Xxxxxx xxxxxxxx Komise
ze xxx 31. července 1981,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(81/715/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. července 1970, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x analýzy Společenství xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Aktem o xxxxxxxxxxx Řecka, x xxxxxxx na xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, zda xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx jakost a xxxxxxx xxxxx, se xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxx Společenství xxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/EHS [2], 71/393/EHS [3], 72/199/XXX [4], 73/46/XXX [5], 74/203/XXX [6], 75/84/XXX [7], 76/372/XXX [8] x 78/633/XXX [9], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxx 30. července 1981, xxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx; xx xxxx od xx doby xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxxx soubor xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xx provádějí xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Článek 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v účinnost xxxxxx x správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu s xxxxx xxxxxxxx do 1. prosince 1981. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu xxx 31. xxxxxxxx 1981.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxx
xxxxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[4] Úř. věst. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[5] Xx. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[6] Úř. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[7] Úř. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
[8] Úř. xxxx. X 102, 15.4.1976, x. 8.
[9] Xx. xxxx. X 206, 29.7.1978, x. 43.
PŘÍLOHA
1. XXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXX X XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXX
1. ÚČEL X XXXXXX XXXXXXX
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx hranice stanovitelnosti xx 2 xx/xx (2 ppm). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx antibiotik xxxx xx stanovení xxxxxxx xxxxxx.
2. PRINCIP
Ze směsi xxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Extrakt xx odstředí. Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx měřením xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx naočkovaném xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr inhibičních xxx je xxx xxxxxx použitých koncentrací xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. MIKROORGANISMUS: XXXXXXXX XXXXXXXX XXXX 6633 (XXXX 8054)
3.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.1) v xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xx při 30 °X xxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx xxx 4 °X x xxxxx xxxxx xx xxxxx naočkuje.
3.2. Xxxxxxxx suspenze spór [1]
Xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx médiu (3.1) xx xxxxx 2-3 xx sterilní xxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx Rouxova láhev, xxxxx xxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), x xx xxxx 3 xx 5 dní xx xxxxxxxx xxx 30 °X. Xx kontrole xxxxxx xxxx pod xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx 15 xx xxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxxx xx. Xxxx xxxxxxxx může xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 5 měsíců xxx 4 °X.
4. KULTIVAČNÍ XXXXXX X ČINIDLA
4.1 Xxxxxxxxxx médium [2]
|
xxxxxx |
6,0 x |
|
xxxxxxx |
4,0 g |
|
kvasnicový xxxxxxx |
3,0 x |
|
xxxxxx extrakt |
1,5 g |
|
glukóza |
1,0 x |
|
xxxx |
15,0 g |
|
voda |
1000 xx |
|
xX 6,5 (xx sterilizaci) |
|
4.2 Xxxxxxx 20 %-xx (x/x): 200 xx xxxxxxxx xx xxxxx 800 xx xxxx.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,18–1,19.
4.4 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx, 2X.
4.5 Xxxxxxxxx xxxx 0,1 X:
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, KH2 PO4: 13,6 g
voda: 1000 xx
xX xxxxxxx xx 4,5.
4.6 Xxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3): 65/32,5/2,5 (x/x/x)
4.7 Standardní xxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx
5. XXXXXXXXXX XXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxx množství xxx 10 mg xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7) xx xxxxxxxx ve fosfátovém xxxxx (4.5) a xxxxx xxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx základní xxxxxx obsahující 100 μx avoparcinu x 1 xx. Při xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx a xxx 4 °C, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 7 xxx.
5.1 Pro xxxxxxxxxx xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx postupným xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
X8 |
4 μg/ml |
|
S4 |
2 μx/xx |
|
X2 |
1 μx/xx |
|
X1 |
0,5 μg/ml. |
5.2 Xxx xxxxxx
X xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx fosfátovým xxxxxx xxxxxxxxxxx roztoky:
|
S8 |
2,0 μx/xx |
|
X4 |
1,0 μx/xx |
|
X2 |
0,5 μx/xx |
|
X1 |
0,25 μg/ml. |
6. XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX XXXXXXX
6.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx množství 10 xx vzorku, xxxxx xxxxxxxx 10-100 xx xxxxxxxxxx, xx x xxxxxxx xxxxx x obsahu 100 xx xxxxxxxxxx protřepe x 60 ml xxxxx (4.6) xx xxxx 15 xxxxx. Xxxxxxx xX xx xxxxxxxxxxx a xxxxx xx xxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (4.3) xx hodnotu 2. Xxxxx (4.6) xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xx. Xxx xx xxxxx xxxxxxxx přefiltruje xxxx xxxxxx filtrační papír (xxxx. Whatman x. 1) x prvních 5 xx xxxxxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xX xx xxxxxxxx hydroxidu sodného (4.4) xxxxxx na xxxxxxx 4,5. Xxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx pufrem (4.5), xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx obsahu avoparcinu 4 μg/ml ( = X8).
X xxxxxx xxxxxxx se postupným xxxxxxxxxxxx (1+1) fosfátovým xxxxxx (4.5) připraví xxxxxxx U4 (xxxxxxxxx xxxxx: 2 μx/xx), X2 (xxxxxxxxx obsah: 1 μg/ml) x X1 (očekávaný xxxxx: 0,5 μx/xx).
6.2 Xxxxxx
Xxxxxx x xxxxxxxxx 50 x se xxxxx xx 100 xx xxxxx (4.6) x xx xxxx 30 xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxx odstředěním (x xxxxxxxxxx zkumavkách). Xxxxxxx xxxx xxxxxxx extraktu xx xxxxxxx (viz. xxxxxxxxxxx xxxxxxx) a xxxxxxx xX se xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (4.4) xxxxxx xx 4,5. Xxxxx roztok xx xxxxxx fosfátovým xxxxxx (4,5), xxx xx xxxxxx xxxxxx X8 (viz. následující xxxxxxx).
X xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (1+1) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5) xxxxxxxx roztoky X4 (očekávaný obsah: 1,0 μx/xx), X2 (xxxxxxxxx obsah: 0,5 μx/xx) a U1 (xxxxxxxxx obsah: 0,25 μx/xx).
|
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx (xx/xx) |
5 |
7,5 |
10 |
15 |
20 |
40 |
|
Xxxxxxxx xxxxxx v x (± 0,1 x) |
50 |
50 |
50 |
50 |
50 |
50 |
|
Xxxxx směsi (4.6) x xx |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
|
Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (ml) |
20 |
15 |
20 |
15 |
20 |
10 |
|
Výsledný xxxxx (xx): U8 |
25 |
25 |
50 |
50 |
100 |
100 |
|
Očekávaný xxxxx X8 v μg/kg |
2 |
přibl. 2 |
2 |
xxxxx. 2 |
2 |
2 |
7. XXXXXX XXXXX
7.1 Naočkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxx médium (4.1) xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (3.2) xxx xxxxxxx 50–60 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (4.1) xx xxxxxxx xxxxxxxx inokula, xxxxx vykáže xx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx ostré xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxx misek
Test se xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1).Xx xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx koncentrace standardu x xxxxxxxx. Z xxxx xxxxxx xxxx xxx miska xxxxxx xxxxxxx, aby xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx prostředí xxxxxxx osm xxxxxx x xxxxxxx 10-13 xx x rozestupem xxxxxx minimálně 30 xx. Xxxx xx xxx být prováděn xxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxx se xxxxxx hliníkové xxxx xxxxxxxx xxxxxxx o xxxxx 20 mm x xxxxxxx 200 xx.
Xx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx média (4.1) xxxxxxxxxxxx podle 7.1, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2 mm (60 xx xx misku x průměru 200 xx). Xxxx, co xxxxxx ztuhne, vyhloubí xx xxxxxx, xx xxxxxxx se pipetou xxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx 0,10 x 0,15 xx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxx). Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx minimálně čtyřikrát, xxxxx xxx xxxxx xxxx xx vyhodnotí 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxx 16 až 18 xxxxx při 30 °X.
8. XXXXXXXXXXX
Xxxxxx inhibičních xxx xx xxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxxxx papíru, xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Pro xxxxxxxxxx roztok xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx. xxxx xxxxxxxx způsobem.
Nejvhodnější xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx standardního roztoku (XX) se xxxxxxx xxxxx následujícího vzorce:
a) XX = 7S8 + 4X4 + X2 – 2X1 / 10
Nejvhodnější xxx xxx nejvyšší xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (XX) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
XX = 7X8 + 4X4 + X2 – 2X1 / 10
Xxxxxx xxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx xxxxxx (UH) xxxxxxxx, xxxxxxx se xx výše xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx U1, X2, X4 a X8 namísto X1, X2, X4 x X8.
Xxxxxxxxxx xxxxxxx XX x SH xx xxxxxxx do stejného xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxx vznikne xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Totéž xx xxxxxxx pro xxxxxxx XX a XX x získání xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx extrakt.
Pokud xx nevyskytují xxxxxx xxxxxxx, měly xx xxx xxxxxx rovnoběžné. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx rovnoběžné, xxxxx se xxxxxxx (XX-XX) x (XX-XX) xxxxxxxxxxx xxxx xxx x 10 % xx xxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxx U1 x X1 xxxx U8 x S8. Xxx xx xxxxxxx SL, XX, XX x XX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xx obdržely xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx přímky:
|
a ) XX = 5X1 + 2X2 − X4 / 6 |
xxxx |
5X2 + 2S4 − X8 / 6 |
|
b ) XX = 5X4 + 2X2 − X1 / 6 |
xxxx |
5X8 + 2S4 − S2 / 6 |
Xxxxx xx provede xxx hodnoty UL x UH. X xxxxxx alternativních xxxxxx xx rovněž zkontroluje xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx, které xxxx stanoveny ze xxx xxxxxx, by xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx je xxxxx xxxxxx považovat xx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity (xxx A) xxxxxx xxxxxxx x následujících xxxxxx:
Xxx 4 xxxxxx
(x) xxx X = (X1+ X2+ U4+ X8 – X1 – S2 – X4 – X8) × 0,602 / X4+ U8+ S4+ X8 – U1 – U2 –
Xxx 3 xxxxxx
(x) xxx X = (X1+ X2+ X4 – X1 – X2 – S4) × 0,401 / X4+ X4 – X1 – X1
xxxx
x´) xxx X = (X2+ X4+ U8 – X2 – X4 – X8) × 0,401 / U8+ X8 – U2 – S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx х relativní xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx rozsah hodnot 0,5–2,0, xxxxxxx se xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx koncentrací xxxxxxxx xxxx. standardních xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x rozsahu xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, a xx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx protokolu x analýze.
Pokud xxxx xxxxx přímky xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, zkouška xx zopakuje. Xxxxx xx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.
9. XXXXXXXXXXXXXX
Xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx jednoho xxxxxxxxx xxx jedné a xxxx xxxxxxx by xxxxxx překračovat:
- 2 xx/xx xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxxx xxxxxxxxxx 2 xx 10 xx/xx,
- 20 % xxxxx hodnoty xxxxxxxx xxx xxxxxx 10 xx 25 xx/xx,
- 5 xx/xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx 25 xx 50 xx/xx,
- 10 % xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxx 50 mg/kg.
2. STANOVENÍ XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXX X XXXXXXXX KULTIVAČNÍM XXXXX
1. XXXX X XXXXXX POUŽITÍ
Metoda xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx sodného x xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 10 mg/kg (10 xxx) [3].
2. XXXXXXX
Xxxxxx xx xxxxxxxxx 90 %-xxx xxxxxxxxxx. Extrakt xx podrobí xxxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxxx sodného xx xxxxxx. Xxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Bacillus xxxxxxxx. Xxxxxx xx prokáže xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Citlivost xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxx sodných xxxxx.
3. XXXXXXXXXXXXXXX: XXXXXXXX XXXXXXXX XXXX 6633 (XXXX 8054)
3.1 Xxxxxxxx kmenové xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.1) x xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Bacillus subtilis x xxxx xxx xx xxxxxxxx xxx 30 °C. Kultura xx uchovává v xxxxxxxxxx xxx asi 4 °C x xxxxx xxxxx xx xxxxx naočkuje.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx spór [4]
Xxxxxxx xxxxxxx xx agaru (3.1) x xxxxx xxxxxxxx xx omyje 2-3 xx xxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx naočkuje Rouxova xxxxx, která xxxxxxxx 300 ml kultivačního xxxxx (4.1), a xx xxxx 3 xx 5 xxx xx inkubuje xxx 30 °X. Po xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx mikroskopem xx xxxxxxx xxxxx xx 15 xx ethanolu (4.3) x zhomogenizuje xx. Tato xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 5 xxxxxx xxx 4 °C.
4. XXXXXXXXXX XXXXXX X XXXXXXX
|
4.1 Xxxxxxxxxx médium [5] |
|
|
xxxxxxx |
10,0 g |
|
kvasnicový extrakt |
3,0 x |
|
xxxxxx extrakt |
1,5 g |
|
glukóza |
1,0 x |
|
xxxx (xxxxx kvality) |
10,0-20,0 x |
|
xxxx |
1000 xx |
|
xX 6,5 (xx sterilizaci) |
|
|
4.2 Xxxxxxxx xxxxxx |
|
|
xxxxxxx |
10,0 g |
|
kvasnicový extrakt |
2,5 x |
|
xxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný, X2XXX4 |
0,69 x |
|
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný, KH2PO4 |
0,45 x |
|
xxxx (xxxxx xxxxxxx) |
10,0-20,0 x |
|
xxxx |
1000 ml |
|
pH 6,5 (xx xxxxxxxxxxx) |
|
4.3 Xxxxxxx 20 %-xx (x/x): 200 ml xxxxxxxx xx zředí 800 xx xxxx.
4.4 Methanol, xxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx 90 %-xx (x/x): 900xx xxxxxxxxx (4.4) xx xxxxx 100 ml xxxx.
4.6 Methanol 50 %-xx (x/x): 500xx xxxxxxxxx (4.4) xx xxxxx 500 xx xxxx.
4.7 Xxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx (xxxxx X, 20 mesh; activated xxxxxxx UG1: X. Xxxxxxxxx xxx Co., xxxx rovnocenný).
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx: xxxxxxxx sodný x xxxxx xxxxxxxx (xxxx xxxx xxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxxxx Laboratory xxx Boilogical Standards, Xxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx, Xxxxxx KT15 3XX, Xxxxx Xxxxxxxx).
5. XXXXXXXXX
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x 250xx xxxxxxx xxxxxx.
5.2 Skleněná xxxxxxxx xxx chromatografii, xxxxxxx průměr: 25 xx, xxxxx: 400 xx, x xxxxxxx x xxxxxxx 2 xx xx jednom xxxxx.
5.3 Skleněná xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx, vnitřní xxxxxx: 11 xx, xxxxx: přibližně 300 xx, x xxxxxxx x xxxxxxx 2 xx xx xxxxxx xxxxx.
6. STANDARDNÍ XXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx asi 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8) xx xxxxxxxx x methanolu (4.4) a xxxxxx, xxx xxxxxx výchozí xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 800 μx/xx. Xxx uchování x uzavřené xxxxx x xxx 4 xX, xxxxxxx xxxxx xxxxxx použitelný 2 xxxxx.
X tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rozřeďováním 50 %-xxx xxxxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxxx roztoky:
|
S8 |
8 μx/xx |
|
X4 |
4 μx/xx |
|
X2 |
2 μx/xx |
|
X1 |
1 μx/xx. |
7. XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX XXXXXXX
7.1 Xxxxxxxx
7.1.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx x xxxxxxxxx 2,0 xx xx xxxxx x 100 xx 90 %-xxxx methanolu (4.5), xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxxx se zředí 50 %-ním xxxxxxxxxx (4.6), xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxx sodného 8 μx/xx ( = X8).
7.1.2 Xxxxxx, u xxxxx podíl monensinu xxxx xxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxx o xxxxxxxxx 10 až 20 x xx xxxxx k 100 xx 90 %-xxxx xxxxxxxxx (4.5), 15 xxxxx xxxxxxxx a xxxxx xxxxx.
Xxxxxx zátka xx xxxxxx xx xxxxxxxx trubičky (5.2) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxx 75–80 xx xxxxxx xxxxxxxx (4.7).
Extrakt xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxx. 30 xx filtrátu xx xxxxx 50 xx xxxx. Hned xxxx xx xxxxx 50 %-xxx xxxxxxxxxx (4.6), xxx xxxx xxxxxxxx očekávané koncentrace xxxxxxxx xxxxxxx 8 μx/xx ( = X8).
7.1.3 Krmiva u xxxxx podíl xxxxxxxxx xxxxxxxxxx 50 xxx (xxxxxx xxxxxxx 10 xxx)
Xxxxxx o xxxxxxxxx 10 xx 20 x xx xxxxx x 100 ml 90 %-xxxx xxxxxxxxx (4.5), 15 minut xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxx x podílem xxxxxxxxx 20 xxx xx xxxxxxx 40 xx zbytku; xxx 10 xxx xx xxxxxxx 80 ml. Xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx nepřesahující 40 °X x xxxxxxxx xxxxxxx (5.1). Zůstatek xx rozpustí v 10 ml 90 %-xxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx trubičky (5.3) x za xxxxxxx xxxxxxx xx trubička xxxxxx xx výše 75–80 mm oxidem xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx roztok xxxxxx xx převede xx xxxxxxx xxxxx hlinitého x filtrát xx xxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx 10 xx 90xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx se xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 40 °X x rotační xxxxxxx (5.1). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.4) x xxxxxx xx doplní xxxxx na 20 xx. Xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 5 xxxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4000 ot/min. Xxxx poté se xxxxx 50 %-xxx xxxxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxx xxxxxxx 8 μx/xx ( = X8).
7.2. Xxxxxxxxx xxxxxx
X xxxxxxx X8 se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (1 + 1) 50 %-xxx xxxxxxxxxx (4.6) xxxxxxxx xxxxxxx X4 (xxxxxxxxx podíl: 4 μx/xx), U2 (xxxxxxxxx xxxxx: 2 μg/ml), X1 (xxxxxxxxx xxxxx: 1 μg/ml).
8. POSTUP XXXXX
8.1 Naočkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx (4.2) xx xxxxxxxx suspenzí xxxx (3.2) xxx 50 xx 60 °X. Předběžnými xxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxx médiem (4.2) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxx použitými xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx sodného.
8.2 Příprava xxxxx
Xxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx test xx xxxxxxx po xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx stupních xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, S2, X1) x testovacího roztoku (X8, X4, X2, X1). Na xxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardu x xxxxxxxx. Z xxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xxxx xxxxx vytvořit xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx x průměru 10-13 xx s xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 30 xx. Xxxx by xxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx na miskách, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx kroužek o xxxxx 20 xx x xxxxxxx 200 xx.
Xx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxxxx podle 8.1, xxx xx vytvořila xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2 xx (60 xx xx xxxxx x xxxxxxx 200 xx). Poté xx xxxxxx ztuhne, xxxxxxxx xx otvory, xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx 0,10 x 0,15 xx xx otvor, xxxxx xxxxxxx xxxxxx). Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxx každý xxxx se xxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
8.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 18 xxxxx xxx 35 xx 37 °X.
9. VYHODNOCENÍ
Průměr xxxxxxxxxxx zón xx xxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 mm. Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx semilogaritmického xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxx standardní roztok xxxxxx jako xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx. xxxx uvedeným xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxx úroveň xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (SL) xx xxxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
x) SL = 7X1 + 4S2 + S4 – 2X8 / 10
Xxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx (XX) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
x) XX = 7X8 + 4X4+ S2 + 2S1 / 10
Xxxxxx xxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx (XX) x nejvyšší xxxxxx (XX) xxxxxxxx, xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx vzorců xxxxxx X1, U2, X4 x X8 xxxxxxx X1, X2, S4 x X8.
Xxxxxxxxxx xxxxxxx XX x XX xx xxxxxxx do xxxxxxxx diagramu. Xxxxxxxx xxxx bodů xxxxxxx xxxxxxxxxxxx přímka xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Totéž xx xxxxxxx pro xxxxxxx UL x XX x získání xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xx být xxxxxx xxxxxxxxxx. Přímky xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxx (SH-SL) a (XX-XX) neodchylují více xxx x 10 % xx střední xxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, xx možné xxxxxxxx xxx U1 x X1 nebo X8 a X8. Xxx xx hodnoty XX, SH, XX x XX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorců, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx:
x) XX = 5S1 + 2S2 – X4 / 6 xxxx 5S2 + 2X4 – X8 / 6
b ) XX = 5X4 + 2S2 − X1 / 6 xxxx 5X8 + 2X4 − X2 / 6
Xxxxx se xxxxxxx pro xxxxxxx XX a UH. X těchto xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx se rovněž xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Výsledky, xxxxx xxxx stanoveny xx xxx xxxxxx, xx xxxx být xxxxxxxxxxx do xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxx přímky xxxxxxxxx xx rovnoběžné, xxxxxxxx xx logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx A) xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
Xxx 4 xxxxxx
x) log A = (X1+ X2+ X4+ X8 – X1 – X2 – X4 – X8) × 0,602 / U4+ U8+ X4+ X8 – X1 – X2 – X1 – X2
Xxx 3 úrovně
d) xxx A = (X1+ X2+ X4 – X1 – X2 – X4) × 0,401 / X4+ X4 – X1 – X1
xxxx
x) xxx X = (X2+ U4+ X8 – X2 – X4 – S8) × 0,401 / X8+ X8 – X2 – S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx х xxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxx 0,5–2,0, xxxx xx xxxxxxxx při xxxxxxxxxxxxx přizpůsobení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx dosáhnout xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, a xx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x analýze.
Pokud xxxx xxxxx přímky xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xx ani xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xx třeba výsledek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.
10. XXXXXXXXXXXXXX
Xxxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxx překračovat:
- 20 % vyšší xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx 25 xx/xx,
- 5 xx/xx xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxxx 25 xx 50 xx/xx,
- 10 % vyšší xxxxxxx xxxxxxxx xxx obsahu xxx 50 xx/xx.
[1] Xxxxx být použity xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx poskytne xxxxxx xxxxxxxx.
[3] 1 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1000 xxxxxxxxx XX.
[4] Mohou být xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx spór.
[5] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.