Xxxxxxxx Komise 2000/33/XX
xx xxx 25. xxxxx 2000,
xxxxxx se po xxxxxxx xxxxx přizpůsobuje xxxxxxxxxxx pokroku xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX x xxxxxxxxxx právních x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxxx nebezpečných xxxxx [1]
(Xxxx x xxxxxxxx pro XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX ze xxx 27. xxxxxx 1967 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x správních xxxxxxxx týkajících xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x Xxxx 1999/33/ES [3], a xxxxxxx xx xxxxxx 28 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxxx xxxxxxx:
(1) X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX se xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx x ekotoxicity xxxxx x přípravků. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx technickému pokroku.
(2) Xxxxx xx. 7 xxxx. 2 směrnice Xxxx 86/609/EHS xx xxx 24. listopadu 1986 x sbližování xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx států xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx používaných pro xxxxxxx x xxxx xxxxxxx účely [4] xxxxx xxx xxxxx, xxx němž xx xxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx, je-li xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Komise zamýšlí xxxxxxx do přílohy X xxxxxxxx 67/548/EHS xxxxxx xxxxxxxxxxxx zkušební xxxxxx, xxx nichž xxxxxx xxxxxxxxx zvířata, x xxxxx xxxxxxxxxxx xx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx. 3 xxxx. 1 xxxxxxxx 67/548/XXX.
(4) Xxxxxxxx této xxxxxxxx xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx technickému xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxx xxxxxx X x XX xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx X xxxxxxx V xxxxxxxx 67/548/XXX.
Xxxxxx 2
1. Členské xxxxx uvedou x xxxxxxxx právní x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x touto xxxxxxxx xxxxxxxxxx do 1. xxxxx 2001. Neprodleně x nich xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx odkaz xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx státy xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx právních xxxxxxxx, které přijmou x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v platnost xxxxxx dnem xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
X Bruselu dne 25. xxxxx 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxxx Wallström
členka Komise
[1] Xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx dvacáté xxxxx.
[2] Xx. xxxx. 196, 16.8.1967, x. 1.
[3] Xx. věst. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Úř. xxxx. X 358, 18.12.1986, x. 1.
PŘÍLOHA I
"B.40 XXXXXXX XXXXXX XX XXXX
1. XXXXXX
1.1 Úvod
Dvě zkoušky xx xxxxx na xxxxxxx xxxxxx na xxxx xx principu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx elektrického xxxxxx kůže xxxxxxx (XXX) x zkouška x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx byly Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx alternativních metod (XXXXX, Společné xxxxxxxx xxxxxxxxx Evropské Xxxxxx) (1, 2, 3) xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx. Validační studie XXXXX prokázala, že xxxxx xxxxxxxxx lze xxxxxxxxxx rozlišit xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kůži. Xxxxxxxx x zkoušce založené xx xxxxxx lidské xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx účinků (xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, R 35 x xxxxxxx látky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kůže, X 34) (2). Xxxxx a xxxxxx xxxx zkoušek je xxxxxx; xxxxx xxxxxxx, xxxxx xx být xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxx také Xxxxxx xxxx, xxxx X.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxx: xxxxxxxx xxxxxxxxx kůže xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx body 1.5.3.4 x 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx metody — xxxxxxx XXX xx xxxx potkana
Zkoušený xxxxxxxx xx xx xx 24 x xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx terčíků xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Materiály s xxxxxxxxx účinky xxxx xxxxxxxxxxxxxx schopností způsobit xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x bariérové xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (stratum xxxxxxx), xxxxx xx xxxxxx xxxx snížení xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx xxxxxx (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX xxx prahovou hodnotu. Xx zkušebního postupu xxx povrchově xxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx (6)) xxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx látek (2, 7).
1.5 Popis xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx TER xx xxxx potkana
1.5.1 Xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx musí xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx (20 — 23 xxxxxxx) xxxxxxx (Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx x boční xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx holicím strojkem. Xxxxxxx xx poté xxxxx xxxxxxxx otíráním, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx antibiotik (xxxxxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx a amfotericin x koncentracích zastavujících xxxx xxxxxxxx). Zvířata xx xxxxx x xxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxx znovu xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x použijí xx xx 3 xxx (x xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx starší xxx 31 xxx).
1.5.2 Xxxxxxxx xxxxxxx kůže
Zvířata xx xxxxxxx xxxxxx. Z xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx tuk xx x xxxx opatrně xxxxxxxxx. Kůže xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx teflonové (XXXX) xxxxxxxx tak, xxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx s trubičkou. Xxxx konec xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X-xxxxxxx, xxx xxxx xxxx xxxxxxxx, x přebytek xxxxx xx xxxxxx. Rozměry xxxxxxxx x X-xxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxxx X-xxxxxxx xx teflonové xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pružinové svorky xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx komory obsahující xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX) (xxxxxxx 2).
1.5.3 Xxxxxxxx xxxxxx
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (150 μx) xx xxxxxxxx xx epidermis xxxxxx xxxxxxxx (xxx. 2). Xxx zkoušení pevných xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx tak, xxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx xx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (150 μx) a xxxxxxxx xx xxxxx protřepe. Xxxx látkami a xxxx by xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx. X některých xxxxx xxxx xxxx xxx dosaženo xxxxxxxx xx xx 30 °X, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx rozemletím xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx terčíky xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx aplikuje xx xxxx 24 h (xxx xxxx bod 1.5.3.4). Zkoušená xxxxx xx xxxxx odstraní xxxxxxx tekoucí xxxx x teplotě xxxxxxx 30 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxx usnadnit omytím xxxxxxx xxxx teplé xx 30 °X.
1.5.3.2 Xxxxxx XXX
XXX xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. XXX 401 xxxx 6401 xxxx ekvivalentní). Xxxx xxxxxxx xx povrchové xxxxxx xxxx sníží xxxxxxxx dostatečného objemu 70 % ethanolu xxx, xxx xxxx xxxxxxxxx zakryta. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 3 ml roztoku xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX). Elektrody xxxxxx xx xxxxxx xx xxx xxxxxx terčíku xxxx xx účelem xxxxxx xxxxxx v xΩ/xxxxxx kůže (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pod xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxx xxxxxxx (silné) xxxxxxxxx je xxxxx xxxxxx odporu xxxxxx x horní xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx, že xx délka xxxxx xxxxxxxxx ponořené v xxxxxxx síranu hořečnatého xxxxxx. Vnější (xxxxx) xxxxxxxxx xx umístěna xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx mezi spodkem xxxxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx konstantní (xxxxxxx 1), neboť xxxx xxxxxxxxxx má xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
Xx xxxxx xx xxxxxxxx, xx xx-xx xxxxxxxx hodnota xxxxx xxx 20 xΩ, xxxx xx xxx způsobeno xxxxxxx xxxxxxxx látky na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. X odstranění xxxx vrstvy se xxx xxxxxxx xxxx. xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx x 10 x xx protřepává. Xxxxxx xxxxxx hořečnatého se xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx síranem xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx kontroly spadají xx přijatelného rozpětí xxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx tyto xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx přijatelná rozpětí xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx odporu (xΩ) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx chlorovodíková (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx voda |
10–25 |
1.5.3.3 Upravený xxxxxx xxx povrchově xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxx-xx xxxxxxx TER xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx látky xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx 5 kΩ, xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxx, xxx výsledky xxxxxx falešně pozitivní (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X
Xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx na 2 x 150 μx 10 % roztoku xxxxxxx sulforhodaminu B x destilované xxxx. Xxxxxxx xxxx se xxxx xxxxxxxxx 10 x xxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx teplotě, aby xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx kůže xx xxxxxxx sejmou z xxxxxxxxx trubičky a xxxxxx se xx xxxxxxxx (xxxx. 20 xx xxxxxxxx lahvičky xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx deionizovanou xxxx (8 xx). Xxxxxxxx xx xxxxx 5 xxx. xxxxxxxxxxxx, xxx xx odstranilo xxxxx xxxxx barvivo. Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx, a xxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx 30 % xxxxxxx (x/X) xxxxxxx-xxxxxxx-xxxxxxx (XXX) x destilované xxxx x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx 60 °C. Xx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx kůže vyjmou x zlikvidují a xxxxx xxxxxx se xxxxxxxx 8 min. xxx 21 °X (xxxxxxxxx odstředivá síla ˜ 175). 1 xx vzorku supernatantu xx xxxx zředí 4 xx 30 % (m/V) xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxx. Absorbance (X) xx měří xxx xxxxxxxxx 565 nm.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx obsahu barviva
Obsah xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx B xx xxxxxx kůže xx xxxxxxx x xxxxxx X (xxxxxxx xxxxxxxxx koeficient xxxxxxxxxxxxxx X xxx 565 xx = 8,7 × 104; molekulová xxxxxxxx = 580). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X se xxxxxxx xxx každý xxxxxx xxxx x xxxx xx vypočte jeho xxxxxxx hodnota. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxxxx, xxxxx hodnoty xxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx xx přijatelného rozmezí xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx doporučeny xxxx xxxxxxxxxx hodnoty xxxxxxx xxxxxx barviva:
|
Kontrola |
Látka |
Rozmezí xxxxxx barviva (μx/xxxxxx xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X kyselina xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
40-100 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx lze xxxxxx aplikovat xx xxxxxxx xxxx na xxxxxx dobu (xxxx. 2 hodiny), aby xx identifikovaly xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx stanovení TER xxxxxxxxxxxx leptavé účinky x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek při xxxxxx aplikaci xx xxxxxx xxxx xx xxxx 2 xxxxx (2), xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx správnou xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx bez leptavých xxxxxx při 24xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx experimentální xxxxxx xxxxx xxx vliv xx získané xxxxxxx XXX. Xxxx 5 Ω pro předpověď xxxxxxxxx xxxxxx byl xxxxxxx z údajů xxxxxxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxx kalibrovat xxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx referenčních xxxxxxxxx vybraných x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (3).
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx — stanovení xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xx xxxx 4 hodin xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx kůže xxxxxxxxxxx x rekonstruované xxxxxxxxx x funkční rohovité xxxxxx. Materiály s xxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx pokles xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (stanovený xxxx. xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX) xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx úroveň. Xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xx, xxx jsou xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxx xxxx xxxxx) x xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxxxxxx xxxx buněk x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
1.7.1 Xxxxxx lidské xxxx
Xxxxxx lidské xxxx xxxxx pocházet z xxxxxxx xxxxxx, musí xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Model musí xxx xxxxxxx rohovitou xxxxxx x xxxxxx xxxxxx buněk pod xx. Bariérová xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx. Xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx modelu k xxxxxxxxxxxx látkám, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rohovitou xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx živých xxxxx x xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx vysoká, xxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxx. xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. redukcí XXX, xx. měřením xxxxxxx absorbance A) xx expozici negativní xxxxxxxxx xxxxx musí xxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxx pro xxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx po xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxx (ve xxxxxxxx x životaschopností xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx) xxxx být xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx, aby xxxxx xxxxxxxxx mezinárodním xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx (2).
1.7.2 Zkušební xxxxxx
1.7.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
X xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx aplikováno xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 25 μx/xx2). X xxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxx látky, xxx xxxxxxx xxxx, x xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx ovlhčena, xxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxx; xxxxx xxxxx xx měly být xxxxx potřeby před xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx látek (2). Xx uplynutí expoziční xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx životaschopnosti buněk
K xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Nejčastěji se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxx níž xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx prokázalo, že xxxxxxxxx správné x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx XXX x koncentraci 0,3 xx/xx při xxxxxxx 20-28 °X xx dobu 3 xxxxx. Sraženina xxxxxxx xxxxxxxxx se poté xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx měřením xxxxxxxxxx X xxx xxxxxx xxxxx 545 až 595 nm.
1.7.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxx xxxxx xxxx xx xxxxxxxx životaschopnosti xxxxx. Xxxxxxxxxx se, xxx metodika x xxxxxxxxxxx xxxxx byly xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx řady xxxxxxxxxxxx standardů xxxxxxxxx x chemických xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx ECVAM (3). Xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x mezinárodními xxxxxxxxx vykazovala x xxxxx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx látek. Metoda xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx validitu (2) x xxxxxxxx xxxxxx validační studie xxxx xxx publikovány xx vědeckém xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
2. ÚDAJE
2.1 Zpracování xxxxxxxx
2.1.1 Zkouška TER xx kůži xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx (xΩ) pro xxxxxxxx xxxxxxxx, pozitivní x negativní xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx experimentech, o xxxxxxxxx hodnotách x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.
2.1.2 Xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx A x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxx zkoušený xxxxxxxx, xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx xxxxx včetně xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x středních xxxxxxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxx tabulky.
2.2 Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.2.1 Xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
Xx-xx hodnota XXX dosažená pro xxxxxxxxx látku xxxxx xxx 5 kΩ, xxxx látka xxxxxx. Xx-xx hodnota TER xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ x xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx organickou xxxxx, xx látka xxxxxx.
X xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx neutrálních xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx průniku barviva. Xx-xx střední xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx větší xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 36 % HCl xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, je xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xx tedy xxxxxx. Xx-xx střední xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxx obsah xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx souběžně xxx použití 36 % HCl, xx xxxxxxx falešně xxxxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx žíravá.
2.2.2 Zkouška x xxxxxxx lidské xxxx
Xxxxxxx obsorbance A xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx; hodnoty xxxxxxxxxx A dosažené xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx lze xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Hraniční xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx od xxxxxxxxxx materiálů, které xxxxxx žíravé (nebo xxxxxx xx rozlišují xxxxx xxxxx leptavých xxxxxx), xxxx být xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx před xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx validační studie xxxx xxxxxxxx, že xx xxxxxx (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx o zkoušce
Protokol x zkoušce xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx tyto xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx látka:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x případně fyzikálně-chemické xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx, pokud byly xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx:
- podrobnosti xxxxxxxxx xxxxxxx,
- popis x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx:
- hodnoty xxxxxx (xxxxxxx TER) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (zkouška x modelem lidské xxxx) xxx zkoušený xxxxxxxx, xxxxxxxxx a xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxx standardní referenční xxxxxxxx látky xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx experimentech x středních xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx,
- xxxxx jakýchkoli xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) XXXXX (1998), ECVAM Xxxx &xxx; Xxxxx, ATLA 26, 275-280.
(2) Xxxxxx, X. H., Xxxxxx, X. E. X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X. A., Xxxxxx, X. X., Xxxx, X. X., Esdaile, X. J., Holzhutter, X-X., Xxxxxxx, X. (1998), The ECVAM xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xx vitro xxxxx xxx skin xxxxxxxxxxx. 2. Results xxx evaluation by xxx Management Team, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 12, 483-524.
(3) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. G., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X., Walker, X. X., Xxxxx, X. X. (1998), The XXXXX international xxxxxxxxxx xxxxx on xx xxxxx tests for xxxx xxxxxxxxxxx. 1. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxx xxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. X. X., Pemberton, X. X., Xxxxxx, X. (1986), An xx xxxxx skin xxxxxxxxxxx xxxx — modifications xxx validation, Food Xxxx. Xxxxxxx. 24, 507-512.
(5) Xxxxxx, X. X., Xxxx, X. X., Xxxxxxx, R., XxXxxx, X. C., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X., Cheeseman, X., Esdaile, D. X., Gardner, X. (1992), The xxxx xxxxxxxxxxx test xx xxxxx: xxxxxxx xx xx interlaboratory xxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. P., Xxxxxx, X. X., Balls, X., Xxxxxx, P. X., Xxxxxx, X. X., Earl, X. X., Xxxxxxx, X. X., Liebsch, X. (1998), Xx xxxxxxxxxx xx the xxxxxxxx XXXX testing xxxxxxxx xxx skin xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. D., Xxxxxx, X. X., Esdaile, X. X., Xxxxxxx, X. R., Gordon, X. X., Hildebrand, X., Xxxxx, X. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxx, M., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, W., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X. 1995), A xxxxxxxxxxxxx study xx xx xxxxx skin xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX workshop 6, ATLA 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Obrázek 2"
&xxxx;
XXXXXXX XX
"X.41 FOTOTOXICITA — XXXXXXX XXXXXXXXXXXX 3X3 XXX IN XXXXX
1. XXXXXX
1.1 Úvod
Fototoxicita xx definována xxxx xxxxxxx odezva xxxxxxxx xx xxxxx expozici xxxx xxxxxxx chemickým xxxxxx a následné xxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxx vyvolaná xxxxxxxx xxxx po systémovém xxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx ze zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx vitro xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx. existence xxxx xxxxxxxxxxx možného nebezpečí, xxxxx může plynout xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx zkoušky xx xxxxx x hlediska xxxxxxxxxxx xx stanovení xxxxxxxxxxxx vyvolané kombinovaným xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x světla, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sloučeniny, xxxxx jsou xxxxxxxxxxx xx xxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxx na xxxx, x rovněž xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX/XXXXXX x xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vitro x xxxxxx xxxxxxxxxx zkouškám xx vivo. X xxxx 1996 doporučila xxxxxxxx skupina XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxx fototoxicity (4).
Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx x akutními fototoxickými xxxx xxxxxxxxxxxx účinky xx vivo x xxxxxx x x xxxxxxx a zkouška xx ukázala xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx vynikající. Xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx jiných nepříznivých xxxxxx, xxxxx mohou xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x světla, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxx, fotoalergie x xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx látek, které xxxxxxxx tyto xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx postupného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx chemických látek xx uvedena v xxxxxxx.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxxx ultrafialového xxxx xxxxxxxxxxx světla dopadajícího xx xxxxxx, xxxxxx xx X/x2 xxxx xX/xx2.
Xxxxx světelného xxxxxx: xxxxxxxx (xxxxxxxxx × xxx) xxxxxxxxxxxxxx (XX) xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx na povrch, xxxxxxxxx v xxxxxxx (X × x) xx xxxxxx povrchu, xxxx. X/x2 xxxx X/xx2.
Xxxxxx xxxxx UV xxxxxx: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx CIE (Commission Xxxxxxxxxxxxxx xx l'Eclairage): XXX (315400 nm), XXX (280315 xx) x XXX (100280 xx). Používají xx xxxxxx xxxx označení: xxxx xxxxxxx xxxx XXX x UVA xx často xxxxxxxxx xxxxxxx 320 xx x xxxxx UVA xxxx být xxxxxxxxx xx UV-A1 x XX-X2 x hranicí xxxxx 340 xx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: parametr, xxxxxx xx měří xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx populace (xxxx. xxxxxx vitálního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx) x který x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x celkovým xxxxxx x/xxxx životaschopností xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (x XX, nebo xxx XX), xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx model: xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx zkoušek xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxxxx metodice xxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx fototoxicity 3T3 XXX xx vitro xx xxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx použít xxxxxx XXX a xxxxxxxx XXX.
XXX (photo-irritation factor — xxxxxxxxxxxx faktor): xxxxxx získaný xxxxxxxxx xxxx stejně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XX50) xxxxxxxx xxxxx, x xx při xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/XXX xxxxxxx (+ XX) a xxx něho (-UV).
MPE (xxxx xxxxx effect — xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx): xxxx veličina xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx průběhu xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/xxx světlem (+ XX) x bez xxxx (-XX).
Xxxxxxxxxxxx: akutní xxxxxxx reakce, vyvolaná xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxxxx: xxxxx úroveň xxxxx "xxxxxxxxxxxx", který xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xx kůži xx expozici xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx nebo xxxxxx). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx vedou vždy x nespecifickému buněčnému xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx xxx opalování).
Fotoalergie: xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, ke xxxxx nedochází při xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxx x xxxxx vyžaduje xxxxxxxx xxxx jeden xxxx xxx týdny xxxx xxx, xxx xxx reakci kůže xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: genotoxická odezva xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx, která je xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx negenotoxické xxxxx XX/XXX světla x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx látce.
Fotokarcinogenita: xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx světla a xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx x případě, xxx xx tvorba tumoru xxxxxxxxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx chemickou xxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx, xx xxx xxxx vyvinutou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xxxxxxxxxx použít xxxx xxxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx předložené xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Úvodní poznámky
Fototoxické xxxxxx byly zaznamenány x mnoha xxxx xxxxxxxxxx látek (5, 6, 7, 8). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxx-Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxx fotoreakce xxxxxxxxxxx absorpci světelných xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx zkoušení xxxxx xxxxxxxxxx metodiky by xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxx Xxxxxxxx OECD 101). Xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 x.xxx-1.xx-1, xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxx zkouškou xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx vitro nebo xxxxxxxxx jinou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx nepříznivé xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek).
1.5 Xxxxxxxx zkušební xxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx mechanismy, xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxx x fototoxické xxxxxx (7). Všechny xxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx zkoušení x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX/XXX xxxxxx x xxx xxxx expozice. Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx zkoušce xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx červeně (XX) (9) 24 xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx Xxxx/x 3X3 xx 24 x kultivují, aby xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx 96xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx zkoušenou chemickou xxxxx xx xxxx 1 x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX/XXX xxxxxx 5 J/cm2 XXX (+ UV xxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx udržuje x temnu (-XX xxxxxxxxxx). X xxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx médium xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a xx dalších 24 x inkubace xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx stanovena 3xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XXX). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx vzhledem x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxx každou x xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx porovnají xxxxxxxxxxxx závislé odezvy xxxxxxx xxx xxxxxxx (+ UV) x xxx ozáření (-UV), xxxxxxx xxx xxxxxxx XX50, xx. xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 % xxxxxx buněčné xxxxxxxxxxxxxxxx xx srovnání x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx buněk xx XXX, xxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx xxxxx xx XXX xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx, xxxxxx xxx se ozáří xxxxxx UVA záření 1 až 9 X/xx2 x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxx později xxxxxxxx XXX. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jakosti, xxxx-xx jejich životaschopnost xx ozáření 5 X/xx2 menší xxx 80 % životaschopnosti xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxx xxxx po xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kontroly xx UVA xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxx kritéria xxxxxxx, xxxxxxxx negativní xxxxxxxx (xxxxx x XXXX (Xxxxxx fyziologický xxxxxx) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) nebo 1 % xxxxxxxxx (XxXX)) nebo xxx xxxx xxxxxxxx xxx + XXX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx alespoň 80 % vzhledem k xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x temnu (-XXX).
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (X540 XXX) xxxxxx v extraktu XX xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx 1 × 104 xxxxx xxxxxxxxxx xx jednu xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx dvou xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxxx). Zkouška xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx hodnota A540 XXX xxxxxxxxxxxxxx kontrol xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: při xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx fototoxická xxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXX), x je xxxx xxxxxxxxx. Pro XXX zkoušený xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zkoušky: xxx XXX xxxxxxx (+ XXX): XX50 = 0,1 xx 0,2 μg/ml, pro XXX xxxxxxxxx (-XXX): XX50 = 7,0 xx 90,0 μx/xx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xx. xxxxx hodnoty XX50, by xxx xxx xxxxxxx 6.
Namísto XXX xxxxx xxx xxxxxxx xxxx souběžné xxxxxxxxx xxxxxxxx jiné xxxxx fototoxické xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx by xxxx xxx na xxxxxxx dosavadních xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx hodnot XX50 x XXX xxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx
1.7.1 Xxxxxxxx
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx xxxxxxxxx studii xxxx použita xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx — Xxxx/x 3X3, xxxx 31 — xxx x xxxxx XXXX, nebo x xxxxx ECACC a xx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx buňky nebo xxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx postupu xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, že xxxx kultivační xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx kontrolovány, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, x xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx tehdy, jsou-li xxxxxxxx takové kontroly xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx k xxxx, xx citlivost buněk xx XX xxxxxxx x počtem pasáží, xxxx xx xxx xxxxxxx buňky Xxxx/x 3X3 z xxxxxx x nejnižším xxxxxxxxxxxx xxxxxx pasáží, xxxxxxx x xxxxx xxx xxx pasáže. Xx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 na XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x této xxxxxxxx.
1.7.1.2 Xxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxx rutinní buněčné xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx postupu by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x inkubační xxxxxxxx. X buněk Xxxx/x 3X3 se jedná x DMEM (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx telecím sérem, 4xX xxxxxxxxxx, penicilinem x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx při 37 °X/7, 5 % XX2. Zvláště xxxxxxxx xx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, aby xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx linie.
1.7.1.3 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xx xxxxxxxxxx kmenových kultur xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx hustotě a xxxxxxx jednou xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU in xxxxx.
Xxx zkoušce xxxxxxxxxxxx xx xxxxx nasazují xx kultivačního xxxxx x xxxxxx hustotě, xxx xxxxxxxxx konfluence xx konce xxxxxxx, xx. do xxxxxxxx, xxx je xx 48 x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx Balb/c 3X3 kultivované v 96xxxxxxxxx destičkách je xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 × 104 buněk xx xxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx nasadí xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx 96xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx jsou poté xxxxxxxx podrobeny celému xxxxxxx zkoušky xx xxxxxxxx xxxxxxxx kromě xxxx, xxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (+XXX/XXX) x xxxxx xx xxxxxxxxx x temnu (-XXX/XXX).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx systému xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx genotoxického x xxxxxxxxxxxxxx potenciálu, xxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx chemická xxxxx, xxx jejíž xxxxxxxx jako xxxxxx xx xxxx nebo xx xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se tedy xxx xx xxxxxxxx xxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx byla xxxxxxxxxx zkouška xxxxxxxxx xx systémem xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx chemické látky xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxx, pokud xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skladování. Xxxx-xx xxxxx x rychlé xxxxxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx látky xxxxxxxx xxx xxxxxxxx světlem.
Zkoušené xxxxxxxx xxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx. x Earlově xxxxxxxxxxxxx roztoku (EBSS) xxxx ve fyziologickém xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx světlo, xxx xxxxxxxx při xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx 100násobek požadované xxxxxxx koncentrace x xxxx xx xxxx xxx zředěny x xxxxxx 1:100 fyziologickým xxxxxxxx. Použije-li xx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 % xxx. xx všech xxxxxxxxx, tj. x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx rozpouštědly xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxx (XxXX). Mohou xxx xxxxxxx jiná xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxxxx), xxx měly xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx specifické xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx radikálů.
Je-li xxxxx, xxxx xxx xxx xxxxxxxxx rozpouštění xxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxx na 37 °X.
1.7.1.6 Xxxxxxx XX xxxxxxx/xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx: xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx v xxxxx XXX x xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx spojováno s xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx záření x xxxxx UVB je xxxx xxxxxxxxxx x xx přímo xxxxxx xxxxxxxxxxx, přičemž xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 313 nm a 280 xx 1000xxxx (11). Xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx světelného xxxxxx xx měla xxxxxxxxx xxxxxxxx požadavek, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx světlo o xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, a xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxx po xxxxxxxxxxx xxxx) byla xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Použité xxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxx oblast), xx dále xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx světla xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx světla. X xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx výbojka. Xxxxx z nich xx xx xxxxxx, xx xxxxxxx méně xxxxx x xx xxxxxxxx, avšak xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx vysoce xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx UVB xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx by mělo xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxx (XXX:XXX ˜ 20:1). Příklad xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx studii xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xxx publikován v xxxxxxxxxx (3).
Xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxx (intenzita xxxxxxx) xx xxxx pravidelně xxxx každou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx vhodného širokopásmového XX-xxxxx. XX-xxxx xxxx xxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx XX-xxxxx by měla xxx xxxxxxxxxxxx x xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX-xxxx xxxxxxxx typu. X xxxxxxxx xxxxxxx by xxx být v xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx zdroje světla x ke xxxxxxxx xxxxxxxxx širokopásmového XX-xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx takové xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx školenými osobami.
Dávka 5 X/xx2 xxxx xxx validační studii xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 x xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxx fototoxických xxxxxxxxxx látek. Pro xxxxxxxx 5 J/cm2 xx xxxx 50 xxx. xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 1,666 XX/xx2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxx XXX xxxxxx xxxxx upravena, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx světelné xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx:
x(xxx) = xxxxx xxxxxxxxxx záření (J/cm2) 100 / xxxxxxxxx xxxxxxx (xX/xx2) 60 (1 X =.X xxx)
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx by xxxxxx xxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx při nižších xxxxxxxxxxxxx; při vyšších xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx). Hodnota xX xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx chemických xxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx (+ XXX) x xxx xxxxxx (-XXX) xx měly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx koncentrační xxxx x xxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxx, xxx xxxx křivky xxxxxxxxxx xxxxxx na koncentraci xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxxxxxx faktorem ředění).
1.7.3 Xxxxxxxx xxxxxx [1]
1.7.3.1 Xxxxx xxx
Xxxxxxxx se xxxxxxx suspenze 1 × 105 buněk/ml x xxxxxxxxxxx xxxxx x 100 μl xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx 96xxxxxxx xxxxxxxx (slepý xxxxx). Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx po 100 μl buněčné xxxxxxxx x hustotě 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 buněk xx xxxxx). Xxx každou xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx připraví xxx xxxxxxxx: xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-UVA) x druhá xxx xxxxxxxxx fotocytotoxicity (+XXX).
Xxxxx xx xxxxxxxx 24 x (7,5 % XX2, 37 °C), xxxxx xxxxxxxxxx semikonfluentní xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx růst.
1.7.3.2 Xxxxx den
Po xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx dekantuje x každá jamka xx promyje xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. Xxxxx se 100 μx XXXX/XXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx rozpouštědlo (xxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxxx se 8 xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky. Xxxxx se zkoušenou xxxxxxxxx látkou xx xxxxxxxx x xxxxx xx dobu 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °X).
X xxxxxxxxx části xxxxxxx x xxxxxxxx XXX xx xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 50 xxx. xxxxxxx přes xxxxx 96xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx o xxxxxxxxx 1,7 MW/cm2 (5 X/xx2. Aby xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx, větrá xx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxx UVA xx xxxxxxxxx 50 xxx. (xxxx xxxxxxxx XXX) v xxxxx xxx pokojové teplotě.
Zkušební xxxxxx xx odstraní x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx dvakrát 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx se xxxx xxx (18-22 x) (7,5 % XX2, 37 °C).
1.7.3.3 Xxxxx xxx
Xxxxxxxxxxxxx hodnocení
Buňky xx xxxxxxxxxx xxx mikroskopem x fázovým kontrastem. Xxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx buněk xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx. Doporučuje xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, aby se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx chyby, xxxxx záznamy xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxxxx 150 μx předehřátého XXXX/XXX x promývací xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx se 100 μl xxxxx XX x xxxxxxxx xx 3 x xxx 37 °X xx xxxxxxxx atmosféře x 7,5 % XX2.
Xx xxxxxxxx xx xxxxxx NR xxxxxxxx x buňky xx xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxx odstředit v xxxxxxxx poloze).
Přidá xx xxxxxx 150 μl xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx, aby se xxxxxxxxxx XX.
Xxxxxxxx se xxxxxx 10 xxx. xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx se XX x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx homogenní xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx xx změří xxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxx 540 xx, xxxxxxx se xxx xxxxxxxx použije xxxxx xxxxx. Údaje xx xxxxx ve xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. ASCII) x xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx analýzu.
2. ÚDAJE
2.1 Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xx měly xxxxxxx xxxxxxxxxxx analýzu xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx získané xxx xxxxxxx XXX/XXX xxxx xxx xxxx. Xx-xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx a interval xxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx bylo xxxxx xxxxxxxx experimentálními xxxxx xxxxxx. Vzhledem x tomu, že xx zkoušená xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx být xx do xxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxx (-XXX) xxxxxxxxxxx, ale xxxxx xx být xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxxxxx (+XXX), xxxx xxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxx koncentrací, xxxxx xxxx xxx x xxxx částech experimentu xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx, xx-xx xxx splněn xxxxxxxxx xxxxxxxxxx kvality xxxxx. Xxxx-xx x xxxx částech xxxxxxxxxxx (-XXX x +XXX) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx zkoušku x xxxxxxx xxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx experimentem xx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledky xxxxxx být dále xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx koncentrací. X xxxxxxxx xxxxxxxxx stačí xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx rozmezí xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx hraničních xxxxxx xxxxxxxxxxxxx modelu xx xxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xx-xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx výsledku xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx podmínky. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx roztoků xxxxxxxx xxxxxxxx látky. X xxxxxx důvodu xxxx být xxxxx xxxxxxxx (jiné xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, použití xxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušky. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx doby xxxx xxxxxxxx. Zkrácení xxxx může mít xxxxxx u xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx.
2.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx-xx xx xxxxx, stanoví xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxxxxxx 50 % xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx neutrální xxxxxxx (XX) (XX50). Xxx tak učinit xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx regrese (xxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxx logistickou xxxxxxx) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci xxxx xxxxxxxx jiných xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (14). Xxxx xxxxxxxx hodnoty XX50 pro xxxxx xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kvalita xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XX50 xxx popřípadě použít xxxxxx xxxxxxxxxx proložení. X xxxxxxx případě xx xxxxxxxxxx použít xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (měřítko xxx x: logaritmické, xxxxxxx osy x: xxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxx x xxxxx případech xxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci xxxxx xxxxxxxx.
2.3 Hodnocení xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxx)
2.3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxx — xxxxx 1: fotoiritační xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx (+XXX), xxx bez ozáření (-XXX) xxxxxxx úplné xxxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX) xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
(x) XXX = (XX50 (-UV)) / (XX50 (+UV))
Hodnota XXX &xx; 5 předpovídá xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu, xxxxxxx xxxxxxx PIF ≥ 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu.
Jestliže xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx +XXX x xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx -XXX, xxxxx hodnotu XXX xxxxxxxxx, xxxxxxx xxx x xxxxxxxx, xxxxx svědčí x xxxxxxxxxxxx potenciálu. X xxxxxxxx případech xxx xxxxxxxxx hodnotu "&xx; XXX", jestliže xx xxxxxxx -XX xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx koncentrace (Cmax), x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx pro xxxxxxx "> XXX";
(x) &xx; XXX = (Xxxx (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx "&xx; XXX", xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx &xx; 1.
Xxxxxxxx nelze x xxxxxxxx toho, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx ani xxxxxxx XX50 (-UV) xxx xxxxxxx EC50 (+ XX), svědčí xx x neexistenci xxxxxxxxxxxxx potenciálu. V xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx "XXX = *1";
(X) &xx; XXX = *1 = (Xxxx (-XX)) / (Xxxx (+XX))
Xxx li xxxxxx xxxxx xxxxxxx "XXX = *1", je xxxx hodnota předpovědí xxxxxxxxxxx fototoxického potenciálu.
V xxxxxxxxx b) x x) xx měly xxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x úvahu xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx model verze 2: xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (MPE)
Alternativně xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, který xxx vyvinut x xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX (15) x xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx studii xxxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxx XX xxxxxx (13). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx XXX x případech, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx XX50. Tento xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx účinek (mean xxxxx xxxxxx) (XXX), xxxxxxxx, která xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na koncentraci. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Berlín) vyvinut xxxxxxxxx počítačový software, xxxxx xx volně x xxxxxxxxx.
2.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx (PIF ≥ 5 nebo XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, xx látka xx xxxxxxxxxxx potenciál. Xxxxxxxx bylo xxxxxxxx xxxxxxxx při koncentracích xxx 10 μx/xx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx, xx látka xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xx xxxx. Xx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pouze při xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx xxx xxx posouzení xxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xx se xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx, absorpci x možné xxxxxxxxx xxxxxxxx látky v xxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zkouškou, xxxx. xx použití xxxxxx xxxxxx xxxx in xxxxx.
Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx (PIF &xx; 5 nebo XXX < 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, kdy bylo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx po xxxxxxxx koncentraci 100 μx/xx, xxxxxxxxx negativní xxxxxxxx, xx chemická xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x fototoxicitu xx xxxx lze xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, xxx xxxx xxx nižších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx totožné xxxxxxxxxx xxxxxxx odezvy xx xxxxxxxxxxx (XX50 +XX a XX50 -XX), je interpretace xxxxx xxxxxx. Xxxx-xx xxxxxxx tomu xxxxxxxx xxxxxxxxx (+XX a -XX) a xxxx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx rozpustností xx vodě xx xxxxxxx xxxxx xxx 100 μx/xx, xxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx vhodná x xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx in xxxxx xxxx xxxxxxxx in xxxx).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxx o zkoušce xxxx obsahovat tyto xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx chemická xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx údaje a xxxxx XXX, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx vlastnosti x xxxxxxx,
- xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx důležité pro xxxxxxxxx studie,
- xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, jsou-li xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- xxxxxxxxxx volby xxxxxxxxxxxx,
- rozpustnost xxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx (XXXX xxxx XXX).
Xxxxx:
- typ x xxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- číslo xxxxxxx xxxxxx, xx-xx známo,
- xxxxxxxxx xxxxx xx XXX stanovená xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro
Zkušební xxxxxxxx x) — inkubace xxxx xxxxxxxx a xx xx:
- xxx x xxxxxxx kultivačního xxxxx,
- inkubační xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxx inkubace (xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxxx koncentrací xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx XX/XXX, xxx xxx něj,
- x xxxxxxx, že zkoušená xxxxxxxx xxxxx vykazuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx koncentrace,
- xxx a složení xxxxxxxxxx média (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok),
- délka xxxxxxxx xxxxxxxx látky.
Zkušební xxxxxxxx x) — xxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx ozáření xx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxxxxxxx propustnosti/absorpce použitého xxxxxx (použitých xxxxxx),
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx o jeho xxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx zkoušeného xxxxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v xX/xx2,
- délka xxxxxxxx XX/XXX xxxxxx,
- xxxxx XXX xxxxxx (intenzita × xxx), vyjádřena x J/cm2,
- xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x temnu.
Zkušební podmínky x) — zkouška XXX:
- xxxxxxx média XX,
- xxxx xxxxxxxx XX,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, teplota, xxxxxxx),
- xxxxxxxx xxxxxxxx XX (xxxxxxxxx činidlo, xxxxx xxxxxxxx),
- xxxxxx xxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx XX,
- xxxxx (referenční) xxxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx,
- xxxxxxx slepého xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xx-xx xxxxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxx xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx +XXX x -XXX,
- xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx: xx-xx xx možné, xxxxxxx xxxxxxx XX50 (+XXX) x EC50 (-XXX),
- xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx získaných x xxxxxxxx XXX/XXX x bez něho, x to xxx xxxxxxxx fotoiritačního xxxxxxx (xxxxx-xxxxxxxxxxx factor ) (XXX), xxxx výpočtem xxxxxxxxx světelného xxxxxx (xxxx xxxxx xxxxxx) (XXX),
- xxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxx XX) ozářených x neozářených buněk,
- xxxxxxxxx údaje xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx,
- xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxx EC50 (+XXX), XX50 (-XXX) x XXX-xxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx,
- xxxxxxxxx údaje xxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx: xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-UVA) x XXX, xxxxxxx xxxxxxx x směrodatná xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) Xxxxxxxxx, H., Xxxxx, X., Xöxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. G., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X., L'Eplattenier, X., Xxxxxxx, M., Lovell, X. X., Xxxxxx, X., Moldenhauer, X., Xxxxx, X., Xxxx, X., Xxxxxxxxxxx, U., Xxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, O., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. (1994), XXX/XXXXXX project xx in vitro xxxxxxxxxxxxx testing: Xxxxx xxxxxxx obtained xxxx x Xxxx/x 3X3 xxxx phototoxicity xxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 8, 793-796.
(2) Xxxx (1998), Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx 3T3 XXX XX xxxx (xx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxxx), Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx: ECVAM xxx XXXX/X/2, 3 Xxxxxxxx 1997, ATLA 26, 7-8.
(3) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, J., Xxxx, X. X. X., Xxxxxxxxxx, X., De Xxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. X., Clothier, X., Xxxxxxx, P., Xxxxxxxxx, X., Liebsch, X., Lovell, W. X., Xxxxxx, T., Xxxxxxxxxxxxx, U., Potthast, X. X., Csato, X., Xxxxxxxxx, D., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. (1998), XX/XXXXXX "Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx study, xxxxxxx xx xxxxx II (xxxxx xxxxx), xxxx 1: xxx 3T3 XXX phototoxicity xxxx, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 12, 305-327.
(4) XXXX Xxxx Guidelines Xxxxxxxxx, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Xxxxx Report xx xxx OECD Xxxxxxxx on Harmonisation xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx Toxicological Test Xxxxxxx, XXXX Publications Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, X. W. (1993), A scheme xxx xx xxxxx xxxxxxxxx of xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx potential, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 7, 95-102.
(6) Santamaria, X., Xxxxx, X. (1972), Xxxx of xxx photodynamic xxxxxxxxxx, Xxxxxxxx xxxxxxxx in xxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx. 3 Xxxx 1, Xxxxx Holland Xxxxxxxxxx Xx, Amsterdam, XI–XXXV.
(7) Xxxxxxxxx, H., Xxxxxx, X. X., Xöxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. A., Xxxx, X. J. X., Sapora, X., Xxxxxxxxx, D. (1994), Xx vitro phototoxicity xxxxxxx: Xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX xxxxxxxx 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, J. X. (1989), Xxxxxxxxxxxxxxxxxx. X: Xxx science xx xxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxx, xx.), Xxxxxx Xxxxx, Xxx Xxxx, 2. xxx., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, E., Xxxxxxx, X. X. (1985), Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx neutral xxx absorption, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, X. A., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx X. (1996). X: Animal xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (F. X. Xxxxxxxx, X. X. Xxxxxxx eds.), Xxxxxx &xxx; Xxxxxxx, Xxxxxxxxxx XX, 5. vyd., 515-530.
(11) Xxxxxxx, X. X., Pidoux M. (1987), Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx skin xxxxx: xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxx violet regions xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, Xxxxxx Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Xxxxxxxx Operating Xxxxxxxxx: Balb/c 3X3 XXX Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, xxxxxxxx 23. prosince 1997 M. Liebschem, xxxxxxxxx 6. března 1998 xxxxx Management Xxxx of xxx XX/XXXXXX xxxxxxx "Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Spielmann, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, J., Xxxx, X. J. W., Xx Xxxxx, O., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, W. X., Pfannenbecker (1998), X Xxxxx on xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx UV Filter Xxxxxxxxx xxxx Annex XXX of xxx XX Xxxxxxxxx 76/768/EEC xx the 3X3 XXX Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, ATLA 26, 679-708.
(14) Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X. (1995), Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx of xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx, 3, 127-138.
(15) Holzhütter, X. X. (1997), A xxxxxxx measure xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx-xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxx xxx xxxxxxxxxx the xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, XXXX 25, 445-462."
"Xxxxxxx
&xxxx;
[1] Další xxxxxxxxxxx lze xxxxxx x xxxxxxxxxx (12).