Devátá směrnice Xxxxxx
xx xxx 31. xxxxxxxx 1981,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(81/715/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxxx společenství,
s ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. července 1970, xxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxxxxxx Řecka, x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, zda xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx právních x xxxxxxxxx předpisů xx xxxxxx x xxxxxxx krmiv, se xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Společenství xxx xxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Komise 71/250/EHS [2], 71/393/XXX [3], 72/199/XXX [4], 73/46/XXX [5], 74/203/XXX [6], 75/84/XXX [7], 76/372/XXX [8] x 78/633/XXX [9], xxxxxxxxx pozměněné xxxxxxxx xx dne 30. xxxxxxxx 1981, xxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství xxxxxxxxx; xx stav od xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, že xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, že analýzy xxx úřední xxxxxxxx xxxxx xx obsah xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx popsanými v xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx xx 1. prosince 1981. Xxxxxxxxxx o nich xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Tato xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 31. xxxxxxxx 1981.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxx
xxxxxxxx
[1] Úř. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[4] Xx. věst. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[5] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[6] Úř. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[7] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
[8] Xx. xxxx. X 102, 15.4.1976, x. 8.
[9] Xx. věst. X 206, 29.7.1978, x. 43.
PŘÍLOHA
1. XXXXXXXXX AVOPARCINU XXXXXX X XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXX
1. XXXX X XXXXXX POUŽITÍ
Tato xxxxxx umožňuje xxxxxxxxx xxxxxxxxxx v krmivech x medikovaných xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx stanovitelnosti xx 2 mg/kg (2 ppm). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx antibiotik xxxx xx xxxxxxxxx působit xxxxxx.
2. XXXXXXX
Xx xxxxx xxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx subtilis. Xxxxxx xx dokáže xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxxxxxx xx přímo xxxxxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx.
3. XXXXXXXXXXXXXXX: XXXXXXXX XXXXXXXX XXXX 6633 (XXXX 8054)
3.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.1) x xxxxxxx zkumavkách xx xxxxxxxx mikroorganismem Xxxxxxxx xxxxxxxx x přes xxx xx xxx 30 °C inkubuje. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx xxx 4 °C x xxxxx měsíc xx xxxxx xxxxxxxx.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx [1]
Xxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxx (3.1) xx xxxxx 2-3 xx xxxxxxxx xxxx. Xxxxx suspenzí xx xxxxxxxx Rouxova xxxxx, xxxxx xxxxxxxx 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), a xx xxxx 3 až 5 dní xx xxxxxxxx při 30 °X. Xx kontrole xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx do 15 xx ethanolu (4.2) x xxxxxxxxxxxxx xx. Xxxx xxxxxxxx xxxx xxx uchována xxxxxxxxx 5 xxxxxx při 4 °X.
4. KULTIVAČNÍ XXXXXX X XXXXXXX
4.1 Xxxxxxxxxx xxxxxx [2]
|
xxxxxx |
6,0 x |
|
xxxxxxx |
4,0 g |
|
kvasnicový xxxxxxx |
3,0 x |
|
xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
xxxxxxx |
1,0 x |
|
xxxx |
15,0 x |
|
xxxx |
1000 xx |
|
xX 6,5 (po xxxxxxxxxxx) |
|
4.2 Xxxxxxx 20 %-ní (x/x): 200 ml xxxxxxxx xx xxxxx 800 ml vody.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, d: 1,18–1,19.
4.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, 2X.
4.5 Xxxxxxxxx xxxx 0,1 M:
dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx, XX2 XX4: 13,6 g
voda: 1000 xx
xX xxxxxxx xx 4,5.
4.6 Xxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3): 65/32,5/2,5 (x/x/x)
4.7 Standardní xxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx x známé xxxxxxxx
5. XXXXXXXXXX XXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx asi 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7) se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx naředí, xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 100 μx avoparcinu x 1 xx. Při xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxx a xxx 4 °X, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 7 xxx.
5.1 Pro xxxxxxxxxx xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx postupným rozřeďováním xxxxxxxxxx xxxxxx následující xxxxxxx:
|
X8 |
4 μx/xx |
|
X4 |
2 μx/xx |
|
X2 |
1 μx/xx |
|
X1 |
0,5 μx/xx. |
5.2 Pro xxxxxx
X výchozího xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
X8 |
2,0 μx/xx |
|
X4 |
1,0 μx/xx |
|
X2 |
0,5 μx/xx |
|
X1 |
0,25 μx/xx. |
6. XXXXXXXX EXTRAKTU A XXXXXXXXXXX XXXXXXX
6.1 Medikované xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 10 xx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx 10-100 xx xxxxxxxxxx, se x odměrné xxxxx x obsahu 100 xx xxxxxxxxxx protřepe x 60 ml xxxxx (4.6) xx xxxx 15 xxxxx. Xxxxxxx xX xx xxxxxxxxxxx a xxxxx xx třeba, xxxxxx xx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (4.3) na xxxxxxx 2. Směsí (4.6) xx xxxxxx xxxxx x homogenizuje xx. Xxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxx x. 1) a xxxxxxx 5 xx xxxxxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx poměrná část x xX xx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (4.4) xxxxxx xx xxxxxxx 4,5. Xxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx pufrem (4.5), xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxx 4 μx/xx ( = U8).
Z xxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (1+1) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5) xxxxxxxx xxxxxxx X4 (očekávaný xxxxx: 2 μg/ml), X2 (xxxxxxxxx obsah: 1 μg/ml) a X1 (očekávaný obsah: 0,5 μx/xx).
6.2 Krmiva
Vzorek x xxxxxxxxx 50 x xx xxxxx xx 100 xx xxxxx (4.6) a xx dobu 30 xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxx odstředěním (v xxxxxxxxxx zkumavkách). Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (viz. xxxxxxxxxxx xxxxxxx) x xxxxxxx xX se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) xxxxxx xx 4,5. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4,5), xxx xx xxxxxx xxxxxx X8 (xxx. následující xxxxxxx).
X xxxxxx xxxxxxx xx postupným xxxxxxxxxxxx (1+1) fosfátovým pufrem (4.5) xxxxxxxx roztoky X4 (xxxxxxxxx xxxxx: 1,0 μx/xx), X2 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,5 μx/xx) a X1 (xxxxxxxxx obsah: 0,25 μx/xx).
|
Xxxxxxxxx obsah xxxxxxxxxx (xx/xx) |
5 |
7,5 |
10 |
15 |
20 |
40 |
|
Xxxxxxxx xxxxxx x x (± 0,1 x) |
50 |
50 |
50 |
50 |
50 |
50 |
|
Xxxxx směsi (4.6) x xx |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
|
Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xx) |
20 |
15 |
20 |
15 |
20 |
10 |
|
Xxxxxxxx objem (xx): U8 |
25 |
25 |
50 |
50 |
100 |
100 |
|
Očekávaný obsah X8 x μx/xx |
2 |
xxxxx. 2 |
2 |
xxxxx. 2 |
2 |
2 |
7. XXXXXX XXXXX
7.1 Xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx (4.1) xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (3.2) při xxxxxxx 50–60 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (4.1) se xxxxxxx množství xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx ostré xxxxxxxxx xxxx xxx různých xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx na xxxxxxx xx xxxxxxx koncentračních xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, X1) x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1).Xx xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardu x xxxxxxxx. X xxxx xxxxxx musí xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby bylo xxxxx vytvořit xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx prostředí xxxxxxx osm xxxxxx x xxxxxxx 10-13 xx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 30 xx. Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na miskách, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx skleněné xxxxx, xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx kroužky o xxxxx 20 mm x xxxxxxx 200 xx.
Xx misku xx xxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxxxx xxxxx 7.1, xxx xx vytvořila xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2 xx (60 xx xx misku x xxxxxxx 200 xx). Xxxx, co xxxxxx xxxxxx, vyhloubí xx xxxxxx, do xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx přesné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx 0,10 x 0,15 xx xx otvor, podle xxxxxxx xxxxxx). Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx čtyřikrát, xxxxx xxx xxxxx xxxx xx vyhodnotí 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxx 16 až 18 xxxxx při 30 °X.
8. XXXXXXXXXXX
Xxxxxx inhibičních xxx xx změří x xxxxxxxxx xx 0,1 xx. Pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx hodnoty xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxxxx papíru, xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx koncentrace ve xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx extrakt xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx např. xxxx xxxxxxxx způsobem.
Nejvhodnější xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx (XX) se stanoví xxxxx následujícího xxxxxx:
x) XX = 7S8 + 4X4 + X2 – 2S1 / 10
Xxxxxxxxxxxx bod xxx nejvyšší úroveň xxxxxxxxxxxx roztoku (XX) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
XX = 7X8 + 4X4 + X2 – 2X1 / 10
Stejně xxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx (UL) x xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxx, přičemž xx xx výše uvedených xxxxxx xxxxxx X1, X2, X4 x X8 xxxxxxx X1, X2, X4 x X8.
Xxxxxxxxxx xxxxxxx XX x XX xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx obou xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx XX a UH x xxxxxxx nejvhodnější xxxxxx pro xxxxxxx.
Xxxxx xx nevyskytují rušivé xxxxxxx, měly by xxx xxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xx možno xxxxxxxxx za rovnoběžné, xxxxx xx xxxxxxx (XX-XX) a (XX-XX) xxxxxxxxxxx více xxx x 10 % xx xxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxx X1 x X1 xxxx X8 x X8. Xxx xx xxxxxxx XX, XX, UL x XX určí xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx přímky:
|
a ) XX = 5X1 + 2X2 − X4 / 6 |
nebo |
5S2 + 2S4 − X8 / 6 |
|
x ) XX = 5X4 + 2S2 − X1 / 6 |
xxxx |
5X8 + 2X4 − S2 / 6 |
Xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx XX x UH. X xxxxxx alternativních xxxxxx xx xxxxxx zkontroluje xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxx úrovní, xx xxxx být xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, vypočítá xx xxxxxxxxxx relativní xxxxxxxx (xxx X) xxxxxx xxxxxxx x následujících xxxxxx:
Xxx 4 úrovně
(c) xxx X = (X1+ U2+ X4+ X8 – S1 – X2 – X4 – S8) × 0,602 / X4+ X8+ S4+ X8 – U1 – X2 –
Xxx 3 xxxxxx
(x) xxx X = (X1+ X2+ U4 – X1 – S2 – X4) × 0,401 / X4+ X4 – X1 – X1
xxxx
x´) log X = (X2+ X4+ X8 – X2 – X4 – X8) × 0,401 / X8+ X8 – U2 – S2
Skutečná xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx х xxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx hodnot 0,5–2,0, xxxxxxx xx xxxxxxxx při xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx koncentrací extraktu xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx možné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, výsledek xx xxxxx považovat xx xxxxxxxxx, x to xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, zkouška xx xxxxxxxx. Pokud xx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx považovat xx neuspokojivý.
9. XXXXXXXXXXXXXX
Xxxxxxx xxxx výsledky dvou xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx jedné x xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:
- 2 xx/xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx 2 až 10 xx/xx,
- 20 % xxxxx xxxxxxx výsledku xxx xxxxxx 10 xx 25 mg/kg,
- 5 xx/xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsahu 25 xx 50 xx/xx,
- 10 % xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxx 50 xx/xx.
2. STANOVENÍ XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXX X XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXX
1. ÚČEL A XXXXXX XXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx monensinu sodného x xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx premixech. Spodní xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 10 xx/xx (10 xxx) [3].
2. XXXXXXX
Xxxxxx xx xxxxxxxxx 90 %-xxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx podrobí xxxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxxx sodného xx xxxxxx. Xxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx monensinu xxxxxxx v agarovém xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx prokáže xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx x rozsahu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx považován xx xxxxx úměrný logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx snížena xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
3. XXXXXXXXXXXXXXX: XXXXXXXX SUBTILIS XXXX 6633 (XXXX 8054)
3.1 Uchování kmenové xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.1) x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx subtilis x xxxx noc xx xxxxxxxx xxx 30 °X. Kultura xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx při asi 4 °C a xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx.
3.2 Příprava xxxxxxxx xxxx [4]
Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx (3.1) x šikmé xxxxxxxx xx xxxxx 2-3 ml sterilní xxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx Rouxova xxxxx, xxxxx xxxxxxxx 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), a xx dobu 3 xx 5 xxx xx xxxxxxxx xxx 30 °X. Po xxxxxxxx xxxxxx spór xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx 15 ml ethanolu (4.3) a xxxxxxxxxxxxx xx. Tato xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 5 xxxxxx xxx 4 °C.
4. XXXXXXXXXX XXXXXX X XXXXXXX
|
4.1 Xxxxxxxxxx xxxxxx [5] |
|
|
xxxxxxx |
10,0 x |
|
xxxxxxxxxx extrakt |
3,0 x |
|
xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
glukóza |
1,0 x |
|
xxxx (xxxxx kvality) |
10,0-20,0 x |
|
xxxx |
1000 xx |
|
xX 6,5 (xx xxxxxxxxxxx) |
|
|
4.2 Xxxxxxxx xxxxxx |
|
|
xxxxxxx |
10,0 g |
|
kvasnicový extrakt |
2,5 x |
|
xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, X2XXX4 |
0,69 x |
|
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, XX2XX4 |
0,45 x |
|
xxxx (xxxxx xxxxxxx) |
10,0-20,0 x |
|
xxxx |
1000 ml |
|
pH 6,5 (xx sterilizaci) |
|
4.3 Xxxxxxx 20 %-xx (x/x): 200 xx xxxxxxxx xx xxxxx 800 xx xxxx.
4.4 Xxxxxxxx, xxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx 90 %-xx (x/x): 900xx xxxxxxxxx (4.4) xx xxxxx 100 xx xxxx.
4.6 Methanol 50 %-xx (x/x): 500xx xxxxxxxxx (4.4) xx xxxxx 500 xx xxxx.
4.7 Xxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx (xxxxx X, 20 xxxx; activated xxxxxxx XX1: X. Xxxxxxxxx xxx Xx., xxxx xxxxxxxxxx).
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx: monensin xxxxx x xxxxx xxxxxxxx (xxxx jiné xxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Standards, Xxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx, Xxxxxx XX15 3XX, Velká Británie).
5. XXXXXXXXX
5.1 Vakuová xxxxxxx xxxxxxx x 250xx xxxxxxx xxxxxx.
5.2 Skleněná xxxxxxxx xxx chromatografii, xxxxxxx xxxxxx: 25 xx, xxxxx: 400 xx, x xxxxxxx x průměru 2 xx xx xxxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxxxxx trubička xxx chromatografii, xxxxxxx xxxxxx: 11 mm, xxxxx: xxxxxxxxx 300 xx, s xxxxxxx x průměru 2 xx xx jednom xxxxx.
6. STANDARDNÍ XXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx 10 mg standardní xxxxxxxxx (4.8) xx xxxxxxxx x methanolu (4.4) x xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 800 μx/xx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx x při 4 xX, zůstane xxxxx xxxxxx použitelný 2 xxxxx.
X xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx rozřeďováním 50 %-xxx xxxxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
X8 |
8 μg/ml |
|
S4 |
4 μx/xx |
|
X2 |
2 μg/ml |
|
S1 |
1 μx/xx. |
7. XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX ROZTOKU
7.1 Xxxxxxxx
7.1.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx x xxxxxxxxx 2,0 mg xx xxxxx x 100 xx 90 %-xxxx methanolu (4.5), xxxxxxx minut se xxxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxxx xx zředí 50 %-xxx xxxxxxxxxx (4.6), xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 8 μx/xx ( = X8).
7.1.2 Xxxxxx, x xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxx o xxxxxxxxx 10 xx 20 g se xxxxx k 100 xx 90 %-ního xxxxxxxxx (4.5), 15 xxxxx xxxxxxxx x xxxxx ustát.
Vatová xxxxx xx zavede xx xxxxxxxx trubičky (5.2) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxx 75–80 xx xxxxxx xxxxxxxx (4.7).
Xxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xx filtrát. 30 ml xxxxxxxx xx xxxxx 50 xx xxxx. Xxxx xxxx se zředí 50 %-xxx xxxxxxxxxx (4.6), xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sodného 8 μx/xx ( = X8).
7.1.3 Xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx 50 ppm (xxxxxx xxxxxxx 10 xxx)
Xxxxxx x xxxxxxxxx 10 až 20 x se přidá x 100 xx 90 %-xxxx methanolu (4.5), 15 minut xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx 20 ppm xx xxxxxxx 40 xx xxxxxx; xxx 10 ppm xx xxxxxxx 80 ml. Xxxxxx xx xxxxxx xx vakuu xxx xxxxxxx nepřesahující 40 °X x xxxxxxxx xxxxxxx (5.1). Xxxxxxxx xx rozpustí x 10 xx 90 %-xxxx methanolu.
Vatová xxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxx (5.3) x xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx do xxxx 75–80 mm xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx roztok xxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x filtrát xx xxxxxxx. Kolona se xxxxxxx 10 ml 90xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx se xxxxxx xx vakuu xxx xxxxxxx nepřesahující 40 °X v rotační xxxxxxx (5.1). Xxxxxxxx xx rozpustí x 10 ml bezvodého xxxxxxxxx (4.4) a xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx 20 xx. Roztok se xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 5 xxxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4000 xx/xxx. Xxxx xxxx se xxxxx 50 %-ním xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 8 μx/xx ( = X8).
7.2. Xxxxxxxxx xxxxxx
X xxxxxxx U8 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (1 + 1) 50 %-xxx methanolem (4.6) xxxxxxxx xxxxxxx X4 (xxxxxxxxx podíl: 4 μx/xx), X2 (očekávaný xxxxx: 2 μx/xx), X1 (xxxxxxxxx xxxxx: 1 μx/xx).
8. XXXXXX XXXXX
8.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxx médium (4.2) xx naočkuje suspenzí xxxx (3.2) při 50 až 60 °X. Předběžnými xxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (4.2) xx stanoví xxxxxxxx xxxxxxx, které vykáže xx možná xxxxxxxx xxx xxxxx ostré xxxxxxxxx xxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
8.2 Příprava xxxxx
Xxxx se xxxxxx xxxx xxxxxxx test xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, S1) x testovacího xxxxxxx (X8, X4, X2, X1). Xx xxxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx všechny xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x extraktu. X xxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx kultivačního xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxx 10-13 xx s xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 30 xx. Xxxx xx xxx xxx prováděn xxxxxxxxx na xxxxxxx, xxxxx xxxx vyrobeny xx skleněné desky, xx nichž xx xxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 20 xx x průměru 200 xx.
Xx xxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxxxx xxxxx 8.1, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx silná přibližně 2 mm (60 xx xx misku x xxxxxxx 200 xx). Poté co xxxxxx ztuhne, xxxxxxxx xx xxxxxx, do xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx 0,10 x 0,15 xx xx otvor, xxxxx xxxxxxx otvoru). Každá xxxxxxxxxxx musí být xxxxxxx minimálně čtyřikrát, xxxxx xxx každý xxxx se xxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
8.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 18 xxxxx xxx 35 xx 37 °X.
9. XXXXXXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 mm. Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx se xxxxxx logaritmus xxxxxxxxxxx xx vztahu k xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxx standardní roztok xxxxxx xxxx pro xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx. xxxx uvedeným xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX) xx xxxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
x) SL = 7X1 + 4X2 + S4 – 2X8 / 10
Xxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (XX) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
x) XX = 7X8 + 4S4+ S2 + 2S1 / 10
Xxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx (XX) x nejvyšší xxxxxx (XX) xxxxxxxx, xxxxxxx xx xx výše xxxxxxxxx xxxxxx dosadí X1, X2, X4 x U8 xxxxxxx X1, S2, X4 x S8.
Vypočítané xxxxxxx XX a XX xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxx vznikne xxxxxxxxxxxx přímka xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Totéž xx xxxxxxx xxx xxxxxxx XX x XX k získání xxxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx.
Xxxxx xx nevyskytují xxxxxx faktory, měly xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx (XX-XX) x (XX-XX) xxxxxxxxxxx více xxx x 10 % od střední xxxxxxx.
Xxxxx přímky xxxxxx xxxxxxxxxx, xx možné xxxxxxxx xxx X1 x X1 nebo X8 x X8. Xxx se xxxxxxx XX, SH, XX x XX určí xxxxxx následujících xxxxxx, xxx se obdržely xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx přímky:
a) XX = 5X1 + 2X2 – X4 / 6 xxxx 5X2 + 2X4 – S8 / 6
b ) XX = 5S4 + 2X2 − X1 / 6 xxxx 5X8 + 2X4 − S2 / 6
Xxxxx se xxxxxxx pro xxxxxxx XX x UH. X těchto xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx rovněž xxxxxxxxxxx rovnoběžnost. Xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx tří úrovní, xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x analýze.
Pokud xx xxxxx xxxxxx považovat xx rovnoběžné, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx relativní xxxxxxxx (xxx A) xxxxxx jednoho z xxxxxxxxxxxxx vzorců:
Pro 4 xxxxxx
x) log A = (X1+ U2+ X4+ X8 – X1 – X2 – X4 – X8) × 0,602 / X4+ U8+ X4+ X8 – X1 – X2 – S1 – X2
Xxx 3 úrovně
d) xxx A = (X1+ U2+ X4 – S1 – X2 – X4) × 0,401 / X4+ S4 – X1 – X1
xxxx
x) xxx X = (X2+ X4+ X8 – X2 – X4 – X8) × 0,401 / X8+ X8 – X2 – S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx х relativní xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxx 0,5–2,0, test xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx koncentrací xxxxxxxx příp. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud není xxxxx dosáhnout relativní xxxxxxxx x rozsahu xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx považovat xx přibližný, a xx by xxxx xxx xxxxxxxxxxx do xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx rovnoběžné, xxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx se ani xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.
10. XXXXXXXXXXXXXX
Xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx rozborů jednoho xxxxxxxxx xxx xxxxx x xxxx zkoušce xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:
- 20 % xxxxx xxxxxxx výsledku xxx xxxxxx xxxxxxxxx sodného 10 xx 25 xx/xx,
- 5 xx/xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx 25 xx 50 mg/kg,
- 10 % xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxx 50 mg/kg.
[1] Xxxxx být použity xxxx xxxxxx, které xxxxxxxxx odpovídající xxxxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoliv xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] 1 xx xxxxxxxxx sodného xxxxxxxx 1000 xxxxxxxxx XX.
[4] Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx metody, xxxxx vytvoří xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx.
[5] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační médium xxxxxxxxxxxxxx složení, které xxxxxxxxx stejné xxxxxxxx.