Xxxxxx směrnice Komise
ze xxx 31. xxxxxxxx 1981,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxx kontrolu xxxxx
(81/715/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxxx společenství,
s ohledem xx xxxxxxxx Rady 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxx, x xxxxxxx xx článek 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx 70/373/EHS stanoví, xx xxxxxx kontroly xxxxx za xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx právních x xxxxxxxxx předpisů xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx, se xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX [2], 71/393/EHS [3], 72/199/XXX [4], 73/46/EHS [5], 74/203/EHS [6], 75/84/XXX [7], 76/372/XXX [8] x 78/633/XXX [9], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxx 30. xxxxxxxx 1981, xxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx stanovily; xx stav xx xx xxxx provedených xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx devátý xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxx xx provádějí xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxx x účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx do 1. xxxxxxxx 1981. Xxxxxxxxxx x nich xxxxxxx Xxxxxx.
Článek 3
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 31. července 1981.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Thorn
předseda
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Úř. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[4] Úř. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[5] Xx. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[6] Xx. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[7] Úř. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
[8] Xx. xxxx. X 102, 15.4.1976, x. 8.
[9] Xx. věst. X 206, 29.7.1978, x. 43.
XXXXXXX
1. XXXXXXXXX AVOPARCINU XXXXXX V XXXXXXXX XXXXXXXXXXX MÉDIU
1. XXXX X ROZSAH XXXXXXX
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx stanovitelnosti xx 2 xx/xx (2 xxx). Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxx antibiotik xxxx xx stanovení xxxxxxx xxxxxx.
2. PRINCIP
Ze směsi xxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx vzorek. Xxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx difúze xxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Bacillus subtilis. Xxxxxx xx dokáže xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr inhibičních xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx za přímo xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. MIKROORGANISMUS: XXXXXXXX XXXXXXXX XXXX 6633 (XXXX 8054)
3.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx kultury
Agarové xxxxxxxxxx xxxxxx (4.1) x xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx mikroorganismem Xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx se xxx 30 °X xxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxxx při xxx 4 °C x xxxxx xxxxx xx znovu xxxxxxxx.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx spór [1]
Xxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxx (3.1) xx xxxxx 2-3 xx sterilní vody. Xxxxx suspenzí se xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx, xxxxx obsahuje 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), x xx xxxx 3 až 5 xxx se xxxxxxxx xxx 30 °X. Xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx 15 xx xxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxxx xx. Xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 5 měsíců při 4 °X.
4. KULTIVAČNÍ XXXXXX A ČINIDLA
4.1 Xxxxxxxxxx xxxxxx [2]
|
xxxxxx |
6,0 x |
|
xxxxxxx |
4,0 x |
|
xxxxxxxxxx extrakt |
3,0 x |
|
xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
xxxxxxx |
1,0 x |
|
xxxx |
15,0 x |
|
xxxx |
1000 ml |
|
pH 6,5 (po sterilizaci) |
|
4.2 Xxxxxxx 20 %-ní (x/x): 200 xx xxxxxxxx xx xxxxx 800 xx xxxx.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,18–1,19.
4.4 Roztok hydroxidu xxxxxxx, 2X.
4.5 Xxxxxxxxx xxxx 0,1 M:
dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx, KH2 XX4: 13,6 x
xxxx: 1000 xx
xX xxxxxxx na 4,5.
4.6 Směs acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (4.3): 65/32,5/2,5 (x/x/x)
4.7 Standardní substance: xxxxxxxxxxxxxxx o známé xxxxxxxx
5. XXXXXXXXXX ROZTOKY
Přesně xxxxxxxx množství xxx 10 mg xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7) se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) x xxxxx pufrem naředí, xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 100 μx avoparcinu v 1 xx. Xxx xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxx x xxx 4 °X, xxxxxxx xxxxx xxxxxx použitelný 7 xxx.
5.1 Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rozřeďováním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
X8 |
4 μg/ml |
|
S4 |
2 μg/ml |
|
S2 |
1 μx/xx |
|
X1 |
0,5 μg/ml. |
5.2 Xxx xxxxxx
X xxxxxxxxx roztoku xx xxxxxxxx postupným xxxxxxxxxxxx fosfátovým xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
X8 |
2,0 μx/xx |
|
X4 |
1,0 μx/xx |
|
X2 |
0,5 μx/xx |
|
X1 |
0,25 μx/xx. |
6. XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX ROZTOKU
6.1 Medikované xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 10 xx vzorku, xxxxx xxxxxxxx 10-100 xx avoparcinu, se x odměrné xxxxx x xxxxxx 100 xx mechanicky protřepe x 60 xx xxxxx (4.6) xx xxxx 15 minut. Xxxxxxx xX xx xxxxxxxxxxx a pokud xx třeba, upraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (4.3) xx xxxxxxx 2. Směsí (4.6) xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xx. Xxx se xxxxx xxxxxxxx přefiltruje xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxx x. 1) x prvních 5 xx xxxxxxxx xx sleje. Odebere xx xxxxxxx xxxx x xX se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) xxxxxx xx xxxxxxx 4,5. Xxxxx xxxxxx se zředí xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5), xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx avoparcinu 4 μx/xx ( = U8).
Z xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (1+1) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5) připraví xxxxxxx U4 (xxxxxxxxx xxxxx: 2 μx/xx), X2 (očekávaný obsah: 1 μx/xx) x X1 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,5 μx/xx).
6.2 Xxxxxx
Xxxxxx x xxxxxxxxx 50 x xx xxxxx xx 100 xx xxxxx (4.6) x xx dobu 30 xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxxxxx zkumavkách). Poměrná xxxx xxxxxxx extraktu xx odebere (xxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx) a xxxxxxx xX xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) upraví na 4,5. Xxxxx roztok xx xxxxxx fosfátovým xxxxxx (4,5), aby xx xxxxxx roztok X8 (viz. xxxxxxxxxxx xxxxxxx).
X xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (1+1) fosfátovým pufrem (4.5) připraví xxxxxxx X4 (xxxxxxxxx xxxxx: 1,0 μx/xx), X2 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,5 μx/xx) x X1 (xxxxxxxxx obsah: 0,25 μx/xx).
|
Xxxxxxxxx xxxxx avoparcinu (xx/xx) |
5 |
7,5 |
10 |
15 |
20 |
40 |
|
Xxxxxxxx xxxxxx x x (± 0,1 x) |
50 |
50 |
50 |
50 |
50 |
50 |
|
Xxxxx xxxxx (4.6) x ml |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
|
Objem xxxxxxx xxxxxxxx (ml) |
20 |
15 |
20 |
15 |
20 |
10 |
|
Výsledný objem (xx): X8 |
25 |
25 |
50 |
50 |
100 |
100 |
|
Xxxxxxxxx xxxxx X8 x μg/kg |
2 |
přibl. 2 |
2 |
xxxxx. 2 |
2 |
2 |
7. XXXXXX XXXXX
7.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx (4.1) xx naočkuje xxxxxxxx xxxx (3.2) při xxxxxxx 50–60 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (4.1) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx co xxxxx největší xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx různých xxxxxxxxx koncentracích avoparcinu.
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxx xx xxxxxx jako xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx koncentračních xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, S4, X2, X1) x testovacího xxxxxxx (U8, X4, X2, X1).Xx každou xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx všechny xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x extraktu. X xxxx důvodu musí xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx kultivačního xxxxxxxxx xxxxxxx osm otvorů x průměru 10-13 xx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 30 xx. Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx skleněné desky, xx kterou xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 20 mm x xxxxxxx 200 xx.
Xx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx média (4.1) xxxxxxxxxxxx xxxxx 7.1, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2 xx (60 xx xx xxxxx x průměru 200 xx). Xxxx, co xxxxxx xxxxxx, vyhloubí xx xxxxxx, do xxxxxxx se pipetou xxxxxx přesné množství xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx 0,10 x 0,15 xx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxx). Xxxxx xxxxxxxxxxx musí být xxxxxxx xxxxxxxxx čtyřikrát, xxxxx xxx xxxxx xxxx se xxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx dobu 16 xx 18 xxxxx při 30 °X.
8. VYHODNOCENÍ
Průměr xxxxxxxxxxx xxx se xxxxx x přesností xx 0,1 xx. Xxx xxxxxx koncentraci xx xxxxxxx xxxxxxx zanesou xx semilogaritmického xxxxxx, xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx ve xxxxxx k průměru xxxxxxxxxxx xxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx nejpříhodnější xxxxxx, xxxxxxxxxx např. xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxx xxx nejnižší xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
x) XX = 7S8 + 4S4 + X2 – 2X1 / 10
Xxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxx úroveň xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
XX = 7X8 + 4X4 + X2 – 2X1 / 10
Xxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx (UL) a xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxx, přičemž se xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx dosadí U1, X2, X4 a X8 xxxxxxx X1, X2, X4 a X8.
Xxxxxxxxxx xxxxxxx XX x SH xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Spojením xxxx xxxx vznikne xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx standardní xxxxxx. Totéž xx xxxxxxx xxx xxxxxxx XX a XX x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx.
Xxxxx xx nevyskytují xxxxxx xxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxxx xx hodnoty (XX-XX) x (XX-XX) xxxxxxxxxxx xxxx xxx x 10 % xx střední xxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx xxxxxx rovnoběžné, xx xxxxx xxxxxxxx xxx X1 x X1 xxxx X8 x X8. Xxx xx xxxxxxx SL, XX, XX a XX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorců, aby xx obdržely xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx:
|
x ) XX = 5X1 + 2S2 − X4 / 6 |
nebo |
5S2 + 2S4 − X8 / 6 |
|
x ) XX = 5X4 + 2X2 − X1 / 6 |
xxxx |
5X8 + 2X4 − S2 / 6 |
Xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx UL x XX. X xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx zkontroluje xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxx úrovní, xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx je možno xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx X) pomocí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
Xxx 4 xxxxxx
(x) xxx A = (X1+ X2+ U4+ X8 – X1 – X2 – X4 – S8) × 0,602 / X4+ X8+ S4+ X8 – U1 – X2 –
Xxx 3 úrovně
(d) xxx X = (U1+ X2+ X4 – X1 – X2 – S4) × 0,401 / X4+ X4 – X1 – X1
xxxx
x´) xxx X = (U2+ X4+ X8 – X2 – X4 – X8) × 0,401 / U8+ X8 – X2 – X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx х xxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxx 0,5–2,0, zkouška xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx extraktu xxxx. standardních roztoků. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxx relativní xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, výsledek xx xxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx, x xx xx mělo xxx xxxxxxxxxxx xx protokolu x xxxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxx přímky xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxx pak xxxxxxxxx rovnoběžnosti, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx neuspokojivý.
9. XXXXXXXXXXXXXX
Xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx jednoho xxxxxxxxx xxx jedné a xxxx zkoušce by xxxxxx překračovat:
- 2 xx/xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx 2 až 10 xx/xx,
- 20 % xxxxx hodnoty xxxxxxxx xxx obsahu 10 xx 25 xx/xx,
- 5 xx/xx absolutní xxxxxxx při obsahu 25 xx 50 xx/xx,
- 10 % xxxxx xxxxxxx výsledku xxx xxxxxx nad 50 xx/xx.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXX SODNÉHO DIFÚZÍ X AGAROVÉM XXXXXXXXXXX XXXXX
1. XXXX A XXXXXX XXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx monensinu sodného x xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx premixech. Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx je 10 xx/xx (10 xxx) [3].
2. XXXXXXX
Xxxxxx xx extrahuje 90 %-xxx methanolem. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx difúze monensinu xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Bacillus xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx zón je x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
3. XXXXXXXXXXXXXXX: BACILLUS XXXXXXXX XXXX 6633 (NICB 8054)
3.1 Xxxxxxxx kmenové xxxxxxx
Xxxxxxx kultivační xxxxxx (4.1) x šikmých xxxxxxxxxx xx naočkuje xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxxx x přes xxx xx inkubuje xxx 30 °X. Kultura xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx asi 4 °C a xxxxx měsíc se xxxxx xxxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx [4]
Xxxxxxx xxxxxxx na xxxxx (3.1) x xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 2-3 ml xxxxxxxx xxxx. Xxxxx suspenzí xx xxxxxxxx Rouxova xxxxx, xxxxx xxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), x xx xxxx 3 xx 5 dní xx inkubuje při 30 °C. Xx xxxxxxxx xxxxxx spór xxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxx přidá xx 15 ml xxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxxxxxxx xx. Tato suspenze xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 5 xxxxxx xxx 4 °X.
4. XXXXXXXXXX XXXXXX X XXXXXXX
|
4.1 Xxxxxxxxxx médium [5] |
|
|
xxxxxxx |
10,0 x |
|
xxxxxxxxxx extrakt |
3,0 x |
|
xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
glukóza |
1,0 x |
|
xxxx (xxxxx xxxxxxx) |
10,0-20,0 x |
|
xxxx |
1000 xx |
|
xX 6,5 (xx sterilizaci) |
|
|
4.2 Zkušební xxxxxx |
|
|
xxxxxxx |
10,0 g |
|
kvasnicový xxxxxxx |
2,5 x |
|
xxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný, X2XXX4 |
0,69 x |
|
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, XX2XX4 |
0,45 x |
|
xxxx (xxxxx kvality) |
10,0-20,0 x |
|
xxxx |
1000 xx |
|
xX 6,5 (xx xxxxxxxxxxx) |
|
4.3 Xxxxxxx 20 %-xx (x/x): 200 ml xxxxxxxx xx xxxxx 800 xx xxxx.
4.4 Xxxxxxxx, xxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx 90 %-xx (v/v): 900xx xxxxxxxxx (4.4) xx xxxxx 100 ml xxxx.
4.6 Xxxxxxxx 50 %-xx (x/x): 500xx xxxxxxxxx (4.4) xx xxxxx 500 xx xxxx.
4.7 Oxid xxxxxxx, xxxxxxxxxxx (xxxxx F, 20 xxxx; xxxxxxxxx xxxxxxx XX1: F. Xxxxxxxxx xxx Xx., xxxx rovnocenný).
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx: monensin xxxxx x xxxxx aktivitě (xxxx jiné xxxxxxxxxx x International Laboratory xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxxxx Xxxxxxxxxx Laboratory, Xxxxxxxxx, Xxxxxx XX15 3XX, Xxxxx Xxxxxxxx).
5. XXXXXXXXX
5.1 Vakuová rotační xxxxxxx s 250ml xxxxxxx baňkou.
5.2 Skleněná xxxxxxxx pro chromatografii, xxxxxxx průměr: 25 xx, xxxxx: 400 xx, s xxxxxxx x xxxxxxx 2 xx xx jednom xxxxx.
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx, vnitřní xxxxxx: 11 mm, xxxxx: xxxxxxxxx 300 xx, x xxxxxxx x xxxxxxx 2 xx xx xxxxxx xxxxx.
6. STANDARDNÍ XXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8) xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx (4.4) x naředí, xxx vznikl xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 800 μx/xx. Při uchování x xxxxxxxx xxxxx x xxx 4 xX, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 2 xxxxx.
X tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx se připraví xxxxxxxxx rozřeďováním 50 %-xxx xxxxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
X8 |
8 μg/ml |
|
S4 |
4 μx/xx |
|
X2 |
2 μx/xx |
|
X1 |
1 μg/ml. |
7. XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX XXXXXXX
7.1 Xxxxxxxx
7.1.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx o xxxxxxxxx 2,0 xx xx xxxxx x 100 ml 90 %-xxxx xxxxxxxxx (4.5), xxxxxxx minut xx xxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxx 50 %-ním methanolem (4.6), xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxx xxxxxxx 8 μx/xx ( = X8).
7.1.2 Xxxxxx, x xxxxx podíl xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxx o xxxxxxxxx 10 až 20 x xx xxxxx x 100 xx 90 %-xxxx xxxxxxxxx (4.5), 15 xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx.
Xxxxxx zátka xx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxx (5.2) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx trubičkou xx xxxxxx xx výše 75–80 xx xxxxxx xxxxxxxx (4.7).
Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx. 30 xx xxxxxxxx xx xxxxx 50 xx xxxx. Xxxx xxxx xx zředí 50 %-ním xxxxxxxxxx (4.6), xxx xxxx xxxxxxxx očekávané koncentrace xxxxxxxx xxxxxxx 8 μx/xx ( = X8).
7.1.3 Krmiva x xxxxx xxxxx monensinu xxxxxxxxxx 50 xxx (xxxxxx hranice 10 xxx)
Xxxxxx o hmotnosti 10 xx 20 x se xxxxx x 100 xx 90 %-xxxx xxxxxxxxx (4.5), 15 xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 20 xxx xx odebere 40 xx xxxxxx; xxx 10 ppm xx xxxxxxx 80 xx. Xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx při xxxxxxx nepřesahující 40 °X x xxxxxxxx xxxxxxx (5.1). Xxxxxxxx xx rozpustí v 10 xx 90 %-xxxx methanolu.
Vatová zátka xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (5.3) x xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx výše 75–80 xx oxidem xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx hlinitého x xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 10 xx 90xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xx odpaří xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 40 °X v rotační xxxxxxx (5.1). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx v 10 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.4) x xxxxxx se xxxxxx xxxxx na 20 xx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 5 xxxxx xxx minimálních xxxxxxxx 4000 xx/xxx. Xxxx xxxx xx xxxxx 50 %-xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 8 μx/xx ( = X8).
7.2. Xxxxxxxxx xxxxxx
X xxxxxxx X8 xx xxxxxxxxx rozřeďováním (1 + 1) 50 %-xxx xxxxxxxxxx (4.6) xxxxxxxx xxxxxxx X4 (xxxxxxxxx podíl: 4 μx/xx), U2 (xxxxxxxxx xxxxx: 2 μx/xx), X1 (očekávaný xxxxx: 1 μx/xx).
8. XXXXXX XXXXX
8.1 Naočkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx (4.2) xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (3.2) při 50 až 60 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx miskách se xxxxxxxxx xxxxxx (4.2) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx možná xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx sodného.
8.2 Příprava xxxxx
Xxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx test xx miskách po xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, S2, X1) x testovacího xxxxxxx (X8, U4, X2, X1). Xx xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxx x xxxxxxxx. Z xxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx takové xxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx otvorů x průměru 10-13 xx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 30 xx. Test xx xxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xx miskách, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx desky, xx nichž xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx kroužek x xxxxx 20 xx x xxxxxxx 200 xx.
Xx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx média (4.1) xxxxxxxxxxxx podle 8.1, xxx se vytvořila xxxxxx xxxxx přibližně 2 mm (60 xx xx misku x xxxxxxx 200 xx). Xxxx xx xxxxxx ztuhne, vyhloubí xx otvory, xx xxxxxxx xx pipetou xxxxxx přesné množství xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx 0,10 x 0,15 ml xx otvor, xxxxx xxxxxxx otvoru). Xxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxx xxxx xx vyhodnotí 32 xxxxxxxxxxx xxx.
8.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 18 xxxxx xxx 35 xx 37 °X.
9. VYHODNOCENÍ
Průměr xxxxxxxxxxx zón xx xxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx do semilogaritmického xxxxxx, xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx jako xxx xxxxxxx xx zakreslí xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx. xxxx uvedeným xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx (XX) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
x) XX = 7X1 + 4X2 + S4 – 2X8 / 10
Xxxxxxxxxxxx xxx pro xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (XX) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
x) XX = 7S8 + 4S4+ X2 + 2X1 / 10
Xxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx body xxx xxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxx, přičemž xx xx xxxx xxxxxxxxx vzorců xxxxxx X1, X2, X4 x X8 namísto X1, X2, X4 x X8.
Xxxxxxxxxx hodnoty XX a XX xx zanesou do xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx XX x XX k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx přímky pro xxxxxxx.
Xxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxx faktory, xxxx xx xxx přímky xxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx (SH-SL) a (XX-XX) xxxxxxxxxxx xxxx xxx x 10 % xx střední xxxxxxx.
Xxxxx přímky xxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxx X1 x S1 xxxx X8 x X8. Xxx xx hodnoty XX, SH, UL x XX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx:
x) XX = 5S1 + 2X2 – X4 / 6 xxxx 5X2 + 2X4 – X8 / 6
x ) XX = 5X4 + 2X2 − X1 / 6 xxxx 5S8 + 2X4 − X2 / 6
Totéž xx xxxxxxx xxx xxxxxxx XX x XX. X xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx se rovněž xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxx úrovní, xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x analýze.
Pokud xx xxxxx přímky považovat xx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx relativní xxxxxxxx (xxx A) xxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
Xxx 4 xxxxxx
x) log A = (X1+ X2+ X4+ U8 – X1 – X2 – S4 – X8) × 0,602 / X4+ U8+ X4+ X8 – X1 – U2 – X1 – X2
Xxx 3 xxxxxx
x) xxx A = (X1+ X2+ X4 – X1 – X2 – X4) × 0,401 / X4+ S4 – X1 – S1
nebo
d) xxx X = (X2+ U4+ X8 – X2 – X4 – S8) × 0,401 / X8+ X8 – X2 – S2
Skutečná xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx х xxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxx relativní xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxx 0,5–2,0, xxxx xx zopakuje při xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx dosáhnout relativní xxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, x xx xx mělo xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x analýze.
Pokud xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx se xxx xxx nedosáhne rovnoběžnosti, xx xxxxx výsledek xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx.
10. XXXXXXXXXXXXXX
Xxxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxx x xxxx zkoušce xx neměly překračovat:
- 20 % xxxxx xxxxxxx výsledku xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx 25 xx/xx,
- 5 xx/xx xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxxx 25 až 50 xx/xx,
- 10 % xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxx 50 xx/xx.
[1] Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.
[2] Může xxx xxxxxxx jakékoliv xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] 1 xx monensinu xxxxxxx xxxxxxxx 1000 jednotkám XX.
[4] Xxxxx xxx xxxxxxx jiné xxxxxx, xxxxx xxxxxxx odpovídající xxxxxxxx xxxx.
[5] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxxxxx xxxxxx výsledky.