dobu 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x mytí xxxxxxx. Xxxxx se 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx pufr x xxxxxxxxx, pH 7,6

Xxxxx pufr se xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx voda 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Citifluor® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Stanovení koncentrace xX a FISH xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk v xxxxxx mikroskopického xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx jednoho xxxx xx xxxxxxx x více xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx i = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x každém xxxxxx x

X = zřeďovací xxxxxx resuspendované xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx izolaci x kultivaci X. x subsp. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Nutrient agar = XX)

Xxxxx agar (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx se rozpustí x provede se xxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx agar (Xxxxxxxx dextrose xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx agar obsahující 1 % X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 X xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
Baktopepton (Xxxxx)	5,0 g
D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (monohydrát)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7H2O	0,1 g
MnSO4 . H2O	0,015
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Difco)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 média x xxxxxxxxx xxx 115 °C xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx není xxxxxxx jinak, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx médií x XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 g
K2HPO4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xX xx xxxxxx na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 X xx přidají xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 g, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx X 0,01 x.

X xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, amphotericin X (Xxxxx) (1 xx/xx) v xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx média xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx skladování x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Difco)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7H2O	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí,upraví xx xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, nalidixic acid (Xxxxx) 0,008 g, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se rozpustí xxx xxxxxxxx zásobních xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx v 0,01 X NaOH, cykloheximid x 50% etanolu, xxxxxxxxx X xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx základního xxxxx je 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je trvanlivost 1 xxxxx při xxxxxxxxxx x chladu xx 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Validované xxxxxxxxx a xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní testování xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx nemělo xxxxxxxxx xxxxx falešné xxxxxxxxx výsledky se xxxxxxxx xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx.

1. Vícenásobný XXX xxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx xxx xxx xxx pa xx -3'

xxxxxx XXX-X 5'- xxx xxx xxx gtt xxx xxx xxx x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx xxx ata xxx xxx ctg xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- tcc xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx x DNA X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (sada XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XXX kontroly 18X xXXX 377 xx (sada XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx PCR

Činidlo	Množství xx reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725 μx
10x XXX xxxx (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs x-x TP (20 xX)	0,125 μx	0,1 mM
Primer XXX-1 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μM
Primer XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 U/μl) (1)	0,2 μl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x Gibco XXX.

(²) Koncentrace xxxxxxx XX-7-X a NS-8-R xxxx optimalizována pro xxxxxxxx xxxxxxx části xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx 6.1 xxxx. x) a 6.2). Xxx použiti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx jinými xxxxxxxx izolace XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx koncentraci xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx podmínky xxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 cyklus: x) 3 xxxxxx xxx teplotě 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

10 cyklů xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX matrice)

iii) 1 minuta při xxxxxxx 64 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx teplotě 72 °C (prodlužování xxxxx)

25 cyklů x) 30 sekund xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 sekund při xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx primerů)

vii) 1 xxxxxx xxx teplotě 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx prodlužování

ix) Xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °C

Poznámka:

Tento xxxxxxx xx optimalizován xxx xxxxxxx x tepelným xxxxxxxx XX Research XXX 200. Při xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx nutná xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx), xx), x), xx) a xxx).

1.4. Xxxxxxx ampliconu xxxxxxxxxxxxx enzymem

Produkty XXX xxxxxxxxxxxxx x DNA X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx XX po xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx rozměry 282 xx a 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µl

Destilovaná xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx na 1x.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla pro XXXX test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx Cms XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx ctc tgc xxx -3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'- xxx gcc xxx xxx agg xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX TOXICKÝ! XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx čisté xxxx (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °X x přidá xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxx proužkem xx xxxxxxxxxxx pH x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX S XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX MĚŘIČ xX!]

xxx) Roztok xx xxxxxxxxxxxx přes membránový xxxxx 0,22 µm x xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx teplotě 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Poznámka:

Alternativní xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Hybmix

NaCl 2,7 M

Tris-HCl 60 xX (xX 7,4)

EDTA (xxxxxxxxxxxxx xxxx filtr x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se až 1x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (SDS) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx podle xxxxxxx x xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Doporučená xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 sklíčka	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx čistá xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx objem (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x temnu xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx použití xx xxxxx xx ochraňovat xxxx přímým slunečním xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x sterilizuje xx autoklávováním při xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Semenáčky x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx přepichují do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx ve skleníku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx přirozená délka xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx odrůdy xxxxx vejcoplodého "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx krystalové xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x xxxxxxxxxx violeti x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 xx destilované xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx draselný 2 g

Destilovaná xxxx 300 ml

Pevné xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxx. Xxxxxxx se xx xxxx x xxxxxxx xx v xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx kontrastního xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 ml

Zamíchá xx a xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku.

Postup xxxxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxxx, xxxxxx xx xx vzduchu x xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx se xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx se xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxx roztokem x xxxxx xx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxx x vysuší xx xxxxx xxxxxxx.

6. Odbarvuje xx pomocí po xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx tak xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx barvivo, xxxx xxxxxxxxx za jemného xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Opláchne xx xxx tekoucí xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx pod xxxxxxx vodou a xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx fialově xxxxx, xxxxxxxxxxxxx bakterie xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx soupravy.

LITERATURA

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of xxx ring rot xxxxxxxxx Corynebacterium sepedonicum xx batches xx xxxxxx tubers. Commission xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Publ XXX 11 288 EN, 21 pp.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Rev. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, I. X., 1984. The xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Corynebacterium sepedonicum xxxx xxxxxxxx potato xxxxxx. EPPO Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx xxxxxxx for general xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, R. x Xxxxxxx, X., 1953. The xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx fermentative xxxxxx oxidative xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx by xxxxxxx gram-negative xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. D. x X. Van Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Jansing, X. x K. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx medium. Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxx and Protection, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Identification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Klement X.; Xxxxxxx, K x X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. A., X. Xxxxxxx x X. X. Hayward, 1966. A determinative xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx plant pathogenic xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. A. x X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Li, X. x S.H. xx Xxxx, 1995. Selection xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx primers from XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Russell, X., W. a X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx xx three xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. a X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx differentiation xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx polymerase xxxx xxxxxxxx-xxxxx techniques. X. Phytopathology 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx multiplex XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx host XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Pathology, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx relationship xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 pp.

19. Schaad, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. a Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx detection xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx guide xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Minnesota:, 373 xx.

21. Skerman, V. X. X., 1967. X xxxxx to xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx genera of xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Smith, X. X.; Hemiesy, X; Stead, DE., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx using xxx XXX-X1 Ralslonia xxxxxxxxxxxx primer xxx xxxxx identification xx xxxxx xxxxxxxx Clavibacler xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. xxx X. X. Xxxxxxx, 1974. X study xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx of Xxxxxxxxxxx working xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. X. a X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Ralslonia solanacearum, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx of xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx hybridization with 23x xXXX-xxxxxxxx probes. Xxxx. Environ. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové xxxxxxxx xxxxxxxx různé postupy, xxxxx jsou součástí:

i) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x hlízách bramboru x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx hostitelských xxxxxxx, x xx xxxxxxxx vody a xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum)

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, schválená xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx optimalizaci x xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku 1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx materiálů, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x odpovídajícím zařízením xx odstraňování xxxxxx x xx podmínek xxxxxxxxxxx příslušným povolením Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx vybraných xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx a všechna xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených na xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x níže xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx IF, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx potvrzen xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, existuje podezření xx infekci X. xxxxxxxxxxxx x musí xxx proveden druhý xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx považován xx xxxxxxxxxx X. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 vyžaduje xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx solanacearum) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx bramboru, rajčete x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí

Postup xxxxxxxxx xx určen xxx xxxxx x rostliny xxxxxxxx x podezřením x výskytu xxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx x infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx živné xxxx x v případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx usnadňují xxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxx. Negativní xxxxxxxx naznačuje vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu je xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xxxx popsány v xxxxxx 6.1.3.

6) Test XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx FISH xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx extraktech xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Test XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

10) Patogen je xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Kultivace xxxx xxxxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxxx typické, xxx xxxxxxxx xxxx xx negativní, xxxx xx izolace xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx živných xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx R. solanacearum xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných v xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, ale doporučuje xx pro každý xxxx xxxxxx.

14) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x bodu 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx screeningových testů (xxx xxxxxxxx v xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx xx X. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x jednoho screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, aby xxx vzorek považován xx podezřelý. Xxxxxxxxxxxx xxxxx a izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx x každé xxxxx xxxxx.

1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx postup xxx xxxxxx x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 hlíz xxxx k dispozici.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v oddíle 3.1.1.

3) Pokud xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx provedena xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx screeningový test. Xx-xx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx jeden nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Další xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Testy XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest xx popsán v xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Kultivace xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx testech xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx dodatečným odebráním xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx pupkového konce xxxx xxxxxxxx vzorku, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x dalšími xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Postupový diagram xxx detekci x xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo rostlin xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Je-li xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X případě, xx je xxxx xxxxxxxxx, vyžaduje xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů založených xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx xxxx xxxxx testy xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx za negativní. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

4) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx IF xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx PCR xxxx popsány v xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX xx popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.9.

10) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx je xxxxxxx x oddíle 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx kuItur, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx se jedná x R. xxxxxxxxxxxx, xx dosáhne pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx u xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotách xxxxx dne, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x zotavení. V xxxxxx fázích xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zelené, xxx později xxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx k xxxxxxx xxxxx xxxx. Vadnutí xxxxxxx výhonku xxxx xxxx rostliny xx xxxxxx xxxxx nevratným x xxxxx kolapsem x xxxxxxxx xxxxxxxx. X cévních svazků xxxxxx uříznutých xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx hnědý x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx je xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx x xxxxxxx xxxxxx táhnou xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Hlízy xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx u xxxxxxxxx konce x xxxxxxx přes xxxxxxx xxxxx. X rané xxxx xx xxxxxxx xxxxx podle xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, ze xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx bledý xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx stává výrazněji xxxxxx a xxxxxxxx xx může rozšířit xx xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx infekce xxxxxxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x x xxxx xxxx xxxxxxx bakteriální xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx půdy. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx červenohnědá, xxxxx propadlá místa xxxx xxxxxxxx vnitřního xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx bakteriálního a xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Příznaky x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxxx 25 °X, xxx nasycené xxxxxxx xxxxxxxx) xx během xxxxxxxx xxxx dní xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx dolů x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx jejím xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxx než 21 °X) rostlina xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx počet xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx pozorovat vodou xxxxxxx xxxxx xx xxxxx stonku, xxxxx xxxx dokladem xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx bílý xxxx nažloutlý bakteriální xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx hostitelů

Rostliny Xxxxxxx xxxxxxxxx a X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx zřídkakdy xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25 °C nebo xxxx extrémně xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. x xxxxxxxx S. xxxxxx rostoucí x xxxxxxx xxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx jako u xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx xx stonky x xxxxxx xx xxxx, mohou xxxxxxxxx xxxxxxx světle xxxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx stonku xxxx částí xxxxxx xxx vodou. X xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx mohou xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx svisle do xxxx, x xx x při absenci xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použije xx jeden nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx stonku

(Viz 6.1.1.)

2.2.2. Test xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x buňkách R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx tepelně fixovaných xxxxx bakteriálního slizu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X xxxx súdánskou xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx (Xxx oddíl 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx testy

Dalšími xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (xxx oddíl 6.1.5.), test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.) atesty XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Odebere xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pletiva z xxxxxxx prstence xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx v xxxxx xxxxxxxx sterilní destilované xxxx xxxx 50 xX fosfátového pufru (dodatek 4) x nechá xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx desetinásobných xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 xx xxxxxxxx x roztoku xx xxxxxxxxxxx živnou xxxx (XX, XXXX nebo XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx tetrazolové xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. SMSA, xxx dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum xxxxxx 2 x pozitivní xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°X.

- Na xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x fluidní xxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxxx spirálkami xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx xxxxx krémově xxxx.

- U Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx média a xxxxx SMSA xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx zcela temně xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx popsány x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x identifikace původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

3.1.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorku xxxx x zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx i xxx xxxxxx x méně xxx 200 hlízami, xxxxx je x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx všech xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x velikosti 200 xxxx.

- Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx použit xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °C xx xxxx xx 2 xxxxx xxxx testováním xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx desinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx má být xxxxxxxx XXX test, xxx xxxxxxxxxx patogenní XXX) a xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx příliš xxxxxx xxxx jestliže má xxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx xx xxxxxxxx xx odstraní xxxxxx na pupkovém xxxxx xxxxx hlízy, xxx xxx bylo xxxxxxxxx vodivé pletivo. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx cévní xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (hnijící) xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx stranou x xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx pří xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx, provede xx xxxxxxxx vyšetření takové xxxxx xx xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx dojít ke xxxxxxxxxxxx (suberizaci) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x chladu (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek. Všechny xxxxx včetně xxxx x xxxxxxxxxxx příznaky xx měly být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx anebo xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxxxx jsou znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx vyčištěny x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx chlóru). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, uchovávají xx x xxxxxx xxx xxxxxxx pufru; v xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 hodin.

Výkrojky z xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x třepou xx x xxxxxxx třepačce (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx při xxxxxxx xxxxx než 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) homogenizují xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx v xxxxxx (xxxx. Xxxxxx nebo Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku na xxxxx použití (xxxx. xxxxx polyethylenový xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx zářením) pomocí xxxxxxxx tloučku nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při homogenizaci xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během extrakčního xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) a xxxxxx. Xxx testu PCR xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx nebo v xxxxxx xxxxxxxxx. U xxxxx PCR xx xxxxxxxxxx použít drcení x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Supernatant xx dekantuje. Je-li xxxxxx zakalený, xxxxxxxx xx xxx pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10 °X) xxxx vakuovou filtrací (40-100 µm), filtr xx xxxxx xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx frakce xx xxxxxxx odstřeďováním, 7&xxxx;000 g xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10 000 g xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Xxxxxx xx resuspenduje v 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 4). Použije xx 500 µx xxx R. xxxxxxxxxxxx, 500 µx pro Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx vířením a xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (týdny) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx testování xxx xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx nedoporučuje.

Je-li xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx přeprava v xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx nezbytně nutné, xxx všechny pozitivní xxxxxxxx x vzorky X. xxxxxxxxxxxx byly xxxxxxxx a zpracovány xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX a xxxxxxx testy.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxx a optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (viz oddíl 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx účely xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx xx smíšené xxxxxx x xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, měl xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx sterilní xxxxxx xx xxxxx 1-2 xx dlouhé xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx kousek xxxxxx 1 xx x paty xxxxxxx xxxxxx hned nad xxxxxx země.

Rostliny x xxxx xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x hlavním xxxxxxx. Xxxxxxx xx nejspodnější, 1 cm xxxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami xx odebere 1 xx xxxxxx díl x xxxx xxxxxxx xxxxxx hned nad xxxxxx xxxx. U xxxxx xxxxxxxxxx (S. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 cm xxxx ze stonku xxx xxxxx nebo xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 rostlin xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx infekci xx xxxxx zjistit xx xxxx xxx x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx rostoucí xx xxxxxxx tocích. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx dulcamara, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x další xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx druhy, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Race 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx specifických xxxxxxxx, zahrnují Atriplex xxxxxxx, Bidens xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx cannabinum, Galinsoga xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx scleratus, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx alba. X. nutans., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X této fázi xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx cév xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxxx díl xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxx atestuje xx xxxxxxxx (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x ihned xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) xxxxxx xx xxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxxx xx xxxxxxx třepačce (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx teplotě xx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) se ihned xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxx). Není-li xx xxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx nejdéle xx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Po xxxxxxx, které xx xxxxx 15 minut, xx dekantuje xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, ale lze xx provést xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x oddíle 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx dva stejné xxxx. Jeden díl xx testuje xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx díl xx xxxxxxxx x 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx při teplotě -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (měsíce) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx protokolů xxxx x xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

Xxxx IF (xxx xxxxx 6.1.5.)

Testy PCR (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.)

Biotest (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Detekce x identifikace původce xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx vodě

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx uvedeny doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx xxx patogenu, xxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx jen xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx izolační xxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.9.

(5) Xxxxxx obohacovacího xxxxx XXX jsou popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 2.3.d.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx testy po xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxx.

(9) Spolehlivá identifikace xxxxxxxxxxx čistých kultur X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

(10) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Metody xxxxxxx x identifikace X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx popsané x xxxxx oddíle je xxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx a xxxxxx xxxx být xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx však xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Citlivost testu xxxxxxxxxx izolace xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, kterých xx obecně xxxxxx xxxx v xxxxxxx xxxx ze zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxx x xxxxxxxxx vodě. Zatímco xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ buněk/litr povrchové xxxx, xxxxxxxxx detekce x xxxxxxx vodě xx zpracování xxxxxxx x odpadní xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X tohoto xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx filtrace), xxx xxxxx dojde xx snížení saprofytických xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx mělo xxx xxxxx x úvahu xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx x případě xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx toto schéma xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx patogenu x xxxxxxxxx vodě, xx xxxxx si uvědomit xxxx xxxxxxx při xxxxxxx x podobnému xxxxxxxx x odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx a v xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, léta x xxxxxxx, xxx teplota xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Opakované xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx určených xxxxxxxxxxxx místech zvýší xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx snížením xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Vlivem xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxx x xxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx vybraných xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30 cm xxx xxxxxxxx x 2 x xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx odpadní xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx upřednostňována xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx nejméně 3xxxx pro xxxxx xxxxxxxxxx místo, z xxxxx každý xxxx xxxxxxxxx 2 opakované xxxxx vzorky x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vyberou xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx každé 3 km vodního xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx se xxxxxxxxxx x chladu a xxxxx (4-10 °C) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx potřeba, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakteriální frakce xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx se 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000 x xx xxxx. 10 xxxxx (nebo 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X, slije xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx přes xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µm) s xxxxxxxxx promytím xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx je vhodná xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx obvykle nedoporučuje x vzorků vody xx zpracování xxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx populace konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx postupový xxxxxxx x popis xxxxx x příslušných xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx v půdě

(1) Viz xxxxx 5.2.1., kde xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Selektivní xxxxxxxx test xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(3) Obohacovací XXX xxxxx jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx popsáni x xxxxxx 6.1.9.

(5) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx v oddíle 2.3.x.

(6) Kultivace xxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx populace xx xxxxxxxxxxxx izolace, xxxxxxx xx testy selektivní xxxxxxx xx dalším xxxxxxx vzorku.

(7) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx v půdě

Principy

Platné xxxxxxxx schéma xxxxxxx x xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx půdy, xxx xxxx xxx rovněž xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxx xxxx. Je xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx metody xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx populací Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx infikovaných xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxx je xxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x polní xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hostitelské rostliny x xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx infikována, xxx x xxx xxxxxxx této metody xxxxxx nízký xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Příprava xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování polní xxxx xx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx používanými xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 až 1 xx xxxx xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 xx z xxxxxxx 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx sběrných xxxx xx 120 x xxxxxx 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 12-15 °X. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx navzorkuje xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 kg x míst reprezentujících xxxxxxx objem testovaného xxxx. Před xxxxxxxxxx xx každý xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Dílčí xxxxxx 10-25 x xxxx nebo xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 a 10-20 x sterilních kamínků xxxx napomoci xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx jsou x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Optimalizované xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Xxxx na xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx hostitelských rostlin xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: uřízne se xxxxxx xxxxx nad xxxxxx xxxx. Řez xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx s xxxxxx vodou. Xxxxxxx xx, xxx se xx několika xxxxxxxx xxxxxx charakteristická samovolně xxxxxxxx vlákna xxxxxxxxxxxxx xxxxx x přeříznutých xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Test xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Připraví xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x infikovaného xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx půdě YPGA xxxx SPA (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx sklíčko.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x známém XXX xxxxxxxxxx sp.

3. Roztěry xx xxxxxxx uschnout x spodní xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx protáhne xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Preparáty xx xxxxxx xxx xxxxxxx modří xxxx xxxxxxxxx černí x xxxxxxx xx mikroskopické xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx nilskou xxxxx:

x) Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % vodným xxxxxxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxxx se inkubovat 10 xxxxx při xxxxxxx 55 °C.

b) Xxxxxxxx xx barvící xxxxxx. Krátce xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z kohoutku. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx octové a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxxx teplotě.

d) Xxxxxx xx opláchne jemně xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx vody x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem při 450 nm xxx xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x xx 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx se xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx jasně oranžová xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx granule xxxxxxxxxxxxxx x zda xx xxxxxxxxxx xxxxx typická xxx X. solanacearum.

Test xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx všechna sklíčka 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X x 70% xxxxxxx a xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Odstraní se xxxxxxx roztok a xxxxxx se opláchne xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx savým papírem.

c) Xxxxxxx se ponoří xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx x digestoři.

d) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x nechají 10 vteřin xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx: safranin xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx xx přebytečná voda xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx v xxxxxxx X. solanacearum x xxxxxx zbarvenými xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx v bakteriálním xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx x pletiv x příznaky xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) označených xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx značkovači, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx postup xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c) Xxxxxxxx xx, zda xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx dobu 15 xxxxxx objeví xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx izolace

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx živnou půdu

Poznámka:

Než xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx x zajištění reprodukovatelné xxxxxxx 10³ až 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx řádně validovaná xxxxxxxxxx živná xxxx, xxxx. XXXX (ve xxxxx Elphinstone xx xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx živné xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. solanacearum xxxxx xxx atypickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx jsou rovněž xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx podezření na xxxxxxxxxx nebo inhibici, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx znovu xxxxxx xxxxxx testu.

Pří xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx touto xxxxxxx bude xxxxx xxxxxx. Metoda xx xxxx xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx při teplotě xx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx kontroly xx připraví xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857). X vyloučení xxxxx xxxxxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx materiál xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx xx ředění x xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Nanese se 50-100 µl extraktu xxxxxx xx 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Misky xx xxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 28 °C. Xx 48 hodinách xx zkontroluje xxxxxx xxxx x pak xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Typické kolonie X. solanacearum xx xxxxx xxxx XXXX xxxx mléčně xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx a xx 3 xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx krvavě červené xxxxxxxx ve středu x xxxxxxxxx pruhy xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx se xx xxxxx médiu xxxxx atypické kolonie X. solanacearum. Mohou xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxxxxx rozeznatelné xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx rozetřou nebo xxxxxx metodou xxxxxxxxx xx universální xxxxxx xxxx., aby xx xxxxxxx izolované xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx krátkodobě xx sterilní xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) při xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxx dlouhodobě xx xxxxxxx xxxxxxxxx médiu xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) x test xxxxxxxxxx (viz xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx na selektivní xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx po 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxx nejsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kolonie xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, xx nedošlo x inhibici xxxxxx xxxxxxxxxx a v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx pozitivní, jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx testy

Použije xx xxxxxxxxxx médium pro xxxxxxxxx, např. modifikovaný xxxxx Wilbrink (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx lze xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xx vzorků a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx (1:100). Obohacení X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxx neúspěšné x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx současně xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x obohacené kultury xxxxxxx. Kromě toho, xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxx populací xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx polyklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx testu XXX xx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx použit xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (např. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

2. Inkubuje se 72 hodin xxx xxxxxxx 27 až 30 °X x xxxxxxx nebo statické xxxxxxx x uvolněnými xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Před xxxxxxxxx xxxxx XXXXX nebo XXX xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. S xxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xx xxxxxx xx výše uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx jinými xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX jako hlavní x xxxxxxxx XX xxxxx xx pozitivní, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx test xxxxxxx, XXX nebo XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx provést xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx analýza úplná.

Poznámka:

Použije xx validovaný zdroj xxxxxxxxxx R. solanacearum. Xxxxxxxxxx se určit xxxx xxx xxxxxx xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx nejvyšší ředění, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx/xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního isothiokyanatanu (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Během xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx protilátky v xxxxxxxxxx xxxxxxxx blízkých xxxx stejných jako xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 až - 86 °C x glycerolu. Xxxxxxxx xxxx xxx ze xxxxxx odstraněn xxxxxxxx 1 ml xxxxx (dodatek 4), 15minutovým odstřeďováním xxx 7000 x x xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx peletového xxxxx. Často xx xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxx pozitivní kontrolní xxxxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx suspendovaným x xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 B, x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx teplotě - 16 xx 24 °C) xx xx mělo xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx alikvotní díly xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx xxx tento xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx sklíčka x testování xxxxxx x následujících postupů:

i) Xxx pelety x xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx pro průměr xxxxxx 6 xx - u xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované bramborové xxxxxx x ředění 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx množství nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének v xxxx. Druhá řada xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxx xx odměřené standardní xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx okénka 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx je xxxxxxxx větší v xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx pro každé xxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx obr. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60 °X), plamenem, 95 % xxxxxxxx xxxx podle konkrétních xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx sklíčka je xxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx krátkou xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx sada xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), ostatní 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Podle xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (XX) protilátek x xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.i) x 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx xxxx. 6.1.5.1.ii) x 6.1.5.3.xx)

1. Podložní sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

2. Podložní xxxxxxx se inkubují xx vlhkém xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx IF. Je xxxxx zabránit xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by xxxxx způsobit vzájemnou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Sklíčka xx xxxxxx na xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 minut xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °C).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx předtím (3.).

Xxxxxxx se odstraní xxxxxxxxxx vlhkost.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x glycerolem (dodatek 4) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x přiloží xx krycí xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX testu

1. Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x až 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X vzorků s xxxxxxx xxxx malým xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx fluoreskující x zcela obarvené x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí být xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx fluorescencí xxxxx xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx může stát, xxxx všechna sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x úvahu pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x titru xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx podle oddílu 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx jasně fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx se odhadne xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx IF xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5 x 10³. Xxxxxx xx považován za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx) Výsledek XX xxxxx je xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

6.1.6. Testy PCR

Principy

Použije-li xx test PCR xxxx hlavní screeningový xxxx x výsledek xx pozitivní, xxxx xxx povinně proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x sice xxxxxxx xxxx IF. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x xxxxx rozsahu xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, je-li xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx xx vzorků xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijí xx xxxxxxxxx činidla x xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx třeba xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x zabránění xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. Xxxx PCR by xxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) by xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli xxxxx k xxxxxxx XXX.

XXX xxxx by xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím testován xx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx používaného xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x DNA ze xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx by xxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, do xxxxxxx byla přidána X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x virulentního xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx XXX xxxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x prostředí xxxxxxxxx xx vzorků, které xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx by měly xxx pokud xxxxx xxx zeminy. V xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx extrakty z xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx pro xxxxx test, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx purifikace XXX

Xxxxxxxxx xx výše xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Test kontrolního xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx vzorku. Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx schválenými metodami XXX uvedenými x dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Tris-HCI (pH 8,0), 1 mM XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do termobloku xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx se 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 mM XxxxXXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Easy XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchá xxxxxxxx x inkubuje xx xxx teplotě 65 °X xx xxxx 30 minut.

6. Přidá xx 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Invitrogen), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx a xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x vytvoření xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15 000 x xx xxxx 20 xxx. xxx teplotě 4 °C.

9. Horní xxxx xx xxxxxxx xx nové Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx se 1 xx 100 % etanolu (- 20 °C), krátce xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx po xxxx 10 min.

11. Xxxxxxxxxx xx při 15 000 x xx dobu 20 xxxxx při xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx se při 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx teplotě 4 °X, xxxxxxx se xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx.

14. Peleta xx xxxxx uschnout xx xxxxxxx xxxx v XXX xxxxxxx.

15. Xxxxxx xx resuspenduje v 100 µx xxxxxxxx XX a xxxxx xx stát xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Skladuje xx xxx teplotě - 20 °C xx do xxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx sraženina xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xx xxxxxxx xxx xxxx XXX.

x) Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Plant Xxx, by xx xxxxx použít, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx při xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxx xxxxxxxx DNA (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

2. Připraví se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xx kterém xxxxxxx kontaminace podle xxxxxxxxxxxx protokolů (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR, který xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx extraktu XXX xx 25 µx XXX reakce podle xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx se xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx se xxx xxxxx XX jako xxx xxx, který xxx použit xx xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxx termocykleru, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx testování, x xxxxxx xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx program XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

1. Amplikony xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx směsi amplifikované XXX x xxxxxxx xxxxxx s 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx se xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX obarvením v xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 mg/l) xx dobu 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních opatření xxx zacházení x xxxxx xxxxxxxxx.

3. V xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx délky xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx gelu se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx a výsledek xx zdokumentuje.

4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx zkontroluje pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x čase shodným xxxxxxxxxxx enzymem x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx UV světlem xx obarvení ethidiumbromidem x porovnává se x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikon PCR xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx zjištěn x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx kontrolními primery xxxxxxxxxxxx pro rostlinu: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorkem).

Test XXX xx pozitivní, xxxxxxxx xx xxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (případně) xxxxx, xx předpokladu, xx není xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxx také získat xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Poznámka:

Lze xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly R. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx protokolech XXX x interními kontrolami XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx není xxxxxx xxxxx ze xxxx amplikonů.

V xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx získán x xxxxxxx nebo xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX test a xx xxxxxxxxx, musí xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používají xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx R xxxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx možno xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx připraví suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857, viz dodatek 3) x 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx kultury. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx nebo jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, suspendovaného x xxxxxxxxxxx extraktu, jak xx uvedeno v dodatku 3 X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx x tomto xxxxx, xx uveden x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx u xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Xxxxxxxxx et xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx fixační xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xx xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx xx 200 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 xxxxxx x xxxxxxxxx zařízení.

4. Xxxxxxxxxx se 7 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a resuspenduje xx xxxxxx v 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx suspenze na xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx sklíčko, x xx neředěný x xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 M XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49 µx) xxxx být uložen xxx xxxxxxx - 20 °C xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX metodu xxxxxxxx, xxxxxxxx xx etanol xxxxxxxxxxx a xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxx xx protřepáním).

Obrázek 7.1 Xxxxxxxxxx xx sklíčku XXXX

6. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx plamenem.

V xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx další xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx skladována chráněna xxxx xxxxxxx x x suchu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Hybridizace

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsí (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx x hybridizační xxxx xxx teplotě 45 °X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx se 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx obr. 7.1) xx xxxxxx sklíčku, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx (24 x 24 mm) xx xxxxx x xxxxxxxx 4 okénka, x xx xxx, xxx pod xx xxxxxxx xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx dobu 5 hodin x xxxxxx xxx teplotě 45 °C v xxxxx.

5. Připraví se 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 x vody x molekulární xxxxxxxx (Xxxxx Q), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx kvalitou) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 ml 3x xxxxxx a 958 ml vody x molekulární xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx vodní lázni x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx držáku xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Držák xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 minut.

9. Sklíčka xx xxxxxx ponoří xx XXX (xxxx. Xxxxx X xxxxx) x položí xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím povrchu xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx každého xxxxxx x xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Sklíčka xx xxxxx xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx olejovou xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) ve xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Použitím filtru xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Porovnává xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků. Buňky xxxx být jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx. 6.1.7) musí xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx zbarvení odchylné. Xxxxxxxxxx xx okénka xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x kolem xxxxxx. X vzorků, xxx xxxxxx pozorovány žádné xxxx málo xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx testovacích xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx než x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Při xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x xxxxxxx, xxx všechna xxxxxxx xx xxxxx ukazují xxxxxxxxx buňky x xxxxxx kontaminace pufru xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx sklíčka) xx xxxxx sklíčka.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x sebou xxxx xxxxxxx problémů. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na pozadí x atypickou xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxx xx saprofytickými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, i xxxx xxxxxx méně xxxxxxx xxx x xxxxx XX.

5. V xxxxx xx berou xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.

6. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx a při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx červeně fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x nejsou xxxxxxxxxx x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx jasně fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadne xx xxxxxxxx počet typických xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Testy XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx kromě xxxxx XX, XXX xxxx XXXX pro xxxx relativně nízkou xxxxxxxxx. Při použití XXX XXXXX xx xxxxxxxxx a použití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx před xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx citlivost xxxxx, ale xxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx určení xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx definován xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx X. solanacearum x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx protilátek xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxxxx xx xxxx xxx použity xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxx vzájemného xxxxxxxx x solném roztoku xxxxxxxxxxx pufru (XXX) xx xxxxxxx jako xxxxxx negativní xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx použijí alikvótní xxxxxx xxxxxxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (např. xxxx XXXXX 4I56 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 2 X x X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x XXX R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx pro xxxxx xxxx, jsou uvedeny x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx kontrolního materiálu xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx jsou xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx xx al., 1995)

1) Použije se 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Zahřátí xx 100 °X xx 4 xxxxxx xx xxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxxxx případech xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Přidá se xxxxxx xxxxxxxx dvojnásobně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx mikrotitrační destičky (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxx 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °X.

4) Extrakty xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx se xxxxxxx vymyji xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx vymývací xxxxxx xx xxxxx v xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Připraví se xxxxxx ředění protilátek xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx je titr).

6) Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx se vymyjí xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Připraví xx xxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy v xxxxxxxxx pufru. Xxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 1 hodinu xxx teplotě 37 °X.

9) Xxxxxxxx se xxxxxx x jamek x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx absorbance xxx 405 nm x xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Připraví xx xxxxxx ředění polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx v uhličitanovém xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C 4 xx 5 xxxxx nebo 4 ° C xx xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx nejméně dvou xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 hodin xxx xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Připraví xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum v XXX (dodatek 4) s xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xxxxx xx 190 µx do xxxxx xxxxx x xxxxx stát 2 xxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

5) Xxxxx xx třikrát dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx protimyšího imunoglobulinu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fosfatázou x XXX. Xxxxx xx 190 µx xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx se xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 mg x-XXX/xx xxxxxxxxx fosfatázy v xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx do xxxxx xxxxx x inkubuje xx x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx při 405 xx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (OH) z xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH x negativního xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků jsou xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x negativních xxxxxxxxxx extraktů.

Test XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx OH x jamek xx xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx než xxxxxxxxxxx XX v xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx xxxxxx v pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx test nebyl xxxxxxxx správně xxxx xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx hodnoty ELISA x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx protilátek.

6.1.9. Biotest

Poznámka.:

Předběžné xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz x dodatku 3).

Nejvyšší xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx očekávat xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx a x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx lze však xxxx xxxxxxx použít xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx x teplotě - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx citlivé xxxxxx xxxxxxx (např. kultivaru Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx třech xxxxxxx listů x xxxxxxx vzorku. Podrobnosti xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx se xxxxxxx xxxxx (např. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. listů xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx použít xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

1. Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx děložními xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx jehlou (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Inokulace xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx prsty x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx skalpelem se xxxxx příčný řez xxx 1 xx xxxxxx x hluboký xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx xxxxxxxx vazelínou z xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 sazenic xxxxx xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx rostlin, xxx xx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Testovací xxxxxxxx xx nechají xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 týdny při xxxxxxx 25 - 30 °X x xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x přiměřeným xxxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Aby xx zabránilo xxxxxxxxxxx, xxxx xxx drženy xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx rostliny z xxxxxxx vzorků xx xxxx inkubace xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx zástěnami. Xxx xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx činnostech xx xxxxxx xxxxxxxx pozornost xxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx kontaminaci. Xxxxx xx udržovat xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx přenést xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx vadnutí, xxxxxxxxx, xxxxxxx anebo xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. Z infikovaných xxxxxxx xx provede xxxxxxx (odst. 2.3) x identifikují se xxxxxxxxx čisté xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx stonků dlouhých 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Identifikují se xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx výsledků biotestu

Platné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxxxxxx typické xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx být x xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxxxxxxx žádné příznaky.

Biotest xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických principech.

Zahrnou xx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx kmeny xxx xxxxx xxxxxxxxx test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, které xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx al. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Očekávaný xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx test xxxxx Kovacse +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx x 1% NaCl +

Xxxx x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx aktivita -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx eskulinu -

Produkce xxxxxx -

Média a xxxxxx viz Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx IF

6.2.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x xxxxx IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Použije xx IF xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx XX kultury xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx sérologický xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx na 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Provede xx test ELISA xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx k R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Test XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxx jeho xxxxxxxx xxxxxxx x této xxxxxxx je nejméně xxxxxxxxx x porovnání x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxx vody (XXX = ultra xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zkumavkách v xxxxxxxxx bloku nebo xxxxxx vodní xxxxx xxx 100 °X 4 minuty. Xxxxxx xxxxx xxx uchovány xxx xxxxxxx - 16 až - 24 °C do xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x amplifikaci xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx et xx. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx al. (2002); Xxxxxxxx xx al. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx velikost x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentů xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Test XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Použije xx xxxxxx XXXX (6.1.7) x nejméně 2 oligosondami xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx pozitivní, jestliže xx u xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx mastných xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx při teplotě 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.2.6.3. Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx stejný jako xxxxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxxx charakteristických xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx použitím xxxxx x xxxxxxxxxxxxx metod.

U xxxxxxx provedeného testu xx xxxxxxx případně xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx využití x/xxxx xxxxxxx xxx disacharidů x xxx hexosových xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Hayward et xx., 1990). Živná xxxx pro xxxx xxxxxxx je xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx provést xxxxxxxxx xx živné xxxx s xxxxxx xxxxxxxx R. solanacearum x xxxxxxxx při xxxxxxx 28 °C. Xx-xx živná xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µl xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 hodin xx olivově xxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx dílčích xxxxxxxx biovaru 2

(¹) Xxx Lelliott x Stead (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxx:

1. Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx RFLP (Xxxx xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x využitím xxxxxxx XXX, XXX a XXXX (Louws xx xx., 1995; Smith xx al., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx AFLP (Xxx xxx Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx dodatek 6) xxx xxxxxx x diferenciaci kmenů xxxxxxxxx do xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2T) X. xxxxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxx definováno xxxxxxxx XXXX (Cook xx xx., 1989) a xxxxxxxxxxxx 16S rDNA (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Konfirmační test (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x k xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x hustotě xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Inokuluje se 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx 3 pravých xxxxx (xxx odst. 6.1.9).

3) Sazenice xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 xxxxx xxx xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. X xxxxxxx kultur by xxxxxxx vadnutí mělo xxxxxx xxxxx 14 xxx. Neobjeví-li xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx považována xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stonku xxx 2 xx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Izolace xx suspense xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx možno xx xxxxxxxxxx živné půdě (dodatek 2). Xx inkubaci 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °C xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx xxxx xxx izolaci x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Difco) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 5,0 g

D(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx agar (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 g

Bacto-Peptone (Difco) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7H₂O 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Difco) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °C x xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztok 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 mg xx litr.

b) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živné půdy

Živná xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx et al., 1996)

Xxxxxxxx živná půda

Casamino xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (viz xxxx. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx violeť (Xxxxx) 5 mg/l

Polymixin-B-suIfát (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 mg)/l

Chloramfenikol (Xxxxx X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx může xxxxxxxx růst X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Xxxxx Agar #1. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx xxxxxx x 1-2 xxx xxxx x červené xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx x rozptýlenější xxx při xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Zvýšení koncentrace xxxxxxxxxxx na 2&xxxx;500 X/x xxxx omezit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx ovlivnění xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx antibiotik xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X v temnu x musí xx xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx xx měly xxx před použitím xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx měla xxx podrobena kontrole xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx referenční xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx médium (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 až 5 dnech při xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Elphinstone xx xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, xxx xxxxxxx xx Bacto-Agar x 2,3,5- trifenyltetrazolium xxxxxxx.

Xxxxxxxx živná xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx et xx., 2002)

Sacharóza 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx se xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx x xxxxxxx se xx 50 °X. Přidá xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx materiál

a) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál bud' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) nebo xxxxx optimalizace testů, xxx se zabránilo xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx komerčně dostupné x xxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Národní xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx vědecká xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx rostlin (XX), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3. Francouzská xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (CFBP), ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Referenční xxxxx izolovaných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx výše uvedených xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, že xxxxxxxxx x původních sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buňky je xxxxxxxxx lyofilizací, nejsou xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx formaldehydu xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx sérologických xxxxx.

X. Xxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxx pletiv PCR/IF x FISH

Kultivuje se 48xxxxxxxx kultura xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. kmen XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) xx SMSA xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxx buněčná xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx suspenzí xxxxxxxxx xx xxxxxxx hustotě 0,15 při 600 xx.

Xxxxxxx se dřeň x xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx xx, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx postupem x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx pelety. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx první xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek se xxxxxxx xxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx označeny.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 N1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx do doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx vzorcích by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx extrakce DNA x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x FISH testy xx xxxxxxx test xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx IF, XXXX x PCR xxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x nejméně x 10⁶ a 10⁴ buněk/ml pozitivních xxxxxxx a xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry lze xxxxxxxxx po xxxx xx jednoho xxxx.

1. Xxxxx pro extrakci

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Peletový pufr (10 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx extraktů z xxxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C po xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx pro XX (10 mM fosfátový xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx k ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx sklíček.

Přidá xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Tento pufr xx xxxxxxx xxxx xxxxx roztok na xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Na₂CO₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx aromatických xxxxxxx, xx možné xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx sodný (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxx sodného xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12H₂O 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx být čerstvě xxxxxxxxx).

10 x PBS 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 g

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx pro substrát xxxxxxxxx fosfatázy, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x koncentrovanou XXx se xxxxxx xX na 9,8.

Doplní xx do 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx xxx 5 mg tabletky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Pufry xxx xxxxx xxxxx DASI XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, pH 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 g

NaH CO₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 ml

Rozpustí xx xxxxxx x zkontroluje xX 9,6.

4.2. 10 x fosfátosolný xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 ml

Destilovaná xxxx 900 xx

Xxxxxx xx a nastaví xx xxxxxxx pH 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Vypočítá xx xxxxxxxx počet typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx pozorovacím poli (x).

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxx x

x - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx typu okuláru),

K = tubusový xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

G = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x atd.).

3. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =X x 1 000/y x X,

xxx y = xxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx protokoly x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx vzorkového extraktu. Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxx vykazovat xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bakterií (xxx dodatek 3).

1. Xxxxxxxx PCR Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý primer XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Y-2: 5'-XXX XXX GCT GCC XXX XXX AGG XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Reakční xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx při 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 20 sekund při 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru Xxxxxx Xxxxx 9600. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx při teplotě 37 °C.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-ggg xxx xxx xxx xxx gtc xxx xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. solanacearum XXX = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	16,025 μl
10x xxxx XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μl
Celkové xxxxxxxx	25,0 μl
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) a Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler XX Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x xxxx mohou xxx xxxxxx použity xx xxxxxxxx koncentracích.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx i) 5 xxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx při 68 °X (hybridizace primerů x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °C (syntéza xxxxx)

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (syntéza xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx x 96 bp.

3. Xxxxxxxx xxx multiplexní PCR x xxxxxxx kontrolou (Xxxxxxx et xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX AAC GAA XXX XXX XXX XXX TA-3'

Reverzní primer XX-1-X: 5'-CCC XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxx primer XX-5-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 bp (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx PCR

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx templátové DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) nechá xx při teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru MJ Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx amplifikací x XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx 1 xxxx Isoschizomere (xxxx. Mva 1269 X) po inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Pastrik xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Rs-1-F: 5'-ACT XXX XXX XXX XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX GAC X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX ACG XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX R. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx PCR

a) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxx specifické xxx xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx při 72 °X (konečná syntéza)

vi) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Použití jiných xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), iii) x iv).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů s xxxxxxx Xxx X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx inkubační době 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx z XXX X. xxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx roztok)

Bromfenolová modř 5 x

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 ml

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (např. xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx činidla xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-ggc xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx gcc tcc xxx agg xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX RUKAVICE A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx čisté xxxx (xxxx. Ultra xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx se 0,4 g parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxxx se rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1N XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (PB; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx xx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx NaOH. [XXXXXXXXXX: V XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx před xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 mM (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx a autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx xx xx x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx dodecyl xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Sonda EUB 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 xxxx XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx se xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx výpočtů v xxxxxxx 1. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µl hybridizačního xxxxxxx. UPOZORNĚNÍ: FORMAMID XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXX POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx hybridizační xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se uchovávají x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) nebo xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx pasterizovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 až 14 xxx) se xxxxxxx xx pasterizovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku x xxxxxxx xx xx měly xxxxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne: 14 xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx xxx D.A. Xxxxx. 1990. Fluorescent-oligonucleotide xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx enviromnental xxxxxxx xx microbiology. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 July 1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Le Xxxx, X. Josi, P. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Design xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxx application xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx isolates. Xxxxxxxx Journal of Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, P., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X and Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Inununosorbent Assay Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Potato Xxxxxx. Applied and Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, D., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx restriction xxxxxxxx xxxxxx polymorphisms xxxx XXX xxxxxx tkat xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Plant-Microbe Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Elphinstone, X.X., Xxxxxxxx, J., Xxxxxx, X.X. and Stead, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx detection of Xxxxxxxxx solanacearum iru xxxxxx xxxxx extracts. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx of x semi-selective xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tn: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx for xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, U. and Xx Lindo, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, X. Xxxxxx-xxxxx, S. Xxxxxxxxx xxx F. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx cells xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx a xxxx-xxxxxxxxx medium xxx x XXX technique. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx potato xxxxxx xxx xxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Janse, X.X. 1991. Xxxxx- xxx intra-specific classification xxXxxxxxxxxxxx solanacaerum xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx analysis. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx colony xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Phytopathology 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Sands, 1990. Xxxxxxx in Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 pp.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Methods xxx the xxxxxxxxx xx bacterial xxxxxxxx xx plants. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 pp.

16. Xxxxx, M.M., Gorris, X.X., Llop, P., Xxxxxx, X., Vicedo, X., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx molecular xxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. In: X.X. Xxxxx et xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Publishers. xx. 117-121.

17. Xxxxx, F.J., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx genomic xxxxxxxxxxxx xx phytopathogenic Xanthomonas xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx repetitive xxxxxxxxx xxx PCR. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx rep-PCR fingerprinting xx rapidly xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, N., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Xx, X. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, V. Xxxxxxxxxxxxx, W.F. Hong, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx species xxx strain-specific XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Mol. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, E. 2000. Xxxxxxxxx xx X. solanacearum xx xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxxx cham xxxxxxxx. X. Phytopathology 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G. and Xxxxxx, R. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX amplification xx 16X-23X xxxxxxxxx intergenic xxxxxx xxxxxx with xxxxxxxx positive control. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx to Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx wilt. Xxxx xxx Agricultural Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 pp.

24. Seal, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx of Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx by xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx for sensitive xxxxxxxxx xx polymerase xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Kenya. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 61; 4262-4268.

26. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. using xxxxxxxx fatty-acid profiles. xxxxxxxxxxxxx Journal of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, A.C., Sly, XX, Xxxxx, M. 1996. Analysiss xx xxx xxxxxxxxxxxx relationships xx strains xx Xxxxxxxxxxxx solanacearum, Pseudomonas xxxxxxx, and the xxxxx disease bacterium xx xxxxxx xxxxx xx 16X rRNA xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Wolf, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Feuillade, X. 1998. Genetic xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 in Xxxxxxx Xxxxxx as xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, P., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx wilt disease: Xxxxxxxxx and Ecological Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Berlin) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. and Xxxxxxx, X. 1999. Detection xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xx xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Wullings, X.X., A.R. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Janse xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Detection xx X. xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx brown rot xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Microbiol. 64: 4546-4554.