Xxxxxxxx Komise 2000/33/XX
xx xxx 25. xxxxx 2000,
xxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pokroku xxxxxxxx Xxxx 67/548/EHS o xxxxxxxxxx právních x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x označování xxxxxxxxxxxx xxxxx [1]
(Xxxx x xxxxxxxx xxx EHP)
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx na xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX xx xxx 27. xxxxxx 1967 o xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx a xxxxxxxxxx nebezpečných látek [2], xxxxxxxxx pozměněnou xxxxxxxx Xxxxxxxxxx parlamentu x Rady 1999/33/ES [3], x zejména xx článek 28 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxxx xxxxxxx:
(1) X xxxxxxx V směrnice 67/548/XXX xx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, toxicity x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
(2) Xxxxx xx. 7 xxxx. 2 směrnice Xxxx 86/609/XXX xx xxx 24. xxxxxxxxx 1986 x sbližování xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx států xxxxxxxxxx se ochrany xxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxx [4] xxxxx xxx xxxxx, xxx němž xx xxx xxxxxxx zvíře, xxxxxxxx, xx-xx xxxxxxx x xxxxxxxxx dostupná xxxx vědecky xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Xxxxxx zamýšlí xxxxxxx do xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX xxxxxx alternativní xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx podle xx. 3 xxxx. 1 xxxxxxxx 67/548/XXX.
(4) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxx xxx přizpůsobení xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx o xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx úseku xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Text xxxxxx X a II xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xx části X přílohy V xxxxxxxx 67/548/XXX.
Xxxxxx 2
1. Členské xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx právní x xxxxxxx předpisy xxxxxxxx xxx dosažení souladu x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 2001. Xxxxxxxxxx x nich xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx předpisy přijaté xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx xxxxx na xxxx směrnici xxxx xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx vyhlášení. Xxxxxx odkazu si xxxxxxx xxxxxxx státy.
2. Xxxxxxx xxxxx sdělí Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které přijmou x xxxxxxx působnosti xxxx směrnice, a xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x přijatými xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx dnem po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství.
Xxxxxx 4
Xxxx směrnice xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 25. dubna 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxxx Wallström
členka Xxxxxx
[1] Přijato xxxx xxxxxxxxxxxxx po xxxxxxx xxxxx.
[2] Xx. věst. 196, 16.8.1967, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Xx. xxxx. X 358, 18.12.1986, x. 1.
XXXXXXX X
"X.40 XXXXXXX XXXXXX XX XXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxx xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx elektrického xxxxxx xxxx potkana (XXX) x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx kůže byly Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (XXXXX, Společné xxxxxxxx xxxxxxxxx Evropské Komise) (1, 2, 3) xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx XXXXX prokázala, xx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx rozlišit xxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxx. Protokol x xxxxxxx založené xx modelu xxxxxx xxxx xxxx umožnil xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxx xxxxx způsobující xxxxx xxxxxxxxx, X 35 x xxxxxxx látky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, X 34) (2). Xxxxx a postup xxxx zkoušek je xxxxxx; xxxxx zkoušky, xxxxx xx xxx xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx požadavcích a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxx xxxx Xxxxxx xxxx, xxxx X.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxx: xxxxxxxx xxxxxxxxx kůže xx xxxxxxxx zkoušeného xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxx 1.5.3.4 a 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx metody — xxxxxxx XXX xx xxxx potkana
Zkoušený xxxxxxxx xx až xx 24 x xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kůže xxxxxxx xxxxxxxxxx mladých xxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx účinky jsou xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx integrity x bariérové xxxxxx xxxxxxxx vrstvy (stratum xxxxxxx), xxxxx je xxxxxx xxxx snížení xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx xxxxxx (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx x nedráždivé xxxxx xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx a neutrální xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxx xxx literatura (6)) xxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx falešně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx pro tyto xxxxx chemických xxxxx (2, 7).
1.5 Xxxxx xxxxxxxx metody — xxxxxxx XXX xx xxxx potkana
1.5.1 Zvířata
Terčíky xxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx (20 — 23 xxxxxxx) xxxxxxx (Xxxxxx xxxx srovnatelný xxxx). Xxxxxxx x xxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx holicím xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xxxxx opatrným xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zastavujících xxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx den po xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx se xx 3 dnů (x xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx než 31 dnů).
1.5.2 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx
Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxx xxxxxxx odstraní xxxxxxx kůže x xxxxxxxxxx tuk xx x xxxx opatrně xxxxxxxxx. Kůže xx xxxx přeloží přes xxxxx teflonové (PTFE) xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxx konec trubičky xx těsně přetáhne xxxxxxx X-xxxxxxx, aby xxxx kůže upevněna, x přebytek xxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx x X-xxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxxx X-xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pružinové xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx komory xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX) (xxxxxxx 2).
1.5.3 Zkušební xxxxxx
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálu
Kapalná xxxxxxxx xxxxx (150 μx) xx aplikuje xx xxxxxxxxx uvnitř xxxxxxxx (xxx. 2). Xxx zkoušení pevných xxxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx, xxx byla xxxxxxx xxxx epidermis. Xxxx xx xx povrch xxxxx látky xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (150 μx) x xxxxxxxx xx xxxxx protřepe. Xxxx xxxxxxx a xxxx xx xxxx xxxxx k maximálnímu xxxxx. X některých xxxxx xxxx xxxx xxx dosaženo xxxxxxxx xx xx 30 °X, xxx xx xxxxxxxx xxxxx roztavila, xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx.
Xx zkoušce xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx 24 x (xxx také xxx 1.5.3.4). Zkoušená xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxx 30 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx x xxxxxxxx ztuhly, xxx usnadnit omytím xxxxxxx xxxx xxxxx xx 30 °X.
1.5.3.2 Xxxxxx XXX
XXX xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxx (xxxx. XXX 401 xxxx 6401 xxxx ekvivalentní). Před xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx sníží xxxxxxxx dostatečného xxxxxx 70 % ethanolu xxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx převrácením xxxxxxx x tkáň xx xxxxxx xxxxxxxx 3 xx roztoku xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX). Elektrody xxxxxx xx xxxxxx xx xxx xxxxxx terčíku xxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xΩ/xxxxxx kůže (obrázek 2). Rozměry elektrod x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx obrázku 1. Xxxxxx xxxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxx, xx xx délka části xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx hořečnatého xxxxxx. Xxxxxx (tenká) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, aby xxxxxxxxx xx dně komory. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxx xxxxxxxxx trubičky xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxx 1), neboť xxxx xxxxxxxxxx má xxxx na naměřené xxxxxxx xxxxxx.
Xx třeba xx xxxxxxxx, že xx-xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 20 xΩ, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx straně terčíku xxxx. O xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx. xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx zakryje xxxxxx x xxxxxxxx x 10 s xx xxxxxxxxxx. Roztok xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx hořečnatým.
Výsledky XXX (xxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx rozpětí xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx tyto xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx přijatelná xxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx odporu (kΩ) |
|
Pozitivní |
10M xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx voda |
10–25 |
1.5.3.3 Xxxxxxxx xxxxxx xxx povrchově xxxxxxx látky x xxxxxxxxx organické xxxxx
Xxxx-xx xxxxxxx TER xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx organické xxxxx xxxxxxx zkoušené xxxxx xxxxx xxxx rovny 5 xΩ, xxx xxxxxxx xx tkáni xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, zda xxxxxxxx xxxxxx falešně pozitivní (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxx sulforhodaminu X
Xx předchozí xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx se xx epidermální xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kůže xxxxxxxx xx 2 x 150 μx 10 % xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xx xxxx přibližně 10 x omývají xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Všechny xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx se xx xxxxxxxx (xxxx. 20 xx skleněné xxxxxxxx xxx scintilační xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx deionizovanou vodu (8 xx). Lahvičky xx xxxxx 5 xxx. protřepávají, xxx xx odstranilo další xxxxx xxxxxxx. Tato xxxxxx oplachování se xxxx zopakuje, x xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx a xxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 ml 30 % xxxxxxx (x/X) xxxxxxx-xxxxxxx-xxxxxxx (XXX) x destilované xxxx x inkubují xx xxxx xxx při 60 °X. Po xxxxxxxx xx všechny xxxxxxx kůže xxxxxx x zlikvidují x xxxxx roztok xx xxxxxxxx 8 min. xxx 21 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx ˜ 175). 1 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx zředí 4 xx 30 % (x/X) xxxxxxx XXX v xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx (X) xx xxxx xxx xxxxxxxxx 565 xx.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X xx xxxxxx kůže xx vypočte z xxxxxx X (molární xxxxxxxxx koeficient xxxxxxxxxxxxxx X při 565 xx = 8,7 × 104; molekulová xxxxxxxx = 580). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X xx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx xx přijatelného rozmezí xxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxx a přístroje xxxx pro uvedení xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx přijatelné xxxxxxx xxxxxxx obsahu xxxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (μx/xxxxxx xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx chlorovodíková (36 %) |
40-100 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx voda |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx informace
Látky xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx (např. 2 hodiny), xxx xx identifikovaly xx xxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx však xxxxxxx, xx stanovení XXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xx xxxx 2 xxxxx (2), třebaže toto xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx 24hodinové xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx x rozměry xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx postup xxxxx xxx xxxx xx získané xxxxxxx XXX. Xxxx 5 Ω pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx účinků byl xxxxxxx x údajů xxxxxxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx v xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx referenčních xxxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxx látek použitých xx xxxxxxxxx studii (3).
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx modelu lidské xxxx
Xxxxxxxx materiál xx xxxxxxxxx až xx xxxx 4 xxxxx xx xxxxxxxxxxxx model xxxxxx kůže xxxxxxxxxxx x rekonstruované epidermis x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx účinky xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx specifikované expoziční xxxx pokles životaschopnosti xxxxx (xxxxxxxxx např. xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX) xxx definovanou xxxxxxxx xxxxxx. Podstata xxxxxxx xx založena xx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xx, xxx jsou xxxxxxx xxxxxxxxxx rohovitou xxxxxxx (difuzí xxxx xxxxx) a xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxx buněčných xxxxxxxx.
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
1.7.1 Xxxxxx lidské xxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx zdrojů, musí xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a vrstvu xxxxxx xxxxx pod xx. Xxxxxxxxx funkce xxxxxxxx vrstvy xxxx xxx xxxxxxxxxx. Xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx modelu x xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx neproniknou rohovitou xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx buněk x modelu xxxx xxx dostatečně xxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxx xxxxxxxx pozitivní x negativní xxxxxxxxx xxxxx. ivotaschopnost buněk (xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxx XXX, tj. xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X) xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxx (xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxx) xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx mezích. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx je, aby xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro validaci (2).
1.7.2 Xxxxxxxx postup
1.7.2.1 Xxxxxxxx zkoušeného xxxxxxxxx
X xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxx pokrylo xxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 25 μx/xx2). U pevných xxxxxxxxx musí být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, aby xxxxxxx kůži, x xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxx zajištěn xxxxx styk s xxxx; xxxxx látky xx xxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx rozemlety na xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx, xx aplikační xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2). Xx xxxxxxxx expoziční xxxx musí být xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx kůže xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx životaschopnosti xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk xxxx xxx použita xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX, pro xxx xx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx prokázalo, xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx kůže se xxxxxx do xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx 0,3 xx/xx xxx xxxxxxx 20-28 °C xx xxxx 3 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxx formazanu se xxxxxxx xxxxxxx absorbance X při vlnové xxxxx 545 až 595 xx.
1.7.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx zaznamenání xxxxxxxxx doby, postupu xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxx velký vliv xx výsledky xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx, xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx zkoušením řady xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx ECVAM (3). Xx xxxxxxxxxxx, aby xxxxxxx metoda x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vykazovala x xxxxx laboratoře a xxxx laboratořemi reprodukovatelnost xxx široké xxxxxxxx xxxxxxxxxx látek. Metoda xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx kritéria xxx xxxxxxxx validitu (2) a výsledky xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx publikovány xx xxxxxxxx xxxxxxxx x předcházející xxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Xxxxxxx XXX xx kůži xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx (xΩ) pro xxxxxxxx xxxxxxxx, pozitivní x xxxxxxxxx kontrolu x pro xxxxxxx xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx xxxxx xxxxxx údajů x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.
2.1.2 Xxxxxxx s xxxxxxx lidské xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x procentech xxx zkoušený xxxxxxxx, xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx experimentech, x středních xxxxxxxxx x x odvozené xxxxxxxxxxx by xxxx xxx uvedeny xx xxxxx tabulky.
2.2 Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx výsledků
2.2.1 Xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx pro xxxxxxxxx látku větší xxx 5 xΩ, xxxx xxxxx žíravá. Xx-xx xxxxxxx TER xxxxx xxxx rovna 5 xΩ a xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx látku nebo xxxxxxxxx organickou látku, xx xxxxx žíravá.
U xxxxxxxxx xxxxxxxxx látek xxxx neutrálních organických xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ, xxx provést xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xx-xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx souběžně xxx xxxxxxx 36 % XXx jakožto xxxxxxxxx kontroly, xx xxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxx pozitivní, x xxxxx xx xxxx xxxxxx. Je-li střední xxxxx barviva x xxxxxxx kůže xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 36 % HCl, xx xxxxxxx falešně xxxxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx.
2.2.2 Xxxxxxx x modelem xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxx negativní kontrolu xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx; hodnoty xxxxxxxxxx A xxxxxxxx xxx každý zkoušený xxxxxx xxx použít x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Hraniční xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx), xxxx xxx xxx předpovědní xxxxx xxxxx definován xxxx xxxxxxxx metody a xxxxxxxx validační studie xxxx xxxxxxxx, xx xx xxxxxx (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx o xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx musí xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx látka:
- identifikační xxxxx, xxxxxxxxx vlastnosti x případně fyzikálně-chemické xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xxx referenční xxxxx, xxxxx byly xxxxxxx.
Xxxxxxxx podmínky:
- podrobnosti xxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxx x zdůvodnění xxxxxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx XXX) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx) xxx zkoušený xxxxxxxx, pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx standardní referenční xxxxxxxx xxxxx včetně xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x středních xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx ve formě xxxxxxx,
- popis xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) XXXXX (1998), ECVAM Xxxx &xxx; Views, XXXX 26, 275-280.
(2) Fentem, X. H., Xxxxxx, X. X. X., Xxxxx, M., Xxxxxx, X. A., Xxxxxx, X. D., Earl, X. X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx, X-X., Liebsch, X. (1998), The XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxx xxxxx for xxxx xxxxxxxxxxx. 2. Xxxxxxx xxx evaluation xx xxx Xxxxxxxxxx Xxxx, Xxxxxxxxxx in xxxxx 12, 483-524.
(3) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. G., Xxxxxx, X. X., Gerner, X., Xxxxxx, A. X., Xxxxx, A. X. (1998), The XXXXX international validation xxxxx on in xxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 1. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxx xxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx in xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, G. J. X., Xxxxxxxxx, M. X., Xxxxxx, C. (1986), Xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx — xxxxxxxxxxxxx xxx validation, Food Xxxx. Xxxxxxx. 24, 507-512.
(5) Xxxxxx, X. X., Hall, X. X., Dennett, R., XxXxxx, X. X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Esdaile, D. X., Xxxxxxx, X. (1992), Xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx: xxxxxxx of xx interlaboratory xxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 6, 191-194.
(6) Worth, X. P., Fentem, X. H., Xxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxx, X. X., Esdaile, D. X., Xxxxxxx, X. (1998), Xx xxxxxxxxxx xx the proposed XXXX xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, P. X., Xxxxxxxxxxx, M., Barratt, X. X., Xxxxxx, X. X., Esdaile, X. X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx, X., Lewis, R. X., Liebsch, M., Xxxxxxxx, P., Xxxxxxx, X., Ponec, X., Xxxxxxx, X. F., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. P., Balls, X. 1995), A xxxxxxxxxxxxx study xx xx vitro xxxx xxxxxxxxxxx testing. Xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX workshop 6, XXXX 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Obrázek 2"
&xxxx;
PŘÍLOHA XX
"X.41 XXXXXXXXXXXX — XXXXXXX XXXXXXXXXXXX 3X3 NRU XX XXXXX
1. XXXXXX
1.1 Úvod
Fototoxicita xx definována xxxx xxxxxxx odezva xxxxxxxx xx první expozici xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx světlu xxxx xxxxxxx xxxxxxxx ozářením xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx ze zkoušky xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx xxxxx xxxxxx x identifikaci xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky, xx. existence xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx plynout xx xxxxxxxx xxxxx xx spojení s xxxxxxxx UV záření xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx in xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx x světla, lze xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sloučeniny, xxxxx xxxx fototoxické xx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxx xx xxxx, x xxxxxx xxxxxxxxxx, které působí xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx byla xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x rámci spojeného xxxxxxxx XX/XXXXXX x xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) x xxxxx xxxxxxxx platnou xxxxxxxxxxx xx vitro k xxxxxx xxxxxxxxxx zkouškám xx xxxx. X xxxx 1996 xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušek xx xxxxx pro xxxxxxxxxx fototoxicity (4).
Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx byly porovnány x xxxxxxxx fototoxickými xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx x xxxxxx x x xxxxxxx a xxxxxxx xx ukázala xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx vynikající. Xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx jiných xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky x světla, např. xxxxxxxxxxxxxxxx, fotoalergie a xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx mnoho xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xxxx vyvinuta x xxxx, xxx xxxxxxxx hodnocení xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx postupného zkoušení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek xx xxxxxxx x xxxxxxx.
1.2 Definice
Intenzita xxxxxxx: xxxxxxxxx ultrafialového nebo xxxxxxxxxxx xxxxxx dopadajícího xx povrch, xxxxxx xx W/m2 xxxx xX/xx2.
Xxxxx světelného xxxxxx: xxxxxxxx (intenzita × xxx) ultrafialového (XX) xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx (X × x) xx xxxxxx povrchu, xxxx. X/x2 xxxx X/xx2.
Xxxxxx xxxxx XX xxxxxx: označení xxxxxxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xx l'Eclairage): XXX (315400 xx), XXX (280315 nm) x XXX (100280 xx). Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx: xxxx xxxxxxx xxxx XXX a XXX xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 320 nm x xxxxx XXX xxxx xxx xxxxxxxxx xx XX-X1 a XX-X2 x xxxxxxx xxxxx 340 xx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxx, kterým xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx buněčné xxxxxxxx (xxxx. xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx neutrální xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx) x xxxxx v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x na xxxxxxxx uspořádání xxxxxxx xxxxxxxx x celkovým xxxxxx a/nebo životaschopností xxxxx.
Xxxxxxxxx životaschopnost xxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxx postupem xxxxxxx (x XX, xxxx xxx XX), xxx xxxxxx exponovány zkoušeným xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx výsledků xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxxxx potenciálu. V xxxxxxxxxx metodice xxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx faktor XXX x veličinu XXX.
XXX (xxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxxxxx xxxxxx): xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx stejně účinných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (EC50) xxxxxxxx xxxxx, x xx xxx necytotoxickém xxxxxxx XXX/XXX xxxxxxx (+ XX) a xxx xxxx (-XX).
XXX (xxxx photo xxxxxx — xxxxxxx světelný xxxxxx): xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x matematické xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx závislosti účinku xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx necytotoxickém xxxxxxx XXX/xxx světlem (+ XX) x bez xxxx (-UV).
Fototoxicita: xxxxxx xxxxxxx reakce, xxxxxxxx xx xxxxx expozici xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x následné xxxxxxxx světlu nebo xxxxxxx xxxxxxxx ozářením xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx: xxxxx úroveň xxxxx "xxxxxxxxxxxx", xxxxx xx xxxxxxx k popisu xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xx kůži xx xxxxxxxx chemickým xxxxxx (topické xxxx xxxxxx). Xxxx fototoxické xxxxxx vedou vždy x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx).
Xxxxxxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx nedochází xxx xxxxx aplikaci chemické xxxxx x xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx jeden xxxx xxx týdny xxxx xxx, xxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxx odezva xxxxxxxxxx z genového xxxxxxxx, která xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx dávce XX/XXX xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovanou xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx tvorba xxxxxx xxxxxxxxxx XX zářením xxxxxxxx chemickou látkou.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxxxxxxxx, xxxxx by xxx být xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx, xx pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxx z xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx srovnáních předložené xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Xxxxxx poznámky
Fototoxické xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx látek (5, 6, 7, 8). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Podle xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxx-Xxxxxxxx xxxxx) vyžaduje xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Před xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx metodiky xx xxxx mělo xxx xxxxxxxxx UV/VIS absorpční xxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx (např. xxxxx Xxxxxxxx XXXX 101). Xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 l.mol-1.cm-1, chemická xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx jinou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx).
1.5 Xxxxxxxx zkušební xxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx čtyři xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxx absorpce xxxxxx (xxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxx k xxxxxxxxxxx xxxxxx (7). Xxxxxxx xxxxx k poškození xxxxx. Xxxxxxx fototoxicity 3X3 NRU xx xxxxx je proto xxxxxxxx na srovnání xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx necytotoxické xxxxx XXX/XXX světla x xxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx je x xxxx zkoušce xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx neutrální červeně (XX) (9) 24 xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x ozáření.
Buňky Xxxx/x 3X3 xx 24 x kultivují, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx 96xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx zkoušenou xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx 1 h xxxxxxxxxxx xxxx různými xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek. Poté xx xxxxx ze xxxx destiček exponována xxxxxxxxxxxxxx dávkou UVA/VIS xxxxxx 5 X/xx2 XXX (+ XX xxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx udržuje x xxxxx (-UV xxxxxxxxxx). X xxxx xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxx xxxxxx nahradí xxxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxx 24 x xxxxxxxx xx xxxxxxx životaschopnost xxxxxxxxx 3xxxxxxxxx příjmem xxxxxxxxx xxxxxxx (NRU). Relativní xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x procentech vzhledem x xxxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx se xxxxxxx xxx každou x xxxx xxxxxxxxxx koncentrací. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx závislé xxxxxx xxxxxxx při ozáření (+ XX) x xxx ozáření (-XX), xxxxxxx xxx xxxxxxx XX50, xx. xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 % xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x neexponovanými xxxxxxxxxx.
1.6 Xxxxxxxx jakosti
Citlivost xxxxx xx XXX, xxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx xxxxx xx UVA xx xxxx být pravidelně xxxxxxxxxxxx. Buňky se xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx ke zkoušce xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx, příští xxx xx ozáří xxxxxx UVA záření 1 až 9 X/xx2 x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x den později xxxxxxxx XXX. Buňky xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx-xx jejich životaschopnost xx ozáření 5 X/xx2 xxxxx xxx 80 % xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx. Xxxx kontrola xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx po xxxxxx pasážích xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxx negativní kontroly xx UVA při xxxxxxxxxx zkoušce: xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jakosti, xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly (xxxxx x XXXX (Xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) nebo 1 % ethanolem (XxXX)) nebo bez xxxx xxxxxxxx při + XXX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 80 % xxxxxxxx k xxxxxxxxxxxxxxxx neozářených xxxxx x tomtéž rozpouštědle xxx xxxxxxxxx experimentu x xxxxx (-UVA).
Životaschopnost xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (X540 XXX) xxxxxx v xxxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, zda 1 × 104 xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx během dvou xxx zkoušky xxxxxxxx xxxx zdvojnásobení (xxxxxxxx xxxx). Zkouška xxxxxxx xxxxxxxxx přijatelnosti, jestliže xxxxxxx xxxxxxx X540 XXX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxx xxxxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX in xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx fototoxická xxxxxxxx látka. Při xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX xxx použit jako xxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx (XXX), x xx xxxx xxxxxxxxx. Xxx XXX xxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx tato xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxx XXX xxxxxxx (+ XXX): XX50 = 0,1 xx 0,2 μx/xx, xxx XXX xxxxxxxxx (-XXX): XX50 = 7,0 xx 90,0 μg/ml. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (PIF), xx. posun xxxxxxx XX50, xx xxx xxx alespoň 6.
Xxxxxxx XXX xxxxx xxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx typu xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxx případě xx xxxx xxx xx xxxxxxx dosavadních xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx přiměřeným xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XX50 x XXX xxxx MPE (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx
1.7.1 Příprava
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx permanentní xxxx xxxxx fibroplastů — Balb/c 3X3, xxxx 31 — xxx z xxxxx XXXX, xxxx x xxxxx XXXXX x xx tedy doporučena. Xxxx buňky xxxx xxxxxxx linie xxxxx xxx xxx stejném xxxxxxxxx postupu xxxxxxx xx předpokladu, xx xxxx xxxxxxxxxx podmínky xxxxxxxxxxxx specifickým xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxx prokázána xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx kontrolovány, xxx nejsou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, x xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxxx buněk xx XX xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx, xxxx xx být xxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 x xxxxxx x xxxxxxxxx dosažitelným xxxxxx xxxxxx, nejlépe x xxxxx xxx xxx pasáže. Xx xxxxxxxx, xxx byla xxxxxxxxx xxxxx Balb/c 3X3 xx UVA xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx metodice.
1.7.1.2 Xxxxx x kultivační xxxxxxxx
Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx použita xxxxxx kultivační xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. X buněk Xxxx/x 3X3 se xxxxx x XXXX (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Eagleova xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx telecím xxxxx, 4xX glutaminem, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx ve vlhčené xxxxxxxxx xxx 37 °X/7, 5 % XX2. Xxxxxxx xxxxxxxx xx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx zajistily, xxx xxx xxxxxxx cyklus xxxxxx dosavadního xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx buněčné linie.
1.7.1.3 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx ze xxxxxxxxxx kmenových kultur xx nasadí do xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx hustotě x xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxx před xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx hustotě, xxx xxxxxxxxx konfluence xx xxxxx zkoušky, xx. xx xxxxxxxx, xxx je po 48 h xx xxxxxxxx stanovována životaschopnost. Xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 xxxxxxxxxxx v 96xxxxxxxxx destičkách xx xxxxxxxxxx inokulum 1 × 104 xxxxx xx xxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx látku se xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx 96jamkových xxxxxxxx, xxxxx jsou xxxx xxxxxxxx podrobeny xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx podmínek xxxxx xxxx, xxx xx xxxxx z xxxxxxxx xxxxxxx (+XXX/XXX) x xxxxx xx xxxxxxxxx x temnu (-UVA/VIS).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx požadavkem xxx xxxxx xxxxxxxxx in xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx potenciálu, není x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, pro xxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx xx xxxx xxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx tedy xxx xx nezbytné xxx xx vědecky xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx zkouška xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxx, xxxxx údaje x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Může-li xxxxx x rychlé xxxxxxxxxxxxx, xxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx by xxxx xxx rozpuštěny xx fyziologickém roztoku, xxxx. x Earlově xxxxxxxxxxxxx roztoku (EBSS) xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xxxxx xxxxx obsahovat xxxxxxxxxx xxxxxx a pH xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx nerušily xxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx vhodném xxxxxxxxxxxx xx 100xxxxxxx požadované xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx by xxxx xxx zředěny x xxxxxx 1:100 xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Použije-li se xxxxxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 % xxx. ve xxxxx xxxxxxxxx, tj. v xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) a xxxxxxx (EtOH). Mohou xxx xxxxxxx jiná xxxxxx xxxx cytotoxická xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxxxx), xxx xxxx xx xxx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx specifické vlastnosti, xxxx. xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx fototoxických účinků, xxxxxx xxxxxxxx.
Xx-xx xxxxx, xxxx xxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx x/xxxx zahřátí na 37 °X.
1.7.1.6 Xxxxxxx XX xxxxxxx/xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx: xxxxx vhodného xxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx v pásmu XXX x xx xxxxxxxxxx pásmu je xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx záření x xxxxx XXX je xxxx xxxxxxxxxx x xx přímo xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 313 xx x 280 xx 1000krát (11). Kritéria xxx xxxxx xxxxxxxx světelného xxxxxx by měla xxxxxxxxx xxxxxxxx požadavek, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx délkách, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látka xxxxxxxxx, a xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx látek. Xxxxxxx xxxxxx délky a xxxxx, včetně xxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxx xxxxxx), xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx poškozovat xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx světla xxxxxxxxx simulátory xx xxxxxxxx xx optimální xxxxx xxxxxx. X xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jak xenonová xxxxxxx, xxx vysokotlaká xxxxxxx halogenová xxxxxxx. Xxxxx x xxxx xx xx xxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxx a je xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx slunečním xxxxxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vyzařují xxxxxxxx xxxxxxxx UVB xxxxxx, xxxx by xxx xxxxxx filtrovány, xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx UVB xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xx mělo xxx xxxxxxx spektrum xxxxxxxxx zbavené XXX xxxxxx (XXX:XXX ˜ 20:1). Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx validační xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (3).
Dozimetrie: intenzita xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) xx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx za xxxxxxx vhodného xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx. XX-xxxx musí xxx pro xxxx xxxxx kalibrován. Funkčnost XX-xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx a xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX-xxxx xxxxxxxx xxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx by xxx xxx v xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx intenzity xxxxxx xxxxxxxxxxxx zdroje světla x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx UV-metru xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx osobami.
Dávka 5 X/xx2 byla xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 a xxxxxxxxxx xxxxx x excitaci x xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek. Pro xxxxxxxx 5 X/xx2 xx xxxx 50 xxx. musí xxx xxxxxxxxx ozáření xxxxxxxxx xx 1,666 MW/cm2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxx UVA xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx buňky a xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx tímto xxxxxxxx:
x(xxx) = xxxxx xxxxxxxxxx záření (X/xx2) 100 / intenzita xxxxxxx (xX/xx2) 60 (1 X =.X xxx)
1.7.2 Zkušební xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx nižších xxxxxxxxxxxxx; xxx vyšších xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx pozitivních xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xX xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx vyhovující (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx zkoušených se xxxxxxx (+ XXX) x xxx xxxxxx (-XXX) xx měly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx zjištění xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx řady x xxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxxx musí být xxxxxxx tak, aby xxxx křivky závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx by xxx použita xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx (s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7.3 Xxxxxxxx postup [1]
1.7.3.1 Xxxxx xxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxx suspenze 1 × 105 buněk/ml x xxxxxxxxxxx médiu x 100 μx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx 96xxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx xxxxx). Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx 100 μx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 xxxxx na xxxxx). Pro xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx: jedna pro xxxxxxxxx cytotoxicity (-XXX) x druhá xxx xxxxxxxxx fotocytotoxicity (+UVA).
Buňky xx xxxxxxxx 24 x (7,5 % XX2, 37 °C), xxxxx nedosáhnou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tato inkubační xxxx umožní xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx přichycení x xxxxxxxxxxxxx růst.
1.7.3.2 Xxxxx xxx
Xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx dekantuje x xxxxx jamka xx xxxxxxx xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. Xxxxx xx 100 μx XXXX/XXX obsahujících xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx rozpouštědlo (negativní xxxxxxxx). Xxxxxxxx xx 8 xxxxxxx koncentrací xxxxxxxx chemické xxxxx. Xxxxx xx zkoušenou xxxxxxxxx látkou xx xxxxxxxx v xxxxx xx dobu 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °X).
X xxxxxxxxx xxxxx zkoušky x xxxxxxxx XXX xx xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě xx xxxx 50 min. xxxxxxx přes xxxxx 96xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx 1,7 MW/cm2 (5 X/xx2. Xxx xxxxxxx xx kondenzaci xxxx xxx víčkem, xxxxx xx xxxxxx ventilátoru. Xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxx UVA xx xxxxxxxxx 50 xxx. (xxxx xxxxxxxx XXX) x temnu xxx pokojové xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX se xxxxxxx xxxxxxxxxxx médiem x xxxxxxxx xx přes xxx (18-22 x) (7,5 % XX2, 37 °X).
1.7.3.3 Xxxxx xxx
Xxxxxxxxxxxxx hodnocení
Buňky xx xxxxxxxxxx xxx mikroskopem x fázovým xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx změny xxxxxxxxxx buněk xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx účinkem xxxxxxxx xxxxxxxx látky. Doporučuje xx provádět xxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx chyby, xxxxx záznamy se xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx fototoxicity nepoužijí.
Zkouška xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxxxx 150 μx xxxxxxxxxxxx EBSS/PBS x xxxxxxxxx roztok xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx 100 μl média XX x xxxxxxxx xx 3 x xxx 37 °C xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x 7,5 % XX2.
Xx xxxxxxxx se xxxxxx XX xxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. EBSS/PBS se xxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx poloze).
Přidá se xxxxxx 150 μx xxxxxxx připraveného xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx XX.
Xxxxxxxx se xxxxxx 10 xxx. xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx se XX x buněk xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx NR xxx 540 nm, xxxxxxx xx xxx xxxxxxxx použije xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx ve vhodném xxxxxxx (xxxx. XXXXX) x xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx analýzu.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xx xxxx xxxxxxx smysluplnou xxxxxxx xxxxxxxxxx odpovědi na xxxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx UVA/VIS xxxx xxx něho. Je-li xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxx nimi xxxxxxxx xxx, xxx bylo xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, že xx zkoušená chemická xxxxx nemusela xxx xx xx mezní xxxxxxxxxxx 100 μx/xx xxxxxx pro experiment x xxxxx (-UVA) xxxxxxxxxxx, xxx mohla xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+XXX), xxxx xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx v xxxx xxxxxxx experimentu xxxxxxxx, xxxxxx lišily, xx-xx být xxxxxx xxxxxxxxx uspokojivé xxxxxxx xxxxx. Xxxx-xx v xxxx částech experimentu (-XXX a +XXX) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, stačí xxxxxxx zkoušku x xxxxxxx intervaly mezi xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxxxx stačí xxxxx hlavní experiment xxxxxxxxx jednou xxxx xxxx předběžnými xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx rozmezí xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx hraničních hodnot xxxxxxxxxxxxx modelu xx xxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xx-xx xxxxxxxxx xxxxxxxx považováno za xxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx výsledku xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Klíčovou xxxxxxxxx této xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. X tohoto xxxxxx xxxx xxx změna xxxxxxxx (xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, použití xxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx může xxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx ozářením. Xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx x chemických xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx.
2.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx-xx xx možné, xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx látky odpovídající 50 % xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (XX50). Xxx xxx učinit xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx nelineární xxxxxxx (xxxxxxx Hillovou funkcí xxxx xxxxxxxxxxx regresí) xxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx koncentraci nebo xxxxxxxx jiných metod xxxxxx xxxxxxxxx (14). Xxxx použitím xxxxxxx XX50 pro další xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx výpočet EC50 xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx grafického xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx doporučuje xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx papír (xxxxxxx xxx x: logaritmické, xxxxxxx xxx x: xxxxxxxxxxxxxxxxx), neboť x xxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxx)
2.3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxx — xxxxx 1: fotoiritační xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxx jsou x xxxx případech jak xxx xxxxxxx (+XXX), xxx xxx ozáření (-XXX) xxxxxxx xxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxxxxx xxxxxx (PIF) xxxxxxxxx xxxxx tohoto xxxxxx:
(x) XXX = (XX50 (-XX)) / (XX50 (+UV))
Hodnota XXX &xx; 5 předpovídá xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu, xxxxxxx xxxxxxx XXX ≥ 5 předpovídá xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pouze při +XXX a xxxx xxxxxxxxxxx při zkoušce -XXX, xxxxx hodnotu XXX xxxxxxxxx, xxxxxxx xxx x xxxxxxxx, xxxxx svědčí x xxxxxxxxxxxx potenciálu. V xxxxxxxx xxxxxxxxx lze xxxxxxxxx hodnotu "&xx; XXX", xxxxxxxx xx xxxxxxx -XX zkouška xx xx nejvyšší xxxxxxxx koncentrace (Xxxx), x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx "&xx; XXX";
(x) &xx; PIF = (Xxxx (-XX)) / (XX50 (+UV))
Lze xx xxxxxx pouze hodnotu "&xx; XXX", xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu xxxx xxxxxxx &xx; 1.
Xxxxxxxx nelze x xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxxx xxxxx nevykazuje xx do xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx žádnou xxxxxxxxxxxx, vypočítat xxx xxxxxxx XX50 (-XX) xxx xxxxxxx XX50 (+ XX), xxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx charakterizaci xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx "XXX = *1";
(C) &xx; XXX = *1 = (Xxxx (-XX)) / (Xxxx (+XX))
Xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx "XXX = *1", xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
X xxxxxxxxx x) x x) by xxxx xxx xxx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx dosažené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx xxxxx verze 2: xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx lze xxxxxx xxxxx verzi xxxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu, xxxxx xxx vyvinut x xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX (15) x byl xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx u xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxx XX xxxxxx (13). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx jako xxxxx XXX x případech, xxx nelze xxxxxx xxxxxxx EC50. Xxxxx xxxxx využívá xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxx xxxxxx) (XXX), xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx na srovnání xxxxxx křivek xxxxxxxxxx xxxxxx na koncentraci. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx software, xxxxx xx xxxxx x dispozici.
2.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx (XXX ≥ 5 xxxx XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xx fototoxický potenciál. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx koncentracích xxx 10 μx/xx, xx xxxx pravděpodobné, xx xxxxx xxxx xxxxxxx za různých xxxxxxxxxxx podmínek xxxx xxxxxxxxx xx xxxx. Xx-xx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx další xxxxx. Xx se xxxxx xxxxx xxxxx x penetraci, xxxxxxxx x xxxxx akumulaci xxxxxxxx xxxxx x xxxx nebo zkoušení xxxxxxxx xxxxx alternativní xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx kůže xx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx (XXX &xx; 5 nebo XXX &xx; 0,1) xxxxxxx, že látka xxxxxx xxx xxxxx xxxxx za xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. V xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxxxxx koncentraci 100 μx/xx, xxxxxxxxx negativní xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx vivo xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (EC50 +XX x XX50 -XX), je xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Není-li xxxxxxx tomu xxxxxxxx xxxxxxxxx (+XX x -XX) x jsou-li xxxxxxxxxxx xxxxxxx rozpustností xx xxxx xx xxxxxxx xxxxx než 100 μx/xx, xxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx in xxxxx xxxx xxxxxxxx in xxxx).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx o xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxxxxx látka:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx CAS, xx-xx xxxxx,
- fyzikální vlastnosti x xxxxxxx,
- xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx důležité xxx xxxxxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, jsou-li xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- rozpustnost xxxxxxxx xxxxx v tomto xxxxxxxxxxxx,
- procentuální xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x aplikačním xxxxx (XXXX nebo XXX).
Xxxxx:
- xxx a xxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- číslo xxxxxxx xxxxxx, je-li xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xx XXX stanovená xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx xx:
- typ x složení xxxxxxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx CO2, teplota, xxxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x po xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx b) — xxxxxxxx xxxxxxxx látky:
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jak xxx xxxxxxx UV/VIS, tak xxx xxx,
- x xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx rozpustnost x xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx,
- xxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx média (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx světla,
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx ozáření xx xxxxxx světla,
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxxxxxxxxxxxx radiometru a xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx zkoušeného xxxxxxx,
- intenzita ozáření XXX x xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v xX/xx2,
- xxxxx xxxxxxxx XX/XXX xxxxxx,
- xxxxx XXX xxxxxx (xxxxxxxxx × xxx), xxxxxxxxx x J/cm2,
- xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx XXX:
- xxxxxxx xxxxx XX,
- xxxx xxxxxxxx XX,
- xxxxxxxxx podmínky (xxxxxxxxxxx XX2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- podmínky xxxxxxxx XX (extrakční xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx),
- xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx odečet xxxxxxxxxx XX,
- druhá (xxxxxxxxxx) xxxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx,
- xxxxxxx slepého xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xx-xx použit.
Výsledky:
- životaschopnost xxxxx xxx každé xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx vyjádřená v xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,
- křivky xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx versus xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) získané xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx +XXX a -UVA,
- xxxxxxx křivek xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx: xx-xx xx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx XX50 (+XXX) a XX50 (-XXX),
- xxxxxxxx obou xxxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx xxxxxxxxxxx získaných x xxxxxxxx XXX/XXX x bez něho, x xx xxx xxxxxxxx fotoiritačního faktoru (xxxxx-xxxxxxxxxxx xxxxxx ) (XXX), nebo xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx photo effect) (XXX),
- xxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx,
- kritéria xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxx XX) ozářených x neozářených xxxxx,
- xxxxxxxxx údaje xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx b) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-UVA) a XXX-xxxxxxxxx kontrolní chemické xxxxx,
- dosavadní xxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx EC50 (+XXX), XX50 (-UVA) x PIF, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) Xxxxxxxxx, H., Xxxxx, X., Döring, X., Xxxxxüxxxx, H. G., Xxxxxxx, X., Klecak, X., X'Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, M., Xxxxxx, X. X., Maurer, X., Xxxxxxxxxxx, F., Xxxxx, X., Pape, X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, J., Xx Xxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. (1994), XXX/XXXXXX project xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x Xxxx/x 3X3 xxxx phototoxicity xxxxx, Xxxxxxxxxx in xxxxx 8, 793-796.
(2) Xxxx (1998), Statement on xxx xxxxxxxxxx validity xx the 3X3 XXX XX xxxx (xx xx xxxxx xxxx xxx phototoxicity), Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx: XXXXX xxx XXXX/X/2, 3 Xxxxxxxx 1997, XXXX 26, 7-8.
(3) Spielmann, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxx, X. X. X., Xxxxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X., Desolle, X., Xxxxxxxxx, F., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxxxx, U., Xxxxxxxx, X. X., Csato, X., Sladowski, X., Xxxxxxxx, W., Xxxxxxx, X. (1998), XX/XXXXXX "Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxx XX (xxxxx trial), part 1: the 3X3 XXX phototoxicity xxxx, Xxxxxxxxxx in Xxxxx 12, 305-327.
(4) XXXX Xxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Xxxxx Xxxxxx xx the XXXX Xxxxxxxx xx Harmonisation xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxx, OECD Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, X. X. (1993), X xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx in Xxxxx 7, 95-102.
(6) Xxxxxxxxxx, X., Prino, X. (1972), List xx xxx photodynamic substances, Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx Vol. 3 Xxxx 1, Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx Xx, Amsterdam, XI–XXXV.
(7) Xxxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Hölzle, X., Johnson, X. X., Maurer, X., Xxxxxxx, X. A., Xxxx, X. J. X., Sapora, X., Xxxxxxxxx, D. (1994), Xx vitro xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: The report xxx recommendations xx XXXXX xxxxxxxx 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, X. D. (1989), Xxxxxxxxxxxxxxxxxx. X: Xxx science of xxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxx, xx.), Xxxxxx Xxxxx, Xxx Xxxx, 2. xxx., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, E., Puerner, X. X. (1985), Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx in xxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx X. (1996). X: Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (F. X. Xxxxxxxx, X. X. Xxxxxxx eds.), Taylor &xxx; Xxxxxxx, Xxxxxxxxxx XX, 5. xxx., 515-530.
(11) Xxxxxxx, X. X., Pidoux M. (1987), Action xxxxxxx xxx human xxxx xxxxx: xxxxxxxxx of xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx ultraviolet xxx violet xxxxxxx xx sunlight xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, Cancer Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Standard Operating Xxxxxxxxx: Xxxx/x 3X3 XXX Xxxxxxxxxxxxx Test, xxxxxxxx 23. prosince 1997 M. Xxxxxxxxx, xxxxxxxxx 6. xxxxxx 1998 xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxx xx xxx XX/XXXXXX xxxxxxx "In Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxx, X. J. W., Xx Silva, X., Xxxxxüxxxx, H. X., Xxxxxxxxx, F., Liebsch, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxxxxx (1998), X Study xx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx XX Xxxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxx XXX of xxx XX Xxxxxxxxx 76/768/XXX xx the 3X3 XXX Xx Vitro Xxxxxxxxxxxxx Test, XXXX 26, 679-708.
(14) Holzhütter, X. X., Quedenau, X. (1995), Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx to xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxx, 3, 127-138.
(15) Holzhütter, H. X. (1997), X xxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx from xxxxx xx dose-response xxxxxx xxx its xxx xxx xxxxxxxxxx xxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx chemicals, XXXX 25, 445-462."
"Dodatek
[1] Další xxxxxxxxxxx lze xxxxxx x xxxxxxxxxx (12).