Xxxxx směrnice Xxxxxx
xx xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Rady xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx pozměněnou xxxxx x přistoupení [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxx, xx uvedená xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx právními a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Komise 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/XXX xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx xxx 5. prosince 1972 [6], 74/203/XXX xx xxx 25. března 1974 [7] x 75/84/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1974 [8] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx na xxxx xxxxxxx provedených prací xx xxxx xxxxx xxxxxxxx sedmou sérii xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem x xxxx, že opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx analýzy xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, pokud xxx x obsah xxxxxxxxxx X1, xx xxxxxxxxx xxxxx metod popsaných x příloze xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx dne 15. xxxxxxxx 1971, s xxxxxxxx části týkající xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. října 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
X Bruselu xxx 1. xxxxxx 1976.
Za Xxxxxx
X. X. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Úř. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Úř. věst. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Úř. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Úř. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX AFLATOXINU B1
A. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Účel a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 v těchto xxxxxxxx: podzemnice olejná, xxxxx, lněná xxxxxx, xxxx, xxxxx, babassu xxxxx a kukuřičné xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx z obilovin, xxxxxxxx mouka, xxxxxxxxxx xxxxx a škrob. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx analýzu podle xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x jeho alikvotní xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x reziduum xx xxxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx roztoku xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx x chromatogramu xxx XX světlem xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aflatoxinu X1. Identita xxxxxxxxxx X1 extrahovaného x xxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxx "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx stabilizovaný 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (V/V) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Methanol.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, neobsahující xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx částic 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Absorbent – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, např. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) kyselina xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), promytá xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Standardní xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 na 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx obsahující xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx B1 x X2 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx koncentrace xxxx xxxxxxxxxx. Musí xxx xxxxxxxx tak, xxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.2 Diethylether (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), chromatografický xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), chromatografický xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Drtič – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx míchačka.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papíry, Schleicher x Xxxüxx x. 588 xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 cm.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, xxxxx 300 xx) s teflonovým xxxxxxxx x 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx odparka, x xxxxxx x xxxxxx 500 xx a xxxxxxx xxxx.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o objemu 500 xx, xx xxxxxxxxxxx zátkami.
4.7 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx desky xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii, 200 x 200 xx, xx xxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx pět xxxxx): xxx 30 x xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx 60 xx xxxx, xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx 1 minutu. Xxxxxxxxxxx suspenzi xx xxxxx xxxxxxx způsobem, xxx se vytvořila xxxxxxxxxxx vrstva x xxxxxxxx 0,25 mm. Xxxxxx uschnout xx xxxxxxx x poté xxxxxxx v desikátoru xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx aktivovat desky xxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx připravené k xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx vykazují podobné xxxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxx podle uvedeného xxxxxxx.
4.9 XX lampa xxxxxxxxxxx (360 mm). Xxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxx 10 xx xx lampy xxxxx xxxxx rozeznatelná.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxx 10 xx, x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 UV xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku (xxx "Xxxxxxxx", část X bod 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxx x velikosti 1 xx (x souladu x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Přidat 25 x křemeliny (3.14), 25 xx vody x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Zazátkovat, xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx skládaný xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, xxxx xxxxxx 50 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně
Do xxxxxx xxxxx chromatografické xxxxxxx (4.4) xxxxxx xxxxx x vaty xxxx xx skelné vaty (3.9), xxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxx chloroformem (3.2), x poté xxxxxx 5 x xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, že xxxxx xxxxxx vrstvy xxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxx, x xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 10 x xxxxxxxxxx (3.8). Xx xxxxxx přidání xxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Nechat 15 xxxxx xxxx, a xxxx xxxxxxx xxxxxx 15 x xxxxxx xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx povrchu xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (5.2) xx 100 xx x-xxxxxx (3.3) x xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx klesnout xx k xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného. Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xx, xxx xxxxxxxx průtoku xxxx 8 xx 12 xx xx xxxxxx x xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Odstranit xxxxxxxxx xxxxxxxx. Poté xxxxxxx 150 xx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (3.7) a xxxxxx celý eluát.
Odpařit xxxxx xx xxxxx xxx proudem xxxxxxxxx xxxxx (3.11) x xxxxxxx vakuové odparce (4.5) xxx xxxxxxx xxxxx než 50 °X. Reziduum xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx zkumavky x xxxxxx 10 ml (4.10). Xxxxxxxxxxxx roztok xxx proudem xxxxxxxxx xxxxx (3.11), x xxxx doplnit objem xx 2 xx xx použití chloroformu (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx chromatografie
Na xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 xx od xxxxxx hrany x x odstupech xx 2 xx tyto xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.3 x k xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxx xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18). Xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x xxxx xx xxxxxx, xxx xxxx aflatoxiny X1 x X2 při xxxxxxxx zcela xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx ve xxx x xxxx xxxxxx xxxxx UV xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 cm od xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx X1 modře xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx provádí xxx xxxxxxxx xxxx fluorimetricky xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx porovnáním xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx překrytím xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxxx xxx fluorescence 10 xx xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx více než xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx fluorescence 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx intenzita xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, rozředit xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 krát xxxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx xxxxx podrobit xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxx fluorimetrem (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 nm x xxxxxx xxxxx 443 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx extraktu xx xxxxxxx xxxxxxxxxx jejich xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx identity aflatoxinu X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx takto:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx sírovou
Na xxxxxxxxxxxx získaný podle xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx sírovou (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx musí xxx XX xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx podle schématu xxxxxxxx na xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx každé xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- x xxxx X: xxxxx xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3, xxxxx xxxxxxxx xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx X1,
- v xxxxxx X a X: 25 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx se vyvíjí xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x tloušťce 1 xx v xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx xxxxx X, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx a nechat xxxxxxxx xxx minut xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) na xxxxx o šířce 2,5 xx, který xxxxxxx body X x B (na xxxxxxx 3 vyznačeno xxxxxxxxx), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx zbytek xxxxx je chráněn xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx tmě, x xxxx vysušit xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx II, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x xxxxxxxxxx linii. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx ve xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pod UV xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxxx xxxxx:
x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 pocházející ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx xx xxxxx X).
x) Objevení se xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx B1 (který xxxxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxxx xxxxxxxxxx B1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxx pocházejí xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx naneseného x xxxx B (xxxxxxx xx xxxxx XX).
x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxx xxxxxxx v xxxx b), xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxx X. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx A xx xxxxx X (stejná xxxxxxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu C) x xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx xx xxxx X xx xxxxx II (xxxxxx xxxxxxxxxx jako u xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 kg vzorku (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X · X · X / X · X
xxx:
X x X xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku aflatoxinu X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) a extraktu, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx xx 1 ml, xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
X = konečný objem xxxxxxxx x mikrolitrech, x xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x gramech, x xxxxxxx xx objem xxxxxxxx použitý xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech xx 1 xx vzorku (xxx) se xxxxxxxx xxxxxx vzorce:
S·V / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, v mikrolitrech, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx nebo 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, x xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx (poměrně x xxxxxxx xxxxxxx Y) xxxxxxxx z měření;
V = konečný xxxxx xxxxxxxx x mikrolitrech, x ohledem xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, s xxxxxxx xx objem xxxxxxxx použitý pro xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxx x testování xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 v xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx je xx 8 xx 10 μx/xx. Xxxxxxxx absorpční xxxxxxxx xxxx 330 x 370 xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (X) xxx 363 xx x případě xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxx 348 xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx koncentraci xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx xxxxxx tohoto xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx; 312 · X · 1 000 / 20&xxxx;600
312 · X · 1 000 / 19&xxxx;800 xxx roztok xx směsi benzenu x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx koncentrace aflatoxinu X1 xx asi 0,1 μg/ml. Xxxxx xx roztok xxxxxxxx x chladničce xxx 4 °C, xx xxxxx xx xxxx xxxx týdnů.
7.2 Testování xxxxxxxxxxxxxxxx čistoty
Nanést xx xxxxx (4.8) 5 μx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 až 10 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x bodu 5.4. Při XX xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx skvrna a x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx znatelná xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx provedl xxxxxx xxxxxxxx, nesmí xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx 10 xx 20 μx/xx,
- 5 μx xxxxxxxxx hodnoty xxx obsahy xx 20 do 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. METODA XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx X. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx). Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x přečistí xxxxxxxxx chromatografií xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xx rozpustí ve xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx a acetonitrilu. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tenkovrstvé chromatografii. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx flourometricky xxxxxxxxx xx známým množstvím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xxxxxxxxxxxxx z xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Činidla
Poznámka:
Pokud xxxx stanoveno jinak, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) ethanolu.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Diethylether, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx peroxidy.
3.6 Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost xxxxxx 0,05 xx 0,20 mm.
3.9 Xxxxxxxxx – vata, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx plyn, např. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková 1 X.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX nebo xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxx xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (V/V), chromatografický xxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx xx uvedeno x xxxx 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 xxxxxx X.
5. Postup
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 x3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Extrakce |
|
|
5.3 Pročištění xx xxxxxx |
5.4 Dvourozměrná xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx obrázku 1)
Narýsovat xx xxxxx (4.8) xxx přímky rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 cm xx každé xxxxxx), xxxxxx x vymezení xxxxxxx čel rozpouštědel. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx injekčních xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- x xxxx X: 20 μx vyčištěného xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3,
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16),
- x xxxx X: 10 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16),
- x xxxx D: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx E: 40 μx standardního xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx slabým proudem xxxxxxx xxxx inertního xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx použití xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx směru X, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx oschnout 15 xxxxx xx xxx x při xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x chromatografickém tanku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x xxxxxxxxxx linii. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xx xxx x při xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (podle schématu xx xxxxxxx 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX světlem, xxxxxxx xx deska xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx od xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx modrých xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X, C, X x E. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx směry. Xxxxxxxx X těchto xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxx xxx očekávat skvrnu xxxxxxxxxx B1 xxxxxxxxxxx x extraktu xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxx X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 však xxxx xxx v xxxx X umístěném xx průsečíku xxxx xxxxxxxxxx přímek svírajících xxxx xxx 100 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx X x X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xxxxxx se stanoví, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx chromatografie
Narýsovat xx xxxxx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx dvěma přilehlými xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx obrázku 1, x xxxxxx xx xxx X (xxx xxxxxxx 1) 20 μx přečištěného xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx podle bodu 5.3, a k xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx xxx je xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxx:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 z xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- fluorescence xxxxxx skvrn xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1, xxxxx xx xxxxxxxx x xxxx Q xx xxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení se xxxxxxxxxx vizuálně nebo xxxxxxxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx skvrn C, X a E xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx intenzita 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku, xxxxxx roztok 10 xxxx nebo 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x poté xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx změří xxxxxxxxxxxx (4.12) při xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx x xxxxxx xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx stanoví porovnáním xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x intenzitou xxxxx X, D x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxx bod 5.6 metody X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxx 6 xxxxxx A.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx A.
8. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. POZNÁMKY XXXXXXXX XX XXXXX X X B
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx obsahující xxxx xxx 5 % xxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (b. x. 40 xx 60 °X).
X xxxxxxxx případech xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorku.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xx. xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx laboratořemi xx xxxxxxxx vzorku, xx odhaduje na:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx B1 x 10 μg/kg xx xx 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx xxxxxxx střední xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
Xxxxxxx x xxxxxxx
