Xxxxxxxx směrnice Komise 93/117/XX
xx xxx 17. xxxxxxxx 1993,
kterou se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX ze xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (EHS) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, xx se xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx podmínek předepsaných xxxxxxxx a správními xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx vzorků a xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xx nutno stanovit xxxxxxxxxx metody Společenství xxx xxxxxxxx dodržování xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx kontrol xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx metody xxxxxxx x příloze této xxxxxxxx.
Článek 2
Členské státy xxxxxx x účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné pro xxxxxxxx souladu s xxxxx směrnicí nejpozději xx 30. xxxxxxxxx 1994. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx na xxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
X Bruselu xxx 17. prosince 1993.
Xx Xxxxxx
Xxxx Xxxxxxxx
xxxx Komise
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 362, 31.12.1985, x. 8.
XXXXXXX
1. XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx]xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x oblast xxxxxxxxxx
Xxxx metoda xxxxxx xx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxx stanovitelnosti je 5 xx/xx.
2. Princip
Vzorek xx extrahuje xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx a jeho xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx x oxidem hlinitým. Xxxxxxxxx se xxxxxx x kolony xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx x xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xx xxxxxxxx xxxx pomocí XX xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx 500 xx odměrné xxxxx xx xxxxx 4,0 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (P20c, 1,18 x/xx), xxxxxx se xx značku xxxxxxxxxx (3.1.) a xxxxxxxx. Xxxxx roztok musí xxx připraven xxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.3 Acetonitril, xxx HPLC
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3X, 8 xx 12 mesh (1,6–2,5 xx perličky xxxxxxxxxxxxx hlinitokřemičitanu, průměr xxxx 0,3 mm).
3.5 Xxxx xxxxxxx: xxxxxx, xxxxxx aktivity X xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
100 x xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xx 2 xx xxxx. Xxxxxxxxx xx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 20 xxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx fosforečnan xxxxxxxx, xxxxxx x = 0,025 xxx/x
3,4 x dihydrogen fosforečnanu xx rozpustí ve xxxx (xxx XXXX) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx, doplní xx xx značku x xxxxxxxx.
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 0, 025 xxx/x
3,55 g xxxxxxxxx (nebo 4,45 x xxxxxxxxx, xxxx 8,95 x xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx ve xxxx (xxx XXXX) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx. Doplní xx po xxxxxx x promíchá.
3.8 Xxxxxxx xxxx XXXX
Xxxxxx xx:
650 xx acetonitrilu (3.3.),
250 xx vody (xxx XXXX),
50 xx roztoku xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.6.),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxx fosforečnanu xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx xx filtrem 0,22 μx (4.6.) x xxxxxx xx xxxxxxxx (např. ultrazvukem xx xxxx 10 xxxxx).
3.9 Xxxxxxxxxx látka
Čistý xxxxxxxxx: 1.3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx] xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, X 758.
3.9.1 Robenidin, xxxxxxxx standardní xxxxxx: 300 μg/ml:
Naváží se 30 mg standardního xxxxx xxxxxxxxxx (3.9.) x přesností 0,1 xx. Xxxxxxxx se x xxxxxxx methanolu (3.2.) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem x xxxxxxxx se. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx v temnu.
3.9.2 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 12 μx/xx
Xxxxxx xxx 10,0 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1) xx 250 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx značku xxxxxxx xxxx (3.8) x xxxxxxxx. Baňka xx xxxxx aluminiovou xxxxx x xxxxx x xxxxx.
3.9.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxxxx xx odměří 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.2.). Xxxxxx xx xx xxxxxx mobilní xxxx (3.8.) x xxxxxxxx. Tyto xxxxxxx xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 x 6.0 μg/ml xxxxxxxxxx. Xxxxxxx tyto xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x pomůcky
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx x tmavého xxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x nádržkou xx xxxxxxxxx 150 xx. Xxxxxxx průměr 10 – 15 xx, xxxxx 250 xx.
4.2 Xxxxx třepačka
4.3 Xxxxxxx xxxxxxx
4.4 Xxxxxxxx xx vysoce xxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii (HPLC) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x měnitelnou xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, X18, 10 μx xxxxxx xxxx xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xx xxxxxxxxxx vláken (Xxxxxxx XX/X xxxx xxxxxxx)
4.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.7 Membránové filtry 0,45 μx
5. Xxxxxx
Xxxx.: Xxxxxxxxx xx citlivý xx světlo. Xxxxx xxxx xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxx skla.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxxxx xx analyzovat xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx robenidinu x xxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx látky.
5.1.2 Xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx analýzou xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1.1.), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx je xx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxx 60 mg/kg xx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xxxxxxx 3 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1.). Roztok xx xxxxxx xxx xx xxxxx 0,5 xx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx x xx xxxxxx minutách xx xxxx začít x extrakcí (5.2.).
Xxxx.: Xxx xxxx této xxxxxx xx xxxx xxx modelové krmivo xxxxxxxxx xxxx xxxx xx zkoušený vzorek x nemělo xx xxxxxxxxx stanovitelné xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 15 g xxxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxx 0,01 x, xxxxx xx 100 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx x hodinu xxxxx xx třepačce (4.2). Roztok se xxxxxxxxxxx xxxx filtr xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5) a celý xxxxx xxxxxxxx xx xxxx xx 150 xx Erlenmeyerovy xxxxx. Xxxxx se 7,5 x xxxxxxxxxxxxx xxxx (3.4), xxxxxxxxx x xxx xxxxx se xxxxx. Potom xx xxxxx přefiltruje xxxx xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx použije x xxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxx s xxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxx skleněné xxxxxx (4.1) xx vloží xxxx xxxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxx se skleněnou xxxxxxxx. Xxxxxx se 11,0 x připraveného xxxxxxxxxx hlinitého (3.5) x xxxxxx se xx xxxxxx, xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx prostředí. Xxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx koloně setřese xxxxxx poklepem na xxxxx xxxxx xxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxx vzorku
Na připravenou xxxxxx se napipetuje 5,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku (5.2). Xxxxxx xxxxxx se xxxx o xxxxx xxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx řádně xxxxxxxxxx xxxxxx hlinitým. Xxxxxxxxx xx z xxxxxx xxxxxx pomocí 100 ml xxxxxxxxx (3.1) xxx rychlosti xxxxxxx 2 – 3 xx xx xxxxxx x xxxxx xx xxxx xx 250 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xx redukovaného xxxxx x xxx xxxxxxx 40xX xxxxxx do xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxx xx xxxxx rozpustí xx 3 – 4 xx xxxxxxx xxxx (3.8.) x xxxxxxxxxxxxx xx převede xx 10 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx vypláchne 1 – 2 xx xxxxxxx fáze x xxxx roztoky xx přidají xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx se. Xxxxxxxxx část zfiltruje xxxx 0,45 μm xxxxx (4.7). Tento xxxxxx xx xxxxxxx xxx vlastní XXXX xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX)
5.4.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxxxxx x xxxx xxxxx povedou xx xxxxxxx výsledkům:
Kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
mobilní xxxx (3.8),
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 317 nm,
objem xxxxxxxx: 20–50 μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx opakovaným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.3), xxxxx xxxxxxxx 3,6 μx/xx, xx do xxxxxxxx konstantních xxxxx xxxx a retenčních xxxx.
5.4.2 Xxxxxxxxxx graf
Pro xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.9.3) xx provede xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxx odpovídajícím xxxxxxxxxxxx kalibračních xxxxxxx x μx/xx.
5.4.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx se nastříkne xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxx při xxxxxxxxx a určí xx xxxxxxxx hodnota xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xxxxxx výšek (xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxx robenidinu x roztoku xxxxxx x μg/ml xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.4.2).
x = (x × 200)/x,
xx xxxxxx xx
x = koncentrace xxxxxxxxxx v roztoku xxxxxx x μg/ml,
m = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x gramech.
7. Xxxxxxx výsledků
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx polem, xxxxx xxxxxxxx porovnání xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x kalibračním xxxxxxxx (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx robenidinu.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x přídavkem
K xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx robenidinu xx xxx xxxxxxx xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx x extraktu xxxxxx.
Xxxx xx xx xxxxxx pouze xxxxx xxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx v xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx šíře.
7.1.2 Detektor xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx absorpce xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx rozlišovací xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx plus/minus 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx záznam xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x standardu zaznamenaný xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx od xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou vykázána xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxxxx vzestupu, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx od ostatních x xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx sledovaných xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxxxx nikde 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x těchto kritérií, xxxxxxxxxx xxxxxxx není xxxxxxxxx.
7.2. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 15 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kruhový xxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx krmiv xxx xxxxxx a xxxxxxx, xxxxxxx nebo peletovaných. Xxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx v xxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx krmivo |
Pelety |
Sypké xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (xx/xx) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
XXx (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
XX (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Výtěžnost (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Sr = xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx odchylka x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
(2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx. Xxxxx mez xxxxxxxxxxxxxxx je 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx ze xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx dichlormethanem, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Obsah xxxxxxxxxxxxxxxx xx stanoví xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxx UV xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, xxx XXXX
3.3 Xxxxxxx xxxx HPLC
Směs xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (xxx HPLC) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx xx xxxx 0,22 μx xxxxx (4.5.) x xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx po xxxx 10 xxxxx).
3.4 Xxxxxx xxxxxxxx methansulfonové σ = 2 %
20 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx x 1000 ml xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Roztok xxxxxxxx chlorovodíkové σ = 10 %
100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (X20 c. 1,18g/ml) xx rozředí v 1000 xx xxxx.
3.6 Xxxxx XX-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx použitím xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx: 100 x xxxxxxxxxxx xx rozmíchá x 500 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3,5) x za xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx x xxxx xx xxxxx desce. Xx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Filtruje se xxxx papírový xxxxx xx sníženého xxxxx. Xxxxx xx propláchne xxxxxxx xxxx 500 xx vody a xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Potom xx propláchne xxxxxxx 250 xx methanolu x xxxxxx prosáváním xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx.
3.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: čistý xxxxxxxxxxxxxxx (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, 500 μx/xx
Xxxxxx se 50 xx xxxxxxxxxx xxxxx (3.7) x přesností 0,1 xx, xxxxxxxx xx ve 100 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.2 Xxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx 50μx/xx
Xx 50 xx xxxxxxx xxxxx xx odpipetuje 5 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.1), xxxxxx xx xxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxx x promíchá.
3.7.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxx 25 xx xxxxxxxxx xxxxx se odpipetuje 1, 2, 3, 4 x 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx methylbenzochátu (3.7.2). Xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx fází (3.3) a xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 x 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxx připravovat xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.2 Xxxxxxx xxxxxxx
4.3 Skleněná kolona (250 x 15 xx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx x kapacitou 200 xx
4.4 XXXX zařízení xxxxxxxx UV xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx polem
4.4.1 Kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii: 300 xx x 4 xx, X – 18, 10μx xxxx kolona podobná
4.5 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.5 Membránové xxxxxx 0,45μx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx krmivo xxx xxxxxxxxxxx methylbenzochátu xx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx v xxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxx rušivé xxxxx.
5.1.2 Xxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx analýzou xxxxxxxxxx krmiva, xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx x obdobném xxxxxxxx, xxxx je xxxxxxxx xx vzorku. X xxxxxxxxxxx xx xxxxxx 1,5 mg/kg xx přidá do 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.1), promíchá se x xx 10 xxxxx xx započne x xxxxxxxx (5.2).
Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx xx xxxx být xxxxxxxxx xxxx, xxxx xx xxxxxx, a xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx být zjištěn xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx xxxxxx xxxxxxxxx 20 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxx 0,01 g. Xxxxx xx 100 xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) a xxxxxxxxxx xx třepe (4.1) xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx papírový xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Extrakce xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx 100 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx přidá 25 xx filtrátu, který xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx (5.2). Dále xx xx nálevky xxxxx 100 ml xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x třepe xx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx) xx xxxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx vodné xxxx xx xxxxxxx xx dvěma xxxxxxx 40 xx dávkami xxxxxxxxxxxxxx a xxxx xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx v xxxxx s xxxxxxx xxxx. Extrakt xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx na xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x 20–25 ml xxxxxxxxx (3.2), xxxxx xx xxxxxxxxx a xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx x iontovou xxxxxxx (5.4).
5.4 Chromatografie xxxxxxx xxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx kolony (4.3) xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxx x 5 x xxxxxxxxxx katexu x x 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5). Xxxx xxxx xx xxxxxx xx skleněné xxxxxx x nechat xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx odpustí xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx promývá vodou xxxxx xxxxxxxx eluát xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xx xxxxxx xx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx se xxxxx xx x xxxxxxx xxxxxx.
5.4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (5.3). Xxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 5 xx 10 xx xxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxx xx také xxxxxxx xx xxxxxx. Extrakt xx nechá xxxxx xx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx za xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxx 150xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx xx jímá xx 250 ml Xxxxxxxxxxxxx baňky.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx eluát (5.4.2) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx nálevky. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 až 10 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxx nálevky. Xxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 300 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) a 130 ml xxxxxxxxxxxxxx (3.1). Xxxxx se xx xxxx jedné xxxxxx a xxxxx xx nechají fáze xxxxxxxxxxx. Xxxxx (dichlormethanová) xxxxxx xx odpustí xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx vodné xxxx xx opakuje xx dvěma xxxxxxx 70 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx x xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxx dichlormethanu xx xxxxxx xx xxxxx v rotační xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx x xxxxx xx rozpustí x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx do 10 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx 1 xx 2 xx xxxxxxxxx x xxxx se xxxxxxx do xxxxxxx xxxxx. Baňka se xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx HPLC (5.6).
5.6 Xxxxxxx xxxxxx XXXX
5.6.1 Parametry
Následující xxxxxxxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx ke stejným xxxxxxxxx:
- kolona pro xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
- xxxxxxx fáze: xxxx xxxxxxxxx x vody,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- vlnová délka xxxxxxxxx: 265 nm,
- xxxxx xxxxxxxx: 20 xx 50μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kalibračního xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, xx xx xxxxxxxx konstantních výšek xxxx xxxxx xxxx x retenčních xxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.7.3) xx provede xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx každou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx vynesením xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μx/xx.
5.6.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.5.) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxxxxx výšky (xxxxxx) x píků xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
X xxxxxxxx hodnoty xxxxx (xxxxxx) xxxx methylbenzochátu x xxxxxxx xxxxxx xx určí xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku x μx/xx xxxxx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2.).
Obsah xxxxxxxxxxxxxxxx w (xx/xx) xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx tohoto xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx xxxxxx xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μg/ml,
m = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Identita
Identita xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx stanovením x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx porovnání xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μg/ml xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx
Xxxxxxx vzorku xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx přidaného methylbenzochátu xx xxx podobné xxxx je předpokládaný xxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xxxxx xxxxx ke xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx píku x polovině xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx diodového xxxx
Xxxxxxxx xxxx vyhodnocovány podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vrcholu píku xx chromatogramu xxxxxx x xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx detekčního xxxxxxx. Xxx detektor x xxxxxxxx polem xx udává xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit xx ostatních xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 10 až 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx stejná maxima x jestliže xxxxx xxxxxxxx mezi dvěma xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % absorbance xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) xxx xxxxxx xxxxx mezi 220 x 350 xx xx nesmí spektrum xxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxx píku zkoušeného xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx v xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tohoto xxxxxxxx xx xxxxxxxx, jestliže xxxx vykázána stejná xxxxxx x jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx odchylka xxxx xxxxxxx nepřesahuje nikde 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx není xxxxxxxx xxxxxxxxx x těchto xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxxxxx k xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx 4 x 20 xx/xx.
7.3 Výtěžnost
Výtěžnost pro xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 90 %.
8. Výsledky xxxxxxxxx xxxxx
X xxxxxx laboratořích xxxx xxxxxxxxxxx pět xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx byly xxxxxxxxx xxx analýzy.
Výsledky
|
Modelové xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
Xxxxxxxxxx |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Xx (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
XX (xx/xx) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
XXX |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx koeficient opakovatelnost
SR = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx reprodukovatelnosti