Xxxxxxxx směrnice Xxxxxx 93/117/XX
xx dne 17. xxxxxxxx 1993,
kterou xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Rady 70/373/XXX xx dne 20. července 1970, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Společenství xxx úřední xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx nařízením (XXX) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx k tomu, xx směrnice 70/373/EHS xxxxxxx, xx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x kvalitě x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx za použití xxxxx Společenství xxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx látek robenidinu x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx této xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxxx výboru pro xxxxxx,
XXXXXXX XXXX SMĚRNICI:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx kontrol xxxxxxxxxx xx obsahu xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx x krmivech se xxxxxxxxx xxxxxx popsané x příloze xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. listopadu 1994. Neprodleně x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx členskými xxxxx xxxx obsahovat xxxxx na xxxx xxxxxxxx nebo musí xxx za xxxxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Článek 3
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x platnost xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
X Xxxxxxx dne 17. xxxxxxxx 1993.
Xx Xxxxxx
Xxxx Steichen
člen Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 362, 31.12.1985, x. 8.
XXXXXXX
1. XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) amino]guanidin xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 mg/kg.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx okyseleným xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx x jeho xxxxxxxxx xxxx se xxxxxxxx xx xxxxxx x oxidem xxxxxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxx x kolony xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se x xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Obsah xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) na xxxxxxxx xxxx xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx 500 xx odměrné xxxxx xx xxxxx 4,0 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (P20c, 1,18 x/xx), doplní se xx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1.) a xxxxxxxx. Xxxxx roztok xxxx xxx xxxxxxxxx těsně xxxx xxxxxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxx, xxx XXXX
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3A, 8 xx 12 xxxx (1,6–2,5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 0,3 xx).
3.5 Xxxx xxxxxxx: xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx X xxx kolonovou chromatografii
100 x oxidu hlinitého xx naváží xx xxxxxx nádoby x xxxxxxx xx 2 xx xxxx. Xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 20 xxxxx. Xxxxxxxx xx x dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx x = 0,025 mol/l
3,4 x dihydrogen fosforečnanu xx xxxxxxxx ve xxxx (xxx XXXX) x 1000 ml xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx po xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sodný, roztok x = 0, 025 xxx/x
3,55 x xxxxxxxxx (xxxx 4,45 x xxxxxxxxx, xxxx 8,95 x xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx rozpustí ve xxxx (pro XXXX) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx. Doplní xx xx xxxxxx x promíchá.
3.8 Mobilní xxxx XXXX
Xxxxxx xx:
650 xx acetonitrilu (3.3.),
250 xx vody (xxx XXXX),
50 xx roztoku xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.6.),
50 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx sodného (3.7.).
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 0,22 μx (4.6.) x xxxxxx xx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx dobu 10 xxxxx).
3.9 Standardní xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx: 1.3-bis [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx] xxxxxxxx hydrochlorid, X 758.
3.9.1 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx standardní xxxxxx: 300 μx/xx:
Xxxxxx xx 30 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx robenidinu (3.9.) x přesností 0,1 xx. Rozpustí se x kyselém methanolu (3.2.) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx folií x xxxxx v xxxxx.
3.9.2 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 12 μx/xx
Xxxxxx xxx 10,0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1) xx 250 xx xxxxxxx baňky, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx fází (3.8) x xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx aluminiovou xxxxx x uloží x temnu.
3.9.3 Kalibrační xxxxxxx
Xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx buněk xx odměří 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.2.). Xxxxxx xx xx xxxxxx mobilní xxxx (3.8.) a xxxxxxxx. Xxxx roztoky xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 a 6.0 μx/xx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx tyto xxxxxxx xx připravují xxxxx xxxx použitím.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx, vybavená uzavíracím xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 150 xx. Xxxxxxx xxxxxx 10 – 15 xx, délka 250 xx.
4.2 Xxxxx xxxxxxxx
4.3 Xxxxxxx odparka
4.4 Xxxxxxxx xx vysoce xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx x diodovým polem, xxxxxxxxxx v pásmu 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, X18, 10 μx xxxxxx xxxx xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx (Whatman XX/X xxxx xxxxxxx)
4.6 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45 μx
5. Postup
Pozn.: Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xx světlo. Xxxxx xxxx xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx.
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx krmivo xxx xxxxxxxxxxx robenidinu x xxxxxx, xxx neobsahuje xxxxxxxxx xxx jiné xxxxxx látky.
5.1.2 Je xxxxxx xxxxxxx test xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1.1.), do xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxx 60 mg/kg xx do 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 3 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.1.). Xxxxxx xx xxxxxx xxx xx xxxxx 0,5 xx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx se 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx a xx xxxxxx xxxxxxxx xx může začít x xxxxxxxx (5.2.).
Xxxx.: Xxx xxxx této xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx vzorek x xxxxxx by xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx xxxxxx xxxxxxxxx 15 g xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 0,01 x, xxxxx xx 100 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx na xxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx filtr xx skleněných xxxxxx (4.5) x xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx do 150 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky. Xxxxx se 7,5 x xxxxxxxxxxxxx síta (3.4), zazátkuje x xxx xxxxx se xxxxx. Potom xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx ze skleněných xxxxxx. Tento xxxxxx xx xxxxxxx k xxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Xxxxxxxx kolony s xxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.1) se xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx se 11,0 g připraveného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.5) x xxxxxx xx xx kolony, xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx prostředí. Xxxx xxxxxxx se x xxxxxxxx koloně xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxx xxxxxx
Xx připravenou xxxxxx se napipetuje 5,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2). Xxxxxx pipety se xxxx x xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx oxidem xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx xxxxxx 100 xx xxxxxxxxx (3.1) při rychlosti xxxxxxx 2 – 3 xx xx xxxxxx a xxxxx xx jímá do 250 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx tlaku x xxx xxxxxxx 40xX xxxxxx do xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx 3 – 4 ml mobilní xxxx (3.8.) x xxxxxxxxxxxxx se převede xx 10 ml xxxxxxx baňky. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 1 – 2 xx mobilní xxxx x tyto xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx mobilní xxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx 0,45 μx xxxxx (4.7). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX)
5.4.1 Parametry
Následující xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx být xxxxxxx x jiné xxxxx povedou ke xxxxxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
xxxxxxx xxxx (3.8),
xxxxxxxxx rychlost: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 317 xx,
xxxxx xxxxxxxx: 20–50 μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3), xxxxx obsahuje 3,6 μx/xx, xx do xxxxxxxx konstantních xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx roztok (3.9.3) xx provede xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx výšky (xxxxxx) píků pro xxxxxx koncentraci. Kalibrační xxxxxx xx získá xxxxxxxxx průměrných hodnot xxxxx nebo xxxxx xxxx xxxxx odpovídajícím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků x μg/ml.
5.4.3 Roztok xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx extraktu xxxxxx, jako xxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxx hodnota xxxxx (plochy) xxxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx
X průměrných xxxxxx xxxxx (xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxx vzorku xx xxxx koncentrace xxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μx/xx xxxxxxxxx x kalibračního grafu (5.4.2).
x = (c × 200)/x,
xx xxxxxx xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx v μg/ml,
m = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.9.3) obsahujícím 6 μx/xx xxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx s přídavkem
K xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx x extraktu xxxxxx.
Xxxx xx xx xxxxxx pouze xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx přidaného robenidinu x xxxxxx robenidinu x naředěném xxxxxxxx. Xxxx xxxx x xxxxxxxx xxxx maximální xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxxxx danou rozlišovací xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx systému. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx polem xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx nesmí xxxxxx xxxxxxx zkoušeného xxxxxx x standardu xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit od xxxxxxxxx částí xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx maxima x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx analytu.
c) xxx vlnové délce xxxx 220 x 350 nm se xxxxx spektrum xxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxx xxxx zkoušeného xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx kritéria xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx bodech xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nikde 15 % absorbance xxxxxxx xx vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx xxxx dosaženo některého x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx není xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených na xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 15 mg/kg.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čtyři xxxxxx krmiv pro xxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx dvěma xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x této xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (xx/xx) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
XXx (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
XX (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Sr = standardní odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = variační xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx odchylka x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = variační xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
(2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
1. Xxxx x xxxxxx použití
Tato xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx. Dolní xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx ze vzorku xxxxxx methanolového roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, a xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxxx kapalinovou chromatografií (XXXX) xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, xxx HPLC
3.3 Xxxxxxx fáze XXXX
Xxxx xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (pro XXXX) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx xx přes 0,22 μx filtr (4.5.) x xxxxxxx (xxxx. ultrazvukem xx xxxx 10 xxxxx).
3.4 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx σ = 2 %
20 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx rozředí x 1000 xx xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx σ = 10 %
100 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (X20 c. 1,18x/xx) xx rozředí x 1000 xx vody.
3.6 Xxxxx XX-120 (Na), 100 – 200 xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx: 100 g iontoměniče xx xxxxxxxx x 500 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3,5) x xx stálého xxxxxxx xx xxxxxxx x varu xx xxxxx xxxxx. Po xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx vždy 500 xx xxxx a xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Xxxxx xx xxxxxxxxxx dalšími 250 xx xxxxxxxxx x vysuší xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Vysušený xxxxx xx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx.
3.7 Standardní xxxxx: xxxxx methylbenzochát (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Základní xxxxxxxxxx xxxxxx benzochátu, 500 μx/xx
Xxxxxx xx 50 xx standardní látky (3.7) x xxxxxxxxx 0,1 xx, xxxxxxxx xx xx 100 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx methylbenzochátu 50μg/ml
Do 50 ml xxxxxxx xxxxx xx odpipetuje 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx methylbenzochátu (3.7.1), xxxxxx se xxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx roztoky
Do xxxxx 25 xx odměrných xxxxx xx xxxxxxxxxx 1, 2, 3, 4 x 5 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.2). Xxxxxx xx xx xxxxxx mobilní xxxx (3.3) x xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx mají xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 a 10 μg/ml methylbenzochátu. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx těsně xxxx xxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.2 Xxxxxxx xxxxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxx (250 x 15 xx) xxxxxxxx uzavíracím xxxxxxxxx x xxxxxxxx x kapacitou 200 xx
4.4 XXXX xxxxxxxx xxxxxxxx UV xxxxxxxxxx x měnitelnou xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx polem
4.4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, C – 18, 10μx xxxx kolona podobná
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.5 Xxxxxxxxxx filtry 0,45μx
5. Postup
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx bez xxxxxxxxxxx methylbenzochátu xx xxxx analyzovat x xxxxxxxxxx zda v xxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx ani xxxx rušivé xxxxx.
5.1.2 Xxxx xx xxxxxxx xxxx výtěžnosti xxxxxxxx xxxxxxxxxx krmiva, xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx, jaké xx xxxxxxxx xx xxxxxx. X fortifikaci na xxxxxx 1,5 xx/xx xx přidá xx 20 g xxxxxxxxxx xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.1), xxxxxxxx xx x xx 10 xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Pozn.: Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx, xxxx xx xxxxxx, x xxx xxxx analýze xx xxxxx xxx zjištěn xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 20 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx s přesností 0,01 g. Přidá xx 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx methansulfonové (3.4) a xxxxxxxxxx xx třepe (4.1) xx dobu 30 xxxxx. Roztok se xxxxxxxxx xxxx papírový xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx 100 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx xxxxx 25 xx filtrátu, xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx (5.2). Dále xx xx xxxxxxx xxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x třepe xx xxxx jedné xxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x spodní xxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx) xx xxxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx 40 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x tyto xx xxxxx s xxxxxx xxxxxxxxx v xxxxx x xxxxxxx xxxx. Extrakt xxxxxxxxxxxxxx xx odpaří do xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x 20–25 xx xxxxxxxxx (3.2), xxxxx xx xxxxxxxxx a xxxx extrakt xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx x iontovou výměnou (5.4).
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
5.4.1 Příprava xxxxxxxx xxxxxx
Xx dolního xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.3) xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xx suspense x 5 g xxxxxxxxxx xxxxxx x x 50 ml xxxxxxxx chlorovodíkové (3.5). Xxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Přebytečná kyselina xx xxxxxxx xx xxxxx nad xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx proteklý xxxxx xxxx neutrální xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xx xxxxxx xx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxx (3.2) x nechá xx xxxxx xx x xxxxxxx xxxxxx.
5.4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxx xx xxxxxxx napipetuje xxxxxxx xxxxxxx (5.3). Xxxxx x xxxxxxx dnem xx vypláchne xxxxx xxxxxxx 5 až 10 ml xxxxxxxxx (3.2) a výplach xx také xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx stéci xx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 50 ml xxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 150xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx se jímá xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx (5.4.2) xx převede xx xxxxxxxxxxxx dělící xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 xx 10 xx methanolu (3.2) x xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx. Dále xx do dělící xxxxxxx xxxxx 300 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) a 130 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1). Xxxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx fáze xxxxxxxxxxx. Xxxxx (xxxxxxxxxxxxxxxx) xxxxxx xx odpustí xx 500 xx xxxxx x kulatým xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx se opakuje xx dvěma xxxxxxx 70 ml dávkami xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx se xxxxx x xxxxxx extraktem x xxxxx s xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx odpaří do xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx tlaku a xxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) a xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx 10 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxx xxxx se xxxxxxxxx xxxxx dalšími xxxxxxx 1 xx 2 xx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx do odměrné xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxxx x promíchá. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Xxxxx xxxxxx xx použije xxx xxxxxxx XXXX (5.6).
5.6 Analýza pomocí XXXX
5.6.1 Parametry
Následující xxxxxxxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxx:
- kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
- xxxxxxx xxxx: směs xxxxxxxxx x xxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 265 nm,
- xxxxx nástřiku: 20 xx 50μl.
Stabilita xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx nástřikem xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.3) obsahujícího 4μx/xx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxx x retenčních xxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx každý xxxxxxxxxx xxxxxx (3.7.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x změří xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx každou koncentraci. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx vynesením xxxxxxxxxx xxxxxx výšek nebo xxxxx píků proti xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μx/xx.
5.6.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx se nastříkne xxxxxxx vzorku (5.5.) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) x píků xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxx xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxx methylbenzochátu x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx koncentrace x xxxxxxx xxxxxx x μg/ml podle xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2.).
Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x (xx/xx) xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx xxxxxx xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μg/ml,
m = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
7. Ověření xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx opakovaným xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx detektoru s xxxxxxxx polem, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx spektra xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx roztokem (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx stanovením x xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx být xxxxxxx xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx by xxxxx xxxxx ke xxxxxxx xxxx methylbenzochátu x ohledem xxx xx přidané xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx x polovině xxxxxxxxx xxxxx musí xxx xx xxxxxxxxx 10 % původní xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx kritérií:
a) xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx být xxxxxx spektra zaznamenaný xx vrcholu xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x nepřesností xxxxx xxxxxxxxxxx schopností detekčního xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x diodovým xxxxx xx udává plus/minus 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx spektra xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx chromatogramu xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 10 xx 100 % relativní absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx stejná xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx mezi dvěma xxxxxxx nepřesahuje 15 % absorbance standardního xxxxxxx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx spektrum xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx zkoušeného xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 až 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx stejná xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxxxx nikde 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx není xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxxxxx k xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx 4 x 20 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X deseti laboratořích xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx
|
Xxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (mg/kg) |
Nezjištěno |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Sr (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
SR (xx/xx) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
XXX |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
CVr = xxxxxxxx xxxxxxxxxx opakovatelnost
SR = standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = variační xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx