Dvanáctá xxxxxxxx Xxxxxx 93/117/XX
xx xxx 17. xxxxxxxx 1993,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx krmiv
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x ohledem na Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx dne 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx nařízením (XXX) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, že xx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx předepsaných xxxxxxxx x správními xxxxxxxx o xxxxxxx x xxxxxxx krmiv, xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xx nutno xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx kontrolu dodržování xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx úředních xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx popsané x příloze této xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. xxxxxxxxx 1994. Xxxxxxxxxx x xxxx uvědomí Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx členskými xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx za takový xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx si xxxxxxx členské xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
X Bruselu xxx 17. xxxxxxxx 1993.
Za Xxxxxx
Xxxx Xxxxxxxx
xxxx Komise
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 362, 31.12.1985, x. 8.
PŘÍLOHA
1. XXXXXXXXX ROBENIDINU
1,3-bis [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) amino]guanidin xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxx slouží xx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxx stanovitelnosti xx 5 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx okyseleným xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx a xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx koloně x xxxxxx hlinitým. Xxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx x xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xx xxxxxxxx fázi pomocí XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx methanol
Do 500 ml xxxxxxx xxxxx xx xxxxx 4,0 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (X20x, 1,18 x/xx), xxxxxx xx xx xxxxxx methanolem (3.1.) a promíchá. Xxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxx těsně xxxx xxxxxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxx, xxx XXXX
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3X, 8 xx 12 xxxx (1,6–2,5 xx perličky xxxxxxxxxxxxx hlinitokřemičitanu, xxxxxx xxxx 0,3 xx).
3.5 Xxxx xxxxxxx: xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx X xxx kolonovou xxxxxxxxxxxxxx
100 x oxidu hlinitého xx xxxxxx xx xxxxxx nádoby x xxxxxxx xx 2 xx xxxx. Zazátkuje xx x protřepává xx xxxxxxxxx 20 xxxxx. Xxxxxxxx xx x dobře zazátkované xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx fosforečnan xxxxxxxx, xxxxxx x = 0,025 xxx/x
3,4 x dihydrogen xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx HPLC) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 0, 025 mol/l
3,55 g xxxxxxxxx (nebo 4,45 x xxxxxxxxx, xxxx 8,95 x xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxx fosforečnanu sodného xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx HPLC) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx po xxxxxx x promíchá.
3.8 Mobilní xxxx XXXX
Xxxxxx xx:
650 xx xxxxxxxxxxxx (3.3.),
250 xx xxxx (xxx XXXX),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.6.),
50 xx roztoku xxxxxxxx fosforečnanu xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx se xxxxxxx 0,22 μm (4.6.) x roztok xx xxxxxxxx (např. xxxxxxxxxxx xx dobu 10 xxxxx).
3.9 Standardní xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx: 1.3-bis [(4-chlorbenziliden) xxxxx] xxxxxxxx hydrochlorid, X 758.
3.9.1 Robenidin, xxxxxxxx standardní roztok: 300 μx/xx:
Xxxxxx xx 30 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx robenidinu (3.9.) x přesností 0,1 xx. Xxxxxxxx se x kyselém methanolu (3.2.) ve 100 xx xxxxxxx baňce, xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxx.
3.9.2 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 12 μx/xx
Xxxxxx xxx 10,0 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.1) do 250 xx xxxxxxx baňky, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8) x xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx aluminiovou xxxxx x xxxxx x xxxxx.
3.9.3 Kalibrační xxxxxxx
Xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx buněk xx odměří 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.2.). Xxxxxx xx xx xxxxxx mobilní xxxx (3.8.) x xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 a 6.0 μg/ml xxxxxxxxxx. Xxxxxxx tyto roztoky xx připravují těsně xxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxx, vybavená uzavíracím xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 150 xx. Xxxxxxx průměr 10 – 15 xx, xxxxx 250 xx.
4.2 Xxxxx xxxxxxxx
4.3 Xxxxxxx xxxxxxx
4.4 Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx vlnovou xxxxxx, xxxxx detektorem x xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx 250 - 400 xx
4.4.1 Kolona na xxxxxxxxxxx chromatografii: 300 xx x 4 xx, C18, 10 μx xxxxxx xxxx xxxxxxx.
4.5 Filtr ze xxxxxxxxxx vláken (Xxxxxxx XX/X xxxx podobný)
4.6 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45 μm
5. Postup
Pozn.: Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx při xxxxx úkonech xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxx skla.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx krmivo xxx xxxxxxxxxxx robenidinu a xxxxxx, zda xxxxxxxxxx xxxxxxxxx ani jiné xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1.1.), xx xxxxxxx bylo přidáno xxxxxx množství xxxxxxxxxx, xxxx xx ve xxxxxx. K dosažení xxxxxx 60 xx/xx xx do 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xxxxxxx 3 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.1.). Xxxxxx xx xxxxxx xxx xx xxxxx 0,5 ml x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx a xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x extrakcí (5.2.).
Xxxx.: Xxx xxxx této xxxxxx xx mělo xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx typu xxxx xx xxxxxxxx vzorek x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx naváží přibližně 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxx 0,01 g, přidá xx 100 ml xxxxxxxxxxx methanolu (3.2), xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx (4.2). Roztok xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx skleněných xxxxxx (4.5) x xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx xx 150 xx Erlenmeyerovy baňky. Xxxxx xx 7,5 x xxxxxxxxxxxxx síta (3.4), zazátkuje x xxx xxxxx se xxxxx. Xxxxx xx xxxxx přefiltruje xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Tento roztok xx xxxxxxx x xxxxxxx (5.3).
5.3 Čištění
5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx
Xx spodního xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.1) xx xxxxx xxxx zátka xx xxxxxx xxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx 11,0 g xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.5) x xxxxxx xx xx kolony, xxxxx xxxxx s minimální xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx prostředí. Xxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx koloně xxxxxxx xxxxxx poklepem na xxxxx konec xxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxx vzorku
Na xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2). Xxxxxx pipety xx xxxx x xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx oxidem xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx pomocí 100 xx xxxxxxxxx (3.1) xxx xxxxxxxxx xxxxxxx 2 – 3 ml xx xxxxxx x xxxxx xx xxxx xx 250 xx xxxxx x kulatým dnem. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xx redukovaného xxxxx x při teplotě 40xX odpaří xx xxxxx v xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Odparek xx xxxxx xxxxxxxx xx 3 – 4 xx xxxxxxx xxxx (3.8.) a xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx 10 ml xxxxxxx xxxxx. Baňka xx několikrát xxxxxxxxx 1 – 2 xx mobilní xxxx x tyto xxxxxxx xx xxxxxxx do xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx se. Xxxxxxxxx část zfiltruje xxxx 0,45 μm xxxxx (4.7). Tento xxxxxx se xxxxxxx xxx vlastní XXXX xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Stanovení xxxxxx účinnou kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (HPLC)
5.4.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
xxxxxxx xxxx (3.8),
průtoková xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 317 nm,
objem xxxxxxxx: 20–50 μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx systému xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.3), xxxxx obsahuje 3,6 μx/xx, až xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Kalibrační xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.9.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xx xxxxx (xxxxxx) xxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx. Kalibrační xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx průměrných hodnot xxxxx nebo xxxxx xxxx proti xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kalibračních xxxxxxx x μg/ml.
5.4.3 Roztok xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx extraktu xxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxx xx průměrná xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx.
6. Výpočet x xxxxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xxxxxx výšek (xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx píků v xxxxxxx xxxxxx xx xxxx koncentrace xxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku x μx/xx xxxxxxxxx x kalibračního xxxxx (5.4.2).
x = (c × 200)/m,
ve kterém xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx analýzy může xxx potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx polem, xxxxx umožňuje porovnání xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx roztokem (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx xxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx
X xxxxxxxx vzorku se xxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x extraktu xxxxxx.
Xxxx xx se xxxxxx pouze výška xxxx robenidinu podle xxxxxxxx xxxxxxxxx robenidinu x obsahu xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx šíře.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při vlnové xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx záznam xxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx píku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx rozlišovací xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx systému. Xxx detektor s xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx plus/minus 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx nesmí xxxxxx xxxxxxx zkoušeného xxxxxx x standardu zaznamenaný xx xxxxxxx píku xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx spektra x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Tohoto xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx vykázána xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x sestupu xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx částí xxxxxxx v xxxxxxx 10 až 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx ve xxxxx sledovaných bodech xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nikde 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x těchto xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx není xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxxx vzorku nesmí xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 15 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx test, xx xxxxxx dvanáct xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx pro xxxxxx x králíky, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx ze xxxxxx xxx podroben xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx krmivo |
Pelety |
|
|
Průměr (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (xx/xx) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
XXx (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
XX (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Sr = standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX METHYLBENZOCHÁTU
(2-methyl-7-benzyl-oxy-6-butyl-1,4-dihydro-4-oxychinolin-3-karboxylát)
1. Xxxx x xxxxxx použití
Tato xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx. Dolní mez xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx methanolového xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx přečištěn dichlormethanem, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Obsah methylbenzochátu xx stanoví xx xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, xxx HPLC
3.3 Xxxxxxx xxxx XXXX
Xxxx xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (pro XXXX) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx xx přes 0,22 μx xxxxx (4.5.) x xxxxxxx (xxxx. ultrazvukem xx xxxx 10 xxxxx).
3.4 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx σ = 2 %
20 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x 1000 xx xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Roztok xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx σ = 10 %
100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (X20 c. 1,18x/xx) xx rozředí x 1000 ml xxxx.
3.6 Xxxxx XX-120 (Na), 100 – 200 xxxx
Xxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxx: 100 g xxxxxxxxxxx xx rozmíchá v 500 xx roztoku xxxxxxxx chlorovodíkové (3,5) x xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x varu xx xxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxxx se kyselina xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx sníženého tlaku. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx vždy 500 xx vody x xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxxxxxxx x vysuší xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx lahvi.
3.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx methylbenzochát (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Xxxxxxxx standardní xxxxxx benzochátu, 500 μx/xx
Xxxxxx se 50 xx xxxxxxxxxx xxxxx (3.7) x xxxxxxxxx 0,1 xx, rozpustí xx ve 100 xx xxxxxxx baňce x roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), xxxxxx xx značku x xxxxxxxx.
3.7.2 Pracovní xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx 50μx/xx
Xx 50 xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx methylbenzochátu (3.7.1), doplní xx xxxxxxxxxx (3.2) po xxxxxx a xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx roztoky
Do série 25 ml odměrných xxxxx se odpipetuje 1, 2, 3, 4 x 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx methylbenzochátu (3.7.2). Xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.3) x xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 a 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx roztoky se xxxx xxxxxxxxxxx těsně xxxx jejich použitím.
4. Xxxxxxxxx a pomůcky
4.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.2 Rotační xxxxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxx (250 x 15 xx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx x kapacitou 200 xx
4.4 HPLC xxxxxxxx xxxxxxxx XX detektorem x xxxxxxxxxx vlnovou xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
4.4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii: 300 mm x 4 xx, C – 18, 10μx xxxx xxxxxx xxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45μx
5. Xxxxxx
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx bez xxxxxxxxxxx methylbenzochátu xx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx zda x xxx není xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx látky.
5.1.2 Xxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, fortifkovaného xxxxxxxxxxxxxxxxx v obdobném xxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx. X fortifikaci na xxxxxx 1,5 mg/kg xx přidá do 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.1), promíchá se x po 10 xxxxx xx xxxxxxx x extrakcí (5.2).
Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx účel xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx, jako xx xxxxxx, x xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxx zjištěn xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx xxxxxx přibližně 20 x připraveného xxxxxx x přesností 0,01 x. Xxxxx xx 100 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) a xxxxxxxxxx xx třepe (4.1) xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx a filtrát xxxxxxx xx extrakci xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 ml xxxxxx nálevky, xxxxxxxxxx 100 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx přidá 25 xx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx postupem xxxxxxxx x xxxx (5.2). Dále se xx xxxxxxx přidá 100 xx dichlormethanu (3.1) a třepe xx xxxx xxxxx xxxxxx. Potom xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx) xx odpustí xx 500 ml xxxxx s xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx vodné xxxx se xxxxxxx xx dvěma dalšími 40 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx x kulatým xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxx na xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x 20–25 xx xxxxxxxxx (3.2), xxxxx xx xxxxxxxxx a xxxx extrakt xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx x iontovou xxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx ionexové xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.3) xx xxxxx tampon xx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 5 x xxxxxxxxxx katexu a x 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5). Xxxx směs xx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx nad xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xx kolony xx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxx (3.2) x nechá se xxxxx až k xxxxxxx xxxxxx.
5.4.2 Kolonová xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (5.3). Xxxxx x kulatým xxxx xx xxxxxxxxx dvěma xxxxxxx 5 xx 10 xx methanolu (3.2) a xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx stéci xx x povrchu xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x kolony 150xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx xx xxxx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.5 Extrakce xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx (5.4.2) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx 5 xx 10 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx xx xxxxx do xxxxxx nálevky. Xxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 300 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) a 130 xx dichlormethanu (3.1). Třepe se xx dobu jedné xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx (xxxxxxxxxxxxxxxx) xxxxxx xx odpustí xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxxx dalšími 70 xx dávkami xxxxxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxxx xx smísí x xxxxxx xxxxxxxxx x baňce s xxxxxxx dnem.
Extrakt xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx tlaku x xxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx x xxxxx xx rozpustí v xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx 10 xx xxxxxxx xxxxx. Baňka s xxxxxxx xxxx se xxxxxxxxx dvěma xxxxxxx xxxxxxx 1 xx 2 xx methanolu x opět xx xxxxxxx xx odměrné xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxx množství xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx analýzu XXXX (5.6).
5.6 Xxxxxxx xxxxxx XXXX
5.6.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx indikativně. Xxxxx být xxxxxxx xxxx parametry xxxxx xxxxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxx:
- kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
- xxxxxxx xxxx: xxxx xxxxxxxxx a vody,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 265 nm,
- xxxxx xxxxxxxx: 20 xx 50μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx kontroluje xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kalibračního xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, až xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx časů.
5.6.2 Xxxxxxxxxx graf
Pro xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.7.3) xx provede několik xxxxxxxx a xxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx křivka xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx výšek nebo xxxxx xxxx proti xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μg/ml.
5.6.3 Roztok xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.5.) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx byl xxxxxx pro kalibrační xxxxxxx a xxxx xxxxxxxx xxxxxxx výšky (xxxxxx) x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Výpočet výsledků
Z xxxxxxxx xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxx methylbenzochátu x roztoku xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku x μx/xx podle xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2.).
Obsah xxxxxxxxxxxxxxxx x (xx/xx) xx vzorku xx xxxxxxx xxxxx tohoto xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx kterém je
c = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x roztoku vzorku x μx/xx,
x = xxxxxxxx xxxxxxx vzorku x xxxxxxx.
7. Ověření xxxxxxxxxx výsledků
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx opakovaným xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx anebo xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, který xxxxxxxx xxxxxxxxx spektra xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx roztokem (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μg/ml xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Opakované stanovením x přídavkem
Extrakt vzorku xx fortifikuje xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxxxxxxx roztoku (3.7.2.). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx být podobné xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xxxxx xxxxx ke xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxx xx přidané xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx píku x polovině maximální xxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx délce xxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku i xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx chromatogramu stejný x nepřesností danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x diodovým polem xx udává plus/minus 2 nm;
b) xxx xxxxxx délce mezi 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx ve vrcholu xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit xx ostatních částí xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx kritéria je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx maxima x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx nepřesahuje 15 % absorbance standardního xxxxxxx;
x) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx nesmí xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxx píku zkoušeného xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x této xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx stejná xxxxxx x xxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxx odchylka xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nikde 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x těchto xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx prokázána.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx mezi 4 a 20 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx nejméně 90 %.
8. Xxxxxxxx kruhového xxxxx
X deseti laboratořích xxxx analyzováno pět xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxx provedeny xxx analýzy.
Výsledky
|
Modelové xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx krmivo |
Pelety |
|
|
Průměr (xx/xx) |
Xxxxxxxxxx |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Xx (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
XX (xx/xx) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
XXX |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
CVr = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
XX = standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx