Sedmá směrnice Komise
ze xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Rady xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx odběru xxxxxx a analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv [1], xxxxxxxxx pozměněnou xxxxx x xxxxxxxxxxx [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx dodržování požadavků xxxxxxxxxxx právními x xxxxxxxxx předpisy a xxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx krmiv, xx xxxxxxxxx podle xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx Komise 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/XXX xx xxx 18. listopadu 1971 [4], 72/199/EHS xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx xxx 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/XXX xx xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX xx xxx 20. prosince 1974 [8] xxx stanovily xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx na stav xxxxxxx xxxxxxxxxxx prací xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, že analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxxx X1, xx xxxxxxxxx xxxxx metod xxxxxxxxx x xxxxxxx této xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx nezbytné pro xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 1. xxxxx 1976. Xxxxxxxxxx o xxxx informují Komisi.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 1. března 1976.
Xx Xxxxxx
X. J. Lardinois
člen Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Úř. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Úř. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Úř. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
PŘÍLOHA
STANOVENÍ XXXXXXXXXX X1
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Účel a xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx obsah xxxxxxxxxx X1 v xxxxxx xxxxxxxx: podzemnice olejná, xxxxx, lněná xxxxxx, xxxx, xxxxx, babassu xxxxx x kukuřičné xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx z xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, které xxxxxxx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x jeho alikvotní xxxx xx odebere x přečistí kolonovou xxxxxxxxxxxxxx xx silikagelu. Xxxxx xx odpaří x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu. Alikvotní xxxx tohoto roztoku xx podrobí tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Množství aflatoxinu X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx buď xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx standardu xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxxxx z xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, všechna xxxxxxx xxxx xxx čistoty "x. x".
3.1 Aceton.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 N–hexan.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, neobsahující xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Absorbent – xxxx, xxxxxx odtučněná xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, např. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) xxxxxxxx sírová.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Standardní xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μx aflatoxinu X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx, xxx xx uvedeno x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx roztok xxx xxxxxxxxx jakosti obsahující xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 x X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx. Musí být xxxxxxxx xxx, aby xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx fluorescence u xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Diethylether (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda: 96/3/1 (X/X), chromatografický xxxx x nenasycenou atmosférou;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), chromatografický xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx atmosférou;
3.18.5 Chloroform (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Drtič – xxxxx.
4.2 Třepačka nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, Schleicher x Xxxüxx x. 588 xxxx ekvivalentní, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, xxxxx 300 xx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 250 μx zásobníkem.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, s xxxxxx o xxxxxx 500 xx a xxxxxxx xxxx.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 200 x 200 xx, xx xxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxx desek): xxx 30 x xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky, xxxxxx 60 xx xxxx, xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx se vytvořila xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 0,25 mm. Xxxxxx uschnout xx xxxxxxx x poté xxxxxxx x desikátoru xxxxxxxxxxx silikagel. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx desky xxxxx xxxxxx x xxxxxxx při 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 XX xxxxx xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx dostatečná, xxx xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx byla xx xxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Odměrné xxxxxxxx o xxxxxx 10 xx, s xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Fluorimetr (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 1)
Rozmělnit xxxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xxxx xxxxxx xxxxx s oky x velikosti 1 xx (x souladu x doporučením XXX X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx baňky o xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Přidat 25 x křemeliny (3.14), 25 xx xxxx x 250 ml xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx skládaný xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, xxxx sebrat 50 ml.
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx
Xx spodní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) vložit xxxxx x xxxx xxxx xx xxxxxx vaty (3.9), naplnit xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x xxxx xxxxxx 5 x xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, že xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného xx xxxxx rovný, x xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 10 x xxxxxxxxxx (3.8). Xx xxxxxx přidání xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx xxxx, x xxxx opatrně xxxxxx 15 g xxxxxx xxxxxxx (3.10). Nechat xxxxxxxx klesnout xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 ml xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (5.2) se 100 xx x-xxxxxx (3.3) x xxxx kvantitativně xxxxxx do kolony. Xxxxxx kapalinu klesnout xx x xxxxxxx xxxxxxx vrstvy xxxxxx xxxxxxx. Přidat 100 xx diethyletheru (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného. Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx na xx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx 8 až 12 xx xx xxxxxx a xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Odstranit xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx 150 xx xxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx (3.7) a xxxxxx xxxx eluát.
Odpařit xxxxx do xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11) x xxxxxxx xxxxxxx odparce (4.5) xxx xxxxxxx xxxxx xxx 50 °X. Reziduum kvantitativně xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx zkumavky x xxxxxx 10 xx (4.10). Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11), x xxxx doplnit objem xx 2 xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) nebo směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 xx od xxxxxx xxxxx x x odstupech xx 2 xx xxxx xxxxxx standardních roztoků x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx extraktu získaného xxxxx xxxx 5.3 x x xxxx 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μl xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx ve xxx xx xxxxxxx jednoho x vyvíjecích rozpouštědel (3.18). Xxxxx xxxxxxxxxxxx xx musí xxxxxxx xxxxxx nanesením 25 μx jakostního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x musí xx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx B1 x B2 xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxx x xxxx xxxxxx xxxxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo fluorimetricky xxxxx těchto xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescence skvrn xxxxxxxx x intenzitou xxxxxxxxxxxx xxxxx standardního xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx získaná xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxxx xxx fluorescence 10 xx xxxxxxxx x nesmí xxx xxxxxxxxx xxxx než xxxxx skvrna. Xxxxx xx intenzita xxxxxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku, rozředit xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 krát xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6) a xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Fluorimetrické xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx vlnové xxxxx 365 nm x emisní délce 443 nm. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx skvrn standardního xxxxxxx xxxxxxxxxx X1.
5.6 Xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 nastříkat xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx skvrn aflatoxinu X1 xx xxxx xxx UV xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx postupy xx musí xxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx dvěma xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx strany), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx kapilárních pipet xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx roztoky:
- v xxxx A: xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3, který obsahuje xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx X1,
- v xxxxxx X x X: 25 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx X, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx z xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxx a xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) na xxxxx o šířce 2,5 cm, který xxxxxxx xxxx X x B (xx xxxxxxx 3 vyznačeno xxxxxxxxx), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, přičemž zbytek xxxxx xx chráněn xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx xxx, x xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vyvíjecího rozpouštědla (3.18.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x vymezující xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx tanku a xxxxxx xxxxxxxx pět xxxxx ve tmě x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Interpretace chromatogramu
Pozorovat xxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx (4.9) a xxxxxx xxxx znaky:
a) Xxxxxxxx xx modré xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx xx xxxxx X).
x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx) x intenzivnější xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, přičemž xxx xxxxxx xxxxxxxxx ze xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx x bodu B (xxxxxxx ve směru XX).
x) Objevení xx xxxxxxxxx skvrn, jaké xxxx popsány x xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X. Xxxxxx těchto xxxxx vychází jednak x xxxxxxxx vzdáleností xxxxxxxxxx X1 od xxxx X ve xxxxx X (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x xxxx C) x xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx aflatoxinu X1 – xxxxxxxxxxx xx xxxx X xx xxxxx II (stejná xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx B). Xxxxxxxxxxxxx intenzity xxxxx xxxxxxxxxxx pocházejících x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x bodu B xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxx (xxx) xx vypočítá xxxxxx xxxxxx:
X · X · V / X · X
xxx:
X x X xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) a xxxxxxxx, xxxxx xx stejnou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxx X1 ve xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
X = konečný xxxxx xxxxxxxx v mikrolitrech, x xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x gramech, x xxxxxxx na objem xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx koloně.
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxx (xxx) se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = objem xxxxxxxx, x mikrolitrech, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx xxxx 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, v xxxxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx hodnotě X) xxxxxxxx z xxxxxx;
X = konečný objem xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx je od 8 do 10 μx/xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 330 x 370 nm xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx optickou xxxxxxx (X) při 363 xx x případě xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx 348 xx x případě xxxxxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1 x mikrogramech xx 1 ml xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx; 312 · X · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · A · 1 000 / 19&xxxx;800 pro roztok xx xxxxx benzenu x acetonitrilu..
Ve xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxx 0,1 μx/xx. Xxxxx xx xxxxxx skladuje x xxxxxxxxxx při 4 °C, xx xxxxx xx xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx na xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 až 10 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v bodu 5.4. Xxx XX xxxxxx xx xxxx xxx viditelná pouze xxxxx xxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx neměla xxx znatelná žádná xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které u xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx výsledku pro xxxxxx aflatoxinu X1 xx 10 xx 20 μx/xx,
- 5 μx xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxxx od 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx vyšší xxx 50 μg/kg.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx do oblasti xxxxxxxxxx metody X. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx). Xxxx metoda xx xxxxxxxxx xxx krmiva xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x jeho xxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografií na xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx ve xxxxxxxxxx objemu chloroformu xxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx tohoto xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx stanoví x xxxxxxxxxxxxx pod UV xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx flourometricky srovnáním xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx z xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx stanoveno xxxxx, xxxxxxx činidla xxxx xxx xxxxxxx "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Směs xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 až 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, předem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx vata.
3.10 Síran xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx plyn, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková 1 X.
3.13 Křemelina (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx G–HR xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Vyvíjecí roztoky.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 na 1 xx chloroformu (3.2) xxxx směsi benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx je xxxxxxx x xxxx 7 xxxxxx X.
4. Přístroje
Viz xxx 4 metody X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Příprava xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 a3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Extrakce |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně |
5.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Nanesení xxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Narýsovat xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx každé xxxxxx), xxxxxx x vymezení xxxxxxx čel rozpouštědel. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx roztoky:
- v xxxx A: 20 μx xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3,
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16),
- v xxxx X: 10 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x bodu X: 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx slabým xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx xxxx mít xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx se vyvíjí xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x chromatografickém xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx I, xxxxx čelo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k vymezující xxxxx. Vyjmout xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nechat xxxxxxxx 15 xxxxx xx xxx a xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx oschnout xx xxx x při xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Ozářit xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx xx deska xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx od xxxxx (4.9). Určit xxxxxx modrých xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X, X, X x X. Načrtnout xxx pomyslné xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a svírají xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx směry. Průsečík X xxxxxx xxxxxx xxxxxx místo, kde xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v bodu X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxx xxxx xxx x xxxx X xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxx přímek xxxxxxxxxxx xxxx asi 100 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx B a X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xxxxxx xx stanoví, xxx je xxxxxxx x bodu 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx na xxxxx desku (4.8) xxx přímky xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak je xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1, x nanést xx xxx A (viz xxxxxxx 1) 20 μx přečištěného xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx 5.3, x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx jak je xxxxxxx x bodu 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX světlem (4.9) x xxxxxx xxx:
- xx xxxxxx aflatoxinu X1 x extraktu x ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- fluorescence xxxxxx xxxxx je xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu B1, xxxxx xx xxxxxxxx x xxxx X xx xxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx extraktu x xxxxxxxxxx xxxxx C, X a X xxxxxxxxxxxx roztoku. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx extraktu xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx 40 μx standardního xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x xxxx xxxxx xxxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx měření
Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx délce 365 xx x emisní xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx skvrnách xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx X, X x X standardního xxxxxxx.
5.6 Potvrzení identity xxxxxxxxxx X1
Xxx xxx 5.6 metody A.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx bod 6 xxxxxx X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx X.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", část C xxx 2.
C. XXXXXXXX XXXXXXXX XX METOD X A X
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx se musí xx xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 odtučnit xxxxxxxxxxxxx (b. x. 40 xx 60 °X).
X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx analytické xxxxxxxx vyjádřeny xxxx xxxxxxxx neodtučněného xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xx. rozdíl xxxx xxxxxxxx získanými dvěma xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx:
± 50 % střední xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x 10 μx/xx xx do 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx základě střední xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % střední xxxxxxx xxx střední xxxxxxx vyšší xxx 50 μx/xx.
Xxxxxxx x xxxxxxx
