Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 25. xxxxxxxx 1984,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(84/425/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx společenství,
s ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx vzorků x analýzy Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxx, a xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxx směrnice xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx za xxxxxx xxxxxxxx dodržování požadavků xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx týkajících xx xxxxxxx x xxxxxxx krmiv xxxx xxxxxxxxx za použití xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx;
xxxxxxxx k tomu, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX [2], 73/46/XXX [3], 74/203/XXX [4], 75/84/XXX [5], 76/372/XXX [6] xxxxxxxxx pozměněné xxxxxxxx 81/680/XXX [7], xxxxxxxx 71/393/XXX [8], 72/199/XXX [9], 78/633/EHS [10] naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxx 84/4/XXX [11] x xxxxxxxx 81/715/XXX [12] již stanovily xxxxxx xxxxx analytických xxxxx Společenství; že xxxxxx x xxxxx xx té doby xxxx účelným přijmout xxxxx xxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, že xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. xxxxxx 1985 a neprodleně x nich xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 25. xxxxxxxx 1984.
Xx Xxxxxx
Xxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[4] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
[6] Xx. xxxx. X 102, 15.4.1976, x. 8.
[7] Xx. xxxx. X 246, 29.8.1981, x. 32.
[8] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[9] Úř. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[10] Úř. xxxx. X 206, 29.7.1978, x. 43.
[11] Úř. věst. X 15, 18.1.1984, x. 28.
[12] Xx. xxxx. X 257, 10.9.1981, x. 38.
XXXXXXX
XXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXX XX XXXXXXXX XXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxxxx xx určena pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx a premixech. Xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx (1 ppm) [1]
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx metanol/fosfát-bikarbonátovým pufrem x pH 8. Xxxxxxx xx dekantován xxxx odstředěn x xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx difúze xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxxx mikroorganizmem Micrococcus xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx tvorbou xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxx xxxxxx XXX 9341 (XXXX 8340, XXXX 8553)
3.1 Udržování základní xxxxxxx
Xxxxxxxxx kultivační médium (4.1) v šikmé xxxxxxxx mikroorganizmem Micrococcus xxxxxx x xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 30 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx okolo 4 °C. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx.
3.2 Xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxx [2]
Ze dříve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx x Rouxově baňce x inkubujte 18 xx 20 xxxxx xxx 30 °X. Xxxxxxxx smyjte xx 25 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxx (4.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx na 1/10 xxxxxxxx chloridu xxxxxxx (4.3). Světelná xxxxxxxxx xxxxxxxx musí xxx xxxxx 75 %, xxxxxx xxx 650 xx x 1 xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (4.3.). Xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx týden při xxx 4 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Kultivační xxxxxx [3]
|
Xxxxxx xxxxxx |
6,0 x |
|
Xxxxxxx |
4,0 x |
|
Xxxxxxx z kvasnic |
3,0 x |
|
Xxxxxxx x masa |
1,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxx |
10,0 xx 20,0 x |
|
Xxxx |
1000 ml |
|
PH 6,5 až 6,6 (xx xxxxxxxxxxx). |
|
|
4.2 Xxxxxxxx xxxxxx [4] |
|
|
Trypton |
5,0 g |
|
Extrakt x xxxxxxx |
4,0 x |
|
Xxxxxxx x masa |
3,0 x |
|
Xxxx |
10,0 xx 20,0 x |
|
Xxxx |
1000 xx |
|
XX 8,0 (xx xxxxxxxxxxx). |
|
4.3 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,8 % (xxxxxx objemový)
Rozpusťte 8 x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx xx 1000 xx; xxxxxxxxxxxx.
4.4 Xxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxx, pH 8,0
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx X2XXX4 |
16,7 g |
|
Hydrogen xxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 |
0,5 x |
|
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx XxXXX3 |
20,0 x |
|
Xxxx xx |
1000 xx |
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxx (4.4)
50/50 (objemově).
4.6 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxx x xxxxx aktivitě (x XX).
5. Standardní xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxx odvážené xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.6.) xx směsi (4.5.) x zřeďte stejnou xxxxx, abyste xxxxxxxx xxxxxxx roztok xxxxxxxxxx 1000 XX spiramycinu xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 4 °X xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx až xxx xxx.
X xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx připravte xxxxxxxxx xxxxxxx směsí (4.5.) xxxxxxxxxxx roztoky:
|
S8 |
1 |
IU/ml |
|
S4 |
0,5 |
IU/ml |
|
S2 |
0,25 |
IU/ml |
|
S1 |
0,125 |
IU/ml |
6. Xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx
6.1 Extrakce
Odvažte 20,0 x xxxxxx x xxxxxxx xxxxx, 1,0 xx 20,0 x x xxxxxxx. Přidejte 100 ml směsi (4.5) x třepejte 30 xxxxx. Odstřeďte xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.5), abyste xxxxxxxx xxxxxxxxx obsah xxxxxxxxxxx 1 IU/ml (= X8).
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 2,5 xx/xx xxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx 20,0 g xxxxxx. Xxxxxxxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x odpařte xx xxx 4 xx xx sníženého tlaku xx rotační xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 40 °C. Xxxxxx xxxxxx xxxxx (4.5), xxxxxx obdrželi očekávaný xxxxx xxxxxxxxxxx 1 XX/xx (= X8).
6.2 Xxxxxxxx xxxxxxx
X xxxxxxx X8 připravte xxxxxxX4 (xxxxxxxxx obsah: 0,5 XX/xx), X2 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,25 IU/ml) x X1 (očekávaný xxxxx: 0,125 XX/xx) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (1 + 1) xxxxx (4.5).
7. Xxxxxxxx xxxxxx
7.1 Naočkování zkušebního xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.2) xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.2) xxx asi 50 °X. Předběžnými xxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (4.2) stanovte xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx inhibiční xxxx s xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx spiramycinu.
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xx miskách xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, X2, S1) x xxxxxx koncentracemi xxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1). Xxxx čtyři xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx nutně xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx. Pro xxxxx xxxxxx vyberte misky xxxxxxxxxx velké, xxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx médiu xxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx 10 xx 13 xx a xxxxxxx 30 mm xxxx středy. Xxxxx xxxx být xxxxxxxx xx miskách xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxxx x xxxxxxxx x hliníku xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx, 200 xx x xxxxxxx a 20 mm xxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx (4.2.), xxxxxxxxxxxxx xxxx x 7.1., xxx vytvořilo xxxxxx xxx 2 xx xxxxxx (60 xx xx xxxxx x xxxxxxx 200 xx). Xxxxxxxx xxxxx, vytvořte xxxxxx a umístěte xx nich xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx 0,10 x 0,15 xx xx xxxxx, podle průměru). Xxxxxxxx xxxxxx koncentraci xxxxxxx čtyřikrát tak, xx každé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubujte xxxxx 16 xx 18 hodin při 30 ± 2 °X.
8. Vyhodnocení
Změřte xxxxxx xxxxxxxxxxx zón x xxxxxxxxx xx 0,1 xx. Zaznamenejte xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx papír, xxx xxxx xxxxxxxxx logaritmus xxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxx nejvhodnější xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xx xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" xxx xxx standardní xxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxx xxxxxxx:
x) XX = 7s1 + 4x2+ x4 – 2x8 / 10
Xxxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" xxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XX) x použitím xxxxxxx:
x) XX = 7x8 + 4x4+ x2 – 2s1 / 10
Podobně vypočítejte "xxxxxxxxxxxx" xxxx pro xxxxxxxx xxxxxx extraktu (XX) x nejvyšší xxxxxx xxxxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x1, u2, x4 x u8 xx s1, x2, x4, x s8 x xxxxx uvedených xxxxxxxxx [5]
Zaznamenejte xxxxxxxxx xxxxxxx SL x XX xx stejný xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx tak, xxxxxx xxxxxxx "xxxxxxxxxxx" xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX a UH x xxxxxx xx xxx, abyste xxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" xxxxxx xxx xxxxxxx.
X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx účely xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx hodnoty (XX — XX) x (XX — XX) xxxxxxxxxx více xxx x 10 % xx jejich xxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xxxx křivky xxxxxxxxxxx, xxx x1 x s1 xxxx x8 a x8, xxxxx být vyřazeny x XX, SH, XX x XX xxxxxxxxx x použitím xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" xxxxxx:
x) XX = 5x1 + 2x2 – x4 / 6 xxxx 5x2 + 2x4 – x8 / 6
x′) XX = 5x4 + 2x2 – x1 / 6 xxxx 5x8 + 2x4 – x2 / 6
a xxxxxxx xxx XX a XX. Xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Skutečnost, xx byl xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxx považovány xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity (xxx X) s xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxxx xx xxx, xxxxx byly použity xxx xxxx čtyři xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxx xxxxx xxxxxx
x) Xxx X = (x1+ u2+ u4+ x8 – s1 – x2 – x4 – x8) × 0,602 / x4+ x8+ x4+ x8 – x1 – u2 – x1 – x2
Xxx xxx xxxxxx
x) Log X = (u1+ x2+ x4 – x1 – x2 – x4) × 0,401 / u4+ x4 – x1 – x1
xxxx
x´) Log X = (u2+ x4+ u8 – x2 – x4 – x8) × 0,401 / x8+ x8 – u2 – x2
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx = xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx × X
(X8 = S8 × X)
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nalezena xxxx xxxxxx 0,5 xx 2,0, potom xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx extraktu xxxx, pokud xxxx xxxx možné, roztoků xxxxxxxxx. Pokud nemůže xxx relativní aktivita xxxxxxxx do xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, musí být xxxxx získaný xxxxxxxx xxxxxxxxx xx přibližný x toto xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx protokolu x xxxxxxx.
Xxxxx jsou xxxxxx xxxxxxxxxx xx neparalelní, xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx stále xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, stanovení musí xxx považováno za xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx výsledek v xxxxxxxxxxx xxxx spiramycinu xx kilogram xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 2 xx/xx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx do 10 xx/xx,
- 20 % xxxxxxxx k xxxxxxxx hodnotě pro xxxxxx 10 až 25 xx/xx,
- 5 xx/xx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsahy 25 xx 50 xx/xx,
- 10 % xxxxxxxx x nejvyšší xxxxxxx xxx xxxxxx xxx 50 mg/kg.
[1] 1 xx báze xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 3200 xxxxxxxxxxxxx jednotek (XX).
[2] Xxxxx xxxxxx xxxxx být xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, že xxxx stanoveno, xx xxxxxxxxx podobné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
[3] Xxxx být xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a dávající xxxxxx výsledky.
[4] Xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[5] Xxxx xxxxxxx "x" x "x" xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx.