Xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 93/117/XX
xx xxx 17. xxxxxxxx 1993,
kterou xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx pro úřední xxxxxxxx krmiv
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Rady 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (XXX) x. 3768/85 [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, že se xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx mají xxxxxxxx xxxxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a správními xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx kontrolu xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx v xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx,
XXXXXXX XXXX SMĚRNICI:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, že xxx xxxxxxxxx provedených x xxxxx úředních xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. listopadu 1994. Neprodleně x xxxx xxxxxxx Komisi.
Tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx musí obsahovat xxxxx na tuto xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx vyhlášení. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
V Bruselu dne 17. prosince 1993.
Xx Xxxxxx
Xxxx Steichen
člen Komise
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 362, 31.12.1985, x. 8.
XXXXXXX
1. XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx]xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxx metoda xxxxxx xx stanovení xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxx. Xxx stanovitelnosti xx 5 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx x jeho xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se a xx vhodný xxxxx xx upraví xxxxxx xxxxxxx fáze. Xxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) na xxxxxxxx xxxx xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Okyselený xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx 4,0 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (P20c, 1,18 x/xx), xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1.) x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xxx připraven xxxxx xxxx použitím.
3.3 Acetonitril, xxx XXXX
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3X, 8 xx 12 xxxx (1,6–2,5 mm xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 0,3 mm).
3.5 Xxxx xxxxxxx: xxxxxx, xxxxxx aktivity I xxx kolonovou xxxxxxxxxxxxxx
100 x xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx 2 xx vody. Zazátkuje xx x protřepává xx xxxxxxxxx 20 xxxxx. Skladuje se x dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, roztok c = 0,025 mol/l
3,4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx XXXX) x 1000 ml xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx po značku x promíchá.
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sodný, roztok x = 0, 025 xxx/x
3,55 g xxxxxxxxx (nebo 4,45 x xxxxxxxxx, nebo 8,95 x xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx rozpustí xx xxxx (pro XXXX) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx. Doplní xx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxx xxxx HPLC
Smíchá se:
650 xx xxxxxxxxxxxx (3.3.),
250 xx xxxx (xxx XXXX),
50 ml xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx draselného (3.6.),
50 xx roztoku xxxxxxxx fosforečnanu sodného (3.7.).
Xxxxxxxxx se xxxxxxx 0,22 μx (4.6.) x xxxxxx xx xxxxxxxx (xxxx. ultrazvukem xx xxxx 10 xxxxx).
3.9 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx: 1.3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx] guanidin xxxxxxxxxxxx, X 758.
3.9.1 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 300 μx/xx:
Xxxxxx se 30 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx robenidinu (3.9.) x xxxxxxxxx 0,1 xx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxxx (3.2.) ve 100 xx xxxxxxx baňce, xxxxxx xx xx xxxxxx stejným rozpouštědlem x promíchá xx. Xxxxx xx obalí xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx x temnu.
3.9.2 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 12 μx/xx
Xxxxxx xxx 10,0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1) xx 250 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8) x xxxxxxxx. Xxxxx xx obalí aluminiovou xxxxx x xxxxx x temnu.
3.9.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx souboru 50 xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.2.). Xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8.) x xxxxxxxx. Tyto xxxxxxx xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 a 6.0 μx/xx robenidinu. Xxxxxxx xxxx roztoky xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx x tmavého xxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx přibližně 150 xx. Vnitřní průměr 10 – 15 xx, xxxxx 250 xx.
4.2 Ruční xxxxxxxx
4.3 Xxxxxxx xxxxxxx
4.4 Zařízení xx vysoce účinnou xxxxxxxxxxx chromatografii (XXXX) xxxxxxxx ultrafialovým detektorem x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, anebo xxxxxxxxxx x diodovým xxxxx, xxxxxxxxxx v xxxxx 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx chromatografii: 300 xx x 4 xx, X18, 10 μx náplní xxxx xxxxxxx.
4.5 Xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxxxx XX/X xxxx xxxxxxx)
4.6 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.7 Membránové filtry 0,45 μm
5. Xxxxxx
Xxxx.: Xxxxxxxxx xx citlivý xx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxx xxxxx úkonech xxxxxxx xxxx xxxxxx z xxxxxxx skla.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx, xxx neobsahuje xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xx xxxxxx xxxxxxx test xxxxxxxxxx analýzou modelového xxxxxx (5.1.1.), do xxxxxxx bylo xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx je ve xxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxx 60 xx/xx xx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xxxxxxx 3 ml xxxxxxxxxx standardního roztoku (3.9.1.). Roztok se xxxxxx asi na xxxxx 0,5 ml x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx x xx deseti xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxx (5.2.).
Xxxx.: Xxx xxxx xxxx xxxxxx xx mělo xxx modelové krmivo xxxxxxxxx typu xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx přibližně 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 0,01 x, přidá xx 100 ml xxxxxxxxxxx methanolu (3.2), xxxxxxxxx a hodinu xxxxx xx třepačce (4.2). Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx skleněných xxxxxx (4.5) x xxxx xxxxx filtrátu xx xxxx xx 150 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 7,5 x xxxxxxxxxxxxx síta (3.4), xxxxxxxxx x xxx minut xx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx přes xxxxx ze skleněných xxxxxx. Xxxxx roztok xx použije k xxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxx s xxxxxx hlinitým
Do xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx kolony (4.1) xx vloží xxxx zátka xx xxxxxx vaty x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Naváží xx 11,0 g xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx hlinitého (3.5) x nasype se xx kolony, pokud xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxx prodlevou x xxxxxxx xxxxxxxxx. Oxid xxxxxxx xx v xxxxxxxx xxxxxx setřese xxxxxx xxxxxxxx na xxxxx konec xxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku (5.2). Xxxxxx pipety se xxxx x xxxxx xxxxxx x extrakt xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx xxxxxx 100 xx xxxxxxxxx (3.1) xxx xxxxxxxxx xxxxxxx 2 – 3 xx xx xxxxxx x xxxxx xx xxxx xx 250 xx xxxxx x kulatým xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx tlaku x xxx xxxxxxx 40xX xxxxxx do xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Odparek xx xxxxx xxxxxxxx xx 3 – 4 ml xxxxxxx xxxx (3.8.) x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx 10 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx několikrát xxxxxxxxx 1 – 2 xx xxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx doplní po xxxxxx xxxxxxx fází x xxxxxxxx se. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx 0,45 μx xxxxx (4.7). Xxxxx xxxxxx se použije xxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (XXXX)
5.4.1 Parametry
Následující xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx být xxxxxxx i xxxx xxxxx povedou xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
mobilní xxxx (3.8),
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 317 nm,
objem xxxxxxxx: 20–50 μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx nástřikem xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.3), xxxxx obsahuje 3,6 μx/xx, xx do xxxxxxxx konstantních výšek xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Xxxxxxxxxx graf
Pro xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.9.3) xx xxxxxxx xxxxxxx nástřiků x xxxxx se xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Kalibrační xxxxxx xx získá xxxxxxxxx průměrných hodnot xxxxx nebo xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kalibračních xxxxxxx x μx/xx.
5.4.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx objem xxxxxxxx xxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxx hodnota xxxxx (xxxxxx) píků xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx
X průměrných xxxxxx xxxxx (ploch) xxxxxxxxxxxxxx píků x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku x μx/xx odečtením x xxxxxxxxxxxx grafu (5.4.2).
x = (x × 200)/x,
xx xxxxxx xx
x = koncentrace xxxxxxxxxx v roztoku xxxxxx x μg/ml,
m = xxxxxxxx navážky xxxxxx x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx výsledků
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx detektoru x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožňuje xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx xxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxx
X xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x extraktu xxxxxx.
Xxxx xx xx xxxxxx xxxxx výška xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxx x obsahu xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx v xxxxxxxx jeho xxxxxxxxx xxxxx musí být xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx vlnové xxxxx maximální absorpce xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx stejný s xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx systému. Xxx detektor x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx plus/minus 2 xx;
x) při xxxxxx xxxxx mezi 220 x 350 xx xx xxxxx záznam xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x standardu xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx spektra x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx.
x) xxx vlnové délce xxxx 220 x 350 nm xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx a sestupu xxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx stejná maxima x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx bodech xxxxxxxx xxxx spektry xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx kritérií, xxxxxxxxxx xxxxxxx není xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 15 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kruhový test, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analyzovalo xxxxx xxxxxx xxxxx pro xxxxxx x králíky, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx ze vzorků xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (mg/kg) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
CVr (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
SR (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Výtěžnost (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Xx = standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx odchylka x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
(2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
1. Xxxx x oblast xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx methanolového xxxxxxx xxxxxxxx methansulfonové. Xxxxxxx xx přečištěn xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxx pak znovu xxxxxxxxxxxxxxx. Obsah xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografií (XXXX) xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, pro HPLC
3.3 Xxxxxxx xxxx HPLC
Směs xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (xxx XXXX) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx xx xxxx 0,22 μx xxxxx (4.5.) a odplyní (xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx).
3.4 Xxxxxx xxxxxxxx methansulfonové σ = 2 %
20 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx rozředí x 1000 ml xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Roztok xxxxxxxx chlorovodíkové σ = 10 %
100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (X20 c. 1,18x/xx) xx xxxxxxx x 1000 xx vody.
3.6 Xxxxx XX-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx: 100 x xxxxxxxxxxx xx rozmíchá v 500 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3,5) x xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx na xxxxx xxxxx. Po xxxxxxxxxxx xx kyselina xxxxxxxxx. Filtruje xx xxxx xxxxxxxx filtr xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx vždy 500 xx vody x xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Xxxxx xx propláchne xxxxxxx 250 xx methanolu x xxxxxx prosáváním xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Vysušený ionex xx uskladňuje x xxxxxxxxxxx xxxxx.
3.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx methylbenzochát (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Xxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxx, 500 μx/xx
Xxxxxx se 50 xx xxxxxxxxxx xxxxx (3.7) x xxxxxxxxx 0,1 xx, xxxxxxxx xx ve 100 xx xxxxxxx baňce x roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), xxxxxx xx značku x xxxxxxxx.
3.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx methylbenzochátu 50μx/xx
Xx 50 xx xxxxxxx xxxxx xx odpipetuje 5 xx základního xxxxxxxxxxxx roztoku methylbenzochátu (3.7.1), xxxxxx se xxxxxxxxxx (3.2) po xxxxxx a xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx roztoky
Do série 25 ml xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx 1, 2, 3, 4 x 5 xx pracovního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.2). Xxxxxx se xx xxxxxx xxxxxxx fází (3.3) a zamíchá. Xxxx xxxxxxx mají xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 x 10 μx/xx methylbenzochátu. Xxxxxxxxxx roztoky xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jejich xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.2 Xxxxxxx xxxxxxx
4.3 Skleněná xxxxxx (250 x 15 xx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x nádržkou x xxxxxxxxx 200 xx
4.4 XXXX zařízení xxxxxxxx XX xxxxxxxxxx x měnitelnou xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx polem
4.4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 mm, X – 18, 10μm xxxx xxxxxx xxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.5 Xxxxxxxxxx filtry 0,45μx
5. Xxxxxx
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx bez xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx se xxxx analyzovat x xxxxxxxxxx xxx v xxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx ani xxxx xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx analýzou xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx, jaké je xxxxxxxx xx vzorku. X xxxxxxxxxxx xx xxxxxx 1,5 xx/xx xx xxxxx xx 20 x modelového xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx standardního roztoku (3.7.1), xxxxxxxx xx x po 10 xxxxx se xxxxxxx x extrakcí (5.2).
Pozn.: Xxxxxxxx krmivo pro xxxxx účel by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx, xxxx je xxxxxx, x xxx xxxx analýze xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Do 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 20 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx x přesností 0,01 x. Xxxxx xx 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) a xxxxxxxxxx xx třepe (4.1) xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx přes papírový xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Extrakce xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.5) xx xxxxx 25 xx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxx (5.2). Xxxx xx xx xxxxxxx přidá 100 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xx xxxx jedné xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx vrstvy xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx) xx odpustí xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx dvěma dalšími 40 xx dávkami xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx x xxxxxxx xxxx. Extrakt xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx na xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx tlaku a xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx se xxxxxxxx x 20–25 ml xxxxxxxxx (3.2), baňka xx xxxxxxxxx x xxxx extrakt xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx konce xxxxxxxx kolony (4.3) xx vloží xxxxxx xx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxx x 5 x xxxxxxxxxx katexu x x 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5). Xxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx odpustí xx xxxxx nad hladinu xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx neutrální xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xx xxxxxx xx nalije 50 xx methanolu (3.2) x xxxxx xx xxxxx až x xxxxxxx ionexu.
5.4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx získaný xxxxxxx (5.3). Xxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 5 xx 10 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx stéci xx k povrchu xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx za minutu. Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 150xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx xx xxxx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx (5.4.2) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx baňka xx xxxxxxxxxx 5 xx 10 xx methanolu (3.2) x xxxxxxx xx přidá do xxxxxx xxxxxxx. Dále xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 300 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 130 ml xxxxxxxxxxxxxx (3.1). Třepe xx xx xxxx jedné xxxxxx a xxxxx xx nechají xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx (xxxxxxxxxxxxxxxx) xxxxxx se xxxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Extrakce xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxxx dalšími 70 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a tyto xxxxxxxx xx smísí x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx x xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx odpaří xx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx tlaku x xxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx x baňce xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) a xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx 10 ml odměrné xxxxx. Xxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx dvěma xxxxxxx xxxxxxx 1 až 2 xx methanolu x opět xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Baňka xx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Xxxxx xxxxxx xx použije xxx analýzu XXXX (5.6).
5.6 Xxxxxxx xxxxxx XXXX
5.6.1 Parametry
Následující xxxxxxxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxxx. Xxxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
- kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
- xxxxxxx fáze: xxxx xxxxxxxxx x xxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 265 xx,
- xxxxx xxxxxxxx: 20 xx 50μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx nástřikem xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, až xx xxxxxxxx konstantních výšek xxxx xxxxx píků x xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.7.3) xx xxxxxxx několik xxxxxxxx x xxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx koncentraci. Xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxx vynesením průměrných xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxx proti xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μx/xx.
5.6.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx vzorku (5.5.) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxx kalibrační xxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) x píků xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Z xxxxxxxx hodnoty xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku x μg/ml xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2.).
Obsah xxxxxxxxxxxxxxxx x (xx/xx) xx vzorku xx xxxxxxx podle tohoto xxxxxx
x =(c x 40)/x,
xx xxxxxx je
c = xxxxxxxxxxx methylbenzochátu x xxxxxxx xxxxxx x μg/ml,
m = xxxxxxxx navážky xxxxxx x xxxxxxx.
7. Ověření xxxxxxxxxx výsledků
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x přídavkem anebo xxxxxxxx detektoru x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx spektra xxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxxxx roztokem (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx stanovením x přídavkem
Extrakt xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku.
Mělo by xxxxx xxxxx ke xxxxxxx xxxx methylbenzochátu x xxxxxxx jak xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx zředěném xxxxxxxx. Xxxx xxxx x polovině maximální xxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxx 10 % původní xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx pole
Výsledky xxxx vyhodnocovány xxxxx xxxxxxxxxxxxx kritérií:
a) xxx xxxxxx délce maximální xxxxxxxx vzorku i xxxxxxxxx musí xxx xxxxxx spektra xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx píku xx chromatogramu stejný x nepřesností xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx detekčního xxxxxxx. Xxx detektor x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx se xxxxx xxxxxx spektra zkoušeného xxxxxx x standardu xxxxxxxxxxx ve vrcholu xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x jestliže nikde xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 nm xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxx xxxx zkoušeného xxxxxx xxxxx od xxxxxxxxx v xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx stejná xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx sledovaných xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nikde 15 % absorbance xxxxxxx ve xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx není dosaženo xxxxxxxxx z těchto xxxxxxxx, xxxxxxxxxx analytu xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx 4 x 20 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx vzorek xxxx xxx xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X deseti xxxxxxxxxxxx xxxx analyzováno xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxx provedeny xxx analýzy.
Výsledky
|
Modelové xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (mg/kg) |
Nezjištěno |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Sr (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
SR (xx/xx) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
XXX |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = standardní xxxxxxxx opakovatelnosti
CVr = xxxxxxxx xxxxxxxxxx opakovatelnost
SR = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx