Dvanáctá směrnice Komise 93/117/XX
xx xxx 17. xxxxxxxx 1993,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 70/373/XXX ze xxx 20. července 1970, xxxxxx xx zavádějí xxxxxx odběru xxxxxx x analýzy Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (XXX) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx xx xxxxxx kontroly krmiv, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx předepsaných xxxxxxxx x správními xxxxxxxx x xxxxxxx x složení krmiv, xxxxxxxxx za použití xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xx xxxxx stanovit xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx kontrolu xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx používání xxxxxxxxxxx xxxxx robenidinu x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX SMĚRNICI:
Článek 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx obsahu xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx x krmivech se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx směrnicí nejpozději xx 30. xxxxxxxxx 1994. Neprodleně x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx členskými xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx nebo musí xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Článek 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx po xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 17. xxxxxxxx 1993.
Za Xxxxxx
Xxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 362, 31.12.1985, x. 8.
PŘÍLOHA
1. XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) amino]guanidin hydrochlorid
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxx slouží xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje okyseleným xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx x jeho xxxxxxxxx xxxx se xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx eluuje x xxxxxx methanolem, xxxxxxxxxxx se x xx vhodný objem xx upraví xxxxxx xxxxxxx xxxx. Obsah xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC) xx xxxxxxxx fázi xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx methanol
Do 500 ml odměrné xxxxx xx oměří 4,0 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (P20c, 1,18 x/xx), doplní xx xx značku xxxxxxxxxx (3.1.) x xxxxxxxx. Xxxxx roztok xxxx xxx xxxxxxxxx těsně xxxx použitím.
3.3 Xxxxxxxxxxx, xxx XXXX
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3A, 8 xx 12 mesh (1,6–2,5 xx perličky xxxxxxxxxxxxx hlinitokřemičitanu, průměr xxxx 0,3 xx).
3.5 Xxxx xxxxxxx: xxxxxx, xxxxxx aktivity I xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
100 x xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx 2 xx xxxx. Xxxxxxxxx xx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 20 xxxxx. Xxxxxxxx xx x dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx fosforečnan xxxxxxxx, xxxxxx c = 0,025 mol/l
3,4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx (pro HPLC) x 1000 xx xxxxxxx baňce, xxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, roztok x = 0, 025 xxx/x
3,55 x xxxxxxxxx (xxxx 4,45 x dihydrátu, nebo 8,95 x dodekahydrátu) xxxxxxxx fosforečnanu sodného xx rozpustí xx xxxx (pro XXXX) x 1000 ml xxxxxxx baňce. Xxxxxx xx po xxxxxx x promíchá.
3.8 Mobilní xxxx XXXX
Xxxxxx xx:
650 xx acetonitrilu (3.3.),
250 xx vody (xxx XXXX),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx fosforečnanu xxxxxxxxxx (3.6.),
50 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx sodného (3.7.).
Xxxxxxxxx se filtrem 0,22 μm (4.6.) x roztok xx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx).
3.9 Xxxxxxxxxx látka
Čistý xxxxxxxxx: 1.3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx] guanidin hydrochlorid, X 758.
3.9.1 Robenidin, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 300 μg/ml:
Naváží xx 30 mg standardního xxxxx xxxxxxxxxx (3.9.) x xxxxxxxxx 0,1 xx. Xxxxxxxx xx x kyselém methanolu (3.2.) ve 100 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x promíchá xx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx x temnu.
3.9.2 Xxxxxxxxx, pracovní xxxxxxxxxx xxxxxx: 12 μg/ml
Odměří xxx 10,0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.1) xx 250 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx značku xxxxxxx xxxx (3.8) x promíchá. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx x temnu.
3.9.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx souboru 50 xx xxxxxxxxx buněk xx odměří 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 xx xxxxxxxxxx standardního roztoku (3.9.2.). Xxxxxx se xx značku mobilní xxxx (3.8.) x xxxxxxxx. Tyto xxxxxxx xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 a 6.0 μx/xx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx použitím.
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx z tmavého xxxx, xxxxxxxx uzavíracím xxxxxxxx x nádržkou xx xxxxxxxxx 150 xx. Vnitřní xxxxxx 10 – 15 xx, délka 250 xx.
4.2 Xxxxx třepačka
4.3 Xxxxxxx xxxxxxx
4.4 Zařízení xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii (HPLC) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx vlnovou xxxxxx, xxxxx detektorem x xxxxxxxx polem, xxxxxxxxxx v xxxxx 250 - 400 xx
4.4.1 Kolona xx xxxxxxxxxxx chromatografii: 300 xx x 4 xx, C18, 10 μx xxxxxx nebo xxxxxxx.
4.5 Xxxxx ze xxxxxxxxxx vláken (Xxxxxxx XX/X xxxx xxxxxxx)
4.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.7 Membránové xxxxxx 0,45 μx
5. Postup
Pozn.: Xxxxxxxxx xx citlivý xx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxx xxxxx xxxxxxx použito xxxx nádobí z xxxxxxx skla.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxxxx xx analyzovat xxxxxxxx xxxxxx bez xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx jiné xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Je xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx analýzou xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1.1.), xx xxxxxxx xxxx přidáno xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxx. X dosažení xxxxxx 60 xx/xx xx do 250 xx Erlenmeyerovy baňky xxxxxxx 3 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.1.). Xxxxxx xx xxxxxx xxx xx xxxxx 0,5 ml x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx se 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx x xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x extrakcí (5.2.).
Xxxx.: Xxx xxxx xxxx xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxx krmivo xxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx vzorek x nemělo by xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Erlenmeyerovy xxxxx xx naváží xxxxxxxxx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 0,01 x, přidá xx 100 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxx xx třepačce (4.2). Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx skleněných xxxxxx (4.5) x celý xxxxx filtrátu xx xxxx do 150 xx Erlenmeyerovy xxxxx. Xxxxx xx 7,5 x xxxxxxxxxxxxx síta (3.4), xxxxxxxxx x xxx xxxxx se xxxxx. Xxxxx xx xxxxx přefiltruje xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx roztok xx xxxxxxx k xxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Xxxxxxxx kolony s xxxxxx xxxxxxxx
Xx spodního xxxxx skleněné kolony (4.1) xx xxxxx xxxx zátka xx xxxxxx xxxx x xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx se 11,0 x připraveného xxxxxxxxxx hlinitého (3.5) x xxxxxx xx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxx prodlevou v xxxxxxx prostředí. Xxxx xxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxx setřese xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxx xxxxxx
Xx připravenou xxxxxx xx xxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2). Xxxxxx xxxxxx xx xxxx x xxxxx xxxxxx a xxxxxxx xx nechá xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx se x xxxxxx eluuje pomocí 100 xx methanolu (3.1) xxx xxxxxxxxx xxxxxxx 2 – 3 xx xx xxxxxx a xxxxx xx jímá xx 250 ml xxxxx x xxxxxxx dnem. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x při xxxxxxx 40xX odpaří xx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx 3 – 4 xx mobilní xxxx (3.8.) x xxxxxxxxxxxxx xx převede xx 10 ml xxxxxxx xxxxx. Baňka xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 1 – 2 xx mobilní xxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx x promíchá xx. Xxxxxxxxx část xxxxxxxxx xxxx 0,45 μm xxxxx (4.7). Tento xxxxxx se použije xxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx účinnou kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (XXXX)
5.4.1 Parametry
Následující xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
xxxxxxx xxxx (3.8),
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx délka xxxxxxxxx: 317 xx,
xxxxx xxxxxxxx: 20–50 μl.
Stabilita xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx nástřikem xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.3), xxxxx xxxxxxxx 3,6 μx/xx, xx xx xxxxxxxx konstantních výšek xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Kalibrační xxxx
Xxx xxxxx kalibrační xxxxxx (3.9.3) xx xxxxxxx xxxxxxx nástřiků a xxxxx xx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Kalibrační xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx nebo xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μg/ml.
5.4.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx extraktu xxxxxx, jako při xxxxxxxxx x xxxx xx průměrná xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xxxxxx výšek (xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.4.2).
x = (c × 200)/m,
ve xxxxxx xx
x = koncentrace xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx v μg/ml,
m = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Identita
Identita xxxxxxx xxxxxxx může xxx potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx extraktu xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx robenidinu.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x přídavkem
K xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx vhodného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxx obdobné xxxx xx předpokládaný xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xx xxxxxx pouze xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x obsahu robenidinu x xxxxxxxxx extraktu. Xxxx píku x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Detektor xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxx podle následujících xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx absorpce xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx detektor x xxxxxxxx polem xx xxxxx plus/minus 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx vykázána xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx spektry xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx.
x) xxx vlnové xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx spektrum vzestupu, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxx xx ostatních x xxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 10 xx 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx kritéria je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx ve xxxxx sledovaných xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nikde 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx vrcholu píku.
Jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx analytu není xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. nejvyššího xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 15 mg/kg.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx fortifikovaný xxxxxx xxxx být xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx kruhového testu
Společenství xxxxxxxxxxxxx kruhový test, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analyzovalo čtyři xxxxxx krmiv pro xxxxxx a xxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx ze xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx krmivo |
Pelety |
Sypké xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (mg/kg) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
CVr (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
SR (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Výtěžnost (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
(2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
1. Účel x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx vzorku xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Extrakt xx přečištěn xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx chromatografií, x xxxxxxxx xxx znovu xxxxxxxxxxxxxxx. Obsah methylbenzochátu xx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx kapalinovou chromatografií (XXXX) pomocí XX xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, xxx XXXX
3.3 Xxxxxxx fáze XXXX
Xxxx xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (xxx XXXX) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx xx přes 0,22 μm xxxxx (4.5.) a xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx 10 minut).
3.4 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx σ = 2 %
20 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x 1000 xx xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx σ = 10 %
100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (X20 x. 1,18g/ml) xx rozředí x 1000 ml xxxx.
3.6 Xxxxx XX-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx použitím xx xxxxxxxx xxxxx takto: 100 x iontoměniče xx xxxxxxxx v 500 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3,5) x za xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxxx xx kyselina xxxxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxx xxxxx xx sníženého xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 500 xx xxxx a xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx 250 xx methanolu x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx filtrační xxxxx. Xxxxxxxx ionex xx uskladňuje x xxxxxxxxxxx xxxxx.
3.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: čistý xxxxxxxxxxxxxxx (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Xxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxx, 500 μx/xx
Xxxxxx se 50 xx standardní xxxxx (3.7) x přesností 0,1 xx, xxxxxxxx xx xx 100 xx xxxxxxx baňce x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), xxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxx.
3.7.2 Pracovní xxxxxxxxxx xxxxxx methylbenzochátu 50μx/xx
Xx 50 xx odměrné xxxxx se odpipetuje 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.1), xxxxxx xx xxxxxxxxxx (3.2) po xxxxxx a xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx roztoky
Do série 25 ml xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 1, 2, 3, 4 a 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.2). Xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxx fází (3.3) x zamíchá. Xxxx roztoky mají xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 a 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxx těsně xxxx xxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx třepačka
4.2 Xxxxxxx xxxxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxx (250 x 15 xx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx 200 xx
4.4 XXXX zařízení xxxxxxxx XX xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx nebo detektorem xxxxxxxx xxxxx
4.4.1 Kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii: 300 mm x 4 xx, X – 18, 10μm xxxx kolona xxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45μx
5. Postup
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx bez xxxxxxxxxxx methylbenzochátu xx xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxx x xxx není xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxx rušivé xxxxx.
5.1.2 Xxxx se xxxxxxx xxxx výtěžnosti analýzou xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx x obdobném xxxxxxxx, jaké je xxxxxxxx ve xxxxxx. X fortifikaci xx xxxxxx 1,5 xx/xx xx přidá xx 20 g xxxxxxxxxx xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.7.1), promíchá xx x xx 10 xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx, xxxx je xxxxxx, a xxx xxxx xxxxxxx by xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx naváží xxxxxxxxx 20 g připraveného xxxxxx s xxxxxxxxx 0,01 x. Xxxxx xx 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx methansulfonové (3.4) x xxxxxxxxxx xx xxxxx (4.1) xx dobu 30 xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx nálevky, obsahující 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.5) xx xxxxx 25 xx xxxxxxxx, který xxx získán postupem xxxxxxxx x xxxx (5.2). Dále xx xx xxxxxxx xxxxx 100 ml dichlormethanu (3.1) x xxxxx xx dobu jedné xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx vrstva (xxxxxxxxxxxxxx) se xxxxxxx xx 500 ml xxxxx s kulatým xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx 40 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x tyto xx xxxxx s xxxxxx xxxxxxxxx v xxxxx s kulatým xxxx. Xxxxxxx dichlormethanu xx xxxxxx do xxxxx na xxxxxxx xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx se xxxxxxxx x 20–25 ml xxxxxxxxx (3.2), baňka xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx se xxxxxxx pro chromatografii x iontovou xxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
Xx dolního konce xxxxxxxx xxxxxx (4.3) xx vloží xxxxxx xx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xx suspense x 5 x xxxxxxxxxx katexu x x 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5). Xxxx směs se xxxxxx xx skleněné xxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx nad xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx eluát xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Potom xx do xxxxxx xx nalije 50 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xx xxxxx xx x xxxxxxx xxxxxx.
5.4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxx xx xxxxxxx napipetuje získaný xxxxxxx (5.3). Baňka x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx dvěma xxxxxxx 5 až 10 ml xxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xx kolonu. Xxxxxxx xx nechá stéci xx k xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx 50 ml xxxxxxxxx tak, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx za xxxxxx. Xxxxxxxx kapalina xx xxxxxxxx. Methylbenzochát xx xxxxxx x xxxxxx 150xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) a xxxxx xx xxxx xx 250 ml Xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.5 Extrakce xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx (5.4.2) xx převede do xxxxxxxxxxxx dělící nálevky. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 až 10 xx xxxxxxxxx (3.2) a výplach xx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx. Dále xx xx xxxxxx xxxxxxx přidá 300 xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 130 ml xxxxxxxxxxxxxx (3.1). Třepe xx xx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xx nechají fáze xxxxxxxxxxx. Nižší (xxxxxxxxxxxxxxxx) xxxxxx se xxxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx se xxxxxxx xx dvěma xxxxxxx 70 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxx x prvním xxxxxxxxx x baňce s xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx v xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx roztok xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx do 10 ml xxxxxxx xxxxx. Baňka x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx dalšími xxxxxxx 1 xx 2 xx methanolu x opět se xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xx značku xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Tento xxxxxx xx xxxxxxx xxx analýzu XXXX (5.6).
5.6 Xxxxxxx xxxxxx XXXX
5.6.1 Parametry
Následující xxxxxxxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
- kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
- xxxxxxx xxxx: směs xxxxxxxxx a vody,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- xxxxxx délka xxxxxxxxx: 265 nm,
- xxxxx xxxxxxxx: 20 xx 50μx.
Xxxxxxxxx chromatografického xxxxxxx xx kontroluje xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, až xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx ploch xxxx x retenčních xxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxx graf
Pro xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.7.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx (xxxxxx) píků xxx xxxxxx koncentraci. Xxxxxxxxxx křivka se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx nebo xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μx/xx.
5.6.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx vzorku (5.5.) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xxxxxxxx hodnota výšky (xxxxxx) x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Z xxxxxxxx hodnoty xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2.).
Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx w (xx/xx) xx xxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx xxxxxx je
c = koncentrace methylbenzochátu x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx xxxxxxx vzorku x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx xxxxxxxxxx výsledků
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx detektoru x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x přídavkem
Extrakt xxxxxx xx xxxxxxxxxxx přidáním xxxxxxxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx přidaného methylbenzochátu xx xxx xxxxxxx xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxx xx přidané xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx zředěném xxxxxxxx. Xxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx musí být xx xxxxxxxxx 10 % původní šíře.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx pole
Výsledky xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku i xxxxxxxxx musí xxx xxxxxx spektra xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x diodovým polem xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx spektra xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx kritéria xx xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx maxima x jestliže xxxxx xxxxxxxx mezi xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, vrcholu x xxxxxxx píku zkoušeného xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tohoto xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx stejná xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx odchylka mezi xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % absorbance xxxxxxx ve xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx, přítomnost xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx 4 x 20 xx/xx.
7.3 Výtěžnost
Výtěžnost pro xxxxxxxxxxxxx vzorek musí xxx xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pět xxxxxx. U xxxxxxx xxxxxx byly provedeny xxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx
|
Xxxxxxxx krmivo |
Sypké xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
Xxxxxxxxxx |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Xx (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
XX (xx/xx) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
XXX |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = variační xxxxxxxxxx reprodukovatelnosti