Dvanáctá směrnice Xxxxxx 93/117/XX
xx xxx 17. xxxxxxxx 1993,
kterou xx xxxxxxx analytické metody Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Rady 70/373/XXX xx dne 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (EHS) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, xx xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx podmínek předepsaných xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xx použití xxxxx Společenství pro xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx metody Společenství xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx používání xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx v xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx kontrol xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx x methylbenzochátu x xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x příloze xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. xxxxxxxxx 1994. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx členskými xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx na tuto xxxxxxxx nebo musí xxx za xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx si xxxxxxx členské xxxxx.
Článek 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x platnost xxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 17. prosince 1993.
Za Xxxxxx
Xxxx Steichen
člen Komise
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. věst. X 362, 31.12.1985, x. 8.
XXXXXXX
1. XXXXXXXXX ROBENIDINU
1,3-bis [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) amino]guanidin hydrochlorid
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxx metoda slouží xx stanovení obsahu xxxxxxxxxx v xxxxxxxx. Xxx stanovitelnosti xx 5 xx/xx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx na xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx se eluuje x xxxxxx methanolem, xxxxxxxxxxx xx x xx xxxxxx objem xx upraví xxxxxx xxxxxxx fáze. Xxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx účinnou kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (HPLC) xx xxxxxxxx fázi xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx methanol
Do 500 xx xxxxxxx xxxxx xx oměří 4,0 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (X20x, 1,18 x/xx), xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1.) a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx použitím.
3.3 Xxxxxxxxxxx, xxx HPLC
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3A, 8 xx 12 xxxx (1,6–2,5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 0,3 xx).
3.5 Xxxx xxxxxxx: kyselý, xxxxxx aktivity X xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
100 x xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xx 2 xx xxxx. Xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 20 xxxxx. Xxxxxxxx xx x dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Dihydrogen fosforečnan xxxxxxxx, xxxxxx c = 0,025 xxx/x
3,4 x dihydrogen fosforečnanu xx xxxxxxxx xx xxxx (pro XXXX) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7 Hydrogen xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 0, 025 xxx/x
3,55 x xxxxxxxxx (xxxx 4,45 x dihydrátu, xxxx 8,95 g xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx HPLC) x 1000 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xx xxxxxx x promíchá.
3.8 Mobilní xxxx HPLC
Smíchá se:
650 xx xxxxxxxxxxxx (3.3.),
250 xx xxxx (pro XXXX),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.6.),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxx fosforečnanu xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx xx filtrem 0,22 μx (4.6.) x roztok se xxxxxxxx (xxxx. ultrazvukem xx xxxx 10 xxxxx).
3.9 Xxxxxxxxxx látka
Čistý xxxxxxxxx: 1.3-bis [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx] guanidin xxxxxxxxxxxx, X 758.
3.9.1 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx standardní xxxxxx: 300 μg/ml:
Naváží xx 30 xx standardního xxxxx xxxxxxxxxx (3.9.) x xxxxxxxxx 0,1 xx. Rozpustí xx x xxxxxxx methanolu (3.2.) xx 100 xx odměrné xxxxx, xxxxxx se xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x promíchá xx. Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxx folií x xxxxx x xxxxx.
3.9.2 Xxxxxxxxx, pracovní xxxxxxxxxx xxxxxx: 12 μx/xx
Xxxxxx xxx 10,0 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.1) do 250 xx odměrné baňky, xxxxxx xx značku xxxxxxx fází (3.8) x promíchá. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x uloží x xxxxx.
3.9.3 Kalibrační xxxxxxx
Xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.2.). Doplní se xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8.) a xxxxxxxx. Tyto roztoky xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 a 6.0 μx/xx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx tyto xxxxxxx xx xxxxxxxxxx těsně xxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxx, xxxxxxxx uzavíracím xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 150 xx. Xxxxxxx xxxxxx 10 – 15 xx, xxxxx 250 xx.
4.2 Xxxxx třepačka
4.3 Xxxxxxx odparka
4.4 Xxxxxxxx xx xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx chromatografii (HPLC) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx detektorem x měnitelnou xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx x diodovým xxxxx, xxxxxxxxxx x pásmu 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, X18, 10 μx náplní xxxx xxxxxxx.
4.5 Xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxxxx XX/X xxxx xxxxxxx)
4.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45 μx
5. Postup
Pozn.: Xxxxxxxxx je citlivý xx xxxxxx. Proto xxxx být xxx xxxxx xxxxxxx použito xxxx xxxxxx z xxxxxxx xxxx.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx krmivo xxx xxxxxxxxxxx robenidinu a xxxxxx, zda xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx látky.
5.1.2 Xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx analýzou modelového xxxxxx (5.1.1.), do xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxx 60 xx/xx xx xx 250 xx Erlenmeyerovy xxxxx xxxxxxx 3 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.1.). Xxxxxx se xxxxxx xxx xx xxxxx 0,5 xx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx a xx deseti minutách xx xxxx začít x extrakcí (5.2.).
Pozn.: Xxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx krmivo xxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Do 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx x přesností 0,01 g, xxxxx xx 100 ml xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx (4.2). Xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5) a xxxx xxxxx filtrátu se xxxx xx 150 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 7,5 x xxxxxxxxxxxxx síta (3.4), xxxxxxxxx x xxx minut se xxxxx. Potom xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx. Tento xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx hlinitým
Do xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.1) xx vloží xxxx xxxxx xx xxxxxx xxxx a xxxxxx xx skleněnou xxxxxxxx. Xxxxxx xx 11,0 g xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.5) x xxxxxx se xx kolony, pokud xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxx. Oxid xxxxxxx xx v xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxx kolony.
5.3.2 Xxxxxxx vzorku
Na xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2). Xxxxxx xxxxxx se xxxx x xxxxx xxxxxx x extrakt xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx oxidem hlinitým. Xxxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx xxxxxx 100 xx xxxxxxxxx (3.1) při xxxxxxxxx xxxxxxx 2 – 3 ml xx xxxxxx x eluát xx jímá do 250 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx roztok xx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxx teplotě 40xX xxxxxx xx xxxxx v rotační xxxxxxx (4.3). Xxxxxxx xx znovu rozpustí xx 3 – 4 xx xxxxxxx xxxx (3.8.) a xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xx 10 xx xxxxxxx baňky. Baňka xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 1 – 2 xx xxxxxxx xxxx x tyto xxxxxxx xx xxxxxxx do xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx fází x promíchá xx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx 0,45 μx xxxxx (4.7). Xxxxx xxxxxx xx použije xxx xxxxxxx HPLC xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Stanovení xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC)
5.4.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxx xxxxx povedou xx xxxxxxx výsledkům:
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
mobilní xxxx (3.8),
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 317 xx,
xxxxx xxxxxxxx: 20–50 μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.3), xxxxx xxxxxxxx 3,6 μx/xx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx a xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Kalibrační xxxx
Xxx xxxxx kalibrační xxxxxx (3.9.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xx xxxxx (xxxxxx) xxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx nebo ploch xxxx proti xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kalibračních xxxxxxx x μg/ml.
5.4.3 Roztok xxxxxx
Xxxxxxxxx xx nastříkne xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx, jako při xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (plochy) píků xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xxxxxx výšek (xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx robenidinu x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx grafu (5.4.2).
x = (c × 200)/x,
xx kterém xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v roztoku xxxxxx x μx/xx,
x = hmotnost xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx výsledků
7.1 Identita
Identita xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx potvrzena opakovaným xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x diodovým polem, xxxxx xxxxxxxx porovnání xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x kalibračním xxxxxxxx (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx xxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx
X xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx vhodného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx robenidinu xx xxx xxxxxxx xxxx je předpokládaný xxxxx x extraktu xxxxxx.
Xxxx by xx xxxxxx pouze xxxxx xxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxx x xxxxxx robenidinu x naředěném xxxxxxxx. Xxxx xxxx x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při vlnové xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx píku xx xxxxxxxxxxxxx stejný s xxxxxxxxxxx xxxxx rozlišovací xxxxxxxxxx detekčního xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx vlnové xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx záznam xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx píku xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx spektra x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx je dosaženo, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
x) xxx xxxxxx délce xxxx 220 a 350 nm xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx zkoušeného xxxxxx xxxxx od ostatních x xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 až 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % absorbance xxxxxxx xx vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x těchto xxxxxxxx, xxxxxxxxxx analytu xxxx xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. nejvyššího výsledku xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 15 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx pro fortifikovaný xxxxxx musí být xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx x králíky, xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx dvěma xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x této xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (xx/xx) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
XXx (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
XX (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Sr = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
(2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
1. Účel x oblast xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx.
2. Princip
Methylbenzochát xx xxxxxxxxxx ze xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx přečištěn xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, a xxxxxxxx pak znovu xxxxxxxxxxxxxxx. Obsah xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, xxx XXXX
3.3 Xxxxxxx xxxx XXXX
Xxxx xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (xxx XXXX) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx xx přes 0,22 μm xxxxx (4.5.) a xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx).
3.4 Xxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx σ = 2 %
20 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x 1000 ml xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Xxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové σ = 10 %
100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (X20 c. 1,18x/xx) xx xxxxxxx v 1000 ml xxxx.
3.6 Xxxxx XX-120 (Na), 100 – 200 xxxx
Xxxx použitím xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx: 100 x iontoměniče xx xxxxxxxx x 500 xx roztoku xxxxxxxx chlorovodíkové (3,5) x xx stálého xxxxxxx xx zahřívá x xxxx na xxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Filtruje xx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se propláchne xxxxxxx vždy 500 xx xxxx a xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Xxxxx xx propláchne dalšími 250 xx xxxxxxxxx x vysuší prosáváním xxxxxxx přes xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx uskladňuje x xxxxxxxxxxx lahvi.
3.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, 500 μx/xx
Xxxxxx se 50 xx standardní látky (3.7) x přesností 0,1 xx, xxxxxxxx xx ve 100 xx xxxxxxx baňce x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.2 Xxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx 50μx/xx
Xx 50 xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.1), doplní se xxxxxxxxxx (3.2) po xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx série 25 ml odměrných xxxxx xx odpipetuje 1, 2, 3, 4 x 5 xx pracovního standardního xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.2). Xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxx fází (3.3) x xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 a 10 μx/xx methylbenzochátu. Xxxxxxxxxx roztoky xx xxxx připravovat xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx třepačka
4.2 Xxxxxxx xxxxxxx
4.3 Skleněná kolona (250 x 15 xx) xxxxxxxx uzavíracím xxxxxxxxx a xxxxxxxx x xxxxxxxxx 200 xx
4.4 XXXX xxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx nebo detektorem xxxxxxxx xxxxx
4.4.1 Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 mm, C – 18, 10μm xxxx xxxxxx xxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45μx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx krmivo xxx xxxxxxxxxxx methylbenzochátu xx xxxx analyzovat x xxxxxxxxxx xxx x xxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxx rušivé xxxxx.
5.1.2 Xxxx xx provést xxxx výtěžnosti xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, fortifkovaného xxxxxxxxxxxxxxxxx x obdobném xxxxxxxx, xxxx je xxxxxxxx ve xxxxxx. X fortifikaci xx xxxxxx 1,5 mg/kg xx xxxxx xx 20 x modelového xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.7.1), xxxxxxxx xx x po 10 xxxxx xx započne x xxxxxxxx (5.2).
Pozn.: Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx, xxxx xx xxxxxx, x xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx přibližně 20 x připraveného xxxxxx s xxxxxxxxx 0,01 x. Přidá xx 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx methansulfonové (3.4) x xxxxxxxxxx xx xxxxx (4.1) xx xxxx 30 xxxxx. Roztok xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xx extrakci xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Extrakce xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx nálevky, xxxxxxxxxx 100 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx přidá 25 xx xxxxxxxx, který xxx získán xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx (5.2). Xxxx xx xx nálevky přidá 100 ml xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x třepe xx xxxx jedné xxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx separovat x spodní vrstva (xxxxxxxxxxxxxx) se odpustí xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx se opakuje xx dvěma xxxxxxx 40 xx dávkami xxxxxxxxxxxxxx a tyto xx spojí x xxxxxx extraktem x xxxxx s xxxxxxx xxxx. Extrakt dichlormethanu xx xxxxxx xx xxxxx na rotační xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx 40 oC. Xxxxxxx se xxxxxxxx x 20–25 xx xxxxxxxxx (3.2), xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxx chromatografii x xxxxxxxx výměnou (5.4).
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx ionexové xxxxxx
Xx xxxxxxx konce xxxxxxxx xxxxxx (4.3) xx vloží tampon xx skelné xxxx. Xxxxxxxx xx suspense x 5 x xxxxxxxxxx xxxxxx x x 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5). Xxxx směs se xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx odpustí xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Potom xx xx xxxxxx xx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xx xxxxx xx x xxxxxxx ionexu.
5.4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (5.3). Baňka x kulatým xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 5 xx 10 ml methanolu (3.2) a výplach xx také xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xx k povrchu xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx tak, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx xx minutu. Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x kolony 150xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx xx jímá xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx (5.4.2) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx nálevky. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 xx 10 ml xxxxxxxxx (3.2) a výplach xx přidá do xxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 300 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 130 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1). Xxxxx xx xx dobu jedné xxxxxx x potom xx xxxxxxx fáze xxxxxxxxxxx. Xxxxx (dichlormethanová) xxxxxx xx xxxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx opakuje xx dvěma xxxxxxx 70 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x tyto xxxxxxxx xx xxxxx x prvním xxxxxxxxx x baňce x xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx odpaří xx xxxxx v rotační xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx tlaku x xxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx x xxxxx xx rozpustí v xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx 10 ml xxxxxxx xxxxx. Baňka x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx dvěma xxxxxxx xxxxxxx 1 xx 2 xx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Baňka xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Tento xxxxxx xx použije xxx xxxxxxx XXXX (5.6).
5.6 Xxxxxxx pomocí XXXX
5.6.1 Parametry
Následující xxxxxxxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
- xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
- xxxxxxx fáze: směs xxxxxxxxx x vody,
- xxxxxxxxx rychlost: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- xxxxxx délka xxxxxxxxx: 265 nm,
- xxxxx nástřiku: 20 xx 50μl.
Stabilita chromatografického xxxxxxx xx kontroluje xxxxxxxxxx nástřikem xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, až xx xxxxxxxx konstantních xxxxx xxxx ploch xxxx x retenčních xxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx každý xxxxxxxxxx roztok (3.7.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx vynesením xxxxxxxxxx xxxxxx výšek xxxx xxxxx xxxx proti xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μx/xx.
5.6.3 Roztok xxxxxx
Xxxxxxxxx xx nastříkne xxxxxxx vzorku (5.5.) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx byl xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxx x určí xxxxxxxx hodnota výšky (xxxxxx) x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxx hodnoty výšky (xxxxxx) píků xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2.).
Obsah xxxxxxxxxxxxxxxx x (xx/xx) xx vzorku xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx xxxxxx xx
x = koncentrace methylbenzochátu x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx xxxxxxx vzorku x gramech.
7. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx opakovaným stanovením x xxxxxxxxx anebo xxxxxxxx detektoru x xxxxxxxx polem, xxxxx xxxxxxxx porovnání xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μg/ml xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x přídavkem
Extrakt xxxxxx xx fortifikuje xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx je předpokládaný xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku.
Mělo by xxxxx xxxxx xx xxxxxxx píku xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxx xx přidané xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx x polovině maximální xxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx šíře.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx pole
Výsledky xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx spektra zaznamenaný xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx detektor x diodovým polem xx udává xxxx/xxxxx 2 nm;
b) při xxxxxx xxxxx mezi 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx zkoušeného xxxxxx a standardu xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx chromatogramu xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx dvěma xxxxxxx nepřesahuje 15 % xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx;
x) při vlnové xxxxx mezi 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx lišit od xxxxxxxxx x xxxx xxxxx spektra v xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tohoto kritéria xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx vykázána stejná xxxxxx x xxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxx odchylka xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx analytu xxxx prokázána.
7.2 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledku při xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx 4 a 20 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X deseti xxxxxxxxxxxx xxxx analyzováno pět xxxxxx. U xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx
|
Xxxxxxxx krmivo |
Sypké xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (mg/kg) |
Nezjištěno |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Sr (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
XX (xx/xx) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
XXX |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx koeficient opakovatelnost
SR = xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx