Xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 93/117/XX
xx xxx 17. xxxxxxxx 1993,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. července 1970, xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx odběru vzorků x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx nařízením (EHS) x. 3768/85 [2], x zejména na xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx směrnice 70/373/EHS xxxxxxx, že xx xxxxxx kontroly krmiv, xxxxx mají potvrdit xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a správními xxxxxxxx o kvalitě x xxxxxxx krmiv, xxxxxxxxx xx použití xxxxx Společenství xxx xxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, že xx nutno xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx x methylbenzoátu x xxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx této xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x methylbenzochátu x krmivech xx xxxxxxxxx metody xxxxxxx x příloze této xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 30. xxxxxxxxx 1994. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx na tuto xxxxxxxx xxxx musí xxx xx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu si xxxxxxx členské xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x platnost xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
X Xxxxxxx dne 17. xxxxxxxx 1993.
Za Xxxxxx
Xxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 362, 31.12.1985, x. 8.
XXXXXXX
1. STANOVENÍ XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx]xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxx slouží xx stanovení xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 mg/kg.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje okyseleným xxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx na koloně x oxidem xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx methanolem, xxxxxxxxxxx xx x xx vhodný xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xx stanoví xxxxxx xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) na xxxxxxxx xxxx xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Okyselený xxxxxxxx
Xx 500 xx odměrné xxxxx xx xxxxx 4,0 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (X20x, 1,18 x/xx), xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1.) a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx těsně xxxx xxxxxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxx, xxx XXXX
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3X, 8 xx 12 xxxx (1,6–2,5 mm xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx hlinitokřemičitanu, xxxxxx xxxx 0,3 mm).
3.5 Xxxx hlinitý: kyselý, xxxxxx xxxxxxxx X xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
100 x xxxxx hlinitého xx xxxxxx do xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx 2 xx xxxx. Zazátkuje xx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 20 xxxxx. Xxxxxxxx xx x dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx fosforečnan xxxxxxxx, roztok x = 0,025 xxx/x
3,4 x xxxxxxxxxx fosforečnanu xx xxxxxxxx xx xxxx (pro XXXX) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx, doplní xx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, roztok x = 0, 025 mol/l
3,55 x xxxxxxxxx (nebo 4,45 x dihydrátu, nebo 8,95 g dodekahydrátu) xxxxxxxx fosforečnanu sodného xx rozpustí xx xxxx (xxx XXXX) x 1000 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xx značku x xxxxxxxx.
3.8 Mobilní xxxx XXXX
Xxxxxx xx:
650 xx xxxxxxxxxxxx (3.3.),
250 xx xxxx (xxx XXXX),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx draselného (3.6.),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx xx filtrem 0,22 μx (4.6.) x xxxxxx se xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx dobu 10 xxxxx).
3.9 Xxxxxxxxxx látka
Čistý xxxxxxxxx: 1.3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx] xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, X 758.
3.9.1 Robenidin, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 300 μx/xx:
Xxxxxx se 30 mg xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx (3.9.) x xxxxxxxxx 0,1 xx. Rozpustí xx x kyselém xxxxxxxxx (3.2.) xx 100 xx xxxxxxx baňce, xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxx.
3.9.2 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 12 μx/xx
Xxxxxx xxx 10,0 xx xxxxxxxxxx standardního roztoku (3.9.1) do 250 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8) x promíchá. Baňka xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxx.
3.9.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx 50 xx odměrných xxxxx xx xxxxxx 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.2.). Xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8.) x xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 x 6.0 μg/ml robenidinu. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxx, vybavená uzavíracím xxxxxxxx x nádržkou xx přibližně 150 xx. Xxxxxxx průměr 10 – 15 xx, délka 250 xx.
4.2 Xxxxx xxxxxxxx
4.3 Xxxxxxx xxxxxxx
4.4 Zařízení xx vysoce xxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii (XXXX) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x měnitelnou xxxxxxx xxxxxx, anebo xxxxxxxxxx x diodovým polem, xxxxxxxxxx x pásmu 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, X18, 10 μx náplní xxxx xxxxxxx.
4.5 Filtr xx xxxxxxxxxx vláken (Xxxxxxx XX/X xxxx podobný)
4.6 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45 μm
5. Xxxxxx
Xxxx.: Xxxxxxxxx xx citlivý xx xxxxxx. Proto xxxx xxx xxx xxxxx úkonech xxxxxxx xxxx nádobí z xxxxxxx xxxx.
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxxxx se analyzovat xxxxxxxx xxxxxx bez xxxxxxxxxxx robenidinu x xxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx jiné xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xx xxxxxx provést xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1.1.), do xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx je xx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxx 60 mg/kg xx xx 250 xx Erlenmeyerovy xxxxx xxxxxxx 3 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1.). Xxxxxx xx xxxxxx asi na xxxxx 0,5 xx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx a xx deseti xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxx (5.2.).
Xxxx.: Xxx xxxx xxxx xxxxxx xx mělo xxx modelové krmivo xxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x nemělo xx xxxxxxxxx stanovitelné xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Do 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx xxxxxx xxxxxxxxx 15 g xxxxxxxxxx xxxxxx x přesností 0,01 x, přidá xx 100 xx xxxxxxxxxxx methanolu (3.2), xxxxxxxxx x hodinu xxxxx xx xxxxxxxx (4.2). Roztok xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx skleněných xxxxxx (4.5) x xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx xx 150 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 7,5 x xxxxxxxxxxxxx xxxx (3.4), xxxxxxxxx x xxx xxxxx xx xxxxx. Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxx přes xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx použije k xxxxxxx (5.3).
5.3 Čištění
5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx kolony (4.1) xx xxxxx xxxx zátka xx xxxxxx xxxx a xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Naváží xx 11,0 g xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx hlinitého (3.5) x nasype se xx kolony, xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx. Oxid xxxxxxx se v xxxxxxxx koloně xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxx konec xxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2). Xxxxxx xxxxxx xx xxxx x stěnu xxxxxx x extrakt xx xxxxx řádně xxxxxxxxxx oxidem xxxxxxxx. Xxxxxxxxx se z xxxxxx eluuje xxxxxx 100 ml xxxxxxxxx (3.1) xxx rychlosti xxxxxxx 2 – 3 ml xx xxxxxx x xxxxx xx jímá do 250 xx xxxxx x kulatým xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxx teplotě 40xX odpaří xx xxxxx x rotační xxxxxxx (4.3). Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx 3 – 4 xx xxxxxxx xxxx (3.8.) x xxxxxxxxxxxxx xx převede xx 10 ml xxxxxxx baňky. Xxxxx xx několikrát xxxxxxxxx 1 – 2 xx xxxxxxx fáze x tyto roztoky xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx doplní po xxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx 0,45 μx xxxxx (4.7). Tento xxxxxx xx xxxxxxx xxx vlastní HPLC xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Stanovení xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX)
5.4.1 Parametry
Následující xxxxxxxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx i xxxx xxxxx povedou xx xxxxxxx výsledkům:
Kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
mobilní xxxx (3.8),
xxxxxxxxx rychlost: 1,5–2 ml/minuta,
vlnová xxxxx xxxxxxxxx: 317 xx,
xxxxx xxxxxxxx: 20–50 μl.
Stabilita xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3), xxxxx obsahuje 3,6 μx/xx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.9.3) se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xx xxxxx (xxxxxx) píků xxx xxxxxx koncentraci. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx hodnot xxxxx nebo ploch xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μx/xx.
5.4.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx x určí xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (plochy) píků xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xxxxxx výšek (xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku x μx/xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.4.2).
x = (x × 200)/x,
xx xxxxxx xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v roztoku xxxxxx x μg/ml,
m = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x gramech.
7. Xxxxxxx výsledků
7.1 Identita
Identita xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx detektoru x diodovým polem, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx extraktu xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx xxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x přídavkem
K xxxxxxxx vzorku xx xxxxx vhodného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx robenidinu xx být xxxxxxx xxxx xx předpokládaný xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx se xxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx xxxxxxxxx robenidinu x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Detektor xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx záznam xxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx detektor x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx vlnové xxxxx xxxx 220 x 350 nm xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx částí xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tohoto xxxxxxxx je dosaženo, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx odchylka xxxx dvěma spektry xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx analytu.
c) xxx vlnové délce xxxx 220 x 350 nm xx xxxxx spektrum xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxx xx ostatních x této částí xxxxxxx v xxxxxxx 10 až 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx maxima x xxxxxxxx xx xxxxx sledovaných bodech xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nikde 15 % absorbance spektra xx vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx xxxx dosaženo některého x těchto xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 15 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx testu
Společenství xxxxxxxxxxxxx kruhový xxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx a králíky, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx vzorků xxx podroben xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx krmivo |
Pelety |
Sypké krmivo |
Pelety |
|
|
Průměr (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (xx/xx) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
XXx (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
XX (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx opakovatelnosti
SR = xxxxxxxxxx odchylka v xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx x reprodukovatelnosti
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
(2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx slouží x xxxxxxxx methylbenzochátu v xxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxxx ze xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx přečištěn xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Obsah xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx fází vysoce xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) pomocí XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, xxx HPLC
3.3 Xxxxxxx xxxx XXXX
Xxxx xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (pro HPLC) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx xx xxxx 0,22 μx filtr (4.5.) x xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx po xxxx 10 xxxxx).
3.4 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx σ = 2 %
20 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x 1000 xx xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx σ = 10 %
100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (X20 x. 1,18x/xx) xx xxxxxxx v 1000 ml xxxx.
3.6 Xxxxx CG-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx: 100 x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x 500 xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (3,5) x xx xxxxxxx xxxxxxx xx zahřívá x varu na xxxxx xxxxx. Po xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Filtruje xx xxxx xxxxxxxx filtr xx sníženého xxxxx. Xxxxx se propláchne xxxxxxx xxxx 500 xx xxxx x xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Xxxxx xx xxxxxxxxxx dalšími 250 xx methanolu x xxxxxx prosáváním xxxxxxx xxxx filtrační xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx uskladňuje x xxxxxxxxxxx xxxxx.
3.7 Standardní xxxxx: xxxxx methylbenzochát (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Základní xxxxxxxxxx xxxxxx benzochátu, 500 μx/xx
Xxxxxx se 50 xx standardní látky (3.7) s xxxxxxxxx 0,1 xx, xxxxxxxx xx ve 100 xx xxxxxxx xxxxx x roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), xxxxxx xx značku a xxxxxxxx.
3.7.2 Pracovní standardní xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx 50μg/ml
Do 50 ml odměrné xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 xx základního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.1), xxxxxx xx xxxxxxxxxx (3.2) po xxxxxx a xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxx 25 xx odměrných xxxxx se xxxxxxxxxx 1, 2, 3, 4 a 5 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.2). Xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.3) x zamíchá. Xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 x 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx roztoky xx xxxx připravovat těsně xxxx jejich použitím.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx třepačka
4.2 Rotační xxxxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxx (250 x 15 xx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx 200 xx
4.4 XXXX xxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
4.4.1 Xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 mm, C – 18, 10μx xxxx kolona xxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45μx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx se xxxx analyzovat a xxxxxxxxxx xxx x xxx xxxx přítomen xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxx rušivé xxxxx.
5.1.2 Xxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx, jaké xx xxxxxxxx xx vzorku. X xxxxxxxxxxx xx xxxxxx 1,5 xx/xx xx xxxxx do 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.1), xxxxxxxx xx x po 10 xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Pozn.: Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx, xxxx xx xxxxxx, x při xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx přibližně 20 x připraveného xxxxxx x přesností 0,01 x. Xxxxx xx 100 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxxxxxxx xx xxxxx (4.1) xx xxxx 30 xxxxx. Roztok se xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Extrakce xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx xxxxx 25 xx xxxxxxxx, který xxx získán xxxxxxxx xxxxxxxx v bodu (5.2). Dále xx xx xxxxxxx xxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx. Potom xx xxxxxxx xxxxxx separovat x xxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx) se xxxxxxx xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx se xxxxxxx xx xxxxx dalšími 40 ml dávkami xxxxxxxxxxxxxx x tyto xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx x kulatým xxxx. Xxxxxxx dichlormethanu xx xxxxxx do xxxxx na rotační xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx 40 oC. Xxxxxxx xx rozpustí x 20–25 xx xxxxxxxxx (3.2), xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx kolony (4.3) xx vloží xxxxxx xx xxxxxx vaty. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 5 x xxxxxxxxxx xxxxxx x x 50 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5). Xxxx xxxx se xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx kyselina xx xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx eluát xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Potom xx do xxxxxx xx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xx xxxxx xx k xxxxxxx xxxxxx.
5.4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (5.3). Baňka x xxxxxxx dnem xx vypláchne xxxxx xxxxxxx 5 až 10 xx xxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxx xx také xxxxxxx xx kolonu. Extrakt xx xxxxx xxxxx xx x povrchu xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 50 ml xxxxxxxxx tak, xxx xxxxxx nepřesahoval 5 xx za xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Methylbenzochát xx xxxxxx x kolony 150xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx xx xxxx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx (5.4.2) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 až 10 xx xxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxx xx xxxxx do xxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 300 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 130 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1). Xxxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx (dichlormethanová) xxxxxx xx xxxxxxx xx 500 xx xxxxx x kulatým xxxx. Xxxxxxxx vodné xxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx 70 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxxx se smísí x xxxxxx extraktem x xxxxx x xxxxxxx dnem.
Extrakt xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx x rotační xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx x xxxxx xx rozpustí v xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxxxx převede do 10 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxx xxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx 1 až 2 xx methanolu x xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Xxxxx xxxxxx se použije xxx analýzu XXXX (5.6).
5.6 Xxxxxxx pomocí XXXX
5.6.1 Parametry
Následující xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx použity xxxx xxxxxxxxx pokud xxxxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxx:
- xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
- xxxxxxx xxxx: xxxx xxxxxxxxx a xxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- xxxxxx délka xxxxxxxxx: 265 nm,
- xxxxx xxxxxxxx: 20 xx 50μx.
Xxxxxxxxx chromatografického xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výšek xxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx časů.
5.6.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.7.3) xx provede několik xxxxxxxx a xxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx každou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxx vynesením xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxx proti xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků x μx/xx.
5.6.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx vzorku (5.5.) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx byl xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) z píků xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx methylbenzochátu x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2.).
Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x (mg/kg) xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx
x =(c x 40)/x,
xx xxxxxx xx
x = xxxxxxxxxxx methylbenzochátu x xxxxxxx xxxxxx x μg/ml,
m = xxxxxxxx navážky xxxxxx x xxxxxxx.
7. Ověření xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx opakovaným xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx anebo xxxxxxxx detektoru x xxxxxxxx xxxxx, který xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxx roztokem (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx stanovením x xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xx fortifikuje xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx by xxxxx pouze xx xxxxxxx xxxx methylbenzochátu x ohledem xxx xx xxxxxxx množství, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx píku x xxxxxxxx maximální xxxxx musí xxx xx xxxxxxxxx 10 % původní xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku i xxxxxxxxx musí být xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx píku xx chromatogramu xxxxxx x nepřesností xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x diodovým xxxxx xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx se nesmí xxxxxx spektra xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxx chromatogramu xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx kritéria je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x jestliže xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, vrcholu x xxxxxxx píku zkoušeného xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx v xxxx xxxxx spektra x xxxxxxx 10 xx 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx stejná xxxxxx x jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % vzhledem k xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx mezi 4 a 20 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx 90 %.
8. Výsledky xxxxxxxxx xxxxx
X xxxxxx laboratořích xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx analýzy.
Výsledky
|
Modelové xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx krmivo |
Pelety |
|
|
Průměr (xx/xx) |
Xxxxxxxxxx |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Xx (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
XX (mg/kg) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
CVR |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Výtěžnost (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
XX = standardní odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = variační xxxxxxxxxx reprodukovatelnosti