Xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx se stanoví xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Smlouvu x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx směrnici Rady xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx x analytických xxxxx Společenství xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx pozměněnou xxxxx x xxxxxxxxxxx [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxx, že uvedená xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx požadavků xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisy a xxxxxxxxxx xx jakosti x xxxxxxx xxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x analytických metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx Komise 71/250/XXX xx xxx 15. července 1971 [3], 71/393/XXX xx xxx 18. listopadu 1971 [4], 72/199/XXX xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX ze xxx 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/XXX xx xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX xx xxx 20. prosince 1974 [8] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx na stav xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem x xxxx, že xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Článek 1
Členské státy xxxxxxx, že analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx jde x xxxxx xxxxxxxxxx X1, xx xxxxxxxxx xxxxx metod xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx první xxxxxxxx Komise 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxxxx 1971, s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 1. října 1976. Neprodleně x xxxx informují Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu xxx 1. xxxxxx 1976.
Xx Xxxxxx
X. J. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. věst. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Úř. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Úř. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Úř. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Úř. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX X1
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Účel a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxx xxxxxxxx: podzemnice olejná, xxxxx, xxxxx xxxxxx, xxxx, sezam, xxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx z xxxxxxxx, xxxxxxxx mouka, xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx chloroformem. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx kolonovou xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x reziduum se xxxxxxxx xx stanoveném xxxxxx chloroformu xxxx xx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu. Alikvotní xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Množství aflatoxinu X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx pod XX světlem xxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aflatoxinu X1. Identita aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx musí být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx stanoveno xxxxx, xxxxxxx činidla xxxx být čistoty "x. a".
3.1 Aceton.
3.2 Xxxxxxxxxx stabilizovaný 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Methanol.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, neobsahující xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost xxxxxx 0,05 až 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx odtučněná xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková 1 X.
3.13 50 % (X/X) kyselina xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx G–HR xxxx xxxxxxxxxx, pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxx 0,1 μx aflatoxinu X1 na 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx a zkontrolovaný, xxx xx xxxxxxx x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx B1 x X2 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx koncentrace xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxx xxx, aby xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx fluorescence u xxxx aflatoxinů.
3.18 Vyvíjecí xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Chloroform (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda: 96/3/1 (X/X), chromatografický tank x xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), chromatografický xxxx s nasycenou xxxxxxxxxx;
3.18.4 Chloroform (3.2)/methanol (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), chromatografický tank x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papíry, Xxxxxxxxxx x Schüll x. 588 nebo ekvivalentní, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx chromatografická trubice (xxxxxxx průměr 22 xx, délka 300 xx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Rotační xxxxxxx xxxxxxx, x xxxxxx x xxxxxx 500 xx x xxxxxxx dnem.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx, se xxxxxxxxxxx zátkami.
4.7 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii, 200 x 200 mm, xx xxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx pět xxxxx): xxx 30 x xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Erlenmeyerovy xxxxx, xxxxxx 60 xx xxxx, xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx suspenzi na xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstva x xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx silikagel. Před xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx k xxxxxxx jsou vyhovující, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 XX xxxxx xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx byla xx xxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx xxxxx xxxxx rozeznatelná.
4.10 Odměrné xxxxxxxx x xxxxxx 10 xx, x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Fluorimetr (volitelný).
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx (xxx "Poznámky", xxxx X bod 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx s xxx x xxxxxxxxx 1 xx (x souladu x doporučením ISO X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx x homogenizovaného xxxxxx. Xxxxxx 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 ml xxxx x 250 ml xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx (4.2) a xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Odstranit xxxxxxx 10 ml xxxxxxxx, xxxx xxxxxx 50 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně
Do spodní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (4.4) xxxxxx xxxxx x xxxx nebo xx xxxxxx xxxx (3.9), naplnit xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x xxxx xxxxxx 5 x síranu xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, xx xxxxx povrch xxxxxx xxxxxx sodného je xxxxx xxxxx, x xxxx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxx 10 x silikagelu (3.8). Xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxx vzduchové xxxxxxx. Nechat 15 xxxxx stát, x xxxx opatrně přidat 15 x xxxxxx xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného.
Smíchat 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bodu (5.2) xx 100 xx x-xxxxxx (3.3) x xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx k hornímu xxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxx. Přidat 100 xx diethyletheru (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx síranu sodného. Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx to, xxx rychlost průtoku xxxx 8 až 12 ml za xxxxxx x aby xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx kapalinu. Poté xxxxxxx 150 ml xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx xxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxx proudem xxxxxxxxx xxxxx (3.11) v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5) při xxxxxxx xxxxx než 50 °X. Xxxxxxxx kvantitativně xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 ml (4.10). Koncentrovat roztok xxx proudem inertního xxxxx (3.11), a xxxx xxxxxxx xxxxx xx 2 xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) nebo směsi xxxxxxx x acetonitrilu (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx (4.8) nanést 2 cm xx xxxxxx xxxxx a x odstupech po 2 xx xxxx xxxxxx standardních roztoků x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.3 x x tomu 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μl xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.
Chromatogram xx xxxxxx xx xxx xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx rozpouštědel (3.18). Xxxxx rozpouštědla xx xxxx provést xxxxxx nanesením 25 μx jakostního standardního xxxxxxx (3.1) xx xxxxx a xxxx xx xxxxxx, zda xxxx xxxxxxxxxx X1 x B2 xxx xxxxxxxx zcela xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx odpařit ve xxx x xxxx xxxxxx xxxxx UV xxxxxxx ze vzdálenosti 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení xx xxxxxxx buď xxxxxxxx xxxx fluorimetricky xxxxx těchto pokynů:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství aflatoxinu X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx překrytím xxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx 10 ml xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx více než xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx fluorescence 10 μx extraktu xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, rozředit xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx xxxxx podrobit xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxx B1 se xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx vlnové xxxxx 365 nm x xxxxxx xxxxx 443 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx jejich xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx skvrn standardního xxxxxxx aflatoxinu X1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx kyselinou sírovou
Na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 nastříkat xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxx XX xxxxxxx xxxxxx z modré xx žlutou.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx tvorbu xxxxxxxxxx B1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx pracovní xxxxxxx xx musí provádět xxxxxx podle schématu xxxxxxxx na xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx k vymezení xxxxxxx xxx rozpouštědel. Xxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- x xxxx A: xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3, xxxxx xxxxxxxx xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx X1,
- x xxxxxx B a X: 25 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx použití vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x tloušťce 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx] ve xxx xx xxxxx X, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx a nechat xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx kyselinu xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx x šířce 2,5 xx, xxxxx xxxxxxx body A x X (na xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), dokud xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx xx chráněn xxxxxxx papírem. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx tmě, a xxxx xxxxxxx desku xxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x chromatografickém tanku x nenasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx II, dokud xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující linii. Xxxxxxx desku x xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxx x xxx pokojové xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx chromatogramu
Pozorovat xxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx tyto znaky:
a) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx xx xxxxx X).
x) Xxxxxxxx xx xxxxx fluoreskující skvrny xxxxxxxxxx X1 (který xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx) a xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, přičemž obě xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx B (xxxxxxx xx xxxxx XX).
x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxx xxxxxxx v xxxx b), xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx extraktu xxxxxxxxxx x xxxx X. Poloha xxxxxx xxxxx vychází xxxxxx x migrační vzdáleností xxxxxxxxxx B1 od xxxx X xx xxxxx X (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx C) x xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx aflatoxinu X1 – xxxxxxxxxxx xx xxxx X ve xxxxx XX (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X xx si měly xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx aflatoxinu X1 x mikrogramech na 1 kg vzorku (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X · X · X / X · X
xxx:
X a Y xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxxxxxx (3.16) x extraktu, xxxxx má stejnou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxx X1 ve xxxxxxxxxxx roztoku (3.16);
X = konečný xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x ohledem xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx xx objem xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx na xxxxxx.
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx aflatoxinu X1 x mikrogramech xx 1 xx xxxxxx (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, x mikrolitrech, xxxxxxxxxxxx desku (10 μx xxxx 20 μx);
X = množství xxxxxxxxxx X1, v xxxxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxx X) xxxxxxxx z xxxxxx;
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 v xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6), jehož xxxxxxxxxxx xx xx 8 xx 10 μx/xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 330 x 370 xx xx xxxxxxx spektrofotometru (4.11).
Xxxxxx optickou xxxxxxx (X) xxx 363 xx x případě xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx 348 xx x xxxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v mikrogramech xx 1 xx xxxxxxx pomocí tohoto xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx; 312 · X · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · X · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 xxx roztok xx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu..
Ve xxx xxxxxxx xxxxxxxxx ředění x xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 je xxx 0,1 μx/xx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x chladničce xxx 4 °X, je xxxxx xx xxxx xxxx týdnů.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx (4.8) 5 μx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 až 10 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx (7.1). Vyvinout xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxx 5.4. Xxx XX xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx pouze xxxxx skvrna x x xxxxx původního xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx analytik, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx aflatoxinu X1 xx 10 do 20 μx/xx,
- 5 μx xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxx xxx 50 μg/kg.
9. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", xxxx C xxx 2.
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ CHROMATOGRAFIE
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu B1 x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx A. Xxxxxx hranice pro xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 ppb). Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx x jeho xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x přečistí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx ve směsi xxxxxxx x acetonitrilu. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx podrobí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx buď vizuálně xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx x krmiv xxxx xxx potvrzena xxxxxxxxxx postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx čistoty "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Diethylether, bezvodý, xxxxxxxxxxxx peroxidy.
3.6 Xxxx xxxxxxx x acetonitrilu: 98/2 (V/V).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 až 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – vata, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx vata.
3.10 Xxxxx xxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 Křemelina (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Vyvíjecí roztoky.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (X/X), chromatografický xxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx.
3.15.2 Chloroform (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou.
3.16 Standardní xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxx xx uvedeno x xxxx 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 metody X.
5. Postup
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 x3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Extrakce |
|
|
5.3 Pročištění xx koloně |
5.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografie
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx schématu xx obrázku 1)
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx každé strany), xxxxxx k vymezení xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx pipet xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3,
- x xxxx X: 20 μx standardního xxxxxxx (3.16),
- v bodu X: 10 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16),
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo inertního xxxxx (3.11). Získané xxxxxx xxxx xxx xxxxxx asi 5 xx.
5.4.2 Vyvíjení (xxxxx xxxxxxxx xx obrázku 1)
Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx použití xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx směru X, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx 15 minut ve xxx x při xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx rozpouštědla (3.15.1) [xxxxxx o xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou] xx xxx xx xxxxx XX, dokud xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x vymezující xxxxx. Xxxxxxx desku z xxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx xxxxxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx modrých fluoreskujících xxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X, X, X x X. Načrtnout xxx xxxxxxxx přímky, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxx s xxxxxxxxxx xxxxx. Průsečík X xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxx xxx xxxxxxxx skvrnu xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (obrázek 1). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 však xxxx xxx v xxxx X xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx 100 xxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxx X x X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x extraktu xxxxxx xx stanoví, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx chromatografie
Narýsovat xx xxxxx desku (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx, jak je xxxxxxx xx xxxxxxxx xx obrázku 1, x nanést na xxx A (xxx xxxxxxx 1) 20 μx přečištěného xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxxxx bodu 5.3, x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16). Xxxxxxx jak xx xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Ozářit xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x ověřit xxx:
- xx xxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx překrývají,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1, xxxxx se vyvinula x xxxx X xx xxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx vizuálně nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx skvrn X, X a E xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx 40 μx standardního roztoku, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x poté xxxxx xxxxxxxx tenkovrstvé chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx x xxxxxx xxxxxx délce 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx skvrnách extraktu xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx skvrny xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx C, D x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Potvrzení xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1
Viz xxx 5.6 xxxxxx X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx bod 6 xxxxxx X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx A.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. XXXXXXXX XXXXXXXX XX XXXXX X X B
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx se xxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. x. 40 xx 60 °X).
X xxxxxxxx případech xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx neodtučněného vzorku.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků, xx. xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku, xx odhaduje xx:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx B1 x 10 μg/kg xx do 20 μx/xx;
± 10 μg/kg xx základě xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
Xxxxxxx x xxxxxxx
