Xxxxx směrnice Xxxxxx
xx xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx se stanoví xxxxxxxxxx metody Společenství xxx úřední kontrolu xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Rady xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxx [2], a xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxx, že uvedená xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k tomu, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx dne 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/XXX ze xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/EHS xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx xxx 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/EHS xx xxx 25. března 1974 [7] x 75/84/XXX xx xxx 20. prosince 1974 [8] již xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx sedmou xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, že analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x obsah xxxxxxxxxx X1, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx dne 15. xxxxxxxx 1971, s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x analýze, xx xxxxxxx pro metody xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské státy xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 1. října 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx informují Xxxxxx.
Článek 3
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 1. xxxxxx 1976.
Xx Xxxxxx
X. J. Lardinois
člen Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Úř. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. věst. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX B1
A. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx obsah xxxxxxxxxx X1 v xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx, xxxxx xxxxxx, xxxx, xxxxx, babassu xxxxx a kukuřičné xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx z obilovin, xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, které xxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx filtruje x xxxx alikvotní xxxx xx odebere x přečistí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxx. Xxxxx xx odpaří x reziduum xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx chloroformu xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx tohoto xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx buď xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aflatoxinu X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 extrahovaného z xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx stanoveným xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx činidla xxxx být čistoty "x. a".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 procentem 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 N–hexan.
3.4 Methanol.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx odtučněná xxxxxxxxxxxx, xxxx skelná xxxx.
3.10 Xxxxx sodný, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, např. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) xxxxxxxx xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx G–HR xxxx xxxxxxxxxx, pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxx 0,1 μx aflatoxinu X1 na 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx, xxx xx uvedeno x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 x X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx koncentrace xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx být xxxxxxxx tak, xxx xx získala xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx aflatoxinů.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/aceton (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx atmosférou;
3.18.5 Chloroform (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Třepačka nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxxx x Schüll x. 588 xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, xxxxx 300 xx) x teflonovým xxxxxxxx a 250 μx zásobníkem.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx odparka, x xxxxxx x objemu 500 ml x xxxxxxx xxxx.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x objemu 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx desky xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii, 200 x 200 xx, xx připraví xxxxx (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxx xxxxx): xxx 30 x xxxxxxxxxx G-HR (3.15) xx Erlenmeyerovy baňky, xxxxxx 60 xx xxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx 1 minutu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx xx vytvořila xxxxxxxxxxx vrstva x xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx uschnout xx xxxxxxx x poté xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx desky xxxxx hodinu v xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx připravené x xxxxxxx xxxx vyhovující, xxxxx vykazují xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx podle uvedeného xxxxxxx.
4.9 XX xxxxx xxxxxxxxxxx (360 mm). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxx 1 ng xxxxxxxxxx B1 xx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxx 10 cm xx lampy ještě xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxx 10 xx, x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 UV xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Fluorimetr (volitelný).
5. Xxxxxx
5.1 Příprava vzorku (xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxx x velikosti 1 xx (x souladu x xxxxxxxxxxx ISO X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 xx xxxx x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx (4.2) x přefiltrovat xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 ml xxxxxxxx, poté sebrat 50 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx
Xx spodní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) vložit xxxxx x vaty xxxx xx skelné xxxx (3.9), naplnit xxxxxxx xx do xxxx xxxxxx chloroformem (3.2), x xxxx xxxxxx 5 g síranu xxxxxxx (3.10).
Ověřit, xx xxxxx xxxxxx vrstvy xxxxxx sodného je xxxxx xxxxx, x xxxx přidat xx xxxxxx dávkách 10 x silikagelu (3.8). Xx xxxxxx přidání xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx stát, x xxxx xxxxxxx xxxxxx 15 x xxxxxx xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx extraktu xxxxxxxxx xxxxx xxxx (5.2) se 100 xx n-hexanu (3.3) x xxxx kvantitativně xxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx kapalinu klesnout xx k xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx diethyletheru (3.5) x znovu nechat xxxxxxxx xxxxxxx až x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx síranu sodného. Xxxxx xxxxxx postupu xxxx xx xx, xxx rychlost xxxxxxx xxxx 8 až 12 xx xx xxxxxx x xxx xxxxxx nevyschla. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx 150 ml xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (3.7) a xxxxxx xxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx inertního xxxxx (3.11) x xxxxxxx xxxxxxx odparce (4.5) při xxxxxxx xxxxx xxx 50 °X. Reziduum kvantitativně xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx zkumavky o xxxxxx 10 ml (4.10). Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx inertního xxxxx (3.11), x xxxx doplnit xxxxx xx 2 xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx a acetonitrilu (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) nanést 2 xx xx xxxxxx xxxxx a x odstupech po 2 xx xxxx xxxxxx standardních xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx získaného xxxxx bodu 5.3 x x tomu 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μl xxxxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx tmě xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18). Výběr xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x xxxx xx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx X1 x X2 xxx xxxxxxxx zcela xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx ve xxx a xxxx xxxxxx xxxxx XX xxxxxxx ze vzdálenosti 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Kvantitativní xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo fluorimetricky xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxx xx xxxxxxx porovnáním xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxx x intenzitou xxxxxxxxxxxx xxxxx standardního xxxxxxx. X případě xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx získaná xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx fluorescence 10 xx xxxxxxxx x nesmí xxx xxxxxxxxx více než xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx intenzita fluorescence 10 μx extraktu xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx B1 se xxxx fluorimetrem (4.12) xxx excitační xxxxxx xxxxx 365 nm x xxxxxx délce 443 nm. Množství xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx jejich xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1.
5.6 Xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxx xx provede xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxx X1 xx musí xxx XX xxxxxxx xxxxxx z xxxxx xx xxxxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx tvorbu xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (aflatoxin B2a)
Poznámky:
Níže xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Nanesení xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx každé xxxxxx), xxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx na desku xxxxxx xxxxxxxxxxx pipet xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- x xxxx A: xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3, xxxxx xxxxxxxx xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx B1,
- v xxxxxx B x X: 25 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx vyvíjí xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x chromatografickém xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] ve xxx xx xxxxx I, xxxxx čelo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx x nechat xxxxxxxx pět xxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx kyselinu xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx x šířce 2,5 xx, který xxxxxxx xxxx A x X (na xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx zbytek xxxxx je xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Nechat xxxxxxx 10 minut xx tmě, a xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx vzduchu xxx xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx rozpouštědla (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nenasycenou atmosférou] xx tmě xx xxxxx XX, dokud xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx ve xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pod UV xxxxxxx (4.9) x xxxxxx tyto xxxxx:
x) Xxxxxxxx se modré xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 pocházející xx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx x bodu X (xxxxxxx xx směru X).
x) Objevení xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx) a xxxxxxxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, přičemž xxx xxxxxx xxxxxxxxx ze xxxxxxxxxxxx roztoku naneseného x xxxx X (xxxxxxx xx směru XX).
x) Objevení xx xxxxxxxxx xxxxx, jaké xxxx popsány v xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx extraktu xxxxxxxxxx x xxxx X. Xxxxxx těchto xxxxx xxxxxxx jednak x xxxxxxxx vzdáleností xxxxxxxxxx B1 xx xxxx X ve xxxxx X (stejná xxxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X) x xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx aflatoxinu X1 – xxxxxxxxxxx od xxxx A xx xxxxx II (xxxxxx xxxxxxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxx pocházejících x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
6.1 Xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech na 1 xx xxxxxx (xxx) se vypočítá xxxxxx vzorce:
S · X · V / W · X
xxx:
X x X xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx X1 x mikrolitrech (3.16) x xxxxxxxx, xxxxx má stejnou xxxxxxxxx fluorescence;
S = xxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx xx 1 ml, xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxx roztoku (3.16);
V = konečný xxxxx xxxxxxxx v mikrolitrech, x xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx xx objem xxxxxxxx použitý pro xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
6.2 Xx xxxxxxx fluorimetrického xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxx (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx xxxx 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, x xxxxxxxxxxx, xx skvrně xxxxxxxx (poměrně k xxxxxxx hodnotě X) xxxxxxxx x měření;
V = konečný xxxxx xxxxxxxx v mikrolitrech, x xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx x gramech, x xxxxxxx xx objem xxxxxxxx použitý pro xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx koncentrace aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx xx od 8 xx 10 μx/xx. Stanovit absorpční xxxxxxxx xxxx 330 x 370 xx xx použití xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx hustotu (X) xxx 363 xx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxx 348 xx x případě roztoku xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx koncentraci aflatoxinu X1 v xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xxxxxx tohoto xxxxxx:
xxx chloroformový roztok; 312 · A · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · X · 1 000 / 19&xxxx;800 xxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx příslušná ředění x cílem xxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxx 0,1 μx/xx. Xxxxx xx roztok skladuje x chladničce xxx 4 °X, je xxxxx xx xxxx xxxx týdnů.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx čistoty
Nanést na xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 xx 10 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.4. Xxx UV xxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx skvrna x x místě xxxxxxxxx xxxxxxxx xx neměla xxx znatelná xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které x xxxxxxx xxxxxx provedl xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx aflatoxinu X1 xx 10 xx 20 μx/xx,
- 5 μx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx od 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
9. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
B. XXXXXX XXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxx, které xxxxxxxxx xx oblasti xxxxxxxxxx xxxxxx A. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx je 0,01 xx/xx (10 xxx). Xxxx metoda xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx x jeho xxxxxxxxx část xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Eluát xx xxxxxx x xxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx podrobí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx stanoví x xxxxxxxxxxxxx pod UV xxxxxxx xxx vizuálně xxxx flourometricky xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx být potvrzena xxxxxxxxxx postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx stanoveno jinak, xxxxxxx činidla musí xxx čistoty "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Chloroform xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx peroxidy.
3.6 Xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx: 98/2 (V/V).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx chromatografii, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 mm.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, předem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx vata.
3.10 Xxxxx xxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx plyn, např. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková 1 X.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) promytá xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx G–HR xxxx xxxxxxxxxx, pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxx roztoky.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx.
3.15.2 Chloroform (2.3)/aceton (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx je xxxxxxx x bodu 7 xxxxxx A.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 metody X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx body 5.1, 5.2 a3.5 metody X. |
|
5.2 Extrakce |
|
|
5.3 Pročištění xx xxxxxx |
5.4 Dvourozměrná xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Narýsovat xx desku (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx (6 xx xx každé xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx kapilárních pipet xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- v xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3,
- x xxxx X: 20 μx standardního xxxxxxx (3.16),
- x bodu X: 10 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x bodu X: 20 μx standardního xxxxxxx (3.16),
- x xxxx E: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx inertního xxxxx (3.11). Získané xxxxxx xxxx xxx xxxxxx asi 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (podle xxxxxxxx na xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx se vyvíjí xx použití xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx v xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx X, xxxxx čelo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nechat xxxxxxxx 15 xxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou] xx xxx xx xxxxx XX, dokud xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx ve xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Ozářit xxxxxxxxxxxx XX světlem, xxxxxxx xx deska xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Určit xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu B1 xx standardního xxxxxxx X, X, X x X. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx úhel x xxxxxxxxxx xxxxx. Průsečík X xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xxxxxxxxxxx x extraktu xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxx X (obrázek 1). Xxxxxxxx poloha skvrny xxxxxxxxxx B1 xxxx xxxx xxx x xxxx X xxxxxxxxx xx průsečíku xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx asi 100 xxxxxx x protínajících xxxx X a X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx desku (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1, x xxxxxx na xxx X (xxx xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, který xxx xxxxxx xxxxx bodu 5.3, x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx jak je xxxxxxx v xxxx 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x ověřit xxx:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx překrývají,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx xx xxxxxxxx x xxxx Q xx xxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx skvrn X, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx intenzita 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx délce 365 xx x emisní xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x intenzitou xxxxx X, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Potvrzení xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxx xxx 5.6 xxxxxx A.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxx 6 xxxxxx X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx A.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", část C xxx 2.
X. POZNÁMKY XXXXXXXX SE XXXXX X X X
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. x. 40 až 60 °X).
X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků, xx. xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx:
± 50 % střední xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx B1 x 10 μg/kg xx xx 20 μx/xx;
± 10 μg/kg xx xxxxxxx střední xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % střední xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xxxxx než 50 μx/xx.
Xxxxxxx x xxxxxxx
