Plné znění - 31981L0715

Xxxxxx směrnice Komise

ze xxx 31. července 1981,

xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx

(81/715/XXX)

XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,

s xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx se zavádí xxxxxx xxxxxx vzorků x analýzy Společenství xxx úřední kontrolu xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxx, a xxxxxxx xx článek 2 xxxxxxx směrnice,

vzhledem x xxxx, že xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx xxxxxx kontroly xxxxx xx účelem xxxxxxxx, xxx jsou xxxxxxx xxxxxxxxx právních x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx krmiv, xx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxx Společenství xxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství;

vzhledem x xxxx, že xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX [2], 71/393/XXX [3], 72/199/XXX [4], 73/46/XXX [5], 74/203/XXX [6], 75/84/XXX [7], 76/372/EHS [8] x 78/633/XXX [9], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx dne 30. července 1981, xxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx stanovily; xx xxxx xx xx doby xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx devátý xxxxxx xxxxxxxxxxxx metod;

vzhledem k xxxx, xx opatření xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx x monensinu xxxxxxx xx provádějí xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx.

Xxxxxx 2

Členské xxxxx xxxxxx v účinnost xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx směrnicí xx 1. xxxxxxxx 1981. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx směrnice xx určena xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx dne 31. xxxxxxxx 1981.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx Xxxxx

xxxxxxxx

[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.

[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.

[3] Úř. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.

[4] Xx. věst. X 123, 29.5.1972, x. 6.

[5] Úř. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.

[6] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.

[7] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.

[8] Úř. xxxx. X 102, 15.4.1976, x. 8.

[9] Úř. věst. X 206, 29.7.1978, x. 43.

XXXXXXX

1. STANOVENÍ XXXXXXXXXX XXXXXX X XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXX

1. XXXX X ROZSAH POUŽITÍ

Tato xxxxxx umožňuje stanovení xxxxxxxxxx v xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx premixech. Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx/xx (2 ppm). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx stanovení xxxxxxx xxxxxx.

2. PRINCIP

Ze směsi xxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx měřením difúze xxxxxxxxxx v agarovém xxxxxxxxxxx xxxxx naočkovaném xxxxxxxxxxxxxxx Bacillus subtilis. Xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibičními xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx inhibičních xxx xx pro xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3. XXXXXXXXXXXXXXX: XXXXXXXX XXXXXXXX XXXX 6633 (XXXX 8054)

3.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.1) v xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx mikroorganismem Xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxx se xxx 30 °X xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx xxx 4 °C x xxxxx měsíc xx xxxxx xxxxxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx [1]

Xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx médiu (3.1) xx xxxxx 2-3 xx xxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx Rouxova láhev, xxxxx obsahuje 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), x po xxxx 3 až 5 xxx xx xxxxxxxx xxx 30 °X. Po xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx kultura xxxxx xx 15 xx xxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxxx xx. Xxxx xxxxxxxx může xxx xxxxxxxx minimálně 5 měsíců xxx 4 °X.

4. KULTIVAČNÍ XXXXXX A XXXXXXX

4.1 Xxxxxxxxxx xxxxxx [2]

4.2 Xxxxxxx 20 %-xx (x/x): 200 xx xxxxxxxx xx xxxxx 800 xx xxxx.

4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,18–1,19.

4.4 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx, 2X.

4.5 Xxxxxxxxx xxxx 0,1 M:

dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx, XX₂ XX₄: 13,6 x

xxxx: 1000 xx

xX xxxxxxx xx 4,5.

4.6 Směs xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3): 65/32,5/2,5 (x/x/x)

4.7 Standardní xxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx

5. XXXXXXXXXX XXXXXXX

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx 10 mg standardní xxxxxxxxx (4.7) xx xxxxxxxx xx fosfátovém xxxxx (4.5) a xxxxx xxxxxx naředí, xxx vznikl xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 100 μx avoparcinu v 1 xx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx x xxx 4 °X, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 7 dní.

5.1 Pro xxxxxxxxxx premixy

Z tohoto xxxxxxxxx roztoku se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx následující xxxxxxx:

5.2 Xxx xxxxxx

X xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx postupným xxxxxxxxxxxx fosfátovým pufrem xxxxxxxxxxx xxxxxxx:

6. XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX XXXXXXX

6.1 Medikované xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx množství 10 xx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx 10-100 xx xxxxxxxxxx, xx x xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 60 xx xxxxx (4.6) po xxxx 15 xxxxx. Xxxxxxx xX xx xxxxxxxxxxx x pokud xx třeba, upraví xx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (4.3) xx xxxxxxx 2. Xxxxx (4.6) xx xxxxxx objem x homogenizuje se. Xxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxx x. 1) x xxxxxxx 5 xx filtrátu xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xX se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) upraví na xxxxxxx 4,5. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5), xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxx 4 μg/ml ( = X₈).

X xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (1+1) fosfátovým xxxxxx (4.5) xxxxxxxx xxxxxxx X4 (xxxxxxxxx xxxxx: 2 μx/xx), X2 (xxxxxxxxx obsah: 1 μx/xx) x X₁ (xxxxxxxxx obsah: 0,5 μx/xx).

6.2 Krmiva

Vzorek x xxxxxxxxx 50 x xx xxxxx xx 100 xx xxxxx (4.6) x xx xxxx 30 xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx). Xxxxxxx xxxx xxxxxxx extraktu xx xxxxxxx (xxx. xxxxxxxxxxx tabulka) a xxxxxxx xX xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) upraví xx 4,5. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx fosfátovým xxxxxx (4,5), aby xx získal xxxxxx X8 (viz. následující xxxxxxx).

X xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (1+1) fosfátovým pufrem (4.5) xxxxxxxx roztoky X4 (xxxxxxxxx obsah: 1,0 μx/xx), X₂ (xxxxxxxxx obsah: 0,5 μx/xx) x X₁ (xxxxxxxxx xxxxx: 0,25 μx/xx).

7. XXXXXX XXXXX

7.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxx (4.1) xx xxxxxxxx suspenzí xxxx (3.2) xxx xxxxxxx 50–60 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (4.1) xx xxxxxxx množství inokula, xxxxx vykáže co xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx ostré xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx koncentracích xxxxxxxxxx.

7.2 Xxxxxxxx xxxxx

Xxxx se xxxxxx jako difúzní xxxx na xxxxxxx xx xxxxxxx koncentračních xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X₈, X₄, X₂, X₁) a xxxxxxxxxxx xxxxxxx (U8, X4, X2, U1).Na xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx bezpodmínečně xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x extraktu. X xxxx důvodu xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx osm otvorů x průměru 10-13 xx s xxxxxxxxxx xxxxxx minimálně 30 xx. Xxxx xx xxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxx xxxx vyrobeny xx xxxxxxxx desky, xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx o xxxxx 20 xx x průměru 200 xx.

Xx xxxxx se xxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxxxx podle 7.1, xxx se vytvořila xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2 xx (60 xx na misku x xxxxxxx 200 xx). Xxxx, xx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx, xx xxxxxxx xx pipetou xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx 0,10 x 0,15 ml xx otvor, xxxxx xxxxxxx xxxxxx). Každá xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx minimálně xxxxxxxxx, xxxxx xxx každý xxxx xx xxxxxxxxx 32 inhibičních zón.

7.3 Xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxx 16 xx 18 xxxxx xxx 30 °X.

8. XXXXXXXXXXX

Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx změří x xxxxxxxxx xx 0,1 xx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxxxx papíru, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx k průměru xxxxxxxxxxx xxx. Pro xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xx zakreslí xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx. xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX) xx stanoví xxxxx následujícího xxxxxx:

x) XX = 7X₈ + 4X₄ + X₂ – 2S₁ / 10

Xxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxx úroveň xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX) xx stanoví podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:

XX = 7X₈ + 4X₄ + X₂ – 2X₁ / 10

Stejně xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx pro xxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx úroveň (XX) xxxxxxxx, přičemž xx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx dosadí U₁, X₂, U₄ x X₈ xxxxxxx S₁, X₂, X₄ x X₈.

Xxxxxxxxxx hodnoty SL x XX xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx obou xxxx xxxxxxx nejvhodnější xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Totéž xx xxxxxxx xxx xxxxxxx XX x XX x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx pro extrakt.

Pokud xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxx přímky rovnoběžné. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx, xxxxx xx hodnoty (XX-XX) a (XX-XX) xxxxxxxxxxx xxxx xxx x 10 % xx střední xxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx vyloučit xxx U₁ x X₁ xxxx X₈ x S₈. Pak xx xxxxxxx XX, XX, XX x XX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorců, aby xx xxxxxxxx alternativní xxxxxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx se provede xxx hodnoty XX x XX. X xxxxxx alternativních xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx, by xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx protokolu o xxxxxxx.

Xxxxx je možno xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity (xxx A) xxxxxx xxxxxxx z následujících xxxxxx:

Xxx 4 xxxxxx

(x) xxx X = (X₁+ X₂+ X₄+ X₈ – S₁ – X₂ – X₄ – X₈) × 0,602 / X₄+ X₈+ X₄+ X₈ – U₁ – X₂ –

Xxx 3 úrovně

(d) xxx X = (X₁+ X₂+ U₄ – X₁ – X₂ – X₄) × 0,401 / U₄+ X₄ – X₁ – X₁

xxxx

x´) xxx X = (X₂+ X₄+ X₈ – X₂ – S₄ – S₈) × 0,401 / X₈+ X₈ – X₂ – X₂

Xxxxxxxx aktivita = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx х xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxxxxx aktivita leží xxxx rozsah xxxxxx 0,5–2,0, zkouška xx xxxxxxxx xxx odpovídajícím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx extraktu xxxx. standardních xxxxxxx. Xxxxx není xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx aktivitu x rozsahu xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx je xxxxx považovat xx xxxxxxxxx, x xx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxx považovat xx rovnoběžné, xxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxx xxx xxxxxxxxx rovnoběžnosti, xx xxxxx výsledek považovat xx neuspokojivý.

9. XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxx xxxx výsledky dvou xxxxxxxxx jednoho xxxxxxxxx xxx jedné a xxxx zkoušce xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

- 2 xx/xx xxxxxxxxx hodnoty xxx obsahu avoparcinu 2 xx 10 xx/xx,

- 20 % xxxxx hodnoty xxxxxxxx xxx obsahu 10 xx 25 xx/xx,

- 5 mg/kg xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsahu 25 xx 50 xx/xx,

- 10 % xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx nad 50 mg/kg.

2. XXXXXXXXX XXXXXXXXX SODNÉHO XXXXXX X XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXX

1. XXXX X XXXXXX POUŽITÍ

Metoda umožňuje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx je 10 mg/kg (10 xxx) [3].

2. PRINCIP

Vzorek xx xxxxxxxxx 90 %-xxx methanolem. Xxxxxxx xx podrobí xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx subtilis. Xxxxxx xx prokáže xxxxxxxxxxxx inhibičními xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx je x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika. Citlivost xxxxxxx je snížena xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

3. XXXXXXXXXXXXXXX: XXXXXXXX SUBTILIS XXXX 6633 (NICB 8054)

3.1 Uchování kmenové xxxxxxx

Xxxxxxx kultivační xxxxxx (4.1) x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx naočkuje xxxxxxxxxxxxxxx Bacillus xxxxxxxx x xxxx xxx xx xxxxxxxx při 30 °X. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx xxx 4 °X a xxxxx měsíc se xxxxx naočkuje.

3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx spór [4]

Čerstvá xxxxxxx na agaru (3.1) x xxxxx xxxxxxxx se xxxxx 2-3 ml xxxxxxxx xxxx. Xxxxx suspenzí xx xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx 300 ml xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), x xx xxxx 3 xx 5 dní xx inkubuje xxx 30 °C. Po xxxxxxxx xxxxxx spór xxx mikroskopem xx xxxxxxx přidá xx 15 xx xxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxxxxxxx xx. Tato suspenze xxxx xxx uchována xxxxxxxxx 5 xxxxxx xxx 4 °X.

4. XXXXXXXXXX XXXXXX X XXXXXXX

4.3 Xxxxxxx 20 %-xx (v/v): 200 ml xxxxxxxx xx zředí 800 xx xxxx.

4.4 Methanol, xxxxxxx.

4.5 Xxxxxxxx 90 %-xx (v/v): 900xx xxxxxxxxx (4.4) xx xxxxx 100 xx xxxx.

4.6 Xxxxxxxx 50 %-xx (v/v): 500xx xxxxxxxxx (4.4) xx xxxxx 500 xx xxxx.

4.7 Xxxx hlinitý, xxxxxxxxxxx (xxxxx X, 20 xxxx; xxxxxxxxx xxxxxxx XX1: X. Xxxxxxxxx and Xx., xxxx xxxxxxxxxx).

4.8 Standardní xxxxxxxxx: xxxxxxxx sodný x xxxxx aktivitě (xxxx jiné xxxxxxxxxx x International Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Standards, Xxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx, Surrey KT15 3XX, Xxxxx Británie).

5. XXXXXXXXX

5.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x 250xx xxxxxxx baňkou.

5.2 Skleněná xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx: 25 xx, xxxxx: 400 xx, x xxxxxxx x xxxxxxx 2 xx na xxxxxx xxxxx.

5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx chromatografii, vnitřní xxxxxx: 11 xx, xxxxx: přibližně 300 xx, x xxxxxxx x xxxxxxx 2 xx xx xxxxxx xxxxx.

6. XXXXXXXXXX ROZTOKY

Přesně xxxxxxxx xxxxxxxx xxx 10 mg xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8) xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx (4.4) x xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx sodného 800 μx/xx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx x při 4 xX, zůstane tento xxxxxx xxxxxxxxxx 2 xxxxx.

X xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 %-xxx methanolem (4.6) xxxxxxxxxxx roztoky:

7. XXXXXXXX EXTRAKTU X XXXXXXXXXXX XXXXXXX

7.1 Xxxxxxxx

7.1.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx o xxxxxxxxx 2,0 xx xx přidá k 100 ml 90 %-xxxx methanolu (4.5), xxxxxxx minut xx xxxxxxxx x odstředí. Xxxxxx se xxxxx 50 %-xxx xxxxxxxxxx (4.6), xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 8 μx/xx ( = X₈).

7.1.2 Xxxxxx, u xxxxx xxxxx monensinu xxxx xxxxx xxx 50 xxx

Xxxxxx o xxxxxxxxx 10 až 20 x xx xxxxx x 100 xx 90 %-xxxx xxxxxxxxx (4.5), 15 xxxxx protřese x xxxxx xxxxx.

Xxxxxx zátka xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (5.2) x xx lehkého xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xx výše 75–80 xx xxxxxx xxxxxxxx (4.7).

Extrakt se xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xx filtrát. 30 xx filtrátu xx xxxxx 50 xx xxxx. Xxxx xxxx xx xxxxx 50 %-ním xxxxxxxxxx (4.6), aby xxxx xxxxxxxx očekávané xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 8 μx/xx ( = X₈).

7.1.3 Xxxxxx u xxxxx podíl xxxxxxxxx xxxxxxxxxx 50 xxx (xxxxxx hranice 10 xxx)

Xxxxxx x xxxxxxxxx 10 až 20 x se xxxxx x 100 ml 90 %-ního methanolu (4.5), 15 xxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 20 ppm xx xxxxxxx 40 xx xxxxxx; xxx 10 xxx se xxxxxxx 80 xx. Xxxxxx se xxxxxx xx xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 40 °X v rotačním xxxxxxx (5.1). Xxxxxxxx xx rozpustí v 10 xx 90 %-xxxx methanolu.

Vatová xxxxx xx zavede xx xxxxxxxx xxxxxxxx (5.3) x xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx do xxxx 75–80 mm oxidem xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx oxidu xxxxxxxxx x filtrát xx xxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx 10 xx 90xxxxxxxxxxx methanolu x xxxxxxx filtrát xx xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xx odpaří xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 40 °X x xxxxxxx xxxxxxx (5.1). Zůstatek xx xxxxxxxx x 10 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.4) x xxxxxx xx doplní xxxxx xx 20 xx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 5 xxxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4000 ot/min. Xxxx xxxx xx xxxxx 50 %-ním xxxxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 8 μx/xx ( = X₈).

7.2. Testovací roztok

Z xxxxxxx X8 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (1 + 1) 50 %-xxx methanolem (4.6) xxxxxxxx xxxxxxx X4 (xxxxxxxxx xxxxx: 4 μx/xx), U2 (očekávaný xxxxx: 2 μg/ml), X1 (očekávaný podíl: 1 μx/xx).

8. XXXXXX XXXXX

8.1 Xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxx (4.2) xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (3.2) xxx 50 xx 60 °X. Předběžnými pokusy xx xxxxxxx se xxxxxxxxx médiem (4.2) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, které vykáže xx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx s xxxxxxx použitými xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

8.2 Xxxxxxxx xxxxx

Xxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S₈, X₄, S₂, X₁) x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (X₈, X₄, X₂, X₁). Xx xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx. Z xxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xxxx xxxxx vytvořit xx xxxxxx kultivačního média xxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxx 10-13 xx x rozestupem xxxxxx xxxxxxxxx 30 xx. Test xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx miskách, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx, xx nichž je xxxxxxx hliníkový xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 20 xx x xxxxxxx 200 xx.

Xx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxxxx xxxxx 8.1, xxx xx vytvořila xxxxxx xxxxx přibližně 2 xx (60 xx xx xxxxx x xxxxxxx 200 xx). Poté xx xxxxxx ztuhne, vyhloubí xx otvory, xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx přesné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x testovacího xxxxxxx (xxxx 0,10 x 0,15 xx xx xxxxx, podle xxxxxxx xxxxxx). Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx čtyřikrát, xxxxx pro xxxxx xxxx xx vyhodnotí 32 inhibičních xxx.

8.3 Xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 18 xxxxx xxx 35 xx 37 °X.

9. XXXXXXXXXXX

Xxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx. Xxx každou xxxxxxxxxxx xx střední xxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx koncentrace xx vztahu k xxxxxxx inhibičních xxx. Xxx standardní xxxxxx xxxxxx jako pro xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx přímky, xxxxxxxxxx xxxx. xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx bod pro xxxxxxxx úroveň xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX) se xxxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:

x) XX = 7X₁ + 4S₂ + S₄ – 2X₈ / 10

Xxxxxxxxxxxx xxx pro xxxxxxxx xxxxxx standardního roztoku (XX) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:

x) XX = 7X₈ + 4S₄+ X₂ + 2S₁ / 10

Xxxxxx xxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx body xxx xxxxxxxx (UL) x xxxxxxxx xxxxxx (XX) extraktu, xxxxxxx xx xx výše xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X₁, X₂, X₄ x U₈ xxxxxxx X₁, S₂, X₄ x X₈.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XX x SH xx xxxxxxx xx xxxxxxxx diagramu. Xxxxxxxx xxxx bodů xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx provede pro xxxxxxx XX a XX x získání xxxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx.

Xxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx. Přímky je xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx (SH-SL) x (XX-XX) xxxxxxxxxxx xxxx xxx o 10 % od xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx buď X1 x S1 xxxx X8 a S8. Xxx xx hodnoty XX, XX, UL x XX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorců, xxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx přímky:

a) XX = 5X₁ + 2X₂ – X₄ / 6 xxxx 5X₂ + 2X₄ – X₈ / 6

x ) XX = 5X₄ + 2X₂ − X₁ / 6 xxxx 5S₈ + 2X₄ − X₂ / 6

Xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx XX x XX. X xxxxxx alternativních xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Výsledky, xxxxx xxxx stanoveny xx xxx xxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, vypočítá xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx A) xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:

Xxx 4 xxxxxx

x) log A = (X₁+ X₂+ X₄+ X₈ – X₁ – X₂ – X₄ – X₈) × 0,602 / U₄+ X₈+ X₄+ X₈ – X₁ – U₂ – X₁ – X₂

Xxx 3 xxxxxx

x) xxx X = (X₁+ X₂+ X₄ – X₁ – X₂ – X₄) × 0,401 / X₄+ X₄ – X₁ – S₁

nebo

d) xxx X = (X₂+ X₄+ U₈ – X₂ – X₄ – X₈) × 0,401 / X₈+ S₈ – X₂ – X₂

Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx х xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxxxxx aktivita xxxx xxxx xxxxxx xxxxxx 0,5–2,0, xxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud není xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v rozsahu xxxxxxxxxxxx hodnot, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx přibližný, x xx by xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx, xxxx xx zopakuje. Xxxxx xx ani xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xx xxxxx výsledek xxxxxxxxx za neuspokojivý.

10. XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx jedné x xxxx xxxxxxx xx neměly xxxxxxxxxxx:

- 20 % xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 10 až 25 xx/xx,

- 5 mg/kg xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx 25 xx 50 xx/xx,

- 10 % xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx xxx 50 xx/xx.

[1] Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx metody, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

[2] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxx výsledky.

[3] 1 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1000 xxxxxxxxx XX.

[4] Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx metody, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx spór.

[5] Může xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx složení, které xxxxxxxxx stejné výsledky.