Xxxxxxxx Komise 2000/45/XX
xx xxx 6. xxxxxxxx 2000,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxx E x tryptofanu v xxxxxxxx
(Xxxx s xxxxxxxx xxx EHP)
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 70/373/XXX ze dne 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx se xxxxxx xxxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxx x Švédska [2], x xxxxxxx na xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, že úřední xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx na jakost x xxxxxxx xxxxx, xxxx xxx prováděny xx xxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
(2) Xxxxxxxx Xxxx 70/524/EHS xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 o xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx [3], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxxx Komise (XX) x. 2439/1999 xx xxx 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx E xxxx xxx xxxxxx na xxxxxxxxx, pokud xxxx xxxx xxxxx přidány xx xxxxxxx a xxxxx.
(3) Xxxxxxxx Xxxx 79/373/XXX xx xxx 2. xxxxx 1979 x uvádění xxxxxxx xxxxx xx xxx [5], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Komise 2000/16/XX [6], x xxxxxxxx Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. září 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx [7], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx 96/25/XX [8], xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx na xxxxxxxxx krmiv.
(4) Xxxx xxx stanoveny xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx látek.
(5) Opatření xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, aby xx xxxxxx kontroly obsahu xxxxxxxx X, xxxxxxxx X a xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx prováděly metodami xxxxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 31. xxxxx 2000. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. xxxx 2000.
Xxxx opatření xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx nebo xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 6. července 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxx Xxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Úř. věst. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Úř. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Úř. xxxx. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Xx. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
PŘÍLOHA
ČÁST X XXXXXXXXX XXXXXXXX A
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx vitamínu X (retinolu) x xxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx X zahrnuje xxx-xxxxx-xxxxxxx alkohol a xxxx xxx xxxxxxx, xxxxx xx stanoví xxxxx xxxxxxx. Obsah xxxxxxxx A xx xxxxxxxx v mezinárodních xxxxxxxxxx (XX) xx xx. Xxxxx IU xxxxxxxx aktivitě 0,300 μx all-trans-vitamín X xxxxxxxx xxxx 0,344 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx nebo 0,550 μx all-trans-vitamín X xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2000 XX xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxxxx etanolovým xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx do xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxx x, xxxxx xx xx nutné, xxxxx xx požadovanou xxxxxxxxxxx. Obsah vitamínu X xx stanoví xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx kapalinové xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx použití XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx parametry xxxx xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °C
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx, β = 50 g/100 ml
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného, β = 10 x/100 ml (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Roztok xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x v xxxxxxxxx, β = 120 x/x (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 g/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 2-propanol
3.9 Xxxxxxx xxxx xxx HPLC: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx použité xxxxxx.
3.10 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.11 Xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxx, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx: Xxxxxxx x přesností xx 0,1 xx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx A (3.11) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace tohoto xxxxxxx je 1400 XX xxxxxxxx X xx xx. Přesný xxxxx musí xxx xxxxxxxx podle 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx A palmitát, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx, např. 1,80 x 106 XX/x.
3.12.1 Xxxxxxx xxxxxx all-trans-vitamín X xxxxxxxxx: Odvažte x xxxxxxxxx xx 0,1 xx 80 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (3.12) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx ve 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx značku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 1400 IU xxxxxxxx A na xx. Přesný xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Nádobí x xxxxxxxx skla
4.2.1 Baňky x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, kuželovité, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx baňky, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Allihnův xxxxxxxxxxx, xxxxx izolační xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx hrdlem, x xxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx plynu.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx oddělení xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Schleicher & Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx vstřikovacím systémem
4.5.1 Xxxxxx pro kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 mm, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μx xxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx XXXX)
4.5.2 UV xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor s xxxxxxxxxxx nastavením xxxxxx xxxxx
4.6 Spektrofotometr s 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx lázeň x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx vložka vybavená xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Nastavitelná xxxxxxx xxxx xxx spodní xxxxx xx tvaru xxxxxxx X x xxxxxx xx opačném xxxxx xxx, aby xxxxx být xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Všechny xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx v nepřítomnosti xxxxxx (xx použití xxxxxx z xxxxxxxx xxxx, nebo xxxxxx xxxxxxxxxx hliníkovou xxxxx) x kyslíku (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx musí být xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 mm, xxxxxxx xxxxxx, aby xxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx může dojít xx ztrátám xxxxxxxx X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx X, odvažte x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x xx 25 g xxxxxx do 500 xx xxxxx s xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx postupně za xxxxxxx kroužení 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 mg XXX (3.13), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a 2 xx xxxxxxx xxxxxxx sodného (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx lázně x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx k xxxx x xxxxxxxx odtékat xxx xxxxx. Potom xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx draselného (3.4) xxxx kondenzátor (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx dalších 25 xxxxx xx stálého xxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Potom xxxxxxxxxxx kondenzátor přibližně 20 xx xxxx x obsah xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Vypláchněte xxxxxxxxxxxxx baňku xxxxxxxx 25 ml etanolu (3.1) a 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x převeďte xxxxxxxx xx dělící xxxxxxx xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Podíl xxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxx minuty.
5.3.1 Xxxxxxxx s použitím xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx vrstvu xxxxxxxxxxx xx další xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Opakujte xxxx xxxxxxxx dvakrát 100 xx petroléteru (3.2) x xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x dělící xxxxxxx xxxxxxx 100 ml xxxxxxx xxxx za xxxxxxxxxx kroužení (xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) x xxxxx xxxxxxxxxx třepáním s xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx nezůstává xxxxxxxx xx přídavku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je obyčejně xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx extrakt xxxx suchý xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx všechna xxxxxxxxxxxx voda do 500 xx odměrné xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx válce (4.8.1) xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) a xxxxxxxxxx xxxxx konec xx xxxxx písmene X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx xxx xxxxx xxx hladinou rozhraní. Xx xxxxxx tlaku x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx a xxxxxxxx xxxxxx vrstvu xx xxxxxx xxxxxxx xxxx předtím. Xxxxxxxx xxxxxx extrakce dalšími 100 ml petroléteru (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
Promyjte xxxxxxxxxxx extrakty xxxxxxxxxxx xxx, xxx xx xx xxxxxxx x 5.3.1, a xxxxxxxxxx xxx xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx roztoku xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx část roztoku xxxxxxxxxxx (z 5.3.1 xxxx 5.3.2) do 250 xx baňky xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx sucha xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) za xxxxxxxxx tlaku xxx xxxxxxx vodní xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.10) x odpojte baňku xx rotační xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx proudem xxxxxx (3.10) a xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx vitamínu X xx měla xxx x xxxxxxx 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Xxxxxxxxx pomocí XXXX
Xxxxxxx X je xxxxxxx na reverzní xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) x koncentrace xx měřena pomocí XX xxxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, xxxxx: 475 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (např. 20 μx) metanolového xxxxxxx xxxxxxxxx x 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.9). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků (5.6.2).
Podmínky XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx podmínky xxxxx xxx xxxxxxx za xxxxxxxxxxx, xx poskytují xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx ekvivalent
Mobilní xxxx (3.9): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx toku: 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): UV xxxxxxxx (325 nm) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 nm/emise: 475 xx)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx (3.11.1) xxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X palmitátu (3.12.1) xx 500 ml xxxxx x plochým xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) a xxxxxxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxx v 5.2, ale xxx xxxxxxxx XXX. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx 100 xx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx vakuové odparce (xxx 5.4) xxxxx xx sucha, odstraňte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx proudem xxxxxx (3.10) a xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x 10,0 ml xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 560 IU xxxxxxxx X/1 ml. Xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx před xxxxxxxx.
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx 20 xx xxxxxxx baňky, doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx.
5.6.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 5,0 x 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx baněk, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 IU xxxxxxxx X na xx.
Xxxxxxxxxx několikrát 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx píků (xxxxx) nyrýsujte xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX xxxxxxxx (5.6.3.3).
5.6.3 XX standardizace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.3.1 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxx (3.11.1) xx 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 56 IU xxxxxxxx A xx xx. Pipetujte 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx A xx ml. Změřte XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx a 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx xxx mezi 325 nm x 327 nm.
Výpočet xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = E326 × 19,0
E1%1cm xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 1 530 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín A xxxxxxxxx (3.12.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx po značku 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X na xx. Pipetujte 3,0 xx xxxxxx zředěného xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx xx 25 xx odměrné xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx X xx ml. Změřte XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx xxx mezi 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
E1%1cm pro xxxxxxx X xxxxxxx = 957 při 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vitamínu A
Pipetujte 3,0 ml xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx X, xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1 xx 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Pipetujte 5,0 xx xxxxxx xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx baňky x doplňte xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace tohoto xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-propanolu (3.8) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx být xxxx 325 xx a 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X325 × 18,3
E1%1cm xxx xxxxxxx A xxxxxxx = 1&xxxx;821 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx roztok xxxxxx vitamínu X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx v IU/ml xx vztahu xx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2).
Xxxxx xxxxxxxx A w x IU/kg xx xxxxxx je xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · V2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu A x xxxxxxx xxxxxx (5.4) x XX/xx
X1 = xxxxx roztoku xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx odebraných x 5.4 x ml
m = xxxxx xxxxxxxx xxxxx x g
7. Xxxxxxxx
7.1 U vzorků x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx petroléteru dvou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx roztoku xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Množství xxxx xx vzorku xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxx překročit 2x.
7.3 Pokud se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx přibližně 10 xx etanolu (3.1), x rozrušení emulze.
7.4 X rybího xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx by xxxx xxx doba saponifikace xxxxxxxxxxx na 45–60 xxxxx.
7.5 Namísto XXX xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Oddělení xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx normální xxxxxx xxxxxx.
7.7 Namísto xxxxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx přibližně 150 mg xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx přibližně 50 mg EDTA.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 15 % x xxxxxxx výsledku.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
L: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx krmivo |
Minerální xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx xxxxxx |
|
|
X |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
x |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
xxxxx [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [XX/xx] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [XX/xx] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [XX/xx] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
X [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
XXXX X
XXXXXXXXX VITAMÍNU X
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx metoda xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu E xx xxxxxxxx xxxx xx DL-α-tokoferol xxxxxxx xx xx. 1 xx DL-α-tokoferol xxxxxxx xxxxxxxx 0,91 xx XX-α-xxxxxxxxxx (xxxxxxx E).
Mez xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxxxx E/kg.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztokem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x vitamín X xx extrahován xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxx x, xxxxx je xx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxx koncentraci. Xxxxx xxxxxxxx E xx stanoví xxxxxxxx xxxx vysoce účinné xxxxxxxxxx chromatografie (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX xxxx fluorescenčního xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 g/100 xx
3.5 Roztok askorbanu xxxxxxx, β = 10 g/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Roztok xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 mol/l x glycerolu, β = 120 x/x (xxx x = 9) (viz 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx fenolftaleinu, β = 2 x/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx metanolu (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově). Xxxxxxxxx poměr xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.10 DL-α-tokoferol acetát, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx
3.10.1 Xxxxxxx xxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx: Odvažte x xxxxxxxxx na 0,1 xx, 100 xx DL-α-tokoferol acetátu (3.10) do 100 xx xxxxxxx baňky. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxx stejným xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx roztoku xxxxxxxx 1 xx DL-α-tokoferol xxxxxxx. (UV xxxxxxxx – xxx 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – viz 7.4 xxxxxxxx).
3.11 DL-α-tokoferol, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx
3.11.1 Odvažte x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 mg XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) do 100 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx v xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx značku xxxxxxx rozpouštědlem. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 mg XX-α-xxxxxxxxxx. (XX xxxxxxxx – xxx 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Přístroje a xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Baňky x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Odměrné xxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 a 500 xx
4.2.3 Dělící xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx zábrusovými xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x adaptérem xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx oddělení fáze, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 HY 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx vstřikovacím xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.5.2 UV nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 mm xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx míchadlem
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) sestávající xx:
4.8.1 Xxxxxxxx odměrný xxxxx x objemu 1x xxxxxxxx zábrusovým xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx vložka xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx trubice xxxx xxx xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx U x xxxxxx xx opačném xxxxx xxx, xxx xxxxx být horní xxxxxx kapaliny xx xxxxx převedena do xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xxxx (XX) světlu x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (za použití xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x kyslíku (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx nad xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (vyhněte xx xxxxxxxx xxxxxxxx povolením xxxxx).
5.1 Příprava vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 mm, xxxxxxx xxxxxx, aby xxxxxxx k zahřátí. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx vitamínu X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxx X odvažte x přesností xx 0,01 x, 2 x xx 25 x xxxxxx do 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Přidejte xxxxxxxx xx xxxxxxx kroužení 130 ml etanolu (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.12), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 ml xxxxxxx xxxxxxx sodného (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x baňce x xxxxxxx baňku xx vodní lázně x magnetickým xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx k xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx minut. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx dalších 25 xxxxx za xxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxx dusíku. Xxxxx vypláchněte xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx x xxxxx xxxxx ochlaďte xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx saponifikovaný xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 ml xxxx xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) a 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxx xxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxx xxxxx 2:1. Třepejte xxxxx xxx minuty x xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx se xxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x dvakrát 50 xx petroléteru (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx nálevce xxxxxxx 100 xx dávkami xxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx emulzí) x potom xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx bezbarvá za xxxxxxxx xxxxxxx fenolftaleinu (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx obyčejně xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx skládaný xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), aby xx xxxxxxxxxx xxxxxxx suspendovaná xxxx do 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a filtr 50 ml xxxxxxxxxxx (3.2), doplňte po xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx vrstvy xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) za xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx tvaru xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, aby xxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx z xxxxxxx dusíku xx xxxxxxxxxxx ramene, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) do xxxxxxxxxx válce, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vrstvy xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx do xxxxxx nálevky jako xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dalšími 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx dvakrát 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) a přidejte xxxxxx petroléteru xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxx je xx xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx jak xx tam xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx vzorku xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxx petroléteru (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) do 250 xx xxxxx xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx rozpouštědlo xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx odparce (4.1) za xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxxxx nepřekračující 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx připuštěním xxxxxx (3.9) a xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx. Xxxxxxxxx zbývající rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (koncentrace XX-α-xxxxxxxxxx by měla xxx x xxxxxxx 5 μx/xx xx 30 μx/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xx xxxxxxxx fázové xxxxxx X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx měřena xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 xx) xxxx XX xxxxxxxxx (292 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx část (např. 20 μx) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 5.4 x vymývejte xxxxxxx xxxx (3.8). Xxxxxxxxx střední xxxxx xxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx stejného xxxxxx a xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx předkládány xxxx xxxxxxxxxx; ostatní xxxxxxxx xxxxx xxx použity xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx shodné xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 mm, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μm xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.8): Xxxx metanolu (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově)
Úroveň xxxx: 1–2 ml/min.
Detektor (4.5.2): Fluorescenční xxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx/xxxxx: 330 xx) nebo XX xxxxxxxx (292 xx)
5.6 Xxxxxxxxx (XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx DL-α-tokoferolu)
5.6.1 Xxxxxxxx DL-α-tokoferol xxxxxxx
5.6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovních xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 25 xx zásobního roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 500 ml xxxxx s xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, jak je xx xxxxxxx v 5.2. Následně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) podle 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx. Odpařte 25 xx tohoto xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (viz 5.4) xxxxx xx sucha, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x 25,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xx 45,5 μx DL-α-tokoferolu xx xx, xxxxxxxxxx 50 μx DL-α-tokoferol xxxxxxx xx xx. Standardní xxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx použitím.
5.6.1.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 a 10,0 xx standardního xxxxxxxxxx roztoku xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx baněk, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx jsou 2,5, 5,0, 10,0 x 25,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx, xx. 2,28, 4,55, 9,10 a 22,8 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx kalibračního xxxxxxx x xxxxxxxx střední xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (ploch) xxxxxxxxx kalibrační graf.
5.6.1.3 XX xxxxxxxxxxxxx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 25,0 xx etanolem x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx roztoku xxxxx etanolu (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 nm x 320 xx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx xxx 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284xx v xxxxxxx
Xxx tomto xxxxxx xx měla být xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Standard XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx, rozpusťte x xxxxxxxx (3.3) x doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 40 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, xxxxxxxxxx 44,0 μg XX-α-xxxxxxxxx acetátu xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx připraven xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a kalibrační xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx po xxxxxx metanolem (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx DL-α-tokoferolu, tj. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μl každého xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx středních xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx zásobního roztoku XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Rozřeďte 2,0 xx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 25,0 xx xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx roztoku xxxxx etanolu (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 xx x 320 nm. Xxxxxxxxx xxxxxxx by xxxx xxx xxx 292 xx:
X1%1xx = 75,8 při 292nm x etanolu
Při xxxxx xxxxxx xx měla xxx získána xxxxxxxx 0,6.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx E xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x μx/xx (xxxxxxxx jako α-xxxxxxxxx xxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx X x x mg/kg xx xxxxxx je dán xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · V2 / X1 · m [xx/xx]
xx které:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx E x roztoku vzorku (5.4) v μx/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) v xx
X2 = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 x ml
m = xxxxx xxxxxxxx xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 X vzorků x xxxxxx koncentrací xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxxxx spojit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxxxx vsázek (hmotnostní xxxxxxx: 25 g) xx jednoho xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX.
7.2 Xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2g.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, přidejte xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), k xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX-α-xxxxxxxxxx podle 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 přidejte xx roztoku (3.10.1 xxxx 3.10.2) xxxxxxxxx 10 xx XXX (3.12) x xxxxxxxxx xxxxxx x chladničce (xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx).
7.5 Xxxxxxx XXX může xxx xxxxxx hydrochinon.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx xx možné x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx kolony.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx roztoku xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx použito přibližně 50 mg XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx nesmí překročit 15 % x xxxxxxx výsledku.
9. Výsledky xxxxxxxx spolupráce [2]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: koeficient variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx xxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
x |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
xxxxx [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
xx [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [xx/xx] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [mg/kg] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
XXXX C
STANOVENÍ XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx určena xxx xxxxxxxxx celkového a xxxxxxx tryptofanu v xxxxxxxx. Nerozlišuje xxxx X- x L- xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx barnatého x xxxxxxxx xxx 110 °X xx 20 xxxxx. Xx xxxxxxxxx xx přidán xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx jsou stanoveny x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx XXXX x fluorescenční xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Dvojnásobně xxxxxxxxxxx xxxx, nebo xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx &xx; 10 μS/cm)
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxx: tryptofan (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), sušený xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx: α-methyl-tryptofan (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx pentoxid xxxxxxx
3.4 Xxxx-xxxxxx xxxxxxxxx barnatého (xxxx xxx xxxxx, xxx xxxxx Ba(OH)2. 8 X2X nadměrně xxxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx BaCO3, xxx xxxx rušit xxxxxxxxx) (xxx xxxxxxxx 9.3)
3.5 Xxxxxxxx sodný
3.6 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, w = 85 %
3.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, p20 = 1,19 x/xx
3.8 Xxxxxxx, XXXX stupeň
3.9 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40–60 °X
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1 mol/l:
Rozpusťte 40,0 x XxXX (3.5) xx xxxx x xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 6 xxx/x:
Xxxxxxx 492 ml XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 l xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 ml XXX (3.7) a xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.13 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x:
Xxxxxxx 8,2 xx XXX (3.7) x xxxxxxx do 1 l xxxxx.
3.14 Xxxxxxxx orto-fosforečná, x = 0,5 xxx/x:
Xxxxxxx 34 ml xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) a xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.2), x = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2553 x xxxxxxxxxx (3.2) x 500 ml xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx při –18 xX xx xxxx maximálně xxxx xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx vnitřní xxxxxxxxxx xxxxxx, c = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2728 g α-xxxxxx-xxxxxxxxxx (3.3) x 500 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x doplňte xx značku xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Skladujte xxx –18 xX xx xxxx maximálně xxxx xxxxx.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok tryptofanu x xxxxxxx standard:
Vezměte 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15), x 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx roztoku vnitřního xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (10–30 %) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxx čerstvý před xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxx
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Ethanolamin &xx; 98 %
3.21 Xxxxxx 1 x 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) xx 100 xx xxxxxxxx (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: 3,00 x xxxxxxxx octové (3.18) + 900 ml xxxx (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1x/100 xx). Upravte xX xx 5 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx xx 1000 xx xxxxx (3.1).
4. Přístroje a xxxxxxx
4.1 Vybavení xxx XXXX se xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
4.2 Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 125 xx x 4 xx, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 3 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.3 xX xxxx
4.4 Polypropylenová xxxxx, objem 125 xx, xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxx, 0,45 μm
4.6 Xxxxxxxx, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) baru
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.8 Xxxxxx mixer
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx tak, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 0,5 xx. Vzorky, xxxxx xxxx vysokou xxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °X, xxxx xxxxxxxxx. Vzorky x xxxxxxx obsahem xxxx xxxx xxx xxxx mletím xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu (extrakt)
Odvažte x přesností xx 1 xx příslušné xxxxxxxx (1–5 g) xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx Erlenmeyerovy baňky. Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x (3.13) a 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx xxxx mixujte 60 xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxx míchadla (4.7). Nechejte usadit xxxxxxxx x xxxxxxxxx 10,0 xx roztoku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 ml xxxxxxxx orto-fosforečné, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxx xX xx 3,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1,0 xxx/x (3.10). Přidejte xxxxxxxxx metanolu (3.8), xxxxxx obdrželi koncentraci xxxx 10 a 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx odměrné xxxxx o vhodném xxxxxx a xxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxxx pro chromatografii (xxxxxxxxx stejný xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Před xxxxxxxxxxx xx xxxxxx HPLC xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx membránový xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Chraňte xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx den, xxxxx xxx skladovány při 5 °X xx xxxxxxxxx dobu tří xxx.
5.3 Stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,2 xx od 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.4). Odvážená xxxxx xxxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx 10 xx. Xxxxxxxx 8,4 x xxxx-xxxxxxx xxxxxxxxx barnatého (3.4) x 10 xx vody. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx mixeru (4.8) xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx potažený magnet xx směsi. Xxxxxxxxxx xxxxx nádoby 4 xx xxxx. Našroubujte xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx autoklávu (4.6) x vroucí xxxxx x xxxxx xx 30–60 xxxxx. Uzavřete xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx 110 (+ 2) °X xx xxxx 20 hodin.
Před xxxxxxxxx autoklávu snižte xxxxxxx xxxxx xxx 100 °X. Xxx xxxxxxx xx krystalizaci Xx(XX)2. 8 H2O, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx 30 xx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx. Přidejte 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxxxx xxxxxx ve xxxxx/xxxxxx xxxxx xx xxxx 15 minut.
Potom přidejte 5 ml xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, c = 0,5 mol/l (3.14). Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx lázni x xxxxxxxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x (3.11) zatímco xxxxxxx a xxxxxxx xX na 3,0 x použitím XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Přidejte xxxxxxxxx metanolu, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % metanolu x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx odměrné baňky x vhodném objemu x zřeďte xxxxx xx definovaný xxxxx xxxxxxxx xxx chromatografii (xxxxxxxxx 100 ml). Xxxxxxxx metanolu by xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx XXXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Pokračujte x xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 5.4.
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x hydrolyzáty xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx není xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx den, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °X xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.4 Xxxxxxxxx pomocí XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx podmínky smějí xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, že poskytují xxxxxx xxxxxxxx (viz xxxx xxxxxxxx 9.1 x 9.2):
Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 xx x 4 mm, C18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μm xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx fáze (3.22): 3,00 x kyseliny xxxxxx (3.18) + 900 ml vody (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 xx). Xxxxxxx xX xx 5,00 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx xx 1000 xx xxxxx (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx xxxx xxxx: xxxxxxxxx 34 xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx délka: excitace: 280 xx, xxxxx: 356 xx
Xxxxxxxxx objem: 20 μl
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X × B × C × X × X × MW / X × X × X × 10&xxxx;000 × W = x xxxxxxxxxx xx 100g xxxxxx
X = xxxxxx píku xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.17)
X = xxxxxx píku xxxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx hydrolyzátu (5.3)
X = objem roztoku xxxxxxxxxxxxxxx tryptofanu (3.15) (2 ml) přidaný xx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.17)
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) x μmolech/ml (= 2,50) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx xxxxxxxxx při xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) nebo xx hydrolyzátu (5.3) (= 2,00 xx)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx standardu, xxxxxxxx (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, kalibračního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx (= 2,00) přidaného xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
W = xxxxxxxx xxxxxx x x (xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, jestliže xxx xxxxxx xxxxx x/xxxx odtučněn)
MW = xxxxxxxxxx xxxxxxxx tryptofanu (= 204,23)
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % z xxxxxxx xxxxxxxx.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxx porovnání) xxxx xxxxxxxxxx tak, xx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 12 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx. Replikované (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx x následující xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx předkládajících xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (identifikované Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient variace xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx xxx xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx xxxxxxx doplněné X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
|
x |
50 |
55 |
50 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [x/xx] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
x [x/xx] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
XXx [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [x/xx] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
X [g/kg] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
CVR [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx studijní xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (třetí xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, že xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xx 13 xxxxxxxxxxxx k ověření xxxxxx xxx extrakci xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v následující xxxxxxx:
X: počet xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odlehlých xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx testem)
sr: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
CVR: xxxxxxxxxx variace reprodukovatelnosti, %
|
Xxxxxx 4 Xxxx xxxxxxx xx xxxxx |
Xxxxxx 5 Xxxx xxxxxxx xx sójou (= xxxxxx 4) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [x/xx] |
0,391 |
0,931 |
|
xx [x/xx] |
0,005 |
0,012 |
|
x [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
xX [g/kg] |
0,018 |
0,048 |
|
R [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Další studijní xxxxxxxxxx Společenství byla xxxxxxxxxx xxx, že xxxxx vzorky xxxx xxxxxxxxxxx xx v xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx tryptofanu xxx hydrolýzy. Xxxxxxxx xxxx uvedeny x xxxxxxxxxxx tabulce:
L: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx jednotlivých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odlehlých xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Cochran-Dixonovým xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: reprodukovatelnost
CVr: xxxxxxxxxx xxxxxxx opakovatelnosti, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx (CRM 117) |
Xxxxxx 2 Nízko-tučná xxxx xxxxxx (XXX 118) |
Xxxxxx 3 Xxxxxx moučka (XXX 119) |
Xxxxxx 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (XXX 120) |
|
|
L |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
n |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
střed [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
xX [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [g/kg] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
CVR [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Následující specielní xxxxxxxxxxxxxxxx podmínky mohou xxxxxxxxxx lepší xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx a α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vymývání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: |
125 xx x 4 xx, C18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 μx xxxx xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxx xxxxxx: |
32 °C |
||
|
Mobilní fáze: |
A: 0,01 xxx/x KH2PO4/metanol, 95 + 5 (xxxxxxxx + objemově) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx program: |
0 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
15 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % X |
40 % B |
|
|
21 xxx. |
100 % A |
0 % X |
|
|
33 min. |
100 % X |
0 % X |
|
|
Xxxxxx xxxx: |
1,2 xx/xxx. |
||
|
Xxxxxxx xxxx xxxx: |
xxxxxxxxx 33 xxxxx |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx se xxxx xxxxxx xxxxx xxxx XXXX xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx systém musí xxx xxxxxxx poskytnout xxxxxxxxx xxxxxxxxx čáru xxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odděleny od xxxxxxxxxx x vnitřního xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx se překontrolovala xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx standardu xxx xxxxxxxxx. Je důležité, xxx xxxx běhu xxxx xxxxxxxxxx dlouhá xxx xxxxxx všech xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx píky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx následný xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
X rozsahu xxxxxxxx, xx měl xxxxxxxxxxxxxxxx systém dát xxxxxxxx xxxxxx. Lineární xxxxxx xx měla xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx) koncentrací xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx velikosti xxxx xxxxxxxxxx x vnitřního xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx rozsahu HPLC/flourescenčního xxxxxxx. Xxxxx xxx (xxxx) xxx xxxxxxxxxx, x/xxxx xxxxxxxxx standardu xx (jsou) příliš xxxx (malé) xxxx xxxxxx xxxxxx (vysoké), xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx jiné xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx stává hydroxid xxxxxxx hůře rozpustný. Xx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx pomocí XXXX, což může x tryptofanu xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
[1] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx Verband Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- und Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).
[2] Řízené xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- und Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).