Xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Rady xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx [2], x xxxxxxx xx článek 2 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxx, že xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxx požadavků xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx jakosti x složení krmiv, xx xxxxxxxxx podle xxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Komise 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/EHS xx dne 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx dne 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/XXX ze xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX ze xxx 20. xxxxxxxx 1974 [8] již xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxx xxx x obsah xxxxxxxxxx X1, xx xxxxxxxxx xxxxx metod xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx první xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx dne 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx směrnice.
Článek 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí nejpozději xx 1. xxxxx 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx Komisi.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 1. xxxxxx 1976.
Za Xxxxxx
X. J. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. věst. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Úř. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Úř. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Úř. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX X1
X. XXXXXX JEDNOROZMĚRNÉ TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Účel a xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxx xxxxxxxx: podzemnice olejná, xxxxx, lněná xxxxxx, xxxx, sezam, babassu xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx a xxxxxxx z xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 ppb).
Pokud xxxx přítomny rušivé xxxxx, xxxxx ztěžují xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx analýzu podle xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx chloroformem. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxx alikvotní xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx silikagelu. Xxxxx se odpaří x reziduum se xxxxxxxx xx stanoveném xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx tohoto roztoku xx podrobí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 se xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx buď xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx známými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Identita aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxxxx z xxxxx musí xxx xxxxxxxxx stanoveným postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx čistoty "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) x methanolu (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx částic 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, předem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx skelná xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, např. dusík.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) kyselina xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), promytá xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 a X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Musí být xxxxxxxx xxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx fluorescence u xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Vyvíjecí xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nenasycenou atmosférou;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), chromatografický xxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x nasycenou atmosférou.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx míchačka.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxxx x Xxxüxx č. 588 xxxx ekvivalentní, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx chromatografická xxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, délka 300 xx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 250 μx zásobníkem.
4.5 Rotační xxxxxxx xxxxxxx, x xxxxxx x xxxxxx 500 xx x xxxxxxx dnem.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxx tenkovrstvou chromatografii.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 200 x 200 xx, xx xxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxxx stačí xxx pět desek): xxx 30 x xxxxxxxxxx G-HR (3.15) xx Erlenmeyerovy xxxxx, xxxxxx 60 xx xxxx, xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx takovým způsobem, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 0,25 mm. Xxxxxx uschnout xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx při 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx jsou vyhovující, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx uvedeného xxxxxxx.
4.9 UV xxxxx xxxxxxxxxxx (360 mm). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx ještě xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx o objemu 10 xx, x xxxxxxxxxxxxxxxx zátkami.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx (xxx "Poznámky", část X xxx 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx celý xxxxxx xxxxx x xxx x xxxxxxxxx 1 xx (x xxxxxxx x doporučením ISO X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 ml vody x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx filtrační xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, xxxx xxxxxx 50 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně
Do xxxxxx xxxxx chromatografické trubice (4.4) vložit xxxxx x xxxx xxxx xx xxxxxx vaty (3.9), naplnit xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x poté přidat 5 x xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxx, a xxxx xxxxxx xx xxxxxx dávkách 10 x xxxxxxxxxx (3.8). Xx každém přidání xxxxxxx zamíchat, xxx xx odstranily vzduchové xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx xxxx, x xxxx opatrně xxxxxx 15 x xxxxxx xxxxxxx (3.10). Nechat xxxxxxxx xxxxxxxx xx x hornímu povrchu xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (5.2) se 100 xx x-xxxxxx (3.3) x směs kvantitativně xxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx klesnout xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Přidat 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x znovu nechat xxxxxxxx xxxxxxx xx x hornímu povrchu xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx tohoto xxxxxxx xxxx xx xx, xxx xxxxxxxx průtoku xxxx 8 xx 12 xx za xxxxxx x aby xxxxxx xxxxxxxxx. Odstranit xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx 150 xx xxxxx chloroformu x xxxxxxxxx (3.7) a xxxxxx xxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx do sucha xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11) x xxxxxxx vakuové odparce (4.5) při xxxxxxx xxxxx než 50 °X. Xxxxxxxx kvantitativně xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) do xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 ml (4.10). Xxxxxxxxxxxx roztok xxx xxxxxxx inertního xxxxx (3.11), x xxxx doplnit objem xx 2 ml xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6).
5.4 Tenkovrstvá xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 cm xx xxxxxx hrany x x xxxxxxxxx xx 2 xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx extraktu xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3 x k xxxx 20 μl standardního xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx ve xxx xx xxxxxxx xxxxxxx x vyvíjecích xxxxxxxxxxxx (3.18). Výběr xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x xxxx xx xxxxxx, xxx xxxx aflatoxiny X1 x X2 xxx xxxxxxxx xxxxx odděleny.
Nechat xxxxxxxxxxxx xxxxxxx ve xxx a xxxx xxxxxx xxxxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo fluorimetricky xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství aflatoxinu X1 x extraktu xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx standardní xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx než fluorescence 10 xx extraktu x xxxxx být xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx fluorescence 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, rozředit xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) a xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 se xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx excitační xxxxxx xxxxx 365 xx x xxxxxx xxxxx 443 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx jejich xxxxxxxx fluorescence x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx identity aflatoxinu X1 x extraktu xx xxxxxxx xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx získaný xxxxx xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx sírovou (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxx UV xxxxxxx xxxxxx z xxxxx xx žlutou.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx zahrnující tvorbu xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx B2a)
Poznámky:
Níže xxxxxxx xxxxxxxx postupy xx musí provádět xxxxxx xxxxx schématu xxxxxxxx na xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Nanesení xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx (6 cm xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx k vymezení xxxxxxx čel rozpouštědel. Xxxxxx na desku xxxxxx xxxxxxxxxxx pipet xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- x xxxx A: objem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.3, xxxxx xxxxxxxx xxx 2,5 nm xxxxxxxxxx X1,
- x xxxxxx X x X: 25 μl xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx v chromatografickém xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx směru I, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxx a xxx pokojové teplotě. Xxxx stříkat kyselinu xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) na xxxxx x xxxxx 2,5 cm, který xxxxxxx body X x X (na xxxxxxx 3 vyznačeno xxxxxxxxx), xxxxx pásek xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx 10 minut xx xxx, x xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx vyvíjí xx xxxxxxx vyvíjecího rozpouštědla (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx rozpouštědla nedosáhne x vymezující linii. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx oschnout pět xxxxx xx tmě x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx chromatogramu
Pozorovat xxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx (4.9) a xxxxxx xxxx xxxxx:
x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx xx xxxxx X).
x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx) x intenzivnější xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx obě xxxxxx pocházejí xx xxxxxxxxxxxx roztoku naneseného x bodu X (xxxxxxx xx xxxxx XX).
x) Objevení xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxx xxxxxxx x xxxx x), pocházejících xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v bodu X. Poloha xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x migrační xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx X xx xxxxx X (stejná xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x xxxx X) x xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 – hemiacetalu xx xxxx A ve xxxxx XX (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxxxx vzorku naneseného x xxxx X). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x ze xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx B xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Výpočet výsledků
6.1 Xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech xx 1 kg xxxxxx (xxx) se xxxxxxxx xxxxxx vzorce:
S · X · X / X · X
xxx:
X x X xxxx xxxxxxxxx objemy xxxxxxxxxxxx roztoku aflatoxinu X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) x xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, x mikrogramech xx 1 xx, xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxxxxx roztoku (3.16);
X = konečný objem xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx xx objem xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 kg xxxxxx (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, x mikrolitrech, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx xxxx 20 μx);
X = množství xxxxxxxxxx X1, x xxxxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx hodnotě X) xxxxxxxx x xxxxxx;
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x ohledem xx xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx na objem xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx na xxxxxx.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx xx od 8 xx 10 μx/xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 330 x 370 xx xx použití xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx optickou xxxxxxx (X) xxx 363 xx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx 348 xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx pomocí tohoto xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx roztok; 312 · A · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · A · 1 000 / 19&xxxx;800 xxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx koncentrace xxxxxxxxxx X1 je asi 0,1 μx/xx. Pokud xx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx 4 °X, xx xxxxx po xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx na xxxxx (4.8) 5 μx standardního roztoku xxxxxxxxxxxx 8 až 10 μx aflatoxinu X1 xx 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.4. Xxx UV xxxxxx by měla xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxx původního xxxxxxxx by xxxxxx xxx znatelná xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx analytik, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx aflatoxinu X1 xx 10 do 20 μg/kg,
- 5 μx xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx xxxxx než 50 μx/xx.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx C xxx 2.
X. METODA XXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx a rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu B1 x krmivech, které xxxxxxxxx do oblasti xxxxxxxxxx metody X. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx je 0,01 xx/xx (10 xxx). Xxxx metoda xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx část xxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tenkovrstvé chromatografii. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx vizuálně xxxx flourometricky xxxxxxxxx xx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxxxx aflatoxinu X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx x krmiv xxxx xxx potvrzena xxxxxxxxxx postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx jinak, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx peroxidy.
3.6 Směs xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (V/V).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, předem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Síran xxxxx, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková 1 X.
3.13 Křemelina (xxxxxxxxxxxxx) promytá xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx G–HR xxxx xxxxxxxxxx, xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxx xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/aceton (3.1): 9/1 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx je xxxxxxx x bodu 7 xxxxxx A.
4. Přístroje
Viz xxx 4 metody X.
5. Postup
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx body 5.1, 5.2 x3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx |
5.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Nanesení xxxxxxx (podle xxxxxxxx xx obrázku 1)
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx k vymezení xxxxxxx xxx rozpouštědel. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx kapilárních pipet xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3,
- v xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- v xxxx X: 10 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x bodu X: 20 μx standardního xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx standardního roztoku (3.16).
Xxxxxxx slabým xxxxxxx xxxxxxx xxxx inertního xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx asi 5 xx.
5.4.2 Vyvíjení (xxxxx xxxxxxxx xx obrázku 1)
Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx směru X, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx. Vyjmout xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx xxxxxxxx 15 xxxxx xx xxx a při xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx se xxxxxxxxxxxx vyvíjí za xxxxxxx xxxxxxxxxx rozpouštědla (3.15.1) [xxxxxx o xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx rozpouštědla nedosáhne x xxxxxxxxxx linii. Xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx tanku a xxxxxx oschnout xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Ozářit xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X, X, X x E. Načrtnout xxx pomyslné xxxxxx, xxxxx procházejí těmito xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx X těchto xxxxxx xxxxxx místo, kde xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 pocházející x xxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx v xxxx X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx xxxxxx skvrny xxxxxxxxxx B1 xxxx xxxx být x xxxx X xxxxxxxxx xx průsečíku xxxx xxxxxxxxxx přímek xxxxxxxxxxx xxxx asi 100 xxxxxx x protínajících xxxx X x X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v extraktu xxxxxx xx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx chromatografie
Narýsovat xx xxxxx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx ve xxxxxxxx xx xxxxxxx 1, x xxxxxx na xxx X (xxx xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxxxx bodu 5.3, a k xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx jak xx xxxxxxx x bodu 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x ověřit xxx:
- xx xxxxxx aflatoxinu X1 x extraktu x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- fluorescence xxxxxx xxxxx je xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1, xxxxx xx vyvinula x xxxx Q xx xxxxx desce.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxx X, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx potřeby xx xxxxxxxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx nebo 100 xxxx chloroformem (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x poté znovu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) při xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx x xxxxxx xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx intenzity xxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxx X, D x E xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Potvrzení identity xxxxxxxxxx X1
Xxx bod 5.6 metody X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxx 6 xxxxxx X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx bod 8 xxxxxx X.
8. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", část C xxx 2.
X. XXXXXXXX XXXXXXXX XX XXXXX X A B
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx obsahující xxxx xxx 5 % xxxx se xxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. x. 40 xx 60 °X).
X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx vyjádřeny jako xxxxxxxx neodtučněného xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků
Reprodukovatelnost výsledků, xx. xxxxxx xxxx xxxxxxxx získanými xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxx xx stejného vzorku, xx xxxxxxxx xx:
± 50 % střední xxxxxxx xxx střední xxxxxxx aflatoxinu B1 x 10 μx/xx xx xx 20 μx/xx;
± 10 μg/kg xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx od 20 xx 50 μg/kg;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
Xxxxxxx x xxxxxxx
