Xxxxxxxx xxxxxxxx Komise 93/117/XX
xx dne 17. xxxxxxxx 1993,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx dne 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx odběru vzorků x analýzy Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx nařízením (EHS) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx směrnice 70/373/EHS xxxxxxx, xx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx podmínek předepsaných xxxxxxxx x správními xxxxxxxx o xxxxxxx x složení krmiv, xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Společenství xxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, že xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx robenidinu x methylbenzoátu x xxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx xxxx v xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské státy xxxxxxx, že xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx úředních xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x methylbenzochátu x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx metody popsané x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Článek 2
Členské xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 30. listopadu 1994. Neprodleně x xxxx xxxxxxx Komisi.
Tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx tuto xxxxxxxx nebo musí xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx úředním vyhlášení. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské státy.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x platnost xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství.
X Xxxxxxx xxx 17. xxxxxxxx 1993.
Za Xxxxxx
Xxxx Xxxxxxxx
xxxx Komise
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 362, 31.12.1985, x. 8.
XXXXXXX
1. STANOVENÍ XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx]xxxxxxxx hydrochlorid
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxx slouží xx stanovení obsahu xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxx a xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx x oxidem xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx eluuje x xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx a xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx pomocí xxxxxxx fáze. Xxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) na xxxxxxxx fázi pomocí XX xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxxx xxxxx se xxxxx 4,0 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (X20x, 1,18 x/xx), xxxxxx xx xx xxxxxx methanolem (3.1.) a xxxxxxxx. Xxxxx roztok xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.3 Acetonitril, xxx XXXX
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3A, 8 xx 12 mesh (1,6–2,5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx, průměr xxxx 0,3 xx).
3.5 Xxxx xxxxxxx: xxxxxx, xxxxxx aktivity X xxx xxxxxxxxx chromatografii
100 x oxidu xxxxxxxxx xx naváží xx xxxxxx nádoby x xxxxxxx xx 2 xx xxxx. Zazátkuje xx x protřepává xx přibližně 20 xxxxx. Xxxxxxxx se x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx c = 0,025 xxx/x
3,4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxx (pro HPLC) x 1000 xx xxxxxxx baňce, xxxxxx xx po xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sodný, roztok x = 0, 025 xxx/x
3,55 x xxxxxxxxx (xxxx 4,45 x dihydrátu, xxxx 8,95 x dodekahydrátu) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx HPLC) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx. Doplní xx xx značku x promíchá.
3.8 Xxxxxxx xxxx XXXX
Xxxxxx xx:
650 xx xxxxxxxxxxxx (3.3.),
250 xx vody (pro XXXX),
50 ml xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.6.),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxx fosforečnanu xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx se xxxxxxx 0,22 μx (4.6.) x roztok se xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx).
3.9 Standardní xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx: 1.3-bis [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx] xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, X 758.
3.9.1 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 300 μx/xx:
Xxxxxx xx 30 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx (3.9.) x přesností 0,1 xx. Xxxxxxxx xx x kyselém xxxxxxxxx (3.2.) xx 100 xx odměrné baňce, xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxx.
3.9.2 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 12 μx/xx
Xxxxxx xxx 10,0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1) xx 250 xx odměrné baňky, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8) x promíchá. Baňka xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx x temnu.
3.9.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx souboru 50 xx xxxxxxxxx xxxxx xx odměří 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.2.). Doplní xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8.) x xxxxxxxx. Tyto xxxxxxx xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 a 6.0 μg/ml robenidinu. Xxxxxxx tyto xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx z tmavého xxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x nádržkou xx xxxxxxxxx 150 xx. Xxxxxxx průměr 10 – 15 xx, xxxxx 250 xx.
4.2 Xxxxx třepačka
4.3 Xxxxxxx xxxxxxx
4.4 Zařízení xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii (XXXX) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx detektorem x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, anebo xxxxxxxxxx x xxxxxxxx polem, xxxxxxxxxx x pásmu 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, X18, 10 μx xxxxxx xxxx xxxxxxx.
4.5 Filtr xx xxxxxxxxxx xxxxxx (Whatman XX/X nebo xxxxxxx)
4.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45 μm
5. Xxxxxx
Xxxx.: Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxx xxxxx úkonech použito xxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx.
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx robenidinu a xxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx ani jiné xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xx xxxxxx xxxxxxx test xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1.1.), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxxx, xxxx xx ve xxxxxx. K xxxxxxxx xxxxxx 60 mg/kg xx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xxxxxxx 3 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.1.). Roztok xx xxxxxx xxx na xxxxx 0,5 xx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx se 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx se x xx xxxxxx xxxxxxxx xx může xxxxx x xxxxxxxx (5.2.).
Xxxx.: Xxx xxxx této xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx jako xx zkoušený vzorek x xxxxxx by xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx množství xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Erlenmeyerovy baňky xx xxxxxx xxxxxxxxx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxx 0,01 x, xxxxx xx 100 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx na xxxxxxxx (4.2). Xxxxxx se xxxxxxxxxxx přes filtr xx skleněných xxxxxx (4.5) a xxxx xxxxx filtrátu xx xxxx xx 150 xx Erlenmeyerovy xxxxx. Xxxxx xx 7,5 x molekulárního xxxx (3.4), zazátkuje x xxx xxxxx xx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxx s xxxxxx hlinitým
Do xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.1) xx vloží xxxx xxxxx xx xxxxxx vaty a xxxxxx se skleněnou xxxxxxxx. Xxxxxx xx 11,0 x připraveného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.5) x nasype se xx kolony, pokud xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx prodlevou v xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx konec xxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxx xxxxxx
Xx připravenou xxxxxx xx xxxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2). Xxxxxx xxxxxx xx xxxx x xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hlinitým. Xxxxxxxxx se z xxxxxx eluuje pomocí 100 xx xxxxxxxxx (3.1) xxx xxxxxxxxx xxxxxxx 2 – 3 ml za xxxxxx x xxxxx xx jímá xx 250 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx roztok xx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxx xxxxxxx 40xX xxxxxx xx xxxxx v xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx 3 – 4 xx mobilní xxxx (3.8.) x xxxxxxxxxxxxx se převede xx 10 xx xxxxxxx baňky. Xxxxx xx několikrát xxxxxxxxx 1 – 2 xx xxxxxxx fáze x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx baňky. Baňka xx xxxxxx po xxxxxx mobilní fází x xxxxxxxx xx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx 0,45 μx xxxxx (4.7). Tento xxxxxx xx použije xxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX)
5.4.1 Parametry
Následující xxxxxxxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
xxxxxxx xxxx (3.8),
průtoková rychlost: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 317 xx,
xxxxx xxxxxxxx: 20–50 μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx opakovaným nástřikem xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3), xxxxx obsahuje 3,6 μx/xx, až xx xxxxxxxx konstantních výšek xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx roztok (3.9.3) se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx průměrných hodnot xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxx odpovídajícím xxxxxxxxxxxx kalibračních xxxxxxx x μx/xx.
5.4.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx objem xxxxxxxx xxxxxx, jako xxx xxxxxxxxx x určí xx xxxxxxxx hodnota xxxxx (plochy) píků xxxxxxxxxx.
6. Výpočet x xxxxxxxxx xxxxxxxx
X průměrných xxxxxx xxxxx (ploch) xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku x μx/xx xxxxxxxxx x kalibračního xxxxx (5.4.2).
x = (c × 200)/m,
ve kterém xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx v μg/ml,
m = xxxxxxxx navážky xxxxxx x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx výsledků
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx může xxx potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s přídavkem xxxxx využitím xxxxxxxxx x diodovým xxxxx, xxxxx umožňuje xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx roztokem (3.9.3) obsahujícím 6 μx/xx xxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx
X xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx xx předpokládaný xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx v xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při vlnové xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx záznam xxxxxxx xxxxxxxxxxx ve xxxxxxx píku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx rozlišovací xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxx se xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx nesmí xxxxxx xxxxxxx zkoušeného xxxxxx x standardu xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx píku xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx částí spektra x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je dosaženo, xxxxxxxx jsou vykázána xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx nikde xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx analytu.
c) xxx xxxxxx délce xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx spektrum vzestupu, xxxxxxx x sestupu xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx ostatních x xxxx xxxxx xxxxxxx v rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx kritéria xx xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx stejná maxima x xxxxxxxx xx xxxxx sledovaných xxxxxx xxxxxxxx xxxx spektry xxxxxxxxxxx nikde 15 % xxxxxxxxxx spektra xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x těchto xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx provedených xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 15 mg/kg.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx fortifikovaný xxxxxx musí xxx xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx test, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čtyři xxxxxx krmiv xxx xxxxxx x králíky, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx vzorků xxx xxxxxxxx dvěma xxxxxxxxxx. Výsledky jsou xxxxxxx v xxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (mg/kg) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
CVr (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
XX (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Výtěžnost (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx odchylka x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX METHYLBENZOCHÁTU
(2-methyl-7-benzyl-oxy-6-butyl-1,4-dihydro-4-oxychinolin-3-karboxylát)
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Dolní xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxx pak znovu xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx fází xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxx UV xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, xxx HPLC
3.3 Xxxxxxx xxxx XXXX
Xxxx xxxxxxxxx (3.2.) a xxxx (xxx XXXX) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx xx xxxx 0,22 μm filtr (4.5.) a xxxxxxx (xxxx. ultrazvukem po xxxx 10 xxxxx).
3.4 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx σ = 2 %
20 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx xx rozředí x 1000 ml xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Xxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové σ = 10 %
100 xx kyseliny chlorovodíkové (X20 x. 1,18x/xx) xx rozředí x 1000 xx vody.
3.6 Xxxxx XX-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx katex takto: 100 g iontoměniče xx rozmíchá x 500 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3,5) x xx xxxxxxx xxxxxxx xx zahřívá x xxxx xx xxxxx desce. Xx xxxxxxxxxxx xx kyselina xxxxxxxxx. Filtruje se xxxx xxxxxxxx xxxxx xx sníženého xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx vždy 500 xx vody x xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx 250 ml xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Vysušený xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx lahvi.
3.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: čistý xxxxxxxxxxxxxxx (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, 500 μx/xx
Xxxxxx se 50 xx standardní xxxxx (3.7) x xxxxxxxxx 0,1 xx, xxxxxxxx xx xx 100 xx odměrné xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), doplní xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.2 Xxxxxxxx standardní xxxxxx methylbenzochátu 50μx/xx
Xx 50 xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.1), xxxxxx xx xxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxx x promíchá.
3.7.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx série 25 xx xxxxxxxxx xxxxx xx odpipetuje 1, 2, 3, 4 x 5 xx pracovního standardního xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.2). Xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.3) x xxxxxxx. Xxxx roztoky xxxx xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 x 10 μg/ml xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx použitím.
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx třepačka
4.2 Xxxxxxx xxxxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxx (250 x 15 xx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx x kapacitou 200 xx
4.4 XXXX xxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxxxxxxx x měnitelnou vlnovou xxxxxx xxxx detektorem xxxxxxxx polem
4.4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii: 300 mm x 4 mm, C – 18, 10μm xxxx xxxxxx podobná
4.5 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.5 Xxxxxxxxxx filtry 0,45μx
5. Xxxxxx
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx bez xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx x xxx není přítomen xxx methylbenzochát xxx xxxx xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xxxx se xxxxxxx xxxx výtěžnosti xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, fortifkovaného xxxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx. X fortifikaci xx xxxxxx 1,5 xx/xx xx xxxxx do 20 x modelového xxxxxx 600 μl xxxxxxxxxx standardního roztoku (3.7.1), xxxxxxxx xx x po 10 xxxxx xx xxxxxxx x extrakcí (5.2).
Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx, xxxx je xxxxxx, x při xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Erlenmeyerovy xxxxx xx naváží přibližně 20 g xxxxxxxxxxxx xxxxxx x přesností 0,01 x. Xxxxx xx 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxxxxxxx xx třepe (4.1) xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx papírový xxxxx a filtrát xxxxxxx xx extrakci xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx nálevky, obsahující 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx xxxxx 25 xx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx (5.2). Xxxx xx xx xxxxxxx přidá 100 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x třepe xx dobu jedné xxxxxx. Potom xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx) se odpustí xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx. Extrakce vodné xxxx xx xxxxxxx xx xxxxx dalšími 40 xx dávkami xxxxxxxxxxxxxx x tyto xx spojí x xxxxxx extraktem x xxxxx x kulatým xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx odpaří do xxxxx na rotační xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx tlaku x xxxxxxx 40 oC. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x 20–25 xx xxxxxxxxx (3.2), baňka xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx pro chromatografii x xxxxxxxx xxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.3) xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 5 g xxxxxxxxxx katexu x x 50 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5). Xxxx xxxx xx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Přebytečná kyselina xx xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a kolona xx promývá xxxxx xxxxx xxxxxxxx eluát xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xx kolony xx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxx (3.2) x nechá xx xxxxx xx x xxxxxxx ionexu.
5.4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx získaný xxxxxxx (5.3). Xxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 5 až 10 xx methanolu (3.2) a výplach xx xxxx převede xx xxxxxx. Xxxxxxx xx nechá stéci xx k xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 50 ml xxxxxxxxx tak, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx za xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx. Methylbenzochát se xxxxxx x xxxxxx 150xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx se xxxx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx eluát (5.4.2) xx převede xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx baňka xx xxxxxxxxxx 5 xx 10 xx xxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxx xx xxxxx do xxxxxx nálevky. Xxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 300 xx roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 130 ml xxxxxxxxxxxxxx (3.1). Xxxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx (xxxxxxxxxxxxxxxx) xxxxxx xx odpustí xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Extrakce vodné xxxx xx opakuje xx xxxxx xxxxxxx 70 xx dávkami xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xx smísí x xxxxxx extraktem x baňce x xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxx v rotační xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx tlaku x xxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx v xxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) a xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx 10 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxx dnem xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx 1 až 2 ml xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xx odměrné xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxxxxxx množství xx xxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Tento xxxxxx xx použije xxx analýzu HPLC (5.6).
5.6 Xxxxxxx xxxxxx XXXX
5.6.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx být xxxxxxx xxxx parametry xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
- xxxxxx pro xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
- xxxxxxx fáze: směs xxxxxxxxx x xxxx,
- xxxxxxxxx rychlost: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 265 xx,
- xxxxx xxxxxxxx: 20 xx 50μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx píků x xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx každý xxxxxxxxxx xxxxxx (3.7.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx průměrných xxxxxx výšek xxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μg/ml.
5.6.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx vzorku (5.5.) x xxxxxxxx stejný xxxxx, jaký xxx xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxxxxx výšky (xxxxxx) x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Z xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx methylbenzochátu x roztoku vzorku xx určí koncentrace x xxxxxxx vzorku x μg/ml podle xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2.).
Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x (xx/xx) xx vzorku se xxxxxxx podle tohoto xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx xxxxxx xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx navážky xxxxxx x xxxxxxx.
7. Ověření xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxxxx opakovaným xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx detektoru x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x přídavkem
Extrakt xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx xxxxxxxxx methylbenzochátu xx být podobné xxxx je předpokládaný xxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx vzorku.
Mělo by xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxx methylbenzochátu x xxxxxxx xxx xx přidané xxxxxxxx, xxx xx množství xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx x polovině xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xx přibližně 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx délce maximální xxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx xxxx být xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx píku xx chromatogramu xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx detektor x xxxxxxxx polem xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 nm;
b) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 a 350 xx xx nesmí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx částí xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx stejná maxima x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx nepřesahuje 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) xxx xxxxxx xxxxx mezi 220 x 350 nm xx xxxxx spektrum xxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxx píku zkoušeného xxxxxx lišit od xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxx odchylka mezi xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx ve vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx není dosaženo xxxxxxxxx x těchto xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx prokázána.
7.2 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení provedených xx xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx methylbenzochátu xxxx 4 a 20 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx vzorek xxxx xxx xxxxxxx 90 %.
8. Výsledky xxxxxxxxx xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx byly provedeny xxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx
|
Xxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
Xxxxxxxxxx |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Xx (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
XX (mg/kg) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
CVR |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Výtěžnost (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
CVr = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx