Xxxxx směrnice Komise
ze xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx metod odběru xxxxxx x analytických xxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv [1], naposledy pozměněnou xxxxx x xxxxxxxxxxx [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx směrnice,
vzhledem k xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx stanoví, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx cílem xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx provádějí podle xxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx směrnice Xxxxxx 71/250/XXX xx xxx 15. července 1971 [3], 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/XXX xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX ze xxx 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/XXX xx xxx 25. března 1974 [7] a 75/84/XXX xx dne 20. xxxxxxxx 1974 [8] již stanovily xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx na xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx prací xx xxxx xxxxx xxxxxxxx sedmou xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem x xxxx, xx opatření xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx úřední kontroly xxxxx, pokud xxx x xxxxx xxxxxxxxxx X1, se xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x části 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx týkající xx přípravy vzorku x analýze, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x příloze xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx a správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí nejpozději xx 1. xxxxx 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx Komisi.
Článek 3
Xxxx xxxxxxxx xx určena členským xxxxxx.
X Bruselu xxx 1. xxxxxx 1976.
Xx Xxxxxx
X. J. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Úř. věst. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Úř. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. věst. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX X1
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxxx olejná, xxxxx, lněná xxxxxx, xxxx, sezam, xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx a xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxx mouka, bramborová xxxxx x xxxxx. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx přítomny xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx X (dvourozměrná xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x jeho alikvotní xxxx xx xxxxxxx x přečistí kolonovou xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu. Xxxxxxxxx xxxx tohoto xxxxxxx xx podrobí tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx X1 se stanoví x xxxxxxxxxxxxx xxx XX světlem xxx xxxxxxxx nebo fluorimetricky xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx standardu xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 extrahovaného z xxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxx "x. a".
3.1 Aceton.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 procentem 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, neobsahující xxxxxxxx.
3.6 Směs xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx chloroformu (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx pro kolonovou xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx odtučněná xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx sodný, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, např. dusík.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) xxxxxxxx xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx B1 x X2 na 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx koncentrace jsou xxxxxxxxxx. Musí xxx xxxxxxxx tak, xxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx fluorescence x xxxx aflatoxinů.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Chloroform (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), chromatografický xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nasycenou xxxxxxxxxx;
3.18.4 Chloroform (3.2)/methanol (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx atmosférou.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Drtič – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Skládané xxxxxxxxx xxxxxx, Schleicher x Xxxüxx x. 588 xxxx ekvivalentní, xxxxxx 24 cm.
4.4 Xxxxxxxx chromatografická xxxxxxx (xxxxxxx průměr 22 xx, délka 300 xx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxx a 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx odparka, x xxxxxx x objemu 500 xx x xxxxxxx dnem.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 ml, xx xxxxxxxxxxx zátkami.
4.7 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii, 200 x 200 xx, xx xxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx množství stačí xxx pět xxxxx): xxx 30 g xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Erlenmeyerovy xxxxx, xxxxxx 60 xx xxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx vytvořila xxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx 0,25 mm. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx vykazují xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 XX xxxxx xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, aby xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxx xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx byla xx xxxxxxxxxx 10 cm xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 xx, x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx takovým xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxx x xxxxxxxxx 1 xx (x souladu x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Přidat 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 ml xxxx x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx promíchávat 30 xxxxx xxxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, poté xxxxxx 50 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně
Do spodní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) xxxxxx zátku x xxxx xxxx xx xxxxxx xxxx (3.9), xxxxxxx xxxxxxx xx do xxxx xxxxxx chloroformem (3.2), x xxxx xxxxxx 5 x xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Ověřit, xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného je xxxxx xxxxx, x xxxx xxxxxx xx xxxxxx dávkách 10 x xxxxxxxxxx (3.8). Xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xx odstranily xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx stát, x xxxx opatrně xxxxxx 15 g xxxxxx xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x hornímu povrchu xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx (5.2) se 100 xx x-xxxxxx (3.3) x xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx do kolony. Xxxxxx xxxxxxxx klesnout xx x hornímu xxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx diethyletheru (3.5) x znovu xxxxxx xxxxxxxx klesnou xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx postupu xxxx xx xx, xxx rychlost xxxxxxx xxxx 8 až 12 xx xx xxxxxx a xxx xxxxxx nevyschla. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx 150 xx xxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx xxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11) v xxxxxxx xxxxxxx odparce (4.5) xxx xxxxxxx xxxxx než 50 °X. Xxxxxxxx kvantitativně xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx zkumavky o xxxxxx 10 xx (4.10). Xxxxxxxxxxxx roztok xxx xxxxxxx inertního xxxxx (3.11), a xxxx doplnit xxxxx xx 2 xx xx xxxxxxx chloroformu (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x acetonitrilu (3.6).
5.4 Tenkovrstvá chromatografie
Na xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) nanést 2 cm xx xxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxx xx 2 cm tyto xxxxxx standardních xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku alfatoxinu X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3 x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μl xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.
Chromatogram se xxxxxx xx xxx xx xxxxxxx jednoho x vyvíjecích xxxxxxxxxxxx (3.18). Výběr rozpouštědla xx xxxx provést xxxxxx nanesením 25 μx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x xxxx xx xxxxxx, xxx xxxx aflatoxiny X1 x X2 xxx xxxxxxxx zcela xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxx a xxxx xxxxxx xxxxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx provádí xxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx pokynů:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x extraktu xx xxxxxxx porovnáním xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx 10 xx extraktu x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx než xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx intenzita xxxxxxxxxxxx 10 μl xxxxxxxx xxxxxxxx xxx intenzita xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6) a xxxx znovu podrobit xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Fluorimetrické xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1 se xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx excitační xxxxxx xxxxx 365 nm x emisní xxxxx 443 nm. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx jejich xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx B1.
5.6 Xxxxxxxxx identity aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx kyselinou sírovou
Na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 nastříkat xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxx UV xxxxxxx xxxxxx x modré xx xxxxxx.
5.6.2 Dvourozměrná xxxxxxxxxxxxxx zahrnující tvorbu xxxxxxxxxx B1 - xxxxxxxxxxx (aflatoxin X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx pracovní xxxxxxx xx musí xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx obrázku 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx přímky xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx (6 cm xx xxxxx strany), xxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx na desku xxxxxx xxxxxxxxxxx pipet xxxx injekčních xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- v xxxx A: objem xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3, který xxxxxxxx xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx X1,
- v xxxxxx X x X: 25 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx se vyvíjí xx použití xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx v xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] ve xxx xx směru I, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx pět xxxxx xx tmě x xxx pokojové xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) na xxxxx o xxxxx 2,5 xx, který xxxxxxx xxxx X x X (na xxxxxxx 3 vyznačeno xxxxxxxxx), dokud xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx xxx, x xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx vzduchu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx se xxxxxxxxxxxx vyvíjí xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxxxxxxx atmosférou] xx xxx ve xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx desku x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx oschnout pět xxxxx ve xxx x při xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxxx znaky:
a) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx naneseného x xxxx X (xxxxxxx ve xxxxx X).
x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxxxx xxxxx fluoreskující skvrny xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx naneseného x bodu X (xxxxxxx ve xxxxx XX).
x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx, jaké xxxx popsány x xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X. Poloha těchto xxxxx xxxxxxx xxxxxx x migrační vzdáleností xxxxxxxxxx B1 xx xxxx X ve xxxxx X (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X) x xxxx migrační xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 – hemiacetalu xx xxxx X xx xxxxx XX (stejná xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X). Xxxxxxxxxxxxx intenzity skvrn xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx z xxxxxxxx x ze xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x bodu X xx si xxxx xxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxx (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X · X · X / X · X
xxx:
X a X xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrolitrech (3.16) x xxxxxxxx, xxxxx xx stejnou xxxxxxxxx fluorescence;
S = xxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxx roztoku (3.16);
V = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx, x ohledem na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx xx koloně.
6.2 Xx základě fluorimetrického xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxx (xxx) xx vypočítá xxxxxx vzorce:
S·V / X·X
xxx:
X = objem xxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx nebo 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, x xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx Y) xxxxxxxx z xxxxxx;
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x mikrolitrech, x xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x gramech, s xxxxxxx xx objem xxxxxxxx použitý xxx xxxxxxxxxx xx koloně.
7. Xxxxxxxx x testování xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx standardní roztok xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx xx xx 8 do 10 μx/xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx mezi 330 x 370 xx xx xxxxxxx spektrofotometru (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (X) xxx 363 xx x případě xxxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxx xxx 348 xx x případě xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx koncentraci xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xxxxxx tohoto xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx roztok; 312 · X · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · X · 1 000 / 19&xxxx;800 xxx xxxxxx xx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx příslušná xxxxxx x xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx asi 0,1 μx/xx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx 4 °X, xx xxxxx xx dobu xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx na xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 xx 10 μx xxxxxxxxxx X1 na 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx v bodu 5.4. Xxx XX xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxxx xxx xxxxxxxx žádná xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, nesmí xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx 10 do 20 μx/xx,
- 5 μx absolutní xxxxxxx xxx obsahy xx 20 do 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx vyšší xxx 50 μx/xx.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
B. METODA XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx umožňuje stanovit xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx X. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx je 0,01 xx/xx (10 ppb). Xxxx xxxxxx se xxxxxxxxx xxx krmiva xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pulpu.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se extrahuje xxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx část xx xxxxxxx a přečistí xxxxxxxxx chromatografií xx xxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxx x residuum xx rozpustí xx xxxxxxxxxx xxxxxx chloroformu xxxx ve xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx tohoto xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx vizuálně xxxx flourometricky xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1. Xxxxxxxx aflatoxinu B1 xxxxxxxxxxxxx x krmiv xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Činidla
Poznámka:
Pokud xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx činidla xxxx xxx čistoty "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Chloroform xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – vata, předem xxxxxxxxx chloroformem, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Síran xxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx plyn, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) promytá kyselinou.
3.14 Xxxxxxxxx G–HR nebo xxxxxxxxxx, pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Vyvíjecí xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda 94/4,5/1,5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Chloroform (2.3)/aceton (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx atmosférou.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 7 xxxxxx A.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 xxxxxx X.
5. Postup
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx body 5.1, 5.2 a3.5 metody X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx |
5.4 Dvourozměrná xxxxxxxxxxx chromatografie
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx schématu xx xxxxxxx 1)
Narýsovat xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx pipet xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- x xxxx A: 20 μx xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3,
- x xxxx X: 20 μx standardního roztoku (3.16),
- x xxxx X: 10 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16),
- x xxxx X: 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- v xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx proudem xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Získané xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Vyvíjení (xxxxx xxxxxxxx na obrázku 1)
Xxxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x tloušťce 1 xx x chromatografickém xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx směru X, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx oschnout 15 xxxxx ve xxx a xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx rozpouštědla (3.15.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxxxxxxx atmosférou] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx xxxxxxxx ve xxx x xxx xxxxxxxx teplotě.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxx schématu xx xxxxxxx 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx UV světlem, xxxxxxx se xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 cm xx xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx xxxxxxx fluoreskujících xxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X, X, X x X. Xxxxxxxxx xxx pomyslné xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx těmito xxxxxxxx x svírají xxxxx úhel s xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx X xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 pocházející x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 však xxxx být x xxxx Q xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx svírajících xxxx xxx 100 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx X x X. Množství aflatoxinu X1 v xxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx, xxx xx uvedeno x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx chromatografie
Narýsovat xx xxxxx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx ve xxxxxxxx xx xxxxxxx 1, x xxxxxx xx xxx X (xxx xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxx podle xxxx 5.3, x k xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx jak xx xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX světlem (4.9) x xxxxxx xxx:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx se xxxxxxxx x xxxx X xx první desce.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vizuálně xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx těchto xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx C, X x X xxxxxxxxxxxx roztoku. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxxx silnější xxx xxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx roztok 10 xxxx xxxx 100 xxxx chloroformem (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), x poté xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxx fluorimetrem (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx x emisní xxxxxx délce 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxx extraktu xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx intenzity xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx C, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxx xxx 5.6 metody X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxx 6 xxxxxx X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx X.
8. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", část X xxx 2.
C. XXXXXXXX XXXXXXXX XX XXXXX X X B
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx se xxxx xx přípravě xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. x. 40 xx 60 °X).
X takových xxxxxxxxx xxxx být analytické xxxxxxxx vyjádřeny xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků, xx. xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx na:
± 50 % střední xxxxxxx pro střední xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x 10 μx/xx xx xx 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx základě střední xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx xxx střední xxxxxxx vyšší než 50 μx/xx.
Xxxxxxx k xxxxxxx
