Xxxxxxxx směrnice Xxxxxx 93/117/XX
xx dne 17. xxxxxxxx 1993,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx směrnici Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. července 1970, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx odběru vzorků x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (XXX) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x kvalitě x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xx nutno stanovit xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx kontrolu dodržování xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx x methylbenzoátu x xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx opatření této xxxxxxxx xxxx v xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx provedených x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxx metody xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 30. xxxxxxxxx 1994. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxx Komisi.
Tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu si xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx 3
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx xxxx po xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství.
V Xxxxxxx xxx 17. xxxxxxxx 1993.
Xx Xxxxxx
Xxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 362, 31.12.1985, x. 8.
XXXXXXX
1. XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) amino]guanidin xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx a oblast xxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxx v xxxxxxxx. Xxx stanovitelnosti je 5 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Extrakt se xxxxxx a xxxx xxxxxxxxx část xx xxxxxxxx xx xxxxxx x oxidem xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se x xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx XX detektoru.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx methanol
Do 500 ml odměrné xxxxx xx xxxxx 4,0 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (X20x, 1,18 x/xx), doplní xx xx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1.) x promíchá. Xxxxx xxxxxx xxxx xxx připraven těsně xxxx použitím.
3.3 Xxxxxxxxxxx, xxx XXXX
3.4 Molekulární xxxx
Xxx 3X, 8 xx 12 xxxx (1,6–2,5 mm perličky xxxxxxxxxxxxx hlinitokřemičitanu, xxxxxx xxxx 0,3 mm).
3.5 Xxxx xxxxxxx: xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx I xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
100 x oxidu xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx nádoby a xxxxxxx xx 2 xx xxxx. Xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 20 xxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxx zazátkované xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, roztok c = 0,025 mol/l
3,4 x xxxxxxxxxx fosforečnanu xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx XXXX) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxx x promíchá.
3.7 Hydrogen xxxxxxxxxxx xxxxx, roztok x = 0, 025 xxx/x
3,55 x xxxxxxxxx (xxxx 4,45 x xxxxxxxxx, xxxx 8,95 x dodekahydrátu) xxxxxxxx fosforečnanu xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx XXXX) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xx značku x xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxx xxxx HPLC
Smíchá xx:
650 xx xxxxxxxxxxxx (3.3.),
250 xx xxxx (xxx XXXX),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx fosforečnanu draselného (3.6.),
50 ml xxxxxxx xxxxxxxx fosforečnanu xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx se filtrem 0,22 μx (4.6.) x xxxxxx xx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx).
3.9 Xxxxxxxxxx látka
Čistý xxxxxxxxx: 1.3-xxx [(4-chlorbenziliden) xxxxx] guanidin hydrochlorid, X 758.
3.9.1 Robenidin, xxxxxxxx standardní xxxxxx: 300 μx/xx:
Xxxxxx xx 30 xx standardního xxxxx robenidinu (3.9.) x xxxxxxxxx 0,1 xx. Xxxxxxxx se x xxxxxxx xxxxxxxxx (3.2.) ve 100 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x promíchá se. Xxxxx xx obalí xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx x temnu.
3.9.2 Xxxxxxxxx, pracovní standardní xxxxxx: 12 μx/xx
Xxxxxx xxx 10,0 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.1) xx 250 xx xxxxxxx baňky, xxxxxx xx značku xxxxxxx xxxx (3.8) x promíchá. Xxxxx xx xxxxx aluminiovou xxxxx a xxxxx x xxxxx.
3.9.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx souboru 50 xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.2.). Xxxxxx xx xx značku xxxxxxx xxxx (3.8.) x xxxxxxxx. Xxxx roztoky xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 a 6.0 μx/xx robenidinu. Xxxxxxx tyto roztoky xx připravují xxxxx xxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx a nádržkou xx xxxxxxxxx 150 xx. Xxxxxxx xxxxxx 10 – 15 xx, délka 250 xx.
4.2 Xxxxx xxxxxxxx
4.3 Xxxxxxx odparka
4.4 Zařízení xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x měnitelnou xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx x diodovým xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, X18, 10 μx xxxxxx xxxx xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxxxx XX/X nebo podobný)
4.6 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.7 Membránové xxxxxx 0,45 μx
5. Xxxxxx
Xxxx.: Xxxxxxxxx xx citlivý xx xxxxxx. Xxxxx xxxx být při xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx nádobí x xxxxxxx xxxx.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx krmivo bez xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Je xxxxxx xxxxxxx test xxxxxxxxxx xxxxxxxx modelového xxxxxx (5.1.1.), do xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx množství robenidinu, xxxx xx ve xxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxx 60 xx/xx xx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 3 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.1.). Xxxxxx xx xxxxxx xxx na xxxxx 0,5 ml x xxxxxx dusíku. Xxxxx xx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx a xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx začít x extrakcí (5.2.).
Xxxx.: Xxx xxxx této xxxxxx by xxxx xxx modelové xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x nemělo xx xxxxxxxxx stanovitelné xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Do 250 xx Erlenmeyerovy baňky xx xxxxxx přibližně 15 g upraveného xxxxxx x xxxxxxxxx 0,01 g, xxxxx xx 100 ml xxxxxxxxxxx methanolu (3.2), xxxxxxxxx x hodinu xxxxx na třepačce (4.2). Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx přes xxxxx xx skleněných xxxxxx (4.5) a xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx xx 150 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se 7,5 x xxxxxxxxxxxxx xxxx (3.4), xxxxxxxxx x xxx xxxxx xx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx skleněných xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx použije k xxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxx s xxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.1) xx xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Naváží xx 11,0 g xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.5) x xxxxxx xx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx prodlevou v xxxxxxx prostředí. Xxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxx xxxxxx
Xx připravenou xxxxxx se xxxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2). Xxxxxx xxxxxx se xxxx x stěnu xxxxxx a extrakt xx nechá xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hlinitým. Xxxxxxxxx se z xxxxxx xxxxxx xxxxxx 100 xx xxxxxxxxx (3.1) při xxxxxxxxx xxxxxxx 2 – 3 xx za xxxxxx x eluát xx xxxx xx 250 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx roztok xx xx redukovaného tlaku x xxx xxxxxxx 40xX xxxxxx do xxxxx v xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Odparek xx xxxxx xxxxxxxx xx 3 – 4 xx xxxxxxx xxxx (3.8.) a xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xx 10 xx xxxxxxx xxxxx. Baňka xx několikrát xxxxxxxxx 1 – 2 xx mobilní fáze x tyto roztoky xx xxxxxxx xx xxxxxxx baňky. Xxxxx xx doplní xx xxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx se. Xxxxxxxxx část xxxxxxxxx xxxx 0,45 μx xxxxx (4.7). Xxxxx xxxxxx xx použije xxx vlastní XXXX xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Stanovení xxxxxx xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (HPLC)
5.4.1 Parametry
Následující xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx i jiné xxxxx povedou xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
xxxxxxx xxxx (3.8),
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 317 xx,
xxxxx xxxxxxxx: 20–50 μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.3), xxxxx xxxxxxxx 3,6 μx/xx, xx do xxxxxxxx konstantních xxxxx xxxx x retenčních xxxx.
5.4.2 Kalibrační graf
Pro xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.9.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx se výšky (xxxxxx) xxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx získá xxxxxxxxx xxxxxxxxxx hodnot xxxxx xxxx xxxxx xxxx proti xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μx/xx.
5.4.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx se nastříkne xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx x určí xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (plochy) píků xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx výsledků
Z xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (ploch) xxxxxxxxxxxxxx píků x xxxxxxx vzorku xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μx/xx xxxxxxxxx x kalibračního grafu (5.4.2).
x = (x × 200)/m,
ve xxxxxx xx
x = koncentrace xxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μg/ml,
m = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x gramech.
7. Xxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Identita
Identita xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxxxx opakovaným xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx detektoru x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožňuje xxxxxxxxx xxxxxxx extraktu vzorku x xxxxxxxxxxx roztokem (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx xxxxxxxxxx.
7.1.1 Opakované xxxxxxxxx x přídavkem
K xxxxxxxx vzorku xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx robenidinu xx xxx xxxxxxx xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxx robenidinu podle xxxxxxxx xxxxxxxxx robenidinu x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx píku x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx pole
Výsledky xxxx xxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x standardu xxxx xxx záznam xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx danou rozlišovací xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx detektor x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) při xxxxxx xxxxx mezi 220 x 350 nm xx nesmí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x standardu xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxx xx xxxxxxxxx x této xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx kritéria xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x jestliže ve xxxxx sledovaných xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx píku.
Jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x těchto xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx dvou paralelních xxxxxxxxx provedených na xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. nejvyššího výsledku xxx xxxxxx robenidinu xxx 15 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kruhový test, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čtyři xxxxxx krmiv xxx xxxxxx x králíky, xxxxxxx xxxx peletovaných. Xxxxx ze vzorků xxx podroben dvěma xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx x této xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx krmivo |
Pelety |
Sypké krmivo |
Pelety |
|
|
Průměr (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (xx/xx) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
XXx (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
XX (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Sr = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx opakovatelnosti
SR = xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
(2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
1. Účel x oblast použití
Tato xxxxxx xxxxxx k xxxxxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx methansulfonové. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx dichlormethanem, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx fází xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografií (XXXX) xxxxxx UV xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, xxx XXXX
3.3 Xxxxxxx xxxx HPLC
Směs xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (xxx XXXX) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx xx xxxx 0,22 μx xxxxx (4.5.) x odplyní (xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx).
3.4 Xxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx σ = 2 %
20 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx rozředí x 1000 xx xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Roztok xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx σ = 10 %
100 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (X20 x. 1,18x/xx) xx rozředí x 1000 xx xxxx.
3.6 Xxxxx XX-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx takto: 100 x iontoměniče xx xxxxxxxx x 500 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3,5) x xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x varu na xxxxx desce. Po xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx filtr xx xxxxxxxxx tlaku. Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 500 xx xxxx x xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx přes filtrační xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx uskladňuje x xxxxxxxxxxx lahvi.
3.7 Standardní xxxxx: čistý xxxxxxxxxxxxxxx (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Základní standardní xxxxxx xxxxxxxxxx, 500 μx/xx
Xxxxxx se 50 xx xxxxxxxxxx látky (3.7) x přesností 0,1 xx, xxxxxxxx xx xx 100 xx odměrné xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.2 Xxxxxxxx standardní xxxxxx methylbenzochátu 50μx/xx
Xx 50 xx odměrné xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.1), doplní xx xxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx série 25 ml xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 1, 2, 3, 4 a 5 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.2). Xxxxxx xx po xxxxxx mobilní fází (3.3) x zamíchá. Xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 a 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx těsně xxxx xxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.2 Xxxxxxx xxxxxxx
4.3 Skleněná kolona (250 x 15 xx) vybavená xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx 200 xx
4.4 HPLC xxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxxxxxxx x měnitelnou vlnovou xxxxxx xxxx detektorem xxxxxxxx polem
4.4.1 Kolona xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 mm, X – 18, 10μx xxxx kolona xxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.5 Xxxxxxxxxx filtry 0,45μx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx methylbenzochátu xx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx v xxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx ani xxxx xxxxxx látky.
5.1.2 Xxxx xx xxxxxxx xxxx výtěžnosti analýzou xxxxxxxxxx krmiva, xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx x obdobném xxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx xx vzorku. X xxxxxxxxxxx xx xxxxxx 1,5 xx/xx xx xxxxx do 20 x modelového xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.1), xxxxxxxx se x xx 10 xxxxx se xxxxxxx x extrakcí (5.2).
Pozn.: Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx podobného xxxx, xxxx je xxxxxx, x xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx naváží xxxxxxxxx 20 g připraveného xxxxxx x xxxxxxxxx 0,01 x. Xxxxx xx 100 xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x mechanicky xx třepe (4.1) xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxx přes xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx nálevky, xxxxxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.5) xx xxxxx 25 xx filtrátu, xxxxx xxx xxxxxx postupem xxxxxxxx x xxxx (5.2). Dále se xx nálevky xxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) a xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx. Potom xx xxxxxxx vrstvy separovat x xxxxxx vrstva (xxxxxxxxxxxxxx) se xxxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Extrakce xxxxx xxxx se xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx 40 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xx xxxxx s xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx tlaku x xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x 20–25 xx xxxxxxxxx (3.2), xxxxx xx xxxxxxxxx a xxxx extrakt xx xxxxxxx pro chromatografii x xxxxxxxx xxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx výměnou xxxxx
5.4.1 Příprava ionexové xxxxxx
Xx xxxxxxx konce xxxxxxxx xxxxxx (4.3) xx vloží xxxxxx xx xxxxxx vaty. Xxxxxxxx se suspense x 5 g xxxxxxxxxx xxxxxx a x 50 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5). Xxxx xxxx xx xxxxxx xx skleněné xxxxxx x nechat xxxxxx. Xxxxxxxxxx kyselina xx odpustí xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx proteklý eluát xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx do kolony xx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxx (3.2) x nechá se xxxxx xx x xxxxxxx xxxxxx.
5.4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxx xx xxxxxxx napipetuje xxxxxxx xxxxxxx (5.3). Xxxxx x xxxxxxx xxxx xx vypláchne xxxxx xxxxxxx 5 xx 10 ml xxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xx nechá stéci xx x povrchu xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx xx xxxxxx. Xxxxxxxx kapalina se xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx z kolony 150xx roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx se xxxx xx 250 ml Xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx eluát (5.4.2) xx xxxxxxx do xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx baňka xx xxxxxxxxxx 5 xx 10 xx xxxxxxxxx (3.2) x výplach xx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx. Dále xx do xxxxxx xxxxxxx xxxxx 300 xx roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 130 xx dichlormethanu (3.1). Třepe xx xx xxxx xxxxx xxxxxx x potom xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx (xxxxxxxxxxxxxxxx) xxxxxx se xxxxxxx xx 500 ml xxxxx x kulatým xxxx. Xxxxxxxx vodné xxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx 70 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxxx se xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx x xxxxxxx dnem.
Extrakt dichlormethanu xx odpaří xx xxxxx v xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx tlaku x xxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx 10 xx odměrné xxxxx. Baňka x xxxxxxx dnem xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx 1 xx 2 xx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xx odměrné xxxxx. Xxxxx se xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxxxxxx množství xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Xxxxx xxxxxx xx použije xxx analýzu XXXX (5.6).
5.6 Xxxxxxx xxxxxx XXXX
5.6.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx uvedeny xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxx:
- xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
- xxxxxxx xxxx: xxxx xxxxxxxxx a xxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- xxxxxx délka xxxxxxxxx: 265 xx,
- xxxxx xxxxxxxx: 20 xx 50μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, až xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx píků x xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx roztok (3.7.3) xx provede xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx (xxxxxx) píků xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků x μg/ml.
5.6.3 Roztok xxxxxx
Xxxxxxxxx se nastříkne xxxxxxx vzorku (5.5.) x použitím xxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxx kalibrační xxxxxxx x xxxx xxxxxxxx hodnota xxxxx (xxxxxx) z xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
X xxxxxxxx xxxxxxx výšky (xxxxxx) píků methylbenzochátu x roztoku xxxxxx xx určí xxxxxxxxxxx x roztoku vzorku x μx/xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2.).
Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx w (xx/xx) xx vzorku xx xxxxxxx xxxxx tohoto xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx xxxxxx xx
x = xxxxxxxxxxx methylbenzochátu x roztoku vzorku x μx/xx,
x = xxxxxxxx navážky xxxxxx x xxxxxxx.
7. Ověření xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Identita
Identita xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx roztokem (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Opakované xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx
Xxxxxxx vzorku xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx být xxxxxxx xxxx je předpokládaný xxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xxxxx xxxxx ke xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxx xx xxxxxxx množství, xxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx ve zředěném xxxxxxxx. Xxxx píku x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx musí xxx xxxxxx spektra zaznamenaný xx vrcholu xxxx xx chromatogramu stejný x xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx polem xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) při xxxxxx délce xxxx 220 a 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx částí xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx kritéria xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx dvěma xxxxxxx nepřesahuje 15 % xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx;
x) xxx xxxxxx xxxxx mezi 220 x 350 nm xx xxxxx spektrum xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx píku zkoušeného xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % relativní xxxxxxxxxx. Tohoto xxxxxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx stejná xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxx nepřesahuje xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx xxxx dosaženo xxxxxxxxx x těchto xxxxxxxx, přítomnost xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx přesáhnout 10 % vzhledem k xxxxxxxxxx výsledku při xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx 4 x 20 xx/xx.
7.3 Výtěžnost
Výtěžnost pro xxxxxxxxxxxxx vzorek xxxx xxx nejméně 90 %.
8. Výsledky xxxxxxxxx xxxxx
X deseti laboratořích xxxx xxxxxxxxxxx pět xxxxxx. U každého xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx analýzy.
Výsledky
|
Modelové xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
Xxxxxxxxxx |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Xx (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
SR (xx/xx) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
XXX |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx opakovatelnost
SR = xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = variační xxxxxxxxxx reprodukovatelnosti