Xxxxx směrnice Komise
ze xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Smlouvu x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x přistoupení [2], x zejména xx článek 2 xxxxxxx směrnice,
vzhledem k xxxx, že xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx xxxxx je xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX ze dne 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/XXX xx xxx 18. listopadu 1971 [4], 72/199/XXX xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX ze xxx 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/XXX ze xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1974 [8] xxx stanovily xxxx analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx prací xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem k xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x souladu xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xxxxx jde x xxxxx aflatoxinu X1, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx popsaných x xxxxxxx této xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx uvedená x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Komise 71/250/XXX xx dne 15. xxxxxxxx 1971, s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x analýze, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx informují Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 1. března 1976.
Xx Xxxxxx
X. X. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. věst. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Úř. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX X1
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Účel a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx, xxxxx xxxxxx, xxxx, sezam, xxxxxxx xxxxx x kukuřičné xxxxxx, obiloviny x xxxxxxx z obilovin, xxxxxxxx xxxxx, bramborová xxxxx a xxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx rušivé xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, je nutné xxxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxx X (dvourozměrná xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx kolonovou xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx se odpaří x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx stanoveném xxxxxx chloroformu xxxx xx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx X1 xx stanoví x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 extrahovaného x xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx není xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx "x. x".
3.1 Aceton.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 procentem 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 N–hexan.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Směs benzenu x acetonitrilu: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx chloroformu (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Absorbent – xxxx, předem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. dusík.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) kyselina xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (hyflosupercel), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x zkontrolovaný, xxx xx uvedeno x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx obsahující xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx B1 x X2 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxx xxx, aby xx xxxxxxx stejná xxxxxxxxx fluorescence u xxxx aflatoxinů.
3.18 Vyvíjecí xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x nenasycenou xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx atmosférou;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Třepačka xxxx xxxxxxxxxx míchačka.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papíry, Xxxxxxxxxx x Xxxüxx x. 588 xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx chromatografická xxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, xxxxx 300 xx) s xxxxxxxxxx xxxxxxxx a 250 μx zásobníkem.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x xxxxxx x xxxxxx 500 xx x xxxxxxx xxxx.
4.6 Erlenmeyerovy xxxxx x objemu 500 ml, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 200 x 200 mm, xx připraví xxxxx (xxxxxxx množství xxxxx xxx xxx xxxxx): xxx 30 x xxxxxxxxxx G-HR (3.15) xx Erlenmeyerovy baňky, xxxxxx 60 ml xxxx, zazátkovat x xxxxxxxxxxx 1 minutu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x desikátoru xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx hodinu v xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx připravené x xxxxxxx jsou xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx uvedeného xxxxxxx.
4.9 XX xxxxx xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx, aby xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx x objemu 10 ml, x xxxxxxxxxxxxxxxx zátkami.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", část X bod 1)
Rozmělnit xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx prošel xxxxx x xxx x xxxxxxxxx 1 xx (v souladu x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Extrakce
Do Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 500 ml xxx 50 g xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx 25 x křemeliny (3.14), 25 xx vody x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Zazátkovat, xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx 30 minut třepačkou (4.2) a xxxxxxxxxxxx xxxx skládaný xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 ml xxxxxxxx, xxxx sebrat 50 ml.
5.3 Přečištění xx koloně
Do spodní xxxxx chromatografické xxxxxxx (4.4) xxxxxx xxxxx x xxxx nebo xx skelné vaty (3.9), xxxxxxx xxxxxxx xx xx dvou xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x poté xxxxxx 5 x xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx rovný, a xxxx přidat po xxxxxx dávkách 10 x xxxxxxxxxx (3.8). Xx každém xxxxxxx xxxxxxx zamíchat, xxx xx odstranily xxxxxxxxx xxxxxxx. Nechat 15 xxxxx xxxx, a xxxx xxxxxxx xxxxxx 15 x xxxxxx xxxxxxx (3.10). Nechat xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx síranu sodného.
Smíchat 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx (5.2) xx 100 xx x-xxxxxx (3.3) x směs xxxxxxxxxxxxx xxxxxx do kolony. Xxxxxx kapalinu klesnout xx k xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Přidat 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx povrchu xxxxxx xxxxxx sodného. Xxxxx xxxxxx postupu xxxx xx xx, xxx rychlost xxxxxxx xxxx 8 xx 12 xx za xxxxxx x xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Poté xxxxxxx 150 ml xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (3.7) a xxxxxx celý eluát.
Odpařit xxxxx xx sucha xxx xxxxxxx inertního xxxxx (3.11) x xxxxxxx vakuové odparce (4.5) xxx teplotě xxxxx než 50 °X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu a xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 ml (4.10). Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx proudem inertního xxxxx (3.11), a xxxx doplnit xxxxx xx 2 ml xx xxxxxxx chloroformu (3.2) nebo směsi xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx chromatografie
Na xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 cm xx xxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxx xx 2 xx xxxx xxxxxx standardních xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.3 x x tomu 20 μx standardního xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.3.
Chromatogram xx xxxxxx xx xxx xx xxxxxxx jednoho x xxxxxxxxxx rozpouštědel (3.18). Výběr rozpouštědla xx musí provést xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx jakostního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxx a xxxx xx xxxxxx, zda xxxx xxxxxxxxxx B1 x X2 xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxx a poté xxxxxx desku XX xxxxxxx ze xxxxxxxxxxx 10 xx od xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx X1 modře xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení xx xxxxxxx buď xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx těchto pokynů:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn standardního xxxxxxx. X případě xxxxxxx xx interpoluje. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx překrytím xxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx x xxxxx být xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx skvrna. Xxxxx xx intenzita fluorescence 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx intenzita xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, rozředit xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6) a xxxx xxxxx podrobit xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Fluorimetrické xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 nm x xxxxxx xxxxx 443 nm. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 ve xxxxxxxx extraktu xx xxxxxxx porovnáním jejich xxxxxxxx fluorescence s xxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1.
5.6 Xxxxxxxxx identity aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xxxx 5.4 nastříkat xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxx XX zářením xxxxxx z xxxxx xx xxxxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx zahrnující xxxxxx xxxxxxxxxx B1 - xxxxxxxxxxx (aflatoxin X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx postupy xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx schématu xxxxxxxx xx xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx desku (4.8) xxx přímky xxxxxxxxxx xx dvěma xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx na desku xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- x xxxx X: xxxxx xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3, xxxxx obsahuje xxx 2,5 nm xxxxxxxxxx X1,
- v xxxxxx X a X: 25 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx se vyvíjí xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx xxxxx X, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx z xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxx minut xx xxx x xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) na xxxxx x xxxxx 2,5 cm, xxxxx xxxxxxx body A x X (na xxxxxxx 3 vyznačeno xxxxxxxxx), dokud xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx zbytek xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx papírem. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx xxx, x xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx vyvíjecího rozpouštědla (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 cm x chromatografickém xxxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx] xx tmě xx xxxxx XX, dokud xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x vymezující xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx tmě x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pod UV xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxxx xxxxx:
x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx ze xxxxxxxxxxxx roztoku naneseného x xxxx X (xxxxxxx ve xxxxx X).
x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, přičemž xxx xxxxxx pocházejí ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx naneseného x bodu B (xxxxxxx xx xxxxx XX).
x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx, jaké xxxx xxxxxxx x xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx extraktu xxxxxxxxxx v bodu X. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxx A ve xxxxx X (stejná xxxxxxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X) x dále xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 – xxxxxxxxxxx od xxxx X ve xxxxx XX (stejná xxxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X). Xxxxxxxxxxxxx intenzity xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxx (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X · X · V / W · X
xxx:
X x Y xxxx příslušné xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) x xxxxxxxx, xxxxx má xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, v mikrogramech xx 1 ml, xxxxxxxxxx B1 ve xxxxxxxxxxx roztoku (3.16);
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
6.2 Xx základě xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech na 1 xx xxxxxx (xxx) se vypočítá xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, v mikrolitrech, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx xxxx 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, x xxxxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx X) xxxxxxxx x xxxxxx;
X = xxxxxxx objem xxxxxxxx x mikrolitrech, x ohledem na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, s xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx na koloně.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx standardní roztok xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), jehož xxxxxxxxxxx xx xx 8 do 10 μx/xx. Stanovit absorpční xxxxxxxx xxxx 330 x 370 nm xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx hustotu (X) xxx 363 xx v případě xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxx 348 xx x případě xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx:
xxx chloroformový xxxxxx; 312 · X · 1 000 / 20&xxxx;600
312 · X · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 xxx roztok xx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx příslušná xxxxxx x cílem xxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxxxx X1 je xxx 0,1 μx/xx. Pokud xx xxxxxx skladuje x xxxxxxxxxx xxx 4 °X, xx xxxxx xx xxxx xxxx týdnů.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 xx 10 μl aflatoxinu X1 xx 1 xx (7.1). Vyvinout xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.4. Xxx XX xxxxxx xx měla xxx viditelná pouze xxxxx xxxxxx a x místě xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx žádná xxxxxxxxxxxx.
8. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx provedl xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx výsledku pro xxxxxx aflatoxinu B1 xx 10 xx 20 μg/kg,
- 5 μx absolutní xxxxxxx xxx obsahy od 20 do 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx vyšší než 50 μg/kg.
9. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. METODA XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxxxxxx metody X. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 ppb). Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxx citrusovou xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x přečistí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Eluát xx xxxxxx a residuum xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx objemu xxxxxxxxxxx xxxx xx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx aflatoxinu B1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx xxx vizuálně xxxx xxxxxxxxxxxxxx srovnáním xx známým xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxx potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx jinak, xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxx "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Směs xxxxxxx a acetonitrilu: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx chloroformem, nebo xxxxxx vata.
3.10 Xxxxx xxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Vyvíjecí roztoky.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Chloroform (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx a kontrolovaný xxx xx uvedeno x bodu 7 xxxxxx A.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 xxxxxx X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 x3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně |
5.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx obrázku 1)
Xxxxxxxxx xx desku (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx x vymezení xxxxxxx xxx rozpouštědel. Xxxxxx na desku xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- v xxxx A: 20 μx vyčištěného xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3,
- x xxxx X: 20 μx standardního xxxxxxx (3.16),
- v bodu X: 10 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16),
- x bodu X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx slabým xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx xx vyvíjí xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva x tloušťce 1 xx v xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx směru I, xxxxx čelo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx. Xxxxxxx desku x xxxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx xxxxxxxx 15 xxxxx xx xxx a xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x chromatografickém xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx II, dokud xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx. Xxxxxxx desku x xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx ve xxx a xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Ozářit xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx xx deska xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Určit xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxxxxxx roztoku X, C, X x X. Xxxxxxxxx xxx pomyslné přímky, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx úhel s xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx X xxxxxx přímek xxxxxx místo, xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxx xxxx být v xxxx X xxxxxxxxx xx průsečíku dvou xxxxxxxxxx xxxxxx svírajících xxxx xxx 100 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx X x X. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 v xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.8) xxx přímky rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx obrázku 1, x xxxxxx xx xxx X (viz xxxxxxx 1) 20 μx přečištěného xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxx podle bodu 5.3, a x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx xxx je xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Ozářit chromatogram XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx zda:
- xx skvrny xxxxxxxxxx X1 x extraktu x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- fluorescence xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1, xxxxx xx vyvinula x xxxx X xx první xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx podle těchto xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx se stanoví xxxxxxxxxx intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxx X, X a X xxxxxxxxxxxx roztoku. V xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxxx silnější xxx xxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku, xxxxxx roztok 10 xxxx xxxx 100 xxxx chloroformem (3.2) xxxx xxxxx benzenu x acetonitrilu (3.6), x poté znovu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx měření
Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx a xxxxxx xxxxxx délce 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxx extraktu xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxx X, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx B1
Viz xxx 5.6 xxxxxx X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxx 6 xxxxxx A.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx bod 8 xxxxxx X.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", část X xxx 2.
C. XXXXXXXX XXXXXXXX XX XXXXX X A B
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx xx xxxx xx xxxxxxxx podle xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (b. v. 40 až 60 °X).
X takových případech xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx neodtučněného xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků
Reprodukovatelnost xxxxxxxx, xx. xxxxxx mezi xxxxxxxx získanými dvěma xxxx xxxx laboratořemi xx xxxxxxxx vzorku, xx xxxxxxxx xx:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx B1 x 10 μg/kg xx xx 20 μx/xx;
± 10 μg/kg xx xxxxxxx střední xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx 50 μg/kg;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 50 μg/kg.
Dodatek x xxxxxxx
