Xxxxx směrnice Komise
ze xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx pozměněnou xxxxx x xxxxxxxxxxx [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, že uvedená xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx právními x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx odběru xxxxxx x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/EHS ze xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/XXX xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX ze dne 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/XXX xx xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX xx xxx 20. prosince 1974 [8] xxx xxxxxxxxx xxxx analytických metod Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx provedených xxxxx xx však xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxxx X1, se provádějí xxxxx xxxxx popsaných x příloze této xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx uvedená x xxxxx 1 (xxxx) přílohy první xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx části xxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, xx xxxxxxx pro metody xxxxxxx x příloze xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx souladu x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. října 1976. Neprodleně x xxxx xxxxxxxxx Komisi.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 1. xxxxxx 1976.
Za Xxxxxx
X. X. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX AFLATOXINU B1
A. XXXXXX JEDNOROZMĚRNÉ TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx, xxxxx xxxxxx, xxxx, sezam, xxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx, obiloviny a xxxxxxx x obilovin, xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx a škrob. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx rušivé xxxxx, které xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx analýzu xxxxx xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x reziduum xx xxxxxxxx xx stanoveném xxxxxx chloroformu nebo xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx roztoku xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo fluorimetricky xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aflatoxinu X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxx "x. x".
3.1 Aceton.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 procentem 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Methanol.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Směs benzenu x acetonitrilu: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx chloroformu (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (V/V).
3.8 Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx částic 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Absorbent – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Síran xxxxx, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) kyselina xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), promytá xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx G–HR xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodu 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx jakosti xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 a X2 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx. Musí xxx xxxxxxxx tak, xxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Chloroform (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s nasycenou xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/methanol (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Chloroform (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Třepačka xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxxx x Schüll x. 588 xxxx ekvivalentní, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx průměr 22 xx, xxxxx 300 xx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 250 μx zásobníkem.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, s xxxxxx x objemu 500 ml a xxxxxxx dnem.
4.6 Erlenmeyerovy xxxxx o objemu 500 ml, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii, 200 x 200 xx, xx xxxxxxxx takto (xxxxxxx xxxxxxxx stačí xxx pět xxxxx): xxx 30 x xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Erlenmeyerovy xxxxx, xxxxxx 60 xx xxxx, zazátkovat x xxxxxxxxxxx 1 minutu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx se vytvořila xxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx 0,25 mm. Xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx x poté xxxxxxx v desikátoru xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Před xxxxxxxx aktivovat xxxxx xxxxx hodinu x xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxx vyhovující, xxxxx vykazují podobné xxxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx uvedeného xxxxxxx.
4.9 UV xxxxx xxxxxxxxxxx (360 mm). Xxxxxxxxx záření musí xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx ještě xxxxx rozeznatelná.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx x objemu 10 xx, s xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (volitelný).
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xxxx xxxxxx xxxxx s xxx x velikosti 1 xx (x souladu x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Extrakce
Do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 xx vody x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou (4.2) a přefiltrovat xxxx xxxxxxxx filtrační xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, xxxx sebrat 50 ml.
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx
Xx spodní xxxxx chromatografické xxxxxxx (4.4) vložit xxxxx x xxxx nebo xx xxxxxx xxxx (3.9), xxxxxxx trubici xx do dvou xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x xxxx přidat 5 g xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, xx xxxxx xxxxxx vrstvy xxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxx, a xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 10 x silikagelu (3.8). Xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx xxxx, a xxxx xxxxxxx xxxxxx 15 x xxxxxx xxxxxxx (3.10). Nechat xxxxxxxx xxxxxxxx až x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 ml extraktu xxxxxxxxx podle bodu (5.2) se 100 xx n-hexanu (3.3) x xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx kolony. Xxxxxx xxxxxxxx klesnout xx k xxxxxxx xxxxxxx vrstvy xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x znovu nechat xxxxxxxx xxxxxxx xx x hornímu xxxxxxx xxxxxx síranu sodného. Xxxxx tohoto xxxxxxx xxxx xx xx, xxx rychlost xxxxxxx xxxx 8 až 12 ml xx xxxxxx a xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx 150 ml xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx celý xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx sucha xxx xxxxxxx inertního xxxxx (3.11) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5) xxx teplotě xxxxx než 50 °X. Reziduum xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxx 10 xx (4.10). Koncentrovat xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11), x xxxx doplnit xxxxx xx 2 ml xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 xx od xxxxxx hrany x x xxxxxxxxx xx 2 xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx alfatoxinu X1 (3.16),
- 10 μx extraktu získaného xxxxx bodu 5.3 x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μl xxxxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxx xx použití jednoho x xxxxxxxxxx rozpouštědel (3.18). Xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx provést xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x xxxx xx ověřit, zda xxxx aflatoxiny X1 x B2 xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx odpařit xx xxx x poté xxxxxx xxxxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 cm od xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Kvantitativní xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx buď xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx s intenzitou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx získaná xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx standardní xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx 10 ml extraktu x nesmí xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 10 μx extraktu xxxxxxxx než xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku, xxxxxxxx xxxxxxx 10 krát xxxx 100 krát xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu a xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1 se xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx excitační xxxxxx xxxxx 365 xx x xxxxxx xxxxx 443 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 ve xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx porovnáním xxxxxx xxxxxxxx fluorescence x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu B1.
5.6 Xxxxxxxxx identity aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1 v extraktu xx xxxxxxx xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx získaný podle xxxx 5.4 nastříkat xxxxxxxx sírovou (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxx XX xxxxxxx xxxxxx x modré xx xxxxxx.
5.6.2 Dvourozměrná xxxxxxxxxxxxxx zahrnující xxxxxx xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx obrázku 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx desku (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx k vymezení xxxxxxx čel xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- x xxxx A: objem xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3, který xxxxxxxx xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx X1,
- x xxxxxx X x X: 25 μl xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx se vyvíjí xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx v xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s nenasycenou xxxxxxxxxx] ve xxx xx směru I, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx z xxxxx x nechat xxxxxxxx pět xxxxx xx xxx a xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx o xxxxx 2,5 xx, xxxxx xxxxxxx xxxx A x X (xx xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), dokud xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx zbytek xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx xxx, x xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx vzduchu xxx xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 cm x chromatografickém xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx ve tmě x xxx pokojové xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxxx znaky:
a) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztoku naneseného x xxxx C (xxxxxxx xx xxxxx X).
x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx naneseného x bodu X (xxxxxxx ve xxxxx XX).
x) Objevení se xxxxxxxxx skvrn, jaké xxxx xxxxxxx x xxxx x), pocházejících xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X. Poloha xxxxxx xxxxx vychází xxxxxx x xxxxxxxx vzdáleností xxxxxxxxxx X1 od xxxx X xx xxxxx I (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxxxx vzorku naneseného x bodu C) x xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx aflatoxinu X1 – hemiacetalu xx xxxx X ve xxxxx XX (xxxxxx xxxxxxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx z xxxxxxxx x ze xxxxxxxxxxxx vzorku naneseného x bodu B xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
6.1 Xx xxxxxxx vizuálních xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 kg vzorku (xxx) xx vypočítá xxxxxx vzorce:
S · X · V / X · X
xxx:
X a X xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) a xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxx xx 1 ml, xxxxxxxxxx X1 ve xxxxxxxxxxx roztoku (3.16);
V = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x mikrolitrech, x xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx x xxxxxxx, s xxxxxxx xx objem xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx na koloně.
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx vzorku (xxx) se vypočítá xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = objem xxxxxxxx, x mikrolitrech, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx xxxx 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, x xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx (poměrně x xxxxxxx xxxxxxx Y) xxxxxxxx x xxxxxx;
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x ohledem xx xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx na objem xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 v xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), jehož xxxxxxxxxxx je xx 8 xx 10 μx/xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 330 x 370 xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx hustotu (X) xxx 363 xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxx 348 nm x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx pomocí tohoto xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx roztok; 312 · X · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · X · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 xxx roztok xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx příslušná ředění x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 je asi 0,1 μx/xx. Pokud xx xxxxxx skladuje x xxxxxxxxxx xxx 4 °X, je xxxxx po xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Testování xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 až 10 μl xxxxxxxxxx X1 na 1 xx (7.1). Vyvinout xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.4. Xxx XX xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx pouze xxxxx xxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx výsledku pro xxxxxx aflatoxinu X1 xx 10 do 20 μg/kg,
- 5 μx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxx xxx 50 μg/kg.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
B. XXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody A. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx). Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx krmiva xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pulpu.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxx část xx xxxxxxx x přečistí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii. Xxxxxxxx aflatoxinu B1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx známým xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx aflatoxinu B1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx čistoty "p.a".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) ethanolu.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx peroxidy.
3.6 Xxxx xxxxxxx x acetonitrilu: 98/2 (V/V).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Silikagel xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Absorbent – xxxx, předem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx vata.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx kyselinou.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, pro tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxx xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda 94/4,5/1,5 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Standardní xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 xxxxxx X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 x3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx |
5.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (podle schématu xx xxxxxxx 1)
Narýsovat xx desku (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 cm xx každé strany), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx čel xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx na desku xxxxxx xxxxxxxxxxx pipet xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- v xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3,
- v xxxx X: 20 μx standardního xxxxxxx (3.16),
- v xxxx X: 10 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx standardního xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx xxxx mít xxxxxx asi 5 xx.
5.4.2 Vyvíjení (podle xxxxxxxx na xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx použití xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x tloušťce 1 xx v xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] ve xxx xx směru I, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nechat xxxxxxxx 15 xxxxx xx xxx a xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx vyvíjí za xxxxxxx xxxxxxxxxx rozpouštědla (3.15.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x nenasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx desku x xxxxxxxxxxxxx tanku a xxxxxx oschnout ve xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx (podle schématu xx xxxxxxx 1)
Ozářit xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxx xxxxxx xx vzdálenosti 10 cm xx xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx xxxxxxx fluoreskujících xxxxx aflatoxinu X1 xx standardního xxxxxxx X, X, X x E. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx přímky, xxxxx procházejí těmito xxxxxxxx x svírají xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx X xxxxxx xxxxxx xxxxxx místo, kde xxx xxxxxxxx skvrnu xxxxxxxxxx B1 xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (obrázek 1). Xxxxxxxx xxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 xxxx xxxx být v xxxx Q xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx 100 xxxxxx a protínajících xxxx X x X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xxxxxx xx stanoví, xxx xx uvedeno x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx chromatografie
Narýsovat na xxxxx xxxxx (4.8) xxx přímky xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx ve xxxxxxxx xx obrázku 1, x nanést xx xxx X (xxx xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, který byl xxxxxx xxxxx xxxx 5.3, a x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx jak xx xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Ozářit xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x ověřit zda:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- fluorescence xxxxxx skvrn xx xxxxxxxx než fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx xx xxxxxxxx x xxxx X xx xxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vizuálně xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx extraktu s xxxxxxxxxx skvrn X, X a X xxxxxxxxxxxx roztoku. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx fluorescence 20 μx xxxxxxxx silnější xxx xxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx chloroformem (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x xxxx znovu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx změří xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx x emisní xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x intenzitou xxxxx X, X x X standardního xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx X1
Xxx bod 5.6 xxxxxx X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxx 6 xxxxxx X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx A.
8. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. POZNÁMKY XXXXXXXX XX XXXXX X X B
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx se musí xx xxxxxxxx podle xxxx 5.1 odtučnit xxxxxxxxxxxxx (b. v. 40 xx 60 °X).
X takových xxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx vyjádřeny jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků, xx. xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx dvěma xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx na:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1 x 10 μx/xx xx xx 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xx 20 xx 50 μg/kg;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx pro střední xxxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
Xxxxxxx x xxxxxxx
