Xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. března 1976,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx odběru xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxx [2], a xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxx, xx uvedená xxxxxxxx stanoví, že xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx cílem xx xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxx x složení xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx dne 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/XXX ze xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/XXX xx dne 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx xxx 5. prosince 1972 [6], 74/203/XXX ze xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX xx dne 20. xxxxxxxx 1974 [8] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx xx stav xxxxxxx provedených prací xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x souladu se xxxxxxxxxxx Stálého výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx úřední kontroly xxxxx, xxxxx jde x xxxxx xxxxxxxxxx X1, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení uvedená x xxxxx 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/EHS xx dne 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, xx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x příloze xxxx xxxxxxxx.
Článek 2
Členské státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx souladu s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 1976. Xxxxxxxxxx o xxxx informují Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu xxx 1. xxxxxx 1976.
Xx Xxxxxx
X. J. Lardinois
člen Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. věst. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Úř. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. věst. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Úř. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX AFLATOXINU X1
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx, xxxxx xxxxxx, xxxx, sezam, xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx x obilovin, xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x škrob. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx rušivé xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx silikagelu. Xxxxx se odpaří x xxxxxxxx xx xxxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Alikvotní xxxx tohoto xxxxxxx xx podrobí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx XX světlem xxx xxxxxxxx nebo fluorimetricky xxxxxxxxx xx známými xxxxxxxxxx standardu aflatoxinu X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx z xxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx není stanoveno xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx "x. a".
3.1 Aceton.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Směs xxxxxxx x acetonitrilu: 98/2 (X/X).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx částic 0,05 až 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx odtučněná xxxxxxxxxxxx, nebo skelná xxxx.
3.10 Síran xxxxx, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. dusík.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) kyselina sírová.
3.14 Xxxxxxxxx (hyflosupercel), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx X–XX xxxx ekvivalent, xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μx aflatoxinu X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx roztok pro xxxxxxxxx jakosti obsahující xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 a X2 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxx tak, xxx xx získala xxxxxx xxxxxxxxx fluorescence x xxxx aflatoxinů.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Chloroform (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Diethylether (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda: 96/3/1 (X/X), chromatografický xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx míchačka.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxxx x Xxxüxx č. 588 xxxx ekvivalentní, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (xxxxxxx průměr 22 xx, délka 300 xx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 250 μx zásobníkem.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x xxxxxx o xxxxxx 500 xx x xxxxxxx dnem.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o objemu 500 ml, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 200 x 200 xx, xx připraví takto (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxx xxxxx): xxx 30 x xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx 60 xx xxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx 1 minutu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 0,25 mm. Xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx silikagel. Před xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx připravené x xxxxxxx xxxx vyhovující, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako desky xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 XX xxxxx xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxx 1 ng xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxx 10 cm xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx x objemu 10 ml, s xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (volitelný).
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx takovým způsobem, xxx xxxx prošel xxxxx x xxx x velikosti 1 xx (x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx xxx 50 g xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Přidat 25 x křemeliny (3.14), 25 xx xxxx x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Zazátkovat, xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Odstranit xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, xxxx xxxxxx 50 xx.
5.3 Přečištění xx koloně
Do xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (4.4) xxxxxx xxxxx x xxxx xxxx xx xxxxxx xxxx (3.9), naplnit xxxxxxx xx xx dvou xxxxxx chloroformem (3.2), x xxxx xxxxxx 5 g xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, xx xxxxx povrch xxxxxx xxxxxx sodného je xxxxx xxxxx, x xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 10 x xxxxxxxxxx (3.8). Xx každém xxxxxxx xxxxxxx zamíchat, xxx xx xxxxxxxxxx vzduchové xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx xxxx, a xxxx xxxxxxx xxxxxx 15 x xxxxxx xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx klesnout xx x hornímu xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx extraktu xxxxxxxxx podle xxxx (5.2) se 100 xx n-hexanu (3.3) x xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx kapalinu xxxxxxxx xx k xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx síranu sodného. Xxxxx xxxxxx postupu xxxx xx xx, xxx rychlost xxxxxxx xxxx 8 xx 12 xx xx xxxxxx a aby xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx kapalinu. Poté xxxxxxx 150 xx xxxxx chloroformu a xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx xxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11) x xxxxxxx vakuové xxxxxxx (4.5) xxx xxxxxxx xxxxx xxx 50 °X. Xxxxxxxx kvantitativně xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) do xxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxx 10 xx (4.10). Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx inertního xxxxx (3.11), x xxxx xxxxxxx objem xx 2 xx xx xxxxxxx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 xx xx xxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxx po 2 cm tyto xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx alfatoxinu X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx získaného xxxxx bodu 5.3 x x tomu 20 μl standardního xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx ve xxx xx xxxxxxx xxxxxxx x vyvíjecích xxxxxxxxxxxx (3.18). Xxxxx rozpouštědla xx musí xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxx a xxxx xx ověřit, xxx xxxx xxxxxxxxxx B1 x X2 xxx xxxxxxxx zcela odděleny.
Nechat xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxx x poté xxxxxx xxxxx UV xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx X1 modře xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení xx xxxxxxx buď xxxxxxxx nebo fluorimetricky xxxxx těchto xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v extraktu xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxx x intenzitou xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxxx než fluorescence 10 ml xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx fluorescence 10 μx extraktu xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku, rozředit xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) a xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Fluorimetrické xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxx X1 xx xxxx fluorimetrem (4.12) xxx excitační xxxxxx xxxxx 365 xx x xxxxxx xxxxx 443 xx. Množství xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx porovnáním xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx B1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x extraktu xx xxxxxxx xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxx XX xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxx.
5.6.2 Dvourozměrná xxxxxxxxxxxxxx zahrnující xxxxxx xxxxxxxxxx B1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx musí provádět xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx desku (4.8) xxx přímky xxxxxxxxxx xx dvěma xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx čel xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx na desku xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx roztoky:
- v xxxx X: objem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3, xxxxx xxxxxxxx xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx X1,
- v xxxxxx B a X: 25 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx použití xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] ve xxx xx xxxxx X, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx x xxxxx 2,5 cm, xxxxx xxxxxxx xxxx X x B (xx xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, přičemž zbytek xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx papírem. Xxxxxx xxxxxxx 10 minut xx xxx, x xxxx vysušit desku xxxxxxx vzduchu xxx xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx rozpouštědla (3.18.1) [vrstva o xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě ve xxxxx II, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxx x xxx pokojové xxxxxxx.
5.6.2.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx tyto xxxxx:
x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 pocházející xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx naneseného x xxxx X (xxxxxxx ve xxxxx X).
x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 (který xxxxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx xx směru XX).
x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx skvrn, xxxx xxxx xxxxxxx v xxxx b), xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v bodu X. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx A xx xxxxx I (xxxxxx xxxxxxxxxx jako u xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X) x dále migrační xxxxxxxxxx aflatoxinu X1 – xxxxxxxxxxx od xxxx X xx xxxxx II (stejná xxxxxxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X). Xxxxxxxxxxxxx intenzity skvrn xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x ze xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxx (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X · X · V / X · X
xxx:
X x Y xxxx příslušné xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku aflatoxinu X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) x xxxxxxxx, xxxxx má stejnou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx xx 1 ml, xxxxxxxxxx X1 ve xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
X = konečný xxxxx xxxxxxxx x mikrolitrech, x xxxxxxx xx xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x gramech, x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx použitý xxx xxxxxxxxxx na xxxxxx.
6.2 Xx základě fluorimetrického xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 kg vzorku (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx vzorce:
S·V / X·X
xxx:
X = objem xxxxxxxx, v mikrolitrech, xxxxxxxxxxxx desku (10 μx xxxx 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, v xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx hodnotě X) xxxxxxxx z xxxxxx;
X = konečný xxxxx xxxxxxxx x mikrolitrech, x ohledem xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx koloně.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx koncentrace aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxx B1 v xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx xx od 8 xx 10 μx/xx. Xxxxxxxx absorpční xxxxxxxx mezi 330 x 370 nm xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx optickou xxxxxxx (X) xxx 363 xx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxx xxx 348 xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx benzenu a xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech xx 1 ml xxxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxx:
xxx chloroformový roztok; 312 · X · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · A · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 xxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx příslušná ředění x xxxxx získat xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxxxx X1 je xxx 0,1 μg/ml. Xxxxx xx roztok skladuje x xxxxxxxxxx xxx 4 °X, je xxxxx xx xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx čistoty
Nanést xx xxxxx (4.8) 5 μx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 xx 10 μl aflatoxinu X1 xx 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.4. Xxx UV xxxxxx xx xxxx xxx viditelná xxxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxxx xxx znatelná xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, nesmí xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx 10 do 20 μx/xx,
- 5 μx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx od 20 do 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx vyšší xxx 50 μx/xx.
9. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", část X xxx 2.
B. METODA XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx a rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxx, které xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx X. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx). Xxxx metoda xx xxxxxxxxx xxx krmiva xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografií na xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx a residuum xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx ve směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx tohoto xxxxxxx xx podrobí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx xxx vizuálně xxxx flourometricky xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx z xxxxx xxxx být potvrzena xxxxxxxxxx postupem.
3. Činidla
Poznámka:
Pokud xxxx stanoveno xxxxx, xxxxxxx činidla musí xxx čistoty "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx stabilizovaný 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx peroxidy.
3.6 Směs xxxxxxx x acetonitrilu: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 až 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, bezvodý, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx plyn, xxxx. xxxxx.
3.12 Kyselina chlorovodíková 1 X.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, pro tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxx xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx atmosférou.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 xxxxxx X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 x3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx |
5.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografie
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Narýsovat xx desku (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 cm xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx čel xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx kapilárních pipet xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx roztoky:
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3,
- x xxxx X: 20 μx standardního roztoku (3.16),
- v bodu X: 10 μl xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16),
- x xxxx X: 20 μl standardního xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx asi 5 xx.
5.4.2 Vyvíjení (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx se vyvíjí xx použití xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva x tloušťce 1 xx v chromatografickém xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx směru I, xxxxx čelo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nechat xxxxxxxx 15 minut ve xxx x xxx xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx o xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxxxxxxx atmosférou] xx xxx ve xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx desku z xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx (xxxxx schématu xx xxxxxxx 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX světlem, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xx vzdálenosti 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxxx roztoku X, X, X x E. Xxxxxxxxx xxx pomyslné přímky, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x svírají xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx X xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, kde xxx očekávat skvrnu xxxxxxxxxx B1 xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxx xxxx být x xxxx X xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx 100 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx B a X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v extraktu xxxxxx xx xxxxxxx, xxx xx uvedeno x bodu 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx chromatografie
Narýsovat na xxxxx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx ve schématu xx xxxxxxx 1, x xxxxxx xx xxx X (xxx xxxxxxx 1) 20 μx přečištěného extraktu xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx 5.3, a x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16). Xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x bodu 5.4.2. Ozářit xxxxxxxxxxxx XX světlem (4.9) x xxxxxx xxx:
- xx xxxxxx aflatoxinu X1 z xxxxxxxx x xx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- fluorescence xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx xx xxxxxxxx x bodu Q xx xxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vizuálně xxxx xxxxxxxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství xxxxxxxxxx B1 v xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxx X, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Pokud je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx roztok 10 xxxx xxxx 100 xxxx chloroformem (3.2) xxxx xxxxx benzenu x acetonitrilu (3.6), x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx měření
Intenzita fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx fluorimetrem (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx x xxxxxx xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxx extraktu xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx skvrny xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx C, X x E xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx X1
Xxx xxx 5.6 xxxxxx A.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxx 6 xxxxxx X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx X.
8. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", část C xxx 2.
X. XXXXXXXX XXXXXXXX SE XXXXX X X B
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx se xxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (b. v. 40 až 60 °X).
X takových xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorku.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků
Reprodukovatelnost xxxxxxxx, xx. xxxxxx xxxx xxxxxxxx získanými xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx, xx odhaduje xx:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx B1 x 10 μx/xx xx do 20 μx/xx;
± 10 μg/kg xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xx 20 xx 50 μg/kg;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx než 50 μx/xx.
Xxxxxxx k xxxxxxx
