Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu krmiv [1], a xxxxxxx xx článek 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxx xxxxxxxx stanoví, xx xxxxxx kontroly krmiv, xxxxxxx cílem xx xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx právními a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x složení xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971 [2] x 71/393/XXX ze dne 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx xxxxxxxxx xxxx analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx na stav xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem k xxxx, xx xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx jde x xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, volného x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, jakož x o xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx I xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx směrnice Xxxxxx x. 71/250/EHS ze xxx 15. xxxxxx 1971, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx pro úřední xxxxxxxx krmiv, xx xxxxxxx pro metody xxxxxxx v příloze X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxxx, že xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, pokud jde x stanovení x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotik, xxxxx i o xxxxxx chlortetracyklinu, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx popsaných x xxxxxxx II xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení xxxxxxx v části 1 (úvod) xxxxxxx xxxxx směrnice Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, x výjimkou xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx použijí xxx xxxxxx popsané x xxxxxxx II xxxx xxxxxxxx.
Článek 3
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. července 1973. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx Komisi.
Xxxxxx 4
Xxxx směrnice xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu xxx 27. xxxxx 1972.
Xx Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Xxxxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX I
1. STANOVENÍ XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx metoda
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x produktů xxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu x xxxxxxxx, s xxxxxxxx těch xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxx pulpu, xxxxxx xxxxx skrojky xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. xxxxx x moučka z xxxxxxxxxx) nebo xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx zahrnuje dvojité xxxxxxxxx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx tepla xxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx x xxxxxxxx xx polarimetricky xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx extrahuje 40 % ethanolem. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou, xxxxxx x xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx podmínek xxxx při xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx vynásobený známým xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xx vzorku.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,126.
3.2 1,128 % (m/V) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx titrací xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X x xx xxxxxxxxxxx 0,1 % (m/V) xxxxxxxxxxxxx v 94 % (X/X) xxxxxxxx. 10 ml = 30,94 ml 0,1 X XxXX.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxx X: xxxxxxxxx xx vodě 21,9 x octanu zinečnatého Xx(XX3XXX)2.2X2X a 3 x xxxxxx kyseliny xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx II: xxxxxxxxx ve vodě 10,6 g xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Doplnit xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) ethanol, d: 0,948 při 20 °X.
4. Přístroje
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 xx x xxxxxxxxxxxxxx zábrusem x xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx prošel xxxxx x kulatými oky x průměru 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X xxxx S) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 ml. Xxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx dobře rozmístil x xxxxxx xxxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx do xxxxxx xxxxx xxxxx a xx dobu xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx x pravidelně xxxxxxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx ve xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, aby i xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx na xxxx varu. Baňka xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx během xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxx, xxxxxx 30 xx xxxxxxx vody x xxxxx xxxxxxxx xx 20 °C.
Přidat 5 xx Xxxxxxxxx roztoku X (3.3) x xxxxx xxxxxx protřepávat. Xxxx xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx XX (3.4) x xxxx xxxxx minutu xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx po xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (což xx xxxxxx), opakovat xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X a XX, xxxxxxxxx 10 ml.
Poté xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx optickou rotaci xxxxxxx x 200 xx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X’ xxxx S’) látek xxxxxxxxxxx xx 4 % ethanolu
Navážit 5 x vzorku x xxxxxxxxx na 1 xx, xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx x xxxxxx xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx baňku xxxx xxxxx hodinu při xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxxx doby xxxxxxxx xxxxx protřepat, xxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx ethanolem (3.5), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x vzorku) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 ml, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x silně xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx chladič x xxxxxxx xx xx xxxxxx xxxxx xxxxx. Přesně xx 15 minutách vyjmou Xxxxxxxxxxxxx baňku x xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx obsah xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx za použití Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) a XX (3.4), xxxxxxx po xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx a změřit xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxx 5.2 druhém x třetím odstavci.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxx škrobu (%) se xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Měření polarimetrem
procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - P’) / [α]D20°
kde xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x úhlových xxxxxxxx.
X’ = xxxxxxx xxxxxx látek rozpustných xx 40 % xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx škrob
+ 195,4°: xxxxxxxxxx škrob
+ 184,6°: kukuřičný xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx škrob
+ 181,5°: xxxxx xxxxx
+ 181,3°: ovesný xxxxx
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx a směsi xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]X20° · (2 X · 0,665) (S - X’) / [α]D20°
Kde xx:
X = celková xxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % ethanolu, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx sacharózy x xxxxxxx xx 100 xx vody, xxxxx xx xxx xxxxxxxx 200 xx xxxxxxxx xxxxxx 100 stupňů xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:
16,29 x xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 x xxx xxxxxxx sacharimetry
20,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = specifická xxxxxxx rotace xxxxxxx xxxxxx (viz 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxx 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx nebo vyššího xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Pokud xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 6 % uhličitanů, xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx rotace zničeny xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx kyseliny xxxxxx.
7.2 V xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx laktózy, xxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx mléko, postupovat xx xxxxxxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx baňku xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xx 30 minut xx xxxxx lázně x teplotě 50 °X. Nechat xxxxxxxxxxx x pokračovat x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.3.
2. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx obsah xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx základě xxxxxx xxxxxx stanoveného xxxxx Xxxxxxxxxxx metody.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx mineralizuje xx xxxxx. Kyselý xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx sodného. Xxxxxxxx amoniak xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxx xxxxxxxx p.a.
3.2 Katalyzátor: xxxx měďnatý CuO x.x. xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx XxXX4 · 5X2X p.a., xxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxx HgO x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx xxxxx x.x.
3.4 Xxxxxxxx sírová x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Kyselina xxxxxx 0,5 X.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxxx xx 100 xx 95-96 % (V/V) ethanolu.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxx sodného.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx roztok xxxxxx sodného x.x.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx thiosíranu xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx v kyselině xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Mineralizace
Navážit 1 x xxxxxx x přesností xx 1 xx x xxx xx xx xxxxx mineralizační xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 x xxxxxx draselného (3.1), xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 xx 0,4 x oxidu xxxxxxxxx nebo 0,9 xx 1,2 x xxxxxx měďnatého nebo xxxxx rtuti nebo 0,6-0,7 g xxxxx xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x xxxxxxx granulí xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx baňky. Xxxxxxxx xxxxx, nejprve xxxxx x za xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx hmota xxxxxxxxxxx a pěna xxxxxxx; poté xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx kapalina xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx stěn baňky x přilnutí xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xx xxxxxx čirý a xxxxxxxx (světlezelený, pokud xx použije xxxxxxxxxxx xx bázi mědi), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxx, poté xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Destilace
Opatrně x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, aby xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx; xxxxxx xxxxxxxxxxx; xxxx xxxxxx několik granulí xxxxx (3.3).
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,5 X (3.6) x závislosti xx xxxxxxxxxxxxxx obsahu dusíku (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx xxxxxxx xxxxx indikátoru xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx konec xxxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx baňce xx xxxxxxx xxxxxxx 1 xx (xxx xxxxxxxx 7.3). Přes xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx nalít do xxxxx 100 xx 40 % xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx byl xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxx 10 xx xxxxxxx xxxxxx sodného (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx sodného (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx se xx 30 minut xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Po xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx, pokud lakmusový xxxxxxx ukáže, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx destilace xxx xx času xxxxxxxxx xxxxx sběrné baňky x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx dojde xx xxxxxxxx xx žluta, xxxxx přidat xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx žlutou.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, se xxxxxxx xxxxx pokus (xxxxxxxxx x xxxxxxx), x xx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxx analyzován. Za xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, destilace x titrace) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx x.x. (x.x. 114 °X; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X odpovídá 1,4 xx xxxxxx. Vynásobit xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x jednoho vzorku xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx hodnoty pro xxxxx vyšší než 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx vyžadují xxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxx x destilací. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx musí provést xxxx ztrát.
7.2 U xxxxxxxx x nízkým xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X, xxxxx má být xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx baňky, xxxxxx xx 10 xx 15 xx x xxxxxxx xxxxx na 25 ml.
7.3 Xxxxx xxxx baňka xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, přidat xxxxxxxx xxxxx bezprostředně před xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxx kapalinu po xxxxxxx xxxxx xxx, xxx se xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX HRUBÝCH XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX CHLOROVODÍKOVOU
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx frakci xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °C xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxx xx filtruje x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx se stanoví xxxxxxx xxx stanovení xxxxxx xxxxxxx proteinů.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina chlorovodíková, x: 1,125.
3.2 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 x/xx pepsinu; xxxxxxxx pepsinu xx xxxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 4 xxxx přílohy x xxxx xxx xxxxxxxxxxxx v xxxxxxx x touto xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx připravený xxxxxx pepsinu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 j/l.
3.5 Xxxxxxxxxx emulze (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxx 3 xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Vodní xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 ml. Přidat 450 xx roztoku xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °X. Xxxxxxxxx, aby se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxx, že xx xX xxxxxxxx xxxxx xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx (4.1) a nechat xx xxx 48 xxxxx. Protřepat xx 8, 24 x 32 xxxxxxxx. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxx 15 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxx xx 20 °C, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx a xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x dát xx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx v xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, ve xxxxx xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xx xxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx, dokud xx xxxx xxxxx zcela xxxxxxxx. Xxxxxx ohřev x xxxxxxx odstranit xxxxxxxx xxxxx xxxx.
Xxxx xx roztok čirý x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx se použije xxxxxxxxxxx xx bázi xxxx), udržovat xxx xxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx vychladnout.
5.3 Xxxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxxx pro stanovení xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 5.2 a 5.3.
5.4 Slepý pokus
Provést xxxxx xxxxx xx xxxxxxx stejného postupu, xxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx slepého xxxxxx od xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N xxxxxxxx 1,4 mg xxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx dusíku xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx:
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % relativní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % x nižší xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx vyšší xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxx metodou xxxxxx xxxxxx souvislost xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx.
7.2 Xxxxxxx x obsahu xxxx vyšším xxx 10 % xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °C).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx použitého xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x činidlo Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx 750 nm x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako množství xxxxxx, xxxxx za xxxxxxxx xxxxxx uvolní xx xxxxxx takové xxxxxxxx hydroxyarylových xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx xx optickou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx jednoho μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,06 X.
3.3 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,025 X.
3.4 5 % xxxxxx (x/X) xxxxxxxx trichloroctové.
3.5 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxx 100 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XX4 · 2H2O), 25 x xxxxxxxxxxx sodného (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 ml xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) a 100 ml koncentrované xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19), xxxxxxxx xxxxx xx zpětný xxxxxxx, xxxxx do xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxx 10 xxxxx. Xxxxxx vychladnout, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxx 175 x xxxxxx lithného (Li2SO4 · 2X2X), 50 xx xxxx x 1 ml xxxxx. Xxxxx xx xxxx 15 minut, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx do odměrné xxxxx x objemu 1 l, doplnit xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Xxxxxx hemoglobinu: Xxxxxxx xxxxxxxx hemoglobinu, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx substrátu xxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 354 mg xxxxxx [1] a xxx xx baňky x xxxxxx 200 xx x xxxxxxxxxxxxxx zábrusem. Xxxxxx několik ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx baňku x xxxxxxxx pumpou x xxxxxxxxxxx, dokud xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxxxxxx doplnit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx xx 100 xx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx: rozpustit 181,2 xx tyrosinu x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) x doplnit xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx kyselinou (xxxxxxx xxxxxx). Odebrat 20 xx tohoto xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μmol xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °X + 0,1 °C.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Stopky, přesnost: 1 sekunda.
4.4 xX xxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx a xxx xx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx x xxxxxxx xx xxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). xX xxxxxxxxxxxx xX xxxxxx musí xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx xx vodní xxxxx (4.1).
5.2 Hydrolýza
Odpipetovat 5,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, zahřát ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx tam x zpět xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx konci. Xxxxxx xxxxxxxx xx vodní xxxxx xxx 25 °X xxxxxx xx xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx x teplota xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx). Xxxx přidat 10,0 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxx zbarvení x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxx, xxx ho xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (3.5) x za xxxxxxx protřepávání 3,0 xx zředěného činidla Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Po 5 xx 10 xxxxxxxx stanovit optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 750 xx x kyvetách o xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxx s xxxxx.
5.4 Xxxxx pokus
Pro xxxxx stanovení xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx lázni (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx trichloroctové (3.4) xxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.1. Promíchat xxxxxxxxx tyčinkou a xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 10 xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx a filtrovat xxxx suchý xxxxx. Xxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x bodě 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, x 5,0 xx alikvotního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tyrosinu, xxxxx odpovídá 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx tyrosinu. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx roztokem xxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) na 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (3.5) a xx stálého xxxxxxxxxxxx 3,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx Folin-Ciocalteu (3.6). Xxxxxx optickou xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx 5.3. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx proti xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx z kalibrační xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx opraveno xxxxxx pokusem.
Aktivita pepsinu x μxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx x za jednu xxxxxx xxx 25 °X xx vypočítá xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx xx xx (j/mg) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx v μxxx xxxxxxxx x kalibrační xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx podle xxxx 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx má xxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx takové, xxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx získána xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Dvě xxxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Ansonovovým xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx xxxxxxxx/xx xxx. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 xxxxxxxxxx xxxxxxxx/x (μxxxx xxxxxxxx/x za 10 xxx. při 35,5 °X).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX X CELKOVÉHO XXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxx směsích, xxxxx xxxx látky obsahují. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xxxxxx je 20 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, a xx buď xxxxx xxxxxxxxxxxx a hexanu xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx dimethylformamidem xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx 440 xx.
3. Činidla
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx isopropanolu p.a. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx x-xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx x objemu 1 x xxxxx xxx 500 ml xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx xxxxxx kyseliny xxxxxx x 50 xx xxxx. Xxxxxxx xx rysku směsí xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1). Trvanlivost xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx X: xxxxxxxxxxx xx odměrné xxxxx x objemu 100 ml 2 xx 3-amino-1-propanolu x 10 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu x xxxxxxx xx xxxxx N,N-dimethylformamidem. Trvanlivost xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx týden.
3.4 Xxxxxx x.x.: xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, destilovat xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Xxxx činidlo xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxx měsíců x xxxxxxxxxxx xxxxx x hnědého xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx xxx 27,9 mg octanu xxxxxxxxx. Rozpustit x xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx xx odměrné xxxxx x xxxxxx 250 xx 50 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxx po xxxxx rozpouštědlem X. Xxxxxxxxxxx gossypolu x xxxxx xxxxxxx xx 0,02 mg/ml. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx stát xx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx B: do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 ml xxx 27,9 mg xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,5 xx/xx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X a X chráněny xxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (třepačka): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Zkušební xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx velkou xxxxxxxxx částí xxxxxxxx, xxx bylo možné xxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx pokrutinách xx xxxxxxxx vzorek xxxxx xxxxxxxxx 1 g; xxx krmné směsi xx xxxx xxx 5 x. Ve xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 10 ml xxxxxxxx; xxxx xx xxxxxxxxx 50 až 100 μx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxx 0,5 x 5 x, xxx xxxxxxxxx část 2 xx filtrátu xxxxxxxxxx 40 xx 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xx měla xxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxx baňky xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxx xxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxx promíchávat v xxxxxx. Xxxxxxxxx přes xxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx v xxxx baňce xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx zakrýt nálevku x xxxxxxxx hodinovým xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx do xxxx xxxxxxxxx baněk (X x B) x xxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx doplnit xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) xx 10 xx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx pipety přidat 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2) xx xxxx xxxxxx odměrných xxxxx (X x X) x xxxxxx 25 ml. Doplnit xx xxxxx baňku (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4) do xxxxx (X) a (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx na pokojovou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx jednu hodinu.
Stanovit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 440 xx a ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx pokus (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx x referenčním xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xx xxxxxxx hustoty xxxxxxx xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx). Z xxxx hodnoty xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx xx xxxxxxx x bodě 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 xx 5 xx gossypolu xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx x xxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx B (3.3) xx jiné xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx. Xxxxxxxx xxx baňky 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát 10 xx 15 xxxxx, xxxx filtrovat x xxxxxxxx filtráty x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 2 ml xxxxxxxx ze vzorku xx dvou xxxxxxxxx xxxxx o objemu 25 ml a 2 xx xxxxxxxx xxxxxxx pokusu xx xxxx xxxxxx odměrných xxxxx x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxx baňky x xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx referenční xxxxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 30 minut xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx vytvořilo xxxxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx teplotu, doplnit xx 25 xx xxxxx isopropanolu a xxxxxx (3.1), homogenizovat x xxxxxx xxxx xxxxx hodinu.
Stanovit optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx je uvedeno x xxxx 5.2. X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx obsah celkového xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 6.
6. Xxxxxxx výsledků
Výpočet xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx buď na xxxxxxx specifické xxxxxxx xxxxxxx (6.1), xxxx xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx podmínek xx specifická xxxxxxx xxxxxxx tato:
volný xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: X 1% / 1xx = 600
Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx gossypolu xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1 250 / X1%1xx ·&xxxx; · p · x
xxx:
X = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, stanovená xxx xx uvedeno x xxxx 5.2
x = xxxxxxxx xxxxxx x g
a = xxxxxxxxx část xxxxxxxx x xx
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx křivky
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxx po xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 xx. X xxxxx xxxxx xxxxxx pipetou 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.5). Doplnit xxxxxx rozpouštědlem A (3.2) na 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxx slepého xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx každé xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx zbarvení. Xxxxxxxx xx pokojovou teplotu, xxxxxxx xx rysku xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx standardní xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx referenční xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx hodnot xxxxxxx hustoty proti xxxxxxxx gossypolu (x μx).
6.2.2 Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx 6 xxxxxxxxx xxxxx x objemu 50 xx. Do xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx 10 ml rozpouštědla X (3.3) x xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.6). Doplnit xxxxx každé baňky xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx xxxxx. Zchladit na xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx a xxxxxx x promíchat.
Přidat xxxxxxx 2 ml xxxxxx xxxxxxx do dvou xxxxx x 6 xxxxxxxxx baňkách x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx obsah xxxxx xxxxx xxxxx xx 25 ml xxxxx x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx xx každé xxxxx xxxxx série 2 xx xxxxxxx (3.4). Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx jednu xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 stanovit xxxxxxxx hustotu xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxxx vzorku xxxxx překročit:
- 15 % relativní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx hodnoty pro xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx: 17,7 % xxxxxx).
XXXXXXX XX
1. XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx antibiotika v xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a kyseliny xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx je xxxxxxxx sestupné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v porovnání x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx stanovena x xxxxxxxxxxxxxx porovnáním xxxxxx hodnot Xx x hodnotami xxxxxxxxxxxx xxxxx, x to xxx fluorescencí v XX xxxxxx (xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx), nebo xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx B. xxxxxx.
3. Činidla
|
3.1 Pufr, xX 3,5 |
|
|
Monohydrát xxxxxxxx xxxxxxxxx x.x. |
10,256 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
7,45 x |
|
Xxxxxx p.a. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Xx2XXX4.2X2X p.a. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx X: směs xxxxxxx nitromethanu/čistého xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím |
|
|
3.4 Xxxxxx XX směs xxxxxxx nitromethanu/čistého xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 xxxxxxxx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 objemově.
3.6 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
3.7 Xxxxxxx, d: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx, tetracyklin, xxxxxxx xxxxxxxx je vyjádřena x xxxxxxxxxxxx.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx přílohy.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda ad |
1000 xx |
Xxxx použitím upravit xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (m/V) xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x 5 % (x/X) roztok glukosy.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx papírovou xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx papíru 25 xx). Xxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxx (2440X xxxx 2043B) nebo xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx stanovení xxxxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx xxx 20 x 30 xx xxx xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Zásobní xxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) x xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.6) připravit xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL x xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.2 Referenční xxxxxxx xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) s xxxxx získat xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 5 μx chlortetracyklinu-HCL, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx předpokládaný xxxxx antibiotika nižší xxx 10 ppm, xx možné xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, neboť xxxxxxxxxxx se nacházejí xxxxxxxxx x xxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx (3.5) a xxxxxxxxx. Sebrat supernatant x xxxxxx xx xxxxx xxxx ho xxxxxxxx zředit xxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx koncentrace antibiotika xxx 100 μg xx 1 ml (6.1) x 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Stanovení x xxxxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xx pufračního xxxxxxx, xX 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx přebytek xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx papíru. Poté xxxxxxx na xxxxx 0,01 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) x xxxxxxxx (6.1 a 6.2). Xxx xxxxx oddělení xxxx mít xxxxx xxxxxxxx vlhkost; xxxxx xx xx nutné, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografií. Xxxxxx xxxxxx I (3.3) xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx XX (3.4) pro xxxxxxxxx XX světlem. Xxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxx xxxxx 15 xx 20 xx (asi 1 xxxxxx 30 xxxxx), xxxxxxxx chromatografii x xxxxxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxx xx xxxxx antibiotika xxxxx xxx 1 μx/xx2, je xxxxx xx ošetření chromatogramu xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx XX xxxxxx žluté xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx bioautografií
Nalít xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), xxxxx xx předem xxxxxxxx X. cereus (3.9), xx xxxxxxxx xxxxx (4.5) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Po pěti xxxxxxxx xxxxxxxx odejmout xxxxx x xxxxxxx xx xx jinou xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx přes xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotika xx xxxxxxx světlými xxxxxxxxxxx zónami v xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx.
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Identifikace
Relativní xxxxxxx Xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx uvedeny zde. Xxxx hodnoty xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx papíru x xxxx xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (TC) |
0,40 |
|
Oxytetracyklin (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "epi" xxxxxxxxx xx xxxxx než xxxxxxxx normálních xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, OXYTETRACYKLINU X TETRACYKLINU
A. DIFÚZÍ XX XXXXX
1. Účel x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x tetracyklin (TC) x krmivech, koncentrátech x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx jejich xxxxxxxxx xx 5 xxx. Xxxxxx nižší xxx 5 xxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx rovných nebo xxxxxxx xxx 50 xxx xx vzorek xxxxxxxxx zředěným xxxxxxxxxx. X obsahů xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx CTC x xxxxx methanolu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx stanovení OTC x XX.
Xxxxxxxx se xxxx zředí a xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX, XXX xxxx TC na xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. cereus. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus XXXX x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxx. Inkubovat xxxx noc xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx xx šikmý xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx fyziologického solného xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Inkubovat 3 xx 5 dní xxx 28 až 30 °C, xxxx xxxx spóry 15 xx xxxxxxxx (4.6) xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx sporulace, x xxxxxxxxxxxxx. Tato xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, které umožní xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotiky xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zóny. Xxxx xxxxxxxx je xxxxxxx 0,2 x 0,3 ml na 1000 ml. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Bazální médium xxx xxxxxxxxx [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 g |
|
Kvasnicový extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 g |
|
"Tween 80" |
1 ml |
|
Fosfátový xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx borité |
15 xx |
|
0,5 % ethanolový xxxxxx xxxxxxxxxxx modře |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx upravit xX na 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2H2O x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 ml |
4.3 Fosfátový xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda ad |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) ethanol.
4.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.8 70 % (V/V) xxxxxxxx: připravit čerstvý xxxx použitím x xxxxxxx xx xX 4,5 xx použití xxxxxxxx sírové xxx 2 X.
4.9 Směs xxxxxxx acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (d: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx je vyjádřena x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxxx zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx chlortetracyklinu-HCL xx 1 xx. Zředění xx provede za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 5,5, zředěného 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx pufru (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Oxytetracyklin
Postupem xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx odpovídá 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 ml, standardní xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 1,6 μg xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 připravit xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8 obsahující 1,0 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,5 |
μg/ml |
|
S2 |
0,25 |
μg/ml |
|
S1 |
0,125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx xxxxx xxxx nižní xxx 50 xxx
Xx xxxxxxxxxx xxxxxx přidat formamid (4.8) x množstvích xxxxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxx fosfátovým pufrem (4.3) podle xxxxxx x xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8. Koncentrace xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxx překročit 40 %.
Xxxxxxxxx nebo dekantovat xxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxxx roztok. Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, U2 x X1 postupným ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx fosfátového xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxx |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Xxxxxxxx xxxxxx x g |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
ml formamidu (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
řeď. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx U8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 ppm
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xx xxxx výrobní xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx 2 xx 10 x 20ti xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx (4.9). Protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xX xxxxx xxx 3; xxxxx xx xx nutné, xxxxxxx pH xx 3 (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 10 % kyseliny xxxxxx). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xX xx 5,5 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8,0 (4.4), za xxxxxxxxxxx bromkresolové zeleně (xxxxxx se ze xxxxx na modrou). Xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8 (xxx 6.1).
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1), xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx je xxxxxxx x xxxx 6.2.1 xxx, xx se xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx na xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx za xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (S8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, X1). Každá miska xxxx obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx tímto xxxxxx xxxxxx misky x xxxxxx velikosti, xxx bylo xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Vypočítat množství xxxxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), které se xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx množství roztoku xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 ml, x závislosti xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat difúzi xxxxxxx čtyřikrát x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx misky xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx inhibičních xxx, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx křivky standardního xxxxxxx x extraktu. Xxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus relativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + U8 - X1 -X2 -X4 -S8) · 0,602 / U4 + X8 + X4 + S8 - X1 -U2 -X1 -X2
Xxxxxxxx aktivita = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % relativní xxxxxxx.
X. TURBIDIMETRICKY
1. Xxxx x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), oxytetracyklin (XXX) x xxxxxxxxxxx (XX) xxx koncentracích xxxxxxx xxx 1 x/xx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, která xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Tato xxxxxx xx xxxxxxxxx než xxxxxx na xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx stanovení obsahu XXX xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x pro xxxxxxxxx xxxxxx XXX x XX směsí xxxxxxxxx a kyseliny xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx účinek se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxx bylo xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx závisí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx K 14 [6]
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx zkumavky x šikmým xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx xx přidá 1,5 xx 3 % agaru (xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxx xxx při 37 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce a xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx na šikmý xxxx. Zároveň připravit xxxxxxxxxx xxx laboratorní xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
24 hodin před xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx celou kulturu xxxxxxxxx xx zkumavce xxxxx v xxx 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxx přenést xxxxxxxx xx sterilních xxxxxxxx xx asi 100 xx xxxxxxxx bazálního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx 37 °X xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmické xxxx (1x30 až 2x).
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Bazální médium xxx xxxxxxxxx [7]
|
Pepton |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx sodný |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
xX xx xxxxxxxxxxx: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Asi 10 % (x/X) roztoku xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx aktivita xx xxxxxxxxx v chlorovodíku.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx látky (4.7) x za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx zásobní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 xx 500 μx XXX-XXX, OTC-HCL xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 200 xxxx 250 xx dát 1 xx 2 x xxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxx asi 100 xx xxxxx (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
6.2 Oxytetracyklin x tetracyklin
Do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xxxx 250 xx dát 1 xx 2 g xxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxx pufrem, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx.
7. Metoda stanovení
7.1 Xxxxxxxx standardních xxxxx x xxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx kalibrační xxxxxx, xx xxxxx xx znázorní xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx hodnot xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx. Ředění xx xxxxxxx xxxxx podmínek xxxxx kmene, xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xx postupuje xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) fosfátovým xxxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx XXX-XXX xx 1 xx. Poté xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxxx určených xxx xxxxxxxxx, 6 ředění, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku |
ml xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Zředit extrakt (6.1) xx použití xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,12 μx CTC-HCL. Xxx 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx a 0,75 xx (= 0,09 μx) xx dvou xxxxxx zkumavek. Doplnit xxxxx xxxx jiných xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) za použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,6 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX na 1 ml. Poté xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx a ve xxxxxxxxxx určených pro xxxxxxxxx, 7 ředění, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.2) xx použití xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxx 1 xx tohoto roztoku xx dvou zkumavek x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx dvou xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx jiných zkumavek xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx při 590 xx 85 % xxxxxxxxx propustnost x 5 xx xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx propustnost xx 2 xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx aparatury xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx xxxxx xxxxxxxx (7.1.1 nebo 7.1.2) 9 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx 37 °C + 0,1 °C. Xxxxxxxxx xxxx se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx gradient xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx (xxxxxx 2h30 xx 3x). Xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx xxxxxxx formaldehydu (4.6) xx xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Měření xxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxxx při 590 xx, přičemž xxxxxxxx xx nastaví xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx nejvyššímu xxxxxx xxxxxxxxxxx). X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 2 cm x raději 5 xx xxxxxx.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx xx milimetrovém xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx koncentracím xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx vzorku.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech, x to xxxxxxx x přítomnosti tetracyklinů. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Princip
Vzorek se xxxxxxxxx zředěným xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx extrakt xxxxx x jeho xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. cereus. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx přímo xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: B. xxxxxx, X 250 TR [8] (rezistentní xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx média (4.1) x xxxxxx 100 μx oxytetracyklinu xx 5 ml. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx asi 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx na xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx bakterie ze xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx xxx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Naočkovat tuto xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxxxx koncentrace xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 až 5 dní xxx 28 xx 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 ml xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx xxxx mikroskopicky xxxxxxx sporulaci, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nejméně 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx testy xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxx použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, ale ještě xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,1 a 0,2 xx na 1000 ml. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
|
Před xxxxxxxx xxxxxxx pH xx 6,5. |
4.2 Bazální médium xxx stanovení [10]
Xxxxxx (4.1) xxxxxxxx na xX 8,8.
4.3 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (X/X) ethanol.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (x/X) xxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) aminometanu x.x.
4.7 Xxxxxxxxx xxxxxx
|
Xxxxx xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (hydroxymethyl) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 x |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx aktivitě.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx látku (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx (4.6) standardní xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,05 |
μg/ml |
|
S2 |
0,025 |
μg/ml |
|
S1 |
0,0125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx 2 až 10 x 100 xx xxxxxxx (4.7) x protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,1 μx oleandomycinu xx 1 ml (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx roztoku (4.6).
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X suspenzí xxxx (3.2).
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx účelem vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx udělat x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx sestávajících xx x xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx do xxx xxxxxx odměřená xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 a 0,15 xx, v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nejméně xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx během 18 xxxxx asi xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx semilogaritmický xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - U2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl mezi xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx ošetří xxxxxxxxxx pufračním xxxxxxxx x xX 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, a poté xx extrahuje methanolem. Xx odstředění xx xxxxxxx zředí a xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx naočkovaném Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný logaritmu xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx přes noc xxx xxx 35 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx měsíc xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx (3.1) za xxxxxxx 2 až 3 xx fyziologického xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx do Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 hodin xxx 35 °X, xxxx xxxx bakterie za xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx 75 % světelnou xxxxxxxxxxx xxx 650 nm.
Pokud xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x chladničce, xxxx xxxxxxxxxxx je xxxxx týden.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) určit xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx zřetelné xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
Za xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze xxxxxxx xX xx7,0 x xx účelem xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Fosfátový pufr, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 p.a. |
5,5 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 60/40 objemově.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: tylosin o xxxxx xxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx látku (4.8) 3 hodiny xxx 60 °X xx xxxxxxx sušárně (5 mm xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 xx do xxxxxxx xxxxx, rozpustit x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxx roztok xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 7 (4.3) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx základního xxxxxxxx 1000 μg/ml.
Na xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok S8 xxxxxxxxxx 2 μg xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx.
Xxxx připravit xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx; xxx premixy a xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Přidat 60 xx fosfátového xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, x homogenizovat 2 minuty (xxxxxxxxx xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx (4.7) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tylosinu 2 μx/xx (= U8). Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx použití směsi (4.7).
Xxx xxxxxx xxxxx xxx 10 xxx xxxxxxx xxxxxxx do xxxxx v rotačním xxxxxxxxxx xxx 35 °X a xxxxxxxxx xxxxxxxx ve 40 % methanolu (4.6).
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xx xX 8 xxx 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx v miskách xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, X1). Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx účelem vybrat xxxxx o takové xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx udělat x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx má xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití misek xxxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 200 mm x x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx do xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, v závislosti xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx přes xxxx xxx 35 xx 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zaznamenat xxxxxx na xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zanesením logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx průměru xxxxxxxxxxx zón. Načrtnout xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, xxx křivky xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx pomocí xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 - X2 - X4 -S8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. STANOVENÍ XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx na xxxxx -
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, koncentrátech x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx stanovení xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztokem "Xxxxx 80". Xx odstředění xxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx měřením xxxxxx virginiamycinu xx xxxxxxxx médiu naočkovaném Xxxxxxx lutea. Difúze xx xxxxxxx vytvořením xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx lutea XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xxxx xxx při asi 35 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každých 14 dní na xxxxx xxxx.
3.2. Příprava xxxxxxxxxxx suspenze
Smýt bakterie xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx použití 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx x cílem xxxxxx xxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 nm. Xxxxx se tato xxxxxxxx skladuje x xxxxxxxxxx, xxxx trvanlivost xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx na deskách x xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx množství xxxxxxxx xxxxx, které xxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx virginiamycinu xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Kultivační xxxxx a činidla
4.1 Xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx [12]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 až 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx použitím xxxxxxx xX na 6,5.
4.2 Fosfátový xxxx, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx ad 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 objemově.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Tween 80" (x/X).
4.7 Standardní xxxxx: xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) obsahující 800 μx virginiamycinu xx 1 xx. Xx základě tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx pracovní roztok X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1+) za xxxxxxx xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 ml xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxxxxx 20 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxx xx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx reziduum xx 20 xx xxxx xxxx xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x U1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx vyšším než 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 g xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 ml xxxxxxx (4.6) x protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxx směsí (4.5) s cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx virginiamycinu xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1, xxx je xxxxxxx x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 48 xx 50 °C xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx koncentrací xxxxxxxx (X8, U4, X2, X1).Xxxxx miska xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat misky x takové velikosti, xxx bylo xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstvy x tloušťce asi 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití misek xxxxxxxxxxxxx xx z xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx plastovým xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx a xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx čtyřikrát x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx misky xxxx xxx xxx 35 xx 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity se xxxxxxxx pomocí této xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 -X1 - X2 - S4 - S8) · 0,602 / U4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - S1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx a dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[3] Xxxx amido slouží x xxxxxxxx inhibičních xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxx).
[6] Xxxxx xxxx xxxxxxxxx x Xxxxx xxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx růst xxx X. xxxxxx XXXX 6538 X.
[7] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Kmen izolovaný x Kielu xxxxx XXXX.
[9] Může xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Může xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx kultivační médium xxxxxxxxx složení a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[11] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx a dávající xxxxxx xxxxxxxx.