Směrnice Xxxxxx 2000/33/ES
ze xxx 25. xxxxx 2000,
xxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pokroku xxxxxxxx Xxxx 67/548/EHS x xxxxxxxxxx právních x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [1]
(Xxxx s xxxxxxxx pro XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx na směrnici Xxxx 67/548/EHS ze xxx 27. června 1967 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx týkajících xx xxxxxxxxxxx, balení x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Evropského parlamentu x Xxxx 1999/33/ES [3], x xxxxxxx xx článek 28 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:
(1) X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX xx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx vlastností, toxicity x xxxxxxxxxxx xxxxx x přípravků. Xx xxxxxxxx přizpůsobit tuto xxxxxxx technickému xxxxxxx.
(2) Xxxxx čl. 7 xxxx. 2 xxxxxxxx Xxxx 86/609/EHS xx xxx 24. xxxxxxxxx 1986 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x správních xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx se ochrany xxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x jiné xxxxxxx účely [4] xxxxx xxx xxxxx, xxx němž má xxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx, je-li xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx přílohy X xxxxxxxx 67/548/EHS xxxxxx xxxxxxxxxxxx zkušební xxxxxx, při xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx zvířata, x cílem xxxxxxxxxxx xx xxx zkoušení xxxxxxxxxx látek xxxxx xx. 3 xxxx. 1 směrnice 67/548/EHS.
(4) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx v xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Výboru xxx xxxxxxxxxxxx technickému xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxx xxxxxx X a XX xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx části X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX.
Článek 2
1. Členské xxxxx uvedou x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx dosažení xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 2001. Xxxxxxxxxx x nich uvědomí Xxxxxx.
Xxxx předpisy přijaté xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx odkaz xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxx xxxxxxx vyhlášení. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx znění hlavních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx směrnice, x xxxxxxxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ustanoveními.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství.
Xxxxxx 4
Tato xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu xxx 25. dubna 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxöx
xxxxxx Xxxxxx
[1] Přijato před xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx.
[2] Xx. věst. 196, 16.8.1967, s. 1.
[3] Xx. věst. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Xx. xxxx. X 358, 18.12.1986, x. 1.
XXXXXXX X
"X.40 LEPTAVÉ XXXXXX NA XXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxx zkoušky xx vitro na xxxxxxx xxxxxx na xxxx na principu xxxxxxxxx transkutánního xxxxxxxxxxxx xxxxxx kůže xxxxxxx (XXX) a xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (XXXXX, Xxxxxxxx výzkumné xxxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx) (1, 2, 3) xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx. Validační studie XXXXX xxxxxxxxx, xx xxxxx zkouškami xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kůži. Protokol x zkoušce xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxx umožnil xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, R 35 x ostatní xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kůže, X 34) (2). Xxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxx je xxxxxx; volba zkoušky, xxxxx xx xxx xxxxxxx, závisí na xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxx také Xxxxxx xxxx, část X.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kůže: xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
1.3 Referenční xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx viz xxxx 1.5.3.4 a 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx zkušební xxxxxx — xxxxxxx TER xx kůži potkana
Zkoušený xxxxxxxx je až xx 24 h xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx způsobit xxxxxx xxxxxxxx integrity x xxxxxxxxx funkce xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxx), xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx xxxxxx (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx TER xxx prahovou xxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx aktivní xxxxx a neutrální xxxxxxxxx látky (xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx (6)) xxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx tyto xxxxx chemických xxxxx (2, 7).
1.5 Popis xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx XXX na xxxx potkana
1.5.1 Xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx musí být xxxxxxxxxx x mladých (20 — 23 xxxxxxx) xxxxxxx (Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx kmen). Xxxxxxx a xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx se poté xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx do xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx xxxx. streptomycin, penicilin, xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zastavujících xxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx třetí x xxxxxx xxx xx xxxxxx omytí xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx se xx 3 xxx (x xxxxxxxx xxxx xxxxx být použita xxxxxxx xxxxxx xxx 31 dnů).
1.5.2 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx
Xxxxxxx xx xxxxxxx usmrtí. Z xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx opatrně xxxxxxxx xxxxxxx xxxx a xxxxxxxxxx tuk xx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Kůže xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx (PTFE) xxxxxxxx tak, xxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx x trubičkou. Xxxx xxxxx xxxxxxxx xx těsně xxxxxxxx xxxxxxx X-xxxxxxx, xxx xxxx xxxx upevněna, x přebytek tkáně xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx x X-xxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxxx X-xxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxxx xx poté xxxxxxx pokryje vrstvou xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pružinové xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 mM) (xxxxxxx 2).
1.5.3 Zkušební xxxxxx
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (150 μx) xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx uvnitř xxxxxxxx (obr. 2). Xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx množství xxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx xx povrch xxxxx xxxxx přidá xxxxxxxxxxxx voda (150 μx) a xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx látkami a xxxx xx mělo xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxx xxxxx toho může xxx dosaženo xxxxxxxx xx na 30 °X, aby xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx materiál xxxx xx prášek.
Ke zkoušce xxxxx xxxxx xx xxxxxxx tři xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx aplikuje po xxxx 24 h (xxx xxxx xxx 1.5.3.4). Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx odstraní xxxxxxx xxxxxxx vody x xxxxxxx xxxxxxx 30 °C. Odstranění xxxxxxxxxx xxxxx, které x trubičce ztuhly, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx 30 °C.
1.5.3.2 Xxxxxx TER
TER xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxx (xxxx. XXX 401 xxxx 6401 xxxx ekvivalentní). Xxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx dostatečného objemu 70 % xxxxxxxx xxx, xxx byla xxxxxxxxx zakryta. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx odstraní xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx zvlhčí xxxxxxxx 3 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX). Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx odporu v xΩ/xxxxxx xxxx (obrázek 2). Xxxxxxx elektrod x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pod xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxx vnitřní (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx odporu opřena x xxxxx xxxxx xxxxxxxxx trubičky, aby xxxx xxxxxxxxx, že xx délka části xxxxxxxxx ponořené x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx komory xxx, xxx xxxxxxxxx xx xxx komory. Xxxxxxxxxx xxxx spodkem xxxxxxxxx xxxxxx x xxxx teflonové xxxxxxxx xx udržuje xxxxxxxxxx (xxxxxxx 1), xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx odporu.
Je xxxxx xx xxxxxxxx, xx xx-xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 20 xΩ, může xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx straně terčíku xxxx. X odstranění xxxx xxxxxx xx xxx pokusit xxxx. xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx zakryje xxxxxx v xxxxxxxx x 10 x xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx x měření xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx přijatelného rozpětí xxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx přijatelná rozpětí xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx (kΩ) |
|
Pozitivní |
10M xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
10–25 |
1.5.3.3 Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx organické xxxxx
Xxxx-xx xxxxxxx XXX xxx xxxxxxxxx aktivní látky xxxx organické xxxxx xxxxxxx zkoušené xxxxx xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ, lze xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxx průniku barviva. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx barviva xxxxxxxxxxxxxx X
Xx xxxxxxxxx aplikaci xxxxxxxx xxxxx xx xx epidermální xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kůže xxxxxxxx xx 2 x 150 μl 10 % roztoku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X x destilované vodě. Xxxxxxx kůže xx xxxx xxxxxxxxx 10 x xxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx odstranilo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Všechny xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxxxx (např. 20 xx skleněné xxxxxxxx xxx scintilační spektrometrii) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx (8 xx). Xxxxxxxx xx lehce 5 xxx. protřepávají, aby xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxx zopakuje, x xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx do lahviček xxxxxxxxxxxx 5 xx 30 % roztoku (x/X) xxxxxxx-xxxxxxx-xxxxxxx (SDS) x xxxxxxxxxxx vodě x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx 60 °X. Xx xxxxxxxx xx všechny xxxxxxx xxxx vyjmou x zlikvidují x xxxxx roztok xx xxxxxxxx 8 min. xxx 21 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx ˜ 175). 1 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx 4 xx 30 % (x/X) roztoku XXX x xxxxxxxxxxx xxxx. Absorbance (X) xx měří xxx xxxxxxxxx 565 xx.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx sulforhodaminu B xx xxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx X (xxxxxxx xxxxxxxxx koeficient sulforhodaminu X při 565 xx = 8,7 × 104; xxxxxxxxxx xxxxxxxx = 580). Xxxxx barviva xxxxxxxxxxxxxx X se xxxxxxx xxx xxxxx terčík xxxx a xxxx xx xxxxxxx jeho xxxxxxx hodnota. Xxxxxxx xxxxxxx výsledků xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxx x přístroje xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx přijatelné xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx barviva:
|
Kontrola |
Látka |
Rozmezí xxxxxx xxxxxxx (μx/xxxxxx xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X kyselina xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
40-100 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx voda |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx informace
Látky xxx xxxxxx aplikovat xx xxxxxxx kůže xx xxxxxx dobu (např. 2 xxxxxx), aby xx xxxxxxxxxxxxxx ty xxxxxxxxx, které xxxx xxxxx leptavé. Xxxxxxxxx xxxxxx však xxxxxxx, xx stanovení TER xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxx xx xxxx 2 xxxxx (2), třebaže xxxx xxxxxxxxx umožnilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx 24xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx a rozměry xxxxxxxxxx zařízení x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx postup xxxxx mít vliv xx xxxxxxx hodnoty XXX. Xxxx 5 Ω xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx účinků xxx xxxxxxx x údajů xxxxxxxxx se zařízením x postupem, xxx xxxx popsány x xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x určit xxxxxxxx hodnotu xxxxxx xxxxxxxxx řady xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vybraných x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (3).
1.6 Podstata zkušební xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx až po xxxx 4 xxxxx xx trojrozměrný xxxxx xxxxxx kůže sestávající x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx rohovité xxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx schopností způsobit xxx xxxxxxxxxxxxx expoziční xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxx zkoušky xxxxxxx XXX) pod xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Podstata xxxxxxx xx založena xx hypotéze, že xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx rohovitou xxxxxxx (xxxxxx nebo xxxxx) x xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — stanovení xxxxxx modelu xxxxxx xxxx
1.7.1 Xxxxxx lidské xxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx zdrojů, musí xxxx splňovat určitá xxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxx funkční xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx dostatečná. To xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Musí xx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx živých xxxxx x xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x negativní kontrolní xxxxx. xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. redukcí XXX, xx. měřením xxxxxxx absorbance A) xx xxxxxxxx negativní xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (ve xxxxxxxx x životaschopností xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx) xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx mezích. Nejdůležitější xxxxxx xx, aby xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx (2).
1.7.2 Zkušební postup
1.7.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálu
U xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx pokrylo povrch xxxx (xxxxxxxxx 25 μx/xx2). X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxx dostatečné množství xxxxxxxx látky, xxx xxxxxxx xxxx, a xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx ovlhčena, xxx xxx zajištěn xxxxx xxxx s xxxx; xxxxx xxxxx xx měly xxx xxxxx xxxxxxx před xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx široké xxxxxxxx xxxxxxxxxx látek (2). Xx xxxxxxxx expoziční xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx fyziologickým xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk
K xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx validovaná kvantitativní xxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx redukce XXX, pro xxx xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx prokázalo, xx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx xxxx xx xxxxxx xx roztoku XXX x xxxxxxxxxxx 0,3 mg/ml xxx xxxxxxx 20-28 °X xx xxxx 3 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxx (rozpouštědlem) a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx absorbance X xxx vlnové xxxxx 545 xx 595 xx.
1.7.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx model xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx atd. xxxxx xxx xxxxx xxxx xx výsledky životaschopnosti xxxxx. Doporučuje se, xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx řady xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vybraných x xxxxxxxxxx látek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx XXXXX (3). Xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx metoda x xxxxxxx s mezinárodními xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx reprodukovatelnost xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx látek. Xxxxxx xxxx splňovat xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx vědeckou validitu (2) a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x předcházející xxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Xxxxxxx XXX xx kůži xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx (xΩ) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx x xxx všechny xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx experimentech, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.
2.1.2 Zkouška x xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx A x xxxxxxxxx hodnoty xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v procentech xxx xxxxxxxx materiál, xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx opakovaných xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx.
2.2 Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.2.1 Xxxxxxx XXX xx xxxx potkana
Je-li xxxxxxx XXX dosažená pro xxxxxxxxx látku větší xxx 5 xΩ, xxxx xxxxx xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxx xxxx rovna 5 kΩ x xxxxx o xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx organickou látku, xx xxxxx xxxxxx.
X xxxxxxxxx aktivních xxxxx xxxx neutrálních organických xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx barviva. Xx-xx xxxxxxx obsah xxxxxxx x terčíku xxxx xxxxx xxxx xxxxx střednímu obsahu xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx souběžně xxx xxxxxxx 36 % XXx jakožto xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx zkoušené látky xxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxx xx xxxx xxxxxx. Je-li xxxxxxx xxxxx barviva x xxxxxxx xxxx menší xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx získaný xxxxxxxx xxx xxxxxxx 36 % HCl, je xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x látka tedy xxxx xxxxxx.
2.2.2 Xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx A xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx; xxxxxxx xxxxxxxxxx A dosažené xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x výpočtu relativní xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx životaschopnosti xxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx žíravé (nebo xxxxxx xx rozlišují xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx), xxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx model xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, že xx xxxxxx (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx musí xxxxxxxxx xxxxxxx tyto xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx látka:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx, fyzikální xxxxxxxxxx x případně xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxx referenční xxxxx, pokud xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,
- popis x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx:
- hodnoty xxxxxx (xxxxxxx XXX) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx) pro xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx,
- xxxxx jakýchkoli xxxxxx xxxxxxxxxxxx účinků.
Rozbor xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) XXXXX (1998), ECVAM News &xxx; Xxxxx, XXXX 26, 275-280.
(2) Xxxxxx, X. X., Archer, X. X. X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. D., Xxxx, X. K., Esdaile, X. X., Xxxxxxxxxx, X-X., Xxxxxxx, M. (1998), Xxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx validation xxxxx xx xx vitro xxxxx xxx skin xxxxxxxxxxx. 2. Xxxxxxx xxx evaluation xx xxx Xxxxxxxxxx Xxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 12, 483-524.
(3) Xxxxxxx, X. X., Brantom, X. G., Fentem, X. H., Gerner, X., Walker, X. X., Xxxxx, X. X. (1998), The XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx on xx xxxxx tests xxx xxxx corrosivity. 1. Xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx xx xxx xxxx xxxxxxxxx, Toxicology in xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, G. X. X., Xxxxxxxxx, M. X., Xxxxxx, X. (1986), Xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx — xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Food Xxxx. Toxicol. 24, 507-512.
(5) Xxxxxx, X. X., Xxxx, X. X., Xxxxxxx, X., XxXxxx, X. X., Xxxxxxxxx, D. A., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. (1992), Xxx xxxx xxxxxxxxxxx test in xxxxx: xxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxxxxx trial, Xxxxxxxxxx in xxxxx 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. X., Xxxxxx, X. H., Balls, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, R. X., Xxxx, X. X., Xxxxxxx, X. X., Liebsch, X. (1998), Xx evaluation xx xxx proposed XXXX testing xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxxx, M., Barratt, X. X., Xxxxxx, X. D., Esdaile, X. X., Xxxxxxx, X. X., Gordon, X. X., Xxxxxxxxxx, X., Xxxxx, X. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxx, P., Xxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxx, J. F., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X. 1995), X xxxxxxxxxxxxx study on xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx testing. Xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX xxxxxxxx 6, XXXX 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Xxxxxxx 2"
&xxxx;
XXXXXXX XX
"X.41 XXXXXXXXXXXX — ZKOUŠKA XXXXXXXXXXXX 3X3 XXX XX XXXXX
1. METODA
1.1 Xxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxx xxxxxx vyvolaná xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a následné xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx ozářením xxxx xx systémovém xxxxxx chemické látky.
Informace xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx vitro xxxxxx x xxxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx. existence xxxx xxxxxxxxxxx možného xxxxxxxxx, xxxxx xxxx plynout xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx s xxxxxxxx XX xxxxxx xxxx viditelnému xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx x hlediska xxxxxxxxxxx je stanovení xxxxxxxxxxxx vyvolané xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, xxx xxxxxxxx identifikovat xxxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxxxx podání x xx nanesení na xxxx, x xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx nanesení xx xxxxxxx jako xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx EU/COLIPA x xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) s cílem xxxxxxxx xxxxxxx alternativu xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx zkouškám xx xxxx. V xxxx 1996 doporučila xxxxxxxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx vitro pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4).
Xxxxxxxx xx zkoušek xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx byly xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx vivo u xxxxxx x u xxxxxxx x xxxxxxx xx ukázala xxx xxxxxxxxx těchto xxxxxx xxxx vynikající. Xxxxxxx xxxx určena xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxx z kombinovaného xxxxxxxx chemické xxxxx x xxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, které xxxxxxxx xxxx specifické xxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx není vyvinuta x tomu, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx uvedena x xxxxxxx.
1.2 Definice
Intenzita ozáření: xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxx xx W/m2 xxxx xX/xx2.
Xxxxx světelného xxxxxx: xxxxxxxx (intenzita × xxx) xxxxxxxxxxxxxx (XX) xxxx xxxxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx xx povrch, xxxxxxxxx x xxxxxxx (X × s) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxx. X/x2 nebo X/xx2.
Xxxxxx xxxxx UV xxxxxx: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xx x'Xxxxxxxxx): XXX (315400 nm), XXX (280315 xx) x XXX (100280 xx). Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx označení: xxxx xxxxxxx xxxx XXX a XXX xx často používána xxxxxxx 320 xx x pásmo XXX xxxx být xxxxxxxxx xx XX-X1 x XX-X2 x xxxxxxx xxxxx 340 xx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxx, kterým xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx buněčné xxxxxxxx (xxxx. xxxxxx vitálního xxxxxxx xxxxxxxxx červeně xx xxxxxxxxx lysosomů) x xxxxx x xxxxxxxxxx xx měřeném xxxx x xx xxxxxxxx uspořádání zkoušky xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx životaschopnost buněk: xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx x negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxx postupem xxxxxxx (x XX, xxxx xxx XX), ale xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx předpověď xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxx xxxxxx výsledků xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx xx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx použít xxxxxx XXX x veličinu XXX.
XXX (xxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxxxxx xxxxxx): xxxxxx získaný srovnáním xxxx stejně účinných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XX50) xxxxxxxx xxxxx, a xx xxx necytotoxickém xxxxxxx XXX/XXX světlem (+ UV) x xxx xxxx (-XX).
XXX (xxxx xxxxx effect — xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx): xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci získaných xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/xxx světlem (+ XX) a xxx xxxx (-XX).
Xxxxxxxxxxxx: akutní xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx určitým xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx ozářením xxxx xx systémovém xxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxxxx: xxxxx úroveň xxxxx "xxxxxxxxxxxx", xxxxx xx xxxxxxx x popisu xxxxx xxxx fototoxických xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx kůži xx expozici xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxxx). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx x nespecifickému xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx).
Xxxxxxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx nedochází xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx dobu xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxx xxx, xxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx po expozici xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XX/XXX xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx látce.
Fotokarcinogenita: xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xx používá x xxxxxxx, xxx xx tvorba xxxxxx xxxxxxxxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx chemickou xxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx látky
Vedle pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxx by xxx xxx souběžně xxxxxxx xxx každé xxxxxxx, xx xxx xxxx xxxxxxxxx zkoušku xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xxxxxxxxxx použít jako xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx z xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx srovnáních předložené xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Xxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx zaznamenány x mnoha xxxx xxxxxxxxxx látek (5, 6, 7, 8). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx je schopnost xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x oblasti xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx prvního xxxxxx xxxxxxxxxx (Grotthaus-Draperův xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx (např. xxxxx Xxxxxxxx XXXX 101). Xx-xx molární xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 x.xxx-1.xx-1, xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x nemusí xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx biologickou xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek).
1.5 Xxxxxxxx zkušební metody
Byly xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxx k xxxxxxxxxxx xxxxxx (7). Všechny xxxxx k xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx srovnání xxxxxxxxxxxx chemické xxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx dávce XXX/XXX xxxxxx x xxx xxxx expozice. Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx zkoušce vyjádřena xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (9) 24 xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx Balb/c 3X3 xx 24 x kultivují, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx 96xxxxxxx destičky na xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx 1 h xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek. Poté xx xxxxx ze xxxx destiček exponována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx UVA/VIS xxxxxx 5 X/xx2 XXX (+ UV xxxxxxxxxx), zatímco xxxxx xxxxxxxx xx udržuje x xxxxx (-XX xxxxxxxxxx). X obou xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxx xxxxxx nahradí xxxxxxxxxxx xxxxxx x xx dalších 24 x inkubace je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 3xxxxxxxxx xxxxxxx neutrální xxxxxxx (XXX). Xxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnost vyjádřená x procentech vzhledem x neexponované negativní xxxxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxx z xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx závislé xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx (+ UV) x xxx ozáření (-UV), xxxxxxx xxx hodnotě XX50, tj. xxx xxxxxxxxxxx způsobující 50 % xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx kontrolami.
1.6 Xxxxxxxx jakosti
Citlivost buněk xx XXX, xxxxxxxxx xxxxx: citlivost xxxxx xx XXX xx xxxx xxx pravidelně xxxxxxxxxxxx. Buňky xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx zkoušce xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx, xxxxxx xxx se xxxxx xxxxxx XXX xxxxxx 1 xx 9 X/xx2 a buněčná xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jakosti, xxxx-xx jejich životaschopnost xx ozáření 5 X/xx2 xxxxx než 80 % xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxx vždy xx xxxxxx pasážích buněk.
Citlivost xxxxx xxxxxxxxx kontroly xx UVA při xxxxxxxxxx zkoušce: xxxxxxx xxxxxxx kritéria xxxxxxx, xxxxxxxx negativní xxxxxxxx (xxxxx v XXXX (Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx 1 % xxxxxxxxx (XxXX)) xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxx + UVA xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx alespoň 80 % vzhledem x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x tomtéž xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx (-XXX).
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (A540 NRU) xxxxxx v xxxxxxxx XX negativních xxxxxxx xxxxxxx, xxx 1 × 104 buněk xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxx xxxxx dvou xxx zkoušky xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X540 XXX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx ≥ 0,2.
Pozitivní xxxxxxxx: při xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in vitro xxxx xxx souběžně xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Při xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx (XXX), a xx xxxx doporučen. Pro XXX xxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx postupu xxx xxxxxxx fototoxicity 3T3 XXX in xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxx XXX xxxxxxx (+ XXX): EC50 = 0,1 až 0,2 μx/xx, pro XXX xxxxxxxxx (-UVA): XX50 = 7,0 xx 90,0 μx/xx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xx. posun hodnoty XX50, xx xxx xxx alespoň 6.
Xxxxxxx XXX mohou být xxxxxxx xxxx souběžné xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx typu nebo xxxxxxxxxxxx hodnocené xxxxxxxx xxxxxxxx látky. V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx být na xxxxxxx xxxxxxxxxxx údajů xxxx kritéria přijatelnosti xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XX50 a XXX xxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx metody
1.7.1 Příprava
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx — Balb/c 3X3, xxxx 31 — xxx x banky XXXX, xxxx z xxxxx ECACC x xx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx buňky xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxx při xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx specifickým xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxx prokázána xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx by xxxx xxx pravidelně xxxxxxxxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, x xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xx UV xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 z xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx než xxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx buněk Balb/c 3X3 xx XXX xxxxxxxxxx kontrolována xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx popsaným x této metodice.
1.7.1.2 Xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxx rutinní xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx postupu by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx kultivační média x xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxx Balb/c 3X3 xx xxxxx x XXXX (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx telecím xxxxx, 4xX glutaminem, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxx xxx 37 °X/7, 5 % XX2. Xxxxxxx důležité xx, xxx kultivační xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxx cyklus xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx použité xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx.
1.7.1.3 Xxxxxxxx kultur
Buňky xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xx nasadí xx xxxxxxxxxxxx xxxxx ve xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx zkoušce xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx buňky xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx hustotě, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx konce xxxxxxx, xx. xx xxxxxxxx, xxx xx xx 48 x od xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxx buňky Xxxx/x 3X3 xxxxxxxxxxx x 96xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 × 104 xxxxx xx xxxxx.
Xxx každou xxxxxxxxx látku xx xxxxx nasadí xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx 96xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx celému xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxxx podmínek xxxxx xxxx, kdy xx xxxxx x destiček xxxxxxx (+XXX/XXX) x xxxxx je xxxxxxxxx x temnu (-XXX/XXX).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx aktivace
Zatímco použití xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx požadavkem xxx xxxxx xxxxxxxxx in xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx potenciálu, xxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx žádná chemická xxxxx, pro xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx vivo nebo xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxx za xxxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx aktivace xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx chemická xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx chemické látky xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx údaje x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Může-li xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx světlem.
Zkoušené xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx rozpuštěny xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx. x Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztoku (EBSS) xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx (PBS), xxxxx xxxxx obsahovat proteinové xxxxxx a xX xxxxxxxxxx absorbující xxxxxx, xxx nerušily při xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx chemické látky x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx xxx rozpuštěny xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx 100xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx koncentrace x xxxx by xxxx xxx zředěny v xxxxxx 1:100 xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Použije-li xx xxxxxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 % xxx. xx xxxxx xxxxxxxxx, xx. v xxxxxxxxx kontrole x xxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) a xxxxxxx (XxXX). Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx méně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx. aceton), xxx xxxx by xxx pečlivě posouzeny xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx účinků, xxxxxx xxxxxxxx.
Xx-xx xxxxx, xxxx být xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x/xxxx ultrazvuk x/xxxx zahřátí na 37 °C.
1.7.1.6 Xxxxxxx XX světlem/příprava
Zdroj světla: xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx je kritickým xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx x pásmu XXX x xx xxxxxxxxxx pásmu je xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx xxxxxx x xxxxx XXX xx xxxx relevantní x xx xxxxx vysoce xxxxxxxxxxx, přičemž xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 313 xx x 280 xx 1000xxxx (11). Xxxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxx světelného xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx důležitý požadavek, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látka xxxxxxxxx, x xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxx xx přijatelnou xxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx známých xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxx délky x xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxx oblast), xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx poškozovat xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx slunečního světla xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx optimální xxxxx světla. X xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jak xxxxxxxx xxxxxxx, tak xxxxxxxxxxx xxxxxxx halogenová xxxxxxx. Xxxxx x xxxx xx xx xxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxx a xx xxxxxxxx, xxxxx její xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx není xxxxxxxx. Xxxxxxxx všechny solární xxxxxxxxxx xxxxxxxx významné xxxxxxxx UVB záření, xxxx xx být xxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx vysoce cytotoxické xxxxxx délky UVB xxxxxxxxx.
Xxx zkoušku xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xx xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxx (XXX:XXX ˜ 20:1). Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx simulátoru xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx vitro xxx publikován x xxxxxxxxxx (3).
Dozimetrie: xxxxxxxxx xxxxxx (intenzita xxxxxxx) xx musí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx. UV-metr xxxx xxx xxx daný xxxxx kalibrován. Funkčnost XX-xxxxx by měla xxx xxxxxxxxxxxx a xx tímto účelem xx doporučuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kalibrovaný XX-xxxx xxxxxxxx xxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx xxx v xxxxxxx časových xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx vyžadují xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx osobami.
Dávka 5 J/cm2 byla xxx xxxxxxxxx studii xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 x xxxxxxxxxx xxxxx x excitaci x xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxx 5 X/xx2 xx xxxx 50 xxx. xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 1,666 XX/xx2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxx světelný xxxxx, xxxx xxx xxxxx UVA xxxxxx xxxxx upravena, aby xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx světelné expozice xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx:
x(xxx) = dávka xxxxxxxxxx xxxxxx (J/cm2) 100 / xxxxxxxxx xxxxxxx (mW/cm2) 60 (1 X =.W xxx)
1.7.2 Xxxxxxxx podmínky
Maximální xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 100 μg/ml, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx látky byly xxxxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx; xxx vyšších xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx pozitivních výsledků (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xX xxxxxxxx koncentrace xx xxxx xxx xxxxxxxxxx (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+ XXX) x xxx xxxxxx (-XXX) xx xxxx xxx náležitě xxxxxxxxx x předchozích xxxxxxxxxxxxx xxx zjištění xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x intervaly mezi xxxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx tak, xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx experimentálními xxxxx. Xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx (s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7.3 Xxxxxxxx postup [1]
1.7.3.1 Xxxxx xxx
Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx x xxxxxxxxxxx médiu x 100 μx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx jamek 96xxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx xxxxx). Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx po 100 μx buněčné xxxxxxxx o xxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 xxxxx na xxxxx). Xxx xxxxxx xxxxxxxxx chemickou xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-UVA) x druhá xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (+XXX).
Xxxxx xx xxxxxxxx 24 x (7,5 % XX2, 37 °X), xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tato xxxxxxxxx xxxx xxxxxx regeneraci xxxxx, jejich xxxxxxxxxx x exponenciální xxxx.
1.7.3.2 Xxxxx den
Po xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx médium x buněk xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xx promyje xxxxxxx 150 μx EBSS/PBS. Xxxxx se 100 μx EBSS/PBS obsahujících xxxxxxx koncentraci zkoušené xxxxxxxx látky nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx). Aplikuje xx 8 xxxxxxx koncentrací xxxxxxxx chemické látky. Xxxxx xx zkoušenou xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxx xx dobu 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °X).
X xxxxxxxxx části xxxxxxx x ozářením XXX xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx po xxxx 50 xxx. xxxxxxx přes víčko 96xxxxxxx destičky XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx 1,7 MW/cm2 (5 X/xx2. Aby xxxxxxx xx kondenzaci xxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx pro xxxxxxx xxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxxx 50 xxx. (xxxx expozice XXX) x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx jamka xx xxxxxxx xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX se xxxxxxx xxxxxxxxxxx médiem a xxxxxxxx xx xxxx xxx (18-22 x) (7,5 % CO2, 37 °C).
1.7.3.3 Xxxxx xxx
Xxxxxxxxxxxxx hodnocení
Buňky se xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx kontrastem. Xxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx provádět xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx fototoxicity xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxx neutrální xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxxxx 150 μx xxxxxxxxxxxx XXXX/XXX x promývací xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx 100 μl média XX a inkubuje xx 3 x xxx 37 °X xx zvlhčené atmosféře x 7,5 % XX2.
Xx inkubaci se xxxxxx XX odstraní x xxxxx se xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. EBSS/PBS se xxxxxxxxx x zcela xxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx poloze).
Přidá xx xxxxxx 150 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx, aby se xxxxxxxxxx XX.
Xxxxxxxx xx xxxxxx 10 xxx. xxxxx na xxxxxxxx, xxxxx se XX x xxxxx nevylouží x xxxxxxxxx homogenní xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx extraktu NR xxx 540 nm, xxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx slepý xxxxx. Xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. ASCII) x xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx
Xxxxx by xxxx xxxxxxx smysluplnou xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx získané xxx xxxxxxx XXX/XXX xxxx xxx xxxx. Je-li xxxxxxxx cytotoxicita, xxx xx být xxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxx, aby xxxx xxxxx proložit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx křivku. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx nemusela být xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxx (-UVA) xxxxxxxxxxx, ale mohla xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxxxxx (+XXX), xxxx xxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx x xxxx částech experimentu xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx, xx-xx být xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Není-li v xxxx částech xxxxxxxxxxx (-XXX x +UVA) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx intervaly xxxx xxxxxxxxxxxx dávkami xx xx xxxxxxxx koncentrace.
Ověření xxxxx pozitivního výsledku xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Negativní xxxxxxxx xxxxxx být dále xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za dostatečně xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. V xxxxxxxx případech xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx experimenty xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx hraničních xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx být xxx xxxxxxxx opakovány.
Je-li opakované xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx, může být xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx výsledku změnit xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx této xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx chemické látky. X tohoto xxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxx (xxxx rozpouštědlo, xxxxxxxxxxxx, použití ultrazvuku) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušky. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxx x xxxxx xxxxxxxx inkubační doby xxxx ozářením. Zkrácení xxxx může xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx.
2.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx-xx xx možné, xxxxxxx xx koncentrace zkoušené xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx 50 % xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (XX50). Xxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxx funkcí xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx jiných xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (14). Xxxx použitím xxxxxxx XX50 pro xxxxx xxxxxxx xx měla xxx vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kvalita xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XX50 xxx popřípadě použít xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx doporučuje použít xxxxxxxxxxxxxxxx papír (xxxxxxx xxx x: xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx x: xxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxx xx této xxxxxxxxxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx téměř xxxxxxxx.
2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx modely)
2.3.1 Předpovědní xxxxx — xxxxx 1: fotoiritační xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxx xxxx v xxxx případech xxx xxx xxxxxxx (+XXX), xxx xxx xxxxxxx (-XXX) získány xxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX) xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
(x) XXX = (XX50 (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxxxxxx XXX &xx; 5 předpovídá xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx XXX ≥ 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu.
Jestliže xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx při +XXX x xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx -XXX, xxxxx hodnotu XXX vypočítat, xxxxxxx xxx x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx potenciálu. X xxxxxxxx případech xxx xxxxxxxxx xxxxxxx "&xx; XXX", xxxxxxxx xx xxxxxxx -XX xxxxxxx xx xx nejvyšší xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxx), x xxxx hodnota xx použije xxx xxxxxxx "> PIF";
(b) &xx; PIF = (Xxxx (-UV)) / (XX50 (+XX))
Xxx li xxxxxx pouze xxxxxxx "&xx; XXX", xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fototoxického potenciálu xxxx xxxxxxx &xx; 1.
Xxxxxxxx nelze v xxxxxxxx xxxx, že xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx do xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX50 (-XX) xxx xxxxxxx XX50 (+ XX), xxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx charakterizaci xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx "XXX = *1";
(X) &xx; XXX = *1 = (Cmax (-XX)) / (Xxxx (+XX))
Xxx li xxxxxx xxxxx hodnotu "XXX = *1", xx xxxx hodnota předpovědí xxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx.
X xxxxxxxxx x) x x) xx xxxx xxx xxx předpověď xxxxxxxxxxxxx potenciálu xxxxxxx xxxxx v xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx 2: střední světelný xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu, který xxx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx studie XX/XXXXXX (15) x xxx xxxxxxxx naslepo v xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vitro u xxxxxxxxxx xxxxx, které xx chovají xxxx XX xxxxxx (13). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx model XXX x xxxxxxxxx, xxx xxxxx získat xxxxxxx EC50. Tento xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx účinek (xxxx xxxxx xxxxxx) (XXX), xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx na srovnání xxxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx koncentraci. Xxx použití xxxxxx xxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx software, xxxxx xx volně x xxxxxxxxx.
2.4 Interpretace xxxxxxxx
Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx xxxxx (PIF ≥ 5 xxxx XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, že xxxxx xx fototoxický xxxxxxxxx. Xxxxxxxx bylo výsledku xxxxxxxx při xxxxxxxxxxxxx xxx 10 μx/xx, xx xxxx pravděpodobné, xx xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxx. Xx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx xxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx intenzity xxxxxxxxxxxx nezbytné další xxxxx. Xx se xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx, xxxxxxxx x možné akumulaci xxxxxxxx látky x xxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zkouškou, xxxx. xx použití xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx (XXX &xx; 5 xxxx XXX < 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxx pro savčí xxxxx za xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, kdy bylo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx až po xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx chemická xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxxxxx. X případech, kdy xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx odezvy xx koncentraci (XX50 +XX x EC50 -XX), xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Není-li xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (+UV x -XX) a xxxx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx na xxxxxxx menší xxx 100 μg/ml, není xxxxxx zkouška xxx xxxxxxxxx xxxxx vhodná x xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx in vitro xxxx xxxxxxxx in xxxx).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx obsahovat xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx chemická xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx CAS, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx,
- xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx studie,
- xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, jsou-li xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- rozpustnost zkoušené xxxxx x tomto xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx x aplikačním xxxxx (EBSS xxxx XXX).
Xxxxx:
- xxx x xxxxx buněk,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- číslo xxxxxxx xxxxxx, je-li xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zkoušce xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro
Zkušební xxxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx xx:
- xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx podmínky (xxxxxxxxxxx CO2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx b) — xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxxx koncentrací xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx XX/XXX, tak xxx xxx,
- x xxxxxxx, xx zkoušená xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx zkušební koncentrace,
- xxx x složení xxxxxxxxxx média (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx:
- xxxxxxxxxx výběru xxxxxxxxx zdroje xxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx zdroje xxxxxx,
- xxxxxxxxxxxxxxx propustnosti/absorpce xxxxxxxxx xxxxxx (použitých filtrů),
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx o jeho xxxxxxxxx,
- vzdálenost zdroje xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x této xxxxxxxxxxx, vyjádřená x xX/xx2,
- délka xxxxxxxx XX/XXX xxxxxx,
- xxxxx XXX záření (xxxxxxxxx × čas), vyjádřena x X/xx2,
- xxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxx xxxxxxxxx a teplota xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx XXX:
- xxxxxxx xxxxx XX,
- xxxx inkubace XX,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxxxxx extrakce XX (xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx),
- xxxxxx xxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx absorbance XX,
- xxxxx (referenční) xxxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx,
- xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xx-xx použit.
Výsledky:
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnosti xxxxxxx,
- xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na koncentraci (xxxxxxxxxxx zkoušené chemické xxxxx xxxxxx relativní xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xxxxxxx xxx paralelních xxxxxxxxxxxxx +XXX x -XXX,
- xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx: xx-xx xx možné, xxxxxxx xxxxxxx XX50 (+XXX) a EC50 (-XXX),
- xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x ozářením XXX/XXX x xxx něho, x xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx faktoru (xxxxx-xxxxxxxxxxx factor ) (XXX), nebo xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxx effect) (XXX),
- klasifikace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a) — xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrola:
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxx XX) ozářených x xxxxxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx kontrolu, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-XXX) x XXX-xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kontrolní chemické xxxxx: xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-XXX) x PIF, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx výsledků.
Závěry.
4. XXXXXXXXXX
(1) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xöxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. G., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X., X'Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, M., Lovell, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, F., Xxxxx, X., Xxxx, X., Pfannbecker, X., Xxxxxxxx, X., De Xxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, A. (1994), EEC/COLIPA xxxxxxx xx in xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxx xxxxxxx obtained xxxx x Xxxx/x 3T3 xxxx xxxxxxxxxxxxx assay, Xxxxxxxxxx in xxxxx 8, 793-796.
(2) Xxxx (1998), Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx the 3X3 XXX PT xxxx (xx xx vitro xxxx xxx xxxxxxxxxxxxx), Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Joint Xxxxxxxx Xxxxxx: XXXXX xxx XXXX/X/2, 3 Xxxxxxxx 1997, XXXX 26, 7-8.
(3) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X., Pape, X. X. W., Xxxxxxxxxx, X., De Xxxxx, X., Holzhütter, X. X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Brantom, X. (1998), EU/COLIPA "Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx study, xxxxxxx xx phase XX (xxxxx xxxxx), part 1: xxx 3X3 XXX xxxxxxxxxxxxx test, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 12, 305-327.
(4) XXXX Xxxx Guidelines Xxxxxxxxx, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Xxxxx Xxxxxx xx xxx OECD Xxxxxxxx xx Harmonisation xx Xxxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxx, OECD Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, X. W. (1993), A xxxxxx xxx in xxxxx xxxxxxxxx of xxxxxxxxxx xxx photoallergenic xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xx Vitro 7, 95-102.
(6) Xxxxxxxxxx, X., Xxxxx, X. (1972), Xxxx xx xxx photodynamic substances, Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx chemistry Xxx. 3 Xxxx 1, Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx Xx, Xxxxxxxxx, XI–XXXV.
(7) Xxxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. W., Hölzle, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxx, M. X., Xxxx, W. X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxx, D. (1994), Xx vitro phototoxicity xxxxxxx: Xxx xxxxxx xxx recommendations xx XXXXX xxxxxxxx 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, J. X. (1989), Xxxxxxxxxxxxxxxxxx. X: Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxx, xx.), Xxxxxx Xxxxx, New Xxxx, 2. vyd., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, E., Xxxxxxx, X. X. (1985), Xxxxxxxx determination xx xxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx and neutral xxx absorption, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx X. (1996). X: Xxxxxx models xxx xxxxxxxxxxxxx testing, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (F. N. Xxxxxxxx, X. X. Xxxxxxx eds.), Taylor &xxx; Francis, Washington XX, 5. xxx., 515-530.
(11) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx M. (1987), Xxxxxx xxxxxxx xxx human skin xxxxx: estimates xx xxx xxxxxxxx cytotoxicity xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, near ultraviolet xxx violet regions xx sunlight on xxxxxxxxx keratinocytes, Xxxxxx Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Xxxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxx: Xxxx/x 3T3 XXX Phototoxicity Test, xxxxxxxx 23. prosince 1997 M. Liebschem, xxxxxxxxx 6. března 1998 týmem Xxxxxxxxxx Xxxx of xxx XX/XXXXXX xxxxxxx "Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Spielmann, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxx, X. X. X., Xx Xxxxx, O., Xxxxxüxxxx, X. G., Xxxxxxxxx, F., Xxxxxxx, X., Lovell, W. X., Pfannenbecker (1998), X Xxxxx xx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx XX Filter Xxxxxxxxx from Xxxxx XXX of xxx XX Directive 76/768/EEC xx the 3X3 XXX In Xxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, ATLA 26, 679-708.
(14) Xxxxxüxxxx, X. G., Quedenau, X. (1995), Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx of xxxxxxxx xxxxxxxxx to xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx, 3, 127-138.
(15) Holzhütter, H. X. (1997), X xxxxxxx measure xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx dose-response xxxxxx xxx its use xxx xxxxxxxxxx xxx xx xxxx phototoxicity xx xxxxxxxxx, ATLA 25, 445-462."
"Xxxxxxx
&xxxx;
[1] Xxxxx xxxxxxxxxxx xxx nalézt x literatuře (12).