Xxxxxxxx Komise 2000/45/XX
xx xxx 6. xxxxxxxx 2000,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxxx X, xxxxxxxx E x xxxxxxxxxx v xxxxxxxx
(Xxxx x významem xxx EHP)
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Rady 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx aktem x xxxxxxxxxxx Rakouska, Xxxxxx x Xxxxxxx [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx splněny xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx krmiv, xxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxx.
(2) Xxxxxxxx Xxxx 70/524/XXX xx dne 23. xxxxxxxxx 1970 o xxxxxxxxxxx látkách v xxxxxxxx [3], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxxx Komise (XX) č. 2439/1999 xx xxx 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx E xxxx xxx uváděn xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx.
(3) Xxxxxxxx Xxxx 79/373/XXX xx xxx 2. xxxxx 1979 x xxxxxxx krmných xxxxx na xxx [5], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Komise 2000/16/XX [6], a xxxxxxxx Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. xxxx 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx ke xxxxxxxxx xxxxxx výživy [7], xxxxxxxxx xxxxxxxxx směrnicí 96/25/XX [8], stanoví, xx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx krmiv.
(4) Musí xxx stanoveny xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxx xxxxx.
(5) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské státy xxxxxxx, aby se xxxxxx kontroly xxxxxx xxxxxxxx X, vitamínu X x tryptofanu x krmivech x xxxxxxxxx prováděly xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze.
Článek 2
Xxxxxxx státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. srpna 2000. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx používat xx 1. xxxx 2000.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx 3
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x platnost xxxxxxxx dnem po xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 6. xxxxxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Byrne
člen Komise
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Úř. věst. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. xxxx. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Xx. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Xx. xxxx. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Xx. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
XXXXXXX
XXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXX X
1. Účel x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx určena xxx stanovení vitamínu X (retinolu) x xxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx A xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx xxxxxxx x xxxx cis izomery, xxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx A je xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (XX) na xx. Xxxxx IU xxxxxxxx xxxxxxxx 0,300 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx xxxx 0,344 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx xxxx 0,550 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 2000 IU xxxxxxxx X/xx.
2. Princip
Vzorek je xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx draselného x xxxxxxx X je xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx odstraněno xxxxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxx x, xxxxx xx xx xxxxx, xxxxx na požadovanou xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X se xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx chromatografie (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx tak, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx x xxxx xxx izomerů.
3. Činidla
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Roztok hydroxidu xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (viz 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Roztok xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 g/l (pro x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 2-xxxxxxxx
3.9 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx metanolu (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.10 Dusík, xxxxxx xxxxxxx
3.11 All-trans-vitamín X xxxxxx, extra xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, např. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx roztok xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx A (3.11) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xx 2-propanolu (3.8) x doplňte po xxxxxx stejným xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 1400 XX xxxxxxxx X xx ml. Xxxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxx podle 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 1,80 x 106 IU/g.
3.12.1 Xxxxxxx roztok xxx-xxxxx-xxxxxxx X palmitátu: Xxxxxxx x xxxxxxxxx na 0,1 mg 80 xx palmitátu xxxxxxxx X (3.12) xx 100 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx ve 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx značku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 1400 XX xxxxxxxx X xx xx. Přesný obsah xxxx být xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx x xxxxxxxx skla
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky, 500 ml, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx se zábrusovými xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 ml
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, kuželovité, 1000 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Allihnův xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx zábrusovým xxxxxx, x adaptérem xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx fáze, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx & Xxxxxxx 597 HY 1/2)
4.5 HPLC xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx systémem
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, velikost částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx parametry: xxxxx jednotlivý xxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx podmínek XXXX)
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx nastavením xxxxxx xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 xx křemennými xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx míchadlem
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 1) sestávající xx:
4.8.1 Skleněný odměrný xxxxx x xxxxxx 1x vybavený xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx trubicí xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx trubice xxxx xxx xxxxxx xxxxx ve xxxxx xxxxxxx X a xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx tak, xxx xxxxx být xxxxx xxxxxx kapaliny xx xxxxx převedena do xxxxxx nálevky.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xxxx (XX) světlu x oxidaci. Všechny xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (za xxxxxxx xxxxxx x opakního xxxx, nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Vzduch nad xxxxxxxxx xxxx být xxxxx extrakce nahrazen xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Příprava vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, aby xxxxxx xxxxx s xxxxxx 1 xx, xxxxxxx dbejte, xxx xxxxxxx k xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx může xxxxx xx xxxxxxx vitamínu X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx obsahu xxxxxxxx X, xxxxxxx x xxxxxxxxx na 0,01 x, 2 g xx 25 x xxxxxx xx 500 xx baňky x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx kroužení 130 xx etanolu (3.1), xxxxxxxxx 100 mg XXX (3.13), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx roztoku xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x baňce x xxxxxxx xxxxx do xxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx k varu x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx dalších 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx dusíku. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přibližně 20 ml xxxx x obsah xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx kvantitativně xxxxxxxxxxxx celkovým objemem 250 xx xxxx xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxx (3.1) x 100 xx petroléteru (3.2) x xxxxxxxx výplachy xx dělící xxxxxxx xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x etanolu v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx x nechejte xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx vrstvu xxxxxxxxxxx xx další dělící xxxxxxx (4.2.3). Opakujte xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx extrakty x xxxxxx nálevce xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx kroužení (xxx xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx) x potom xxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx nezůstává xxxxxxxx xx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Přefiltrujte extrakt xxxx suchý xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxx (4.4), aby xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx do 500 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Vypláchněte xxxxxx xxxxxxx a xxxxx 50 ml xxxxxxxxxxx (3.2), doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8)
Xxxx xx vrstvy xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx zátku xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx zábrusovou vložku (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx xxx xxxxx xxx hladinou xxxxxxxx. Xx xxxxxx tlaku x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx do 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Přidejte 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx skleněného xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vrstvy xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx dělící nálevky xxxx předtím. Opakujte xxxxxx xxxxxxxx dalšími 100 xx petroléteru (3.2), potom dvakrát 50 ml dávkami xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx vrstvy xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx petroléteru xxx, xxx je xx xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx je xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 ml baňky xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx rozpouštědlo xxxxx xx xxxxx xx rotační vakuové xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx tlaku při xxxxxxx xxxxx lázně xxxxxxxxxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx atmosférický xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.10) x odpojte xxxxx xx rotační xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx dusíku (3.10) a ihned xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx objemu (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx A xx xxxx xxx x rozsahu 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx C18 (4.5.1) x koncentrace xx xxxxxx xxxxxx XX detektoru (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, xxxxx: 475 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μx) xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx v 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.9). Vypočtěte xxxxxxx xxxxx píku (xxxxxx) xxxxxxxx vstřiků xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx doporučení; xxxxxxx podmínky xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.5.1):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; 250 xx x 4 xx, C18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.9):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (objemově + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; XX xxxxxxxx (325 xx) xxxx fluorescenční xxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 nm/emise: 475 xx)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx (3.11.1) xxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx nebo Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxx x 5.2, xxx bez xxxxxxxx BHT. Následně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 a xxxxxxx do 500 xx petroléterem (3.2). Xxxxxxx 100 ml xxxxxx extraktu na xxxxxxx vakuové xxxxxxx (xxx 5.4) téměř xx sucha, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) a xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x 10,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 560 IU xxxxxxxx X/1 ml. Xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx podle 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx použitím.
Pipetujte 2,0 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx 20 ml xxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx metanolem (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx A xx xx.
5.6.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0 x 10,0 ml zředěného xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx sérií 20 xx odměrných baněk, xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 XX xxxxxxxx X xx xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx kalibračního xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Za xxxxxxx xxxxxxxxx výšek píků (xxxxx) xxxxxxxxx kalibrační xxxx odpovídající xxxxxxxxx XX xxxxxxxx (5.6.3.3).
5.6.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.3.1 Zásobní xxxxxx xxxxxxx X acetátu
Pipetujte 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 56 IU xxxxxxxx X na xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxx xx 25 xx odměrné baňky x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX spektrum xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-propanolu (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx A:
IU vitamínu X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx pro xxxxxxx A xxxxxxx = 1&xxxx;530 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Zásobní xxxxxx xxxxxxx X palmitátu
Pipetujte 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 IU xxxxxxxx A xx xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxxxx do 25 xx xxxxxxx baňky x xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Změřte XX spektrum xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-propanolu (3.8) ve xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 nm x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX vitamínu X/xx = E326 × 19,0
E1%1cm pro xxxxxxx X alkohol = 957 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx X
Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx A, připraveného xxxxx 5.6.1 xx 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxx xxxxxxx xx 25 xx odměrné xxxxx x doplňte xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace tohoto xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx A xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 xx a 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = E325 × 18,3
X1%1xx xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 1&xxxx;821 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
6. Xxxxxxx výsledků
Ze xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx A xxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxx x XX/xx xx vztahu xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2).
Obsah xxxxxxxx X x x XX/xx xx xxxxxx je xxx xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · V2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x roztoku vzorku (5.4) x XX/xx
X1 = xxxxx roztoku xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 x ml
m = hmota zkušební xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 X vzorků x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X může xxx užitečné spojit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 g) xx jednoho roztoku xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX.
7.2 Xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxxxxxxx xxx analýzu xx xxxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Pokud xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx přibližně 10 xx xxxxxxx (3.1), x rozrušení emulze.
7.4 X xxxxxx tuku x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Oddělení izomerů xxxxxxxx xx xxxxx x použitím normální xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx sodného může xxx použito přibližně 150 mg xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Namísto xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx přibližně 50 mg EDTA.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx nesmí překročit 15 % x xxxxxxx výsledku.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx krmivo |
Minerální koncentrát |
Bílkovinný xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx xxxxxx |
|
|
X |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
x |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
xxxxx [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [IU/kg] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [IU/kg] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [XX/xx] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
X [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
CVR [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXX X
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X v xxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu X xx xxxxxxxx xxxx xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx kg. 1 xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xxxxxxxx 0,91 xx XX-α-xxxxxxxxxx (vitamín E).
Mez xxxxxxxxxxxxxxx je 2 xx xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx X je xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx odstraněno xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx x metanolu x, xxxxx je xx xxxxx, zředí xx požadovanou xxxxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu E xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx účinné xxxxxxxxxx chromatografie (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx detekce.
3. Xxxxxxx
3.1 Etanol, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, rozsah varu 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Roztok xxxxxxxxx draselného, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx askorbanu xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx sodný, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx sodného, x = 0,5 xxx/x x glycerolu, β = 120 x/x (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx fenolftaleinu, β = 2 x/100 xx v xxxxxxx (3.1)
3.8 Mobilní xxxx xxx XXXX: xxxx metanolu (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx poměr xxxx xxxxxxxx charakteristikami xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.10 XX-α-xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.10.1 Zásobní xxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 xx DL-α-tokoferol acetátu (3.10) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x etanolu (3.1) x doplňte xx značku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 mg DL-α-tokoferol xxxxxxx. (XX kontrola – xxx 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – viz 7.4 xxxxxxxx).
3.11 XX-α-xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.11.1 Xxxxxxx s xxxxxxxxx na 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 ml xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte x xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 mg XX-α-xxxxxxxxxx. (UV xxxxxxxx – xxx 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Rotační vakuová xxxxxxx
4.2 Xxxxxx z xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Baňky x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx, úzkohrdlé, 10, 25, 100 a 500 xx
4.2.3 Dělící xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx baňky, 250 ml, se xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx izolační xxxxxx 300 xx, xx zábrusovým xxxxxx, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx trubici xxxxx
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papír xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx & Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx vstřikovacím xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 mm, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor s xxxxxxxxxxx nastavením vlnové xxxxx
4.6 Spektrofotometr s 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 1) sestávající xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx vložka vybavená xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx trubicí xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx trubice xxxx xxx xxxxxx xxxxx ve xxxxx xxxxxxx X x xxxxxx na xxxxxxx xxxxx tak, aby xxxxx xxx xxxxx xxxxxx kapaliny xx xxxxx převedena xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X je citlivý xxxx (XX) světlu x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx použití xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, nebo nádobí xxxxxxxxxx hliníkovou fólií) x kyslíku (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxx extrakce nahrazen xxxxxxx (vyhněte se xxxxxxxx občasným xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Příprava vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx s xxxxxx 1 mm, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx x zahřátí. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx vitamínu X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx hmotnosti xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x až 25 x xxxxxx do 500 ml xxxxx x xxxxxxx dnem xxxx Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx postupně xx stálého xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), přibližně 100 xx XXX (3.12), 2 xx roztoku xxxxxxxxx sodného (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) k xxxxx x ponořte xxxxx xx xxxxx xxxxx x magnetickým xxxxxxxxx (4.7). Zahřejte k xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx pět xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx odtékat xxxxxxx 25 xxxxx za xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx x obsah xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx saponifikovaný xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx do 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxx (3.1) x 100 ml petroléteru (3.2) x převeďte xxxxxxxx xx dělící xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx minuty x xxxxxxxx ustát xxx minuty.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx tuto xxxxxxxx dvakrát 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x dvakrát 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Promyjte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (aby xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, xxxxx voda xxxxxxxxx bezbarvá xx xxxxxxxx xxxxxxx fenolftaleinu (3.7) (čtyřnásobné xxxxxxxxx xx obyčejně dostačující). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx dělení xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx dělící xxxxxxx x xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx petroléterem (3.2) x dobře promíchejte.
5.3.2 Xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx xxxxxx oddělily (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx zátku xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x nasměrujte xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx U xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, aby xxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx z xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx vrstvu xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vrstvy oddělit xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Opakujte xxxxxx xxxxxxxx dalšími 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx dávkami xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx kombinované xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxx xx xx xxxxxxx x 5.3.1, x pokračujte jak xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx roztoku xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx xxxxx ve xxxxx hrušky (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx téměř xx sucha na xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx při teplotě xxxxx lázně xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Obnovte xxxxxxxxxxxx xxxx připuštěním xxxxxx (3.9) x xxxxxxx xxxxx od xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (koncentrace XX-α-xxxxxxxxxx xx xxxx xxx v xxxxxxx 5 μx/xx xx 30 μg/ml).
5.5 Stanovení xxxxxx XXXX
Xxxxxxx E xx oddělen xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) a xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 nm, xxxxx: 330 nm) xxxx UV detektoru (292 nm) (4.5.2).
Vstříkněte xxxxxxxxx část (xxxx. 20 μl) metanolového xxxxxxx xxxxxxxxx x 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx stejného xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx kalibračních xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx být použity xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx shodné xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.5.1): 250 xx x 4 mm, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově)
Úroveň xxxx: 1–2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): Xxxxxxxxxxxxx detektor (xxxxxxxx: 295 nm/emise: 330 xx) nebo XX xxxxxxxx (292 xx)
5.6 Kalibrace (XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX-α-xxxxxxxxxx)
5.6.1 Xxxxxxxx DL-α-tokoferol xxxxxxx
5.6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 25 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) a xxxxxxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxx x 5.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) podle 5.3 x doplňte xx 500 xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx 25 xx tohoto extraktu xx rotační xxxxxxx xxxxxxx (viz 5.4) xxxxx xx sucha, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx dusíku (3.9) x xxxxx rozpusťte xxxxxx x 25,0 xx netanolu (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 45,5 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, xxxxxxxxxx 50 μx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xx xx. Standardní xxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 ml standardního xxxxxxxxxx roztoku xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,5, 5,0, 10,0 x 25,0 μg/ml XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx, tj. 2,28, 4,55, 9,10 a 22,8 μg/ml XX-α-xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μl xxxxxxx kalibračního roztoku x xxxxxxxx střední xxxxx xxxx (plochy). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (ploch) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.1.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxxx roztoku DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10.1) xx 25,0 xx xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx etanolu (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx mělo xxx xxx 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284nm x xxxxxxx
Xxx tomto xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Standard XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Příprava standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx, rozpusťte x xxxxxxxx (3.3) x doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 40 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx ml, xxxxxxxxxx 44,0 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx na xx. Xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx připraven xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a kalibrační xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx, tj. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (plochy). Xx xxxxxxx středních xxxxx xxxx (ploch) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx graf.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Xxxxxxxx 2,0 xx zásobního roztoku XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 25,0 ml xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 nm x 320 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx xxx 292 xx:
X1%1xx = 75,8 xxx 292xx x xxxxxxx
Xxx tomto xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,6.
6. Výpočet výsledků
Ze xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxx pro xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxx x μg/ml (xxxxxxxx xxxx α-xxxxxxxxx xxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx E x x xx/xx xx xxxxxx xx dán xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 / X1 · x [xx/xx]
xx které:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu X x xxxxxxx xxxxxx (5.4) x μx/xx
X1 = xxxxx roztoku xxxxxx (5.4) v xx
X2 = xxxxx xxxxxxx odebraných x 5.4 v xx
x = hmota xxxxxxxx xxxxx v x
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x xxxxxx koncentrací xxxxxxxx E xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx petroléteru xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Množství xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx pro analýzu xxxxx překročit 2x.
7.3 Xxxxx xx neobjeví xxxxxx dělení, přidejte xxxxxxxxx 10 ml xxxxxxx (3.1), k xxxxxxxxx emulze.
7.4 Xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xxxx XX-α-xxxxxxxxxx podle 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 xxxxxxxx xx xxxxxxx (3.10.1 xxxx 3.10.2) přibližně 10 mg BHT (3.12) x xxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx doba xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx).
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx xxx použit xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx přibližně 150 xx kyseliny xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx přibližně 50 xx XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 15 % z xxxxxxx výsledku.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx spolupráce [2]
L: xxxxx xxxxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient variace xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx koncentrát |
Bílkovinný xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx xxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
x |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
xxxxx [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
xx [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [xx/xx] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
ČÁST X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx určena xxx xxxxxxxxx celkového x xxxxxxx tryptofanu v xxxxxxxx. Nerozlišuje mezi X- x X- xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx hydrolyzován xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx barnatého x xxxxxxxx xxx 110 °C xx 20 xxxxx. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx kyselých xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx x vnitřní xxxxxxxx xxxx stanoveny x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx pomocí XXXX x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx používána (xxxxxxxx &xx; 10 μX/xx)
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Xxxxxxx standardní xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx vakuem xxxx xxxxxxxx fosforu
3.4 Xxxx-xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxx být xxxxx, xxx xxxxx Xx(XX)2. 8 X2X xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxx XxXX3, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx) (xxx poznámky 9.3)
3.5 Xxxxxxxx sodný
3.6 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x20 = 1,19 x/xx
3.8 Xxxxxxx, XXXX xxxxxx
3.9 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40–60 °X
3.10 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxx, c = 1 xxx/x:
Xxxxxxxxx 40,0 x XxXX (3.5) xx xxxx x xxxxxxx do 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x:
Xxxxxxx 492 xx HCL (3.7) a xxxxxxx xx 1 l xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 xx XXX (3.7) x xxxxxxx do 1 x vodou.
3.13 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x:
Xxxxxxx 8,2 xx HCL (3.7) x xxxxxxx do 1 x xxxxx.
3.14 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, c = 0,5 xxx/x:
Xxxxxxx 34 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) a xxxxxxx do 1 x xxxxx (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.2), x = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2553 x xxxxxxxxxx (3.2) x 500 xx xxxxxxx baňce x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 xX xx xxxx xxxxxxxxx čtyř xxxxx.
3.16 Koncentrovaný xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2728 g α-methyl-tryptofanu (3.3) x 500 xx xxxxxxx xxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx xx značku kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 oC xx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.17 Kalibrační xxxxxxxxxx xxxxxx tryptofanu x xxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxxx 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15), x 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx (α-methyl-tryptofan) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x metanolem (3.8) xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx x na xxxxxxxxx stejnou koncentraci xxxxxxxx (10–30 %) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx před xxxxxxxx.
Xxxxx přípravy xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxx
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Ethanolamin > 98 %
3.21 Xxxxxx 1 g 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) ve 100 xx xxxxxxxx (3.8).
3.22 Xxxxxxx fáze xxx XXXX: 3,00 x xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 ml xxxxxxx (3.21) 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanolu (3.19) x metanolu (3.8) (1x/100 ml). Upravte xX xx 5 x použitím xxxxxxxxxxxx (3.20). Doplňte do 1000 ml vodou (3.1).
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Vybavení pro XXXX se xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
4.2 Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.3 xX metr
4.4 Polypropylenová xxxxx, xxxxx 125 xx, se xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxx, 0,45 μm
4.6 Autokláv, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) xxxx
4.7 Mechanická xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.8 Xxxxxx mixer
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxx sítem x otvory 0,5 xx. Vzorky, které xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxxxxxxxx usušeny xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °X, xxxx xxxxxxxxx. Vzorky x xxxxxxx obsahem xxxx xxxx xxx xxxx xxxxxx extrahovány xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (extrakt)
Odvažte x xxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 g) xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 xxx/x (3.13) x 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx nebo xxxxxxx 60 minut s xxxxxxxx xxxxxxxxxx třepačky, xxxx xxxxxxxxxxxx míchadla (4.7). Nechejte xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx 10,0 ml roztoku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 ml xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, c = 0,5 mol/l (3.14). Upravte pH xx 3,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1,0 xxx/x (3.10). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (3.8), xxxxxx xxxxxxxx koncentraci xxxx 10 x 30 % metanolu x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx odměrné xxxxx x xxxxxxx xxxxxx x zřeďte xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx stejný objem xxxx kalibrační xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Před vstříknutím xx kolony HPLC xxxxxxxxxxxx xxxxxxx ml xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μm (4.5). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx není xxxxx xxxxxxxxxx extrakty xxxxxx xxx, xxxxx xxx skladovány při 5 °X xx xxxxxxxxx xxxx tří xxx.
5.3 Stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,2 xx od 0,1 xx 1 g xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx polypropylénové láhve (4.4). Xxxxxxxx dávka xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx 10 xx. Xxxxxxxx 8,4 x xxxx-xxxxxxx hydroxidu barnatého (3.4) x 10 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (4.8) xxxx magnetickém xxxxxxxx (4.7). Ponechejte xxxxxxxx potažený xxxxxx xx směsi. Xxxxxxxxxx xxxxx nádoby 4 xx xxxx. Našroubujte xxxxxx x láhev xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx (4.6) x vroucí vodou x xxxxx na 30–60 minut. Uzavřete xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx 110 (+ 2) °X xx xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 100 °X. Aby xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx Xx(XX)2. 8 X2X, xxxxxxxx xx horké xxxxx 30 xx xxxx o pokojové xxxxxxx. Mírně xxxxxxxxxxxxx, xxxx míchejte. Xxxxxxxx 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx standardu (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx/xxxxxx xxxxx xx xxxx 15 minut.
Potom xxxxxxxx 5 xx xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx kyselinou chlorovodíkovou, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xX xx 3,0 x xxxxxxxx XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Xxxxxxxx xxxxxxxxx metanolu, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x vhodném xxxxxx x xxxxxx xxxxx xx definovaný xxxxx xxxxxxxx xxx chromatografii (xxxxxxxxx 100 ml). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxxxx xx kolony XXXX přefiltrujte xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx x chromatografii podle xxxxxxxx 5.4.
Chraňte xxxxxxxxxx xxxxxx x hydrolyzáty xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx. Pokud není xxxxx analyzovat hydrolyzáty xxxxxx xxx, mohou xxx skladovány při 5 °X xx xxxxxxxxx xxxx tří xxx.
5.4 Xxxxxxxxx pomocí XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx poskytují xxxxxx výsledky (xxx xxxx xxxxxxxx 9.1 x 9.2):
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 xx x 4 mm, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μm xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.22): 3,00 x kyseliny xxxxxx (3.18) + 900 ml xxxx (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 ml). Xxxxxxx xX xx 5,00 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Doplňte xx 1000 ml xxxxx (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx xxxx xxxx: xxxxxxxxx 34 xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx xxxxx: xxxxxxxx: 280 xx, emise: 356 xx
Xxxxxxxxx xxxxx: 20 μx
6. Výpočet xxxxxxxx
X × X × X × X × X × MW / X × G × X × 10&xxxx;000 × X = x xxxxxxxxxx xx 100g vzorku
A = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.17)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = xxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxxxx tryptofanu (3.15) (2 xx) xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.17)
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx (3.15) v μxxxxxx/xx (= 2,50) přidaného xx kalibračního xxxxxxx (3.17)
X = objem xxxxxxxxxxxxxxx vnitřního standardního xxxxxxx (3.16) v xx xxxxxxxxx při xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) xxxx xx hydrolyzátu (5.3) (= 2,00 xx)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) nebo hydrolyzátu (5.3)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, kalibračního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.16) v xx (= 2,00) přidaného xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxx xxxxxx v x (opravená na xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx x/xxxx odtučněn)
MW = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (= 204,23)
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
8. Xxxxxxxx studijní xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx spolupráce Společenství (xxxxxx xxxxxxxx porovnání) xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 12 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx. Replikované (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx uvedeny x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx eliminačních xxxxxxxxx výsledků (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Krmivo xxx xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Xxxxx xxxxxxxxxx xxx prasata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
|
n |
50 |
55 |
50 |
|
střed [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [x/xx] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
x [x/xx] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
XXx [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [g/kg] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
R [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx xxxxxxxx spolupráce Xxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) byla xxxxxxxxxx xxx, xx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xx 13 xxxxxxxxxxxx x ověření xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) analýzy xxxx xxxxxxxxx u každého xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: počet xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot zadržených xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Cochran-Dixonovým xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: reprodukovatelnost
CVr: xxxxxxxxxx xxxxxxx opakovatelnosti, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Směs xxxxxxx se sójou |
Vzorek 5 Směs pšenice xx xxxxx (= xxxxxx 4) s xxxxxxxx tryptofanem (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [x/xx] |
0,391 |
0,931 |
|
xx [x/xx] |
0,005 |
0,012 |
|
x [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
xX [x/xx] |
0,018 |
0,048 |
|
X [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx v xxxxx laboratořích x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx uvedeny v xxxxxxxxxxx tabulce:
L: xxxxx xxxxxxxxxx předkládajících výsledky
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (identifikované Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: reprodukovatelnost
CVr: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx (XXX 117) |
Vzorek 2 Nízko-tučná xxxx xxxxxx (XXX 118) |
Vzorek 3 Xxxxxx xxxxxx (XXX 119) |
Xxxxxx 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx mléko (XXX 120) |
|
|
L |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
n |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
střed [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [g/kg] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
CVr [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
xX [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [g/kg] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
CVR [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx tryptofanem a α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vymývání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kolony:
|
Kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii: |
125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 μx xxxx obdobné |
||
|
Teplota xxxxxx: |
32 °X |
||
|
Xxxxxxx xxxx: |
X: 0,01 mol/l XX2XX4/xxxxxxx, 95 + 5 (xxxxxxxx + xxxxxxxx) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx program: |
0 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
15 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
17 min. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % A |
40 % X |
|
|
21 min. |
100 % X |
0 % X |
|
|
33 min. |
100 % X |
0 % X |
|
|
Xxxxxx xxxx: |
1,2 xx/xxx. |
||
|
Xxxxxxx xxxx xxxx: |
xxxxxxxxx 33 xxxxx |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx xx bude xxxxxx podle typu XXXX kolony x xxxxxxxxx xxxxxxxx materiálu. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx tryptofanem a xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx, xxx xxxx degradační xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx bez xxxxxxxxx standardu xx xxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx se překontrolovala xxxxxxxxx čára za xxxxxxxxx standardu xxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxx běhu xxxx xxxxxxxxxx dlouhá xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
X xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx. Lineární xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxx xxxxxxx HPLC/flourescenčního xxxxxxx. Pokud xxx (xxxx) xxx tryptofanu, x/xxxx vnitřního xxxxxxxxx xx (xxxx) xxxxxx xxxx (malé) xxxx xxxxxx xxxxxx (xxxxxx), xxxx by být xxxxxxx opakovány xx xxxxxxx jiné velikosti x/xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Hydroxid barnatý
Stářím xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hůře xxxxxxxxx. Xx se projevuje x nečirém xxxxxxx xxx stanovení xxxxxx XXXX, což xxxx x xxxxxxxxxx způsobovat xxxxx výsledky.
[1] Řízené xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (VDLUFA).
[2] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Xxxxxxx Deutscher Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).