Xxxxxxxx Komise 2000/45/ES
ze xxx 6. xxxxxxxx 2000,
xxxxxx se stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx stanovení vitamínu X, xxxxxxxx X x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx
(Xxxx x významem xxx XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x ohledem na Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx směrnici Rady 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx Rakouska, Xxxxxx x Xxxxxxx [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx:
(1) Směrnice 70/373/XXX xxxxxxx, že úřední xxxxxxxx xxxxx za xxxxxx xxxxxxxx, zda xxxx splněny xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x složení xxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx x analýzy.
(2) Xxxxxxxx Rady 70/524/XXX xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx látkách x xxxxxxxx [3], xxxxxxxxx xxxxxxxxx nařízením Xxxxxx (XX) x. 2439/1999 xx xxx 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, xx obsah xxxxxxxx X x xxxxxxxx X xxxx xxx uváděn xx xxxxxxxxx, pokud xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx.
(3) Směrnice Xxxx 79/373/XXX xx dne 2. xxxxx 1979 x xxxxxxx krmných xxxxx na xxx [5], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 2000/16/ES [6], x směrnice Xxxx 93/74/EHS xx xxx 13. xxxx 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx ke xxxxxxxxx xxxxxx výživy [7], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/XX [8], xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx.
(4) Musí xxx stanoveny xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxx xxxxx.
(5) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xxx se xxxxxx xxxxxxxx obsahu xxxxxxxx A, xxxxxxxx X a xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxx v účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxx 2000. Neprodleně x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx xxxx předpisy xxxxxxxx xx 1. xxxx 2000.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx takový xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu si xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v platnost xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství.
Článek 4
Xxxx směrnice xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu xxx 6. července 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxx
xxxx Komise
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Úř. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. věst. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Xx. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Xx. xxxx. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Xx. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
XXXXXXX
XXXX X STANOVENÍ XXXXXXXX X
1. Účel x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (xxxxxxxx) v xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx X xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx xxxxxxx a xxxx cis izomery, xxxxx xx xxxxxxx xxxxx metodou. Obsah xxxxxxxx A xx xxxxxxxx x mezinárodních xxxxxxxxxx (IU) xx xx. Xxxxx XX xxxxxxxx aktivitě 0,300 μx all-trans-vitamín X xxxxxxxx xxxx 0,344 μx all-trans-vitamín A xxxxxxx nebo 0,550 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2000 IU xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx etanolovým roztokem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zbytek xx xxxxxxxx x xxxxxxxx x, pokud xx to xxxxx, xxxxx xx požadovanou xxxxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu X se xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxx xxxxxxxxxx chromatografie (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX nebo fluorescenční xxxxxxx. Chromatografické parametry xxxx vybírány xxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx x jeho xxx xxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °C
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 g/100 xx
3.5 Xxxxxx askorbanu xxxxxxx, β = 10 x/100 ml (xxx 7.7 poznámky)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx sulfidu xxxxxxx, x = 0,5 mol/l x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (pro x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 2-xxxxxxxx
3.9 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx poměr xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx použité xxxxxx.
3.10 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.11 All-trans-vitamín X xxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, např. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx: Xxxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,1 mg 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx X (3.11) xx 100 xx xxxxxxx baňky. Xxxxxxxxx xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx po xxxxxx stejným xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace tohoto xxxxxxx xx 1400 XX xxxxxxxx X xx ml. Xxxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X palmitát, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 1,80 x 106 XX/x.
3.12.1 Xxxxxxx roztok xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxxx: Odvažte x xxxxxxxxx xx 0,1 mg 80 xx xxxxxxxxx vitamínu X (3.12) xx 100 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx značku xxxxxxx rozpouštědlem. Nominální xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 1400 IU xxxxxxxx A na xx. Xxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Nádobí x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x plochým xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 ml, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 a 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, se zábrusovými xxxxxxx
4.2.4 Hruškovité xxxxx, 250 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Allihnův xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papír xxx xxxxxxxx fáze, xxxxxx 185 mm (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx systémem
4.5.1 Xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx XXXX)
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Spektrofotometr s 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx lázeň x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx přístroj (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1x xxxxxxxx zábrusovým xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx vložka vybavená xxxxxx ramenem a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx spodní xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X a xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx tak, xxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx nálevky.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Všechny xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (za xxxxxxx xxxxxx z opakního xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x kyslíku (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Vzduch xxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxx nahrazen xxxxxxx (vyhněte xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx, aby xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx k zahřátí. Xxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx ztrátám xxxxxxxx X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxx s xxxxxxxxx na 0,01 x, 2 x xx 25 x xxxxxx do 500 xx xxxxx x xxxxxxx dnem nebo Xxxxxxxxxxxxx baňky (4.2.1). Xxxxxxxx postupně xx xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 mg XXX (3.13), 2 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x baňce x xxxxxxx xxxxx do xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx k xxxx x nechejte xxxxxxx xxx minut. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx draselného (3.4) přes xxxxxxxxxxx (4.3) a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx pomalým xxxxxxx xxxxxx. Potom xxxxxxxxxxx kondenzátor přibližně 20 xx xxxx x xxxxx baňky xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztok kvantitativně xxxxxxxxxxxx celkovým objemem 250 xx xxxx xx 1000 ml xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx do extrakčního xxxxxxxxx (4.8). Vypláchněte xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 xx etanolu (3.1) x 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx dělící xxxxxxx xxxx xx extrakčního xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx okolo 2:1. Xxxxxxxx silně xxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxx minuty.
5.3.1 Xxxxxxxx x použitím xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx vrstvy oddělily (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx extrakci xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx kombinované xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx vody za xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx zabránilo xxxxxx xxxxxx) x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 100 xx xxxxxxx vody, dokud xxxx xxxxxxxxx bezbarvá xx přídavku roztoku xxxxxxxxxxxxx (3.7) (čtyřnásobné xxxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx pro dělení xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx do 500 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx značku xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Extrakce xx xxxxxxx extrakčního přístroje (4.8)
Xxxx se xxxxxx xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), nahraďte zátku xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ve xxxxx písmene U xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx xxx xxxxx xxx hladinou xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx x rozvodu xxxxxx xx xxxxxxxxxxx ramene, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx dělící nálevky (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x dobře xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx dělící nálevky xxxx předtím. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx dávkami xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxx xx xx xxxxxxx v 5.3.1, a xxxxxxxxxx xxx xx xxx xxxxxxx.
5.4 Příprava xxxxxxx xxxxxx pro HPLC
Odpipetujte xxxxxxxxx část xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx baňky xx xxxxx hrušky (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx do sucha xx rotační xxxxxxx xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx lázně xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tlak xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx. Xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx proudem xxxxxx (3.10) a ihned xxxxxxxxx zbytek xx xxxxxx objemu (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx A xx xxxx xxx x xxxxxxx 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Xxxxxxxxx pomocí XXXX
Xxxxxxx A xx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) a xxxxxxxxxxx xx měřena xxxxxx XX xxxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, xxxxx: 475 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (např. 20 μx) metanolového xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 x vymývejte xxxxxxx xxxx (3.9). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x střední xxxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx chromatografii (4.5.1):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; 250 mm x 4 mm, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.9): Směs xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; UV xxxxxxxx (325 nm) xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor (xxxxxxxx: 325 nm/emise: 475 nm)
5.6 Kalibrace
5.6.1 Xxxxxxxx standardních xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X acetátu (3.11.1) xxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X palmitátu (3.12.1) xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, jak xx xx popsáno x 5.2, xxx xxx xxxxxxxx XXX. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx do 500 xx xxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx 100 xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx sucha, odstraňte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxx rozpusťte xxxxxx x 10,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 560 XX xxxxxxxx X/1 ml. Xxxxxx obsah se xxxxxxx xxxxx 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxx 2,0 ml tohoto xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx 20 ml xxxxxxx baňky, xxxxxxx xx xxxxxx metanolem (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx.
5.6.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 5,0 a 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx sérií 20 xx odměrných baněk, xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) a xxxxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 XX xxxxxxxx X na xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx kalibračního xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx výšky xxxx (xxxxxx). Za použití xxxxxxxxx výšek píků (xxxxx) nyrýsujte xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX xxxxxxxx (5.6.3.3).
5.6.3 XX xxxxxxxxxxxxx standardních xxxxxxx
5.6.3.1 Xxxxxxx roztok xxxxxxx X xxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxx (3.11.1) do 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 56 IU xxxxxxxx X na xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx tohoto zředěného xxxxxxx vitamín A xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x doplňte xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX vitamínu X xx xx. Xxxxxx XX spektrum xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) ve xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 nm a 327 nm.
Výpočet xxxxxx xxxxxxxx X:
XX vitamínu X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx xxx xxxxxxx A alkohol = 1&xxxx;530 při 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Zásobní xxxxxx xxxxxxx X palmitátu
Pipetujte 2,0 ml zásobního xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X na xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx zředěného xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx xx 25 xx odměrné xxxxx x doplňte po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx A xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx 2-propanolu (3.8) xx spektrofotometru (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 xx a 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx pro xxxxxxx X xxxxxxx = 957 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx A
Pipetujte 3,0 ml nezředěného xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx X, připraveného xxxxx 5.6.1 xx 50 xx odměrné xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxx xxxxxxx do 25 xx odměrné xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX spektrum tohoto xxxxxxx xxxxx 2-propanolu (3.8) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 xx x 327 nm.
Výpočet xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X325 × 18,3
E1%1cm xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 1&xxxx;821 xxx 326 nm xx 2-xxxxxxxxx
6. Výpočet xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx pro xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx A xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx v XX/xx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2).
Obsah xxxxxxxx X w x IU/kg ve xxxxxx xx dán xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx A x xxxxxxx xxxxxx (5.4) v XX/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) v xx
X2 = objem xxxxxxx xxxxxxxxxx v 5.4 v xx
x = xxxxx xxxxxxxx xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 U vzorků x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X může xxx užitečné spojit xxxxxxxx petroléteru xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (hmotnostní xxxxxxx: 25 x) xx jednoho xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX.
7.2 Množství xxxx ve xxxxxx xxxxxxxxx xxx analýzu xx xxxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx fázové dělení, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx emulze.
7.4 X xxxxxx xxxx x ostatních xxxxxxx xxxx by xxxx xxx xxxx saponifikace xxxxxxxxxxx xx 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx xxx použit xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx izomerů xxxxxxxx xx xxxxx x použitím xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Namísto xxxxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 xx kyseliny xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx použito přibližně 50 xx XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx xxxxx překročit 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient variace xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx koncentrát |
Bílkovinný xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro xxxxxx |
|
|
X |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
x |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
xxxxx [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [XX/xx] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [IU/kg] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
CVr [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [IU/kg] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
R [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
ČÁST X
XXXXXXXXX XXXXXXXX X
1. Xxxx a oblast xxxxxxx
Xxxx xxxxxx je xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx a premixech. Xxxxx vitamínu X xx vyjádřen xxxx xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. 1 xx DL-α-tokoferol acetátu xxxxxxxx 0,91 mg XX-α-xxxxxxxxxx (xxxxxxx E).
Mez xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx a vitamín X xx extrahován xx petroléteru. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx v metanolu x, xxxxx je xx nutné, zředí xx xxxxxxxxxxx koncentraci. Xxxxx vitamínu X xx xxxxxxx reverzní xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (RP-HPLC) xx použití UV xxxx xxxxxxxxxxxxxxx detekce.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx varu 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx draselného, β = 50 g/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx sodný, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, c = 0,5 xxx/x x glycerolu, β = 120 x/x (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx fenolftaleinu, β = 2 x/100 ml v xxxxxxx (3.1)
3.8 Xxxxxxx xxxx xxx HPLC: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx použité xxxxxx.
3.9 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.10 DL-α-tokoferol xxxxxx, xxxxx xxxxx, ověřené xxxxxxxx
3.10.1 Zásobní roztok XX-α-xxxxxxxxx acetátu: Odvažte x xxxxxxxxx xx 0,1 mg, 100 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10) xx 100 xx odměrné baňky. Xxxxxxxxx v xxxxxxx (3.1) a doplňte xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx. (UV xxxxxxxx – xxx 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.11 DL-α-tokoferol, xxxxx xxxxx, ověřené xxxxxxxx
3.11.1 Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 mg XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 xx odměrné xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem. 1 xx tohoto roztoku xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (XX xxxxxxxx – viz 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Nádobí x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Erlenmeyerovy baňky, 500 xx, se xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx zábrusovými xxxxxxx, úzkohrdlé, 10, 25, 100 x 500 ml
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, kuželovité, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Hruškovité baňky, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x adaptérem xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx oddělení xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Schleicher & Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx nastavením vlnové xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 mm křemennými xxxxxxxx
4.7 Vodní xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) sestávající xx:
4.8.1 Xxxxxxxx odměrný xxxxx x xxxxxx 1x xxxxxxxx zábrusovým xxxxxx x zátkou
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx vybavená xxxxxx ramenem a xxxxxxxxxxxxx trubicí procházející xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx trubice xxxx xxx xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, aby xxxxx xxx horní xxxxxx kapaliny xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X xx xxxxxxx xxxx (UV) xxxxxx x oxidaci. Všechny xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, xxxx nádobí xxxxxxxxxx hliníkovou xxxxx) x kyslíku (vypláchněte xxxxxxx). Xxxxxx nad xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx občasným povolením xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx tak, xxx xxxxxx sítem x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, aby xxxxxxx k xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx může xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Saponifikace
V závislosti xx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxx X xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x až 25 x xxxxxx do 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx stálého kroužení 130 ml xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.12), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.5) x 2 ml xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Připojte xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx míchadlem (4.7). Xxxxxxxx x xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 minut xx xxxxxxx míchání pod xxxxxxx xxxxxxx dusíku. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 ml xxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx teplotu.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx vypláchnutím xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx do 1000 xx dělící xxxxxxx (4.2.3) nebo xx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxx (3.1) a 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx dělící xxxxxxx nebo do xxxxxxxxxxx přístroje. Xxxxx xxxx a xxxxxxx x kombinovaných xxxxxxxxx xx měl xxx xxxxx 2:1. Třepejte xxxxx dvě xxxxxx x nechejte xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx dělící xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxx dělící nálevky (4.2.3). Xxxxxxxx tuto xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2) x dvakrát 50 xx petroléteru (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) x potom xxxxxxxxxx xxxxxxxx s dalšími 100 xx xxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx bezbarvá za xxxxxxxx xxxxxxx fenolftaleinu (3.7) (čtyřnásobné xxxxxxxxx xx xxxxxxxx dostačující). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx přes xxxxx skládaný filtr xxx xxxxxx fází (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx všechna suspendovaná xxxx do 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Vypláchněte xxxxxx xxxxxxx a xxxxx 50 xx petroléteru (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx petroléterem (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Když xx vrstvy oddělily (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx zátku skleněného xxxxx (4.8.1) za xxxxxxxxxx vložku (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx U xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx xxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Za xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx ramene, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx petroléteru xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) do xxxxxxxxxx xxxxx, zazátkujte x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx x převeďte xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx jako xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx dvakrát 50 xx dávkami petroléteru (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx petroléteru tak, xxx xx xx xxxxxxx v 5.3.1, x xxxxxxxxxx jak xx xxx popsáno.
5.4 Xxxxxxxx roztoku vzorku xxx HPLC
Odpipetujte alikvotní xxxx roztoku petroléteru (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx xxxxx xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx rozpouštědlo téměř xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx odparce (4.1) xx sníženého xxxxx xxx teplotě xxxxx xxxxx nepřekračující 40 °X. Obnovte xxxxxxxxxxxx tlak xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxxxx baňku xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx dusíku (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 ml) xxxxxxxx (3.3) (koncentrace XX-α-xxxxxxxxxx by měla xxx v rozsahu 5 μx/xx xx 30 μg/ml).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xx xxxxxxxx fázové koloně X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx detektoru (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 xx) xxxx XX detektoru (292 nm) (4.5.2).
Vstříkněte xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μl) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx získaného x 5.4 x vymývejte xxxxxxx fází (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxx výšky xxxx (plochy) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx stejného xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (plochy) několika xxxxxxx kalibračních xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx; xxxxxxx podmínky xxxxx xxx použity xx předpokladu, xx xxxxxxxxx shodné výsledky.
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx fáze (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx: 1–2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): Fluorescenční xxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx/xxxxx: 330 xx) xxxx XX detektor (292 xx)
5.6 Xxxxxxxxx (DL-α-tokoferol xxxxxxx xxxx DL-α-tokoferolu)
5.6.1 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovních xxxxxxx
Xxxxxxxx pipetou 25 xx xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 500 xx xxxxx s plochým xxxx nebo Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) a xxxxxxxxxxxx, xxx je xx xxxxxxx x 5.2. Xxxxxxxx extrahujte xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 a xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx. Odpařte 25 xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx sucha, xxxxxxxxx xxxxxxxxx rozpouštědlo xxxxxxx dusíku (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x 25,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 45,5 μx DL-α-tokoferolu xx xx, xxxxxxxxxx 50 μx DL-α-tokoferol xxxxxxx xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx metanolem (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxx xxxx 2,5, 5,0, 10,0 x 25,0 μx/xx DL-α-tokoferol xxxxxxx, xx. 2,28, 4,55, 9,10 a 22,8 μg/ml DL-α-tokoferolu.
Vstříkněte xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x stanovte xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx kalibrační graf.
5.6.1.3 XX standardizace zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) na 25,0 xx xxxxxxxx x xxxxxx UV xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx by xxxx xxx při 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284xx x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx extinkce 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku
Převeďte pipetou 2,0 ml zásobního xxxxxxx DL-α-tokoferolu (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x metanolu (3.3) x doplňte po xxxxxx xxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 40 μg XX-α-xxxxxxxxxx xx ml, xxxxxxxxxx 44,0 μg XX-α-xxxxxxxxx acetátu xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx xx sérií 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x promíchejte. Nominální xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxx xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx, tj. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu.
Vstříkněte xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx výšky xxxx (plochy). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx zásobního roztoku XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Xxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 25,0 ml etanolem x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx. Xxxxxxxxx maximum xx xxxx xxx xxx 292 xx:
X1%1xx = 75,8 xxx 292nm x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx extinkce 0,6.
6. Xxxxxxx výsledků
Ze xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx pro xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx koncentraci xxxxxxx xxxxxx x μg/ml (xxxxxxxx xxxx α-tokoferol xxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Obsah xxxxxxxx E x x mg/kg ve xxxxxx je dán xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 / X1 · x [xx/xx]
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x roztoku xxxxxx (5.4) x μx/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) v xx
X2 = xxxxx xxxxxxx odebraných x 5.4 v xx
x = xxxxx zkušební xxxxx v x
7. Xxxxxxxx
7.1 X vzorků x xxxxxx koncentrací xxxxxxxx E může xxx xxxxxxxx spojit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx vsázek (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx roztoku xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX.
7.2 Množství xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx pro analýzu xxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Xxxxx xx neobjeví xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 ml xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX-α-xxxxxxxxxx podle 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 xxxxxxxx xx xxxxxxx (3.10.1 xxxx 3.10.2) xxxxxxxxx 10 mg XXX (3.12) x xxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxx skladovatelnosti xx xxxxx xxxxx).
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx xx xxxxx x použitím xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx přibližně 150 mg xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx EDTA.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 15 % z xxxxxxx výsledku.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx spolupráce [2]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot
sr: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro xxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
x |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
xxxxx [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
xx [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [mg/kg] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
CVr [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [mg/kg] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
XXXX C
STANOVENÍ XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx použití
Tato xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Nerozlišuje xxxx X- x L- xxxxxxx.
2. Princip
Pro stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx při 110 °C po 20 xxxxx. Xx xxxxxxxxx xx přidán xxxxxxx standard.
Pro stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx x vnitřní xxxxxxxx xxxx stanoveny x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx pomocí XXXX x fluorescenční detekcí.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx voda xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx používána (vodivost &xx; 10 μS/cm)
3.2 Xxxxxxxxxx látka: xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), sušený pod xxxxxx přes pentoxid xxxxxxx
3.3 Xxxxxxx standardní xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx vakuem xxxx xxxxxxxx fosforu
3.4 Xxxx-xxxxxx hydroxidu xxxxxxxxx (xxxx xxx xxxxx, xxx xxxxx Xx(XX)2. 8 X2X xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx XxXX3, xxx xxxx rušit stanovení) (xxx xxxxxxxx 9.3)
3.5 Xxxxxxxx xxxxx
3.6 Kyselina xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x20 = 1,19 x/xx
3.8 Xxxxxxx, XXXX stupeň
3.9 Petroléter, xxxxxx varu 40–60 °X
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxxxx 40,0 x NaOH (3.5) xx vodě x xxxxxxx do 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 6 mol/l:
Vezměte 492 xx HCL (3.7) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.12 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 ml XXX (3.7) a xxxxxxx do 1 x vodou.
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 mol/l:
Vezměte 8,2 xx XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.14 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, c = 0,5 mol/l:
Vezměte 34 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) x xxxxxxx do 1 x xxxxx (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.2), x = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2553 x tryptofanu (3.2) x 500 xx xxxxxxx baňce v xxxxxxxx chlorovodíkové (3.13) x doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Skladujte xxx –18 xX xx xxxx xxxxxxxxx čtyř xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2728 g α-xxxxxx-xxxxxxxxxx (3.3) x 500 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 xX xx xxxx maximálně xxxx týdnů.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx x xxxxxxx standard:
Vezměte 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15), x 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-methyl-tryptofan) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx x na xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (10–30 %) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx před xxxxxxxx.
Xxxxx přípravy chraňte xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx octová
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Xxxxxxxxxxx > 98 %
3.21 Xxxxxx 1 g 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanolu (3.19) xx 100 xx metanolu (3.8).
3.22 Xxxxxxx fáze pro XXXX: 3,00 x xxxxxxxx octové (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 ml xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x metanolu (3.8) (1x/100 xx). Upravte xX xx 5 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx do 1000 ml vodou (3.1).
4. Přístroje a xxxxxxx
4.1 Vybavení xxx XXXX se spektrofluorimetrickým xxxxxxxxxx
4.2 Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 125 xx x 4 xx, C18, velikost xxxxxx xxxxxx 3 μx xxxx ekvivalent
4.3 xX xxxx
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, objem 125 xx, xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Membránový xxxxx, 0,45 μx
4.6 Xxxxxxxx, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) xxxx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo magnetické xxxxxxxx
4.8 Xxxxxx xxxxx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx rozmělněn tak, xxx xxxxxx sítem x xxxxxx 0,5 xx. Xxxxxx, xxxxx xxxx vysokou xxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx buď xxxxxxxx při teplotě xxxxxxxxxxxxx 50 °C, xxxx xxxxxxxxx. Vzorky x vysokým obsahem xxxx xxxx být xxxx xxxxxx extrahovány xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu (xxxxxxx)
Xxxxxxx x přesností na 1 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky. Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x (3.13) a 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx 60 minut x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxx míchadla (4.7). Xxxxxxxx usadit xxxxxxxx x pipetujte 10,0 ml roztoku xxxxxxxxxxxx do xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 ml xxxxxxxx orto-fosforečné, c = 0,5 mol/l (3.14). Xxxxxxx xX xx 3,0 za xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1,0 xxx/x (3.10). Přidejte xxxxxxxxx xxxxxxxx (3.8), xxxxxx obdrželi xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % xxxxxxxx x konečném xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Xxxx vstříknutím xx xxxxxx XXXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx přes membránový xxxxx 0,45 μx (4.5). Provádějte xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx. Pokud není xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °X xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.3 Stanovení celkového xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,2 xx xx 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.4). Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx dusíku xxxxx 10 mg. Xxxxxxxx 8,4 x xxxx-xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxx (3.4) x 10 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (4.8) xxxx magnetickém xxxxxxxx (4.7). Ponechejte xxxxxxxx potažený xxxxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx nádoby 4 xx xxxx. Našroubujte xxxxxx x láhev xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx autoklávu (4.6) x vroucí vodou x xxxxx na 30–60 xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx x autoklávujte xxx 110 (+ 2) °X xx xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx snižte xxxxxxx xxxxx pod 100 °X. Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx Xx(XX)2. 8 H2O, xxxxxxxx xx horké xxxxx 30 xx xxxx x pokojové xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx. Přidejte 2,00 xx koncentrovaného xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Zchlaďte xxxxxx ve vodní/ledové xxxxx xx xxxx 15 xxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx 5 xx xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, x = 0,5 mol/l (3.14). Xxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxxx lázni x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x (3.11) zatímco xxxxxxx x upravte xX xx 3,0 x použitím XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Přidejte xxxxxxxxx metanolu, abyste xxxxxxxx koncentraci mezi 10 x 30 % metanolu x xxxxxxxx objemu. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx x zřeďte xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx chromatografii (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx metanolu xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx XXXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Pokračujte x xxxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 5.4.
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx hydrolyzáty xxxxxx den, mohou xxx skladovány při 5 °X xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.4 Stanovení xxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx podmínky xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx podmínky xxxxx xxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxx poznámky 9.1 x 9.2):
Kolona pro xxxxxxxxxxx chromatografii (4.2): 125 mm x 4 xx, C18, xxxxxxxx částic xxxxxx 3 μm xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx Pokojová xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.22): 3,00 g xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx vody (3.1) + 50,0 xx roztoku (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 ml). Upravte xX xx 5,00 x použitím ethanolaminu (3.20). Doplňte do 1000 xx vodou (3.1)
Xxxxxx toku: 1 xx/xxx.
Xxxxxxx xxxx běhu: xxxxxxxxx 34 xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx xxxxx: xxxxxxxx: 280 nm, xxxxx: 356 xx
Xxxxxxxxx xxxxx: 20 μx
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X × X × X × X × X × XX / X × G × X × 10&xxxx;000 × W = x tryptofanu xx 100g xxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx standardu, xxxxxxx xxxxxxxxxxxx standardu (3.17)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
C = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) (2 xx) xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) x μxxxxxx/xx (= 2,50) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.16) x xx přidaného při xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) xxxx xx xxxxxxxxxxx (5.3) (= 2,00 xx)
X = plocha píku xxxxxxxxx standardu, xxxxxxxx (5.2) nebo xxxxxxxxxxx (5.3)
X = xxxxxx xxxx tryptofanu, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.17)
H = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) v xx (= 2,00) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
W = xxxxxxxx xxxxxx x x (xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx vzorek xxxxx x/xxxx odtučněn)
MW = xxxxxxxxxx xxxxxxxx tryptofanu (= 204,23)
7. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx stanovení provedených x xxxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % x vyššího xxxxxxxx.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx spolupráce Společenství (xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx uspořádána tak, xx byly xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx ve 12 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx. Replikované (5) xxxxxxx xxxx prováděny x každého vzorku. Xxxxxxxx jsou uvedeny x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx předkládajících xxxxxxxx
x: xxxxx jednotlivých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx testem)
sr: standardní xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx xxx xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Krmivo xxx xxxxxxx xxxxxxxx X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
|
x |
50 |
55 |
50 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [g/kg] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
r [x/xx] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
XXx [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [x/xx] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
X [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx studijní xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, že xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xx 13 xxxxxxxxxxxx k ověření xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx zadržených xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledků (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Xxxx xxxxxxx xx sójou |
Vzorek 5 Xxxx xxxxxxx xx xxxxx (= xxxxxx 4) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [x/xx] |
0,391 |
0,931 |
|
xx [x/xx] |
0,005 |
0,012 |
|
x [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
sR [x/xx] |
0,018 |
0,048 |
|
X [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx, že xxxxx vzorky xxxx xxxxxxxxxxx až x xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: počet xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odlehlých xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: reprodukovatelnost
CVr: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx (CRM 117) |
Xxxxxx 2 Nízko-tučná xxxx xxxxxx (XXX 118) |
Xxxxxx 3 Xxxxxx moučka (XXX 119) |
Xxxxxx 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [g/kg] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
CVr [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
xX [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [g/kg] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
CVR [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx podmínky xxxxx xxxxxxxxxx lepší xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx následované xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: |
125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 μx xxxx xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxx xxxxxx: |
32 °C |
||
|
Mobilní fáze: |
A: 0,01 mol/l KH2PO4/metanol, 95 + 5 (xxxxxxxx + xxxxxxxx) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % A |
0 % X |
|
15 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
21 min. |
100 % A |
0 % X |
|
|
33 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
Xxxxxx xxxx: |
1,2 ml/min. |
||
|
Celková xxxx xxxx: |
xxxxxxxxx 33 xxxxx |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx xx bude xxxxxx xxxxx xxxx XXXX kolony x xxxxxxxxx xxxxxxxx materiálu. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx čáru xxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx standardem. Xxxxx xx důležité, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx standardu xx xxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx xx překontrolovala xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxx běhu xxxx dostatečně xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx produktů, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
X xxxxxxx xxxxxxxx, by xxx xxxxxxxxxxxxxxxx systém xxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx by měla xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardu a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx velikosti píků xxxxxxxxxx x vnitřního xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx rozsahu XXXX/xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xxx (xxxx) xxx xxxxxxxxxx, x/xxxx xxxxxxxxx standardu xx (jsou) příliš xxxx (xxxx) nebo xxxxxx xxxxxx (xxxxxx), xxxx xx být xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Hydroxid barnatý
Stářím xx stává xxxxxxxx xxxxxxx hůře rozpustný. Xx se projevuje x nečirém xxxxxxx xxx stanovení pomocí XXXX, xxx xxxx x tryptofanu xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
[1] Xxxxxx xxxxxxxx skupinou pro xxxxxx Verband Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).
[2] Xxxxxx xxxxxxxx skupinou xxx xxxxxx Xxxxxxx Deutscher Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).