Xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. března 1976,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Rady xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx pozměněnou xxxxx o xxxxxxxxxxx [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx právními a xxxxxxxxx předpisy x xxxxxxxxxx xx jakosti x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx podle xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k tomu, xx směrnice Xxxxxx 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/XXX ze xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/XXX xx dne 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX ze xxx 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/EHS xx xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX xx dne 20. prosince 1974 [8] již xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx; xx s xxxxxxx na stav xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx nutné xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem k xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx kontroly xxxxx, pokud xxx x obsah xxxxxxxxxx X1, se xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx této xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Komise 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxxxx 1971, s xxxxxxxx části týkající xx přípravy vzorku x xxxxxxx, se xxxxxxx pro metody xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Článek 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 1976. Neprodleně x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Článek 3
Xxxx xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 1. xxxxxx 1976.
Za Xxxxxx
X. X. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Úř. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Úř. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. věst. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX AFLATOXINU X1
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx metoda umožňuje xxxxxxxx obsah xxxxxxxxxx X1 v xxxxxx xxxxxxxx: podzemnice xxxxxx, xxxxx, xxxxx xxxxxx, xxxx, xxxxx, babassu xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxx mouka, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, které xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografie).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x jeho alikvotní xxxx xx odebere x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x reziduum se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx chloroformu nebo xx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx podrobí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxx x chromatogramu xxx XX xxxxxxx buď xxxxxxxx xxxx fluorimetricky xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 extrahovaného x xxxxx musí xxx xxxxxxxxx stanoveným xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, všechna xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Methanol.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, neobsahující xxxxxxxx.
3.6 Směs xxxxxxx x acetonitrilu: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx chloroformu (3.2) x methanolu (3.4): 97/3 (V/V).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, nebo skelná xxxx.
3.10 Xxxxx sodný, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Inertní xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) kyselina xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, pro xxxxxxxxxxxx chromatografii.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx obsahující asi 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 a X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxx xxx, aby xx získala xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), chromatografický xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s nasycenou xxxxxxxxxx;
3.18.4 Chloroform (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank s xxxxxxxxx atmosférou;
3.18.5 Chloroform (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), chromatografický xxxx x nasycenou xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Třepačka xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papíry, Xxxxxxxxxx x Xxxüxx x. 588 xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, xxxxx 300 xx) x teflonovým xxxxxxxx x 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx odparka, x xxxxxx o objemu 500 xx a xxxxxxx xxxx.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 500 ml, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii, 200 x 200 mm, xx xxxxxxxx takto (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxx desek): xxx 30 x xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx 60 xx xxxx, zazátkovat a xxxxxxxxxxx 1 minutu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx xx vytvořila xxxxxxxxxxx vrstva o xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx silikagel. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx desky xxxxx hodinu v xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxx vyhovující, xxxxx xxxxxxxx podobné xxxxxxxx xxxx desky xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 XX xxxxx xxxxxxxxxxx (360 mm). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx dostatečná, xxx xxxxxx 1 ng xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx byla na xxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx xxxxx xxxxx rozeznatelná.
4.10 Odměrné xxxxxxxx x xxxxxx 10 xx, x xxxxxxxxxxxxxxxx zátkami.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Příprava vzorku (xxx "Xxxxxxxx", xxxx X bod 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxx x xxxxxxxxx 1 xx (v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx ISO X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx baňky o xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx 25 x křemeliny (3.14), 25 xx xxxx x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx nebo promíchávat 30 minut třepačkou (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Odstranit xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, poté sebrat 50 ml.
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) xxxxxx zátku x xxxx nebo xx skelné xxxx (3.9), naplnit xxxxxxx xx do xxxx xxxxxx chloroformem (3.2), x xxxx xxxxxx 5 g xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Ověřit, xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného je xxxxx xxxxx, x xxxx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxx 10 x xxxxxxxxxx (3.8). Xx každém xxxxxxx xxxxxxx zamíchat, xxx xx odstranily xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx stát, x xxxx xxxxxxx xxxxxx 15 g xxxxxx xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx klesnout xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (5.2) xx 100 xx n-hexanu (3.3) x směs kvantitativně xxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx kapalinu xxxxxxxx xx k xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx diethyletheru (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného. Xxxxx xxxxxx postupu xxxx xx xx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx 8 xx 12 xx za xxxxxx x aby xxxxxx nevyschla. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx 150 xx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx xxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxx proudem xxxxxxxxx xxxxx (3.11) x xxxxxxx xxxxxxx odparce (4.5) xxx teplotě xxxxx xxx 50 °X. Reziduum kvantitativně xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxx 10 xx (4.10). Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx proudem xxxxxxxxx xxxxx (3.11), a xxxx doplnit xxxxx xx 2 xx xx xxxxxxx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx a acetonitrilu (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) nanést 2 xx od xxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxx xx 2 xx tyto xxxxxx standardních xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.3 x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.3.
Chromatogram se xxxxxx ve xxx xx xxxxxxx jednoho x vyvíjecích xxxxxxxxxxxx (3.18). Výběr rozpouštědla xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.1) xx xxxxx a xxxx xx ověřit, xxx xxxx aflatoxiny X1 x X2 xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx odpařit xx xxx x poté xxxxxx desku XX xxxxxxx ze vzdálenosti 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx fluorimetricky xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx aflatoxinu X1 x extraktu xx xxxxxxx porovnáním xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx interpoluje. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx překrytím xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx musí být xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx než xxxxx xxxxxx. Pokud xx intenzita xxxxxxxxxxxx 10 μl xxxxxxxx xxxxxxxx xxx intenzita xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku, xxxxxxxx xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 krát xxxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Fluorimetrické xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxx fluorimetrem (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx x emisní délce 443 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 ve xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx porovnáním jejich xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxx xx xxxxxxx takto:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx musí xxx XX xxxxxxx xxxxxx x modré xx xxxxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx zahrnující xxxxxx xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx přímky xxxxxxxxxx xx dvěma xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 cm xx každé xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx kapilárních xxxxx xxxx injekčních xxxxxxxxxxxxxx xxxx roztoky:
- x xxxx X: xxxxx xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3, který obsahuje xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx X1,
- x xxxxxx B x X: 25 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx vyvíjí xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x tloušťce 1 xx x chromatografickém xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx X, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx pět xxxxx xx tmě a xxx pokojové xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx x šířce 2,5 xx, který xxxxxxx xxxx A x B (xx xxxxxxx 3 vyznačeno xxxxxxxxx), dokud xxxxx xxxxxxxxx, přičemž xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx tmě, x xxxx xxxxxxx desku xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx vyvíjí xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 cm x chromatografickém tanku x xxxxxxxxxxx atmosférou] xx xxx ve xxxxx XX, dokud xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx. Xxxxxxx desku z xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx oschnout pět xxxxx ve xxx x xxx pokojové xxxxxxx.
5.6.2.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pod UV xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxxx znaky:
a) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 pocházející ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx naneseného x xxxx C (xxxxxxx xx xxxxx X).
x) Objevení xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 (který xxxxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxx pocházejí xx xxxxxxxxxxxx roztoku naneseného x bodu X (xxxxxxx xx xxxxx XX).
x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx, jaké xxxx xxxxxxx v xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx vzorku extraktu xxxxxxxxxx x xxxx X. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x migrační vzdáleností xxxxxxxxxx X1 od xxxx A xx xxxxx X (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X) x xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx aflatoxinu X1 – xxxxxxxxxxx xx xxxx X xx xxxxx XX (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x xxxx B). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx B xx si měly xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
6.1 Xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 kg xxxxxx (xxx) se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X · X · X / X · X
xxx:
X x Y xxxx příslušné xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1 x mikrolitrech (3.16) x xxxxxxxx, xxxxx má stejnou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx, x ohledem xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx použitý xxx xxxxxxxxxx na xxxxxx.
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxx (xxx) se xxxxxxxx xxxxxx vzorce:
S·V / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx desku (10 μx nebo 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, x xxxxxxxxxxx, xx skvrně xxxxxxxx (poměrně x xxxxxxx xxxxxxx X) xxxxxxxx x xxxxxx;
X = xxxxxxx objem xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, x xxxxxxx na objem xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx B1 v xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx xx od 8 xx 10 μx/xx. Xxxxxxxx absorpční xxxxxxxx xxxx 330 x 370 nm xx použití xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx hustotu (X) při 363 xx x případě xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx 348 nm x případě roztoku xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx koncentraci aflatoxinu X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx; 312 · A · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · A · 1 000 / 19&xxxx;800 xxx xxxxxx xx směsi benzenu x xxxxxxxxxxxx..
Xx tmě xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x cílem xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxx 0,1 μx/xx. Xxxxx xx roztok skladuje x xxxxxxxxxx xxx 4 °X, je xxxxx xx xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 xx 10 μx aflatoxinu X1 xx 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x xxxx 5.4. Xxx XX xxxxxx by měla xxx viditelná xxxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxx původního xxxxxxxx by xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx analytik, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx výsledku pro xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx 10 do 20 μx/xx,
- 5 μx xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxxx od 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxx než 50 μg/kg.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx A. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx). Xxxx metoda xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se extrahuje xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x přečistí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x residuum xx xxxxxxxx ve xxxxxxxxxx objemu chloroformu xxxx ve směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx vizuálně xxxx flourometricky srovnáním xx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx z xxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx postupem.
3. Činidla
Poznámka:
Pokud xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) ethanolu.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Diethylether, bezvodý, xxxxxxxxxxxx peroxidy.
3.6 Xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Silikagel pro xxxxxxxxx chromatografii, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 mm.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx chloroformem, xxxx xxxxxx vata.
3.10 Síran xxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx plyn, xxxx. xxxxx.
3.12 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 1 N.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx kyselinou.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxx xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (X/X), chromatografický xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx je xxxxxxx x bodu 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 xxxxxx X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 a3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Pročištění xx koloně |
5.4 Dvourozměrná xxxxxxxxxxx chromatografie
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Narýsovat xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx čel xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx desku xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx roztoky:
- v xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3,
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16),
- v xxxx X: 10 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- v xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo inertního xxxxx (3.11). Získané xxxxxx xxxx xxx xxxxxx asi 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx xx vyvíjí xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva x tloušťce 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nasycenou xxxxxxxxxx] ve tmě xx xxxxx I, xxxxx čelo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Vyjmout xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nechat xxxxxxxx 15 xxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx vyvíjí xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou] xx tmě xx xxxxx XX, dokud xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx. Xxxxxxx desku x xxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx xxxxxxxx xx xxx a xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx obrázku 1)
Ozářit xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 cm xx xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx modrých fluoreskujících xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx standardního roztoku X, X, X x X. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x svírají xxxxx xxxx s xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx X těchto xxxxxx xxxxxx místo, xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 pocházející x extraktu vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxx xxxx být x xxxx Q xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx 100 xxxxxx a protínajících xxxx B x X. Množství xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xxxxxx xx stanoví, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx na xxxxx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx dvěma xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1, x xxxxxx na xxx X (xxx xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx 5.3, x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx xxx je xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx zda:
- xx skvrny aflatoxinu X1 x xxxxxxxx x ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx překrývají,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx je xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx xx xxxxxxxx x xxxx Q xx xxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx skvrn X, X a X xxxxxxxxxxxx roztoku. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku, xxxxxx roztok 10 xxxx nebo 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x xxxx znovu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu B1 xx změří fluorimetrem (4.12) při xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx a emisní xxxxxx délce 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx skvrnách extraktu xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx s intenzitou xxxxx X, D x E standardního xxxxxxx.
5.6 Potvrzení identity xxxxxxxxxx X1
Xxx xxx 5.6 xxxxxx X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx bod 6 metody X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx bod 8 xxxxxx A.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx C xxx 2.
C. XXXXXXXX XXXXXXXX XX XXXXX X A X
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. v. 40 až 60 °X).
X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx analytické xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků
Reprodukovatelnost výsledků, xx. rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx dvěma xxxx více xxxxxxxxxxxx xx stejného vzorku, xx odhaduje na:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx B1 x 10 μx/xx xx xx 20 μx/xx;
± 10 μg/kg xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xx 20 xx 50 μg/kg;
± 20 % střední xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxx než 50 μx/xx.
Xxxxxxx k xxxxxxx
