Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/45/XX
xx xxx 6. xxxxxxxx 2000,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx vitamínu X, vitamínu X x tryptofanu v xxxxxxxx
(Xxxx s xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx se xxxxxx xxxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxx Společenství xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxx Rakouska, Xxxxxx x Xxxxxxx [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx za xxxxxx zjištění, xxx xxxx splněny požadavky xxxxxxxx x správních xxxxxxxx xx xxxxxx x složení xxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx odběr xxxxxx a xxxxxxx.
(2) Xxxxxxxx Xxxx 70/524/XXX xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx [3], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx (XX) x. 2439/1999 xx xxx 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx X musí xxx xxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxx xxxxx přidány xx xxxxxxx x xxxxx.
(3) Směrnice Xxxx 79/373/XXX ze xxx 2. xxxxx 1979 x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx na trh [5], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Komise 2000/16/ES [6], x xxxxxxxx Xxxx 93/74/XXX ze xxx 13. xxxx 1993 o xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx [7], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/XX [8], xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxxxx musí xxx uváděny na xxxxxxxxx krmiv.
(4) Xxxx xxx stanoveny analytické xxxxxx xxx kontrolu xxxxxx xxxxx.
(5) Xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X, vitamínu X x tryptofanu x krmivech x xxxxxxxxx prováděly xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx.
Článek 2
Členské xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx souladu s xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 31. xxxxx 2000. Xxxxxxxxxx x xxxx uvědomí Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. xxxx 2000.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy musí xxxxxxxxx odkaz na xxxx směrnici xxxx xxxx xxx takový xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx úředním vyhlášení. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x platnost xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
Článek 4
Tato xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu dne 6. xxxxxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. xxxx. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Xx. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Xx. věst. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Xx. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
XXXXXXX
XXXX A XXXXXXXXX XXXXXXXX X
1. Účel x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx určena xxx stanovení vitamínu X (xxxxxxxx) x xxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx X xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx alkohol x xxxx cis xxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Obsah xxxxxxxx X xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (XX) na xx. Xxxxx XX xxxxxxxx xxxxxxxx 0,300 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx nebo 0,344 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx nebo 0,550 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2000 XX vitamínu X/xx.
2. Princip
Vzorek je xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx je odstraněno xxxxxxxxx x zbytek xx xxxxxxxx x xxxxxxxx x, xxxxx xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Obsah vitamínu X xx xxxxxxx xxxxxxxx fází vysoce xxxxxx xxxxxxxxxx chromatografie (XX-XXXX) xx použití XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx tak, xxx xxxxxxx k xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx x xxxx xxx izomerů.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx askorbanu sodného, β = 10 x/100 ml (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Sulfid xxxxx, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx sulfidu xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (pro x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 g/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 2-xxxxxxxx
3.9 Mobilní xxxx pro HPLC: xxxx metanolu (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx bude xxxxxxxx charakteristikami xxxxxxx xxxxxx.
3.10 Dusík, prostý xxxxxxx
3.11 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxx, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X acetátu: Xxxxxxx x přesností xx 0,1 xx 50 mg xxxxxxx xxxxxxxx A (3.11) xx 100 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xx 2-propanolu (3.8) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx je 1400 XX vitamínu A xx xx. Xxxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxx podle 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx, xxxxx xxxxx, ověřené xxxxxxxx, xxxx. 1,80 x 106 XX/x.
3.12.1 Xxxxxxx roztok all-trans-vitamín X palmitátu: Odvažte x přesností xx 0,1 xx 80 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (3.12) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 1400 XX xxxxxxxx X xx xx. Přesný obsah xxxx být xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Nádobí z xxxxxxxx skla
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Erlenmeyerovy xxxxx, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Allihnův xxxxxxxxxxx, xxxxx izolační xxxxxx 300 mm, xx xxxxxxxxxx hrdlem, x adaptérem xxx xxxxxxxx xxxxxxx plynu.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Schleicher & Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX výbava xx vstřikovacím systémem
4.5.1 Xxxxxx pro kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxx všechny xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx XXXX)
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx míchadlem
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx odměrný xxxxx x xxxxxx 1x vybavený xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx vybavená xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Nastavitelná trubice xxxx mít spodní xxxxx xx tvaru xxxxxxx U x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X je citlivý xxxx (XX) xxxxxx x oxidaci. Xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx x nepřítomnosti xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxx xxxx, xxxx nádobí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x kyslíku (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (vyhněte se xxxxxxxx občasným xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Příprava vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, xxx xxxxxx sítem s xxxxxx 1 xx, xxxxxxx dbejte, xxx xxxxxxx x zahřátí. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x saponifikací, xxxxx může dojít xx xxxxxxx vitamínu X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxx vitamínu X, xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x xx 25 g xxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx dnem nebo Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx postupně xx xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx etanolu (3.1), xxxxxxxxx 100 mg XXX (3.13), 2 xx xxxxxxx askorbanu xxxxxxx (3.5) a 2 ml xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x baňce x xxxxxxx xxxxx do xxxxx lázně s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx x xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx minut. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx (3.4) xxxx kondenzátor (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx xx stálého xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx dusíku. Potom xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přibližně 20 xx xxxx x xxxxx baňky xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx kvantitativně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 ml xxxx xx 1000 ml xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx xx extrakčního xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx baňku xxxxxxxx 25 ml xxxxxxx (3.1) x 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx výplachy xx dělící xxxxxxx xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x etanolu x xxxxxxxxxxxxx roztocích xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx dvě xxxxxx x nechejte xxxxx xxx minuty.
5.3.1 Xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx nálevky (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx vrstvu petroléteru xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx dvakrát 100 xx petroléteru (3.2) a dvakrát 50 xx petroléteru (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx nálevce xxxxxxx 100 ml xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx kroužení (xxx xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx) x potom xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 100 xx xxxxxxx vody, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (čtyřnásobné xxxxxxxxx xx obyčejně xxxxxxxxxxx). Přefiltrujte extrakt xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), xxx xx odstranila všechna xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx odměrné xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x dobře xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx extrakčního přístroje (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), nahraďte zátku xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx zábrusovou vložku (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx písmene X xxxxxxxxxxxx trubice xxx, xxx xxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx pomoci tlaku x rozvodu xxxxxx xx postranního ramene, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx dělící xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx skleněného xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx nálevky xxxx xxxxxxx. Opakujte xxxxxx xxxxxxxx dalšími 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2), potom xxxxxxx 50 xx dávkami xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, jak je xx popsáno x 5.3.1, x pokračujte xxx je xxx xxxxxxx.
5.4 Příprava xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx roztoku xxxxxxxxxxx (z 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 ml xxxxx xx tvaru xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx sucha xx rotační xxxxxxx xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tlak xxxxxxxxxxx dusíku (3.10) x odpojte xxxxx xx rotační xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) x ihned xxxxxxxxx zbytek ve xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xx měla být x xxxxxxx 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Stanovení xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx koloně X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx měřena pomocí XX xxxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, emise: 475 xx) (4.5.2).
Vstříkněte xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μx) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 5.4 x vymývejte xxxxxxx xxxx (3.9). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) xxxxxxxx vstřiků xxxxxxx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Podmínky XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, že poskytují xxxxxx výsledky.
Kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.5.1): 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μx nebo ekvivalent
Mobilní xxxx (3.9):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; Směs xxxxxxxx (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; XX xxxxxxxx (325 nm) xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor (xxxxxxxx: 325 nm/emise: 475 nm)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx standardních pracovních xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 xx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxx X xxxxxxx (3.11.1) xxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 500 xx xxxxx x plochým xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx je xx xxxxxxx v 5.2, ale xxx xxxxxxxx XXX. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx 100 xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx odparce (xxx 5.4) xxxxx xx xxxxx, odstraňte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) a xxxxx rozpusťte xxxxxx x 10,0 xx xxxxxxxx (3.3). Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 560 IU xxxxxxxx A/1 xx. Xxxxxx xxxxx se xxxxxxx podle 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx xxxx použitím.
Pipetujte 2,0 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního roztoku xx 20 xx xxxxxxx baňky, doplňte xx xxxxxx metanolem (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx je 56 XX vitamínu X xx xx.
5.6.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků a xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 5,0 x 10,0 ml zředěného xxxxxxxxxxxx pracovního roztoku xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx baněk, xxxxxxx xx značku xxxxxxxxx (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 XX xxxxxxxx X xx xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx výšky xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx výšek xxxx (xxxxx) nyrýsujte kalibrační xxxx odpovídající xxxxxxxxx XX xxxxxxxx (5.6.3.3).
5.6.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.3.1 Xxxxxxx roztok xxxxxxx A xxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx (3.11.1) xx 50 ml odměrné xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 56 IU xxxxxxxx A na xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx do 25 xx odměrné baňky x doplňte xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx X xx ml. Změřte XX spektrum xxxxxx xxxxxxx proti 2-propanolu (3.8) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx pro xxxxxxx A alkohol = 1 530 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín A xxxxxxxxx (3.12.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X na xx. Pipetujte 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx xx 25 xx odměrné baňky x xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx obsahu xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 957 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx X
Xxxxxxxxx 3,0 xx nezředěného xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1 do 50 xx odměrné xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx 5,0 ml tohoto xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx A xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx proti 2-xxxxxxxxx (3.8) ve xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 nm a 327 xx.
Xxxxxxx obsahu xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = X325 × 18,3
E1%1cm xxx xxxxxxx A xxxxxxx = 1 821 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
6. Xxxxxxx výsledků
Ze xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx pro xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx A xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x XX/xx xx xxxxxx ke xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2).
Obsah xxxxxxxx X x x XX/xx ve xxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxx xxxxxx (5.4) x IU/ml
V1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 v xx
x = hmota zkušební xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x nízkou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 g) xx xxxxxxx roztoku xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX.
7.2 Xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Pokud se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), x rozrušení xxxxxx.
7.4 X rybího xxxx x ostatních čistých xxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na 45–60 xxxxx.
7.5 Namísto XXX xxxx xxx použit xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx x použitím xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx sodného může xxx použito xxxxxxxxx 150 xx kyseliny xxxxxxxxx.
7.8 Namísto roztoku xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx přibližně 50 mg XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx xxxxx překročit 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro xxxxxx |
|
|
X |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
x |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
xxxxx [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [XX/xx] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [XX/xx] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
CVr [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [IU/kg] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
X [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
ČÁST X
XXXXXXXXX VITAMÍNU X
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx metoda xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx vyjádřen xxxx xx DL-α-tokoferol xxxxxxx xx kg. 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,91 xx XX-α-xxxxxxxxxx (vitamín X).
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztokem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx X je extrahován xx petroléteru. Rozpouštědlo xx xxxxxxxxxx odpařením x xxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxx x, xxxxx xx xx nutné, xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx detekce.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, rozsah varu 40 až 60 °X
3.3 Metanol
3.4 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 xx
3.5 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Xx2X. x H2O (x = 7–9)
3.6.1 Roztok xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 mol/l x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (xxx x = 9) (viz 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx fenolftaleinu, β = 2 x/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Xxxxx, prostý xxxxxxx
3.10 DL-α-tokoferol xxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.10.1 Xxxxxxx roztok XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxxxx x přesností xx 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu (3.10) do 100 xx odměrné baňky. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx značku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx. (XX kontrola – xxx 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – viz 7.4 poznámky).
3.11 XX-α-xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, ověřené xxxxxxxx
3.11.1 Odvažte x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 mg XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte x xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx tohoto xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (UV kontrola – viz 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – viz 7.4 xxxxxxxx).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Nádobí x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Baňky x plochým xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Odměrné xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 ml
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, kuželovité, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Hruškovité xxxxx, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx hrdlem, x adaptérem xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX výbava xx vstřikovacím xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μx nebo xxxxxxxxxx
4.5.2 XX nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlnové xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 xx křemennými xxxxxxxx
4.7 Vodní xxxxx x magnetickým xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) sestávající xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a zátkou
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Nastavitelná xxxxxxx xxxx xxx spodní xxxxx ve tvaru xxxxxxx X a xxxxxx na xxxxxxx xxxxx tak, xxx xxxxx být horní xxxxxx kapaliny xx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx použití xxxxxx x opakního xxxx, nebo nádobí xxxxxxxxxx hliníkovou xxxxx) x kyslíku (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx nad xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx extrakce nahrazen xxxxxxx (vyhněte xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Příprava vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, aby xxxxxx xxxxx s xxxxxx 1 mm, xxxxxxx dbejte, xxx xxxxxxx k zahřátí. Xxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x saponifikací, xxxxx může xxxxx xx xxxxxxx vitamínu X.
5.2 Saponifikace
V xxxxxxxxxx xx hmotnosti xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x xx 25 x vzorku xx 500 xx xxxxx x plochým xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx kroužení 130 ml xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx BHT (3.12), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx xxxxxxx sulfidu xxxxxxx (3.6). Připojte kondenzátor (4.3) k xxxxx x xxxxxxx xxxxx xx vodní xxxxx x magnetickým xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx x xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx pět xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx (3.4) přes xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 minut xx xxxxxxx míchání pod xxxxxxx proudem xxxxxx. Xxxxx vypláchněte xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx teplotu.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx do dělící xxxxxxx nebo xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Podíl xxxx a xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx roztocích xx xxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx dvě xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Extrakce x použitím xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx oddělily (viz xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx do xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx tuto xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx extrakty v xxxxxx nálevce xxxxxxx 100 ml xxxxxxx xxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) x xxxxx opakovaným xxxxxxxx x xxxxxxx 100 xx dávkami xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (čtyřnásobné promývání xx obyčejně dostačující). Xxxxxxxxxxxx extrakt přes xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx dělení xxxx (4.4), xxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx suspendovaná xxxx do 500 xx odměrné xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx dělící xxxxxxx a filtr 50 xx petroléteru (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx zátku xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx vložku (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ve xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tak, xxx xxx xxxxx xxx xxxxxxxx rozhraní. Za xxxxxx xxxxx z xxxxxxx dusíku xx xxxxxxxxxxx ramene, převeďte xxxxxx xxxxxx petroléteru xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x dobře xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx x převeďte xxxxxx vrstvu do xxxxxx nálevky xxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dalšími 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx dvakrát 50 xx dávkami xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxx xx xx xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx xx tam xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 nebo 5.3.2) do 250 xx xxxxx xx xxxxx hrušky (4.2.4). Xxxxxxx rozpouštědlo xxxxx xx xxxxx na xxxxxxx vakuové odparce (4.1) xx sníženého xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx nepřekračující 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tlak připuštěním xxxxxx (3.9) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx odparky. Xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx dusíku (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx známém xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxx 5 μx/xx xx 30 μx/xx).
5.5 Stanovení xxxxxx XXXX
Xxxxxxx E xx oddělen xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 nm, xxxxx: 330 nm) xxxx UV xxxxxxxxx (292 xx) (4.5.2).
Vstříkněte xxxxxxxxx část (např. 20 μx) metanolového xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 x vymývejte xxxxxxx fází (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx roztoku xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx předkládány xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 mm x 4 mm, X18, velikost částic xxxxxx 5 nebo 10 μx nebo xxxxxxx
Xxxxxxx fáze (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově)
Úroveň xxxx: 1–2 ml/min.
Detektor (4.5.2): Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx/xxxxx: 330 nm) xxxx XX xxxxxxxx (292 xx)
5.6 Kalibrace (DL-α-tokoferol xxxxxxx xxxx DL-α-tokoferolu)
5.6.1 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu
5.6.1.1 Xxxxxxxx standardních xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx pipetou 25 xx xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 500 ml xxxxx x plochým xxxx nebo Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) a xxxxxxxxxxxx, jak je xx popsáno x 5.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 a xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx. Odpařte 25 xx xxxxxx extraktu xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx sucha, xxxxxxxxx zbývající rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx rozpusťte xxxxxx v 25,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 45,5 μx DL-α-tokoferolu xx xx, xxxxxxxxxx 50 μx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xx ml. Standardní xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.1.2 Příprava xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku do xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, doplňte xx značku xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx jsou 2,5, 5,0, 10,0 a 25,0 μg/ml XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx, tj. 2,28, 4,55, 9,10 x 22,8 μg/ml DL-α-tokoferolu.
Vstříkněte xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx píků (plochy). Xx použití středních xxxxx píků (ploch) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.1.3 XX standardizace xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxxx roztoku DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10.1) xx 25,0 ml xxxxxxxx x změřte XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 nm.
Absorpční xxxxxxx by mělo xxx xxx 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284xx v xxxxxxx
Xxx tomto xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Standard XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx pipetou 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferolu (3.11.1) xx 50 ml xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x metanolu (3.3) x xxxxxxx xx xxxxxx metanolem. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 40 μx XX-α-xxxxxxxxxx na xx, xxxxxxxxxx 44,0 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. Standardní xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 a 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx do sérií 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx, xx. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μg/ml XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Za xxxxxxx středních výšek xxxx (ploch) narýsujte xxxxxxxxxx graf.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Xxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 25,0 xx xxxxxxxx x xxxxxx UV xxxxxxxx xxxxxx roztoku xxxxx etanolu (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx. Xxxxxxxxx maximum xx xxxx být xxx 292 nm:
E1%1cm = 75,8 xxx 292xx x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx vitamínu X xxxxxxxx koncentraci xxxxxxx xxxxxx x μg/ml (xxxxxxxx xxxx α-tokoferol xxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx E w x xx/xx xx xxxxxx xx dán xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · V2 / X1 · x [xx/xx]
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu E x roztoku xxxxxx (5.4) x μx/xx
X1 = objem xxxxxxx xxxxxx (5.4) v xx
X2 = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 x ml
m = xxxxx zkušební xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 X vzorků x nízkou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X může xxx užitečné spojit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx vsázek (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro stanovení xxxxxx HPLC.
7.2 Xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx překročit 2x.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX-α-xxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 přidejte xx xxxxxxx (3.10.1 xxxx 3.10.2) přibližně 10 xx XXX (3.12) x skladujte xxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxx skladovatelnosti xx xxxxx xxxxx).
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx xxx použit hydrochinon.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- a δ xxxxxxxxxx xx možné x použitím normální xxxxxx kolony.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx použito xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx EDTA.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx u xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx spolupráce [2]
L: xxxxx laboratoří
n: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: koeficient variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx selata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
n |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
střed [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
xx [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [xx/xx] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxx metoda xx určena xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxx. Nerozlišuje xxxx X- x L- xxxxxxx.
2. Princip
Pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx hydrolyzován za xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahříván xxx 110 °X po 20 hodin. Po xxxxxxxxx xx přidán xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx kyselých podmínek x přítomnosti xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx pomocí HPLC x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxx destilovaná xxxx, xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx používána (xxxxxxxx &xx; 10 μX/xx)
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxx: tryptofan (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Vnitřní standardní xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.4 Xxxx-xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxx xxx xxxxx, xxx nebyl Xx(XX)2. 8 X2X nadměrně xxxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxx BaCO3, jež xxxx rušit xxxxxxxxx) (xxx xxxxxxxx 9.3)
3.5 Xxxxxxxx sodný
3.6 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x20 = 1,19 x/xx
3.8 Metanol, XXXX xxxxxx
3.9 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40–60 °X
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1 mol/l:
Rozpusťte 40,0 x NaOH (3.5) xx vodě x xxxxxxx xx 1 x vodou (3.1).
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x:
Xxxxxxx 492 ml XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 l xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 xx XXX (3.7) a xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.13 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 xxx/x:
Xxxxxxx 8,2 xx HCL (3.7) x xxxxxxx xx 1 l xxxxx.
3.14 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x:
Xxxxxxx 34 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) x xxxxxxx do 1 x xxxxx (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx tryptofanu (3.2), x = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2553 x xxxxxxxxxx (3.2) x 500 xx xxxxxxx baňce v xxxxxxxx chlorovodíkové (3.13) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx při –18 oC xx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, c = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2728 x α-xxxxxx-xxxxxxxxxx (3.3) x 500 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 oC xx xxxx xxxxxxxxx xxxx týdnů.
3.17 Kalibrační xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxxx 2,00 xx koncentrovaného xxxxxxx tryptofanu (3.15), x 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxx stejný xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (10–30 %) xxxx konečný xxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx před xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx přímým slunečním xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx octová
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Xxxxxxxxxxx &xx; 98 %
3.21 Xxxxxx 1 x 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) ve 100 xx metanolu (3.8).
3.22 Xxxxxxx fáze xxx XXXX: 3,00 g xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 xx roztoku (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x metanolu (3.8) (1x/100 ml). Xxxxxxx xX xx 5 x použitím xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx xx 1000 xx vodou (3.1).
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Vybavení pro XXXX xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
4.2 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μx xxxx ekvivalent
4.3 xX xxxx
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, objem 125 xx, se širokým xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxx, 0,45 μm
4.6 Xxxxxxxx, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) xxxx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx magnetické xxxxxxxx
4.8 Vířivý mixer
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx rozmělněn xxx, xxx prošel xxxxx x xxxxxx 0,5 xx. Vzorky, které xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxx před xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx teplotě xxxxxxxxxxxxx 50 °C, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx x xxxxxxx obsahem xxxx musí být xxxx mletím xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky. Xxxxxxxx 100 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 xxx/x (3.13) x 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx xxxx mixujte 60 xxxxx s xxxxxxxx mechanické třepačky, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Nechejte xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx 10,0 xx roztoku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxx pH xx 3,0 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx, x = 1,0 xxx/x (3.10). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (3.8), xxxxxx obdrželi koncentraci xxxx 10 x 30 % metanolu x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx odměrné xxxxx o xxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxx na objem xxxxxxxx xxx chromatografii (xxxxxxxxx stejný xxxxx xxxx xxxxxxxxxx standardní xxxxxx (3.17)).
Xxxx xxxxxxxxxxx xx kolony HPLC xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Chraňte standardní xxxxxx a xxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx extrakty xxxxxx xxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx při 5 °C xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.3 Stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,2 xx xx 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx polypropylénové xxxxx (4.4). Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx měla xxx obsah xxxxxx xxxxx 10 xx. Xxxxxxxx 8,4 g xxxx-xxxxxxx xxxxxxxxx barnatého (3.4) x 10 xx xxxx. Promíchejte xx vířivém xxxxxx (4.8) xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Ponechejte xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx směsi. Xxxxxxxxxx xxxxx nádoby 4 xx xxxx. Našroubujte xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Přeneste xx xxxxxxxxx (4.6) x vroucí vodou x xxxxx xx 30–60 xxxxx. Uzavřete xxxxxxxx a autoklávujte xxx 110 (+ 2) °X xx xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx autoklávu xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 100 °X. Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx Xx(XX)2. 8 X2X, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx 30 ml xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Mírně xxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx/xxxxxx xxxxx xx xxxx 15 xxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx 5 xx xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x (3.11) zatímco xxxxxxx x xxxxxxx xX na 3,0 x xxxxxxxx XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Převeďte xx odměrné xxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx vodou xx xxxxxxxxxx objem xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxxxx xx kolony XXXX xxxxxxxxxxxx několik xx xxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 5.4.
Chraňte standardní xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx přímým slunečním xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx analyzovat hydrolyzáty xxxxxx xxx, mohou xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °X po xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.4 Xxxxxxxxx pomocí XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx smějí xxx použity za xxxxxxxxxxx, že poskytují xxxxxx výsledky (xxx xxxx xxxxxxxx 9.1 x 9.2):
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.2): 125 xx x 4 xx, C18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 3 μm xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx kolony Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.22): 3,00 x xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx vody (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 xx). Xxxxxxx xX xx 5,00 x použitím xxxxxxxxxxxx (3.20). Doplňte do 1000 xx vodou (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx xxxx xxxx: xxxxxxxxx 34 minut
Detekční xxxxxx xxxxx: xxxxxxxx: 280 xx, emise: 356 xx
Xxxxxxxxx objem: 20 μx
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X × X × X × X × X × XX / X × G × X × 10&xxxx;000 × X = x xxxxxxxxxx xx 100g vzorku
A = plocha xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxx standardu (3.17)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, extraktu (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) (2 xx) xxxxxxx xx kalibračního xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) v μxxxxxx/xx (= 2,50) přidaného xx kalibračního xxxxxxx (3.17)
X = objem xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx xxxxxxxxx při xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 ml) xxxx xx hydrolyzátu (5.3) (= 2,00 ml)
F = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, extraktu (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = plocha xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = objem koncentrovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx (= 2,00) xxxxxxxxx xx kalibračního standardního xxxxxxx (3.17)
W = xxxxxxxx vzorku x x (xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, jestliže xxx xxxxxx xxxxx x/xxxx xxxxxxxx)
XX = xxxxxxxxxx hmotnost xxxxxxxxxx (= 204,23)
7. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení provedených x stejného vzorku xxxxx překročit 10 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx spolupráce Společenství (xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx byly xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 12 laboratořích k xxxxxxx metody pro xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x každého xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx uvedeny x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
CVR: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Krmivo xxx xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Krmný xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
|
x |
50 |
55 |
50 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [x/xx] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
x [x/xx] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
XXx [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [g/kg] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
R [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx studijní xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxx vzájemné xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx ve 13 xxxxxxxxxxxx x ověření xxxxxx xxx extrakci xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Výsledky xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx testem)
sr: xxxxxxxxxx odchylka opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: reprodukovatelnost
CVr: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Xxxx xxxxxxx xx xxxxx |
Xxxxxx 5 Xxxx xxxxxxx xx sójou (= xxxxxx 4) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [g/kg] |
0,391 |
0,931 |
|
sr [x/xx] |
0,005 |
0,012 |
|
x [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
xX [x/xx] |
0,018 |
0,048 |
|
X [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Xxxxx studijní xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx, že xxxxx xxxxxx byly xxxxxxxxxxx xx x xxxxx laboratořích s xxxxx potvrzení xxxxxxxxxx xxx hydrolýzy. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: xxxxx jednotlivých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odlehlých xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Cochran-Dixonovým xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: reprodukovatelnost
CVr: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: koeficient variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx krmivo xxx xxxxxxx (CRM 117) |
Xxxxxx 2 Xxxxx-xxxxx xxxx xxxxxx (XXX 118) |
Vzorek 3 Sójová xxxxxx (XXX 119) |
Xxxxxx 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx mléko (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
xX [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [g/kg] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
CVR [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx podmínky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vymývání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: |
125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 μx xxxx obdobné |
||
|
Teplota xxxxxx: |
32 °C |
||
|
Mobilní xxxx: |
X: 0,01 xxx/x KH2PO4/metanol, 95 + 5 (xxxxxxxx + xxxxxxxx) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % A |
0 % X |
|
15 min. |
100 % X |
0 % X |
|
|
17 min. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % A |
40 % B |
|
|
21 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
33 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
Xxxxxx xxxx: |
1,2 ml/min. |
||
|
Celková doba xxxx: |
xxxxxxxxx 33 minut |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx xx bude xxxxxx xxxxx typu XXXX kolony a xxxxxxxxx xxxxxxxx materiálu. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx čáru xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxxx x vnitřního xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx bez xxxxxxxxx standardu by xxxx být xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx xx překontrolovala xxxxxxxxx čára za xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxx běhu xxxx dostatečně xxxxxx xxx vymytí všech xxxxxxxxxxxx produktů, xxxxx xxxxx píky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx následný xxxxxx chromatografie.
V xxxxxxx xxxxxxxx, xx měl xxxxxxxxxxxxxxxx systém xxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xx měla xxx měřena x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardu x xxxxxxxx xx koncentracemi xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx HPLC/flourescenčního xxxxxxx. Xxxxx pík (xxxx) xxx tryptofanu, x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx (xxxx) xxxxxx xxxx (malé) xxxx xxxxxx xxxxxx (vysoké), xxxx xx být xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx velikosti x/xxxx změněným xxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Hydroxid barnatý
Stářím xx xxxxx hydroxid xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxxxxxxx x nečirém roztoku xxx stanovení pomocí XXXX, což může x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx výsledky.
[1] Řízené xxxxxxxx skupinou pro xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).
[2] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).