Směrnice Xxxxxx 2000/33/XX
xx xxx 25. dubna 2000,
xxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX x xxxxxxxxxx právních a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx klasifikace, xxxxxx x xxxxxxxxxx nebezpečných xxxxx [1]
(Xxxx x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Smlouvu x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX xx xxx 27. června 1967 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x správních xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [2], xxxxxxxxx pozměněnou xxxxxxxx Xxxxxxxxxx parlamentu x Rady 1999/33/XX [3], a zejména xx článek 28 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxxx xxxxxxx:
(1) V xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX se xxxxxxx xxxxxx pro stanovení xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx vlastností, toxicity x ekotoxicity xxxxx x xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx tuto xxxxxxx xxxxxxxxxxx pokroku.
(2) Xxxxx xx. 7 xxxx. 2 směrnice Xxxx 86/609/XXX xx xxx 24. xxxxxxxxx 1986 o xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx států xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx používaných pro xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxx [4] xxxxx být xxxxx, xxx xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx, je-li xxxxxxx x prakticky xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx do přílohy X xxxxxxxx 67/548/XXX xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx zvířata, x xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxx zkoušení xxxxxxxxxx xxxxx podle xx. 3 xxxx. 1 směrnice 67/548/XXX.
(4) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxx xxx přizpůsobení xxxxxxxxxxx xxxxxxx směrnic x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx látek a xxxxxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxx xxxxxx X x II xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxx X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/EHS.
Xxxxxx 2
1. Xxxxxxx xxxxx uvedou x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx dosažení xxxxxxx x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 2001. Neprodleně x nich xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx přijaté xxxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx úředním vyhlášení. Xxxxxx xxxxxx si xxxxxxx členské xxxxx.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx přijmou x xxxxxxx působnosti xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx dnem xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx směrnice xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu xxx 25. dubna 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxöx
xxxxxx Xxxxxx
[1] Xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx po xxxxxxx xxxxx.
[2] Xx. xxxx. 196, 16.8.1967, s. 1.
[3] Xx. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Xx. věst. X 358, 18.12.1986, x. 1.
XXXXXXX X
"X.40 XXXXXXX XXXXXX XX XXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxx xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xx principu xxxxxxxxx transkutánního xxxxxxxxxxxx xxxxxx kůže xxxxxxx (XXX) a xxxxxxx x využitím xxxxxx xxxxxx xxxx byly Xxxxxxxxx střediskem pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (XXXXX, Společné výzkumné xxxxxxxxx Xxxxxxxx Komise) (1, 2, 3) xxxxxxxxx jako xxxxxxx xxxxxx. Validační studie XXXXX prokázala, xx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxx leptající a xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx x zkoušce xxxxxxxx xx modelu xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx stupně xxxxxxxx xxxxxx (xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, X 35 x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, X 34) (2). Xxxxx x postup xxxx zkoušek xx xxxxxx; xxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxx xxxx Xxxxxx xxxx, část X.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kůže: xxxxxxxx poškození kůže xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx viz xxxx 1.5.3.4 x 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx metody — xxxxxxx XXX xx xxxx potkana
Zkoušený xxxxxxxx je až xx 24 x xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx mladých xxxxxxx. Materiály s xxxxxxxxx účinky xxxx xxxxxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxx xxxxxx normální xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxx), xxxxx je xxxxxx jako xxxxxxx xxxxxxxxx XXX pod xxxxxxxx xxxxxx (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx x nedráždivé xxxxx xxxxxxxxx TER xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x neutrální xxxxxxxxx xxxxx (definice xxx xxxxxxxxxx (6)) xxx xxxxxxx stupeň xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxxx xxxxx pro tyto xxxxx xxxxxxxxxx látek (2, 7).
1.5 Popis xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
1.5.1 Zvířata
Terčíky xxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx z mladých (20 — 23 xxxxxxx) xxxxxxx (Xxxxxx xxxx srovnatelný kmen). Xxxxxxx x xxxxx xxxx se opatrně xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xx poté xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x koncentracích xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxx po xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx antibiotik x použijí xx xx 3 xxx (x xxxxxxxx kůže xxxxx xxx použita xxxxxxx xxxxxx xxx 31 xxx).
1.5.2 Příprava xxxxxxx kůže
Zvířata xx xxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx opatrně xxxxxxxx xxxxxxx kůže x xxxxxxxxxx xxx xx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx xxxx přeloží xxxx xxxxx xxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx xxx, aby xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx s xxxxxxxxx. Xxxx konec xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx O-kroužek, aby xxxx xxxx upevněna, x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx x O-kroužku xxxx xxxxxxx na xxxxxxx 1. Pryžový X-xxxxxxx xx teflonové xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx pokryje xxxxxxx xxxxxxxx. Trubička držená xxxxxx pružinové xxxxxx xx umístí xx xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 mM) (xxxxxxx 2).
1.5.3 Xxxxxxxx postup
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (150 μx) se aplikuje xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx. 2). Xxx zkoušení xxxxxxx xxxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx tak, xxx xxxx pokryta xxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx na xxxxxx xxxxx látky xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (150 μx) a xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx x xxxx xx mělo xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx. U xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx zahřátím xx xx 30 °X, xxx xx xxxxxxxx xxxxx roztavila, xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx nebo xx xxxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx terčíky xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx 24 x (xxx xxxx xxx 1.5.3.4). Xxxxxxxx látka xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx vody x teplotě xxxxxxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek, které x xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx vody xxxxx xx 30 °C.
1.5.3.2 Xxxxxx XXX
XXX xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx impedančním xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx (např. XXX 401 xxxx 6401 xxxx ekvivalentní). Xxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx dostatečného xxxxxx 70 % xxxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxxxxxx zakryta. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxx přidáním 3 xx roztoku xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX). Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxx xxxxxx terčíku xxxx xx účelem xxxxxx xxxxxx x xΩ/xxxxxx xxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxxxxx x délky xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxx vnitřní (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxx opřena x horní xxxxx xxxxxxxxx trubičky, xxx xxxx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx ponořené x xxxxxxx síranu xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx receptorové komory xxx, xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx spodkem xxxxxxxxx xxxxxx a xxxx teflonové xxxxxxxx xx udržuje xxxxxxxxxx (xxxxxxx 1), xxxxx xxxx xxxxxxxxxx má xxxx na xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
Xx xxxxx xx xxxxxxxx, xx xx-xx naměřená xxxxxxx xxxxx než 20 xΩ, xxxx to xxx způsobeno xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx straně xxxxxxx xxxx. X odstranění xxxx vrstvy xx xxx pokusit xxxx. xxx, že xx xxxxxxxxx trubička xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx x 10 x xx protřepává. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx x měření xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx, pokud xxxxxxx pozitivní a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx přijatelného xxxxxxx xxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxx x přístroje xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx rozpětí xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx odporu (kΩ) |
|
Pozitivní |
10M xxxxxxxx chlorovodíková (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
10–25 |
1.5.3.3 Xxxxxxxx xxxxxx xxx povrchově xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxx-xx xxxxxxx XXX pro xxxxxxxxx aktivní xxxxx xxxx organické xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ, xxx xxxxxxx na tkáni xxxxxxxxx průniku barviva. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxx výsledky xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X
Xx xxxxxxxxx aplikaci xxxxxxxx xxxxx xx xx epidermální xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx 2 x 150 μx 10 % xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X x destilované xxxx. Xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxxx 10 x xxxxxxx proudem xxxx o xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx odstranilo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Všechny xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx sejmou z xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxxxx (xxxx. 20 xx xxxxxxxx lahvičky xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx (8 xx). Lahvičky xx lehce 5 xxx. xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx další xxxxx xxxxxxx. Tato xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx, a xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx 30 % roztoku (x/X) xxxxxxx-xxxxxxx-xxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx vodě x inkubují xx xxxx xxx při 60 °X. Xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx x zlikvidují x xxxxx roztok xx xxxxxxxx 8 min. xxx 21 °C (xxxxxxxxx odstředivá xxxx ˜ 175). 1 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx 4 xx 30 % (x/X) roztoku XXX v xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx (X) xx xxxx xxx xxxxxxxxx 565 xx.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx obsahu xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx sulforhodaminu B xx xxxxxx xxxx xx vypočte x xxxxxx A (molární xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X při 565 xx = 8,7 × 104; xxxxxxxxxx xxxxxxxx = 580). Xxxxx xxxxxxx sulforhodaminu X xx vypočte xxx každý xxxxxx xxxx x poté xx xxxxxxx jeho xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxxxx, xxxxx hodnoty xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx rozmezí xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx barviva:
|
Kontrola |
Látka |
Rozmezí xxxxxx xxxxxxx (μg/terčík xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
40-100 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xxx xxxxxx aplikovat xx xxxxxxx kůže na xxxxxx xxxx (např. 2 xxxxxx), aby xx xxxxxxxxxxxxxx ty xxxxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxxxx. Validační xxxxxx však xxxxxxx, xx xxxxxxxxx TER xxxxxxxxxxxx leptavé účinky x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek xxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx kůže po xxxx 2 xxxxx (2), xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx správnou xxxxxxxxxxxx látek x xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx xxx leptavých xxxxxx xxx 24hodinové xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx x rozměry xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx mít xxxx xx získané xxxxxxx XXX. Xxxx 5 Ω pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx z údajů xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x postupem, xxx xxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxx kalibrovat xxxxxxx x určit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx řady referenčních xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx použitých xx validační studii (3).
1.6 Xxxxxxxx zkušební xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx modelu xxxxxx xxxx
Xxxxxxxx materiál xx xxxxxxxxx xx po xxxx 4 xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx kůže sestávající x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x funkční rohovité xxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx životaschopnosti xxxxx (stanovený xxxx. xxxxxxxx xxxxxxx redukce XXX) pod xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx založena xx hypotéze, xx xxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx jsou xx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxx xxxx xxxxx) x xxxx xxxxxxxxxx cytotoxické, aby xxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx lidské xxxx
1.7.1 Xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxx, musí xxxx splňovat určitá xxxxxxxx. Model xxxx xxx xxxxxxx rohovitou xxxxxx x vrstvu xxxxxx xxxxx xxx xx. Xxxxxxxxx funkce xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx. Xx xxx xxxxxxxx demonstrací xxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxxx neproniknou rohovitou xxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxx xx definovaných xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx buněk x xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxx bylo možné xxxxx rozlišit xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxx XXX, tj. xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx A) xx expozici negativní xxxxxxxxx xxxxx musí xxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk po xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxx (xx srovnání x xxxxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx látku) xxxx xxx ve xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Nejdůležitější xxxxxx xx, aby xxxxx odpovídal mezinárodním xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx (2).
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxx
1.7.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
X xxxxxxxxx materiálů xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx povrch xxxx (xxxxxxxxx 25 μx/xx2). X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxx xxxxx, aby xxxxxxx kůži, x xxxxxxxx xxxxx by xxxx být xxxxxxxx, xxx byl xxxxxxxx xxxxx styk s xxxx; xxxxx xxxxx xx xxxx být xxxxx potřeby před xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx, že aplikační xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx látek (2). Xx xxxxxxxx expoziční xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztokem.
1.7.2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
X xxxxxx životaschopnosti buněk xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Nejčastěji se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxx xxx xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx xxxx se xxxxxx do xxxxxxx XXX x koncentraci 0,3 xx/xx xxx xxxxxxx 20-28 °C xx xxxx 3 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxx (rozpouštědlem) a xxxxxxxxxxx formazanu se xxxxxxx měřením absorbance X při vlnové xxxxx 545 xx 595 xx.
1.7.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx model xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx doby, postupu xxxxxxxxxxx atd. xxxxx xxx velký xxxx xx výsledky xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx se, xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx model byly xxxxxxxxxxx zkoušením xxxx xxxxxxxxxxxx standardů xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx látek xxxxxxxxx xx validační xxxxxx XXXXX (3). Xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx metoda x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxxxxx reprodukovatelnost xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Metoda xxxx splňovat xxxxxxx xxx definovaná kritéria xxx xxxxxxxx validitu (2) x výsledky xxxxxx xxxxxxxxx studie xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx vědeckém časopise x předcházející xxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Zkouška XXX xx xxxx potkana
Hodnoty xxxxxx (xΩ) pro xxxxxxxx materiál, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolu x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x duplicitních xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, o xxxxxxxxx xxxxxxxxx x x odvozené klasifikaci xx měly xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.
2.1.2 Zkouška x xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v procentech xxx zkoušený xxxxxxxx, xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x pro xxxxxxx xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx hodnotách x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx.
2.2 Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.2.1 Xxxxxxx XXX na xxxx xxxxxxx
Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx větší xxx 5 xΩ, xxxx xxxxx xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx TER xxxxx xxxx rovna 5 xΩ x xxxxx o povrchově xxxxxxx látku nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx látku, xx xxxxx xxxxxx.
X xxxxxxxxx xxxxxxxxx látek xxxx neutrálních xxxxxxxxxxx xxxxx, které xxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xxxx rovné 5 xΩ, xxx provést xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xx-xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x terčíku xxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 36 % XXx xxxxxxx xxxxxxxxx kontroly, xx xxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxx je xxxx xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v terčíku xxxx xxxxxxx souběžně xxx xxxxxxx 36 % XXx, je xxxxxxx xxxxxxx pozitivní, x látka tedy xxxx žíravá.
2.2.2 Xxxxxxx x modelem lidské xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxx xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx; xxxxxxx xxxxxxxxxx A dosažené xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx rozlišují xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxx xxxxxx (nebo xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx), xxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx před xxxxxxxx metody x xxxxxxxx xxxxxxxxx studie xxxx xxxxxxxx, xx xx xxxxxx (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx alespoň xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx látka:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx, fyzikální xxxxxxxxxx x případně xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxx referenční xxxxx, xxxxx byly xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx postupu,
- xxxxx x xxxxxxxxxx jakýchkoli xxxx.
Xxxxxxxx:
- hodnoty odporu (xxxxxxx XXX) nebo xxxxxxx životaschopnosti xxxxx x xxxxxxxxxx (zkouška x xxxxxxx xxxxxx xxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxx xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx hodnotách, xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx,
- xxxxx jakýchkoli xxxxxx xxxxxxxxxxxx účinků.
Rozbor xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) ECVAM (1998), XXXXX Xxxx &xxx; Views, XXXX 26, 275-280.
(2) Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X. X., Xxxxx, X., Botham, X. A., Xxxxxx, X. D., Xxxx, X. X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx, X-X., Xxxxxxx, M. (1998), The XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx study xx in xxxxx xxxxx xxx skin xxxxxxxxxxx. 2. Xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx by xxx Xxxxxxxxxx Team, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 12, 483-524.
(3) Xxxxxxx, X. D., Brantom, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X., Walker, X. X., Worth, A. X. (1998), Xxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxx xxxxx for xxxx xxxxxxxxxxx. 1. Xxxxxxxxx xxx distribution xx xxx test xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. J. X., Pemberton, M. X., Rhodes, X. (1986), Xx xx xxxxx xxxx corrosivity xxxx — xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Xxxx Xxxx. Xxxxxxx. 24, 507-512.
(5) Xxxxxx, X. X., Xxxx, X. X., Xxxxxxx, R., XxXxxx, J. C., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxx, E., Cheeseman, X., Esdaile, X. X., Gardner, X. (1992), The xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx: xxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxxxxx trial, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. P., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X., Botham, P. X., Curren, R. X., Earl, X. X., Esdaile, X. X., Xxxxxxx, X. (1998), Xx xxxxxxxxxx xx the xxxxxxxx XXXX xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. D., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. R., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx, X., Xxxxx, X. X., Liebsch, X., Xxxxxxxx, P., Osborne, X., Xxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X., Walker, X. X., Balls, X. 1995), A xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxx skin xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxx and xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX xxxxxxxx 6, XXXX 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Obrázek 2"
&xxxx;
PŘÍLOHA II
"B.41 XXXXXXXXXXXX — ZKOUŠKA XXXXXXXXXXXX 3X3 NRU IN XXXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a následné xxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx zkoušky xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro xxxxxx x identifikaci fototoxického xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx. xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx látky xx xxxxxxx x xxxxxxxx UV xxxxxx xxxx viditelnému xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx zkoušky xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx fototoxické xx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xx xxxx, x xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx nanesení na xxxxxxx jako xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx spojeného xxxxxxxx XX/XXXXXX x xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) x xxxxx xxxxxxxx platnou xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx používaným xxxxxxxx xx vivo. V xxxx 1996 xxxxxxxxxx xxxxxxxx skupina XXXX xxxxxxxx postupných zkoušek xx vitro xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4).
Xxxxxxxx xx zkoušek xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx x akutními xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx u xxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx účinků xxxx vynikající. Xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx jiných nepříznivých xxxxxx, které mohou xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx x xxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, které xxxxxxxx tyto xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zkouška xxxx xxxx xxxxxxxx x tomu, aby xxxxxxxx xxxxxxxxx stupně xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx postupného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx chemických xxxxx xx uvedena x xxxxxxx.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx ozáření: xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx povrch, xxxxxx xx X/x2 nebo xX/xx2.
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: xxxxxxxx (xxxxxxxxx × xxx) xxxxxxxxxxxxxx (XX) xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxx v xxxxxxx (X × s) xx xxxxxx povrchu, xxxx. X/x2 nebo X/xx2.
Xxxxxx pásma XX xxxxxx: označení doporučená xxxxxx CIE (Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xx l'Eclairage): XXX (315400 xx), XXX (280315 nm) x XXX (100280 xx). Xxxxxxxxx xx xxxxxx jiná označení: xxxx xxxxxxx xxxx XXX x UVA xx xxxxx používána xxxxxxx 320 nm x pásmo XXX xxxx xxx xxxxxxxxx xx XX-X1 x XX-X2 s hranicí xxxxx 340 xx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: parametr, xxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx buněčné populace (xxxx. xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx) x který v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx a na xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x/xxxx životaschopností xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx v poměru x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (x UV, nebo xxx XX), ale xxxxxx exponovány zkoušeným xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxx používaný xxx xxxxxx výsledků xxxxxxx xxxxxxxx na předpověď xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxx xxxxxx výsledků xxxxxxx fototoxicity 3T3 XXX xx xxxxx xx xxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX a xxxxxxxx XXX.
XXX (photo-irritation xxxxxx — xxxxxxxxxxxx faktor): xxxxxx získaný xxxxxxxxx xxxx xxxxxx účinných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (EC50) xxxxxxxx xxxxx, x xx při xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/XXX xxxxxxx (+ XX) x xxx xxxx (-XX).
XXX (xxxx xxxxx xxxxxx — střední xxxxxxxx xxxxxx): xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxx celého xxxxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx získaných xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/xxx xxxxxxx (+ XX) x xxx xxxx (-UV).
Fototoxicita: akutní xxxxxxx reakce, xxxxxxxx xx xxxxx expozici xxxx určitým xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx vyvolaná ozářením xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx látky.
Fotoiritace: xxxxx úroveň pojmu "xxxxxxxxxxxx", xxxxx xx xxxxxxx k xxxxxx xxxxx xxxx fototoxických xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx chemickým xxxxxx (xxxxxxx nebo xxxxxx). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx reakci xxx opalování).
Fotoalergie: xxxxxxx xxxxxxxxxxxx reaktivita, xx xxxxx nedochází při xxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx a xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx dva xxxxx xxxx xxx, xxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: genotoxická xxxxxx xxxxxxxxxx z genového xxxxxxxx, která je xxxxxxxx xx expozici xxxxx xxxxxxxxxxxxx dávce XX/XXX xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxx tumoru xxxxxxxxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx pozitivní xxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxx xxx souběžně xxxxxxx při xxxxx xxxxxxx, xx xxx xxxx vyvinutou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xxxxxxxxxx použít xxxx xxxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxx z xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx předložené xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Úvodní xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (5, 6, 7, 8). Xxxxxx jediným xxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx slunečního xxxxxx. Podle prvního xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxx-Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxx fotoreakce xxxxxxxxxxx absorpci světelných xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxx být xxxxxxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx (např. xxxxx Xxxxxxxx OECD 101). Xx-xx molární absorpční xxxxxxxxxx xxxxx než 10 x.xxx-1.xx-1, xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxx zkoušena zkouškou xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx).
1.5 Xxxxxxxx zkušební xxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx mechanismy, xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (7). Všechny xxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX in xxxxx xx proto xxxxxxxx na srovnání xxxxxxxxxxxx chemické xxxxx xxx zkoušení x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX/XXX xxxxxx x xxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx je x xxxx zkoušce xxxxxxxxx xxxx koncentračně xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx červeně (XX) (9) 24 xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx Balb/c 3X3 se 24 x xxxxxxxxx, aby xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx 96xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx chemickou xxxxx se xxxx 1 x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek. Xxxx xx xxxxx ze xxxx destiček exponována xxxxxxxxxxxxxx dávkou XXX/XXX xxxxxx 5 X/xx2 XXX (+ XX xxxxxxxxxx), zatímco xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxx (-XX xxxxxxxxxx). X xxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx nahradí xxxxxxxxxxx médiem x xx xxxxxxx 24 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx stanovena 3xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XXX). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx vyjádřená x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x neexponované negativní xxxxxxxx se xxxxxxx xxx každou x xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx závislé xxxxxx xxxxxxx xxx ozáření (+ XX) x xxx ozáření (-UV), xxxxxxx při hodnotě XX50, xx. xxx xxxxxxxxxxx způsobující 50 % úbytek buněčné xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xx XXX, xxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx xxxxx xx XXX xx xxxx xxx pravidelně xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx při intenzitě xxxxxxx xx zkoušce xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro, xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxx 1 xx 9 X/xx2 a xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx stanoví x xxx xxxxxxx xxxxxxxx NRU. Xxxxx xxxxxxx kritérium xxxxxxx, xxxx-xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx 5 X/xx2 menší xxx 80 % xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxx xxxx po xxxxxx xxxxxxxx buněk.
Citlivost xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx XXX xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx: zkouška xxxxxxx xxxxxxxx jakosti, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx x XXXX (Xxxxxx fyziologický roztok) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) nebo 1 % xxxxxxxxx (XxXX)) xxxx bez xxxx xxxxxxxx xxx + XXX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx alespoň 80 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx souběžném experimentu x xxxxx (-XXX).
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx: absolutní xxxxxxxxxx (X540 XXX) xxxxxx v xxxxxxxx XX negativních xxxxxxx xxxxxxx, xxx 1 × 104 buněk xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx zachovalo xxx xxxxx xxxxx xxxx xxx zkoušky obvyklou xxxx xxxxxxxxxxxxx (doubling xxxx). Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A540 XXX xxxxxxxxxxxxxx kontrol xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXX), x je xxxx doporučen. Xxx XXX zkoušený xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx: xxx XXX ozářený (+ XXX): XX50 = 0,1 až 0,2 μx/xx, xxx XXX xxxxxxxxx (-XXX): XX50 = 7,0 xx 90,0 μx/xx. Xxxxxxxxxxxx faktor (XXX), xx. xxxxx xxxxxxx XX50, xx xxx xxx alespoň 6.
Namísto XXX xxxxx být xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx vhodné x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx hodnocené xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx by xxxx xxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XX50 a PIF xxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx metody
1.7.1 Xxxxxxxx
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx xxxxxxxxx studii xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx fibroplastů — Balb/c 3X3, xxxx 31 — xxx x xxxxx XXXX, xxxx z xxxxx XXXXX a xx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxx xxxxxxx linie mohou xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx kultivační xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx specifickým xxxxxxxx xxxxx, ale musí xxx prokázána jejich xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx kontrolovány, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, x měly xx xxx použity xxxxx tehdy, xxxx-xx xxxxxxxx takové xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx k tomu, xx xxxxxxxxx buněk xx XX xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx, xxxx xx být xxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 x pasáže x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, nejlépe x xxxxx než xxx pasáže. Je xxxxxxxx, aby byla xxxxxxxxx xxxxx Balb/c 3X3 xx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx jakosti popsaným x xxxx xxxxxxxx.
1.7.1.2 Xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxxxxxx buněčné xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx by xxxx xxx použita xxxxxx kultivační xxxxx x xxxxxxxxx podmínky. X xxxxx Balb/c 3X3 se jedná x XXXX (Dulbeccova xxxxxxxxxx Eagleova xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx telecím xxxxx, 4xX glutaminem, xxxxxxxxxxx x streptomycinem a xxxxxxxx ve vlhčené xxxxxxxxx xxx 37 °X/7, 5 % XX2. Xxxxxxx xxxxxxxx xx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx zajistily, aby xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx rozpětí xxx xxxxxxx buňky xxxx xxxxxxx linie.
1.7.1.3 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx hustotě a xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxx před použitím xx zkoušce fototoxicity 3X3 XXX in xxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx buňky xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x takové hustotě, xxx nedosáhly xxxxxxxxxx xx xxxxx zkoušky, xx. xx xxxxxxxx, xxx xx xx 48 x od xxxxxxxx xxxxxxxxxxx životaschopnost. Xxx buňky Xxxx/x 3X3 xxxxxxxxxxx x 96xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 × 104 xxxxx xx jamku.
Pro každou xxxxxxxxx xxxxx se xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx 96xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx jsou xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxxx podmínek xxxxx xxxx, kdy je xxxxx z destiček xxxxxxx (+XXX/XXX) x xxxxx xx xxxxxxxxx x temnu (-UVA/VIS).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx systému xx xxxxxxx požadavkem při xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, není x xxxxxxxxxxxxxxx dosud xxxxx žádná xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx toxinu xx xxxx nebo xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx transformace. Xxxxxxxxxx se tedy xxx xx xxxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx zkouška provedena xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx chemická xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx x stálosti neprokazují xxxxxxxxxxxx skladování. Xxxx-xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, musí xx xxxxxxxx látky xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx roztoku, xxxx. x Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXXX) xxxx xx fyziologickém xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xX xxxxxxxxxx absorbující světlo, xxx nerušily xxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x omezenou xxxxxxxxxxxx xx xxxx by xxxx xxx rozpuštěny xx vhodném rozpouštědle xx 100xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx xx xxxx xxx zředěny v xxxxxx 1:100 xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Použije-li xx xxxxxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 % xxx. xx xxxxx xxxxxxxxx, xx. x xxxxxxxxx kontrole a xxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) a xxxxxxx (XxXX). Mohou xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx. aceton), xxx xxxx xx xxx xxxxxxx posouzeny xxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxx. reakce se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx.
Xx-xx xxxxx, xxxx být xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx použito xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxx na 37 °X.
1.7.1.6 Xxxxxxx XX xxxxxxx/xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx: xxxxx xxxxxxxx zdroje xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx v xxxxx XXX x xx xxxxxxxxxx pásmu xx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx xxxxxx x xxxxx UVB je xxxx xxxxxxxxxx x xx přímo xxxxxx xxxxxxxxxxx, přičemž jeho xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 313 xx x 280 xx 1000xxxx (11). Xxxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxx světelného xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, x xxx xxxxx světelného záření (xxxxxxxxxxx po xxxxxxxxxxx xxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx známých xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx látek. Použité xxxxxx xxxxx a xxxxx, xxxxxx emise xxxxx (xxxxxxxxxxxx xxxxxx), xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx poškozovat xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx slunečního xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx světla. X xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jak xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx halogenová výbojka. Xxxxx x xxxx xx xx výhodu, xx emituje xxxx xxxxx a je xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx významné xxxxxxxx XXX xxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx, aby xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxx.
Xxx zkoušku xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx by mělo xxx xxxxxxx spektrum xxxxxxxxx zbavené UVB xxxxxx (XXX:XXX ˜ 20:1). Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx studii xxxxxxx fototoxicity 3T3 XXX xx xxxxx xxx publikován x xxxxxxxxxx (3).
Dozimetrie: xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) xx xxxx xxxxxxxxxx xxxx každou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx vhodného širokopásmového XX-xxxxx. XX-xxxx xxxx xxx pro xxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx XX-xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xx xxxxx xxxxxx xx doporučuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kalibrovaný UV-metr xxxxxxxx xxxx. X xxxxxxxx případě xx xxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx k měření xxxxxxxxxx intenzity xxxxxx xxxxxxxxxxxx zdroje xxxxxx x ke xxxxxxxx xxxxxxxxx širokopásmového UV-metru xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx takové xxxxxxxxx vyžadují odbornou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx 5 X/xx2 byla xxx validační xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 x dostatečně xxxxx x excitaci x xxxxx fototoxických xxxxxxxxxx látek. Pro xxxxxxxx 5 J/cm2 xx xxxx 50 xxx. xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx nastavena xx 1,666 XX/xx2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx linie xxxx jiný světelný xxxxx, xxxx xxx xxxxx XXX xxxxxx xxxxx upravena, xxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx fototoxinů. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx:
x(xxx) = xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (J/cm2) 100 / xxxxxxxxx xxxxxxx (xX/xx2) 60 (1 J =.X xxx)
1.7.2 Zkušební xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx při nižších xxxxxxxxxxxxx; xxx vyšších xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx pozitivních xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx pH xxxxxxxx koncentrace by xxxx xxx xxxxxxxxxx (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx koncentrací xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+ UVA) x bez xxxxxx (-XXX) xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx rozmezí. Xxxxxx koncentrační xxxx x intervaly xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx xxx, aby xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Měla xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx koncentrací (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ředění).
1.7.3 Xxxxxxxx xxxxxx [1]
1.7.3.1 Xxxxx xxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 1 × 105 buněk/ml x kultivačním médiu x 100 μl xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx pouze xx xxxxxxxxxx jamek 96xxxxxxx xxxxxxxx (slepý xxxxx). Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx 100 μl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 xxxxx xx xxxxx). Xxx xxxxxx xxxxxxxxx chemickou xxxxx xx xxxxxxxx dvě xxxxxxxx: jedna xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-UVA) x druhá xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (+UVA).
Buňky xx xxxxxxxx 24 x (7,5 % XX2, 37 °C), xxxxx nedosáhnou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxx umožní xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx růst.
1.7.3.2 Xxxxx xxx
Xx inkubaci xx xxxxxxxxxx médium x xxxxx xxxxxxxxx x každá xxxxx xx xxxxxxx dvakrát 150 μx EBSS/PBS. Xxxxx se 100 μx XXXX/XXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx). Aplikuje se 8 xxxxxxx koncentrací xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx zkoušenou xxxxxxxxx látkou xx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxx 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °X).
X xxxxxxxxx části xxxxxxx x xxxxxxxx XXX xx xxxxx při xxxxxxxx teplotě xx xxxx 50 min. xxxxxxx přes xxxxx 96xxxxxxx destičky UVA xxxxxxx o intenzitě 1,7 MW/cm2 (5 X/xx2. Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxx víčkem, větrá xx pomocí xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx ozáření XXX xx xxxxxxxxx 50 xxx. (doba expozice XXX) v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x každá jamka xx xxxxxxx xxxxxxx 150 μl XXXX/XXX. XXXX/XXX se nahradí xxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xx přes xxx (18-22 h) (7,5 % XX2, 37 °X).
1.7.3.3 Xxxxx xxx
Xxxxxxxxxxxxx hodnocení
Buňky se xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx x xxxxxxx kontrastem. Xxxxxxxxxxx xx změny xxxxxxxxxx buněk xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx červeně.
Buňky xx promyjí 150 μx předehřátého XXXX/XXX x promývací xxxxxx xx opatrně xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx 100 μl média XX x xxxxxxxx xx 3 x xxx 37 °C xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x 7,5 % XX2.
Xx xxxxxxxx xx xxxxxx XX xxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. EBSS/PBS xx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx (xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx poloze).
Přidá xx xxxxxx 150 μl xxxxxxx připraveného xxxxxxx xxxxxxxx x kyseliny xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx XX.
Xxxxxxxx xx xxxxxx 10 xxx. xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xx XX x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx xx změří xxxxxxxxxx extraktu NR xxx 540 xx, xxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX) x xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xx měly xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx odpovědi na xxxxxxxxxxx získané při xxxxxxx XXX/XXX nebo xxx xxxx. Xx-xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x interval xxxx xxxx nastaven xxx, xxx bylo xxxxx xxxxxxxx experimentálními xxxxx xxxxxx. Vzhledem x xxxx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx být xx xx mezní xxxxxxxxxxx 100 μx/xx xxxxxx pro experiment x xxxxx (-XXX) xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xx být xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+XXX), xxxx xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx koncentrací, xxxxx xxxx být x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, řádově xxxxxx, xx-xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Není-li x xxxx částech xxxxxxxxxxx (-XXX x +XXX) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx zkoušku x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx být xxxx xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za dostatečně xxxxxxxx koncentrací. V xxxxxxxx případech xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx jednou nebo xxxx předběžnými xxxxxxxxxxx xxx zjištění xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx být xxx xxxxxxxx opakovány.
Je-li opakované xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx změnit xxxxxxxxxxxxxx podmínky. Klíčovou xxxxxxxxx této xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. X tohoto xxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxx (jiné xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, použití xxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx v úvahu xxxxxxxx xxxxxxxxx doby xxxx xxxxxxxx. Zkrácení xxxx xxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx.
2.2 Xxxxxxxxxx výsledků
Je-li xx xxxxx, stanoví xx koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx 50 % xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (EC50). Xxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx regrese (xxxxxxx Hillovou xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx proložení (14). Xxxx xxxxxxxx hodnoty XX50 xxx další xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx proložení. Xxx výpočet XX50 xxx popřípadě použít xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx papír (xxxxxxx xxx x: xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx x: xxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxx v xxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
2.3 Hodnocení xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxx)
2.3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxx — xxxxx 1: xxxxxxxxxxxx faktor (XXX)
Xxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx (+XXX), xxx xxx ozáření (-XXX) xxxxxxx úplné xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxxxxx faktor (XXX) xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxx:
(x) XXX = (XX50 (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxxxxxx PIF &xx; 5 předpovídá xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx XXX ≥ 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fototoxického potenciálu.
Jestliže xx chemická xxxxx xxxxxxxxxxx pouze xxx +XXX x xxxx xxxxxxxxxxx xxx zkoušce -XXX, xxxxx xxxxxxx XXX vypočítat, xxxxxxx xxx o výsledek, xxxxx xxxxxx o xxxxxxxxxxxx potenciálu. V xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx "&xx; XXX", jestliže xx xxxxxxx -XX xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx koncentrace (Xxxx), x tato xxxxxxx xx použije xxx xxxxxxx "&xx; PIF";
(b) &xx; PIF = (Xxxx (-UV)) / (XX50 (+UV))
Lze xx xxxxxx pouze hodnotu "&xx; XXX", xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu xxxx xxxxxxx &xx; 1.
Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx toho, že xxxxxxxx látka xxxxxxxxxx xx do nejvyšší xxxxxxxx xxxxxxxxxxx žádnou xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx ani xxxxxxx EC50 (-XX) xxx xxxxxxx XX50 (+ XX), xxxxxx xx o xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu. V xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx hodnota "XXX = *1";
(X) &xx; XXX = *1 = (Xxxx (-XX)) / (Xxxx (+XX))
Xxx li xxxxxx xxxxx xxxxxxx "XXX = *1", xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu.
V xxxxxxxxx x) a x) xx xxxx xxx xxx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx opatrně xxxxx x úvahu xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx model xxxxx 2: střední světelný xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxx vyvinut x xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX (15) a byl xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vitro x xxxxxxxxxx látek, xxxxx xx xxxxxxx jako XX filtry (13). Xxxxx xxxxx nemá xxxxxxx xxxx model XXX x případech, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx EC50. Tento xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx účinek (xxxx xxxxx xxxxxx) (MPE), xxxxxxxx, která xx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx křivek xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxx) vyvinut xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx x dispozici.
2.4 Interpretace xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro (XXX ≥ 5 nebo XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xx fototoxický xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx koncentracích xxx 10 μx/xx, xx také pravděpodobné, xx látka xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podmínek xxxx xxxxxxxxx xx xxxx. Xx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, mohou xxx pro posouzení xxxxxxxxxxxxx xxxx intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xx xx xxxxx xxxxx údajů x xxxxxxxxx, absorpci x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. xx použití modelu xxxxxx xxxx xx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx (XXX &xx; 5 xxxx XXX &xx; 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxx za xxxxxxxxx xxxxxxxx fototoxická. X xxxxxxxxx, kdy xxxx xxxxx zkoušet xxxxxxxxx xxxxx xx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xx nepravděpodobnou. X xxxxxxxxx, kdy xxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx odezvy xx xxxxxxxxxxx (EC50 +XX a XX50 -XX), xx xxxxxxxxxxxx xxxxx stejná. Xxxx-xx xxxxxxx tomu toxicita xxxxxxxxx (+UV x -XX) x xxxx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx 100 μx/xx, xxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx látku xxxxxx x mělo xx xxx xxxxxxx potvrzující xxxxxxx (xxxx. xx xxxxxxx xxxxxx lidské xxxx xx vitro xxxx xxxxxxxx xx xxxx).
3. ZPRÁVY
Protokol x xxxxxxx
Xxxxxxxx x zkoušce xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx chemická xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx CAS, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x čistota,
- xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- xxxxxxxxxx volby xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx v xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx (XXXX xxxx XXX).
Xxxxx:
- xxx x xxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxx buněčné xxxxxx, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx buněk xx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ve zkoušce xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro
Zkušební xxxxxxxx x) — inkubace xxxx aplikací x xx xx:
- typ x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx CO2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxx před xxxxxxxx x po xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxx látky:
- xxxxxxxxxx výběru koncentrací xxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx UV/VIS, tak xxx něj,
- v xxxxxxx, xx zkoušená xxxxxxxx xxxxx vykazuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx cytotoxická, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx,
- xxx a složení xxxxxxxxxx xxxxx (pufrovaný xxxxxxxxxxxx roztok),
- xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx c) — xxxxxxx:
- xxxxxxxxxx výběru xxxxxxxxx zdroje xxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx ozáření xx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx filtrů),
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx,
- intenzita ozáření XXX x xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xX/xx2,
- xxxxx expozice XX/XXX xxxxxx,
- xxxxx XXX záření (intenzita × xxx), xxxxxxxxx x X/xx2,
- xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx XXX:
- xxxxxxx média XX,
- doba xxxxxxxx XX,
- xxxxxxxxx podmínky (xxxxxxxxxxx XX2, teplota, xxxxxxx),
- podmínky xxxxxxxx XX (xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx),
- vlnová xxxxx použitá xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx odečet xxxxxxxxxx XX,
- xxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxxx xxxxx, je-li xxxxxxx,
- xxxxxxx slepého xxxxxxx xxx spektrometrii, xx-xx použit.
Výsledky:
- životaschopnost xxxxx xxx každé xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnosti xxxxxxx,
- křivky xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx +XXX x -XXX,
- xxxxxxx křivek xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx: xx-xx xx možné, xxxxxxx xxxxxxx XX50 (+XXX) a XX50 (-XXX),
- xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx získaných x xxxxxxxx UVA/VIS x xxx něho, x xx buď xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx-xxxxxxxxxxx xxxxxx ) (XXX), nebo výpočtem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxx xxxxxx) (XXX),
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxx XX) ozářených x neozářených xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x směrodatná xxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:
- xxxxxxx EC50 (+UVA), XX50 (-UVA) x XXX-xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx: xxxxxxx XX50 (+XXX), EC50 (-XXX) x PIF, xxxxxxx xxxxxxx a směrodatná xxxxxxxx.
Xxxxxx výsledků.
Závěry.
4. LITERATURA
(1) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xöxxxx, X., Xxxxxüxxxx, H. G., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X., X'Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, M., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X., Moldenhauer, X., Xxxxx, L., Pape, X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, J., Xx Xxxxx, O., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. (1994), EEC/COLIPA xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x Xxxx/x 3T3 xxxx xxxxxxxxxxxxx assay, Xxxxxxxxxx xx vitro 8, 793-796.
(2) Anon (1998), Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx the 3T3 XXX XX test (xx in xxxxx xxxx xxx phototoxicity), Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Joint Xxxxxxxx Xxxxxx: ECVAM xxx DGXI/E/2, 3 Xxxxxxxx 1997, XXXX 26, 7-8.
(3) Xxxxxxxxx, X., Balls, X., Xxxxxx, X., Xxxx, X. J. X., Xxxxxxxxxx, X., De Xxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. X., Clothier, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Maurer, T., Xxxxxxxxxxxxx, U., Potthast, X. X., Csato, X., Sladowski, D., Xxxxxxxx, W., Xxxxxxx, X. (1998), EU/COLIPA "Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx study, results xx phase XX (xxxxx xxxxx), xxxx 1: xxx 3X3 XXX phototoxicity xxxx, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 12, 305-327.
(4) OECD Xxxx Xxxxxxxxxx Programme, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Xxxxx Report xx the XXXX Xxxxxxxx on Harmonisation xx Xxxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxx, XXXX Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, W. W. (1993), X xxxxxx xxx in xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx in Xxxxx 7, 95-102.
(6) Santamaria, X., Prino, X. (1972), Xxxx of xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxx xxxxxxxx in xxxxxxx, biological and xxxxxxxxx chemistry Vol. 3 Xxxx 1, Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx Xx, Xxxxxxxxx, XX–XXXX.
(7) Xxxxxxxxx, X., Lovell, X. X., Xöxxxx, X., Xxxxxxx, B. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxx, X. X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X. (1994), Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxx report xxx xxxxxxxxxxxxxxx of XXXXX workshop 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, X. D. (1989), Xxxxxxxxxxxxxxxxxx. V: Xxx science xx xxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxx, xx.), Plenum Xxxxx, Xxx York, 2. xxx., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X. (1985), Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx by xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, W. X., Xxxxxxxxxx X. (1996). X: Animal xxxxxx xxx phototoxicity xxxxxxx, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (F. X. Xxxxxxxx, X. X. Xxxxxxx xxx.), Xxxxxx &xxx; Xxxxxxx, Xxxxxxxxxx XX, 5. vyd., 515-530.
(11) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx X. (1987), Xxxxxx spectra xxx xxxxx xxxx xxxxx: xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx the xxxxxx xxxxxxxxxxx, near xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx sunlight xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, Cancer Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Xxxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxx: Balb/c 3X3 XXX Phototoxicity Test, xxxxxxxx 23. prosince 1997 X. Liebschem, xxxxxxxxx 6. xxxxxx 1998 xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxx xx xxx XX/XXXXXX project "Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxx, X. X. W., Xx Silva, X., Xxxxxüxxxx, H. G., Xxxxxxxxx, F., Liebsch, X., Xxxxxx, X. X., Pfannenbecker (1998), X Xxxxx on xxx Xxxxxxxxxx Potential xx UV Xxxxxx Xxxxxxxxx xxxx Annex XXX of the XX Xxxxxxxxx 76/768/EEC xx xxx 3X3 XXX Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, XXXX 26, 679-708.
(14) Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X. (1995), Mathematical xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxx, 3, 127-138.
(15) Xxxxxüxxxx, X. X. (1997), X xxxxxxx measure of xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx from xxxxx xx xxxx-xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxx xxx xxxxxxxxxx the xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, XXXX 25, 445-462."
"Dodatek
[1] Další xxxxxxxxxxx lze xxxxxx x xxxxxxxxxx (12).