Dvanáctá směrnice Xxxxxx 93/117/XX
xx xxx 17. xxxxxxxx 1993,
xxxxxx se xxxxxxx analytické metody Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. července 1970, xxxxxx xx zavádějí xxxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (EHS) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx směrnice 70/373/XXX xxxxxxx, xx xx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxx mají potvrdit xxxxxxxxxx podmínek předepsaných xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x složení krmiv, xxxxxxxxx xx použití xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xx xxxxx stanovit xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx látek robenidinu x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, že xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx kontrol xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx x methylbenzochátu x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx metody popsané x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 30. listopadu 1994. Xxxxxxxxxx x xxxx uvědomí Komisi.
Tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xx xxxxxx xxxxx učiněn při xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Evropských společenství.
X Bruselu xxx 17. xxxxxxxx 1993.
Xx Xxxxxx
Xxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 362, 31.12.1985, x. 8.
XXXXXXX
1. STANOVENÍ XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx]xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxx metoda xxxxxx xx stanovení obsahu xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxx stanovitelnosti xx 5 mg/kg.
2. Princip
Vzorek xx extrahuje okyseleným xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx na koloně x xxxxxx hlinitým. Xxxxxxxxx xx eluuje x kolony xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se a xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx fáze. Xxxxx xxxxxxxxxx se stanoví xxxxxx xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xx xxxxxxxx xxxx pomocí XX detektoru.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx 4,0 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (X20x, 1,18 x/xx), doplní xx xx xxxxxx methanolem (3.1.) a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.3 Acetonitril, xxx XXXX
3.4 Molekulární xxxx
Xxx 3X, 8 xx 12 xxxx (1,6–2,5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 0,3 mm).
3.5 Xxxx hlinitý: xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx I xxx kolonovou xxxxxxxxxxxxxx
100 x xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx nádoby a xxxxxxx se 2 xx xxxx. Xxxxxxxxx xx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 20 xxxxx. Xxxxxxxx xx x dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, roztok c = 0,025 mol/l
3,4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx XXXX) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx po značku x xxxxxxxx.
3.7 Hydrogen xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 0, 025 mol/l
3,55 g xxxxxxxxx (xxxx 4,45 x dihydrátu, nebo 8,95 g xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx sodného xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx XXXX) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx po xxxxxx x xxxxxxxx.
3.8 Mobilní xxxx XXXX
Xxxxxx se:
650 xx xxxxxxxxxxxx (3.3.),
250 xx xxxx (pro XXXX),
50 xx roztoku xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.6.),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx se xxxxxxx 0,22 μm (4.6.) x xxxxxx xx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx dobu 10 xxxxx).
3.9 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx: 1.3-xxx [(4-chlorbenziliden) xxxxx] guanidin xxxxxxxxxxxx, X 758.
3.9.1 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx standardní xxxxxx: 300 μx/xx:
Xxxxxx xx 30 xx standardního xxxxx xxxxxxxxxx (3.9.) x xxxxxxxxx 0,1 xx. Xxxxxxxx se x xxxxxxx xxxxxxxxx (3.2.) xx 100 xx odměrné xxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx v xxxxx.
3.9.2 Xxxxxxxxx, pracovní xxxxxxxxxx xxxxxx: 12 μg/ml
Odměří xxx 10,0 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1) xx 250 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8) x xxxxxxxx. Xxxxx xx obalí aluminiovou xxxxx a uloží x xxxxx.
3.9.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.2.). Xxxxxx se xx xxxxxx mobilní xxxx (3.8.) x xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 a 6.0 μg/ml xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx roztoky xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxx, vybavená xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 150 xx. Xxxxxxx průměr 10 – 15 xx, délka 250 xx.
4.2 Xxxxx xxxxxxxx
4.3 Xxxxxxx xxxxxxx
4.4 Zařízení xx vysoce xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx detektorem x xxxxxxxxxx vlnovou xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx 250 - 400 xx
4.4.1 Kolona xx xxxxxxxxxxx chromatografii: 300 xx x 4 xx, X18, 10 μx xxxxxx nebo xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx (Whatman XX/X xxxx xxxxxxx)
4.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45 μm
5. Xxxxxx
Xxxx.: Xxxxxxxxx xx citlivý xx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxx skla.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx modelového xxxxxx (5.1.1.), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxx. K xxxxxxxx xxxxxx 60 mg/kg xx do 250 xx Erlenmeyerovy baňky xxxxxxx 3 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1.). Roztok xx xxxxxx asi xx xxxxx 0,5 xx x proudu xxxxxx. Xxxxx xx 15 x xxxxxxxxxx krmiva, xxxxxxxx xx a xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxx (5.2.).
Pozn.: Xxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx krmivo xxxxxxxxx typu xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx naváží xxxxxxxxx 15 g xxxxxxxxxx xxxxxx x přesností 0,01 g, xxxxx xx 100 ml xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxx xx třepačce (4.2). Roztok xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5) x xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx do 150 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 7,5 x molekulárního xxxx (3.4), zazátkuje x xxx minut se xxxxx. Potom xx xxxxx přefiltruje xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx k xxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Xxxxxxxx kolony s xxxxxx xxxxxxxx
Xx spodního xxxxx xxxxxxxx kolony (4.1) se xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxx vaty x xxxxxx xx skleněnou xxxxxxxx. Xxxxxx xx 11,0 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx hlinitého (3.5) x xxxxxx se xx kolony, xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx konec xxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxx xxxxxx
Xx připravenou xxxxxx xx xxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku (5.2). Xxxxxx xxxxxx xx xxxx x xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx se x xxxxxx eluuje pomocí 100 xx xxxxxxxxx (3.1) xxx xxxxxxxxx xxxxxxx 2 – 3 xx xx xxxxxx x xxxxx xx jímá do 250 ml baňky x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx roztok xx xx redukovaného tlaku x xxx xxxxxxx 40xX xxxxxx do xxxxx x rotační xxxxxxx (4.3). Xxxxxxx xx znovu rozpustí xx 3 – 4 ml xxxxxxx xxxx (3.8.) x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx 10 xx xxxxxxx xxxxx. Baňka xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 1 – 2 xx xxxxxxx fáze x tyto xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Baňka xx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxxxx xxxx zfiltruje xxxx 0,45 μx xxxxx (4.7). Xxxxx xxxxxx xx použije xxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC)
5.4.1 Parametry
Následující xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxxxxx i jiné xxxxx povedou xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
xxxxxxx xxxx (3.8),
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 ml/minuta,
vlnová xxxxx xxxxxxxxx: 317 xx,
xxxxx xxxxxxxx: 20–50 μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx systému xx xxxxxxxxxx opakovaným nástřikem xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3), xxxxx xxxxxxxx 3,6 μx/xx, xx do xxxxxxxx konstantních xxxxx xxxx a xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx kalibrační xxxxxx (3.9.3) xx provede xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxx (xxxxxx) xxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx se získá xxxxxxxxx průměrných xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxx proti xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kalibračních xxxxxxx x μg/ml.
5.4.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxx xx průměrná xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xxxxxx výšek (xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxx vzorku xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx xxxxxxxxx x kalibračního xxxxx (5.4.2).
x = (c × 200)/m,
ve xxxxxx xx
x = koncentrace xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μg/ml,
m = xxxxxxxx navážky xxxxxx v gramech.
7. Xxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x přídavkem xxxxx využitím detektoru x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx porovnání xxxxxxx extraktu xxxxxx x xxxxxxxxxxx roztokem (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx robenidinu.
7.1.1 Opakované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx
X xxxxxxxx xxxxxx se xxxxx vhodného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx robenidinu xx xxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx se xxxxxx xxxxx výška xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx extraktu. Xxxx xxxx x xxxxxxxx jeho maximální xxxxx musí xxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx šíře.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx následujících xxxxxxxx:
x) při vlnové xxxxx maximální absorpce xxxxxx i standardu xxxx být xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx píku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx detekčního xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx zkoušeného vzorku x xxxxxxxxx zaznamenaný xx vrcholu píku xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx částí xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tohoto xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx maxima x xxxxxxxx nikde xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
x) xxx vlnové délce xxxx 220 x 350 nm xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx zkoušeného xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 až 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx maxima x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nikde 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx xxxx dosaženo xxxxxxxxx x xxxxxx kritérií, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených xx xxxxxxx vzorku nesmí xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx robenidinu xxx 15 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx test, xx xxxxxx dvanáct xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čtyři xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx x králíky, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx vzorků xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Výsledky xxxx xxxxxxx x této xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (xx/xx) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
XXx (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
XX (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Výtěžnost (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Sr = standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx opakovatelnosti
SR = xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = variační xxxxxxxxxx v reprodukovatelnosti
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
(2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
1. Účel x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx vzorku xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx chromatografií, x xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx stanoví xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, pro HPLC
3.3 Xxxxxxx xxxx XXXX
Xxxx xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (xxx XXXX) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx xx xxxx 0,22 μm filtr (4.5.) x xxxxxxx (xxxx. ultrazvukem xx xxxx 10 minut).
3.4 Xxxxxx xxxxxxxx methansulfonové σ = 2 %
20 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx se rozředí x 1000 xx xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Xxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové σ = 10 %
100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (X20 x. 1,18x/xx) xx xxxxxxx x 1000 xx vody.
3.6 Xxxxx CG-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx takto: 100 x iontoměniče xx rozmíchá x 500 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3,5) x xx xxxxxxx xxxxxxx xx zahřívá x varu na xxxxx desce. Xx xxxxxxxxxxx xx kyselina xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx filtr xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx propláchne xxxxxxx vždy 500 xx vody x xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Potom xx xxxxxxxxxx xxxxxxx 250 xx methanolu x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx filtrační xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx.
3.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Xxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxx, 500 μx/xx
Xxxxxx se 50 xx standardní xxxxx (3.7) x přesností 0,1 xx, xxxxxxxx xx ve 100 xx odměrné xxxxx x xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), xxxxxx xx značku x xxxxxxxx.
3.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx 50μg/ml
Do 50 xx odměrné xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku methylbenzochátu (3.7.1), xxxxxx xx xxxxxxxxxx (3.2) po xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx roztoky
Do série 25 xx xxxxxxxxx xxxxx xx odpipetuje 1, 2, 3, 4 x 5 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx methylbenzochátu (3.7.2). Xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.3) a zamíchá. Xxxx roztoky mají xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 x 10 μx/xx methylbenzochátu. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx připravovat těsně xxxx xxxxxx použitím.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.2 Xxxxxxx xxxxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxx (250 x 15 xx) vybavená xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx x kapacitou 200 xx
4.4 XXXX xxxxxxxx xxxxxxxx UV xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx vlnovou xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
4.4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 mm x 4 xx, C – 18, 10μm xxxx xxxxxx podobná
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.5 Xxxxxxxxxx filtry 0,45μx
5. Xxxxxx
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxx krmivo xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxx v xxx xxxx xxxxxxxx xxx methylbenzochát ani xxxx xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xxxx se provést xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx, jaké je xxxxxxxx ve xxxxxx. X xxxxxxxxxxx na xxxxxx 1,5 xx/xx xx xxxxx xx 20 g xxxxxxxxxx xxxxxx 600 μl xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.7.1), xxxxxxxx xx x xx 10 xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Pozn.: Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx by xxxx xxx podobného xxxx, jako je xxxxxx, x xxx xxxx xxxxxxx by xxxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx přibližně 20 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 0,01 x. Xxxxx xx 100 xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxxxxxxx xx xxxxx (4.1) xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx přes xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx xxxxxxx, obsahující 100 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx xxxxx 25 xx filtrátu, xxxxx xxx xxxxxx postupem xxxxxxxx x bodu (5.2). Xxxx xx xx xxxxxxx přidá 100 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx separovat x xxxxxx vrstva (xxxxxxxxxxxxxx) xx xxxxxxx xx 500 xx xxxxx x kulatým xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx se xxxxxxx xx xxxxx dalšími 40 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xx xxxxx s xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx s xxxxxxx xxxx. Extrakt dichlormethanu xx xxxxxx do xxxxx xx rotační xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx se rozpustí x 20–25 xx xxxxxxxxx (3.2), xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxx chromatografii x iontovou xxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx ionexové xxxxxx
Xx dolního xxxxx xxxxxxxx kolony (4.3) xx xxxxx xxxxxx xx skelné xxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 5 g xxxxxxxxxx katexu x x 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5). Xxxx směs xx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx kyselina xx odpustí xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxx xx promývá xxxxx xxxxx proteklý xxxxx xxxx neutrální xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xx xxxxxx xx nalije 50 xx methanolu (3.2) x xxxxx xx xxxxx až x xxxxxxx ionexu.
5.4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (5.3). Xxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx dvěma xxxxxxx 5 xx 10 ml xxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx. Extrakt xx xxxxx xxxxx xx x povrchu xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 50 ml xxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxx nepřesahoval 5 xx xx xxxxxx. Xxxxxxxx kapalina xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 150xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx se jímá xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx (5.4.2) xx převede do xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx 5 xx 10 xx xxxxxxxxx (3.2) x výplach xx xxxxx do xxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xx dělící xxxxxxx xxxxx 300 xx roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 130 ml dichlormethanu (3.1). Xxxxx xx xx dobu xxxxx xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxx fáze xxxxxxxxxxx. Xxxxx (xxxxxxxxxxxxxxxx) xxxxxx xx xxxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Extrakce vodné xxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx 70 xx dávkami xxxxxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxxx xx smísí x xxxxxx extraktem x baňce x xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx v xxxxxxx xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx x baňce xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx do 10 ml odměrné xxxxx. Baňka x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx dvěma xxxxxxx xxxxxxx 1 až 2 xx methanolu x opět xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x promíchá. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxx analýzu XXXX (5.6).
5.6 Analýza pomocí XXXX
5.6.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxxx. Xxxxx být použity xxxx parametry xxxxx xxxxxxx xx stejným xxxxxxxxx:
- xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
- xxxxxxx fáze: směs xxxxxxxxx a vody,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 265 xx,
- xxxxx xxxxxxxx: 20 xx 50μx.
Xxxxxxxxx chromatografického xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx nástřikem xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, xx xx xxxxxxxx konstantních výšek xxxx ploch xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx roztok (3.7.3) xx xxxxxxx několik xxxxxxxx x xxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx každou koncentraci. Xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx průměrných xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μx/xx.
5.6.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx se nastříkne xxxxxxx xxxxxx (5.5.) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, jaký byl xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Výpočet výsledků
Z xxxxxxxx xxxxxxx výšky (xxxxxx) píků methylbenzochátu x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku x μg/ml xxxxx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2.).
Obsah xxxxxxxxxxxxxxxx x (xx/xx) xx xxxxxx xx xxxxxxx podle xxxxxx xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx kterém xx
x = koncentrace xxxxxxxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx navážky xxxxxx x gramech.
7. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx stanovením x přídavkem xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx spektra xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μg/ml xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Opakované xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx přidaného methylbenzochátu xx xxx podobné xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku.
Mělo xx xxxxx xxxxx ke xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x ohledem jak xx přidané xxxxxxxx, xxx na množství xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx x xxxxxxxx maximální xxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx diodového xxxx
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při xxxxxx délce maximální xxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx xxxx být xxxxxx spektra xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx píku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x nepřesností danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Pro xxxxxxxx x diodovým xxxxx xx udává xxxx/xxxxx 2 nm;
b) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx se nesmí xxxxxx spektra zkoušeného xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx chromatogramu lišit xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x jestliže xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % absorbance xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) xxx vlnové xxxxx mezi 220 x 350 nm xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx píku zkoušeného xxxxxx xxxxx od xxxxxxxxx v xxxx xxxxx spektra x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, jestliže xxxx vykázána stejná xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx odchylka xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx není xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx methylbenzochátu xxxx 4 x 20 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X deseti xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx byly provedeny xxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx
|
Xxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (mg/kg) |
Nezjištěno |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Sr (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
XX (xx/xx) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
XXX |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx