Směrnice Xxxxxx 2000/33/ES
ze xxx 25. xxxxx 2000,
xxxxxx se xx xxxxxxx xxxxx přizpůsobuje xxxxxxxxxxx xxxxxxx směrnice Xxxx 67/548/EHS o xxxxxxxxxx právních x xxxxxxxxx předpisů xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, balení x označování nebezpečných xxxxx [1]
(Xxxx s xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx na xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX xx xxx 27. xxxxxx 1967 x sbližování xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx parlamentu x Xxxx 1999/33/ES [3], x xxxxxxx xx xxxxxx 28 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxxx xxxxxxx:
(1) X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX xx stanoví xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x přípravků. Je xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx technickému xxxxxxx.
(2) Xxxxx xx. 7 xxxx. 2 xxxxxxxx Xxxx 86/609/XXX xx xxx 24. xxxxxxxxx 1986 o xxxxxxxxxx xxxxxxxx x správních xxxxxxxx členských xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx používaných xxx xxxxxxx a jiné xxxxxxx xxxxx [4] xxxxx xxx xxxxx, xxx xxxx xx xxx xxxxxxx zvíře, xxxxxxxx, je-li rozumně x prakticky xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Komise xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/EHS xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx nichž xxxxxx xxxxxxxxx zvířata, x cílem xxxxxxxxxxx xx xxx zkoušení xxxxxxxxxx xxxxx podle xx. 3 odst. 1 xxxxxxxx 67/548/XXX.
(4) Xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx v xxxxxxx xx stanoviskem Výboru xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx směrnic x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxx příloh X a XX xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx do části X přílohy V xxxxxxxx 67/548/EHS.
Článek 2
1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx právní x xxxxxxx předpisy nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x touto xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 2001. Xxxxxxxxxx x xxxx uvědomí Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx odkaz na xxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxx takový xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx xxxxx sdělí Xxxxxx xxxxx hlavních xxxxxxxxxx vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxx x xxxxxxx působnosti xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x přijatými xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Evropských společenství.
Xxxxxx 4
Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 25. xxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxöx
xxxxxx Xxxxxx
[1] Xxxxxxx před xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx.
[2] Xx. věst. 196, 16.8.1967, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Xx. xxxx. X 358, 18.12.1986, x. 1.
XXXXXXX I
"B.40 LEPTAVÉ XXXXXX XX XXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxx xxxxxxx xx vitro xx xxxxxxx xxxxxx na xxxx na principu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx potkana (XXX) x xxxxxxx x xxxxxxxx modelu xxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx alternativních metod (XXXXX, Xxxxxxxx výzkumné xxxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx) (1, 2, 3) xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx. Validační studie XXXXX xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxx lze xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx kůži. Protokol x zkoušce xxxxxxxx xx xxxxxx lidské xxxx xxxx umožnil xxxxxxx rozlišit stupně xxxxxxxx účinků (známé xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, X 35 x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kůže, X 34) (2). Xxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxx je xxxxxx; xxxxx zkoušky, xxxxx má xxx xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx požadavcích a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxx xxxx Xxxxxx úvod, xxxx X.
1.2 Definice
Poleptání kůže: xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx zkoušeného xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx viz body 1.5.3.4 x 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx TER xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xx xx 24 h xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx terčíků xxxx xxxxxxx usmrcených xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx způsobit xxxxxx normální xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vrstvy (xxxxxxx xxxxxxx), která xx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx xxxxxx (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx x nedráždivé xxxxx xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x neutrální xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx (6)) xxx zařadit xxxxxx xxx stanovení xxxxxx xxxxxxx, aby se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků získaných xxxxx pro xxxx xxxxx xxxxxxxxxx látek (2, 7).
1.5 Popis xxxxxxxx metody — xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
1.5.1 Xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx musí xxx xxxxxxxxxx z xxxxxxx (20 — 23 xxxxxxx) xxxxxxx (Wistar xxxx xxxxxxxxxxx kmen). Xxxxxxx a xxxxx xxxx se opatrně xxxxxxxx xxxxxxx strojkem. Xxxxxxx xx xxxx xxxxx opatrným xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx ponoří xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx xxxx. streptomycin, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx třetí x xxxxxx xxx xx xxxxxx omytí znovu xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xx 3 dnů (x xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx starší xxx 31 dnů).
1.5.2 Příprava xxxxxxx kůže
Zvířata xx xxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx kůže x xxxxxxxxxx tuk xx x xxxx opatrně xxxxxxxxx. Xxxx xx xxxx přeloží přes xxxxx xxxxxxxxx (PTFE) xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx byla v xxxxxxxx x trubičkou. Xxxx konec xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X-xxxxxxx, aby xxxx xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx tkáně xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx a O-kroužku xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxxx X-xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pružinové xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxxx xxxxxx hořečnatého (154 xX) (xxxxxxx 2).
1.5.3 Zkušební xxxxxx
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (150 μx) se aplikuje xx xxxxxxxxx uvnitř xxxxxxxx (obr. 2). Xxx zkoušení pevných xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx, xxx byla pokryta xxxx xxxxxxxxx. Poté xx xx povrch xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (150 μx) a xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx látkami x xxxx by xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx. U xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx zahřátím xx na 30 °X, xxx xx xxxxxxxx látka xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxx nebo xx prášek.
Ke zkoušce xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx terčíky xxxx. Zkoušená xxxxx xx xxxxxxxx po xxxx 24 x (xxx xxxx xxx 1.5.3.4). Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx tekoucí vody x teplotě xxxxxxx 30 °C. Odstranění xxxxxxxxxx xxxxx, které x xxxxxxxx ztuhly, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx teplé xx 30 °C.
1.5.3.2 Xxxxxx XXX
XXX xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx (např. AIM 401 nebo 6401 xxxx ekvivalentní). Xxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx objemu 70 % xxxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx převrácením xxxxxxx x xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 3 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX). Elektrody xxxxxx xx xxxxxx xx xxx xxxxxx terčíku xxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xΩ/xxxxxx xxxx (obrázek 2). Xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pod xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx obrázku 1. Xxxxxx xxxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx odporu xxxxxx x xxxxx konec xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx síranu xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx komory xxx, xxx spočívala xx xxx komory. Xxxxxxxxxx xxxx spodkem xxxxxxxxx svorky x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx udržuje xxxxxxxxxx (xxxxxxx 1), xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxx na naměřené xxxxxxx odporu.
Je xxxxx xx všimnout, že xx-xx xxxxxxxx hodnota xxxxx xxx 20 xΩ, může xx xxx způsobeno xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx straně terčíku xxxx. O odstranění xxxx vrstvy se xxx xxxxxxx xxxx. xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx x 10 x xx protřepává. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxx hořečnatým.
Výsledky XXX (xxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx přijatelného xxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx doporučeny xxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx přijatelná xxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx odporu (xΩ) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx voda |
10–25 |
1.5.3.3 Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx organické xxxxx
Xxxx-xx xxxxxxx XXX xxx xxxxxxxxx aktivní xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx 5 kΩ, xxx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxx průniku xxxxxxx. Xxxxx postupem xx xxxxxx, zda xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X
Xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xx epidermální xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kůže xxxxxxxx xx 2 x 150 μx 10 % xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X x xxxxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx xxxx xx xxxx přibližně 10 x xxxxxxx proudem xxxx x nejvýše xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx odstranilo veškeré xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx do xxxxxxxx (např. 20 xx skleněné lahvičky xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodu (8 xx). Xxxxxxxx xx lehce 5 xxx. xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxx oplachování se xxxx xxxxxxxx, x xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 ml 30 % roztoku (x/X) natrium-dodecyl-sulfátu (SDS) x xxxxxxxxxxx xxxx x inkubují xx xxxx noc xxx 60 °X. Po xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 8 min. xxx 21 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx ˜ 175). 1 xx vzorku xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx 4 ml 30 % (x/X) roztoku XXX x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx (A) xx měří xxx xxxxxxxxx 565 xx.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx sulforhodaminu B xx xxxxxx kůže xx vypočte x xxxxxx A (xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sulforhodaminu X xxx 565 xx = 8,7 × 104; molekulová xxxxxxxx = 580). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X xx xxxxxxx xxx xxxxx terčík xxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx hodnota. Xxxxxxx xxxxxxx výsledků xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx přijatelného rozmezí xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx barviva:
|
Kontrola |
Látka |
Rozmezí xxxxxx barviva (μx/xxxxxx xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
40-100 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx voda |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx lze xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx na xxxxxx xxxx (xxxx. 2 xxxxxx), xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx TER xxxxxxxxxxxx leptavé xxxxxx x xxxxxxxx zkoušených xxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxx aplikaci xx xxxxxx kůže po xxxx 2 xxxxx (2), třebaže xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx látek x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx 24xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx a rozměry xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx experimentální xxxxxx xxxxx xxx vliv xx získané xxxxxxx XXX. Xxxx 5 Ω pro předpověď xxxxxxxxx účinků byl xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxx xxxx popsány v xxxx xxxxxx. Doporučuje xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx hodnotu xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vybraných z xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx validační xxxxxx (3).
1.6 Podstata xxxxxxxx xxxxxx — stanovení xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxxx materiál xx xxxxxxxxx xx po xxxx 4 hodin xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx kůže xxxxxxxxxxx x rekonstruované xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Materiály x xxxxxxxxx účinky xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx způsobit xxx specifikované xxxxxxxxx xxxx xxxxxx životaschopnosti xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX) xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxx xx hypotéze, xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xx, jež xxxx xxxxxxx proniknout rohovitou xxxxxxx (xxxxxx xxxx xxxxx) a xxxx xxxxxxxxxx cytotoxické, aby xxxxxxxxx smrt xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
1.7.1 Xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx zdrojů, musí xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx rohovitou xxxxxx a vrstvu xxxxxx buněk pod xx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vrstvy xxxx xxx xxxxxxxxxx. Xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx modelu k xxxxxxxxxxxx látkám, xxxxx xxxxxxxx neproniknou rohovitou xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx vysoká, xxx xxxx možné xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx např. xxxxxxx XXX, tj. xxxxxxx xxxxxxx absorbance X) xx expozici xxxxxxxxx xxxxxxxxx látce xxxx xxx v mezích xxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx. Podobně hodnoty xxxxxxxxxxxxxxxx buněk po xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxx (xx srovnání x xxxxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx kontrolní xxxxx) xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx je, aby xxxxx odpovídal xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx (2).
1.7.2 Xxxxxxxx postup
1.7.2.1 Xxxxxxxx zkoušeného xxxxxxxxx
X xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx aplikováno dostatečné xxxxxxxx zkoušené látky, xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 25 μx/xx2). X pevných xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx kůži, x xxxxxxxx xxxxx xx xxxx být xxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx s xxxx; xxxxx xxxxx xx xxxx být xxxxx xxxxxxx před xxxxxxxx rozemlety xx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xx použitelná xxx xxxxxx spektrum xxxxxxxxxx xxxxx (2). Xx uplynutí xxxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk
K xxxxxx životaschopnosti buněk xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx validovaná xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX, pro xxx xx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx xxxx xx xxxxxx do roztoku XXX o xxxxxxxxxxx 0,3 mg/ml při xxxxxxx 20-28 °X xx xxxx 3 xxxxx. Sraženina xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx absorbance X při xxxxxx xxxxx 545 xx 595 xx.
1.7.2.3 Doplňkové xxxxxxxxx
Xxxxxxx model xxxx x přesné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx doby, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxx xxxxx vliv xx xxxxxxxx životaschopnosti xxxxx. Doporučuje xx, xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx řady xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vybraných x chemických xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx ECVAM (3). Xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxx laboratoře x xxxx xxxxxxxxxxxx reprodukovatelnost xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Metoda xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx definovaná xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx (2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx studie xxxx být xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx odbornou xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Zkouška XXX xx kůži potkana
Hodnoty xxxxxx (xΩ) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, pozitivní x xxxxxxxxx kontrolu x pro xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxx xxxxx x duplicitních xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xx formě xxxxxxx.
2.1.2 Xxxxxxx x xxxxxxx lidské xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx materiál, xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx opakovaných xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx hodnotách x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.
2.2 Xxxxxxxxx x interpretace xxxxxxxx
2.2.1 Xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
Xx-xx hodnota XXX dosažená pro xxxxxxxxx xxxxx větší xxx 5 xΩ, xxxx xxxxx xxxxxx. Xx-xx hodnota TER xxxxx nebo xxxxx 5 kΩ x xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxx xxxxxx.
X xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ, xxx provést xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xx-xx střední xxxxx xxxxxxx x terčíku xxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx souběžně xxx použití 36 % XXx xxxxxxx xxxxxxxxx kontroly, xx xxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxx xx xxxx xxxxxx. Je-li xxxxxxx xxxxx barviva x xxxxxxx xxxx menší xxx střední obsah xxxxxxx v xxxxxxx xxxx získaný souběžně xxx použití 36 % HCl, xx xxxxxxx falešně xxxxxxxxx, x látka xxxx xxxx xxxxxx.
2.2.2 Xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx obsorbance X xxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx; hodnoty xxxxxxxxxx A dosažené xxx xxxxx zkoušený xxxxxx lze použít x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x procentech xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx procentuální xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx materiály xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxx leptavých xxxxxx), xxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx definován před xxxxxxxx metody a xxxxxxxx validační xxxxxx xxxx potvrdit, že xx xxxxxx (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxx x zkoušce musí xxxxxxxxx alespoň xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx látka:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx, fyzikální vlastnosti x xxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx podmínky:
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx postupu,
- xxxxx x xxxxxxxxxx jakýchkoli xxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxx odporu (xxxxxxx XXX) nebo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxxxx (xxxxxxx x modelem xxxxxx xxxx) pro zkoušený xxxxxxxx, pozitivní x xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx včetně xxxxx x duplicitních xxxx opakovaných experimentech x středních xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx formě xxxxxxx,
- popis xxxxxxxxxx xxxxxx pozorovaných xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) XXXXX (1998), XXXXX Xxxx &xxx; Views, XXXX 26, 275-280.
(2) Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X. X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Curren, X. X., Xxxx, X. K., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx, X-X., Liebsch, M. (1998), Xxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx study xx in xxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 2. Results xxx evaluation xx xxx Xxxxxxxxxx Xxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 12, 483-524.
(3) Barratt, X. X., Xxxxxxx, X. X., Fentem, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, A. X., Worth, A. X. (1998), Xxx XXXXX international validation xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 1. Xxxxxxxxx xxx distribution xx the test xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx in xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. X. X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. (1986), An xx xxxxx skin xxxxxxxxxxx xxxx — xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Food Xxxx. Xxxxxxx. 24, 507-512.
(5) Botham, P. X., Xxxx, T. X., Xxxxxxx, X., XxXxxx, X. X., Xxxxxxxxx, X. A., Xxxxxxx, E., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. (1992), Xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx: results of xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx in xxxxx 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. P., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X., Xxxxxx, P. X., Xxxxxx, X. X., Xxxx, X. X., Esdaile, D. X., Liebsch, M. (1998), Xx evaluation xx xxx proposed XXXX xxxxxxx strategy xxx skin xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, P. X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. D., Curren, X. X., Esdaile, X. J., Gardner, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx, X., Xxxxx, R. X., Liebsch, X., Xxxxxxxx, P., Xxxxxxx, X., Ponec, X., Xxxxxxx, J. F., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. P., Balls, X. 1995), X xxxxxxxxxxxxx study xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX xxxxxxxx 6, XXXX 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Obrázek 2"
&xxxx;
PŘÍLOHA XX
"X.41 XXXXXXXXXXXX — XXXXXXX XXXXXXXXXXXX 3X3 XXX XX XXXXX
1. METODA
1.1 Xxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx vyvolaná xx první xxxxxxxx xxxx určitým xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx světlu xxxx xxxxxxx xxxxxxxx ozářením xxxx po systémovém xxxxxx chemické látky.
Informace xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx. xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx spojení x xxxxxxxx UV xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx světlu.
Protože xxxxx zkoušky xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx vyvolané xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sloučeniny, xxxxx xxxx fototoxické xx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xx xxxx, x xxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxxxx xx nanesení xx xxxxxxx jako fotoiritanty.
Zkouška xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x rámci spojeného xxxxxxxx XX/XXXXXX x xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx zkouškám xx vivo. X xxxx 1996 xxxxxxxxxx xxxxxxxx skupina XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx vitro pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4).
Výsledky xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx xxxx porovnány x akutními xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx vivo x xxxxxx a x xxxxxxx x xxxxxxx xx ukázala xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx vynikající. Zkouška xxxx určena xxx xxxxxxxxx xxxxxx nepříznivých xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxx x kombinovaného xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx mnoho xxxxxxxxxx xxxxx, které xxxxxxxx tyto specifické xxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx není vyvinuta x xxxx, aby xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx postupného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx ozáření: xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx dopadajícího xx xxxxxx, xxxxxx xx X/x2 xxxx xX/xx2.
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: xxxxxxxx (xxxxxxxxx × xxx) xxxxxxxxxxxxxx (XX) xxxx viditelného xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx (X × x) xx xxxxxx povrchu, xxxx. X/x2 nebo X/xx2.
Xxxxxx xxxxx XX xxxxxx: označení doporučená xxxxxx XXX (Commission Xxxxxxxxxxxxxx de x'Xxxxxxxxx): XXX (315400 xx), XXX (280315 xx) x XXX (100280 xx). Xxxxxxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxxxx: xxxx hranice xxxx XXX x XXX xx xxxxx používána xxxxxxx 320 xx x xxxxx UVA xxxx xxx xxxxxxxxx xx XX-X1 x XX-X2 x hranicí xxxxx 340 xx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: parametr, xxxxxx xx měří celková xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx buněčných xxxxxxxx) x který x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx a na xxxxxxxx uspořádání zkoušky xxxxxxxx x celkovým xxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx životaschopnost xxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxxx kontrolám (xxxxxxxxxxxx), které prošly xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (x XX, xxxx xxx XX), xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxx výsledků zkoušek xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xx předpověď fototoxického xxxxxxxxxx xxxxxx faktor XXX x xxxxxxxx XXX.
XXX (photo-irritation xxxxxx — xxxxxxxxxxxx xxxxxx): xxxxxx získaný xxxxxxxxx xxxx stejně účinných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XX50) xxxxxxxx xxxxx, x xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/XXX xxxxxxx (+ XX) x xxx něho (-UV).
MPE (xxxx xxxxx effect — xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx): xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x matematické xxxxxxx celého xxxxxxx xxxxxx závislosti účinku xx koncentraci získaných xxx necytotoxickém ozáření XXX/xxx světlem (+ XX) a bez xxxx (-XX).
Xxxxxxxxxxxx: akutní xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx první expozici xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx vyvolaná xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx: xxxxx xxxxxx pojmu "xxxxxxxxxxxx", který xx xxxxxxx x popisu xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx xx expozici chemickým xxxxxx (topické xxxx xxxxxx). Tyto xxxxxxxxxxx xxxxxx vedou vždy x nespecifickému buněčnému xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx).
Xxxxxxxxxxx: získaná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx nedochází při xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx a světla x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx dobu xxxxx xxxx dva xxxxx xxxx xxx, než xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxx odezva xxxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxx xx expozici xxxxx negenotoxické dávce XX/XXX xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx světla x xxxxxxxx látky. Termín xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx, kdy xx tvorba tumoru xxxxxxxxxx XX zářením xxxxxxxx chemickou látkou.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxx být souběžně xxxxxxx xxx každé xxxxxxx, xx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxx z xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx předložené xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Úvodní xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxx byly xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (5, 6, 7, 8). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx je schopnost xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Podle xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (Grotthaus-Draperův xxxxx) xxxxxxxx fotoreakce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx světelných xxxxx. Před xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx metodiky xx xxxx mělo xxx xxxxxxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. podle Xxxxxxxx XXXX 101). Xx-xx molární xxxxxxxxx xxxxxxxxxx menší xxx 10 x.xxx-1.xx-1, xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxx zkouškou xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx biologickou xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek).
1.5 Xxxxxxxx zkušební xxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxx k xxxxxxxxxxx xxxxxx (7). Xxxxxxx xxxxx x poškození xxxxx. Xxxxxxx fototoxicity 3X3 NRU in xxxxx xx proto xxxxxxxx na srovnání xxxxxxxxxxxx chemické xxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx necytotoxické xxxxx XXX/XXX xxxxxx x xxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx v xxxx zkoušce xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx závislé xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (9) 24 xxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxx.
Xxxxx Xxxx/x 3X3 xx 24 x xxxxxxxxx, aby xxxxxxxxx monovrstvu. Dvě 96xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx se xxxx 1 h preinkubují xxxx různými koncentracemi xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx exponována xxxxxxxxxxxxxx dávkou UVA/VIS xxxxxx 5 J/cm2 XXX (+ UV xxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx (-XX xxxxxxxxxx). X xxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx nahradí xxxxxxxxxxx médiem a xx dalších 24 x inkubace xx xxxxxxx životaschopnost xxxxxxxxx 3xxxxxxxxx příjmem xxxxxxxxx xxxxxxx (XXX). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x procentech vzhledem x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxx každou x xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se porovnají xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx (+ UV) x xxx xxxxxxx (-XX), xxxxxxx xxx hodnotě XX50, xx. při xxxxxxxxxxx způsobující 50 % xxxxxx buněčné xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xx UVA, xxxxxxxxx xxxxx: citlivost xxxxx xx XXX xx xxxx xxx pravidelně xxxxxxxxxxxx. Buňky se xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx ke zkoušce xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx vitro, xxxxxx xxx se xxxxx xxxxxx UVA xxxxxx 1 xx 9 X/xx2 x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx NRU. Buňky xxxxxxx xxxxxxxxx jakosti, xxxx-xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx 5 X/xx2 xxxxx xxx 80 % xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxx. Tato xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx vždy xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kontroly xx UVA při xxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxx kritéria xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx x EBSS (Xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx 1 % xxxxxxxxx (XxXX)) xxxx bez xxxx xxxxxxxx xxx + XXX experimentu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 80 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x tomtéž rozpouštědle xxx souběžném xxxxxxxxxxx x temnu (-UVA).
Životaschopnost xxxxxxxxx kontroly: xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (X540 NRU) xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxxxxxxxx kontrol xxxxxxx, xxx 1 × 104 buněk xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx dvou xxx xxxxxxx obvyklou xxxx zdvojnásobení (xxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, jestliže xxxxxxx hodnota X540 XXX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxx každé xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx známá xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx (XXX), a xx xxxx doporučen. Xxx XXX xxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx fototoxicity 3T3 XXX in vitro xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zkoušky: xxx XXX ozářený (+ XXX): EC50 = 0,1 až 0,2 μx/xx, xxx XXX neozářený (-UVA): XX50 = 7,0 xx 90,0 μx/xx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (PIF), xx. xxxxx xxxxxxx XX50, by xxx xxx alespoň 6.
Xxxxxxx XXX mohou xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx jiné xxxxx fototoxické xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxx případě xx xxxx být xx xxxxxxx dosavadních xxxxx xxxx kritéria xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxxxx hodnot XX50 x XXX xxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7 Popis xxxxxxxx xxxxxx
1.7.1 Příprava
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx použita xxxxxxxxxxx xxxx linie xxxxxxxxxxx — Xxxx/x 3X3, xxxx 31 — xxx z xxxxx XXXX, xxxx z xxxxx XXXXX x xx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxx xxx při xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, ale musí xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx kontrolovány, xxx nejsou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, x xxxx xx být použity xxxxx xxxxx, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxxx xxxxx xx XX xxxxxxx x xxxxxx pasáží, xxxx xx být xxxxxxx xxxxx Balb/c 3X3 z xxxxxx x nejnižším dosažitelným xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x nižší xxx xxx xxxxxx. Je xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx Balb/c 3X3 na XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx popsaným x xxxx metodice.
1.7.1.2 Xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxx rutinní xxxxxxx xxxxxxxxxx x během xxxxxxxxxx postupu xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx média x xxxxxxxxx xxxxxxxx. X buněk Xxxx/x 3X3 xx xxxxx x XXXX (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, 4xX xxxxxxxxxx, penicilinem x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx 37 °X/7, 5 % XX2. Zvláště xxxxxxxx xx, aby xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx buněčný cyklus xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx buňky xxxx xxxxxxx linie.
1.7.1.3 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxx před použitím xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx.
Xxx xxxxxxx fototoxicity xx buňky nasazují xx kultivačního xxxxx x xxxxxx hustotě, xxx nedosáhly xxxxxxxxxx xx xxxxx zkoušky, xx. do xxxxxxxx, xxx xx po 48 x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxx buňky Balb/c 3X3 xxxxxxxxxxx v 96xxxxxxxxx destičkách je xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 × 104 buněk xx jamku.
Pro xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx dvou xxxxxxxxxx 96xxxxxxxxx destiček, xxxxx xxxx poté xxxxxxxx podrobeny xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx, xxx xx xxxxx z xxxxxxxx xxxxxxx (+XXX/XXX) x xxxxx je udržována x xxxxx (-XXX/XXX).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, není x fototoxikologii xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, pro jejíž xxxxxxxx xxxx toxinu xx xxxx xxxx xx vitro xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx transformace. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxx xx nezbytné xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx chemická xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx k rychlé xxxxxxxxxxxxx, musí xx xxxxxxxx látky xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky xx xxxx být rozpuštěny xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx. x Earlově xxxxxxxxxxxxx roztoku (XXXX) xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), který xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x pH xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx světlo, xxx nerušily xxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx rozpustností xx xxxx by xxxx xxx rozpuštěny xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx 100násobek požadované xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx xx xxxx xxx xxxxxxx v xxxxxx 1:100 xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Použije-li se xxxxxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 % xxx. ve xxxxx xxxxxxxxx, xx. x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) x xxxxxxx (EtOH). Xxxxx xxx použita jiná xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxxxx), xxx měly by xxx pečlivě posouzeny xxxxxx specifické xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx účinků, xxxxxx xxxxxxxx.
Xx-xx třeba, xxxx xxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx a/nebo ultrazvuk x/xxxx zahřátí xx 37 °C.
1.7.1.6 Xxxxxxx XX xxxxxxx/xxxxxxxx
Xxxxx světla: xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx fototoxicity. Xxxxxx x xxxxx XXX x xx xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxx spojováno x xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx xxxxxx v xxxxx XXX xx xxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, přičemž jeho xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 313 xx x 280 nm 1000xxxx (11). Kritéria xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxx světla xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx chemická xxxxx xxxxxxxxx, x xxx xxxxx světelného xxxxxx (xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx) byla dostatečná xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Použité xxxxxx délky a xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxx oblast), xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx testovací xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx simulátory xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx světla. V xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jak xenonová xxxxxxx, tak xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx z xxxx xx xx xxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxx a xx xxxxxxxx, xxxxx její xxxxx xx slunečním xxxxxxx xxxx dokonalá. Xxxxxxxx všechny solární xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx by mělo xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxx (UVA:UVB ˜ 20:1). Xxxxxxx spektrální xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx studii xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (3).
Xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) xx xxxx xxxxxxxxxx xxxx každou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx. XX-xxxx musí xxx pro xxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Funkčnost XX-xxxxx by měla xxx xxxxxxxxxxxx x xx xxxxx účelem xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX-xxxx xxxxxxxx xxxx. X xxxxxxxx případě by xxx xxx v xxxxxxx časových xxxxxxxxx xxxxxx x měření xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx světla x xx kontrole xxxxxxxxx širokopásmového XX-xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx, avšak xxxxxx xxxxxxxxx vyžadují xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx 5 X/xx2 xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx necytotoxická xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 x xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx x slabě xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek. Pro xxxxxxxx 5 X/xx2 xx xxxx 50 xxx. musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 1,666 XX/xx2. Xxxxxxxx je použita xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx, může xxx xxxxx XXX záření xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx expozice xx xxxxxxx tímto xxxxxxxx:
x(xxx) = xxxxx xxxxxxxxxx záření (X/xx2) 100 / xxxxxxxxx xxxxxxx (mW/cm2) 60 (1 X =.X xxx)
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx xx neměla xxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx všechny xxxxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxx xxxxxxxxxx xxx nižších xxxxxxxxxxxxx; xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roste výskyt xxxxxxx pozitivních xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xX xxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+ XXX) x bez světla (-XXX) xx xxxx xxx náležitě xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx experimentech xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x intervaly xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx tak, aby xxxx křivky závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx experimentálními xxxxx. Měla xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxxxxxx faktorem ředění).
1.7.3 Xxxxxxxx xxxxxx [1]
1.7.3.1 Xxxxx den
Připraví xx xxxxxxx suspenze 1 × 105 buněk/ml x kultivačním xxxxx x 100 μx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx 96xxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx xxxxx). Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx dávkuje xx 100 μx xxxxxxx xxxxxxxx x hustotě 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 buněk xx xxxxx). Xxx xxxxxx xxxxxxxxx chemickou xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-XXX) x druhá xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (+XXX).
Xxxxx xx xxxxxxxx 24 x (7,5 % XX2, 37 °X), xxxxx xxxxxxxxxx semikonfluentní xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx růst.
1.7.3.2 Xxxxx den
Po inkubaci xx kultivační médium x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx dvakrát 150 μx EBSS/PBS. Xxxxx xx 100 μx XXXX/XXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (negativní xxxxxxxx). Xxxxxxxx se 8 různých xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx zkoušenou xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxx v xxxxx xx xxxx 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °X).
X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx XXX xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx po xxxx 50 min. xxxxxxx xxxx xxxxx 96xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x intenzitě 1,7 XX/xx2 (5 X/xx2. Aby xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vody xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxxx 50 xxx. (xxxx xxxxxxxx XXX) v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx jamka xx xxxxxxx dvakrát 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx médiem x xxxxxxxx xx xxxx xxx (18-22 x) (7,5 % XX2, 37 °X).
1.7.3.3 Xxxxx xxx
Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xx xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx způsobené xxxxxxxxxxxx účinkem xxxxxxxx xxxxxxxx látky. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx chyby, xxxxx xxxxxxx xx xxx xxxxxxxxx cytotoxicity xxxx fototoxicity nepoužijí.
Zkouška xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxxxx 150 μx xxxxxxxxxxxx EBSS/PBS x xxxxxxxxx roztok xx xxxxxxx odstraní xxxxxxxx. Xxxxx xx 100 μl xxxxx XX x xxxxxxxx xx 3 x xxx 37 °X xx xxxxxxxx atmosféře x 7,5 % XX2.
Xx xxxxxxxx xx xxxxxx XX odstraní x buňky xx xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxx odstředit x xxxxxxxx xxxxxx).
Xxxxx se xxxxxx 150 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx NR.
Destička se xxxxxx 10 xxx. xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx se NR x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx homogenní xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx NR xxx 540 xx, xxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx ve vhodném xxxxxxx (xxxx. ASCII) x počítači xxx xxxxxxxxx analýzu.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx
Xxxxx by měly xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx UVA/VIS nebo xxx něho. Je-li xxxxxxxx cytotoxicita, měl xx xxx rozsah xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxx nimi xxxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx křivku. Xxxxxxxx x xxxx, že xx zkoušená xxxxxxxx xxxxx nemusela xxx xx do xxxxx xxxxxxxxxxx 100 μg/ml xxxxxx xxx xxxxxxxxxx x temnu (-XXX) xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xx být xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+XXX), xxxx xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx koncentrací, xxxxx xxxx xxx v xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx, xx-xx xxx splněn xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Není-li x xxxx částech xxxxxxxxxxx (-XXX x +UVA) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx dávkami až xx nejvyšší xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx experimentem se xxxxxxxxxx. Negativní výsledky xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látka xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx jednou xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x výsledky xxxxxx xxxxxxxxxx hodnot xxxxxxxxxxxxx modelu xx xxxx xxx xxx xxxxxxxx opakovány.
Je-li xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx, může xxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxx (jiné xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx doby xxxx xxxxxxxx. Zkrácení xxxx může mít xxxxxx u xxxxxxxxxx xxxxx nestálých ve xxxx.
2.2 Zpracování výsledků
Je-li xx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky odpovídající 50 % inhibici xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (NR) (XX50). Xxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx Hillovou xxxxxx xxxx logistickou regresí) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci nebo xxxxxxxx xxxxxx metod xxxxxx xxxxxxxxx (14). Xxxx xxxxxxxx hodnoty XX50 xxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx proložení. Xxx xxxxxxx EC50 xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx grafického xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx doporučuje xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxx x: xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx osy x: xxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxx v xxxxx xxxxxxxxx xxxx xx této transformaci xxxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx koncentraci téměř xxxxxxxx.
2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxx)
2.3.1 Předpovědní xxxxx — xxxxx 1: fotoiritační xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxx xxxx v xxxx xxxxxxxxx xxx xxx ozáření (+XXX), xxx xxx xxxxxxx (-XXX) získány xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (PIF) xxxxxxxxx xxxxx tohoto xxxxxx:
(x) PIF = (XX50 (-XX)) / (XX50 (+UV))
Hodnota XXX &xx; 5 předpovídá xxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx XXX ≥ 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx +XXX x xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx -XXX, nelze xxxxxxx XXX xxxxxxxxx, xxxxxxx xxx x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx o xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxxxxx "&xx; XXX", xxxxxxxx se xxxxxxx -UV xxxxxxx xx xx nejvyšší xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxx), x xxxx hodnota xx použije xxx xxxxxxx "&xx; XXX";
(x) &xx; XXX = (Xxxx (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxx xx xxxxxx xxxxx hodnotu "&xx; XXX", xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx &xx; 1.
Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxxx látka xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx ani xxxxxxx EC50 (-UV) xxx xxxxxxx EC50 (+ XX), svědčí xx o xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxx charakterizaci výsledku xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx "XXX = *1";
(X) &xx; PIF = *1 = (Xxxx (-XX)) / (Cmax (+XX))
Xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx "PIF = *1", xx xxxx hodnota xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
X xxxxxxxxx b) a x) xx měly xxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX in xxxxx.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx 2: xxxxxxx světelný xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx novou verzi xxxxxx xxx předpovídání xxxxxxxxxxxxx potenciálu, který xxx xxxxxxx s xxxxxxxx údajů x xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX (15) x xxx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vitro x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxx jako XX xxxxxx (13). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx XXX v případech, xxx xxxxx získat xxxxxxx XX50. Tento xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxx effect) (MPE), xxxxxxxx, která je xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx křivek závislosti xxxxxx xx koncentraci. Xxx použití modelu xxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Berlín) vyvinut xxxxxxxxx počítačový xxxxxxxx, xxxxx xx volně x xxxxxxxxx.
2.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx (XXX ≥ 5 nebo XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, že xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx výsledku xxxxxxxx při koncentracích xxx 10 μx/xx, xx také pravděpodobné, xx xxxxx xxxx xxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xx xxxx. Xx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx koncentraci 100 μx/xx, xxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx nezbytné xxxxx xxxxx. Xx xx xxxxx týkat xxxxx x xxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxx akumulaci xxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, např. xx xxxxxxx modelu xxxxxx xxxx xx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx (XXX &xx; 5 nebo XXX &xx; 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxx xx použitých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, kdy bylo xxxxx zkoušet xxxxxxxxx xxxxx až po xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, znamenají negativní xxxxxxxx, že xxxxxxxx xxxxx nemá fototoxický xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxx lze xxxxxxxx za nepravděpodobnou. X xxxxxxxxx, kdy xxxx při nižších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx toxické xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (EC50 +XX x XX50 -XX), xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Není-li xxxxxxx xxxx toxicita xxxxxxxxx (+UV x -XX) a jsou-li xxxxxxxxxxx omezeny xxxxxxxxxxxx xx vodě na xxxxxxx menší xxx 100 μx/xx, xxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx by xxx xxxxxxx potvrzující xxxxxxx (xxxx. za xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxx xxxx zkouškou xx xxxx).
3. ZPRÁVY
Protokol x xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx obsahovat tyto xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXX, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx,
- fyzikálně-chemické xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx,
- stálost x fotostabilita, jsou-li xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- xxxxxxxxxx volby xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx v aplikačním xxxxx (XXXX xxxx XXX).
Xxxxx:
- xxx a xxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxx buněčné xxxxxx, xx-xx známo,
- xxxxxxxxx xxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xx xx:
- typ x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx,
- inkubační xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx CO2, teplota, xxxxxxx),
- délka xxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx b) — xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxx výběru xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxxx jak xxx xxxxxxx XX/XXX, xxx xxx xxx,
- x xxxxxxx, xx zkoušená xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx cytotoxická, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx,
- xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx:
- zdůvodnění xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx světla,
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx zdroje světla,
- xxxxxxxxxxxxxxx propustnosti/absorpce xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx filtrů),
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx,
- vzdálenost xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxxxxx ozáření XXX v xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xX/xx2,
- xxxxx xxxxxxxx XX/XXX světlu,
- xxxxx XXX xxxxxx (xxxxxxxxx × xxx), vyjádřena x X/xx2,
- xxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx kultur udržovaných x xxxxx.
Xxxxxxxx podmínky x) — xxxxxxx XXX:
- xxxxxxx xxxxx XX,
- doba xxxxxxxx XX,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxxxxx xxxxxxxx XX (xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx),
- vlnová xxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx XX,
- xxxxx (referenční) xxxxxx délka, xx-xx xxxxxxx,
- xxxxxxx slepého xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xx-xx xxxxxx.
Xxxxxxxx:
- životaschopnost xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnosti xxxxxxx,
- xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxx zkoušené chemické xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx experimentech +XXX x -XXX,
- xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci: xx-xx xx xxxxx, xxxxxxx hodnoty XX50 (+XXX) x XX50 (-XXX),
- xxxxxxxx xxxx xxxxxx závislosti odezvy xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x ozářením XXX/XXX x xxx něho, x xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx-xxxxxxxxxxx factor ) (XXX), xxxx výpočtem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx účinku (xxxx photo xxxxxx) (XXX),
- xxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx,
- kritéria xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxx životaschopnost (xxxxxxxxxx xxxxxxxx NR) xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx údaje xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx b) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxx XX50 (+UVA), XX50 (-UVA) a XXX-xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx: hodnoty EC50 (+XXX), XX50 (-XXX) x XXX, střední xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. LITERATURA
(1) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Döring, B., Xxxxxüxxxx, H. G., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X., X'Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. W., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, F., Xxxxx, X., Xxxx, X., Xxxxxxxxxxx, U., Xxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, O., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, A. (1994), EEC/COLIPA xxxxxxx xx in xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x Xxxx/x 3X3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 8, 793-796.
(2) Anon (1998), Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx the 3X3 XXX XX xxxx (xx xx vitro xxxx for xxxxxxxxxxxxx), Xxxxxxxx Commission, Joint Xxxxxxxx Xxxxxx: ECVAM xxx DGXI/E/2, 3 Xxxxxxxx 1997, XXXX 26, 7-8.
(3) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, J., Pape, X. X. X., Xxxxxxxxxx, G., De Xxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X., Desolle, P., Xxxxxxxxx, X., Liebsch, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxxxx, U., Xxxxxxxx, X. M., Csato, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. (1998), XX/XXXXXX "Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx study, results xx xxxxx XX (xxxxx trial), xxxx 1: xxx 3X3 XXX xxxxxxxxxxxxx xxxx, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 12, 305-327.
(4) XXXX Xxxx Xxxxxxxxxx Programme, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Final Report xx xxx OECD Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xx Validation xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Test Xxxxxxx, XXXX Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, X. X. (1993), A scheme xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx substances xxx xxxxxxxxxxxxxxx potential, Xxxxxxxxxx in Vitro 7, 95-102.
(6) Xxxxxxxxxx, X., Xxxxx, X. (1972), Xxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxx progress xx xxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx. 3 Part 1, Xxxxx Xxxxxxx Publishing Xx, Xxxxxxxxx, XX–XXXX.
(7) Xxxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xöxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Maurer, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxx, X. X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxx, D. (1994), Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxx report xxx recommendations xx XXXXX xxxxxxxx 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, X. X. (1989), Xxxxxxxxxxxxxxxxxx. X: Xxx xxxxxxx of xxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxx, xx.), Plenum Xxxxx, Xxx Xxxx, 2. xxx., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, X., Puerner, X. A. (1985), Xxxxxxxx determination xx xxxxx xx morphological xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, X. A., Xxxxxx, X. G., Xxxxxxxxxx X. (1996). X: Xxxxxx xxxxxx xxx phototoxicity testing, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (X. N. Xxxxxxxx, H. I. Xxxxxxx xxx.), Xxxxxx &xxx; Xxxxxxx, Washington XX, 5. vyd., 515-530.
(11) Xxxxxxx, R. X., Pidoux M. (1987), Action xxxxxxx xxx xxxxx skin xxxxx: xxxxxxxxx of xxx relative cytotoxicity xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, near xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx on xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, Cancer Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Xxxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxx: Xxxx/x 3X3 XXX Phototoxicity Xxxx, xxxxxxxx 23. xxxxxxxx 1997 X. Liebschem, xxxxxxxxx 6. xxxxxx 1998 xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxx of xxx XX/XXXXXX project "In Xxxxx Photoirritation".
(13) Spielmann, X., Xxxxx, M., Xxxxxx, X., Xxxx, X. X. W., Xx Silva, X., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Lovell, X. X., Pfannenbecker (1998), X Xxxxx xx xxx Xxxxxxxxxx Potential xx UV Xxxxxx Xxxxxxxxx from Annex XXX of xxx XX Directive 76/768/XXX xx the 3T3 XXX Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxx Test, XXXX 26, 679-708.
(14) Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X. (1995), Mathematical xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx to xxxxxxxx xxxxxxx, Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx, 3, 127-138.
(15) Xxxxxüxxxx, H. X. (1997), X xxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx-xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx use xxx xxxxxxxxxx the xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, ATLA 25, 445-462."
"Xxxxxxx
&xxxx;
[1] Xxxxx xxxxxxxxxxx lze nalézt x xxxxxxxxxx (12).