Xxxxxxxx Komise 2000/45/XX
xx xxx 6. xxxxxxxx 2000,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx vitamínu X, xxxxxxxx X x xxxxxxxxxx v xxxxxxxx
(Xxxx s významem xxx EHP)
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx dne 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxx x Xxxxxxx [2], x xxxxxxx na xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k tomu, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, xx úřední xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxx xxx prováděny xx použití metod Xxxxxxxxxxxx xxx odběr xxxxxx x xxxxxxx.
(2) Xxxxxxxx Xxxx 70/524/XXX xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx [3], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx (XX) x. 2439/1999 xx dne 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, xx obsah xxxxxxxx X x xxxxxxxx X musí xxx xxxxxx na xxxxxxxxx, pokud xxxx xxxx xxxxx přidány xx xxxxxxx a xxxxx.
(3) Xxxxxxxx Xxxx 79/373/XXX xx xxx 2. dubna 1979 x uvádění xxxxxxx xxxxx na xxx [5], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 2000/16/XX [6], x xxxxxxxx Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. xxxx 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx výživy [7], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/XX [8], xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx uváděny na xxxxxxxxx xxxxx.
(4) Xxxx xxx stanoveny analytické xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx.
(5) Opatření xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxx kontroly xxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxx X x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxx v účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 31. xxxxx 2000. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxx Komisi.
Budou xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. xxxx 2000.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx odkaz xx xxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx vyhlášení. Xxxxxx xxxxxx si xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Článek 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx dnem po xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Článek 4
Xxxx xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu xxx 6. xxxxxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. xxxx. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Úř. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Úř. xxxx. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Úř. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
XXXXXXX
XXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXX A
1. Xxxx x oblast xxxxxxx
Xxxx xxxxxx je určena xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (xxxxxxxx) x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx A xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx alkohol x xxxx xxx xxxxxxx, xxxxx xx stanoví xxxxx xxxxxxx. Obsah xxxxxxxx A xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (XX) xx xx. Jedna XX xxxxxxxx aktivitě 0,300 μx all-trans-vitamín A xxxxxxxx nebo 0,344 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxx xxxx 0,550 μx all-trans-vitamín X xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2000 XX xxxxxxxx X/xx.
2. Princip
Vzorek je xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztokem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx je odstraněno xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxx a, xxxxx xx to xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu X xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxx kapalinové xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) za použití XX nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx vybírány xxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Petroléter, xxxxxx varu 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 g/100 xx
3.5 Xxxxxx askorbanu sodného, β = 10 x/100 xx (viz 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Sulfid xxxxx, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx sulfidu xxxxxxx, c = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 g/l (xxx x = 9) (xxx 7.8 poznámky)
3.7 Xxxxxx fenolftaleinu, β = 2 x/100 xx v etanolu (3.1)
3.8 2-xxxxxxxx
3.9 Mobilní xxxx xxx HPLC: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx poměr bude xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx použité xxxxxx.
3.10 Dusík, xxxxxx xxxxxxx
3.11 All-trans-vitamín X xxxxxx, extra xxxxx, xxxxxxx aktivity, xxxx. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx A acetátu: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx 50 mg acetátu xxxxxxxx A (3.11) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx je 1400 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx, xxxxx čistý, ověřené xxxxxxxx, xxxx. 1,80 x 106 XX/x.
3.12.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X palmitátu: Xxxxxxx x přesností na 0,1 xx 80 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (3.12) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 1400 IU xxxxxxxx A na xx. Xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx vakuová xxxxxxx
4.2 Xxxxxx z xxxxxxxx skla
4.2.1 Baňky x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 xx, se xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, úzkohrdlé, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Dělící xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx zábrusovými xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 ml, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Allihnův xxxxxxxxxxx, délka xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx pro xxxxxxxx trubici xxxxx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx oddělení fáze, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx & Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx vstřikovacím xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μm xxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx XXXX)
4.5.2 XX nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx nastavením vlnové xxxxx
4.6 Spektrofotometr x 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Vodní xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x objemu 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X a xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xxxxx xxx horní xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xxxx (XX) světlu x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxx nahrazen xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělněte xxxxxx tak, aby xxxxxx xxxxx s xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, aby xxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx vitamínu X.
5.2 Saponifikace
V závislosti xx xxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxx s xxxxxxxxx na 0,01 x, 2 x xx 25 x xxxxxx xx 500 xx baňky x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.13), 2 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x xxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx x xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) přes xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx kondenzátor přibližně 20 ml xxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx dekantací xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx kvantitativně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx vody xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx postupně 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx nálevky xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx vody x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx roztocích xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx silně xxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx nálevky (4.2.3)
Xxxx xx vrstvy xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Opakujte xxxx extrakci dvakrát 100 xx petroléteru (3.2) x dvakrát 50 xx petroléteru (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx extrakty x xxxxxx nálevce xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx) x potom xxxxxxxxxx třepáním s xxxxxxx 100 ml xxxxxxx xxxx, dokud xxxx nezůstává xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Přefiltrujte xxxxxxx xxxx suchý xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), aby xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Vypláchněte xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx značku xxxxxxxxxxxx (3.2) a dobře xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8)
Xxxx se vrstvy xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), nahraďte zátku xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx zábrusovou xxxxxx (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx konec xx xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tak, xxx xxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx postranního ramene, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx válce, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se x xxxxxxxx vrchní xxxxxx xx dělící nálevky xxxx předtím. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 ml petroléteru (3.2), xxxxx dvakrát 50 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxx vrstvy xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx extrakty petroléteru xxx, xxx xx xx xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx roztoku xxxxxxxxxxx (z 5.3.1 xxxx 5.3.2) do 250 ml baňky xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Odpařte rozpouštědlo xxxxx xx xxxxx xx rotační xxxxxxx xxxxxxx (4.1) za xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx atmosférický xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.10) x odpojte xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx dusíku (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx zbytek xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xx měla být x xxxxxxx 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X je xxxxxxx xx reverzní xxxxxx xxxxxx C18 (4.5.1) x koncentrace xx měřena xxxxxx XX xxxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, xxxxx: 475 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μx) xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx x 5.4 x xxxxxxxxx mobilní xxxx (3.9). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx stejného xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Podmínky XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx jako doporučení; xxxxxxx podmínky xxxxx xxx použity za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx výsledky.
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 mm, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 5 xxxx 10 μx nebo xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.9):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; Xxxx xxxxxxxx (3.3) a xxxx, např. 980 + 20 (objemově + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): UV xxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 nm/emise: 475 xx)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx standardních pracovních xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X acetátu (3.11.1) xxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) a xxxxxxxxxxxx, xxx je xx xxxxxxx x 5.2, xxx xxx xxxxxxxx XXX. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx 100 xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx odparce (xxx 5.4) xxxxx xx xxxxx, odstraňte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) a xxxxx rozpusťte xxxxxx x 10,0 ml xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 560 XX xxxxxxxx X/1 xx. Xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx před použitím.
Pipetujte 2,0 ml xxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx 20 xx xxxxxxx xxxxx, doplňte xx značku xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 56 XX vitamínu A xx ml.
5.6.2 Příprava xxxxxxxxxxxx roztoků x xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 5,0 x 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx sérií 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx po značku xxxxxxxxx (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 XX xxxxxxxx A xx xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx výšek píků (xxxxx) nyrýsujte kalibrační xxxx xxxxxxxxxxxx výsledkům XX xxxxxxxx (5.6.3.3).
5.6.3 XX standardizace standardních xxxxxxx
5.6.3.1 Zásobní xxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxx (3.11.1) do 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx. Pipetujte 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxx xx 25 xx odměrné xxxxx x doplňte xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx být mezi 325 xx x 327 nm.
Výpočet xxxxxx xxxxxxxx X:
XX vitamínu X/xx = E326 × 19,0
X1%1xx xxx xxxxxxx A xxxxxxx = 1&xxxx;530 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Zásobní xxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx zásobního xxxxxxx vitamín A xxxxxxxxx (3.12.1) do 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 56 IU xxxxxxxx X na xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín A xxxxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx A xx ml. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-propanolu (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 nm a 327 xx.
Xxxxxxx obsahu xxxxxxxx A:
IU vitamínu X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx xxx xxxxxxx A alkohol = 957 při 326 nm ve 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx A
Pipetujte 3,0 xx nezředěného xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx X, připraveného xxxxx 5.6.1 do 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8). Pipetujte 5,0 ml tohoto xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x doplňte po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX vitamínu X xx xx. Změřte XX spektrum tohoto xxxxxxx xxxxx 2-propanolu (3.8) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Extinkční maximum xxxx xxx xxxx 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X325 × 18,3
X1%1xx xxx xxxxxxx X alkohol = 1 821 xxx 326 xx ve 2-xxxxxxxxx
6. Xxxxxxx výsledků
Ze xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx pro roztok xxxxxx vitamínu X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x IU/ml xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2).
Xxxxx xxxxxxxx X x x XX/xx ve xxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · V2 · 1 000 / X1 · m (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu X x xxxxxxx vzorku (5.4) x XX/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = objem xxxxxxx xxxxxxxxxx v 5.4 x ml
m = hmota zkušební xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 X vzorků x nízkou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X může xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 g) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Xxxxxxxx xxxx xx vzorku xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx nemělo překročit 2x.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx fázové xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx emulze.
7.4 X xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx by xxxx xxx doba xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx být xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx možné x použitím xxxxxxxx xxxxxx kolony.
7.7 Namísto xxxxxxxxx sodného může xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Namísto xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx přibližně 50 mg XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx nesmí překročit 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx spolupráce [1]
L: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: standardní xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx selata |
|
|
L |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
n |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
střed [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [XX/xx] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [XX/xx] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [XX/xx] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
X [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXX X
1. Xxxx x oblast xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx pro stanovení xxxxxxxx X x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxxx xxxx xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. 1 xx DL-α-tokoferol xxxxxxx xxxxxxxx 0,91 mg XX-α-xxxxxxxxxx (xxxxxxx E).
Mez xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztokem hydroxidu xxxxxxxxxx a vitamín X je extrahován xx petroléteru. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx odpařením x xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxx x, xxxxx xx xx xxxxx, zředí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu E xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx chromatografie (XX-XXXX) xx použití XX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx varu 40 xx 60 °X
3.3 Metanol
3.4 Roztok xxxxxxxxx draselného, β = 50 g/100 xx
3.5 Xxxxxx askorbanu xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 poznámky)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Xx2X. x H2O (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx sodného, x = 0,5 xxx/x x glycerolu, β = 120 g/l (xxx x = 9) (viz 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Roztok fenolftaleinu, β = 2 x/100 xx v xxxxxxx (3.1)
3.8 Xxxxxxx xxxx xxx HPLC: xxxx metanolu (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Dusík, xxxxxx xxxxxxx
3.10 DL-α-tokoferol acetát, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx
3.10.1 Zásobní xxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx: Odvažte x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 xx DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10) xx 100 xx odměrné baňky. Xxxxxxxxx v etanolu (3.1) a doplňte xx značku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx obsahuje 1 mg XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx. (UV xxxxxxxx – xxx 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.11 XX-α-xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.11.1 Odvažte x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) do 100 xx xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte x xxxxxxx (3.1) a xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem. 1 xx tohoto xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (XX kontrola – xxx 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 poznámky).
3.12 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx vakuová xxxxxxx
4.2 Xxxxxx z xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 ml, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx, úzkohrdlé, 10, 25, 100 x 500 ml
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 xx, se xxxxxxxxxxx hrdly
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx izolační xxxxxx 300 mm, xx zábrusovým xxxxxx, x xxxxxxxxx pro xxxxxxxx trubici plynu
4.4 Xxxxxxxx filtrační xxxxx xxx xxxxxxxx fáze, xxxxxx 185 xx (xxxx. Schleicher & Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 xx, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μm nebo xxxxxxxxxx
4.5.2 UV nebo xxxxxxxxxxxxx detektor s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x magnetickým míchadlem
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1x vybavený zábrusovým xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx ramenem x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Nastavitelná xxxxxxx xxxx mít xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xxxxx být xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X je xxxxxxx xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxx xxxx, nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Vzduch xxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Příprava vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, aby xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx hmotnosti obsahu xxxxxxxx X xxxxxxx x přesností xx 0,01 x, 2 x xx 25 x vzorku do 500 ml xxxxx x plochým dnem xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx stálého xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.12), 2 ml xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.5) x 2 ml xxxxxxx sulfidu sodného (3.6). Připojte xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxx x xxxxxxx baňku xx vodní xxxxx x magnetickým xxxxxxxxx (4.7). Zahřejte x xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx přidejte 25 xx roztoku hydroxidu xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx x xxxxx xxxxx ochlaďte xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx saponifikovaný xxxxxx xxxxxxxxxxxxx vypláchnutím celkovým xxxxxxx 250 ml xxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxx (3.1) x 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) x převeďte xxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx nebo xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Podíl xxxx a xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx roztocích xx xxx xxx xxxxx 2:1. Třepejte xxxxx dvě xxxxxx x nechejte xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Když xx xxxxxx oddělily (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx nálevky (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2) x xxxxxxx 50 xx petroléteru (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx (aby xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx) x potom xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 100 ml dávkami xxxx, xxxxx voda xxxxxxxxx bezbarvá xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx dostačující). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx přes xxxxx xxxxxxxx filtr xxx xxxxxx xxxx (4.4), aby se xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx odměrné xxxxx (4.2.2). Vypláchněte dělící xxxxxxx x xxxxx 50 ml xxxxxxxxxxx (3.2), doplňte po xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx promíchejte.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx tvaru xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tak, xxx xxx právě nad xxxxxxxx rozhraní. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx petroléteru xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) Xxxxxxxx 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx válce, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vrstvy xxxxxxx xx a převeďte xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx postup xxxxxxxx dalšími 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx dvakrát 50 xx dávkami petroléteru (3.2) a přidejte xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx petroléteru tak, xxx je to xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx xx tam popsáno.
5.4 Xxxxxxxx roztoku xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx roztoku xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) do 250 xx baňky ve xxxxx hrušky (4.2.4). Xxxxxxx rozpouštědlo xxxxx xx xxxxx na xxxxxxx vakuové xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Obnovte xxxxxxxxxxxx tlak připuštěním xxxxxx (3.9) x xxxxxxx baňku xx xxxxxxx xxxxxxx odparky. Xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx dusíku (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx ve známém xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx by xxxx xxx x xxxxxxx 5 μx/xx xx 30 μg/ml).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx HPLC
Vitamín X xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx koloně X18 (4.5.1) a xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 xx) xxxx UV xxxxxxxxx (292 nm) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx část (xxxx. 20 μx) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx získaného v 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx fází (3.8). Xxxxxxxxx střední xxxxx xxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxx stejného xxxxxx x střední xxxxx (plochy) xxxxxxxx xxxxxxx kalibračních xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx výsledky.
Kolona xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově)
Úroveň xxxx: 1–2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx/xxxxx: 330 xx) nebo XX xxxxxxxx (292 xx)
5.6 Xxxxxxxxx (XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX-α-xxxxxxxxxx)
5.6.1 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 25 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu (3.10.1) xx 500 xx xxxxx x plochým xxxx nebo Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) a xxxxxxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxx x 5.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) podle 5.3 x doplňte xx 500 ml xxxxxxxxxxxx. Odpařte 25 xx xxxxxx xxxxxxxx xx rotační xxxxxxx xxxxxxx (viz 5.4) xxxxx xx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x 25,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx koncentrace tohoto xxxxxxx xx 45,5 μx DL-α-tokoferolu na xx, xxxxxxxxxx 50 μx DL-α-tokoferol acetátu xx ml. Standardní xxxxxxxx roztok musí xxx čerstvě xxxxxxxxx xxxx použitím.
5.6.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx do xxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,5, 5,0, 10,0 a 25,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx, xx. 2,28, 4,55, 9,10 x 22,8 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx kalibračního roztoku x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx píků (plochy). Xx xxxxxxx středních xxxxx xxxx (ploch) xxxxxxxxx kalibrační graf.
5.6.1.3 XX standardizace xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferol acetátu (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 25,0 xx xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx by xxxx xxx při 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284nm v xxxxxxx
Xxx tomto xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferolu (3.11.1) xx 50 ml xxxxxxx baňky, xxxxxxxxx x metanolu (3.3) x xxxxxxx xx xxxxxx metanolem. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 40 μx XX-α-xxxxxxxxxx na ml, xxxxxxxxxx 44,0 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. Xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx do xxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxx xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx DL-α-tokoferolu, xx. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxx několikrát 20 μl xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx výšky xxxx (xxxxxx). Za xxxxxxx středních xxxxx xxxx (ploch) narýsujte xxxxxxxxxx graf.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Xxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) na 25,0 xx xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx by xxxx být xxx 292 nm:
E1%1cm = 75,8 při 292nm x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,6.
6. Výpočet výsledků
Ze xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx roztok xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x μg/ml (xxxxxxxx xxxx α-tokoferol xxxxxx) ve xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx X x x mg/kg ve xxxxxx xx dán xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 / X1 · x [xx/xx]
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx E x roztoku xxxxxx (5.4) x μx/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = objem xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 v xx
x = xxxxx zkušební xxxxx x g
7. Xxxxxxxx
7.1 X vzorků x nízkou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx E xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx XXXX.
7.2 Xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxx analýzu xxxxx překročit 2g.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 ml xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX-α-xxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 xxxxxxxx xx xxxxxxx (3.10.1 xxxx 3.10.2) xxxxxxxxx 10 xx BHT (3.12) x skladujte xxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx týdny).
7.5 Xxxxxxx BHT xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx je xxxxx x použitím xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Namísto roztoku xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 mg XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 15 % z xxxxxxx výsledku.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [2]
X: xxxxx laboratoří
n: počet xxxxxxxxxxxx hodnot
sr: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient variace xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx koncentrát |
Bílkovinný xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro xxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
x |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
xxxxx [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
sr [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [xx/xx] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
ČÁST C
STANOVENÍ XXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx X- x X- xxxxxxx.
2. Princip
Pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx tryptofanu je xxxxxx xxxxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nasyceným xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahříván xxx 110 °X xx 20 hodin. Xx xxxxxxxxx xx přidán xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu xx xxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxx kyselých xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx x vnitřní xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx pomocí XXXX x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxx destilovaná xxxx, nebo voda xxxxxxx kvality xxxx xxx používána (vodivost &xx; 10 μS/cm)
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx pod xxxxxx přes xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Xxxxxxx standardní xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx vakuem xxxx pentoxid fosforu
3.4 Xxxx-xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxx být dbáno, xxx nebyl Ba(OH)2. 8 X2X xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx XxXX3, xxx xxxx xxxxx stanovení) (xxx xxxxxxxx 9.3)
3.5 Xxxxxxxx xxxxx
3.6 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x20 = 1,19 x/xx
3.8 Xxxxxxx, XXXX xxxxxx
3.9 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40–60 °X
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxxxx 40,0 x NaOH (3.5) xx xxxx a xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx chlorovodíková, c = 6 mol/l:
Vezměte 492 xx XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 xx XXX (3.7) x xxxxxxx do 1 x vodou.
3.13 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x:
Xxxxxxx 8,2 xx XXX (3.7) x doplňte xx 1 x vodou.
3.14 Xxxxxxxx orto-fosforečná, c = 0,5 mol/l:
Vezměte 34 ml xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) x xxxxxxx xx 1 x vodou (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.2), x = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2553 x xxxxxxxxxx (3.2) x 500 ml xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.13) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 xX xx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.16 Koncentrovaný vnitřní xxxxxxxxxx xxxxxx, c = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2728 x α-xxxxxx-xxxxxxxxxx (3.3) x 500 xx xxxxxxx xxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Skladujte xxx –18 oC xx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx tryptofanu x xxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxxx 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15), x 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x metanolem (3.8) xx přibližně stejný xxxxx x xx xxxxxxxxx stejnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (10–30 %) xxxx xxxxxxx hydrolyzát.
Tento xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxx přípravy xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx octová
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Xxxxxxxxxxx > 98 %
3.21 Xxxxxx 1 x 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) ve 100 xx xxxxxxxx (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx pro XXXX: 3,00 x xxxxxxxx octové (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 ml xxxxxxx (3.21) 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanolu (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1x/100 ml). Xxxxxxx xX xx 5 x xxxxxxxx ethanolaminu (3.20). Doplňte do 1000 ml xxxxx (3.1).
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx XXXX se xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
4.2 Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx chromatografii, 125 xx x 4 xx, C18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.3 xX metr
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx 125 xx, se širokým xxxxxx a šroubovacím xxxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx filtr, 0,45 μx
4.6 Xxxxxxxx, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) xxxx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.8 Xxxxxx xxxxx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx, xxx prošel xxxxx x xxxxxx 0,5 xx. Xxxxxx, xxxxx xxxx vysokou xxxxxxx, xxxx být před xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °X, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx x xxxxxxx obsahem xxxx xxxx xxx xxxx xxxxxx extrahovány xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxx (extrakt)
Odvažte x xxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky. Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové, x = 0,1 xxx/x (3.13) x 5,00 xx koncentrovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx 60 xxxxx x xxxxxxxx mechanické xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, c = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxx pH xx 3,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného, x = 1,0 xxx/x (3.10). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (3.8), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 a 30 % xxxxxxxx x konečném objemu. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x vhodném xxxxxx x zřeďte xxxxx xx objem xxxxxxxx xxx chromatografii (xxxxxxxxx stejný xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx XXXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μm (4.5). Xxxxxxxxxx chromatografii xxxxx 5.4.
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a extrakty xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx analyzovat xxxxxxxx xxxxxx xxx, mohou xxx xxxxxxxxxx při 5 °C xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.3 Stanovení celkového xxxxxxxxxx (hydrolyzát)
Odvažte x xxxxxxxxx na 0,2 xx xx 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.4). Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx měla xxx xxxxx xxxxxx xxxxx 10 xx. Xxxxxxxx 8,4 g xxxx-xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.4) a 10 xx vody. Xxxxxxxxxxx xx vířivém mixeru (4.8) xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx magnet xx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4 xx vody. Našroubujte xxxxxx x láhev xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx autoklávu (4.6) x xxxxxx xxxxx x párou xx 30–60 xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx x autoklávujte xxx 110 (+ 2) °C po xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx pod 100 °C. Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx Xx(XX)2. 8 X2X, xxxxxxxx do xxxxx xxxxx 30 xx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Mírně xxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx. Přidejte 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxxxx xxxxxx ve vodní/ledové xxxxx xx dobu 15 xxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx 5 xx xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, c = 0,5 mol/l (3.14). Xxxxxxxx nádobu xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx kyselinou chlorovodíkovou, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xX na 3,0 x použitím XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Přidejte xxxxxxxxx xxxxxxxx, abyste xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 10 x 30 % metanolu x xxxxxxxx xxxxxx. Převeďte xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx objemu x xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx objem xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx 100 ml). Xxxxxxxx metanolu by xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxxxx do kolony XXXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx x chromatografii xxxxx xxxxxxxx 5.4.
Xxxxxxx standardní xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxx přímým slunečním xxxxxxx. Pokud xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °C po xxxxxxxxx dobu xxx xxx.
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx vymývání xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx za xxxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxx poznámky 9.1 x 9.2):
Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 3 μx nebo xxxxxxxxxx
Xxxxxxx kolony Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx fáze (3.22): 3,00 x kyseliny xxxxxx (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 xx roztoku (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) v xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 ml). Xxxxxxx xX xx 5,00 x xxxxxxxx ethanolaminu (3.20). Doplňte xx 1000 xx xxxxx (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx xxxx xxxx: xxxxxxxxx 34 xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx délka: xxxxxxxx: 280 xx, xxxxx: 356 xx
Xxxxxxxxx xxxxx: 20 μx
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X × B × X × X × X × XX / X × X × X × 10&xxxx;000 × X = x tryptofanu xx 100x xxxxxx
X = plocha xxxx xxxxxxxxx standardu, xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.17)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
C = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx tryptofanu (3.15) (2 ml) xxxxxxx xx kalibračního roztoku (3.17)
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) v μmolech/ml (= 2,50) xxxxxxxxx xx kalibračního xxxxxxx (3.17)
X = objem xxxxxxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 ml) nebo xx hydrolyzátu (5.3) (= 2,00 ml)
F = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) nebo xxxxxxxxxxx (5.3)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, kalibračního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = objem koncentrovaného xxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.16) x xx (= 2,00) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxx xxxxxx x x (xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx vzorek sušen x/xxxx odtučněn)
MW = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (= 204,23)
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % z xxxxxxx xxxxxxxx.
8. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxx porovnání) xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 12 xxxxxxxxxxxx k xxxxxxx metody xxx xxxxxxxxx. Replikované (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x následující tabulce:
L: xxxxx laboratoří předkládajících xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (identifikované Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: koeficient xxxxxxx reprodukovatelnosti, %
|
Xxxxxx 1 Krmivo xxx xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx prasata doplněné X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Krmný xxxxxxxxxx pro xxxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
|
x |
50 |
55 |
50 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [x/xx] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
x [g/kg] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
CVr [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [x/xx] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
X [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (třetí vzájemné xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, že xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx ve 13 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Replikované (5) analýzy xxxx xxxxxxxxx x každého xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: počet xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odlehlých xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Cochran-Dixonovým testem)
sr: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Xxxx xxxxxxx xx sójou |
Vzorek 5 Xxxx xxxxxxx xx sójou (= xxxxxx 4) s xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [g/kg] |
0,391 |
0,931 |
|
sr [x/xx] |
0,005 |
0,012 |
|
x [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
sR [x/xx] |
0,018 |
0,048 |
|
X [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx tak, xx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx x xxxxx laboratořích s xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx tabulce:
L: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx jednotlivých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (identifikované Cochran-Dixonovým xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx krmivo pro xxxxxxx (XXX 117) |
Xxxxxx 2 Xxxxx-xxxxx rybí xxxxxx (XXX 118) |
Vzorek 3 Xxxxxx xxxxxx (XXX 119) |
Xxxxxx 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx mléko (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [g/kg] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
sr [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
xX [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [x/xx] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
XXX [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx podmínky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx tryptofanem x α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vymývání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kolony:
|
Kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii: |
125 xx x 4 xx, C18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 μx xxxx xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxx xxxxxx: |
32 °C |
||
|
Mobilní fáze: |
A: 0,01 xxx/x KH2PO4/metanol, 95 + 5 (xxxxxxxx + xxxxxxxx) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % A |
0 % X |
|
15 xxx. |
100 % A |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
21 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
33 xxx. |
100 % X |
0 % B |
|
|
Úroveň xxxx: |
1,2 xx/xxx. |
||
|
Xxxxxxx doba xxxx: |
xxxxxxxxx 33 minut |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxx XXXX xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx čáru xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx standardem. Navíc xx xxxxxxxx, xxx xxxx degradační produkty xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Hydrolyzáty bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx chromatografovány, xxx se překontrolovala xxxxxxxxx čára za xxxxxxxxx standardu xxx xxxxxxxxx. Xx důležité, xxx doba běhu xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx produktů, jinak xxxxx píky pozdního xxxxxxxx ovlivňovat xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
X xxxxxxx xxxxxxxx, xx měl xxxxxxxxxxxxxxxx systém xxx xxxxxxxx xxxxxx. Lineární xxxxxx xx měla xxx měřena s xxxxxxxxxx (normální) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardu x xxxxxxxx se koncentracemi xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx a vnitřního xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxx xxxxxxx HPLC/flourescenčního xxxxxxx. Pokud pík (xxxx) xxx tryptofanu, x/xxxx vnitřního xxxxxxxxx xx (jsou) xxxxxx xxxx (malé) xxxx xxxxxx xxxxxx (vysoké), xxxx xx být xxxxxxx opakovány xx xxxxxxx xxxx velikosti x/xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx stává hydroxid xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX, což může x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
[1] Řízené xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Verband Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).
[2] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Verband Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).