Dvanáctá xxxxxxxx Xxxxxx 93/117/XX
xx xxx 17. xxxxxxxx 1993,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx směrnici Xxxx 70/373/XXX ze xxx 20. července 1970, xxxxxx se zavádějí xxxxxx xxxxxx xxxxxx x analýzy Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx nařízením (XXX) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxx, xx směrnice 70/373/EHS xxxxxxx, že xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx potvrdit xxxxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a správními xxxxxxxx o xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xx použití xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx kontrolu xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx x methylbenzoátu v xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, že xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxx úředních kontrol xxxxxxxxxx xx obsahu xxxxxxxxxx a methylbenzochátu x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x příloze xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. xxxxxxxxx 1994. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx přijatá xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx na tuto xxxxxxxx nebo musí xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx si xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx 3
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství.
V Xxxxxxx xxx 17. xxxxxxxx 1993.
Za Xxxxxx
Xxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. věst. X 362, 31.12.1985, x. 8.
XXXXXXX
1. XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx]xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x oblast xxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 5 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxx a xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx eluuje x kolony xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se x xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx fáze. Obsah xxxxxxxxxx se stanoví xxxxxx xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (HPLC) xx xxxxxxxx xxxx pomocí XX xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Okyselený xxxxxxxx
Xx 500 ml xxxxxxx xxxxx se xxxxx 4,0 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (P20c, 1,18 x/xx), doplní se xx xxxxxx methanolem (3.1.) a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxx, xxx XXXX
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3A, 8 xx 12 xxxx (1,6–2,5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 0,3 mm).
3.5 Xxxx xxxxxxx: xxxxxx, xxxxxx aktivity X xxx xxxxxxxxx chromatografii
100 x xxxxx hlinitého xx naváží xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx 2 xx xxxx. Xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 20 xxxxx. Skladuje xx x dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Dihydrogen xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx x = 0,025 xxx/x
3,4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx HPLC) x 1000 ml xxxxxxx baňce, doplní xx xx značku x promíchá.
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 0, 025 xxx/x
3,55 g xxxxxxxxx (nebo 4,45 x xxxxxxxxx, xxxx 8,95 g dodekahydrátu) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx sodného xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx HPLC) x 1000 ml xxxxxxx baňce. Xxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.8 Mobilní xxxx XXXX
Xxxxxx xx:
650 xx acetonitrilu (3.3.),
250 xx xxxx (pro XXXX),
50 ml xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx draselného (3.6.),
50 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx se filtrem 0,22 μx (4.6.) x xxxxxx xx xxxxxxxx (xxxx. ultrazvukem xx dobu 10 xxxxx).
3.9 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx: 1.3-bis [(4-chlorbenziliden) xxxxx] xxxxxxxx hydrochlorid, X 758.
3.9.1 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx standardní xxxxxx: 300 μg/ml:
Naváží xx 30 xx standardního xxxxx robenidinu (3.9.) x přesností 0,1 xx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxxx (3.2.) xx 100 xx xxxxxxx baňce, xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx folií x xxxxx x xxxxx.
3.9.2 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 12 μx/xx
Xxxxxx xxx 10,0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1) do 250 xx odměrné xxxxx, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8) x xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx aluminiovou xxxxx a uloží x xxxxx.
3.9.3 Kalibrační xxxxxxx
Xx xxxxxxx 50 xx odměrných buněk xx odměří 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.2.). Xxxxxx xx xx značku xxxxxxx xxxx (3.8.) x xxxxxxxx. Xxxx roztoky xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 x 6.0 μg/ml robenidinu. Xxxxxxx xxxx roztoky xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Skleněná xxxxxx
Xxxxxxxx x tmavého xxxx, xxxxxxxx uzavíracím xxxxxxxx a nádržkou xx xxxxxxxxx 150 xx. Xxxxxxx xxxxxx 10 – 15 xx, délka 250 xx.
4.2 Xxxxx třepačka
4.3 Xxxxxxx xxxxxxx
4.4 Zařízení xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx v pásmu 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, X18, 10 μx xxxxxx xxxx xxxxxxx.
4.5 Xxxxx ze xxxxxxxxxx vláken (Xxxxxxx XX/X nebo podobný)
4.6 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.7 Xxxxxxxxxx filtry 0,45 μm
5. Postup
Pozn.: Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xx světlo. Proto xxxx být při xxxxx úkonech xxxxxxx xxxx nádobí x xxxxxxx xxxx.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx bez xxxxxxxxxxx robenidinu a xxxxxx, xxx neobsahuje xxxxxxxxx ani xxxx xxxxxx látky.
5.1.2 Xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx modelového xxxxxx (5.1.1.), do xxxxxxx xxxx přidáno xxxxxx množství xxxxxxxxxx, xxxx je xx xxxxxx. X dosažení xxxxxx 60 xx/xx xx xx 250 xx Erlenmeyerovy xxxxx xxxxxxx 3 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1.). Roztok xx xxxxxx xxx na xxxxx 0,5 ml x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx 15 x xxxxxxxxxx krmiva, xxxxxxxx xx x xx xxxxxx minutách xx může začít x xxxxxxxx (5.2.).
Xxxx.: Xxx xxxx této xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x nemělo by xxxxxxxxx stanovitelné xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Do 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx x přesností 0,01 g, přidá xx 100 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx na xxxxxxxx (4.2). Xxxxxx se xxxxxxxxxxx přes filtr xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5) x xxxx xxxxx filtrátu se xxxx do 150 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se 7,5 x xxxxxxxxxxxxx síta (3.4), xxxxxxxxx x xxx xxxxx se xxxxx. Potom se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Tento xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Xxxxxxxx kolony x xxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx kolony (4.1) xx vloží xxxx zátka ze xxxxxx xxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx 11,0 x připraveného xxxxxxxxxx hlinitého (3.5) x xxxxxx xx xx xxxxxx, pokud xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxx prodlevou x xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx se v xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx poklepem xx xxxxx xxxxx kolony.
5.3.2 Xxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx napipetuje 5,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku (5.2). Xxxxxx xxxxxx se xxxx x stěnu xxxxxx x extrakt xx nechá xxxxx xxxxxxxxxx oxidem xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx z xxxxxx xxxxxx xxxxxx 100 ml methanolu (3.1) xxx rychlosti xxxxxxx 2 – 3 ml xx xxxxxx a xxxxx xx xxxx do 250 xx baňky x xxxxxxx dnem. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxx xxxxxxx 40xX odpaří xx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Odparek xx znovu xxxxxxxx xx 3 – 4 xx mobilní xxxx (3.8.) a xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xx 10 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx několikrát vypláchne 1 – 2 xx mobilní xxxx x tyto xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx baňky. Baňka xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx fází x xxxxxxxx se. Xxxxxxxxx část xxxxxxxxx xxxx 0,45 μx xxxxx (4.7). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxx vlastní HPLC xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX)
5.4.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxx xxxxx povedou xx xxxxxxx výsledkům:
Kolona pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
xxxxxxx xxxx (3.8),
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx délka xxxxxxxxx: 317 nm,
objem xxxxxxxx: 20–50 μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx opakovaným nástřikem xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.3), xxxxx xxxxxxxx 3,6 μx/xx, xx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx a xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Kalibrační xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.9.3) xx provede xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xx výšky (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx koncentraci. Kalibrační xxxxxx xx získá xxxxxxxxx průměrných xxxxxx xxxxx xxxx ploch xxxx xxxxx odpovídajícím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μx/xx.
5.4.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx objem xxxxxxxx xxxxxx, jako při xxxxxxxxx x určí xx průměrná xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx
X průměrných xxxxxx xxxxx (ploch) xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx odečtením x kalibračního xxxxx (5.4.2).
x = (x × 200)/x,
xx kterém xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v roztoku xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx navážky xxxxxx x gramech.
7. Xxxxxxx výsledků
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx analýzy xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxx využitím detektoru x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožňuje porovnání xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx robenidinu.
7.1.1 Opakované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx
X xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx být xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x extraktu xxxxxx.
Xxxx by se xxxxxx xxxxx výška xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx robenidinu x xxxxxx robenidinu x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx x xxxxxxxx jeho xxxxxxxxx xxxxx musí být xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Detektor xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při vlnové xxxxx maximální absorpce xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx systému. Xxx detektor s xxxxxxxx xxxxx se xxxxx plus/minus 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx mezi 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx od xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tohoto xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx vykázána xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx analytu.
c) xxx vlnové délce xxxx 220 a 350 xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx a sestupu xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x této xxxxx xxxxxxx v rozsahu 10 až 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx stejná xxxxxx x jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxxxx nikde 15 % xxxxxxxxxx spektra xx vrcholu píku.
Jestliže xxxx xxxxxxxx některého x těchto kritérií, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. nejvyššího xxxxxxxx xxx obsahu xxxxxxxxxx xxx 15 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx testu
Společenství xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xx kterém dvanáct xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čtyři xxxxxx xxxxx pro xxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx vzorků xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx krmivo |
Pelety |
Sypké krmivo |
Pelety |
|
|
Průměr (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (mg/kg) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
CVr (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
SR (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Výtěžnost (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Xx = xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx opakovatelnosti
SR = xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
(2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx k xxxxxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx. Dolní mez xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx methanolového xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxxx dichlormethanem, xxxxxxxxx chromatografií, x xxxxxxxx xxx znovu xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx methylbenzochátu xx xxxxxxx xx xxxxxxxx fází xxxxxx xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) pomocí XX xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, pro HPLC
3.3 Xxxxxxx xxxx HPLC
Směs xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (xxx HPLC) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx xx xxxx 0,22 μx xxxxx (4.5.) x odplyní (xxxx. xxxxxxxxxxx po xxxx 10 minut).
3.4 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx σ = 2 %
20 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x 1000 xx xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx σ = 10 %
100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (X20 x. 1,18x/xx) xx xxxxxxx x 1000 xx vody.
3.6 Xxxxx CG-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx takto: 100 x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x 500 ml xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (3,5) x xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Filtruje se xxxx papírový filtr xx xxxxxxxxx tlaku. Xxxxx xx propláchne xxxxxxx xxxx 500 xx xxxx x xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Xxxxx xx propláchne xxxxxxx 250 ml xxxxxxxxx x vysuší prosáváním xxxxxxx xxxx filtrační xxxxx. Vysušený ionex xx uskladňuje x xxxxxxxxxxx xxxxx.
3.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: čistý methylbenzochát (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx benzochátu, 500 μx/xx
Xxxxxx se 50 xx xxxxxxxxxx xxxxx (3.7) s xxxxxxxxx 0,1 xx, rozpustí xx xx 100 xx xxxxxxx xxxxx x roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), doplní xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.2 Pracovní xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx 50μg/ml
Do 50 ml xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx methylbenzochátu (3.7.1), xxxxxx xx xxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxx 25 xx xxxxxxxxx xxxxx se odpipetuje 1, 2, 3, 4 a 5 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.2). Xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx fází (3.3) a xxxxxxx. Xxxx roztoky xxxx xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 x 10 μx/xx methylbenzochátu. Xxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.2 Rotační xxxxxxx
4.3 Skleněná kolona (250 x 15 xx) xxxxxxxx uzavíracím xxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx 200 xx
4.4 XXXX xxxxxxxx xxxxxxxx UV xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx vlnovou xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
4.4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, X – 18, 10μm xxxx xxxxxx podobná
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45μx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx v xxx není přítomen xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxx rušivé xxxxx.
5.1.2 Xxxx xx xxxxxxx xxxx výtěžnosti analýzou xxxxxxxxxx xxxxxx, fortifkovaného xxxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx xx vzorku. X fortifikaci xx xxxxxx 1,5 xx/xx xx přidá xx 20 g xxxxxxxxxx xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.7.1), xxxxxxxx xx x xx 10 xxxxx se započne x xxxxxxxx (5.2).
Xxxx.: Xxxxxxxx krmivo xxx xxxxx účel by xxxx xxx podobného xxxx, xxxx je xxxxxx, a xxx xxxx analýze by xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 20 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxx 0,01 x. Xxxxx xx 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxxxxxxx xx xxxxx (4.1) xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx a filtrát xxxxxxx xx extrakci xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx nálevky, xxxxxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx přidá 25 xx filtrátu, xxxxx xxx xxxxxx postupem xxxxxxxx x xxxx (5.2). Dále se xx xxxxxxx xxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx separovat x xxxxxx vrstva (xxxxxxxxxxxxxx) xx xxxxxxx xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx. Extrakce xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx dvěma dalšími 40 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xx spojí s xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx s xxxxxxx xxxx. Extrakt xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx tlaku a xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx se rozpustí x 20–25 xx xxxxxxxxx (3.2), baňka xx zazátkuje x xxxx extrakt xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx výměnou (5.4).
5.4 Chromatografie xxxxxxx xxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
Xx dolního xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.3) xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 5 x xxxxxxxxxx xxxxxx a x 50 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.5). Xxxx xxxx xx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Přebytečná kyselina xx odpustí xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxx vodou xxxxx xxxxxxxx eluát xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx papír. Xxxxx xx xx kolony xx nalije 50 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xx xxxxx až x xxxxxxx ionexu.
5.4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (5.3). Baňka x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx dvěma xxxxxxx 5 až 10 ml xxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xx nechá stéci xx x xxxxxxx xxxxxx. Kolona xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxx, aby xxxxxx nepřesahoval 5 xx xx xxxxxx. Xxxxxxxx kapalina xx xxxxxxxx. Methylbenzochát se xxxxxx z kolony 150xx roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx xx jímá xx 250 ml Xxxxxxxxxxxxx baňky.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx (5.4.2) xx převede do xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx baňka xx xxxxxxxxxx 5 xx 10 xx xxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxx xx přidá xx xxxxxx xxxxxxx. Dále xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 300 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 130 ml xxxxxxxxxxxxxx (3.1). Třepe xx xx dobu xxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx (dichlormethanová) xxxxxx se xxxxxxx xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx 70 ml dávkami xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xx smísí x prvním xxxxxxxxx x xxxxx s xxxxxxx dnem.
Extrakt dichlormethanu xx odpaří do xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx tlaku x xxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx x baňce xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx 5 ml xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx 10 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxx dnem xx xxxxxxxxx xxxxx dalšími xxxxxxx 1 xx 2 xx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxx HPLC (5.6).
5.6 Xxxxxxx xxxxxx XXXX
5.6.1 Parametry
Následující xxxxxxxx xxxx xxxxxxx indikativně. Xxxxx být použity xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
- kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
- xxxxxxx xxxx: xxxx xxxxxxxxx x vody,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- xxxxxx délka xxxxxxxxx: 265 xx,
- xxxxx xxxxxxxx: 20 xx 50μl.
Stabilita xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx kontroluje xxxxxxxxxx nástřikem xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, xx xx xxxxxxxx konstantních výšek xxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx roztok (3.7.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μx/xx.
5.6.3 Roztok xxxxxx
Xxxxxxxxx se nastříkne xxxxxxx vzorku (5.5.) x použitím xxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxx x určí xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
X xxxxxxxx xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx xx určí xxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μx/xx podle xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2.).
Obsah xxxxxxxxxxxxxxxx w (mg/kg) xx vzorku xx xxxxxxx podle tohoto xxxxxx
x =(c x 40)/x,
xx xxxxxx je
c = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx xxxxxxx vzorku x xxxxxxx.
7. Ověření xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x přídavkem anebo xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx porovnání xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μg/ml xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx stanovením x xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xx fortifikuje xxxxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.7.2.). Xxxxxxxx xxxxxxxxx methylbenzochátu xx xxx podobné xxxx xx předpokládaný xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xxxxx xxxxx ke xxxxxxx xxxx methylbenzochátu x xxxxxxx jak xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx ve zředěném xxxxxxxx. Xxxx píku x xxxxxxxx maximální xxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx diodového xxxx
Xxxxxxxx xxxx vyhodnocovány podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx xxxxx maximální xxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx stejný x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx schopností detekčního xxxxxxx. Xxx detektor x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx xxxxxx délce mezi 220 a 350 xx se nesmí xxxxxx xxxxxxx zkoušeného xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx maxima x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx dvěma xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx;
x) xxx vlnové xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx spektrum xxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx lišit xx xxxxxxxxx v této xxxxx spektra x xxxxxxx 10 xx 100 % relativní xxxxxxxxxx. Tohoto xxxxxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x jestliže xx všech sledovaných xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx xxxx dosaženo xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx stanovení provedených xx xxxxxxx vzorku xxxxx přesáhnout 10 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx mezi 4 a 20 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxx vzorek xxxx xxx xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X deseti laboratořích xxxx xxxxxxxxxxx pět xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx byly xxxxxxxxx xxx analýzy.
Výsledky
|
Modelové xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
Xxxxxxxxxx |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Xx (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
SR (xx/xx) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
XXX |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx opakovatelnost
SR = xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx