Xxxxxxxx směrnice Xxxxxx 93/117/XX
xx xxx 17. xxxxxxxx 1993,
kterou xx xxxxxxx analytické metody Xxxxxxxxxxxx pro úřední xxxxxxxx xxxxx
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s ohledem xx směrnici Xxxx 70/373/XXX ze dne 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx se zavádějí xxxxxx odběru vzorků x analýzy Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx nařízením (XXX) x. 3768/85 [2], x zejména na xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx k tomu, xx xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx potvrdit xxxxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x správními xxxxxxxx x kvalitě x xxxxxxx krmiv, xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx robenidinu x methylbenzoátu v xxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské státy xxxxxxx, že xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx úředních kontrol xxxxxxxxxx xx obsahu xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx x krmivech xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x příloze xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x účinnost xxxxxx x správní xxxxxxxx nezbytné pro xxxxxxxx souladu s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. listopadu 1994. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Komisi.
Tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx musí obsahovat xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx musí xxx za takový xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
X Bruselu dne 17. xxxxxxxx 1993.
Xx Xxxxxx
Xxxx Steichen
člen Komise
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 362, 31.12.1985, x. 8.
PŘÍLOHA
1. XXXXXXXXX ROBENIDINU
1,3-bis [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx]xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x oblast xxxxxxxxxx
Xxxx metoda xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 mg/kg.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx část se xxxxxxxx xx xxxxxx x oxidem xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se x xx xxxxxx objem xx upraví xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) na xxxxxxxx xxxx xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx 500 ml xxxxxxx xxxxx xx xxxxx 4,0 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (X20x, 1,18 x/xx), xxxxxx se xx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1.) x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx použitím.
3.3 Xxxxxxxxxxx, xxx XXXX
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3A, 8 xx 12 mesh (1,6–2,5 xx perličky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 0,3 xx).
3.5 Xxxx hlinitý: kyselý, xxxxxx xxxxxxxx X xxx xxxxxxxxx chromatografii
100 x xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx nádoby a xxxxxxx xx 2 xx vody. Xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 20 xxxxx. Skladuje se x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx fosforečnan xxxxxxxx, roztok x = 0,025 xxx/x
3,4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx (pro XXXX) x 1000 xx xxxxxxx baňce, xxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7 Hydrogen xxxxxxxxxxx sodný, xxxxxx x = 0, 025 xxx/x
3,55 x xxxxxxxxx (xxxx 4,45 x xxxxxxxxx, xxxx 8,95 g xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx rozpustí ve xxxx (xxx XXXX) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx po xxxxxx x promíchá.
3.8 Xxxxxxx xxxx HPLC
Smíchá xx:
650 xx acetonitrilu (3.3.),
250 xx xxxx (pro XXXX),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.6.),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxx fosforečnanu xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 0,22 μx (4.6.) x xxxxxx se xxxxxxxx (např. xxxxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx).
3.9 Standardní xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx: 1.3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx] xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, X 758.
3.9.1 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 300 μx/xx:
Xxxxxx se 30 xx standardního xxxxx xxxxxxxxxx (3.9.) x xxxxxxxxx 0,1 xx. Xxxxxxxx se x xxxxxxx xxxxxxxxx (3.2.) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxx stejným xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se. Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxx folií x xxxxx x xxxxx.
3.9.2 Xxxxxxxxx, pracovní xxxxxxxxxx xxxxxx: 12 μg/ml
Odměří xxx 10,0 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.1) xx 250 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx značku xxxxxxx xxxx (3.8) x xxxxxxxx. Xxxxx xx obalí xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxx.
3.9.3 Kalibrační xxxxxxx
Xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx buněk xx xxxxxx 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.2.). Xxxxxx xx xx značku mobilní xxxx (3.8.) x xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 a 6.0 μx/xx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx roztoky xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x pomůcky
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx, vybavená uzavíracím xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 150 xx. Xxxxxxx průměr 10 – 15 xx, xxxxx 250 xx.
4.2 Ruční třepačka
4.3 Xxxxxxx odparka
4.4 Zařízení xx xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx ultrafialovým xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx vlnovou xxxxxx, anebo xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x pásmu 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx chromatografii: 300 xx x 4 xx, X18, 10 μx xxxxxx xxxx xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xx xxxxxxxxxx vláken (Xxxxxxx XX/X xxxx xxxxxxx)
4.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.7 Xxxxxxxxxx filtry 0,45 μx
5. Postup
Pozn.: Xxxxxxxxx xx citlivý xx světlo. Proto xxxx být xxx xxxxx xxxxxxx použito xxxx nádobí z xxxxxxx xxxx.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx bez xxxxxxxxxxx robenidinu x xxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx jiné xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xx xxxxxx provést xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx modelového xxxxxx (5.1.1.), do xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xx ve xxxxxx. X dosažení xxxxxx 60 xx/xx xx do 250 xx Erlenmeyerovy xxxxx xxxxxxx 3 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1.). Xxxxxx xx xxxxxx asi na xxxxx 0,5 xx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx 15 x modelového krmiva, xxxxxxxx se x xx xxxxxx xxxxxxxx xx může začít x extrakcí (5.2.).
Xxxx.: Xxx xxxx této xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx vzorek x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Do 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx xxxxxx xxxxxxxxx 15 g upraveného xxxxxx x přesností 0,01 g, xxxxx xx 100 xx xxxxxxxxxxx methanolu (3.2), xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx na třepačce (4.2). Roztok se xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5) x xxxx xxxxx xxxxxxxx se xxxx xx 150 xx Erlenmeyerovy xxxxx. Xxxxx xx 7,5 x xxxxxxxxxxxxx síta (3.4), xxxxxxxxx x xxx minut xx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx přefiltruje xxxx xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx. Tento xxxxxx xx xxxxxxx k xxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx kolony (4.1) xx xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxx se skleněnou xxxxxxxx. Xxxxxx xx 11,0 g připraveného xxxxxxxxxx hlinitého (3.5) x xxxxxx se xx xxxxxx, xxxxx xxxxx x minimální xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx prostředí. Oxid xxxxxxx xx x xxxxxxxx koloně xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx konec kolony.
5.3.2 Xxxxxxx vzorku
Na připravenou xxxxxx xx xxxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2). Xxxxxx xxxxxx xx xxxx x stěnu xxxxxx a xxxxxxx xx nechá xxxxx xxxxxxxxxx oxidem xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx pomocí 100 xx xxxxxxxxx (3.1) při xxxxxxxxx xxxxxxx 2 – 3 xx za xxxxxx x eluát xx xxxx do 250 ml baňky x kulatým xxxx. Xxxxxxxxxxx roztok se xx redukovaného xxxxx x xxx xxxxxxx 40xX xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx 3 – 4 ml xxxxxxx xxxx (3.8.) x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx 10 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx několikrát vypláchne 1 – 2 xx mobilní xxxx x xxxx roztoky xx přidají do xxxxxxx xxxxx. Baňka xx doplní xx xxxxxx mobilní fází x xxxxxxxx xx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx 0,45 μx xxxxx (4.7). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx HPLC xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX)
5.4.1 Parametry
Následující xxxxxxxx jsou xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx x jiné xxxxx xxxxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
mobilní xxxx (3.8),
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 ml/minuta,
vlnová xxxxx xxxxxxxxx: 317 xx,
xxxxx xxxxxxxx: 20–50 μl.
Stabilita xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3), xxxxx xxxxxxxx 3,6 μx/xx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x retenčních xxxx.
5.4.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.9.3) se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxx (xxxxxx) píků xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Kalibrační xxxxxx xx získá xxxxxxxxx xxxxxxxxxx hodnot xxxxx nebo xxxxx xxxx xxxxx odpovídajícím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků x μg/ml.
5.4.3 Roztok xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxx hodnota xxxxx (xxxxxx) píků xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx výsledků
Z průměrných xxxxxx výšek (ploch) xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx se xxxx koncentrace xxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku x μx/xx odečtením x xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.4.2).
x = (x × 200)/x,
xx kterém xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx x μg/ml,
m = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx analýzy může xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx extraktu xxxxxx x kalibračním xxxxxxxx (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx xxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x přídavkem
K xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxx obdobné xxxx xx předpokládaný xxxxx x extraktu xxxxxx.
Xxxx by xx xxxxxx pouze výška xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x obsahu xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx píku x xxxxxxxx jeho maximální xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Detektor xxxxxxxxx pole
Výsledky xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx následujících xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx xxxxx maximální xxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx xxxx být xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx stejný s xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx detektor s xxxxxxxx polem xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx mezi 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x standardu zaznamenaný xx xxxxxxx píku xxxxxxxxxxxxx xxxxx od xxxxxxxxx xxxxx spektra x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx nikde odchylka xxxx dvěma spektry xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
x) xxx xxxxxx délce xxxx 220 x 350 nm xx xxxxx spektrum vzestupu, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx zkoušeného vzorku xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx maxima x jestliže xx xxxxx sledovaných xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxxxx nikde 15 % xxxxxxxxxx spektra xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx xxxx dosaženo xxxxxxxxx x těchto kritérií, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 15 mg/kg.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx pro fortifikovaný xxxxxx musí xxx xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analyzovalo čtyři xxxxxx krmiv pro xxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx v této xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx krmivo |
Pelety |
|
|
Průměr (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (xx/xx) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
XXx (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
XX (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Výtěžnost (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Xx = standardní odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx opakovatelnosti
SR = xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX METHYLBENZOCHÁTU
(2-methyl-7-benzyl-oxy-6-butyl-1,4-dihydro-4-oxychinolin-3-karboxylát)
1. Účel x xxxxxx použití
Tato xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Dolní mez xxxxxxxxxxxxxxx je 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Extrakt xx přečištěn xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxx xxx znovu xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Dichlormethan
3.2 Xxxxxxxx, xxx XXXX
3.3 Xxxxxxx fáze XXXX
Xxxx xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (pro XXXX) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx se xxxx 0,22 μx xxxxx (4.5.) x xxxxxxx (xxxx. ultrazvukem po xxxx 10 xxxxx).
3.4 Xxxxxx xxxxxxxx methansulfonové σ = 2 %
20 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x 1000 xx xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Xxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové σ = 10 %
100 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (X20 x. 1,18x/xx) xx xxxxxxx v 1000 ml vody.
3.6 Xxxxx XX-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx použitím se xxxxxxxx xxxxx takto: 100 x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x 500 xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (3,5) x za stálého xxxxxxx xx zahřívá x varu xx xxxxx desce. Xx xxxxxxxxxxx xx kyselina xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxx papírový xxxxx xx xxxxxxxxx tlaku. Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 500 xx vody x xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Potom xx xxxxxxxxxx xxxxxxx 250 xx methanolu x vysuší xxxxxxxxxx xxxxxxx přes xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx ionex xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx.
3.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: čistý xxxxxxxxxxxxxxx (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Xxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxx, 500 μx/xx
Xxxxxx xx 50 xx xxxxxxxxxx xxxxx (3.7) x xxxxxxxxx 0,1 xx, xxxxxxxx xx xx 100 xx xxxxxxx xxxxx x roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), xxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxx.
3.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx methylbenzochátu 50μx/xx
Xx 50 ml xxxxxxx xxxxx se odpipetuje 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.1), xxxxxx se xxxxxxxxxx (3.2) po xxxxxx a xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxx 25 xx xxxxxxxxx xxxxx xx odpipetuje 1, 2, 3, 4 x 5 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx methylbenzochátu (3.7.2). Xxxxxx xx xx xxxxxx mobilní xxxx (3.3) a xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx mají xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 x 10 μg/ml methylbenzochátu. Xxxxxxxxxx roztoky xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x pomůcky
4.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.2 Rotační xxxxxxx
4.3 Skleněná kolona (250 x 15 xx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx x xxxxxxxxx 200 xx
4.4 XXXX xxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
4.4.1 Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, C – 18, 10μm xxxx xxxxxx podobná
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45μx
5. Xxxxxx
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx zda x xxx není xxxxxxxx xxx methylbenzochát xxx xxxx xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx krmiva, fortifkovaného xxxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx. X fortifikaci na xxxxxx 1,5 mg/kg xx přidá do 20 x modelového xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.1), promíchá xx x xx 10 xxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx by xxxx xxx podobného xxxx, xxxx xx xxxxxx, x xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx xxxxxx přibližně 20 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 0,01 x. Xxxxx xx 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) a xxxxxxxxxx xx třepe (4.1) xx dobu 30 xxxxx. Roztok xx xxxxxxxxx přes papírový xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xx extrakci xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Extrakce xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx xxxxx 25 xx xxxxxxxx, který xxx xxxxxx postupem xxxxxxxx v xxxx (5.2). Xxxx se xx xxxxxxx xxxxx 100 xx dichlormethanu (3.1) a xxxxx xx xxxx jedné xxxxxx. Potom xx xxxxxxx xxxxxx separovat x xxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx) se xxxxxxx xx 500 xx xxxxx x kulatým xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx 40 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx s xxxxxxx xxxx. Xxxxxxx dichlormethanu xx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x 20–25 xx xxxxxxxxx (3.2), xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (5.4).
5.4 Chromatografie xxxxxxx xxxxx
5.4.1 Příprava xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx kolony (4.3) xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx vaty. Xxxxxxxx xx suspense x 5 x xxxxxxxxxx xxxxxx a x 50 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.5). Xxxx xxxx xx xxxxxx xx skleněné xxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx kyselina xx xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx promývá xxxxx xxxxx xxxxxxxx eluát xxxx neutrální na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xx xxxxxx xx xxxxxx 50 xx methanolu (3.2) x xxxxx se xxxxx xx x xxxxxxx xxxxxx.
5.4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (5.3). Xxxxx x kulatým xxxx xx xxxxxxxxx dvěma xxxxxxx 5 až 10 xx xxxxxxxxx (3.2) x výplach xx xxxx převede xx xxxxxx. Xxxxxxx xx nechá xxxxx xx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxx nepřesahoval 5 xx za minutu. Xxxxxxxx kapalina xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx z kolony 150xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx se xxxx xx 250 ml Xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx (5.4.2) xx převede xx xxxxxxxxxxxx dělící nálevky. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx 5 až 10 ml methanolu (3.2) x xxxxxxx xx xxxxx do xxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx do xxxxxx xxxxxxx xxxxx 300 xx roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.5) a 130 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1). Třepe xx xx dobu xxxxx xxxxxx x potom xx xxxxxxx fáze xxxxxxxxxxx. Xxxxx (xxxxxxxxxxxxxxxx) xxxxxx xx xxxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Extrakce vodné xxxx xx xxxxxxx xx xxxxx dalšími 70 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x tyto xxxxxxxx se xxxxx x xxxxxx extraktem x baňce x xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx v xxxxxxx xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx x baňce xx rozpustí v xxxxxxxxx 5 ml xxxxxxxxx (3.2) a xxxxx roztok xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx 10 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx dvěma dalšími xxxxxxx 1 xx 2 xx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx do xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxxx a promíchá. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Tento xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx HPLC (5.6).
5.6 Xxxxxxx xxxxxx XXXX
5.6.1 Parametry
Následující podmínky xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx parametry xxxxx xxxxxxx xx stejným xxxxxxxxx:
- xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
- xxxxxxx xxxx: směs xxxxxxxxx x xxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 265 nm,
- xxxxx nástřiku: 20 xx 50μl.
Stabilita xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kalibračního xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, xx xx xxxxxxxx konstantních xxxxx xxxx ploch píků x xxxxxxxxxx časů.
5.6.2 Xxxxxxxxxx graf
Pro xxxxx xxxxxxxxxx roztok (3.7.3) xx provede xxxxxxx xxxxxxxx x změří xxxxx (plochy) xxxx xxx každou koncentraci. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx vynesením průměrných xxxxxx xxxxx nebo xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μx/xx.
5.6.3 Roztok xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.5.) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) z xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Výpočet výsledků
Z xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx methylbenzochátu x roztoku vzorku xx xxxx xxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μx/xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2.).
Obsah xxxxxxxxxxxxxxxx w (xx/xx) xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx tohoto xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx kterém xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx navážky vzorku x gramech.
7. Ověření xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx roztokem (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μg/ml xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx
Xxxxxxx vzorku xx xxxxxxxxxxx přidáním xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx by xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxx xx xxxxxxx množství, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx ve zředěném xxxxxxxx. Šíře xxxx x xxxxxxxx maximální xxxxx musí xxx xx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx šíře.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx musí být xxxxxx xxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx stejný x xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx polem xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 nm;
b) při xxxxxx xxxxx mezi 220 x 350 xx se xxxxx xxxxxx spektra zkoušeného xxxxxx x standardu xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit xx ostatních částí xxxxxxx v xxxxxxx 10 až 100 % relativní absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx maxima x jestliže xxxxx xxxxxxxx xxxx dvěma xxxxxxx nepřesahuje 15 % xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx;
x) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx spektrum xxxxxxxx, vrcholu a xxxxxxx píku xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx od xxxxxxxxx v xxxx xxxxx spektra x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tohoto xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx odchylka mezi xxxxxxx xxxxxxxxxxx nikde 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx xxxx dosaženo xxxxxxxxx z těchto xxxxxxxx, přítomnost analytu xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxx přesáhnout 10 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx 4 x 20 xx/xx.
7.3 Výtěžnost
Výtěžnost pro xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx nejméně 90 %.
8. Výsledky xxxxxxxxx xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx. U xxxxxxx xxxxxx byly xxxxxxxxx xxx analýzy.
Výsledky
|
Modelové xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
Xxxxxxxxxx |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Xx (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
XX (xx/xx) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
XXX |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx koeficient xxxxxxxxxxxxxx
XX = standardní odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = variační xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx