Desátá Směrnice Komise
ze xxx 25. xxxxxxxx 1984,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxx kontrolu xxxxx
(84/425/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx společenství,
s ohledem xx xxxxxxxx Rady 70/373/XXX ze dne 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx zavádějí xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxx, a xxxxxxx xx článek 2 uvedené směrnice,
vzhledem x tomu, že xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx kontrola xxxxx za xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx právních x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx vzorků x xxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx směrnice Xxxxxx 71/250/XXX [2], 73/46/XXX [3], 74/203/XXX [4], 75/84/XXX [5], 76/372/EHS [6] xxxxxxxxx pozměněné xxxxxxxx 81/680/EHS [7], xxxxxxxx 71/393/XXX [8], 72/199/XXX [9], 78/633/XXX [10] naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxx 84/4/XXX [11] x xxxxxxxx 81/715/XXX [12] již stanovily xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství; že xxxxxx v xxxxx xx té xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx jde x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xx provádějí xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 30. xxxxxx 1985 x xxxxxxxxxx x xxxx uvědomí Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 25. xxxxxxxx 1984.
Xx Xxxxxx
Xxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[4] Úř. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
[6] Xx. xxxx. X 102, 15.4.1976, x. 8.
[7] Úř. xxxx. X 246, 29.8.1981, x. 32.
[8] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[9] Úř. věst. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[10] Xx. xxxx. X 206, 29.7.1978, x. 43.
[11] Xx. věst. X 15, 18.1.1984, x. 28.
[12] Xx. věst. X 257, 10.9.1981, x. 38.
PŘÍLOHA
STANOVENÍ XXXXXXXXXXX DIFÚZÍ XX AGAROVÉM MÉDIU
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxxxx xx určena xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxx stanovitelnosti xx 1 xx/xx (1 xxx) [1]
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx metanol/fosfát-bikarbonátovým pufrem x pH 8. Xxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx difúze xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxxx mikroorganizmem Xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx inhibičních xxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx použitých antibiotických xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganizmus: Xxxxxxxxxxx xxxxxx ATC 9341 (XXXX 8340, XXXX 8553)
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx kultivační médium (4.1) x šikmé xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 24 hodin při 30 °X. Kulturu xxxxxxxxx x chladničce xxx teplotě xxxxx 4 °X. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx [2]
Ze xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx 2 xx 3 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxx suspenzi xxxxxxxx x naočkování 250 ml kultivačního xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx x Xxxxxxx baňce x xxxxxxxxx 18 xx 20 xxxxx xxx 30 °X. Xxxxxxxx smyjte do 25 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (4.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx 1/10 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx musí xxx xxxxx 75 %, xxxxxx xxx 650 xx x 1 xx xxxxxx proti xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (4.3.). Xxxx suspenze xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxx 4 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxx médium [3]
|
Xxxxxx pepton |
6,0 x |
|
Xxxxxxx |
4,0 x |
|
Xxxxxxx z kvasnic |
3,0 x |
|
Xxxxxxx z xxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxx |
10,0 xx 20,0 x |
|
Xxxx |
1000 ml |
|
PH 6,5 xx 6,6 (xx sterilizaci). |
|
|
4.2 Zkušební xxxxxx [4] |
|
|
Trypton |
5,0 x |
|
Xxxxxxx x xxxxxxx |
4,0 g |
|
Extrakt x xxxx |
3,0 g |
|
Agar |
10,0 xx 20,0 g |
|
Voda |
1000 xx |
|
XX 8,0 (po xxxxxxxxxxx). |
|
4.3 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,8 % (xxxxxx objemový)
Rozpusťte 8 x chloridu xxxxxxx xx vodě x xxxxxx xx 1000 xx; xxxxxxxxxxxx.
4.4 Xxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Dihydrogen xxxxxxxxxxx dvou xxxxxxxx X2XXX4 |
16,7 x |
|
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 |
0,5 g |
|
Hydrogen xxxxxxxxx sodný NaHCO3 |
20,0 x |
|
Xxxx do |
1000 ml |
4.5 Xxxx metanol xxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxx (4.4)
50/50 (xxxxxxxx).
4.6 Xxxxxxxxxx látka
Spiramycin o xxxxx xxxxxxxx (x XX).
5. Xxxxxxxxxx roztoky
Rozpusťte xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx látky (4.6.) xx xxxxx (4.5.) x zřeďte xxxxxxx xxxxx, xxxxxx obdrželi xxxxxxx roztok obsahující 1000 IU spiramycinu xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx láhvi xxx 4 °C xx xxxxx roztok xxxxxxxx xx xxx xxx.
X xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx směsí (4.5.) xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
X8 |
1 |
XX/xx |
|
X4 |
0,5 |
XX/xx |
|
X2 |
0,25 |
XX/xx |
|
X1 |
0,125 |
XX/xx |
6. Příprava xxxxxxxx a zkušebních xxxxxxx
6.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxx 20,0 x xxxxxx x xxxxxxx xxxxx, 1,0 xx 20,0 x x xxxxxxx. Xxxxxxxx 100 xx xxxxx (4.5) x třepejte 30 xxxxx. Odstřeďte xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxx supernatantu xxxxx (4.5), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx 1 IU/ml (= X8).
Xxx očekávané xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 2,5 mg/kg xxxxxx, xxxx být xxxxxxxx provedena xxxxxxxxxx. Xxxxxxx 20,0 x xxxxxx. Přidejte 100 xx směsi (4.5) x třepejte 30 xxxxx. Odstřeďujte několik xxxxx, odeberte 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx na xxx 4 xx xx sníženého xxxxx xx rotační odparce xxx teplotě xxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxx xxxxxx xxxxx (4.5), xxxxxx xxxxxxxx očekávaný xxxxx xxxxxxxxxxx 1 XX/xx (= X8).
6.2 Xxxxxxxx xxxxxxx
X xxxxxxx X8 připravte xxxxxxX4 (xxxxxxxxx obsah: 0,5 XX/xx), X2 (očekávaný xxxxx: 0,25 XX/xx) x X1 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,125 XX/xx) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (1 + 1) xxxxx (4.5).
7. Xxxxxxxx xxxxxx
7.1 Naočkování zkušebního xxxxx
Xxxxxxxxx zkušební xxxxxx (4.2) xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.2) při xxx 50 °X. Předběžnými xxxxxx na xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (4.2) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx poskytne největší x xxxxxxxxxxx inhibiční xxxx s xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx agarem xx xxxxxxx xx miskách xx xxxxxx koncentracemi xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, S1) x čtyřmi xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, U2, U1). Xxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxx. Xxx tento xxxxxx xxxxxxx misky xxxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx nejméně xxx otvorů s xxxxxxxx 10 až 13 mm a xxxxxxx 30 mm xxxx xxxxxx. Pokus xxxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxxx s xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx, 200 xx x xxxxxxx a 20 mm vysokým.
Rozlijte xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx (4.2.), inokulovaného xxxx x 7.1., xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx 2 xx xxxxxx (60 ml xx xxxxx x xxxxxxx 200 xx). Xxxxxxxx ustát, xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x standardních xxxxxxx (xxxx 0,10 x 0,15 ml na xxxxx, xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxx každou xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx, xx xxxxx stanovení xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx 16 xx 18 xxxxx xxx 30 ± 2 °X.
8. Vyhodnocení
Změřte xxxxxx xxxxxxxxxxx zón s xxxxxxxxx xx 0,1 xx. Zaznamenejte xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu, xxxxxxxxx xxx je níže xxxxxxx.
Xxxxxxxx "nejvhodnější" bod xxx standardní nejnižší xxxxxx (XX) s xxxxxxxx xxxxxxx:
x) XX = 7x1 + 4x2+ x4 – 2x8 / 10
Xxxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" xxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxx xxxxxxx:
x) XX = 7x8 + 4s4+ x2 – 2x1 / 10
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" body xxx xxxxxxxx úroveň extraktu (XX) a nejvyšší xxxxxx xxxxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x1, u2, x4 x x8 xx s1, x2, x4, x x8 x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx [5]
Zaznamenejte xxxxxxxxx xxxxxxx XX x XX xx xxxxxx xxxxxxxx papír x xxxxxx xx xxx, xxxxxx dostali "nejhodnější" xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX x XX x xxxxxx xx xxx, xxxxxx dostali "xxxxxxxxxxxx" xxxxxx xxx xxxxxxx.
X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx (XX — XX) x (XX — XX) xxxxxxxxxx xxxx xxx x 10 % xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx x1 x x1 nebo x8 x x8, xxxxx xxx xxxxxxxx x XX, SH, XX a XX xxxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx rovnic, aby xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx "nejvhodnější" xxxxxx:
x) SL = 5x1 + 2x2 – x4 / 6 xxxx 5s2 + 2x4 – x8 / 6
b′) XX = 5x4 + 2x2 – x1 / 6 xxxx 5x8 + 2x4 – s2 / 6
x xxxxxxx xxx UL a XX. Xxxx by xxx splněna xxxxxx xxxxxxxx paralelnosti. Xxxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx, musí xxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x analýze.
Pokud xxxx xxxxxx považovány xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity (xxx X) s xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx rovnic, v xxxxxxxxxx xx xxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx ohodnocení xxxxxxxxxxxx.
Xxx xxxxx úrovně
c) Xxx X = (x1+ x2+ u4+ x8 – s1 – x2 – x4 – s8) × 0,602 / x4+ x8+ s4+ x8 – x1 – x2 – x1 – x2
Xxx xxx xxxxxx
x) Xxx X = (u1+ x2+ u4 – x1 – x2 – x4) × 0,401 / u4+ x4 – x1 – s1
nebo
d´) Xxx X = (u2+ x4+ u8 – x2 – s4 – s8) × 0,401 / x8+ x8 – x2 – x2
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx = xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx × X
(X8 = X8 × X)
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx aktivita xxxxxxxx xxxx rozsah 0,5 xx 2,0, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx koncentrací xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxx xxxxx, roztoků xxxxxxxxx. Pokud nemůže xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx do požadovaného xxxxxxx, xxxx být xxxxx získaný xxxxxxxx xxxxxxxxx xx přibližný x toto xxxx xxx uvedeno x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx o xxxxxxx.
Xxxxx jsou křivky xxxxxxxxxx za neparalelní, xxxxxxxx stanovení. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxx považováno xx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxx báze spiramycinu xx kilogram krmiva.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx xxxxxxx analytikem xxxxx překročit:
- 2 xx/xx x xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx xxxx spiramycinu do 10 xx/xx,
- 20 % xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx 10 xx 25 mg/kg,
- 5 xx/xx x absolutní xxxxxxx xxx obsahy 25 xx 50 xx/xx,
- 10 % xxxxxxxx x nejvyšší xxxxxxx pro xxxxxx xxx 50 xx/xx.
[1] 1 xx báze xxxxxxxxxxx xx ekvivalentem 3200 xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (XX).
[2] Další metody xxxxx xxx xxxxxxx xx předpokladu, xx xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
[3] Může xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[4] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx složení a xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[5] Xxxx xxxxxxx "x" x "u" xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón.