Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/45/XX
xx xxx 6. července 2000,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxxxxx vitamínu X, vitamínu E x xxxxxxxxxx v xxxxxxxx
(Xxxx x významem xxx XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Rady 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx zavádí xxxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxx Společenství xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxx Rakouska, Xxxxxx x Švédska [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k tomu, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx za xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx požadavky xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x složení xxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx odběr xxxxxx x analýzy.
(2) Xxxxxxxx Xxxx 70/524/EHS xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx látkách x xxxxxxxx [3], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx (XX) x. 2439/1999 xx dne 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx A x xxxxxxxx X xxxx xxx uváděn xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx látky xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx.
(3) Xxxxxxxx Xxxx 79/373/XXX xx xxx 2. dubna 1979 x xxxxxxx krmných xxxxx xx xxx [5], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 2000/16/XX [6], x xxxxxxxx Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. září 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx výživy [7], xxxxxxxxx xxxxxxxxx směrnicí 96/25/XX [8], stanoví, xx aminokyseliny xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx.
(4) Xxxx xxx stanoveny xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx.
(5) Xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xxx xx xxxxxx kontroly xxxxxx xxxxxxxx A, vitamínu X a tryptofanu x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské státy xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 31. xxxxx 2000. Neprodleně x xxxx uvědomí Komisi.
Budou xxxx předpisy xxxxxxxx xx 1. xxxx 2000.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxx xxxxxxx vyhlášení. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských společenství.
Článek 4
Tato xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 6. xxxxxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxx
xxxx Komise
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Úř. věst. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. věst. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Xx. věst. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Xx. věst. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Úř. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Xx. věst. X 125, 23.5.1996, x. 35.
XXXXXXX
XXXX A XXXXXXXXX XXXXXXXX A
1. Účel x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx je určena xxx stanovení xxxxxxxx X (xxxxxxxx) v xxxxxxxx x premixech. Xxxxxxx X xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx alkohol x xxxx cis xxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx xxxxx metodou. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (XX) xx xx. Jedna IU xxxxxxxx aktivitě 0,300 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx xxxx 0,344 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxx xxxx 0,550 μx all-trans-vitamín X xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 2000 XX xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztokem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx A je xxxxxxxxxx xx petroléteru. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxx a, pokud xx xx xxxxx, xxxxx na požadovanou xxxxxxxxxxx. Obsah xxxxxxxx X xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx all-trans-vitamín X xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °C
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 g/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 mol/l x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (pro x = 9) (xxx 7.8 poznámky)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 g/100 xx v xxxxxxx (3.1)
3.8 2-xxxxxxxx
3.9 Mobilní xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx charakteristikami xxxxxxx xxxxxx.
3.10 Dusík, xxxxxx xxxxxxx
3.11 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxx, xxxxx čistý, xxxxxxx aktivity, xxxx. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx roztok xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx 50 xx acetátu xxxxxxxx A (3.11) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem. Xxxxxxxxx koncentrace tohoto xxxxxxx xx 1400 XX xxxxxxxx A xx ml. Xxxxxx xxxxx musí být xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 1,80 x 106 XX/x.
3.12.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxxx: Odvažte x přesností xx 0,1 mg 80 xx palmitátu vitamínu X (3.12) do 100 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx ve 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 1400 XX xxxxxxxx X xx xx. Přesný xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Nádobí x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Baňky x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 ml, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Odměrné xxxxx xx zábrusovými xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 ml
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, kuželovité, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Allihnův xxxxxxxxxxx, délka izolační xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx trubici xxxxx.
4.4 Xxxxxxxx filtrační xxxxx xxx oddělení xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 HY 1/2)
4.5 HPLC výbava xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx nebo xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx XXXX)
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor s xxxxxxxxxxx nastavením xxxxxx xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 mm křemennými xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx míchadlem
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx ramenem x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Nastavitelná xxxxxxx xxxx mít xxxxxx xxxxx ve tvaru xxxxxxx U x xxxxxx xx opačném xxxxx xxx, xxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Všechny xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx v nepřítomnosti xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx x opakního xxxx, nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx (vypláchněte xxxxxxx). Xxxxxx nad xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx se xxxxxxxx občasným xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx tak, aby xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 mm, xxxxxxx dbejte, xxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxx a saponifikací, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x xx 25 g xxxxxx do 500 xx baňky x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.13), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x baňce x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx x varu x xxxxxxxx xxxxxxx xxx minut. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx hydroxidu draselného (3.4) xxxx kondenzátor (4.3) a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx pomalým xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx kvantitativně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx postupně 25 xx etanolu (3.1) a 100 xx petroléteru (3.2) x xxxxxxxx výplachy xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx vody x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx dvě xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx další xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2) x xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx (aby xx zabránilo xxxxxx xxxxxx) x potom xxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx 100 xx xxxxxxx vody, xxxxx xxxx xxxxxxxxx bezbarvá xx přídavku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (čtyřnásobné xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), xxx xx odstranila všechna xxxxxxxxxxxx voda xx 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Vypláchněte xxxxxx nálevku x xxxxx 50 ml xxxxxxxxxxx (3.2), doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Extrakce za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), nahraďte xxxxx xxxxxxxxxx válce (4.8.1) xx zábrusovou xxxxxx (4.8.2) x nasměrujte xxxxx konec ve xxxxx xxxxxxx U xxxxxxxxxxxx trubice xxx, xxx byl právě xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx x rozvodu xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Přidejte 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx skleněného válce, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Nechejte xxxxxx xxxxxxx xx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx předtím. Opakujte xxxxxx extrakce xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), potom xxxxxxx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx vrstvy xxxxxxxxxxx xx dělící nálevky.
Promyjte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, jak xx xx popsáno x 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx je xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx roztoku xxxxxxxxxxx (z 5.3.1 xxxx 5.3.2) do 250 ml xxxxx xx tvaru xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx rozpouštědlo xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx. Odstraňte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx proudem xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx zbytek xx xxxxxx objemu (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx vitamínu X xx xxxx být x xxxxxxx 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xx reverzní xxxxxx xxxxxx C18 (4.5.1) a xxxxxxxxxxx xx xxxxxx pomocí XX xxxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, xxxxx: 475 xx) (4.5.2).
Vstříkněte xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μx) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 x vymývejte xxxxxxx xxxx (3.9). Xxxxxxxxx xxxxxxx výšku xxxx (xxxxxx) xxxxxxxx vstřiků xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx xxxxxxxxxxx xxxx doporučení; xxxxxxx podmínky xxxxx xxx xxxxxxx za xxxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx chromatografii (4.5.1): 250 xx x 4 xx, C18, xxxxxxxx částic náplně 5 nebo 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.9): Směs xxxxxxxx (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; XX xxxxxxxx (325 xx) xxxx fluorescenční detektor (xxxxxxxx: 325 nm/emise: 475 nm)
5.6 Kalibrace
5.6.1 Xxxxxxxx standardních xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 xx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxx X acetátu (3.11.1) xxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 500 xx xxxxx x plochým xxxx xxxx Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx je xx popsáno x 5.2, xxx xxx xxxxxxxx XXX. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx 100 xx xxxxxx extraktu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx sucha, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) a xxxxx xxxxxxxxx zbytek x 10,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 560 XX xxxxxxxx X/1 ml. Xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx použitím.
Pipetujte 2,0 ml xxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx 20 ml xxxxxxx baňky, xxxxxxx xx xxxxxx metanolem (3.3) x promíchejte. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx.
5.6.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků x xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 5,0 x 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx xxxxx 20 xx odměrných xxxxx, xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoků xxxx 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 XX xxxxxxxx X xx xx.
Xxxxxxxxxx několikrát 20 μx xxxxxxx kalibračního xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx výšky xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx odpovídající xxxxxxxxx XX kontroly (5.6.3.3).
5.6.3 XX xxxxxxxxxxxxx standardních xxxxxxx
5.6.3.1 Xxxxxxx roztok xxxxxxx X acetátu
Pipetujte 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx (3.11.1) do 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx. Pipetujte 3,0 xx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxx xx 25 xx odměrné baňky x doplňte xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX vitamínu A xx ml. Změřte XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx proti 2-xxxxxxxxx (3.8) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx a 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 nm a 327 nm.
Výpočet obsahu xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = E326 × 19,0
X1%1xx xxx xxxxxxx X alkohol = 1&xxxx;530 při 326 xx ve 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X na xx. Pipetujte 3,0 xx xxxxxx zředěného xxxxxxx vitamín A xxxxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx spektrofotometru (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx maximum xxxx xxx xxxx 325 nm a 327 nm.
Výpočet obsahu xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx pro xxxxxxx X alkohol = 957 při 326 xx ve 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx X
Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx A, připraveného xxxxx 5.6.1 do 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx po značku 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxx xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x doplňte xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Změřte XX spektrum xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) ve spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 nm x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X325 × 18,3
X1%1xx xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 1&xxxx;821 při 326 xx ve 2-xxxxxxxxx
6. Xxxxxxx výsledků
Ze xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx A xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx v XX/xx xx vztahu ke xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2).
Obsah xxxxxxxx X x x IU/kg xx xxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 · 1 000 / X1 · m (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu X x xxxxxxx xxxxxx (5.4) x XX/xx
X1 = xxxxx roztoku xxxxxx (5.4) x xx
X2 = objem xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 v ml
m = xxxxx xxxxxxxx xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (hmotnostní xxxxxxx: 25 x) xx jednoho xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Xxxxxxxx xxxx xx vzorku xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx fázové xxxxxx, xxxxxxxx přibližně 10 xx xxxxxxx (3.1), x rozrušení xxxxxx.
7.4 X rybího xxxx x ostatních xxxxxxx xxxx xx xxxx xxx doba saponifikace xxxxxxxxxxx xx 45–60 xxxxx.
7.5 Namísto BHT xxxx být použit xxxxxxxxxxx.
7.6 Oddělení xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxx x použitím normální xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx přibližně 150 mg kyseliny xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx roztoku xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 mg XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx u stejného xxxxxx nesmí překročit 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
L: xxxxx laboratoří
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot
sr: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx xxxxxx |
|
|
X |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
x |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
xxxxx [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [XX/xx] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [XX/xx] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [XX/xx] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
X [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXX E
1. Xxxx a oblast xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx E xx vyjádřen xxxx xx DL-α-tokoferol xxxxxxx xx kg. 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,91 mg XX-α-xxxxxxxxxx (xxxxxxx X).
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxxxx E/kg.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztokem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Rozpouštědlo xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxx x, xxxxx xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxx koncentraci. Xxxxx xxxxxxxx X xx stanoví xxxxxxxx xxxx vysoce účinné xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx detekce.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, rozsah varu 40 xx 60 °X
3.3 Metanol
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx draselného, β = 50 g/100 xx
3.5 Roztok askorbanu xxxxxxx, β = 10 x/100 ml (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, c = 0,5 mol/l x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Roztok fenolftaleinu, β = 2 x/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 Xxxxxxx xxxx pro XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx bude xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Dusík, xxxxxx xxxxxxx
3.10 XX-α-xxxxxxxxx acetát, xxxxx xxxxx, ověřené xxxxxxxx
3.10.1 Xxxxxxx roztok XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu (3.10) do 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) a xxxxxxx xx značku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx roztoku xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx. (XX xxxxxxxx – viz 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 poznámky).
3.11 DL-α-tokoferol, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx
3.11.1 Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) a xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem. 1 xx xxxxxx roztoku xxxxxxxx 1 mg XX-α-xxxxxxxxxx. (XX xxxxxxxx – xxx 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.12 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx z xxxxxxxx skla
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Odměrné xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, délka izolační xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 mm (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 HY 1/2)
4.5 XXXX výbava xx vstřikovacím xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx pro kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 mm, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.5.2 UV xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 mm xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Vodní xxxxx x magnetickým xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 1) sestávající xx:
4.8.1 Skleněný odměrný xxxxx x objemu 1x xxxxxxxx zábrusovým xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx mít xxxxxx xxxxx xx tvaru xxxxxxx U x xxxxxx na xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Všechny xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (za použití xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fólií) x kyslíku (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Vzduch nad xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx občasným xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, xxx xxxxxx sítem x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx dbejte, xxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxx x přesností xx 0,01 g, 2 x xx 25 x xxxxxx xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Erlenmeyerovy baňky (4.2.1). Přidejte xxxxxxxx xx xxxxxxx kroužení 130 xx etanolu (3.1), přibližně 100 xx XXX (3.12), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x xxxxx x ponořte xxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Zahřejte x xxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx (3.4) přes xxxxxxxxxxx (4.3) a xxxxxxxx xxxxxxx dalších 25 xxxxx xx xxxxxxx míchání pod xxxxxxx xxxxxxx dusíku. Xxxxx xxxxxxxxxxx kondenzátor xxxxxxxxx 20 xx xxxx x xxxxx xxxxx ochlaďte xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxx (3.1) x 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx do xxxxxxxxxxx přístroje. Podíl xxxx x xxxxxxx x kombinovaných roztocích xx xxx xxx xxxxx 2:1. Třepejte xxxxx dvě xxxxxx x xxxxxxxx ustát xxx xxxxxx.
5.3.1 Extrakce x použitím xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx dělící xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x dvakrát 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Promyjte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx) x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x dalšími 100 xx xxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx bezbarvá xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx obyčejně xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx přes xxxxx xxxxxxxx filtr xxx xxxxxx xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx všechna suspendovaná xxxx xx 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Vypláchněte xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx po xxxxxx petroléterem (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx vrstvy xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx zátku xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x nasměrujte xxxxx xxxxx ve xxxxx xxxxxxx U nastavitelné xxxxxxx tak, xxx xxx xxxxx nad xxxxxxxx xxxxxxxx. Za xxxxxx tlaku z xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx petroléteru xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) do xxxxxxxxxx válce, xxxxxxxxxx x xxxxx protřepejte. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Opakujte postup xxxxxxxx dalšími 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x přidejte xxxxxx petroléteru xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxx xx xx xxxxxxx x 5.3.1, x pokračujte jak xx tam xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx roztoku xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx roztoku xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx baňky xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx sucha xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) xx sníženého xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Obnovte xxxxxxxxxxxx tlak připuštěním xxxxxx (3.9) a xxxxxxx xxxxx od xxxxxxx vakuové xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx rozpusťte xxxxxx ve xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx by měla xxx v xxxxxxx 5 μx/xx až 30 μx/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx koloně X18 (4.5.1) a xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 nm) xxxx XX detektoru (292 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (např. 20 μx) metanolového xxxxxxx získaného x 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx fází (3.8). Xxxxxxxxx střední xxxxx xxxx (plochy) několika xxxxxxx xxxxxxx stejného xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; ostatní xxxxxxxx xxxxx být xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx shodné výsledky.
Kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.5.1): 250 xx x 4 mm, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx fáze (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově)
Úroveň xxxx: 1–2 ml/min.
Detektor (4.5.2): Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx/xxxxx: 330 xx) xxxx XX detektor (292 xx)
5.6 Xxxxxxxxx (XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX-α-xxxxxxxxxx)
5.6.1 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.1.1 Xxxxxxxx standardních xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 25 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx xx xx popsáno x 5.2. Následně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x doplňte xx 500 ml xxxxxxxxxxxx. Odpařte 25 xx xxxxxx extraktu xx rotační xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx do sucha, xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x znovu xxxxxxxxx xxxxxx v 25,0 xx netanolu (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 45,5 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, xxxxxxxxxx 50 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx použitím.
5.6.1.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx značku xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx jsou 2,5, 5,0, 10,0 a 25,0 μx/xx DL-α-tokoferol xxxxxxx, xx. 2,28, 4,55, 9,10 x 22,8 μg/ml DL-α-tokoferolu.
Vstříkněte xxxxxxxxxx 20 μl xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx píků (xxxxxx). Xx xxxxxxx středních xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx graf.
5.6.1.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10.1) na 25,0 ml xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx etanolu (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 nm.
Absorpční xxxxxxx by xxxx xxx xxx 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284nm x xxxxxxx
Xxx xxxxx ředění xx měla xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferolu (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx baňky, xxxxxxxxx x xxxxxxxx (3.3) x xxxxxxx xx xxxxxx metanolem. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 40 μx XX-α-xxxxxxxxxx na ml, xxxxxxxxxx 44,0 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx na xx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx připraven před xxxxxxxx.
5.6.2.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx metanolem (3.3) x promíchejte. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxx xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx DL-α-tokoferolu, tj. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μg/ml XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx střední xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx středních xxxxx xxxx (ploch) narýsujte xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2.3 UV xxxxxxxxxxxxx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Xxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 25,0 xx etanolem x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx. Xxxxxxxxx maximum by xxxx xxx xxx 292 xx:
X1%1xx = 75,8 při 292nm x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx koncentraci xxxxxxx xxxxxx x μx/xx (xxxxxxxx xxxx α-xxxxxxxxx xxxxxx) ve xxxxxx xx kalibračnímu grafu (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx X w x mg/kg xx xxxxxx xx dán xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 / X1 · x [xx/xx]
xx které:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxx xxxxxx (5.4) x μx/xx
X1 = objem xxxxxxx xxxxxx (5.4) v xx
X2 = xxxxx xxxxxxx odebraných x 5.4 x ml
m = xxxxx xxxxxxxx xxxxx v x
7. Xxxxxxxx
7.1 U xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx E může xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 g) xx jednoho xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Množství xxxx xx vzorku xxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Po xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX-α-xxxxxxxxxx podle 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 xxxxxxxx xx xxxxxxx (3.10.1 xxxx 3.10.2) xxxxxxxxx 10 mg XXX (3.12) x xxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx čtyři týdny).
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx xxx použit hydrochinon.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx je xxxxx x použitím xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx použito xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx spolupráce [2]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: standardní xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: koeficient variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro xxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
x |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
xxxxx [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
sr [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [mg/kg] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [mg/kg] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx metoda xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx X- x L- xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx stanovení xxxxxxxxx tryptofanu je xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nasyceným xxxxxxxx hydroxidu barnatého x xxxxxxxx xxx 110 °C xx 20 xxxxx. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x přítomnosti vnitřního xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx stanoveny x xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx XXXX x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx &xx; 10 μS/cm)
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx > 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Xxxxxxx standardní xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx pentoxid xxxxxxx
3.4 Xxxx-xxxxxx hydroxidu barnatého (xxxx xxx xxxxx, xxx xxxxx Ba(OH)2. 8 X2X xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx vzduchu, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx BaCO3, jež xxxx rušit xxxxxxxxx) (xxx xxxxxxxx 9.3)
3.5 Xxxxxxxx xxxxx
3.6 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x20 = 1,19 x/xx
3.8 Xxxxxxx, XXXX xxxxxx
3.9 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40–60 °X
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxxxx 40,0 x NaOH (3.5) xx xxxx x xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 6 xxx/x:
Xxxxxxx 492 ml HCL (3.7) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.12 Kyselina chlorovodíková, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 ml XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 x vodou.
3.13 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 mol/l:
Vezměte 8,2 xx HCL (3.7) x doplňte xx 1 l xxxxx.
3.14 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 mol/l:
Vezměte 34 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) a xxxxxxx xx 1 x vodou (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx roztok tryptofanu (3.2), c = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2553 x tryptofanu (3.2) x 500 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.13). Xxxxxxxxx při –18 oC xx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx roztok, c = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2728 g α-methyl-tryptofanu (3.3) v 500 xx odměrné xxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.13) a xxxxxxx xx xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 xX xx dobu maximálně xxxx xxxxx.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxxx 2,00 ml koncentrovaného xxxxxxx tryptofanu (3.15), x 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x metanolem (3.8) xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx x na xxxxxxxxx stejnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (10–30 %) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxx před xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxx
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Ethanolamin &xx; 98 %
3.21 Roztok 1 g 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) ve 100 xx metanolu (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: 3,00 g xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 ml xxxxxxx (3.21) 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanolu (3.19) x metanolu (3.8) (1x/100 xx). Xxxxxxx xX na 5 x xxxxxxxx ethanolaminu (3.20). Doplňte xx 1000 xx xxxxx (3.1).
4. Přístroje a xxxxxxx
4.1 Vybavení xxx XXXX se xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
4.2 Kolona pro xxxxxxxxxxx chromatografii, 125 xx x 4 xx, X18, velikost xxxxxx náplně 3 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.3 xX xxxx
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx 125 xx, xx širokým xxxxxx a šroubovacím xxxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx filtr, 0,45 μx
4.6 Xxxxxxxx, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) xxxx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx magnetické xxxxxxxx
4.8 Xxxxxx xxxxx
5. Xxxxxx
5.1 Příprava vzorku
Vzorek xx rozmělněn xxx, xxx xxxxxx sítem x xxxxxx 0,5 xx. Xxxxxx, které xxxx xxxxxxx vlhkost, xxxx být xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx buď xxxxxxxx xxx teplotě xxxxxxxxxxxxx 50 °X, xxxx xxxxxxxxx. Vzorky x xxxxxxx obsahem xxxx musí být xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxx)
Xxxxxxx x přesností xx 1 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky. Xxxxxxxx 100 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 xxx/x (3.13) a 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx nebo xxxxxxx 60 xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxx míchadla (4.7). Xxxxxxxx usadit xxxxxxxx a xxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, c = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxx xX xx 3,0 xx xxxxxxx hydroxidu sodného, x = 1,0 xxx/x (3.10). Přidejte xxxxxxxxx xxxxxxxx (3.8), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % metanolu x konečném xxxxxx. Xxxxxxxx xx odměrné xxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxx na objem xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx standardní xxxxxx (3.17)).
Před xxxxxxxxxxx xx kolony HPLC xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μm (4.5). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Xxxxxxx standardní xxxxxx x extrakty xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx není xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx při 5 °X xx xxxxxxxxx xxxx tří xxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (hydrolyzát)
Odvažte x xxxxxxxxx xx 0,2 xx od 0,1 xx 1 g xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx láhve (4.4). Xxxxxxxx dávka xxxxxx xx měla xxx obsah xxxxxx xxxxx 10 mg. Xxxxxxxx 8,4 g xxxx-xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.4) x 10 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (4.8) nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Ponechejte xxxxxxxx potažený magnet xx xxxxx. Opláchněte xxxxx xxxxxx 4 xx vody. Xxxxxxxxxxx xxxxxx x láhev xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx (4.6) x xxxxxx vodou x xxxxx xx 30–60 xxxxx. Uzavřete xxxxxxxx x autoklávujte xxx 110 (+ 2) °X po xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx snižte xxxxxxx xxxxx xxx 100 °C. Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx Xx(XX)2. 8 H2O, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx 30 xx xxxx o xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx míchejte. Přidejte 2,00 xx koncentrovaného xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx/xxxxxx xxxxx po xxxx 15 xxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx 5 ml xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, x = 0,5 mol/l (3.14). Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xX xx 3,0 x xxxxxxxx XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 10 x 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Převeďte xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx vodou xx definovaný xxxxx xxxxxxxx pro chromatografii (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxxxx xx kolony XXXX xxxxxxxxxxxx několik xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Pokračujte x xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 5.4.
Chraňte xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx. Pokud není xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, mohou xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °X xx xxxxxxxxx xxxx tří xxx.
5.4 Stanovení xxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx podmínky smějí xxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx poskytují xxxxxx výsledky (xxx xxxx xxxxxxxx 9.1 x 9.2):
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 xx x 4 mm, X18, xxxxxxxx částic náplně 3 μx xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx kolony Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx fáze (3.22): 3,00 x xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 xx roztoku (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 ml). Upravte xX na 5,00 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Doplňte do 1000 xx xxxxx (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx doba běhu: xxxxxxxxx 34 minut
Detekční xxxxxx xxxxx: xxxxxxxx: 280 xx, xxxxx: 356 nm
Vstřikový xxxxx: 20 μl
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X × X × X × X × E × XX / X × X × X × 10&xxxx;000 × W = x xxxxxxxxxx xx 100x vzorku
A = xxxxxx píku xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxx standardu (3.17)
X = plocha xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = xxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) (2 xx) xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu (3.15) x μmolech/ml (= 2,50) přidaného xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx přidaného xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) xxxx xx xxxxxxxxxxx (5.3) (= 2,00 xx)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx hydrolyzátu (5.3)
X = plocha xxxx xxxxxxxxxx, kalibračního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx (= 2,00) xxxxxxxxx xx kalibračního standardního xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxx xxxxxx x x (xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx vzorek sušen x/xxxx odtučněn)
MW = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (= 204,23)
7. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % z xxxxxxx xxxxxxxx.
8. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxx porovnání) xxxx uspořádána tak, xx xxxx xxx xxxxxx analyzovány xx 12 xxxxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx. Replikované (5) xxxxxxx xxxx prováděny x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx uvedeny x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: počet jednotlivých xxxxxx xxxxxxxxxx eliminačních xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx, %
CVR: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Krmivo xxx xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Krmný xxxxxxxxxx xxx prasata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
|
n |
50 |
55 |
50 |
|
střed [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [x/xx] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
x [x/xx] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
XXx [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [x/xx] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
X [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx studijní xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (třetí xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, že xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xx 13 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) analýzy byly xxxxxxxxx u každého xxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx laboratoří xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odlehlých xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx odchylka reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: reprodukovatelnost
CVr: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
CVR: xxxxxxxxxx variace reprodukovatelnosti, %
|
Xxxxxx 4 Směs xxxxxxx xx sójou |
Vzorek 5 Xxxx pšenice xx xxxxx (= xxxxxx 4) s xxxxxxxx tryptofanem (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [x/xx] |
0,391 |
0,931 |
|
xx [x/xx] |
0,005 |
0,012 |
|
x [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
xX [x/xx] |
0,018 |
0,048 |
|
X [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Další xxxxxxxx xxxxxxxxxx Společenství xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx xxxxx vzorky byly xxxxxxxxxxx xx x xxxxx laboratořích s xxxxx potvrzení xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxxx tabulce:
L: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: xxxxx jednotlivých hodnot xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Cochran-Dixonovým xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx opakovatelnosti, %
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx krmivo xxx xxxxxxx (XXX 117) |
Xxxxxx 2 Nízko-tučná xxxx xxxxxx (XXX 118) |
Xxxxxx 3 Xxxxxx xxxxxx (XXX 119) |
Xxxxxx 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx mléko (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
xX [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [x/xx] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
XXX [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxx xxx kapalinovou chromatografii: |
125 xx x 4 xx, C18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 μx nebo xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxx xxxxxx: |
32 °C |
||
|
Mobilní fáze: |
A: 0,01 mol/l XX2XX4/xxxxxxx, 95 + 5 (xxxxxxxx + xxxxxxxx) X: Metanol |
||
|
Gradientový xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % A |
0 % B |
|
15 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % B |
|
|
19 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
21 xxx. |
100 % A |
0 % X |
|
|
33 xxx. |
100 % X |
0 % B |
|
|
Úroveň xxxx: |
1,2 ml/min. |
||
|
Celková xxxx xxxx: |
xxxxxxxxx 33 minut |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxx XXXX xxxxxx a xxxxxxxxx plnícího xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx schopen xxxxxxxxxx xxxxxxxxx startovní xxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx standardem. Xxxxx xx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odděleny xx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx standardu by xxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx. Je xxxxxxxx, xxx xxxx běhu xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jinak xxxxx píky pozdního xxxxxxxx ovlivňovat xxxxxxxx xxxxxx chromatografie.
V xxxxxxx xxxxxxxx, xx měl xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx. Lineární xxxxxx by xxxx xxx měřena x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx) koncentrací xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je důležité, xxx xxxxxxxxx píků xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxx xxxxxxx XXXX/xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xxx (xxxx) xxx tryptofanu, x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx (jsou) xxxxxx xxxx (xxxx) nebo xxxxxx xxxxxx (vysoké), xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Hydroxid xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx hydroxid xxxxxxx hůře xxxxxxxxx. Xx se xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx pomocí XXXX, což xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
[1] Řízené xxxxxxxx skupinou pro xxxxxx Verband Deutscher Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).
[2] Řízené xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx Verband Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).