Xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx úřední kontrolu xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Smlouvu x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv [1], xxxxxxxxx pozměněnou xxxxx x xxxxxxxxxxx [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxx, že xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx cílem xx xxxxxx dodržování požadavků xxxxxxxxxxx právními x xxxxxxxxx předpisy x xxxxxxxxxx xx jakosti x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx xxx 15. července 1971 [3], 71/393/XXX ze xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/XXX xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx dne 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/XXX xx xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX ze xxx 20. xxxxxxxx 1974 [8] xxx stanovily xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx provedených xxxxx xx však nutné xxxxxxxx sedmou xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem x xxxx, že opatření xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x obsah xxxxxxxxxx X1, se xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx uvedená x xxxxx 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx dne 15. xxxxxxxx 1971, s xxxxxxxx části týkající xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx metody xxxxxxx v xxxxxxx xxxx směrnice.
Článek 2
Xxxxxxx státy xxxxxx v účinnost xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 1. října 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 1. xxxxxx 1976.
Za Xxxxxx
X. J. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. věst. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Úř. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Úř. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Úř. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
PŘÍLOHA
STANOVENÍ XXXXXXXXXX B1
A. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx obsah xxxxxxxxxx X1 x těchto xxxxxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx, xxxxx semena, xxxx, xxxxx, xxxxxxx xxxxx a kukuřičné xxxxxx, xxxxxxxxx a xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxx mouka, bramborová xxxxx x škrob. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxxx analýzu xxxxx xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografie).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxx alikvotní xxxx se odebere x přečistí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx chloroformu xxxx xx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Alikvotní xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxx x chromatogramu xxx XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Identita aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxxxx z xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx stanoveným postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxx "x. x".
3.1 Aceton.
3.2 Xxxxxxxxxx stabilizovaný 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Methanol.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (V/V).
3.8 Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx odtučněná xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx sodný, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, např. dusík.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) kyselina xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx G–HR xxxx ekvivalent, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Standardní xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μg aflatoxinu X1 na 1 xx chloroformu (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x zkontrolovaný, xxx xx xxxxxxx x bodu 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx B1 a X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxx tak, xxx xx xxxxxxx stejná xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx u xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Vyvíjecí xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/aceton (3.1): 9/1 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx tank s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Chloroform (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Chloroform (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), chromatografický xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Třepačka xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papíry, Schleicher x Xxxüxx x. 588 xxxx ekvivalentní, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx průměr 22 xx, xxxxx 300 xx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x xxxxxx x xxxxxx 500 ml x xxxxxxx dnem.
4.6 Erlenmeyerovy xxxxx o xxxxxx 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxx tenkovrstvou chromatografii.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 200 x 200 mm, xx připraví takto (xxxxxxx xxxxxxxx stačí xxx pět desek): xxx 30 x xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky, xxxxxx 60 ml xxxx, xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx suspenzi xx xxxxx takovým způsobem, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Před xxxxxxxx xxxxxxxxx desky xxxxx hodinu x xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx vykazují xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 XX lampa xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx, aby xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx byla xx xxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx ještě xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx o objemu 10 xx, x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx (xxx "Poznámky", část X bod 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx s xxx x xxxxxxxxx 1 xx (v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx ISO X 565).
5.2 Extrakce
Do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Přidat 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 xx vody x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 30 minut třepačkou (4.2) a xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, poté sebrat 50 ml.
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně
Do spodní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (4.4) vložit zátku x xxxx nebo xx skelné xxxx (3.9), naplnit xxxxxxx xx do xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x poté přidat 5 g xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, xx xxxxx xxxxxx vrstvy xxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxx, x xxxx xxxxxx po xxxxxx dávkách 10 x xxxxxxxxxx (3.8). Xx xxxxxx přidání xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx odstranily xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx xxxx, a xxxx xxxxxxx xxxxxx 15 g xxxxxx xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x hornímu xxxxxxx xxxxxx síranu sodného.
Smíchat 50 xx extraktu xxxxxxxxx xxxxx bodu (5.2) xx 100 xx n-hexanu (3.3) x xxxx kvantitativně xxxxxx xx kolony. Xxxxxx kapalinu xxxxxxxx xx k hornímu xxxxxxx vrstvy síranu xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx diethyletheru (3.5) x znovu xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx to, xxx xxxxxxxx průtoku xxxx 8 xx 12 ml xx xxxxxx x aby xxxxxx nevyschla. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx kapalinu. Poté xxxxxxx 150 xx xxxxx chloroformu a xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx xxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx sucha xxx proudem xxxxxxxxx xxxxx (3.11) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5) xxx xxxxxxx xxxxx xxx 50 °X. Reziduum xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 xx (4.10). Xxxxxxxxxxxx roztok xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11), x xxxx doplnit xxxxx xx 2 xx xx použití chloroformu (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) nanést 2 xx xx xxxxxx hrany a x xxxxxxxxx xx 2 xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku alfatoxinu X1 (3.16),
- 10 μx extraktu xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.3 x k tomu 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μl xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxx xx použití jednoho x xxxxxxxxxx rozpouštědel (3.18). Výběr rozpouštědla xx xxxx xxxxxxx xxxxxx nanesením 25 μx jakostního standardního xxxxxxx (3.1) na xxxxx x xxxx xx xxxxxx, zda xxxx xxxxxxxxxx B1 x B2 při xxxxxxxx zcela xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx ve xxx a xxxx xxxxxx xxxxx XX xxxxxxx ze xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Skvrny xxxxxxxxxx X1 modře xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx provádí xxx xxxxxxxx xxxx fluorimetricky xxxxx těchto pokynů:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství aflatoxinu X1 x extraktu xx xxxxxxx porovnáním xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx s intenzitou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx přes standardní xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx fluorescence 10 xx extraktu x xxxxx být xxxxxxxxx více než xxxxx xxxxxx. Pokud xx intenzita fluorescence 10 μx extraktu xxxxxxxx než xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 40 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx 10 krát xxxx 100 krát xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx znovu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence skvrn xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx excitační xxxxxx xxxxx 365 nm x emisní xxxxx 443 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 ve xxxxxxxx extraktu xx xxxxxxx porovnáním jejich xxxxxxxx fluorescence x xxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx B1.
5.6 Xxxxxxxxx identity aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxx xx provede xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xxxx 5.4 nastříkat xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxx X1 xx musí xxx UV zářením xxxxxx x modré xx xxxxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx provádět xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 cm xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx xxx rozpouštědel. Xxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx pipet xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- x xxxx A: xxxxx xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3, xxxxx xxxxxxxx xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx X1,
- x xxxxxx X a X: 25 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx směru X, xxxxx čelo rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx x nechat xxxxxxxx xxx minut xx xxx x xxx pokojové teplotě. Xxxx stříkat xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) na xxxxx o šířce 2,5 cm, xxxxx xxxxxxx body X x B (xx xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx zbytek xxxxx xx chráněn xxxxxxx xxxxxxx. Nechat xxxxxxx 10 xxxxx xx xxx, a xxxx vysušit desku xxxxxxx vzduchu při xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vyvíjecího rozpouštědla (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující linii. Xxxxxxx desku x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Interpretace chromatogramu
Pozorovat xxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxxx xxxxx:
x) Xxxxxxxx xx modré xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx C (xxxxxxx xx směru X).
x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, přičemž xxx xxxxxx pocházejí xx xxxxxxxxxxxx roztoku naneseného x xxxx B (xxxxxxx ve směru XX).
x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx, jaké xxxx xxxxxxx x xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxx X. Xxxxxx těchto xxxxx vychází jednak x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx X ve xxxxx X (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx vzorku naneseného x xxxx X) x xxxx migrační xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 – hemiacetalu xx xxxx X xx xxxxx XX (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx B). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx z xxxxxxxx x ze xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxx (xxx) xx vypočítá xxxxxx xxxxxx:
X · X · V / X · X
xxx:
X x X xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1 v xxxxxxxxxxxx (3.16) x xxxxxxxx, xxxxx xx stejnou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxx xx 1 ml, xxxxxxxxxx X1 ve xxxxxxxxxxx roztoku (3.16);
X = konečný xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx zkušebního vzorku x xxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx použitý xxx xxxxxxxxxx xx koloně.
6.2 Xx xxxxxxx fluorimetrického xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxxx na 1 xx vzorku (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx nebo 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, x xxxxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxxx (poměrně x xxxxxxx xxxxxxx Y) xxxxxxxx x xxxxxx;
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x gramech, x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx na xxxxxx.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), jehož xxxxxxxxxxx xx od 8 do 10 μx/xx. Xxxxxxxx absorpční xxxxxxxx mezi 330 x 370 xx xx xxxxxxx spektrofotometru (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (X) při 363 xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx 348 xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx koncentraci xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx; 312 · X · 1 000 / 20&xxxx;600
312 · X · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 pro roztok xx xxxxx benzenu x acetonitrilu..
Ve xxx xxxxxxx příslušná xxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx koncentrace xxxxxxxxxx X1 xx xxx 0,1 μx/xx. Xxxxx xx xxxxxx skladuje x chladničce xxx 4 °X, je xxxxx xx xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx čistoty
Nanést na xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 až 10 μx xxxxxxxxxx X1 na 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.4. Xxx UV xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx a x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Opakovatelnost
Rozdíl mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx provedl xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx 10 do 20 μg/kg,
- 5 μx absolutní xxxxxxx xxx obsahy xx 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. METODA XXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ CHROMATOGRAFIE
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu B1 x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx X. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 ppb). Xxxx metoda xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx x jeho xxxxxxxxx část xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Eluát xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx objemu chloroformu xxxx ve směsi xxxxxxx a acetonitrilu. Xxxxxxxxx část xxxxxx xxxxxxx xx podrobí xxxxxxxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx flourometricky xxxxxxxxx xx známým xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx aflatoxinu X1. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx stanoveno xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxx "p.a".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx stabilizovaný 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) ethanolu.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx peroxidy.
3.6 Směs xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost xxxxxx 0,05 až 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, předem xxxxxxxxx chloroformem, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Síran xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 Křemelina (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxx roztoky.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Chloroform (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxx xx uvedeno x bodu 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 metody X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 x3.5 metody X. |
|
5.2 Extrakce |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx |
5.4 Dvourozměrná xxxxxxxxxxx chromatografie
5.4.1 Nanesení xxxxxxx (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxx xx desku (4.8) xxx přímky xxxxxxxxxx xx dvěma xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx strany), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx na desku xxxxxx xxxxxxxxxxx pipet xxxx injekčních mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- v xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3,
- x xxxx B: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x bodu X: 10 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16),
- x xxxx X: 20 μl standardního xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx inertního xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx v chromatografickém xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx směru I, xxxxx čelo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx. Xxxxxxx desku x chromatografického xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx 15 xxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x nenasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx ve xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující linii. Xxxxxxx desku z xxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx oschnout xx xxx x při xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx (xxxxx schématu xx xxxxxxx 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx UV xxxxxxx, xxxxxxx xx deska xxxxxx do vzdálenosti 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 xx standardního roztoku X, C, X x X. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx X těchto xxxxxx xxxxxx místo, xxx xxx očekávat xxxxxx xxxxxxxxxx X1 pocházející x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v bodu X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 však xxxx xxx v xxxx X umístěném xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx 100 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx X x X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodu 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx na xxxxx xxxxx (4.8) xxx přímky rovnoběžné xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx obrázku 1, x xxxxxx xx xxx X (viz xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx 5.3, x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16). Xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Ozářit xxxxxxxxxxxx XX světlem (4.9) x xxxxxx xxx:
- xx skvrny xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx x xx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxx skvrn xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1, xxxxx xx xxxxxxxx x bodu X xx xxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescence xxxxx extraktu x xxxxxxxxxx xxxxx X, X a X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx intenzita 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x xxxx znovu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx fluorimetrem (4.12) při xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx a xxxxxx xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx skvrny xxxxxxxx s intenzitou xxxxx X, D x E standardního xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1
Viz bod 5.6 xxxxxx X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxx 6 xxxxxx X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx bod 8 xxxxxx X.
8. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", část C xxx 2.
X. XXXXXXXX XXXXXXXX XX XXXXX X X X
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx xx musí xx přípravě xxxxx xxxx 5.1 odtučnit xxxxxxxxxxxxx (b. x. 40 xx 60 °X).
X takových xxxxxxxxx xxxx xxx analytické xxxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx neodtučněného vzorku.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků
Reprodukovatelnost xxxxxxxx, xx. xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx dvěma xxxx xxxx laboratořemi xx xxxxxxxx vzorku, xx xxxxxxxx xx:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x 10 μg/kg xx do 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx střední xxxxxxx od 20 xx 50 μg/kg;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx než 50 μx/xx.
Xxxxxxx k xxxxxxx
