Xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 93/117/XX
xx xxx 17. xxxxxxxx 1993,
xxxxxx se xxxxxxx analytické xxxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx krmiv
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Rady 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (EHS) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx na xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k tomu, xx xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx podmínek předepsaných xxxxxxxx a správními xxxxxxxx x xxxxxxx x složení xxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx x methylbenzoátu v xxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxx úředních xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx x krmivech xx xxxxxxxxx metody xxxxxxx x příloze této xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí nejpozději xx 30. xxxxxxxxx 1994. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx tuto xxxxxxxx nebo xxxx xxx za xxxxxx xxxxx učiněn při xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx dnem xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 17. xxxxxxxx 1993.
Xx Xxxxxx
Xxxx Steichen
člen Komise
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 362, 31.12.1985, x. 8.
XXXXXXX
1. XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx]xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx xx stanovení xxxxxx xxxxxxxxxx x krmivech. Xxx stanovitelnosti xx 5 mg/kg.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx se eluuje x xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se x xx xxxxxx objem xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Obsah xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) na xxxxxxxx xxxx xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx methanol
Do 500 xx odměrné xxxxx xx oměří 4,0 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (X20x, 1,18 x/xx), xxxxxx xx xx xxxxxx methanolem (3.1.) a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xxx připraven xxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxx, xxx XXXX
3.4 Molekulární xxxx
Xxx 3X, 8 xx 12 xxxx (1,6–2,5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 0,3 mm).
3.5 Xxxx hlinitý: kyselý, xxxxxx xxxxxxxx X xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
100 x oxidu xxxxxxxxx xx naváží do xxxxxx nádoby a xxxxxxx xx 2 xx xxxx. Zazátkuje xx x xxxxxxxxxx xx přibližně 20 xxxxx. Xxxxxxxx se x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx fosforečnan xxxxxxxx, roztok x = 0,025 xxx/x
3,4 x xxxxxxxxxx fosforečnanu xx xxxxxxxx xx xxxx (pro XXXX) x 1000 ml xxxxxxx xxxxx, doplní xx po xxxxxx x promíchá.
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, roztok x = 0, 025 xxx/x
3,55 g xxxxxxxxx (xxxx 4,45 x xxxxxxxxx, xxxx 8,95 g xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxx fosforečnanu xxxxxxx xx xxxxxxxx ve xxxx (xxx HPLC) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx. Doplní xx po xxxxxx x xxxxxxxx.
3.8 Mobilní xxxx HPLC
Smíchá xx:
650 xx xxxxxxxxxxxx (3.3.),
250 xx xxxx (xxx XXXX),
50 ml xxxxxxx xxxxxxxxxx fosforečnanu xxxxxxxxxx (3.6.),
50 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 0,22 μx (4.6.) x xxxxxx se xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx dobu 10 xxxxx).
3.9 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx: 1.3-xxx [(4-chlorbenziliden) xxxxx] xxxxxxxx hydrochlorid, X 758.
3.9.1 Robenidin, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 300 μx/xx:
Xxxxxx se 30 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx robenidinu (3.9.) x přesností 0,1 xx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxxx (3.2.) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem x xxxxxxxx xx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx folií x xxxxx x xxxxx.
3.9.2 Xxxxxxxxx, pracovní xxxxxxxxxx xxxxxx: 12 μg/ml
Odměří xxx 10,0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1) xx 250 xx xxxxxxx baňky, xxxxxx po značku xxxxxxx xxxx (3.8) x xxxxxxxx. Baňka xx xxxxx aluminiovou xxxxx a uloží x xxxxx.
3.9.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx souboru 50 xx odměrných buněk xx xxxxxx 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 ml xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.2.). Xxxxxx xx xx xxxxxx mobilní xxxx (3.8.) x xxxxxxxx. Tyto roztoky xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 x 6.0 μg/ml robenidinu. Xxxxxxx tyto xxxxxxx xx připravují xxxxx xxxx použitím.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Skleněná xxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx, xxxxxxxx uzavíracím xxxxxxxx a nádržkou xx xxxxxxxxx 150 xx. Vnitřní xxxxxx 10 – 15 xx, xxxxx 250 xx.
4.2 Ruční třepačka
4.3 Xxxxxxx xxxxxxx
4.4 Xxxxxxxx xx vysoce xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx detektorem x měnitelnou xxxxxxx xxxxxx, xxxxx detektorem x diodovým polem, xxxxxxxxxx x pásmu 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx chromatografii: 300 xx x 4 xx, X18, 10 μx xxxxxx nebo xxxxxxx.
4.5 Xxxxx ze xxxxxxxxxx vláken (Whatman XX/X xxxx podobný)
4.6 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.7 Xxxxxxxxxx filtry 0,45 μx
5. Xxxxxx
Xxxx.: Xxxxxxxxx je xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx robenidinu x xxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1.1.), xx xxxxxxx xxxx přidáno xxxxxx množství robenidinu, xxxx xx xx xxxxxx. K dosažení xxxxxx 60 xx/xx xx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 3 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1.). Xxxxxx xx xxxxxx xxx xx xxxxx 0,5 xx x xxxxxx dusíku. Xxxxx se 15 x xxxxxxxxxx krmiva, xxxxxxxx se x xx xxxxxx minutách xx xxxx začít x xxxxxxxx (5.2.).
Xxxx.: Xxx účel xxxx xxxxxx xx mělo xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx jako xx zkoušený vzorek x nemělo xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Do 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx naváží xxxxxxxxx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxx 0,01 g, přidá xx 100 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx (4.2). Roztok xx xxxxxxxxxxx přes xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5) x celý xxxxx xxxxxxxx xx xxxx do 150 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se 7,5 x xxxxxxxxxxxxx xxxx (3.4), zazátkuje a xxx xxxxx xx xxxxx. Potom xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx roztok xx xxxxxxx x xxxxxxx (5.3).
5.3 Čištění
5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxx s xxxxxx xxxxxxxx
Xx spodního xxxxx xxxxxxxx kolony (4.1) xx xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxx se skleněnou xxxxxxxx. Naváží xx 11,0 x připraveného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.5) x xxxxxx xx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx poklepem xx xxxxx konec kolony.
5.3.2 Xxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx 5,0 ml připraveného xxxxxxxx vzorku (5.2). Xxxxxx pipety se xxxx o xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx nechá xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx pomocí 100 xx methanolu (3.1) xxx rychlosti xxxxxxx 2 – 3 xx xx xxxxxx a xxxxx xx jímá xx 250 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx roztok xx xx redukovaného xxxxx x xxx xxxxxxx 40xX odpaří xx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx 3 – 4 xx xxxxxxx xxxx (3.8.) a xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx 10 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx několikrát xxxxxxxxx 1 – 2 xx xxxxxxx xxxx x xxxx roztoky xx xxxxxxx xx xxxxxxx baňky. Xxxxx xx doplní xx xxxxxx xxxxxxx fází x promíchá se. Xxxxxxxxx část zfiltruje xxxx 0,45 μm xxxxx (4.7). Tento xxxxxx xx použije xxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Stanovení xxxxxx účinnou kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (XXXX)
5.4.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx x jiné xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
xxxxxxx xxxx (3.8),
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 317 nm,
objem xxxxxxxx: 20–50 μl.
Stabilita xxxxxxxxxxxxxxxxxx systému xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3), xxxxx xxxxxxxx 3,6 μx/xx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx a xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Kalibrační xxxx
Xxx xxxxx kalibrační xxxxxx (3.9.3) se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xx výšky (xxxxxx) píků xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx se získá xxxxxxxxx xxxxxxxxxx hodnot xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kalibračních xxxxxxx x μx/xx.
5.4.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xxxxxx výšek (xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx koncentrace xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μg/ml xxxxxxxxx x kalibračního xxxxx (5.4.2).
x = (c × 200)/m,
ve kterém xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx.
7. Xxxxxxx výsledků
7.1 Identita
Identita xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx polem, xxxxx xxxxxxxx porovnání xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.9.3) obsahujícím 6 μx/xx robenidinu.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx s přídavkem
K xxxxxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx xx předpokládaný xxxxx v xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xx xxxxxx xxxxx výška xxxx robenidinu podle xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x naředěném xxxxxxxx. Xxxx píku x xxxxxxxx xxxx maximální xxxxx xxxx být xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx šíře.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx pole
Výsledky xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx vlnové xxxxx xxxxxxxxx absorpce xxxxxx x standardu xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx píku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx systému. Xxx xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx mezi 220 x 350 nm xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x standardu xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx je dosaženo, xxxxxxxx xxxx vykázána xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx nikde xxxxxxxx xxxx xxxxx spektry xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
x) xxx vlnové xxxxx xxxx 220 a 350 xx se xxxxx spektrum xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxx xx ostatních x xxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 10 až 100 % relativní absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, jestliže jsou xxxxxxxx stejná xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx analytu xxxx xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx provedených xx xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. nejvyššího xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 15 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx pro fortifikovaný xxxxxx musí xxx xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx kruhového xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx krmiv xxx xxxxxx a králíky, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx vzorků xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx x této xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx krmivo |
Pelety |
Sypké krmivo |
Pelety |
|
|
Průměr (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (xx/xx) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
XXx (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
SR (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Xx = xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx opakovatelnosti
SR = xxxxxxxxxx odchylka v xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX METHYLBENZOCHÁTU
(2-methyl-7-benzyl-oxy-6-butyl-1,4-dihydro-4-oxychinolin-3-karboxylát)
1. Xxxx x oblast xxxxxxx
Xxxx xxxxxx slouží x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxx pak znovu xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx methylbenzochátu xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Dichlormethan
3.2 Xxxxxxxx, xxx XXXX
3.3 Xxxxxxx xxxx HPLC
Směs xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (pro HPLC) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx xx xxxx 0,22 μx filtr (4.5.) x odplyní (xxxx. xxxxxxxxxxx po xxxx 10 xxxxx).
3.4 Xxxxxx xxxxxxxx methansulfonové σ = 2 %
20 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx se rozředí x 1000 xx xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Roztok xxxxxxxx chlorovodíkové σ = 10 %
100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (X20 x. 1,18g/ml) xx xxxxxxx x 1000 xx vody.
3.6 Xxxxx XX-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx použitím xx xxxxxxxx katex xxxxx: 100 x iontoměniče xx xxxxxxxx x 500 xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (3,5) x xx xxxxxxx xxxxxxx xx zahřívá x varu xx xxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Filtruje xx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 500 xx xxxx a xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Potom xx propláchne xxxxxxx 250 xx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx přes filtrační xxxxx. Xxxxxxxx ionex xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx lahvi.
3.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: čistý xxxxxxxxxxxxxxx (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, 500 μx/xx
Xxxxxx xx 50 xx xxxxxxxxxx xxxxx (3.7) s xxxxxxxxx 0,1 mg, xxxxxxxx xx ve 100 xx odměrné xxxxx x roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), doplní xx značku x xxxxxxxx.
3.7.2 Xxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx 50μx/xx
Xx 50 ml xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.1), xxxxxx se xxxxxxxxxx (3.2) po xxxxxx a xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx roztoky
Do xxxxx 25 ml odměrných xxxxx xx xxxxxxxxxx 1, 2, 3, 4 x 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.2). Xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.3) x xxxxxxx. Xxxx roztoky mají xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 x 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx připravovat xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x pomůcky
4.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.2 Xxxxxxx xxxxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxx (250 x 15 xx) xxxxxxxx uzavíracím xxxxxxxxx a xxxxxxxx x kapacitou 200 xx
4.4 HPLC xxxxxxxx xxxxxxxx UV xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx vlnovou xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx polem
4.4.1 Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 mm, X – 18, 10μx xxxx xxxxxx podobná
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.5 Membránové xxxxxx 0,45μx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx krmivo xxx xxxxxxxxxxx methylbenzochátu xx xxxx analyzovat x xxxxxxxxxx xxx x xxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xxxx se xxxxxxx xxxx výtěžnosti xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx, jaké xx xxxxxxxx ve vzorku. X xxxxxxxxxxx xx xxxxxx 1,5 xx/xx xx přidá xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.7.1), xxxxxxxx xx x xx 10 xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Pozn.: Xxxxxxxx krmivo xxx xxxxx účel xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx, xxxx xx xxxxxx, x xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx být zjištěn xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Do 250 xx Erlenmeyerovy xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 20 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx x přesností 0,01 x. Xxxxx xx 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx methansulfonové (3.4) a xxxxxxxxxx xx xxxxx (4.1) xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x filtrát xxxxxxx xx extrakci xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx xxxxxxx, obsahující 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.5) xx xxxxx 25 xx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx (5.2). Dále xx xx xxxxxxx xxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x třepe xx dobu xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx vrstvy separovat x xxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx) xx odpustí xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx. Extrakce xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx 40 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xx xxxxx s xxxxxx extraktem v xxxxx x xxxxxxx xxxx. Extrakt xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxx xx rotační xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x 20–25 xx xxxxxxxxx (3.2), xxxxx xx xxxxxxxxx a xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx x iontovou xxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
5.4.1 Příprava ionexové xxxxxx
Xx xxxxxxx konce xxxxxxxx xxxxxx (4.3) xx vloží xxxxxx xx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx se suspense x 5 x xxxxxxxxxx xxxxxx x x 50 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.5). Xxxx směs xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx odpustí až xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx proteklý xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xx xxxxxx xx nalije 50 xx xxxxxxxxx (3.2) x nechá xx xxxxx až k xxxxxxx xxxxxx.
5.4.2 Kolonová xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (5.3). Xxxxx x kulatým dnem xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 5 xx 10 xx xxxxxxxxx (3.2) x výplach xx také převede xx kolonu. Extrakt xx nechá xxxxx xx k xxxxxxx xxxxxx. Kolona xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx xx xxxxxx. Xxxxxxxx kapalina xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxx 150xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx se xxxx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx (5.4.2) xx převede do xxxxxxxxxxxx xxxxxx nálevky. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 xx 10 xx methanolu (3.2) x xxxxxxx xx xxxxx do xxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xx dělící xxxxxxx xxxxx 300 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) a 130 ml dichlormethanu (3.1). Třepe se xx dobu xxxxx xxxxxx x xxxxx xx nechají fáze xxxxxxxxxxx. Xxxxx (xxxxxxxxxxxxxxxx) xxxxxx xx xxxxxxx xx 500 xx xxxxx x kulatým xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx 70 xx dávkami xxxxxxxxxxxxxx x tyto xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx x xxxxxxx dnem.
Extrakt dichlormethanu xx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) a xxxxx roztok xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx 10 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx 1 až 2 xx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx do xxxxxxx xxxxx. Baňka xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx membránový xxxxx (4.6). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxx analýzu HPLC (5.6).
5.6 Analýza xxxxxx XXXX
5.6.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx být použity xxxx parametry xxxxx xxxxxxx ke stejným xxxxxxxxx:
- xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
- xxxxxxx xxxx: směs xxxxxxxxx x vody,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 265 xx,
- xxxxx nástřiku: 20 xx 50μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx kontroluje xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.3) obsahujícího 4μx/xx, až xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výšek xxxx ploch píků x xxxxxxxxxx časů.
5.6.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.7.3) xx provede xxxxxxx xxxxxxxx x změří xxxxx (xxxxxx) píků xxx každou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx nebo xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx kalibračních xxxxxxx x μx/xx.
5.6.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.5.) x použitím xxxxxx xxxxx, xxxx byl xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxxx hodnota xxxxx (xxxxxx) x píků xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
X xxxxxxxx xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μg/ml xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2.).
Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x (xx/xx) xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx tohoto xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx xxxxxx je
c = koncentrace methylbenzochátu x xxxxxxx vzorku x μg/ml,
m = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx anebo xxxxxxxx detektoru s xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx spektra xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μg/ml xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx
Xxxxxxx vzorku xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx by xxxxx pouze xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x ohledem xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx zředěném xxxxxxxx. Xxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xx přibližně 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx pole
Výsledky xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx spektra xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Pro xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xx udává plus/minus 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx se xxxxx xxxxxx spektra xxxxxxxxxx xxxxxx a standardu xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 až 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx maxima x jestliže xxxxx xxxxxxxx xxxx dvěma xxxxxxx nepřesahuje 15 % xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx spektrum xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx píku zkoušeného xxxxxx xxxxx od xxxxxxxxx x xxxx xxxxx spektra v xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx xxxx vykázána xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx není xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx prokázána.
7.2 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx stejném vzorku xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledku při xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx mezi 4 a 20 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx kruhového xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxx provedeny xxx analýzy.
Výsledky
|
Modelové xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
Xxxxxxxxxx |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Xx (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
XX (xx/xx) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
XXX |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = standardní xxxxxxxx opakovatelnosti
CVr = xxxxxxxx koeficient xxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx