Xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx se stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx směrnici Rady xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx stanoví, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx cílem xx xxxxxx xxxxxxxxxx požadavků xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx jakosti x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx směrnice Komise 71/250/XXX xx xxx 15. července 1971 [3], 71/393/XXX ze xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/XXX xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx xxx 5. prosince 1972 [6], 74/203/XXX ze xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1974 [8] již xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx xx stav xxxxxxx xxxxxxxxxxx prací xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, pokud xxx x xxxxx xxxxxxxxxx X1, xx xxxxxxxxx xxxxx metod popsaných x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x části 1 (xxxx) xxxxxxx první xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx části xxxxxxxx xx přípravy xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx v příloze xxxx xxxxxxxx.
Článek 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx informují Komisi.
Článek 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 1. xxxxxx 1976.
Xx Xxxxxx
X. X. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Úř. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
PŘÍLOHA
STANOVENÍ XXXXXXXXXX X1
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx, xxxxx xxxxxx, xxxx, xxxxx, xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx z obilovin, xxxxxxxx xxxxx, bramborová xxxxx a xxxxx. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx je 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, které xxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x přečistí kolonovou xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x reziduum se xxxxxxxx xx stanoveném xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx tohoto roztoku xx xxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 se xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx XX světlem xxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx standardu xxxxxxxxxx X1. Identita xxxxxxxxxx X1 extrahovaného x xxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx činidla xxxx xxx xxxxxxx "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 procentem 96 % (V/V) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Absorbent – xxxx, xxxxxx odtučněná xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Inertní xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) xxxxxxxx sírová.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Silikagel X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Standardní xxxxxx obsahující xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 na 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x bodu 7.
3.17 Xxxxxxxxxx roztok xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 x X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx být xxxxxxxx xxx, xxx xx získala stejná xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx u xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Chloroform (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s nasycenou xxxxxxxxxx;
3.18.4 Chloroform (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx atmosférou;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx atmosférou.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Třepačka xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxxx x Xxxüxx č. 588 xxxx ekvivalentní, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx chromatografická xxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, délka 300 xx) s xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x xxxxxx o objemu 500 xx x xxxxxxx xxxx.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 500 xx, xx xxxxxxxxxxx zátkami.
4.7 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 200 x 200 xx, xx xxxxxxxx takto (xxxxxxx množství stačí xxx xxx xxxxx): xxx 30 x xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Erlenmeyerovy xxxxx, xxxxxx 60 xx xxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xx vytvořila xxxxxxxxxxx vrstva x xxxxxxxx 0,25 mm. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx silikagel. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx hodinu x xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx jsou xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx podobné xxxxxxxx jako desky xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 XX xxxxx xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx ještě xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 ml, x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 UV xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", část X xxx 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxx x xxxxxxxxx 1 xx (v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx x homogenizovaného xxxxxx. Xxxxxx 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 xx vody x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Zazátkovat, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx filtrační xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, xxxx xxxxxx 50 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně
Do xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (4.4) xxxxxx xxxxx x xxxx xxxx xx skelné xxxx (3.9), xxxxxxx xxxxxxx xx do dvou xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x xxxx přidat 5 x xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, že xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, a xxxx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxx 10 x silikagelu (3.8). Xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx zamíchat, aby xx odstranily xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx stát, x xxxx xxxxxxx xxxxxx 15 g xxxxxx xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx až x xxxxxxx povrchu xxxxxx xxxxxx sodného.
Smíchat 50 xx extraktu xxxxxxxxx xxxxx xxxx (5.2) xx 100 xx n-hexanu (3.3) x xxxx kvantitativně xxxxxx xx kolony. Xxxxxx kapalinu klesnout xx k xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxx klesnou xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx na to, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx 8 až 12 ml xx xxxxxx x aby xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx 150 ml xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (3.7) a xxxxxx xxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx do xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11) x xxxxxxx vakuové xxxxxxx (4.5) při teplotě xxxxx než 50 °X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu a xxxxxxxxxxxx (3.6) do xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 xx (4.10). Koncentrovat xxxxxx xxx xxxxxxx inertního xxxxx (3.11), x xxxx doplnit xxxxx xx 2 xx xx xxxxxxx chloroformu (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx chromatografie
Na xxxxx xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 xx xx xxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxx xx 2 cm xxxx xxxxxx standardních roztoků x extraktu:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3 x k xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx ve xxx xx xxxxxxx jednoho x xxxxxxxxxx rozpouštědel (3.18). Xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxx a musí xx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx B1 x X2 xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx ve xxx x poté xxxxxx xxxxx UV xxxxxxx ze xxxxxxxxxxx 10 cm xx xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Kvantitativní stanovení
Stanovení xx xxxxxxx buď xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství aflatoxinu X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxx s intenzitou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx získaná překrytím xxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx 10 xx extraktu x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx než xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx intenzita fluorescence 10 μl xxxxxxxx xxxxxxxx než intenzita xxxxxxxxxxxx 40 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx 10 krát xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx xxxxx podrobit xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx fluorimetrem (4.12) xxx xxxxxxxxx vlnové xxxxx 365 nm x xxxxxx xxxxx 443 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx fluorescence x xxxxxxxxxxx skvrn standardního xxxxxxx aflatoxinu X1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1 v xxxxxxxx xx provede takto:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 se xxxx xxx XX xxxxxxx xxxxxx z modré xx xxxxxx.
5.6.2 Dvourozměrná xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx pracovní postupy xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx dvěma přilehlými xxxxxxxx (6 xx xx každé strany), xxxxxx x vymezení xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx desku xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx roztoky:
- x xxxx X: xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3, xxxxx xxxxxxxx xxx 2,5 nm xxxxxxxxxx X1,
- x xxxxxx X x X: 25 μl xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx se vyvíjí xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x tloušťce 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx I, xxxxx čelo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k vymezující xxxxx.
Xxxxxxx desku x xxxxx a nechat xxxxxxxx xxx minut xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx stříkat kyselinu xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) na xxxxx x šířce 2,5 cm, který xxxxxxx body X x B (xx xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), xxxxx pásek xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx xxx, x xxxx xxxxxxx desku xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx vyvíjí za xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x nenasycenou atmosférou] xx xxx xx xxxxx II, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx desku x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pod UV xxxxxxx (4.9) x xxxxxx tyto xxxxx:
x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny aflatoxinu X1 pocházející xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx C (xxxxxxx ve xxxxx X).
x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx B1 (xxxxx xxxxxxxxxx s kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx) a xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, přičemž xxx xxxxxx xxxxxxxxx ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx xx xxxxx XX).
x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx, jaké xxxx xxxxxxx v xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx extraktu xxxxxxxxxx x bodu X. Xxxxxx xxxxxx xxxxx vychází jednak x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx X xx xxxxx X (stejná xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X) x dále xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 – hemiacetalu xx xxxx A xx xxxxx II (xxxxxx xxxxxxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x bodu X). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx a xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x xxxx B xx si xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
6.1 Xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx aflatoxinu X1 x mikrogramech xx 1 xx vzorku (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X · X · X / X · X
xxx:
X a X xxxx xxxxxxxxx objemy xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) x xxxxxxxx, xxxxx xx stejnou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
X = konečný xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx, x ohledem na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx zkušebního vzorku x xxxxxxx, s xxxxxxx xx objem xxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx na xxxxxx.
6.2 Xx základě xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech na 1 xx vzorku (xxx) xx vypočítá xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx xxxx 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, x xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx hodnotě Y) xxxxxxxx x xxxxxx;
X = konečný objem xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x gramech, x xxxxxxx na objem xxxxxxxx použitý xxx xxxxxxxxxx xx koloně.
7. Xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), jehož xxxxxxxxxxx xx od 8 xx 10 μx/xx. Stanovit xxxxxxxxx xxxxxxxx mezi 330 x 370 xx xx použití spektrofotometru (4.11).
Xxxxxx optickou xxxxxxx (X) xxx 363 xx x případě xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxx 348 xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx koncentraci xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech xx 1 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx; 312 · A · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · A · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 xxx xxxxxx xx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 je xxx 0,1 μg/ml. Xxxxx xx xxxxxx skladuje x chladničce xxx 4 °C, xx xxxxx xx dobu xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx čistoty
Nanést xx xxxxx (4.8) 5 μx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 xx 10 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx v xxxx 5.4. Xxx XX xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x x místě xxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxxx xxx xxxxxxxx žádná xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx analytik, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx 10 do 20 μx/xx,
- 5 μx absolutní hodnoty xxx xxxxxx od 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx než 50 μx/xx.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
B. XXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX CHROMATOGRAFIE
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx, které xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx X. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 ppb). Xxxx metoda xx xxxxxxxxx xxx krmiva xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxx část xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografií xx xxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx stanoví x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx vizuálně xxxx flourometricky xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxx potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx stanoveno xxxxx, xxxxxxx činidla xxxx xxx xxxxxxx "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Chloroform xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Směs xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Silikagel xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Absorbent – xxxx, předem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx plyn, xxxx. xxxxx.
3.12 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 Křemelina (xxxxxxxxxxxxx) promytá xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Vyvíjecí xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda 94/4,5/1,5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Chloroform (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx atmosférou.
3.16 Standardní xxxxxx obsahující xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx a kontrolovaný xxx xx xxxxxxx x xxxx 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 metody X.
5. Postup
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 a3.5 metody X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx |
5.4 Dvourozměrná xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Nanesení xxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Narýsovat xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx k vymezení xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- x xxxx A: 20 μx vyčištěného xxxxxxxx xxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.3,
- x xxxx B: 20 μx standardního roztoku (3.16),
- x bodu X: 10 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16),
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx slabým xxxxxxx xxxxxxx xxxx inertního xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (podle xxxxxxxx xx obrázku 1)
Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx směru I, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx xxxxxxxx 15 xxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou] xx tmě xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx tanku a xxxxxx xxxxxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx teplotě.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxx schématu xx xxxxxxx 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X, C, D x X. Načrtnout xxx pomyslné xxxxxx, xxxxx procházejí těmito xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx X těchto přímek xxxxxx xxxxx, xxx xxx očekávat skvrnu xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx x extraktu vzorku xxxxxxxxxx x bodu X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx xxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 xxxx xxxx být x xxxx X xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxx přímek xxxxxxxxxxx xxxx xxx 100 xxxxxx x protínajících xxxx B a X. Množství xxxxxxxxxx X1 v extraktu xxxxxx se stanoví, xxx xx uvedeno x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx ve xxxxxxxx xx xxxxxxx 1, x xxxxxx xx xxx X (xxx xxxxxxx 1) 20 μx přečištěného extraktu xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx 5.3, x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx jak xx xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX světlem (4.9) x ověřit xxx:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 z extraktu x ze standardního xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx xx vyvinula x xxxx X xx xxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství xxxxxxxxxx B1 v xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx extraktu s xxxxxxxxxx skvrn X, X a E xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx extraktu silnější xxx xxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku, xxxxxx roztok 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), x xxxx znovu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence xxxxx aflatoxinu X1 xx změří xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx délce 365 xx a emisní xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x intenzitou xxxxx C, D x E xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxx bod 5.6 xxxxxx X.
6. Xxxxxxx výsledků
Viz xxx 6 xxxxxx A.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx bod 8 xxxxxx X.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. XXXXXXXX XXXXXXXX XX XXXXX X X X
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx xx xxxx xx xxxxxxxx podle xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. v. 40 xx 60 °X).
X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx být analytické xxxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xx. xxxxxx xxxx xxxxxxxx získanými xxxxx xxxx více laboratořemi xx stejného vzorku, xx xxxxxxxx na:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x 10 μg/kg xx xx 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % střední xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
Xxxxxxx x xxxxxxx
