Xxxxx Xxxxxxxx Komise
ze xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxx kontrolu xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx směrnici Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx krmiv [1], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx směrnice;
vzhledem x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx stanoví, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x složení xxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx směrnice Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971 [2] x 71/393/XXX ze dne 18. listopadu 1971 [3] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx; xx s xxxxxxx na xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx prací xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx jde x xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx proteinů, hrubých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x o aktivitu xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx popsaných x příloze X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Komise x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské státy xxxxxxx, xx analýzy xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotik, xxxxx i x xxxxxx chlortetracyklinu, oxytetracyklinu, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, tylosinu x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx metod popsaných x xxxxxxx II xxxx směrnice.
Obecná xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx směrnice Xxxxxx x. 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx II xxxx směrnice.
Xxxxxx 3
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1973. Xxxxxxxxxx x xxxx informují Xxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx dne 27. xxxxx 1972.
Xx Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Mansholt
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX X
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx metoda
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx, s xxxxxxxx xxxx krmiv, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, řepnou pulpu, xxxxxx xxxxx skrojky xxxx listy, xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. xxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx zahrnuje dvojité xxxxxxxxx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx vzorek xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx stanovení xx vzorek xxxxxxxxx 40 % xxxxxxxxx. Xx okyselení xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, čiření x xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx stejných xxxxxxxx xxxx xxx prvním xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx dvěma xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx chlorovodíková, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx roztoku hydroxidu xxxxxxx 0,1 N x xx xxxxxxxxxxx 0,1 % (m/V) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (X/X) xxxxxxxx. 10 xx = 30,94 xx 0,1 X NaOH.
3.3 Carrezův xxxxxx X: rozpustit xx vodě 21,9 x xxxxxx zinečnatého Xx(XX3XXX)2.2X2X a 3 x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx II: xxxxxxxxx xx xxxx 10,6 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, x: 0,948 xxx 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Erlenmeyerova xxxxx x xxxxxx 250 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx vzorek xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxx x průměru 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx a dát xx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 ml. Přidat 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), protřepat, xxx xx zkušební xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx xx vroucí xxxxx xxxxx a xx xxxx prvních xxx xxxxx silně x pravidelně protřepávat, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx hrudek. Xxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxxxx, xxx i xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx 15 minutách xxxxxxx xxxxx x lázně, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx a xxxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx roztoku X (3.3) x xxxxx minutu xxxxxxxxxxx. Xxxx přidat 5 xx Xxxxxxxxx roztoku XX (3.4) a xxxx xxxxx minutu xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx vodou, homogenizovat x filtrovat. Xxxxx xxxx filtrát xxxxx xxxx (xxx xx xxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X a XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x 200 xx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx rotace (P’ xxxx S’) xxxxx xxxxxxxxxxx xx 4 % ethanolu
Navážit 5 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx, xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx x xxxxxx xxx 80 ml xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx baňku stát xxxxx hodinu xxx xxxxxxxx teplotě x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx dobře smíchal x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (3.5), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x vzorku) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x ponořit ji xx xxxxxx vodní xxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx obsah xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x poté xxxxxxxx xx 20 °C.
Poté xxxxxxx za xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) x XX (3.4), doplnit po xxxxx xxxxx, homogenizovat, xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxx x třetím xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Obsah xxxxxx (%) xx xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - P’) / [α]X20°
xxx xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, v úhlových xxxxxxxx.
X’ = xxxxxxx xxxxxx látek rozpustných xx 40 % xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx xxxxx
+ 195,4°: xxxxxxxxxx škrob
+ 184,6°: xxxxxxxxx xxxxx
+ 182,7°: pšeničný xxxxx
+ 181,5°: xxxxx škrob
+ 181,3°: xxxxxx xxxxx
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Měření sacharimetrem
Procenta xxxxxx = 2 000 / [α]D20° · (2 X · 0,665) (X - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx ve 40 % ethanolu, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xx 100 xx vody, xxxxx xx xxx tloušťce 200 xx xxxxxxxx xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tato xxxxxxxx xx mění xxxxx xxxxxxxxxxxx:
16,29 x xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 g xxx německé xxxxxxxxxxxx
20,00 x xxx smíšené xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = specifická xxxxxxx rotace xxxxxxx xxxxxx (viz 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah škrobu xxxxx xxx 40 % a 1 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx škrobu xxxxxxxxxxx xx xxxx vyššího xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Pokud xxxxxx xxxxxxxx xxxx než 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx zředěné xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 X xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx přidání 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Připojit xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx zpětný xxxxxxx, xxxxxxx ji xx 30 xxxxx xx xxxxx lázně x xxxxxxx 50 °X. Xxxxxx vychladnout x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.3.
2. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx stanovit xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx na základě xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx mineralizuje xx xxxxx. Kyselý xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx amoniak se xxxxxxxxxxx a shromáždí xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny sírové, xxxxx přebytek xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx xxxxxxx XxX x.x. nebo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx XxXX4 · 5X2X x.x., xxxx xxxx xxxx xxxx rtuťnatý XxX x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx xxxxx x.x.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx x.x., d: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx sírová 0,1 X.
3.6 Kyselina xxxxxx 0,5 X.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxxx xx 100 xx 95-96 % (X/X) ethanolu.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx hydroxidu xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx hydroxidu sodného 0,1 N.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx p.a.
3.12 8 % (m/V) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5H2O x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx v kyselině xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1).
5. Postup
5.1 Mineralizace
Navážit 1 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 mg x xxx xx xx xxxxx mineralizační xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 g xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx katalyzátoru (3.2) (0,3 xx 0,4 g xxxxx xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxx 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxx; poté xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx baňky x přilnutí xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx var ještě xxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx; xxxxxx vychladnout; poté xxxxxx xxxxxxx granulí xxxxx (3.3).
Xxxxxx do xxxxxx baňky xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxxx sírové 0,1 X (3.5) xxxx 0,5 N (3.6) x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2) x přidat několik xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx destilační aparatury x ponořit konec xxxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx baňce xx xxxxxxx xxxxxxx 1 xx (xxx xxxxxxxx 7.3). Xxxx xxxxxxx s kohoutem xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 100 xx 40 % xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx xxx použit xxxxxxxxxxx na xxxx xxxxx, xxxxxx do xxxxx xxxxxx xxx 10 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xx 30 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxx této xxxx xxxxxxxxxxxx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx lakmusového xxxxxxx. Xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx lakmusový xxxxxxx xxxxx, že xx xxxxxxxx neutrální. Xxxxx xxxxxxxxx xxx xx času xxxxxxxxx xxxxx sběrné xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx do xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N (3.5) nebo 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx xxxxx titrovat xxxxxxxx kyseliny sírové xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) v závislosti xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx dusík, xx xxxxxxx slepý xxxxx (xxxxxxxxx x xxxxxxx), x xx xxx xxxxxx, který xx xxx analyzován. Za xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, destilace x titrace) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx x.x. (x.x. 114 °C; % X: 10,36) za xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx bez xxxxxx; 1 x acetanilidu xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx sírové 0,5 X.
6. Výpočet výsledků
Stanovit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X odpovídá 1,4 xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx dusíku xxxxxxxx 6,25. Výsledek xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx hrubých xxxxxxxx xxxxx než 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 20 % x xxxxx než 40 %;
- 0,4 absolutní xxxxxxx xxx obsah xxxxx než 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Je xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x destilací. X xxxxxxx případě xx xxxxxxx musí xxxxxxx xxxx ztrát.
7.2 X xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx objem kyseliny xxxxxx 0,1 X, xxxxx xx xxx xxxxxxxx nalita xx xxxxxx xxxxx, xxxxxx xx 10 xx 15 ml a xxxxxxx xxxxx na 25 ml.
7.3 Xxxxx xxxx baňka xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, přidat hydroxid xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xx nesmíchala x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX HRUBÝCH XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX CHLOROVODÍKOVOU
1. Xxxx x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx stanovit frakci xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx všechna xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxx 48 hodin xxx 40 °C xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx ve xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx stanovení xxxxxx xxxxxxx proteinů.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx chlorovodíková, x: 1,125.
3.2 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 j/mg xxxxxxx; xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x metodě xxxxxxx v xxxxx 4 xxxx přílohy x xxxx xxx xxxxxxxxxxxx v xxxxxxx x xxxxx metodou.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), čerstvě xxxxxxxxxx xxxxxx pepsinu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 j/l.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (např. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxx 3 metody pro xxxxxxxxx obsahu xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Vodní xxxxx xxxx inkubátor xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Mineralizační a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx metody.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx roztoku (xxx xxxxxxxx 7.2)
Navážit 2 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx x xxx xx xx xxxxxxx xxxxx o objemu 500 xx. Přidat 450 xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °X. Xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxx, xx je xX suspenze xxxxx xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx xx vodní xxxxx nebo xxxxxxxxxx (4.1) x xxxxxx xx tam 48 xxxxx. Xxxxxxxxx xx 8, 24 a 32 xxxxxxxx. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxx 15 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxx xx 20 °X, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx a filtrovat.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 ml xxxxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx ho xx baňky xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxx bodu 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx kapek xxxxxxxxxx emulse (3.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx, xxxxx xx xxxx téměř xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx.
Xxxx xx xxxxxx čirý x bezbarvý (světlezelený, xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx hodinu. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Destilace x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, xxx xx uvedeno x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Slepý xxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx postupu, xxx xxx vzorku, xxxxx má xxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx během slepého xxxxxx od xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. 1 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 mg xxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Výsledek xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx než 20 % x xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 absolutní hodnoty xxx obsah xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Hodnoty xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx souvislost se xxxxxxxxxxxxxx xx vivo.
7.2 Xxxxxxx x obsahu xxxx xxxxxx xxx 10 % xxxx xxx xxxxxxxxx extrakcí xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx použitého xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx ošetří xx xxxxxxxxxxx podmínek xxxxxxxx v prostředí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx proteinů se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x činidlo Folin-Ciocalteu. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx 750 xx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx odečte x xxxxxxxxxx křivky.
Definice: Xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx metody xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx zbarvení činidlem Xxxxx-Xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx μmolu xxxxxxxx zbarveného xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,025 N.
3.4 5 % xxxxxx (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Folin-Ciocalteu. Xxx 100 x xxxxxxxxxx sodného (Na2WO4 · 2X2X), 25 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 xx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx x kulatým xxxx a normalizovaným xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) x 100 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19), xxxxxxxx baňku xx zpětný chladič, xxxxx do xxxx x udržovat xxxxxx x xxxxxx varu xx xxxx 10 xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zpětný chladič, xxxxxx 175 x xxxxxx xxxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 50 xx xxxx x 1 xx xxxxx. Xxxxx xx xxxx 15 minut, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx vychladnout. Xxxxxx xxxxxx do odměrné xxxxx x objemu 1 x, xxxxxxx xx rysku xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx nazelenalé xxxxxxxx. Xxxx použitím xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx množství xxxxxxxxxxx, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx metody odpovídajícího 354 xx xxxxxx [1] a dát xx baňky o xxxxxx 200 ml x normalizovaným xxxxxxxx. Xxxxxx několik xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx, dokud se xxxxxxxxxx zcela nerozpustí. Xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx xx 100 xx. Xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxx.
3.8 Standardní xxxxxx xxxxxxxx: rozpustit 181,2 xx tyrosinu x kyselině chlorovodíkové (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxxx litru xxxxxxx kyselinou (zásobní xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx xxxxxx roztoku xxxxxxxx 0,2 μmol xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °C + 0,1 °C.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Stopky, xxxxxxxx: 1 sekunda.
4.4 xX xxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx xx 100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Odpipetovat 2 xx xxxxxxx x xxx xx xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 50 xx x xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.3). xX xxxxxxxxxxxx xX xxxxxx musí xxx 1,6+0,1. Ponořit xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Hydrolýza
Odpipetovat 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, zahřát xx xxxxx lázni (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 1,0 ml xxxxxxx pepsinu xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx x zpět skleněnou xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx 25 °X xxxxxx po xxxx 10 minut, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx). Xxxx přidat 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxx zbarvení a xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxx, xxx xx do Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx zředěného xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 xx 10 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx roztoku spektrofotometrem xxx 750 xx x kyvetách x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxx x xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxx provést xxxxx xxxxx pokus:
Odpipetovat 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx lázni (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxx na 25 °C, homogenizovat x xxxx xxxxxx 1,0 ml xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx přesně 10 minut xx xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx suchý xxxxx. Xxxxxxxxxx x postupu xxxxxxxx x xxxx 5.3.
5.5 Kalibrační křivka
Do Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 50 ml xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, x 5,0 xx alikvotního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx odpovídá 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μmolu xxxxxxxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxx referenčním xxxxxxxx xxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.1) xx 5,0 xx. Přidat 10,0 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (3.5) a xx xxxxxxx protřepávání 3,0 xx zředěného xxxxxxx Folin-Ciocalteu (3.6). Xxxxxx optickou xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx 5.3. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxxxxx hustot xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx z kalibrační xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxxxxx, které xxxxxxxx optické hustotě xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx opraveno xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx pepsinu x μmolech xxxxxxxx xx 1 xx x xx xxxxx xxxxxx xxx 25 °X se xxxxxxxx xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx na xx (j/mg) = 0,32 a / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx v μxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx x mg xxxxxxx xxxxx bodu 5.2.
7. Poznámky
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxx rozpuštěno, xxxx xxx takové, xxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Dvě xxxxxxxx xx mg xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx xxxxxxxx/xx xxx. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 xxxxxxxxxx xxxxxxxx/x (μxxxx xxxxxxxx/x xx 10 xxx. xxx 35,5 °C).
5. STANOVENÍ XXXXXXX X CELKOVÉHO XXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx látky x bavlníkových xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu je 20 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, a xx buď směsí xxxxxxxxxxxx x hexanu xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx dimethylformamidem xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx anilinu xxxxxxxx xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, jehož xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx při 440 xx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx p.a. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx x-xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxxxx X: do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 l xxxxx xxx 500 xx xxxxx isopropanolu a xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx xxxxxx kyseliny xxxxxx a 50 xx xxxx. Doplnit xx rysku směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx je xxxxx xxxxx.
3.3 Rozpouštědlo B: xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx x 10 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx teplotu x doplnit xx xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Trvanlivost xxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxx.
3.4 Xxxxxx x.x.: xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Xxxx činidlo xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx několik xxxxxx x zazátkované xxxxx x xxxxxxx xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 ml xxx 27,9 xx octanu xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2). Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx 50 xx tohoto xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx rozpouštědlem X. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx je 0,02 xx/xx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx stát xx dobu xxxxx xxxxxx xxx pokojové xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxx X: do xxxxxxx baňky o xxxxxx 50 xx xxx 27,9 mg xxxxxx gossypolu. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,5 xx/xx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxx X a X xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (třepačka): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx zkušebního vzorku xxxxxx xx předpokládaném xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx. Je výhodné xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x relativně xxxxxx xxxxxxxxx částí filtrátu, xxx bylo xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxxx pro přesné xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Pro xxxxxxxxx volného gossypolu x xxxxxxxxxxxx semenech, xxxxxxxxxx mouce a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorek neměl xxxxxxxxx 1 x; xxx xxxxx xxxxx xx xxxx být 5 x. Ve xxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxxxxxxx část 10 xx xxxxxxxx; xxxx xx xxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx gossypolu xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxx 0,5 x 5 g, aby xxxxxxxxx část 2 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 40 xx 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx by xx xxxx provádět xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu
Dát xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxx xxx xx xxxxxxx skleněnými střepy. Xxxxxx xxxxxx přidat 50 ml xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx xxxxxx promíchávat x xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxx filtr x xxxxxxxx xxxxxxx v xxxx baňce xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x kohoutem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Pomocí xxxxxx xxxxxx do dvou xxxxxxxxx baněk (A x X) x xxxxxx 25 ml xxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxx obsahujícího 50 xx 100 μg xxxxxxxxx. Xxxxxxxx doplnit xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) xx 10 xx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx baňku (X) směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx xxxx referenční xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx přidat 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2) xx xxxx jiných xxxxxxxxx xxxxx (C x X) o xxxxxx 25 ml. Xxxxxxx xx rysku xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx jako referenční xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (D) a (X). Zahřívat 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx vytvořilo xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit po xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx a nechat xxxx jednu hodinu.
Stanovit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 440 xx a xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx slepý xxxxx (X) xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx roztokem (C) x optickou hustotu xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx x referenčním xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx pokus xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (= upravená xxxxxxx xxxxxxx). X xxxx xxxxxxx vypočítat xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x bodě 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 xx 5 xx gossypolu do xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx x xxxxxx 10 xx rozpouštědla X (3.3). Současně xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx xxxx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx. Xxxxxxxx xxx xxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x doplnit xx xxxxx xxx baňky xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx 10 xx 15 xxxxx, poté filtrovat x zachytit xxxxxxxx x baňce xx xxxxxxxxxx hrdlem.
Pomocí xxxxxx xxxxxx 2 ml xxxxxxxx xx vzorku xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 ml a 2 xx xxxxxxxx xxxxxxx pokusu xx xxxx jiných xxxxxxxxx xxxxx x objemu 25 xx. Xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxx baňky x xxxxx série xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Tyto xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) do xxxx xxxxxx xxxxx. Zahřívat 30 xxxxx nad xxxxxx vodní xxxxx, xxx xx vytvořilo xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx 25 xx xxxxx isopropanolu a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx volného gossypolu, xxx xx uvedeno x bodě 5.2. X této hodnoty xxxxxxxxx xxxxx celkového xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodě 6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx může xxxxxxx xxx na xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx (6.1), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xx stanovených xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx optická xxxxxxx tato:
volný xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: X 1% / 1xx = 600
Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx obsah gossypolu xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1&xxxx;250 / X1%1xx ·&xxxx; · x · x
xxx:
X = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xx uvedeno x bodě 5.2
x = zkušební xxxxxx x x
x = xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x ml
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx křivky
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 xx. X xxxxx xxxxx xxxxxx pipetou 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) xx 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx po xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx série xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx hodnot xxxxxxx hustoty xxxxx xxxxxxxx gossypolu (x μx).
6.2.2 Celkový xxxxxxxx
Xxxxxxxxx 6 xxxxxxxxx baněk x objemu 50 xx. Xx xxxxx xxxxx přidat xxxxxxx 10 ml rozpouštědla X (3.3) x xx ostatních 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu X (3.6). Doplnit xxxxx xxxxx baňky xx 10 ml xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 minut xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu x xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxx 2 xx těchto xxxxxxx do dvou xxxxx x 6 xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx obsah xxxxx xxxxx xxxxx na 25 xx xxxxx x xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx do každé xxxxx xxxxx série 2 ml xxxxxxx (3.4). Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), homogenizovat a xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 stanovit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx série. Načrtnout xxxxxxxxxx křivku xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hustoty xxxxx množství xxxxxxxxx (x μx).
6.3 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x stejného vzorku xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % xxxxxxxxx hodnoty xxx obsah xxxxxxxxx xxxxx než 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % relativní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx obsah xxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx obsah: 17,7 % dusíku).
XXXXXXX XX
1. STANOVENÍ X IDENTIFIKACE TETRACYKLINOVÝCH XXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 ppm xxxxxxxxxx, x koncentrátech x premixech.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx směsí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx sestupné papírové xxxxxxxxxxxxxx x porovnání x referenčními xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx stanovena x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx Rf x hodnotami standardních xxxxx, x to xxx xxxxxxxxxxxx x XX světle (xxxxxx xxxxx antibiotik), xxxx xxxxxxxxxxxxx na agarovém xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x.x. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X p.a. |
7,45 x |
|
Xxxxxx x.x. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 g |
|
Destilovavná xxxx xx |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx X: xxxx xxxxxxx nitromethanu/čistého chroroformu/α-dichlorhydrinu: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx XX xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx chroroformu/α-pikolinu: 20/10/3 objemově. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, d: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx látky: Chlortetracyklin, xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx, příprava xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda ad |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 5,8.
3.11 0,1 % (m/V) xxxxxx 2,3,5-triphenyltetrazolium xxxxxxxx x 5 % (x/X) roztok xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx pro xxxxxxxxxx papírovou chromatografii (xxxxx papíru 25 xx). Xxxxxxxx a Xxxxxxx xxxxx (2440B xxxx 2043B) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx xxx 20 x 30 xx xxx bioautografii.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Zásobní xxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) a xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.6) připravit xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx UV xxxxxxx
Xxxxxx roztoky (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x cílem xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) fosfátovým xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 5 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x tetracyklinu-HCL xx 1 ml
6. Xxxxxxxx
Xxxx je předpokládaný xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 ppm, xx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx vzorek, xxxx xxxxxxxxxxx frakci xxxxxxxxx proséváním, xxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx v této xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Sebrat xxxxxxxxxxx x xxxxxx ho xxxxx nebo ho xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) x cílem xxxxxx koncentrace antibiotika xxx 100 μg xx 1 xx (6.1) x 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x identifikace
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxxxx xxxxxxx, xX 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx listy xxxxxxx xxxxxxxxxxx papíru. Xxxx xxxxxxx xx papír 0,01 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) x xxxxxxxx (6.1 x 6.2). Xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx mít xxxxx xxxxxxxx vlhkost; xxxxx xx to nutné, xxxxxx xxxxxx vyschnout.
Rozvinout xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx X (3.3) xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx XX (3.4) xxx stanovení XX xxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx dosáhne xxxxx 15 až 20 xx (xxx 1 xxxxxx 30 xxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx papír.
7.2 Xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxx xx obsah xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 1 μx/xx2, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx amoniaku (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx XX lampou xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx bioautografií
Nalít xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), které xx předem xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx xxxxxxxx desky (4.5) a položit xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx pěti xxxxxxxx xxxxxxxx odejmout xxxxx a xxxxxxx xx na jinou xxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx, kde xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx přes xxx xxx 30 °C. Xxxxxxxxxx tetracyklinového xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx zónami x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx.
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Identifikace
Relativní hodnoty Xx tetracyklinových antibiotik xxxx uvedeny zde. Xxxx hodnoty xx xxxxx mírně měnit xxxxx xxxxxxx xxxxxx x jeho vlhkosti:
|
Chlortetracyklin (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (TC) |
0,40 |
|
Oxytetracyklin (OTC) |
0,20 |
|
4-epi-CTC |
0,15 |
|
4-epi-TC |
0,13 |
|
4-epi-OTC |
0,10 |
Antibiotická xxxxxxxx "xxx" xxxxxxxxx xx menší xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX CHLORTETRACYKLINU, XXXXXXXXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX
X. XXXXXX XX AGARU
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (TC) x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx je 5 xxx. Xxxxxx xxxxx xxx 5 xxx xxxxx být xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Princip
U xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx než 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové xxx xxxxxxxxx XXX x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové xxx stanovení XXX x XX.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx a xxxxxx antibiotická aktivita xx stanoví xxxxxxx xxxxxx XXX, OTC xxxx XX na xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. cereus. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx ATCC x. 11778
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. xxxxxx xx zkumavky xx šikmým agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx modře x xxxxxxxx borité. Inkubovat xxxx noc při xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx xx šikmý xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx solného xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx agaru je 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 až 30 °X, xxxx xxxx spóry 15 xx ethanolu (4.6) xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx ověřena sporulace, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx může x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx množství xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotiky největší xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxx množství je xxxxxxx 0,2 a 0,3 xx xx 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx média a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 xx |
|
Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % ethanolový xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda ad |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx upravit xX na 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Na2HPO4 · 2X2X x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xx pH 4,5 za xxxxxxx xxxxxxxx sírové xxx 2 X.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx xx vyjádřena x xxxxxxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
5.1 Chlortetracyklin
Na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (4.7) xxxxxxxxx zásobní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml. Xxxxx roztok xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx. Zředění xx xxxxxxx xx xxxxxxx fosfátového xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx přidáno 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx pufru (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Oxytetracyklin
Postupem xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx oxytetracyklinu-HCL xx 1 ml, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx a xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 připravit xx základě zásobního xxxxxxx, jehož koncentrace xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, standardní xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 1,0 μx tetracyklinu-HCL xx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Obsahy rovné xxxx xxxxx xxx 50 xxx
Xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (4.8) v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3) xxxxx odkazů x tabulce s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx formamidu x tomto xxxxxxx xxxxx překročit 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx dekantovat xxxxxxx x cílem xxxxxx čirý xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxx |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Xxxxxxxx vzorek x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx fosfátového xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
řeď. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx X8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xx xxxx výrobní xxxxxx přidat do xxxxxxxxxx vzorku o xxxxxxxxx 2 xx 10 x 20xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xX xxxxx xxx 3; pokud xx to xxxxx, xxxxxxx xX xx 3 (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx alikvotní xxxx extraktu x xxxxxxx xX xx 5,5 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx bromkresolové xxxxxx (xxxxxx se xx xxxxx xx modrou). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), s cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx X8 (xxx 6.1).
Poté připravit xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.2.1 xxx, xx se xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx na xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, S1) x čtyř koncentrací xxxxxxxx (U8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx čtyři xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx tímto xxxxxx xxxxxx misky x xxxxxx velikosti, xxx xxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx o xxxxxxx 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které se xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx stanovení zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx misky xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx křivky xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx rovnice:
(U1 + X2 + X4 + X8 - S1 -X2 -X4 -X8) · 0,602 / U4 + U8 + X4 + S8 - X1 -X2 -X1 -X2
Xxxxxxxx aktivita = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), oxytetracyklin (XXX) x tetracyklin (XX) xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 1 g/kg, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx vzniknout xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx metoda xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX xx vzorek xxxxxxxx xxxxx acetonu, xxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x pro xxxxxxxxx xxxxxx XXX x XX směsí xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx naočkováno Xxxxxxxxxxxxxx aureus x xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx aureus X 14 [6]
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), do xxxxxxx xx xxxxx 1,5 xx 3 % xxxxx (podle xxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx na xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx očkovací xxxxx
24 xxxxx xxxx xxxxxxxx přeočkovat xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx celou xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx v asi 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) a xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xx vodní xxxxx xxx 37 °X xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx fáze (1x30 až 2x).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [7]
|
Pepton |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 g |
|
Chlorid sodný |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 p.a. |
1,32 g |
|
Hydrofosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
xX po xxxxxxxxxxx: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.4 Xxxx čistého acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (m/V) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Standardní xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztok
Na základě xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx zásobní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 xx 500 μx XXX-XXX, XXX-XXX xxxx XX-XXX na 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
6. Extrakce
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.4) x protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x tetracyklin
Do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 g xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxx po xxxxx fosfátovým xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx.
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx standardních sérií x xxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxx lišit xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx standardní xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx XXX-XXX na 1 xx. Poté xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2), xxx je uvedeno xxxx a xx xxxxxxxxxx určených xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx xxxxxx dvakrát.
|
ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.1) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,12 μx XXX-XXX. Xxx 1 ml xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx a 0,75 xx (= 0,09 μx) xx dvou xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx dvou jiných xxxxxxxx na 1 xx fosfátovým xxxxxx (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx roztok (5) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,6 μx OTC-HCL xxxx XX-XXX na 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx, 7 ředění, xxxxx xxxxxx dvakrát.
|
ml xxxxxxxxxxxx pracovního roztoku |
ml xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx extrakt (6.2) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Dát 1 xx tohoto roztoku xx xxxx zkumavek x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx jiných xxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.2 Xxxxxxxx kultivačního média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) očkovací xxxxxx (3.2) x xxxxx získat na xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x 5 xx xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx nenaočkovaného xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Očkování
Dát xx xxxxx xxxxxxxx (7.1.1 nebo 7.1.2) 9 xx naočkovaného xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx zkumavek musí xxx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xxxxxxxx xx sterilním xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx se musí xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, jejíž teplota xx xxxxxxxx udržuje xx 37 °C + 0,1 °C. Xxxxxxxxx xxxx se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx (obecně 2h30 xx 3h). Xxxx xxxxxxxx další růstu xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) xx xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx růstu
Změřit xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, přičemž fotometr xx xxxxxxx xx 100 % propustnost xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (xxxxxxxxxxxxxx nejvyššímu xxxxxx xxxxxxxxxxx). Z xxxxxx xxxxxx rozdílů v xxxxxxxx různých xxxxxxxx xx doporučuje xxxxxx xxxxxxx 2 xx x xxxxxx 5 xx kyvety.
8. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx křivku xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx propustností xxxxx koncentracím antibiotika. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx propustnosti xxxxxxxx. Xxxxxxxx obsah xxxxxxxxxxx xx vzorku.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení provedených x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % relativní xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxx x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx, x to xxxxxxx x xxxxxxxxxxx tetracyklinů. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zředí x jeho xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. cereus. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx inhibičních xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus, X 250 XX [8] (rezistentní vůči xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. cereus xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx média (4.1) x xxxxxx 100 μx oxytetracyklinu xx 5 xx. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx asi 30 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Příprava suspenze xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx se šikmým xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx xxx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 dní xxx 28 až 30 °X, poté xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx byla xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx v xxxxxxxxxx skladovat xxxxxxx 5 měsíců.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) určit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx získat xxx různé xxxxxxx xxxxxxxxxxx oleandomycinu xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,1 a 0,2 xx xx 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx při 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxx xxx udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Glukosa |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar, xxxxx jakosti |
10 až 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
|
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,5. |
4.2 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [10]
Médium (4.1) xxxxxxxx xx xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx methanol
4.6 0,5 % (x/X) xxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx x.x.
4.7 Xxxxxxxxx xxxxxx
|
Xxxxx xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 g |
4.8 Standardní xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxx
Xxxxxxxxx standardní xxxxx (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x zředit roztokem (4.6) s xxxxx xxxxxx koncentraci oleandomycinu 100 μg/ml.
Na základě xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,05 |
μg/ml |
|
S2 |
0,025 |
μg/ml |
|
S1 |
0,0125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx 2 xx 10 x 100 xx roztoku (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou.
Odstředit, xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 0,1 μg xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a U1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx roztoku (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx xxxxx xx xxxxxxx x miskách xx použití čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, U1). Xxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 až 13 mm. Xxxxxxxxx xxxxxxxx očkovacího kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx o tloušťce xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx sestávajících xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x dokonale xxxxxx hliníkovým xxxx xxxxxxxxx kroužkem x xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx asi při 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx inhibičních xxx. Načrtnout xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 - S1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - U1 - U2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
4. STANOVENÍ XXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztokem x xX 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, a xxxx xx xxxxxxxxx methanolem. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Difúze xx projeví vytvořením xxxxxxxxxxx zón za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný logaritmu xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx lutea ATCC x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxx agarem (3.1) za xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.4). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °C, xxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx a zředit xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 nm.
Pokud xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx testy xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxxxx umožní xxxxxx xxx xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx největší možné, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [11]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xx xxxxxx xxxxxxxxx rodičovského xxxxx x přípravy xxxxxxxxxxx xxxxxxxx upravit xX xx7,0 x xx xxxxxx stanovení xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx voda xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Směs fosfátového xxxxx (4.2)/xxxxx methanol: 60/40 objemově.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx x xxxxx aktivitě.
5. Standardní xxxxxxx
Xxxxx standardní xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °X xx xxxxxxx xxxxxxx (5 mm rtuti). Xxxxxxx 10 až 50 xx xx xxxxxxx baňky, xxxxxxxxx x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx roztok xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 7 (4.3) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx základního xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx připravit rozředěním xxxxx (4.7) standardní xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 2 μg xxxxxxxxxx xxxxxxxx na 1 xx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Extrakce
Pro xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx; xxx xxxxxxx x xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx fosfátového xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx na 80 °X, x homogenizovat 2 minuty (kuchyňský xxxxx, Xxxxx-xxxxxx atd.).
Nechat xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 ml xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxx extrakt x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx (4.7) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7).
Xxx obsahy nižší xxx 10 ppm xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx x rotačním xxxxxxxxxx xxx 35 °X x xxxxxxxxx xxxxxxxx ve 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro stanovení (4.1) xxxxxxxx na xX 8 xxx 48 xx 50 °X xxxxxxxx bakterií (3.2).
7.2 Příprava misek
Difúze xx xxxxx xx xxxxxxx v miskách xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) a čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, U1). Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx o xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx médiu xxxxxxx 8 děr o xxxxxxx 10 až 13 mm. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x tloušťce 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx a x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx vzorku opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx 35 xx 37 °C.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zanesením xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x extraktu. Xxxxx xxxxxxx k interferenci, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 - X2 - S4 -S8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl mezi xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených u xxxxxxx vzorku nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
5. STANOVENÍ XXXXXXXXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, koncentrátech x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztokem "Xxxxx 80". Po xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx zředí x xxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx do zkumavky xx xxxxxx xxxxxx x kultivačního média (4.1). Inkubovat xxxx xxx xxx xxx 35 °C. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce x přeočkovat xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx agar.
3.2. Příprava xxxxxxxxxxx suspenze
Smýt bakterie xx zkumavky se xxxxxx xxxxxx (3.1) xx použití 2 xx 3 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoku (4.3). Naočkovat xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx smýt xxxxxxxx xx pomoci 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx s cílem xxxxxx xxx 75 % světelnou propustnost xxx 650 xx. Xxxxx se tato xxxxxxxx skladuje x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx týden.
Předběžnými xxxxx na xxxxxxx x xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx virginiamycinu xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx zřetelné xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [12]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 g |
|
Agar, xxxxx xxxxxxx |
10 až 20 g |
|
Destilovaná voda xx |
1000 ml |
Před xxxxxxxx xxxxxxx xX na 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
8,0 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx voda ad 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Xxxxx 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) obsahující 800 μx virginiamycinu xx 1 xx. Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1+) za xxxxxxx xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Extrakce
6.1 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Odstředit xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx 20 xx xxxxxx roztoku x odpařit do xxxxx x rotačním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 ml xxxx xxxx směsi (4.5) x xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 1 μg virginiamycinu xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.5)
6.2 Xxxxxxx o obsahu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 g xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 ml roztoku (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxx zředit xxxxx (4.5) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml (= U8). Poté xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x U1, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx stanovení (4.1) při 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx za xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4, X2, U1).Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx vybrat misky x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo možné xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx x průměru 10 xx 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.1), které se xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstvy x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx misek xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx plastovým xxxxxxxx o xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx čtyřikrát x xxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxx xxx při 35 xx 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x interferenci, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 -X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx aktivita x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % relativní xxxxxxx.
[1] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[3] Xxxx xxxxx slouží x označení xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx roztoků (xxxxx xxxxx).
[6] Xxxxx xxxx xxxxxxxxx x Xxxxx xxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx X. aureus XXXX 6538 X.
[7] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Kmen xxxxxxxxx x Xxxxx podle XXXX.
[9] Xxxx být xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[10] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[11] Xxxx být použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.