Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 odst. 2 xxxxxx x. 326/2004 Xx., o xxxxxxxxxxxxxxxx péči x x změně některých xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "zákon") k xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx úpravy

Tato xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušné xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx na xxxxx Xxxxx republiky xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann et Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru, x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx, aby xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx eradikace.

§2

Xxxxx

Xxx xxxxx této xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) s xxxxxxxx semen xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx lilkovitých (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x přirozených podmínkách,

2. xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) s xxxxxxxx semen xxxxxxxx, xxxxx xxxxx (Solanum xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx xxxxx x plodů, xxxxx potměchuť (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx lilkovitých (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx možnost infekce xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx podmínkách,

d) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx x určité partii,

e) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x určení xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x určení xxxxxxx šíření xxxxxxx x x xxxxxx xxxxxx území, xx xxxxx se vztahují xxxxxxxxx rostlinolékařská opatření xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, zásilce, xxxxxx, xxxxxxxx, stroji, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx části x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, podle §11 xxxx. 1 zákona,

g) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

i) karanténním xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, na xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 xxxx. 1 zákona z xxxxxx potvrzení výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx které xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx,

x) xxxxxxx příbuznou partií - partie hostitelské xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx množením z xxxxx původní xxxxxx; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx klonově xxxxxxxx partie, xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx množením x xxxxxx rodičovské xxxxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxxxx osiva,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxxxxxx klonově xxxxxxxxx partiím, xxxxx x ní xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Průzkum xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Ústav xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx hnědé xxxxxxx x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 až 7.

(2) Xxxxxxxxxx průzkumu xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bramboru²⁾ xxxxxxx x České xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 odst. 2,

b) xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce hnědé xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx vymezeném podle §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxx rostlinolékařské xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx a xxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) všechny xxxxxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx vybrané partie xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx výskyt xxxxxxx hnědé hniloby xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx pěstování,

b) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x závlaze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxx doprovodných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxxxxxxxx podniků, které xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx hlízy xxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxx odpady x xxxxxx podniků.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v případě xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx substrát x místech xxxxxxxx, xxxxx xxxx partie xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x), xxxxxxxx 3 x v xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx, x případě uvedeném x odstavci 4 xxxx. a) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) prohlídkou xxxxxx xxxxxxx bramboru x řezu xxxxxxxx xxxx, v xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. c) x x),

x) xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 písm. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 písm. x) x x xxxxxxxx 6.

(8) Způsob xxxxxxxxx partie x xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxx odběru xxxxxx při xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 až 7, xxxxxx tohoto xxxxxxxx x způsob předávání xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x testovaných vzorcích xxxxxxxxx x souladu x §10 xxxx. 1 xxxxxx Xxxxx xx základě xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé hniloby, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx produkce xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx na míře xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ústavu xxxxxxxxxxxx (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxx zjištění a xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxx x souladu x §10 odst. 1 xxxxxx a xxxxxxxxxxx xx Věstníku.

(9) X průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx anebo xxxxxxxxx osobou, xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, pokud bude xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx odstavce 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx prováděného xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Ústav bez xxxxxxxxxx odkladu xxxxxxxxx xxxx fyzické xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx tuto partii xxxxxx na xxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(11) Podrobnosti x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx v souladu x §10 odst. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx A xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx za účelem xxxxxxxxx srovnatelné xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx státy. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxx provedených xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx jednou xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx, x xx v xxxxxxx xxxxxxxx v rozmnožovacím xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxx xx pozemcích xxxxxxxxx, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, týkající se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx vztahují xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Podrobnosti tohoto xxxxxxxx jsou xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx xxx zjištění xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xx podezření z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx

x) Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vizuálních xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X číslo 1 x xxxxxx II, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu provedeného Xxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Ústav x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx právního xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx provedení xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x to xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx B, x xxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx neodkladně xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x x souladu x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) zakáže xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx byly xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx opatření pod xxxxxxxx Ústavu, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, a

b) nařídí xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx stupni xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx zajištění xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx a v xxxxxxxxx spojených x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxxxx i mimo xxxx pozemky a xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx nebezpečí xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x jiného xxxxxxxxx xxxxx nebo x xxxxxxxx jiném xxxxxxxx xxxxx, sdělí Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx tohoto podezření x bude s xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Pokud xxxx x podezření x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxx xxxxx x České xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx republiku xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx Ústav xxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx testování odebraných xxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx §3 odst. 8 potvrdí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxx x xxxxxxx x §76 odst. 2 xxxxxx a x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxxx vědeckým xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxx, uvádění xx xxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx

x) xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, zásilku, xxxxx partii, a xxxxxxxx, xxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxx nebo xxxxxx části x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, x xxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxxxx xx xxxxx s uvedeným xxxxxxxxxx materiálem, xx xxxxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxx místa xxxxxxxx xxxxxx těch, kde xx možná úplná xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) provede odborné xxxxxxx zaměřené xx xxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a prvotního xxxxxx xxxxxx v xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx testování xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 x xxxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx předsklizňového xxxx xxxxxxxxxxxxx kontaktu, a xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx předmětem xxxx xxxxxxxx, označeným xxxxx xxxxxxx a),

c) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxxx předmětů xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx podle písmene x) a xxxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x souladu x ustanovením bodu 3 přílohy č. 3.

(2) V xxxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx hnědé hniloby x ohledem na xxxxxxxxxx vodu, odpadní xxxx ze zařízení xx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx vegetace, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, zalévání xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx ohroženo xxxxxxxxx brambor, Xxxxx

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx x čeledi xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx s cílem xxxxx xxxxxx zamoření,

b) xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, z xxx xxxx odebírány xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx karanténní území xx xxxxxxx označení xxxxxxxxx vody xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a xxxxxxxxxxxx xxxx xx základě xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxx xxxxxxx x jeho xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Komisi x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), popřípadě xxxxxxxx 2 xxxx. x), x xxxxx podrobnosti x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. c), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x xxxxx oznámení xxxx xxxxxxx.

(4) Pokud xxxx členský xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby v xxxxxxxx, xxxxxxx anebo xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky x xxxxxxxx xxxxxxxx obdobně xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx odpovídajícím způsobem x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 a 2 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření x vymezí xxxxxxxxxx xxxxx, popřípadě bezpečnostní xxxx.

(5) Ústav stanoví xxxxxxx xxxxxxxx ve Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x) a xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxx území a xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x), xxxxxxxx 2 xxxx. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Testování xxxxxxx příbuzných xxxxxx hostitelských xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx klonově xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), x xxxxxx xxxxxxx však všechny xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾, a xx x rozsahu xxxxxxxxx xx stanovení xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x rozsahu xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx míru rizika xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Podle xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 Xxxxx x případě xxxxxxx xxxxxx xxxxx předměty x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx vymezí xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) x x).

§7

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxx xxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx Xxxxxx xx x xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v bodě 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx neexistuje xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx jsou xxxxxxx xxxxxxxxx na zneškodňování xxxxxx, stanovené v příloze č. 5, v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. b) xxx xxx použita xxx xxxxxxxx Ústavu xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x pokud xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxx výsledku testování xxxxxxx příbuzných partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 označena xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x veškeré jiné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) nebo xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xx xxx xxxxx xxxx podrobí xxxxxx x xxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 x xxx, xx po xxxxxxxxx očisty a xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xx pravděpodobně zamořené xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx, vymezených podle §5 xxxx. 1 xxxx. c), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. x), xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x bodě 4 přílohy č. 4 x x xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Ústav xxxx xxxxxxx podle §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx 1, xxxxx budou xxxx xxxxxxxx xxxxxxx odůvodněná, xxxxxxxxxx x účinná. Xxxxxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. x) uvnitř xxxxxxxxxxxx xxxxx x v xxxxxxxxxxxx zóně xxxxxxx Xxxxx ostatním xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 odst. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxx xxxxx §76 odst. 4 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 a xxxxxxxx 2 po xxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx doby xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Přechovávání xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx s §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx jejich xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, šlechtitelským xxxx diagnostickým účelům, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 zákona, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx opatření xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx materiál²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na xxxxx České xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §3 xxxx. 2, x xxxxxxx podle xxxxxxxx 2 x x souladu x §3 xxxx. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Testování xxxxx odstavce 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx v posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx byl x xxxxxxxxx uplynulém sklizňovém xxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx potvrzen xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx tuto souvislost, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x xxxxx prokazatelně xxxxxxxxxx žádná xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího materiálu xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxxxxxx x množení x následujícím roce, xxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ani xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx vyhláška xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx č. 1 x vyhlášce x. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) diagnózy xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx xxxxxx, validovaná xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx přípravu testovaných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x dodatcích. Seznam laboratoří, xxxxx se podílely xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx stanovené prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. oddělení xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeningových xxxxx provedených xx xxxxxx, jak je xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech.

Pokud xx xxxxx screeningový xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti a xxxx být proveden xxxxx screeningový test. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx považován xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx je xxxxxxxxx XX test xxxxx §4 odst. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x identifikaci xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti v xxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx x xxxxxxxx bramboru x podezřením x xxxxxxx nebo typickými xxxxxxxx kroužkovitosti. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxx médiu x v případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx testy jsou:

- XX xxxx (oddíl 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- FISH xxxx (oddíl 5).

(3) Xxxxxx izolace xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxx suspenzí xx xxxxx xxxx komplikovaná, xxxxxxxxx x pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx. Saprofytické xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx pletivu, xxxxx přerůst xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx i selektivní xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (oddíl 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx jsou typické, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx patogenity xx popsána x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x nichž xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx, a xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx typických kolonií, xxxxxxxxxx, že čistá xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx dostačující k xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx menší xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx jeden screeningový xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx pozitivní, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx ještě xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx je druhý xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Test xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx IF xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátka, xxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x xxxxxxxxx (viz xxxxx 6).

(6) FISH xxxx.

Xxxxxxx se validovaná xxxxxxx x protokoly (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx izolace.

Toto xxxx xxx x mnoha xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX média xxxx XXX-88 média x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100. Typické xxxxxxx xxx získat xxxxx 3-10 xxx xx xxxxxxxxx na xxxxxx. Xxxxxxx patogena lze xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx sekundární xxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx médiu x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx kultivační xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, musí xxx izolace xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx k xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx bramborových extraktů xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Xxxx vyžaduje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx XXXX xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx (viz oddíl 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx výsledky xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, xxx izolační xxxxx xxxxxxxxx, opakují se xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vodivého xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku x x případě potřeby xx xxxxxxx test xxxxxxx xxxxxx.

(11) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx dosáhne xxxxxxxx xxxxx popsaných v xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální kroužkovitosti xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx velikosti vzorků - viz xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.

(3) Pokud xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx druhého xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx druhý xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx v oddílu 8.

(5) XX test xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) PCR xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx je xxxxxx v xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud jsou xxxxxxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxx, ale izolační xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, u xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 10.

2. Vizuální xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx poli xxxxxx xxx xxxxxxxxx x často pak xx na xxxxx xxxxxx. Kromě xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx se xxxxxx x příznaky jiných xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Proto xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx přehlédnuty. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx odlišné xx xxxxxxxx xxxxx hniloby; xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Mladé xxxxxxxxxx xxxxx často i xxxx infekci xxxxxx xxxxxx, x když xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx spodní xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, listy x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Často xxxx listy x xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx bramboru

Nejranějšími xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx bez měknutí x okolí xxxxxxx xxxxxxx, zejména blízko xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx dobře identifikovaným xxxxxxxxx xx žlutavé xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x cév xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx obsahuje xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx hlízách xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx být tyto xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx se vyskytovat xxx blízko xxxxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx část xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx stadiích xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxx okraji. V xxxxxxxx xxxx se x Evropě xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxx hnije x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx dochází x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx vznikem xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx houbová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx být xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky kroužkovitosti xx xxxxxx hnilob xxxxxxxx. Možné xxxx x atypické xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx řady xxxxxxxx jsou xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx vzorků

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Standardní xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx 1 test. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx vede x xxxxxxxxx nebo složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxxx lze xxxxxx xxxxxx i pro xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je k xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx popsaný xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx omyjí. Xxxxxxx se vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx xxxxxxxx XXX test, pro xxxxxxxxxx možné patogenní XXX) a mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx oschnout xx xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx x případě, xx xx ve xxxxxx příliš zeminy x xxxxxxxx se xx xxxxxxxx XXX xxxx nebo přímá xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx nožem či xxxxxxxx na xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx konců xxxxxxx. Na xxxxxxx xx xxxxx nadbytečná xxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x pupkových xxxxx zpracovány xx 24 xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx dobu xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx s podezřelými xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx stranou x xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx jsou při xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx konce xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx vizuální xxxxxxxxx xxxx xxxxx po xxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky se xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx teplotě x uchovávají xx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Všechny xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x pupkové xxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být důkladně xxxxxxxxx x dezinfikovány xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx, xxxxx to není xxxxx, xxxxxxxxxx se x nádobě xxx xxxxxxx xxxxx, v xxxxxx po xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Schnutí x xxxxxxxxxx výkrojků x xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx skladování xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx.:

x) výkrojky xx xxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x třepají xx x rotační třepačce (50-100 ot/min) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx nižší xxx 24 °C xxxx xx dobu 16-24 hodin xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx se homogenizují x xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx jednorázovém xxxxxxxxxx xxxxx za použití xxxxxxxx tloučku nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během extrakce. Xxx xxxxx vzorek xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx sterilizovaná xxxxx (xxxx) x xxxxxx. Xxxxx xx být xxxxxx XXX test, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX na xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x použití xxxxxxxx xx jedno použití.

3.1.4. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx nadměrně xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx odstředěním (xxx maximálně 180 x xx xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100µm), xxxxx se omyje xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x xx xxxx 15 minut (xxxx 10 000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, aniž xx se rozvířila xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µl xxx xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx sterilní xxxxxxxx xx konečnou xxxxxxxxxxx 10-25 % (v/v) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x ke zbývající xxxxx xxxxxx, promíchá xx vířením x xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 až -86°X (xxxxxx). Extrakty xx xxxxx testování xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx nutný xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx v chladícím xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx nezbytně xxxxx, xxx xx se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x vzorky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx předešlo xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx i xxx xxxxxxx xx XX testy x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx kontrola kombinovaných xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Pokud xx provádí podrobné xxxxxxxx, měly by xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx čistého dezinfikovaného xxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx 1-2 xx xx xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx osuší savým xxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx sterilní xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx zpracují jedním x následujících postupů:

a) xxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx při xxxxxxx xxxxx než 24 °X nebo xx xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx se xxxxxxxx rozdrtí v xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx množstvím xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxxx možné, xxxxxxxx se části xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx xxxxxxx, xxxxx má trvat 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.4 Další xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx na 2 xxxxxx xxxxx, Jedna xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C x druhá polovina xx xxxxxxxx x 10-25 % (v/v) xxxxxxxxxx glycerolu při xxxxxxx -16 xx -24 °C (xxxxx) xxxx při teplotě -68 xx -86 °X (xxxxxx), pokud xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx se použít xX xxxx jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx byla xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx test XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx výsledek xx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx xxxxxxx nutné xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX xxxx xxxxxxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xx xxxx polyklonální xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Doporučuje xx xxxxxxx xxxx xxx každou xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 až 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxx xxxxxxx vhodného xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX titr xxxxxxx 1:2000. Během testu xx se xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 až - 86 °C x xxxxxxxxx. Glycerol xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx při 7 000 x x resuspenzí xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx nutné, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (viz 4.2).

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní sklíčka x homologickým kmenem xxxx x jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx ve xxxxxx x brambor xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X) xx xx xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx jako paralelní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 okénky x xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

4.1. Sklíčka xx test se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x relativně xxxxxx množstvím škrobového xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx x průměru 6 mm xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx resuspendované bramborové xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx stejné xxxxxxxx xxxxxxxxx pelety (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx jako duplikát xxxx xxx xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10 a 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - pro větší xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x každého roztoku xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako duplikát xxxx xxx xxxxx xxxxxx podle obrázku. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky se xxxxxx xx xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx fixovaná xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx boxu po xx možná xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx IF xxxxx:

x) Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x oddílu 4.1 xxxx. a):

Připraví xx xxxx dvojnásobných roztoků xxxxxxxxxx x XX xxxxx. X první xxxxx by měl xxx xxxx 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx titr (2X).

x) Xxxxx přípravy sklíčka xx xxxx x xxxxxx 4.1 písm. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x XX pufru. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) a xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko se xxxxxxx kompletně xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx každém okénku xxxx xxx nejméně xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx nejsou x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx xx xxxxxx papíře xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx podložních xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxx opláchnou xxxxxx IF. Umyjí xx ponořením xx xxxx 5 minut x pufru IF Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx v pufru XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by mohly xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx na vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, kterým xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx naneseného xx xxxxxx xxxx xxx stejné jako xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx po dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx předtím (4.3.3.).

Xxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx krycí xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx sklíčko.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx se prohlížejí xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx FITC pod xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxx xxx zvětšení 500x xx 1000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x xxxxx obvodu. U xxxxxx s xxxxxxx xxxx malým xxxxxx xxxxx se zkoumá xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní vzorek. Xxxxx musí xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx titru protilátky xxxx pracovním ředění. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx okénkách sklíčka (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x pozitivním xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo lepší. Xxxxx s neúplným xxxxxxxxx nebo slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx brát x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x jakékoli kontaminace xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka ve xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxx x morfologií x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Výsledek IF xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx další testování.

b) Xxxxxxxx IF testu xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx testování není xxxxx.

5. Xxxx FISH

PRINCIP

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test použije XXXX test x xx xxxxxxxxx, musí xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx možno xxxxxxxx x xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx je xxxxx jej xxxxxxx xxxxxxx x extraktem, xxxxx xxx xxxxxxx x glycerolu xxx xxxxxxx -16 xx -24 xxxx -68 xx -86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 X xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x 3-5 denní xxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx podle dodatku 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx oligosond značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu se xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x rozpustí xx peleta x 500 µx fixačního xxxxxxx připraveného xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx xx xxxx xxx při xxxxxxx 4 °C.

Alternativním fixačním xxxxxxxx je 96 % xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx 5.1.2. x 50 µl 0,01 X XX x 50 µx 96 % xxxxxxx. Promíchá xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx xx dobu 8 xxxxx na 7 000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 75 µl 0,01 X XX (viz dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (v 0,01 X XX). Xxxxxxxxx roztok vzorku (49 µx) může xxx xxxxxx při xxxxxxx -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx množství 96 % xxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX metodu xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx, přidá xx stejné xxxxxxxx 0,01 M XX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Rozmístění xx xxxxxxx FISH

5.1.6. Sklíčka xx nechají uschnout xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X této xxxx xx xxxxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x hybridizaci xxxxx den. Sklíčka xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x xxxxx při pokojové xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Připraví se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 xx lyzozymu (Xxxxx X-6876) x 10 ml pufru (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Tento xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx by xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx dobře xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx při xxxxxxxx teplotě. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx demineralizované xxxx, xxxxx jednou, a xxxxx filtračním papírem.

Alternativně xx přidá místo xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 v pufru (20 mM Tris-HCl, 2 xX CaCl₂, xX 7,4) xx xxxxx xxxxx a xxxxxxxx se při xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Buňky xx xxxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % a 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dna xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °C xx dobu xxxxxxx 10 minut.

5.2.4. Připraví xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) s 45 µx xx 1 xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx po xxxx 5 minut při xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x xx xxxxxxx xx 4 xxxxxx xx sklíčku / xxxxxxxxx se xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 krycími sklíčky (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx se 14 - 18 h x xxxx xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Ultra xxxx xxxxx = XX), 1 l 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x xxxxxx a 833 xx XXX). Xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xx držáku sklíček.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 15 minut x xxxxxxx x 1x xxxxxxxx při xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx krátce xx XXX x xxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xx nadbytečná xxxxxxx lehkým xxxxxxxx xxxxxxx filtračním papírem. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx krycího xxxxxxx (xxxx. Vectashield, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) do xxxxx jamky x xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Hodnocení XXXX xxxxx

5.3.1. Sklíčka xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x pod xxxxxxxx xxxxxx. S xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx fluorescenčně xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x pravých xxxxxx x kolem xxxxxx. X xxxxxx, xxx nejsou pozorovány xxxxx nebo xxxx xxxxx, se pozoruje xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Hledají se xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testovacích xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat xxxx xxx xxxxx než x pozitivního kontrolního xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx xxxxx zbarveny xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx neberou x úvahu.

5.3.3. Při xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx může stát, xxxx všechna xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X peletách z xxxxxxx části xxxxxxxx x částí xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnou Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xxxxxx mnohem méně xxxxx xxx x XX testu.

5.3.5. V xxxxx se xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxx x morfologií, viz 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx výsledku xxxxx XXXX:

x) Výsledky XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx jsou xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx pozorovány x xxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx a vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxx testování. Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx považují xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx v pozitivních xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx PCR xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx PCR test xxxxxxx jako druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xx xxx dokončení diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx postupového diagramu.

Využití xxxx metody x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxx xxxxx , je-li xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít vhodná xxxxxxxxxxxx opatření, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX xxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na molekulární xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx možnost kontaminace xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (u xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) by se xxxx xxxx zacházet xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx bylo xxxxx, xxxxxx došlo x přenosu XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxx xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (příprava xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- pokud xxxxx použít xxx xxxxxxxxx XXX testu xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly x odděleném xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx xx měly xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. X xxxxxxx použití XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty z xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Použijí xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx DNA x komplexních substrátů xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx enzymatických xxxxxx a koncentrující xxxxxxx XXX v xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx optimalizována xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 xX NaCl, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX EDTA [xX 8,0]) do mikrozkumavky x objemu 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µx extraktu xx xxxxxx x xxxxxx xx do xxxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx x xxxxxxx 95 °C xx xxxx 10 minut.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Přidá xx 80 µl xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx xx 1 xx x 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx A (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x inkubuje xx xxx xxxxxxx 65 °C xx xxxx 30 minut.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx DNAR xxxxxx X (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá se 500 µl chloroformu x míchá xx xxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx sníží x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Odstřeďuje se xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X xxx oddělení xxxx x vytvoření xxxxxxxx.

9. Přenese xx xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 ml 100 % xxxxxxx (-20 °C), xxxxxx xx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx se xx xxxx xx xxxx 10 minut.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x xxxxxxxx se x pelety xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °C) x xxxxxxxx převracením xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°C, xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xx vzduchu xxxx x DNA xxxxx xxx.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µl xxxxxxxx xxxx (XXX) x xxxxx stát nejméně 20 minut xxx xxxxxxxx teplotě.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -20 °X až xx upotřebení xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxxx a xxx XXX xx xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx použít, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 PCR

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx validovaného xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx desetinný xxxxxx xxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx reakční xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx zveřejněného xxxxxxxxx (dodatek 6). Validovaný xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, která xxxxxxxx také xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx PCR mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx extraktu DNA xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Zahrne xx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx XXX x přidá se xxxxxx xxxxxxxx voda XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx stejného xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx amplikony XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx xx nejméně 12 µx amplifikované xxxxxxx xxxxx DNA x xxxxxxx xxxxxx smíchané x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X xx xx. Použije xx xxxxxx marker DNA, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Detekují se xxxxxxx XXX xxxxxxxx x ethidium bromidu (0,5 xx xx x) xx xxxx 30-45 xxxxx, za xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x tímto mutagenem.

6.3.3. X xxxxxxxxx a XX (krátké vlnové xxxxx, xxxx. 302 xx) prosvíceném xxxx xx hledají xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR o xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx nových xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx x vhodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx a pufrem (xxx dodatek 6). Rozdělí xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x agarózovém xxxx a pozoruje xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentu xxx XX xxxxxxxxxxx po xxxxxxxx ethidiumbromidem x xxxxxxxxx xx s xxxxxxxxxx x štěpenou xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX test xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx produkt XXX očekávané velikosti xxxx být xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx zjištěn xxxxxxxx typický xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x vzoru (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx žádným z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (oddíl 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx získán x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx protokolech XXX s interními xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx došlo, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx z obou xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx xx xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx přidaný x xxxxxxxxx xx xxxxxx, které byly xxxxxxxxx s negativním (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x xx extrakty, xxxxx xxxx uchovávány x xxxxxxxxx při xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obohacující xxxxxx xxx xxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx vynikající xxxxxxxx xxxxxxxxxxx test.

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxx růstové xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx mezi xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x níže xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx se xxxxx rostliny xx xxxx 2-3 xxxxx xx úplného rozvinutí xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxx se xxxxxxxxx xxxxx využití resuspendované xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude xxx xxxx uvedené postupy xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xx je xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x vyhloubenou xxxxx x xxxxxxxxx 5 xx hloubky, 10 xx šířky x 15 xx délky). Xxx xxxxx testovaný xxxxxx xx xxxx xxxxxx a xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx možno xxxxxxx xx místě xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx mezi děložními xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxx podélný xxxx xxxxx úhlopříčný xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx čtvrtiny xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx čepele xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxx štětečkem xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx pelety xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx vazelínou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx o xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx zářezem XX

7.3.1. Xx xxxxxx rostliny xxxxxx dvěma xxxxx xx napipetuje mezi xxxxxxx lístky x xxxxx pravý xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Pomocí xxxxxxxxxx skalpelu xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x xxxx xxxxxxxxx 5°), dlouhý 1,0 xx a hluboký xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx se xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx vazelínou x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx lilku xxx xxxx xxxxxxxxx nezalévají.

7.4.2 Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx těsně xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Peleta xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se inokuluje 5 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 nebo 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xx možné x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx.

7.6. Jako negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx sterilním 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Po inokulaci xx xxxxxxxx nechají xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx vhodných podmínkách (dodatek 8) po dobu xx 4 týdnů xxx teplotě 18-24 °X. Rostliny xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx se xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx nedostatku xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx při teplotách xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, inkubují xx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skleníku xxxx xxxxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx se zajistí xxxxxx oddělení mezi xxxxxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxx manipulaci xx věnuje maximální xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx nezbytné, aby xxxxxxxx i růstové xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx by mohl xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx po xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazující xxxxxxxx. Xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx ochablost (xxxxxx xxxxxxx). Zvadlé xxxxxxx xxxx zprvu xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mívají xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Nekrotická xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; čím xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, tím xx xxxxx naděje xx xxxxxxx. Rostliny mohou xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx citlivější xxxx nízkým koncentracím xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ve fázi xxx listů x xxxx xxxxxx xxxx xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx způsobovat xxxxxxxx xxxxxx bakterií nebo xxx přítomných v xxxxxx x pletiv xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Phoma xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx vadnutí lze xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx rostliny. Xxxx xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: tento xxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx Xxxxxxx spp

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx vejcoplodém objeví xxxxxxxx, xxxx by xxx provedena xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx zvadlých xxxxx xxxx stonků xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx vydezinfikuje xxxxxxx 70 % etanolem. Xxxxxxx xx xxxx xX nebo XXX xx xxxxx z xxxxx a xxxxxxx xx xx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx 8). Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

7.10. Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, zejména xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx stát, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx latentní xxxxxxx xxxxxxx i po xxxxxxxx xxxxxxxxx doby xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4 týdnech pozorovány xxxxx xxxxxxxx, provede xx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 xx x každé xxxxxxxxx xxxxxxxx odebraných xxx xxxxxx inokulace. Pokud xx test xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) médiích xxxxxxxx podle xxxxxx 8. Čisté kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se identifikují x xxxxxxx se xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 a 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx pouze xxxxx, je-li původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Ačkoliv xx xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx xxxxxxxxxx, je xxxxx ho xxxxxxxx x xxxxxx projevujících xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx jej xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x proto xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx izolaci xxxxx z xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx možná xx xxxxxxx selektivního xxxxx x vhodného ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx stonků xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx nevykazují xxxxxxxx xxxxxxxx, ale x xxxxx xxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX složených xxxxxx (xxx oddíl 7.9). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.l.2.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxx 106 xxx na xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus (např. XXXXX 4053 nebo XX 406). Xxx xx vyloučilo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx připravenou xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx se měla xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx xxxx patogenu.

Kontrolní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

8.1. Roztěr xx xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Xx 100 µx alikvotní xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové pelety xxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění x peletovém pufru (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx saprofytů. Vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx saprofyty xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µl x xxxxxxx xxxxxx, x ředění 1/100 xx 1/10&xxxx;000 na XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx použití xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx se xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx zahrnuje porovnání x kontrolními xxxxxxx x xxxxxxxx všech xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx provádějí po xxxxx dnech, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx kolonií podobných Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx pěstovat xx YGM xxxxx; xxxxxxxxx a identifikace xx xx měly xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. nejlépe xx 3-5 dnech.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx rozetřou na xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- živný xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx glukosový xxxx,

- xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx probíhá při xxxxxxx 21-24 °X xx xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx kroužkovitosti xxxxx xxxxxx a xxxxxxx vytváří xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx zbarvené.

8.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxx zaručení xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx kolonie xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, konvexně xxxxxxxxx, slizovitě xxxxxx, x rovnými xxxxxx x obvykle xxxx x průměru 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx vybrat xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx kultury xxxxxxxxxxxxx izolované kultury Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xx použití xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xx zahrne xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx známý referenční xxxx.

9.1. Xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Veškerá xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X a xx xxxxx xxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xx dobu xxxxxxx 20 dní.

Všechny xxxxx xxxx zahrnovat xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutriční x fyziologické xxxxx xx xxxx provádět xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx živného xxxxx. Morfologická xxxxxxxx xx musí xxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx agaru.

Test Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (O/F) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Aktivita xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx při 37 °X -

Růst x 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Hydrolýza eskulinu +

Xxxxxx kyseliny x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - nebo xxxxx

- xxxxxxxx -

- salicinu -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx na xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx antiséra.

c) Provede xx xX postup (xxxxx 4).

d) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF xxxxx xx dosaženo, jestliže xX xxxx kultury xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. PCR xxxx

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml ve xxxxxxxx xxxx (UPW)

b) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx při teplotě 100 °X po xxxx 4 xxxxx. X případě xxxxxxx xx může xxxx xxxxx xxxxxxxx přidáním xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx konečné xxxxxxxxxxx 0,05 X. Vzorky xxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C xx xx xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx postupy XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x de Xxxx, 1995; Mills x xxx., 1997; Pastrik x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x kol., 1999).

x) Identifikace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx amplikony XXX xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze přibližně 10⁶ xxxxx xx xx v XXX.

x) Xxxxxxx se postup XXXX (xxxxx 5)

x) Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx dosaženy xxxxxx reakce xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°C).

b) Xxxxxxx xx vhodný xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s profilem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx jasně xxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxx rody xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter x Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X je xxx xxxx bakterie xxxxxxxxx kyselina, která xx xxxx vyskytuje xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. v xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kolem 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Provede se xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx x kol., 2001.

10. Test xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx potvrzení původce xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 pravých xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx zaléváním, aby xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. U xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx nastat typické xxxxxxx, avšak rostliny, xxxxx xx uplynutí xxxx doby xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx až 3 xxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx vejcoplodého, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx xx 3 xxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx, nemůže xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx se xxxxxxx z xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx části stonku 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru. Xxxxxxx se xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx xx dobu. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °X x sleduje xx xxxxx xxxxxxx typických xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx na xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx für Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Agency	Edinburgh	Skotsko
Laboratoire Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni xxxxxxxx xx biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro de Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 2

Xxxxxxxx pozitivních a xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxxxxxxx xx v 10 xX fosfátového xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zakalené xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x pupkových xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx s xxxxx xxxxxxx, u které xx xxxxx, že xx prosta C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx zpracují xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 sterilních xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx x 900 µl resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx se 100 µx suspenze X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx první xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx se protřepat. X xxxxxxxxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx xx provedou xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použije xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx opatří xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až-24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x XXXX xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x PCR xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx zjištěn x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x xxxxx být xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 3

Xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx dobu xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 mM xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x provede xx sterilizace x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx následující složky:

	Účel	Množství (xx litr)
Lubrolové xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx činidlo	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů PCR	50 x
(*) xxx použití xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx byly odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje se xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 min.

2. Pufry xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx xxx IF (10 mM xxxxxxxxx xxxx ve fyziologickém xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 min

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxx xxxxxxx. Xxxxx se 0,1 % Tween 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx pufr x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx jako krycí xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x zvýšení xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx komerčně dostupné, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Vector Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX x XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Vypočítá xx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx mikroskopického sklíčka (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx jednoho xxxx xx xxxxxxx x více xxxxxxx x

x = plocha xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (X).

X = X x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx resuspendované pelety x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované pelety

Dodatek 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x kultivaci X. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx agar (Xxxxx)	23 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx se rozpustí x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx xxxx obsahující 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 X po xxxx 20 min.

Kvasnično-pepton-glukózový agar (Xxxxx peptone xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
Baktopepton (Xxxxx)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x kvasnicovým xxxxxxxxx x minerálními solemi (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 g
FeSO4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxx xx sterilizace 0,5 1 média x autoklávu xxx 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx jinak, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx médií x XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
Manit	2,5 g
K2HPO4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xX xx xxxxxx xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx X 0,01 x.

X zásobě xx nechají xxxxxxx xxxxxxxxxx: trimethoprim (Xxxxx) x xxxxxxxxx acid (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, amphotericin X (Sigma) (1 xx/xx) x dimethyl xxxxxxxxx. Zásobní xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx média je 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx skladování x xxxxxx do 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX na 7,2. Xx autoklávování a xxxxxxxxx xx 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, nalidixic xxxx (Xxxxx) 0,008 g, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: nalidixic xxxx v 0,01 X NaOH, cykloheximid x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx B sulphate x destilované vodě. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx při xxxxxxxxxx v chladu xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx x činidla xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění nejméně 10³ xx 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx testování xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx žádné xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx PCR xxxxxxxx s xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Pastrik, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx ctt xxx xxx xxx xx xx -3'

primer XXX-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx x -3'

xxxxxx NS-7-F 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x DNA C. xx. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (sada PSA-primer(i).

Předpokládaná xxxxxxxx amplikonu x xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X rRNA 377 xx (sada XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 μx
10x XXX xxxx (1) (15 xX MgCl2)	2,5 μx	1x(1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μl	0,1 mM
Primer XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx PSA-R (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 U/μl) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Metody xxxx xxxxxxxxxx za použití Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq xxxx Xxxx) x Xxxxx XXX.

(²) Koncentrace xxxxxxx XX-7-X a XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx části xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx XXX podle Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx xx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 minuty xxx teplotě 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 cyklů xx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA matrice)

iii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °C (xxxxxxxxx primerů)

iv) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx při xxxxxxx 62 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx při teplotě 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx prodlužování

ix) Udržuje xx xxx teplotě 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii), xx), x), vi) a xxx).

1.4. Xxxxxxx ampliconu xxxxxxxxxxxxx enzymem

Produkty XXX xxxxxxxxxxxxx x XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkuji xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu x enzymem Bgl XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X xx dobu 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x fragmentu xxxxxxxxxxxx pro X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx rozměry 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx modř (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx voda 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová kyselina xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx použitím xx xxxxx xx 1x.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxxxxxxx nebo rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'- xxx xxx xxx xxx agg agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE XXXXXXX! XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX V XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx se 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx se rozpustí xx přidání 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX na 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (PB; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxx proužkem se xxxxxxxxxxx pH x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx pomocí XXx nebo NaOH.

[UPOZORNĚNÍ: X XXXXXXXXX S XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT MĚŘIČ xX!]

xxx) Roztok xx xxxxxxxxxxxx xxxx membránový xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx prachem xxx xxxxxxx 4 °X do dalšího xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (xX 7,4)

EDTA (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx xx až 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (SDS) 0,01 %

Xxxxx EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxx xxxxx sklíčko (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 µx hybridizačního xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 sklíčka	8 sklíček
Sterilní xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx objem (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující světlocitlivé xxxxxxxxxx xx uchovávají x temnu xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxx je ochraňovat xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 M xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku vejcoplodého (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxx x xxxx rozvinutými xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 xxx) xx přepichují xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx se xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx následujících podmínek:

Délka xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, pokud xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Roztok xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x krystalové xxxxxxx x 20 xx 95 % etanolu.

Rozpustí xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 ml xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx roztok

Jód 1 g

Jodid draselný 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 xx

Xxxxx látky xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxx x xxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 ml

Zamíchá xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Připraví xx xxxxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxxx x xxxxxx xx zahřátím.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx krystalové xxxxxxx x nechá xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx se xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx se Xxxxxxxxx xxxxxxx roztokem x xxxxx se xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx.

5. Opláchne se xxx xxxxxxx vodou x xxxxxx se xxxxx papírem.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx tak xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx barvivo, xxxx xxxxxxxxx za jemného xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx safraninovým roztokem x nechá xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx se pod xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx bakterie xx xxxxxx fialově xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Mohou xx také použít xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Scheme xx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxx ring xxx xxxxxxxxx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xx batches xx xxxxxx xxxxxx. Commission xx the European Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11 288 EN, 21 xx.

2. Bradbury, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx bacteria xxxx xxxxxx. Rev. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Dinesen, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx diagnosis xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, American Xxxxxxx xxx Microbiology, Washington, 21-23.

5. Hugh, X. x Xxxxxxx, X., 1953. The taxonomic xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx oxidative metabolism xx carbohydrates by xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Bact., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx intra-specific classification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx analysis. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, J. X. x J. Van Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx infections (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) in xxxxxx. XXXX Bull., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x K. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of x semi-selective medium. Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxx xxx Protection, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Klement X.; Xxxxxxx, X x X. C. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. The xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. X., X. Xxxxxxx a X. X. Hayward, 1966. X determinative xxxxxx for xxx xxxxxxxxxxx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx J. appl. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, R. A. x P. X., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Corynebacterium xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Burkh.) in xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. de Xxxx, 1995. Selection xx Polymerase Chain Xxxxxxxx primers xxxx XXX intergenic spacer xxxxxx for specific xxxxxxxxx of Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Russell, X., X. a X., W. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx polymerase xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Phytopathology 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx by xxxxxxxxx XXX with coamplification xx xxxx DNA. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Ramamurthi, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx phytopathogenic xxxxxxxx xxx xxxxx relationship xx xxx Corynebacteria. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Sta., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, Y., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers xx B1O-PCR xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx detection xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, V. X. X., 1967. X xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx genera of xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, X. X.; Hemiesy, X; Xxxxx, XX., 2001. Repetetive xxxxxxxx-xxxxxxx XXX profiling xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx primer xxx xxxxx identification xx xxxxx pathogen Clavibacler xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofPlantPathology, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. xxx X. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx between xxxxxxxxxxxx: report xx Xxxxxxxxxxx working xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

25. Wullings, X. X.; van Xxxxxxxxx, X. X.; Janse, X. X. a X. X. L. Xxxxxxxxx, 1998. Detection xx Ralslonia solanacearum, xxxxx causes xxxxx xxx xx potato, xx fluorescent in xxxx hybridization xxxx 23x rRNA-targeted xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

B. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx dalších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) detekce Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxxx, rostlin xxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, schválená xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx přípravu testovaných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx životaschopných kultur X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx karanténních xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zařízením xx odstraňování xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prahy vybraných xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx také zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx a všechna xxxxxxxx pro zamezení xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx administrativním a xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, jak xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x níže xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx je podezření xxxxxxxxx x xxxx xx pokračovat x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx považován xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 vyžaduje xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Postupový diagram xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x bakteriálního xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujících příznaky xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí

Postup testování xx xxxxx pro xxxxx a rostliny xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x výskytu xxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx živné půdě x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx naznačuje xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Test xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxx v xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu xxxx extraktů z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 6.1.3.

6) Test XX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx FISH xxxxxxxxxxxxx slizu suspendovaného xx xxxx nebo xxxxxxxxxx pletiva vykazujícího xxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxx ELISA xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx nebo extraktech xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx snadno xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Typická xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx pokročilých xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxx, xxx xxxxxxxx test xx xxxxxxxxx, xxxx xx izolace opakovat, xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxx 6.2. Dílčí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxx případ.

14) Test xxxxxxxxxx xx popsán x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň xx xxxx screeningových xxxxx (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), z xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx xx R. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx screeningového xxxxx není xxxxxxxxxxx x tomu, aby xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx a izolační xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x xxxxx sérii xxxxx.

1) Standardní velikost xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx počet, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x dispozici.

2) Xxxxxx extrakce a xxxxxxxxxxx patogenu jsou xxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx provedena xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx negativní, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Další xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Test XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.7.

8) Testy XXXXX xxxx popsány v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx testech získány xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxxx izolační xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx dodatečným xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku, xxxxxxxx provést test x xxxxxxx vzorky.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx podezřelých xx X. solanacearum xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx vzorcích xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky, xxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky

1) Xxx xxxxx 3.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx alespoň xxx testy xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx provedena izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx alespoň xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx xxxx negativní, je xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx validaci xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li xxxxx xxxx další xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx je xxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x oddíle 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxx-xx xx screeningových xxxxxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx u bramboru

Rostlina xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx rozpozná xxxxxxxx xxxxx směrem x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotách xxxxx xxx, xxxxxxx x noci xxxxxxx x xxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx listy xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxx dolů. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x uhynutím xxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlin obvykle xxxxxx hnědý x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx je xxxxx xxxx vymáčknout. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx bramboru. Hlízy xxxxxxxx xx třeba xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx konce x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. V xxxx xxxx xx infekce xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx cévního xxxxxxxx, ze xxxxxxx xx několika xxxxxxxx xxxxx prýštit xxxxx xxxxxxx bakteriální xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx stává xxxxxxxxx xxxxxx x odumření xx může xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X pokročilejších xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x x xxxx může xxxxxxx bakteriální xxxx, xx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx červenohnědá, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vnitřního xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx obvyklý xxxxxxxxxx xxxxxx měkkých xxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx rajčete. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx povadlý xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx (teplota xxxx xxxxx 25 °X, xxx nasycené vzdušné xxxxxxxx) se xxxxx xxxxxxxx málo dní xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx na xxxxx xxxxxx rostliny nebo xxxx xxxxxxxx, které xxxxx xxxxx úplným xxxxxxxxx. Xx méně xxxxxxxxxx podmínek pro xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx než 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx se xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx výhonů.. Xx xxxxx pozorovat vodou xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx stonkem xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx pletiva xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx hostitelů

Rostliny Solanum xxxxxxxxx x X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx půdy xxxxxxxxxxx 25 °X nebo xxxx extrémně vysoká xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x xxxxxxxx S. xxxxxx rostoucí x xxxxxxx xxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx u xxxxxxxx xxxxxxx. Nevadnoucí xxxxxxxx X. dulcamara, xxxxx xx stonky x xxxxxx xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx části stonku xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. X xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx mohou xxxxxx xxxxxx slizu, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, a to x xxx absenci xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx mohou napomoci xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx jeden xxxx xxxx následujících xxxxx:

2.2.1. Xxxx na xxxxx xxxxx xx stonku

(Viz 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-b-hydroxybutyrátu (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule XXX x buňkách X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx tepelně fixovaných xxxxx bakteriálního slizu x infikovaného xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx modří X xxxx súdánskou černí (xxx oddíl 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Jiné xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx jsou xxxx XX (xxx oddíl 6.1.5.), test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.) atesty XXX (viz xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx nebo vrstva xxxxxxxxxx pletiva x xxxxxxx prstence xxxxx xxxxxxxx xxxx z xxxxxxx vláken stonku xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny. Suspenduje xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx nebo 50 xX fosfátového xxxxx (dodatek 4) a xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se 50-100 il suspenze x roztoku xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx XXX; viz dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx tetrazolové xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx se xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx buněčnou xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°X.

- Na xxxxxxxxxxx živné xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Aviruletní formy X. solanacearum xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx zcela xxxxxxx xxxx.

- U Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx formy X. solanacearum tvoří xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx zcela temně xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx solanacearum

Testy xxxxxxxxxxx xxxxxx R. solanacearum x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 hlíz xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx testů na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx množství hlíz xx vzorku vede x xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx může xxx rovněž xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku

a) Xxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 2-30 °X po xxxx xx 2 xxxxx před xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx odstranění xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx oschnout xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxx x případě, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx zeminy xxxx jestliže xx xxx xxxxxxxx test XXX xxxx přímá xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx na xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx na pupkovém xxxxx xxxxx hlízy, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxx na pupkovém xxxxx. Množství pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx stranou x xxxxxxx xx odděleně.

Pokud xxxx pří xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx vyšetření xxxxxx xxxxx na řezu xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx dojít xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x chladu (4-10 °X) za řádných xxxxxxxxxxxx podmínek. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx hlíz x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx části se xxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx utěsnitelné (x případě, že xxxxxx xxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx vyčištěny x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx to xxxxx, uchovávají xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; v xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx konců xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx množství (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x mixéru (xxxx. Waring xxxx Xxxxx Thurax) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxx použití (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx, 150xx x 250mm, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) pomocí xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx mlecího zařízení (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx homogenizaci xxxxxx xxxxxx mixéru xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx extrakčního xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx sterilované nože (xxxxx) a nádoby. Xxx xxxxx XXX xx nutno zabránit xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx nebo x xxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxx PCR se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx použití a xxxxxxx zkumavek na xxxxx použití.

3.1.1.3. Supernatant xx dekantuje. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx pomalým xxxxxxxxxxxxx (nejvýš 180 x xx dobu 10 minut xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µm), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 g po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °C a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx resuspenduje v 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 4). Použije xx 500 µx xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx referenční xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (v/v) x 500 µl xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x ke zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx se xxx xxxxxxx -16 až -24 °C (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °C (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx testování při xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx všechny pozitivní xxxxxxxx x xxxxxx X. solanacearum byly xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí xxx xxxxxxx XX x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x popisy xxxxx a optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

IF xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

3.2. Podrobné xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vzorcích bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx účely detekce xxxxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vzorky. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx o xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Provádí-li se xxxxxxx, měl xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx populace.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx 1-2 xx xxxxxx xxxxxx stonků xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxx xxxxxx hned xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z xxxx nebo xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx výhonek x xxxxx xxxxxxxx uříznutý xxxx nad spojením x xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxx, 1 xx xxxxxx xxx z každého xxxxxxx.

Xxxx hostitelské xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1 xx xxxxxx xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. X xxxxx xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 xx xxxx xx xxxxxx xxx vodou nebo xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx statisticky representativní xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx plevelnou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx pozdního xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx zjistit xx xxxx rok x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx rostoucí xx xxxxxxx tocích. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx plevelné rostliny xxxxxxxx, Solanum xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Datura xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx spp. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx druhy, xxxxx xxxxx hostit xxxxxxxx R. solanacearum xxxxxx 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx glomeratum,

Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx spp, Xxxxx xxx., Silene xxxx. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Urtica xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx fázi xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx sliz). Xxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxx atestuje xx odděleně (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x xxxxx vysuší xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx zpracují části xxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx při teplotě xx 24 °X xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx to xxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxx v xxxxxx nejdéle na 72 xxxxx nebo xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °X) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 minut, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.1.4. Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx lze xx xxxxxxx filtrací xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x oddíle 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx dva stejné xxxx. Xxxxx xxx xx testuje při xxxxxxx 4-10 °C x druhý xxx xx xxxxxxxx x 10-25% (v/v) xxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 °X (týdny) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx další xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Testy XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (viz xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., kde xxxx uvedeny doporučené xxxxxxx vzorkování.

(2) Metody xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx xxx patogenu, xxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxx tehdy, xxxxxxxx nebrání xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx selhat x důvodu xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx saprofytická xxxxxxxx ovlivní spolehlivost xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx patogenity xx popsán x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxx být xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx vody. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx detekce xx xxxx liší x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxx populacemi xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxxxxxx xx xxxxxx mnohem xxxx v odpadní xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxx v xxxxxxxxx xxxx. Zatímco xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ buněk/litr xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx podstatně xxxxx. X tohoto xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx dojde xx xxxxxxx saprofytických xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x úvahu xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x tomu, xx xx xxxx schéma xxxxxxx úspěšně x xxxxxxxx výskytu xxxx xxxxxxxxxxxxx patogenu v xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx uvědomit xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x podobnému xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx xx nejspolehlivější x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxx teplota xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Opakované xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx silných xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Vzorky vody xx odebírají x xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx vybraných xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx možno 30 cm pod xxxxxxxx a 2 x od xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx odpadní vody. Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxxx vzorky nejméně 3xxxx pro xxxxx xxxxxxxxxx místo, x xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Při intenzivním xxxxxxxx xx vyberou xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3 km xxxxxxx xxxx x vzorkují xx xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxx a xxxxx (4-10 °C) xxxxxxxx do 24 xxxxx.

4.2.1.3. Je-li potřeba, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx dílčí xxxxxx xxx 10 000 x xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x po xxxx 15 minut), xxxxx xxxxx při teplotě 4-10 °X, slije xx kapalina xxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx peleta x 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx se xxxxxxxx přes xxxxxxxx (xxxxxxxxx velikost xxxx 0,45 µx) x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx saprofytů.

Koncentrace xx xxxxxxx nedoporučuje x vzorků xxxx xx zpracování brambor xxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx dodatcích.

5. Xxxxxxx a identifikace xxxxxxx hnědé xxxxxxx x půdě

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

(6) Kultivace xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xx-xx xxxxxxxxx na vliv xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx izolace, opakují xx testy xxxxxxxxxx xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

(7) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx podezřelých čistých xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx pro xxxxxxx x identifikaci R. xxxxxxxxxxxx v xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx popsané x tomto xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx xxxxxxxxxx brambor xxxx kalu z xxxxxxx xxxx. Je xxxx nutné xxxxxxxxxx, xx xxxx metody xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx zaručovaly detekci xxxxxxx xxxx nepravidelně xxxxxxxxxxxx populací Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx infikovaných vzorcích xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků a xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxx kalu xx xxxxx xxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx testovacího schématu. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem přítomnosti xxxxxxxx v xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx sledování, xxx není xxxxxxxxxx, xxx i při xxxxxxx této xxxxxx xxxxxx nízký stupeň xxxxxxxx pozornosti.

5.2.1. Příprava xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování polní xxxx xx xx xxxx řídit xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 až 1 xx půdy xx 60 míst xx xxxxx 0,3 xx x xxxxxxx 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxx, zvýší xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 x xxxxxx 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorky při xxxxxxx 12-15 °C. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x kanalizace xx navzorkuje xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx reprezentujících xxxxxxx xxxxx testovaného xxxx. Před testováním xx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 ml xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx napomoci xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx a popis xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Optimalizované xxxxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Diagnostické x xxxxxxxx testy

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx vadnoucích xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete nebo xxxxxx hostitelských rostlin xxxx ukázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx pravděpodobného xxxxxxx: uřízne se xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx země. Xxx xxxxxx xx xxxxxx xx zkumavky s xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, zda xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx charakteristická xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Test xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx pletiva xxxx xx 48 xxxxxxxx kultury na xxxxx půdě YPGA xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3. Roztěry xx xxxxxxx uschnout x spodní xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx buď xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx popisu:

Test nilskou xxxxx:

x) Xxx xxxxxxx xx zakápnou 1 % vodným roztokem xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx inkubovat 10 minut při xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx se barvící xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx se xxxxxx savým papírem.

c) Xxxxxx se xxxxxxx 8% xxxxxx roztokem xxxxxxxx xxxxxx a xxxxx se xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

d) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Znovu se xxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 nm xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx 600x až 1000x x použitím objektivu xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersi.

g) Pozoruje xx, xxx se xxxxxx na XXX xxxxxxxxx xxxxx oranžová xxxxxxxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x zda je xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. solanacearum.

Test xxxxxxxxx xxxxx:

x) Zakápnou xx všechna sklíčka 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X v 70% xxxxxxx a xxxxxxxx xx 10 xxxxx při pokojové xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx roztok x xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx tekoucí vodou x xxxxxxxx a xxxxxx xx přebytečná xxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xylolu x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Upozornění: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx nezbytná bezpečnostní xxxxxxxx x pracovat x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x nechají 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx v digestoři.

e) Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx, odsaje xx přebytečná voda xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx se krycí xxxxxxx.

x) Zkoumá se xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PHB xxxxxxx v xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx zbarvenými stěnami xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x bakteriálním xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxx x příznaky xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo obarvenými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx komerčně xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx postupuje xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx postup xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx testovacího víceokénkového xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c) Xxxxxxxx xx, xxx xx x pozitivních xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx dobu 15 xxxxxx objeví aglutinace.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Očkování xx xxxxxx půdu

Poznámka:

Než xx xxxxxxx xxxx xxxxxx poprvé, xxxxxxx xx předběžný xxxx x xxxxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx tvořících xxxxxxx R. solanacearum xx 1 ml xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx řádně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živná xxxx, xxxx. XXXX (ve xxxxx Xxxxxxxxxxx et xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx bakterií xxxxxxxxx na xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Dále, xxxxxxx X. solanacearum xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Petriho xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx xxxx rovněž xxxxxxxx antagonistické bakterie. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx testu.

Pří xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxx xxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě xx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 X. solanacearum (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx možné xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní vzorky xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx připravené xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx před jejím xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx patogenu. Xxxxxxxxx materiál xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx se xxxxxx x xxxxx zajistit, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µl xxxxxxxx xxxxxx na 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Misky se xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx a xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx po 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xx 3 dnech xxxxxxxx xx rozvine xxxxxx xx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx spirálami.

Poznámka:

Někdy se xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx kolonie X. solanacearum. Xxxxx xxx xxxx, kruhové, xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx obtížně rozeznatelné xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx rozetřou nebo xxxxxx xxxxxxx zřeďování xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., aby se xxxxxxx xxxxxxxxx kolonie (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx uchovávají xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx dlouhodobě xx xxxxxxx ochranném xxxxx xxx teplotě -68 xx -86 °C xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (viz oddíl 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx podezřelé kolonie xxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, xx nedošlo x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx kolonie X. solanacearum.

Test xxxxxxxx xx selektivní xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx izolovány xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx testy

Použije se xxxxxxxxxx médium pro xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (viz dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx populací R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxx citlivosti xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx inhibitorů XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. solanacearum xxxx xxxx xxx neúspěšné x důvodů konkurence xxxx antagonismu saprofytických xxxxxxxxx, xxxxx bývají xxxxx současně xxxx xxxxxxxxx. Z xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x obohacené xxxxxxx xxxxxxx. Kromě xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxxx, xx xxx test XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X obohacovacího testu XXX xx přenese 100 ul extraktu xx xxxxxx do 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx baněk. U xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx být použit xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx živné xxxx).

2. Xxxxxxxx se 72 xxxxx při xxxxxxx 27 xx 30 °X x xxxxxxx xxxx statické xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx ELISA nebo XXX xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. S xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx se xxxxxx xx výše uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x důvodu xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ze vzorků xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx jinými xxxxxxx xxxxxxxxx koncentrace.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx XX jako hlavní x xxxxxxxx IF xxxxx je pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test x je xxxxxxxxx, xx xxxxx provést xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx každou xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x optimální reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk/ml homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x použitím vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Validovaná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ředěních xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx měl xxx proveden xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 až - 86 °X x xxxxxxxxx. Glycerol xxxx být xx xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 ml xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 g x resuspenzí xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx potřeba, xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx plamenem.

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x homologickým xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem R. xxxxxxxxxxxx suspendovaným v xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx uvedeno x dodatku 3 X, a xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx podložním sklíčku.

Jako xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx xxx tento xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x 10 xxxxxx x průměrem xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx pelety x xxxxxxxxx nízkým množstvím xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - u většího xxxxxx je xxxxxxxx xxxxx x příslušném xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx v ředění 1/100 xx prvního xxxxxx.

Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx okének x xxxx. Druhá xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx obr. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx větší x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx řada xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím xx teplotu 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx na xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), plamenem, 95 % xxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx je potřeba, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx skladovat xx xxxxxxxxx stavu x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx krátkou xxxx (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx dalším testováním.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. První xxxxx xx měla xxx 1/2 xxxxx (X/2), ostatní 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) x dvojnásobek xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (PŘ) xxxxxxxxxx x xxxxx XX. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.i)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx test podle xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx papír. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx kompletně xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

2. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx papíře xxxxxxxx xx dobu 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx se xxxxx ze všech xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx v xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x následně x xxxxx IF. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo přenosu xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Pečlivě xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Sklíčka xx xxxxxxxx zakrytá na xxxxxx papíru xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové teplotě (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx se odstraní xxxxxxxxxx vlhkost.

7. Napipetuje xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx komerční krycí xxxxxxxx do každého xxxxxx a přiloží xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx se testovací xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x filtry vhodnými xxx xxxxxxxx FITC xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x až 1&xxxx;000x. Zkoumají se xxxxxx ve dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X vzorků x xxxxxxx nebo malým xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky musí xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx obarvené x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx xxx test IF xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx kontrolním kmenem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx zbarvením nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx bramboru x částí stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace fluoreskujících xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx se x úvahu xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxxx xx odhadne xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx IF xx xxxxxxxxx x vzorků, xxx je počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Vzorek xx považován za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx IF xxxxx je xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

6.1.6. Testy XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx XXX xxxx hlavní screeningový xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx proveden xxxxx screeningový test, x xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx této xxxxxx x celém xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se doporučuje xxx tehdy, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto metodou xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. solanacearum xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako negativní. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x přesnosti ve xxxxx xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxxx optimalizační xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x protokoly XXX (xxx dodatek 6). Pokud xxxxx, zvolí xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x zabránění xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx kontrolami (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx xx xxxx vždy xxxxxxxx jako s xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX test xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx X. solanacearum x xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx pufru používaného xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX ze xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, do xxxxxxx byla xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx XXX použít xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx se zabránilo xxxxxxxx kontaminaci, připravují xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx xxxx xxx pokud xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx použití PCR xxxxx je potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx brambor.

Standardizované materiály x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrole, xxxxx xxx xxxxxx pro xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx v dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx popsané xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

K xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX a xxxxxx enzymových reakcí x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX ve vzorku. Xxxxxxxxxxx metoda byla xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Xxxxxx podle Xxxxxxx (2000)

1. Napipetuje xx 220 µl xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX NaCI, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 mM XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx ze xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Mikrozkumavka xx xxxxx na 5 xxx. do xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx zásobního roztoku xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 mM TrisHCl, xX 8,0) a xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx se 220 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxx třepáním x inkubuje se xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Easy XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx třepáním, pokud xxxxxx nezačne být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µl xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx stane homogenní.

8. Xxx xxxxxxxx fází x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx odstřeďuje xxx 15 000 g xx dobu 20 xxx. při xxxxxxx 4 °C.

9. Xxxxx xxxx xx převede xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Přidá se 1 ml 100 % xxxxxxx (- 20 °C), xxxxxx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx se na xxxx xx xxxx 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15 000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x odstraní xx xxxxxx x xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x promíchá xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 g xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4 °X, zachová se xxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx uschnout xx xxxxxxx nebo v XXX odparce.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx v 100 µx sterilní XX a xxxxx xx stát xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xx použití xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx odstředěním. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xx použije xxx test PCR.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx DNeasy Plant Xxx, by xx xxxxx použít, xxxxx xx se xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.1.6.2. PCR

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Připraví xx desetinásobné xxxxxx xxxxxx extraktu XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx použít xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR, xxxxx xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx přidá 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (viz dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx reakční xxxx PCR x xxxxx se týž xxxxx XX jako xxx ten, xxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx XXX místo xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx umístí do xxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx testování, a xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx program PCR (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

1. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX z xxxxxxx xxxxxx s 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx vhodný XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx zacházení x xxxxx mutagenem.

3. V xxxxxxxxx a XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx XXX o xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx optimální teplotě x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx xx xxxxxxxx ethidiumbromidem x porovnává se x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx očekávané velikosti xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx zjištěn, xxx xx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx vzorkem).

Test XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx zjištěn xxxxxxxx XXX specifický pro X. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx x (xxxxxxxx) xxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx amplifikován x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Spolehlivé xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxx také xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Poznámka:

Lze mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x interními xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx inhibici xxxxxx, xxxxxxxx není xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx očekávaný amplikon xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx negativních xxxxxxx, xx podezření na xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Test FISH

Princip

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX test. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx jako druhý xxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, je x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx postupového diagramu.

Poznámka:

Používají xx schválené xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx R xxxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx měl xxx pokud xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extrakty, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx provést x xxxxxxxxx, který byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě - 16 xx - 24 °X nebo - 68 až - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx na 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 3) x 0,01X fosfátovém xxxxx (XX) ze 3-5 denní xxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, suspendovaného x xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx přítomné xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx x tomto xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede stejným xxxxxxxx jako u xxxxxx(x).

6.1.7.1. Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol vychází x Wullingse xx xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x odstřeďuje se xx dobu 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx ve 200 µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx xxx 7 000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx vzorky xx xxxxx sklíčko, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx být uložen xxx xxxxxxx - 20 °X po xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxx xx etanol xxxxxxxxxxx x přidá xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxx xx protřepáním).

Obrázek 7.1 Xxxxxxxxxx na sklíčku XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37 °X) a xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx a x xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

6.1.7.2. Hybridizace

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % a 96 %, xxxxxxx xx dobu 1 xxxxxx. Osuší xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxxx xxx vzduchotěsného xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Před xxxxxxxx xx xxxxxx xxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxx teplotě 45 °X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µx hybridizačního xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) xx xxxxxx sklíčku, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 a 8) xx nechají xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 mm) xx xxxxx a xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx xxx, xxx xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xx proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxx 5 xxxxx v xxxxxx při teplotě 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 x xxxx x molekulární kvalitou (Xxxxx Q), 1 x 1x hybmix (334 ml 3x xxxxxx a 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx a 958 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x kádince x 1 x xxxxxxxx při xxxxxxx 45°X.

8. Držák sklíček xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx x xxxxx xx inkubovat dalších 15 xxxxx.

9. Sklíčka xx krátce xxxxxx xx XXX (xxxx. Xxxxx X water) x xxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Odstraní xx nadbytečná xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, XX, USA xxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxx xx zakryje xxxxxx krycím sklíčkem (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Hodnocení XXXX xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx prohlížejí pod xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx olejovou imerzí. X filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně většiny xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Cy3 jeví xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x morfologií pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků. Buňky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Test XXXX (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx dvěma průměry x xxxxxxx xxxxxx x kolem xxxxxx. X vzorků, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx buněk, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. solanacearum x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Při xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxx. To xxxx xxxxxx v xxxxxxx, xxx všechna sklíčka xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx buňky x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx krytu xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx FISH x sebou nese xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx u xxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxx x pelet xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dojde x xxxxxxx populací xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx křížové xxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnými X. xxxxxxxxxxxx, i xxxx xxxxxx méně častěji xxx u xxxxx XX.

5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Interpretace xxxxxxxx xxxxx FISH

i) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, pokud jsou xxx xxxxxxx FITC xxxxxx jasně zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, odhadne xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx typickou xxx X. solanacearum, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx ELISA Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx jako xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxx. Xxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx testu XXXXX xxxx zvýšit xxxxxxxxx xxxxx, xxx může xx rovněž xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx jiných xxxxxxxxx xx vzorku.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxx protilátek X. solanacearum. Doporučuje xx xxxxxx titru xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx ředění, při xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx suspense obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx vhodných druhotných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxxxx by xxxx xxx použity xxxxxxxxxx x pracovním xxxxxx, xxxxx xx blízké xxxx stejné xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx titr xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx negativní x xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx alikvótní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx negativní, x příměsí 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 xx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4I56 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 2 A a X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Pozitivní kontrolní xxxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx k xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx provede týmž xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx xx xx., 1995)

1) Xxxxxxx se 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx na 100 °X xx 4 xxxxxx xx xxxxx lázni xxxx xxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx nespecifických xxxxxxxx).

2) Přidá xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx krycího xxxxx (dodatek 4) x xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx mikrotitrační destičky (xxxx. Nunc-Polysorp xxxx xxxxxxxxxx) a nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při teplotě 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °X.

4) Extrakty xx vylijí x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx vymyji pomocí XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxx nejméně 5 xxxxx.

5) Připraví xx xxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x blokačním xxxxx (dodatek 4). X validovaných xxxxxxxxxx protilátek se xxxxxxx doporučená ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx je xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x nechá xx inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x jamek a xxxxx se vymyjí xxxx xxxxxxx (bod 4.).

8) Připraví xx xxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy v xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Konjugát xx xxxxxx z jamek x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx v xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x odečítá xx xxxxxxxxxx při 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90minutových intervalech.

b) XXX-XXXXX

1) Připraví xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx pH 9.6 (dodatek 4). Přidá xx 200 µl do xxxxx jamky. Xxxxx xx inkubovat xxx xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° C xx xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx xx vzorku xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Přidají se xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xx xxxx jamek xx každé xxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx se třikrát xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx albuminu (XXX), xxxxx xx 190 µl xx xxxxx jamky x xxxxx xxxx 2 xxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

5) Xxxxx xx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Xxxxx xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx do xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx při 405 xx xx xxxxxxx x pravidelných intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (OH) x xxxxx se stejnými xxxxxx xx menší xxx dvojnásobek XX x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH xxxxxxx z negativních xxxxxxxxxx extraktů.

Test XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx OH x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx dvojnásobek XX v xxxxxxxxxx xxxxxxxx testovaného vzorku, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích.

Negativní xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx test nebyl xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx inhibován. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nespecifickému xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přípravu xxx x dodatku 3).

Nejvyšší xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx úspěšně použít xx xxxxxxxx, které xxxx uchovány x xxxxxxxxx v xxxxxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Použije xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx odrůdy xxxxxxx (např. kultivaru Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx citlivostí xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx fázi xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx viz x dodatku 8. Nebo xx xxxxxxx lilek (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), ale xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. až 3. xxxxx xx xx plného xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxxxxxxx u xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x vyvíjejí xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx děložními xxxxx pomocí stříkačky x podkožní jehlou (xx méně xxx 23X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx se kápne xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx pelety na xxxxxx mezi děložními xxxxx x prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx příčný řez xxx 1 cm xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 tloušťky xxxxxx, xxxxxxx řez xx začne x xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxx xx utěsní xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Stejnou xxxxxxxxx se nainokulujte 5 xxxxxxx vodní xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního kmene xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx pufrem (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx rostlin, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x karanténním xxxxxxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °X a xxxxxx relativní vlhkosti x přiměřeným xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x důvodu xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx být xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx oddělených xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx nebo jinak xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx rostliny x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx drženy xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx zástěnami. Xxx hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x všech xxxxxxxxx činnostech xx xxxxxx zvláštní xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx udržovat xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxx xxx hmyzích xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx vadnutí, xxxxxxxxx, xxxxxxx anebo xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. Z infikovaných xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (odst. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, provede se xxxx IF/PCR/izolace xx xxxxxxxx vzorku xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx roztěry (bod 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx čisté xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx typické xxxxxxxx, xxxxxxxx mohou xxx x těchto xxxxxxx xxxxx izolovány x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxxxx příznaky.

Biotest xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testovacích rostlin.

Biotest xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx bakteriemi X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrnou xx případně xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxx se následující xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxxx xxxx xxxxxx přítomny xxxx xxxxxx chybí x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx al. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Očekávaný xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu -

Xxxxxxx XXX +

Oxidačně xxxxxxxxxxx xxxx O+/F-

Katalázová xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Xxxx při 40 °X -

Xxxx x 1% NaCl +

Xxxx x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Ztekucení xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx a xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Test XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x pufru XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Připraví xx xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Použije xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx IF xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx IF kultury xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx xx 1 xx v 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Provede xx xxxx XXXXX xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Test XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxx jeho výsledku xxxxxxx z xxxx xxxxxxx xx nejméně xxxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxx vody (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zkumavkách x xxxxxxxxx bloku nebo xxxxxx xxxxx lázni xxx 100 °X 4 minuty. Xxxxxx xxxxx být uchovány xxx xxxxxxx - 16 až - 24 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Použijí xx příslušné xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifických xxx X. solanacearum (xxxx. Xxxx et xx. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx et xx. (1999); Xxxxx et xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx stejnou xxxxxxxx x xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

6.2.5. Test XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x UM.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (6.1.7) x xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx specifickými xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Test XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx stejných xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx mastných xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^oC.

6.2.6.2. Použijte xx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx pozitivní, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx stejný xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx charakteristických mastných xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2OH, 16:1 2XX a 18:1 2XX a xxxxxxx 16:0 3XX poukazuje xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx zahrnou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Stanovení xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx lišící se xxxxxxxxxx využití a/nebo xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx provést xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x čistou xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx sterilní xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek xxxxx.

Xxxxxxxxx testy xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Viz Xxxxxxxx x Stead (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx patří:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, BOX a XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Xxxxx xx al., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx al., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx et xx, 2002; viz dodatek 6) lze použít x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2X) R. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16S rDNA (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Konfirmační xxxx (xxxx patogenity)

Jako závěrečné xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx virulence kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly X. solanacearum (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx se 5 až 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxx xxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (viz xxxx. 6.1.9).

3) Sazenice xx xxxxxxx inkubovat xx 2 týdny při xxxxxxx 25-28 °X x vysoké relativní xxxxxxx vlhkosti s xxxxxxxxxx zaléváním, bez xxxxxxxxx zamokření nebo xxxxxxxxxxx xxxx. X xxxxxxx kultur xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Neobjeví-li se xx této době xxxxxxxx, kultura xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx forma X. xxxxxxxxxxxx.

4) Hledají xx xxxxxxxx vadnutí x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Provede xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 xx xxx místem inokulace. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Izolace xx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx možno xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Xx xxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx při xxxxxxx 28 °C se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Živné půdy xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (NA)

Živný xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Glukóza (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

K₂HPO₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °X x přidá xx xxxxxxx sterilizovaný xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Sigma), xx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Validované xxxxxxxxxx xxxxx půdy

Živná xxxx SMSA (Xxxxxxxxxxx 1994 xx znění Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx živná xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °C x xxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx vodný xxxxxx xxxxxxxxxxxxx složek, aby xx získala xxxxxxxxx xxxxxxx koncentrace:

Krystalová xxxxxx (Xxxxx) 5 mg/l

Polymixin-B-suIfát (Xxxxx P1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx B-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032) 825 X (přibližně 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 50 mg/l

Poznámky:

1. Xxxxxxx xxxxxx než výše xxxxxxxxx reagenci může xxxxxxxx růst X. xxxxxxxxxxxx.

2. Místo Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx být xxxxxx Oxoid Xxxx #1. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx xxxx xxxxxx růst xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Typické xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx xxxxxx x 1-2 dny xxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx při xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Zvýšení xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na 2&xxxx;500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx ovlivnění růstu

Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X v xxxxx x musí xx xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Misky s xxxxxx xx měly xxx před xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kondenzace. Xxxxx zabránit xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx šarže xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxx (viz xxxxxxx 3) a xxxxxxxxxxx, zda se xx 2 až 5 xxxxx při xxxxxxx 28 °C xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, xxx xxxxxxx xx Bacto-Agar x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx živná xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx xx xx 50 °C. Přidá xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx půdu SMSA.

Dodatek 3

X. Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx bud' x xxxxxxxxx kontrole (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx optimalizace xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Všechny xxxxx xxxx xxxxxxxx dostupné x xxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií rostlin (XXXXX), Xxxxxxxx vědecká xxxxxxxxx York, XX.

2. Xxxxxx kultur xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxx (XXXX), ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx izolovaných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx může být xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x původních xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx SMT xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx k xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx testů

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx k negativní xxxxxxxx xxxxx testů.

Mražené xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX xxxxx. Protože xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx vhodné xxxx xxxxxxxxx v testech xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx formaldehydu xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx k xxxxxxxxx kontrole sérologických xxxxx.

X. Xxxxxxxx pozitivních x negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxx xxxxxx PCR/IF x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx kultura xxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum xxxx 3/biovaru 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx se v 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Obvykle xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx suspenzí xxxxxxxxx xx xxxxxxx hustotě 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx se dřeň x xxxxxxxxx konců 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx se ví, xx xx prosta X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx X. solanacearum xx první xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se. Xxxxxxx xx desetinásobné xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx šest xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxx označeny.

Připraví xx xxxxxxxxx části x 100 X1 xx xxxxxxxxxx zkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 kopií xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 až - 24 °C xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství X. solanacearum x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x pozitivních a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x XXXX testy xx provede xxxx xxxxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX xxxx xxx R. solanacearum xxxxxxxx v nejméně x 10⁶ x 10⁴ buněk/ml pozitivních xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze xxxxxxxxx po xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Tento pufr xx xxxxxxx k xxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou být xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx bramborových xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C po xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx pro XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx používá x xxxxxxxxxxx podložních xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx roztok na xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Laboratories) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx xxxxx nepřímého xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx obsahuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx možné xxxx antioxidant xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Desetinásobný roztok xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (10 x XXX), pH 7,4

XxXX 80,0 g

KH₂PO₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Blokační xxxx (xxxx být čerstvě xxxxxxxxx).

10 x PBS 10,0 ml

Polyvinylpyrrolidon-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx doplnit xx 100 ml

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 ml

Rozpustí xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx xx upraví xX xx 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidá xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx xxx 5 xx tabletky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 ml xxxxxxx.

4. Xxxxx pro xxxxx testu XXXX XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 g

NaH XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx a zkontroluje xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx pufr (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12H₂O 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 ml

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x xxxxxxx xx hodnota pH 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Vypočítá se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx pozorovacím xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = c x X/x,

xxx S = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx sklíčku s xxxx okénky x

x - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = xxxxxxxxxx xxxx (v rozmezí 8 - 24 xxxxx typu okuláru),

K = tubusový xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N =X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx okénku x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištěni xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx se skupinou xxxxxxxxx xxxxx bakterií (xxx dodatek 3).

1. Xxxxxxxx XXX Seal xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Y-2: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX AGG XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA R. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Reakční xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx následující cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 minuty xxx 96 °X (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

35 cyklů: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 sekund xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 minut xxx 72 °X (xxxxxxxxx syntéza)

vi) ponechá xx xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru Xxxxxx Xxxxx 9600. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu ii), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx II po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx x -3'

Reverzní xxxxxx Ps-2: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum DNA = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx směs PCR

Reagencie	Množství x reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μl
10x xxxx XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 mM MgCl2)
BSA (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Ps-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Taq polymerasa (5X/μx) (1)	0,1 μl	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μl
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) a Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler MJ Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx a xxxx xxxxx xxx xxxxxx použity xx xxxxxxxx koncentracích.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx i) 5 xxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: ii) 30 xxxxxx při 95 °C (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund při 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx bude xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) a xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx X po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx mají xxxxxxxx 457 bp a 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx kontrolou (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer RS-1-F: 5'-XXX XXX XXX XXX GAG XXX XXX TA-3'

Reverzní xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX GGC XXX XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx XX-5-X: 5'-XXX XXX XXX GAA TTG XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX ACC TGT XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 bp (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxx kontroly PCR 18X xXXX = 310 bp (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx podmínky PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: i) 5 minut při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 30 sekund xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) nechá xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx vyžadovat úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. solanacearum xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx 1 xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Mva 1269 X) po inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Rs-1-F: 5'-ACT XXX GAA XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX AGT XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-3-R: 5'-XXX ACG XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX R. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 bp

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

b) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx následující cyklický xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 sekund xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx xxx 72 °X (konečná xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx XXX X. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx době 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x Xx-3-X nemají žádná xxxxxxxxxx místa.

5. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) voda (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx se zředí xx 1 X.

Také xxxxxxxx dostupné (xxxx. xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-xxx xxx xxx caa xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'-xxx xxx tcc xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX JE XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx se 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1X NaOH x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (XX; xX 7,0) a 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxxx xx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxx a x případě xxxxxxx xx xxxxxx pomocí XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X PARAFORMALEDHYDEM XXXXXXXXXX XXXXX PH!]

iii) Přefiltruje xx roztok xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx použití.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 mM

Zředí xx xx x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx XXX 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 xxxx OLI2 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 1. Xxx xxxxx sklíčko (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µl hybridizačního xxxxxxx. UPOZORNĚNÍ: XXXXXXXX XX XXXXX JEDOVATÝ, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X UČINIT XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsi

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x temnu při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx zářením nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x sterilizuje autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x rajčete

Vysejí xx xxxxxx rajčete (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) nebo xxxxx (Solanum melongena) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 až 14 xxx) xx xxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku x rajčete xx xx měly xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka dne: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °C.

Vhodná xxxxxx lilku vejcoplodého: "Xxxxx Beauty"

Vhodná xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

LITERATURA

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/EC of 20 Xxxx 1998 xx the control xx Ralstonla xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Xxxx, X. Josi, P. Xxxxxxx and X. Xxxxx. 1999. Design xx xxxxxxxx specific xxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal of Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, P., Gorris, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, J.L., Collar, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Assay Xxxx Uses x Xxxxxxxx Monoclonal Antibody xxx sensitive Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, E. and Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: detection xx restriction fragment xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx tkat xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Interactions 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxxxxx, X., Wilson, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Sensitivity xx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x semi-selective xxxxxx xxx the isolation xxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Hayward (ed.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8. Hayward, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., Xx-Xxxxxxx, H.M., Xxxxxxxx, U. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx metabolism xx xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, X. Xxxxxx-xxxxx, S. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of xxxxxx cells of Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxx xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx and x PCR xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X detection method xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx potato xxxxxx and some xxxx on xxx xxxxxxxxxxx and specificity. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Bulletin 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole cell xxxxx-xxxx analysis. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx appearance xx a tetrazolium xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Klement X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 pp.

15. Xxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1987. Methods xxx xxx diagnosis xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx plants. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Ltd., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, M., 1997. Selective xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx isolation, xxxxxxxxxxx xxx molecular xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. In: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, X.X. and Xx Xxxxxx, F.J., 1994. Xxxxxxxx genomic xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxx xxx xxxxxxx generated xxxx xxxxxxxxxx sequences xxx PCR. Applied xxx Environmental Microbiology, 60, 2286-2295.

18. Louws, X.X., Xxxxxxxxx, X. X., Stephens, X.X. xxx De Xxxxxx, X.X. 1995. Differentiation xx xxxxxxx structure xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx campestris pv. xxxxxxxxxxx. Phytopathology 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Li, R. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, X.X. Hayward, V. Xxxxxxxxxxxxx, W.F. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx for xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx strain-specific XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx solanacearum (fornierly Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). As Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, K.H. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. solanacearum xx xxxxxx tubers xx xxxxxxxxxx cham reaction. X. Phytopathology 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, R. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx of 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, P., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Forde, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx wilt. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx plant pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 pp.

24. Seal, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xx xxxx, Pseudomonas xxxxxxxxx xxx Blood Xxxxxxx Xxxxxxxxx by xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx of oligonucleotide xxxxxxx for xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction. J. Xxx. Microbiol. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. and Saddler, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (synonym Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Kenya. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Grouping xx plant pathogenic xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, A.C., Sly, XX, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx solanacearum, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx the xxxxx xxxxxxx bacterium xx xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Der Xxxx, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Nijhuis, X., Xxx Beckhoven, J.R.C., Xxxxxxx, G.S., Trigalet, X., Feuillade, X. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum Xxxx 3 in Xxxxxxx Xxxxxx as xxxxxxxxxx xx AFLP, XX-XXXX and rep-PCR. Xx: Xxxxx, P., Xxxxx, X. and Xxxxxxxxxxx, J. (eds.) Xxxxxxxxx wilt xxxxxxx: Xxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Springer (Berlin) xx. 44-49.

29. Weller, X.X., Elphinstone, J.G., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Detection xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using an xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Wullings, X.X., A.R. xxx Xxxxxxxxx, J.D. Xxxxx xxx A.D.L. Akkennans. 1998. Xxxxxxxxx of X. xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx xxx xx potato, xx xxxxxxxxxxx xx sihl xxxxxxxxxxxxx with 23s xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64: 4546-4554.