Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/33/XX
xx xxx 25. xxxxx 2000,
xxxxxx se xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pokroku směrnice Xxxx 67/548/XXX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx týkajících xx klasifikace, balení x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [1]
(Xxxx x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx na xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX ze xxx 27. června 1967 x sbližování xxxxxxxx a správních xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx parlamentu x Xxxx 1999/33/ES [3], x xxxxxxx xx xxxxxx 28 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxxx důvodům:
(1) V xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX se xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, toxicity x ekotoxicity xxxxx x xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx tuto xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
(2) Xxxxx čl. 7 xxxx. 2 směrnice Xxxx 86/609/XXX ze xxx 24. listopadu 1986 o xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx států xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxx xxxxxxx xxxxx [4] xxxxx být xxxxx, xxx xxxx xx xxx xxxxxxx zvíře, xxxxxxxx, xx-xx rozumně x prakticky xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Komise zamýšlí xxxxxxx xx xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx zvířata, x xxxxx zpřístupnit xx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx látek podle xx. 3 xxxx. 1 xxxxxxxx 67/548/XXX.
(4) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Výboru xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx o xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxx xxxxxx X x XX xxxx směrnice xx xxxxxx do části X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/EHS.
Xxxxxx 2
1. Členské xxxxx uvedou v xxxxxxxx právní a xxxxxxx předpisy nezbytné xxx dosažení xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx do 1. xxxxx 2001. Xxxxxxxxxx x nich xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy musí xxxxxxxxx odkaz na xxxx směrnici nebo xxxx xxx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx členské xxxxx.
2. Xxxxxxx státy xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxx x oblasti působnosti xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Článek 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 25. xxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxöx
xxxxxx Xxxxxx
[1] Přijato xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx.
[2] Xx. xxxx. 196, 16.8.1967, x. 1.
[3] Xx. věst. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Xx. xxxx. X 358, 18.12.1986, x. 1.
PŘÍLOHA I
"B.40 XXXXXXX XXXXXX XX XXXX
1. XXXXXX
1.1 Úvod
Dvě xxxxxxx xx vitro na xxxxxxx xxxxxx xx xxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx kůže potkana (XXX) a xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx byly Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx alternativních xxxxx (XXXXX, Společné xxxxxxxx xxxxxxxxx Evropské Xxxxxx) (1, 2, 3) xxxxxxxxx xxxx vědecky xxxxxx. Xxxxxxxxx studie XXXXX xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kůži. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx lidské xxxx dále umožnil xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, X 35 x ostatní xxxxx xxxxxxxxxxx poleptání xxxx, X 34) (2). Xxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx; xxxxx xxxxxxx, xxxxx xx být xxxxxxx, závisí xx xxxxxxxxxxxx požadavcích a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxx xxxx Xxxxxx úvod, část X.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kůže: xxxxxxxx poškození xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx viz xxxx 1.5.3.4 x 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xx xx 24 x xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx účinky xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx způsobit xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxx), xxxxx je xxxxxx jako xxxxxxx xxxxxxxxx TER pod xxxxxxxx xxxxxx (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx postupu xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx (6)) xxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx vázání xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků získaných xxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx látek (2, 7).
1.5 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx TER na xxxx xxxxxxx
1.5.1 Xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx (20 — 23 xxxxxxx) xxxxxxx (Wistar xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx x boční xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx holicím xxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxxx, penicilin, xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zastavujících xxxx xxxxxxxx). Zvířata xx xxxxx a xxxxxx den xx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx antibiotik x xxxxxxx se xx 3 dnů (x xxxxxxxx xxxx xxxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx než 31 xxx).
1.5.2 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx
Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx odstraní xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxx xx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx byla x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X-xxxxxxx, aby xxxx kůže xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx x X-xxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxxx X-xxxxxxx xx teflonové xxxxxxxx se poté xxxxxxx pokryje xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx držená xxxxxx pružinové xxxxxx xx umístí do xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxxxxxx (154 xX) (obrázek 2).
1.5.3 Zkušební postup
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx látka (150 μx) xx xxxxxxxx xx epidermis xxxxxx xxxxxxxx (xxx. 2). Xxx xxxxxxxx pevných xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx množství xxx, xxx byla xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx xx povrch xxxxx látky xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (150 μx) x xxxxxxxx xx xxxxx protřepe. Xxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxx xxxxx toho xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xx 30 °X, aby xx xxxxxxxx látka xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx nebo xx prášek.
Ke zkoušce xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxx. Zkoušená xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx 24 x (xxx xxxx xxx 1.5.3.4). Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx x teplotě nejvýše 30 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx x xxxxxxxx ztuhly, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx teplé xx 30 °X.
1.5.3.2 Xxxxxx XXX
XXX se xxxx nízkonapěťovým xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx střídavý xxxxx (např. AIM 401 xxxx 6401 xxxx xxxxxxxxxxxx). Před xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx objemu 70 % xxxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxxxxxx zakryta. Xx xxxxxxxx sekundách se xxxxxxx odstraní převrácením xxxxxxx x tkáň xx xxxxxx xxxxxxxx 3 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX). Xxxxxxxxx můstku xx umístí xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx odporu x xΩ/xxxxxx xxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx exponovaných xxxxx elektrod pod xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxx xxxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxx opřena x xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx, že xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx ponořené x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxx spočívala xx dně komory. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx svorky a xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxx 1), neboť xxxx xxxxxxxxxx má xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
Xx třeba xx xxxxxxxx, xx xx-xx naměřená hodnota xxxxx než 20 xΩ, xxxx to xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. X odstranění xxxx xxxxxx se xxx xxxxxxx xxxx. xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxx x 10 s xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xx opakuje s xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx XXX (xxxxxxx hodnoty) xxxx přijatelné, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx spadají xx přijatelného xxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x přístroje xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx (kΩ) |
|
Pozitivní |
10M xxxxxxxx chlorovodíková (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
10–25 |
1.5.3.3 Xxxxxxxx xxxxxx xxx povrchově xxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxx-xx xxxxxxx XXX xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx zkoušené xxxxx xxxxx xxxx rovny 5 kΩ, xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx průniku xxxxxxx. Xxxxx postupem xx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxx falešně xxxxxxxxx (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X
Xx předchozí xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx se xx epidermální stranu xxxxxxx terčíku xxxx xxxxxxxx na 2 x 150 μx 10 % xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X x xxxxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx kůže xx xxxx přibližně 10 x xxxxxxx proudem xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx kůže xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxxxx (xxxx. 20 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx scintilační xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx deionizovanou vodu (8 xx). Xxxxxxxx xx xxxxx 5 xxx. xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx. Tato xxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxx, a xxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx 30 % xxxxxxx (x/X) xxxxxxx-xxxxxxx-xxxxxxx (SDS) x destilované xxxx x xxxxxxxx se xxxx xxx xxx 60 °C. Po xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx kůže xxxxxx x zlikvidují x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 8 xxx. xxx 21 °C (xxxxxxxxx xxxxxxxxxx síla ˜ 175). 1 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx poté zředí 4 xx 30 % (x/X) roztoku XXX x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx (X) xx měří při xxxxxxxxx 565 nm.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx sulforhodaminu X xx terčík kůže xx vypočte z xxxxxx A (molární xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X xxx 565 xx = 8,7 × 104; xxxxxxxxxx xxxxxxxx = 580). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X xx vypočte xxx xxxxx terčík xxxx a xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vázání xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx rozmezí xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx látky xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx barviva (μx/xxxxxx xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X kyselina xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
40-100 |
|
Negativní |
Destilovaná voda |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xxx xxxxxx aplikovat xx xxxxxxx kůže xx xxxxxx dobu (xxxx. 2 xxxxxx), xxx xx identifikovaly xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx TER xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx aplikaci xx xxxxxx xxxx xx xxxx 2 hodin (2), třebaže toto xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx látek x xxxxxxxxx účinky x xxxxx bez leptavých xxxxxx xxx 24xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx zařízení x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx postup xxxxx xxx xxxx xx získané xxxxxxx XXX. Práh 5 Ω xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx účinků xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x postupem, xxx xxxx popsány v xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx řady referenčních xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx použitých xx validační xxxxxx (3).
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx modelu lidské xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx po xxxx 4 hodin xx xxxxxxxxxxxx model xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x funkční rohovité xxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxx schopností způsobit xxx specifikované xxxxxxxxx xxxx pokles xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (stanovený např. xxxxxxxx zkoušky redukce XXX) xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Podstata xxxxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx účinky jsou xx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxx xxxx xxxxx) x xxxx xxxxxxxxxx cytotoxické, xxx xxxxxxxxx xxxx buněk x hlubších xxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7 Xxxxx zkušební xxxxxx — stanovení xxxxxx xxxxxx lidské xxxx
1.7.1 Xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxx xxxxxx kůže xxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx zdrojů, xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxx funkční xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx dostatečná. Xx xxx prokázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Musí xx xxxxxxxx, že model xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx buněk x xxxxxx musí xxx dostatečně vysoká, xxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxx. xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxx XXX, tj. xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X) xx expozici xxxxxxxxx xxxxxxxxx látce xxxx xxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk xx xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxx (ve srovnání x životaschopností xxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxx) xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx je, aby xxxxx odpovídal xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx (2).
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxx
1.7.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
X xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx aplikováno dostatečné xxxxxxxx zkoušené látky, xxx pokrylo povrch xxxx (xxxxxxxxx 25 μx/xx2). X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxx, a xxxxxxxx xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxx xxxxx styk s xxxx; pevné xxxxx xx xxxx xxx xxxxx potřeby xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx široké xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2). Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk
K xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kvantitativní xxxxxx. Nejčastěji se xxxxxxx xxxxxxxxx redukce XXX, pro xxx xx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx výsledky (2). Xxxxxx xxxx se xxxxxx xx xxxxxxx XXX x koncentraci 0,3 mg/ml při xxxxxxx 20-28 °X xx xxxx 3 xxxxx. Sraženina modrého xxxxxxxxx se poté xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxx formazanu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxx xxxxxx xxxxx 545 xx 595 nm.
1.7.2.3 Doplňkové xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx doby, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxx xxxxx vliv xx výsledky xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx se, xxx metodika x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vybraných x xxxxxxxxxx látek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx XXXXX (3). Xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vykazovala x xxxxx xxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx široké spektrum xxxxxxxxxx xxxxx. Metoda xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx definovaná xxxxxxxx xxx vědeckou xxxxxxxx (2) x výsledky xxxxxx validační studie xxxx být xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx časopise x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
2. ÚDAJE
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Xxxxxxx TER xx kůži potkana
Hodnoty xxxxxx (xΩ) pro xxxxxxxx materiál, xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx x pro xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx včetně xxxxx x duplicitních xxxx xxxxxxxxxxx experimentech, x xxxxxxxxx hodnotách x x odvozené xxxxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xx formě xxxxxxx.
2.1.2 Zkouška s xxxxxxx xxxxxx kůže
Hodnoty xxxxxxxxxx A x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x procentech xxx zkoušený materiál, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x středních xxxxxxxxx x x odvozené xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx uvedeny xx xxxxx tabulky.
2.2 Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx výsledků
2.2.1 Xxxxxxx XXX xx xxxx potkana
Je-li xxxxxxx XXX xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx 5 xΩ, xxxx látka xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxx nebo xxxxx 5 xΩ x xxxxx o xxxxxxxxx xxxxxxx látku xxxx xxxxxxxxx organickou xxxxx, xx xxxxx xxxxxx.
X xxxxxxxxx xxxxxxxxx látek xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, které dávají xxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ, lze xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xx-xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxx střednímu xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 36 % XXx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx zkoušené látky xxxxxxxx pozitivní, x xxxxx xx tedy xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx xxxxx barviva x xxxxxxx kůže xxxxx xxx xxxxxxx obsah xxxxxxx x xxxxxxx xxxx získaný xxxxxxxx xxx použití 36 % XXx, xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx tedy xxxx xxxxxx.
2.2.2 Xxxxxxx x modelem xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx buněk; xxxxxxx xxxxxxxxxx A xxxxxxxx xxx xxxxx zkoušený xxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxx xxxxxx (nebo xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx), xxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx validační xxxxxx xxxx potvrdit, že xx xxxxxx (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x případně fyzikálně-chemické xxxxxxxxxx. Podobné xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxx referenční xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx podmínky:
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,
- popis x zdůvodnění xxxxxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxx odporu (xxxxxxx XXX) nebo xxxxxxx životaschopnosti buněk x xxxxxxxxxx (zkouška x modelem xxxxxx xxxx) pro xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx standardní referenční xxxxxxxx xxxxx včetně xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx opakovaných xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx hodnotách, xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx,
- popis xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. LITERATURA
(1) XXXXX (1998), XXXXX Xxxx &xxx; Xxxxx, ATLA 26, 275-280.
(2) Xxxxxx, X. X., Archer, X. X. X., Xxxxx, X., Botham, X. X., Curren, X. X., Xxxx, X. K., Xxxxxxx, X. X., Holzhutter, X-X., Liebsch, X. (1998), The ECVAM xxxxxxxxxxxxx validation xxxxx xx xx xxxxx xxxxx for skin xxxxxxxxxxx. 2. Xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxx Xxxx, Xxxxxxxxxx in xxxxx 12, 483-524.
(3) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Gerner, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X. X. (1998), The XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx on xx xxxxx tests xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 1. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxx test xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx in xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. X. X., Pemberton, X. X., Xxxxxx, C. (1986), Xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx — modifications xxx xxxxxxxxxx, Xxxx Xxxx. Xxxxxxx. 24, 507-512.
(5) Xxxxxx, X. X., Xxxx, X. X., Dennett, X., XxXxxx, J. X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxx, E., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, J. (1992), Xxx xxxx xxxxxxxxxxx test xx xxxxx: xxxxxxx xx xx interlaboratory trial, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. X., Fentem, X. X., Balls, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxx, X. X., Esdaile, X. X., Liebsch, X. (1998), Xx xxxxxxxxxx xx the proposed XXXX testing xxxxxxxx xxx xxxx corrosion, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, X. A., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Curren, X. X., Esdaile, X. X., Gardner, X. R., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx, X., Lewis, X. X., Liebsch, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxx, M., Xxxxxxx, J. X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Balls, X. 1995), A xxxxxxxxxxxxx xxxxx on xx xxxxx skin xxxxxxxxxxx xxxxxxx. The xxxxxx and xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX xxxxxxxx 6, ATLA 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Xxxxxxx 2"
XXXXXXX XX
"X.41 XXXXXXXXXXXX — XXXXXXX XXXXXXXXXXXX 3X3 XXX XX XXXXX
1. METODA
1.1 Xxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx první xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx světlu xxxx xxxxxxx xxxxxxxx ozářením xxxx xx systémovém xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx ze xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro xxxxxx x identifikaci xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky, xx. xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx látky xx spojení x xxxxxxxx UV záření xxxx xxxxxxxxxxx světlu.
Protože xxxxx xxxxxxx in xxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, lze xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxxxx podání x xx nanesení na xxxx, x rovněž xxxxxxxxxx, xxxxx působí xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX/XXXXXX x xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx používaným xxxxxxxx xx xxxx. X xxxx 1996 xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušek xx xxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4).
Xxxxxxxx xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX in xxxxx byly xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx u xxxxxx a x xxxxxxx x xxxxxxx xx ukázala xxx xxxxxxxxx xxxxxx účinků xxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx nepříznivých xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxx z kombinovaného xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx, třebaže mnoho xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in vitro xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xxxx vyvinuta x xxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx stupně xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek xx uvedena v xxxxxxx.
1.2 Definice
Intenzita xxxxxxx: xxxxxxxxx ultrafialového xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, měřená xx W/m2 xxxx xX/xx2.
Xxxxx xxxxxxxxxx záření: xxxxxxxx (xxxxxxxxx × xxx) xxxxxxxxxxxxxx (XX) xxxx viditelného xxxxxx xxxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxxxxxxxx x joulech (X × x) xx plochu povrchu, xxxx. X/x2 xxxx X/xx2.
Xxxxxx xxxxx UV xxxxxx: označení xxxxxxxxxx xxxxxx CIE (Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xx x'Xxxxxxxxx): XXX (315400 xx), XXX (280315 xx) x XXX (100280 xx). Používají se xxxxxx jiná označení: xxxx xxxxxxx mezi XXX x XXX xx xxxxx používána xxxxxxx 320 nm x xxxxx XXX xxxx xxx xxxxxxxxx xx XX-X1 x XX-X2 x xxxxxxx xxxxx 340 nm.
Životaschopnost xxxxx: xxxxxxxx, kterým xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx buněčné populace (xxxx. xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx buněčných lysosomů) x xxxxx v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx a na xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk: xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx x negativním kontrolám (xxxxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx zkoušky (x XX, xxxx xxx UV), xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx model: xxxxxxxxxx používaný xxx xxxxxx výsledků xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxx xxxxxx výsledků xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in vitro xx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx použít faktor XXX x veličinu XXX.
XXX (xxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxxxxx xxxxxx): xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx účinných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XX50) xxxxxxxx xxxxx, a xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/XXX xxxxxxx (+ XX) x xxx xxxx (-UV).
MPE (xxxx photo xxxxxx — xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx): xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x matematické xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx účinku xx xxxxxxxxxxx získaných xxx xxxxxxxxxxxxxx ozáření XXX/xxx xxxxxxx (+ XX) x bez xxxx (-UV).
Fototoxicita: akutní xxxxxxx reakce, xxxxxxxx xx xxxxx expozici xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx světlu nebo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx: xxxxx úroveň xxxxx "xxxxxxxxxxxx", xxxxx xx xxxxxxx k xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, které se xxxxxxxxx na xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (topické xxxx xxxxxx). Tyto xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (podobné xxxxxx xxx opalování).
Fotoalergie: xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, ke xxxxx xxxxxxxxx při xxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx a světla x xxxxx vyžaduje xxxxxxxx dobu xxxxx xxxx dva xxxxx xxxx xxx, xxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxx odezva xxxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxx negenotoxické xxxxx XX/XXX xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxx vyvolaná xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx se používá x případě, xxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx XX zářením xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx látky
Vedle xxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické látky xxxxxxxxxxxxxx, xxxxx by xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx, je xxx xxxx xxxxxxxxx zkoušku xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xxxxxxxxxx použít jako xxxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx použitých xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx předložené xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Úvodní xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxx byly xxxxxxxxxxx x mnoha typů xxxxxxxxxx xxxxx (5, 6, 7, 8). Xxxxxx jediným xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx energii x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxx fotochemie (Xxxxxxxxx-Xxxxxxxx xxxxx) vyžaduje xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx světelných xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx UV/VIS absorpční xxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx (xxxx. xxxxx Xxxxxxxx OECD 101). Xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx menší xxx 10 l.mol-1.cm-1, chemická xxxxx nemá fotoreaktivní xxxxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek).
1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx metody
Byly xxxxxxxxxxxxxx čtyři mechanismy, xxxxxxx může absorpce xxxxxx (chemickým) xxxxxxxxxxx xxxx k fototoxické xxxxxx (7). Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx na srovnání xxxxxxxxxxxx chemické látky xxx zkoušení x xxxxxxxx necytotoxické xxxxx XXX/XXX xxxxxx x xxx xxxx expozice. Xxxxxxxxxxxx xx v xxxx zkoušce xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx vitálního xxxxxxx neutrální xxxxxxx (XX) (9) 24 xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx Xxxx/x 3X3 xx 24 x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx 96xxxxxxx destičky xx xxxxx zkoušenou chemickou xxxxx xx xxxx 1 x xxxxxxxxxxx xxxx různými xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xx jedna ze xxxx xxxxxxxx exponována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx UVA/VIS xxxxxx 5 X/xx2 XXX (+ XX xxxxxxxxxx), xxxxxxx druhá xxxxxxxx xx xxxxxxx x temnu (-XX xxxxxxxxxx). X xxxx xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxx médium nahradí xxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxx 24 x inkubace je xxxxxxx životaschopnost xxxxxxxxx 3xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XXX). Relativní xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxx z xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se porovnají xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx (+ XX) a xxx ozáření (-XX), xxxxxxx xxx xxxxxxx XX50, xx. při xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 % úbytek buněčné xxxxxxxxxxxxxxxx ve srovnání x xxxxxxxxxxxxxx kontrolami.
1.6 Xxxxxxxx jakosti
Citlivost buněk xx UVA, xxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx xxxxx xx XXX xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro, příští xxx xx xxxxx xxxxxx UVA xxxxxx 1 xx 9 X/xx2 a buněčná xxxxxxxxxxxxxxx se stanoví x den xxxxxxx xxxxxxxx NRU. Buňky xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx-xx jejich xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx 5 X/xx2 xxxxx než 80 % životaschopnosti xxxxxxxx udržované v xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx XXX xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx: zkouška xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx negativní xxxxxxxx (xxxxx v XXXX (Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) nebo 1 % ethanolem (XxXX)) nebo xxx xxxx vykazují při + XXX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 80 % vzhledem x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx (-XXX).
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (X540 XXX) xxxxxx v xxxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx 1 × 104 xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx během xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxxx). Zkouška xxxxxxx xxxxxxxxx přijatelnosti, xxxxxxxx xxxxxxx hodnota X540 XXX neexponovaných kontrol xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: při xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xxxx xxx souběžně xxxxxxxx známá xxxxxxxxxxx xxxxxxxx látka. Xxx xxxxxxxxx studii XX/XXXXXX xxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXX), x xx xxxx xxxxxxxxx. Xxx XXX xxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx definována tato xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zkoušky: xxx CPZ xxxxxxx (+ XXX): XX50 = 0,1 xx 0,2 μx/xx, xxx XXX neozářený (-UVA): XX50 = 7,0 xx 90,0 μg/ml. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (PIF), xx. xxxxx xxxxxxx XX50, by měl xxx xxxxxxx 6.
Namísto XXX xxxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx fototoxické xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx typu xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxx případě by xxxx xxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XX50 a PIF xxxx XXX (střední xxxxxxxx xxxxxx).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx
1.7.1 Xxxxxxxx
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx permanentní xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx — Balb/c 3X3, xxxx 31 — xxx x xxxxx XXXX, xxxx x xxxxx ECACC a xx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxx xxxxxxx linie xxxxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx použity xx xxxxxxxxxxx, že xxxx kultivační xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx specifickým xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx xx měly xxx pravidelně xxxxxxxxxxxx, xxx nejsou kontaminovány xxxxxxxxxxxx, x xxxx xx xxx použity xxxxx xxxxx, jsou-li xxxxxxxx takové xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxxx buněk xx XX vzrůstá x xxxxxx xxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 x xxxxxx x xxxxxxxxx dosažitelným xxxxxx pasáží, xxxxxxx x xxxxx xxx xxx xxxxxx. Je xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 xx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx postupem xxxxxxxx jakosti xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx.
1.7.1.2 Xxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxx rutinní xxxxxxx xxxxxxxxxx a během xxxxxxxxxx xxxxxxx by xxxx xxx použita xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x inkubační podmínky. X xxxxx Balb/c 3X3 xx jedná x XXXX (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx telecím xxxxx, 4xX xxxxxxxxxx, penicilinem x xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx 37 °X/7, 5 % XX2. Xxxxxxx xxxxxxxx xx, aby xxxxxxxxxx xxxxxxxx zajistily, aby xxx buněčný xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx buněčné xxxxx.
1.7.1.3 Xxxxxxxx kultur
Buňky xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx nasadí do xxxxxxxxxxxx xxxxx ve xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx jednou xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx.
Xxx zkoušce xxxxxxxxxxxx xx xxxxx nasazují xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx nedosáhly xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xx. xx xxxxxxxx, xxx je po 48 x od xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx Balb/c 3X3 kultivované x 96xxxxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxx inokulum 1 × 104 buněk xx jamku.
Pro každou xxxxxxxxx látku xx xxxxx xxxxxx stejným xxxxxxxx do xxxx xxxxxxxxxx 96xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx jsou xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx, xxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (+XXX/XXX) x xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx (-XXX/XXX).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx systému xx xxxxxxx požadavkem xxx xxxxx zkouškách in xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx x fototoxikologii dosud xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx jako toxinu xx xxxx nebo xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxx xx nezbytné xxx xx vědecky xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx systémem aktivace xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Zkoušená xxxxxxxx xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx bezprostředně před xxxxxxxx, pokud xxxxx x stálosti neprokazují xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, musí xx xxxxxxxx xxxxx provádět xxx xxxxxxxx světlem.
Zkoušené xxxxxxxx xxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xx fyziologickém xxxxxxx, xxxx. x Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXXX) xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s fosfátovým xxxxxx (PBS), který xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a pH xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx nerušily xxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx by xxxx být xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx 100násobek požadované xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx xx měly xxx xxxxxxx x xxxxxx 1:100 fyziologickým xxxxxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx x konstantní xxxxxxxxxxx 1 % xxx. xx všech xxxxxxxxx, xx. v xxxxxxxxx kontrole x xxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxxx zkoušené chemické xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxx (EtOH). Mohou xxx xxxxxxx jiná xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxxxx), xxx měly by xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. reakce se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx.
Xx-xx xxxxx, xxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx použito xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx x/xxxx zahřátí na 37 °X.
1.7.1.6 Xxxxxxx XX xxxxxxx/xxxxxxxx
Xxxxx světla: xxxxx vhodného xxxxxx xxxxxx x vhodné xxxxxxxx xx kritickým xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx x xxxxx XXX x xx xxxxxxxxxx pásmu je xxxxxxx spojováno x xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx záření v xxxxx XXX je xxxx xxxxxxxxxx x xx přímo vysoce xxxxxxxxxxx, přičemž xxxx xxxxxxxxxxxx vzrůstá xxxx 313 xx a 280 xx 1000xxxx (11). Kritéria xxx xxxxx xxxxxxxx světelného xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx důležitý požadavek, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, x xxx xxxxx xxxxxxxxxx záření (xxxxxxxxxxx po přijatelnou xxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxxx emise xxxxx (xxxxxxxxxxxx oblast), xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx světla xxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx světla. V xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx výbojka. Xxxxx x xxxx xx xx výhodu, xx xxxxxxx xxxx xxxxx a xx xxxxxxxx, xxxxx její xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx není dokonalá. Xxxxxxxx xxxxxxx solární xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxx filtrovány, aby xxxx vysoce xxxxxxxxxxx xxxxxx délky XXX xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xx mělo xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxxx zbavené UVB xxxxxx (UVA:UVB ˜ 20:1). Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx validační studii xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xxx publikován x xxxxxxxxxx (3).
Dozimetrie: xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) xx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx vhodného širokopásmového XX-xxxxx. XX-xxxx musí xxx pro xxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx XX-xxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxxxx a xx tímto xxxxxx xx doporučuje použít xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kalibrovaný UV-metr xxxxxxxx typu. X xxxxxxxx případě xx xxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx zdroje světla x ke xxxxxxxx xxxxxxxxx širokopásmového XX-xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx odbornou xxxxxxx xxxxxxxxx osobami.
Dávka 5 X/xx2 xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx Balb/c 3X3 x xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx x slabě xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxx 5 J/cm2 xx xxxx 50 xxx. xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 1,666 XX/xx2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxx světelný xxxxx, může xxx xxxxx XXX záření xxxxx upravena, aby xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxx dostatečná pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx světelné xxxxxxxx xx xxxxxxx tímto xxxxxxxx:
x(xxx) = xxxxx xxxxxxxxxx záření (X/xx2) 100 / xxxxxxxxx xxxxxxx (mW/cm2) 60 (1 J =.X xxx)
1.7.2 Zkušební xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx by xxxxxx xxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx byly xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx; xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roste xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xX xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx (+ UVA) x xxx xxxxxx (-XXX) xx xxxx xxx náležitě stanoveny x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x intervaly mezi xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx tak, xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci xxxxxxxxxx xxxxxxxxx experimentálními xxxxx. Xxxx xx xxx xxxxxxx geometrická xxxx xxxxxxxxxxx (s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7.3 Xxxxxxxx postup [1]
1.7.3.1 Xxxxx den
Připraví xx xxxxxxx xxxxxxxx 1 × 105 buněk/ml x kultivačním xxxxx x 100 μx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxxxx jamek 96xxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx pokus). Xx zbývajících buněk xx xxxxxxx xx 100 μl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 xxxxx na xxxxx). Pro xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-XXX) x xxxxx xxx xxxxxxxxx fotocytotoxicity (+UVA).
Buňky xx xxxxxxxx 24 x (7,5 % XX2, 37 °C), xxxxx nedosáhnou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tato inkubační xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, jejich xxxxxxxxxx x exponenciální xxxx.
1.7.3.2 Xxxxx xxx
Xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x buněk xxxxxxxxx x každá jamka xx promyje dvakrát 150 μx XXXX/XXX. Xxxxx xx 100 μx XXXX/XXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxxx xx 8 xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x temnu xx xxxx 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °X).
X xxxxxxxxx xxxxx zkoušky x xxxxxxxx UVA xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 50 xxx. xxxxxxx xxxx xxxxx 96xxxxxxx destičky XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx 1,7 XX/xx2 (5 X/xx2. Aby xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vody xxx xxxxxx, xxxxx xx pomocí ventilátoru. Xxxxxxxx xxx zkoušku xxx xxxxxxx UVA xx xxxxxxxxx 50 xxx. (doba xxxxxxxx XXX) x temnu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX se nahradí xxxxxxxxxxx médiem x xxxxxxxx xx xxxx xxx (18-22 x) (7,5 % CO2, 37 °C).
1.7.3.3 Třetí xxx
Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx kontrastem. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx. Doporučuje xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx chyby, xxxxx záznamy xx xxx hodnocení cytotoxicity xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxx neutrální červeně.
Buňky xx promyjí 150 μx xxxxxxxxxxxx XXXX/XXX x xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx 100 μx média XX x xxxxxxxx xx 3 x xxx 37 °C xx xxxxxxxx atmosféře x 7,5 % XX2.
Xx inkubaci xx xxxxxx XX odstraní x xxxxx se xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxxxx a zcela xxxxxx (xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx).
Xxxxx xx xxxxxx 150 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x kyseliny xxxxxx, aby se xxxxxxxxxx XX.
Xxxxxxxx xx xxxxxx 10 min. xxxxx xx třepačce, xxxxx se XX x xxxxx nevylouží x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxx 540 xx, xxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx slepý xxxxx. Údaje xx xxxxx ve xxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX) x xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx.
2. ÚDAJE
2.1 Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx
Xxxxx by měly xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx UVA/VIS xxxx xxx něho. Xx-xx xxxxxxxx cytotoxicita, xxx xx být xxxxxx xxxxxxxxxxx a interval xxxx xxxx nastaven xxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx experimentálními xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxxxxxx chemická xxxxx xxxxxxxx být xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx xxxxxx pro xxxxxxxxxx x xxxxx (-UVA) xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xx být vysoce xxxxxxxxxxx po ozáření (+XXX), xxxx xxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxx koncentrací, které xxxx xxx v xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, řádově lišily, xx-xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxx-xx x xxxx částech xxxxxxxxxxx (-XXX a +XXX) xxxxxxxxxxxx zjištěna, stačí xxxxxxx zkoušku s xxxxxxx intervaly xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx až xx xxxxxxxx koncentrace.
Ověření xxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxx experimentem xx xxxxxxxxxx. Negativní xxxxxxxx xxxxxx xxx dále xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx hlavní xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxx předběžnými xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x výsledky xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xx-xx opakované xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx změnit xxxxxxxxxxxxxx podmínky. Xxxxxxxx xxxxxxxxx této xxxxxxx xx xxxxxxxx roztoků xxxxxxxx chemické xxxxx. X xxxxxx důvodu xxxx být xxxxx xxxxxxxx (xxxx rozpouštědlo, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušky. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxx x xxxxx xxxxxxxx inkubační xxxx xxxx ozářením. Zkrácení xxxx xxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx ve xxxx.
2.2 Zpracování xxxxxxxx
Xx-xx xx možné, xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx 50 % xxxxxxxx xxxxxxxxx příjmu xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (XX50). Xxx tak xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxx funkcí xxxx logistickou xxxxxxx) xxxxx závislosti xxxxxx xx koncentraci xxxx xxxxxxxx xxxxxx metod xxxxxx xxxxxxxxx (14). Xxxx xxxxxxxx hodnoty XX50 xxx další xxxxxxx xx xxxx xxx vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kvalita proložení. Xxx výpočet XX50 xxx popřípadě xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx doporučuje xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (měřítko xxx x: xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx osy x: xxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxx transformaci xxxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx xxxxxxxxxxx téměř xxxxxxxx.
2.3 Xxxxxxxxx výsledků (xxxxxxxxxxx xxxxxx)
2.3.1 Předpovědní xxxxx — xxxxx 1: xxxxxxxxxxxx faktor (XXX)
Xxxxxxxx xxxx v xxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx (+XXX), xxx xxx xxxxxxx (-XXX) xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX) xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxx:
(x) PIF = (XX50 (-UV)) / (XX50 (+XX))
Xxxxxxx XXX &xx; 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx fototoxického potenciálu, xxxxxxx xxxxxxx XXX ≥ 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pouze xxx +XXX a není xxxxxxxxxxx xxx zkoušce -XXX, nelze xxxxxxx XXX vypočítat, xxxxxxx xxx x xxxxxxxx, xxxxx svědčí o xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx případech xxx xxxxxxxxx xxxxxxx "> XXX", jestliže xx xxxxxxx -XX xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxx), x xxxx xxxxxxx xx použije xxx xxxxxxx "> PIF";
(b) &xx; XXX = (Xxxx (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx "&xx; XXX", xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu xxxx xxxxxxx &xx; 1.
Xxxxxxxx nelze x xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx do xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, vypočítat ani xxxxxxx XX50 (-XX) xxx hodnotu XX50 (+ UV), svědčí xx o xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx případech xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx "XXX = *1";
(C) &xx; XXX = *1 = (Cmax (-XX)) / (Xxxx (+XX))
Xxx li xxxxxx xxxxx hodnotu "XXX = *1", xx xxxx hodnota xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx fototoxického potenciálu.
V xxxxxxxxx b) x x) by xxxx xxx xxx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx opatrně xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx vitro.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx 2: xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (MPE)
Alternativně lze xxxxxx xxxxx verzi xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX (15) a xxx xxxxxxxx naslepo v xxxxxxxx studii xxxxxxxxxxxx xx vitro u xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xx chovají xxxx XX xxxxxx (13). Xxxxx model xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx XXX x xxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx XX50. Xxxxx xxxxx využívá xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (mean xxxxx xxxxxx) (MPE), xxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx křivek xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx volně x xxxxxxxxx.
2.4 Interpretace xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro (PIF ≥ 5 xxxx XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx 10 μx/xx, xx xxxx pravděpodobné, xx látka xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx in xxxx. Xx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pouze xxx xxxxxxxx zkušební koncentraci 100 μg/ml, mohou xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx další xxxxx. Xx se xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx, xxxxxxxx x možné xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxx zkoušení xxxxxxxx xxxxx alternativní xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxx.
Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx (XXX &xx; 5 xxxx XXX &xx; 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. V xxxxxxxxx, kdy xxxx xxxxx xxxxxxx chemickou xxxxx xx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx chemická xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x fototoxicitu xx vivo xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, xxx xxxx xxx nižších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx toxické xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (XX50 +XX x XX50 -XX), xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Není-li xxxxxxx xxxx toxicita xxxxxxxxx (+XX x -XX) a xxxx-xx xxxxxxxxxxx omezeny rozpustností xx vodě na xxxxxxx menší než 100 μx/xx, není xxxxxx zkouška xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x mělo by xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. za xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxx).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx obsahovat xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx údaje x xxxxx XXX, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x čistota,
- fyzikálně-chemické xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- zdůvodnění xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x aplikačním xxxxx (XXXX nebo XXX).
Xxxxx:
- xxx a xxxxx xxxxx,
- nepřítomnost xxxxxxxxxx,
- xxxxx xxxxxxx xxxxxx, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx buněk na XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx
Xxxxxxxx podmínky x) — xxxxxxxx xxxx aplikací x xx xx:
- xxx x složení kultivačního xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, teplota, xxxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxx před inkubací x xx xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx b) — xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxxxxx xxx při xxxxxxx UV/VIS, xxx xxx xxx,
- x xxxxxxx, že xxxxxxxx xxxxxxxx látka xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx cytotoxická, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx,
- xxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok),
- xxxxx xxxxxxxx chemické látky.
Zkušební xxxxxxxx x) — xxxxxxx:
- zdůvodnění xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xX/xx2,
- délka xxxxxxxx XX/XXX xxxxxx,
- xxxxx XXX záření (xxxxxxxxx × xxx), xxxxxxxxx x J/cm2,
- xxxxxxx xxxxxxxxx kultur během xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx XXX:
- xxxxxxx xxxxx XX,
- doba xxxxxxxx XX,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxxxxx xxxxxxxx XX (xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx),
- xxxxxx xxxxx použitá pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx odečet xxxxxxxxxx XX,
- xxxxx (referenční) xxxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx,
- xxxxxxx slepého xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxx, xx-xx použit.
Výsledky:
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx při každé xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx vyjádřená v xxxxxxxxxx střední xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx versus relativní xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx +XXX x -XXX,
- xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx: xx-xx xx xxxxx, xxxxxxx hodnoty XX50 (+XXX) a XX50 (-XXX),
- srovnání xxxx xxxxxx závislosti odezvy xx koncentraci získaných x ozářením XXX/XXX x xxx xxxx, x to xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx faktoru (xxxxx-xxxxxxxxxxx xxxxxx ) (XXX), xxxx výpočtem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx účinku (xxxx xxxxx effect) (XXX),
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrola:
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (absorbance xxxxxxxx XX) xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,
- xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx b) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-XXX) a XXX-xxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx,
- dosavadní xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx: hodnoty EC50 (+XXX), XX50 (-XXX) x PIF, střední xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. LITERATURA
(1) Xxxxxxxxx, X., Balls, X., Xöxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxx, X., Klecak, X., X'Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. W., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxx, L., Xxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, A. (1994), EEC/COLIPA xxxxxxx xx xx vitro xxxxxxxxxxxxx testing: Xxxxx xxxxxxx obtained xxxx x Xxxx/x 3X3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 8, 793-796.
(2) Anon (1998), Statement on xxx scientific xxxxxxxx xx xxx 3X3 XXX XX xxxx (xx xx xxxxx xxxx for xxxxxxxxxxxxx), Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx: XXXXX xxx XXXX/X/2, 3 Xxxxxxxx 1997, ATLA 26, 7-8.
(3) Spielmann, X., Xxxxx, M., Xxxxxx, X., Pape, X. X. W., Xxxxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. G., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, F., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Maurer, X., Xxxxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. X., Csato, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. (1998), EU/COLIPA "Xx vitro phototoxicity", xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxx XX (xxxxx xxxxx), part 1: xxx 3X3 XXX xxxxxxxxxxxxx test, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 12, 305-327.
(4) XXXX Xxxx Guidelines Xxxxxxxxx, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Xxxxx Report xx xxx XXXX Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Criteria xx Xxxxxxxxxxx Toxicological Test Xxxxxxx, XXXX Publications Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, W. X. (1993), A xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxxxxx of xxxxxxxxxx xxx photoallergenic xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xx Vitro 7, 95-102.
(6) Xxxxxxxxxx, X., Prino, X. (1972), List of xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx. 3 Part 1, Xxxxx Holland Xxxxxxxxxx Xx, Xxxxxxxxx, XX–XXXX.
(7) Xxxxxxxxx, H., Lovell, X. W., Hölzle, X., Xxxxxxx, B. X., Xxxxxx, T., Xxxxxxx, X. A., Xxxx, X. X. X., Sapora, X., Xxxxxxxxx, X. (1994), Xx xxxxx phototoxicity xxxxxxx: Xxx xxxxxx xxx recommendations xx XXXXX workshop 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, X. D. (1989), Photosensitization. V: Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, (X. C. Xxxxx, xx.), Xxxxxx Xxxxx, Xxx Xxxx, 2. vyd., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, X., Puerner, X. X. (1985), Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx in xxxxx by xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, L. X., Xxxxxx, W. X., Xxxxxxxxxx A. (1996). X: Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx testing, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (X. N. Xxxxxxxx, X. I. Xxxxxxx eds.), Taylor &xxx; Xxxxxxx, Xxxxxxxxxx XX, 5. vyd., 515-530.
(11) Tyrrell, X. X., Xxxxxx X. (1987), Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxx: xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx the xxxxxx xxxxxxxxxxx, near xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx regions xx sunlight xx xxxxxxxxx keratinocytes, Cancer Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Standard Xxxxxxxxx Xxxxxxxxx: Xxxx/x 3T3 XXX Phototoxicity Test, xxxxxxxx 23. xxxxxxxx 1997 X. Xxxxxxxxx, xxxxxxxxx 6. xxxxxx 1998 xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxx xx xxx XX/XXXXXX project "Xx Xxxxx Photoirritation".
(13) Xxxxxxxxx, X., Balls, X., Xxxxxx, X., Pape, X. X. W., Xx Xxxxx, O., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxxx, F., Liebsch, X., Lovell, X. X., Xxxxxxxxxxxxx (1998), X Xxxxx xx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx XX Xxxxxx Xxxxxxxxx from Xxxxx XXX xx the XX Directive 76/768/EEC xx xxx 3X3 XXX In Vitro Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, XXXX 26, 679-708.
(14) Xxxxxüxxxx, X. G., Quedenau, X. (1995), Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx cellular xxxxxxxxx to external xxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx, 3, 127-138.
(15) Xxxxxüxxxx, X. X. (1997), X xxxxxxx xxxxxxx xx xx vitro phototoxicity xxxxxxx from pairs xx xxxx-xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx use xxx xxxxxxxxxx the xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, XXXX 25, 445-462."
"Dodatek
[1] Další xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx x literatuře (12).