Sedmá xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx úřední kontrolu xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx a analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx o přistoupení [2], x zejména xx článek 2 xxxxxxx směrnice,
vzhledem k xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx stanoví, že xxxxxx kontroly krmiv, xxxxxxx xxxxx je xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisy a xxxxxxxxxx se jakosti x xxxxxxx krmiv, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX ze xxx 15. července 1971 [3], 71/393/EHS xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/XXX xx dne 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX ze xxx 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/XXX xx xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX xx dne 20. xxxxxxxx 1974 [8] xxx stanovily xxxx xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx na xxxx xxxxxxx provedených xxxxx xx však nutné xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx opatření xxxx směrnice xxxx x souladu se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx kontroly xxxxx, pokud jde x xxxxx xxxxxxxxxx X1, se xxxxxxxxx xxxxx xxxxx popsaných x xxxxxxx této xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení uvedená x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Komise 71/250/EHS xx dne 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx týkající xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx směrnice.
Článek 2
Xxxxxxx státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Článek 3
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
X Bruselu xxx 1. března 1976.
Xx Xxxxxx
X. X. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Úř. věst. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Úř. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Úř. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Úř. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
PŘÍLOHA
STANOVENÍ XXXXXXXXXX B1
A. XXXXXX JEDNOROZMĚRNÉ TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x těchto xxxxxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx, xxxxx xxxxxx, xxxx, sezam, babassu xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx, obiloviny x xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, které xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx analýzu podle xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x jeho xxxxxxxxx xxxx xx odebere x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na silikagelu. Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxx ve stanoveném xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Množství aflatoxinu X1 se stanoví x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx buď xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Identita aflatoxinu X1 extrahovaného z xxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx stanoveno xxxxx, xxxxxxx činidla xxxx xxx xxxxxxx "x. a".
3.1 Aceton.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 procentem 96 % (V/V) xxxxxxxx.
3.3 N–hexan.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Směs chloroformu (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (V/V).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, předem odtučněná xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) kyselina xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (hyflosupercel), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx X–XX xxxx ekvivalent, xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii.
3.16 Standardní xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxx xx uvedeno x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 x X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxx xxx, aby xx xxxxxxx stejná xxxxxxxxx fluorescence x xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/aceton (3.1): 9/1 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Diethylether (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), chromatografický xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Chloroform (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nasycenou atmosférou.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Třepačka xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Skládané xxxxxxxxx papíry, Xxxxxxxxxx x Xxxüxx x. 588 nebo xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, délka 300 xx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxx a 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x xxxxxx o xxxxxx 500 ml x xxxxxxx dnem.
4.6 Erlenmeyerovy xxxxx x xxxxxx 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii, 200 x 200 xx, xx xxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx množství xxxxx xxx xxx xxxxx): xxx 30 g xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx 60 ml xxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx 1 minutu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstva x xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx uschnout xx xxxxxxx x poté xxxxxxx v desikátoru xxxxxxxxxxx silikagel. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx desky xxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 XX lampa xxxxxxxxxxx (360 mm). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, aby xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx byla xx xxxxxxxxxx 10 cm xx lampy xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Odměrné xxxxxxxx x objemu 10 ml, s xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (volitelný).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 1)
Rozmělnit xxxxxx takovým xxxxxxxx, xxx celý prošel xxxxx s xxx x velikosti 1 xx (v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx ISO X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 xx xxxx x 250 ml xxxxxxxxxxx (3.2). Zazátkovat, xxxxxxxxxxx xxxx promíchávat 30 minut xxxxxxxxx (4.2) a přefiltrovat xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, xxxx sebrat 50 ml.
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx
Xx spodní xxxxx chromatografické trubice (4.4) xxxxxx zátku x xxxx nebo xx skelné vaty (3.9), xxxxxxx trubici xx xx xxxx xxxxxx chloroformem (3.2), x poté xxxxxx 5 g síranu xxxxxxx (3.10).
Ověřit, xx xxxxx povrch xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x xxxx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxx 10 x xxxxxxxxxx (3.8). Xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx zamíchat, aby xx odstranily vzduchové xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx stát, x xxxx opatrně xxxxxx 15 x xxxxxx xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx až x xxxxxxx povrchu xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (5.2) xx 100 xx x-xxxxxx (3.3) x xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx k hornímu xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x znovu nechat xxxxxxxx klesnou xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného. Xxxxx xxxxxx postupu xxxx xx xx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx 8 xx 12 xx xx xxxxxx x aby xxxxxx nevyschla. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx kapalinu. Xxxx xxxxxxx 150 xx xxxxx chloroformu x xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx xxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx do xxxxx xxx proudem xxxxxxxxx xxxxx (3.11) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5) xxx teplotě xxxxx xxx 50 °X. Xxxxxxxx kvantitativně xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6) do xxxxxxx zkumavky o xxxxxx 10 ml (4.10). Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11), a xxxx xxxxxxx xxxxx xx 2 ml xx použití xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6).
5.4 Tenkovrstvá xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 cm xx xxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxx po 2 xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx alfatoxinu X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3 x x xxxx 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxx xx použití xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18). Výběr xxxxxxxxxxxx xx musí xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.1) xx xxxxx a xxxx xx xxxxxx, zda xxxx aflatoxiny B1 x X2 xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxx a poté xxxxxx xxxxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 cm xx xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Kvantitativní xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx provádí buď xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx těchto pokynů:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství xxxxxxxxxx X1 x extraktu xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx se interpoluje. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx fluorescence 10 ml xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx než xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 10 μl xxxxxxxx xxxxxxxx xxx intenzita xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx 10 krát xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx znovu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx excitační xxxxxx xxxxx 365 xx x xxxxxx délce 443 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx porovnáním jejich xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx B1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx kyselinou xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx získaný podle xxxx 5.4 nastříkat xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxx XX xxxxxxx xxxxxx x modré xx xxxxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (aflatoxin X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx pracovní postupy xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxx xxxxxxxx xx obrázku 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx roztoků
Narýsovat xx xxxxx (4.8) xxx přímky rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx pipet xxxx injekčních mikrostříkaček xxxx roztoky:
- x xxxx A: xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3, xxxxx obsahuje xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx B1,
- x xxxxxx X x X: 25 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx vyvíjí xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s nenasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx I, xxxxx čelo rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx x nechat xxxxxxxx xxx xxxxx xx tmě a xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx kyselinu xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx o xxxxx 2,5 xx, xxxxx xxxxxxx xxxx X x X (na xxxxxxx 3 vyznačeno xxxxxxxxx), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx papírem. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx xxx, x xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx desku z xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx oschnout xxx xxxxx xx xxx x při xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx (4.9) a xxxxxx tyto xxxxx:
x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 pocházející xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X (xxxxxxx ve xxxxx X).
x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx) a intenzivnější xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx naneseného x xxxx B (xxxxxxx ve xxxxx XX).
x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx, jaké xxxx popsány x xxxx b), xxxxxxxxxxxxx xx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X. Xxxxxx těchto xxxxx vychází xxxxxx x migrační xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx X ve xxxxx X (xxxxxx xxxxxxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X) x xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx aflatoxinu B1 – xxxxxxxxxxx od xxxx A xx xxxxx II (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
6.1 Xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxx (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X · X · X / W · X
xxx:
X a X xxxx xxxxxxxxx objemy xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) a xxxxxxxx, xxxxx má xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, x mikrogramech xx 1 xx, xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x ohledem xx xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx x xxxxxxx, s xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx použitý pro xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech xx 1 xx vzorku (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx xxxx 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1, x xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx (poměrně x xxxxxxx xxxxxxx Y) xxxxxxxx z xxxxxx;
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x ohledem na xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, s xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx použitý xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), jehož xxxxxxxxxxx xx od 8 xx 10 μx/xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx mezi 330 x 370 xx xx použití xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (X) xxx 363 xx x případě xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxx 348 xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx benzenu a xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx koncentraci xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx roztok; 312 · X · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · X · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 xxx xxxxxx xx směsi benzenu x xxxxxxxxxxxx..
Xx tmě xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxx 0,1 μg/ml. Xxxxx xx xxxxxx skladuje x xxxxxxxxxx xxx 4 °X, xx xxxxx xx xxxx xxxx týdnů.
7.2 Testování xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 až 10 μl aflatoxinu X1 na 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x xxxx 5.4. Xxx UV xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx skvrna x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které x xxxxxxx vzorku xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, nesmí xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx aflatoxinu X1 xx 10 do 20 μg/kg,
- 5 μx absolutní xxxxxxx xxx xxxxxx od 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx C xxx 2.
X. METODA XXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 x krmivech, xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx X. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 ppb). Xxxx metoda se xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x jeho xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx objemu xxxxxxxxxxx xxxx ve xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx část xxxxxx xxxxxxx se podrobí xxxxxxxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx pod UV xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx x krmiv xxxx xxx potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx jinak, xxxxxxx xxxxxxx musí xxx čistoty "p.a".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) ethanolu.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost xxxxxx 0,05 až 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, předem xxxxxxxxx chloroformem, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx plyn, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 Křemelina (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx G–HR nebo xxxxxxxxxx, pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxx xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (V/V), chromatografický xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank s xxxxxxxxxxx atmosférou.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx obsahující asi 0,1 μx aflatoxinu X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi benzenu x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxx je xxxxxxx x xxxx 7 xxxxxx X.
4. Přístroje
Viz xxx 4 xxxxxx X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Příprava xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 x3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx |
5.4 Dvourozměrná xxxxxxxxxxx chromatografie
5.4.1 Nanesení xxxxxxx (podle schématu xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxx xx desku (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx dvěma xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx kapilárních xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx roztoky:
- x xxxx A: 20 μx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.3,
- x xxxx B: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 10 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x bodu X: 20 μx standardního xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx asi 5 xx.
5.4.2 Vyvíjení (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx se vyvíjí xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x chromatografickém xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx směru X, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x chromatografického xxxxx x xxxxxx oschnout 15 xxxxx xx xxx a při xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx linii. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx tanku a xxxxxx xxxxxxxx ve xxx x při xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx (podle schématu xx xxxxxxx 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 cm od xxxxx (4.9). Určit xxxxxx modrých xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxxxxxxx roztoku X, X, X x E. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx přímky, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx směry. Xxxxxxxx X xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxx xxx xxxxxxxx skvrnu xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx poloha xxxxxx xxxxxxxxxx X1 však xxxx xxx x xxxx X umístěném xx průsečíku xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx svírajících xxxx xxx 100 xxxxxx x protínajících xxxx B x X. Množství aflatoxinu X1 x extraktu xxxxxx se xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodu 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx desku (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx obrázku 1, x xxxxxx na xxx A (xxx xxxxxxx 1) 20 μx přečištěného xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxx xxxxx xxxx 5.3, x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx jak xx xxxxxxx v xxxx 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x ověřit zda:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- fluorescence xxxxxx skvrn xx xxxxxxxx xxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx B1, xxxxx xx xxxxxxxx x xxxx X xx xxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx X, X a E xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx fluorescence 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx roztok 10 xxxx xxxx 100 xxxx chloroformem (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), x xxxx znovu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 xx změří fluorimetrem (4.12) xxx excitační xxxxxx xxxxx 365 xx x emisní xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx skvrnách xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx C, X x X standardního xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx B1
Viz xxx 5.6 xxxxxx A.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxx 6 xxxxxx X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx bod 8 xxxxxx X.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx C xxx 2.
X. XXXXXXXX XXXXXXXX XX METOD X A X
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx obsahující xxxx xxx 5 % xxxx xx xxxx xx přípravě xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. v. 40 až 60 °X).
X xxxxxxxx případech xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx vyjádřeny xxxx xxxxxxxx neodtučněného vzorku.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků
Reprodukovatelnost xxxxxxxx, xx. rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku, xx xxxxxxxx na:
± 50 % střední xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1 x 10 μg/kg xx do 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx základě xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
Xxxxxxx x xxxxxxx
