Devátá xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 31. xxxxxxxx 1981,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(81/715/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx odběru vzorků x analýzy Společenství xxx úřední xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Aktem o xxxxxxxxxxx Xxxxx, a xxxxxxx xx článek 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx 70/373/XXX stanoví, xx úřední xxxxxxxx xxxxx za xxxxxx xxxxxxxx, zda xxxx xxxxxxx požadavky právních x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx, se xxxxxxxxx xx použití xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství;
vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX [2], 71/393/EHS [3], 72/199/XXX [4], 73/46/EHS [5], 74/203/XXX [6], 75/84/XXX [7], 76/372/XXX [8] a 78/633/XXX [9], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxx xx dne 30. července 1981, xxx xxxx analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx; xx stav xx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxxx soubor xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx kontrolu xxxxx xx obsah xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx se provádějí xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Článek 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx do 1. xxxxxxxx 1981. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxx Komisi.
Xxxxxx 3
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 31. července 1981.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxx
xxxxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[4] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[5] Xx. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[6] Xx. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[7] Xx. věst. X 32, 5.2.1975, x. 26.
[8] Xx. věst. X 102, 15.4.1976, x. 8.
[9] Xx. xxxx. X 206, 29.7.1978, x. 43.
PŘÍLOHA
1. XXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXX V XXXXXXXX XXXXXXXXXXX MÉDIU
1. XXXX X ROZSAH XXXXXXX
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx hranice xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx/xx (2 ppm). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx antibiotik xxxx xx stanovení xxxxxxx xxxxxx.
2. XXXXXXX
Xx xxxxx xxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxxx aktivita se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v agarovém xxxxxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zónami xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx.
3. XXXXXXXXXXXXXXX: XXXXXXXX XXXXXXXX XXXX 6633 (XXXX 8054)
3.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx kultury
Agarové xxxxxxxxxx xxxxxx (4.1) v xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Bacillus xxxxxxxx x xxxx xxx xx při 30 °X inkubuje. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x chladničce xxx xxx 4 °C x každý xxxxx xx znovu xxxxxxxx.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx spór [1]
Xxxxxxx kultura x xxxxxxxx médiu (3.1) xx xxxxx 2-3 xx sterilní xxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxxx láhev, xxxxx xxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), x xx xxxx 3 xx 5 xxx xx xxxxxxxx při 30 °X. Po xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx kultura xxxxx xx 15 xx ethanolu (4.2) x xxxxxxxxxxxxx se. Xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 5 xxxxxx xxx 4 °X.
4. XXXXXXXXXX XXXXXX A XXXXXXX
4.1 Xxxxxxxxxx médium [2]
|
pepton |
6,0 x |
|
xxxxxxx |
4,0 g |
|
kvasnicový extrakt |
3,0 x |
|
xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
xxxxxxx |
1,0 x |
|
xxxx |
15,0 x |
|
xxxx |
1000 ml |
|
pH 6,5 (po sterilizaci) |
|
4.2 Xxxxxxx 20 %-ní (x/x): 200 xx xxxxxxxx se xxxxx 800 xx vody.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,18–1,19.
4.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, 2X.
4.5 Xxxxxxxxx xxxx 0,1 X:
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, XX2 XX4: 13,6 x
xxxx: 1000 xx
xX upravit xx 4,5.
4.6 Směs acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (4.3): 65/32,5/2,5 (x/x/x)
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx
5. XXXXXXXXXX XXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxx množství xxx 10 mg xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7) xx xxxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) a xxxxx pufrem naředí, xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxx v 1 xx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx x při 4 °X, zůstane xxxxx xxxxxx použitelný 7 xxx.
5.1 Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx postupným rozřeďováním xxxxxxxxxx xxxxxx následující xxxxxxx:
|
X8 |
4 μx/xx |
|
X4 |
2 μx/xx |
|
X2 |
1 μx/xx |
|
X1 |
0,5 μg/ml. |
5.2 Pro xxxxxx
X výchozího xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
X8 |
2,0 μx/xx |
|
X4 |
1,0 μx/xx |
|
X2 |
0,5 μx/xx |
|
X1 |
0,25 μx/xx. |
6. XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX ROZTOKU
6.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 10 mg vzorku, xxxxx xxxxxxxx 10-100 xx xxxxxxxxxx, xx x odměrné baňce x xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 60 ml xxxxx (4.6) xx xxxx 15 xxxxx. Xxxxxxx pH xx xxxxxxxxxxx a xxxxx xx xxxxx, upraví xx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (4.3) xx hodnotu 2. Xxxxx (4.6) xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xx. Xxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxx č. 1) a xxxxxxx 5 ml filtrátu xx xxxxx. Odebere xx xxxxxxx část x xX xx xxxxxxxx xxxxxxxxx sodného (4.4) xxxxxx xx xxxxxxx 4,5. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5), xxx xx dosáhlo xxxxxxxxxxx xxxxxx avoparcinu 4 μg/ml ( = X8).
X xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (1+1) fosfátovým xxxxxx (4.5) xxxxxxxx xxxxxxx X4 (očekávaný xxxxx: 2 μx/xx), X2 (očekávaný xxxxx: 1 μx/xx) x X1 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,5 μg/ml).
6.2 Xxxxxx
Xxxxxx x xxxxxxxxx 50 x xx přidá xx 100 ml xxxxx (4.6) x xx xxxx 30 xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx (v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx). Xxxxxxx xxxx xxxxxxx extraktu xx xxxxxxx (viz. xxxxxxxxxxx xxxxxxx) x xxxxxxx xX se xxxxxxxx xxxxxxxxx sodného (4.4) xxxxxx na 4,5. Tento xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4,5), xxx xx xxxxxx xxxxxx X8 (viz. následující xxxxxxx).
X tohoto xxxxxxx xx postupným xxxxxxxxxxxx (1+1) xxxxxxxxxx pufrem (4.5) xxxxxxxx xxxxxxx X4 (očekávaný obsah: 1,0 μg/ml), X2 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,5 μx/xx) x X1 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,25 μx/xx).
|
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx (xx/xx) |
5 |
7,5 |
10 |
15 |
20 |
40 |
|
Xxxxxxxx xxxxxx x x (± 0,1 x) |
50 |
50 |
50 |
50 |
50 |
50 |
|
Xxxxx xxxxx (4.6) x xx |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
|
Xxxxx čistého xxxxxxxx (xx) |
20 |
15 |
20 |
15 |
20 |
10 |
|
Xxxxxxxx xxxxx (xx): U8 |
25 |
25 |
50 |
50 |
100 |
100 |
|
Očekávaný xxxxx X8 x μg/kg |
2 |
přibl. 2 |
2 |
xxxxx. 2 |
2 |
2 |
7. XXXXXX XXXXX
7.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx (4.1) xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (3.2) xxx xxxxxxx 50–60 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (4.1) xx xxxxxxx xxxxxxxx inokula, xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx ale xxxxx xxxxx inhibiční xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxx misek
Test xx xxxxxx xxxx difúzní xxxx na xxxxxxx xx čtyřech koncentračních xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x testovacího xxxxxxx (U8, X4, X2, X1).Xx xxxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardu x xxxxxxxx. Z xxxx důvodu xxxx xxx xxxxx takové xxxxxxx, xxx xxxx xxxxx vytvořit xx xxxxxx kultivačního xxxxxxxxx xxxxxxx osm otvorů x xxxxxxx 10-13 xx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 30 xx. Test xx xxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxx xxxx vyrobeny xx xxxxxxxx xxxxx, xx kterou xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 20 xx x průměru 200 xx.
Xx misku xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx média (4.1) xxxxxxxxxxxx podle 7.1, xxx xx vytvořila xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2 xx (60 xx na xxxxx x xxxxxxx 200 xx). Xxxx, xx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx otvory, do xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx 0,10 x 0,15 xx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxx otvoru). Každá xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx pro každý xxxx se xxxxxxxxx 32 inhibičních zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxx 16 xx 18 xxxxx xxx 30 °X.
8. XXXXXXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxx x přesností xx 0,1 xx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx hodnoty xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxxxx papíru, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx ve xxxxxx x průměru xxxxxxxxxxx zón. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx nejpříhodnější xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx. xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxx xxx nejnižší xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (XX) xx xxxxxxx xxxxx následujícího vzorce:
a) XX = 7X8 + 4X4 + X2 – 2X1 / 10
Xxxxxxxxxxxx xxx xxx nejvyšší xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorce:
SH = 7X8 + 4S4 + X2 – 2X1 / 10
Stejně xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx pro xxxxxxxx (UL) x xxxxxxxx xxxxxx (UH) xxxxxxxx, přičemž xx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx U1, X2, U4 x X8 xxxxxxx X1, X2, S4 x X8.
Xxxxxxxxxx xxxxxxx XX x XX se xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Spojením xxxx xxxx vznikne xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxx hodnoty XX x XX x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxx přímky rovnoběžné. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx rovnoběžné, xxxxx xx xxxxxxx (XX-XX) a (UH-UL) xxxxxxxxxxx xxxx než x 10 % xx xxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxx X1 x X1 nebo X8 x X8. Pak xx hodnoty SL, XX, XX a XX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorců, aby xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx:
|
x ) XX = 5X1 + 2X2 − X4 / 6 |
xxxx |
5X2 + 2X4 − X8 / 6 |
|
x ) SH = 5X4 + 2X2 − X1 / 6 |
xxxx |
5X8 + 2S4 − X2 / 6 |
Xxxxx xx xxxxxxx xxx hodnoty XX x XX. X xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx rovněž zkontroluje xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxx úrovní, xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity (xxx A) xxxxxx xxxxxxx x následujících xxxxxx:
Xxx 4 xxxxxx
(x) xxx X = (X1+ X2+ X4+ X8 – S1 – S2 – X4 – S8) × 0,602 / X4+ X8+ X4+ X8 – X1 – X2 –
Xxx 3 xxxxxx
(x) log X = (U1+ X2+ U4 – X1 – S2 – X4) × 0,401 / X4+ X4 – X1 – S1
nebo
d´) xxx X = (X2+ X4+ U8 – X2 – S4 – S8) × 0,401 / U8+ X8 – U2 – S2
Skutečná aktivita = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx х xxxxxxxxx aktivita.
Pokud xxxxxxxxx aktivita xxxx xxxx xxxxxx hodnot 0,5–2,0, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxxx roztoků. Xxxxx xxxx možné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x rozsahu požadovaných xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx považovat xx xxxxxxxxx, a xx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx do xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx není xxxxx přímky xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxx pak xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx považovat xx xxxxxxxxxxxx.
9. XXXXXXXXXXXXXX
Xxxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxx xxxxxxx analytika xxx jedné x xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:
- 2 xx/xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsahu xxxxxxxxxx 2 až 10 xx/xx,
- 20 % xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx 10 xx 25 xx/xx,
- 5 xx/xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsahu 25 xx 50 xx/xx,
- 10 % xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxx 50 xx/xx.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXX SODNÉHO XXXXXX X AGAROVÉM XXXXXXXXXXX XXXXX
1. XXXX X XXXXXX XXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx monensinu xxxxxxx x xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx je 10 xx/xx (10 xxx) [3].
2. XXXXXXX
Xxxxxx xx extrahuje 90 %-xxx methanolem. Xxxxxxx xx podrobí vhodnému xxxxxxx xxxxx obsahu xxxxxxxxx sodného ve xxxxxx. Xxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx difúze xxxxxxxxx xxxxxxx x agarovém xxxxxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibičními zónami xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx těchto xxxxxxxxxxx zón xx x xxxxxxx použitých xxxxxxxxxxx považován xx xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
3. XXXXXXXXXXXXXXX: XXXXXXXX XXXXXXXX XXXX 6633 (XXXX 8054)
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx kultivační xxxxxx (4.1) x šikmých xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Bacillus xxxxxxxx x přes noc xx inkubuje xxx 30 °X. Xxxxxxx xx uchovává v xxxxxxxxxx xxx xxx 4 °X x xxxxx xxxxx se xxxxx xxxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx [4]
Xxxxxxx xxxxxxx na agaru (3.1) x šikmé xxxxxxxx se omyje 2-3 xx xxxxxxxx xxxx. Xxxxx suspenzí xx xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx 300 ml xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), a xx xxxx 3 xx 5 dní xx xxxxxxxx xxx 30 °X. Xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xx 15 ml xxxxxxxx (4.3) a xxxxxxxxxxxxx xx. Tato xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx 5 měsíců xxx 4 °C.
4. XXXXXXXXXX MÉDIUM X XXXXXXX
|
4.1 Xxxxxxxxxx xxxxxx [5] |
|
|
xxxxxxx |
10,0 x |
|
xxxxxxxxxx extrakt |
3,0 x |
|
xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
glukóza |
1,0 x |
|
xxxx (xxxxx kvality) |
10,0-20,0 x |
|
xxxx |
1000 xx |
|
xX 6,5 (xx sterilizaci) |
|
|
4.2 Xxxxxxxx xxxxxx |
|
|
xxxxxxx |
10,0 x |
|
xxxxxxxxxx xxxxxxx |
2,5 x |
|
xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, X2XXX4 |
0,69 x |
|
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, XX2XX4 |
0,45 x |
|
xxxx (xxxxx xxxxxxx) |
10,0-20,0 x |
|
xxxx |
1000 ml |
|
pH 6,5 (xx xxxxxxxxxxx) |
|
4.3 Xxxxxxx 20 %-xx (v/v): 200 xx xxxxxxxx xx xxxxx 800 xx vody.
4.4 Xxxxxxxx, xxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx 90 %-xx (x/x): 900xx xxxxxxxxx (4.4) xx xxxxx 100 xx xxxx.
4.6 Xxxxxxxx 50 %-xx (v/v): 500xx xxxxxxxxx (4.4) se xxxxx 500 xx xxxx.
4.7 Xxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx (alcoa F, 20 xxxx; xxxxxxxxx xxxxxxx XX1: X. Xxxxxxxxx and Xx., xxxx rovnocenný).
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx: xxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxx (xxxx xxxx xxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Standards, Xxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx, Xxxxxx KT15 3XX, Xxxxx Xxxxxxxx).
5. XXXXXXXXX
5.1 Vakuová xxxxxxx xxxxxxx s 250ml xxxxxxx xxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx chromatografii, xxxxxxx průměr: 25 xx, xxxxx: 400 xx, x xxxxxxx x xxxxxxx 2 xx xx xxxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxxxxx trubička xxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx: 11 xx, xxxxx: xxxxxxxxx 300 xx, x otvorem x xxxxxxx 2 xx na xxxxxx xxxxx.
6. STANDARDNÍ XXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx 10 mg xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8) xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx (4.4) x xxxxxx, xxx vznikl xxxxxxx xxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 800 μx/xx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx x xxx 4 xX, xxxxxxx tento xxxxxx použitelný 2 xxxxx.
X xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 %-xxx xxxxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
X8 |
8 μx/xx |
|
X4 |
4 μx/xx |
|
X2 |
2 μx/xx |
|
X1 |
1 μx/xx. |
7. XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX ROZTOKU
7.1 Xxxxxxxx
7.1.1 Xxxxxxxxxx premixy
Vzorek o xxxxxxxxx 2,0 xx xx xxxxx x 100 xx 90 %-xxxx xxxxxxxxx (4.5), xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxxx xx zředí 50 %-xxx xxxxxxxxxx (4.6), xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxx xxxxxxx 8 μx/xx ( = X8).
7.1.2 Xxxxxx, x xxxxx xxxxx monensinu xxxx nižší xxx 50 ppm
Vzorek o xxxxxxxxx 10 až 20 g se xxxxx k 100 xx 90 %-xxxx xxxxxxxxx (4.5), 15 xxxxx xxxxxxxx x xxxxx ustát.
Vatová zátka xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (5.2) x za lehkého xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxx 75–80 xx xxxxxx xxxxxxxx (4.7).
Xxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxx xxxxx hlinitého a xxxxxxx xx xxxxxxx. 30 ml xxxxxxxx xx zředí 50 xx xxxx. Hned xxxx xx xxxxx 50 %-ním methanolem (4.6), xxx xxxx xxxxxxxx očekávané xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 8 μx/xx ( = X8).
7.1.3 Xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx 50 ppm (xxxxxx xxxxxxx 10 xxx)
Xxxxxx x xxxxxxxxx 10 xx 20 x xx xxxxx x 100 xx 90 %-xxxx xxxxxxxxx (4.5), 15 minut xxxxxxxx x odstřeďuje xxxxx xx xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxx x podílem xxxxxxxxx 20 ppm xx xxxxxxx 40 xx xxxxxx; xxx 10 ppm se xxxxxxx 80 ml. Xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx při xxxxxxx nepřesahující 40 °X x xxxxxxxx xxxxxxx (5.1). Xxxxxxxx xx rozpustí v 10 ml 90 %-xxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (5.3) x za lehkého xxxxxxx xx trubička xxxxxx xx xxxx 75–80 xx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx oxidu xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx 10 xx 90xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx se xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx při xxxxxxx nepřesahující 40 °X x rotační xxxxxxx (5.1). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx v 10 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.4) x xxxxxx xx doplní xxxxx na 20 xx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 5 xxxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4000 ot/min. Xxxx poté xx xxxxx 50 %-xxx xxxxxxxxxx, aby bylo xxxxxxxx očekávané xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sodného 8 μx/xx ( = X8).
7.2. Xxxxxxxxx xxxxxx
X xxxxxxx X8 se xxxxxxxxx rozřeďováním (1 + 1) 50 %-xxx methanolem (4.6) xxxxxxxx xxxxxxx X4 (xxxxxxxxx podíl: 4 μx/xx), X2 (xxxxxxxxx xxxxx: 2 μx/xx), X1 (xxxxxxxxx xxxxx: 1 μx/xx).
8. XXXXXX XXXXX
8.1 Xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx (4.2) xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (3.2) při 50 xx 60 °X. Předběžnými pokusy xx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (4.2) xx stanoví xxxxxxxx xxxxxxx, které vykáže xx xxxxx největší xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
8.2 Příprava xxxxx
Xxxx se nasadí xxxx difúzní xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx koncentračních xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, X2, X1) x xxxxxxxxxxx roztoku (X8, U4, X2, X1). Xx xxxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx všechny xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx. X xxxx důvodu xxxx xxx miska xxxxxx xxxxxxx, aby xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx otvorů x xxxxxxx 10-13 xx x xxxxxxxxxx xxxxxx minimálně 30 xx. Test xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx skleněné desky, xx xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx kroužek x xxxxx 20 xx x xxxxxxx 200 xx.
Xx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx média (4.1) xxxxxxxxxxxx xxxxx 8.1, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2 xx (60 xx xx xxxxx x xxxxxxx 200 xx). Poté xx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx přesné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx 0,10 x 0,15 xx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxx otvoru). Každá xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx čtyřikrát, xxxxx xxx každý xxxx xx xxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
8.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx přibližně po xxxx 18 hodin xxx 35 xx 37 °C.
9. VYHODNOCENÍ
Průměr xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxx x přesností xx 0,1 xx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx hodnoty xxxxxxx xx semilogaritmického xxxxxx, xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx koncentrace xx xxxxxx k xxxxxxx inhibičních zón. Xxx xxxxxxxxxx roztok xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx se zakreslí xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx. níže xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxx bod xxx xxxxxxxx úroveň standardního xxxxxxx (XX) se xxxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
x) XX = 7X1 + 4X2 + X4 – 2X8 / 10
Xxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx (XX) xx stanoví xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
x) XX = 7S8 + 4S4+ S2 + 2X1 / 10
Xxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx xxxxxx (XX) extraktu, xxxxxxx xx do xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X1, U2, U4 x X8 xxxxxxx X1, X2, X4 x X8.
Xxxxxxxxxx xxxxxxx XX a SH xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx přímka pro xxxxxxxxxx roztok. Xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx UL x XX x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, měly xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx je xxxxx považovat xx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx (XX-XX) x (XX-XX) xxxxxxxxxxx xxxx xxx x 10 % xx střední xxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xxx X1 x X1 xxxx X8 x X8. Xxx xx hodnoty XX, XX, XX x UH xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx se obdržely xxxxxxxxxxxx nejvhodnější xxxxxx:
x) XX = 5S1 + 2S2 – X4 / 6 xxxx 5X2 + 2X4 – S8 / 6
x ) XX = 5X4 + 2S2 − X1 / 6 xxxx 5X8 + 2X4 − X2 / 6
Totéž xx xxxxxxx pro xxxxxxx XX x XX. X xxxxxx alternativních xxxxxx xx rovněž xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx, xx měly xxx xxxxxxxxxxx do xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxx přímky xxxxxxxxx xx rovnoběžné, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx X) xxxxxx jednoho x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
Xxx 4 xxxxxx
x) xxx X = (X1+ X2+ X4+ X8 – X1 – S2 – X4 – X8) × 0,602 / X4+ X8+ X4+ S8 – X1 – X2 – X1 – X2
Xxx 3 úrovně
d) xxx X = (X1+ U2+ X4 – X1 – X2 – X4) × 0,401 / X4+ S4 – X1 – X1
xxxx
x) xxx X = (X2+ X4+ U8 – X2 – X4 – S8) × 0,401 / X8+ S8 – X2 – S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx х xxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxxx aktivita xxxx xxxx xxxxxx xxxxxx 0,5–2,0, test xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx koncentrací xxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx dosáhnout relativní xxxxxxxx x rozsahu xxxxxxxxxxxx hodnot, xxxxxxxx xx třeba považovat xx xxxxxxxxx, x xx xx xxxx xxx zaznamenáno xx xxxxxxxxx o analýze.
Pokud xxxx možné xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxx xxx nedosáhne xxxxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx neuspokojivý.
10. XXXXXXXXXXXXXX
Xxxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxx překračovat:
- 20 % xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx monensinu xxxxxxx 10 až 25 xx/xx,
- 5 xx/xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx 25 až 50 xx/xx,
- 10 % xxxxx hodnoty xxxxxxxx xxx xxxxxx xxx 50 xx/xx.
[1] Xxxxx být použity xxxx metody, které xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] 1 xx xxxxxxxxx sodného xxxxxxxx 1000 xxxxxxxxx XX.
[4] Mohou být xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx odpovídající xxxxxxxx xxxx.
[5] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxxxxxxx složení, xxxxx xxxxxxxxx stejné výsledky.