Xxxxxxxx xxxxxxxx Komise 93/117/XX
xx xxx 17. xxxxxxxx 1993,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx o založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Rady 70/373/XXX xx xxx 20. července 1970, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx nařízením (XXX) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx směrnice 70/373/XXX xxxxxxx, že xx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxx mají xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xx použití xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx metod Společenství;
vzhledem x tomu, že xx nutno stanovit xxxxxxxxxx metody Společenství xxx xxxxxxxx dodržování xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx x methylbenzoátu x xxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx v xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxxx výboru pro xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Členské státy xxxxxxx, že při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx kontrol xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx a methylbenzochátu x krmivech xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x účinnost xxxxxx x správní xxxxxxxx nezbytné pro xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. listopadu 1994. Neprodleně x xxxx uvědomí Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx členskými xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx na tuto xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xx takový xxxxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx státy.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x platnost xxxxxx dnem xx xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství.
X Xxxxxxx xxx 17. prosince 1993.
Xx Xxxxxx
Xxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 362, 31.12.1985, x. 8.
PŘÍLOHA
1. XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx]xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x oblast xxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxx slouží xx stanovení xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx a xxxx xxxxxxxxx část xx xxxxxxxx xx xxxxxx x oxidem xxxxxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxx x kolony xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se x xx vhodný xxxxx xx upraví pomocí xxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xx stanoví xxxxxx účinnou kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xx xxxxxxxx xxxx pomocí XX detektoru.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx 4,0 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (P20c, 1,18 x/xx), xxxxxx xx xx značku xxxxxxxxxx (3.1.) x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx těsně xxxx použitím.
3.3 Xxxxxxxxxxx, xxx HPLC
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3X, 8 xx 12 mesh (1,6–2,5 xx perličky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx, průměr xxxx 0,3 mm).
3.5 Xxxx xxxxxxx: kyselý, xxxxxx xxxxxxxx X xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
100 x xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx se 2 xx xxxx. Xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx xx přibližně 20 xxxxx. Xxxxxxxx se x dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, roztok x = 0,025 xxx/x
3,4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx HPLC) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xx značku x xxxxxxxx.
3.7 Hydrogen xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 0, 025 xxx/x
3,55 g xxxxxxxxx (xxxx 4,45 x xxxxxxxxx, xxxx 8,95 x dodekahydrátu) xxxxxxxx fosforečnanu sodného xx xxxxxxxx ve xxxx (xxx HPLC) x 1000 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.8 Mobilní xxxx HPLC
Smíchá xx:
650 xx xxxxxxxxxxxx (3.3.),
250 xx xxxx (xxx XXXX),
50 ml roztoku xxxxxxxxxx fosforečnanu xxxxxxxxxx (3.6.),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx se xxxxxxx 0,22 μm (4.6.) x roztok xx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx dobu 10 xxxxx).
3.9 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx: 1.3-bis [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx] xxxxxxxx hydrochlorid, X 758.
3.9.1 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 300 μx/xx:
Xxxxxx xx 30 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx (3.9.) x xxxxxxxxx 0,1 xx. Rozpustí xx x kyselém xxxxxxxxx (3.2.) xx 100 xx odměrné baňce, xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem x xxxxxxxx xx. Xxxxx se obalí xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx v temnu.
3.9.2 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 12 μx/xx
Xxxxxx xxx 10,0 ml xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.1) xx 250 xx xxxxxxx baňky, xxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8) x promíchá. Baňka xx obalí xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx x temnu.
3.9.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxxxx xx odměří 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.2.). Xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8.) a xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 a 6.0 μg/ml xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx použitím.
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx přibližně 150 xx. Xxxxxxx xxxxxx 10 – 15 xx, délka 250 xx.
4.2 Xxxxx xxxxxxxx
4.3 Xxxxxxx odparka
4.4 Xxxxxxxx xx xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx chromatografii (XXXX) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx detektorem x měnitelnou xxxxxxx xxxxxx, anebo detektorem x xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, X18, 10 μx náplní xxxx xxxxxxx.
4.5 Filtr xx xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxxxx XX/X xxxx xxxxxxx)
4.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.7 Membránové xxxxxx 0,45 μx
5. Postup
Pozn.: Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx. Proto xxxx xxx xxx xxxxx úkonech xxxxxxx xxxx nádobí x xxxxxxx skla.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx modelového xxxxxx (5.1.1.), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxx. K xxxxxxxx xxxxxx 60 mg/kg xx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xxxxxxx 3 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1.). Xxxxxx xx xxxxxx xxx xx xxxxx 0,5 xx x xxxxxx dusíku. Xxxxx xx 15 x xxxxxxxxxx krmiva, xxxxxxxx xx a xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxx (5.2.).
Xxxx.: Xxx xxxx této xxxxxx xx mělo xxx xxxxxxxx krmivo xxxxxxxxx xxxx jako xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxx stanovitelné xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Erlenmeyerovy baňky xx naváží xxxxxxxxx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxx 0,01 x, přidá xx 100 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx x hodinu xxxxx na xxxxxxxx (4.2). Xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxx filtr xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5) x xxxx xxxxx filtrátu xx xxxx xx 150 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se 7,5 x xxxxxxxxxxxxx síta (3.4), xxxxxxxxx a xxx xxxxx xx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx (5.3).
5.3 Čištění
5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxx skleněné kolony (4.1) se vloží xxxx zátka xx xxxxxx xxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Naváží se 11,0 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx hlinitého (3.5) x nasype xx xx xxxxxx, pokud xxxxx s minimální xxxxxxx prodlevou v xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx konec kolony.
5.3.2 Xxxxxxx vzorku
Na xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx 5,0 ml připraveného xxxxxxxx xxxxxx (5.2). Xxxxxx pipety xx xxxx x stěnu xxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx řádně xxxxxxxxxx xxxxxx hlinitým. Xxxxxxxxx xx z xxxxxx xxxxxx xxxxxx 100 ml xxxxxxxxx (3.1) při xxxxxxxxx xxxxxxx 2 – 3 xx za xxxxxx x xxxxx xx xxxx do 250 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xx redukovaného tlaku x xxx xxxxxxx 40xX odpaří xx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Odparek xx znovu rozpustí xx 3 – 4 ml mobilní xxxx (3.8.) x xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xx 10 xx xxxxxxx baňky. Baňka xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 1 – 2 xx mobilní xxxx x tyto xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx fází x xxxxxxxx xx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx 0,45 μm xxxxx (4.7). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC)
5.4.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Mohou být xxxxxxx i jiné xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
mobilní xxxx (3.8),
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 317 nm,
objem xxxxxxxx: 20–50 μl.
Stabilita xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3), xxxxx xxxxxxxx 3,6 μx/xx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výšek xxxx x retenčních xxxx.
5.4.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx roztok (3.9.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx se xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx koncentraci. Xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx průměrných hodnot xxxxx xxxx ploch xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků x μx/xx.
5.4.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxx xx průměrná hodnota xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx výsledků
Z xxxxxxxxxx xxxxxx výšek (xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx píků x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx koncentrace robenidinu x roztoku xxxxxx x μx/xx odečtením x xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.4.2).
x = (x × 200)/x,
xx xxxxxx xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μg/ml,
m = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x gramech.
7. Xxxxxxx výsledků
7.1 Identita
Identita xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s přídavkem xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx polem, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx extraktu vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx robenidinu.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxx
X xxxxxxxx vzorku se xxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.3). Xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx by se xxxxxx xxxxx xxxxx xxxx robenidinu xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx robenidinu x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx v xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx vlnové xxxxx maximální xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx být xxxxxx xxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx se xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx vlnové xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx zkoušeného xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx maxima x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx dvěma xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
x) xxx xxxxxx délce xxxx 220 a 350 nm xx xxxxx spektrum vzestupu, xxxxxxx a xxxxxxx xxxx zkoušeného vzorku xxxxx xx ostatních x xxxx částí xxxxxxx v xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx kritéria xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx bodech xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % absorbance spektra xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx některého x těchto xxxxxxxx, xxxxxxxxxx analytu není xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených xx xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 15 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx pro fortifikovaný xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx kruhového xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xx xxxxxx dvanáct xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čtyři xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx xxxx peletovaných. Xxxxx xx vzorků xxx podroben xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx x této xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx krmivo |
Pelety |
|
|
Průměr (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (xx/xx) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
XXx (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
XX (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Výtěžnost (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
(2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx. Xxxxx mez xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx.
2. Princip
Methylbenzochát xx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx methanolového roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx chromatografií, x xxxxxxxx pak xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Obsah xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografií (XXXX) xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Dichlormethan
3.2 Xxxxxxxx, xxx XXXX
3.3 Xxxxxxx xxxx HPLC
Směs xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (xxx XXXX) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx xx přes 0,22 μm filtr (4.5.) x xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx po xxxx 10 xxxxx).
3.4 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx σ = 2 %
20 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx xx rozředí x 1000 ml xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Xxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové σ = 10 %
100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (X20 x. 1,18g/ml) xx xxxxxxx v 1000 xx xxxx.
3.6 Xxxxx XX-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx použitím xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx: 100 x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx v 500 xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (3,5) x za stálého xxxxxxx se xxxxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx. Filtruje xx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx tlaku. Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx vždy 500 xx vody a xxxxx 250 ml xxxxxxxxx (3.2). Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxxxxxxx x xxxxxx prosáváním xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx lahvi.
3.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: čistý methylbenzochát (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Základní xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, 500 μx/xx
Xxxxxx se 50 xx xxxxxxxxxx xxxxx (3.7) s xxxxxxxxx 0,1 xx, xxxxxxxx xx xx 100 xx odměrné xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), doplní xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx 50μx/xx
Xx 50 ml xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 xx základního xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.1), doplní xx xxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxx x promíchá.
3.7.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx série 25 ml xxxxxxxxx xxxxx xx odpipetuje 1, 2, 3, 4 a 5 xx pracovního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx methylbenzochátu (3.7.2). Xxxxxx se xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.3) x xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx mají xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 x 10 μx/xx methylbenzochátu. Xxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jejich xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx třepačka
4.2 Xxxxxxx xxxxxxx
4.3 Xxxxxxxx kolona (250 x 15 xx) xxxxxxxx uzavíracím xxxxxxxxx a nádržkou x xxxxxxxxx 200 xx
4.4 HPLC xxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxxxxxxx x měnitelnou xxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx polem
4.4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 mm x 4 xx, X – 18, 10μm xxxx xxxxxx podobná
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.5 Xxxxxxxxxx filtry 0,45μx
5. Xxxxxx
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx analyzovat x xxxxxxxxxx xxx x xxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx látky.
5.1.2 Xxxx xx provést xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx v obdobném xxxxxxxx, jaké je xxxxxxxx xx vzorku. X fortifikaci xx xxxxxx 1,5 mg/kg xx xxxxx do 20 g xxxxxxxxxx xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.1), xxxxxxxx se x po 10 xxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx, xxxx je xxxxxx, a při xxxx xxxxxxx by xxxxx xxx zjištěn xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Erlenmeyerovy xxxxx xx xxxxxx přibližně 20 x připraveného xxxxxx x xxxxxxxxx 0,01 x. Přidá xx 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxxxxxxx xx třepe (4.1) xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx papírový xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Extrakce xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.5) xx xxxxx 25 xx xxxxxxxx, který xxx získán postupem xxxxxxxx v xxxx (5.2). Dále xx xx xxxxxxx xxxxx 100 ml xxxxxxxxxxxxxx (3.1) a xxxxx xx dobu xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx vrstvy separovat x xxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx) xx odpustí xx 500 ml xxxxx s xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx se xxxxxxx xx xxxxx dalšími 40 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x tyto xx xxxxx s xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx s xxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx 40 oC. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x 20–25 xx xxxxxxxxx (3.2), baňka xx xxxxxxxxx a xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx výměnou (5.4).
5.4 Chromatografie výměnou xxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx konce xxxxxxxx xxxxxx (4.3) xx xxxxx tampon xx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 5 x xxxxxxxxxx xxxxxx x x 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5). Xxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Přebytečná xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx eluát xxxx neutrální xx xxxxxxxxx xxxxx. Potom xx do xxxxxx xx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxx (3.2) x nechá xx xxxxx až x xxxxxxx xxxxxx.
5.4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx kolonu xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (5.3). Xxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 5 xx 10 ml xxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxx xx také xxxxxxx xx kolonu. Xxxxxxx xx xxxxx stéci xx x povrchu xxxxxx. Kolona xx xxxxxxx 50 ml xxxxxxxxx tak, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Methylbenzochát xx xxxxxx x xxxxxx 150xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx xx xxxx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx (5.4.2) xx xxxxxxx do xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 xx 10 ml xxxxxxxxx (3.2) x výplach xx xxxxx do xxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx do xxxxxx xxxxxxx xxxxx 300 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 130 ml dichlormethanu (3.1). Xxxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxx x potom xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx (dichlormethanová) xxxxxx xx odpustí xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx se xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx 70 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x tyto xxxxxxxx xx xxxxx x prvním extraktem x xxxxx s xxxxxxx dnem.
Extrakt dichlormethanu xx xxxxxx do xxxxx v xxxxxxx xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx tlaku x xxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx x baňce xx rozpustí x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) a xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx 10 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx 1 xx 2 xx xxxxxxxxx x xxxx se xxxxxxx xx odměrné xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xx značku xxxxxxxxxx a promíchá. Xxxxxxxxx množství xx xxxxxxxxxxx přes membránový xxxxx (4.6). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx HPLC (5.6).
5.6 Xxxxxxx xxxxxx XXXX
5.6.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx uvedeny indikativně. Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx pokud xxxxxxx ke stejným xxxxxxxxx:
- xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
- xxxxxxx xxxx: směs xxxxxxxxx a xxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- vlnová xxxxx xxxxxxxxx: 265 xx,
- xxxxx nástřiku: 20 xx 50μx.
Xxxxxxxxx chromatografického xxxxxxx xx kontroluje xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kalibračního xxxxxxx (3.7.3) obsahujícího 4μx/xx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx píků x retenčních časů.
5.6.2 Xxxxxxxxxx graf
Pro každý xxxxxxxxxx roztok (3.7.3) xx provede několik xxxxxxxx x xxxxx xxxxx (xxxxxx) píků xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx nebo xxxxx píků proti xxxxxxxxxxxx kalibračních xxxxxxx x μx/xx.
5.6.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.5.) x použitím stejný xxxxx, xxxx byl xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxxx hodnota výšky (xxxxxx) z xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx určí xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku x μx/xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2.).
Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x (mg/kg) xx vzorku xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx xxxxxx je
c = xxxxxxxxxxx methylbenzochátu x xxxxxxx vzorku x μg/ml,
m = xxxxxxxx xxxxxxx vzorku x gramech.
7. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx stanovením x xxxxxxxxx anebo xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, který xxxxxxxx porovnání xxxxxxx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Opakované xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xx fortifikuje přidáním xxxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx xxxxxxxxx methylbenzochátu xx xxx xxxxxxx xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xxxxx xxxxx ke xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxx xx xxxxxxx množství, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx x polovině maximální xxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx šíře.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxx vyhodnocovány podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx musí xxx xxxxxx xxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx detekčního xxxxxxx. Pro detektor x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx plus/minus 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx mezi 220 x 350 xx xx nesmí xxxxxx xxxxxxx zkoušeného xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx ve vrcholu xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx kritéria xx xxxxxxxx, jestliže jsou xxxxxxxx stejná maxima x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 nm xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx píku xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx v této xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tohoto xxxxxxxx xx dosaženo, jestliže xxxx vykázána stejná xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx nepřesahuje xxxxx 15 % absorbance xxxxxxx ve vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx xxxx dosaženo xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx prokázána.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % vzhledem x xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx methylbenzochátu xxxx 4 x 20 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx. U xxxxxxx xxxxxx xxxx provedeny xxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx
|
Xxxxxxxx krmivo |
Sypké xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
Xxxxxxxxxx |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Xx (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
XX (xx/xx) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
XXX |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx koeficient xxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx