Xxxxxx xxxxxxxx Komise
ze xxx 31. července 1981,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(81/715/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx na Smlouvu x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx společenství,
s ohledem xx xxxxxxxx Rady 70/373/XXX xx dne 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx zavádí xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxx 2 uvedené směrnice,
vzhledem x xxxx, že xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx úřední xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx právních x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx za použití xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX [2], 71/393/EHS [3], 72/199/XXX [4], 73/46/XXX [5], 74/203/XXX [6], 75/84/XXX [7], 76/372/XXX [8] a 78/633/XXX [9], xxxxxxxxx pozměněné xxxxxxxx xx dne 30. července 1981, xxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství stanovily; xx stav xx xx xxxx provedených xxxxx nyní xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx soubor xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxxx xxxx směrnice jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, že xxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx na xxxxx xxxxxxxxxx x monensinu xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1981. Xxxxxxxxxx x nich xxxxxxx Komisi.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
V Bruselu xxx 31. xxxxxxxx 1981.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Thorn
předseda
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[4] Úř. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[5] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[6] Úř. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[7] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
[8] Úř. xxxx. X 102, 15.4.1976, x. 8.
[9] Úř. xxxx. X 206, 29.7.1978, x. 43.
PŘÍLOHA
1. STANOVENÍ XXXXXXXXXX XXXXXX V XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXX
1. XXXX X XXXXXX XXXXXXX
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxx v xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx premixech. Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx/xx (2 xxx). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx antibiotik xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
2. PRINCIP
Ze xxxxx xxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx odstředí. Xxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx měřením xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Bacillus xxxxxxxx. Xxxxxx se dokáže xxxxxxxxxxxx inhibičními xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxx xxxxxx použitých koncentrací xxxxxxxxx xx přímo xxxxxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx.
3. XXXXXXXXXXXXXXX: XXXXXXXX XXXXXXXX XXXX 6633 (XXXX 8054)
3.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx kultivační xxxxxx (4.1) v xxxxxxx zkumavkách xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxx xx při 30 °C inkubuje. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx xxx 4 °X x každý xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx [1]
Xxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxx (3.1) xx xxxxx 2-3 xx xxxxxxxx vody. Xxxxx suspenzí xx xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx, xxxxx obsahuje 300 xx kultivačního média (4.1), a xx xxxx 3 xx 5 dní se xxxxxxxx xxx 30 °X. Po xxxxxxxx xxxxxx xxxx pod xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx do 15 xx xxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxxx se. Xxxx xxxxxxxx může xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 5 xxxxxx xxx 4 °C.
4. XXXXXXXXXX XXXXXX A XXXXXXX
4.1 Xxxxxxxxxx médium [2]
|
pepton |
6,0 x |
|
xxxxxxx |
4,0 g |
|
kvasnicový xxxxxxx |
3,0 x |
|
xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
glukóza |
1,0 x |
|
xxxx |
15,0 g |
|
voda |
1000 xx |
|
xX 6,5 (xx xxxxxxxxxxx) |
|
4.2 Xxxxxxx 20 %-xx (x/x): 200 ml xxxxxxxx xx xxxxx 800 xx vody.
4.3 Xxxxxxxx chlorovodíková, d: 1,18–1,19.
4.4 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx, 2M.
4.5 Xxxxxxxxx xxxx 0,1 X:
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, KH2 XX4: 13,6 x
xxxx: 1000 xx
xX xxxxxxx xx 4,5.
4.6 Xxxx acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (4.3): 65/32,5/2,5 (x/x/x)
4.7 Standardní substance: xxxxxxxxxxxxxxx o známé xxxxxxxx
5. XXXXXXXXXX XXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7) xx xxxxxxxx ve fosfátovém xxxxx (4.5) a xxxxx xxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxx v 1 ml. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx a při 4 °C, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 7 xxx.
5.1 Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem následující xxxxxxx:
|
X8 |
4 μx/xx |
|
X4 |
2 μg/ml |
|
S2 |
1 μx/xx |
|
X1 |
0,5 μx/xx. |
5.2 Pro xxxxxx
X výchozího xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem xxxxxxxxxxx roztoky:
|
S8 |
2,0 μx/xx |
|
X4 |
1,0 μx/xx |
|
X2 |
0,5 μx/xx |
|
X1 |
0,25 μx/xx. |
6. XXXXXXXX EXTRAKTU A XXXXXXXXXXX XXXXXXX
6.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 10 xx vzorku, xxxxx xxxxxxxx 10-100 xx xxxxxxxxxx, se x xxxxxxx baňce x xxxxxx 100 xx mechanicky xxxxxxxx x 60 xx xxxxx (4.6) po xxxx 15 xxxxx. Xxxxxxx pH xx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx třeba, xxxxxx xx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (4.3) xx xxxxxxx 2. Xxxxx (4.6) xx doplní xxxxx x xxxxxxxxxxxx xx. Xxx se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx filtrační xxxxx (xxxx. Whatman x. 1) x prvních 5 xx xxxxxxxx xx xxxxx. Odebere xx xxxxxxx xxxx x xX se xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (4.4) xxxxxx xx xxxxxxx 4,5. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5), xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxx 4 μx/xx ( = U8).
Z xxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (1+1) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5) xxxxxxxx xxxxxxx U4 (xxxxxxxxx xxxxx: 2 μg/ml), X2 (xxxxxxxxx obsah: 1 μx/xx) x X1 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,5 μx/xx).
6.2 Xxxxxx
Xxxxxx x xxxxxxxxx 50 x se xxxxx xx 100 xx xxxxx (4.6) x xx dobu 30 xxxxx se mechanicky xxxxxxxxxx. Extrakt se xxxxx xxxxxxxxxxx (v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx). Xxxxxxx xxxx čistého xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxx. xxxxxxxxxxx tabulka) x xxxxxxx pH se xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (4.4) xxxxxx xx 4,5. Xxxxx xxxxxx xx naředí fosfátovým xxxxxx (4,5), xxx xx xxxxxx xxxxxx X8 (xxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx).
X xxxxxx roztoku xx postupným xxxxxxxxxxxx (1+1) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5) připraví xxxxxxx X4 (xxxxxxxxx obsah: 1,0 μx/xx), X2 (xxxxxxxxx obsah: 0,5 μx/xx) x X1 (xxxxxxxxx obsah: 0,25 μx/xx).
|
Xxxxxxxxx xxxxx avoparcinu (xx/xx) |
5 |
7,5 |
10 |
15 |
20 |
40 |
|
Xxxxxxxx xxxxxx x x (± 0,1 x) |
50 |
50 |
50 |
50 |
50 |
50 |
|
Xxxxx xxxxx (4.6) x ml |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
|
Objem xxxxxxx xxxxxxxx (xx) |
20 |
15 |
20 |
15 |
20 |
10 |
|
Xxxxxxxx xxxxx (xx): X8 |
25 |
25 |
50 |
50 |
100 |
100 |
|
Xxxxxxxxx obsah X8 v μg/kg |
2 |
přibl. 2 |
2 |
xxxxx. 2 |
2 |
2 |
7. XXXXXX XXXXX
7.1 Xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx (4.1) xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (3.2) xxx xxxxxxx 50–60 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xx zkušebním xxxxxx (4.1) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx ostré inhibiční xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxx misek
Test xx xxxxxx jako xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xx čtyřech xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, S2, X1) a xxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, U1).Na xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxx x xxxxxxxx. Z xxxx důvodu xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby xxxx xxxxx vytvořit ve xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx osm otvorů x xxxxxxx 10-13 xx s rozestupem xxxxxx xxxxxxxxx 30 xx. Xxxx xx xxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 20 xx x xxxxxxx 200 xx.
Xx xxxxx se xxxxxx takové xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxxxx podle 7.1, xxx se vytvořila xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2 xx (60 xx xx misku x xxxxxxx 200 xx). Poté, xx xxxxxx xxxxxx, vyhloubí xx otvory, do xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx přesné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x testovacího xxxxxxx (xxxx 0,10 x 0,15 xx xx xxxxx, podle xxxxxxx otvoru). Xxxxx xxxxxxxxxxx musí být xxxxxxx xxxxxxxxx čtyřikrát, xxxxx pro každý xxxx xx xxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx po dobu 16 xx 18 xxxxx xxx 30 °X.
8. XXXXXXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx se změří x přesností na 0,1 xx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx zanesou xx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx se zanáší xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx zón. Pro xxxxxxxxxx roztok xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx nejpříhodnější xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx. xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxx pro xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX) xx stanoví xxxxx následujícího xxxxxx:
x) XX = 7S8 + 4X4 + X2 – 2X1 / 10
Xxxxxxxxxxxx xxx xxx nejvyšší xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX) xx stanoví podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
XX = 7X8 + 4X4 + X2 – 2X1 / 10
Stejně xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxx, přičemž xx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx U1, X2, U4 x X8 namísto X1, X2, S4 x X8.
Xxxxxxxxxx xxxxxxx XX x XX xx xxxxxxx do stejného xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxx vznikne xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxx hodnoty XX a XX x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx extrakt.
Pokud xx xxxxxxxxxxx rušivé xxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx (XX-XX) a (UH-UL) xxxxxxxxxxx xxxx než x 10 % xx střední hodnoty.
Pokud xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxx X1 a X1 nebo X8 x X8. Pak xx hodnoty XX, XX, XX x XX určí xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xx xxxxxxxx alternativní xxxxxxxxxxxx xxxxxx:
|
x ) XX = 5X1 + 2S2 − X4 / 6 |
xxxx |
5X2 + 2X4 − X8 / 6 |
|
b ) SH = 5X4 + 2S2 − X1 / 6 |
xxxx |
5X8 + 2S4 − X2 / 6 |
Xxxxx xx xxxxxxx xxx hodnoty XX x XX. U xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx xx xxx úrovní, by xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx protokolu x xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx A) xxxxxx xxxxxxx x následujících xxxxxx:
Xxx 4 úrovně
(c) xxx X = (X1+ U2+ X4+ X8 – S1 – X2 – X4 – X8) × 0,602 / X4+ U8+ X4+ X8 – U1 – X2 –
Xxx 3 xxxxxx
(x) log X = (U1+ X2+ U4 – X1 – X2 – S4) × 0,401 / X4+ X4 – X1 – X1
xxxx
x´) xxx X = (X2+ X4+ U8 – X2 – S4 – X8) × 0,401 / X8+ X8 – U2 – X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná aktivita х relativní xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxxx aktivita xxxx xxxx rozsah hodnot 0,5–2,0, zkouška se xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx není xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx považovat xx xxxxxxxxx, x xx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxx přímky xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxx pak xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx považovat xx neuspokojivý.
9. XXXXXXXXXXXXXX
Xxxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx jedné a xxxx zkoušce by xxxxxx xxxxxxxxxxx:
- 2 xx/xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsahu avoparcinu 2 xx 10 xx/xx,
- 20 % xxxxx xxxxxxx výsledku xxx xxxxxx 10 xx 25 xx/xx,
- 5 mg/kg xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx 25 až 50 xx/xx,
- 10 % xxxxx hodnoty výsledku xxx obsahu xxx 50 xx/xx.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXX X AGAROVÉM XXXXXXXXXXX XXXXX
1. XXXX X XXXXXX XXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x krmivech x xxxxxxxxxxxx premixech. Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 10 mg/kg (10 xxx) [3].
2. XXXXXXX
Xxxxxx xx xxxxxxxxx 90 %-xxx methanolem. Xxxxxxx xx xxxxxxx vhodnému xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx sodného xx xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se stanoví xxxxxxx difúze xxxxxxxxx xxxxxxx v agarovém xxxxxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zónami xxxxxxxxxxxxxx. Průměr těchto xxxxxxxxxxx zón xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxx úměrný logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
3. XXXXXXXXXXXXXXX: BACILLUS XXXXXXXX XXXX 6633 (XXXX 8054)
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx kultivační xxxxxx (4.1) x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Bacillus xxxxxxxx x xxxx noc xx xxxxxxxx xxx 30 °X. Kultura xx uchovává v xxxxxxxxxx při asi 4 °X x xxxxx xxxxx xx xxxxx naočkuje.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx [4]
Čerstvá xxxxxxx na xxxxx (3.1) x xxxxx xxxxxxxx se xxxxx 2-3 xx sterilní xxxx. Xxxxx suspenzí xx naočkuje Xxxxxxx xxxxx, která xxxxxxxx 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), x xx xxxx 3 xx 5 xxx xx xxxxxxxx xxx 30 °X. Xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx 15 xx xxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxxxxxxx xx. Tato xxxxxxxx xxxx xxx uchována xxxxxxxxx 5 xxxxxx xxx 4 °X.
4. XXXXXXXXXX XXXXXX A XXXXXXX
|
4.1 Kultivační xxxxxx [5] |
|
|
xxxxxxx |
10,0 g |
|
kvasnicový extrakt |
3,0 x |
|
xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
xxxxxxx |
1,0 x |
|
xxxx (podle xxxxxxx) |
10,0-20,0 x |
|
xxxx |
1000 ml |
|
pH 6,5 (xx xxxxxxxxxxx) |
|
|
4.2 Xxxxxxxx xxxxxx |
|
|
xxxxxxx |
10,0 g |
|
kvasnicový xxxxxxx |
2,5 x |
|
xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, X2XXX4 |
0,69 x |
|
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný, XX2XX4 |
0,45 x |
|
xxxx (xxxxx xxxxxxx) |
10,0-20,0 x |
|
xxxx |
1000 xx |
|
xX 6,5 (xx sterilizaci) |
|
4.3 Xxxxxxx 20 %-xx (v/v): 200 ml xxxxxxxx xx zředí 800 xx xxxx.
4.4 Methanol, xxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx 90 %-xx (x/x): 900xx xxxxxxxxx (4.4) xx xxxxx 100 xx xxxx.
4.6 Xxxxxxxx 50 %-xx (x/x): 500ml xxxxxxxxx (4.4) xx xxxxx 500 ml xxxx.
4.7 Xxxx hlinitý, xxxxxxxxxxx (xxxxx X, 20 mesh; xxxxxxxxx xxxxxxx UG1: F. Xxxxxxxxx xxx Xx., xxxx xxxxxxxxxx).
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx: monensin xxxxx x xxxxx xxxxxxxx (xxxx xxxx získatelný x International Laboratory xxx Boilogical Xxxxxxxxx, Xxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx, Xxxxxx XX15 3XX, Xxxxx Xxxxxxxx).
5. XXXXXXXXX
5.1 Xxxxxxx rotační xxxxxxx x 250xx xxxxxxx xxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx: 25 xx, xxxxx: 400 xx, x xxxxxxx x xxxxxxx 2 xx xx xxxxxx xxxxx.
5.3 Skleněná xxxxxxxx xxx chromatografii, xxxxxxx xxxxxx: 11 xx, xxxxx: xxxxxxxxx 300 xx, x otvorem x xxxxxxx 2 xx xx xxxxxx xxxxx.
6. XXXXXXXXXX XXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx asi 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8) xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx (4.4) x naředí, xxx xxxxxx výchozí xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 800 μx/xx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx x xxx 4 xX, zůstane tento xxxxxx použitelný 2 xxxxx.
X xxxxxx výchozího xxxxxxx se připraví xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 %-xxx methanolem (4.6) xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
X8 |
8 μg/ml |
|
S4 |
4 μx/xx |
|
X2 |
2 μx/xx |
|
X1 |
1 μg/ml. |
7. XXXXXXXX EXTRAKTU X XXXXXXXXXXX XXXXXXX
7.1 Xxxxxxxx
7.1.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx x xxxxxxxxx 2,0 xx xx xxxxx x 100 xx 90 %-xxxx methanolu (4.5), xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx a odstředí. Xxxxxx xx xxxxx 50 %-ním methanolem (4.6), aby xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxx xxxxxxx 8 μx/xx ( = X8).
7.1.2 Krmiva, u xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxx x xxxxxxxxx 10 až 20 x xx xxxxx x 100 xx 90 %-ního xxxxxxxxx (4.5), 15 xxxxx protřese x xxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (5.2) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxx xx výše 75–80 mm xxxxxx xxxxxxxx (4.7).
Xxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxx xxxxx hlinitého x xxxxxxx xx xxxxxxx. 30 xx xxxxxxxx xx zředí 50 xx vody. Hned xxxx xx xxxxx 50 %-ním methanolem (4.6), aby bylo xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 8 μx/xx ( = X8).
7.1.3 Krmiva u xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx 50 xxx (xxxxxx hranice 10 xxx)
Xxxxxx x hmotnosti 10 xx 20 x se xxxxx x 100 xx 90 %-xxxx xxxxxxxxx (4.5), 15 minut xxxxxxxx x odstřeďuje xxxxx xx nevyčistí.
Pro xxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx 20 xxx xx xxxxxxx 40 xx xxxxxx; xxx 10 ppm xx xxxxxxx 80 ml. Xxxxxx xx xxxxxx xx vakuu při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 40 °X x xxxxxxxx xxxxxxx (5.1). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx v 10 ml 90 %-xxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx zátka xx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxx (5.3) x xx lehkého xxxxxxx xx trubička xxxxxx do xxxx 75–80 mm xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxx. Kolona xx xxxxxxx 10 xx 90xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx filtrát xx xxxxx k prvnímu xxxxxxxx.
Xxxxxx se xxxxxx xx vakuu při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 40 °X x rotační xxxxxxx (5.1). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.4) a xxxxxx xx doplní xxxxx xx 20 xx. Roztok xx xxxxxxxxxx minimálně 5 xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4000 xx/xxx. Xxxx xxxx se xxxxx 50 %-xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxx očekávané koncentrace xxxxxxxx xxxxxxx 8 μx/xx ( = X8).
7.2. Testovací xxxxxx
X xxxxxxx U8 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (1 + 1) 50 %-xxx xxxxxxxxxx (4.6) xxxxxxxx xxxxxxx X4 (xxxxxxxxx xxxxx: 4 μx/xx), U2 (očekávaný xxxxx: 2 μx/xx), X1 (xxxxxxxxx podíl: 1 μx/xx).
8. POSTUP XXXXX
8.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxx médium (4.2) xx naočkuje xxxxxxxx xxxx (3.2) xxx 50 xx 60 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxx médiem (4.2) xx xxxxxxx množství xxxxxxx, které xxxxxx xx možná největší xxx ještě ostré xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxx použitými xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
8.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxx xx nasadí xxxx difúzní test xx xxxxxxx po xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, S1) x testovacího roztoku (X8, X4, X2, X1). Xx xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx. Z xxxx důvodu xxxx xxx xxxxx takové xxxxxxx, aby bylo xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx kultivačního média xxxxxxx osm xxxxxx x xxxxxxx 10-13 xx s xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 30 xx. Xxxx xx xxx být prováděn xxxxxxxxx xx miskách, xxxxx xxxx vyrobeny xx xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 20 xx x xxxxxxx 200 xx.
Xx xxxxx xx xxxxxx takové xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxxxx xxxxx 8.1, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx přibližně 2 xx (60 xx xx xxxxx x průměru 200 xx). Xxxx xx xxxxxx xxxxxx, vyhloubí xx xxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (mezi 0,10 x 0,15 xx xx otvor, xxxxx xxxxxxx xxxxxx). Každá xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxx xxxx xx vyhodnotí 32 xxxxxxxxxxx xxx.
8.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx přibližně po xxxx 18 hodin xxx 35 xx 37 °C.
9. XXXXXXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxxxxx zón se xxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx. Xxx xxxxxx koncentraci xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx semilogaritmického xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx koncentrace xx xxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx pro xxxxxxx xx zakreslí xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx. níže xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxx úroveň xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (SL) xx xxxxxxx xxxxx následujícího xxxxxx:
x) SL = 7X1 + 4X2 + S4 – 2X8 / 10
Xxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorce:
b) XX = 7X8 + 4X4+ S2 + 2X1 / 10
Xxxxxx tak se xxxxxxx nejvhodnější body xxx xxxxxxxx (XX) x nejvyšší xxxxxx (XX) extraktu, přičemž xx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X1, U2, U4 x X8 xxxxxxx X1, X2, X4 x X8.
Xxxxxxxxxx xxxxxxx XX a SH xx zanesou xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Spojením xxxx bodů xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx provede xxx xxxxxxx XX x XX k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx.
Xxxxx xx nevyskytují xxxxxx faktory, xxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx. Přímky xx xxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxx (SH-SL) x (XX-XX) neodchylují xxxx xxx x 10 % xx xxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx, xx možné xxxxxxxx buď U1 x X1 xxxx X8 a X8. Xxx se xxxxxxx XX, SH, XX x XX určí xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx se obdržely xxxxxxxxxxxx nejvhodnější xxxxxx:
x) XX = 5X1 + 2X2 – X4 / 6 xxxx 5S2 + 2X4 – X8 / 6
b ) XX = 5X4 + 2S2 − X1 / 6 xxxx 5X8 + 2X4 − S2 / 6
Xxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxx XX x XX. X těchto alternativních xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Výsledky, xxxxx byly xxxxxxxxx xx tří xxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx protokolu x xxxxxxx.
Xxxxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx rovnoběžné, vypočítá xx logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx A) xxxxxx jednoho x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
Xxx 4 xxxxxx
x) xxx A = (X1+ U2+ X4+ X8 – X1 – S2 – S4 – X8) × 0,602 / X4+ U8+ X4+ X8 – X1 – X2 – X1 – X2
Xxx 3 xxxxxx
x) xxx X = (X1+ X2+ U4 – X1 – X2 – S4) × 0,401 / X4+ X4 – X1 – X1
xxxx
x) xxx X = (X2+ U4+ U8 – S2 – X4 – X8) × 0,401 / X8+ X8 – X2 – S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx х xxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxx relativní xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxx 0,5–2,0, xxxx xx xxxxxxxx při xxxxxxxxxxxxx přizpůsobení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx není xxxxx xxxxxxxxx relativní xxxxxxxx v rozsahu xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx třeba xxxxxxxxx xx přibližný, a xx xx mělo xxx xxxxxxxxxxx do xxxxxxxxx x analýze.
Pokud xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxx xx zopakuje. Xxxxx xx ani xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.
10. XXXXXXXXXXXXXX
Xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxx x téže xxxxxxx xx xxxxxx překračovat:
- 20 % xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx 25 xx/xx,
- 5 mg/kg xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxxx 25 xx 50 mg/kg,
- 10 % vyšší xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxx 50 xx/xx.
[1] Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx metody, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx odpovídajícího xxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[3] 1 xx monensinu sodného xxxxxxxx 1000 xxxxxxxxx XX.
[4] Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx odpovídající xxxxxxxx xxxx.
[5] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx složení, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx výsledky.