Směrnice Komise 2000/33/XX
xx xxx 25. xxxxx 2000,
xxxxxx se xx xxxxxxx xxxxx přizpůsobuje xxxxxxxxxxx xxxxxxx směrnice Xxxx 67/548/EHS o xxxxxxxxxx právních x xxxxxxxxx předpisů xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [1]
(Xxxx x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx na směrnici Xxxx 67/548/EHS xx xxx 27. xxxxxx 1967 x sbližování xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxxx nebezpečných xxxxx [2], xxxxxxxxx pozměněnou xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x Xxxx 1999/33/XX [3], x xxxxxxx xx xxxxxx 28 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:
(1) X xxxxxxx X směrnice 67/548/XXX xx stanoví xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, toxicity x xxxxxxxxxxx xxxxx x přípravků. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pokroku.
(2) Xxxxx xx. 7 xxxx. 2 směrnice Xxxx 86/609/XXX xx xxx 24. xxxxxxxxx 1986 o sbližování xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx používaných xxx xxxxxxx a xxxx xxxxxxx xxxxx [4] xxxxx být pokus, xxx xxxx xx xxx použito xxxxx, xxxxxxxx, je-li xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx vědecky xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x cílem zpřístupnit xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx látek xxxxx xx. 3 xxxx. 1 xxxxxxxx 67/548/XXX.
(4) Xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxx xxx přizpůsobení xxxxxxxxxxx xxxxxxx směrnic x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Text xxxxxx X x XX xxxx směrnice se xxxxxx do xxxxx X přílohy X xxxxxxxx 67/548/XXX.
Xxxxxx 2
1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx dosažení xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 2001. Neprodleně x nich xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx na xxxx směrnici xxxx xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx si xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx státy xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vnitrostátních právních xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x oblasti působnosti xxxx xxxxxxxx, a xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx a přijatými xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Článek 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x platnost xxxxxx dnem xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 25. xxxxx 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxöx
xxxxxx Xxxxxx
[1] Přijato před xxxxxxxxxxxxx xx dvacáté xxxxx.
[2] Xx. xxxx. 196, 16.8.1967, x. 1.
[3] Úř. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Úř. xxxx. X 358, 18.12.1986, x. 1.
XXXXXXX I
"B.40 XXXXXXX XXXXXX XX XXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxx xxxxxxx xx xxxxx na xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx transkutánního xxxxxxxxxxxx xxxxxx kůže xxxxxxx (XXX) x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx kůže xxxx Xxxxxxxxx střediskem xxx xxxxxxxx alternativních xxxxx (XXXXX, Xxxxxxxx výzkumné xxxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx) (1, 2, 3) xxxxxxxxx xxxx vědecky xxxxxx. Validační studie XXXXX xxxxxxxxx, že xxxxx zkouškami xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxx. Protokol x xxxxxxx založené xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx účinků (známé xxxxx způsobující xxxxx xxxxxxxxx, X 35 x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kůže, X 34) (2). Xxxxx a xxxxxx xxxx xxxxxxx je xxxxxx; xxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxx, závisí xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxx xxxx Xxxxxx úvod, část X.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxx: xxxxxxxx poškození xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx látky
Nespecifikovány, xxxxx xxx xxxx 1.5.3.4 a 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx — zkouška XXX xx xxxx potkana
Zkoušený xxxxxxxx xx až xx 24 x xxxxxxxxx xx epidermální xxxxxx terčíků kůže xxxxxxx xxxxxxxxxx mladých xxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxx), která xx xxxxxx jako xxxxxxx xxxxxxxxx XXX pod xxxxxxxx úroveň (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX xxx prahovou hodnotu. Xx xxxxxxxxxx postupu xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (definice xxx xxxxxxxxxx (6)) xxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx falešně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxx chemických xxxxx (2, 7).
1.5 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
1.5.1 Xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x mladých (20 — 23 xxxxxxx) xxxxxxx (Xxxxxx xxxx srovnatelný xxxx). Xxxxxxx x xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx holicím strojkem. Xxxxxxx se poté xxxxx opatrným otíráním, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (obsahujícího xxxx. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x amfotericin x xxxxxxxxxxxxx zastavujících xxxx bakterií). Xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxx po xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx roztokem antibiotik x xxxxxxx xx xx 3 dnů (x xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx použita xxxxxxx xxxxxx xxx 31 xxx).
1.5.2 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx
Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Z xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx opatrně xxxxxxxx xxxxxxx xxxx a xxxxxxxxxx tuk xx x xxxx opatrně xxxxxxxxx. Xxxx xx xxxx xxxxxxx přes xxxxx teflonové (XXXX) xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx s trubičkou. Xxxx xxxxx trubičky xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx O-kroužek, xxx xxxx xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx x O-kroužku xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxxx X-xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx poté xxxxxxx pokryje xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pružinové svorky xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxxxxxx (154 mM) (xxxxxxx 2).
1.5.3 Xxxxxxxx postup
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (150 μx) xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx. 2). Xxx zkoušení xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx množství xxx, xxx byla pokryta xxxx xxxxxxxxx. Poté xx na xxxxxx xxxxx xxxxx přidá xxxxxxxxxxxx voda (150 μx) x xxxxxxxx xx lehce protřepe. Xxxx xxxxxxx x xxxx by xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx. U některých xxxxx xxxx může xxx dosaženo zahřátím xx na 30 °X, aby xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx nebo xx prášek.
Ke xxxxxxx xxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx látka xx xxxxxxxx po xxxx 24 h (xxx také bod 1.5.3.4). Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx odstraní xxxxxxx xxxxxxx xxxx x teplotě xxxxxxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxx usnadnit xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx 30 °X.
1.5.3.2 Xxxxxx XXX
XXX xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx impedančním xxxxxxx xxx střídavý xxxxx (xxxx. AIM 401 nebo 6401 xxxx xxxxxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx kůže sníží xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 70 % xxxxxxxx xxx, aby byla xxxxxxxxx xxxxxxx. Po xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx odstraní xxxxxxxxxxx xxxxxxx x tkáň xx zvlhčí xxxxxxxx 3 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX). Elektrody můstku xx xxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx za účelem xxxxxx xxxxxx x xΩ/xxxxxx xxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx elektrod x délky xxxxxxxxxxxx xxxxx elektrod xxx xxxxxxxxxxxx jsou uvedeny xx xxxxxxx 1. Xxxxxx vnitřní (xxxxx) xxxxxxxxx je během xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxx, xx xx délka xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx síranu xxxxxxxxxxx xxxxxx. Vnější (xxxxx) xxxxxxxxx xx umístěna xxxxxx receptorové komory xxx, xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx mezi spodkem xxxxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxx 1), xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xx naměřené xxxxxxx odporu.
Je třeba xx všimnout, xx xx-xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx než 20 xΩ, může to xxx způsobeno vrstvou xxxxxxxx látky xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. X odstranění xxxx xxxxxx xx xxx pokusit např. xxx, xx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x rukavici x 10 s xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxx xx opakuje x xxxxxxxx síranem xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly spadají xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxx popsanou xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx tyto xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx (kΩ) |
|
Pozitivní |
10M xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx voda |
10–25 |
1.5.3.3 Upravený xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx látky a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxx-xx xxxxxxx XXX xxx xxxxxxxxx aktivní látky xxxx organické látky xxxxxxx zkoušené xxxxx xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ, lze xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxx falešně xxxxxxxxx (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx barviva xxxxxxxxxxxxxx X
Xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxxxxxxxx stranu xxxxxxx terčíku kůže xxxxxxxx xx 2 x 150 μx 10 % roztoku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X x destilované vodě. Xxxxxxx kůže xx xxxx přibližně 10 x omývají xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx veškeré xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx kůže se xxxxxxx sejmou x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx se do xxxxxxxx (xxxx. 20 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx spektrometrii) xxxxxxxxxx deionizovanou xxxx (8 ml). Lahvičky xx xxxxx 5 xxx. protřepávají, aby xx xxxxxxxxxx další xxxxx barvivo. Tato xxxxxx oplachování se xxxx xxxxxxxx, a xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx 30 % xxxxxxx (x/X) xxxxxxx-xxxxxxx-xxxxxxx (XXX) x destilované xxxx x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx 60 °C. Xx xxxxxxxx xx všechny xxxxxxx kůže vyjmou x xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 8 min. xxx 21 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx ˜ 175). 1 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx 4 ml 30 % (x/X) xxxxxxx XXX v xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx (A) xx xxxx xxx xxxxxxxxx 565 xx.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx obsahu xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx sulforhodaminu X xx terčík xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx X (xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sulforhodaminu X xxx 565 xx = 8,7 × 104; xxxxxxxxxx xxxxxxxx = 580). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X se xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx x xxxx xx xxxxxxx jeho xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vázání xxxxxxx xxxx přijatelné, xxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx kontroly spadají xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxx popsanou xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx přijatelné hodnoty xxxxxxx obsahu barviva:
|
Kontrola |
Látka |
Rozmezí xxxxxx barviva (μx/xxxxxx xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
40-100 |
|
Negativní |
Destilovaná xxxx |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx informace
Látky xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxx dobu (xxxx. 2 xxxxxx), aby xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx leptavé. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxx leptavé účinky x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx aplikaci na xxxxxx xxxx po xxxx 2 xxxxx (2), xxxxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx látek s xxxxxxxxx účinky x xxxxx bez xxxxxxxxx xxxxxx xxx 24xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx x rozměry xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx postup xxxxx xxx vliv xx xxxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx 5 Ω xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx z údajů xxxxxxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxx, jež xxxx xxxxxxx x xxxx metodě. Doporučuje xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a určit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (3).
1.6 Podstata xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx až xx xxxx 4 xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx kůže xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx rohovité xxxxxx. Materiály s xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx expoziční xxxx xxxxxx životaschopnosti xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxx xxxxxxx redukce XXX) pod definovanou xxxxxxxx úroveň. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx hypotéze, xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx účinky xxxx xx, jež jsou xxxxxxx proniknout xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxx nebo xxxxx) a xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx x hlubších buněčných xxxxxxxx.
1.7 Xxxxx zkušební xxxxxx — stanovení xxxxxx xxxxxx lidské xxxx
1.7.1 Xxxxxx lidské xxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx zdrojů, xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Model musí xxx xxxxxxx rohovitou xxxxxx a vrstvu xxxxxx xxxxx xxx xx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx. Xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx modelu k xxxxxxxxxxxx látkám, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rohovitou xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx, xx model xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx živých buněk x modelu xxxx xxx dostatečně vysoká, xxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x negativní kontrolní xxxxx. xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. redukcí XXX, xx. měřením xxxxxxx xxxxxxxxxx X) xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látce musí xxx x mezích xxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx hodnoty xxxxxxxxxxxxxxxx buněk po xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxx (xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látku) xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx mezích. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx je, xxx xxxxx odpovídal xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx (2).
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxx
1.7.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálu
U xxxxxxxxx materiálů musí xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx pokrylo povrch xxxx (xxxxxxxxx 25 μx/xx2). U xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxx, x xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx, xxx byl xxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxx; xxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxx potřeby xxxx xxxxxxxx rozemlety na xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx, že aplikační xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2). Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxxxx materiál x xxxxxxx kůže xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx validovaná xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx stanovení xxxxxxx XXX, xxx xxx xx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx výsledky (2). Xxxxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx 0,3 xx/xx xxx xxxxxxx 20-28 °X xx dobu 3 xxxxx. Sraženina xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxx formazanu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxx xxxxxx xxxxx 545 xx 595 nm.
1.7.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx zaznamenání xxxxxxxxx xxxx, postupu xxxxxxxxxxx atd. xxxxx xxx xxxxx vliv xx xxxxxxxx životaschopnosti xxxxx. Doporučuje xx, xxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx model xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx řady xxxxxxxxxxxx standardů xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxxxxx xxxxxx XXXXX (3). Xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx laboratoře x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx spektrum xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx kritéria xxx xxxxxxxx xxxxxxxx (2) x výsledky xxxxxx validační studie xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x předcházející xxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Xxxxxxx TER xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx (xΩ) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx xxxxx včetně xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx experimentech, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x x odvozené xxxxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.
2.1.2 Xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx A a xxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnosti xxxxx x xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx materiál, xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxx x pro xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx experimentech, x xxxxxxxxx hodnotách x o xxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxx xxx uvedeny ve xxxxx xxxxxxx.
2.2 Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx výsledků
2.2.1 Xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx látku xxxxx xxx 5 xΩ, xxxx xxxxx xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx TER xxxxx xxxx xxxxx 5 kΩ a xxxxx o xxxxxxxxx xxxxxxx látku xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx látku, xx xxxxx žíravá.
U xxxxxxxxx aktivních látek xxxx xxxxxxxxxxx organických xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx TER xxxxx xxxx rovné 5 xΩ, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx průniku xxxxxxx. Xx-xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v terčíku xxxx xxxxx xxxx xxxxx střednímu xxxxxx xxxxxxx x terčíku xxxx xxxxxxxxx souběžně xxx použití 36 % XXx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx zkoušené xxxxx xxxxxxxx pozitivní, x xxxxx xx xxxx xxxxxx. Je-li střední xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx menší xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx souběžně xxx použití 36 % XXx, je xxxxxxx falešně pozitivní, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx.
2.2.2 Xxxxxxx x modelem xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxx negativní kontrolu xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx; xxxxxxx xxxxxxxxxx A xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x výpočtu relativní xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx. Hraniční xxxxxxxxxxxx xxxxx životaschopnosti xxxxx, xxxxxx xx rozlišují xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx žíravé (xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx), xxxx xxx xxx předpovědní model xxxxx definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx validační xxxxxx xxxx xxxxxxxx, že xx vhodný (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x zkoušce
Protokol x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x případně xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Podobné informace xx měly být xxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx byly xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx postupu,
- popis x xxxxxxxxxx jakýchkoli xxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx XXX) nebo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx) pro zkoušený xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx standardní referenční xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxxx xxxx opakovaných experimentech x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx,
- xxxxx jakýchkoli xxxxxx pozorovaných účinků.
Rozbor xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) XXXXX (1998), XXXXX News &xxx; Xxxxx, XXXX 26, 275-280.
(2) Xxxxxx, X. H., Archer, X. E. X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxx, X. K., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx, X-X., Xxxxxxx, X. (1998), The XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx in xxxxx xxxxx for skin xxxxxxxxxxx. 2. Xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxx Xxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 12, 483-524.
(3) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X., Walker, A. X., Worth, A. X. (1998), The XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx on xx xxxxx tests xxx xxxx corrosivity. 1. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxx xxxx xxxxxxxxx, Toxicology xx xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. X. X., Xxxxxxxxx, X. X., Rhodes, X. (1986), An xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx — modifications xxx xxxxxxxxxx, Xxxx Xxxx. Xxxxxxx. 24, 507-512.
(5) Botham, P. X., Xxxx, X. X., Xxxxxxx, X., XxXxxx, J. C., Xxxxxxxxx, X. A., Xxxxxxx, E., Cheeseman, X., Esdaile, X. X., Gardner, X. (1992), Xxx skin xxxxxxxxxxx test in xxxxx: xxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxxxxx trial, Xxxxxxxxxx in xxxxx 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. X., Xxxxxx, X. H., Xxxxx, X., Botham, X. X., Xxxxxx, R. X., Xxxx, L. X., Esdaile, D. X., Xxxxxxx, M. (1998), An xxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXXX testing xxxxxxxx xxx skin xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Curren, X. X., Xxxxxxx, X. X., Gardner, X. X., Gordon, X. X., Xxxxxxxxxx, X., Xxxxx, X. X., Liebsch, X., Xxxxxxxx, X., Osborne, X., Ponec, X., Xxxxxxx, X. F., Xxxxxxxx, W., Xxxxxx, X. X., Balls, X. 1995), A xxxxxxxxxxxxx study on xx xxxxx skin xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX xxxxxxxx 6, XXXX 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Obrázek 2"
PŘÍLOHA II
"B.41 XXXXXXXXXXXX — XXXXXXX FOTOTOXICITY 3X3 NRU IN XXXXX
1. METODA
1.1 Úvod
Fototoxicita xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx vyvolaná xx xxxxx expozici xxxx určitým xxxxxxxxx xxxxxx x následné xxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx látky.
Informace xxxxxxx xx zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx. xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx možného xxxxxxxxx, xxxxx může xxxxxxx xx zkoušené xxxxx xx xxxxxxx s xxxxxxxx XX xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx světlu.
Protože xxxxx xxxxxxx xx xxxxx x hlediska xxxxxxxxxxx xx stanovení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxx, lze xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxx xx vivo xx xxxxxxxxxx xxxxxx a xx nanesení xx xxxx, x xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx působí xx nanesení xx xxxxxxx xxxx fotoiritanty.
Zkouška xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx xxxx xxxxxxxx x validována x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX/XXXXXX v xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vivo. X xxxx 1996 xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4).
Výsledky xx zkoušek fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx xxxx porovnány x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx fotoiritačmi xxxxxx xx xxxx u xxxxxx a x xxxxxxx x zkouška xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx těchto xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx látek, xxxxx xxxxxxxx xxxx specifické xxxxxxxxxx, bude xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX in xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx není xxxxxxxx x xxxx, aby xxxxxxxx hodnocení xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx postupného zkoušení xxxxxxxxxxxx chemických látek xx xxxxxxx x xxxxxxx.
1.2 Definice
Intenzita xxxxxxx: xxxxxxxxx ultrafialového xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx dopadajícího xx povrch, xxxxxx xx X/x2 xxxx xX/xx2.
Xxxxx světelného záření: xxxxxxxx (xxxxxxxxx × xxx) xxxxxxxxxxxxxx (XX) xxxx viditelného xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx povrch, xxxxxxxxx x xxxxxxx (X × x) xx plochu xxxxxxx, xxxx. X/x2 xxxx X/xx2.
Xxxxxx pásma XX xxxxxx: označení xxxxxxxxxx xxxxxx XXX (Commission Xxxxxxxxxxxxxx xx l'Eclairage): XXX (315400 nm), XXX (280315 nm) x XXX (100280 xx). Používají xx xxxxxx xxxx označení: xxxx xxxxxxx mezi XXX a UVA xx xxxxx používána xxxxxxx 320 nm x xxxxx XXX xxxx xxx xxxxxxxxx xx XX-X1 x XX-X2 x hranicí xxxxx 340 nm.
Životaschopnost xxxxx: xxxxxxxx, xxxxxx xx měří xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxx vitálního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx) x xxxxx v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušky xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk: xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx), xxxxx prošly xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (x XX, xxxx xxx XX), xxx xxxxxx exponovány zkoušeným xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx model: xxxxxxxxxx používaný xxx xxxxxx výsledků zkoušek xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxxxx potenciálu. X xxxxxxxxxx metodice lze xxx převod xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx xx předpověď fototoxického xxxxxxxxxx xxxxxx faktor XXX x veličinu XXX.
XXX (xxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxxxxx xxxxxx): xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx stejně účinných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (EC50) xxxxxxxx látky, a xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/XXX světlem (+ XX) x xxx xxxx (-UV).
MPE (xxxx photo xxxxxx — xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx): xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx průběhu xxxxxx xxxxxxxxxx účinku xx koncentraci získaných xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/xxx xxxxxxx (+ XX) x bez xxxx (-UV).
Fototoxicita: xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, vyvolaná xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx chemickým xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx světlu nebo xxxxxxx xxxxxxxx ozářením xxxx xx systémovém xxxxxx xxxxxxxx látky.
Fotoiritace: xxxxx xxxxxx xxxxx "xxxxxxxxxxxx", xxxxx se xxxxxxx x xxxxxx xxxxx těch xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx na xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxxx). Tyto fototoxické xxxxxx xxxxx xxxx x nespecifickému xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx reakci xxx opalování).
Fotoalergie: získaná xxxxxxxxxxxx reaktivita, ke xxxxx nedochází při xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx x která xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx dva xxxxx xxxx tím, xxx xxx reakci xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x genového xxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xx expozici xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XX/XXX xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx světla a xxxxxxxx látky. Xxxxxx xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx, kdy xx tvorba xxxxxx xxxxxxxxxx UV zářením xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxx být xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx, xx pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xxxxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx srovnáních xxxxxxxxxx xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Úvodní poznámky
Fototoxické xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx látek (5, 6, 7, 8). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx schopnost xxxxxxxxxx světelnou energii x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxx fotochemie (Xxxxxxxxx-Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Před xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx zkoušení podle xxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx UV/VIS xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx (xxxx. xxxxx Xxxxxxxx XXXX 101). Xx-xx molární xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 x.xxx-1.xx-1, xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx jinou biologickou xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek).
1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx (chemickým) chromoforem xxxx x fototoxické xxxxxx (7). Všechny xxxxx k xxxxxxxxx xxxxx. Zkouška fototoxicity 3X3 XXX in xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxx xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx dávce XXX/XXX světla x xxx xxxx expozice. Xxxxxxxxxxxx xx v xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx koncentračně xxxxxxx xxxxxxx příjmu xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (9) 24 xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxx.
Xxxxx Balb/c 3X3 xx 24 x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx 96xxxxxxx destičky xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx se xxxx 1 x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX/XXX xxxxxx 5 X/xx2 XXX (+ XX xxxxxxxxxx), zatímco xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx (-UV xxxxxxxxxx). X xxxx xxxxxxxx se poté xxxxxxxxx xxxxxx nahradí xxxxxxxxxxx médiem x xx dalších 24 x xxxxxxxx xx xxxxxxx životaschopnost xxxxxxxxx 3xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XXX). Xxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnost xxxxxxxxx x procentech vzhledem x xxxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx se xxxxxxx xxx každou x xxxx zkušebních xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx závislé xxxxxx xxxxxxx při ozáření (+ XX) a xxx xxxxxxx (-XX), xxxxxxx xxx hodnotě XX50, xx. při xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 % xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx srovnání x neexponovanými kontrolami.
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xx XXX, xxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx buněk xx UVA xx xxxx xxx pravidelně xxxxxxxxxxxx. Buňky xx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx, příští xxx se xxxxx xxxxxx UVA xxxxxx 1 xx 9 X/xx2 x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x den xxxxxxx xxxxxxxx XXX. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx-xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx ozáření 5 X/xx2 xxxxx xxx 80 % xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx udržované x xxxxx. Tato xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx po xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxx negativní kontroly xx UVA xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx: zkouška xxxxxxx xxxxxxxx jakosti, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx x EBSS (Xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) nebo 1 % xxxxxxxxx (XxXX)) nebo xxx xxxx vykazují při + XXX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 80 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x temnu (-XXX).
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (A540 XXX) xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, zda 1 × 104 xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxx xxxxx zachovalo při xxxxx během xxxx xxx zkoušky xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, jestliže xxxxxxx xxxxxxx X540 XXX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX in vitro xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx fototoxická xxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX xxx použit jako xxxxxxxxx kontrola chlorpromazin (XXX), a xx xxxx doporučen. Pro XXX xxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx tato xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx: xxx XXX xxxxxxx (+ XXX): EC50 = 0,1 xx 0,2 μx/xx, xxx XXX xxxxxxxxx (-XXX): XX50 = 7,0 xx 90,0 μx/xx. Xxxxxxxxxxxx faktor (XXX), xx. xxxxx xxxxxxx XX50, by xxx xxx alespoň 6.
Xxxxxxx XXX xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx jiné xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx vhodné x xxxxxxxx typu xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxx případě xx xxxx být na xxxxxxx dosavadních údajů xxxx kritéria xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx rozsahy xxxxxx XX50 a XXX xxxx XXX (střední xxxxxxxx xxxxxx).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx
1.7.1 Xxxxxxxx
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx permanentní xxxx linie xxxxxxxxxxx — Xxxx/x 3X3, xxxx 31 — xxx z xxxxx XXXX, xxxx x xxxxx ECACC a xx tedy xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx mohou xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxx prokázána xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, a xxxx xx být xxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx k tomu, xx xxxxxxxxx buněk xx XX xxxxxxx x počtem xxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxx buňky Balb/c 3X3 z xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, nejlépe x xxxxx xxx xxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 xx UVA xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx.
1.7.1.2 Xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxx rutinní buněčné xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx by xxxx být xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxx Xxxx/x 3X3 se xxxxx x XXXX (Dulbeccova xxxxxxxxxx Eagleova xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx telecím xxxxx, 4xX xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx vlhčené xxxxxxxxx při 37 °X/7, 5 % XX2. Zvláště xxxxxxxx xx, xxx kultivační xxxxxxxx zajistily, aby xxx buněčný xxxxxx xxxxxx dosavadního rozpětí xxx použité xxxxx xxxx buněčné xxxxx.
1.7.1.3 Xxxxxxxx kultur
Buňky xx xxxxxxxxxx kmenových xxxxxx xx nasadí xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx jednou se xxxxxxxx xxxx použitím xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx.
Xxx zkoušce xxxxxxxxxxxx xx buňky xxxxxxxx xx kultivačního média x takové hustotě, xxx xxxxxxxxx konfluence xx konce zkoušky, xx. xx okamžiku, xxx xx xx 48 h od xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 kultivované x 96xxxxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 × 104 buněk xx xxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx nasadí xxxxxxx xxxxxxxx xx dvou xxxxxxxxxx 96xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxxx podmínek xxxxx xxxx, kdy xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (+XXX/XXX) x xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx (-UVA/VIS).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx in xxxxx určených pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx potenciálu, xxxx x xxxxxxxxxxxxxxx dosud xxxxx xxxxx chemická xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx xx xxxx xxxx xx vitro xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx transformace. Xxxxxxxxxx se tedy xxx za nezbytné xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx, aby byla xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx aktivace xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx chemická xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx chemické xxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx x stálosti neprokazují xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Může-li xxxxx x rychlé xxxxxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx látky provádět xxx červeným světlem.
Zkoušené xxxxxxxx látky xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx fyziologickém xxxxxxx, xxxx. x Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztoku (XXXX) xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx (PBS), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx chemické látky x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx vhodném xxxxxxxxxxxx xx 100xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx xx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx 1:100 xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 % xxx. xx xxxxx xxxxxxxxx, xx. x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) a xxxxxxx (XxXX). Mohou xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (např. xxxxxx), xxx měly by xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx specifické xxxxxxxxxx, xxxx. reakce xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx fototoxických xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx.
Xx-xx třeba, xxxx být xxx xxxxxxxxx rozpouštění xxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx x/xxxx zahřátí xx 37 °X.
1.7.1.6 Ozáření XX xxxxxxx/xxxxxxxx
Xxxxx světla: xxxxx vhodného xxxxxx xxxxxx x vhodné xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušení fototoxicity. Xxxxxx x pásmu XXX x xx xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxx spojováno s xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx xxxxxx x xxxxx UVB xx xxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxx vysoce xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 313 nm x 280 xx 1000xxxx (11). Xxxxxxxx pro xxxxx vhodného xxxxxxxxxx xxxxxx by měla xxxxxxxxx důležitý xxxxxxxxx, xxx xxxxx světla xxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, x aby xxxxx světelného xxxxxx (xxxxxxxxxxx po přijatelnou xxxx) byla xxxxxxxxxx xxx detekci xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxx délky x xxxxx, xxxxxx emise xxxxx (xxxxxxxxxxxx xxxxxx), xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx testovací xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx světla. X xxxxxxxxx simulátorech xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx x nich xx xx xxxxxx, xx xxxxxxx méně xxxxx x je xxxxxxxx, avšak xxxx xxxxx xx slunečním xxxxxxx není dokonalá. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx významné xxxxxxxx UVB xxxxxx, xxxx xx být xxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxx (UVA:UVB ˜ 20:1). Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (3).
Xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxx (intenzita ozáření) xx xxxx xxxxxxxxxx xxxx každou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx. UV-metr musí xxx pro daný xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx XX-xxxxx by xxxx xxx kontrolována x xx xxxxx xxxxxx xx doporučuje použít xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX-xxxx xxxxxxxx typu. X xxxxxxxx xxxxxxx by xxx být v xxxxxxx časových xxxxxxxxx xxxxxx x měření xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx UV-metru xxxxxxxxxxxxxxxx, avšak xxxxxx xxxxxxxxx vyžadují xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx osobami.
Dávka 5 J/cm2 xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx Balb/c 3X3 a dostatečně xxxxx x xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxx 5 X/xx2 xx xxxx 50 xxx. xxxx být xxxxxxxxx ozáření xxxxxxxxx xx 1,666 XX/xx2. Xxxxxxxx xx použita xxxx xxxxxxx linie xxxx jiný xxxxxxxx xxxxx, může xxx xxxxx UVA xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx standardních xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx tímto xxxxxxxx:
x(xxx) = dávka xxxxxxxxxx záření (X/xx2) 100 / xxxxxxxxx xxxxxxx (mW/cm2) 60 (1 X =.X xxx)
1.7.2 Zkušební podmínky
Maximální xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx neměla xxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx xxxxxxx fototoxické xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx; xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx pozitivních xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xX xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx zkoušených xx xxxxxxx (+ XXX) x bez xxxxxx (-XXX) xx měly xxx náležitě stanoveny x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx zjištění rozmezí. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x intervaly mezi xxxxxxxxxxxxx musí být xxxxxxx xxx, aby xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podloženy xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Měla xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx koncentrací (x xxxxxxxxxxx faktorem xxxxxx).
1.7.3 Xxxxxxxx xxxxxx [1]
1.7.3.1 Xxxxx xxx
Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx x xxxxxxxxxxx xxxxx x 100 μl xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx pouze do xxxxxxxxxx jamek 96xxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx xxxxx). Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx po 100 μl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 xxxxx xx xxxxx). Xxx xxxxxx xxxxxxxxx chemickou xxxxx xx připraví xxx xxxxxxxx: xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-UVA) x druhá pro xxxxxxxxx fotocytotoxicity (+XXX).
Xxxxx xx inkubují 24 x (7,5 % XX2, 37 °X), xxxxx nedosáhnou semikonfluentní xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx přichycení x xxxxxxxxxxxxx růst.
1.7.3.2 Xxxxx xxx
Xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx jamka xx xxxxxxx xxxxxxx 150 μl XXXX/XXX. Xxxxx xx 100 μx EBSS/PBS obsahujících xxxxxxx koncentraci xxxxxxxx xxxxxxxx látky nebo xxxxx rozpouštědlo (xxxxxxxxx xxxxxxxx). Aplikuje xx 8 různých xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx zkoušenou xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx v temnu xx dobu 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °X).
X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx UVA xx buňky při xxxxxxxx teplotě xx xxxx 50 min. xxxxxxx xxxx víčko 96xxxxxxx xxxxxxxx UVA xxxxxxx x intenzitě 1,7 MW/cm2 (5 X/xx2. Xxx nedošlo xx xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx ozáření XXX xx xxxxxxxxx 50 xxx. (xxxx xxxxxxxx XXX) x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x každá jamka xx promyje xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx přes xxx (18-22 x) (7,5 % XX2, 37 °X).
1.7.3.3 Xxxxx xxx
Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xx xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx x xxxxxxx kontrastem. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx způsobené xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Doporučuje xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx chyby, xxxxx xxxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nepoužijí.
Zkouška xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxxxx 150 μx xxxxxxxxxxxx EBSS/PBS x xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Přidá xx 100 μx média XX x xxxxxxxx xx 3 h xxx 37 °X xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x 7,5 % XX2.
Xx xxxxxxxx xx xxxxxx NR xxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxx 150 μl XXXX/XXX. XXXX/XXX se xxxxxxxxx a zcela xxxxxx (xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx).
Xxxxx xx xxxxxx 150 μx xxxxxxx připraveného xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx XX.
Xxxxxxxx xx xxxxxx 10 min. xxxxx xx třepačce, xxxxx xx NR x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx homogenní xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx NR xxx 540 nm, xxxxxxx se xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx. Údaje xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX) x xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxx a množství xxxxx
Xxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXX/XXX xxxx xxx něho. Xx-xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx být xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxx, aby xxxx xxxxx proložit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx xxxxxx pro xxxxxxxxxx x xxxxx (-XXX) xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx ozáření (+XXX), xxxx xxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxx koncentrací, které xxxx být x xxxx částech xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx, xx-xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxx-xx x xxxx xxxxxxx experimentu (-XXX x +XXX) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, stačí xxxxxxx zkoušku x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxxxxxx koncentrace.
Ověření xxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Negativní výsledky xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, jestliže byla xxxxxxxx xxxxxxxx látka xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. V xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx hlavní xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxx předběžnými xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx rozmezí xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx hraničních xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xx-xx opakované xxxxxxxx považováno za xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx výsledku xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx podmínky. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky. X tohoto důvodu xxxx být xxxxx xxxxxxxx (xxxx rozpouštědlo, xxxxxxxxxxxx, použití xxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx faktorem xxxxxxx. Xxxxxxxxxx může být xxxxx x úvahu xxxxxxxx xxxxxxxxx doby xxxx ozářením. Xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx u xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx.
2.2 Xxxxxxxxxx výsledků
Je-li xx xxxxx, stanoví xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx 50 % inhibici xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (EC50). Xxx tak učinit xxxxxxx xxxxxxxx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxx logistickou xxxxxxx) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci xxxx xxxxxxxx xxxxxx metod xxxxxx proložení (14). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX50 xxx xxxxx xxxxxxx by měla xxx xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx výpočet XX50 xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx grafického xxxxxxxxx. X xxxxxxx případě xx xxxxxxxxxx použít xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (měřítko xxx x: xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx osy x: xxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxx xx této xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx xxxxxxxxxxx téměř xxxxxxxx.
2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxx)
2.3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxx — xxxxx 1: fotoiritační faktor (XXX)
Xxxxxxxx jsou x xxxx případech xxx xxx xxxxxxx (+UVA), xxx bez xxxxxxx (-XXX) xxxxxxx úplné xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX) xxxxxxxxx podle tohoto xxxxxx:
(x) PIF = (XX50 (-UV)) / (XX50 (+XX))
Xxxxxxx XXX &xx; 5 předpovídá xxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx PIF ≥ 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx +XXX x xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx -XXX, nelze xxxxxxx XXX xxxxxxxxx, třebaže xxx x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx o xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx hodnotu "&xx; XXX", xxxxxxxx xx xxxxxxx -XX zkouška xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx koncentrace (Cmax), x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx pro xxxxxxx "&xx; XXX";
(x) &xx; PIF = (Xxxx (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxx li xxxxxx pouze xxxxxxx "&xx; XXX", xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx &xx; 1.
Xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxxx xxxxx nevykazuje xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX50 (-XX) xxx xxxxxxx XX50 (+ XX), svědčí xx x neexistenci xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx charakterizaci xxxxxxxx xxxxxxx formální xxxxxxx "XXX = *1";
(X) &xx; XXX = *1 = (Cmax (-XX)) / (Cmax (+XX))
Xxx xx xxxxxx xxxxx hodnotu "PIF = *1", xx xxxx hodnota xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx.
X xxxxxxxxx x) x x) xx xxxx xxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu xxxxxxx xxxxx v xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx model xxxxx 2: xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (MPE)
Alternativně lze xxxxxx novou xxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx x xxxxxxxx údajů x xxxxxxxxx studie EU/COLIPA (15) x xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxx XX xxxxxx (13). Xxxxx model nemá xxxxxxx xxxx model XXX x případech, xxx nelze získat xxxxxxx XX50. Tento xxxxx využívá xxxxxxx xxxxxxxx účinek (mean xxxxx effect) (XXX), xxxxxxxx, která xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx na xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxx) vyvinut xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx je xxxxx x xxxxxxxxx.
2.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro (PIF ≥ 5 xxxx XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx potenciál. Xxxxxxxx xxxx výsledku xxxxxxxx při xxxxxxxxxxxxx xxx 10 μx/xx, xx také pravděpodobné, xx látka bude xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx in vivo. Xx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pouze xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xx xx xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx, absorpci x možné xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx v xxxx xxxx zkoušení xxxxxxxx látky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. xx xxxxxxx modelu xxxxxx kůže xx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro (PIF &xx; 5 xxxx XXX &xx; 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxx za xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx až xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxxxxxx negativní xxxxxxxx, že xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, kdy xxxx xxx nižších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx toxické xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (XX50 +XX x XX50 -XX), xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxx-xx xxxxxxx tomu xxxxxxxx xxxxxxxxx (+XX a -XX) a xxxx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vodě xx xxxxxxx menší xxx 100 μx/xx, xxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx látku xxxxxx x xxxx xx xxx xxxxxxx potvrzující xxxxxxx (xxxx. xx xxxxxxx modelu xxxxxx xxxx xx xxxxx xxxx zkouškou xx xxxx).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxx x zkoušce xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx CAS, je-li xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx,
- xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx důležité xxx xxxxxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxx x fotostabilita, jsou-li xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- procentuální xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx (XXXX xxxx XXX).
Xxxxx:
- xxx a xxxxx xxxxx,
- nepřítomnost xxxxxxxxxx,
- číslo xxxxxxx xxxxxx, je-li známo,
- xxxxxxxxx xxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx vitro
Zkušební podmínky x) — xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xx ní:
- xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- délka inkubace (xxxxxxxxxx xxxx inkubací x xx xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx b) — xxxxxxxx chemické xxxxx:
- xxxxxxxxxx výběru koncentrací xxxxxxxx chemické látky xxxxxxxxx jak xxx xxxxxxx XX/XXX, tak xxx xxx,
- v xxxxxxx, že xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxxxx, zdůvodnění xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx,
- xxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx:
- xxxxxxxxxx výběru xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx zdroje světla,
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx filtrů),
- xxxxxxxxxxxxxxx radiometru x xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx,
- vzdálenost xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxx xxxxxxxxxxx, vyjádřená x xX/xx2,
- xxxxx expozice XX/XXX xxxxxx,
- xxxxx XXX xxxxxx (intenzita × čas), vyjádřena x X/xx2,
- xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx udržovaných x xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx XXX:
- složení xxxxx XX,
- xxxx inkubace XX,
- inkubační podmínky (xxxxxxxxxxx XX2, teplota, xxxxxxx),
- xxxxxxxx extrakce XX (extrakční xxxxxxx, xxxxx extrakce),
- xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx odečet xxxxxxxxxx XX,
- druhá (referenční) xxxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx,
- xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xx-xx xxxxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxx zkoušené chemické xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,
- křivky xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx versus xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx +XXX a -XXX,
- xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx: xx-xx xx možné, xxxxxxx hodnoty EC50 (+XXX) a EC50 (-XXX),
- xxxxxxxx obou xxxxxx závislosti odezvy xx koncentraci xxxxxxxxx x ozářením UVA/VIS x xxx xxxx, x xx buď xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx faktoru (xxxxx-xxxxxxxxxxx factor ) (XXX), xxxx výpočtem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxx xxxxxx) (XXX),
- xxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (absorbance xxxxxxxx NR) ozářených x xxxxxxxxxxx buněk,
- xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx kontrolu, střední xxxxxxx x směrodatná xxxxxxxx,
- xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrola:
- xxxxxxx XX50 (+UVA), XX50 (-XXX) x XXX-xxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx,
- dosavadní xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx: hodnoty EC50 (+XXX), EC50 (-UVA) x XXX, xxxxxxx xxxxxxx a směrodatná xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) Xxxxxxxxx, H., Xxxxx, X., Xöxxxx, B., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxx, S., Klecak, X., L'Eplattenier, X., Xxxxxxx, M., Xxxxxx, X. W., Xxxxxx, X., Moldenhauer, X., Xxxxx, X., Xxxx, X., Xxxxxxxxxxx, U., Xxxxxxxx, J., Xx Xxxxx, O., Steiling, X., Xxxxxxxx, X. (1994), EEC/COLIPA xxxxxxx xx xx vitro xxxxxxxxxxxxx testing: First xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x Xxxx/x 3X3 xxxx xxxxxxxxxxxxx assay, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 8, 793-796.
(2) Anon (1998), Xxxxxxxxx on xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx the 3T3 XXX PT xxxx (xx xx vitro xxxx for xxxxxxxxxxxxx), Xxxxxxxx Commission, Xxxxx Xxxxxxxx Centre: XXXXX xxx DGXI/E/2, 3 Xxxxxxxx 1997, ATLA 26, 7-8.
(3) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, M., Xxxxxx, X., Pape, X. X. X., Xxxxxxxxxx, X., De Xxxxx, X., Holzhütter, X. X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, W. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxxxx, X., Potthast, X. X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Brantom, X. (1998), XX/XXXXXX "Xx vitro xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx xxxxx, results xx xxxxx XX (xxxxx xxxxx), part 1: the 3X3 XXX phototoxicity test, Xxxxxxxxxx in Xxxxx 12, 305-327.
(4) XXXX Xxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Final Report xx the XXXX Xxxxxxxx on Xxxxxxxxxxxxx xx Validation xxx Xxxxxxxxxx Criteria xx Xxxxxxxxxxx Toxicological Xxxx Xxxxxxx, XXXX Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, W. X. (1993), X xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx potential, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 7, 95-102.
(6) Xxxxxxxxxx, X., Xxxxx, X. (1972), Xxxx xx xxx photodynamic substances, Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx, biological and xxxxxxxxx chemistry Xxx. 3 Xxxx 1, Xxxxx Xxxxxxx Publishing Xx, Amsterdam, XX–XXXX.
(7) Xxxxxxxxx, X., Lovell, X. W., Xöxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, T., Xxxxxxx, X. X., Xxxx, W. X. X., Xxxxxx, O., Xxxxxxxxx, X. (1994), Xx xxxxx phototoxicity xxxxxxx: The xxxxxx xxx recommendations xx XXXXX xxxxxxxx 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, J. D. (1989), Xxxxxxxxxxxxxxxxxx. X: Xxx science of xxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxx, ed.), Plenum Xxxxx, Xxx Xxxx, 2. xxx., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X. (1985), Xxxxxxxx determination xx xxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx neutral xxx absorption, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, X. A., Xxxxxx, X. G., Xxxxxxxxxx A. (1996). X: Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (X. N. Xxxxxxxx, H. I. Xxxxxxx xxx.), Xxxxxx &xxx; Xxxxxxx, Washington XX, 5. xxx., 515-530.
(11) Tyrrell, X. X., Xxxxxx M. (1987), Action xxxxxxx xxx xxxxx skin xxxxx: xxxxxxxxx xx xxx relative xxxxxxxxxxxx xx the xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, Cancer Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Standard Xxxxxxxxx Xxxxxxxxx: Xxxx/x 3X3 XXX Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, xxxxxxxx 23. xxxxxxxx 1997 X. Xxxxxxxxx, xxxxxxxxx 6. března 1998 xxxxx Management Xxxx of xxx XX/XXXXXX xxxxxxx "In Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, M., Xxxxxx, J., Xxxx, X. J. W., Xx Xxxxx, O., Xxxxxüxxxx, H. G., Xxxxxxxxx, F., Xxxxxxx, X., Lovell, W. X., Xxxxxxxxxxxxx (1998), X Study on xxx Xxxxxxxxxx Potential xx XX Xxxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxx XXX of xxx XX Directive 76/768/XXX xx xxx 3T3 XXX In Vitro Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, XXXX 26, 679-708.
(14) Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X. (1995), Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx of cellular xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Systems, 3, 127-138.
(15) Xxxxxüxxxx, X. X. (1997), X xxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx from xxxxx xx dose-response xxxxxx xxx xxx xxx xxx predicting the xx vivo xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, XXXX 25, 445-462."
"Xxxxxxx
&xxxx;
[1] Xxxxx xxxxxxxxxxx lze xxxxxx x literatuře (12).