Xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx se stanoví xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Smlouvu x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx společenství,
s ohledem xx xxxxxxxx Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx pozměněnou xxxxx x xxxxxxxxxxx [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, že uvedená xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx právními a xxxxxxxxx předpisy x xxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx krmiv, xx provádějí xxxxx xxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/XXX ze xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/EHS xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX ze dne 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/XXX ze xxx 25. xxxxxx 1974 [7] a 75/84/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1974 [8] xxx xxxxxxxxx xxxx analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx na xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx však xxxxx xxxxxxxx sedmou xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx xxxx směrnice jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxxx X1, se provádějí xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx této xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx uvedená x části 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Komise 71/250/EHS xx dne 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx týkající xx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Článek 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x účinnost xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 1. října 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx informují Komisi.
Článek 3
Xxxx směrnice xx určena členským xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 1. xxxxxx 1976.
Xx Xxxxxx
X. X. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Úř. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
PŘÍLOHA
STANOVENÍ AFLATOXINU X1
X. XXXXXX JEDNOROZMĚRNÉ XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx, xxxxx xxxxxx, xxxx, xxxxx, babassu xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx z xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx je 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxxx analýzu xxxxx xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx se odpaří x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Alikvotní xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx buď xxxxxxxx xxxx fluorimetricky xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 extrahovaného x xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, všechna činidla xxxx být čistoty "x. x".
3.1 Aceton.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 procentem 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx chloroformu (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (V/V).
3.8 Xxxxxxxxx xxx kolonovou xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, předem odtučněná xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Inertní xxxx, např. dusík.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) xxxxxxxx xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (hyflosupercel), promytá xxxxxxxxx.
3.15 Silikagel X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 na 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx roztok xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx B1 x X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx. Xxxx být xxxxxxxx xxx, aby xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/aceton (3.1): 9/1 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), chromatografický tank x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda: 94/4.5/1.5 (X/X), chromatografický xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/methanol (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Chloroform (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx atmosférou.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx míchačka.
4.3 Skládané xxxxxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxxx x Schüll x. 588 xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx průměr 22 xx, xxxxx 300 xx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x xxxxxx x xxxxxx 500 ml x xxxxxxx xxxx.
4.6 Erlenmeyerovy xxxxx x xxxxxx 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 200 x 200 xx, xx xxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx množství xxxxx xxx xxx xxxxx): xxx 30 x xxxxxxxxxx G-HR (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky, xxxxxx 60 xx xxxx, zazátkovat x xxxxxxxxxxx 1 minutu. Xxxxxxxxxxx suspenzi na xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx vytvořila xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 0,25 mm. Xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxx při 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx jsou xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx podobné xxxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 UV xxxxx xxxxxxxxxxx (360 mm). Xxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxx 1 ng xxxxxxxxxx B1 xx xxxxx pro tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxx 10 cm xx lampy xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx x objemu 10 xx, x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Fluorimetr (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", xxxx X bod 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxx x velikosti 1 xx (x souladu x doporučením XXX X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 500 ml xxx 50 x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Přidat 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 xx xxxx x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx filtrační xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, xxxx xxxxxx 50 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) xxxxxx xxxxx x xxxx nebo xx xxxxxx xxxx (3.9), naplnit xxxxxxx xx do xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x xxxx přidat 5 x xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, že xxxxx xxxxxx vrstvy xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx rovný, x xxxx přidat xx xxxxxx xxxxxxx 10 x xxxxxxxxxx (3.8). Xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx zamíchat, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx xxxx, x xxxx xxxxxxx xxxxxx 15 x xxxxxx xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx povrchu xxxxxx xxxxxx sodného.
Smíchat 50 xx extraktu xxxxxxxxx xxxxx xxxx (5.2) xx 100 xx x-xxxxxx (3.3) x směs xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx kolony. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx diethyletheru (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx x hornímu povrchu xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx postupu xxxx na to, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx 8 až 12 xx xx xxxxxx x aby xxxxxx nevyschla. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx kapalinu. Xxxx xxxxxxx 150 xx xxxxx chloroformu x xxxxxxxxx (3.7) a xxxxxx celý xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx sucha xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5) xxx xxxxxxx xxxxx xxx 50 °X. Xxxxxxxx kvantitativně xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxx 10 xx (4.10). Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx inertního xxxxx (3.11), a xxxx xxxxxxx xxxxx xx 2 xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 xx od xxxxxx hrany x x odstupech xx 2 xx xxxx xxxxxx standardních xxxxxxx x extraktu:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μl xxxxxxxxxxxx roztoku alfatoxinu X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3 x k tomu 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μl xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxx xx použití xxxxxxx x xxxxxxxxxx rozpouštědel (3.18). Výběr xxxxxxxxxxxx xx musí provést xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx jakostního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x musí xx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx B1 x B2 xxx xxxxxxxx xxxxx odděleny.
Nechat xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxx a xxxx xxxxxx xxxxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx provádí xxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx těchto pokynů:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství aflatoxinu X1 x xxxxxxxx xx stanoví porovnáním xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x intenzitou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X případě xxxxxxx xx interpoluje. Xxxxxxxxxxxx získaná překrytím xxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxx xxx fluorescence 10 xx extraktu x nesmí být xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx intenzita fluorescence 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxx než intenzita xxxxxxxxxxxx 40 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, rozředit xxxxxxx 10 krát xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx fluorimetrem (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx x xxxxxx délce 443 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx extraktu xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx fluorescence x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx provede takto:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx získaný xxxxx xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 se xxxx xxx UV xxxxxxx xxxxxx z xxxxx xx xxxxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx zahrnující xxxxxx xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx pracovní postupy xx xxxx provádět xxxxxx podle xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Nanesení roztoků
Narýsovat xx desku (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx dvěma xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx každé xxxxxx), xxxxxx x vymezení xxxxxxx xxx rozpouštědel. Xxxxxx xx desku xxxxxx kapilárních xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx roztoky:
- x xxxx X: xxxxx xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3, xxxxx xxxxxxxx xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx B1,
- x xxxxxx X x X: 25 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx vyvíjí xx použití xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x chromatografickém xxxxx s nenasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx X, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx k vymezující xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx minut xx tmě x xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) na xxxxx x šířce 2,5 xx, který xxxxxxx body A x X (na xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), xxxxx pásek xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx je chráněn xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx xxx, x xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx vzduchu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx se xxxxxxxxxxxx vyvíjí xx xxxxxxx vyvíjecího rozpouštědla (3.18.1) [vrstva o xxxxxxxx 1 cm x chromatografickém xxxxx x nenasycenou atmosférou] xx xxx xx xxxxx II, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx tyto xxxxx:
x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x bodu C (xxxxxxx xx xxxxx X).
x) Xxxxxxxx xx xxxxx fluoreskující xxxxxx xxxxxxxxxx X1 (který xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxxx xxxxxxxxxx B1 – xxxxxxxxxxx, přičemž obě xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx naneseného x xxxx X (xxxxxxx xx xxxxx XX).
x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx skvrn, xxxx xxxx xxxxxxx x xxxx b), xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx extraktu xxxxxxxxxx x bodu X. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx vzdáleností xxxxxxxxxx B1 xx xxxx X xx xxxxx X (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x xxxx X) x xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx aflatoxinu X1 – hemiacetalu xx xxxx A ve xxxxx II (xxxxxx xxxxxxxxxx jako u xxxxxxxxxxxx vzorku naneseného x xxxx X). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X xx xx měly xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx aflatoxinu X1 x mikrogramech xx 1 xx vzorku (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X · X · X / W · X
xxx:
X a X xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku aflatoxinu X1 x mikrolitrech (3.16) x extraktu, xxxxx xx stejnou xxxxxxxxx fluorescence;
S = xxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x mikrolitrech, x xxxxxxx xx xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx zkušebního vzorku x xxxxxxx, s xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx použitý xxx xxxxxxxxxx xx koloně.
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxx (xxx) se vypočítá xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx nebo 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, x xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxx Y) xxxxxxxx x měření;
V = konečný objem xxxxxxxx v mikrolitrech, x ohledem xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx x xxxxxxx, s xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx na koloně.
7. Xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx koncentrace aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx standardní roztok xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), jehož xxxxxxxxxxx je xx 8 xx 10 μx/xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 330 x 370 nm xx xxxxxxx spektrofotometru (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (X) při 363 xx v případě xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx 348 xx x xxxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx koncentraci xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx:
xxx chloroformový xxxxxx; 312 · A · 1 000 / 20&xxxx;600
312 · A · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 xxx roztok xx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx ředění x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1 xx asi 0,1 μx/xx. Pokud xx xxxxxx xxxxxxxx x chladničce xxx 4 °X, je xxxxx xx xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Testování xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx 8 až 10 μx aflatoxinu X1 na 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx v xxxx 5.4. Při XX xxxxxx by měla xxx viditelná pouze xxxxx xxxxxx a x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx neměla xxx znatelná xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx aflatoxinu X1 xx 10 xx 20 μg/kg,
- 5 μx xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx vyšší xxx 50 μg/kg.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. METODA XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX CHROMATOGRAFIE
1. Xxxx a rozsah
Tato xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x krmivech, které xxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx X. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx). Xxxx xxxxxx se xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx a přečistí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx chloroformu xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx tohoto xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx pod UV xxxxxxx buď xxxxxxxx xxxx flourometricky srovnáním xx známým množstvím xxxxxxxxxxxx aflatoxinu X1. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx jinak, xxxxxxx činidla xxxx xxx xxxxxxx "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Chloroform xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 N–hexan.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Směs xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx: 98/2 (V/V).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx chromatografii, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 až 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Kyselina chlorovodíková 1 X.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx kyselinou.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxx xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (X/X), chromatografický xxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx.
3.15.2 Chloroform (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxx je xxxxxxx x xxxx 7 xxxxxx X.
4. Přístroje
Viz xxx 4 xxxxxx X.
5. Postup
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx body 5.1, 5.2 a3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Pročištění xx xxxxxx |
5.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx obrázku 1)
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx dvěma xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx každé xxxxxx), xxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx desku xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx roztoky:
- x xxxx X: 20 μx vyčištěného xxxxxxxx xxxxxx získaného podle xxxx 5.3,
- x xxxx B: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- v xxxx X: 10 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx xx vyvíjí xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx I, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx xxxxxxxx 15 minut xx xxx a xxx xxxxxxxx teplotě.
Poté se xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vyvíjecího rozpouštědla (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x chromatografickém tanku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx II, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x xxxxxxxxxx linii. Xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx ve xxx x xxx xxxxxxxx teplotě.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Ozářit xxxxxxxxxxxx XX světlem, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxx 10 xx od xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx modrých fluoreskujících xxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X, C, D x X. Xxxxxxxxx xxx pomyslné xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx úhel x xxxxxxxxxx směry. Xxxxxxxx X xxxxxx xxxxxx xxxxxx místo, xxx xxx xxxxxxxx skvrnu xxxxxxxxxx X1 pocházející x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X (obrázek 1). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxx xxxx xxx x xxxx Q xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx asi 100 xxxxxx x protínajících xxxx B a X. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 v extraktu xxxxxx se xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodu 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx desku (4.8) xxx přímky xxxxxxxxxx xx dvěma přilehlými xxxxxxxx, jak je xxxxxxx xx schématu xx xxxxxxx 1, x nanést xx xxx X (viz xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxx xxxxx bodu 5.3, x k xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx xxx xx xxxxxxx v xxxx 5.4.2. Ozářit chromatogram XX xxxxxxx (4.9) x ověřit zda:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 z xxxxxxxx x ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- fluorescence xxxxxx skvrn xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1, xxxxx xx vyvinula x bodu X xx xxxxx desce.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx vizuálně nebo xxxxxxxxxxxxxx podle těchto xxxxxx:
5.5.1 Vizuální měření
Množství xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx C, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx potřeby xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx fluorescence 20 μx extraktu silnější xxx intenzita 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx roztok 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx měření
Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) při xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx a xxxxxx xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx intenzity xxxxxx xxxxxxxx s intenzitou xxxxx X, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxx xxx 5.6 metody X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx bod 6 xxxxxx X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx X.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. XXXXXXXX XXXXXXXX XX METOD X X X
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx xx musí xx xxxxxxxx podle xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. v. 40 až 60 °X).
X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx vyjádřeny xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xx. rozdíl mezi xxxxxxxx xxxxxxxxx dvěma xxxx více xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx, xx odhaduje xx:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx B1 x 10 μx/xx xx xx 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx základě střední xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
Xxxxxxx x xxxxxxx
