Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 odst. 2 zákona č. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx a x změně některých xxxxxxxxxxxxx zákonů, (dále xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 odst. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx úpravy

Tato xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušné xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxxx na xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx xx. subsp. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Davis et xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx se

a) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) zjistilo místo xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx výskytu xx xxxxxxxxx xxxxxx šíření x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx opatření x xxxxx xxxxxx eradikace.

§2

Pojmy

Pro účely xxxx xxxxxxxx se xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Clavibacter michiganensis (Xxxxx) Davis et xx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Kotthoff) Davis xx xx.,

x) xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) hostitelskými rostlinami -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx L.) s xxxxxxxx semen xxxxxxxx, x ostatní xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx potvrzena xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx L.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx X.) kromě xxxxx a xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx L.) x xxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Solanaceae), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx možnost infekce xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby x xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxx x původu xxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, k xxxxxx xxxxxxx šíření xxxxxxx x k xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxx xx vztahují xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 zákona,

f) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxx, zásilce, xxxxxx, xxxxxxxx, stroji, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, skladu xxxx jejich xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xx pozemku, x xxxxxxx xxxxx x xxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 odst. 1 zákona z xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé hniloby,

j) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx vymezené Xxxxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - partie xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx xx za:

1. xxxxxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx partie, xxxxx xxxxxxx x témže xxxx vegetativním xxxxxxxx x xxxxxx rodičovské xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. rodičovskou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx klonově xxxxxxxx sesterským xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které x ní xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx každoročně v xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) rozmnožovací xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ původem x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu bramboru²⁾ xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx nesadbových xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxxxxxxx v bezpečnostní xxxx vymezené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Vymezovacímu xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x karanténním xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Zjišťování xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxxx

x) porosty xxxxxxx xxxxxxx určených x dalšímu pěstování,

b) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x závlaze hostitelských xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx zpracovávají xxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Vymezovacímu xxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx zdroje xxxxxxxxx x závlaze xxxxxx podezřelých x xxxxxxx x plevelné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx produkce, xxxxx tyto partie xxxxxxxxx.

(7) Výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx x případech xxxxxxxxx v xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x), odstavci 3 a v xxxxxxxx 4 písm. x) z porostů xxxx xx skládek, x xxxxxxx xxxxxxxx x odstavci 4 xxxx. a) x xxxxxxxxxx partií,

b) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxxx x xxxx dužninou xxxx, v xxxxxxxxx xxxx ve skládkách, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 písm. c) x d),

c) xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx dobu s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 písm. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vegetace x xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx 5 xxxx. x) x x xxxxxxxx 6.

(8) Způsob xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx, původ, xxxxxxx x dobu xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx předávání xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x testovaných xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx Xxxxx xx základě uznávaných xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx hostitelských xxxxxxx x v xxxxxxxxxx xx aktuální xxxxxxx xx výskytu xxxxx xx míře xxxxxx zavlečení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx ve Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx ústavu xxxxxxxxxxxx (xxxx xxx "Věstník"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx provádí xxxxxxxx stanoveným v příloze č. 1 nebo stanoveným Xxxxxxx v souladu x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx rovněž xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx osobou, xxxxxxxxx x této činnosti Xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, že xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx odstavce 8.

(10) Xxxxxxxx průzkumu prováděného xxxxx odstavců 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx bez xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru nebo xxxxxxx anebo xx xxxxxxxxx tuto partii xxxxxx xx xxx xxxx xx xxxxxxx xxxx pěstovala.

(11) Podrobnosti x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 předkládá Xxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 5 xxxxxx jednou xxxxx x rozsahu xxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Výsledky xxxxxxxx průzkumů provedených xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Komisi, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru,²⁾ xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxx xx pozemcích xxxxxxxxx, xx 1. září, x xxxxxxxxx případech xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, týkající se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx vztahují xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xx podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x v xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x xxxxxx II, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X případě xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxx x xxxxx odborného xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x zvláštního právního xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx, x to xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx dodržení podmínek xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx xxxx podezření xxxxxxxx xxxx vyvrátit.

(3) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x x souladu x §11 xxxx. 1 zákona

a) zakáže xxxxxx xxxxx partií xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, a

b) nařídí xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx zajištění xxxxxxxx xxxxxxx nad xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin na xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x výskytu, xxxxxxxxx i mimo xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Při podezření xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, x případě xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxx jiném členském xxxxx, xxxxx Xxxxx xxxxxxxxxx úřední xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx podrobnosti xxxxxxxx xx xxxxxx podezření x xxxx s xxxxx xxxxxx vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxx xxxxx x České xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Česká xxxxxxxxx, xxxxxx Xxxxx vhodná xxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 a 3.

§5

Xxxxxxxx xxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx §3 odst. 8 xxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxx x souladu x §76 odst. 2 xxxxxx a x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xx xxxxxxx pěstování, uvádění xx trh x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) označí xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, sklady nebo xxxxxx xxxxx a xxxxxxx jiné objekty xxxxxx obalového materiálu, x něhož xxx xxxxxx odebrán, x xxxxx přišly do xxxxx s uvedeným xxxxxxxxxx materiálem, xx xxxxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovány x xxxxx byl vzorek xxxxxxx,

x) provede odborné xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx nákazy v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 x xxxxxxx v xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx kontaktu, a xx základě klonové xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, zavlažování x xxxxxxxx nebo xxxx pěstitelské xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, označeným xxxxx xxxxxxx a),

c) xxxxxx karanténní xxxxx xx xxxxxxx označení xxxxxxxxxx předmětů nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x bezpečnostní xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x možného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x souladu x ustanovením xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx na xxxxxxxxxx vodu, xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx lilkovitých z xxxxxxxxxx vegetace, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Ústav

a) xxxxxxx xxxxxx laboratorní xxxxxxxxx odebraných vzorků xxxxxxxxxxx xxx a xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1 xx vhodných xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx výsledky xxxxxxxx laboratorního testování xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx vodu, z xxx xxxx odebírány xxxxxx, za zamořenou,

c) xxxxxx karanténní xxxxx xx základě označení xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a bezpečnostní xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx původcem hnědé xxxxxxx x xxxx xxxxxxx rozšíření xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx oznámí xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 písm. b), x xxxxx xxxxxxxxxxx x vymezení xxxxxxxxxxxx xxxxx a bezpečnostní xxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. x). Podrobnosti x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Pokud xxxx xxxxxxx stát xxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx původem x Xxxxx republiky x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx odstavce 3, Xxxxx odpovídajícím způsobem x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx xxxxxxxx předměty x xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx x vymezí xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxx stanoví xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. b) x xxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x), xxxxxxxx 2 xxxx. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx zajistí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 všech xxxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx klonově příbuzných x xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, a xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx zdroje xxxxxx x rozsahu možného xxxxxxxx x cílem xxxxxxxx míru rizika xxxxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 Ústav x případě xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx zamoření x xxxx vymezí xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), x) a x).

§7

Xxxxxxxx proti šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx hnědé hniloby

(1) Xxxxx v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx za zamořenou xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. a) xxxxx být xxxxxx x pod xxxxxxxx Xxxxxx xx x xx xxxxxx způsobem xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx předem ověří, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx této xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx označená xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. b) smí xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx způsobem xxxxxxxx x bodě 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, pokud Ústav xxxxxx ověří, že xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x že xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx této partie, x xxxxx není xxxx xxxxxx xx xxxxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 označena jako xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx prostředky, xxxxxx xxxx xxxxxx části x veškeré xxxx xxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. b), xx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx očistě x xxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 x xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) v xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. x), xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 x x xxxxxxx výskytu xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Ústav xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx proti šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé hniloby xxx xxxxxxxx xxxxxxx x odstavci 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x těchto xxxxxxxxxx x o xxxxxxxxxx nařízených podle xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx ostatním členským xxxxxx a Komisi xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx dotčených povinných xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 odst. 1 xxxxxx.

(3) Ústav xxxxx xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nařízená xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx doby xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Přechovávání xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby xx x xxxxxxx x §7 odst. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, šlechtitelským xxxx diagnostickým xxxxxx, xxxxx povoluje Xxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx opatření xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx jejich xxxxxx.

§8

Testování rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Rozmnožovací xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, vypěstovaný xx xxxxx Xxxxx republiky x uváděný xx xxx, xxxx být xxxxxxxx laboratornímu xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx v rámci xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 2, x xxxxxxx podle xxxxxxxx 2 a x xxxxxxx x §3 xxxx. 8 x 9, a xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Testování xxxxx odstavce 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx určené x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, a xxxx

x) xxxxx xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ bramboru xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx potvrzen xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx xx zaměřením xx tuto xxxxxxxxxx, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx partií základního xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x případech, x xxxxx prokazatelně xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ nebo reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x množení x xxxxxxxxxxxx roce, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce potvrzen x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx jejího xxxxxxxxx.

Xxxxxxx č. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Sb.

A. METODY XXXXXXXX, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE KROUŽKOVITOSTI

Předložené xxxxxxxxx xxxxxxxx popisují xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) diagnózy xxxxxxxxxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) detekce Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x rostlin xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus.

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku č. 1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajistit xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x kalibraci xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení s xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx od xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, zvláště xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX nebo XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx infekci xxxxxxxx kroužkovitosti a xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, pak je xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x musí xx pokračovat x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx považován xx xxxxxxxxxx původcem kroužkovitosti.

Z xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX test xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx xxxxxxxxx druhým xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje izolaci x identifikaci čisté xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Postupový xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx bramboru x x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx pro hlízy x rostliny xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx kroužkovitosti. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx diagnostickém médiu x x případě xxxxxxxxxxx výsledku identifikaci xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx příznaků je x oddíle 2.

(2) Xxxxxx testy jsou:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- PCR xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx není komplikovaná, xxxxxxxxx x pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx podařit. Saprofytické xxxxxxxx, které xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx přerůst nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx doporučuje používat xxxxxxxxxxxx i xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx MTNA (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx v xxxxxx 8.

(5) Pokud xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxxxx jsou typické, xxxx xxx izolace xxxxxxxxx znovu.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx dosáhne xx použití xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx patogenity xx xxxxxxx v xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xx založen xx xxxxx biologickém xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn xxxxxxx patogena, a xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že čistá xxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx pouze xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx dostačující x xxxx, xxx byl xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní kontroly x xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, že je xxxxx xxxx pozitivní, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ještě jeden xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Test imunofluorescence (XX).

Xxx xxxxxxxxx IF xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (viz xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx (viz xxxxx 6).

(6) FISH xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a protokoly (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxx xxx v mnoha xxxxxxxxx xxxxxx metoda xxx přímou xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX média nebo XXX-88 xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100. Typické xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx 3-10 dní xx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx potenciálu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx přípravu xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxx sekundární xxxxxxxx, xxxxx xxxx konkurencí Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x které xxxxx xxxxxxxx přerůst. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx provedena x xxxxxxx použitých xxx xxxxxxx (viz xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus z xxxxx bramborových extraktů xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx XXXX nebo XXX-88 xxxxx pravděpodobně xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pozitivní, xxx izolační xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx odebráním vodivého xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx test xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx použitím xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru

(1) Xxxxxxxxxx velikosti xxxxxx - xxx xxxxx 3.2.

(2) Metody xxxxxxxx x koncentrace patogena xxxx popsány x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Provede se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je druhý xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx za negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Selektivní xxxxxxxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 8.

(5) XX test xx xxxxxx v xxxxxx 4.

(6) PCR xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) XXXX test xx xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx xx xxxxxx v oddílu 7.

(9) Kultivace xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, xxx izolační xxxxx xxxx negativní, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx test xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx kultur, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xx jedná x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Test xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 10.

2. Vizuální xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx jen xxxxxxxxx x xxxxx xxx xx na xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx skryté xxxx se xxxxxx x příznaky jiných xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Proto xxxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx přehlédnuty. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx od xxxxxxxx hnědé hniloby; xxxxxxx xx obvykle xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx často x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx je omezený. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx listy. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx vodivých xxxxxx na xxxxxx xxxxx stonku často xxxx chlorotické, xxxxx xx xxxxxxxx mezižeberní xxxxxx. Xxxxxxxxxx děložní xxxxxx, listy x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Často xxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy bramboru

Nejranějšími xxxxxxxx jsou slabá xxxxxxxxxx nebo průsvitnost xxxxxxx xxx xxxxxxx x okolí xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx blízko xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx na pupkovém xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx než xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx žlutavé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxx, xxx při xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vystupují x cév sloupky xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v tomto xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx prstence, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxxx pupkové xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx šířit xx xxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx část xx xxxx xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx stadiích xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. V xxxxxxxx xxxx xx x Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxx xxxxx x prstencem svazků xxxxxxx, xxxx dochází x druhotnému xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxxxx maskovat a xxxx xxx obtížné, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx hnilob xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx příznaky. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx stránce http://forum.europa.eu.int/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx bramboru

Poznámka:

- Standardní xxxxxxxx vzorku je 200 hlíz na 1 test. lntenzivnější xxxxxxxxxx xxxxxxxx více xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Větší xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx vhodně xxxxxx i xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx je x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx extrakt lze xxxxxx také pro xxxxxxxx původce hnědé xxxxxxx, Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx se xxxxx. Xxxxxxx se vhodné xxxxxxxxxxx prostředky (s xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx být proveden XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX xxxx nebo přímá xxxxxxx.

3.1.1. Pomocí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nožem xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx hlízy. Opatrně xx vyříznou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx konců xxxxxxx. Na minimum xx omezí nadbytečná xxxx pletiva nezahrnující xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X po dobu xxxxxxx dvou týdnů.

Všechny xxxxx x podezřelými xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx dají stranou x xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce zjištěny xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx xx vizuální vyšetření xxxx xxxxx po xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxx. Všechny xxxxxxxxx hlízy x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx po xxxx 2 dnů xxx pokojové teplotě x xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx xxxxxxxx všech xxxxx. Xxxxxxx hlízy xx vzorku se xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx se shromáždí x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (v xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx je xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx, xxxxx to není xxxxx, xxxxxxxxxx xx x nádobě xxx xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx po dobu xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx maximálně 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx výkrojků x xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx přítomnosti xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx xx x xxxxxxx třepačce (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx chlazené;

nebo

b) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx jednorázovém maceračním xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení.

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx učinit bezpečnostní xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxx použita xxxxxxx sterilizovaná xxxxx (xxxx) a nádoby. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX test, xx nutno xxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxx nebo mlecí xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xx jedno xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx supernatant. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx pomalým xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µm), xxxxx se xxxxx xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx frakce xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x po xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1,5 xx peletového pufru (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µx xxx xxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, 500 µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µx pro xxxxxxxxxx účely. Xxxxx xx sterilní xxxxxxxx xx konečnou xxxxxxxxxxx 10-25 % (v/v) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, promíchá xx xxxxxxx a xxxxx při xxxxxxx -16 až -24°X (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 až -86°X (měsíce). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se nedoporučuje.

Pokud xx xxxxx transport xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.7. Xx xxxxxxxx nutné, xxx xx xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx kontaminaci. Xx xxxxx x xxx xxxxxxx xx XX xxxxx a xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx latentních xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxx až 200 xxxxx xxxxxx. (Pokud xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, měly xx xxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx dezinfikovaného xxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx o xxxxxxxxx 1-2 xx ze xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx přímo xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx dezinfikují xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx osuší xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx x uzavřené xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Části xxxxxx xx xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx xx zalijí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot/min) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) části xx xxxxxxxx rozdrtí x xxxxxx maceračním xxxxx x xxxxxxxxxx množstvím xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx použití gumového xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení. Pokud xx není xxxxx, xxxxxxxx se xxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx usazení, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.4 Další xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx podle xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Jedna xxxxxxxx se udržuje xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx polovina xx xxxxxxxx x 10-25 % (v/v) xxxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx -16 až -24 °X (týdny) xxxx xxx xxxxxxx -68 až -86 °X (měsíce), xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX test jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx hlavní screeningový xxxx x jeho xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx test PCR xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx výsledek xx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx analýzy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX xxxx používán xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xx xxxx polyklonální xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx x xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxx být xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx kmenu původce xxxxxxxxxxxxxx - ATCC33113 (XXXXX 2137) nebo XXXXX 2140. Doporučuje xx určovat titr xxx xxxxxx novou xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx stanoven xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxx xxxxxxx vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální xxxxxxxxxx xx měly xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Během xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx na titru. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx vzorkových xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 xx - 86 °C x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx peletového xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx při 7&xxxx;000 x x xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. To xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx (viz 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka x xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx x jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, suspendovaným ve xxxxxx x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X) by xx xxxx podle možnosti xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx xxxxxx, nejlépe x 10 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx škrobového xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x průměru 6 xx je xxxxxx 15 µl - xxx větší xxxxxx xxxxx vyšší) xxxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx okénka. Následně xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pelety (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx obrázku 1.

x) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x průměru 6 xx je xxxxxx 15 µl - pro větší xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100 x každého xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx duplikát xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx obrázku. 2.

4.2. Vysuší se xxxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx dodavatelů protilátek.

V xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx sklíčka xxxx dalším xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx boxu xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx IF xxxxx:

x) Podle přípravy xxxxxxx xx test x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x XX xxxxx. V xxxxx xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x ostatních xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (T/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx titr (2X).

x) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx oddílu 4.1. xxxx. a) a xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxx xxxxxxxxx okénko se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství protilátky xx xxxxxx okénku xxxx být xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní sklíčka xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °C).

4.3.3. Xxxxxxxx xx kapky xx všech xxxxxxxxxx xxxxxxx a tato xx xxxxxxx opláchnou xxxxxx XX. Xxxxx xx ponořením xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx v xxxxx XX. Xx třeba xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x pečlivě xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Sklíčka se xxxxxx xx vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředěním xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx musí xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx na vlhkém xxxxxx po xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx konjugátu xx setřesou xx xxxxxxx a xxxx xx opláchnou x xxxxx jako předtím (4.3.3.).

Xxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Napipetuje xx 5-10 µl 0,1X fosfátového xxxxx x glycerolem (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx krycí xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Testovací xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem s xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx 500x až 1000x. Xxxxxxxx se okénka xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx s žádnými xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se zkontroluje xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxx xxxx být xxxxx fluoreskující a xxxxx obarvené v xxxxxxx titru xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxx IF xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx xxxxx fluoreskující xxxxx x charakteristickou xxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus v xxxxxxxxxxx okénkách xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx brát x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x jakékoli kontaminace xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx pozitivních buněk (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx v xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx pracovním xxxxxx protilátek xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx pozitivní x xxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5x10³. Vzorek je xxxxxxxxx na potenciálně xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx za negativní. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Xxxx FISH

PRINCIP

Když xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx pozitivní, xxxx xxx jako druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x je xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxx testovány s xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující postup xx měl xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx jej úspěšně xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx uchován x xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 až -24 xxxx -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. kmen XXXXX 4053 nebo XX 406) x 0,01 X fosfátového xxxxx (XX) x 3-5 xxxxx kultury (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu

5.1.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx dobu 8 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Odstraní xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx v 500 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním fixačním xxxxxxxx je 96 % etanol. Pro xxxx použití xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX a 50 µx 96 % etanolu. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje xx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 75 µl 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx čisté 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 různé xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx x zředěný 1:100 x použitím 10 µl (x 0,01 X PB). Xxxxxxxxx xxxxxx vzorku (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % etanolu. X xxxxxxx, xx xx xxxxx FISH xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx stejné množství 0,01 M XX x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37 °C) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx a x xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Předhybridizace a xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx lyzozymu obsahující 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 xx pufru (100 xX Xxxx-XXX, 50 mM XXXX, xX 8,0). Tento xxxxxx lze xxxxxxxxx, xxx měl xx xx xxxxx jednou xxxxxxx a xxxxxx xxxxxx. Každý xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx lyzozymu a xxxxxxxx xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxxx teplotě. Potom xx xxxxxx xxxxxxx xx demineralizované xxxx, xxxxx jednou, x xxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 v xxxxx (20 xX Tris-HCl, 2 mM XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky x xxxxxxxx xx při xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 minuty. Sklíčka xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Připraví xx xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxx dna xxxxxxxxxxxx krabice tkaninou xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Krabice xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx peci při xxxxxxx 55 °C xx xxxx xxxxxxx 10 minut.

5.2.4. Připraví xx hybridizační roztok (dodatek 7) s 45 µx xx 1 xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx 5 minut xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.5. Xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x do xxxxxxx ze 4 xxxxxx na sklíčku / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6. Každé xxxxxxx se přikryje 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) tak, xxx xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx komory a xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x xxxx xxx xxxxxxx 55 °X x temnu.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx vody (Ultra xxxx xxxxx = XX), 1 l 1x hybmixu (334 xx 3x hybmix x 666 xx XXX) a 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 ml 3x hybmix x 833 xx XXX). Xxxxx x nich xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx umístí xx držáku sklíček.

5.2.9. Xxxxxxxx xx nadbytek xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx s 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx promývacího xxxxxxx 1/2 xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Sklíčka xx xxxxxx krátce xx XXX a xxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx roztoku (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, CA, USA xxxx xxxxxxx) xx xxxxx jamky x xxxx sklíčko xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx prohlížejí ihned x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630x xxxx 1&xxxx;000x pod xxxxxxxx imerzí. S xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx xxxxxxx gramnegativních xxxxx) xx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx obarvené Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx fluoreskující x xxxxx zbarveny. Xxxx XXXX (oddíl 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx a xxxxx xxxxxx. U vzorků, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, se xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx než x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx zopakován. Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx všechna xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění pozitivních xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx XXXX xxxxx. X xxxxxxxx z xxxxxxx části bramboru x částí xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx populace fluoreskujících xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx mnohem xxxx xxxxx než x XX testu.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx fluoreskující buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, viz 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx výsledku xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX testu xxxx xxxxxx, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx pozorovány v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxx testování. Xxxxxx, které obsahují xxxx než 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx rhodaminového filtru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. PCR test

PRINCIP

Použije-li xx PCR xxxx xxxx xxxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxxx xx XXX test xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, je xxx dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového diagramu.

Využití xxxx metody v xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx doporučuje xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x xxxxxxxxx. Přednostně xx používá xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx zabránilo kontaminaci xxxxxx xxxxxxx DNA. XXX xxxx xx xxxx provádět xxxxxxx xxxxxxxxx x laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X negativními xxxxxxxxxx (u průběhu xxxxxxxx DNA x XXX) by se xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, jestli došlo x přenosu XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

- extraktu ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a DNA xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x nimž byl xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- suspenze 10⁶ xxxxx na 1 xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 nebo XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx možno xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx různé metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x koncentrující xxxxxxx XXX v xxxxxxxx vzorku.

Následující metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x validovanou xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

a) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx lýzového xxxxx (100 xX XxXx, 10 mM Tris-HCl [xX 8,0], 1 xX EDTA [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx o xxxxxxx 95 °X na xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx vloží xx 5 minut xx xxxx.

4. Přidá xx 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx xx 1 xx x 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xx xxx teplotě 37 °C po xxxx 30 minut.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx se promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 minut.

6. Xxxxx se 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx)x xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx, xx usazenina xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá se 500 µl xxxxxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15 000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X xxx xxxxxxxx xxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xx xxxxx mikrozkumavky.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % etanolu (-20 °X), krátce xx promíchá třepáním x inkubuje xx xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx se na 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 minut xxx 4 °C x xxxxxxxx xx x pelety xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15 000 g xx xxxx 10 xxxxx při 4°X, xxxxxx se xxxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx na vzduchu xxxx v XXX xxxxx xxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx v 100 µx xxxxxxxx xxxx (XXX) x xxxxx stát xxxxxxx 20 xxxxx při xxxxxxxx teplotě.

16. Xxxxxxxx xx xxx teplotě -20 °X xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Jakákoliv bílá xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x pro XXX se xxxxxxx 5 µl supernatantu xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx extrakce XXX xx xx xxxxx použít, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx jsou při xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorky x kontroly pro XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Připraví xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx reakční směs xxx PCR x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, která xxxxxxxx xxxx interní xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx přidá 5 µx extraktu XXX xx 25 µl XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, která byla xxxxxxx xx xxxxx XXX namísto xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx stejného xxxxxxxxxxxx, který byl xxxxxx při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx reakční xxxxx XXX x xxxxxxx vzorku smíchané x 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového gelu x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X xx xx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Detekují se xxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 xx xx x) xx xxxx 30-45 minut, xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx xxx zacházení x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX o xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx restrikční enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a době x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX prosvícením xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledku XXX testu:

PCR xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxxx xxxxxxx v xxxxx vzorku, ale xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx: druhý xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx typický pro Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx nebyl xxxxxxxxxxxx žádným z xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x druhou sadou XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít podezření xx inhibici XXX, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx získán x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx z xxxxxxxxx kontroly x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX x interními xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx reakce došlo, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx z xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx kontaminaci, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Test xx xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx na 1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxx, které byly xxxxxxxxx x negativním (xxxxxxxx viz dodatek 2).

Nejvyšší xxxxxxxxx zjištění xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx však lze xxxxxxx xxxxxx i xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx odrůdy lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obohacující médium xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v případě xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxx růstové xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x pěstování jsou xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Používají xx xxxxx xxxxxxxx ve xxxx 2-3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxx xx zajistilo xxxxx využití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx i efektivní xxxxxxxxx, xxxx pro xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx vzorek.

7.2. Inokulace xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (pro xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xx xx vhodný xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx částí x xxxxxxxxx 5 xx hloubky, 10 xx xxxxx x 15 cm xxxxx). Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx se xxxx xxxxxx x blok xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Rostlinu xx xxxxx xxxxxxx xx místě gumovým xxxxxx xxxxx bloku.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx mezi děložními xxxxxx a xxxxxx xxxxxx listem xxxxxxx xxxx xxxxx úhlopříčný xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx přibližně xxxx xxx čtvrtiny xxxxxxx stonku.

7.2.3. Xxxxx xx přidrží xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x nanese xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxx linky xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx aplikovanou xxxxxxxx stříkačkou o xxxxxx 2 ml.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx II

7.3.1. Xx stonek xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx mezi xxxxxxx lístky x xxxxx pravý list xxxxx (přibližně 5 xx 10 µl) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx zářez (x xxxx přibližně 5°), xxxxxx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx jako 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x řezem xx xxxxx v xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx vazelínou z xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx napětí xxxxx (turgoru) se xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx vejcoplodého xx inokulují xxxxx xxx xxxxxxxxx lístky xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx jehlou (xx méně xxx 23 X). Peleta xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx rostliny lilku xxxxxxxxxxxx.

7.5. Jako pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 nebo 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a kde xx xx xxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx inokuluje 5 rostlin xxxxxxxxx 0,05 X PBS xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x karanténě xx xxxxxxxx podmínkách (dodatek 8) xx dobu xx 4 týdnů xxx teplotě 18-24 °X. Xxxxxxxx se xxxxxxxx za dostatečného xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) a xxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx při teplotách xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, inkubují se xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x negativní kontroly xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxx policích, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx oddělení xxxx xxxxxxxxx x nimi. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx různé xxxxxx xxxxxxxxxx blízko xxxx, oddělí xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x jiné xxxxxxxxxx xx věnuje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, aby xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx veškerým xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx bakterie x xxxxxxx xxxxxx na xxxxx.

7.8. Pravidelně xx xxxx dnech xx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx u lilku xxxxxxxxxxxx vadnutí listů, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (ztráta xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx nebo strakaté, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Povadlá místa xxxx xxxxxxxxxx mívají xxxxx xxxxxx vodnatý xxxxxx. Xxxxxxxxxx pletiva xxxxxx xxxxx jasně xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx neodumírají; xxx xxxx trvá xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx lilku vejcoplodého xxxx mnohem citlivější xxxx nízkým xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti než xxxxxx rostliny, proto xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx fázi xxx xxxxx x xxxx krátce před xx. Vadnutí xxxxx xxxx způsobovat populace xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. carotovora xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxx exigua xxx. foveata, jakož x velké koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxxxxxx původcem kroužkovitosti, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx listy xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx také připravit Xxxxxxx barvení: tento xxxx rozliší Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx Xxxxxxx spp

7.9. Xxxxxxx xx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace xx použití xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxx stonků rostlin. Xxxxxx listů x xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx vydezinfikuje otřením 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xX xxxx PCR xx šťávě x xxxxx a izoluje xx na xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) médiu (viz xxxxx 8). Může xx také připravit Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx identifikují a xxxxxxx se xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx růstové xxxxxxxx optimální, xx xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx zůstává v xxxxxxxxxx lilku vejcoplodého xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx inkubační xxxx xx 4 týdnů. Xxxxx xxxxxx po 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx test XX/XXX xx složeném xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 xx x xxxxx testované xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx potvrzena xxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx izolován a xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx xxxxxxxxxx, je xxxxx ho xxxxxxxx x pletiv xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx jej xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx saprofytické bakterie, x proto xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x pelety xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx izolace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx hlízy xxxx ze xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx všech xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx nevykazují xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx u xxxxx byl pozitivní xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX složených xxxxxx (xxx oddíl 7.9). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx maceraci xxxxxx xxxxx, měla xx xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se připraví xxxxxxxxx ředění xxxxxxxx 106 xxx xx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Aby xx xxxxxxxxx nebezpečí xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xx měla xxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx růst xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

8.1. Roztěr xx xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Xx 100 µx alikvotní xxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx šťávy z xxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění x xxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx obvykle xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx růstovým xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve vysokých xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx vzorku, x ředění 1/100 xx 1/10 000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxx teplotě 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx kontrola xxxxx zahrnuje xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x počítání xxxxx xxxxxxx podobných Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x xxxxxx xxxxxxxxx po 5,7 a 10 xxxxx.

8.2. Čištění podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx pěstovat xx YGM xxxxx; xxxxxxxxx a identifikace xx xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. nejlépe xx 3-5 dnech.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx na xxxxx x následujících xxxxx (složení xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx agar,

- xxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxx s minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 21-24 °C xx xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kolonie xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx hlavičky, xxxxxxxxx, smetanově xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx zaručení xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx rychlost růstu xxxxxxxx. Xxxxxxx kolonie xxxx smetanově xxxx xxxx xxxxx slonoviny, xxxxx xxxxx, okrouhlé, xxxxxx, xxxxxxxx, konvexně xxxxxxxxx, slizovitě tekuté, x rovnými xxxxxx x obvykle xxxx x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Podezřelé xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx (viz xxxxx 9) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx izolované kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

V xxxxxxx xxxxxxx xx zahrne xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx známý xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy

Zjišťují xx následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Veškerá xxxxx xx se měla xxxxxxxxx xxx 21 °X x po xxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, inkubuje xx xx xxxx xxxxxxx 20 dní.

Všechny xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx subkultur xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx musí provádět x xxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx agaru.

Test Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx nitrátů -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Tvorba X₂X -

Tvorba xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxx - nebo xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Xxxx v 7% NaCI -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx eskulinu +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - nebo xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX test

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx v xxxxx xx lF (dodatek 3).

x) Připraví xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xX xxxxxx (xxxxx 4).

d) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX titr xxxxxxx xxxxxxxx titru pozitivní xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx vodě (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx suspenze xxxxx x xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x ohřívacím xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx teplotě 100 °X xx xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxx podpořit xxxxxxxx xxxxxxx připraveného XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx xxxxx uložit xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C xx xx xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx postupy XXX (xxxx. Pastrik, 2000; viz dodatek 4; Li x xx Xxxx, 1995; Mills x xxx., 1997; Pastrik x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx pozitivní, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx fragmentu jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX test

a) Připraví xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na xx v UPW.

b) Xxxxxxx xx postup XXXX (oddíl 5)

c) Xxxx XXXX je xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx reakce xxxxxxx x pozitivní xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) po xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

x) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Anteiso X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 lso, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx se hodnota xxxxxxx pohybuje xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx se suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx se xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx x xxx., 2001.

10. Test patogenity

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx patogenity.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ buněk na xx z 3-denních xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 pravých xxxxx..

10.3. Inkubuje se xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx dostatečném xxxxxx x vysoké xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, aby xxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. U xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx typické xxxxxxx, avšak xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx nevykazují xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xx měly xxxxxxxxx až 3 xxxxx xxx teplotách xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxxxxxxx 25 °C. Xxxxxxxx xx xx 3 týdnech příznaky xxxxxxx nevyskytují, nemůže xxx kultura xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Izolace se xxxxxxx z xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x malém xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx MTNA x YPGA, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 xxx při xxxxxxx 21-23 °X x sleduje xx xxxxx kolonií xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus.

Dodatek 1

Laboratoře xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Linec	Rakousko
Departement Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Quarantaine xx la Xxxxx xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx de Protecção xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni institut xx biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro de Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx kontrol pro xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx základním xxxxx XXXX x xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 až 2 x 10⁸ xxxxx schopných xxxxxx xxxxxxx/xx. Toho xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zakalené xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx optické xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxx x pupkových xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x které xx xxxxx, xx xx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 sterilních xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se 100 µx suspenze C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx rnikrozkumavky. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použije xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxxxxx xx opatří štítkem.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µl xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx se xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X xx xx xxxx použití.

Přítomnost x xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x FISH xxxxx xx provedou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx IF, FISH x XXX musí xxx X. x. xxxxx. sepedonicus zjištěn x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x xxxxx být xxxxxxx v žádné x negativních kontrol.

Dodatek 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze skladovat xx xxxx až xxxxxxx xxxx.

1. Pufry xxx xxxxxxxx

1.1. Extrakční xxxx(50 mM xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x rostlinných xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxx xx sterilizace v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx následující xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx činidlo (*)	1,0 ml
Tetrasodiumpyrofosfát	Antioxidační xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50 x
(*) xxx použití xxx extrakci homogenizací

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá pro xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x pupkových částí xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx xx pelety.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 g

NaH₂PO₄. 2H₂O 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx IF xxxx

2.1. Xxxxx xxx IF (10 xX xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx dobu 15 min

2.2. IF-pufr-Tween

Tento xxxx xx používá x xxxx xxxxxxx. Xxxxx se 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx pro XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, pH 7,6

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxxx krycí xxxxxx xx okénka xxxxxxx na IF xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 g

Glycerol 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx dostupné, xxxx. Vectashield® (Vector Xxxxxxxxxxxx) nebo Citifluor® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Stanovení xxxxxxxxxxx xX x XXXX xxxxxxxxxxx buněk

1. Xxxxxxxx xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx mikroskopického sklíčka (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx na xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x

x = plocha xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx i = xxxxxxxxxx pole (v xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá se xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x kultivaci C. x xxxxx. sepedonicus

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Nutrient xxxx = NA)

Živný agar (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx agar = XXX)

Xxxxx bakto xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 X xx xxxx 20 min.

Kvasnično-pepton-glukózový agar (Xxxxx peptone xxxxxxx xxxx = YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Difco)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx sterilizace x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

Médium x xxxxxxxxxxx extraktem x xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx extract mineral xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (monohydrát)	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . H2O	0,015
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx při 115 °C xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx není xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx médií x XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 g
FeSO4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, xX xx upraví xx 7,2. Xx autoklávování (xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 C xx xxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx X 0,01 x.

X xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x nalidixic xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Xxxxx) (1 xx/xx) v xxxxxxxx xxxxxxxxx. Zásobní xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx média xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx antibiotik je xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx skladování x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx na 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X sulphate (Xxxxx) 0,003x, nalidixic xxxx (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxx xxxxxxx následovně: nalidixic xxxx v 0,01 X XxXX, cykloheximid x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx B xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx roztoky xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx základního xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x činidla xxx PCR

Poznámka:

Úvodní testování xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx testování xx xxxx nemělo xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Vícenásobný PCR xxxxxxxx x interní XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx gtg xxx xxx pa xx -3'

xxxxxx XXX-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx ccc x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx gca ata xxx ggt xxx xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- tcc xxx ggt xxx xxx xxx ga -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x XXX X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (sada PSA-primer(i).

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx PCR kontroly 18X xXXX 377 xx (sada NS-primerů).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 μl
10x XXX xxxx (1) (15 xX MgCl2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μx	0,1 mM
Primer XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx NS-7-F(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μM
Taq xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx objem	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za použití Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x Gibco XXX.

(²) Koncentrace xxxxxxx XX-7-X x XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx pupkové části xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody a xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Xxx použiti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx jinými xxxxxxxx izolace DNA xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx činidla.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 minuty xxx teplotě 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

10 xxxxx ii) 1 xxxxxx při xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 minuta xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx teplotě 72 °C (prodlužování xxxxx)

25 xxxxx x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX matrice)

vi) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (prodlužování xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx nutná xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii), iv), x), xx) a xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx enzymem

Produkty PCR xxxxxxxxxxxxx x DNA X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx charakteristickou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Bgl XX xx inkubaci xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x fragmentu xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx a 220 xx.

2. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 ml

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxx použitím se xxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro Xxx XXX-XX3-01: 5'- ttg xxx xxx gca xxx xxx xxx xxx -3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE TOXICKÝ! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (xxxx. Ultra xxxx water = (XXX)) na teplotu xxxxxxxxx 60 °X x přidá se 0,4 x parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1N XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX na 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (PB; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxx proužkem xx xxxxxxxxxxx xX x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx filtr x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx se xx 1x, xxxxx potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Hybmix

Sodium xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Sonda XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů x xxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je třeba 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 sklíček
Sterilní xxxxx čistá xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxx při xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx je xxxxx je xxxxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx elektrickým xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 g

Destilovaná voda 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x sterilizuje xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx vejcoplodého (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Semenáčky x xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx přepichují do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx ve skleníku xx xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka xxx: 14 xxxxx xxxx přirozená xxxxx xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: den: 21 xx 24 °C,

noc: 15 °X.

Xxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx barvení x Xxxxxxxxx modifikaci (Doetsch, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 g xxxxxxxxx amonného x 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx roztok

Jód 1 x

Xxxxx draselný 2 g

Destilovaná xxxx 300 xx

Xxxxx látky xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx tloučku x xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxx x xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx a uloží xx.

Xxxxxx: 1:10 pro xxxxxxxx pracovního roztoku.

Postup xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx se xx xxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx tekoucí xxxxx.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xx působit xx xxxx xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx tekoucí xxxxx x xxxxxx se xxxxx papírem.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx přidávaného 95 % xxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xx jemného xxxxxxxxxx do xxxxxxx xx dobu 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxx tekoucí vodou x xxxxxx se xxxxx papírem.

8. Zalije xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx pod xxxxxxx vodou a xxxxxx se savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx také použít xxxxxxxx xxxxxxxx roztoky xxxx barvicí xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx diagnosis xx xxx ring rot xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx batches xx xxxxxx xxxxxx. Commission xx the European Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11&xxxx;288 EN, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. F., 1970. Xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xxxxx xx bacteria xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Path., 49, 213-218.

3. Dinesen, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx diagnosis xx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xxxx diseased potato xxxxxx. XXXX Bull. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. N., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Manual of xxxxxxx for xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Society xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Xxxxxxx, F., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx oxidative xxxxxxxxxx xx carbohydrates by xxxxxxx gram-negative xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. X., 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx xxxxx whole xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. D. x X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx interpretation xx the XX xxxxxx for the xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx infections (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxx development xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx and Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx oxidase xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Rudolph, K x X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. X., X. Billing a X. X. Hayward, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx J. appl. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x P. X., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx of latent xxxx xxx (Corynebacterium xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Burkh.) in xxxxxx stocks. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Selection xx Xxxxxxxxxx Chain Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX intergenic spacer xxxxxx for xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, D., Russell, X., X. x X., X. Xxxxx, 1997. Specific detection xx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxx XXX sequences xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -H. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx polymerase xxxx xxxxxxxx-xxxxx techniques. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Pastrik, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx by multiplex XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx DNA. Xxxxxxxx Joiunal xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, C. X., 1959. Comparative xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx bacteria xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 pp.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, Y., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx X1X-XXX and xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx system. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Minnesota:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, V. X. X., 1967. X xxxxx xx xxx identification of xxx xxxxxx of xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Baltimore.

22. Smith, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, XX., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx using xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx primer xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. xxx X. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: report xx Xxxxxxxxxxx working xxxxx. Xxxxxxx van Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, B. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. R.; Xxxxx, X. X. x X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx of xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx hybridization xxxx 23x rRNA-targeted xxxxxx. Xxxx. Environ. Microbiol. 64, 4546-4554.

B. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové diagramy xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x bakteriálního xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx,

xx) detekce Ralstonia xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x ve xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum)

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, schválená xxxxxxx x podrobnosti xxx přípravu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx uvedeny x dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku 1.

Protože protokoly xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. solanacearum jako xxxxxxxxxxx materiálů, je xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x xxxxxxxxxxxxx zařízením xx odstraňování xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx úrovní X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení x xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x všechna xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeníngových xxxxx provedených xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx podezření xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx a musí xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxx a musí xx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx podle daného xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx považován za xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx vadnutí

Postup xxxxxxxxx xx určen xxx xxxxx x rostliny xxxxxxxx s xxxxxxxxxx x výskytu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo bakteriálního xxxxxxx. Zahrnuje rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx půdě x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

1) Xxxxx příznaků xx xxxxxxx x xxxxxx 2.1.

2) Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx usnadňují xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx dokonalé. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Test xx výtok xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.5.

7) Test FISH xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.8.

9) Test XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Patogen xx xxxxxxx xxxxxx izolovatelný x xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů (xxxxxxxxx xxxxxxx) (viz x xxxxxx 2.3.).

11) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

12) Kultivace může xxxxxx xxx pokročilých xxxxxx infekce x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx saprofytických xxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx kultivací na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Dílčí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, ale doporučuje xx xxx každý xxxx xxxxxx.

14) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x bodu 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky

Testování xx xxxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx screeningových xxxxx (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx x dále, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx xx R. solanacearum. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx x jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx podezřelý. Xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxx sérii xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx, ačkoli postup xxx xxxxxx i xx menší počet, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x dispozici.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 3.1.1.

3) Pokud xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xx-xx test negativní, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, že xx xxxx xxxxxxxxx, je xxx validaci prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx nebo xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx selektivní xxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx v xxxxxx 6.1.7.

8) Testy XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

11) Kultivace xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx stejného xxxxxx, xxxxxxxx provést test x dalšími xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

13) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Ralstonia solanacearum xx vzorcích rostlin xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete nevykazujících xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Viz xxxxx 3.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 3.2.1.

3) Xxxxx jsou alespoň xxx xxxxx založené xx různých biologických xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx provedena xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Je-li xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx je xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Jsou-li xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xx negativní. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

4) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx popsán x oddíle 6.1.4.

5) Xxxx XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX je xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.8.

9) Xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx nebo biotest xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx izolační xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx.

12) Spolehlivé identifikace xxxxxxx xxXxxx, u xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x X. solanacearum, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x polních xxxxxxxxxx xx rozpozná xxxxxxxx xxxxx směrem x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, přičemž x xxxx xxxxxxx x zotavení. X xxxxxx fázích xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zelené, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxx nekrózy. Dochází xxxx x ohýbání xxxxx xxxx. Vadnutí xxxxxxx výhonku nebo xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x uhynutím rostliny. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx z xxxxxxx xxxxxx táhnou vlákna xxxxx.

Xxxxx bramboru. Xxxxx xxxxxxxx je třeba xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx přes xxxxxxx xxxxx. X xxxx xxxx se infekce xxxxx podle xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx cévního xxxxxxxx, xx kterého xx několika xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx bledý xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx stává xxxxxxxxx xxxxxx x odumření xx xxxx rozšířit xx xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. X pokročilejších xxxxxx xx infekce xxxxxxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx a x xxxx xxxx xxxxxxx bakteriální xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx půdy. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx rozvoj měkkých xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx původu.

2.1.2. Příznaky x xxxxxxx

Xxxxxxxx rajčete. Xxxxxx xxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx listů. Xx xxxxxxxxxx podmínek pro xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °C, xxx xxxxxxxx vzdušné xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx dní xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx (teplota půdy xxxx xxx 21 °X) rostlina xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx se xxxx xxxxxx xxxxx počet xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pruhy od xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx nažloutlý xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Příznaky u xxxxxx hostitelů

Rostliny Xxxxxxx xxxxxxxxx x X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx plevelných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx zřídkakdy pozorovány xxxxxxxx vadnutí, pokud xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25 °X xxxx xxxx extrémně xxxxxx xxxxxxxxxxx inokula (xxxx. x xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rajčete). Xxx xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx u xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx S. xxxxxxxxx, xxxxx má xxxxxx x kořeny ve xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx světle xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pletiv xx příčném xxxx xxxxxx části stonku xxxx částí stonku xxx xxxxx. X xxxx xxxxxxx svazků xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx xxxxx tvořit xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, a xx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx dostačující. Xxxxxxx xx jeden xxxx xxxx následujících testů:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Test na xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule PHB x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx zviditelněny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x infikovaného xxxxxxx xx mikroskopickém xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X xxxx xxxxxxxxx černí (xxx oddíl 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx oddíl 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx rychlými xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (xxx oddíl 6.1.5.), test XXXX (xxx oddíl 6.1.7.), xxxxx ELISA (viz xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx oddíl 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx při xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx nebo vrstva xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx vláken xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Suspenduje xx x malém xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx (dodatek 4) x nechá xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Přenese xx 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 dní xxx xxxxxxx 28°X.

- Na xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx izoláty X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx a fluidní xxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, které xxxx zcela xxxxxxx xxxx.

- X Kelmanova xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx kolonie, které xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx solanacearum

Testy xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxx 6.2.

3. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 hlíz xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx této velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx vede x zpomalení nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx i xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx je x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Validace xxxxx xxxx uvedených zjišťovacích xxxxx xx založená xx xxxxxxxxx xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx níže xxxx xxx xxxxxx použit xxx xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx

x) Inkubace xxxxxx při xxxxxxx 2-30 °X po xxxx xx 2 xxxxx xxxx testováním xx podporu xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx desinfekční prostředky (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxx x případě, xxxx je xx xxxxxxxx příliš zeminy xxxx xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxx XXX nebo přímá xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx xxxx na xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém xxxxx xxxxx hlízy, xxx aby xxxx xxxxxxxxx vodivé pletivo. Xxxxxxx xx vyříznou xxxx výkrojky vodivých xxxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx cévní xxxxxx xx omezí xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) hlízy x podezřelými xxxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx odděleně.

Pokud xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx na řezu xxxxx na pupkovém xxxxx. Všechny xxxxxxxxx xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx dojít xx xxxxxxxxxxxx (suberizaci) x xxxxx se xxxxxxxxxx x chladu (4-10 °X) xx řádných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx včetně xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxx xxxxx přílohy XXX.

3.1.1.2. Výkrojky z xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx vyčištěny x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxx chlóru). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x pupkového xxxxx xxxxxxxx. Není-li xx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; v xxxxxx nejdéle 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx konců se xxxxxxxx jedním z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot./min) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx než 24 °X xxxx 16-24 xxxxx chlazené,

nebo

b) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx v utěsněném xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx zamezit xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx během xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xx použijí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) a nádoby. Xxx testu PCR xx nutno xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx přístroji. X xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx použít drcení x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx dekantuje. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx xxx pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx xxxx 10 minut při xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100 µx), xxxxx xx omyje xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx zahustí xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 g po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4-10 °X a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Peleta xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µl xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µl xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °C (xxxxxx). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx testování xxx xxxxxxx 4-10 °C.

Opakované xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx přeprava x xxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx nezbytně xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí pro xxxxxxx IF a xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

IF xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx FISH (xxx oddíl 6.1.7.)

Testy XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx lze vhodně xxxxxx xx smíšené xxxxxx x xxxxx xx 200 stonkových xxxxx. Provádí-li xx xxxxxxx, xxx xx xxx založen na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx populace.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx 1-2 xx xxxxxx xxxxxx stonků podle xxxxxxxxxxxxx postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx odebere xxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z xxxx xxxx skleníku: Xxxxxx dezinfikovaným nožem xx odebere xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x hlavním xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, 1 xx xxxxxx xxx z xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx odebere 1 xx xxxxxx xxx x paty xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země. U xxxxx potměchuti (X. xxxxxxxxx) xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 xx xxxx xx stonku xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x vodními xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x počtu xxxxxxx 10 rostlin xx 1 vzorkovací xxxxx xxx každou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx pozdního jara, xxxx x podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx infekci xx možné xxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx rostoucí xx xxxxxxx xxxxxx. Mezi xxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Solanum xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Datura xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx spp. a Xxxxxxxxx oleracea. Xxxxxxx xxxxxxxx plevelné druhy, xxxxx mohou xxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3 x kořenech x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, zahrnují Xxxxxxxx xxxxxxx, Bidens pilosa, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx album, Xxxxxxxxxx cannabinum, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx alba. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X této fázi xx možné provést xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (zbarvení xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx stranou atestuje xx odděleně (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% etanolem x xxxxx xxxxxx xxxxx papírem. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) xxxxxx xx části xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 4) a xxxxxx xx xxxxxxx třepačce (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °C xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) s přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) pomocí gumového xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, uloží xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xx 72 hodin xxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °X) na 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx zahušťování xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, ale lze xx provést filtrací xxxxx odstřeďováním xxxxxxxx x oddíle 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Čistý xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se rozdělí xx xxx stejné xxxx. Jeden díl xx xxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °C x druhý xxx xx skladuje x 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx) pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx protokolů xxxx x xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx IF (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx oddíl 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x identifikace původce xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx diagram xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx vodě

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx a doporučuje xx jen tehdy, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx izolační xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx popsán x oddíle 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.4.2. a 6.1.8.

(7) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

(8) Xxxxxxxxx může xxxxxx x důvodu konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx spolehlivost xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxx.

(9) Spolehlivá identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. solarcacearum xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

(10) Xxxx patogenity xx popsán x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x detekci xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxx vody a xxxxxx může xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx vody. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx detekce xx xxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx testu xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxx populacemi konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x odpadní xxxx než v xxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx schéma xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Z xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx nějakého xxxxxxxxx postupu (např. xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx), xxx xxxxx dojde xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx populací. Omezení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx v xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx výsledků. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx výskytu xxxx xxxxxxxxxxxxx patogenu x xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx omezení xxx xxxxxxx k podobnému xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx ze zpracování xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Zjištění R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx je nejspolehlivější x období xxxxxxxx xxxx, léta x xxxxxxx, xxx teplota xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x různé xxxx xxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxx x xxx x zastření xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30 xx xxx xxxxxxxx x 2 x xx břehu. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx odpadní xxxx. Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx nejméně 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx místo, z xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx 3 km xxxxxxx xxxx x vzorkují xx rovněž xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx být provedena xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx xxxxx vzorky xxx 10 000 g xx dobu. 10 xxxxx (xxxx 7000 x po xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C, xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx x 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Provede xx xxxxxxxx přes xxxxxxxx (xxxxxxxxx velikost xxxx 0,45 µm) x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 ml xxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx je xxxxxx xxx xxxxx objemy xxxx, xxxxx obsahují xxxx počet xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx u xxxxxx xxxxxxx vody, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx diagram x xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx dodatcích.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v půdě

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., xxx xxxx uvedeny doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(3) Obohacovací XXX xxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Biotest xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Kultivace může xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx testy xxxxxxxxxx xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx pro detekci x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx patogenu xx xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx xxx rovněž xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxx xxxx. Je xxxx nutné poznamenat, xx xxxx xxxxxx xxxxxx dostatečně xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx populací Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx infikovaných xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx xxxxx získaných xxxxxxxxxxx výsledků a xxxx xxx sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxx v půdě xxxx xxxx je xxxxx vzít v xxxxx omezenou citlivost xxxxxx xxxxxxxxxxx schématu. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx infikována, xxx x xxx xxxxxxx této xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování polní xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx hlístů. Na xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx xxxx xx 60 míst xx xxxxx 0,3 xx x hloubky 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 x xxxxxx 0,3 xx. Xxxx testováním xx xxxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 12-15 °X. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x kanalizace xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 kg x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xx každý xxxxxx xxxxx promíchá.

5.2.1.2. Dílčí xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx kalu xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx třeba, xxxxxxx 0,02% sterilního Xxxxx-20 a 10-20 x xxxxxxxxxx kamínků xxxx napomoci xxxxxxxx.

5.2.2. Testování

Postupový xxxxxxx a xxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Optimalizované xxxxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Xxxx na xxxxx xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: uřízne xx xxxxxx xxxxx nad xxxxxx xxxx. Řez xxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, xxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx bakteriálního xxxxx x infikovaného pletiva xxxx ze 48 xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx půdě XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx mikroskopické xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx PHB xxxxxxxxxx sp.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx uschnout x xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, aby se xxxxxxx fixovaly.

4. Xxxxxxxxx xx obarví buď xxxxxxx modří xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx modři x xxxxxxx xx inkubovat 10 minut při xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx barvící xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x kohoutku. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx se zakápne 8% vodním xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 minutu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Znovu se xxxxxxx xxxxxx xxxx x přiloží xx xxxxx xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem při 450 xx pod xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xx zvětšením 600x xx 1000x x použitím xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, zda xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx oranžová xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx světle, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Zakápnou xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx B x 70% xxxxxxx a xxxxxxxx se 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Odstraní se xxxxxxx roztok x xxxxxx xx opláchne xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxx xx přebytečná xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx do xxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx je xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx zakápnou 0,5% (x/x) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 vteřin xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: safranin xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx opláchnou xxxxx tekoucí xxxxx x xxxxxxxx, odsaje xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx se krycí xxxxxxx.

x) Xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx světlem xxx olejovou imersí x při xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Hledá xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx pozorovatelná xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx buňkami Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo obarvenými xxxxxxxxxx částicemi. Xxx xxxxxxx xxxxxxxx dostupného xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx postupuje xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx následující:

a) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx testovacího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx x xxxxxxxxxxx vzorcích xx jemném míchání xx dobu 15 xxxxxx objeví xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx použije tato xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx 1 ml xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použije xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx živné xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx pozornost. Xxxx, xxxxxxx X. solanacearum xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx přeplněny xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx inhibici, xxx xx xxx xxxxxx otestován znovu xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx čerstvě přípravených xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx touto xxxxxxx bude xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx -68 do -86 °C.

Pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx kmene biovaru 2 R. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx možné xxxxxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx odděleně xx xxxxxx x testování.

U xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx by měla xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků nejdříve xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx se xxxxxx x cílem zajistit, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xxxxxx se 50-100 µx extraktu xxxxxx xx 1 xxxxx pro xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx se xxxxxxx inkubovat při xxxxxxx 28 °X. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx jejich xxxx x xxx xx provádí xxxxxxxx xxxxx po 6 xxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX xxxx mléčně xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx a po 3 xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx pruhy xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx nebo jen xxxxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx rozetřou nebo xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., aby xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx uchovávají krátkodobě xx xxxxxxxx vodě (xX 6-8, xxx xxxxxx) při xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx teplotě -68 xx -86 °X xxxx lyofilizované.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxx (viz oddíl 6.2.) a xxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, jestliže xx 6 dnech xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, xx nedošlo x inhibici xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx vzorcích xxxx xxxxxxxx typické xxxxxxx X. solanacearum.

Test xxxxxxxx xx selektivní média xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx testy

Použije se xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx, např. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x extraktech xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx detekce. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xx zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. solanacearum xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx antagonismu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxxxx. X tohoto xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Kromě toho, xxxxxxx xxxx xxxxx x rozvoji xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X xxxxxxxxxxxxx testu XXX se xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10 ml xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx předem xxxxxxxx xx sterilních xxxxxxxx xxxx xxxxx. U xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxx extraktu xx xxxxxx xx xxxxxx (např. 100 xx x 1,0 xx obohacené xxxxx xxxx).

2. Inkubuje se 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 až 30 °X v xxxxxxx xxxx statické xxxxxxx x uvolněnými xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX nebo XXX se xxxxx xxxxx promíchá.

4. X xxxxxxxxxx bujónem se xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xx xxxxxx xx výše xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx inhibice xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx postupy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx testu XX xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx doporučuje xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx test XX xxxx xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx screeningový test xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX nebo FISH. Xxxxxxxx je xxxx XX xxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx reakci xxx testování suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk/ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx mají všechna xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Během testování xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx připravených extraktech xx vzorků. Xxxxxxxx xx xx nutné, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 až - 86 °X x xxxxxxxxx. Glycerol xxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 xx pufru (dodatek 4), 15minutovým xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x x xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx to xxxx potřeba, xxxxxxx xxxxx x jsou xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx pozitivní kontrolní xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X, x xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly se xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x testování jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x příslušném xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx v ředění 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Druhá řada xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx vhodné xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx větší x xxxxxxxxxx poměru) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx do xxxx xxxxxx. Druhá řada xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 2.

6.1.5.2. Vysuší xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °X), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxx po xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx měla xxx 1/2 xxxxx (X/2), ostatní 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (T/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x xxxxx XX. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx odst. 6.1.5.1.i) x 6.1.5.3.x)

Obrázek 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) a 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx pokryje xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx následovně:

2. Podložní xxxxxxx se inkubují xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 minut při xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx ze xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx se pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x následně x xxxxx IF. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx přebytečná vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx se stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx být stejné xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxx zakrytá xx xxxxxx xxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

6. Setřesou xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Napipetuje xx 5-10 ul 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x glycerolem (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx sklíčko.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x filtry xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx olejovou xxxx xxxxx imersí xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx se xxxxxx ve xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx s xxxxxxx nebo malým xxxxxx buněk se xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Buňky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx obarvené x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovním xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx xxx test XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií R. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx porovnání x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí být xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx buňky díky xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx zjištění pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

3. Existuje několik xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X peletách x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx stonku xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx s atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx IF:

i) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Výsledek XX xxxxx xx negativní xxx vzorky, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx XXX xxxx hlavní screeningový xxxx x výsledek xx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test, x xxxx izolace xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX použita xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 ml xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx x přesnosti xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijí xx schválená xxxxxxx x xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx se xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx třeba xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx PCR xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx laboranty x xxxxxxxxxxxx specializovaných xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx minimalizovala xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x PCR) by xx xxxx xxxx xxxxxxxx jako x xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x přenosu XXX.

XXX test xx xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx R. solanacearum x xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- reakční směs XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx části xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. solanacearum (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx možno, xxx PCR xxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxxxx odděleném xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx brambor.

Standardizované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx purifikace DNA

Používají xx výše xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Test kontrolního xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX a xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX ve xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla xxxxxxxxxxxxxx xxx použití xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX uvedenými x dodatku. 6.

x) Metoda podle Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µl xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (pH 8,0), 1 mM XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx termobloku xxxx xxxxx xxxxx x teplotou 95 °X na 10 xxx.

3. Mikrozkumavka xx xxxxx xx 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx zásobního xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Easy XXX® X (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 65 °X po dobu 30 minut.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Xxxx DNA® X (Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xx viskozita xxxxx a xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx fází x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx směs xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 g xx dobu 20 xxx. xxx xxxxxxx 4 °C.

9. Xxxxx xxxx se převede xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 ml 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx třepáním a xxxxxxxx xx xx xxxx xx dobu 10 xxx.

11. Odstřeďuje xx při 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C x xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x promíchá xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx.

14. Peleta se xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v XXX odparce.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxx x 100 µl sterilní XX x xxxxx xx stát xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xx použití xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx sraženina xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xx xxxxxxx xxx test PCR.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX, např. Xxxxxx DNeasy Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx při xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.1.6.2. PCR

1. Připraví xx testované vzorky x kontroly pro XXX xxxxx schválených xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxx xxxxxxxx DNA (1:10 xx sterilní xxxx).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx reakční xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx možno, doporučuje xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

3. Do xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx extraktu XXX xx 25 µx XXX reakce xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx PCR a xxxxx xx týž xxxxx UM jako xxx xxx, který xxx xxxxxx xx xxxxx PCR xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxx termocykleru, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx testování, x xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

1. Amplikony se xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx. Nanese xx xxxxxxx 12 µx xxxxx amplifikované XXX x xxxxxxx xxxxxx s 3 µx nanášecího xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx v Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx vhodný XXX marker, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx dobu 30-60 xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx zacházení x xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx gelu xx xxxxxxx amplifikované produkty XXX x očekávané xxxxxxxxx a výsledek xx zdokumentuje.

4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx zbývajícím vzorku xxxxxxxxxxxxx DNA inkubací xxx optimální xxxxxxx x xxxx shodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (viz dodatek 6). Xxxxxxxxx fragmenty xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx gelu x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX světlem xx xxxxxxxx ethidiumbromidem x porovnává se x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxx u xxxxxxxxxx xxxxxx zjištěn, xxx xx zjištěn x xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx PCR s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery xxxxxxxxxxxx xxx rostlinu: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx amplifikován se xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx PCR xx pozitivní, xxxxxxxx xx zjištěn xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum očekávané xxxxxxxxx x (xxxxxxxx) xxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx také xxxxxx xxxxxxxxxx testu x xxxxxx sadou primerů XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, jestliže xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahujícího R. xxxxxxxxxxxx ve xxxx, xxxxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. V xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, jestliže není xxxxxx xxxxx ze xxxx xxxxxxxxx.

X případě, xx očekávaný amplikon xx získán x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx podezření xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx a xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX test. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xx x dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx schválené xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto metodou xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx X xxxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx pokud možno xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx jej xxxxxxx provést x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě - 16 až - 24 °X nebo - 68 xx - 86 °C.

Jako xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx na 1 xx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (PB) xx 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno v dodatku 3 X.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx v tomto xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx provede xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx fixační xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x odstřeďuje se xx xxxx 7 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

3. Odstraní se xxxxxxxxxxx a rozpustí xx xxxxxx ve 200 µl fixačního xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 xxxxxx x xxxxxxxxx zařízení.

4. Xxxxxxxxxx se 7 xxxxx xxx 7 000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx a resuspenduje xx xxxxxx v 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx použijí 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, a xx neředěný a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49 µl) xxxx být xxxxxx xxx teplotě - 20 °X po xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X případě, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se etanol xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (zamíchá xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37 °X) x fixují xx xxx plamenem.

V xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x pokračovat v xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx by xxxx xxx skladována chráněna xxxx xxxxxxx x x xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Hybridizace

1. Xxxxxxxxxxx xx buňky x postupné xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % x 96 %, pokaždé xx dobu 1 xxxxxx. Osuší xx xxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem nasáklým xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx při xxxxxxx 45 °C xx xxxx nejméně 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µl hybridizačního xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx středová xxxxxx (3 x 8) se nechají xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx první x xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx xxx, xxx xxx ně xxxxxxx vzduch. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx po dobu 5 xxxxx x xxxxxx při teplotě 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxx x molekulární kvalitou (Xxxxx X), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx s xxxxxxxxxxx kvalitou) x 1 l 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 ml xxxx x molekulární kvalitou). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx lázni x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

7. Spláchne xx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx dobu 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx xxx teplotě 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx přemístí do xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx x xxxxx xx inkubovat xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Sklíčka xx xxxxxx ponoří xx UPW (např. Xxxxx X water) x xxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1 000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx morfologie x morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x pravých úhlech x xxxxx obvodu. X vzorků, kde xxxxxx pozorovány xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx nejméně 40 polí mikroskopu.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. solanacearum x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xx xxxxxxx v xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx jakoukoli kontaminaci xxxx xxx test xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx v xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx várce xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx kontaminace pufru xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx buňky xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx testu XXXX x xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx fluorescenčních xxxxx xx xxxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, i xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x xxxxx XX.

5. V xxxxx xx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx použití FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x nejsou pozorovány x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxx xxxxxxxxx. Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx za negativní.

ii) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. solanacearum, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx ELISA Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX lze xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, PCR xxxx XXXX xxx xxxx relativně xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx použití XXX ELISA je xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx testu XXXXX xxxx zvýšit citlivost xxxxx, xxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx x nezdarem xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx vzorku.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum. Doporučuje xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx k xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx suspense obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx X. solanacearum a xxxxxxx xxxxxxxx druhotných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx výrobce. Xxx xxxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx blízké xxxx xxxxxx jakou xxxxx komerční formulace.

Určí xx titr protilátek xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx negativní x xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx působeni x xxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx použijí jako xxxxxx negativní kontroly.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx použijí xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 xx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (např. kmen XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 2 X x X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx na každé xxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx suspenze 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xx mikrotitrové destičce xxxxx odděleny xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx ELISA.

a) Xxxxxxx xxxx ELISA (Robinson Xxxxx xx al., 1995)

1) Použije xx 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Zahřátí xx 100 °X xx 4 minuty ve xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x některých xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Přidá xx xxxxxx množství xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxx se xxxxxxxx.

3) Xxxxxx se 100 µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Nunc-Polysorp nebo xxxxxxxxxx) x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxx 37 °X nebo 14 - 18 x xxx teplotě 4 °X.

4) Extrakty xx vylijí x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx vymyji xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx pufru (dodatek 4). U xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx protilátek se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx je titr).

6) Xxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při teplotě 37 °C.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy v xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx jamky x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx jako předtím (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 405 xx v xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx x uhličitanovém xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx jamky. Xxxxx xx inkubovat při xxxxxxx 37 °C 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° X xx xxxx 16 hodin.

2) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Přidá xx 190 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx nejméně xxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx xx každé xxxxxxxx. Xxxxx xx inkubovat 16 hodin xxx xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx se třikrát xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xxxxx xx 190 µx do xxxxx xxxxx x xxxxx stát 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

5) Xxxxx xx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx použitím PBS-Tween (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx se xxxxxx protimyšího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Přidá xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x nechá se xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Jamky xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 mg x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx xx každé xxxxx a inkubuje xx x temnu xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx xxxxxxx x pravidelných xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) z xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx všechny xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků jsou xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx se substrátem) x jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů.

Test ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx OH x xxxxx xx xxxxxxx vzorkem xxxx xxxxx xxx dvojnásobek XX x negativním xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx hodnoty OH xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx inhibován. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo nespecifickému xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx extraktu xx xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány x xxxxxxxxx v xxxxxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx citlivostí xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx fázi xxxxx xxxxxxx listů x xxxxxxx xxxxxx. Podrobnosti xxxxxxxxx xxx v dodatku 8. Nebo xx xxxxxxx lilek (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Beauty xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. listů xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxxxx u lilku xxxx méně výrazné x xxxxxxxx se xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx proto xxxxxx xxxxxxxx rajčat.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µx xxxxxxxx xx vzorku xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx stonky xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx pomocí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx méně xxx 23X). Xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx zářezem

Rostlina xx xxxxxxx xxxx xxxxx prsty x xxxxxxx xx kápne xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx pelety xx xxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx příčný xxx xxx 1 xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx řez xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Stejnou xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx vodní xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk na 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek, x xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx zabránilo vzájemné xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx růst x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °X x xxxxxx relativní xxxxxxxx x přiměřeným xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx rostliny xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Musejí-li xxx rostliny x xxxxxxx xxxxxx po xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx, oddělí xx vhodnými xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx zvláštní xxxxxxxxx xxxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, protože by xxxxx přenést xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxx vadnutí, epinastie, xxxxxxx anebo krnění xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx kultury (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxx XX/XXX/xxxxxxx na xxxxxxxx vzorku xx xxxxxxxx stonků dlouhých 1 xx x xxxxx testovací xxxxxxxx, xxxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (bod 4.1).

6.1.9.7. Identifikují xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx mohou xxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx bakteriemi X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. solanacearum použitím xxxxxxx dvou následujících xxxxx založených na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx případně xxxxx xxxxxxxxxx kmeny xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Lelliott x Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Očekávaný xxxxxxxx

Xxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxx -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx test xxxxx Xxxxxxx +

Redukce xxxxxxxxx +

Xxxxxxx citrátů +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Růst x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx aktivita -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx škrobu -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx a xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x xxxxx IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx se xxxx dvojnásobných zředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX metoda (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX kultury xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Test XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx testů xx xxxxxxxxx kromě xxxx xxxxxx jiný xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Připraví se xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx na 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx XXXXX xx specifickou monoklonální xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Test ELISA xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx z této xxxxxxx xx nejméně xxxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx kontroly.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Připraví xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = ultra xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Ohřeje xx 100 µx xxxxxxx suspense x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °C 4 minuty. Vzorky xxxxx xxx uchovány xxx xxxxxxx - 16 až - 24 °C xx xxxxxxx použití.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. solanacearum (xxxx. Xxxx et xx. (1993); Xxxxxxx a Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx al. (2002); Xxxxxxxx xx xx. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikony XXX xxxx stejnou xxxxxxxx x mají stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentů xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx FISH

6.2.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x UM.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx metoda XXXX (6.1.7) x xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, jestliže xx u xxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx teplotě 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx stejný xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX x absence 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Ralstonia xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx nový xxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje charakteristika xxxxx použitím xxxxx x následujících metod.

U xxxxxxx provedeného xxxxx xx zahrnou xxxxxxxx xxxxx referenční xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Stanovení xxxxxxx

X. solanacearum xxxxx xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx tří disacharidů x tří hexosových xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Test xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx sterilní xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx se xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx žlutou a xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek xxxxx.

Dodatečné testy xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx lze dosáhnout xxxxxxxxxxxx technikami, xxxx xxx patří:

1. Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx primerů XXX, XXX a XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Smith xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx AFLP (Xxx xxx Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx PCR

Specifické primery XXX (Pastrik xx xx, 2002; viz dodatek 6) lze použít x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxx 1 (biovary 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2X) R. xxxxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Xxxx et xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx virulence kultur xxxxxxxxxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx test xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx se inokulum x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xx 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx se 5 xx 10 xxxxxxxxxx sazenic rajčete xxxx lilku xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx odst. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 xxxxx při xxxxxxx 25-28 °C x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx půdy. U xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vadnutí xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx této xxxx xxxxxxxx, kultura xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx forma X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ze stonku xxx 2 cm xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx rozmělní x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Xx inkubaci 48 až 72 xxxxx při xxxxxxx 28 °X se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Dodatek 2

x) Xxxxx půdy xxx xxxxxxx a xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Glukóza (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7H₂O 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují x xxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °X x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Sigma), xx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Validované xxxxxxxxxx xxxxx půdy

Živná xxxx SMSA (Englebrecht 1994 ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xx al., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx půda

Casamino xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx pozn. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut.

Ochladí se xx 50 °X x xxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx složek, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 mg/l

Polymixin-B-suIfát (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Signa X-0125) 1&xxxx;250 X (přibližně 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx může xxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) může xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X xxxxxxx xxxxxxx bude růst X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx to xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx xxxxxx x 1-2 xxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x rozptýlenější xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Zvýšení xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxx růstu

Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx teplotě 4 °X x xxxxx x xxxx se xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Misky s xxxxxx by xxxx xxx xxxx použitím xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx přílišnému xxxxxxxx média.

Každá nově xxxxxxxxxx šarže živné xxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx živné půdy xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx se xx 2 až 5 dnech při xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Živná xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx jako pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, ale xxxxxxx xx Bacto-Agar x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx půda Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 g

NaNO₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx se xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx x xxxxxxx xx xx 50 °C. Přidá xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jako pro xxxxxx xxxx SMSA.

Dodatek 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál

a) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx bud' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx testů, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (tabulka 2). Xxxxxxx kmeny xxxx komerčně xxxxxxxx x xxx xx xxxxxx x těchto xxxxxx:

1. Národní xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxx (XXXXX), Ústřední xxxxxxx xxxxxxxxx York, XX.

2. Xxxxxx kultur xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (PD), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Francouzská xxxxxx patogenních bakterií xxxxxxx (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx výše uvedených xxxxx může být xxxxxxxx pouze x xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x původních xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx SMT xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx testů

b) Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx x testech xxxxxxx a testech xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2 X. solanacearum (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx screeningové xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x FISH

Kultivuje xx 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xx SMSA xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx se v 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxx buněčná xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ buněk xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Obvykle se xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx rovnající xx optické xxxxxxx 0,15 při 600 xx.

Xxxxxxx xx dřeň x xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz z xxxxxxxx odrůdy s xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx ví, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx postupem x xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx se 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek o xxxxxx 1,5 xx x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx první xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jako kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Mikrozkumavky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx se xxxxxxx extrakce XXX x pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x FISH xxxxx xx provede xxxx xxxxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx IF, FISH x XXX xxxx xxx R. solanacearum xxxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx zjištěn x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

OBECNĚ: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx jednoho xxxx.

1. Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx pufr (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Tento pufr xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx resuspenzi x xxxxxx extraktů x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx bramborových hlíz xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx ve fyziologickém xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx pufr se xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx podložních sklíček.

Přidá xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx pro XX.

Xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx používá xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx sklíček na XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx jsou komerčně xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Laboratories) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Pufry xxx účely nepřímého xxxxx ELISA

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, je xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx přidat xxxxxxxxx sodný (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxx sodného pufrovaný xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

NaCI 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 ml

Polyvinylpyrrolidon-44000 (PVP-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx doplnit xx 100 xx

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx xx xxxxxx xX xx 9,8.

Doplní xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 g XxXX₂.

Xxxxxxxx se dvě 5 mg tabletky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx xxxxx DASI XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, pH 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 g

NaH CO₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 ml

Rozpustí xx xxxxxx x zkontroluje xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

4.3. PBS-Tween

10xPBS 50 xx

10 %Tween 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx a xxxxxxx xx xxxxxxx xX 9,8 koncentrovanou HCl.

Dodatek 5

1. Vypočítá se xxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Xxxxxxxx se xxxxx typických fluoreskujících xxxxx v okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x x X/x,

xxx S = xxxxxx xxxxxxx pole xx xxxxxxx x xxxx xxxxxx x

x - plocha pole xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = koeficient xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = tubusový koeficient (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x atd.).

3. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxx okénku x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx protokoly x xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištěni xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk R. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx testování xx xxxx xxxxxx vykazovat xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX AGC XXX XXX CCT XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-XXX XXX XXX GCC XXX XXX AGG XXX-3'

Xxxxxxxxx velikost amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: i) 2 minuty xxx 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 sekund xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 10 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxxxx syntéza)

vi) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1: 5'-agt xxx xxx xxx xxx xxx x -3'

Reverzní xxxxxx Xx-2: 5'-ggg xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx DNA = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	16,025 μl
10x xxxx XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) a Xxxxx BRL. Poznámka: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler MJ Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Perkin Xxxxx XxxxxXxx x xxxx mohou být xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx koncentracích.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx při 95 °X (denaturace templátové XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (syntéza xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů bude xxxxx vyžadovat úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) a xx).

2.4. Restrikční enzymová xxxxxxx amplikonu

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z X. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx X xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X. Restrikční xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx mají xxxxxxxx 457 xx x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx al., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer RS-1-F: 5'-XXX AAC GAA XXX XXX XXX XXX TA-3'

Reverzní xxxxxx XX-1-X: 5'-CCC XXX XXX GGC XXX XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx XX-5-X: 5'-XXX XXX XXX GAA XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA TCA XXX XXX TGT XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 bp (xxxx primerů XX). Xxxxxxxxx velikost amplikonu xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 bp (sada xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx podmínky PCR

Provede xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) xxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) x xx).

3.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx 1 xxxx Isoschizomere (xxxx. Mva 1269 X) po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X.

4. Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx pro xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1-X: 5'-ACT XXX XXX GCA XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX GAC X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX ACG XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX R. solanacearum:

s Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Reakční xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx 1/2- a xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx templátové DNA)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 sekund xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx při 72 °X (konečná syntéza)

vi) xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl optimalizován xxx xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých kroků xxxxx ii), xxx) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Xx-1-X x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Bsm X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (např. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx x DNA X. xxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxx Rs-1-F x Xx-3-X xxxxxx žádná xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx roztok)

Bromfenolová modř 5 g

Destilovaná (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) voda (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (např. xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-ggc xxx xxx caa xxx acc xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sonda XXX-338-XXXX: 5'-xxx gcc tcc xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX TOXICKÝ. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx čisté xxxx (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx přidání 5 xxxxx 1N NaOH x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxxx se pH xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx pomocí XXx xxxx NaOH. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx a xxxxxxxx xx chráněný před xxxxxxx xxx teplotě 4 °X xx xxxxxxx použití.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 M

Tris-HCI 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx a autoklávovaný) 15 mM

Zředí xx xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx dodecyl xxxxxx (XXX) 0,01 %

Formamid 30 %

Sonda EUB 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 nebo XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 1. Xxx xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx třeba 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX VELMI JEDOVATÝ, XXXXX POUŽÍVAT RUKAVICE X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1. Xxxxxxxxxx množství pro xxxxxxxx hybridizační směsi

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx světlocitlivé xxxxxxxxxx se uchovávají x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx zářením xxxx xxxxxxxxxxx světlem.

5. 0,1M xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx x rajčete

Vysejí xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) nebo xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx substrátu.

Rostliny xxxxx x rajčete by xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxx xx delší;

Teplota: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx odrůda xxxxxxx: "Moneymaker"

Dodavatelé: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx and X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx microbiology. X. Bacteriol. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 Xxxx 1998 xx xxx control xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofthe Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx and X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx the xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, P., Gorris, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, J.L., Collar, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Enrichment Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Assay Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Antibody xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx Xxxxxxxxxxxx Potato Xxxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, E. xxx Xxxxxxxx, L. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx restriction xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, J., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Sensitivity xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Bulletin 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx the isolation xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Hayward (xx.) Xxxxxxxxx Wilt Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx for xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Variation xx xxxxxxx xxxxxxxxxx in xxxxxxx ofYseudomonas xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, M. Xxxxxx-xxxxx, X. Yoshiwara xxx X. Xxxxx. 1998. Detection xx xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxx xxxxx a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x XXX xxxxxxxxx. X. Phytopathololry 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X detection xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx symptomless potato xxxxxx and some xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxx specificity. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx analysis. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Kelman, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx pathogenicity xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx x tetrazolium xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Klement X.; Xxxxxxx, K xxx X.X. Sands, 1990. Xxxxxxx in Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Lelliott, X.X. xxx Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx diagnosis xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx plants. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 pp.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, P., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx enricliment xxxxxxxx selective isolation, xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Delme xx xx., (eds). Xxxxxx Xxxxxxxx Publishers. xx. 117-121.

17. Xxxxx, F.J., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx De Xxxxxx, F.J., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XXX. Applied xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxxx, C.T. xxx De Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx campestris xx. xxxxxxxxxxx. Phytopathology 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, J.-F Xxxx, X.-X Xx, R. Xxxxxxxxx, M. Fegan, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, W.F. Hong, X.X. Holloway, X.X. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx method for xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx DNA xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx solanacearum). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, K.H. xxx Xxxxx, E. 2000. Detection of X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. X. Phytopathology 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx and xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx of 16X-23X ribosomal intergenic xxxxxx region xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Robinson-Smith, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X.X. (1995) Production xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx agent xx xxxxxxxxx wilt. Food xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Minnesota: 373 xx.

24. Seal, X.X., L.A. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx partial 16X rRNA xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx oligonucleotide xxxxxxx xxx sensitive xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Microbiol. 139: 1587-1594.

25. Snith, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. xxx Saddler, X.X. 1995. Genetic xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Grouping xx plant xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, A.C., Sly, XX, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx strains of Xxxxxxxxxxxx solanacearum, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx disease bacterium xx xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Wolf, X.X., Bonants, P.J.M., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Trigalet, X., Xxxxxxxxx, X. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx by XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, P., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Weller, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' nuclease XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. van Xxxxxxxxx, J.D. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx rot xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXXxxxxxxxx probes. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.