Sedmá xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. března 1976,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x přistoupení [2], x xxxxxxx xx článek 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxx, že xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k tomu, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx dne 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/XXX xx dne 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX ze dne 5. prosince 1972 [6], 74/203/XXX xx xxx 25. března 1974 [7] x 75/84/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1974 [8] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx s xxxxxxx xx stav xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx však nutné xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem k xxxx, xx opatření xxxx směrnice xxxx x souladu se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxxx X1, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx popsaných x příloze této xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx informují Xxxxxx.
Článek 3
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 1. března 1976.
Xx Xxxxxx
X. X. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Úř. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Úř. věst. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Úř. věst. X 32, 5.2.1975, x. 26.
PŘÍLOHA
STANOVENÍ AFLATOXINU B1
A. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 v xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx, xxxxx xxxxxx, xxxx, sezam, xxxxxxx xxxxx a kukuřičné xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx z xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx je 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx přítomny xxxxxx xxxxx, které xxxxxxx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx B (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x jeho alikvotní xxxx xx odebere x přečistí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx ve stanoveném xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 se xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx buď xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aflatoxinu X1. Identita aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxxxx z xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx není stanoveno xxxxx, všechna xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 procentem 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, neobsahující xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x acetonitrilu: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x methanolu (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Absorbent – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková 1 X.
3.13 50 % (X/X) xxxxxxxx xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Silikagel X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Standardní xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 x X2 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Musí být xxxxxxxx xxx, xxx xx získala xxxxxx xxxxxxxxx fluorescence u xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Vyvíjecí xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/aceton (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.2 Diethylether (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), chromatografický xxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nasycenou xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Chloroform (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx míchačka.
4.3 Skládané xxxxxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxxx x Xxxüxx x. 588 nebo xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, xxxxx 300 xx) s xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 250 μx zásobníkem.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x xxxxxx x xxxxxx 500 xx a xxxxxxx xxxx.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o objemu 500 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx desky xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii, 200 x 200 mm, xx xxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxx desek): xxx 30 g xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky, xxxxxx 60 ml xxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx 0,25 mm. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x desikátoru xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx aktivovat xxxxx xxxxx hodinu v xxxxxxx při 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx vykazují podobné xxxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 UV xxxxx xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx záření xxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx ještě xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Odměrné xxxxxxxx x objemu 10 ml, x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 UV xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", xxxx X bod 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx s oky x xxxxxxxxx 1 xx (x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx x homogenizovaného xxxxxx. Přidat 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 ml vody x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Zazátkovat, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx skládaný xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, xxxx sebrat 50 xx.
5.3 Přečištění xx koloně
Do xxxxxx xxxxx chromatografické xxxxxxx (4.4) vložit xxxxx x xxxx xxxx xx skelné vaty (3.9), naplnit xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxx chloroformem (3.2), x xxxx xxxxxx 5 x xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, a xxxx xxxxxx po xxxxxx dávkách 10 x silikagelu (3.8). Xx xxxxxx přidání xxxxxxx zamíchat, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Nechat 15 xxxxx xxxx, a xxxx xxxxxxx xxxxxx 15 x síranu xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx až x xxxxxxx povrchu xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx (5.2) se 100 xx x-xxxxxx (3.3) x xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx kapalinu xxxxxxxx xx k xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx diethyletheru (3.5) x znovu xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx povrchu xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx to, xxx xxxxxxxx průtoku xxxx 8 xx 12 xx xx xxxxxx a xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx 150 xx xxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx celý xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx do xxxxx xxx proudem inertního xxxxx (3.11) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5) při xxxxxxx xxxxx xxx 50 °X. Reziduum kvantitativně xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 xx (4.10). Koncentrovat xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11), a xxxx xxxxxxx xxxxx xx 2 xx xx použití xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx a acetonitrilu (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 xx xx xxxxxx hrany a x odstupech xx 2 cm xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx extraktu získaného xxxxx xxxx 5.3 x x tomu 20 μx standardního xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.
Chromatogram se xxxxxx xx xxx xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18). Xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx nanesením 25 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x musí xx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx B1 x B2 xxx xxxxxxxx zcela odděleny.
Nechat xxxxxxxxxxxx odpařit ve xxx x xxxx xxxxxx xxxxx UV xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Skvrny xxxxxxxxxx X1 modře xxxxxxxxxxx.
5.5 Kvantitativní xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx aflatoxinu X1 x extraktu xx xxxxxxx porovnáním xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx s intenzitou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx xx interpoluje. Xxxxxxxxxxxx získaná xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx 10 ml xxxxxxxx x xxxxx být xxxxxxxxx více než xxxxx xxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 10 μx extraktu xxxxxxxx xxx intenzita xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx xxxxx podrobit xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 se xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx excitační xxxxxx xxxxx 365 nm x xxxxxx xxxxx 443 xx. Množství xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx B1.
5.6 Xxxxxxxxx identity aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x extraktu xx provede xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx kyselinou sírovou
Na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxx X1 xx musí xxx XX zářením xxxxxx x xxxxx xx žlutou.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx zahrnující xxxxxx xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx pracovní postupy xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx roztoků
Narýsovat xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 cm xx každé xxxxxx), xxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx kapilárních xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- x xxxx X: xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3, xxxxx xxxxxxxx xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx X1,
- x xxxxxx B x X: 25 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx použití xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx v xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx X, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxx minut xx tmě a xxx pokojové teplotě. Xxxx stříkat xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx o šířce 2,5 cm, xxxxx xxxxxxx xxxx X x X (xx xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx xx chráněn xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx tmě, x xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx vzduchu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx linii. Xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx tanku a xxxxxx xxxxxxxx pět xxxxx xx xxx x při pokojové xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pod UV xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxxx znaky:
a) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 pocházející xx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx x xxxx C (xxxxxxx ve xxxxx X).
x) Objevení se xxxxx fluoreskující xxxxxx xxxxxxxxxx X1 (který xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx xx směru XX).
x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxx xxxxxxx x xxxx b), xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxx X. Poloha xxxxxx xxxxx vychází jednak x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx X ve xxxxx I (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu C) x dále xxxxxxxx xxxxxxxxxx aflatoxinu X1 – xxxxxxxxxxx xx xxxx A xx xxxxx XX (stejná xxxxxxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x xxxx X xx xx měly xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx aflatoxinu X1 x mikrogramech xx 1 kg xxxxxx (xxx) xx vypočítá xxxxxx xxxxxx:
X · X · X / X · X
xxx:
X x X xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) x extraktu, xxxxx xx stejnou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
X = konečný xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x ohledem xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, s xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech xx 1 xx xxxxxx (xxx) xx vypočítá xxxxxx vzorce:
S·V / X·X
xxx:
X = objem xxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx xxxx 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, v xxxxxxxxxxx, xx skvrně xxxxxxxx (poměrně x xxxxxxx hodnotě Y) xxxxxxxx z xxxxxx;
X = xxxxxxx objem xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, s xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx xx od 8 do 10 μx/xx. Stanovit xxxxxxxxx xxxxxxxx mezi 330 x 370 xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (X) při 363 xx x případě xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxx 348 xx x případě xxxxxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx:
xxx chloroformový roztok; 312 · X · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · A · 1 000 / 19&xxxx;800 xxx xxxxxx xx směsi benzenu x acetonitrilu..
Ve xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1 je xxx 0,1 μx/xx. Xxxxx xx roztok xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx 4 °X, xx xxxxx xx xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Testování xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx (4.8) 5 μx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 až 10 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, jak je xxxxxxx x bodu 5.4. Při XX xxxxxx xx xxxx xxx viditelná xxxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxx původního xxxxxxxx xx xxxxxx xxx znatelná žádná xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx, xxxxx u xxxxxxx xxxxxx provedl xxxxxx xxxxxxxx, nesmí xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx 10 do 20 μx/xx,
- 5 μx absolutní hodnoty xxx xxxxxx xx 20 do 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxx než 50 μg/kg.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx C xxx 2.
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx, které xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody X. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx). Xxxx xxxxxx se xxxxxxxxx xxx krmiva xxxxxxxxxx citrusovou xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x jeho xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografií na xxxxxxxxxx. Eluát se xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx tohoto xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx flourometricky srovnáním xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx aflatoxinu X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xxxxxxxxxxxxx z krmiv xxxx být potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Činidla
Poznámka:
Pokud xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxx "p.a".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx stabilizovaný 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Silikagel pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx chloroformem, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 N.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx kyselinou.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX nebo xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxx xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (X/X), chromatografický xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi benzenu x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 xxxxxx X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Příprava xxxxxx |
xxx body 5.1, 5.2 x3.5 metody X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Pročištění xx xxxxxx |
5.4 Dvourozměrná xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxx xx desku (4.8) xxx přímky xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx (6 cm xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx x vymezení xxxxxxx xxx rozpouštědel. Xxxxxx xx desku xxxxxx kapilárních xxxxx xxxx injekčních mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- v xxxx A: 20 μx vyčištěného xxxxxxxx xxxxxx získaného podle xxxx 5.3,
- x xxxx X: 20 μx standardního roztoku (3.16),
- x bodu X: 10 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx D: 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx E: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx proudem xxxxxxx xxxx inertního xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxx asi 5 xx.
5.4.2 Vyvíjení (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx v xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] ve xxx xx xxxxx X, xxxxx čelo rozpouštědla xxxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxx. Vyjmout xxxxx x chromatografického xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx 15 minut ve xxx x při xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x vymezující linii. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx tanku a xxxxxx xxxxxxxx xx xxx a xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxx schématu xx obrázku 1)
Ozářit xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx modrých fluoreskujících xxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X, C, D x E. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx přímky, xxxxx xxxxxxxxxx těmito xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx X xxxxxx xxxxxx xxxxxx místo, xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 pocházející x xxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx v xxxx X (obrázek 1). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxx xxxx xxx v xxxx Q xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx svírajících xxxx asi 100 xxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxx X x X. Množství xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx ve schématu xx xxxxxxx 1, x xxxxxx na xxx A (viz xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxx xxxxx xxxx 5.3, x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16). Xxxxxxx jak xx xxxxxxx v bodu 5.4.2. Ozářit chromatogram XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxx:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 z xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx překrývají,
- fluorescence xxxxxx skvrn je xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx xx xxxxxxxx x bodu X xx první desce.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx vizuálně nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx skvrn C, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Pokud je xxxxxxxxx fluorescence 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku, xxxxxx roztok 10 xxxx nebo 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x poté znovu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx délce 365 xx a emisní xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx skvrnách xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx C, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx B1
Viz bod 5.6 xxxxxx X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx bod 6 metody X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx A.
8. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", část C xxx 2.
X. XXXXXXXX XXXXXXXX XX METOD X X B
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx se musí xx xxxxxxxx podle xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. v. 40 až 60 °X).
X takových xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx neodtučněného xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků
Reprodukovatelnost xxxxxxxx, xx. xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku, xx xxxxxxxx xx:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1 x 10 μx/xx xx xx 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
Xxxxxxx k xxxxxxx
