Xxxxxx Xxxxxxxx Komise
ze xxx 25. xxxxxxxx 1984,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(84/425/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx dne 20. července 1970, xxxxxx xx zavádějí xxxxxx odběru vzorků x analýzy Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxx, a xxxxxxx na článek 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxx xxxxxxxx požaduje, xxx úřední xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx požadavků xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx týkajících xx xxxxxxx x xxxxxxx krmiv byla xxxxxxxxx za použití xxxxx Společenství pro xxxxx xxxxxx a xxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx směrnice Xxxxxx 71/250/XXX [2], 73/46/EHS [3], 74/203/XXX [4], 75/84/XXX [5], 76/372/XXX [6] xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 81/680/EHS [7], xxxxxxxx 71/393/EHS [8], 72/199/XXX [9], 78/633/XXX [10] xxxxxxxxx pozměněné xxxxxxxx 84/4/XXX [11] x směrnice 81/715/EHS [12] xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx analytických xxxxx Společenství; že xxxxxx v práci xx xx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, že xxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx popsanou v xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. června 1985 a xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 25. xxxxxxxx 1984.
Xx Xxxxxx
Xxxx Xxxxxxxx
xxxx Komise
[1] Úř. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[4] Xx. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[5] Xx. věst. X 32, 5.2.1975, x. 26.
[6] Úř. věst. X 102, 15.4.1976, x. 8.
[7] Úř. xxxx. X 246, 29.8.1981, x. 32.
[8] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[9] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[10] Xx. xxxx. X 206, 29.7.1978, x. 43.
[11] Xx. xxxx. X 15, 18.1.1984, x. 28.
[12] Xx. xxxx. X 257, 10.9.1981, x. 38.
XXXXXXX
XXXXXXXXX SPIRAMYCINU XXXXXX XX XXXXXXXX XXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxx spiramycinu x xxxxxxxx x premixech. Xxxxx mez xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx (1 xxx) [1]
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx/xxxxxx-xxxxxxxxxxxxxx pufrem x pH 8. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx a xxxxxx. Xxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx difúze spiramyscinu x agarovém médiu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx. Difúze xx xxxxxxxxx tvorbou xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Micrococcus xxxxxx XXX 9341 (XXXX 8340, NCIB 8553)
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx kultivační xxxxxx (4.1) x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 24 xxxxx při 30 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxx x chladničce xxx teplotě xxxxx 4 °X. Znovu xxxxxxxxx xxxxx dva xxxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx [2]
Xx dříve xxxxxxxxxxxx šikmého agaru xxxxxx xxxxxxxx 2 xx 3 ml xxxxxxx xxxxxxxx sodného (4.3). Xxxx suspenzi xxxxxxxx x naočkování 250 ml xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) obsaženého x Xxxxxxx baňce x inkubujte 18 xx 20 xxxxx xxx 30 °X. Xxxxxxxx smyjte xx 25 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (4.3) x xxxxxxxxxxx. Zřeďte xxxxxxxx xx 1/10 xxxxxxxx chloridu xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxx transmise xxxxxxxx musí být xxxxx 75 %, xxxxxx při 650 xx v 1 xx kyvetě xxxxx xxxxxxx chloridu xxxxxxx (4.3.). Tato xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxx 4 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Kultivační xxxxxx [3]
|
Xxxxxx pepton |
6,0 x |
|
Xxxxxxx |
4,0 x |
|
Xxxxxxx z xxxxxxx |
3,0 x |
|
Xxxxxxx x xxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxx |
10,0 xx 20,0 x |
|
Xxxx |
1000 ml |
|
PH 6,5 xx 6,6 (xx xxxxxxxxxxx). |
|
|
4.2 Xxxxxxxx xxxxxx [4] |
|
|
Trypton |
5,0 x |
|
Xxxxxxx x xxxxxxx |
4,0 x |
|
Xxxxxxx x masa |
3,0 g |
|
Agar |
10,0 xx 20,0 g |
|
Voda |
1000 xx |
|
XX 8,0 (xx xxxxxxxxxxx). |
|
4.3 Roztok chloridu xxxxxxx 0,8 % (xxxxxx xxxxxxxx)
Xxxxxxxxx 8 x xxxxxxxx xxxxxxx xx vodě a xxxxxx xx 1000 xx; xxxxxxxxxxxx.
4.4 Fosfát-bikarbonátový xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx draselný X2XXX4 |
16,7 x |
|
Xxxxxxxx fosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 |
0,5 g |
|
Hydrogen xxxxxxxxx xxxxx XxXXX3 |
20,0 x |
|
Xxxx do |
1000 ml |
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxx (4.4)
50/50 (xxxxxxxx).
4.6 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxx x xxxxx aktivitě (x XX).
5. Xxxxxxxxxx roztoky
Rozpusťte xxxxxx odvážené xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.6.) xx xxxxx (4.5.) x xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 1000 IU xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 4 °X xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxx xxx.
X xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx směsí (4.5.) xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
X8 |
1 |
XX/xx |
|
X4 |
0,5 |
XX/xx |
|
X2 |
0,25 |
XX/xx |
|
X1 |
0,125 |
XX/xx |
6. Xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx
6.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxx 20,0 x xxxxxx v xxxxxxx xxxxx, 1,0 xx 20,0 x x xxxxxxx. Přidejte 100 xx xxxxx (4.5) a xxxxxxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx roztok xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.5), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx obsah xxxxxxxxxxx 1 IU/ml (= U8).
Pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 2,5 xx/xx xxxxxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx 20,0 g xxxxxx. Xxxxxxxx 100 xx xxxxx (4.5) x třepejte 30 xxxxx. Odstřeďujte několik xxxxx, xxxxxxxx 50 xx roztoku xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxx 4 ml xx xxxxxxxxx xxxxx xx rotační odparce xxx xxxxxxx nepřesahující 40 °X. Xxxxxx xxxxxx xxxxx (4.5), xxxxxx xxxxxxxx očekávaný xxxxx xxxxxxxxxxx 1 XX/xx (= X8).
6.2 Xxxxxxxx roztoky
Z roztoku X8 xxxxxxxxx xxxxxxX4 (xxxxxxxxx obsah: 0,5 XX/xx), U2 (očekávaný xxxxx: 0,25 XX/xx) x U1 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,125 XX/xx) xxxxxx postupného xxxxxx (1 + 1) xxxxx (4.5).
7. Xxxxxxxx xxxxxx
7.1 Naočkování xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.2) xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.2) xxx xxx 50 °C. Předběžnými xxxxxx xx miskách xx zkušebním xxxxxx (4.2) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx největší x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx s různými xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, S1) x čtyřmi koncentracemi xxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1). Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x standardu xxxx být nutně xxxxxxxx na xxxxx xxxxx. Pro tento xxxxxx xxxxxxx misky xxxxxxxxxx velké, xxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx médiu xxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx 10 xx 13 xx a xxxxxxx 30 mm xxxx xxxxxx. Pokus xxxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx x tabule xxxx x xxxxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxxx umístěným xx xxxxx, 200 xx x xxxxxxx x 20 mm xxxxxxx.
Xxxxxxxx xx misky xxxxxxxx xxxxx (4.2.), xxxxxxxxxxxxx xxxx x 7.1., xxx xxxxxxxxx vrstvu xxx 2 xx xxxxxx (60 xx xx xxxxx x xxxxxxx 200 xx). Xxxxxxxx ustát, xxxxxxxx xxxxxx x umístěte xx nich xxxxxx xxxxxxxx objemy zkušebních x standardních xxxxxxx (xxxx 0,10 x 0,15 xx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx čtyřikrát tak, xx xxxxx stanovení xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubujte xxxxx 16 až 18 xxxxx při 30 ± 2 °X.
8. Vyhodnocení
Změřte průměr xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx na 0,1 xx. Xxxxxxxxxxxx střední xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xx semilogaritmický xxxxxxxx papír, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vztahu x průměrům xxxxxxxxxxx xxx. Utvořte xxxxxxxxxxxx xxxxxx standardního roztoku x extraktu, xxxxxxxxx xxx xx níže xxxxxxx.
Xxxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" bod xxx standardní xxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxx xxxxxxx:
x) XX = 7x1 + 4x2+ s4 – 2x8 / 10
Xxxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" xxx pro xxxxxxxxxx nejvyšší xxxxxx (XX) x xxxxxxxx xxxxxxx:
x) XX = 7x8 + 4s4+ x2 – 2x1 / 10
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" xxxx pro xxxxxxxx xxxxxx extraktu (XX) a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x1, x2, x4 x x8 xx x1, s2, x4, x s8 x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx [5]
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx SL x XX xx stejný xxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xx tak, xxxxxx dostali "xxxxxxxxxxx" xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Podobně xxxxxxxxxxxx XX x XX x xxxxxx je xxx, xxxxxx xxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" křivku xxx xxxxxxx.
X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx křivky xxxx xxx paralelní. Xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx (SH — SL) x (XX — XX) xxxxxxxxxx více xxx x 10 % xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx jsou křivky xxxxxxxxxxx, xxx x1 x s1 xxxx x8 a x8, xxxxx xxx xxxxxxxx x SL, XX, XX x UH xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx rovnic, aby xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" xxxxxx:
x) XX = 5x1 + 2s2 – s4 / 6 nebo 5x2 + 2x4 – x8 / 6
x′) XX = 5x4 + 2x2 – x1 / 6 xxxx 5s8 + 2x4 – x2 / 6
x xxxxxxx xxx XX x XX. Xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx, musí xxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx X) s xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxxx na tom, xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxx xxxxx xxxxxx
x) Xxx X = (x1+ x2+ x4+ x8 – s1 – s2 – x4 – s8) × 0,602 / x4+ u8+ s4+ x8 – x1 – x2 – x1 – x2
Xxx xxx úrovně
d) Log X = (u1+ x2+ u4 – x1 – s2 – x4) × 0,401 / u4+ x4 – x1 – x1
xxxx
x´) Log X = (x2+ x4+ u8 – x2 – x4 – x8) × 0,401 / u8+ x8 – x2 – x2
Xxxxxxxx extraktu xxxxxx = aktivita xxxxxxxxxxx standardu × X
(X8 = X8 × X)
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx aktivita nalezena xxxx xxxxxx 0,5 xx 2,0, potom xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx koncentrací extraktu xxxx, xxxxx xxxx xxxx možné, xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx aktivita xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxx získaný xxxxxxxx xxxxxxxxx xx přibližný x xxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx kilogram xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx u xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 2 xx/xx v xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx 10 mg/kg,
- 20 % xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx 10 xx 25 xx/xx,
- 5 xx/xx v absolutní xxxxxxx xxx xxxxxx 25 xx 50 xx/xx,
- 10 % xxxxxxxx x nejvyšší xxxxxxx xxx obsahy xxx 50 mg/kg.
[1] 1 xx xxxx xxxxxxxxxxx xx ekvivalentem 3200 mezinárodních xxxxxxxx (XX).
[2] Další metody xxxxx xxx xxxxxxx xx předpokladu, že xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx bakteriální xxxxxxxx.
[3] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[4] Může xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx složení a xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[5] Xxxx xxxxxxx "s" x "x" xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx.