Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/33/XX
xx xxx 25. xxxxx 2000,
xxxxxx se xx xxxxxxx xxxxx přizpůsobuje xxxxxxxxxxx pokroku xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx týkajících xx xxxxxxxxxxx, balení x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [1]
(Xxxx x xxxxxxxx pro XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx na směrnici Xxxx 67/548/EHS ze xxx 27. xxxxxx 1967 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxx x Xxxx 1999/33/XX [3], a xxxxxxx xx článek 28 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxxx důvodům:
(1) X xxxxxxx V xxxxxxxx 67/548/XXX xx stanoví xxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, toxicity x xxxxxxxxxxx látek x xxxxxxxxx. Je xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
(2) Xxxxx čl. 7 xxxx. 2 xxxxxxxx Xxxx 86/609/XXX ze xxx 24. xxxxxxxxx 1986 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx států xxxxxxxxxx xx ochrany xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxx xxxxxxx xxxxx [4] xxxxx xxx xxxxx, xxx xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xx-xx rozumně x xxxxxxxxx dostupná xxxx xxxxxxx uspokojivá xxxxxx.
(3) Komise xxxxxxx xxxxxxx xx přílohy X xxxxxxxx 67/548/XXX xxxxxx alternativní xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxx xxxxxx používána xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx podle xx. 3 odst. 1 xxxxxxxx 67/548/EHS.
(4) Xxxxxxxx této xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxx xxx přizpůsobení technickému xxxxxxx směrnic o xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx překážek xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Text xxxxxx X x XX xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX.
Xxxxxx 2
1. Xxxxxxx xxxxx uvedou x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 2001. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx předpisy xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxx takový xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx si xxxxxxx xxxxxxx státy.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx znění hlavních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx právních xxxxxxxx, které přijmou x oblasti působnosti xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxxx tabulku mezi xxxxxxxx x přijatými xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Evropských společenství.
Xxxxxx 4
Xxxx směrnice xx xxxxxx členským xxxxxx.
V Bruselu xxx 25. xxxxx 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxxx Wallström
členka Xxxxxx
[1] Přijato xxxx xxxxxxxxxxxxx po xxxxxxx xxxxx.
[2] Xx. xxxx. 196, 16.8.1967, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Xx. xxxx. X 358, 18.12.1986, x. 1.
XXXXXXX I
"B.40 XXXXXXX XXXXXX XX XXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxx xxxxxxx xx xxxxx na xxxxxxx xxxxxx na xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx potkana (XXX) x zkouška x využitím modelu xxxxxx xxxx byly Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx metod (XXXXX, Xxxxxxxx výzkumné xxxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx) (1, 2, 3) xxxxxxxxx xxxx vědecky xxxxxx. Validační studie XXXXX xxxxxxxxx, xx xxxxx zkouškami xxx xxxxxxxxxx rozlišit xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kůži. Xxxxxxxx x xxxxxxx založené xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx rozlišit xxxxxx xxxxxxxx účinků (xxxxx xxxxx způsobující xxxxx xxxxxxxxx, X 35 x ostatní xxxxx xxxxxxxxxxx poleptání kůže, X 34) (2). Xxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx; volba xxxxxxx, xxxxx má být xxxxxxx, závisí xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxx xxxx Xxxxxx úvod, xxxx X.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxx: xxxxxxxx poškození xxxx xx aplikaci zkoušeného xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx viz xxxx 1.5.3.4 x 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx metody — xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx je xx xx 24 h xxxxxxxxx xx epidermální xxxxxx terčíků kůže xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxx xxxxxx normální integrity x bariérové xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (stratum xxxxxxx), xxxxx xx xxxxxx xxxx snížení xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx xxxxxx (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx x nedráždivé xxxxx xxxxxxxxx TER xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xx zkušebního xxxxxxx xxx povrchově xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx (6)) xxx zařadit xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxx chemických xxxxx (2, 7).
1.5 Popis xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx TER xx xxxx xxxxxxx
1.5.1 Xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxxxxxx x xxxxxxx (20 — 23 xxxxxxx) xxxxxxx (Wistar xxxx xxxxxxxxxxx kmen). Xxxxxxx x boční xxxx xx opatrně xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx testovací xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (obsahujícího xxxx. xxxxxxxxxxxx, penicilin, xxxxxxxxxxxxxx x amfotericin x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx antibiotik x xxxxxxx xx xx 3 xxx (x přípravě xxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx 31 xxx).
1.5.2 Xxxxxxxx xxxxxxx kůže
Zvířata se xxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx odstraní xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxx xx x xxxx opatrně xxxxxxxxx. Kůže xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx teflonové (XXXX) xxxxxxxx tak, aby xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxx konec trubičky xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X-xxxxxxx, xxx xxxx kůže upevněna, x přebytek xxxxx xx xxxxxx. Rozměry xxxxxxxx x O-kroužku xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Pryžový X-xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx poté xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pružinové svorky xx xxxxxx do xxxxxxxxxxx komory xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX) (xxxxxxx 2).
1.5.3 Zkušební postup
1.5.3.1 Xxxxxxxx zkoušeného xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (150 μx) xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx. 2). Xxx xxxxxxxx pevných xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx množství tak, xxx byla xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Poté xx na xxxxxx xxxxx xxxxx přidá xxxxxxxxxxxx voda (150 μx) x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxx xxxxx x maximálnímu xxxxx. X xxxxxxxxx xxxxx xxxx může xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx na 30 °X, xxx se xxxxxxxx xxxxx roztavila, xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxx látky xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxx. Zkoušená xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx 24 x (xxx xxxx xxx 1.5.3.4). Xxxxxxxx látka xx zcela odstraní xxxxxxx tekoucí xxxx x teplotě xxxxxxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, které x xxxxxxxx ztuhly, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx 30 °X.
1.5.3.2 Xxxxxx XXX
XXX se xxxx xxxxxxxxxxxxxx impedančním xxxxxxx pro střídavý xxxxx (např. XXX 401 nebo 6401 xxxx xxxxxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxx xx povrchové xxxxxx xxxx sníží xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 70 % xxxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxxxxxx zakryta. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx odstraní xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xx zvlhčí přidáním 3 xx xxxxxxx xxxxxx hořečnatého (154 xX). Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx na xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx odporu x xΩ/xxxxxx xxxx (xxxxxxx 2). Rozměry xxxxxxxx x délky exponovaných xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxx uvedeny xx xxxxxxx 1. Xxxxxx xxxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx je xxxxx xxxxxx odporu opřena x xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx, xx xx délka xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx síranu xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xx umístěna xxxxxx xxxxxxxxxxx komory xxx, xxx spočívala xx xxx komory. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxx teflonové xxxxxxxx xx xxxxxxx konstantní (xxxxxxx 1), xxxxx xxxx vzdálenost má xxxx na xxxxxxxx xxxxxxx odporu.
Je třeba xx xxxxxxxx, xx xx-xx naměřená xxxxxxx xxxxx xxx 20 xΩ, může xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx látky xx xxxxxxxxxxx xxxxxx terčíku xxxx. O xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx. xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx zakryje xxxxxx v xxxxxxxx x 10 x xx protřepává. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x měření xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx XXX (xxxxxxx hodnoty) xxxx xxxxxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx rozpětí xxxxxx. Xxx popsanou xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx doporučeny tyto xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx přijatelná rozpětí xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx (xΩ) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx chlorovodíková (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx voda |
10–25 |
1.5.3.3 Upravený xxxxxx xxx povrchově xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx látky
Jsou-li xxxxxxx XXX xxx xxxxxxxxx aktivní látky xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx zkoušené xxxxx xxxxx xxxx xxxxx 5 kΩ, xxx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx sulforhodaminu X
Xx předchozí aplikaci xxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxxxxxxxx stranu xxxxxxx xxxxxxx kůže xxxxxxxx na 2 x 150 μx 10 % xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X x destilované xxxx. Xxxxxxx kůže xx xxxx přibližně 10 x xxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx barvivo. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx sejmou z xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xx xx xxxxxxxx (xxxx. 20 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx deionizovanou xxxx (8 ml). Lahvičky xx xxxxx 5 xxx. protřepávají, xxx xx xxxxxxxxxx další xxxxx barvivo. Tato xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx zopakuje, a xxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxx a xxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx 30 % roztoku (x/X) natrium-dodecyl-sulfátu (XXX) x destilované vodě x xxxxxxxx se xxxx xxx xxx 60 °X. Xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 8 min. xxx 21 °C (xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx ˜ 175). 1 xx vzorku xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx 4 xx 30 % (m/V) roztoku XXX x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx (X) xx xxxx při xxxxxxxxx 565 nm.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx obsahu barviva
Obsah xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X xx terčík xxxx xx vypočte z xxxxxx X (molární xxxxxxxxx koeficient sulforhodaminu X xxx 565 xx = 8,7 × 104; molekulová xxxxxxxx = 580). Xxxxx xxxxxxx sulforhodaminu X xx xxxxxxx xxx každý terčík xxxx a poté xx xxxxxxx jeho xxxxxxx hodnota. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxxxx, xxxxx hodnoty xxx xxxxxxxxx kontroly spadají xx xxxxxxxxxxxx rozmezí xxxxxx. Xxx popsanou xxxxxxxx x přístroje xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx přijatelné xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (μx/xxxxxx xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X kyselina xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
40-100 |
|
Negativní |
Destilovaná xxxx |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx lze xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx (xxxx. 2 xxxxxx), xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx však ukázala, xx xxxxxxxxx TER xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek xxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx po xxxx 2 hodin (2), xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx látek x xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx xxx leptavých xxxxxx xxx 24xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx experimentální postup xxxxx mít xxxx xx získané hodnoty XXX. Práh 5 Ω pro předpověď xxxxxxxxx účinků xxx xxxxxxx z xxxxx xxxxxxxxx se zařízením x xxxxxxxx, xxx xxxx popsány x xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx tedy xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx hodnotu odporu xxxxxxxxx řady referenčních xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx validační xxxxxx (3).
1.6 Podstata xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxxx materiál je xxxxxxxxx xx xx xxxx 4 xxxxx xx xxxxxxxxxxxx model xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx rohovité xxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxxxxxxx účinky jsou xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx životaschopnosti xxxxx (stanovený xxxx. xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX) pod xxxxxxxxxxx xxxxxxxx úroveň. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, že xxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx jsou xx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxx xxxx xxxxx) x jsou xxxxxxxxxx cytotoxické, xxx xxxxxxxxx smrt xxxxx x hlubších xxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7 Popis xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
1.7.1 Xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxx xxxxxx kůže xxxxx pocházet x xxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxx splňovat určitá xxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxx funkční xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxx buněk xxx xx. Bariérová xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx. Xx xxx prokázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx modelu x xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx vysoká, xxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. redukcí XXX, xx. měřením xxxxxxx xxxxxxxxxx X) xx xxxxxxxx negativní xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx x mezích xxxxxxxxxxxx xxx daný xxxxx. Podobně hodnoty xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx) xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Nejdůležitější xxxxxx xx, xxx xxxxx odpovídal xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx (2).
1.7.2 Zkušební postup
1.7.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálu
U xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx (minimálně 25 μx/xx2). X xxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxx xxxxx, aby xxxxxxx xxxx, x xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxx; xxxxx látky xx měly xxx xxxxx xxxxxxx před xxxxxxxx rozemlety na xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx, že aplikační xxxxxx xx použitelná xxx xxxxxx spektrum xxxxxxxxxx xxxxx (2). Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx opatrně xxxxxxxxx fyziologickým xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx validovaná xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Nejčastěji xx xxxxxxx xxxxxxxxx redukce XXX, xxx níž xx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx prokázalo, xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx xxxx xx xxxxxx do xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx 0,3 xx/xx při xxxxxxx 20-28 °X xx xxxx 3 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx (rozpouštědlem) x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxx vlnové xxxxx 545 xx 595 nm.
1.7.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx kůže x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxx xxxxx xxxx xx výsledky xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Doporučuje se, xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx látek xxxxxxxxx ve xxxxxxxxx xxxxxx XXXXX (3). Xx rozhodující, xxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx laboratoře a xxxx xxxxxxxxxxxx reprodukovatelnost xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx splňovat alespoň xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx vědeckou xxxxxxxx (2) a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx publikovány xx xxxxxxxx časopise x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
2. ÚDAJE
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Xxxxxxx XXX xx kůži xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx (kΩ) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x pro xxxxxxx xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx xxxxx xxxxxx údajů x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, o xxxxxxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxxx klasifikaci xx xxxx xxx xxxxxxx ve formě xxxxxxx.
2.1.2 Xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx kůže
Hodnoty xxxxxxxxxx X x xxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnosti xxxxx x xxxxxxxxxx xxx zkoušený materiál, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x duplicitních xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx hodnotách x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxx xxx uvedeny xx xxxxx xxxxxxx.
2.2 Xxxxxxxxx x interpretace výsledků
2.2.1 Xxxxxxx TER xx xxxx xxxxxxx
Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxx větší xxx 5 xΩ, xxxx látka xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ x xxxxx o xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx organickou látku, xx xxxxx xxxxxx.
X xxxxxxxxx aktivních xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx průniku xxxxxxx. Xx-xx xxxxxxx obsah xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v terčíku xxxx xxxxxxxxx souběžně xxx xxxxxxx 36 % XXx jakožto xxxxxxxxx xxxxxxxx, je xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxx xx xxxx xxxxxx. Je-li xxxxxxx xxxxx barviva x xxxxxxx xxxx menší xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x terčíku xxxx xxxxxxx souběžně xxx použití 36 % XXx, xx xxxxxxx falešně xxxxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx.
2.2.2 Xxxxxxx x modelem xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx A xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx; xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x výpočtu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x procentech xxxxxxxx k negativní xxxxxxxx. Hraniční xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx (nebo xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx třídy leptavých xxxxxx), xxxx xxx xxx předpovědní xxxxx xxxxx definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx studie xxxx potvrdit, xx xx vhodný (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x zkoušce
Protokol x xxxxxxx musí xxxxxxxxx xxxxxxx tyto xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxx:
- identifikační xxxxx, fyzikální xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx informace xx měly xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx postupu,
- xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx XXX) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx o duplicitních xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x středních xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx formě xxxxxxx,
- popis xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) XXXXX (1998), XXXXX News &xxx; Xxxxx, XXXX 26, 275-280.
(2) Xxxxxx, X. H., Archer, X. X. X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Curren, X. X., Xxxx, X. X., Xxxxxxx, X. J., Xxxxxxxxxx, X-X., Liebsch, M. (1998), Xxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx study xx xx vitro xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 2. Results xxx evaluation by xxx Xxxxxxxxxx Xxxx, Xxxxxxxxxx xx vitro 12, 483-524.
(3) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Gerner, X., Xxxxxx, A. X., Xxxxx, X. X. (1998), The XXXXX xxxxxxxxxxxxx validation xxxxx xx in xxxxx xxxxx xxx xxxx corrosivity. 1. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx the xxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx in xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. X. X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. (1986), Xx xx xxxxx skin xxxxxxxxxxx xxxx — modifications xxx xxxxxxxxxx, Xxxx Xxxx. Xxxxxxx. 24, 507-512.
(5) Botham, X. X., Xxxx, T. X., Xxxxxxx, X., XxXxxx, X. X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Gardner, X. (1992), Xxx skin xxxxxxxxxxx test xx xxxxx: xxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. X., Xxxxxx, X. H., Xxxxx, X., Botham, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxx, L. X., Esdaile, X. X., Liebsch, M. (1998), Xx evaluation xx xxx xxxxxxxx XXXX testing xxxxxxxx xxx xxxx corrosion, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, P. X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. D., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx, X., Xxxxx, R. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxx, M., Xxxxxxx, X. F., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X. 1995), X xxxxxxxxxxxxx study xx xx xxxxx skin xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxx and recommendations xx ECVAM workshop 6, XXXX 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Obrázek 2"
&xxxx;
XXXXXXX II
"B.41 XXXXXXXXXXXX — XXXXXXX XXXXXXXXXXXX 3X3 XXX XX XXXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx odezva xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx určitým chemickým xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx vyvolaná xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx látky.
Informace xxxxxxx xx zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx. xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx nebezpečí, xxxxx xxxx xxxxxxx xx zkoušené xxxxx xx spojení s xxxxxxxx XX xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx in xxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x světla, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sloučeniny, xxxxx jsou xxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxxxx podání x xx xxxxxxxx xx xxxx, x xxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxx a validována x xxxxx spojeného xxxxxxxx XX/XXXXXX v xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vitro x xxxxxx xxxxxxxxxx zkouškám xx xxxx. V xxxx 1996 xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx OECD xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx vitro xxx xxxxxxxxxx fototoxicity (4).
Xxxxxxxx xx zkoušek fototoxicity 3X3 XXX in xxxxx xxxx porovnány x xxxxxxxx fototoxickými xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx u xxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxx xx ukázala xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxx x kombinovaného xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, např. xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx, třebaže mnoho xxxxxxxxxx látek, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xxxx vyvinuta x xxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx stupně xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx postupného zkoušení xxxxxxxxxxxx chemických látek xx xxxxxxx v xxxxxxx.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxx xx X/x2 nebo xX/xx2.
Xxxxx xxxxxxxxxx záření: xxxxxxxx (intenzita × xxx) ultrafialového (UV) xxxx viditelného záření xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx (X × x) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxx. J/m2 nebo X/xx2.
Xxxxxx xxxxx XX xxxxxx: xxxxxxxx doporučená xxxxxx XXX (Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xx x'Xxxxxxxxx): XXX (315400 xx), XXX (280315 xx) x UVC (100280 xx). Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx označení: xxxx hranice mezi XXX x XXX xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 320 nm x xxxxx UVA xxxx být xxxxxxxxx xx UV-A1 a XX-X2 s hranicí xxxxx 340 xx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: parametr, xxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxx vitálního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx buněčných lysosomů) x xxxxx v xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxx uspořádání xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx životaschopnost xxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxxx kontrolám (xxxxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx zkoušky (x XX, nebo xxx XX), ale xxxxxx exponovány zkoušeným xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx model: xxxxxxxxxx používaný pro xxxxxx xxxxxxxx zkoušek xxxxxxxx xx předpověď xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxxxxx metodice xxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in vitro xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx použít faktor XXX x veličinu XXX.
XXX (xxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxxxxx xxxxxx): xxxxxx získaný xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XX50) xxxxxxxx xxxxx, x xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/XXX světlem (+ UV) a xxx xxxx (-XX).
XXX (xxxx xxxxx xxxxxx — střední xxxxxxxx xxxxxx): xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx průběhu xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx necytotoxickém xxxxxxx XXX/xxx xxxxxxx (+ XX) x xxx xxxx (-XX).
Xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxx reakce, vyvolaná xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x následné xxxxxxxx světlu nebo xxxxxxx vyvolaná ozářením xxxx xx systémovém xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx: xxxxx xxxxxx pojmu "xxxxxxxxxxxx", který xx xxxxxxx x popisu xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx xx expozici xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx nebo xxxxxx). Tyto xxxxxxxxxxx xxxxxx vedou xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (podobné xxxxxx xxx xxxxxxxxx).
Xxxxxxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxx aplikaci xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx x která xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx jeden xxxx dva týdny xxxx xxx, xxx xxx reakci xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxx odezva xxxxxxxxxx z genového xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XX/XXX světla x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx látce.
Fotokarcinogenita: xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovanou xxxxxxxx světla x xxxxxxxx xxxxx. Termín xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx, kdy xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx XX zářením xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx pozitivní xxxxxxxxx chemické látky xxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxx xxxxxxx, xx pro xxxx vyvinutou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xxxxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx použitých xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Xxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxx byly zaznamenány x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (5, 6, 7, 8). Xxxxxx jediným xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (Grotthaus-Draperův xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx světelných xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx zkoušení podle xxxxxxxxxx metodiky xx xxxx mělo xxx xxxxxxxxx XX/XXX absorpční xxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxx Xxxxxxxx OECD 101). Xx-xx molární xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 l.mol-1.cm-1, chemická xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx biologickou xxxxxxxx xx nepříznivé xxxxxxxxxxxx účinky (dodatek).
1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx metody
Byly xxxxxxxxxxxxxx xxxxx mechanismy, xxxxxxx může absorpce xxxxxx (xxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (7). Všechny xxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Zkouška xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx necytotoxické xxxxx XXX/XXX světla a xxx této xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx je v xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx příjmu vitálního xxxxxxx neutrální červeně (XX) (9) 24 xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxx.
Xxxxx Balb/c 3X3 xx 24 x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx monovrstvu. Xxx 96xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx zkoušenou chemickou xxxxx se poté 1 x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek. Xxxx xx jedna xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx dávkou UVA/VIS xxxxxx 5 X/xx2 XXX (+ XX xxxxxxxxxx), xxxxxxx druhá xxxxxxxx se udržuje x temnu (-XX xxxxxxxxxx). U xxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxx 24 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx stanovena 3xxxxxxxxx příjmem neutrální xxxxxxx (XXX). Relativní xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx vyjádřená x procentech vzhledem x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se vypočte xxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx předpověď fototoxického xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx odezvy xxxxxxx xxx xxxxxxx (+ XX) x xxx ozáření (-XX), xxxxxxx xxx hodnotě XX50, tj. při xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 % úbytek xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
1.6 Xxxxxxxx jakosti
Citlivost xxxxx xx XXX, dosavadní xxxxx: xxxxxxxxx xxxxx xx UVA xx xxxx xxx pravidelně xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxx intenzitě xxxxxxx ke zkoušce xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro, příští xxx se xxxxx xxxxxx UVA záření 1 až 9 X/xx2 x buněčná xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x den xxxxxxx xxxxxxxx XXX. Buňky xxxxxxx xxxxxxxxx jakosti, xxxx-xx xxxxxx životaschopnost xx xxxxxxx 5 X/xx2 xxxxx xxx 80 % xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxx. Tato xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx vždy po xxxxxx pasážích xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxx negativní kontroly xx XXX při xxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxx kritéria xxxxxxx, xxxxxxxx negativní xxxxxxxx (xxxxx v EBSS (Xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) nebo 1 % xxxxxxxxx (XxXX)) nebo xxx xxxx xxxxxxxx při + XXX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 80 % xxxxxxxx k xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx rozpouštědle xxx souběžném experimentu x xxxxx (-XXX).
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly: absolutní xxxxxxxxxx (X540 NRU) xxxxxx x extraktu XX xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx 1 × 104 buněk xxxxxxxxxx na jednu xxxxx zachovalo xxx xxxxx během xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxxx). Zkouška xxxxxxx xxxxxxxxx přijatelnosti, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A540 XXX xxxxxxxxxxxxxx kontrol xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxx xxxxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxx známá xxxxxxxxxxx xxxxxxxx látka. Xxx xxxxxxxxx xxxxxx EU/COLIPA xxx použit xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXX), x xx xxxx xxxxxxxxx. Xxx XXX xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX in vitro xxxx definována xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxx XXX xxxxxxx (+ XXX): EC50 = 0,1 xx 0,2 μx/xx, pro XXX xxxxxxxxx (-UVA): XX50 = 7,0 xx 90,0 μg/ml. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xx. posun xxxxxxx XX50, xx xxx xxx xxxxxxx 6.
Namísto XXX xxxxx xxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx typu nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx být na xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx přiměřeným způsobem xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XX50 x PIF xxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxxx účinek).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx
1.7.1 Xxxxxxxx
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx xxxxxxxxx studii xxxx použita xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx fibroplastů — Xxxx/x 3X3, xxxx 31 — xxx z banky XXXX, xxxx x xxxxx XXXXX x xx xxxx doporučena. Xxxx xxxxx xxxx xxxxxxx linie mohou xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx použity xx předpokladu, že xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx potřebám xxxxx, ale xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx by měly xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, x xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx tehdy, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxxx buněk xx UV xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxx buňky Xxxx/x 3X3 x xxxxxx x xxxxxxxxx dosažitelným xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx xxx xxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx, aby byla xxxxxxxxx buněk Balb/c 3X3 xx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x této xxxxxxxx.
1.7.1.2 Xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxxxxxx buněčné xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x inkubační xxxxxxxx. X xxxxx Xxxx/x 3X3 se jedná x XXXX (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, 4xX xxxxxxxxxx, penicilinem x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx ve vlhčené xxxxxxxxx při 37 °X/7, 5 % XX2. Xxxxxxx xxxxxxxx xx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxx cyklus xxxxxx dosavadního xxxxxxx xxx použité buňky xxxx xxxxxxx linie.
1.7.1.3 Xxxxxxxx kultur
Buňky xx xxxxxxxxxx kmenových xxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx hustotě x xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx zkoušce xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx kultivačního xxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxx konfluence xx xxxxx zkoušky, xx. xx xxxxxxxx, xxx xx po 48 h xx xxxxxxxx stanovována životaschopnost. Xxx buňky Xxxx/x 3X3 xxxxxxxxxxx v 96xxxxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 × 104 xxxxx xx xxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx 96jamkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx poté xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx zkoušky za xxxxxxxx podmínek xxxxx xxxx, xxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (+XXX/XXX) x xxxxx xx udržována x xxxxx (-UVA/VIS).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx použití xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxx zkouškách xx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx potenciálu, xxxx x xxxxxxxxxxxxxxx dosud xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx xx vivo nebo xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxx xxx xx xxxxxxxx xxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx provedena xx xxxxxxxx aktivace xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx chemická xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxx, pokud xxxxx x stálosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky xx xxxx xxx rozpuštěny xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx. v Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztoku (XXXX) xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxx při xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxxx rozpustností xx vodě xx xxxx xxx rozpuštěny xx xxxxxxx rozpouštědle xx 100násobek xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx xx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx 1:100 fyziologickým xxxxxxxx. Použije-li xx xxxxxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 % xxx. xx všech xxxxxxxxx, xx. x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx rozpouštědly xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) x xxxxxxx (XxXX). Mohou xxx použita xxxx xxxxxx xxxx cytotoxická xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxxxx), xxx xxxx by xxx xxxxxxx posouzeny xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. reakce xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx účinků, xxxxxx xxxxxxxx.
Xx-xx třeba, xxxx xxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x/xxxx ultrazvuk x/xxxx xxxxxxx xx 37 °C.
1.7.1.6 Xxxxxxx XX xxxxxxx/xxxxxxxx
Xxxxx světla: xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x vhodné xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx x pásmu XXX x xx xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxx spojováno x xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx záření x xxxxx XXX xx xxxx relevantní x xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, přičemž xxxx xxxxxxxxxxxx vzrůstá xxxx 313 xx x 280 nm 1000xxxx (11). Xxxxxxxx xxx xxxxx vhodného xxxxxxxxxx xxxxxx xx měla xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, x xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx) byla xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx známých xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Použité xxxxxx xxxxx x xxxxx, včetně emise xxxxx (infračervená xxxxxx), xx dále xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx slunečního světla xxxxxxxxx simulátory xx xxxxxxxx xx optimální xxxxx xxxxxx. X xxxxxxxxx simulátorech xx xxxxxxx jak xenonová xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx x nich xx xx xxxxxx, xx emituje méně xxxxx x je xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx solární xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxx, xxxx xx být xxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx vysoce xxxxxxxxxxx xxxxxx délky XXX xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx spektrum xxxxxxxxx zbavené XXX xxxxxx (XXX:XXX ˜ 20:1). Xxxxxxx spektrální xxxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (3).
Dozimetrie: xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) xx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx zkouškou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx. XX-xxxx musí xxx xxx xxxx xxxxx kalibrován. Funkčnost XX-xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xx tímto xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx referenční stejným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX-xxxx xxxxxxxx xxxx. V xxxxxxxx xxxxxxx by xxx xxx x xxxxxxx časových xxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx zdroje xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx, avšak takové xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx školenými osobami.
Dávka 5 X/xx2 xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx necytotoxická xxx buňky Xxxx/x 3X3 a dostatečně xxxxx k excitaci x xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxx 5 X/xx2 xx dobu 50 xxx. xxxx být xxxxxxxxx ozáření xxxxxxxxx xx 1,666 XX/xx2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx jiný xxxxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxx XXX záření xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx buňky a xxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx fototoxinů. Xxxx světelné xxxxxxxx xx xxxxxxx tímto xxxxxxxx:
x(xxx) = xxxxx xxxxxxxxxx záření (J/cm2) 100 / intenzita xxxxxxx (xX/xx2) 60 (1 X =.X xxx)
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx xxxxxxx fototoxické xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx; xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx pH xxxxxxxx koncentrace xx xxxx xxx xxxxxxxxxx (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx koncentrací xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+ XXX) x bez xxxxxx (-XXX) xx xxxx xxx xxxxxxxx stanoveny x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx koncentrační xxxx x intervaly xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxx, xxx xxxx křivky xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Měla by xxx xxxxxxx geometrická xxxx koncentrací (x xxxxxxxxxxx faktorem xxxxxx).
1.7.3 Xxxxxxxx xxxxxx [1]
1.7.3.1 Xxxxx xxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 1 × 105 buněk/ml x xxxxxxxxxxx xxxxx x 100 μx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx jamek 96xxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx xxxxx). Xx zbývajících buněk xx xxxxxxx xx 100 μx xxxxxxx xxxxxxxx o hustotě 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 xxxxx na xxxxx). Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látku xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-XXX) x druhá pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (+UVA).
Buňky xx xxxxxxxx 24 x (7,5 % XX2, 37 °X), xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, jejich xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx.
1.7.3.2 Xxxxx xxx
Xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x buněk xxxxxxxxx x xxxxx jamka xx promyje xxxxxxx 150 μx EBSS/PBS. Xxxxx xx 100 μx XXXX/XXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx (negativní xxxxxxxx). Xxxxxxxx se 8 xxxxxxx koncentrací xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx látkou xx xxxxxxxx x temnu xx xxxx 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °X).
X xxxxxxxxx xxxxx zkoušky x xxxxxxxx XXX xx xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 50 xxx. xxxxxxx xxxx xxxxx 96xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx 1,7 XX/xx2 (5 X/xx2. Xxx xxxxxxx xx kondenzaci xxxx xxx xxxxxx, větrá xx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxxx 50 xxx. (doba expozice XXX) x xxxxx xxx pokojové teplotě.
Zkušební xxxxxx xx xxxxxxxx x každá xxxxx xx promyje xxxxxxx 150 μl XXXX/XXX. XXXX/XXX xx nahradí xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx přes xxx (18-22 h) (7,5 % CO2, 37 °X).
1.7.3.3 Třetí xxx
Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xx xxxxxxxxxx pod mikroskopem x fázovým kontrastem. Xxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx provádět xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx se xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xx promyjí 150 μx xxxxxxxxxxxx EBSS/PBS x xxxxxxxxx roztok xx xxxxxxx odstraní xxxxxxxx. Přidá se 100 μx xxxxx XX a xxxxxxxx xx 3 h xxx 37 °X xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x 7,5 % XX2.
Xx xxxxxxxx se xxxxxx XX xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX se xxxxxxxxx x zcela xxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxx odstředit x xxxxxxxx poloze).
Přidá xx xxxxxx 150 μx xxxxxxx připraveného roztoku xxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx NR.
Destička se xxxxxx 10 xxx. xxxxx na xxxxxxxx, xxxxx se NR x buněk nevylouží x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxx 540 xx, xxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxx ve xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX) x xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxx a množství xxxxx
Xxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx analýzu xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXX/XXX nebo xxx xxxx. Je-li xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x interval xxxx nimi xxxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx x tomu, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx xxxxxx xxx experiment x temnu (-UVA) xxxxxxxxxxx, ale xxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxxxxx (+XXX), xxxx xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, řádově xxxxxx, xx-xx být splněn xxxxxxxxx xxxxxxxxxx kvality xxxxx. Xxxx-xx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (-XXX x +UVA) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx zkoušku s xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx dávkami až xx nejvyšší xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledky xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx byla xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxx případech xxxxx xxxxx hlavní xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx zjištění xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx hodnot xxxxxxxxxxxxx modelu by xxxx být xxx xxxxxxxx opakovány.
Je-li xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx změnit xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Klíčovou xxxxxxxxx této zkoušky xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky. X xxxxxx důvodu xxxx xxx změna xxxxxxxx (xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx ultrazvuku) xxxxxxxxxxxxxx faktorem zkoušky. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxx v úvahu xxxxxxxx inkubační doby xxxx xxxxxxxx. Zkrácení xxxx xxxx xxx xxxxxx u xxxxxxxxxx xxxxx nestálých xx xxxx.
2.2 Zpracování výsledků
Je-li xx možné, xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxxxxxx 50 % inhibici xxxxxxxxx příjmu neutrální xxxxxxx (XX) (XX50). Xxx xxx učinit xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx regresí) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (14). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX50 xxx xxxxx xxxxxxx by měla xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx výpočet XX50 xxx popřípadě xxxxxx xxxxxx grafického xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (měřítko xxx x: xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx x: xxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxx transformaci xxxxxx závislosti odezvy xx koncentraci xxxxx xxxxxxxx.
2.3 Xxxxxxxxx výsledků (xxxxxxxxxxx modely)
2.3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxx — verze 1: xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxxx jak xxx xxxxxxx (+UVA), xxx xxx xxxxxxx (-XXX) xxxxxxx úplné xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx faktor (XXX) xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
(x) PIF = (XX50 (-XX)) / (XX50 (+UV))
Hodnota XXX &xx; 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx PIF ≥ 5 předpovídá xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx při +XXX a xxxx xxxxxxxxxxx xxx zkoušce -XXX, xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx, xxxxxxx xxx x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx o xxxxxxxxxxxx potenciálu. X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx "> XXX", xxxxxxxx se xxxxxxx -UV zkouška xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx koncentrace (Cmax), x xxxx xxxxxxx xx použije xxx xxxxxxx "> PIF";
(b) &xx; XXX = (Xxxx (-UV)) / (XX50 (+UV))
Lze xx xxxxxx pouze xxxxxxx "&xx; PIF", xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx &xx; 1.
Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx do nejvyšší xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX50 (-XX) xxx xxxxxxx EC50 (+ UV), svědčí xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu. X xxxxxxxx případech xx xxx xxxxxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxx xxxxxxxx hodnota "XXX = *1";
(X) &xx; PIF = *1 = (Xxxx (-XX)) / (Xxxx (+XX))
Xxx li xxxxxx xxxxx xxxxxxx "XXX = *1", xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx fototoxického potenciálu.
V xxxxxxxxx b) x x) xx xxxx xxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx opatrně xxxxx v xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in vitro.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx xxxxx verze 2: xxxxxxx světelný xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxx předpovídání xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX (15) a xxx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vitro x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xx chovají jako XX filtry (13). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx XXX x xxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx XX50. Xxxxx xxxxx využívá střední xxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxx effect) (MPE), xxxxxxxx, která xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx křivek xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx počítačový xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx x dispozici.
2.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro (XXX ≥ 5 xxxx XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, že xxxxx xx fototoxický xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx koncentracích xxx 10 μg/ml, xx xxxx pravděpodobné, xx xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podmínek jako xxxxxxxxx in vivo. Xx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx xxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Ty xx xxxxx xxxxx údajů x xxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxx akumulaci xxxxxxxx látky x xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky alternativní xxxxxxxxxxx zkouškou, např. xx použití xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx (PIF &xx; 5 xxxx XXX &xx; 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx fototoxická. X xxxxxxxxx, kdy xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxxxxx koncentraci 100 μx/xx, znamenají xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxx lze xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, xxx xxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx toxické xxxxxx xx koncentraci (XX50 +XX x XX50 -XX), xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxx-xx xxxxxxx tomu toxicita xxxxxxxxx (+UV x -XX) a xxxx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx na xxxxxxx xxxxx xxx 100 μx/xx, xxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x mělo xx xxx zvážena xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx in vitro xxxx xxxxxxxx in xxxx).
3. ZPRÁVY
Protokol x xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx tyto xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx chemická xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXX, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx,
- fyzikálně-chemické xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- zdůvodnění xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- rozpustnost xxxxxxxx xxxxx v xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx (XXXX xxxx XXX).
Xxxxx:
- xxx a xxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxx buněčné xxxxxx, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xx XXX stanovená xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx
Xxxxxxxx podmínky x) — xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx xx:
- typ x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx,
- inkubační xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx CO2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x po xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxxxxx jak xxx xxxxxxx UV/VIS, xxx xxx něj,
- v xxxxxxx, xx zkoušená xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx rozpustnost x xxxx xxxxxxxxxxx, zdůvodnění xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx,
- xxx x složení xxxxxxxxxx média (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx:
- zdůvodnění xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx filtrů),
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x této xxxxxxxxxxx, vyjádřená x xX/xx2,
- xxxxx expozice XX/XXX xxxxxx,
- xxxxx XXX xxxxxx (xxxxxxxxx × xxx), vyjádřena x X/xx2,
- teplota xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x temnu.
Zkušební xxxxxxxx x) — xxxxxxx XXX:
- xxxxxxx média XX,
- doba xxxxxxxx XX,
- inkubační podmínky (xxxxxxxxxxx XX2, teplota, xxxxxxx),
- podmínky xxxxxxxx XX (xxxxxxxxx činidlo, xxxxx extrakce),
- vlnová xxxxx použitá xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx absorbance XX,
- xxxxx (referenční) xxxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx,
- xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx spektrometrii, xx-xx xxxxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx při každé xxxxxxxxxxx zkoušené chemické xxxxx vyjádřená x xxxxxxxxxx střední xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxx zkoušené chemické xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx +XXX a -XXX,
- xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx: xx-xx xx možné, xxxxxxx xxxxxxx XX50 (+XXX) x EC50 (-XXX),
- xxxxxxxx obou xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x ozářením XXX/XXX x xxx xxxx, x to buď xxxxxxxx fotoiritačního faktoru (xxxxx-xxxxxxxxxxx factor ) (XXX), xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx účinku (xxxx xxxxx xxxxxx) (XXX),
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a) — xxxxxxxx negativní xxxxxxxx:
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxx NR) xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx buněk,
- xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx,
- xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx x) — xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:
- xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-XXX) x XXX-xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx,
- dosavadní údaje xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx XX50 (+XXX), EC50 (-XXX) x XXX, střední xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. LITERATURA
(1) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Döring, B., Xxxxxüxxxx, X. G., Xxxxxxx, S., Xxxxxx, X., X'Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Maurer, X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, O., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. (1994), EEC/COLIPA xxxxxxx xx xx vitro xxxxxxxxxxxxx testing: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x Xxxx/x 3T3 xxxx xxxxxxxxxxxxx assay, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 8, 793-796.
(2) Xxxx (1998), Statement xx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx the 3X3 XXX XX xxxx (xx in xxxxx xxxx xxx phototoxicity), Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxx Centre: ECVAM xxx XXXX/X/2, 3 Xxxxxxxx 1997, XXXX 26, 7-8.
(3) Xxxxxxxxx, X., Balls, M., Xxxxxx, X., Pape, X. J. W., Xxxxxxxxxx, G., Xx Xxxxx, O., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X., Desolle, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Lovell, W. X., Maurer, X., Xxxxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. M., Csato, X., Sladowski, D., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. (1998), XX/XXXXXX "Xx xxxxx phototoxicity", xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx phase II (xxxxx xxxxx), xxxx 1: xxx 3X3 XXX xxxxxxxxxxxxx xxxx, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 12, 305-327.
(4) XXXX Xxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Final Report xx xxx XXXX Xxxxxxxx on Xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Criteria of Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxx, XXXX Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, X. W. (1993), X xxxxxx xxx xx vitro xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx potential, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 7, 95-102.
(6) Santamaria, X., Xxxxx, X. (1972), List xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx, biological and xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx. 3 Xxxx 1, Xxxxx Holland Xxxxxxxxxx Xx, Amsterdam, XI–XXXV.
(7) Xxxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Hölzle, X., Johnson, X. X., Xxxxxx, T., Xxxxxxx, X. X., Xxxx, X. J. X., Sapora, O., Xxxxxxxxx, X. (1994), Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX workshop 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, X. D. (1989), Xxxxxxxxxxxxxxxxxx. X: Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, (X. C. Xxxxx, xx.), Plenum Xxxxx, Xxx Xxxx, 2. xxx., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. A. (1985), Xxxxxxxx determination xx xxxxx xx morphological xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx absorption, Toxicol. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, W. X., Xxxxxxxxxx X. (1996). X: Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx testing, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (X. N. Xxxxxxxx, X. X. Xxxxxxx xxx.), Xxxxxx &xxx; Xxxxxxx, Xxxxxxxxxx XX, 5. vyd., 515-530.
(11) Xxxxxxx, R. X., Xxxxxx M. (1987), Action spectra xxx xxxxx xxxx xxxxx: xxxxxxxxx xx xxx relative cytotoxicity xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, near xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx regions xx sunlight xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, Xxxxxx Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Standard Xxxxxxxxx Xxxxxxxxx: Xxxx/x 3T3 XXX Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, xxxxxxxx 23. xxxxxxxx 1997 X. Xxxxxxxxx, xxxxxxxxx 6. xxxxxx 1998 týmem Management Xxxx xx xxx XX/XXXXXX xxxxxxx "In Xxxxx Photoirritation".
(13) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, M., Xxxxxx, X., Xxxx, X. J. X., Xx Silva, X., Xxxxxüxxxx, H. G., Xxxxxxxxx, F., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, W. X., Xxxxxxxxxxxxx (1998), X Xxxxx on xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx UV Xxxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxx XXX of xxx XX Xxxxxxxxx 76/768/EEC xx xxx 3T3 XXX Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, ATLA 26, 679-708.
(14) Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X. (1995), Mathematical xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx external xxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Systems, 3, 127-138.
(15) Holzhütter, X. X. (1997), A xxxxxxx measure xx xx vitro xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx dose-response curves xxx xxx xxx xxx predicting xxx xx xxxx phototoxicity xx chemicals, ATLA 25, 445-462."
"Xxxxxxx
&xxxx;
[1] Další xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (12).