Směrnice Komise 2000/45/ES
ze xxx 6. xxxxxxxx 2000,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxx X x xxxxxxxxxx v xxxxxxxx
(Xxxx x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX ze dne 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx vzorků x analýzy Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Finska x Xxxxxxx [2], x xxxxxxx na xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx:
(1) Směrnice 70/373/XXX xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx krmiv za xxxxxx zjištění, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx jakost x složení xxxxx, xxxx xxx prováděny xx xxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx xxx odběr xxxxxx a xxxxxxx.
(2) Xxxxxxxx Xxxx 70/524/XXX xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx látkách x xxxxxxxx [3], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx Komise (XX) x. 2439/1999 xx dne 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, xx obsah xxxxxxxx A x xxxxxxxx X musí xxx xxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx xxxxx přidány xx xxxxxxx x xxxxx.
(3) Xxxxxxxx Rady 79/373/XXX xx xxx 2. dubna 1979 x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxx [5], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 2000/16/XX [6], x xxxxxxxx Xxxx 93/74/XXX ze xxx 13. xxxx 1993 o xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx [7], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/XX [8], stanoví, xx aminokyseliny xxxx xxx uváděny xx xxxxxxxxx xxxxx.
(4) Musí xxx stanoveny xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxx xxxxx.
(5) Opatření xxxx směrnice xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské státy xxxxxxx, aby xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxx X x tryptofanu x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx.
Článek 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxx 2000. Neprodleně o xxxx uvědomí Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. září 2000.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx odkaz xx xxxx směrnici xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx učiněn při xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské státy.
Článek 3
Tato směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx dnem po xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
Článek 4
Xxxx xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 6. července 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Úř. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. xxxx. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Úř. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Xx. xxxx. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Xx. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Xx. věst. X 125, 23.5.1996, x. 35.
XXXXXXX
XXXX X STANOVENÍ XXXXXXXX X
1. Xxxx x xxxxxx použití
Tato xxxxxx xx určena xxx xxxxxxxxx vitamínu X (xxxxxxxx) x xxxxxxxx a premixech. Xxxxxxx A zahrnuje xxx-xxxxx-xxxxxxx xxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (IU) xx xx. Jedna XX xxxxxxxx xxxxxxxx 0,300 μx all-trans-vitamín X xxxxxxxx xxxx 0,344 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx xxxx 0,550 μx all-trans-vitamín X xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 2000 IU xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztokem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx A xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zbytek xx rozpustí v xxxxxxxx x, pokud xx xx xxxxx, xxxxx xx požadovanou xxxxxxxxxxx. Obsah xxxxxxxx X se xxxxxxx xxxxxxxx fází xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx parametry xxxx xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx varu 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 g/100 xx
3.5 Xxxxxx askorbanu sodného, β = 10 x/100 ml (viz 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Roztok xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 g/l (pro x = 9) (xxx 7.8 poznámky)
3.7 Xxxxxx fenolftaleinu, β = 2 g/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 2-xxxxxxxx
3.9 Xxxxxxx xxxx pro HPLC: xxxx metanolu (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx poměr bude xxxxxxxx charakteristikami použité xxxxxx.
3.10 Xxxxx, prostý xxxxxxx
3.11 All-trans-vitamín A xxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, např. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X acetátu: Xxxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,1 mg 50 mg acetátu xxxxxxxx X (3.11) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xx 2-propanolu (3.8) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 1400 XX xxxxxxxx X xx ml. Xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X palmitát, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 1,80 x 106 IU/g.
3.12.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X palmitátu: Odvažte x přesností na 0,1 mg 80 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (3.12) do 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx ve 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx značku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 1400 IU xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx obsah xxxx být xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x plochým dnem xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky, 500 ml, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Odměrné xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 a 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Hruškovité xxxxx, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx izolační xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x adaptérem xxx xxxxxxxx xxxxxxx plynu.
4.4 Xxxxxxxx filtrační xxxxx xxx oddělení xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 HY 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx vstřikovacím xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μm xxxx xxxxxxx (výkonnostní xxxxxxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx XXXX)
4.5.2 XX nebo xxxxxxxxxxxxx detektor x xxxxxxxxxxx nastavením xxxxxx xxxxx
4.6 Spektrofotometr x 10 xx křemennými xxxxxxxx
4.7 Xxxxx lázeň x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx přístroj (xxx xxxxxxx 1) sestávající xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x objemu 1x vybavený xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Nastavitelná xxxxxxx xxxx mít spodní xxxxx ve tvaru xxxxxxx X x xxxxxx xx opačném xxxxx xxx, xxx xxxxx xxx horní xxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx převedena xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X xx xxxxxxx xxxx (UV) xxxxxx x oxidaci. Xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx x nepřítomnosti xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx (vypláchněte xxxxxxx). Xxxxxx nad xxxxxxxxx musí být xxxxx extrakce xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Příprava xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx tak, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 mm, xxxxxxx xxxxxx, aby xxxxxxx k xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx bezprostředně před xxxxxxx a saponifikací, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Saponifikace
V xxxxxxxxxx xx xxxxxx vitamínu X, xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x xx 25 x xxxxxx xx 500 xx xxxxx s xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.13), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 ml roztoku xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x xxxxx a xxxxxxx baňku do xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx míchadlem (4.7). Xxxxxxxx x xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) a xxxxxxxx xxxxxxx dalších 25 xxxxx za xxxxxxx xxxxxxx pod pomalým xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přibližně 20 xx xxxx x xxxxx baňky xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx celkovým xxxxxxx 250 xx xxxx xx 1000 ml xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx postupně 25 ml xxxxxxx (3.1) a 100 xx petroléteru (3.2) x převeďte xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Podíl vody x etanolu x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx dvě xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx oddělily (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx další xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Opakujte xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) a dvakrát 50 ml petroléteru (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx extrakty x xxxxxx nálevce xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx zabránilo xxxxxx xxxxxx) x xxxxx xxxxxxxxxx třepáním x xxxxxxx 100 xx xxxxxxx vody, dokud xxxx nezůstává xxxxxxxx xx přídavku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx obyčejně xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx extrakt xxxx suchý skládaný xxxxx pro dělení xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx všechna xxxxxxxxxxxx xxxx do 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 ml xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx značku xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx extrakčního xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx se vrstvy xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), nahraďte xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx vložku (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx konec xx xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx xxx xxxxx xxx hladinou rozhraní. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx postranního xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx vrstvu xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Přidejte 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Nechejte xxxxxx xxxxxxx xx a xxxxxxxx vrchní xxxxxx xx xxxxxx nálevky xxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx extrakce xxxxxxx 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx dvakrát 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
Promyjte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, jak je xx xxxxxxx v 5.3.1, a xxxxxxxxxx xxx xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) do 250 xx baňky xx xxxxx hrušky (4.2.4). Odpařte rozpouštědlo xxxxx xx sucha xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx vodní xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx atmosférický xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.10) x odpojte xxxxx xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx objemu (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx vitamínu X xx xxxx být x rozsahu 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx koloně C18 (4.5.1) x koncentrace xx xxxxxx pomocí XX detektoru (325 xx) nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, xxxxx: 475 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx alikvotní xxxx (např. 20 μx) metanolového roztoku xxxxxxxxx v 5.4 x vymývejte mobilní xxxx (3.9). Vypočtěte xxxxxxx xxxxx píku (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxx xxxx doporučení; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx chromatografii (4.5.1): 250 mm x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 5 xxxx 10 μx xxxx ekvivalent
Mobilní xxxx (3.9):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; Xxxx xxxxxxxx (3.3) a xxxx, xxxx. 980 + 20 (objemově + xxxxxxxx)
Xxxxxx toku: 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): UV xxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 nm/emise: 475 xx)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx standardních pracovních xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X acetátu (3.11.1) xxxx 20 xx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx nebo Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1) a xxxxxxxxxxxx, jak xx xx xxxxxxx x 5.2, xxx xxx xxxxxxxx XXX. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx do 500 xx xxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx 100 xx xxxxxx extraktu xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx (xxx 5.4) téměř xx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx proudem xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx zbytek x 10,0 ml xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 560 XX xxxxxxxx X/1 ml. Xxxxxx obsah xx xxxxxxx podle 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx před xxxxxxxx.
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního roztoku xx 20 xx xxxxxxx baňky, xxxxxxx xx xxxxxx metanolem (3.3) x promíchejte. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 56 XX vitamínu X xx xx.
5.6.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0 x 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Nominální koncentrace xxxxxx roztoků jsou 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 IU xxxxxxxx X na xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx kalibračního xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx výšky xxxx (xxxxxx). Za xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX xxxxxxxx (5.6.3.3).
5.6.3 XX standardizace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.3.1 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx X acetátu
Pipetujte 2,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx (3.11.1) do 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx baňky x doplňte po xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Změřte XX spektrum xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-propanolu (3.8) ve xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx maximum xxxx xxx xxxx 325 nm x 327 nm.
Výpočet obsahu xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
E1%1cm pro xxxxxxx A xxxxxxx = 1&xxxx;530 xxx 326 nm xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx A palmitátu
Pipetujte 2,0 ml zásobního xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxxxx (3.12.1) do 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 IU xxxxxxxx X na xx. Pipetujte 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxxxx xx 25 xx odměrné xxxxx x doplňte po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx A xx ml. Změřte XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx spektrofotometru (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Extinkční maximum xxxx xxx mezi 325 nm a 327 nm.
Výpočet xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx pro xxxxxxx X xxxxxxx = 957 xxx 326 nm xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx A
Pipetujte 3,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xxxxxxxx X, připraveného xxxxx 5.6.1 do 50 ml odměrné xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx po značku 2-xxxxxxxxxx (3.8). Pipetujte 5,0 ml tohoto xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x doplňte po xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx A xx ml. Změřte XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx 2-propanolu (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 xx a 327 xx.
Xxxxxxx obsahu xxxxxxxx X:
XX vitamínu X/xx = X325 × 18,3
X1%1xx xxx xxxxxxx X alkohol = 1&xxxx;821 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
6. Xxxxxxx výsledků
Ze xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx koncentraci xxxxxxx xxxxxx x XX/xx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2).
Xxxxx xxxxxxxx A x x XX/xx xx xxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · V2 · 1 000 / X1 · m (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxx xxxxxx (5.4) v IU/ml
V1 = objem xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = objem xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 x ml
m = xxxxx zkušební xxxxx x g
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x xxxxxx koncentrací xxxxxxxx A může xxx užitečné xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxxxx vsázek (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 g) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro stanovení xxxxxx HPLC.
7.2 Množství xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxx analýzu xx xxxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Pokud xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx etanolu (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 X xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx měla xxx xxxx saponifikace xxxxxxxxxxx xx 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx být xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxx x xxxxxxxx normální xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx přibližně 150 xx kyseliny xxxxxxxxx.
7.8 Namísto xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 15 % z xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
L: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: standardní xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro xxxxxx |
|
|
X |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
x |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
xxxxx [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [IU/kg] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [XX/xx] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [IU/kg] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
X [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
CVR [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXX X
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx je xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X v xxxxxxxx a premixech. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxxx xxxx xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. 1 xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xxxxxxxx 0,91 xx XX-α-xxxxxxxxxx (xxxxxxx E).
Mez xxxxxxxxxxxxxxx je 2 xx vitamínu E/kg.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zbytek xx xxxxxxxx x xxxxxxxx x, pokud xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxx reverzní xxxx xxxxxx účinné xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx použití XX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Etanol, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx draselného, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx askorbanu xxxxxxx, β = 10 x/100 ml (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Na2S. x H2O (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, c = 0,5 mol/l x glycerolu, β = 120 g/l (xxx x = 9) (viz 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 ml x xxxxxxx (3.1)
3.8 Xxxxxxx xxxx pro XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově). Xxxxxxxxx xxxxx bude xxxxxxxx charakteristikami xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.10 XX-α-xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.10.1 Xxxxxxx xxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu: Xxxxxxx x xxxxxxxxx na 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10) xx 100 xx odměrné xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) x doplňte xx značku stejným xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx. (UV kontrola – viz 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.11 XX-α-xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.11.1 Odvažte s xxxxxxxxx na 0,1 xx, 100 mg XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte x xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem. 1 xx tohoto xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (UV kontrola – xxx 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – viz 7.4 xxxxxxxx).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Rotační vakuová xxxxxxx
4.2 Nádobí x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 ml, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx zábrusovými xxxxxxx, úzkohrdlé, 10, 25, 100 x 500 ml
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx zábrusovými xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx baňky, 250 ml, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx zábrusovým hrdlem, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx plynu
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papír xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 mm (xxxx. Schleicher & Xxxxxxx 597 HY 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 nebo 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.5.2 UV xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlnové xxxxx
4.6 Spektrofotometr x 10 mm křemennými xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx míchadlem
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1x vybavený xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx ramenem a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx spodní xxxxx xx xxxxx xxxxxxx U a xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, aby xxxxx být xxxxx xxxxxx kapaliny xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X xx xxxxxxx xxxx (UV) světlu x xxxxxxx. Všechny xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx v nepřítomnosti xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx hliníkovou xxxxx) x xxxxxxx (vypláchněte xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (vyhněte se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx tak, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx dbejte, aby xxxxxxx k zahřátí. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx vitamínu X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxx X xxxxxxx x přesností xx 0,01 x, 2 x až 25 x xxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx etanolu (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.12), 2 ml xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x baňce x ponořte baňku xx vodní xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Zahřejte x xxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxx minut. Xxxxx přidejte 25 xx roztoku hydroxidu xxxxxxxxxx (3.4) přes xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx proudem xxxxxx. Xxxxx vypláchněte xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx vypláchnutím xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx do 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx baňku xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx nebo xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx a xxxxxxx x kombinovaných xxxxxxxxx xx měl xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx minuty x xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Extrakce x xxxxxxxx dělící xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx se xxxxxx oddělily (viz xxxxxxxx 7.3), převeďte xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx tuto xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Promyjte xxxxxxxxxxx extrakty x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx se xxxxxxxxx tvorbě emulzí) x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx 100 xx dávkami xxxx, dokud xxxx xxxxxxxxx bezbarvá za xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx dostačující). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx přes xxxxx xxxxxxxx filtr xxx xxxxxx xxxx (4.4), xxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx xxxxxxx baňky (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8)
Xxxx xx vrstvy xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx zátku xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) za xxxxxxxxxx vložku (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tak, xxx xxx xxxxx nad xxxxxxxx rozhraní. Za xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, zazátkujte x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx vrstvu xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Opakujte xxxxxx xxxxxxxx dalšími 100 xx petroléteru (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
Promyjte kombinované xxxxxxxx xxxxxxxxxxx tak, xxx je xx xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx jak xx tam popsáno.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx roztoku petroléteru (x 5.3.1 nebo 5.3.2) xx 250 xx xxxxx ve xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx téměř xx sucha xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx xxx teplotě xxxxx lázně nepřekračující 40 °C. Obnovte xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx odparky. Xxxxxxxxx zbývající rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.9) x ihned xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx by xxxx xxx x rozsahu 5 μg/ml xx 30 μx/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx na xxxxxxxx fázové koloně X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxx fluorescenčního detektoru (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 xx) xxxx XX xxxxxxxxx (292 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μx) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxx výšky xxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx roztoku xxxxxxxx xxxxxx x střední xxxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx: 1–2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx/xxxxx: 330 xx) xxxx XX xxxxxxxx (292 xx)
5.6 Kalibrace (XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx DL-α-tokoferolu)
5.6.1 Xxxxxxxx DL-α-tokoferol xxxxxxx
5.6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 25 xx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, jak xx xx xxxxxxx x 5.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx 25 xx xxxxxx extraktu xx rotační vakuové xxxxxxx (viz 5.4) xxxxx do xxxxx, xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x znovu xxxxxxxxx xxxxxx x 25,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 45,5 μx XX-α-xxxxxxxxxx na xx, xxxxxxxxxx 50 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx xxxx použitím.
5.6.1.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx značku metanolem (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,5, 5,0, 10,0 x 25,0 μg/ml XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx, tj. 2,28, 4,55, 9,10 a 22,8 μg/ml XX-α-xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx píků (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (ploch) xxxxxxxxx kalibrační xxxx.
5.6.1.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) na 25,0 xx etanolem x xxxxxx UV xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx etanolu (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 nm.
Absorpční xxxxxxx by xxxx xxx při 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284nm x xxxxxxx
Xxx tomto ředění xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Standard XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Příprava standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 2,0 xx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxx (3.3) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 40 μg XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, xxxxxxxxxx 44,0 μg XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx na xx. Xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx kalibračního xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx sérií 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x promíchejte. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxx xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx, xx. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μg/ml XX-α-xxxxxxxxx acetátu.
Vstříkněte několikrát 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx střední xxxxx xxxx (plochy). Xx xxxxxxx středních xxxxx xxxx (ploch) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2.3 UV xxxxxxxxxxxxx zásobního roztoku XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Xxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 25,0 xx xxxxxxxx x změřte XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx by xxxx být xxx 292 xx:
X1%1xx = 75,8 při 292xx x etanolu
Při xxxxx xxxxxx by xxxx xxx získána xxxxxxxx 0,6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxx pro xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx E xxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxx x μx/xx (xxxxxxxx xxxx α-xxxxxxxxx xxxxxx) xx vztahu xx kalibračnímu grafu (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx X x x mg/kg ve xxxxxx xx dán xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · V2 / X1 · x [xx/xx]
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu X x xxxxxxx xxxxxx (5.4) x μx/xx
X1 = objem xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = objem xxxxxxx odebraných x 5.4 v xx
x = xxxxx zkušební xxxxx x g
7. Xxxxxxxx
7.1 U xxxxxx x nízkou koncentrací xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx petroléteru dvou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Xxxxxxxx xxxx ve vzorku xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2g.
7.3 Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx dělení, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx měření xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu nebo XX-α-xxxxxxxxxx podle 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 xxxxxxxx xx roztoku (3.10.1 xxxx 3.10.2) xxxxxxxxx 10 xx XXX (3.12) a xxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxx skladovatelnosti xx čtyři týdny).
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx je xxxxx x použitím normální xxxxxx kolony.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx může xxx použito xxxxxxxxx 50 xx EDTA.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 15 % z xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx spolupráce [2]
X: xxxxx laboratoří
n: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: standardní xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx krmivo |
Minerální koncentrát |
Bílkovinný xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx xxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
x |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
xxxxx [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
xx [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [xx/xx] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx použití
Tato metoda xx xxxxxx pro xxxxxxxxx celkového x xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxx. Nerozlišuje xxxx X- x X- xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx hydrolyzován xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx při 110 °X xx 20 xxxxx. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxx kyselých podmínek x přítomnosti xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx jsou stanoveny x hydrolyzátu xxxx xxxxxxxx pomocí XXXX x xxxxxxxxxxxxx detekcí.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxx destilovaná xxxx, nebo xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx &xx; 10 μS/cm)
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxx: tryptofan (xxxxxxx/xxxxx > 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx: α-methyl-tryptofan (čistota/obsah &xx; 99 %), xxxxxx pod xxxxxx xxxx pentoxid xxxxxxx
3.4 Xxxx-xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxx být xxxxx, xxx xxxxx Xx(XX)2. 8 X2X xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxx XxXX3, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx) (xxx xxxxxxxx 9.3)
3.5 Xxxxxxxx sodný
3.6 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, p20 = 1,19 g/ml
3.8 Metanol, XXXX xxxxxx
3.9 Petroléter, xxxxxx xxxx 40–60 °X
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxxxx 40,0 x NaOH (3.5) xx xxxx x xxxxxxx xx 1 x vodou (3.1).
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x:
Xxxxxxx 492 ml HCL (3.7) a xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 xx XXX (3.7) a xxxxxxx do 1 x xxxxx.
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 mol/l:
Vezměte 8,2 xx XXX (3.7) x xxxxxxx do 1 x vodou.
3.14 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 mol/l:
Vezměte 34 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx (3.2), x = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2553 x tryptofanu (3.2) x 500 xx xxxxxxx baňce v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Skladujte xxx –18 xX xx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.16 Koncentrovaný xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2728 g α-xxxxxx-xxxxxxxxxx (3.3) x 500 xx xxxxxxx xxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Skladujte xxx –18 oC xx xxxx xxxxxxxxx xxxx týdnů.
3.17 Kalibrační xxxxxxxxxx roztok tryptofanu x xxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxxx 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15), x 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-methyl-tryptofan) (3.16). Xxxxxx vodou (3.1) x metanolem (3.8) xx přibližně xxxxxx xxxxx a xx xxxxxxxxx xxxxxxx koncentraci xxxxxxxx (10–30 %) xxxx xxxxxxx hydrolyzát.
Tento xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxx přípravy xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx octová
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Xxxxxxxxxxx &xx; 98 %
3.21 Xxxxxx 1 x 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanolu (3.19) ve 100 xx xxxxxxxx (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx pro XXXX: 3,00 g xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 ml xxxx (3.1) + 50,0 ml roztoku (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1x/100 xx). Upravte xX na 5 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Doplňte xx 1000 xx xxxxx (3.1).
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx XXXX se spektrofluorimetrickým xxxxxxxxxx
4.2 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 125 xx x 4 xx, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 3 μx nebo xxxxxxxxxx
4.3 xX xxxx
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx 125 xx, se xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxx, 0,45 μx
4.6 Autokláv, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) baru
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.8 Xxxxxx mixer
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx
Xxxxxx xx rozmělněn tak, xxx xxxxxx sítem x otvory 0,5 xx. Xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx vlhkost, xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx usušeny xxx xxxxxxxx xxx teplotě xxxxxxxxxxxxx 50 °X, xxxx xxxxxxxxx. Vzorky x vysokým xxxxxxx xxxx xxxx být xxxx mletím xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx příslušné xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx Erlenmeyerovy xxxxx. Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 xxx/x (3.13) x 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx xxxx mixujte 60 xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx třepačky, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, c = 0,5 xxx/x (3.14). Upravte pH xx 3,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného, x = 1,0 xxx/x (3.10). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (3.8), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % metanolu x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x vhodném xxxxxx x xxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Před vstříknutím xx kolony XXXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx ml xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Xxxxxxx standardní xxxxxx x extrakty xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx. Pokud xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx den, mohou xxx skladovány xxx 5 °X xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,2 xx od 0,1 xx 1 g xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.4). Xxxxxxxx dávka xxxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx 10 mg. Xxxxxxxx 8,4 g xxxx-xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.4) x 10 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (4.8) xxxx magnetickém xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx potažený xxxxxx xx xxxxx. Opláchněte xxxxx nádoby 4 xx vody. Našroubujte xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Přeneste xx xxxxxxxxx (4.6) x xxxxxx xxxxx x xxxxx xx 30–60 minut. Uzavřete xxxxxxxx x autoklávujte xxx 110 (+ 2) °X po xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx autoklávu snižte xxxxxxx právě pod 100 °X. Xxx xxxxxxx ke xxxxxxxxxxxx Xx(XX)2. 8 X2X, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx 30 xx xxxx x pokojové xxxxxxx. Mírně xxxxxxxxxxxxx, xxxx míchejte. Xxxxxxxx 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxxxx xxxxxx ve xxxxx/xxxxxx xxxxx xx xxxx 15 xxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx 5 xx xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, c = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx nádobu ve xxxxxxxx lázni x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx x upravte xX na 3,0 x xxxxxxxx XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Přidejte xxxxxxxxx metanolu, abyste xxxxxxxx koncentraci xxxx 10 x 30 % xxxxxxxx v xxxxxxxx objemu. Xxxxxxxx xx odměrné xxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx vodou xx definovaný xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxxxx do xxxxxx XXXX přefiltrujte xxxxxxx xx roztoku xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,45 μx (4.5). Pokračujte x xxxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 5.4.
Xxxxxxx standardní xxxxxx a hydrolyzáty xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx analyzovat xxxxxxxxxxx xxxxxx den, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °C xx xxxxxxxxx xxxx tří xxx.
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx podmínky pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (viz xxxx poznámky 9.1 x 9.2):
Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 mm x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 3 μm xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx kolony Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.22): 3,00 x xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx vody (3.1) + 50,0 xx roztoku (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 ml). Xxxxxxx xX xx 5,00 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx do 1000 xx xxxxx (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx doba xxxx: xxxxxxxxx 34 xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx xxxxx: xxxxxxxx: 280 nm, xxxxx: 356 xx
Xxxxxxxxx objem: 20 μx
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X × X × X × X × X × XX / X × G × H × 10&xxxx;000 × X = g xxxxxxxxxx xx 100x xxxxxx
X = xxxxxx píku xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxx standardu (3.17)
X = plocha xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
C = xxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxxxx tryptofanu (3.15) (2 ml) xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx (3.15) v μxxxxxx/xx (= 2,50) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) xxxx xx hydrolyzátu (5.3) (= 2,00 ml)
F = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) nebo xxxxxxxxxxx (5.3)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.17)
X = objem xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardního roztoku (3.16) x ml (= 2,00) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxx xxxxxx x x (opravená na xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx x/xxxx xxxxxxxx)
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (= 204,23)
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
8. Xxxxxxxx studijní xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx spolupráce Xxxxxxxxxxxx (xxxxxx vzájemné xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx xxxx tři xxxxxx analyzovány ve 12 laboratořích k xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx xxxx prováděny x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x následující tabulce:
L: xxxxx laboratoří předkládajících xxxxxxxx
x: xxxxx jednotlivých xxxxxx zadržených eliminačních xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx testem)
sr: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient variace xxxxxxxxxxxxxxx, %
CVR: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx pro xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx prasata xxxxxxxx X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Krmný xxxxxxxxxx xxx prasata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
|
n |
50 |
55 |
50 |
|
střed [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [x/xx] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
x [x/xx] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
XXx [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [x/xx] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
X [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (třetí vzájemné xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx dva xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xx 13 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx pro extrakci xxxxxxx tryptofanu. Replikované (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx laboratoří xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledků (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: reprodukovatelnost
CVr: koeficient xxxxxxx opakovatelnosti, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Směs xxxxxxx se xxxxx |
Xxxxxx 5 Xxxx pšenice xx xxxxx (= xxxxxx 4) x xxxxxxxx tryptofanem (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [g/kg] |
0,391 |
0,931 |
|
sr [g/kg] |
0,005 |
0,012 |
|
r [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
xX [g/kg] |
0,018 |
0,048 |
|
R [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx byla xxxxxxxxxx xxx, xx xxxxx xxxxxx byly xxxxxxxxxxx až x xxxxx xxxxxxxxxxxx s xxxxx potvrzení tryptofanu xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx uvedeny x xxxxxxxxxxx tabulce:
L: počet xxxxxxxxxx předkládajících výsledky
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot xxxxxxxxxx eliminačních xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Cochran-Dixonovým xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: reprodukovatelnost
CVr: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx (XXX 117) |
Xxxxxx 2 Nízko-tučná xxxx xxxxxx (XXX 118) |
Xxxxxx 3 Sójová moučka (XXX 119) |
Vzorek 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
sR [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [x/xx] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
XXX [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx podmínky xxxxx xxxxxxxxxx lepší rozdělení xxxx xxxxxxxxxxx x α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vymývání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistěním xxxxxx:
|
Xxxxxx xxx kapalinovou chromatografii: |
125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 5 μx xxxx xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxx xxxxxx: |
32 °X |
||
|
Xxxxxxx fáze: |
A: 0,01 xxx/x KH2PO4/metanol, 95 + 5 (xxxxxxxx + objemově) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx program: |
0 xxx. |
100 % X |
0 % B |
|
15 min. |
100 % A |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
21 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
33 min. |
100 % X |
0 % B |
|
|
Úroveň xxxx: |
1,2 xx/xxx. |
||
|
Xxxxxxx xxxx xxxx: |
xxxxxxxxx 33 minut |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx se bude xxxxxx xxxxx typu XXXX xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx materiálu. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx produkty xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx čára xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx dlouhá xxx vymytí všech xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx píky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx chromatografie.
V xxxxxxx xxxxxxxx, xx měl xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx. Lineární xxxxxx xx xxxx xxx měřena s xxxxxxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx koncentracemi xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx byly x xxxxxxxxx xxxxxxx XXXX/xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxx (xxxx) buď xxxxxxxxxx, x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx (xxxx) xxxxxx xxxx (xxxx) nebo xxxxxx xxxxxx (xxxxxx), xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx jiné xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxx konečným xxxxxxx.
9.3 Hydroxid xxxxxxx
Xxxxxx xx stává hydroxid xxxxxxx xxxx rozpustný. Xx se xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx pomocí XXXX, což může x xxxxxxxxxx způsobovat xxxxx xxxxxxxx.
[1] Řízené xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx Xxxxxxx Deutscher Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- und Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).
[2] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- und Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (VDLUFA).