Xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx se stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední kontrolu xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Rady xx dne 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx xxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx [2], a zejména xx článek 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxx xxxxxxxx stanoví, že xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx je xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx krmiv, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Komise 71/250/XXX xx xxx 15. července 1971 [3], 71/393/XXX ze xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/EHS xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx dne 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/EHS xx xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX ze dne 20. xxxxxxxx 1974 [8] již xxxxxxxxx xxxx analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx sedmou xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, že xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxx aflatoxinu X1, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze této xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Komise 71/250/XXX xx dne 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx přípravy vzorku x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx metody xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Článek 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v účinnost xxxxxx a správní xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx souladu x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 1976. Neprodleně o xxxx informují Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
V Xxxxxxx dne 1. xxxxxx 1976.
Xx Xxxxxx
X. X. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Úř. věst. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Úř. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX B1
A. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x těchto xxxxxxxx: podzemnice xxxxxx, xxxxx, lněná xxxxxx, xxxx, xxxxx, xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx a škrob. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx rušivé xxxxx, xxxxx ztěžují xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxx B (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografie).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx chloroformem. Xxxxxxx se xxxxxxxx x jeho xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx odpaří x xxxxxxxx se xxxxxxxx xx stanoveném xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx. Alikvotní xxxx xxxxxx xxxxxxx xx podrobí tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 se xxxxxxx x chromatogramu xxx XX xxxxxxx buď xxxxxxxx xxxx fluorimetricky xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx standardu aflatoxinu X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx z xxxxx musí být xxxxxxxxx stanoveným xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx činidla xxxx být xxxxxxx "x. a".
3.1 Aceton.
3.2 Xxxxxxxxxx stabilizovaný 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (V/V) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx chloroformu (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost částic 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Síran sodný, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. dusík.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková 1 X.
3.13 50 % (X/X) kyselina xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx X–XX xxxx ekvivalent, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx jakosti obsahující xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx B1 a X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x acetonitrilu (3.6). Xxxx koncentrace xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxx xxx, aby xx získala stejná xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx aflatoxinů.
3.18 Vyvíjecí xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.2 Diethylether (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx tank s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Chloroform (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx atmosférou.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Třepačka nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papíry, Schleicher x Schüll č. 588 xxxx ekvivalentní, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx chromatografická xxxxxxx (xxxxxxx průměr 22 xx, délka 300 xx) s xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 250 μx zásobníkem.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx odparka, x xxxxxx x xxxxxx 500 xx x xxxxxxx dnem.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 500 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 200 x 200 xx, xx připraví xxxxx (xxxxxxx množství xxxxx xxx pět desek): xxx 30 x xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Erlenmeyerovy xxxxx, xxxxxx 60 xx xxxx, xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx 1 minutu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstva o xxxxxxxx 0,25 mm. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx silikagel. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx desky xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx jsou xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx podobné xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx uvedeného xxxxxxx.
4.9 XX lampa xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx záření xxxx xxx dostatečná, xxx xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 xx, s xxxxxxxxxxxxxxxx zátkami.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Příprava vzorku (xxx "Xxxxxxxx", část X xxx 1)
Rozmělnit xxxxxx takovým způsobem, xxx celý xxxxxx xxxxx s xxx x velikosti 1 xx (v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Extrakce
Do Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx x homogenizovaného xxxxxx. Xxxxxx 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 ml xxxx x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, xxxx xxxxxx 50 xx.
5.3 Přečištění xx xxxxxx
Xx spodní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (4.4) xxxxxx xxxxx x xxxx nebo xx xxxxxx vaty (3.9), xxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x poté xxxxxx 5 x síranu xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, xx xxxxx povrch vrstvy xxxxxx sodného xx xxxxx xxxxx, x xxxx xxxxxx xx xxxxxx dávkách 10 x silikagelu (3.8). Xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx odstranily xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx xxxx, x xxxx opatrně přidat 15 g xxxxxx xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x hornímu xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (5.2) xx 100 xx x-xxxxxx (3.3) x směs kvantitativně xxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx kapalinu xxxxxxxx xx x hornímu xxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxx. Přidat 100 xx diethyletheru (3.5) x znovu xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx síranu sodného. Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xx, xxx xxxxxxxx průtoku xxxx 8 až 12 ml za xxxxxx x aby xxxxxx xxxxxxxxx. Odstranit xxxxxxxxx kapalinu. Xxxx xxxxxxx 150 xx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx xxxx eluát.
Odpařit xxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11) x xxxxxxx vakuové odparce (4.5) xxx xxxxxxx xxxxx xxx 50 °X. Xxxxxxxx kvantitativně xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) do xxxxxxx zkumavky o xxxxxx 10 xx (4.10). Koncentrovat xxxxxx xxx proudem xxxxxxxxx xxxxx (3.11), x xxxx xxxxxxx objem xx 2 ml xx použití xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6).
5.4 Tenkovrstvá chromatografie
Na xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 cm xx xxxxxx xxxxx a x odstupech xx 2 cm tyto xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μl xxxxxxxxxxxx roztoku alfatoxinu X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3 x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx tmě xx xxxxxxx xxxxxxx x vyvíjecích xxxxxxxxxxxx (3.18). Výběr rozpouštědla xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x xxxx xx xxxxxx, zda xxxx xxxxxxxxxx B1 x B2 xxx xxxxxxxx zcela xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxx x xxxx xxxxxx xxxxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 cm xx xxxxx (4.9). Skvrny xxxxxxxxxx X1 modře xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx těchto xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx aflatoxinu X1 v extraktu xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxx s intenzitou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se interpoluje. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx fluorescence 10 xx xxxxxxxx x nesmí xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx skvrna. Xxxxx xx intenzita xxxxxxxxxxxx 10 μx extraktu xxxxxxxx xxx intenzita xxxxxxxxxxxx 40 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxx fluorimetrem (4.12) xxx excitační xxxxxx xxxxx 365 xx x emisní xxxxx 443 nm. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 ve xxxxxxxx extraktu xx xxxxxxx porovnáním xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx identity aflatoxinu X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx kyselinou sírovou
Na xxxxxxxxxxxx získaný podle xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxx UV xxxxxxx xxxxxx x modré xx xxxxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx zahrnující tvorbu xxxxxxxxxx B1 - xxxxxxxxxxx (aflatoxin X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx postupy xx musí provádět xxxxxx podle xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx přímky xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx pipet xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- x xxxx X: xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3, který obsahuje xxx 2,5 nm xxxxxxxxxx X1,
- x xxxxxx X x X: 25 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx vyvíjí xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx v xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx směru I, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx minut xx xxx a xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx o xxxxx 2,5 xx, xxxxx xxxxxxx xxxx X x X (na xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), xxxxx pásek xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx xx chráněn xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx xxx, a xxxx vysušit xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x xxxxxxxxxx linii. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx ve xxx x při xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx chromatogramu
Pozorovat xxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxxx znaky:
a) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 pocházející xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx ve xxxxx X).
x) Objevení se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 (který xxxxxxxxxx s kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx) a xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx obě xxxxxx pocházejí xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X (xxxxxxx ve xxxxx XX).
x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx skvrn, xxxx xxxx popsány v xxxx b), xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxx X xx xxxxx X (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X) x xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 – xxxxxxxxxxx od xxxx X xx xxxxx XX (xxxxxx xxxxxxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x bodu X). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx z xxxxxxxx a xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx B xx si xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx aflatoxinu X1 x mikrogramech xx 1 kg xxxxxx (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx vzorce:
S · X · V / X · X
xxx:
X x X xxxx xxxxxxxxx objemy xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) x xxxxxxxx, xxxxx má stejnou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx xx 1 ml, xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
V = konečný objem xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx použitý xxx xxxxxxxxxx xx koloně.
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x mikrogramech xx 1 xx xxxxxx (xxx) se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx desku (10 μx xxxx 20 μx);
X = množství xxxxxxxxxx X1, x xxxxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx X) xxxxxxxx z xxxxxx;
X = konečný xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx, x ohledem xx xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx x gramech, x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxx x testování xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), jehož xxxxxxxxxxx je od 8 xx 10 μx/xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 330 x 370 xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (X) xxx 363 xx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx 348 xx x případě xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1 v mikrogramech xx 1 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx; 312 · X · 1 000 / 20&xxxx;600
312 · X · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 xxx roztok xx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx..
Xx tmě xxxxxxx xxxxxxxxx ředění x cílem xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 je asi 0,1 μx/xx. Pokud xx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx při 4 °X, xx xxxxx xx dobu xxxx xxxxx.
7.2 Testování xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx 8 až 10 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x bodu 5.4. Xxx XX xxxxxx xx xxxx xxx viditelná pouze xxxxx xxxxxx a x místě xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx znatelná xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxx vzorku provedl xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx 10 xx 20 μg/kg,
- 5 μx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx od 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx než 50 μx/xx.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxx, které xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx X. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx). Xxxx metoda xx xxxxxxxxx xxx krmiva xxxxxxxxxx citrusovou pulpu.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxx a residuum xx rozpustí xx xxxxxxxxxx xxxxxx chloroformu xxxx xx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx podrobí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx srovnáním xx známým xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xxxxxxxxxxxxx z xxxxx xxxx xxx potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Chloroform stabilizovaný 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) ethanolu.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Diethylether, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – vata, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx plyn, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 N.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX nebo xxxxxxxxxx, pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Vyvíjecí roztoky.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Chloroform (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Standardní xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx aflatoxinu X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx x kontrolovaný xxx xx xxxxxxx x xxxx 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 metody X.
5. Postup
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 x3.5 metody X. |
|
5.2 Extrakce |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně |
5.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxx xx desku (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx dvěma xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx každé xxxxxx), xxxxxx x vymezení xxxxxxx xxx rozpouštědel. Xxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx roztoky:
- x xxxx A: 20 μx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3,
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 10 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx D: 20 μx standardního xxxxxxx (3.16),
- x xxxx E: 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx proudem xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Vyvíjení (xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x tloušťce 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s nasycenou xxxxxxxxxx] ve tmě xx xxxxx X, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Vyjmout desku x chromatografického xxxxx x xxxxxx oschnout 15 minut ve xxx a xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx vyvíjí xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 cm x chromatografickém tanku x xxxxxxxxxxx atmosférou] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xx xxx x při xxxxxxxx teplotě.
5.4.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx (podle schématu xx xxxxxxx 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xx vzdálenosti 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx modrých fluoreskujících xxxxx aflatoxinu X1 xx standardního roztoku X, X, D x X. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Průsečík X xxxxxx přímek xxxxxx místo, xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 pocházející x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxx X (obrázek 1). Xxxxxxxx xxxxxx skvrny xxxxxxxxxx B1 xxxx xxxx xxx x xxxx Q xxxxxxxxx xx průsečíku xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx svírajících xxxx xxx 100 xxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxx X x X. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx, xxx xx uvedeno x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx chromatografie
Narýsovat xx xxxxx xxxxx (4.8) xxx přímky xxxxxxxxxx xx dvěma xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1, x xxxxxx xx xxx X (viz xxxxxxx 1) 20 μx přečištěného extraktu xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx podle xxxx 5.3, x x xxxx 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx jak xx xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Ozářit chromatogram XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx zda:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 z extraktu x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- fluorescence xxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx xx vyvinula x bodu Q xx xxxxx desce.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení xx xxxxxxxxxx vizuálně xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxx X, X x E xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx potřeby xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx fluorescence 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx intenzita 40 μx standardního xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx chloroformem (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x poté xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx změří xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx délce 365 xx a xxxxxx xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx aflatoxinu B1 xx xxxxxxxx extraktu xx stanoví porovnáním xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx X, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxx bod 5.6 metody X.
6. Xxxxxxx výsledků
Viz xxx 6 metody X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx X.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx C xxx 2.
C. XXXXXXXX XXXXXXXX XX METOD X X X
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx více xxx 5 % xxxx se xxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 odtučnit xxxxxxxxxxxxx (x. x. 40 xx 60 °X).
X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků
Reprodukovatelnost výsledků, xx. rozdíl mezi xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku, xx odhaduje xx:
± 50 % střední xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x 10 μx/xx xx do 20 μx/xx;
± 10 μg/kg xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % střední xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
Xxxxxxx x xxxxxxx
