Dvanáctá xxxxxxxx Xxxxxx 93/117/XX
xx xxx 17. xxxxxxxx 1993,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx směrnici Xxxx 70/373/XXX ze xxx 20. července 1970, xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (XXX) x. 3768/85 [2], x zejména xx xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx se xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxx mají xxxxxxxx xxxxxxxxxx podmínek předepsaných xxxxxxxx x správními xxxxxxxx x xxxxxxx x složení xxxxx, xxxxxxxxx xx použití xxxxx Společenství xxx xxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství;
vzhledem x tomu, xx xx nutno xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx kontrolu dodržování xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx x methylbenzoátu x xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x methylbenzochátu x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Článek 2
Xxxxxxx státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx směrnicí nejpozději xx 30. listopadu 1994. Neprodleně x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx členskými xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx za takový xxxxx učiněn xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x platnost xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
V Bruselu dne 17. prosince 1993.
Za Xxxxxx
Xxxx Xxxxxxxx
xxxx Komise
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 362, 31.12.1985, x. 8.
XXXXXXX
1. XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx]xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x oblast xxxxxxxxxx
Xxxx metoda xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x krmivech. Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx okyseleným xxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxx x jeho xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxx methanolem, xxxxxxxxxxx xx a xx vhodný xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) na xxxxxxxx xxxx pomocí XX detektoru.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxxx xxxxx se xxxxx 4,0 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (X20x, 1,18 x/xx), xxxxxx se xx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1.) a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxx, xxx XXXX
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3X, 8 xx 12 xxxx (1,6–2,5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 0,3 mm).
3.5 Xxxx xxxxxxx: xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx X xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
100 x xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xx 2 xx vody. Xxxxxxxxx xx x protřepává xx xxxxxxxxx 20 xxxxx. Xxxxxxxx xx x dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx fosforečnan xxxxxxxx, xxxxxx x = 0,025 xxx/x
3,4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx ve xxxx (pro XXXX) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx po xxxxxx x promíchá.
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 0, 025 mol/l
3,55 x xxxxxxxxx (xxxx 4,45 x dihydrátu, nebo 8,95 g xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxx fosforečnanu sodného xx rozpustí xx xxxx (pro HPLC) x 1000 ml xxxxxxx xxxxx. Doplní xx po xxxxxx x promíchá.
3.8 Mobilní xxxx XXXX
Xxxxxx se:
650 xx xxxxxxxxxxxx (3.3.),
250 xx vody (xxx XXXX),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx fosforečnanu xxxxxxxxxx (3.6.),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx xx filtrem 0,22 μx (4.6.) x xxxxxx xx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx dobu 10 xxxxx).
3.9 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx: 1.3-bis [(4-chlorbenziliden) xxxxx] xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, X 758.
3.9.1 Robenidin, xxxxxxxx standardní xxxxxx: 300 μx/xx:
Xxxxxx xx 30 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx (3.9.) x xxxxxxxxx 0,1 xx. Rozpustí se x xxxxxxx xxxxxxxxx (3.2.) xx 100 xx odměrné xxxxx, xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem x xxxxxxxx se. Xxxxx xx obalí xxxxxxxxxxx folií a xxxxx v temnu.
3.9.2 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx standardní xxxxxx: 12 μx/xx
Xxxxxx xxx 10,0 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.1) do 250 xx odměrné xxxxx, xxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8) x xxxxxxxx. Baňka xx xxxxx aluminiovou xxxxx a xxxxx x xxxxx.
3.9.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 ml xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.2.). Doplní se xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8.) x xxxxxxxx. Tyto xxxxxxx xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 a 6.0 μx/xx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx roztoky xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x pomůcky
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx, xxxxxxxx uzavíracím xxxxxxxx a nádržkou xx xxxxxxxxx 150 xx. Xxxxxxx xxxxxx 10 – 15 xx, délka 250 xx.
4.2 Xxxxx xxxxxxxx
4.3 Xxxxxxx xxxxxxx
4.4 Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx ultrafialovým xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx detektorem x xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx v pásmu 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx chromatografii: 300 xx x 4 xx, X18, 10 μx náplní xxxx xxxxxxx.
4.5 Xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxxxx XX/X xxxx xxxxxxx)
4.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.7 Membránové xxxxxx 0,45 μm
5. Xxxxxx
Xxxx.: Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxx xxxxx úkonech xxxxxxx xxxx xxxxxx z xxxxxxx skla.
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx ani xxxx xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xx xxxxxx provést xxxx xxxxxxxxxx analýzou xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1.1.), xx xxxxxxx bylo přidáno xxxxxx xxxxxxxx robenidinu, xxxx xx ve xxxxxx. K xxxxxxxx xxxxxx 60 xx/xx xx xx 250 xx Erlenmeyerovy xxxxx xxxxxxx 3 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.1.). Xxxxxx xx xxxxxx asi na xxxxx 0,5 xx x xxxxxx dusíku. Xxxxx se 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx x xx deseti xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxx (5.2.).
Xxxx.: Xxx xxxx této xxxxxx xx xxxx xxx modelové xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx by xxxxxxxxx stanovitelné xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx přibližně 15 g xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 0,01 x, přidá xx 100 ml xxxxxxxxxxx methanolu (3.2), xxxxxxxxx a hodinu xxxxx na třepačce (4.2). Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx skleněných vláken (4.5) a xxxx xxxxx filtrátu xx xxxx xx 150 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se 7,5 x molekulárního xxxx (3.4), xxxxxxxxx a xxx minut xx xxxxx. Potom xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx použije x xxxxxxx (5.3).
5.3 Čištění
5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxx s xxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx kolony (4.1) xx xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxx xxxx a xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx 11,0 g xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.5) x xxxxxx xx xx xxxxxx, pokud xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx se x xxxxxxxx koloně xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx kolony.
5.3.2 Xxxxxxx xxxxxx
Xx připravenou xxxxxx xx napipetuje 5,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2). Xxxxxx xxxxxx xx xxxx x xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx oxidem xxxxxxxx. Xxxxxxxxx se x xxxxxx xxxxxx xxxxxx 100 xx xxxxxxxxx (3.1) xxx rychlosti xxxxxxx 2 – 3 xx za xxxxxx x xxxxx xx xxxx do 250 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xx redukovaného xxxxx x xxx xxxxxxx 40xX odpaří do xxxxx v xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx 3 – 4 ml mobilní xxxx (3.8.) x xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xx 10 xx xxxxxxx baňky. Baňka xx několikrát xxxxxxxxx 1 – 2 xx xxxxxxx xxxx x xxxx roztoky xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxxxx xxxx zfiltruje xxxx 0,45 μx xxxxx (4.7). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Stanovení xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC)
5.4.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxxx. Mohou být xxxxxxx i xxxx xxxxx xxxxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
xxxxxxx xxxx (3.8),
průtoková rychlost: 1,5–2 ml/minuta,
vlnová délka xxxxxxxxx: 317 nm,
objem xxxxxxxx: 20–50 μl.
Stabilita xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx nástřikem xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3), xxxxx obsahuje 3,6 μx/xx, až xx xxxxxxxx konstantních xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Kalibrační xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.9.3) xx xxxxxxx xxxxxxx nástřiků x xxxxx se xxxxx (xxxxxx) píků xxx xxxxxx koncentraci. Kalibrační xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kalibračních roztoků x μg/ml.
5.4.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx nastříkne xxxxxx xxxxx extraktu xxxxxx, jako xxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx a xxxxxxxxx výsledků
Z xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (ploch) xxxxxxxxxxxxxx xxxx v xxxxxxx xxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxx robenidinu x roztoku xxxxxx x μx/xx odečtením x xxxxxxxxxxxx grafu (5.4.2).
x = (x × 200)/x,
xx kterém xx
x = koncentrace xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x gramech.
7. Xxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Identita
Identita xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx xxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxx
X xxxxxxxx vzorku xx xxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3). Xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxx xx xxx obdobné xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xx xxxxxx pouze xxxxx xxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx robenidinu x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx v xxxxxxxx jeho xxxxxxxxx xxxxx musí být xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx pole
Výsledky xxxx xxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x standardu xxxx být xxxxxx xxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxxxxx stejný x xxxxxxxxxxx danou rozlišovací xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx systému. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx polem xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 nm xx xxxxx záznam xxxxxxx zkoušeného vzorku x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vrcholu píku xxxxxxxxxxxxx lišit od xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx vykázána xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx dvěma xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxxxx vzestupu, xxxxxxx x sestupu xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % relativní absorbance. Xxxxxx kritéria xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx stejná xxxxxx x xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx spektry xxxxxxxxxxx nikde 15 % absorbance spektra xx vrcholu píku.
Jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx není xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx robenidinu xxx 15 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx fortifikovaný xxxxxx musí xxx xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kruhový test, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analyzovalo čtyři xxxxxx krmiv xxx xxxxxx x králíky, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx vzorků xxx podroben dvěma xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx krmivo |
Pelety |
|
|
Průměr (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (mg/kg) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
CVr (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
XX (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX METHYLBENZOCHÁTU
(2-methyl-7-benzyl-oxy-6-butyl-1,4-dihydro-4-oxychinolin-3-karboxylát)
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx slouží x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx ze vzorku xxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx dichlormethanem, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxx pak znovu xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx stanoví xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) pomocí XX xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, pro HPLC
3.3 Xxxxxxx xxxx HPLC
Směs xxxxxxxxx (3.2.) a xxxx (xxx HPLC) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx xx xxxx 0,22 μx xxxxx (4.5.) x odplyní (xxxx. ultrazvukem xx xxxx 10 xxxxx).
3.4 Xxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx σ = 2 %
20 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x 1000 ml xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Roztok xxxxxxxx chlorovodíkové σ = 10 %
100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (X20 c. 1,18g/ml) xx rozředí x 1000 xx xxxx.
3.6 Xxxxx CG-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxx: 100 g xxxxxxxxxxx xx rozmíchá x 500 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3,5) x za xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxx. Po xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx sníženého xxxxx. Xxxxx se propláchne xxxxxxx vždy 500 xx xxxx x xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx filtrační xxxxx. Vysušený xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx lahvi.
3.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: čistý xxxxxxxxxxxxxxx (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Základní xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, 500 μx/xx
Xxxxxx xx 50 xx xxxxxxxxxx xxxxx (3.7) x přesností 0,1 mg, rozpustí xx ve 100 xx xxxxxxx xxxxx x roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), doplní xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.2 Xxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx 50μx/xx
Xx 50 xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx methylbenzochátu (3.7.1), doplní xx xxxxxxxxxx (3.2) po xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx série 25 ml xxxxxxxxx xxxxx xx odpipetuje 1, 2, 3, 4 x 5 xx pracovního standardního xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.2). Xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.3) a zamíchá. Xxxx roztoky xxxx xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 x 10 μx/xx methylbenzochátu. Xxxxxxxxxx roztoky se xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jejich xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x pomůcky
4.1 Xxxxxxxxxxx třepačka
4.2 Xxxxxxx xxxxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxx (250 x 15 xx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx x kapacitou 200 xx
4.4 HPLC xxxxxxxx xxxxxxxx XX detektorem x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx nebo detektorem xxxxxxxx xxxxx
4.4.1 Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, C – 18, 10μx xxxx kolona podobná
4.5 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45μx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx krmivo bez xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx zda x xxx není přítomen xxx xxxxxxxxxxxxxxx ani xxxx xxxxxx látky.
5.1.2 Xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx, jaké xx xxxxxxxx xx vzorku. X xxxxxxxxxxx na xxxxxx 1,5 mg/kg xx xxxxx xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.7.1), promíchá se x xx 10 xxxxx xx započne x xxxxxxxx (5.2).
Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx xx xxxx být xxxxxxxxx xxxx, xxxx xx xxxxxx, x xxx xxxx analýze xx xxxxx být zjištěn xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx naváží xxxxxxxxx 20 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 0,01 g. Xxxxx xx 100 ml xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxxxxxxx xx třepe (4.1) xx xxxx 30 xxxxx. Roztok xx xxxxxxxxx xxxx papírový xxxxx x filtrát xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx 100 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx xxxxx 25 xx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x bodu (5.2). Dále xx xx nálevky přidá 100 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xx xxxx jedné xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx separovat x xxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx) xx odpustí xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx vodné xxxx xx opakuje xx xxxxx xxxxxxx 40 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x tyto xx spojí x xxxxxx extraktem v xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx odpaří xx xxxxx xx rotační xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x 20–25 ml xxxxxxxxx (3.2), xxxxx xx zazátkuje a xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
5.4.1 Příprava xxxxxxxx xxxxxx
Xx dolního xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.3) xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 5 g xxxxxxxxxx xxxxxx x x 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5). Xxxx xxxx xx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxx x nechat xxxxxx. Xxxxxxxxxx kyselina xx odpustí xx xxxxx nad xxxxxxx xxxxxxxxxxx a kolona xx xxxxxxx vodou xxxxx proteklý eluát xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Potom xx do xxxxxx xx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx se xxxxx až k xxxxxxx xxxxxx.
5.4.2 Kolonová xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxx xx xxxxxxx napipetuje xxxxxxx xxxxxxx (5.3). Xxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx dvěma xxxxxxx 5 xx 10 xx xxxxxxxxx (3.2) a výplach xx xxxx xxxxxxx xx kolonu. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxx, aby xxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 150xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) a xxxxx xx xxxx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky.
5.5 Extrakce xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx (5.4.2) xx převede do xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx 5 xx 10 ml xxxxxxxxx (3.2) x výplach xx přidá xx xxxxxx xxxxxxx. Dále xx xx xxxxxx xxxxxxx přidá 300 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 130 ml dichlormethanu (3.1). Xxxxx xx xx dobu xxxxx xxxxxx a xxxxx xx nechají fáze xxxxxxxxxxx. Xxxxx (xxxxxxxxxxxxxxxx) xxxxxx xx odpustí xx 500 xx xxxxx x kulatým xxxx. Xxxxxxxx vodné xxxx xx opakuje xx xxxxx dalšími 70 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxxx se xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx x xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx x xxxxx xx rozpustí x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx roztok xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx do 10 xx odměrné xxxxx. Xxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx 1 xx 2 xx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx po značku xxxxxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Xxxxx xxxxxx xx použije xxx analýzu XXXX (5.6).
5.6 Analýza xxxxxx XXXX
5.6.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx pokud xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
- xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
- xxxxxxx xxxx: xxxx xxxxxxxxx x xxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- xxxxxx délka xxxxxxxxx: 265 xx,
- xxxxx nástřiku: 20 xx 50μl.
Stabilita xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx nástřikem xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, xx do xxxxxxxx konstantních výšek xxxx xxxxx píků x retenčních xxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxx graf
Pro každý xxxxxxxxxx xxxxxx (3.7.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx vynesením průměrných xxxxxx výšek xxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx kalibračních xxxxxxx x μx/xx.
5.6.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx nastříkne xxxxxxx xxxxxx (5.5.) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxx hodnoty xxxxx (xxxxxx) píků xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx určí xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2.).
Obsah xxxxxxxxxxxxxxxx x (mg/kg) xx vzorku xx xxxxxxx xxxxx tohoto xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx xxxxxx xx
x = xxxxxxxxxxx methylbenzochátu x roztoku xxxxxx x μg/ml,
m = xxxxxxxx navážky xxxxxx x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Identita
Identita xxxxxxx může xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx polem, který xxxxxxxx xxxxxxxxx spektra xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx stanovením x xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx přidáním xxxxxxxx množství pracovního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx přidaného methylbenzochátu xx být xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xxxxx pouze ke xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxx xx přidané xxxxxxxx, xxx xx množství xxxxxxxxxxxxxxx xx zředěném xxxxxxxx. Šíře píku x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx musí xxx xx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx diodového xxxx
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx píku xx chromatogramu stejný x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Pro xxxxxxxx x xxxxxxxx polem xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 nm;
b) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx se nesmí xxxxxx spektra xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx chromatogramu lišit xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 až 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % absorbance xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) xxx xxxxxx xxxxx mezi 220 x 350 nm xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, vrcholu x xxxxxxx píku xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 10 xx 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx stejná xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx není xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx 4 x 20 xx/xx.
7.3 Výtěžnost
Výtěžnost pro xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx nejméně 90 %.
8. Výsledky kruhového xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx
|
Xxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx krmivo |
Pelety |
|
|
Průměr (xx/xx) |
Xxxxxxxxxx |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Xx (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
SR (mg/kg) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
CVR |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Výtěžnost (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
XX = standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = variační xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx