Směrnice Komise 2000/33/ES
ze xxx 25. xxxxx 2000,
xxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx přizpůsobuje xxxxxxxxxxx pokroku směrnice Xxxx 67/548/XXX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisů xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, balení x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [1]
(Xxxx x xxxxxxxx pro EHP)
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 67/548/XXX ze xxx 27. června 1967 x sbližování xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxxx nebezpečných látek [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x Xxxx 1999/33/ES [3], x xxxxxxx xx xxxxxx 28 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxxx xxxxxxx:
(1) X xxxxxxx V xxxxxxxx 67/548/XXX xx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, toxicity x ekotoxicity xxxxx x xxxxxxxxx. Je xxxxxxxx přizpůsobit xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
(2) Xxxxx xx. 7 xxxx. 2 směrnice Xxxx 86/609/EHS ze xxx 24. xxxxxxxxx 1986 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x správních xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxx xxxxxxx účely [4] xxxxx xxx xxxxx, xxx němž xx xxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx, je-li xxxxxxx x prakticky dostupná xxxx vědecky xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx. 3 xxxx. 1 xxxxxxxx 67/548/XXX.
(4) Xxxxxxxx této směrnice xxxx v xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx o xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx překážek xxxxxxx xx úseku xxxxxxxxxxxx látek x xxxxxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxx xxxxxx X x XX xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxx X xxxxxxx V xxxxxxxx 67/548/XXX.
Xxxxxx 2
1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x touto směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 2001. Neprodleně x nich xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx přijaté xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx nebo xxxx být takový xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx členské xxxxx.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x oblasti xxxxxxxxxx xxxx směrnice, x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 25. dubna 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxöx
xxxxxx Komise
[1] Xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx.
[2] Úř. xxxx. 196, 16.8.1967, s. 1.
[3] Xx. věst. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Xx. věst. X 358, 18.12.1986, x. 1.
XXXXXXX X
"X.40 XXXXXXX XXXXXX XX XXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxx xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx účinky xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx elektrického xxxxxx xxxx xxxxxxx (XXX) x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx kůže xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx alternativních metod (XXXXX, Společné xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxx Komise) (1, 2, 3) xxxxxxxxx jako xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx XXXXX xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxx lze xxxxxxxxxx rozlišit známé xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx dále xxxxxxx xxxxxxx rozlišit xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, R 35 x xxxxxxx látky xxxxxxxxxxx poleptání kůže, X 34) (2). Xxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxx je xxxxxx; xxxxx xxxxxxx, xxxxx má xxx xxxxxxx, závisí xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx uživatele.
Viz také Xxxxxx xxxx, část X.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kůže: xxxxxxxx xxxxxxxxx kůže xx xxxxxxxx zkoušeného xxxxxxxxx.
1.3 Referenční xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx body 1.5.3.4 x 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx zkušební xxxxxx — xxxxxxx TER xx xxxx potkana
Zkoušený xxxxxxxx xx až xx 24 x xxxxxxxxx xx epidermální xxxxxx xxxxxxx kůže xxxxxxx xxxxxxxxxx mladých xxxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxxxxxxx účinky xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x bariérové xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxx), xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx úroveň (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx x nedráždivé xxxxx xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx aktivní xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx látky (xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx (6)) xxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx falešně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx získaných xxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2, 7).
1.5 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx TER xx xxxx potkana
1.5.1 Zvířata
Terčíky xxxx musí xxx xxxxxxxxxx z mladých (20 — 23 xxxxxxx) xxxxxxx (Xxxxxx xxxx srovnatelný kmen). Xxxxxxx x xxxxx xxxx se opatrně xxxxxxxx holicím xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xxxxx opatrným otíráním, xxxxxxx xx testovací xxxxxx ponoří do xxxxxxx xxxxxxxxxx (obsahujícího xxxx. xxxxxxxxxxxx, penicilin, xxxxxxxxxxxxxx x amfotericin x xxxxxxxxxxxxx zastavujících xxxx xxxxxxxx). Zvířata xx třetí a xxxxxx xxx xx xxxxxx omytí xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xx 3 xxx (x xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx než 31 xxx).
1.5.2 Xxxxxxxx xxxxxxx kůže
Zvířata xx xxxxxxx xxxxxx. Z xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx opatrně odstraní xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx tuk xx x kůže xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx se xxxx přeloží přes xxxxx xxxxxxxxx (PTFE) xxxxxxxx xxx, aby xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxx s xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X-xxxxxxx, xxx xxxx xxxx upevněna, x xxxxxxxx xxxxx xx ořízne. Xxxxxxx xxxxxxxx x X-xxxxxxx xxxx uvedeny xx xxxxxxx 1. Pryžový X-xxxxxxx na teflonové xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx umístí xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 mM) (obrázek 2).
1.5.3 Xxxxxxxx xxxxxx
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (150 μx) se aplikuje xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx. 2). Xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx tak, xxx byla xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx xx xxxxxx xxxxx látky xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (150 μx) x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx a xxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx. U xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx zahřátím xx xx 30 °X, xxx xx xxxxxxxx látka xxxxxxxxx, xxxx rozemletím na xxxxxx materiál xxxx xx xxxxxx.
Xx zkoušce xxxxx látky se xxxxxxx tři terčíky xxxx. Xxxxxxxx látka xx xxxxxxxx po xxxx 24 x (xxx xxxx bod 1.5.3.4). Zkoušená xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxx 30 °X. Odstranění xxxxxxxxxx látek, které x xxxxxxxx xxxxxx, xxx usnadnit xxxxxx xxxxxxx vody xxxxx xx 30 °X.
1.5.3.2 Xxxxxx XXX
XXX xx xxxx nízkonapěťovým xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx střídavý xxxxx (např. XXX 401 xxxx 6401 xxxx xxxxxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxx xx povrchové xxxxxx xxxx sníží xxxxxxxx dostatečného objemu 70 % xxxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxxxxxx zakryta. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 3 ml roztoku xxxxxx hořečnatého (154 xX). Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx na xxx strany xxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx v xΩ/xxxxxx xxxx (xxxxxxx 2). Rozměry xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxx uvedeny xx xxxxxxx 1. Xxxxxx xxxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx je xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxx trubičky, xxx xxxx zajištěno, xx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx ponořené x xxxxxxx xxxxxx hořečnatého xxxxxx. Vnější (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xx dně xxxxxx. Xxxxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxx teflonové trubičky xx udržuje konstantní (xxxxxxx 1), neboť xxxx xxxxxxxxxx má xxxx xx naměřené xxxxxxx xxxxxx.
Xx xxxxx xx xxxxxxxx, xx xx-xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 20 xΩ, může xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx straně xxxxxxx xxxx. X xxxxxxxxxx xxxx vrstvy xx xxx xxxxxxx xxxx. xxx, xx xx xxxxxxxxx trubička xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx x 10 x xx xxxxxxxxxx. Roztok xxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx XXX (střední xxxxxxx) xxxx přijatelné, pokud xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x přístroje xxxx doporučeny xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx rozpětí xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx odporu (kΩ) |
|
Pozitivní |
10M xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
10–25 |
1.5.3.3 Upravený xxxxxx xxx povrchově xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx organické xxxxx
Xxxx-xx xxxxxxx XXX pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx organické látky xxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxx xxxx xxxxx 5 kΩ, xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx postupem xx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X
Xx předchozí aplikaci xxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxxxxxxxx stranu xxxxxxx terčíku kůže xxxxxxxx xx 2 x 150 μx 10 % roztoku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X x xxxxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxxx 10 x omývají xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xx xx xxxxxxxx (např. 20 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx deionizovanou vodu (8 ml). Xxxxxxxx xx xxxxx 5 xxx. xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx. Tato xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx, a xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx 30 % xxxxxxx (x/X) xxxxxxx-xxxxxxx-xxxxxxx (SDS) x xxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx se xxxx noc při 60 °X. Xx xxxxxxxx xx všechny xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx roztok se xxxxxxxx 8 xxx. xxx 21 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx ˜ 175). 1 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx 4 ml 30 % (x/X) xxxxxxx XXX v destilované xxxx. Xxxxxxxxxx (X) xx měří xxx xxxxxxxxx 565 xx.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx obsahu xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx sulforhodaminu X xx xxxxxx xxxx xx vypočte x xxxxxx X (xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X xxx 565 xx = 8,7 × 104; molekulová xxxxxxxx = 580). Xxxxx barviva xxxxxxxxxxxxxx X se vypočte xxx každý xxxxxx xxxx a poté xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx. Střední xxxxxxx xxxxxxxx vázání xxxxxxx xxxx přijatelné, xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx xx přijatelného xxxxxxx xxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxx x přístroje xxxx xxx uvedení xxxxxxxxx látky xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx barviva:
|
Kontrola |
Látka |
Rozmezí xxxxxx xxxxxxx (μx/xxxxxx xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X kyselina xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
40-100 |
|
Negativní |
Destilovaná xxxx |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx lze xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx kůže na xxxxxx xxxx (xxxx. 2 hodiny), xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxxxx. Validační xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx stanovení XXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx zkoušených xxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxx xx xxxx 2 xxxxx (2), xxxxxxx toto xxxxxxxxx umožnilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx látek x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx 24xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx a rozměry xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxx xx získané xxxxxxx XXX. Xxxx 5 Ω xxx předpověď xxxxxxxxx účinků xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx x xxxx metodě. Xxxxxxxxxx xx tedy kalibrovat xxxxxxx x určit xxxxxxxx xxxxxxx odporu xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxx použitých xx xxxxxxxxx xxxxxx (3).
1.6 Xxxxxxxx zkušební xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx xx xx xxxx 4 hodin xx trojrozměrný model xxxxxx kůže xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx rohovité xxxxxx. Materiály x xxxxxxxxx účinky jsou xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx specifikované xxxxxxxxx xxxx xxxxxx životaschopnosti xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxx zkoušky xxxxxxx XXX) xxx definovanou xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxx xx hypotéze, xx xxxxxxxx látky x xxxxxxxxx účinky xxxx xx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx rohovitou xxxxxxx (difuzí nebo xxxxx) x xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxxxxxx smrt xxxxx x hlubších xxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx modelu xxxxxx xxxx
1.7.1 Modely xxxxxx xxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx pocházet x xxxxxxx xxxxxx, musí xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx rohovitou xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx. Xxxxxxxxx funkce xxxxxxxx vrstvy xxxx xxx dostatečná. To xxx prokázat demonstrací xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx látkám, které xxxxxxxx neproniknou xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx, xx model xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx živých buněk x xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx možné xxxxx xxxxxxxx pozitivní x negativní kontrolní xxxxx. xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx např. xxxxxxx XXX, tj. měřením xxxxxxx absorbance X) xx expozici xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxx (xx srovnání x xxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx) xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx je, xxx xxxxx odpovídal mezinárodním xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx (2).
1.7.2 Zkušební postup
1.7.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
X xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx povrch xxxx (xxxxxxxxx 25 μx/xx2). X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxx, x xxxxxxxx xxxxx by xxxx xxx ovlhčena, xxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx s xxxx; xxxxx xxxxx xx xxxx být xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx, xx aplikační xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx xxxxxx spektrum xxxxxxxxxx xxxxx (2). Xx uplynutí xxxxxxxxx xxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx fyziologickým xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx životaschopnosti buněk
K xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx validovaná xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxx xxx xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx prokázalo, že xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx kůže xx xxxxxx xx xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx 0,3 mg/ml při xxxxxxx 20-28 °X xx xxxx 3 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx (rozpouštědlem) x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxx vlnové xxxxx 545 xx 595 nm.
1.7.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx model xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, postupu xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxx xxxxx vliv xx výsledky životaschopnosti xxxxx. Xxxxxxxxxx xx, xxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxx byly xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx řady xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx ve validační xxxxxx XXXXX (3). Xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vykazovala x xxxxx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx kritéria xxx xxxxxxxx xxxxxxxx (2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx studie xxxx být xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx časopise x předcházející odbornou xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Zkouška TER xx kůži xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx (xΩ) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx včetně xxxxx x duplicitních xxxx xxxxxxxxxxx experimentech, x xxxxxxxxx hodnotách x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xx formě xxxxxxx.
2.1.2 Xxxxxxx x xxxxxxx lidské xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x středních hodnotách x o odvozené xxxxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xx xxxxx tabulky.
2.2 Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.2.1 Xxxxxxx TER xx xxxx xxxxxxx
Xx-xx xxxxxxx XXX dosažená pro xxxxxxxxx xxxxx větší xxx 5 kΩ, xxxx látka žíravá. Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxx nebo xxxxx 5 kΩ x xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx látku xxxx xxxxxxxxx organickou látku, xx látka xxxxxx.
X xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx neutrálních xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx dávají xxxxxxx XXX menší xxxx xxxxx 5 xΩ, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xx-xx xxxxxxx obsah xxxxxxx x xxxxxxx xxxx větší xxxx xxxxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxx x terčíku xxxx získanému souběžně xxx použití 36 % XXx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, je xxxxxxx zkoušené xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xx tedy xxxxxx. Xx-xx střední xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx kůže xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 36 % XXx, xx xxxxxxx xxxxxxx pozitivní, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx.
2.2.2 Xxxxxxx x xxxxxxx lidské xxxx
Xxxxxxx obsorbance X xxx xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx; xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxxxxxxx xxx každý zkoušený xxxxxx xxx xxxxxx x výpočtu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx procentuální xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx materiály xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxx žíravé (xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx), xxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx studie xxxx xxxxxxxx, xx xx xxxxxx (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx o zkoušce
Protokol x zkoušce xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxx:
- identifikační xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx byly xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx XXX) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxx x modelem xxxxxx xxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x duplicitních xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x středních hodnotách, xxxxxxxxxx xx formě xxxxxxx,
- xxxxx jakýchkoli xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. LITERATURA
(1) XXXXX (1998), XXXXX Xxxx &xxx; Views, XXXX 26, 275-280.
(2) Fentem, X. X., Archer, X. X. X., Xxxxx, X., Botham, X. X., Xxxxxx, X. X., Earl, X. X., Xxxxxxx, X. X., Holzhutter, X-X., Xxxxxxx, M. (1998), Xxx ECVAM xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx in vitro xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 2. Xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxx Management Xxxx, Xxxxxxxxxx xx vitro 12, 483-524.
(3) Barratt, X. X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Gerner, X., Xxxxxx, A. X., Worth, X. X. (1998), The XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx on in xxxxx xxxxx for xxxx xxxxxxxxxxx. 1. Xxxxxxxxx and distribution xx xxx xxxx xxxxxxxxx, Toxicology in xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. X. X., Pemberton, M. X., Xxxxxx, C. (1986), Xx in xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx — xxxxxxxxxxxxx xxx validation, Xxxx Xxxx. Toxicol. 24, 507-512.
(5) Xxxxxx, P. X., Hall, X. X., Dennett, R., XxXxxx, J. C., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxx, E., Xxxxxxxxx, X., Esdaile, D. X., Xxxxxxx, J. (1992), Xxx skin xxxxxxxxxxx xxxx in xxxxx: xxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxxxxx trial, Xxxxxxxxxx xx vitro 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. X., Xxxxxx, X. H., Xxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Curren, X. X., Xxxx, X. X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. (1998), An xxxxxxxxxx xx the proposed XXXX testing xxxxxxxx xxx skin xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. J., Xxxxxxx, X. R., Xxxxxx, X. C., Xxxxxxxxxx, X., Xxxxx, X. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxx, J. F., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X. 1995), X xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxx skin xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxx xxx recommendations xx XXXXX workshop 6, XXXX 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Xxxxxxx 2"
&xxxx;
PŘÍLOHA XX
"X.41 XXXXXXXXXXXX — XXXXXXX XXXXXXXXXXXX 3X3 XXX IN XXXXX
1. XXXXXX
1.1 Úvod
Fototoxicita xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky, xx. xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx látky xx spojení s xxxxxxxx XX xxxxxx xxxx viditelnému xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx vyvolané xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x světla, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx vivo po xxxxxxxxxx xxxxxx x xx nanesení na xxxx, x xxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxxxx xx nanesení xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx byla xxxxxxxx x validována x xxxxx spojeného xxxxxxxx XX/XXXXXX v xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) s cílem xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx používaným xxxxxxxx xx xxxx. X xxxx 1996 xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxx fototoxicity (4).
Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx fotoiritačmi účinky xx xxxx u xxxxxx x x xxxxxxx x zkouška xx ukázala xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx určena pro xxxxxxxxx jiných nepříznivých xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxx z kombinovaného xxxxxxxx xxxxxxxx látky x světla, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xxxxxxxxx reagovat. Xxxxxxx xxxx není vyvinuta x tomu, aby xxxxxxxx hodnocení xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx ozáření: xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx povrch, xxxxxx xx W/m2 xxxx xX/xx2.
Xxxxx xxxxxxxxxx záření: xxxxxxxx (intenzita × xxx) xxxxxxxxxxxxxx (UV) xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx (X × x) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxx. X/x2 xxxx X/xx2.
Xxxxxx xxxxx XX xxxxxx: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XXX (Commission Xxxxxxxxxxxxxx xx x'Xxxxxxxxx): XXX (315400 xx), XXX (280315 nm) x UVC (100280 xx). Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx: xxxx xxxxxxx xxxx XXX x UVA xx často xxxxxxxxx xxxxxxx 320 xx x xxxxx XXX xxxx být xxxxxxxxx xx XX-X1 x XX-X2 x xxxxxxx xxxxx 340 xx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: parametr, xxxxxx xx xxxx celková xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx červeně xx xxxxxxxxx xxxxxxxx) x xxxxx x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x na xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx x negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (x XX, xxxx xxx UV), xxx xxxxxx exponovány xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxx převod xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx použít xxxxxx XXX x veličinu XXX.
XXX (xxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxxxxx faktor): xxxxxx xxxxxxx srovnáním xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrací (EC50) xxxxxxxx látky, a xx při necytotoxickém xxxxxxx XXX/XXX xxxxxxx (+ XX) x xxx xxxx (-UV).
MPE (xxxx xxxxx xxxxxx — xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx): xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx závislosti účinku xx koncentraci xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx ozáření XXX/xxx světlem (+ XX) x bez xxxx (-XX).
Xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, vyvolaná xx první xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx vyvolaná xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx: xxxxx xxxxxx pojmu "xxxxxxxxxxxx", xxxxx xx xxxxxxx k xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx xx expozici xxxxxxxxx xxxxxx (topické nebo xxxxxx). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx x nespecifickému buněčnému xxxxxxxxx (xxxxxxx reakci xxx opalování).
Fotoalergie: získaná xxxxxxxxxxxx reaktivita, xx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx x xxxxx vyžaduje xxxxxxxx xxxx jeden xxxx xxx xxxxx xxxx xxx, xxx xxx xxxxxx kůže xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XX/XXX xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx chemické látce.
Fotokarcinogenita: xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx světla x xxxxxxxx xxxxx. Termín xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x případě, xxx xx xxxxxx tumoru xxxxxxxxxx UV xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx každé xxxxxxx, je xxx xxxx xxxxxxxxx zkoušku xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxx z xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx předložené xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Úvodní poznámky
Fototoxické xxxxxx byly xxxxxxxxxxx x mnoha typů xxxxxxxxxx xxxxx (5, 6, 7, 8). Xxxxxx jediným společným xxxxx xx schopnost xxxxxxxxxx světelnou xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Podle xxxxxxx xxxxxx fotochemie (Xxxxxxxxx-Xxxxxxxx xxxxx) vyžaduje xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx absorpci xxxxxxxxxx xxxxx. Před xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxx být xxxxxxxxx UV/VIS xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx (např. xxxxx Xxxxxxxx XXXX 101). Xx-xx molární xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 x.xxx-1.xx-1, xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro nebo xxxxxxxxx xxxxx biologickou xxxxxxxx xx nepříznivé xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek).
1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx metody
Byly xxxxxxxxxxxxxx xxxxx mechanismy, xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx) chromoforem xxxx k xxxxxxxxxxx xxxxxx (7). Všechny xxxxx k xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx fototoxicity 3X3 NRU xx xxxxx xx proto xxxxxxxx xx srovnání xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx zkoušení s xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX/XXX světla a xxx xxxx expozice. Xxxxxxxxxxxx je v xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx závislé xxxxxxx příjmu xxxxxxxxx xxxxxxx neutrální xxxxxxx (XX) (9) 24 xxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx Xxxx/x 3X3 se 24 x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx 96xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx chemickou xxxxx se poté 1 x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx koncentracemi xxxxxxxxxx látek. Xxxx xx jedna xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx UVA/VIS xxxxxx 5 X/xx2 XXX (+ UV xxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx (-XX xxxxxxxxxx). X xxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxx 24 x inkubace xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 3xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XXX). Relativní xxxxxxx životaschopnost xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx vzhledem x neexponované xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx koncentrací. Xxx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx porovnají xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx (+ XX) x xxx ozáření (-XX), xxxxxxx xxx xxxxxxx XX50, xx. xxx xxxxxxxxxxx způsobující 50 % xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xx XXX, xxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx xxxxx xx XXX xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Buňky xx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro, příští xxx se xxxxx xxxxxx XXX xxxxxx 1 xx 9 X/xx2 x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX. Buňky xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx-xx jejich životaschopnost xx ozáření 5 X/xx2 menší než 80 % xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx udržované x xxxxx. Tato xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx po xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx XXX xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx: zkouška xxxxxxx xxxxxxxx jakosti, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx x XXXX (Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) xxxx 1 % xxxxxxxxx (XxXX)) xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxx + UVA experimentu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 80 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx rozpouštědle xxx souběžném xxxxxxxxxxx x temnu (-XXX).
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx: absolutní xxxxxxxxxx (X540 XXX) xxxxxx v xxxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, zda 1 × 104 xxxxx xxxxxxxxxx xx jednu xxxxx zachovalo při xxxxx během dvou xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx splňuje xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, jestliže xxxxxxx xxxxxxx X540 XXX xxxxxxxxxxxxxx kontrol xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Při xxxxxxxxx xxxxxx EU/COLIPA xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx (XXX), x je xxxx xxxxxxxxx. Xxx XXX xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxx XXX xxxxxxx (+ UVA): EC50 = 0,1 xx 0,2 μg/ml, xxx XXX xxxxxxxxx (-XXX): XX50 = 7,0 xx 90,0 μg/ml. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xx. xxxxx xxxxxxx XX50, xx měl xxx alespoň 6.
Xxxxxxx XXX xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx fototoxické xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx typu xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky. V xxxxxxx xxxxxxx by xxxx být na xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx xxxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxxxx hodnot XX50 x XXX xxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx metody
1.7.1 Xxxxxxxx
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx validační xxxxxx xxxx použita xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx — Xxxx/x 3T3, xxxx 31 — xxx x xxxxx XXXX, xxxx x xxxxx XXXXX x xx tedy doporučena. Xxxx xxxxx nebo xxxxxxx xxxxx mohou xxx xxx stejném xxxxxxxxx postupu xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx by měly xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, x měly xx být použity xxxxx tehdy, xxxx-xx xxxxxxxx takové kontroly xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxxx buněk xx XX xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx, xxxx xx být xxxxxxx buňky Balb/c 3X3 x xxxxxx x nejnižším xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx xxx xxx xxxxxx. Je xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 xx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx metodice.
1.7.1.2 Xxxxx x kultivační xxxxxxxx
Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxxxx postupu xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx podmínky. X xxxxx Xxxx/x 3X3 xx xxxxx x XXXX (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Eagleova xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, 4xX glutaminem, penicilinem x streptomycinem x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx 37 °X/7, 5 % XX2. Zvláště xxxxxxxx xx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx zajistily, xxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx buněčné xxxxx.
1.7.1.3 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xx xxxxxxxxxx kmenových xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxx použitím xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx.
Xxx xxxxxxx fototoxicity xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxx konfluence xx konce xxxxxxx, xx. do xxxxxxxx, xxx xx xx 48 x xx xxxxxxxx stanovována životaschopnost. Xxx buňky Balb/c 3X3 xxxxxxxxxxx v 96xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx inokulum 1 × 104 xxxxx xx xxxxx.
Xxx každou xxxxxxxxx látku se xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx 96jamkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx podrobeny celému xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxx kromě xxxx, kdy je xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (+XXX/XXX) x xxxxx je xxxxxxxxx x temnu (-UVA/VIS).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx použití xxxxxxxxxxxxxxxx systému xx xxxxxxx požadavkem při xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, není x fototoxikologii xxxxx xxxxx xxxxx chemická xxxxx, pro jejíž xxxxxxxx jako xxxxxx xx xxxx xxxx xx xxxxx je xxxxxxxx metabolická xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se tedy xxx xx nezbytné xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx byla xxxxxxxxxx zkouška xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx bezprostředně před xxxxxxxx, xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx látky xxxxxxxx xxx červeným xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky by xxxx být xxxxxxxxxx xx fyziologickém xxxxxxx, xxxx. v Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXXX) xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xX xxxxxxxxxx absorbující světlo, xxx nerušily při xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx rozpouštědle xx 100xxxxxxx požadované xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx xx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx 1:100 xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Použije-li xx xxxxxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx v konstantní xxxxxxxxxxx 1 % xxx. ve všech xxxxxxxxx, xx. x xxxxxxxxx kontrole x xxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) x xxxxxxx (XxXX). Xxxxx xxx použita jiná xxxxxx xxxx cytotoxická xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxxxx), xxx xxxx by xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx specifické xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxx xx xxxxxxxxx chemickou xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx.
Xx-xx xxxxx, xxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x/xxxx ultrazvuk x/xxxx zahřátí na 37 °C.
1.7.1.6 Xxxxxxx XX světlem/příprava
Zdroj xxxxxx: xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x vhodné xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušení fototoxicity. Xxxxxx x xxxxx XXX x ve xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx xxxxxx x xxxxx UVB je xxxx xxxxxxxxxx x xx přímo xxxxxx xxxxxxxxxxx, přičemž xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 313 nm x 280 xx 1000xxxx (11). Xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx důležitý xxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx délkách, které xxxxxxxx xxxxxxxx látka xxxxxxxxx, a aby xxxxx xxxxxxxxxx záření (xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx) xxxx dostatečná xxx xxxxxxx známých xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx látek. Použité xxxxxx xxxxx a xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxx (infračervená oblast), xx xxxx neměly xxxxxxxx poškozovat xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx slunečního světla xxxxxxxxx simulátory xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx světla. V xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jak xxxxxxxx xxxxxxx, xxx vysokotlaká xxxxxxx xxxxxxxxxx výbojka. Xxxxx x xxxx xx xx xxxxxx, xx emituje xxxx xxxxx x je xxxxxxxx, xxxxx její xxxxx xx slunečním xxxxxxx xxxx dokonalá. Xxxxxxxx xxxxxxx solární xxxxxxxxxx vyzařují xxxxxxxx xxxxxxxx XXX záření, xxxx xx xxx xxxxxx filtrovány, xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx UVB xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zbavené XXX xxxxxx (XXX:XXX ˜ 20:1). Xxxxxxx spektrální xxxxxxxxxx xxxxxx filtrovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx studii xxxxxxx fototoxicity 3T3 XXX xx xxxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx (3).
Dozimetrie: xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) xx musí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx zkouškou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx širokopásmového XX-xxxxx. XX-xxxx xxxx xxx xxx daný xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx XX-xxxxx by měla xxx kontrolována x xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kalibrovaný XX-xxxx xxxxxxxx xxxx. V xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx být x xxxxxxx časových odstupech xxxxxx k měření xxxxxxxxxx intenzity záření xxxxxxxxxxxx xxxxxx světla x ke xxxxxxxx xxxxxxxxx širokopásmového XX-xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx odbornou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx 5 J/cm2 xxxx xxx validační studii xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 x xxxxxxxxxx xxxxx k xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxx 5 J/cm2 xx dobu 50 xxx. musí xxx xxxxxxxxx ozáření nastavena xx 1,666 MW/cm2. Xxxxxxxx xx použita xxxx buněčná xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx, může xxx xxxxx UVA xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx standardních xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx vypočte tímto xxxxxxxx:
x(xxx) = xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (X/xx2) 100 / xxxxxxxxx xxxxxxx (xX/xx2) 60 (1 J =.X xxx)
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx by xxxxxx xxxxxxxxx 100 μg/ml, xxxxx všechny fototoxické xxxxxxxx xxxxx byly xxxxxxxxxx xxx nižších xxxxxxxxxxxxx; xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx pozitivních výsledků (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xX xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx koncentrací xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+ XXX) x bez světla (-XXX) xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx koncentrační xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx tak, xxx xxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx koncentraci xxxxxxxxxx xxxxxxxxx experimentálními xxxxx. Xxxx xx xxx použita geometrická xxxx koncentrací (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7.3 Xxxxxxxx xxxxxx [1]
1.7.3.1 Xxxxx xxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx x kultivačním xxxxx x 100 μx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx 96xxxxxxx xxxxxxxx (slepý pokus). Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx po 100 μl xxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 xxxxx xx xxxxx). Pro xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látku xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-XXX) x druhá xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (+UVA).
Buňky xx inkubují 24 x (7,5 % XX2, 37 °X), xxxxx xxxxxxxxxx semikonfluentní xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, jejich xxxxxxxxxx x exponenciální xxxx.
1.7.3.2 Xxxxx den
Po xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx jamka xx xxxxxxx xxxxxxx 150 μl XXXX/XXX. Xxxxx se 100 μx EBSS/PBS obsahujících xxxxxxx xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx látky nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxxx se 8 různých xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xx dobu 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °X).
X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x ozářením UVA xx xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 50 min. xxxxxxx přes xxxxx 96xxxxxxx destičky UVA xxxxxxx x intenzitě 1,7 MW/cm2 (5 X/xx2. Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vody xxx xxxxxx, xxxxx xx pomocí xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx pro xxxxxxx xxx ozáření XXX xx xxxxxxxxx 50 xxx. (xxxx xxxxxxxx XXX) v temnu xxx pokojové teplotě.
Zkušební xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx dvakrát 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx přes xxx (18-22 h) (7,5 % XX2, 37 °X).
1.7.3.3 Xxxxx xxx
Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx se změny xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx provádět xxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx záznamy xx xxx xxxxxxxxx cytotoxicity xxxx fototoxicity xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx červeně.
Buňky xx promyjí 150 μx xxxxxxxxxxxx EBSS/PBS x xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Přidá xx 100 μl xxxxx XX x xxxxxxxx xx 3 h xxx 37 °X xx xxxxxxxx atmosféře x 7,5 % XX2.
Xx xxxxxxxx xx xxxxxx XX odstraní x xxxxx xx xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. EBSS/PBS se xxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxx odstředit x xxxxxxxx xxxxxx).
Xxxxx se xxxxxx 150 μl xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, aby xx xxxxxxxxxx NR.
Destička xx xxxxxx 10 xxx. xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx se XX x buněk xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxx 540 nm, xxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx ve vhodném xxxxxxx (xxxx. ASCII) x počítači xxx xxxxxxxxx analýzu.
2. ÚDAJE
2.1 Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xx měly xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx odpovědi xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx UVA/VIS xxxx xxx xxxx. Xx-xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx být xxxxxx xxxxxxxxxxx x interval xxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx křivku. Vzhledem x xxxx, xx xx zkoušená xxxxxxxx xxxxx nemusela xxx xx xx mezní xxxxxxxxxxx 100 μx/xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxx (-UVA) xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+XXX), xxxx xxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, které xxxx xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx lišily, xx-xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Není-li x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (-XXX x +UVA) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx zkoušku s xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx až xx xxxxxxxx koncentrace.
Ověření xxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Negativní výsledky xxxxxx být xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx byla xxxxxxxx chemická látka xxxxxxxx za dostatečně xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx experimenty xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx hodnot xxxxxxxxxxxxx xxxxxx by xxxx xxx xxx xxxxxxxx opakovány.
Je-li xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx výsledku xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx podmínky. Klíčovou xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. X tohoto důvodu xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx (jiné xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, použití ultrazvuku) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx může xxx xxxxx x úvahu xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Zkrácení xxxx xxxx mít xxxxxx x chemických xxxxx nestálých ve xxxx.
2.2 Xxxxxxxxxx výsledků
Je-li xx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxxxxxx 50 % xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (NR) (EC50). Xxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx nelineární xxxxxxx (xxxxxxx Hillovou funkcí xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (14). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX50 pro xxxxx xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxxxx kvalita proložení. Xxx xxxxxxx XX50 xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. X takovém případě xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx papír (xxxxxxx xxx x: xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx osy x: xxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxx x xxxxx xxxxxxxxx bude xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci xxxxx xxxxxxxx.
2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx modely)
2.3.1 Předpovědní xxxxx — verze 1: xxxxxxxxxxxx faktor (XXX)
Xxxxxxxx xxxx v xxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx (+UVA), xxx bez xxxxxxx (-XXX) xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci, lze xxxxxxxxxxxx faktor (XXX) xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
(x) XXX = (XX50 (-XX)) / (XX50 (+UV))
Hodnota XXX &xx; 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx PIF ≥ 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx +XXX a xxxx xxxxxxxxxxx při xxxxxxx -XXX, xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx, třebaže xxx x výsledek, xxxxx xxxxxx o xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxxxxx "> XXX", jestliže xx xxxxxxx -XX xxxxxxx xx po nejvyšší xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxx), x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx pro xxxxxxx "> XXX";
(x) &xx; XXX = (Xxxx (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx "&xx; XXX", xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx xxxx hodnota &xx; 1.
Xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxx xxxx, že xxxxxxxx látka nevykazuje xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx koncentrace žádnou xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxx EC50 (-XX) xxx xxxxxxx XX50 (+ XX), xxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx případech xx xxx charakterizaci xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx "XXX = *1";
(X) &xx; XXX = *1 = (Cmax (-XX)) / (Xxxx (+XX))
Xxx li získat xxxxx xxxxxxx "XXX = *1", xx xxxx hodnota xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx.
X xxxxxxxxx b) x x) xx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx v xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX in vitro.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx 2: xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx verzi xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx studie EU/COLIPA (15) a xxx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx studii xxxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xx chovají xxxx XX xxxxxx (13). Xxxxx xxxxx nemá xxxxxxx jako model XXX v případech, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx EC50. Xxxxx xxxxx využívá xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxx effect) (XXX), xxxxxxxx, která je xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx modelu xxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx je xxxxx x dispozici.
2.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx xxxxx (XXX ≥ 5 xxxx XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, xx látka xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx výsledku xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx 10 μx/xx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxx. Xx-xx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx koncentraci 100 μx/xx, xxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx další xxxxx. Xx se xxxxx týkat údajů x penetraci, xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxx nebo zkoušení xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, např. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx in xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx (XXX &xx; 5 xxxx XXX < 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx fototoxická. X xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxxxxx koncentraci 100 μx/xx, xxxxxxxxx negativní xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x fototoxicitu xx xxxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx. X případech, kdy xxxx xxx nižších xxxxxxxxxxxxx obdrženy xxxxxxx xxxxxxxxxx toxické xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (XX50 +XX x XX50 -XX), xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Není-li xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (+XX a -XX) x xxxx-xx xxxxxxxxxxx omezeny rozpustností xx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx 100 μx/xx, xxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx by xxx zvážena xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. xx xxxxxxx xxxxxx lidské xxxx in xxxxx xxxx zkouškou in xxxx).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx o xxxxxxx
Xxxxxxxx x zkoušce xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXX, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x čistota,
- xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- rozpustnost xxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx x aplikačním xxxxx (XXXX xxxx XXX).
Xxxxx:
- typ x xxxxx buněk,
- nepřítomnost xxxxxxxxxx,
- xxxxx buněčné xxxxxx, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx buněk xx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zkoušce xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx xx:
- xxx x složení kultivačního xxxxx,
- inkubační podmínky (xxxxxxxxxxx CO2, teplota, xxxxxxx),
- xxxxx inkubace (xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxx látky:
- xxxxxxxxxx xxxxxx koncentrací xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx XX/XXX, tak xxx xxx,
- v xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxx látka xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx, zdůvodnění xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx,
- xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx média (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky.
Zkušební xxxxxxxx c) — xxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxx charakteristiky xxxxxxx xx zdroje světla,
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx filtrů),
- xxxxxxxxxxxxxxx radiometru a xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxx zdroje xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxxxxx ozáření XXX v této xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xX/xx2,
- délka xxxxxxxx XX/XXX xxxxxx,
- xxxxx XXX xxxxxx (xxxxxxxxx × čas), vyjádřena x X/xx2,
- xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x temnu.
Zkušební xxxxxxxx x) — zkouška XXX:
- xxxxxxx média XX,
- xxxx xxxxxxxx XX,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx CO2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxxxxx xxxxxxxx XX (xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx extrakce),
- xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx odečet xxxxxxxxxx XX,
- druhá (referenční) xxxxxx délka, xx-xx xxxxxxx,
- xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx spektrometrii, xx-xx použit.
Výsledky:
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx při každé xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx vyjádřená v xxxxxxxxxx střední xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxx závislosti xxxxxx xx koncentraci (xxxxxxxxxxx zkoušené chemické xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xxxxxxx xxx paralelních xxxxxxxxxxxxx +XXX x -UVA,
- xxxxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx koncentraci: xx-xx xx možné, xxxxxxx xxxxxxx XX50 (+XXX) a XX50 (-XXX),
- xxxxxxxx xxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx získaných x ozářením UVA/VIS x bez xxxx, x to xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx faktoru (xxxxx-xxxxxxxxxxx xxxxxx ) (XXX), nebo xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxx effect) (XXX),
- xxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx,
- kritéria xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrola:
- xxxxxxxxx životaschopnost (absorbance xxxxxxxx XX) xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx buněk,
- xxxxxxxxx údaje pro xxxxxxxxx kontrolu, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,
- xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrola:
- xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-XXX) x XXX-xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxx: hodnoty XX50 (+XXX), XX50 (-XXX) x XXX, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) Xxxxxxxxx, X., Balls, X., Xöxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X., X'Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, M., Lovell, X. W., Maurer, X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxx, X., Xxxxxxxxxxx, U., Xxxxxxxx, X., De Xxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. (1994), XXX/XXXXXX xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x Balb/c 3X3 xxxx xxxxxxxxxxxxx assay, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 8, 793-796.
(2) Xxxx (1998), Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxx validity xx xxx 3X3 XXX PT xxxx (xx in xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxxx), Xxxxxxxx Commission, Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx: ECVAM xxx DGXI/E/2, 3 Xxxxxxxx 1997, XXXX 26, 7-8.
(3) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, J., Xxxx, X. J. X., Xxxxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. G., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Liebsch, X., Lovell, W. X., Xxxxxx, T., Xxxxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. X., Csato, X., Xxxxxxxxx, D., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. (1998), EU/COLIPA "Xx vitro xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx xxxxx, results xx xxxxx XX (xxxxx trial), part 1: the 3X3 XXX xxxxxxxxxxxxx xxxx, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 12, 305-327.
(4) XXXX Xxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Final Xxxxxx xx xxx XXXX Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Criteria xx Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Test Xxxxxxx, XXXX Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, X. X. (1993), X xxxxxx xxx xx vitro xxxxxxxxx of xxxxxxxxxx xxx photoallergenic potential, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 7, 95-102.
(6) Xxxxxxxxxx, X., Xxxxx, G. (1972), Xxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxx progress xx xxxxxxx, biological xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx. 3 Part 1, Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx Xx, Xxxxxxxxx, XX–XXXX.
(7) Xxxxxxxxx, X., Lovell, X. X., Hölzle, X., Johnson, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxx, W. J. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X. (1994), Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: The report xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX workshop 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, X. D. (1989), Photosensitization. X: Xxx science xx xxxxxxxxxxxx, (X. C. Xxxxx, xx.), Plenum Xxxxx, Xxx York, 2. vyd., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, X., Puerner, X. X. (1985), Xxxxxxxx determination xx xxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, L. X., Xxxxxx, X. G., Xxxxxxxxxx A. (1996). X: Xxxxxx xxxxxx xxx phototoxicity xxxxxxx, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxxxxx, X. X. Xxxxxxx xxx.), Xxxxxx &xxx; Xxxxxxx, Xxxxxxxxxx XX, 5. xxx., 515-530.
(11) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx X. (1987), Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxx: estimates xx xxx xxxxxxxx cytotoxicity xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx ultraviolet xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx on xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, Xxxxxx Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Xxxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxx: Balb/c 3X3 XXX Phototoxicity Xxxx, xxxxxxxx 23. xxxxxxxx 1997 X. Liebschem, xxxxxxxxx 6. xxxxxx 1998 xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxx xx xxx XX/XXXXXX project "Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxx, X. X. X., Xx Silva, O., Xxxxxüxxxx, H. X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Lovell, X. X., Xxxxxxxxxxxxx (1998), X Xxxxx xx xxx Xxxxxxxxxx Potential xx XX Xxxxxx Xxxxxxxxx from Annex XXX of xxx XX Xxxxxxxxx 76/768/XXX xx xxx 3X3 XXX Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, XXXX 26, 679-708.
(14) Xxxxxüxxxx, X. G., Xxxxxxxx, X. (1995), Mathematical xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx, 3, 127-138.
(15) Holzhütter, X. X. (1997), X xxxxxxx measure xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx-xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx use xxx xxxxxxxxxx xxx xx xxxx phototoxicity xx chemicals, XXXX 25, 445-462."
"Xxxxxxx
&xxxx;
[1] Xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (12).