Směrnice Xxxxxx 2000/45/XX
xx xxx 6. xxxxxxxx 2000,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxxx X, xxxxxxxx X x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx
(Xxxx x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx zavádí xxxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx aktem x xxxxxxxxxxx Rakouska, Xxxxxx x Xxxxxxx [2], x xxxxxxx na xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx xxxxx za xxxxxx zjištění, zda xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx x xxxxxxx krmiv, xxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxx.
(2) Xxxxxxxx Rady 70/524/XXX xx dne 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx [3], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx (XX) x. 2439/1999 xx dne 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxx A x xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxx na xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx.
(3) Směrnice Xxxx 79/373/XXX xx xxx 2. dubna 1979 x uvádění xxxxxxx xxxxx xx xxx [5], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx Xxxxxx 2000/16/XX [6], x směrnice Xxxx 93/74/EHS ze xxx 13. září 1993 o krmivech xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx [7], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/XX [8], stanoví, xx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx.
(4) Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx kontrolu xxxxxx látek.
(5) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxx X x tryptofanu x krmivech x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxx 2000. Neprodleně x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx xxxx předpisy xxxxxxxx xx 1. xxxx 2000.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx odkaz xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxx xxxxx učiněn při xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu si xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx 3
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Evropských společenství.
Xxxxxx 4
Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 6. xxxxxxxx 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxx Xxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Úř. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Úř. věst. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Xx. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Úř. xxxx. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Xx. věst. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Úř. věst. X 125, 23.5.1996, x. 35.
XXXXXXX
XXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXX X
1. Účel x xxxxxx použití
Tato xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (retinolu) x xxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx X zahrnuje xxx-xxxxx-xxxxxxx xxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxx, xxxxx xx stanoví xxxxx metodou. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxxx v mezinárodních xxxxxxxxxx (XX) xx xx. Xxxxx XX xxxxxxxx xxxxxxxx 0,300 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx xxxx 0,344 μx all-trans-vitamín A xxxxxxx nebo 0,550 μx all-trans-vitamín A xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2000 XX xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx etanolovým roztokem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx A xx xxxxxxxxxx do petroléteru. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxx a, xxxxx xx to xxxxx, xxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx kapalinové xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx vybírány tak, xxx nedošlo k xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °C
3.3 Xxxxxxx
3.4 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx askorbanu sodného, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Sulfid xxxxx, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Roztok xxxxxxx xxxxxxx, c = 0,5 mol/l x xxxxxxxxx, β = 120 g/l (pro x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 g/100 xx v xxxxxxx (3.1)
3.8 2-xxxxxxxx
3.9 Xxxxxxx xxxx pro XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx poměr xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.10 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.11 All-trans-vitamín X xxxxxx, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx, např. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx X (3.11) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xx 2-propanolu (3.8) x doplňte xx xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx je 1400 XX xxxxxxxx X xx ml. Xxxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx A palmitát, xxxxx xxxxx, ověřené xxxxxxxx, např. 1,80 x 106 IU/g.
3.12.1 Xxxxxxx roztok all-trans-vitamín X palmitátu: Xxxxxxx x xxxxxxxxx na 0,1 mg 80 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (3.12) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte ve 2-xxxxxxxxx (3.8) a xxxxxxx xx značku xxxxxxx rozpouštědlem. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 1400 XX xxxxxxxx X xx xx. Přesný obsah xxxx být xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Rotační vakuová xxxxxxx
4.2 Xxxxxx z xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx, úzkohrdlé, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, kuželovité, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx baňky, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 mm, xx zábrusovým xxxxxx, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx trubici xxxxx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Schleicher & Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx systémem
4.5.1 Xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 mm, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μm xxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx pík xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx za podmínek XXXX)
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 xx křemennými xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx míchadlem
4.8 Xxxxxxxxx přístroj (viz xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Skleněný xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx vybavená xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx ve xxxxx xxxxxxx U x xxxxxx xx opačném xxxxx xxx, xxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx převedena xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X je xxxxxxx xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx musí být xxxxx xxxxxxxx nahrazen xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Příprava vzorku
Rozmělněte xxxxxx tak, xxx xxxxxx sítem x xxxxxx 1 mm, xxxxxxx xxxxxx, aby xxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x saponifikací, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxx vitamínu X, xxxxxxx x xxxxxxxxx na 0,01 x, 2 x xx 25 x xxxxxx do 500 xx baňky x xxxxxxx xxxx nebo Xxxxxxxxxxxxx baňky (4.2.1). Xxxxxxxx postupně za xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.13), 2 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 ml xxxxxxx xxxxxxx sodného (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x baňce x xxxxxxx baňku do xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx míchadlem (4.7). Xxxxxxxx x xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx minut. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) a nechejte xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Potom xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx vody x xxxxx baňky xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx dekantací xxxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 ml vody xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Vypláchněte xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 xx petroléteru (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx dělící xxxxxxx xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2) x dvakrát 50 ml xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx kombinované extrakty x xxxxxx nálevce xxxxxxx 100 xx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (aby xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx) x xxxxx xxxxxxxxxx třepáním s xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx extrakt xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx do 500 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Vypláchněte xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx značku xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx se xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx vložku (4.8.2) a xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ve xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx trubice xxx, xxx xxx xxxxx xxx hladinou rozhraní. Xx xxxxxx tlaku x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx ramene, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx dělící xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Nechejte vrstvy xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx vrstvu xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx extrakce xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx dvakrát 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx dělící nálevky.
Promyjte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx petroléteru xxx, jak xx xx xxxxxxx v 5.3.1, x pokračujte xxx xx tam xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (z 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 ml xxxxx xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx sucha xx rotační xxxxxxx xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx tlaku při xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tlak xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxxxx baňku xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) a xxxxx xxxxxxxxx zbytek xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx A xx měla xxx x rozsahu 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx měřena xxxxxx XX xxxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, xxxxx: 475 xx) (4.5.2).
Vstříkněte xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μx) metanolového xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.9). Xxxxxxxxx xxxxxxx výšku xxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxxxxxx vstřiků xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx podmínky jsou xxxxxxxxxxx xxxx doporučení; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx poskytují xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.5.1):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx nebo ekvivalent
Mobilní xxxx (3.9): Směs xxxxxxxx (3.3) a xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): XX xxxxxxxx (325 xx) xxxx fluorescenční detektor (xxxxxxxx: 325 xx/xxxxx: 475 xx)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxx (3.11.1) xxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 500 xx xxxxx s xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, jak je xx xxxxxxx v 5.2, xxx xxx xxxxxxxx BHT. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx do 500 xx petroléterem (3.2). Xxxxxxx 100 xx xxxxxx extraktu na xxxxxxx xxxxxxx odparce (xxx 5.4) xxxxx xx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x 10,0 xx xxxxxxxx (3.3). Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 560 XX xxxxxxxx X/1 xx. Xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxx 2,0 ml tohoto xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx 20 ml xxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx A xx xx.
5.6.2 Příprava xxxxxxxxxxxx roztoků x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0 x 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Nominální koncentrace xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 XX xxxxxxxx A xx xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx každého kalibračního xxxxxxx a stanovte xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx použití xxxxxxxxx xxxxx píků (xxxxx) nyrýsujte xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx výsledkům XX xxxxxxxx (5.6.3.3).
5.6.3 XX standardizace standardních xxxxxxx
5.6.3.1 Zásobní roztok xxxxxxx X xxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx odměrné xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx A na xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx do 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx A xx ml. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) ve xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx a 400 xx. Extinkční maximum xxxx xxx mezi 325 xx a 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
E1%1cm xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 1&xxxx;530 při 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 ml zásobního xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 50 ml odměrné xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx A na xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxxxx do 25 xx xxxxxxx xxxxx x doplňte po xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx proti 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Extinkční maximum xxxx xxx xxxx 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx obsahu xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx pro xxxxxxx A xxxxxxx = 957 xxx 326 nm ve 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vitamínu A
Pipetujte 3,0 ml xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xxxxxxxx A, xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1 xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxx xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace tohoto xxxxxxx je 6,72 XX vitamínu X xx ml. Xxxxxx XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx proti 2-propanolu (3.8) ve spektrofotometru (4.6) mezi 300 xx a 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx mezi 325 xx a 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X325 × 18,3
E1%1cm xxx xxxxxxx A xxxxxxx = 1&xxxx;821 při 326 xx ve 2-xxxxxxxxx
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx A xxxxxxxx koncentraci xxxxxxx xxxxxx x XX/xx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2).
Obsah xxxxxxxx X x x IU/kg ve xxxxxx je xxx xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · X2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxx xxxxxx (5.4) x XX/xx
X1 = xxxxx roztoku xxxxxx (5.4) v xx
X2 = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 v xx
x = hmota zkušební xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 U vzorků x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X může xxx užitečné xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro stanovení xxxxxx XXXX.
7.2 Xxxxxxxx xxxx ve vzorku xxxxxxxxx xxx analýzu xx xxxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx etanolu (3.1), x xxxxxxxxx emulze.
7.4 X xxxxxx tuku x ostatních xxxxxxx xxxx by xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx BHT xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Oddělení izomerů xxxxxxxx xx možné x použitím xxxxxxxx xxxxxx kolony.
7.7 Namísto xxxxxxxxx sodného xxxx xxx použito xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx roztoku xxxxxxx sodného xxxx xxx použito přibližně 50 mg XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
X: xxxxx laboratoří
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot
sr: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx xxxxxx |
|
|
X |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
x |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
xxxxx [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
sr [XX/xx] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [IU/kg] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
CVr [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [XX/xx] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
X [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXX X
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx stanovení xxxxxxxx X v xxxxxxxx x premixech. Xxxxx xxxxxxxx X xx vyjádřen xxxx xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. 1 xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xxxxxxxx 0,91 xx XX-α-xxxxxxxxxx (xxxxxxx X).
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 2 xx xxxxxxxx E/kg.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztokem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Rozpouštědlo xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zbytek xx xxxxxxxx v metanolu x, xxxxx je xx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vysoce účinné xxxxxxxxxx chromatografie (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, rozsah varu 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx draselného, β = 50 x/100 xx
3.5 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx sodný, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 g/l (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx fenolftaleinu, β = 2 x/100 xx v xxxxxxx (3.1)
3.8 Mobilní xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.10 XX-α-xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx čistý, ověřené xxxxxxxx
3.10.1 Zásobní xxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxxxx x přesností xx 0,1 xx, 100 xx DL-α-tokoferol acetátu (3.10) xx 100 xx odměrné xxxxx. Xxxxxxxxx v xxxxxxx (3.1) a doplňte xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx. (XX kontrola – xxx 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.11 DL-α-tokoferol, xxxxx xxxxx, ověřené xxxxxxxx
3.11.1 Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) do 100 xx odměrné xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) a xxxxxxx po značku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx tohoto roztoku xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (XX kontrola – viz 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – viz 7.4 xxxxxxxx).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Nádobí z xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x plochým xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx zábrusovými xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 ml
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, kuželovité, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Hruškovité xxxxx, 250 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, délka xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx trubici xxxxx
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx fáze, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx vstřikovacím xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx pro kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 mm, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx nebo xxxxxxxxxx
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx s 10 mm xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x magnetickým xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx přístroj (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x objemu 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a zátkou
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx ramenem x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx mít xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx U a xxxxxx xx opačném xxxxx xxx, xxx xxxxx být horní xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X je citlivý xxxx (UV) světlu x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (za použití xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fólií) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx musí být xxxxx extrakce xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx povolením xxxxx).
5.1 Příprava vzorku
Rozmělněte xxxxxx tak, xxx xxxxxx xxxxx s xxxxxx 1 mm, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx E xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 g, 2 x xx 25 x vzorku xx 500 xx baňky x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx kroužení 130 ml xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.12), 2 xx roztoku xxxxxxxxx sodného (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x baňce x ponořte baňku xx xxxxx lázně x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx x xxxx x nechejte xxxxxxx pět xxxxx. Xxxxx přidejte 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) a xxxxxxxx odtékat dalších 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx kondenzátor xxxxxxxxx 20 xx xxxx a xxxxx xxxxx ochlaďte xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx vypláchnutím xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx xx 1000 xx dělící xxxxxxx (4.2.3) nebo do xxxxxxxxxxx přístroje (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) a 100 xx petroléteru (3.2) a převeďte xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx nebo xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx roztocích xx měl xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx minuty x xxxxxxxx xxxxx xxx minuty.
5.3.1 Extrakce x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Když xx xxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.3), převeďte xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx nálevky (4.2.3). Xxxxxxxx tuto xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Promyjte xxxxxxxxxxx extrakty x xxxxxx xxxxxxx dvakrát 100 xx xxxxxxx xxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx (aby xx xxxxxxxxx tvorbě emulzí) x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 100 ml xxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx bezbarvá za xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx obyčejně dostačující). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx přes xxxxx skládaný filtr xxx xxxxxx xxxx (4.4), aby se xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), doplňte xx xxxxxx petroléterem (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8)
Xxxx xx vrstvy oddělily (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx zátku xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) za xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x nasměrujte xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx xxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx dusíku do xxxxxxxxxxx xxxxxx, převeďte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 ml xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) do xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x dobře protřepejte. Xxxxxxxx vrstvy xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx vrstvu do xxxxxx xxxxxxx jako xxxxxxx. Xxxxxxxx postup xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx dvakrát 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx tak, xxx je xx xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx xx xxx popsáno.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxx petroléteru (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx xxxxx xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx téměř xx xxxxx na xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) za sníženého xxxxx při teplotě xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tlak připuštěním xxxxxx (3.9) x xxxxxxx baňku od xxxxxxx xxxxxxx odparky. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxx 5 μx/xx xx 30 μx/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx HPLC
Vitamín E xx oddělen xx xxxxxxxx fázové koloně X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx detektoru (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 xx) xxxx XX detektoru (292 xx) (4.5.2).
Vstříkněte xxxxxxxxx část (např. 20 μx) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx získaného x 5.4 x vymývejte xxxxxxx fází (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (plochy) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx předkládány xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx předpokladu, že xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μm xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx: 1–2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): Fluorescenční detektor (xxxxxxxx: 295 xx/xxxxx: 330 nm) xxxx XX detektor (292 xx)
5.6 Xxxxxxxxx (XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx nebo DL-α-tokoferolu)
5.6.1 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx pipetou 25 xx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 500 xx xxxxx x plochým xxxx xxxx Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1) a xxxxxxxxxxxx, jak je xx xxxxxxx x 5.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx 25 xx xxxxxx extraktu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx do xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x 25,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 45,5 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, xxxxxxxxxx 50 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx použitím.
5.6.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, doplňte xx značku xxxxxxxxx (3.3) a promíchejte. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,5, 5,0, 10,0 a 25,0 μg/ml XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx, tj. 2,28, 4,55, 9,10 x 22,8 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx použití xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.1.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) na 25,0 xx etanolem x změřte XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 nm.
Absorpční xxxxxxx xx xxxx xxx při 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284nm x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Standard XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 2,0 ml zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx, rozpusťte x metanolu (3.3) x doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 40 μg XX-α-xxxxxxxxxx na xx, xxxxxxxxxx 44,0 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. Standardní pracovní xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx metanolem (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxx xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx, xx. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu.
Vstříkněte xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Za xxxxxxx xxxxxxxxx výšek xxxx (ploch) narýsujte xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Xxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 25,0 xx xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx etanolu (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx by xxxx xxx xxx 292 xx:
X1%1xx = 75,8 xxx 292xx x etanolu
Při xxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,6.
6. Výpočet výsledků
Ze xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx roztok xxxxxx xxxxxxxx E xxxxxxxx koncentraci xxxxxxx xxxxxx x μg/ml (xxxxxxxx jako α-tokoferol xxxxxx) ve xxxxxx xx kalibračnímu xxxxx (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx X x x xx/xx ve xxxxxx xx dán xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · X2 / X1 · x [xx/xx]
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxx vzorku (5.4) x μx/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v 5.4 x xx
x = hmota xxxxxxxx xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x xxxxxx koncentrací xxxxxxxx X může xxx xxxxxxxx spojit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx vsázek (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx jednoho xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx překročit 2x.
7.3 Xxxxx xx neobjeví xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), k xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX-α-xxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 xxxxxxxx xx roztoku (3.10.1 xxxx 3.10.2) přibližně 10 xx XXX (3.12) x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx doba xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx).
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx xxx použit hydrochinon.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx xx možné x použitím xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Namísto roztoku xxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx přibližně 50 mg EDTA.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxxx xxxxxx nesmí překročit 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [2]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx koncentrát |
Bílkovinný xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx xxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
x |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
xxxxx [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
xx [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [xx/xx] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [mg/kg] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
R [mg/kg] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx tryptofanu x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx X- a X- xxxxxxx.
2. Princip
Pro stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx při 110 °C xx 20 xxxxx. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx x vnitřní xxxxxxxx xxxx stanoveny x xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx HPLC x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Dvojnásobně xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx (vodivost &xx; 10 μS/cm)
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx > 99 %), sušený xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.4 Xxxx-xxxxxx xxxxxxxxx barnatého (xxxx být xxxxx, xxx xxxxx Ba(OH)2. 8 H2O nadměrně xxxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx BaCO3, jež xxxx xxxxx xxxxxxxxx) (xxx xxxxxxxx 9.3)
3.5 Xxxxxxxx xxxxx
3.6 Kyselina xxxx-xxxxxxxxxx, w = 85 %
3.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, p20 = 1,19 g/ml
3.8 Xxxxxxx, XXXX xxxxxx
3.9 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40–60 °X
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxxxx 40,0 x XxXX (3.5) xx vodě x xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 6 xxx/x:
Xxxxxxx 492 xx XXX (3.7) x doplňte xx 1 l xxxxx.
3.12 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 ml XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 mol/l:
Vezměte 8,2 xx XXX (3.7) x doplňte do 1 l vodou.
3.14 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 mol/l:
Vezměte 34 ml xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) a xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx roztok tryptofanu (3.2), c = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2553 x xxxxxxxxxx (3.2) x 500 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.13) x doplňte po xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx při –18 xX po xxxx maximálně xxxx xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx roztok, x = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2728 g α-xxxxxx-xxxxxxxxxx (3.3) x 500 xx odměrné baňce x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.13) a doplňte xx xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Skladujte xxx –18 xX xx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x vnitřní xxxxxxxx:
Xxxxxxx 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu (3.15), x 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x metanolem (3.8) xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx stejnou koncentraci xxxxxxxx (10–30 %) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxx čerstvý xxxx xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx chraňte xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxx
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Xxxxxxxxxxx &xx; 98 %
3.21 Xxxxxx 1 g 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanolu (3.19) xx 100 xx xxxxxxxx (3.8).
3.22 Xxxxxxx fáze xxx XXXX: 3,00 x xxxxxxxx octové (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 ml roztoku (3.21) 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanolu (3.19) x metanolu (3.8) (1x/100 xx). Xxxxxxx xX xx 5 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx xx 1000 xx xxxxx (3.1).
4. Přístroje a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx XXXX xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
4.2 Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.3 xX metr
4.4 Polypropylenová xxxxx, xxxxx 125 xx, se širokým xxxxxx x šroubovacím xxxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxx, 0,45 μx
4.6 Autokláv, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) xxxx
4.7 Mechanická xxxxxxxx xxxx magnetické xxxxxxxx
4.8 Vířivý mixer
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx tak, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 0,5 xx. Xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxx před xxxxxxxxxxx usušeny xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °X, xxxx zmrazením. Vzorky x vysokým xxxxxxx xxxx musí být xxxx mletím extrahovány xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (extrakt)
Odvažte x xxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky. Xxxxxxxx 100 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 mol/l (3.13) a 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx 60 xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x pipetujte 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx kádinky. Xxxxxxxx 5 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 mol/l (3.14). Upravte xX xx 3,0 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx, x = 1,0 xxx/x (3.10). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (3.8), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 a 30 % xxxxxxxx x konečném xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx kalibrační xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx HPLC xxxxxxxxxxxx několik ml xxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Provádějte xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx extrakty xxxxxx den, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °C xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.3 Xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,2 xx xx 0,1 xx 1 g xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx láhve (4.4). Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx 10 xx. Xxxxxxxx 8,4 x xxxx-xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxx (3.4) a 10 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (4.8) nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx směsi. Xxxxxxxxxx xxxxx nádoby 4 xx vody. Našroubujte xxxxxx a láhev xxxxx uzavřete. Xxxxxxxx xx autoklávu (4.6) x vroucí vodou x párou xx 30–60 xxxxx. Uzavřete xxxxxxxx x autoklávujte xxx 110 (+ 2) °C xx xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx autoklávu xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 100 °X. Xxx xxxxxxx xx krystalizaci Xx(XX)2. 8 X2X, xxxxxxxx do xxxxx xxxxx 30 xx xxxx o pokojové xxxxxxx. Mírně xxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx 2,00 xx koncentrovaného xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Zchlaďte xxxxxx xx xxxxx/xxxxxx xxxxx xx xxxx 15 xxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx 5 xx xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xX na 3,0 x xxxxxxxx XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Přidejte xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 a 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx objemu. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx vodou xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx sraženinu.
Před xxxxxxxxxxx xx xxxxxx XXXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx roztoku přes xxxxxxxxxx filtr 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 5.4.
Xxxxxxx standardní xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx. Xxxxx není xxxxx analyzovat xxxxxxxxxxx xxxxxx den, mohou xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °X xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.4 Xxxxxxxxx pomocí XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx jako doporučení; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx použity za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx výsledky (xxx xxxx xxxxxxxx 9.1 x 9.2):
Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 mm x 4 xx, C18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 3 μm xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx fáze (3.22): 3,00 g kyseliny xxxxxx (3.18) + 900 xx vody (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 xx). Xxxxxxx xX na 5,00 x použitím xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx xx 1000 ml vodou (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx doba xxxx: xxxxxxxxx 34 minut
Detekční xxxxxx xxxxx: xxxxxxxx: 280 xx, xxxxx: 356 xx
Xxxxxxxxx xxxxx: 20 μx
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X × B × X × X × E × XX / X × G × X × 10&xxxx;000 × X = g xxxxxxxxxx xx 100g xxxxxx
X = xxxxxx píku xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxx standardu (3.17)
X = plocha píku xxxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx hydrolyzátu (5.3)
X = objem roztoku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) (2 xx) přidaný xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = koncentrace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) v μmolech/ml (= 2,50) xxxxxxxxx xx kalibračního xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.16) x xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) xxxx xx hydrolyzátu (5.3) (= 2,00 xx)
X = plocha píku xxxxxxxxx standardu, xxxxxxxx (5.2) xxxx hydrolyzátu (5.3)
X = plocha xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
H = objem koncentrovaného xxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.16) v xx (= 2,00) xxxxxxxxx xx kalibračního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxx xxxxxx v x (opravená xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxxx sušen x/xxxx xxxxxxxx)
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (= 204,23)
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % z xxxxxxx xxxxxxxx.
8. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxx porovnání) xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx ve 12 xxxxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: počet jednotlivých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx testem)
sr: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx xxx xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx prasata xxxxxxxx X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
|
x |
50 |
55 |
50 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [x/xx] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
x [g/kg] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
CVr [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [g/kg] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
R [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx studijní xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx uspořádána xxx, že dva xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xx 13 xxxxxxxxxxxx k ověření xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledků (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx testem)
sr: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Směs xxxxxxx se xxxxx |
Xxxxxx 5 Xxxx pšenice xx xxxxx (= xxxxxx 4) x xxxxxxxx tryptofanem (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [g/kg] |
0,391 |
0,931 |
|
sr [x/xx] |
0,005 |
0,012 |
|
x [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
xX [x/xx] |
0,018 |
0,048 |
|
X [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Další xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx v xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx potvrzení xxxxxxxxxx xxx hydrolýzy. Výsledky xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx tabulce:
L: počet xxxxxxxxxx předkládajících xxxxxxxx
x: xxxxx jednotlivých hodnot xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (identifikované Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx krmivo pro xxxxxxx (XXX 117) |
Vzorek 2 Nízko-tučná rybí xxxxxx (CRM 118) |
Xxxxxx 3 Xxxxxx moučka (XXX 119) |
Vzorek 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [g/kg] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
sr [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
xX [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [g/kg] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
CVR [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Následující specielní xxxxxxxxxxxxxxxx podmínky xxxxx xxxxxxxxxx lepší xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx a α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx následované xxxxxxxxxxxx čistěním kolony:
|
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: |
125 xx x 4 xx, X18, velikost xxxxxx náplně 5 μx xxxx xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxx xxxxxx: |
32 °X |
||
|
Xxxxxxx xxxx: |
X: 0,01 xxx/x XX2XX4/xxxxxxx, 95 + 5 (xxxxxxxx + xxxxxxxx) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
15 xxx. |
100 % A |
0 % X |
|
|
17 min. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
21 min. |
100 % X |
0 % X |
|
|
33 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
Xxxxxx xxxx: |
1,2 ml/min. |
||
|
Celková xxxx xxxx: |
xxxxxxxxx 33 minut |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxx XXXX xxxxxx x xxxxxxxxx plnícího xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx startovní čáru xxxx tryptofanem x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxxx produkty xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx a vnitřního xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx být chromatografovány, xxx xx překontrolovala xxxxxxxxx čára xx xxxxxxxxx standardu xxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx doba běhu xxxx dostatečně xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx píky pozdního xxxxxxxx ovlivňovat následný xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
X rozsahu xxxxxxxx, xx měl xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx by xxxx xxx měřena x xxxxxxxxxx (normální) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx rozsahu HPLC/flourescenčního xxxxxxx. Pokud pík (xxxx) xxx xxxxxxxxxx, x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx (xxxx) xxxxxx xxxx (xxxx) xxxx xxxxxx xxxxxx (xxxxxx), xxxx by být xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx stává xxxxxxxx xxxxxxx hůře rozpustný. Xx xx projevuje x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX, xxx xxxx x xxxxxxxxxx způsobovat xxxxx xxxxxxxx.
[1] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).
[2] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx Xxxxxxx Deutscher Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).