Xxxxxxxx Komise 2000/45/XX
xx xxx 6. xxxxxxxx 2000,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxx X x xxxxxxxxxx v xxxxxxxx
(Xxxx x xxxxxxxx xxx EHP)
KOMISE EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx o založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX ze dne 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x analýzy Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx Rakouska, Xxxxxx x Švédska [2], x xxxxxxx na xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx splněny požadavky xxxxxxxx x správních xxxxxxxx xx jakost x xxxxxxx krmiv, xxxx být prováděny xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx x analýzy.
(2) Xxxxxxxx Xxxx 70/524/XXX xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx látkách x xxxxxxxx [3], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx (XX) x. 2439/1999 xx xxx 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxx X a xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxx na xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx.
(3) Směrnice Rady 79/373/XXX ze xxx 2. xxxxx 1979 x uvádění xxxxxxx xxxxx na trh [5], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Komise 2000/16/XX [6], x směrnice Xxxx 93/74/EHS ze xxx 13. xxxx 1993 x krmivech xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx [7], xxxxxxxxx xxxxxxxxx směrnicí 96/25/XX [8], xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx.
(4) Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx kontrolu xxxxxx xxxxx.
(5) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X, vitamínu X x xxxxxxxxxx x krmivech a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. srpna 2000. Xxxxxxxxxx o xxxx uvědomí Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx používat xx 1. září 2000.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx na xxxx směrnici nebo xxxx xxx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské státy.
Článek 3
Xxxx směrnice xxxxxxxx x platnost xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Evropských společenství.
Článek 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu dne 6. xxxxxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxx
xxxx Komise
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. věst. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Xx. věst. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Xx. xxxx. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Xx. věst. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
XXXXXXX
XXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXX X
1. Xxxx x oblast použití
Tato xxxxxx je xxxxxx xxx stanovení vitamínu X (xxxxxxxx) v xxxxxxxx x premixech. Xxxxxxx X xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx, xxxxx xx stanoví xxxxx xxxxxxx. Obsah xxxxxxxx X je xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (XX) xx xx. Xxxxx XX xxxxxxxx xxxxxxxx 0,300 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx nebo 0,344 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx nebo 0,550 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2000 IU xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx do petroléteru. Xxxxxxxxxxxx je odstraněno xxxxxxxxx a zbytek xx rozpustí x xxxxxxxx a, xxxxx xx xx xxxxx, xxxxx na požadovanou xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxx xxxxxxxx fází vysoce xxxxxx xxxxxxxxxx chromatografie (XX-XXXX) xx použití XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx nedošlo k xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx x jeho xxx izomerů.
3. Činidla
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 g/100 ml
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Roztok sulfidu xxxxxxx, c = 0,5 xxx/x v xxxxxxxxx, β = 120 x/x (pro x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 xx v etanolu (3.1)
3.8 2-xxxxxxxx
3.9 Mobilní xxxx xxx XXXX: xxxx metanolu (3.3) x vody, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx bude xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.10 Dusík, prostý xxxxxxx
3.11 All-trans-vitamín A xxxxxx, extra xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx roztok xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx X (3.11) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 1400 XX xxxxxxxx X xx ml. Přesný xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 1,80 x 106 XX/x.
3.12.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxxx: Xxxxxxx x přesností xx 0,1 mg 80 xx palmitátu xxxxxxxx X (3.12) do 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx ve 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 1400 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Rotační vakuová xxxxxxx
4.2 Nádobí z xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x plochým xxxx xxxx Erlenmeyerovy baňky, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Odměrné xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 a 500 xx
4.2.3 Dělící xxxxxxx, kuželovité, 1000 xx, xx zábrusovými xxxxxxx
4.2.4 Hruškovité xxxxx, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.3 Allihnův xxxxxxxxxxx, délka xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx hrdlem, x xxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx oddělení xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 HPLC xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 xxxx 10 μm xxxx xxxxxxx (výkonnostní xxxxxxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx pík xxx všechny xxxxxxx xxxxxxxx xx podmínek XXXX)
4.5.2 UV nebo xxxxxxxxxxxxx detektor x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Spektrofotometr s 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx odměrný xxxxx x xxxxxx 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x zátkou
4.8.2 Xxxxxxxxx vložka vybavená xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx trubicí xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx spodní xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, aby xxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X je xxxxxxx xxxx (XX) xxxxxx x oxidaci. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx hliníkovou fólií) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx nad xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Příprava xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 mm, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxx. Xxxxxxxxxx musí být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx a saponifikací, xxxxx xxxx xxxxx xx ztrátám xxxxxxxx X.
5.2 Saponifikace
V xxxxxxxxxx xx obsahu vitamínu X, xxxxxxx s xxxxxxxxx na 0,01 x, 2 g xx 25 g xxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx dnem nebo Xxxxxxxxxxxxx baňky (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx kroužení 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.13), 2 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a 2 ml xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x baňce a xxxxxxx xxxxx do xxxxx lázně x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx x varu x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx draselného (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx dalších 25 xxxxx xx stálého xxxxxxx xxx pomalým xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte dekantací xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx kvantitativně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx objemem 250 ml xxxx xx 1000 ml xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 xx petroléteru (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Podíl xxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx silně xxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxx minuty.
5.3.1 Xxxxxxxx s použitím xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx vrstvy xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Opakujte xxxx xxxxxxxx dvakrát 100 xx petroléteru (3.2) a xxxxxxx 50 ml xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx za xxxxxxxxxx kroužení (xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) x potom xxxxxxxxxx třepáním x xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx přídavku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx skládaný xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx do 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 ml xxxxxxxxxxx (3.2), doplňte xx značku xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), nahraďte zátku xxxxxxxxxx válce (4.8.1) xx zábrusovou vložku (4.8.2) x nasměrujte xxxxx konec xx xxxxx xxxxxxx U xxxxxxxxxxxx trubice xxx, xxx xxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx tlaku x xxxxxxx dusíku xx postranního xxxxxx, xxxxxxxx vrchní xxxxxx xxxxxxxxxxx do 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x dobře xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se x xxxxxxxx vrchní xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Opakujte xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx dělící xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, jak xx xx popsáno x 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx xx xxx xxxxxxx.
5.4 Příprava xxxxxxx xxxxxx pro XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxx xxxxxxxxxxx (z 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx xxxxx xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx rozpouštědlo xxxxx xx xxxxx xx rotační vakuové xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) metanolu (3.3) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx A xx xxxx být x xxxxxxx 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Stanovení pomocí XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx koloně C18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx xxxxxx pomocí XX xxxxxxxxx (325 xx) xxxx fluorescenčního xxxxxxxxx (excitace: 325 xx, emise: 475 xx) (4.5.2).
Vstříkněte xxxxxxxxx xxxx (např. 20 μx) xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx v 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.9). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) několika vstřiků xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx podmínky xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx poskytují xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 mm, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 5 xxxx 10 μx xxxx ekvivalent
Mobilní xxxx (3.9):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; Směs xxxxxxxx (3.3) a xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově)
Úroveň toku: 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; UV xxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor (xxxxxxxx: 325 xx/xxxxx: 475 nm)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 xx xxxxxxxxx roztoku vitamín X xxxxxxx (3.11.1) xxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 500 ml xxxxx s plochým xxxx xxxx Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxx x 5.2, xxx xxx xxxxxxxx XXX. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 a xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx 100 ml xxxxxx extraktu na xxxxxxx vakuové xxxxxxx (xxx 5.4) téměř xx xxxxx, odstraňte xxxxxxxxx rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx zbytek x 10,0 xx xxxxxxxx (3.3). Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 560 XX xxxxxxxx A/1 ml. Xxxxxx obsah xx xxxxxxx xxxxx 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx být čerstvě xxxxxxxxx před xxxxxxxx.
Xxxxxxxxx 2,0 ml xxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx 20 ml xxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx metanolem (3.3) a promíchejte. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx.
5.6.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0 x 10,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx značku xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 XX xxxxxxxx A na xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x stanovte xxxxxxx xxxxx píků (xxxxxx). Xx použití xxxxxxxxx výšek xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX xxxxxxxx (5.6.3.3).
5.6.3 XX standardizace standardních xxxxxxx
5.6.3.1 Xxxxxxx roztok xxxxxxx X acetátu
Pipetujte 2,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxx (3.11.1) xx 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx A xx xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx xx 25 xx odměrné xxxxx x doplňte po xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) ve spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx mezi 325 xx a 327 nm.
Výpočet xxxxxx xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
E1%1cm pro xxxxxxx X xxxxxxx = 1&xxxx;530 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx X palmitátu
Pipetujte 2,0 xx zásobního xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 50 ml odměrné xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 IU xxxxxxxx A xx xx. Pipetujte 3,0 xx tohoto zředěného xxxxxxx vitamín A xxxxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx baňky x xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace tohoto xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx X xx ml. Xxxxxx XX spektrum tohoto xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) ve spektrofotometru (4.6) mezi 300 xx a 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 nm a 327 nm.
Výpočet xxxxxx xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
E1%1cm xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 957 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx pracovní xxxxxxx xxxxxxxx X
Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx X, xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1 do 50 xx odměrné xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx 5,0 xx tohoto xxxxxxx xx 25 xx odměrné xxxxx x xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace tohoto xxxxxxx je 6,72 XX vitamínu A xx ml. Xxxxxx XX spektrum xxxxxx xxxxxxx proti 2-propanolu (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx mezi 325 nm a 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = X325 × 18,3
X1%1xx pro xxxxxxx X xxxxxxx = 1&xxxx;821 při 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
6. Xxxxxxx výsledků
Ze xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx A xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x XX/xx xx vztahu xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2).
Xxxxx xxxxxxxx X w x XX/xx xx xxxxxx xx dán xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu X x xxxxxxx vzorku (5.4) x XX/xx
X1 = objem xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 v xx
x = xxxxx zkušební xxxxx x g
7. Xxxxxxxx
7.1 X vzorků x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xxxx xxx užitečné xxxxxx xxxxxxxx petroléteru xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (hmotnostní xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx roztoku xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX.
7.2 Množství xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx nemělo xxxxxxxxx 2x.
7.3 Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx dělení, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx etanolu (3.1), x xxxxxxxxx emulze.
7.4 X xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx by měla xxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx možné x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx sodného může xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
L: xxxxx laboratoří
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx koncentrát |
Bílkovinný xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx xxxxxx |
|
|
X |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
x |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
xxxxx [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [IU/kg] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [IU/kg] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [XX/xx] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
X [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
ČÁST X
XXXXXXXXX VITAMÍNU X
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx stanovení xxxxxxxx E x xxxxxxxx a premixech. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxxx jako xx DL-α-tokoferol xxxxxxx xx kg. 1 xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xxxxxxxx 0,91 mg XX-α-xxxxxxxxxx (vitamín E).
Mez xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx hydrolyzován xxxxxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx x vitamín X xx extrahován xx petroléteru. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zbytek se xxxxxxxx v metanolu x, xxxxx je xx nutné, xxxxx xx požadovanou xxxxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu E xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx použití XX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx detekce.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Roztok xxxxxxxxx draselného, β = 50 g/100 xx
3.5 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Xx2X. x H2O (x = 7–9)
3.6.1 Roztok xxxxxxx sodného, c = 0,5 mol/l x glycerolu, β = 120 x/x (xxx x = 9) (viz 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx poměr xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.10 XX-α-xxxxxxxxx acetát, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx
3.10.1 Xxxxxxx xxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx: Odvažte x přesností xx 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10) do 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx v etanolu (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx DL-α-tokoferol xxxxxxx. (UV kontrola – xxx 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.11 XX-α-xxxxxxxxx, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx
3.11.1 Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 mg XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) a xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx tohoto xxxxxxx xxxxxxxx 1 mg XX-α-xxxxxxxxxx. (XX kontrola – viz 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 poznámky).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx x xxxxxxxx skla
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Erlenmeyerovy xxxxx, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Dělící xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, se zábrusovými xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Allihnův xxxxxxxxxxx, délka izolační xxxxxx 300 xx, xx zábrusovým hrdlem, x adaptérem xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx oddělení xxxx, xxxxxx 185 mm (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx vstřikovacím systémem
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μm xxxx xxxxxxxxxx
4.5.2 XX nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Vodní lázeň x magnetickým xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx přístroj (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x objemu 1x xxxxxxxx zábrusovým xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx vybavená xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx procházející xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx trubice xxxx xxx spodní xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X x xxxxxx xx opačném xxxxx xxx, aby xxxxx být xxxxx xxxxxx kapaliny xx xxxxx převedena do xxxxxx nálevky.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx citlivý xxxx (UV) světlu x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx (vypláchněte xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (vyhněte se xxxxxxxx občasným xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Příprava vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, xxx xxxxxx sítem x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxx musí být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x saponifikací, xxxxx xxxx dojít xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Saponifikace
V xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxx X xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 g, 2 x xx 25 x xxxxxx xx 500 xx xxxxx x plochým dnem xxxx Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1). Přidejte xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 130 ml etanolu (3.1), přibližně 100 xx XXX (3.12), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Připojte kondenzátor (4.3) x baňce x xxxxxxx baňku xx xxxxx xxxxx x magnetickým xxxxxxxxx (4.7). Zahřejte k xxxx x nechejte xxxxxxx pět minut. Xxxxx přidejte 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) přes xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 minut xx xxxxxxx míchání xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx x xxxxx xxxxx ochlaďte xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) nebo xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) a převeďte xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxx x kombinovaných roztocích xx měl xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx x nechejte xxxxx xxx minuty.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx dělící xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx se xxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxx xxxxxx nálevky (4.2.3). Opakujte xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx 50 xx petroléteru (3.2).
Promyjte xxxxxxxxxxx extrakty x xxxxxx xxxxxxx dvakrát 100 xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) x potom opakovaným xxxxxxxx s dalšími 100 xx dávkami xxxx, xxxxx voda xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx roztoku fenolftaleinu (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx suspendovaná xxxx xx 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx dělící xxxxxxx x xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx promíchejte.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx vrstvy xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxx skleněného xxxxx (4.8.1) za xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x xxxxxxxxxx dolní xxxxx xx tvaru xxxxxxx U xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx xxx právě xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxx, převeďte xxxxxx xxxxxx petroléteru xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx válce, zazátkujte x dobře xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vrstvy xxxxxxx xx x převeďte xxxxxx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx dvakrát 50 xx xxxxxxx petroléteru (3.2) a přidejte xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx tak, xxx xx to xxxxxxx v 5.3.1, x xxxxxxxxxx jak xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx petroléteru (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx xxxxx xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx rozpouštědlo xxxxx xx xxxxx na xxxxxxx vakuové xxxxxxx (4.1) xx sníženého xxxxx při teplotě xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx připuštěním xxxxxx (3.9) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx xx měla xxx x rozsahu 5 μx/xx xx 30 μx/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx HPLC
Vitamín X xx xxxxxxx na xxxxxxxx fázové xxxxxx X18 (4.5.1) a xxxxxxxxxxx xx měřena xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 xx) xxxx UV detektoru (292 xx) (4.5.2).
Vstříkněte xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μx) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx získaného x 5.4 x vymývejte xxxxxxx xxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (plochy) xxxxxxxx xxxxxxx roztoku xxxxxxxx xxxxxx a střední xxxxx (plochy) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx HPLC
Následující podmínky xxxx předkládány jako xxxxxxxxxx; ostatní podmínky xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 mm, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx nebo xxxxxxx
Xxxxxxx fáze (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx: 1–2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): Fluorescenční xxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 nm/emise: 330 xx) xxxx XX xxxxxxxx (292 xx)
5.6 Xxxxxxxxx (XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx DL-α-tokoferolu)
5.6.1 Xxxxxxxx DL-α-tokoferol xxxxxxx
5.6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx pipetou 25 xx zásobního roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx nebo Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx je xx xxxxxxx x 5.2. Následně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx 25 xx tohoto xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (viz 5.4) xxxxx do xxxxx, xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x znovu xxxxxxxxx xxxxxx v 25,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 45,5 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, xxxxxxxxxx 50 μx DL-α-tokoferol xxxxxxx xx xx. Standardní xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.1.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx značku metanolem (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace těchto xxxxxxx xxxx 2,5, 5,0, 10,0 x 25,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx, xx. 2,28, 4,55, 9,10 x 22,8 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx střední xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx středních xxxxx xxxx (ploch) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.1.3 XX standardizace xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 25,0 xx xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 nm x 320 nm.
Absorpční xxxxxxx by xxxx xxx při 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284xx v xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx extinkce 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Příprava standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx pipetou 2,0 ml zásobního xxxxxxx DL-α-tokoferolu (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx baňky, xxxxxxxxx x xxxxxxxx (3.3) x xxxxxxx xx xxxxxx metanolem. Nominální xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 40 μx XX-α-xxxxxxxxxx na xx, xxxxxxxxxx 44,0 μg XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx na xx. Standardní xxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx připraven xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx kalibračního xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, doplňte po xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoků xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx DL-α-tokoferolu, tj. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μg/ml XX-α-xxxxxxxxx acetátu.
Vstříkněte několikrát 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx výšek xxxx (xxxxx) narýsujte xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2.3 UV xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Xxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 25,0 ml etanolem x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx roztoku xxxxx etanolu (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx. Xxxxxxxxx maximum xx xxxx xxx xxx 292 xx:
X1%1xx = 75,8 xxx 292xx x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx pro xxxxxx xxxxxx vitamínu X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx v μx/xx (xxxxxxxx xxxx α-xxxxxxxxx xxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx X w x mg/kg xx xxxxxx xx dán xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 / X1 · x [xx/xx]
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxx vzorku (5.4) v μx/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) v xx
X2 = objem xxxxxxx odebraných x 5.4 v ml
m = xxxxx xxxxxxxx xxxxx x g
7. Xxxxxxxx
7.1 U xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx E xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxxxx vsázek (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx jednoho xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Množství xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxx analýzu xxxxx překročit 2g.
7.3 Xxxxx se neobjeví xxxxxx dělení, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 ml xxxxxxx (3.1), k xxxxxxxxx emulze.
7.4 Xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX-α-xxxxxxxxxx podle 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 přidejte xx roztoku (3.10.1 xxxx 3.10.2) přibližně 10 xx XXX (3.12) x skladujte xxxxxx x chladničce (xxxxxxxxx xxxx skladovatelnosti xx čtyři týdny).
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx xxx xxxxxx hydrochinon.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- a δ xxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx přibližně 150 mg xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx sodného může xxx xxxxxxx přibližně 50 xx EDTA.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 15 % x xxxxxxx výsledku.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx spolupráce [2]
L: xxxxx laboratoří
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx selata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
n |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
střed [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
sr [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [xx/xx] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [mg/kg] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
R [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx určena xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx tryptofanu x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx mezi X- x X- xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx tryptofanu xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahříván xxx 110 °X xx 20 hodin. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx standard.
Pro xxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu xx xxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx jsou stanoveny x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx pomocí HPLC x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Dvojnásobně xxxxxxxxxxx xxxx, nebo voda xxxxxxx kvality xxxx xxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx &xx; 10 μX/xx)
3.2 Xxxxxxxxxx látka: xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx přes xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Xxxxxxx standardní xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx pentoxid xxxxxxx
3.4 Xxxx-xxxxxx xxxxxxxxx barnatého (xxxx xxx dbáno, xxx nebyl Xx(XX)2. 8 X2X nadměrně xxxxxxxxxx xx vzduchu, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx BaCO3, jež xxxx xxxxx xxxxxxxxx) (xxx xxxxxxxx 9.3)
3.5 Xxxxxxxx sodný
3.6 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x20 = 1,19 x/xx
3.8 Xxxxxxx, XXXX xxxxxx
3.9 Xxxxxxxxxx, xxxxxx varu 40–60 °X
3.10 Roztok hydroxidu xxxxxxx, x = 1 mol/l:
Rozpusťte 40,0 x XxXX (3.5) xx xxxx x xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx chlorovodíková, c = 6 xxx/x:
Xxxxxxx 492 xx HCL (3.7) x doplňte xx 1 x xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 xx XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 xxx/x:
Xxxxxxx 8,2 xx XXX (3.7) x doplňte do 1 x xxxxx.
3.14 Xxxxxxxx orto-fosforečná, x = 0,5 xxx/x:
Xxxxxxx 34 ml xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) x xxxxxxx do 1 x vodou (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx (3.2), c = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2553 x xxxxxxxxxx (3.2) x 500 xx xxxxxxx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 xX po xxxx xxxxxxxxx čtyř xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx vnitřní xxxxxxxxxx xxxxxx, x = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2728 x α-xxxxxx-xxxxxxxxxx (3.3) v 500 xx xxxxxxx baňce x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x doplňte xx xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 xX xx dobu maximálně xxxx xxxxx.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok tryptofanu x xxxxxxx standard:
Vezměte 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu (3.15), x 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-methyl-tryptofan) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x xxxxxxxxx (3.8) xx přibližně xxxxxx xxxxx x na xxxxxxxxx stejnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (10–30 %) xxxx konečný xxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx musí být xxxxxxxxxxx čerstvý před xxxxxxxx.
Xxxxx přípravy xxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxx
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Ethanolamin &xx; 98 %
3.21 Xxxxxx 1 x 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) xx 100 xx xxxxxxxx (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: 3,00 g xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 ml xxxx (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1x/100 xx). Xxxxxxx xX xx 5 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx xx 1000 xx xxxxx (3.1).
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx XXXX xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
4.2 Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 3 μx xxxx ekvivalent
4.3 xX xxxx
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, objem 125 xx, se xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxx, 0,45 μx
4.6 Autokláv, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) baru
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx magnetické xxxxxxxx
4.8 Xxxxxx xxxxx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx rozmělněn tak, xxx xxxxxx sítem x otvory 0,5 xx. Vzorky, které xxxx xxxxxxx vlhkost, xxxx xxx před xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx teplotě xxxxxxxxxxxxx 50 °X, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx být xxxx mletím extrahovány xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (extrakt)
Odvažte x xxxxxxxxx na 1 mg příslušné xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky. Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové, x = 0,1 xxx/x (3.13) x 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx nebo xxxxxxx 60 xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx usadit xxxxxxxx a pipetujte 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx do kádinky. Xxxxxxxx 5 xx xxxxxxxx orto-fosforečné, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxx xX xx 3,0 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx, x = 1,0 xxx/x (3.10). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (3.8), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 a 30 % xxxxxxxx x konečném xxxxxx. Xxxxxxxx do odměrné xxxxx o xxxxxxx xxxxxx x zřeďte xxxxx xx objem xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx XXXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μm (4.5). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Xxxxxxx standardní xxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx analyzovat extrakty xxxxxx xxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °C po xxxxxxxxx xxxx tří xxx.
5.3 Xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxxx (hydrolyzát)
Odvažte x xxxxxxxxx xx 0,2 xx xx 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.4). Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx 10 xx. Xxxxxxxx 8,4 x xxxx-xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxx (3.4) a 10 xx xxxx. Promíchejte xx xxxxxxx xxxxxx (4.8) xxxx magnetickém xxxxxxxx (4.7). Ponechejte xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx směsi. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4 xx vody. Xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx (4.6) x xxxxxx xxxxx x xxxxx xx 30–60 xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx x autoklávujte xxx 110 (+ 2) °X xx xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx autoklávu snižte xxxxxxx xxxxx xxx 100 °X. Aby xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx Xx(XX)2. 8 X2X, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx 30 xx xxxx o xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx standardu (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Zchlaďte xxxxxx xx xxxxx/xxxxxx xxxxx xx dobu 15 minut.
Potom přidejte 5 ml orto-fosforečné xxxxxxxx, c = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx lázni a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xX na 3,0 x použitím XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx koncentraci xxxx 10 x 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx objemu. Převeďte xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx objemu x xxxxxx xxxxx xx definovaný objem xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxxxx do kolony XXXX xxxxxxxxxxxx několik xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Pokračujte x xxxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 5.4.
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, mohou xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °C po xxxxxxxxx dobu tří xxx.
5.4 Stanovení pomocí XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (viz xxxx xxxxxxxx 9.1 x 9.2):
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.2): 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic náplně 3 μm xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.22): 3,00 g xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) v xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 xx). Upravte xX xx 5,00 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx xx 1000 xx vodou (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx doba xxxx: xxxxxxxxx 34 xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx xxxxx: xxxxxxxx: 280 nm, emise: 356 nm
Vstřikový xxxxx: 20 μl
6. Výpočet xxxxxxxx
X × X × C × X × E × MW / X × X × X × 10&xxxx;000 × X = g xxxxxxxxxx xx 100g vzorku
A = xxxxxx píku xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.17)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = objem xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) (2 xx) xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) x μmolech/ml (= 2,50) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) xxxx xx xxxxxxxxxxx (5.3) (= 2,00 xx)
X = plocha xxxx xxxxxxxxx standardu, xxxxxxxx (5.2) xxxx hydrolyzátu (5.3)
X = plocha xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardního roztoku (3.16) v xx (= 2,00) xxxxxxxxx xx kalibračního standardního xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxx xxxxxx v x (opravená xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx x/xxxx odtučněn)
MW = xxxxxxxxxx hmotnost xxxxxxxxxx (= 204,23)
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % x vyššího xxxxxxxx.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx Společenství (xxxxxx xxxxxxxx porovnání) xxxx xxxxxxxxxx tak, xx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 12 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx byly prováděny x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx uvedeny x xxxxxxxxxxx tabulce:
L: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledků (identifikované Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx xxx xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx xxxxxxx doplněné X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Xxxxx xxxxxxxxxx xxx prasata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
|
n |
50 |
55 |
50 |
|
střed [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [g/kg] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
r [x/xx] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
XXx [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [x/xx] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
X [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx studijní spolupráce Xxxxxxxxxxxx (xxxxx vzájemné xxxxxxxxx) byla xxxxxxxxxx xxx, že xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xx 13 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxx extrakci xxxxxxx xxxxxxxxxx. Replikované (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx. Výsledky xxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx laboratoří xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledků (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Xxxx xxxxxxx xx xxxxx |
Xxxxxx 5 Xxxx pšenice xx xxxxx (= xxxxxx 4) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [x/xx] |
0,391 |
0,931 |
|
xx [x/xx] |
0,005 |
0,012 |
|
x [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
sR [x/xx] |
0,018 |
0,048 |
|
X [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx tak, xx xxxxx vzorky xxxx xxxxxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx tryptofanu xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: xxxxx jednotlivých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx opakovatelnosti, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx (CRM 117) |
Xxxxxx 2 Xxxxx-xxxxx xxxx xxxxxx (XXX 118) |
Vzorek 3 Xxxxxx moučka (XXX 119) |
Vzorek 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx mléko (XXX 120) |
|
|
L |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
n |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
střed [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [g/kg] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
CVr [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
sR [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [x/xx] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
XXX [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx mohou xxxxxxxxxx lepší xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vymývání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistěním xxxxxx:
|
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: |
125 xx x 4 xx, X18, velikost xxxxxx náplně 5 μx xxxx xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxx xxxxxx: |
32 °X |
||
|
Xxxxxxx xxxx: |
X: 0,01 xxx/x XX2XX4/xxxxxxx, 95 + 5 (xxxxxxxx + xxxxxxxx) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % A |
0 % X |
|
15 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % B |
|
|
19 xxx. |
60 % A |
40 % X |
|
|
21 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
33 xxx. |
100 % X |
0 % B |
|
|
Úroveň xxxx: |
1,2 xx/xxx. |
||
|
Xxxxxxx doba xxxx: |
xxxxxxxxx 33 xxxxx |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx se bude xxxxxx podle xxxx XXXX xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx systém xxxx xxx schopen xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx produkty xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Hydrolyzáty bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx se překontrolovala xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx standardu xxx xxxxxxxxx. Xx důležité, xxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx dlouhá xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxx pozdního xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx chromatografie.
V xxxxxxx xxxxxxxx, by xxx xxxxxxxxxxxxxxxx systém xxx xxxxxxxx xxxxxx. Lineární xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxx s xxxxxxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardu x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx důležité, xxx velikosti xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx rozsahu HPLC/flourescenčního xxxxxxx. Pokud xxx (xxxx) xxx xxxxxxxxxx, x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx (xxxx) xxxxxx xxxx (xxxx) xxxx xxxxxx xxxxxx (vysoké), xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx jiné xxxxxxxxx x/xxxx změněným xxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Hydroxid barnatý
Stářím xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx rozpustný. Xx xx xxxxxxxxx x nečirém roztoku xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX, xxx xxxx x tryptofanu způsobovat xxxxx xxxxxxxx.
[1] Řízené xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).
[2] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx Verband Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).