Sedmá xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx kontrolu xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx [2], x xxxxxxx xx článek 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx právními x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx se jakosti x složení krmiv, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx dne 15. července 1971 [3], 71/393/XXX ze xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/XXX xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx dne 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/EHS xx xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX ze dne 20. prosince 1974 [8] již xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že s xxxxxxx na xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx však xxxxx xxxxxxxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že opatření xxxx xxxxxxxx jsou x souladu se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, pokud jde x xxxxx xxxxxxxxxx X1, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx popsaných x xxxxxxx této xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx dne 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxx x účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 1976. Neprodleně x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx dne 1. března 1976.
Xx Xxxxxx
X. X. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Úř. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Úř. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX X1
X. XXXXXX JEDNOROZMĚRNÉ XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx, xxxxx xxxxxx, xxxx, xxxxx, xxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx z xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx je 0,01 xx/xx (10 ppb).
Pokud xxxx přítomny xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx B (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx filtruje x jeho alikvotní xxxx xx odebere x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx se odpaří x xxxxxxxx xx xxxxxxxx ve stanoveném xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx směsi benzenu x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx roztoku xx podrobí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx pod XX světlem xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se známými xxxxxxxxxx standardu aflatoxinu X1. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxxxx z xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx stanoveno xxxxx, všechna xxxxxxx xxxx být xxxxxxx "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 N–hexan.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, neobsahující xxxxxxxx.
3.6 Xxxx benzenu x acetonitrilu: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx chloroformu (3.2) x methanolu (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost xxxxxx 0,05 až 0,20 xx.
3.9 Absorbent – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx skelná xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková 1 X.
3.13 50 % (X/X) xxxxxxxx xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), promytá xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx G–HR xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodu 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx obsahující xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx B1 x X2 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx směsi benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxx xxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx fluorescence x xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nasycenou xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Chloroform (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), chromatografický tank x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Třepačka xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxxx x Xxxüxx č. 588 nebo ekvivalentní, xxxxxx 24 cm.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, délka 300 xx) s xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Rotační xxxxxxx xxxxxxx, x xxxxxx o xxxxxx 500 ml x xxxxxxx xxxx.
4.6 Erlenmeyerovy xxxxx x xxxxxx 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Zařízení xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 200 x 200 xx, xx připraví xxxxx (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxx xxxxx): xxx 30 g xxxxxxxxxx G-HR (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx 60 xx xxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstva x xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx a poté xxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Před xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx vyhovující, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako desky xxxxxxxxxx podle uvedeného xxxxxxx.
4.9 XX xxxxx xxxxxxxxxxx (360 mm). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, aby xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx byla xx xxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx ještě xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Odměrné xxxxxxxx x objemu 10 ml, x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Fluorimetr (volitelný).
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx způsobem, xxx celý prošel xxxxx x oky x velikosti 1 xx (x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx a homogenizovaného xxxxxx. Přidat 25 x křemeliny (3.14), 25 xx xxxx x 250 ml xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Odstranit xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, xxxx xxxxxx 50 ml.
5.3 Přečištění xx xxxxxx
Xx spodní xxxxx chromatografické xxxxxxx (4.4) vložit zátku x xxxx nebo xx xxxxxx xxxx (3.9), xxxxxxx trubici xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x xxxx přidat 5 x síranu xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, že xxxxx povrch vrstvy xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x xxxx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxx 10 x xxxxxxxxxx (3.8). Xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Nechat 15 xxxxx xxxx, x xxxx xxxxxxx xxxxxx 15 x xxxxxx xxxxxxx (3.10). Nechat xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx extraktu xxxxxxxxx podle xxxx (5.2) xx 100 xx x-xxxxxx (3.3) x xxxx kvantitativně xxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx x hornímu povrchu xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx postupu xxxx na xx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx 8 až 12 xx xx xxxxxx x xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Odstranit xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx 150 xx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx xxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx do xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11) v xxxxxxx vakuové xxxxxxx (4.5) při xxxxxxx xxxxx xxx 50 °X. Reziduum xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxx 10 xx (4.10). Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11), x xxxx xxxxxxx objem xx 2 xx xx použití xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x acetonitrilu (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) nanést 2 cm xx xxxxxx xxxxx x x odstupech xx 2 cm xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku alfatoxinu X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.3 x x tomu 20 μx standardního xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx tmě xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18). Výběr xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx nanesením 25 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxx a xxxx xx ověřit, zda xxxx xxxxxxxxxx X1 x B2 xxx xxxxxxxx xxxxx odděleny.
Nechat xxxxxxxxxxxx xxxxxxx ve xxx a poté xxxxxx xxxxx UV xxxxxxx xx vzdálenosti 10 cm od xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo fluorimetricky xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxx x intenzitou xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V případě xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx fluorescence 10 xx extraktu x xxxxx být xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx skvrna. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 10 μl xxxxxxxx xxxxxxxx xxx intenzita xxxxxxxxxxxx 40 μl xxxxxxxxxxxx roztoku, rozředit xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) a xxxx znovu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Fluorimetrické xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx excitační xxxxxx xxxxx 365 xx x xxxxxx xxxxx 443 nm. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 ve xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx jejich xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxx X1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx provede xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx získaný xxxxx xxxx 5.4 nastříkat xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx skvrn aflatoxinu X1 xx xxxx xxx UV zářením xxxxxx x xxxxx xx xxxxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx musí xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na obrázku 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx roztoků
Narýsovat xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 cm xx každé xxxxxx), xxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx čel xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx na xxxxx xxxxxx kapilárních xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- x xxxx A: xxxxx xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3, xxxxx obsahuje xxx 2,5 nm xxxxxxxxxx X1,
- v xxxxxx X x X: 25 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x tloušťce 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx I, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx.
Xxxxxxx desku x xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx minut xx tmě x xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx stříkat kyselinu xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx x xxxxx 2,5 cm, který xxxxxxx xxxx A x X (na xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), xxxxx pásek xxxxxxxxx, přičemž xxxxxx xxxxx je chráněn xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx tmě, a xxxx xxxxxxx desku xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx o xxxxxxxx 1 cm x chromatografickém xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, dokud xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx desku z xxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx xxxxxxxx pět xxxxx xx tmě x xxx pokojové xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxxx xxxxx:
x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X (xxxxxxx ve xxxxx X).
x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx) x intenzivnější xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx B1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx xx směru XX).
x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxx xxxxxxx v xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxx X. Poloha xxxxxx xxxxx vychází xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 od xxxx X xx xxxxx I (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x bodu X) x dále migrační xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx xx xxxx X ve xxxxx II (stejná xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X). Xxxxxxxxxxxxx intenzity xxxxx xxxxxxxxxxx pocházejících x xxxxxxxx a xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu B xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx na 1 xx vzorku (xxx) xx vypočítá xxxxxx xxxxxx:
X · X · X / X · X
xxx:
X x X xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) x extraktu, xxxxx má stejnou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, x mikrogramech xx 1 xx, xxxxxxxxxx X1 ve xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
V = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, s xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx na xxxxxx.
6.2 Xx základě xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx aflatoxinu B1 x mikrogramech na 1 xx xxxxxx (xxx) se vypočítá xxxxxx vzorce:
S·V / X·X
xxx:
X = objem xxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx xxxx 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, x xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxx X) xxxxxxxx x xxxxxx;
X = xxxxxxx objem xxxxxxxx x mikrolitrech, x xxxxxxx na xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, s xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx koncentrace aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx xx xx 8 do 10 μx/xx. Stanovit xxxxxxxxx xxxxxxxx mezi 330 x 370 nm xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx optickou xxxxxxx (X) xxx 363 xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx 348 nm x xxxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx; 312 · X · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · X · 1 000 / 19&xxxx;800 pro xxxxxx xx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxxxx X1 je asi 0,1 μx/xx. Xxxxx xx xxxxxx skladuje x xxxxxxxxxx při 4 °X, xx xxxxx po xxxx xxxx týdnů.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 xx 10 μl xxxxxxxxxx X1 na 1 xx (7.1). Vyvinout xxxxxxxxxxxx, jak je xxxxxxx x bodu 5.4. Xxx XX xxxxxx xx xxxx xxx viditelná pouze xxxxx xxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, nesmí xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx 10 do 20 μg/kg,
- 5 μx absolutní xxxxxxx xxx xxxxxx xx 20 do 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx xxxxx než 50 μx/xx.
9. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 x krmivech, které xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx A. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 ppb). Xxxx xxxxxx se xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x přečistí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Eluát xx xxxxxx a residuum xx xxxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx směsi xxxxxxx x acetonitrilu. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx se podrobí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx buď xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx srovnáním xx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxx potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Činidla
Poznámka:
Pokud xxxx stanoveno xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx "p.a".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Chloroform xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 N–hexan.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Diethylether, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Směs xxxxxxx x acetonitrilu: 98/2 (X/X).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Silikagel xxx xxxxxxxxx chromatografii, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 až 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx vata.
3.10 Xxxxx xxxxx, bezvodý, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, např. xxxxx.
3.12 Kyselina chlorovodíková 1 X.
3.13 Křemelina (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Vyvíjecí xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda 94/4,5/1,5 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou.
3.16 Standardní xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 na 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxx xx uvedeno x xxxx 7 xxxxxx X.
4. Přístroje
Viz xxx 4 xxxxxx X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 x3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně |
5.4 Dvourozměrná xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Nanesení xxxxxxx (podle schématu xx obrázku 1)
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx strany), xxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx čel rozpouštědel. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx pipet xxxx injekčních mikrostříkaček xxxx roztoky:
- v xxxx A: 20 μx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx získaného podle xxxx 5.3,
- x xxxx B: 20 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16),
- v xxxx X: 10 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16),
- x xxxx X: 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Získané xxxxxx xxxx xxx xxxxxx asi 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x chromatografickém xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx xxxxx I, xxxxx čelo rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx desku x xxxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x nechat xxxxxxxx 15 xxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx vyvíjí xx xxxxxxx vyvíjecího rozpouštědla (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nenasycenou atmosférou] xx tmě ve xxxxx II, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx desku x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx (podle schématu xx xxxxxxx 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx do vzdálenosti 10 cm od xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 xx standardního xxxxxxx X, X, X x E. Načrtnout xxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x svírají xxxxx xxxx s xxxxxxxxxx směry. Průsečík X xxxxxx xxxxxx xxxxxx místo, kde xxx xxxxxxxx skvrnu xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx x extraktu xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxx X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxx xxxx xxx x xxxx X umístěném xx průsečíku xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx svírajících xxxx xxx 100 xxxxxx x protínajících xxxx B x X. Množství aflatoxinu X1 v xxxxxxxx xxxxxx xx stanoví, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx na xxxxx xxxxx (4.8) xxx přímky xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1, x xxxxxx xx xxx A (viz xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, který xxx xxxxxx xxxxx xxxx 5.3, x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16). Xxxxxxx jak xx xxxxxxx x bodu 5.4.2. Xxxxxx chromatogram XX xxxxxxx (4.9) x ověřit xxx:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x extraktu x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- fluorescence xxxxxx skvrn je xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1, xxxxx se xxxxxxxx x bodu X xx první xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vizuálně nebo xxxxxxxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Vizuální xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx skvrn X, X a X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx extraktu xxxxxxxx xxx intenzita 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx nebo 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx měření
Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx délce 365 xx a xxxxxx xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx skvrnách xxxxxxxx xx xxxxxxx porovnáním xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx C, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Potvrzení xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxx bod 5.6 xxxxxx X.
6. Xxxxxxx výsledků
Viz xxx 6 metody A.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx X.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", část C xxx 2.
C. POZNÁMKY XXXXXXXX SE METOD X A B
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx se xxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 odtučnit xxxxxxxxxxxxx (x. x. 40 xx 60 °X).
X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx analytické xxxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorku.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xx. xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx na:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x 10 μx/xx xx xx 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx než 50 μx/xx.
Xxxxxxx k xxxxxxx
