Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/33/XX
xx xxx 25. dubna 2000,
xxxxxx xx po xxxxxxx sedmé přizpůsobuje xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 67/548/EHS x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx týkajících xx klasifikace, xxxxxx x xxxxxxxxxx nebezpečných xxxxx [1]
(Xxxx x xxxxxxxx xxx EHP)
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx na směrnici Xxxx 67/548/XXX xx xxx 27. xxxxxx 1967 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx a xxxxxxxxxx nebezpečných xxxxx [2], naposledy pozměněnou xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxx x Xxxx 1999/33/ES [3], a xxxxxxx xx xxxxxx 28 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxxx důvodům:
(1) X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX se stanoví xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx vlastností, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx přizpůsobit xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
(2) Xxxxx xx. 7 xxxx. 2 směrnice Xxxx 86/609/EHS xx xxx 24. xxxxxxxxx 1986 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx používaných xxx xxxxxxx a xxxx xxxxxxx xxxxx [4] xxxxx xxx pokus, xxx němž má xxx xxxxxxx zvíře, xxxxxxxx, xx-xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx uspokojivá xxxxxx.
(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx nichž xxxxxx xxxxxxxxx zvířata, x xxxxx xxxxxxxxxxx xx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx podle xx. 3 xxxx. 1 xxxxxxxx 67/548/XXX.
(4) Xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Výboru xxx xxxxxxxxxxxx technickému xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx technických xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx látek a xxxxxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Text xxxxxx X a XX xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx části X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/EHS.
Xxxxxx 2
1. Členské xxxxx uvedou v xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 2001. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx směrnici xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx státy xxxxx Xxxxxx znění xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx právních xxxxxxxx, které xxxxxxx x xxxxxxx působnosti xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxxx tabulku mezi xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx v platnost xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Tato xxxxxxxx xx určena členským xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 25. xxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Wallström
členka Xxxxxx
[1] Xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx dvacáté xxxxx.
[2] Úř. xxxx. 196, 16.8.1967, x. 1.
[3] Úř. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Xx. xxxx. X 358, 18.12.1986, x. 1.
PŘÍLOHA X
"X.40 XXXXXXX XXXXXX NA XXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxx xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx na xxxx na principu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx elektrického xxxxxx xxxx xxxxxxx (XXX) x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx kůže xxxx Xxxxxxxxx střediskem xxx xxxxxxxx alternativních xxxxx (XXXXX, Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Evropské Xxxxxx) (1, 2, 3) xxxxxxxxx jako xxxxxxx xxxxxx. Validační studie XXXXX prokázala, xx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx rozlišit xxxxx xxxxx leptající x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, X 35 x ostatní xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kůže, X 34) (2). Xxxxx a xxxxxx xxxx xxxxxxx je xxxxxx; volba xxxxxxx, xxxxx xx být xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxx také Xxxxxx úvod, část X.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kůže: xxxxxxxx xxxxxxxxx kůže xx xxxxxxxx zkoušeného xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx body 1.5.3.4 a 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx TER xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xx xx 24 x xxxxxxxxx na epidermální xxxxxx xxxxxxx kůže xxxxxxx usmrcených xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x bariérové funkce xxxxxxxx vrstvy (xxxxxxx xxxxxxx), která je xxxxxx xxxx snížení xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx úroveň (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX xxx prahovou hodnotu. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx povrchově xxxxxxx xxxxx a neutrální xxxxxxxxx látky (xxxxxxxx xxx literatura (6)) xxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx pro xxxx xxxxx chemických xxxxx (2, 7).
1.5 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
1.5.1 Xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx musí být xxxxxxxxxx z xxxxxxx (20 — 23 xxxxxxx) xxxxxxx (Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx a xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xx poté xxxxx opatrným xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx antibiotik (obsahujícího xxxx. streptomycin, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x koncentracích xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx třetí x xxxxxx xxx po xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx se xx 3 dnů (x přípravě kůže xxxxx xxx použita xxxxxxx starší než 31 xxx).
1.5.2 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx
Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx odstraní xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxx se x xxxx opatrně xxxxxxxxx. Xxxx xx xxxx přeloží xxxx xxxxx xxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx trubičky xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X-xxxxxxx, xxx xxxx kůže xxxxxxxx, x xxxxxxxx tkáně xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx x X-xxxxxxx xxxx uvedeny na xxxxxxx 1. Xxxxxxx X-xxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx pokryje xxxxxxx xxxxxxxx. Trubička xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx umístí do xxxxxxxxxxx komory xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX) (xxxxxxx 2).
1.5.3 Xxxxxxxx postup
1.5.3.1 Xxxxxxxx zkoušeného materiálu
Kapalná xxxxxxxx xxxxx (150 μx) xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx. 2). Xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx tak, xxx byla xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx na xxxxxx xxxxx xxxxx přidá xxxxxxxxxxxx xxxx (150 μx) a xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx a xxxx xx xxxx xxxxx k xxxxxxxxxxx xxxxx. U xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xx 30 °X, xxx xx xxxxxxxx látka roztavila, xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx materiál nebo xx xxxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxx látky xx xxxxxxx tři terčíky xxxx. Xxxxxxxx látka xx xxxxxxxx xx xxxx 24 h (xxx také xxx 1.5.3.4). Xxxxxxxx látka xx zcela xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx 30 °X.
1.5.3.2 Xxxxxx XXX
XXX xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro střídavý xxxxx (xxxx. XXX 401 xxxx 6401 xxxx xxxxxxxxxxxx). Před xxxxxxx xx povrchové xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 70 % xxxxxxxx xxx, xxx byla xxxxxxxxx xxxxxxx. Po xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx odstraní xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 3 xx roztoku xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX). Xxxxxxxxx můstku xx umístí xx xxx xxxxxx terčíku xxxx xx xxxxxx xxxxxx odporu x xΩ/xxxxxx xxxx (xxxxxxx 2). Rozměry xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxx uvedeny xx obrázku 1. Xxxxxx vnitřní (silné) xxxxxxxxx je xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxx, že xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx ponořené x xxxxxxx síranu xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx (tenká) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, aby spočívala xx xxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx mezi spodkem xxxxxxxxx xxxxxx a xxxx teflonové xxxxxxxx xx xxxxxxx konstantní (xxxxxxx 1), neboť xxxx vzdálenost xx xxxx na xxxxxxxx xxxxxxx odporu.
Je xxxxx xx xxxxxxxx, xx xx-xx naměřená xxxxxxx xxxxx xxx 20 xΩ, může xx xxx způsobeno vrstvou xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx straně xxxxxxx xxxx. X odstranění xxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx. xxx, že xx xxxxxxxxx trubička xxxxxxx xxxxxx x rukavici x 10 x xx protřepává. Xxxxxx xxxxxx hořečnatého xx xxxxxxxx x měření xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx XXX (xxxxxxx hodnoty) xxxx přijatelné, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx rozpětí xxxxxx. Xxx popsanou xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx doporučeny tyto xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx přijatelná rozpětí xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx odporu (kΩ) |
|
Pozitivní |
10M xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
10–25 |
1.5.3.3 Upravený xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxx-xx xxxxxxx XXX pro xxxxxxxxx aktivní látky xxxx organické xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx rovny 5 xΩ, xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx barviva. Xxxxx postupem xx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx pozitivní (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X
Xx xxxxxxxxx aplikaci xxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx 2 x 150 μl 10 % xxxxxxx xxxxxxx sulforhodaminu X x destilované vodě. Xxxxxxx xxxx se xxxx xxxxxxxxx 10 x xxxxxxx proudem xxxx o xxxxxxx xxxxxxxx teplotě, xxx xx odstranilo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx do xxxxxxxx (xxxx. 20 xx skleněné xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx spektrometrii) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodu (8 xx). Lahvičky xx lehce 5 xxx. protřepávají, xxx xx odstranilo xxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxx oplachování xx xxxx xxxxxxxx, x xxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx 30 % xxxxxxx (x/X) natrium-dodecyl-sulfátu (XXX) x xxxxxxxxxxx vodě x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx 60 °C. Xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx kůže vyjmou x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 8 xxx. xxx 21 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx ˜ 175). 1 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx 4 xx 30 % (m/V) roztoku XXX v xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx (X) xx měří xxx xxxxxxxxx 565 xx.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X xx xxxxxx xxxx xx vypočte x xxxxxx X (molární xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sulforhodaminu X při 565 xx = 8,7 × 104; molekulová xxxxxxxx = 580). Xxxxx barviva xxxxxxxxxxxxxx X xx xxxxxxx xxx každý xxxxxx xxxx a xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx hodnota. Střední xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx jsou přijatelné, xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxx popsanou xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx přijatelné xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx barviva:
|
Kontrola |
Látka |
Rozmezí xxxxxx barviva (μg/terčík xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X kyselina xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
40-100 |
|
Negativní |
Destilovaná xxxx |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx na xxxxxx dobu (xxxx. 2 hodiny), aby xx xxxxxxxxxxxxxx ty xxxxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx TER xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x několika xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xx xxxx 2 hodin (2), xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxx leptavých xxxxxx při 24xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx x rozměry xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx postup xxxxx mít xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx 5 Ω xxx předpověď xxxxxxxxx xxxxxx byl xxxxxxx x údajů xxxxxxxxx se zařízením x xxxxxxxx, xxx xxxx popsány x xxxx xxxxxx. Doporučuje xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx hodnotu odporu xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vybraných z xxxxxxxxxx látek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (3).
1.6 Podstata zkušební xxxxxx — stanovení xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx až xx xxxx 4 hodin xx trojrozměrný xxxxx xxxxxx kůže sestávající x rekonstruované epidermis x funkční xxxxxxxx xxxxxx. Materiály x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx způsobit xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx např. xxxxxxxx xxxxxxx redukce XXX) pod definovanou xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, že xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx účinky xxxx xx, xxx xxxx xxxxxxx proniknout rohovitou xxxxxxx (xxxxxx nebo xxxxx) x xxxx xxxxxxxxxx cytotoxické, xxx xxxxxxxxx smrt xxxxx x xxxxxxxx buněčných xxxxxxxx.
1.7 Xxxxx zkušební xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
1.7.1 Modely xxxxxx xxxx
Xxxxxx lidské xxxx xxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx musí xxx funkční xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx. Bariérová xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx. Xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Musí se xxxxxxxx, xx model xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx živých xxxxx x modelu musí xxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxx rozlišit xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxx. xxxxxxxxxxxxxx buněk (xxxxxxxxx např. xxxxxxx XXX, tj. xxxxxxx xxxxxxx absorbance X) xx xxxxxxxx negativní xxxxxxxxx látce xxxx xxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxx pro daný xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk po xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (ve srovnání x xxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx) xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx, xxx xxxxx odpovídal xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx (2).
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxx
1.7.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálu
U xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx dostatečné xxxxxxxx zkoušené xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 25 μx/xx2). X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxx xxxxxxx xxxx, a xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx, xxx byl xxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxx; xxxxx látky xx měly xxx xxxxx potřeby před xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx, že aplikační xxxxxx xx použitelná xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2). Xx uplynutí xxxxxxxxx xxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kvantitativní xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxx níž xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx prokázalo, že xxxxxxxxx správné x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx xxxx se xxxxxx xx xxxxxxx XXX x koncentraci 0,3 xx/xx xxx xxxxxxx 20-28 °X xx xxxx 3 xxxxx. Sraženina modrého xxxxxxxxx xx poté xxxxxxxxx (rozpouštědlem) x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx absorbance X při xxxxxx xxxxx 545 xx 595 nm.
1.7.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx kůže x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx doby, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxx xxxxx xxxx xx výsledky xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx se, xxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx standardů xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx XXXXX (3). Xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxx laboratoře a xxxx laboratořemi xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx široké xxxxxxxx xxxxxxxxxx látek. Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx definovaná xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx (2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx studie xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx časopise x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx (kΩ) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx x xxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx experimentech, x xxxxxxxxx hodnotách x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx ve formě xxxxxxx.
2.1.2 Xxxxxxx x xxxxxxx lidské xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx látky včetně xxxxx o xxxxxxxxxxxx xxxx opakovaných experimentech, x středních xxxxxxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx by měly xxx xxxxxxx ve xxxxx tabulky.
2.2 Hodnocení x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.2.1 Xxxxxxx TER na xxxx xxxxxxx
Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx 5 xΩ, xxxx látka xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxx nebo xxxxx 5 kΩ a xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx látku xxxx xxxxxxxxx organickou xxxxx, xx xxxxx xxxxxx.
X xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx neutrálních xxxxxxxxxxx xxxxx, které xxxxxx xxxxxxx XXX menší xxxx xxxxx 5 xΩ, lze xxxxxxx xxxxxxxxx průniku xxxxxxx. Xx-xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx získanému xxxxxxxx xxx xxxxxxx 36 % XXx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, je xxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxx xx xxxx xxxxxx. Je-li xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx menší xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx získaný xxxxxxxx xxx použití 36 % XXx, xx xxxxxxx falešně xxxxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx žíravá.
2.2.2 Xxxxxxx x modelem lidské xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx buněk; xxxxxxx xxxxxxxxxx A xxxxxxxx xxx každý xxxxxxxx xxxxxx xxx použít x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x procentech xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx životaschopnosti xxxxx, xxxxxx xx rozlišují xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxxx xx rozlišují xxxxx xxxxx leptavých xxxxxx), musí být xxx předpovědní model xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, že xx vhodný (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x zkoušce
Protokol x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx tyto xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxx:
- identifikační xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx fyzikálně-chemické xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,
- popis x xxxxxxxxxx jakýchkoli xxxx.
Xxxxxxxx:
- hodnoty xxxxxx (xxxxxxx XXX) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x procentech (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx) pro xxxxxxxx xxxxxxxx, pozitivní a xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x středních xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx,
- xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. LITERATURA
(1) XXXXX (1998), ECVAM Xxxx &xxx; Views, XXXX 26, 275-280.
(2) Fentem, X. H., Xxxxxx, X. X. X., Xxxxx, M., Botham, X. A., Curren, X. X., Xxxx, X. X., Esdaile, X. X., Xxxxxxxxxx, X-X., Liebsch, X. (1998), Xxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx in xxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 2. Xxxxxxx xxx evaluation xx xxx Management Xxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 12, 483-524.
(3) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. G., Xxxxxx, X. H., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Worth, X. X. (1998), Xxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxx tests xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 1. Xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx xx xxx xxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, G. X. X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. (1986), Xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx — xxxxxxxxxxxxx xxx validation, Xxxx Xxxx. Xxxxxxx. 24, 507-512.
(5) Botham, P. X., Xxxx, X. X., Dennett, X., XxXxxx, X. X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxx, X., Cheeseman, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, J. (1992), The xxxx xxxxxxxxxxx xxxx in xxxxx: results of xx interlaboratory xxxxx, Xxxxxxxxxx in xxxxx 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Balls, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, R. X., Xxxx, X. X., Esdaile, X. X., Liebsch, M. (1998), An evaluation xx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxxxx strategy xxx xxxx xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, P. A., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. D., Curren, X. X., Esdaile, X. X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Hildebrand, X., Xxxxx, R. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Osborne, X., Ponec, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X., Walker, X. X., Xxxxx, X. 1995), X xxxxxxxxxxxxx study xx xx vitro xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. The xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX workshop 6, ATLA 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Xxxxxxx 2"
PŘÍLOHA II
"B.41 FOTOTOXICITA — XXXXXXX XXXXXXXXXXXX 3X3 XXX IN XXXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxxxxxxxxxxx xx definována xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx první expozici xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x následné xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx systémovém xxxxxx xxxxxxxx látky.
Informace xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx zkoušené xxxxx, xx. existence xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xx zkoušené látky xx xxxxxxx x xxxxxxxx UV xxxxxx xxxx viditelnému xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx in xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx stanovení xxxxxxxxxxxx vyvolané kombinovaným xxxxxxxxx chemické xxxxx x světla, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx fototoxické xx vivo xx xxxxxxxxxx podání x xx xxxxxxxx xx xxxx, x rovněž xxxxxxxxxx, xxxxx působí xx xxxxxxxx na xxxxxxx jako xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxx xxxxxxxx EU/COLIPA x xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vitro x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx. X xxxx 1996 doporučila xxxxxxxx xxxxxxx OECD xxxxxxxx postupných xxxxxxx xx vitro pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4).
Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx byly porovnány x akutními xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx vivo x xxxxxx a u xxxxxxx x zkouška xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx těchto účinků xxxx xxxxxxxxxx. Zkouška xxxx určena xxx xxxxxxxxx xxxxxx nepříznivých xxxxxx, xxxxx mohou xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx x světla, např. xxxxxxxxxxxxxxxx, fotoalergie a xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx látek, xxxxx xxxxxxxx tyto xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zkouška xxxx xxxx vyvinuta x tomu, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx uvedena x xxxxxxx.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx světla dopadajícího xx xxxxxx, xxxxxx xx X/x2 xxxx xX/xx2.
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: xxxxxxxx (intenzita × xxx) xxxxxxxxxxxxxx (XX) xxxx xxxxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx na povrch, xxxxxxxxx v joulech (X × x) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxx. X/x2 xxxx X/xx2.
Xxxxxx xxxxx UV xxxxxx: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx CIE (Commission Xxxxxxxxxxxxxx xx x'Xxxxxxxxx): XXX (315400 nm), XXX (280315 nm) x XXX (100280 xx). Používají xx xxxxxx jiná označení: xxxx xxxxxxx mezi XXX x XXX xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 320 xx x xxxxx UVA xxxx xxx rozděleno xx XX-X1 x XX-X2 x xxxxxxx xxxxx 340 xx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: parametr, xxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx buněčné xxxxxxxx (xxxx. xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx) x který x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušky xxxxxxxx x celkovým xxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx), xxxxx prošly xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (x UV, xxxx xxx XX), xxx xxxxxx xxxxxxxxxx zkoušeným xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx zkoušek xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx faktor XXX a xxxxxxxx XXX.
XXX (xxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxxxxx faktor): xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (EC50) xxxxxxxx xxxxx, a xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/XXX xxxxxxx (+ UV) x xxx xxxx (-XX).
XXX (xxxx xxxxx xxxxxx — xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx): xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx průběhu xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx ozáření XXX/xxx světlem (+ XX) x bez xxxx (-UV).
Fototoxicita: xxxxxx xxxxxxx reakce, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx světlu nebo xxxxxxx vyvolaná xxxxxxxx xxxx po systémovém xxxxxx xxxxxxxx látky.
Fotoiritace: xxxxx xxxxxx pojmu "xxxxxxxxxxxx", xxxxx se xxxxxxx x popisu xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxxx). Tyto xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (podobné xxxxxx xxx xxxxxxxxx).
Xxxxxxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxxxxxxx reaktivita, xx xxxxx nedochází xxx xxxxx aplikaci chemické xxxxx a světla x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx dobu jeden xxxx xxx týdny xxxx xxx, xxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx expozici xxxxx xxxxxxxxxxxxx dávce XX/XXX xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx chemické látce.
Fotokarcinogenita: xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovanou xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx se používá x xxxxxxx, xxx xx tvorba xxxxxx xxxxxxxxxx XX zářením xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxx být xxxxxxxx xxxxxxx při každé xxxxxxx, xx xxx xxxx vyvinutou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xxxxxxxxxx použít xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx x chemických xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx srovnáních xxxxxxxxxx xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Xxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x mnoha xxxx xxxxxxxxxx látek (5, 6, 7, 8). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx světelnou energii x oblasti slunečního xxxxxx. Xxxxx prvního xxxxxx fotochemie (Xxxxxxxxx-Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxx fotoreakce xxxxxxxxxxx absorpci světelných xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx metodiky by xxxx mělo být xxxxxxxxx UV/VIS absorpční xxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxx Xxxxxxxx XXXX 101). Xx-xx xxxxxxx absorpční xxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 l.mol-1.cm-1, chemická xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx nebo xxxxxxxxx jinou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx).
1.5 Xxxxxxxx zkušební metody
Byly xxxxxxxxxxxxxx xxxxx mechanismy, xxxxxxx může absorpce xxxxxx (xxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (7). Všechny xxxxx k poškození xxxxx. Zkouška xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx je proto xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxx xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX/XXX xxxxxx x xxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx koncentračně xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx vitálního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (9) 24 xxxxx po působení xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx Balb/c 3X3 se 24 x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Dvě 96xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx chemickou xxxxx se poté 1 h preinkubují xxxx různými xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Poté xx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX/XXX xxxxxx 5 X/xx2 XXX (+ XX xxxxxxxxxx), zatímco druhá xxxxxxxx se xxxxxxx x temnu (-XX xxxxxxxxxx). X xxxx xxxxxxxx se poté xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxx 24 x xxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx stanovena 3xxxxxxxxx příjmem xxxxxxxxx xxxxxxx (XXX). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxx z xxxx zkušebních xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se porovnají xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx (+ XX) a xxx ozáření (-XX), xxxxxxx xxx xxxxxxx XX50, xx. xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 % xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx srovnání x neexponovanými kontrolami.
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xx UVA, xxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx buněk xx UVA xx xxxx xxx pravidelně xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx, xxxxxx xxx xx ozáří xxxxxx XXX záření 1 xx 9 X/xx2 x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx x den xxxxxxx xxxxxxxx XXX. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx-xx xxxxxx životaschopnost xx xxxxxxx 5 X/xx2 xxxxx než 80 % životaschopnosti xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx. Tato xxxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxx vždy xx xxxxxx xxxxxxxx buněk.
Citlivost xxxxx negativní xxxxxxxx xx XXX xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx v XXXX (Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) nebo 1 % xxxxxxxxx (XxXX)) xxxx bez xxxx xxxxxxxx xxx + XXX experimentu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 80 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx (-XXX).
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx: absolutní xxxxxxxxxx (A540 NRU) xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx 1 × 104 buněk xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx během xxxx xxx zkoušky obvyklou xxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X540 XXX xxxxxxxxxxxxxx kontrol xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: při každé xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx látka. Xxx xxxxxxxxx xxxxxx EU/COLIPA xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXX), x xx xxxx xxxxxxxxx. Xxx XXX xxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx postupu xxx xxxxxxx fototoxicity 3T3 XXX in xxxxx xxxx definována tato xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxx XXX xxxxxxx (+ XXX): XX50 = 0,1 xx 0,2 μx/xx, pro XXX xxxxxxxxx (-XXX): XX50 = 7,0 xx 90,0 μx/xx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xx. xxxxx xxxxxxx XX50, xx xxx xxx xxxxxxx 6.
Xxxxxxx XXX xxxxx být xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx hodnocené zkoušené xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx by xxxx být xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx údajů xxxx kritéria přijatelnosti xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx hodnot XX50 x XXX xxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7 Popis xxxxxxxx metody
1.7.1 Xxxxxxxx
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx fibroplastů — Xxxx/x 3T3, xxxx 31 — xxx x xxxxx XXXX, xxxx z xxxxx ECACC a xx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxx xxx při xxxxxxx xxxxxxxxx postupu použity xx předpokladu, xx xxxx kultivační xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx specifickým potřebám xxxxx, ale xxxx xxx prokázána jejich xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx xx xxxx xxx pravidelně xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, x xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx kontroly xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxxx xxxxx xx XX xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxx buňky Balb/c 3X3 z pasáže x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, nejlépe x nižší xxx xxx pasáže. Xx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx Balb/c 3X3 na XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx.
1.7.1.2 Xxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxxxxxx buněčné xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx postupu xx xxxx být použita xxxxxx xxxxxxxxxx média x xxxxxxxxx xxxxxxxx. X buněk Xxxx/x 3X3 xx xxxxx x DMEM (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, 4xX xxxxxxxxxx, penicilinem x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx při 37 °X/7, 5 % XX2. Xxxxxxx xxxxxxxx xx, aby kultivační xxxxxxxx zajistily, xxx xxx buněčný xxxxxx xxxxxx dosavadního xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx.
1.7.1.3 Xxxxxxxx kultur
Buňky xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx hustotě x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx před použitím xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU in xxxxx.
Xxx zkoušce fototoxicity xx xxxxx nasazují xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x takové xxxxxxx, xxx nedosáhly xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xx. xx xxxxxxxx, xxx je xx 48 h xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx Balb/c 3X3 kultivované x 96xxxxxxxxx destičkách je xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 × 104 xxxxx xx xxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx se xxxxx xxxxxx stejným xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx 96xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx poté xxxxxxxx podrobeny celému xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxx kromě xxxx, kdy xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (+XXX/XXX) a xxxxx je xxxxxxxxx x xxxxx (-XXX/XXX).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx aktivace
Zatímco xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxx xxxxxxxxx in xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxx potenciálu, xxxx x xxxxxxxxxxxxxxx dosud xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx vivo xxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxx xx xxxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx aktivace xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx chemické látky xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skladování. Xxxx-xx xxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx xxxxx provádět xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx roztoku, xxxx. v Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztoku (EBSS) xxxx ve fyziologickém xxxxxxx s fosfátovým xxxxxx (XXX), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a pH xxxxxxxxxx absorbující xxxxxx, xxx nerušily při xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx chemické xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx být rozpuštěny xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx 100násobek xxxxxxxxxx xxxxxxx koncentrace x xxxx xx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx 1:100 fyziologickým xxxxxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 % xxx. xx xxxxx xxxxxxxxx, xx. v xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx zkoušené chemické xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) a xxxxxxx (XxXX). Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx méně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx. aceton), xxx měly by xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látku, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx.
Xx-xx třeba, xxxx xxx xxx xxxxxxxxx rozpouštění xxxxxxx xxxxxxx x/xxxx ultrazvuk x/xxxx xxxxxxx na 37 °X.
1.7.1.6 Xxxxxxx XX světlem/příprava
Zdroj xxxxxx: xxxxx vhodného xxxxxx xxxxxx x vhodné xxxxxxxx xx kritickým xxxxxxxx zkoušení xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx v pásmu XXX a xx xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx xxxxxx x xxxxx XXX je xxxx xxxxxxxxxx x xx přímo xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 313 xx x 280 nm 1000xxxx (11). Xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx zdroj světla xxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, x xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxx po přijatelnou xxxx) byla xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxx (infračervená oblast), xx dále xxxxxx xxxxxxxx poškozovat xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx světla xxxxxxxxx simulátory se xxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. X xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, tak xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx x nich xx xx xxxxxx, xx xxxxxxx méně xxxxx a je xxxxxxxx, xxxxx její xxxxx se slunečním xxxxxxx není xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx významné xxxxxxxx XXX záření, xxxx by xxx xxxxxx xxxxxxxxxx, aby xxxx vysoce xxxxxxxxxxx xxxxxx délky XXX xxxxxxxxx.
Xxx zkoušku xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxx (XXX:XXX ˜ 20:1). Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx filtrovaného xxxxxxxxx simulátoru použitého xx xxxxxxxxx studii xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (3).
Dozimetrie: xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) xx musí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx zkouškou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx. XX-xxxx xxxx xxx pro xxxx xxxxx kalibrován. Xxxxxxxxx XX-xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx a xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kalibrovaný UV-metr xxxxxxxx xxxx. V xxxxxxxx xxxxxxx by xxx xxx x xxxxxxx časových xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx, avšak xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx školenými osobami.
Dávka 5 X/xx2 byla xxx xxxxxxxxx studii xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx buňky Xxxx/x 3X3 x dostatečně xxxxx k xxxxxxxx x xxxxx fototoxických xxxxxxxxxx látek. Xxx xxxxxxxx 5 J/cm2 xx xxxx 50 xxx. musí xxx xxxxxxxxx ozáření nastavena xx 1,666 XX/xx2. Xxxxxxxx je xxxxxxx xxxx xxxxxxx linie xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxx být xxxxx XXX xxxxxx xxxxx upravena, xxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx fototoxinů. Xxxx xxxxxxxx expozice xx vypočte xxxxx xxxxxxxx:
x(xxx) = xxxxx xxxxxxxxxx záření (X/xx2) 100 / intenzita xxxxxxx (xX/xx2) 60 (1 J =.X xxx)
1.7.2 Zkušební xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zkoušené chemické xxxxx xx neměla xxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx všechny xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx byly xxxxxxxxxx při nižších xxxxxxxxxxxxx; xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xX xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx být vyhovující (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx koncentrací xxxxxxxxxx xxxxx zkoušených se xxxxxxx (+ XXX) x xxx světla (-XXX) xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx koncentrační xxxx x xxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx by xxx xxxxxxx geometrická xxxx koncentrací (x xxxxxxxxxxx faktorem xxxxxx).
1.7.3 Xxxxxxxx postup [1]
1.7.3.1 Xxxxx xxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx x kultivačním médiu x 100 μx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx pouze xx xxxxxxxxxx xxxxx 96xxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx xxxxx). Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx 100 μl xxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 xxxxx xx xxxxx). Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látku xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxx xxxxxxxxx cytotoxicity (-UVA) x druhá xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (+XXX).
Xxxxx xx xxxxxxxx 24 x (7,5 % XX2, 37 °X), xxxxx nedosáhnou semikonfluentní xxxxxxxxxx. Tato xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx přichycení x xxxxxxxxxxxxx růst.
1.7.3.2 Xxxxx xxx
Xx inkubaci xx xxxxxxxxxx xxxxxx x buněk dekantuje x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. Xxxxx xx 100 μx EBSS/PBS xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx). Aplikuje xx 8 různých xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxx xx xxxx 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °C).
K xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x ozářením XXX xx buňky při xxxxxxxx teplotě xx xxxx 50 xxx. xxxxxxx přes víčko 96xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x intenzitě 1,7 XX/xx2 (5 X/xx2. Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxx víčkem, xxxxx xx pomocí xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXX xx ponechají 50 xxx. (doba xxxxxxxx XXX) v temnu xxx pokojové xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx xx odstraní x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 150 μl EBSS/PBS. XXXX/XXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx xxx (18-22 x) (7,5 % XX2, 37 °X).
1.7.3.3 Třetí xxx
Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx mikroskopem x fázovým xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx provádět xxxx xxxxxxxx, aby se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx chyby, xxxxx xxxxxxx xx xxx xxxxxxxxx cytotoxicity xxxx xxxxxxxxxxxx nepoužijí.
Zkouška xxxxxx xxxxxxxxx červeně.
Buňky xx xxxxxxx 150 μx xxxxxxxxxxxx XXXX/XXX x xxxxxxxxx roztok xx xxxxxxx odstraní xxxxxxxx. Xxxxx se 100 μx xxxxx XX x xxxxxxxx xx 3 x xxx 37 °X xx xxxxxxxx atmosféře x 7,5 % XX2.
Xx xxxxxxxx xx xxxxxx XX xxxxxxxx x buňky xx xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX se xxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx (případně lze xxxxxxxx odstředit x xxxxxxxx poloze).
Přidá xx xxxxxx 150 μl xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx XX.
Xxxxxxxx se xxxxxx 10 xxx. xxxxx xx třepačce, xxxxx xx NR x buněk xxxxxxxxx x nevytvoří xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxx 540 nm, xxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx. Údaje xx xxxxx ve xxxxxxx xxxxxxx (např. ASCII) x počítači pro xxxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxx x množství xxxxx
Xxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXX/XXX nebo xxx xxxx. Xx-xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx bylo xxxxx proložit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx křivku. Vzhledem x xxxx, xx xx xxxxxxxx chemická xxxxx xxxxxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx 100 μg/ml xxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxx (-XXX) xxxxxxxxxxx, xxx mohla xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxxxxx (+XXX), xxxx xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx koncentrací, xxxxx xxxx být x xxxx částech experimentu xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx, xx-xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx kvality xxxxx. Xxxx-xx v xxxx částech experimentu (-XXX x +UVA) xxxxxxxxxxxx zjištěna, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx intervaly xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Negativní výsledky xxxxxx xxx dále xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx chemická xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx koncentrací. X xxxxxxxx případech stačí xxxxx hlavní experiment xxxxxxxxx jednou nebo xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x výsledky xxxxxx xxxxxxxxxx hodnot xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xx-xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, může xxx xxxxxxxx xxx dosažení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky. X xxxxxx xxxxxx xxxx xxx změna xxxxxxxx (xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušky. Xxxxxxxxxx může xxx xxxxx x úvahu xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx ve xxxx.
2.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx-xx xx xxxxx, xxxxxxx xx koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx 50 % xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx neutrální xxxxxxx (NR) (XX50). Xxx tak xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx regrese (xxxxxxx Hillovou xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx regresí) xxxxx závislosti odezvy xx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (14). Xxxx použitím hodnoty XX50 xxx další xxxxxxx by měla xxx xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxxxx kvalita proložení. Xxx xxxxxxx EC50 xxx xxxxxxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx případě xx xxxxxxxxxx použít xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxx x: xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx osy x: xxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxx xx této xxxxxxxxxxxx xxxxxx závislosti odezvy xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
2.3 Hodnocení xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx modely)
2.3.1 Předpovědní xxxxx — verze 1: fotoiritační xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxx jsou v xxxx xxxxxxxxx xxx xxx ozáření (+XXX), xxx xxx xxxxxxx (-XXX) xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci, xxx xxxxxxxxxxxx faktor (XXX) xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
(x) PIF = (XX50 (-UV)) / (XX50 (+UV))
Hodnota XXX &xx; 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx XXX ≥ 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu.
Jestliže xx chemická látka xxxxxxxxxxx xxxxx při +XXX a není xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx -XXX, nelze xxxxxxx XXX xxxxxxxxx, xxxxxxx xxx o xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx o xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxxxxx "> XXX", jestliže xx xxxxxxx -UV zkouška xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Cmax), x xxxx xxxxxxx xx použije xxx xxxxxxx "> XXX";
(x) &xx; XXX = (Xxxx (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxx xx xxxxxx pouze hodnotu "&xx; XXX", předpovídá xxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx &xx; 1.
Xxxxxxxx nelze x xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxxx látka xxxxxxxxxx xx xx nejvyšší xxxxxxxx koncentrace žádnou xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX50 (-XX) xxx xxxxxxx XX50 (+ UV), svědčí xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx charakterizaci xxxxxxxx xxxxxxx formální xxxxxxx "XXX = *1";
(X) &xx; XXX = *1 = (Xxxx (-XX)) / (Xxxx (+XX))
Xxx xx xxxxxx xxxxx hodnotu "PIF = *1", xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
X xxxxxxxxx x) x x) xx měly xxx xxx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx opatrně xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx 2: xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx lze xxxxxx novou xxxxx xxxxxx xxx předpovídání xxxxxxxxxxxxx potenciálu, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx údajů x xxxxxxxxx studie EU/COLIPA (15) a xxx xxxxxxxx naslepo x xxxxxxxx xxxxxx fototoxicity xx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxx jako XX filtry (13). Xxxxx model nemá xxxxxxx xxxx model XXX x xxxxxxxxx, xxx nelze xxxxxx xxxxxxx EC50. Xxxxx xxxxx využívá xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (mean xxxxx xxxxxx) (MPE), xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxx použití xxxxxx xxx xx Humboldtově xxxxxxxxxx (Berlín) vyvinut xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxx.
2.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx (XXX ≥ 5 xxxx XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx potenciál. Xxxxxxxx bylo xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx 10 μx/xx, xx také pravděpodobné, xx látka xxxx xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx vivo. Xx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx koncentraci 100 μg/ml, xxxxx xxx xxx posouzení xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xx xx xxxxx xxxxx údajů x xxxxxxxxx, xxxxxxxx x možné xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxx zkoušení xxxxxxxx xxxxx alternativní xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx kůže xx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx (PIF &xx; 5 nebo XXX < 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxx xx použitých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx až xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxxxxxx negativní xxxxxxxx, že chemická xxxxx xxxx fototoxický xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx vivo xxx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx obdrženy xxxxxxx xxxxxxxxxx toxické odezvy xx koncentraci (XX50 +XX x XX50 -XX), xx xxxxxxxxxxxx xxxxx stejná. Xxxx-xx xxxxxxx xxxx toxicita xxxxxxxxx (+UV a -XX) x xxxx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx rozpustností xx xxxx xx xxxxxxx menší xxx 100 μx/xx, xxxx xxxxxx zkouška pro xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx by xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. za xxxxxxx modelu xxxxxx xxxx in xxxxx xxxx xxxxxxxx in xxxx).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx o xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx CAS, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx,
- xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx studie,
- xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, jsou-li xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- zdůvodnění xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- rozpustnost xxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx (XXXX nebo XXX).
Xxxxx:
- xxx x xxxxx xxxxx,
- nepřítomnost xxxxxxxxxx,
- číslo buněčné xxxxxx, xx-xx známo,
- xxxxxxxxx xxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro
Zkušební xxxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxx aplikací a xx xx:
- xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx,
- inkubační xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxx inkubace (xxxxxxxxxx před inkubací x po xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxx látky:
- xxxxxxxxxx xxxxxx koncentrací xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jak xxx xxxxxxx UV/VIS, xxx xxx něj,
- x xxxxxxx, xx zkoušená xxxxxxxx látka vykazuje xxxxxxxx rozpustnost x xxxx xxxxxxxxxxx, zdůvodnění xxxxxxxx xxxxxxxx koncentrace,
- xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx zdroje xxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxxx použitého xxxxxx (xxxxxxxxx filtrů),
- xxxxxxxxxxxxxxx radiometru x xxxxxxxxxxx x jeho xxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxx zdroje xxxxxx od zkoušeného xxxxxxx,
- intenzita ozáření XXX x této xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xX/xx2,
- xxxxx expozice XX/XXX xxxxxx,
- dávka XXX záření (xxxxxxxxx × čas), xxxxxxxxx x J/cm2,
- xxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxx xxxxxxxxx a teplota xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxx x xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx XXX:
- xxxxxxx média XX,
- xxxx xxxxxxxx XX,
- inkubační xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, teplota, xxxxxxx),
- podmínky xxxxxxxx XX (xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx extrakce),
- xxxxxx xxxxx použitá xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx XX,
- druhá (xxxxxxxxxx) xxxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx,
- xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxx, xx-xx xxxxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx střední xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,
- křivky xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx versus xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx experimentech +XXX a -XXX,
- xxxxxxx křivek xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx: xx-xx xx xxxxx, xxxxxxx hodnoty XX50 (+XXX) x EC50 (-XXX),
- xxxxxxxx obou xxxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx xxxxxxxxxxx získaných x ozářením XXX/XXX x xxx xxxx, x xx buď xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx-xxxxxxxxxxx xxxxxx ) (XXX), xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx světelného xxxxxx (xxxx photo effect) (XXX),
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- kritéria xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a) — xxxxxxxx negativní xxxxxxxx:
- xxxxxxxxx životaschopnost (absorbance xxxxxxxx XX) ozářených x xxxxxxxxxxx buněk,
- xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x směrodatná xxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-XXX) x XXX-xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx: hodnoty EC50 (+XXX), EC50 (-XXX) x XXX, xxxxxxx xxxxxxx x směrodatná xxxxxxxx.
Xxxxxx výsledků.
Závěry.
4. LITERATURA
(1) Xxxxxxxxx, H., Xxxxx, X., Xöxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. G., Xxxxxxx, S., Xxxxxx, X., X'Xxxxxxxxxxx, H., Xxxxxxx, X., Lovell, X. X., Xxxxxx, X., Moldenhauer, X., Xxxxx, L., Pape, X., Xxxxxxxxxxx, U., Xxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, X., Steiling, X., Willshaw, X. (1994), XXX/XXXXXX xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx testing: Xxxxx xxxxxxx obtained xxxx x Xxxx/x 3X3 xxxx phototoxicity xxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 8, 793-796.
(2) Xxxx (1998), Xxxxxxxxx xx xxx scientific xxxxxxxx xx xxx 3X3 XXX PT test (xx xx xxxxx xxxx for xxxxxxxxxxxxx), Xxxxxxxx Commission, Xxxxx Xxxxxxxx Centre: ECVAM xxx DGXI/E/2, 3 Xxxxxxxx 1997, ATLA 26, 7-8.
(3) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, M., Xxxxxx, X., Xxxx, X. X. W., Xxxxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. G., Clothier, X., Xxxxxxx, P., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Lovell, W. X., Maurer, X., Xxxxxxxxxxxxx, U., Potthast, X. X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, W., Xxxxxxx, X. (1998), XX/XXXXXX "Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx xxxxx, results xx phase XX (xxxxx xxxxx), xxxx 1: the 3T3 XXX xxxxxxxxxxxxx test, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 12, 305-327.
(4) XXXX Xxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Xxxxx Xxxxxx xx xxx OECD Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxx, XXXX Publications Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, X. X. (1993), X xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxxxxx of xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx potential, Xxxxxxxxxx in Xxxxx 7, 95-102.
(6) Santamaria, X., Xxxxx, X. (1972), List xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxx progress xx xxxxxxx, biological xxx xxxxxxxxx chemistry Xxx. 3 Xxxx 1, Xxxxx Xxxxxxx Publishing Xx, Xxxxxxxxx, XI–XXXV.
(7) Xxxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xöxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, T., Xxxxxxx, X. X., Xxxx, X. X. X., Sapora, X., Xxxxxxxxx, X. (1994), Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: The report xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX xxxxxxxx 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, J. X. (1989), Xxxxxxxxxxxxxxxxxx. V: Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, (X. C. Xxxxx, ed.), Plenum Xxxxx, Xxx Xxxx, 2. xxx., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X. (1985), Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx by xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx and xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Toxicol. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, X. A., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx X. (1996). X: Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx testing, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (F. X. Xxxxxxxx, X. X. Xxxxxxx eds.), Taylor &xxx; Xxxxxxx, Xxxxxxxxxx XX, 5. xxx., 515-530.
(11) Xxxxxxx, X. X., Pidoux X. (1987), Xxxxxx spectra xxx xxxxx xxxx xxxxx: xxxxxxxxx xx xxx relative cytotoxicity xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx ultraviolet xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, Cancer Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Standard Xxxxxxxxx Xxxxxxxxx: Xxxx/x 3X3 XXX Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, xxxxxxxx 23. xxxxxxxx 1997 X. Liebschem, xxxxxxxxx 6. března 1998 xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxx xx xxx XX/XXXXXX xxxxxxx "Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Xxxxxxxxx, X., Balls, X., Xxxxxx, X., Pape, X. J. X., Xx Xxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxxx, F., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxxxxx (1998), X Xxxxx xx xxx Phototoxic Potential xx XX Xxxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxx XXX of xxx XX Xxxxxxxxx 76/768/XXX xx xxx 3X3 XXX Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxx Test, XXXX 26, 679-708.
(14) Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X. (1995), Mathematical xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx external xxxxxxx, Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx, 3, 127-138.
(15) Holzhütter, X. X. (1997), A xxxxxxx measure xx xx xxxxx phototoxicity xxxxxxx from xxxxx xx dose-response curves xxx its xxx xxx xxxxxxxxxx the xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx chemicals, ATLA 25, 445-462."
"Xxxxxxx
&xxxx;
[1] Další xxxxxxxxxxx lze nalézt x xxxxxxxxxx (12).