Dvanáctá xxxxxxxx Xxxxxx 93/117/XX
xx dne 17. xxxxxxxx 1993,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x ohledem na Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx odběru vzorků x xxxxxxx Společenství xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (XXX) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx potvrdit xxxxxxxxxx podmínek předepsaných xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxx krmiv, xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xx nutno xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx dodržování xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx robenidinu x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, že při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx se obsahu xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx x krmivech se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. xxxxxxxxx 1994. Neprodleně x xxxx uvědomí Komisi.
Tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx za takový xxxxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
V Bruselu dne 17. xxxxxxxx 1993.
Xx Xxxxxx
Xxxx Xxxxxxxx
xxxx Komise
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 362, 31.12.1985, x. 8.
PŘÍLOHA
1. XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx]xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxx slouží xx stanovení obsahu xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxx stanovitelnosti xx 5 xx/xx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx okyseleným xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx a jeho xxxxxxxxx část xx xxxxxxxx xx xxxxxx x oxidem xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx eluuje x xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx a xx vhodný xxxxx xx upraví pomocí xxxxxxx xxxx. Obsah xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC) xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Okyselený xxxxxxxx
Xx 500 ml xxxxxxx xxxxx xx xxxxx 4,0 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (X20x, 1,18 x/xx), xxxxxx xx xx značku xxxxxxxxxx (3.1.) x xxxxxxxx. Xxxxx roztok xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxx, xxx XXXX
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3A, 8 xx 12 mesh (1,6–2,5 mm xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 0,3 xx).
3.5 Xxxx hlinitý: kyselý, xxxxxx xxxxxxxx X xxx xxxxxxxxx chromatografii
100 x xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xx 2 xx xxxx. Xxxxxxxxx xx a xxxxxxxxxx xx přibližně 20 xxxxx. Skladuje xx x xxxxx zazátkované xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, roztok c = 0,025 mol/l
3,4 x dihydrogen xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx XXXX) x 1000 ml xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 0, 025 xxx/x
3,55 x xxxxxxxxx (xxxx 4,45 x xxxxxxxxx, xxxx 8,95 x dodekahydrátu) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx sodného xx xxxxxxxx xx xxxx (pro HPLC) x 1000 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxx xxxx XXXX
Xxxxxx se:
650 xx xxxxxxxxxxxx (3.3.),
250 xx vody (xxx XXXX),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.6.),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxx fosforečnanu xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 0,22 μx (4.6.) x xxxxxx xx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx).
3.9 Standardní xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx: 1.3-xxx [(4-chlorbenziliden) xxxxx] guanidin xxxxxxxxxxxx, X 758.
3.9.1 Robenidin, xxxxxxxx standardní xxxxxx: 300 μx/xx:
Xxxxxx se 30 mg standardního xxxxx xxxxxxxxxx (3.9.) x přesností 0,1 xx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxxx (3.2.) xx 100 xx xxxxxxx baňce, xxxxxx se xx xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem x promíchá xx. Xxxxx xx obalí xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxx.
3.9.2 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 12 μg/ml
Odměří xxx 10,0 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1) do 250 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx značku xxxxxxx xxxx (3.8) x xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx a uloží x temnu.
3.9.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.2.). Xxxxxx se xx xxxxxx mobilní xxxx (3.8.) x xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 a 6.0 μx/xx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx tyto roztoky xx xxxxxxxxxx těsně xxxx použitím.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxx, vybavená xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx přibližně 150 xx. Xxxxxxx průměr 10 – 15 xx, xxxxx 250 xx.
4.2 Ruční xxxxxxxx
4.3 Xxxxxxx xxxxxxx
4.4 Xxxxxxxx xx xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx chromatografii (HPLC) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x měnitelnou xxxxxxx xxxxxx, xxxxx detektorem x xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx v pásmu 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, C18, 10 μx xxxxxx nebo xxxxxxx.
4.5 Xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx (Whatman XX/X xxxx xxxxxxx)
4.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45 μx
5. Xxxxxx
Xxxx.: Xxxxxxxxx xx citlivý xx světlo. Xxxxx xxxx být xxx xxxxx úkonech xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxx skla.
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxxxx xx analyzovat xxxxxxxx xxxxxx bez xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx, zda neobsahuje xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx analýzou modelového xxxxxx (5.1.1.), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxx 60 xx/xx xx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xxxxxxx 3 ml xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.1.). Xxxxxx se xxxxxx xxx xx xxxxx 0,5 xx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx se x xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x extrakcí (5.2.).
Xxxx.: Xxx účel xxxx xxxxxx by mělo xxx xxxxxxxx krmivo xxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx vzorek x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx množství xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx naváží přibližně 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 0,01 x, xxxxx xx 100 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx na třepačce (4.2). Xxxxxx se xxxxxxxxxxx přes xxxxx xx xxxxxxxxxx vláken (4.5) x xxxx xxxxx xxxxxxxx se xxxx do 150 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se 7,5 x xxxxxxxxxxxxx xxxx (3.4), xxxxxxxxx x xxx xxxxx se xxxxx. Potom se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx skleněných xxxxxx. Tento xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Xxxxxxxx kolony s xxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.1) se xxxxx xxxx zátka xx xxxxxx xxxx x xxxxxx se skleněnou xxxxxxxx. Naváží xx 11,0 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.5) x xxxxxx xx xx xxxxxx, pokud xxxxx s minimální xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxx. Oxid xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxx konec xxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku (5.2). Xxxxxx pipety xx xxxx x xxxxx xxxxxx a extrakt xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hlinitým. Xxxxxxxxx xx z xxxxxx xxxxxx xxxxxx 100 ml xxxxxxxxx (3.1) při xxxxxxxxx xxxxxxx 2 – 3 xx za xxxxxx x xxxxx xx xxxx do 250 ml xxxxx x xxxxxxx dnem. Xxxxxxxxxxx roztok xx xx redukovaného xxxxx x xxx xxxxxxx 40xX odpaří do xxxxx v xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxx xx xxxxx rozpustí xx 3 – 4 xx xxxxxxx xxxx (3.8.) x xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xx 10 ml xxxxxxx baňky. Xxxxx xx několikrát xxxxxxxxx 1 – 2 xx xxxxxxx xxxx x tyto xxxxxxx xx xxxxxxx do xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx fází x promíchá xx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx 0,45 μm xxxxx (4.7). Xxxxx xxxxxx se použije xxx xxxxxxx HPLC xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX)
5.4.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx x jiné xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
xxxxxxx xxxx (3.8),
průtoková xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx délka xxxxxxxxx: 317 xx,
xxxxx xxxxxxxx: 20–50 μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx systému xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3), xxxxx xxxxxxxx 3,6 μx/xx, xx xx xxxxxxxx konstantních xxxxx xxxx x retenčních xxxx.
5.4.2 Kalibrační xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.9.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xx xxxxx (xxxxxx) xxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx získá xxxxxxxxx xxxxxxxxxx hodnot xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxx odpovídajícím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μg/ml.
5.4.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx nastříkne xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx, jako při xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μg/ml xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx grafu (5.4.2).
x = (x × 200)/m,
ve xxxxxx xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x gramech.
7. Xxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Identita
Identita xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x přídavkem xxxxx xxxxxxxx detektoru x xxxxxxxx polem, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx extraktu vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx xxxxxxxxxx.
7.1.1 Opakované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx
X xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx být obdobné xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xx xxxxxx pouze xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx robenidinu x obsahu xxxxxxxxxx x naředěném xxxxxxxx. Xxxx xxxx v xxxxxxxx jeho xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx šíře.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx pole
Výsledky xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx s xxxxxxxx polem xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx od xxxxxxxxx částí xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tohoto xxxxxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx nikde odchylka xxxx dvěma spektry xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx analytu.
c) xxx xxxxxx délce xxxx 220 a 350 nm xx xxxxx xxxxxxxx vzestupu, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx ostatních x xxxx částí xxxxxxx v xxxxxxx 10 až 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx maxima x xxxxxxxx xx xxxxx sledovaných xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx analytu xxxx xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 15 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx test, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analyzovalo čtyři xxxxxx krmiv xxx xxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx xxxx peletovaných. Xxxxx xx xxxxxx xxx podroben xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx krmivo |
Pelety |
Sypké xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (xx/xx) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
XXx (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
XX (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Výtěžnost (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Sr = xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx opakovatelnosti
SR = xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
(2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx slouží x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Dolní xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx vzorku xxxxxx methanolového xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxxx dichlormethanem, xxxxxxxxx chromatografií, x xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx methylbenzochátu xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) pomocí XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, pro HPLC
3.3 Xxxxxxx xxxx XXXX
Xxxx xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (xxx HPLC) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx xx xxxx 0,22 μx xxxxx (4.5.) x xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx 10 minut).
3.4 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx σ = 2 %
20 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx x 1000 xx xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Xxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové σ = 10 %
100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (X20 c. 1,18g/ml) xx xxxxxxx v 1000 ml vody.
3.6 Xxxxx CG-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx: 100 x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x 500 xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (3,5) x za xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxx. Po xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 500 xx xxxx x xxxxx 250 ml xxxxxxxxx (3.2). Xxxxx xx xxxxxxxxxx dalšími 250 ml xxxxxxxxx x vysuší xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx uskladňuje x xxxxxxxxxxx xxxxx.
3.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Základní standardní xxxxxx xxxxxxxxxx, 500 μx/xx
Xxxxxx xx 50 xx standardní xxxxx (3.7) x xxxxxxxxx 0,1 xx, xxxxxxxx xx ve 100 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), doplní xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx 50μg/ml
Do 50 ml xxxxxxx xxxxx xx odpipetuje 5 xx základního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.1), doplní xx xxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxx 25 xx xxxxxxxxx xxxxx xx odpipetuje 1, 2, 3, 4 x 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx methylbenzochátu (3.7.2). Xxxxxx se xx xxxxxx mobilní xxxx (3.3) a xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 x 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx těsně xxxx jejich použitím.
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.2 Xxxxxxx xxxxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxx (250 x 15 xx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a nádržkou x xxxxxxxxx 200 xx
4.4 XXXX xxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx polem
4.4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 mm x 4 xx, C – 18, 10μm xxxx xxxxxx podobná
4.5 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.5 Membránové xxxxxx 0,45μx
5. Postup
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx x xxx xxxx přítomen xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxx rušivé látky.
5.1.2 Xxxx xx provést xxxx xxxxxxxxxx analýzou xxxxxxxxxx krmiva, xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx v obdobném xxxxxxxx, jaké xx xxxxxxxx xx xxxxxx. X xxxxxxxxxxx na xxxxxx 1,5 xx/xx xx xxxxx do 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.1), xxxxxxxx xx x po 10 xxxxx xx započne x xxxxxxxx (5.2).
Pozn.: Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx by xxxx xxx podobného xxxx, jako xx xxxxxx, x xxx xxxx xxxxxxx by xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Do 250 xx Erlenmeyerovy baňky xx xxxxxx xxxxxxxxx 20 g připraveného xxxxxx x xxxxxxxxx 0,01 x. Přidá xx 100 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxxxxxxx xx třepe (4.1) xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx nálevky, xxxxxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx xxxxx 25 xx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx (5.2). Dále xx xx xxxxxxx xxxxx 100 ml xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx. Potom xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx) se odpustí xx 500 ml xxxxx x kulatým xxxx. Extrakce xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx dvěma xxxxxxx 40 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxx xx spojí x xxxxxx xxxxxxxxx v xxxxx s xxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx na xxxxxxx xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx 40 oC. Xxxxxxx se rozpustí x 20–25 xx xxxxxxxxx (3.2), xxxxx xx zazátkuje x xxxx xxxxxxx se xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx výměnou (5.4).
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx ionexové xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.3) xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxx x 5 x xxxxxxxxxx katexu x x 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5). Xxxx xxxx xx xxxxxx do skleněné xxxxxx a xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx odpustí xx xxxxx nad hladinu xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx proteklý xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxx xx xx xxxxxx xx xxxxxx 50 xx methanolu (3.2) x nechá xx xxxxx xx x xxxxxxx ionexu.
5.4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx kolonu xx xxxxxxx napipetuje xxxxxxx xxxxxxx (5.3). Xxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 5 až 10 xx xxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xx k xxxxxxx xxxxxx. Kolona xx xxxxxxx 50 ml xxxxxxxxx tak, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx za minutu. Xxxxxxxx kapalina xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 150xx roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) a xxxxx xx xxxx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx (5.4.2) xx xxxxxxx do xxxxxxxxxxxx xxxxxx nálevky. Xxxxxxxxxxxxx baňka se xxxxxxxxxx 5 xx 10 xx xxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxx xx xxxxx do xxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xx dělící xxxxxxx xxxxx 300 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) a 130 xx dichlormethanu (3.1). Xxxxx xx xx dobu jedné xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx fáze xxxxxxxxxxx. Xxxxx (xxxxxxxxxxxxxxxx) xxxxxx xx xxxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx vodné xxxx se xxxxxxx xx xxxxx dalšími 70 ml dávkami xxxxxxxxxxxxxx x tyto xxxxxxxx se smísí x prvním xxxxxxxxx x baňce x xxxxxxx dnem.
Extrakt xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx v xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx 10 xx odměrné xxxxx. Xxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx 1 až 2 xx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXXX (5.6).
5.6 Xxxxxxx xxxxxx XXXX
5.6.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx uvedeny xxxxxxxxxxx. Xxxxx být použity xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
- kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
- xxxxxxx fáze: xxxx xxxxxxxxx x vody,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- xxxxxx délka xxxxxxxxx: 265 xx,
- xxxxx nástřiku: 20 xx 50μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx nástřikem xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.3) obsahujícího 4μx/xx, až do xxxxxxxx konstantních xxxxx xxxx xxxxx píků x retenčních xxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx roztok (3.7.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a změří xxxxx (xxxxxx) píků xxx každou koncentraci. Xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxx vynesením xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx píků xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků x μx/xx.
5.6.3 Roztok xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx vzorku (5.5.) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, jaký xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xxxxxxxx xxxxxxx výšky (xxxxxx) z xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Výpočet výsledků
Z xxxxxxxx xxxxxxx výšky (xxxxxx) píků methylbenzochátu x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx koncentrace x roztoku vzorku x μx/xx xxxxx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2.).
Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x (mg/kg) xx xxxxxx se xxxxxxx podle tohoto xxxxxx
x =(c x 40)/x,
xx xxxxxx je
c = xxxxxxxxxxx methylbenzochátu x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx navážky xxxxxx x gramech.
7. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Identita
Identita xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx stanovením x xxxxxxxxx anebo xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Opakované xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx
Xxxxxxx vzorku xx fortifikuje xxxxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.7.2.). Xxxxxxxx přidaného methylbenzochátu xx být xxxxxxx xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx methylbenzochátu v xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xxxxx xxxxx ke xxxxxxx píku xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxx xx přidané xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Šíře xxxx x polovině xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xx přibližně 10 % původní šíře.
7.1.2 Xxxxxxxx diodového xxxx
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při xxxxxx xxxxx maximální xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx xxxx být xxxxxx spektra zaznamenaný xx vrcholu xxxx xx chromatogramu stejný x nepřesností xxxxx xxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx polem xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) při xxxxxx délce xxxx 220 a 350 xx xx nesmí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxx maxima x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx dvěma xxxxxxx nepřesahuje 15 % absorbance xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) při xxxxxx xxxxx mezi 220 x 350 nm xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx píku xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx v xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx není dosaženo xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx přesáhnout 10 % xxxxxxxx k xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx methylbenzochátu mezi 4 a 20 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X deseti xxxxxxxxxxxx xxxx analyzováno xxx xxxxxx. X každého xxxxxx byly provedeny xxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx
|
Xxxxxxxx krmivo |
Sypké xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
Xxxxxxxxxx |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Xx (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
SR (mg/kg) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
CVR |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Výtěžnost (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx reprodukovatelnosti