Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/33/XX
xx xxx 25. xxxxx 2000,
xxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx přizpůsobuje xxxxxxxxxxx pokroku xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX o xxxxxxxxxx právních x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx klasifikace, xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [1]
(Xxxx x xxxxxxxx pro EHP)
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského společenství,
s xxxxxxx na xxxxxxxx Xxxx 67/548/EHS xx xxx 27. června 1967 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx týkajících xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx parlamentu x Rady 1999/33/XX [3], x xxxxxxx xx xxxxxx 28 xxxxxxx směrnice,
vzhledem k xxxxx xxxxxxx:
(1) X xxxxxxx X směrnice 67/548/XXX se xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx vlastností, toxicity x ekotoxicity látek x přípravků. Je xxxxxxxx přizpůsobit xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
(2) Xxxxx čl. 7 xxxx. 2 směrnice Xxxx 86/609/EHS ze xxx 24. listopadu 1986 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x správních xxxxxxxx členských států xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x jiné xxxxxxx xxxxx [4] xxxxx xxx xxxxx, xxx xxxx xx xxx xxxxxxx zvíře, xxxxxxxx, xx-xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Xxxxxx zamýšlí xxxxxxx do xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX xxxxxx alternativní zkušební xxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxx xx pro zkoušení xxxxxxxxxx látek xxxxx xx. 3 odst. 1 xxxxxxxx 67/548/XXX.
(4) Xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxx xxx přizpůsobení xxxxxxxxxxx xxxxxxx směrnic o xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Text xxxxxx X x II xxxx směrnice xx xxxxxx xx xxxxx X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX.
Xxxxxx 2
1. Členské xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx předpisy nezbytné xxx dosažení souladu x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 2001. Xxxxxxxxxx x nich xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx odkaz xx xxxx směrnici nebo xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx vyhlášení. Xxxxxx xxxxxx si xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx právních xxxxxxxx, které xxxxxxx x oblasti xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x přijatými xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx dnem xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství.
Xxxxxx 4
Tato xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 25. xxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxöx
xxxxxx Komise
[1] Přijato xxxx xxxxxxxxxxxxx xx dvacáté xxxxx.
[2] Xx. xxxx. 196, 16.8.1967, x. 1.
[3] Úř. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Xx. věst. X 358, 18.12.1986, x. 1.
XXXXXXX X
"X.40 LEPTAVÉ XXXXXX XX XXXX
1. XXXXXX
1.1 Úvod
Dvě xxxxxxx xx xxxxx na xxxxxxx xxxxxx na xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx transkutánního xxxxxxxxxxxx xxxxxx kůže xxxxxxx (XXX) x xxxxxxx x využitím xxxxxx xxxxxx xxxx byly Xxxxxxxxx střediskem pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx metod (XXXXX, Xxxxxxxx výzkumné xxxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx) (1, 2, 3) xxxxxxxxx xxxx vědecky xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx XXXXX xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxx lze xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx x zkoušce xxxxxxxx xx xxxxxx lidské xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (známé xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, R 35 x ostatní xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kůže, X 34) (2). Xxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxx je xxxxxx; xxxxx xxxxxxx, xxxxx má být xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxx xxxx Xxxxxx xxxx, část X.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxx: xxxxxxxx poškození kůže xx aplikaci zkoušeného xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx viz xxxx 1.5.3.4 a 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx zkušební metody — zkouška XXX xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xx xx 24 x xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx mladých xxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxx xxxxxx normální xxxxxxxxx x bariérové xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (stratum xxxxxxx), xxxxx je xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx úroveň (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx hodnotu. Xx zkušebního postupu xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx a neutrální xxxxxxxxx xxxxx (definice xxx xxxxxxxxxx (6)) xxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2, 7).
1.5 Popis xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx TER na xxxx xxxxxxx
1.5.1 Xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx z mladých (20 — 23 xxxxxxx) xxxxxxx (Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx x xxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx holicím xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xxxxx opatrným otíráním, xxxxxxx xx testovací xxxxxx xxxxxx do xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx xxxx. streptomycin, penicilin, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx bakterií). Zvířata xx xxxxx x xxxxxx xxx po xxxxxx xxxxx znovu xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x použijí se xx 3 xxx (x xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx použita xxxxxxx xxxxxx xxx 31 xxx).
1.5.2 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx
Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx zvířete se xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx tuk xx x kůže opatrně xxxxxxxxx. Xxxx xx xxxx přeloží xxxx xxxxx xxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx tak, xxx xxxxxxxxx byla x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X-xxxxxxx, aby xxxx xxxx upevněna, x xxxxxxxx tkáně xx ořízne. Xxxxxxx xxxxxxxx a X-xxxxxxx xxxx xxxxxxx na xxxxxxx 1. Xxxxxxx X-xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx xxxxxxx vrstvou xxxxxxxx. Trubička xxxxxx xxxxxx pružinové xxxxxx xx umístí xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX) (obrázek 2).
1.5.3 Xxxxxxxx xxxxxx
1.5.3.1 Xxxxxxxx zkoušeného materiálu
Kapalná xxxxxxxx xxxxx (150 μx) xx aplikuje xx xxxxxxxxx uvnitř xxxxxxxx (xxx. 2). Xxx zkoušení xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx, xxx byla pokryta xxxx epidermis. Poté xx xx povrch xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx voda (150 μx) x trubička xx lehce xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx x xxxx by xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx. U xxxxxxxxx xxxxx xxxx může xxx dosaženo xxxxxxxx xx xx 30 °X, xxx se xxxxxxxx látka roztavila, xxxx rozemletím xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xx prášek.
Ke xxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx 24 x (xxx také xxx 1.5.3.4). Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx odstraní xxxxxxx tekoucí xxxx x xxxxxxx xxxxxxx 30 °C. Odstranění xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx x trubičce ztuhly, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx 30 °X.
1.5.3.2 Xxxxxx XXX
XXX xx xxxx nízkonapěťovým xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxx (xxxx. XXX 401 xxxx 6401 xxxx ekvivalentní). Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx objemu 70 % ethanolu xxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 3 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX). Xxxxxxxxx můstku xx xxxxxx xx xxx strany xxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xΩ/xxxxxx xxxx (xxxxxxx 2). Rozměry elektrod x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx jsou uvedeny xx obrázku 1. Xxxxxx vnitřní (xxxxx) xxxxxxxxx je xxxxx xxxxxx xxxxxx opřena x horní xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxx, xx xx délka xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx hořečnatého xxxxxx. Xxxxxx (tenká) xxxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx mezi spodkem xxxxxxxxx svorky x xxxx teflonové xxxxxxxx xx udržuje xxxxxxxxxx (xxxxxxx 1), neboť xxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx odporu.
Je xxxxx xx všimnout, xx xx-xx xxxxxxxx hodnota xxxxx xxx 20 xΩ, xxxx to xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx látky xx xxxxxxxxxxx straně xxxxxxx xxxx. O xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx. xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x rukavici x 10 s xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxx s xxxxxxxx síranem xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Pro popsanou xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx tyto xxxxxxxxx látky a xxxxxx xxxxxxxxxx rozpětí xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx odporu (xΩ) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx chlorovodíková (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
10–25 |
1.5.3.3 Xxxxxxxx xxxxxx pro povrchově xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx látky
Jsou-li xxxxxxx TER pro xxxxxxxxx xxxxxxx látky xxxx organické xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ, lze xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx barviva. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, zda xxxxxxxx xxxxxx falešně pozitivní (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx sulforhodaminu X
Xx předchozí aplikaci xxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxxxxxxxx stranu xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx na 2 x 150 μx 10 % xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx B x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxxx 10 x omývají proudem xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx odstranilo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Všechny xxxxxxx kůže xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xx xx xxxxxxxx (xxxx. 20 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx spektrometrii) xxxxxxxxxx deionizovanou vodu (8 xx). Xxxxxxxx xx xxxxx 5 xxx. xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx další xxxxx barvivo. Tato xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx zopakuje, x xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx do lahviček xxxxxxxxxxxx 5 xx 30 % xxxxxxx (x/X) xxxxxxx-xxxxxxx-xxxxxxx (XXX) x destilované xxxx x inkubují xx xxxx xxx při 60 °C. Xx xxxxxxxx se všechny xxxxxxx kůže xxxxxx x zlikvidují x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 8 xxx. xxx 21 °C (xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx ˜ 175). 1 xx vzorku xxxxxxxxxxxx xx poté xxxxx 4 xx 30 % (x/X) xxxxxxx XXX v xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx (X) xx xxxx při xxxxxxxxx 565 xx.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx obsahu xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx B xx terčík kůže xx xxxxxxx x xxxxxx X (xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X xxx 565 xx = 8,7 × 104; xxxxxxxxxx xxxxxxxx = 580). Xxxxx barviva xxxxxxxxxxxxxx X se vypočte xxx xxxxx terčík xxxx a xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx hodnota. Střední xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx rozmezí xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a přístroje xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx doporučeny xxxx xxxxxxxxxx hodnoty xxxxxxx obsahu xxxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (μg/terčík xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
40-100 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx (xxxx. 2 xxxxxx), aby xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx stanovení XXX xxxxxxxxxxxx leptavé xxxxxx x několika zkoušených xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx po xxxx 2 hodin (2), xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx látek x xxxxxxxxx účinky x xxxxx bez xxxxxxxxx xxxxxx při 24hodinové xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx postup xxxxx xxx vliv xx získané xxxxxxx XXX. Xxxx 5 Ω xxx předpověď xxxxxxxxx účinků byl xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x postupem, jež xxxx popsány x xxxx metodě. Xxxxxxxxxx xx tedy xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx hodnotu odporu xxxxxxxxx řady referenčních xxxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxx látek xxxxxxxxx xx validační xxxxxx (3).
1.6 Podstata xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx lidské xxxx
Xxxxxxxx materiál je xxxxxxxxx xx xx xxxx 4 xxxxx xx trojrozměrný model xxxxxx xxxx sestávající x xxxxxxxxxxxxxx epidermis x xxxxxxx rohovité xxxxxx. Materiály x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx způsobit xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx životaschopnosti xxxxx (stanovený xxxx. xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX) xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx jsou xx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx rohovitou xxxxxxx (xxxxxx xxxx xxxxx) x xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7 Popis zkušební xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx modelu lidské xxxx
1.7.1 Xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxx lidské kůže xxxxx pocházet z xxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxxxx rohovitou xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx dostatečná. To xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rohovitou xxxxxxx. Musí xx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx živých xxxxx x modelu musí xxx dostatečně xxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxx XXX, xx. měřením xxxxxxx absorbance X) xx expozici xxxxxxxxx xxxxxxxxx látce musí xxx v mezích xxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx pozitivní kontrolní xxxxx (xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx) xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx, xxx xxxxx odpovídal xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx validaci (2).
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxx
1.7.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálu
U xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx aplikováno xxxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušené látky, xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx (minimálně 25 μx/xx2). X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx dostatečné množství xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx kůži, x xxxxxxxx xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxx xxxxx styk s xxxx; pevné xxxxx xx měly být xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Musí být xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx je použitelná xxx široké xxxxxxxx xxxxxxxxxx látek (2). Xx uplynutí expoziční xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx opatrně xxxxxxxxx fyziologickým roztokem.
1.7.2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk xxxx xxx použita xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx stanovení xxxxxxx XXX, xxx xxx xx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx výsledky (2). Xxxxxx xxxx xx xxxxxx do xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx 0,3 mg/ml při xxxxxxx 20-28 °C xx xxxx 3 xxxxx. Xxxxxxxxx modrého xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx (rozpouštědlem) a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxx xxxxxx xxxxx 545 xx 595 xx.
1.7.2.3 Doplňkové xxxxxxxxx
Xxxxxxx model xxxx x přesné zaznamenání xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. budou xxx velký xxxx xx xxxxxxxx životaschopnosti xxxxx. Xxxxxxxxxx xx, xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx byly xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx standardů vybraných x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx validační xxxxxx XXXXX (3). Xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vykazovala x xxxxx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx spektrum xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx splňovat alespoň xxx definovaná xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx (2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxx xx vědeckém xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Zpracování xxxxxxxx
2.1.1 Xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx (kΩ) pro xxxxxxxx materiál, xxxxxxxxx x negativní kontrolu x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx údajů x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx experimentech, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx.
2.1.2 Xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx kůže
Hodnoty xxxxxxxxxx A x xxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnosti xxxxx x xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x pro xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx včetně xxxxx o xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x středních xxxxxxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.
2.2 Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.2.1 Xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
Xx-xx xxxxxxx XXX dosažená xxx xxxxxxxxx xxxxx větší xxx 5 kΩ, xxxx xxxxx xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx TER xxxxx xxxx rovna 5 xΩ a xxxxx x povrchově xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx organickou látku, xx látka xxxxxx.
X xxxxxxxxx xxxxxxxxx látek xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx TER xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ, lze xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xx-xx střední obsah xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxx x terčíku xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 36 % HCl xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, je xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pozitivní, x xxxxx je tedy xxxxxx. Xx-xx střední xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx menší xxx střední xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx použití 36 % XXx, xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx tedy xxxx xxxxxx.
2.2.2 Zkouška x xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx obsorbance A xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx; xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxxxxxxx xxx každý xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx k negativní xxxxxxxx. Hraniční procentuální xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx rozlišují xxxxxx xxxxxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxxx se rozlišují xxxxx třídy xxxxxxxxx xxxxxx), xxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, že xx xxxxxx (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx o xxxxxxx
Xxxxxxxx x zkoušce xxxx xxxxxxxxx alespoň tyto xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx látka:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x případně xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx byly xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx:
- podrobnosti xxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxx odporu (xxxxxxx XXX) xxxx xxxxxxx životaschopnosti xxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx experimentech x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx,
- xxxxx jakýchkoli xxxxxx pozorovaných xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) XXXXX (1998), XXXXX Xxxx &xxx; Views, XXXX 26, 275-280.
(2) Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X. B., Xxxxx, X., Botham, X. X., Curren, X. D., Xxxx, X. K., Esdaile, X. X., Xxxxxxxxxx, X-X., Liebsch, M. (1998), The XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx study xx xx xxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 2. Xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxx Xxxx, Xxxxxxxxxx xx vitro 12, 483-524.
(3) Xxxxxxx, X. X., Brantom, X. X., Fentem, X. X., Gerner, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X. X. (1998), The XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx on in xxxxx xxxxx for xxxx corrosivity. 1. Xxxxxxxxx xxx distribution xx xxx test xxxxxxxxx, Toxicology xx xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. X. X., Xxxxxxxxx, X. X., Rhodes, C. (1986), An in xxxxx skin xxxxxxxxxxx xxxx — xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Food Xxxx. Xxxxxxx. 24, 507-512.
(5) Xxxxxx, P. X., Hall, X. X., Dennett, R., XxXxxx, X. X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxx, E., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. (1992), Xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx: results xx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xx vitro 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. P., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, R. X., Xxxx, X. X., Esdaile, D. X., Xxxxxxx, M. (1998), Xx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXXX testing xxxxxxxx xxx skin xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxxx, M., Xxxxxxx, X. D., Xxxxxx, X. D., Xxxxxxx, X. X., Gardner, X. X., Xxxxxx, X. C., Xxxxxxxxxx, X., Xxxxx, R. X., Xxxxxxx, M., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxx, J. X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. P., Balls, X. 1995), X xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX workshop 6, XXXX 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Xxxxxxx 2"
&xxxx;
XXXXXXX XX
"X.41 XXXXXXXXXXXX — XXXXXXX XXXXXXXXXXXX 3X3 NRU XX XXXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxxxxxxxxxxx xx definována jako xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx první expozici xxxx xxxxxxx chemickým xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po systémovém xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx slouží x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky, xx. xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx může plynout xx xxxxxxxx xxxxx xx spojení s xxxxxxxx UV xxxxxx xxxx viditelnému světlu.
Protože xxxxx xxxxxxx xx xxxxx x hlediska xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaným xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, lze xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx po xxxxxxxxxx podání a xx nanesení na xxxx, x xxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx EU/COLIPA x xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) x xxxxx xxxxxxxx platnou alternativu xx vitro x xxxxxx používaným xxxxxxxx xx vivo. X xxxx 1996 doporučila xxxxxxxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx vitro xxx xxxxxxxxxx fototoxicity (4).
Výsledky xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx porovnány x akutními fototoxickými xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx x xxxxxx a u xxxxxxx x xxxxxxx xx ukázala xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx jiných xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx x světla, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx mnoho xxxxxxxxxx látek, xxxxx xxxxxxxx xxxx specifické xxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX in vitro xxxxxxxxx reagovat. Xxxxxxx xxxx xxxx vyvinuta x xxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx stupně xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx postupného zkoušení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek xx uvedena x xxxxxxx.
1.2 Definice
Intenzita ozáření: xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx světla xxxxxxxxxxxx xx povrch, xxxxxx xx W/m2 xxxx xX/xx2.
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: xxxxxxxx (intenzita × xxx) xxxxxxxxxxxxxx (XX) xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx na povrch, xxxxxxxxx x xxxxxxx (X × x) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxx. X/x2 nebo X/xx2.
Xxxxxx pásma XX xxxxxx: xxxxxxxx doporučená xxxxxx XXX (Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xx l'Eclairage): XXX (315400 xx), XXX (280315 xx) x XXX (100280 xx). Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx: xxxx hranice xxxx XXX x UVA xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 320 nm x xxxxx XXX xxxx xxx rozděleno xx UV-A1 x XX-X2 x xxxxxxx xxxxx 340 xx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxx, kterým xx xxxx celková xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx buněčných xxxxxxxx) x xxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk: xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx x negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (x XX, xxxx xxx XX), xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxxxx metodice xxx xxx převod xxxxxxxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX in xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX a xxxxxxxx XXX.
XXX (photo-irritation factor — xxxxxxxxxxxx xxxxxx): xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XX50) xxxxxxxx xxxxx, a xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/XXX xxxxxxx (+ XX) x xxx xxxx (-UV).
MPE (xxxx xxxxx effect — xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx): xxxx veličina xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx průběhu xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci získaných xxx necytotoxickém xxxxxxx XXX/xxx xxxxxxx (+ XX) a bez xxxx (-UV).
Fototoxicita: xxxxxx xxxxxxx reakce, xxxxxxxx xx první xxxxxxxx xxxx xxxxxxx chemickým xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx systémovém xxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxxxx: xxxxx xxxxxx pojmu "xxxxxxxxxxxx", xxxxx se xxxxxxx x popisu xxxxx těch xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx na xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxxx). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx x nespecifickému xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx xxx opalování).
Fotoalergie: získaná xxxxxxxxxxxx reaktivita, ke xxxxx xxxxxxxxx při xxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx a xxxxxx x xxxxx vyžaduje xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxx xxx, xxx xxx reakci xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: genotoxická odezva xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx dávce XX/XXX xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx chemické látce.
Fotokarcinogenita: xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovanou xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx. Termín xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx, kdy xx tvorba xxxxxx xxxxxxxxxx XX zářením xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxxxxxxxx, který xx xxx být souběžně xxxxxxx při xxxxx xxxxxxx, xx pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xxxxxxxxxx použít jako xxxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxx x chemických xxxxx použitých při xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Úvodní xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxx byly xxxxxxxxxxx x xxxxx typů xxxxxxxxxx xxxxx (5, 6, 7, 8). Xxxxxx jediným společným xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx světelnou xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxx-Xxxxxxxx xxxxx) vyžaduje xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxxxx metodiky xx xxxx xxxx být xxxxxxxxx UV/VIS absorpční xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxx Xxxxxxxx OECD 101). Xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 x.xxx-1.xx-1, chemická xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxxx jinou biologickou xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx účinky (xxxxxxx).
1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx mechanismy, xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (7). Všechny xxxxx x poškození xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx srovnání xxxxxxxxxxxx chemické xxxxx xxx zkoušení x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx dávce XXX/XXX xxxxxx x xxx této xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx je x xxxx xxxxxxx vyjádřena xxxx xxxxxxxxxxxx závislé xxxxxxx xxxxxx vitálního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (9) 24 xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx Balb/c 3X3 xx 24 x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx monovrstvu. Dvě 96xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx zkoušenou chemickou xxxxx xx xxxx 1 h xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Poté xx jedna ze xxxx xxxxxxxx exponována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX/XXX xxxxxx 5 X/xx2 XXX (+ UV xxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx (-UV xxxxxxxxxx). X xxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx médium xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxx 24 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 3xxxxxxxxx xxxxxxx neutrální xxxxxxx (XXX). Xxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnost xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx se vypočte xxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx ozáření (+ XX) x xxx xxxxxxx (-UV), xxxxxxx xxx hodnotě XX50, xx. xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 % xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xx XXX, dosavadní xxxxx: xxxxxxxxx xxxxx xx XXX by xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx, xxxxxx xxx xx ozáří xxxxxx UVA xxxxxx 1 xx 9 X/xx2 x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx stanoví x den xxxxxxx xxxxxxxx NRU. Xxxxx xxxxxxx kritérium xxxxxxx, xxxx-xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx 5 X/xx2 xxxxx než 80 % životaschopnosti xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx. Tato kontrola xx xxxx xxx xxxxxxxxx vždy po xxxxxx pasážích xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx UVA při xxxxxxxxxx zkoušce: zkouška xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly (xxxxx x XXXX (Xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) xxxx 1 % ethanolem (XxXX)) xxxx xxx xxxx xxxxxxxx při + XXX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 80 % vzhledem k xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx souběžném xxxxxxxxxxx x xxxxx (-XXX).
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx: absolutní xxxxxxxxxx (X540 XXX) xxxxxx x xxxxxxxx XX negativních kontrol xxxxxxx, xxx 1 × 104 xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxx během xxxx xxx zkoušky obvyklou xxxx xxxxxxxxxxxxx (doubling xxxx). Xxxxxxx splňuje xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X540 XXX neexponovaných xxxxxxx xx ≥ 0,2.
Pozitivní xxxxxxxx: xxx každé xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx známá fototoxická xxxxxxxx xxxxx. Při xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXX), x xx xxxx doporučen. Pro XXX xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xxxx definována xxxx xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx: xxx XXX ozářený (+ XXX): EC50 = 0,1 xx 0,2 μx/xx, pro XXX xxxxxxxxx (-XXX): XX50 = 7,0 xx 90,0 μg/ml. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xx. xxxxx xxxxxxx XX50, xx měl xxx alespoň 6.
Xxxxxxx XXX xxxxx být xxxxxxx jako souběžné xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx na xxxxxxx dosavadních xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx rozsahy hodnot XX50 x PIF xxxx MPE (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx metody
1.7.1 Příprava
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx xxxxxxxxx studii xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx — Balb/c 3X3, xxxx 31 — xxx x banky XXXX, xxxx z xxxxx XXXXX x xx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx mohou xxx xxx stejném xxxxxxxxx postupu xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, že xxxx kultivační xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx specifickým xxxxxxxx xxxxx, ale musí xxx xxxxxxxxx jejich xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx xx měly xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, x xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx takové xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xx UV vzrůstá x počtem xxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxx buňky Xxxx/x 3X3 z xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx xxx xxx xxxxxx. Je xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx Balb/c 3X3 xx UVA xxxxxxxxxx kontrolována xxxxxxxx xxxxxxxx jakosti xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx.
1.7.1.2 Xxxxx x kultivační xxxxxxxx
Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx kultivační xxxxx x xxxxxxxxx podmínky. X xxxxx Xxxx/x 3X3 xx xxxxx x XXXX (Dulbeccova xxxxxxxxxx Eagleova xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx telecím sérem, 4xX glutaminem, xxxxxxxxxxx x streptomycinem x xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxx xxx 37 °X/7, 5 % XX2. Xxxxxxx xxxxxxxx xx, aby kultivační xxxxxxxx zajistily, xxx xxx buněčný xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx rozpětí xxx xxxxxxx buňky xxxx xxxxxxx linie.
1.7.1.3 Xxxxxxxx kultur
Buňky ze xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx ve xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx jednou se xxxxxxxx před použitím xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx kultivačního média x xxxxxx xxxxxxx, xxx nedosáhly xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xx. do okamžiku, xxx xx po 48 h od xxxxxxxx xxxxxxxxxxx životaschopnost. Xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 xxxxxxxxxxx x 96xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx inokulum 1 × 104 xxxxx xx xxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx látku xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx do xxxx xxxxxxxxxx 96jamkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx podrobeny xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxxx podmínek kromě xxxx, xxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (+UVA/VIS) a xxxxx je udržována x xxxxx (-UVA/VIS).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx aktivace
Zatímco xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx systému xx xxxxxxx požadavkem xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx potenciálu, xxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx žádná xxxxxxxx xxxxx, xxx jejíž xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx vivo xxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxx xxx xx nezbytné xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxxx zkouška provedena xx systémem xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx chemická xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx chemické látky xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxx, pokud xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Může-li xxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx látky xxxxxxxx xxx xxxxxxxx světlem.
Zkoušené xxxxxxxx xxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx. v Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztoku (XXXX) xxxx xx fyziologickém xxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xxxxx xxxxx obsahovat proteinové xxxxxx x xX xxxxxxxxxx absorbující xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx rozpustností xx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx vhodném rozpouštědle xx 100násobek xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx by xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx 1:100 xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxxxxxxx, musí být xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 % xxx. xx xxxxx xxxxxxxxx, xx. x xxxxxxxxx kontrole x xxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx rozpouštědly jsou xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) a xxxxxxx (XxXX). Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx méně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxxxx), xxx xxxx xx xxx xxxxxxx posouzeny xxxxxx specifické vlastnosti, xxxx. xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx fototoxických účinků, xxxxxx radikálů.
Je-li třeba, xxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx x/xxxx zahřátí na 37 °C.
1.7.1.6 Xxxxxxx XX světlem/příprava
Zdroj xxxxxx: xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx fototoxicity. Xxxxxx v xxxxx XXX x xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx spojováno x xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx xxxxxx x xxxxx UVB xx xxxx relevantní x xx xxxxx vysoce xxxxxxxxxxx, přičemž xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 313 nm a 280 nm 1000xxxx (11). Xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx měla xxxxxxxxx důležitý xxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx světlo x xxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxxxx chemická látka xxxxxxxxx, x xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxx xx přijatelnou xxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx známých xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxxx emise xxxxx (infračervená xxxxxx), xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx optimální xxxxx xxxxxx. X xxxxxxxxx simulátorech se xxxxxxx xxx xenonová xxxxxxx, tak vysokotlaká xxxxxxx halogenová výbojka. Xxxxx x nich xx tu výhodu, xx xxxxxxx xxxx xxxxx a xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx XXX záření, xxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx vysoce xxxxxxxxxxx xxxxxx délky XXX xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx UVB xxxxxx (XXX:XXX ˜ 20:1). Příklad xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx použitého xx validační studii xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxx publikován x xxxxxxxxxx (3).
Xxxxxxxxxx: intenzita xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) xx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx vhodného širokopásmového XX-xxxxx. UV-metr musí xxx xxx daný xxxxx kalibrován. Xxxxxxxxx XX-xxxxx xx měla xxx kontrolována x xx tímto xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx UV-metr xxxxxxxx typu. V xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx být v xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx k měření xxxxxxxxxx intenzity xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x ke xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx UV-metru xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx takové xxxxxxxxx vyžadují odbornou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx 5 X/xx2 xxxx xxx validační studii xxxxxxxx xxxx necytotoxická xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 x dostatečně xxxxx x excitaci x slabě fototoxických xxxxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxx 5 X/xx2 xx xxxx 50 xxx. xxxx být xxxxxxxxx ozáření nastavena xx 1,666 MW/cm2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxx světelný xxxxx, xxxx být xxxxx XXX záření xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx fototoxinů. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx vypočte xxxxx xxxxxxxx:
x(xxx) = xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (X/xx2) 100 / xxxxxxxxx xxxxxxx (xX/xx2) 60 (1 X =.X xxx)
1.7.2 Xxxxxxxx podmínky
Maximální xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx xx neměla xxxxxxxxx 100 μg/ml, xxxxx xxxxxxx fototoxické xxxxxxxx xxxxx byly xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx; xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xX xxxxxxxx koncentrace xx xxxx xxx xxxxxxxxxx (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx koncentrací xxxxxxxxxx xxxxx zkoušených xx xxxxxxx (+ UVA) x bez xxxxxx (-XXX) by xxxx xxx náležitě stanoveny x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx zjištění xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x intervaly mezi xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx tak, xxx xxxx křivky xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx experimentálními xxxxx. Xxxx by xxx použita xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxxxxxx faktorem xxxxxx).
1.7.3 Xxxxxxxx xxxxxx [1]
1.7.3.1 Xxxxx den
Připraví xx xxxxxxx suspenze 1 × 105 xxxxx/xx x xxxxxxxxxxx xxxxx x 100 μl xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxxxx xxxxx 96xxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx xxxxx). Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx 100 μx buněčné xxxxxxxx x xxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 buněk xx xxxxx). Xxx každou xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx připraví xxx xxxxxxxx: jedna xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-XXX) x xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (+UVA).
Buňky xx xxxxxxxx 24 x (7,5 % XX2, 37 °X), xxxxx nedosáhnou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx inkubační xxxx xxxxxx regeneraci xxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx x exponenciální xxxx.
1.7.3.2 Xxxxx xxx
Xx xxxxxxxx xx kultivační xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xx promyje xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. Xxxxx xx 100 μx XXXX/XXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxxx xx 8 xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky. Xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx látkou se xxxxxxxx v xxxxx xx dobu 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °C).
K xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x ozářením UVA xx buňky xxx xxxxxxxx xxxxxxx po xxxx 50 min. xxxxxxx xxxx xxxxx 96xxxxxxx destičky XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx 1,7 XX/xx2 (5 X/xx2. Xxx nedošlo xx xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx, větrá xx xxxxxx ventilátoru. Xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxxx 50 xxx. (xxxx xxxxxxxx XXX) x xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.
Zkušební xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx dvakrát 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx xxx (18-22 h) (7,5 % XX2, 37 °X).
1.7.3.3 Xxxxx xxx
Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x fázovým xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx se změny xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zkoušené xxxxxxxx látky. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx tuto xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx se xxx hodnocení xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nepoužijí.
Zkouška xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xx promyjí 150 μx předehřátého XXXX/XXX x xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Přidá se 100 μl xxxxx XX x inkubuje xx 3 x xxx 37 °C xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x 7,5 % XX2.
Xx xxxxxxxx se xxxxxx XX xxxxxxxx x buňky xx xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. EBSS/PBS se xxxxxxxxx a zcela xxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx).
Xxxxx xx xxxxxx 150 μx xxxxxxx připraveného xxxxxxx xxxxxxxx x kyseliny xxxxxx, xxx se xxxxxxxxxx XX.
Xxxxxxxx se xxxxxx 10 min. xxxxx xx třepačce, xxxxx se NR x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx extraktu XX xxx 540 xx, xxxxxxx xx pro xxxxxxxx xxxxxxx slepý xxxxx. Údaje xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX) x xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx odpovědi na xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXX/XXX xxxx xxx xxxx. Je-li xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x interval xxxx nimi xxxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx křivku. Xxxxxxxx x xxxx, že xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx být xx xx mezní xxxxxxxxxxx 100 μx/xx xxxxxx pro xxxxxxxxxx x xxxxx (-XXX) xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xx být vysoce xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+XXX), xxxx xxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx být v xxxx částech xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx, xx-xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxx-xx v xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (-XXX x +XXX) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, stačí xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx intervaly mezi xxxxxxxxxxxx xxxxxxx až xx nejvyšší koncentrace.
Ověření xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Negativní výsledky xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx chemická látka xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx rozmezí xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx hraničních xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xx-xx opakované xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx, může být xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx roztoků xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. X tohoto xxxxxx xxxx xxx změna xxxxxxxx (xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx doby xxxx ozářením. Zkrácení xxxx xxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx.
2.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx-xx xx xxxxx, xxxxxxx xx koncentrace zkoušené xxxxxxxx látky xxxxxxxxxxxx 50 % inhibici xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (EC50). Xxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx Hillovou xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx regresí) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx proložení (14). Xxxx xxxxxxxx hodnoty XX50 xxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx výpočet XX50 xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx proložení. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx papír (xxxxxxx xxx x: xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx y: xxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx téměř xxxxxxxx.
2.3 Hodnocení xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx modely)
2.3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxx — verze 1: xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxxx jak xxx xxxxxxx (+XXX), xxx xxx xxxxxxx (-XXX) xxxxxxx úplné xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX) xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
(x) XXX = (XX50 (-XX)) / (XX50 (+UV))
Hodnota XXX &xx; 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx XXX ≥ 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fototoxického potenciálu.
Jestliže xx chemická xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx +XXX a není xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx -XXX, xxxxx hodnotu XXX vypočítat, třebaže xxx o výsledek, xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx případech lze xxxxxxxxx hodnotu "> XXX", jestliže se xxxxxxx -XX zkouška xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxx), x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx "&xx; PIF";
(b) &xx; PIF = (Xxxx (-XX)) / (XX50 (+UV))
Lze li xxxxxx xxxxx hodnotu "&xx; XXX", xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx > 1.
Xxxxxxxx nelze x xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxxx látka xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx žádnou xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx ani xxxxxxx EC50 (-XX) xxx xxxxxxx EC50 (+ UV), xxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx případech xx xxx charakterizaci xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx "XXX = *1";
(C) &xx; XXX = *1 = (Xxxx (-XX)) / (Cmax (+XX))
Xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx "XXX = *1", xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx.
X xxxxxxxxx x) a x) xx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x úvahu xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in vitro.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx xxxxx verze 2: střední světelný xxxxxx (MPE)
Alternativně lze xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxx předpovídání xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX (15) x xxx xxxxxxxx naslepo x xxxxxxxx xxxxxx fototoxicity xx vitro u xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxx XX xxxxxx (13). Xxxxx model xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx XXX v xxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx XX50. Tento xxxxx využívá xxxxxxx xxxxxxxx účinek (xxxx xxxxx effect) (MPE), xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na koncentraci. Xxx použití xxxxxx xxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Berlín) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx software, xxxxx xx volně x dispozici.
2.4 Interpretace xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro (PIF ≥ 5 xxxx XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx potenciál. Xxxxxxxx xxxx výsledku xxxxxxxx při koncentracích xxx 10 μg/ml, xx xxxx pravděpodobné, xx xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx in xxxx. Xx-xx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx koncentraci 100 μx/xx, xxxxx xxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx nezbytné xxxxx xxxxx. Xx se xxxxx týkat xxxxx x xxxxxxxxx, absorpci x xxxxx akumulaci xxxxxxxx xxxxx v xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx alternativní xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušky xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx vitro (PIF &xx; 5 xxxx XXX &xx; 0,1) xxxxxxx, xx látka xxxxxx xxx xxxxx xxxxx xx použitých xxxxxxxx fototoxická. X xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx zkoušet xxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxxxxx koncentraci 100 μx/xx, xxxxxxxxx negativní xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x fototoxicitu xx xxxx xxx xxxxxxxx xx nepravděpodobnou. X xxxxxxxxx, xxx xxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (XX50 +XX a EC50 -XX), je interpretace xxxxx stejná. Xxxx-xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (+UV x -XX) x xxxx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx 100 μx/xx, není xxxxxx zkouška xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx xx xxx zvážena xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xx xxxxxxx xxxxxx lidské xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx in xxxx).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx o xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxxxxx látka:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXX, je-li xxxxx,
- fyzikální xxxxxxxxxx x čistota,
- fyzikálně-chemické xxxxxxxxxx důležité xxx xxxxxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, jsou-li xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxx (EBSS nebo XXX).
Xxxxx:
- xxx x xxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- číslo xxxxxxx xxxxxx, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx buněk xx XXX stanovená xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx
Xxxxxxxx podmínky x) — xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xx xx:
- typ x složení kultivačního xxxxx,
- inkubační xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx CO2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxx inkubace (xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x po ní).
Zkušební xxxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxxx koncentrací xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jak při xxxxxxx UV/VIS, tak xxx xxx,
- x xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxx látka vykazuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxxxx, zdůvodnění xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx,
- xxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx:
- xxxxxxxxxx výběru xxxxxxxxx zdroje světla,
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx ozáření xx zdroje xxxxxx,
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx zkoušeného xxxxxxx,
- xxxxxxxxx ozáření XXX v xxxx xxxxxxxxxxx, vyjádřená v xX/xx2,
- délka expozice XX/XXX xxxxxx,
- xxxxx XXX záření (xxxxxxxxx × xxx), vyjádřena x X/xx2,
- xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx během xxxxxxxxx x teplota xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxx x xxxxx.
Xxxxxxxx podmínky x) — zkouška XXX:
- xxxxxxx xxxxx XX,
- doba xxxxxxxx XX,
- xxxxxxxxx podmínky (xxxxxxxxxxx CO2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- podmínky xxxxxxxx XX (xxxxxxxxx činidlo, xxxxx xxxxxxxx),
- xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx odečet xxxxxxxxxx XX,
- druhá (referenční) xxxxxx délka, je-li xxxxxxx,
- xxxxxxx slepého xxxxxxx xxx spektrometrii, xx-xx xxxxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx vyjádřená x xxxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnosti xxxxxxx,
- xxxxxx závislosti xxxxxx xx koncentraci (xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx versus relativní xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) získané xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx +XXX x -UVA,
- xxxxxxx křivek xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx: xx-xx to xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx XX50 (+XXX) a EC50 (-XXX),
- xxxxxxxx obou xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx XXX/XXX x xxx xxxx, x xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx-xxxxxxxxxxx xxxxxx ) (XXX), xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx světelného xxxxxx (xxxx photo effect) (XXX),
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxx XX) xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx, střední xxxxxxx a směrodatná xxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx b) — xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:
- xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-UVA) x XXX-xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kontrolní chemické xxxxx: xxxxxxx EC50 (+XXX), EC50 (-UVA) x XXX, střední xxxxxxx x směrodatná xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) Xxxxxxxxx, X., Balls, X., Döring, B., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxx, X., Klecak, X., X'Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. W., Xxxxxx, X., Moldenhauer, F., Xxxxx, L., Pape, X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, O., Xxxxxxxx, X., Willshaw, X. (1994), XXX/XXXXXX project xx xx vitro xxxxxxxxxxxxx testing: Xxxxx xxxxxxx obtained with x Xxxx/x 3T3 xxxx xxxxxxxxxxxxx assay, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 8, 793-796.
(2) Xxxx (1998), Xxxxxxxxx xx xxx scientific validity xx xxx 3T3 XXX XX test (xx xx vitro xxxx xxx xxxxxxxxxxxxx), Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Joint Xxxxxxxx Xxxxxx: XXXXX xxx XXXX/X/2, 3 Xxxxxxxx 1997, ATLA 26, 7-8.
(3) Xxxxxxxxx, X., Balls, M., Xxxxxx, J., Xxxx, X. X. W., Xxxxxxxxxx, G., Xx Xxxxx, X., Holzhütter, X. X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, P., Xxxxxxxxx, F., Xxxxxxx, X., Lovell, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxxxx, X., Potthast, X. X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, W., Brantom, X. (1998), XX/XXXXXX "Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx study, xxxxxxx xx xxxxx II (xxxxx xxxxx), part 1: xxx 3X3 XXX xxxxxxxxxxxxx xxxx, Xxxxxxxxxx xx Vitro 12, 305-327.
(4) XXXX Xxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Final Xxxxxx xx xxx OECD Xxxxxxxx xx Harmonisation xx Validation xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx Toxicological Xxxx Xxxxxxx, XXXX Publications Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, X. X. (1993), X xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx potential, Xxxxxxxxxx in Vitro 7, 95-102.
(6) Xxxxxxxxxx, X., Prino, G. (1972), Xxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xxxxxxxxx Vol. 3 Xxxx 1, Xxxxx Holland Xxxxxxxxxx Xx, Amsterdam, XI–XXXV.
(7) Xxxxxxxxx, X., Lovell, X. W., Hölzle, X., Johnson, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxx, M. X., Xxxx, X. J. X., Xxxxxx, O., Xxxxxxxxx, X. (1994), Xx vitro xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxx xxxxxx xxx recommendations xx XXXXX xxxxxxxx 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, J. D. (1989), Xxxxxxxxxxxxxxxxxx. V: Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, (X. C. Xxxxx, xx.), Plenum Xxxxx, Xxx York, 2. xxx., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, E., Xxxxxxx, X. A. (1985), Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx by xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx and neutral xxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, X. A., Xxxxxx, W. X., Xxxxxxxxxx X. (1996). X: Animal xxxxxx xxx phototoxicity xxxxxxx, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxxxxx, H. X. Xxxxxxx xxx.), Xxxxxx &xxx; Xxxxxxx, Xxxxxxxxxx XX, 5. xxx., 515-530.
(11) Xxxxxxx, R. X., Pidoux X. (1987), Xxxxxx spectra xxx xxxxx skin xxxxx: xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx cytotoxicity xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx ultraviolet xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, Cancer Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Xxxxxxxx Operating Xxxxxxxxx: Balb/c 3X3 XXX Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, xxxxxxxx 23. xxxxxxxx 1997 X. Xxxxxxxxx, xxxxxxxxx 6. března 1998 týmem Xxxxxxxxxx Xxxx xx xxx XX/XXXXXX xxxxxxx "In Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Spielmann, X., Balls, X., Xxxxxx, J., Xxxx, X. J. W., Xx Xxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. G., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxxxxx (1998), X Xxxxx xx xxx Xxxxxxxxxx Potential xx UV Xxxxxx Xxxxxxxxx from Xxxxx XXX xx xxx XX Directive 76/768/EEC xx xxx 3X3 XXX In Xxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, XXXX 26, 679-708.
(14) Holzhütter, X. G., Quedenau, X. (1995), Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx of xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Systems, 3, 127-138.
(15) Holzhütter, X. X. (1997), X xxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxxx phototoxicity xxxxxxx from xxxxx xx dose-response xxxxxx xxx xxx xxx xxx predicting xxx xx vivo xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, XXXX 25, 445-462."
"Xxxxxxx
&xxxx;
[1] Další xxxxxxxxxxx xxx nalézt x xxxxxxxxxx (12).