Xxxxx směrnice Xxxxxx
xx xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx x analytických xxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x přistoupení [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx stanoví, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Komise 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/XXX ze xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/XXX xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX ze dne 5. prosince 1972 [6], 74/203/XXX xx xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX xx dne 20. xxxxxxxx 1974 [8] xxx stanovily xxxx xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx; xx s xxxxxxx xx stav xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx nutné xxxxxxxx sedmou xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem x xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx jsou x souladu xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA TUTO XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, že analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x obsah xxxxxxxxxx X1, se provádějí xxxxx xxxxx popsaných x xxxxxxx této xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x části 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x analýze, se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v účinnost xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí nejpozději xx 1. xxxxx 1976. Neprodleně o xxxx informují Xxxxxx.
Článek 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu xxx 1. března 1976.
Xx Xxxxxx
X. J. Lardinois
člen Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Úř. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX AFLATOXINU B1
A. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxxx olejná, xxxxx, xxxxx xxxxxx, xxxx, xxxxx, babassu xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx x obilovin, xxxxxxxx mouka, bramborová xxxxx x xxxxx. Xxxxxx hranice pro xxxxxxxxx je 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, které xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx analýzu podle xxxxxx X (dvourozměrná xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se filtruje x xxxx xxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx odpaří x reziduum xx xxxxxxxx xx stanoveném xxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xx xxxxx benzenu x acetonitrilu. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx roztoku xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx stanoví x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 extrahovaného z xxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, všechna xxxxxxx xxxx xxx čistoty "x. x".
3.1 Aceton.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 procentem 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Methanol.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx chloroformu (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Absorbent – xxxx, předem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx sodný, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková 1 X.
3.13 50 % (X/X) kyselina sírová.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Silikagel X–XX xxxx ekvivalent, pro xxxxxxxxxxxx chromatografii.
3.16 Standardní xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx benzenu x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxx xx uvedeno x bodu 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx obsahující xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx B1 x X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx být xxxxxxxx xxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx aflatoxinů.
3.18 Vyvíjecí xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), chromatografický xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/methanol (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx atmosférou;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx atmosférou.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx míchačka.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, Schleicher x Xxxüxx x. 588 xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (xxxxxxx průměr 22 xx, xxxxx 300 xx) s teflonovým xxxxxxxx a 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x xxxxxx x xxxxxx 500 ml x xxxxxxx xxxx.
4.6 Erlenmeyerovy xxxxx x xxxxxx 500 xx, xx xxxxxxxxxxx zátkami.
4.7 Xxxxxxxx xxx tenkovrstvou chromatografii.
4.8 Xxxxxxxx desky xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii, 200 x 200 xx, xx připraví xxxxx (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx pět xxxxx): xxx 30 x xxxxxxxxxx G-HR (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx 60 xx xxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx 1 minutu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx se vytvořila xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx x poté xxxxxxx x desikátoru xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx hodinu x xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx uvedeného xxxxxxx.
4.9 XX xxxxx xxxxxxxxxxx (360 mm). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, aby xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx X1 na xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxx 10 cm xx xxxxx xxxxx xxxxx rozeznatelná.
4.10 Odměrné xxxxxxxx x xxxxxx 10 xx, x xxxxxxxxxxxxxxxx zátkami.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", xxxx X bod 1)
Rozmělnit xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x oky x xxxxxxxxx 1 xx (x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 ml xxx 50 x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx 25 x křemeliny (3.14), 25 xx vody x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Zazátkovat, xxxxxxxxxxx xxxx promíchávat 30 minut třepačkou (4.2) a xxxxxxxxxxxx xxxx skládaný xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Odstranit xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, poté xxxxxx 50 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx
Xx spodní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (4.4) xxxxxx xxxxx x vaty xxxx xx xxxxxx xxxx (3.9), naplnit trubici xx xx xxxx xxxxxx chloroformem (3.2), x poté xxxxxx 5 g xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, že xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného je xxxxx xxxxx, a xxxx xxxxxx po xxxxxx dávkách 10 x silikagelu (3.8). Xx každém přidání xxxxxxx zamíchat, aby xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx stát, x xxxx xxxxxxx přidat 15 g xxxxxx xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx (5.2) xx 100 xx n-hexanu (3.3) x směs kvantitativně xxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx kapalinu xxxxxxxx xx k xxxxxxx xxxxxxx vrstvy síranu xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x znovu nechat xxxxxxxx klesnou xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného. Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx na xx, xxx rychlost xxxxxxx xxxx 8 až 12 ml xx xxxxxx x xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx 150 xx xxxxx chloroformu x xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx celý xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx do sucha xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11) v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5) xxx teplotě xxxxx xxx 50 °X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 xx (4.10). Koncentrovat xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11), x xxxx xxxxxxx objem xx 2 xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6).
5.4 Tenkovrstvá chromatografie
Na xxxxx xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 cm xx xxxxxx hrany a x xxxxxxxxx po 2 xx xxxx xxxxxx standardních xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx extraktu xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.3 x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx tmě xx použití jednoho x vyvíjecích xxxxxxxxxxxx (3.18). Xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x xxxx xx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx X1 x B2 xxx xxxxxxxx zcela odděleny.
Nechat xxxxxxxxxxxx xxxxxxx ve xxx a xxxx xxxxxx desku UV xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení xx provádí xxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x intenzitou xxxxxxxxxxxx xxxxx standardního xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx překrytím xxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx x xxxxx být xxxxxxxxx xxxx než xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx fluorescence 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx intenzita xxxxxxxxxxxx 40 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx 10 krát xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx x xxxxxx délce 443 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxx extraktu xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx provede xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx získaný podle xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx sírovou (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 se musí xxx XX zářením xxxxxx x modré xx xxxxxx.
5.6.2 Dvourozměrná xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx tvorbu xxxxxxxxxx B1 - xxxxxxxxxxx (aflatoxin B2a)
Poznámky:
Níže xxxxxxx xxxxxxxx postupy xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx schématu xxxxxxxx na xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Nanesení roztoků
Narýsovat xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx čel rozpouštědel. Xxxxxx xx desku xxxxxx xxxxxxxxxxx pipet xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- v xxxx A: objem xxxxxxxxxxx extraktu vzorku xxxxxxxxx podle xxxx 5.3, který xxxxxxxx xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx B1,
- x xxxxxx X a X: 25 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx použití vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx xxxxx X, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx tmě x xxx pokojové xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) na xxxxx x xxxxx 2,5 cm, xxxxx xxxxxxx body X x X (xx xxxxxxx 3 vyznačeno xxxxxxxxx), dokud pásek xxxxxxxxx, xxxxxxx zbytek xxxxx je xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Nechat xxxxxxx 10 xxxxx xx tmě, x xxxx vysušit xxxxx xxxxxxx vzduchu xxx xxxxxxxx teplotě.
Poté se xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x xxxxxxxxxx linii. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx pět xxxxx xx tmě x při xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx (4.9) a xxxxxx xxxx znaky:
a) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 pocházející xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X (xxxxxxx xx xxxxx X).
x) Objevení xx xxxxx fluoreskující skvrny xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx) a xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx obě xxxxxx xxxxxxxxx ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx ve xxxxx XX).
x) Objevení xx xxxxxxxxx xxxxx, jaké xxxx xxxxxxx v xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx vzorku extraktu xxxxxxxxxx x xxxx X. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx jednak x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxx X ve xxxxx X (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxxxx vzorku naneseného x xxxx C) x xxxx migrační xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx xx xxxx X ve xxxxx II (stejná xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx vzorku naneseného x xxxx X). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pocházejících z xxxxxxxx x ze xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Výpočet výsledků
6.1 Xx xxxxxxx vizuálních xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxx (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X · X · X / X · X
xxx:
X x Y xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku aflatoxinu X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) x xxxxxxxx, xxxxx xx stejnou xxxxxxxxx fluorescence;
S = xxxxxxxxxxx, x mikrogramech xx 1 xx, xxxxxxxxxx X1 ve xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
V = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx na xxxxxx.
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech xx 1 xx xxxxxx (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx xxxx 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, v xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxx Y) xxxxxxxx x měření;
V = xxxxxxx objem xxxxxxxx x mikrolitrech, x xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx xx objem xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx na koloně.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx xx od 8 xx 10 μx/xx. Stanovit absorpční xxxxxxxx mezi 330 x 370 nm xx použití xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx optickou xxxxxxx (X) xxx 363 xx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxx 348 xx x případě roztoku xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxx:
xxx chloroformový roztok; 312 · X · 1 000 / 20&xxxx;600
312 · X · 1 000 / 19&xxxx;800 xxx xxxxxx xx směsi benzenu x acetonitrilu..
Ve xxx xxxxxxx příslušná ředění x xxxxx získat xxxxxxxxxx pracovní roztok, xxxxx koncentrace xxxxxxxxxx X1 xx xxx 0,1 μx/xx. Xxxxx xx xxxxxx skladuje x xxxxxxxxxx xxx 4 °X, je xxxxx xx xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx na xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx 8 xx 10 μl xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx (7.1). Vyvinout xxxxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x bodu 5.4. Xxx XX xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x x místě původního xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Opakovatelnost
Rozdíl mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx 10 xx 20 μg/kg,
- 5 μx xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxxx xx 20 do 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx vyšší než 50 μx/xx.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
B. METODA XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX CHROMATOGRAFIE
1. Xxxx a rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx X. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 ppb). Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx krmiva xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx část se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx chloroformu xxxx ve xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx část xxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx stanoví z xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx buď vizuálně xxxx flourometricky xxxxxxxxx xx známým xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx aflatoxinu X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx z xxxxx xxxx xxx potvrzena xxxxxxxxxx postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Chloroform xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx peroxidy.
3.6 Xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx: 98/2 (V/V).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx chromatografii, velikost xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – vata, předem xxxxxxxxx chloroformem, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, např. xxxxx.
3.12 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 Křemelina (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx kyselinou.
3.14 Xxxxxxxxx G–HR xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxx xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Standardní xxxxxx obsahující asi 0,1 μx aflatoxinu X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx x kontrolovaný xxx xx xxxxxxx x xxxx 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 xxxxxx X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx body 5.1, 5.2 x3.5 metody X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně |
5.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografie
5.4.1 Nanesení xxxxxxx (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx dvěma přilehlými xxxxxxxx (6 cm xx xxxxx strany), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx čel xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx desku xxxxxx xxxxxxxxxxx pipet xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- v xxxx X: 20 μx vyčištěného xxxxxxxx xxxxxx získaného podle xxxx 5.3,
- v xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16),
- x xxxx X: 10 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x bodu D: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx inertního xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x chromatografickém xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx xxxxx X, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx k vymezující xxxxx. Vyjmout xxxxx x chromatografického xxxxx x nechat oschnout 15 xxxxx xx xxx x při xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x nenasycenou xxxxxxxxxx] xx tmě xx xxxxx XX, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx linii. Xxxxxxx desku x xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx ve xxx a xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx xxxxxxx fluoreskujících xxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X, X, D x X. Xxxxxxxxx xxx pomyslné přímky, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx úhel s xxxxxxxxxx směry. Xxxxxxxx X těchto přímek xxxxxx xxxxx, xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x bodu X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx poloha skvrny xxxxxxxxxx B1 xxxx xxxx xxx x xxxx X xxxxxxxxx xx průsečíku xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx 100 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx B x X. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 v extraktu xxxxxx se xxxxxxx, xxx je uvedeno x bodu 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx chromatografie
Narýsovat xx xxxxx desku (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1, x xxxxxx xx xxx A (viz xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, který xxx xxxxxx xxxxx xxxx 5.3, x k xxxx 20 μl xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16). Xxxxxxx jak xx xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxx:
- xx skvrny aflatoxinu X1 x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx překrývají,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxx skvrn xx xxxxxxxx xxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx xx vyvinula x bodu X xx první desce.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx těchto xxxxxx:
5.5.1 Vizuální měření
Množství xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxx C, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx fluorescence 20 μx extraktu xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx roztok 10 xxxx xxxx 100 xxxx chloroformem (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), x xxxx znovu xxxxxxxx tenkovrstvé chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx x xxxxxx xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx aflatoxinu B1 xx skvrnách extraktu xx xxxxxxx porovnáním xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxx X, D x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1
Viz xxx 5.6 xxxxxx X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxx 6 metody A.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx X.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. XXXXXXXX XXXXXXXX XX METOD X A X
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx xx xxxx xx přípravě podle xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. x. 40 až 60 °X).
X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx analytické xxxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorku.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xx. rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx laboratořemi xx stejného xxxxxx, xx odhaduje na:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1 x 10 μx/xx xx xx 20 μx/xx;
± 10 μg/kg xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
Xxxxxxx x xxxxxxx
