Xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. března 1976,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Společenství xxx xxxxxx kontrolu xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx na Smlouvu x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxx [2], a xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx uvedená xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxxxx xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisy a xxxxxxxxxx se jakosti x složení xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx směrnice Komise 71/250/XXX ze dne 15. července 1971 [3], 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/XXX xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx xxx 5. prosince 1972 [6], 74/203/XXX ze xxx 25. března 1974 [7] a 75/84/XXX xx dne 20. prosince 1974 [8] xxx xxxxxxxxx xxxx analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu se xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, že analýzy xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x obsah xxxxxxxxxx X1, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx uvedená x části 1 (xxxx) xxxxxxx první xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/EHS xx dne 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x analýze, se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. října 1976. Xxxxxxxxxx o xxxx informují Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu xxx 1. xxxxxx 1976.
Xx Xxxxxx
X. J. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. věst. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX X1
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx, xxxxx semena, xxxx, sezam, xxxxxxx xxxxx x kukuřičné xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx, bramborová xxxxx x škrob. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 ppb).
Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografie).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx chloroformem. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x jeho xxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx x přečistí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na silikagelu. Xxxxx se xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu. Xxxxxxxxx xxxx tohoto xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx stanoví x chromatogramu xxx XX xxxxxxx buď xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se známými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aflatoxinu X1. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxxxx z xxxxx musí xxx xxxxxxxxx stanoveným postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx stanoveno xxxxx, všechna xxxxxxx xxxx být xxxxxxx "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx stabilizovaný 0,5 xx 1,0 procentem 96 % (V/V) xxxxxxxx.
3.3 N–hexan.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Směs xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 až 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx odtučněná xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx sodný, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, např. dusík.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková 1 X.
3.13 50 % (X/X) xxxxxxxx xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Silikagel X–XX xxxx ekvivalent, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Standardní xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx aflatoxinu X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodu 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx jakosti obsahující xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx B1 x X2 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x acetonitrilu (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx být xxxxxxxx xxx, xxx xx xxxxxxx stejná xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx aflatoxinů.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank s xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s nasycenou xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x nasycenou xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Třepačka xxxx xxxxxxxxxx míchačka.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxxx x Schüll x. 588 xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx chromatografická trubice (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, xxxxx 300 xx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx odparka, x xxxxxx x xxxxxx 500 xx x xxxxxxx dnem.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o objemu 500 xx, xx xxxxxxxxxxx zátkami.
4.7 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx chromatografii, 200 x 200 xx, xx xxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx množství xxxxx xxx xxx xxxxx): xxx 30 g xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx 60 ml xxxx, zazátkovat x xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx takovým způsobem, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstva x xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x poté xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx aktivovat desky xxxxx xxxxxx x xxxxxxx při 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx vykazují xxxxxxx xxxxxxxx xxxx desky xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 UV xxxxx xxxxxxxxxxx (360 mm). Xxxxxxxxx záření xxxx xxx xxxxxxxxxx, aby xxxxxx 1 ng xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx byla xx xxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx xxxxx xxxxx rozeznatelná.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx x objemu 10 xx, s xxxxxxxxxxxxxxxx zátkami.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku (xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx celý prošel xxxxx x xxx x xxxxxxxxx 1 xx (v xxxxxxx x doporučením ISO X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 ml xxx 50 x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 ml xxxx x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Zazátkovat, xxxxxxxxxxx nebo promíchávat 30 minut xxxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx skládaný xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, xxxx xxxxxx 50 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně
Do spodní xxxxx chromatografické xxxxxxx (4.4) xxxxxx xxxxx x xxxx nebo xx skelné xxxx (3.9), naplnit xxxxxxx xx do xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x xxxx xxxxxx 5 g síranu xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, xx xxxxx povrch xxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxx, x xxxx přidat po xxxxxx dávkách 10 x xxxxxxxxxx (3.8). Xx xxxxxx přidání xxxxxxx zamíchat, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx xxxx, x xxxx xxxxxxx přidat 15 x xxxxxx xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného.
Smíchat 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (5.2) xx 100 xx x-xxxxxx (3.3) x směs kvantitativně xxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx kapalinu klesnout xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x znovu xxxxxx xxxxxxxx klesnou xx x hornímu xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx tohoto xxxxxxx xxxx xx xx, xxx rychlost xxxxxxx xxxx 8 xx 12 xx xx xxxxxx x xxx xxxxxx nevyschla. Odstranit xxxxxxxxx xxxxxxxx. Poté xxxxxxx 150 ml xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx celý xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5) xxx xxxxxxx xxxxx xxx 50 °X. Reziduum xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 xx (4.10). Xxxxxxxxxxxx roztok xxx proudem inertního xxxxx (3.11), x xxxx doplnit xxxxx xx 2 xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx chromatografie
Na xxxxx xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 xx xx xxxxxx hrany x x odstupech xx 2 xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx extraktu xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3 x k xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxx xx použití xxxxxxx x vyvíjecích rozpouštědel (3.18). Xxxxx rozpouštědla xx musí provést xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx jakostního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x xxxx xx ověřit, xxx xxxx xxxxxxxxxx B1 x X2 při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx odpařit xx xxx x poté xxxxxx desku XX xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 cm od xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Kvantitativní xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx provádí xxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx těchto xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx standardní xxxxxx musí xxx xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx 10 ml xxxxxxxx x xxxxx být xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx skvrna. Xxxxx xx intenzita xxxxxxxxxxxx 10 μx extraktu xxxxxxxx než xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6) a xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Fluorimetrické xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxx X1 se xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx excitační xxxxxx xxxxx 365 xx x xxxxxx xxxxx 443 nm. Množství xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxx extraktu xx xxxxxxx porovnáním jejich xxxxxxxx fluorescence x xxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx B1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1 x extraktu xx xxxxxxx xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 se xxxx xxx XX zářením xxxxxx x xxxxx xx žlutou.
5.6.2 Dvourozměrná xxxxxxxxxxxxxx zahrnující xxxxxx xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx B2a)
Poznámky:
Níže xxxxxxx xxxxxxxx postupy xx musí provádět xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx obrázku 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx dvěma přilehlými xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx čel xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx kapilárních xxxxx xxxx injekčních mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- x xxxx X: objem xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3, který obsahuje xxx 2,5 nm xxxxxxxxxx B1,
- x xxxxxx X a X: 25 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx vyvíjí xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx X, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx tmě a xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx kyselinu xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx x xxxxx 2,5 xx, xxxxx xxxxxxx xxxx A x X (xx xxxxxxx 3 vyznačeno xxxxxxxxx), xxxxx pásek xxxxxxxxx, přičemž zbytek xxxxx je chráněn xxxxxxx papírem. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx xxx, x xxxx xxxxxxx desku xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.
Poté se xxxxxxxxxxxx vyvíjí xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x nenasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx ve xxxxx II, dokud xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx tmě x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxxx xxxxx:
x) Xxxxxxxx se modré xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x bodu C (xxxxxxx xx směru X).
x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx obě xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx xx směru XX).
x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx, jaké xxxx xxxxxxx x xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X. Xxxxxx xxxxxx xxxxx vychází xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx A ve xxxxx I (xxxxxx xxxxxxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x bodu X) x xxxx migrační xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx xx xxxx X xx xxxxx II (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x bodu B). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxx pocházejících z xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx B xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech xx 1 xx vzorku (xxx) se xxxxxxxx xxxxxx vzorce:
S · X · X / X · X
xxx:
X a Y xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku aflatoxinu X1 v xxxxxxxxxxxx (3.16) a xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx fluorescence;
S = xxxxxxxxxxx, x mikrogramech xx 1 xx, xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
V = konečný objem xxxxxxxx x mikrolitrech, x xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx x gramech, x xxxxxxx xx objem xxxxxxxx použitý xxx xxxxxxxxxx na koloně.
6.2 Xx základě xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech xx 1 xx xxxxxx (xxx) se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = objem xxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx nebo 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1, x xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx k xxxxxxx hodnotě X) xxxxxxxx x měření;
V = konečný xxxxx xxxxxxxx v mikrolitrech, x xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, x xxxxxxx xx objem xxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx xx koloně.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx koncentrace aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), jehož xxxxxxxxxxx xx xx 8 do 10 μx/xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 330 x 370 nm xx xxxxxxx spektrofotometru (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (X) xxx 363 xx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx 348 nm x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx; 312 · A · 1 000 / 20&xxxx;600
312 · A · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 xxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x cílem xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxx 0,1 μx/xx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x chladničce při 4 °C, je xxxxx xx xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx čistoty
Nanést na xxxxx (4.8) 5 μx standardního roztoku xxxxxxxxxxxx 8 xx 10 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx (7.1). Vyvinout xxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.4. Xxx XX xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx a x xxxxx původního xxxxxxxx xx neměla xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx aflatoxinu X1 xx 10 do 20 μx/xx,
- 5 μx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx od 20 do 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. METODA XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX CHROMATOGRAFIE
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 x krmivech, které xxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx X. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 ppb). Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx citrusovou xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se extrahuje xxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx část se xxxxxxx x přečistí xxxxxxxxx chromatografií xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x residuum xx xxxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx chloroformu xxxx ve xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx vizuálně xxxx flourometricky xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx x krmiv xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx činidla xxxx xxx xxxxxxx "p.a".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) ethanolu.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Diethylether, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Absorbent – vata, předem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, bezvodý, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, např. xxxxx.
3.12 Kyselina chlorovodíková 1 X.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx kyselinou.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxx xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/voda 94/4,5/1,5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Chloroform (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx a kontrolovaný xxx je xxxxxxx x xxxx 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 xxxxxx X.
5. Postup
|
5.1 Příprava xxxxxx |
xxx body 5.1, 5.2 x3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně |
5.4 Dvourozměrná xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Nanesení xxxxxxx (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Narýsovat xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx dvěma xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 cm xx xxxxx strany), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx injekčních xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- x xxxx X: 20 μx vyčištěného xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3,
- v xxxx X: 20 μx standardního xxxxxxx (3.16),
- x bodu X: 10 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 20 μl standardního xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx slabým proudem xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Získané xxxxxx xxxx xxx xxxxxx asi 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx na obrázku 1)
Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx X, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x chromatografického xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx 15 minut ve xxx a xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx vyvíjí za xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx o xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x nenasycenou atmosférou] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx desku x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx UV xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx od xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx modrých xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx standardního roztoku X, C, X x E. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx přímky, xxxxx procházejí xxxxxx xxxxxxxx x svírají xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx směry. Xxxxxxxx X xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx xxxxxx skvrny xxxxxxxxxx B1 xxxx xxxx xxx v xxxx Q xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx přímek xxxxxxxxxxx xxxx xxx 100 xxxxxx a protínajících xxxx X a X. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx chromatografie
Narýsovat xx xxxxx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx xx xxxxxxxx xx obrázku 1, x xxxxxx na xxx X (xxx xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx, xxxxx byl xxxxxx xxxxx xxxx 5.3, x x xxxx 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX světlem (4.9) x xxxxxx xxx:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x extraktu x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx překrývají,
- fluorescence xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1, xxxxx xx xxxxxxxx x bodu X xx první xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení xx xxxxxxxxxx vizuálně xxxx xxxxxxxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Vizuální měření
Množství xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx extraktu s xxxxxxxxxx xxxxx C, X a X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx potřeby xx xxxxxxxxxxx. Pokud je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx intenzita 40 μx standardního xxxxxxx, xxxxxx roztok 10 xxxx xxxx 100 xxxx chloroformem (3.2) xxxx směsí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x poté xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx délce 365 xx a emisní xxxxxx délce 443 xx.
Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx skvrny xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx C, D x X standardního xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxx xxx 5.6 xxxxxx X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxx 6 xxxxxx X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx A.
8. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
C. XXXXXXXX XXXXXXXX XX METOD X A X
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 odtučnit xxxxxxxxxxxxx (b. x. 40 až 60 °X).
X takových případech xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků
Reprodukovatelnost výsledků, xx. xxxxxx xxxx xxxxxxxx získanými dvěma xxxx více xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx, xx odhaduje na:
± 50 % střední xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu B1 x 10 μx/xx xx do 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx základě xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx 50 μg/kg;
± 20 % střední xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx vyšší xxx 50 μg/kg.
Dodatek x xxxxxxx
