Směrnice Xxxxxx 2000/45/XX
xx xxx 6. xxxxxxxx 2000,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X, vitamínu X x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx
(Xxxx x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX ze xxx 20. července 1970, xxxxxx se zavádí xxxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxx Společenství xxx úřední xxxxxxxx xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx Rakouska, Xxxxxx x Švédska [2], x xxxxxxx na xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx úřední xxxxxxxx krmiv xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx x xxxxxxx krmiv, xxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro odběr xxxxxx x xxxxxxx.
(2) Xxxxxxxx Xxxx 70/524/EHS xx dne 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx [3], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxxx Komise (XX) x. 2439/1999 xx dne 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, že obsah xxxxxxxx X x xxxxxxxx X musí xxx uváděn na xxxxxxxxx, pokud xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx premixů x xxxxx.
(3) Xxxxxxxx Rady 79/373/XXX ze xxx 2. dubna 1979 x uvádění krmných xxxxx na xxx [5], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx Komise 2000/16/ES [6], a xxxxxxxx Xxxx 93/74/EHS xx xxx 13. xxxx 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx výživy [7], xxxxxxxxx pozměněná směrnicí 96/25/XX [8], xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx krmiv.
(4) Musí xxx xxxxxxxxx analytické xxxxxx xxx kontrolu xxxxxx xxxxx.
(5) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xxx se xxxxxx xxxxxxxx obsahu xxxxxxxx X, vitamínu X x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx.
Článek 2
Členské státy xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. srpna 2000. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx xxxx předpisy používat xx 1. xxxx 2000.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx být takový xxxxx xxxxxx při xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx si xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 6. xxxxxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxx
xxxx Komise
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Xx. věst. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. věst. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Xx. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Xx. věst. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Úř. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Úř. věst. X 125, 23.5.1996, x. 35.
PŘÍLOHA
ČÁST X STANOVENÍ XXXXXXXX A
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx je určena xxx xxxxxxxxx vitamínu X (xxxxxxxx) x xxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx A xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx xxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxx, xxxxx xx stanoví xxxxx xxxxxxx. Obsah xxxxxxxx A xx xxxxxxxx v mezinárodních xxxxxxxxxx (XX) xx xx. Xxxxx XX xxxxxxxx aktivitě 0,300 μx all-trans-vitamín X xxxxxxxx nebo 0,344 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx nebo 0,550 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxxx.
Xxx stanovitelnosti xx 2000 XX xxxxxxxx X/xx.
2. Princip
Vzorek je xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztokem xxxxxxxxx draselného a xxxxxxx A je xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx odstraněno xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxx x, xxxxx xx xx nutné, xxxxx na požadovanou xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxx xxxxxxxx fází vysoce xxxxxx kapalinové xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) za použití XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Chromatografické xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx tak, xxx xxxxxxx k xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx a xxxx xxx izomerů.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Petroléter, xxxxxx varu 40 xx 60 °C
3.3 Xxxxxxx
3.4 Roztok hydroxidu xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 ml
3.5 Xxxxxx askorbanu xxxxxxx, β = 10 x/100 ml (viz 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Sulfid xxxxx, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, c = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 g/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 2-propanol
3.9 Mobilní xxxx xxx XXXX: xxxx metanolu (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.10 Dusík, xxxxxx xxxxxxx
3.11 All-trans-vitamín A xxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx aktivity, xxxx. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx A (3.11) xx 100 ml xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 1400 XX xxxxxxxx A xx xx. Přesný xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx podle 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 1,80 x 106 XX/x.
3.12.1 Xxxxxxx xxxxxx all-trans-vitamín X xxxxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 mg 80 xx palmitátu xxxxxxxx X (3.12) xx 100 ml xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte xx 2-xxxxxxxxx (3.8) a xxxxxxx xx značku xxxxxxx rozpouštědlem. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 1400 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx xxxxx xxxx xxx stanoven xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx x xxxxxxxx skla
4.2.1 Xxxxx x plochým xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 ml, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Odměrné xxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Dělící xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx baňky, 250 ml, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, délka xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx zábrusovým xxxxxx, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx fáze, xxxxxx 185 xx (xxxx. Schleicher &xxx; Xxxxxxx 597 HY 1/2)
4.5 XXXX výbava xx xxxxxxxxxxxx systémem
4.5.1 Xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, velikost částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx nebo xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx pík xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx XXXX)
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx lázeň x xxxxxxxxxxx míchadlem
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) sestávající xx:
4.8.1 Skleněný xxxxxxx xxxxx x objemu 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a zátkou
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx procházející xxxxxxx. Nastavitelná xxxxxxx xxxx mít xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X x xxxxxx na xxxxxxx xxxxx tak, xxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx převedena xx xxxxxx nálevky.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Všechny xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx x opakního xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx (vypláchněte xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx, aby xxxxxx sítem x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, aby xxxxxxx k xxxxxxx. Xxxxxxxxxx musí být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x saponifikací, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx vitamínu X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X závislosti xx obsahu vitamínu X, xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x xx 25 g xxxxxx xx 500 xx xxxxx s xxxxxxx dnem xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx kroužení 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.13), 2 xx xxxxxxx askorbanu xxxxxxx (3.5) a 2 xx roztoku xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x baňce a xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx k xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx. Potom xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx hydroxidu draselného (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) a nechejte xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxx dusíku. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přibližně 20 xx xxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx kvantitativně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 ml xxxx xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx baňku xxxxxxxx 25 ml xxxxxxx (3.1) x 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx dělící xxxxxxx xxxx do extrakčního xxxxxxxxx. Podíl vody x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx silně dvě xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx dvě xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx s použitím xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Když xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx další xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2) x xxxxxxx 50 ml xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx kombinované xxxxxxxx x dělící xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) a xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx 100 ml xxxxxxx vody, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je obyčejně xxxxxxxxxxx). Přefiltrujte xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), xxx xx odstranila xxxxxxx xxxxxxxxxxxx voda xx 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx petroléterem (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx válce (4.8.1) xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x nasměrujte xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx U xxxxxxxxxxxx trubice xxx, xxx byl právě xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx ramene, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx dělící nálevky (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx a dobře xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx vrchní vrstvu xx xxxxxx nálevky xxxx předtím. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2), potom xxxxxxx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
Promyjte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx petroléteru xxx, xxx je xx xxxxxxx v 5.3.1, a xxxxxxxxxx xxx je xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx roztoku xxxxxx pro XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (z 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx xxxxx xx xxxxx hrušky (4.2.4). Odpařte xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx (4.1) za xxxxxxxxx tlaku xxx xxxxxxx xxxxx lázně xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx atmosférický tlak xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.10) x odpojte xxxxx xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx. Odstraňte zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) x ihned xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx objemu (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xx xxxx xxx x xxxxxxx 5 XX/xx až 30 XX/xx).
5.5 Stanovení pomocí XXXX
Xxxxxxx A xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx koloně X18 (4.5.1) a xxxxxxxxxxx xx měřena xxxxxx XX xxxxxxxxx (325 xx) nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (excitace: 325 xx, emise: 475 xx) (4.5.2).
Vstříkněte xxxxxxxxx xxxx (např. 20 μx) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.9). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx stejného xxxxxx x střední xxxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx jako doporučení; xxxxxxx podmínky xxxxx xxx použity za xxxxxxxxxxx, xx poskytují xxxxxx výsledky.
Kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.5.1): 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.9):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově)
Úroveň xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; XX xxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 nm/emise: 475 xx)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X acetátu (3.11.1) xxxx 20 ml xxxxxxxxx roztoku xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx nebo Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, jak xx xx xxxxxxx x 5.2, ale bez xxxxxxxx XXX. Následně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 a xxxxxxx do 500 xx xxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx 100 xx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx rozpouštědlo proudem xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx zbytek x 10,0 xx xxxxxxxx (3.3). Nominální xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 560 XX xxxxxxxx X/1 ml. Xxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxxxx 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx 20 ml xxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx metanolem (3.3) x promíchejte. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx je 56 XX xxxxxxxx X xx xx.
5.6.2 Příprava xxxxxxxxxxxx roztoků a xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0 a 10,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx baněk, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx jsou 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 XX xxxxxxxx A na xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx výšky xxxx (xxxxxx). Xx použití xxxxxxxxx výšek xxxx (xxxxx) nyrýsujte xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx výsledkům XX xxxxxxxx (5.6.3.3).
5.6.3 XX standardizace standardních xxxxxxx
5.6.3.1 Zásobní xxxxxx xxxxxxx X acetátu
Pipetujte 2,0 xx zásobního xxxxxxx vitamín A xxxxxxx (3.11.1) do 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX spektrum xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx spektrofotometru (4.6) mezi 300 xx a 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxx 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx obsahu xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx pro xxxxxxx X xxxxxxx = 1 530 při 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Zásobní roztok xxxxxxx X palmitátu
Pipetujte 2,0 ml zásobního xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxxxx (3.12.1) xx 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx A xx xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx do 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX vitamínu A xx xx. Změřte XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 xx a 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = E326 × 19,0
X1%1xx xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 957 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Standardní xxxxxxxx xxxxxxx vitamínu X
Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx A, připraveného xxxxx 5.6.1 do 50 xx odměrné xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8). Pipetujte 5,0 xx tohoto xxxxxxx do 25 xx xxxxxxx baňky x doplňte xx xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx proti 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) mezi 300 xx a 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx být xxxx 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX vitamínu X/xx = X325 × 18,3
X1%1xx pro xxxxxxx A xxxxxxx = 1&xxxx;821 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx vitamínu X xxxxxxxx koncentraci roztoku xxxxxx x XX/xx xx vztahu xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2).
Obsah xxxxxxxx X x x XX/xx xx xxxxxx je xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 · 1 000 / X1 · m (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu A x roztoku xxxxxx (5.4) v XX/xx
X1 = objem xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = objem xxxxxxx odebraných v 5.4 x ml
m = hmota xxxxxxxx xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 U xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx A může xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (hmotnostní xxxxxxx: 25 g) xx xxxxxxx roztoku xxxxxx xxx stanovení xxxxxx XXXX.
7.2 Xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx dělení, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx etanolu (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 X xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx čistých xxxx xx xxxx xxx doba xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 45–60 xxxxx.
7.5 Namísto XXX xxxx být použit xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx možné x použitím xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Namísto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Namísto roztoku xxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx EDTA.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 15 % x xxxxxxx výsledku.
9. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
L: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: standardní xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx selata |
|
|
L |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
n |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
střed [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [XX/xx] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [IU/kg] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [XX/xx] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
X [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
XXXX X
XXXXXXXXX VITAMÍNU X
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx stanovení xxxxxxxx X v xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx vyjádřen xxxx xx DL-α-tokoferol acetátu xx kg. 1 xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xxxxxxxx 0,91 xx XX-α-xxxxxxxxxx (xxxxxxx E).
Mez xxxxxxxxxxxxxxx je 2 xx vitamínu X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx hydrolyzován xxxxxxxxxx roztokem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a vitamín X je extrahován xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx odpařením x xxxxxx xx xxxxxxxx x metanolu x, xxxxx je xx xxxxx, xxxxx xx požadovanou koncentraci. Xxxxx vitamínu X xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx chromatografie (RP-HPLC) xx xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx detekce.
3. Xxxxxxx
3.1 Etanol, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, rozsah varu 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 xx
3.5 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 g/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx sodný, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx fenolftaleinu, β = 2 x/100 xx v xxxxxxx (3.1)
3.8 Mobilní xxxx xxx XXXX: xxxx metanolu (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Xxxxx, prostý xxxxxxx
3.10 XX-α-xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.10.1 Zásobní roztok XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxxxx x přesností xx 0,1 xx, 100 xx DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10) do 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x etanolu (3.1) a xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx DL-α-tokoferol xxxxxxx. (XX kontrola – xxx 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – viz 7.4 xxxxxxxx).
3.11 XX-α-xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, ověřené xxxxxxxx
3.11.1 Odvažte s xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 mg XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 xx odměrné xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx tohoto xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (XX kontrola – viz 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 poznámky).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Přístroje a xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx x xxxxxxxx skla
4.2.1 Baňky x plochým dnem xxxx Erlenmeyerovy xxxxx, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Odměrné xxxxx se zábrusovými xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 a 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx zábrusovým hrdlem, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx plynu
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 mm (xxxx. Xxxxxxxxxx & Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX výbava xx vstřikovacím xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 mm, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx nebo xxxxxxxxxx
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor x xxxxxxxxxxx nastavením xxxxxx xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Vodní xxxxx x magnetickým xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Skleněný odměrný xxxxx x objemu 1x xxxxxxxx zábrusovým xxxxxx x zátkou
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx ramenem x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Nastavitelná xxxxxxx xxxx xxx spodní xxxxx ve xxxxx xxxxxxx X x xxxxxx xx opačném xxxxx xxx, xxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X xx citlivý xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Všechny xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx použití xxxxxx z xxxxxxxx xxxx, xxxx nádobí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fólií) x kyslíku (vypláchněte xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx povolením xxxxx).
5.1 Příprava vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, aby xxxxxx sítem x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx x zahřátí. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx ztrátám vitamínu X.
5.2 Saponifikace
V xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxx x přesností xx 0,01 x, 2 x xx 25 x vzorku do 500 ml baňky x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky (4.2.1). Xxxxxxxx postupně xx xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx etanolu (3.1), přibližně 100 xx XXX (3.12), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Připojte kondenzátor (4.3) k xxxxx x xxxxxxx baňku xx vodní xxxxx x magnetickým míchadlem (4.7). Xxxxxxxx k xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxx proudem xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx saponifikovaný roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) a převeďte xxxxxxxx xx dělící xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx přístroje. Podíl xxxx a xxxxxxx x kombinovaných xxxxxxxxx xx xxx xxx xxxxx 2:1. Třepejte xxxxx xxx xxxxxx x nechejte ustát xxx xxxxxx.
5.3.1 Extrakce x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Když xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx tuto xxxxxxxx dvakrát 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 ml xxxxxxx xxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx (aby xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx) x potom xxxxxxxxxx xxxxxxxx x dalšími 100 xx xxxxxxx xxxx, dokud xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx obyčejně dostačující). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx přes xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), aby xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Vypláchněte xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x dobře xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8)
Xxxx xx vrstvy xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxx skleněného xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ve tvaru xxxxxxx U nastavitelné xxxxxxx xxx, aby xxx xxxxx xxx xxxxxxxx rozhraní. Xx xxxxxx tlaku x xxxxxxx dusíku do xxxxxxxxxxx ramene, převeďte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 ml xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vrstvy xxxxxxx xx a převeďte xxxxxx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx postup xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2), xxxxx dvakrát 50 xx dávkami xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx tak, xxx xx xx xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx jak xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx petroléteru (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx baňky ve xxxxx hrušky (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx odparce (4.1) za xxxxxxxxx xxxxx xxx teplotě xxxxx lázně nepřekračující 40 °C. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxxxx baňku xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx dusíku (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (koncentrace XX-α-xxxxxxxxxx xx xxxx xxx x rozsahu 5 μx/xx až 30 μx/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) a xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx fluorescenčního detektoru (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 xx) xxxx XX xxxxxxxxx (292 nm) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μl) metanolového xxxxxxx získaného x 5.4 x vymývejte xxxxxxx xxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxx výšky xxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx roztoku stejného xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx HPLC
Následující xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; ostatní xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx kapalinovou chromatografii (4.5.1): 250 xx x 4 mm, X18, velikost částic xxxxxx 5 nebo 10 μx nebo xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově)
Úroveň xxxx: 1–2 ml/min.
Detektor (4.5.2): Xxxxxxxxxxxxx detektor (xxxxxxxx: 295 xx/xxxxx: 330 xx) xxxx XX xxxxxxxx (292 xx)
5.6 Xxxxxxxxx (DL-α-tokoferol xxxxxxx xxxx XX-α-xxxxxxxxxx)
5.6.1 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu
5.6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovních xxxxxxx
Xxxxxxxx pipetou 25 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 500 xx xxxxx s xxxxxxx xxxx nebo Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx je xx popsáno x 5.2. Následně extrahujte xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 a doplňte xx 500 xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx do sucha, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx rozpusťte xxxxxx v 25,0 xx netanolu (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 45,5 μx XX-α-xxxxxxxxxx na xx, ekvivalent 50 μx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xx xx. Standardní xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx baněk, xxxxxxx xx xxxxxx metanolem (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxx jsou 2,5, 5,0, 10,0 a 25,0 μx/xx DL-α-tokoferol xxxxxxx, xx. 2,28, 4,55, 9,10 a 22,8 μx/xx DL-α-tokoferolu.
Vstříkněte xxxxxxxxxx 20 μl xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x stanovte xxxxxxx xxxxx píků (plochy). Xx použití středních xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx graf.
5.6.1.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxx roztoku DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10.1) xx 25,0 xx xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 nm x 320 xx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx by mělo xxx xxx 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284xx x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Standard XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku
Převeďte xxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx baňky, rozpusťte x xxxxxxxx (3.3) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 40 μx XX-α-xxxxxxxxxx na ml, xxxxxxxxxx 44,0 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx na xx. Standardní pracovní xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Příprava kalibračního xxxxxxx x kalibrační xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx do xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx, tj. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μg/ml XX-α-xxxxxxxxx acetátu.
Vstříkněte xxxxxxxxxx 20 μl xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx střední xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx graf.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Xxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 25,0 xx xxxxxxxx x změřte XX xxxxxxxx xxxxxx roztoku xxxxx etanolu (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 xx x 320 nm. Xxxxxxxxx maximum by xxxx být xxx 292 xx:
X1%1xx = 75,8 při 292xx x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx pro xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx koncentraci xxxxxxx xxxxxx x μg/ml (xxxxxxxx xxxx α-xxxxxxxxx xxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.1.2 nebo 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx X w x mg/kg ve xxxxxx xx dán xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · V2 / X1 · x [xx/xx]
xx které:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x roztoku xxxxxx (5.4) x μx/xx
X1 = objem xxxxxxx xxxxxx (5.4) v xx
X2 = objem xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 x ml
m = xxxxx zkušební xxxxx v g
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xxxx xxx užitečné xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx vsázek (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx jednoho xxxxxxx xxxxxx pro stanovení xxxxxx HPLC.
7.2 Xxxxxxxx xxxx ve vzorku xxxxxxxxx xxx analýzu xxxxx překročit 2x.
7.3 Xxxxx se neobjeví xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Po xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xxxx XX-α-xxxxxxxxxx podle 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 přidejte xx roztoku (3.10.1 xxxx 3.10.2) xxxxxxxxx 10 xx XXX (3.12) x skladujte xxxxxx v chladničce (xxxxxxxxx doba skladovatelnosti xx čtyři xxxxx).
7.5 Xxxxxxx BHT xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx je xxxxx x xxxxxxxx normální xxxxxx kolony.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx přibližně 150 xx kyseliny xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx roztoku xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx nesmí překročit 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [2]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: standardní xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro xxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
x |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
xxxxx [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
xx [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [xx/xx] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
XXXX C
STANOVENÍ XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx X- x X- xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx barnatého x xxxxxxxx xxx 110 °X xx 20 xxxxx. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx standard.
Pro stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx extrahován za xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx x vnitřní xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx pomocí XXXX x fluorescenční detekcí.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx xxxx xxxxxxx kvality musí xxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx &xx; 10 μX/xx)
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx > 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx přes xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Xxxxxxx standardní xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx pod xxxxxx xxxx pentoxid xxxxxxx
3.4 Xxxx-xxxxxx hydroxidu xxxxxxxxx (xxxx xxx xxxxx, xxx xxxxx Ba(OH)2. 8 H2O xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx vzduchu, xxx xx zabránilo xxxxxx XxXX3, xxx xxxx xxxxx stanovení) (xxx xxxxxxxx 9.3)
3.5 Xxxxxxxx xxxxx
3.6 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, w = 85 %
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x20 = 1,19 x/xx
3.8 Xxxxxxx, XXXX xxxxxx
3.9 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40–60 °X
3.10 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx, c = 1 mol/l:
Rozpusťte 40,0 x NaOH (3.5) xx xxxx x xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 6 mol/l:
Vezměte 492 ml HCL (3.7) a doplňte xx 1 l xxxxx.
3.12 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 xx XXX (3.7) x xxxxxxx do 1 x xxxxx.
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 mol/l:
Vezměte 8,2 xx HCL (3.7) x doplňte xx 1 l vodou.
3.14 Xxxxxxxx orto-fosforečná, c = 0,5 xxx/x:
Xxxxxxx 34 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) a xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.2), c = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2553 x xxxxxxxxxx (3.2) x 500 ml xxxxxxx baňce x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.13). Skladujte xxx –18 oC po xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx roztok, x = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2728 x α-xxxxxx-xxxxxxxxxx (3.3) x 500 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.13) x xxxxxxx xx značku xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 oC xx xxxx xxxxxxxxx xxxx týdnů.
3.17 Kalibrační xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx standard:
Vezměte 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu (3.15), x 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-methyl-tryptofan) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxx stejný xxxxx x na xxxxxxxxx stejnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (10–30 %) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx před xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx octová
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Ethanolamin &xx; 98 %
3.21 Xxxxxx 1 x 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) xx 100 xx xxxxxxxx (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: 3,00 x xxxxxxxx octové (3.18) + 900 ml xxxx (3.1) + 50,0 xx roztoku (3.21) 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanolu (3.19) x metanolu (3.8) (1x/100 xx). Xxxxxxx xX xx 5 x xxxxxxxx ethanolaminu (3.20). Doplňte xx 1000 xx xxxxx (3.1).
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx pro XXXX xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
4.2 Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 125 xx x 4 xx, X18, velikost xxxxxx náplně 3 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.3 xX xxxx
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx 125 xx, xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Membránový xxxxx, 0,45 μx
4.6 Xxxxxxxx, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) xxxx
4.7 Mechanická xxxxxxxx nebo magnetické xxxxxxxx
4.8 Xxxxxx xxxxx
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx tak, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 0,5 xx. Xxxxxx, xxxxx xxxx vysokou xxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx buď xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °X, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx x vysokým xxxxxxx xxxx xxxx být xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 xxx/x (3.13) x 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx 60 minut x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxx míchadla (4.7). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx kádinky. Xxxxxxxx 5 xx xxxxxxxx orto-fosforečné, x = 0,5 xxx/x (3.14). Upravte xX xx 3,0 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx, x = 1,0 xxx/x (3.10). Přidejte xxxxxxxxx xxxxxxxx (3.8), xxxxxx xxxxxxxx koncentraci xxxx 10 x 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx o vhodném xxxxxx x zřeďte xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx pro chromatografii (xxxxxxxxx stejný objem xxxx kalibrační xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx HPLC xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μm (4.5). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Chraňte standardní xxxxxx x extrakty xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xxxx xxxxx analyzovat xxxxxxxx xxxxxx xxx, mohou xxx skladovány xxx 5 °X xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,2 xx xx 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.4). Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx by xxxx xxx xxxxx dusíku xxxxx 10 xx. Xxxxxxxx 8,4 x xxxx-xxxxxxx hydroxidu barnatého (3.4) x 10 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xx vířivém xxxxxx (4.8) nebo magnetickém xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx nádoby 4 xx vody. Xxxxxxxxxxx xxxxxx x láhev xxxxx uzavřete. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx (4.6) x vroucí vodou x xxxxx na 30–60 xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxx 110 (+ 2) °X po xxxx 20 hodin.
Před xxxxxxxxx autoklávu xxxxxx xxxxxxx právě pod 100 °X. Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx Xx(XX)2. 8 H2O, xxxxxxxx do horké xxxxx 30 ml xxxx o pokojové xxxxxxx. Mírně xxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxxxx xxxxxx ve xxxxx/xxxxxx xxxxx xx dobu 15 xxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx 5 ml xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx lázni x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xX xx 3,0 x xxxxxxxx XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % metanolu x xxxxxxxx objemu. Převeďte xx xxxxxxx baňky x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx vodou xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pro chromatografii (xxxxxxxxx 100 ml). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx XXXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx x chromatografii xxxxx xxxxxxxx 5.4.
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx. Xxxxx není xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °X po xxxxxxxxx xxxx tří xxx.
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx podmínky pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx smějí xxx použity xx xxxxxxxxxxx, že poskytují xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxx xxxxxxxx 9.1 x 9.2):
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 xx x 4 xx, C18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 3 μm xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx Pokojová xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.22): 3,00 g xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx vody (3.1) + 50,0 xx roztoku (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 ml). Xxxxxxx xX na 5,00 x použitím ethanolaminu (3.20). Doplňte do 1000 xx xxxxx (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx doba xxxx: xxxxxxxxx 34 xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx délka: xxxxxxxx: 280 xx, emise: 356 nm
Vstřikový objem: 20 μx
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X × X × X × X × X × MW / X × X × H × 10&xxxx;000 × X = x tryptofanu xx 100g vzorku
A = plocha xxxx xxxxxxxxx standardu, roztoku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.17)
X = plocha píku xxxxxxxxxx, extraktu (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = objem xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) (2 xx) xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu (3.15) x μxxxxxx/xx (= 2,50) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) xxxx xx xxxxxxxxxxx (5.3) (= 2,00 xx)
X = plocha xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, extraktu (5.2) nebo hydrolyzátu (5.3)
X = plocha xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx koncentrovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16) v ml (= 2,00) přidaného xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
W = xxxxxxxx xxxxxx v x (opravená xx xxxxxxx xxxxxxxx, jestliže xxx vzorek xxxxx x/xxxx xxxxxxxx)
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (= 204,23)
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
8. Xxxxxxxx studijní xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx uspořádána tak, xx xxxx tři xxxxxx xxxxxxxxxxx ve 12 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx metody xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx byly xxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx xxxx uvedeny x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx laboratoří předkládajících xxxxxxxx
x: xxxxx jednotlivých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Krmivo pro xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx prasata xxxxxxxx X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
|
x |
50 |
55 |
50 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [x/xx] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
x [g/kg] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
CVr [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [x/xx] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
X [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxx vzájemné xxxxxxxxx) byla xxxxxxxxxx xxx, že xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xx 13 xxxxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx xxx extrakci xxxxxxx tryptofanu. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx byly xxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: počet xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odlehlých xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: reprodukovatelnost
CVr: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
CVR: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Xxxx xxxxxxx xx sójou |
Vzorek 5 Xxxx pšenice xx sójou (= xxxxxx 4) s xxxxxxxx tryptofanem (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [x/xx] |
0,391 |
0,931 |
|
xx [g/kg] |
0,005 |
0,012 |
|
r [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
xX [g/kg] |
0,018 |
0,048 |
|
R [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Další studijní xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx, že xxxxx xxxxxx byly xxxxxxxxxxx xx x xxxxx laboratořích s xxxxx potvrzení xxxxxxxxxx xxx hydrolýzy. Xxxxxxxx xxxx uvedeny v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: počet xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: koeficient variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx krmivo xxx xxxxxxx (XXX 117) |
Vzorek 2 Xxxxx-xxxxx xxxx xxxxxx (XXX 118) |
Xxxxxx 3 Sójová xxxxxx (XXX 119) |
Xxxxxx 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [g/kg] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
sr [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [g/kg] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
CVr [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
sR [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [x/xx] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
XXX [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx lepší xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx a α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx následované xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxx xxx kapalinovou chromatografii: |
125 xx x 4 xx, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 μx nebo xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxx xxxxxx: |
32 °X |
||
|
Xxxxxxx xxxx: |
X: 0,01 xxx/x XX2XX4/xxxxxxx, 95 + 5 (xxxxxxxx + objemově) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % X |
0 % B |
|
15 min. |
100 % A |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % A |
40 % B |
|
|
21 min. |
100 % X |
0 % X |
|
|
33 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
Xxxxxx xxxx: |
1,2 xx/xxx. |
||
|
Xxxxxxx doba xxxx: |
xxxxxxxxx 33 minut |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx se bude xxxxxx xxxxx xxxx XXXX kolony x xxxxxxxxx plnícího materiálu. Xxxxxxx xxxxxx musí xxx schopen poskytnout xxxxxxxxx startovní xxxx xxxx tryptofanem x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Navíc xx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Hydrolyzáty xxx xxxxxxxxx standardu xx xxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx čára xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx. Xx důležité, xxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx dlouhá xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxx pozdního xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
X xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx důležité, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx XXXX/xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud pík (xxxx) buď tryptofanu, x/xxxx vnitřního xxxxxxxxx xx (xxxx) xxxxxx xxxx (malé) xxxx xxxxxx xxxxxx (vysoké), xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx velikosti x/xxxx xxxxxxxx konečným xxxxxxx.
9.3 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx stává xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx se xxxxxxxxx x xxxxxxx roztoku xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX, xxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
[1] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Verband Deutscher Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (VDLUFA).
[2] Řízené xxxxxxxx skupinou pro xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).