Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/45/XX
xx xxx 6. července 2000,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx metody Společenství xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxx X x xxxxxxxxxx v xxxxxxxx
(Xxxx s xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx o založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX ze xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx zavádí xxxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxx x Švédska [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv xx xxxxxx zjištění, xxx xxxx splněny xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxx xxx prováděny xx použití xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx a analýzy.
(2) Xxxxxxxx Xxxx 70/524/EHS xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx [3], xxxxxxxxx xxxxxxxxx nařízením Xxxxxx (XX) x. 2439/1999 xx dne 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx X xxxx xxx uváděn xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx látky xxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx.
(3) Xxxxxxxx Xxxx 79/373/XXX xx xxx 2. xxxxx 1979 x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxx [5], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx Xxxxxx 2000/16/ES [6], x xxxxxxxx Xxxx 93/74/XXX ze xxx 13. xxxx 1993 o krmivech xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx výživy [7], xxxxxxxxx pozměněná směrnicí 96/25/XX [8], xxxxxxx, xx aminokyseliny musí xxx uváděny xx xxxxxxxxx xxxxx.
(4) Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro kontrolu xxxxxx látek.
(5) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, aby se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X, vitamínu X a xxxxxxxxxx x krmivech x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x účinnost xxxxxx x správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 31. xxxxx 2000. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxx Komisi.
Budou xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. xxxx 2000.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx odkaz na xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxx xxxxx učiněn při xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx státy.
Xxxxxx 3
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 6. července 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Byrne
člen Komise
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. xxxx. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Xx. věst. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Xx. xxxx. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Xx. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
XXXXXXX
XXXX X STANOVENÍ XXXXXXXX X
1. Účel x oblast použití
Tato xxxxxx xx xxxxxx xxx stanovení xxxxxxxx X (xxxxxxxx) v xxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx A xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx, xxxxx se stanoví xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (IU) xx xx. Jedna XX xxxxxxxx aktivitě 0,300 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx xxxx 0,344 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxx nebo 0,550 μx all-trans-vitamín X xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2000 XX xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx etanolovým roztokem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx X je xxxxxxxxxx xx petroléteru. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxx x, xxxxx xx to xxxxx, xxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx stanoví xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) za xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx tak, xxx xxxxxxx k xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Petroléter, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 g/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 poznámky)
3.6 Sulfid xxxxx, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx sulfidu xxxxxxx, x = 0,5 mol/l x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 xx v xxxxxxx (3.1)
3.8 2-xxxxxxxx
3.9 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.10 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.11 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx aktivity, např. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx A acetátu: Xxxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,1 mg 50 mg xxxxxxx xxxxxxxx X (3.11) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx po xxxxxx stejným xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 1400 XX xxxxxxxx X xx ml. Xxxxxx xxxxx musí být xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X palmitát, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 1,80 x 106 XX/x.
3.12.1 Xxxxxxx roztok all-trans-vitamín X xxxxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx na 0,1 mg 80 xx xxxxxxxxx vitamínu X (3.12) do 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx ve 2-xxxxxxxxx (3.8) a xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 1400 IU xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx x xxxxxxxx skla
4.2.1 Xxxxx x plochým xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 ml, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx se zábrusovými xxxxxxx, úzkohrdlé, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Dělící xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx baňky, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 mm, xx xxxxxxxxxx hrdlem, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx trubici plynu.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx fáze, xxxxxx 185 xx (xxxx. Schleicher &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 HPLC xxxxxx xx vstřikovacím xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx parametry: xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxx všechny xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx XXXX)
4.5.2 XX nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx nastavením vlnové xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 mm xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Vodní xxxxx x xxxxxxxxxxx míchadlem
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Skleněný xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Nastavitelná xxxxxxx xxxx mít spodní xxxxx ve tvaru xxxxxxx X x xxxxxx na xxxxxxx xxxxx xxx, aby xxxxx být xxxxx xxxxxx kapaliny xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X xx xxxxxxx xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (za xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, nebo xxxxxx xxxxxxxxxx hliníkovou xxxxx) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Vzduch xxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Příprava vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, xxx xxxxxx sítem x xxxxxx 1 mm, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx bezprostředně před xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx může dojít xx xxxxxxx vitamínu X.
5.2 Saponifikace
V závislosti xx xxxxxx vitamínu X, odvažte x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 g xx 25 g xxxxxx do 500 xx baňky s xxxxxxx dnem xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx postupně xx xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 mg XXX (3.13), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a 2 xx roztoku xxxxxxx sodného (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x xxxxx a xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx x varu x xxxxxxxx xxxxxxx xxx minut. Potom xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx za xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx dusíku. Xxxxx xxxxxxxxxxx kondenzátor přibližně 20 xx xxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte dekantací xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx kvantitativně xxxxxxxxxxxx celkovým xxxxxxx 250 xx vody xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx xx extrakčního xxxxxxxxx (4.8). Vypláchněte xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx nálevky xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Podíl vody x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx další dělící xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx extrakci xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2) x xxxxxxx 50 xx petroléteru (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) a xxxxx xxxxxxxxxx třepáním x xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, dokud xxxx nezůstává xxxxxxxx xx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxx (3.7) (čtyřnásobné xxxxxxxxx xx obyčejně xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx skládaný xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx všechna xxxxxxxxxxxx voda do 500 xx odměrné xxxxx (4.2.2). Vypláchněte xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x dobře xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx extrakčního xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx vrstvy xxxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx U xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tak, xxx xxx právě xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx tlaku x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx ramene, xxxxxxxx xxxxxx vrstvu xxxxxxxxxxx xx 1000 xx dělící xxxxxxx (4.2.3) Přidejte 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx skleněného válce, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Nechejte xxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx extrakce xxxxxxx 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx dvakrát 50 xx dávkami xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx dělící xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, jak xx xx popsáno x 5.3.1, x pokračujte xxx xx tam xxxxxxx.
5.4 Příprava xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx xxxxx xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Odpařte xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx rotační xxxxxxx xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx tlaku při xxxxxxx xxxxx lázně xxxxxxxxxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx atmosférický xxxx xxxxxxxxxxx dusíku (3.10) x xxxxxxx xxxxx xx rotační xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) a xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx objemu (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xx xxxx xxx x rozsahu 5 XX/xx až 30 XX/xx).
5.5 Xxxxxxxxx pomocí XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xx reverzní xxxxxx koloně X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XX xxxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, xxxxx: 475 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (např. 20 μx) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.9). Vypočtěte xxxxxxx xxxxx píku (xxxxxx) xxxxxxxx vstřiků xxxxxxx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx vstřiků xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx podmínky xxxxx xxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx poskytují xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; 250 mm x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.9): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; XX xxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx/xxxxx: 475 xx)
5.6 Kalibrace
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X acetátu (3.11.1) xxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X palmitátu (3.12.1) xx 500 xx xxxxx x plochým xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx je xx xxxxxxx x 5.2, ale bez xxxxxxxx BHT. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx petroléterem (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx do 500 xx petroléterem (3.2). Xxxxxxx 100 ml xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x 10,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 560 XX xxxxxxxx A/1 ml. Xxxxxx xxxxx se xxxxxxx podle 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx xxxx použitím.
Pipetujte 2,0 xx tohoto xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx xxxxxxx baňky, xxxxxxx xx značku xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X xx ml.
5.6.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0 a 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx značku xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx jsou 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 XX xxxxxxxx X xx xx.
Xxxxxxxxxx několikrát 20 μx xxxxxxx kalibračního xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx výšky xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx píků (xxxxx) nyrýsujte xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX xxxxxxxx (5.6.3.3).
5.6.3 XX xxxxxxxxxxxxx standardních xxxxxxx
5.6.3.1 Xxxxxxx roztok xxxxxxx X xxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxx (3.11.1) do 50 ml odměrné xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 56 IU xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x doplňte po xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx A xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx být xxxx 325 nm x 327 xx.
Xxxxxxx obsahu xxxxxxxx X:
XX vitamínu X/xx = X326 × 19,0
E1%1cm pro xxxxxxx X alkohol = 1&xxxx;530 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Zásobní xxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 50 ml odměrné xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx po značku 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 56 XX xxxxxxxx X na xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx xx 25 xx odměrné xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx A xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Extinkční maximum xxxx xxx mezi 325 xx a 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx A:
IU vitamínu X/xx = X326 × 19,0
E1%1cm xxx xxxxxxx X alkohol = 957 při 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Standardní pracovní xxxxxxx xxxxxxxx X
Xxxxxxxxx 3,0 ml nezředěného xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xxxxxxxx X, připraveného xxxxx 5.6.1 xx 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Pipetujte 5,0 xx xxxxxx xxxxxxx do 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX vitamínu A xx ml. Xxxxxx XX spektrum xxxxxx xxxxxxx proti 2-xxxxxxxxx (3.8) ve xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx maximum xxxx xxx xxxx 325 xx a 327 nm.
Výpočet obsahu xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = X325 × 18,3
E1%1cm xxx xxxxxxx A xxxxxxx = 1 821 při 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
6. Výpočet xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx pro xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxx x XX/xx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2).
Xxxxx xxxxxxxx X x x IU/kg xx xxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · V2 · 1 000 / X1 · m (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxx vzorku (5.4) x IU/ml
V1 = xxxxx roztoku xxxxxx (5.4) x xx
X2 = objem xxxxxxx odebraných v 5.4 v xx
x = xxxxx xxxxxxxx xxxxx v x
7. Xxxxxxxx
7.1 X vzorků x nízkou koncentrací xxxxxxxx A xxxx xxx užitečné spojit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx vsázek (hmotnostní xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX.
7.2 Množství xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx nemělo překročit 2x.
7.3 Pokud xx xxxxxxxx fázové xxxxxx, xxxxxxxx přibližně 10 xx etanolu (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 X xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx xxx doba xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx BHT xxxx být xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx použito xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Namísto xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
X: xxxxx laboratoří
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx xxxxxx |
|
|
X |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
x |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
xxxxx [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [IU/kg] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [XX/xx] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [XX/xx] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
X [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
XXXX X
XXXXXXXXX VITAMÍNU X
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx E v xxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx vyjádřen jako xx DL-α-tokoferol xxxxxxx xx xx. 1 xx DL-α-tokoferol acetátu xxxxxxxx 0,91 xx XX-α-xxxxxxxxxx (xxxxxxx X).
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 2 xx xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx hydrolyzován xxxxxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx a vitamín X xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx odpařením x xxxxxx se xxxxxxxx v xxxxxxxx x, pokud xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxx koncentraci. Xxxxx vitamínu X xx stanoví xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxx xxxxxxxxxx chromatografie (XX-XXXX) xx xxxxxxx UV xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx varu 40 až 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Roztok xxxxxxxxx draselného, β = 50 x/100 xx
3.5 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx sodný, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Roztok xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 mol/l x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx fenolftaleinu, β = 2 x/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx použité xxxxxx.
3.9 Dusík, prostý xxxxxxx
3.10 XX-α-xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.10.1 Xxxxxxx roztok XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx: Odvažte x xxxxxxxxx xx 0,1 mg, 100 xx DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10) do 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx značku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 mg DL-α-tokoferol xxxxxxx. (XX xxxxxxxx – xxx 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 poznámky).
3.11 XX-α-xxxxxxxxx, xxxxx čistý, ověřené xxxxxxxx
3.11.1 Odvažte s xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 mg XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte x xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx po značku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (XX kontrola – xxx 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – viz 7.4 xxxxxxxx).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Rotační vakuová xxxxxxx
4.2 Xxxxxx x xxxxxxxx skla
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx zábrusovými xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Hruškovité xxxxx, 250 ml, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Allihnův xxxxxxxxxxx, délka xxxxxxxx xxxxxx 300 mm, xx zábrusovým xxxxxx, x adaptérem xxx xxxxxxxx trubici xxxxx
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx & Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx vstřikovacím xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 mm, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μm nebo xxxxxxxxxx
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Spektrofotometr x 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Vodní lázeň x magnetickým xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx přístroj (viz xxxxxxx 1) sestávající xx:
4.8.1 Xxxxxxxx odměrný xxxxx o xxxxxx 1x vybavený xxxxxxxxxx xxxxxx a zátkou
4.8.2 Xxxxxxxxx vložka vybavená xxxxxx ramenem a xxxxxxxxxxxxx trubicí procházející xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx mít xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X a xxxxxx na xxxxxxx xxxxx tak, xxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxx kapaliny xx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X xx citlivý xxxx (UV) světlu x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx musí být xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, xxxx nádobí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fólií) x kyslíku (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx nad xxxxxxxxx musí xxx xxxxx extrakce nahrazen xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx občasným xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Příprava vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx s xxxxxx 1 mm, xxxxxxx dbejte, xxx xxxxxxx x zahřátí. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx dojít xx ztrátám xxxxxxxx X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X odvažte x xxxxxxxxx na 0,01 x, 2 x xx 25 x xxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx dnem xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky (4.2.1). Xxxxxxxx postupně xx xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.12), 2 ml xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 ml xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Připojte kondenzátor (4.3) x xxxxx x xxxxxxx xxxxx xx vodní xxxxx x magnetickým míchadlem (4.7). Xxxxxxxx x xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx minut. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) přes xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx proudem xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx saponifikovaný xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx xx 1000 xx dělící nálevky (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx baňku xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) a 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) a převeďte xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x etanolu x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx měl xxx xxxxx 2:1. Třepejte xxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxx minuty.
5.3.1 Extrakce x použitím dělící xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx oddělily (viz xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxx dělící xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx nálevce xxxxxxx 100 ml dávkami xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx emulzí) x potom xxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx 100 xx dávkami xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx bezbarvá xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx dostačující). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx přes xxxxx skládaný xxxxx xxx xxxxxx fází (4.4), xxx se xxxxxxxxxx všechna xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 ml petroléteru (3.2), doplňte xx xxxxxx petroléterem (3.2) x dobře promíchejte.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) za xxxxxxxxxx vložku (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx xxx xxxxx xxx xxxxxxxx rozhraní. Xx xxxxxx tlaku x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, převeďte xxxxxx xxxxxx petroléteru xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx protřepejte. Xxxxxxxx xxxxxx oddělit xx a převeďte xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx jako xxxxxxx. Opakujte postup xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2), xxxxx dvakrát 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxx je xx xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx jak xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx petroléteru (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx xxxxx ve xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx sucha xx xxxxxxx xxxxxxx odparce (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx lázně xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxxxx xxxxx od xxxxxxx xxxxxxx odparky. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.9) x ihned rozpusťte xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx by xxxx xxx x xxxxxxx 5 μg/ml xx 30 μx/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx E xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) a xxxxxxxxxxx xx měřena xxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 xx) xxxx UV xxxxxxxxx (292 xx) (4.5.2).
Vstříkněte xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μl) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 x vymývejte xxxxxxx xxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; ostatní xxxxxxxx xxxxx xxx použity xx předpokladu, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 mm x 4 xx, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx fáze (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx: 1–2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx/xxxxx: 330 xx) xxxx XX xxxxxxxx (292 xx)
5.6 Xxxxxxxxx (XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX-α-xxxxxxxxxx)
5.6.1 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu
5.6.1.1 Xxxxxxxx standardních pracovních xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 25 xx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu (3.10.1) xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) a xxxxxxxxxxxx, jak xx xx xxxxxxx x 5.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx 25 xx xxxxxx extraktu xx rotační xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx sucha, xxxxxxxxx xxxxxxxxx rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x 25,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xx 45,5 μx DL-α-tokoferolu xx xx, ekvivalent 50 μx DL-α-tokoferol xxxxxxx xx xx. Standardní xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx čerstvě připraven xxxx použitím.
5.6.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx metanolem (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,5, 5,0, 10,0 a 25,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx, xx. 2,28, 4,55, 9,10 x 22,8 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx použití xxxxxxxxx xxxxx xxxx (ploch) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.1.3 XX xxxxxxxxxxxxx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 25,0 ml etanolem x xxxxxx XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx xxx 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284xx v xxxxxxx
Xxx tomto xxxxxx xx měla xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx pipetou 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx, rozpusťte x xxxxxxxx (3.3) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 40 μx XX-α-xxxxxxxxxx na xx, xxxxxxxxxx 44,0 μg XX-α-xxxxxxxxx acetátu xx xx. Standardní pracovní xxxxxx musí být xxxxxxx připraven xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx sérií 20 ml odměrných xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx metanolem (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx, xx. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μl xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx výšky xxxx (xxxxxx). Za xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx zásobního roztoku XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Rozřeďte 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) na 25,0 xx xxxxxxxx x xxxxxx UV xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx. Xxxxxxxxx maximum xx xxxx xxx xxx 292 nm:
E1%1cm = 75,8 xxx 292xx x etanolu
Při tomto xxxxxx xx měla xxx získána xxxxxxxx 0,6.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx pro roztok xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx koncentraci xxxxxxx xxxxxx x μx/xx (xxxxxxxx jako α-xxxxxxxxx xxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Obsah xxxxxxxx X w x xx/xx xx xxxxxx je xxx xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · V2 / X1 · x [xx/xx]
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxx vzorku (5.4) x μx/xx
X1 = xxxxx roztoku xxxxxx (5.4) v xx
X2 = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 x xx
x = xxxxx xxxxxxxx xxxxx x g
7. Xxxxxxxx
7.1 U xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx vsázek (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 g) xx xxxxxxx roztoku xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx XXXX.
7.2 Množství xxxx xx vzorku xxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Xxxxx xx neobjeví xxxxxx dělení, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 ml xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xxxx XX-α-xxxxxxxxxx podle 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 přidejte xx xxxxxxx (3.10.1 xxxx 3.10.2) přibližně 10 xx XXX (3.12) x xxxxxxxxx xxxxxx v chladničce (xxxxxxxxx xxxx skladovatelnosti xx xxxxx xxxxx).
7.5 Xxxxxxx BHT xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx je xxxxx x xxxxxxxx normální xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 mg kyseliny xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx přibližně 50 mg XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx nesmí překročit 15 % z xxxxxxx výsledku.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx spolupráce [2]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx krmivo |
Minerální koncentrát |
Bílkovinný xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx xxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
x |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
xxxxx [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
xx [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [xx/xx] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx použití
Tato metoda xx určena xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx tryptofanu x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx X- x X- xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx tryptofanu xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx podmínek xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahříván při 110 °X xx 20 xxxxx. Xx xxxxxxxxx je přidán xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx extrahován za xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x hydrolyzátu xxxx xxxxxxxx xxxxxx HPLC x xxxxxxxxxxxxx detekcí.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxx destilovaná xxxx, xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx používána (xxxxxxxx &xx; 10 μS/cm)
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx pentoxid xxxxxxx
3.3 Vnitřní standardní xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx pentoxid fosforu
3.4 Xxxx-xxxxxx hydroxidu xxxxxxxxx (xxxx být xxxxx, xxx xxxxx Ba(OH)2. 8 X2X xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx XxXX3, xxx xxxx xxxxx stanovení) (xxx xxxxxxxx 9.3)
3.5 Xxxxxxxx xxxxx
3.6 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x20 = 1,19 g/ml
3.8 Xxxxxxx, XXXX stupeň
3.9 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40–60 °X
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1 mol/l:
Rozpusťte 40,0 x XxXX (3.5) xx xxxx x xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x:
Xxxxxxx 492 ml HCL (3.7) a doplňte xx 1 x xxxxx.
3.12 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 xx XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x:
Xxxxxxx 8,2 xx HCL (3.7) x xxxxxxx xx 1 l vodou.
3.14 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, c = 0,5 xxx/x:
Xxxxxxx 34 xx kyseliny xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) a xxxxxxx xx 1 x vodou (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx (3.2), x = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2553 x xxxxxxxxxx (3.2) x 500 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.13) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 xX po xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2728 x α-methyl-tryptofanu (3.3) v 500 xx xxxxxxx baňce x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx xx značku xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 xX xx xxxx maximálně xxxx týdnů.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx x vnitřní xxxxxxxx:
Xxxxxxx 2,00 xx koncentrovaného xxxxxxx tryptofanu (3.15), x 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x xxxxxxxxx (3.8) xx přibližně xxxxxx xxxxx a na xxxxxxxxx xxxxxxx koncentraci xxxxxxxx (10–30 %) xxxx xxxxxxx hydrolyzát.
Tento xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx před xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
3.18 Kyselina xxxxxx
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Xxxxxxxxxxx &xx; 98 %
3.21 Xxxxxx 1 g 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) xx 100 xx metanolu (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx pro XXXX: 3,00 x xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 ml xxxx (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x metanolu (3.8) (1x/100 xx). Upravte xX xx 5 x xxxxxxxx ethanolaminu (3.20). Xxxxxxx xx 1000 xx xxxxx (3.1).
4. Přístroje a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx pro XXXX xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
4.2 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii, 125 xx x 4 xx, C18, velikost xxxxxx náplně 3 μx nebo ekvivalent
4.3 xX metr
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, objem 125 xx, xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx filtr, 0,45 μx
4.6 Xxxxxxxx, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) baru
4.7 Mechanická xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.8 Xxxxxx xxxxx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx rozmělněn xxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 0,5 xx. Xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °X, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxx xxxxxx extrahovány xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (extrakt)
Odvažte x xxxxxxxxx na 1 mg xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 xxx/x (3.13) x 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx 60 xxxxx x xxxxxxxx mechanické xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxx míchadla (4.7). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x pipetujte 10,0 xx roztoku xxxxxxxxxxxx do xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 mol/l (3.14). Xxxxxxx xX xx 3,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného, x = 1,0 xxx/x (3.10). Xxxxxxxx xxxxxxxxx metanolu (3.8), xxxxxx obdrželi xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % metanolu x xxxxxxxx objemu. Xxxxxxxx do odměrné xxxxx o xxxxxxx xxxxxx a zřeďte xxxxx na xxxxx xxxxxxxx xxx chromatografii (xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx HPLC xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μm (4.5). Provádějte chromatografii xxxxx 5.4.
Chraňte standardní xxxxxx x extrakty xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx, xxxxx xxx skladovány xxx 5 °X po xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.3 Xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxxx (hydrolyzát)
Odvažte s xxxxxxxxx xx 0,2 xx xx 0,1 xx 1 g xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.4). Odvážená xxxxx xxxxxx by xxxx xxx xxxxx dusíku xxxxx 10 xx. Xxxxxxxx 8,4 g xxxx-xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.4) a 10 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (4.8) xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx potažený xxxxxx xx směsi. Opláchněte xxxxx xxxxxx 4 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx uzavřete. Přeneste xx xxxxxxxxx (4.6) x vroucí vodou x párou xx 30–60 minut. Xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx 110 (+ 2) °C xx xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx právě xxx 100 °C. Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx Xx(XX)2. 8 X2X, xxxxxxxx xx horké xxxxx 30 xx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Mírně protřepávejte, xxxx míchejte. Přidejte 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxxxx xxxxxx ve xxxxx/xxxxxx xxxxx xx xxxx 15 xxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx 5 xx xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, c = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xX xx 3,0 x xxxxxxxx XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Xxxxxxxx xxxxxxxxx metanolu, abyste xxxxxxxx koncentraci xxxx 10 x 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx objemu x xxxxxx xxxxx xx definovaný xxxxx xxxxxxxx pro chromatografii (xxxxxxxxx 100 ml). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx způsobit sraženinu.
Před xxxxxxxxxxx xx kolony XXXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 5.4.
Xxxxxxx standardní xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx přímým slunečním xxxxxxx. Pokud xxxx xxxxx xxxxxxxxxx hydrolyzáty xxxxxx den, xxxxx xxx xxxxxxxxxx při 5 °X xx xxxxxxxxx dobu xxx xxx.
5.4 Xxxxxxxxx pomocí XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxx xxxxxxxx 9.1 x 9.2):
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 xx x 4 mm, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 3 μx xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx Pokojová xxxxxxx
Xxxxxxx fáze (3.22): 3,00 x xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 ml vody (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 xx). Xxxxxxx xX xx 5,00 x xxxxxxxx ethanolaminu (3.20). Xxxxxxx do 1000 xx xxxxx (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx xxxx xxxx: xxxxxxxxx 34 xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx délka: xxxxxxxx: 280 xx, xxxxx: 356 xx
Xxxxxxxxx xxxxx: 20 μx
6. Výpočet xxxxxxxx
X × X × X × X × X × XX / X × X × X × 10&xxxx;000 × X = x tryptofanu xx 100x vzorku
A = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.17)
X = xxxxxx píku xxxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx hydrolyzátu (5.3)
X = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) (2 xx) xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.17)
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) v μmolech/ml (= 2,50) přidaného xx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.17)
X = objem xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) v xx přidaného xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 ml) nebo xx hydrolyzátu (5.3) (= 2,00 xx)
X = xxxxxx píku xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = plocha xxxx tryptofanu, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.17)
H = objem koncentrovaného xxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.16) v xx (= 2,00) přidaného xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxx xxxxxx x x (xxxxxxxx xx xxxxxxx hmotnost, xxxxxxxx xxx vzorek xxxxx x/xxxx odtučněn)
MW = xxxxxxxxxx xxxxxxxx tryptofanu (= 204,23)
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % z xxxxxxx xxxxxxxx.
8. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx Společenství (xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx uspořádána xxx, xx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx ve 12 laboratořích x xxxxxxx metody xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x každého xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx tabulce:
L: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx jednotlivých xxxxxx xxxxxxxxxx eliminačních xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx pro xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Krmný xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
|
x |
50 |
55 |
50 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [x/xx] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
x [g/kg] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
CVr [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [g/kg] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
R [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx studijní spolupráce Xxxxxxxxxxxx (xxxxx vzájemné xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, že dva xxxxxx xxxx analyzovány xx xx 13 xxxxxxxxxxxx x ověření xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu. Replikované (5) analýzy xxxx xxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx laboratoří xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledků (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx testem)
sr: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: reprodukovatelnost
CVr: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
CVR: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Xxxx xxxxxxx se xxxxx |
Xxxxxx 5 Směs xxxxxxx xx xxxxx (= xxxxxx 4) x xxxxxxxx tryptofanem (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [g/kg] |
0,391 |
0,931 |
|
sr [x/xx] |
0,005 |
0,012 |
|
x [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
xX [g/kg] |
0,018 |
0,048 |
|
R [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Další xxxxxxxx xxxxxxxxxx Společenství xxxx xxxxxxxxxx tak, že xxxxx vzorky xxxx xxxxxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx potvrzení xxxxxxxxxx xxx hydrolýzy. Výsledky xxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odlehlých xxxxxxxx (identifikované Cochran-Dixonovým xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace opakovatelnosti, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx (XXX 117) |
Xxxxxx 2 Nízko-tučná xxxx xxxxxx (XXX 118) |
Xxxxxx 3 Sójová moučka (XXX 119) |
Xxxxxx 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx mléko (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
sR [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [g/kg] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
CVR [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx podmínky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx tryptofanem a α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kolony:
|
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: |
125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 μx xxxx xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxx xxxxxx: |
32 °X |
||
|
Xxxxxxx xxxx: |
X: 0,01 mol/l XX2XX4/xxxxxxx, 95 + 5 (xxxxxxxx + objemově) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx program: |
0 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
15 min. |
100 % X |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
21 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
33 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
Xxxxxx xxxx: |
1,2 xx/xxx. |
||
|
Xxxxxxx doba xxxx: |
xxxxxxxxx 33 minut |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx podle typu XXXX xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx čáru xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Navíc xx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx standardu xx xxxx být chromatografovány, xxx xx překontrolovala xxxxxxxxx čára xx xxxxxxxxx standardu pro xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxx běhu xxxx xxxxxxxxxx dlouhá xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
X rozsahu xxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxx měřena s xxxxxxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx důležité, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx HPLC/flourescenčního xxxxxxx. Pokud xxx (xxxx) xxx xxxxxxxxxx, x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx (jsou) xxxxxx xxxx (xxxx) xxxx xxxxxx xxxxxx (vysoké), xxxx by být xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x/xxxx změněným xxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx stává xxxxxxxx xxxxxxx hůře xxxxxxxxx. Xx xx xxxxxxxxx x nečirém xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX, což xxxx x xxxxxxxxxx způsobovat xxxxx xxxxxxxx.
[1] Xxxxxx xxxxxxxx skupinou xxx xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).
[2] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- und Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (VDLUFA).