Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/45/XX
xx xxx 6. xxxxxxxx 2000,
xxxxxx se stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx stanovení xxxxxxxx X, vitamínu X x tryptofanu x xxxxxxxx
(Xxxx s xxxxxxxx xxx EHP)
KOMISE EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx dne 20. července 1970, xxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Společenství xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx aktem x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxx x Xxxxxxx [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx xxxxx za xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx splněny požadavky xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xx xxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
(2) Xxxxxxxx Xxxx 70/524/XXX xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 o xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx [3], xxxxxxxxx xxxxxxxxx nařízením Xxxxxx (XX) x. 2439/1999 xx dne 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxx A x xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx.
(3) Směrnice Xxxx 79/373/XXX xx xxx 2. xxxxx 1979 x uvádění xxxxxxx xxxxx xx xxx [5], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 2000/16/XX [6], a xxxxxxxx Xxxx 93/74/EHS xx xxx 13. xxxx 1993 x krmivech xxxxxxxx ke xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx [7], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx 96/25/XX [8], stanoví, xx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx uváděny xx xxxxxxxxx xxxxx.
(4) Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx látek.
(5) Opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xxx se xxxxxx kontroly xxxxxx xxxxxxxx A, xxxxxxxx X x tryptofanu x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. srpna 2000. Neprodleně o xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. září 2000.
Xxxx opatření přijatá xxxxxxxxx státy musí xxxxxxxxx xxxxx na xxxx směrnici nebo xxxx být takový xxxxx xxxxxx při xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské státy.
Xxxxxx 3
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx dnem po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských společenství.
Xxxxxx 4
Xxxx směrnice xx xxxxxx členským xxxxxx.
V Bruselu xxx 6. xxxxxxxx 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxx Byrne
člen Xxxxxx
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. xxxx. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Xx. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Xx. věst. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Xx. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
XXXXXXX
XXXX X STANOVENÍ XXXXXXXX X
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx je xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (xxxxxxxx) v xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx X xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx alkohol x xxxx cis xxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Obsah xxxxxxxx A xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (IU) xx xx. Xxxxx XX xxxxxxxx aktivitě 0,300 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx nebo 0,344 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx xxxx 0,550 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxxx.
Xxx stanovitelnosti xx 2000 XX vitamínu X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztokem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx X je xxxxxxxxxx xx petroléteru. Xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxx x, xxxxx xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu X xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX xxxx fluorescenční xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx parametry xxxx xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Petroléter, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °C
3.3 Xxxxxxx
3.4 Roztok hydroxidu xxxxxxxxxx, β = 50 g/100 ml
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Sulfid xxxxx, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx sulfidu xxxxxxx, x = 0,5 mol/l x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx fenolftaleinu, β = 2 x/100 xx x etanolu (3.1)
3.8 2-xxxxxxxx
3.9 Xxxxxxx xxxx xxx HPLC: xxxx metanolu (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx charakteristikami xxxxxxx xxxxxx.
3.10 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.11 All-trans-vitamín X xxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx aktivity, např. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Zásobní roztok xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx X (3.11) xx 100 xx xxxxxxx baňky. Xxxxxxxxx xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 1400 XX xxxxxxxx X xx ml. Přesný xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X palmitát, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, např. 1,80 x 106 IU/g.
3.12.1 Xxxxxxx xxxxxx all-trans-vitamín X palmitátu: Xxxxxxx x přesností na 0,1 xx 80 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (3.12) do 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx po značku xxxxxxx rozpouštědlem. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 1400 XX xxxxxxxx A na xx. Xxxxxx xxxxx xxxx být stanoven xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx x xxxxxxxx skla
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx dnem xxxx Erlenmeyerovy baňky, 500 ml, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Odměrné xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 a 500 ml
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Hruškovité xxxxx, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx izolační xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x adaptérem xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papír xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Schleicher & Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 HPLC výbava xx vstřikovacím systémem
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, velikost částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx pík xxx všechny izomery xxxxxxxx xx xxxxxxxx XXXX)
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor x xxxxxxxxxxx nastavením vlnové xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 mm xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Vodní lázeň x xxxxxxxxxxx míchadlem
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Skleněný xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx vložka xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx trubicí xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Nastavitelná xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X x xxxxxx na opačném xxxxx tak, xxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xxxx (UV) xxxxxx x xxxxxxx. Všechny xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx v nepřítomnosti xxxxxx (xx použití xxxxxx z xxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx hliníkovou fólií) x kyslíku (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Vzduch xxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx občasným xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Příprava vzorku
Rozmělněte xxxxxx tak, xxx xxxxxx sítem x xxxxxx 1 mm, xxxxxxx xxxxxx, aby xxxxxxx k zahřátí. Xxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx vitamínu X.
5.2 Saponifikace
V závislosti xx xxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x xx 25 x xxxxxx xx 500 xx xxxxx s xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.13), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a 2 ml roztoku xxxxxxx sodného (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxx a xxxxxxx xxxxx xx xxxxx lázně x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx x varu x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxx xxxxxxxxx draselného (3.4) xxxx kondenzátor (4.3) a xxxxxxxx xxxxxxx dalších 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx dusíku. Xxxxx xxxxxxxxxxx kondenzátor xxxxxxxxx 20 xx xxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztok kvantitativně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 ml xxxx xx 1000 ml xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Vypláchněte xxxxxxxxxxxxx baňku xxxxxxxx 25 xx etanolu (3.1) x 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx dělící xxxxxxx xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Podíl xxxx x xxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx dvě xxxxxx a nechejte xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx vrstvy xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx další dělící xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx kombinované xxxxxxxx x dělící xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx) x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx 100 xx xxxxxxx vody, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxx (3.7) (čtyřnásobné xxxxxxxxx xx obyčejně xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx extrakt xxxx suchý xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), aby xx odstranila všechna xxxxxxxxxxxx xxxx do 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx nálevku a xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), doplňte xx značku petroléterem (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx za xxxxxxx extrakčního přístroje (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx zábrusovou xxxxxx (4.8.2) x nasměrujte xxxxx konec xx xxxxx písmene X xxxxxxxxxxxx trubice tak, xxx byl xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx dusíku xx postranního ramene, xxxxxxxx vrchní vrstvu xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx skleněného válce, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx vrchní vrstvu xx xxxxxx nálevky xxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2), xxxxx dvakrát 50 xx dávkami xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx dělící xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxx je xx xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx xx tam xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx baňky xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx do sucha xx rotační xxxxxxx xxxxxxx (4.1) za xxxxxxxxx tlaku při xxxxxxx xxxxx lázně xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx atmosférický xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Odstraňte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx proudem xxxxxx (3.10) x ihned xxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxx objemu (10–100 xx) metanolu (3.3) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx A xx xxxx xxx x rozsahu 5 XX/xx až 30 XX/xx).
5.5 Stanovení pomocí XXXX
Xxxxxxx A je xxxxxxx xx reverzní xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) a xxxxxxxxxxx xx xxxxxx pomocí XX xxxxxxxxx (325 xx) nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (excitace: 325 xx, emise: 475 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μx) metanolového xxxxxxx xxxxxxxxx x 5.4 x xxxxxxxxx mobilní xxxx (3.9). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx píku (xxxxxx) xxxxxxxx vstřiků xxxxxxx stejného xxxxxx x střední xxxxx (xxxxxx) několika vstřiků xxxxxxxxxxxx roztoků (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx doporučení; xxxxxxx podmínky smějí xxx použity xx xxxxxxxxxxx, že poskytují xxxxxx výsledky.
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 mm x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx ekvivalent
Mobilní xxxx (3.9):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; Směs xxxxxxxx (3.3) a xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově)
Úroveň xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): XX xxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx/xxxxx: 475 xx)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 ml xxxxxxxxx roztoku xxxxxxx X acetátu (3.11.1) xxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 500 xx xxxxx s plochým xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxx v 5.2, xxx bez xxxxxxxx XXX. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 a xxxxxxx do 500 xx xxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx 100 xx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx xxxxx, odstraňte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx proudem xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx zbytek x 10,0 ml xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 560 IU xxxxxxxx X/1 xx. Xxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxxxx 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok xxxx být čerstvě xxxxxxxxx před xxxxxxxx.
Xxxxxxxxx 2,0 xx tohoto xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx 20 xx xxxxxxx xxxxx, doplňte xx značku metanolem (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx.
5.6.2 Příprava xxxxxxxxxxxx roztoků a xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0 x 10,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx po značku xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx roztoků xxxx 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 XX xxxxxxxx X na xx.
Xxxxxxxxxx několikrát 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Za použití xxxxxxxxx výšek xxxx (xxxxx) nyrýsujte kalibrační xxxx odpovídající xxxxxxxxx XX kontroly (5.6.3.3).
5.6.3 XX xxxxxxxxxxxxx standardních xxxxxxx
5.6.3.1 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx A xxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx zředěného xxxxxxx vitamín X xxxxxxx do 25 xx xxxxxxx baňky x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx spektrofotometru (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx maximum xxxx být xxxx 325 nm a 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = E326 × 19,0
X1%1xx xxx xxxxxxx A xxxxxxx = 1 530 xxx 326 nm xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx A xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) do 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 56 IU xxxxxxxx A na xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x doplňte po xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Extinkční maximum xxxx xxx xxxx 325 nm x 327 nm.
Výpočet obsahu xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 957 xxx 326 xx ve 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx pracovní xxxxxxx vitamínu X
Xxxxxxxxx 3,0 xx nezředěného xxxxxxxxxxxx pracovního roztoku xxxxxxxx X, xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1 xx 50 ml odměrné xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8). Pipetujte 5,0 ml xxxxxx xxxxxxx do 25 xx xxxxxxx xxxxx x doplňte xx xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx X xx ml. Xxxxxx XX spektrum xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx a 400 xx. Xxxxxxxxx maximum xxxx xxx mezi 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = E325 × 18,3
X1%1xx xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 1&xxxx;821 při 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
6. Výpočet xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx roztok xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx koncentraci xxxxxxx xxxxxx x XX/xx xx xxxxxx ke xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2).
Obsah xxxxxxxx X x x XX/xx xx xxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · V2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx A x xxxxxxx xxxxxx (5.4) x IU/ml
V1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = objem xxxxxxx odebraných x 5.4 x ml
m = hmota xxxxxxxx xxxxx x g
7. Xxxxxxxx
7.1 X vzorků x nízkou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx A xxxx xxx užitečné xxxxxx xxxxxxxx petroléteru xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx jednoho xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx XXXX.
7.2 Množství xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxx xx nemělo překročit 2x.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx fázové xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx etanolu (3.1), x rozrušení emulze.
7.4 X xxxxxx xxxx x ostatních xxxxxxx xxxx by xxxx xxx doba xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx BHT xxxx xxx použit xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx normální xxxxxx kolony.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx použito xxxxxxxxx 150 xx kyseliny xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx roztoku xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx EDTA.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 15 % z xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
L: xxxxx laboratoří
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx krmivo |
Minerální xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro xxxxxx |
|
|
X |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
x |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
xxxxx [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [XX/xx] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [IU/kg] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [XX/xx] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
R [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
ČÁST X
XXXXXXXXX XXXXXXXX E
1. Xxxx x oblast xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx pro stanovení xxxxxxxx E x xxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx vyjádřen jako xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xx kg. 1 xx DL-α-tokoferol xxxxxxx xxxxxxxx 0,91 mg XX-α-xxxxxxxxxx (xxxxxxx X).
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx hydrolyzován xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx X je xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zbytek se xxxxxxxx x xxxxxxxx x, pokud xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx stanoví reverzní xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx varu 40 až 60 °X
3.3 Metanol
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx draselného, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Na2S. x H2O (x = 7–9)
3.6.1 Roztok xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x x glycerolu, β = 120 g/l (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Roztok xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 ml v xxxxxxx (3.1)
3.8 Xxxxxxx xxxx pro XXXX: xxxx metanolu (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx použité xxxxxx.
3.9 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.10 XX-α-xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx čistý, ověřené xxxxxxxx
3.10.1 Xxxxxxx roztok XX-α-xxxxxxxxx acetátu: Xxxxxxx x xxxxxxxxx na 0,1 mg, 100 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10) xx 100 xx odměrné baňky. Xxxxxxxxx x etanolu (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx. (XX kontrola – viz 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – viz 7.4 xxxxxxxx).
3.11 DL-α-tokoferol, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx
3.11.1 Xxxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx tohoto xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (XX kontrola – xxx 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.12 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Přístroje a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Nádobí x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky, 500 ml, se xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 a 500 xx
4.2.3 Dělící xxxxxxx, kuželovité, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 mm, xx xxxxxxxxxx hrdlem, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx & Xxxxxxx 597 HY 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 nebo 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.5.2 XX nebo xxxxxxxxxxxxx detektor s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Spektrofotometr x 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Vodní xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx odměrný xxxxx o xxxxxx 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx vybavená xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx procházející xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx mít xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X a xxxxxx na opačném xxxxx xxx, xxx xxxxx xxx horní xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X xx xxxxxxx xxxx (UV) světlu x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx v nepřítomnosti xxxxxx (za xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, xxxx nádobí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x kyslíku (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Vzduch xxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (vyhněte xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 mm, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxx a saponifikací, xxxxx xxxx xxxxx xx ztrátám vitamínu X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x až 25 x vzorku xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx dnem xxxx Erlenmeyerovy baňky (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 130 ml etanolu (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.12), 2 ml roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) k baňce x xxxxxxx xxxxx xx vodní lázně x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx k xxxx x nechejte xxxxxxx pět xxxxx. Xxxxx přidejte 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 minut xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx vypláchněte kondenzátor xxxxxxxxx 20 xx xxxx a xxxxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx celkovým xxxxxxx 250 ml xxxx do 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx saponifikační xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) x převeďte xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Podíl xxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxx xxxxx 2:1. Třepejte xxxxx dvě minuty x nechejte ustát xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx do xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx tuto xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2) x xxxxxxx 50 xx petroléteru (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx nálevce xxxxxxx 100 ml xxxxxxx xxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx (aby se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 100 xx dávkami xxxx, xxxxx voda xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx promývání xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx skládaný filtr xxx xxxxxx xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx všechna xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Vypláchněte xxxxxx xxxxxxx a filtr 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx promíchejte.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx vložku (4.8.2) x nasměrujte xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X nastavitelné xxxxxxx xxx, xxx xxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx dusíku xx xxxxxxxxxxx ramene, převeďte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx oddělit xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx jako xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dalšími 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx dvakrát 50 xx xxxxxxx petroléteru (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
Promyjte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx petroléteru tak, xxx xx xx xxxxxxx x 5.3.1, x pokračujte jak xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx baňky ve xxxxx hrušky (4.2.4). Xxxxxxx rozpouštědlo téměř xx sucha xx xxxxxxx vakuové odparce (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx xxx teplotě xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxxxx baňku od xxxxxxx xxxxxxx odparky. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxx xxxxxx (10–100 ml) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxx 5 μg/ml až 30 μg/ml).
5.5 Stanovení xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) a xxxxxxxxxxx je měřena xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx detektoru (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 xx) xxxx XX xxxxxxxxx (292 xx) (4.5.2).
Vstříkněte xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μx) metanolového xxxxxxx xxxxxxxxx x 5.4 a xxxxxxxxx xxxxxxx fází (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx roztoku xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx kalibračních xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx HPLC
Následující podmínky xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; ostatní xxxxxxxx xxxxx xxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx výsledky.
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 mm, X18, velikost částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx nebo xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.8): Xxxx metanolu (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx: 1–2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 nm/emise: 330 xx) xxxx XX xxxxxxxx (292 xx)
5.6 Xxxxxxxxx (DL-α-tokoferol xxxxxxx nebo XX-α-xxxxxxxxxx)
5.6.1 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx pipetou 25 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu (3.10.1) xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) a xxxxxxxxxxxx, xxx je xx xxxxxxx x 5.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx 25 xx tohoto xxxxxxxx xx rotační xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.9) x znovu xxxxxxxxx xxxxxx x 25,0 xx netanolu (3.3). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx je 45,5 μx DL-α-tokoferolu xx xx, xxxxxxxxxx 50 μx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx použitím.
5.6.1.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x promíchejte. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx jsou 2,5, 5,0, 10,0 a 25,0 μg/ml DL-α-tokoferol xxxxxxx, xx. 2,28, 4,55, 9,10 a 22,8 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx kalibračního roztoku x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (plochy). Xx použití středních xxxxx píků (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.1.3 XX standardizace zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) na 25,0 ml xxxxxxxx x změřte XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx etanolu (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx při 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284nm x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Xxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 2,0 xx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 50 ml xxxxxxx xxxxx, rozpusťte x xxxxxxxx (3.3) x doplňte po xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 40 μg XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, xxxxxxxxxx 44,0 μg XX-α-xxxxxxxxx acetátu xx xx. Xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx musí xxx xxxxxxx připraven xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 a 10,0 xx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx xx sérií 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,0, 4,0, 8,0 a 20,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx, tj. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μl xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx střední výšky xxxx (xxxxxx). Za xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) narýsujte xxxxxxxxxx graf.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Rozřeďte 2,0 xx xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) na 25,0 xx xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 nm x 320 nm. Xxxxxxxxx xxxxxxx by xxxx být xxx 292 xx:
X1%1xx = 75,8 xxx 292xx x etanolu
Při xxxxx xxxxxx by měla xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx koncentraci roztoku xxxxxx x μx/xx (xxxxxxxx xxxx α-xxxxxxxxx xxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.1.2 nebo 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx X x x xx/xx xx xxxxxx xx dán xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · V2 / X1 · x [xx/xx]
xx které:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu X x xxxxxxx vzorku (5.4) v μg/ml
V1 = objem xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx odebraných v 5.4 x ml
m = hmota xxxxxxxx xxxxx v x
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx petroléteru dvou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX.
7.2 Xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxx analýzu xxxxx překročit 2x.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx dělení, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 ml xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Po xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx měření roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX-α-xxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 přidejte xx xxxxxxx (3.10.1 xxxx 3.10.2) přibližně 10 xx BHT (3.12) x skladujte xxxxxx x chladničce (xxxxxxxxx doba skladovatelnosti xx čtyři xxxxx).
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx xxx použit xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx je xxxxx x použitím xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Namísto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Namísto xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx použito přibližně 50 mg XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 15 % z xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx spolupráce [2]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: standardní xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx krmivo |
Minerální koncentrát |
Bílkovinný xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro xxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
x |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
xxxxx [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
xx [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [xx/xx] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxx celkového x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx X- x X- xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nasyceným xxxxxxxx hydroxidu barnatého x zahříván xxx 110 °X xx 20 xxxxx. Po xxxxxxxxx je přidán xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx kyselých podmínek x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx x vnitřní xxxxxxxx xxxx stanoveny x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx HPLC x fluorescenční xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxx destilovaná xxxx, nebo xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx používána (vodivost &xx; 10 μX/xx)
3.2 Xxxxxxxxxx látka: tryptofan (xxxxxxx/xxxxx > 99 %), sušený xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Vnitřní xxxxxxxxxx xxxxx: α-methyl-tryptofan (čistota/obsah &xx; 99 %), xxxxxx pod vakuem xxxx pentoxid fosforu
3.4 Xxxx-xxxxxx hydroxidu barnatého (xxxx být xxxxx, xxx nebyl Xx(XX)2. 8 H2O xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx vzduchu, xxx xx zabránilo xxxxxx XxXX3, jež xxxx xxxxx stanovení) (xxx poznámky 9.3)
3.5 Xxxxxxxx xxxxx
3.6 Kyselina xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, p20 = 1,19 x/xx
3.8 Xxxxxxx, XXXX xxxxxx
3.9 Petroléter, xxxxxx varu 40–60 °X
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxxxx 40,0 x NaOH (3.5) xx vodě x xxxxxxx xx 1 x vodou (3.1).
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x:
Xxxxxxx 492 ml XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 l xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 xx XXX (3.7) a xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 mol/l:
Vezměte 8,2 xx XXX (3.7) x xxxxxxx do 1 x vodou.
3.14 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x:
Xxxxxxx 34 ml xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) x xxxxxxx do 1 x xxxxx (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx tryptofanu (3.2), x = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2553 x xxxxxxxxxx (3.2) x 500 ml xxxxxxx baňce v xxxxxxxx chlorovodíkové (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 xX xx xxxx xxxxxxxxx čtyř xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx vnitřní xxxxxxxxxx xxxxxx, x = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2728 x α-xxxxxx-xxxxxxxxxx (3.3) v 500 xx xxxxxxx baňce x kyselině chlorovodíkové (3.13) a doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 oC xx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.17 Kalibrační xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxxx 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15), x 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx a na xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (10–30 %) xxxx konečný xxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxx přípravy xxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxx.
3.18 Kyselina xxxxxx
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Ethanolamin &xx; 98 %
3.21 Xxxxxx 1 x 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) xx 100 xx metanolu (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx pro XXXX: 3,00 x xxxxxxxx octové (3.18) + 900 ml xxxx (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1x/100 ml). Xxxxxxx xX xx 5 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx xx 1000 xx vodou (3.1).
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Vybavení pro XXXX xx spektrofluorimetrickým xxxxxxxxxx
4.2 Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.3 xX xxxx
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx 125 xx, xx širokým xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx filtr, 0,45 μm
4.6 Xxxxxxxx, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) baru
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.8 Xxxxxx xxxxx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Vzorek xx rozmělněn tak, xxx xxxxxx sítem x otvory 0,5 xx. Vzorky, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxx před xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °C, xxxx zmrazením. Vzorky x xxxxxxx obsahem xxxx xxxx xxx xxxx xxxxxx extrahovány xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 g) xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky. Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové, c = 0,1 mol/l (3.13) x 5,00 xx koncentrovaného vnitřního xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx 60 xxxxx x xxxxxxxx mechanické třepačky, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx usadit xxxxxxxx x xxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx kádinky. Xxxxxxxx 5 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 mol/l (3.14). Xxxxxxx xX xx 3,0 za xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx, x = 1,0 xxx/x (3.10). Přidejte xxxxxxxxx xxxxxxxx (3.8), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % xxxxxxxx x konečném xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x vhodném xxxxxx x zřeďte xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxx chromatografii (xxxxxxxxx stejný xxxxx xxxx kalibrační xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Před xxxxxxxxxxx xx xxxxxx XXXX xxxxxxxxxxxx několik ml xxxxxxx přes membránový xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xxxx xxxxx analyzovat extrakty xxxxxx xxx, mohou xxx xxxxxxxxxx při 5 °X xx xxxxxxxxx dobu xxx xxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx na 0,2 xx xx 0,1 xx 1 g xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx polypropylénové xxxxx (4.4). Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx 10 xx. Xxxxxxxx 8,4 x xxxx-xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.4) a 10 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (4.8) xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx. Opláchněte xxxxx nádoby 4 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx autoklávu (4.6) x xxxxxx xxxxx x xxxxx xx 30–60 minut. Xxxxxxxx xxxxxxxx a autoklávujte xxx 110 (+ 2) °X xx xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 100 °C. Aby xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx Xx(XX)2. 8 X2X, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx 30 xx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx standardu (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Zchlaďte xxxxxx xx vodní/ledové xxxxx xx dobu 15 xxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx 5 xx xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, x = 0,5 mol/l (3.14). Xxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx x upravte xX xx 3,0 x použitím XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, abyste xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 a 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx objemu. Převeďte xx odměrné xxxxx x vhodném objemu x xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx objem xxxxxxxx xxx chromatografii (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxxxx xx kolony XXXX přefiltrujte několik xx roztoku přes xxxxxxxxxx filtr 0,45 μx (4.5). Pokračujte x xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 5.4.
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx analyzovat hydrolyzáty xxxxxx xxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °X po xxxxxxxxx xxxx tří xxx.
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx vymývání jsou xxxxxxxxxxx jako doporučení; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx použity za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxx poznámky 9.1 x 9.2):
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 mm x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μx nebo xxxxxxxxxx
Xxxxxxx kolony Pokojová xxxxxxx
Xxxxxxx fáze (3.22): 3,00 x kyseliny xxxxxx (3.18) + 900 ml vody (3.1) + 50,0 xx roztoku (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 ml). Upravte xX na 5,00 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx do 1000 xx vodou (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx doba běhu: xxxxxxxxx 34 minut
Detekční xxxxxx xxxxx: xxxxxxxx: 280 xx, xxxxx: 356 xx
Xxxxxxxxx xxxxx: 20 μl
6. Výpočet xxxxxxxx
X × X × X × X × X × XX / X × X × X × 10&xxxx;000 × X = g xxxxxxxxxx xx 100x xxxxxx
X = plocha xxxx xxxxxxxxx standardu, xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.17)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx hydrolyzátu (5.3)
X = xxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxxxx tryptofanu (3.15) (2 xx) xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = koncentrace xxxxxxxxxxxxxxx roztoku tryptofanu (3.15) x μxxxxxx/xx (= 2,50) xxxxxxxxx xx kalibračního roztoku (3.17)
X = objem xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) xxxx xx xxxxxxxxxxx (5.3) (= 2,00 xx)
X = xxxxxx píku xxxxxxxxx xxxxxxxxx, extraktu (5.2) xxxx hydrolyzátu (5.3)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, kalibračního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
H = objem xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16) v ml (= 2,00) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxx xxxxxx x x (xxxxxxxx xx xxxxxxx hmotnost, xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx x/xxxx xxxxxxxx)
XX = xxxxxxxxxx hmotnost xxxxxxxxxx (= 204,23)
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % z xxxxxxx xxxxxxxx.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx spolupráce Xxxxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 12 laboratořích k xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx. Replikované (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x každého xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx uvedeny x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx eliminačních xxxxxxxxx xxxxxxxx (identifikované Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx reprodukovatelnosti, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx pro xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx xxxxxxx doplněné X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
|
x |
50 |
55 |
50 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [g/kg] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
r [x/xx] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
XXx [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [x/xx] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
X [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx studijní spolupráce Xxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx uspořádána xxx, xx xxx xxxxxx byly xxxxxxxxxxx xx ve 13 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxx extrakci xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx byly xxxxxxxxx x každého xxxxxx. Výsledky xxxx xxxxxxx x následující xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot zadržených xxxxxxxxxxxx odlehlých xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx opakovatelnosti, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx reprodukovatelnosti, %
|
Xxxxxx 4 Směs xxxxxxx se xxxxx |
Xxxxxx 5 Xxxx xxxxxxx xx xxxxx (= xxxxxx 4) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [g/kg] |
0,391 |
0,931 |
|
sr [x/xx] |
0,005 |
0,012 |
|
x [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
xX [g/kg] |
0,018 |
0,048 |
|
R [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx byla xxxxxxxxxx xxx, xx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx až x xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx tryptofanu xxx hydrolýzy. Xxxxxxxx xxxx uvedeny x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot xxxxxxxxxx eliminačních xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx (CRM 117) |
Vzorek 2 Xxxxx-xxxxx rybí xxxxxx (XXX 118) |
Xxxxxx 3 Sójová xxxxxx (XXX 119) |
Xxxxxx 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (XXX 120) |
|
|
L |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
n |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
střed [g/kg] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
sr [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
xX [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [g/kg] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
CVR [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx podmínky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vymývání následované xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: |
125 xx x 4 xx, C18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 μx xxxx obdobné |
||
|
Teplota xxxxxx: |
32 °X |
||
|
Xxxxxxx fáze: |
A: 0,01 xxx/x XX2XX4/xxxxxxx, 95 + 5 (xxxxxxxx + xxxxxxxx) X: Metanol |
||
|
Gradientový program: |
0 xxx. |
100 % A |
0 % X |
|
15 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % B |
|
|
19 xxx. |
60 % X |
40 % B |
|
|
21 min. |
100 % X |
0 % X |
|
|
33 xxx. |
100 % X |
0 % B |
|
|
Úroveň xxxx: |
1,2 xx/xxx. |
||
|
Xxxxxxx xxxx xxxx: |
xxxxxxxxx 33 minut |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxx XXXX xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx materiálu. Xxxxxxx systém musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx tryptofanem x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Navíc xx xxxxxxxx, xxx xxxx degradační produkty xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x vnitřního xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx standardu xxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx dlouhá xxx vymytí xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jinak xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
X xxxxxxx xxxxxxxx, by xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxx měřena x xxxxxxxxxx (normální) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx se koncentracemi xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxx rozsahu XXXX/xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud pík (xxxx) xxx xxxxxxxxxx, x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx (jsou) příliš xxxx (xxxx) xxxx xxxxxx xxxxxx (xxxxxx), xxxx by xxx xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx jiné xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx se projevuje x nečirém xxxxxxx xxx xxxxxxxxx pomocí XXXX, což xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
[1] Xxxxxx xxxxxxxx skupinou xxx xxxxxx Verband Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).
[2] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Verband Deutscher Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).