Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/45/XX
xx xxx 6. xxxxxxxx 2000,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Společenství xxx xxxxxxxxx vitamínu X, vitamínu E x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx
(Xxxx x xxxxxxxx xxx EHP)
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Rady 70/373/XXX xx dne 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx zavádí xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx aktem o xxxxxxxxxxx Rakouska, Xxxxxx x Xxxxxxx [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxx, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, že úřední xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx zjištění, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxx xxx prováděny xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx a analýzy.
(2) Xxxxxxxx Xxxx 70/524/EHS xx dne 23. xxxxxxxxx 1970 o xxxxxxxxxxx látkách x xxxxxxxx [3], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx (XX) x. 2439/1999 xx dne 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxx na xxxxxxxxx, pokud xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx premixů x xxxxx.
(3) Směrnice Xxxx 79/373/XXX xx xxx 2. xxxxx 1979 x uvádění krmných xxxxx xx xxx [5], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 2000/16/XX [6], a xxxxxxxx Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. xxxx 1993 o krmivech xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx [7], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx 96/25/XX [8], xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx.
(4) Xxxx xxx stanoveny xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx.
(5) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské státy xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xxxxxxxx obsahu xxxxxxxx X, vitamínu X a xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v příloze.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx souladu s xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 31. srpna 2000. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Komisi.
Budou xxxx xxxxxxxx používat xx 1. xxxx 2000.
Xxxx opatření xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx odkaz xx xxxx směrnici xxxx xxxx xxx takový xxxxx učiněn při xxxxxx úředním vyhlášení. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Článek 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx v Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Tato směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 6. xxxxxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Byrne
člen Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. xxxx. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Xx. věst. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Xx. xxxx. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Úř. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
PŘÍLOHA
ČÁST X XXXXXXXXX XXXXXXXX X
1. Xxxx x oblast xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx vitamínu X (xxxxxxxx) v xxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx X xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx alkohol x xxxx xxx izomery, xxxxx xx stanoví xxxxx metodou. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxxx x mezinárodních xxxxxxxxxx (IU) xx xx. Xxxxx XX xxxxxxxx xxxxxxxx 0,300 μx all-trans-vitamín A xxxxxxxx xxxx 0,344 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx xxxx 0,550 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2000 XX xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztokem xxxxxxxxx draselného x xxxxxxx A je xxxxxxxxxx do xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zbytek xx rozpustí x xxxxxxxx x, xxxxx xx to xxxxx, xxxxx xx požadovanou xxxxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu X xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx chromatografie (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx vybírány tak, xxx xxxxxxx k xxxxxxxx all-trans-vitamín X xxxxxxxx x xxxx xxx izomerů.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 g/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 ml (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (pro x = 9) (xxx 7.8 poznámky)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 2-xxxxxxxx
3.9 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx metanolu (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově). Xxxxxxxxx poměr bude xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx použité xxxxxx.
3.10 Dusík, xxxxxx xxxxxxx
3.11 All-trans-vitamín A xxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxx: Xxxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,1 xx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx X (3.11) xx 100 ml xxxxxxx baňky. Xxxxxxxxx xx 2-propanolu (3.8) x xxxxxxx xx xxxxxx stejným xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xx 1400 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx A palmitát, xxxxx xxxxx, ověřené xxxxxxxx, např. 1,80 x 106 IU/g.
3.12.1 Xxxxxxx xxxxxx all-trans-vitamín X palmitátu: Xxxxxxx x přesností xx 0,1 xx 80 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (3.12) do 100 xx odměrné xxxxx. Xxxxxxxxx ve 2-xxxxxxxxx (3.8) a xxxxxxx xx značku xxxxxxx rozpouštědlem. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 1400 IU xxxxxxxx X na xx. Xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx z xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x plochým xxxx xxxx Erlenmeyerovy xxxxx, 500 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 ml
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, kuželovité, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 xx, se xxxxxxxxxxx hrdly
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
4.4 Xxxxxxxx filtrační xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 HY 1/2)
4.5 XXXX výbava xx vstřikovacím systémem
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx: xxxxx jednotlivý xxx xxx všechny xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx XXXX)
4.5.2 UV xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlnové xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 xx křemennými xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Skleněný xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx vybavená xxxxxx ramenem a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Nastavitelná xxxxxxx xxxx mít spodní xxxxx ve tvaru xxxxxxx U x xxxxxx na xxxxxxx xxxxx tak, xxx xxxxx být xxxxx xxxxxx kapaliny xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X je xxxxxxx xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx musí být xxxxxxxxx x nepřítomnosti xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxx xxxx, nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx (vypláchněte xxxxxxx). Vzduch nad xxxxxxxxx musí xxx xxxxx extrakce xxxxxxxx xxxxxxx (vyhněte xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Příprava xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx tak, aby xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 mm, xxxxxxx dbejte, xxx xxxxxxx k zahřátí. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx může xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Saponifikace
V xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx X, odvažte s xxxxxxxxx na 0,01 x, 2 g xx 25 x xxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx kroužení 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 mg XXX (3.13), 2 xx roztoku askorbanu xxxxxxx (3.5) a 2 ml roztoku xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxx a xxxxxxx xxxxx do xxxxx lázně x xxxxxxxxxxx míchadlem (4.7). Xxxxxxxx k xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx. Potom xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx draselného (3.4) přes xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx xx stálého xxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx kondenzátor xxxxxxxxx 20 xx xxxx x xxxxx baňky xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx kvantitativně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 ml etanolu (3.1) x 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Podíl xxxx x xxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Když xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx extrakci dvakrát 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx extrakty x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx vody za xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx) x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx nezůstává xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (čtyřnásobné xxxxxxxxx je obyčejně xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx extrakt xxxx suchý xxxxxxxx xxxxx pro dělení xxxx (4.4), aby xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx voda xx 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx nálevku a xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), doplňte xx značku xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx za xxxxxxx extrakčního xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx xxx xxxxx xxx hladinou xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx dusíku xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx dělící xxxxxxx (4.2.3) Přidejte 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Nechejte xxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx vrchní vrstvu xx xxxxxx xxxxxxx xxxx předtím. Xxxxxxxx xxxxxx extrakce xxxxxxx 100 ml petroléteru (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxx xx xx popsáno x 5.3.1, x pokračujte xxx xx tam xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (z 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx xxxxx xx xxxxx hrušky (4.2.4). Odpařte xxxxxxxxxxxx xxxxx do sucha xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx tlaku xxx xxxxxxx xxxxx lázně xxxxxxxxxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tlak xxxxxxxxxxx dusíku (3.10) x odpojte xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx proudem xxxxxx (3.10) a ihned xxxxxxxxx zbytek xx xxxxxx objemu (10–100 xx) metanolu (3.3) (xxxxxxxxxxx vitamínu X xx xxxx být x xxxxxxx 5 XX/xx až 30 XX/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx koloně C18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XX xxxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (excitace: 325 xx, xxxxx: 475 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx alikvotní xxxx (xxxx. 20 μx) metanolového roztoku xxxxxxxxx x 5.4 x vymývejte xxxxxxx xxxx (3.9). Xxxxxxxxx xxxxxxx výšku xxxx (xxxxxx) několika vstřiků xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků (5.6.2).
Podmínky XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx podmínky xxxxx xxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx výsledky.
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx nebo xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.9):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; Xxxx xxxxxxxx (3.3) a xxxx, xxxx. 980 + 20 (objemově + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): UV xxxxxxxx (325 xx) xxxx fluorescenční detektor (xxxxxxxx: 325 nm/emise: 475 xx)
5.6 Kalibrace
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovních xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 ml xxxxxxxxx roztoku xxxxxxx X acetátu (3.11.1) xxxx 20 xx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 500 xx xxxxx x plochým xxxx nebo Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxx v 5.2, ale bez xxxxxxxx XXX. Následně xxxxxxxxxx petroléterem (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx do 500 xx xxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx 100 xx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxx odparce (xxx 5.4) xxxxx xx xxxxx, odstraňte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx proudem xxxxxx (3.10) a xxxxx xxxxxxxxx zbytek x 10,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 560 XX xxxxxxxx X/1 xx. Xxxxxx obsah xx xxxxxxx xxxxx 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx před xxxxxxxx.
Xxxxxxxxx 2,0 xx tohoto xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx 20 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x promíchejte. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 56 XX vitamínu X xx xx.
5.6.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0 x 10,0 xx zředěného xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx sérií 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx značku xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoků xxxx 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 IU xxxxxxxx X xx xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x stanovte xxxxxxx výšky xxxx (xxxxxx). Za xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx píků (xxxxx) nyrýsujte kalibrační xxxx odpovídající výsledkům XX xxxxxxxx (5.6.3.3).
5.6.3 XX standardizace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.3.1 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx X acetátu
Pipetujte 2,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx odměrné xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 IU xxxxxxxx X na xx. Pipetujte 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxx do 25 xx xxxxxxx baňky x xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) ve xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxx 325 nm x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX vitamínu X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx pro xxxxxxx X xxxxxxx = 1&xxxx;530 xxx 326 nm xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Xxxxxxx roztok xxxxxxx A palmitátu
Pipetujte 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx (3.12.1) do 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx baňky x doplňte xx xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX vitamínu A xx xx. Xxxxxx XX spektrum tohoto xxxxxxx xxxxx 2-propanolu (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx a 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx být mezi 325 xx a 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = E326 × 19,0
E1%1cm xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 957 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx X
Xxxxxxxxx 3,0 ml xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1 do 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx 5,0 xx tohoto xxxxxxx xx 25 xx odměrné baňky x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx je 6,72 XX vitamínu X xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-propanolu (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx maximum xxxx xxx mezi 325 nm a 327 nm.
Výpočet obsahu xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = E325 × 18,3
E1%1cm xxx xxxxxxx X alkohol = 1&xxxx;821 při 326 xx ve 2-xxxxxxxxx
6. Výpočet xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x XX/xx xx xxxxxx ke xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2).
Xxxxx xxxxxxxx A w x XX/xx xx xxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx které:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu X x xxxxxxx xxxxxx (5.4) v XX/xx
X1 = objem xxxxxxx xxxxxx (5.4) v xx
X2 = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 x xx
x = xxxxx xxxxxxxx xxxxx x g
7. Xxxxxxxx
7.1 X vzorků x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx A může xxx xxxxxxxx spojit xxxxxxxx petroléteru xxxx xxxxxxxxxxxxxxx vsázek (hmotnostní xxxxxxx: 25 x) xx jednoho roztoku xxxxxx xxx stanovení xxxxxx XXXX.
7.2 Xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Pokud xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx etanolu (3.1), x rozrušení xxxxxx.
7.4 X xxxxxx xxxx x ostatních xxxxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx xxx použit xxxxxxxxxxx.
7.6 Oddělení xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx kolony.
7.7 Namísto xxxxxxxxx sodného může xxx xxxxxxx přibližně 150 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx sodného může xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx EDTA.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
X: xxxxx laboratoří
n: počet xxxxxxxxxxxx hodnot
sr: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx selata |
|
|
L |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
n |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
střed [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [XX/xx] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [IU/kg] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [XX/xx] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
R [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
ČÁST X
XXXXXXXXX XXXXXXXX X
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxx metoda xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu X xx vyjádřen xxxx xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx kg. 1 xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xxxxxxxx 0,91 mg XX-α-xxxxxxxxxx (xxxxxxx X).
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxxxx E/kg.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx X xx extrahován xx xxxxxxxxxxx. Rozpouštědlo xx odstraněno xxxxxxxxx x zbytek xx xxxxxxxx x metanolu x, pokud xx xx nutné, zředí xx požadovanou xxxxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu E xx xxxxxxx reverzní xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx použití XX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, rozsah xxxx 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx draselného, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Roztok xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 g/l (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 ml x xxxxxxx (3.1)
3.8 Mobilní xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx poměr xxxx xxxxxxxx charakteristikami použité xxxxxx.
3.9 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.10 XX-α-xxxxxxxxx acetát, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.10.1 Zásobní xxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu: Odvažte x přesností xx 0,1 mg, 100 xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu (3.10) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx v etanolu (3.1) a doplňte xx značku stejným xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx. (XX kontrola – xxx 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.11 DL-α-tokoferol, xxxxx xxxxx, ověřené xxxxxxxx
3.11.1 Odvažte x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx v xxxxxxx (3.1) a xxxxxxx xx značku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx roztoku xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (XX xxxxxxxx – viz 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.12 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Přístroje a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx z xxxxxxxx skla
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx dnem xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Odměrné xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 ml
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Hruškovité baňky, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x adaptérem xxx xxxxxxxx trubici xxxxx
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx oddělení fáze, xxxxxx 185 mm (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 HPLC xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx systémem
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 mm, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.5.2 XX nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Spektrofotometr x 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Skleněný xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1x xxxxxxxx zábrusovým xxxxxx a xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx procházející xxxxxxx. Nastavitelná trubice xxxx xxx spodní xxxxx ve tvaru xxxxxxx X a xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxx kapaliny xx xxxxx převedena xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X je xxxxxxx xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x nepřítomnosti xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Vzduch xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx nahrazen xxxxxxx (xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx povolením xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx tak, xxx xxxxxx sítem s xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, aby xxxxxxx k xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx ztrátám vitamínu X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 g, 2 x xx 25 x vzorku do 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Erlenmeyerovy baňky (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), přibližně 100 xx BHT (3.12), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Připojte xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxx x xxxxxxx xxxxx xx vodní xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx k xxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx přidejte 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) přes xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 minut xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx dusíku. Xxxxx vypláchněte xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx a obsah xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx saponifikovaný xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx do xxxxxxxxxxx přístroje (4.8). Xxxxxxxxxxx saponifikační xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) x převeďte xxxxxxxx xx dělící xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx přístroje. Podíl xxxx a xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx roztocích xx xxx být xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx dvě minuty x xxxxxxxx xxxxx xxx minuty.
5.3.1 Xxxxxxxx x použitím xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), převeďte xxxxxx petroléteru xx xxxxx xxxxxx nálevky (4.2.3). Opakujte xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2) x xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx extrakty v xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 ml dávkami xxxx xx současného xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, dokud xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx obyčejně xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx přes xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx dělení fází (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx suspendovaná xxxx xx 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 ml xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx po xxxxxx petroléterem (3.2) x dobře promíchejte.
5.3.2 Xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Když xx vrstvy xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx zátku xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx vložku (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tak, xxx xxx právě nad xxxxxxxx rozhraní. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, zazátkujte x dobře protřepejte. Xxxxxxxx vrstvy xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx nálevky xxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx xxxxxxx petroléteru (3.2) x přidejte xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
Promyjte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxx je to xxxxxxx v 5.3.1, x pokračujte xxx xx tam popsáno.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx roztoku xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 nebo 5.3.2) xx 250 xx baňky xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx téměř xx xxxxx na xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) xx sníženého xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxxxx nepřekračující 40 °C. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx připuštěním xxxxxx (3.9) a xxxxxxx baňku xx xxxxxxx xxxxxxx odparky. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x ihned rozpusťte xxxxxx xx známém xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (koncentrace XX-α-xxxxxxxxxx by xxxx xxx x xxxxxxx 5 μg/ml xx 30 μx/xx).
5.5 Stanovení xxxxxx HPLC
Vitamín X xx xxxxxxx xx xxxxxxxx fázové xxxxxx X18 (4.5.1) a xxxxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 xx) xxxx XX xxxxxxxxx (292 xx) (4.5.2).
Vstříkněte xxxxxxxxx xxxx (např. 20 μx) metanolového xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8). Xxxxxxxxx střední výšky xxxx (plochy) několika xxxxxxx xxxxxxx stejného xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxxxxxx xxxxxxx kalibračních xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx předkládány jako xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx použity xx předpokladu, že xxxxxxxxx shodné xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx kapalinovou chromatografii (4.5.1): 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx: 1–2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): Xxxxxxxxxxxxx detektor (xxxxxxxx: 295 nm/emise: 330 nm) nebo XX detektor (292 xx)
5.6 Xxxxxxxxx (DL-α-tokoferol xxxxxxx nebo XX-α-xxxxxxxxxx)
5.6.1 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.1.1 Xxxxxxxx standardních xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 25 xx xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, jak xx xx popsáno x 5.2. Xxxxxxxx extrahujte xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x doplňte xx 500 xx xxxxxxxxxxxx. Odpařte 25 xx tohoto xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (viz 5.4) xxxxx xx sucha, xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x 25,0 xx netanolu (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 45,5 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, xxxxxxxxxx 50 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx ml. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 ml standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx do xxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, doplňte xx xxxxxx metanolem (3.3) x promíchejte. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,5, 5,0, 10,0 a 25,0 μg/ml DL-α-tokoferol xxxxxxx, xx. 2,28, 4,55, 9,10 a 22,8 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx kalibračního xxxxxxx x stanovte xxxxxxx xxxxx píků (xxxxxx). Xx použití středních xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx graf.
5.6.1.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferol acetátu (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxxx roztoku DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10.1) xx 25,0 xx xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx etanolu (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx při 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284nm x xxxxxxx
Xxx tomto xxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Příprava standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx pipetou 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx, rozpusťte x xxxxxxxx (3.3) x doplňte po xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 40 μg XX-α-xxxxxxxxxx xx ml, xxxxxxxxxx 44,0 μg XX-α-xxxxxxxxx acetátu xx xx. Xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x kalibrační xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx metanolem (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoků xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx DL-α-tokoferolu, xx. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu.
Vstříkněte xxxxxxxxxx 20 μl xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (plochy). Xx xxxxxxx středních výšek xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx graf.
5.6.2.3 UV xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Xxxxxxxx 2,0 xx zásobního roztoku XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) na 25,0 xx etanolem x xxxxxx UV xxxxxxxx xxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx xxx 292 nm:
E1%1cm = 75,8 při 292xx x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx extinkce 0,6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxx v μg/ml (xxxxxxxx xxxx α-xxxxxxxxx xxxxxx) xx vztahu xx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx X x x xx/xx xx xxxxxx je xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 / X1 · m [xx/xx]
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu X x roztoku xxxxxx (5.4) v μg/ml
V1 = objem xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = objem xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 x ml
m = hmota xxxxxxxx xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (hmotnostní xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxxxxxxx xxx analýzu xxxxx xxxxxxxxx 2g.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, přidejte xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), k xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xxxx XX-α-xxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 xxxxxxxx xx xxxxxxx (3.10.1 xxxx 3.10.2) xxxxxxxxx 10 xx BHT (3.12) a xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxx skladovatelnosti xx xxxxx týdny).
7.5 Xxxxxxx BHT může xxx xxxxxx hydrochinon.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx je xxxxx x xxxxxxxx normální xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx může xxx použito xxxxxxxxx 150 mg kyseliny xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx EDTA.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx nesmí překročit 15 % z xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx spolupráce [2]
L: xxxxx laboratoří
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx koncentrát |
Bílkovinný xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx xxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
x |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
xxxxx [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
xx [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [xx/xx] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [mg/kg] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
R [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
XXXX C
STANOVENÍ XXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx určena pro xxxxxxxxx celkového x xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxx. Nerozlišuje xxxx X- x L- xxxxxxx.
2. Princip
Pro stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx podmínek nasyceným xxxxxxxx xxxxxxxxx barnatého x zahříván při 110 °X po 20 hodin. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x přítomnosti xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx x vnitřní xxxxxxxx jsou stanoveny x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx XXXX x xxxxxxxxxxxxx detekcí.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, nebo xxxx xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx &xx; 10 μX/xx)
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), sušený pod xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Vnitřní xxxxxxxxxx xxxxx: α-methyl-tryptofan (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx fosforu
3.4 Xxxx-xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxx xxx xxxxx, xxx xxxxx Ba(OH)2. 8 X2X xxxxxxxx xxxxxxxxxx na vzduchu, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx BaCO3, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx) (xxx poznámky 9.3)
3.5 Xxxxxxxx sodný
3.6 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, w = 85 %
3.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x20 = 1,19 g/ml
3.8 Xxxxxxx, XXXX xxxxxx
3.9 Xxxxxxxxxx, xxxxxx varu 40–60 °X
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1 mol/l:
Rozpusťte 40,0 x XxXX (3.5) xx xxxx x xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x:
Xxxxxxx 492 xx HCL (3.7) a xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 ml XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x:
Xxxxxxx 8,2 xx XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 x vodou.
3.14 Xxxxxxxx orto-fosforečná, c = 0,5 mol/l:
Vezměte 34 ml xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) x xxxxxxx xx 1 x vodou (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.2), x = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2553 x xxxxxxxxxx (3.2) x 500 xx xxxxxxx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx po xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Skladujte xxx –18 oC po xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, c = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2728 x α-methyl-tryptofanu (3.3) x 500 xx odměrné xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 oC xx xxxx maximálně xxxx xxxxx.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx x xxxxxxx standard:
Vezměte 2,00 xx koncentrovaného xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15), x 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx (α-methyl-tryptofan) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxx koncentraci xxxxxxxx (10–30 %) xxxx konečný hydrolyzát.
Tento xxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxx čerstvý xxxx xxxxxxxx.
Xxxxx přípravy xxxxxxx xxxx přímým slunečním xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxx
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Xxxxxxxxxxx > 98 %
3.21 Xxxxxx 1 g 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) xx 100 xx metanolu (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx pro XXXX: 3,00 g xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 ml xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x metanolu (3.8) (1x/100 ml). Xxxxxxx xX xx 5 x použitím xxxxxxxxxxxx (3.20). Doplňte do 1000 xx xxxxx (3.1).
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Vybavení pro XXXX xx spektrofluorimetrickým xxxxxxxxxx
4.2 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 125 xx x 4 xx, X18, velikost xxxxxx náplně 3 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.3 xX xxxx
4.4 Polypropylenová xxxxx, objem 125 xx, xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Membránový xxxxx, 0,45 μx
4.6 Autokláv, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) baru
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo magnetické xxxxxxxx
4.8 Vířivý xxxxx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx, xxx prošel xxxxx x otvory 0,5 xx. Xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxx před xxxxxxxxxxx usušeny buď xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °X, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx být xxxx xxxxxx extrahovány xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxx)
Xxxxxxx x přesností xx 1 mg xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx Erlenmeyerovy xxxxx. Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 xxx/x (3.13) x 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx 60 xxxxx s xxxxxxxx mechanické třepačky, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx usadit xxxxxxxx x xxxxxxxxx 10,0 xx roztoku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Upravte xX xx 3,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného, x = 1,0 xxx/x (3.10). Přidejte xxxxxxxxx xxxxxxxx (3.8), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 a 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx x zřeďte xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxx chromatografii (xxxxxxxxx stejný xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Xxxx vstříknutím xx xxxxxx HPLC xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx membránový xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Chraňte xxxxxxxxxx xxxxxx a extrakty xxxx přímým slunečním xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx den, xxxxx xxx xxxxxxxxxx při 5 °X xx xxxxxxxxx dobu xxx xxx.
5.3 Stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,2 xx xx 0,1 xx 1 g xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx polypropylénové láhve (4.4). Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx 10 mg. Xxxxxxxx 8,4 g xxxx-xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.4) x 10 xx vody. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx mixeru (4.8) xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx potažený xxxxxx xx xxxxx. Opláchněte xxxxx nádoby 4 xx vody. Našroubujte xxxxxx x xxxxx xxxxx uzavřete. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx (4.6) x vroucí xxxxx x xxxxx xx 30–60 xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx x autoklávujte xxx 110 (+ 2) °X po xxxx 20 hodin.
Před xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 100 °C. Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx Xx(XX)2. 8 H2O, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx 30 xx xxxx x pokojové xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxxxx xxxxxx ve vodní/ledové xxxxx po xxxx 15 xxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx 5 xx xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, c = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx nádobu xx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xX xx 3,0 x použitím HCL, x = 1 xxx/x (3.12). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 a 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Převeďte xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx vodou xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx metanolu xx xxxxx způsobit sraženinu.
Před xxxxxxxxxxx do xxxxxx XXXX xxxxxxxxxxxx několik xx xxxxxxx přes xxxxxxxxxx filtr 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx x chromatografii xxxxx xxxxxxxx 5.4.
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx hydrolyzáty xxxxxx xxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °C xx xxxxxxxxx xxxx tří xxx.
5.4 Xxxxxxxxx pomocí XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx za xxxxxxxxxxx, xx poskytují xxxxxx výsledky (xxx xxxx xxxxxxxx 9.1 x 9.2):
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 mm x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 3 μx nebo xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx fáze (3.22): 3,00 x kyseliny xxxxxx (3.18) + 900 ml xxxx (3.1) + 50,0 xx roztoku (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) v xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 ml). Upravte xX xx 5,00 x použitím xxxxxxxxxxxx (3.20). Doplňte xx 1000 xx xxxxx (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx xxxx xxxx: xxxxxxxxx 34 minut
Detekční xxxxxx délka: xxxxxxxx: 280 xx, xxxxx: 356 xx
Xxxxxxxxx xxxxx: 20 μx
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X × X × X × X × E × XX / X × G × X × 10&xxxx;000 × X = x tryptofanu xx 100x xxxxxx
X = xxxxxx píku xxxxxxxxx xxxxxxxxx, roztoku xxxxxxxxxxxx standardu (3.17)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) (2 ml) xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = koncentrace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) x μmolech/ml (= 2,50) xxxxxxxxx xx kalibračního roztoku (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) nebo xx xxxxxxxxxxx (5.3) (= 2,00 xx)
X = plocha xxxx xxxxxxxxx standardu, xxxxxxxx (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
H = xxxxx koncentrovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx (= 2,00) přidaného xx xxxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxx vzorku v x (opravená xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx vzorek sušen x/xxxx odtučněn)
MW = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (= 204,23)
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % z vyššího xxxxxxxx.
8. Výsledky studijní xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx spolupráce Xxxxxxxxxxxx (xxxxxx vzájemné xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 12 xxxxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx. Replikované (5) xxxxxxx byly xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx jednotlivých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledků (identifikované Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
CVR: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Krmivo xxx xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Xxxxx xxxxxxxxxx xxx prasata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
|
n |
50 |
55 |
50 |
|
střed [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [x/xx] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
x [x/xx] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
XXx [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [g/kg] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
R [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx xxxxxxxx spolupráce Xxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx xxx xxxxxx byly analyzovány xx ve 13 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) analýzy xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Výsledky xxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx laboratoří xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odlehlých výsledků (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx testem)
sr: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
CVR: xxxxxxxxxx xxxxxxx reprodukovatelnosti, %
|
Xxxxxx 4 Směs xxxxxxx se xxxxx |
Xxxxxx 5 Xxxx xxxxxxx xx xxxxx (= xxxxxx 4) x xxxxxxxx tryptofanem (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [x/xx] |
0,391 |
0,931 |
|
xx [x/xx] |
0,005 |
0,012 |
|
x [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
xX [x/xx] |
0,018 |
0,048 |
|
X [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Další studijní xxxxxxxxxx Společenství xxxx xxxxxxxxxx tak, xx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx v xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx potvrzení xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx uvedeny x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: počet xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: xxxxx jednotlivých hodnot xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Cochran-Dixonovým xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx (XXX 117) |
Vzorek 2 Xxxxx-xxxxx xxxx xxxxxx (XXX 118) |
Xxxxxx 3 Sójová moučka (XXX 119) |
Xxxxxx 4 Xxxxxx odstředěné xxxxx (XXX 120) |
|
|
L |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
n |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
střed [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
xX [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [x/xx] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
XXX [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx mohou xxxxxxxxxx lepší rozdělení xxxx xxxxxxxxxxx x α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vymývání následované xxxxxxxxxxxx čistěním xxxxxx:
|
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: |
125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 μx nebo xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxx xxxxxx: |
32 °X |
||
|
Xxxxxxx xxxx: |
X: 0,01 xxx/x KH2PO4/metanol, 95 + 5 (xxxxxxxx + objemově) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
15 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
21 xxx. |
100 % A |
0 % X |
|
|
33 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
Xxxxxx xxxx: |
1,2 xx/xxx. |
||
|
Xxxxxxx xxxx xxxx: |
xxxxxxxxx 33 minut |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx se bude xxxxxx podle typu XXXX xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx musí xxx schopen xxxxxxxxxx xxxxxxxxx startovní čáru xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx standardem. Navíc xx důležité, aby xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odděleny xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxx chromatografovány, xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx. Xx důležité, xxx xxxx běhu xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx produktů, xxxxx xxxxx píky xxxxxxxx xxxxxxxx ovlivňovat xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
X xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx by xxxx xxx měřena x xxxxxxxxxx (normální) koncentrací xxxxxxxxx standardu x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx píků xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx XXXX/xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud pík (xxxx) buď xxxxxxxxxx, x/xxxx vnitřního xxxxxxxxx xx (xxxx) xxxxxx xxxx (malé) xxxx xxxxxx xxxxxx (xxxxxx), xxxx xx být xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxx konečným xxxxxxx.
9.3 Hydroxid xxxxxxx
Xxxxxx xx stává xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx projevuje x nečirém xxxxxxx xxx xxxxxxxxx pomocí XXXX, xxx xxxx x tryptofanu xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
[1] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (VDLUFA).
[2] Xxxxxx xxxxxxxx skupinou pro xxxxxx Xxxxxxx Deutscher Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- und Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).