Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. dubna 1972,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x založení Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], x xxxxxxx xx článek 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx cílem xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx právními a xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx se xxxxxxx x složení xxxxx, xx provádějí podle xxxxx xxxxxx xxxxxx x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k tomu, xx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971 [2] a 71/393/XXX ze xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [3] již xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx na xxxx xxxxxxx provedených prací xx však nutné xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx jde x xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx proteinů, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx, volného a xxxxxxxxx xxxxxxxxx, jakož x x xxxxxxxx xxxxxxx, xx provádějí xxxxx metod popsaných x xxxxxxx X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) přílohy xxxxx směrnice Komise x. 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxx 1971, xxxxxx xx xxxxxxx analytické metody Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx pro metody xxxxxxx x xxxxxxx X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx x o xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, oxytetracyklinu, xxxxxxxxxxxx, oleandomycinu, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, se provádějí xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS ze xxx 15. června 1971, s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, se použijí xxx metody xxxxxxx x xxxxxxx II xxxx směrnice.
Článek 3
Členské státy xxxxxx x účinnost xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné pro xxxxxxxx souladu s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1973. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 27. xxxxx 1972.
Za Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Xxxxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
PŘÍLOHA I
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx metoda
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxx obsahují xxxxx xxxxx, řepnou xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, bramborovou xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. xxxxx x xxxxxx z xxxxxxxxxx) nebo škvarky.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx zahrnuje dvojité xxxxxxxxx. Při prvním xxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxx za tepla xxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx stanovení xx xxxxxx extrahuje 40 % xxxxxxxxx. Xx okyselení xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxx rotace xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx vynásobený známým xxxxxxxx xxxxx obsah xxxxxx xx xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) kyselina chlorovodíková, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N x za xxxxxxxxxxx 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx v 94 % (X/X) ethanolu. 10 ml = 30,94 ml 0,1 X XxXX.
3.3 Carrezův xxxxxx X: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x xxxxxx zinečnatého Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x xxxxxx kyseliny xxxxxx. Xxxxxxx vodou xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx roztok XX: xxxxxxxxx ve vodě 10,6 g xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Doplnit xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, d: 0,948 při 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 ml x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Polarimetr xxxx sacharimetr.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělnit vzorek xxxxxxx způsobem, aby xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxx x xxxxxxx 0,5 xx.
5.2 Stanovení celkové xxxxxxx xxxxxx (X xxxx X) (viz xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx a xxx xx xx odměrné xxxxx x xxxxxx 100 xx. Xxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx rozmístil x přidat xxxxxxx 25 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx xx vroucí xxxxx xxxxx x xx xxxx prvních xxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx lázeň na xxxx xxxx. Baňka xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx během xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx 15 minutách vyjmout xxxxx x xxxxx, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx x xxxxx zchladit na 20 °C.
Přidat 5 xx Xxxxxxxxx roztoku X (3.3) a xxxxx minutu xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx roztoku XX (3.4) x xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat. Pokud xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxx je xxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx většího xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X x XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx rotaci xxxxxxx x 200 xx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X’ xxxx X’) látek xxxxxxxxxxx ve 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx, dát ho xx odměrné xxxxx x objemu 100 xx a přidat xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx hodinu xxx xxxxxxxx teplotě x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx silně protřepat, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx dobře xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx rysku xxxxxxxxx (3.5), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 ml, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x silně xxxxxxxxx. Xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx chladič x xxxxxxx ji xx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) a II (3.4), xxxxxxx xx xxxxx vodou, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Obsah škrobu (%) xx xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Xxxxxx polarimetrem
procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - X’) / [α]X20°
xxx xx:
X = celková xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx.
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, x úhlových xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : rýžový xxxxx
+ 195,4°: xxxxxxxxxx škrob
+ 184,6°: xxxxxxxxx xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx škrob
+ 181,5°: ječný škrob
+ 181,3°: xxxxxx škrob
+ 184,0°: xxxxxxx druhy xxxxxx a xxxxx xxxxxx x krmných xxxxxxx
6.2 Měření xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]D20° · (2 X · 0,665) (X - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx rotace, ve xxxxxxxx sacharimetru
S’ = xxxxxxx xxxxxx látek xxxxxxxxxxx ve 40 % xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx sacharózy x xxxxxxx xx 100 xx xxxx, xxxxx xx při xxxxxxxx 200 mm optickou xxxxxx 100 stupňů xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:
16,29 x xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 g xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
20,00 x pro smíšené xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 0,4 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx škrobu xxxxx než 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx vyššího xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx více xxx 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx uhličitan xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxx před xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zničeny xx xxxxxxx příslušného xxxxxxxx zředěné xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 X případě xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, jako xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx sušené xxxxxxxxxx xxxxx, postupovat xx přidání 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Připojit xx Xxxxxxxxxxxxx baňku xxxxxx xxxxxxx, ponořit xx xx 30 minut xx xxxxx xxxxx x teplotě 50 °X. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x bodě 5.3.
2. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx xxxxxx stanoveného xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx mineralizuje xx xxxxx. Kyselý xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx a shromáždí xx x odměřeném xxxxxxxx kyseliny sírové, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Síran xxxxxxxx x.x.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx měďnatý XxX x.x. xxxx xxxxx xxxxxxx pentahydrát XxXX4 · 5H2O p.a., xxxx rtuť xxxx xxxx xxxxxxxx XxX x.x.
3.3 Granulovaný xxxxx x.x.
3.4 Xxxxxxxx sírová x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Kyselina xxxxxx 0,5 N.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx methylčerveně ve 100 xx 95-96 % (X/X) ethanolu.
3.8 40 % (m/V) xxxxxx hydroxidu xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx roztok xxxxxx xxxxxxx x.x.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx thiosíranu xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx a zpopelněná.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 mg x xxx ho do xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 x xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 xx 0,4 x xxxxx xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx nebo 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 ml xxxxxxxx sírové (3.4) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.13), promíchat xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx, nejprve mírně x za xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx hmota xxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxx; poté zahřívat xxxxxxxxxxxx dokud xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Když je xxxxxx xxxx a xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxx katalyzátor xx xxxx mědi), xxxxxxxx var xxxxx xxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Destilace
Opatrně x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 ml xxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxx rozpustily; xxxxxx xxxxxxxxxxx; poté xxxxxx několik xxxxxxx xxxxx (3.3).
Xxxxxx xx xxxxxx baňky xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxxx sírové 0,1 X (3.5) nebo 0,5 N (3.6) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx destilační xxxxxxxxx x xxxxxxx konec xxxxxxxx xx kapaliny xx sběrné xxxxx xx hloubky xxxxxxx 1 xx (xxx xxxxxxxx 7.3). Přes xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx nalít xx xxxxx 100 ml 40 % xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxx xxxxx, xxxxxx do xxxxx rovněž xxx 10 ml xxxxxxx xxxxxx sodného (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx sodného (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx takovým xxxxxxxx, aby xx xx 30 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx kapaliny. Xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx lakmusového xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx alkalická, xxxxxxxxxx x destilaci. Ukončit xxxxxxxxx, xxxxx lakmusový xxxxxxx xxxxx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx destilace xxx xx xxxx promíchat xxxxx xxxxxx xxxxx x pozorovat xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Titrace
Ve xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) x závislosti xx normalitě xxxxxxx xxxxxxxx sírové, xxxxx xx zbarvení nezmění xx světle žlutou.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxxxxx, zda xxxxxxx xxxxxxxxxx dusík, xx xxxxxxx xxxxx pokus (xxxxxxxxx x titrace), x to bez xxxxxx, který má xxx analyzován. Za xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx (mineralizace, destilace x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 g xxxxxxxxxxx x.x. (x.x. 114 °X; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 x acetanilidu xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx sírové 0,5 X.
6. Xxxxxxx výsledků
Stanovit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx sírové 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Výsledek vyjádřit xxxx xxxxxxxx vzorku.
Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x jednoho vzorku xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxxxx proteinů xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx vyšší než 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Poznámky
7.1 Xx xxxxx použít xxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x destilací. X xxxxxxx případě se xxxxxxx musí xxxxxxx xxxx ztrát.
7.2 X xxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxx dusíku může xxx xxxxx kyseliny xxxxxx 0,1 X, xxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxx xxxxx, snížen xx 10 xx 15 xx x xxxxxxx xxxxx xx 25 xx.
7.3 Xxxxx xxxx xxxxx destilační xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx hydroxid xxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxxxx baňky xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxx po xxxxxxx baňky xxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxx 48 hodin xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx dusíku xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina chlorovodíková, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 N.
3.3 2,0 j/mg xxxxxxx; xxxxxxxx pepsinu je xxxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 4 této xxxxxxx x musí být xxxxxxxxxxxx v souladu x touto metodou.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx připravený xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (např. xxxxxxx).
3.6 Všechna činidla xxxxxxx x bodě 3 xxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Vodní xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Mineralizační a xxxxxxxxxx aparatura xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx a xxx xx do odměrné xxxxx o objemu 500 ml. Xxxxxx 450 xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 40 °X. Xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx. Xxxxxx, že je xX suspenze nižší xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx do xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx (4.1) x nechat xx xxx 48 xxxxx. Xxxxxxxxx xx 8, 24 x 32 xxxxxxxx. Xx 48 hodinách xxxxxx 15 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxx xx 20 °X, xxxxxxx po rysku xxxxx x xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x dát xx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx hrubých xxxxxxxx, xx xxxxx xxxx bodu 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x uvést xx varu. Xxxxx xx xxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx v silném xxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Snížit ohřev x opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx.
Xxxx xx xxxxxx čirý x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx bázi xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx hodinu. Xxxxxx vychladnout.
5.3 Xxxxxxxxx x titrace
Postupovat, xxx xx uvedeno x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx proteinů x xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx vzorku, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx od xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorkem. 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx dusíku xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,4 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx nižší xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro obsah xxxxx než 20 % x nižší xxx 40 %,
- 0,8 absolutní xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Hodnoty xxxxxxx xxxxx xxxxxxx nemají xxxxxx souvislost xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx.
7.2 Xxxxxxx o xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 10 % xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (b.v. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX AKTIVITY XXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx proteinů xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx sodný x xxxxxxx Folin-Ciocalteu. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se xxxx xxx 750 nm x xxxxxxxxxxxx množství xxxxxxxx se xxxxxx x kalibrační křivky.
Definice: Xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx za xxxxxxxx xxxxxx uvolní xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx hydroxyarylových skupin, xxxxxxx xxxxxxxx činidlem Xxxxx-Xxxxxxxxx má xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 N.
3.2 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,025 X.
3.4 5 % xxxxxx (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Činidlo Folin-Ciocalteu. Xxx 100 x xxxxxxxxxx sodného (Xx2XX4 · 2H2O), 25 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 xx xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx s kulatým xxxx a normalizovaným xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) x 100 xx koncentrované xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19), xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxx x udržovat xxxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxx 10 xxxxx. Nechat xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxx 175 g xxxxxx xxxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 50 xx xxxx x 1 ml brómu. Xxxxx po xxxx 15 xxxxx, aby xx odstranil xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx odměrné xxxxx o xxxxxx 1 l, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx zůstat xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Roztok xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx 2 g xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxx xxxxxx odpovídajícího 354 xx dusíku [1] x dát xx xxxxx x xxxxxx 200 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx ml xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Xxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx, dokud xx xxxxxxxxxx zcela xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx xx 100 xx. Xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxx.
3.8 Standardní xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx 181,2 mg xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) a doplnit xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx tohoto xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx tohoto xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μmol xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Vodní xxxxx nastavená xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °C + 0,1 °C.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Stopky, přesnost: 1 sekunda.
4.4 xX xxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx xx 100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx x xxx ho do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 ml x doplnit xx xxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). xX kontrolované xX xxxxxx xxxx xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Hydrolýza
Odpipetovat 5,0 xx roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx získaného xxxxx bodu 5.1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx tam x xxxx skleněnou xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx 25 °X xxxxxx xx xxxx 10 minut, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx musí xxx přesně xxxxxxxx). Xxxx xxxxxx 10,0 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat xxxx xxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx hustoty
Odpipetovat 5,0 xx filtrátu, xxx xx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx protřepávání 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 xx 10 xxxxxxxx stanovit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx spektrofotometrem xxx 750 xx x xxxxxxxx o xxxxxxxx 1 xx x porovnání x xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx lázni (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxx xx 25 °X, homogenizovat x xxxx přidat 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx zkumavku xxxxxx 10 minut xx xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °C. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx x postupu xxxxxxxx v bodě 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx křivka
Do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, a 5,0 xx alikvotního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx tyrosinu. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.1) xx 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Folin-Ciocalteu (3.6). Xxxxxx optickou hustotu xxx je uvedeno x poslední větě xxxx 5.3. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx hustot xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x μmolech, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx pepsinu x μxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx x za xxxxx xxxxxx xxx 25 °X xx vypočítá xxxxx vzorce:
Jednotky xx xx (x/xx) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μmol xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx x mg xxxxxxx xxxxx xxxx 5.2.
7. Poznámky
7.1 Množství xxxxxxx, xxxxx má xxx rozpuštěno, xxxx xxx xxxxxx, aby xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx získána xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx xx mg xxxxxxx touto xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Ansonovovým xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx xxxxxxxx/xx min. xxx 35,5 °C) xxxx
36400 komerčních jednotek/g (μxxxx tyrosinu/g xx 10 xxx. při 35,5 °C).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX X CELKOVÉHO XXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx gossypolu, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx příbuzné xxxxx x bavlníkových xxxxxxxx, xxxxxxxxxx mouce a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx směsích, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu xx 20 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, x xx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx je xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx přeměněn xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx 440 xx.
3. Činidla
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu: xxxxxxx 60 objemových xxxxx xxxxxxxxxxxx x.x. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx x-xxxxxx.
3.2 Rozpouštědlo X: do xxxxxxx xxxxx x objemu 1 l nalít xxx 500 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-amino-1-propanolu, 8 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a 50 xx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx B: xxxxxxxxxxx xx odměrné xxxxx o xxxxxx 100 xx 2 xx 3-amino-1-propanolu x 10 ml xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou teplotu x doplnit xx xxxxx N,N-dimethylformamidem. Xxxxxxxxxxx xxxxxx činidla xx xxxxx xxxxx.
3.4 Anilin x.x.: xxxxx optická xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, destilovat xxxxxx xxxx zinkový xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx a posledních xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx několik xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx odměrné xxxxx x xxxxxx 250 xx xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx po rysku xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o objemu 250 xx 50 xx xxxxxx xxxxxxx x doplnit po xxxxx xxxxxxxxxxxxx A. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx je 0,02 xx/xx. Před xxxxxxxx nechat xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx xxx 27,9 mg xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx rozpouštědlem X (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx roztoku xx 0,5 mg/ml.
Pokud xxxx xxxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxx X a X chráněny xxxx xxxxxxx, jejich xxxxxxxxxxx xx 24 hodin.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 ot./mim.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx zkušebního xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx. Je výhodné xxxxxxxx s malým xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx velkou xxxxxxxxx částí xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pro přesné xxxxxxxxxxxx měření. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 x; xxx xxxxx směsi xx xxxx být 5 x. Ve xxxxxxx případů xx xxxxxxxxxx alikvotní xxxx 10 xx xxxxxxxx; xxxx xx obsahovat 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx gossypolu xx množství zkušebního xxxxxx xxxx xxx xxxx 0,5 a 5 x, aby xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx obsahovala 40 xx 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xx měla xxxxxxxx xxx pokojové teplotě xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 250 ml, xxxxx xxx xx xxxxxxx skleněnými xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx v xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx hrdlem. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx nálevku x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx do dvou xxxxxxxxx xxxxx (X x B) x xxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxx obsahujícího 50 xx 100 μg xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) xx 10 xx. Poté xxxxxxx xx rysku xxxxx (X) směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx.
Xxxxxx pipety přidat 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2) do xxxx xxxxxx odměrných xxxxx (X a X) x xxxxxx 25 ml. Xxxxxxx xx xxxxx baňku (X) xxxxx isopropanolu x hexanu (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx jako referenční xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) do xxxxx (X) x (X). Zahřívat 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx vytvořilo xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx po xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx a nechat xxxx jednu xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 440 xx a ve xxxxxxxxxx kyvetách x xxxxxxxx 1 cm xxxxxxxx hustotu xxxxxxx xxx xxxxx pokus (X) porovnáním s xxxxxxxxxxx roztokem (X) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx x referenčním xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx hustoty roztoku xxxxxx (= upravená xxxxxxx xxxxxxx). X xxxx hodnoty xxxxxxxxx xxxxx volného xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 až 5 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx x přidat 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx připravit xxxxx xxxxx x xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx B (3.3) xx jiné xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 ml. Xxxxxxxx xxx xxxxx 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx xxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Homogenizovat x nechat stát 10 až 15 xxxxx, poté filtrovat x xxxxxxxx filtráty x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 2 ml xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 25 ml a 2 xx filtrátu xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx odměrných xxxxx x xxxxxx 25 ml. Xxxxxxx xx 25 ml xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxx série xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4) do xxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx 25 ml xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodě 5.2. X xxxx hodnoty xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 6.
6. Xxxxxxx výsledků
Výpočet xxxxxxxx xx může xxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx (6.1), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xx stanovených xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx tato:
volný gossypol: X 1% / 1xx = 625
celkový xxxxxxxx: X 1% / 1xx = 600
Xxxxx volného nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1&xxxx;250 / X1%1xx ·&xxxx; · x · x
xxx:
X = xxxxxxxx xxxxxxx hustota, stanovená xxx xx xxxxxxx x bodě 5.2
x = xxxxxxxx xxxxxx x x
x = xxxxxxxxx xxxx filtrátu x xx
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx křivky
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxx po pěti xxxxxxxxx baňkách o xxxxxx 25 xx. X xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.5). Doplnit xxxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) na 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxx slepého xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx po xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), homogenizovat x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxx 5.2 xxxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxxxxx série xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx referenční xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxx xxxxxxx hustoty xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (v μx).
6.2.2 Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx 6 xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Do xxxxx xxxxx xxxxxx pipetou 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.6). Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx na xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxx pipetou 2 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx o 6 xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xxxxx baněk xxxxx xxxxx na 25 xx xxxxx x isopropanolu a xxxxxx (3.1) (referenční xxxxx).
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx druhé xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu, doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), homogenizovat a xxxxxx stát jednu xxxxxx (standardní xxxxx).
Xx xxxxxxxx uvedených x xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx standardní xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x odpovídajícími xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx optické xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx gossypolu (x μg).
6.3 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení provedených x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx než 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx: 17,7 % xxxxxx).
XXXXXXX XX
1. XXXXXXXXX X IDENTIFIKACE TETRACYKLINOVÝCH XXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, x koncentrátech x premixech.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v porovnání x xxxxxxxxxxxx roztoky. Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x identifikována xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx Xx x xxxxxxxxx standardních xxxxx, x to xxx xxxxxxxxxxxx x XX xxxxxx (xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx), xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx B. xxxxxx.
3. Činidla
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx p.a. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Na2HPO4.2H2O p.a. |
7,45 x |
|
Xxxxxx p.a. |
300 ml |
|
Destilovaná xxxx ad |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx X: směs xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx XX xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx chroroformu/α-pikolinu: 20/10/3 xxxxxxxx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx čistého methanolu/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Chlortetracyklin, xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
3.9 Mikroorganismus: X. xxxxxx ATCC x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x očkování xxxxxxxxxxxx média: xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Kultivační xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 g |
|
Agar |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (m/V) xxxxxx 2,3,5-triphenyltetrazolium xxxxxxxx x 5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx pro xxxxxxxxxx papírovou xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxx 25 xx). Xxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxx (2440B xxxx 2043X) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Odstředivka
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx asi 20 x 30 xx xxx bioautografii.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx roztoky xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) s xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μg chlortetracyklinu-HCL, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a tetracyklinu-HCL xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 xxx, xx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx x této xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx (3.5) a xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxx xx xxxxxxxx zředit xxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika xxx 100 μg xx 1 xx (6.1) x 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x identifikace
7.1 Chromatografie
Ponořit xxxxx xx pufračního xxxxxxx, pH 3,5 (3.1). Odstranit přebytek xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx suchého xxxxxxxxxxx papíru. Xxxx xxxxxxx xx papír 0,01 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) x extraktu (6.1 x 6.2). Xxx dobré oddělení xxxx xxx papír xxxxxxxx xxxxxxx; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Použít xxxxxx X (3.3) xxx xxxxxxxxx bioautografií x eluent XX (3.4) xxx xxxxxxxxx XX světlem. Xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx dosáhne xxxxx 15 xx 20 xx (asi 1 xxxxxx 30 xxxxx), přerušit xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx papír.
7.2 Xxxxxxxxx XX světlem
Když xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 1 μx/xx2, xx možné xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx amoniaku (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx XX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx kultivační xxxxxx (3.10), xxxxx xx předem xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx xxxxxxxx xxxxx (4.5) a položit xxxxx xx kultivační xxxxxx. Xx pěti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x položit xx xx xxxxx xxxxxx x kultivačním xxxxx, kde zůstane xxxxx xxxxxxxxx doby. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx světlými xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx.
X xxxxxx chromatogramu xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (3.11) na xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx Xx tetracyklinových xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx. Xxxx xxxxxxx se xxxxx mírně xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxx vlhkosti:
|
Chlortetracyklin (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (XX) |
0,40 |
|
Xxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "xxx" sloučenin xx xxxxx než xxxxxxxx xxxxxxxxxx sloučenin.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX
X. XXXXXX XX XXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), oxytetracyklin (XXX) x tetracyklin (XX) x xxxxxxxx, koncentrátech x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Xxxxxx xxxxx xxx 5 xxx xxxxx být určeny xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx rovných xxxx xxxxxxx než 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx zředěným xxxxxxxxxx. X xxxxxx vyšších xxx 50 xxx xx xxxxxx extrahuje xxxxx xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové xxx xxxxxxxxx XXX x xxxxx xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x XX.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx měřením xxxxxx CTC, OTC xxxx XX xx xxxxxxxx médiu naočkovaném X. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx vytvořením xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x přeočkovat xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx suspenze xxxx
Xxxx xxxxxxxx ze zkumavky xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 až 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 ml xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx borité, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Inkubovat 3 xx 5 dní xxx 28 xx 30 °C, poté xxxx spóry 15 xx ethanolu (4.6) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx se může x chladničce xxxxxxxxx xxxxxxx 5 měsíců.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxxxx množství xxxxxxxx xxxxx, které umožní xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx největší xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxx xxxxxxxx je xxxxxxx 0,2 a 0,3 xx xx 1000 ml. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 50 xx 60 °C.
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Bazální médium xxx stanovení [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, podle jakosti |
10 xx 20 g |
|
"Tween 80" |
1 xx |
|
Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % ethanolový xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx pufr, pH 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Xx2XXX4 · 2H2O x.x. |
6,947 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Fosfátový xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Na2HPO4 · 2X2X x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: xxxxxxxxx čerstvý xxxx použitím x xxxxxxx na xX 4,5 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx 2 X.
4.9 Směs xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (d: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxxx zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx. Xxxxxxx xx provede za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, zředěného 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx 0,01 % černě xxxxx [3].
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,05 |
μg/ml |
|
S1 |
0,025 |
μg/ml |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, standardní xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 připravit xx základě zásobního xxxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,0 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx než 50 xxx
Xx xxxxxxxxxx xxxxxx přidat xxxxxxxx (4.8) v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3) xxxxx odkazů x tabulce x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx roztoku xxxxx překročit 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx dekantovat xxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x ppm |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Zkušební vzorek x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx fosfátového xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
řeď. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx U8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Obsahy xxxxx xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx antibiotika xx xxxxxx xxxx xx xxxx výrobní xxxxxx přidat do xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 xx 10 x 20xx xxxxxxx jeho xxxxxx xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx musí xxxxxx pH xxxxx xxx 3; pokud xx to nutné, xxxxxxx pH xx 3 (u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Odebrat xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx pH na 5,5 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxx se ze xxxxx xx modrou). Xxxxxx za použití xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 5,5, zředěného 1/10 (4.3), s cílem xxxxxx koncentraci X8 (xxx 6.1).
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, U2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.2.1 xxx, že xx xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Očkování kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxx 50–60 °C xxxxxxxx spór (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx na xxxxx xx provádí x xxxxxxx za xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, X1) x xxxx koncentrací xxxxxxxx (X8, U4,U2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx misky x takové xxxxxxxxx, xxx xxxx možné xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx asi 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx o průměru 200 xx x xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx xxx xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, aby xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 hodin xxx xxx 28 xx 30 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx zón. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, xxx křivky xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx relativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 -X2 -X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + S8 - X1 -X2 -X1 -X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná aktivita x xxxxxxxxx aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx nesmí překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. TURBIDIMETRICKY
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (TC) xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 1 g/kg, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx matným xxxxxxxxx. Xxxx metoda xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX se vzorek xxxxxxxx xxxxx acetonu, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX x TC xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx účinek xx xxxxxxx měřením xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx aureus x xx xxxxxxx bylo xxxxxxx antibiotikum. Světelná xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxxxxxxxxx aureus K 14 [6]
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx zkumavky x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx xx xxxxx 1,5 až 3 % xxxxx (podle xxxxxxx). Inkubovat xxxx xxx při 37 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Příprava xxxxxxxx xxxxx
24 hodin před xxxxxxxx přeočkovat xxxxx xxxx subkulturou x xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °C. Xxxxxxxxxxx celou kulturu xxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxx x xxx 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx sterilních xxxxxxxx xx xxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat xx vodní lázni xxx 37 °X xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmické xxxx (1x30 až 2x).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [7]
|
Pepton |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Chlorid sodný |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
1,32 g |
|
Hydrofosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
xX po sterilizaci: 6,8 až 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx čistého xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Směs xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (x/X) roztoku xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx látky: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxx látky (4.7) x za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 xx 500 μx XXX-XXX, XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 ml. Tento xxxxxx xx xxxxxxxx x chladničce jeden xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 200 xxxx 250 xx dát 1 až 2 x zkušebního xxxxxx. Xxxxxx asi 100 xx xxxxx (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx rysku xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x tetracyklin
Do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xxxx 250 xx dát 1 xx 2 g xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx fosfátovým xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx.
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x extraktu
Zředit standardní xxxxxx (5) a xxxxxxx (6) fosfátovým xxxxxx, xX 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx stanovení xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx interpolace xxxxxxx dvou hodnot xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx podle podmínek xxxxx kmene, které xx mohou xxxxx xxxxxxxxx od xxxxxxxxxx. Xxxxxx se postupuje xxxxx:
7.1.1 Chlortetracyklin
Zředit xxxxxxxxxx xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx XXX-XXX xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx je uvedeno xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Koncentrace XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx extrakt (6.1) xx použití xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,12 μx CTC-HCL. Xxx 1 ml tohoto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) do xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxx xxxx jiných xxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,6 μg OTC-HCL xxxx XX-XXX na 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx je uvedeno xxxx x xx xxxxxxxxxx určených xxx xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.2) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxx 1 xx tohoto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,5 ml (= 0,24 μg) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx jiných xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx získat na xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x 5 cm xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx propustnost xx 2 xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx aparatury xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bazálního xxxxx (4.1).
7.3 Očkování
Dát xx xxxxx xxxxxxxx (7.1.1 nebo 7.1.2) 9 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx zkumavek xxxx xxx provedeno x xxxxxx, ale xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, jejíž teplota xx mícháním xxxxxxx xx 37 °C + 0,1 °X. Xxxxxxxxx doba xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx gradient xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx (xxxxxx 2x30 xx 3h). Poté xxxxxxxx další xxxxx xxxxxxx vstříknutím 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) xx každé xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx xxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, xxxxxxx fotometr xx xxxxxxx xx 100 % propustnost xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx). X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 2 xx x xxxxxx 5 xx kyvety.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx xx milimetrovém xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx propustností xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx propustnosti extraktu. Xxxxxxxx xxxxx antibiotika xx xxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx v krmivech, xxxxxxxxxxxxx x premixech, x to xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx extrakt xxxxx x xxxx antibiotická xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx difúze oleandomycinu xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx B. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx inhibičních xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: B. cereus, X 250 TR [8] (rezistentní xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. xxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx odebraným x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) a přidat 100 μg xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx xxx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 až 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx byla xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx sporulaci, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx suspenze xx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nejméně 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx xxx různé použité xxxxxxxxxxx oleandomycinu xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,1 x 0,2 xx xx 1000 ml. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média se xxxxxxx při 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxx xxx udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
Xxxx použitím xxxxxxx xX na 6,5. |
4.2 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [10]
Médium (4.1) upravené na xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (x/X) xxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx x.x.
4.7 Xxxxxxxxx roztok
|
Čistý xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 x |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: oleandomycin x xxxxx aktivitě.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x zředit roztokem (4.6) s cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 μx/xx.
Xx základě xxxxxx zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx (4.6) standardní xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx roztoku (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Extrakce
V xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx oleandomycinu ve xxxxxx přidat xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 xx 10 x 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 0,1 μg xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace U4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X xxxxxxxx spór (3.2).
7.2 Příprava misek
Difúze xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx použití čtyř xxxxxxxxxxx standardního roztoku (X8, X4, X2, X1) a čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx koncentrace standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx účelem xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 mm. Xxxxxxxxx xxxxxxxx očkovacího xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx získání stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx sestávajících xx x plochých xxxxxxxxxx xxxxx x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx odměřená množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x každou xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx během 18 xxxxx xxx při 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zaznamenat xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, obě xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + U4 + X8 - X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro stanovení xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xX 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxx xx xxxxxxxxx methanolem. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx antibiotická xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx z kultivačního xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °X. Skladovat xxxxxxx x chladničce a xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze
Smýt xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx použití 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Naočkovat xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), xxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, poté xxxx bakterie za xxxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v chladničce, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx možné, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx při 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 ml |
Za xxxxxx udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx x přípravy xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx7,0 a xx účelem xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Fosfátový xxxx, xX 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Fosfátový pufr, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda ad |
1000 xx |
4.4 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Xxxxx methanol.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Xxxx fosfátového xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Standardní xxxxx: tylosin x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) 3 hodiny xxx 60 °X xx vakuové xxxxxxx (5 xx rtuti). Xxxxxxx 10 až 50 mg do xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxx roztok xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 7 (4.3) x xxxxx xxxxxx koncentraci xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μg/ml.
Na xxxxxxx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) standardní xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 1 ml.
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x zkušebního vzorku; xxx premixy x xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, x homogenizovat 2 minuty (xxxxxxxxx xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 ml xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxxxxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxx extrakt x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx (4.7) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7).
Xxx obsahy xxxxx xxx 10 xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 35 °X x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxxxxxxx xx xX 8 xxx 48 xx 50 °X xxxxxxxx bakterií (3.2).
7.2 Příprava misek
Difúze xx agaru xx xxxxxxx x xxxxxxx xx použití xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, X1) a čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a extraktu.
Za xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x takové xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 děr x xxxxxxx 10 xx 13 mm. Xxxxxxxxx xxxxxxxx očkovaného xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití misek xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx o průměru 200 xx x x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx každé stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx 35 až 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx na semilogaritmický xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx zón. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx relativní xxxxxxxx xx vypočítá pomocí xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + U8 - X1 - X2 - X4 -X8) · 0,602 / X4 + U8 + S4 + X8 - X1 - X2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
- difúzí na xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, koncentrátech x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx stanovení xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxx roztokem "Xxxxx 80". Xx xxxxxxxxxx xxxx filtraci se xxxxxxx xxxxx a xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Difúze xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Sarcina xxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat xxxx xxx xxx asi 35 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každých 14 dní na xxxxx xxxx.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze
Smýt bakterie xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoku (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 250 xx kultivačního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx s cílem xxxxxx xxx 75 % světelnou propustnost xxx 650 nm. Xxxxx se xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx týden.
Předběžnými xxxxx na xxxxxxx x xxxxxxxx médiem xxx stanovení (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx zřetelné xxxxxxxxx xxxx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
8,0 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx voda xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 Xxxxx methanol.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Xxxxx 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) obsahující 800 μx virginiamycinu xx 1 xx. Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx směsí (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1+) xx xxxxxxx xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Výrobky x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx nižším xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Odstředit nebo xxxxxxxxx, odebrat 20 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 xx xxxx xxxx xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 1 μx virginiamycinu xx 1 ml (= U8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx o obsahu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 x xxxxxxxxxx vzorku, xxxxxx 100 ml xxxxxxx (4.6) x protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxx zředit xxxxx (4.5) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) při 48 xx 50 °X xxxxxxxx bakterií (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se provádí x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (S8, X4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4, X2, U1).Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo možné xxxxxx v agarovém xxxxx nejméně 8 xxx x průměru 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního média (7.1), xxxxx se xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstvy x tloušťce asi 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx se z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x dokonale rovným xxxxxxxxxx nebo plastovým xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx xxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 ml, x závislosti na xxxxxxx xxx.
X každého xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx při 35 až 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 -S1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / U4 + X8 + X4 + S8 - X1 - X2 - X1 - S2
Skutečná aktivita = předpokládaná aktivita x relativní aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Může xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] Xxxx amido xxxxxx x označení xxxxxxxxxxx xxx standardních roztoků (xxxxx xxxxx).
[6] Xxxxx xxxx xxxxxxxxx v Xxxxx xxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx S. xxxxxx XXXX 6538 X.
[7] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Kmen xxxxxxxxx x Kielu podle XXXX.
[9] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení a xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[11] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.