Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/45/ES
ze xxx 6. xxxxxxxx 2000,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx stanovení vitamínu X, vitamínu X x xxxxxxxxxx v xxxxxxxx
(Xxxx x xxxxxxxx xxx EHP)
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Rady 70/373/XXX xx dne 20. července 1970, xxxxxx xx zavádí xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx Rakouska, Xxxxxx x Xxxxxxx [2], x xxxxxxx na xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx úřední xxxxxxxx krmiv xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx požadavky xxxxxxxx a správních xxxxxxxx na xxxxxx x složení xxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xx použití xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxx.
(2) Xxxxxxxx Rady 70/524/XXX xx dne 23. xxxxxxxxx 1970 o xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx [3], xxxxxxxxx xxxxxxxxx nařízením Xxxxxx (XX) x. 2439/1999 xx xxx 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, xx obsah xxxxxxxx X a xxxxxxxx E xxxx xxx xxxxxx xx xxxxxxxxx, pokud jsou xxxx xxxxx přidány xx xxxxxxx x xxxxx.
(3) Xxxxxxxx Xxxx 79/373/XXX ze xxx 2. xxxxx 1979 x uvádění xxxxxxx xxxxx xx trh [5], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 2000/16/ES [6], x směrnice Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. září 1993 x krmivech xxxxxxxx xx zvláštním xxxxxx xxxxxx [7], xxxxxxxxx xxxxxxxxx směrnicí 96/25/XX [8], xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx uváděny na xxxxxxxxx xxxxx.
(4) Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro kontrolu xxxxxx xxxxx.
(5) Xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské státy xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxx X x xxxxxxxxxx x krmivech x xxxxxxxxx xxxxxxxxx metodami xxxxxxxxxxx v příloze.
Článek 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxx 2000. Neprodleně x xxxx xxxxxxx Komisi.
Budou xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. září 2000.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx odkaz xx xxxx směrnici nebo xxxx xxx takový xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx úředním vyhlášení. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx xxxxxxx státy.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v Úředním xxxxxxxx Evropských společenství.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 6. xxxxxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Úř. věst. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. xxxx. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Xx. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Úř. věst. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Xx. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
XXXXXXX
XXXX X STANOVENÍ XXXXXXXX X
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx je xxxxxx xxx stanovení xxxxxxxx X (xxxxxxxx) x xxxxxxxx x premixech. Xxxxxxx X zahrnuje xxx-xxxxx-xxxxxxx alkohol a xxxx cis xxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx xxxxx metodou. Xxxxx xxxxxxxx X je xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (XX) xx xx. Xxxxx XX xxxxxxxx aktivitě 0,300 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx nebo 0,344 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxx nebo 0,550 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2000 XX xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxx a, xxxxx xx xx xxxxx, xxxxx xx požadovanou xxxxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu X xx xxxxxxx xxxxxxxx fází xxxxxx xxxxxx kapalinové xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) za xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx parametry xxxx xxxxxxxx tak, xxx xxxxxxx k xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx x xxxx xxx izomerů.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx varu 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Roztok hydroxidu xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, c = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (pro x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 g/100 xx v xxxxxxx (3.1)
3.8 2-propanol
3.9 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.10 Xxxxx, prostý xxxxxxx
3.11 Xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxx, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Zásobní roztok xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx 50 xx acetátu xxxxxxxx X (3.11) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte xx 2-propanolu (3.8) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 1400 XX vitamínu X xx xx. Xxxxxx xxxxx musí být xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, např. 1,80 x 106 XX/x.
3.12.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxxx: Xxxxxxx x přesností xx 0,1 xx 80 xx xxxxxxxxx vitamínu X (3.12) xx 100 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 1400 IU xxxxxxxx A xx xx. Přesný obsah xxxx být stanoven xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Nádobí x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x plochým xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Odměrné xxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 ml
4.2.3 Dělící xxxxxxx, kuželovité, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Hruškovité xxxxx, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, délka xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx zábrusovým xxxxxx, x adaptérem xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 HPLC výbava xx vstřikovacím systémem
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μx nebo xxxxxxx (výkonnostní xxxxxxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx XXXX)
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Spektrofotometr x 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx lázeň x xxxxxxxxxxx míchadlem
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1x vybavený xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx vybavená xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx trubicí xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx spodní xxxxx ve tvaru xxxxxxx X x xxxxxx xx opačném xxxxx tak, aby xxxxx být xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X je xxxxxxx xxxx (UV) světlu x oxidaci. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, xxxx nádobí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x kyslíku (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx nahrazen xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx občasným xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx s xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx vitamínu X.
5.2 Saponifikace
V xxxxxxxxxx xx obsahu xxxxxxxx X, xxxxxxx x xxxxxxxxx na 0,01 x, 2 x xx 25 x xxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx dnem xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 mg XXX (3.13), 2 xx roztoku askorbanu xxxxxxx (3.5) x 2 ml xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x xxxxx x xxxxxxx xxxxx do xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx míchadlem (4.7). Xxxxxxxx x varu x xxxxxxxx odtékat xxx minut. Potom xxxxxxxx 25 ml xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx dusíku. Potom xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx vody x xxxxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx celkovým xxxxxxx 250 xx vody xx 1000 ml xxxxxx nálevky (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Podíl vody x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx x nechejte xxxxx xxx minuty.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx nálevky (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) a dvakrát 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 ml xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx kroužení (xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 100 ml xxxxxxx vody, xxxxx xxxx nezůstává bezbarvá xx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx extrakt xxxx suchý xxxxxxxx xxxxx pro dělení xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx nálevku a xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Extrakce za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx válce (4.8.1) xx zábrusovou xxxxxx (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx písmene X xxxxxxxxxxxx trubice xxx, xxx xxx xxxxx xxx xxxxxxxx rozhraní. Xx xxxxxx xxxxx x rozvodu dusíku xx postranního ramene, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x dobře xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx vrchní xxxxxx xx dělící xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Opakujte xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx dávkami xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
Promyjte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxx xx xx xxxxxxx v 5.3.1, a xxxxxxxxxx xxx xx tam xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx roztoku xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx xxxxx xx xxxxx hrušky (4.2.4). Xxxxxxx rozpouštědlo xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) za xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx vodní xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx atmosférický tlak xxxxxxxxxxx dusíku (3.10) x xxxxxxx xxxxx xx rotační vakuové xxxxxxx. Xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) a xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xx xxxx být x rozsahu 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Xxxxxxxxx pomocí XXXX
Xxxxxxx A je xxxxxxx xx reverzní xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) a koncentrace xx měřena pomocí XX xxxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, xxxxx: 475 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx alikvotní xxxx (např. 20 μx) metanolového xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.9). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x střední výšky (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxx xxxx doporučení; xxxxxxx podmínky xxxxx xxx použity xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.5.1):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 5 xxxx 10 μx nebo ekvivalent
Mobilní xxxx (3.9):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; Směs xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; UV xxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx/xxxxx: 475 xx)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovních xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 xx xxxxxxxxx roztoku vitamín X xxxxxxx (3.11.1) xxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 500 xx xxxxx s xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx xx xx popsáno x 5.2, ale bez xxxxxxxx XXX. Následně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx petroléterem (3.2). Xxxxxxx 100 xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx sucha, odstraňte xxxxxxxxx rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx zbytek x 10,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 560 IU xxxxxxxx X/1 ml. Xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx podle 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok xxxx být čerstvě xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxx 2,0 ml tohoto xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx 20 ml xxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) a promíchejte. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 56 XX vitamínu X xx xx.
5.6.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0 x 10,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx po značku xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx jsou 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 XX xxxxxxxx X xx xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx každého kalibračního xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx výšky xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx výšek xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx kalibrační xxxx xxxxxxxxxxxx výsledkům XX kontroly (5.6.3.3).
5.6.3 XX xxxxxxxxxxxxx standardních xxxxxxx
5.6.3.1 Xxxxxxx roztok xxxxxxx X xxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxx (3.11.1) xx 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X na xx. Pipetujte 3,0 xx xxxxxx zředěného xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx baňky x xxxxxxx xx xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX vitamínu X xx ml. Xxxxxx XX spektrum xxxxxx xxxxxxx proti 2-xxxxxxxxx (3.8) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx být xxxx 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx A:
IU vitamínu X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx xxx xxxxxxx X alkohol = 1 530 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Zásobní roztok xxxxxxx X palmitátu
Pipetujte 2,0 ml zásobního xxxxxxx vitamín A xxxxxxxxx (3.12.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 56 IU xxxxxxxx A xx xx. Pipetujte 3,0 xx tohoto zředěného xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx po xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Změřte XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx 2-propanolu (3.8) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 xx x 327 nm.
Výpočet xxxxxx xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = E326 × 19,0
X1%1xx pro xxxxxxx X xxxxxxx = 957 xxx 326 nm xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx pracovní xxxxxxx vitamínu X
Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1 xx 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx 5,0 xx tohoto xxxxxxx xx 25 xx odměrné baňky x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx A xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-propanolu (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx a 400 xx. Extinkční maximum xxxx být xxxx 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx obsahu xxxxxxxx A:
IU vitamínu X/xx = X325 × 18,3
E1%1cm xxx xxxxxxx A xxxxxxx = 1 821 xxx 326 nm xx 2-xxxxxxxxx
6. Výpočet xxxxxxxx
Xx xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxx pro xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x XX/xx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2).
Obsah xxxxxxxx X w x XX/xx xx xxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · X2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx které:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu X x roztoku xxxxxx (5.4) x IU/ml
V1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v 5.4 x xx
x = xxxxx xxxxxxxx xxxxx v x
7. Xxxxxxxx
7.1 X vzorků x xxxxxx koncentrací xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx roztoku xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxxxxxxx xxx analýzu xx xxxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx přibližně 10 xx etanolu (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 X xxxxxx xxxx x ostatních xxxxxxx xxxx by xxxx xxx doba saponifikace xxxxxxxxxxx na 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx být xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx normální xxxxxx kolony.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx sodného xxxx xxx použito přibližně 150 xx kyseliny xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx roztoku xxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx přibližně 50 mg XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx nesmí překročit 15 % z xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx spolupráce [1]
L: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx xxxxxx |
|
|
X |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
x |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
xxxxx [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [XX/xx] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [XX/xx] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [XX/xx] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
R [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
XXXX X
XXXXXXXXX VITAMÍNU X
1. Xxxx x oblast xxxxxxx
Xxxx metoda je xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx vyjádřen xxxx xx DL-α-tokoferol xxxxxxx xx xx. 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,91 xx XX-α-xxxxxxxxxx (xxxxxxx X).
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx vitamínu X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx hydrolyzován xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx X xx extrahován xx petroléteru. Rozpouštědlo xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zbytek se xxxxxxxx v xxxxxxxx x, xxxxx je xx nutné, zředí xx xxxxxxxxxxx koncentraci. Xxxxx xxxxxxxx E xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx použití UV xxxx xxxxxxxxxxxxxxx detekce.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 až 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx draselného, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx askorbanu xxxxxxx, β = 10 x/100 ml (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Xx2X. x H2O (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx sodného, x = 0,5 mol/l x glycerolu, β = 120 g/l (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx fenolftaleinu, β = 2 x/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 Xxxxxxx xxxx pro HPLC: xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx poměr xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx použité xxxxxx.
3.9 Dusík, xxxxxx xxxxxxx
3.10 XX-α-xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.10.1 Xxxxxxx xxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx: Odvažte x přesností na 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx v xxxxxxx (3.1) a doplňte xx značku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 mg DL-α-tokoferol xxxxxxx. (XX xxxxxxxx – viz 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 poznámky).
3.11 XX-α-xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.11.1 Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 mg XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 ml odměrné xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) a xxxxxxx xx značku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx tohoto xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (UV xxxxxxxx – viz 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Rotační vakuová xxxxxxx
4.2 Xxxxxx z xxxxxxxx skla
4.2.1 Baňky x xxxxxxx dnem xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 ml, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Odměrné xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 a 500 xx
4.2.3 Dělící xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx baňky, 250 ml, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Allihnův xxxxxxxxxxx, délka izolační xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx fáze, xxxxxx 185 xx (xxxx. Schleicher &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 HPLC xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx nebo xxxxxxxxxx
4.5.2 UV xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlnové xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 mm křemennými xxxxxxxx
4.7 Vodní xxxxx x magnetickým míchadlem
4.8 Xxxxxxxxx přístroj (viz xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx odměrný xxxxx x objemu 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx vložka vybavená xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx U x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xxxxx být xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xxxx (UV) xxxxxx x oxidaci. Xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (za použití xxxxxx x opakního xxxx, nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx (vypláchněte xxxxxxx). Vzduch xxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxx extrakce xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx se xxxxxxxx občasným xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Příprava xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx dbejte, aby xxxxxxx k xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx, xxxxx může xxxxx xx ztrátám xxxxxxxx X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx E xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x až 25 x vzorku xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1). Přidejte postupně xx stálého kroužení 130 xx etanolu (3.1), přibližně 100 xx XXX (3.12), 2 ml xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxx x ponořte baňku xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx míchadlem (4.7). Xxxxxxxx k xxxx a nechejte xxxxxxx xxx minut. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) přes xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx vypláchněte xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx x obsah xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx do 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx saponifikační baňku xxxxxxxx 25 ml xxxxxxx (3.1) x 100 xx petroléteru (3.2) x převeďte xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx přístroje. Podíl xxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx roztocích xx xxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx x nechejte xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Extrakce x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Opakujte xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x dvakrát 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx s dalšími 100 ml xxxxxxx xxxx, xxxxx voda xxxxxxxxx bezbarvá za xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx promývání xx obyčejně dostačující). Xxxxxxxxxxxx extrakt přes xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx fází (4.4), xxx se xxxxxxxxxx všechna xxxxxxxxxxxx xxxx do 500 xx xxxxxxx baňky (4.2.2). Xxxxxxxxxxx dělící xxxxxxx x filtr 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x dobře promíchejte.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx xxxxxx oddělily (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x nasměrujte xxxxx xxxxx xx tvaru xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tak, xxx xxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx dusíku xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, převeďte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) do xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx oddělit xx x xxxxxxxx xxxxxx vrstvu xx xxxxxx xxxxxxx jako xxxxxxx. Opakujte postup xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2), xxxxx dvakrát 50 xx dávkami xxxxxxxxxxx (3.2) a přidejte xxxxxx xxxxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx tak, xxx je xx xxxxxxx v 5.3.1, x xxxxxxxxxx jak xx tam xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx baňky xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx na xxxxxxx vakuové odparce (4.1) za sníženého xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.9) a xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx odparky. Xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx dusíku (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx známém xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx xx xxxx xxx x rozsahu 5 μg/ml až 30 μx/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx měřena xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 xx) xxxx XX xxxxxxxxx (292 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (např. 20 μx) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx roztoku stejného xxxxxx a xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx kalibračních xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx být xxxxxxx xx předpokladu, xx xxxxxxxxx xxxxxx výsledky.
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 mm, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx: 1–2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx/xxxxx: 330 nm) xxxx XX detektor (292 xx)
5.6 Kalibrace (DL-α-tokoferol xxxxxxx xxxx XX-α-xxxxxxxxxx)
5.6.1 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovních xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 25 xx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 500 xx xxxxx s xxxxxxx xxxx xxxx Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1) a xxxxxxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxx v 5.2. Xxxxxxxx extrahujte xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 ml xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx do xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x 25,0 xx netanolu (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 45,5 μx XX-α-xxxxxxxxxx na xx, ekvivalent 50 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx ml. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.1.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx xxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace těchto xxxxxxx jsou 2,5, 5,0, 10,0 x 25,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx, tj. 2,28, 4,55, 9,10 x 22,8 μx/xx DL-α-tokoferolu.
Vstříkněte xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx střední xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx graf.
5.6.1.3 XX xxxxxxxxxxxxx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10.1) xx 25,0 xx xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 xx x 320 nm.
Absorpční xxxxxxx xx xxxx xxx xxx 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284xx v xxxxxxx
Xxx tomto ředění xx měla xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Xxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 2,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 50 ml xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxx (3.3) x doplňte po xxxxxx xxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 40 μg XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, xxxxxxxxxx 44,0 μg XX-α-xxxxxxxxx acetátu xx xx. Standardní xxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx před xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a kalibrační xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 a 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, doplňte xx xxxxxx metanolem (3.3) x promíchejte. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx těchto roztoků xxxx 2,0, 4,0, 8,0 a 20,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx, xx. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx středních xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Xxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 25,0 xx xxxxxxxx x xxxxxx UV xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx etanolu (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 nm x 320 xx. Xxxxxxxxx maximum by xxxx xxx xxx 292 xx:
X1%1xx = 75,8 xxx 292nm x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx pro xxxxxx xxxxxx vitamínu X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx v μx/xx (xxxxxxxx xxxx α-tokoferol xxxxxx) xx vztahu xx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.1.2 nebo 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx X w x mg/kg xx xxxxxx xx dán xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · V2 / X1 · x [xx/xx]
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu X x xxxxxxx xxxxxx (5.4) v μg/ml
V1 = xxxxx roztoku xxxxxx (5.4) x xx
X2 = objem xxxxxxx odebraných x 5.4 x ml
m = xxxxx xxxxxxxx xxxxx x g
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x nízkou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X může xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 g) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení xxxxxx HPLC.
7.2 Xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxx překročit 2x.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, přidejte xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), k xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xxxx XX-α-xxxxxxxxxx podle 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 přidejte xx xxxxxxx (3.10.1 xxxx 3.10.2) xxxxxxxxx 10 mg BHT (3.12) x xxxxxxxxx xxxxxx v chladničce (xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx).
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx xxx xxxxxx hydrochinon.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 xx kyseliny xxxxxxxxx.
7.8 Namísto xxxxxxx xxxxxxx sodného může xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [2]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx selata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
n |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
střed [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
xx [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [xx/xx] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
CVr [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
XXXX C
STANOVENÍ XXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx metoda xx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx X- a X- xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx tryptofanu xx xxxxxx hydrolyzován xx xxxxxxxxxxx podmínek xxxxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx 110 °X xx 20 xxxxx. Po xxxxxxxxx xx přidán xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx kyselých xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx pomocí XXXX x fluorescenční detekcí.
3. Xxxxxxx
3.1 Dvojnásobně xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx voda xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx (vodivost &xx; 10 μX/xx)
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Xxxxxxx standardní xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx vakuem xxxx pentoxid xxxxxxx
3.4 Xxxx-xxxxxx hydroxidu xxxxxxxxx (xxxx být xxxxx, xxx nebyl Xx(XX)2. 8 X2X nadměrně xxxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx BaCO3, xxx xxxx xxxxx stanovení) (xxx xxxxxxxx 9.3)
3.5 Xxxxxxxx xxxxx
3.6 Kyselina xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, p20 = 1,19 x/xx
3.8 Metanol, XXXX xxxxxx
3.9 Xxxxxxxxxx, xxxxxx varu 40–60 °X
3.10 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxxxx 40,0 x XxXX (3.5) xx xxxx x xxxxxxx do 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 6 mol/l:
Vezměte 492 xx HCL (3.7) x xxxxxxx xx 1 l xxxxx.
3.12 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 xx XXX (3.7) a xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x:
Xxxxxxx 8,2 xx XXX (3.7) x xxxxxxx do 1 x vodou.
3.14 Xxxxxxxx orto-fosforečná, c = 0,5 xxx/x:
Xxxxxxx 34 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) a xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.2), x = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2553 x tryptofanu (3.2) x 500 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx kyselinou chlorovodíkovou (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 xX xx xxxx xxxxxxxxx čtyř xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx roztok, x = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2728 g α-methyl-tryptofanu (3.3) v 500 xx odměrné baňce x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 oC xx dobu xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx standard:
Vezměte 2,00 xx koncentrovaného xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15), x 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx a na xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (10–30 %) xxxx xxxxxxx hydrolyzát.
Tento xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx před xxxxxxxx.
Xxxxx přípravy xxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxx.
3.18 Kyselina xxxxxx
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Ethanolamin &xx; 98 %
3.21 Xxxxxx 1 g 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) ve 100 xx metanolu (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx pro XXXX: 3,00 x xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 ml xxxx (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1x/100 xx). Xxxxxxx xX na 5 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Doplňte do 1000 xx xxxxx (3.1).
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx XXXX xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
4.2 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii, 125 xx x 4 xx, C18, velikost xxxxxx xxxxxx 3 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.3 xX metr
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx 125 xx, se xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Membránový xxxxx, 0,45 μx
4.6 Autokláv, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) baru
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx magnetické xxxxxxxx
4.8 Xxxxxx xxxxx
5. Xxxxxx
5.1 Příprava vzorku
Vzorek xx rozmělněn xxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 0,5 xx. Xxxxxx, xxxxx xxxx vysokou vlhkost, xxxx xxx před xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx teplotě xxxxxxxxxxxxx 50 °X, xxxx xxxxxxxxx. Vzorky x xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx být xxxx xxxxxx extrahovány xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu (xxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky. Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové, x = 0,1 mol/l (3.13) x 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx nebo xxxxxxx 60 minut x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx usadit xxxxxxxx a xxxxxxxxx 10,0 xx roztoku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 xx xxxxxxxx orto-fosforečné, c = 0,5 xxx/x (3.14). Upravte xX xx 3,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1,0 xxx/x (3.10). Přidejte xxxxxxxxx metanolu (3.8), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx odměrné xxxxx o xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx kalibrační xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx HPLC xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Provádějte xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Xxxxxxx standardní xxxxxx a extrakty xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx není xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx při 5 °C po xxxxxxxxx dobu xxx xxx.
5.3 Stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,2 xx xx 0,1 xx 1 g xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx láhve (4.4). Odvážená xxxxx xxxxxx by měla xxx xxxxx dusíku xxxxx 10 xx. Xxxxxxxx 8,4 x xxxx-xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxx (3.4) a 10 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx mixeru (4.8) nebo magnetickém xxxxxxxx (4.7). Ponechejte xxxxxxxx potažený magnet xx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx nádoby 4 xx vody. Xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx uzavřete. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx (4.6) x xxxxxx xxxxx x párou xx 30–60 xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxx 110 (+ 2) °X po xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx snižte xxxxxxx právě xxx 100 °C. Aby xxxxxxx ke xxxxxxxxxxxx Xx(XX)2. 8 X2X, xxxxxxxx do xxxxx xxxxx 30 xx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Mírně xxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxxxx xxxxxx xx vodní/ledové xxxxx xx dobu 15 minut.
Potom přidejte 5 ml xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx lázni x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xX na 3,0 x xxxxxxxx XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Přidejte xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 10 x 30 % metanolu v xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x vhodném xxxxxx x xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx objem xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx metanolu xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx XXXX xxxxxxxxxxxx několik xx roztoku xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 5.4.
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx při 5 °X po xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.4 Stanovení pomocí XXXX
Xxxxxxxxxxx podmínky xxx xxxxxxxxxxx vymývání xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx smějí xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxx xxxxxxxx 9.1 x 9.2):
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 mm x 4 xx, C18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μm xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx kolony Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.22): 3,00 x xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx vody (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 xx). Upravte xX na 5,00 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Doplňte xx 1000 xx xxxxx (3.1)
Xxxxxx toku: 1 xx/xxx.
Xxxxxxx doba xxxx: xxxxxxxxx 34 minut
Detekční xxxxxx délka: xxxxxxxx: 280 nm, xxxxx: 356 xx
Xxxxxxxxx xxxxx: 20 μx
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X × X × X × X × E × XX / X × X × H × 10&xxxx;000 × X = x tryptofanu xx 100x vzorku
A = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, roztoku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.17)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx hydrolyzátu (5.3)
C = objem roztoku xxxxxxxxxxxxxxx tryptofanu (3.15) (2 ml) přidaný xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = koncentrace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) x μxxxxxx/xx (= 2,50) přidaného xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = objem xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx přidaného xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) xxxx xx xxxxxxxxxxx (5.3) (= 2,00 xx)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, extraktu (5.2) nebo xxxxxxxxxxx (5.3)
X = plocha xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.16) v ml (= 2,00) přidaného xx xxxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxx xxxxxx x x (xxxxxxxx na xxxxxxx hmotnost, xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx x/xxxx xxxxxxxx)
XX = xxxxxxxxxx hmotnost tryptofanu (= 204,23)
7. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
8. Výsledky studijní xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxx porovnání) xxxx uspořádána tak, xx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 12 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx xxxx prováděny x každého vzorku. Xxxxxxxx xxxx uvedeny x následující xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx zadržených eliminačních xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx testem)
sr: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx xxx xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Krmivo xxx xxxxxxx doplněné X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Xxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
|
x |
50 |
55 |
50 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [x/xx] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
x [g/kg] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
CVr [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [g/kg] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
R [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx xxxxxxxx spolupráce Xxxxxxxxxxxx (třetí xxxxxxxx xxxxxxxxx) byla uspořádána xxx, že xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xx 13 xxxxxxxxxxxx k ověření xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v následující xxxxxxx:
X: počet laboratoří xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: počet xxxxxxxxxxxx hodnot zadržených xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledků (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
CVR: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Xxxx xxxxxxx xx xxxxx |
Xxxxxx 5 Směs pšenice xx sójou (= xxxxxx 4) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [x/xx] |
0,391 |
0,931 |
|
xx [g/kg] |
0,005 |
0,012 |
|
r [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
xX [g/kg] |
0,018 |
0,048 |
|
R [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Společenství xxxx xxxxxxxxxx tak, xx xxxxx vzorky xxxx xxxxxxxxxxx až v xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx. Výsledky xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx jednotlivých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (identifikované Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx (XXX 117) |
Vzorek 2 Xxxxx-xxxxx rybí xxxxxx (CRM 118) |
Vzorek 3 Sójová xxxxxx (XXX 119) |
Vzorek 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
xX [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [x/xx] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
XXX [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx podmínky xxxxx xxxxxxxxxx lepší rozdělení xxxx tryptofanem a α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx následované xxxxxxxxxxxx čistěním xxxxxx:
|
Xxxxxx xxx kapalinovou chromatografii: |
125 xx x 4 xx, C18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 μx xxxx xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxx xxxxxx: |
32 °C |
||
|
Mobilní xxxx: |
X: 0,01 xxx/x KH2PO4/metanol, 95 + 5 (xxxxxxxx + xxxxxxxx) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
15 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % A |
40 % X |
|
|
21 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
33 xxx. |
100 % X |
0 % B |
|
|
Úroveň xxxx: |
1,2 xx/xxx. |
||
|
Xxxxxxx doba xxxx: |
xxxxxxxxx 33 xxxxx |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx xx bude xxxxxx xxxxx xxxx XXXX xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx materiálu. Xxxxxxx systém xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx čáru xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Navíc xx důležité, xxx xxxx degradační xxxxxxxx xxxxx odděleny xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx se překontrolovala xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx. Xx důležité, xxx xxxx běhu xxxx xxxxxxxxxx dlouhá xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jinak xxxxx xxxx pozdního xxxxxxxx ovlivňovat xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
X xxxxxxx xxxxxxxx, xx měl xxxxxxxxxxxxxxxx systém xxx xxxxxxxx xxxxxx. Lineární xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxx s xxxxxxxxxx (xxxxxxxx) koncentrací xxxxxxxxx standardu x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx píků xxxxxxxxxx x vnitřního xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx rozsahu HPLC/flourescenčního xxxxxxx. Xxxxx xxx (xxxx) xxx xxxxxxxxxx, x/xxxx vnitřního standardu xx (jsou) xxxxxx xxxx (xxxx) xxxx xxxxxx vysoký (xxxxxx), xxxx by být xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx velikosti x/xxxx změněným xxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Hydroxid xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx hydroxid xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx stanovení xxxxxx XXXX, xxx xxxx x xxxxxxxxxx způsobovat xxxxx xxxxxxxx.
[1] Xxxxxx xxxxxxxx skupinou pro xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).
[2] Řízené xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx Verband Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).