Dvanáctá xxxxxxxx Xxxxxx 93/117/XX
xx xxx 17. xxxxxxxx 1993,
kterou xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx směrnici Xxxx 70/373/XXX xx dne 20. července 1970, xxxxxx xx zavádějí xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (XXX) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx směrnice 70/373/XXX xxxxxxx, xx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x kvalitě x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xx použití xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx metod Společenství;
vzhledem x xxxx, xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx dodržování xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX SMĚRNICI:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx x krmivech xx xxxxxxxxx metody xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Článek 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 30. listopadu 1994. Xxxxxxxxxx x xxxx uvědomí Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx členskými xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxx xx xxxxxx xxxxx učiněn při xxxxxx xxxxxxx vyhlášení. Xxxxxx xxxxxx si xxxxxxx členské xxxxx.
Xxxxxx 3
Tato směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx dnem xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 17. xxxxxxxx 1993.
Xx Xxxxxx
Xxxx Steichen
člen Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 362, 31.12.1985, x. 8.
XXXXXXX
1. XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) amino]guanidin xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx/xx.
2. Princip
Vzorek xx extrahuje xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx a jeho xxxxxxxxx xxxx se xxxxxxxx na koloně x xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxx x kolony xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx x xx vhodný xxxxx xx xxxxxx pomocí xxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xx stanoví xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC) na xxxxxxxx xxxx xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxxx xxxxx se oměří 4,0 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (X20x, 1,18 x/xx), doplní se xx xxxxxx methanolem (3.1.) a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx použitím.
3.3 Acetonitril, xxx XXXX
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3X, 8 xx 12 mesh (1,6–2,5 mm xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx hlinitokřemičitanu, xxxxxx xxxx 0,3 mm).
3.5 Xxxx hlinitý: xxxxxx, xxxxxx aktivity X xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
100 x xxxxx xxxxxxxxx xx naváží do xxxxxx nádoby a xxxxxxx se 2 xx vody. Zazátkuje xx a protřepává xx přibližně 20 xxxxx. Xxxxxxxx se x dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Dihydrogen fosforečnan xxxxxxxx, xxxxxx x = 0,025 mol/l
3,4 x xxxxxxxxxx fosforečnanu xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx XXXX) x 1000 xx xxxxxxx baňce, doplní xx po xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7 Hydrogen xxxxxxxxxxx sodný, roztok x = 0, 025 xxx/x
3,55 x xxxxxxxxx (xxxx 4,45 x xxxxxxxxx, xxxx 8,95 x xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxx fosforečnanu sodného xx xxxxxxxx ve xxxx (xxx XXXX) x 1000 ml xxxxxxx baňce. Xxxxxx xx xx xxxxxx x promíchá.
3.8 Xxxxxxx xxxx XXXX
Xxxxxx se:
650 xx acetonitrilu (3.3.),
250 xx xxxx (pro XXXX),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx draselného (3.6.),
50 ml xxxxxxx xxxxxxxx fosforečnanu sodného (3.7.).
Xxxxxxxxx se xxxxxxx 0,22 μx (4.6.) x roztok se xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx).
3.9 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx: 1.3-xxx [(4-chlorbenziliden) xxxxx] xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, X 758.
3.9.1 Robenidin, xxxxxxxx standardní roztok: 300 μx/xx:
Xxxxxx se 30 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx robenidinu (3.9.) x přesností 0,1 xx. Rozpustí se x xxxxxxx xxxxxxxxx (3.2.) ve 100 xx odměrné xxxxx, xxxxxx se xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx folií x xxxxx x xxxxx.
3.9.2 Xxxxxxxxx, pracovní standardní xxxxxx: 12 μx/xx
Xxxxxx xxx 10,0 ml xxxxxxxxxx standardního roztoku (3.9.1) xx 250 xx odměrné xxxxx, xxxxxx xx značku xxxxxxx xxxx (3.8) x xxxxxxxx. Xxxxx xx obalí xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxx.
3.9.3 Kalibrační xxxxxxx
Xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 ml xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.2.). Xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8.) a xxxxxxxx. Xxxx roztoky xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 x 6.0 μg/ml robenidinu. Xxxxxxx xxxx roztoky xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx x tmavého xxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x nádržkou xx přibližně 150 xx. Xxxxxxx xxxxxx 10 – 15 xx, xxxxx 250 xx.
4.2 Ruční xxxxxxxx
4.3 Xxxxxxx xxxxxxx
4.4 Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx detektorem x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, anebo detektorem x xxxxxxxx polem, xxxxxxxxxx x xxxxx 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, C18, 10 μx náplní xxxx xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xx xxxxxxxxxx vláken (Xxxxxxx XX/X xxxx xxxxxxx)
4.6 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45 μx
5. Xxxxxx
Xxxx.: Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xx světlo. Xxxxx xxxx být xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx krmivo xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx, zda xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xx xxxxxx xxxxxxx test xxxxxxxxxx xxxxxxxx modelového xxxxxx (5.1.1.), xx xxxxxxx bylo přidáno xxxxxx množství xxxxxxxxxx, xxxx je xx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxx 60 xx/xx xx xx 250 xx Erlenmeyerovy xxxxx xxxxxxx 3 ml xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.1.). Roztok xx xxxxxx xxx xx xxxxx 0,5 xx x proudu dusíku. Xxxxx xx 15 x modelového xxxxxx, xxxxxxxx xx x xx xxxxxx xxxxxxxx xx může xxxxx x xxxxxxxx (5.2.).
Pozn.: Xxx xxxx této xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx krmivo xxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx vzorek x nemělo xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx množství xxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Do 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxx 0,01 g, xxxxx xx 100 ml xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xx třepačce (4.2). Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx filtr xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5) x xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx xx 150 xx Erlenmeyerovy baňky. Xxxxx xx 7,5 x xxxxxxxxxxxxx xxxx (3.4), xxxxxxxxx a xxx xxxxx xx xxxxx. Potom xx xxxxx přefiltruje xxxx xxxxx xx skleněných xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx použije x xxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Xxxxxxxx kolony x xxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx kolony (4.1) se vloží xxxx zátka xx xxxxxx vaty x xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx se 11,0 g xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.5) x xxxxxx xx xx kolony, xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx. Oxid xxxxxxx xx v xxxxxxxx koloně xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx konec xxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxx xxxxxx
Xx připravenou xxxxxx xx xxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2). Xxxxxx pipety xx xxxx o xxxxx xxxxxx x extrakt xx nechá řádně xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx pomocí 100 xx xxxxxxxxx (3.1) xxx rychlosti xxxxxxx 2 – 3 ml xx xxxxxx x xxxxx xx xxxx xx 250 xx xxxxx x xxxxxxx dnem. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxx xxxxxxx 40xX odpaří xx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Odparek xx znovu rozpustí xx 3 – 4 xx mobilní xxxx (3.8.) x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx 10 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 1 – 2 xx xxxxxxx xxxx x xxxx roztoky xx xxxxxxx xx xxxxxxx baňky. Xxxxx xx doplní xx xxxxxx mobilní xxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxxxx část xxxxxxxxx xxxx 0,45 μx xxxxx (4.7). Tento xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx HPLC xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Stanovení xxxxxx xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (XXXX)
5.4.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx i xxxx xxxxx xxxxxxx ke xxxxxxx výsledkům:
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
mobilní xxxx (3.8),
průtoková xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 317 xx,
xxxxx xxxxxxxx: 20–50 μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx systému xx xxxxxxxxxx opakovaným nástřikem xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.3), xxxxx xxxxxxxx 3,6 μx/xx, xx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx kalibrační xxxxxx (3.9.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx výšky (xxxxxx) píků xxx xxxxxx koncentraci. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx získá xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx nebo ploch xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μg/ml.
5.4.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx, jako xxx xxxxxxxxx x určí xx průměrná xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) píků xxxxxxxxxx.
6. Výpočet x xxxxxxxxx xxxxxxxx
X průměrných xxxxxx xxxxx (xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxx v xxxxxxx xxxxxx xx xxxx koncentrace xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx grafu (5.4.2).
x = (x × 200)/x,
xx kterém xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx,
x = hmotnost xxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx.
7. Xxxxxxx výsledků
7.1 Identita
Identita xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s přídavkem xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxx roztokem (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx xxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxx
X xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx robenidinu xx xxx obdobné xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xx xxxxxx xxxxx výška xxxx robenidinu xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x obsahu xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx extraktu. Xxxx píku v xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx následujících xxxxxxxx:
x) xxx vlnové xxxxx maximální xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx stejný s xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx detekčního xxxxxxx. Xxx detektor x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx mezi 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx zkoušeného xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tohoto xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx nikde xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
x) xxx vlnové xxxxx xxxx 220 x 350 xx se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x této xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx stejná xxxxxx x jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx xxxx dosaženo některého x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx provedených xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. nejvyššího výsledku xxx obsahu xxxxxxxxxx xxx 15 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx pro fortifikovaný xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxx analyzovalo xxxxx xxxxxx xxxxx pro xxxxxx a xxxxxxx, xxxxxxx nebo peletovaných. Xxxxx xx vzorků xxx podroben xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x této xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (mg/kg) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
CVr (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
XX (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Xx = standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = variační xxxxxxxxxx opakovatelnosti
SR = xxxxxxxxxx odchylka x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx x reprodukovatelnosti
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
(2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx slouží k xxxxxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx. Dolní mez xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx.
2. Princip
Methylbenzochát je xxxxxxxxxx xx vzorku xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx methansulfonové. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx dichlormethanem, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxx xxx znovu xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografií (XXXX) xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, xxx HPLC
3.3 Xxxxxxx xxxx XXXX
Xxxx xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (pro XXXX) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx se xxxx 0,22 μx xxxxx (4.5.) x xxxxxxx (xxxx. ultrazvukem xx xxxx 10 minut).
3.4 Xxxxxx xxxxxxxx methansulfonové σ = 2 %
20 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx rozředí x 1000 ml xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx σ = 10 %
100 xx kyseliny chlorovodíkové (X20 x. 1,18x/xx) xx xxxxxxx x 1000 xx xxxx.
3.6 Xxxxx XX-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx takto: 100 x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x 500 ml xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (3,5) x xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x varu na xxxxx desce. Xx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx. Filtruje xx xxxx papírový filtr xx sníženého xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 500 xx vody x xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx 250 ml xxxxxxxxx x xxxxxx prosáváním xxxxxxx přes xxxxxxxxx xxxxx. Vysušený xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx.
3.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: čistý xxxxxxxxxxxxxxx (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Xxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxx, 500 μx/xx
Xxxxxx xx 50 xx xxxxxxxxxx xxxxx (3.7) x xxxxxxxxx 0,1 mg, xxxxxxxx xx xx 100 xx xxxxxxx xxxxx x roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), doplní xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.2 Pracovní standardní xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx 50μx/xx
Xx 50 xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.1), doplní se xxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxx 25 xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 1, 2, 3, 4 x 5 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx methylbenzochátu (3.7.2). Xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.3) x xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx mají xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 x 10 μg/ml xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx roztoky xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jejich xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.2 Rotační xxxxxxx
4.3 Xxxxxxxx kolona (250 x 15 xx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx 200 xx
4.4 HPLC xxxxxxxx xxxxxxxx XX detektorem x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
4.4.1 Xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, X – 18, 10μx xxxx kolona xxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.5 Xxxxxxxxxx filtry 0,45μx
5. Xxxxxx
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxx krmivo xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx analyzovat a xxxxxxxxxx zda v xxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx ani xxxx xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xxxx xx provést xxxx výtěžnosti xxxxxxxx xxxxxxxxxx krmiva, xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx je xxxxxxxx xx xxxxxx. X xxxxxxxxxxx xx xxxxxx 1,5 mg/kg xx xxxxx xx 20 g modelového xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.7.1), xxxxxxxx se x po 10 xxxxx se započne x extrakcí (5.2).
Pozn.: Xxxxxxxx krmivo pro xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx, xxxx xx xxxxxx, x xxx xxxx xxxxxxx by xxxxx xxx zjištěn xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 20 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx x přesností 0,01 g. Xxxxx xx 100 xx xxxxxxx kyseliny methansulfonové (3.4) x mechanicky xx xxxxx (4.1) xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 ml xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx 100 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx xxxxx 25 xx filtrátu, xxxxx xxx získán postupem xxxxxxxx v xxxx (5.2). Dále se xx nálevky xxxxx 100 ml xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x třepe xx xxxx jedné xxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx vrstva (xxxxxxxxxxxxxx) xx xxxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx vodné xxxx xx xxxxxxx xx xxxxx dalšími 40 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x tyto xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx s kulatým xxxx. Extrakt dichlormethanu xx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx tlaku a xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx se xxxxxxxx x 20–25 xx xxxxxxxxx (3.2), xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (5.4).
5.4 Chromatografie xxxxxxx xxxxx
5.4.1 Příprava xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.3) xx xxxxx tampon xx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 5 x xxxxxxxxxx xxxxxx x x 50 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.5). Xxxx xxxx xx xxxxxx do skleněné xxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx kyselina xx odpustí xx xxxxx nad xxxxxxx xxxxxxxxxxx x kolona xx promývá xxxxx xxxxx xxxxxxxx eluát xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx do kolony xx nalije 50 xx methanolu (3.2) x xxxxx se xxxxx xx k xxxxxxx xxxxxx.
5.4.2 Kolonová xxxxxxxxxxxxxx
Xx kolonu se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (5.3). Baňka x kulatým dnem xx vypláchne xxxxx xxxxxxx 5 xx 10 xx xxxxxxxxx (3.2) x výplach xx také xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xx nechá stéci xx x xxxxxxx xxxxxx. Kolona se xxxxxxx 50 ml xxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxx 150xx roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx se xxxx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx (5.4.2) xx xxxxxxx do xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 až 10 xx methanolu (3.2) a xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxx nálevky. Xxxx xx xx dělící xxxxxxx xxxxx 300 xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 130 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1). Třepe se xx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx fáze xxxxxxxxxxx. Xxxxx (xxxxxxxxxxxxxxxx) xxxxxx xx xxxxxxx xx 500 xx xxxxx x kulatým xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx 70 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x tyto xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx x xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx tlaku a xxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx v baňce xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx převede xx 10 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx 1 až 2 xx methanolu x xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Baňka xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxxxxxx množství se xxxxxxxxxxx xxxx membránový xxxxx (4.6). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx analýzu XXXX (5.6).
5.6 Xxxxxxx xxxxxx XXXX
5.6.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx uvedeny indikativně. Xxxxx xxx použity xxxx xxxxxxxxx pokud xxxxxxx xx stejným xxxxxxxxx:
- xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
- xxxxxxx xxxx: směs xxxxxxxxx a vody,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 265 nm,
- xxxxx xxxxxxxx: 20 xx 50μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, až xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx ploch xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.7.3) xx provede xxxxxxx xxxxxxxx x změří xxxxx (plochy) xxxx xxx xxxxxx koncentraci. Xxxxxxxxxx křivka se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx kalibračních roztoků x μx/xx.
5.6.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.5.) x použitím xxxxxx xxxxx, xxxx byl xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x určí xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) x píků xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxx xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xx xxxx koncentrace x xxxxxxx xxxxxx x μg/ml xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2.).
Obsah xxxxxxxxxxxxxxxx w (mg/kg) xx vzorku xx xxxxxxx podle xxxxxx xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx xxxxxx xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx xxxxxxx vzorku x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx stanovením x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx porovnání xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx stanovením x přídavkem
Extrakt vzorku xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx množství pracovního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx přidaného methylbenzochátu xx být xxxxxxx xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx by xxxxx pouze ke xxxxxxx píku xxxxxxxxxxxxxxxx x ohledem xxx xx přidané xxxxxxxx, xxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx píku x polovině maximální xxxxx musí xxx xx přibližně 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při xxxxxx délce maximální xxxxxxxx vzorku i xxxxxxxxx musí xxx xxxxxx xxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx schopností detekčního xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x diodovým xxxxx xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) při xxxxxx délce mezi 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit xx ostatních částí xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, jestliže jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) xxx vlnové xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx spektrum xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx zkoušeného xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx v xxxx xxxxx spektra x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx kritéria xx dosaženo, xxxxxxxx xxxx vykázána xxxxxx xxxxxx x jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx ve vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených xx stejném xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx methylbenzochátu mezi 4 x 20 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx 90 %.
8. Výsledky xxxxxxxxx xxxxx
X deseti xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx. X každého xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx
|
Xxxxxxxx krmivo |
Sypké xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
Xxxxxxxxxx |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Xx (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
XX (mg/kg) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
CVR |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Výtěžnost (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = standardní xxxxxxxx opakovatelnosti
CVr = xxxxxxxx koeficient opakovatelnost
SR = standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = variační xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx