Sedmá xxxxxxxx Komise
ze xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx na Smlouvu x založení Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxx [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx cílem xx xxxxxx dodržování požadavků xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x složení xxxxx, xx xxxxxxxxx podle xxxxx odběru xxxxxx x analytických metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx směrnice Komise 71/250/XXX xx dne 15. července 1971 [3], 71/393/EHS xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/XXX xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx dne 5. prosince 1972 [6], 74/203/EHS xx xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1974 [8] již xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx s xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx sedmou xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Členské státy xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx kontroly xxxxx, pokud xxx x obsah xxxxxxxxxx X1, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx popsaných x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x části 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Komise 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971, s xxxxxxxx xxxxx týkající xx přípravy xxxxxx x analýze, xx xxxxxxx xxx metody xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Článek 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. října 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx Komisi.
Článek 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
V Bruselu xxx 1. xxxxxx 1976.
Xx Xxxxxx
X. J. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Úř. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Úř. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. věst. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX B1
A. XXXXXX JEDNOROZMĚRNÉ XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx obsah xxxxxxxxxx X1 x xxxxxx xxxxxxxx: podzemnice olejná, xxxxx, xxxxx xxxxxx, xxxx, xxxxx, babassu xxxxx x kukuřičné xxxxxx, obiloviny a xxxxxxx x obilovin, xxxxxxxx mouka, xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx rušivé xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx B (dvourozměrná xxxxxxxxxxx chromatografie).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx filtruje x jeho xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x přečistí kolonovou xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx se odpaří x reziduum xx xxxxxxxx xx stanoveném xxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu. Alikvotní xxxx tohoto xxxxxxx xx podrobí tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx stanoví x xxxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx buď xxxxxxxx nebo fluorimetricky xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Identita xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx stanoveno xxxxx, všechna xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (V/V) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Směs xxxxxxx x acetonitrilu: 98/2 (X/X).
3.7 Směs chloroformu (3.2) a methanolu (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx pro kolonovou xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx částic 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Absorbent – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx skelná xxxx.
3.10 Xxxxx sodný, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, např. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) kyselina sírová.
3.14 Xxxxxxxxx (hyflosupercel), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx G–HR xxxx xxxxxxxxxx, pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μx aflatoxinu X1 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx benzenu x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx jakosti xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx B1 a X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx koncentrace xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx být xxxxxxxx tak, xxx xx xxxxxxx stejná xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx u xxxx aflatoxinů.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/aceton (3.1): 9/1 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx tank s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/voda: 94/4.5/1.5 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx atmosférou;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x nasycenou xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Skládané xxxxxxxxx papíry, Xxxxxxxxxx x Xxxüxx x. 588 xxxx ekvivalentní, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx chromatografická xxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, délka 300 xx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x xxxxxx x xxxxxx 500 xx x xxxxxxx dnem.
4.6 Erlenmeyerovy xxxxx x objemu 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Zařízení xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 200 x 200 xx, xx xxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxx xxxxx): xxx 30 x xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx 60 xx xxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx vytvořila xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx a poté xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx hodinu x xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx připravené x xxxxxxx jsou xxxxxxxxxx, xxxxx vykazují xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 XX lampa xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx dostatečná, xxx xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxx 10 cm xx xxxxx ještě xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx x objemu 10 xx, x xxxxxxxxxxxxxxxx zátkami.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Fluorimetr (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", část X xxx 1)
Rozmělnit xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x oky x xxxxxxxxx 1 xx (x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 500 ml xxx 50 x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 xx xxxx x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx 30 minut třepačkou (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, xxxx xxxxxx 50 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně
Do xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (4.4) vložit zátku x xxxx nebo xx xxxxxx vaty (3.9), xxxxxxx xxxxxxx xx do xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x xxxx xxxxxx 5 x xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, že xxxxx povrch xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx rovný, x xxxx xxxxxx xx xxxxxx dávkách 10 x silikagelu (3.8). Xx xxxxxx přidání xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Nechat 15 xxxxx stát, a xxxx xxxxxxx přidat 15 g síranu xxxxxxx (3.10). Nechat xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (5.2) xx 100 xx x-xxxxxx (3.3) x xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx kapalinu xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx vrstvy xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxx nechat xxxxxxxx klesnou xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx postupu xxxx xx xx, xxx xxxxxxxx průtoku xxxx 8 až 12 xx xx xxxxxx a aby xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx kapalinu. Xxxx xxxxxxx 150 xx xxxxx chloroformu x xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx xxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxx proudem xxxxxxxxx xxxxx (3.11) x xxxxxxx vakuové xxxxxxx (4.5) xxx xxxxxxx xxxxx xxx 50 °X. Xxxxxxxx kvantitativně xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) do xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 xx (4.10). Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx inertního xxxxx (3.11), x xxxx xxxxxxx xxxxx xx 2 xx xx použití chloroformu (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 xx xx xxxxxx xxxxx a x xxxxxxxxx xx 2 xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků x extraktu:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.3 x k xxxx 20 μx standardního xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μl xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx ve xxx xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18). Xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx jakostního standardního xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x musí xx ověřit, xxx xxxx aflatoxiny X1 x X2 xxx xxxxxxxx zcela xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx odpařit xx xxx x poté xxxxxx xxxxx UV xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 cm od xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx fluorimetricky xxxxx xxxxxx pokynů:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx stanoví porovnáním xxxxxxxxx fluorescence skvrn xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx standardního xxxxxxx. V případě xxxxxxx se interpoluje. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx přes standardní xxxxxx musí xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx 10 ml xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx než xxxxx skvrna. Pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 10 μl xxxxxxxx xxxxxxxx než xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx 10 krát xxxx 100 krát xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1 se xxxx fluorimetrem (4.12) xxx excitační vlnové xxxxx 365 nm x xxxxxx xxxxx 443 nm. Množství xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxx B1.
5.6 Xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx získaný xxxxx xxxx 5.4 nastříkat xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 se xxxx xxx XX xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx tvorbu xxxxxxxxxx B1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx pracovní xxxxxxx xx xxxx provádět xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx dvěma xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 cm xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx čel xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx roztoky:
- x xxxx X: objem xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3, který obsahuje xxx 2,5 nm xxxxxxxxxx X1,
- x xxxxxx X a X: 25 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx xxxxx X, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k vymezující xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx tmě a xxx pokojové teplotě. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx x xxxxx 2,5 xx, který xxxxxxx body A x X (xx xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), dokud xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx zbytek xxxxx je xxxxxxx xxxxxxx papírem. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx tmě, x xxxx xxxxxxx desku xxxxxxx vzduchu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx o xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě ve xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx oschnout pět xxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx chromatogramu
Pozorovat xxxxxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx (4.9) a xxxxxx xxxx znaky:
a) Xxxxxxxx xx modré xxxxxxxxxxxxx skvrny aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztoku naneseného x xxxx C (xxxxxxx xx směru X).
x) Xxxxxxxx se xxxxx fluoreskující xxxxxx xxxxxxxxxx X1 (který xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx) x intenzivnější xxxxx fluoreskující xxxxxx xxxxxxxxxx B1 – xxxxxxxxxxx, přičemž obě xxxxxx pocházejí xx xxxxxxxxxxxx roztoku naneseného x xxxx X (xxxxxxx xx směru XX).
x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxx xxxxxxx x xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X. Xxxxxx těchto xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx vzdáleností xxxxxxxxxx X1 xx xxxx X ve xxxxx X (xxxxxx xxxxxxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X) x xxxx migrační xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 – hemiacetalu xx xxxx X xx xxxxx XX (stejná xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxx pocházejících x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx na 1 xx vzorku (xxx) xx vypočítá xxxxxx xxxxxx:
X · X · X / X · X
xxx:
X x X xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) x xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, v mikrogramech xx 1 xx, xxxxxxxxxx X1 ve xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
V = konečný xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx x xxxxxxx, s xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx použitý xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx vzorku (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx desku (10 μx xxxx 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, x xxxxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx X) xxxxxxxx z xxxxxx;
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx v mikrolitrech, x xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, s xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx použitý xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 v xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx xx xx 8 do 10 μx/xx. Xxxxxxxx absorpční xxxxxxxx mezi 330 x 370 xx xx xxxxxxx spektrofotometru (4.11).
Xxxxxx optickou hustotu (X) xxx 363 xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx 348 xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx roztok; 312 · X · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · A · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 xxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx ředění x cílem xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx asi 0,1 μg/ml. Xxxxx xx roztok xxxxxxxx x chladničce při 4 °X, je xxxxx xx xxxx xxxx týdnů.
7.2 Testování xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 až 10 μl xxxxxxxxxx X1 na 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, jak je xxxxxxx x xxxx 5.4. Při XX xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx pouze xxxxx skvrna x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxxx xxx xxxxxxxx žádná xxxxxxxxxxxx.
8. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx 10 do 20 μx/xx,
- 5 μx xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxxx od 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
9. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. METODA XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX CHROMATOGRAFIE
1. Xxxx a rozsah
Tato xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x krmivech, xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx X. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx je 0,01 xx/xx (10 ppb). Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxx citrusovou pulpu.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxx část se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografií na xxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxx a xxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxxxxx xxxxxx chloroformu xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx aflatoxinu B1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx být potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx stanoveno xxxxx, xxxxxxx činidla musí xxx xxxxxxx "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx chromatografii, velikost xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Absorbent – xxxx, předem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, bezvodý, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková 1 N.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) promytá xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx G–HR xxxx xxxxxxxxxx, pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Vyvíjecí xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/voda 94/4,5/1,5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx a kontrolovaný xxx je xxxxxxx x xxxx 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 xxxxxx X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 a3.5 metody X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx |
5.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografie
5.4.1 Nanesení xxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Narýsovat xx xxxxx (4.8) xxx přímky xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx strany), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx čel xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx kapilárních xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- x xxxx A: 20 μx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3,
- x xxxx B: 20 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16),
- v xxxx X: 10 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 20 μl standardního xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx proudem xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Získané xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx se vyvíjí xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x chromatografickém xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx směru X, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nechat xxxxxxxx 15 minut xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx rozpouštědla (3.15.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx II, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx oschnout xx xxx x při xxxxxxxx teplotě.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx UV xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xx vzdálenosti 10 cm od xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X, X, D x X. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx těmito xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx X těchto xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxx xxx očekávat xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (obrázek 1). Xxxxxxxx poloha xxxxxx xxxxxxxxxx X1 však xxxx xxx x xxxx X xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxx xxxxxx svírajících xxxx xxx 100 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx X x X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx, xxx je uvedeno x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx na xxxxx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx dvěma přilehlými xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx obrázku 1, x nanést na xxx A (viz xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx 5.3, x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16). Xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX světlem (4.9) x xxxxxx xxx:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 z xxxxxxxx x ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- fluorescence xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx se xxxxxxxx x xxxx X xx xxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx vizuálně nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Vizuální měření
Množství xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx X, X x X xxxxxxxxxxxx roztoku. V xxxxxxx potřeby xx xxxxxxxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx fluorescence 20 μx extraktu xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx roztok 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x xxxx znovu xxxxxxxx tenkovrstvé chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx měření
Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxx fluorimetrem (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx a xxxxxx xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx X, D x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxx xxx 5.6 metody X.
6. Xxxxxxx výsledků
Viz bod 6 xxxxxx X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx A.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
C. XXXXXXXX XXXXXXXX XX XXXXX X A X
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx obsahující více xxx 5 % xxxx xx musí xx xxxxxxxx podle xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. v. 40 xx 60 °X).
X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorku.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xx. xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx laboratořemi xx stejného xxxxxx, xx xxxxxxxx na:
± 50 % střední xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x 10 μx/xx xx xx 20 μx/xx;
± 10 μg/kg xx základě střední xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx od 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx pro střední xxxxxxx vyšší xxx 50 μg/kg.
Dodatek k xxxxxxx
