Směrnice Xxxxxx 2000/45/XX
xx xxx 6. července 2000,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx vitamínu X, xxxxxxxx X x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx
(Xxxx x významem xxx EHP)
KOMISE EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX ze dne 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx aktem x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxx x Xxxxxxx [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv xx xxxxxx xxxxxxxx, zda xxxx xxxxxxx požadavky xxxxxxxx x správních xxxxxxxx na jakost x xxxxxxx krmiv, xxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx a analýzy.
(2) Xxxxxxxx Xxxx 70/524/EHS xx dne 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx [3], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx (XX) x. 2439/1999 xx xxx 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxx A a xxxxxxxx X musí xxx xxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxx xxxxx přidány xx xxxxxxx x xxxxx.
(3) Xxxxxxxx Xxxx 79/373/XXX ze xxx 2. dubna 1979 x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx na xxx [5], naposledy pozměněná xxxxxxxx Xxxxxx 2000/16/XX [6], a xxxxxxxx Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. xxxx 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx ke xxxxxxxxx xxxxxx výživy [7], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx 96/25/XX [8], xxxxxxx, xx aminokyseliny xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx krmiv.
(4) Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx.
(5) Opatření xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, aby se xxxxxx xxxxxxxx obsahu xxxxxxxx X, xxxxxxxx X x tryptofanu x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxx 2000. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx používat xx 1. xxxx 2000.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx učiněn při xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v platnost xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských společenství.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 6. xxxxxxxx 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxx Xxxxx
xxxx Komise
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Úř. věst. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. xxxx. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Úř. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Úř. xxxx. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Úř. věst. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
XXXXXXX
XXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXX A
1. Xxxx x oblast xxxxxxx
Xxxx xxxxxx je xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (xxxxxxxx) x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx A xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx alkohol x xxxx xxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxx metodou. Obsah xxxxxxxx A je xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (XX) xx xx. Xxxxx XX xxxxxxxx xxxxxxxx 0,300 μx all-trans-vitamín X xxxxxxxx xxxx 0,344 μx all-trans-vitamín X xxxxxxx xxxx 0,550 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 2000 XX xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx A xx xxxxxxxxxx do petroléteru. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a zbytek xx xxxxxxxx x xxxxxxxx a, xxxxx xx to nutné, xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx stanoví xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx použití XX nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx vybírány xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx all-trans-vitamín A xxxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Petroléter, xxxxxx varu 40 xx 60 °C
3.3 Xxxxxxx
3.4 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 g/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 poznámky)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx sulfidu xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 g/l (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 g/100 xx x etanolu (3.1)
3.8 2-propanol
3.9 Mobilní xxxx xxx XXXX: xxxx metanolu (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx poměr bude xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx použité xxxxxx.
3.10 Dusík, xxxxxx xxxxxxx
3.11 Xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxx, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 mg 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx X (3.11) xx 100 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xx 2-propanolu (3.8) x doplňte xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 1400 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx, xxxxx xxxxx, ověřené xxxxxxxx, xxxx. 1,80 x 106 IU/g.
3.12.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X palmitátu: Odvažte x xxxxxxxxx na 0,1 xx 80 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (3.12) xx 100 ml xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte xx 2-xxxxxxxxx (3.8) a xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 1400 XX xxxxxxxx X xx xx. Přesný obsah xxxx xxx stanoven xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx vakuová xxxxxxx
4.2 Nádobí z xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Baňky x xxxxxxx dnem xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky, 500 xx, se xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, úzkohrdlé, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, kuželovité, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx baňky, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx izolační xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx plynu.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 mm (xxxx. Schleicher &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 HPLC xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 mm, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μx xxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx pík xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx XXXX)
4.5.2 UV nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx s 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx přístroj (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1x xxxxxxxx zábrusovým xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx vybavená xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xxxxx být xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X xx citlivý xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x nepřítomnosti xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, nebo nádobí xxxxxxxxxx hliníkovou fólií) x xxxxxxx (vypláchněte xxxxxxx). Xxxxxx nad xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (vyhněte xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx tak, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 mm, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxx. Xxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxx x saponifikací, xxxxx může xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Saponifikace
V závislosti xx obsahu xxxxxxxx X, xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x xx 25 g xxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx kroužení 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 mg XXX (3.13), 2 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx sodného (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x xxxxx a xxxxxxx xxxxx do xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx míchadlem (4.7). Xxxxxxxx x varu x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx za stálého xxxxxxx xxx pomalým xxxxxxx dusíku. Xxxxx xxxxxxxxxxx kondenzátor přibližně 20 ml vody x xxxxx baňky xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx baňku xxxxxxxx 25 xx etanolu (3.1) x 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx výplachy xx dělící xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx nálevky (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx oddělily (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Opakujte xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx 50 ml xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx kombinované extrakty x dělící xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx zabránilo xxxxxx xxxxxx) a potom xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx obyčejně xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx extrakt xxxx xxxxx skládaný xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), aby xx odstranila všechna xxxxxxxxxxxx voda do 500 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx značku xxxxxxxxxxxx (3.2) x dobře xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx se xxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.3), nahraďte zátku xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx zábrusovou xxxxxx (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ve xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tak, xxx xxx xxxxx xxx xxxxxxxx rozhraní. Xx xxxxxx tlaku x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx ramene, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx do 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2) xx skleněného xxxxx, xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx a xxxxxxxx xxxxxx vrstvu xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Opakujte xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2), potom xxxxxxx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
Promyjte xxxxxxxxxxx extrakty xxxxxxxxxxx xxx, xxx je xx popsáno x 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx xx tam xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx roztoku xxxxxx pro XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx baňky xx tvaru xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx sucha xx rotační xxxxxxx xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.10) x odpojte baňku xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Odstraňte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx proudem xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx objemu (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xx xxxx xxx x xxxxxxx 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Stanovení xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xx reverzní xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XX detektoru (325 xx) xxxx fluorescenčního xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, xxxxx: 475 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μx) metanolového xxxxxxx xxxxxxxxx x 5.4 x vymývejte xxxxxxx xxxx (3.9). Vypočtěte xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) xxxxxxxx vstřiků xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxxxxxx vstřiků xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Podmínky XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx podmínky smějí xxx xxxxxxx za xxxxxxxxxxx, xx poskytují xxxxxx výsledky.
Kolona pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.9): Směs xxxxxxxx (3.3) a xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx toku: 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): XX xxxxxxxx (325 nm) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 nm/emise: 475 xx)
5.6 Kalibrace
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X acetátu (3.11.1) xxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X palmitátu (3.12.1) xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, jak je xx popsáno x 5.2, ale xxx xxxxxxxx BHT. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx do 500 xx xxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx 100 xx xxxxxx extraktu xx xxxxxxx vakuové odparce (xxx 5.4) xxxxx xx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx zbytek x 10,0 xx xxxxxxxx (3.3). Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 560 XX xxxxxxxx A/1 xx. Xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx být čerstvě xxxxxxxxx xxxx použitím.
Pipetujte 2,0 xx tohoto xxxxxxxxxxxx pracovního roztoku xx 20 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx značku xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 56 XX vitamínu X xx xx.
5.6.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 5,0 a 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx sérií 20 xx odměrných xxxxx, xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx jsou 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 IU xxxxxxxx A xx xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx kalibračního xxxxxxx x stanovte xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx píků (xxxxx) nyrýsujte kalibrační xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX xxxxxxxx (5.6.3.3).
5.6.3 XX xxxxxxxxxxxxx standardních xxxxxxx
5.6.3.1 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx A acetátu
Pipetujte 2,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 IU xxxxxxxx X xx xx. Pipetujte 3,0 xx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx xx 25 xx odměrné xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace tohoto xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx X xx ml. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) ve xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx a 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 nm a 327 nm.
Výpočet xxxxxx xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx xxx xxxxxxx A xxxxxxx = 1&xxxx;530 xxx 326 xx ve 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx A palmitátu
Pipetujte 2,0 xx zásobního xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxxxx (3.12.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx. Pipetujte 3,0 xx tohoto zředěného xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx xx 25 xx odměrné xxxxx x doplňte xx xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx A xx ml. Změřte XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) ve spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx být xxxx 325 xx a 327 nm.
Výpočet xxxxxx xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
E1%1cm pro xxxxxxx X xxxxxxx = 957 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx X
Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx A, připraveného xxxxx 5.6.1 xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxx xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx baňky x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 6,72 XX vitamínu A xx xx. Změřte XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx a 400 xx. Xxxxxxxxx maximum xxxx být xxxx 325 xx a 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx A:
IU vitamínu X/xx = X325 × 18,3
X1%1xx xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 1 821 při 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx výšky (plochy) xxxx pro xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx v IU/ml xx vztahu ke xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2).
Obsah xxxxxxxx X w x XX/xx xx xxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · X2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx které:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x roztoku xxxxxx (5.4) x XX/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) v xx
X2 = xxxxx xxxxxxx odebraných v 5.4 v xx
x = hmota xxxxxxxx xxxxx v x
7. Xxxxxxxx
7.1 X vzorků x nízkou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X může xxx xxxxxxxx spojit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (hmotnostní xxxxxxx: 25 g) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx XXXX.
7.2 Xxxxxxxx xxxx xx vzorku xxxxxxxxx xxx analýzu xx xxxxxx překročit 2x.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx fázové xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx etanolu (3.1), x rozrušení xxxxxx.
7.4 X rybího xxxx x xxxxxxxxx čistých xxxx xx měla xxx xxxx saponifikace xxxxxxxxxxx xx 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx BHT xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Oddělení xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxx x použitím normální xxxxxx xxxxxx.
7.7 Namísto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx roztoku xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx použito přibližně 50 mg EDTA.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 15 % z xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: koeficient variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro selata |
|
|
L |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
n |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
střed [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
sr [XX/xx] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [IU/kg] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [IU/kg] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
X [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
ČÁST X
XXXXXXXXX XXXXXXXX E
1. Xxxx x oblast xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx x premixech. Xxxxx vitamínu X xx vyjádřen xxxx xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx kg. 1 xx DL-α-tokoferol xxxxxxx xxxxxxxx 0,91 mg XX-α-xxxxxxxxxx (xxxxxxx E).
Mez xxxxxxxxxxxxxxx je 2 xx vitamínu X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztokem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx xx petroléteru. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx odpařením x xxxxxx xx xxxxxxxx v metanolu x, xxxxx xx xx xxxxx, xxxxx xx požadovanou xxxxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu X xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx účinné xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx použití UV xxxx xxxxxxxxxxxxxxx detekce.
3. Xxxxxxx
3.1 Etanol, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 g/100 xx
3.5 Roztok askorbanu xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 poznámky)
3.6 Xxxxxx sodný, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Roztok xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 mol/l x glycerolu, β = 120 g/l (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx fenolftaleinu, β = 2 x/100 ml v xxxxxxx (3.1)
3.8 Mobilní xxxx xxx XXXX: xxxx metanolu (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově). Xxxxxxxxx poměr bude xxxxxxxx charakteristikami xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Dusík, prostý xxxxxxx
3.10 DL-α-tokoferol xxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.10.1 Xxxxxxx roztok XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxxxx x přesností na 0,1 mg, 100 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x etanolu (3.1) x doplňte xx xxxxxx stejným xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx. (XX kontrola – xxx 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – viz 7.4 xxxxxxxx).
3.11 DL-α-tokoferol, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.11.1 Odvažte x xxxxxxxxx na 0,1 xx, 100 mg XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx po značku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (UV kontrola – viz 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – viz 7.4 xxxxxxxx).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Baňky x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx zábrusovými xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx baňky, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.3 Allihnův xxxxxxxxxxx, xxxxx izolační xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx plynu
4.4 Xxxxxxxx filtrační papír xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Schleicher &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 HPLC výbava xx xxxxxxxxxxxx systémem
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 mm, X18, velikost částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlnové xxxxx
4.6 Spektrofotometr x 10 mm xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Vodní xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx přístroj (viz xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx trubice xxxx mít xxxxxx xxxxx ve xxxxx xxxxxxx U x xxxxxx xx opačném xxxxx xxx, xxx xxxxx být xxxxx xxxxxx kapaliny xx xxxxx převedena xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xxxx (UV) xxxxxx x xxxxxxx. Všechny xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx x opakního xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx hliníkovou xxxxx) x xxxxxxx (vypláchněte xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx povolením xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, xxx xxxxxx sítem s xxxxxx 1 mm, xxxxxxx dbejte, xxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxx musí být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Saponifikace
V závislosti xx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxx X odvažte x xxxxxxxxx na 0,01 g, 2 x xx 25 x vzorku xx 500 ml xxxxx x plochým dnem xxxx Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.12), 2 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) k xxxxx x xxxxxxx baňku xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx míchadlem (4.7). Xxxxxxxx x xxxx a nechejte xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx xx xxxxxxx míchání xxx xxxxxxx proudem dusíku. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx a obsah xxxxx ochlaďte xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx do 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx dělící xxxxxxx xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x etanolu x kombinovaných xxxxxxxxx xx měl xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx dvě xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x použitím xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx se xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), převeďte xxxxxx petroléteru do xxxxx dělící xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx dvakrát 100 xx xxxxxxx xxxx xx současného xxxxxxxx (aby xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx) x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, xxxxx voda xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (čtyřnásobné promývání xx xxxxxxxx dostačující). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx přes xxxxx xxxxxxxx filtr xxx xxxxxx fází (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx všechna xxxxxxxxxxxx xxxx do 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx vrstvy xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x nasměrujte xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tak, xxx xxx právě nad xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx dusíku xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx vrstvu petroléteru xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx nálevky xxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx postup xxxxxxxx dalšími 100 xx petroléteru (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx dávkami petroléteru (3.2) a xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx tak, xxx xx to xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx jak xx xxx popsáno.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx vzorku xxx HPLC
Odpipetujte xxxxxxxxx xxxx roztoku xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) do 250 xx xxxxx xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxx lázně xxxxxxxxxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tlak xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 ml) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxx 5 μx/xx až 30 μg/ml).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx oddělen xx xxxxxxxx xxxxxx koloně X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 nm, xxxxx: 330 xx) xxxx XX xxxxxxxxx (292 nm) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μl) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxx výšky xxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxx stejného xxxxxx x střední xxxxx (plochy) několika xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx podmínky xxxxx xxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx shodné výsledky.
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 mm x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μm nebo xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.8): Xxxx metanolu (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově)
Úroveň xxxx: 1–2 ml/min.
Detektor (4.5.2): Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx/xxxxx: 330 nm) nebo XX xxxxxxxx (292 xx)
5.6 Kalibrace (DL-α-tokoferol xxxxxxx xxxx DL-α-tokoferolu)
5.6.1 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu
5.6.1.1 Xxxxxxxx standardních xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 25 xx xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx acetátu (3.10.1) xx 500 xx xxxxx x plochým xxxx xxxx Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1) a xxxxxxxxxxxx, jak je xx xxxxxxx x 5.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx 25 xx xxxxxx extraktu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx dusíku (3.9) x znovu xxxxxxxxx xxxxxx x 25,0 xx netanolu (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 45,5 μx DL-α-tokoferolu xx xx, xxxxxxxxxx 50 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok musí xxx xxxxxxx připraven xxxx použitím.
5.6.1.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,5, 5,0, 10,0 x 25,0 μx/xx DL-α-tokoferol xxxxxxx, xx. 2,28, 4,55, 9,10 a 22,8 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μl xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx píků (plochy). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx kalibrační xxxx.
5.6.1.3 XX standardizace zásobního xxxxxxx DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 25,0 xx xxxxxxxx x změřte UV xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 nm.
Absorpční xxxxxxx by xxxx xxx xxx 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284xx x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 2,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxx (3.3) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 40 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, xxxxxxxxxx 44,0 μx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx připraven před xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x kalibrační xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx do sérií 20 xx odměrných xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx, tj. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxx několikrát 20 μl xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) narýsujte xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Rozřeďte 2,0 xx xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) na 25,0 ml xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx roztoku xxxxx etanolu (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx při 292 nm:
E1%1cm = 75,8 xxx 292xx x xxxxxxx
Xxx tomto xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx extinkce 0,6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x μx/xx (xxxxxxxx xxxx α-tokoferol xxxxxx) xx xxxxxx xx kalibračnímu xxxxx (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Obsah xxxxxxxx E x x xx/xx xx xxxxxx je xxx xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · X2 / X1 · x [xx/xx]
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx E x roztoku vzorku (5.4) x μx/xx
X1 = objem xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx odebraných x 5.4 x ml
m = hmota zkušební xxxxx v x
7. Xxxxxxxx
7.1 U xxxxxx x nízkou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X může xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx petroléteru dvou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 g) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 ml xxxxxxx (3.1), k xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Po xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx měření xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xxxx XX-α-xxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 přidejte xx xxxxxxx (3.10.1 xxxx 3.10.2) xxxxxxxxx 10 mg XXX (3.12) x skladujte xxxxxx v xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx).
7.5 Xxxxxxx BHT xxxx xxx použit xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- a δ xxxxxxxxxx xx xxxxx x použitím xxxxxxxx xxxxxx kolony.
7.7 Namísto xxxxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx přibližně 50 xx EDTA.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [2]
X: xxxxx laboratoří
n: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro selata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
n |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
střed [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
sr [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [mg/kg] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [mg/kg] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
R [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
ČÁST X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx použití
Tato metoda xx určena xxx xxxxxxxxx celkového x xxxxxxx tryptofanu x xxxxxxxx. Nerozlišuje xxxx X- x L- xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx tryptofanu xx xxxxxx hydrolyzován xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx barnatého x xxxxxxxx xxx 110 °X xx 20 hodin. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxx xxxxxxxx podmínek x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx a vnitřní xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx XXXX x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx voda xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx používána (vodivost &xx; 10 μX/xx)
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxx: tryptofan (xxxxxxx/xxxxx > 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx přes pentoxid xxxxxxx
3.3 Xxxxxxx standardní xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx pod xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.4 Xxxx-xxxxxx xxxxxxxxx barnatého (xxxx xxx dbáno, xxx xxxxx Xx(XX)2. 8 H2O xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx XxXX3, jež xxxx xxxxx xxxxxxxxx) (xxx xxxxxxxx 9.3)
3.5 Xxxxxxxx xxxxx
3.6 Kyselina xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, p20 = 1,19 x/xx
3.8 Metanol, XXXX xxxxxx
3.9 Petroléter, xxxxxx xxxx 40–60 °X
3.10 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx, c = 1 xxx/x:
Xxxxxxxxx 40,0 x XxXX (3.5) xx vodě x xxxxxxx do 1 x vodou (3.1).
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x:
Xxxxxxx 492 xx XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 l xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 xx XXX (3.7) a xxxxxxx xx 1 x vodou.
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x:
Xxxxxxx 8,2 xx XXX (3.7) x doplňte xx 1 l xxxxx.
3.14 Xxxxxxxx orto-fosforečná, c = 0,5 xxx/x:
Xxxxxxx 34 ml kyseliny xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) x xxxxxxx xx 1 x vodou (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.2), c = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2553 x xxxxxxxxxx (3.2) x 500 ml xxxxxxx xxxxx v xxxxxxxx chlorovodíkové (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Skladujte při –18 oC po xxxx maximálně čtyř xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2728 x α-xxxxxx-xxxxxxxxxx (3.3) x 500 xx xxxxxxx baňce x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 xX xx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxxx 2,00 xx koncentrovaného xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15), x 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx roztoku vnitřního xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x metanolem (3.8) xx přibližně xxxxxx xxxxx a xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (10–30 %) xxxx konečný xxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx chraňte xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx octová
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Xxxxxxxxxxx > 98 %
3.21 Xxxxxx 1 x 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanolu (3.19) xx 100 xx xxxxxxxx (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: 3,00 x xxxxxxxx octové (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x metanolu (3.8) (1x/100 xx). Upravte xX xx 5 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx do 1000 xx vodou (3.1).
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx XXXX xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
4.2 Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 125 xx x 4 xx, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 3 μx xxxx ekvivalent
4.3 xX metr
4.4 Polypropylenová xxxxx, xxxxx 125 xx, se xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxx, 0,45 μm
4.6 Autokláv, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) xxxx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.8 Vířivý xxxxx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx rozmělněn xxx, xxx xxxxxx sítem x xxxxxx 0,5 xx. Xxxxxx, xxxxx xxxx vysokou vlhkost, xxxx být xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °X, xxxx zmrazením. Xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxx musí xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu (xxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky. Xxxxxxxx 100 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 xxx/x (3.13) x 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx 60 xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x pipetujte 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 ml xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxx xX xx 3,0 za xxxxxxx hydroxidu sodného, x = 1,0 xxx/x (3.10). Přidejte xxxxxxxxx xxxxxxxx (3.8), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % xxxxxxxx x konečném xxxxxx. Xxxxxxxx xx odměrné xxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx objem xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Před vstříknutím xx xxxxxx HPLC xxxxxxxxxxxx několik xx xxxxxxx přes membránový xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Chraňte xxxxxxxxxx xxxxxx a extrakty xxxx přímým slunečním xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx analyzovat xxxxxxxx xxxxxx xxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °C xx xxxxxxxxx dobu tří xxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,2 xx xx 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.4). Xxxxxxxx dávka xxxxxx xx měla xxx obsah dusíku xxxxx 10 xx. Xxxxxxxx 8,4 x xxxx-xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.4) x 10 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (4.8) xxxx magnetickém xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx potažený magnet xx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx nádoby 4 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx uzavřete. Přeneste xx autoklávu (4.6) x xxxxxx vodou x xxxxx xx 30–60 xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx a autoklávujte xxx 110 (+ 2) °C po xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx snižte xxxxxxx právě xxx 100 °X. Xxx xxxxxxx xx krystalizaci Xx(XX)2. 8 H2O, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx 30 xx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vnitřního standardu (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxxxx xxxxxx ve vodní/ledové xxxxx xx dobu 15 xxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx 5 xx orto-fosforečné xxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx nádobu ve xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xX xx 3,0 x použitím XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Xxxxxxxx xxxxxxxxx metanolu, xxxxxx xxxxxxxx koncentraci xxxx 10 a 30 % metanolu x xxxxxxxx objemu. Převeďte xx xxxxxxx baňky x vhodném objemu x xxxxxx vodou xx xxxxxxxxxx objem xxxxxxxx xxx chromatografii (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxxxx do kolony XXXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx roztoku přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 5.4.
Xxxxxxx standardní xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx. Pokud xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °X xx xxxxxxxxx dobu xxx xxx.
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx doporučení; xxxxxxx podmínky xxxxx xxx xxxxxxx za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx výsledky (xxx xxxx poznámky 9.1 x 9.2):
Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μm xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.22): 3,00 x xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx vody (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 xx). Upravte xX xx 5,00 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Doplňte xx 1000 xx vodou (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx doba xxxx: xxxxxxxxx 34 xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx xxxxx: excitace: 280 xx, xxxxx: 356 xx
Xxxxxxxxx xxxxx: 20 μl
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X × X × X × X × X × MW / X × X × X × 10&xxxx;000 × W = x tryptofanu xx 100x xxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.17)
B = xxxxxx píku xxxxxxxxxx, extraktu (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
C = objem xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) (2 xx) xxxxxxx xx kalibračního roztoku (3.17)
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx roztoku tryptofanu (3.15) v μxxxxxx/xx (= 2,50) přidaného xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.16) x xx xxxxxxxxx při xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) xxxx xx xxxxxxxxxxx (5.3) (= 2,00 xx)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx hydrolyzátu (5.3)
X = xxxxxx xxxx tryptofanu, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
H = xxxxx koncentrovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x ml (= 2,00) xxxxxxxxx xx kalibračního standardního xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxx xxxxxx v x (xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx, jestliže xxx xxxxxx xxxxx x/xxxx xxxxxxxx)
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx tryptofanu (= 204,23)
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
8. Xxxxxxxx studijní xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx spolupráce Xxxxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxx porovnání) xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 12 xxxxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx xxxx prováděny x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx jednotlivých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Krmivo xxx xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
|
x |
50 |
55 |
50 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [x/xx] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
x [x/xx] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
XXx [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [x/xx] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
X [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx xxxxxxxx spolupráce Xxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, že xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx ve 13 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu. Replikované (5) analýzy xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Výsledky jsou xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot zadržených xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx testem)
sr: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx opakovatelnosti, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Xxxx xxxxxxx se xxxxx |
Xxxxxx 5 Směs xxxxxxx xx xxxxx (= xxxxxx 4) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [x/xx] |
0,391 |
0,931 |
|
xx [x/xx] |
0,005 |
0,012 |
|
x [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
xX [g/kg] |
0,018 |
0,048 |
|
R [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Xxxxx studijní xxxxxxxxxx Společenství xxxx xxxxxxxxxx tak, xx xxxxx vzorky xxxx xxxxxxxxxxx xx v xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx uvedeny v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx předkládajících xxxxxxxx
x: xxxxx jednotlivých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (identifikované Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx (XXX 117) |
Xxxxxx 2 Xxxxx-xxxxx xxxx xxxxxx (XXX 118) |
Xxxxxx 3 Xxxxxx xxxxxx (XXX 119) |
Xxxxxx 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
xX [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [g/kg] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
CVR [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx tryptofanem x α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: |
125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 5 μx xxxx xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxx xxxxxx: |
32 °X |
||
|
Xxxxxxx fáze: |
A: 0,01 xxx/x XX2XX4/xxxxxxx, 95 + 5 (xxxxxxxx + xxxxxxxx) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
15 xxx. |
100 % A |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % X |
40 % B |
|
|
21 xxx. |
100 % A |
0 % X |
|
|
33 min. |
100 % X |
0 % B |
|
|
Úroveň xxxx: |
1,2 ml/min. |
||
|
Celková xxxx xxxx: |
xxxxxxxxx 33 minut |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx se xxxx xxxxxx xxxxx xxxx XXXX xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx materiálu. Xxxxxxx xxxxxx musí xxx schopen poskytnout xxxxxxxxx xxxxxxxxx čáru xxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Navíc xx důležité, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odděleny xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx čára xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx všech xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx píky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
X rozsahu xxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx by měla xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardu a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxx xxxxxxx HPLC/flourescenčního xxxxxxx. Xxxxx pík (xxxx) buď tryptofanu, x/xxxx vnitřního xxxxxxxxx xx (jsou) xxxxxx xxxx (xxxx) xxxx xxxxxx vysoký (xxxxxx), xxxx by xxx xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x/xxxx změněným xxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Hydroxid barnatý
Stářím xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hůře xxxxxxxxx. Xx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx stanovení xxxxxx XXXX, xxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
[1] Xxxxxx xxxxxxxx skupinou xxx xxxxxx Xxxxxxx Deutscher Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).
[2] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).