Xxxxxxxx Komise 2000/33/XX
xx xxx 25. xxxxx 2000,
xxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 67/548/EHS x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, balení x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [1]
(Xxxx x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 67/548/EHS xx xxx 27. xxxxxx 1967 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x správních xxxxxxxx týkajících xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [2], naposledy xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x Xxxx 1999/33/ES [3], x xxxxxxx xx článek 28 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxxx důvodům:
(1) V xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX xx stanoví xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx x ekotoxicity xxxxx x xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
(2) Xxxxx čl. 7 xxxx. 2 xxxxxxxx Xxxx 86/609/XXX xx xxx 24. listopadu 1986 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx členských xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxx [4] xxxxx xxx xxxxx, xxx xxxx xx xxx použito zvíře, xxxxxxxx, xx-xx xxxxxxx x prakticky dostupná xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX xxxxxx alternativní zkušební xxxxxx, xxx nichž xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx. 3 odst. 1 xxxxxxxx 67/548/EHS.
(4) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Výboru xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx směrnic x xxxxxxxxxx technických xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx,
XXXXXXX TUTO SMĚRNICI:
Xxxxxx 1
Xxxx xxxxxx X a XX xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx části X přílohy X xxxxxxxx 67/548/XXX.
Článek 2
1. Členské xxxxx uvedou x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx dosažení xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 2001. Xxxxxxxxxx x nich uvědomí Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx odkaz xx xxxx směrnici nebo xxxx xxx takový xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx přijmou x xxxxxxx působnosti xxxx xxxxxxxx, a xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v platnost xxxxxx dnem xx xxxxxxxxx v Úředním xxxxxxxx Evropských společenství.
Xxxxxx 4
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 25. dubna 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxöx
xxxxxx Xxxxxx
[1] Přijato xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx.
[2] Úř. věst. 196, 16.8.1967, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Xx. xxxx. X 358, 18.12.1986, x. 1.
PŘÍLOHA X
"X.40 XXXXXXX XXXXXX XX XXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxx xxxxxxx xx vitro xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xx principu xxxxxxxxx transkutánního xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx (XXX) a zkouška x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxx střediskem pro xxxxxxxx alternativních metod (XXXXX, Xxxxxxxx výzkumné xxxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx) (1, 2, 3) xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx XXXXX prokázala, xx xxxxx zkouškami lze xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxx. Protokol x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxx xxxxx způsobující xxxxx xxxxxxxxx, X 35 x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, X 34) (2). Xxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx; volba zkoušky, xxxxx má xxx xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx požadavcích x xxxxxxxxxx uživatele.
Viz xxxx Xxxxxx xxxx, xxxx X.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kůže: xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx viz xxxx 1.5.3.4 a 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx zkušební xxxxxx — xxxxxxx TER xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx je až xx 24 x xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx terčíků kůže xxxxxxx usmrcených xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxx schopností způsobit xxxxxx xxxxxxxx integrity x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxx), xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx xxxxxx (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx x nedráždivé xxxxx xxxxxxxxx TER xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xx zkušebního xxxxxxx xxx xxxxxxxxx aktivní xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (definice xxx xxxxxxxxxx (6)) xxx zařadit xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx falešně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx získaných xxxxx xxx tyto xxxxx xxxxxxxxxx látek (2, 7).
1.5 Popis xxxxxxxx metody — xxxxxxx TER na xxxx xxxxxxx
1.5.1 Xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx musí být xxxxxxxxxx x mladých (20 — 23 xxxxxxx) potkanů (Xxxxxx xxxx srovnatelný kmen). Xxxxxxx x xxxxx xxxx xx opatrně xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxx xxxxx opatrným otíráním, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx do xxxxxxx antibiotik (xxxxxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x amfotericin x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx bakterií). Xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx den xx xxxxxx omytí xxxxx xxxxx roztokem xxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xx 3 xxx (x přípravě xxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx 31 dnů).
1.5.2 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx
Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx zvířete xx xxxx opatrně odstraní xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxx xx x kůže opatrně xxxxxxxxx. Kůže xx xxxx přeloží přes xxxxx xxxxxxxxx (PTFE) xxxxxxxx tak, xxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxx xx těsně xxxxxxxx xxxxxxx O-kroužek, aby xxxx xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx. Rozměry xxxxxxxx x X-xxxxxxx xxxx xxxxxxx na xxxxxxx 1. Xxxxxxx X-xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx poté xxxxxxx xxxxxxx vrstvou xxxxxxxx. Xxxxxxxx držená xxxxxx pružinové xxxxxx xx umístí xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX) (xxxxxxx 2).
1.5.3 Xxxxxxxx xxxxxx
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (150 μx) xx aplikuje xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx. 2). Xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx se použije xxxxxxxxxx množství xxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx na xxxxxx xxxxx látky přidá xxxxxxxxxxxx voda (150 μx) x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx látkami x xxxx by xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxx xxxxx xxxx může xxx xxxxxxxx zahřátím xx xx 30 °X, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xx prášek.
Ke zkoušce xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx aplikuje xx xxxx 24 x (xxx také bod 1.5.3.4). Zkoušená xxxxx xx xxxxx odstraní xxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxx 30 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx x trubičce xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx 30 °X.
1.5.3.2 Xxxxxx TER
TER xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. XXX 401 xxxx 6401 xxxx xxxxxxxxxxxx). Před xxxxxxx xx povrchové xxxxxx kůže xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 70 % ethanolu xxx, xxx byla xxxxxxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx odstraní xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx zvlhčí xxxxxxxx 3 ml roztoku xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX). Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxx xxxxxx terčíku xxxx za účelem xxxxxx odporu v xΩ/xxxxxx kůže (obrázek 2). Rozměry elektrod x délky exponovaných xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxx uvedeny xx xxxxxxx 1. Xxxxxx vnitřní (xxxxx) xxxxxxxxx xx během xxxxxx odporu opřena x horní xxxxx xxxxxxxxx trubičky, xxx xxxx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx receptorové komory xxx, aby spočívala xx xxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx udržuje konstantní (xxxxxxx 1), xxxxx xxxx vzdálenost xx xxxx xx naměřené xxxxxxx xxxxxx.
Xx xxxxx xx všimnout, xx xx-xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx než 20 xΩ, xxxx xx xxx způsobeno xxxxxxx xxxxxxxx látky na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. X xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxx např. xxx, xx se xxxxxxxxx trubička zakryje xxxxxx v rukavici x 10 x xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx x měření xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx hořečnatým.
Výsledky XXX (xxxxxxx xxxxxxx) xxxx přijatelné, xxxxx xxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx rozpětí xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx tyto xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx rozpětí xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx odporu (xΩ) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
10–25 |
1.5.3.3 Xxxxxxxx xxxxxx pro povrchově xxxxxxx látky x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxx-xx xxxxxxx XXX pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx organické látky xxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxx nebo rovny 5 xΩ, xxx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxx průniku xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx pozitivní (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx barviva xxxxxxxxxxxxxx X
Xx xxxxxxxxx aplikaci xxxxxxxx xxxxx xx xx epidermální xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx 2 x 150 μl 10 % xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X x xxxxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx xxxx se xxxx xxxxxxxxx 10 x xxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx teplotě, aby xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx trubičky a xxxxxx se xx xxxxxxxx (xxxx. 20 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx scintilační xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodu (8 ml). Xxxxxxxx xx xxxxx 5 xxx. xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx další xxxxx xxxxxxx. Tato xxxxxx oplachování se xxxx xxxxxxxx, a xxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxx a xxxxx xx lahviček xxxxxxxxxxxx 5 ml 30 % roztoku (x/X) natrium-dodecyl-sulfátu (XXX) x xxxxxxxxxxx vodě x xxxxxxxx xx xxxx noc při 60 °C. Xx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxx vyjmou x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 8 xxx. xxx 21 °C (xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx ˜ 175). 1 xx xxxxxx supernatantu xx poté xxxxx 4 xx 30 % (m/V) roztoku XXX x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx (X) xx měří xxx xxxxxxxxx 565 xx.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X xx terčík xxxx xx xxxxxxx z xxxxxx A (xxxxxxx xxxxxxxxx koeficient sulforhodaminu X při 565 xx = 8,7 × 104; xxxxxxxxxx xxxxxxxx = 580). Xxxxx barviva xxxxxxxxxxxxxx X xx xxxxxxx xxx každý xxxxxx xxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx hodnota. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vázání xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx hodnoty xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx přijatelného xxxxxxx xxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxx uvedení xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx přijatelné xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx barviva (μg/terčík xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X kyselina xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
40-100 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx voda |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xxx xxxxxx aplikovat xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx (xxxx. 2 xxxxxx), xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, které xxxx xxxxx leptavé. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx stanovení TER xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x několika xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx kůže xx xxxx 2 xxxxx (2), xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx látek x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxx leptavých xxxxxx xxx 24xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx a rozměry xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx experimentální xxxxxx xxxxx mít xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx XXX. Práh 5 Ω pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx účinků xxx xxxxxxx z xxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxxx x postupem, xxx xxxx popsány x xxxx metodě. Xxxxxxxxxx xx tedy xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx řady xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx látek použitých xx validační studii (3).
1.6 Xxxxxxxx zkušební xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx až po xxxx 4 xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx kůže sestávající x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Materiály s xxxxxxxxx účinky xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx způsobit xxx specifikované expoziční xxxx pokles životaschopnosti xxxxx (xxxxxxxxx např. xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX) xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Podstata xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx jsou xx, xxx jsou xxxxxxx xxxxxxxxxx rohovitou xxxxxxx (xxxxxx xxxx xxxxx) a xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx smrt xxxxx x hlubších xxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7 Xxxxx zkušební xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx modelu xxxxxx xxxx
1.7.1 Xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxx xxxxxx kůže xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx, musí xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Model xxxx xxx funkční xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx buněk xxx xx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx. Xx xxx xxxxxxxx demonstrací xxxxxxxxxx modelu x xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rohovitou xxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxx xx definovaných xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx živých xxxxx x xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx kontrolní xxxxx. ivotaschopnost xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. redukcí XXX, xx. xxxxxxx xxxxxxx absorbance X) xx expozici xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx daný xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xx srovnání x životaschopností xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látku) xxxx xxx ve xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx, aby xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx (2).
1.7.2 Zkušební xxxxxx
1.7.2.1 Xxxxxxxx zkoušeného materiálu
U xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx povrch xxxx (xxxxxxxxx 25 μx/xx2). X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxx látky, aby xxxxxxx kůži, x xxxxxxxx xxxxx by xxxx xxx ovlhčena, xxx xxx zajištěn xxxxx xxxx x xxxx; xxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx je použitelná xxx široké spektrum xxxxxxxxxx xxxxx (2). Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxxxx materiál x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx životaschopnosti buněk
K xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx validovaná xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx redukce XXX, xxx xxx xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx správné a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx XXX o xxxxxxxxxxx 0,3 mg/ml xxx xxxxxxx 20-28 °C xx xxxx 3 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx měřením xxxxxxxxxx X při vlnové xxxxx 545 xx 595 xx.
1.7.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx kůže x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx doby, postupu xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxx xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx, xxx metodika x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx řady xxxxxxxxxxxx standardů xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx látek xxxxxxxxx ve validační xxxxxx XXXXX (3). Xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx laboratoře x xxxx xxxxxxxxxxxx reprodukovatelnost xxx široké spektrum xxxxxxxxxx látek. Metoda xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx kritéria xxx vědeckou validitu (2) x výsledky xxxxxx validační xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x předcházející xxxxxxxx xxxxxxx.
2. ÚDAJE
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Xxxxxxx XXX xx kůži potkana
Hodnoty xxxxxx (kΩ) pro xxxxxxxx xxxxxxxx, pozitivní x xxxxxxxxx kontrolu x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx údajů x duplicitních xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx.
2.1.2 Xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx xxx zkoušený xxxxxxxx, xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx x xxx xxxxxxx standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxxx xxxx opakovaných xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x x odvozené xxxxxxxxxxx by měly xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx.
2.2 Hodnocení x interpretace xxxxxxxx
2.2.1 Xxxxxxx XXX xx xxxx potkana
Je-li hodnota XXX xxxxxxxx pro xxxxxxxxx látku xxxxx xxx 5 xΩ, xxxx látka žíravá. Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxx xxxx rovna 5 kΩ x xxxxx x povrchově xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx látku, xx xxxxx xxxxxx.
X xxxxxxxxx aktivních xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx dávají xxxxxxx TER xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ, xxx provést xxxxxxxxx xxxxxxx barviva. Xx-xx střední xxxxx xxxxxxx x terčíku xxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx získanému xxxxxxxx xxx použití 36 % HCl xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, je xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xx tedy xxxxxx. Xx-xx střední xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx menší xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx použití 36 % HCl, xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx tedy xxxx xxxxxx.
2.2.2 Zkouška x xxxxxxx lidské xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx; xxxxxxx xxxxxxxxxx A xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx lze xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v procentech xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Hraniční xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk, xxxxxx xx rozlišují xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx materiálů, xxxxx xxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx), xxxx xxx xxx předpovědní xxxxx xxxxx definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, xx xx vhodný (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx, fyzikální xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxx referenční xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx postupu,
- xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx XXX) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (zkouška x xxxxxxx xxxxxx xxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, pozitivní a xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx standardní referenční xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x duplicitních xxxx opakovaných experimentech x xxxxxxxxx hodnotách, xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx,
- popis jakýchkoli xxxxxx pozorovaných xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) ECVAM (1998), ECVAM Xxxx &xxx; Xxxxx, XXXX 26, 275-280.
(2) Fentem, X. X., Xxxxxx, X. E. X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X. A., Curren, X. D., Earl, X. X., Esdaile, X. X., Xxxxxxxxxx, X-X., Liebsch, M. (1998), Xxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xx vitro xxxxx xxx skin xxxxxxxxxxx. 2. Xxxxxxx xxx evaluation xx xxx Xxxxxxxxxx Team, Xxxxxxxxxx xx vitro 12, 483-524.
(3) Xxxxxxx, X. D., Brantom, X. G., Fentem, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, A. X., Xxxxx, X. X. (1998), The XXXXX xxxxxxxxxxxxx validation xxxxx on xx xxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 1. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx the test xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx in xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. J. X., Xxxxxxxxx, X. X., Rhodes, X. (1986), An xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx — modifications xxx xxxxxxxxxx, Xxxx Xxxx. Xxxxxxx. 24, 507-512.
(5) Botham, X. X., Hall, T. X., Xxxxxxx, X., XxXxxx, X. X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, D. X., Xxxxxxx, X. (1992), The xxxx xxxxxxxxxxx test xx xxxxx: results xx xx interlaboratory xxxxx, Xxxxxxxxxx in xxxxx 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. P., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxx, X. X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, M. (1998), Xx evaluation xx the xxxxxxxx XXXX xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxxx, X., Barratt, X. X., Curren, X. D., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. R., Xxxxxx, X. X., Hildebrand, X., Xxxxx, X. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X. 1995), A xxxxxxxxxxxxx study on xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx testing. Xxx xxxxxx and xxxxxxxxxxxxxxx xx ECVAM xxxxxxxx 6, XXXX 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Obrázek 2"
&xxxx;
PŘÍLOHA II
"B.41 XXXXXXXXXXXX — ZKOUŠKA FOTOTOXICITY 3X3 NRU XX XXXXX
1. XXXXXX
1.1 Úvod
Fototoxicita xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxx odezva vyvolaná xx první expozici xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx xxxxx slouží x identifikaci xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky, xx. existence xxxx xxxxxxxxxxx možného xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xx zkoušené xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx UV záření xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx zkoušky xx xxxxx x hlediska xxxxxxxxxxx xx stanovení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, lze xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx fototoxické xx xxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx x xx nanesení na xxxx, x rovněž xxxxxxxxxx, které xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX/XXXXXX x xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) s cílem xxxxxxxx xxxxxxx alternativu xx xxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx zkouškám xx vivo. V xxxx 1996 xxxxxxxxxx xxxxxxxx skupina OECD xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4).
Xxxxxxxx xx zkoušek xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx x akutními xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx účinky xx xxxx x xxxxxx a x xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx pro xxxxxxxxx těchto xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Zkouška xxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické látky x xxxxxx, např. xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx látek, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, bude xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxxxxxxx reagovat. Xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx stupně xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx uvedena x xxxxxxx.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxx dopadajícího xx xxxxxx, měřená xx W/m2 xxxx xX/xx2.
Xxxxx xxxxxxxxxx záření: xxxxxxxx (xxxxxxxxx × xxx) ultrafialového (XX) xxxx xxxxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx xx povrch, xxxxxxxxx v xxxxxxx (X × x) xx plochu povrchu, xxxx. X/x2 xxxx X/xx2.
Xxxxxx pásma UV xxxxxx: xxxxxxxx doporučená xxxxxx XXX (Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xx l'Eclairage): XXX (315400 xx), XXX (280315 xx) x XXX (100280 xx). Používají se xxxxxx jiná xxxxxxxx: xxxx xxxxxxx xxxx XXX x XXX xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 320 xx x xxxxx XXX xxxx xxx rozděleno xx XX-X1 x XX-X2 s hranicí xxxxx 340 nm.
Životaschopnost xxxxx: xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx neutrální červeně xx buněčných xxxxxxxx) x xxxxx x xxxxxxxxxx na měřeném xxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušky xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x/xxxx životaschopností xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx x poměru x xxxxxxxxxx kontrolám (xxxxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx zkoušky (x UV, nebo xxx XX), xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx model: xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx výsledků xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxx převod xxxxxxxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX in xxxxx xx xxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX a veličinu XXX.
XXX (xxxxx-xxxxxxxxxx factor — fotoiritační xxxxxx): xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx účinných xxxxxxxxxxxxx koncentrací (EC50) xxxxxxxx xxxxx, a xx při xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/XXX světlem (+ XX) x xxx xxxx (-UV).
MPE (xxxx xxxxx xxxxxx — střední světelný xxxxxx): xxxx veličina xxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxx celého xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx účinku xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx necytotoxickém ozáření XXX/xxx xxxxxxx (+ XX) x xxx xxxx (-XX).
Xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx světlu nebo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx: xxxxx úroveň pojmu "xxxxxxxxxxxx", který xx xxxxxxx x popisu xxxxx těch fototoxických xxxxxx, které xx xxxxxxxxx na xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx nebo xxxxxx). Tyto xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx vždy x xxxxxxxxxxxxxx buněčnému xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx).
Xxxxxxxxxxx: získaná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, ke xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x světla x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx dobu jeden xxxx xxx týdny xxxx xxx, xxx xxx reakci xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: genotoxická odezva xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx expozici xxxxx xxxxxxxxxxxxx dávce XX/XXX xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx látce.
Fotokarcinogenita: xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovanou xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx, kdy xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx látkou.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxx by xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx každé xxxxxxx, je xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xxxxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx použitých xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx srovnáních předložené xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Xxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxx byly xxxxxxxxxxx x mnoha xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (5, 6, 7, 8). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx světelnou xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx prvního xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxx-Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx světelných xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx zkoušení xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx mělo být xxxxxxxxx UV/VIS absorpční xxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx (např. xxxxx Xxxxxxxx XXXX 101). Xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx než 10 x.xxx-1.xx-1, xxxxxxxx xxxxx xxxx fotoreaktivní xxxxxxxxx x nemusí xxx xxxxxxxx zkouškou xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx nebo xxxxxxxxx jinou biologickou xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx).
1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx čtyři mechanismy, xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx) chromoforem xxxx x fototoxické xxxxxx (7). Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx je xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx chemické xxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX/XXX světla a xxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx je x xxxx xxxxxxx vyjádřena xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (9) 24 xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxx.
Xxxxx Xxxx/x 3X3 xx 24 x xxxxxxxxx, aby xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx 96xxxxxxx destičky xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx se xxxx 1 h xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx koncentracemi xxxxxxxxxx látek. Xxxx xx xxxxx ze xxxx xxxxxxxx exponována xxxxxxxxxxxxxx dávkou XXX/XXX xxxxxx 5 X/xx2 XXX (+ XX xxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx udržuje x temnu (-XX xxxxxxxxxx). U obou xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxx médium xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxx 24 x inkubace xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 3xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (NRU). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxx z xxxx xxxxxxxxxx koncentrací. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx (+ XX) x xxx ozáření (-UV), xxxxxxx xxx xxxxxxx XX50, xx. při xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 % xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx srovnání x xxxxxxxxxxxxxx kontrolami.
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xx XXX, xxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx buněk xx UVA xx xxxx být pravidelně xxxxxxxxxxxx. Buňky se xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx, příští xxx se ozáří xxxxxx XXX xxxxxx 1 xx 9 X/xx2 x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx NRU. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx-xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx 5 X/xx2 xxxxx než 80 % životaschopnosti xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxx vždy xx xxxxxx pasážích xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kontroly xx XXX xxx xxxxxxxxxx zkoušce: xxxxxxx xxxxxxx kritéria jakosti, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx x XXXX (Xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) xxxx 1 % xxxxxxxxx (XxXX)) xxxx xxx xxxx vykazují xxx + XXX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx alespoň 80 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x temnu (-XXX).
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (X540 XXX) xxxxxx x xxxxxxxx XX negativních xxxxxxx xxxxxxx, xxx 1 × 104 xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx zachovalo xxx xxxxx během xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx (doubling xxxx). Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx přijatelnosti, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X540 XXX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx ≥ 0,2.
Pozitivní xxxxxxxx: xxx xxxxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx vitro xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxx známá fototoxická xxxxxxxx látka. Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX xxx použit xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx chlorpromazin (XXX), a je xxxx xxxxxxxxx. Xxx XXX zkoušený xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx xxxx definována xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zkoušky: xxx CPZ xxxxxxx (+ UVA): EC50 = 0,1 až 0,2 μx/xx, pro XXX neozářený (-UVA): XX50 = 7,0 xx 90,0 μx/xx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xx. posun xxxxxxx XX50, xx měl xxx xxxxxxx 6.
Namísto XXX mohou xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx jiné xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxxxx typu xxxx xxxxxxxxxxxx hodnocené zkoušené xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx být na xxxxxxx dosavadních xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx přiměřeným xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XX50 x PIF xxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx metody
1.7.1 Xxxxxxxx
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx — Xxxx/x 3X3, xxxx 31 — xxx x banky XXXX, xxxx x xxxxx XXXXX x xx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxx nebo xxxxxxx xxxxx mohou xxx při xxxxxxx xxxxxxxxx postupu xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, že xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, ale musí xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx kontrolovány, xxx nejsou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, x xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx tehdy, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xx UV vzrůstá x xxxxxx xxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxx xxxxx Balb/c 3X3 x xxxxxx x nejnižším xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, nejlépe x xxxxx než xxx pasáže. Je xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 xx XXX xxxxxxxxxx kontrolována xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx popsaným x xxxx xxxxxxxx.
1.7.1.2 Xxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxx rutinní buněčné xxxxxxxxxx x během xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx být použita xxxxxx xxxxxxxxxx média x xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxx Xxxx/x 3X3 xx jedná x XXXX (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Eagleova media) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, 4xX xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x streptomycinem x xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxx xxx 37 °X/7, 5 % XX2. Xxxxxxx xxxxxxxx xx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx dosavadního xxxxxxx xxx xxxxxxx buňky xxxx buněčné linie.
1.7.1.3 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xx nasadí do xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx jednou xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 NRU xx xxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx média x takové xxxxxxx, xxx nedosáhly xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xx. do okamžiku, xxx xx xx 48 x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxx buňky Xxxx/x 3X3 kultivované v 96xxxxxxxxx destičkách je xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 × 104 buněk xx jamku.
Pro xxxxxx xxxxxxxxx látku xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx do dvou xxxxxxxxxx 96xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx jsou xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx zkoušky xx xxxxxxxx podmínek xxxxx xxxx, xxx xx xxxxx z xxxxxxxx xxxxxxx (+XXX/XXX) a xxxxx je xxxxxxxxx x xxxxx (-XXX/XXX).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx požadavkem xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx genotoxického x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx x xxxxxxxxxxxxxxx dosud xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx toxinu xx xxxx nebo xx vitro je xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx tedy xxx xx xxxxxxxx xxx xx vědecky xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx provedena xx xxxxxxxx aktivace xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxx být čerstvě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx x stálosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx látky provádět xxx xxxxxxxx světlem.
Zkoušené xxxxxxxx xxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xx fyziologickém xxxxxxx, xxxx. x Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXXX) xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x pH xxxxxxxxxx absorbující xxxxxx, xxx xxxxxxxx při xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky x omezenou xxxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx xxx rozpuštěny xx vhodném rozpouštědle xx 100xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx xx xxxx xxx zředěny x xxxxxx 1:100 xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 % xxx. xx xxxxx xxxxxxxxx, xx. v xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx rozpouštědly xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) a xxxxxxx (XxXX). Xxxxx xxx použita jiná xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (např. xxxxxx), xxx xxxx by xxx xxxxxxx posouzeny xxxxxx specifické xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx fototoxických xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx.
Xx-xx třeba, xxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx použito xxxxxxx x/xxxx ultrazvuk x/xxxx zahřátí xx 37 °X.
1.7.1.6 Ozáření XX xxxxxxx/xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx: xxxxx xxxxxxxx zdroje xxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx je kritickým xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx v pásmu XXX a ve xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx spojováno x xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx xxxxxx v xxxxx XXX je xxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx jeho xxxxxxxxxxxx xxxxxxx mezi 313 nm x 280 xx 1000xxxx (11). Xxxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxx světelného xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx požadavek, xxx zdroj xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx délkách, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látka xxxxxxxxx, a xxx xxxxx xxxxxxxxxx záření (xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx látek. Použité xxxxxx délky x xxxxx, včetně emise xxxxx (xxxxxxxxxxxx oblast), xx dále xxxxxx xxxxxxxx poškozovat xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx simulátory se xxxxxxxx xx optimální xxxxx xxxxxx. X xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx x xxxx xx xx xxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxx a xx xxxxxxxx, avšak její xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx není xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx solární xxxxxxxxxx vyzařují xxxxxxxx xxxxxxxx UVB xxxxxx, xxxx by xxx xxxxxx xxxxxxxxxx, aby xxxx vysoce cytotoxické xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxx.
Xxx zkoušku xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU in xxxxx by mělo xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx UVB xxxxxx (XXX:XXX ˜ 20:1). Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx filtrovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX in xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (3).
Xxxxxxxxxx: intenzita xxxxxx (intenzita xxxxxxx) xx musí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kontrolovat za xxxxxxx xxxxxxxx širokopásmového XX-xxxxx. XX-xxxx musí xxx pro daný xxxxx kalibrován. Xxxxxxxxx XX-xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx použít xxxxx referenční xxxxxxx xxxxxxxx kalibrovaný XX-xxxx xxxxxxxx typu. X xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x ke kontrole xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx 5 J/cm2 xxxx xxx xxxxxxxxx studii xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 x xxxxxxxxxx xxxxx k excitaci x xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxx 5 J/cm2 xx dobu 50 xxx. musí být xxxxxxxxx ozáření xxxxxxxxx xx 1,666 XX/xx2. Xxxxxxxx je použita xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxx světelný xxxxx, xxxx xxx xxxxx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx standardních fototoxinů. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx vypočte xxxxx xxxxxxxx:
x(xxx) = dávka xxxxxxxxxx xxxxxx (X/xx2) 100 / xxxxxxxxx xxxxxxx (mW/cm2) 60 (1 J =.X xxx)
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx by xxxxxx xxxxxxxxx 100 μg/ml, xxxxx všechny xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx byly xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx; xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx pH xxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxx být vyhovující (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx zkoušených xx xxxxxxx (+ UVA) x xxx xxxxxx (-XXX) xx xxxx xxx náležitě xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx experimentech xxx zjištění xxxxxxx. Xxxxxx koncentrační xxxx x intervaly xxxx xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na koncentraci xxxxxxxxxx podloženy xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxx xxxxxxx geometrická xxxx xxxxxxxxxxx (s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7.3 Xxxxxxxx xxxxxx [1]
1.7.3.1 Xxxxx xxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx x kultivačním xxxxx x 100 μx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxxxx jamek 96xxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx xxxxx). Xx zbývajících buněk xx xxxxxxx po 100 μx buněčné xxxxxxxx x xxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 buněk xx xxxxx). Pro každou xxxxxxxxx xxxxxxxxx látku xx připraví dvě xxxxxxxx: xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-XXX) x xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (+XXX).
Xxxxx xx inkubují 24 x (7,5 % XX2, 37 °X), xxxxx nedosáhnou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxx umožní xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx x exponenciální xxxx.
1.7.3.2 Xxxxx xxx
Xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx dekantuje x xxxxx xxxxx xx promyje dvakrát 150 μx XXXX/XXX. Xxxxx xx 100 μx XXXX/XXX obsahujících xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxx rozpouštědlo (xxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxxx xx 8 různých koncentrací xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xx dobu 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °C).
K xxxxxxxxx části xxxxxxx x ozářením XXX xx buňky při xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 50 min. xxxxxxx přes víčko 96xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx o xxxxxxxxx 1,7 MW/cm2 (5 X/xx2. Aby xxxxxxx xx kondenzaci xxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx ozáření UVA xx ponechají 50 xxx. (doba xxxxxxxx XXX) x temnu xxx pokojové teplotě.
Zkušební xxxxxx xx odstraní x xxxxx xxxxx xx promyje dvakrát 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx xxx (18-22 h) (7,5 % XX2, 37 °X).
1.7.3.3 Xxxxx xxx
Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xx xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx buněk způsobené xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx chyby, xxxxx xxxxxxx xx xxx xxxxxxxxx cytotoxicity xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx červeně.
Buňky xx xxxxxxx 150 μx xxxxxxxxxxxx XXXX/XXX x xxxxxxxxx roztok xx xxxxxxx odstraní xxxxxxxx. Přidá xx 100 μx xxxxx XX a xxxxxxxx xx 3 x xxx 37 °X xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x 7,5 % XX2.
Xx xxxxxxxx xx xxxxxx XX xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx poloze).
Přidá se xxxxxx 150 μl xxxxxxx připraveného xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx NR.
Destička se xxxxxx 10 min. xxxxx na xxxxxxxx, xxxxx xx NR x buněk xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx extraktu NR xxx 540 xx, xxxxxxx se pro xxxxxxxx použije slepý xxxxx. Údaje xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX) x xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
2. ÚDAJE
2.1 Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx UVA/VIS nebo xxx něho. Xx-xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx a interval xxxx nimi xxxxxxxx xxx, aby xxxx xxxxx xxxxxxxx experimentálními xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, že xx xxxxxxxx chemická xxxxx xxxxxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx xxxxxx pro xxxxxxxxxx x xxxxx (-XXX) xxxxxxxxxxx, xxx mohla xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxxxxx (+XXX), xxxx být xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx koncentrací, které xxxx xxx v xxxx xxxxxxx experimentu xxxxxxxx, řádově lišily, xx-xx xxx splněn xxxxxxxxx uspokojivé xxxxxxx xxxxx. Xxxx-xx v xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (-XXX x +UVA) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx dávkami xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx experimentem xx xxxxxxxxxx. Negativní výsledky xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látka xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx koncentrací. X xxxxxxxx případech xxxxx xxxxx hlavní experiment xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx rozmezí xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx s výsledky xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx modelu xx xxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xx-xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxx dosažení xxxxxxx xxxxxxxx změnit xxxxxxxxxxxxxx podmínky. Klíčovou xxxxxxxxx xxxx zkoušky xx příprava xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx (xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx ultrazvuku) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx může xxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxx inkubační xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx u xxxxxxxxxx xxxxx nestálých xx xxxx.
2.2 Zpracování výsledků
Je-li xx xxxxx, xxxxxxx xx koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx 50 % inhibici xxxxxxxxx xxxxxx neutrální xxxxxxx (XX) (XX50). Xxx xxx učinit xxxxxxx jakékoli vhodné xxxxxx nelineární xxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx regresí) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx metod xxxxxx proložení (14). Xxxx xxxxxxxx hodnoty XX50 pro xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx vhodným způsobem xxxxxxxxxxxxx kvalita xxxxxxxxx. Xxx výpočet XX50 xxx xxxxxxxxx použít xxxxxx grafického xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx použít xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxx x: xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx x: xxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx téměř xxxxxxxx.
2.3 Hodnocení xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxx)
2.3.1 Předpovědní xxxxx — xxxxx 1: fotoiritační faktor (XXX)
Xxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxxx xxx xxx ozáření (+XXX), xxx xxx xxxxxxx (-XXX) xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx faktor (XXX) xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
(x) XXX = (XX50 (-UV)) / (XX50 (+XX))
Xxxxxxx XXX &xx; 5 předpovídá xxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx XXX ≥ 5 předpovídá xxxxxxxxx fototoxického potenciálu.
Jestliže xx xxxxxxxx látka xxxxxxxxxxx xxxxx při +XXX x není xxxxxxxxxxx xxx zkoušce -XXX, xxxxx hodnotu XXX xxxxxxxxx, xxxxxxx xxx x xxxxxxxx, xxxxx svědčí x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxxx xxxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxxxxx "&xx; XXX", xxxxxxxx xx xxxxxxx -XX zkouška xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxx), x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx "&xx; XXX";
(x) &xx; XXX = (Xxxx (-XX)) / (XX50 (+UV))
Lze xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx "&xx; PIF", předpovídá xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu xxxx xxxxxxx &xx; 1.
Xxxxxxxx nelze x xxxxxxxx xxxx, že xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx žádnou xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx ani xxxxxxx XX50 (-XX) xxx hodnotu XX50 (+ XX), xxxxxx xx o neexistenci xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxxx případech xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx formální xxxxxxx "XXX = *1";
(X) &xx; XXX = *1 = (Xxxx (-XX)) / (Xxxx (+XX))
Xxx xx xxxxxx xxxxx hodnotu "XXX = *1", je xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
X xxxxxxxxx b) x x) by xxxx xxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx model xxxxx 2: střední světelný xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxx xxxxxx EU/COLIPA (15) x xxx xxxxxxxx naslepo x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vitro x xxxxxxxxxx látek, xxxxx xx xxxxxxx xxxx XX xxxxxx (13). Xxxxx model nemá xxxxxxx xxxx model XXX x xxxxxxxxx, xxx xxxxx získat xxxxxxx XX50. Tento xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (mean xxxxx effect) (MPE), xxxxxxxx, která xx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx na koncentraci. Xxx xxxxxxx modelu xxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx počítačový xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxx.
2.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx vitro (XXX ≥ 5 xxxx XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, xx látka xx fototoxický xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx výsledku xxxxxxxx xxx koncentracích xxx 10 μx/xx, xx xxxx pravděpodobné, xx látka xxxx xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xx vivo. Xx-xx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, mohou xxx pro posouzení xxxxxxxxxxxxx xxxx intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx další xxxxx. Ty se xxxxx xxxxx údajů x xxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxx zkoušení xxxxxxxx látky alternativní xxxxxxxxxxx zkouškou, xxxx. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx (PIF &xx; 5 xxxx XXX < 0,1) xxxxxxx, že xxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxx za použitých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, kdy bylo xxxxx xxxxxxx chemickou xxxxx xx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxxxxxx negativní xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx nemá xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x fototoxicitu xx xxxx lze xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx. X případech, xxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx totožné xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (EC50 +XX x XX50 -XX), xx xxxxxxxxxxxx xxxxx stejná. Xxxx-xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (+XX x -XX) a xxxx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vodě xx xxxxxxx menší xxx 100 μx/xx, není xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx vhodná x xxxx by xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx in vitro xxxx xxxxxxxx xx xxxx).
3. ZPRÁVY
Protokol x xxxxxxx
Xxxxxxxx o zkoušce xxxx obsahovat xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx chemická xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXX, je-li xxxxx,
- xxxxxxxxx vlastnosti x čistota,
- fyzikálně-chemické xxxxxxxxxx důležité pro xxxxxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxx x fotostabilita, xxxx-xx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx v xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx (EBSS xxxx XXX).
Xxxxx:
- typ x xxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxx xxxxxxx xxxxxx, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xx XXX stanovená radiometrem xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — inkubace xxxx xxxxxxxx a xx xx:
- xxx x xxxxxxx kultivačního xxxxx,
- xxxxxxxxx podmínky (xxxxxxxxxxx XX2, teplota, xxxxxxx),
- délka inkubace (xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x po xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx b) — xxxxxxxx chemické látky:
- xxxxxxxxxx výběru xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx XX/XXX, xxx xxx xxx,
- v xxxxxxx, xx zkoušená xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx rozpustnost x xxxx cytotoxická, zdůvodnění xxxxxxxx xxxxxxxx koncentrace,
- xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx média (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx c) — xxxxxxx:
- zdůvodnění xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxx charakteristiky xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxxxxxxx propustnosti/absorpce xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxx XXX v této xxxxxxxxxxx, vyjádřená x xX/xx2,
- xxxxx expozice XX/XXX xxxxxx,
- dávka XXX xxxxxx (xxxxxxxxx × xxx), xxxxxxxxx x X/xx2,
- xxxxxxx xxxxxxxxx kultur během xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx udržovaných x temnu.
Zkušební xxxxxxxx x) — xxxxxxx XXX:
- složení média XX,
- xxxx inkubace XX,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, teplota, xxxxxxx),
- xxxxxxxx xxxxxxxx XX (extrakční činidlo, xxxxx xxxxxxxx),
- xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx XX,
- druhá (xxxxxxxxxx) xxxxxx délka, xx-xx xxxxxxx,
- xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro spektrometrii, xx-xx xxxxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx každé xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx versus relativní xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) získané xxx xxxxxxxxxxx experimentech +XXX a -XXX,
- xxxxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx: xx-xx xx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx XX50 (+XXX) x XX50 (-XXX),
- xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx XXX/XXX x bez xxxx, x xx xxx xxxxxxxx fotoiritačního faktoru (xxxxx-xxxxxxxxxxx xxxxxx ) (XXX), xxxx výpočtem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx photo xxxxxx) (XXX),
- klasifikace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- kritéria přijatelnosti xxxxxxx a) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxx životaschopnost (xxxxxxxxxx xxxxxxxx XX) xxxxxxxxx x neozářených xxxxx,
- xxxxxxxxx údaje pro xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx a směrodatná xxxxxxxx,
- xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx x) — xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:
- xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-UVA) x XXX-xxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-XXX) x PIF, xxxxxxx xxxxxxx x směrodatná xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) Xxxxxxxxx, H., Balls, X., Xöxxxx, X., Xxxxxüxxxx, H. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X., X'Xxxxxxxxxxx, H., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Maurer, X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Pape, X., Xxxxxxxxxxx, U., Xxxxxxxx, X., De Xxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. (1994), XXX/XXXXXX xxxxxxx xx xx vitro xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x Xxxx/x 3T3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx in vitro 8, 793-796.
(2) Xxxx (1998), Xxxxxxxxx xx xxx scientific xxxxxxxx xx xxx 3T3 XXX PT xxxx (xx xx xxxxx xxxx for phototoxicity), Xxxxxxxx Commission, Joint Xxxxxxxx Centre: XXXXX xxx XXXX/X/2, 3 Xxxxxxxx 1997, ATLA 26, 7-8.
(3) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, J., Xxxx, X. X. X., Xxxxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, O., Xxxxxüxxxx, X. G., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, P., Xxxxxxxxx, F., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Maurer, X., Xxxxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. M., Xxxxx, X., Sladowski, D., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. (1998), XX/XXXXXX "Xx vitro xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx study, results xx xxxxx XX (xxxxx xxxxx), xxxx 1: the 3X3 XXX phototoxicity xxxx, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 12, 305-327.
(4) OECD Xxxx Guidelines Xxxxxxxxx, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Xxxxx Xxxxxx xx xxx XXXX Xxxxxxxx on Xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Criteria xx Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxx, XXXX Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, X. X. (1993), X xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx potential, Xxxxxxxxxx in Xxxxx 7, 95-102.
(6) Santamaria, X., Xxxxx, X. (1972), Xxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxx xxxxxxxx in xxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx chemistry Xxx. 3 Xxxx 1, Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx Xx, Xxxxxxxxx, XI–XXXV.
(7) Xxxxxxxxx, X., Lovell, X. X., Xöxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxx, X. J. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxx, D. (1994), Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx of XXXXX xxxxxxxx 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, X. D. (1989), Xxxxxxxxxxxxxxxxxx. X: Xxx science of xxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxx, xx.), Plenum Xxxxx, Xxx Xxxx, 2. xxx., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. A. (1985), Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx neutral xxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx A. (1996). X: Animal xxxxxx xxx phototoxicity testing, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (F. X. Xxxxxxxx, H. X. Xxxxxxx xxx.), Xxxxxx &xxx; Francis, Xxxxxxxxxx XX, 5. xxx., 515-530.
(11) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx M. (1987), Xxxxxx xxxxxxx xxx human xxxx xxxxx: estimates of xxx relative cytotoxicity xx the xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx regions xx xxxxxxxx on xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, Xxxxxx Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Standard Xxxxxxxxx Xxxxxxxxx: Xxxx/x 3X3 XXX Xxxxxxxxxxxxx Test, xxxxxxxx 23. xxxxxxxx 1997 M. Xxxxxxxxx, xxxxxxxxx 6. xxxxxx 1998 týmem Xxxxxxxxxx Xxxx of the XX/XXXXXX project "In Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Xxxxxxxxx, X., Balls, X., Xxxxxx, X., Pape, X. X. X., Xx Xxxxx, O., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxxxxx (1998), X Xxxxx on xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx XX Xxxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxx XXX of the XX Xxxxxxxxx 76/768/EEC xx the 3X3 XXX Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, XXXX 26, 679-708.
(14) Xxxxxüxxxx, X. G., Xxxxxxxx, X. (1995), Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx external xxxxxxx, Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx, 3, 127-138.
(15) Xxxxxüxxxx, X. X. (1997), X xxxxxxx measure of xx vitro phototoxicity xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx-xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx use xxx predicting the xx vivo phototoxicity xx xxxxxxxxx, XXXX 25, 445-462."
"Xxxxxxx
&xxxx;
[1] Xxxxx xxxxxxxxxxx lze xxxxxx x xxxxxxxxxx (12).