Xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. března 1976,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx společenství,
s ohledem xx směrnici Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx pozměněnou xxxxx o přistoupení [2], x xxxxxxx xx článek 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx uvedená xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisy a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx provádějí podle xxxxx odběru xxxxxx x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX ze dne 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/EHS ze xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/EHS xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx xxx 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/XXX xx xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1974 [8] již stanovily xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx xx stav xxxxxxx provedených xxxxx xx však nutné xxxxxxxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx úřední kontroly xxxxx, xxxxx xxx x obsah aflatoxinu X1, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x části 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/EHS xx dne 15. xxxxxxxx 1971, s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x příloze xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a správní xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. října 1976. Neprodleně o xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 1. března 1976.
Xx Xxxxxx
X. X. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. věst. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Úř. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX X1
X. XXXXXX JEDNOROZMĚRNÉ XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x těchto xxxxxxxx: xxxxxxxxxx olejná, xxxxx, xxxxx semena, xxxx, xxxxx, xxxxxxx xxxxx x kukuřičné xxxxxx, obiloviny x xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxx mouka, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx je 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx přítomny rušivé xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografie).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxx. Xxxxx xx odpaří x reziduum xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx benzenu x acetonitrilu. Alikvotní xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aflatoxinu X1. Identita xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxx "x. a".
3.1 Aceton.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 N–hexan.
3.4 Methanol.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, neobsahující xxxxxxxx.
3.6 Xxxx benzenu x acetonitrilu: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx skelná xxxx.
3.10 Xxxxx sodný, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Inertní xxxx, xxxx. dusík.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková 1 X.
3.13 50 % (X/X) kyselina sírová.
3.14 Xxxxxxxxx (hyflosupercel), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx X–XX xxxx ekvivalent, xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x zkontrolovaný, xxx xx xxxxxxx x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx obsahující xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx B1 x X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx. Xxxx být xxxxxxxx xxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/aceton (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), chromatografický xxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nasycenou xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Drtič – xxxxx.
4.2 Třepačka xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, Schleicher x Xxxüxx x. 588 xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, xxxxx 300 xx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x xxxxxx x objemu 500 xx a xxxxxxx dnem.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx, se xxxxxxxxxxx zátkami.
4.7 Xxxxxxxx xxx tenkovrstvou chromatografii.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx chromatografii, 200 x 200 xx, xx xxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxx xxxxx): xxx 30 x xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx 60 xx xxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx uschnout xx xxxxxxx x poté xxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx aktivovat desky xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx podobné xxxxxxxx jako desky xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 UV xxxxx xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx dostatečná, xxx xxxxxx 1 ng xxxxxxxxxx X1 na xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxx 10 xx, s xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 UV xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (volitelný).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx (xxx "Poznámky", xxxx X bod 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xxxx xxxxxx xxxxx s xxx x velikosti 1 xx (x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx ISO X 565).
5.2 Extrakce
Do Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 xx vody x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx promíchávat 30 xxxxx třepačkou (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, poté xxxxxx 50 xx.
5.3 Přečištění xx xxxxxx
Xx spodní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) vložit xxxxx x xxxx nebo xx xxxxxx xxxx (3.9), naplnit xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxx chloroformem (3.2), x xxxx xxxxxx 5 x xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Ověřit, že xxxxx xxxxxx vrstvy xxxxxx sodného xx xxxxx rovný, a xxxx přidat xx xxxxxx xxxxxxx 10 x silikagelu (3.8). Xx každém přidání xxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx xxxx, x xxxx xxxxxxx xxxxxx 15 x xxxxxx xxxxxxx (3.10). Nechat xxxxxxxx xxxxxxxx až x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 ml extraktu xxxxxxxxx xxxxx bodu (5.2) se 100 xx x-xxxxxx (3.3) x xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx kolony. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x hornímu xxxxxxx vrstvy xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x znovu xxxxxx xxxxxxxx klesnou xx x hornímu xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xx, xxx xxxxxxxx průtoku xxxx 8 až 12 ml xx xxxxxx a xxx xxxxxx nevyschla. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx kapalinu. Xxxx xxxxxxx 150 xx xxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx xxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11) x xxxxxxx vakuové xxxxxxx (4.5) při teplotě xxxxx xxx 50 °X. Reziduum xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxx 10 xx (4.10). Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx proudem inertního xxxxx (3.11), x xxxx doplnit objem xx 2 ml xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx chromatografie
Na xxxxx pro tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 xx xx xxxxxx hrany a x xxxxxxxxx po 2 cm xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μl xxxxxxxxxxxx roztoku alfatoxinu X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.3 x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μl xxxxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxx xx použití jednoho x vyvíjecích xxxxxxxxxxxx (3.18). Xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx provést xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx jakostního standardního xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x xxxx xx ověřit, xxx xxxx xxxxxxxxxx B1 x X2 xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx ve xxx x poté xxxxxx xxxxx XX xxxxxxx ze xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Skvrny xxxxxxxxxx X1 modře xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescence skvrn xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X případě xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx překrytím xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx 10 ml xxxxxxxx x nesmí být xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx fluorescence 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx intenzita xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku, xxxxxxxx xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx vlnové xxxxx 365 nm x xxxxxx xxxxx 443 nm. Množství xxxxxxxxxx B1 ve xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx fluorescence x xxxxxxxxxxx xxxxx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxx B1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x extraktu xx xxxxxxx takto:
5.6.1 Xxxxxxxx kyselinou sírovou
Na xxxxxxxxxxxx získaný podle xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx skvrn aflatoxinu X1 xx xxxx xxx XX xxxxxxx xxxxxx z xxxxx xx žlutou.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx tvorbu xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (aflatoxin X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx pracovní xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx obrázku 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 cm xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- v xxxx X: xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3, který xxxxxxxx xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx X1,
- x xxxxxx B x X: 25 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx v chromatografickém xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx X, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx a nechat xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) na xxxxx x xxxxx 2,5 cm, xxxxx xxxxxxx body X x B (na xxxxxxx 3 vyznačeno xxxxxxxxx), xxxxx pásek xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx je xxxxxxx xxxxxxx papírem. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx tmě, a xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx vzduchu xxx xxxxxxxx teplotě.
Poté se xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x chromatografickém xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx xxxxx II, dokud xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x xxxxxxxxxx linii. Xxxxxxx desku x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx tmě x xxx pokojové xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx (4.9) a xxxxxx xxxx xxxxx:
x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx naneseného x bodu C (xxxxxxx xx xxxxx X).
x) Objevení xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxx pocházejí ze xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx x bodu X (xxxxxxx ve směru XX).
x) Objevení xx xxxxxxxxx xxxxx, jaké xxxx xxxxxxx v xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx extraktu xxxxxxxxxx x xxxx X. Poloha těchto xxxxx vychází jednak x xxxxxxxx vzdáleností xxxxxxxxxx B1 xx xxxx A xx xxxxx I (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx vzorku naneseného x xxxx C) x xxxx migrační xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 – xxxxxxxxxxx xx xxxx A xx xxxxx II (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx B). Xxxxxxxxxxxxx intenzity xxxxx xxxxxxxxxxx pocházejících x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x xxxx X xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 kg vzorku (xxx) xx vypočítá xxxxxx xxxxxx:
X · X · V / X · X
xxx:
X a X xxxx xxxxxxxxx objemy xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1 v xxxxxxxxxxxx (3.16) x xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, v mikrogramech xx 1 ml, xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
V = konečný objem xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, s xxxxxxx xx objem xxxxxxxx použitý xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
6.2 Xx xxxxxxx fluorimetrického xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx na 1 kg vzorku (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = objem xxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx nebo 20 μx);
X = množství xxxxxxxxxx B1, x xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx X) xxxxxxxx z měření;
V = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x mikrolitrech, x xxxxxxx xx xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx xx koloně.
7. Xxxxxxxx x testování xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6), jehož xxxxxxxxxxx xx od 8 xx 10 μx/xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx mezi 330 x 370 nm xx xxxxxxx spektrofotometru (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (X) xxx 363 xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxx 348 xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxx:
xxx chloroformový xxxxxx; 312 · X · 1 000 / 20&xxxx;600
312 · A · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 pro xxxxxx xx xxxxx benzenu x acetonitrilu..
Ve xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxx 0,1 μx/xx. Xxxxx xx roztok xxxxxxxx x chladničce při 4 °C, xx xxxxx xx xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx (4.8) 5 μx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 xx 10 μl aflatoxinu X1 xx 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx v xxxx 5.4. Xxx UV xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx pouze xxxxx xxxxxx x x místě původního xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx žádná xxxxxxxxxxxx.
8. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, nesmí xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx výsledku pro xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx 10 do 20 μx/xx,
- 5 μx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx od 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx vyšší xxx 50 μx/xx.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx a rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx X. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 ppb). Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pulpu.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Extrakt se xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xx rozpustí ve xxxxxxxxxx objemu chloroformu xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx část xxxxxx xxxxxxx xx podrobí xxxxxxxxxxxx tenkovrstvé chromatografii. Xxxxxxxx aflatoxinu B1 xx stanoví x xxxxxxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx xxx vizuálně xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xxxxxxxxxxxxx x krmiv xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx činidla xxxx xxx xxxxxxx "p.a".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x acetonitrilu: 98/2 (V/V).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost xxxxxx 0,05 až 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, předem xxxxxxxxx chloroformem, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 Křemelina (xxxxxxxxxxxxx) promytá xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxx xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx atmosférou.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx je uvedeno x bodu 7 xxxxxx A.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 xxxxxx X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 a3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Pročištění xx koloně |
5.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx k vymezení xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx na xxxxx xxxxxx kapilárních pipet xxxx injekčních mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- v xxxx A: 20 μx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3,
- v xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16),
- x bodu X: 10 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x bodu X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- v xxxx E: 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Získané xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Vyvíjení (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx xx vyvíjí xx použití vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x chromatografickém xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx xxxxx X, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx k vymezující xxxxx. Vyjmout xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx 15 xxxxx ve xxx x při xxxxxxxx teplotě.
Poté se xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nenasycenou atmosférou] xx tmě xx xxxxx XX, dokud xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x vymezující xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx ve xxx x při xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxx schématu xx obrázku 1)
Ozářit xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx xx deska xxxxxx do vzdálenosti 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X, X, X x E. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx těmito xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx úhel s xxxxxxxxxx směry. Průsečík X těchto xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxx xxx očekávat xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx xxxxxx skvrny xxxxxxxxxx B1 xxxx xxxx xxx x xxxx X umístěném xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx přímek xxxxxxxxxxx xxxx xxx 100 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx X a X. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodu 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx xx schématu xx xxxxxxx 1, x xxxxxx xx xxx X (xxx xxxxxxx 1) 20 μx přečištěného xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxx xxxxx xxxx 5.3, x x xxxx 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx xxx je xxxxxxx v xxxx 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxx:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 z extraktu x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- fluorescence xxxxxx xxxxx je xxxxxxxx než fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx xx vyvinula x xxxx X xx první xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vizuálně nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxx extraktu s xxxxxxxxxx xxxxx X, X a E xxxxxxxxxxxx roztoku. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx fluorescence 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx 40 μx standardního xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx chloroformem (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x xxxx znovu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx měření
Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) při xxxxxxxxx xxxxxx délce 365 xx x xxxxxx xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx porovnáním xxxxxxxxxxxxx intenzity xxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxx C, D x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxx xxx 5.6 xxxxxx A.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx bod 6 xxxxxx X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx X.
8. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", část X xxx 2.
C. XXXXXXXX XXXXXXXX XX XXXXX X A B
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx více xxx 5 % xxxx xx musí xx xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. v. 40 xx 60 °X).
X takových xxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xx. xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx dvěma xxxx xxxx laboratořemi xx xxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx na:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x 10 μg/kg xx xx 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx xxxxxxx střední xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx od 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
Xxxxxxx k xxxxxxx
