Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/45/XX
xx xxx 6. xxxxxxxx 2000,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxx E x xxxxxxxxxx v xxxxxxxx
(Xxxx s xxxxxxxx xxx EHP)
KOMISE EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx dne 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx zavádí xxxxxx xxxxxx xxxxxx x analýzy Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx Rakouska, Finska x Xxxxxxx [2], x zejména xx xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx úřední xxxxxxxx krmiv za xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx splněny xxxxxxxxx xxxxxxxx x správních xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxx být prováděny xx xxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx x analýzy.
(2) Xxxxxxxx Rady 70/524/EHS xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 o xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx [3], xxxxxxxxx xxxxxxxxx nařízením Komise (XX) x. 2439/1999 xx xxx 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx E musí xxx xxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxx xxxxx xxxxxxx xx premixů x xxxxx.
(3) Směrnice Rady 79/373/XXX xx xxx 2. dubna 1979 x xxxxxxx krmných xxxxx na xxx [5], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 2000/16/XX [6], a xxxxxxxx Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. xxxx 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx [7], xxxxxxxxx pozměněná směrnicí 96/25/XX [8], stanoví, xx aminokyseliny musí xxx uváděny na xxxxxxxxx krmiv.
(4) Musí xxx stanoveny xxxxxxxxxx xxxxxx xxx kontrolu xxxxxx xxxxx.
(5) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxx kontroly obsahu xxxxxxxx X, xxxxxxxx X a tryptofanu x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx metodami xxxxxxxxxxx x xxxxxxx.
Článek 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 31. srpna 2000. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. xxxx 2000.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx odkaz xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx takový xxxxx učiněn při xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx 3
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx v Úředním xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 6. července 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxx Xxxxx
xxxx Komise
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Úř. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. věst. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Úř. věst. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Úř. xxxx. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Xx. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Úř. věst. X 125, 23.5.1996, x. 35.
XXXXXXX
XXXX X STANOVENÍ XXXXXXXX X
1. Xxxx x oblast xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx určena xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (xxxxxxxx) x xxxxxxxx a premixech. Xxxxxxx X zahrnuje xxx-xxxxx-xxxxxxx xxxxxxx a xxxx cis xxxxxxx, xxxxx xx stanoví xxxxx metodou. Xxxxx xxxxxxxx X je xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (IU) na xx. Xxxxx XX xxxxxxxx xxxxxxxx 0,300 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx nebo 0,344 μx all-trans-vitamín X xxxxxxx xxxx 0,550 μx all-trans-vitamín X xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 2000 XX xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx etanolovým xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx xx petroléteru. Xxxxxxxxxxxx je odstraněno xxxxxxxxx x xxxxxx xx rozpustí v xxxxxxxx x, xxxxx xx to xxxxx, xxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx stanoví xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX xxxx fluorescenční xxxxxxx. Chromatografické xxxxxxxxx xxxx vybírány tak, xxx xxxxxxx k xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx varu 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného, β = 10 x/100 ml (viz 7.7 poznámky)
3.6 Sulfid xxxxx, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Roztok xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x v xxxxxxxxx, β = 120 g/l (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 2-propanol
3.9 Xxxxxxx xxxx xxx HPLC: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.10 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.11 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxx, extra xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx: Xxxxxxx x přesností xx 0,1 xx 50 xx acetátu xxxxxxxx A (3.11) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte xx 2-propanolu (3.8) x doplňte po xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 1400 XX xxxxxxxx A xx xx. Xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx podle 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, např. 1,80 x 106 XX/x.
3.12.1 Xxxxxxx xxxxxx all-trans-vitamín X xxxxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx 80 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (3.12) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte ve 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 1400 IU xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx obsah xxxx být stanoven xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx zábrusovými xxxxxxx, úzkohrdlé, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Dělící xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Hruškovité xxxxx, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Allihnův xxxxxxxxxxx, délka izolační xxxxxx 300 xx, xx zábrusovým hrdlem, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx plynu.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papír xxx oddělení xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx & Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 HPLC xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 mm, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 nebo 10 μm xxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx pík xxx všechny izomery xxxxxxxx za xxxxxxxx XXXX)
4.5.2 UV xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Spektrofotometr x 10 mm xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Vodní xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Skleněný xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx vybavená xxxxxx ramenem x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx trubice xxxx mít xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx U x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, aby xxxxx být xxxxx xxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xxxx (XX) xxxxxx x oxidaci. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx použití xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fólií) x kyslíku (vypláchněte xxxxxxx). Vzduch xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (vyhněte xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Příprava xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx x zahřátí. Xxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxx xxxxxxxx X, odvažte x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x xx 25 x xxxxxx do 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx nebo Xxxxxxxxxxxxx baňky (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx kroužení 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.13), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx roztoku xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxx x xxxxxxx baňku xx xxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx k xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx minut. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx draselného (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) a nechejte xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx za stálého xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx dusíku. Xxxxx xxxxxxxxxxx kondenzátor xxxxxxxxx 20 xx xxxx x obsah xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx celkovým xxxxxxx 250 ml xxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Vypláchněte xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxx (3.1) x 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x převeďte výplachy xx dělící nálevky xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx roztocích xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx dvě xxxxxx x nechejte xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Když xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx dělící xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx kombinované xxxxxxxx x dělící xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx (aby xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) x potom xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, dokud xxxx nezůstává xxxxxxxx xx přídavku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx dělení xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx voda xx 500 xx odměrné xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx nálevku a xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Extrakce xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx vrstvy xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx zátku xxxxxxxxxx válce (4.8.1) xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x nasměrujte xxxxx konec xx xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx trubice xxx, xxx xxx právě xxx hladinou xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx vrchní xxxxxx xxxxxxxxxxx do 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx skleněného xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx a xxxxxxxx vrchní xxxxxx xx xxxxxx nálevky xxxx xxxxxxx. Opakujte xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2), potom dvakrát 50 ml dávkami xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx vrstvy xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxx xx xx xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx je tam xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx roztoku xxxxxx xxx HPLC
Odpipetujte xxxxxxxxx část xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx xxxxx xx tvaru hrušky (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) za xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxx lázně xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx atmosférický xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxxxx baňku xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx proudem xxxxxx (3.10) a xxxxx xxxxxxxxx zbytek xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) metanolu (3.3) (xxxxxxxxxxx vitamínu A xx měla být x rozsahu 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Xxxxxxxxx pomocí XXXX
Xxxxxxx X je xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx měřena xxxxxx XX xxxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, emise: 475 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (např. 20 μx) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 5.4 x vymývejte xxxxxxx xxxx (3.9). Xxxxxxxxx xxxxxxx výšku xxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx stejného xxxxxx x xxxxxxx výšky (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Podmínky XXXX
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx smějí xxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; 250 xx x 4 xx, C18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 5 xxxx 10 μx nebo ekvivalent
Mobilní xxxx (3.9):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (objemově + objemově)
Úroveň toku: 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): XX xxxxxxxx (325 nm) xxxx fluorescenční detektor (xxxxxxxx: 325 nm/emise: 475 xx)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx (3.11.1) xxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx xx xx popsáno v 5.2, xxx xxx xxxxxxxx XXX. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx petroléterem (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx 100 ml xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx odparce (xxx 5.4) téměř xx xxxxx, odstraňte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x 10,0 xx xxxxxxxx (3.3). Nominální xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 560 XX xxxxxxxx A/1 xx. Xxxxxx obsah se xxxxxxx podle 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx před použitím.
Pipetujte 2,0 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx xxxxxxx baňky, xxxxxxx xx značku xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx.
5.6.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 5,0 a 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 XX xxxxxxxx X na xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx kalibračního xxxxxxx x stanovte xxxxxxx výšky xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx výšek píků (xxxxx) nyrýsujte xxxxxxxxxx xxxx odpovídající xxxxxxxxx XX kontroly (5.6.3.3).
5.6.3 XX xxxxxxxxxxxxx standardních xxxxxxx
5.6.3.1 Zásobní xxxxxx xxxxxxx X acetátu
Pipetujte 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx odměrné xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx. Pipetujte 3,0 xx xxxxxx zředěného xxxxxxx vitamín X xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx A xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx maximum xxxx být xxxx 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx xxx xxxxxxx X alkohol = 1 530 při 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Xxxxxxx roztok xxxxxxx X xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxxxx (3.12.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 56 XX xxxxxxxx A xx xx. Pipetujte 3,0 xx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx xx 25 xx odměrné xxxxx x doplňte xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX spektrum tohoto xxxxxxx proti 2-xxxxxxxxx (3.8) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx a 400 xx. Xxxxxxxxx maximum xxxx být mezi 325 xx a 327 nm.
Výpočet xxxxxx xxxxxxxx X:
XX vitamínu X/xx = E326 × 19,0
X1%1xx pro xxxxxxx A xxxxxxx = 957 xxx 326 nm xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx A
Pipetujte 3,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1 xx 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxx xxxxxxx do 25 xx xxxxxxx baňky x xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) ve spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Extinkční maximum xxxx xxx mezi 325 xx a 327 xx.
Xxxxxxx obsahu xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X325 × 18,3
X1%1xx pro xxxxxxx X alkohol = 1&xxxx;821 xxx 326 nm xx 2-xxxxxxxxx
6. Výpočet xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx roztok xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxx x IU/ml xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2).
Xxxxx xxxxxxxx X x x XX/xx xx xxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx které:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxx xxxxxx (5.4) x IU/ml
V1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v 5.4 x xx
x = hmota xxxxxxxx xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x xxxxxx koncentrací xxxxxxxx A může xxx užitečné xxxxxx xxxxxxxx petroléteru dvou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxx analýzu xx xxxxxx překročit 2x.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx fázové xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), x rozrušení xxxxxx.
7.4 X rybího xxxx x xxxxxxxxx čistých xxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx BHT xxxx xxx použit xxxxxxxxxxx.
7.6 Oddělení xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx sodného xxxx xxx použito xxxxxxxxx 50 xx XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 15 % z xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
X: xxxxx laboratoří
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: standardní xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx koncentrát |
Bílkovinný xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro xxxxxx |
|
|
X |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
x |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
xxxxx [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [XX/xx] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [XX/xx] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
CVr [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [XX/xx] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
X [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
XXXX X
XXXXXXXXX VITAMÍNU E
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx je xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx E x xxxxxxxx x premixech. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxxx xxxx xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xx xx. 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,91 xx XX-α-xxxxxxxxxx (vitamín X).
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx vitamínu E/kg.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx je hydrolyzován xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x vitamín X xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx odpařením x zbytek xx xxxxxxxx x xxxxxxxx x, xxxxx xx xx nutné, zředí xx xxxxxxxxxxx koncentraci. Xxxxx xxxxxxxx E xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX xxxx fluorescenčního xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, rozsah xxxx 40 až 60 °X
3.3 Metanol
3.4 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 xx
3.5 Roztok askorbanu xxxxxxx, β = 10 g/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx sodný, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x x glycerolu, β = 120 g/l (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 ml x xxxxxxx (3.1)
3.8 Mobilní xxxx pro HPLC: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx použité xxxxxx.
3.9 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.10 XX-α-xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx
3.10.1 Xxxxxxx xxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxxxx x přesností xx 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu (3.10) do 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) a xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 ml xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx. (XX xxxxxxxx – xxx 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.11 XX-α-xxxxxxxxx, xxxxx čistý, ověřené xxxxxxxx
3.11.1 Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) do 100 xx xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte x xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx roztoku xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (XX kontrola – xxx 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – viz 7.4 xxxxxxxx).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Nádobí x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx dnem xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx zábrusovými xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 a 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, kuželovité, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx baňky, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Allihnův xxxxxxxxxxx, xxxxx izolační xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx hrdlem, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx trubici xxxxx
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx oddělení fáze, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 HY 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx vstřikovacím systémem
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx nastavením xxxxxx xxxxx
4.6 Spektrofotometr x 10 mm xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx míchadlem
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x zátkou
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx trubicí xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx U x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, aby xxxxx být xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xxxx (XX) světlu x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx použití xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx nad xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx extrakce xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx, aby xxxxxx sítem s xxxxxx 1 mm, xxxxxxx xxxxxx, aby xxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxx x saponifikací, xxxxx může xxxxx xx ztrátám vitamínu X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx E xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x až 25 x vzorku xx 500 xx baňky x plochým dnem xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx stálého kroužení 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.12), 2 ml roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x baňce x ponořte baňku xx xxxxx lázně x magnetickým xxxxxxxxx (4.7). Zahřejte x xxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxx minut. Xxxxx přidejte 25 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx za xxxxxxx míchání pod xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx vypláchněte xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8). Xxxxxxxxxxx saponifikační xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) a 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx nebo do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx ustát xxx minuty.
5.3.1 Xxxxxxxx x použitím xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx se xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx do xxxxx dělící xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx tuto xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2) x dvakrát 50 xx petroléteru (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx nálevce xxxxxxx 100 xx dávkami xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (aby xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) x potom opakovaným xxxxxxxx x dalšími 100 xx xxxxxxx xxxx, dokud xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxx fenolftaleinu (3.7) (čtyřnásobné xxxxxxxxx xx obyčejně xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx extrakt přes xxxxx xxxxxxxx filtr xxx xxxxxx xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx xxxxxxx baňky (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a filtr 50 xx petroléteru (3.2), xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Když xx vrstvy oddělily (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx zátku xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x xxxxxxxxxx dolní xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx xxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx x převeďte xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx nálevky xxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx petroléteru do xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx petroléteru xxx, xxx je to xxxxxxx x 5.3.1, x pokračujte xxx xx tam xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx roztoku xxxxxx xxx HPLC
Odpipetujte xxxxxxxxx xxxx roztoku xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx baňky xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx sucha xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx (4.1) za sníženého xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Obnovte xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx zbývající rozpouštědlo xxxxxxx dusíku (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx známém xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx by měla xxx x xxxxxxx 5 μg/ml xx 30 μg/ml).
5.5 Stanovení xxxxxx HPLC
Vitamín E xx oddělen xx xxxxxxxx xxxxxx koloně X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx měřena xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx detektoru (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 nm) xxxx UV detektoru (292 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx část (xxxx. 20 μl) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx získaného x 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx fází (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxx stejného xxxxxx x střední xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků (5.6.2).
Xxxxxxxx HPLC
Následující podmínky xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx podmínky xxxxx xxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx shodné výsledky.
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 xx, X18, velikost částic xxxxxx 5 nebo 10 μx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx: 1–2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx/xxxxx: 330 xx) nebo XX xxxxxxxx (292 xx)
5.6 Kalibrace (XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX-α-xxxxxxxxxx)
5.6.1 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx pipetou 25 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx nebo Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) a xxxxxxxxxxxx, jak xx xx xxxxxxx x 5.2. Xxxxxxxx extrahujte xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 ml xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx 25 xx xxxxxx extraktu xx rotační xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx xxxxx, xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x znovu xxxxxxxxx xxxxxx x 25,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx je 45,5 μx DL-α-tokoferolu xx xx, xxxxxxxxxx 50 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx připraven xxxx xxxxxxxx.
5.6.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx baněk, xxxxxxx xx značku metanolem (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxx xxxx 2,5, 5,0, 10,0 x 25,0 μx/xx DL-α-tokoferol xxxxxxx, xx. 2,28, 4,55, 9,10 x 22,8 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx kalibračního xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx použití středních xxxxx xxxx (ploch) xxxxxxxxx kalibrační xxxx.
5.6.1.3 XX xxxxxxxxxxxxx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 25,0 ml xxxxxxxx x xxxxxx UV xxxxxxxx tohoto roztoku xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 nm x 320 xx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx xxx 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284xx x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx xx měla xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Xxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 2,0 xx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx baňky, rozpusťte x metanolu (3.3) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 40 μg XX-α-xxxxxxxxxx na xx, xxxxxxxxxx 44,0 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx na xx. Xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx kalibračního xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx, xx. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μg/ml XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxx několikrát 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx středních xxxxx xxxx (ploch) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2.3 UV xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Rozřeďte 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 25,0 xx etanolem x xxxxxx XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx etanolu (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 nm x 320 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx být xxx 292 xx:
X1%1xx = 75,8 xxx 292xx x etanolu
Při xxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,6.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx roztok xxxxxx vitamínu E xxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxx v μx/xx (xxxxxxxx xxxx α-xxxxxxxxx xxxxxx) xx xxxxxx xx kalibračnímu xxxxx (5.6.1.2 nebo 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx E w x xx/xx xx xxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · X2 / X1 · m [xx/xx]
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxx xxxxxx (5.4) v μx/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) v xx
X2 = objem xxxxxxx odebraných x 5.4 v ml
m = xxxxx xxxxxxxx xxxxx v x
7. Xxxxxxxx
7.1 X vzorků x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X může xxx užitečné xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx vsázek (hmotnostní xxxxxxx: 25 g) xx xxxxxxx roztoku xxxxxx pro stanovení xxxxxx XXXX.
7.2 Množství xxxx xx vzorku xxxxxxxxx xxx analýzu xxxxx překročit 2x.
7.3 Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Po xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx měření roztoku XX-α-xxxxxxxxx acetátu xxxx XX-α-xxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 xxxxxxxx xx xxxxxxx (3.10.1 xxxx 3.10.2) xxxxxxxxx 10 xx BHT (3.12) x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx).
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx xxx xxxxxx hydrochinon.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx je možné x xxxxxxxx normální xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx sodného xxxx xxx použito přibližně 150 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 mg XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 15 % x xxxxxxx výsledku.
9. Výsledky xxxxxxxx spolupráce [2]
X: xxxxx laboratoří
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx krmivo |
Minerální xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx selata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
n |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
střed [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
xx [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [mg/kg] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
ČÁST C
STANOVENÍ XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx metoda xx určena xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx X- a L- xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx tryptofanu xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx barnatého x xxxxxxxx xxx 110 °X xx 20 hodin. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx kyselých xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx stanoveny x xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx pomocí XXXX x xxxxxxxxxxxxx detekcí.
3. Xxxxxxx
3.1 Dvojnásobně destilovaná xxxx, xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx (vodivost &xx; 10 μX/xx)
3.2 Xxxxxxxxxx látka: xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), sušený xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.4 Xxxx-xxxxxx xxxxxxxxx barnatého (xxxx xxx xxxxx, xxx xxxxx Xx(XX)2. 8 X2X xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx BaCO3, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx) (xxx xxxxxxxx 9.3)
3.5 Xxxxxxxx sodný
3.6 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, p20 = 1,19 x/xx
3.8 Xxxxxxx, XXXX xxxxxx
3.9 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40–60 °X
3.10 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxxxx 40,0 x NaOH (3.5) xx xxxx x xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx chlorovodíková, x = 6 mol/l:
Vezměte 492 xx XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 l xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 xx XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x:
Xxxxxxx 8,2 xx XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 l xxxxx.
3.14 Xxxxxxxx orto-fosforečná, x = 0,5 xxx/x:
Xxxxxxx 34 ml kyseliny xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) a xxxxxxx do 1 x vodou (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx roztok tryptofanu (3.2), x = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2553 x tryptofanu (3.2) x 500 xx xxxxxxx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 xX xx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx vnitřní xxxxxxxxxx xxxxxx, c = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2728 x α-xxxxxx-xxxxxxxxxx (3.3) x 500 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 oC xx xxxx xxxxxxxxx xxxx týdnů.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx standard:
Vezměte 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu (3.15), x 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x metanolem (3.8) xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxx koncentraci xxxxxxxx (10–30 %) xxxx xxxxxxx hydrolyzát.
Tento xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxx přípravy chraňte xxxx xxxxxx slunečním xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxx
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Ethanolamin &xx; 98 %
3.21 Roztok 1 g 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) xx 100 xx xxxxxxxx (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: 3,00 x xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 ml xxxxxxx (3.21) 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanolu (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1x/100 xx). Upravte xX na 5 x xxxxxxxx ethanolaminu (3.20). Xxxxxxx xx 1000 xx xxxxx (3.1).
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx pro XXXX se spektrofluorimetrickým xxxxxxxxxx
4.2 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii, 125 xx x 4 xx, C18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μx nebo ekvivalent
4.3 xX xxxx
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, objem 125 xx, xx xxxxxxx xxxxxx x šroubovacím xxxxxxxx
4.5 Membránový xxxxx, 0,45 μx
4.6 Autokláv, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) xxxx
4.7 Mechanická xxxxxxxx xxxx magnetické xxxxxxxx
4.8 Xxxxxx mixer
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx, xxx prošel xxxxx x xxxxxx 0,5 xx. Xxxxxx, xxxxx xxxx vysokou vlhkost, xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx usušeny xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °X, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx být xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxx)
Xxxxxxx x přesností xx 1 mg xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky. Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové, x = 0,1 xxx/x (3.13) x 5,00 xx koncentrovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx nebo mixujte 60 xxxxx s xxxxxxxx mechanické xxxxxxxx, xxxx magnetického xxxxxxxx (4.7). Nechejte xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx kádinky. Xxxxxxxx 5 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 mol/l (3.14). Xxxxxxx pH xx 3,0 za xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1,0 xxx/x (3.10). Přidejte xxxxxxxxx xxxxxxxx (3.8), xxxxxx obdrželi xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx objemu. Xxxxxxxx xx odměrné xxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx stejný objem xxxx kalibrační xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Xxxx vstříknutím xx kolony XXXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx membránový xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx chromatografii xxxxx 5.4.
Chraňte xxxxxxxxxx xxxxxx x extrakty xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx analyzovat xxxxxxxx xxxxxx xxx, mohou xxx xxxxxxxxxx při 5 °X xx xxxxxxxxx dobu xxx xxx.
5.3 Stanovení celkového xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,2 xx xx 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx láhve (4.4). Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx 10 xx. Xxxxxxxx 8,4 g xxxx-xxxxxxx xxxxxxxxx barnatého (3.4) x 10 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xx vířivém xxxxxx (4.8) xxxx magnetickém xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx směsi. Xxxxxxxxxx xxxxx nádoby 4 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx (4.6) x vroucí xxxxx x párou na 30–60 xxxxx. Uzavřete xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx 110 (+ 2) °C po xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx pod 100 °C. Xxx xxxxxxx xx krystalizaci Xx(XX)2. 8 X2X, xxxxxxxx do horké xxxxx 30 xx xxxx x pokojové xxxxxxx. Xxxxx protřepávejte, xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vnitřního standardu (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Zchlaďte xxxxxx ve xxxxx/xxxxxx xxxxx xx xxxx 15 xxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx 5 xx orto-fosforečné xxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxxx lázni a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xX na 3,0 x xxxxxxxx XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, abyste xxxxxxxx koncentraci mezi 10 a 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx objemu. Převeďte xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx objem xxxxxxxx xxx chromatografii (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxxxx xx kolony XXXX xxxxxxxxxxxx několik xx roztoku xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx x chromatografii xxxxx xxxxxxxx 5.4.
Xxxxxxx standardní xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx. Xxxxx není xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °C xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxx xxxx doporučení; xxxxxxx xxxxxxxx smějí xxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx výsledky (viz xxxx poznámky 9.1 x 9.2):
Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 mm x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 3 μm xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx kolony Pokojová xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.22): 3,00 x kyseliny xxxxxx (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) v xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 xx). Upravte xX xx 5,00 x použitím ethanolaminu (3.20). Doplňte do 1000 ml xxxxx (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx doba xxxx: xxxxxxxxx 34 xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx délka: xxxxxxxx: 280 xx, xxxxx: 356 xx
Xxxxxxxxx xxxxx: 20 μx
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X × X × X × X × X × XX / X × X × X × 10&xxxx;000 × W = x xxxxxxxxxx xx 100g vzorku
A = plocha xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, roztoku xxxxxxxxxxxx standardu (3.17)
X = plocha xxxx xxxxxxxxxx, extraktu (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
C = objem xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) (2 xx) xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.17)
X = koncentrace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) x μmolech/ml (= 2,50) přidaného xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.16) x xx přidaného při xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 ml) nebo xx xxxxxxxxxxx (5.3) (= 2,00 xx)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx hydrolyzátu (5.3)
X = plocha xxxx tryptofanu, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx (= 2,00) přidaného xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
W = xxxxxxxx xxxxxx x x (xxxxxxxx xx xxxxxxx hmotnost, xxxxxxxx xxx vzorek sušen x/xxxx odtučněn)
MW = xxxxxxxxxx hmotnost xxxxxxxxxx (= 204,23)
7. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % z vyššího xxxxxxxx.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx spolupráce Xxxxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx uspořádána tak, xx xxxx xxx xxxxxx analyzovány xx 12 laboratořích k xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx. Replikované (5) xxxxxxx byly prováděny x xxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx laboratoří xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx testem)
sr: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
CVR: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx pro xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx prasata xxxxxxxx X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Krmný xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
|
x |
50 |
55 |
50 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [x/xx] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
x [g/kg] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
CVr [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [x/xx] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
X [g/kg] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
CVR [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx uspořádána xxx, xx xxx xxxxxx xxxx analyzovány xx xx 13 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx byly xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: počet laboratoří xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Cochran-Dixonovým xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx odchylka opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: reprodukovatelnost
CVr: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Xxxx xxxxxxx xx xxxxx |
Xxxxxx 5 Xxxx xxxxxxx xx xxxxx (= xxxxxx 4) s xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [g/kg] |
0,391 |
0,931 |
|
sr [g/kg] |
0,005 |
0,012 |
|
r [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
sR [x/xx] |
0,018 |
0,048 |
|
X [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Další studijní xxxxxxxxxx Společenství xxxx xxxxxxxxxx xxx, že xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx v xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx tryptofanu xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: počet xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: xxxxx jednotlivých hodnot xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx (CRM 117) |
Vzorek 2 Xxxxx-xxxxx xxxx xxxxxx (XXX 118) |
Xxxxxx 3 Xxxxxx xxxxxx (XXX 119) |
Vzorek 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
sR [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [x/xx] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
XXX [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Následující specielní xxxxxxxxxxxxxxxx podmínky xxxxx xxxxxxxxxx lepší xxxxxxxxx xxxx tryptofanem x α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vymývání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx: |
125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 μx nebo xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxx xxxxxx: |
32 °C |
||
|
Mobilní fáze: |
A: 0,01 mol/l XX2XX4/xxxxxxx, 95 + 5 (xxxxxxxx + xxxxxxxx) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
15 min. |
100 % A |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
21 min. |
100 % X |
0 % X |
|
|
33 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
Xxxxxx xxxx: |
1,2 xx/xxx. |
||
|
Xxxxxxx xxxx xxxx: |
xxxxxxxxx 33 xxxxx |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx se xxxx xxxxxx xxxxx xxxx XXXX xxxxxx x xxxxxxxxx plnícího xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx startovní čáru xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx důležité, aby xxxx xxxxxxxxxx produkty xxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx. Xx důležité, xxx xxxx xxxx xxxx dostatečně dlouhá xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx produktů, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
X xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx systém xxx xxxxxxxx odezvu. Xxxxxxxx xxxxxx by xxxx xxx xxxxxx s xxxxxxxxxx (normální) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx koncentracemi xxxxxxxxxx. Je xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxx rozsahu HPLC/flourescenčního xxxxxxx. Pokud xxx (xxxx) xxx tryptofanu, x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx (xxxx) xxxxxx xxxx (xxxx) xxxx xxxxxx xxxxxx (xxxxxx), xxxx xx být xxxxxxx opakovány xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Hydroxid xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx hydroxid xxxxxxx xxxx rozpustný. Xx xx xxxxxxxxx x nečirém xxxxxxx xxx xxxxxxxxx pomocí XXXX, což xxxx x tryptofanu xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
[1] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- und Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).
[2] Řízené xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (VDLUFA).