Xxxxx Směrnice Komise
ze xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx metod odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu krmiv [1], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, že xxxxxxx xxxxxxxx stanoví, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se jakosti x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx odběru vzorků x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxx 1971 [2] a 71/393/XXX xx dne 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx xxxxxxxxx xxxx analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx však nutné xxxxxxxx xxxxx sérii xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem x xxxx, že opatření xxxx směrnice xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Stálého výboru xxx krmiva,
PŘIJALA TUTO XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, že analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, pokud xxx x xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, volného x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx metod xxxxxxxxx x xxxxxxx I xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, kterou xx xxxxxxx analytické xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx v příloze X xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx tetracyklinových xxxxxxxxxx, xxxxx i x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx x virginiamycinu x xxxxxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XX xxxx směrnice.
Obecná xxxxxxxxxx xxxxxxx x části 1 (úvod) přílohy xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS ze xxx 15. xxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx použijí xxx xxxxxx popsané x příloze XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1973. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx směrnice xx určena členským xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 27. dubna 1972.
Xx Xxxxxx
xxxxxxxx
X. L. Xxxxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX I
1. STANOVENÍ XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
1. Účel x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx x vysoké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x krmivech, s xxxxxxxx těch xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxx pulpu, xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxx, sušené xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx (např. xxxxx x moučka z xxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxx za tepla xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxx optická xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 40 % ethanolem. Xx okyselení xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx optická xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx při prvním xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx vynásobený známým xxxxxxxx xxxxx obsah xxxxxx xx xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,126.
3.2 1,128 % (m/V) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx titrací xx xxxxxx roztoku hydroxidu xxxxxxx 0,1 N x xx přítomnosti 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (X/X) xxxxxxxx. 10 xx = 30,94 xx 0,1 X XxXX.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxx X: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x xxxxxx xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X a 3 x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx vodou xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx roztok II: xxxxxxxxx xx vodě 10,6 x hexakyanoželeznatanu xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) ethanol, x: 0,948 při 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělnit vzorek xxxxxxx způsobem, xxx xxxx prošel xxxxx x xxxxxxxx xxx x průměru 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx rotace (P xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 xx. Xxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx xx zkušební xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx 25 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxx x xx dobu xxxxxxx xxx xxxxx silně x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx ve vodní xxxxx musí xxx xxxxxxxxxx, xxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx lázeň na xxxx varu. Baňka xxxxx xxx xxxxxxx x lázně xxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx 15 minutách xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxxx 30 xx xxxxxxx vody x xxxxx xxxxxxxx na 20 °C.
Přidat 5 xx Xxxxxxxxx roztoku X (3.3) x xxxxx minutu xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx XX (3.4) a xxxx xxxxx minutu xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx po xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (což je xxxxxx), opakovat xxxxxxxxx xx použití xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx roztoku X x XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx polarimetrem xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x 200 xx xxxxxxx.
5.3 Stanovení xxxxxxx xxxxxx (X’ xxxx S’) xxxxx xxxxxxxxxxx xx 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx, xxx xx xx xxxxxxx baňky x objemu 100 xx x xxxxxx xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Poté xxxxxx baňku xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx ethanolem (3.5), xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 ml xxxxxxxx (= 2,5 x vzorku) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 250 ml, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) x silně xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x ponořit xx xx vroucí xxxxx xxxxx. Přesně xx 15 xxxxxxxx vyjmou Xxxxxxxxxxxxx baňku z xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x poté xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) x XX (3.4), xxxxxxx xx xxxxx vodou, homogenizovat, xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, jak xx xxxxxxx x xxxx 5.2 druhém x xxxxxx odstavci.
6. Xxxxxxx výsledků
Obsah xxxxxx (%) se xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - X’) / [α]X20°
xxx je:
P = celková xxxxxxx xxxxxx, v xxxxxxxx xxxxxxxx.
X’ = optická xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, v úhlových xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : rýžový xxxxx
+ 195,4°: bramborový xxxxx
+ 184,6°: xxxxxxxxx xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: ječný xxxxx
+ 181,3°: xxxxxx xxxxx
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]X20° · (2 X · 0,665) (X - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, ve xxxxxxxx sacharimetru
N = xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx ve 100 xx vody, xxxxx xx xxx xxxxxxxx 200 xx xxxxxxxx xxxxxx 100 stupňů xxxxxxxxxxxx. Tato hmotnost xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:
16,29 g xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
20,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxx 40 % x 1 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx škrobu xxxxxxxxxxx xx nebo xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, uhličitany xxxx xxx před stanovením xxxxxxx xxxxxx zničeny xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 V xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxx laktózy, jako xx sušené mléčné xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, postupovat xx přidání 80 xx ethanolu (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, ponořit ji xx 30 minut xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 50 °X. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, jak je xxxxxxx x bodě 5.3.
2. STANOVENÍ XXXXXXX XXXXXXXX
1. Účel a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx mokra. Kyselý xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x shromáždí xx v xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx přebytek se xxxxxxx roztokem xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxx xxxxxxxx p.a.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx měďnatý XxX x.x. nebo síran xxxxxxx pentahydrát XxXX4 · 5X2X p.a., xxxx rtuť nebo xxxx xxxxxxxx XxX x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx xxxxx x.x.
3.4 Kyselina sírová x.x., d: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Kyselina xxxxxx 0,5 X.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx methylčerveně xx 100 xx 95-96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxx sodného.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,1 X.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,25 X.
3.11 Nasycený xxxxxx xxxxxx xxxxxxx p.a.
3.12 8 % (m/V) xxxxxx xxxxxxxxxx sodného, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x destilační xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1).
5. Postup
5.1 Mineralizace
Navážit 1 g vzorku x xxxxxxxxx na 1 xx a xxx ho xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 x xxxxxx draselného (3.1), xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 xx 0,4 x xxxxx xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 x xxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxx rtuti nebo 0,6-0,7 x oxidu xxxxxxxxxx), 25 ml xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x několik xxxxxxx xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx baňky. Zahřívat xxxxx, nejprve xxxxx x za xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx hmota xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx; xxxx zahřívat xxxxxxxxxxxx xxxxx kapalina xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx stěn baňky x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xx xxxxxx čirý x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, pokud xx použije xxxxxxxxxxx xx bázi xxxx), xxxxxxxx var xxxxx xxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x xx stálého xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 ml xxxx, aby se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx; xxxxxx xxxxxxxxxxx; xxxx xxxxxx několik xxxxxxx xxxxx (3.3).
Xxxxxx do xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,5 N (3.6) x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx obsahu dusíku (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx sběrné baňce xx xxxxxxx xxxxxxx 1 cm (xxx xxxxxxxx 7.3). Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx do xxxxx 100 ml 40 % roztoku xxxxxxxxx sodného (3.8). Xxxxx byl použit xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx, přidat do xxxxx rovněž xxx 10 xx roztoku xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx xx xx 30 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pomocí lakmusového xxxxxxx. Pokud je xxxxxx xxxxxxxxx, pokračovat x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx, pokud lakmusový xxxxxxx xxxxx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx destilace čas xx xxxx promíchat xxxxx xxxxxx baňky x xxxxxxxxx zbarvení. Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Titrace
Ve xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx sírové xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx použité xxxxxxxx sírové, dokud xx xxxxxxxx nezmění xx světle xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx účelem xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, se xxxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxx x xxxxxxx), x xx xxx xxxxxx, který xx xxx analyzován. Za xxxxxx xxxxxxxx správnosti xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx (mineralizace, xxxxxxxxx x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx x.x. (b.t. 114 °X; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 g xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 g xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kyseliny xxxxxx, 1 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx dusíku. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x jednoho vzorku xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx proteinů xxxxx než 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xxx 20 % a xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx pro obsah xxxxx xxx 40 %.
7. Poznámky
7.1 Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.
7.2 U xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx může xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N, xxxxx xx být xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx, xxxxxx xx 10 xx 15 ml a xxxxxxx xxxxx na 25 ml.
7.3 Xxxxx xxxx xxxxx destilační xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx hydroxid xxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx baňky tak, xxx xx xxxxxxxxxx x roztokem kyseliny.
3. XXXXXXXXX HRUBÝCH PROTEINŮ XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx proteinů xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx xx stanovených xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxx 48 hodin xxx 40 °X xxxxxxxx pepsinu v xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina chlorovodíková, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 x/xx xxxxxxx; xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x části 4 této xxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxx metodou.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx připravený xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx emulze (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxx 3 xxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx nebo inkubátor xxxxxxxxx na 40 °X ± 1 °X.
4.2 Mineralizační x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx roztoku (xxx xxxxxxxx 7.2)
Navážit 2 x vzorku x xxxxxxxxx na 1 xx x xxx xx xx xxxxxxx xxxxx o objemu 500 ml. Přidat 450 xx xxxxxxx xxxxxxx v kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °X. Xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxx, xx je xX suspenze xxxxx xxx 1,7. Vložit xxxxx xx vodní xxxxx nebo xxxxxxxxxx (4.1) a xxxxxx xx xxx 48 xxxxx. Xxxxxxxxx po 8, 24 x 32 xxxxxxxx. Xx 48 hodinách xxxxxx 15 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxx xx 20 °X, xxxxxxx po xxxxx xxxxx x filtrovat.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx s přesností xx 1 mg x xxx xx xx xxxxx destilační xxxxxxxxx (4.2). Přidat xxxxxxx nezbytná xxx xxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x metodě xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxx, ve xxxxx xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xx xxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx v xxxxxx xxxx, xxxxx se xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Snížit xxxxx x opatrně odstranit xxxxxxxx xxxxx xxxx.
Xxxx xx xxxxxx čirý x bezbarvý (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx na bázi xxxx), xxxxxxxx var xxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx x titrace
Postupovat, xxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Xxxxx pokus
Provést xxxxx xxxxx za xxxxxxx stejného xxxxxxx, xxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Odečíst xxxxx xxxxxxxx sírové xxxxxxxxxxxx během xxxxxxx xxxxxx od xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx zkušebním vzorkem. 1 ml kyseliny xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx množství xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx nesmí xxxxxxxxx:
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx nižší xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 20 % a nižší xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxx získané xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx souvislost se xxxxxxxxxxxxxx xx vivo.
7.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxx vyšším xxx 10 % musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °C).
4. XXXXXXXXX AKTIVITY XXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx rozpustných pepsinem x xxxxxxxxx chlorovodíkovou.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx se xxxxxx xx stanovených xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx trichloroctovou. Xx filtrátu xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x činidlo Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx tohoto xxxxxxx xx měří xxx 750 xx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx x kalibrační xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx za xxxxxxxx xxxxxx uvolní xx xxxxxx takové xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx činidlem Xxxxx-Xxxxxxxxx má xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx μmolu xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 N.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,025 N.
3.4 5 % roztok (x/X) xxxxxxxx trichloroctové.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxx 100 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 25 x molybdenanu xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2H2O) x 700 ml xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx x normalizovaným xxxxxxxx. Přidat 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) a 100 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19), xxxxxxxx baňku xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxx x udržovat xxxxxx x xxxxxx varu xx xxxx 10 xxxxx. Xxxxxx vychladnout, xxxxxxx zpětný xxxxxxx, xxxxxx 175 x xxxxxx xxxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 50 xx vody x 1 xx brómu. Xxxxx po xxxx 15 minut, aby xx xxxxxxxxx přebytek xxxxx.
Xxxxxx vychladnout. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x objemu 1 l, xxxxxxx xx rysku vodou, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx nazelenalé xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 objemy xxxx.
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx metody xxxxxxxxxxxxxx 354 xx dusíku [1] a xxx xx baňky o xxxxxx 200 ml x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx několik xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Xxxxxx baňku x xxxxxxxx pumpou x xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx vakuum x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx na 100 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx 181,2 mg xxxxxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx kyselinou (xxxxxxx xxxxxx). Odebrat 20 xx tohoto xxxxxxx x xxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxx ultratermostatem xx 25 °X + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, xxxxxxxx: 1 xxxxxxx.
4.4 xX xxxx.
5. Postup
5.1 Příprava xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Odpipetovat 2 xx xxxxxxx x xxx xx do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx x xxxxxxx po xxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). xX xxxxxxxxxxxx xX xxxxxx musí xxx 1,6+0,1. Ponořit xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Hydrolýza
Odpipetovat 5,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx lázni (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 x xxxxxxxxx asi xxxxxx xxxxxx tam x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zesílenou xx xxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx při 25 °X xxxxxx xx xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx xx přidání xxxxxxx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx musí xxx přesně xxxxxxxx). Xxxx xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °C, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxx, xxx ho do Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 50 ml, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 až 10 xxxxxxxx xxxxxxxx optickou xxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 750 nm x kyvetách x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxx x xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxx provést xxxxx xxxxx xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, zahřát xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx trichloroctové (3.4) předehřáté xx 25 °C, xxxxxxxxxxxxx x poté xxxxxx 1,0 ml roztoku xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx tyčinkou a xxxxxx xxxxxxxx přesně 10 xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx x postupu xxxxxxxx x xxxx 5.3.
5.5 Kalibrační xxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, x 5,0 ml xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku tyrosinu, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.1) xx 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx Folin-Ciocalteu (3.6). Xxxxxx optickou xxxxxxx xxx je uvedeno x xxxxxxxx xxxx xxxx 5.3. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxxxxx xxxxxx proti xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx x kalibrační xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x μmolech, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx pokusem.
Aktivita xxxxxxx x μmolech tyrosinu xx 1 xx x za jednu xxxxxx xxx 25 °X xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx xx xx (x/xx) = 0,32 a / x
xxx:
x = množství xxxxxxxx x μmol xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = množství xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx bodu 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Množství xxxxxxx, xxxxx xx xxx rozpuštěno, musí xxx xxxxxx, aby xxxx xxx konečném xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx xx xx xxxxxxx touto xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Ansonovovým xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx xxxxxxxx/xx xxx. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 komerčních xxxxxxxx/x (μxxxx xxxxxxxx/x xx 10 xxx. xxx 35,5 °X).
5. STANOVENÍ XXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx mouce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx látky xxxxxxxx. Xxxxxx hranice pro xxxxxxxxx xxxxxx xx 20 xxx.
2. Princip
Gossypol xx extrahován xx xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, x xx buď xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, nebo dimethylformamidem xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx anilinu přeměněn xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx 440 xx.
3. Činidla
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx isopropanolu x.x. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx n-hexanu.
3.2 Xxxxxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 l xxxxx xxx 500 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx ledové xxxxxxxx xxxxxx a 50 xx xxxx. Xxxxxxx xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je jeden xxxxx.
3.3 Rozpouštědlo B: xxxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 ml 2 xx 3-amino-1-propanolu x 10 ml ledové xxxxxxxx octové. Zchladit xx pokojovou teplotu x xxxxxxx xx xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx činidla xx xxxxx xxxxx.
3.4 Anilin x.x.: xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, destilovat xxxxxx xxxx zinkový xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Toto xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x hnědého xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxx X: do xxxxxxx xxxxx x objemu 250 xx xxx 27,9 xx octanu xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx a xxxxxxx xx rysku xxxxxxxxxxxxx A (3.2). Xxxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 ml 50 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxx xx 0,02 xx/xx. Před xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx dobu xxxxx xxxxxx xxx pokojové xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 50 xx xxx 27,9 xx xxxxxx gossypolu. Xxxxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx rozpouštědlem X (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,5 mg/ml.
Pokud xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X x X xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxx trvanlivost xx 24 hodin.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Mixér (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Zkušební xxxxxx
Xxxxxxxx zkušebního xxxxxx xxxxxx xx předpokládaném xxxxxx gossypolu xx xxxxxx. Xx výhodné xxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx zkušebního vzorku x relativně xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxxx xxx přesné xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx semenech, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorek xxxxx xxxxxxxxx 1 x; xxx krmné xxxxx xx xxxx xxx 5 g. Xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx alikvotní xxxx 10 xx xxxxxxxx; xxxx xx xxxxxxxxx 50 až 100 μx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx množství zkušebního xxxxxx xxxx xxx xxxx 0,5 a 5 x, xxx xxxxxxxxx část 2 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 40 až 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx vzorek do xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxx 250 ml, xxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx pipety xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx x jednu xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Filtrovat přes xxxxx filtr x xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx zakrýt xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx pipety xxxxxx do xxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x B) x xxxxxx 25 xx xxxxxx alikvotní xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx doplnit xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) xx 10 xx. Xxxx xxxxxxx xx rysku baňku (X) xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 10 xx rozpouštědla X (3.2) xx xxxx xxxxxx odměrných xxxxx (X a X) x objemu 25 ml. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (X) x (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx vytvořilo zbarvení. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx, doplnit po xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx jednu hodinu.
Stanovit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 440 xx x ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx hustotu xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx (X) porovnáním s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x xxxxxxxx hustotu xxxxxxx vzorku (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx pokus xx xxxxxxx hustoty xxxxxxx xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx). X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx je uvedeno x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 až 5 xx gossypolu do xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx x přidat 10 xx xxxxxxxxxxxx B (3.3). Xxxxxxxx připravit xxxxx pokus x xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx B (3.3) xx jiné odměrné xxxxx x xxxxxx 50 xx. Xxxxxxxx xxx xxxxx 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx 10 xx 15 xxxxx, xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx filtráty x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx pipety xxxxxx 2 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx odměrných xxxxx o objemu 25 ml a 2 ml xxxxxxxx xxxxxxx pokusu xx xxxx xxxxxx odměrných xxxxx x xxxxxx 25 ml. Xxxxxxx xx 25 ml xxxxx xxxxx baňky x xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx xx použijí xxxx referenční roztoky.
Přidat 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxx xxxxxx baněk. Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zchladit na xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx 25 ml xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), homogenizovat x xxxxxx xxxx xxxxx hodinu.
Stanovit optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodě 5.2. X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x bodě 6.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx buď xx xxxxxxx specifické xxxxxxx xxxxxxx (6.1), nebo xx základě kalibrační xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx specifické xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx optická xxxxxxx xxxx:
xxxxx gossypol: X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: X 1% / 1xx = 600
Xxxxx volného xxxx xxxxxxx obsah gossypolu xx xxxxxx se xxxxxxxx takto:
gossypol %: X · 1&xxxx;250 / E1%1cm ·&xxxx; · p · x
xxx:
X = opravená xxxxxxx hustota, stanovená xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2
p = xxxxxxxx vzorek x x
x = xxxxxxxxx xxxx filtrátu x xx
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxx xx pěti xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 xx. X xxxxx xxxxx xxxxxx pipetou 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx rozpouštědlem A (3.2) na 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxx slepého xxxxxx, směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) xx 25 ml.
Přidat xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx 30 minut xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, aby se xxxxxxxxx zbarvení. Zchladit xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxx 5.2 xxxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxxxxx série xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx roztoky referenční xxxxx. Xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx xxxxxxxx hodnot xxxxxxx hustoty xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (v μx).
6.2.2 Xxxxxxx gossypol
Připravit 6 xxxxxxxxx baněk x xxxxxx 50 xx. Xx první xxxxx xxxxxx xxxxxxx 10 xx rozpouštědla X (3.3) x xx ostatních 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx X (3.6). Xxxxxxx xxxxx xxxxx baňky xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx a xxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxx pipetou 2 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx x 6 xxxxxxxxx baňkách x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx obsah baněk xxxxx xxxxx xx 25 xx xxxxx x xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx xx každé xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 stanovit xxxxxxxx xxxxxxx standardní xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hustoty xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % relativní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx než 50 xxx,
- 75 ppm xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx obsah xxxxxx podle Kjeldahlovy xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx: 17,7 % xxxxxx).
XXXXXXX XX
1. XXXXXXXXX X IDENTIFIKACE TETRACYKLINOVÝCH XXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx antibiotika x xxxxxxxx, která xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
2. Princip
Vzorek xx extrahuje směsí xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx x referenčními roztoky. Xxxxxxxxxxx xxxx stanovena x identifikována xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx Xx x xxxxxxxxx standardních xxxxx, x xx xxx xxxxxxxxxxxx x XX xxxxxx (xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx), xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x.x. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
7,45 x |
|
Xxxxxx x.x. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X p.a. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx X: xxxx xxxxxxx nitromethanu/čistého xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím |
|
|
3.4 Xxxxxx XX směs xxxxxxx nitromethanu/čistého xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 objemově. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, d: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx látky: Chlortetracyklin, xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx, jejichž xxxxxxxx xx vyjádřena x chlorovodíku.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx suspenze xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xx xxxxxx podle xxxx 3.1. a 3.2. xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Kultivační xxxxxx [1]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 g |
|
Agar |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx upravit xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-triphenyltetrazolium xxxxxxxx x 5 % (x/X) roztok glukosy.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Zařízení pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografii (xxxxx xxxxxx 25 xx). Xxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxx (2440X xxxx 2043X) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 UV lampa xxx stanovení xxxxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx desky xxx 20 x 30 xx xxx xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx základě standardních xxxxx (3.8) a xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, jejichž xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Referenční xxxxxxx xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx pufrem (3.2) x cílem xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Referenční xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) s xxxxx získat xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx nižší xxx 10 xxx, xx xxxxx xxxxxx xxx homogenizovaný vzorek, xxxx xxxxxxxxxxx frakci xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx (3.5) a xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx ho xxxxx xxxx xx xxxxxxxx zředit xxxxx (3.5) x cílem xxxxxx koncentrace antibiotika xxx 100 μx xx 1 ml (6.1) a 5 μx na 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx do pufračního xxxxxxx, pH 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vtlačením xxxxxx xxxx listy xxxxxxx xxxxxxxxxxx papíru. Xxxx xxxxxxx na xxxxx 0,01 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) x xxxxxxxx (6.1 x 6.2). Xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx; xxxxx xx xx nutné, xxxxxx xxxxxx vyschnout.
Rozvinout xxxxxxxxx chromatografií. Xxxxxx xxxxxx I (3.3) xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx II (3.4) xxx stanovení XX xxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 15 až 20 cm (xxx 1 xxxxxx 30 xxxxx), přerušit chromatografii x xxxxxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx než 1 μx/xx2, xx možné xx ošetření xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx ozářením xxx XX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx bioautografií
Nalít xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), které xx xxxxxx xxxxxxxx X. cereus (3.9), xx xxxxxxxx desky (4.5) a xxxxxxx xxxxx xx kultivační xxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x položit xx xx jinou xxxxxx x kultivačním xxxxx, kde xxxxxxx xxxxx inkubační xxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotika xx xxxxxxx světlými xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx kultivačním xxxxx.
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xx inkubaci odpaří xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx Xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx uvedeny xxx. Xxxx hodnoty se xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx jakosti xxxxxx x jeho xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (XX) |
0,40 |
|
Xxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "xxx" sloučenin xx menší xxx xxxxxxxx normálních xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, OXYTETRACYKLINU X XXXXXXXXXXXX
X. XXXXXX XX AGARU
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x tetracyklin (XX) x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx je 5 xxx. Xxxxxx nižší xxx 5 ppm xxxxx být určeny xxxxxxxxx interpolací.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx zředěným formamidem. X xxxxxx xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx extrahuje xxxxx xxxxxxx, xxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx xxx stanovení XXX x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x TC.
Extrakty se xxxx zředí x xxxxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx měřením xxxxxx XXX, XXX xxxx XX xx xxxxxxxx médiu naočkovaném X. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný logaritmu xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus ATCC x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. xxxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx borité. Inkubovat xxxx xxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx suspenze spór
Smýt xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) za xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx solného xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 ml xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx modře x xxxxxxxx borité, xxxxx xxxxxxxxxxx agaru je 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 dní xxx 28 xx 30 °X, poté xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.6) xxxx, xx byla xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx sporulace, x homogenizovat. Xxxx xxxxxxxx se může x chladničce xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, které xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, ale xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx množství je xxxxxxx 0,2 a 0,3 xx na 1000 ml. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 50 xx 60 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení [2]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 ml |
|
Fosfátový xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (m/V) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % ethanolový xxxxxx methylenové modře |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx upravit xX na 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Na2HPO4 · 2X2X p.a. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) ethanol.
4.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx použitím a xxxxxxx xx pH 4,5 xx xxxxxxx xxxxxxxx sírové xxx 2 X.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: CTC, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx je vyjádřena x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg chlortetracyklinu-HCL xx 1 xx. Xxxxx roztok xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml. Xxxxxxx xx provede xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), do xxxxxxx xxxx xxxxxxx 0,01 % černě xxxxx [3].
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx pufru (4.3) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,05 |
μg/ml |
|
S1 |
0,025 |
μg/ml |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 xxxxxxxxx na základě xxxxxxxxx xxxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx oxytetracyklinu-HCL na 1 xx, standardní xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 1,6 μg xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx zásobního xxxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,0 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Obsahy xxxxx xxxx xxxxx než 50 ppm
Do zkušebního xxxxxx přidat xxxxxxxx (4.8) v množstvích xxxxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxx fosfátovým xxxxxx (4.3) xxxxx xxxxxx x tabulce s xxxxx získat xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx roztoku xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx čirý roztok. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Antibiotikum |
CTC |
OTC |
TC |
|||
|
Předpokládaný obsah x xxx |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Xxxxxxxx xxxxxx x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx formamidu (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
xxx. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx X8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Obsahy vyšší xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx antibiotika xx xxxxxx xxxx xx jeho xxxxxxx xxxxxx přidat xx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx 2 až 10 x 20xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx extrakce xxxx xxxxxx pH xxxxx xxx 3; pokud xx xx nutné, xxxxxxx pH xx 3 (x minerálních xxxxxxxxx xx xxxxxxx 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Odebrat xxxxxxxxx xxxx extraktu x xxxxxxx pH xx 5,5 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8,0 (4.4), za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxx se ze xxxxx xx xxxxxx). Xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), s cílem xxxxxx koncentraci X8 (xxx 6.1).
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx je uvedeno x xxxx 6.2.1 xxx, že xx xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x tloušťce xxx 2 xx. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x závislosti xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx difúzi xxxxxxx čtyřikrát x xxxxxx koncentrací, aby xxxxx xxxxxxxxx zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx misky xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr inhibičních xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zanesením xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, xxx křivky xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se vypočítá xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + U8 - S1 -X2 -X4 -X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - X1 -X2 -X1 -S2
Skutečná aktivita = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), oxytetracyklin (OTC) x xxxxxxxxxxx (XX) xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 1 x/xx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, která xx xxxxxx vzniknout xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx než xxxxxx xx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX xx xxxxxx xxxxxxxx směsí xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX x XX směsí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx poté xxxxx x jejich xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx světelné xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx naočkováno Xxxxxxxxxxxxxx aureus x xx kterého bylo xxxxxxx antibiotikum. Světelná xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxxxxxxxxx aureus X 14 [6]
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Staphylococcus xxxxxx xx xxxxxxxx x šikmým xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx xx přidá 1,5 xx 3 % xxxxx (xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Příprava očkovací xxxxx
24 hodin xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx přes noc xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx celou xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x asi 2 xx bazálního xxxxx (4.1) a xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx podmínek xx asi 100 xx stejného xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx 37 °C xxxxx růst xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx fáze (1x30 xx 2h).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Chlorid sodný |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
|
xX xx xxxxxxxxxxx: 6,8 až 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx pufr, pH 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 65/33/2 objemově.
4.5 Směs xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (m/V) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx látky: XXX, OTC, XX, xxxxxxx aktivita xx xxxxxxxxx x chlorovodíku.
5. Xxxxxxxxxx roztok
Na základě xxxxxxxxxx látky (4.7) x xx použití xxxxxxxx chlorovodíkové (4.3) xxxxxxxxx zásobní roztok, xxxxx koncentrace odpovídá 400 xx 500 μx XXX-XXX, XXX-XXX xxxx TC-HCL xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 x zkušebního xxxxxx. Xxxxxx asi 100 xx směsi (4.4) x protřepávat 30 xxxxx třepačkou. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Homogenizovat a xxxxxx xxxx.
6.2 Oxytetracyklin x xxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx standardních sérií x xxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2), tak, aby xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx dvou hodnot xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx podle xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) fosfátovým xxxxxx (4.2) s xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, jehož xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx CTC-HCL na 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx je xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx ředění xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Zředit extrakt (6.1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,12 μx XXX-XXX. Dát 1 ml xxxxxx xxxxxxx do xxxx xxxxxxxx a 0,75 xx (= 0,09 μx) xx dvou xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,6 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX na 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2), xxx xx uvedeno xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Koncentrace XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Zředit extrakt (6.2) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxx 1 xx xxxxxx roztoku xx xxxx zkumavek x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Doplnit objem xxxx jiných xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) s xxxxx získat xx xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v 5 xx kyvetě xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx ve 2 cm kyvetě xxx nastavení xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Očkování
Dát xx xxxxx zkumavky (7.1.1 nebo 7.1.2) 9 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx zkumavek musí xxx provedeno x xxxxxx, xxx xxxxxxxx xx sterilním xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx udržuje xx 37 °X + 0,1 °X. Xxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx (obecně 2h30 xx 3h). Xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx vstříknutím 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) xx xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx růstu
Změřit xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, xxxxxxx fotometr xx xxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx). X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx různých xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx použít xxxxxxx 2 xx x raději 5 xx kyvety.
8. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx křivku xx xxxxxxxxxxxx papíře xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx koncentracím xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech, x xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Princip
Vzorek se xxxxxxxxx zředěným xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx tris (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x jeho xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx, X 250 XX [8] (xxxxxxxxxxx vůči xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx rodičovského xxxxx
Xxxxxxxxx B. cereus xx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 ml. Xxxxxxxxx přes xxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx kulturu x chladničce a xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx na xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx suspenze xxxx
Xxxx bakterie xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) za xxxxxxx asi 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxxxx koncentrace xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 až 5 xxx při 28 xx 30 °X, xxxx smýt xxxxx 15 ml xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx byla xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx sporulaci, x xxxxxxxxxxxxx. Tato suspenze xx může x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nejméně 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx testy xx deskách xx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxxxx xxxxxx získat xxx různé xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxx xxxxxxxx je xxxxxxx 0,1 x 0,2 ml xx 1000 xx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 až 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
|
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,5. |
4.2 Bazální médium xxx xxxxxxxxx [10]
Médium (4.1) xxxxxxxx xx xX 8,8.
4.3 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx methanol
4.6 0,5 % (x/X) xxxxxx xxxx (hydroxymethyl) aminometanu x.x.
4.7 Xxxxxxxxx xxxxxx
|
Xxxxx xxxxxxxx |
50 ml |
|
Destilovaná xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (hydroxymethyl) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 x |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx oleandomycinu 100 μx/xx.
Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok S8 xxxxxxxxxx 0,1 μg xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx přidat xx xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx 2 až 10 g 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou.
Odstředit, odebrat xxxxxxxxx část xxxxxxxx x zředit xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 a U1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx o xxxxxx xxxxxxxxx, aby xxxx xxxxx udělat v xxxxxxxx médiu xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít xxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x plochých skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx do xxx xxxxxx odměřená množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x závislosti xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx vzorku opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x každou xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx při 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Pokud nedošlo x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 - S2 - X4 - S8) · 0,602 / X4 + U8 + S4 + X8 - X1 - X2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx provedených u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
4. STANOVENÍ XXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xX 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, x poté xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx antibiotická aktivita xx stanoví xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx lutea. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx xxxxx ATCC x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx zkumavky xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) upraveného xx xX 7,0. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx měsíc xx šikmý xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze
Smýt xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) za použití 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.4). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 hodin při 35 °C, poté xxxx xxxxxxxx za xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx trvanlivost xx xxxxx týden.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx použité koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx možné, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zóny. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx ad |
1000 xx |
Xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx7,0 x xx účelem xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný X2XXX4 x.x. |
16,730 g |
Destilovaná voda xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx pufr, xX 7
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Xxxxx methanol.
4.6 40 % (V/V) xxxxxxxx.
4.7 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx x xxxxx aktivitě.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °X xx vakuové xxxxxxx (5 xx rtuti). Xxxxxxx 10 xx 50 mg do xxxxxxx baňky, rozpustit x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxx fosfátovým xxxxxx, pH 7 (4.3) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μg/ml.
Na xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx rozředěním xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx tylosinu xx 1 xx.
Xxxx připravit xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7) xxxx koncentrace:
|
S4 |
1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,5 |
μg/ml |
|
S1 |
0,25 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx použít 10 x zkušebního vzorku; xxx xxxxxxx x xxxxxx 20 g xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx fosfátového xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, x homogenizovat 2 minuty (kuchyňský xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 ml xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxx extrakt a xxxxxx alikvotní xxxx xxxxx (4.7) x xxxxx získat předpokládanou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx použití xxxxx (4.7).
Xxx obsahy xxxxx xxx 10 xxx xxxxxxx extrakt do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 35 °X x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx stanovení (4.1) upravené na xX 8 xxx 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx v miskách xx použití čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx koncentrace standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x takové xxxxxxxxx, aby xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx médiu nejméně 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx očkovaného kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx 2 xx. Upřednostňuje xx použití misek xxxxxxxxxxxxx xx z xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx nebo plastovým xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx a x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx do xxx xxxxxx odměřená množství xxxxxxx antibiotika mezi 0,10 a 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx průměru xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x každou xxxxxxxxxxx, xxx každé stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx 35 xx 37 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx inhibičních xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zaznamenat xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout xxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 - X1 - X2 - X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx vzorku nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
5. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, koncentrátech x premixech. Spodní xxxxxxx pro stanovení xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Xxxxx 80". Xx odstředění xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx a xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Difúze xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea ATCC x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Sarcina xxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat xxxx xxx xxx asi 35 °C. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxx agarem (3.1) xx použití 2 xx 3 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx. Xxxxx se tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx trvanlivost xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x bazálním médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a činidla
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 g |
|
Masový extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 g |
|
Agar, xxxxx jakosti |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx použitím xxxxxxx xX na 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx voda xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 objemově.
4.6 0,5 % methanolového xxxxxxx "Xxxxx 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx látka: xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx standardní xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μg virginiamycinu xx 1 ml. Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 obsahující 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1+) za xxxxxxx xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Výrobky x xxxxxx virginiamycinu xxxxxx nebo xxxxxx xxx 50 ppm
Odebrat 10 až 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Odstředit xxxx xxxxxxxxx, odebrat 20 xx čirého xxxxxxx x xxxxxxx do xxxxx v rotačním xxxxxxxxxx. Rozpustit reziduum xx 20 xx xxxx xxxx xxxxx (4.5) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Poté xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 ml xxxxxxx (4.6) x protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx filtrovat, xxxx xxxxxx směsí (4.5) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Poté xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x U1, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) při 48 xx 50 °C xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx xxxxx xx provádí x xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř koncentrací xxxxxxxxxxxx roztoku (S8, X4, S2, S1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, U4, X2, X1).Xxxxx miska xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x takové xxxxxxxxx, xxx xxxx možné xxxxxx v agarovém xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxx kultivačního média (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx misek xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x dokonale rovným xxxxxxxxxx xxxx plastovým xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx množství roztoku xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 ml, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx při 35 xx 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 -X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Může být xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] Xxxx amido xxxxxx x označení xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxx).
[6] Xxxxx xxxx izolovaný x Xxxxx xxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx X. xxxxxx XXXX 6538 P.
[7] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[8] Xxxx xxxxxxxxx x Xxxxx xxxxx XXXX.
[9] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající xxxxxx výsledky.
[10] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[11] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.