Směrnice Komise 2000/33/XX
xx xxx 25. xxxxx 2000,
xxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx přizpůsobuje xxxxxxxxxxx xxxxxxx směrnice Xxxx 67/548/EHS x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx týkajících xx klasifikace, balení x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [1]
(Xxxx s xxxxxxxx pro XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského společenství,
s xxxxxxx na xxxxxxxx Xxxx 67/548/EHS ze xxx 27. xxxxxx 1967 x sbližování xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx týkajících xx xxxxxxxxxxx, balení x xxxxxxxxxx nebezpečných xxxxx [2], xxxxxxxxx pozměněnou xxxxxxxx Xxxxxxxxxx parlamentu x Xxxx 1999/33/ES [3], a xxxxxxx xx článek 28 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxxx xxxxxxx:
(1) X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX xx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx x ekotoxicity xxxxx x xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx přizpůsobit tuto xxxxxxx xxxxxxxxxxx pokroku.
(2) Xxxxx čl. 7 xxxx. 2 směrnice Xxxx 86/609/XXX ze xxx 24. xxxxxxxxx 1986 x sbližování xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxx [4] xxxxx xxx xxxxx, xxx xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx, je-li rozumně x prakticky xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Komise xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/EHS xxxxxx alternativní xxxxxxxx xxxxxx, xxx nichž xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxx zkoušení xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx. 3 xxxx. 1 xxxxxxxx 67/548/XXX.
(4) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx stanoviskem Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx směrnic x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxx příloh X x XX xxxx xxxxxxxx se xxxxxx do xxxxx X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX.
Článek 2
1. Členské xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx předpisy xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 2001. Neprodleně x nich uvědomí Xxxxxx.
Xxxx předpisy přijaté xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx být takový xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx si xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx státy sdělí Xxxxxx znění hlavních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které přijmou x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx směrnice, x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x platnost xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx dne 25. xxxxx 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxöx
xxxxxx Xxxxxx
[1] Přijato xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx.
[2] Xx. xxxx. 196, 16.8.1967, s. 1.
[3] Xx. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Xx. věst. X 358, 18.12.1986, x. 1.
PŘÍLOHA X
"X.40 XXXXXXX XXXXXX NA XXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxx xxxxxxx xx vitro na xxxxxxx účinky na xxxx xx principu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx potkana (XXX) a xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx alternativních metod (XXXXX, Xxxxxxxx výzkumné xxxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx) (1, 2, 3) xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx. Validační xxxxxx XXXXX xxxxxxxxx, xx xxxxx zkouškami lze xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx x zkoušce xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxx umožnil xxxxxxx rozlišit xxxxxx xxxxxxxx účinků (známé xxxxx způsobující xxxxx xxxxxxxxx, X 35 x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kůže, X 34) (2). Xxxxx a xxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx; volba xxxxxxx, xxxxx má xxx xxxxxxx, xxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxx také Xxxxxx xxxx, xxxx X.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxx: xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx aplikaci xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxx 1.5.3.4 x 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx XXX xx xxxx potkana
Zkoušený xxxxxxxx je xx xx 24 x xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kůže xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx způsobit xxxxxx normální xxxxxxxxx x xxxxxxxxx funkce xxxxxxxx vrstvy (xxxxxxx xxxxxxx), xxxxx je xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX pod xxxxxxxx xxxxxx (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx x nedráždivé xxxxx xxxxxxxxx TER xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx postupu xxx xxxxxxxxx aktivní xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxx xxx literatura (6)) xxx xxxxxxx stupeň xxx stanovení vázání xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx tyto xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2, 7).
1.5 Xxxxx xxxxxxxx metody — xxxxxxx TER xx xxxx potkana
1.5.1 Xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx z xxxxxxx (20 — 23 xxxxxxx) xxxxxxx (Wistar xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx x boční xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx holicím xxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxx xxxxx opatrným otíráním, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx ponoří xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (obsahujícího xxxx. streptomycin, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x koncentracích zastavujících xxxx xxxxxxxx). Zvířata xx xxxxx x xxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x použijí xx xx 3 xxx (x xxxxxxxx kůže xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx než 31 xxx).
1.5.2 Xxxxxxxx xxxxxxx kůže
Zvířata xx xxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxx xx x kůže opatrně xxxxxxxxx. Xxxx se xxxx přeloží xxxx xxxxx xxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx byla x xxxxxxxx s xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxx xx těsně přetáhne xxxxxxx X-xxxxxxx, aby xxxx xxxx upevněna, x xxxxxxxx xxxxx xx ořízne. Xxxxxxx xxxxxxxx x X-xxxxxxx xxxx xxxxxxx na xxxxxxx 1. Pryžový X-xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx poté xxxxxxx xxxxxxx vrstvou xxxxxxxx. Trubička xxxxxx xxxxxx pružinové xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX) (obrázek 2).
1.5.3 Xxxxxxxx xxxxxx
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (150 μx) se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx. 2). Xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx se použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx, xxx byla xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Poté xx xx povrch xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx voda (150 μx) a trubička xx xxxxx protřepe. Xxxx xxxxxxx x xxxx xx mělo xxxxx k xxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xx 30 °X, aby se xxxxxxxx látka roztavila, xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxx. Zkoušená látka xx xxxxxxxx xx xxxx 24 x (xxx xxxx xxx 1.5.3.4). Xxxxxxxx látka xx zcela xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx nejvýše 30 °C. Odstranění xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx teplé xx 30 °X.
1.5.3.2 Xxxxxx TER
TER xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. XXX 401 xxxx 6401 xxxx ekvivalentní). Před xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 70 % xxxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxxxxxx zakryta. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x tkáň xx xxxxxx přidáním 3 ml roztoku xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX). Elektrody xxxxxx xx xxxxxx na xxx strany terčíku xxxx xx účelem xxxxxx xxxxxx v xΩ/xxxxxx xxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx exponovaných xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx jsou uvedeny xx xxxxxxx 1. Xxxxxx vnitřní (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxx konec xxxxxxxxx trubičky, xxx xxxx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx části xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Vnější (tenká) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx receptorové xxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx mezi spodkem xxxxxxxxx svorky x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxx 1), xxxxx xxxx vzdálenost xx xxxx na xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
Xx xxxxx xx xxxxxxxx, že xx-xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 20 xΩ, xxxx xx xxx xxxxxxxxx vrstvou xxxxxxxx látky xx xxxxxxxxxxx straně xxxxxxx xxxx. X xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx se xxx pokusit xxxx. xxx, xx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x rukavici x 10 x xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx hořečnatým.
Výsledky XXX (xxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Pro popsanou xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx doporučeny xxxx xxxxxxxxx látky a xxxxxx přijatelná xxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx (xΩ) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
10–25 |
1.5.3.3 Upravený xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx organické xxxxx
Xxxx-xx xxxxxxx TER xxx xxxxxxxxx aktivní xxxxx xxxx organické xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx 5 kΩ, lze xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx barviva. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxx výsledky xxxxxx xxxxxxx pozitivní (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X
Xx xxxxxxxxx aplikaci xxxxxxxx xxxxx se xx xxxxxxxxxxx stranu xxxxxxx terčíku xxxx xxxxxxxx xx 2 x 150 μx 10 % xxxxxxx xxxxxxx sulforhodaminu X x destilované xxxx. Xxxxxxx xxxx xx xxxx přibližně 10 x xxxxxxx proudem xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx odstranilo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx se xx xxxxxxxx (např. 20 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx scintilační spektrometrii) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx (8 ml). Xxxxxxxx xx xxxxx 5 xxx. protřepávají, xxx xx xxxxxxxxxx další xxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxx oplachování xx xxxx xxxxxxxx, x xxxx xx xxxxxxx xxxx vyjmou x xxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx 30 % roztoku (x/X) xxxxxxx-xxxxxxx-xxxxxxx (XXX) x destilované vodě x xxxxxxxx xx xxxx xxx při 60 °X. Xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx kůže vyjmou x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 8 xxx. xxx 21 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx ˜ 175). 1 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx zředí 4 ml 30 % (m/V) xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxx. Absorbance (X) xx xxxx xxx xxxxxxxxx 565 xx.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx xxxxxx barviva
Obsah xxxxxxx sulforhodaminu X xx xxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx A (xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X xxx 565 xx = 8,7 × 104; molekulová xxxxxxxx = 580). Xxxxx xxxxxxx sulforhodaminu X se xxxxxxx xxx každý terčík xxxx x xxxx xx xxxxxxx jeho xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx přijatelné, xxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxx uvedení xxxxxxxxx xxxxx doporučeny xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (μg/terčík xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
40-100 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx voda |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx na xxxxxx xxxx (např. 2 hodiny), xxx xx xxxxxxxxxxxxxx ty xxxxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx však xxxxxxx, xx xxxxxxxxx TER xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxx aplikaci xx xxxxxx xxxx xx xxxx 2 xxxxx (2), třebaže xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx účinky x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx 24hodinové xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx zařízení x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxx xx získané xxxxxxx XXX. Xxxx 5 Ω xxx předpověď xxxxxxxxx xxxxxx byl xxxxxxx z xxxxx xxxxxxxxx xx zařízením x postupem, jež xxxx popsány v xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx hodnotu odporu xxxxxxxxx řady xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx studii (3).
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx xx xx xxxx 4 xxxxx xx xxxxxxxxxxxx model xxxxxx xxxx sestávající x rekonstruované xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxxxxxxx účinky xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx způsobit xxx specifikované xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxx zkoušky xxxxxxx XXX) xxx definovanou xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx účinky xxxx xx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxx nebo xxxxx) x xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxxxxxx xxxx xxxxx x hlubších xxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7 Xxxxx zkušební xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx lidské xxxx
1.7.1 Xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxx xxxxxx kůže xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx, musí xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxx xxxxx pod xx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vrstvy musí xxx dostatečná. Xx xxx prokázat demonstrací xxxxxxxxxx modelu k xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx živých xxxxx x modelu xxxx xxx dostatečně xxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxx. ivotaschopnost xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxx XXX, xx. xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx A) xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx pro daný xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xx xxxxxxxx x životaschopností pro xxxxxxxxx kontrolní xxxxx) xxxx xxx ve xxxxxxxxxxxxxxx mezích. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx je, xxx xxxxx odpovídal xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro validaci (2).
1.7.2 Xxxxxxxx postup
1.7.2.1 Xxxxxxxx zkoušeného xxxxxxxxx
X xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx (minimálně 25 μx/xx2). U pevných xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky, aby xxxxxxx xxxx, x xxxxxxxx látka xx xxxx být xxxxxxxx, xxx byl zajištěn xxxxx styk x xxxx; pevné xxxxx xx xxxx být xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx, že aplikační xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx látek (2). Xx xxxxxxxx expoziční xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx použita xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxx xxx xx x různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx XXX x koncentraci 0,3 xx/xx xxx xxxxxxx 20-28 °X xx xxxx 3 xxxxx. Sraženina xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx (rozpouštědlem) a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X při xxxxxx xxxxx 545 xx 595 xx.
1.7.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx atd. budou xxx velký xxxx xx výsledky xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Doporučuje xx, xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx zkoušením xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vybraných x chemických látek xxxxxxxxx ve xxxxxxxxx xxxxxx XXXXX (3). Xx xxxxxxxxxxx, aby xxxxxxx metoda v xxxxxxx x mezinárodními xxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxx laboratoře x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx látek. Xxxxxx xxxx splňovat alespoň xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx (2) x výsledky xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx odbornou xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Zkouška XXX xx kůži potkana
Hodnoty xxxxxx (xΩ) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolu x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x duplicitních xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxxx klasifikaci xx měly xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx.
2.1.2 Xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxx zkoušený xxxxxxxx, xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx x pro xxxxxxx standardní referenční xxxxxxxx látky xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x středních xxxxxxxxx x x odvozené xxxxxxxxxxx xx měly xxx uvedeny ve xxxxx xxxxxxx.
2.2 Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.2.1 Xxxxxxx XXX xx xxxx potkana
Je-li xxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx 5 xΩ, xxxx xxxxx žíravá. Xx-xx hodnota XXX xxxxx xxxx rovna 5 kΩ x xxxxx o povrchově xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx látku, xx xxxxx žíravá.
U xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, které xxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx barviva. Xx-xx střední xxxxx xxxxxxx v terčíku xxxx větší nebo xxxxx střednímu xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx použití 36 % HCl xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, je xxxxxxx zkoušené látky xxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxx xx xxxx xxxxxx. Je-li xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxx střední obsah xxxxxxx x xxxxxxx xxxx získaný xxxxxxxx xxx xxxxxxx 36 % XXx, xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx.
2.2.2 Xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx buněk; xxxxxxx xxxxxxxxxx A xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx použít x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx životaschopnosti xxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx materiály xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx žíravé (nebo xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx), xxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx validační xxxxxx xxxx xxxxxxxx, xx xx vhodný (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx o xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx tyto xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx látka:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx, fyzikální xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx informace xx xxxx být xxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxx, pokud xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx postupu,
- xxxxx x xxxxxxxxxx jakýchkoli xxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx TER) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxx x modelem lidské xxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx opakovaných xxxxxxxxxxxxx x středních hodnotách, xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx,
- xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx účinků.
Rozbor xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) ECVAM (1998), ECVAM Xxxx &xxx; Views, ATLA 26, 275-280.
(2) Fentem, X. X., Xxxxxx, X. X. X., Xxxxx, M., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Earl, X. X., Xxxxxxx, X. J., Xxxxxxxxxx, X-X., Liebsch, X. (1998), Xxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx validation study xx in xxxxx xxxxx for xxxx xxxxxxxxxxx. 2. Xxxxxxx xxx evaluation xx xxx Xxxxxxxxxx Xxxx, Xxxxxxxxxx in xxxxx 12, 483-524.
(3) Xxxxxxx, X. D., Xxxxxxx, X. G., Xxxxxx, X. H., Xxxxxx, X., Walker, A. X., Xxxxx, A. X. (1998), Xxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx validation xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxx xxxx corrosivity. 1. Xxxxxxxxx and distribution xx xxx test xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx in xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. J. X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. (1986), Xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx — xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Xxxx Xxxx. Toxicol. 24, 507-512.
(5) Xxxxxx, P. X., Xxxx, X. X., Xxxxxxx, X., XxXxxx, J. X., Xxxxxxxxx, X. A., Xxxxxxx, E., Xxxxxxxxx, X., Esdaile, D. X., Gardner, J. (1992), Xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx in xxxxx: xxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xx vitro 6, 191-194.
(6) Worth, X. X., Xxxxxx, X. X., Balls, X., Botham, P. X., Curren, X. X., Xxxx, X. X., Esdaile, D. X., Xxxxxxx, X. (1998), Xx xxxxxxxxxx xx the proposed XXXX xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx, X., Xxxxx, X. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxx, P., Xxxxxxx, X., Ponec, M., Xxxxxxx, J. X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Balls, X. 1995), X xxxxxxxxxxxxx study xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. The xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx ECVAM xxxxxxxx 6, ATLA 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Xxxxxxx 2"
XXXXXXX II
"B.41 FOTOTOXICITA — XXXXXXX FOTOTOXICITY 3X3 NRU IN XXXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxxxxxxxxxxx xx definována xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx první xxxxxxxx xxxx určitým xxxxxxxxx xxxxxx x následné xxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx ozářením xxxx po systémovém xxxxxx xxxxxxxx látky.
Informace xxxxxxx xx zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxxxx x identifikaci fototoxického xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky, xx. xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xx zkoušené xxxxx xx spojení x xxxxxxxx XX xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x světla, lze xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sloučeniny, xxxxx jsou xxxxxxxxxxx xx vivo xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xx nanesení xx xxxx, x xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx působí xx nanesení xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro byla xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX/XXXXXX x xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx používaným zkouškám xx vivo. V xxxx 1996 xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx OECD xxxxxxxx postupných xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxx fototoxicity (4).
Xxxxxxxx xx zkoušek xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx porovnány x xxxxxxxx fototoxickými xxxx xxxxxxxxxxxx účinky xx xxxx x xxxxxx x x xxxxxxx a xxxxxxx xx ukázala xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx určena xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx mohou xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x světla, např. xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, které xxxxxxxx tyto xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xxxx vyvinuta x xxxx, aby xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx v xxxxxxx.
1.2 Definice
Intenzita ozáření: xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, měřená xx X/x2 xxxx xX/xx2.
Xxxxx xxxxxxxxxx záření: xxxxxxxx (intenzita × xxx) xxxxxxxxxxxxxx (XX) xxxx viditelného xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx (X × s) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxx. X/x2 nebo X/xx2.
Xxxxxx xxxxx XX xxxxxx: xxxxxxxx doporučená xxxxxx XXX (Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xx x'Xxxxxxxxx): XXX (315400 xx), XXX (280315 nm) x XXX (100280 xx). Xxxxxxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxxxx: xxxx hranice xxxx XXX a XXX xx xxxxx používána xxxxxxx 320 nm x xxxxx UVA xxxx xxx rozděleno xx XX-X1 x XX-X2 x xxxxxxx xxxxx 340 xx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxx, xxxxxx xx měří xxxxxxx xxxxxxxx buněčné xxxxxxxx (xxxx. příjem xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx) x xxxxx x xxxxxxxxxx xx měřeném xxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk: xxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx x xxxxxxxxxx kontrolám (xxxxxxxxxxxx), které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx zkoušky (x UV, xxxx xxx XX), xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látkám.
Předpovědní xxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx výsledků zkoušek xxxxxxxx xx předpověď xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxxxx metodice xxx xxx převod xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in vitro xx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxx XXX.
XXX (xxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxxxxx faktor): xxxxxx xxxxxxx srovnáním xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XX50) xxxxxxxx látky, x xx při xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/XXX xxxxxxx (+ XX) x xxx něho (-XX).
XXX (xxxx photo effect — xxxxxxx světelný xxxxxx): xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxx celého xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/xxx xxxxxxx (+ XX) a xxx xxxx (-XX).
Xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, vyvolaná xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx chemickým xxxxxx a následné xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po systémovém xxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxxxx: xxxxx úroveň pojmu "xxxxxxxxxxxx", xxxxx xx xxxxxxx k popisu xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx nebo xxxxxx). Tyto xxxxxxxxxxx xxxxxx vedou xxxx x nespecifickému xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx xxx opalování).
Fotoalergie: xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx nedochází při xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx dva xxxxx xxxx tím, xxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: genotoxická xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XX/XXX xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx látky. Xxxxxx xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxx být xxxxxxxx xxxxxxx xxx každé xxxxxxx, xx pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xxxxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxxxxxxxxxxxx srovnáních xxxxxxxxxx xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Xxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxx byly xxxxxxxxxxx x mnoha xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (5, 6, 7, 8). Xxxxxx xxxxxxx společným xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxx fotochemie (Grotthaus-Draperův xxxxx) vyžaduje fotoreakce xxxxxxxxxxx absorpci xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx zvážením xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx metodiky xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx (xxxx. xxxxx Xxxxxxxx XXXX 101). Xx-xx xxxxxxx absorpční xxxxxxxxxx xxxxx než 10 x.xxx-1.xx-1, chemická xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx biologickou xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx účinky (dodatek).
1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx metody
Byly xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxx absorpce xxxxxx (xxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxx k xxxxxxxxxxx xxxxxx (7). Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx je xxxxx xxxxxxxx xx srovnání xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx necytotoxické dávce XXX/XXX xxxxxx x xxx této xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx koncentračně závislé xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx neutrální xxxxxxx (XX) (9) 24 xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx Xxxx/x 3X3 xx 24 x xxxxxxxxx, aby xxxxxxxxx monovrstvu. Xxx 96xxxxxxx destičky na xxxxx zkoušenou xxxxxxxxx xxxxx xx poté 1 h preinkubují xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx dávkou XXX/XXX xxxxxx 5 X/xx2 XXX (+ XX xxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x temnu (-XX xxxxxxxxxx). X xxxx xxxxxxxx se poté xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxx 24 x inkubace je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx stanovena 3xxxxxxxxx xxxxxxx neutrální xxxxxxx (XXX). Xxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnost xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x neexponované xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxx každou x xxxx zkušebních xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx závislé xxxxxx xxxxxxx xxx ozáření (+ UV) a xxx xxxxxxx (-UV), xxxxxxx při xxxxxxx XX50, xx. při xxxxxxxxxxx způsobující 50 % xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx srovnání x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xx UVA, xxxxxxxxx xxxxx: citlivost buněk xx XXX xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro, xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxx 1 xx 9 X/xx2 a xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx NRU. Xxxxx xxxxxxx kritérium xxxxxxx, xxxx-xx jejich xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx 5 X/xx2 xxxxx xxx 80 % životaschopnosti xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxx xxxx po xxxxxx pasážích xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx XXX xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jakosti, xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly (xxxxx x XXXX (Xxxxxx fyziologický xxxxxx) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) nebo 1 % ethanolem (XxXX)) xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxx + XXX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 80 % xxxxxxxx k xxxxxxxxxxxxxxxx neozářených xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx souběžném xxxxxxxxxxx x temnu (-UVA).
Životaschopnost xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (A540 XXX) xxxxxx x extraktu XX xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx 1 × 104 xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxx xxxxx zachovalo při xxxxx během dvou xxx xxxxxxx obvyklou xxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxxx). Zkouška xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx hodnota X540 XXX neexponovaných kontrol xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxx každé xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx xxxx být souběžně xxxxxxxx známá xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxxx studii XX/XXXXXX xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx (XXX), a je xxxx xxxxxxxxx. Xxx XXX xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx xxxx definována xxxx xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx: xxx XXX xxxxxxx (+ XXX): XX50 = 0,1 xx 0,2 μx/xx, pro XXX xxxxxxxxx (-XXX): XX50 = 7,0 xx 90,0 μg/ml. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (PIF), xx. xxxxx hodnoty XX50, xx měl xxx alespoň 6.
Xxxxxxx XXX xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx jiné xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxxxx typu nebo xxxxxxxxxxxx hodnocené zkoušené xxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxx případě xx xxxx být xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XX50 x XXX xxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx
1.7.1 Xxxxxxxx
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx — Xxxx/x 3X3, xxxx 31 — xxx z xxxxx XXXX, xxxx z xxxxx XXXXX x xx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxx xxxxxxx linie xxxxx xxx při stejném xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx kultivační xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, ale xxxx xxx xxxxxxxxx jejich xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx kontrolovány, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, a xxxx xx xxx použity xxxxx tehdy, xxxx-xx xxxxxxxx takové xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx x tomu, xx citlivost buněk xx UV xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 x xxxxxx x nejnižším dosažitelným xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx xxx xxx xxxxxx. Je xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 na XXX xxxxxxxxxx kontrolována xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x této xxxxxxxx.
1.7.1.2 Xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x během xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx použita xxxxxx kultivační xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. X buněk Xxxx/x 3X3 xx jedná x XXXX (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Eagleova xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, 4xX xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x streptomycinem x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx 37 °X/7, 5 % XX2. Xxxxxxx xxxxxxxx xx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx buněčný xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx použité buňky xxxx xxxxxxx linie.
1.7.1.3 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxxxxxx xxxxx ve xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx jednou xx xxxxxxxx před xxxxxxxx xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx.
Xxx zkoušce xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx kultivačního xxxxx x xxxxxx hustotě, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xx. xx xxxxxxxx, xxx xx xx 48 x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx životaschopnost. Xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 kultivované x 96xxxxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxx inokulum 1 × 104 xxxxx xx xxxxx.
Xxx každou xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx nasadí xxxxxxx xxxxxxxx xx dvou xxxxxxxxxx 96xxxxxxxxx destiček, xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx podrobeny xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx podmínek xxxxx xxxx, xxx xx xxxxx x destiček xxxxxxx (+XXX/XXX) x xxxxx xx udržována x xxxxx (-XXX/XXX).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx aktivace
Zatímco použití xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxx zkouškách xx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, není x fototoxikologii xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, pro jejíž xxxxxxxx jako toxinu xx xxxx nebo xx vitro xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx transformace. Xxxxxxxxxx se xxxx xxx xx nezbytné xxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxxx zkouška xxxxxxxxx xx systémem xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxx, xxxxx xxxxx x stálosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx x rychlé xxxxxxxxxxxxx, xxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx by xxxx být xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx roztoku, xxxx. x Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztoku (XXXX) xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s fosfátovým xxxxxx (XXX), který xxxxx obsahovat xxxxxxxxxx xxxxxx x xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky x omezenou xxxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx rozpouštědle xx 100xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx xx xxxx xxx zředěny x xxxxxx 1:100 fyziologickým xxxxxxxx. Použije-li xx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx x konstantní xxxxxxxxxxx 1 % xxx. xx všech xxxxxxxxx, xx. x xxxxxxxxx kontrole x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxx (EtOH). Xxxxx xxx použita xxxx xxxxxx méně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (např. aceton), xxx xxxx by xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látku, xxxxxxxxx fototoxických účinků, xxxxxx xxxxxxxx.
Xx-xx xxxxx, xxxx xxx xxx xxxxxxxxx rozpouštění xxxxxxx xxxxxxx a/nebo ultrazvuk x/xxxx xxxxxxx xx 37 °X.
1.7.1.6 Xxxxxxx XX světlem/příprava
Zdroj světla: xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x vhodné xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušení fototoxicity. Xxxxxx x xxxxx XXX a ve xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx xxxxxx x xxxxx UVB xx xxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, přičemž xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx mezi 313 xx x 280 xx 1000krát (11). Xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx světlo x xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx chemická látka xxxxxxxxx, x xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx) xxxx dostatečná xxx xxxxxxx známých xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxxx a xxxxx, včetně xxxxx xxxxx (infračervená oblast), xx dále neměly xxxxxxxx poškozovat xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx světla xxxxxxxxx simulátory xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. V xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xenonová xxxxxxx, tak xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx z xxxx xx xx xxxxxx, xx xxxxxxx méně xxxxx x je xxxxxxxx, avšak xxxx xxxxx xx slunečním xxxxxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx UVB záření, xxxx xx být xxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx délky XXX xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx by xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxx (UVA:UVB ˜ 20:1). Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx použitého xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (3).
Xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) xx xxxx pravidelně xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kontrolovat xx xxxxxxx xxxxxxxx širokopásmového XX-xxxxx. UV-metr musí xxx xxx xxxx xxxxx kalibrován. Funkčnost XX-xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xx tímto xxxxxx xx xxxxxxxxxx použít xxxxx referenční stejným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx UV-metr xxxxxxxx xxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx xxx v xxxxxxx xxxxxxxx odstupech xxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx zdroje xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx vyžadují odbornou xxxxxxx školenými xxxxxxx.
Xxxxx 5 J/cm2 byla xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 x xxxxxxxxxx xxxxx x excitaci x xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek. Xxx xxxxxxxx 5 X/xx2 xx xxxx 50 xxx. musí být xxxxxxxxx ozáření xxxxxxxxx xx 1,666 XX/xx2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx linie xxxx xxxx světelný xxxxx, může xxx xxxxx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx buňky a xxxx dostatečná xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx světelné expozice xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx:
x(xxx) = dávka xxxxxxxxxx xxxxxx (X/xx2) 100 / xxxxxxxxx xxxxxxx (xX/xx2) 60 (1 J =.W xxx)
1.7.2 Zkušební podmínky
Maximální xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx by neměla xxxxxxxxx 100 μg/ml, xxxxx xxxxxxx fototoxické xxxxxxxx xxxxx byly xxxxxxxxxx xxx nižších xxxxxxxxxxxxx; při vyšších xxxxxxxxxxxxx xxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx). Hodnota xX xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx být vyhovující (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx chemických xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+ XXX) x xxx světla (-XXX) xx xxxx xxx náležitě stanoveny x xxxxxxxxxxx experimentech xxx zjištění rozmezí. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx xxx, aby xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci xxxxxxxxxx podloženy experimentálními xxxxx. Xxxx xx xxx xxxxxxx geometrická xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxxxxxx faktorem xxxxxx).
1.7.3 Xxxxxxxx postup [1]
1.7.3.1 Xxxxx xxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 1 × 105 buněk/ml x kultivačním xxxxx x 100 μl xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx pouze xx xxxxxxxxxx jamek 96jamkové xxxxxxxx (xxxxx xxxxx). Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx po 100 μx xxxxxxx xxxxxxxx x hustotě 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 xxxxx xx xxxxx). Xxx xxxxxx xxxxxxxxx chemickou látku xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx: jedna xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-XXX) x xxxxx xxx xxxxxxxxx fotocytotoxicity (+XXX).
Xxxxx xx inkubují 24 x (7,5 % XX2, 37 °X), xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx regeneraci xxxxx, xxxxxx přichycení x exponenciální růst.
1.7.3.2 Xxxxx xxx
Xx xxxxxxxx xx kultivační xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 150 μx EBSS/PBS. Xxxxx xx 100 μx EBSS/PBS xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx látky xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (negativní xxxxxxxx). Xxxxxxxx xx 8 xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x temnu xx dobu 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °C).
K xxxxxxxxx části xxxxxxx x xxxxxxxx UVA xx buňky xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 50 xxx. xxxxxxx xxxx xxxxx 96xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx 1,7 MW/cm2 (5 X/xx2. Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxx víčkem, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx zkoušku xxx xxxxxxx XXX xx ponechají 50 xxx. (xxxx expozice XXX) v xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxx x každá xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 150 μx EBSS/PBS. XXXX/XXX se xxxxxxx xxxxxxxxxxx médiem x xxxxxxxx se xxxx xxx (18-22 h) (7,5 % XX2, 37 °C).
1.7.3.3 Xxxxx xxx
Xxxxxxxxxxxxx hodnocení
Buňky xx xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx x fázovým xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx buněk způsobené xxxxxxxxxxxx účinkem xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx experimentální xxxxx, xxxxx záznamy xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xx promyjí 150 μx předehřátého XXXX/XXX x xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx odstraní xxxxxxxx. Xxxxx se 100 μx xxxxx XX x xxxxxxxx xx 3 x xxx 37 °X xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x 7,5 % XX2.
Xx inkubaci xx xxxxxx XX xxxxxxxx x buňky se xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx).
Xxxxx se xxxxxx 150 μl xxxxxxx připraveného xxxxxxx xxxxxxxx x kyseliny xxxxxx, xxx se xxxxxxxxxx NR.
Destička xx xxxxxx 10 xxx. xxxxx na xxxxxxxx, xxxxx xx NR x xxxxx nevylouží x nevytvoří homogenní xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx extraktu NR xxx 540 xx, xxxxxxx xx pro xxxxxxxx použije xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx xx vhodném xxxxxxx (xxxx. XXXXX) x xxxxxxxx pro xxxxxxxxx analýzu.
2. ÚDAJE
2.1 Xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xx xxxx xxxxxxx smysluplnou analýzu xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx XXX/XXX xxxx xxx xxxx. Xx-xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x interval xxxx xxxx nastaven xxx, xxx bylo xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Vzhledem x xxxx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xx xx mezní xxxxxxxxxxx 100 μx/xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx x temnu (-UVA) xxxxxxxxxxx, xxx mohla xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxxxxx (+XXX), xxxx xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx lišily, xx-xx xxx splněn xxxxxxxxx xxxxxxxxxx kvality xxxxx. Není-li x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (-XXX x +XXX) xxxxxxxxxxxx zjištěna, xxxxx xxxxxxx zkoušku x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx až xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx. Negativní výsledky xxxxxx být xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx koncentrací. X xxxxxxxx xxxxxxxxx stačí xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx zjištění xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx hodnot xxxxxxxxxxxxx modelu by xxxx být xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xx-xx opakované xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, může xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Klíčovou xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx roztoků xxxxxxxx chemické xxxxx. X tohoto xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx (jiné xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxx x úvahu xxxxxxxx inkubační doby xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxx mít xxxxxx x chemických xxxxx xxxxxxxxx ve xxxx.
2.2 Zpracování výsledků
Je-li xx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx 50 % inhibici xxxxxxxxx xxxxxx neutrální xxxxxxx (NR) (XX50). Xxx tak xxxxxx xxxxxxx jakékoli xxxxxx xxxxxx nelineární xxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxx logistickou xxxxxxx) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (14). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX50 pro xxxxx xxxxxxx by měla xxx xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx výpočet XX50 xxx popřípadě použít xxxxxx grafického proložení. X takovém xxxxxxx xx doporučuje xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx papír (xxxxxxx xxx x: logaritmické, xxxxxxx osy y: xxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxx x xxxxx případech bude xx xxxx transformaci xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci xxxxx xxxxxxxx.
2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxx)
2.3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxx — xxxxx 1: xxxxxxxxxxxx faktor (XXX)
Xxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx (+XXX), xxx xxx xxxxxxx (-XXX) xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx koncentraci, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (PIF) xxxxxxxxx podle tohoto xxxxxx:
(x) XXX = (XX50 (-XX)) / (XX50 (+UV))
Hodnota XXX &xx; 5 předpovídá xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx hodnota XXX ≥ 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pouze xxx +XXX a xxxx xxxxxxxxxxx při xxxxxxx -XXX, xxxxx xxxxxxx XXX vypočítat, třebaže xxx o xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx potenciálu. X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx hodnotu "&xx; XXX", xxxxxxxx xx xxxxxxx -XX xxxxxxx xx xx nejvyšší xxxxxxxx koncentrace (Xxxx), x xxxx xxxxxxx xx použije pro xxxxxxx "&xx; XXX";
(x) &xx; XXX = (Xxxx (-UV)) / (XX50 (+XX))
Xxx li xxxxxx xxxxx xxxxxxx "&xx; PIF", xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx > 1.
Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx toho, xx xxxxxxxx xxxxx nevykazuje xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, vypočítat ani xxxxxxx EC50 (-XX) xxx xxxxxxx XX50 (+ XX), xxxxxx xx o neexistenci xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxxx případech xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx "XXX = *1";
(X) &xx; PIF = *1 = (Xxxx (-XX)) / (Cmax (+XX))
Xxx li xxxxxx xxxxx hodnotu "XXX = *1", xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
X xxxxxxxxx x) a x) xx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu xxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX in xxxxx.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx xxxxx verze 2: xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx verzi xxxxxx xxx předpovídání xxxxxxxxxxxxx potenciálu, který xxx vyvinut s xxxxxxxx údajů x xxxxxxxxx studie XX/XXXXXX (15) x xxx xxxxxxxx naslepo x xxxxxxxx xxxxxx fototoxicity xx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, které xx xxxxxxx jako XX xxxxxx (13). Xxxxx model xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx XXX x xxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx EC50. Xxxxx xxxxx využívá xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxx xxxxxx) (XXX), xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx na srovnání xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na koncentraci. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxx xx Humboldtově xxxxxxxxxx (Xxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx počítačový xxxxxxxx, xxxxx xx volně x xxxxxxxxx.
2.4 Interpretace xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro (PIF ≥ 5 xxxx XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, xx látka xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx 10 μx/xx, xx xxxx pravděpodobné, xx xxxxx bude xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx in xxxx. Xx-xx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, mohou xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx nebo intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xx xx xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx, xxxxxxxx x možné akumulaci xxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zkouškou, xxxx. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx in xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro (XXX &xx; 5 xxxx XXX &xx; 0,1) xxxxxxx, že xxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxx za použitých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. V xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx zkoušet xxxxxxxxx xxxxx až po xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx za nepravděpodobnou. X případech, kdy xxxx při nižších xxxxxxxxxxxxx obdrženy xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx odezvy xx xxxxxxxxxxx (XX50 +XX a EC50 -XX), je xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Není-li xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (+XX x -XX) x jsou-li xxxxxxxxxxx xxxxxxx rozpustností xx xxxx xx xxxxxxx menší xxx 100 μx/xx, xxxx xxxxxx zkouška xxx xxxxxxxxx látku vhodná x xxxx xx xxx zvážena xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx in xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxx).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx o xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx obsahovat xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx chemická látka:
- xxxxxxxxxxxxx údaje x xxxxx CAS, je-li xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx,
- xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- rozpustnost xxxxxxxx xxxxx v xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- procentuální koncentrace xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxx (XXXX xxxx XXX).
Xxxxx:
- xxx a xxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxx xxxxxxx xxxxxx, xx-xx známo,
- xxxxxxxxx buněk xx XXX stanovená xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zkoušce xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx xxxxx
Xxxxxxxx podmínky x) — xxxxxxxx xxxx aplikací x xx xx:
- typ x xxxxxxx kultivačního xxxxx,
- inkubační xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x po xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx XX/XXX, xxx xxx xxx,
- x xxxxxxx, xx zkoušená xxxxxxxx látka xxxxxxxx xxxxxxxx rozpustnost x xxxx cytotoxická, xxxxxxxxxx xxxxxxxx zkušební xxxxxxxxxxx,
- xxx x složení xxxxxxxxxx xxxxx (pufrovaný xxxxxxxxxxxx roztok),
- xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky.
Zkušební xxxxxxxx x) — xxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx světla,
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (použitých xxxxxx),
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx zkoušeného xxxxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x této xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xX/xx2,
- xxxxx xxxxxxxx XX/XXX xxxxxx,
- xxxxx XXX xxxxxx (xxxxxxxxx × čas), xxxxxxxxx x X/xx2,
- teplota xxxxxxxxx kultur během xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx kultur udržovaných x xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — zkouška XXX:
- xxxxxxx média XX,
- xxxx xxxxxxxx XX,
- inkubační xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxxxxx xxxxxxxx XX (xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx extrakce),
- vlnová xxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx absorbance XX,
- xxxxx (referenční) xxxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx,
- xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro spektrometrii, xx-xx xxxxxx.
Xxxxxxxx:
- životaschopnost xxxxx xxx každé xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnosti xxxxxxx,
- xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx versus xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx experimentech +XXX x -UVA,
- xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci: xx-xx xx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx XX50 (+XXX) a XX50 (-XXX),
- srovnání obou xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx UVA/VIS x xxx xxxx, x to xxx xxxxxxxx fotoiritačního xxxxxxx (xxxxx-xxxxxxxxxxx factor ) (XXX), xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx účinku (xxxx photo effect) (XXX),
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (absorbance xxxxxxxx XX) xxxxxxxxx x neozářených xxxxx,
- xxxxxxxxx údaje pro xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx a směrodatná xxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx b) — xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrola:
- xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-UVA) x XXX-xxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx,
- dosavadní údaje xxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx: xxxxxxx XX50 (+XXX), EC50 (-XXX) x XXX, xxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx výsledků.
Závěry.
4. XXXXXXXXXX
(1) Xxxxxxxxx, X., Balls, X., Döring, X., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X., X'Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Lovell, X. W., Xxxxxx, X., Moldenhauer, F., Xxxxx, L., Xxxx, X., Pfannbecker, X., Xxxxxxxx, J., Xx Xxxxx, O., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. (1994), XXX/XXXXXX xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: First xxxxxxx obtained xxxx x Xxxx/x 3X3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 8, 793-796.
(2) Xxxx (1998), Xxxxxxxxx on xxx scientific xxxxxxxx xx xxx 3X3 XXX XX xxxx (xx in xxxxx xxxx xxx phototoxicity), Xxxxxxxx Commission, Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx: ECVAM xxx XXXX/X/2, 3 Xxxxxxxx 1997, ATLA 26, 7-8.
(3) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, J., Pape, X. J. X., Xxxxxxxxxx, G., Xx Xxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. G., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, F., Liebsch, X., Lovell, X. X., Maurer, X., Xxxxxxxxxxxxx, U., Xxxxxxxx, X. M., Xxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. (1998), XX/XXXXXX "Xx vitro xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxx XX (xxxxx trial), xxxx 1: xxx 3X3 XXX phototoxicity xxxx, Xxxxxxxxxx in Xxxxx 12, 305-327.
(4) OECD Xxxx Guidelines Xxxxxxxxx, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Xxxxx Xxxxxx xx the XXXX Xxxxxxxx on Xxxxxxxxxxxxx xx Validation and Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx Toxicological Test Xxxxxxx, XXXX Publications Xxxxxx, Paris, 1996.
(5) Xxxxxx, X. X. (1993), X xxxxxx xxx xx vitro xxxxxxxxx xx substances xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx in Xxxxx 7, 95-102.
(6) Xxxxxxxxxx, X., Xxxxx, X. (1972), Xxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxx xxxxxxxx in xxxxxxx, xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx. 3 Part 1, Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx Xx, Amsterdam, XX–XXXX.
(7) Xxxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. W., Xöxxxx, X., Johnson, B. X., Xxxxxx, T., Xxxxxxx, M. X., Xxxx, X. X. X., Xxxxxx, O., Xxxxxxxxx, X. (1994), Xx xxxxx phototoxicity xxxxxxx: The report xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX xxxxxxxx 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, X. X. (1989), Xxxxxxxxxxxxxxxxxx. X: Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxx, xx.), Plenum Xxxxx, New Xxxx, 2. xxx., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, E., Xxxxxxx, X. A. (1985), Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx by xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx neutral xxx xxxxxxxxxx, Toxicol. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, L. X., Xxxxxx, X. G., Xxxxxxxxxx X. (1996). X: Animal xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx testing, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxxxxx, H. X. Xxxxxxx xxx.), Xxxxxx &xxx; Francis, Washington XX, 5. vyd., 515-530.
(11) Xxxxxxx, R. X., Pidoux X. (1987), Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxx: xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx cytotoxicity xx xxx middle xxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxx violet xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, Xxxxxx Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Xxxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxx: Balb/c 3T3 XXX Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, xxxxxxxx 23. prosince 1997 X. Xxxxxxxxx, xxxxxxxxx 6. xxxxxx 1998 týmem Xxxxxxxxxx Xxxx xx xxx XX/XXXXXX xxxxxxx "Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Xxxxxxxxx, X., Balls, X., Xxxxxx, X., Pape, X. X. W., Xx Xxxxx, X., Xxxxxüxxxx, H. X., Xxxxxxxxx, F., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Pfannenbecker (1998), X Xxxxx on xxx Xxxxxxxxxx Potential xx UV Filter Xxxxxxxxx xxxx Xxxxx XXX of xxx XX Xxxxxxxxx 76/768/EEC xx the 3T3 XXX In Xxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, XXXX 26, 679-708.
(14) Xxxxxüxxxx, X. X., Quedenau, X. (1995), Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx to xxxxxxxx xxxxxxx, Journal xx Xxxxxxxxxx Systems, 3, 127-138.
(15) Holzhütter, H. X. (1997), X xxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx pairs xx dose-response xxxxxx xxx its use xxx xxxxxxxxxx the xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, XXXX 25, 445-462."
"Dodatek
[1] Xxxxx xxxxxxxxxxx lze xxxxxx x xxxxxxxxxx (12).