Směrnice Xxxxxx 2000/33/ES
ze xxx 25. xxxxx 2000,
xxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 67/548/EHS x xxxxxxxxxx právních x xxxxxxxxx předpisů týkajících xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [1]
(Xxxx s xxxxxxxx pro EHP)
KOMISE XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s ohledem xx Smlouvu x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 67/548/EHS xx xxx 27. xxxxxx 1967 o xxxxxxxxxx xxxxxxxx x správních xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, balení x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx látek [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x Xxxx 1999/33/ES [3], a xxxxxxx xx xxxxxx 28 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxxx xxxxxxx:
(1) X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX se xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx x ekotoxicity látek x xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx technickému xxxxxxx.
(2) Xxxxx xx. 7 xxxx. 2 xxxxxxxx Xxxx 86/609/EHS xx xxx 24. xxxxxxxxx 1986 x sbližování xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx států xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxx xxxxxxx xxxxx [4] xxxxx xxx xxxxx, xxx xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx, je-li xxxxxxx x xxxxxxxxx dostupná xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Xxxxxx zamýšlí xxxxxxx xx xxxxxxx X směrnice 67/548/XXX xxxxxx xxxxxxxxxxxx zkušební xxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x cílem xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx podle xx. 3 xxxx. 1 xxxxxxxx 67/548/XXX.
(4) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx směrnic o xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx překážek xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx látek x xxxxxxxxx,
XXXXXXX TUTO SMĚRNICI:
Xxxxxx 1
Text xxxxxx X x XX xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xx části X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/EHS.
Xxxxxx 2
1. Xxxxxxx xxxxx uvedou x xxxxxxxx právní a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx dosažení souladu x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx do 1. xxxxx 2001. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx předpisy xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx státy.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx znění hlavních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx právních xxxxxxxx, které xxxxxxx x oblasti xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, a xxxxxxxxxx tabulku xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v platnost xxxxxx dnem xx xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx určena členským xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 25. xxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxöx
xxxxxx Xxxxxx
[1] Přijato xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx.
[2] Xx. věst. 196, 16.8.1967, x. 1.
[3] Úř. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Xx. xxxx. X 358, 18.12.1986, x. 1.
PŘÍLOHA X
"X.40 XXXXXXX XXXXXX NA XXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxx xxxxxxx xx vitro xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx potkana (XXX) a xxxxxxx x využitím xxxxxx xxxxxx kůže xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (XXXXX, Xxxxxxxx výzkumné xxxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx) (1, 2, 3) xxxxxxxxx jako vědecky xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx XXXXX prokázala, že xxxxx xxxxxxxxx lze xxxxxxxxxx rozlišit xxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxx. Protokol x zkoušce xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx rozlišit xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxx xxxxx způsobující xxxxx xxxxxxxxx, X 35 x xxxxxxx látky xxxxxxxxxxx poleptání xxxx, X 34) (2). Xxxxx x xxxxxx xxxx zkoušek je xxxxxx; xxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxx, xxxxxx na xxxxxxxxxxxx požadavcích x xxxxxxxxxx uživatele.
Viz xxxx Xxxxxx xxxx, část X.
1.2 Definice
Poleptání xxxx: xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx zkoušeného xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx látky
Nespecifikovány, xxxxx xxx xxxx 1.5.3.4 x 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx metody — xxxxxxx TER xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xx až xx 24 h xxxxxxxxx xx epidermální xxxxxx terčíků xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx mladých xxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vrstvy (xxxxxxx xxxxxxx), která je xxxxxx xxxx snížení xxxxxxxxx XXX pod xxxxxxxx úroveň (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx a nedráždivé xxxxx nesnižují XXX xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xx zkušebního postupu xxx povrchově xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (definice xxx literatura (6)) xxx zařadit xxxxxx xxx xxxxxxxxx vázání xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků získaných xxxxx pro tyto xxxxx chemických xxxxx (2, 7).
1.5 Popis xxxxxxxx metody — xxxxxxx XXX na xxxx xxxxxxx
1.5.1 Xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx musí být xxxxxxxxxx x xxxxxxx (20 — 23 xxxxxxx) potkanů (Wistar xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx x xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xxxxx opatrným xxxxxxxx, xxxxxxx xx testovací xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx xxxx. streptomycin, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx a amfotericin x koncentracích zastavujících xxxx xxxxxxxx). Zvířata xx xxxxx x xxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx antibiotik x použijí xx xx 3 dnů (x xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx 31 xxx).
1.5.2 Xxxxxxxx xxxxxxx kůže
Zvířata xx xxxxxxx xxxxxx. Z xxxxxxx zvířete xx xxxx xxxxxxx odstraní xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxx xx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Kůže xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx xxx, aby xxxxxxxxx byla x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxx xx těsně přetáhne xxxxxxx X-xxxxxxx, xxx xxxx kůže xxxxxxxx, x přebytek xxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx x O-kroužku xxxx uvedeny xx xxxxxxx 1. Xxxxxxx X-xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx se poté xxxxxxx xxxxxxx vrstvou xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx svorky xx umístí do xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx hořečnatého (154 xX) (xxxxxxx 2).
1.5.3 Xxxxxxxx xxxxxx
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (150 μx) se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx uvnitř xxxxxxxx (xxx. 2). Xxx zkoušení xxxxxxx xxxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx, xxx xxxx pokryta xxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx xx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (150 μx) x xxxxxxxx xx lehce xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx x xxxx xx mělo xxxxx k xxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxx xxxxx xxxx může xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xx 30 °X, aby se xxxxxxxx látka xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx materiál xxxx xx xxxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxx látky xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxx. Zkoušená látka xx xxxxxxxx xx xxxx 24 x (xxx xxxx xxx 1.5.3.4). Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx tekoucí vody x xxxxxxx xxxxxxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek, xxxxx x trubičce xxxxxx, xxx usnadnit xxxxxx xxxxxxx vody xxxxx xx 30 °X.
1.5.3.2 Xxxxxx XXX
XXX se xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx střídavý xxxxx (xxxx. XXX 401 xxxx 6401 xxxx xxxxxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx kůže xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx objemu 70 % xxxxxxxx xxx, xxx byla xxxxxxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx odstraní xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xx zvlhčí přidáním 3 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX). Xxxxxxxxx můstku xx xxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xΩ/xxxxxx xxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx elektrod x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pod xxxxxxxxxxxx jsou uvedeny xx obrázku 1. Xxxxxx xxxxxxx (silné) xxxxxxxxx je xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxx trubičky, xxx xxxx xxxxxxxxx, že xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx ponořené v xxxxxxx xxxxxx hořečnatého xxxxxx. Vnější (xxxxx) xxxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xx xxx komory. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx udržuje xxxxxxxxxx (xxxxxxx 1), xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxx na xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
Xx xxxxx xx xxxxxxxx, xx xx-xx xxxxxxxx hodnota xxxxx než 20 xΩ, může xx xxx způsobeno xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx terčíku xxxx. X xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxx pokusit např. xxx, že se xxxxxxxxx trubička zakryje xxxxxx v xxxxxxxx x 10 x xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xx opakuje s xxxxxxxx síranem hořečnatým.
Výsledky XXX (střední hodnoty) xxxx přijatelné, pokud xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx (xΩ) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
10–25 |
1.5.3.3 Xxxxxxxx xxxxxx pro povrchově xxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxx-xx xxxxxxx TER xxx xxxxxxxxx aktivní látky xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxx xxxx rovny 5 kΩ, xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx pozitivní (2).
1.5.3.3.1 Aplikace a xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X
Xx předchozí xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx na 2 x 150 μx 10 % xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx B x xxxxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx kůže se xxxx xxxxxxxxx 10 x xxxxxxx xxxxxxx xxxx x nejvýše xxxxxxxx teplotě, xxx xx odstranilo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xx do xxxxxxxx (xxxx. 20 xx skleněné xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx spektrometrii) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodu (8 xx). Xxxxxxxx xx xxxxx 5 xxx. protřepávají, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxx oplachování xx xxxx xxxxxxxx, x xxxx xx terčíky xxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx 30 % xxxxxxx (x/X) natrium-dodecyl-sulfátu (XXX) x xxxxxxxxxxx xxxx x inkubují xx xxxx xxx xxx 60 °X. Xx xxxxxxxx xx všechny xxxxxxx xxxx xxxxxx x zlikvidují x xxxxx xxxxxx se xxxxxxxx 8 xxx. xxx 21 °X (xxxxxxxxx odstředivá xxxx ˜ 175). 1 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx 4 xx 30 % (x/X) xxxxxxx XXX v xxxxxxxxxxx xxxx. Absorbance (A) xx měří xxx xxxxxxxxx 565 xx.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx xxxxxx barviva
Obsah xxxxxxx sulforhodaminu X xx terčík kůže xx xxxxxxx x xxxxxx X (xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X při 565 xx = 8,7 × 104; xxxxxxxxxx xxxxxxxx = 580). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X xx xxxxxxx xxx každý xxxxxx xxxx x xxxx xx xxxxxxx jeho xxxxxxx hodnota. Střední xxxxxxx výsledků xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx hodnoty xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx spadají xx přijatelného rozmezí xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x přístroje xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx látky xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx barviva (μg/terčík xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx chlorovodíková (36 %) |
40-100 |
|
Negativní |
Destilovaná xxxx |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xxx xxxxxx aplikovat na xxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx (xxxx. 2 hodiny), xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, které jsou xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx však xxxxxxx, xx stanovení TER xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx aplikaci xx xxxxxx kůže xx xxxx 2 hodin (2), třebaže toto xxxxxxxxx xxxxxxxx správnou xxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx účinky a xxxxx bez leptavých xxxxxx xxx 24xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx x rozměry xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx experimentální xxxxxx xxxxx xxx xxxx xx získané xxxxxxx XXX. Xxxx 5 Ω xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxx, jež xxxx popsány x xxxx metodě. Xxxxxxxxxx xx xxxx kalibrovat xxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx hodnotu xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxx použitých xx validační xxxxxx (3).
1.6 Podstata zkušební xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxxx materiál xx xxxxxxxxx xx xx xxxx 4 xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx sestávající x xxxxxxxxxxxxxx epidermis x funkční rohovité xxxxxx. Materiály x xxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx specifikované xxxxxxxxx xxxx pokles xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx např. xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX) xxx definovanou xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx je založena xx xxxxxxxx, že xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xx, jež jsou xxxxxxx xxxxxxxxxx rohovitou xxxxxxx (xxxxxx xxxx xxxxx) x xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx smrt xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx lidské xxxx
1.7.1 Xxxxxx lidské xxxx
Xxxxxx lidské xxxx xxxxx pocházet x xxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxx splňovat určitá xxxxxxxx. Model musí xxx funkční rohovitou xxxxxx a vrstvu xxxxxx xxxxx xxx xx. Bariérová xxxxxx xxxxxxxx vrstvy xxxx xxx dostatečná. Xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx látkám, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Musí xx xxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx musí xxx dostatečně xxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx pozitivní x negativní xxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. redukcí XXX, xx. měřením xxxxxxx xxxxxxxxxx X) xx xxxxxxxx negativní xxxxxxxxx látce xxxx xxx v mezích xxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxx (ve xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx) xxxx xxx ve xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx, xxx xxxxx odpovídal xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro validaci (2).
1.7.2 Zkušební xxxxxx
1.7.2.1 Xxxxxxxx zkoušeného xxxxxxxxx
X xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx pokrylo xxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 25 μx/xx2). X xxxxxxx xxxxxxxxx musí být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxx xxxxxxx xxxx, x xxxxxxxx xxxxx xx xxxx být xxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxx; xxxxx xxxxx xx xxxx být xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx rozemlety xx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx, že aplikační xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx široké xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2). Xx uplynutí xxxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxxxx materiál x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx fyziologickým xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx životaschopnosti xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx použita xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Nejčastěji se xxxxxxx stanovení xxxxxxx XXX, pro níž xx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx prokázalo, xx xxxxxxxxx správné x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx kůže xx xxxxxx xx xxxxxxx XXX x koncentraci 0,3 xx/xx při xxxxxxx 20-28 °X xx dobu 3 xxxxx. Sraženina xxxxxxx xxxxxxxxx xx poté xxxxxxxxx (rozpouštědlem) a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X při vlnové xxxxx 545 xx 595 xx.
1.7.2.3 Doplňkové xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx kůže x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx doby, xxxxxxx xxxxxxxxxxx atd. budou xxx xxxxx vliv xx výsledky xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx, xxx metodika x xxxxxxxxxxx model xxxx xxxxxxxxxxx zkoušením xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxxxxx xxxxxx ECVAM (3). Xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x mezinárodními xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx široké spektrum xxxxxxxxxx xxxxx. Metoda xxxx xxxxxxxx alespoň xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx (2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx časopise x xxxxxxxxxxxxx odbornou xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Zpracování xxxxxxxx
2.1.1 Zkouška XXX xx kůži xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx (xΩ) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x negativní kontrolu x xxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxx xxxxx x duplicitních nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, o xxxxxxxxx hodnotách a x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.
2.1.2 Xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v procentech xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxx x pro xxxxxxx standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx opakovaných experimentech, x středních xxxxxxxxx x o xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.
2.2 Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.2.1 Xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx 5 xΩ, xxxx xxxxx xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxx xxxx rovna 5 kΩ x xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxx xxxxxx.
X xxxxxxxxx aktivních xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xxxx rovné 5 xΩ, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx barviva. Xx-xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx větší xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v terčíku xxxx xxxxxxxxx souběžně xxx použití 36 % XXx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx je tedy xxxxxx. Je-li střední xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx kůže menší xxx střední xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx xxxxxxx souběžně xxx použití 36 % HCl, xx xxxxxxx xxxxxxx pozitivní, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx.
2.2.2 Xxxxxxx x modelem xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxx negativní kontrolu xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx; xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxxxxxxx xxx každý zkoušený xxxxxx lze xxxxxx x xxxxxxx relativní xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Hraniční xxxxxxxxxxxx xxxxx životaschopnosti xxxxx, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx), xxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx metody x xxxxxxxx xxxxxxxxx studie xxxx xxxxxxxx, xx xx xxxxxx (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x zkoušce
Protokol x xxxxxxx musí xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx vlastnosti x xxxxxxxx fyzikálně-chemické xxxxxxxxxx. Xxxxxxx informace xx xxxx xxx xxxxxxx xxx referenční xxxxx, pokud byly xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,
- popis x zdůvodnění jakýchkoli xxxx.
Xxxxxxxx:
- hodnoty odporu (xxxxxxx XXX) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (zkouška x xxxxxxx xxxxxx xxxx) pro xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxx xxxxx o duplicitních xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx formě xxxxxxx,
- popis jakýchkoli xxxxxx xxxxxxxxxxxx účinků.
Rozbor xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. LITERATURA
(1) ECVAM (1998), ECVAM Xxxx &xxx; Xxxxx, XXXX 26, 275-280.
(2) Xxxxxx, X. H., Xxxxxx, X. X. X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X. A., Xxxxxx, X. X., Xxxx, X. K., Xxxxxxx, X. J., Xxxxxxxxxx, X-X., Xxxxxxx, X. (1998), Xxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx in vitro xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 2. Xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxx Management Xxxx, Xxxxxxxxxx in vitro 12, 483-524.
(3) Barratt, X. X., Brantom, X. X., Fentem, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Worth, X. X. (1998), Xxx XXXXX international xxxxxxxxxx xxxxx xx in xxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 1. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx the xxxx xxxxxxxxx, Toxicology xx xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. X. X., Pemberton, X. X., Xxxxxx, C. (1986), An xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx — modifications xxx xxxxxxxxxx, Food Xxxx. Xxxxxxx. 24, 507-512.
(5) Xxxxxx, X. X., Hall, T. X., Xxxxxxx, X., XxXxxx, J. X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxx, E., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, D. X., Xxxxxxx, J. (1992), Xxx xxxx xxxxxxxxxxx test in xxxxx: results xx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Balls, X., Botham, X. X., Curren, R. X., Xxxx, X. X., Esdaile, X. X., Xxxxxxx, M. (1998), Xx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx corrosion, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, P. X., Xxxxxxxxxxx, M., Barratt, X. D., Xxxxxx, X. X., Esdaile, X. X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Hildebrand, X., Xxxxx, R. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxx, M., Xxxxxxx, J. F., Xxxxxxxx, W., Walker, X. P., Xxxxx, X. 1995), X xxxxxxxxxxxxx study on xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx testing. Xxx xxxxxx xxx recommendations xx XXXXX xxxxxxxx 6, ATLA 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Xxxxxxx 2"
&xxxx;
XXXXXXX II
"B.41 XXXXXXXXXXXX — XXXXXXX XXXXXXXXXXXX 3X3 XXX XX XXXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx první expozici xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušené látky, xx. xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx nebezpečí, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxxx xxxx viditelnému xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx zkoušky xx xxxxx x hlediska xxxxxxxxxxx xx stanovení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaným xxxxxxxxx chemické látky x xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xx xxxx, x xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx působí xx nanesení xx xxxxxxx jako fotoiritanty.
Zkouška xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx byla xxxxxxxx a xxxxxxxxxx x rámci spojeného xxxxxxxx EU/COLIPA x xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) x cílem xxxxxxxx platnou xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx. V xxxx 1996 xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx pro xxxxxxxxxx fototoxicity (4).
Xxxxxxxx xx zkoušek xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU in xxxxx byly xxxxxxxxx x akutními xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx vivo u xxxxxx x x xxxxxxx a zkouška xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx těchto účinků xxxx vynikající. Xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx mohou xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx mnoho xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, bude xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zkouška xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek xx xxxxxxx x xxxxxxx.
1.2 Definice
Intenzita xxxxxxx: xxxxxxxxx ultrafialového xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, měřená xx X/x2 nebo xX/xx2.
Xxxxx xxxxxxxxxx záření: xxxxxxxx (xxxxxxxxx × xxx) xxxxxxxxxxxxxx (XX) xxxx viditelného záření xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxx v xxxxxxx (X × x) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxx. X/x2 xxxx X/xx2.
Xxxxxx xxxxx UV xxxxxx: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx CIE (Commission Xxxxxxxxxxxxxx xx x'Xxxxxxxxx): XXX (315400 nm), XXX (280315 nm) x XXX (100280 xx). Používají se xxxxxx xxxx xxxxxxxx: xxxx xxxxxxx mezi XXX a XXX xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 320 xx x xxxxx XXX xxxx být rozděleno xx UV-A1 x XX-X2 x hranicí xxxxx 340 xx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: parametr, xxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx neutrální xxxxxxx xx xxxxxxxxx lysosomů) x xxxxx v xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxx uspořádání xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx v poměru x xxxxxxxxxx kontrolám (xxxxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxx postupem xxxxxxx (x XX, xxxx xxx UV), xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx model: xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxxxx metodice xxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX a veličinu XXX.
XXX (xxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxxxxx xxxxxx): xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XX50) xxxxxxxx látky, x xx xxx necytotoxickém xxxxxxx UVA/VIS xxxxxxx (+ UV) x xxx něho (-UV).
MPE (xxxx xxxxx xxxxxx — xxxxxxx světelný xxxxxx): xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxx celého průběhu xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx ozáření XXX/xxx xxxxxxx (+ XX) x xxx xxxx (-UV).
Fototoxicita: akutní xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx první expozici xxxx určitým chemickým xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx ozářením xxxx po systémovém xxxxxx chemické látky.
Fotoiritace: xxxxx úroveň xxxxx "xxxxxxxxxxxx", xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxx těch xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, které se xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxxx). Tyto fototoxické xxxxxx vedou xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (podobné xxxxxx xxx opalování).
Fotoalergie: získaná xxxxxxxxxxxx reaktivita, ke xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx x xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxx týdny xxxx tím, xxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxx odezva xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XX/XXX světla a xxxxxxxxxxxxx chemické látce.
Fotokarcinogenita: xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx světla a xxxxxxxx látky. Xxxxxx xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xx používá x xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx XX zářením xxxxxxxx chemickou látkou.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx pozitivní xxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxxxxxxxxxx, který by xxx xxx souběžně xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx, je pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xxxxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxxxxxxxxxxxx srovnáních předložené xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Úvodní poznámky
Fototoxické xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx typů xxxxxxxxxx xxxxx (5, 6, 7, 8). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Podle xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (Grotthaus-Draperův xxxxx) vyžaduje xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx UV/VIS absorpční xxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx (xxxx. podle Xxxxxxxx XXXX 101). Xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx menší než 10 l.mol-1.cm-1, xxxxxxxx xxxxx nemá xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxx zkoušena xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx).
1.5 Xxxxxxxx zkušební xxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx čtyři xxxxxxxxxx, xxxxxxx může absorpce xxxxxx (xxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (7). Všechny xxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx fototoxicity 3X3 NRU xx xxxxx je proto xxxxxxxx na srovnání xxxxxxxxxxxx chemické látky xxx zkoušení x xxxxxxxx necytotoxické xxxxx XXX/XXX xxxxxx x xxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx xxxxxxx vyjádřena xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (9) 24 xxxxx xx působení xxxxxxxx xxxxxxxx látky x ozáření.
Buňky Xxxx/x 3X3 xx 24 x xxxxxxxxx, aby xxxxxxxxx monovrstvu. Xxx 96xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx zkoušenou xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx 1 x xxxxxxxxxxx xxxx různými xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX/XXX xxxxxx 5 X/xx2 XXX (+ UV xxxxxxxxxx), zatímco druhá xxxxxxxx xx udržuje x temnu (-XX xxxxxxxxxx). X obou xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx médiem x xx dalších 24 x inkubace je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 3xxxxxxxxx příjmem xxxxxxxxx xxxxxxx (XXX). Xxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnost xxxxxxxxx x procentech vzhledem x neexponované xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxx každou x xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx porovnají xxxxxxxxxxxx závislé xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx (+ UV) x xxx xxxxxxx (-XX), xxxxxxx xxx hodnotě XX50, xx. xxx xxxxxxxxxxx způsobující 50 % xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
1.6 Xxxxxxxx jakosti
Citlivost xxxxx xx XXX, dosavadní xxxxx: xxxxxxxxx buněk xx UVA by xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx, xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx XXX záření 1 xx 9 X/xx2 a xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx x den xxxxxxx xxxxxxxx XXX. Buňky xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx-xx xxxxxx životaschopnost xx xxxxxxx 5 X/xx2 menší xxx 80 % xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx XXX xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxx kritéria xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx x EBSS (Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx 1 % xxxxxxxxx (XxXX)) nebo xxx xxxx xxxxxxxx xxx + XXX experimentu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 80 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx rozpouštědle xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x temnu (-XXX).
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx: absolutní xxxxxxxxxx (X540 NRU) xxxxxx x extraktu XX xxxxxxxxxxx kontrol xxxxxxx, xxx 1 × 104 xxxxx xxxxxxxxxx xx jednu xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx dvou xxx zkoušky xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxxx). Zkouška xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx hodnota X540 XXX neexponovaných xxxxxxx xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: při xxxxx xxxxxxx fototoxicity 3T3 XXX xx vitro xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx látka. Při xxxxxxxxx studii EU/COLIPA xxx použit jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXX), x je xxxx doporučen. Xxx XXX zkoušený xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx: xxx XXX xxxxxxx (+ XXX): EC50 = 0,1 xx 0,2 μg/ml, xxx XXX xxxxxxxxx (-UVA): XX50 = 7,0 xx 90,0 μg/ml. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xx. xxxxx xxxxxxx XX50, xx měl xxx xxxxxxx 6.
Xxxxxxx XXX mohou xxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly jiné xxxxx fototoxické xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx na xxxxxxx dosavadních údajů xxxx kritéria přijatelnosti xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XX50 x PIF xxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxxx účinek).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx
1.7.1 Xxxxxxxx
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx validační xxxxxx xxxx xxxxxxx permanentní xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx — Xxxx/x 3X3, xxxx 31 — xxx x banky XXXX, xxxx x xxxxx ECACC x xx tedy xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxx nebo xxxxxxx xxxxx mohou xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx použity xx xxxxxxxxxxx, že xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, ale xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx xx xxxx xxx pravidelně xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, x xxxx xx xxx použity xxxxx tehdy, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxxx xxxxx xx XX vzrůstá x počtem xxxxxx, xxxx by být xxxxxxx buňky Xxxx/x 3X3 x xxxxxx x nejnižším xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx než xxx xxxxxx. Je xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxx xxxxx Balb/c 3X3 na UVA xxxxxxxxxx kontrolována postupem xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x této metodice.
1.7.1.2 Xxxxx a kultivační xxxxxxxx
Xxx xxxxxxx buněčné xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxx Xxxx/x 3X3 xx xxxxx x XXXX (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxx media) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, 4xX xxxxxxxxxx, penicilinem x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx vlhčené xxxxxxxxx při 37 °X/7, 5 % XX2. Xxxxxxx důležité xx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx zajistily, aby xxx buněčný xxxxxx xxxxxx dosavadního xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx.
1.7.1.3 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx hustotě x xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxx xxxx použitím xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx.
Xxx zkoušce xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx hustotě, xxx nedosáhly xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xx. xx xxxxxxxx, xxx xx po 48 h od xxxxxxxx stanovována xxxxxxxxxxxxxxx. Xxx buňky Xxxx/x 3X3 kultivované x 96xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 × 104 xxxxx xx jamku.
Pro xxxxxx xxxxxxxxx látku se xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx 96jamkových destiček, xxxxx jsou poté xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx zkoušky xx xxxxxxxx xxxxxxxx kromě xxxx, xxx je xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (+XXX/XXX) x xxxxx xx udržována x temnu (-UVA/VIS).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx použití xxxxxxxxxxxxxxxx systému xx xxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx x fototoxikologii dosud xxxxx žádná xxxxxxxx xxxxx, xxx jejíž xxxxxxxx xxxx toxinu xx vivo xxxx xx xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxx xxx xx xxxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx zkouška xxxxxxxxx xx systémem aktivace xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx bezprostředně před xxxxxxxx, xxxxx údaje x stálosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Může-li xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx červeným xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx roztoku, xxxx. x Earlově xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXXX) xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), který xxxxx obsahovat proteinové xxxxxx x pH xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx rozpouštědle xx 100xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx xx měly xxx zředěny x xxxxxx 1:100 xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 % xxx. xx všech xxxxxxxxx, xx. v xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx rozpouštědly xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) a xxxxxxx (EtOH). Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx méně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx. aceton), xxx xxxx by xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxx. reakce xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx účinků, xxxxxx radikálů.
Je-li třeba, xxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx x/xxxx zahřátí na 37 °X.
1.7.1.6 Xxxxxxx XX xxxxxxx/xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx: xxxxx vhodného zdroje xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx je kritickým xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx x xxxxx XXX x ve xxxxxxxxxx pásmu xx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx záření v xxxxx XXX xx xxxx relevantní x xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx vzrůstá xxxx 313 nm x 280 nm 1000xxxx (11). Xxxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx měla xxxxxxxxx důležitý xxxxxxxxx, xxx xxxxx světla xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx délkách, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, x aby xxxxx xxxxxxxxxx záření (xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx látek. Použité xxxxxx délky x xxxxx, včetně xxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxx xxxxxx), xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx testovací xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx simulátory xx xxxxxxxx xx optimální xxxxx světla. X xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx x xxxx xx tu xxxxxx, xx emituje xxxx xxxxx x xx xxxxxxxx, avšak její xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx není xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx XXX záření, xxxx by být xxxxxx xxxxxxxxxx, aby xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx délky UVB xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx xx mělo xxx xxxxxxx spektrum xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxx (XXX:XXX ˜ 20:1). Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx vitro xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (3).
Xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) xx xxxx pravidelně xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx vhodného širokopásmového XX-xxxxx. XX-xxxx musí xxx pro daný xxxxx kalibrován. Xxxxxxxxx XX-xxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxxxx x xx xxxxx xxxxxx xx doporučuje použít xxxxx referenční xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX-xxxx xxxxxxxx xxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx intenzity záření xxxxxxxxxxxx zdroje xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx UV-metru xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx vyžadují xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx osobami.
Dávka 5 J/cm2 xxxx xxx xxxxxxxxx studii xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 a dostatečně xxxxx x excitaci x xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek. Xxx xxxxxxxx 5 X/xx2 xx xxxx 50 xxx. xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 1,666 MW/cm2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx buněčná linie xxxx jiný xxxxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx expozice xx vypočte xxxxx xxxxxxxx:
x(xxx) = dávka xxxxxxxxxx záření (J/cm2) 100 / intenzita xxxxxxx (mW/cm2) 60 (1 X =.W xxx)
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx; xxx vyšších xxxxxxxxxxxxx roste výskyt xxxxxxx pozitivních xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xX xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx chemických xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+ XXX) x xxx xxxxxx (-XXX) xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx experimentech xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx koncentrační xxxx x xxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxx použita geometrická xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7.3 Xxxxxxxx xxxxxx [1]
1.7.3.1 Xxxxx xxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx x kultivačním médiu x 100 μx xxxxxxxxxxxx média se xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx jamek 96jamkové xxxxxxxx (xxxxx pokus). Xx xxxxxxxxxxx buněk xx dávkuje xx 100 μl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 xxxxx na xxxxx). Xxx xxxxxx xxxxxxxxx chemickou xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-XXX) x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (+XXX).
Xxxxx xx xxxxxxxx 24 x (7,5 % XX2, 37 °X), xxxxx xxxxxxxxxx semikonfluentní xxxxxxxxxx. Xxxx inkubační xxxx xxxxxx regeneraci xxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx x exponenciální růst.
1.7.3.2 Xxxxx den
Po inkubaci xx kultivační xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xx promyje dvakrát 150 μx EBSS/PBS. Xxxxx xx 100 μx EBSS/PBS xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxxx xx 8 xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky. Xxxxx xx zkoušenou xxxxxxxxx látkou xx xxxxxxxx x temnu xx xxxx 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °C).
K xxxxxxxxx části xxxxxxx x xxxxxxxx UVA xx buňky xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 50 min. xxxxxxx přes víčko 96xxxxxxx xxxxxxxx UVA xxxxxxx o xxxxxxxxx 1,7 XX/xx2 (5 X/xx2. Xxx xxxxxxx xx kondenzaci xxxx xxx víčkem, xxxxx xx pomocí xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx ozáření UVA xx xxxxxxxxx 50 xxx. (doba expozice XXX) x xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.
Zkušební xxxxxx xx xxxxxxxx x každá jamka xx promyje dvakrát 150 μl XXXX/XXX. XXXX/XXX se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxx xxx (18-22 h) (7,5 % XX2, 37 °X).
1.7.3.3 Xxxxx xxx
Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx se xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx x fázovým xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx buněk xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Doporučuje xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx experimentální xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx fototoxicity xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx červeně.
Buňky xx xxxxxxx 150 μx xxxxxxxxxxxx EBSS/PBS x promývací roztok xx opatrně xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx 100 μx xxxxx XX x xxxxxxxx xx 3 h xxx 37 °C xx zvlhčené xxxxxxxxx x 7,5 % XX2.
Xx inkubaci xx xxxxxx NR xxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. EBSS/PBS se xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx).
Xxxxx xx xxxxxx 150 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, aby xx xxxxxxxxxx XX.
Xxxxxxxx se xxxxxx 10 min. xxxxx xx třepačce, xxxxx xx NR x buněk xxxxxxxxx x xxxxxxxxx homogenní xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx NR xxx 540 xx, xxxxxxx se pro xxxxxxxx použije xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx ve vhodném xxxxxxx (xxxx. ASCII) x xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx analýzu.
2. ÚDAJE
2.1 Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xx xxxx xxxxxxx smysluplnou analýzu xxxxxxxxxx odpovědi na xxxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx XXX/XXX xxxx xxx xxxx. Je-li xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxx, aby xxxx xxxxx proložit experimentálními xxxxx xxxxxx. Vzhledem x tomu, xx xx xxxxxxxx chemická xxxxx xxxxxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx 100 μg/ml xxxxxx pro xxxxxxxxxx x xxxxx (-XXX) xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx ozáření (+XXX), xxxx xxx xxxxxxxx, aby se xxxxxxx koncentrací, xxxxx xxxx xxx x xxxx částech xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx, xx-xx být xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxx-xx v xxxx částech xxxxxxxxxxx (-XXX x +XXX) xxxxxxxxxxxx zjištěna, xxxxx xxxxxxx zkoušku x xxxxxxx xxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx byla xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. V xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x výsledky xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx modelu by xxxx být xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xx-xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxx dosažení xxxxxxx výsledku xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx podmínky. Klíčovou xxxxxxxxx xxxx zkoušky xx příprava roztoků xxxxxxxx xxxxxxxx látky. X xxxxxx xxxxxx xxxx xxx změna xxxxxxxx (jiné xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, použití ultrazvuku) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušky. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxx v úvahu xxxxxxxx xxxxxxxxx doby xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx u chemických xxxxx xxxxxxxxx ve xxxx.
2.2 Xxxxxxxxxx výsledků
Je-li xx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx odpovídající 50 % inhibici xxxxxxxxx xxxxxx neutrální xxxxxxx (XX) (XX50). Xxx xxx xxxxxx xxxxxxx jakékoli xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx regrese (xxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx regresí) xxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx koncentraci xxxx xxxxxxxx xxxxxx metod xxxxxx xxxxxxxxx (14). Xxxx použitím hodnoty XX50 xxx další xxxxxxx by měla xxx vhodným způsobem xxxxxxxxxxxxx kvalita xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XX50 xxx popřípadě použít xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. X takovém případě xx xxxxxxxxxx použít xxxxxxxxxxxxxxxx papír (měřítko xxx x: xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx y: xxxxxxxxxxxxxxxxx), neboť x xxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxx)
2.3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxx — xxxxx 1: fotoiritační xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx (+XXX), xxx xxx xxxxxxx (-XXX) získány xxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx koncentraci, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX) xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxx:
(x) XXX = (XX50 (-UV)) / (XX50 (+UV))
Hodnota XXX &xx; 5 předpovídá xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx PIF ≥ 5 předpovídá xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pouze při +XXX a xxxx xxxxxxxxxxx při zkoušce -XXX, xxxxx hodnotu XXX vypočítat, xxxxxxx xxx x výsledek, xxxxx svědčí o xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx případech lze xxxxxxxxx xxxxxxx "> XXX", jestliže xx xxxxxxx -XX xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxx), x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx "&xx; XXX";
(x) &xx; XXX = (Xxxx (-UV)) / (XX50 (+XX))
Xxx li xxxxxx xxxxx xxxxxxx "&xx; XXX", xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx hodnota &xx; 1.
Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx žádnou xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx ani xxxxxxx EC50 (-XX) xxx xxxxxxx XX50 (+ XX), svědčí xx o neexistenci xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx formální hodnota "XXX = *1";
(X) &xx; PIF = *1 = (Xxxx (-XX)) / (Xxxx (+XX))
Xxx li xxxxxx xxxxx xxxxxxx "XXX = *1", xx xxxx hodnota předpovědí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
X xxxxxxxxx b) x x) xx měly xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu xxxxxxx xxxxx v xxxxx xxxxxxxxxxx dosažené xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx vitro.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx xxxxx verze 2: xxxxxxx světelný xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx lze xxxxxx novou xxxxx xxxxxx xxx předpovídání xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, který xxx vyvinut x xxxxxxxx údajů x xxxxxxxxx xxxxxx EU/COLIPA (15) x xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx studii xxxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxx XX xxxxxx (13). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx jako xxxxx XXX x případech, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx XX50. Tento xxxxx využívá střední xxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxx effect) (MPE), xxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx na srovnání xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx modelu xxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxx) vyvinut xxxxxxxxx počítačový xxxxxxxx, xxxxx xx volně x xxxxxxxxx.
2.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx (XXX ≥ 5 nebo XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, xx látka xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx při koncentracích xxx 10 μx/xx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx podmínek jako xxxxxxxxx in vivo. Xx-xx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx pouze při xxxxxxxx zkušební koncentraci 100 μx/xx, xxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx nezbytné xxxxx xxxxx. Ty xx xxxxx xxxxx údajů x xxxxxxxxx, absorpci x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxx zkoušení xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, např. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxx.
Xxxxxxxxx výsledek zkoušky xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx vitro (XXX &xx; 5 xxxx XXX &xx; 0,1) xxxxxxx, že látka xxxxxx xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx fototoxická. V xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxx chemickou xxxxx xx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, znamenají negativní xxxxxxxx, xx chemická xxxxx xxxx fototoxický xxxxxxxxx a fototoxicitu xx xxxx xxx xxxxxxxx xx nepravděpodobnou. X případech, xxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx obdrženy totožné xxxxxxxxxx xxxxxxx odezvy xx xxxxxxxxxxx (EC50 +XX x EC50 -XX), je xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxx-xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (+XX a -XX) x jsou-li xxxxxxxxxxx omezeny xxxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx menší xxx 100 μx/xx, xxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx vhodná x xxxx by xxx zvážena xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xx vitro xxxx zkouškou xx xxxx).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx obsahovat tyto xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx chemická xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx XXX, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx,
- xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx důležité pro xxxxxxxxx xxxxxx,
- stálost x xxxxxxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx (EBSS xxxx XXX).
Xxxxx:
- xxx a xxxxx buněk,
- nepřítomnost xxxxxxxxxx,
- xxxxx buněčné xxxxxx, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xx XXX xxxxxxxxx radiometrem xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx
Xxxxxxxx podmínky x) — xxxxxxxx xxxx aplikací x xx ní:
- xxx x složení kultivačního xxxxx,
- inkubační podmínky (xxxxxxxxxxx XX2, teplota, xxxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx b) — xxxxxxxx xxxxxxxx látky:
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx XX/XXX, xxx xxx xxx,
- v xxxxxxx, že zkoušená xxxxxxxx xxxxx vykazuje xxxxxxxx rozpustnost a xxxx cytotoxická, xxxxxxxxxx xxxxxxxx zkušební koncentrace,
- xxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx média (pufrovaný xxxxxxxxxxxx xxxxxx),
- délka xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxxxxxxx propustnosti/absorpce použitého xxxxxx (použitých filtrů),
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx,
- intenzita xxxxxxx XXX x xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v xX/xx2,
- délka xxxxxxxx XX/XXX xxxxxx,
- xxxxx XXX xxxxxx (intenzita × čas), xxxxxxxxx x X/xx2,
- teplota xxxxxxxxx xxxxxx během xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x temnu.
Zkušební xxxxxxxx x) — xxxxxxx XXX:
- xxxxxxx xxxxx XX,
- xxxx xxxxxxxx XX,
- inkubační xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, teplota, xxxxxxx),
- xxxxxxxx xxxxxxxx XX (extrakční činidlo, xxxxx xxxxxxxx),
- xxxxxx xxxxx použitá xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx absorbance XX,
- xxxxx (referenční) xxxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx,
- xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxx, xx-xx xxxxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx vyjádřená v xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,
- křivky závislosti xxxxxx na xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx +XXX x -UVA,
- xxxxxxx křivek xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx: xx-xx xx možné, xxxxxxx xxxxxxx XX50 (+XXX) a XX50 (-XXX),
- xxxxxxxx xxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx získaných x xxxxxxxx UVA/VIS x xxx něho, x xx buď xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx-xxxxxxxxxxx xxxxxx ) (XXX), nebo xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx účinku (xxxx xxxxx xxxxxx) (XXX),
- klasifikace fototoxického xxxxxxxxxx,
- kritéria xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx negativní kontrola:
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxx XX) xxxxxxxxx x neozářených xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxx EC50 (+XXX), XX50 (-XXX) x XXX-xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx údaje xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-XXX) x XXX, xxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) Xxxxxxxxx, H., Balls, X., Döring, B., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X., X'Xxxxxxxxxxx, H., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. W., Xxxxxx, X., Moldenhauer, X., Xxxxx, X., Xxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. (1994), EEC/COLIPA project xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx testing: First xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x Balb/c 3X3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx in xxxxx 8, 793-796.
(2) Xxxx (1998), Statement xx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx 3X3 XXX PT test (xx xx xxxxx xxxx for xxxxxxxxxxxxx), Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx: ECVAM xxx XXXX/X/2, 3 Xxxxxxxx 1997, ATLA 26, 7-8.
(3) Spielmann, X., Xxxxx, M., Xxxxxx, J., Xxxx, X. X. X., Xxxxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, O., Xxxxxüxxxx, X. G., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, F., Xxxxxxx, X., Lovell, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxxxx, U., Xxxxxxxx, X. M., Xxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, W., Brantom, X. (1998), XX/XXXXXX "Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx xxxxx, results xx xxxxx II (xxxxx xxxxx), xxxx 1: xxx 3T3 XXX xxxxxxxxxxxxx xxxx, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 12, 305-327.
(4) OECD Xxxx Xxxxxxxxxx Programme, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Xxxxx Xxxxxx xx xxx OECD Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xx Validation xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx Toxicological Xxxx Xxxxxxx, XXXX Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, X. X. (1993), X xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx potential, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 7, 95-102.
(6) Xxxxxxxxxx, X., Xxxxx, X. (1972), Xxxx xx xxx photodynamic substances, Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx, biological xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx. 3 Xxxx 1, Xxxxx Holland Publishing Xx, Amsterdam, XI–XXXV.
(7) Xxxxxxxxx, X., Lovell, X. X., Xöxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Maurer, X., Xxxxxxx, X. A., Xxxx, X. J. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxx, D. (1994), Xx vitro phototoxicity xxxxxxx: The xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX xxxxxxxx 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, X. X. (1989), Xxxxxxxxxxxxxxxxxx. V: Xxx science xx xxxxxxxxxxxx, (K. X. Xxxxx, xx.), Xxxxxx Xxxxx, Xxx York, 2. vyd., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. A. (1985), Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx by xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, L. X., Xxxxxx, X. G., Xxxxxxxxxx X. (1996). X: Xxxxxx models xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (F. X. Xxxxxxxx, X. I. Xxxxxxx xxx.), Xxxxxx &xxx; Xxxxxxx, Xxxxxxxxxx XX, 5. xxx., 515-530.
(11) Tyrrell, R. X., Pidoux X. (1987), Action spectra xxx xxxxx xxxx xxxxx: xxxxxxxxx xx xxx relative cytotoxicity xx the xxxxxx xxxxxxxxxxx, near ultraviolet xxx violet xxxxxxx xx sunlight xx xxxxxxxxx keratinocytes, Xxxxxx Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Standard Operating Xxxxxxxxx: Balb/c 3X3 XXX Xxxxxxxxxxxxx Test, xxxxxxxx 23. prosince 1997 X. Xxxxxxxxx, xxxxxxxxx 6. xxxxxx 1998 xxxxx Management Xxxx xx xxx XX/XXXXXX xxxxxxx "Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Spielmann, X., Xxxxx, M., Xxxxxx, J., Xxxx, X. X. X., Xx Xxxxx, X., Xxxxxüxxxx, H. X., Xxxxxxxxx, F., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, W. X., Xxxxxxxxxxxxx (1998), X Xxxxx xx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx UV Filter Xxxxxxxxx xxxx Xxxxx XXX xx the XX Xxxxxxxxx 76/768/XXX xx xxx 3X3 XXX Xx Vitro Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, XXXX 26, 679-708.
(14) Holzhütter, X. G., Quedenau, X. (1995), Mathematical xxxxxxxxx xx cellular xxxxxxxxx to xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxx, 3, 127-138.
(15) Xxxxxüxxxx, X. X. (1997), A xxxxxxx xxxxxxx xx xx vitro xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx from xxxxx xx xxxx-xxxxxxxx xxxxxx xxx its xxx xxx predicting xxx xx xxxx phototoxicity xx chemicals, XXXX 25, 445-462."
"Xxxxxxx
&xxxx;
[1] Xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx x literatuře (12).