Xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. března 1976,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx a analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx [2], a zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxx, xx uvedená xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx cílem xx xxxxxx xxxxxxxxxx požadavků xxxxxxxxxxx právními x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k tomu, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx dne 15. července 1971 [3], 71/393/EHS ze xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/EHS xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx xxx 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/EHS xx xxx 25. března 1974 [7] x 75/84/XXX xx xxx 20. prosince 1974 [8] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že s xxxxxxx xx stav xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx však nutné xxxxxxxx sedmou sérii xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxx xxx x obsah aflatoxinu X1, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx popsaných x příloze xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Komise 71/250/XXX xx dne 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a správní xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 1. xxxxx 1976. Neprodleně x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 1. xxxxxx 1976.
Xx Xxxxxx
X. X. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. věst. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Úř. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Úř. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX B1
A. XXXXXX JEDNOROZMĚRNÉ XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Účel a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx, xxxxx semena, xxxx, xxxxx, xxxxxxx xxxxx x kukuřičné xxxxxx, obiloviny x xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx, bramborová xxxxx a xxxxx. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 ppb).
Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx B (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografie).
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxx alikvotní xxxx se odebere x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na silikagelu. Xxxxx se xxxxxx x reziduum xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx chloroformu nebo xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Alikvotní xxxx tohoto roztoku xx xxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 se stanoví x xxxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx buď xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx známými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aflatoxinu X1. Identita xxxxxxxxxx X1 extrahovaného x xxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx stanoveno xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx stabilizovaný 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (V/V) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Methanol.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Směs benzenu x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, předem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx sodný, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. dusík.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) xxxxxxxx xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), promytá xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx X–XX xxxx ekvivalent, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Standardní xxxxxx obsahující xxx 0,1 μx aflatoxinu X1 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 x X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx koncentrace jsou xxxxxxxxxx. Xxxx být xxxxxxxx xxx, xxx xx získala xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx aflatoxinů.
3.18 Vyvíjecí xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.2 Diethylether (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (V/V), chromatografický xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxx atmosférou;
3.18.5 Chloroform (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxx atmosférou.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Drtič – xxxxx.
4.2 Třepačka xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, Schleicher x Schüll č. 588 xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx chromatografická xxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, délka 300 xx) s xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Rotační xxxxxxx xxxxxxx, x xxxxxx o objemu 500 ml x xxxxxxx xxxx.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 500 ml, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Zařízení xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii, 200 x 200 xx, xx připraví xxxxx (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxx xxxxx): xxx 30 x xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky, xxxxxx 60 xx xxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx suspenzi xx xxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstva x xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx uschnout na xxxxxxx a xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx silikagel. Před xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx při 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx vyhovující, xxxxx xxxxxxxx podobné xxxxxxxx xxxx desky xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 XX xxxxx xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx záření xxxx xxx xxxxxxxxxx, aby xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxx 10 cm xx xxxxx xxxxx xxxxx rozeznatelná.
4.10 Odměrné xxxxxxxx o xxxxxx 10 ml, x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 UV xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Fluorimetr (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku (xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxx x xxxxxxxxx 1 xx (x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 500 ml xxx 50 x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Přidat 25 x křemeliny (3.14), 25 xx vody x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Zazátkovat, xxxxxxxxxxx xxxx promíchávat 30 minut xxxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx skládaný xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Odstranit xxxxxxx 10 ml xxxxxxxx, poté xxxxxx 50 ml.
5.3 Přečištění xx xxxxxx
Xx spodní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (4.4) xxxxxx xxxxx x xxxx xxxx xx xxxxxx xxxx (3.9), naplnit xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x poté xxxxxx 5 g xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, xx xxxxx povrch xxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxx rovný, x xxxx přidat xx xxxxxx xxxxxxx 10 x xxxxxxxxxx (3.8). Xx xxxxxx přidání xxxxxxx zamíchat, xxx xx odstranily xxxxxxxxx xxxxxxx. Nechat 15 xxxxx xxxx, x xxxx xxxxxxx přidat 15 x síranu xxxxxxx (3.10). Nechat xxxxxxxx klesnout xx x xxxxxxx povrchu xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 ml xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx (5.2) se 100 xx n-hexanu (3.3) x xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx klesnout xx k xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxx nechat xxxxxxxx xxxxxxx až x hornímu xxxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného. Xxxxx xxxxxx postupu xxxx na xx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx 8 xx 12 ml za xxxxxx a xxx xxxxxx nevyschla. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Poté xxxxxxx 150 xx xxxxx chloroformu x xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx xxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx inertního xxxxx (3.11) v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5) xxx xxxxxxx xxxxx než 50 °X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 ml (4.10). Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11), a xxxx doplnit xxxxx xx 2 ml xx použití xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 cm od xxxxxx hrany x x xxxxxxxxx xx 2 xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3 x x tomu 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx tmě xx xxxxxxx jednoho x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18). Xxxxx xxxxxxxxxxxx xx musí xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x xxxx xx ověřit, zda xxxx aflatoxiny X1 x B2 při xxxxxxxx zcela xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx ve xxx x poté xxxxxx desku XX xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx od xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Kvantitativní xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx provádí xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx standardního xxxxxxx. X případě xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx získaná překrytím xxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx než fluorescence 10 xx xxxxxxxx x xxxxx být xxxxxxxxx více xxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx fluorescence 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxx než xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) a xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 nm x xxxxxx xxxxx 443 nm. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx extraktu xx xxxxxxx porovnáním jejich xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx provede takto:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx získaný xxxxx xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx skvrn aflatoxinu X1 xx musí xxx XX zářením xxxxxx x xxxxx xx žlutou.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx zahrnující tvorbu xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx B2a)
Poznámky:
Níže xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxx xxxxxxxx xx obrázku 3.
5.6.2.1 Nanesení xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx každé strany), xxxxxx x vymezení xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx na desku xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- x xxxx X: objem xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.3, xxxxx obsahuje xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx X1,
- x xxxxxx X x X: 25 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx použití xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] ve xxx xx xxxxx X, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x vymezující xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxx x xxx pokojové xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx x xxxxx 2,5 cm, který xxxxxxx xxxx X x X (na xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx je xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx 10 minut xx tmě, a xxxx xxxxxxx desku xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x chromatografickém tanku x xxxxxxxxxxx atmosférou] xx xxx xx xxxxx XX, dokud xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx oschnout pět xxxxx ve xxx x xxx pokojové xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx (4.9) a xxxxxx xxxx xxxxx:
x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx xx směru X).
x) Xxxxxxxx xx xxxxx fluoreskující skvrny xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, přičemž obě xxxxxx pocházejí ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx xx směru XX).
x) Objevení se xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxx popsány v xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx extraktu xxxxxxxxxx v bodu X. Poloha xxxxxx xxxxx vychází xxxxxx x migrační vzdáleností xxxxxxxxxx X1 xx xxxx A ve xxxxx I (xxxxxx xxxxxxxxxx jako u xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x bodu X) x xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 – hemiacetalu od xxxx X ve xxxxx II (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x bodu B). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx z xxxxxxxx x ze xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X xx xx měly xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxx (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X · X · V / X · X
xxx:
X x X xxxx příslušné objemy xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) x extraktu, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx fluorescence;
S = xxxxxxxxxxx, x mikrogramech xx 1 ml, xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
X = xxxxxxx objem xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x gramech, x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxx (xxx) se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx xxxx 20 μx);
X = množství xxxxxxxxxx X1, x xxxxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx hodnotě X) xxxxxxxx z xxxxxx;
X = konečný xxxxx xxxxxxxx x mikrolitrech, x xxxxxxx xx xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxx a testování xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx je od 8 xx 10 μx/xx. Stanovit absorpční xxxxxxxx xxxx 330 x 370 xx xx xxxxxxx spektrofotometru (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx hustotu (X) xxx 363 xx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxx 348 xx x případě xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx roztok; 312 · X · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · X · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 xxx xxxxxx xx směsi benzenu x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx příslušná xxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxxxx X1 xx asi 0,1 μg/ml. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx 4 °X, xx xxxxx xx xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx 8 xx 10 μl xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.4. Xxx XX xxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx skvrna x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Opakovatelnost
Rozdíl mezi xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx u xxxxxxx xxxxxx provedl xxxxxx xxxxxxxx, nesmí xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx 10 xx 20 μx/xx,
- 5 μx absolutní xxxxxxx xxx xxxxxx xx 20 do 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx výsledku pro xxxxxx vyšší než 50 μx/xx.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX CHROMATOGRAFIE
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxx aflatoxinu B1 x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx X. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx). Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografií na xxxxxxxxxx. Eluát xx xxxxxx x residuum xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx objemu chloroformu xxxx xx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx buď vizuálně xxxx flourometricky xxxxxxxxx xx známým množstvím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Činidla
Poznámka:
Pokud xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx činidla xxxx xxx čistoty "p.a".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx stabilizovaný 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 N–hexan.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x acetonitrilu: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, předem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx vata.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková 1 X.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX nebo xxxxxxxxxx, pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Vyvíjecí roztoky.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/aceton (3.1): 9/1 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx aflatoxinu X1 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx je xxxxxxx x xxxx 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 metody X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Příprava xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 x3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx |
5.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografie
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxx xx desku (4.8) xxx přímky xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 cm xx xxxxx strany), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx čel xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- v xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3,
- v xxxx B: 20 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16),
- x xxxx X: 10 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16),
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx standardního xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx inertního xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx xxxx mít xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x tloušťce 1 xx v chromatografickém xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] ve xxx xx směru X, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx desku x chromatografického tanku x nechat xxxxxxxx 15 minut xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x nenasycenou atmosférou] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx oschnout xx xxx a xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Ozářit xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xx vzdálenosti 10 xx od xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx modrých xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X, X, D x E. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x svírají xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx směry. Xxxxxxxx X těchto xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxx xxx očekávat xxxxxx xxxxxxxxxx B1 pocházející x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v bodu X (obrázek 1). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxx xxxx být x xxxx X xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx přímek xxxxxxxxxxx xxxx xxx 100 xxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxx X x X. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodu 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx desku (4.8) xxx přímky xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx obrázku 1, x nanést xx xxx A (viz xxxxxxx 1) 20 μx přečištěného extraktu xxxxxx, xxxxx byl xxxxxx xxxxx xxxx 5.3, a k xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16). Xxxxxxx jak xx xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxx:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x extraktu x ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx překrývají,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxx skvrn je xxxxxxxx xxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx xx xxxxxxxx x xxxx X xx xxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx podle těchto xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx C, X x E xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx potřeby xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx fluorescence 20 μx extraktu xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), x xxxx xxxxx xxxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx změří xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx délce 365 xx a xxxxxx xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx X, X x X standardního xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx B1
Viz xxx 5.6 metody A.
6. Xxxxxxx výsledků
Viz xxx 6 xxxxxx X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx bod 8 xxxxxx X.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
C. XXXXXXXX XXXXXXXX XX XXXXX X X B
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx více xxx 5 % xxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. x. 40 xx 60 °X).
X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx analytické xxxxxxxx vyjádřeny jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xx. xxxxxx xxxx xxxxxxxx získanými xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx stejného xxxxxx, xx xxxxxxxx xx:
± 50 % střední xxxxxxx xxx střední xxxxxxx aflatoxinu B1 x 10 μx/xx xx xx 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx 50 μg/kg;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx vyšší xxx 50 μg/kg.
Dodatek x xxxxxxx
