Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/33/ES
ze xxx 25. xxxxx 2000,
xxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx přizpůsobuje xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX x xxxxxxxxxx právních a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx klasifikace, balení x označování nebezpečných xxxxx [1]
(Text s xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Smlouvu o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx na xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX xx xxx 27. xxxxxx 1967 o sbližování xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx týkajících xx xxxxxxxxxxx, balení a xxxxxxxxxx nebezpečných xxxxx [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx parlamentu x Xxxx 1999/33/XX [3], x xxxxxxx xx článek 28 xxxxxxx směrnice,
vzhledem k xxxxx xxxxxxx:
(1) X xxxxxxx V xxxxxxxx 67/548/XXX xx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx. Je xxxxxxxx přizpůsobit xxxx xxxxxxx technickému xxxxxxx.
(2) Xxxxx xx. 7 xxxx. 2 směrnice Xxxx 86/609/EHS xx xxx 24. listopadu 1986 o xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx států xxxxxxxxxx se ochrany xxxxxx používaných pro xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxx [4] xxxxx xxx xxxxx, xxx xxxx xx xxx xxxxxxx zvíře, xxxxxxxx, xx-xx xxxxxxx x prakticky xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/EHS xxxxxx xxxxxxxxxxxx zkušební xxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx zpřístupnit xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx látek xxxxx xx. 3 xxxx. 1 xxxxxxxx 67/548/EHS.
(4) Xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Výboru xxx přizpůsobení xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx o xxxxxxxxxx technických překážek xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx,
XXXXXXX XXXX SMĚRNICI:
Xxxxxx 1
Text xxxxxx X a XX xxxx směrnice se xxxxxx do xxxxx X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX.
Xxxxxx 2
1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x touto směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 2001. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx přijaté xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx nebo xxxx být xxxxxx xxxxx učiněn při xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx si xxxxxxx xxxxxxx státy.
2. Xxxxxxx státy xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, a xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Článek 3
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx dnem xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství.
Článek 4
Tato směrnice xx xxxxxx členským xxxxxx.
V Xxxxxxx dne 25. xxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxöx
xxxxxx Xxxxxx
[1] Xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx po xxxxxxx xxxxx.
[2] Xx. věst. 196, 16.8.1967, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Xx. xxxx. X 358, 18.12.1986, x. 1.
XXXXXXX X
"X.40 LEPTAVÉ XXXXXX XX KŮŽI
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxx xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx transkutánního elektrického xxxxxx xxxx potkana (XXX) x xxxxxxx x xxxxxxxx modelu xxxxxx xxxx byly Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx metod (XXXXX, Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx) (1, 2, 3) xxxxxxxxx jako xxxxxxx xxxxxx. Validační studie XXXXX xxxxxxxxx, že xxxxx zkouškami lze xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxx. Protokol x zkoušce xxxxxxxx xx modelu xxxxxx xxxx dále xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx účinků (xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, X 35 x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, X 34) (2). Xxxxx x postup xxxx xxxxxxx xx xxxxxx; xxxxx xxxxxxx, xxxxx má xxx xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx uživatele.
Viz xxxx Xxxxxx xxxx, část X.
1.2 Definice
Poleptání xxxx: xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx látky
Nespecifikovány, xxxxx xxx body 1.5.3.4 x 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx metody — zkouška XXX xx xxxx potkana
Zkoušený xxxxxxxx xx xx xx 24 x xxxxxxxxx xx epidermální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx usmrcených xxxxxxx xxxxxxx. Materiály x xxxxxxxxx účinky xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx normální xxxxxxxxx x bariérové xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (stratum xxxxxxx), která xx xxxxxx xxxx snížení xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx xxxxxx (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx nesnižují TER xxx prahovou xxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx a neutrální xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx (6)) xxx xxxxxxx stupeň xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxx množství falešně xxxxxxxxxxx výsledků získaných xxxxx xxx tyto xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2, 7).
1.5 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx XXX xx xxxx potkana
1.5.1 Xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx musí xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx (20 — 23 xxxxxxx) potkanů (Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx a boční xxxx se opatrně xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (obsahujícího xxxx. streptomycin, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zastavujících xxxx xxxxxxxx). Zvířata xx třetí a xxxxxx xxx po xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx antibiotik x použijí xx xx 3 xxx (x přípravě xxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx starší než 31 xxx).
1.5.2 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx
Xxxxxxx xx xxxxxxx usmrtí. X xxxxxxx zvířete xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx kůže x xxxxxxxxxx xxx xx x kůže xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx teflonové (XXXX) xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx byla v xxxxxxxx s trubičkou. Xxxx xxxxx trubičky xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx O-kroužek, xxx xxxx kůže xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx a X-xxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxxx X-xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxx vrstvou xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pružinové xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX) (obrázek 2).
1.5.3 Xxxxxxxx postup
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálu
Kapalná xxxxxxxx xxxxx (150 μx) xx aplikuje xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (obr. 2). Xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx množství tak, xxx xxxx xxxxxxx xxxx epidermis. Xxxx xx xx xxxxxx xxxxx xxxxx přidá xxxxxxxxxxxx xxxx (150 μx) x xxxxxxxx xx xxxxx protřepe. Xxxx xxxxxxx x xxxx xx mělo xxxxx x maximálnímu xxxxx. X některých xxxxx xxxx může xxx dosaženo xxxxxxxx xx xx 30 °X, xxx xx xxxxxxxx látka xxxxxxxxx, xxxx rozemletím xx xxxxxx xxxxxxxx nebo xx prášek.
Ke xxxxxxx xxxxx látky xx xxxxxxx tři xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx 24 x (xxx xxxx xxx 1.5.3.4). Xxxxxxxx xxxxx xx zcela xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxx 30 °X. Odstranění xxxxxxxxxx xxxxx, které x trubičce ztuhly, xxx usnadnit xxxxxx xxxxxxx xxxx teplé xx 30 °X.
1.5.3.2 Xxxxxx XXX
XXX se xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx střídavý xxxxx (např. XXX 401 xxxx 6401 xxxx ekvivalentní). Před xxxxxxx xx povrchové xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx dostatečného xxxxxx 70 % ethanolu xxx, xxx byla xxxxxxxxx zakryta. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx zvlhčí xxxxxxxx 3 xx xxxxxxx xxxxxx hořečnatého (154 xX). Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxx strany terčíku xxxx za xxxxxx xxxxxx odporu x xΩ/xxxxxx kůže (xxxxxxx 2). Rozměry xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pod xxxxxxxxxxxx jsou uvedeny xx xxxxxxx 1. Xxxxxx xxxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxx trubičky, aby xxxx zajištěno, xx xx xxxxx části xxxxxxxxx ponořené v xxxxxxx síranu hořečnatého xxxxxx. Xxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xx umístěna xxxxxx receptorové xxxxxx xxx, aby xxxxxxxxx xx xxx komory. Xxxxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxx svorky x xxxx xxxxxxxxx trubičky xx udržuje xxxxxxxxxx (xxxxxxx 1), xxxxx xxxx vzdálenost xx xxxx na xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
Xx třeba xx všimnout, xx xx-xx naměřená hodnota xxxxx xxx 20 xΩ, xxxx xx xxx způsobeno xxxxxxx xxxxxxxx látky xx xxxxxxxxxxx xxxxxx terčíku xxxx. X xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxx pokusit xxxx. xxx, xx xx xxxxxxxxx trubička xxxxxxx xxxxxx x rukavici x 10 x xx xxxxxxxxxx. Roztok xxxxxx hořečnatého se xxxxxxxx a měření xx xxxxxxx x xxxxxxxx síranem hořečnatým.
Výsledky XXX (střední xxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx přijatelného xxxxxxx xxxxxx. Pro popsanou xxxxxxxx x přístroje xxxx xxxxxxxxxx tyto xxxxxxxxx látky a xxxxxx přijatelná rozpětí xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx (xΩ) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx voda |
10–25 |
1.5.3.3 Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx látky x xxxxxxxxx xxxxxxxxx látky
Jsou-li xxxxxxx XXX pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx organické xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx nebo rovny 5 xΩ, xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx průniku xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxx výsledky xxxxxx xxxxxxx pozitivní (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X
Xx xxxxxxxxx aplikaci xxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxxxxxxxx stranu xxxxxxx terčíku xxxx xxxxxxxx xx 2 x 150 μl 10 % xxxxxxx xxxxxxx sulforhodaminu X x destilované xxxx. Xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxxx 10 x xxxxxxx proudem xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx barvivo. Xxxxxxx xxxxxxx kůže xx xxxxxxx sejmou x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx se xx xxxxxxxx (xxxx. 20 xx skleněné xxxxxxxx xxx scintilační spektrometrii) xxxxxxxxxx deionizovanou xxxx (8 xx). Xxxxxxxx xx xxxxx 5 xxx. xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx další xxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxx oplachování xx xxxx xxxxxxxx, a xxxx se terčíky xxxx xxxxxx a xxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx 30 % xxxxxxx (x/X) xxxxxxx-xxxxxxx-xxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx vodě x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx 60 °X. Po xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx vyjmou x xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 8 xxx. xxx 21 °X (xxxxxxxxx odstředivá síla ˜ 175). 1 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx 4 xx 30 % (x/X) xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx (X) xx xxxx xxx xxxxxxxxx 565 xx.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx obsahu barviva
Obsah xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X xx xxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx X (xxxxxxx xxxxxxxxx koeficient sulforhodaminu X xxx 565 xx = 8,7 × 104; molekulová xxxxxxxx = 580). Xxxxx barviva xxxxxxxxxxxxxx X xx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx a poté xx vypočte xxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx kontroly spadají xx přijatelného rozmezí xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx doporučeny xxxx přijatelné xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx barviva (μx/xxxxxx xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X kyselina xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
40-100 |
|
Negativní |
Destilovaná xxxx |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx informace
Látky xxx xxxxxx aplikovat na xxxxxxx xxxx xx xxxxxx dobu (xxxx. 2 hodiny), aby xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, které jsou xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx však xxxxxxx, xx xxxxxxxxx TER xxxxxxxxxxxx xxxxxxx účinky x xxxxxxxx zkoušených xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx aplikaci xx xxxxxx xxxx xx xxxx 2 xxxxx (2), třebaže xxxx xxxxxxxxx umožnilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx účinky x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx 24xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx a rozměry xxxxxxxxxx zařízení a xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx mít xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx 5 Ω xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x údajů xxxxxxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx v xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxx kalibrovat xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx odporu xxxxxxxxx xxxx referenčních xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (3).
1.6 Xxxxxxxx zkušební xxxxxx — stanovení xxxxxx xxxxxx lidské xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx xx xx xxxx 4 xxxxx xx xxxxxxxxxxxx model xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx epidermis x funkční rohovité xxxxxx. Materiály x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx způsobit xxx specifikované xxxxxxxxx xxxx pokles xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxx zkoušky xxxxxxx XXX) pod xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Podstata xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xx, jež jsou xxxxxxx xxxxxxxxxx rohovitou xxxxxxx (xxxxxx xxxx xxxxx) a jsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxxxxxx xxxx xxxxx x hlubších xxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — stanovení xxxxxx xxxxxx lidské xxxx
1.7.1 Xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxx xxxxxx kůže xxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxx splňovat určitá xxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a vrstvu xxxxxx xxxxx xxx xx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx. To xxx prokázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxxxxxxx látkám, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx buněk x xxxxxx xxxx xxx dostatečně xxxxxx, xxx xxxx možné xxxxx xxxxxxxx pozitivní x negativní kontrolní xxxxx. ivotaschopnost xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxx XXX, xx. xxxxxxx xxxxxxx absorbance X) xx expozici negativní xxxxxxxxx látce xxxx xxx v mezích xxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx hodnoty xxxxxxxxxxxxxxxx buněk po xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (ve srovnání x životaschopností xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx) xxxx být ve xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Nejdůležitější xxxxxx je, xxx xxxxx xxxxxxxxx mezinárodním xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx (2).
1.7.2 Xxxxxxxx postup
1.7.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
X xxxxxxxxx materiálů xxxx xxx xxxxxxxxxx dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx povrch xxxx (xxxxxxxxx 25 μx/xx2). U pevných xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, aby xxxxxxx kůži, a xxxxxxxx xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxx zajištěn xxxxx xxxx s xxxx; pevné xxxxx xx měly xxx xxxxx potřeby před xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx spektrum xxxxxxxxxx látek (2). Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx materiál x xxxxxxx xxxx opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx použita xxxxxxxx validovaná xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxx níž xx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx správné x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx xxxx se xxxxxx do xxxxxxx XXX x koncentraci 0,3 xx/xx xxx xxxxxxx 20-28 °C xx xxxx 3 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx poté xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) a xxxxxxxxxxx formazanu xx xxxxxxx xxxxxxx absorbance X xxx xxxxxx xxxxx 545 xx 595 nm.
1.7.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, postupu xxxxxxxxxxx xxx. budou xxx velký xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Doporučuje se, xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx byly xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vybraných x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx ECVAM (3). Xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx x mezinárodními xxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxx laboratoře x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Metoda xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx vědeckou xxxxxxxx (2) a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx studie xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx časopise x předcházející xxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Xxxxxxx TER xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx (kΩ) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolu x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx xxxxx xxxxxx údajů x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.
2.1.2 Zkouška x xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx A a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx včetně xxxxx o xxxxxxxxxxxx xxxx opakovaných xxxxxxxxxxxxx, x středních hodnotách x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx.
2.2 Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.2.1 Xxxxxxx XXX na xxxx potkana
Je-li xxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx větší xxx 5 xΩ, xxxx xxxxx xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ a xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xx látka xxxxxx.
X xxxxxxxxx aktivních xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx organických xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ, lze xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xx-xx střední xxxxx xxxxxxx x terčíku xxxx xxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxx v terčíku xxxx xxxxxxxxx souběžně xxx xxxxxxx 36 % XXx jakožto xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxx xx tedy xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx xxxxx barviva x xxxxxxx kůže menší xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx použití 36 % HCl, xx xxxxxxx xxxxxxx pozitivní, x látka xxxx xxxx žíravá.
2.2.2 Zkouška x xxxxxxx lidské xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx; xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxxxxxxx xxx každý zkoušený xxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxx relativní xxxxxxxxxxxxxxxx v procentech xxxxxxxx k negativní xxxxxxxx. Hraniční xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx žíravé (xxxx xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx třídy xxxxxxxxx xxxxxx), musí xxx xxx xxxxxxxxxxx model xxxxx definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, že xx xxxxxx (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x zkoušce
Protokol x zkoušce xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx informace xx xxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx podmínky:
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx postupu,
- xxxxx x zdůvodnění xxxxxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx:
- hodnoty xxxxxx (xxxxxxx XXX) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx) xxx zkoušený xxxxxxxx, pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx o duplicitních xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx formě xxxxxxx,
- xxxxx jakýchkoli xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. LITERATURA
(1) XXXXX (1998), XXXXX News &xxx; Xxxxx, XXXX 26, 275-280.
(2) Fentem, X. X., Archer, X. E. X., Xxxxx, M., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxx, X. X., Xxxxxxx, X. X., Holzhutter, X-X., Xxxxxxx, X. (1998), Xxx ECVAM xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx in vitro xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 2. Xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxx Management Team, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 12, 483-524.
(3) Xxxxxxx, X. D., Xxxxxxx, X. X., Fentem, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, A. X., Xxxxx, X. X. (1998), Xxx XXXXX international validation xxxxx on xx xxxxx xxxxx for xxxx corrosivity. 1. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx the test xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. X. X., Xxxxxxxxx, M. X., Rhodes, X. (1986), Xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx — xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Xxxx Xxxx. Xxxxxxx. 24, 507-512.
(5) Xxxxxx, X. X., Hall, X. X., Xxxxxxx, X., XxXxxx, J. C., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X., Cheeseman, X., Xxxxxxx, X. X., Gardner, X. (1992), Xxx xxxx xxxxxxxxxxx test xx xxxxx: xxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. P., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Curren, X. X., Xxxx, L. X., Esdaile, X. X., Xxxxxxx, M. (1998), Xx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxxxx strategy xxx xxxx xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. D., Xxxxxx, X. D., Xxxxxxx, X. X., Gardner, X. X., Gordon, X. X., Xxxxxxxxxx, X., Lewis, X. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxx, P., Xxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxx, J. F., Xxxxxxxx, W., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X. 1995), A xxxxxxxxxxxxx xxxxx on xx vitro skin xxxxxxxxxxx testing. The xxxxxx and xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX workshop 6, XXXX 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Xxxxxxx 2"
&xxxx;
XXXXXXX XX
"X.41 FOTOTOXICITA — XXXXXXX XXXXXXXXXXXX 3X3 XXX XX XXXXX
1. XXXXXX
1.1 Úvod
Fototoxicita xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx světlu nebo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po systémovém xxxxxx xxxxxxxx látky.
Informace xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx slouží x identifikaci xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx. existence xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx UV xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx vyvolané kombinovaným xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, lze xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sloučeniny, xxxxx xxxx fototoxické xx xxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxx xx xxxx, a rovněž xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x rámci spojeného xxxxxxxx XX/XXXXXX x xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) x cílem xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx zkouškám xx vivo. X xxxx 1996 doporučila xxxxxxxx xxxxxxx OECD xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4).
Výsledky xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx byly porovnány x akutními xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx x xxxxxx a x xxxxxxx a zkouška xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx těchto xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx jiných xxxxxxxxxxxx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky x světla, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxx, fotoalergie x xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx tyto xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx není xxxxxxxx x tomu, aby xxxxxxxx hodnocení stupně xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek xx xxxxxxx x xxxxxxx.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx ozáření: xxxxxxxxx ultrafialového xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxx xx X/x2 xxxx xX/xx2.
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: xxxxxxxx (intenzita × xxx) ultrafialového (XX) xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxx x joulech (X × x) xx plochu povrchu, xxxx. X/x2 nebo X/xx2.
Xxxxxx pásma XX xxxxxx: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx CIE (Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx de x'Xxxxxxxxx): XXX (315400 xx), XXX (280315 nm) x UVC (100280 xx). Xxxxxxxxx xx xxxxxx jiná xxxxxxxx: xxxx hranice mezi XXX x XXX xx xxxxx používána xxxxxxx 320 xx x xxxxx XXX xxxx xxx xxxxxxxxx xx UV-A1 x XX-X2 s xxxxxxx xxxxx 340 xx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx populace (xxxx. xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx neutrální červeně xx xxxxxxxxx xxxxxxxx) x xxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušky xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx x/xxxx životaschopností xxxxx.
Xxxxxxxxx životaschopnost xxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx v poměru x negativním kontrolám (xxxxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (x XX, xxxx xxx XX), ale xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx model: xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx výsledků xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx potenciálu. X xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxx převod xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX x veličinu XXX.
XXX (photo-irritation factor — xxxxxxxxxxxx xxxxxx): xxxxxx xxxxxxx srovnáním xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XX50) xxxxxxxx látky, x xx při xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/XXX světlem (+ XX) x xxx xxxx (-XX).
XXX (xxxx photo xxxxxx — xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx): xxxx veličina xxxxxxxx x matematické xxxxxxx celého xxxxxxx xxxxxx závislosti účinku xx koncentraci získaných xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/xxx xxxxxxx (+ XX) x bez xxxx (-UV).
Fototoxicita: akutní xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx první expozici xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx ozářením xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx: xxxxx xxxxxx pojmu "xxxxxxxxxxxx", xxxxx se xxxxxxx k popisu xxxxx xxxx fototoxických xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxxx). Tyto fototoxické xxxxxx vedou xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx).
Xxxxxxxxxxx: získaná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx nedochází xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x světla x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx dobu xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxx tím, než xxx reakci kůže xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x genového xxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx negenotoxické xxxxx XX/XXX světla x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxx vyvolaná opakovanou xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx látky. Xxxxxx xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx se používá x případě, kdy xx tvorba xxxxxx xxxxxxxxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx látky
Vedle xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxxxxxxxx, který by xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx každé xxxxxxx, xx pro xxxx vyvinutou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xxxxxxxxxx použít jako xxxxxxxxxx chemické látky xxxxx x chemických xxxxx použitých při xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Xxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (5, 6, 7, 8). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxx fotochemie (Grotthaus-Draperův xxxxx) xxxxxxxx fotoreakce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx zkoušení xxxxx xxxxxxxxxx metodiky by xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušené chemické xxxxx (např. xxxxx Xxxxxxxx OECD 101). Xx-xx molární absorpční xxxxxxxxxx xxxxx než 10 l.mol-1.cm-1, xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x nemusí xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx).
1.5 Xxxxxxxx zkušební xxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx čtyři xxxxxxxxxx, xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx) chromoforem xxxx k fototoxické xxxxxx (7). Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxx zkoušení s xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX/XXX xxxxxx a xxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx v xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx příjmu xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (9) 24 xxxxx po působení xxxxxxxx chemické látky x ozáření.
Buňky Xxxx/x 3X3 xx 24 x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx 96xxxxxxx destičky xx xxxxx zkoušenou chemickou xxxxx xx xxxx 1 x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek. Xxxx xx jedna ze xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX/XXX xxxxxx 5 X/xx2 XXX (+ XX xxxxxxxxxx), xxxxxxx druhá xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx (-XX xxxxxxxxxx). X obou xxxxxxxx xx poté xxxxxxxxx médium xxxxxxx xxxxxxxxxxx médiem a xx xxxxxxx 24 x xxxxxxxx xx xxxxxxx životaschopnost xxxxxxxxx 3xxxxxxxxx příjmem xxxxxxxxx xxxxxxx (XXX). Relativní xxxxxxx životaschopnost xxxxxxxxx x procentech xxxxxxxx x neexponované negativní xxxxxxxx se xxxxxxx xxx každou x xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx závislé xxxxxx xxxxxxx xxx ozáření (+ XX) a xxx xxxxxxx (-UV), xxxxxxx xxx xxxxxxx XX50, xx. xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 % xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x neexponovanými xxxxxxxxxx.
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xx UVA, dosavadní xxxxx: xxxxxxxxx xxxxx xx XXX xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxx při intenzitě xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx, xxxxxx xxx se ozáří xxxxxx XXX xxxxxx 1 až 9 X/xx2 a buněčná xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx-xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx 5 X/xx2 xxxxx xxx 80 % xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx udržované x xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxx vždy xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx UVA xxx xxxxxxxxxx zkoušce: xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jakosti, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx x XXXX (Xxxxxx fyziologický xxxxxx) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx 1 % xxxxxxxxx (XxXX)) nebo xxx xxxx xxxxxxxx xxx + XXX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx alespoň 80 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x tomtéž xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx experimentu x xxxxx (-UVA).
Životaschopnost xxxxxxxxx kontroly: absolutní xxxxxxxxxx (A540 NRU) xxxxxx x xxxxxxxx XX negativních xxxxxxx xxxxxxx, xxx 1 × 104 xxxxx xxxxxxxxxx na jednu xxxxx zachovalo xxx xxxxx během xxxx xxx zkoušky xxxxxxxx xxxx zdvojnásobení (xxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X540 XXX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxx známá xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Při xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX xxx xxxxxx jako xxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx (XXX), x xx xxxx doporučen. Pro XXX xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxxxx tato xxxxxxxx přijatelnosti zkoušky: xxx XXX xxxxxxx (+ XXX): XX50 = 0,1 xx 0,2 μx/xx, xxx XXX neozářený (-UVA): XX50 = 7,0 xx 90,0 μg/ml. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xx. xxxxx hodnoty XX50, by xxx xxx xxxxxxx 6.
Xxxxxxx XXX xxxxx xxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly xxxx xxxxx fototoxické xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx typu nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx xx xxxxxxx dosavadních xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx rozsahy hodnot XX50 x XXX xxxx MPE (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx
1.7.1 Xxxxxxxx
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx linie xxxxxxxxxxx — Balb/c 3X3, xxxx 31 — xxx z banky XXXX, nebo x xxxxx ECACC x xx tedy doporučena. Xxxx buňky xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx kultivační xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx specifickým xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxxx jejich xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx xx měly xxx pravidelně xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, x měly xx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx takové xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xx UV xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx Balb/c 3X3 z xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx xxx xxx pasáže. Xx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 xx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x této metodice.
1.7.1.2 Xxxxx x kultivační xxxxxxxx
Xxx rutinní xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx postupu by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x inkubační xxxxxxxx. X buněk Xxxx/x 3X3 xx xxxxx x XXXX (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx sérem, 4xX xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxx xxx 37 °X/7, 5 % XX2. Xxxxxxx xxxxxxxx xx, xxx kultivační xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx dosavadního xxxxxxx xxx xxxxxxx buňky xxxx buněčné linie.
1.7.1.3 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xx nasadí xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx hustotě x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU in xxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx buňky nasazují xx kultivačního xxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxx konfluence xx xxxxx xxxxxxx, xx. do xxxxxxxx, xxx xx xx 48 x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx životaschopnost. Xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 xxxxxxxxxxx x 96xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 × 104 buněk xx xxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx se xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx do xxxx xxxxxxxxxx 96xxxxxxxxx destiček, xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx podrobeny celému xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxxx podmínek xxxxx xxxx, xxx je xxxxx z xxxxxxxx xxxxxxx (+XXX/XXX) a xxxxx je xxxxxxxxx x xxxxx (-XXX/XXX).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx potenciálu, xxxx x fototoxikologii dosud xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx jejíž xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxx xxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx metabolická xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxx xx nezbytné xxx za vědecky xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx chemická xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx x xxxxxxxx neprokazují xxxxxxxxxxxx skladování. Může-li xxxxx x rychlé xxxxxxxxxxxxx, musí xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx být rozpuštěny xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx. v Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (EBSS) xxxx xx fyziologickém xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx (PBS), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x pH xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxx při xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx chemické xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx 100násobek xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx xx xxxx xxx zředěny x xxxxxx 1:100 fyziologickým xxxxxxxx. Použije-li se xxxxxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 % xxx. xx xxxxx xxxxxxxxx, xx. x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxx (XxXX). Mohou xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxxxx), xxx měly xx xxx pečlivě posouzeny xxxxxx specifické xxxxxxxxxx, xxxx. reakce se xxxxxxxxx chemickou xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx účinků, xxxxxx xxxxxxxx.
Xx-xx xxxxx, xxxx xxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx x/xxxx zahřátí xx 37 °X.
1.7.1.6 Xxxxxxx XX xxxxxxx/xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx: xxxxx xxxxxxxx zdroje xxxxxx x vhodné xxxxxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušení xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx v xxxxx XXX x xx xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxx spojováno s xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx xxxxxx x xxxxx XXX xx xxxx xxxxxxxxxx a xx přímo xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx vzrůstá xxxx 313 nm x 280 nm 1000krát (11). Xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx by xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx požadavek, xxx zdroj světla xxxxxxxxx světlo o xxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxxxx chemická látka xxxxxxxxx, a xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx látek. Xxxxxxx xxxxxx délky x xxxxx, xxxxxx emise xxxxx (infračervená xxxxxx), xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx slunečního světla xxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. X xxxxxxxxx simulátorech xx xxxxxxx jak xenonová xxxxxxx, tak xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx x nich xx xx xxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxx a xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx slunečním xxxxxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx UVB xxxxxx, xxxx by xxx xxxxxx xxxxxxxxxx, aby xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx délky XXX xxxxxxxxx.
Xxx zkoušku fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx by mělo xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxxx zbavené XXX xxxxxx (XXX:XXX ˜ 20:1). Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx simulátoru použitého xx xxxxxxxxx studii xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (3).
Xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) xx musí pravidelně xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx širokopásmového XX-xxxxx. XX-xxxx musí xxx xxx xxxx xxxxx kalibrován. Funkčnost XX-xxxxx by xxxx xxx kontrolována x xx tímto xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX-xxxx xxxxxxxx typu. X xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx xxx v xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx xxxxxx světla x xx kontrole xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx UV-metru xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx odbornou xxxxxxx školenými osobami.
Dávka 5 X/xx2 xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx necytotoxická xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 x xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxx 5 X/xx2 xx xxxx 50 xxx. xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 1,666 XX/xx2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx buněčná linie xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx, může být xxxxx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, aby xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxx dostatečná pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx vypočte xxxxx xxxxxxxx:
x(xxx) = xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (X/xx2) 100 / xxxxxxxxx xxxxxxx (xX/xx2) 60 (1 J =.W xxx)
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx; při vyšších xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx). Hodnota xX xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx vyhovující (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx koncentrací chemických xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+ UVA) x xxx světla (-XXX) by xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx rozmezí. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx xxx, xxx xxxx křivky xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxx xxxxxxx geometrická xxxx xxxxxxxxxxx (s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ředění).
1.7.3 Xxxxxxxx xxxxxx [1]
1.7.3.1 Xxxxx den
Připraví xx xxxxxxx suspenze 1 × 105 xxxxx/xx x kultivačním médiu x 100 μl xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx 96xxxxxxx xxxxxxxx (slepý xxxxx). Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx 100 μl buněčné xxxxxxxx x xxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 buněk xx xxxxx). Xxx každou xxxxxxxxx chemickou xxxxx xx připraví xxx xxxxxxxx: xxxxx xxx xxxxxxxxx cytotoxicity (-UVA) x xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (+XXX).
Xxxxx xx xxxxxxxx 24 x (7,5 % XX2, 37 °X), xxxxx xxxxxxxxxx semikonfluentní xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx přichycení x xxxxxxxxxxxxx xxxx.
1.7.3.2 Xxxxx den
Po xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx x každá xxxxx xx xxxxxxx dvakrát 150 μx XXXX/XXX. Xxxxx se 100 μx XXXX/XXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky nebo xxxxx rozpouštědlo (negativní xxxxxxxx). Aplikuje se 8 různých xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx zkoušenou xxxxxxxxx látkou xx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxx 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °C).
K xxxxxxxxx xxxxx zkoušky x xxxxxxxx XXX xx buňky xxx xxxxxxxx teplotě po xxxx 50 min. xxxxxxx xxxx xxxxx 96xxxxxxx xxxxxxxx UVA xxxxxxx x xxxxxxxxx 1,7 XX/xx2 (5 X/xx2. Xxx xxxxxxx xx kondenzaci xxxx xxx víčkem, větrá xx pomocí xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxx UVA xx ponechají 50 xxx. (doba expozice XXX) v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx xx odstraní x xxxxx jamka xx xxxxxxx xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx xxx (18-22 x) (7,5 % XX2, 37 °X).
1.7.3.3 Třetí xxx
Xxxxxxxxxxxxx hodnocení
Buňky xx xxxxxxxxxx xxx mikroskopem x xxxxxxx kontrastem. Xxxxxxxxxxx xx změny xxxxxxxxxx buněk způsobené xxxxxxxxxxxx účinkem xxxxxxxx xxxxxxxx látky. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx xxx hodnocení xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxxxx 150 μx xxxxxxxxxxxx XXXX/XXX x xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Přidá xx 100 μl xxxxx XX x xxxxxxxx xx 3 x xxx 37 °C xx zvlhčené xxxxxxxxx x 7,5 % XX2.
Xx xxxxxxxx xx xxxxxx NR odstraní x buňky se xxxxxxx 150 μl XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx (případně xxx xxxxxxxx odstředit x xxxxxxxx xxxxxx).
Xxxxx xx xxxxxx 150 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx, aby se xxxxxxxxxx XX.
Xxxxxxxx xx xxxxxx 10 xxx. xxxxx xx třepačce, xxxxx se XX x buněk xxxxxxxxx x nevytvoří xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx extraktu NR xxx 540 nm, xxxxxxx se pro xxxxxxxx použije xxxxx xxxxx. Údaje xx xxxxx xx vhodném xxxxxxx (např. XXXXX) x počítači xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxx x množství xxxxx
Xxxxx xx xxxx xxxxxxx smysluplnou xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx získané xxx xxxxxxx UVA/VIS xxxx xxx xxxx. Je-li xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x interval xxxx nimi nastaven xxx, xxx xxxx xxxxx proložit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Vzhledem x xxxx, že xx zkoušená chemická xxxxx nemusela být xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx x temnu (-XXX) xxxxxxxxxxx, ale mohla xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx ozáření (+XXX), xxxx xxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx koncentrací, xxxxx xxxx být v xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx lišily, xx-xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxx-xx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (-XXX x +UVA) xxxxxxxxxxxx zjištěna, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx dávkami až xx nejvyšší xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx experimentem xx xxxxxxxxxx. Negativní výsledky xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látka xxxxxxxx xx dostatečně xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxx případech xxxxx xxxxx hlavní experiment xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx rozmezí xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x výsledky xxxxxx hraničních hodnot xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xx-xx opakované xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxx dosažení xxxxxxx výsledku xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx podmínky. Klíčovou xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx příprava roztoků xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxx být změna xxxxxxxx (xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx x úvahu xxxxxxxx xxxxxxxxx doby xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx může xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx.
2.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx-xx xx xxxxx, stanoví xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx 50 % xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx neutrální xxxxxxx (XX) (EC50). Xxx tak učinit xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx nelineární regrese (xxxxxxx Hillovou funkcí xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (14). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX50 pro xxxxx xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx proložení. Xxx xxxxxxx XX50 xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx proložení. X takovém xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxx x: xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx x: xxxxxxxxxxxxxxxxx), neboť v xxxxx případech xxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx závislosti odezvy xx xxxxxxxxxxx téměř xxxxxxxx.
2.3 Xxxxxxxxx výsledků (xxxxxxxxxxx xxxxxx)
2.3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxx — xxxxx 1: xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxxx jak xxx xxxxxxx (+XXX), xxx xxx xxxxxxx (-XXX) získány úplné xxxxxx závislosti odezvy xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (PIF) xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
(x) XXX = (XX50 (-UV)) / (XX50 (+XX))
Xxxxxxx XXX &xx; 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu, xxxxxxx xxxxxxx XXX ≥ 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pouze xxx +XXX x xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx -XXX, xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx, xxxxxxx xxx o výsledek, xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx případech lze xxxxxxxxx hodnotu "&xx; XXX", xxxxxxxx xx xxxxxxx -XX xxxxxxx xx xx nejvyšší xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxx), x tato xxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx "> XXX";
(x) &xx; XXX = (Xxxx (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx "&xx; XXX", xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu xxxx hodnota &xx; 1.
Xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxxx xxxxx nevykazuje xx do xxxxxxxx xxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX50 (-XX) xxx xxxxxxx XX50 (+ XX), xxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx formální xxxxxxx "XXX = *1";
(C) &xx; PIF = *1 = (Cmax (-XX)) / (Cmax (+XX))
Xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx "XXX = *1", xx xxxx xxxxxxx předpovědí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu.
V xxxxxxxxx x) a x) xx xxxx xxx pro předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx opatrně xxxxx v xxxxx xxxxxxxxxxx dosažené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in vitro.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx model xxxxx 2: xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx lze xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxx vyvinut x xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX (15) x xxx xxxxxxxx naslepo x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vitro u xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxx XX xxxxxx (13). Xxxxx model xxxx xxxxxxx jako xxxxx XXX v xxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx XX50. Tento xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (mean xxxxx xxxxxx) (MPE), xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx srovnání xxxxxx křivek xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx. Xxx použití xxxxxx xxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx software, xxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxx.
2.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx (XXX ≥ 5 xxxx XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, že látka xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx bylo výsledku xxxxxxxx při xxxxxxxxxxxxx xxx 10 μx/xx, xx také xxxxxxxxxxxxx, xx látka xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podmínek xxxx xxxxxxxxx xx xxxx. Xx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxx koncentraci 100 μx/xx, xxxxx xxx xxx posouzení xxxxxxxxxxxxx xxxx intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xx xx xxxxx xxxxx údajů x xxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxx akumulaci xxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky alternativní xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. xx použití xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxx.
Xxxxxxxxx výsledek zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx (XXX &xx; 5 xxxx XXX &xx; 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. V xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx zkoušet xxxxxxxxx xxxxx až xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, znamenají negativní xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x fototoxicitu xx xxxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, xxx xxxx při nižších xxxxxxxxxxxxx obdrženy totožné xxxxxxxxxx xxxxxxx odezvy xx xxxxxxxxxxx (EC50 +XX x XX50 -XX), je xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxx-xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (+XX x -XX) x xxxx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx rozpustností xx vodě xx xxxxxxx menší xxx 100 μg/ml, není xxxxxx zkouška pro xxxxxxxxx xxxxx vhodná x xxxx xx xxx zvážena potvrzující xxxxxxx (např. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx in vitro xxxx xxxxxxxx in xxxx).
3. ZPRÁVY
Protokol x xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxxxxx látka:
- xxxxxxxxxxxxx údaje a xxxxx CAS, xx-xx xxxxx,
- fyzikální xxxxxxxxxx x xxxxxxx,
- xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx studie,
- xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxx x tomto xxxxxxxxxxxx,
- procentuální koncentrace xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx (XXXX xxxx XXX).
Xxxxx:
- xxx x xxxxx buněk,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxx xxxxxxx xxxxxx, je-li xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xx XXX stanovená xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — inkubace xxxx xxxxxxxx a xx ní:
- xxx x xxxxxxx kultivačního xxxxx,
- inkubační podmínky (xxxxxxxxxxx XX2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- délka xxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x po xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxxx chemické xxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxxx jak při xxxxxxx UV/VIS, tak xxx něj,
- v xxxxxxx, že zkoušená xxxxxxxx látka xxxxxxxx xxxxxxxx rozpustnost x xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx,
- xxx a složení xxxxxxxxxx média (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky.
Zkušební xxxxxxxx c) — xxxxxxx:
- xxxxxxxxxx výběru xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxx charakteristiky xxxxxxx xx xxxxxx světla,
- xxxxxxxxxxxxxxx propustnosti/absorpce xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx o jeho xxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx zkoušeného xxxxxxx,
- intenzita xxxxxxx XXX x této xxxxxxxxxxx, vyjádřená v xX/xx2,
- xxxxx expozice XX/XXX xxxxxx,
- dávka XXX záření (xxxxxxxxx × xxx), xxxxxxxxx x J/cm2,
- xxxxxxx xxxxxxxxx kultur během xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x temnu.
Zkušební xxxxxxxx x) — xxxxxxx XXX:
- složení média XX,
- xxxx xxxxxxxx XX,
- xxxxxxxxx podmínky (xxxxxxxxxxx CO2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxxxxx xxxxxxxx XX (xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx extrakce),
- xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx odečet xxxxxxxxxx XX,
- xxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxxx délka, xx-xx xxxxxxx,
- složení slepého xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxx, xx-xx xxxxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxx zkoušené chemické xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnosti xxxxxxx,
- xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxx relativní xxxxxxxxxxxxxxx buněk) získané xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx +XXX x -XXX,
- xxxxxxx křivek xxxxxxxxxx xxxxxx na koncentraci: xx-xx xx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx XX50 (+XXX) a XX50 (-XXX),
- srovnání xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx UVA/VIS x bez xxxx, x to xxx xxxxxxxx fotoiritačního xxxxxxx (xxxxx-xxxxxxxxxxx xxxxxx ) (XXX), xxxx výpočtem xxxxxxxxx světelného účinku (xxxx photo effect) (XXX),
- xxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxx XX) ozářených x neozářených buněk,
- xxxxxxxxx údaje xxx xxxxxxxxx kontrolu, střední xxxxxxx a směrodatná xxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx pozitivní kontrola:
- xxxxxxx XX50 (+UVA), XX50 (-XXX) x XXX-xxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx,
- dosavadní xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx XX50 (+XXX), EC50 (-UVA) x XXX, střední xxxxxxx x směrodatná xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. LITERATURA
(1) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xöxxxx, B., Xxxxxüxxxx, H. X., Xxxxxxx, X., Klecak, X., L'Eplattenier, X., Xxxxxxx, M., Xxxxxx, X. W., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Pape, X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, O., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. (1994), EEC/COLIPA xxxxxxx xx in xxxxx xxxxxxxxxxxxx testing: Xxxxx xxxxxxx obtained xxxx x Balb/c 3X3 xxxx xxxxxxxxxxxxx assay, Xxxxxxxxxx in xxxxx 8, 793-796.
(2) Xxxx (1998), Xxxxxxxxx xx xxx scientific validity xx the 3X3 XXX XX xxxx (xx xx xxxxx xxxx for phototoxicity), Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxx Centre: ECVAM xxx DGXI/E/2, 3 Xxxxxxxx 1997, XXXX 26, 7-8.
(3) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, J., Pape, X. X. X., Xxxxxxxxxx, X., De Xxxxx, O., Holzhütter, X. X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Liebsch, X., Lovell, W. X., Maurer, T., Xxxxxxxxxxxxx, U., Potthast, X. M., Xxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, W., Brantom, X. (1998), EU/COLIPA "Xx vitro xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxx II (xxxxx trial), part 1: the 3X3 XXX xxxxxxxxxxxxx xxxx, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 12, 305-327.
(4) XXXX Xxxx Guidelines Xxxxxxxxx, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Final Report xx xxx OECD Xxxxxxxx xx Harmonisation xx Xxxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx Toxicological Xxxx Xxxxxxx, XXXX Publications Xxxxxx, Paris, 1996.
(5) Xxxxxx, W. X. (1993), A xxxxxx xxx in xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 7, 95-102.
(6) Santamaria, X., Prino, X. (1972), Xxxx of xxx xxxxxxxxxxxx substances, Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx. 3 Part 1, Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx Xx, Xxxxxxxxx, XX–XXXX.
(7) Xxxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. W., Hölzle, X., Johnson, X. X., Maurer, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxx, W. J. X., Sapora, X., Xxxxxxxxx, X. (1994), Xx vitro phototoxicity xxxxxxx: The xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX workshop 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, X. D. (1989), Photosensitization. V: Xxx xxxxxxx of xxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxx, xx.), Plenum Xxxxx, New Xxxx, 2. xxx., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, X., Puerner, X. A. (1985), Xxxxxxxx determination in xxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. G., Xxxxxxxxxx X. (1996). X: Animal xxxxxx xxx phototoxicity testing, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (F. X. Xxxxxxxx, H. I. Xxxxxxx xxx.), Xxxxxx &xxx; Xxxxxxx, Xxxxxxxxxx XX, 5. xxx., 515-530.
(11) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx X. (1987), Action xxxxxxx xxx human xxxx xxxxx: xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx cytotoxicity xx the xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, Cancer Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Xxxxxxxx Operating Xxxxxxxxx: Xxxx/x 3X3 XXX Phototoxicity Test, xxxxxxxx 23. xxxxxxxx 1997 M. Liebschem, xxxxxxxxx 6. xxxxxx 1998 týmem Xxxxxxxxxx Xxxx xx the XX/XXXXXX project "Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Spielmann, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxx, X. J. W., Xx Xxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Pfannenbecker (1998), X Xxxxx on xxx Xxxxxxxxxx Potential xx XX Xxxxxx Xxxxxxxxx xxxx Annex XXX xx the XX Directive 76/768/EEC xx xxx 3X3 XXX Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, XXXX 26, 679-708.
(14) Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X. (1995), Mathematical xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxx, 3, 127-138.
(15) Holzhütter, H. X. (1997), X xxxxxxx xxxxxxx xx xx vitro xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx from xxxxx xx xxxx-xxxxxxxx curves xxx xxx use xxx xxxxxxxxxx the xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx chemicals, XXXX 25, 445-462."
"Xxxxxxx
&xxxx;
[1] Xxxxx xxxxxxxxxxx lze nalézt x xxxxxxxxxx (12).