Xxxxx Směrnice Komise
ze xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx metod odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu krmiv [1], a xxxxxxx xx článek 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisy x xxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx krmiv, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx odběru xxxxxx x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS xx xxx 15. června 1971 [2] a 71/393/XXX xx dne 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že s xxxxxxx na xxxx xxxxxxx provedených xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem x xxxx, xx opatření xxxx směrnice jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské státy xxxxxxx, že xxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxx škrobu, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx, jakož x x aktivitu xxxxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx popsaných x xxxxxxx I xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx směrnice Komise x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, kterou xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx pro úřední xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x příloze X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx x o xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, oleandomycinu, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, se provádějí xxxxx metod popsaných x příloze XX xxxx směrnice.
Obecná xxxxxxxxxx xxxxxxx x části 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS ze xxx 15. června 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku k xxxxxxx, se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx II xxxx směrnice.
Xxxxxx 3
Členské státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1973. Xxxxxxxxxx o xxxx informují Xxxxxx.
Xxxxxx 4
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 27. xxxxx 1972.
Za Xxxxxx
xxxxxxxx
X. L. Xxxxxxxx
[1] Úř. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX I
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x vysoké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu x xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxx krmiv, xxxxx xxxxxxxx řepné xxxxx, řepnou xxxxx, xxxxxx řepné skrojky xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx kvasnice, xxxxxxxx bohaté xx xxxxxx (xxxx. řízky x xxxxxx z xxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx dvojité xxxxxxxxx. Při xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxx za tepla xxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx a xxxxxxxx xx polarimetricky xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 40 % ethanolem. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx optická xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx při prvním xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx vynásobený xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx ve vzorku.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) kyselina chlorovodíková, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X x xx xxxxxxxxxxx 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (X/X) ethanolu. 10 xx = 30,94 ml 0,1 X XxXX.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxx X: xxxxxxxxx xx vodě 21,9 x octanu xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x ledové xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx 100 ml.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx XX: xxxxxxxxx xx vodě 10,6 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, x: 0,948 při 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 xx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xxxx xxxxxx sítem x xxxxxxxx oky x xxxxxxx 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx celkové xxxxxxx xxxxxx (X xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx. Xxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx xx zkušební xxxxxx xxxxx rozmístil x xxxxxx dalších 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxx a xx dobu xxxxxxx xxx xxxxx silně x pravidelně xxxxxxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx ve xxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxxxx, xxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx x lázně xxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx vyjmout xxxxx x xxxxx, xxxxxx 30 ml xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx na 20 °C.
Přidat 5 xx Carrezova xxxxxxx X (3.3) a xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxx přidat 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx XX (3.4) x xxxx jednu xxxxxx xxxxxxxxxxx. Doplnit po xxxxx vodou, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (což xx xxxxxx), xxxxxxxx stanovení xx použití xxxxxxx xxxxxxxx Carrezova roztoku X x II, xxxxxxxxx 10 ml.
Poté xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v 200 xx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx rotace (P’ xxxx X’) xxxxx xxxxxxxxxxx xx 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx, dát xx xx xxxxxxx baňky x objemu 100 xx x xxxxxx xxx 80 ml xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Poté xxxxxx baňku xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx rysku xxxxxxxxx (3.5), homogenizovat x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x silně xxxxxxxxx. Xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxxxx xxxxx zpětný xxxxxxx x ponořit ji xx xxxxxx vodní xxxxx. Přesně xx 15 minutách xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx, přelít xxxx xxxxx do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx Xxxxxxxxx roztoku X (3.3) x II (3.4), xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, jak xx xxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Obsah xxxxxx (%) xx xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2 000 (X - X’) / [α]X20°
xxx je:
P = celková xxxxxxx xxxxxx, x úhlových xxxxxxxx.
X’ = xxxxxxx xxxxxx látek xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : rýžový xxxxx
+ 195,4°: bramborový xxxxx
+ 184,6°: xxxxxxxxx škrob
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: xxxxx xxxxx
+ 181,3°: xxxxxx škrob
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]X20° · (2 X · 0,665) (S - X’) / [α]D20°
Kde xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx rotace, ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx xxxxxx látek xxxxxxxxxxx xx 40 % ethanolu, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xx 100 xx xxxx, xxxxx xx při xxxxxxxx 200 mm xxxxxxxx xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx podle xxxxxxxxxxxx:
16,29 x pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 g xxx německé xxxxxxxxxxxx
20,00 x pro smíšené xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = xxxxxxxxxx xxxxxxx rotace xxxxxxx xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 0,4 absolutní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxx 40 % x 1 xxxxxxxxx hodnoty pro xxxxx xxxxxx rovnajícího xx xxxx xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx více xxx 6 % uhličitanů, xxxxxxxxxxx jako uhličitan xxxxxxxx, uhličitany xxxx xxx xxxx stanovením xxxxxxx rotace xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 V případě xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx laktózy, jako xx sušené xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, postupovat xx přidání 80 xx ethanolu (3.5) xxxxx: Připojit xx Xxxxxxxxxxxxx baňku zpětný xxxxxxx, ponořit ji xx 30 minut xx xxxxx lázně x xxxxxxx 50 °X. Xxxxxx vychladnout x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x bodě 5.3.
2. STANOVENÍ XXXXXXX XXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx dusíku xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx mineralizuje xx mokra. Kyselý xxxxxx se alkalizuje xxxxxxxx hydroxidu sodného. Xxxxxxxx amoniak se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x odměřeném xxxxxxxx xxxxxxxx sírové, xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx xxxxxxx XxX x.x. xxxx síran xxxxxxx xxxxxxxxxxx CuSO4 · 5X2X x.x., xxxx rtuť xxxx xxxx xxxxxxxx HgO x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx xxxxx x.x.
3.4 Xxxxxxxx sírová x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Kyselina sírová 0,5 X.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxxx xx 100 xx 95-96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxx sodného.
3.9 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 N.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx roztok xxxxxx xxxxxxx x.x.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx thiosíranu xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 x vzorku x přesností xx 1 xx x xxx ho xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 g xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 xx 0,4 g xxxxx xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 g xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxx 0,6-0,7 g xxxxx xxxxxxxxxx), 25 ml xxxxxxxx sírové (3.4) x několik granulí xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx baňky. Xxxxxxxx xxxxx, nejprve xxxxx x za xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx hmota xxxxxxxxxxx x pěna xxxxxxx; xxxx zahřívat xxxxxxxxxxxx dokud xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xx xxxxxx xxxx a xxxxxxxx (světlezelený, pokud xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxx vychladnout.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, aby se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx; xxxxxx xxxxxxxxxxx; poté xxxxxx několik xxxxxxx xxxxx (3.3).
Přidat xx xxxxxx xxxxx destilační xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) nebo 0,5 X (3.6) x závislosti na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx několik xxxxx indikátoru xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx baňku na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x ponořit konec xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx baňce xx xxxxxxx nejméně 1 cm (viz xxxxxxxx 7.3). Xxxx xxxxxxx x kohoutem xxxxxxxx nalít do xxxxx 100 ml 40 % xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx byl xxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxx xxxxx, přidat xx xxxxx rovněž buď 10 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xx 30 minut xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Po xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x destilaci. Ukončit xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxxx xxxxxxx ukáže, že xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx destilace čas xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx baňky x xxxxxxxxx zbarvení. Xxxxx xxxxx ke xxxxxxxx xx žluta, xxxxx xxxxxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx baňce xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx sírové, dokud xx zbarvení xxxxxxx xx xxxxxx žlutou.
5.4 Xxxxxxxx metody
Za účelem xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, se xxxxxxx xxxxx pokus (xxxxxxxxx x xxxxxxx), x xx xxx xxxxxx, xxxxx má xxx xxxxxxxxxx. Za xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx se provede xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, destilace x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx x.x. (x.x. 114 °X; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 x acetanilidu xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kyseliny xxxxxx, 1 ml xxxxxxxx sírové 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx. Vynásobit xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx vyjádřit xxxx procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % a xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx pro obsah xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xx xxxxx použít xxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx xxxx mineralizací x xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx ztrát.
7.2 X xxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N, xxxxx má být xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx, xxxxxx xx 10 xx 15 xx x xxxxxxx xxxxx xx 25 xx.
7.3 Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, přidat hydroxid xxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxxxx baňky na xxxxxxx a xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx tak, xxx xx nesmíchala x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXX PEPSINEM X XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx frakci xxxxxxx xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx ve xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx pro stanovení xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx chlorovodíková, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 x/xx xxxxxxx; xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx v xxxxx 4 xxxx xxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxxx v souladu x xxxxx metodou.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2); xxxxxxxx: 400 j/l.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (např. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x bodě 3 metody pro xxxxxxxxx obsahu xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Vodní xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 40 °X ± 1 °X.
4.2 Mineralizační x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx a dát xx xx odměrné xxxxx o xxxxxx 500 xx. Xxxxxx 450 xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 40 °C. Xxxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxx hrudek. Xxxxxx, xx je xX xxxxxxxx nižší xxx 1,7. Vložit xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx (4.1) a xxxxxx xx xxx 48 xxxxx. Xxxxxxxxx po 8, 24 a 32 hodinách. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxx 15 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.1), zchladit xx 20 °X, xxxxxxx xx rysku xxxxx a xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 ml xxxxxxxx x přesností xx 1 mg x dát ho xx xxxxx destilační xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, ve xxxxx xxxx bodu 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx emulse (3.5). Xxxxxxxxxx x silném xxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stopy xxxx.
Xxxx xx xxxxxx čirý x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx var xxxxx xxxxx hodinu. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx proteinů x xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxxx, xxxxx xx být xxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx sírové xxxxxxxxxxxx během xxxxxxx xxxxxx xx objemu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorkem. 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 mg xxxxxx.
Xxxxxxxxx množství xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Výsledek xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx xxxxx překročit:
- 0,4 absolutní xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx než 20 % x xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 absolutní hodnoty xxx xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxx získané xxxxx xxxxxxx nemají xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx vivo.
7.2 Xxxxxxx o obsahu xxxx vyšším než 10 % xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX AKTIVITY PEPSINU
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pepsinu xxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx chlorovodíkovou.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v prostředí xxxxxxxx chlorovodíkové. Nehydrolyzovaná xxxxxx proteinů xx xxxxxxx xxxxxxxxx trichloroctovou. Xx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx hustota tohoto xxxxxxx xx xxxx xxx 750 nm x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxx množství xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx takové xxxxxxxx hydroxyarylových xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx činidlem Xxxxx-Xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 N.
3.2 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,025 N.
3.4 5 % roztok (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Činidlo Folin-Ciocalteu. Xxx 100 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (Na2WO4 · 2X2X), 25 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 xx xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx a xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx kyseliny xxxxxxxxxx (x: 1,71) x 100 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (d: 1,19), xxxxxxxx xxxxx xx zpětný chladič, xxxxx xx xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx varu xx xxxx 10 xxxxx. Nechat vychladnout, xxxxxxx xxxxxx chladič, xxxxxx 175 x xxxxxx lithného (Li2SO4 · 2X2X), 50 xx vody x 1 ml xxxxx. Xxxxx xx dobu 15 xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx vychladnout. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1 x, xxxxxxx xx xxxxx vodou, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx použitím xxxxxxxx 1 objem xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx 2 g xxxxxxxxxxxx substrátu xxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 354 xx xxxxxx [1] x dát xx baňky x xxxxxx 200 xx x xxxxxxxxxxxxxx zábrusem. Xxxxxx několik xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx, dokud se xxxxxxxxxx zcela xxxxxxxxxx. Xxxxxxx vakuum x xx protřepávání xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx xx 100 xx. Xxxxxxxxx bezprostředně xxxx použitím.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx: rozpustit 181,2 xx tyrosinu x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (zásobní xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx tohoto roztoku x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx xxxxxx roztoku xxxxxxxx 0,2 μmol xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxx ultratermostatem xx 25 °X + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, xxxxxxxx: 1 xxxxxxx.
4.4 xX xxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx x xxx ho xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx x xxxxxxx xx xxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). xX xxxxxxxxxxxx xX metrem xxxx xxx 1,6+0,1. Ponořit xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 ml roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx lázni (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 1,0 ml xxxxxxx xxxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx x xxxx skleněnou xxxxxxxx zesílenou xx xxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx 25 °X xxxxxx xx xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxx pepsinu (doba x xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx). Xxxx xxxxxx 10,0 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx hustoty
Odpipetovat 5,0 xx xxxxxxxx, xxx xx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx zředěného xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 až 10 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx roztoku spektrofotometrem xxx 750 xx x kyvetách x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxx x xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxx na 25 °C, xxxxxxxxxxxxx x xxxx přidat 1,0 ml roztoku xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1. Promíchat xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx přesně 10 minut xx xxxxx lázni (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx suchý xxxxx. Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 5.3.
5.5 Kalibrační xxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, a 5,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.1) xx 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx zředěného xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xxxxxx optickou hustotu xxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx větě xxxx 5.3. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx proti xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x μmolech, které xxxxxxxx optické hustotě xxxxxxxxxx roztoku x xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx pepsinu x μxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx x za jednu xxxxxx při 25 °X se xxxxxxxx xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx xx xx (x/xx) = 0,32 a / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx v μxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx v xx xxxxxxx podle bodu 5.2.
7. Poznámky
7.1 Množství xxxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx, musí xxx takové, xxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx měření získána xxxxxxx hustota 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx na mg xxxxxxx touto metodou xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx milijednotkám/mg (μxxxx xxxxxxxx/xx xxx. xxx 35,5 °C) xxxx
36400 komerčních xxxxxxxx/x (μxxxx xxxxxxxx/x za 10 xxx. xxx 35,5 °C).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx volný xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx mouce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx obsahují. Xxxxxx hranice pro xxxxxxxxx obsahu je 20 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 3-amino-1-propanolu, a xx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu xxx stanovení volného xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Gossypol xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx je xxxxxx xxx 440 xx.
3. Činidla
3.1 Směs xxxxxxxxxxxx x xxxxxx: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx p.a. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx n-hexanu.
3.2 Xxxxxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx x objemu 1 x nalít xxx 500 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx ledové xxxxxxxx xxxxxx x 50 xx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx je xxxxx xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx X: xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx 2 xx 3-amino-1-propanolu a 10 xx ledové xxxxxxxx xxxxxx. Zchladit xx pokojovou xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx činidla je xxxxx xxxxx.
3.4 Anilin x.x.: xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pokusu xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx přes xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x posledních xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx několik měsíců x zazátkované xxxxx x xxxxxxx xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 xx dát 27,9 xx octanu xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx xx odměrné xxxxx o xxxxxx 250 xx 50 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx A. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,02 xx/xx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx jedné xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 ml xxx 27,9 xx xxxxxx gossypolu. Rozpustit x doplnit xx xxxxx rozpouštědlem X (3.3). Koncentrace xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,5 xx/xx.
Xxxxx xxxx standardní xxxxxxx xxxxxxxxx X a X xxxxxxxx před xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 24 hodin.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxx s malým xxxxxxxxx zkušebního xxxxxx x xxxxxxxxx velkou xxxxxxxxx částí xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx přesné xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x bavlníkových xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx pokrutinách xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 x; xxx krmné směsi xx může xxx 5 g. Xx xxxxxxx případů je xxxxxxxxxx alikvotní část 10 xx xxxxxxxx; xxxx by xxxxxxxxx 50 xx 100 μx gossypolu. Pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx zkušebního xxxxxx xxxx xxx xxxx 0,5 x 5 x, xxx xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 40 xx 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xx měla xxxxxxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx vzorek do xxxxxxx baňky xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxx xxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx přidat 50 ml xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx x jednu xxxxxx promíchávat v xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx v xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx nálevku x xxxxxxxx hodinovým xxxxxxxx. Pomocí xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (A x X) x xxxxxx 25 ml xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Případně xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) xx 10 xx. Xxxx xxxxxxx xx rysku xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx.
Xxxxxx pipety xxxxxx 10 ml rozpouštědla X (3.2) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (C x X) x xxxxxx 25 xx. Doplnit xx rysku xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (X) x (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx jednu xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx při 440 xx a xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx slepý pokus (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (C) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx pokus xx xxxxxxx xxxxxxx roztoku xxxxxx (= upravená xxxxxxx xxxxxxx). X xxxx xxxxxxx vypočítat xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx uvedeno x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx celkového gossypolu
Dát xxxxxxxx vzorek xxxxxxxxxx 1 až 5 xx gossypolu xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx x přidat 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3). Současně připravit xxxxx xxxxx x xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx xxxx odměrné xxxxx x objemu 50 xx. Zahřívat xxx xxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx xxx baňky xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát 10 xx 15 xxxxx, poté xxxxxxxxx x zachytit filtráty x baňce se xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx pipety xxxxxx 2 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 xx x 2 ml xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 ml. Doplnit xx 25 xx xxxxx xxxxx baňky x xxxxx xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Tyto xxxxxxx xx použijí xxxx referenční xxxxxxx.
Xxxxxx 2 ml anilinu (3.4) xx xxxx xxxxxx xxxxx. Zahřívat 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní lázní, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat stát xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx uvedeno x xxxx 5.2. X této hodnoty xxxxxxxxx xxxxx celkového xxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx v xxxx 6.
6. Xxxxxxx výsledků
Výpočet xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx buď xx xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx (6.1), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xx stanovených xxxxxxxx xx specifická xxxxxxx xxxxxxx xxxx:
xxxxx gossypol: X 1% / 1xx = 625
celkový xxxxxxxx: X 1% / 1xx = 600
Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx takto:
gossypol %: X · 1 250 / X1%1xx ·&xxxx; · p · x
xxx:
X = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xx uvedeno x xxxx 5.2
x = xxxxxxxx vzorek x x
x = xxxxxxxxx část xxxxxxxx x xx
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx křivky
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxx xx pěti xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 xx. X každé xxxxx xxxxxx pipetou 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) xx 10 xx.
Xxxxxxx baňky xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx, aby se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou teplotu, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxxxx optickou xxxxxxx standardní xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx gossypolu (x μx).
6.2.2 Xxxxxxx gossypol
Připravit 6 odměrných xxxxx x xxxxxx 50 xx. Do xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx 10 ml xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx X (3.6). Xxxxxxx xxxxx xxxxx baňky xx 10 ml xxxxxxxxxxxxx B (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx x promíchat.
Přidat xxxxxxx 2 ml těchto xxxxxxx do xxxx xxxxx x 6 xxxxxxxxx baňkách x xxxxxx 25 ml. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx na 25 ml xxxxx x isopropanolu a xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxx 5.2 stanovit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx roztoků xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx série. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hustoty xxxxx množství gossypolu (x μx).
6.3 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit:
- 15 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxxxxxx xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 ppm xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % relativní xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx: 17,7 % xxxxxx).
PŘÍLOHA XX
1. STANOVENÍ X IDENTIFIKACE XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Účel a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, x koncentrátech x xxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx směsí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx sestupné papírové xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx roztoky. Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hodnot Xx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, x xx xxx xxxxxxxxxxxx x XX xxxxxx (xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx), nebo xxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx naočkovaném B. xxxxxx.
3. Činidla
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx kyseliny xxxxxxxxx x.x. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X p.a. |
7,45 x |
|
Xxxxxx x.x. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan disodný Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx I: xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 objemově. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím |
|
|
3.4 Xxxxxx II xxxx xxxxxxx nitromethanu/čistého chroroformu/α-pikolinu: 20/10/3 objemově. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx, tetracyklin, xxxxxxx xxxxxxxx xx vyjádřena x chlorovodíku.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx suspenze xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx: řídit xx xxxxxx xxxxx xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx a tetracyklinu xxxxxx xx xxxxx, xxx je xxxxxxx x části 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Kultivační xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x 5 % (x/X) roztok glukosy.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx papírovou xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxx 25 xx). Xxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxx (2440B xxxx 2043X) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Odstředivka
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx asi 20 x 30 xx xxx bioautografii.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) x xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx stanovení XX xxxxxxx
Xxxxxx roztoky (5.1) xxxxxxxxxx pufrem (3.2) x xxxxx získat xxxxxxx, jejichž koncentrace xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx roztoky, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μg chlortetracyklinu-HCL, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a tetracyklinu-HCL xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 xxx, xx možné xxxxxx xxx homogenizovaný xxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx proséváním, neboť xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vzorek xx xxxxx (3.5) a xxxxxxxxx. Sebrat xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxx ho xxxxxxxx xxxxxx směsí (3.5) x cílem xxxxxx koncentrace antibiotika xxx 100 μx xx 1 xx (6.1) x 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Stanovení x xxxxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxxxx xxxxxxx, xX 3,5 (3.1). Odstranit xxxxxxxx xxxxxxxx vtlačením xxxxxx xxxx listy xxxxxxx xxxxxxxxxxx papíru. Xxxx xxxxxxx na xxxxx 0,01 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 a 5.3) a xxxxxxxx (6.1 a 6.2). Xxx xxxxx oddělení xxxx mít papír xxxxxxxx xxxxxxx; xxxxx xx to xxxxx, xxxxxx trochu xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografií. Xxxxxx xxxxxx I (3.3) xxx stanovení xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx XX (3.4) xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx. Xxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxx xxxxx 15 až 20 cm (asi 1 xxxxxx 30 xxxxx), přerušit xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx UV světlem
Když xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 1 μx/xx2, xx možné xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx ozářením xxx XX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx bioautografií
Nalít xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), xxxxx xx předem naočkuje X. xxxxxx (3.9), xx skleněné xxxxx (4.5) a položit xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Po pěti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x položit xx xx jinou xxxxxx x kultivačním xxxxx, kde zůstane xxxxx xxxxxxxxx doby. Xxxxxxxxx přes xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx tetracyklinového antibiotika xx xxxxxxx světlými xxxxxxxxxxx zónami x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx.
X xxxxxx chromatogramu xx xx inkubaci xxxxxx xxxxxx (3.11) na xxxxxx.
7.4 Identifikace
Relativní xxxxxxx Xx tetracyklinových antibiotik xxxx xxxxxxx zde. Xxxx xxxxxxx se xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx jakosti xxxxxx x jeho vlhkosti:
|
Chlortetracyklin (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (TC) |
0,40 |
|
Oxytetracyklin (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "xxx" xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX
X. XXXXXX XX XXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Xxxxxx xxxxx xxx 5 ppm xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx interpolací.
2. Princip
U xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx než 50 xxx se xxxxxx xxxxxxxxx zředěným xxxxxxxxxx. X xxxxxx vyšších xxx 50 xxx xx xxxxxx extrahuje xxxxx xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové xxx stanovení CTC x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové xxx xxxxxxxxx OTC x XX.
Xxxxxxxx se xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX, XXX xxxx TC xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. cereus. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Průměr xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus XXXX x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx modře x xxxxxxxx xxxxxx. Inkubovat xxxx xxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx x přeočkovat xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx borité, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Inkubovat 3 xx 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, poté xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.6) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x homogenizovat. Tato xxxxxxxx se xxxx x chladničce xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx na deskách x bazálním xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, které umožní xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx největší xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,2 x 0,3 xx xx 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx při 50 xx 60 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 ml |
|
Fosfátový xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx kyseliny xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % ethanolový xxxxxx methylenové xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx použitím upravit xX xx 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.8 70 % (V/V) xxxxxxxx: xxxxxxxxx čerstvý xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx pH 4,5 za použití xxxxxxxx xxxxxx asi 2 X.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 objemově.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, jejichž xxxxxxxx xx vyjádřena x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx látek (4.11) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx zásobní roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx týden.
Na xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8, jehož xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, standardní xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,6 μg xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx podle xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 1,0 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Obsahy xxxxx xxxx xxxxx xxx 50 ppm
Do xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx formamid (4.8) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx v tabulce. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3) xxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxx získat xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx dekantovat xxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 postupným xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx obsah x xxx |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Xxxxxxxx xxxxxx x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx fosfátového xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
řeď. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx X8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx antibiotika xx vzorku xxxx xx xxxx výrobní xxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxx vzorku o xxxxxxxxx 2 xx 10 g 20xx xxxxxxx jeho xxxxxx xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx musí xxxxxx xX xxxxx xxx 3; xxxxx xx xx nutné, xxxxxxx xX xx 3 (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx použití 10 % kyseliny xxxxxx). Odebrat xxxxxxxxx xxxx extraktu x xxxxxxx pH xx 5,5 za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxx xx ze xxxxx na xxxxxx). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8 (xxx 6.1).
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x U1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx je xxxxxxx x xxxx 6.2.1 xxx, že se xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx spór (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, S2, S1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, X1). Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x extraktu.
Za tímto xxxxxx vybrat xxxxx x xxxxxx velikosti, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx misek xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx nebo plastovým xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr přesně xxxxxxxx množství roztoku xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx při 28 xx 30 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx inhibičních xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx této rovnice:
(U1 + U2 + X4 + X8 - S1 -S2 -X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 -U2 -X1 -S2
Skutečná xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx překročit 10 % relativní xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx chlortetracyklin (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x tetracyklin (TC) xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 1 g/kg, xxxxx xxxxxxxxxx žádná xxxxx, xxxxx by xxxxxx vzniknout xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx rychlejší xxx xxxxxx na agaru.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX se xxxxxx xxxxxxxx xxxxx acetonu, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx obsahu OTC x XX xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx měřením xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultivačního média, xxxxx bylo naočkováno Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Světelná xxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx aureus X 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1.), do xxxxxxx se xxxxx 1,5 až 3 % agaru (xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxx xxx při 37 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx šikmý xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
24 xxxxx xxxx xxxxxxxx přeočkovat xxxxx xxxx subkulturou x xxxxxxxxx xxxx noc xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx v xxx 2 ml bazálního xxxxx (4.1) x xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx asi 100 xx stejného xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xx xxxxx lázni xxx 37 °X xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx fáze (1x30 xx 2h).
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Bazální médium xxx stanovení [7]
|
Pepton |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx sodný |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,32 g |
|
Hydrofosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
|
xX xx sterilizaci: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Asi 10 % (m/V) roztoku xxxxxxxxxxxx.
4.7 Standardní xxxxx: XXX, XXX, TC, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 xx 500 μx XXX-XXX, XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 ml. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx jeden xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 nebo 250 xx dát 1 až 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx asi 100 xx xxxxx (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 4,5 (4.2). Homogenizovat x xxxxxx xxxx.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x tetracyklin
Do xxxxxxx xxxxx o objemu 200 xxxx 250 xx dát 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxx pufrem, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx.
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x extraktu
Zředit standardní xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 4,5 (4.2), tak, aby xxxxxxx xxxxx koncentrací. Xxx každé stanovení xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx interpolace xxxxxxx xxxx hodnot xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxx lišit xxxxxxxxx od laboratoře. Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Chlortetracyklin
Zředit xxxxxxxxxx xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx standardní xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx XXX-XXX xx 1 xx. Poté xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx ředění xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.1) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,12 μx XXX-XXX. Dát 1 xx xxxxxx xxxxxxx do xxxx xxxxxxxx a 0,75 xx (= 0,09 μx) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,6 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx uvedeno xxxx x ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku |
ml xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.2) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxx 1 xx tohoto roztoku xx dvou zkumavek x 0,5 ml (= 0,24 μg) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx objem xxxx jiných xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x 5 xx kyvetě xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 xx kyvetě xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx nenaočkovaného bazálního xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx každé zkumavky (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx v xxxxxx, xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx xx vodní xxxxx, jejíž xxxxxxx xx mícháním udržuje xx 37 °X + 0,1 °X. Xxxxxxxxx xxxx se xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx xxxx možné xxxxxxxxx křivky propustnosti, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxx přesná xxxxxx (obecně 2x30 xx 3x). Xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx vstříknutím 1 xx roztoku formaldehydu (4.6) do xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Měření xxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxxx při 590 xx, přičemž xxxxxxxx xx xxxxxxx na 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx). X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx různých xxxxxxxx xx doporučuje xxxxxx xxxxxxx 2 cm x xxxxxx 5 xx xxxxxx.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx křivku xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx fotometrických propustností xxxxx koncentracím xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx propustnosti xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech, x xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Xx odstředění xx xxxxxxx zředí x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx oleandomycinu xx agarovém xxxxx xxxxxxxxxxx X. cereus. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx, X 250 TR [8] (rezistentní xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxx agarem xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1) x xxxxxx 100 μx oxytetracyklinu xx 5 ml. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx se šikmým xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx asi 3 xx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.3). Naočkovat tuto xxxxxxxx do Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), jehož xxxxxxxxxxx xxxxx je 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 až 5 dní při 28 xx 30 °X, xxxx smýt xxxxx 15 ml xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx může x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nejméně 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx deskách se xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.2) určit xxxxxxxx očkovací látky, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx oleandomycinu největší xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx je xxxxxxx 0,1 x 0,2 xx na 1000 ml. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx při 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 až 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
|
Před použitím xxxxxxx xX xx 6,5. |
4.2 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [10]
Xxxxxx (4.1) xxxxxxxx na xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx methanol
4.6 0,5 % (m/V) xxxxxx xxxx (hydroxymethyl) aminometanu x.x.
4.7 Xxxxxxxxx xxxxxx
|
Xxxxx xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 x |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxx o xxxxx aktivitě.
5. Standardní xxxxxx
Xxxxxxxxx standardní xxxxx (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x zředit roztokem (4.6) x xxxxx xxxxxx koncentraci xxxxxxxxxxxxx 100 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx zředěním s xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xxxx připravit xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx roztoku (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx přidat xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 xx 10 x 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou.
Odstředit, odebrat xxxxxxxxx část extraktu x xxxxxx roztokem (4.6) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,1 μx oleandomycinu xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace U4, X2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro stanovení (4.2) xxx 60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx agaru xx xxxxxxx v xxxxxxx xx použití xxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (X8, S4, X2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx extraktu (U8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx účelem xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x plochých xxxxxxxxxx xxxxx x dokonale xxxxxx hliníkovým xxxx xxxxxxxxx kroužkem x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx odměřená množství xxxxxxx antibiotika xxxx 0,10 a 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx průměru xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x každou xxxxxxxxxxx, xxx každé xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 až 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zaznamenat měření xx semilogaritmický xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - S1 - S2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx xxxxxxxx tylosin x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx pufračním xxxxxxxx x pH 8, xxxxxxxxxxx na 80 °X, x poté xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx se xxxxxxx zředí a xxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx lutea. Difúze xx xxxxxxx vytvořením xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Sarcina xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °X. Skladovat xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx každý xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx agarem (3.1) za xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.4). Naočkovat xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxxxxxx na xX 7,0. Inkubovat 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx xxxx bakterie xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx 75 % světelnou xxxxxxxxxxx xxx 650 nm.
Pokud xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx, xxxx trvanlivost xx xxxxx týden.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx médiem pro xxxxxxxxx (4.1) určit xxxxxxxx očkovací xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx největší možné, xxx ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx zóny. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx při 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, podle jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a přípravy xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx7,0 x xx xxxxxx xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx voda xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Fosfátový pufr, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.4 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Xxxxx methanol.
4.6 40 % (V/V) xxxxxxxx.
4.7 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx methanol: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Standardní xxxxx: xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
Xxxxx standardní látku (4.8) 3 hodiny xxx 60 °C xx xxxxxxx sušárně (5 xx xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 mg xx xxxxxxx xxxxx, rozpustit x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 7 (4.3) x cílem xxxxxx koncentraci xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μg/ml.
Na xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) standardní xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 2 μg xxxxxxxxxx tylosinu xx 1 xx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7) xxxx koncentrace:
|
S4 |
1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,5 |
μg/ml |
|
S1 |
0,25 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x zkušebního vzorku; xxx premixy x xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx na 80 °X, x homogenizovat 2 minuty (kuchyňský xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx (4.7) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1) xx použití směsi (4.7).
Xxx obsahy nižší xxx 10 ppm xxxxxxx xxxxxxx do xxxxx x rotačním xxxxxxxxxx xxx 35 °X x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 40 % methanolu (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat bazální xxxxxx xxx stanovení (4.1) upravené na xX 8 xxx 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx agaru se xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx o xxxxxx xxxxxxxxx, aby xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx médiu nejméně 8 děr o xxxxxxx 10 xx 13 mm. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), které xx má xxxxxx xxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx nebo plastovým xxxxxxxx o průměru 200 xx a x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx čtyřikrát x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx každé xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxx xxxx xxx 35 xx 37 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx standardního roztoku x xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx rovnice:
(U1 + X2 + U4 + X8 - X1 - X2 - X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + S4 + X8 - U1 - U2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. STANOVENÍ XXXXXXXXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxxx x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztokem "Xxxxx 80". Xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx zředí x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx stanoví měřením xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx médiu naočkovaném Xxxxxxx lutea. Difúze xx xxxxxxx vytvořením xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx lutea XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým agarem x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xxxx xxx při xxx 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 dní xx xxxxx xxxx.
3.2. Příprava xxxxxxxxxxx suspenze
Smýt bakterie xx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 ml xxxxxxxxxxxxxx solného xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx smýt xxxxxxxx xx pomoci 25 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x zředit xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 nm. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx trvanlivost xx jeden týden.
Předběžnými xxxxx na xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx virginiamycinu xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [12]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
Xxxx použitím xxxxxxx xX na 6,5.
4.2 Fosfátový xxxx, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 objemově.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Tween 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx látka: xxxxxxxxxxxxx x známé xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
Připravit xxxxxxxxxxx xxxxxx standardní xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 obsahující 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml. Poté xxxxxxxxx postupným xxxxxxx (1+) xx použití xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Výrobky x xxxxxx virginiamycinu xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 xx 20 x xxxxxxxxxx vzorku, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Odstředit nebo xxxxxxxxx, odebrat 20 xx čirého xxxxxxx x odpařit xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 ml xxxx více směsi (4.5) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx směsi (4.5)
6.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx vyšším než 50 ppm
Odebrat 1 xx 10 g xxxxxxxxxx vzorku, xxxxxx 100 ml roztoku (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx filtrovat, xxxx xxxxxx xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx předpokládanou koncentraci 1 μx virginiamycinu xx 1 ml (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x U1, xxx xx uvedeno x bodě 6.1.
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) xxx 48 xx 50 °C xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze na xxxxx xx xxxxxxx x miskách xx xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx roztoku (S8, X4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4, X2, U1).Každá miska xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx tímto xxxxxx xxxxxx misky x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx stejnoměrné vrstvy x tloušťce xxx 2 xx. Upřednostňuje xx použití misek xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx o průmětu 200 xx a xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx xxx xxxxxx xxxxxxxx množství roztoku xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 ml, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxx 35 xx 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx zón, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity se xxxxxxxx pomocí této xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 -X1 - X2 - X4 - S8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Může xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení a xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[3] Xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx inhibičních xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxx).
[6] Tento xxxx xxxxxxxxx v Xxxxx podle XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx S. xxxxxx XXXX 6538 X.
[7] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx složení x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Xxxx xxxxxxxxx x Kielu podle XXXX.
[9] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[11] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx složení x dávající stejné xxxxxxxx.
[12] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.