Dvanáctá xxxxxxxx Xxxxxx 93/117/XX
xx xxx 17. xxxxxxxx 1993,
kterou xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Rady 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (EHS) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx na xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, xx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx o kvalitě x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, že xx nutno xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx kontrolu xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx látek xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx v xxxxxxx se stanoviskem Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxx úředních xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx x krmivech se xxxxxxxxx xxxxxx popsané x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 30. xxxxxxxxx 1994. Xxxxxxxxxx x xxxx uvědomí Komisi.
Tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx tuto xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xx takový xxxxx učiněn při xxxxxx xxxxxxx vyhlášení. Xxxxxx xxxxxx si xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx dnem xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství.
X Xxxxxxx dne 17. prosince 1993.
Za Xxxxxx
Xxxx Steichen
člen Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. věst. X 362, 31.12.1985, x. 8.
PŘÍLOHA
1. XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx]xxxxxxxx hydrochlorid
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxx metoda xxxxxx xx stanovení xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 mg/kg.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje okyseleným xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx na xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx eluuje x kolony xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx a xx xxxxxx objem xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx 4,0 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (X20x, 1,18 x/xx), doplní xx xx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1.) a xxxxxxxx. Xxxxx roztok xxxx xxx připraven xxxxx xxxx použitím.
3.3 Xxxxxxxxxxx, xxx HPLC
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3X, 8 xx 12 xxxx (1,6–2,5 mm xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx hlinitokřemičitanu, xxxxxx xxxx 0,3 xx).
3.5 Xxxx xxxxxxx: xxxxxx, xxxxxx aktivity X xxx kolonovou xxxxxxxxxxxxxx
100 x xxxxx hlinitého xx naváží xx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxx se 2 xx xxxx. Xxxxxxxxx xx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 20 xxxxx. Skladuje se x xxxxx zazátkované xxxxxxx.
3.6 Dihydrogen xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, roztok c = 0,025 mol/l
3,4 x xxxxxxxxxx fosforečnanu xx xxxxxxxx ve xxxx (xxx HPLC) x 1000 ml xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 0, 025 xxx/x
3,55 g xxxxxxxxx (xxxx 4,45 x dihydrátu, nebo 8,95 x dodekahydrátu) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx rozpustí xx xxxx (xxx HPLC) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xx xxxxxx x promíchá.
3.8 Xxxxxxx xxxx HPLC
Smíchá xx:
650 xx acetonitrilu (3.3.),
250 xx xxxx (xxx XXXX),
50 ml xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.6.),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx xx filtrem 0,22 μm (4.6.) x xxxxxx xx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx dobu 10 xxxxx).
3.9 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx: 1.3-bis [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx] xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, X 758.
3.9.1 Robenidin, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 300 μx/xx:
Xxxxxx xx 30 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx robenidinu (3.9.) x xxxxxxxxx 0,1 xx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxxx (3.2.) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxx se obalí xxxxxxxxxxx folií x xxxxx x temnu.
3.9.2 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 12 μg/ml
Odměří xxx 10,0 ml xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.1) xx 250 xx odměrné baňky, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8) x promíchá. Baňka xx xxxxx aluminiovou xxxxx x xxxxx x xxxxx.
3.9.3 Kalibrační xxxxxxx
Xx souboru 50 xx odměrných xxxxx xx xxxxxx 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.2.). Doplní xx xx značku mobilní xxxx (3.8.) x xxxxxxxx. Tyto xxxxxxx xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 x 6.0 μx/xx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx, vybavená xxxxxxxxxx xxxxxxxx a nádržkou xx přibližně 150 xx. Xxxxxxx průměr 10 – 15 xx, xxxxx 250 xx.
4.2 Xxxxx xxxxxxxx
4.3 Xxxxxxx odparka
4.4 Zařízení xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii (XXXX) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, anebo xxxxxxxxxx x xxxxxxxx polem, xxxxxxxxxx x pásmu 250 - 400 xx
4.4.1 Kolona xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, C18, 10 μx xxxxxx xxxx xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxxxx XX/X xxxx xxxxxxx)
4.6 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45 μx
5. Postup
Pozn.: Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xx světlo. Xxxxx xxxx xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx nádobí x xxxxxxx xxxx.
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx, zda neobsahuje xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx látky.
5.1.2 Je xxxxxx provést xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1.1.), xx xxxxxxx xxxx přidáno xxxxxx xxxxxxxx robenidinu, xxxx xx xx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxx 60 xx/xx xx xx 250 xx Erlenmeyerovy baňky xxxxxxx 3 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.1.). Roztok xx xxxxxx xxx xx xxxxx 0,5 ml x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx se a xx deseti xxxxxxxx xx může začít x extrakcí (5.2.).
Pozn.: Xxx xxxx xxxx xxxxxx xx mělo xxx modelové xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xx zkoušený xxxxxx x nemělo by xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx přibližně 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxx 0,01 x, xxxxx xx 100 ml xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxx xx třepačce (4.2). Xxxxxx se xxxxxxxxxxx přes xxxxx xx xxxxxxxxxx vláken (4.5) x celý xxxxx xxxxxxxx xx xxxx xx 150 xx Erlenmeyerovy baňky. Xxxxx xx 7,5 x xxxxxxxxxxxxx xxxx (3.4), zazátkuje x xxx xxxxx xx xxxxx. Potom xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Xxxxxxxx kolony x xxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxx skleněné kolony (4.1) se xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxx vaty a xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx 11,0 g připraveného xxxxxxxxxx hlinitého (3.5) x xxxxxx xx xx kolony, pokud xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx prodlevou x xxxxxxx xxxxxxxxx. Oxid xxxxxxx xx v xxxxxxxx xxxxxx setřese xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx napipetuje 5,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku (5.2). Xxxxxx xxxxxx xx xxxx o stěnu xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx řádně xxxxxxxxxx oxidem xxxxxxxx. Xxxxxxxxx se x xxxxxx eluuje xxxxxx 100 xx methanolu (3.1) při rychlosti xxxxxxx 2 – 3 xx xx xxxxxx a xxxxx xx jímá xx 250 xx xxxxx x xxxxxxx dnem. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xx xxxxxxxxxxxx tlaku x xxx xxxxxxx 40xX xxxxxx do xxxxx v rotační xxxxxxx (4.3). Xxxxxxx xx znovu xxxxxxxx xx 3 – 4 ml xxxxxxx xxxx (3.8.) a xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xx 10 ml xxxxxxx xxxxx. Baňka xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 1 – 2 xx xxxxxxx fáze x xxxx roztoky xx přidají xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx x promíchá xx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx 0,45 μx xxxxx (4.7). Tento xxxxxx se použije xxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Stanovení xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC)
5.4.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxxx. Mohou být xxxxxxx i jiné xxxxx povedou ke xxxxxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
mobilní xxxx (3.8),
průtoková xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx délka xxxxxxxxx: 317 nm,
objem xxxxxxxx: 20–50 μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx systému xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3), xxxxx xxxxxxxx 3,6 μx/xx, až xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Xxxxxxxxxx graf
Pro xxxxx xxxxxxxxxx roztok (3.9.3) xx xxxxxxx xxxxxxx nástřiků x xxxxx xx xxxxx (xxxxxx) xxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx. Kalibrační xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx průměrných xxxxxx xxxxx xxxx ploch xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kalibračních xxxxxxx x μx/xx.
5.4.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx objem xxxxxxxx xxxxxx, jako xxx xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxxxxxxxxx.
6. Výpočet a xxxxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxx vzorku xx xxxx koncentrace xxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku x μg/ml odečtením x kalibračního xxxxx (5.4.2).
x = (x × 200)/x,
xx xxxxxx xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μg/ml,
m = xxxxxxxx navážky xxxxxx x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Identita
Identita xxxxxxx analýzy může xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx polem, xxxxx umožňuje xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxx roztokem (3.9.3) obsahujícím 6 μx/xx xxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx s přídavkem
K xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx by xx xxxxxx xxxxx výška xxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx xxxxxxxxx robenidinu x obsahu xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx extraktu. Xxxx xxxx x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Detektor xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při vlnové xxxxx maximální xxxxxxxx xxxxxx i standardu xxxx být xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxxxxx stejný s xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Tohoto xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx maxima x xxxxxxxx xxxxx odchylka xxxx dvěma xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx standardního analytu.
c) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxxxx vzestupu, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx částí xxxxxxx v rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x jestliže ve xxxxx sledovaných xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % absorbance xxxxxxx xx xxxxxxx píku.
Jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx kritérií, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. xxxxxxxxxx výsledku xxx obsahu robenidinu xxx 15 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxx analyzovalo xxxxx xxxxxx xxxxx pro xxxxxx x králíky, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx vzorků xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x této xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx krmivo |
Pelety |
|
|
Průměr (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (xx/xx) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
XXx (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
XX (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Xx = standardní odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
(2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
1. Účel x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx vzorku xxxxxx methanolového xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxx pak xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx methylbenzochátu xx stanoví xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Dichlormethan
3.2 Xxxxxxxx, pro XXXX
3.3 Xxxxxxx xxxx XXXX
Xxxx xxxxxxxxx (3.2.) a xxxx (xxx XXXX) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx se přes 0,22 μm xxxxx (4.5.) x xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx).
3.4 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx σ = 2 %
20 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx x 1000 xx xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Xxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové σ = 10 %
100 xx kyseliny chlorovodíkové (X20 c. 1,18x/xx) xx xxxxxxx x 1000 xx vody.
3.6 Xxxxx XX-120 (Na), 100 – 200 xxxx
Xxxx použitím xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx: 100 x xxxxxxxxxxx xx rozmíchá v 500 ml xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (3,5) x xx stálého xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xx xxxxx desce. Xx xxxxxxxxxxx se kyselina xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxx papírový xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se propláchne xxxxxxx vždy 500 xx vody x xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Xxxxx xx xxxxxxxxxx dalšími 250 ml xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx.
3.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: čistý xxxxxxxxxxxxxxx (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, 500 μx/xx
Xxxxxx xx 50 xx standardní xxxxx (3.7) x přesností 0,1 xx, xxxxxxxx xx xx 100 xx xxxxxxx xxxxx x roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), xxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxx.
3.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx 50μx/xx
Xx 50 ml xxxxxxx xxxxx se odpipetuje 5 ml základního xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.1), doplní xx xxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxx 25 xx odměrných xxxxx xx odpipetuje 1, 2, 3, 4 a 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.2). Xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.3) x zamíchá. Xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 x 10 μg/ml xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx roztoky xx xxxx připravovat xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.2 Xxxxxxx xxxxxxx
4.3 Skleněná kolona (250 x 15 xx) vybavená xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a nádržkou x kapacitou 200 xx
4.4 XXXX xxxxxxxx xxxxxxxx UV xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx vlnovou xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx polem
4.4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, C – 18, 10μm xxxx xxxxxx xxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.5 Xxxxxxxxxx filtry 0,45μx
5. Postup
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx krmivo xxx xxxxxxxxxxx methylbenzochátu xx xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxx x xxx xxxx xxxxxxxx xxx methylbenzochát xxx xxxx rušivé xxxxx.
5.1.2 Xxxx se provést xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx krmiva, fortifkovaného xxxxxxxxxxxxxxxxx x obdobném xxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx xx vzorku. X xxxxxxxxxxx na xxxxxx 1,5 xx/xx xx xxxxx xx 20 g modelového xxxxxx 600 μl xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.7.1), xxxxxxxx se x xx 10 xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Xxxx.: Xxxxxxxx krmivo pro xxxxx účel xx xxxx být podobného xxxx, jako xx xxxxxx, x xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxx zjištěn xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Do 250 xx Erlenmeyerovy xxxxx xx xxxxxx přibližně 20 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 0,01 x. Xxxxx xx 100 ml xxxxxxx xxxxxxxx methansulfonové (3.4) x xxxxxxxxxx xx třepe (4.1) xx dobu 30 xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx přes papírový xxxxx x filtrát xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Extrakce xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx nálevky, xxxxxxxxxx 100 xx roztoku xxxxxxxx chlorovodíkové (3.5) xx přidá 25 xx filtrátu, xxxxx xxx xxxxxx postupem xxxxxxxx x xxxx (5.2). Dále se xx nálevky xxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xx dobu jedné xxxxxx. Potom se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x spodní xxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx) se xxxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Extrakce xxxxx xxxx se xxxxxxx xx dvěma xxxxxxx 40 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xx spojí x xxxxxx extraktem x xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxx na xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x 20–25 xx xxxxxxxxx (3.2), xxxxx xx zazátkuje x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx x iontovou xxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx výměnou xxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
Xx dolního konce xxxxxxxx kolony (4.3) xx vloží xxxxxx xx skelné xxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 5 x xxxxxxxxxx katexu x x 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5). Xxxx směs xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Přebytečná xxxxxxxx xx odpustí xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx promývá xxxxx xxxxx xxxxxxxx eluát xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Potom xx xx xxxxxx xx nalije 50 xx methanolu (3.2) x xxxxx se xxxxx xx x xxxxxxx xxxxxx.
5.4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx získaný xxxxxxx (5.3). Xxxxx x kulatým xxxx xx vypláchne dvěma xxxxxxx 5 až 10 xx xxxxxxxxx (3.2) x výplach xx také xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx 50 ml xxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxx nepřesahoval 5 xx za xxxxxx. Xxxxxxxx kapalina xx xxxxxxxx. Methylbenzochát xx xxxxxx z kolony 150xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx se xxxx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx (5.4.2) xx převede do xxxxxxxxxxxx xxxxxx nálevky. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 xx 10 ml methanolu (3.2) x xxxxxxx xx xxxxx do xxxxxx nálevky. Xxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx přidá 300 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 130 xx dichlormethanu (3.1). Xxxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxx a xxxxx xx nechají fáze xxxxxxxxxxx. Xxxxx (dichlormethanová) xxxxxx xx xxxxxxx xx 500 ml xxxxx s kulatým xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx se opakuje xx xxxxx xxxxxxx 70 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx s xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx tlaku a xxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx do 10 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx dalšími xxxxxxx 1 xx 2 xx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxx množství xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Tento xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXXX (5.6).
5.6 Xxxxxxx xxxxxx XXXX
5.6.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx použity xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
- xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
- xxxxxxx fáze: xxxx xxxxxxxxx x xxxx,
- xxxxxxxxx rychlost: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- vlnová xxxxx xxxxxxxxx: 265 xx,
- xxxxx xxxxxxxx: 20 xx 50μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx se kontroluje xxxxxxxxxx nástřikem xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, až xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx ploch xxxx x retenčních xxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx každý xxxxxxxxxx xxxxxx (3.7.3) xx provede xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx (xxxxxx) píků xxx každou koncentraci. Xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx nebo xxxxx xxxx proti xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků x μx/xx.
5.6.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.5.) x použitím xxxxxx xxxxx, jaký xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
X xxxxxxxx hodnoty xxxxx (xxxxxx) xxxx methylbenzochátu x xxxxxxx vzorku xx xxxx koncentrace x xxxxxxx xxxxxx x μg/ml podle xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2.).
Obsah xxxxxxxxxxxxxxxx x (xx/xx) xx xxxxxx xx xxxxxxx podle xxxxxx xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx xxxxxx xx
x = xxxxxxxxxxx methylbenzochátu x xxxxxxx vzorku x μx/xx,
x = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx opakovaným xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx detektoru x xxxxxxxx polem, který xxxxxxxx porovnání xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx roztokem (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx xxxxxxxxx methylbenzochátu xx xxx xxxxxxx xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx methylbenzochátu v xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx by xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x ohledem xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx na množství xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Šíře xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xx přibližně 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx kritérií:
a) xxx xxxxxx délce xxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku i xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx spektra zaznamenaný xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx stejný x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx detekčního xxxxxxx. Xxx detektor x xxxxxxxx polem xx xxxxx plus/minus 2 nm;
b) xxx xxxxxx xxxxx mezi 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx maxima x jestliže nikde xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % absorbance standardního xxxxxxx;
x) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx nesmí xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx lišit od xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tohoto kritéria xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x jestliže xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxx odchylka xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nikde 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx není xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxx, přítomnost xxxxxxx xxxx prokázána.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % vzhledem x xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx mezi 4 a 20 xx/xx.
7.3 Výtěžnost
Výtěžnost xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx musí xxx nejméně 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X deseti xxxxxxxxxxxx xxxx analyzováno pět xxxxxx. X každého xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx
|
Xxxxxxxx krmivo |
Sypké xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
Xxxxxxxxxx |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Xx (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
SR (xx/xx) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
XXX |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
CVr = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
XX = standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx