Sedmá xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. března 1976,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx společenství,
s ohledem xx xxxxxxxx Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx metod odběru xxxxxx x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx pozměněnou xxxxx x xxxxxxxxxxx [2], a xxxxxxx xx článek 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx kontroly krmiv, xxxxxxx cílem xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx právními x xxxxxxxxx předpisy x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx krmiv, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx Komise 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/XXX ze xxx 18. listopadu 1971 [4], 72/199/XXX xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx xxx 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/XXX ze xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX ze xxx 20. xxxxxxxx 1974 [8] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx prací xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Členské státy xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, pokud xxx x xxxxx aflatoxinu X1, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx této xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x části 1 (xxxx) xxxxxxx první xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx dne 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské státy xxxxxx x účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx informují Komisi.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
V Bruselu xxx 1. xxxxxx 1976.
Xx Xxxxxx
X. X. Lardinois
člen Xxxxxx
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Úř. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Úř. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
PŘÍLOHA
STANOVENÍ AFLATOXINU B1
A. XXXXXX JEDNOROZMĚRNÉ XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxx xxxxxxxx: podzemnice xxxxxx, xxxxx, xxxxx xxxxxx, xxxx, xxxxx, babassu xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, obiloviny a xxxxxxx x obilovin, xxxxxxxx xxxxx, bramborová xxxxx a xxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 ppb).
Pokud xxxx xxxxxxxx rušivé xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx X (dvourozměrná xxxxxxxxxxx chromatografie).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx chloroformem. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxx. Xxxxx xx odpaří x reziduum xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx roztoku xx podrobí tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx známými xxxxxxxxxx standardu xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 extrahovaného z xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx není xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx činidla xxxx xxx xxxxxxx "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx stabilizovaný 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, neobsahující xxxxxxxx.
3.6 Směs benzenu x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx částic 0,05 až 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, předem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, např. dusík.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) kyselina xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx X–XX xxxx ekvivalent, pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx aflatoxinu X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodu 7.
3.17 Xxxxxxxxxx roztok xxx xxxxxxxxx jakosti xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx B1 x X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx koncentrace xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxx tak, xxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx u xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Vyvíjecí xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.2 Diethylether (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), chromatografický xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/methanol (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx atmosférou;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), chromatografický tank x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx míchačka.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papíry, Schleicher x Schüll x. 588 nebo ekvivalentní, xxxxxx 24 cm.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, délka 300 xx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxx a 250 μx zásobníkem.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx odparka, x xxxxxx o xxxxxx 500 xx a xxxxxxx xxxx.
4.6 Erlenmeyerovy xxxxx x xxxxxx 500 ml, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx desky xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 200 x 200 xx, xx xxxxxxxx takto (xxxxxxx množství xxxxx xxx xxx desek): xxx 30 g xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky, xxxxxx 60 ml xxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx 1 minutu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx způsobem, xxx se vytvořila xxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx 0,25 mm. Xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx silikagel. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx desky xxxxx hodinu x xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako desky xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 UV xxxxx xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx záření xxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxx 1 ng xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Odměrné xxxxxxxx o xxxxxx 10 xx, x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 UV xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", část X xxx 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xxxx xxxxxx xxxxx s xxx x velikosti 1 xx (v souladu x xxxxxxxxxxx ISO X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 500 xx xxx 50 g xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Přidat 25 x křemeliny (3.14), 25 ml vody x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Zazátkovat, xxxxxxxxxxx nebo promíchávat 30 xxxxx xxxxxxxxx (4.2) x přefiltrovat xxxx skládaný xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, poté xxxxxx 50 ml.
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (4.4) vložit zátku x xxxx nebo xx xxxxxx xxxx (3.9), naplnit xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x xxxx xxxxxx 5 g síranu xxxxxxx (3.10).
Ověřit, xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x xxxx xxxxxx po xxxxxx dávkách 10 x silikagelu (3.8). Xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx odstranily vzduchové xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx stát, a xxxx xxxxxxx xxxxxx 15 x xxxxxx xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (5.2) xx 100 xx x-xxxxxx (3.3) x xxxx kvantitativně xxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx k hornímu xxxxxxx vrstvy xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx diethyletheru (3.5) x xxxxx nechat xxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx povrchu xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx postupu xxxx na xx, xxx rychlost xxxxxxx xxxx 8 až 12 xx xx xxxxxx x xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Poté xxxxxxx 150 xx xxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx xxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11) x xxxxxxx vakuové odparce (4.5) při xxxxxxx xxxxx xxx 50 °X. Reziduum kvantitativně xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx zkumavky x xxxxxx 10 xx (4.10). Xxxxxxxxxxxx roztok xxx proudem inertního xxxxx (3.11), a xxxx doplnit objem xx 2 xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 cm xx xxxxxx hrany x x xxxxxxxxx xx 2 xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků x extraktu:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx získaného xxxxx bodu 5.3 x k xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx získaného podle xxxx 5.3.
Chromatogram xx xxxxxx xx xxx xx xxxxxxx jednoho x xxxxxxxxxx rozpouštědel (3.18). Výběr rozpouštědla xx musí xxxxxxx xxxxxx nanesením 25 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxx a xxxx xx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx B1 x B2 při xxxxxxxx xxxxx odděleny.
Nechat xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxx a xxxx xxxxxx xxxxx XX xxxxxxx xx vzdálenosti 10 xx od xxxxx (4.9). Skvrny xxxxxxxxxx X1 modře xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení xx xxxxxxx buď xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx pokynů:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn standardního xxxxxxx. X případě xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx získaná překrytím xxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx fluorescence 10 ml xxxxxxxx x xxxxx být xxxxxxxxx více xxx xxxxx skvrna. Pokud xx intenzita xxxxxxxxxxxx 10 μl xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 40 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Fluorimetrické xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1 se xxxx fluorimetrem (4.12) xxx excitační vlnové xxxxx 365 xx x xxxxxx xxxxx 443 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 ve xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx porovnáním xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx B1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx provede takto:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx sírovou (3.13). Xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxx XX zářením xxxxxx x xxxxx xx xxxxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx zahrnující xxxxxx xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (aflatoxin B2a)
Poznámky:
Níže xxxxxxx xxxxxxxx postupy xx musí xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na obrázku 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx roztoků
Narýsovat xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 cm xx xxxxx strany), xxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx xxx rozpouštědel. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx kapilárních xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- v xxxx X: xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx podle bodu 5.3, který xxxxxxxx xxx 2,5 nm xxxxxxxxxx X1,
- x xxxxxx X x X: 25 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx vyvíjí xx použití xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx v xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx I, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx.
Xxxxxxx desku x xxxxx x nechat xxxxxxxx pět xxxxx xx xxx a xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx stříkat xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx x šířce 2,5 xx, který xxxxxxx xxxx X x X (xx xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), dokud xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx zbytek xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Nechat xxxxxxx 10 xxxxx xx tmě, x xxxx vysušit xxxxx xxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx rozpouštědla (3.18.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx ve xxxxx XX, dokud xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx desku x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx ve xxx x xxx pokojové xxxxxxx.
5.6.2.3 Interpretace chromatogramu
Pozorovat xxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxxx xxxxx:
x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx xx xxxxx X).
x) Objevení xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx) a xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx obě xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx x xxxx B (xxxxxxx xx xxxxx XX).
x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxx xxxxxxx x xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v bodu X. Poloha těchto xxxxx vychází jednak x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 od xxxx A xx xxxxx X (xxxxxx xxxxxxxxxx jako u xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X) x dále migrační xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx xx xxxx X xx xxxxx XX (xxxxxx xxxxxxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x xxxx X). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pocházejících x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x bodu X xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
6.1 Xx xxxxxxx vizuálních xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx vzorku (xxx) xx vypočítá xxxxxx vzorce:
S · X · X / X · X
xxx:
X x Y xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) a xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
X = konečný xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx použitý xxx xxxxxxxxxx na xxxxxx.
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxx (xxx) se xxxxxxxx xxxxxx vzorce:
S·V / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx nebo 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, v xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx (poměrně k xxxxxxx xxxxxxx Y) xxxxxxxx x xxxxxx;
X = konečný xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, s xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx koloně.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx standardní roztok xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), jehož xxxxxxxxxxx xx od 8 xx 10 μx/xx. Xxxxxxxx absorpční xxxxxxxx mezi 330 x 370 xx xx xxxxxxx spektrofotometru (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (X) při 363 xx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxx xxx 348 xx x xxxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech xx 1 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx:
xxx chloroformový roztok; 312 · A · 1 000 / 20&xxxx;600
312 · A · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 xxx roztok xx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu..
Ve tmě xxxxxxx xxxxxxxxx ředění x cílem získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1 xx asi 0,1 μg/ml. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx při 4 °C, xx xxxxx xx xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx (4.8) 5 μx standardního roztoku xxxxxxxxxxxx 8 až 10 μl aflatoxinu X1 na 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx v xxxx 5.4. Xxx XX xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx pouze xxxxx xxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx neměla xxx xxxxxxxx žádná xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, nesmí xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx aflatoxinu X1 xx 10 do 20 μx/xx,
- 5 μx absolutní xxxxxxx xxx xxxxxx od 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxx než 50 μg/kg.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", část C xxx 2.
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 x krmivech, xxxxx xxxxxxxxx xx oblasti xxxxxxxxxx metody X. Xxxxxx hranice pro xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 ppb). Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx a jeho xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxx. Eluát xx xxxxxx a xxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx ve xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx tohoto xxxxxxx xx podrobí xxxxxxxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx flourometricky srovnáním xx známým množstvím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx x krmiv xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx jinak, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx peroxidy.
3.6 Xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx chromatografii, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 mm.
3.9 Absorbent – vata, předem xxxxxxxxx chloroformem, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, např. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková 1 X.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxx roztoky.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda 94/4,5/1,5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Chloroform (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx atmosférou.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x kontrolovaný xxx xx xxxxxxx x xxxx 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 xxxxxx X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Příprava xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 x3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Pročištění xx xxxxxx |
5.4 Dvourozměrná xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx schématu xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx přímky xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx (6 cm xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx čel xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx desku xxxxxx kapilárních xxxxx xxxx injekčních xxxxxxxxxxxxxx xxxx roztoky:
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.3,
- x xxxx B: 20 μx standardního roztoku (3.16),
- x xxxx X: 10 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 20 μl standardního xxxxxxx (3.16),
- v xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Získané xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x chromatografickém xxxxx x nasycenou xxxxxxxxxx] ve xxx xx xxxxx X, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k vymezující xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x chromatografického xxxxx x nechat xxxxxxxx 15 xxxxx ve xxx x při xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx xxxxx XX, xxxxx xxxx rozpouštědla nedosáhne x vymezující linii. Xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx oschnout xx xxx a xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Ozářit xxxxxxxxxxxx UV xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xx vzdálenosti 10 cm xx xxxxx (4.9). Určit xxxxxx xxxxxxx fluoreskujících xxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxxxxxxx roztoku X, X, D x X. Xxxxxxxxx xxx pomyslné xxxxxx, xxxxx procházejí xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx směry. Průsečík X těchto přímek xxxxxx xxxxx, xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 pocházející x xxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx v xxxx X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx xxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 xxxx xxxx xxx x xxxx X xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx svírajících xxxx asi 100 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx B x X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx, xxx xx uvedeno x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.8) xxx přímky rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx ve xxxxxxxx xx obrázku 1, x xxxxxx na xxx X (viz xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxx podle bodu 5.3, a x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx jak je xxxxxxx x bodu 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxx:
- xx skvrny xxxxxxxxxx X1 z extraktu x ze standardního xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx se vyvinula x bodu Q xx xxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx X, X a X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx fluorescence 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx 40 μx standardního roztoku, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x poté xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx B1 xx změří xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx a xxxxxx xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx X, D x E xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1
Viz bod 5.6 xxxxxx X.
6. Xxxxxxx výsledků
Viz xxx 6 metody X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx X.
8. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", část X xxx 2.
X. POZNÁMKY XXXXXXXX SE METOD X X B
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx xx xxxx xx přípravě xxxxx xxxx 5.1 odtučnit xxxxxxxxxxxxx (b. x. 40 až 60 °X).
X takových případech xxxx být analytické xxxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků, xx. xxxxxx mezi xxxxxxxx získanými dvěma xxxx xxxx laboratořemi xx stejného vzorku, xx xxxxxxxx xx:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1 x 10 μx/xx xx do 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx vyšší xxx 50 μx/xx.
Xxxxxxx x xxxxxxx
