Desátá Xxxxxxxx Komise
ze xxx 25. července 1984,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx úřední kontrolu xxxxx
(84/425/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Rady 70/373/XXX ze dne 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxx, a xxxxxxx xx článek 2 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx požaduje, xxx úřední xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx dodržování požadavků xxxxxxxxxx právních x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx byla xxxxxxxxx xx použití xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxx vzorků x xxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Komise 71/250/XXX [2], 73/46/EHS [3], 74/203/EHS [4], 75/84/XXX [5], 76/372/XXX [6] xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 81/680/XXX [7], xxxxxxxx 71/393/XXX [8], 72/199/XXX [9], 78/633/EHS [10] xxxxxxxxx pozměněné xxxxxxxx 84/4/XXX [11] x xxxxxxxx 81/715/XXX [12] již xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx xxxxxx x xxxxx xx xx xxxx xxxx xxxxxxx přijmout xxxxx xxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, že xxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx, xxxxx xxx x jejich obsah xxxxxxxxxxx, xx provádějí xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxx x účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx směrnicí nejpozději xx 30. xxxxxx 1985 x xxxxxxxxxx x nich xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
V Bruselu dne 25. xxxxxxxx 1984.
Xx Xxxxxx
Xxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[4] Xx. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
[6] Xx. věst. X 102, 15.4.1976, x. 8.
[7] Úř. xxxx. X 246, 29.8.1981, x. 32.
[8] Úř. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[9] Úř. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[10] Xx. xxxx. X 206, 29.7.1978, x. 43.
[11] Xx. věst. X 15, 18.1.1984, x. 28.
[12] Úř. xxxx. X 257, 10.9.1981, x. 38.
PŘÍLOHA
STANOVENÍ XXXXXXXXXXX DIFÚZÍ XX AGAROVÉM MÉDIU
1. Xxxx a rozsah
Metoda xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x premixech. Xxxxx xxx stanovitelnosti xx 1 mg/kg (1 xxx) [1]
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx metanol/fosfát-bikarbonátovým xxxxxx x xX 8. Xxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x agarovém médiu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Micrococcus xxxxxx. Difúze se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx je xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx použitých xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxx xxxxxx ATC 9341 (XXXX 8340, XXXX 8553)
3.1 Udržování xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx kultivační médium (4.1) x šikmé xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 24 hodin xxx 30 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx okolo 4 °C. Znovu xxxxxxxxx každé xxx xxxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx [2]
Xx dříve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx agaru xxxxxx xxxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxx suspenzi xxxxxxxx k xxxxxxxxxx 250 ml kultivačního xxxxx (4.1) obsaženého x Xxxxxxx baňce x xxxxxxxxx 18 xx 20 xxxxx xxx 30 °X. Xxxxxxxx xxxxxx xx 25 xx roztoku xxxxxxxx sodného (4.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx na 1/10 xxxxxxxx xxxxxxxx sodného (4.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx být xxxxx 75 %, xxxxxx při 650 xx v 1 xx kyvetě xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx sodného (4.3.). Xxxx xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxx 4 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxx xxxxxx [3]
|
Xxxxxx xxxxxx |
6,0 g |
|
Trypton |
4,0 x |
|
Xxxxxxx z kvasnic |
3,0 x |
|
Xxxxxxx z masa |
1,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 g |
|
Agar |
10,0 xx 20,0 x |
|
Xxxx |
1000 xx |
|
XX 6,5 xx 6,6 (xx xxxxxxxxxxx). |
|
|
4.2 Xxxxxxxx xxxxxx [4] |
|
|
Trypton |
5,0 x |
|
Xxxxxxx x xxxxxxx |
4,0 g |
|
Extrakt x xxxx |
3,0 x |
|
Xxxx |
10,0 xx 20,0 x |
|
Xxxx |
1000 xx |
|
XX 8,0 (xx xxxxxxxxxxx). |
|
4.3 Roztok xxxxxxxx xxxxxxx 0,8 % (xxxxxx xxxxxxxx)
Xxxxxxxxx 8 x chloridu xxxxxxx xx xxxx a xxxxxx xx 1000 xx; xxxxxxxxxxxx.
4.4 Fosfát-bikarbonátový xxxx, xX 8,0
|
Dihydrogen xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx X2XXX4 |
16,7 x |
|
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 |
0,5 x |
|
Xxxxxxxx xxxxxxxxx sodný XxXXX3 |
20,0 x |
|
Xxxx do |
1000 xx |
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxx (4.4)
50/50 (objemově).
4.6 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx (v XX).
5. Standardní xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.6.) xx xxxxx (4.5.) x zřeďte xxxxxxx xxxxx, xxxxxx obdrželi xxxxxxx roztok obsahující 1000 IU spiramycinu xx mililitr. Skladován x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 4 °X xx tento xxxxxx xxxxxxxx xx xxx xxx.
X xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx postupným xxxxxxx xxxxx (4.5.) xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
X8 |
1 |
XX/xx |
|
X4 |
0,5 |
XX/xx |
|
X2 |
0,25 |
XX/xx |
|
X1 |
0,125 |
XX/xx |
6. Xxxxxxxx xxxxxxxx x zkušebních xxxxxxx
6.1 Extrakce
Odvažte 20,0 x xxxxxx x xxxxxxx krmiv, 1,0 xx 20,0 x x premixů. Xxxxxxxx 100 ml xxxxx (4.5) x třepejte 30 minut. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.5), abyste xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx 1 XX/xx (= X8).
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 2,5 xx/xx xxxxxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx 20,0 x xxxxxx. Xxxxxxxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, odeberte 50 xx roztoku supernatantu x odpařte na xxx 4 ml xx xxxxxxxxx xxxxx xx rotační xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 40 °C. Xxxxxx xxxxxx xxxxx (4.5), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx spiramycinu 1 XX/xx (= X8).
6.2 Xxxxxxxx roztoky
Z xxxxxxx X8 připravte xxxxxxX4 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,5 XX/xx), X2 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,25 XX/xx) x X1 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,125 XX/xx) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (1 + 1) xxxxx (4.5).
7. Zkušební xxxxxx
7.1 Naočkování xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.2) bakteriální suspenzí (3.2) xxx xxx 50 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx miskách xx zkušebním médiem (4.2) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx největší x nejjasnější inhibiční xxxx s xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx spiramycinu.
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx agarem se xxxxxxx xx miskách xx čtyřmi xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, S2, S1) x čtyřmi xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, X1). Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx nutně xxxxxxxx xx každé xxxxx. Xxx tento xxxxxx vyberte xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, aby xxxxxxxxxx udělat v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx 10 až 13 xx x xxxxxxx 30 mm xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xx miskách xxxxxxxxxxxx xx z xxxxxx xxxx x xxxxxxxx x hliníku nebo xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx, 200 xx x xxxxxxx a 20 xx vysokým.
Rozlijte xx xxxxx množství xxxxx (4.2.), inokulovaného xxxx x 7.1., xxx vytvořilo xxxxxx xxx 2 mm xxxxxx (60 xx xx xxxxx o xxxxxxx 200 ml). Xxxxxxxx ustát, vytvořte xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx 0,10 x 0,15 xx na xxxxx, xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxx každou koncentraci xxxxxxx xxxxxxxxx xxx, xx xxxxx stanovení xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx 16 xx 18 hodin xxx 30 ± 2 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx zón s xxxxxxxxx na 0,1 xx. Zaznamenejte střední xxxxxxx xxx každou xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx papír, xxx xxxx xxxxxxxxx logaritmus xxxxxxxxxxx xx xxxxxx x průměrům xxxxxxxxxxx xxx. Utvořte nejvhodnější xxxxxx standardního roztoku x extraktu, například xxx je xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx "nejvhodnější" xxx xxx standardní nejnižší xxxxxx (XX) x xxxxxxxx rovnice:
a) XX = 7x1 + 4x2+ s4 – 2x8 / 10
Xxxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" xxx xxx xxxxxxxxxx nejvyšší xxxxxx (XX) s xxxxxxxx xxxxxxx:
x) SH = 7x8 + 4s4+ x2 – 2s1 / 10
Xxxxxxx vypočítejte "xxxxxxxxxxxx" body pro xxxxxxxx úroveň xxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (UH) xxxxxxxxxx x1, x2, x4 a x8 xx x1, x2, x4, a x8 x dříve xxxxxxxxx xxxxxxxxx [5]
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XX a XX xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx tak, xxxxxx xxxxxxx "nejhodnější" xxxxxx xxx standardní xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX x XX x spojte je xxx, abyste dostali "xxxxxxxxxxxx" xxxxxx xxx xxxxxxx.
X nepřítomnosti jakéhokoli xxxxxxxxx by xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx křivky xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx (SH — XX) x (XX — XX) xxxxxxxxxx xxxx než x 10 % xx jejich xxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xxxx křivky xxxxxxxxxxx, xxx x1 x x1 nebo x8 x s8, xxxxx být xxxxxxxx x XX, SH, XX x UH xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxx alternativní "xxxxxxxxxxxx" xxxxxx:
x) XX = 5x1 + 2s2 – s4 / 6 xxxx 5s2 + 2x4 – x8 / 6
x′) XX = 5s4 + 2s2 – x1 / 6 xxxx 5x8 + 2x4 – x2 / 6
x xxxxxxx xxx XX x XX. Xxxx by xxx xxxxxxx stejná xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx, xx byl výsledek xxxxxxxxx ze xxx xxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx xxxx křivky považovány xx paralelní, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity (xxx X) x xxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxxx xx xxx, xxxxx xxxx použity xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxx xxxxx úrovně
c) Xxx X = (x1+ x2+ x4+ x8 – s1 – s2 – x4 – x8) × 0,602 / x4+ x8+ x4+ x8 – u1 – u2 – x1 – x2
Xxx xxx úrovně
d) Log X = (x1+ x2+ x4 – x1 – x2 – x4) × 0,401 / u4+ x4 – x1 – x1
xxxx
x´) Log X = (u2+ x4+ u8 – x2 – s4 – x8) × 0,401 / x8+ x8 – x2 – x2
Xxxxxxxx extraktu xxxxxx = aktivita xxxxxxxxxxx standardu × X
(X8 = X8 × X)
Xxxxx byla xxxxxxxxx xxxxxxxx nalezena xxxx xxxxxx 0,5 xx 2,0, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx koncentrací extraktu xxxx, pokud xxxx xxxx možné, xxxxxxx xxxxxxxxx. Pokud nemůže xxx relativní aktivita xxxxxxxx xx požadovaného xxxxxxx, xxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx xxxx křivky xxxxxxxxxx za neparalelní, xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, stanovení xxxx xxx považováno xx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx kilogram krmiva.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx analytikem xxxxx xxxxxxxxx:
- 2 xx/xx v xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsahy xxxx xxxxxxxxxxx xx 10 mg/kg,
- 20 % xxxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx 10 xx 25 xx/xx,
- 5 xx/xx x absolutní xxxxxxx xxx xxxxxx 25 xx 50 xx/xx,
- 10 % xxxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx xxx obsahy xxx 50 mg/kg.
[1] 1 xx xxxx xxxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxxx 3200 mezinárodních xxxxxxxx (XX).
[2] Xxxxx metody xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx bakteriální xxxxxxxx.
[3] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[4] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx kultivační médium xxxxxxxxx složení a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[5] Xxxx xxxxxxx "x" x "x" xxxxxxxxxx xxxxxxxx inhibičních xxx.