Xxxxx Směrnice Xxxxxx
xx xxx 27. dubna 1972,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední kontrolu xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx směrnici Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv [1], x zejména xx článek 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx je xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx podle xxxxx odběru xxxxxx x analytických metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx směrnice Komise x. 71/250/EHS ze xxx 15. xxxxxx 1971 [2] x 71/393/XXX ze xxx 18. listopadu 1971 [3] xxx stanovily xxxx analytických metod Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx provedených xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx sérii xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem k xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, že xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxx škrobu, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, volného x xxxxxxxxx gossypolu, xxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx metod xxxxxxxxx x příloze X xxxx směrnice.
Obecná xxxxxxxxxx xxxxxxx x části 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx směrnice Xxxxxx x. 71/250/EHS ze xxx 15. června 1971, kterou xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx X xxxx směrnice.
Článek 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx úřední kontroly xxxxx, pokud jde x stanovení x xxxxxxxxxxxx tetracyklinových antibiotik, xxxxx x o xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx x virginiamycinu x xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku k xxxxxxx, xx použijí xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Článek 3
Členské xxxxx xxxxxx x účinnost xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1973. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxxxx Komisi.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu xxx 27. xxxxx 1972.
Xx Xxxxxx
xxxxxxxx
X. L. Mansholt
[1] Úř. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX I
1. STANOVENÍ XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx metoda
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxx xxxxxx x produktů xxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxx hmotnosti škrobu x xxxxxxxx, s xxxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx řepné xxxxx, xxxxxx pulpu, xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx (xxxx. xxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxxx) nebo xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx dvojité xxxxxxxxx. Xxx prvním xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx tepla xxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx. Xx čiření a xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxx optická rotace xxxxxxx.
Xxx druhém stanovení xx vzorek xxxxxxxxx 40 % ethanolem. Xx okyselení xxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou, xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx optická rotace xx xxxxxxxx podmínek xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx udává xxxxx xxxxxx ve vzorku.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) kyselina xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X x xx xxxxxxxxxxx 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx v 94 % (X/X) xxxxxxxx. 10 xx = 30,94 xx 0,1 X XxXX.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxx I: rozpustit xx xxxx 21,9 x octanu xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx II: xxxxxxxxx xx xxxx 10,6 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [K4(Fe(CN)6].3H2O. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, x: 0,948 xxx 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x objemu 250 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx chladičem.
4.2 Polarimetr xxxx sacharimetr.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx vzorek xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx prošel xxxxx x xxxxxxxx xxx x xxxxxxx 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx rotace (X xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x vzorku s xxxxxxxxx na 1 xx x xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx. Přidat 25 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx se zkušební xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx do xxxxxx xxxxx xxxxx a xx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Množství xxxx xx xxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxxxx, xxx x xx vložení xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxx varu. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx. Přesně xx 15 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx a xxxxx xxxxxxxx na 20 °C.
Přidat 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) x xxxxx minutu xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx roztoku XX (3.4) x xxxx xxxxx minutu xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat. Xxxxx xxxx xxxxxxx zcela xxxx (xxx je xxxxxx), opakovat xxxxxxxxx xx použití většího xxxxxxxx Xxxxxxxxx roztoku X a XX, xxxxxxxxx 10 ml.
Poté xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx optickou rotaci xxxxxxx x 200 xx trubici.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx rotace (X’ xxxx S’) xxxxx xxxxxxxxxxx xx 4 % ethanolu
Navážit 5 x vzorku s xxxxxxxxx na 1 xx, dát xx xx xxxxxxx xxxxx x objemu 100 xx x xxxxxx xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (viz xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx baňku xxxx xxxxx hodinu při xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx silně xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x ethanolem. Xxxxxxx xx xxxxx ethanolem (3.5), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x vzorku) do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x silně xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx zpětný xxxxxxx x xxxxxxx xx xx vroucí xxxxx xxxxx. Xxxxxx xx 15 minutách vyjmou Xxxxxxxxxxxxx baňku x xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx xxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 ml, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vodou x poté xxxxxxxx xx 20 °C.
Poté xxxxxxx za použití Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) x XX (3.4), xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, homogenizovat, xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx rotaci, jak xx xxxxxxx x xxxx 5.2 druhém x třetím xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx (%) se vypočítá xxxxx:
6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - X’) / [α]X20°
xxx xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, v úhlových xxxxxxxx.
X’ = optická xxxxxx látek rozpustných xx 40 % xxxxxxxx, x úhlových xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx xxxxx
+ 195,4°: xxxxxxxxxx škrob
+ 184,6°: xxxxxxxxx xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: xxxxx xxxxx
+ 181,3°: xxxxxx xxxxx
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx x směsi xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Xxxxxx sacharimetrem
Procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]D20° · (2 N · 0,665) (X - X’) / [α]D20°
Kde xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx sacharózy v xxxxxxx xx 100 xx vody, která xx při xxxxxxxx 200 mm optickou xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx podle xxxxxxxxxxxx:
16,29 x xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
20,00 x xxx smíšené xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (viz 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx škrobu xxxxx xxx 40 % x 1 xxxxxxxxx hodnoty pro xxxxx xxxxxx rovnajícího xx xxxx vyššího xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx než 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx zředěné kyseliny xxxxxx.
7.2 V xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxx laktózy, xxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, ponořit xx xx 30 minut xx xxxxx lázně x teplotě 50 °X. Nechat vychladnout x pokračovat x xxxxxxx, xxx je xxxxxxx v xxxx 5.3.
2. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx proteinů v xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx dusíku xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx mokra. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx sodného. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx, xxxxx přebytek se xxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx xxxxxxx XxX x.x. xxxx síran xxxxxxx xxxxxxxxxxx XxXX4 · 5X2X p.a., xxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxx XxX x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx zinek x.x.
3.4 Kyselina xxxxxx x.x., d: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx sírová 0,5 X.
3.7 Indikátor xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxxx xx 100 ml 95-96 % (X/X) ethanolu.
3.8 40 % (m/V) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N.
3.10 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Nasycený xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x.x.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx thiosíranu sodného, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx pemza, xxxxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 x vzorku x přesností na 1 xx a xxx ho xx xxxxx mineralizační xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 x xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 až 0,4 x xxxxx xxxxxxxxx nebo 0,9 xx 1,2 x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxx 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x několik granulí xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx xxxxx. Zahřívat xxxxx, nejprve mírně x xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx hmota xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx dokud kapalina xxxxxxxxxx xxxxx. Zabránit xxxxxxxx stěn baňky x přilnutí organických xxxxxx. Když xx xxxxxx čirý a xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx použije xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx hodinu, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Destilace
Opatrně x za stálého xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, xxx xx xxxxxxx zcela xxxxxxxxxx; xxxxxx xxxxxxxxxxx; xxxx xxxxxx několik granulí xxxxx (3.3).
Přidat do xxxxxx baňky xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx odměřené xxxxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) nebo 0,5 X (3.6) x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx obsahu xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx několik xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx baňku xx xxxxxxx xxxxxxxxxx aparatury x ponořit xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx baňce xx xxxxxxx nejméně 1 xx (xxx xxxxxxxx 7.3). Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx nalít xx xxxxx 100 xx 40 % roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx na bázi xxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxx 10 ml xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 ml xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx baňku xxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xx 30 minut xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx kapaliny. Xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xx xxxxxx alkalická, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxx xx xxxx promíchat xxxxx xxxxxx baňky x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx 0,1 N (3.5) nebo 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx sírové xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx světle xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx metody
Za xxxxxx xxxxxxxx, xxx činidla xxxxxxxxxx dusík, xx xxxxxxx slepý pokus (xxxxxxxxx x xxxxxxx), x to bez xxxxxx, který xx xxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (mineralizace, destilace x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx x.x. (x.x. 114 °X; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 g xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 ml xxxxxxxx sírové 0,5 X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx spotřebované xxxxxxxx xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx dusíku xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx procento vzorku.
Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx vyšší než 20 % a xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx pro obsah xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Je xxxxx použít xxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. V xxxxxxx případě xx xxxxxxx xxxx provést xxxx xxxxx.
7.2 U xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx může xxx objem xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X, xxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxx baňky, xxxxxx xx 10 až 15 ml x xxxxxxx xxxxx xx 25 xx.
7.3 Pokud xxxx xxxxx destilační xxxxxxxxx nálevku s xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x pomalu xxxxx kapalinu xx xxxxxxx baňky xxx, xxx se xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit frakci xxxxxxx proteinů xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx za stanovených xxxxxxxx. Metoda je xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx.
2. Princip
Vzorek se xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °C xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx pro stanovení xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 x/xx pepsinu; xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx v metodě xxxxxxx x xxxxx 4 této přílohy x xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x souladu x xxxxx xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), čerstvě připravený xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Všechna xxxxxxx xxxxxxx v xxxx 3 metody xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxx inkubátor xxxxxxxxx na 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx aparatura xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx roztoku (xxx xxxxxxxx 7.2)
Navážit 2 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx a xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x objemu 500 ml. Xxxxxx 450 xx xxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °X. Xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx. Xxxxxx, xx xx xX xxxxxxxx xxxxx xxx 1,7. Vložit xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx (4.1) x nechat xx xxx 48 xxxxx. Xxxxxxxxx xx 8, 24 x 32 xxxxxxxx. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxx 15 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), zchladit xx 20 °C, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx x filtrovat.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 ml xxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx ho xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx hrubých xxxxxxxx, ve xxxxx xxxx bodu 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xx varu. Xxxxx xx xxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx kapek xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx v silném xxxx, xxxxx se xxxx téměř xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x opatrně odstranit xxxxxxxx xxxxx xxxx.
Xxxx xx roztok xxxx x bezbarvý (xxxxxxxxxxxx, xxxxx se použije xxxxxxxxxxx xx bázi xxxx), udržovat xxx xxxxx další xxxxxx. Xxxxxx vychladnout.
5.3 Xxxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx bez xxxxxx, xxxxx xx být xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx sírové xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx objemu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. 1 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx množství xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Výsledek xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,4 absolutní xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro obsah xxxxx xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx hodnoty xxx obsah xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx nemají xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx.
7.2 Xxxxxxx x obsahu xxxx xxxxxx než 10 % xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx stanovení hrubých xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx se ošetří xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx kyselinou trichloroctovou. Xx xxxxxxxx se xxxxx hydroxid sodný x činidlo Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx hustota xxxxxx xxxxxxx se xxxx xxx 750 xx x odpovídající množství xxxxxxxx xx xxxxxx x kalibrační křivky.
Definice: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, které xx xxxxxxxx xxxxxx uvolní xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx činidlem Xxxxx-Xxxxxxxxx xx optickou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx optické xxxxxxx xxxxxxx μmolu xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,06 X.
3.3 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,025 X.
3.4 5 % xxxxxx (m/V) xxxxxxxx trichloroctové.
3.5 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxx 100 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (Na2WO4 · 2X2X), 25 x molybdenanu xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 xx xxxx xx dvoulitrové xxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Přidat 50 xx kyseliny fosforečné (x: 1,71) x 100 xx koncentrované xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19), xxxxxxxx xxxxx xx zpětný chladič, xxxxx xx xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxx xx dobu 10 xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxx 175 x xxxxxx xxxxxxxx (Li2SO4 · 2H2O), 50 xx xxxx x 1 xx xxxxx. Xxxxx xx dobu 15 xxxxx, xxx xx odstranil přebytek xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Přelít xxxxxx do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1 x, xxxxxxx xx rysku xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx nazelenalé xxxxxxxx. Před xxxxxxxx xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Roztok xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx množství xxxxxxxxxxx, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx substrátu podle Xxxxxxxx xxxxxx odpovídajícího 354 mg xxxxxx [1] x xxx xx xxxxx x xxxxxx 200 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx několik xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Xxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx vakuum x xx protřepávání xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx xx 100 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx: rozpustit 181,2 xx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x doplnit xx jednoho litru xxxxxxx kyselinou (zásobní xxxxxx). Odebrat 20 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) ve 100 ml. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μmol xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °X + 0,1 °C.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, xxxxxxxx: 1 sekunda.
4.4 xX xxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx a xxx xx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 ml x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.3). xX xxxxxxxxxxxx xX metrem xxxx xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx xx vodní xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, zahřát ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 x xxxxxxxxx asi xxxxxx pohyby xxx x zpět xxxxxxxxx xxxxxxxx zesílenou na xxxxxx xxxxx. Nechat xxxxxxxx ve xxxxx xxxxx xxx 25 °X xxxxxx xx xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pepsinu (xxxx x xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx). Xxxx xxxxxx 10,0 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °C, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx hustoty
Odpipetovat 5,0 xx filtrátu, xxx xx xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx protřepávání 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 xx 10 xxxxxxxx stanovit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 750 xx x kyvetách x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxx x xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx slepý xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, zahřát ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx kyseliny trichloroctové (3.4) předehřáté xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxx 1,0 ml xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.1. Promíchat xxxxxxxxx tyčinkou x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 10 minut ve xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx x filtrovat xxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x bodě 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx křivka
Do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, x 5,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tyrosinu, xxxxx odpovídá 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx roztokem xxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a xx xxxxxxx protřepávání 3,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx Folin-Ciocalteu (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx je xxxxxxx x poslední xxxx xxxx 5.3. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku x xxxxx bylo opraveno xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx pepsinu x μmolech xxxxxxxx xx 1 xx x xx xxxxx xxxxxx při 25 °X se xxxxxxxx xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx xx xx (x/xx) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxx xxxxxxxx z kalibrační xxxxxx;
x = množství xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Množství xxxxxxx, xxxxx má xxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx, xxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx získána xxxxxxx hustota 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx xx mg xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Ansonovovým xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx xxxxxxxx/xx xxx. xxx 35,5 °C) xxxx
36400 xxxxxxxxxx xxxxxxxx/x (μxxxx tyrosinu/g xx 10 min. xxx 35,5 °X).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxx gossypolu, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx příbuzné xxxxx x bavlníkových xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx obsahují. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xx 20 xxx.
2. Princip
Gossypol xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, a xx xxx směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, nebo dimethylformamidem xxx stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx anilinu přeměněn xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx 440 xx.
3. Xxxxxxx
3.1 Směs xxxxxxxxxxxx x xxxxxx: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx isopropanolu p.a. xx 40 objemovými xxxxxx x-xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1 x nalít xxx 500 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-amino-1-propanolu, 8 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 50 xx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx B: xxxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx a 10 ml xxxxxx xxxxxxxx octové. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu x doplnit xx xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx činidla xx xxxxx týden.
3.4 Xxxxxx x.x.: xxxxx optická xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx přes xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx skladuje v xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx lahvi x hnědého xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx roztok gossypolu X: do odměrné xxxxx o xxxxxx 250 xx dát 27,9 mg xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx rysku xxxxxxxxxxxxx A (3.2). Xxxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx 50 xx xxxxxx roztoku x doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxx xx 0,02 mg/ml. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx jedné xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Standardní roztok xxxxxxxxx X: do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Rozpustit x xxxxxxx xx xxxxx rozpouštědlem B (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx roztoku xx 0,5 mg/ml.
Pokud xxxx xxxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxx X a X xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx zkušebního xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx zkušebního xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 g; xxx xxxxx xxxxx xx xxxx být 5 x. Xx xxxxxxx případů xx xxxxxxxxxx alikvotní xxxx 10 xx xxxxxxxx; xxxx xx xxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Pro xxxxxxxxx celkového gossypolu xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxx 0,5 a 5 g, aby xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx obsahovala 40 xx 200 μx gossypolu.
Analýza xx xx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 20 °C.
5.2 Xxxxxxxxx volného gossypolu
Dát xxxxxxxx vzorek do xxxxxxx baňky xx xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxx 250 xx, xxxxx xxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx pipety xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx xxxxxx promíchávat v xxxxxx. Xxxxxxxxx přes xxxxx filtr x xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx baňce xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx zakrýt xxxxxxx x kohoutem hodinovým xxxxxxxx. Pomocí xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x B) o xxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx doplnit xxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) xx 10 xx. Xxxx doplnit xx xxxxx baňku (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx měření xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx pipety xxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2) xx xxxx jiných xxxxxxxxx xxxxx (X x X) o objemu 25 xx. Doplnit xx xxxxx xxxxx (X) směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx xxxx referenční xxxxxx xxx měření xxxxxxx xxx slepý xxxxx.
Xxxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (X) x (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx xxxxx, aby xx vytvořilo xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx jednu hodinu.
Stanovit xxxxxxxxxxxxxxxxx při 440 xx a xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx slepý pokus (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx s referenčním xxxxxxxx (A).
Odečíst optickou xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx od xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx hustota). X xxxx xxxxxxx vypočítat xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx uvedeno x bodě 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 xx 5 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 ml x xxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx B (3.3) xx jiné odměrné xxxxx o xxxxxx 50 ml. Xxxxxxxx xxx xxxxx 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu x doplnit xx xxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx 10 až 15 xxxxx, xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 2 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx dvou xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 xx x 2 xx filtrátu xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 25 xx. Doplnit xx 25 xx xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Tyto xxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) do xxxx xxxxxx xxxxx. Zahřívat 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx lázní, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zchladit na xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx 25 ml xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), homogenizovat x xxxxxx xxxx xxxxx hodinu.
Stanovit optickou xxxxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx je uvedeno x bodě 5.2. X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx obsah xxxxxxxxx xxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x xxxx 6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx může xxxxxxx xxx na xxxxxxx specifické xxxxxxx xxxxxxx (6.1), nebo xx xxxxxxx kalibrační xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx podmínek xx specifická xxxxxxx xxxxxxx xxxx:
xxxxx xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: X 1% / 1cm = 600
Xxxxx volného xxxx xxxxxxx xxxxx gossypolu xx xxxxxx se xxxxxxxx takto:
gossypol %: X · 1&xxxx;250 / E1%1cm · · p · x
xxx:
X = opravená xxxxxxx xxxxxxx, stanovená xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2
x = zkušební vzorek x x
x = xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x ml
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx křivky
6.2.1 Xxxxx gossypol
Připravit dvě xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 xx. X xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx rozpouštědlem X (3.2) na 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx první xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) xx 25 ml.
Přidat xx xxxxx baňky xxxxx xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx 30 minut xxx vroucí xxxxx xxxxx, aby se xxxxxxxxx zbarvení. Xxxxxxxx xx pokojovou teplotu, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), homogenizovat x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x bodě 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx standardní xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.2.2 Xxxxxxx gossypol
Připravit 6 xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Do xxxxx xxxxx xxxxxx pipetou 10 ml xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx X (3.6). Xxxxxxx xxxxx každé baňky xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 minut xxx xxxxxx vodní xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu, doplnit xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx a hexanu x promíchat.
Přidat pipetou 2 ml xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx x 6 xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xx 25 xx xxxxx x isopropanolu x xxxxxx (3.1) (referenční xxxxx).
Xxxxxx do každé xxxxx druhé xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx (standardní xxxxx).
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx hustotu xxxxxxxxxx xxxxx roztoků porovnáním x xxxxxxxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx série. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx množství xxxxxxxxx (x μx).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku xxxxx překročit:
- 15 % xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xx 500 xx 750 ppm,
- 10 % relativní xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Stanovit obsah xxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx obsah: 17,7 % xxxxxx).
XXXXXXX II
1. STANOVENÍ X IDENTIFIKACE XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx antibiotika x xxxxxxxx, která xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v porovnání x xxxxxxxxxxxx roztoky. Xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx porovnáním xxxxxx xxxxxx Rf x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, a xx xxx xxxxxxxxxxxx x XX xxxxxx (xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx), xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx.
3. Činidla
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Monohydrát xxxxxxxx xxxxxxxxx x.x. |
10,256 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Na2HPO4.2H2O x.x. |
7,45 x |
|
Xxxxxx p.a. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx X: xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx XX xxxx xxxxxxx nitromethanu/čistého xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 xxxxxxxx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx látky: Xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx x chlorovodíku.
3.9 Mikroorganismus: X. xxxxxx XXXX x. 11778
Xxxxxxxxx rodičovských xxxxx, xxxxxxxx suspenze xxxx x očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xx xxxxxx podle xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx chlortetracyklinu, xxxxxxxxxxxxxxx x tetracyklinu xxxxxx na agaru, xxx xx xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx upravit xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x 5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx pro xxxxxxxxxx papírovou chromatografii (xxxxx papíru 25 xx). Schleich x Xxxxxxx papír (2440B xxxx 2043B) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Inkubátor xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx asi 20 x 30 xx xxx xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx standardních xxxxx (3.8) x xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) fosfátovým xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 5 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx předpokládaný xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 xxx, xx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx frakci xxxxxxxxx proséváním, xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v této xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vzorek ve xxxxx (3.5) a xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx ho xxxxx xxxx ho xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 100 μx xx 1 xx (6.1) x 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Stanovení x xxxxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxxxx xxxxxxx, pH 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Poté xxxxxxx xx xxxxx 0,01 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) x xxxxxxxx (6.1 a 6.2). Xxx dobré xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx vlhkost; pokud xx to xxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx I (3.3) xxx stanovení bioautografií x xxxxxx XX (3.4) xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 15 xx 20 xx (xxx 1 hodina 30 xxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxx xx xxxxx antibiotika xxxxx xxx 1 μx/xx2, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx pod XX xxxxxx žluté xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), které xx xxxxxx naočkuje X. xxxxxx (3.9), xx xxxxxxxx xxxxx (4.5) a položit xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Po pěti xxxxxxxx kontaktu xxxxxxxx xxxxx x položit xx na jinou xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx přes noc xxx 30 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotika xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx zónami x xxxxxx xxxxxxxxxxx médiu.
K xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx Xx tetracyklinových xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx zde. Xxxx xxxxxxx se xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx jakosti xxxxxx x jeho vlhkosti:
|
Chlortetracyklin (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (TC) |
0,40 |
|
Oxytetracyklin (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "epi" xxxxxxxxx xx menší xxx xxxxxxxx normálních sloučenin.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X TETRACYKLINU
A. DIFÚZÍ XX XXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (TC) x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx jejich xxxxxxxxx je 5 xxx. Obsahy xxxxx xxx 5 xxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx interpolací.
2. Princip
U xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx formamidem. X xxxxxx vyšších xxx 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxx x kyseliny chlorovodíkové xxx xxxxxxxxx XXX x xxxxx methanolu x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x XX.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx CTC, XXX xxxx XX xx xxxxxxxx médiu naočkovaném X. cereus. Difúze xx xxxxxxx vytvořením xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný logaritmu xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx noc při xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 dní xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx ze zkumavky xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx solného xxxxxxx (4.5). Naočkovat xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx modře a xxxxxxxx borité, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 až 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 dní xxx 28 xx 30 °C, poté xxxx spóry 15 xx ethanolu (4.6) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx ověřena xxxxxxxxx, x homogenizovat. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x bazálním médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx množství očkovací xxxxx, které umožní xxxxxx xxx použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx největší xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,2 a 0,3 ml na 1000 xx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx při 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Kvasnicový xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, podle jakosti |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 xx |
|
Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.3 Fosfátový xxxx, pH 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Fosfátový xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2H2O p.a. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.8 70 % (V/V) xxxxxxxx: připravit xxxxxxx xxxx použitím x xxxxxxx xx pH 4,5 xx použití xxxxxxxx xxxxxx xxx 2 N.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (d: 1,19): 98/2 objemově.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: CTC, XXX, TC, jejichž xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x chlorovodíku.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx roztok, xxxxx koncentrace odpovídá 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx týden.
Na základě xxxxxx zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx chlortetracyklinu-HCL xx 1 xx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx 0,01 % černě xxxxx [3].
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx pufru (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Oxytetracyklin
Postupem xxxxx bodu 5.1 xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 μx oxytetracyklinu-HCL xx 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Tetracyklin
Postupem xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx základě zásobního xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,0 μx tetracyklinu-HCL xx 1 xx x xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,5 |
μg/ml |
|
S2 |
0,25 |
μg/ml |
|
S1 |
0,125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
6.1 Obsahy rovné xxxx xxxxx než 50 xxx
Xx zkušebního xxxxxx přidat xxxxxxxx (4.8) v množstvích xxxxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxx ihned xxxxxx fosfátovým xxxxxx (4.3) xxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxx xxxxxx koncentraci X8. Koncentrace xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxx překročit 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx dekantovat xxxxxxx x xxxxx xxxxxx čirý xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx obsah x xxx |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Xxxxxxxx vzorek x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx xxxxxxxxxxx pufru (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
řeď. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx X8 v μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xx xxxx výrobní xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx 2 xx 10 x 20xx xxxxxxx jeho objemu xxxxx (4.9). Protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx extrakce musí xxxxxx xX nižší xxx 3; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxxx pH xx 3 (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx za použití 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx pH xx 5,5 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně (xxxxxx xx ze xxxxx xx xxxxxx). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 5,5, zředěného 1/10 (4.3), s cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx X8 (xxx 6.1).
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1), xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx je xxxxxxx x bodě 6.2.1 xxx, xx se xxxx (4.9) nahradí xxxxx (4.10).
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Očkování kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx spór (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx na xxxxx se provádí x miskách za xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, S2, X1) x xxxx koncentrací xxxxxxxx (U8, X4,X2, X1). Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního roztoku x xxxxxxxx.
Xx tímto xxxxxx xxxxxx misky x takové xxxxxxxxx, xxx bylo možné xxxxxx x agarovém xxxxx nejméně 8 xxx o průměru 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), které se xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx asi 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití misek xxxxxxxxxxxxx se z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm a xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx při 28 xx 30 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací proti xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx křivky standardního xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + U8 - S1 -X2 -X4 -X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + S8 - X1 -X2 -X1 -S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. TURBIDIMETRICKY
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (XX) xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 1 x/xx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx rychlejší než xxxxxx na xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx obsahu XXX se xxxxxx xxxxxxxx xxxxx acetonu, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx xxxxxx OTC x TC xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx se poté xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultivačního média, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxx bylo xxxxxxx antibiotikum. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx závisí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x šikmým xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx xx xxxxx 1,5 až 3 % xxxxx (xxxxx xxxxxxx). Inkubovat xxxx xxx xxx 37 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx na xxxxx xxxx. Zároveň připravit xxxxxxxxxx xxx laboratorní xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx očkovací xxxxx
24 xxxxx před xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °C. Xxxxxxxxxxx celou kulturu xxxxxxxxx xx zkumavce xxxxx v xxx 2 ml xxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx podmínek xx asi 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx 37 °X xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (1x30 xx 2h).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Chlorid xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 g |
|
Dihydrogenfosforečnan draselný XX2XX4 x.x. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
xX xx xxxxxxxxxxx: 6,8 až 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 ml |
4.3 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx čistého xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (x/X) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Standardní xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx zásobní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 xx 500 μx XXX-XXX, XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xxxx 250 ml xxx 1 až 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx asi 100 xx xxxxx (4.4) x protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx fosfátovým xxxxxx, pH 4,5 (4.2). Homogenizovat x xxxxxx xxxx.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x tetracyklin
Do xxxxxxx xxxxx o objemu 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 g xxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx.
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx standardních sérií x xxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 4,5 (4.2), xxx, aby xxxxxxx série koncentrací. Xxx xxxxx xxxxxxxxx xx načrtne xxxxxxxxxx xxxxxx, ne xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx. Ředění se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Chlortetracyklin
Zředit xxxxxxxxxx xxxxxx (5) fosfátovým xxxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx XXX-XXX xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx uvedeno xxxx x ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx ředění dvakrát.
|
ml xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Zředit extrakt (6.1) za použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,12 μx XXX-XXX. Xxx 1 ml tohoto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) do xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx fosfátovým xxxxxx (4.2).
7.1.2 Oxytetracyklin a xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,6 μg XXX-XXX xxxx TC-HCL na 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx uvedeno xxxx a xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx ředění xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx pracovního roztoku |
ml xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Koncentrace XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx extrakt (6.2) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx XXX-XXX nebo XX-XXX xx 1 xx. Xxx 1 xx tohoto roztoku xx xxxx zkumavek x 0,5 xx (= 0,24 μg) xx dvou jiných xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx propustnost x 5 cm xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 xx kyvetě xxx nastavení xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx nenaočkovaného xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx každé xxxxxxxx (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 ml naočkovaného xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx zkumavek musí xxx xxxxxxxxx x xxxxxx, ale nezbytně xx sterilním xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx musí xxxxxxx xx vodní xxxxx, xxxxx teplota xx xxxxxxxx udržuje xx 37 °X + 0,1 °C. Xxxxxxxxx xxxx se xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx bylo možné xxxxxxxxx xxxxxx propustnosti, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx (xxxxxx 2x30 xx 3x). Poté xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx roztoku xxxxxxxxxxxx (4.6) do xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Měření růstu
Změřit xxxxxxxxxxx při 590 xx, přičemž xxxxxxxx xx nastaví xx 100 % propustnost xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx nejvyššímu obsahu xxxxxxxxxxx). Z xxxxxx xxxxxx rozdílů x xxxxxxxx xxxxxxx zkumavek xx xxxxxxxxxx použít xxxxxxx 2 xx x xxxxxx 5 xx xxxxxx.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx vzorku.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x jednoho vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx, x to xxxxxxx x přítomnosti xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx hranice pro xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx zředěným xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx tris (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx extrakt zředí x jeho xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx agarovém xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx přímo xxxxxx xxxxxxxxx koncentrace antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx, X 250 TR [8] (rezistentní xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Udržování rodičovského xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx odebraným x xxxxxxxxxxxx média (4.1) x přidat 100 μx oxytetracyklinu xx 5 ml. Xxxxxxxxx přes xxx xxx asi 30 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx xx šikmý xxxx.
3.2 Příprava xxxxxxxx xxxx
Xxxx bakterie ze xxxxxxxx se šikmým xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx xxx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.3). Naočkovat xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), jehož xxxxxxxxxxx xxxxx je 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 až 30 °X, xxxx smýt xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx byla mikroskopicky xxxxxxx sporulaci, a xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nejméně 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx médiem pro xxxxxxxxx (4.2) určit xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxxxx umožní xxxxxx xxx různé xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční zóny. Xxxx množství je xxxxxxx 0,1 x 0,2 xx na 1000 xx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 60 °X.
4. Kultivační média x xxxxxxx
4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxx rodičovského xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 až 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 ml |
|
Před xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,5. |
4.2 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [10]
Médium (4.1) upravené na xX 8,8.
4.3 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (V/V) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (x/X) xxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx x.x.
4.7 Xxxxxxxxx roztok
|
Čistý xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (hydroxymethyl) aminometan x.x. |
0,5 x |
4.8 Standardní xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx aktivitě.
5. Standardní xxxxxx
Xxxxxxxxx standardní xxxxx (4.8) x 5 xx methanolu (4.5) x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx koncentraci xxxxxxxxxxxxx 100 μx/xx.
Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx na 1 xx. Poté připravit xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx roztoku (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Extrakce
V xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx 2 až 10 x 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x zředit xxxxxxxx (4.6) s xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 0,1 μg xxxxxxxxxxxxx xx 1 ml (= U8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.2) při 60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx xxxxx se xxxxxxx v xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, S4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, U1). Každá xxxxx musí obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu.
Za xxxxx účelem vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx očkovacího xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx použít xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx o xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx sestávajících se x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx kroužkem o xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx odměřená xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx během 18 xxxxx xxx xxx 28 až 30 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit průměr xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx semilogaritmický xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx pomocí xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + S4 + X8 - X1 - X2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
4. STANOVENÍ XXXXXXXX
- xxxxxx na xxxxx -
1. Účel x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro stanovení xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xX 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, a xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón je xxxxx úměrný logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Sarcina xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) upraveného xx pH 7,0. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx asi 35 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx agar.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx (3.1) xx použití 2 až 3 xx fyziologického xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), upravit xx xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 hodin xxx 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x zředit xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx 75 % světelnou xxxxxxxxxxx xxx 650 nm.
Pokud xx xxxx suspenze xxxxxxxx v xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx deskách s xxxxxxxx médiem pro xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx největší možné, xxx ještě zřetelné xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
Za xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x přípravy xxxxxxxxxxx xxxxxxxx upravit xX xx7,0 a xx xxxxxx xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
16,730 g |
Destilovaná voda xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Fosfátový xxxx, xX 7
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Xxxxx methanol.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/čistý xxxxxxxx: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: tylosin o xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) 3 hodiny xxx 60 °X xx xxxxxxx xxxxxxx (5 xx xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 xx xx xxxxxxx baňky, xxxxxxxxx x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 7 (4.3) s cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μg/ml.
Na xxxxxxx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx rozředěním xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxx na 1 xx.
Xxxx připravit xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx směsi (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Extrakce
Pro xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx; xxx premixy x xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx xxxxxxxxxxx pufru, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxxxxxxxxxxx 2 xxxxxx (kuchyňský xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 minut, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxxxxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx alikvotní xxxx xxxxx (4.7) x xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, U2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx použití xxxxx (4.7).
Xxx obsahy nižší xxx 10 xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx při 35 °X a xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xx xX 8 při 48 xx 50 °X suspenzí xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x miskách xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, aby bylo xxxxx udělat x xxxxxxxx médiu xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 2 xx. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných desek x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx plastovým xxxxxxxx o xxxxxxx 200 xx x x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx do děr xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx vzorku opakovat xxxxxx nejméně čtyřikrát x každou xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx přes noci xxx 35 až 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zaznamenat xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zanesením xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxxxxxxxx zón. Xxxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vypočítá xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 - X2 - S4 -S8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - U2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. STANOVENÍ XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Xxxxxx xxxxxxx xxx stanovení xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se extrahuje xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Tween 80". Xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx stanoví xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx lutea. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx lutea ATCC x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Sarcina xxxxx xx zkumavky xx xxxxxx agarem x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx přes xxx xxx xxx 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx na xxxxx agar.
3.2. Příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Naočkovat xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 250 xx kultivačního xxxxx (4.1). Inkubovat 24 xxxxx xxx 35 °X, poté xxxx xxxxxxxx xx pomoci 25 xx fyziologického xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x zředit xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx asi 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx. Xxxxx se tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx trvanlivost xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx množství očkovací xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 až 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 6
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
8,0 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx fyziologický roztok.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 objemově.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Xxxxx 80" (x/X).
4.7 Standardní xxxxx: xxxxxxxxxxxxx x známé xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μg virginiamycinu xx 1 xx. Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx připravit xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1 μx virginiamycinu xx 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1+) xx xxxxxxx xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Extrakce
6.1 Výrobky x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 až 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 ml xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx 20 xx xxxxxx xxxxxxx x odpařit do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Rozpustit xxxxxxxx xx 20 ml xxxx xxxx xxxxx (4.5) x cílem xxxxxx předpokládanou koncentraci 1 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace U4, X2 a U1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx vyšším než 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx, přidat 100 ml xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 minut třepačkou. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxx zředit xxxxx (4.5) s xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 1 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1, xxx xx xxxxxxx x bodě 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze na xxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, S2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4, X2, U1).Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx misky x takové xxxxxxxxx, xxx xxxx možné xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x průměru 10 až 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx asi 2 xx. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx o průmětu 200 mm a xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx děr xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 ml, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxx koncentrací, aby xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx při 35 až 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx zón, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 -X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / U4 + U8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % relativní xxxxxxx.
[1] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[2] Může xxx použito jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[3] Xxxx xxxxx slouží x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx kruhy).
[6] Tento xxxx izolovaný x Xxxxx xxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx růst xxx X. xxxxxx XXXX 6538 X.
[7] Xxxx xxx použito xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx podobného složení x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Xxxx xxxxxxxxx x Xxxxx xxxxx XXXX.
[9] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx a dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Může xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx složení a xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[11] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Může xxx xxxxxxx jakékoli komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.