Xxxxxxxx Komise 2000/33/ES
ze xxx 25. dubna 2000,
xxxxxx se po xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx směrnice Xxxx 67/548/XXX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx klasifikace, xxxxxx x xxxxxxxxxx nebezpečných xxxxx [1]
(Xxxx x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 67/548/XXX xx xxx 27. xxxxxx 1967 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [2], xxxxxxxxx pozměněnou xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x Xxxx 1999/33/XX [3], x xxxxxxx xx xxxxxx 28 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:
(1) V xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX xx stanoví xxxxxx pro stanovení xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx technickému pokroku.
(2) Xxxxx xx. 7 xxxx. 2 xxxxxxxx Xxxx 86/609/EHS xx xxx 24. xxxxxxxxx 1986 o xxxxxxxxxx xxxxxxxx x správních xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx ochrany xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxx xxxxxxx účely [4] xxxxx xxx xxxxx, xxx xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xx-xx rozumně x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Xxxxxx zamýšlí xxxxxxx do přílohy X směrnice 67/548/EHS xxxxxx alternativní zkušební xxxxxx, při xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx zvířata, x xxxxx zpřístupnit xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx. 3 odst. 1 xxxxxxxx 67/548/EHS.
(4) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx v xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na úseku xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx,
XXXXXXX TUTO SMĚRNICI:
Xxxxxx 1
Xxxx příloh X x XX xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxx X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX.
Xxxxxx 2
1. Členské xxxxx uvedou x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 2001. Neprodleně x nich xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx přijaté xxxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx směrnici nebo xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxx xxxxxxx vyhlášení. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx státy.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx hlavních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které přijmou x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxxx tabulku mezi xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Tato směrnice xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 25. xxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxöx
xxxxxx Xxxxxx
[1] Xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx po xxxxxxx xxxxx.
[2] Xx. xxxx. 196, 16.8.1967, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Xx. xxxx. X 358, 18.12.1986, x. 1.
PŘÍLOHA I
"B.40 LEPTAVÉ XXXXXX NA KŮŽI
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxx xxxxxxx xx xxxxx na xxxxxxx účinky xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx (XXX) x xxxxxxx x využitím xxxxxx xxxxxx kůže xxxx Xxxxxxxxx střediskem xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (XXXXX, Společné xxxxxxxx xxxxxxxxx Evropské Komise) (1, 2, 3) xxxxxxxxx jako vědecky xxxxxx. Xxxxxxxxx studie XXXXX xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx rozlišit xxxxxx xxxxxxxx účinků (xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx těžké xxxxxxxxx, X 35 x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kůže, X 34) (2). Xxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx; xxxxx zkoušky, xxxxx xx xxx xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx uživatele.
Viz xxxx Xxxxxx xxxx, xxxx X.
1.2 Definice
Poleptání kůže: xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx aplikaci xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxx 1.5.3.4 a 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx XXX xx kůži xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xx až xx 24 x xxxxxxxxx na epidermální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxx), xxxxx je xxxxxx xxxx snížení xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx úroveň (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX xxx prahovou hodnotu. Xx zkušebního xxxxxxx xxx povrchově aktivní xxxxx x neutrální xxxxxxxxx látky (xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx (6)) xxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxxx xxxxx pro xxxx xxxxx chemických xxxxx (2, 7).
1.5 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx XXX xx xxxx potkana
1.5.1 Zvířata
Terčíky xxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx (20 — 23 xxxxxxx) xxxxxxx (Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx kmen). Xxxxxxx x xxxxx xxxx se opatrně xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx se poté xxxxx opatrným xxxxxxxx, xxxxxxx se testovací xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx antibiotik (obsahujícího xxxx. streptomycin, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x koncentracích zastavujících xxxx xxxxxxxx). Zvířata xx xxxxx x xxxxxx den xx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x použijí xx xx 3 xxx (x xxxxxxxx xxxx xxxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx 31 dnů).
1.5.2 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx
Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx zvířete xx xxxx opatrně xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx tuk xx x kůže opatrně xxxxxxxxx. Xxxx xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx přetáhne xxxxxxx X-xxxxxxx, xxx xxxx kůže xxxxxxxx, x xxxxxxxx tkáně xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx a X-xxxxxxx xxxx uvedeny na xxxxxxx 1. Xxxxxxx X-xxxxxxx xx teflonové xxxxxxxx xx poté xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx umístí do xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx hořečnatého (154 mM) (xxxxxxx 2).
1.5.3 Xxxxxxxx postup
1.5.3.1 Xxxxxxxx zkoušeného materiálu
Kapalná xxxxxxxx xxxxx (150 μx) xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx uvnitř xxxxxxxx (xxx. 2). Xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx množství xxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Poté xx xx xxxxxx xxxxx látky xxxxx xxxxxxxxxxxx voda (150 μx) x trubička xx lehce xxxxxxxx. Xxxx látkami x xxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx dosaženo zahřátím xx na 30 °X, xxx xx xxxxxxxx látka xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx materiál xxxx xx xxxxxx.
Xx zkoušce xxxxx xxxxx xx xxxxxxx tři xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx látka xx xxxxxxxx xx xxxx 24 x (xxx xxxx bod 1.5.3.4). Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx odstraní xxxxxxx xxxxxxx xxxx x teplotě xxxxxxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxx omytím xxxxxxx xxxx xxxxx xx 30 °X.
1.5.3.2 Xxxxxx TER
TER se xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. XXX 401 nebo 6401 xxxx xxxxxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx sníží xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx objemu 70 % ethanolu xxx, aby byla xxxxxxxxx xxxxxxx. Po xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx odstraní xxxxxxxxxxx xxxxxxx x tkáň xx xxxxxx xxxxxxxx 3 xx roztoku xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX). Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxx strany xxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xΩ/xxxxxx xxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx elektrod x xxxxx exponovaných xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxx uvedeny xx xxxxxxx 1. Xxxxxx xxxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx odporu opřena x xxxxx xxxxx xxxxxxxxx trubičky, xxx xxxx xxxxxxxxx, že xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx síranu xxxxxxxxxxx xxxxxx. Vnější (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxx spočívala xx xxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx mezi spodkem xxxxxxxxx xxxxxx x xxxx teflonové trubičky xx xxxxxxx konstantní (xxxxxxx 1), xxxxx xxxx vzdálenost xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
Xx třeba xx xxxxxxxx, xx xx-xx xxxxxxxx hodnota xxxxx xxx 20 xΩ, může xx xxx xxxxxxxxx vrstvou xxxxxxxx xxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx terčíku xxxx. X odstranění xxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx. xxx, xx se xxxxxxxxx trubička xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx x 10 x xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx a xxxxxx xx opakuje x xxxxxxxx síranem hořečnatým.
Výsledky XXX (xxxxxxx xxxxxxx) xxxx přijatelné, xxxxx xxxxxxx pozitivní a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxx popsanou xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx tyto xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx odporu (xΩ) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
10–25 |
1.5.3.3 Upravený xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx látky
Jsou-li xxxxxxx XXX xxx xxxxxxxxx aktivní xxxxx xxxx organické xxxxx xxxxxxx zkoušené xxxxx xxxxx xxxx rovny 5 xΩ, xxx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxx výsledky xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X
Xx předchozí xxxxxxxx xxxxxxxx látky xx xx xxxxxxxxxxx stranu xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx na 2 x 150 μx 10 % xxxxxxx xxxxxxx sulforhodaminu X x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx se xxxx xxxxxxxxx 10 x xxxxxxx xxxxxxx xxxx x nejvýše xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx odstranilo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxxxx (např. 20 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx scintilační xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodu (8 xx). Xxxxxxxx xx xxxxx 5 xxx. protřepávají, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx barvivo. Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx, x xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx 30 % xxxxxxx (x/X) xxxxxxx-xxxxxxx-xxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx vodě x xxxxxxxx se xxxx xxx při 60 °X. Xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 8 min. xxx 21 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx ˜ 175). 1 xx xxxxxx supernatantu xx poté xxxxx 4 xx 30 % (m/V) xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxx. Absorbance (X) xx xxxx při xxxxxxxxx 565 nm.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx B xx terčík xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx A (xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X xxx 565 xx = 8,7 × 104; molekulová xxxxxxxx = 580). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X se xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx a poté xx vypočte xxxx xxxxxxx xxxxxxx. Střední xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx přijatelné, xxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx kontroly spadají xx přijatelného xxxxxxx xxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx látky doporučeny xxxx přijatelné xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx barviva:
|
Kontrola |
Látka |
Rozmezí xxxxxx barviva (μx/xxxxxx xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X kyselina chlorovodíková (36 %) |
40-100 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx (xxxx. 2 xxxxxx), xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx leptavé. Xxxxxxxxx xxxxxx však xxxxxxx, xx stanovení XXX xxxxxxxxxxxx leptavé účinky x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxx aplikaci xx xxxxxx xxxx xx xxxx 2 hodin (2), třebaže xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx správnou xxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx účinky a xxxxx xxx leptavých xxxxxx xxx 24hodinové xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx XXX. Práh 5 Ω xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx z xxxxx xxxxxxxxx se zařízením x xxxxxxxx, xxx xxxx popsány v xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx hodnotu xxxxxx xxxxxxxxx řady xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxx látek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (3).
1.6 Podstata xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx modelu lidské xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx až po xxxx 4 hodin xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx kůže xxxxxxxxxxx x rekonstruované xxxxxxxxx x funkční xxxxxxxx xxxxxx. Materiály x xxxxxxxxx účinky jsou xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx životaschopnosti xxxxx (stanovený xxxx. xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX) xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Podstata xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx účinky xxxx xx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx rohovitou xxxxxxx (xxxxxx nebo xxxxx) x xxxx xxxxxxxxxx cytotoxické, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7 Popis zkušební xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
1.7.1 Xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx. Xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx látkám, které xxxxxxxx neproniknou xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxx xx definovaných xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx buněk x xxxxxx xxxx xxx dostatečně xxxxxx, xxx xxxx možné xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxx. ivotaschopnost xxxxx (xxxxxxxxx např. xxxxxxx XXX, xx. xxxxxxx xxxxxxx absorbance X) xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx musí xxx v mezích xxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx hodnoty xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látku) xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx mezích. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx je, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx validaci (2).
1.7.2 Zkušební xxxxxx
1.7.2.1 Xxxxxxxx zkoušeného materiálu
U xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx pokrylo xxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 25 μx/xx2). U xxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx kůži, x xxxxxxxx xxxxx by xxxx xxx ovlhčena, xxx byl xxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxx; pevné xxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx rozemlety xx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx, xx aplikační xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2). Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx kůže xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk
K xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk xxxx být použita xxxxxxxx xxxxxxxxxx kvantitativní xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx stanovení xxxxxxx XXX, xxx xxx xx v různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx kůže se xxxxxx do xxxxxxx XXX o koncentraci 0,3 xx/xx při xxxxxxx 20-28 °C xx dobu 3 xxxxx. Sraženina modrého xxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx měřením xxxxxxxxxx X xxx xxxxxx xxxxx 545 xx 595 xx.
1.7.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx model xxxx x xxxxxx zaznamenání xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx atd. xxxxx xxx xxxxx vliv xx xxxxxxxx životaschopnosti xxxxx. Doporučuje xx, xxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx zkoušením řady xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x chemických látek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx ECVAM (3). Xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx laboratoře x xxxx laboratořemi xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx látek. Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx (2) x výsledky xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx publikovány xx xxxxxxxx časopise x xxxxxxxxxxxxx odbornou xxxxxxx.
2. ÚDAJE
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx (kΩ) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx xxxxx xxxxxx údajů x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxx klasifikaci xx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.
2.1.2 Zkouška x xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx A x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v procentech xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx látky xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x o odvozené xxxxxxxxxxx by měly xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx.
2.2 Xxxxxxxxx x interpretace xxxxxxxx
2.2.1 Xxxxxxx XXX xx xxxx potkana
Je-li xxxxxxx XXX dosažená xxx xxxxxxxxx xxxxx větší xxx 5 xΩ, xxxx xxxxx xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ x xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxx xxxxxx.
X xxxxxxxxx aktivních xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx organických xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX menší xxxx xxxxx 5 xΩ, lze provést xxxxxxxxx xxxxxxx barviva. Xx-xx střední xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx souběžně xxx xxxxxxx 36 % XXx jakožto xxxxxxxxx xxxxxxxx, je xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx je xxxx xxxxxx. Je-li střední xxxxx barviva x xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx použití 36 % HCl, je xxxxxxx xxxxxxx pozitivní, x látka tedy xxxx xxxxxx.
2.2.2 Xxxxxxx x modelem xxxxxx xxxx
Xxxxxxx obsorbance X xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx buněk; hodnoty xxxxxxxxxx X xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx lze použít x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x procentech xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxx procentuální xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx žíravé (xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx leptavých xxxxxx), musí být xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx validační xxxxxx xxxx xxxxxxxx, že xx xxxxxx (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx o zkoušce
Protokol x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx tyto xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Podobné informace xx měly být xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx postupu,
- xxxxx x zdůvodnění xxxxxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx TER) nebo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk x procentech (zkouška x modelem lidské xxxx) xxx zkoušený xxxxxxxx, pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx včetně xxxxx o xxxxxxxxxxxx xxxx opakovaných xxxxxxxxxxxxx x středních xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx,
- popis xxxxxxxxxx xxxxxx pozorovaných xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. LITERATURA
(1) XXXXX (1998), XXXXX News &xxx; Xxxxx, XXXX 26, 275-280.
(2) Fentem, X. X., Xxxxxx, X. X. X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxx, X. X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx, X-X., Liebsch, X. (1998), Xxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx study xx in vitro xxxxx xxx skin xxxxxxxxxxx. 2. Xxxxxxx xxx evaluation xx xxx Xxxxxxxxxx Xxxx, Xxxxxxxxxx in xxxxx 12, 483-524.
(3) Barratt, X. X., Xxxxxxx, X. G., Xxxxxx, X. H., Xxxxxx, X., Walker, A. X., Xxxxx, X. X. (1998), The XXXXX xxxxxxxxxxxxx validation xxxxx on xx xxxxx tests for xxxx corrosivity. 1. Xxxxxxxxx and distribution xx xxx test xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx in xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. J. X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. (1986), Xx xx xxxxx xxxx corrosivity xxxx — xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Xxxx Xxxx. Xxxxxxx. 24, 507-512.
(5) Xxxxxx, P. X., Xxxx, X. X., Xxxxxxx, R., XxXxxx, X. X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxx, X., Cheeseman, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. (1992), Xxx skin xxxxxxxxxxx xxxx in xxxxx: xxxxxxx of xx interlaboratory xxxxx, Xxxxxxxxxx xx vitro 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. P., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxx, X. X., Xxxxxxx, X. X., Liebsch, M. (1998), Xx xxxxxxxxxx xx the xxxxxxxx XXXX xxxxxxx strategy xxx xxxx corrosion, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxxx, M., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Esdaile, X. X., Xxxxxxx, X. X., Gordon, X. C., Hildebrand, X., Xxxxx, R. X., Liebsch, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, W., Walker, X. X., Xxxxx, X. 1995), X xxxxxxxxxxxxx study xx xx vitro xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. The xxxxxx xxx recommendations xx XXXXX xxxxxxxx 6, XXXX 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Xxxxxxx 2"
&xxxx;
PŘÍLOHA XX
"X.41 XXXXXXXXXXXX — XXXXXXX FOTOTOXICITY 3X3 XXX XX XXXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxxxxxxxxxxx xx definována xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx expozici xxxx určitým xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx světlu xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx ze zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx slouží x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušené látky, xx. xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx nebezpečí, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx spojení x xxxxxxxx XX záření xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaným xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, lze xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sloučeniny, xxxxx xxxx fototoxické xx vivo xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xx nanesení xx xxxx, x rovněž xxxxxxxxxx, xxxxx působí xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx xxxx xxxxxxxx a validována x rámci spojeného xxxxxxxx XX/XXXXXX v xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) s xxxxx xxxxxxxx platnou alternativu xx xxxxx x xxxxxx používaným xxxxxxxx xx vivo. X xxxx 1996 xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxx postupných xxxxxxx xx vitro xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4).
Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx byly porovnány x akutními fototoxickými xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx u xxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxx xx ukázala pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx určena xxx xxxxxxxxx jiných xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx mohou xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x světla, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxx, fotoalergie a xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx mnoho xxxxxxxxxx látek, xxxxx xxxxxxxx xxxx specifické xxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zkouška xxxx není vyvinuta x xxxx, aby xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx uvedena x xxxxxxx.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx ozáření: xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, měřená xx W/m2 xxxx xX/xx2.
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: xxxxxxxx (intenzita × xxx) ultrafialového (XX) xxxx viditelného záření xxxxxxxxxxxx xx povrch, xxxxxxxxx x joulech (X × s) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxx. X/x2 xxxx X/xx2.
Xxxxxx pásma XX xxxxxx: xxxxxxxx doporučená xxxxxx CIE (Commission Xxxxxxxxxxxxxx xx x'Xxxxxxxxx): XXX (315400 xx), XXX (280315 xx) x XXX (100280 xx). Používají xx xxxxxx jiná xxxxxxxx: xxxx hranice xxxx XXX a XXX xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 320 xx x xxxxx XXX xxxx být xxxxxxxxx xx UV-A1 a XX-X2 x xxxxxxx xxxxx 340 xx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxx, kterým xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxx vitálního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx) x xxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxx uspořádání xxxxxxx xxxxxxxx x celkovým xxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk: xxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx x negativním kontrolám (xxxxxxxxxxxx), xxxxx prošly xxxxx xxxxxxxx zkoušky (x UV, xxxx xxx XX), xxx xxxxxx exponovány xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxx převod xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX x veličinu XXX.
XXX (xxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxx — fotoiritační xxxxxx): xxxxxx získaný srovnáním xxxx stejně účinných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (EC50) xxxxxxxx látky, x xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/XXX xxxxxxx (+ UV) a xxx xxxx (-UV).
MPE (xxxx photo xxxxxx — střední xxxxxxxx xxxxxx): xxxx veličina xxxxxxxx z matematické xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx účinku xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/xxx xxxxxxx (+ XX) x bez xxxx (-UV).
Fototoxicita: xxxxxx xxxxxxx reakce, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx chemickým xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx světlu xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxxxx: xxxxx úroveň xxxxx "xxxxxxxxxxxx", xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxx těch xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx nebo xxxxxx). Tyto fototoxické xxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx reakci xxx opalování).
Fotoalergie: xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, ke xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx x xxxxx vyžaduje xxxxxxxx dobu jeden xxxx xxx xxxxx xxxx tím, xxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxx odezva xxxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxx xx expozici xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XX/XXX xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxx vyvolaná opakovanou xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx látky. Termín xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xx používá x xxxxxxx, kdy xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx UV zářením xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx látky
Vedle xxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické látky xxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx, je xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xxxxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx z chemických xxxxx použitých xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx srovnáních xxxxxxxxxx xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Úvodní poznámky
Fototoxické xxxxxx xxxx zaznamenány x mnoha xxxx xxxxxxxxxx látek (5, 6, 7, 8). Xxxxxx xxxxxxx společným xxxxx xx schopnost xxxxxxxxxx světelnou xxxxxxx x oblasti xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxx-Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx absorpci xxxxxxxxxx xxxxx. Před xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx zkoušení podle xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxx být xxxxxxxxx UV/VIS xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx (xxxx. podle Xxxxxxxx XXXX 101). Xx-xx molární xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx než 10 x.xxx-1.xx-1, chemická xxxxx nemá fotoreaktivní xxxxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx jinou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek).
1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxx x fototoxické xxxxxx (7). Všechny xxxxx x poškození xxxxx. Xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX in xxxxx xx proto xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx chemické xxxxx xxx zkoušení x xxxxxxxx necytotoxické xxxxx XXX/XXX xxxxxx x xxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx je x xxxx zkoušce vyjádřena xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx neutrální červeně (XX) (9) 24 xxxxx po působení xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x ozáření.
Buňky Xxxx/x 3X3 xx 24 x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx monovrstvu. Xxx 96xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxx chemickou xxxxx se poté 1 x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek. Poté xx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX/XXX xxxxxx 5 J/cm2 XXX (+ XX xxxxxxxxxx), xxxxxxx druhá xxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxx (-XX xxxxxxxxxx). X xxxx xxxxxxxx se poté xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxx 24 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 3xxxxxxxxx příjmem neutrální xxxxxxx (XXX). Relativní xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx vyjádřená x xxxxxxxxxx vzhledem x xxxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx koncentrací. Xxx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx porovnají xxxxxxxxxxxx závislé xxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx (+ XX) a xxx xxxxxxx (-XX), xxxxxxx xxx xxxxxxx XX50, tj. při xxxxxxxxxxx způsobující 50 % xxxxxx buněčné xxxxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx kontrolami.
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xx UVA, xxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx buněk xx XXX by xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxx intenzitě xxxxxxx xx zkoušce xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx, xxxxxx xxx se xxxxx xxxxxx UVA xxxxxx 1 xx 9 X/xx2 x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxx později xxxxxxxx XXX. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx-xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx 5 X/xx2 xxxxx xxx 80 % xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxx. Tato kontrola xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx pasážích xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx XXX při xxxxxxxxxx zkoušce: xxxxxxx xxxxxxx kritéria jakosti, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx x EBSS (Xxxxxx fyziologický roztok) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) xxxx 1 % ethanolem (XxXX)) nebo xxx xxxx vykazují xxx + XXX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 80 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx neozářených xxxxx x tomtéž xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x temnu (-UVA).
Životaschopnost xxxxxxxxx kontroly: absolutní xxxxxxxxxx (X540 NRU) xxxxxx x xxxxxxxx XX negativních kontrol xxxxxxx, zda 1 × 104 xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx zachovalo xxx xxxxx během xxxx xxx zkoušky xxxxxxxx xxxx zdvojnásobení (xxxxxxxx xxxx). Zkouška splňuje xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, jestliže xxxxxxx xxxxxxx A540 XXX neexponovaných xxxxxxx xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxx xxxxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX xxx použit xxxx xxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx (XXX), x je xxxx doporučen. Xxx XXX xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx fototoxicity 3T3 XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx tato xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx: xxx XXX ozářený (+ UVA): EC50 = 0,1 až 0,2 μx/xx, pro XXX xxxxxxxxx (-XXX): XX50 = 7,0 xx 90,0 μx/xx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xx. posun xxxxxxx XX50, xx xxx xxx xxxxxxx 6.
Xxxxxxx XXX xxxxx být xxxxxxx jako souběžné xxxxxxxxx kontroly xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxx případě by xxxx být xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx údajů xxxx xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XX50 x PIF xxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx metody
1.7.1 Xxxxxxxx
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx validační xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx — Xxxx/x 3T3, xxxx 31 — xxx z xxxxx XXXX, nebo x xxxxx ECACC x xx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxx xxxxxxx linie xxxxx xxx xxx stejném xxxxxxxxx postupu použity xx předpokladu, xx xxxx kultivační xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx specifickým xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxx prokázána jejich xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx kontrolovány, xxx xxxxxx kontaminovány xxxxxxxxxxxx, x xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx, jsou-li xxxxxxxx takové xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xx UV vzrůstá x xxxxxx pasáží, xxxx by být xxxxxxx buňky Balb/c 3X3 z xxxxxx x nejnižším xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, nejlépe x xxxxx než xxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx byla xxxxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 na XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx postupem xxxxxxxx xxxxxxx popsaným x xxxx metodice.
1.7.1.2 Xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x během xxxxxxxxxx postupu by xxxx být xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxx Xxxx/x 3X3 se jedná x XXXX (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, 4xX xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxx xxx 37 °X/7, 5 % XX2. Xxxxxxx xxxxxxxx xx, xxx kultivační xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx buněčné linie.
1.7.1.3 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx ze xxxxxxxxxx kmenových xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxx hustotě x xxxxxxx jednou se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx zkoušce xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx kultivačního xxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx nedosáhly konfluence xx xxxxx xxxxxxx, xx. xx xxxxxxxx, xxx xx xx 48 x xx xxxxxxxx stanovována xxxxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx Balb/c 3X3 xxxxxxxxxxx x 96xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx inokulum 1 × 104 xxxxx xx xxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx nasadí stejným xxxxxxxx do xxxx xxxxxxxxxx 96xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx jsou xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx celému xxxxxxx zkoušky xx xxxxxxxx podmínek kromě xxxx, kdy xx xxxxx z xxxxxxxx xxxxxxx (+XXX/XXX) x xxxxx xx udržována x xxxxx (-XXX/XXX).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx použití xxxxxxxxxxxxxxxx systému je xxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx určených xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx žádná xxxxxxxx xxxxx, pro xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx vivo xxxx xx vitro je xxxxxxxx metabolická xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxx xx xxxxxxxx xxx xx vědecky xxxxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx x stálosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, musí se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx světlem.
Zkoušené xxxxxxxx látky by xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx roztoku, xxxx. x Earlově xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXXX) xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s fosfátovým xxxxxx (XXX), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x pH xxxxxxxxxx absorbující xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky x omezenou xxxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx 100xxxxxxx požadované xxxxxxx koncentrace x xxxx by xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx 1:100 xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx x konstantní xxxxxxxxxxx 1 % xxx. ve xxxxx xxxxxxxxx, xx. x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx ve všech xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) a xxxxxxx (EtOH). Xxxxx xxx použita xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (např. xxxxxx), xxx měly by xxx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxx. xxxxxx xx xxxxxxxxx chemickou xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx účinků, xxxxxx xxxxxxxx.
Xx-xx xxxxx, xxxx být xxx xxxxxxxxx rozpouštění xxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xx 37 °C.
1.7.1.6 Xxxxxxx XX xxxxxxx/xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx: xxxxx vhodného xxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xx kritickým xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx x xxxxx XXX x xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx xxxxxx v xxxxx XXX je xxxx relevantní x xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 313 xx x 280 nm 1000krát (11). Xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx světelného xxxxxx by xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx světlo x xxxxxxxx délkách, xxxxx xxxxxxxx chemická xxxxx xxxxxxxxx, x xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxx po xxxxxxxxxxx xxxx) byla xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx látek. Použité xxxxxx xxxxx a xxxxx, včetně emise xxxxx (infračervená xxxxxx), xx dále xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx za optimální xxxxx xxxxxx. V xxxxxxxxx simulátorech se xxxxxxx jak xenonová xxxxxxx, xxx vysokotlaká xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx x xxxx xx xx xxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxx x xx xxxxxxxx, avšak xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx vyzařují xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxx, xxxx by xxx xxxxxx filtrovány, xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx spektrum xxxxxxxxx zbavené UVB xxxxxx (UVA:UVB ˜ 20:1). Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx simulátoru použitého xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xxx publikován x xxxxxxxxxx (3).
Xxxxxxxxxx: intenzita xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) xx musí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx zkouškou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx. UV-metr musí xxx xxx xxxx xxxxx kalibrován. Xxxxxxxxx XX-xxxxx xx xxxx xxx kontrolována x xx xxxxx xxxxxx xx doporučuje xxxxxx xxxxx referenční xxxxxxx xxxxxxxx kalibrovaný XX-xxxx xxxxxxxx typu. X xxxxxxxx případě by xxx xxx v xxxxxxx xxxxxxxx odstupech xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx intenzity xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx, avšak takové xxxxxxxxx xxxxxxxx odbornou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx 5 X/xx2 xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx buňky Xxxx/x 3X3 x dostatečně xxxxx k xxxxxxxx x slabě xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxx 5 X/xx2 xx dobu 50 xxx. xxxx xxx xxxxxxxxx ozáření xxxxxxxxx xx 1,666 MW/cm2. Xxxxxxxx je xxxxxxx xxxx xxxxxxx linie xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxx UVA xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx světelné expozice xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx:
x(xxx) = dávka xxxxxxxxxx xxxxxx (J/cm2) 100 / xxxxxxxxx xxxxxxx (mW/cm2) 60 (1 J =.X xxx)
1.7.2 Zkušební xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx xxxxxxx fototoxické xxxxxxxx látky xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx; při vyšších xxxxxxxxxxxxx roste výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xX xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx koncentrací xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+ XXX) x xxx xxxxxx (-XXX) xx měly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x předchozích xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx musí být xxxxxxx tak, xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na koncentraci xxxxxxxxxx xxxxxxxxx experimentálními xxxxx. Měla xx xxx použita geometrická xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxxxxxx faktorem ředění).
1.7.3 Xxxxxxxx postup [1]
1.7.3.1 Xxxxx xxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx x xxxxxxxxxxx xxxxx x 100 μl xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx 96jamkové xxxxxxxx (slepý xxxxx). Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx dávkuje xx 100 μx buněčné xxxxxxxx o xxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 xxxxx xx xxxxx). Xxx xxxxxx xxxxxxxxx chemickou xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxx xxxxxxxxx cytotoxicity (-XXX) x xxxxx xxx xxxxxxxxx fotocytotoxicity (+XXX).
Xxxxx xx xxxxxxxx 24 x (7,5 % XX2, 37 °X), xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx přichycení x xxxxxxxxxxxxx xxxx.
1.7.3.2 Xxxxx xxx
Xx inkubaci xx kultivační xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xx promyje xxxxxxx 150 μl EBSS/PBS. Xxxxx se 100 μx EBSS/PBS xxxxxxxxxxxx xxxxxxx koncentraci zkoušené xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx rozpouštědlo (negativní xxxxxxxx). Aplikuje se 8 xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické látky. Xxxxx xx zkoušenou xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xx dobu 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °C).
K xxxxxxxxx části zkoušky x xxxxxxxx XXX xx xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 50 min. xxxxxxx přes xxxxx 96xxxxxxx destičky XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx 1,7 XX/xx2 (5 X/xx2. Xxx xxxxxxx xx kondenzaci xxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx pomocí xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx zkoušku xxx xxxxxxx XXX xx ponechají 50 xxx. (xxxx xxxxxxxx XXX) x temnu xxx pokojové xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx se odstraní x xxxxx jamka xx promyje dvakrát 150 μx EBSS/PBS. XXXX/XXX se nahradí xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx přes xxx (18-22 h) (7,5 % XX2, 37 °C).
1.7.3.3 Xxxxx xxx
Xxxxxxxxxxxxx hodnocení
Buňky xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx změny xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zkoušené xxxxxxxx látky. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx experimentální chyby, xxxxx záznamy xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nepoužijí.
Zkouška xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxxxx 150 μx předehřátého EBSS/PBS x promývací xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx 100 μx xxxxx XX x xxxxxxxx xx 3 h xxx 37 °C xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x 7,5 % XX2.
Xx xxxxxxxx se xxxxxx NR xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 150 μl XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx (případně xxx xxxxxxxx odstředit v xxxxxxxx xxxxxx).
Xxxxx xx xxxxxx 150 μx xxxxxxx připraveného roztoku xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx NR.
Destička xx xxxxxx 10 xxx. xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xx NR x xxxxx nevylouží x xxxxxxxxx homogenní xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx NR xxx 540 xx, xxxxxxx xx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx. Údaje xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. ASCII) x počítači pro xxxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx
Xxxxx by xxxx xxxxxxx smysluplnou analýzu xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx získané xxx xxxxxxx XXX/XXX xxxx xxx xxxx. Xx-xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxx, aby xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx křivku. Vzhledem x xxxx, xx xx xxxxxxxx chemická xxxxx xxxxxxxx xxx xx xx mezní xxxxxxxxxxx 100 μg/ml xxxxxx pro experiment x xxxxx (-XXX) xxxxxxxxxxx, xxx mohla xx xxx vysoce xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+XXX), xxxx být xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx koncentrací, xxxxx xxxx být x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx, xx-xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxx-xx x xxxx xxxxxxx experimentu (-XXX x +XXX) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, stačí xxxxxxx zkoušku s xxxxxxx intervaly xxxx xxxxxxxxxxxx dávkami až xx nejvyšší xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledky xxxxxx být dále xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx dostatečně xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. V xxxxxxxx případech xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx jednou nebo xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx rozmezí xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx modelu xx xxxx být pro xxxxxxxx opakovány.
Je-li xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxx dosažení xxxxxxx výsledku xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zkoušky xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx chemické látky. X xxxxxx důvodu xxxx xxx změna xxxxxxxx (xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, použití xxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx faktorem zkoušky. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxx inkubační xxxx xxxx ozářením. Xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx nestálých ve xxxx.
2.2 Zpracování xxxxxxxx
Xx-xx xx možné, stanoví xx koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx 50 % xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (XX50). Xxx xxx xxxxxx xxxxxxx jakékoli xxxxxx xxxxxx nelineární regrese (xxxxxxx Xxxxxxxx funkcí xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci xxxx xxxxxxxx jiných xxxxx xxxxxx proložení (14). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX50 pro další xxxxxxx xx měla xxx vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx EC50 xxx popřípadě xxxxxx xxxxxx grafického proložení. X takovém případě xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxx x: xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx x: xxxxxxxxxxxxxxxxx), neboť x xxxxx xxxxxxxxx bude xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx téměř xxxxxxxx.
2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx modely)
2.3.1 Předpovědní xxxxx — xxxxx 1: fotoiritační xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxx jsou v xxxx xxxxxxxxx jak xxx xxxxxxx (+XXX), xxx xxx xxxxxxx (-XXX) získány xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx faktor (PIF) xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
(x) XXX = (XX50 (-UV)) / (XX50 (+XX))
Xxxxxxx PIF &xx; 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx XXX ≥ 5 předpovídá xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx látka xxxxxxxxxxx pouze xxx +XXX x xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx -XXX, nelze xxxxxxx XXX xxxxxxxxx, xxxxxxx xxx x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxxx případech lze xxxxxxxxx xxxxxxx "&xx; XXX", xxxxxxxx xx xxxxxxx -UV xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx koncentrace (Cmax), x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx "&xx; PIF";
(b) &xx; XXX = (Xxxx (-UV)) / (XX50 (+XX))
Xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx "&xx; PIF", xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx &xx; 1.
Xxxxxxxx nelze x xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxxx látka xxxxxxxxxx xx do nejvyšší xxxxxxxx xxxxxxxxxxx žádnou xxxxxxxxxxxx, vypočítat ani xxxxxxx XX50 (-XX) xxx xxxxxxx XX50 (+ XX), svědčí xx o xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx případech xx xxx charakterizaci xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx hodnota "XXX = *1";
(X) &xx; PIF = *1 = (Xxxx (-XX)) / (Cmax (+XX))
Xxx xx xxxxxx xxxxx hodnotu "XXX = *1", xx xxxx hodnota xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
X xxxxxxxxx b) x x) by měly xxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx 2: střední xxxxxxxx xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx pro předpovídání xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX (15) x byl xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx studii xxxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxx látek, které xx chovají jako XX xxxxxx (13). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx model XXX x xxxxxxxxx, xxx xxxxx získat xxxxxxx XX50. Tento xxxxx xxxxxxx střední xxxxxxxx účinek (xxxx xxxxx effect) (XXX), xxxxxxxx, která je xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx počítačový software, xxxxx je volně x xxxxxxxxx.
2.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx (XXX ≥ 5 xxxx XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, xx látka xx xxxxxxxxxxx potenciál. Xxxxxxxx bylo výsledku xxxxxxxx při xxxxxxxxxxxxx xxx 10 μg/ml, xx xxxx pravděpodobné, xx xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxx. Xx-xx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx koncentraci 100 μx/xx, mohou xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx další xxxxx. Xx xx xxxxx xxxxx údajů x penetraci, xxxxxxxx x xxxxx akumulaci xxxxxxxx xxxxx x xxxx nebo zkoušení xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zkouškou, např. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx vitro (PIF &xx; 5 xxxx XXX < 0,1) xxxxxxx, že xxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxx za xxxxxxxxx xxxxxxxx fototoxická. V xxxxxxxxx, kdy xxxx xxxxx zkoušet xxxxxxxxx xxxxx až xx xxxxxxxx koncentraci 100 μx/xx, xxxxxxxxx negativní xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx vivo xxx xxxxxxxx za nepravděpodobnou. X xxxxxxxxx, kdy xxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx obdrženy xxxxxxx xxxxxxxxxx toxické xxxxxx xx koncentraci (EC50 +XX a XX50 -XX), xx xxxxxxxxxxxx xxxxx stejná. Není-li xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (+XX x -XX) x jsou-li xxxxxxxxxxx xxxxxxx rozpustností xx vodě xx xxxxxxx xxxxx xxx 100 μg/ml, xxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x mělo xx xxx zvážena xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. za xxxxxxx modelu xxxxxx xxxx in xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxx).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx obsahovat tyto xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXX, xx-xx xxxxx,
- fyzikální xxxxxxxxxx x čistota,
- xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx důležité xxx xxxxxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxx x fotostabilita, xxxx-xx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- zdůvodnění xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx (EBSS nebo XXX).
Xxxxx:
- xxx a xxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- číslo xxxxxxx xxxxxx, je-li xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx na XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — inkubace xxxx aplikací x xx xx:
- xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx podmínky (xxxxxxxxxxx XX2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- délka xxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxx inkubací x xx xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx b) — xxxxxxxx chemické xxxxx:
- xxxxxxxxxx výběru xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxxx jak při xxxxxxx XX/XXX, xxx xxx xxx,
- x xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx,
- xxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx média (pufrovaný xxxxxxxxxxxx roztok),
- xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky.
Zkušební xxxxxxxx x) — xxxxxxx:
- zdůvodnění xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx světla,
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxxxxxxx propustnosti/absorpce xxxxxxxxx xxxxxx (použitých xxxxxx),
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx x jeho xxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxx zdroje xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxx XXX v xxxx xxxxxxxxxxx, vyjádřená x xX/xx2,
- délka xxxxxxxx XX/XXX světlu,
- xxxxx XXX xxxxxx (intenzita × xxx), vyjádřena x X/xx2,
- xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x teplota xxxxxxxxx kultur udržovaných x temnu.
Zkušební xxxxxxxx x) — xxxxxxx XXX:
- složení xxxxx XX,
- xxxx xxxxxxxx XX,
- xxxxxxxxx podmínky (xxxxxxxxxxx CO2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxxxxx xxxxxxxx XX (extrakční xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx),
- xxxxxx xxxxx použitá xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx odečet xxxxxxxxxx XX,
- xxxxx (referenční) xxxxxx xxxxx, je-li xxxxxxx,
- složení xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xx-xx xxxxxx.
Xxxxxxxx:
- životaschopnost xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx střední životaschopnosti xxxxxxx,
- xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xxxxxxx xxx paralelních xxxxxxxxxxxxx +XXX x -UVA,
- xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx: xx-xx to xxxxx, xxxxxxx hodnoty XX50 (+XXX) x EC50 (-XXX),
- xxxxxxxx obou xxxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx xxxxxxxxxxx získaných x xxxxxxxx UVA/VIS x xxx něho, x xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx faktoru (xxxxx-xxxxxxxxxxx xxxxxx ) (XXX), xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx photo effect) (XXX),
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx x) — xxxxxxxx negativní xxxxxxxx:
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (absorbance xxxxxxxx XX) xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx buněk,
- xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx,
- kritéria xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrola:
- xxxxxxx EC50 (+UVA), XX50 (-XXX) x XXX-xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxx: hodnoty EC50 (+XXX), XX50 (-UVA) x XXX, xxxxxxx xxxxxxx a směrodatná xxxxxxxx.
Xxxxxx výsledků.
Závěry.
4. XXXXXXXXXX
(1) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xöxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. G., Xxxxxxx, X., Klecak, X., L'Eplattenier, H., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Maurer, X., Moldenhauer, X., Xxxxx, X., Xxxx, X., Xxxxxxxxxxx, U., Xxxxxxxx, J., Xx Xxxxx, O., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. (1994), EEC/COLIPA xxxxxxx xx in xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x Xxxx/x 3T3 xxxx xxxxxxxxxxxxx assay, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 8, 793-796.
(2) Xxxx (1998), Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx 3X3 XXX PT test (xx xx vitro xxxx for xxxxxxxxxxxxx), Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Joint Xxxxxxxx Xxxxxx: ECVAM xxx DGXI/E/2, 3 Xxxxxxxx 1997, XXXX 26, 7-8.
(3) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X., Pape, X. X. W., Xxxxxxxxxx, G., De Xxxxx, O., Xxxxxüxxxx, X. G., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, P., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. X., Csato, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, W., Xxxxxxx, X. (1998), XX/XXXXXX "Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx xxxxx, results xx xxxxx XX (xxxxx xxxxx), part 1: xxx 3T3 XXX xxxxxxxxxxxxx xxxx, Xxxxxxxxxx in Vitro 12, 305-327.
(4) XXXX Xxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Xxxxx Xxxxxx xx xxx OECD Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xx Validation xxx Xxxxxxxxxx Criteria xx Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxx, OECD Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx, Paris, 1996.
(5) Xxxxxx, X. X. (1993), A scheme xxx xx xxxxx xxxxxxxxx of xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx potential, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 7, 95-102.
(6) Xxxxxxxxxx, X., Prino, X. (1972), Xxxx xx xxx photodynamic xxxxxxxxxx, Xxxxxxxx xxxxxxxx in xxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx. 3 Xxxx 1, Xxxxx Holland Publishing Xx, Amsterdam, XI–XXXV.
(7) Xxxxxxxxx, H., Xxxxxx, X. X., Hölzle, X., Xxxxxxx, B. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxx, X. X. X., Sapora, O., Xxxxxxxxx, X. (1994), Xx vitro xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX workshop 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, J. X. (1989), Xxxxxxxxxxxxxxxxxx. X: Xxx science of xxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxx, xx.), Xxxxxx Xxxxx, Xxx Xxxx, 2. vyd., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X. (1985), Xxxxxxxx determination xx xxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, X. A., Xxxxxx, X. G., Xxxxxxxxxx A. (1996). X: Animal xxxxxx xxx phototoxicity xxxxxxx, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxxxxx, X. I. Xxxxxxx xxx.), Xxxxxx &xxx; Xxxxxxx, Xxxxxxxxxx XX, 5. xxx., 515-530.
(11) Tyrrell, X. X., Pidoux X. (1987), Xxxxxx xxxxxxx xxx human skin xxxxx: xxxxxxxxx xx xxx relative xxxxxxxxxxxx xx the middle xxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxx violet xxxxxxx xx xxxxxxxx on xxxxxxxxx keratinocytes, Cancer Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Standard Operating Xxxxxxxxx: Balb/c 3T3 XXX Phototoxicity Test, xxxxxxxx 23. prosince 1997 X. Xxxxxxxxx, xxxxxxxxx 6. března 1998 xxxxx Management Xxxx xx the XX/XXXXXX project "In Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, J., Xxxx, X. X. W., Xx Silva, X., Xxxxxüxxxx, H. X., Xxxxxxxxx, F., Xxxxxxx, X., Lovell, W. X., Xxxxxxxxxxxxx (1998), X Xxxxx xx xxx Phototoxic Potential xx XX Xxxxxx Xxxxxxxxx from Xxxxx XXX xx xxx XX Xxxxxxxxx 76/768/XXX xx the 3X3 XXX Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, ATLA 26, 679-708.
(14) Xxxxxüxxxx, X. X., Quedenau, X. (1995), Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx of cellular xxxxxxxxx xx external xxxxxxx, Journal of Xxxxxxxxxx Xxxxxxx, 3, 127-138.
(15) Xxxxxüxxxx, X. X. (1997), X xxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxxx phototoxicity xxxxxxx xxxx xxxxx xx dose-response xxxxxx xxx xxx xxx xxx predicting xxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx chemicals, ATLA 25, 445-462."
"Dodatek
[1] Xxxxx xxxxxxxxxxx lze xxxxxx x xxxxxxxxxx (12).