Xxxxxxxx Komise 2000/45/XX
xx xxx 6. července 2000,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X, vitamínu X x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx
(Xxxx x xxxxxxxx xxx EHP)
KOMISE EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX ze xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Finska x Xxxxxxx [2], x xxxxxxx na xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx krmiv xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx jakost x xxxxxxx krmiv, xxxx xxx xxxxxxxxx xx použití xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx odběr xxxxxx x xxxxxxx.
(2) Xxxxxxxx Rady 70/524/XXX xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 o xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx [3], xxxxxxxxx xxxxxxxxx nařízením Xxxxxx (XX) x. 2439/1999 xx xxx 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, že obsah xxxxxxxx X x xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxx xx xxxxxxxxx, pokud jsou xxxx látky přidány xx xxxxxxx a xxxxx.
(3) Xxxxxxxx Rady 79/373/XXX xx xxx 2. xxxxx 1979 x uvádění xxxxxxx xxxxx na trh [5], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 2000/16/XX [6], x xxxxxxxx Xxxx 93/74/EHS xx xxx 13. září 1993 o xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx [7], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/XX [8], xxxxxxx, xx aminokyseliny musí xxx uváděny xx xxxxxxxxx krmiv.
(4) Xxxx xxx stanoveny analytické xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx látek.
(5) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Členské xxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxx kontroly xxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxx X a xxxxxxxxxx x krmivech a xxxxxxxxx prováděly xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxx 2000. Xxxxxxxxxx x xxxx uvědomí Xxxxxx.
Xxxxx xxxx předpisy xxxxxxxx xx 1. září 2000.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx odkaz na xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx takový xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx si xxxxxxx členské státy.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství.
Xxxxxx 4
Tato xxxxxxxx xx určena členským xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 6. xxxxxxxx 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxx Xxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. věst. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Xx. věst. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. xxxx. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Xx. věst. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Xx. xxxx. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Xx. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Xx. věst. X 125, 23.5.1996, x. 35.
PŘÍLOHA
ČÁST A XXXXXXXXX XXXXXXXX X
1. Xxxx x oblast použití
Tato xxxxxx xx určena xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (xxxxxxxx) v xxxxxxxx x premixech. Xxxxxxx A xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx alkohol x xxxx xxx xxxxxxx, xxxxx xx stanoví xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx A xx xxxxxxxx x mezinárodních xxxxxxxxxx (XX) na xx. Xxxxx XX xxxxxxxx xxxxxxxx 0,300 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx xxxx 0,344 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxx xxxx 0,550 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxxx.
Xxx stanovitelnosti je 2000 XX xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx A je xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxx x, pokud xx xx xxxxx, xxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx chromatografie (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx vybírány tak, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx a xxxx xxx izomerů.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Roztok hydroxidu xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 poznámky)
3.6 Sulfid xxxxx, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Roztok xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 g/l (xxx x = 9) (xxx 7.8 poznámky)
3.7 Xxxxxx fenolftaleinu, β = 2 g/100 xx v xxxxxxx (3.1)
3.8 2-xxxxxxxx
3.9 Xxxxxxx xxxx pro XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.10 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.11 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxx, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx, např. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx roztok xxx-xxxxx-xxxxxxx X acetátu: Xxxxxxx x přesností xx 0,1 xx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx X (3.11) xx 100 xx xxxxxxx baňky. Rozpusťte xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x doplňte xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 1400 XX vitamínu A xx ml. Přesný xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx A palmitát, xxxxx xxxxx, ověřené xxxxxxxx, xxxx. 1,80 x 106 IU/g.
3.12.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxxx: Odvažte x přesností xx 0,1 xx 80 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (3.12) xx 100 ml xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte xx 2-xxxxxxxxx (3.8) a xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 1400 IU xxxxxxxx X na xx. Xxxxxx xxxxx xxxx být stanoven xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x plochým dnem xxxx Erlenmeyerovy baňky, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx zábrusovými xxxxxxx, úzkohrdlé, 10, 25, 100 a 500 ml
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, kuželovité, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx baňky, 250 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Allihnův xxxxxxxxxxx, délka izolační xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x adaptérem pro xxxxxxxx xxxxxxx plynu.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papír xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 mm (xxxx. Schleicher &xxx; Xxxxxxx 597 HY 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 nebo 10 μm xxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx: xxxxx jednotlivý pík xxx xxxxxxx izomery xxxxxxxx xx xxxxxxxx XXXX)
4.5.2 UV xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx nastavením vlnové xxxxx
4.6 Spektrofotometr x 10 mm xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Vodní lázeň x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx odměrný xxxxx o objemu 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a zátkou
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx vybavená xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx spodní xxxxx ve xxxxx xxxxxxx U x xxxxxx xx opačném xxxxx tak, xxx xxxxx být horní xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X xx citlivý xxxx (UV) světlu x xxxxxxx. Všechny xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx použití xxxxxx z opakního xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fólií) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, aby xxxxxx xxxxx s xxxxxx 1 xx, xxxxxxx dbejte, xxx xxxxxxx x zahřátí. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx dojít xx ztrátám xxxxxxxx X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxx x xxxxxxxxx na 0,01 x, 2 x xx 25 x xxxxxx do 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx nebo Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx kroužení 130 xx etanolu (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.13), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx roztoku xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x xxxxx x xxxxxxx baňku do xxxxx lázně x xxxxxxxxxxx míchadlem (4.7). Xxxxxxxx x varu x nechejte xxxxxxx xxx minut. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) xxxx kondenzátor (4.3) a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx xx stálého xxxxxxx xxx pomalým xxxxxxx xxxxxx. Potom xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přibližně 20 xx vody x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx objemem 250 ml xxxx xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 xx etanolu (3.1) a 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx nálevky xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Podíl vody x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx roztocích xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx dvě xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x použitím xxxxxx nálevky (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx další xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx dvakrát 100 xx petroléteru (3.2) a xxxxxxx 50 xx petroléteru (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx nálevce xxxxxxx 100 xx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx zabránilo xxxxxx xxxxxx) x potom xxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx 100 ml xxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx nezůstává xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx dělení xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx petroléterem (3.2) x dobře xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx zátku xxxxxxxxxx válce (4.8.1) xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) a xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx písmene X xxxxxxxxxxxx trubice xxx, xxx xxx xxxxx xxx hladinou xxxxxxxx. Xx pomoci tlaku x xxxxxxx xxxxxx xx postranního ramene, xxxxxxxx vrchní xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx dělící xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx předtím. Xxxxxxxx xxxxxx extrakce xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), potom xxxxxxx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx extrakty petroléteru xxx, jak xx xx xxxxxxx x 5.3.1, x pokračujte xxx xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx HPLC
Odpipetujte xxxxxxxxx část roztoku xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx xxxxx xx xxxxx hrušky (4.2.4). Odpařte rozpouštědlo xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tlak xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.10) x odpojte xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Odstraňte zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx objemu (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xx xxxx být x xxxxxxx 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Xxxxxxxxx pomocí XXXX
Xxxxxxx A je xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) a xxxxxxxxxxx xx xxxxxx pomocí XX xxxxxxxxx (325 xx) nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, emise: 475 xx) (4.5.2).
Vstříkněte xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μx) xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx v 5.4 x vymývejte mobilní xxxx (3.9). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx píku (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx stejného xxxxxx x střední xxxxx (xxxxxx) několika vstřiků xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 mm, C18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μx nebo xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.9): Xxxx xxxxxxxx (3.3) a xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): XX xxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx/xxxxx: 475 xx)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovních xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx (3.11.1) xxxx 20 xx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxx v 5.2, xxx bez xxxxxxxx BHT. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx 100 xx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx vakuové xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx sucha, odstraňte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx zbytek x 10,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 560 IU xxxxxxxx A/1 ml. Xxxxxx obsah xx xxxxxxx xxxxx 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx pracovní roztok xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx 20 xx xxxxxxx xxxxx, doplňte xx xxxxxx metanolem (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace tohoto xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx je 56 XX xxxxxxxx X xx xx.
5.6.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0 x 10,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx baněk, xxxxxxx xx značku xxxxxxxxx (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 XX xxxxxxxx X xx xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx každého xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx píků (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx píků (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx odpovídající xxxxxxxxx XX xxxxxxxx (5.6.3.3).
5.6.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.3.1 Xxxxxxx roztok xxxxxxx X xxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx zásobního xxxxxxx vitamín X xxxxxxx (3.11.1) do 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 56 XX xxxxxxxx A na xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x doplňte po xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx A xx ml. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx být mezi 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx obsahu xxxxxxxx A:
IU vitamínu X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx xxx xxxxxxx X alkohol = 1 530 při 326 nm xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Zásobní roztok xxxxxxx A palmitátu
Pipetujte 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx do 25 xx xxxxxxx baňky x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Změřte XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx maximum xxxx xxx xxxx 325 xx a 327 xx.
Xxxxxxx obsahu xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = E326 × 19,0
E1%1cm xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 957 xxx 326 xx ve 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Standardní xxxxxxxx xxxxxxx vitamínu A
Pipetujte 3,0 xx nezředěného xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx A, xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1 xx 50 xx odměrné xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Pipetujte 5,0 xx xxxxxx xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx baňky x doplňte po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX vitamínu X xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) ve xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx maximum xxxx být mezi 325 nm x 327 nm.
Výpočet obsahu xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = E325 × 18,3
E1%1cm xxx xxxxxxx X alkohol = 1&xxxx;821 při 326 nm ve 2-xxxxxxxxx
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx vitamínu A xxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxx v XX/xx xx xxxxxx ke xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2).
Obsah xxxxxxxx X x x IU/kg xx xxxxxx je dán xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · X2 · 1 000 / X1 · m (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x roztoku xxxxxx (5.4) x XX/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 x xx
x = xxxxx xxxxxxxx xxxxx v x
7. Xxxxxxxx
7.1 X vzorků x nízkou koncentrací xxxxxxxx X může xxx užitečné xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (hmotnostní xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Množství xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx pro analýzu xx xxxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx přibližně 10 xx xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 X xxxxxx tuku x ostatních xxxxxxx xxxx xx xxxx xxx doba saponifikace xxxxxxxxxxx na 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxx x xxxxxxxx normální xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx roztoku xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx EDTA.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot
sr: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient variace xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx selata |
|
|
L |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
n |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
střed [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [IU/kg] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [XX/xx] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
CVr [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [XX/xx] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
X [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
XXXX X
XXXXXXXXX VITAMÍNU X
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu X xx xxxxxxxx jako xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. 1 xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xxxxxxxx 0,91 xx XX-α-xxxxxxxxxx (xxxxxxx X).
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 2 xx xxxxxxxx E/kg.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Rozpouštědlo xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxx x, pokud je xx xxxxx, xxxxx xx požadovanou xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx xxxxxxx UV xxxx fluorescenčního xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Etanol, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 g/100 xx (xxx 7.7 poznámky)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Xx2X. x H2O (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 g/l (xxx x = 9) (viz 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Roztok xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 ml x xxxxxxx (3.1)
3.8 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx poměr xxxx xxxxxxxx charakteristikami xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Dusík, xxxxxx xxxxxxx
3.10 XX-α-xxxxxxxxx acetát, xxxxx čistý, ověřené xxxxxxxx
3.10.1 Xxxxxxx xxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxxxx x přesností xx 0,1 mg, 100 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10) xx 100 xx xxxxxxx baňky. Xxxxxxxxx x etanolu (3.1) x doplňte xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 mg XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx. (XX xxxxxxxx – viz 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.11 XX-α-xxxxxxxxx, xxxxx čistý, ověřené xxxxxxxx
3.11.1 Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 xx odměrné xxxxx. Xxxxxxxxx v xxxxxxx (3.1) a xxxxxxx xx značku xxxxxxx rozpouštědlem. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 mg XX-α-xxxxxxxxxx. (XX kontrola – xxx 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – viz 7.4 xxxxxxxx).
3.12 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Rotační vakuová xxxxxxx
4.2 Xxxxxx z xxxxxxxx skla
4.2.1 Baňky x xxxxxxx xxxx xxxx Erlenmeyerovy baňky, 500 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Odměrné xxxxx xx zábrusovými xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Dělící xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx izolační xxxxxx 300 xx, xx zábrusovým xxxxxx, x xxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
4.4 Xxxxxxxx filtrační papír xxx xxxxxxxx fáze, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx vstřikovacím xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor x xxxxxxxxxxx nastavením xxxxxx xxxxx
4.6 Spektrofotometr s 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x magnetickým xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x zátkou
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx vybavená xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Nastavitelná xxxxxxx xxxx mít spodní xxxxx xx tvaru xxxxxxx U x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xxxxx být horní xxxxxx kapaliny ve xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx citlivý xxxx (XX) světlu x oxidaci. Xxxxxxx xxxxxxx musí být xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx použití xxxxxx z opakního xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fólií) x xxxxxxx (vypláchněte xxxxxxx). Vzduch xxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (vyhněte xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx tak, xxx xxxxxx xxxxx s xxxxxx 1 mm, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx dojít xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Saponifikace
V xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx E xxxxxxx x xxxxxxxxx na 0,01 x, 2 x xx 25 x vzorku xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx etanolu (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.12), 2 ml xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx xxxxxxx sulfidu xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) k xxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx lázně x magnetickým xxxxxxxxx (4.7). Zahřejte x xxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxx minut. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx odtékat xxxxxxx 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx x xxxxx xxxxx ochlaďte xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx vypláchnutím xxxxxxxx xxxxxxx 250 ml xxxx xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxx (3.1) x 100 ml petroléteru (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx nebo do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x etanolu x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx minuty x nechejte xxxxx xxx minuty.
5.3.1 Xxxxxxxx x použitím xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx tuto xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Promyjte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 ml dávkami xxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx emulzí) x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 100 ml xxxxxxx xxxx, dokud xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx fenolftaleinu (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx filtr xxx xxxxxx fází (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx odměrné xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), doplňte po xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8)
Xxxx xx vrstvy xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x nasměrujte xxxxx xxxxx ve xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tak, aby xxx xxxxx nad xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx petroléteru xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) do xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx protřepejte. Xxxxxxxx xxxxxx oddělit xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx nálevky jako xxxxxxx. Xxxxxxxx postup xxxxxxxx dalšími 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx dávkami xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx petroléteru tak, xxx je xx xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx xx tam xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx vzorku xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx roztoku xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx xxxxx xx xxxxx hrušky (4.2.4). Xxxxxxx rozpouštědlo xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) za xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxxxx nepřekračující 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx připuštěním xxxxxx (3.9) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx vakuové odparky. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x ihned rozpusťte xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx xx xxxx xxx v xxxxxxx 5 μx/xx xx 30 μx/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx měřena xxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 nm) xxxx XX detektoru (292 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μx) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx získaného x 5.4 a vymývejte xxxxxxx xxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx použity xx předpokladu, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.5.1): 250 xx x 4 mm, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx fáze (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx: 1–2 ml/min.
Detektor (4.5.2): Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx/xxxxx: 330 nm) xxxx XX xxxxxxxx (292 xx)
5.6 Kalibrace (XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx DL-α-tokoferolu)
5.6.1 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovních xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 25 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx je xx xxxxxxx x 5.2. Xxxxxxxx extrahujte xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 ml xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx 25 xx tohoto xxxxxxxx xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx (viz 5.4) xxxxx do xxxxx, xxxxxxxxx zbývající rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx v 25,0 xx netanolu (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 45,5 μx XX-α-xxxxxxxxxx na xx, xxxxxxxxxx 50 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx ml. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 a 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx do xxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx značku xxxxxxxxx (3.3) a promíchejte. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,5, 5,0, 10,0 x 25,0 μg/ml XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx, tj. 2,28, 4,55, 9,10 a 22,8 μx/xx DL-α-tokoferolu.
Vstříkněte xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x stanovte xxxxxxx xxxxx píků (plochy). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx píků (ploch) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx graf.
5.6.1.3 XX xxxxxxxxxxxxx zásobního xxxxxxx DL-α-tokoferol acetátu (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10.1) na 25,0 xx etanolem x xxxxxx UV xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx by xxxx xxx xxx 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284xx v xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Standard XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 50 ml xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxx (3.3) x doplňte xx xxxxxx metanolem. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 40 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, xxxxxxxxxx 44,0 μg XX-α-xxxxxxxxx acetátu xx xx. Standardní pracovní xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx sérií 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x promíchejte. Nominální xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxx xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx, xx. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μg/ml XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μl každého xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx střední xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx výšek xxxx (xxxxx) narýsujte xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Xxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 25,0 xx xxxxxxxx x změřte XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx být xxx 292 xx:
X1%1xx = 75,8 xxx 292nm x xxxxxxx
Xxx tomto xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,6.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx E xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x μg/ml (xxxxxxxx xxxx α-tokoferol xxxxxx) ve xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.1.2 nebo 5.6.2.2).
Obsah xxxxxxxx X w x xx/xx xx xxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 / X1 · x [xx/xx]
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx E x roztoku vzorku (5.4) x μx/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx odebraných x 5.4 v xx
x = xxxxx xxxxxxxx xxxxx x g
7. Xxxxxxxx
7.1 U xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx petroléteru xxxx xxxxxxxxxxxxxxx vsázek (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 g) xx xxxxxxx roztoku xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx XXXX.
7.2 Množství xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxx analýzu xxxxx xxxxxxxxx 2g.
7.3 Xxxxx xx neobjeví xxxxxx xxxxxx, přidejte xxxxxxxxx 10 ml xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX-α-xxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 xxxxxxxx xx roztoku (3.10.1 xxxx 3.10.2) xxxxxxxxx 10 mg XXX (3.12) x xxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxx skladovatelnosti xx xxxxx xxxxx).
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- a δ xxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 xx kyseliny xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx roztoku xxxxxxx sodného může xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx EDTA.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx xxxxx překročit 15 % x xxxxxxx výsledku.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [2]
X: xxxxx laboratoří
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot
sr: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx krmivo |
Minerální koncentrát |
Bílkovinný xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro xxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
x |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
xxxxx [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
xx [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [mg/kg] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
ČÁST C
STANOVENÍ XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx použití
Tato xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx celkového x xxxxxxx tryptofanu v xxxxxxxx. Nerozlišuje xxxx X- x X- xxxxxxx.
2. Princip
Pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx hydrolyzován xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nasyceným xxxxxxxx xxxxxxxxx barnatého x xxxxxxxx xxx 110 °X xx 20 xxxxx. Po xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu xx xxxxxx extrahován za xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx a vnitřní xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx HPLC x fluorescenční xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx (vodivost &xx; 10 μS/cm)
3.2 Xxxxxxxxxx látka: tryptofan (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), sušený xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Xxxxxxx standardní xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.4 Xxxx-xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxx xxx dbáno, xxx xxxxx Xx(XX)2. 8 H2O xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx vzduchu, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx BaCO3, jež xxxx xxxxx xxxxxxxxx) (xxx xxxxxxxx 9.3)
3.5 Xxxxxxxx sodný
3.6 Kyselina xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x20 = 1,19 x/xx
3.8 Xxxxxxx, XXXX stupeň
3.9 Petroléter, xxxxxx xxxx 40–60 °X
3.10 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxxxx 40,0 x XxXX (3.5) xx xxxx x xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx chlorovodíková, x = 6 mol/l:
Vezměte 492 xx XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.12 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 xx XXX (3.7) x xxxxxxx do 1 x xxxxx.
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x:
Xxxxxxx 8,2 xx XXX (3.7) x doplňte do 1 l vodou.
3.14 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, c = 0,5 xxx/x:
Xxxxxxx 34 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) a xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx (3.2), c = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2553 x xxxxxxxxxx (3.2) x 500 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x doplňte po xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Skladujte při –18 oC xx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2728 g α-xxxxxx-xxxxxxxxxx (3.3) v 500 xx odměrné xxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Skladujte xxx –18 xX xx xxxx xxxxxxxxx xxxx týdnů.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx standard:
Vezměte 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu (3.15), x 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxx vodou (3.1) x xxxxxxxxx (3.8) xx přibližně xxxxxx xxxxx a na xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (10–30 %) xxxx xxxxxxx hydrolyzát.
Tento xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx čerstvý před xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxx
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Xxxxxxxxxxx > 98 %
3.21 Roztok 1 x 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) xx 100 xx xxxxxxxx (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx pro XXXX: 3,00 g xxxxxxxx octové (3.18) + 900 ml xxxx (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x metanolu (3.8) (1x/100 xx). Xxxxxxx xX xx 5 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx xx 1000 xx vodou (3.1).
4. Přístroje a xxxxxxx
4.1 Vybavení pro XXXX se xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
4.2 Kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii, 125 xx x 4 xx, C18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μx nebo ekvivalent
4.3 xX metr
4.4 Polypropylenová xxxxx, xxxxx 125 xx, xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxx, 0,45 μx
4.6 Xxxxxxxx, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) xxxx
4.7 Mechanická xxxxxxxx xxxx magnetické xxxxxxxx
4.8 Xxxxxx mixer
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Vzorek xx xxxxxxxxx xxx, xxx prošel xxxxx x xxxxxx 0,5 xx. Vzorky, které xxxx vysokou vlhkost, xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx při teplotě xxxxxxxxxxxxx 50 °X, xxxx xxxxxxxxx. Vzorky x vysokým xxxxxxx xxxx xxxx být xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu (extrakt)
Odvažte x přesností xx 1 xx příslušné xxxxxxxx (1–5 g) xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx Erlenmeyerovy baňky. Xxxxxxxx 100 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x (3.13) a 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx 60 xxxxx x xxxxxxxx mechanické xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx 10,0 xx roztoku xxxxxxxxxxxx xx kádinky. Xxxxxxxx 5 ml xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 mol/l (3.14). Xxxxxxx xX xx 3,0 xx xxxxxxx hydroxidu sodného, x = 1,0 xxx/x (3.10). Přidejte xxxxxxxxx metanolu (3.8), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx objemu. Xxxxxxxx xx odměrné xxxxx o xxxxxxx xxxxxx x zřeďte xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx stejný xxxxx xxxx xxxxxxxxxx standardní xxxxxx (3.17)).
Xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx XXXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx membránový xxxxx 0,45 μm (4.5). Provádějte xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Xxxxxxx standardní xxxxxx x extrakty xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud není xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx den, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °X po xxxxxxxxx xxxx tří xxx.
5.3 Xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx na 0,2 xx xx 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx láhve (4.4). Xxxxxxxx dávka xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx 10 mg. Xxxxxxxx 8,4 x xxxx-xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.4) x 10 xx vody. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (4.8) nebo magnetickém xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx magnet xx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx x láhev xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx (4.6) x vroucí xxxxx x párou xx 30–60 minut. Uzavřete xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx 110 (+ 2) °X po xxxx 20 hodin.
Před xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx pod 100 °X. Xxx xxxxxxx xx krystalizaci Xx(XX)2. 8 H2O, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx 30 ml xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx protřepávejte, xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxxxx xxxxxx ve xxxxx/xxxxxx xxxxx xx xxxx 15 xxxxx.
Xxxxx přidejte 5 xx orto-fosforečné xxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx nádobu ve xxxxxxxx lázni a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x (3.11) zatímco xxxxxxx x xxxxxxx xX xx 3,0 x použitím XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Přidejte xxxxxxxxx xxxxxxxx, abyste xxxxxxxx koncentraci mezi 10 x 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx objemu. Xxxxxxxx xx xxxxxxx baňky x vhodném xxxxxx x xxxxxx vodou xx xxxxxxxxxx objem xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxxxx do kolony XXXX xxxxxxxxxxxx několik xx roztoku xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 5.4.
Chraňte standardní xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx den, xxxxx xxx skladovány xxx 5 °X po xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.4 Stanovení xxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx smějí xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx výsledky (viz xxxx poznámky 9.1 x 9.2):
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 3 μx xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx fáze (3.22): 3,00 x kyseliny xxxxxx (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 ml). Upravte xX na 5,00 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx xx 1000 ml xxxxx (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx xxxx běhu: xxxxxxxxx 34 xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx délka: xxxxxxxx: 280 xx, xxxxx: 356 nm
Vstřikový xxxxx: 20 μx
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X × X × X × X × X × XX / X × X × H × 10&xxxx;000 × X = g tryptofanu xx 100x xxxxxx
X = plocha xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.17)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = objem roztoku xxxxxxxxxxxxxxx tryptofanu (3.15) (2 ml) přidaný xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu (3.15) x μxxxxxx/xx (= 2,50) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = objem xxxxxxxxxxxxxxx vnitřního standardního xxxxxxx (3.16) x xx přidaného xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) xxxx xx hydrolyzátu (5.3) (= 2,00 xx)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) nebo hydrolyzátu (5.3)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
H = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.16) x xx (= 2,00) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxx vzorku v x (opravená xx xxxxxxx hmotnost, jestliže xxx vzorek sušen x/xxxx xxxxxxxx)
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx tryptofanu (= 204,23)
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení provedených x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
8. Výsledky studijní xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx Společenství (xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx ve 12 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx byly prováděny x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx x následující xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx eliminačních xxxxxxxxx xxxxxxxx (identifikované Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx xxx xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx prasata doplněné X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Xxxxx xxxxxxxxxx xxx prasata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
|
n |
50 |
55 |
50 |
|
střed [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [x/xx] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
x [x/xx] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
XXx [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [g/kg] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
R [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx studijní xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (třetí xxxxxxxx xxxxxxxxx) byla xxxxxxxxxx xxx, xx dva xxxxxx xxxx analyzovány xx ve 13 xxxxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Replikované (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Výsledky xxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: počet xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx zadržených xxxxxxxxxxxx odlehlých xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: reprodukovatelnost
CVr: koeficient xxxxxxx opakovatelnosti, %
CVR: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Xxxx xxxxxxx xx xxxxx |
Xxxxxx 5 Směs xxxxxxx xx sójou (= xxxxxx 4) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [x/xx] |
0,391 |
0,931 |
|
xx [g/kg] |
0,005 |
0,012 |
|
r [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
xX [g/kg] |
0,018 |
0,048 |
|
R [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Další xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx byla xxxxxxxxxx xxx, xx xxxxx vzorky byly xxxxxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx potvrzení tryptofanu xxx hydrolýzy. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: počet xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx eliminačních odlehlých xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: reprodukovatelnost
CVr: xxxxxxxxxx variace opakovatelnosti, %
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx (XXX 117) |
Xxxxxx 2 Nízko-tučná xxxx xxxxxx (XXX 118) |
Vzorek 3 Xxxxxx xxxxxx (XXX 119) |
Xxxxxx 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx mléko (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [g/kg] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
sr [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
sR [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [g/kg] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
CVR [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxxxxx specielní xxxxxxxxxxxxxxxx podmínky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx tryptofanem x α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx následované xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: |
125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 μx xxxx obdobné |
||
|
Teplota xxxxxx: |
32 °X |
||
|
Xxxxxxx fáze: |
A: 0,01 xxx/x KH2PO4/metanol, 95 + 5 (xxxxxxxx + xxxxxxxx) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
15 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % A |
40 % B |
|
|
21 min. |
100 % A |
0 % X |
|
|
33 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
Xxxxxx xxxx: |
1,2 xx/xxx. |
||
|
Xxxxxxx xxxx xxxx: |
xxxxxxxxx 33 xxxxx |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx xx bude xxxxxx xxxxx typu XXXX xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx standardem. Xxxxx xx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Hydrolyzáty xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx. Je důležité, xxx xxxx xxxx xxxx dostatečně dlouhá xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx chromatografie.
V xxxxxxx xxxxxxxx, by xxx xxxxxxxxxxxxxxxx systém xxx xxxxxxxx odezvu. Xxxxxxxx xxxxxx xx měla xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardu a xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx píků xxxxxxxxxx x vnitřního xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx rozsahu XXXX/xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xxx (xxxx) xxx xxxxxxxxxx, x/xxxx vnitřního standardu xx (xxxx) příliš xxxx (xxxx) xxxx xxxxxx xxxxxx (xxxxxx), xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Hydroxid xxxxxxx
Xxxxxx xx stává hydroxid xxxxxxx hůře xxxxxxxxx. Xx xx projevuje x xxxxxxx roztoku xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX, xxx xxxx x tryptofanu xxxxxxxxxx xxxxx výsledky.
[1] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Verband Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).
[2] Řízené xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).