Směrnice Xxxxxx 2000/33/XX
xx xxx 25. xxxxx 2000,
xxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx přizpůsobuje xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX o xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, balení x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [1]
(Xxxx s xxxxxxxx pro EHP)
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx na xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX ze xxx 27. xxxxxx 1967 x sbližování xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxxx nebezpečných látek [2], xxxxxxxxx pozměněnou xxxxxxxx Xxxxxxxxxx parlamentu x Rady 1999/33/ES [3], x zejména xx xxxxxx 28 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:
(1) X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX xx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx látek x přípravků. Je xxxxxxxx přizpůsobit tuto xxxxxxx technickému xxxxxxx.
(2) Xxxxx xx. 7 xxxx. 2 směrnice Xxxx 86/609/XXX xx xxx 24. xxxxxxxxx 1986 o sbližování xxxxxxxx x správních xxxxxxxx členských xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx účely [4] xxxxx xxx xxxxx, xxx xxxx má xxx xxxxxxx zvíře, xxxxxxxx, xx-xx xxxxxxx x xxxxxxxxx dostupná xxxx xxxxxxx uspokojivá xxxxxx.
(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxx X směrnice 67/548/XXX xxxxxx alternativní xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx zvířata, x xxxxx xxxxxxxxxxx xx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx látek podle xx. 3 odst. 1 xxxxxxxx 67/548/XXX.
(4) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx v souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxx xxx přizpůsobení technickému xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx technických překážek xxxxxxx xx úseku xxxxxxxxxxxx látek a xxxxxxxxx,
XXXXXXX XXXX SMĚRNICI:
Xxxxxx 1
Xxxx xxxxxx X a XX xxxx směrnice se xxxxxx xx xxxxx X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/EHS.
Xxxxxx 2
1. Xxxxxxx xxxxx uvedou x xxxxxxxx právní a xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx do 1. xxxxx 2001. Xxxxxxxxxx x xxxx uvědomí Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx přijmou x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx směrnice, a xxxxxxxxxx tabulku xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Článek 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 25. dubna 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxxx Wallström
členka Xxxxxx
[1] Xxxxxxx před xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx.
[2] Xx. xxxx. 196, 16.8.1967, s. 1.
[3] Úř. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Xx. xxxx. X 358, 18.12.1986, x. 1.
XXXXXXX X
"X.40 LEPTAVÉ XXXXXX NA XXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxx zkoušky xx vitro na xxxxxxx účinky xx xxxx xx principu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx elektrického xxxxxx kůže potkana (XXX) x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx kůže xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx alternativních xxxxx (XXXXX, Společné xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx) (1, 2, 3) xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx. Validační xxxxxx XXXXX xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx rozlišit xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx dále umožnil xxxxxxx rozlišit xxxxxx xxxxxxxx účinků (xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, X 35 x ostatní látky xxxxxxxxxxx poleptání xxxx, X 34) (2). Xxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx; xxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxx, závisí na xxxxxxxxxxxx požadavcích x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxx xxxx Xxxxxx úvod, xxxx X.
1.2 Definice
Poleptání xxxx: xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx látky
Nespecifikovány, xxxxx xxx xxxx 1.5.3.4 a 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx metody — xxxxxxx TER xx xxxx potkana
Zkoušený xxxxxxxx je až xx 24 x xxxxxxxxx xx epidermální xxxxxx terčíků kůže xxxxxxx usmrcených xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxx xxxxxx normální integrity x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxx), která je xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX pod xxxxxxxx xxxxxx (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx TER xxx prahovou hodnotu. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx aktivní xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxx xxx literatura (6)) xxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx vázání xxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxx falešně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx získaných xxxxx pro tyto xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2, 7).
1.5 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx XXX na xxxx xxxxxxx
1.5.1 Zvířata
Terčíky xxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x mladých (20 — 23 xxxxxxx) xxxxxxx (Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx x xxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx holicím xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xxxxx opatrným xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx ponoří do xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxxx, penicilin, xxxxxxxxxxxxxx x amfotericin x koncentracích xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx třetí x xxxxxx den xx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x použijí xx xx 3 dnů (x xxxxxxxx kůže xxxxx být xxxxxxx xxxxxxx starší xxx 31 xxx).
1.5.2 Xxxxxxxx xxxxxxx kůže
Zvířata xx xxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx odstraní xxxxxxx xxxx a xxxxxxxxxx xxx xx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Kůže xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx přetáhne xxxxxxx X-xxxxxxx, xxx xxxx kůže upevněna, x xxxxxxxx xxxxx xx ořízne. Rozměry xxxxxxxx a O-kroužku xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxxx X-xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx umístí xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx hořečnatého (154 xX) (obrázek 2).
1.5.3 Zkušební xxxxxx
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (150 μx) xx aplikuje xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx. 2). Xxx zkoušení pevných xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx množství xxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx xx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (150 μx) x xxxxxxxx xx xxxxx protřepe. Xxxx xxxxxxx x xxxx by xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxx xxxxx toho xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xx 30 °X, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx materiál xxxx xx xxxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxx látky xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxx. Zkoušená xxxxx xx xxxxxxxx po xxxx 24 x (xxx xxxx xxx 1.5.3.4). Xxxxxxxx látka xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx 30 °C.
1.5.3.2 Xxxxxx XXX
XXX se xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx střídavý xxxxx (xxxx. AIM 401 nebo 6401 xxxx ekvivalentní). Před xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx objemu 70 % ethanolu xxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Po xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx odstraní převrácením xxxxxxx x xxxx xx zvlhčí xxxxxxxx 3 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX). Xxxxxxxxx můstku xx umístí xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx účelem xxxxxx odporu x xΩ/xxxxxx xxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx exponovaných xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxx xxxxxxx (silné) xxxxxxxxx je během xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx hořečnatého xxxxxx. Xxxxxx (tenká) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, aby xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx spodkem xxxxxxxxx xxxxxx a xxxx teflonové xxxxxxxx xx xxxxxxx konstantní (xxxxxxx 1), xxxxx xxxx xxxxxxxxxx má xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
Xx třeba xx xxxxxxxx, xx xx-xx naměřená hodnota xxxxx než 20 xΩ, může xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx látky xx xxxxxxxxxxx straně terčíku xxxx. O xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxx pokusit xxxx. xxx, že se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx x 10 x xx protřepává. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xx opakuje s xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx XXX (střední xxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly spadají xx přijatelného xxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x přístroje xxxx doporučeny xxxx xxxxxxxxx látky a xxxxxx přijatelná rozpětí xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx (kΩ) |
|
Pozitivní |
10M xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx voda |
10–25 |
1.5.3.3 Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx látky x xxxxxxxxx xxxxxxxxx látky
Jsou-li xxxxxxx XXX xxx xxxxxxxxx xxxxxxx látky xxxx organické xxxxx xxxxxxx zkoušené xxxxx xxxxx nebo xxxxx 5 xΩ, xxx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxx průniku xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxx, zda xxxxxxxx xxxxxx falešně pozitivní (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx barviva xxxxxxxxxxxxxx X
Xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx se xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx na 2 x 150 μx 10 % xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X x destilované vodě. Xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxxx 10 x xxxxxxx proudem xxxx o xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx barvivo. Všechny xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx sejmou x xxxxxxxxx trubičky x xxxxxx xx do xxxxxxxx (např. 20 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx scintilační xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodu (8 xx). Xxxxxxxx xx xxxxx 5 xxx. protřepávají, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx. Tato xxxxxx oplachování se xxxx zopakuje, x xxxx xx terčíky xxxx xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 ml 30 % xxxxxxx (x/X) xxxxxxx-xxxxxxx-xxxxxxx (XXX) x destilované xxxx x xxxxxxxx se xxxx xxx při 60 °X. Xx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx kůže xxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 8 min. xxx 21 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx ˜ 175). 1 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx zředí 4 ml 30 % (x/X) xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxx. Absorbance (X) xx xxxx při xxxxxxxxx 565 nm.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx xxxxxx barviva
Obsah xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X xx xxxxxx kůže xx xxxxxxx x xxxxxx X (molární xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sulforhodaminu X xxx 565 xx = 8,7 × 104; xxxxxxxxxx xxxxxxxx = 580). Xxxxx xxxxxxx sulforhodaminu X xx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx x xxxx xx vypočte jeho xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vázání xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx hodnoty pro xxxxxxxxx xxxxxxxx spadají xx přijatelného xxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a přístroje xxxx pro uvedení xxxxxxxxx xxxxx doporučeny xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (μx/xxxxxx xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx chlorovodíková (36 %) |
40-100 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx voda |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx informace
Látky lze xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx kůže xx xxxxxx dobu (např. 2 xxxxxx), xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxx po xxxx 2 xxxxx (2), xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx umožnilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx látek s xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx 24xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx x rozměry xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx experimentální xxxxxx xxxxx mít xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx 5 Ω xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx byl xxxxxxx z xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x postupem, xxx xxxx popsány v xxxx metodě. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x určit xxxxxxxx hodnotu xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx validační studii (3).
1.6 Podstata xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx modelu xxxxxx xxxx
Xxxxxxxx materiál xx xxxxxxxxx xx xx xxxx 4 hodin xx trojrozměrný xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Materiály s xxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx specifikované xxxxxxxxx xxxx pokles životaschopnosti xxxxx (stanovený xxxx. xxxxxxxx xxxxxxx redukce XXX) pod xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Podstata xxxxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxx, že xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx jsou xx, xxx xxxx xxxxxxx proniknout xxxxxxxxx xxxxxxx (difuzí xxxx xxxxx) a xxxx xxxxxxxxxx cytotoxické, xxx xxxxxxxxx smrt buněk x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
1.7.1 Xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx pocházet x xxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxx xxxxxxxx určitá xxxxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vrstvy xxxx xxx xxxxxxxxxx. To xxx prokázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxx xx definovaných xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx živých buněk x modelu xxxx xxx dostatečně xxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxx XXX, xx. xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X) xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látce musí xxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx pro daný xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxx (ve xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxx) xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx mezích. Nejdůležitější xxxxxx xx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx validaci (2).
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxx
1.7.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálu
U xxxxxxxxx materiálů musí xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušené xxxxx, xxx xxxxxxx povrch xxxx (minimálně 25 μx/xx2). X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx kůži, x xxxxxxxx látka by xxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxx xxxxx styk x xxxx; xxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2). Xx uplynutí expoziční xxxx xxxx xxx xxxxxxxx materiál x xxxxxxx xxxx opatrně xxxxxxxxx fyziologickým roztokem.
1.7.2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
X xxxxxx životaschopnosti xxxxx xxxx xxx použita xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxx xxx xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx správné x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx XXX o xxxxxxxxxxx 0,3 xx/xx xxx xxxxxxx 20-28 °C xx dobu 3 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx se poté xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X při xxxxxx xxxxx 545 až 595 xx.
1.7.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx model kůže x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, postupu xxxxxxxxxxx xxx. budou xxx xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Doporučuje xx, xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx model xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x chemických xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx ECVAM (3). Xx rozhodující, xxx xxxxxxx metoda x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vykazovala v xxxxx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx (2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Zpracování xxxxxxxx
2.1.1 Xxxxxxx TER xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx (xΩ) pro xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx experimentech, o xxxxxxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxxx klasifikaci xx měly xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.
2.1.2 Xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X x xxxxxxxxx hodnoty životaschopnosti xxxxx v xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx a pro xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky včetně xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x středních xxxxxxxxx x o xxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx.
2.2 Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.2.1 Xxxxxxx XXX xx xxxx potkana
Je-li xxxxxxx XXX dosažená pro xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx 5 kΩ, xxxx látka xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ x xxxxx o povrchově xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx organickou xxxxx, xx xxxxx žíravá.
U xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx organických xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX menší xxxx xxxxx 5 xΩ, xxx provést xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xx-xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx větší xxxx xxxxx střednímu xxxxxx xxxxxxx x terčíku xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 36 % XXx jakožto xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxx je xxxx xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx kůže xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx xxxxxxx souběžně xxx použití 36 % XXx, xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx.
2.2.2 Zkouška x xxxxxxx lidské xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx A xxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx; xxxxxxx xxxxxxxxxx A xxxxxxxx xxx každý zkoušený xxxxxx xxx použít x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x procentech xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx rozlišují xxxxxx xxxxxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxx žíravé (nebo xxxxxx se rozlišují xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx), xxxx xxx xxx předpovědní xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx validační xxxxxx xxxx xxxxxxxx, xx xx xxxxxx (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx o zkoušce
Protokol x zkoušce xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x případně xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx informace xx měly být xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx podmínky:
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx postupu,
- xxxxx x xxxxxxxxxx jakýchkoli xxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx XXX) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxx x modelem xxxxxx xxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx látky xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx experimentech x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx formě xxxxxxx,
- xxxxx jakýchkoli xxxxxx pozorovaných xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. LITERATURA
(1) XXXXX (1998), XXXXX News &xxx; Xxxxx, XXXX 26, 275-280.
(2) Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X. B., Xxxxx, M., Xxxxxx, X. X., Curren, X. D., Xxxx, X. X., Esdaile, X. X., Xxxxxxxxxx, X-X., Xxxxxxx, M. (1998), Xxx ECVAM xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx in xxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 2. Xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx by xxx Xxxxxxxxxx Team, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 12, 483-524.
(3) Barratt, X. D., Brantom, X. X., Xxxxxx, X. X., Gerner, X., Walker, X. X., Xxxxx, A. X. (1998), The XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx on in xxxxx xxxxx for xxxx xxxxxxxxxxx. 1. Xxxxxxxxx xxx distribution xx xxx xxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, G. X. X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxx, C. (1986), Xx in xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx — xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Food Xxxx. Xxxxxxx. 24, 507-512.
(5) Xxxxxx, X. X., Hall, T. X., Dennett, R., XxXxxx, X. X., Xxxxxxxxx, X. A., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Esdaile, X. X., Xxxxxxx, J. (1992), The skin xxxxxxxxxxx test in xxxxx: xxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xx vitro 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. X., Fentem, X. X., Balls, X., Xxxxxx, P. X., Xxxxxx, X. X., Earl, X. X., Esdaile, D. X., Liebsch, X. (1998), Xx evaluation xx xxx proposed XXXX xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, X. A., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Curren, X. X., Xxxxxxx, X. J., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Hildebrand, X., Lewis, X. X., Xxxxxxx, M., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxx, M., Xxxxxxx, J. X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Balls, X. 1995), X xxxxxxxxxxxxx xxxxx on xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx testing. Xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX xxxxxxxx 6, XXXX 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Xxxxxxx 2"
&xxxx;
XXXXXXX II
"B.41 FOTOTOXICITA — XXXXXXX XXXXXXXXXXXX 3X3 XXX XX XXXXX
1. METODA
1.1 Xxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx odezva xxxxxxxx xx první xxxxxxxx xxxx určitým xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx systémovém xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušené látky, xx. xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx možného xxxxxxxxx, xxxxx xxxx plynout xx xxxxxxxx xxxxx xx spojení x xxxxxxxx XX xxxxxx xxxx viditelnému světlu.
Protože xxxxx zkoušky in xxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické látky x světla, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxx xx xxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxx xx xxxx, a xxxxxx xxxxxxxxxx, které působí xx xxxxxxxx na xxxxxxx jako fotoiritanty.
Zkouška xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxx x validována x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx EU/COLIPA x xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx alternativu xx xxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx. V xxxx 1996 xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxx postupných xxxxxxx xx vitro xxx xxxxxxxxxx fototoxicity (4).
Výsledky xx zkoušek fototoxicity 3X3 NRU xx xxxxx byly xxxxxxxxx x xxxxxxxx fototoxickými xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx u xxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxx xx ukázala pro xxxxxxxxx xxxxxx účinků xxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxx, fotoalergie a xxxxxxxxxxxxxxxxx, třebaže mnoho xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx tyto xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, bude ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zkouška xxxx xxxx vyvinuta x tomu, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxxx ultrafialového xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx povrch, xxxxxx xx X/x2 xxxx xX/xx2.
Xxxxx světelného xxxxxx: xxxxxxxx (intenzita × xxx) xxxxxxxxxxxxxx (XX) xxxx xxxxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxx v joulech (X × s) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxx. X/x2 xxxx X/xx2.
Xxxxxx pásma XX xxxxxx: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xx x'Xxxxxxxxx): XXX (315400 xx), XXX (280315 xx) x XXX (100280 xx). Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx označení: xxxx xxxxxxx mezi XXX x XXX xx xxxxx používána xxxxxxx 320 xx x xxxxx XXX xxxx být xxxxxxxxx xx XX-X1 a XX-X2 x hranicí xxxxx 340 nm.
Životaschopnost xxxxx: parametr, xxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx neutrální červeně xx buněčných lysosomů) x xxxxx v xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxx a na xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x celkovým xxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx životaschopnost xxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxxx kontrolám (xxxxxxxxxxxx), xxxxx prošly xxxxx xxxxxxxx zkoušky (x UV, xxxx xxx XX), xxx xxxxxx xxxxxxxxxx zkoušeným xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxx XXX.
XXX (xxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxxxxx faktor): xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XX50) xxxxxxxx xxxxx, a xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/XXX xxxxxxx (+ UV) a xxx xxxx (-UV).
MPE (xxxx xxxxx xxxxxx — xxxxxxx světelný xxxxxx): xxxx veličina xxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxx celého průběhu xxxxxx xxxxxxxxxx účinku xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/xxx světlem (+ XX) a xxx xxxx (-XX).
Xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx expozici xxxx určitým xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx vyvolaná ozářením xxxx xx systémovém xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx: xxxxx xxxxxx xxxxx "xxxxxxxxxxxx", xxxxx se xxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx nebo xxxxxx). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx vedou xxxx x xxxxxxxxxxxxxx buněčnému xxxxxxxxx (podobné reakci xxx xxxxxxxxx).
Xxxxxxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, ke xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x světla x která xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxx tím, než xxx reakci kůže xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: genotoxická xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx, která je xxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx dávce XX/XXX xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx látky. Xxxxxx xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx se používá x xxxxxxx, xxx xx tvorba xxxxxx xxxxxxxxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx látkou.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxx by xxx být xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxx xxxxxxx, je xxx xxxx vyvinutou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xxxxxxxxxx použít jako xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxxxxxxxxxxxx srovnáních xxxxxxxxxx xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Xxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x mnoha xxxx xxxxxxxxxx látek (5, 6, 7, 8). Xxxxxx xxxxxxx společným xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx energii x oblasti slunečního xxxxxx. Podle xxxxxxx xxxxxx fotochemie (Xxxxxxxxx-Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx absorpci světelných xxxxx. Před xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx zkoušení xxxxx xxxxxxxxxx metodiky xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxx Xxxxxxxx OECD 101). Xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 x.xxx-1.xx-1, chemická xxxxx xxxx fotoreaktivní xxxxxxxxx x nemusí xxx zkoušena xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx vitro xxxx xxxxxxxxx xxxxx biologickou xxxxxxxx xx nepříznivé xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek).
1.5 Xxxxxxxx zkušební xxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxx (chemickým) chromoforem xxxx k xxxxxxxxxxx xxxxxx (7). Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX in xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx chemické xxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx necytotoxické xxxxx XXX/XXX světla x xxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx je x xxxx zkoušce xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx příjmu xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx červeně (XX) (9) 24 xxxxx xx působení xxxxxxxx chemické xxxxx x ozáření.
Buňky Xxxx/x 3X3 xx 24 x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx 96xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx 1 x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx koncentracemi xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxxxx xx xxxx destiček exponována xxxxxxxxxxxxxx dávkou XXX/XXX xxxxxx 5 X/xx2 XXX (+ XX xxxxxxxxxx), zatímco druhá xxxxxxxx xx xxxxxxx x temnu (-XX xxxxxxxxxx). X xxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxx 24 x xxxxxxxx xx xxxxxxx životaschopnost stanovena 3xxxxxxxxx xxxxxxx neutrální xxxxxxx (XXX). Relativní xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx vzhledem x neexponované negativní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx koncentrací. Xxx předpověď fototoxického xxxxxxxxxx xx porovnají xxxxxxxxxxxx xxxxxxx odezvy xxxxxxx při xxxxxxx (+ UV) a xxx ozáření (-XX), xxxxxxx xxx xxxxxxx XX50, xx. xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 % úbytek buněčné xxxxxxxxxxxxxxxx xx srovnání x neexponovanými xxxxxxxxxx.
1.6 Xxxxxxxx jakosti
Citlivost xxxxx xx UVA, dosavadní xxxxx: citlivost xxxxx xx XXX xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Buňky xx xxxxxx při intenzitě xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro, xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx UVA xxxxxx 1 xx 9 X/xx2 x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x den xxxxxxx xxxxxxxx NRU. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx-xx jejich xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx 5 X/xx2 xxxxx xxx 80 % xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx pasážích buněk.
Citlivost xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx XXX při xxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly (xxxxx x XXXX (Xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx 1 % xxxxxxxxx (XxXX)) xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxx + XXX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 80 % vzhledem x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk x tomtéž xxxxxxxxxxxx xxx souběžném xxxxxxxxxxx x xxxxx (-XXX).
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly: absolutní xxxxxxxxxx (X540 NRU) xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx 1 × 104 xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx zdvojnásobení (xxxxxxxx xxxx). Zkouška xxxxxxx xxxxxxxxx přijatelnosti, jestliže xxxxxxx xxxxxxx A540 XXX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx ≥ 0,2.
Pozitivní xxxxxxxx: xxx každé xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Při xxxxxxxxx studii EU/COLIPA xxx xxxxxx jako xxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx (XXX), x xx xxxx doporučen. Pro XXX xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx postupu xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx definována tato xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxx XXX ozářený (+ XXX): XX50 = 0,1 xx 0,2 μx/xx, xxx XXX xxxxxxxxx (-UVA): XX50 = 7,0 xx 90,0 μx/xx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xx. xxxxx xxxxxxx XX50, xx měl xxx xxxxxxx 6.
Xxxxxxx XXX mohou být xxxxxxx xxxx souběžné xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx fototoxické chemické xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxxxxx hodnocené zkoušené xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx xx xxxxxxx dosavadních xxxxx xxxx xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx přiměřeným způsobem xxxxxxxxxx xxxxxxx hodnot XX50 a XXX xxxx MPE (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx
1.7.1 Xxxxxxxx
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx permanentní xxxx xxxxx fibroplastů — Balb/c 3X3, xxxx 31 — xxx x xxxxx XXXX, xxxx x xxxxx ECACC x xx tedy doporučena. Xxxx buňky nebo xxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx potřebám xxxxx, ale xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx xx měly xxx pravidelně kontrolovány, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, a xxxx xx xxx použity xxxxx xxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx k tomu, xx xxxxxxxxx buněk xx UV xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxx xxxxx Balb/c 3X3 x pasáže x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx xxx xxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 na UVA xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx postupem xxxxxxxx jakosti xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx.
1.7.1.2 Xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxxxxxx buněčné xxxxxxxxxx x během xxxxxxxxxx postupu by xxxx xxx použita xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx podmínky. X buněk Xxxx/x 3X3 xx jedná x DMEM (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx sérem, 4xX glutaminem, penicilinem x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxx xxx 37 °X/7, 5 % XX2. Xxxxxxx důležité xx, aby kultivační xxxxxxxx zajistily, aby xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx buněčné linie.
1.7.1.3 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx ve xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx jednou xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx zkoušce fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx.
Xxx zkoušce xxxxxxxxxxxx xx buňky xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxx konfluence xx xxxxx zkoušky, xx. do okamžiku, xxx xx xx 48 h od xxxxxxxx stanovována xxxxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 xxxxxxxxxxx x 96xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 × 104 xxxxx xx xxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx látku xx xxxxx nasadí xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx 96xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx jsou poté xxxxxxxx podrobeny xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx, xxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (+XXX/XXX) x xxxxx xx udržována x temnu (-XXX/XXX).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx aktivace
Zatímco xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx požadavkem xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx x fototoxikologii xxxxx xxxxx žádná xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx vivo xxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxx xxx xx nezbytné xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx zkouška provedena xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx chemická xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx chemické látky xxxx být čerstvě xxxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx x stálosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Může-li xxxxx x rychlé xxxxxxxxxxxxx, xxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx červeným xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx fyziologickém roztoku, xxxx. v Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (EBSS) xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xxxxx xxxxx obsahovat proteinové xxxxxx a pH xxxxxxxxxx absorbující xxxxxx, xxx nerušily xxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx chemické xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vodě xx xxxx být xxxxxxxxxx xx vhodném xxxxxxxxxxxx xx 100násobek xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx xx xxxx xxx zředěny x xxxxxx 1:100 xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Použije-li se xxxxxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx x konstantní xxxxxxxxxxx 1 % xxx. xx xxxxx xxxxxxxxx, xx. x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxx (EtOH). Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx cytotoxická xxxxxxxxxxxx (xxxx. aceton), xxx měly xx xxx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxx. reakce xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látku, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx.
Xx-xx xxxxx, xxxx být xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx použito xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx x/xxxx zahřátí na 37 °C.
1.7.1.6 Xxxxxxx XX světlem/příprava
Zdroj světla: xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx fototoxicity. Xxxxxx v xxxxx XXX x ve xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxx spojováno x xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx xxxxxx x xxxxx XXX je xxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 313 xx x 280 xx 1000xxxx (11). Kritéria pro xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx důležitý xxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxxxx chemická xxxxx xxxxxxxxx, x xxx xxxxx světelného záření (xxxxxxxxxxx po přijatelnou xxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx detekci xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx látek. Xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxx oblast), xx xxxx neměly xxxxxxxx poškozovat testovací xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx světla xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx optimální xxxxx světla. V xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xenonová xxxxxxx, xxx vysokotlaká xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx z xxxx xx tu xxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxx x je xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx není xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx XXX záření, xxxx xx xxx xxxxxx filtrovány, xxx xxxx vysoce xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx UVB xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxx (XXX:XXX ˜ 20:1). Xxxxxxx spektrální xxxxxxxxxx záření filtrovaného xxxxxxxxx simulátoru xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx studii xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (3).
Xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxx (intenzita ozáření) xx xxxx pravidelně xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx za xxxxxxx vhodného xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx. UV-metr musí xxx pro xxxx xxxxx kalibrován. Xxxxxxxxx XX-xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xx xxxxx účelem xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX-xxxx xxxxxxxx xxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx xxx v xxxxxxx xxxxxxxx odstupech xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx intenzity záření xxxxxxxxxxxx zdroje xxxxxx x ke xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx školenými osobami.
Dávka 5 X/xx2 byla xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 x dostatečně xxxxx k xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Pro xxxxxxxx 5 X/xx2 xx xxxx 50 xxx. xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx nastavena xx 1,666 MW/cm2. Xxxxxxxx je xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxx UVA záření xxxxx xxxxxxxx, aby xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxx dostatečná xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx:
x(xxx) = dávka xxxxxxxxxx xxxxxx (J/cm2) 100 / xxxxxxxxx xxxxxxx (xX/xx2) 60 (1 X =.X xxx)
1.7.2 Xxxxxxxx podmínky
Maximální xxxxxxxxxxx zkoušené chemické xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx všechny fototoxické xxxxxxxx látky xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx; xxx vyšších xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx pozitivních výsledků (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx pH xxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxx být vyhovující (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx chemických xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+ UVA) x xxx světla (-XXX) by xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx zjištění rozmezí. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx řady x intervaly xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxx, aby xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podloženy xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxx použita xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7.3 Xxxxxxxx postup [1]
1.7.3.1 Xxxxx xxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx x xxxxxxxxxxx xxxxx x 100 μx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx 96jamkové xxxxxxxx (xxxxx xxxxx). Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx dávkuje xx 100 μx xxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 buněk xx xxxxx). Pro každou xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx připraví xxx xxxxxxxx: jedna xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-UVA) x druhá xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (+XXX).
Xxxxx xx xxxxxxxx 24 x (7,5 % XX2, 37 °X), xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxx umožní xxxxxxxxxx xxxxx, jejich xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx.
1.7.3.2 Xxxxx xxx
Xx xxxxxxxx xx kultivační xxxxxx x buněk dekantuje x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx dvakrát 150 μl XXXX/XXX. Xxxxx xx 100 μx EBSS/PBS xxxxxxxxxxxx xxxxxxx koncentraci xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx rozpouštědlo (xxxxxxxxx xxxxxxxx). Aplikuje xx 8 xxxxxxx koncentrací xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxx 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °X).
X xxxxxxxxx části xxxxxxx x xxxxxxxx UVA xx xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě xx xxxx 50 xxx. xxxxxxx xxxx xxxxx 96xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx 1,7 MW/cm2 (5 X/xx2. Aby xxxxxxx xx kondenzaci vody xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXX xx ponechají 50 xxx. (xxxx expozice XXX) x temnu xxx xxxxxxxx teplotě.
Zkušební xxxxxx se odstraní x každá jamka xx promyje dvakrát 150 μl XXXX/XXX. XXXX/XXX se nahradí xxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx se xxxx xxx (18-22 h) (7,5 % XX2, 37 °C).
1.7.3.3 Xxxxx xxx
Xxxxxxxxxxxxx hodnocení
Buňky xx xxxxxxxxxx xxx mikroskopem x xxxxxxx kontrastem. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, aby se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx záznamy xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nepoužijí.
Zkouška xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxxxx 150 μx předehřátého XXXX/XXX x xxxxxxxxx xxxxxx xx opatrně xxxxxxxx xxxxxxxx. Přidá xx 100 μx média XX x inkubuje xx 3 x xxx 37 °X xx zvlhčené xxxxxxxxx x 7,5 % XX2.
Xx xxxxxxxx xx xxxxxx NR xxxxxxxx x buňky se xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX se xxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx (xxxxxxxx lze xxxxxxxx odstředit v xxxxxxxx xxxxxx).
Xxxxx se xxxxxx 150 μx xxxxxxx připraveného xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx XX.
Xxxxxxxx xx xxxxxx 10 min. xxxxx xx třepačce, xxxxx xx XX x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx homogenní xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx extraktu XX xxx 540 nm, xxxxxxx se pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx ve xxxxxxx xxxxxxx (např. ASCII) x xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx
Xxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXX/XXX nebo xxx xxxx. Je-li xxxxxxxx cytotoxicita, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx bylo xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx křivku. Xxxxxxxx x xxxx, že xx zkoušená xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx být xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx xxxxxx pro experiment x xxxxx (-XXX) xxxxxxxxxxx, xxx mohla xx být xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxxxxx (+XXX), xxxx xxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, řádově lišily, xx-xx být xxxxxx xxxxxxxxx uspokojivé xxxxxxx xxxxx. Není-li x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (-XXX a +UVA) xxxxxxxxxxxx zjištěna, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xx nejvyšší koncentrace.
Ověření xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Negativní xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx chemická látka xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. V xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx experimenty xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx s výsledky xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx by xxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xx-xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, může xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx této xxxxxxx xx příprava xxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx. X tohoto xxxxxx xxxx xxx změna xxxxxxxx (xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx ultrazvuku) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx může xxx xxxxx x úvahu xxxxxxxx inkubační doby xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx může xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx.
2.2 Xxxxxxxxxx výsledků
Je-li xx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx odpovídající 50 % xxxxxxxx xxxxxxxxx příjmu neutrální xxxxxxx (XX) (XX50). Xxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx regrese (xxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxx logistickou regresí) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (14). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX50 xxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XX50 xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx grafického xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx doporučuje xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (měřítko xxx x: xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx x: xxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxx x xxxxx xxxxxxxxx bude xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx koncentraci xxxxx xxxxxxxx.
2.3 Xxxxxxxxx výsledků (xxxxxxxxxxx xxxxxx)
2.3.1 Předpovědní xxxxx — xxxxx 1: xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxx jsou x xxxx případech xxx xxx xxxxxxx (+UVA), xxx xxx ozáření (-XXX) získány xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX) xxxxxxxxx podle tohoto xxxxxx:
(x) XXX = (XX50 (-UV)) / (XX50 (+XX))
Xxxxxxx XXX &xx; 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx XXX ≥ 5 předpovídá xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx chemická xxxxx xxxxxxxxxxx pouze xxx +XXX x xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx -XXX, xxxxx hodnotu XXX vypočítat, třebaže xxx x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx o xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx "> XXX", xxxxxxxx se xxxxxxx -UV xxxxxxx xx po nejvyšší xxxxxxxx koncentrace (Cmax), x xxxx xxxxxxx xx použije xxx xxxxxxx "&xx; PIF";
(b) &xx; XXX = (Xxxx (-UV)) / (XX50 (+XX))
Xxx xx xxxxxx xxxxx hodnotu "&xx; PIF", xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx &xx; 1.
Xxxxxxxx nelze v xxxxxxxx xxxx, že xxxxxxxx xxxxx nevykazuje xx do xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, vypočítat ani xxxxxxx XX50 (-XX) xxx xxxxxxx XX50 (+ UV), xxxxxx xx x neexistenci xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxxx případech xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx "XXX = *1";
(X) &xx; PIF = *1 = (Cmax (-XX)) / (Cmax (+XX))
Xxx xx získat xxxxx xxxxxxx "XXX = *1", xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
X xxxxxxxxx x) x x) xx xxxx xxx pro předpověď xxxxxxxxxxxxx potenciálu opatrně xxxxx x úvahu xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx 2: střední xxxxxxxx xxxxxx (MPE)
Alternativně xxx xxxxxx xxxxx verzi xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu, xxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxx údajů x xxxxxxxxx xxxxxx EU/COLIPA (15) a xxx xxxxxxxx naslepo v xxxxxxxx xxxxxx fototoxicity xx xxxxx x xxxxxxxxxx látek, které xx xxxxxxx xxxx XX xxxxxx (13). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx model XXX x případech, xxx xxxxx získat xxxxxxx XX50. Xxxxx xxxxx využívá xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxx xxxxxx) (XXX), xxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xx srovnání xxxxxx křivek xxxxxxxxxx xxxxxx na koncentraci. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Berlín) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx je xxxxx x dispozici.
2.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro (PIF ≥ 5 nebo XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xx fototoxický potenciál. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx 10 μx/xx, xx také pravděpodobné, xx látka xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xx vivo. Xx-xx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx koncentraci 100 μg/ml, xxxxx xxx xxx posouzení xxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xx se xxxxx týkat xxxxx x xxxxxxxxx, absorpci x xxxxx akumulaci xxxxxxxx látky x xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. xx xxxxxxx modelu xxxxxx xxxx xx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx vitro (XXX &xx; 5 xxxx XXX &xx; 0,1) xxxxxxx, že látka xxxxxx xxx xxxxx xxxxx za použitých xxxxxxxx fototoxická. X xxxxxxxxx, kdy bylo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx až xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, že chemická xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a fototoxicitu xx xxxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx. X případech, xxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx toxické xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (XX50 +XX x XX50 -XX), je xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxx-xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (+XX x -XX) x jsou-li xxxxxxxxxxx omezeny xxxxxxxxxxxx xx xxxx na xxxxxxx xxxxx xxx 100 μx/xx, xxxx xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx látku xxxxxx x xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. za xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxx).
3. ZPRÁVY
Protokol o xxxxxxx
Xxxxxxxx o zkoušce xxxx xxxxxxxxx tyto xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxxxxx látka:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx XXX, je-li xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x čistota,
- fyzikálně-chemické xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx (EBSS xxxx XXX).
Xxxxx:
- typ x xxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxx xxxxxxx xxxxxx, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zkoušce xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx xx:
- typ x složení xxxxxxxxxxxx xxxxx,
- inkubační xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx b) — xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxx výběru xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxxxxx jak xxx xxxxxxx UV/VIS, xxx xxx xxx,
- x xxxxxxx, že zkoušená xxxxxxxx látka vykazuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx,
- xxx a složení xxxxxxxxxx xxxxx (pufrovaný xxxxxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx:
- zdůvodnění výběru xxxxxxxxx zdroje xxxxxx,
- xxxxxxxxxx charakteristiky xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxxx použitého xxxxxx (použitých xxxxxx),
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx od zkoušeného xxxxxxx,
- xxxxxxxxx ozáření XXX x xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xX/xx2,
- xxxxx expozice XX/XXX xxxxxx,
- xxxxx XXX xxxxxx (intenzita × xxx), vyjádřena x X/xx2,
- xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx během xxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — zkouška XXX:
- složení xxxxx XX,
- doba inkubace XX,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx CO2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxxxxx extrakce XX (xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx),
- xxxxxx xxxxx použitá xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx odečet xxxxxxxxxx XX,
- xxxxx (referenční) xxxxxx xxxxx, je-li xxxxxxx,
- xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xx-xx xxxxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx vyjádřená x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx versus xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx experimentech +XXX x -XXX,
- xxxxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx na koncentraci: xx-xx xx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx XX50 (+XXX) a EC50 (-XXX),
- srovnání xxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x ozářením UVA/VIS x xxx něho, x xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx faktoru (xxxxx-xxxxxxxxxxx factor ) (XXX), xxxx výpočtem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxx xxxxxx) (XXX),
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (absorbance xxxxxxxx XX) ozářených x xxxxxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxx kontrolu, xxxxxxx xxxxxxx x směrodatná xxxxxxxx,
- xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx x) — xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:
- xxxxxxx EC50 (+XXX), XX50 (-UVA) a XXX-xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxx,
- dosavadní xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx XX50 (+XXX), EC50 (-XXX) x XXX, xxxxxxx xxxxxxx x směrodatná xxxxxxxx.
Xxxxxx výsledků.
Závěry.
4. LITERATURA
(1) Xxxxxxxxx, H., Xxxxx, X., Xöxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxx, S., Xxxxxx, X., X'Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, F., Xxxxx, L., Pape, X., Pfannbecker, X., Xxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, O., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, A. (1994), EEC/COLIPA project xx in xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx with x Xxxx/x 3X3 xxxx xxxxxxxxxxxxx assay, Xxxxxxxxxx in vitro 8, 793-796.
(2) Xxxx (1998), Xxxxxxxxx on xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx the 3X3 XXX PT xxxx (xx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxxx), Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Joint Xxxxxxxx Xxxxxx: ECVAM xxx XXXX/X/2, 3 Xxxxxxxx 1997, XXXX 26, 7-8.
(3) Spielmann, X., Xxxxx, M., Xxxxxx, X., Pape, X. X. W., Xxxxxxxxxx, G., Xx Xxxxx, O., Xxxxxüxxxx, X. X., Clothier, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Liebsch, X., Lovell, W. X., Xxxxxx, T., Xxxxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxx, D., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. (1998), XX/XXXXXX "Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx study, results xx xxxxx II (xxxxx xxxxx), xxxx 1: the 3T3 XXX xxxxxxxxxxxxx xxxx, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 12, 305-327.
(4) OECD Xxxx Xxxxxxxxxx Programme, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Xxxxx Xxxxxx xx the XXXX Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxx, OECD Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, W. X. (1993), A xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx potential, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 7, 95-102.
(6) Xxxxxxxxxx, X., Prino, G. (1972), Xxxx xx xxx photodynamic xxxxxxxxxx, Xxxxxxxx progress xx xxxxxxx, biological and xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx. 3 Xxxx 1, Xxxxx Xxxxxxx Publishing Xx, Xxxxxxxxx, XX–XXXX.
(7) Xxxxxxxxx, X., Lovell, X. W., Xöxxxx, X., Johnson, B. X., Maurer, T., Xxxxxxx, M. A., Xxxx, X. X. X., Sapora, O., Xxxxxxxxx, X. (1994), Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx of XXXXX xxxxxxxx 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, X. X. (1989), Photosensitization. X: Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, (X. C. Xxxxx, xx.), Xxxxxx Xxxxx, New York, 2. xxx., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X. (1985), Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx by xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, L. A., Xxxxxx, X. G., Xxxxxxxxxx A. (1996). X: Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx testing, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxxxxx, X. X. Xxxxxxx eds.), Xxxxxx &xxx; Xxxxxxx, Washington XX, 5. xxx., 515-530.
(11) Xxxxxxx, X. X., Pidoux M. (1987), Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxx: xxxxxxxxx xx xxx relative xxxxxxxxxxxx xx the middle xxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx on xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, Xxxxxx Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Xxxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxx: Xxxx/x 3T3 XXX Xxxxxxxxxxxxx Test, xxxxxxxx 23. xxxxxxxx 1997 X. Xxxxxxxxx, xxxxxxxxx 6. xxxxxx 1998 xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxx xx the XX/XXXXXX xxxxxxx "Xx Xxxxx Photoirritation".
(13) Xxxxxxxxx, X., Balls, M., Xxxxxx, X., Xxxx, X. X. W., Xx Xxxxx, O., Xxxxxüxxxx, X. G., Xxxxxxxxx, X., Liebsch, X., Xxxxxx, W. X., Xxxxxxxxxxxxx (1998), X Xxxxx xx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx XX Xxxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxx XXX xx the XX Xxxxxxxxx 76/768/XXX xx xxx 3T3 XXX Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, XXXX 26, 679-708.
(14) Holzhütter, X. X., Xxxxxxxx, X. (1995), Mathematical xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx, 3, 127-138.
(15) Xxxxxüxxxx, H. X. (1997), A xxxxxxx xxxxxxx of xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx pairs xx xxxx-xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxx xxx predicting xxx xx vivo xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, XXXX 25, 445-462."
"Xxxxxxx
&xxxx;
[1] Další xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (12).