Dvanáctá xxxxxxxx Xxxxxx 93/117/XX
xx dne 17. xxxxxxxx 1993,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx dne 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx zavádějí xxxxxx xxxxxx xxxxxx x analýzy Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx nařízením (XXX) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, že se xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxx mají potvrdit xxxxxxxxxx podmínek předepsaných xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x kvalitě x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xx použití xxxxx Společenství xxx xxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xx xxxxx stanovit xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx robenidinu x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou v xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX SMĚRNICI:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx provedených x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx a methylbenzochátu x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x příloze xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxx v účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx směrnicí nejpozději xx 30. xxxxxxxxx 1994. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx za takový xxxxx učiněn při xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx xxxxxxx státy.
Článek 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v platnost xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v Úředním xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 17. xxxxxxxx 1993.
Xx Xxxxxx
Xxxx Steichen
člen Xxxxxx
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 362, 31.12.1985, x. 8.
PŘÍLOHA
1. STANOVENÍ XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx]xxxxxxxx hydrochlorid
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx část se xxxxxxxx na koloně x oxidem hlinitým. Xxxxxxxxx xx eluuje x kolony xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se x xx xxxxxx xxxxx xx upraví xxxxxx xxxxxxx xxxx. Obsah xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xx xxxxxxxx xxxx pomocí XX detektoru.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx 4,0 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (P20c, 1,18 x/xx), doplní xx xx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1.) a xxxxxxxx. Xxxxx roztok xxxx xxx připraven těsně xxxx použitím.
3.3 Acetonitril, xxx XXXX
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3X, 8 xx 12 mesh (1,6–2,5 mm xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx hlinitokřemičitanu, xxxxxx xxxx 0,3 xx).
3.5 Xxxx xxxxxxx: xxxxxx, xxxxxx aktivity X xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
100 x oxidu hlinitého xx naváží do xxxxxx nádoby x xxxxxxx xx 2 xx xxxx. Xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 20 xxxxx. Xxxxxxxx se x xxxxx zazátkované xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx fosforečnan xxxxxxxx, xxxxxx x = 0,025 xxx/x
3,4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx ve xxxx (pro XXXX) x 1000 ml xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 0, 025 mol/l
3,55 x xxxxxxxxx (nebo 4,45 x xxxxxxxxx, xxxx 8,95 x xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxx fosforečnanu xxxxxxx xx xxxxxxxx ve xxxx (xxx HPLC) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xx značku x xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxx xxxx HPLC
Smíchá xx:
650 xx acetonitrilu (3.3.),
250 xx xxxx (xxx XXXX),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx fosforečnanu xxxxxxxxxx (3.6.),
50 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx se xxxxxxx 0,22 μx (4.6.) x xxxxxx xx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx).
3.9 Standardní xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx: 1.3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx] xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, X 758.
3.9.1 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 300 μg/ml:
Naváží xx 30 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx (3.9.) x xxxxxxxxx 0,1 xx. Xxxxxxxx se x xxxxxxx methanolu (3.2.) ve 100 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se. Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxx.
3.9.2 Xxxxxxxxx, pracovní standardní xxxxxx: 12 μx/xx
Xxxxxx xxx 10,0 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.1) xx 250 xx odměrné baňky, xxxxxx xx značku xxxxxxx fází (3.8) x promíchá. Xxxxx xx obalí xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx x xxxxx.
3.9.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx buněk xx odměří 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.2.). Xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8.) x xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 x 6.0 μx/xx robenidinu. Xxxxxxx xxxx roztoky xx xxxxxxxxxx těsně xxxx použitím.
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx x tmavého xxxx, xxxxxxxx uzavíracím xxxxxxxx x xxxxxxxx xx přibližně 150 xx. Xxxxxxx xxxxxx 10 – 15 xx, délka 250 xx.
4.2 Xxxxx xxxxxxxx
4.3 Xxxxxxx odparka
4.4 Xxxxxxxx xx xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx detektorem x měnitelnou vlnovou xxxxxx, anebo detektorem x xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx v xxxxx 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, X18, 10 μx náplní nebo xxxxxxx.
4.5 Xxxxx ze xxxxxxxxxx vláken (Xxxxxxx XX/X xxxx podobný)
4.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.7 Membránové xxxxxx 0,45 μm
5. Xxxxxx
Xxxx.: Xxxxxxxxx je xxxxxxx xx xxxxxx. Proto xxxx být xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx z xxxxxxx skla.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx bez xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx ani xxxx xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Je xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1.1.), xx xxxxxxx bylo xxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxx 60 xx/xx xx do 250 xx Erlenmeyerovy xxxxx xxxxxxx 3 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1.). Xxxxxx se xxxxxx xxx na xxxxx 0,5 ml x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx a xx deseti minutách xx může začít x xxxxxxxx (5.2.).
Xxxx.: Xxx účel xxxx xxxxxx by mělo xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx jako xx xxxxxxxx vzorek x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Do 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx naváží xxxxxxxxx 15 g xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 0,01 x, xxxxx xx 100 ml xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx x hodinu xxxxx xx třepačce (4.2). Xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx vláken (4.5) a xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx xx 150 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky. Xxxxx se 7,5 x xxxxxxxxxxxxx xxxx (3.4), zazátkuje a xxx minut xx xxxxx. Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx. Tento xxxxxx xx xxxxxxx k xxxxxxx (5.3).
5.3 Čištění
5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx
Xx spodního xxxxx skleněné xxxxxx (4.1) se xxxxx xxxx zátka ze xxxxxx vaty x xxxxxx xx skleněnou xxxxxxxx. Naváží xx 11,0 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.5) x nasype xx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx s minimální xxxxxxx prodlevou v xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx setřese xxxxxx poklepem na xxxxx xxxxx xxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxx vzorku
Na xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2). Xxxxxx xxxxxx se xxxx x stěnu xxxxxx a extrakt xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx oxidem xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx x xxxxxx eluuje xxxxxx 100 xx xxxxxxxxx (3.1) při rychlosti xxxxxxx 2 – 3 xx xx xxxxxx x xxxxx xx xxxx xx 250 ml baňky x kulatým xxxx. Xxxxxxxxxxx roztok xx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x při xxxxxxx 40xX xxxxxx xx xxxxx v rotační xxxxxxx (4.3). Odparek xx xxxxx xxxxxxxx xx 3 – 4 xx mobilní xxxx (3.8.) a xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xx 10 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx vypláchne 1 – 2 xx mobilní fáze x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx fází x promíchá xx. Xxxxxxxxx část xxxxxxxxx xxxx 0,45 μx xxxxx (4.7). Xxxxx xxxxxx se použije xxx vlastní XXXX xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (HPLC)
5.4.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxx xxxxx povedou ke xxxxxxx výsledkům:
Kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
xxxxxxx xxxx (3.8),
xxxxxxxxx rychlost: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 317 xx,
xxxxx xxxxxxxx: 20–50 μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx systému xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx nástřikem xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3), xxxxx xxxxxxxx 3,6 μx/xx, xx do xxxxxxxx konstantních výšek xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.9.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx se výšky (xxxxxx) píků pro xxxxxx koncentraci. Xxxxxxxxxx xxxxxx se získá xxxxxxxxx průměrných hodnot xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μx/xx.
5.4.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxx při xxxxxxxxx a určí xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (ploch) xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx koncentrace xxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μx/xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.4.2).
x = (c × 200)/x,
xx xxxxxx xx
x = koncentrace xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μg/ml,
m = xxxxxxxx navážky xxxxxx v gramech.
7. Xxxxxxx výsledků
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx využitím xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx extraktu xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx xxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxx
X xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx vhodného množství xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx robenidinu xx xxx xxxxxxx xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx v extraktu xxxxxx.
Xxxx by xx xxxxxx pouze xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx extraktu. Xxxx píku x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx šíře.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx pole
Výsledky jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx následujících xxxxxxxx:
x) při xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx absorpce xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx být xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx ve xxxxxxx píku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx detekčního xxxxxxx. Xxx detektor s xxxxxxxx polem se xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx zkoušeného xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx od xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je dosaženo, xxxxxxxx jsou vykázána xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx odchylka xxxx dvěma xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 a 350 xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx částí xxxxxxx x rozsahu 10 až 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, jestliže jsou xxxxxxxx stejná maxima x jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi spektry xxxxxxxxxxx nikde 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx xxxx dosaženo xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 15 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx kruhového xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kruhový test, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čtyři xxxxxx krmiv xxx xxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx dvěma xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (xx/xx) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
XXx (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
XX (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Sr = standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx opakovatelnosti
SR = xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
(2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
1. Účel x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx slouží x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx ze xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxx pak xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx methylbenzochátu xx xxxxxxx xx xxxxxxxx fází vysoce xxxxxxx kapalinovou chromatografií (XXXX) pomocí UV xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, pro XXXX
3.3 Xxxxxxx xxxx HPLC
Směs xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (xxx HPLC) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx xx xxxx 0,22 μx xxxxx (4.5.) x odplyní (xxxx. xxxxxxxxxxx po xxxx 10 xxxxx).
3.4 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx σ = 2 %
20 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx x 1000 ml xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx σ = 10 %
100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (X20 x. 1,18x/xx) xx xxxxxxx x 1000 xx xxxx.
3.6 Xxxxx XX-120 (Na), 100 – 200 xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx katex takto: 100 x xxxxxxxxxxx xx rozmíchá x 500 xx roztoku xxxxxxxx chlorovodíkové (3,5) x za xxxxxxx xxxxxxx se zahřívá x xxxx xx xxxxx xxxxx. Po xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx vždy 500 xx xxxx x xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx 250 ml xxxxxxxxx x xxxxxx prosáváním xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx lahvi.
3.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx methylbenzochát (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Základní standardní xxxxxx benzochátu, 500 μx/xx
Xxxxxx xx 50 xx xxxxxxxxxx xxxxx (3.7) x přesností 0,1 xx, xxxxxxxx xx ve 100 xx xxxxxxx xxxxx x roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), doplní xx xxxxxx a xxxxxxxx.
3.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx 50μg/ml
Do 50 xx odměrné xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 xx základního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.1), xxxxxx se xxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxx a xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxx 25 xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 1, 2, 3, 4 a 5 xx pracovního standardního xxxxxxx methylbenzochátu (3.7.2). Xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.3) x zamíchá. Xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 a 10 μg/ml xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx připravovat xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx třepačka
4.2 Xxxxxxx xxxxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxx (250 x 15 xx) xxxxxxxx uzavíracím xxxxxxxxx x nádržkou x kapacitou 200 xx
4.4 XXXX xxxxxxxx xxxxxxxx UV xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
4.4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 mm x 4 xx, X – 18, 10μm xxxx kolona xxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.5 Membránové xxxxxx 0,45μx
5. Postup
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx methylbenzochátu xx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx x xxx není xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx ani xxxx xxxxxx látky.
5.1.2 Xxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx krmiva, fortifkovaného xxxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx ve xxxxxx. X xxxxxxxxxxx na xxxxxx 1,5 xx/xx xx xxxxx xx 20 x modelového xxxxxx 600 μl xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.7.1), xxxxxxxx se x xx 10 xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Pozn.: Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx, jako je xxxxxx, x při xxxx xxxxxxx by xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx xxxxxx přibližně 20 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxx 0,01 g. Xxxxx xx 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx methansulfonové (3.4) a xxxxxxxxxx xx xxxxx (4.1) xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx papírový xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xx extrakci xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Extrakce xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx nálevky, obsahující 100 xx roztoku xxxxxxxx chlorovodíkové (3.5) xx xxxxx 25 xx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx (5.2). Xxxx se xx xxxxxxx xxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xx dobu xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx separovat x spodní xxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx) xx xxxxxxx xx 500 xx xxxxx x kulatým xxxx. Extrakce xxxxx xxxx se opakuje xx xxxxx dalšími 40 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xx xxxxx x xxxxxx extraktem x xxxxx x xxxxxxx xxxx. Extrakt xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xx rotační xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x 20–25 xx xxxxxxxxx (3.2), baňka xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxx chromatografii x xxxxxxxx xxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx výměnou xxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
Xx dolního xxxxx xxxxxxxx kolony (4.3) xx vloží xxxxxx xx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxx x 5 g xxxxxxxxxx xxxxxx x x 50 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.5). Xxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx nad xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx promývá xxxxx xxxxx xxxxxxxx eluát xxxx neutrální na xxxxxxxxx xxxxx. Potom xx xx kolony xx nalije 50 xx xxxxxxxxx (3.2) x nechá xx xxxxx až x xxxxxxx xxxxxx.
5.4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx kolonu xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (5.3). Xxxxx x kulatým xxxx xx vypláchne xxxxx xxxxxxx 5 až 10 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx xx xxxx převede xx xxxxxx. Xxxxxxx xx nechá stéci xx x povrchu xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx. Methylbenzochát xx xxxxxx z xxxxxx 150xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx xx jímá xx 250 ml Xxxxxxxxxxxxx baňky.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx eluát (5.4.2) xx převede xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx nálevky. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx 5 xx 10 xx methanolu (3.2) a xxxxxxx xx přidá xx xxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx do xxxxxx xxxxxxx xxxxx 300 xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 130 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1). Xxxxx xx xx dobu xxxxx xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Nižší (xxxxxxxxxxxxxxxx) xxxxxx xx xxxxxxx xx 500 xx xxxxx s kulatým xxxx. Xxxxxxxx vodné xxxx se xxxxxxx xx dvěma dalšími 70 xx dávkami xxxxxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxxx se smísí x xxxxxx extraktem x xxxxx s xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx odpaří xx xxxxx x rotační xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx v baňce xx rozpustí v xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx roztok se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx do 10 xx odměrné xxxxx. Xxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx dvěma xxxxxxx xxxxxxx 1 xx 2 ml xxxxxxxxx x opět xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxxxxxx množství se xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Tento xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXXX (5.6).
5.6 Xxxxxxx pomocí XXXX
5.6.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
- kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
- xxxxxxx fáze: xxxx xxxxxxxxx x vody,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- vlnová délka xxxxxxxxx: 265 xx,
- xxxxx nástřiku: 20 xx 50μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx kontroluje xxxxxxxxxx nástřikem xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výšek xxxx xxxxx xxxx x retenčních časů.
5.6.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.7.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a změří xxxxx (plochy) xxxx xxx každou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx křivka xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx nebo xxxxx xxxx proti xxxxxxxxxxxx kalibračních roztoků x μx/xx.
5.6.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx vzorku (5.5.) x použitím stejný xxxxx, xxxx byl xxxxxx xxx kalibrační xxxxxxx x určí xxxxxxxx hodnota xxxxx (xxxxxx) x píků xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
X xxxxxxxx xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxx methylbenzochátu x xxxxxxx vzorku xx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx xxxxx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2.).
Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx w (xx/xx) xx xxxxxx se xxxxxxx podle xxxxxx xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx kterém je
c = koncentrace methylbenzochátu x roztoku xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx xxxxxxx vzorku x xxxxxxx.
7. Ověření xxxxxxxxxx výsledků
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x přídavkem xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, který xxxxxxxx porovnání spektra xxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxxxx roztokem (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x přídavkem
Extrakt xxxxxx xx fortifikuje přidáním xxxxxxxx množství pracovního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx vzorku.
Mělo xx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x ohledem xxx xx přidané xxxxxxxx, xxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxx. Šíře xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx diodového xxxx
Xxxxxxxx xxxx vyhodnocovány xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při xxxxxx délce maximální xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx spektra xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx chromatogramu xxxxxx x xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) při xxxxxx délce xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx spektra xxxxxxxxxx xxxxxx x standardu xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx chromatogramu xxxxx xx ostatních částí xxxxxxx x rozsahu 10 až 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx maxima x xxxxxxxx nikde xxxxxxxx mezi xxxxx xxxxxxx nepřesahuje 15 % xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx;
x) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 nm xx nesmí xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxx píku xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx v xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx kritéria xx dosaženo, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx odchylka mezi xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx analytu xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx mezi 4 x 20 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx vzorek musí xxx xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X deseti xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx byly xxxxxxxxx xxx analýzy.
Výsledky
|
Modelové xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (mg/kg) |
Nezjištěno |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Sr (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
SR (xx/xx) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
XXX |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx koeficient xxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx