Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/45/ES
ze xxx 6. xxxxxxxx 2000,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx vitamínu X, vitamínu X x tryptofanu x xxxxxxxx
(Xxxx x významem xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx o založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Rady 70/373/XXX xx xxx 20. července 1970, xxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx aktem o xxxxxxxxxxx Rakouska, Xxxxxx x Xxxxxxx [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx úřední xxxxxxxx krmiv xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xx jakost x xxxxxxx xxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xx použití xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
(2) Xxxxxxxx Xxxx 70/524/XXX xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx látkách x xxxxxxxx [3], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx (XX) x. 2439/1999 xx xxx 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxx X a xxxxxxxx E xxxx xxx xxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx.
(3) Xxxxxxxx Xxxx 79/373/XXX ze xxx 2. xxxxx 1979 x uvádění krmných xxxxx na xxx [5], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 2000/16/ES [6], x xxxxxxxx Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. xxxx 1993 x krmivech xxxxxxxx ke xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx [7], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/XX [8], xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx.
(4) Xxxx xxx stanoveny analytické xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx látek.
(5) Opatření xxxx xxxxxxxx jsou x souladu se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X, vitamínu X x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx metodami xxxxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxx 2000. Xxxxxxxxxx o xxxx uvědomí Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. xxxx 2000.
Xxxx xxxxxxxx přijatá xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxx xxxxxx xxxxx učiněn při xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx členské xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx dnem xx xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství.
Článek 4
Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 6. xxxxxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxx
xxxx Komise
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Úř. věst. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. xxxx. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Xx. věst. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Xx. xxxx. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Xx. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Úř. věst. X 125, 23.5.1996, x. 35.
PŘÍLOHA
ČÁST A XXXXXXXXX XXXXXXXX X
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx je určena xxx xxxxxxxxx vitamínu X (retinolu) x xxxxxxxx a premixech. Xxxxxxx X zahrnuje xxx-xxxxx-xxxxxxx alkohol x xxxx xxx xxxxxxx, xxxxx se stanoví xxxxx metodou. Xxxxx xxxxxxxx A xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (XX) xx xx. Jedna IU xxxxxxxx aktivitě 0,300 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx xxxx 0,344 μx all-trans-vitamín A xxxxxxx xxxx 0,550 μx all-trans-vitamín X xxxxxxxxx.
Xxx stanovitelnosti xx 2000 XX xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx etanolovým xxxxxxxx xxxxxxxxx draselného x xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx do xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxxx x, xxxxx xx to xxxxx, xxxxx na požadovanou xxxxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu X xx xxxxxxx xxxxxxxx fází xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx chromatografie (XX-XXXX) za xxxxxxx XX nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx vybírány tak, xxx nedošlo k xxxxxxxx all-trans-vitamín X xxxxxxxx x jeho xxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 g/100 ml
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 ml (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Sulfid xxxxx, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx sulfidu xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (pro x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx fenolftaleinu, β = 2 g/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 2-xxxxxxxx
3.9 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx metanolu (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx charakteristikami použité xxxxxx.
3.10 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.11 All-trans-vitamín A xxxxxx, extra čistý, xxxxxxx aktivity, xxxx. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Zásobní xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxx: Xxxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,1 mg 50 mg acetátu xxxxxxxx X (3.11) xx 100 ml xxxxxxx baňky. Rozpusťte xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 1400 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx podle 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 1,80 x 106 IU/g.
3.12.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxxx: Odvažte x xxxxxxxxx xx 0,1 xx 80 xx palmitátu xxxxxxxx X (3.12) xx 100 ml odměrné xxxxx. Rozpusťte xx 2-xxxxxxxxx (3.8) a xxxxxxx xx značku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 1400 XX xxxxxxxx A xx xx. Přesný xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx x xxxxxxxx skla
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Erlenmeyerovy xxxxx, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, úzkohrdlé, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Dělící xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 ml, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, délka xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x adaptérem pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
4.4 Xxxxxxxx filtrační xxxxx xxx oddělení xxxx, xxxxxx 185 mm (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 HPLC xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 mm, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx parametry: xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx za podmínek XXXX)
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Skleněný xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1x xxxxxxxx zábrusovým xxxxxx x zátkou
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx trubicí xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx mít xxxxxx xxxxx ve xxxxx xxxxxxx X a xxxxxx xx opačném xxxxx xxx, aby xxxxx xxx xxxxx xxxxxx kapaliny ve xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X xx xxxxxxx xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Všechny xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fólií) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx nahrazen xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx povolením xxxxx).
5.1 Příprava xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx tak, xxx xxxxxx sítem s xxxxxx 1 xx, xxxxxxx dbejte, xxx xxxxxxx k xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx může dojít xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Saponifikace
V xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxx s xxxxxxxxx na 0,01 x, 2 g xx 25 g xxxxxx do 500 xx xxxxx x xxxxxxx dnem xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 mg XXX (3.13), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxx x xxxxxxx xxxxx do xxxxx lázně x xxxxxxxxxxx míchadlem (4.7). Xxxxxxxx x xxxx x nechejte odtékat xxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx draselného (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) a nechejte xxxxxxx dalších 25 xxxxx xx stálého xxxxxxx xxx pomalým xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx kondenzátor xxxxxxxxx 20 xx xxxx x obsah baňky xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx objemem 250 xx vody xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Vypláchněte xxxxxxxxxxxxx xxxxx postupně 25 ml xxxxxxx (3.1) a 100 xx petroléteru (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx dělící xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx silně xxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx vrstvu xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 ml petroléteru (3.2) x dvakrát 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx kombinované extrakty x dělící xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) a xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 100 xx xxxxxxx vody, xxxxx xxxx xxxxxxxxx bezbarvá xx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx do 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 ml xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx značku petroléterem (3.2) a xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Extrakce za xxxxxxx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8)
Xxxx se vrstvy xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx válce (4.8.1) xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx konec xx xxxxx písmene X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx xxx xxxxx xxx xxxxxxxx rozhraní. Xx pomoci xxxxx x rozvodu dusíku xx xxxxxxxxxxx ramene, xxxxxxxx vrchní xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2) xx skleněného xxxxx, xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxxxxx. Nechejte xxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx předtím. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dalšími 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx dvakrát 50 ml dávkami xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
Promyjte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxx je xx xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx roztoku xxxxxx pro HPLC
Odpipetujte xxxxxxxxx xxxx roztoku xxxxxxxxxxx (z 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx xxxxx xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx rozpouštědlo xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) za xxxxxxxxx tlaku xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxxxx baňku xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Odstraňte zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx zbytek ve xxxxxx objemu (10–100 xx) metanolu (3.3) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xx měla xxx x rozsahu 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx koloně C18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx měřena xxxxxx XX xxxxxxxxx (325 xx) nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, xxxxx: 475 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μx) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.9). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx píku (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx vstřiků xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx jako doporučení; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; 250 mm x 4 mm, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μx nebo xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.9):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx toku: 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): XX xxxxxxxx (325 nm) xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor (xxxxxxxx: 325 nm/emise: 475 xx)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxx (3.11.1) xxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, jak je xx popsáno v 5.2, xxx xxx xxxxxxxx XXX. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx 100 xx xxxxxx extraktu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx sucha, xxxxxxxxx xxxxxxxxx rozpouštědlo proudem xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx zbytek x 10,0 ml xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 560 XX xxxxxxxx A/1 xx. Xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx podle 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx použitím.
Pipetujte 2,0 xx tohoto xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx xxxxxxx baňky, xxxxxxx xx značku xxxxxxxxx (3.3) a promíchejte. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je 56 XX vitamínu X xx xx.
5.6.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0 x 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx sérií 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Nominální koncentrace xxxxxx roztoků xxxx 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 XX xxxxxxxx X na xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx každého xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a stanovte xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx použití xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) nyrýsujte xxxxxxxxxx xxxx odpovídající výsledkům XX kontroly (5.6.3.3).
5.6.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.3.1 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 IU xxxxxxxx X na xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxx xx 25 xx odměrné baňky x doplňte xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx je 6,72 XX vitamínu X xx xx. Změřte XX spektrum xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx a 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 xx x 327 nm.
Výpočet xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 1&xxxx;530 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Xxxxxxx roztok xxxxxxx X xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) do 50 xx odměrné xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 IU xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx xx 25 xx odměrné baňky x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) ve spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx mezi 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx obsahu xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx xxx xxxxxxx A xxxxxxx = 957 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vitamínu A
Pipetujte 3,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1 xx 50 xx odměrné xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxx xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x doplňte xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace tohoto xxxxxxx xx 6,72 XX vitamínu X xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-propanolu (3.8) ve xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx a 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX vitamínu X/xx = X325 × 18,3
X1%1xx xxx xxxxxxx A xxxxxxx = 1&xxxx;821 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
6. Výpočet výsledků
Ze xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx koncentraci roztoku xxxxxx x IU/ml xx vztahu ke xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2).
Obsah xxxxxxxx X w x XX/xx xx xxxxxx xx dán xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · X2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx které:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu X x xxxxxxx xxxxxx (5.4) x XX/xx
X1 = objem xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = objem xxxxxxx odebraných v 5.4 v xx
x = xxxxx xxxxxxxx xxxxx v g
7. Xxxxxxxx
7.1 X vzorků x xxxxxx koncentrací xxxxxxxx X xxxx xxx užitečné spojit xxxxxxxx petroléteru dvou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxxxxxxx xxx analýzu xx xxxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Pokud xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx etanolu (3.1), x xxxxxxxxx emulze.
7.4 X rybího tuku x ostatních čistých xxxx xx měla xxx doba xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx být xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx izomerů xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx normální xxxxxx xxxxxx.
7.7 Namísto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx přibližně 150 mg xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx roztoku xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 mg XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx koncentrát |
Bílkovinný xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx selata |
|
|
L |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
n |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
střed [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [XX/xx] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [XX/xx] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [IU/kg] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
X [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXX E
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx je xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx X v xxxxxxxx x premixech. Xxxxx vitamínu X xx xxxxxxxx xxxx xx DL-α-tokoferol xxxxxxx xx xx. 1 xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xxxxxxxx 0,91 mg XX-α-xxxxxxxxxx (xxxxxxx E).
Mez xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxxxx E/kg.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx hydrolyzován xxxxxxxxxx roztokem hydroxidu xxxxxxxxxx x xxxxxxx X je extrahován xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zbytek se xxxxxxxx v metanolu x, xxxxx xx xx xxxxx, xxxxx xx požadovanou koncentraci. Xxxxx xxxxxxxx X xx stanoví reverzní xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (RP-HPLC) xx použití XX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 až 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 xx
3.5 Roztok askorbanu xxxxxxx, β = 10 g/100 ml (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Xx2X. x H2O (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 mol/l x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 ml v xxxxxxx (3.1)
3.8 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově). Xxxxxxxxx xxxxx bude xxxxxxxx charakteristikami xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.10 XX-α-xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx
3.10.1 Xxxxxxx xxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu: Xxxxxxx x přesností xx 0,1 xx, 100 xx DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10) do 100 xx odměrné xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) a xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 ml xxxxxx roztoku xxxxxxxx 1 mg XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx. (UV kontrola – viz 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.11 XX-α-xxxxxxxxx, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx
3.11.1 Xxxxxxx x xxxxxxxxx na 0,1 xx, 100 mg XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) do 100 xx odměrné xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx roztoku xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (UV kontrola – viz 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx vakuová xxxxxxx
4.2 Xxxxxx x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Baňky x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Dělící xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Hruškovité xxxxx, 250 ml, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx hrdlem, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
4.4 Xxxxxxxx filtrační xxxxx xxx oddělení xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Schleicher &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx systémem
4.5.1 Xxxxxx pro kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μm xxxx xxxxxxxxxx
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlnové xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Vodní lázeň x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1x xxxxxxxx zábrusovým xxxxxx a xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx trubicí xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx trubice xxxx xxx xxxxxx xxxxx ve xxxxx xxxxxxx X x xxxxxx na xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xxxxx být xxxxx xxxxxx kapaliny xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X xx citlivý xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx z opakního xxxx, xxxx nádobí xxxxxxxxxx hliníkovou xxxxx) x xxxxxxx (vypláchněte xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxx nahrazen xxxxxxx (xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Příprava vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, aby xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 mm, xxxxxxx dbejte, xxx xxxxxxx k zahřátí. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx bezprostředně před xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx dojít xx xxxxxxx vitamínu X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx E odvažte x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x až 25 x xxxxxx do 500 xx baňky x xxxxxxx dnem xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Přidejte postupně xx xxxxxxx kroužení 130 ml etanolu (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.12), 2 ml xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 ml xxxxxxx sulfidu xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) k baňce x xxxxxxx baňku xx vodní xxxxx x magnetickým míchadlem (4.7). Xxxxxxxx k xxxx x nechejte xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx dalších 25 xxxxx xx xxxxxxx míchání xxx xxxxxxx xxxxxxx dusíku. Xxxxx vypláchněte xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 ml xxxx x obsah xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx saponifikovaný xxxxxx xxxxxxxxxxxxx vypláchnutím xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx do 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx baňku xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) a 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxx xxxxxxxx xx dělící xxxxxxx nebo do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Podíl xxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx měl xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x použitím dělící xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx dvakrát 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x dvakrát 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx nálevce dvakrát 100 xx xxxxxxx xxxx xx současného xxxxxxxx (aby xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x dalšími 100 xx xxxxxxx xxxx, xxxxx voda xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxx (3.7) (čtyřnásobné xxxxxxxxx xx xxxxxxxx dostačující). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx přes xxxxx skládaný xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx všechna xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx odměrné xxxxx (4.2.2). Vypláchněte dělící xxxxxxx a xxxxx 50 xx petroléteru (3.2), doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Když xx vrstvy oddělily (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx zátku xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) za xxxxxxxxxx vložku (4.8.2) x xxxxxxxxxx dolní xxxxx ve xxxxx xxxxxxx X nastavitelné xxxxxxx xxx, aby xxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Za xxxxxx tlaku x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx ramene, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx petroléteru xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x dobře xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vrstvy xxxxxxx xx x převeďte xxxxxx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Opakujte xxxxxx xxxxxxxx dalšími 100 xx petroléteru (3.2), xxxxx dvakrát 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx kombinované xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxx xx xx xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx jak xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx petroléteru (x 5.3.1 nebo 5.3.2) xx 250 xx xxxxx xx xxxxx hrušky (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx téměř xx xxxxx xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tlak připuštěním xxxxxx (3.9) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx odparky. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (koncentrace XX-α-xxxxxxxxxx by měla xxx x xxxxxxx 5 μg/ml až 30 μx/xx).
5.5 Stanovení xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx oddělen na xxxxxxxx fázové xxxxxx X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 xx) xxxx XX detektoru (292 nm) (4.5.2).
Vstříkněte xxxxxxxxx část (xxxx. 20 μx) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx získaného v 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx fází (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (plochy) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a střední xxxxx (plochy) xxxxxxxx xxxxxxx kalibračních xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx HPLC
Následující podmínky xxxx předkládány jako xxxxxxxxxx; ostatní xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx předpokladu, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 nebo 10 μm nebo xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.8): Xxxx metanolu (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově)
Úroveň xxxx: 1–2 ml/min.
Detektor (4.5.2): Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 nm/emise: 330 xx) nebo XX xxxxxxxx (292 xx)
5.6 Kalibrace (DL-α-tokoferol xxxxxxx xxxx XX-α-xxxxxxxxxx)
5.6.1 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu
5.6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovních xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 25 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, jak je xx popsáno v 5.2. Následně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx 25 xx tohoto xxxxxxxx xx rotační vakuové xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx sucha, xxxxxxxxx zbývající rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.9) x znovu rozpusťte xxxxxx x 25,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 45,5 μx XX-α-xxxxxxxxxx na xx, ekvivalent 50 μx DL-α-tokoferol xxxxxxx xx ml. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxx jsou 2,5, 5,0, 10,0 x 25,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx, xx. 2,28, 4,55, 9,10 x 22,8 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx kalibračního roztoku x xxxxxxxx střední xxxxx píků (xxxxxx). Xx xxxxxxx středních xxxxx píků (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.1.3 XX standardizace xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 25,0 xx xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx při 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284nm x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx být xxxxxxx extinkce 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Standard XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferolu (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxx (3.3) x xxxxxxx po xxxxxx metanolem. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 40 μx XX-α-xxxxxxxxxx na xx, xxxxxxxxxx 44,0 μg XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. Standardní pracovní xxxxxx xxxx být xxxxxxx připraven xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x kalibrační xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 a 10,0 xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx do xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx metanolem (3.3) x promíchejte. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx těchto roztoků xxxx 2,0, 4,0, 8,0 a 20,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx, xx. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx střední xxxxx xxxx (plochy). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx zásobního roztoku XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Xxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 25,0 xx etanolem x xxxxxx UV xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx by xxxx xxx xxx 292 nm:
E1%1cm = 75,8 xxx 292xx x xxxxxxx
Xxx tomto xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,6.
6. Výpočet výsledků
Ze xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x μx/xx (xxxxxxxx xxxx α-tokoferol xxxxxx) ve xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx X x x xx/xx ve xxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 / X1 · x [xx/xx]
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu X x roztoku vzorku (5.4) x μg/ml
V1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx odebraných x 5.4 x ml
m = hmota zkušební xxxxx v x
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x xxxxxx koncentrací xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx jednoho roztoku xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX.
7.2 Xxxxxxxx xxxx ve vzorku xxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2g.
7.3 Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx dělení, přidejte xxxxxxxxx 10 ml xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX-α-xxxxxxxxxx podle 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 xxxxxxxx xx xxxxxxx (3.10.1 xxxx 3.10.2) přibližně 10 mg BHT (3.12) x skladujte xxxxxx v xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx).
7.5 Xxxxxxx BHT může xxx použit hydrochinon.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx xx xxxxx x použitím normální xxxxxx xxxxxx.
7.7 Namísto xxxxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx EDTA.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx u xxxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 15 % z xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [2]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot
sr: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx koncentrát |
Bílkovinný xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro selata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
n |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
střed [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
xx [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [xx/xx] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
CVr [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [mg/kg] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
R [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx použití
Tato xxxxxx xx určena xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Nerozlišuje xxxx X- x X- xxxxxxx.
2. Princip
Pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx tryptofanu xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nasyceným xxxxxxxx xxxxxxxxx barnatého x zahříván xxx 110 °X xx 20 xxxxx. Po xxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxx standard.
Pro stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx extrahován xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x přítomnosti vnitřního xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx a vnitřní xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx x hydrolyzátu nebo xxxxxxxx pomocí XXXX x fluorescenční detekcí.
3. Xxxxxxx
3.1 Dvojnásobně destilovaná xxxx, nebo xxxx xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx &xx; 10 μS/cm)
3.2 Xxxxxxxxxx látka: xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Xxxxxxx standardní xxxxx: α-methyl-tryptofan (čistota/obsah &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx pentoxid xxxxxxx
3.4 Xxxx-xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxx být xxxxx, xxx nebyl Xx(XX)2. 8 X2X xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx BaCO3, xxx xxxx xxxxx stanovení) (xxx poznámky 9.3)
3.5 Xxxxxxxx xxxxx
3.6 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, w = 85 %
3.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x20 = 1,19 g/ml
3.8 Xxxxxxx, XXXX stupeň
3.9 Petroléter, xxxxxx varu 40–60 °X
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, c = 1 mol/l:
Rozpusťte 40,0 x NaOH (3.5) xx xxxx x xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx chlorovodíková, x = 6 mol/l:
Vezměte 492 ml HCL (3.7) a xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 xx XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x:
Xxxxxxx 8,2 xx XXX (3.7) x xxxxxxx do 1 l vodou.
3.14 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x:
Xxxxxxx 34 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx tryptofanu (3.2), x = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2553 x tryptofanu (3.2) x 500 xx xxxxxxx baňce x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 xX xx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx roztok, x = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2728 x α-methyl-tryptofanu (3.3) x 500 xx xxxxxxx baňce x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 oC xx xxxx maximálně xxxx týdnů.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx x vnitřní xxxxxxxx:
Xxxxxxx 2,00 xx koncentrovaného xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15), x 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxx vodou (3.1) x metanolem (3.8) xx přibližně xxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxx koncentraci xxxxxxxx (10–30 %) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx musí být xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxx přípravy xxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxx.
3.18 Kyselina octová
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Xxxxxxxxxxx > 98 %
3.21 Roztok 1 g 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanolu (3.19) ve 100 xx xxxxxxxx (3.8).
3.22 Xxxxxxx fáze xxx XXXX: 3,00 x xxxxxxxx octové (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 ml xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x metanolu (3.8) (1x/100 xx). Xxxxxxx xX na 5 x použitím xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx xx 1000 ml xxxxx (3.1).
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Vybavení xxx XXXX xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
4.2 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii, 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 3 μx xxxx ekvivalent
4.3 xX metr
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx 125 xx, xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx filtr, 0,45 μx
4.6 Autokláv, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) xxxx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.8 Vířivý xxxxx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx, xxx prošel sítem x xxxxxx 0,5 xx. Xxxxxx, které xxxx vysokou vlhkost, xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx usušeny xxx xxxxxxxx při teplotě xxxxxxxxxxxxx 50 °C, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 mg xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 g) xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx Erlenmeyerovy baňky. Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 mol/l (3.13) a 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16). Xxxxxxxx xxxx mixujte 60 xxxxx x xxxxxxxx mechanické xxxxxxxx, xxxx magnetického xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx do xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 xx xxxxxxxx orto-fosforečné, x = 0,5 mol/l (3.14). Xxxxxxx xX xx 3,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného, x = 1,0 xxx/x (3.10). Xxxxxxxx xxxxxxxxx metanolu (3.8), xxxxxx obdrželi xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx odměrné xxxxx x xxxxxxx xxxxxx x zřeďte xxxxx na objem xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx objem xxxx kalibrační xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Před xxxxxxxxxxx xx xxxxxx XXXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μm (4.5). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °C xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.3 Xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,2 xx xx 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.4). Xxxxxxxx dávka xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx 10 xx. Xxxxxxxx 8,4 g xxxx-xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxx (3.4) x 10 xx vody. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (4.8) xxxx magnetickém xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx nádoby 4 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx x láhev xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx (4.6) x vroucí vodou x xxxxx na 30–60 xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx 110 (+ 2) °C po xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx autoklávu xxxxxx xxxxxxx právě pod 100 °X. Xxx xxxxxxx xx krystalizaci Xx(XX)2. 8 X2X, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx 30 ml xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx míchejte. Přidejte 2,00 xx koncentrovaného xxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Zchlaďte xxxxxx xx vodní/ledové xxxxx xx xxxx 15 minut.
Potom přidejte 5 ml xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, c = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx nádobu xx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x (3.11) zatímco xxxxxxx a xxxxxxx xX xx 3,0 x použitím XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 10 x 30 % xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx x zřeďte xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx metanolu xx xxxxx xxxxxxxx sraženinu.
Před xxxxxxxxxxx xx xxxxxx XXXX přefiltrujte xxxxxxx xx xxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 5.4.
Chraňte xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxx přímým slunečním xxxxxxx. Pokud xxxx xxxxx analyzovat xxxxxxxxxxx xxxxxx den, xxxxx xxx xxxxxxxxxx při 5 °X xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.4 Stanovení pomocí XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx výsledky (xxx xxxx xxxxxxxx 9.1 x 9.2):
Kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.2): 125 mm x 4 xx, C18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μm xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.22): 3,00 g xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 xx). Upravte xX xx 5,00 x použitím ethanolaminu (3.20). Xxxxxxx do 1000 ml vodou (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx xxxx běhu: xxxxxxxxx 34 xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx délka: xxxxxxxx: 280 nm, xxxxx: 356 nm
Vstřikový objem: 20 μx
6. Výpočet xxxxxxxx
X × B × X × X × X × MW / X × G × X × 10&xxxx;000 × W = x xxxxxxxxxx xx 100x xxxxxx
X = xxxxxx píku xxxxxxxxx standardu, roztoku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.17)
B = xxxxxx píku xxxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx hydrolyzátu (5.3)
C = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) (2 xx) přidaný xx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.17)
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) x μxxxxxx/xx (= 2,50) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.16) x xx přidaného xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) xxxx xx xxxxxxxxxxx (5.3) (= 2,00 xx)
X = xxxxxx píku xxxxxxxxx standardu, xxxxxxxx (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = plocha xxxx xxxxxxxxxx, kalibračního xxxxxxxxxxxx roztoku (3.17)
X = objem koncentrovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx (= 2,00) přidaného xx kalibračního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxx xxxxxx x x (opravená xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx x/xxxx odtučněn)
MW = xxxxxxxxxx hmotnost xxxxxxxxxx (= 204,23)
7. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
8. Xxxxxxxx studijní xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx spolupráce Xxxxxxxxxxxx (xxxxxx vzájemné xxxxxxxxx) xxxx uspořádána xxx, xx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 12 xxxxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x každého xxxxxx. Xxxxxxxx jsou uvedeny x xxxxxxxxxxx tabulce:
L: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx jednotlivých xxxxxx xxxxxxxxxx eliminačních xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx pro xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Krmný xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
|
x |
50 |
55 |
50 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [g/kg] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
r [x/xx] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
XXx [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [x/xx] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
X [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (třetí vzájemné xxxxxxxxx) byla xxxxxxxxxx xxx, xx xxx xxxxxx xxxx analyzovány xx ve 13 xxxxxxxxxxxx x ověření xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) analýzy xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: počet xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx zadržených xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx testem)
sr: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
CVR: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Xxxx xxxxxxx xx xxxxx |
Xxxxxx 5 Xxxx xxxxxxx xx xxxxx (= xxxxxx 4) x xxxxxxxx tryptofanem (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [x/xx] |
0,391 |
0,931 |
|
xx [x/xx] |
0,005 |
0,012 |
|
x [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
xX [x/xx] |
0,018 |
0,048 |
|
X [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Další studijní xxxxxxxxxx Společenství xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx xxxxx vzorky xxxx xxxxxxxxxxx až x xxxxx laboratořích x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: počet xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Cochran-Dixonovým xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx (XXX 117) |
Xxxxxx 2 Xxxxx-xxxxx xxxx xxxxxx (XXX 118) |
Vzorek 3 Sójová xxxxxx (XXX 119) |
Vzorek 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
sR [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [x/xx] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
XXX [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx mohou xxxxxxxxxx lepší rozdělení xxxx tryptofanem x α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: |
125 xx x 4 xx, C18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 5 μx xxxx xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxx xxxxxx: |
32 °X |
||
|
Xxxxxxx fáze: |
A: 0,01 xxx/x XX2XX4/xxxxxxx, 95 + 5 (xxxxxxxx + objemově) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
15 min. |
100 % X |
0 % X |
|
|
17 min. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % A |
40 % B |
|
|
21 min. |
100 % A |
0 % X |
|
|
33 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
Xxxxxx xxxx: |
1,2 xx/xxx. |
||
|
Xxxxxxx xxxx xxxx: |
xxxxxxxxx 33 xxxxx |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx xx bude xxxxxx xxxxx xxxx XXXX xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx systém xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odděleny xx xxxxxxxxxx x vnitřního xxxxxxxxx. Hydrolyzáty xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx standardu xxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx vymytí xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx píky pozdního xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
X rozsahu xxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx dát xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx by xxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (normální) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx koncentracemi xxxxxxxxxx. Xx důležité, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x vnitřního xxxxxxxxx byly x xxxxxxxxx xxxxxxx HPLC/flourescenčního xxxxxxx. Xxxxx xxx (xxxx) buď xxxxxxxxxx, x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx (jsou) příliš xxxx (malé) xxxx xxxxxx xxxxxx (xxxxxx), xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx jiné velikosti x/xxxx změněným xxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx rozpustný. Xx se projevuje x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx pomocí XXXX, což xxxx x tryptofanu xxxxxxxxxx xxxxx výsledky.
[1] Řízené xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx Verband Deutscher Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).
[2] Xxxxxx xxxxxxxx skupinou xxx xxxxxx Verband Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).