Xxxxxx Xxxxxxxx Komise
ze xxx 25. xxxxxxxx 1984,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(84/425/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Rady 70/373/XXX xx xxx 20. července 1970, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x analýzy Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Aktem o xxxxxxxxxxx Řecka, x xxxxxxx na xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx požaduje, xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx dodržování požadavků xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisů týkajících xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Komise 71/250/XXX [2], 73/46/XXX [3], 74/203/XXX [4], 75/84/XXX [5], 76/372/XXX [6] naposledy pozměněné xxxxxxxx 81/680/XXX [7], xxxxxxxx 71/393/XXX [8], 72/199/XXX [9], 78/633/XXX [10] xxxxxxxxx pozměněné xxxxxxxx 84/4/XXX [11] x xxxxxxxx 81/715/XXX [12] již xxxxxxxxx xxxxxx počet xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že xxxxxx x práci xx xx doby xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že opatření xxxx xxxxxxxx jsou x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxx obsah xxxxxxxxxxx, xx provádějí xxxxxxx popsanou x xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. června 1985 x neprodleně x xxxx uvědomí Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 25. xxxxxxxx 1984.
Xx Xxxxxx
Xxxx Dalsager
člen Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[4] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[5] Xx. věst. X 32, 5.2.1975, x. 26.
[6] Xx. věst. X 102, 15.4.1976, x. 8.
[7] Xx. věst. X 246, 29.8.1981, x. 32.
[8] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[9] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[10] Xx. věst. X 206, 29.7.1978, x. 43.
[11] Xx. věst. X 15, 18.1.1984, x. 28.
[12] Xx. věst. X 257, 10.9.1981, x. 38.
PŘÍLOHA
STANOVENÍ XXXXXXXXXXX XXXXXX XX XXXXXXXX MÉDIU
1. Xxxx x rozsah
Metoda xx určena xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxx stanovitelnosti xx 1 xx/xx (1 xxx) [1]
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx metanol/fosfát-bikarbonátovým xxxxxx x pH 8. Xxxxxxx xx dekantován xxxx odstředěn a xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxx difúze xxxxxxxxxxxx x agarovém xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Micrococcus xxxxxx. Difúze se xxxxxxxxx tvorbou xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón je xxxxx úměrný logaritmu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx antibiotických xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganizmus: Xxxxxxxxxxx xxxxxx ATC 9341 (XXXX 8340, XXXX 8553)
3.1 Udržování xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx kultivační xxxxxx (4.1) x xxxxx xxxxxxxx mikroorganizmem Xxxxxxxxxxx xxxxxx x inkubujte 24 hodin xxx 30 °X. Kulturu xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx 4 °X. Znovu xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx.
3.2 Příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxxx [2]
Xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx bakterie 2 xx 3 ml xxxxxxx chloridu xxxxxxx (4.3). Xxxx suspenzi xxxxxxxx x naočkování 250 ml xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx x Rouxově xxxxx x xxxxxxxxx 18 xx 20 xxxxx xxx 30 °X. Xxxxxxxx smyjte xx 25 ml xxxxxxx xxxxxxxx sodného (4.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx na 1/10 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx 75 %, xxxxxx xxx 650 xx x 1 xx xxxxxx proti xxxxxxx xxxxxxxx sodného (4.3.). Tato xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxx 4 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxx xxxxxx [3]
|
Xxxxxx pepton |
6,0 g |
|
Trypton |
4,0 x |
|
Xxxxxxx x kvasnic |
3,0 x |
|
Xxxxxxx x xxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxx |
10,0 až 20,0 x |
|
Xxxx |
1000 xx |
|
XX 6,5 xx 6,6 (xx xxxxxxxxxxx). |
|
|
4.2 Zkušební xxxxxx [4] |
|
|
Trypton |
5,0 g |
|
Extrakt x xxxxxxx |
4,0 g |
|
Extrakt x xxxx |
3,0 x |
|
Xxxx |
10,0 xx 20,0 g |
|
Voda |
1000 xx |
|
XX 8,0 (xx xxxxxxxxxxx). |
|
4.3 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,8 % (xxxxxx xxxxxxxx)
Xxxxxxxxx 8 x chloridu xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx xx 1000 xx; xxxxxxxxxxxx.
4.4 Fosfát-bikarbonátový xxxx, pH 8,0
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx dvou xxxxxxxx X2XXX4 |
16,7 x |
|
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 |
0,5 x |
|
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx XxXXX3 |
20,0 x |
|
Xxxx xx |
1000 ml |
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxx (4.4)
50/50 (objemově).
4.6 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx (v XX).
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx látky (4.6.) xx směsi (4.5.) x xxxxxx xxxxxxx xxxxx, abyste obdrželi xxxxxxx roztok xxxxxxxxxx 1000 IU xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx x zazátkované xxxxx xxx 4 °X xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx až xxx xxx.
X xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (4.5.) xxxxxxxxxxx roztoky:
|
S8 |
1 |
IU/ml |
|
S4 |
0,5 |
IU/ml |
|
S2 |
0,25 |
IU/ml |
|
S1 |
0,125 |
IU/ml |
6. Xxxxxxxx xxxxxxxx a zkušebních xxxxxxx
6.1 Extrakce
Odvažte 20,0 x xxxxxx x xxxxxxx xxxxx, 1,0 xx 20,0 g x premixů. Xxxxxxxx 100 xx směsi (4.5) x xxxxxxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx supernatantu xxxxx (4.5), abyste xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx 1 IU/ml (= U8).
Pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 2,5 mg/kg xxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx 20,0 g xxxxxx. Xxxxxxxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxx 30 xxxxx. Odstřeďujte xxxxxxx xxxxx, odeberte 50 xx xxxxxxx supernatantu x xxxxxxx na xxx 4 xx xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 40 °C. Xxxxxx xxxxxx xxxxx (4.5), xxxxxx xxxxxxxx očekávaný xxxxx spiramycinu 1 XX/xx (= X8).
6.2 Xxxxxxxx xxxxxxx
X xxxxxxx X8 xxxxxxxxx xxxxxxX4 (xxxxxxxxx obsah: 0,5 XX/xx), X2 (očekávaný xxxxx: 0,25 IU/ml) x X1 (očekávaný xxxxx: 0,125 XX/xx) xxxxxx postupného xxxxxx (1 + 1) xxxxx (4.5).
7. Xxxxxxxx xxxxxx
7.1 Naočkování xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.2) xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.2) xxx xxx 50 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxxx na miskách xx xxxxxxxxx xxxxxx (4.2) stanovte xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze, xxxxx poskytne xxxxxxxx x nejjasnější xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx spiramycinu.
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxx xx čtyřmi xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, X1). Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxx nutně xxxxxxxx na xxxxx xxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx vyberte misky xxxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxxxxx udělat v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx 10 xx 13 xx x xxxxxxx 30 xx xxxx středy. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxxx x xxxxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx, 200 mm x průměru a 20 mm vysokým.
Rozlijte xx xxxxx množství xxxxx (4.2.), inokulovaného xxxx x 7.1., xxx xxxxxxxxx vrstvu xxx 2 xx xxxxxx (60 xx xx desku x xxxxxxx 200 xx). Xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx nich xxxxxx xxxxxxxx objemy xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx 0,10 a 0,15 xx xx xxxxx, podle průměru). Xxxxxxxx každou koncentraci xxxxxxx xxxxxxxxx tak, xx xxxxx stanovení xxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubujte xxxxx 16 xx 18 xxxxx xxx 30 ± 2 °X.
8. Vyhodnocení
Změřte xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx na 0,1 xx. Zaznamenejte xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, při xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx ve vztahu x xxxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxx nejvhodnější xxxxxx standardního roztoku x xxxxxxxx, například xxx je xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" xxx xxx xxxxxxxxxx nejnižší xxxxxx (XX) x xxxxxxxx xxxxxxx:
x) XX = 7x1 + 4x2+ s4 – 2x8 / 10
Stanovte "xxxxxxxxxxxx" bod xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx úroveň (XX) s použitím xxxxxxx:
x) SH = 7x8 + 4s4+ x2 – 2x1 / 10
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" xxxx xxx xxxxxxxx úroveň xxxxxxxx (XX) a xxxxxxxx xxxxxx extraktu (UH) xxxxxxxxxx x1, x2, x4 x x8 xx x1, s2, x4, x x8 x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx [5]
Zaznamenejte xxxxxxxxx xxxxxxx SL a XX xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx je xxx, xxxxxx dostali "nejhodnější" xxxxxx xxx standardní xxxxxx. Podobně xxxxxxxxxxxx XX x XX x spojte xx xxx, xxxxxx dostali "xxxxxxxxxxxx" křivku pro xxxxxxx.
X nepřítomnosti xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx být xxxxxx xxxxxxxxxx xx paralelní, xxxxx xxxxxxx (XX — SL) x (XX — XX) xxxxxxxxxx xxxx xxx x 10 % xx jejich střední xxxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx u1 x x1 xxxx x8 a s8, xxxxx být xxxxxxxx x XX, XX, XX x XX xxxxxxxxx x použitím xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxx alternativní "xxxxxxxxxxxx" xxxxxx:
x) SL = 5x1 + 2x2 – x4 / 6 xxxx 5x2 + 2x4 – x8 / 6
b′) XX = 5x4 + 2s2 – x1 / 6 xxxx 5x8 + 2x4 – x2 / 6
x podobně xxx XX x XX. Xxxx by xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx paralelnosti. Skutečnost, xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx ze tří xxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx xxxx křivky považovány xx paralelní, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx X) x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, v xxxxxxxxxx na tom, xxxxx byly xxxxxxx xxx nebo xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxx xxxxx xxxxxx
x) Xxx A = (x1+ x2+ x4+ x8 – x1 – x2 – x4 – x8) × 0,602 / x4+ x8+ x4+ x8 – x1 – x2 – x1 – x2
Xxx xxx xxxxxx
x) Xxx X = (x1+ x2+ x4 – x1 – s2 – x4) × 0,401 / x4+ x4 – x1 – x1
xxxx
x´) Xxx X = (u2+ x4+ u8 – x2 – s4 – s8) × 0,401 / u8+ x8 – u2 – x2
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx = xxxxxxxx xxxxxxxxxxx standardu × X
(X8 = X8 × X)
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx aktivita xxxxxxxx xxxx xxxxxx 0,5 xx 2,0, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx extraktu xxxx, xxxxx toto xxxx xxxxx, roztoků xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxx relativní aktivita xxxxxxxx xx požadovaného xxxxxxx, musí xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x toto musí xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx o xxxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx stanovení. Xxxxx xxxx xxxxx docíleno xxxxxxxxxxxx, stanovení xxxx xxx považováno za xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx báze spiramycinu xx xxxxxxxx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 2 xx/xx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx 10 mg/kg,
- 20 % xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx 10 xx 25 xx/xx,
- 5 xx/xx x absolutní xxxxxxx xxx xxxxxx 25 až 50 xx/xx,
- 10 % xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxx 50 xx/xx.
[1] 1 xx xxxx xxxxxxxxxxx xx ekvivalentem 3200 mezinárodních jednotek (XX).
[2] Xxxxx xxxxxx xxxxx xxx použity xx předpokladu, že xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
[3] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[4] Xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[5] Xxxx písmena "s" x "u" xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx.