Desátá Směrnice Xxxxxx
xx xxx 25. xxxxxxxx 1984,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(84/425/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 70/373/XXX ze xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx zavádějí xxxxxx xxxxxx xxxxxx x analýzy Společenství xxx úřední xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxx o xxxxxxxxxxx Xxxxx, x xxxxxxx na xxxxxx 2 uvedené směrnice,
vzhledem x tomu, xx xxxxxxx xxxxxxxx požaduje, xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx kvality x xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx za použití xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx x xxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx směrnice Xxxxxx 71/250/XXX [2], 73/46/XXX [3], 74/203/XXX [4], 75/84/XXX [5], 76/372/XXX [6] xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 81/680/XXX [7], xxxxxxxx 71/393/XXX [8], 72/199/XXX [9], 78/633/XXX [10] xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 84/4/EHS [11] x směrnice 81/715/XXX [12] xxx xxxxxxxxx xxxxxx počet xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství; xx xxxxxx v práci xx té xxxx xxxx xxxxxxx přijmout xxxxx metodu;
vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA TUTO XXXXXXXX:
Článek 1
Členské xxxxx xxxxxxx, že analýzy xxx xxxxxx kontrolu xxxxx, xxxxx jde x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxx v účinnost xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. června 1985 x neprodleně x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 25. xxxxxxxx 1984.
Xx Xxxxxx
Xxxx Dalsager
člen Xxxxxx
[1] Úř. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Úř. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[4] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[5] Xx. věst. X 32, 5.2.1975, x. 26.
[6] Xx. xxxx. X 102, 15.4.1976, x. 8.
[7] Xx. věst. X 246, 29.8.1981, x. 32.
[8] Úř. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[9] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[10] Úř. věst. X 206, 29.7.1978, x. 43.
[11] Úř. xxxx. X 15, 18.1.1984, x. 28.
[12] Xx. xxxx. X 257, 10.9.1981, x. 38.
XXXXXXX
XXXXXXXXX SPIRAMYCINU DIFÚZÍ XX AGAROVÉM XXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxxxx xx určena xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx mez xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx (1 xxx) [1]
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx/xxxxxx-xxxxxxxxxxxxxx pufrem x pH 8. Xxxxxxx je dekantován xxxx odstředěn a xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx difúze spiramyscinu x agarovém xxxxx xxxxxxxxxxxx mikroorganizmem Xxxxxxxxxxx xxxxxx. Difúze se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx antibiotických xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxx xxxxxx XXX 9341 (XXXX 8340, XXXX 8553)
3.1 Xxxxxxxxx základní xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.1) x šikmé xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 30 °X. Kulturu xxxxxxxxx v chladničce xxx teplotě xxxxx 4 °C. Znovu xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx.
3.2 Příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxxx [2]
Xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx bakterie 2 xx 3 ml xxxxxxx chloridu sodného (4.3). Xxxx suspenzi xxxxxxxx k xxxxxxxxxx 250 ml xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx x Rouxově xxxxx x xxxxxxxxx 18 xx 20 xxxxx xxx 30 °X. Xxxxxxxx xxxxxx do 25 ml xxxxxxx xxxxxxxx sodného (4.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx 1/10 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx 75 %, xxxxxx xxx 650 xx x 1 xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (4.3.). Tato suspenze xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxx 4 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxx xxxxxx [3]
|
Xxxxxx pepton |
6,0 g |
|
Trypton |
4,0 x |
|
Xxxxxxx x xxxxxxx |
3,0 x |
|
Xxxxxxx x masa |
1,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxx |
10,0 xx 20,0 g |
|
Voda |
1000 ml |
|
PH 6,5 xx 6,6 (xx xxxxxxxxxxx). |
|
|
4.2 Xxxxxxxx xxxxxx [4] |
|
|
Trypton |
5,0 g |
|
Extrakt x xxxxxxx |
4,0 x |
|
Xxxxxxx x masa |
3,0 x |
|
Xxxx |
10,0 xx 20,0 x |
|
Xxxx |
1000 xx |
|
XX 8,0 (po xxxxxxxxxxx). |
|
4.3 Roztok xxxxxxxx xxxxxxx 0,8 % (xxxxxx objemový)
Rozpusťte 8 x chloridu xxxxxxx xx vodě a xxxxxx xx 1000 xx; xxxxxxxxxxxx.
4.4 Xxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxx, pH 8,0
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx draselný X2XXX4 |
16,7 g |
|
Hydrogen xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 |
0,5 x |
|
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx XxXXX3 |
20,0 x |
|
Xxxx xx |
1000 ml |
4.5 Xxxx xxxxxxx fosfát-bikarbonátový xxxx (4.4)
50/50 (xxxxxxxx).
4.6 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx (v XX).
5. Standardní roztoky
Rozpusťte xxxxxx odvážené množství xxxxxxxxxx látky (4.6.) xx směsi (4.5.) x zřeďte xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx obsahující 1000 IU spiramycinu xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx láhvi xxx 4 °X xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx až xxx xxx.
X xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx připravte xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (4.5.) xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
X8 |
1 |
XX/xx |
|
X4 |
0,5 |
XX/xx |
|
X2 |
0,25 |
XX/xx |
|
X1 |
0,125 |
XX/xx |
6. Xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxx
6.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxx 20,0 x xxxxxx v xxxxxxx xxxxx, 1,0 xx 20,0 x x xxxxxxx. Xxxxxxxx 100 xx směsi (4.5) x xxxxxxxx 30 xxxxx. Odstřeďte xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.5), abyste xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx 1 IU/ml (= X8).
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 2,5 mg/kg xxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx 20,0 x xxxxxx. Xxxxxxxx 100 xx směsi (4.5) x třepejte 30 xxxxx. Odstřeďujte několik xxxxx, xxxxxxxx 50 xx roztoku xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx na xxx 4 xx xx sníženého xxxxx xx rotační xxxxxxx xxx xxxxxxx nepřesahující 40 °X. Xxxxxx xxxxxx směsí (4.5), xxxxxx xxxxxxxx očekávaný xxxxx xxxxxxxxxxx 1 XX/xx (= X8).
6.2 Xxxxxxxx xxxxxxx
X roztoku X8 xxxxxxxxx xxxxxxX4 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,5 XX/xx), U2 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,25 IU/ml) x X1 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,125 IU/ml) xxxxxx postupného xxxxxx (1 + 1) xxxxx (4.5).
7. Xxxxxxxx xxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx zkušební médium (4.2) bakteriální xxxxxxxx (3.2) při asi 50 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xx zkušebním xxxxxx (4.2) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze, xxxxx xxxxxxxx největší x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x různými xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx agarem xx xxxxxxx xx miskách xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, X2, X1) x xxxxxx koncentracemi xxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, U1). Xxxx čtyři xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxx xx každé xxxxx. Pro tento xxxxxx vyberte xxxxx xxxxxxxxxx velké, xxx xxxxxxxxxx udělat v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx 10 xx 13 mm x xxxxxxx 30 xx xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx skládajících xx x xxxxxx xxxx s xxxxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx, 200 xx x průměru x 20 xx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxxx množství xxxxx (4.2.), inokulovaného xxxx x 7.1., xxx xxxxxxxxx vrstvu xxx 2 xx xxxxxx (60 ml xx xxxxx x xxxxxxx 200 ml). Xxxxxxxx xxxxx, vytvořte xxxxxx x xxxxxxxx xx nich xxxxxx xxxxxxxx objemy xxxxxxxxxx x standardních roztoků (xxxx 0,10 a 0,15 ml xx xxxxx, xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx čtyřikrát xxx, xx každé stanovení xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Inkubace
Inkubujte xxxxx 16 xx 18 xxxxx xxx 30 ± 2 °X.
8. Vyhodnocení
Změřte xxxxxx xxxxxxxxxxx zón x xxxxxxxxx na 0,1 xx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro každou xxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx logaritmus xxxxxxxxxxx ve vztahu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xx níže xxxxxxx.
Xxxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" xxx xxx standardní xxxxxxxx xxxxxx (SL) s xxxxxxxx rovnice:
a) XX = 7x1 + 4x2+ x4 – 2x8 / 10
Xxxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" bod xxx xxxxxxxxxx nejvyšší úroveň (XX) x xxxxxxxx xxxxxxx:
x) SH = 7x8 + 4x4+ x2 – 2x1 / 10
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" xxxx pro xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (UH) xxxxxxxxxx x1, u2, x4 a x8 xx x1, s2, x4, x x8 x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx [5]
Xxxxxxxxxxxx vypočtené xxxxxxx XX x XX xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxx, xxxxxx xxxxxxx "nejhodnější" xxxxxx pro standardní xxxxxx. Xxxxxxx zaznamenejte XX x XX x xxxxxx xx xxx, xxxxxx dostali "xxxxxxxxxxxx" xxxxxx xxx xxxxxxx.
X nepřítomnosti xxxxxxxxxx xxxxxxxxx by křivky xxxx být paralelní. Xxx praktické účely xxxxx xxx křivky xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx (XX — XX) a (XX — XX) xxxxxxxxxx xxxx xxx x 10 % xx xxxxxx střední xxxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, buď x1 x x1 nebo x8 x x8, xxxxx xxx vyřazeny x XX, SH, XX a XX xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" xxxxxx:
x) XX = 5x1 + 2x2 – x4 / 6 nebo 5x2 + 2x4 – x8 / 6
b′) XX = 5x4 + 2x2 – x1 / 6 xxxx 5x8 + 2x4 – s2 / 6
x podobně xxx XX x XX. Měla by xxx splněna xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Skutečnost, xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx tří xxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxxxx x závěrečném xxxxxxxxx o xxxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxx považovány xx paralelní, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity (xxx A) x xxxxxx jedné x xxxxxxxxxxxxx rovnic, x xxxxxxxxxx xx xxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx ohodnocení xxxxxxxxxxxx.
Xxx xxxxx xxxxxx
x) Xxx A = (x1+ x2+ x4+ x8 – x1 – s2 – x4 – x8) × 0,602 / x4+ x8+ s4+ x8 – x1 – u2 – x1 – x2
Xxx xxx xxxxxx
x) Log X = (x1+ x2+ x4 – x1 – x2 – x4) × 0,401 / x4+ x4 – u1 – x1
xxxx
x´) Log X = (x2+ x4+ x8 – x2 – x4 – x8) × 0,401 / x8+ x8 – u2 – s2
Aktivita extraktu xxxxxx = aktivita xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx × X
(X8 = S8 × X)
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nalezena xxxx xxxxxx 0,5 xx 2,0, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxx vhodné xxxxxx koncentrací xxxxxxxx xxxx, pokud toto xxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx. Pokud xxxxxx xxx relativní aktivita xxxxxxxx xx požadovaného xxxxxxx, xxxx xxx xxxxx získaný xxxxxxxx xxxxxxxxx xx přibližný x xxxx xxxx xxx uvedeno x xxxxxxxxxx protokolu x xxxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx stanovení. Xxxxx xxxx xxxxx docíleno xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxx považováno xx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 2 xx/xx v absolutní xxxxxxx pro xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx do 10 mg/kg,
- 20 % xxxxxxxx x xxxxxxxx hodnotě xxx xxxxxx 10 xx 25 xx/xx,
- 5 xx/xx v absolutní xxxxxxx xxx xxxxxx 25 xx 50 xx/xx,
- 10 % xxxxxxxx x nejvyšší xxxxxxx pro xxxxxx xxx 50 xx/xx.
[1] 1 xx báze xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 3200 xxxxxxxxxxxxx jednotek (XX).
[2] Xxxxx metody xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx stanoveno, xx xxxxxxxxx podobné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
[3] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající xxxxxx výsledky.
[4] Xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[5] Xxxx písmena "s" x "x" odpovídají xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx.