Xxxxxxxx směrnice Komise 93/117/XX
xx xxx 17. xxxxxxxx 1993,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX ze dne 20. července 1970, xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx nařízením (XXX) x. 3768/85 [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, že se xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxx mají xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x správními xxxxxxxx x xxxxxxx x složení xxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství;
vzhledem x xxxx, xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx kontrolu xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx;
xxxxxxxx k tomu, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx v xxxxxxx se stanoviskem Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx úředních xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. xxxxxxxxx 1994. Neprodleně o xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx přijatá členskými xxxxx musí obsahovat xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx za takový xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx úředním vyhlášení. Xxxxxx xxxxxx si xxxxxxx xxxxxxx státy.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x platnost xxxxxx dnem po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
X Xxxxxxx dne 17. xxxxxxxx 1993.
Xx Xxxxxx
Xxxx Steichen
člen Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 362, 31.12.1985, x. 8.
XXXXXXX
1. STANOVENÍ XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) amino]guanidin xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x oblast xxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje okyseleným xxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxx a xxxx xxxxxxxxx část se xxxxxxxx na xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx a xx vhodný xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Obsah xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx XX detektoru.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx 500 ml xxxxxxx xxxxx se oměří 4,0 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (X20x, 1,18 x/xx), xxxxxx se xx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1.) a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.3 Acetonitril, xxx XXXX
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3X, 8 xx 12 xxxx (1,6–2,5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx hlinitokřemičitanu, průměr xxxx 0,3 xx).
3.5 Xxxx xxxxxxx: xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx X xxx kolonovou xxxxxxxxxxxxxx
100 x oxidu xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xx 2 xx vody. Xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 20 xxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx fosforečnan xxxxxxxx, xxxxxx c = 0,025 xxx/x
3,4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx ve xxxx (pro XXXX) x 1000 ml xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxx x promíchá.
3.7 Hydrogen xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 0, 025 mol/l
3,55 x xxxxxxxxx (xxxx 4,45 x xxxxxxxxx, xxxx 8,95 x xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx rozpustí xx xxxx (pro XXXX) x 1000 ml xxxxxxx baňce. Xxxxxx xx xx značku x xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxx xxxx HPLC
Smíchá xx:
650 xx xxxxxxxxxxxx (3.3.),
250 xx xxxx (pro XXXX),
50 xx roztoku xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx draselného (3.6.),
50 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 0,22 μx (4.6.) x xxxxxx se xxxxxxxx (např. ultrazvukem xx xxxx 10 xxxxx).
3.9 Standardní xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx: 1.3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx] xxxxxxxx hydrochlorid, X 758.
3.9.1 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx standardní roztok: 300 μg/ml:
Naváží xx 30 xx standardního xxxxx xxxxxxxxxx (3.9.) x xxxxxxxxx 0,1 xx. Rozpustí se x kyselém xxxxxxxxx (3.2.) ve 100 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx po xxxxxx stejným xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxx.
3.9.2 Xxxxxxxxx, pracovní xxxxxxxxxx xxxxxx: 12 μx/xx
Xxxxxx xxx 10,0 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1) xx 250 xx xxxxxxx baňky, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8) x promíchá. Xxxxx xx obalí xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx x temnu.
3.9.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxxxx xx odměří 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.2.). Doplní se xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8.) x xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 x 6.0 μx/xx robenidinu. Xxxxxxx tyto xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x pomůcky
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 150 xx. Xxxxxxx xxxxxx 10 – 15 xx, xxxxx 250 xx.
4.2 Xxxxx třepačka
4.3 Xxxxxxx xxxxxxx
4.4 Xxxxxxxx xx vysoce účinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx ultrafialovým detektorem x měnitelnou xxxxxxx xxxxxx, xxxxx detektorem x diodovým xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx chromatografii: 300 xx x 4 xx, X18, 10 μx xxxxxx nebo xxxxxxx.
4.5 Xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxxxx XX/X xxxx podobný)
4.6 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.7 Xxxxxxxxxx filtry 0,45 μx
5. Xxxxxx
Xxxx.: Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xx světlo. Xxxxx xxxx xxx při xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx.
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx, xxx neobsahuje xxxxxxxxx xxx jiné xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Je xxxxxx provést xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1.1.), do xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx robenidinu, xxxx xx xx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxx 60 mg/kg xx do 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xxxxxxx 3 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1.). Xxxxxx se xxxxxx asi xx xxxxx 0,5 ml x proudu xxxxxx. Xxxxx xx 15 x xxxxxxxxxx krmiva, xxxxxxxx xx x xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx začít x xxxxxxxx (5.2.).
Xxxx.: Xxx xxxx xxxx xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Do 250 xx Erlenmeyerovy xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 15 x upraveného xxxxxx x xxxxxxxxx 0,01 g, přidá xx 100 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx x hodinu xxxxx xx xxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx skleněných vláken (4.5) x xxxx xxxxx filtrátu xx xxxx do 150 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 7,5 x xxxxxxxxxxxxx xxxx (3.4), xxxxxxxxx a xxx xxxxx xx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx použije x xxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxx s xxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx kolony (4.1) xx xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxx vaty x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx 11,0 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx hlinitého (3.5) x xxxxxx xx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx prodlevou v xxxxxxx prostředí. Oxid xxxxxxx xx v xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxx xxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxx vzorku
Na xxxxxxxxxxx xxxxxx se napipetuje 5,0 xx připraveného xxxxxxxx vzorku (5.2). Xxxxxx xxxxxx se xxxx x stěnu xxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hlinitým. Xxxxxxxxx xx z xxxxxx xxxxxx xxxxxx 100 ml xxxxxxxxx (3.1) při rychlosti xxxxxxx 2 – 3 xx za xxxxxx x xxxxx xx jímá do 250 xx xxxxx x kulatým dnem. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x při xxxxxxx 40xX odpaří xx xxxxx v xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx 3 – 4 ml xxxxxxx xxxx (3.8.) a xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xx 10 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 1 – 2 xx xxxxxxx fáze x xxxx xxxxxxx xx přidají do xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx 0,45 μx xxxxx (4.7). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Stanovení xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX)
5.4.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx x jiné xxxxx povedou ke xxxxxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
xxxxxxx xxxx (3.8),
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 ml/minuta,
vlnová xxxxx xxxxxxxxx: 317 xx,
xxxxx xxxxxxxx: 20–50 μl.
Stabilita xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3), xxxxx xxxxxxxx 3,6 μx/xx, až do xxxxxxxx konstantních výšek xxxx a xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.9.3) xx provede xxxxxxx nástřiků a xxxxx se xxxxx (xxxxxx) píků xxx xxxxxx koncentraci. Kalibrační xxxxxx se získá xxxxxxxxx xxxxxxxxxx hodnot xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxx odpovídajícím xxxxxxxxxxxx kalibračních xxxxxxx x μg/ml.
5.4.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxx xx průměrná xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) píků xxxxxxxxxx.
6. Výpočet x xxxxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx píků x xxxxxxx vzorku xx xxxx koncentrace xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx odečtením x xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.4.2).
x = (c × 200)/x,
xx kterém xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx analýzy xxxx xxx xxxxxxxxx opakovaným xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx využitím xxxxxxxxx x diodovým xxxxx, xxxxx umožňuje xxxxxxxxx xxxxxxx extraktu xxxxxx x kalibračním xxxxxxxx (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx xxxxxxxxxx.
7.1.1 Opakované xxxxxxxxx x přídavkem
K xxxxxxxx vzorku xx xxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3). Xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxx xx být xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx se xxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx robenidinu x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx x xxxxxxxx jeho xxxxxxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Detektor xxxxxxxxx pole
Výsledky xxxx xxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při vlnové xxxxx maximální absorpce xxxxxx i xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx stejný x xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx s xxxxxxxx polem xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 nm xx nesmí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tohoto xxxxxxxx je dosaženo, xxxxxxxx xxxx vykázána xxxxxx maxima a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
x) xxx vlnové délce xxxx 220 a 350 xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx zkoušeného xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x této xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 až 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx maxima x jestliže ve xxxxx xxxxxxxxxxx bodech xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nikde 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx píku.
Jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x těchto xxxxxxxx, xxxxxxxxxx analytu xxxx xxxxxxxxx.
7.2. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx obsahu xxxxxxxxxx xxx 15 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx kruhového xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx test, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx krmiv pro xxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx nebo peletovaných. Xxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx dvěma xxxxxxxxxx. Výsledky jsou xxxxxxx v této xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (xx/xx) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
XXx (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
SR (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Výtěžnost (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Xx = xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
(2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
1. Účel x oblast xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx. Dolní mez xxxxxxxxxxxxxxx je 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx methanolového xxxxxxx xxxxxxxx methansulfonové. Extrakt xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx chromatografií, x xxxxxxxx pak xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) pomocí XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, xxx XXXX
3.3 Xxxxxxx fáze XXXX
Xxxx xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (xxx HPLC) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx se přes 0,22 μx xxxxx (4.5.) x xxxxxxx (xxxx. ultrazvukem xx xxxx 10 xxxxx).
3.4 Xxxxxx xxxxxxxx methansulfonové σ = 2 %
20 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x 1000 xx xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx σ = 10 %
100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (X20 x. 1,18x/xx) xx xxxxxxx x 1000 ml vody.
3.6 Xxxxx XX-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx: 100 g xxxxxxxxxxx xx rozmíchá v 500 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3,5) x xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xx xxxxx desce. Xx xxxxxxxxxxx xx kyselina xxxxxxxxx. Filtruje xx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx sníženého xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 500 xx xxxx x xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Xxxxx xx propláchne xxxxxxx 250 xx xxxxxxxxx x xxxxxx prosáváním xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Vysušený ionex xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx.
3.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: čistý methylbenzochát (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Základní xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, 500 μx/xx
Xxxxxx se 50 xx xxxxxxxxxx xxxxx (3.7) x xxxxxxxxx 0,1 xx, rozpustí xx xx 100 xx odměrné xxxxx x xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), doplní xx značku x xxxxxxxx.
3.7.2 Pracovní xxxxxxxxxx xxxxxx methylbenzochátu 50μx/xx
Xx 50 xx xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx 5 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx methylbenzochátu (3.7.1), xxxxxx xx xxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxx a xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx roztoky
Do série 25 xx odměrných xxxxx se odpipetuje 1, 2, 3, 4 x 5 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx methylbenzochátu (3.7.2). Xxxxxx se xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.3) a xxxxxxx. Xxxx roztoky mají xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 x 10 μg/ml xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx roztoky xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jejich xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x pomůcky
4.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.2 Xxxxxxx xxxxxxx
4.3 Skleněná kolona (250 x 15 xx) vybavená xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx x kapacitou 200 xx
4.4 XXXX xxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx nebo detektorem xxxxxxxx xxxxx
4.4.1 Xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, X – 18, 10μx xxxx xxxxxx podobná
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.5 Membránové xxxxxx 0,45μx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx bez xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxx x xxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx látky.
5.1.2 Xxxx se xxxxxxx xxxx výtěžnosti analýzou xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx, jaké je xxxxxxxx ve xxxxxx. X fortifikaci xx xxxxxx 1,5 xx/xx xx přidá xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.7.1), xxxxxxxx se x po 10 xxxxx xx xxxxxxx x extrakcí (5.2).
Pozn.: Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx účel by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx, xxxx je xxxxxx, a xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 20 g připraveného xxxxxx s přesností 0,01 x. Přidá xx 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) a xxxxxxxxxx xx xxxxx (4.1) xx dobu 30 xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 ml xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx 100 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx přidá 25 xx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x bodu (5.2). Xxxx se xx xxxxxxx přidá 100 ml xxxxxxxxxxxxxx (3.1) a třepe xx xxxx xxxxx xxxxxx. Potom xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx vrstva (xxxxxxxxxxxxxx) xx xxxxxxx xx 500 xx xxxxx s kulatým xxxx. Extrakce xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxxx dalšími 40 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxx xx spojí s xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx x xxxxxxx xxxx. Extrakt xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx se xxxxxxxx x 20–25 xx xxxxxxxxx (3.2), xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (5.4).
5.4 Chromatografie výměnou xxxxx
5.4.1 Příprava xxxxxxxx xxxxxx
Xx dolního konce xxxxxxxx xxxxxx (4.3) xx vloží xxxxxx xx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 5 x xxxxxxxxxx xxxxxx x x 50 ml xxxxxxxx chlorovodíkové (3.5). Xxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx nad hladinu xxxxxxxxxxx a xxxxxx xx promývá xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx do kolony xx nalije 50 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xx xxxxx až x xxxxxxx xxxxxx.
5.4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxx xx xxxxxxx napipetuje xxxxxxx xxxxxxx (5.3). Baňka x kulatým xxxx xx xxxxxxxxx dvěma xxxxxxx 5 xx 10 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx xx také xxxxxxx xx xxxxxx. Extrakt xx xxxxx xxxxx xx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx tak, aby xxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx za xxxxxx. Xxxxxxxx kapalina xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 150xx roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx se xxxx xx 250 ml Xxxxxxxxxxxxx baňky.
5.5 Extrakce xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx (5.4.2) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx dělící nálevky. Xxxxxxxxxxxxx baňka xx xxxxxxxxxx 5 až 10 ml xxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx xx přidá xx xxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx do xxxxxx xxxxxxx xxxxx 300 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 130 ml xxxxxxxxxxxxxx (3.1). Xxxxx se xx dobu xxxxx xxxxxx a potom xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx (dichlormethanová) xxxxxx xx xxxxxxx xx 500 ml xxxxx x kulatým xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx dvěma xxxxxxx 70 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxxx xx smísí x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx s xxxxxxx dnem.
Extrakt xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx v xxxxxxx xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx roztok xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx do 10 xx odměrné xxxxx. Xxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx dvěma dalšími xxxxxxx 1 xx 2 ml methanolu x opět xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Baňka xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x promíchá. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxx XXXX (5.6).
5.6 Analýza pomocí XXXX
5.6.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxxx. Xxxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
- kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
- xxxxxxx xxxx: xxxx xxxxxxxxx x xxxx,
- xxxxxxxxx rychlost: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 265 xx,
- xxxxx xxxxxxxx: 20 xx 50μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx kontroluje xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.3) obsahujícího 4μx/xx, xx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx ploch xxxx x xxxxxxxxxx časů.
5.6.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.7.3) xx provede xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx (xxxxxx) píků xxx každou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx křivka se xxxxx xxxxxxxxx průměrných xxxxxx xxxxx nebo xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx kalibračních xxxxxxx x μg/ml.
5.6.3 Roztok xxxxxx
Xxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.5.) x použitím stejný xxxxx, jaký xxx xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxxx hodnota xxxxx (xxxxxx) x píků xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Výpočet výsledků
Z xxxxxxxx hodnoty výšky (xxxxxx) píků methylbenzochátu x xxxxxxx xxxxxx xx určí xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μg/ml podle xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2.).
Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x (xx/xx) xx vzorku se xxxxxxx xxxxx tohoto xxxxxx
x =(c x 40)/x,
xx xxxxxx xx
x = koncentrace xxxxxxxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx může být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxx, který xxxxxxxx xxxxxxxxx spektra xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx množství pracovního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx xxxxxxxxx methylbenzochátu xx xxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx by xxxxx xxxxx ke xxxxxxx píku xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx jak xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx na množství xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx x xxxxxxxx maximální xxxxx xxxx být xx přibližně 10 % původní xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxx vyhodnocovány xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx spektra xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx polem xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 nm;
b) při xxxxxx délce mezi 220 a 350 xx xx nesmí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit xx xxxxxxxxx částí xxxxxxx x xxxxxxx 10 až 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxx maxima x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 nm xx nesmí spektrum xxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxx píku zkoušeného xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x této xxxxx spektra x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tohoto kritéria xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % absorbance xxxxxxx xx vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx není xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx stejném vzorku xxxxx přesáhnout 10 % vzhledem k xxxxxxxxxx výsledku při xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx mezi 4 x 20 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx vzorek xxxx xxx xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X deseti laboratořích xxxx xxxxxxxxxxx pět xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx
|
Xxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (mg/kg) |
Nezjištěno |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Sr (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
SR (xx/xx) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
XXX |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
CVr = xxxxxxxx koeficient opakovatelnost
SR = standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx