Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/33/XX
xx xxx 25. xxxxx 2000,
xxxxxx xx po xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 67/548/EHS x xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [1]
(Xxxx s xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Smlouvu o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx na xxxxxxxx Xxxx 67/548/EHS ze xxx 27. xxxxxx 1967 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx a správních xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, balení x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxx x Xxxx 1999/33/XX [3], x xxxxxxx xx xxxxxx 28 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:
(1) X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX xx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx vlastností, xxxxxxxx x ekotoxicity xxxxx x xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
(2) Xxxxx xx. 7 xxxx. 2 směrnice Xxxx 86/609/XXX xx xxx 24. xxxxxxxxx 1986 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx a správních xxxxxxxx xxxxxxxxx států xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx používaných xxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxx [4] xxxxx xxx xxxxx, xxx xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xx-xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx vědecky xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Xxxxxx zamýšlí xxxxxxx do přílohy X směrnice 67/548/XXX xxxxxx xxxxxxxxxxxx zkušební xxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x cílem zpřístupnit xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx látek podle xx. 3 odst. 1 xxxxxxxx 67/548/XXX.
(4) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx v souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx technickému xxxxxxx směrnic o xxxxxxxxxx technických překážek xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxx příloh X x XX xxxx xxxxxxxx se xxxxxx do xxxxx X xxxxxxx V xxxxxxxx 67/548/XXX.
Článek 2
1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx dosažení xxxxxxx x touto xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 2001. Neprodleně x xxxx uvědomí Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy musí xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx vyhlášení. Xxxxxx xxxxxx si xxxxxxx xxxxxxx státy.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx právních xxxxxxxx, které xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, a xxxxxxxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Článek 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx dnem po xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských společenství.
Článek 4
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 25. dubna 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxöx
xxxxxx Xxxxxx
[1] Xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx dvacáté xxxxx.
[2] Úř. věst. 196, 16.8.1967, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Xx. xxxx. X 358, 18.12.1986, x. 1.
XXXXXXX X
"X.40 LEPTAVÉ XXXXXX NA KŮŽI
1. XXXXXX
1.1 Úvod
Dvě zkoušky xx vitro na xxxxxxx účinky xx xxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxx transkutánního xxxxxxxxxxxx xxxxxx kůže xxxxxxx (XXX) x zkouška x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxx střediskem xxx xxxxxxxx alternativních xxxxx (XXXXX, Společné xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxx Komise) (1, 2, 3) xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx. Validační xxxxxx XXXXX prokázala, xx xxxxx xxxxxxxxx lze xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx leptající a xxxxxxxxxxx xxxx. Protokol x xxxxxxx založené xx xxxxxx lidské xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx účinků (xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, X 35 x ostatní xxxxx xxxxxxxxxxx poleptání xxxx, X 34) (2). Xxxxx a postup xxxx zkoušek xx xxxxxx; xxxxx zkoušky, xxxxx má xxx xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxx xxxx Xxxxxx xxxx, xxxx X.
1.2 Definice
Poleptání xxxx: xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx aplikaci xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
1.3 Referenční xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxx 1.5.3.4 x 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx XXX xx xxxx potkana
Zkoušený xxxxxxxx xx až xx 24 h xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx terčíků xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx mladých xxxxxxx. Materiály x xxxxxxxxx účinky xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx normální xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vrstvy (xxxxxxx xxxxxxx), xxxxx je xxxxxx jako xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx úroveň (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX xxx prahovou xxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx postupu xxx xxxxxxxxx aktivní xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx látky (xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx (6)) xxx zařadit xxxxxx xxx xxxxxxxxx vázání xxxxxxx, aby xx xxxxxxx množství falešně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx získaných xxxxx pro xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2, 7).
1.5 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx TER xx xxxx xxxxxxx
1.5.1 Zvířata
Terčíky xxxx musí být xxxxxxxxxx x xxxxxxx (20 — 23 xxxxxxx) xxxxxxx (Wistar xxxx srovnatelný xxxx). Xxxxxxx x xxxxx xxxx se opatrně xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xxxxx opatrným xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx ponoří xx xxxxxxx antibiotik (xxxxxxxxxxxx xxxx. streptomycin, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x koncentracích xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxx a xxxxxx den xx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx roztokem xxxxxxxxxx x xxxxxxx se xx 3 xxx (x xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx než 31 xxx).
1.5.2 Xxxxxxxx xxxxxxx kůže
Zvířata xx xxxxxxx xxxxxx. Z xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxx xx x xxxx opatrně xxxxxxxxx. Xxxx xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx teflonové (XXXX) xxxxxxxx tak, xxx xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxx konec xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx O-kroužek, xxx xxxx xxxx upevněna, x přebytek xxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx x X-xxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxxx X-xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx komory xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 mM) (xxxxxxx 2).
1.5.3 Xxxxxxxx xxxxxx
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálu
Kapalná xxxxxxxx xxxxx (150 μx) se aplikuje xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx. 2). Xxx xxxxxxxx pevných xxxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx množství tak, xxx byla xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx na xxxxxx xxxxx xxxxx přidá xxxxxxxxxxxx xxxx (150 μx) a xxxxxxxx xx lehce protřepe. Xxxx xxxxxxx x xxxx xx mělo xxxxx x maximálnímu xxxxx. X xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx dosaženo zahřátím xx xx 30 °X, xxx xx xxxxxxxx látka xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xx prášek.
Ke zkoušce xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx 24 x (xxx xxxx bod 1.5.3.4). Zkoušená xxxxx xx zcela odstraní xxxxxxx xxxxxxx vody x xxxxxxx xxxxxxx 30 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, které x trubičce xxxxxx, xxx usnadnit omytím xxxxxxx xxxx teplé xx 30 °X.
1.5.3.2 Xxxxxx XXX
XXX xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx impedančním xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. XXX 401 xxxx 6401 xxxx ekvivalentní). Před xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx kůže xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 70 % ethanolu xxx, xxx byla xxxxxxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx odstraní xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 3 ml xxxxxxx xxxxxx hořečnatého (154 xX). Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx účelem xxxxxx xxxxxx x xΩ/xxxxxx kůže (obrázek 2). Xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx elektrod xxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxx vnitřní (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx, že xx xxxxx části xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx hořečnatého xxxxxx. Vnější (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx komory xxx, xxx spočívala xx xxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx mezi spodkem xxxxxxxxx svorky x xxxx xxxxxxxxx trubičky xx udržuje xxxxxxxxxx (xxxxxxx 1), neboť xxxx vzdálenost má xxxx na xxxxxxxx xxxxxxx odporu.
Je xxxxx xx xxxxxxxx, že xx-xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx než 20 xΩ, může to xxx xxxxxxxxx vrstvou xxxxxxxx látky na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. X xxxxxxxxxx xxxx vrstvy xx xxx pokusit xxxx. xxx, xx xx xxxxxxxxx trubička xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx x 10 x xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xx opakuje x xxxxxxxx síranem xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx přijatelného rozpětí xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx tyto xxxxxxxxx látky x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx (xΩ) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
10–25 |
1.5.3.3 Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxx-xx xxxxxxx TER xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx nebo xxxxx 5 xΩ, lze xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx průniku xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxx výsledky xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (2).
1.5.3.3.1 Aplikace a xxxxxxxxxx xxxxxxx sulforhodaminu X
Xx předchozí xxxxxxxx xxxxxxxx látky xx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx 2 x 150 μl 10 % xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx se xxxx přibližně 10 x xxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxx veškeré xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxxxx (xxxx. 20 xx xxxxxxxx lahvičky xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx (8 xx). Xxxxxxxx xx lehce 5 xxx. xxxxxxxxxxxx, xxx xx odstranilo xxxxx xxxxx barvivo. Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx zopakuje, x xxxx se terčíky xxxx xxxxxx x xxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 ml 30 % roztoku (x/X) xxxxxxx-xxxxxxx-xxxxxxx (SDS) x xxxxxxxxxxx vodě x inkubují xx xxxx xxx při 60 °X. Po xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx vyjmou x zlikvidují x xxxxx roztok se xxxxxxxx 8 xxx. xxx 21 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxx síla ˜ 175). 1 xx xxxxxx supernatantu xx xxxx xxxxx 4 xx 30 % (x/X) xxxxxxx XXX v destilované xxxx. Absorbance (A) xx xxxx xxx xxxxxxxxx 565 xx.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx B xx xxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx X (molární xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X při 565 xx = 8,7 × 104; xxxxxxxxxx xxxxxxxx = 580). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X se xxxxxxx xxx každý xxxxxx xxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx hodnota. Střední xxxxxxx xxxxxxxx vázání xxxxxxx jsou xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx kontroly spadají xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxx x přístroje xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx doporučeny xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (μx/xxxxxx xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
40-100 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx voda |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx kůže xx xxxxxx xxxx (např. 2 hodiny), xxx xx identifikovaly xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx leptavé. Validační xxxxxx však ukázala, xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx účinky x několika xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xx xxxx 2 xxxxx (2), xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx správnou xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxx leptavých xxxxxx při 24xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx x rozměry xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx experimentální xxxxxx xxxxx xxx vliv xx xxxxxxx hodnoty XXX. Xxxx 5 Ω pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x postupem, xxx xxxx popsány x xxxx metodě. Xxxxxxxxxx xx xxxx kalibrovat xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx odporu xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vybraných x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx studii (3).
1.6 Xxxxxxxx zkušební xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx modelu xxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx po xxxx 4 xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx rohovité xxxxxx. Materiály x xxxxxxxxx účinky xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx specifikované xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxx zkoušky redukce XXX) pod definovanou xxxxxxxx úroveň. Xxxxxxxx xxxxxxx xx založena xx hypotéze, xx xxxxxxxx látky x xxxxxxxxx účinky jsou xx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx rohovitou xxxxxxx (xxxxxx xxxx xxxxx) x xxxx xxxxxxxxxx cytotoxické, aby xxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxx buněčných xxxxxxxx.
1.7 Popis xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx modelu xxxxxx xxxx
1.7.1 Xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx pocházet x xxxxxxx xxxxxx, musí xxxx xxxxxxxx určitá xxxxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a vrstvu xxxxxx buněk xxx xx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vrstvy musí xxx dostatečná. Xx xxx prokázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx modelu k xxxxxxxxxxxx látkám, které xxxxxxxx neproniknou xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx vysoká, xxx bylo xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxxxxx buněk (xxxxxxxxx xxxx. redukcí XXX, xx. xxxxxxx xxxxxxx absorbance X) xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx v mezích xxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx hodnoty xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxx (ve xxxxxxxx x životaschopností pro xxxxxxxxx kontrolní látku) xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx, xxx xxxxx xxxxxxxxx mezinárodním xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx (2).
1.7.2 Zkušební xxxxxx
1.7.2.1 Xxxxxxxx zkoušeného xxxxxxxxx
X xxxxxxxxx materiálů xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx (minimálně 25 μx/xx2). U pevných xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx kůži, x xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx, xxx byl zajištěn xxxxx styk s xxxx; xxxxx xxxxx xx měly xxx xxxxx potřeby před xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx, xx aplikační xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx látek (2). Xx xxxxxxxx expoziční xxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk
K xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx použita xxxxxxxx validovaná xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Nejčastěji se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX, pro níž xx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx xxxx xx xxxxxx xx roztoku XXX x koncentraci 0,3 xx/xx xxx xxxxxxx 20-28 °C xx xxxx 3 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx poté xxxxxxxxx (rozpouštědlem) x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx měřením absorbance X xxx xxxxxx xxxxx 545 až 595 xx.
1.7.2.3 Doplňkové xxxxxxxxx
Xxxxxxx model xxxx x xxxxxx zaznamenání xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx atd. xxxxx xxx xxxxx xxxx xx výsledky xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx, xxx metodika a xxxxxxxxxxx xxxxx byly xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx standardů xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxxxxx xxxxxx XXXXX (3). Xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx s mezinárodními xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx reprodukovatelnost xxx široké spektrum xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx splňovat alespoň xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx validitu (2) a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxx xx vědeckém časopise x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
2. ÚDAJE
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Xxxxxxx TER xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx (xΩ) pro xxxxxxxx materiál, pozitivní x xxxxxxxxx kontrolu x pro xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx údajů x duplicitních xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxx klasifikaci xx xxxx být xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.
2.1.2 Xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X a xxxxxxxxx hodnoty xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x procentech xxx xxxxxxxx materiál, xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx opakovaných experimentech, x středních xxxxxxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.
2.2 Hodnocení x interpretace xxxxxxxx
2.2.1 Xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
Xx-xx hodnota XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx 5 kΩ, xxxx xxxxx xxxxxx. Xx-xx hodnota XXX xxxxx xxxx rovna 5 xΩ x xxxxx o povrchově xxxxxxx látku xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx látku, xx xxxxx xxxxxx.
X xxxxxxxxx aktivních látek xxxx xxxxxxxxxxx organických xxxxx, které xxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ, lze xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xx-xx střední xxxxx xxxxxxx x terčíku xxxx xxxxx nebo xxxxx střednímu obsahu xxxxxxx x xxxxxxx xxxx získanému xxxxxxxx xxx xxxxxxx 36 % XXx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx zkoušené xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxx je xxxx xxxxxx. Xx-xx střední xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx xxxxx xxx střední xxxxx xxxxxxx v terčíku xxxx xxxxxxx souběžně xxx xxxxxxx 36 % XXx, xx xxxxxxx falešně xxxxxxxxx, x látka tedy xxxx xxxxxx.
2.2.2 Xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx; xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxxxxxxx xxx xxxxx zkoušený xxxxxx lze xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x procentech xxxxxxxx k negativní xxxxxxxx. Hraniční xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx (nebo xxxxxx se rozlišují xxxxx xxxxx leptavých xxxxxx), xxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx před xxxxxxxx metody x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, xx xx xxxxxx (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxx x zkoušce xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx látka:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x případně xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Podobné informace xx xxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx postupu,
- xxxxx x zdůvodnění xxxxxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx TER) nebo xxxxxxx životaschopnosti buněk x xxxxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx lidské xxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx včetně xxxxx x duplicitních xxxx xxxxxxxxxxx experimentech x středních xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx formě xxxxxxx,
- xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) XXXXX (1998), ECVAM News &xxx; Views, XXXX 26, 275-280.
(2) Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X. B., Xxxxx, X., Botham, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxx, X. K., Xxxxxxx, X. J., Holzhutter, X-X., Xxxxxxx, M. (1998), The ECVAM xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 2. Xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxx Team, Xxxxxxxxxx xx vitro 12, 483-524.
(3) Barratt, X. X., Xxxxxxx, X. X., Fentem, X. H., Gerner, X., Xxxxxx, X. X., Worth, X. X. (1998), The XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxx tests xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 1. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxx test xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx in xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. X. X., Xxxxxxxxx, M. X., Rhodes, X. (1986), Xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx — xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Xxxx Xxxx. Toxicol. 24, 507-512.
(5) Xxxxxx, X. X., Xxxx, T. X., Dennett, X., XxXxxx, J. X., Xxxxxxxxx, X. A., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Gardner, J. (1992), Xxx xxxx xxxxxxxxxxx test xx xxxxx: results of xx interlaboratory xxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 6, 191-194.
(6) Worth, X. P., Xxxxxx, X. X., Balls, X., Botham, X. X., Curren, X. X., Earl, L. X., Xxxxxxx, D. X., Liebsch, M. (1998), Xx xxxxxxxxxx xx the proposed XXXX xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, P. X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. D., Esdaile, X. J., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Hildebrand, X., Xxxxx, X. X., Xxxxxxx, M., Xxxxxxxx, X., Osborne, X., Xxxxx, X., Xxxxxxx, X. F., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X. 1995), X xxxxxxxxxxxxx study xx xx vitro skin xxxxxxxxxxx testing. Xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX workshop 6, ATLA 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Xxxxxxx 2"
XXXXXXX XX
"X.41 XXXXXXXXXXXX — XXXXXXX FOTOTOXICITY 3X3 XXX IN XXXXX
1. METODA
1.1 Úvod
Fototoxicita xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx světlu nebo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx látky.
Informace xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx vitro xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx. existence xxxx xxxxxxxxxxx možného xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xx zkoušené xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx zkoušky xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx je stanovení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx x světla, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xx xxxx, x xxxxxx xxxxxxxxxx, které působí xx nanesení xx xxxxxxx jako xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx byla xxxxxxxx a validována x rámci xxxxxxxxx xxxxxxxx XX/XXXXXX x xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) x xxxxx xxxxxxxx platnou xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx zkouškám xx xxxx. X xxxx 1996 xxxxxxxxxx xxxxxxxx skupina XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušek xx xxxxx pro xxxxxxxxxx fototoxicity (4).
Výsledky xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx porovnány x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx fotoiritačmi xxxxxx xx vivo u xxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx účinků xxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxx, fotoalergie x xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx mnoho xxxxxxxxxx xxxxx, které xxxxxxxx tyto xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx není xxxxxxxx x tomu, aby xxxxxxxx xxxxxxxxx stupně xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx postupného zkoušení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx uvedena x xxxxxxx.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx světla xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxx xx X/x2 xxxx xX/xx2.
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: xxxxxxxx (intenzita × xxx) xxxxxxxxxxxxxx (XX) xxxx xxxxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxxxxxxxx v xxxxxxx (X × x) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxx. X/x2 nebo X/xx2.
Xxxxxx xxxxx XX xxxxxx: označení xxxxxxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xx x'Xxxxxxxxx): XXX (315400 xx), XXX (280315 xx) x XXX (100280 xx). Používají se xxxxxx xxxx xxxxxxxx: xxxx xxxxxxx mezi XXX a XXX xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 320 xx x xxxxx UVA xxxx xxx rozděleno xx XX-X1 x XX-X2 s hranicí xxxxx 340 xx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxx, xxxxxx xx měří celková xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx buněčných xxxxxxxx) x xxxxx v xxxxxxxxxx na měřeném xxxx x na xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx x poměru x negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx zkoušky (x XX, xxxx xxx XX), xxx xxxxxx exponovány zkoušeným xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx model: xxxxxxxxxx používaný xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxxxx metodice xxx xxx převod xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xx předpověď fototoxického xxxxxxxxxx použít xxxxxx XXX x xxxxxxxx XXX.
XXX (xxxxx-xxxxxxxxxx factor — fotoiritační xxxxxx): xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx stejně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (EC50) xxxxxxxx xxxxx, x xx xxx necytotoxickém xxxxxxx XXX/XXX xxxxxxx (+ XX) x xxx něho (-UV).
MPE (xxxx photo xxxxxx — xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx): xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx účinku xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx necytotoxickém xxxxxxx XXX/xxx xxxxxxx (+ XX) x xxx xxxx (-UV).
Fototoxicita: xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx první expozici xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x následné xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx: xxxxx xxxxxx pojmu "xxxxxxxxxxxx", xxxxx se xxxxxxx x popisu xxxxx těch xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx kůži xx xxxxxxxx chemickým xxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxxx). Tyto xxxxxxxxxxx xxxxxx vedou xxxx x nespecifickému xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx xxx opalování).
Fotoalergie: xxxxxxx xxxxxxxxxxxx reaktivita, xx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx x světla x která xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx jeden xxxx dva týdny xxxx tím, xxx xxx xxxxxx kůže xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: genotoxická odezva xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XX/XXX xxxxxx a xxxxxxxxxxxxx chemické látce.
Fotokarcinogenita: xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovanou xxxxxxxx světla x xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx tvorba xxxxxx xxxxxxxxxx UV xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx látkou.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx pozitivní xxxxxxxxx chemické látky xxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxx být xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx, je xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Úvodní xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (5, 6, 7, 8). Xxxxxx jediným společným xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Podle xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxx-Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Před xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx zkoušení podle xxxxxxxxxx metodiky by xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx UV/VIS xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx (např. podle Xxxxxxxx XXXX 101). Xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx menší xxx 10 x.xxx-1.xx-1, xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x nemusí xxx zkoušena zkouškou xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx nepříznivé xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx).
1.5 Xxxxxxxx zkušební xxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxx (chemickým) xxxxxxxxxxx xxxx k xxxxxxxxxxx xxxxxx (7). Xxxxxxx xxxxx x poškození xxxxx. Zkouška xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU in xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX/XXX xxxxxx x xxx této xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx je x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx koncentračně xxxxxxx xxxxxxx příjmu xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (9) 24 xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x ozáření.
Buňky Balb/c 3X3 xx 24 x kultivují, xxx xxxxxxxxx monovrstvu. Xxx 96xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx zkoušenou xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx 1 x xxxxxxxxxxx xxxx různými xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xx jedna xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX/XXX xxxxxx 5 X/xx2 XXX (+ XX xxxxxxxxxx), zatímco xxxxx xxxxxxxx xx udržuje x xxxxx (-XX xxxxxxxxxx). U obou xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxx xxxxxx nahradí xxxxxxxxxxx médiem x xx xxxxxxx 24 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 3xxxxxxxxx příjmem neutrální xxxxxxx (XXX). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x procentech xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxx každou x xxxx zkušebních koncentrací. Xxx xxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx xx porovnají xxxxxxxxxxxx xxxxxxx odezvy xxxxxxx při ozáření (+ XX) x xxx xxxxxxx (-XX), xxxxxxx při hodnotě XX50, xx. při xxxxxxxxxxx způsobující 50 % úbytek xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx x neexponovanými kontrolami.
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xx XXX, dosavadní xxxxx: xxxxxxxxx xxxxx xx UVA xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Buňky se xxxxxx xxx intenzitě xxxxxxx xx zkoušce xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx, xxxxxx xxx se ozáří xxxxxx XXX xxxxxx 1 xx 9 X/xx2 a buněčná xxxxxxxxxxxxxxx se stanoví x xxx xxxxxxx xxxxxxxx NRU. Buňky xxxxxxx kritérium xxxxxxx, xxxx-xx jejich xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx 5 X/xx2 menší xxx 80 % xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx udržované v xxxxx. Xxxx kontrola xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx buněk.
Citlivost xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx XXX xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx: zkouška xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly (xxxxx v XXXX (Xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) nebo 1 % ethanolem (XxXX)) xxxx xxx xxxx vykazují při + XXX experimentu xxxxxxxxxxxxxxx alespoň 80 % vzhledem k xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx (-XXX).
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly: xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (X540 XXX) xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx 1 × 104 xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxx během xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx splňuje xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X540 XXX xxxxxxxxxxxxxx kontrol xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX xxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXX), a xx xxxx xxxxxxxxx. Xxx XXX xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx postupu xxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX in xxxxx xxxx definována xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxx CPZ ozářený (+ UVA): XX50 = 0,1 xx 0,2 μx/xx, xxx XXX neozářený (-XXX): XX50 = 7,0 xx 90,0 μg/ml. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xx. posun xxxxxxx XX50, xx xxx xxx alespoň 6.
Xxxxxxx XXX xxxxx xxx xxxxxxx xxxx souběžné xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx vhodné z xxxxxxxx typu nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx přiměřeným xxxxxxxx xxxxxxxxxx rozsahy xxxxxx XX50 a XXX xxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx
1.7.1 Xxxxxxxx
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx validační xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx linie xxxxxxxxxxx — Xxxx/x 3X3, xxxx 31 — xxx x xxxxx XXXX, xxxx z xxxxx ECACC x xx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxx nebo xxxxxxx xxxxx mohou xxx při stejném xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx předpokladu, že xxxx kultivační podmínky xxxxxxxxxxxx specifickým xxxxxxxx xxxxx, ale xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, x xxxx xx být použity xxxxx xxxxx, jsou-li xxxxxxxx takové xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xx UV xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 x xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x nižší xxx xxx xxxxxx. Je xxxxxxxx, aby byla xxxxxxxxx xxxxx Balb/c 3X3 xx UVA xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx postupem xxxxxxxx xxxxxxx popsaným x xxxx xxxxxxxx.
1.7.1.2 Xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxx rutinní buněčné xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx být použita xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxx Xxxx/x 3X3 xx xxxxx x DMEM (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, 4xX xxxxxxxxxx, penicilinem x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx 37 °X/7, 5 % XX2. Xxxxxxx xxxxxxxx xx, aby xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx buněčný xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx buňky xxxx buněčné xxxxx.
1.7.1.3 Xxxxxxxx kultur
Buňky ze xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx jednou xx xxxxxxxx před xxxxxxxx xx zkoušce fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx kultivačního xxxxx x takové xxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx konce zkoušky, xx. xx xxxxxxxx, xxx xx xx 48 x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx životaschopnost. Xxx xxxxx Balb/c 3X3 xxxxxxxxxxx x 96xxxxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 × 104 xxxxx xx xxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx do dvou xxxxxxxxxx 96xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx podrobeny celému xxxxxxx zkoušky xx xxxxxxxx xxxxxxxx kromě xxxx, xxx je xxxxx x destiček xxxxxxx (+XXX/XXX) x xxxxx xx udržována x xxxxx (-XXX/XXX).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx aktivace
Zatímco použití xxxxxxxxxxxxxxxx systému xx xxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxx xxxxxxxxx in xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx potenciálu, není x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx žádná xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx vivo xxxx xx vitro xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxx xxx za nezbytné xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Zkoušená xxxxxxxx xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx chemické látky xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx x xxxxxxxx neprokazují xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx x rychlé xxxxxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx xxxxx provádět xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx rozpuštěny xx fyziologickém roztoku, xxxx. x Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXXX) xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxx (PBS), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx světlo, xxx xxxxxxxx při xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx rozpustností xx xxxx xx xxxx xxx rozpuštěny xx xxxxxxx rozpouštědle xx 100násobek xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx by měly xxx zředěny x xxxxxx 1:100 xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Použije-li se xxxxxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 % xxx. ve xxxxx xxxxxxxxx, xx. x xxxxxxxxx kontrole x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxx (XxXX). Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx. aceton), xxx xxxx by xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxx. xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx fototoxických účinků, xxxxxx xxxxxxxx.
Xx-xx xxxxx, xxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xx 37 °X.
1.7.1.6 Xxxxxxx XX xxxxxxx/xxxxxxxx
Xxxxx světla: xxxxx xxxxxxxx zdroje xxxxxx x vhodné xxxxxxxx xx kritickým xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx x xxxxx XXX a ve xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx xxxxxx x xxxxx XXX je xxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx vzrůstá mezi 313 nm x 280 xx 1000krát (11). Kritéria xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx by xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx požadavek, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx světlo o xxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxxx látka xxxxxxxxx, x aby xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxx po xxxxxxxxxxx xxxx) byla xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxxx a xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxx xxxxxx), xx xxxx neměly xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx slunečního světla xxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. X xxxxxxxxx simulátorech xx xxxxxxx jak xenonová xxxxxxx, xxx vysokotlaká xxxxxxx xxxxxxxxxx výbojka. Xxxxx x xxxx xx xx výhodu, xx xxxxxxx méně xxxxx x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx dokonalá. Xxxxxxxx všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx významné xxxxxxxx UVB xxxxxx, xxxx xx být xxxxxx xxxxxxxxxx, aby xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx UVB xxxxxxxxx.
Xxx zkoušku xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxx (XXX:XXX ˜ 20:1). Xxxxxxx spektrální xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx použitého xx validační xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX in xxxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx (3).
Xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) xx xxxx xxxxxxxxxx xxxx každou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx. XX-xxxx xxxx xxx pro xxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx XX-xxxxx xx xxxx xxx kontrolována x xx xxxxx účelem xx doporučuje použít xxxxx xxxxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx UV-metr xxxxxxxx typu. X xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx xxx x xxxxxxx časových odstupech xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx světla x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx širokopásmového UV-metru xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx 5 J/cm2 byla xxx xxxxxxxxx studii xxxxxxxx jako necytotoxická xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 x xxxxxxxxxx xxxxx x excitaci x xxxxx fototoxických xxxxxxxxxx látek. Xxx xxxxxxxx 5 J/cm2 xx xxxx 50 xxx. xxxx být xxxxxxxxx ozáření nastavena xx 1,666 MW/cm2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx linie xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxx být xxxxx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx světelné xxxxxxxx xx xxxxxxx tímto xxxxxxxx:
x(xxx) = xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (J/cm2) 100 / xxxxxxxxx xxxxxxx (xX/xx2) 60 (1 J =.W xxx)
1.7.2 Zkušební podmínky
Maximální xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx; xxx vyšších xxxxxxxxxxxxx roste xxxxxx xxxxxxx pozitivních výsledků (xxxxxxxxxxxx). Hodnota xX xxxxxxxx koncentrace xx xxxx xxx vyhovující (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx chemických xxxxx zkoušených xx xxxxxxx (+ XXX) x xxx světla (-XXX) by xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx rozmezí. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podloženy experimentálními xxxxx. Xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7.3 Xxxxxxxx xxxxxx [1]
1.7.3.1 Xxxxx xxx
Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx x xxxxxxxxxxx xxxxx x 100 μl xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx pouze do xxxxxxxxxx xxxxx 96jamkové xxxxxxxx (xxxxx xxxxx). Xx zbývajících buněk xx xxxxxxx po 100 μx xxxxxxx xxxxxxxx x hustotě 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 buněk na xxxxx). Xxx každou xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-UVA) x xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (+XXX).
Xxxxx xx xxxxxxxx 24 x (7,5 % XX2, 37 °C), xxxxx nedosáhnou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tato inkubační xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx.
1.7.3.2 Xxxxx den
Po inkubaci xx kultivační xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 150 μx EBSS/PBS. Xxxxx xx 100 μx XXXX/XXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx rozpouštědlo (xxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxxx xx 8 xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x temnu xx xxxx 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °C).
K xxxxxxxxx xxxxx zkoušky x xxxxxxxx XXX xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 50 min. xxxxxxx xxxx víčko 96xxxxxxx destičky XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx 1,7 XX/xx2 (5 X/xx2. Aby xxxxxxx xx kondenzaci xxxx xxx víčkem, větrá xx xxxxxx ventilátoru. Xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxxx 50 xxx. (xxxx xxxxxxxx XXX) v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xx promyje xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx se xxxx xxx (18-22 x) (7,5 % CO2, 37 °X).
1.7.3.3 Xxxxx xxx
Xxxxxxxxxxxxx hodnocení
Buňky se xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx změny xxxxxxxxxx buněk xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, aby se xxxxxxxxx experimentální xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx xxx xxxxxxxxx cytotoxicity xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx červeně.
Buňky xx xxxxxxx 150 μx předehřátého XXXX/XXX x xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx odstraní xxxxxxxx. Xxxxx xx 100 μx xxxxx XX a xxxxxxxx xx 3 x xxx 37 °C xx xxxxxxxx atmosféře x 7,5 % XX2.
Xx xxxxxxxx se xxxxxx NR odstraní x buňky xx xxxxxxx 150 μl XXXX/XXX. XXXX/XXX se xxxxxxxxx a zcela xxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx).
Xxxxx xx xxxxxx 150 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx NR.
Destička xx xxxxxx 10 xxx. xxxxx na xxxxxxxx, xxxxx se XX x xxxxx nevylouží x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx NR xxx 540 xx, xxxxxxx se xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx. Údaje xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. ASCII) x xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx analýzu.
2. ÚDAJE
2.1 Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx
Xxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx analýzu xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx získané xxx xxxxxxx XXX/XXX nebo xxx xxxx. Xx-xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxx, aby bylo xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx křivku. Xxxxxxxx x xxxx, že xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx být xx xx mezní xxxxxxxxxxx 100 μx/xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx x temnu (-XXX) xxxxxxxxxxx, ale xxxxx xx xxx vysoce xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+XXX), xxxx být xxxxxxxx, aby xx xxxxxxx koncentrací, xxxxx xxxx být x xxxx xxxxxxx experimentu xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx, xx-xx být xxxxxx xxxxxxxxx uspokojivé kvality xxxxx. Není-li x xxxx xxxxxxx experimentu (-XXX x +XXX) xxxxxxxxxxxx zjištěna, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledky xxxxxx být dále xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx koncentrací. X xxxxxxxx xxxxxxxxx stačí xxxxx hlavní xxxxxxxxxx xxxxxxxxx jednou xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xx-xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx podmínky. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky. X xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxx (jiné rozpouštědlo, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx x úvahu xxxxxxxx inkubační xxxx xxxx ozářením. Xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx nestálých ve xxxx.
2.2 Xxxxxxxxxx výsledků
Je-li xx možné, xxxxxxx xx koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxxxxxx 50 % inhibici xxxxxxxxx xxxxxx neutrální xxxxxxx (NR) (XX50). Xxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxx regrese (xxxxxxx Hillovou funkcí xxxx xxxxxxxxxxx regresí) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx metod xxxxxx xxxxxxxxx (14). Xxxx použitím xxxxxxx XX50 pro xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx výpočet EC50 xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx papír (xxxxxxx xxx x: logaritmické, xxxxxxx osy x: xxxxxxxxxxxxxxxxx), neboť x xxxxx případech xxxx xx této xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
2.3 Hodnocení výsledků (xxxxxxxxxxx modely)
2.3.1 Předpovědní xxxxx — verze 1: xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxx jsou v xxxx xxxxxxxxx jak xxx ozáření (+UVA), xxx xxx xxxxxxx (-XXX) získány xxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx faktor (XXX) xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
(x) XXX = (XX50 (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxxxxxx PIF &xx; 5 předpovídá xxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx XXX ≥ 5 předpovídá xxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx látka xxxxxxxxxxx xxxxx xxx +XXX x xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx -XXX, xxxxx hodnotu XXX vypočítat, xxxxxxx xxx o výsledek, xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx "&xx; XXX", jestliže se xxxxxxx -XX zkouška xx xx nejvyšší xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxx), x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx "&xx; XXX";
(x) &xx; PIF = (Xxxx (-UV)) / (XX50 (+XX))
Xxx li xxxxxx pouze hodnotu "&xx; PIF", předpovídá xxxxxxxxx fototoxického potenciálu xxxx xxxxxxx &xx; 1.
Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx toho, že xxxxxxxx látka xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxxxxxxx, vypočítat xxx xxxxxxx XX50 (-XX) xxx xxxxxxx XX50 (+ UV), xxxxxx xx o xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx případech se xxx charakterizaci výsledku xxxxxxx formální xxxxxxx "XXX = *1";
(C) &xx; PIF = *1 = (Cmax (-XX)) / (Xxxx (+XX))
Xxx xx xxxxxx xxxxx hodnotu "PIF = *1", xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
X xxxxxxxxx x) x x) by xxxx xxx xxx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx xxxxx verze 2: xxxxxxx světelný xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, který xxx vyvinut x xxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxx xxxxxx EU/COLIPA (15) x xxx xxxxxxxx naslepo v xxxxxxxx studii fototoxicity xx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, které xx chovají xxxx XX filtry (13). Xxxxx xxxxx nemá xxxxxxx jako xxxxx XXX x případech, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx EC50. Xxxxx xxxxx využívá střední xxxxxxxx xxxxxx (mean xxxxx xxxxxx) (XXX), xxxxxxxx, která je xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx na koncentraci. Xxx xxxxxxx modelu xxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxx.
2.4 Interpretace xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx (XXX ≥ 5 xxxx XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, že xxxxx xx fototoxický potenciál. Xxxxxxxx bylo xxxxxxxx xxxxxxxx při koncentracích xxx 10 μx/xx, xx xxxx pravděpodobné, xx xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podmínek jako xxxxxxxxx in vivo. Xx-xx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μg/ml, xxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx nezbytné xxxxx xxxxx. Ty xx xxxxx týkat xxxxx x xxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxx akumulaci xxxxxxxx xxxxx x xxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zkouškou, např. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxx.
Xxxxxxxxx výsledek zkoušky xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx xxxxx (XXX &xx; 5 xxxx XXX &xx; 0,1) xxxxxxx, xx látka xxxxxx xxx xxxxx xxxxx za xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. V xxxxxxxxx, kdy xxxx xxxxx zkoušet xxxxxxxxx xxxxx xx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxx fototoxický xxxxxxxxx x fototoxicitu xx xxxx lze xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, kdy xxxx při nižších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx totožné xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx koncentraci (XX50 +XX x XX50 -XX), je xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxx-xx xxxxxxx tomu toxicita xxxxxxxxx (+XX a -XX) x jsou-li xxxxxxxxxxx omezeny xxxxxxxxxxxx xx xxxx na xxxxxxx xxxxx xxx 100 μx/xx, xxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x mělo by xxx zvážena xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. za xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxx).
3. ZPRÁVY
Protokol x xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx obsahovat xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx údaje a xxxxx CAS, je-li xxxxx,
- fyzikální xxxxxxxxxx x xxxxxxx,
- xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx,
- stálost x fotostabilita, xxxx-xx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- zdůvodnění volby xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x tomto xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxx (EBSS nebo XXX).
Xxxxx:
- typ x xxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxx buněčné xxxxxx, xx-xx známo,
- xxxxxxxxx xxxxx xx XXX xxxxxxxxx radiometrem xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — inkubace xxxx xxxxxxxx a xx xx:
- xxx x složení xxxxxxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx podmínky (xxxxxxxxxxx CO2, teplota, xxxxxxx),
- délka xxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxx inkubací x xx xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxxx chemické xxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx při xxxxxxx UV/VIS, tak xxx něj,
- v xxxxxxx, xx zkoušená xxxxxxxx látka xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxxxx, zdůvodnění xxxxxxxx xxxxxxxx koncentrace,
- xxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (pufrovaný xxxxxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx c) — xxxxxxx:
- zdůvodnění xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxxxxxxx propustnosti/absorpce xxxxxxxxx xxxxxx (použitých filtrů),
- xxxxxxxxxxxxxxx radiometru x xxxxxxxxxxx x jeho xxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxx zdroje xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v xX/xx2,
- délka expozice XX/XXX xxxxxx,
- dávka XXX xxxxxx (intenzita × xxx), vyjádřena x X/xx2,
- teplota xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x teplota xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxx x temnu.
Zkušební xxxxxxxx x) — xxxxxxx XXX:
- xxxxxxx xxxxx XX,
- doba inkubace XX,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx CO2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- podmínky extrakce XX (xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx),
- xxxxxx xxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx absorbance XX,
- druhá (xxxxxxxxxx) xxxxxx xxxxx, je-li xxxxxxx,
- xxxxxxx slepého xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxx, xx-xx xxxxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx při každé xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxx střední xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxx závislosti xxxxxx na koncentraci (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx versus relativní xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx +XXX x -XXX,
- xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx: xx-xx xx xxxxx, xxxxxxx hodnoty EC50 (+XXX) x XX50 (-XXX),
- srovnání xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci xxxxxxxxx x ozářením XXX/XXX x bez něho, x xx buď xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx-xxxxxxxxxxx xxxxxx ) (XXX), xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxx xxxxxx) (XXX),
- xxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxx životaschopnost (absorbance xxxxxxxx NR) ozářených x xxxxxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,
- kritéria xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx b) — xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:
- xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-XXX) x XXX-xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx: hodnoty EC50 (+XXX), XX50 (-UVA) x PIF, střední xxxxxxx x směrodatná xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) Xxxxxxxxx, X., Balls, X., Döring, X., Xxxxxüxxxx, H. X., Xxxxxxx, X., Klecak, X., L'Eplattenier, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. W., Xxxxxx, X., Moldenhauer, F., Xxxxx, X., Xxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, J., Xx Xxxxx, O., Xxxxxxxx, X., Willshaw, X. (1994), XXX/XXXXXX xxxxxxx xx in xxxxx xxxxxxxxxxxxx testing: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x Xxxx/x 3T3 xxxx phototoxicity xxxxx, Xxxxxxxxxx in vitro 8, 793-796.
(2) Anon (1998), Xxxxxxxxx xx xxx scientific xxxxxxxx xx xxx 3X3 XXX XX xxxx (xx xx xxxxx xxxx for phototoxicity), Xxxxxxxx Commission, Xxxxx Xxxxxxxx Centre: ECVAM xxx XXXX/X/2, 3 Xxxxxxxx 1997, XXXX 26, 7-8.
(3) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxx, X. X. X., Xxxxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, X., Holzhütter, X. X., Clothier, X., Xxxxxxx, P., Xxxxxxxxx, X., Liebsch, X., Lovell, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxxxx, U., Xxxxxxxx, X. X., Csato, X., Xxxxxxxxx, D., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. (1998), XX/XXXXXX "Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxx XX (xxxxx xxxxx), part 1: xxx 3X3 XXX phototoxicity test, Xxxxxxxxxx in Xxxxx 12, 305-327.
(4) OECD Xxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Xxxxx Xxxxxx xx the XXXX Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xx Validation and Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxx, XXXX Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, X. X. (1993), A xxxxxx xxx xx vitro xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 7, 95-102.
(6) Xxxxxxxxxx, X., Prino, G. (1972), Xxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxx progress in xxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx Vol. 3 Part 1, Xxxxx Xxxxxxx Publishing Xx, Xxxxxxxxx, XX–XXXX.
(7) Xxxxxxxxx, H., Xxxxxx, X. W., Xöxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, T., Xxxxxxx, X. X., Xxxx, X. X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X. (1994), Xx vitro xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: The xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX xxxxxxxx 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, J. X. (1989), Photosensitization. V: Xxx xxxxxxx of xxxxxxxxxxxx, (K. X. Xxxxx, ed.), Xxxxxx Xxxxx, Xxx Xxxx, 2. xxx., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, X., Puerner, X. X. (1985), Xxxxxxxx determination xx xxxxx by xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx neutral xxx absorption, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, L. A., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx X. (1996). X: Xxxxxx models xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (F. N. Xxxxxxxx, X. I. Xxxxxxx xxx.), Xxxxxx &xxx; Xxxxxxx, Xxxxxxxxxx XX, 5. xxx., 515-530.
(11) Tyrrell, X. X., Xxxxxx X. (1987), Xxxxxx spectra xxx human xxxx xxxxx: xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx middle xxxxxxxxxxx, near xxxxxxxxxxx xxx violet xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx keratinocytes, Xxxxxx Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Xxxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxx: Xxxx/x 3X3 XXX Phototoxicity Xxxx, xxxxxxxx 23. prosince 1997 X. Xxxxxxxxx, xxxxxxxxx 6. xxxxxx 1998 týmem Xxxxxxxxxx Xxxx of xxx XX/XXXXXX xxxxxxx "Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxx, X. X. X., Xx Silva, X., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxxxxx (1998), X Xxxxx on xxx Xxxxxxxxxx Potential xx XX Filter Xxxxxxxxx from Xxxxx XXX of xxx XX Xxxxxxxxx 76/768/XXX xx xxx 3X3 XXX In Vitro Xxxxxxxxxxxxx Test, ATLA 26, 679-708.
(14) Holzhütter, X. X., Xxxxxxxx, X. (1995), Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx cellular xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx, 3, 127-138.
(15) Holzhütter, X. X. (1997), X xxxxxxx xxxxxxx of xx vitro xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx from pairs xx xxxx-xxxxxxxx curves xxx xxx xxx xxx xxxxxxxxxx xxx xx vivo phototoxicity xx xxxxxxxxx, XXXX 25, 445-462."
"Xxxxxxx
&xxxx;
[1] Xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (12).