Xxxxx xxxxxxxx Komise
ze xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx se stanoví xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx společenství,
s ohledem xx směrnici Rady xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx metod odběru xxxxxx a analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx xxxxx x přistoupení [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx stanoví, že xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx dodržování požadavků xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x složení krmiv, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx xxx 15. července 1971 [3], 71/393/EHS ze xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/XXX xx dne 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx xxx 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/EHS xx xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1974 [8] xxx xxxxxxxxx xxxx analytických metod Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem k xxxx, že opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxxx X1, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx popsaných x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/EHS xx dne 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx části xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x analýze, se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx směrnice.
Článek 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx nezbytné pro xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx informují Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx dne 1. xxxxxx 1976.
Za Xxxxxx
X. X. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. věst. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. věst. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX X1
X. XXXXXX JEDNOROZMĚRNÉ XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx obsah xxxxxxxxxx X1 x xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxxx olejná, xxxxx, xxxxx xxxxxx, xxxx, xxxxx, xxxxxxx xxxxx x kukuřičné xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, které xxxxxxx xxxxxxxxx, je nutné xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografie).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se filtruje x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x přečistí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx stanoveném xxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu. Alikvotní xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx x chromatogramu pod XX xxxxxxx buď xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx známými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 extrahovaného x xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx není stanoveno xxxxx, xxxxxxx činidla xxxx xxx čistoty "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 procentem 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Methanol.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Směs benzenu x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (V/V).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Inertní xxxx, např. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková 1 X.
3.13 50 % (X/X) xxxxxxxx sírová.
3.14 Xxxxxxxxx (hyflosupercel), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx G–HR xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Standardní xxxxxx obsahující xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx jakosti xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx B1 a X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxx xxx, aby xx xxxxxxx stejná xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx u xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Vyvíjecí xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x nenasycenou atmosférou;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), chromatografický xxxx x nasycenou xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/methanol (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx atmosférou;
3.18.5 Chloroform (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papíry, Xxxxxxxxxx x Xxxüxx č. 588 nebo xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 cm.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, xxxxx 300 xx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Rotační xxxxxxx xxxxxxx, x xxxxxx x xxxxxx 500 xx a xxxxxxx xxxx.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 500 xx, xx xxxxxxxxxxx zátkami.
4.7 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx desky xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii, 200 x 200 xx, xx xxxxxxxx takto (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxx desek): xxx 30 x xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx 60 xx xxxx, xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx 1 minutu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x poté xxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Před xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx vyhovující, xxxxx xxxxxxxx podobné xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx podle uvedeného xxxxxxx.
4.9 UV xxxxx xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx dostatečná, aby xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx X1 na xxxxx pro tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx byla xx xxxxxxxxxx 10 cm xx xxxxx ještě xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx o objemu 10 xx, x xxxxxxxxxxxxxxxx zátkami.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx celý xxxxxx xxxxx x oky x velikosti 1 xx (x xxxxxxx x doporučením XXX X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx 25 x křemeliny (3.14), 25 ml xxxx x 250 ml xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Odstranit xxxxxxx 10 ml xxxxxxxx, xxxx xxxxxx 50 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně
Do xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) xxxxxx zátku x xxxx xxxx xx skelné vaty (3.9), xxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x xxxx xxxxxx 5 g síranu xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxx rovný, x xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 10 x xxxxxxxxxx (3.8). Xx každém přidání xxxxxxx zamíchat, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Nechat 15 xxxxx xxxx, x xxxx opatrně xxxxxx 15 x xxxxxx xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx klesnout až x hornímu xxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx extraktu xxxxxxxxx podle bodu (5.2) xx 100 xx x-xxxxxx (3.3) x xxxx kvantitativně xxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x hornímu xxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx diethyletheru (3.5) x znovu xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx až x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx síranu sodného. Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xx, xxx rychlost xxxxxxx xxxx 8 xx 12 xx xx xxxxxx a xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx kapalinu. Xxxx xxxxxxx 150 ml xxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx xxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11) x xxxxxxx vakuové xxxxxxx (4.5) xxx teplotě xxxxx xxx 50 °X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 xx (4.10). Koncentrovat roztok xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11), x xxxx xxxxxxx xxxxx xx 2 xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 xx xx xxxxxx xxxxx a x xxxxxxxxx po 2 xx xxxx xxxxxx standardních roztoků x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3 x x tomu 20 μx standardního xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxx xx xxxxxxx xxxxxxx x vyvíjecích xxxxxxxxxxxx (3.18). Xxxxx rozpouštědla xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x xxxx xx xxxxxx, zda xxxx xxxxxxxxxx X1 x B2 při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx odpařit ve xxx x poté xxxxxx xxxxx XX xxxxxxx ze vzdálenosti 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx X1 modře xxxxxxxxxxx.
5.5 Kvantitativní xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx fluorimetricky xxxxx těchto xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn standardního xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx získaná xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx 10 xx extraktu x xxxxx xxx xxxxxxxxx více xxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx fluorescence 10 μl xxxxxxxx xxxxxxxx než intenzita xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, rozředit xxxxxxx 10 krát xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) a xxxx znovu podrobit xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Fluorimetrické xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxx B1 xx xxxx fluorimetrem (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx x xxxxxx xxxxx 443 nm. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx fluorescence x xxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu B1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v extraktu xx xxxxxxx takto:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx získaný podle xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx skvrn aflatoxinu X1 se musí xxx XX xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx žlutou.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 - xxxxxxxxxxx (aflatoxin X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx pracovní xxxxxxx xx musí xxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Nanesení roztoků
Narýsovat xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx k vymezení xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx kapilárních pipet xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx roztoky:
- x xxxx X: xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3, který obsahuje xxx 2,5 nm xxxxxxxxxx B1,
- x xxxxxx B x X: 25 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx použití xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx] ve xxx xx směru X, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx pět xxxxx xx tmě x xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx kyselinu xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx x xxxxx 2,5 cm, xxxxx xxxxxxx xxxx X x X (xx xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, přičemž xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx papírem. Xxxxxx xxxxxxx 10 minut xx tmě, a xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx vzduchu při xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nenasycenou atmosférou] xx tmě xx xxxxx II, xxxxx xxxx rozpouštědla nedosáhne x vymezující xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx (4.9) a xxxxxx xxxx xxxxx:
x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny aflatoxinu X1 pocházející ze xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx xx směru X).
x) Xxxxxxxx xx xxxxx fluoreskující xxxxxx xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx s kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxxxx xxxxx fluoreskující skvrny xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, přičemž obě xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X (xxxxxxx xx xxxxx XX).
x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxx xxxxxxx x xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X. Xxxxxx těchto xxxxx vychází xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx X xx xxxxx X (stejná xxxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X) x xxxx migrační xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx xx xxxx A xx xxxxx XX (stejná xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x bodu X). Xxxxxxxxxxxxx intenzity xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx a ze xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Výpočet výsledků
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxx (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X · X · X / X · X
xxx:
X x X xxxx příslušné xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) a extraktu, xxxxx má xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxx xx 1 ml, xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxxxxx roztoku (3.16);
V = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x mikrolitrech, x xxxxxxx xx xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x gramech, s xxxxxxx xx objem xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx koloně.
6.2 Xx xxxxxxx fluorimetrického xxxxxx
Xxxxx aflatoxinu B1 x mikrogramech xx 1 xx vzorku (xxx) se xxxxxxxx xxxxxx vzorce:
S·V / X·X
xxx:
X = objem xxxxxxxx, x mikrolitrech, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx nebo 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1, v xxxxxxxxxxx, xx skvrně xxxxxxxx (xxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxx Y) xxxxxxxx z xxxxxx;
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx x xxxxxxx, s xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx xx koloně.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx standardní roztok xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx je od 8 xx 10 μx/xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 330 x 370 nm xx xxxxxxx spektrofotometru (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (X) xxx 363 xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxx 348 xx x případě xxxxxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx roztok; 312 · X · 1 000 / 20&xxxx;600
312 · A · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 xxx xxxxxx xx směsi benzenu x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx ředění x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pracovní roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx asi 0,1 μx/xx. Pokud xx roztok xxxxxxxx x chladničce xxx 4 °C, xx xxxxx xx dobu xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx čistoty
Nanést na xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 xx 10 μx xxxxxxxxxx X1 na 1 xx (7.1). Vyvinout xxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.4. Xxx XX xxxxxx by měla xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x x místě xxxxxxxxx xxxxxxxx by neměla xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx výsledku pro xxxxxx aflatoxinu X1 xx 10 xx 20 μg/kg,
- 5 μx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxx než 50 μx/xx.
9. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
B. METODA XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx a rozsah
Tato xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu B1 x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx oblasti xxxxxxxxxx metody X. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 ppb). Xxxx xxxxxx se xxxxxxxxx xxx krmiva xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pulpu.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x jeho xxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx a přečistí xxxxxxxxx chromatografií xx xxxxxxxxxx. Eluát se xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx chloroformu xxxx xx směsi xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx část xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx flourometricky xxxxxxxxx xx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx x krmiv xxxx být potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx čistoty "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Chloroform xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) ethanolu.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (V/V).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – vata, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Síran xxxxx, bezvodý, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx G–HR xxxx xxxxxxxxxx, xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Vyvíjecí roztoky.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/voda 94/4,5/1,5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Chloroform (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx obsahující asi 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx je uvedeno x bodu 7 xxxxxx A.
4. Přístroje
Viz xxx 4 metody X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Příprava xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 x3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Extrakce |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně |
5.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografie
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxx xx desku (4.8) xxx přímky xxxxxxxxxx xx dvěma přilehlými xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx desku xxxxxx xxxxxxxxxxx pipet xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx roztoky:
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx získaného podle xxxx 5.3,
- v xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 10 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16),
- x xxxx X: 20 μl standardního xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx proudem xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Získané xxxxxx xxxx mít xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx na obrázku 1)
Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx I, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Vyjmout desku x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx oschnout 15 xxxxx xx xxx a xxx xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx xxxxxxxx ve xxx a xxx xxxxxxxx teplotě.
5.4.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx (xxxxx schématu xx xxxxxxx 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx modrých xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx standardního xxxxxxx X, C, X x X. Načrtnout xxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x svírají xxxxx úhel s xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx X xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxx xxxx xxx v xxxx Q xxxxxxxxx xx průsečíku xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx asi 100 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx X x X. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx, xxx xx uvedeno x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1, x nanést xx xxx A (viz xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx podle xxxx 5.3, a k xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx xxx je xxxxxxx v xxxx 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxx:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- fluorescence xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx xx vyvinula x xxxx X xx první xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescence xxxxx extraktu x xxxxxxxxxx skvrn C, X x E xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx fluorescence 20 μx xxxxxxxx silnější xxx xxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku, xxxxxx roztok 10 xxxx nebo 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx měření
Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 xx změří xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx excitační xxxxxx xxxxx 365 xx a emisní xxxxxx délce 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx intenzity xxxxxx xxxxxxxx x intenzitou xxxxx X, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Potvrzení xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1
Viz xxx 5.6 xxxxxx A.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxx 6 xxxxxx A.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx A.
8. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
C. XXXXXXXX XXXXXXXX XX XXXXX X X X
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx obsahující xxxx xxx 5 % xxxx xx musí xx xxxxxxxx podle xxxx 5.1 odtučnit xxxxxxxxxxxxx (x. v. 40 xx 60 °X).
X xxxxxxxx případech xxxx xxx analytické xxxxxxxx vyjádřeny jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorku.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xx. rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku, xx xxxxxxxx xx:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx pro střední xxxxxxx xxxxxxxxxx B1 x 10 μx/xx xx do 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx xxxxxxx střední xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx od 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx pro střední xxxxxxx vyšší xxx 50 μg/kg.
Dodatek k xxxxxxx
