Xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 93/117/XX
xx dne 17. xxxxxxxx 1993,
kterou se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx dne 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx vzorků x analýzy Společenství xxx úřední xxxxxxxx xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (XXX) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, že xx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx o kvalitě x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx za použití xxxxx Společenství xxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx látek robenidinu x methylbenzoátu x xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxx úředních kontrol xxxxxxxxxx xx obsahu xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx metody xxxxxxx x xxxxxxx této xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. listopadu 1994. Neprodleně x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx přijatá xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx musí xxx za xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx členské xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xxxxxxxx x platnost xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství.
X Xxxxxxx xxx 17. prosince 1993.
Xx Xxxxxx
Xxxx Steichen
člen Xxxxxx
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 362, 31.12.1985, x. 8.
XXXXXXX
1. XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx]xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x oblast xxxxxxxxxx
Xxxx metoda slouží xx stanovení obsahu xxxxxxxxxx v xxxxxxxx. Xxx stanovitelnosti xx 5 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxx a xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx x oxidem xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx eluuje x xxxxxx methanolem, xxxxxxxxxxx se x xx xxxxxx objem xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx se stanoví xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) na xxxxxxxx fázi pomocí XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxxx xxxxx xx oměří 4,0 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (X20x, 1,18 x/xx), xxxxxx xx xx xxxxxx methanolem (3.1.) x promíchá. Xxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxx, xxx HPLC
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3A, 8 xx 12 mesh (1,6–2,5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx, průměr xxxx 0,3 xx).
3.5 Xxxx xxxxxxx: xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx X xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
100 x xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx nádoby x xxxxxxx se 2 xx vody. Xxxxxxxxx xx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 20 xxxxx. Skladuje se x dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx fosforečnan xxxxxxxx, roztok x = 0,025 xxx/x
3,4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx HPLC) x 1000 xx xxxxxxx baňce, xxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 0, 025 mol/l
3,55 g xxxxxxxxx (xxxx 4,45 x xxxxxxxxx, nebo 8,95 g dodekahydrátu) xxxxxxxx fosforečnanu sodného xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx XXXX) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxx xxxx XXXX
Xxxxxx se:
650 xx xxxxxxxxxxxx (3.3.),
250 xx xxxx (xxx XXXX),
50 ml xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.6.),
50 ml roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx sodného (3.7.).
Xxxxxxxxx se xxxxxxx 0,22 μx (4.6.) x xxxxxx se xxxxxxxx (např. xxxxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx).
3.9 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx: 1.3-xxx [(4-chlorbenziliden) xxxxx] xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, X 758.
3.9.1 Robenidin, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 300 μx/xx:
Xxxxxx se 30 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx robenidinu (3.9.) x přesností 0,1 xx. Xxxxxxxx se x xxxxxxx xxxxxxxxx (3.2.) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se. Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx x temnu.
3.9.2 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx standardní xxxxxx: 12 μx/xx
Xxxxxx xxx 10,0 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1) do 250 xx xxxxxxx baňky, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8) x xxxxxxxx. Baňka xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x uloží x temnu.
3.9.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.2.). Xxxxxx se xx značku xxxxxxx xxxx (3.8.) a xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 a 6.0 μg/ml xxxxxxxxxx. Xxxxxxx tyto roztoky xx xxxxxxxxxx těsně xxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x pomůcky
4.1 Skleněná xxxxxx
Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 150 xx. Xxxxxxx xxxxxx 10 – 15 xx, xxxxx 250 xx.
4.2 Xxxxx třepačka
4.3 Xxxxxxx xxxxxxx
4.4 Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx ultrafialovým xxxxxxxxxx x měnitelnou xxxxxxx xxxxxx, anebo xxxxxxxxxx x xxxxxxxx polem, xxxxxxxxxx x pásmu 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx chromatografii: 300 xx x 4 xx, C18, 10 μx xxxxxx xxxx xxxxxxx.
4.5 Filtr xx xxxxxxxxxx xxxxxx (Whatman XX/X xxxx xxxxxxx)
4.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.7 Xxxxxxxxxx filtry 0,45 μm
5. Xxxxxx
Xxxx.: Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx z xxxxxxx skla.
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx robenidinu x xxxxxx, zda neobsahuje xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx látky.
5.1.2 Xx xxxxxx provést xxxx xxxxxxxxxx analýzou modelového xxxxxx (5.1.1.), do xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx je xx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxx 60 xx/xx xx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 3 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1.). Roztok xx xxxxxx xxx xx xxxxx 0,5 xx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx x xx xxxxxx minutách xx může začít x xxxxxxxx (5.2.).
Xxxx.: Xxx účel xxxx xxxxxx xx xxxx xxx modelové xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx vzorek x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx xxxxxx xxxxxxxxx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxx 0,01 x, xxxxx xx 100 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx x hodinu xxxxx xx xxxxxxxx (4.2). Xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx skleněných xxxxxx (4.5) a xxxx xxxxx filtrátu se xxxx xx 150 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 7,5 x molekulárního xxxx (3.4), zazátkuje x xxx xxxxx xx xxxxx. Xxxxx se xxxxx přefiltruje přes xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxx skleněné xxxxxx (4.1) xx xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxx vaty x xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Naváží se 11,0 g připraveného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.5) x nasype xx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxx prodlevou v xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx v xxxxxxxx koloně xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxx xxxxxx
Xx připravenou xxxxxx xx napipetuje 5,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2). Xxxxxx xxxxxx se xxxx x stěnu xxxxxx x extrakt xx xxxxx řádně xxxxxxxxxx xxxxxx hlinitým. Xxxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx xxxxxx 100 xx xxxxxxxxx (3.1) při xxxxxxxxx xxxxxxx 2 – 3 xx xx xxxxxx x xxxxx xx jímá xx 250 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xx redukovaného xxxxx x xxx teplotě 40xX xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx 3 – 4 ml xxxxxxx xxxx (3.8.) a xxxxxxxxxxxxx xx převede xx 10 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx několikrát xxxxxxxxx 1 – 2 xx mobilní xxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx doplní xx xxxxxx xxxxxxx fází x promíchá xx. Xxxxxxxxx část xxxxxxxxx xxxx 0,45 μx xxxxx (4.7). Tento xxxxxx xx použije xxx vlastní XXXX xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX)
5.4.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxx xxxxx povedou xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
mobilní xxxx (3.8),
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 317 xx,
xxxxx xxxxxxxx: 20–50 μl.
Stabilita xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx nástřikem xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.3), xxxxx xxxxxxxx 3,6 μx/xx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Kalibrační xxxx
Xxx xxxxx kalibrační xxxxxx (3.9.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxx (xxxxxx) píků xxx xxxxxx koncentraci. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx hodnot xxxxx nebo xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μx/xx.
5.4.3 Roztok xxxxxx
Xxxxxxxxx se nastříkne xxxxxx xxxxx extraktu xxxxxx, xxxx při xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx
X průměrných xxxxxx xxxxx (xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx píků v xxxxxxx xxxxxx se xxxx koncentrace xxxxxxxxxx x roztoku vzorku x μx/xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.4.2).
x = (x × 200)/x,
xx xxxxxx xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx výsledků
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx opakovaným xxxxxxxxxx x přídavkem xxxxx xxxxxxxx detektoru x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x kalibračním xxxxxxxx (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx xxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx s přídavkem
K xxxxxxxx vzorku se xxxxx vhodného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3). Xxxxxxxx přidaného robenidinu xx být xxxxxxx xxxx xx předpokládaný xxxxx x extraktu xxxxxx.
Xxxx xx xx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx robenidinu x xxxxxx robenidinu x naředěném xxxxxxxx. Xxxx xxxx x xxxxxxxx xxxx maximální xxxxx musí xxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx záznam xxxxxxx zaznamenaný ve xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx stejný x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx detekčního systému. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx se xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx zaznamenaný xx vrcholu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx spektra x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx spektry xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx analytu.
c) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 a 350 nm xx xxxxx xxxxxxxx vzestupu, xxxxxxx x sestupu xxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxx od xxxxxxxxx x této xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx kritéria xx xxxxxxxx, jestliže jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi spektry xxxxxxxxxxx nikde 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx některého x těchto kritérií, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených xx xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 15 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analyzovalo čtyři xxxxxx krmiv pro xxxxxx a králíky, xxxxxxx xxxx peletovaných. Xxxxx xx vzorků xxx xxxxxxxx dvěma xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx krmivo |
Pelety |
Sypké krmivo |
Pelety |
|
|
Průměr (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (mg/kg) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
CVr (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
XX (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = variační xxxxxxxxxx opakovatelnosti
SR = xxxxxxxxxx odchylka x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX METHYLBENZOCHÁTU
(2-methyl-7-benzyl-oxy-6-butyl-1,4-dihydro-4-oxychinolin-3-karboxylát)
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx.
2. Princip
Methylbenzochát xx xxxxxxxxxx ze xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx methansulfonové. Extrakt xx xxxxxxxxx dichlormethanem, xxxxxxxxx chromatografií, a xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx stanoví na xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) pomocí UV xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, xxx XXXX
3.3 Xxxxxxx xxxx XXXX
Xxxx xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (xxx XXXX) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx xx přes 0,22 μx filtr (4.5.) x xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx).
3.4 Xxxxxx kyseliny methansulfonové σ = 2 %
20 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x 1000 ml xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Xxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové σ = 10 %
100 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (X20 x. 1,18x/xx) xx rozředí x 1000 ml xxxx.
3.6 Xxxxx CG-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx: 100 g xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x 500 ml roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3,5) x za xxxxxxx xxxxxxx xx zahřívá x varu xx xxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxx filtr xx xxxxxxxxx tlaku. Xxxxx xx propláchne xxxxxxx xxxx 500 xx xxxx x xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxxxxxxx x xxxxxx prosáváním xxxxxxx přes xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx.
3.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Základní xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, 500 μx/xx
Xxxxxx se 50 xx xxxxxxxxxx xxxxx (3.7) x xxxxxxxxx 0,1 xx, xxxxxxxx xx ve 100 xx xxxxxxx xxxxx x roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), xxxxxx xx značku x xxxxxxxx.
3.7.2 Xxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx 50μg/ml
Do 50 xx odměrné xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx methylbenzochátu (3.7.1), doplní xx xxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxx a xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx série 25 xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 1, 2, 3, 4 a 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.2). Xxxxxx se po xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.3) x zamíchá. Xxxx roztoky xxxx xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 x 10 μx/xx methylbenzochátu. Xxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxx připravovat těsně xxxx xxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.2 Rotační xxxxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxx (250 x 15 xx) vybavená uzavíracím xxxxxxxxx a nádržkou x kapacitou 200 xx
4.4 XXXX zařízení xxxxxxxx XX xxxxxxxxxx x měnitelnou vlnovou xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx polem
4.4.1 Kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii: 300 xx x 4 mm, X – 18, 10μm xxxx xxxxxx podobná
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45μx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx analyzovat x xxxxxxxxxx zda v xxx není xxxxxxxx xxx methylbenzochát xxx xxxx xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xxxx xx xxxxxxx xxxx výtěžnosti analýzou xxxxxxxxxx krmiva, fortifkovaného xxxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx ve xxxxxx. X fortifikaci na xxxxxx 1,5 mg/kg xx xxxxx xx 20 x modelového xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.7.1), xxxxxxxx se x xx 10 xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Pozn.: Xxxxxxxx krmivo pro xxxxx xxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx, xxxx je xxxxxx, x xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx xxxxxx xxxxxxxxx 20 x připraveného xxxxxx x xxxxxxxxx 0,01 g. Přidá xx 100 xx xxxxxxx kyseliny methansulfonové (3.4) x xxxxxxxxxx xx třepe (4.1) xx dobu 30 xxxxx. Roztok xx xxxxxxxxx přes papírový xxxxx x filtrát xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx 100 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx xxxxx 25 xx filtrátu, který xxx xxxxxx postupem xxxxxxxx x xxxx (5.2). Xxxx se xx nálevky xxxxx 100 ml xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx. Potom xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x spodní xxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx) xx odpustí xx 500 xx xxxxx x kulatým xxxx. Extrakce xxxxx xxxx se xxxxxxx xx xxxxx dalšími 40 ml dávkami xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx se rozpustí x 20–25 ml xxxxxxxxx (3.2), baňka xx zazátkuje x xxxx extrakt xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx x iontovou xxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx výměnou xxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
Xx dolního xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.3) xx vloží tampon xx skelné xxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxx x 5 x xxxxxxxxxx xxxxxx x x 50 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.5). Xxxx směs se xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx kyselina xx odpustí až xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx proteklý xxxxx xxxx neutrální xx xxxxxxxxx papír. Potom xx xx xxxxxx xx xxxxxx 50 xx methanolu (3.2) x nechá se xxxxx xx x xxxxxxx xxxxxx.
5.4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxx se xxxxxxx napipetuje získaný xxxxxxx (5.3). Xxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 5 xx 10 xx methanolu (3.2) a výplach xx xxxx xxxxxxx xx kolonu. Extrakt xx xxxxx xxxxx xx k xxxxxxx xxxxxx. Kolona xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxx nepřesahoval 5 xx xx minutu. Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxx x kolony 150xx roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx se xxxx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.5 Extrakce xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx (5.4.2) xx xxxxxxx do xxxxxxxxxxxx xxxxxx nálevky. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx 5 xx 10 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx. Dále xx xx xxxxxx xxxxxxx přidá 300 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) a 130 ml dichlormethanu (3.1). Xxxxx se xx dobu xxxxx xxxxxx x xxxxx xx nechají fáze xxxxxxxxxxx. Nižší (xxxxxxxxxxxxxxxx) xxxxxx xx odpustí xx 500 xx xxxxx s kulatým xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx se xxxxxxx xx dvěma xxxxxxx 70 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx extraktem x xxxxx s xxxxxxx dnem.
Extrakt xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx v xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx tlaku x xxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx v baňce xx rozpustí x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx roztok se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx do 10 xx odměrné xxxxx. Baňka x xxxxxxx dnem xx xxxxxxxxx dvěma xxxxxxx xxxxxxx 1 xx 2 xx xxxxxxxxx x xxxx se xxxxxxx do xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxx XXXX (5.6).
5.6 Analýza pomocí XXXX
5.6.1 Parametry
Následující podmínky xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
- xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
- xxxxxxx xxxx: xxxx xxxxxxxxx x xxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 265 xx,
- xxxxx xxxxxxxx: 20 xx 50μl.
Stabilita xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, xx xx xxxxxxxx konstantních xxxxx xxxx xxxxx píků x xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx každý xxxxxxxxxx xxxxxx (3.7.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxx vynesením průměrných xxxxxx výšek xxxx xxxxx píků xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μx/xx.
5.6.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx nastříkne xxxxxxx xxxxxx (5.5.) x použitím xxxxxx xxxxx, jaký xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xxxxxxxx hodnota xxxxx (xxxxxx) x píků xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Z xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx x roztoku vzorku x μx/xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2.).
Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx w (xx/xx) xx vzorku se xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx xxxxxx je
c = koncentrace xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μg/ml,
m = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx stanovením x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxx polem, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Opakované stanovením x xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx přidáním xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.7.2.). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxx podobné xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx píku xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxx xx přidané množství, xxx xx množství xxxxxxxxxxxxxxx ve zředěném xxxxxxxx. Šíře xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx šíře.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx pole
Výsledky xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx xxxxx maximální xxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxxxx xxxxxxx. Pro xxxxxxxx x xxxxxxxx polem xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx xxxxxx délce xxxx 220 x 350 xx se xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x standardu xxxxxxxxxxx ve vrcholu xxxx chromatogramu lišit xx xxxxxxxxx částí xxxxxxx x rozsahu 10 až 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, jestliže jsou xxxxxxxx stejná xxxxxx x jestliže xxxxx xxxxxxxx mezi xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % absorbance xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) xxx vlnové xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx lišit xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxx spektra x xxxxxxx 10 xx 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx kritéria xx xxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx a jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx nepřesahuje xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx není xxxxxxxx xxxxxxxxx z těchto xxxxxxxx, přítomnost xxxxxxx xxxx prokázána.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx přesáhnout 10 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx methylbenzochátu xxxx 4 x 20 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx vzorek musí xxx nejméně 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X deseti xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx. U každého xxxxxx byly xxxxxxxxx xxx analýzy.
Výsledky
|
Modelové xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
Xxxxxxxxxx |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Xx (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
XX (mg/kg) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
CVR |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Výtěžnost (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = standardní xxxxxxxx opakovatelnosti
CVr = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
XX = standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = variační xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx