Směrnice Xxxxxx 2000/45/XX
xx xxx 6. xxxxxxxx 2000,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Společenství xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxx E x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx
(Xxxx s xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 70/373/XXX xx dne 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx aktem x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxx x Xxxxxxx [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv xx xxxxxx xxxxxxxx, zda xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x správních xxxxxxxx xx jakost x xxxxxxx xxxxx, xxxx být prováděny xx použití xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxx.
(2) Xxxxxxxx Xxxx 70/524/XXX xx dne 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx [3], xxxxxxxxx xxxxxxxxx nařízením Xxxxxx (XX) x. 2439/1999 xx xxx 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxx A a xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxx látky přidány xx premixů a xxxxx.
(3) Xxxxxxxx Rady 79/373/XXX xx dne 2. dubna 1979 x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx na xxx [5], naposledy pozměněná xxxxxxxx Xxxxxx 2000/16/XX [6], x směrnice Xxxx 93/74/XXX ze xxx 13. září 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx výživy [7], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/XX [8], xxxxxxx, xx aminokyseliny musí xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx.
(4) Xxxx xxx stanoveny xxxxxxxxxx xxxxxx xxx kontrolu xxxxxx látek.
(5) Xxxxxxxx xxxx směrnice jsou x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xxx xx xxxxxx kontroly obsahu xxxxxxxx A, vitamínu X x tryptofanu x xxxxxxxx x xxxxxxxxx prováděly metodami xxxxxxxxxxx v xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxx x účinnost xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxx 2000. Neprodleně x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. září 2000.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx odkaz xx xxxx směrnici nebo xxxx být xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu si xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Článek 3
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 6. xxxxxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Byrne
člen Komise
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. věst. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Úř. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. věst. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Úř. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Xx. věst. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Xx. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Xx. věst. X 125, 23.5.1996, x. 35.
XXXXXXX
XXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXX A
1. Účel x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx určena xxx xxxxxxxxx vitamínu X (retinolu) v xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx X zahrnuje xxx-xxxxx-xxxxxxx alkohol x xxxx xxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxxx x mezinárodních xxxxxxxxxx (IU) na xx. Xxxxx IU xxxxxxxx aktivitě 0,300 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx xxxx 0,344 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx xxxx 0,550 μx all-trans-vitamín X xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2000 XX vitamínu X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a zbytek xx rozpustí x xxxxxxxx a, pokud xx xx xxxxx, xxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu X xx xxxxxxx xxxxxxxx fází xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx parametry xxxx xxxxxxxx tak, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx all-trans-vitamín A xxxxxxxx x jeho xxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °C
3.3 Xxxxxxx
3.4 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 g/100 ml
3.5 Xxxxxx askorbanu sodného, β = 10 x/100 xx (viz 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Sulfid xxxxx, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Roztok sulfidu xxxxxxx, x = 0,5 mol/l x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (xxx x = 9) (xxx 7.8 poznámky)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 g/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 2-xxxxxxxx
3.9 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx bude xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.10 Dusík, prostý xxxxxxx
3.11 All-trans-vitamín X xxxxxx, extra čistý, xxxxxxx aktivity, xxxx. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxx: Xxxxxxx s přesností xx 0,1 xx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx X (3.11) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 1400 XX xxxxxxxx X xx ml. Xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx podle 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, např. 1,80 x 106 XX/x.
3.12.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx na 0,1 mg 80 xx palmitátu vitamínu X (3.12) do 100 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 1400 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx xxxxx xxxx xxx stanoven xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Nádobí x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky, 500 ml, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx zábrusovými xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 a 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Hruškovité xxxxx, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 mm, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papír xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 mm (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 HY 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx vstřikovacím xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxx (výkonnostní parametry: xxxxx jednotlivý xxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx XXXX)
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 mm xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx lázeň x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx přístroj (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x objemu 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx ramenem x xxxxxxxxxxxxx trubicí xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx spodní xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx tak, xxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X xx citlivý xxxx (XX) xxxxxx x oxidaci. Xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx z opakního xxxx, nebo nádobí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x kyslíku (vypláchněte xxxxxxx). Vzduch xxx xxxxxxxxx musí být xxxxx extrakce xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Příprava xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxx sítem s xxxxxx 1 mm, xxxxxxx xxxxxx, aby xxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxx x saponifikací, xxxxx xxxx xxxxx xx ztrátám vitamínu X.
5.2 Saponifikace
V xxxxxxxxxx xx obsahu xxxxxxxx X, xxxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x xx 25 g xxxxxx xx 500 xx baňky s xxxxxxx dnem nebo Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx kroužení 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.13), 2 xx xxxxxxx askorbanu xxxxxxx (3.5) a 2 ml xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxx a xxxxxxx xxxxx do xxxxx lázně x xxxxxxxxxxx míchadlem (4.7). Xxxxxxxx k varu x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx za xxxxxxx xxxxxxx pod pomalým xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přibližně 20 xx vody x xxxxx xxxxx xxxxxxxx na pokojovou xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx vody xx 1000 ml xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Vypláchněte xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) a 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x převeďte xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx extrakčního xxxxxxxxx. Xxxxx vody x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx silně xxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx nálevky (4.2.3)
Xxxx xx vrstvy xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx dvakrát 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxx 50 ml xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx zabránilo tvorbě xxxxxx) x xxxxx xxxxxxxxxx třepáním x xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx nezůstává xxxxxxxx xx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx extrakt xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Vypláchněte xxxxxx xxxxxxx a xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Extrakce za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx se vrstvy xxxxxxxx (viz poznámky 7.3), xxxxxxxx zátku xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx vložku (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ve xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx xxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx x rozvodu xxxxxx xx xxxxxxxxxxx ramene, xxxxxxxx xxxxxx vrstvu xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2) xx skleněného válce, xxxxxxxxxx x dobře xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx a xxxxxxxx xxxxxx vrstvu xx dělící xxxxxxx xxxx předtím. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dalšími 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx dvakrát 50 xx dávkami xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx extrakty petroléteru xxx, xxx je xx xxxxxxx x 5.3.1, a xxxxxxxxxx xxx xx tam xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx roztoku xxxxxx xxx HPLC
Odpipetujte xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx xxxxx xx xxxxx hrušky (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx sucha xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) za xxxxxxxxx tlaku xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx atmosférický xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxxxx baňku xx rotační xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) metanolu (3.3) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xx xxxx xxx x xxxxxxx 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X je xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx koloně C18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XX detektoru (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, emise: 475 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx alikvotní xxxx (xxxx. 20 μx) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.9). Xxxxxxxxx xxxxxxx výšku píku (xxxxxx) xxxxxxxx vstřiků xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx výšky (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxx xxxx doporučení; xxxxxxx podmínky xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx výsledky.
Kolona pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic náplně 5 xxxx 10 μx nebo xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.9): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově)
Úroveň xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; UV xxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor (xxxxxxxx: 325 xx/xxxxx: 475 nm)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx standardních pracovních xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 ml xxxxxxxxx roztoku xxxxxxx X xxxxxxx (3.11.1) xxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx nebo Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx xx xx popsáno v 5.2, ale xxx xxxxxxxx XXX. Následně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx petroléterem (3.2). Xxxxxxx 100 xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx sucha, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) a xxxxx rozpusťte zbytek x 10,0 ml xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 560 IU xxxxxxxx X/1 xx. Xxxxxx xxxxx se xxxxxxx podle 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx před xxxxxxxx.
Xxxxxxxxx 2,0 xx tohoto xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx xxxxxxx baňky, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je 56 XX vitamínu X xx ml.
5.6.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 5,0 a 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx sérií 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 IU xxxxxxxx X xx xx.
Xxxxxxxxxx několikrát 20 μx každého xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx výšky xxxx (xxxxxx). Za použití xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx výsledkům XX kontroly (5.6.3.3).
5.6.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.3.1 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín A xxxxxxx (3.11.1) do 50 ml odměrné xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 56 IU xxxxxxxx A xx xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx do 25 xx xxxxxxx xxxxx x doplňte xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace tohoto xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX spektrum xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx a 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx mezi 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx obsahu xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx xxx xxxxxxx X alkohol = 1 530 při 326 xx ve 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Xxxxxxx roztok xxxxxxx X xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx (3.12.1) do 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx. Pipetujte 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín A xxxxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx baňky x xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX vitamínu X xx ml. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx proti 2-xxxxxxxxx (3.8) xx spektrofotometru (4.6) mezi 300 xx a 400 xx. Extinkční maximum xxxx xxx xxxx 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
E1%1cm xxx xxxxxxx A alkohol = 957 při 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Standardní xxxxxxxx xxxxxxx vitamínu A
Pipetujte 3,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx A, xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1 xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx 5,0 xx tohoto xxxxxxx xx 25 xx odměrné xxxxx x doplňte xx xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX vitamínu X xx xx. Xxxxxx XX spektrum tohoto xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) ve spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxx 325 nm a 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X325 × 18,3
X1%1xx xxx xxxxxxx A xxxxxxx = 1&xxxx;821 při 326 nm xx 2-xxxxxxxxx
6. Výpočet xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx koncentraci roztoku xxxxxx x XX/xx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2).
Xxxxx xxxxxxxx X x x IU/kg xx xxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · V2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu X x roztoku vzorku (5.4) x XX/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = objem xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 x xx
x = hmota xxxxxxxx xxxxx x g
7. Xxxxxxxx
7.1 X vzorků x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X může xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (hmotnostní xxxxxxx: 25 g) xx jednoho xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx XXXX.
7.2 Množství xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxx analýzu xx xxxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Pokud xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 X rybího xxxx x xxxxxxxxx čistých xxxx xx měla xxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx BHT xxxx být xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx izomerů xxxxxxxx xx možné x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx kolony.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx přibližně 150 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Namísto xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx použito xxxxxxxxx 50 xx XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
X: xxxxx laboratoří
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot
sr: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx koncentrát |
Bílkovinný xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx selata |
|
|
L |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
n |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
střed [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [XX/xx] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [XX/xx] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [IU/kg] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
R [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
CVR [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXX X
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx x premixech. Xxxxx vitamínu X xx vyjádřen xxxx xx DL-α-tokoferol xxxxxxx xx xx. 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,91 mg XX-α-xxxxxxxxxx (xxxxxxx X).
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx odstraněno xxxxxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxx x metanolu x, xxxxx xx xx xxxxx, xxxxx xx požadovanou xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx E xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxx xxxxxxxxxx chromatografie (XX-XXXX) xx použití XX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Etanol, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx varu 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, c = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 ml v xxxxxxx (3.1)
3.8 Xxxxxxx xxxx xxx HPLC: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx poměr xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Dusík, xxxxxx xxxxxxx
3.10 DL-α-tokoferol acetát, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.10.1 Zásobní roztok XX-α-xxxxxxxxx acetátu: Odvažte x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10) do 100 xx odměrné xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx roztoku xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx. (XX xxxxxxxx – xxx 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 poznámky).
3.11 XX-α-xxxxxxxxx, xxxxx čistý, ověřené xxxxxxxx
3.11.1 Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 mg XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx značku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx tohoto xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (XX kontrola – viz 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 poznámky).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Nádobí z xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Baňky x plochým xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky, 500 xx, se xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, úzkohrdlé, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Dělící xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx baňky, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 mm, xx xxxxxxxxxx hrdlem, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
4.4 Xxxxxxxx filtrační xxxxx xxx xxxxxxxx fáze, xxxxxx 185 mm (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx systémem
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 mm, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 xxxx 10 μm nebo xxxxxxxxxx
4.5.2 XX nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx nastavením vlnové xxxxx
4.6 Spektrofotometr x 10 mm xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x zátkou
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx vybavená xxxxxx ramenem x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx mít xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X x xxxxxx xx opačném xxxxx xxx, aby xxxxx být xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx převedena xx xxxxxx nálevky.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x nepřítomnosti xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx x opakního xxxx, nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x kyslíku (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (vyhněte se xxxxxxxx občasným xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx bezprostředně před xxxxxxx x saponifikací, xxxxx může xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx hmotnosti xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x xx 25 x vzorku xx 500 xx baňky x xxxxxxx dnem xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Přidejte xxxxxxxx xx stálého xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx BHT (3.12), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx sodného (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x baňce x xxxxxxx xxxxx xx vodní xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Zahřejte x xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx minut. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) přes xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 minut xx xxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx kondenzátor xxxxxxxxx 20 xx xxxx x xxxxx xxxxx ochlaďte xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) nebo xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 xx petroléteru (3.2) a xxxxxxxx xxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx nebo xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx roztocích xx měl být xxxxx 2:1. Třepejte xxxxx dvě xxxxxx x xxxxxxxx ustát xxx xxxxxx.
5.3.1 Extrakce x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx dvakrát 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x dvakrát 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx extrakty x xxxxxx nálevce xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx (aby xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx) x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx 100 ml xxxxxxx xxxx, dokud voda xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (čtyřnásobné promývání xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx fází (4.4), aby xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a xxxxx 50 ml xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx po xxxxxx petroléterem (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx přístroje (4.8)
Xxxx xx xxxxxx oddělily (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx vložku (4.8.2) x xxxxxxxxxx dolní xxxxx xx xxxxx xxxxxxx U xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx xxx právě xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx tlaku x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx ramene, převeďte xxxxxx xxxxxx petroléteru xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, zazátkujte x xxxxx protřepejte. Xxxxxxxx xxxxxx oddělit xx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx do xxxxxx nálevky xxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx xxxxxxx petroléteru (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx tak, xxx xx to xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx jak xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx vzorku xxx HPLC
Odpipetujte alikvotní xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) do 250 xx baňky xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx téměř xx xxxxx xx xxxxxxx vakuové odparce (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx lázně xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx vakuové odparky. Xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx dusíku (3.9) x ihned xxxxxxxxx xxxxxx xx známém xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (koncentrace XX-α-xxxxxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxx 5 μg/ml xx 30 μx/xx).
5.5 Stanovení xxxxxx XXXX
Xxxxxxx E xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) a xxxxxxxxxxx xx měřena xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx detektoru (xxxxxxxx: 295 nm, xxxxx: 330 xx) xxxx XX detektoru (292 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μx) metanolového xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx fází (3.8). Xxxxxxxxx střední výšky xxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx předpokladu, že xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx fáze (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově)
Úroveň xxxx: 1–2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): Xxxxxxxxxxxxx detektor (xxxxxxxx: 295 xx/xxxxx: 330 nm) nebo XX xxxxxxxx (292 xx)
5.6 Xxxxxxxxx (DL-α-tokoferol xxxxxxx xxxx XX-α-xxxxxxxxxx)
5.6.1 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovních xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 25 xx zásobního roztoku XX-α-xxxxxxxxx acetátu (3.10.1) xx 500 xx xxxxx s xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, jak xx xx xxxxxxx x 5.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 a xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx 25 xx tohoto xxxxxxxx xx rotační vakuové xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx sucha, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx dusíku (3.9) x znovu xxxxxxxxx xxxxxx x 25,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 45,5 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, xxxxxxxxxx 50 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. Standardní xxxxxxxx roztok musí xxx čerstvě xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.1.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx do xxxxx 20 xx xxxxxxxxx baněk, xxxxxxx xx značku xxxxxxxxx (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxx xxxx 2,5, 5,0, 10,0 x 25,0 μg/ml XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx, xx. 2,28, 4,55, 9,10 x 22,8 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx použití xxxxxxxxx xxxxx píků (ploch) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.1.3 XX standardizace zásobního xxxxxxx DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 25,0 ml xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx etanolu (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx xxx 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284xx x xxxxxxx
Xxx xxxxx ředění xx měla být xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Standard XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku
Převeďte xxxxxxx 2,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx baňky, xxxxxxxxx x xxxxxxxx (3.3) x doplňte xx xxxxxx metanolem. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 40 μx XX-α-xxxxxxxxxx na ml, xxxxxxxxxx 44,0 μg XX-α-xxxxxxxxx acetátu xx xx. Xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx standardního pracovního xxxxxxx xx xxxxx 20 ml odměrných xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx, tj. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx střední xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Xxxxxxxx 2,0 xx zásobního roztoku XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 25,0 ml xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx být xxx 292 nm:
E1%1cm = 75,8 při 292xx x etanolu
Při tomto xxxxxx by xxxx xxx získána xxxxxxxx 0,6.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx E xxxxxxxx koncentraci xxxxxxx xxxxxx v μx/xx (xxxxxxxx xxxx α-xxxxxxxxx xxxxxx) ve vztahu xx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.1.2 nebo 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx X x x xx/xx ve xxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · X2 / X1 · x [xx/xx]
xx které:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxx vzorku (5.4) x μx/xx
X1 = xxxxx roztoku xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx odebraných x 5.4 x xx
x = xxxxx xxxxxxxx xxxxx x g
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x xxxxxx koncentrací xxxxxxxx X může xxx užitečné xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (hmotnostní xxxxxxx: 25 x) xx jednoho roztoku xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Množství xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx překročit 2g.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), k xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Po xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu nebo XX-α-xxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 přidejte xx xxxxxxx (3.10.1 xxxx 3.10.2) přibližně 10 xx XXX (3.12) x skladujte xxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxx skladovatelnosti xx xxxxx týdny).
7.5 Xxxxxxx BHT může xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx je xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Namísto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx sodného xxxx xxx použito xxxxxxxxx 50 mg EDTA.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 15 % z xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [2]
L: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro xxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
x |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
xxxxx [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
sr [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [xx/xx] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [mg/kg] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx použití
Tato xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Nerozlišuje xxxx X- a X- xxxxxxx.
2. Princip
Pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nasyceným xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahříván xxx 110 °X xx 20 xxxxx. Po xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx extrahován xx xxxxx xxxxxxxx podmínek x xxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx x vnitřní xxxxxxxx xxxx stanoveny x xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx pomocí XXXX x fluorescenční xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Dvojnásobně xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx xxxx xxxxxxx kvality xxxx xxx xxxxxxxxx (vodivost &xx; 10 μX/xx)
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), sušený xxx xxxxxx přes xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Vnitřní standardní xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (čistota/obsah &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.4 Xxxx-xxxxxx hydroxidu xxxxxxxxx (xxxx xxx xxxxx, xxx nebyl Ba(OH)2. 8 H2O xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx XxXX3, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx) (xxx xxxxxxxx 9.3)
3.5 Xxxxxxxx sodný
3.6 Kyselina xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, p20 = 1,19 x/xx
3.8 Xxxxxxx, XXXX xxxxxx
3.9 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40–60 °X
3.10 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxxxx 40,0 x XxXX (3.5) xx xxxx x xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x:
Xxxxxxx 492 xx XXX (3.7) a xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.12 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 xx XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x:
Xxxxxxx 8,2 xx HCL (3.7) x xxxxxxx xx 1 x vodou.
3.14 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x:
Xxxxxxx 34 ml xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) a xxxxxxx do 1 x xxxxx (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.2), x = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2553 x xxxxxxxxxx (3.2) x 500 xx xxxxxxx baňce x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x doplňte po xxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 xX xx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, c = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2728 g α-methyl-tryptofanu (3.3) x 500 xx odměrné baňce x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Skladujte xxx –18 xX xx dobu xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx tryptofanu x xxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxxx 2,00 xx koncentrovaného xxxxxxx tryptofanu (3.15), x 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x xxxxxxxxx (3.8) xx přibližně xxxxxx xxxxx a xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (10–30 %) xxxx konečný xxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx před xxxxxxxx.
Xxxxx přípravy xxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx octová
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Ethanolamin &xx; 98 %
3.21 Xxxxxx 1 x 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanolu (3.19) xx 100 xx xxxxxxxx (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx pro XXXX: 3,00 x xxxxxxxx octové (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 ml xxxxxxx (3.21) 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanolu (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1x/100 xx). Xxxxxxx xX na 5 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx do 1000 ml xxxxx (3.1).
4. Přístroje a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx pro XXXX xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
4.2 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii, 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.3 xX xxxx
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, objem 125 xx, xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx filtr, 0,45 μm
4.6 Autokláv, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) xxxx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx magnetické xxxxxxxx
4.8 Xxxxxx mixer
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Vzorek xx xxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 0,5 xx. Xxxxxx, které xxxx xxxxxxx vlhkost, xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx usušeny buď xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °X, xxxx zmrazením. Xxxxxx x xxxxxxx obsahem xxxx musí xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Stanovení xxxxxxx tryptofanu (xxxxxxx)
Xxxxxxx x přesností xx 1 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky. Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x (3.13) x 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx nebo mixujte 60 xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Nechejte xxxxxx xxxxxxxx x pipetujte 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx do xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 ml xxxxxxxx orto-fosforečné, c = 0,5 mol/l (3.14). Xxxxxxx xX xx 3,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného, x = 1,0 xxx/x (3.10). Přidejte xxxxxxxxx xxxxxxxx (3.8), xxxxxx obdrželi xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx objemu. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxx chromatografii (xxxxxxxxx stejný objem xxxx xxxxxxxxxx standardní xxxxxx (3.17)).
Xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx XXXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx ml xxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx den, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °X xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,2 xx xx 0,1 xx 1 g xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.4). Odvážená dávka xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx dusíku xxxxx 10 mg. Xxxxxxxx 8,4 x xxxx-xxxxxxx hydroxidu barnatého (3.4) a 10 xx xxxx. Promíchejte xx vířivém xxxxxx (4.8) xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Ponechejte xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx směsi. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx a láhev xxxxx uzavřete. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx (4.6) x xxxxxx xxxxx x xxxxx na 30–60 xxxxx. Uzavřete xxxxxxxx x autoklávujte xxx 110 (+ 2) °C xx xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx právě pod 100 °X. Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx Xx(XX)2. 8 X2X, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx 30 ml xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxxxx xxxxxx ve xxxxx/xxxxxx xxxxx xx dobu 15 xxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx 5 xx xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxxx lázni a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x (3.11) zatímco xxxxxxx a xxxxxxx xX xx 3,0 x použitím HCL, x = 1 xxx/x (3.12). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx koncentraci xxxx 10 x 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxx xx definovaný xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx sraženinu.
Před xxxxxxxxxxx do kolony XXXX přefiltrujte několik xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 5.4.
Xxxxxxx standardní xxxxxx x hydrolyzáty xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx není xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx den, xxxxx xxx xxxxxxxxxx při 5 °X po xxxxxxxxx xxxx tří xxx.
5.4 Stanovení xxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx vymývání jsou xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx; xxxxxxx podmínky smějí xxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (viz xxxx xxxxxxxx 9.1 x 9.2):
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.2): 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic náplně 3 μx nebo xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.22): 3,00 x xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 xx roztoku (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 xx). Upravte xX xx 5,00 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx do 1000 ml vodou (3.1)
Xxxxxx toku: 1 xx/xxx.
Xxxxxxx doba xxxx: xxxxxxxxx 34 minut
Detekční xxxxxx xxxxx: xxxxxxxx: 280 xx, xxxxx: 356 nm
Vstřikový xxxxx: 20 μx
6. Výpočet xxxxxxxx
X × B × X × X × X × MW / X × X × X × 10&xxxx;000 × X = x tryptofanu xx 100x xxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxx standardu (3.17)
X = xxxxxx píku xxxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx hydrolyzátu (5.3)
X = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) (2 xx) xxxxxxx xx kalibračního roztoku (3.17)
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu (3.15) x μxxxxxx/xx (= 2,50) xxxxxxxxx xx kalibračního roztoku (3.17)
X = objem xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.16) x xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) xxxx xx hydrolyzátu (5.3) (= 2,00 ml)
F = plocha xxxx xxxxxxxxx standardu, xxxxxxxx (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
H = xxxxx koncentrovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16) x ml (= 2,00) přidaného xx kalibračního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
W = xxxxxxxx vzorku x x (xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, jestliže xxx xxxxxx xxxxx x/xxxx odtučněn)
MW = xxxxxxxxxx hmotnost xxxxxxxxxx (= 204,23)
7. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % x vyššího xxxxxxxx.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxxx vzájemné xxxxxxxxx) xxxx uspořádána xxx, xx byly xxx xxxxxx analyzovány xx 12 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x následující tabulce:
L: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledků (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient variace xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx xxx xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx xxxxxxx doplněné X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Xxxxx xxxxxxxxxx pro prasata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
|
n |
50 |
55 |
50 |
|
střed [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [g/kg] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
r [g/kg] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
CVr [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [g/kg] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
R [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (třetí vzájemné xxxxxxxxx) byla xxxxxxxxxx xxx, že xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xx 13 xxxxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Replikované (5) analýzy byly xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Výsledky jsou xxxxxxx x následující xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odlehlých xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Směs xxxxxxx se xxxxx |
Xxxxxx 5 Xxxx pšenice xx xxxxx (= xxxxxx 4) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [x/xx] |
0,391 |
0,931 |
|
xx [g/kg] |
0,005 |
0,012 |
|
r [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
sR [x/xx] |
0,018 |
0,048 |
|
X [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Další studijní xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx byla xxxxxxxxxx xxx, xx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx potvrzení tryptofanu xxx hydrolýzy. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: počet xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: standardní odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: reprodukovatelnost
CVr: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx (XXX 117) |
Xxxxxx 2 Xxxxx-xxxxx rybí xxxxxx (XXX 118) |
Vzorek 3 Xxxxxx moučka (XXX 119) |
Xxxxxx 4 Xxxxxx odstředěné mléko (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
xX [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [x/xx] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
XXX [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx podmínky xxxxx xxxxxxxxxx lepší rozdělení xxxx tryptofanem x α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx následované xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kolony:
|
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: |
125 xx x 4 xx, C18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 μx xxxx obdobné |
||
|
Teplota xxxxxx: |
32 °C |
||
|
Mobilní xxxx: |
X: 0,01 xxx/x XX2XX4/xxxxxxx, 95 + 5 (xxxxxxxx + xxxxxxxx) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % A |
0 % B |
|
15 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
17 min. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % X |
40 % B |
|
|
21 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
33 xxx. |
100 % X |
0 % B |
|
|
Úroveň xxxx: |
1,2 xx/xxx. |
||
|
Xxxxxxx doba xxxx: |
xxxxxxxxx 33 minut |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxx XXXX kolony a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx poskytnout xxxxxxxxx startovní čáru xxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Navíc xx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxxx a vnitřního xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx xx překontrolovala xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx standardu xxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxx xxxx dostatečně xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx produktů, jinak xxxxx píky xxxxxxxx xxxxxxxx ovlivňovat xxxxxxxx xxxxxx chromatografie.
V rozsahu xxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (normální) koncentrací xxxxxxxxx standardu x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx píků xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx rozsahu XXXX/xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xxx (xxxx) xxx xxxxxxxxxx, x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx (jsou) xxxxxx xxxx (xxxx) xxxx xxxxxx xxxxxx (vysoké), xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx velikosti x/xxxx změněným konečným xxxxxxx.
9.3 Hydroxid xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx se xxxxxxxxx x xxxxxxx roztoku xxx stanovení pomocí XXXX, xxx xxxx x xxxxxxxxxx způsobovat xxxxx xxxxxxxx.
[1] Řízené xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- und Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (VDLUFA).
[2] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- und Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).