Sedmá xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. března 1976,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx x analytických xxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x přistoupení [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx krmiv, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX ze dne 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/EHS xx dne 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx xxx 5. prosince 1972 [6], 74/203/XXX ze xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX ze xxx 20. xxxxxxxx 1974 [8] již stanovily xxxx xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx však xxxxx xxxxxxxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem k xxxx, že opatření xxxx směrnice jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxxx X1, se provádějí xxxxx metod xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x části 1 (xxxx) xxxxxxx první xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 1. xxxxx 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx informují Komisi.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 1. xxxxxx 1976.
Za Xxxxxx
X. X. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. věst. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. věst. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Úř. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
PŘÍLOHA
STANOVENÍ XXXXXXXXXX B1
A. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx obsah aflatoxinu X1 v xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx, xxxxx semena, xxxx, xxxxx, xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxx mouka, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx rušivé xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx analýzu xxxxx xxxxxx X (dvourozměrná xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Princip
Vzorek xx extrahuje chloroformem. Xxxxxxx se xxxxxxxx x jeho xxxxxxxxx xxxx xx odebere x přečistí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Alikvotní xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx X1 se xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx standardu xxxxxxxxxx X1. Identita aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx není stanoveno xxxxx, všechna činidla xxxx xxx xxxxxxx "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 procentem 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 N–hexan.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Směs benzenu x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x methanolu (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx pro kolonovou xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Síran xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) xxxxxxxx xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), promytá xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx X–XX xxxx ekvivalent, xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii.
3.16 Standardní xxxxxx obsahující asi 0,1 μx aflatoxinu X1 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx roztok xxx xxxxxxxxx xxxxxxx obsahující xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 x X2 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx benzenu x acetonitrilu (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx. Musí xxx xxxxxxxx xxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx aflatoxinů.
3.18 Vyvíjecí xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Chloroform (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx tank s xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.2 Diethylether (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Chloroform (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), chromatografický tank x xxxxxxxxx atmosférou.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Skládané xxxxxxxxx xxxxxx, Schleicher x Schüll x. 588 xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, xxxxx 300 xx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 250 μx zásobníkem.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx odparka, s xxxxxx x objemu 500 xx x xxxxxxx xxxx.
4.6 Erlenmeyerovy xxxxx x xxxxxx 500 xx, se xxxxxxxxxxx zátkami.
4.7 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx desky xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii, 200 x 200 mm, xx připraví xxxxx (xxxxxxx xxxxxxxx stačí xxx xxx desek): xxx 30 g xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx 60 ml xxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstva x xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x poté xxxxxxx x desikátoru xxxxxxxxxxx silikagel. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx při 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx jsou vyhovující, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx desky xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 UV lampa xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxx 1 ng xxxxxxxxxx B1 xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx 10 xx xx lampy ještě xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 xx, x xxxxxxxxxxxxxxxx zátkami.
4.11 UV xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku (xxx "Xxxxxxxx", xxxx X bod 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx prošel xxxxx s xxx x velikosti 1 xx (x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Extrakce
Do Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 500 ml xxx 50 x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Přidat 25 x křemeliny (3.14), 25 ml xxxx x 250 ml xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx promíchávat 30 xxxxx xxxxxxxxx (4.2) x přefiltrovat xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Odstranit xxxxxxx 10 ml xxxxxxxx, xxxx xxxxxx 50 ml.
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně
Do xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) vložit xxxxx x vaty nebo xx xxxxxx xxxx (3.9), xxxxxxx trubici xx xx xxxx xxxxxx chloroformem (3.2), x xxxx xxxxxx 5 g xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného xx xxxxx xxxxx, x xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 10 x xxxxxxxxxx (3.8). Xx každém xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx xxxx, x xxxx opatrně přidat 15 g xxxxxx xxxxxxx (3.10). Nechat xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx extraktu xxxxxxxxx xxxxx xxxx (5.2) se 100 xx n-hexanu (3.3) x xxxx kvantitativně xxxxxx do kolony. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx k hornímu xxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxx. Přidat 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx x hornímu povrchu xxxxxx xxxxxx sodného. Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xx, xxx rychlost xxxxxxx xxxx 8 xx 12 xx za xxxxxx x xxx xxxxxx nevyschla. Odstranit xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx 150 xx xxxxx chloroformu x xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx celý xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx do xxxxx xxx proudem inertního xxxxx (3.11) v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5) xxx teplotě xxxxx xxx 50 °X. Reziduum xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6) do xxxxxxx zkumavky x xxxxxx 10 xx (4.10). Koncentrovat xxxxxx xxx proudem inertního xxxxx (3.11), a xxxx xxxxxxx xxxxx xx 2 ml xx xxxxxxx chloroformu (3.2) nebo směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx chromatografie
Na xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 cm od xxxxxx xxxxx x x odstupech po 2 cm xxxx xxxxxx standardních xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx alfatoxinu X1 (3.16),
- 10 μx extraktu získaného xxxxx xxxx 5.3 x k tomu 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.3.
Chromatogram xx xxxxxx ve tmě xx xxxxxxx jednoho x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18). Výběr xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx nanesením 25 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x musí xx xxxxxx, zda xxxx aflatoxiny B1 x X2 xxx xxxxxxxx xxxxx odděleny.
Nechat xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxx a xxxx xxxxxx xxxxx XX xxxxxxx xx vzdálenosti 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo fluorimetricky xxxxx xxxxxx pokynů:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství xxxxxxxxxx X1 x extraktu xx stanoví porovnáním xxxxxxxxx fluorescence skvrn xxxxxxxx x intenzitou xxxxxxxxxxxx xxxxx standardního xxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx než fluorescence 10 ml extraktu x xxxxx xxx xxxxxxxxx více xxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx intenzita xxxxxxxxxxxx 10 μx extraktu xxxxxxxx xxx intenzita xxxxxxxxxxxx 40 μl xxxxxxxxxxxx roztoku, xxxxxxxx xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 krát xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx xxxxx podrobit xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxx B1 se xxxx fluorimetrem (4.12) xxx excitační xxxxxx xxxxx 365 xx x xxxxxx xxxxx 443 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx fluorescence s xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxx xx provede takto:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx sírovou
Na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 xx musí xxx UV xxxxxxx xxxxxx z xxxxx xx xxxxxx.
5.6.2 Dvourozměrná xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx tvorbu xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx B2a)
Poznámky:
Níže xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx schématu xxxxxxxx xx xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx desku (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx (6 cm xx každé strany), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx desku xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- x xxxx X: xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.3, xxxxx xxxxxxxx xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx X1,
- x xxxxxx B x X: 25 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx vyvíjí xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx v xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] ve xxx xx xxxxx I, xxxxx čelo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxx stříkat xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx x šířce 2,5 xx, který xxxxxxx xxxx A x X (na xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, přičemž zbytek xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx papírem. Xxxxxx xxxxxxx 10 minut xx xxx, x xxxx xxxxxxx desku xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx se xxxxxxxxxxxx vyvíjí xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx] xx tmě xx xxxxx XX, dokud xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx desku z xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx oschnout xxx xxxxx xx tmě x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxxx xxxxx:
x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxx ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx naneseného x xxxx X (xxxxxxx xx směru X).
x) Xxxxxxxx se xxxxx fluoreskující xxxxxx xxxxxxxxxx X1 (který xxxxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx) a intenzivnější xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx x bodu X (xxxxxxx xx xxxxx XX).
x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxx popsány x xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx vzorku extraktu xxxxxxxxxx x xxxx X. Xxxxxx xxxxxx xxxxx vychází xxxxxx x migrační vzdáleností xxxxxxxxxx X1 xx xxxx X xx xxxxx X (stejná xxxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X) x dále xxxxxxxx xxxxxxxxxx aflatoxinu B1 – xxxxxxxxxxx xx xxxx A xx xxxxx XX (xxxxxx xxxxxxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx a xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu B xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
6.1 Xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech xx 1 xx vzorku (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X · X · X / X · X
xxx:
X x Y xxxx xxxxxxxxx objemy xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1 x mikrolitrech (3.16) x extraktu, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxx B1 ve xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x mikrolitrech, x xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx zkušebního vzorku x gramech, x xxxxxxx na objem xxxxxxxx použitý xxx xxxxxxxxxx xx koloně.
6.2 Xx základě fluorimetrického xxxxxx
Xxxxx aflatoxinu B1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx vzorku (xxx) se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx desku (10 μx xxxx 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, x xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx X) xxxxxxxx x měření;
V = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x mikrolitrech, x xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x gramech, x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx na xxxxxx.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx koncentrace aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 v xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx xx xx 8 xx 10 μx/xx. Xxxxxxxx absorpční xxxxxxxx mezi 330 x 370 xx xx použití xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (X) xxx 363 xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx 348 nm x případě xxxxxxx xxxxx benzenu a xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech xx 1 ml xxxxxxx pomocí tohoto xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx; 312 · X · 1 000 / 20&xxxx;600
312 · X · 1 000 / 19&xxxx;800 pro roztok xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx..
Xx tmě xxxxxxx xxxxxxxxx ředění x xxxxx získat xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxxxx X1 je xxx 0,1 μx/xx. Xxxxx xx roztok skladuje x chladničce při 4 °X, je xxxxx xx xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx na xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 xx 10 μl aflatoxinu X1 xx 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.4. Při XX xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx a x místě původního xxxxxxxx xx neměla xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxxxx xxxxxx analytik, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx 10 xx 20 μg/kg,
- 5 μx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx výsledku pro xxxxxx xxxxx než 50 μx/xx.
9. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", část X xxx 2.
X. METODA XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX CHROMATOGRAFIE
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx, které xxxxxxxxx xx oblasti xxxxxxxxxx xxxxxx X. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 ppb). Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx citrusovou xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx část se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxxxxx objemu xxxxxxxxxxx xxxx ve xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx pod UV xxxxxxx xxx vizuálně xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Činidla
Poznámka:
Pokud xxxx stanoveno xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx stabilizovaný 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 N–hexan.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 mm.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, předem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Síran xxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx kyselinou.
3.14 Xxxxxxxxx G–HR xxxx xxxxxxxxxx, xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxx xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx.
3.15.2 Chloroform (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx aflatoxinu X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x bodu 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 metody X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 x3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně |
5.4 Dvourozměrná xxxxxxxxxxx chromatografie
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx přímky rovnoběžné xx dvěma xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx každé xxxxxx), xxxxxx k vymezení xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx pipet xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx roztoky:
- x xxxx A: 20 μx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3,
- v xxxx B: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 10 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx D: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- v xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx proudem xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Získané xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx xx vyvíjí xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] ve xxx xx xxxxx X, xxxxx čelo rozpouštědla xxxxxxxxx k vymezující xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x nechat oschnout 15 minut xx xxx x xxx xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx vyvíjí xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx II, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x vymezující xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xx xxx x při xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx obrázku 1)
Ozářit xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx se deska xxxxxx xx vzdálenosti 10 xx od xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx modrých fluoreskujících xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxxx roztoku X, X, X x X. Načrtnout xxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx směry. Xxxxxxxx X xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxx xxx xxxxxxxx skvrnu xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (obrázek 1). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 však xxxx xxx x xxxx X xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx 100 xxxxxx x protínajících xxxx X a X. Množství aflatoxinu X1 x extraktu xxxxxx se xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx dvěma xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx obrázku 1, x nanést na xxx A (xxx xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxx xxxxx bodu 5.3, x k xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Xxxxxx chromatogram XX xxxxxxx (4.9) x ověřit zda:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 z xxxxxxxx x xx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- fluorescence xxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xxx fluorescence xxxxx aflatoxinu X1, xxxxx xx xxxxxxxx x xxxx Q xx xxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx X, X a E xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx fluorescence 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx nebo 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx a xxxxxx xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx skvrny xxxxxxxx x intenzitou xxxxx C, X x X standardního xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1
Viz xxx 5.6 metody X.
6. Xxxxxxx výsledků
Viz xxx 6 metody X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx X.
8. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", část C xxx 2.
X. POZNÁMKY XXXXXXXX XX XXXXX X A B
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx obsahující více xxx 5 % xxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. x. 40 xx 60 °X).
X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx vyjádřeny jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorku.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků, xx. xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx dvěma xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx na:
± 50 % střední xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x 10 μx/xx xx xx 20 μx/xx;
± 10 μg/kg xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % střední xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx vyšší než 50 μx/xx.
Xxxxxxx x xxxxxxx
