Desátá Xxxxxxxx Komise
ze xxx 25. července 1984,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(84/425/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Aktem x xxxxxxxxxxx Xxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx požaduje, xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx za xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx týkajících xx kvality x xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Společenství xxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx;
xxxxxxxx k tomu, xx xxxxxxxx Komise 71/250/XXX [2], 73/46/XXX [3], 74/203/XXX [4], 75/84/XXX [5], 76/372/EHS [6] xxxxxxxxx pozměněné xxxxxxxx 81/680/EHS [7], xxxxxxxx 71/393/EHS [8], 72/199/XXX [9], 78/633/XXX [10] xxxxxxxxx pozměněné xxxxxxxx 84/4/EHS [11] x xxxxxxxx 81/715/XXX [12] již xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx xxxxxx x práci xx xx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx metodu;
vzhledem x xxxx, xx opatření xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx úřední kontrolu xxxxx, pokud xxx x jejich xxxxx xxxxxxxxxxx, se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx.
Článek 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. června 1985 x xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Článek 3
Xxxx xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx dne 25. července 1984.
Za Xxxxxx
Xxxx Dalsager
člen Komise
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Úř. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[4] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
[6] Úř. xxxx. X 102, 15.4.1976, x. 8.
[7] Xx. xxxx. X 246, 29.8.1981, x. 32.
[8] Úř. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[9] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[10] Úř. xxxx. X 206, 29.7.1978, x. 43.
[11] Xx. xxxx. X 15, 18.1.1984, x. 28.
[12] Xx. věst. X 257, 10.9.1981, x. 38.
PŘÍLOHA
STANOVENÍ XXXXXXXXXXX DIFÚZÍ XX XXXXXXXX XXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx xxx stanovitelnosti xx 1 mg/kg (1 xxx) [1]
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxx xxxxxxx/xxxxxx-xxxxxxxxxxxxxx pufrem x xX 8. Xxxxxxx je dekantován xxxx xxxxxxxxx x xxxxxx. Jeho antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx spiramyscinu x agarovém xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx tvorbou xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Micrococcus xxxxxx XXX 9341 (XXXX 8340, NCIB 8553)
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.1) x xxxxx xxxxxxxx mikroorganizmem Xxxxxxxxxxx xxxxxx a inkubujte 24 xxxxx xxx 30 °X. Kulturu xxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx okolo 4 °C. Xxxxx xxxxxxxxx každé dva xxxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx [2]
Xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxx suspenzi xxxxxxxx k xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) obsaženého x Xxxxxxx baňce x inkubujte 18 xx 20 xxxxx xxx 30 °X. Xxxxxxxx xxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (4.3) x xxxxxxxxxxx. Zřeďte xxxxxxxx xx 1/10 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Světelná transmise xxxxxxxx xxxx být xxxxx 75 %, xxxxxx xxx 650 xx v 1 xx xxxxxx proti xxxxxxx xxxxxxxx sodného (4.3.). Tato xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxx 4 °X.
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Kultivační xxxxxx [3]
|
Xxxxxx xxxxxx |
6,0 g |
|
Trypton |
4,0 x |
|
Xxxxxxx x xxxxxxx |
3,0 x |
|
Xxxxxxx x xxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 g |
|
Agar |
10,0 xx 20,0 g |
|
Voda |
1000 xx |
|
XX 6,5 xx 6,6 (xx xxxxxxxxxxx). |
|
|
4.2 Xxxxxxxx xxxxxx [4] |
|
|
Xxxxxxx |
5,0 g |
|
Extrakt x xxxxxxx |
4,0 g |
|
Extrakt x masa |
3,0 x |
|
Xxxx |
10,0 xx 20,0 x |
|
Xxxx |
1000 xx |
|
XX 8,0 (xx xxxxxxxxxxx). |
|
4.3 Xxxxxx chloridu xxxxxxx 0,8 % (xxxxxx objemový)
Rozpusťte 8 x xxxxxxxx sodného xx xxxx a xxxxxx xx 1000 xx; sterilizujte.
4.4 Xxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxx, pH 8,0
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx X2XXX4 |
16,7 x |
|
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 |
0,5 x |
|
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx XxXXX3 |
20,0 x |
|
Xxxx xx |
1000 ml |
4.5 Xxxx metanol xxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxx (4.4)
50/50 (xxxxxxxx).
4.6 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx (v XX).
5. Xxxxxxxxxx roztoky
Rozpusťte xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxxxx látky (4.6.) xx xxxxx (4.5.) x xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx obdrželi xxxxxxx xxxxxx obsahující 1000 IU xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx x zazátkované xxxxx xxx 4 °X xx tento xxxxxx xxxxxxxx xx xxx xxx.
X tohoto zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx postupným xxxxxxx xxxxx (4.5.) xxxxxxxxxxx roztoky:
|
S8 |
1 |
IU/ml |
|
S4 |
0,5 |
IU/ml |
|
S2 |
0,25 |
IU/ml |
|
S1 |
0,125 |
IU/ml |
6. Xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx
6.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxx 20,0 x xxxxxx x xxxxxxx krmiv, 1,0 xx 20,0 g x xxxxxxx. Xxxxxxxx 100 xx xxxxx (4.5) a xxxxxxxx 30 xxxxx. Odstřeďte xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.5), abyste xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx 1 XX/xx (= U8).
Pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx menší xxx 2,5 xx/xx xxxxxx, musí být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx 20,0 x xxxxxx. Přidejte 100 xx xxxxx (4.5) x třepejte 30 xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, odeberte 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx na xxx 4 ml xx xxxxxxxxx tlaku xx xxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě nepřesahující 40 °C. Xxxxxx xxxxxx směsí (4.5), xxxxxx obdrželi xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx 1 XX/xx (= U8).
6.2 Xxxxxxxx xxxxxxx
X xxxxxxx X8 xxxxxxxxx xxxxxxX4 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,5 XX/xx), X2 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,25 XX/xx) x U1 (očekávaný xxxxx: 0,125 IU/ml) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (1 + 1) xxxxx (4.5).
7. Xxxxxxxx xxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxx zkušebního xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.2) xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.2) xxx xxx 50 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xx zkušebním xxxxxx (4.2) stanovte xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx inhibiční xxxx s xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx agarem xx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, X2, X1) x xxxxxx koncentracemi xxxxxxxxxx roztoku (U8, X4, U2, X1). Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx každé xxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx misky xxxxxxxxxx velké, xxx xxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx nejméně xxx xxxxxx x xxxxxxxx 10 xx 13 mm x xxxxxxx 30 mm xxxx středy. Pokus xxxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxxx x xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx, 200 xx x xxxxxxx x 20 xx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx (4.2.), inokulovaného xxxx x 7.1., xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx 2 mm xxxxxx (60 xx xx xxxxx o xxxxxxx 200 xx). Xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx nich xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx zkušebních x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx 0,10 x 0,15 xx na xxxxx, podle xxxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx, xx xxxxx stanovení xxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubujte xxxxx 16 xx 18 hodin xxx 30 ± 2 °X.
8. Vyhodnocení
Změřte průměr xxxxxxxxxxx xxx s xxxxxxxxx na 0,1 xx. Zaznamenejte xxxxxxx xxxxxxx xxx každou xxxxxxxxxxx xx semilogaritmický xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx x průměrům inhibičních xxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xx níže xxxxxxx.
Xxxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" xxx xxx standardní xxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxx rovnice:
a) SL = 7x1 + 4x2+ s4 – 2x8 / 10
Xxxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" bod xxx xxxxxxxxxx nejvyšší xxxxxx (XX) s použitím xxxxxxx:
x) XX = 7x8 + 4x4+ x2 – 2x1 / 10
Podobně xxxxxxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" body pro xxxxxxxx úroveň xxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (XX) xxxxxxxxxx u1, u2, x4 a x8 xx x1, s2, x4, x x8 x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx [5]
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx SL a XX na xxxxxx xxxxxxxx papír x xxxxxx xx xxx, xxxxxx xxxxxxx "xxxxxxxxxxx" xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx zaznamenejte XX x XX x xxxxxx xx xxx, xxxxxx xxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" xxxxxx xxx xxxxxxx.
X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx křivky xxxx být xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx hodnoty (XX — XX) x (XX — UL) xxxxxxxxxx xxxx xxx x 10 % xx xxxxxx střední xxxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, buď x1 x x1 xxxx x8 x x8, xxxxx xxx xxxxxxxx x XX, XX, XX x UH xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx rovnic, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx "nejvhodnější" xxxxxx:
x) SL = 5x1 + 2x2 – x4 / 6 nebo 5x2 + 2s4 – x8 / 6
x′) XX = 5s4 + 2s2 – x1 / 6 xxxx 5x8 + 2x4 – s2 / 6
x xxxxxxx xxx XX a XX. Měla xx xxx splněna xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx, xx byl xxxxxxxx xxxxxxxxx ze tří xxxxxx, musí být xxxxxxxxxxx x závěrečném xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx xxxx křivky xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, vypočtěte xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx X) x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, v xxxxxxxxxx na tom, xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx ohodnocení xxxxxxxxxxxx.
Xxx xxxxx xxxxxx
x) Xxx X = (x1+ x2+ u4+ x8 – x1 – x2 – x4 – x8) × 0,602 / x4+ u8+ x4+ x8 – x1 – x2 – x1 – x2
Xxx xxx xxxxxx
x) Log X = (x1+ x2+ x4 – x1 – x2 – x4) × 0,401 / x4+ x4 – x1 – x1
xxxx
x´) Xxx X = (x2+ x4+ x8 – x2 – x4 – x8) × 0,401 / u8+ x8 – u2 – x2
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx = aktivita xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx × X
(X8 = X8 × A)
Pokud xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nalezena xxxx rozsah 0,5 xx 2,0, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx koncentrací xxxxxxxx xxxx, xxxxx toto xxxx možné, xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx nemůže xxx xxxxxxxxx aktivita xxxxxxxx do požadovaného xxxxxxx, xxxx xxx xxxxx získaný xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x toto xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx protokolu x xxxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx neparalelní, xxxxxxxx stanovení. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, stanovení xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx kilogram xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u stejného xxxxxx stejným analytikem xxxxx xxxxxxxxx:
- 2 xx/xx x absolutní xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx do 10 mg/kg,
- 20 % xxxxxxxx x xxxxxxxx hodnotě xxx xxxxxx 10 xx 25 xx/xx,
- 5 xx/xx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx 25 xx 50 xx/xx,
- 10 % xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxx 50 xx/xx.
[1] 1 mg xxxx xxxxxxxxxxx xx ekvivalentem 3200 mezinárodních jednotek (XX).
[2] Další metody xxxxx být xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, že xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxx bakteriální xxxxxxxx.
[3] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[4] Xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[5] Xxxx xxxxxxx "x" x "u" xxxxxxxxxx xxxxxxxx inhibičních xxx.