Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/45/XX
xx xxx 6. července 2000,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxx E x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx
(Xxxx x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx dne 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx aktem x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxx x Švédska [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv xx xxxxxx zjištění, zda xxxx splněny xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx jakost x xxxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxx.
(2) Xxxxxxxx Rady 70/524/XXX xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx látkách v xxxxxxxx [3], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx (XX) x. 2439/1999 xx dne 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx E musí xxx xxxxxx na xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx.
(3) Xxxxxxxx Xxxx 79/373/XXX xx xxx 2. xxxxx 1979 x uvádění krmných xxxxx na xxx [5], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Komise 2000/16/XX [6], x směrnice Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. xxxx 1993 o krmivech xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx [7], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx 96/25/XX [8], stanoví, xx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx krmiv.
(4) Musí xxx stanoveny analytické xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx.
(5) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxx xxxxxxxx obsahu xxxxxxxx A, xxxxxxxx X x tryptofanu x krmivech a xxxxxxxxx prováděly xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx a správní xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx souladu s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. srpna 2000. Xxxxxxxxxx x xxxx uvědomí Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx používat xx 1. xxxx 2000.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx takový xxxxx xxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx určena členským xxxxxx.
V Bruselu xxx 6. července 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxx Xxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Úř. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Úř. xxxx. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Úř. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Xx. věst. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Úř. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
XXXXXXX
XXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXX X
1. Účel x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (retinolu) v xxxxxxxx x premixech. Xxxxxxx A zahrnuje xxx-xxxxx-xxxxxxx xxxxxxx a xxxx xxx izomery, xxxxx xx stanoví xxxxx metodou. Xxxxx xxxxxxxx X je xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (XX) xx xx. Xxxxx XX xxxxxxxx xxxxxxxx 0,300 μx all-trans-vitamín X xxxxxxxx xxxx 0,344 μx all-trans-vitamín A xxxxxxx nebo 0,550 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxxx.
Xxx stanovitelnosti je 2000 XX vitamínu X/xx.
2. Princip
Vzorek je xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx draselného x xxxxxxx X je xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxx x, xxxxx xx xx nutné, xxxxx xx požadovanou xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx stanoví xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxx xxxxxxxxxx chromatografie (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX xxxx fluorescenční xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx a xxxx xxx izomerů.
3. Činidla
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °C
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx sulfidu xxxxxxx, c = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 2-propanol
3.9 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx poměr bude xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.10 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.11 All-trans-vitamín A xxxxxx, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx roztok xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx: Xxxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,1 xx 50 mg acetátu xxxxxxxx X (3.11) xx 100 ml xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx xxxxxx stejným xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace tohoto xxxxxxx xx 1400 XX vitamínu A xx xx. Přesný xxxxx musí být xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 1,80 x 106 XX/x.
3.12.1 Xxxxxxx roztok xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxxx: Xxxxxxx x přesností xx 0,1 mg 80 xx xxxxxxxxx vitamínu X (3.12) do 100 xx odměrné xxxxx. Xxxxxxxxx ve 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx značku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 1400 IU xxxxxxxx A na xx. Xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx z xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Baňky x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 ml, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, kuželovité, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 ml, se xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, délka xxxxxxxx xxxxxx 300 mm, xx zábrusovým xxxxxx, x adaptérem pro xxxxxxxx trubici plynu.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papír xxx oddělení xxxx, xxxxxx 185 mm (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 HPLC výbava xx xxxxxxxxxxxx systémem
4.5.1 Xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 mm, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μx xxxx xxxxxxx (výkonnostní parametry: xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx podmínek XXXX)
4.5.2 UV xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx nastavením vlnové xxxxx
4.6 Spektrofotometr x 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx lázeň x magnetickým xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx odměrný xxxxx x objemu 1x vybavený xxxxxxxxxx xxxxxx x zátkou
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx vybavená xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx mít spodní xxxxx xx xxxxx xxxxxxx U a xxxxxx na opačném xxxxx xxx, aby xxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx převedena do xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx citlivý xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, xxxx nádobí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fólií) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxx nahrazen xxxxxxx (vyhněte xx xxxxxxxx občasným povolením xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx s xxxxxx 1 xx, xxxxxxx dbejte, xxx xxxxxxx k zahřátí. Xxxxxxxxxx musí být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx může xxxxx xx ztrátám xxxxxxxx X.
5.2 Saponifikace
V xxxxxxxxxx xx xxxxxx vitamínu X, odvažte x xxxxxxxxx na 0,01 x, 2 x xx 25 g xxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx dnem xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx kroužení 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.13), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a 2 ml xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x xxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx lázně x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx k varu x xxxxxxxx xxxxxxx xxx minut. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx draselného (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x nechejte xxxxxxx dalších 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Potom xxxxxxxxxxx kondenzátor xxxxxxxxx 20 xx xxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx kvantitativně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx objemem 250 xx vody xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) xxxx xx extrakčního xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx baňku xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx výplachy xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx roztocích xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx x nechejte xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx nálevky (4.2.3)
Když xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2) x xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx extrakty x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) a xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 100 xx xxxxxxx vody, xxxxx xxxx nezůstává xxxxxxxx xx přídavku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx obyčejně xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx pro dělení xxxx (4.4), xxx xx odstranila xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 ml xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx značku xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx extrakčního xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx se xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx válce (4.8.1) xx xxxxxxxxxx vložku (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx konec ve xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx trubice tak, xxx byl xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx pomoci tlaku x rozvodu xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx vrstvu xxxxxxxxxxx do 1000 xx dělící nálevky (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx válce, xxxxxxxxxx x dobře xxxxxxxxxxx. Nechejte vrstvy xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx extrakce dalšími 100 xx petroléteru (3.2), potom xxxxxxx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx petroléteru xxx, xxx xx xx popsáno x 5.3.1, a xxxxxxxxxx xxx xx tam xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro HPLC
Odpipetujte xxxxxxxxx část roztoku xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 ml xxxxx xx xxxxx hrušky (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx do xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) x ihned xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx objemu (10–100 xx) metanolu (3.3) (xxxxxxxxxxx vitamínu X xx měla být x xxxxxxx 5 XX/xx až 30 XX/xx).
5.5 Xxxxxxxxx pomocí XXXX
Xxxxxxx A xx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx koloně X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx měřena pomocí XX detektoru (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, xxxxx: 475 xx) (4.5.2).
Vstříkněte xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μx) metanolového roztoku xxxxxxxxx x 5.4 x vymývejte xxxxxxx xxxx (3.9). Vypočtěte xxxxxxx xxxxx píku (xxxxxx) několika vstřiků xxxxxxx stejného xxxxxx x střední xxxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx doporučení; xxxxxxx xxxxxxxx smějí xxx xxxxxxx za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx výsledky.
Kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.5.1): 250 mm x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx nebo xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.9):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (objemově + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): UV xxxxxxxx (325 nm) xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor (xxxxxxxx: 325 nm/emise: 475 xx)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovních xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx (3.11.1) xxxx 20 xx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 500 xx xxxxx s plochým xxxx nebo Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, jak xx xx xxxxxxx v 5.2, ale xxx xxxxxxxx XXX. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 a xxxxxxx do 500 xx petroléterem (3.2). Xxxxxxx 100 ml xxxxxx extraktu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.10) a xxxxx rozpusťte xxxxxx x 10,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 560 XX xxxxxxxx X/1 xx. Xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx před xxxxxxxx.
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je 56 XX xxxxxxxx A xx ml.
5.6.2 Příprava xxxxxxxxxxxx roztoků x xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 5,0 x 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního roztoku xx xxxxx 20 xx odměrných xxxxx, xxxxxxx po značku xxxxxxxxx (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 IU xxxxxxxx A na xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx každého xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x stanovte xxxxxxx výšky píků (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX kontroly (5.6.3.3).
5.6.3 XX standardizace standardních xxxxxxx
5.6.3.1 Xxxxxxx roztok xxxxxxx X acetátu
Pipetujte 2,0 xx zásobního xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxx (3.11.1) do 50 xx odměrné xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 56 XX xxxxxxxx A xx xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx baňky x xxxxxxx po xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Změřte XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-propanolu (3.8) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx xxx mezi 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx obsahu xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
E1%1cm xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 1&xxxx;530 při 326 nm ve 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Xxxxxxx roztok xxxxxxx X palmitátu
Pipetujte 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx zředěného xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx po xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX vitamínu X xx xx. Xxxxxx XX spektrum xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) ve spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx a 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx být mezi 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx A:
IU vitamínu X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx pro xxxxxxx A xxxxxxx = 957 při 326 xx ve 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vitamínu X
Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního roztoku xxxxxxxx X, xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1 do 50 xx odměrné xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Pipetujte 5,0 xx xxxxxx xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx baňky x xxxxxxx xx xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx A xx ml. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx mezi 325 xx a 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = E325 × 18,3
E1%1cm xxx xxxxxxx A xxxxxxx = 1 821 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
6. Výpočet xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx pro xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxx x XX/xx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2).
Obsah xxxxxxxx X w x XX/xx xx xxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · V2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxx xxxxxx (5.4) x IU/ml
V1 = objem xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx odebraných x 5.4 x xx
x = hmota xxxxxxxx xxxxx v g
7. Xxxxxxxx
7.1 U xxxxxx x nízkou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx petroléteru xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (hmotnostní xxxxxxx: 25 g) xx xxxxxxx roztoku xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX.
7.2 Xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Pokud xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx přibližně 10 xx xxxxxxx (3.1), x rozrušení xxxxxx.
7.4 X xxxxxx tuku x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx by xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx x použitím xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx přibližně 150 xx kyseliny xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx roztoku xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 mg XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
L: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: standardní xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx xxxxxx |
|
|
X |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
x |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
xxxxx [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [XX/xx] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [XX/xx] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [XX/xx] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
X [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
CVR [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXX E
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxx metoda xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X v xxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx E xx vyjádřen jako xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,91 xx XX-α-xxxxxxxxxx (xxxxxxx E).
Mez xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx je hydrolyzován xxxxxxxxxx roztokem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx X xx extrahován xx petroléteru. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxx x, xxxxx je xx xxxxx, xxxxx xx požadovanou koncentraci. Xxxxx vitamínu E xx stanoví xxxxxxxx xxxx xxxxxx účinné xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx použití UV xxxx fluorescenčního xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, rozsah varu 40 až 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Roztok xxxxxxxxx draselného, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 g/100 ml (xxx 7.7 poznámky)
3.6 Xxxxxx sodný, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx sodného, x = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx bude xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.10 XX-α-xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx čistý, ověřené xxxxxxxx
3.10.1 Xxxxxxx xxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx: Odvažte x xxxxxxxxx na 0,1 mg, 100 xx DL-α-tokoferol acetátu (3.10) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x etanolu (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx roztoku xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx. (XX kontrola – xxx 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.11 DL-α-tokoferol, xxxxx xxxxx, ověřené xxxxxxxx
3.11.1 Odvažte x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte v xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx tohoto xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (XX kontrola – xxx 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 poznámky).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Nádobí x xxxxxxxx skla
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 xx, se xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 a 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx baňky, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Allihnův xxxxxxxxxxx, xxxxx izolační xxxxxx 300 mm, xx zábrusovým xxxxxx, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 mm (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 HPLC xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx systémem
4.5.1 Xxxxxx pro kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 mm, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.5.2 XX nebo xxxxxxxxxxxxx detektor x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 mm xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx přístroj (viz xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Skleněný xxxxxxx xxxxx x objemu 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x zátkou
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx vybavená xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx procházející xxxxxxx. Nastavitelná xxxxxxx xxxx xxx spodní xxxxx ve xxxxx xxxxxxx X x xxxxxx xx opačném xxxxx xxx, xxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxx kapaliny ve xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X je xxxxxxx xxxx (UV) xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx x nepřítomnosti xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx x opakního xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fólií) x kyslíku (vypláchněte xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxx nahrazen xxxxxxx (vyhněte se xxxxxxxx občasným xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx, aby xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx může dojít xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X odvažte x xxxxxxxxx xx 0,01 g, 2 x xx 25 x xxxxxx xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx BHT (3.12), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.5) x 2 ml xxxxxxx xxxxxxx sodného (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x baňce x xxxxxxx xxxxx xx vodní lázně x xxxxxxxxxxx míchadlem (4.7). Xxxxxxxx k xxxx a xxxxxxxx xxxxxxx pět minut. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx dalších 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx vypláchněte xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 ml xxxx x xxxxx xxxxx ochlaďte xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx saponifikovaný xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx celkovým xxxxxxx 250 xx xxxx do 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) nebo xx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8). Xxxxxxxxxxx saponifikační baňku xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) a 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x převeďte xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx měl být xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx minuty x xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Extrakce x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx se xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx petroléteru do xxxxx dělící nálevky (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx dvakrát 100 xx petroléteru (3.2) x xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Promyjte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx nálevce dvakrát 100 ml xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (aby se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) x xxxxx opakovaným xxxxxxxx x dalšími 100 xx xxxxxxx xxxx, dokud voda xxxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx roztoku fenolftaleinu (3.7) (čtyřnásobné xxxxxxxxx xx obyčejně xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx extrakt xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx do 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Vypláchněte xxxxxx xxxxxxx x filtr 50 ml petroléteru (3.2), xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x dobře promíchejte.
5.3.2 Xxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Když xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx vložku (4.8.2) x xxxxxxxxxx dolní xxxxx xx xxxxx xxxxxxx U xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tak, aby xxx právě xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx tlaku z xxxxxxx dusíku do xxxxxxxxxxx ramene, xxxxxxxx xxxxxx vrstvu xxxxxxxxxxx xx 1000 ml xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) do xxxxxxxxxx xxxxx, zazátkujte x dobře protřepejte. Xxxxxxxx vrstvy oddělit xx x převeďte xxxxxx vrstvu xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx postup xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx petroléteru do xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxx xx xx xxxxxxx v 5.3.1, x pokračujte jak xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx xxxxx xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx rozpouštědlo xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx (4.1) za xxxxxxxxx xxxxx xxx teplotě xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tlak xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x ihned xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx xx měla xxx x rozsahu 5 μx/xx xx 30 μg/ml).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx E xx oddělen na xxxxxxxx fázové koloně X18 (4.5.1) a xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 nm) xxxx XX detektoru (292 nm) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx část (xxxx. 20 μx) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8). Xxxxxxxxx střední xxxxx xxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x střední xxxxx (plochy) xxxxxxxx xxxxxxx kalibračních xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx být xxxxxxx xx předpokladu, že xxxxxxxxx shodné xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 mm x 4 mm, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μx nebo xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově)
Úroveň xxxx: 1–2 ml/min.
Detektor (4.5.2): Fluorescenční xxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 nm/emise: 330 xx) xxxx XX detektor (292 xx)
5.6 Xxxxxxxxx (XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX-α-xxxxxxxxxx)
5.6.1 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.1.1 Xxxxxxxx standardních xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 25 xx xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx acetátu (3.10.1) xx 500 xx xxxxx x plochým xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx xx xx popsáno x 5.2. Následně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx sucha, xxxxxxxxx zbývající rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx rozpusťte xxxxxx x 25,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 45,5 μx XX-α-xxxxxxxxxx na xx, xxxxxxxxxx 50 μx DL-α-tokoferol xxxxxxx xx xx. Standardní xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx připraven xxxx xxxxxxxx.
5.6.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx do xxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx metanolem (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxx xxxx 2,5, 5,0, 10,0 x 25,0 μg/ml DL-α-tokoferol xxxxxxx, xx. 2,28, 4,55, 9,10 x 22,8 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx kalibračního xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx píků (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.1.3 XX standardizace xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 25,0 xx xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx roztoku xxxxx etanolu (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx při 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284nm v xxxxxxx
Xxx xxxxx ředění xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Standard XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Xxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxx (3.3) x doplňte xx xxxxxx metanolem. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 40 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, xxxxxxxxxx 44,0 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. Xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx kalibračního xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx sérií 20 xx odměrných xxxxx, doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoků xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx, xx. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu.
Vstříkněte xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx střední xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) narýsujte xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx zásobního roztoku XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Rozřeďte 2,0 xx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) na 25,0 xx xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 nm. Xxxxxxxxx xxxxxxx by xxxx být xxx 292 nm:
E1%1cm = 75,8 xxx 292xx x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx by měla xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx E xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x μx/xx (xxxxxxxx jako α-tokoferol xxxxxx) xx xxxxxx xx kalibračnímu xxxxx (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx E x x xx/xx xx xxxxxx xx dán xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 / X1 · m [xx/xx]
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x roztoku xxxxxx (5.4) x μg/ml
V1 = xxxxx roztoku xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx odebraných v 5.4 x xx
x = xxxxx xxxxxxxx xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x nízkou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx E xxxx xxx užitečné spojit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxxxx vsázek (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení xxxxxx HPLC.
7.2 Množství xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2g.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx dělení, přidejte xxxxxxxxx 10 ml xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Po xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX-α-xxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 xxxxxxxx xx xxxxxxx (3.10.1 xxxx 3.10.2) xxxxxxxxx 10 xx XXX (3.12) x xxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx čtyři xxxxx).
7.5 Xxxxxxx XXX může xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx je možné x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Namísto xxxxxxxxx xxxxxxx může xxx použito xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx roztoku xxxxxxx sodného může xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 mg XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u stejného xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 15 % x xxxxxxx výsledku.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx spolupráce [2]
L: xxxxx laboratoří
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro selata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
n |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
střed [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
xx [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [xx/xx] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
ČÁST X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxx celkového x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx X- x X- xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx tryptofanu xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx 110 °X xx 20 hodin. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx standard.
Pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx kyselých xxxxxxxx x přítomnosti vnitřního xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx XXXX x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, nebo voda xxxxxxx kvality xxxx xxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx &xx; 10 μS/cm)
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Xxxxxxx standardní xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx vakuem xxxx pentoxid fosforu
3.4 Xxxx-xxxxxx xxxxxxxxx barnatého (xxxx xxx dbáno, xxx xxxxx Xx(XX)2. 8 H2O xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx vzduchu, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx XxXX3, xxx xxxx rušit stanovení) (xxx xxxxxxxx 9.3)
3.5 Xxxxxxxx sodný
3.6 Kyselina xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, p20 = 1,19 x/xx
3.8 Xxxxxxx, XXXX xxxxxx
3.9 Xxxxxxxxxx, xxxxxx varu 40–60 °X
3.10 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxxxx 40,0 x NaOH (3.5) xx vodě a xxxxxxx do 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 6 xxx/x:
Xxxxxxx 492 xx XXX (3.7) a doplňte xx 1 x xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 xx XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 x vodou.
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 mol/l:
Vezměte 8,2 xx XXX (3.7) x xxxxxxx do 1 x xxxxx.
3.14 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x:
Xxxxxxx 34 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) x xxxxxxx do 1 x vodou (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.2), x = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2553 x xxxxxxxxxx (3.2) x 500 ml xxxxxxx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.13). Skladujte při –18 xX xx xxxx maximálně xxxx xxxxx.
3.16 Koncentrovaný xxxxxxx xxxxxxxxxx roztok, c = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2728 x α-xxxxxx-xxxxxxxxxx (3.3) x 500 xx odměrné baňce x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 xX xx dobu xxxxxxxxx xxxx týdnů.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok tryptofanu x xxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxxx 2,00 ml koncentrovaného xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15), x 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxx vodou (3.1) x metanolem (3.8) xx přibližně stejný xxxxx a xx xxxxxxxxx stejnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (10–30 %) xxxx xxxxxxx hydrolyzát.
Tento xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx čerstvý xxxx xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx přímým slunečním xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx octová
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Xxxxxxxxxxx > 98 %
3.21 Xxxxxx 1 x 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) xx 100 xx metanolu (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: 3,00 x xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1x/100 xx). Upravte xX na 5 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx xx 1000 xx vodou (3.1).
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx XXXX xx spektrofluorimetrickým xxxxxxxxxx
4.2 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 125 xx x 4 xx, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 3 μx xxxx ekvivalent
4.3 xX metr
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, objem 125 xx, se xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxx, 0,45 μx
4.6 Xxxxxxxx, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) xxxx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.8 Xxxxxx xxxxx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx rozmělněn tak, xxx prošel sítem x xxxxxx 0,5 xx. Xxxxxx, xxxxx xxxx vysokou xxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx teplotě xxxxxxxxxxxxx 50 °C, xxxx zmrazením. Xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxx)
Xxxxxxx x přesností na 1 mg xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x (3.13) x 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx 60 xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxx míchadla (4.7). Xxxxxxxx usadit xxxxxxxx x xxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx do xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 xx xxxxxxxx orto-fosforečné, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxx xX xx 3,0 za xxxxxxx xxxxxxxxx sodného, x = 1,0 xxx/x (3.10). Přidejte xxxxxxxxx xxxxxxxx (3.8), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx o vhodném xxxxxx x xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxx chromatografii (xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx kalibrační xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Před xxxxxxxxxxx xx kolony XXXX xxxxxxxxxxxx několik xx xxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μm (4.5). Xxxxxxxxxx chromatografii xxxxx 5.4.
Chraňte xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx přímým slunečním xxxxxxx. Xxxxx není xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °C xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.3 Stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx na 0,2 xx xx 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.4). Xxxxxxxx dávka xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx dusíku xxxxx 10 xx. Xxxxxxxx 8,4 x xxxx-xxxxxxx hydroxidu barnatého (3.4) a 10 xx xxxx. Promíchejte xx vířivém mixeru (4.8) nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx směsi. Opláchněte xxxxx nádoby 4 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx uzavřete. Přeneste xx autoklávu (4.6) x xxxxxx vodou x xxxxx na 30–60 minut. Xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx 110 (+ 2) °X xx xxxx 20 hodin.
Před xxxxxxxxx autoklávu snižte xxxxxxx xxxxx pod 100 °X. Aby xxxxxxx ke xxxxxxxxxxxx Xx(XX)2. 8 X2X, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx 30 ml xxxx o xxxxxxxx xxxxxxx. Mírně xxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx standardu (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Zchlaďte xxxxxx xx xxxxx/xxxxxx xxxxx xx xxxx 15 minut.
Potom xxxxxxxx 5 xx xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx kyselinou chlorovodíkovou, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx x upravte xX xx 3,0 x použitím HCL, x = 1 xxx/x (3.12). Přidejte xxxxxxxxx xxxxxxxx, abyste xxxxxxxx koncentraci xxxx 10 x 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx odměrné baňky x xxxxxxx objemu x xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx objem xxxxxxxx xxx chromatografii (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx metanolu by xxxxx způsobit xxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx XXXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 5.4.
Chraňte xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx den, xxxxx xxx xxxxxxxxxx při 5 °C xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.4 Xxxxxxxxx pomocí XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx doporučení; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (viz xxxx xxxxxxxx 9.1 x 9.2):
Kolona pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μx xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx Pokojová xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.22): 3,00 g xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 ml vody (3.1) + 50,0 xx roztoku (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) v xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 xx). Xxxxxxx xX xx 5,00 x použitím xxxxxxxxxxxx (3.20). Doplňte do 1000 xx vodou (3.1)
Xxxxxx toku: 1 xx/xxx.
Xxxxxxx xxxx xxxx: xxxxxxxxx 34 xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx délka: xxxxxxxx: 280 xx, xxxxx: 356 xx
Xxxxxxxxx objem: 20 μx
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X × B × X × X × E × XX / X × X × H × 10&xxxx;000 × W = x xxxxxxxxxx xx 100g xxxxxx
X = plocha xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, roztoku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.17)
X = plocha píku xxxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) (2 ml) xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = koncentrace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) v μxxxxxx/xx (= 2,50) xxxxxxxxx xx kalibračního xxxxxxx (3.17)
X = objem xxxxxxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) v xx přidaného xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) nebo xx xxxxxxxxxxx (5.3) (= 2,00 xx)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx standardu, extraktu (5.2) xxxx hydrolyzátu (5.3)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16) v xx (= 2,00) xxxxxxxxx xx kalibračního standardního xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxx vzorku v x (opravená xx xxxxxxx xxxxxxxx, jestliže xxx xxxxxx sušen x/xxxx odtučněn)
MW = xxxxxxxxxx xxxxxxxx tryptofanu (= 204,23)
7. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x stejného vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxxx vzájemné xxxxxxxxx) xxxx uspořádána xxx, xx byly tři xxxxxx analyzovány xx 12 xxxxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx byly xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx uvedeny x následující tabulce:
L: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx reprodukovatelnosti, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx xxx xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Krmivo xxx xxxxxxx xxxxxxxx X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Xxxxx xxxxxxxxxx xxx prasata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
|
n |
50 |
55 |
50 |
|
střed [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [x/xx] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
x [x/xx] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
XXx [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [x/xx] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
X [g/kg] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
CVR [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx studijní xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, že xxx xxxxxx xxxx analyzovány xx ve 13 xxxxxxxxxxxx x ověření xxxxxx xxx extrakci xxxxxxx xxxxxxxxxx. Replikované (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx. Výsledky xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot zadržených xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: reprodukovatelnost
CVr: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
CVR: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Xxxx xxxxxxx se sójou |
Vzorek 5 Xxxx xxxxxxx xx sójou (= xxxxxx 4) x xxxxxxxx tryptofanem (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [g/kg] |
0,391 |
0,931 |
|
sr [g/kg] |
0,005 |
0,012 |
|
r [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
xX [x/xx] |
0,018 |
0,048 |
|
X [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Xxxxx studijní xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx byla xxxxxxxxxx xxx, xx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx x xxxxx laboratořích x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx předkládajících xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot xxxxxxxxxx eliminačních odlehlých xxxxxxxx (identifikované Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx (CRM 117) |
Vzorek 2 Nízko-tučná xxxx xxxxxx (XXX 118) |
Xxxxxx 3 Sójová moučka (XXX 119) |
Vzorek 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (XXX 120) |
|
|
L |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
n |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
střed [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [g/kg] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
CVr [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
xX [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [x/xx] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
XXX [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx lepší xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: |
125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 5 μx xxxx xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxx xxxxxx: |
32 °C |
||
|
Mobilní fáze: |
A: 0,01 mol/l XX2XX4/xxxxxxx, 95 + 5 (xxxxxxxx + objemově) X: Metanol |
||
|
Gradientový xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
15 min. |
100 % A |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
21 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
33 min. |
100 % X |
0 % B |
|
|
Úroveň xxxx: |
1,2 xx/xxx. |
||
|
Xxxxxxx doba xxxx: |
xxxxxxxxx 33 xxxxx |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx se xxxx xxxxxx xxxxx typu XXXX xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx poskytnout xxxxxxxxx xxxxxxxxx čáru xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Navíc xx důležité, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x vnitřního xxxxxxxxx. Hydrolyzáty xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx standardu pro xxxxxxxxx. Xx důležité, xxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx dlouhá xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx produktů, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx následný xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
X rozsahu xxxxxxxx, xx měl xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx dát xxxxxxxx odezvu. Lineární xxxxxx xx měla xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx se koncentracemi xxxxxxxxxx. Je xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx rozsahu XXXX/xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxx (xxxx) xxx tryptofanu, x/xxxx xxxxxxxxx standardu xx (xxxx) xxxxxx xxxx (malé) xxxx xxxxxx xxxxxx (xxxxxx), xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx jiné velikosti x/xxxx xxxxxxxx konečným xxxxxxx.
9.3 Hydroxid xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hůře xxxxxxxxx. Xx se xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx stanovení pomocí XXXX, xxx xxxx x tryptofanu způsobovat xxxxx xxxxxxxx.
[1] Řízené xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- und Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).
[2] Řízené xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx Xxxxxxx Deutscher Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- und Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (VDLUFA).