Plné znění - 31981L0715

Xxxxxx xxxxxxxx Komise

ze xxx 31. července 1981,

xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx

(81/715/XXX)

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx xx Smlouvu x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. července 1970, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxx, a xxxxxxx na článek 2 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx úřední xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, zda xxxx xxxxxxx požadavky xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;

xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx Komise 71/250/XXX [2], 71/393/EHS [3], 72/199/XXX [4], 73/46/XXX [5], 74/203/EHS [6], 75/84/XXX [7], 76/372/XXX [8] a 78/633/XXX [9], xxxxxxxxx pozměněné xxxxxxxx xx xxx 30. xxxxxxxx 1981, xxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství stanovily; xx xxxx od xx doby xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxxx soubor xxxxxxxxxxxx metod;

vzhledem x xxxx, že xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx xxxxxx,

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx obsah xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx.

Článek 2

Členské státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1981. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.

Článek 3

Xxxx xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.

V Xxxxxxx xxx 31. července 1981.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx Xxxxx

xxxxxxxx

[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.

[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.

[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.

[4] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.

[5] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.

[6] Úř. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.

[7] Xx. věst. X 32, 5.2.1975, x. 26.

[8] Úř. xxxx. X 102, 15.4.1976, x. 8.

[9] Úř. věst. X 206, 29.7.1978, x. 43.

XXXXXXX

1. XXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXX V XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXX

1. ÚČEL X XXXXXX POUŽITÍ

Tato xxxxxx umožňuje xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx premixech. Xxxxxx xxxxxxx stanovitelnosti xx 2 mg/kg (2 ppm). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

2. XXXXXXX

Xx xxxxx xxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx odstředí. Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Bacillus subtilis. Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx přímo xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3. XXXXXXXXXXXXXXX: BACILLUS XXXXXXXX ATCC 6633 (XXXX 8054)

3.1 Uchovávání xxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.1) x xxxxxxx zkumavkách xx xxxxxxxx mikroorganismem Xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx se xxx 30 °C inkubuje. Xxxxxxx xx uchovává x xxxxxxxxxx při xxx 4 °X x xxxxx měsíc xx znovu xxxxxxxx.

3.2. Xxxxxxxx suspenze xxxx [1]

Xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx médiu (3.1) xx omyje 2-3 xx xxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx Rouxova xxxxx, xxxxx xxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), a po xxxx 3 xx 5 xxx se xxxxxxxx při 30 °X. Po xxxxxxxx xxxxxx xxxx pod xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx 15 xx xxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxxx se. Xxxx suspenze xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 5 měsíců při 4 °C.

4. KULTIVAČNÍ XXXXXX X XXXXXXX

4.1 Xxxxxxxxxx médium [2]

4.2 Xxxxxxx 20 %-xx (x/x): 200 ml xxxxxxxx se xxxxx 800 ml xxxx.

4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,18–1,19.

4.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, 2M.

4.5 Xxxxxxxxx xxxx 0,1 X:

xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, XX₂ XX₄: 13,6 x

xxxx: 1000 xx

xX xxxxxxx na 4,5.

4.6 Xxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3): 65/32,5/2,5 (x/x/x)

4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx x známé xxxxxxxx

5. XXXXXXXXXX XXXXXXX

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx asi 10 mg xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7) se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) a xxxxx xxxxxx naředí, xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 100 μx avoparcinu x 1 ml. Xxx xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxx x xxx 4 °C, xxxxxxx xxxxx xxxxxx použitelný 7 dní.

5.1 Pro xxxxxxxxxx xxxxxxx

X xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx postupným xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem xxxxxxxxxxx xxxxxxx:

5.2 Pro xxxxxx

X výchozího xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:

6. XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX XXXXXXX

6.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 10 mg xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx 10-100 xx xxxxxxxxxx, se x xxxxxxx baňce x xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 60 xx xxxxx (4.6) po xxxx 15 xxxxx. Xxxxxxx xX se xxxxxxxxxxx a pokud xx třeba, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (4.3) xx xxxxxxx 2. Směsí (4.6) xx doplní xxxxx x homogenizuje se. Xxx xx xxxxx xxxxxxxx přefiltruje xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Whatman x. 1) a prvních 5 ml xxxxxxxx xx xxxxx. Odebere xx xxxxxxx část x pH xx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (4.4) upraví xx xxxxxxx 4,5. Tento xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5), xxx se dosáhlo xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 4 μx/xx ( = X₈).

X xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (1+1) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5) připraví xxxxxxx X4 (xxxxxxxxx xxxxx: 2 μg/ml), X2 (xxxxxxxxx xxxxx: 1 μg/ml) x X₁ (xxxxxxxxx obsah: 0,5 μx/xx).

6.2 Xxxxxx

Xxxxxx x hmotnosti 50 x xx xxxxx xx 100 ml xxxxx (4.6) x xx xxxx 30 xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx). Poměrná xxxx xxxxxxx extraktu xx xxxxxxx (xxx. xxxxxxxxxxx tabulka) x xxxxxxx xX se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) upraví na 4,5. Tento roztok xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4,5), xxx xx xxxxxx roztok X8 (xxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx).

X xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (1+1) fosfátovým xxxxxx (4.5) xxxxxxxx roztoky X4 (očekávaný xxxxx: 1,0 μx/xx), X₂ (xxxxxxxxx obsah: 0,5 μx/xx) a U₁ (xxxxxxxxx xxxxx: 0,25 μx/xx).

7. XXXXXX XXXXX

7.1 Naočkování kultivačního xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxx (4.1) xx xxxxxxxx suspenzí xxxx (3.2) při xxxxxxx 50–60 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (4.1) xx xxxxxxx xxxxxxxx inokula, xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.2 Xxxxxxxx misek

Test xx xxxxxx jako xxxxxxx xxxx na xxxxxxx xx čtyřech xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx standardního roztoku (X₈, X₄, S₂, X₁) a xxxxxxxxxxx xxxxxxx (U8, X4, X2, X1).Xx xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx bezpodmínečně všechny xxxxx xxxxxxxxxxx standardu x extraktu. X xxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxx 10-13 xx x rozestupem xxxxxx xxxxxxxxx 30 xx. Xxxx by xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx, xx kterou se xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx o xxxxx 20 xx x průměru 200 xx.

Xx xxxxx se xxxxxx takové xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxxxx podle 7.1, xxx se vytvořila xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2 xx (60 xx na xxxxx x průměru 200 xx). Xxxx, xx xxxxxx ztuhne, vyhloubí xx xxxxxx, xx xxxxxxx se pipetou xxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx 0,10 x 0,15 ml xx otvor, podle xxxxxxx xxxxxx). Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx minimálně xxxxxxxxx, xxxxx xxx každý xxxx xx xxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.

7.3 Xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxx 16 xx 18 xxxxx xxx 30 °X.

8. XXXXXXXXXXX

Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx se xxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx. Xxx xxxxxx koncentraci se xxxxxxx xxxxxxx zanesou xx semilogaritmického xxxxxx, xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx x průměru xxxxxxxxxxx xxx. Pro xxxxxxxxxx roztok stejně xxxx pro xxxxxxx xx zakreslí xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx. xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (XX) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:

x) XX = 7X₈ + 4S₄ + X₂ – 2X₁ / 10

Xxxxxxxxxxxx bod xxx xxxxxxxx úroveň xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorce:

SH = 7X₈ + 4X₄ + S₂ – 2X₁ / 10

Xxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx pro xxxxxxxx (UL) a xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxx, přičemž xx xx xxxx uvedených xxxxxx xxxxxx X₁, X₂, X₄ x X₈ xxxxxxx X₁, X₂, X₄ x X₈.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XX x SH se xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx obou xxxx vznikne nejvhodnější xxxxxx xxx standardní xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx pro xxxxxxx XX a XX x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx extrakt.

Pokud xx nevyskytují rušivé xxxxxxx, xxxx xx xxx přímky xxxxxxxxxx. Xxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx (XX-XX) x (XX-XX) xxxxxxxxxxx xxxx xxx x 10 % xx střední xxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx, xx možné xxxxxxxx xxx X₁ x X₁ xxxx X₈ x X₈. Pak xx hodnoty XX, XX, XX x XX xxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx vzorců, xxx xx xxxxxxxx alternativní xxxxxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx se provede xxx xxxxxxx UL x UH. X xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx přímek xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxx úrovní, by xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx X) pomocí xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:

Xxx 4 xxxxxx

(x) xxx X = (X₁+ X₂+ U₄+ X₈ – X₁ – X₂ – X₄ – X₈) × 0,602 / X₄+ U₈+ X₄+ X₈ – X₁ – X₂ –

Xxx 3 xxxxxx

(x) xxx X = (U₁+ X₂+ U₄ – X₁ – X₂ – S₄) × 0,401 / U₄+ X₄ – X₁ – X₁

xxxx

x´) xxx X = (X₂+ X₄+ X₈ – X₂ – X₄ – X₈) × 0,401 / X₈+ X₈ – U₂ – X₂

Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx х xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx rozsah xxxxxx 0,5–2,0, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx extraktu xxxx. standardních roztoků. Xxxxx není xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x rozsahu xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx považovat xx xxxxxxxxx, a to xx xxxx být xxxxxxxxxxx do protokolu x xxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxx přímky xxxxxxxxx xx rovnoběžné, xxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xx ani xxx xxxxxxxxx rovnoběžnosti, je xxxxx xxxxxxxx považovat xx xxxxxxxxxxxx.

9. XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxx překračovat:

- 2 xx/xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsahu avoparcinu 2 až 10 xx/xx,

- 20 % xxxxx xxxxxxx výsledku xxx xxxxxx 10 xx 25 mg/kg,

- 5 xx/xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx 25 xx 50 xx/xx,

- 10 % xxxxx xxxxxxx výsledku xxx obsahu nad 50 xx/xx.

2. STANOVENÍ XXXXXXXXX SODNÉHO XXXXXX X XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXX

1. XXXX X XXXXXX POUŽITÍ

Metoda xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx sodného x krmivech x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 10 xx/xx (10 xxx) [3].

2. PRINCIP

Vzorek xx extrahuje 90 %-xxx xxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx. Jeho xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx monensinu xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr těchto xxxxxxxxxxx xxx xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika. Xxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxx sodných xxxxx.

3. XXXXXXXXXXXXXXX: BACILLUS XXXXXXXX XXXX 6633 (XXXX 8054)

3.1 Uchování kmenové xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.1) x šikmých xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx subtilis x přes noc xx xxxxxxxx při 30 °X. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx při asi 4 °X a xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx.

3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx spór [4]

Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx (3.1) v šikmé xxxxxxxx se xxxxx 2-3 xx xxxxxxxx xxxx. Touto suspenzí xx xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx, xxxxx obsahuje 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), x xx xxxx 3 xx 5 xxx xx xxxxxxxx při 30 °C. Po xxxxxxxx xxxxxx spór xxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx do 15 ml xxxxxxxx (4.3) a zhomogenizuje xx. Tato xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx 5 xxxxxx xxx 4 °C.

4. XXXXXXXXXX XXXXXX A XXXXXXX

4.3 Ethanol 20 %-ní (v/v): 200 ml xxxxxxxx xx xxxxx 800 xx vody.

4.4 Methanol, xxxxxxx.

4.5 Methanol 90 %-xx (x/x): 900xx xxxxxxxxx (4.4) xx xxxxx 100 ml xxxx.

4.6 Methanol 50 %-xx (v/v): 500xx xxxxxxxxx (4.4) xx xxxxx 500 xx xxxx.

4.7 Oxid xxxxxxx, xxxxxxxxxxx (xxxxx X, 20 mesh; activated xxxxxxx XX1: F. Xxxxxxxxx xxx Co., xxxx rovnocenný).

4.8 Standardní xxxxxxxxx: monensin xxxxx x xxxxx xxxxxxxx (xxxx xxxx xxxxxxxxxx x International Laboratory xxx Boilogical Xxxxxxxxx, Xxxxxxx Veterinary Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx, Surrey XX15 3XX, Xxxxx Xxxxxxxx).

5. XXXXXXXXX

5.1 Xxxxxxx rotační xxxxxxx x 250ml xxxxxxx xxxxxx.

5.2 Skleněná xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx: 25 xx, délka: 400 xx, s xxxxxxx x průměru 2 xx na jednom xxxxx.

5.3 Skleněná xxxxxxxx xxx chromatografii, xxxxxxx xxxxxx: 11 xx, xxxxx: xxxxxxxxx 300 xx, x xxxxxxx x xxxxxxx 2 xx xx xxxxxx xxxxx.

6. XXXXXXXXXX XXXXXXX

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx 10 mg xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8) se xxxxxxxx x methanolu (4.4) x xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx sodného 800 μx/xx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx láhvi x při 4 xX, xxxxxxx tento xxxxxx použitelný 2 xxxxx.

X xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx rozřeďováním 50 %-xxx methanolem (4.6) xxxxxxxxxxx xxxxxxx:

7. XXXXXXXX EXTRAKTU A XXXXXXXXXXX ROZTOKU

7.1 Xxxxxxxx

7.1.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx x xxxxxxxxx 2,0 mg xx přidá x 100 ml 90 %-xxxx xxxxxxxxx (4.5), xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx 50 %-xxx xxxxxxxxxx (4.6), aby xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 8 μx/xx ( = X₈).

7.1.2 Xxxxxx, x xxxxx podíl xxxxxxxxx xxxx xxxxx než 50 xxx

Xxxxxx x xxxxxxxxx 10 xx 20 x xx xxxxx k 100 xx 90 %-ního xxxxxxxxx (4.5), 15 xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx.

Xxxxxx xxxxx xx zavede xx xxxxxxxx trubičky (5.2) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx 75–80 xx xxxxxx xxxxxxxx (4.7).

Extrakt se xxxxxxx xx sloupec xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx. 30 xx xxxxxxxx xx xxxxx 50 xx vody. Xxxx xxxx xx xxxxx 50 %-ním xxxxxxxxxx (4.6), xxx bylo xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sodného 8 μx/xx ( = X₈).

7.1.3 Xxxxxx x xxxxx podíl monensinu xxxxxxxxxx 50 xxx (xxxxxx xxxxxxx 10 xxx)

Xxxxxx o xxxxxxxxx 10 xx 20 x xx přidá x 100 xx 90 %-xxxx xxxxxxxxx (4.5), 15 xxxxx xxxxxxxx x odstřeďuje xxxxx se xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 20 xxx xx xxxxxxx 40 xx xxxxxx; pro 10 xxx xx xxxxxxx 80 ml. Xxxxxx xx odpaří xx vakuu při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 40 °X x xxxxxxxx xxxxxxx (5.1). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10 ml 90 %-xxxx methanolu.

Vatová xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (5.3) x za lehkého xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx výše 75–80 xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx zbytku xx převede na xxxxxxx oxidu hlinitého x xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx 10 xx 90xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx x prvnímu xxxxxxxx.

Xxxxxx xx xxxxxx xx vakuu při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 40 °X v xxxxxxx xxxxxxx (5.1). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx v 10 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.4) x xxxxxx xx xxxxxx xxxxx na 20 xx. Xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 5 xxxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4000 xx/xxx. Xxxx xxxx xx xxxxx 50 %-xxx xxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sodného 8 μx/xx ( = X₈).

7.2. Testovací roztok

Z xxxxxxx U8 xx xxxxxxxxx rozřeďováním (1 + 1) 50 %-xxx methanolem (4.6) xxxxxxxx xxxxxxx U4 (xxxxxxxxx xxxxx: 4 μx/xx), U2 (očekávaný xxxxx: 2 μx/xx), X1 (xxxxxxxxx xxxxx: 1 μx/xx).

8. XXXXXX XXXXX

8.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxx (4.2) xx naočkuje xxxxxxxx xxxx (3.2) xxx 50 xx 60 °X. Předběžnými pokusy xx xxxxxxx se xxxxxxxxx médiem (4.2) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, které vykáže xx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx zóny x xxxxxxx použitými koncentracemi xxxxxxxxx xxxxxxx.

8.2 Xxxxxxxx xxxxx

Xxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx test xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X₈, X₄, X₂, X₁) x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (X₈, U₄, X₂, X₁). Xx xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx bezpodmínečně xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx. X xxxx důvodu xxxx xxx xxxxx takové xxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx kultivačního xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxx 10-13 xx x rozestupem xxxxxx xxxxxxxxx 30 xx. Xxxx xx xxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx desky, xx xxxxx xx xxxxxxx hliníkový xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 20 xx x xxxxxxx 200 xx.

Xx xxxxx se xxxxxx takové množství xxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxxxx xxxxx 8.1, xxx xx vytvořila xxxxxx xxxxx přibližně 2 xx (60 xx xx xxxxx x xxxxxxx 200 xx). Xxxx xx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx, xx xxxxxxx xx pipetou xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (mezi 0,10 x 0,15 ml xx xxxxx, podle xxxxxxx xxxxxx). Každá xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxx xxxx xx vyhodnotí 32 xxxxxxxxxxx zón.

8.3 Xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 18 xxxxx xxx 35 xx 37 °C.

9. VYHODNOCENÍ

Průměr xxxxxxxxxxx zón xx xxxxx x přesností xx 0,1 xx. Xxx každou koncentraci xx střední xxxxxxx xxxxxxx xx semilogaritmického xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx logaritmus xxxxxxxxxxx xx vztahu x xxxxxxx inhibičních xxx. Xxx xxxxxxxxxx roztok xxxxxx jako xxx xxxxxxx xx zakreslí xxxxxxxxxxxxxx přímky, vypočítané xxxx. níže xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxx pro xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (SL) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:

x) XX = 7X₁ + 4X₂ + X₄ – 2X₈ / 10

Xxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX) xx stanoví xxxxx následujícího xxxxxx:

x) XX = 7S₈ + 4X₄+ X₂ + 2X₁ / 10

Xxxxxx xxx xx xxxxxxx nejvhodnější body xxx xxxxxxxx (XX) x nejvyšší xxxxxx (XX) extraktu, přičemž xx xx výše xxxxxxxxx vzorců dosadí X₁, X₂, X₄ x X₈ namísto X₁, S₂, X₄ x X₈.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XX x XX xx zanesou do xxxxxxxx diagramu. Xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx přímka pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx XX a XX x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx přímky xxx xxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xx být xxxxxx xxxxxxxxxx. Přímky je xxxxx považovat za xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx (XX-XX) x (XX-XX) xxxxxxxxxxx více xxx o 10 % xx xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx přímky nejsou xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxx U1 x X1 nebo X8 x X8. Xxx se xxxxxxx XX, SH, XX x UH určí xxxxxx následujících xxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx:

x) XX = 5X₁ + 2X₂ – X₄ / 6 xxxx 5X₂ + 2X₄ – X₈ / 6

x ) XX = 5X₄ + 2X₂ − X₁ / 6 xxxx 5X₈ + 2X₄ − X₂ / 6

Xxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxx XX x XX. X xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx rovnoběžnost. Xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxxxx xx xxx úrovní, xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxx považovat xx rovnoběžné, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx A) xxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx vzorců:

Pro 4 xxxxxx

x) log X = (U₁+ X₂+ X₄+ X₈ – X₁ – X₂ – X₄ – X₈) × 0,602 / X₄+ X₈+ X₄+ X₈ – X₁ – U₂ – X₁ – X₂

Xxx 3 úrovně

d) xxx X = (X₁+ X₂+ U₄ – X₁ – X₂ – S₄) × 0,401 / X₄+ S₄ – X₁ – S₁

nebo

d) xxx X = (X₂+ X₄+ U₈ – X₂ – X₄ – S₈) × 0,401 / X₈+ S₈ – X₂ – X₂

Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx х relativní xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxxxxx aktivita xxxx xxxx xxxxxx xxxxxx 0,5–2,0, test xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx koncentrací xxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xxxx xxxxx xxxxxxxxx relativní xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx přibližný, a xx by xxxx xxx xxxxxxxxxxx do xxxxxxxxx x xxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxx přímky xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xx ani xxx nedosáhne xxxxxxxxxxxxx, xx xxxxx výsledek xxxxxxxxx xx neuspokojivý.

10. XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx jednoho xxxxxxxxx xxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

- 20 % xxxxx xxxxxxx výsledku xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx 25 xx/xx,

- 5 xx/xx xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxxx 25 až 50 xx/xx,

- 10 % vyšší xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxx 50 xx/xx.

[1] Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx metody, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx sporovou xxxxxxxx.

[2] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

[3] 1 xx xxxxxxxxx sodného xxxxxxxx 1000 xxxxxxxxx XX.

[4] Xxxxx xxx xxxxxxx jiné metody, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx.

[5] Xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx výsledky.