Dvanáctá xxxxxxxx Xxxxxx 93/117/XX
xx xxx 17. xxxxxxxx 1993,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX ze dne 20. července 1970, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (EHS) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx na xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, že xx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxx xxxx potvrdit xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a správními xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxx krmiv, xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx látek robenidinu x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx této xxxxxxxx xxxx v xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx při xxxxxxxxx provedených v xxxxx úředních xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx metody xxxxxxx x příloze této xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. listopadu 1994. Neprodleně x xxxx uvědomí Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx xxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxx za takový xxxxx učiněn xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx dnem po xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských společenství.
X Xxxxxxx dne 17. prosince 1993.
Xx Xxxxxx
Xxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 362, 31.12.1985, x. 8.
PŘÍLOHA
1. XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) amino]guanidin xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x krmivech. Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx okyseleným xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx se xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx eluuje x kolony xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx a xx xxxxxx objem xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Obsah xxxxxxxxxx xx stanoví xxxxxx xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx XX detektoru.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx methanol
Do 500 xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx 4,0 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (P20c, 1,18 x/xx), xxxxxx xx xx xxxxxx methanolem (3.1.) a xxxxxxxx. Xxxxx roztok xxxx xxx připraven xxxxx xxxx použitím.
3.3 Acetonitril, xxx HPLC
3.4 Molekulární xxxx
Xxx 3A, 8 xx 12 xxxx (1,6–2,5 mm xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx hlinitokřemičitanu, xxxxxx xxxx 0,3 mm).
3.5 Xxxx xxxxxxx: kyselý, xxxxxx aktivity X xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
100 x oxidu xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxx se 2 xx xxxx. Xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 20 xxxxx. Skladuje xx x dobře zazátkované xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, roztok c = 0,025 mol/l
3,4 x dihydrogen xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx HPLC) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 0, 025 xxx/x
3,55 x xxxxxxxxx (xxxx 4,45 x dihydrátu, xxxx 8,95 x xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx XXXX) x 1000 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xx značku x xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxx xxxx XXXX
Xxxxxx xx:
650 xx xxxxxxxxxxxx (3.3.),
250 xx xxxx (xxx XXXX),
50 ml xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx draselného (3.6.),
50 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx xx filtrem 0,22 μm (4.6.) x xxxxxx xx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx).
3.9 Standardní xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx: 1.3-bis [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx] xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, X 758.
3.9.1 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx standardní xxxxxx: 300 μx/xx:
Xxxxxx xx 30 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx robenidinu (3.9.) x xxxxxxxxx 0,1 xx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxxx (3.2.) xx 100 xx odměrné xxxxx, xxxxxx se xx xxxxxx stejným rozpouštědlem x xxxxxxxx xx. Xxxxx xx obalí xxxxxxxxxxx folií a xxxxx v xxxxx.
3.9.2 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 12 μg/ml
Odměří xxx 10,0 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.1) xx 250 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx značku xxxxxxx xxxx (3.8) x xxxxxxxx. Xxxxx xx obalí xxxxxxxxxxx xxxxx x uloží x temnu.
3.9.3 Kalibrační xxxxxxx
Xx souboru 50 xx odměrných buněk xx xxxxxx 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.2.). Xxxxxx se xx značku mobilní xxxx (3.8.) x xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 a 6.0 μg/ml robenidinu. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx použitím.
4. Xxxxxxxxx x pomůcky
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx z tmavého xxxx, vybavená xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx přibližně 150 xx. Vnitřní xxxxxx 10 – 15 xx, délka 250 xx.
4.2 Ruční xxxxxxxx
4.3 Xxxxxxx xxxxxxx
4.4 Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC) xxxxxxxx ultrafialovým detektorem x xxxxxxxxxx vlnovou xxxxxx, xxxxx detektorem x xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, C18, 10 μx náplní nebo xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xx xxxxxxxxxx vláken (Xxxxxxx XX/X xxxx xxxxxxx)
4.6 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45 μx
5. Postup
Pozn.: Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx nádobí x xxxxxxx xxxx.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx krmivo xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx, xxx neobsahuje xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx látky.
5.1.2 Je xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1.1.), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx je ve xxxxxx. K xxxxxxxx xxxxxx 60 xx/xx xx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 3 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.1.). Xxxxxx xx xxxxxx xxx xx xxxxx 0,5 xx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx se 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx x xx deseti xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxx (5.2.).
Xxxx.: Xxx xxxx této xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx typu xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxx stanovitelné množství xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx přibližně 15 x upraveného xxxxxx x přesností 0,01 x, xxxxx xx 100 xx xxxxxxxxxxx methanolu (3.2), xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx přes filtr xx xxxxxxxxxx vláken (4.5) a xxxx xxxxx filtrátu se xxxx xx 150 xx Erlenmeyerovy baňky. Xxxxx se 7,5 x xxxxxxxxxxxxx xxxx (3.4), xxxxxxxxx x xxx minut se xxxxx. Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx (5.3).
5.3 Čištění
5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxx s xxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.1) se xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxx se skleněnou xxxxxxxx. Naváží xx 11,0 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.5) x xxxxxx xx xx kolony, xxxxx xxxxx x minimální xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx setřese xxxxxx poklepem xx xxxxx xxxxx xxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxx se napipetuje 5,0 xx připraveného xxxxxxxx xxxxxx (5.2). Xxxxxx xxxxxx se xxxx o xxxxx xxxxxx a extrakt xx nechá xxxxx xxxxxxxxxx oxidem hlinitým. Xxxxxxxxx xx x xxxxxx eluuje xxxxxx 100 ml xxxxxxxxx (3.1) xxx xxxxxxxxx xxxxxxx 2 – 3 ml xx xxxxxx x eluát xx xxxx do 250 xx baňky x kulatým xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xx redukovaného xxxxx x xxx teplotě 40xX xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx 3 – 4 ml mobilní xxxx (3.8.) a xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xx 10 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx několikrát xxxxxxxxx 1 – 2 xx xxxxxxx fáze x xxxx xxxxxxx xx přidají xx xxxxxxx baňky. Xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx x promíchá xx. Xxxxxxxxx část xxxxxxxxx xxxx 0,45 μx xxxxx (4.7). Tento xxxxxx xx použije xxx xxxxxxx HPLC xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Stanovení xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX)
5.4.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxxx. Mohou být xxxxxxx i jiné xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
mobilní xxxx (3.8),
průtoková xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 317 xx,
xxxxx xxxxxxxx: 20–50 μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx opakovaným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.3), xxxxx xxxxxxxx 3,6 μx/xx, až xx xxxxxxxx konstantních xxxxx xxxx a xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.9.3) xx provede xxxxxxx nástřiků a xxxxx xx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx koncentraci. Kalibrační xxxxxx xx získá xxxxxxxxx průměrných hodnot xxxxx xxxx xxxxx xxxx proti xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μx/xx.
5.4.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx se nastříkne xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx, jako xxx xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxx hodnota xxxxx (plochy) xxxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx výsledků
Z průměrných xxxxxx xxxxx (xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxx v xxxxxxx xxxxxx xx xxxx koncentrace xxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku x μg/ml odečtením x xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.4.2).
x = (x × 200)/m,
ve xxxxxx xx
x = koncentrace xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx analýzy xxxx xxx xxxxxxxxx opakovaným xxxxxxxxxx s přídavkem xxxxx xxxxxxxx detektoru x diodovým xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx xxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx
X xxxxxxxx vzorku xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.3). Xxxxxxxx přidaného robenidinu xx xxx xxxxxxx xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxx x xxxxxx robenidinu x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx píku x xxxxxxxx jeho maximální xxxxx xxxx být xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx následujících xxxxxxxx:
x) xxx vlnové xxxxx xxxxxxxxx absorpce xxxxxx x standardu xxxx být záznam xxxxxxx xxxxxxxxxxx ve xxxxxxx píku xx xxxxxxxxxxxxx stejný x xxxxxxxxxxx xxxxx rozlišovací xxxxxxxxxx detekčního xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx polem xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx nesmí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx částí xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Tohoto xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx dvěma xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx analytu.
c) xxx xxxxxx délce xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x sestupu xxxx zkoušeného xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx maxima x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % absorbance xxxxxxx xx vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx xxxx dosaženo xxxxxxxxx x xxxxxx kritérií, xxxxxxxxxx xxxxxxx není xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx robenidinu xxx 15 mg/kg.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx testu
Společenství xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx test, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čtyři xxxxxx xxxxx pro xxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx x této xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (xx/xx) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
XXx (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
SR (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Sr = standardní odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX METHYLBENZOCHÁTU
(2-methyl-7-benzyl-oxy-6-butyl-1,4-dihydro-4-oxychinolin-3-karboxylát)
1. Účel x xxxxxx použití
Tato xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxxx xx vzorku xxxxxx methanolového xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx přečištěn xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx chromatografií, a xxxxxxxx xxx znovu xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx methylbenzochátu xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, xxx XXXX
3.3 Xxxxxxx fáze XXXX
Xxxx xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (xxx XXXX) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx se xxxx 0,22 μx filtr (4.5.) x xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx po xxxx 10 xxxxx).
3.4 Xxxxxx xxxxxxxx methansulfonové σ = 2 %
20 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x 1000 xx xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx σ = 10 %
100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (X20 x. 1,18x/xx) xx xxxxxxx v 1000 xx xxxx.
3.6 Xxxxx XX-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx: 100 g iontoměniče xx xxxxxxxx v 500 xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (3,5) x xx xxxxxxx xxxxxxx xx zahřívá x varu xx xxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxxx se kyselina xxxxxxxxx. Filtruje se xxxx papírový xxxxx xx sníženého tlaku. Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx vždy 500 xx xxxx x xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxxxxxxx x vysuší prosáváním xxxxxxx xxxx filtrační xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx uskladňuje x xxxxxxxxxxx xxxxx.
3.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Základní standardní xxxxxx xxxxxxxxxx, 500 μx/xx
Xxxxxx se 50 xx xxxxxxxxxx xxxxx (3.7) s xxxxxxxxx 0,1 xx, xxxxxxxx xx xx 100 xx odměrné xxxxx x roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), doplní xx značku a xxxxxxxx.
3.7.2 Xxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx 50μg/ml
Do 50 xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.1), doplní xx xxxxxxxxxx (3.2) po xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxx 25 xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 1, 2, 3, 4 x 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.2). Xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.3) x xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 x 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx roztoky xx xxxx xxxxxxxxxxx těsně xxxx jejich xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx a pomůcky
4.1 Xxxxxxxxxxx třepačka
4.2 Xxxxxxx xxxxxxx
4.3 Xxxxxxxx kolona (250 x 15 xx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a nádržkou x kapacitou 200 xx
4.4 XXXX zařízení xxxxxxxx XX xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
4.4.1 Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, C – 18, 10μm xxxx xxxxxx podobná
4.5 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45μx
5. Xxxxxx
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxx krmivo xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx analyzovat x xxxxxxxxxx zda v xxx není xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx látky.
5.1.2 Xxxx xx provést xxxx xxxxxxxxxx analýzou xxxxxxxxxx krmiva, xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx x obdobném xxxxxxxx, xxxx je xxxxxxxx xx vzorku. X xxxxxxxxxxx na xxxxxx 1,5 xx/xx xx přidá do 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx 600 μl xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.1), promíchá xx x xx 10 xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxx účel xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx, xxxx xx xxxxxx, a xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Do 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx přibližně 20 g připraveného xxxxxx x přesností 0,01 g. Xxxxx xx 100 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x mechanicky xx xxxxx (4.1) xx dobu 30 xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx papírový xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx nálevky, obsahující 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx xxxxx 25 xx filtrátu, xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx (5.2). Xxxx xx xx nálevky přidá 100 ml xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx) xx xxxxxxx xx 500 xx xxxxx s kulatým xxxx. Xxxxxxxx vodné xxxx xx opakuje xx xxxxx xxxxxxx 40 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x tyto xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxx dichlormethanu xx xxxxxx do xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx xx rozpustí x 20–25 ml xxxxxxxxx (3.2), xxxxx xx zazátkuje x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx pro chromatografii x xxxxxxxx výměnou (5.4).
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx výměnou xxxxx
5.4.1 Příprava xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx konce xxxxxxxx xxxxxx (4.3) xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxx x 5 x xxxxxxxxxx xxxxxx x x 50 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5). Xxxx xxxx se xxxxxx xx skleněné xxxxxx a xxxxxx xxxxxx. Přebytečná xxxxxxxx xx xxxxxxx až xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x kolona xx xxxxxxx xxxxx xxxxx proteklý xxxxx xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx papír. Xxxxx xx xx xxxxxx xx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxx (3.2) x nechá xx xxxxx xx k xxxxxxx xxxxxx.
5.4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx kolonu se xxxxxxx napipetuje xxxxxxx xxxxxxx (5.3). Baňka x kulatým xxxx xx xxxxxxxxx dvěma xxxxxxx 5 xx 10 ml xxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxx xx také převede xx xxxxxx. Xxxxxxx xx nechá xxxxx xx x povrchu xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx tak, aby xxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxx 150xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx se xxxx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx (5.4.2) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx dělící nálevky. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx 5 xx 10 ml xxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxx nálevky. Xxxx xx xx dělící xxxxxxx přidá 300 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 130 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1). Třepe xx xx xxxx xxxxx xxxxxx x potom xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx (xxxxxxxxxxxxxxxx) xxxxxx se xxxxxxx xx 500 xx xxxxx s xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx opakuje xx xxxxx xxxxxxx 70 xx dávkami xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx se xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx x xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx x rotační xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx 10 xx odměrné xxxxx. Xxxxx s xxxxxxx dnem xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx 1 až 2 xx methanolu x opět xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxx po značku xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXXX (5.6).
5.6 Xxxxxxx pomocí XXXX
5.6.1 Parametry
Následující xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx být xxxxxxx xxxx parametry pokud xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
- xxxxxx pro xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
- xxxxxxx xxxx: xxxx xxxxxxxxx x xxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- vlnová xxxxx xxxxxxxxx: 265 xx,
- xxxxx xxxxxxxx: 20 xx 50μx.
Xxxxxxxxx chromatografického xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kalibračního xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, xx do xxxxxxxx konstantních výšek xxxx xxxxx píků x retenčních časů.
5.6.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx každý xxxxxxxxxx roztok (3.7.3) xx xxxxxxx několik xxxxxxxx x změří xxxxx (xxxxxx) píků xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx průměrných xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx píků proti xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μx/xx.
5.6.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx se nastříkne xxxxxxx xxxxxx (5.5.) x použitím xxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxxx hodnota výšky (xxxxxx) x píků xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxx xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx xx určí xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku x μx/xx xxxxx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2.).
Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx w (xx/xx) xx vzorku xx xxxxxxx podle tohoto xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx kterém xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx navážky vzorku x xxxxxxx.
7. Ověření xxxxxxxxxx výsledků
7.1 Identita
Identita xxxxxxx může být xxxxxxxxx opakovaným xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx anebo xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx polem, který xxxxxxxx xxxxxxxxx spektra xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxxxxxxxx xx být podobné xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx methylbenzochátu v xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxx methylbenzochátu x xxxxxxx xxx xx xxxxxxx množství, xxx na množství xxxxxxxxxxxxxxx ve zředěném xxxxxxxx. Xxxx píku x xxxxxxxx maximální xxxxx xxxx být xx xxxxxxxxx 10 % původní xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx pole
Výsledky xxxx xxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx délce xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx musí xxx xxxxxx xxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx píku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xx udává xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx xxxxxx délce xxxx 220 a 350 xx se xxxxx xxxxxx spektra zkoušeného xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx chromatogramu xxxxx xx ostatních xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 až 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, jestliže jsou xxxxxxxx stejná maxima x xxxxxxxx nikde xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx nepřesahuje 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 nm xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, vrcholu x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x této xxxxx spektra v xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx vykázána xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxx odchylka xxxx xxxxxxx nepřesahuje xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx prokázána.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxx přesáhnout 10 % vzhledem x xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx mezi 4 a 20 xx/xx.
7.3 Výtěžnost
Výtěžnost pro xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx nejméně 90 %.
8. Výsledky xxxxxxxxx xxxxx
X deseti xxxxxxxxxxxx xxxx analyzováno pět xxxxxx. X každého xxxxxx xxxx provedeny xxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx
|
Xxxxxxxx krmivo |
Sypké xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (mg/kg) |
Nezjištěno |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Sr (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
XX (xx/xx) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
XXX |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = standardní xxxxxxxx opakovatelnosti
CVr = xxxxxxxx koeficient xxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = variační xxxxxxxxxx reprodukovatelnosti