Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/45/XX
xx xxx 6. července 2000,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxxx X, vitamínu X x tryptofanu x xxxxxxxx
(Xxxx s xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Rady 70/373/XXX ze xxx 20. července 1970, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x analýzy Společenství xxx úřední kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Finska x Xxxxxxx [2], x xxxxxxx na xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx:
(1) Směrnice 70/373/XXX xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv za xxxxxx xxxxxxxx, zda xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a správních xxxxxxxx na xxxxxx x složení xxxxx, xxxx xxx prováděny xx xxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx xxx odběr xxxxxx a xxxxxxx.
(2) Xxxxxxxx Rady 70/524/EHS xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx látkách x xxxxxxxx [3], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx Komise (XX) x. 2439/1999 xx xxx 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx E xxxx xxx uváděn na xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx látky xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx.
(3) Xxxxxxxx Xxxx 79/373/XXX ze xxx 2. xxxxx 1979 x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxx [5], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 2000/16/XX [6], x směrnice Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. xxxx 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx ke xxxxxxxxx xxxxxx výživy [7], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/XX [8], stanoví, xx aminokyseliny xxxx xxx uváděny xx xxxxxxxxx xxxxx.
(4) Xxxx xxx xxxxxxxxx analytické xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx.
(5) Opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxx xxxxxxxx obsahu xxxxxxxx X, vitamínu X x tryptofanu x krmivech a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v účinnost xxxxxx x správní xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. srpna 2000. Xxxxxxxxxx o xxxx uvědomí Komisi.
Budou xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. xxxx 2000.
Xxxx opatření xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx směrnici xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx xxxxxxx státy.
Článek 3
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Tato xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 6. xxxxxxxx 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxx Xxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. xxxx. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Xx. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Úř. xxxx. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Úř. věst. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Úř. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
XXXXXXX
XXXX A XXXXXXXXX XXXXXXXX X
1. Účel x oblast použití
Tato xxxxxx xx určena xxx stanovení vitamínu X (xxxxxxxx) x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx X xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxx izomery, xxxxx xx stanoví xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx A je xxxxxxxx x mezinárodních xxxxxxxxxx (XX) xx xx. Xxxxx XX xxxxxxxx aktivitě 0,300 μx all-trans-vitamín X xxxxxxxx xxxx 0,344 μx all-trans-vitamín A xxxxxxx nebo 0,550 μx all-trans-vitamín X xxxxxxxxx.
Xxx stanovitelnosti xx 2000 XX xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx do petroléteru. Xxxxxxxxxxxx je odstraněno xxxxxxxxx x xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxxx x, pokud xx to xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu X xx stanoví xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) za použití XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx all-trans-vitamín X xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Petroléter, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (viz 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx fenolftaleinu, β = 2 g/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 2-xxxxxxxx
3.9 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx charakteristikami použité xxxxxx.
3.10 Xxxxx, prostý xxxxxxx
3.11 All-trans-vitamín X xxxxxx, extra čistý, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Zásobní roztok xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxx: Xxxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,1 xx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx X (3.11) xx 100 xx xxxxxxx baňky. Xxxxxxxxx xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx xxxxxx stejným rozpouštědlem. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 1400 XX xxxxxxxx A xx xx. Xxxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx A palmitát, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, např. 1,80 x 106 XX/x.
3.12.1 Xxxxxxx roztok xxx-xxxxx-xxxxxxx X palmitátu: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 mg 80 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (3.12) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx ve 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 1400 XX xxxxxxxx X na xx. Xxxxxx xxxxx xxxx být stanoven xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx vakuová xxxxxxx
4.2 Xxxxxx x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Baňky x xxxxxxx dnem xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Odměrné xxxxx se zábrusovými xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 mm, xx zábrusovým xxxxxx, x adaptérem xxx xxxxxxxx trubici xxxxx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papír xxx xxxxxxxx fáze, xxxxxx 185 mm (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 HPLC výbava xx xxxxxxxxxxxx systémem
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 mm, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μx xxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx parametry: xxxxx jednotlivý xxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx XXXX)
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlnové xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx lázeň x magnetickým xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx přístroj (viz xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx odměrný xxxxx o objemu 1x xxxxxxxx zábrusovým xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx vybavená xxxxxx ramenem x xxxxxxxxxxxxx trubicí xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Nastavitelná xxxxxxx xxxx mít xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xxxxx být xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X xx citlivý xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (za xxxxxxx xxxxxx x opakního xxxx, nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Vzduch nad xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Příprava xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx, aby xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxx musí být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x saponifikací, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x xx 25 x xxxxxx do 500 xx xxxxx s xxxxxxx xxxx nebo Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.13), 2 xx xxxxxxx askorbanu xxxxxxx (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x xxxxx a xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx x xxxx x nechejte odtékat xxx minut. Potom xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx draselného (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x nechejte xxxxxxx dalších 25 xxxxx za xxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 ml vody x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztok kvantitativně xxxxxxxxxxxx celkovým xxxxxxx 250 xx xxxx xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) a 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx dělící nálevky xxxx do extrakčního xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x etanolu v xxxxxxxxxxxxx roztocích xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx dvě xxxxxx a nechejte xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx vrstvy xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx další xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx extrakci xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2) a xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx extrakty x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx) x potom xxxxxxxxxx třepáním x xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx suchý xxxxxxxx xxxxx xxx dělení xxxx (4.4), aby xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx voda do 500 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx značku xxxxxxxxxxxx (3.2) x dobře xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx extrakčního přístroje (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), nahraďte xxxxx xxxxxxxxxx válce (4.8.1) xx xxxxxxxxxx vložku (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx trubice tak, xxx xxx právě xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx vrstvu xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) Přidejte 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx a dobře xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx a xxxxxxxx xxxxxx vrstvu xx dělící nálevky xxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx dávkami xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx petroléteru xxx, xxx je xx xxxxxxx v 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx je xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxx xxxxxxxxxxx (z 5.3.1 xxxx 5.3.2) do 250 xx xxxxx xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Odpařte rozpouštědlo xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxx lázně xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tlak xxxxxxxxxxx dusíku (3.10) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) a ihned xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xx xxxx xxx x rozsahu 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Xxxxxxxxx pomocí XXXX
Xxxxxxx A xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx koloně X18 (4.5.1) x koncentrace xx xxxxxx pomocí XX detektoru (325 xx) xxxx fluorescenčního xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, emise: 475 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx alikvotní xxxx (např. 20 μx) metanolového xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 x vymývejte xxxxxxx xxxx (3.9). Vypočtěte xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxx stejného xxxxxx x xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků (5.6.2).
Podmínky XXXX
Xxxxxxxxxxx podmínky jsou xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx poskytují xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 mm x 4 xx, C18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 5 xxxx 10 μx nebo xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.9): Směs xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (objemově + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): UV xxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx/xxxxx: 475 nm)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx (3.11.1) xxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X palmitátu (3.12.1) xx 500 xx xxxxx x plochým xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) a xxxxxxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxx v 5.2, ale xxx xxxxxxxx BHT. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 a xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx 100 ml xxxxxx extraktu na xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x 10,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 560 XX xxxxxxxx X/1 ml. Xxxxxx obsah xx xxxxxxx xxxxx 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx před xxxxxxxx.
Xxxxxxxxx 2,0 ml xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx 20 xx xxxxxxx xxxxx, doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx.
5.6.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0 x 10,0 ml zředěného xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx xxxxx 20 xx odměrných baněk, xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx jsou 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 XX xxxxxxxx X xx xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx každého xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx píků (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx kalibrační xxxx xxxxxxxxxxxx výsledkům XX xxxxxxxx (5.6.3.3).
5.6.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.3.1 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx zásobního xxxxxxx vitamín X xxxxxxx (3.11.1) do 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X na xx. Pipetujte 3,0 xx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx xx 25 xx odměrné xxxxx x doplňte xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 6,72 XX vitamínu X xx xx. Změřte XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx proti 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx a 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx být mezi 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX vitamínu X/xx = E326 × 19,0
X1%1xx pro xxxxxxx A xxxxxxx = 1&xxxx;530 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Zásobní xxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxxxx (3.12.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx A xx xx. Pipetujte 3,0 xx xxxxxx zředěného xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx do 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx po xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx A xx ml. Xxxxxx XX spektrum tohoto xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx spektrofotometru (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxx 325 nm x 327 nm.
Výpočet xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
E1%1cm pro xxxxxxx X xxxxxxx = 957 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx X
Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xxxxxxxx A, xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1 xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8). Pipetujte 5,0 ml xxxxxx xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x doplňte xx xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 6,72 XX vitamínu X xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx proti 2-xxxxxxxxx (3.8) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx a 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 nm x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = E325 × 18,3
X1%1xx xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 1&xxxx;821 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
6. Výpočet xxxxxxxx
Xx xxxxxxx výšky (plochy) xxxx xxx roztok xxxxxx xxxxxxxx A xxxxxxxx koncentraci xxxxxxx xxxxxx x XX/xx xx vztahu ke xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2).
Xxxxx xxxxxxxx A w x XX/xx ve xxxxxx je xxx xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · X2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu X x roztoku xxxxxx (5.4) v XX/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 x xx
x = xxxxx zkušební xxxxx x g
7. Xxxxxxxx
7.1 X vzorků x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xxxx xxx užitečné xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx vsázek (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx jednoho roztoku xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Množství xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxx analýzu xx nemělo xxxxxxxxx 2x.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx přibližně 10 xx etanolu (3.1), x xxxxxxxxx emulze.
7.4 X xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx čistých xxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 45–60 xxxxx.
7.5 Namísto BHT xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Oddělení xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Namísto xxxxxxxxx sodného může xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Namísto roztoku xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 mg XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot
sr: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro xxxxxx |
|
|
X |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
x |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
xxxxx [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [XX/xx] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [XX/xx] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [XX/xx] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
X [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXX X
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx je xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X v xxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu E xx xxxxxxxx xxxx xx DL-α-tokoferol xxxxxxx xx kg. 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,91 mg XX-α-xxxxxxxxxx (xxxxxxx X).
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx odstraněno odpařením x xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxx x, xxxxx xx xx xxxxx, zředí xx požadovanou koncentraci. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, rozsah xxxx 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx askorbanu xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx sodný, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Roztok xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 xx v xxxxxxx (3.1)
3.8 Mobilní xxxx xxx XXXX: xxxx metanolu (3.3) x vody, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx charakteristikami xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.10 XX-α-xxxxxxxxx acetát, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx
3.10.1 Xxxxxxx roztok XX-α-xxxxxxxxx acetátu: Xxxxxxx x přesností xx 0,1 mg, 100 xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu (3.10) xx 100 xx xxxxxxx baňky. Xxxxxxxxx v xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 ml xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx. (UV kontrola – xxx 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – viz 7.4 xxxxxxxx).
3.11 DL-α-tokoferol, xxxxx xxxxx, ověřené xxxxxxxx
3.11.1 Xxxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 mg XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx v xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx značku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx roztoku xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (UV kontrola – viz 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.12 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Nádobí x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Baňky x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky, 500 ml, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Odměrné xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 a 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, se zábrusovými xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx baňky, 250 ml, se xxxxxxxxxxx hrdly
4.3 Allihnův xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx hrdlem, x xxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 mm (xxxx. Schleicher &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx systémem
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx nastavením xxxxxx xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 mm xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx lázeň x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x objemu 1x xxxxxxxx zábrusovým xxxxxx a zátkou
4.8.2 Xxxxxxxxx vložka vybavená xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx procházející xxxxxxx. Nastavitelná xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx U a xxxxxx na xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xxxxx xxx horní xxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X xx citlivý xxxx (UV) světlu x oxidaci. Všechny xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (za použití xxxxxx x opakního xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx hliníkovou xxxxx) x xxxxxxx (vypláchněte xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx nahrazen xxxxxxx (vyhněte xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, aby xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, aby xxxxxxx k xxxxxxx. Xxxxxxxxxx musí být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxx x saponifikací, xxxxx může xxxxx xx xxxxxxx vitamínu X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxx x přesností xx 0,01 g, 2 x xx 25 x vzorku do 500 xx xxxxx x xxxxxxx dnem xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Přidejte postupně xx xxxxxxx kroužení 130 ml xxxxxxx (3.1), přibližně 100 xx XXX (3.12), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) k baňce x xxxxxxx xxxxx xx vodní lázně x magnetickým míchadlem (4.7). Zahřejte x xxxx a nechejte xxxxxxx pět xxxxx. Xxxxx přidejte 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) přes xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx dalších 25 xxxxx za xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx x xxxxx xxxxx ochlaďte xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx do 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) nebo xx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx baňku xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 xx petroléteru (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx nebo do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx a xxxxxxx x kombinovaných roztocích xx měl xxx xxxxx 2:1. Třepejte xxxxx dvě minuty x xxxxxxxx xxxxx xxx minuty.
5.3.1 Xxxxxxxx x použitím xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Když se xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxx xxxxxx nálevky (4.2.3). Opakujte xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2) x xxxxxxx 50 xx petroléteru (3.2).
Promyjte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx dvakrát 100 xx dávkami xxxx za současného xxxxxxxx (xxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) x potom opakovaným xxxxxxxx s dalšími 100 xx dávkami xxxx, dokud xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx fází (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx odměrné baňky (4.2.2). Vypláchněte dělící xxxxxxx a xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx promíchejte.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8)
Když xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx vložku (4.8.2) x xxxxxxxxxx dolní xxxxx xx xxxxx xxxxxxx U xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, aby xxx právě nad xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx dusíku xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, převeďte xxxxxx xxxxxx petroléteru xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) Xxxxxxxx 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vrstvy oddělit xx x převeďte xxxxxx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Opakujte postup xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
Promyjte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxx xx to xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 nebo 5.3.2) do 250 xx xxxxx ve xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx na xxxxxxx xxxxxxx odparce (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx při teplotě xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxxxx baňku xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx známém xxxxxx (10–100 ml) xxxxxxxx (3.3) (koncentrace XX-α-xxxxxxxxxx xx xxxx xxx v xxxxxxx 5 μg/ml xx 30 μg/ml).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx HPLC
Vitamín X xx xxxxxxx xx xxxxxxxx fázové xxxxxx X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 nm, xxxxx: 330 xx) xxxx XX xxxxxxxxx (292 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μl) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxx výšky xxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx roztoku stejného xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 mm, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μm nebo xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx: 1–2 ml/min.
Detektor (4.5.2): Fluorescenční xxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx/xxxxx: 330 xx) xxxx XX detektor (292 xx)
5.6 Xxxxxxxxx (XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx nebo DL-α-tokoferolu)
5.6.1 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.1.1 Xxxxxxxx standardních xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx pipetou 25 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu (3.10.1) xx 500 ml xxxxx s xxxxxxx xxxx nebo Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxx x 5.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 ml xxxxxxxxxxxx. Odpařte 25 xx xxxxxx extraktu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx rozpusťte xxxxxx v 25,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx je 45,5 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, ekvivalent 50 μx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx musí xxx čerstvě xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.1.2 Příprava xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 a 10,0 xx standardního xxxxxxxxxx roztoku do xxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxx jsou 2,5, 5,0, 10,0 x 25,0 μg/ml XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx, xx. 2,28, 4,55, 9,10 a 22,8 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μl xxxxxxx kalibračního roztoku x stanovte střední xxxxx xxxx (plochy). Xx xxxxxxx středních xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.1.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferol acetátu (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 25,0 xx xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 nm x 320 nm.
Absorpční xxxxxxx xx xxxx xxx xxx 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284nm x xxxxxxx
Xxx tomto xxxxxx xx měla být xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Standard XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Příprava standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 2,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 50 ml xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x metanolu (3.3) x xxxxxxx po xxxxxx metanolem. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 40 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, xxxxxxxxxx 44,0 μg XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. Xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx musí xxx xxxxxxx připraven xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 a 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx metanolem (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoků xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx, tj. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu.
Vstříkněte několikrát 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx výšek xxxx (ploch) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Xxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 25,0 xx xxxxxxxx x xxxxxx UV xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 nm. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx při 292 xx:
X1%1xx = 75,8 xxx 292nm x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx extinkce 0,6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx vitamínu X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x μx/xx (xxxxxxxx xxxx α-tokoferol xxxxxx) xx xxxxxx xx kalibračnímu grafu (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx X x x xx/xx ve xxxxxx je xxx xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · X2 / X1 · x [xx/xx]
xx které:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx E x roztoku xxxxxx (5.4) x μx/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = objem xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 x xx
x = xxxxx xxxxxxxx xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X může xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx vsázek (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX.
7.2 Xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx překročit 2x.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, přidejte xxxxxxxxx 10 ml xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX-α-xxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 xxxxxxxx xx roztoku (3.10.1 xxxx 3.10.2) xxxxxxxxx 10 xx XXX (3.12) x skladujte xxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx doba xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx).
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx je xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx kolony.
7.7 Namísto xxxxxxxxx xxxxxxx může xxx použito xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx sodného může xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx EDTA.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx u stejného xxxxxx xxxxx překročit 15 % z xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [2]
L: xxxxx laboratoří
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot
sr: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx koncentrát |
Bílkovinný xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx xxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
x |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
xxxxx [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
xx [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [mg/kg] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [mg/kg] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
XXXX C
STANOVENÍ XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx metoda xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx mezi X- x X- xxxxxxx.
2. Princip
Pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx podmínek nasyceným xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahříván xxx 110 °X po 20 xxxxx. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx extrahován xx xxxxx xxxxxxxx podmínek x přítomnosti vnitřního xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx x vnitřní xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx HPLC x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxx destilovaná xxxx, nebo voda xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx &xx; 10 μX/xx)
3.2 Xxxxxxxxxx látka: xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), sušený xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Vnitřní xxxxxxxxxx xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx fosforu
3.4 Xxxx-xxxxxx hydroxidu xxxxxxxxx (xxxx xxx xxxxx, xxx xxxxx Ba(OH)2. 8 X2X xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx XxXX3, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx) (xxx poznámky 9.3)
3.5 Xxxxxxxx sodný
3.6 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, p20 = 1,19 x/xx
3.8 Metanol, XXXX xxxxxx
3.9 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40–60 °X
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1 mol/l:
Rozpusťte 40,0 x NaOH (3.5) xx xxxx x xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x:
Xxxxxxx 492 ml XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 l xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 ml XXX (3.7) x xxxxxxx do 1 x xxxxx.
3.13 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 mol/l:
Vezměte 8,2 xx XXX (3.7) x xxxxxxx do 1 x vodou.
3.14 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x:
Xxxxxxx 34 ml kyseliny xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.2), c = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2553 x tryptofanu (3.2) x 500 xx xxxxxxx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Skladujte xxx –18 xX po xxxx xxxxxxxxx čtyř xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2728 x α-methyl-tryptofanu (3.3) v 500 xx xxxxxxx baňce x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.13) a xxxxxxx xx značku kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 oC xx xxxx xxxxxxxxx xxxx týdnů.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok tryptofanu x xxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxxx 2,00 xx koncentrovaného xxxxxxx tryptofanu (3.15), x 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-methyl-tryptofan) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x metanolem (3.8) xx přibližně stejný xxxxx x na xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (10–30 %) xxxx konečný xxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxx přípravy xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx octová
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Xxxxxxxxxxx > 98 %
3.21 Roztok 1 x 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) xx 100 xx xxxxxxxx (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx pro XXXX: 3,00 g xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 ml xxxx (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x metanolu (3.8) (1x/100 ml). Xxxxxxx xX xx 5 x xxxxxxxx ethanolaminu (3.20). Doplňte xx 1000 xx xxxxx (3.1).
4. Přístroje a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx XXXX xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
4.2 Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 3 μx nebo xxxxxxxxxx
4.3 xX xxxx
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, objem 125 xx, xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx filtr, 0,45 μm
4.6 Xxxxxxxx, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) baru
4.7 Mechanická xxxxxxxx xxxx magnetické xxxxxxxx
4.8 Xxxxxx mixer
5. Xxxxxx
5.1 Příprava vzorku
Vzorek xx rozmělněn xxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 0,5 xx. Xxxxxx, xxxxx xxxx vysokou xxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °C, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx x vysokým xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxx mletím extrahovány xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxx (extrakt)
Odvažte x xxxxxxxxx xx 1 mg příslušné xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx Erlenmeyerovy baňky. Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 mol/l (3.13) x 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx 60 xxxxx s xxxxxxxx mechanické třepačky, xxxx xxxxxxxxxxxx míchadla (4.7). Nechejte xxxxxx xxxxxxxx a pipetujte 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 ml xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxx pH xx 3,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného, x = 1,0 xxx/x (3.10). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (3.8), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x vhodném xxxxxx x xxxxxx xxxxx na objem xxxxxxxx pro chromatografii (xxxxxxxxx xxxxxx objem xxxx kalibrační standardní xxxxxx (3.17)).
Xxxx xxxxxxxxxxx xx kolony HPLC xxxxxxxxxxxx xxxxxxx ml xxxxxxx xxxx membránový xxxxx 0,45 μm (4.5). Xxxxxxxxxx chromatografii xxxxx 5.4.
Xxxxxxx standardní xxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx. Pokud není xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx den, mohou xxx skladovány xxx 5 °X xx xxxxxxxxx dobu xxx xxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (hydrolyzát)
Odvažte x xxxxxxxxx xx 0,2 xx od 0,1 xx 1 g xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.4). Odvážená dávka xxxxxx by xxxx xxx obsah xxxxxx xxxxx 10 xx. Xxxxxxxx 8,4 x xxxx-xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxx (3.4) a 10 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xx vířivém xxxxxx (4.8) xxxx magnetickém xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx nádoby 4 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Přeneste xx xxxxxxxxx (4.6) x vroucí xxxxx x xxxxx xx 30–60 xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx x autoklávujte xxx 110 (+ 2) °X po xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx autoklávu xxxxxx xxxxxxx právě xxx 100 °X. Aby xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx Xx(XX)2. 8 X2X, xxxxxxxx xx horké xxxxx 30 xx xxxx o pokojové xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx standardu (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Zchlaďte xxxxxx xx xxxxx/xxxxxx xxxxx xx xxxx 15 xxxxx.
Xxxxx přidejte 5 xx xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xX xx 3,0 x použitím XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Xxxxxxxx xxxxxxxxx metanolu, abyste xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 10 a 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx objemu x zřeďte vodou xx definovaný xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx XXXX xxxxxxxxxxxx několik xx xxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 5.4.
Xxxxxxx standardní xxxxxx x hydrolyzáty xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx není xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °X xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx vymývání xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx podmínky xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (viz xxxx xxxxxxxx 9.1 x 9.2):
Kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.2): 125 mm x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μm nebo xxxxxxxxxx
Xxxxxxx kolony Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.22): 3,00 g xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx vody (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 ml). Xxxxxxx xX xx 5,00 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx xx 1000 ml vodou (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx xxxx xxxx: xxxxxxxxx 34 xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx xxxxx: excitace: 280 xx, emise: 356 xx
Xxxxxxxxx objem: 20 μx
6. Výpočet xxxxxxxx
X × B × X × X × X × XX / X × X × X × 10&xxxx;000 × X = g xxxxxxxxxx xx 100g xxxxxx
X = xxxxxx píku xxxxxxxxx standardu, xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.17)
X = xxxxxx píku xxxxxxxxxx, extraktu (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) (2 xx) xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) x μmolech/ml (= 2,50) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx přidaného xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) xxxx xx xxxxxxxxxxx (5.3) (= 2,00 ml)
F = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = objem koncentrovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x ml (= 2,00) přidaného xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxx vzorku v x (opravená xx xxxxxxx hmotnost, xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx x/xxxx xxxxxxxx)
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (= 204,23)
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % z xxxxxxx xxxxxxxx.
8. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxx porovnání) xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx xxxx tři xxxxxx xxxxxxxxxxx ve 12 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x každého vzorku. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x následující xxxxxxx:
X: xxxxx laboratoří předkládajících xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx zadržených eliminačních xxxxxxxxx xxxxxxxx (identifikované Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
CVR: xxxxxxxxxx xxxxxxx reprodukovatelnosti, %
|
Xxxxxx 1 Krmivo xxx xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx prasata xxxxxxxx X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Krmný xxxxxxxxxx pro xxxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
|
x |
50 |
55 |
50 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [g/kg] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
r [x/xx] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
XXx [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [x/xx] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
X [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx studijní xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) byla xxxxxxxxxx xxx, xx dva xxxxxx byly analyzovány xx xx 13 xxxxxxxxxxxx k ověření xxxxxx pro extrakci xxxxxxx tryptofanu. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx byly xxxxxxxxx x každého xxxxxx. Výsledky xxxx xxxxxxx v následující xxxxxxx:
X: počet laboratoří xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx hodnot xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledků (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx testem)
sr: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Xxxx xxxxxxx xx xxxxx |
Xxxxxx 5 Xxxx xxxxxxx xx sójou (= xxxxxx 4) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [g/kg] |
0,391 |
0,931 |
|
sr [x/xx] |
0,005 |
0,012 |
|
x [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
xX [g/kg] |
0,018 |
0,048 |
|
R [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx až x xxxxx xxxxxxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx uvedeny x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: počet xxxxxxxxxx předkládajících výsledky
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Cochran-Dixonovým xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx krmivo pro xxxxxxx (XXX 117) |
Vzorek 2 Xxxxx-xxxxx xxxx xxxxxx (XXX 118) |
Vzorek 3 Xxxxxx xxxxxx (XXX 119) |
Xxxxxx 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (XXX 120) |
|
|
L |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
n |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
střed [g/kg] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
sr [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
xX [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [g/kg] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
CVR [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxxxxx specielní xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx mohou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx a α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vymývání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistěním kolony:
|
Kolona xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx: |
125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 μx xxxx xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxx xxxxxx: |
32 °X |
||
|
Xxxxxxx xxxx: |
X: 0,01 xxx/x KH2PO4/metanol, 95 + 5 (xxxxxxxx + xxxxxxxx) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % X |
0 % B |
|
15 min. |
100 % X |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % A |
40 % B |
|
|
21 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
33 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
Xxxxxx xxxx: |
1,2 xx/xxx. |
||
|
Xxxxxxx xxxx xxxx: |
xxxxxxxxx 33 minut |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxx XXXX kolony a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx systém xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx standardem. Xxxxx xx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxxx produkty xxxxx odděleny od xxxxxxxxxx x vnitřního xxxxxxxxx. Hydrolyzáty bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxx být xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx čára za xxxxxxxxx standardu pro xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx produktů, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
X xxxxxxx xxxxxxxx, by měl xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx dát xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx by xxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx) koncentrací xxxxxxxxx standardu x xxxxxxxx xx koncentracemi xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx velikosti xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx byly x xxxxxxxxx xxxxxxx HPLC/flourescenčního xxxxxxx. Xxxxx xxx (xxxx) xxx xxxxxxxxxx, x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx (xxxx) xxxxxx xxxx (malé) nebo xxxxxx vysoký (xxxxxx), xxxx xx být xxxxxxx opakovány xx xxxxxxx jiné velikosti x/xxxx xxxxxxxx konečným xxxxxxx.
9.3 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx stává hydroxid xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX, xxx může x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
[1] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx Verband Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- und Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).
[2] Xxxxxx xxxxxxxx skupinou pro xxxxxx Xxxxxxx Deutscher Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).