Xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], naposledy pozměněnou xxxxx o xxxxxxxxxxx [2], a xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k tomu, xx směrnice Xxxxxx 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/XXX ze xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/EHS xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx dne 5. prosince 1972 [6], 74/203/XXX xx xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX ze xxx 20. prosince 1974 [8] xxx stanovily xxxx analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že s xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx provedených xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx sedmou sérii xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že opatření xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xxxxx jde x obsah xxxxxxxxxx X1, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx uvedená x části 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971, s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx informují Komisi.
Článek 3
Xxxx směrnice xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu xxx 1. března 1976.
Za Xxxxxx
X. X. Lardinois
člen Xxxxxx
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Úř. věst. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX X1
X. XXXXXX JEDNOROZMĚRNÉ XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx, xxxxx xxxxxx, xxxx, xxxxx, babassu xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, obiloviny x xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxx mouka, xxxxxxxxxx xxxxx a škrob. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, které xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx X (dvourozměrná xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx kolonovou xxxxxxxxxxxxxx xx silikagelu. Xxxxx se odpaří x reziduum xx xxxxxxxx xx stanoveném xxxxxx chloroformu nebo xx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx podrobí tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx stanoví x chromatogramu xxx XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Identita xxxxxxxxxx X1 extrahovaného x xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx stanoveným xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx čistoty "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx stabilizovaný 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx benzenu x acetonitrilu: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx chloroformu (3.2) a methanolu (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, předem odtučněná xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Síran sodný, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Inertní xxxx, xxxx. dusík.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) xxxxxxxx xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Silikagel X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx směsi benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx obsahující xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx B1 x X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx. Musí být xxxxxxxx xxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx fluorescence x xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/aceton (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Diethylether (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/methanol (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Chloroform (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), chromatografický xxxx x nasycenou xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx míchačka.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, Schleicher x Xxxüxx x. 588 nebo xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, xxxxx 300 xx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 250 μx zásobníkem.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, s xxxxxx o objemu 500 xx x xxxxxxx xxxx.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxx tenkovrstvou chromatografii.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 200 x 200 xx, xx xxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx pět desek): xxx 30 g xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx 60 xx xxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx suspenzi na xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx se vytvořila xxxxxxxxxxx vrstva o xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx uvedeného xxxxxxx.
4.9 XX xxxxx xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx, aby xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx X1 na xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx ještě xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Odměrné xxxxxxxx x objemu 10 xx, x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Fluorimetr (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", část X bod 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx prošel xxxxx x oky x xxxxxxxxx 1 xx (x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx a homogenizovaného xxxxxx. Xxxxxx 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 xx xxxx x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, xxxx sebrat 50 xx.
5.3 Přečištění xx koloně
Do xxxxxx xxxxx chromatografické xxxxxxx (4.4) xxxxxx xxxxx x xxxx xxxx xx xxxxxx xxxx (3.9), naplnit xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxx chloroformem (3.2), x poté xxxxxx 5 x síranu xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, že xxxxx povrch xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx rovný, x xxxx xxxxxx xx xxxxxx dávkách 10 x xxxxxxxxxx (3.8). Xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xx odstranily xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx xxxx, x xxxx xxxxxxx xxxxxx 15 x xxxxxx xxxxxxx (3.10). Nechat xxxxxxxx klesnout až x hornímu xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx extraktu xxxxxxxxx xxxxx bodu (5.2) se 100 xx x-xxxxxx (3.3) x směs kvantitativně xxxxxx do kolony. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx vrstvy xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxx klesnou xx x xxxxxxx povrchu xxxxxx xxxxxx sodného. Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xx, xxx rychlost xxxxxxx xxxx 8 xx 12 xx xx xxxxxx x aby xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx 150 ml xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx xxxx eluát.
Odpařit xxxxx xx sucha xxx xxxxxxx inertního xxxxx (3.11) x xxxxxxx xxxxxxx odparce (4.5) xxx teplotě xxxxx xxx 50 °X. Xxxxxxxx kvantitativně xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) do xxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxx 10 ml (4.10). Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11), a xxxx doplnit objem xx 2 ml xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx chromatografie
Na xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 xx xx xxxxxx xxxxx x x odstupech xx 2 cm tyto xxxxxx standardních xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx získaného xxxxx bodu 5.3 x x xxxx 20 μl standardního xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx získaného podle xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx tmě xx použití jednoho x vyvíjecích xxxxxxxxxxxx (3.18). Xxxxx xxxxxxxxxxxx xx musí xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x xxxx xx ověřit, xxx xxxx aflatoxiny B1 x X2 při xxxxxxxx xxxxx odděleny.
Nechat xxxxxxxxxxxx odpařit xx xxx x xxxx xxxxxx xxxxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx standardního xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx 10 ml xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx skvrna. Xxxxx xx intenzita xxxxxxxxxxxx 10 μl extraktu xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 40 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx 10 krát xxxx 100 krát xxxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) a xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxx X1 xx xxxx fluorimetrem (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx x xxxxxx délce 443 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 ve xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxx B1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1 x extraktu xx xxxxxxx xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx získaný xxxxx xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxx UV zářením xxxxxx x xxxxx xx xxxxxx.
5.6.2 Dvourozměrná xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx provádět xxxxxx podle schématu xxxxxxxx xx xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Nanesení xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 cm xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx pipet xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- x xxxx X: objem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3, xxxxx xxxxxxxx xxx 2,5 nm xxxxxxxxxx B1,
- x xxxxxx B x X: 25 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx použití xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x tloušťce 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx směru X, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx pět xxxxx xx tmě a xxx pokojové xxxxxxx. Xxxx stříkat kyselinu xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx o xxxxx 2,5 xx, xxxxx xxxxxxx xxxx X x X (xx xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), dokud xxxxx xxxxxxxxx, přičemž xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Nechat xxxxxxx 10 xxxxx xx xxx, x xxxx vysušit xxxxx xxxxxxx vzduchu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx rozpouštědla (3.18.1) [xxxxxx o xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx xxxxx II, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x vymezující xxxxx. Xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx ve tmě x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxxx xxxxx:
x) Xxxxxxxx xx modré xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 pocházející xx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx xx xxxxx X).
x) Xxxxxxxx se xxxxx fluoreskující xxxxxx xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxx pocházejí ze xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx x bodu B (xxxxxxx xx xxxxx XX).
x) Objevení se xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxx popsány x xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X. Xxxxxx těchto xxxxx vychází jednak x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxx A xx xxxxx X (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X) x xxxx migrační xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 – hemiacetalu od xxxx A ve xxxxx XX (stejná xxxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pocházejících x xxxxxxxx a ze xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X xx xx měly xxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
6.1 Xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x mikrogramech na 1 xx xxxxxx (xxx) se xxxxxxxx xxxxxx vzorce:
S · X · X / X · X
xxx:
X x X xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku aflatoxinu X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) a xxxxxxxx, xxxxx má xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
X = konečný objem xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx použitý pro xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxxxxxx na 1 kg vzorku (xxx) se xxxxxxxx xxxxxx vzorce:
S·V / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx desku (10 μx nebo 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1, x xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx Y) xxxxxxxx x xxxxxx;
X = konečný xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, s xxxxxxx na objem xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx xx od 8 xx 10 μx/xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 330 x 370 xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (X) při 363 xx v případě xxxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxx xxx 348 nm x xxxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx; 312 · X · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · X · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 xxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu..
Ve xxx xxxxxxx xxxxxxxxx ředění x cílem xxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxx 0,1 μx/xx. Xxxxx xx roztok xxxxxxxx x chladničce xxx 4 °X, je xxxxx po xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Testování xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx (4.8) 5 μx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 až 10 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx (7.1). Vyvinout xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.4. Při UV xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx žádná xxxxxxxxxxxx.
8. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které x xxxxxxx vzorku provedl xxxxxx xxxxxxxx, nesmí xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx 10 xx 20 μx/xx,
- 5 μx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsahy xx 20 do 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx vyšší než 50 μx/xx.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", část X xxx 2.
X. METODA XXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ CHROMATOGRAFIE
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx oblasti xxxxxxxxxx metody A. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx je 0,01 xx/xx (10 xxx). Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx krmiva xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografií xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx ve xxxxxxxxxx objemu xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tenkovrstvé chromatografii. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx z xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx jinak, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 N–hexan.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Směs xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Silikagel pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 až 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, předem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Síran xxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx plyn, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 N.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) promytá xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Vyvíjecí roztoky.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (X/X), chromatografický xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx aflatoxinu X1 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxx je xxxxxxx x bodu 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 xxxxxx X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 a3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně |
5.4 Dvourozměrná xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (podle xxxxxxxx xx obrázku 1)
Xxxxxxxxx xx desku (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx (6 cm xx každé strany), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- v xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3,
- v xxxx B: 20 μx standardního xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 10 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx proudem xxxxxxx xxxx inertního xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x tloušťce 1 xx v xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx xxxxx X, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Vyjmout xxxxx x chromatografického xxxxx x nechat xxxxxxxx 15 minut xx xxx x při xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, dokud xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x vymezující linii. Xxxxxxx desku x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx oschnout ve xxx a xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Ozářit xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx xx deska xxxxxx xx vzdálenosti 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx xxxxxxx fluoreskujících xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx standardního xxxxxxx X, X, X x E. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx přímky, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx úhel x xxxxxxxxxx xxxxx. Průsečík X xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx xxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 xxxx xxxx xxx v xxxx X xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx přímek svírajících xxxx xxx 100 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx X x X. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx chromatografie
Narýsovat xx xxxxx desku (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx ve xxxxxxxx xx obrázku 1, x xxxxxx na xxx A (xxx xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx podle xxxx 5.3, a k xxxx 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x bodu 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx zda:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 z extraktu x ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx překrývají,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxx fluorescence xxxxx aflatoxinu X1, xxxxx xx vyvinula x bodu X xx první xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx extraktu s xxxxxxxxxx xxxxx C, X a X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Pokud je xxxxxxxxx fluorescence 20 μx extraktu silnější xxx xxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu B1 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) při xxxxxxxxx xxxxxx délce 365 xx x emisní xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx skvrnách extraktu xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx X, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Potvrzení xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxx xxx 5.6 xxxxxx A.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxx 6 xxxxxx X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx X.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", část C xxx 2.
X. POZNÁMKY XXXXXXXX XX METOD X X B
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx více xxx 5 % xxxx se musí xx přípravě xxxxx xxxx 5.1 odtučnit xxxxxxxxxxxxx (b. x. 40 xx 60 °X).
X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx analytické xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků, xx. rozdíl xxxx xxxxxxxx získanými xxxxx xxxx xxxx laboratořemi xx xxxxxxxx vzorku, xx xxxxxxxx xx:
± 50 % střední xxxxxxx pro střední xxxxxxx xxxxxxxxxx B1 x 10 μx/xx xx do 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % střední xxxxxxx xxx střední xxxxxxx vyšší xxx 50 μg/kg.
Dodatek x xxxxxxx
