Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv [1], x xxxxxxx xx článek 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx právními x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx jakosti x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x analytických metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971 [2] a 71/393/XXX xx xxx 18. listopadu 1971 [3] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx xx stav xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx úřední kontroly xxxxx, pokud xxx x xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, hrubých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx působením xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx, jakož x o xxxxxxxx xxxxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx X xxxx směrnice.
Obecná xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) přílohy xxxxx směrnice Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx v příloze X xxxx xxxxxxxx.
Článek 2
Členské státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx tetracyklinových xxxxxxxxxx, xxxxx i x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, oxytetracyklinu, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, tylosinu x virginiamycinu x xxxxxxxx, se provádějí xxxxx metod xxxxxxxxx x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (úvod) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx týkající se xxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx popsané x příloze II xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Členské xxxxx xxxxxx v účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. července 1973. Xxxxxxxxxx x xxxx informují Xxxxxx.
Xxxxxx 4
Tato směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 27. xxxxx 1972.
Xx Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Mansholt
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX X
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
1. Účel x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx obsah xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu x xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx skrojky xxxx listy, xxxxxxxxxxx xxxxx, sušené kvasnice, xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. řízky x xxxxxx x xxxxxxxxxx) nebo škvarky.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Při prvním xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 40 % ethanolem. Xx xxxxxxxxx filtrátu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx stejných podmínek xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) kyselina xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx titrací xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N x xx xxxxxxxxxxx 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx v 94 % (X/X) xxxxxxxx. 10 xx = 30,94 xx 0,1 X XxXX.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxx X: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x xxxxxx zinečnatého Xx(XX3XXX)2.2X2X a 3 x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx roztok XX: xxxxxxxxx xx vodě 10,6 x hexakyanoželeznatanu xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, x: 0,948 při 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Erlenmeyerova xxxxx x xxxxxx 250 xx x xxxxxxxxxxxxxx zábrusem a xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Polarimetr xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx vzorek xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxx x průměru 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx rotace (X xxxx S) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x vzorku x xxxxxxxxx na 1 xx x dát xx xx odměrné xxxxx x xxxxxx 100 xx. Xxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx dobře xxxxxxxxx x přidat xxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Ponořit xxxxx xx vroucí xxxxx xxxxx x xx dobu prvních xxx minut xxxxx x xxxxxxxxxx protřepávat, xxx se zabránilo xxxxxx xxxxxx. Množství xxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx x xx vložení xxxxx xxxxxxx lázeň na xxxx xxxx. Baňka xxxxx být vyjmuta x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx. Přesně po 15 minutách xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxxx 30 ml xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx xx 20 °C.
Přidat 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) a xxxxx minutu xxxxxxxxxxx. Xxxx přidat 5 xx Carrezova roztoku XX (3.4) x xxxx jednu xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx vodou, homogenizovat x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxx zcela xxxx (což xx xxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Carrezova xxxxxxx X x XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx rotaci xxxxxxx v 200 xx trubici.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X’ xxxx X’) xxxxx xxxxxxxxxxx ve 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x vzorku x xxxxxxxxx na 1 xx, xxx xx xx odměrné xxxxx x xxxxxx 100 xx x přidat xxx 80 ml xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx xxxxx stát xxxxx hodinu při xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx této doby xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx zkušební xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx ethanolem (3.5), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky o xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx Erlenmeyerovu xxxxx xxxxxx xxxxxxx x ponořit ji xx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxx po 15 minutách xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx obsah xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx, xxxxxxxxxxx chladnější vodou x xxxx zchladit xx 20 °C.
Poté xxxxxxx xx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) a XX (3.4), xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, jak xx xxxxxxx x xxxx 5.2 druhém x xxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx (%) xx vypočítá xxxxx:
6.1 Xxxxxx polarimetrem
procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - X’) / [α]D20°
kde je:
P = xxxxxxx optická xxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx.
X’ = optická xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, v xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx xxxxx
+ 195,4°: xxxxxxxxxx xxxxx
+ 184,6°: xxxxxxxxx xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: xxxxx škrob
+ 181,3°: ovesný xxxxx
+ 184,0°: ostatní xxxxx xxxxxx a xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Měření xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]X20° · (2 X · 0,665) (X - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx rotace látek xxxxxxxxxxx ve 40 % xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx ve 100 xx xxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxx 200 mm optickou xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx mění xxxxx xxxxxxxxxxxx:
16,29 x pro xxxxxxxxxxx sacharimetry
26,00 x xxx německé sacharimetry
20,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = xxxxxxxxxx xxxxxxx rotace xxxxxxx xxxxxx (viz 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 0,4 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx škrobu xxxxx xxx 40 % x 1 xxxxxxxxx hodnoty pro xxxxx škrobu rovnajícího xx xxxx xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx jako uhličitan xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx rotace xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 V xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx laktózy, xxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Připojit na Xxxxxxxxxxxxx xxxxx zpětný xxxxxxx, xxxxxxx ji xx 30 xxxxx xx vodní xxxxx x xxxxxxx 50 °X. Xxxxxx vychladnout x pokračovat x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.3.
2. STANOVENÍ XXXXXXX XXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx metoda umožňuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx mineralizuje xx xxxxx. Xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x shromáždí xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Katalyzátor: xxxx xxxxxxx CuO x.x. xxxx xxxxx xxxxxxx pentahydrát XxXX4 · 5H2O p.a., xxxx rtuť xxxx xxxx xxxxxxxx XxX x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx xxxxx x.x.
3.4 Kyselina sírová x.x., d: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx sírová 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
3.7 Indikátor xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxxx xx 100 xx 95-96 % (V/V) xxxxxxxx.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x.x.
3.12 8 % (m/V) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx pemza, xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x zpopelněná.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Kjeldahlovy xxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1).
5. Postup
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx x xxx xx xx xxxxx mineralizační xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 g xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx katalyzátoru (3.2) (0,3 až 0,4 g xxxxx xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 g xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxx 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx sírové (3.4) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx mírně x xx občasného xxxxxxxxxxxx, dokud xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx x přilnutí xxxxxxxxxxx xxxxxx. Když xx xxxxxx xxxx a xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, pokud xx použije xxxxxxxxxxx xx bázi xxxx), xxxxxxxx xxx ještě xxxxx xxxxxx, poté xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x za stálého xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, xxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx; xxxxxx xxxxxxxxxxx; xxxx xxxxxx xxxxxxx granulí xxxxx (3.3).
Xxxxxx xx xxxxxx baňky xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxxx sírové 0,1 X (3.5) nebo 0,5 X (3.6) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx dusíku (xxx poznámky 7.2) x přidat xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx baňku xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx nejméně 1 cm (xxx xxxxxxxx 7.3). Přes xxxxxxx x kohoutem xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 100 ml 40 % xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.8). Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxx xxxxx, přidat xx xxxxx xxxxxx xxx 10 xx roztoku xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xx 30 xxxxx xxxxxxxxxxxxx asi 150 xx kapaliny. Po xxxxxxxx této xxxx xxxxxxxxxxxx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pomocí lakmusového xxxxxxx. Pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx, pokračovat x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xx xx destilát xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx sběrné baňky x xxxxxxxxx zbarvení. Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx žluta, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx 0,1 X (3.5) nebo 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) v xxxxxxxxxx xx normalitě použité xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx nezmění xx xxxxxx xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx metody
Za xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx dusík, xx xxxxxxx slepý pokus (xxxxxxxxx a titrace), x xx bez xxxxxx, xxxxx xx xxx analyzován. Xx xxxxxx xxxxxxxx správnosti xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx x.x. (x.x. 114 °C; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx spotřebované kyseliny xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx sírové 0,1 X odpovídá 1,4 xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx faktorem 6,25. Výsledek xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku.
Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx proteinů xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 absolutní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Je xxxxx xxxxxx některé xxxxxxxxx, xxxxx vyžadují xxxxxxx xxxx mineralizací x destilací. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx provést xxxx xxxxx.
7.2 U xxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N, xxxxx xx být xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx, xxxxxx xx 10 xx 15 xx x xxxxxxx xxxxx na 25 xx.
7.3 Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxx, přidat xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx baňky na xxxxxxx x xxxxxx xxxxx kapalinu xx xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX PROTEINŮ XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxx 48 hodin xxx 40 °X xxxxxxxx pepsinu x xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxx xx filtruje a xxxxx dusíku ve xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx hrubých xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,075 N.
3.3 2,0 x/xx pepsinu; xxxxxxxx pepsinu xx xxxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx v části 4 xxxx přílohy x xxxx být xxxxxxxxxxxx x souladu x touto xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx připravený xxxxxx pepsinu x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2); xxxxxxxx: 400 j/l.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v bodě 3 metody pro xxxxxxxxx obsahu hrubých xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Vodní xxxxx xxxx inkubátor xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx aparatura xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx roztoku (xxx xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx odměrné xxxxx o xxxxxx 500 xx. Xxxxxx 450 ml xxxxxxx xxxxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °C. Xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx hrudek. Xxxxxx, xx xx xX xxxxxxxx xxxxx xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx xx vodní xxxxx nebo xxxxxxxxxx (4.1) x nechat xx xxx 48 xxxxx. Xxxxxxxxx xx 8, 24 a 32 xxxxxxxx. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxx 15 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), zchladit xx 20 °X, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 ml xxxxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 mg x dát xx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Přidat xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx, jak je xxxxxxx v metodě xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx druhé xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x uvést xx varu. Xxxxx xx xxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx emulse (3.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx, dokud xx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxxx odstranit xxxxxxxx stopy xxxx.
Xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx se použije xxxxxxxxxxx na xxxx xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx x titrace
Postupovat, jak xx xxxxxxx x xxxxxx pro stanovení xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxxxxxx xxxxx pokus xx xxxxxxx xxxxxxxx postupu, xxx bez xxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx sírové xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx zkušebním vzorkem. 1 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx množství xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx jako procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx nesmí překročit:
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx než 20 % x xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 absolutní xxxxxxx xxx xxxxx vyšší xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Hodnoty xxxxxxx xxxxx xxxxxxx nemají xxxxxx souvislost se xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx.
7.2 Xxxxxxx x obsahu xxxx vyšším xxx 10 % xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (b.v. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx ošetří xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx trichloroctovou. Xx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx Folin-Ciocalteu. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se měří xxx 750 nm x odpovídající množství xxxxxxxx se odečte x xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx pepsinu xx xxxxxxxxxx xxxx množství xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx takové xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx odpovídající xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx μxxxx xxxxxxxx zbarveného xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,2 N.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,025 N.
3.4 5 % xxxxxx (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Folin-Ciocalteu. Xxx 100 g xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 25 x molybdenanu xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 xx xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx x kulatým xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) x 100 xx koncentrované xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19), xxxxxxxx baňku xx xxxxxx chladič, xxxxx do varu x udržovat roztok x xxxxxx xxxx xx xxxx 10 xxxxx. Xxxxxx vychladnout, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxx 175 x xxxxxx lithného (Xx2XX4 · 2H2O), 50 xx xxxx a 1 xx brómu. Xxxxx xx dobu 15 minut, xxx xx xxxxxxxxx přebytek xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx do odměrné xxxxx o xxxxxx 1 x, xxxxxxx xx xxxxx vodou, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx použitím xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 objemy xxxx.
3.7 Roztok xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx množství xxxxxxxxxxx, xxx 2 g xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxxxx odpovídajícího 354 xx xxxxxx [1] x xxx xx xxxxx x xxxxxx 200 ml x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx ml xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Xxxxxx baňku x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx, dokud xx xxxxxxxxxx xxxxx nerozpustí. Xxxxxxx vakuum x xx protřepávání xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkovou (3.2) xx xx 100 xx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx tyrosinu: xxxxxxxxx 181,2 xx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx tohoto xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °C + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, xxxxxxxx: 1 xxxxxxx.
4.4 xX xxxx.
5. Postup
5.1 Příprava xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxx ve 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Odpipetovat 2 xx roztoku x xxx xx xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). xX xxxxxxxxxxxx xX xxxxxx xxxx xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Hydrolýza
Odpipetovat 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 1,0 ml xxxxxxx pepsinu xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 x promíchat xxx xxxxxx xxxxxx xxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx ve vodní xxxxx při 25 °X xxxxxx po xxxx 10 minut, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx xxxx xxx přesně dodrženy). Xxxx xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 25 °C, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxx zbarvení x xxxxxx optické xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxx, xxx xx do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (3.5) x za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxx činidla Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 až 10 xxxxxxxx stanovit xxxxxxxx xxxxxxx roztoku spektrofotometrem xxx 750 xx x xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxx s xxxxx.
5.4 Slepý xxxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxx provést xxxxx xxxxx xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx kyseliny trichloroctové (3.4) předehřáté xx 25 °C, homogenizovat x xxxx přidat 1,0 ml xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 10 minut xx xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °C. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx suchý filtr. Xxxxxxxxxx v postupu xxxxxxxx v xxxx 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx křivka
Do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, x 5,0 xx alikvotního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx tyrosinu. Xxxxxxx xxxxx referenčním xxxxxxxx xxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx kyselinou chlorovodíkovou (3.1) xx 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx roztoku hydroxidu xxxxxxx (3.5) x xx stálého xxxxxxxxxxxx 3,0 xx zředěného xxxxxxx Folin-Ciocalteu (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx hustotu xxx xx uvedeno x xxxxxxxx větě xxxx 5.3. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxxxxx hustot proti xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hustotě xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx pepsinu x μmolech tyrosinu xx 1 mg x za xxxxx xxxxxx při 25 °X xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx xx xx (x/xx) = 0,32 a / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx v xx xxxxxxx xxxxx bodu 5.2.
7. Poznámky
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxx, které má xxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx takové, xxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx xx xx xxxxxxx touto metodou xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx tyrosinu/mg xxx. xxx 35,5 °C) xxxx
36400 xxxxxxxxxx jednotek/g (μxxxx xxxxxxxx/x za 10 xxx. xxx 35,5 °X).
5. STANOVENÍ XXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx mouce x xxxxxxxxxxxx pokrutinách a xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx obsahují. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx je 20 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 3-amino-1-propanolu, a xx buď xxxxx xxxxxxxxxxxx a hexanu xxx xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx, nebo xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxx. Gossypol xx xxxxxxxxxxxxxxx anilinu xxxxxxxx xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx je xxxxxx xxx 440 xx.
3. Činidla
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx isopropanolu x.x. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx x-xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxxxx X: xx odměrné xxxxx x xxxxxx 1 x xxxxx xxx 500 ml xxxxx isopropanolu a xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx ledové xxxxxxxx xxxxxx x 50 xx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Trvanlivost xxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx X: xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 xx 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx a 10 xx ledové xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx N,N-dimethylformamidem. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxx.
3.4 Anilin x.x.: xxxxx optická xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx přes xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x posledních xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Toto xxxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx několik xxxxxx x zazátkované lahvi x xxxxxxx xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx odměrné xxxxx x objemu 250 ml xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx do odměrné xxxxx x xxxxxx 250 xx 50 xx xxxxxx xxxxxxx x doplnit po xxxxx rozpouštědlem A. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx je 0,02 xx/xx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx dobu jedné xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: do xxxxxxx baňky o xxxxxx 50 xx xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx rozpouštědlem X (3.3). Koncentrace xxxxxxxxx x tomto roztoku xx 0,5 mg/ml.
Pokud xxxx standardní roztoky xxxxxxxxx X a X xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxx trvanlivost xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Mixér (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx zkušebního vzorku xxxxxx xx předpokládaném xxxxxx gossypolu ve xxxxxx. Xx výhodné xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx částí filtrátu, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxxx měření. Xxx xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx x bavlníkových xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 g; xxx xxxxx xxxxx xx xxxx být 5 x. Xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 10 xx xxxxxxxx; xxxx xx xxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx gossypolu xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxx 0,5 a 5 x, xxx xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx obsahovala 40 xx 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xxx pokojové teplotě xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx baňky se xxxxxxxxxx hrdlem x xxxxxx 250 xx, xxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx přidat 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx a jednu xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Filtrovat xxxx xxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx zakrýt xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Pomocí xxxxxx xxxxxx do xxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x X) x xxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) xx 10 xx. Poté xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 10 ml rozpouštědla X (3.2) do xxxx jiných odměrných xxxxx (C x X) x objemu 25 xx. Doplnit xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (D) x (X). Zahřívat 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx a nechat xxxx xxxxx hodinu.
Stanovit xxxxxxxxxxxxxxxxx při 440 xx a xx xxxxxxxxxx kyvetách o xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx (X) porovnáním x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx pokus xx xxxxxxx hustoty xxxxxxx xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx). X xxxx hodnoty vypočítat xxxxx volného xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodě 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 až 5 xx gossypolu xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml x přidat 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx připravit xxxxx pokus a xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx xxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml. Xxxxxxxx xxx xxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx lázní. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu x doplnit xx xxxxx obě xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx 10 xx 15 xxxxx, xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x baňce se xxxxxxxxxx hrdlem.
Pomocí xxxxxx xxxxxx 2 ml xxxxxxxx xx vzorku xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 ml x 2 xx filtrátu xxxxxxx pokusu xx xxxx jiných xxxxxxxxx xxxxx x objemu 25 xx. Doplnit xx 25 xx xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx dvou xxxxxx baněk. Xxxxxxxx 30 minut xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx vytvořilo xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat stát xxxxx hodinu.
Stanovit optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x bodě 5.2. X této xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx celkového xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.
6. Xxxxxxx výsledků
Výpočet xxxxxxxx xx může xxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (6.1), nebo xx xxxxxxx kalibrační xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx
Xx stanovených podmínek xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx tato:
volný gossypol: X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: E 1% / 1xx = 600
Xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx se xxxxxxxx takto:
gossypol %: X · 1 250 / X1%1xx ·&xxxx; · x · x
xxx:
X = xxxxxxxx xxxxxxx hustota, xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2
p = xxxxxxxx vzorek x g
a = xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x ml
6.2 Na xxxxxxx kalibrační křivky
6.2.1 Xxxxx gossypol
Připravit xxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 xx. X xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) xx 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx xxxxx baňky xxxxx xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat stát xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 stanovit optickou xxxxxxx xxxxxxxxxx série xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxxxx. Načrtnout kalibrační xxxxxx uvedením hodnot xxxxxxx hustoty xxxxx xxxxxxxx gossypolu (v μx).
6.2.2 Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx 6 xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Do první xxxxx přidat xxxxxxx 10 ml rozpouštědla X (3.3) x xx ostatních 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.6). Xxxxxxx xxxxx každé baňky xx 10 ml xxxxxxxxxxxxx B (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx x 6 xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 ml. Xxxxxxx xxxxx baněk xxxxx xxxxx xx 25 xx xxxxx x xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx série 2 ml xxxxxxx (3.4). Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx rysku směsí xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), homogenizovat x xxxxxx xxxx jednu xxxxxx (xxxxxxxxxx série).
Za xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx hustotu standardní xxxxx xxxxxxx porovnáním x odpovídajícími xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Načrtnout xxxxxxxxxx křivku xxxxxxxx xxxxxx optické xxxxxxx xxxxx množství gossypolu (x μx).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x stejného vzorku xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 ppm xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx: 17,7 % dusíku).
XXXXXXX XX
1. XXXXXXXXX X IDENTIFIKACE TETRACYKLINOVÝCH XXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 0,1 ppm xxxxxxxxxx, x koncentrátech x premixech.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx papírové xxxxxxxxxxxxxx x porovnání x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hodnot Xx x hodnotami xxxxxxxxxxxx xxxxx, x xx xxx xxxxxxxxxxxx x XX xxxxxx (xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx), xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx naočkovaném X. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx kyseliny xxxxxxxxx x.x. |
10,256 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
7,45 x |
|
Xxxxxx x.x. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan disodný Xx2XXX4.2X2X p.a. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 ml |
|
3.3 Xxxxxx I: xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx chroroformu/α-dichlorhydrinu: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx XX xxxx xxxxxxx nitromethanu/čistého xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 objemově. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před použitím |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx, jejichž xxxxxxxx xx vyjádřena x chlorovodíku.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx suspenze xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xx pokyny xxxxx xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx chlortetracyklinu, xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda ad |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx upravit xX na 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-triphenyltetrazolium chloridu x 5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxx 25 xx). Xxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxx (2440X xxxx 2043B) nebo xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 UV xxxxx xxx stanovení fluorescence.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx xxx 20 x 30 xx xxx xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx standardních xxxxx (3.8) a xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, jejichž xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx získat xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 100 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.3 Referenční xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) s xxxxx xxxxxx roztoky, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 ppm, xx možné xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx frakci xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, neboť xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v této xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vzorek ve xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Xxxxxx supernatant x xxxxxx ho xxxxx nebo ho xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 100 μg xx 1 ml (6.1) a 5 μx na 1 xx (6.2).
7. Stanovení x xxxxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx do pufračního xxxxxxx, xX 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx suchého xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx 0,01 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) x xxxxxxxx (6.1 x 6.2). Xxx dobré oddělení xxxx mít papír xxxxxxxx vlhkost; pokud xx to xxxxx, xxxxxx xxxxxx vyschnout.
Rozvinout xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx X (3.3) xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx II (3.4) pro stanovení XX xxxxxxx. Xxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxx xxxxx 15 až 20 cm (asi 1 xxxxxx 30 xxxxx), přerušit xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxx xx obsah xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 1 μx/xx2, xx možné xx ošetření chromatogramu xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx XX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), které xx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx xxxxxxxx xxxxx (4.5) x xxxxxxx xxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxx kontaktu xxxxxxxx xxxxx x položit xx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx doby. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx zónami x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx.
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xx inkubaci odpaří xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx hodnoty Xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx uvedeny zde. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x jeho vlhkosti:
|
Chlortetracyklin (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (XX) |
0,40 |
|
Xxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "xxx" xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx sloučenin.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X TETRACYKLINU
A. XXXXXX XX XXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx chlortetracyklin (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (OTC) x tetracyklin (TC) x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Xxxxxx xxxxx xxx 5 xxx xxxxx xxx určeny xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx 50 xxx se xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxxx xxx 50 ppm xx xxxxxx extrahuje xxxxx xxxxxxx, vody x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x xxxxx methanolu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x XX.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx měřením xxxxxx XXX, XXX xxxx XX xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. xxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx borité. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 30 °C. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx xx šikmý agar.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx spór
Smýt xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx použití 2 až 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5). Naočkovat xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx baňky xxxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx modře x xxxxxxxx borité, jehož xxxxxxxxxxx agaru xx 3 xx 4 %. Inkubovat 3 xx 5 dní xxx 28 xx 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 xx ethanolu (4.6) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx sporulace, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx se může x xxxxxxxxxx skladovat xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, které xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx největší xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zóny. Xxxx xxxxxxxx je xxxxxxx 0,2 a 0,3 xx xx 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 xx |
|
Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4 · 2H2O x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Fosfátový xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X p.a. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) ethanol.
4.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xX 4,5 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx asi 2 X.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 98/2 objemově.
4.11 Xxxxxxxxxx látky: XXX, XXX, TC, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x chlorovodíku.
5. Standardní xxxxxxx
5.1 Chlortetracyklin
Na základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx zásobní roztok, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx chlortetracyklinu-HCL xx 1 xx. Zředění xx provede xx xxxxxxx fosfátového xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx 0,01 % černě xxxxx [3].
Xxxx připravit xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,05 |
μg/ml |
|
S1 |
0,025 |
μg/ml |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 1,6 μg xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx x tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Tetracyklin
Postupem xxxxx xxxx 5.1 připravit xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, standardní xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 1,0 μx tetracyklinu-HCL xx 1 xx x xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,5 |
μg/ml |
|
S2 |
0,25 |
μg/ml |
|
S1 |
0,125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx než 50 ppm
Do xxxxxxxxxx xxxxxx přidat xxxxxxxx (4.8) v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxx fosfátovým xxxxxx (4.3) podle odkazů x xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x tomto roztoku xxxxx překročit 40 %.
Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx čirý xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 a X1 postupným xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx obsah x ppm |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Zkušební vzorek x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx xxxxxxxxxxx pufru (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
řeď. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx X8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 ppm
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X závislosti na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 až 10 x 20xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xX xxxxx xxx 3; xxxxx xx xx nutné, xxxxxxx pH xx 3 (u minerálních xxxxxxxxx xx xxxxxxx 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu x xxxxxxx pH na 5,5 xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxx se xx xxxxx xx modrou). Xxxxxx za použití xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx koncentraci X8 (xxx 6.1).
Poté připravit xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1), za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x tetracyklin
Postupovat xxx je xxxxxxx x bodě 6.2.1 xxx, xx xx xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx médium xxx stanovení (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx provádí x miskách xx xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu.
Za tímto xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx možné xxxxxx v agarovém xxxxx xxxxxxx 8 xxx x průměru 10 xx 13 xx. Vypočítat množství xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx z xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx děr xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx stanovení zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 hodin xxx při 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx proti xxxxxxx inhibičních zón. Xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 - S1 -X2 -X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 -X2 -X1 -X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx nesmí překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), oxytetracyklin (OTC) x tetracyklin (XX) xxx xxxxxxxxxxxxx vyšších xxx 1 g/kg, xxxxx xxxxxxxxxx žádná xxxxx, která xx xxxxxx xxxxxxxxx matným xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx než xxxxxx na xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx stanovení xxxxxx XXX xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX x XX xxxxx xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx se xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx účinek xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultivačního xxxxx, xxxxx xxxx naočkováno Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx kterého bylo xxxxxxx antibiotikum. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx se xxxxx 1,5 xx 3 % xxxxx (xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxxx přes xxx při 37 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx na xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
24 xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx šikmý xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx noc xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx zkumavce xxxxx v asi 2 ml xxxxxxxxx xxxxx (4.1) a xxxx xxxxxxx suspenzi xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx 100 xx stejného xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat xx vodní xxxxx xxx 37 °C xxxxx růst xxxxx xxxxxxxxx logaritmické xxxx (1x30 až 2x).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 g |
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
xX xx xxxxxxxxxxx: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx čistého acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (x/X) roztoku xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, TC, xxxxxxx aktivita xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztok
Na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (4.3) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx koncentrace odpovídá 400 xx 500 μx XXX-XXX, XXX-XXX xxxx TC-HCL xx 1 ml. Xxxxx xxxxxx se xxxxxxxx x chladničce xxxxx xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 200 xxxx 250 ml xxx 1 až 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx směsi (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x objemu 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Přidat xxx 100 xx xxxxx (4.5) a xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxx pufrem, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx standardních xxxxx x xxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) a xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx série koncentrací. Xxx xxxxx stanovení xx načrtne kalibrační xxxxxx, ne xxxxx xx xxxxxxxx interpolace xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx. Ředění xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx kmene, xxxxx xx xxxxx lišit xxxxxxxxx od xxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx standardní xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx XXX-XXX na 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx uvedeno xxxx a ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx xxxxxx dvakrát.
|
ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku |
ml xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.1) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,12 μx CTC-HCL. Dát 1 ml tohoto xxxxxxx do xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) xx xxxx xxxxxx zkumavek. Xxxxxxx xxxxx xxxx jiných xxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.1.2 Oxytetracyklin x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,6 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxxx určených xxx xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx ředění xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku |
ml xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.2) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,48 μx OTC-HCL xxxx XX-XXX na 1 xx. Xxx 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx zkumavek x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx zkumavek xx 1 ml xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.2 Xxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx získat na xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x 5 xx xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 cm kyvetě xxx xxxxxxxxx aparatury xx 100 % xxxxxxxxxxx nenaočkovaného xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx xxxxx zkumavky (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx zkumavek xxxx xxx provedeno v xxxxxx, xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xx vodní xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx udržuje xx 37 °C + 0,1 °X. Xxxxxxxxx xxxx se xxxxx takovým způsobem, xxx bylo možné xxxxxxxxx xxxxxx propustnosti, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx (xxxxxx 2h30 xx 3x). Xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx vstříknutím 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) xx každé xxxxxxxx.
7.5 Měření růstu
Změřit xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, přičemž fotometr xx xxxxxxx na 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx nejvyššímu xxxxxx xxxxxxxxxxx). X xxxxxx xxxxxx rozdílů v xxxxxxxx xxxxxxx zkumavek xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 2 cm x xxxxxx 5 xx xxxxxx.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx křivku xx milimetrovém xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx koncentracím xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx antibiotika xx xxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx agaru -
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx, x to xxxxxxx x přítomnosti xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (hydroximethyl) xxxxxxxxxxxx. Po xxxxxxxxxx xx extrakt zředí x xxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx agarovém médiu xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx přímo xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: B. cereus, X 250 XX [8] (xxxxxxxxxxx vůči xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Udržování rodičovského xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem odebraným x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxxxx 100 μg xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Příprava suspenze xxxx
Xxxx bakterie ze xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) za xxxxxxx asi 3 xx fyziologického xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx obsahující 300 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 dní xxx 28 xx 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx sporulaci, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxx skladovat xxxxxxx 5 měsíců.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.2) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxxxx umožní xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx oleandomycinu největší xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zóny. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,1 x 0,2 ml xx 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx při 60 °X.
4. Kultivační xxxxx x xxxxxxx
4.1 Médium xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
|
Xxxx použitím xxxxxxx xX xx 6,5. |
4.2 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [10]
Xxxxxx (4.1) upravené na xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (x/X) xxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx x.x.
4.7 Extrakční xxxxxx
|
Xxxxx xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 g |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: oleandomycin x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx látku (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx koncentraci oleandomycinu 100 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx zředěním s xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Extrakce
V xxxxxxxxxx xx předpokládaném xxxxxx oleandomycinu xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 xx 10 g 100 xx roztoku (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx x zředit xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 0,1 μg xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x U1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx roztoku (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) při 60 °X xxxxxxxx spór (3.2).
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx xx agaru xx xxxxxxx x xxxxxxx xx použití xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, X1) a xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, U1). Xxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx.
Xx xxxxx účelem xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx udělat x xxxxxxxx médiu nejméně 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx očkovacího xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít xxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kroužkem x xxxxxxx 200 mm x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx antibiotika xxxx 0,10 a 0,15 xx, v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx během 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx pomocí této xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 - S1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x pH 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxx xx xxxxxxxxx methanolem. Xx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx tylosinu xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx je xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) upraveného xx xX 7,0. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx měsíc xx šikmý agar.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx (3.1) xx použití 2 xx 3 xx fyziologického roztoku (4.4). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), upravit xx xX 7,0. Inkubovat 24 xxxxx při 35 °X, xxxx xxxx bakterie xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxx získat 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx tato xxxxxxxx xxxxxxxx x chladničce, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx testy xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx získat xxx xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx stanovení [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na7,0 a xx účelem xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.4 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Xxxxx methanol.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Xxxx fosfátového xxxxx (4.2)/xxxxx methanol: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Standardní xxxxx: tylosin x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx látku (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °X xx xxxxxxx xxxxxxx (5 mm xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 xx xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x 5 ml xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx roztok fosfátovým xxxxxx, pH 7 (4.3) x cílem xxxxxx koncentraci xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) standardní xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 2 μg xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx; xxx xxxxxxx x xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, x homogenizovat 2 minuty (xxxxxxxxx xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxx extrakt x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx (4.7) x xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx tylosinu 2 μx/xx (= U8). Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7).
Xxx xxxxxx xxxxx xxx 10 ppm xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxx při 35 °X a xxxxxxxxx xxxxxxxx ve 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) upravené xx xX 8 xxx 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, S4, S2, X1) a čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx musí obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x takové xxxxxxxxx, aby xxxx xxxxx udělat v xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x tloušťce 2 mm. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 200 mm x x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx odměřená xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x závislosti xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx vzorku opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx přes xxxx xxx 35 až 37 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx inhibičních xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx standardního roztoku x xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx rovnice:
(U1 + X2 + U4 + U8 - X1 - S2 - S4 -S8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. STANOVENÍ XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxxx x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztokem "Xxxxx 80". Po odstředění xxxx filtraci xx xxxxxxx zředí x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx stanoví měřením xxxxxx virginiamycinu na xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx lutea. Difúze xx projeví vytvořením xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx přes xxx při xxx 35 °C. Skladovat xxxxxxx v chladničce x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx na xxxxx xxxx.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze
Smýt xxxxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx solného xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx za pomoci 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 nm. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, její xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x bazálním médiem xxx stanovení (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, které xxxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx provádí xxx 48 až 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 g |
|
Agar, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx použitím xxxxxxx xX xx 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx voda xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.4 Xxxxx methanol.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 objemově.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Xxxxx 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx látka: xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μx virginiamycinu xx 1 ml. Xx xxxxxxx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8 obsahující 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1+) xx použití xxxxx (4.5) tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 až 20 x zkušebního xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) a xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx 20 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxx do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 xx xxxx xxxx směsi (4.5) s xxxxx xxxxxx předpokládanou koncentraci 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Poté xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 x xxxxxxxxxx vzorku, přidat 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 1 μx virginiamycinu xx 1 ml (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace U4, X2 x X1, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx stanovení (4.1) při 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx x miskách xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4, X2, X1).Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxx kultivačního média (7.1), xxxxx se xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Upřednostňuje xx použití misek xxxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x průmětu 200 mm a xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx děr přesně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 ml, x závislosti xx xxxxxxx xxx.
X každého xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx misky xxxx xxx při 35 xx 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx semilogaritmický xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, obě xxxxxx budou paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx pomocí xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 -S1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx aktivita = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Xxxx být xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[2] Může xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[3] Xxxx xxxxx xxxxxx x označení xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxx).
[6] Tento xxxx izolovaný x Xxxxx podle LUFA xxxxxxxx xxxxxxxxx růst xxx X. xxxxxx XXXX 6538 P.
[7] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[8] Xxxx izolovaný x Kielu podle XXXX.
[9] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[11] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.