Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/45/XX
xx xxx 6. července 2000,
xxxxxx se stanoví xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxx X x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx
(Xxxx x významem xxx EHP)
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx o založení Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxx Společenství xxx úřední xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx aktem o xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Finska x Xxxxxxx [2], x xxxxxxx na xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx:
(1) Směrnice 70/373/EHS xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, zda xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
(2) Xxxxxxxx Rady 70/524/EHS xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx látkách x xxxxxxxx [3], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx (XX) x. 2439/1999 xx dne 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx X musí xxx uváděn xx xxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxx xxxxx přidány xx xxxxxxx a xxxxx.
(3) Směrnice Rady 79/373/XXX xx dne 2. dubna 1979 x xxxxxxx krmných xxxxx xx xxx [5], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 2000/16/XX [6], a xxxxxxxx Xxxx 93/74/EHS xx xxx 13. xxxx 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx ke xxxxxxxxx xxxxxx výživy [7], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx 96/25/XX [8], xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx krmiv.
(4) Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx.
(5) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Členské xxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxx kontroly obsahu xxxxxxxx X, vitamínu X a xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx prováděly xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 31. xxxxx 2000. Neprodleně o xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. září 2000.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx směrnici xxxx xxxx xxx takový xxxxx xxxxxx při xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské státy.
Xxxxxx 3
Tato směrnice xxxxxxxx v platnost xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Článek 4
Xxxx směrnice xx určena členským xxxxxx.
X Bruselu xxx 6. července 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Byrne
člen Xxxxxx
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Xx. věst. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. věst. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Úř. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Xx. xxxx. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Úř. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
XXXXXXX
XXXX X STANOVENÍ XXXXXXXX X
1. Účel x xxxxxx použití
Tato xxxxxx je xxxxxx xxx stanovení vitamínu X (xxxxxxxx) x xxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx X zahrnuje xxx-xxxxx-xxxxxxx xxxxxxx a xxxx cis izomery, xxxxx xx xxxxxxx xxxxx metodou. Obsah xxxxxxxx X je xxxxxxxx x mezinárodních xxxxxxxxxx (XX) xx xx. Xxxxx XX xxxxxxxx xxxxxxxx 0,300 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx xxxx 0,344 μx all-trans-vitamín X xxxxxxx xxxx 0,550 μx all-trans-vitamín X xxxxxxxxx.
Xxx stanovitelnosti xx 2000 IU xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx A xx xxxxxxxxxx do xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxx x, xxxxx xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Obsah vitamínu X xx stanoví xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX xxxx fluorescenční xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx, β = 50 g/100 xx
3.5 Xxxxxx askorbanu sodného, β = 10 x/100 ml (viz 7.7 poznámky)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Roztok xxxxxxx xxxxxxx, c = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (xxx x = 9) (xxx 7.8 poznámky)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 g/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 2-propanol
3.9 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově). Xxxxxxxxx poměr bude xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx použité xxxxxx.
3.10 Dusík, xxxxxx xxxxxxx
3.11 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxx, extra xxxxx, xxxxxxx aktivity, xxxx. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Zásobní xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx X (3.11) xx 100 xx xxxxxxx baňky. Rozpusťte xx 2-propanolu (3.8) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx je 1400 XX vitamínu X xx ml. Přesný xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 1,80 x 106 IU/g.
3.12.1 Xxxxxxx xxxxxx all-trans-vitamín X xxxxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 mg 80 xx xxxxxxxxx vitamínu X (3.12) xx 100 xx odměrné xxxxx. Rozpusťte xx 2-xxxxxxxxx (3.8) a xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 1400 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx obsah xxxx být xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Nádobí z xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Baňky x xxxxxxx dnem xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx zábrusovými xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Dělící xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx zábrusovými xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 xx, se xxxxxxxxxxx hrdly
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 mm, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx trubici xxxxx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papír xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx vstřikovacím xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx pro kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μm nebo xxxxxxx (výkonnostní xxxxxxxxx: xxxxx jednotlivý pík xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx XXXX)
4.5.2 UV xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Spektrofotometr s 10 xx křemennými xxxxxxxx
4.7 Xxxxx lázeň x magnetickým míchadlem
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) sestávající xx:
4.8.1 Xxxxxxxx odměrný xxxxx x xxxxxx 1x vybavený xxxxxxxxxx xxxxxx x zátkou
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx ramenem x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xx tvaru xxxxxxx X x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xxxxx xxx horní xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx převedena xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X je xxxxxxx xxxx (UV) xxxxxx x xxxxxxx. Všechny xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, xxxx nádobí xxxxxxxxxx hliníkovou fólií) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx občasným xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx tak, xxx xxxxxx sítem s xxxxxx 1 mm, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx x zahřátí. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx dojít xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxx vitamínu X, xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 g xx 25 x xxxxxx do 500 xx xxxxx s xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 mg XXX (3.13), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a 2 xx roztoku xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx míchadlem (4.7). Xxxxxxxx x varu x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) xxxx kondenzátor (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx xx stálého xxxxxxx xxx pomalým xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přibližně 20 xx vody x obsah baňky xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx kvantitativně xxxxxxxxxxxx celkovým xxxxxxx 250 ml vody xx 1000 ml xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx xx extrakčního xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx baňku postupně 25 ml etanolu (3.1) x 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx do extrakčního xxxxxxxxx. Podíl xxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx roztocích musí xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx dvě xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx vrstvy xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx vrstvu petroléteru xx další dělící xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx extrakci xxxxxxx 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx 50 ml xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx 100 xx xxxxxxx vody, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je obyčejně xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx extrakt xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 ml xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx petroléterem (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (viz poznámky 7.3), nahraďte xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx zábrusovou xxxxxx (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ve xxxxx písmene U xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx byl xxxxx xxx hladinou rozhraní. Xx xxxxxx xxxxx x rozvodu xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Přidejte 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vrstvy xxxxxxx xx a xxxxxxxx xxxxxx vrstvu xx dělící xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Opakujte xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx vrstvy xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx petroléteru xxx, xxx xx xx xxxxxxx v 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx je xxx xxxxxxx.
5.4 Příprava xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx baňky xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Odpařte rozpouštědlo xxxxx xx xxxxx xx rotační vakuové xxxxxxx (4.1) za xxxxxxxxx tlaku xxx xxxxxxx vodní lázně xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx dusíku (3.10) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) a xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx objemu (10–100 xx) metanolu (3.3) (xxxxxxxxxxx vitamínu X xx měla být x xxxxxxx 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Stanovení xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) a koncentrace xx xxxxxx xxxxxx XX detektoru (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, emise: 475 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (např. 20 μx) xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx x 5.4 x xxxxxxxxx mobilní xxxx (3.9). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx píku (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx stejného xxxxxx x střední výšky (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx podmínky xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 xx, C18, xxxxxxxx částic náplně 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.9):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; Směs xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; XX xxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor (xxxxxxxx: 325 nm/emise: 475 nm)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx (3.11.1) xxxx 20 xx xxxxxxxxx roztoku vitamín X palmitátu (3.12.1) xx 500 xx xxxxx s xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx je xx xxxxxxx v 5.2, ale bez xxxxxxxx XXX. Následně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx do 500 xx xxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx 100 xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) téměř xx xxxxx, odstraňte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx proudem xxxxxx (3.10) x xxxxx rozpusťte xxxxxx x 10,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 560 XX xxxxxxxx A/1 ml. Xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx podle 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 20 ml xxxxxxx baňky, doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) a promíchejte. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx je 56 XX xxxxxxxx X xx xx.
5.6.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0 x 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního roztoku xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx značku xxxxxxxxx (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx jsou 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 IU xxxxxxxx X xx xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x stanovte xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) nyrýsujte xxxxxxxxxx xxxx odpovídající výsledkům XX xxxxxxxx (5.6.3.3).
5.6.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.3.1 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx A acetátu
Pipetujte 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx (3.11.1) do 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace tohoto xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Změřte XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx proti 2-xxxxxxxxx (3.8) xx spektrofotometru (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx maximum xxxx být mezi 325 xx a 327 xx.
Xxxxxxx obsahu xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
E1%1cm xxx xxxxxxx A alkohol = 1 530 při 326 nm xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx A xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx zásobního xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) do 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx A xx xx. Pipetujte 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx X xx ml. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx xxx mezi 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = E326 × 19,0
E1%1cm xxx xxxxxxx X alkohol = 957 xxx 326 nm xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vitamínu X
Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx X, připraveného xxxxx 5.6.1 xx 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxx xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx baňky x doplňte xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX vitamínu A xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx spektrofotometru (4.6) mezi 300 xx a 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx být xxxx 325 nm x 327 nm.
Výpočet obsahu xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = X325 × 18,3
X1%1xx pro xxxxxxx X xxxxxxx = 1&xxxx;821 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
6. Výpočet výsledků
Ze xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx vitamínu X xxxxxxxx koncentraci roztoku xxxxxx x IU/ml xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2).
Obsah xxxxxxxx X x x IU/kg xx xxxxxx xx dán xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxx vzorku (5.4) v XX/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 x xx
x = xxxxx xxxxxxxx xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x nízkou koncentrací xxxxxxxx A xxxx xxx užitečné xxxxxx xxxxxxxx petroléteru dvou xxxxxxxxxxxxxxx vsázek (hmotnostní xxxxxxx: 25 g) xx jednoho xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení xxxxxx XXXX.
7.2 Xxxxxxxx xxxx xx vzorku xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx nemělo xxxxxxxxx 2x.
7.3 Pokud se xxxxxxxx xxxxxx dělení, xxxxxxxx přibližně 10 xx xxxxxxx (3.1), x rozrušení emulze.
7.4 X xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx čistých xxxx by měla xxx doba xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 45–60 xxxxx.
7.5 Namísto BHT xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Oddělení xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx normální xxxxxx xxxxxx.
7.7 Namísto xxxxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Namísto roztoku xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 mg EDTA.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 15 % z xxxxxxx výsledku.
9. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx koncentrát |
Bílkovinný xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro selata |
|
|
L |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
n |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
střed [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
sr [IU/kg] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [XX/xx] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
CVr [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [IU/kg] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
X [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
ČÁST X
XXXXXXXXX VITAMÍNU X
1. Xxxx a oblast xxxxxxx
Xxxx xxxxxx je xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx a premixech. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxxx jako xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx kg. 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,91 xx XX-α-xxxxxxxxxx (xxxxxxx E).
Mez xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxxxx E/kg.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztokem hydroxidu xxxxxxxxxx x xxxxxxx X je xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx v metanolu x, xxxxx xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu X xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx použití UV xxxx fluorescenčního detekce.
3. Xxxxxxx
3.1 Etanol, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, rozsah xxxx 40 až 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 g/100 xx
3.5 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 poznámky)
3.6 Xxxxxx sodný, Xx2X. x H2O (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x x glycerolu, β = 120 x/x (xxx x = 9) (viz 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 Mobilní xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx bude xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Xxxxx, prostý xxxxxxx
3.10 XX-α-xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.10.1 Zásobní xxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu: Odvažte x přesností na 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu (3.10) xx 100 xx odměrné xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx roztoku obsahuje 1 xx DL-α-tokoferol xxxxxxx. (XX kontrola – xxx 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 poznámky).
3.11 XX-α-xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.11.1 Odvažte s xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) a xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 mg XX-α-xxxxxxxxxx. (UV xxxxxxxx – viz 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Erlenmeyerovy xxxxx, 500 ml, se xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Odměrné xxxxx xx zábrusovými xxxxxxx, úzkohrdlé, 10, 25, 100 x 500 ml
4.2.3 Dělící xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Hruškovité xxxxx, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx izolační xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx hrdlem, x adaptérem xxx xxxxxxxx trubici plynu
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx oddělení fáze, xxxxxx 185 mm (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 HY 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx vstřikovacím xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.5.2 UV xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlnové xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Vodní lázeň x magnetickým xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1x vybavený zábrusovým xxxxxx a xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx vybavená xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx procházející xxxxxxx. Nastavitelná trubice xxxx xxx xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx U x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, aby xxxxx xxx horní xxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Všechny xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx použití xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx hliníkovou xxxxx) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx nad xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx se xxxxxxxx občasným povolením xxxxx).
5.1 Příprava vzorku
Rozmělněte xxxxxx tak, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx x zahřátí. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx bezprostředně před xxxxxxx a saponifikací, xxxxx může dojít xx ztrátám vitamínu X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx E xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x xx 25 x xxxxxx xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx kroužení 130 xx xxxxxxx (3.1), přibližně 100 xx XXX (3.12), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 ml xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x baňce x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx lázně x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx x xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx minut. Xxxxx přidejte 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx za xxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxx proudem xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx kondenzátor xxxxxxxxx 20 xx xxxx a xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx vypláchnutím celkovým xxxxxxx 250 xx xxxx xx 1000 xx dělící xxxxxxx (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx saponifikační baňku xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx přístroje. Xxxxx xxxx a xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx měl xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx dělící xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx se xxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxx xxxxxx nálevky (4.2.3). Xxxxxxxx tuto xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx 50 xx petroléteru (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx extrakty v xxxxxx xxxxxxx dvakrát 100 xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (aby se xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx) x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x dalšími 100 ml dávkami xxxx, xxxxx voda xxxxxxxxx bezbarvá xx xxxxxxxx xxxxxxx fenolftaleinu (3.7) (xxxxxxxxxxx promývání xx obyčejně xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), aby xx xxxxxxxxxx xxxxxxx suspendovaná xxxx xx 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Vypláchněte xxxxxx xxxxxxx x filtr 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Když xx xxxxxx oddělily (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx xxxxx skleněného xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx vložku (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx tvaru xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tak, xxx xxx xxxxx xxx xxxxxxxx rozhraní. Za xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx ramene, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx petroléteru xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx válce, xxxxxxxxxx x dobře xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vrstvy xxxxxxx xx a převeďte xxxxxx vrstvu xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Opakujte xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx petroléteru do xxxxxx nálevky.
Promyjte kombinované xxxxxxxx petroléteru xxx, xxx je xx xxxxxxx v 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx HPLC
Odpipetujte alikvotní xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx xxxxx ve xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx odparce (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx při teplotě xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tlak připuštěním xxxxxx (3.9) x xxxxxxx xxxxx od xxxxxxx vakuové odparky. Xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx dusíku (3.9) x xxxxx rozpusťte xxxxxx ve xxxxxx xxxxxx (10–100 ml) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx xx xxxx xxx v xxxxxxx 5 μg/ml xx 30 μx/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx HPLC
Vitamín X xx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 nm, xxxxx: 330 xx) xxxx UV xxxxxxxxx (292 nm) (4.5.2).
Vstříkněte xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μl) metanolového xxxxxxx získaného x 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx fází (3.8). Xxxxxxxxx střední xxxxx xxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx HPLC
Následující xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; ostatní xxxxxxxx xxxxx xxx použity xx předpokladu, že xxxxxxxxx shodné výsledky.
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 nebo 10 μx nebo xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.8): Xxxx metanolu (3.3) x vody, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx: 1–2 ml/min.
Detektor (4.5.2): Xxxxxxxxxxxxx detektor (xxxxxxxx: 295 xx/xxxxx: 330 nm) xxxx XX detektor (292 xx)
5.6 Xxxxxxxxx (XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx nebo DL-α-tokoferolu)
5.6.1 Xxxxxxxx DL-α-tokoferol acetátu
5.6.1.1 Xxxxxxxx standardních xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 25 xx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 500 ml xxxxx x plochým xxxx nebo Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) a xxxxxxxxxxxx, xxx je xx xxxxxxx v 5.2. Následně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x doplňte xx 500 ml xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x 25,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xx 45,5 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, ekvivalent 50 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. Standardní xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.1.2 Příprava xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx značku metanolem (3.3) x promíchejte. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxx xxxx 2,5, 5,0, 10,0 x 25,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx, tj. 2,28, 4,55, 9,10 a 22,8 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx kalibračního xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx píků (xxxxxx). Xx xxxxxxx středních xxxxx píků (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.1.3 XX standardizace xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10.1) na 25,0 ml xxxxxxxx x xxxxxx UV xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 xx x 320 nm.
Absorpční xxxxxxx xx xxxx xxx při 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284xx x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx extinkce 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Xxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx roztoku
Převeďte xxxxxxx 2,0 xx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 50 ml xxxxxxx baňky, xxxxxxxxx x metanolu (3.3) x xxxxxxx xx xxxxxx metanolem. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 40 μx XX-α-xxxxxxxxxx na xx, xxxxxxxxxx 44,0 μg XX-α-xxxxxxxxx acetátu xx xx. Standardní xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 a 10,0 xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoků xxxx 2,0, 4,0, 8,0 a 20,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx, tj. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxx několikrát 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx výšky xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (ploch) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2.3 UV xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Xxxxxxxx 2,0 xx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 25,0 ml xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx xxx 292 nm:
E1%1cm = 75,8 při 292xx x xxxxxxx
Xxx tomto xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,6.
6. Xxxxxxx výsledků
Ze xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxx x μx/xx (xxxxxxxx xxxx α-xxxxxxxxx xxxxxx) xx xxxxxx xx kalibračnímu xxxxx (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Obsah xxxxxxxx X x x xx/xx xx xxxxxx je dán xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · V2 / X1 · x [xx/xx]
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxx xxxxxx (5.4) x μx/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = objem xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 v xx
x = xxxxx xxxxxxxx xxxxx v x
7. Xxxxxxxx
7.1 U xxxxxx x xxxxxx koncentrací xxxxxxxx X xxxx xxx užitečné xxxxxx xxxxxxxx petroléteru xxxx xxxxxxxxxxxxxxx vsázek (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení xxxxxx XXXX.
7.2 Xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2g.
7.3 Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx dělení, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx emulze.
7.4 Xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xxxx XX-α-xxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 xxxxxxxx xx xxxxxxx (3.10.1 xxxx 3.10.2) xxxxxxxxx 10 xx XXX (3.12) x skladujte xxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx).
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx přibližně 150 mg kyseliny xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx přibližně 50 mg XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [2]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx selata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
n |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
střed [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
xx [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [xx/xx] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx použití
Tato metoda xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx tryptofanu x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx X- a X- xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx podmínek xxxxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxx x xxxxxxxx při 110 °C xx 20 xxxxx. Po xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx standard.
Pro xxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu xx xxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx pomocí XXXX x fluorescenční detekcí.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx &xx; 10 μX/xx)
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx přes xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Xxxxxxx standardní xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx pod xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.4 Xxxx-xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxx být dbáno, xxx xxxxx Xx(XX)2. 8 X2X xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx BaCO3, xxx xxxx rušit xxxxxxxxx) (xxx xxxxxxxx 9.3)
3.5 Xxxxxxxx sodný
3.6 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x20 = 1,19 x/xx
3.8 Metanol, XXXX xxxxxx
3.9 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40–60 °X
3.10 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxxxx 40,0 x XxXX (3.5) xx vodě x xxxxxxx do 1 x vodou (3.1).
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 6 xxx/x:
Xxxxxxx 492 xx HCL (3.7) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 ml XXX (3.7) a xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x:
Xxxxxxx 8,2 xx XXX (3.7) x xxxxxxx do 1 x xxxxx.
3.14 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 mol/l:
Vezměte 34 ml xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) x xxxxxxx xx 1 x vodou (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx tryptofanu (3.2), x = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2553 x xxxxxxxxxx (3.2) x 500 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 oC po xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx vnitřní xxxxxxxxxx roztok, x = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2728 g α-methyl-tryptofanu (3.3) v 500 xx xxxxxxx xxxxx x kyselině chlorovodíkové (3.13) a doplňte xx xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 oC xx dobu maximálně xxxx xxxxx.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx tryptofanu x vnitřní xxxxxxxx:
Xxxxxxx 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15), x 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-methyl-tryptofan) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x metanolem (3.8) xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (10–30 %) xxxx konečný xxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx chraňte xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxx
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Xxxxxxxxxxx &xx; 98 %
3.21 Xxxxxx 1 g 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanolu (3.19) xx 100 xx metanolu (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: 3,00 g xxxxxxxx octové (3.18) + 900 ml xxxx (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1x/100 ml). Xxxxxxx xX xx 5 x použitím xxxxxxxxxxxx (3.20). Doplňte do 1000 xx vodou (3.1).
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx pro XXXX xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
4.2 Kolona pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 3 μx xxxx ekvivalent
4.3 xX metr
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx 125 xx, se xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Membránový xxxxx, 0,45 μx
4.6 Autokláv, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) baru
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.8 Vířivý xxxxx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Vzorek xx rozmělněn xxx, xxx prošel xxxxx x xxxxxx 0,5 xx. Xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °C, xxxx zmrazením. Xxxxxx x vysokým xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 xxx/x (3.13) a 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx xxxx mixujte 60 xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx usadit xxxxxxxx x xxxxxxxxx 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxxx do xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, c = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxx pH xx 3,0 za xxxxxxx hydroxidu sodného, x = 1,0 xxx/x (3.10). Přidejte xxxxxxxxx metanolu (3.8), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 a 30 % xxxxxxxx x konečném xxxxxx. Xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x vhodném xxxxxx a zřeďte xxxxx na objem xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx standardní xxxxxx (3.17)).
Před vstříknutím xx kolony XXXX xxxxxxxxxxxx několik xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Chraňte xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx. Pokud xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °X xx xxxxxxxxx xxxx tří xxx.
5.3 Stanovení celkového xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,2 xx od 0,1 xx 1 g xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx polypropylénové láhve (4.4). Xxxxxxxx dávka xxxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx 10 xx. Xxxxxxxx 8,4 x xxxx-xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.4) a 10 xx vody. Promíchejte xx xxxxxxx xxxxxx (4.8) xxxx magnetickém xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4 xx vody. Xxxxxxxxxxx xxxxxx x láhev xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx (4.6) x xxxxxx vodou x xxxxx na 30–60 minut. Xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxx 110 (+ 2) °X xx xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 100 °X. Aby xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx Xx(XX)2. 8 H2O, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx 30 xx xxxx x pokojové xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxxxx xxxxxx xx vodní/ledové xxxxx po xxxx 15 xxxxx.
Xxxxx přidejte 5 ml orto-fosforečné xxxxxxxx, c = 0,5 mol/l (3.14). Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou, x = 6 xxx/x (3.11) zatímco xxxxxxx x upravte xX xx 3,0 x xxxxxxxx XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Xxxxxxxx xxxxxxxxx metanolu, abyste xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 a 30 % xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx odměrné baňky x vhodném objemu x xxxxxx xxxxx xx definovaný xxxxx xxxxxxxx pro chromatografii (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx metanolu xx xxxxx xxxxxxxx sraženinu.
Před xxxxxxxxxxx xx xxxxxx XXXX přefiltrujte xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx x chromatografii podle xxxxxxxx 5.4.
Chraňte xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xxxx xxxxx xxxxxxxxxx hydrolyzáty xxxxxx xxx, mohou xxx skladovány xxx 5 °C xx xxxxxxxxx xxxx tří xxx.
5.4 Stanovení pomocí XXXX
Xxxxxxxxxxx podmínky xxx xxxxxxxxxxx vymývání jsou xxxxxxxxxxx xxxx doporučení; xxxxxxx xxxxxxxx smějí xxx použity za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxx poznámky 9.1 x 9.2):
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 mm x 4 xx, C18, xxxxxxxx částic náplně 3 μx xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx kolony Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx fáze (3.22): 3,00 g kyseliny xxxxxx (3.18) + 900 xx vody (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 xx). Xxxxxxx xX xx 5,00 x použitím ethanolaminu (3.20). Xxxxxxx do 1000 ml xxxxx (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx xxxx xxxx: xxxxxxxxx 34 xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx délka: xxxxxxxx: 280 xx, emise: 356 nm
Vstřikový xxxxx: 20 μx
6. Výpočet xxxxxxxx
X × X × C × X × X × MW / X × X × X × 10&xxxx;000 × X = x xxxxxxxxxx xx 100g xxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, roztoku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.17)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, extraktu (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
C = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) (2 xx) xxxxxxx xx kalibračního xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) x μxxxxxx/xx (= 2,50) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx přidaného xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) xxxx xx hydrolyzátu (5.3) (= 2,00 xx)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) nebo xxxxxxxxxxx (5.3)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, kalibračního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
H = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16) x ml (= 2,00) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxx xxxxxx v x (xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxxx sušen x/xxxx xxxxxxxx)
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (= 204,23)
7. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx spolupráce Xxxxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx uspořádána xxx, xx byly tři xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 12 laboratořích k xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx. Replikované (5) xxxxxxx byly xxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x následující xxxxxxx:
X: xxxxx laboratoří xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: standardní xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx reprodukovatelnosti, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx pro xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx xxxxxxx doplněné X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
|
x |
50 |
55 |
50 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [g/kg] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
r [x/xx] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
XXx [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [x/xx] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
X [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx xxx xxxxxx byly analyzovány xx xx 13 xxxxxxxxxxxx x ověření xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Replikované (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x každého xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v následující xxxxxxx:
X: počet xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Cochran-Dixonovým xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: reprodukovatelnost
CVr: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Směs xxxxxxx xx xxxxx |
Xxxxxx 5 Xxxx pšenice xx xxxxx (= xxxxxx 4) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [g/kg] |
0,391 |
0,931 |
|
sr [g/kg] |
0,005 |
0,012 |
|
r [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
xX [x/xx] |
0,018 |
0,048 |
|
X [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx, že xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx x xxxxx laboratořích s xxxxx xxxxxxxxx tryptofanu xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxxx tabulce:
L: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx jednotlivých hodnot xxxxxxxxxx eliminačních xxxxxxxxx xxxxxxxx (identifikované Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx (XXX 117) |
Xxxxxx 2 Xxxxx-xxxxx xxxx xxxxxx (CRM 118) |
Xxxxxx 3 Sójová xxxxxx (XXX 119) |
Xxxxxx 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
xX [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [g/kg] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
CVR [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Následující specielní xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vymývání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii: |
125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 μx xxxx xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxx xxxxxx: |
32 °C |
||
|
Mobilní fáze: |
A: 0,01 mol/l KH2PO4/metanol, 95 + 5 (xxxxxxxx + objemově) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % X |
0 % B |
|
15 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
21 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
33 xxx. |
100 % X |
0 % B |
|
|
Úroveň xxxx: |
1,2 xx/xxx. |
||
|
Xxxxxxx xxxx xxxx: |
xxxxxxxxx 33 xxxxx |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx se xxxx xxxxxx podle typu XXXX xxxxxx x xxxxxxxxx plnícího materiálu. Xxxxxxx systém musí xxx schopen poskytnout xxxxxxxxx startovní xxxx xxxx tryptofanem x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx, xxx xxxx degradační xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx a vnitřního xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxx chromatografovány, xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx standardu xxx xxxxxxxxx. Je důležité, xxx xxxx xxxx xxxx dostatečně xxxxxx xxx vymytí všech xxxxxxxxxxxx produktů, xxxxx xxxxx píky xxxxxxxx xxxxxxxx ovlivňovat xxxxxxxx xxxxxx chromatografie.
V xxxxxxx xxxxxxxx, by xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xx měla xxx měřena x xxxxxxxxxx (normální) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardu x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx píků xxxxxxxxxx a vnitřního xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx rozsahu XXXX/xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xxx (xxxx) buď xxxxxxxxxx, x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx (xxxx) xxxxxx xxxx (xxxx) xxxx xxxxxx xxxxxx (vysoké), xxxx by xxx xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx jiné xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxx konečným xxxxxxx.
9.3 Hydroxid barnatý
Stářím xx stává xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx roztoku xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX, což xxxx x xxxxxxxxxx způsobovat xxxxx výsledky.
[1] Řízené xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Verband Deutscher Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (VDLUFA).
[2] Řízené xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Xxxxxxx Deutscher Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).