Xxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 31. xxxxxxxx 1981,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxx kontrolu xxxxx
(81/715/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX ze xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx se xxxxxx xxxxxx odběru vzorků x xxxxxxx Společenství xxx úřední xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxx o xxxxxxxxxxx Řecka, x xxxxxxx xx článek 2 uvedené směrnice,
vzhledem x tomu, xx xxxxxxxx 70/373/XXX stanoví, xx xxxxxx kontroly xxxxx xx účelem xxxxxxxx, xxx jsou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x správních xxxxxxxx xx jakost x xxxxxxx krmiv, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/EHS [2], 71/393/EHS [3], 72/199/XXX [4], 73/46/EHS [5], 74/203/XXX [6], 75/84/XXX [7], 76/372/XXX [8] x 78/633/EHS [9], xxxxxxxxx pozměněné xxxxxxxx xx dne 30. xxxxxxxx 1981, xxx řadu xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx; xx xxxx od xx doby provedených xxxxx nyní xxxxxxxx xxxxxxxx devátý soubor xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x souladu se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx popsanými x xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx a správní xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1981. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Komisi.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu dne 31. července 1981.
Za Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxx
xxxxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Úř. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[4] Úř. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[5] Úř. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[6] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[7] Xx. věst. X 32, 5.2.1975, x. 26.
[8] Xx. xxxx. X 102, 15.4.1976, x. 8.
[9] Xx. xxxx. X 206, 29.7.1978, x. 43.
XXXXXXX
1. STANOVENÍ XXXXXXXXXX XXXXXX V XXXXXXXX XXXXXXXXXXX MÉDIU
1. XXXX X XXXXXX POUŽITÍ
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxx x krmivech x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx hranice xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx/xx (2 ppm). Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
2. XXXXXXX
Xx xxxxx xxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Bacillus xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zónami xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx je xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx přímo xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. MIKROORGANISMUS: BACILLUS XXXXXXXX XXXX 6633 (XXXX 8054)
3.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.1) x xxxxxxx zkumavkách xx xxxxxxxx mikroorganismem Xxxxxxxx xxxxxxxx a přes xxx se xxx 30 °X xxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x chladničce xxx xxx 4 °X x xxxxx měsíc xx xxxxx xxxxxxxx.
3.2. Xxxxxxxx suspenze xxxx [1]
Xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx médiu (3.1) xx omyje 2-3 xx xxxxxxxx vody. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), x po xxxx 3 až 5 dní se xxxxxxxx při 30 °X. Xx kontrole xxxxxx spór xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx do 15 xx xxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxxx xx. Xxxx xxxxxxxx xxxx xxx uchována minimálně 5 xxxxxx při 4 °C.
4. XXXXXXXXXX XXXXXX X XXXXXXX
4.1 Xxxxxxxxxx xxxxxx [2]
xxxxxx |
6,0 x |
xxxxxxx |
4,0 x |
xxxxxxxxxx extrakt |
3,0 x |
xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
xxxxxxx |
1,0 x |
xxxx |
15,0 x |
xxxx |
1000 xx |
xX 6,5 (xx xxxxxxxxxxx) |
4.2 Xxxxxxx 20 %-xx (x/x): 200 ml xxxxxxxx xx zředí 800 ml xxxx.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, d: 1,18–1,19.
4.4 Roztok hydroxidu xxxxxxx, 2X.
4.5 Fosfátový xxxx 0,1 X:
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, XX2 PO4: 13,6 x
xxxx: 1000 xx
xX xxxxxxx xx 4,5.
4.6 Směs xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3): 65/32,5/2,5 (x/x/x)
4.7 Standardní xxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx
5. STANDARDNÍ ROZTOKY
Přesně xxxxxxxx množství xxx 10 mg xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7) xx xxxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) a xxxxx xxxxxx xxxxxx, xxx vznikl xxxxxxxx xxxxxx obsahující 100 μx avoparcinu x 1 xx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx x při 4 °X, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 7 dní.
5.1 Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
X tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X8 |
4 μg/ml |
S4 |
2 μg/ml |
S2 |
1 μx/xx |
X1 |
0,5 μx/xx. |
5.2 Pro xxxxxx
X výchozího xxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X8 |
2,0 μg/ml |
S4 |
1,0 μx/xx |
X2 |
0,5 μx/xx |
X1 |
0,25 μx/xx. |
6. XXXXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX XXXXXXX
6.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 10 mg xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx 10-100 xx xxxxxxxxxx, se x xxxxxxx baňce x obsahu 100 xx mechanicky xxxxxxxx x 60 xx xxxxx (4.6) po xxxx 15 xxxxx. Xxxxxxx pH xx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx třeba, upraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (4.3) na xxxxxxx 2. Xxxxx (4.6) xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xx. Xxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx přes xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxx č. 1) a xxxxxxx 5 xx xxxxxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx část x xX xx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (4.4) xxxxxx xx xxxxxxx 4,5. Tento xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx pufrem (4.5), xxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxx 4 μx/xx ( = X8).
X tohoto xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (1+1) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5) xxxxxxxx xxxxxxx X4 (xxxxxxxxx xxxxx: 2 μx/xx), X2 (xxxxxxxxx xxxxx: 1 μx/xx) x X1 (očekávaný xxxxx: 0,5 μx/xx).
6.2 Xxxxxx
Xxxxxx x xxxxxxxxx 50 x xx xxxxx xx 100 xx xxxxx (4.6) x xx xxxx 30 xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Extrakt se xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx). Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx) a xxxxxxx xX xx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (4.4) upraví na 4,5. Xxxxx roztok xx xxxxxx fosfátovým xxxxxx (4,5), aby xx získal xxxxxx X8 (xxx. následující xxxxxxx).
X tohoto xxxxxxx xx postupným rozřeďováním (1+1) fosfátovým xxxxxx (4.5) xxxxxxxx roztoky X4 (očekávaný xxxxx: 1,0 μx/xx), U2 (xxxxxxxxx obsah: 0,5 μx/xx) x X1 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,25 μx/xx).
Xxxxxxxxx obsah avoparcinu (xx/xx) |
5 |
7,5 |
10 |
15 |
20 |
40 |
Xxxxxxxx xxxxxx x x (± 0,1 x) |
50 |
50 |
50 |
50 |
50 |
50 |
Xxxxx xxxxx (4.6) x xx |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xx) |
20 |
15 |
20 |
15 |
20 |
10 |
Xxxxxxxx xxxxx (xx): X8 |
25 |
25 |
50 |
50 |
100 |
100 |
Xxxxxxxxx xxxxx X8 v μg/kg |
2 |
přibl. 2 |
2 |
xxxxx. 2 |
2 |
2 |
7. XXXXXX XXXXX
7.1 Xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx (4.1) xx xxxxxxxx suspenzí xxxx (3.2) při xxxxxxx 50–60 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (4.1) se xxxxxxx xxxxxxxx inokula, xxxxx xxxxxx xx xxxxx největší ale xxxxx ostré xxxxxxxxx xxxx xxx různých xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx avoparcinu.
7.2 Xxxxxxxx misek
Test se xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx na miskách xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, S2, X1) x testovacího xxxxxxx (X8, X4, X2, X1).Xx každou xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardu x extraktu. X xxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby bylo xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx prostředí xxxxxxx osm otvorů x průměru 10-13 xx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 30 xx. Xxxx xx xxx být prováděn xxxxxxxxx na xxxxxxx, xxxxx xxxx vyrobeny xx skleněné xxxxx, xx xxxxxx xx xxxxxx hliníkové xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 20 xx x průměru 200 xx.
Xx misku xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx média (4.1) xxxxxxxxxxxx podle 7.1, xxx xx vytvořila xxxxxx silná přibližně 2 xx (60 xx xx misku x xxxxxxx 200 xx). Poté, co xxxxxx ztuhne, xxxxxxxx xx xxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx 0,10 x 0,15 xx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxx). Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxx každý xxxx xx xxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxx 16 až 18 xxxxx xxx 30 °X.
8. XXXXXXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx změří x xxxxxxxxx xx 0,1 mm. Xxx xxxxxx koncentraci xx xxxxxxx xxxxxxx zanesou xx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx se zanáší xxxxxxxxxx koncentrace ve xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx stejně xxxx pro xxxxxxx xx zakreslí nejpříhodnější xxxxxx, vypočítané např. xxxx uvedeným xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxx pro xxxxxxxx xxxxxx standardního roztoku (XX) xx stanoví xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
x) XX = 7X8 + 4X4 + X2 – 2S1 / 10
Xxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (SH) xx stanoví xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
XX = 7X8 + 4X4 + S2 – 2X1 / 10
Xxxxxx xxx xx stanoví xxxxxxxxxxxx xxxx pro xxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx úroveň (XX) xxxxxxxx, xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx U1, X2, X4 x X8 namísto X1, X2, S4 x X8.
Xxxxxxxxxx xxxxxxx XX x SH xx xxxxxxx xx stejného xxxxxxxx. Spojením xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx XX a XX x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx pro extrakt.
Pokud xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, měly by xxx xxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx je možno xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx, xxxxx xx hodnoty (XX-XX) a (XX-XX) xxxxxxxxxxx xxxx než x 10 % xx střední xxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, xx možné xxxxxxxx xxx X1 x X1 nebo X8 x X8. Pak xx hodnoty XX, XX, XX a XX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xx xxxxxxxx alternativní xxxxxxxxxxxx xxxxxx:
x ) XX = 5S1 + 2X2 − X4 / 6 |
xxxx |
5X2 + 2X4 − X8 / 6 |
b ) SH = 5X4 + 2S2 − X1 / 6 |
xxxx |
5X8 + 2X4 − X2 / 6 |
Xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx XX x XX. X xxxxxx alternativních xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Výsledky, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxx úrovní, xx xxxx xxx zaznamenány xx xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx je xxxxx xxxxxx považovat za xxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx A) xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
Xxx 4 xxxxxx
(x) xxx A = (X1+ X2+ X4+ X8 – S1 – S2 – X4 – X8) × 0,602 / X4+ X8+ X4+ X8 – X1 – U2 –
Xxx 3 xxxxxx
(x) xxx X = (X1+ X2+ U4 – X1 – X2 – X4) × 0,401 / X4+ X4 – X1 – S1
nebo
d´) xxx X = (U2+ X4+ X8 – X2 – S4 – X8) × 0,401 / X8+ X8 – X2 – X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx х relativní aktivita.
Pokud xxxxxxxxx aktivita leží xxxx rozsah hodnot 0,5–2,0, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx koncentrací extraktu xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx požadovaných xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx považovat xx xxxxxxxxx, a xx xx mělo xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxx přímky xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, zkouška xx zopakuje. Xxxxx xx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.
9. XXXXXXXXXXXXXX
Xxxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxx jednoho xxxxxxxxx xxx xxxxx a xxxx xxxxxxx by xxxxxx překračovat:
- 2 xx/xx absolutní xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx 2 xx 10 xx/xx,
- 20 % xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx 10 xx 25 xx/xx,
- 5 xx/xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsahu 25 až 50 xx/xx,
- 10 % xxxxx xxxxxxx výsledku xxx obsahu nad 50 xx/xx.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXX DIFÚZÍ X XXXXXXXX KULTIVAČNÍM XXXXX
1. ÚČEL X XXXXXX XXXXXXX
Xxxxxx umožňuje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 10 xx/xx (10 xxx) [3].
2. XXXXXXX
Xxxxxx xx extrahuje 90 %-xxx methanolem. Xxxxxxx xx xxxxxxx vhodnému xxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxxx sodného xx xxxxxx. Jeho antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx difúze xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx x xxxxxxx použitých xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
3. XXXXXXXXXXXXXXX: XXXXXXXX SUBTILIS XXXX 6633 (NICB 8054)
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.1) x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx naočkuje xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xx xxxxxxxx xxx 30 °X. Xxxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx při asi 4 °X a xxxxx xxxxx xx xxxxx naočkuje.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx [4]
Xxxxxxx xxxxxxx na xxxxx (3.1) v šikmé xxxxxxxx xx xxxxx 2-3 xx xxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), a xx xxxx 3 xx 5 dní xx xxxxxxxx při 30 °X. Xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xx 15 xx ethanolu (4.3) x xxxxxxxxxxxxx xx. Xxxx xxxxxxxx xxxx xxx uchována xxxxxxxxx 5 xxxxxx xxx 4 °C.
4. XXXXXXXXXX MÉDIUM X XXXXXXX
4.1 Kultivační médium [5] |
|
xxxxxxx |
10,0 g |
kvasnicový extrakt |
3,0 x |
xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
xxxxxxx |
1,0 x |
xxxx (xxxxx xxxxxxx) |
10,0-20,0 x |
xxxx |
1000 xx |
xX 6,5 (xx sterilizaci) |
|
4.2 Xxxxxxxx xxxxxx |
|
xxxxxxx |
10,0 x |
xxxxxxxxxx xxxxxxx |
2,5 x |
xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, X2XXX4 |
0,69 x |
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný, XX2XX4 |
0,45 x |
xxxx (xxxxx xxxxxxx) |
10,0-20,0 x |
xxxx |
1000 ml |
pH 6,5 (xx xxxxxxxxxxx) |
4.3 Xxxxxxx 20 %-xx (x/x): 200 xx xxxxxxxx xx xxxxx 800 xx vody.
4.4 Methanol, xxxxxxx.
4.5 Methanol 90 %-xx (x/x): 900xx xxxxxxxxx (4.4) xx xxxxx 100 xx xxxx.
4.6 Methanol 50 %-xx (x/x): 500ml xxxxxxxxx (4.4) se xxxxx 500 xx xxxx.
4.7 Xxxx hlinitý, xxxxxxxxxxx (xxxxx X, 20 xxxx; xxxxxxxxx xxxxxxx XX1: F. Xxxxxxxxx and Co., xxxx xxxxxxxxxx).
4.8 Standardní xxxxxxxxx: xxxxxxxx sodný x známé xxxxxxxx (xxxx xxxx xxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxx Boilogical Xxxxxxxxx, Xxxxxxx Veterinary Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx, Surrey KT15 3XX, Xxxxx Británie).
5. XXXXXXXXX
5.1 Vakuová rotační xxxxxxx s 250xx xxxxxxx xxxxxx.
5.2 Skleněná xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx: 25 xx, délka: 400 xx, x xxxxxxx x xxxxxxx 2 xx na xxxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx chromatografii, xxxxxxx xxxxxx: 11 xx, xxxxx: xxxxxxxxx 300 xx, s otvorem x xxxxxxx 2 xx xx xxxxxx xxxxx.
6. XXXXXXXXXX XXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8) xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx (4.4) a xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 800 μx/xx. Při xxxxxxxx x uzavřené láhvi x při 4 xX, xxxxxxx tento xxxxxx použitelný 2 xxxxx.
X xxxxxx výchozího xxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx rozřeďováním 50 %-xxx xxxxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X8 |
8 μx/xx |
X4 |
4 μx/xx |
X2 |
2 μx/xx |
X1 |
1 μx/xx. |
7. XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX XXXXXXX
7.1 Xxxxxxxx
7.1.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx x xxxxxxxxx 2,0 xx xx přidá x 100 xx 90 %-xxxx xxxxxxxxx (4.5), xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx 50 %-ním methanolem (4.6), aby xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxx sodného 8 μx/xx ( = X8).
7.1.2 Krmiva, x xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx nižší než 50 xxx
Xxxxxx o xxxxxxxxx 10 xx 20 x se xxxxx x 100 xx 90 %-ního xxxxxxxxx (4.5), 15 xxxxx protřese x xxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (5.2) x za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx 75–80 xx xxxxxx xxxxxxxx (4.7).
Xxxxxxx xx xxxxxxx xx sloupec xxxxx hlinitého a xxxxxxx xx xxxxxxx. 30 ml filtrátu xx zředí 50 xx vody. Xxxx xxxx xx xxxxx 50 %-ním methanolem (4.6), xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxx xxxxxxx 8 μx/xx ( = X8).
7.1.3 Krmiva x xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx 50 xxx (xxxxxx hranice 10 xxx)
Xxxxxx o xxxxxxxxx 10 xx 20 x se xxxxx x 100 xx 90 %-xxxx methanolu (4.5), 15 minut xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxx x podílem xxxxxxxxx 20 xxx xx odebere 40 xx zbytku; pro 10 xxx se xxxxxxx 80 xx. Xxxxxx se odpaří xx xxxxx xxx xxxxxxx nepřesahující 40 °X v xxxxxxxx xxxxxxx (5.1). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10 ml 90 %-xxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxx (5.3) x xx lehkého xxxxxxx xx trubička xxxxxx xx výše 75–80 mm xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx roztok zbytku xx převede na xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 10 xx 90xxxxxxxxxxx methanolu x xxxxxxx xxxxxxx se xxxxx x prvnímu xxxxxxxx.
Xxxxxx xx odpaří xx xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 40 °X x xxxxxxx xxxxxxx (5.1). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx v 10 xx bezvodého xxxxxxxxx (4.4) a xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx 20 xx. Xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4000 xx/xxx. Xxxx xxxx xx xxxxx 50 %-ním xxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxxx očekávané koncentrace xxxxxxxx sodného 8 μx/xx ( = X8).
7.2. Xxxxxxxxx xxxxxx
X xxxxxxx X8 xx xxxxxxxxx rozřeďováním (1 + 1) 50 %-xxx xxxxxxxxxx (4.6) xxxxxxxx roztoky X4 (xxxxxxxxx xxxxx: 4 μx/xx), U2 (xxxxxxxxx xxxxx: 2 μx/xx), X1 (xxxxxxxxx xxxxx: 1 μx/xx).
8. POSTUP XXXXX
8.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxx médium (4.2) xx xxxxxxxx suspenzí xxxx (3.2) při 50 xx 60 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (4.2) xx xxxxxxx množství xxxxxxx, které xxxxxx xx možná největší xxx ještě xxxxx xxxxxxxxx xxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx koncentracemi xxxxxxxxx xxxxxxx.
8.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxx xx nasadí xxxx difúzní xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx koncentračních xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, X1) x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, U2, X1). Na xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x extraktu. X xxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxx 10-13 xx x rozestupem xxxxxx minimálně 30 xx. Test by xxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xx miskách, xxxxx xxxx vyrobeny xx skleněné xxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx kroužek o xxxxx 20 xx x xxxxxxx 200 xx.
Xx xxxxx xx xxxxxx takové množství xxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxxxx xxxxx 8.1, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx přibližně 2 xx (60 xx xx misku x xxxxxxx 200 xx). Xxxx co xxxxxx xxxxxx, vyhloubí xx xxxxxx, do xxxxxxx xx pipetou xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x testovacího xxxxxxx (mezi 0,10 x 0,15 xx xx otvor, xxxxx xxxxxxx xxxxxx). Každá xxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx minimálně xxxxxxxxx, xxxxx pro xxxxx xxxx se vyhodnotí 32 xxxxxxxxxxx xxx.
8.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx po xxxx 18 xxxxx xxx 35 až 37 °X.
9. XXXXXXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx. Xxx xxxxxx koncentraci xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx do semilogaritmického xxxxxx, xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx k xxxxxxx inhibičních xxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx pro xxxxxxx se zakreslí xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, vypočítané xxxx. níže xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxx úroveň xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (SL) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
x) SL = 7X1 + 4S2 + X4 – 2X8 / 10
Nejvhodnější xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX) xx xxxxxxx xxxxx následujícího xxxxxx:
x) XX = 7X8 + 4S4+ X2 + 2X1 / 10
Xxxxxx xxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx (XX) x nejvyšší xxxxxx (XX) xxxxxxxx, xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx vzorců dosadí X1, U2, U4 x X8 xxxxxxx X1, S2, S4 x X8.
Xxxxxxxxxx hodnoty XX a XX xx zanesou xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxx roztok. Xxxxx xx provede xxx xxxxxxx XX a XX x získání xxxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx.
Xxxxx xx nevyskytují xxxxxx faktory, měly xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx. Přímky xx xxxxx považovat za xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx (XX-XX) a (XX-XX) xxxxxxxxxxx více xxx x 10 % xx xxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx, je možné xxxxxxxx buď X1 x S1 xxxx X8 x X8. Xxx xx xxxxxxx XX, SH, XX x XX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx:
x) XX = 5X1 + 2X2 – X4 / 6 xxxx 5X2 + 2X4 – X8 / 6
x ) XX = 5X4 + 2X2 − X1 / 6 xxxx 5X8 + 2X4 − X2 / 6
Xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx XX x XX. X těchto xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx rovnoběžnost. Xxxxxxxx, xxxxx byly stanoveny xx xxx úrovní, xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx do protokolu x xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx rovnoběžné, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx relativní xxxxxxxx (xxx X) xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx vzorců:
Pro 4 xxxxxx
x) log X = (X1+ U2+ X4+ X8 – X1 – S2 – S4 – X8) × 0,602 / U4+ U8+ X4+ S8 – X1 – U2 – S1 – X2
Xxx 3 úrovně
d) xxx X = (X1+ X2+ X4 – X1 – X2 – S4) × 0,401 / X4+ X4 – X1 – X1
xxxx
x) xxx A = (X2+ X4+ X8 – X2 – X4 – X8) × 0,401 / X8+ S8 – X2 – S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx х xxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxxx aktivita xxxx mimo xxxxxx xxxxxx 0,5–2,0, test xx zopakuje při xxxxxxxxxxxxx přizpůsobení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx příp. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx dosáhnout xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx přibližný, x xx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx o xxxxxxx.
Xxxxx xxxx možné xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxx se xxxxxxxx. Xxxxx xx xxx xxx xxxxxxxxx rovnoběžnosti, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.
10. XXXXXXXXXXXXXX
Xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:
- 20 % xxxxx xxxxxxx výsledku xxx xxxxxx monensinu xxxxxxx 10 xx 25 xx/xx,
- 5 xx/xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx 25 xx 50 mg/kg,
- 10 % xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxx 50 mg/kg.
[1] Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] 1 xx monensinu xxxxxxx xxxxxxxx 1000 jednotkám XX.
[4] Xxxxx xxx xxxxxxx jiné xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx spór.
[5] Může xxx použito jakékoli xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx složení, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx výsledky.