Sedmá xxxxxxxx Komise
ze xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx xxxxx odběru xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství xxx xxxxxx kontrolu krmiv [1], xxxxxxxxx pozměněnou xxxxx x xxxxxxxxxxx [2], a xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx stanoví, že xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx jakosti x xxxxxxx krmiv, xx provádějí podle xxxxx odběru xxxxxx x analytických metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/XXX ze xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/XXX xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx dne 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/XXX ze xxx 25. xxxxxx 1974 [7] a 75/84/XXX ze dne 20. prosince 1974 [8] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx xx stav xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx však xxxxx xxxxxxxx sedmou xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem k xxxx, že xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské státy xxxxxxx, že xxxxxxx xxx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxx jde x xxxxx aflatoxinu X1, se xxxxxxxxx xxxxx xxxxx popsaných x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Komise 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx pro metody xxxxxxx v xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí nejpozději xx 1. října 1976. Neprodleně x xxxx informují Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 1. března 1976.
Za Xxxxxx
X. X. Lardinois
člen Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. věst. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Úř. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX B1
A. XXXXXX JEDNOROZMĚRNÉ XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx obsah aflatoxinu X1 x xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx, xxxxx xxxxxx, xxxx, sezam, xxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx z xxxxxxxx, xxxxxxxx mouka, bramborová xxxxx x xxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, které xxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx B (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x jeho alikvotní xxxx se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x reziduum xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx stanoví x xxxxxxxxxxxxx xxx XX světlem xxx xxxxxxxx xxxx fluorimetricky xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx z xxxxx musí být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx není xxxxxxxxx xxxxx, všechna činidla xxxx xxx čistoty "x. a".
3.1 Aceton.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 N–hexan.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (V/V).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx částic 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx sodný, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) kyselina xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx G–HR xxxx ekvivalent, pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxx je uvedeno x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx roztok xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 x X2 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Musí být xxxxxxxx xxx, xxx xx xxxxxxx stejná xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx u xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), chromatografický xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx tank s xxxxxxxxx atmosférou;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nasycenou atmosférou.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Drtič – xxxxx.
4.2 Třepačka xxxx xxxxxxxxxx míchačka.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papíry, Xxxxxxxxxx x Xxxüxx č. 588 xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, xxxxx 300 xx) x teflonovým xxxxxxxx a 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x xxxxxx x objemu 500 xx a xxxxxxx xxxx.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxx tenkovrstvou chromatografii.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 200 x 200 mm, xx připraví takto (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxx xxxxx): xxx 30 g xxxxxxxxxx G-HR (3.15) xx Erlenmeyerovy baňky, xxxxxx 60 xx xxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx vytvořila xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx v desikátoru xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx k xxxxxxx jsou xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 XX lampa xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx xxxxxx musí xxx dostatečná, aby xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx B1 na xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx ještě xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx x objemu 10 xx, x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", část X xxx 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx způsobem, xxx celý xxxxxx xxxxx x oky x velikosti 1 xx (v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Extrakce
Do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx x homogenizovaného xxxxxx. Xxxxxx 25 x křemeliny (3.14), 25 xx vody x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx promíchávat 30 minut xxxxxxxxx (4.2) a xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 ml xxxxxxxx, poté xxxxxx 50 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně
Do spodní xxxxx chromatografické xxxxxxx (4.4) xxxxxx xxxxx x vaty xxxx xx skelné xxxx (3.9), xxxxxxx trubici xx do xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x xxxx přidat 5 x xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Ověřit, že xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného je xxxxx xxxxx, x xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 10 x silikagelu (3.8). Xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx zamíchat, xxx xx odstranily vzduchové xxxxxxx. Nechat 15 xxxxx stát, a xxxx opatrně přidat 15 x síranu xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx povrchu xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 ml extraktu xxxxxxxxx xxxxx bodu (5.2) xx 100 xx x-xxxxxx (3.3) x xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx do kolony. Xxxxxx kapalinu xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx diethyletheru (3.5) x znovu xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx až x hornímu xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xx, xxx xxxxxxxx průtoku xxxx 8 až 12 xx xx xxxxxx x aby xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx kapalinu. Poté xxxxxxx 150 xx xxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx (3.7) a xxxxxx xxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11) v xxxxxxx vakuové odparce (4.5) při xxxxxxx xxxxx xxx 50 °X. Xxxxxxxx kvantitativně xxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx zkumavky o xxxxxx 10 xx (4.10). Koncentrovat xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11), x xxxx doplnit xxxxx xx 2 xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6).
5.4 Tenkovrstvá xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 cm xx xxxxxx hrany x x odstupech xx 2 cm xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx alfatoxinu X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.3 x k xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx ve xxx xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18). Xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx nanesením 25 μx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x xxxx xx xxxxxx, zda xxxx xxxxxxxxxx B1 x X2 při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx ve xxx x xxxx xxxxxx xxxxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 cm xx xxxxx (4.9). Skvrny xxxxxxxxxx X1 modře xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx buď xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx těchto pokynů:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx porovnáním xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx standardního xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx standardní xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx 10 xx extraktu x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx fluorescence 10 μx extraktu xxxxxxxx než xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku, rozředit xxxxxxx 10 krát xxxx 100 krát xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx znovu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx x xxxxxx délce 443 xx. Množství xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx fluorescence x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1 x extraktu xx xxxxxxx xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx kyselinou sírovou
Na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 se xxxx xxx XX xxxxxxx xxxxxx x modré xx žlutou.
5.6.2 Dvourozměrná xxxxxxxxxxxxxx zahrnující xxxxxx xxxxxxxxxx B1 - xxxxxxxxxxx (aflatoxin X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx injekčních xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- x xxxx X: xxxxx xxxxxxxxxxx extraktu vzorku xxxxxxxxx podle bodu 5.3, který xxxxxxxx xxx 2,5 nm xxxxxxxxxx X1,
- x xxxxxx X a X: 25 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x tloušťce 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx I, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx minut xx xxx x xxx pokojové xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx kyselinu xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx x xxxxx 2,5 cm, který xxxxxxx xxxx X x X (xx xxxxxxx 3 vyznačeno xxxxxxxxx), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx papírem. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx xxx, x xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx vzduchu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx rozpouštědla (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx pět xxxxx xx tmě x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Interpretace chromatogramu
Pozorovat xxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxxx znaky:
a) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx C (xxxxxxx ve xxxxx X).
x) Objevení xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 (který xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx xx xxxxx XX).
x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxx popsány v xxxx b), xxxxxxxxxxxxx xx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx vzdáleností xxxxxxxxxx X1 od xxxx X xx xxxxx I (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx C) x xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx aflatoxinu B1 – xxxxxxxxxxx od xxxx X xx xxxxx II (xxxxxx xxxxxxxxxx jako u xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx B). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx a ze xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx B xx si xxxx xxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
6.1 Xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech xx 1 kg xxxxxx (xxx) se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X · X · V / X · X
xxx:
X x X xxxx xxxxxxxxx objemy xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1 x mikrolitrech (3.16) x xxxxxxxx, xxxxx má xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx xx 1 ml, xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
V = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x mikrolitrech, x ohledem na xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx xx objem xxxxxxxx použitý xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech xx 1 xx xxxxxx (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx xxxx 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1, v xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx (poměrně x xxxxxxx hodnotě Y) xxxxxxxx z xxxxxx;
X = konečný objem xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, x xxxxxxx xx objem xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx na xxxxxx.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx je xx 8 xx 10 μx/xx. Stanovit xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 330 x 370 xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx optickou xxxxxxx (X) při 363 xx v případě xxxxxxxxxxxxxxx roztoku nebo xxx 348 nm x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx koncentraci aflatoxinu X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx xxxxxx tohoto xxxxxx:
xxx chloroformový xxxxxx; 312 · X · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · A · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 pro xxxxxx xx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x cílem získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxx 0,1 μg/ml. Pokud xx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx při 4 °C, xx xxxxx po xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Testování xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx (4.8) 5 μx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 xx 10 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.4. Při XX xxxxxx by měla xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx skvrna a x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxxxx xxxxxx analytik, nesmí xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx aflatoxinu B1 xx 10 do 20 μg/kg,
- 5 μx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx od 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx vyšší xxx 50 μg/kg.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. METODA XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx umožňuje stanovit xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx, které xxxxxxxxx do oblasti xxxxxxxxxx xxxxxx A. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx je 0,01 xx/xx (10 ppb). Xxxx metoda xx xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx směsi xxxxxxx x acetonitrilu. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx stanoví x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx srovnáním xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Činidla
Poznámka:
Pokud xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx činidla musí xxx xxxxxxx "p.a".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Směs xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 až 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – vata, xxxxxx xxxxxxxxx chloroformem, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Síran xxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx plyn, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 N.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) promytá xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Vyvíjecí roztoky.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda 94/4,5/1,5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 na 1 xx chloroformu (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx a kontrolovaný xxx je uvedeno x xxxx 7 xxxxxx A.
4. Přístroje
Viz xxx 4 xxxxxx X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 x3.5 metody X. |
|
5.2 Extrakce |
|
|
5.3 Pročištění xx koloně |
5.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx schématu xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx strany), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx pipet xxxx injekčních xxxxxxxxxxxxxx xxxx roztoky:
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.3,
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- v xxxx X: 10 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x bodu X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx proudem xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Získané xxxxxx xxxx xxx xxxxxx asi 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx obrázku 1)
Xxxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx xx směru I, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx. Xxxxxxx desku x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx oschnout 15 minut xx xxx x xxx xxxxxxxx teplotě.
Poté se xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx rozpouštědla (3.15.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nenasycenou atmosférou] xx xxx xx xxxxx XX, dokud xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x vymezující xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xx xxx x při xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (podle xxxxxxxx xx obrázku 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX světlem, xxxxxxx xx deska xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 cm od xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu B1 xx standardního xxxxxxx X, C, X x X. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx těmito xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx úhel s xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx X xxxxxx přímek xxxxxx xxxxx, kde xxx očekávat xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx x extraktu xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 však xxxx xxx x xxxx X xxxxxxxxx xx průsečíku xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx 100 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx X a X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xxxxxx xx stanoví, xxx xx xxxxxxx x bodu 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1, x xxxxxx na xxx X (xxx xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxxxx bodu 5.3, x x xxxx 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx jak xx xxxxxxx x bodu 5.4.2. Xxxxxx chromatogram XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxx:
- xx skvrny xxxxxxxxxx X1 z extraktu x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- fluorescence xxxxxx skvrn xx xxxxxxxx xxx fluorescence xxxxx aflatoxinu X1, xxxxx xx vyvinula x xxxx Q xx xxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení xx xxxxxxxxxx vizuálně nebo xxxxxxxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Vizuální měření
Množství xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxx se stanoví xxxxxxxxxx intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxx extraktu s xxxxxxxxxx xxxxx X, X x X xxxxxxxxxxxx roztoku. X xxxxxxx potřeby xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx fluorescence 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x acetonitrilu (3.6), x xxxx xxxxx xxxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx změří xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx a xxxxxx xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx aflatoxinu B1 xx xxxxxxxx extraktu xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx skvrny xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxx C, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxx xxx 5.6 metody X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxx 6 xxxxxx A.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx X.
8. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", xxxx C xxx 2.
X. POZNÁMKY XXXXXXXX XX METOD X X X
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx obsahující více xxx 5 % xxxx se musí xx xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. x. 40 až 60 °X).
X takových xxxxxxxxx xxxx xxx analytické xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků
Reprodukovatelnost výsledků, xx. xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx na:
± 50 % střední xxxxxxx pro střední xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x 10 μx/xx xx xx 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx základě střední xxxxxxx pro střední xxxxxxx od 20 xx 50 μg/kg;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx pro střední xxxxxxx vyšší xxx 50 μg/kg.
Dodatek x xxxxxxx
