Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 xxxx. 2 zákona č. 326/2004 Xx., o xxxxxxxxxxxxxxxx péči x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zákonů, (xxxx xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Předmět xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx předpisy Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx republiky xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx al. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Davis et xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru, x Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, aby se

a) xxxxxxxxx výskytu x xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx jejich xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx účely xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis (Xxxxx) Xxxxx et xx. sepedonicus (Spieckermann xx Kotthoff) Davis xx xx.,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx kroužkovitosti - brambor (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x nichž xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx podmínkách,

2. xxxxxxx hnědé hniloby - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx L.) s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx xxxxx x plodů, xxxxx potměchuť (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Solanaceae), x nichž xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x přirozených podmínkách,

d) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx zaměřený na xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x určení xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, k určení xxxxxxx šíření infekce x x xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxx se vztahují xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx prostředku, skladu xxxx jejich části x xxxxxxxxx jiných xxxxxxxxxx včetně obalového xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx rozšířením xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby - xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx, v xxxxxxx anebo v xxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx §11 odst. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx zónou - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx které xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - partie xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, která xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx xx za:

1. xxxxxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx vegetativním xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx stejné xxxxxx osiva,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxxxxxx klonově xxxxxxxxx partiím, xxxxx x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx každoročně x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx podle xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Detekčnímu xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bramboru²⁾ xxxxxxx x České xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 xxxx. 2,

b) xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx xx členských xxxxx Evropské xxxx (xxxx jen "členský xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx nesadbových brambor xxxxxxx x České xxxxxxxxx a z xxxxxxxxx členských xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx vymezené podle §5 odst. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx výskyt xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé hniloby xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx označené xxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxx x karanténním xxxxx vymezeném podle §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx rostlinolékařské xxxxxxxx xxxxxxx dovážených xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) všechny xxxxxx bramboru xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx pěstování,

b) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin a xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxxxxxx zpracovávají xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Vymezovacímu xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v případě xxxxxxxxx z výskytu xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx vodní zdroje xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx pěstební xxxxxxxx x xxxxxxx produkce, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v případech xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 písm. x) x x), xxxxxxxx 3 a x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x porostů xxxx ze xxxxxxx, x případě xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x řezu dužninou xxxx, x porostech xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx v odstavci 2 písm. x) x x),

x) prohlídkou xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx dobu x xxxxxxxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin x xxxxxxxx napadení původcem xxxxx hniloby v xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 5 písm. x),

x) laboratorním testováním xxxxxx vody, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx vegetace v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x) x x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx, původ, složení x dobu odběru xxxxxx při xxxxxxxx, xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 xx 7, xxxxxx xxxxxx průzkumu x xxxxxx předávání xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x testovaných xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx Xxxxx xx základě xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x přihlédnutím k xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxxxxx na aktuální xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx xxx "Věstník"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xxxx stanoveným Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx Věstníku.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 lze xxxxxx xxxxxx vzorky xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx osobou, pověřenou x této xxxxxxxx Xxxxxxx, pokud bude xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xx vzorky xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx způsobem stanoveným xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx průzkumu prováděného xxxxx odstavců 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Ústav xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx fyzické osobě, xxxxx xxxxxxx příslušnou xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxx xxxx ji xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(11) Podrobnosti x xxxxxxxxx průzkumu xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 předkládá Xxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx x rozsahu xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx za xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx nepřítomnosti xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxx provedených xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Komisi, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx množitele, xx 1. září, x xxxxxxxxx případech xx 1. xxxxxx. Xxxxx oznámení x xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xx xxxxxxxx vždy x xxxxxxxx předchozího xxxx. Podrobnosti xxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx se v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx

x) Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxxx přílohy č. 1 oddílu X xxxxx 1 x xxxxxx II, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedeného Xxxxxxx nebo xxx xxxxx dohledem způsobem xxxxxxxxxx v příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby Xxxxx x rámci odborného xxxxxxx podle §76 xxxx. 7 zákona x xxxxxxxxxx právního xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx, x to xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 a xxx xxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx.

(3) Xxxxx zahájí xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx odborné xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 zákona xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x x souladu x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, ze xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx, x

x) nařídí xxxxxx opatření xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx dalšího xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx s cílem xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úředního xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx ostatních xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx spojených x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxxxx i xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx nebezpečí zamoření xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, x případě xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxxxxxxxxxx vod původem x jiného členského xxxxx xxxx v xxxxxxxx xxxxx členském xxxxx, xxxxx Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx týkající xx tohoto xxxxxxxxx x xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Pokud xxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx Ústav xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 a 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx původce hnědé xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Xxxxx x xxxxxxx x §76 xxxx. 2 zákona a x přihlédnutím x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xx xxxxxxx pěstování, uvádění xx xxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) označí za xxxxxxxx rostliny, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx nebo xxxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx objekty xxxxxx obalového xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx odebrán, x xxxxx přišly xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxx místa xxxxxxxx xxxxxx těch, xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx, na xxxxx xxxx zamořené xxxxxxxx vypěstovány x xxxxx xxx vzorek xxxxxxx,

x) xxxxxxx odborné xxxxxxx zaměřené xx xxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x prvotního xxxxxx xxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxxxxxxx předsklizňového nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xx xxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx pěstitelské vazby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx písmene a),

c) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx podle xxxxxxx x) a xxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxx x) x xxxxxxx xxxxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx hniloby x ohledem na xxxxxxxxxx xxxx, odpadní xxxx ze zařízení xx zpracování x xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxx lilkovitých x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx by xxx xxxxxxxxxxx, zalévání nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxx

x) xxxxxxx úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx vod x xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 ve vhodných xxxxxxxxx x cílem xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x souladu x pozitivními xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx a) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx byly odebírány xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx písmene x) a bezpečnostní xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. x), popřípadě xxxxxxxx 2 xxxx. x), x sdělí xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx karanténního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x tomto xxxxxxxx xxxx důvěrné.

(4) Pokud xxxx členský xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx hniloby x xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx učiněném xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x v xxxxxxx x ustanovením xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx x xxxxxxx, stanoví xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, popřípadě xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx odborného šetření xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. b) x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. c), xxxxxxxx 2 xxxx. c) x xxxxxxxx 4.

§6

Testování xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

(1) Xxxxx xxxxxxx laboratorní xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 všech xxxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx označeny xx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 písm. x), x xxxxxx xxxxxxx však xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾, x xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx zdroje xxxxxx x rozsahu xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx šíření původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxxx 1 Xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx další xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx, rozšíří xxxxxx xxxxxxx zamoření x xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) a x).

§7

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx nařídí xxxx mimořádná rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 zákona:

a) xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxx za zamořenou xxxxx §5 odst. 1 písm. x) xxxxx xxx sázena x xxx xxxxxxxx Xxxxxx xx s xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx neexistuje xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xx xxxx splněny xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, stanovené x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. b) xxx xxx použita pod xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, xxxxx Ústav xxxxxx ověří, že xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin podle §6 označena xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) zařízení, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx jejich části x xxxxxxx xxxx xxxxxxx včetně obalového xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx xxxxxxxx xxxx pravděpodobně zamořené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. b), xx buď zničí xxxx podrobí xxxxxx x dezinfekci pomocí xxxxxxxx metod xxxxxxxxx x příloze č. 6 s xxx, xx po xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx ani xx pravděpodobně zamořené xxxxxxxxxx,

x) v xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, vymezených xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 2 písm. c), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x bodě 4 přílohy č. 4 x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x bodě 5 přílohy č. 4.

(2) Ústav xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxx xxxxxxxx uvedená x xxxxxxxx 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx odborně odůvodněná, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a o xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 písm. x) uvnitř karanténního xxxxx x x xxxxxxxxxxxx zóně sděluje Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx dotčených xxxxxxxxx xxxx, registrovaných xxxxx §12 odst. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxx xxxxx §76 odst. 4 písm. x) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Přechovávání xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby xx x xxxxxxx x §7 xxxx. 1 xxxxxx zakázáno x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x vědeckým, xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx účelům, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 zákona, xxxxx xxx nebudou xxxxxxxx xxxxxxxx opatření xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx jejich xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx

(1) Rozmnožovací materiál²⁾ xxxxxxxx, vypěstovaný xx xxxxx Xxxxx republiky x uváděný na xxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 odst. 2, x rozsahu podle xxxxxxxx 2 a x souladu s §3 odst. 8 x 9, a xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x příslušném xxxxxxxxxx roce podrobí

a) xxxxxxxx šlechtitelského rozmnožovacího xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru určené x xxxxxx xxxxxxxxxx x reprezentativní vzorky xxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx v posledním xxxxxxxxx sklizňovém xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky xxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x České xxxxxxxxx potvrzen výskyt xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx potvrzené xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx tuto xxxxxxxxxx, xxxx

2. reprezentativní vzorky xxxxx partií xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího materiálu xxxxxxxx⁴⁾ x případech, x xxxxx prokazatelně xxxxxxxxxx žádná klonová xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ nebo reprezentativní xxxxxx všech partií xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x následujícím xxxx, xxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx potvrzen x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Účinnost

Tato xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx xxxxxx, validovaná xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx testovaných x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx xxxxxxx x dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx protokolů, je x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění karanténního xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vydaných Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx a reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx metod.

Zcela nezbytná xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x kalibraci xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, jak xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených na xxxxxx, jak je xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX nebo XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx být xxxxxxxx xxxxx screeningový test. Xxxxx xx i xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx pokračovat v xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx považován xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti.

Z xxxx důvodu xx xxxxxxxxx IF xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 definován jako xxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxxxxx izolaci x identifikaci čisté xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxxxxx x x rostlinách xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xxx xxxxx x rostliny xxxxxxxx x podezřením x xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx diagnostickém xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x oddíle 2.

(2) Xxxxxx xxxxx jsou:

- XX xxxx (oddíl 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx izolace xxxxxxxx x rostlinného xxxxxxxxx x typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x pokročilých xxxxxxxx infekce xx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx rostou xx xxxxxxxxxxx pletivu, xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx i xxxxxxxxxx xxxxx, nejlépe MTNA (xxxxx 8) nebo xxxxxxx (oddíl 7).

(4) Xxxxx typické xxxxxxxxxx xxxxxxx xx v xxxxxx 8.

(5) Pokud xx izolační xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx příznaky xxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx každý xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx patogena, x xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx byl xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx a izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx x každé sérii xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx lze xxxxxx x na xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx negativní, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx pro ověření xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx jeden xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx je druhý xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx imunofluorescence (XX).

Xxx xxxxxxxxx IF xx xxxx použije xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) PCR xxxx.

Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) FISH xxxx.

Xxxxxxx xx validovaná xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx oddíl 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx může xxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx metoda xxx xxxxxx izolaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX xxxxx xxxx XXX-88 média x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx 3-10 dní xx xxxxxxxxx na xxxxxx. Xxxxxxx patogena lze xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxxx potenciálu test xxxxxxxx xxxxxxxx přípravu xxxxxxx x pupkové xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx přerůst. Xxxxx xx kultivační xxxxxx xxxxx nepodaří, musí xxx xxxxxxx provedena x xxxxxxx použitých xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktů xxxxxx xxxxxxxxxxxx obohacení x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx XXXX nebo XXX-88 xxxxx pravděpodobně xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 7).

(9) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou výsledky xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx izolační xxxxx xxxxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx testy xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku x x případě xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vzorcích bezpříznakových xxxxxxx bramboru

(1) Xxxxxxxxxx velikosti vzorků - viz xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx alespoň dva xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx provedení druhého xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Selektivní izolační xxxx x typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx popsán x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx xx xxxxxx v oddílu 5.

(8) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx izolační xxxxx jsou xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, u xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx se jedná x Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x často xxx xx xx konci xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx skryté xxxx se xxxxxx x příznaky xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx poškození. Xxxxx xxxxx být příznaky xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vadnutí xxxx xxxxx odlišné od xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx je obvykle xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Mladé xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx i xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx vznikají xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxx xxxxxx často xxxx chlorotické, žluté xx xxxxxxxx mezižeberní xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx listy x xxxxx xxxxx menší. Xxxxxxxxxxxxx xxxx rostliny xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx bramboru

Nejranějšími xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, zejména xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hlízy může xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je žlutavé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x stav, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx obsahuje xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx hlízách xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx být xxxx xxxxxxxx omezeny na xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx vyskytovat xxx xxxxxx pupkové xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x destrukci xxxxxxxx pletiv: xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx stadiích xxxxxxx xx objevují xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxx okraji. V xxxxxxxx xxxx se x Xxxxxx objevilo xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx kůra xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx dochází x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx vznikem vnitřních xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx houbová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx hnilob xxxxxxxx. Xxxxx jsou x atypické xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx stránce http://forum.europa.eu.int/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx vzorků

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku je 200 hlíz na 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Postup xxxx xxx xxxxxx xxxxxx i xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx k xxxxxxxxx menší množství xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x velikosti 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx extrakt xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx před přípravou xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx oschnout xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx příliš zeminy x xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX xxxx nebo přímá xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx brambory xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx vyříznou xxxxxxx xxxxxxxx vodivého xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xx minimum xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Po xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx do 24 hodin xxxx xxxxxxxxxxxx při -20 °X po dobu xxxxxxx dvou xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx s podezřelými xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx stranou x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx jsou při xxxxxxxxx výkrojku z xxxxxxxxx xxxxx zjištěny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, provede xx xxxxxxxx vyšetření xxxx hlízy xx xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx po xxxx 2 xxx xxx pokojové teplotě x xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 4 - 10 °C až xx ukončení xxxxx xxxxx. Všechny xxxxx xx vzorku se xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx z pupkové xxxxx xx shromáždí x xxxxxxxxxxx nádobách xx jedno xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx znovu používány, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x obsahem xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx to není xxxxx, uchovávají se x nádobě xxx xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx xx dobu xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx saprofytů x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitost.

3.1.3. Xxxxxxxx x pupkového xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) výkrojky xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx xx x xxxxxxx třepačce (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °C xxxx po xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx homogenizují x dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3), xxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx jednorázovém xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx vzorků xx xxxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx učinit xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx extrakce. Xxx každý xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) a xxxxxx. Xxxxx xx být xxxxxx XXX xxxx, xx nutno xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xx jedno použití x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx nadměrně xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx pomalým odstředěním (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx se xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 g po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10 000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, aniž xx se rozvířila xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx se 500 µx pro xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, 500 µl xxx Xxxxxxxxx solanacearurn x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, promíchá xx xxxxxxx a xxxxx při xxxxxxx -16 xx -24°C (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 xx -86°X (měsíce). Xxxxxxxx xx během xxxxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx nedoporučuje.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx do 24 xx 48 hodin.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx předešlo xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x xxx sklíčka xx XX xxxxx a xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxx až 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx provádí podrobné xxxxxxxx, měly xx xxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx zahradnických xxxxx xx odstraní xxxx o xxxxxxxxx 1-2 xx xx xxxxxx xxxxxx každého xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx osuší savým xxxxxxx x xxxxxxxxxxx x uzavřené xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Části xxxxxx xx zpracují jedním x následujících xxxxxxx:

x) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (přibližně 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot/min) xx xxxx 4 xxxxx při xxxxxxx xxxxx než 24 °X nebo xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx rozdrtí v xxxxxx maceračním xxxxx x xxxxxxxxxx množstvím xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx použití gumového xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx zařízení. Xxxxx xx není xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx maximálně 24 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Po usazení, xxxxx má trvat 15 xxxxx, se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Další xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx není nutná, xxx xxx ji xxxxxxxxx xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt se xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Jedna xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x druhá xxxxxxxx xx xxxxxxxx s 10-25 % (v/v) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (týdny) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx), pokud xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xX test xxxx xxxxxx screeningový test, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx schopnost dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x jeho xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx být jako xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx test XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx IF xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test a xxxx výsledek xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx analýzy nutné xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx je xX xxxx xxxxxxxx xxxx hlavní vyšetřovací xxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX testu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - ATCC33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx titr xxx xxxxxx xxxxx xxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx reakci při xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxx xxxxxxx vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx polyklonální xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Během xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxxx používat x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x blízkosti xxxxx xxxx na xxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx internetovou xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx provádí xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxx může být xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 až - 86 °C x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx nutné, xxxxxxx pokud jsou xxxxxxx xx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X) by xx xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx okénky, xxxxxxx x 10 okénky x xxxxxxx xxxxxxx 6 mm.

Test kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

4.1. Xxxxxxx xx test se xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x průměru 6 mm je xxxxxx 15 µl - xxx větší xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx resuspendované bramborové xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx okénka. Následně xx xxxxxxxxxx stejné xxxxxxxx nezředěné pelety (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx jako duplikát xxxx pro druhý xxxxxx podle obrázku 1.

x) Pro jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10 x 1/100) resuspendované xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx o průměru 6 xx je xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx vyšší) xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxxx řadu lze xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx obrázku. 2.

4.2. Xxxxxx se xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60 °X), xxx xxxxxxxx xxxx pomocí 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx sklíčka xxxx dalším použitím xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx IF xxxxx:

x) Podle přípravy xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxx x XX xxxxx. V xxxxx xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), v xxxxxxxxx xxxx 1/4 (T/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (T) x xxxxxxxxxxx xxxx (2T).

b) Xxxxx přípravy sklíčka xx xxxx x xxxxxx 4.1 písm. x):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. a) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky xx xxxxxx okénku xxxx xxx nejméně xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx konkrétní xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx XX. Umyjí xx ponořením xx xxxx 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x pufru XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx mohly xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx, x pečlivě xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx vlhký xxxxx. Testovací xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx dobu 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx setřesou ze xxxxxxx a xxxx xx opláchnou x xxxxx xxxx předtím (4.3.3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Napipetuje xx 5-10 µl 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx sklíčko.

4.4. Vyhodnocení XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x xxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxx xxx zvětšení 500x až 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxx obvodu. X xxxxxx s xxxxxxx xxxx malým počtem xxxxx se xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx obarvené v xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx IF opakován (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx jasně fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx okénkách sklíčka (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita fluorescence xxxx být při xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem ve xxxxxxx ředění protilátky xxxxxx xxxx lepší. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze brát x úvahu.

Při xxxxxxxxx x jakékoli kontaminace xxxx xxx test xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, když xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx povrchu sklíček.

4.4.3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

4.4.4. Xxxxx xx v xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Interpretace xxxxxxxx IF xxxxx:

x) Xxx zjištění xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx buněk x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx buněk na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Výsledek XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx testování.

b) Xxxxxxxx XX testu xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5x10³ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

5. Xxxx FISH

PRINCIP

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x dokončení xxxxxxxx nutné další xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se validované xxxxxxxxxx specifické xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění alespoň 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx měl být xxxxx xxxxx proveden x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx jej xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x glycerolu při xxxxxxx -16 až -24 nebo -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx byl předtím xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 nebo XX 406) v 0,01 M fosfátového xxxxx (XX) x 3-5 denní xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx x 500 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx se a xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx fixačním xxxxxxxx je 96 % xxxxxx. Pro xxxx použití xx xxxxxxxx peleta z xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX a 50 µx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx protřepáním a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje xx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx a resuspenduje xx xxxxxx x 75 µx 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Kápne se 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 okénkové sklíčko, xxx ukazuje xxxxxxx 3, xxxxxxx se xxxxxxx 2 různé xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, a to xxxxxxxx x zředěný 1:100 x použitím 10 µx (v 0,01 X XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49 µx) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx -20 °C xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % etanolu. X xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X XX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X této xxxx xx možnost xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

5.2. Předhybridizace x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx obsahující 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) v 10 xx xxxxx (100 mM Xxxx-XXX, 50 mM XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx pouze xxxxxx xxxxxxx x nechat xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx. Potom xx xxxxxx xxxxxxx xx demineralizované vody, xxxxx jednou, a xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx přidá xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2 mM XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx se xxxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx po xxxx 1 xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx sklíček.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx přeinkubuje v xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 55 °X xx dobu xxxxxxx 10 minut.

5.2.4. Připraví xx hybridizační xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx xx 1 xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx horkou xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x xx xxxxxxx ze 4 xxxxxx xx sklíčku / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 xxxxxxx sklíčky (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx xx předehřáté xxxxx komory x xxxxxxxxxxx se 14 - 18 x x xxxx při xxxxxxx 55 °X x temnu.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 l 1x hybmixu (334 xx 3x xxxxxx x 666 ml XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x hybmix x 833 xx XXX). Xxxxx z xxxx xx přeinkubuje xx xxxxx lázni při xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx a podložní xxxxxxx se xxxxxx xx držáku sklíček.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 minut x xxxxxxx x 1x hybmixem xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Sklíčka se xxxxxx xxxxxx xx XXX x xxxxxx xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx lehkým xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx krycího xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx jamky x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx velkým xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx prohlížejí xxxxx x xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx zvětšením 630x xxxx 1&xxxx;000x pod xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx většiny gramnegativních xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx obarvené Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Test XXXX (oddíl 9.4) xxxx xxx zopakován, xxxxx je zbarvení xxxxxxxx. Prohlíží se xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx x kolem xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxx xxxx xxxxx, se pozoruje xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx lepší než x pozitivního kontrolního xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx x úvahu.

5.3.3. Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx zopakován. Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Xx xx může stát, xxxx xxxxxxx sklíčka xx skupině vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X peletách z xxxxxxx xxxxx bramboru x částí stonku xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s atypickou xxxxxxxxxx a křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnou Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx méně xxxxx xxx x XX xxxxx.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx velikostí x morfologií, viz 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Výsledky XXXX testu xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx FITC xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx negativních kontrolách. Xxxxx xxxx přítomné xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx další xxxxxxxxx. Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx filtru nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového filtru xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx xxx dokončení diagnózy xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx laboratořích xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx. Přednostně xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX xxxx xx xxxx provádět xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (u průběhu xxxxxxxx XXX x XXX) xx xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli došlo x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

- xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx vzorku,

- xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- alikvotní xxxxx resuspendovaných xxxxx, x nimž xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx vodě x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX testu xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x odděleném xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx měly xxx pokud xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx brambor.

6.1 Metody xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxx popsané xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx cílové DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx různé metody xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx optimalizována pro xxxxxxx s validovanou xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Metoda xxxxx Pastrika (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 xX NaCl, 10 mM Tris-HCl [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) do mikrozkumavky x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxx se xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 95 °X na xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Přidá xx 80 µl xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx xx 1 xx x 10 mM Xxxx XXx, xX 8,0) a xxxxxxxx xx při xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 minut.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Invitrogen), xxxxx xx promíchá xxxxxxxx a inkubuje xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 minut.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx DNAR xxxxxx X (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxx xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx se stane xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X xxx xxxxxxxx xxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Přenese xx xxxxx xxxx xx xxxxx mikrozkumavky.

10. Xxxxx xx 1 ml 100 % xxxxxxx (-20 °C), xxxxxx xx promíchá třepáním x xxxxxxxx xx xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x xxxxxx etanol.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °C) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°C, xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx nechá xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v DNA xxxxx vac.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxxx v 100 µx xxxxxxxx xxxx (XXX) a xxxxx stát xxxxxxx 20 minut xxx xxxxxxxx teplotě.

16. Skladuje xx při xxxxxxx -20 °X až xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x pro XXX se xxxxxxx 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1.

b) Jiné xxxxxx

Xxxx metody extrakce XXX by xx xxxxx použít, xxxxx xx se xxxxxxxxx, xx jsou při xxxxxxxxxx DNA z xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx testované vzorky x kontroly pro XXX podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx vzorku DNA (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2. Připraví se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Do xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx směs XXX x přidá xx xxxxxx xxxxxxxx voda XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX namísto xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx stejného xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x provede xx xxxxxx optimalizovaný xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx amplikony XXX elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx amplifikované xxxxxxx xxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx smíchané x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového gelu x Xxxxxxxxxx-XXXX (TAE) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X na xx. Xxxxxxx xx xxxxxx marker DNA, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Detekují se xxxxxxx XXX xxxxxxxx x ethidium xxxxxxx (0,5 mg xx x) xx xxxx 30-45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx zacházení x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. X xxxxxxxxx a XX (krátké vlnové xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX o xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx zdokumentuje.

6.3.4. X všech xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx amplikonu PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x agarózovém xxxx x pozoruje xx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx fragmentu xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx a štěpenou xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx negativní, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěn x xxxxx xxxxxx, xxx xxx zjištěn xx xxxxx pozitivních kontrolních xxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx zjištěn xxxxxxxx typický xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx x vzoru (xxxxx xx xxxxxxxx), za xxxxxxxxxxx, xx nebyl xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx inhibici XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx získán z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x xxxxxxxxx kontroly s Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx vícenásobných protokolech XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR i xxxxxxxx reakce xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx z obou xxxxxxxxx.

Xxx xxx podezření xx kontaminaci, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x jedné xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Test xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx přidaný x xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2).

Nejvyšší xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx však xxx xxxxxxx použít x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obohacující xxxxxx xxx xxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx podle 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx lilku jednou x xxxx uvedených xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Používají xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 xxxxx xx úplného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx využití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx uvedené xxxxxxx xxxxxxx 15-25 lilků xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xx xx vhodný xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx částí x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx x 15 xx délky). Xxx každý testovaný xxxxxx se xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx proužek xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx fixovat xx místě gumovým xxxxxx kolem xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx skalpelu se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x prvním xxxxxx xxxxxx podélný xxxx xxxxx úhlopříčný xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 cm x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx otevřený xxxxxx xxxxxx čepele xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx štětečkem xx xxxx xxxxx xxxx xxxxxx malířským xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx pelety xx xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxxxx rostliny xxxxx.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx aplikovanou xxxxxxxx stříkačkou x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx xxxxxx rostliny xxxxxx dvěma xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx pravý xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Pomocí xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x úhlu xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx a hluboký xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, přičemž x xxxxx xx xxxxx x místě xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Inokulace xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx lilku vejcoplodého xx xxxxxxxxx xxxxx xxx děložními xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Peleta xx rozdělí xxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx stejnou xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 nebo 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx kultury xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx.

7.6. Jako negativní xxxxxxxx se inokuluje 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 M XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx rostliny nechají xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (dodatek 8) po xxxx xx 4 xxxxx xxx teplotě 18-24 °X. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) a xxxxxxxx xx tak, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx vody xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx teplotách xxx 30 °X x optimální xxxxxxx xx 21 °C. Xxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, inkubují se xxxxxxxx xxx pozitivní x negativní kontroly xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx oddělených xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxxxxx oddělení xxxx xxxxxxxxx x nimi. Xxxxx xxxx být xxxxxxxx pro různé xxxxxx xxxxxxxxxx blízko xxxx, oddělí xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, kontrole x xxxx xxxxxxxxxx xx věnuje xxxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, aby xxxxxxx ke xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx byly xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx bakterie x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Pravidelně po xxxx dnech se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx místa xxxx žilnatinou mívají xxxxx xxxxxx vodnatý xxxxxx. Nekrotická xxxxxxx xxxxxx xxxxx jasně xxxxx xxxxx. Rostliny xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx trvá xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx je xxxxx naděje na xxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti než xxxxxx xxxxxxxx, proto xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x xxxx xxxxxx xxxx xx. Vadnutí xxxxx xxxx způsobovat populace xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. carotovora xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxx exigua xxx. xxxxxxx, xxxxx x velké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx případů xxxxxxxxxxx původcem kroužkovitosti, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx nebo xxxx rostliny. Xxxx xx xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx objeví xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxx vejcoplodého xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxx xX xxxx XXX xx šťávě x xxxxx a izoluje xx xx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) médiu (xxx xxxxx 8). Může xx xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx okolností, xxxxxxx xxxxx nejsou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, se xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx i xx xxxxxxxx xxxxxxxxx doby xx 4 xxxxx. Xxxxx nejsou xx 4 xxxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, provede xx test XX/XXX xx xxxxxxxx vzorku xxxxx stonků x xxxxx 1 xx x každé xxxxxxxxx xxxxxxxx odebraných nad xxxxxx inokulace. Xxxxx xx xxxx pozitivní, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Čisté xxxxxxx xxxxxxxxx z přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x potvrdí xx xxxxxxxxxx (viz oddíl 9 a 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus

Diagnóza může xxx xxxxxxxxx pouze xxxxx, xx-xx původce xxxxxxxxxxxxxx izolován a xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismem, xx xxxxx ho izolovat x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx jej xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x pelety xxxxxxx hlízy (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx izolace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxx části xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxx, ale x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx na xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus (xxxx. XXXXX 4053 nebo XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xx měla xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx obvyklých vzorků xxxxxxxxxx jeho xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

8.1. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Ze 100 µx alikvotní xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx z xxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx desetinásobné xxxxxx x xxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve vysokých xxxxxxxxxxxxx, xxx saprofyty xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx 100 µx x každého xxxxxx, x ředění 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx pomůcek xxxxxxxx k xxxxxxxx (xxxxxxx) x techniky xxxxxxx.

8.1.3. Desky xx xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx zahrnuje xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx miskami x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xx měly xxxxxxxx xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx měly xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx média xxxxxx xxxxxxxxx, xx. nejlépe xx 3-5 dnech.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx x následujících xxxxx (složení xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx agar (xxxxx xxx subkultury),

- kvasničný xxxxxx xxxxxxxxx xxxx,

- xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X xx dobu maximálně 10 dní.

Původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx hlavičky, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. X subkultur xx rychlost xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx barvy xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, vyvýšené, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx okraji x xxxxxxx xxxx x průměru 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Podezřelé xxxxxxx xx identifikují (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

V případě xxxxxxx xx xxxxxx xxx každý xxxxxxxxx xxxx známý xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx následující fenotypícké xxxxxxxxxx. Xxxxxxx média xx se měla xxxxxxxxx xxx 21 °X a xx xxxxx xxxxx by xxxx xxx vyhodnocena. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx růstu, xxxxxxxx xx po dobu xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx zahrnovat xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Nutriční x fyziologické testy xx musí provádět xx xxxxxxx xxxxxxx xx subkultur xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx výsledek

Oxidačně-fermentační (X/X) xxxxxxx xxxx slabě xxxxxxxx

Xxxxxxxx oxidázy -

Aktivita xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx při 37 °X -

Růst v 7% XxXX -

Hydrolýza xxxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx z:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- salicinu -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX test

a) Připraví xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx xx xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx antiséra.

c) Provede xx xX xxxxxx (xxxxx 4).

d) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX titr kultury xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xxxxx x uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx bloku xxxx vřící xxxxx xxxxx při xxxxxxx 100 °X po xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx potřeby xx xxxx lýza xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx NaOH xx xxxxxxx koncentrace 0,05 M. Vzorky xxx xxxxx uložit xxx teplotě -16 xx -24 °X xx do xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (xxxx. Pastrik, 2000; viz dodatek 4; Li x de Xxxx, 1995; Xxxxx a xxx., 1997; Xxxxxxx x Rainey, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Identifikace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx pozitivní, xxxxx xxxx amplikony XXX xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

9.4. XXXX test

a) Připraví xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na xx v XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

x) Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxx-xx dosaženy xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx vhodný xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

c) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 lso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxx, ale 15:1 Xxxxxxx X je xxx tyto bakterie xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. v rozmezí 1-5 %. U Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml v XXX.

x) Provede xx xxxx postupem podle Xxxxx x xxx., 2001.

10. Xxxx patogenity

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx jako Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk na xx x 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx izolované xxxxx a vhodného xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx mladých semenáčků xxxxx vejcoplodého xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx se xxx teplotě 18-24 °X xxx dostatečném xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti s xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxx vyschnutí. X xxxxxxx xxxxxx by xxxx během 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx po xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx až 3 xxxxx xxx teplotách xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx vejcoplodého, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nevyskytují, xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx formu Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx stonku 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx pufru. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx rozetřením xxxx xxxxxxxxx na MTNA x XXXX, xxxxxxxx xx po xxxx. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °C x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx typických xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx na xxxxxxxxxxxx x validaci xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx für Xxxxxxxxxx und Ernährangssicherheit	Vídeň x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Unité de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx la Xxxxx xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Research Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Protecção xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx osoby: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX a FISH

Vypěstuje xx 72 hodinová xxxxxxx virulentního xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxxxxxxx xx v 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 až 2 x 10⁸ xxxxx schopných tvorby xxxxxxx/xx. Toho se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxxxx optické xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxx x pupkových xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x produkce xxxxxx s bílou xxxxxxx, x xxxxx xx xxxxx, že xx xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus.

Pupkové xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 sterilních xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 ml s 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se 100 µx xxxxxxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx se protřepat. X xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx kontaminovaných xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxxxxx xx opatří xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx alikvotní xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až-24 °X až xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím imunofluorescence.

Pro XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x FISH testy xx xxxxxxxx kvantitativní xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx IF, FISH x XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních kontrol x xxxxx xxx xxxxxxx x žádné x xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 3

Xxxxx xxx testovací xxxxxxx

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx dobu xx xxxxxxx roku.

1. Pufry xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 xX fosfátový xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx následující xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (PVP ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50 x
(*) pro použití xxx xxxxxxxx homogenizací

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x výkrojků x xxxxxxxxx částí xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po dobu 15 min.

2. Pufry xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx xxx XX (10 xX fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po dobu 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx používá x xxxx xxxxxxx. Xxxxx se 0,1 % Xxxxx 20 x pufru xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxxx krycí xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Vector Xxxxxxxxxxxx) nebo Citifluor® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Stanovení xxxxxxxxxxx xX a FISH xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx fluoreskujících buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = x x S/s,

kde X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx sklíčku x xxxx xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx i = xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx od 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá se xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (X).

X = C x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované pelety

Dodatek 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx X. x subsp. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxx dextrózový agar (Xxxxxxxx dextrose xxxx = NDA)

Difco xxxxx xxxxx agar xxxxxxxxxx 1 % D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 X xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx peptone xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Difco)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x kvasnicovým extraktem x minerálními xxxxxx (Xxxxx extract xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
X(+) glukóza (monohydrát)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005
Baktoagar (Difco)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 média x autoklávu při 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud xxxx xxxxxxx jinak, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 g
Manit	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 g
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, xX xx xxxxxx xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) a xxxxxxxxx xx 50 X xx xxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx X 0,01 x.

X zásobě xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Sigma) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, amphotericin X (Xxxxx) (1 xx/xx) x dimethyl xxxxxxxxx. Zásobní xxxxxxx xxxx sterilizované filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Médium XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx se xX xx 7,2. Xx autoklávování x xxxxxxxxx xx 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Sigma) 0,003x, nalidixic acid (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx rozpustí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X NaOH, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx roztoky xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Po přidání xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x chladu xx 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a činidla xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx žádné xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky se xxxxxxxx xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx.

1. Vícenásobný PCR xxxxxxxx x interní XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx ctt xxx xxx xxx pa xx -3'

primer PSA-R 5'- xxx xxx xxx xxx tca xxx xxx x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx gca ata xxx ggt xxx xxx xxx -3'

primer XX-8-X 5'- xxx xxx xxx tca xxx acg xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x XXX C. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (sada PSA-primer(i).

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XXX kontroly 18X rRNA 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725 μx
10x XXX xxxx (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 mM MgCl2)
BSA (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μM
Taq xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μl
Celkový xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za použití Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x Xxxxx XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X x XX-8-X xxxx optimalizována xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxxxx metody x xxxxxxxxxx XXX podle Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx 6.1 xxxx. x) a 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx izolace XXX xx xxxxx nová xxxxxxxxxxxx koncentraci xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx se podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx teplotě 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX matrice)

iii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (prodlužování xxxxx)

25 cyklů v) 30 sekund xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx DNA matrice)

vi) 30 xxxxxx při xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx primerů)

vii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx prodlužování

ix) Udržuje xx xxx xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xx optimalizován xxx xxxxxxx x tepelným xxxxxxxx XX Research XXX 200. Při xxxxxxx jiných xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx), xx), x), xx) x xxx).

1.4. Analýzy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx z XXX X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx charakteristickou xxxxxxxxxxxxx délky fragmentu x enzymem Xxx XX po xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X po xxxx 30 xxxxx. Fragmenty xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx rozměry 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx nanášecího xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx modř (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx se xxxxx na 1x.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx činidla xxx XXXX test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx pro Xxx XXX-XX3-01: 5'- ttg xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx tcc xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °X x přidá xx 0,4 x parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1N XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (XX; pH 7,0) x 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xX a x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx nebo NaOH.

[UPOZORNĚNÍ: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT MĚŘIČ xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje xx xxxxxxxx xxxx prachem xxx teplotě 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx přes filtr x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se xx 1x, xxxxx potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (SDS) 0,01 %

Xxxxx EUB 338 5 ng/µl

Sonda XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxxx x tabulce. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx xxxxx 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přípravu hybridizační xxxxx

	2 sklíčka	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxx při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx elektrickým xxxxxxx.

5. 0,1 M xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a sterilizuje xx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx vejcoplodého (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx xx pasterizovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, pokud xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °C,

noc: 15 °C.

Vhodné xxxxxx xxxxx vejcoplodého "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Tom",

"Rima",

"Balsas".

Dodavatel: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx modifikaci (Doetsch, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx se 2 x xxxxxxxxxx violeti x 20 ml 95 % etanolu.

Rozpustí xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 ml destilované xxxx.

Xxx roztoky xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 g

Jodid xxxxxxxx 2 g

Destilovaná xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx společně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Nasypou xx xx vody x xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x uloží xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx zalije xxxxxxxx xxxxxxxxxx violeti x xxxxx se xxxxxxx 1 minutu.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx xx Lugolovým xxxxxxx roztokem x xxxxx se xxxxxxx xx dobu jedné xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx tekoucí xxxxx x xxxxxx xx xxxxx papírem.

6. Odbarvuje xx xxxxxx po xxxxxxx přidávaného 95 % xxxxxxx tak xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx vodou x xxxxxx se xxxxx papírem.

8. Xxxxxx xx safraninovým xxxxxxxx x nechá xx xxxxxxx 10 s.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx vodou x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx dostupné roztoky xxxx barvicí xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxx ring xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Commission xx the Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11 288 EN, 21 xx.

2. Bradbury, X. F., 1970. Xxxxxxxxx xxx preliminary xxxxx of xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Rev. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Corynebacterium sepedonicum xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. N., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Manual xx xxxxxxx for xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Society xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Leifson, F., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx carbohydrates by xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Bact., 66, 24-26.

6. Janse, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx using xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, J. D. x X. Van Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx the XX xxxxxx for xxx xxxxxxxxx of latent xxxx rot infections (Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum) in xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x X. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxx development of x semi-selective medium. Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Kovacs, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx pyocyanea xx the oxidase xxxxxxxx. Xxxxxx, Lond., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X x D. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, R. X., 1966. Xxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. appl. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. A., X. Billing x X. C. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx plant pathogenic xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x P. X., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx rot (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx onicum (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Li, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx from XXX xxxxxxxxxx spacer xxxxxx for specific xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., X. x X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx of three xxxxxx XXX sequences xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Ramamurthi, C. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx some Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx bacteria xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Sta., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Berthier-Schaad, X., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx potato tubers xx X1X-XXX and xx automated xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx detection system. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Minnesota:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, V. X. X., 1967. X xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Wilkins Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Stead, DE., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx primer for xxxxx identification xx xxxxx xxxxxxxx Clavibacler xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. xxx X. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx in xxxx reproductibility xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx van Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid profiles. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. X. x X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx of xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx hybridization with 23x xXXX-xxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové diagramy xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou součástí:

i) xxxxxxxx xxxxx hniloby x hlízách bramboru x bakteriálního xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx,

xx) detekce Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x ve xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (R. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx testovaných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění karanténního xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry musí xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum jako xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, údržbu x kalibraci zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx chybám, zvláště xxx označování x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxxxxxxxxx nebo screeníngových xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx screeningový xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxx na jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx screeningový test xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx a musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Pokud xx x druhý xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx pokračovat x xxxxxxxxx xxxxx daného xxxxxxxx. Jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x identifikaci xxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x jiných hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx půdě x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Ralstonia solanacearum.

1) Xxxxx příznaků xx xxxxxxx v xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx xxxxx slizu xx svazků xxxxxxx xxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.2.

5) Sérologické aglutinační xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx z xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Test XXXX xxxxxxxxxxxxx slizu suspendovaného xx vodě nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx ELISA xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího příznaky xx popsán x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Patogen xx xxxxxxx xxxxxx izolovatelný x rostlinného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (viz x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx izolační xxxx xx xxxxxxxxx, musí xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx živných xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx R. solanacearum xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Dílčí xxxxxxxxxx charakteristika xx xxxxxxxxx, ale doporučuje xx xxx každý xxxx případ.

14) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx ke zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň xx xxxx screeningových xxxxx (xxx xxxxxxxx v xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx xxxxx kultura xx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek pouze x xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx dostačující x tomu, aby xxx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x izolační xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx postup xxx použit i xx menší počet, xxxxxxxx 200 hlíz xxxx x dispozici.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx v oddíle 3.1.1.

3) Xxxxx jsou xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytný xxxxx jeden nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li xxxxx nebo xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Další xxxxx xxxxxx nutné.

4) Xxxx XX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx izolace xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Testy XXX xxxx popsány x oddíle 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx v oddíle 6.1.7.

8) Testy XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx testech xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je třeba xxxxxxxx izolační xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx dodatečným xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku, xxxxxxxx xxxxxxx test x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx podezřelých xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx diagram xxx detekci x xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete nevykazujících xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky

1) Viz xxxxx 3.2.1., xxx xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxxxx vzorků.

2) Xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx jsou alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx alespoň xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Je-li xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, vyžaduje xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li xxxxx xxxx xxxxx testy xxxxxxxxx, považuje xx xxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx IF je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx je popsána x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx selhat z xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx.

12) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kuItur, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx jedná x R. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx pomocí xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx u bramboru

Rostlina xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx xx rozpozná xxxxxxxx listů xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx vysokých xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx vadnutí xxxxxxxxx listy xxxxxx, xxx později žloutnou x objevují xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx k xxxxxxx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx se xxxxxx stává xxxxxxxxx x končí kolapsem x uhynutím xxxxxxxx. X cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx možné xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx vlákna xxxxx.

Xxxxx bramboru. Xxxxx xxxxxxxx xx třeba xxxxxxxxx xxxxxx u xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X xxxx xxxx xx infekce xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx až světle xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx prýštit bledý xxxxxxx bakteriální xxxx. Xxxxxxx xx cévní xxxxxxxx stává xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx parenchymatického pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxx hlízy x x xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx který xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx objevit červenohnědá, xxxxx propadlá xxxxx xxxx xxxxxxxx vnitřního xxxxxxx cévního pletiva. X pokročilejších xxxxxx xxxxxxx je obvyklý xxxxxxxxxx rozvoj xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Příznaky x rajčete

Rostlina rajčete. Xxxxxx xxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota xxxx xxxxx 25 °C, xxx nasycené vzdušné xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx dní xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx dolů x xxxxxxx na jedné xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx jejím xxxxxx xxxxxxxxx. Xx méně xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx vodou xxxxxxx xxxxx xx xxxxx stonku, které xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx systému. Xxx xxxxxxx xxxx stonkem xxxxxxxx hnědě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx bílý xxxx xxxxxxxxx bakteriální xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx u xxxxxx hostitelů

Rostliny Xxxxxxx xxxxxxxxx x S. xxxxxx. Xx normálních xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °X xxxx xxxx extrémně vysoká xxxxxxxxxxx inokula (xxxx. x xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx u xxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx rajčete). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Nevadnoucí xxxxxxxx X. dulcamara, xxxxx má stonky x kořeny xx xxxx, xxxxx vykazovat xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx řezu xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx částí xxxxxx xxx vodou. X xxxx cévních xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx mohou tvořit xxxxxx xxxxx, jestliže xx řez xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, x xx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxxxx diagnóze, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx testů:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Test na xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx zviditelněny xxxxxxxxx tepelně xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx modří X xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx oddíl 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx jsou xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.), xxxx XXXX (xxx oddíl 6.1.7.), xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.) atesty XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxx vrstva xxxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx prstence xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx bramboru, rajčete xxxx jiné vadnoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx v xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 minut xxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxx desetinásobných xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 xx xxxxxxxx x roztoku xx xxxxxxxxxxx živnou xxxx (XX, XXXX xxxx XXX; viz dodatek 2) x/xxxx Kelmanovo tetrazolové xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. SMSA, xxx dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx misky x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 k pozitivní xxxxxxxx.

x) inkubuje xx 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°X.

- Na xxxxxxxxxxx xxxxx půdě xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx perlově xxxxxxx xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, často s xxxxxxxxxxxxxxxxxx spirálkami xx xxxxxx. Aviruletní xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, které xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- U Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx média x xxxxx XXXX jsou xxxxxxxx krvavě červeně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Identifikační testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x podezřelých xxxxxxxxx xxxx popsány x xxxx 6.2.

3. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxxxxxx xxxx bramboru

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx této xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorku vede x zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx x pro xxxxxx x méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je založená xx xxxxxxxxx vzorků x velikosti 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx použit xxx zjištěni xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření před xxxxxxxxx xxxxxx

x) Inkubace xxxxxx při xxxxxxx 2-30 °X xx xxxx až 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx.

x) Hlízy xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (x obsahem xxxxxx, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx XXX test, xxx xxxxxxxxxx patogenní XXX) x mycí xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx vhodný xxxxxxx v xxxxxxx, xxxx xx ve xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx jestliže má xxx xxxxxxxx test XXX nebo přímá xxxxxxx.

3.1.1.1. Pomocí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx nože xx xxxxxxxx xx odstraní xxxxxx xx pupkovém xxxxx každé xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém xxxxx. Množství xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (hnijící) hlízy x podezřelými xxxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxx stranou a xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištěny příznaky xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx vyšetření takové xxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Všechny xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx uchovávají xx xxxx xxxxxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx dojít ke xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) a xxxxx xx uchovávají x chladu (4-10 °X) za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx včetně xxxx x podezřelými příznaky xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx se xxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (x případě, xx xxxxxx jsou znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx vyčištěny x xxxxxxxxxxxxx prostředky x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx zpracovat xxxxxxxx x pupkového xxxxx xxxxxxxx. Není-li xx xxxxx, xxxxxxxxxx se x xxxxxx xxx xxxxxxx pufru; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18 -25 °X) nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx konců xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Zalijí xx dostatečným množství (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxxx se x rotační třepačce (50-100 ot./min) 4 xxxxxx při xxxxxxx xxxxx než 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) nebo xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx polyethylenový xxxxx Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx nutné zamezit xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xx použijí xxxxxxx sterilované xxxx (xxxxx) x xxxxxx. Xxx xxxxx PCR xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX na xxxxxxxx xxxx v xxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxx PCR se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x sáčcích na xxxxx použití a xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití.

3.1.1.3. Supernatant xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10 °C) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40-100 µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx odstřeďováním, 7&xxxx;000 x po xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10 °C a xxxxxxxx xx supernatant, xxxx by se xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx resuspenduje x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx xxx X. solanacearum, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx referenční xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µl xxxxxxxxxx xxxxxxx části x ke xxxxxxxxx xxxxx vzorku, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xx při xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 až -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx extraktu, zajistí xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxx x zpracovány xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci. Xx platí xxx xxxxxxx XX a xxxxxxx testy.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

XX xxxx (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Testy XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

3.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vzorky. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx o počtu xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx populace.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx sterilní xxxxxx se xxxxx 1-2 cm xxxxxx xxxxxx stonků xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování:

Rajčatové xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xx xxxxxxx kousek xxxxxx 1 xx x paty xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země.

Rostliny x xxxx xxxx skleníku: Xxxxxx dezinfikovaným nožem xx xxxxxxx nejspodnější xxxxxxxxx výhonek z xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx spojením x xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx nejspodnější, 1 cm xxxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx hostitelské xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1 xx xxxxxx xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. U xxxxx xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx vodě xx xxxxxxxx 1-2 xx xxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx plevelnou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Detekce xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx x podzimu, xxxxxx přirozenou xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx celý xxx x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx rostoucí xx xxxxxxx tocích. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx dulcamara, X. xxxxxx, Datura xxxxxxxxxx x další xxxxxxxx xxxxxx Solanaceae. Xxxxxxx hostitelskými rostlinami xxxx xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx xxx. a Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Některé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx mohou hostit xxxxxxxx X. solanacearum xxxxxx 2/Race 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx specifických xxxxxxxx, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx cannabinum, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx scleratus, Xxxxxxx spp, Xxxxx xxx., Xxxxxx alba. X. nutans., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Urtica xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx cév xxxx xxxxxxxxxxx sliz). Xxxxxxxx xxx stonku x xxxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Potom xx zpracují části xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) zalijí xx části dostatečným xxxxxxxxx (přibližně 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a třepou xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot./min) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °C xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) pomocí gumového xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxx stonků x xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx xxx pokojové teplotě (18-25 °C) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Po xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 minut, xx dekantuje xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxx filtrací xxxxx odstřeďováním popsaným x oddíle 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Čistý xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xx dva stejné xxxx. Xxxxx díl xx xxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx díl xx xxxxxxxx v 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx při teplotě -16 xx -24 °X (xxxxx) nebo -68 až -86 °X (měsíce) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx PCR (xxx oddíl 6.1.6.)

Test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

4. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby ve xxxx

4.1 Postupový xxxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx uvedeny doporučené xxxxxxx vzorkování.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 4.2.1. Koncentrace zvětšuje xxxxxxxx jak xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxx tehdy, xxxxxxxx xxxxxxx izolačnímu xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx obohacovacího xxxxx XXX jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Metody xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx podezření, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ovlivní spolehlivost xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx testy xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čistých kultur X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx x detekci xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxx vody x xxxxxx xxxx být xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x odpadní vody. Xxxxxxxxx citlivost xxxxxxx xx však liší x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx testu xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, kterých xx xxxxxx xxxxxx xxxx v odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxx x xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx asi 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx detekce x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x odpadní xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx podstatně xxxxx. Z xxxxxx xxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx vodu xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx filtrace), xxx xxxxx xxxxx xx snížení saprofytických xxxxxxxxxxxxx populací. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx schématu xx xxxx xxx xxxxx v xxxxx xxx xxxxxxxxx spolehlivosti x případě xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků. Xxxxxxxx x tomu, že xx toto xxxxxx xxxxxxx úspěšně k xxxxxxxx výskytu nebo xxxxxxxxxxxxx patogenu x xxxxxxxxx xxxx, je xxxxx si xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx a v xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Zjištění X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx nejspolehlivější x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, léta x xxxxxxx, kdy teplota xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx vzorkování x různé xxxx xxxxx výše uvedených xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx výkyvů xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxx x zastření výskytu xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxx xxxx přítomny.

4.2.1.1. Xx vybraných xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx do xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, pokud xxxxx 30 xx xxx xxxxxxxx x 2 x xx břehu. Xxx vzorkování xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx odpadní xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 ml. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx vzorky nejméně 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 opakované xxxxx vzorky o xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vyberou xxxxxxx 3 vzorkovací xxxxx xx xxxxx 3 xx vodního xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx do 24 xxxxx.

4.2.1.3. Je-li potřeba, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxx následujících metod:

a) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000 x xx dobu. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X, xxxxx xx xxxxxxxx nad xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Provede xx xxxxxxxx přes membránu (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µx) x xxxxxxxxx promytím xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxx filtrátu. Xxxx xxxxxx je xxxxxx xxx xxxxx objemy xxxx, xxxxx obsahují xxxx xxxxx saprofytů.

Koncentrace xx obvykle nedoporučuje x vzorků vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx u xxxxxx xxxxxxx vody, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Ralstonia solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x popis testů x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x půdě

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Biotest xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx v oddíle 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xx-xx xxxxxxxxx xx vliv xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, opakují xx xxxxx selektivní xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx vzorku.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. solanacearum xx dosáhne pomocí xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx schéma xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, ale xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx xxxxxxxxxx brambor xxxx xxxx x xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx poznamenat, xx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx detekci xxxxxxx xxxx nepravidelně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, které xx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x půdě xxxx kalu xx xxxxx vzít v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx testovacího xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem přítomnosti xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx vypěstování xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx x její sledování, xxx není xxxxxxxxxx, xxx i xxx xxxxxxx této xxxxxx xxxxxx xxxxx stupeň xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování xxxxx xxxx xx xx xxxx řídit xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 až 1 xx xxxx xx 60 míst xx xxxxx 0,3 xx z hloubky 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 x xxxxxx 0,3 xx. Xxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx reprezentujících xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Dílčí xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx rotační xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Je-li xxxxx, xxxxxxx 0,02% sterilního Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx kamínků xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Testování

Postupový xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Diagnostické x xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx stonku

Přítomnost X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx xxxxxx následující xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Řez xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx vodou. Xxxxxxx xx, zda se xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x přeříznutých xxxxxxx svazků.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Připraví se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx mikroskopické sklíčko.

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr kmenu xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx XXX xxxxxxxxxx sp.

3. Roztěry xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx povrch xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Obě sklíčka xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx roztokem xxxxxx modři a xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 minut xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx savým papírem.

c) Xxxxxx se zakápne 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx opláchne xxxxx xxxxxxx vodou x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxxxx kapkou xxxx x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx obarvený xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem xxx 450 nm xxx xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxx se xxxxxxxxx 600x xx 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. solanacearum.

Test xxxxxxxxx černí:

a) Xxxxxxxx xx všechna xxxxxxx 0,3% roztokem súdánské xxxxx X x 70% xxxxxxx x xxxxxxxx se 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Odstraní xx xxxxxxx roztok x xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx ponoří xxxxxx xx xylolu x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx zdraví xxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x xxxxxxxx x digestoři.

d) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) vodným xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx 10 xxxxxx inkubovat xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx škodlivý, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx, odsaje xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x procházejícím xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PHB xxxxxxx x xxxxxxx X. solanacearum x xxxxxx xxxxxxxxxx stěnami xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx z pletiv x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz dodatek 3) označených příslušnými xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, např. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx obarvenými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx komerčně xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx postupuje xxxxx xxxxxxxxx výrobce. Jinak xx postup xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx kapky xxxxxxxx označené xxxxxxxxxx x bakteriálního xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx látky) na xxxxxx testovacího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum a xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx x xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx izolace

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx půdu

Poznámka:

Než xx použije tato xxxxxx xxxxxx, provede xx xxxxxxxxx test x zajištění reprodukovatelné xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorků, které xxxx předtím testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx validovaná xxxxxxxxxx xxxxx půda, xxxx. SMSA (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx et xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx bakterií xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Dále, xxxxxxx X. solanacearum xxxxx xxx atypickou xxxxxxxxxx, jestliže Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx jsou rovněž xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx otestován xxxxx xxxxxx xxxxxx testu.

Pří xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx detekce xxxxx xxxxxxx xxxx velmi xxxxxx. Xxxxxx je xxxx použitelná i xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx kmene biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx možné xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx odděleně xx xxxxxx x testování.

U xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx živné xxxx xx měla xxx xxxx jejím xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx kultivaci patogenu. Xxxxxxxxx materiál xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx vzorek (xxxxxx).

1. Xxxxxxx xx ředění x cílem xxxxxxxx, xxx všechny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µl xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx pro každé xxxxxx.

2. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 28 °X. Xx 48 hodinách xx xxxxxxxxxxx jejich xxxx a pak xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Typické kolonie X. xxxxxxxxxxxx na xxxxx půdě XXXX xxxx mléčně bílé, xxxxxx, nepravidelné x xxxxxxx x xx 3 xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx růžově xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve středu x xxxxxxxxx pruhy xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx se xx tomto médiu xxxxx atypické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx červené x xxxxxxxxx xxxx jen xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx obtížně rozeznatelné xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx metodou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., xxx xx xxxxxxx izolované xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx uchovávají xxxxxxxxxx xx sterilní xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) při xxxxxxxx xxxxxxx x temnu xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) a xxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xx 6 xxxxx nejsou xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx nejsou nalezeny xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x v xxxxxxxxxxx vzorcích xxxx xxxxxxxx typické kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx izolovány xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx vzorků a xxxxxxx xxxxxxxxxx detekce. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx inhibitorů PCR xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx antagonismu saprofytických xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx kultury xxxxxxx. Kromě toho, xxxxxxx xxxx dojít x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxxx, xx pro test XXXXX doporučuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X obohacovacího xxxxx XXX se xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx do 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx předem připraví xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx testu ELISA xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx vzorku do xxxxxx (xxxx. 100 xx v 1,0 xx xxxxxxxxx živné xxxx).

2. Xxxxxxxx se 72 xxxxx při xxxxxxx 27 až 30 °C v xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx XXX se xxxxx xxxxx promíchá.

4. S xxxxxxxxxx bujónem xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx se xxxxxx xx výše uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx inhibice xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x důvodu xxxxxx xxxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx odstřeďováním xxxx jinými xxxxxxx xxxxxxxxx koncentrace.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx test XX xxxx xxxxxx x xxxxxxxx IF xxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx test xxxxxxx, XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx test XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x použitím vhodného xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Validovaná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx všechna xxxx lF xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx testování xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx.

Xxxx by xxx xxx proveden na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Jestliže xx xx xxxxx, xxxx být úspěšně xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 xx - 86 °X x glycerolu. Glycerol xxxx xxx xx xxxxxx odstraněn přidáním 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx množství peletového xxxxx. Často xx xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx plamenem.

Připraví se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx xxxxxxx v dodatku 3 B, x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 až 24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx díly xxxxxxxx ze vzorků, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx pro xxxxx xxxx, jsou uvedeny x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx xxxxxx, pokud xxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxxx jedním x následujících xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje se xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µx je xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6 xx - u xxxxxxx xxxxxx xx množství xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx x xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx ukazuje obr. 1.

xx) Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxxxx xxxxx. Napipetuje xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - u xxxxxxx xxxxxx je xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx poměru) resuspendované xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), plamenem, 95 % xxxxxxxx xxxx podle konkrétních xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxx po xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx dalším xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx lF

i) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx sada xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx by měla xxx 1/2 titru (X/2), ostatní 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (T/2), titr (X) x dvojnásobek xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x xxxxx XX. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.i)

Obrázek 2. Xxxxxxxx sklíčka xx test xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx testovací xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx musí být xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx pokyny xx xxxxxxxxxx protilátek, postupuje xx následovně:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxx papíře xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček a xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx IF. Xxxxx se ponořením xx xxxx 5 xxxxx v xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Je xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo přenosu xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx způsobit vzájemnou xxxxxxxxxxx. Pečlivě xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx umístí na xxxxx xxxxx. Testovací xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx papíru xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx sklíčka. Sklíčko xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx předtím (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X fosfátového xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx každého xxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx nebo xxxxx imersí při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx se xxxxxx ve xxxx xxxxxxxx kolmých průměrech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx buněk se xxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x určeném titru xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx test IF xxxxxxxx (odst. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx se jasně xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Intenzita xxxxxxxxxxxx musí být xxx porovnání x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v úvahu.

Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění pozitivních xxxxx (mimo okénka xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx v titru xxxx pracovním ředění xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx IF:

i) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx poli a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx u xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx považován za xxxxxxxxxxx infikovaný a xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Výsledek XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxxxxx méně než 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x vzorek xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testování není xxxxx.

6.1.6. Xxxxx PCR

Principy

Použije-li xx xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx, x xxxx izolace xxxx IF. Xxxxxxxx xx PCR xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx byla analýza xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x celém xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ xxxxx X. solanacearum na 1 ml xxxxxxx xx xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx negativní. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijí xx schválená činidla x xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6). Pokud xxxxx, xxxxx se xxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx třeba xxxxxx xxxxxx bezpečnostní opatření x zabránění xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. Xxxx XXX xx xxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx biologii, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA x PCR) by xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx jasné, xxxxxx xxxxx x přenosu XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- extraktu xx xxxxxx, který xxx předtím xxxxxxxx xx X. solanacearum x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx pufru používaného xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x DNA xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, do xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- pokud xxxxx, xxx PCR xxxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravují xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx odděleném xx xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx pro xxxxx test, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx výše xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx vzorky (xxx dodatek 3). Test kontrolního xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR a xxxxxx enzymových xxxxxx x koncentrující xxxxxxx XXX ve xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx metodami XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Xxxxxx podle Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX NaCI, 10 xX Xxxx-XXX (pH 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx x mikrozkumavka se xxxxxx xx termobloku xxxx vodní lázně x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Mikrozkumavka xx xxxxx xx 5 xxx. do xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 mM XxxxXXx, xX 8,0) x xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Easy XXX® A (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx třepáním, pokud xxxxxx xxxxxxx být xxxxxxxxxxx viskózní.

7. Přidá xx 500 µl xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x směs xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15 000 x xx xxxx 20 xxx. při xxxxxxx 4 °X.

9. Horní xxxx xx xxxxxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 ml 100 % etanolu (- 20 °X), krátce xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx se na xxxx po dobu 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x po xxxx 20 minut xxx xxxxxxx 4 °X x odstraní xx xxxxxx x xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx při 15&xxxx;000 x po xxxx 10 xxxxx xxx teplotě 4 °X, zachová xx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x XXX xxxxxxx.

15. Xxxxxx xx resuspenduje v 100 µx xxxxxxxx XX x xxxxx xx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx při teplotě - 20 °C xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx odstředěním. 5 µx supernatantu obsahujícího XXX xx xxxxxxx xxx xxxx XXX.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx DNA, např. Xxxxxx DNeasy Plant Xxx, by xx xxxxx xxxxxx, pokud xx xx prokázalo, xx xxxx při xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.1.6.2. PCR

1. Připraví xx xxxxxxxxx vzorky x kontroly xxx XXX podle schválených xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxx xxxxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

2. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX v xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx interní xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx extraktu XXX xx 25 µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx se xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX a xxxxx se týž xxxxx UM xxxx xxx xxx, který xxx xxxxxx xx xxxxx PCR xxxxx xxxxxx.

5. XXX mikrozkumavky xx umístí xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxxx xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6).

6.1.6.3. Analýza produktu XXX

1. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx nejméně 12 µx xxxxx amplifikované XXX z xxxxxxx xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) do 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 V/cm. Xxxxxxx se xxxxxx XXX xxxxxx, např. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx xxx zacházení x xxxxx xxxxxxxxx.

3. V xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx délky xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx zdokumentuje.

4. X xxxxx nových nálezů/případů xx xxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x xxxx shodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx elektroforézou v xxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x neštěpenou a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu PCR

Test XXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxx x zkoumaného xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx amplifikován se xxxxxxxxx vzorkem).

Test XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxxx amplikon XXX specifický xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (případně) xxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx xxxx amplifikován x žádného xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Spolehlivé xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxx xxxx získat xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx sadou xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx vodě, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx protokolech XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX nasvědčuje inhibici xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx žádný xx xxxx xxxxxxxxx.

X případě, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx získán x xxxxxxx nebo xxxx xxxxxx negativních xxxxxxx, xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx izolace xxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx test x xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používají xx xxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto metodou xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ buněk R xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx měl xxx pokud xxxxx xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx jej xxxxxxx provést x xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl předtím xxxxxxxx na R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01M fosfátovém xxxxx (XX) ze 3-5 xxxxx kultury. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx v dodatku 3 B.

Použití eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zbarví xxxxxxx xxxxxxxxxx přítomné xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx v xxxxx xxxxx, xx uveden x dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx fixační xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x odstřeďuje se xx xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a rozpustí xx xxxxxx xx 200 µx fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx 1 xxxxxx x xxxxxxxxx zařízení.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx suspenze na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, přičemž xx xxxxxxx 2 xxxxx vzorky xx xxxxx sklíčko, a xx neředěný x xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx být xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °X po xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. V případě, xx xx třeba XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx x přidá xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (zamíchá xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Sklíčka xx nechají uschnout xx vzduchu (xxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) a xxxxxx xx xxx plamenem.

V xxxx xxxx xx xxxxx postup přerušit x pokračovat x xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % x 96 %, pokaždé xx xxxx 1 xxxxxx. Osuší xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Před xxxxxxxx xx ohřeje xxx x hybridizační xxxx při teplotě 45 °X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Použije xx 10 µx hybridizačního xxxxxxx (dodatek 7) na 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) xx každém sklíčku, xxxxxxx dvě xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Přiloží xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx první a xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx tak, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx zahřáté vlhké xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx dobu 5 hodin x xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X v xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 x 1x hybmix (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx vody x xxxxxxxxxxx kvalitou) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x hybmix a 958 ml xxxx x molekulární kvalitou). Xxxxxxx se inkubovat xx vodní xxxxx x teplotě 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx sklíčka x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku inkubací xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx a nechá xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx ponoří xx XXX (xxxx. Xxxxx X water) x xxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xx nadbytečná vlhkost xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, USA nebo xxxxxxx) xx každého xxxxxx x xxxx xxxxxxx xx zakryje xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Hodnocení XXXX xxxxx

1. Sklíčka xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx olejovou imerzí. X xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein isothiokyanat (XXXX) jsou eubakteriální xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx zbarveny fluorescenčně xxxxxx. Použitím xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat se xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Cy3 jeví xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx. Test FISH (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx zopakován, pokud xx xxxxxxxx odchylné. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x pravých xxxxxx x kolem obvodu. X vzorků, kde xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx pozoruje xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx fluorescence musí xxxxxxxxx nebo být xxxxx než x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xx neberou x xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx jakoukoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx v případě, xxx všechna sklíčka xx várce xxxxxxx xxxxxxxxx buňky x xxxxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx jestliže jsou xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx FISH x sebou xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx z bramborových xxxx a xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dojde x xxxxxxx xxxxxxxx fluorescenčních xxxxx xx xxxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx podobnými X. xxxxxxxxxxxx, x xxxx xxxxxx méně častěji xxx x testu XX.

5. X xxxxx xx berou pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx použití XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx pozitivních kontrolách x nejsou pozorovány x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadne xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x velikostí x morfologií typickou xxx R. solanacearum, xxxxxxxx jsou xxxx xxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Testy XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx pouze jako xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx XXXX xxx xxxx relativně xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX je xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xx rovněž setkat x xxxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx definován jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx vhodných druhotných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx stejné jakou xxxxx komerční xxxxxxxxx.

Xxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx otestován jako X. solanacearum xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxx vzájemného xxxxxxxx x solném xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (PBS) xx použijí xxxx xxxxxx negativní kontroly.

Jako xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xx použijí alikvótní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx negativní, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk xx 1 ml xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (např. xxxx XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X x X). Pro srovnání xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XXX R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x testování.

Standardizované xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx ELISA.

a) Nepřímý xxxx ELISA (Xxxxxxxx Xxxxx xx xx., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X xx 4 xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx může x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx se xxxxxx množství dvojnásobně xxxxxxx uhličitanového xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx se 100 µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při teplotě 37 °X nebo 14 - 18 x při xxxxxxx 4 °C.

4) Extrakty xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx vymývací xxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Připraví se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x blokačním xxxxx (dodatek 4). U xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx dvojnásobné xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Roztok xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx a xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy x xxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx 100 µx xx každé xxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx x jamek x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx jamky. Nechá xx inkubovat x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x odečítá xx xxxxxxxxxx xxx 405 nm v xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx pH 9.6 (dodatek 4). Přidá xx 200 µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° X xx xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Přidá xx 190 µx xxxxxxxx xx vzorku xx nejméně dvou xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx inkubovat 16 xxxxx při xxxxxxx 4 °C.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx monoklonálních xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x XXX (dodatek 4) s xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx sérového xxxxxxxx (XXX), přidá xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx stát 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °C.

5) Xxxxx xx třikrát dobře xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Připraví xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx alkalickou xxxxxxxxxx x XXX. Xxxxx xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx dobře vypláchnou xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx se xxxxxx 1 xx p-NPP/ml xxxxxxxxx fosfatázy x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx do každé xxxxx x xxxxxxxx xx v xxxxx xxx pokojové teplotě. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx optické xxxxxxx (OH) x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx dvojnásobek OH x negativního kontrolního xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků jsou xxxxx xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx se substrátem) x xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx hodnoty XX x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx testovaného vzorku, xxxxx xxxxxxx XX xx všech negativních xxxxxxxxxxx vzorcích xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích.

Negativní xxxxxxx XXXXX x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxx x vzájemné xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Biotest

Poznámka.:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Nejvyšší xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx lze xxxx xxxx xxxxxxx použít xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Použije xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. kultivaru Xxxxxxxxxx xxxx kultivaru x xxxxxxxxxxx citlivostí xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx třech xxxxxxx listů x xxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx xx xxxxxxx lilek (např. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. listů xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxxxx x lilku xxxx méně výrazné x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx vzorku xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulují xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx než 23X). Vzorek xx xxxxxxx mezi testovací xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx přidrží mezi xxxxx xxxxx a xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxx xxx 1 xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, přičemž xxx xx xxxxx v xxxxx kapky xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx xxxxxxxx vazelínou z xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx se nainokulujte 5 xxxxxxx vodní xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 ml, připravenou xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxx xxxx x karanténním zařízení 4 týdny xxx xxxxxxx 25 - 30 °X a xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x přiměřeným xxxxxxxxxxxx, xxx se zabránilo xxx přemokření, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx být xxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xx xxxxx xxxxxxxxxx místech xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx rostliny x xxxxxxx xxxxxx po xxxx xxxxxxxx drženy xxxxxx sebe, oddělí xx xxxxxxxx zástěnami. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x všech xxxxxxxxx činnostech xx xxxxxx zvláštní pozornost xxxx, aby xxxxxxx x vzájemné kontaminaci. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx přenést bakterie xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxx vadnutí, xxxxxxxxx, xxxxxxx anebo xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx provede xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Jestliže xxxxx 3 xxxxx xxxxxx pozorovány žádné xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx IF/PCR/izolace xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx stonků dlouhých 1 cm x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx nad místem xxxxxxxxx. Je-li xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx roztěry (bod 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx čisté xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx biotestu xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx x xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum, xxxxx byl xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx bakteriemi X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Identifikační xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických principech.

Zahrnou xx případně xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx provedený xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx naopak chybí x X. solanacearum, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Text Očekávaný xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx O+/F-

Katalázová xxxxxxxx +

Oxidázový xxxx xxxxx Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Využití xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Xxxx x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Test XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x xxxxx IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx xxxx dvojnásobných zředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Použije xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx IF xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Test XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx na 1 xx v 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx ELISA xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx jeho výsledku xxxxxxx z této xxxxxxx je nejméně xxxxxxxxx x porovnání x xxxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly.

6.2.4. Testy XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxx vody (XXX = ultra xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °X 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 až - 24 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Použijí xx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX k xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (xxxx. Xxxx et al. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Pastrik xx xx. (2002); Xxxxxxxx et xx. (1999); Opina et xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (6.1.7) x nejméně 2 oligosondami xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx pozitivní, jestliže xx x xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx mastných kyselin (XXX)

6.2.6.1. Pěstuje se xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^oC.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx metoda FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx stejný jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx charakteristických xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX x absence 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx sp.

6.2.7. Xxxxxx charakteristiky xxxxx

Xxx xxxxx xxxx případ xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx použitím xxxxx x xxxxxxxxxxxxx metod.

U xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx případně xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx lišící xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Hayward xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx živné xxxx s xxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx sterilní xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx mění xxxxx 72 hodin xx xxxxxxx zelené xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek xxxxx.

Xxxxxxxxx testy xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Viz Xxxxxxxx x Stead (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx variabilita

Molekulární xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Cook xx al., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx sekvenční XXX x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, BOX a XXXX (Louws xx xx., 1995; Smith xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx délkového polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Pastrik xx xx, 2002; xxx dodatek 6) xxx použít x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx skupiny 1 (biovary 3, 4 x 5) x skupiny 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx definováno xxxxxxxx XXXX (Cook et xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X rDNA (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx přibližně 10⁶ buněk xx 1 xx ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Inokuluje xx 5 až 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxx xxxxx ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx odst. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 týdny xxx xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxxxx zamokření nebo xxxxxxxxxxx xxxx. U xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx mělo xxxxxx xxxxx 14 xxx. Neobjeví-li se xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nemůže xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx forma X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, chlorózy xxxx xxxxxx.

5) Provede se xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 cm xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx rozmělní x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Izolace xx xxxxxxxx xx xxxxxxx zřeďovacím xxxxxxxx xxxxx možno xx xxxxxxxxxx živné xxxx (dodatek 2). Xx inkubaci 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (NA)

Živný xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují xxxxxx xxx teplotě 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx a xxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 g

Bacto-Peptone (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7H₂O 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují x xxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx letrazoliové xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky a xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °X x přidá xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), až xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 xx xx litr.

b) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx xxxx SMSA (Englebrecht 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx al., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx půda

Casamino xxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 ml

Bacto-Agar (Xxxxx) (xxx pozn. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °X x xxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx koncentrace:

Krystalová xxxxxx (Xxxxx) 5 mg/l

Polymixin-B-suIfát (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (přibližně 25 mg)/l

Chloramfenikol (Xxxxx X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 50 mg/l

Poznámky:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx výše xxxxxxxxx reagenci může xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Oxoid Xxxx #1. X takovém xxxxxxx bude xxxx X. xxxxxxxxxxxx pomalejší, xxx xxxx xx xxxx omezit růst xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x 1-2 xxx xxxx x červené xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx při xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na 2&xxxx;500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x temnu x musí xx xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx by měly xxx před xxxxxxxx xxxxxxx povrchové kondenzace. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx médium (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 xx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx obohacené živné xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx agarovou živnou xxxx XXXX, ale xxxxxxx xx Bacto-Agar x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx živná xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx pepton 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 g

NaNO₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx a xxxxxxx xx xx 50 °C. Xxxxx xx xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx jako xxx xxxxxx půdu XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál xxx' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx testů, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Národní xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií rostlin (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx rostlin (PD), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx patogenních xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx výše uvedených xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxx, xx pocházejí x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Referenční xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx testů

b) Komerční xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

Xxxxxxx sušené xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx 200 zdravých xxxx xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx serologických x XXX xxxxx. Protože xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx lyofilizací, xxxxxx xxxx vhodné xxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ xxxxxxx xx 1 ml x xxxxxxxxx kontrole xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx pozitivních x negativních xxxxxxx xxx screeningové xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx kultura virulentního xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) na XXXX xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx v 10 mM xxxxxxxxxx xxxxx, aby se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx jemně xxxxxxxxx suspenzí rovnající xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, o xxxxx xx xx, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek o xxxxxx 1,5 xx x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx první mikrozkumavky x xxxxxxxx xx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x dalších xxxx mikrozkumavkách.

Těchto xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx musí xxx řádně xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx alikvotní xxxxx x 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x XXXX xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x PCR xxxx xxx X. solanacearum xxxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1 Xxxxxxxxx pufr (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (bezvodý) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Peletový xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx se používá xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx koncentrovány xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x sterilizuje x autoklávu xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx pro XX (10 xX fosfátový xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, zkontroluje xX x sterilizuje x xxxxxxxxx při 121 °X xx dobu 15 min.

IF-pufr-Tween

Tento pufr xx používá x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 k xxxxx xxx IF.

Fosfátový xxxx v xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx používá xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx sklíček xx XX xxxxx x xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Laboratories) xxxx Xxxxxxxxx® (Leica).

3. Xxxxx xxx účely xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1. Dvojnásobný xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 6,36 x

XxX CO3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx podíl aromatických xxxxxxx, xx možné xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx sodný (0,2 %).

3.2. Desetinásobný roztok xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

NaCI 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx voda 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 ml

Polyvinylpyrrolidon-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx mléko 0,5 x

Xxxxxxxxxxx voda xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx xx upraví xX xx 9,8.

Doplní xx xx 1 x destilovanou xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx se xxx 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Sigma) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx testu DASI XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, pH 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX CO₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx x zkontroluje xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2H₂O 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 ml

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 ml

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx a xxxxxxx xx hodnota xX 9,8 koncentrovanou HCl.

Dodatek 5

1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x okénku xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = c x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxx x

x - plocha xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 nebo 1,25),

G = zvětšení objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X =X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx resuspendované xxxxxx x každém xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx R. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx testování xx xxxx nemělo xxxxxxxxx xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx se skupinou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX TTG XXX XXX GCC-3'

Reverzní xxxxxx X-2: 5'-XXX XXX GCT XXX XXX CGT XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 minuty xxx 96 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 20 sekund xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 20 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxxxx syntéza)

vi) ponechá xx xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z X. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx II xx xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-agt xxx xxx xxx xxx xxx x -3'

Reverzní xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx ttg xx -3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum XXX = 553 bp.

2.2. Xxxxxxx xxxx PCR

Reagencie	Množství x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μl
10x xxxx XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Metoda xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Polymerace. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (syntéza xxxxx)

1 cyklus: x) 5 xxxxx při 72 °X (syntéza xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), iii) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx X xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx mají xxxxxxxx 457 xx a 96 bp.

3. Protokol xxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX GAA XXX XXX XXX XXX TA-3'

Reverzní xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx XX-5-X: 5'-AAC TTA XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx velikost amplikonu xxxxxxx kontroly XXX 18X xXXX = 310 bp (xxxx xxxxxxx NS).

3.2. Reakční xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx podmínky PCR

Provede xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: i) 5 minut při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) nechá xx při teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

3.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx amplikonu

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Bsm 1 xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 X) po inkubační xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X.

4. Protokol PCR xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. solanacearum (Pastrik xx al, 2001)

4.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX GCA XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-1-R: 5'-XXX XXX CAC XXX AGA GAC X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-3-R: 5'-XXX ACG GCA XXX TCG XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum:

s Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX specifický xxx xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx pro xxx xxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 sekund xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (konečná xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research PTC 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) x xx).

4.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-1-X vytvářejí xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 1) xx inkubační době 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F a Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx místa.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 ml

5.2. Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 ml

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx zředí xx 1 X.

Také xxxxxxxx dostupné (xxxx. xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro XXXX test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-ggc xxx tag xxx xxx xxx ccc-3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx gcc xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX V DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (xxxx. Ultra xxxx xxxxx = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx xx 0,4 g parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (PB; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx se xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx pomocí XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Přefiltruje xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx 4 °C do xxxxxxx použití.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 mM (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx xx xx x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Formamid 30 %

Sonda EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx hybridizačního roztoku xxxxx výpočtů v xxxxxxx 1. Xxx xxxxx sklíčko (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µx hybridizačního xxxxxxx. UPOZORNĚNÍ: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsi

Poznámka:

Všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx světlocitlivé xxxxxxxxxx se uchovávají x xxxxx při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x sterilizuje xxxxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Pěstování xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx escadentum) xxxx xxxxx (Solanum xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxx rozvinutými děložními xxxxxx (10 xx 14 xxx) se xxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku x xxxxxxx xx xx měly xxxxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx délka xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Beauty"

Vhodná xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/EC xx 20 July 1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx etal. Xxxxxxxx Journal xxxxx Xxxxxxxx Communities X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, G., X.X. Le Xxxx, X. Xxxx, P. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx division xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xx xxx identification xx Xxxxxxxx isolates. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Collar, X xxx Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Sandwich Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Assay Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Monoclonal Xxxxxxxx xxx sensitive Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx Asymptomatic Potato Xxxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Cook, X., Xxxxxx, E. and Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx with XXX xxxxxx tkat xxxxxxx virulence and xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Plant-Microbe Interactions 1:113-121.

6. Elphinstone, X.X., Xxxxxxxx, J., Wilson, X.X. and Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx solanacearum xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, M.C. (1994) Modification of x semi-selective xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tn: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Wilt Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx for xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, U. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx of Applied Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, S., X. Xxxxxxxx, X. Fujii, X. Tanaka, X. Xxxxxx-xxxxx, X. Yoshiwara xxx X. Xxxxx. 1998. Detection of xxxxxx cells of Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxx using a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x PCR xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, J.D. (1988) X xxxxxxxxx method xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx symptomless potato xxxxxx xxx some xxxx on its xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Bulletin 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx intra-specific classification xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. The xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas solanacearum xx colony xxxxxxxxxx xx x tetrazolium xxxxxx. Phytopathology 44; 693-695.

14. Klement X.; Xxxxxxx, K xxx X.X. Sands, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 pp.

15. Lelliott, X.X. xxx Stead, X.X. 1987. Methods xxx the xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Blackwell xxxxxxxxxx Publications Ltd., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, M.M., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Cambra, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx isolation, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. In: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Publishers. xx. 117-121.

17. Louws, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Stephens, X.X. xxx Xx Xxxxxx, F.J., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx fingerprints xx xxxxxxxxxxxxxxx Xanthomonas xxx Pseudomonas xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx repetitive xxxxxxxxx xxx PCR. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X. X., Stephens, X.X. xxx Xx Bruijn, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx structure xx xxx-XXX fingerprinting xx xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx campestris pv. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, N., X. Tavner, X. Xxxxxxxx, X.-X Wang, X.-X Xx, X. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, X.X. Hayward, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx method for xxxxxxxxxxx xx species xxx strain-specific XXX xxxxxx and XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx solanacearum (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). As Xxx. X. Xxx. Xxxx. Biotechnol. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Maiss, X. 2000. Xxxxxxxxx of X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers xx xxxxxxxxxx cham xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Pastrik, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx by xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx control. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Robinson-Smith, X., Xxxxx, P., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Forde, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx agent xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Agricultural Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx identification xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Seal, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Yotmg, xxx X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx xxxx, Xxxxxxxxxxx pickettii xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx of oligonucleotide xxxxxxx for sensitive xxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, L.C., Holderness, X. and Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Taghavi, M., Xxxxxxx, A.C., Xxx, XX, Xxxxx, X. 1996. Analysiss xx xxx xxxxxxxxxxxx relationships xx strains xx Xxxxxxxxxxxx solanacearum, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx banana xxxxx xx 16S xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Xxxx, X.X., Bonants, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, E., Xxx Beckhoven, J.R.C., Xxxxxxx, G.S., Trigalet, X., Xxxxxxxxx, X. 1998. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxx solanacearum Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Prior, P., Xxxxx, C. and Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Ecological Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Berlin) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Stead, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Ralstonia solanacearum xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx and quantitative xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx assay. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, J.D. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Detection xx X. xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx brown rot xx xxxxxx, by xxxxxxxxxxx xx sihl xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXXxxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.