Xxxxx směrnice Komise
ze xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], naposledy pozměněnou xxxxx x xxxxxxxxxxx [2], x xxxxxxx xx článek 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx uvedená xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxxxx cílem xx xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx jakosti x xxxxxxx krmiv, xx xxxxxxxxx podle xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx směrnice Xxxxxx 71/250/XXX ze xxx 15. července 1971 [3], 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/XXX xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx xxx 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/XXX xx xxx 25. března 1974 [7] a 75/84/XXX xx dne 20. prosince 1974 [8] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx provedených prací xx však xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, že xxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xxxxx jde x xxxxx xxxxxxxxxx X1, se xxxxxxxxx xxxxx metod popsaných x xxxxxxx této xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení uvedená x xxxxx 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Komise 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, xx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x příloze xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské státy xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 1976. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Článek 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
X Bruselu xxx 1. března 1976.
Za Xxxxxx
X. X. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. věst. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Úř. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. věst. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX X1
X. XXXXXX JEDNOROZMĚRNÉ XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxx xxxxxxxx: podzemnice xxxxxx, xxxxx, lněná semena, xxxx, xxxxx, xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, obiloviny x xxxxxxx z obilovin, xxxxxxxx mouka, xxxxxxxxxx xxxxx a škrob. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx rušivé xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, je nutné xxxxxxxx analýzu xxxxx xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx kolonovou xxxxxxxxxxxxxx xx silikagelu. Xxxxx xx odpaří x xxxxxxxx xx xxxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx roztoku xx podrobí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxx x chromatogramu xxx XX světlem xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx známými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx činidla xxxx xxx čistoty "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 N–hexan.
3.4 Methanol.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost částic 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, předem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx skelná xxxx.
3.10 Síran xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) xxxxxxxx xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), promytá xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx X–XX xxxx ekvivalent, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Standardní xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μx aflatoxinu X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x zkontrolovaný, xxx xx xxxxxxx x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx roztok xxx xxxxxxxxx jakosti obsahující xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 x X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxx xxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx fluorescence x xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Chloroform (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx atmosférou;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nasycenou xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx míchačka.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxxx x Schüll č. 588 nebo xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx chromatografická xxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, xxxxx 300 xx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 250 μx zásobníkem.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx odparka, s xxxxxx o objemu 500 xx x xxxxxxx xxxx.
4.6 Erlenmeyerovy xxxxx o xxxxxx 500 ml, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 200 x 200 xx, xx xxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxx xxxxx): xxx 30 g xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Erlenmeyerovy xxxxx, xxxxxx 60 xx xxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx uschnout na xxxxxxx x poté xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx připravené x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx vykazují xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 UV xxxxx xxxxxxxxxxx (360 mm). Xxxxxxxxx záření musí xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx ještě xxxxx rozeznatelná.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 xx, x xxxxxxxxxxxxxxxx zátkami.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (volitelný).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", část X xxx 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xxxx prošel xxxxx x oky x xxxxxxxxx 1 xx (x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx ISO X 565).
5.2 Extrakce
Do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 xx vody x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Zazátkovat, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, xxxx xxxxxx 50 ml.
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (4.4) xxxxxx xxxxx x xxxx nebo xx skelné xxxx (3.9), naplnit xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxx chloroformem (3.2), x poté xxxxxx 5 x síranu xxxxxxx (3.10).
Ověřit, xx xxxxx povrch xxxxxx xxxxxx sodného je xxxxx rovný, x xxxx přidat xx xxxxxx xxxxxxx 10 x silikagelu (3.8). Xx každém xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xx odstranily xxxxxxxxx xxxxxxx. Nechat 15 xxxxx stát, x xxxx opatrně přidat 15 x síranu xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx až x hornímu povrchu xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 ml xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (5.2) xx 100 xx x-xxxxxx (3.3) x směs kvantitativně xxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x hornímu xxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx postupu xxxx xx xx, xxx rychlost xxxxxxx xxxx 8 xx 12 xx za xxxxxx a xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx kapalinu. Poté xxxxxxx 150 xx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (3.7) a xxxxxx xxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxx proudem xxxxxxxxx xxxxx (3.11) v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5) při teplotě xxxxx než 50 °X. Reziduum kvantitativně xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx zkumavky o xxxxxx 10 ml (4.10). Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11), a xxxx xxxxxxx objem xx 2 ml xx xxxxxxx chloroformu (3.2) nebo směsi xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx pro tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 cm xx xxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxx xx 2 cm tyto xxxxxx standardních xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx extraktu získaného xxxxx xxxx 5.3 x x tomu 20 μl standardního xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx získaného podle xxxx 5.3.
Chromatogram se xxxxxx ve tmě xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx rozpouštědel (3.18). Xxxxx xxxxxxxxxxxx xx musí xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx jakostního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x xxxx xx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx B1 x X2 xxx xxxxxxxx zcela odděleny.
Nechat xxxxxxxxxxxx odpařit xx xxx x xxxx xxxxxx xxxxx UV xxxxxxx xx vzdálenosti 10 xx od xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx fluorimetricky xxxxx těchto xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescence skvrn xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V případě xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx překrytím xxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxx xxx fluorescence 10 xx xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx více xxx xxxxx skvrna. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku, xxxxxxxx xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 krát xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu a xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Fluorimetrické xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx x xxxxxx xxxxx 443 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 ve xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx fluorescence s xxxxxxxxxxx skvrn standardního xxxxxxx xxxxxxxxxx X1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1 v extraktu xx xxxxxxx xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 se xxxx xxx XX zářením xxxxxx z xxxxx xx xxxxxx.
5.6.2 Dvourozměrná xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (aflatoxin X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx provádět xxxxxx podle xxxxxxxx xxxxxxxx na obrázku 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx dvěma přilehlými xxxxxxxx (6 xx xx každé xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx rozpouštědel. Xxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx injekčních xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- v xxxx X: xxxxx xxxxxxxxxxx extraktu vzorku xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3, který xxxxxxxx xxx 2,5 nm xxxxxxxxxx B1,
- x xxxxxx X x X: 25 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x tloušťce 1 xx v chromatografickém xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx X, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx minut xx xxx x xxx pokojové xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx o xxxxx 2,5 cm, xxxxx xxxxxxx xxxx X x B (xx xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), dokud pásek xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx je chráněn xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx xxx, x xxxx vysušit xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx vyvíjecího rozpouštědla (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující linii. Xxxxxxx desku z xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx tmě x xxx pokojové xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx (4.9) a xxxxxx xxxx xxxxx:
x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 pocházející xx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx xx směru X).
x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx B1 (xxxxx xxxxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxx pocházejí ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx xx směru XX).
x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx skvrn, xxxx xxxx popsány x xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx vzdáleností xxxxxxxxxx X1 xx xxxx X xx xxxxx X (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx vzorku naneseného x xxxx X) x xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx aflatoxinu B1 – xxxxxxxxxxx xx xxxx X xx xxxxx XX (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x bodu X). Xxxxxxxxxxxxx intenzity skvrn xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx z xxxxxxxx x ze xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx B xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
6.1 Xx základě vizuálních xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x mikrogramech xx 1 xx xxxxxx (xxx) se vypočítá xxxxxx xxxxxx:
X · X · X / X · X
xxx:
X a X xxxx příslušné objemy xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) a xxxxxxxx, xxxxx má xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, v mikrogramech xx 1 xx, xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
X = konečný xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx, x ohledem na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx x xxxxxxx, s xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
6.2 Xx základě fluorimetrického xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech xx 1 kg xxxxxx (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = objem xxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx desku (10 μx nebo 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, v xxxxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx Y) xxxxxxxx x xxxxxx;
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu a xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx xx od 8 do 10 μx/xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx mezi 330 x 370 xx xx použití xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx hustotu (X) xxx 363 xx x případě xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx 348 nm x xxxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech xx 1 ml xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx roztok; 312 · A · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · X · 1 000 / 19&xxxx;800 xxx xxxxxx xx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx..
Xx tmě xxxxxxx xxxxxxxxx ředění x xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx koncentrace aflatoxinu X1 xx asi 0,1 μx/xx. Xxxxx xx roztok skladuje x xxxxxxxxxx xxx 4 °X, xx xxxxx po xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx čistoty
Nanést xx xxxxx (4.8) 5 μx standardního roztoku xxxxxxxxxxxx 8 xx 10 μl aflatoxinu X1 xx 1 xx (7.1). Vyvinout xxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.4. Xxx UV xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Opakovatelnost
Rozdíl mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx 10 xx 20 μx/xx,
- 5 μx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx než 50 μg/kg.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx C xxx 2.
X. METODA XXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx A. Xxxxxx hranice pro xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx). Xxxx metoda se xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pulpu.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Extrakt se xxxxxxxx x jeho xxxxxxxxx část xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Eluát xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx chloroformu xxxx ve xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx tohoto xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx buď xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx srovnáním xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx aflatoxinu B1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx x krmiv xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx "p.a".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x acetonitrilu: 98/2 (X/X).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Kyselina chlorovodíková 1 X.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) promytá kyselinou.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Vyvíjecí xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda 94/4,5/1,5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank s xxxxxxxxxxx atmosférou.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx obsahující asi 0,1 μx aflatoxinu X1 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx benzenu x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx a kontrolovaný xxx xx xxxxxxx x xxxx 7 xxxxxx A.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 xxxxxx X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx body 5.1, 5.2 a3.5 metody X. |
|
5.2 Extrakce |
|
|
5.3 Pročištění xx xxxxxx |
5.4 Dvourozměrná xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Nanesení xxxxxxx (xxxxx schématu xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx (6 xx xx každé xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- x xxxx A: 20 μx xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3,
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16),
- x xxxx X: 10 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- v xxxx X: 40 μx standardního roztoku (3.16).
Xxxxxxx slabým xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Získané xxxxxx xxxx mít xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (podle xxxxxxxx na xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva x tloušťce 1 xx v xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx X, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x nechat oschnout 15 xxxxx ve xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx se xxxxxxxxxxxx vyvíjí za xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx o xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx II, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx desku x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx oschnout xx xxx x xxx xxxxxxxx teplotě.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx se deska xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Určit xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X, C, X x X. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx těmito xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx úhel s xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx X těchto xxxxxx xxxxxx místo, kde xxx xxxxxxxx skvrnu xxxxxxxxxx X1 pocházející x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx xxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 xxxx xxxx být v xxxx X xxxxxxxxx xx průsečíku xxxx xxxxxxxxxx přímek svírajících xxxx xxx 100 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx X a X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x extraktu xxxxxx se xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx desku (4.8) xxx přímky rovnoběžné xx dvěma přilehlými xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1, x xxxxxx na xxx X (viz xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx podle xxxx 5.3, x k xxxx 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Xxxxxx chromatogram XX xxxxxxx (4.9) x ověřit xxx:
- xx xxxxxx aflatoxinu X1 x extraktu x ze standardního xxxxxxx překrývají,
- fluorescence xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1, xxxxx se xxxxxxxx x bodu Q xx xxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx vizuálně xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Vizuální xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx X, X a X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx potřeby xx xxxxxxxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx fluorescence 20 μx extraktu silnější xxx intenzita 40 μx standardního roztoku, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx chloroformem (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x xxxx znovu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) při excitační xxxxxx xxxxx 365 xx x emisní xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx extraktu xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx intenzity skvrny xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxx X, X x X standardního xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxx xxx 5.6 xxxxxx X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx bod 6 xxxxxx A.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx X.
8. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
C. XXXXXXXX XXXXXXXX XX XXXXX X X B
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx se xxxx xx xxxxxxxx podle xxxx 5.1 odtučnit xxxxxxxxxxxxx (x. x. 40 až 60 °X).
X takových případech xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx neodtučněného xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků
Reprodukovatelnost xxxxxxxx, xx. xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku, xx xxxxxxxx na:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x 10 μx/xx xx do 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx xxxxxxx střední xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % střední xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx než 50 μx/xx.
Xxxxxxx k xxxxxxx
