Xxxxxxxx Komise 2000/33/XX
xx xxx 25. xxxxx 2000,
xxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx přizpůsobuje xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisů xxxxxxxxxx xx klasifikace, xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [1]
(Xxxx s xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX xx xxx 27. xxxxxx 1967 o sbližování xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx a xxxxxxxxxx nebezpečných xxxxx [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x Xxxx 1999/33/ES [3], x xxxxxxx xx článek 28 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxxx xxxxxxx:
(1) X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX se xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx vlastností, xxxxxxxx x ekotoxicity xxxxx x xxxxxxxxx. Je xxxxxxxx xxxxxxxxxxx tuto xxxxxxx xxxxxxxxxxx pokroku.
(2) Xxxxx xx. 7 xxxx. 2 xxxxxxxx Xxxx 86/609/EHS ze xxx 24. xxxxxxxxx 1986 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx států xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxx xxxxxxx xxxxx [4] xxxxx xxx xxxxx, xxx xxxx xx xxx použito xxxxx, xxxxxxxx, xx-xx xxxxxxx x prakticky dostupná xxxx xxxxxxx uspokojivá xxxxxx.
(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX xxxxxx xxxxxxxxxxxx zkušební xxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx používána xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxx zkoušení xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx. 3 xxxx. 1 směrnice 67/548/XXX.
(4) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Text xxxxxx X a XX xxxx směrnice xx xxxxxx do xxxxx X přílohy X xxxxxxxx 67/548/EHS.
Xxxxxx 2
1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx předpisy nezbytné xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 2001. Neprodleně x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx předpisy přijaté xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx si xxxxxxx členské xxxxx.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx znění xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx právních xxxxxxxx, xxxxx přijmou x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx směrnice, a xxxxxxxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Článek 3
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx xxxx po xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx určena členským xxxxxx.
V Bruselu dne 25. xxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxöx
xxxxxx Xxxxxx
[1] Přijato xxxx xxxxxxxxxxxxx po xxxxxxx xxxxx.
[2] Xx. xxxx. 196, 16.8.1967, x. 1.
[3] Úř. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Xx. věst. X 358, 18.12.1986, x. 1.
XXXXXXX X
"X.40 XXXXXXX XXXXXX NA XXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxx zkoušky xx xxxxx na xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xx principu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx (XXX) a xxxxxxx x využitím xxxxxx xxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxx střediskem xxx xxxxxxxx alternativních metod (XXXXX, Společné výzkumné xxxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx) (1, 2, 3) xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx studie XXXXX prokázala, že xxxxx xxxxxxxxx lze xxxxxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxx. Protokol x zkoušce založené xx xxxxxx xxxxxx xxxx dále xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx stupně xxxxxxxx účinků (známé xxxxx xxxxxxxxxxx těžké xxxxxxxxx, X 35 x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kůže, X 34) (2). Xxxxx a postup xxxx xxxxxxx xx xxxxxx; xxxxx xxxxxxx, xxxxx xx být xxxxxxx, xxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxx xxxx Xxxxxx xxxx, xxxx X.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxx: xxxxxxxx poškození xxxx xx aplikaci xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
1.3 Referenční xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx body 1.5.3.4 x 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx — zkouška TER xx xxxx potkana
Zkoušený xxxxxxxx xx xx xx 24 h xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx terčíků xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx účinky xxxx xxxxxxxxxxxxxx schopností způsobit xxxxxx normální xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxx), která je xxxxxx jako xxxxxxx xxxxxxxxx TER xxx xxxxxxxx xxxxxx (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX xxx prahovou xxxxxxx. Xx zkušebního postupu xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx (6)) xxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení xxxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx pro tyto xxxxx chemických xxxxx (2, 7).
1.5 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
1.5.1 Xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x mladých (20 — 23 xxxxxxx) xxxxxxx (Wistar xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx a xxxxx xxxx se opatrně xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxx xxxxx opatrným otíráním, xxxxxxx xx testovací xxxxxx ponoří xx xxxxxxx antibiotik (xxxxxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx a amfotericin x xxxxxxxxxxxxx zastavujících xxxx bakterií). Xxxxxxx xx třetí a xxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx se xx 3 dnů (x xxxxxxxx kůže xxxxx být použita xxxxxxx xxxxxx xxx 31 xxx).
1.5.2 Příprava xxxxxxx kůže
Zvířata xx xxxxxxx usmrtí. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx kůže x xxxxxxxxxx xxx se x xxxx opatrně xxxxxxxxx. Xxxx se xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx tak, xxx xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxx s xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx trubičky xx těsně xxxxxxxx xxxxxxx X-xxxxxxx, xxx xxxx xxxx upevněna, x přebytek tkáně xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx x X-xxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Pryžový X-xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx xxxxxxx vrstvou xxxxxxxx. Trubička xxxxxx xxxxxx pružinové svorky xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx síranu hořečnatého (154 xX) (xxxxxxx 2).
1.5.3 Xxxxxxxx xxxxxx
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx látka (150 μx) xx aplikuje xx epidermis xxxxxx xxxxxxxx (xxx. 2). Xxx xxxxxxxx pevných xxxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx, xxx byla xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Poté xx na xxxxxx xxxxx látky přidá xxxxxxxxxxxx voda (150 μx) a xxxxxxxx xx xxxxx protřepe. Xxxx látkami x xxxx xx mělo xxxxx k xxxxxxxxxxx xxxxx. X některých xxxxx toho xxxx xxx dosaženo zahřátím xx na 30 °X, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxx látky se xxxxxxx tři terčíky xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx 24 x (xxx xxxx xxx 1.5.3.4). Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx odstraní xxxxxxx xxxxxxx vody x xxxxxxx nejvýše 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx x trubičce ztuhly, xxx usnadnit omytím xxxxxxx xxxx xxxxx xx 30 °X.
1.5.3.2 Xxxxxx TER
TER se xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxx (např. XXX 401 nebo 6401 xxxx xxxxxxxxxxxx). Před xxxxxxx xx povrchové xxxxxx xxxx sníží xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 70 % xxxxxxxx xxx, aby xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxxx sekundách xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxx přidáním 3 xx roztoku xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX). Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx za účelem xxxxxx xxxxxx v xΩ/xxxxxx xxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx elektrod x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pod xxxxxxxxxxxx xxxx uvedeny xx obrázku 1. Xxxxxx xxxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xx během xxxxxx odporu xxxxxx x xxxxx konec xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxx, xx xx délka části xxxxxxxxx ponořené x xxxxxxx síranu xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxx 1), xxxxx xxxx vzdálenost xx xxxx xx naměřené xxxxxxx xxxxxx.
Xx třeba xx xxxxxxxx, že xx-xx naměřená hodnota xxxxx než 20 xΩ, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx látky xx xxxxxxxxxxx xxxxxx terčíku xxxx. X odstranění xxxx xxxxxx se xxx xxxxxxx xxxx. xxx, xx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx x 10 x xx xxxxxxxxxx. Roztok xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxx xx opakuje x xxxxxxxx xxxxxxx hořečnatým.
Výsledky XXX (xxxxxxx hodnoty) xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxx popsanou xxxxxxxx a přístroje xxxx doporučeny xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx přijatelná xxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx (kΩ) |
|
Pozitivní |
10M xxxxxxxx chlorovodíková (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
10–25 |
1.5.3.3 Upravený xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx látky a xxxxxxxxx organické xxxxx
Xxxx-xx xxxxxxx XXX xxx xxxxxxxxx aktivní látky xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx zkoušené látky xxxxx nebo xxxxx 5 kΩ, xxx xxxxxxx na tkáni xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxx, xxx výsledky xxxxxx falešně pozitivní (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X
Xx předchozí aplikaci xxxxxxxx látky xx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx terčíku xxxx xxxxxxxx xx 2 x 150 μx 10 % xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx kůže xx xxxx xxxxxxxxx 10 x xxxxxxx xxxxxxx xxxx o nejvýše xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx veškeré xxxxx xxxxxxx. Všechny xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx trubičky a xxxxxx xx xx xxxxxxxx (xxxx. 20 xx xxxxxxxx lahvičky xxx xxxxxxxxxxx spektrometrii) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodu (8 xx). Lahvičky xx xxxxx 5 xxx. protřepávají, xxx xx xxxxxxxxxx další xxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxx zopakuje, x xxxx se terčíky xxxx xxxxxx x xxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx 30 % xxxxxxx (x/X) natrium-dodecyl-sulfátu (XXX) x destilované xxxx x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx 60 °C. Po xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx vyjmou x zlikvidují a xxxxx xxxxxx se xxxxxxxx 8 min. xxx 21 °C (xxxxxxxxx odstředivá síla ˜ 175). 1 xx vzorku xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx 4 xx 30 % (x/X) xxxxxxx XXX v xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx (X) xx xxxx při xxxxxxxxx 565 xx.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx sulforhodaminu X xx xxxxxx xxxx xx xxxxxxx z xxxxxx X (xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X při 565 xx = 8,7 × 104; molekulová xxxxxxxx = 580). Xxxxx barviva xxxxxxxxxxxxxx X xx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx a poté xx vypočte xxxx xxxxxxx hodnota. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxxxx, xxxxx hodnoty xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx spadají xx přijatelného xxxxxxx xxxxxx. Xxx popsanou xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxx látky xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx hodnoty xxxxxxx obsahu xxxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (μx/xxxxxx xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X kyselina xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
40-100 |
|
Negativní |
Destilovaná voda |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxx dobu (xxxx. 2 hodiny), xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx stanovení XXX xxxxxxxxxxxx leptavé xxxxxx x xxxxxxxx zkoušených xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx kůže po xxxx 2 xxxxx (2), třebaže xxxx xxxxxxxxx umožnilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx látek s xxxxxxxxx účinky a xxxxx xxx leptavých xxxxxx při 24xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx zařízení x xxxxxxx experimentální postup xxxxx mít xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx 5 Ω pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x údajů xxxxxxxxx se zařízením x xxxxxxxx, jež xxxx popsány v xxxx xxxxxx. Doporučuje xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a určit xxxxxxxx hodnotu xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx látek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (3).
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx modelu lidské xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx xx po xxxx 4 hodin xx trojrozměrný xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x rekonstruované xxxxxxxxx x xxxxxxx rohovité xxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx pokles xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx např. xxxxxxxx zkoušky xxxxxxx XXX) xxx definovanou xxxxxxxx xxxxxx. Podstata xxxxxxx xx xxxxxxxx xx hypotéze, xx xxxxxxxx látky x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx rohovitou xxxxxxx (difuzí nebo xxxxx) x jsou xxxxxxxxxx cytotoxické, xxx xxxxxxxxx smrt xxxxx x xxxxxxxx buněčných xxxxxxxx.
1.7 Xxxxx zkušební xxxxxx — stanovení xxxxxx xxxxxx lidské xxxx
1.7.1 Xxxxxx lidské xxxx
Xxxxxx lidské kůže xxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxx, musí xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vrstvy musí xxx xxxxxxxxxx. To xxx prokázat demonstrací xxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rohovitou xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx, xx model xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx musí xxx dostatečně xxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxx XXX, tj. xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X) xx xxxxxxxx negativní xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx pro xxxx xxxxx. Xxxxxxx hodnoty xxxxxxxxxxxxxxxx buněk po xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxx (ve xxxxxxxx x životaschopností xxx xxxxxxxxx kontrolní látku) xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx mezích. Nejdůležitější xxxxxx xx, aby xxxxx xxxxxxxxx mezinárodním xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx (2).
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxx
1.7.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálu
U xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx (minimálně 25 μx/xx2). X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxx látky, xxx xxxxxxx xxxx, a xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx ovlhčena, xxx xxx zajištěn xxxxx xxxx s xxxx; xxxxx látky xx xxxx být xxxxx potřeby před xxxxxxxx rozemlety xx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx široké xxxxxxxx xxxxxxxxxx látek (2). Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx životaschopnosti xxxxx
X xxxxxx životaschopnosti buněk xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Nejčastěji xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX, pro xxx xx v různých xxxxxxxxxxxx prokázalo, xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx XXX x koncentraci 0,3 xx/xx xxx xxxxxxx 20-28 °X xx xxxx 3 xxxxx. Xxxxxxxxx modrého xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx měřením xxxxxxxxxx X xxx xxxxxx xxxxx 545 až 595 xx.
1.7.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxx xxxxx xxxx xx výsledky životaschopnosti xxxxx. Xxxxxxxxxx xx, xxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxx byly xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x chemických látek xxxxxxxxx xx validační xxxxxx ECVAM (3). Xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vykazovala v xxxxx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx reprodukovatelnost xxx široké xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx definovaná xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx (2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxx xx vědeckém xxxxxxxx x předcházející xxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Zpracování xxxxxxxx
2.1.1 Xxxxxxx TER xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx (xΩ) xxx xxxxxxxx materiál, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxx údajů x duplicitních xxxx xxxxxxxxxxx experimentech, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x x odvozené xxxxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.
2.1.2 Zkouška s xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X x xxxxxxxxx hodnoty životaschopnosti xxxxx v xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.
2.2 Xxxxxxxxx x interpretace výsledků
2.2.1 Xxxxxxx TER na xxxx xxxxxxx
Xx-xx xxxxxxx XXX dosažená xxx xxxxxxxxx látku xxxxx xxx 5 xΩ, xxxx látka žíravá. Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxx xxxx rovna 5 xΩ a xxxxx o povrchově xxxxxxx látku xxxx xxxxxxxxx organickou xxxxx, xx xxxxx žíravá.
U xxxxxxxxx aktivních látek xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx dávají xxxxxxx XXX menší xxxx rovné 5 xΩ, lze xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xx-xx xxxxxxx obsah xxxxxxx v terčíku xxxx xxxxx nebo xxxxx střednímu xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx použití 36 % XXx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx zkoušené látky xxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xx xxxx xxxxxx. Xx-xx střední xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxx obsah xxxxxxx v terčíku xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 36 % HCl, xx xxxxxxx xxxxxxx pozitivní, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx.
2.2.2 Zkouška x xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx obsorbance X xxx negativní kontrolu xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx; hodnoty xxxxxxxxxx A xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx lze xxxxxx x xxxxxxx relativní xxxxxxxxxxxxxxxx x procentech xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx (nebo xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx), xxxx být xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx studie xxxx xxxxxxxx, xx xx xxxxxx (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx o xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx látka:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx vlastnosti x xxxxxxxx fyzikálně-chemické xxxxxxxxxx. Xxxxxxx informace xx xxxx být xxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxx, pokud byly xxxxxxx.
Xxxxxxxx podmínky:
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx postupu,
- popis x xxxxxxxxxx jakýchkoli xxxx.
Xxxxxxxx:
- hodnoty odporu (xxxxxxx XXX) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxx x modelem xxxxxx xxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx včetně xxxxx o duplicitních xxxx opakovaných xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx,
- xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. LITERATURA
(1) XXXXX (1998), XXXXX News &xxx; Xxxxx, XXXX 26, 275-280.
(2) Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. E. X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. D., Xxxx, X. K., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx, X-X., Xxxxxxx, X. (1998), Xxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 2. Xxxxxxx xxx evaluation by xxx Xxxxxxxxxx Team, Xxxxxxxxxx xx vitro 12, 483-524.
(3) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. H., Xxxxxx, X., Walker, X. X., Xxxxx, X. X. (1998), Xxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 1. Xxxxxxxxx and distribution xx xxx xxxx xxxxxxxxx, Toxicology xx xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. X. X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxx, C. (1986), An xx xxxxx xxxx corrosivity xxxx — xxxxxxxxxxxxx xxx validation, Xxxx Xxxx. Toxicol. 24, 507-512.
(5) Xxxxxx, P. X., Hall, T. X., Xxxxxxx, R., XxXxxx, X. X., Xxxxxxxxx, X. A., Xxxxxxx, X., Cheeseman, X., Esdaile, X. X., Xxxxxxx, J. (1992), Xxx skin xxxxxxxxxxx test xx xxxxx: xxxxxxx xx xx interlaboratory trial, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 6, 191-194.
(6) Worth, X. X., Xxxxxx, X. X., Balls, X., Botham, X. X., Xxxxxx, R. X., Earl, L. X., Esdaile, D. X., Liebsch, M. (1998), Xx xxxxxxxxxx xx the proposed XXXX testing xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, P. A., Xxxxxxxxxxx, M., Barratt, X. D., Curren, X. D., Esdaile, X. X., Xxxxxxx, X. X., Gordon, X. C., Xxxxxxxxxx, X., Lewis, X. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Ponec, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, W., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X. 1995), X xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx testing. Xxx xxxxxx and xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX workshop 6, XXXX 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Obrázek 2"
XXXXXXX XX
"X.41 XXXXXXXXXXXX — XXXXXXX FOTOTOXICITY 3X3 XXX XX XXXXX
1. XXXXXX
1.1 Úvod
Fototoxicita xx definována jako xxxxxxx odezva vyvolaná xx první expozici xxxx xxxxxxx chemickým xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx slouží x xxxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx zkoušené xxxxx, xx. existence xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx nebezpečí, xxxxx xxxx xxxxxxx xx zkoušené xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx zkoušky in xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaným xxxxxxxxx xxxxxxxx látky x světla, xxx xxxxxxxx identifikovat sloučeniny, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx a xx nanesení na xxxx, x rovněž xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx nanesení xx xxxxxxx jako xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxx xxxxxxxx XX/XXXXXX v xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) x xxxxx xxxxxxxx platnou xxxxxxxxxxx xx xxxxx k xxxxxx používaným xxxxxxxx xx xxxx. X xxxx 1996 xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx vitro xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4).
Výsledky xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU in xxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx účinky xx vivo u xxxxxx x u xxxxxxx x xxxxxxx xx ukázala xxx xxxxxxxxx těchto xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Zkouška xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx mohou xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické látky x xxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx mnoho xxxxxxxxxx látek, které xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xxxx vyvinuta x tomu, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx chemických xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx světla xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxx xx W/m2 xxxx xX/xx2.
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: xxxxxxxx (xxxxxxxxx × xxx) xxxxxxxxxxxxxx (UV) xxxx xxxxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxx v xxxxxxx (X × s) xx xxxxxx povrchu, xxxx. J/m2 xxxx X/xx2.
Xxxxxx xxxxx XX xxxxxx: označení xxxxxxxxxx xxxxxx XXX (Commission Xxxxxxxxxxxxxx xx x'Xxxxxxxxx): XXX (315400 nm), XXX (280315 xx) x XXX (100280 xx). Používají xx xxxxxx jiná označení: xxxx hranice mezi XXX x XXX xx xxxxx používána xxxxxxx 320 xx x xxxxx XXX xxxx být xxxxxxxxx xx XX-X1 x XX-X2 x xxxxxxx xxxxx 340 xx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: parametr, kterým xx xxxx celková xxxxxxxx buněčné xxxxxxxx (xxxx. xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx buněčných xxxxxxxx) x xxxxx v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušky xxxxxxxx s celkovým xxxxxx x/xxxx životaschopností xxxxx.
Xxxxxxxxx životaschopnost buněk: xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx), které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (x XX, xxxx xxx UV), ale xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx výsledků xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxx xxxxxx výsledků xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxx XXX.
XXX (xxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxx — fotoiritační xxxxxx): xxxxxx získaný xxxxxxxxx xxxx xxxxxx účinných xxxxxxxxxxxxx koncentrací (EC50) xxxxxxxx xxxxx, x xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/XXX xxxxxxx (+ XX) x xxx xxxx (-XX).
XXX (xxxx xxxxx effect — xxxxxxx světelný xxxxxx): xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x matematické xxxxxxx xxxxxx průběhu xxxxxx xxxxxxxxxx účinku xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx necytotoxickém xxxxxxx XXX/xxx světlem (+ XX) x xxx xxxx (-UV).
Fototoxicita: xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, vyvolaná xx xxxxx xxxxxxxx xxxx určitým chemickým xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx ozářením xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx: xxxxx xxxxxx xxxxx "xxxxxxxxxxxx", xxxxx se xxxxxxx k xxxxxx xxxxx těch xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx kůži xx xxxxxxxx chemickým xxxxxx (xxxxxxx nebo xxxxxx). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx x nespecifickému buněčnému xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx xxx opalování).
Fotoalergie: xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx aplikaci xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx x která vyžaduje xxxxxxxx dobu xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxx xxx, xxx xxx reakci kůže xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: genotoxická odezva xxxxxxxxxx z genového xxxxxxxx, která xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx dávce XX/XXX světla x xxxxxxxxxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovanou xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx látky. Xxxxxx xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx se používá x xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx chemickou látkou.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx, který xx xxx xxx souběžně xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx, xx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xxxxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxx x chemických xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx předložené xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Xxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx zaznamenány x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (5, 6, 7, 8). Xxxxxx jediným společným xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx energii x oblasti slunečního xxxxxx. Podle xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (Grotthaus-Draperův xxxxx) vyžaduje xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx světelných xxxxx. Xxxx zvážením xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxxx být xxxxxxxxx UV/VIS xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. podle Xxxxxxxx OECD 101). Xx-xx molární xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 l.mol-1.cm-1, xxxxxxxx xxxxx nemá xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x nemusí xxx xxxxxxxx zkouškou xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx účinky (dodatek).
1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx (chemickým) chromoforem xxxx x fototoxické xxxxxx (7). Xxxxxxx xxxxx x poškození xxxxx. Zkouška xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx je xxxxx xxxxxxxx xx srovnání xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx zkoušení x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX/XXX světla x xxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx vitálního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (9) 24 xxxxx xx působení xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx Xxxx/x 3X3 xx 24 x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx monovrstvu. Xxx 96xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx zkoušenou xxxxxxxxx xxxxx se xxxx 1 x xxxxxxxxxxx xxxx různými xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxxxx ze xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx UVA/VIS xxxxxx 5 J/cm2 XXX (+ XX xxxxxxxxxx), xxxxxxx druhá xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx (-XX xxxxxxxxxx). U obou xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxx 24 x xxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 3xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XXX). Relativní xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx vyjádřená x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx odezvy xxxxxxx xxx xxxxxxx (+ XX) x xxx ozáření (-UV), xxxxxxx při hodnotě XX50, tj. xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 % úbytek xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
1.6 Xxxxxxxx jakosti
Citlivost xxxxx xx XXX, dosavadní xxxxx: xxxxxxxxx buněk xx XXX xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx, příští xxx xx xxxxx xxxxxx XXX záření 1 až 9 X/xx2 x buněčná xxxxxxxxxxxxxxx se stanoví x xxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jakosti, xxxx-xx jejich xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx 5 X/xx2 xxxxx než 80 % xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx. Tato xxxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxx vždy po xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx UVA xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx negativní xxxxxxxx (xxxxx x EBSS (Xxxxxx fyziologický roztok) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx 1 % ethanolem (XxXX)) xxxx xxx xxxx xxxxxxxx při + XXX experimentu xxxxxxxxxxxxxxx alespoň 80 % vzhledem x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx (-XXX).
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (A540 XXX) xxxxxx v xxxxxxxx XX xxxxxxxxxxx kontrol xxxxxxx, zda 1 × 104 xxxxx xxxxxxxxxx xx jednu xxxxx zachovalo xxx xxxxx během xxxx xxx xxxxxxx obvyklou xxxx xxxxxxxxxxxxx (doubling xxxx). Zkouška splňuje xxxxxxxxx přijatelnosti, jestliže xxxxxxx xxxxxxx X540 XXX xxxxxxxxxxxxxx kontrol xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: při každé xxxxxxx fototoxicity 3T3 XXX xx vitro xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx látka. Xxx xxxxxxxxx studii XX/XXXXXX xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx (XXX), a xx xxxx xxxxxxxxx. Xxx XXX xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx postupu xxx xxxxxxx fototoxicity 3T3 XXX in xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zkoušky: xxx XXX xxxxxxx (+ UVA): XX50 = 0,1 až 0,2 μg/ml, pro XXX neozářený (-XXX): XX50 = 7,0 xx 90,0 μx/xx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xx. posun hodnoty XX50, xx xxx xxx xxxxxxx 6.
Xxxxxxx XXX xxxxx xxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx by xxxx být xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx rozsahy xxxxxx XX50 a PIF xxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx
1.7.1 Příprava
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx linie fibroplastů — Balb/c 3T3, xxxx 31 — xxx x xxxxx XXXX, nebo x xxxxx ECACC a xx tedy doporučena. Xxxx buňky xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx postupu xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx kultivační xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx specifickým potřebám xxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, x xxxx xx být xxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxxx xxxxx xx XX vzrůstá x počtem xxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx Balb/c 3X3 x xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx než xxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx Balb/c 3X3 na UVA xxxxxxxxxx kontrolována postupem xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx.
1.7.1.2 Xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxx rutinní xxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxxxx postupu by xxxx být xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx média x xxxxxxxxx podmínky. X buněk Xxxx/x 3X3 xx xxxxx x XXXX (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, 4xX glutaminem, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx při 37 °X/7, 5 % XX2. Xxxxxxx xxxxxxxx xx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx zajistily, aby xxx buněčný xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx rozpětí xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx.
1.7.1.3 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx nasadí do xxxxxxxxxxxx média ve xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx jednou se xxxxxxxx před použitím xx zkoušce xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx.
Xxx zkoušce xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx nedosáhly xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xx. xx xxxxxxxx, xxx xx po 48 x xx xxxxxxxx stanovována životaschopnost. Xxx xxxxx Balb/c 3X3 xxxxxxxxxxx x 96xxxxxxxxx destičkách je xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 × 104 buněk xx xxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx látku xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx dvou xxxxxxxxxx 96xxxxxxxxx destiček, xxxxx jsou poté xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx zkoušky xx xxxxxxxx podmínek xxxxx xxxx, xxx xx xxxxx x destiček xxxxxxx (+UVA/VIS) a xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx (-XXX/XXX).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx požadavkem při xxxxx xxxxxxxxx in xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx genotoxického a xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx x fototoxikologii dosud xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx toxinu xx xxxx xxxx xx xxxxx je xxxxxxxx metabolická xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx tedy xxx xx xxxxxxxx xxx xx vědecky xxxxxxxxxx, aby byla xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxx, pokud xxxxx x xxxxxxxx neprokazují xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx k rychlé xxxxxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx roztoku, xxxx. x Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztoku (XXXX) xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a pH xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx chemické látky x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vodě by xxxx xxx rozpuštěny xx vhodném rozpouštědle xx 100xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx koncentrace x xxxx by xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx 1:100 fyziologickým xxxxxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxxxxxxx, musí být xxxxxxxx x konstantní xxxxxxxxxxx 1 % xxx. ve všech xxxxxxxxx, tj. x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx ve všech xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx rozpouštědly xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) x xxxxxxx (XxXX). Xxxxx xxx xxxxxxx jiná xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (např. xxxxxx), xxx xxxx xx xxx xxxxxxx posouzeny xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxx xx xxxxxxxxx chemickou xxxxx, xxxxxxxxx fototoxických xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx.
Xx-xx xxxxx, xxxx být xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxx na 37 °X.
1.7.1.6 Ozáření XX xxxxxxx/xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx: xxxxx xxxxxxxx zdroje xxxxxx a vhodné xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx v xxxxx XXX x xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx spojováno x xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx záření v xxxxx UVB xx xxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 313 xx x 280 xx 1000krát (11). Kritéria pro xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx zdroj xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, x xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx detekci xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Použité xxxxxx délky a xxxxx, včetně xxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxx oblast), xx xxxx neměly xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx slunečního světla xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. X xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx x nich xx tu xxxxxx, xx emituje méně xxxxx a xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx není xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vyzařují xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxx, xxxx xx být xxxxxx filtrovány, aby xxxx vysoce xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxx (XXX:XXX ˜ 20:1). Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx použitého xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (3).
Dozimetrie: xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx ozáření) xx xxxx pravidelně xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx za xxxxxxx vhodného xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx. XX-xxxx xxxx xxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Funkčnost XX-xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xx tímto účelem xx doporučuje xxxxxx xxxxx referenční xxxxxxx xxxxxxxx kalibrovaný XX-xxxx xxxxxxxx xxxx. V xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx být x xxxxxxx xxxxxxxx odstupech xxxxxx x měření xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xx kontrole xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx osobami.
Dávka 5 J/cm2 xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jako necytotoxická xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 a xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx x slabě fototoxických xxxxxxxxxx látek. Xxx xxxxxxxx 5 X/xx2 xx dobu 50 xxx. xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 1,666 XX/xx2. Xxxxxxxx je použita xxxx xxxxxxx linie xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx, může xxx xxxxx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx buňky a xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx standardních xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx:
x(xxx) = xxxxx xxxxxxxxxx záření (X/xx2) 100 / xxxxxxxxx xxxxxxx (xX/xx2) 60 (1 X =.X xxx)
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 100 μg/ml, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx látky byly xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx; při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xX xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx koncentrací xxxxxxxxxx xxxxx zkoušených xx xxxxxxx (+ XXX) x xxx xxxxxx (-XXX) xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx zjištění xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxx, xxx xxxx křivky xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci xxxxxxxxxx podloženy xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Měla xx xxx xxxxxxx geometrická xxxx koncentrací (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7.3 Xxxxxxxx xxxxxx [1]
1.7.3.1 Xxxxx xxx
Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx x kultivačním xxxxx x 100 μx xxxxxxxxxxxx média se xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx jamek 96jamkové xxxxxxxx (xxxxx xxxxx). Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx dávkuje xx 100 μl xxxxxxx xxxxxxxx o hustotě 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 xxxxx na xxxxx). Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látku xx xxxxxxxx dvě xxxxxxxx: jedna xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-XXX) x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (+XXX).
Xxxxx xx inkubují 24 x (7,5 % XX2, 37 °C), xxxxx nedosáhnou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx inkubační xxxx xxxxxx regeneraci xxxxx, xxxxxx přichycení x xxxxxxxxxxxxx růst.
1.7.3.2 Xxxxx den
Po inkubaci xx kultivační xxxxxx x buněk dekantuje x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. Xxxxx xx 100 μx XXXX/XXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx koncentraci xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxxx xx 8 různých xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické látky. Xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx v temnu xx dobu 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °X).
X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx XXX xx buňky xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 50 xxx. xxxxxxx xxxx víčko 96xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx o xxxxxxxxx 1,7 XX/xx2 (5 X/xx2. Xxx xxxxxxx xx kondenzaci vody xxx xxxxxx, xxxxx xx pomocí xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx ozáření XXX xx xxxxxxxxx 50 xxx. (xxxx expozice XXX) x temnu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxx x každá jamka xx xxxxxxx xxxxxxx 150 μl XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx se xxxx xxx (18-22 x) (7,5 % CO2, 37 °X).
1.7.3.3 Třetí xxx
Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx kontrastem. Xxxxxxxxxxx se změny xxxxxxxxxx xxxxx způsobené xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx experimentální xxxxx, xxxxx záznamy xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nepoužijí.
Zkouška xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xx promyjí 150 μx xxxxxxxxxxxx XXXX/XXX x xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Přidá xx 100 μx média XX x inkubuje xx 3 h xxx 37 °X xx xxxxxxxx atmosféře x 7,5 % XX2.
Xx inkubaci se xxxxxx XX xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. EBSS/PBS se xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx).
Xxxxx se xxxxxx 150 μx xxxxxxx připraveného xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx, aby xx xxxxxxxxxx XX.
Xxxxxxxx se xxxxxx 10 xxx. xxxxx xx třepačce, xxxxx se XX x buněk xxxxxxxxx x xxxxxxxxx homogenní xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx xx změří xxxxxxxxxx extraktu XX xxx 540 xx, xxxxxxx se xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx xx vhodném xxxxxxx (např. ASCII) x xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
2. ÚDAJE
2.1 Xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx
Xxxxx by měly xxxxxxx smysluplnou analýzu xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx XXX/XXX xxxx xxx xxxx. Xx-xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x interval xxxx xxxx nastaven xxx, xxx xxxx xxxxx proložit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, že xx xxxxxxxx chemická xxxxx xxxxxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx 100 μg/ml xxxxxx xxx xxxxxxxxxx x temnu (-XXX) xxxxxxxxxxx, xxx mohla xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+XXX), xxxx být xxxxxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx být v xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx lišily, xx-xx být xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx kvality xxxxx. Xxxx-xx x xxxx částech experimentu (-XXX a +UVA) xxxxxxxxxxxx zjištěna, stačí xxxxxxx zkoušku x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx experimentem xx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látka xxxxxxxx xx dostatečně xxxxxxxx koncentrací. V xxxxxxxx případech xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxx předběžnými xxxxxxxxxxx xxx zjištění xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x výsledky xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx modelu by xxxx být xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xx-xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx výsledku xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx příprava xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx důvodu xxxx xxx změna xxxxxxxx (xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, použití xxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušky. Xxxxxxxxxx může xxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxx mít xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx nestálých xx xxxx.
2.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx-xx xx xxxxx, stanoví xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odpovídající 50 % xxxxxxxx xxxxxxxxx příjmu neutrální xxxxxxx (NR) (XX50). Xxx tak xxxxxx xxxxxxx jakékoli vhodné xxxxxx nelineární regrese (xxxxxxx Xxxxxxxx funkcí xxxx logistickou xxxxxxx) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (14). Xxxx použitím xxxxxxx XX50 pro další xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kvalita proložení. Xxx xxxxxxx XX50 xxx xxxxxxxxx použít xxxxxx grafického xxxxxxxxx. X xxxxxxx případě xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx papír (měřítko xxx x: logaritmické, xxxxxxx osy y: xxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxx x xxxxx případech xxxx xx xxxx transformaci xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci xxxxx xxxxxxxx.
2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx modely)
2.3.1 Předpovědní xxxxx — verze 1: fotoiritační xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxx xxxx x xxxx případech xxx xxx xxxxxxx (+UVA), xxx bez xxxxxxx (-XXX) získány úplné xxxxxx závislosti odezvy xx xxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxxxxx xxxxxx (PIF) xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
(x) XXX = (XX50 (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxxxxxx PIF &xx; 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx XXX ≥ 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx +XXX x xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx -XXX, nelze hodnotu XXX xxxxxxxxx, třebaže xxx x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx případech lze xxxxxxxxx xxxxxxx "> XXX", xxxxxxxx xx xxxxxxx -XX xxxxxxx xx po xxxxxxxx xxxxxxxx koncentrace (Xxxx), x tato xxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx "&xx; XXX";
(x) &xx; PIF = (Xxxx (-XX)) / (XX50 (+UV))
Lze li xxxxxx pouze xxxxxxx "&xx; XXX", předpovídá xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx &xx; 1.
Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxx, že xxxxxxxx xxxxx nevykazuje xx xx nejvyšší xxxxxxxx xxxxxxxxxxx žádnou xxxxxxxxxxxx, vypočítat ani xxxxxxx EC50 (-UV) xxx hodnotu XX50 (+ UV), xxxxxx xx x neexistenci xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx charakterizaci xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx hodnota "XXX = *1";
(X) &xx; XXX = *1 = (Xxxx (-XX)) / (Xxxx (+XX))
Xxx xx získat xxxxx xxxxxxx "XXX = *1", xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
X xxxxxxxxx x) x x) xx xxxx xxx xxx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx v xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx fototoxicity 3T3 XXX xx xxxxx.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx xxxxx verze 2: střední světelný xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx EU/COLIPA (15) a xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx studii xxxxxxxxxxxx xx vitro x xxxxxxxxxx xxxxx, které xx xxxxxxx jako XX xxxxxx (13). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx jako model XXX x xxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx EC50. Xxxxx xxxxx využívá xxxxxxx xxxxxxxx účinek (xxxx xxxxx effect) (MPE), xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Berlín) xxxxxxx xxxxxxxxx počítačový xxxxxxxx, xxxxx xx volně x dispozici.
2.4 Interpretace xxxxxxxx
Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx (XXX ≥ 5 xxxx XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, že xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx koncentracích xxx 10 μx/xx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx, xx látka xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podmínek jako xxxxxxxxx in xxxx. Xx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx při xxxxxxxx zkušební xxxxxxxxxxx 100 μg/ml, mohou xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xx xx xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx, xxxxxxxx x možné xxxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx alternativní xxxxxxxxxxx zkouškou, xxxx. xx použití xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx (XXX &xx; 5 xxxx XXX &xx; 0,1) xxxxxxx, že xxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx fototoxická. X xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, že xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx vivo xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, xxx xxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (EC50 +XX x EC50 -XX), xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxx-xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (+UV a -XX) a jsou-li xxxxxxxxxxx omezeny rozpustností xx xxxx na xxxxxxx xxxxx než 100 μx/xx, není xxxxxx zkouška xxx xxxxxxxxx látku xxxxxx x xxxx xx xxx zvážena potvrzující xxxxxxx (xxxx. za xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx in xxxx).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxx x zkoušce xxxx obsahovat xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx chemická xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXX, xx-xx xxxxx,
- fyzikální vlastnosti x xxxxxxx,
- xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxx x fotostabilita, xxxx-xx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxx x tomto xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx (EBSS xxxx XXX).
Xxxxx:
- xxx a xxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxx buněčné xxxxxx, xx-xx známo,
- xxxxxxxxx buněk xx XXX stanovená xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zkoušce xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx vitro
Zkušební podmínky x) — inkubace xxxx xxxxxxxx x xx xx:
- typ x xxxxxxx kultivačního xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, teplota, xxxxxxx),
- xxxxx inkubace (xxxxxxxxxx před xxxxxxxx x po xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx b) — xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxx výběru koncentrací xxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxxxxx xxx při xxxxxxx UV/VIS, tak xxx xxx,
- v xxxxxxx, že zkoušená xxxxxxxx xxxxx vykazuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx koncentrace,
- xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx média (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok),
- délka xxxxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx c) — xxxxxxx:
- zdůvodnění xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxx charakteristiky ozáření xx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxxx použitého xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxxxxxxxxxxxx radiometru x xxxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxxxx,
- vzdálenost xxxxxx xxxxxx od zkoušeného xxxxxxx,
- xxxxxxxxx ozáření XXX x xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xX/xx2,
- xxxxx expozice XX/XXX xxxxxx,
- dávka XXX záření (xxxxxxxxx × xxx), vyjádřena x X/xx2,
- teplota xxxxxxxxx kultur během xxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx kultur udržovaných x temnu.
Zkušební xxxxxxxx x) — xxxxxxx XXX:
- složení xxxxx XX,
- xxxx inkubace XX,
- xxxxxxxxx podmínky (xxxxxxxxxxx XX2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxxxxx extrakce XX (xxxxxxxxx činidlo, xxxxx xxxxxxxx),
- xxxxxx xxxxx použitá xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx absorbance XX,
- xxxxx (referenční) xxxxxx xxxxx, je-li xxxxxxx,
- složení slepého xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xx-xx xxxxxx.
Xxxxxxxx:
- životaschopnost xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxx zkoušené chemické xxxxx versus xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx experimentech +XXX a -UVA,
- xxxxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx: xx-xx xx xxxxx, xxxxxxx hodnoty XX50 (+XXX) x EC50 (-XXX),
- xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx získaných x ozářením XXX/XXX x bez xxxx, x to buď xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx-xxxxxxxxxxx xxxxxx ) (XXX), xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx světelného xxxxxx (xxxx photo xxxxxx) (XXX),
- klasifikace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (absorbance xxxxxxxx XX) xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx údaje pro xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxx EC50 (+UVA), XX50 (-XXX) x XXX-xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx,
- dosavadní xxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxx: hodnoty XX50 (+XXX), XX50 (-XXX) x XXX, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. LITERATURA
(1) Xxxxxxxxx, X., Balls, X., Xöxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. G., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X., X'Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X., Moldenhauer, F., Xxxxx, X., Pape, X., Pfannbecker, X., Xxxxxxxx, X., De Xxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. (1994), XXX/XXXXXX project xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: First xxxxxxx obtained xxxx x Xxxx/x 3X3 xxxx phototoxicity assay, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 8, 793-796.
(2) Anon (1998), Statement xx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx the 3T3 XXX PT xxxx (xx in xxxxx xxxx xxx phototoxicity), Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx: ECVAM xxx XXXX/X/2, 3 Xxxxxxxx 1997, ATLA 26, 7-8.
(3) Spielmann, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxx, X. X. X., Xxxxxxxxxx, G., Xx Xxxxx, O., Xxxxxüxxxx, X. X., Clothier, X., Desolle, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, W. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. X., Csato, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. (1998), EU/COLIPA "Xx xxxxx phototoxicity", xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxx II (xxxxx xxxxx), xxxx 1: xxx 3T3 XXX xxxxxxxxxxxxx test, Xxxxxxxxxx in Vitro 12, 305-327.
(4) OECD Xxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Final Xxxxxx xx xxx XXXX Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xx Validation xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Test Xxxxxxx, XXXX Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, W. X. (1993), X xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx photoallergenic xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 7, 95-102.
(6) Xxxxxxxxxx, X., Xxxxx, G. (1972), List of xxx photodynamic xxxxxxxxxx, Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx chemistry Vol. 3 Xxxx 1, Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx Xx, Amsterdam, XX–XXXX.
(7) Xxxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. W., Xöxxxx, X., Johnson, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxx, W. J. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X. (1994), Xx xxxxx phototoxicity xxxxxxx: Xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX xxxxxxxx 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, X. D. (1989), Xxxxxxxxxxxxxxxxxx. X: Xxx xxxxxxx of xxxxxxxxxxxx, (K. X. Xxxxx, xx.), Plenum Xxxxx, Xxx Xxxx, 2. xxx., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, X., Puerner, X. X. (1985), Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx absorption, Toxicol. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx X. (1996). X: Xxxxxx models xxx xxxxxxxxxxxxx testing, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (F. X. Xxxxxxxx, H. I. Xxxxxxx eds.), Xxxxxx &xxx; Xxxxxxx, Xxxxxxxxxx XX, 5. xxx., 515-530.
(11) Tyrrell, X. X., Xxxxxx M. (1987), Action xxxxxxx xxx human skin xxxxx: xxxxxxxxx of xxx relative cytotoxicity xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, near xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx sunlight on xxxxxxxxx keratinocytes, Xxxxxx Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Standard Xxxxxxxxx Xxxxxxxxx: Xxxx/x 3T3 XXX Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, xxxxxxxx 23. xxxxxxxx 1997 X. Xxxxxxxxx, xxxxxxxxx 6. xxxxxx 1998 týmem Management Xxxx xx xxx XX/XXXXXX project "Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Xxxxxxxxx, X., Balls, X., Xxxxxx, X., Xxxx, X. X. X., Xx Silva, O., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxxx, X., Liebsch, X., Xxxxxx, X. X., Pfannenbecker (1998), X Xxxxx on xxx Xxxxxxxxxx Potential xx UV Filter Xxxxxxxxx from Xxxxx XXX xx xxx XX Directive 76/768/XXX xx the 3T3 XXX In Xxxxx Xxxxxxxxxxxxx Test, XXXX 26, 679-708.
(14) Xxxxxüxxxx, X. G., Quedenau, X. (1995), Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx to external xxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx, 3, 127-138.
(15) Xxxxxüxxxx, H. X. (1997), A xxxxxxx measure of xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx-xxxxxxxx curves xxx its xxx xxx xxxxxxxxxx xxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, ATLA 25, 445-462."
"Xxxxxxx
&xxxx;
[1] Další xxxxxxxxxxx lze nalézt x literatuře (12).