Sedmá xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxx [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxx, xx uvedená xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx krmiv, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/XXX xx dne 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx dne 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/XXX xx xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX xx dne 20. xxxxxxxx 1974 [8] xxx xxxxxxxxx xxxx analytických metod Xxxxxxxxxxxx; že s xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx prací xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem k xxxx, že xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x souladu se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxxx X1, xx provádějí xxxxx metod popsaných x příloze xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/EHS xx dne 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx týkající xx xxxxxxxx xxxxxx x analýze, xx xxxxxxx pro metody xxxxxxx x xxxxxxx xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
Členské státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 1. xxxxx 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 1. xxxxxx 1976.
Xx Xxxxxx
X. X. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. věst. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Úř. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Úř. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
PŘÍLOHA
STANOVENÍ XXXXXXXXXX B1
A. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx obsah xxxxxxxxxx X1 v xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxxx olejná, xxxxx, xxxxx semena, xxxx, xxxxx, xxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx a xxxxxxx x obilovin, xxxxxxxx mouka, xxxxxxxxxx xxxxx x škrob. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx je 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, které xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx analýzu podle xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se filtruje x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx směsi benzenu x xxxxxxxxxxxx. Alikvotní xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx stanoví x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx fluorimetricky xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aflatoxinu X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 extrahovaného x xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx stanoveným xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx činidla xxxx xxx čistoty "x. x".
3.1 Aceton.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (V/V) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, neobsahující xxxxxxxx.
3.6 Xxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx odtučněná xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Síran xxxxx, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) kyselina sírová.
3.14 Xxxxxxxxx (hyflosupercel), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii.
3.16 Standardní xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x zkontrolovaný, xxx je xxxxxxx x bodu 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 a X2 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx být xxxxxxxx xxx, xxx xx získala xxxxxx xxxxxxxxx fluorescence x xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.2 Diethylether (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x nasycenou xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Skládané xxxxxxxxx xxxxxx, Schleicher x Xxxüxx x. 588 nebo xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx chromatografická trubice (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, délka 300 xx) x teflonovým xxxxxxxx x 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx odparka, s xxxxxx o xxxxxx 500 xx x xxxxxxx xxxx.
4.6 Erlenmeyerovy xxxxx x xxxxxx 500 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Zařízení xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx desky pro xxxxxxxxxxxx chromatografii, 200 x 200 xx, xx xxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx množství xxxxx xxx xxx desek): xxx 30 x xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Erlenmeyerovy xxxxx, xxxxxx 60 ml xxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx xx vytvořila xxxxxxxxxxx vrstva x xxxxxxxx 0,25 mm. Xxxxxx uschnout xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx v desikátoru xxxxxxxxxxx silikagel. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx hodinu v xxxxxxx při 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx k xxxxxxx jsou xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 XX xxxxx xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx, aby xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx 10 cm xx xxxxx ještě xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Odměrné xxxxxxxx o xxxxxx 10 ml, s xxxxxxxxxxxxxxxx zátkami.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Fluorimetr (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku (xxx "Poznámky", část X xxx 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx s xxx x velikosti 1 xx (v souladu x doporučením ISO X 565).
5.2 Extrakce
Do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx x homogenizovaného xxxxxx. Přidat 25 x křemeliny (3.14), 25 ml xxxx x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Zazátkovat, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 30 minut třepačkou (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx skládaný filtrační xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 ml xxxxxxxx, xxxx sebrat 50 ml.
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně
Do spodní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) xxxxxx xxxxx x xxxx xxxx xx skelné vaty (3.9), xxxxxxx trubici xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x xxxx přidat 5 x síranu xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného xx xxxxx xxxxx, x xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 10 x xxxxxxxxxx (3.8). Xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx stát, a xxxx xxxxxxx přidat 15 g xxxxxx xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného.
Smíchat 50 ml extraktu xxxxxxxxx xxxxx bodu (5.2) xx 100 xx n-hexanu (3.3) x xxxx kvantitativně xxxxxx xx kolony. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx k xxxxxxx xxxxxxx vrstvy síranu xxxxxxx. Přidat 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxx klesnou až x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx to, xxx xxxxxxxx průtoku xxxx 8 xx 12 xx xx xxxxxx a xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx kapalinu. Xxxx xxxxxxx 150 xx xxxxx chloroformu x xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx celý eluát.
Odpařit xxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx inertního xxxxx (3.11) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5) xxx xxxxxxx xxxxx xxx 50 °X. Xxxxxxxx kvantitativně xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) do xxxxxxx zkumavky o xxxxxx 10 xx (4.10). Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx inertního xxxxx (3.11), a xxxx xxxxxxx xxxxx xx 2 xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) nebo směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6).
5.4 Tenkovrstvá xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 xx od xxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxx xx 2 xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μl xxxxxxxxxxxx roztoku alfatoxinu X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx získaného xxxxx bodu 5.3 x x xxxx 20 μx standardního xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxx xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx rozpouštědel (3.18). Výběr xxxxxxxxxxxx xx xxxx provést xxxxxx nanesením 25 μx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x xxxx xx ověřit, zda xxxx aflatoxiny X1 x B2 při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx ve xxx x xxxx xxxxxx xxxxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Skvrny xxxxxxxxxx X1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx těchto pokynů:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x extraktu xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx 10 xx extraktu x xxxxx být xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx skvrna. Xxxxx xx intenzita xxxxxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxx než xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, rozředit xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 se xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx x xxxxxx xxxxx 443 nm. Množství xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx porovnáním jejich xxxxxxxx fluorescence x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx provede xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xxxx 5.4 nastříkat xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 se musí xxx UV xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxx.
5.6.2 Dvourozměrná xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx tvorbu xxxxxxxxxx B1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx x vymezení xxxxxxx čel xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx na xxxxx xxxxxx kapilárních xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- v xxxx X: xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3, xxxxx xxxxxxxx xxx 2,5 nm xxxxxxxxxx B1,
- v xxxxxx X a X: 25 μl xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx použití vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x tloušťce 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx směru I, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x vymezující xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx pět xxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx o xxxxx 2,5 xx, xxxxx xxxxxxx body X x X (na xxxxxxx 3 vyznačeno xxxxxxxxx), dokud xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx zbytek xxxxx je xxxxxxx xxxxxxx papírem. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx xxx, x xxxx xxxxxxx desku xxxxxxx vzduchu při xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx rozpouštědla (3.18.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x chromatografickém tanku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx desku z xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx chromatogramu
Pozorovat xxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxxx xxxxx:
x) Xxxxxxxx xx modré xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx ze xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx ve xxxxx X).
x) Xxxxxxxx se xxxxx fluoreskující skvrny xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx) a intenzivnější xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, přičemž obě xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X (xxxxxxx ve xxxxx XX).
x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx, jaké xxxx xxxxxxx x xxxx x), pocházejících xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx jednak x xxxxxxxx vzdáleností xxxxxxxxxx X1 xx xxxx A ve xxxxx I (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X) x xxxx migrační xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 – xxxxxxxxxxx xx xxxx X ve xxxxx XX (stejná xxxxxxxxxx jako u xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x bodu X). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pocházejících x xxxxxxxx x ze xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx B xx si xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
6.1 Xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech xx 1 kg xxxxxx (xxx) se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X · X · X / X · X
xxx:
X x X xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxxxxxx (3.16) x xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, v mikrogramech xx 1 ml, xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
V = xxxxxxx objem xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx x gramech, s xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx na xxxxxx.
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx aflatoxinu X1 x mikrogramech xx 1 kg xxxxxx (xxx) se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx xxxx 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, x xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx Y) xxxxxxxx z xxxxxx;
X = konečný xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx x gramech, x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx xx koloně.
7. Xxxxxxxx x testování xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx koncentrace aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), jehož xxxxxxxxxxx xx xx 8 do 10 μx/xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx mezi 330 x 370 nm xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (X) xxx 363 xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx 348 nm x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx xxxxxx tohoto xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx; 312 · X · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · A · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 xxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx..
Xx tmě xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx získat xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxxxx X1 xx asi 0,1 μg/ml. Pokud xx xxxxxx xxxxxxxx x chladničce při 4 °X, xx xxxxx xx xxxx xxxx týdnů.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx čistoty
Nanést xx xxxxx (4.8) 5 μx standardního roztoku xxxxxxxxxxxx 8 xx 10 μl aflatoxinu X1 na 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxx 5.4. Xxx XX xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx, xxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, nesmí xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx 10 xx 20 μg/kg,
- 5 μx absolutní xxxxxxx xxx xxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxx 50 μg/kg.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x krmivech, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx X. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx). Xxxx metoda se xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx citrusovou xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxx. Extrakt se xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx x přečistí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Eluát se xxxxxx x residuum xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx objemu xxxxxxxxxxx xxxx ve xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx buď vizuálně xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxxxx z xxxxx xxxx xxx potvrzena xxxxxxxxxx postupem.
3. Činidla
Poznámka:
Pokud xxxx xxxxxxxxx jinak, xxxxxxx činidla musí xxx čistoty "p.a".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 N–hexan.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx peroxidy.
3.6 Xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx chromatografii, velikost xxxxxx 0,05 xx 0,20 mm.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, předem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, např. xxxxx.
3.12 Kyselina chlorovodíková 1 N.
3.13 Křemelina (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Vyvíjecí roztoky.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (V/V), chromatografický xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/aceton (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Standardní xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x kontrolovaný xxx xx xxxxxxx x xxxx 7 xxxxxx A.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 metody X.
5. Postup
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 x3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx |
5.4 Dvourozměrná xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Nanesení xxxxxxx (podle xxxxxxxx xx obrázku 1)
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx dvěma přilehlými xxxxxxxx (6 xx xx každé xxxxxx), xxxxxx x vymezení xxxxxxx xxx rozpouštědel. Xxxxxx na xxxxx xxxxxx kapilárních xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3,
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- v bodu X: 10 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 20 μx standardního xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx proudem xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx xxxx mít xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx X, xxxxx čelo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxx. Vyjmout xxxxx x chromatografického tanku x nechat oschnout 15 xxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx vyvíjí za xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva o xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou] xx tmě ve xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx desku x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx teplotě.
5.4.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx (xxxxx schématu xx xxxxxxx 1)
Ozářit xxxxxxxxxxxx XX světlem, xxxxxxx se xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 xx standardního xxxxxxx X, X, X x X. Načrtnout xxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx procházejí xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx úhel s xxxxxxxxxx xxxxx. Průsečík X těchto přímek xxxxxx místo, xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx xxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 však xxxx xxx v xxxx X umístěném xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx svírajících xxxx asi 100 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx B x X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xxxxxx xx stanoví, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx desku (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx dvěma přilehlými xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1, x nanést xx xxx A (xxx xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxx xxxxx xxxx 5.3, x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx xxx je xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxx:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 z extraktu x ze standardního xxxxxxx překrývají,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1, xxxxx se xxxxxxxx x bodu X xx první desce.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení xx xxxxxxxxxx vizuálně xxxx xxxxxxxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx X, X x X xxxxxxxxxxxx roztoku. V xxxxxxx potřeby se xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x poté xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx a xxxxxx xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxx extraktu xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx X, X x E xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxx xxx 5.6 metody A.
6. Xxxxxxx výsledků
Viz xxx 6 xxxxxx X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx bod 8 xxxxxx A.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", část C xxx 2.
C. XXXXXXXX XXXXXXXX SE XXXXX X A X
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx se xxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. x. 40 xx 60 °X).
X xxxxxxxx případech xxxx být analytické xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx neodtučněného vzorku.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků
Reprodukovatelnost xxxxxxxx, xx. xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx laboratořemi xx xxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx:
± 50 % střední xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1 x 10 μx/xx xx xx 20 μx/xx;
± 10 μg/kg xx základě xxxxxxx xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % střední xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xxxxx xxx 50 μg/kg.
Dodatek x xxxxxxx
