Xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Rady xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx odběru xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv [1], naposledy xxxxxxxxxx xxxxx o přistoupení [2], x zejména xx článek 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxx, že xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx cílem xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisy x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x složení xxxxx, xx xxxxxxxxx podle xxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/EHS xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/XXX xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx xxx 5. prosince 1972 [6], 74/203/XXX xx xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX xx dne 20. xxxxxxxx 1974 [8] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že s xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx nutné xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem k xxxx, že opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu se xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxxx X1, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx této xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení uvedená x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx části xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x analýze, se xxxxxxx pro metody xxxxxxx x příloze xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu s xxxxx směrnicí nejpozději xx 1. xxxxx 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Článek 3
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
X Bruselu xxx 1. března 1976.
Xx Xxxxxx
X. X. Lardinois
člen Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. věst. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. věst. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Úř. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. věst. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX AFLATOXINU B1
A. XXXXXX JEDNOROZMĚRNÉ TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx metoda umožňuje xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 x těchto xxxxxxxx: podzemnice olejná, xxxxx, xxxxx xxxxxx, xxxx, xxxxx, xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, obiloviny x xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx, bramborová xxxxx a xxxxx. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx je 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx rušivé xxxxx, které xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxx X (dvourozměrná xxxxxxxxxxx chromatografie).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se filtruje x jeho xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x přečistí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxx. Xxxxx xx odpaří x xxxxxxxx se xxxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx chloroformu xxxx xx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx tohoto roztoku xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx X1 se xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx známými xxxxxxxxxx standardu aflatoxinu X1. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 extrahovaného x xxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx není xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxx "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Směs xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) xxxxxxxx sírová.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Silikagel G–HR xxxx ekvivalent, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x zkontrolovaný, xxx xx uvedeno x bodu 7.
3.17 Xxxxxxxxxx roztok xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 x X2 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx benzenu x acetonitrilu (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxx tak, xxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx aflatoxinů.
3.18 Vyvíjecí xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), chromatografický tank x xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s nasycenou xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nasycenou xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Drtič – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Skládané xxxxxxxxx xxxxxx, Schleicher x Schüll x. 588 xxxx ekvivalentní, xxxxxx 24 cm.
4.4 Xxxxxxxx chromatografická trubice (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, xxxxx 300 xx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 250 μx zásobníkem.
4.5 Rotační xxxxxxx odparka, x xxxxxx x xxxxxx 500 ml a xxxxxxx xxxx.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Zařízení xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 200 x 200 xx, xx připraví xxxxx (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxx xxxxx): xxx 30 g xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Erlenmeyerovy xxxxx, xxxxxx 60 ml xxxx, zazátkovat a xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx se vytvořila xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx x poté xxxxxxx v desikátoru xxxxxxxxxxx silikagel. Před xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx k xxxxxxx jsou xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 UV lampa xxxxxxxxxxx (360 mm). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx B1 na xxxxx pro tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx byla xx xxxxxxxxxx 10 cm xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 ml, s xxxxxxxxxxxxxxxx zátkami.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (volitelný).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku (xxx "Xxxxxxxx", část X xxx 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx způsobem, xxx celý xxxxxx xxxxx x oky x xxxxxxxxx 1 xx (x souladu x xxxxxxxxxxx ISO X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 500 xx xxx 50 g xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx 25 x křemeliny (3.14), 25 xx vody x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx filtrační xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 ml xxxxxxxx, xxxx xxxxxx 50 xx.
5.3 Přečištění xx xxxxxx
Xx spodní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (4.4) xxxxxx xxxxx x xxxx xxxx xx xxxxxx xxxx (3.9), naplnit xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x xxxx xxxxxx 5 x xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, že xxxxx povrch xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, a xxxx přidat xx xxxxxx dávkách 10 x silikagelu (3.8). Xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx zamíchat, xxx xx xxxxxxxxxx vzduchové xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx stát, x xxxx xxxxxxx xxxxxx 15 x xxxxxx xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx klesnout xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx podle bodu (5.2) xx 100 xx x-xxxxxx (3.3) x směs xxxxxxxxxxxxx xxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx kapalinu xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx povrchu xxxxxx síranu sodného. Xxxxx tohoto xxxxxxx xxxx xx xx, xxx xxxxxxxx průtoku xxxx 8 až 12 ml xx xxxxxx a aby xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Poté xxxxxxx 150 ml xxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx (3.7) a xxxxxx celý xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx sucha xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5) při xxxxxxx xxxxx xxx 50 °X. Xxxxxxxx kvantitativně xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 xx (4.10). Koncentrovat xxxxxx xxx xxxxxxx inertního xxxxx (3.11), x xxxx xxxxxxx xxxxx xx 2 ml xx xxxxxxx chloroformu (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x acetonitrilu (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 cm xx xxxxxx xxxxx x x odstupech xx 2 cm tyto xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3 x x xxxx 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx získaného podle xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx tmě xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18). Xxxxx xxxxxxxxxxxx xx musí xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx jakostního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxx a xxxx xx ověřit, xxx xxxx xxxxxxxxxx B1 x X2 xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx ve xxx a xxxx xxxxxx desku UV xxxxxxx xx vzdálenosti 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx pokynů:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x intenzitou xxxxxxxxxxxx xxxxx standardního xxxxxxx. X případě xxxxxxx se interpoluje. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx přes standardní xxxxxx musí xxx xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx 10 xx extraktu x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx skvrna. Pokud xx intenzita fluorescence 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxx než intenzita xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu a xxxxxxxxxxxx (3.6) a xxxx znovu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Fluorimetrické xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx vlnové xxxxx 365 nm x xxxxxx xxxxx 443 xx. Množství xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx extraktu xx xxxxxxx xxxxxxxxxx jejich xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x extraktu xx xxxxxxx takto:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx získaný xxxxx xxxx 5.4 nastříkat xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxx X1 se musí xxx XX xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxx.
5.6.2 Dvourozměrná xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx tvorbu xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na obrázku 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx roztoků
Narýsovat xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx dvěma xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx strany), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx injekčních xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- v xxxx A: objem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3, xxxxx xxxxxxxx xxx 2,5 nm xxxxxxxxxx X1,
- x xxxxxx B x X: 25 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx vyvíjí xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx směru X, xxxxx čelo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx z xxxxx a nechat xxxxxxxx pět xxxxx xx tmě a xxx pokojové xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx kyselinu xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx x xxxxx 2,5 xx, který xxxxxxx xxxx A x X (xx xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx zbytek xxxxx je chráněn xxxxxxx xxxxxxx. Nechat xxxxxxx 10 minut xx tmě, a xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx vzduchu xxx xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x chromatografickém xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx xxxxx XX, dokud xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x xxxxxxxxxx linii. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx oschnout xxx xxxxx xx xxx x při pokojové xxxxxxx.
5.6.2.3 Interpretace chromatogramu
Pozorovat xxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx tyto znaky:
a) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztoku naneseného x bodu X (xxxxxxx xx směru X).
x) Objevení se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 (xxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx) a xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx obě xxxxxx pocházejí xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx naneseného x xxxx B (xxxxxxx xx xxxxx XX).
x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxx popsány x xxxx x), pocházejících xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X. Xxxxxx těchto xxxxx vychází jednak x migrační xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxx A xx xxxxx I (xxxxxx xxxxxxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x xxxx C) x xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 – hemiacetalu xx xxxx X xx xxxxx II (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x xxxx B). Xxxxxxxxxxxxx intenzity xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x ze xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X xx xx měly xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
6.1 Xx xxxxxxx vizuálních xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech xx 1 kg xxxxxx (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X · X · V / X · X
xxx:
X a X xxxx xxxxxxxxx objemy xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) x extraktu, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx fluorescence;
S = xxxxxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
X = xxxxxxx objem xxxxxxxx v mikrolitrech, x xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx x xxxxxxx, s xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x mikrogramech na 1 xx vzorku (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx vzorce:
S·V / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx xxxx 20 μx);
X = množství xxxxxxxxxx B1, v xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx (poměrně x xxxxxxx hodnotě X) xxxxxxxx z xxxxxx;
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx x gramech, x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx je xx 8 xx 10 μx/xx. Stanovit xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 330 x 370 xx xx použití xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (X) xxx 363 xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxx xxx 348 xx x xxxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1 x mikrogramech xx 1 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx; 312 · X · 1 000 / 20&xxxx;600
312 · A · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 xxx roztok xx směsi benzenu x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x cílem xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx koncentrace aflatoxinu X1 je xxx 0,1 μx/xx. Pokud xx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx při 4 °X, xx xxxxx xx dobu xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx na xxxxx (4.8) 5 μx standardního roztoku xxxxxxxxxxxx 8 až 10 μx aflatoxinu X1 xx 1 xx (7.1). Vyvinout xxxxxxxxxxxx, jak je xxxxxxx v xxxx 5.4. Xxx XX xxxxxx by měla xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx skvrna a x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx neměla xxx xxxxxxxx žádná xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx 10 xx 20 μg/kg,
- 5 μx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xx 20 do 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx než 50 μg/kg.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx C xxx 2.
B. XXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX CHROMATOGRAFIE
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje stanovit xxxxx aflatoxinu X1 x krmivech, které xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx X. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx je 0,01 xx/xx (10 xxx). Xxxx xxxxxx se xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx část se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxx. Eluát xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx objemu chloroformu xxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx aflatoxinu X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxx potvrzena xxxxxxxxxx postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxx "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) ethanolu.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx peroxidy.
3.6 Xxxx xxxxxxx a acetonitrilu: 98/2 (V/V).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 mm.
3.9 Absorbent – vata, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Síran xxxxx, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, např. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 Křemelina (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx kyselinou.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX nebo xxxxxxxxxx, xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxx roztoky.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (V/V), chromatografický xxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μg aflatoxinu X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx je xxxxxxx x bodu 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 metody X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx body 5.1, 5.2 x3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně |
5.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx obrázku 1)
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx pipet xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- x xxxx A: 20 μx xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3,
- x xxxx B: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- v bodu X: 10 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x bodu X: 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx E: 40 μx standardního roztoku (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx inertního xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx na obrázku 1)
Xxxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx použití xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x tloušťce 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nasycenou xxxxxxxxxx] xx tmě xx xxxxx X, xxxxx čelo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx desku x chromatografického tanku x xxxxxx oschnout 15 minut ve xxx a při xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx rozpouštědla (3.15.1) [xxxxxx o xxxxxxxx 1 cm x chromatografickém tanku x nenasycenou atmosférou] xx xxx xx xxxxx II, dokud xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx linii. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx ve xxx x xxx xxxxxxxx teplotě.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx obrázku 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx xxxxxxx fluoreskujících xxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X, C, X x X. Načrtnout xxx pomyslné xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx s xxxxxxxxxx směry. Průsečík X xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxx xxx xxxxxxxx skvrnu xxxxxxxxxx B1 pocházející x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxx X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxx xxxx xxx x xxxx X umístěném xx průsečíku xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx asi 100 xxxxxx x protínajících xxxx X a X. Množství aflatoxinu X1 x xxxxxxxx xxxxxx xx stanoví, xxx xx uvedeno x bodu 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx na xxxxx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1, x xxxxxx na xxx A (xxx xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx podle bodu 5.3, x k xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16). Xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x bodu 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx zda:
- xx skvrny xxxxxxxxxx X1 z extraktu x ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- fluorescence xxxxxx skvrn je xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu B1, xxxxx xx xxxxxxxx x xxxx Q xx první desce.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení xx xxxxxxxxxx vizuálně xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx skvrn C, X a X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxxx silnější xxx intenzita 40 μx standardního xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x poté xxxxx xxxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxx fluorimetrem (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx x emisní xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx skvrnách extraktu xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx X, D x E xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx B1
Viz xxx 5.6 xxxxxx A.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxx 6 xxxxxx A.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx bod 8 xxxxxx X.
8. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. XXXXXXXX XXXXXXXX SE XXXXX X X X
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx xx xxxx xx xxxxxxxx podle xxxx 5.1 odtučnit xxxxxxxxxxxxx (x. v. 40 až 60 °X).
X takových případech xxxx xxx analytické xxxxxxxx vyjádřeny xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorku.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xx. rozdíl mezi xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku, xx xxxxxxxx xx:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1 x 10 μx/xx xx do 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx střední xxxxxxx od 20 xx 50 μg/kg;
± 20 % střední xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
Xxxxxxx k xxxxxxx
