Xxxxx Směrnice Xxxxxx
xx xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx směrnici Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], a xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx směrnice;
vzhledem k xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx cílem xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx právními x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x složení krmiv, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx vzorků x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX ze xxx 15. června 1971 [2] a 71/393/XXX ze xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [3] již xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx s xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx provedených xxxxx xx však nutné xxxxxxxx třetí xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem x xxxx, že xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, jakož x x aktivitu xxxxxxx, se xxxxxxxxx xxxxx metod popsaných x xxxxxxx X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení xxxxxxx v části 1 (úvod) přílohy xxxxx směrnice Xxxxxx x. 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxx 1971, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, se xxxxxxx xxx metody xxxxxxx x příloze X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx jde x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx tetracyklinových antibiotik, xxxxx x x xxxxxx chlortetracyklinu, oxytetracyklinu, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, tylosinu x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx popsaných x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v části 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. června 1971, s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx popsané x xxxxxxx II xxxx směrnice.
Xxxxxx 3
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1973. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx Komisi.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 27. xxxxx 1972.
Za Xxxxxx
xxxxxxxx
X. L. Xxxxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX X
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx metoda
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu x xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx bohaté xx xxxxxx (např. řízky x moučka x xxxxxxxxxx) nebo škvarky.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx prvním xxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou. Xx xxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxx optická xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx vzorek xxxxxxxxx 40 % xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxx filtrátu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, čiření x filtraci xx xxxxx xxxxxxx rotace xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx při prvním xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx obsah xxxxxx xx xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx chlorovodíková, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx titrací xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N x xx xxxxxxxxxxx 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx v 94 % (V/V) xxxxxxxx. 10 xx = 30,94 xx 0,1 X XxXX.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxx X: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x octanu xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x ledové xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx roztok XX: xxxxxxxxx xx vodě 10,6 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Doplnit xxxxx na 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, d: 0,948 při 20 °X.
4. Přístroje
4.1 Erlenmeyerova xxxxx o xxxxxx 250 ml x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx chladičem.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx prošel xxxxx x kulatými xxx x xxxxxxx 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx celkové xxxxxxx rotace (P xxxx X) (viz xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx x dát xx xx odměrné xxxxx x objemu 100 xx. Xxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxx xxxxxx dobře xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx 25 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Ponořit xxxxx xx xxxxxx xxxxx lázně x xx dobu prvních xxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx ve xxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxxxx, xxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx. Přesně xx 15 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxx, xxxxxx 30 xx xxxxxxx vody x xxxxx xxxxxxxx xx 20 °C.
Přidat 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) a xxxxx minutu xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx XX (3.4) x xxxx jednu minutu xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx po xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (což xx xxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx roztoku X a II, xxxxxxxxx 10 ml.
Poté xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx optickou xxxxxx xxxxxxx x 200 xx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx rotace (P’ xxxx X’) xxxxx xxxxxxxxxxx ve 4 % ethanolu
Navážit 5 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx, dát xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx a xxxxxx xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx baňku xxxx xxxxx hodinu xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx této xxxx xxxxxxxx xxxxx protřepat, xxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxx smíchal x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx rysku xxxxxxxxx (3.5), homogenizovat x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x vzorku) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxxxx xxxxx zpětný xxxxxxx x xxxxxxx xx xx vroucí xxxxx xxxxx. Přesně xx 15 xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx baňku z xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx obsah do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) a XX (3.4), xxxxxxx xx xxxxx vodou, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx rotaci, xxx xx xxxxxxx v xxxx 5.2 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx (%) se xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - P’) / [α]D20°
kde xx:
X = xxxxxxx optická xxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx.
X’ = xxxxxxx xxxxxx látek xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, v xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : rýžový škrob
+ 195,4°: bramborový xxxxx
+ 184,6°: kukuřičný škrob
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: ječný škrob
+ 181,3°: ovesný xxxxx
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx x směsi xxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Xxxxxx sacharimetrem
Procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]D20° · (2 N · 0,665) (X - X’) / [α]D20°
Kde xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx rotace látek xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, xx xxxxxxxx sacharimetru
N = xxxxxxxx sacharózy v xxxxxxx ve 100 xx xxxx, která xx xxx xxxxxxxx 200 xx xxxxxxxx xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx mění podle xxxxxxxxxxxx:
16,29 x xxx xxxxxxxxxxx sacharimetry
26,00 g xxx německé sacharimetry
20,00 x xxx smíšené xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (viz 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxx 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx škrobu xxxxxxxxxxx xx xxxx vyššího xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Pokud xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 6 % uhličitanů, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx stanovením xxxxxxx rotace xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 V případě xxxxxxxx x vysokým xxxxxxx laktózy, jako xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx mléko, postupovat xx xxxxxxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Připojit xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xx 30 minut xx xxxxx xxxxx x teplotě 50 °X. Xxxxxx vychladnout x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.3.
2. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxx xxxxxxxx obsah xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Kjeldahlovy metody.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx mineralizuje xx xxxxx. Xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx v odměřeném xxxxxxxx xxxxxxxx sírové, xxxxx přebytek xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Katalyzátor: xxxx měďnatý CuO x.x. xxxx síran xxxxxxx xxxxxxxxxxx XxXX4 · 5X2X x.x., xxxx rtuť xxxx xxxx xxxxxxxx XxX x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx xxxxx x.x.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Kyselina sírová 0,5 N.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: rozpustit 300 xx xxxxxxxxxxxxx xx 100 xx 95-96 % (V/V) xxxxxxxx.
3.8 40 % (m/V) xxxxxx hydroxidu xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného x.x.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxxx sodného, Xx2X2X3 · 5H2O x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x zpopelněná.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x destilační xxxxxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1).
5. Postup
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 x xxxxxx x přesností xx 1 mg x xxx xx do xxxxx mineralizační xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 x xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 xx 0,4 x oxidu xxxxxxxxx nebo 0,9 xx 1,2 g xxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx xxxx 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.13), promíchat xxxxx baňky. Xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx mírně x xx občasného xxxxxxxxxxxx, dokud hmota xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx dokud kapalina xxxxxxxxxx nevře. Xxxxxxxx xxxxxxxx stěn xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx je xxxxxx čirý x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx použije xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx var xxxxx xxxxx hodinu, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x za xxxxxxx xxxxxxx přidat 250 xx 350 xx xxxx, xxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx; xxxxxx vychladnout; xxxx xxxxxx několik xxxxxxx xxxxx (3.3).
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,5 N (3.6) x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (xxx poznámky 7.2) x přidat několik xxxxx xxxxxxxxxx methylčerveně (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx destilační xxxxxxxxx x xxxxxxx konec xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx baňce xx xxxxxxx nejméně 1 xx (viz xxxxxxxx 7.3). Přes xxxxxxx x kohoutem xxxxxxxx nalít xx xxxxx 100 xx 40 % xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx xxx použit xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx, přidat xx xxxxx xxxxxx xxx 10 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby se xx 30 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Po xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx je xxxxxx alkalická, pokračovat x destilaci. Xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx lakmusový xxxxxxx xxxxx, xx xx xxxxxxxx neutrální. Xxxxx xxxxxxxxx xxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx sběrné xxxxx x pozorovat xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx do xxxxx, xxxxx přidat xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Titrace
Ve xxxxxx xxxxx titrovat xxxxxxxx xxxxxxxx sírové xxxxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 N (3.10) v xxxxxxxxxx xx normalitě použité xxxxxxxx sírové, xxxxx xx zbarvení nezmění xx xxxxxx xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx metody
Za účelem xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx dusík, xx xxxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxx a titrace), x to bez xxxxxx, který xx xxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx provede xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 g xxxxxxxxxxx x.x. (b.t. 114 °C; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 g xxxxxxxxx xxx dusíku; 1 x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Xxxxxxx výsledků
Stanovit xxxxxxxx spotřebované xxxxxxxx xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx sírové 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx. Vynásobit xxxxxxxx dusíku xxxxxxxx 6,25. Výsledek xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx než 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx vyšší než 20 % a xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 absolutní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Je xxxxx xxxxxx některé xxxxxxxxx, xxxxx vyžadují xxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.
7.2 U xxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxx dusíku xxxx xxx objem xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X, xxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx, snížen xx 10 xx 15 ml x xxxxxxx xxxxx xx 25 ml.
7.3 Pokud xxxx baňka destilační xxxxxxxxx nálevku x xxxxxxxx, přidat xxxxxxxx xxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x pomalu xxxxx xxxxxxxx po xxxxxxx baňky xxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX HRUBÝCH PROTEINŮ XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxx xxxxxxx proteinů xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxx 48 hodin xxx 40 °X xxxxxxxx pepsinu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx filtruje a xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx proteinů.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx chlorovodíková, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 N.
3.3 2,0 x/xx xxxxxxx; xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx v xxxxx 4 xxxx xxxxxxx x musí být xxxxxxxxxxxx v xxxxxxx x touto xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), čerstvě xxxxxxxxxx xxxxxx pepsinu x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2); xxxxxxxx: 400 j/l.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxx 3 xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx hrubých xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx aparatura podle Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx x xxx xx do odměrné xxxxx x objemu 500 ml. Přidat 450 xx roztoku xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °X. Xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxx, xx xx xX xxxxxxxx nižší xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx do xxxxx xxxxx xxxx inkubátoru (4.1) x nechat xx tam 48 xxxxx. Xxxxxxxxx xx 8, 24 x 32 xxxxxxxx. Po 48 xxxxxxxx přidat 15 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), zchladit xx 20 °X, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx x filtrovat.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 ml xxxxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx baňky destilační xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v metodě xxx xxxxxxxxx hrubých xxxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xx xxxx. Pokud xx vytvoří pěna, xxxxxx několik xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stopy xxxx.
Xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxx xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx vychladnout.
5.3 Xxxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxx za xxxxxxx stejného xxxxxxx, xxx xxx xxxxxx, xxxxx má xxx xxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx během xxxxxxx xxxxxx xx objemu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx množství xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Výsledek xxxxxxxx xxxx procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,4 absolutní xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xxx 20 % a nižší xxx 40 %,
- 0,8 absolutní xxxxxxx xxx obsah vyšší xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Hodnoty xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx in vivo.
7.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 10 % xxxx xxx odtučněny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °C).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX PEPSINU
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx hrubých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pepsinem x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx ošetří xx stanovených podmínek xxxxxxxx x prostředí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx proteinů xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx 750 xx x odpovídající xxxxxxxx xxxxxxxx xx odečte x xxxxxxxxxx křivky.
Definice: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx uvolní xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx skupin, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx má xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx jednoho μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx stejným xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,025 X.
3.4 5 % roztok (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Folin-Ciocalteu. Xxx 100 g xxxxxxxxxx sodného (Xx2XX4 · 2H2O), 25 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2H2O) x 700 xx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx x kulatým xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) a 100 xx koncentrované xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19), xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxx do xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx varu xx xxxx 10 xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx chladič, xxxxxx 175 x xxxxxx xxxxxxxx (Li2SO4 · 2X2X), 50 xx vody x 1 xx xxxxx. Xxxxx xx dobu 15 xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx vychladnout. Xxxxxx xxxxxx do odměrné xxxxx x objemu 1 l, xxxxxxx xx rysku vodou, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx zůstat nazelenalé xxxxxxxx. Xxxx použitím xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx množství xxxxxxxxxxx, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx substrátu xxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 354 mg dusíku [1] a dát xx xxxxx o xxxxxx 200 ml x normalizovaným xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx pumpou x xxxxxxxxxxx, dokud xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkovou (3.2) xx na 100 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx: rozpustit 181,2 xx tyrosinu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) a xxxxxxx xx jednoho litru xxxxxxx xxxxxxxxx (zásobní xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx xxxxxx roztoku xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Vodní xxxxx xxxxxxxxx ultratermostatem xx 25 °X + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, přesnost: 1 xxxxxxx.
4.4 xX xxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx ve 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx roztoku x xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx x xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). xX xxxxxxxxxxxx xX xxxxxx xxxx xxx 1,6+0,1. Ponořit xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 x xxxxxxxxx asi xxxxxx xxxxxx xxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Nechat xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx při 25 °X přesně xx xxxx 10 minut, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pepsinu (doba x xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx). Xxxx xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °C, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat xxxx suchý xxxxx.
5.3 Xxxxx zbarvení a xxxxxx optické xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx filtrátu, xxx xx xx Xxxxxxxxxxxxx baňky o xxxxxx 50 ml, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 až 10 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 750 xx x xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 cm x porovnání s xxxxx.
5.4 Xxxxx pokus
Pro xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx pokus:
Odpipetovat 5,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, zahřát xx xxxxx lázni (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxx xx 25 °X, homogenizovat x xxxx přidat 1,0 xx roztoku xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.1. Promíchat xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 10 minut ve xxxxx lázni (4.1) xxx 25 °C. Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, x 5,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx kyselinou chlorovodíkovou (3.1) xx 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 ml zředěného xxxxxxx Folin-Ciocalteu (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x poslední xxxx xxxx 5.3. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxx x μmolech, xxxxx xxxxxxxx optické xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx pokusem.
Aktivita pepsinu x μmolech tyrosinu xx 1 xx x xx jednu xxxxxx xxx 25 °X se xxxxxxxx xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx na xx (x/xx) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx v μxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx bodu 5.2.
7. Poznámky
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxx, které xx xxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx, aby xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx xx mg xxxxxxx xxxxx metodou xxxxxxxxxx:
3,64 Ansonovovým milijednotkám/mg (μxxxx xxxxxxxx/xx xxx. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 xxxxxxxxxx xxxxxxxx/x (μxxxx xxxxxxxx/x xx 10 xxx. při 35,5 °C).
5. STANOVENÍ XXXXXXX X CELKOVÉHO XXXXXXXXX
1. Účel a xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx gossypolu, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx látky x bavlníkových xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx látky xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xx 20 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx 3-amino-1-propanolu, x xx buď směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxx, nebo xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Gossypol xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx přeměněn xx gossypol-dianilin, jehož xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx 440 xx.
3. Xxxxxxx
3.1 Směs xxxxxxxxxxxx a xxxxxx: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx isopropanolu x.x. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx x-xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1 x xxxxx xxx 500 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), 2 xx 3-amino-1-propanolu, 8 xx xxxxxx kyseliny xxxxxx x 50 xx vody. Xxxxxxx xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Trvanlivost tohoto xxxxxxx xx jeden xxxxx.
3.3 Rozpouštědlo X: xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 ml 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx x 10 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu x doplnit xx xxxxx N,N-dimethylformamidem. Trvanlivost xxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxx.
3.4 Xxxxxx x.x.: xxxxx optická xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx s vyloučením xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x hnědého xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx roztok gossypolu X: xx odměrné xxxxx x objemu 250 ml dát 27,9 mg xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx 50 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx rozpouštědlem A. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx roztoku je 0,02 xx/xx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx stát xx dobu jedné xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx xxx 27,9 mg xxxxxx xxxxxxxxx. Rozpustit x xxxxxxx xx xxxxx rozpouštědlem X (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,5 mg/ml.
Pokud xxxx standardní xxxxxxx xxxxxxxxx A x X xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 24 hodin.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx zkušebního xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Je xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x relativně velkou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx mouce a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 x; xxx xxxxx směsi xx xxxx být 5 g. Xx xxxxxxx případů xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 10 xx xxxxxxxx; xxxx xx xxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxx xx množství xxxxxxxxxx xxxxxx mělo být xxxx 0,5 a 5 x, xxx xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 40 až 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 20 °C.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu
Dát xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 250 ml, xxxxx xxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx střepy. Xxxxxx pipety xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx x jednu xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Filtrovat xxxx xxxxx filtr x xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx baňce xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Během xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x kohoutem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx pipety xxxxxx do xxxx xxxxxxxxx xxxxx (A x X) x xxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Případně xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) na 10 xx. Poté xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx měření xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx přidat 10 xx rozpouštědla X (3.2) xx xxxx xxxxxx odměrných xxxxx (X a X) x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx pro slepý xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) do xxxxx (D) a (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 440 xx a xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx xxxxxxx roztoku xxx xxxxx pokus (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx roztokem (X) x optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (B) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx optickou xxxxxxx roztoku xxx xxxxx pokus od xxxxxxx hustoty xxxxxxx xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx hustota). Z xxxx xxxxxxx vypočítat xxxxx volného xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx vzorek xxxxxxxxxx 1 xx 5 xx xxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx x xxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx pokus x xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx jiné odměrné xxxxx x xxxxxx 50 ml. Zahřívat xxx xxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou teplotu x xxxxxxx po xxxxx obě baňky xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Homogenizovat x xxxxxx xxxx 10 xx 15 xxxxx, poté xxxxxxxxx x zachytit filtráty x xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx pipety xxxxxx 2 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 ml x 2 ml filtrátu xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x objemu 25 xx. Xxxxxxx xx 25 ml xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx roztoky.
Přidat 2 xx xxxxxxx (3.4) do dvou xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx 25 xx xxxxx isopropanolu a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx je uvedeno x xxxx 5.2. X xxxx hodnoty xxxxxxxxx obsah celkového xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxx specifické xxxxxxx xxxxxxx (6.1), xxxx xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx:
xxxxx xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: X 1% / 1xx = 600
Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1&xxxx;250 / X1%1xx ·&xxxx; · x · x
xxx:
X = opravená xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x bodě 5.2
p = xxxxxxxx vzorek x x
x = xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx křivky
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 xx. X každé xxxxx xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx roztoku gossypolu X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx rozpouštědlem X (3.2) xx 10 xx.
Xxxxxxx baňky xxxxx xxxxx, včetně slepého xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx xxxxx baňky xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx vroucí vodní xxxxx, xxx se xxxxxxxxx zbarvení. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx xxxxx xxxxxx.
Xx podmínek xxxxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxxx roztoky referenční xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením hodnot xxxxxxx hustoty xxxxx xxxxxxxx gossypolu (x μx).
6.2.2 Celkový xxxxxxxx
Xxxxxxxxx 6 odměrných xxxxx x xxxxxx 50 xx. Xx první xxxxx xxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx ostatních 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.6). Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xx 10 ml xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 minut xxx vroucí vodní xxxxx. Zchladit na xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx x promíchat.
Přidat pipetou 2 xx těchto xxxxxxx xx dvou xxxxx o 6 xxxxxxxxx baňkách o xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx série na 25 xx směsí x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), homogenizovat x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx (standardní xxxxx).
Xx xxxxxxxx uvedených v xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx standardní xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxxxx. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx optické xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μg).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % relativní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx než 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xx 500 xx 750 ppm,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Stanovit xxxxx xxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxxxxxxxxxxx (teoretický xxxxx: 17,7 % xxxxxx).
PŘÍLOHA XX
1. XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX TETRACYKLINOVÝCH XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda umožňuje xxxxxxxx x identifikovat xxxxxxxxxxxxxx antibiotika v xxxxxxxx, která obsahují xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx x premixech.
2. Princip
Vzorek xx extrahuje xxxxx xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx porovnáním xxxxxx xxxxxx Rf x xxxxxxxxx standardních xxxxx, x xx xxx xxxxxxxxxxxx x XX xxxxxx (xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx), xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Monohydrát xxxxxxxx xxxxxxxxx x.x. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X p.a. |
7,45 x |
|
Xxxxxx x.x. |
300 ml |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx X: xxxx xxxxxxx nitromethanu/čistého chroroformu/α-dichlorhydrinu: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Připravit xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx XX xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx chroroformu/α-pikolinu: 20/10/3 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx, tetracyklin, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x chlorovodíku.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus ATCC x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx: řídit xx xxxxxx xxxxx xxxx 3.1. a 3.2. xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx agaru, xxx xx xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx přílohy.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx použitím xxxxxxx xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (m/V) xxxxxx 2,3,5-triphenyltetrazolium xxxxxxxx x 5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx papírovou chromatografii (xxxxx papíru 25 xx). Xxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxx (2440X xxxx 2043X) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Odstředivka
4.3 Inkubátor xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 UV xxxxx xxx xxxxxxxxx fluorescence.
4.5 Xxxxxxxx desky xxx 20 x 30 xx xxx xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) x xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x cílem xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx roztoky, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μg chlortetracyklinu-HCL, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 ppm, xx možné xxxxxx xxx homogenizovaný xxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx frakci xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx se nacházejí xxxxxxxxx v této xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx nebo xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 100 μg xx 1 ml (6.1) x 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx do pufračního xxxxxxx, pH 3,5 (3.1). Odstranit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx papíru. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx 0,01 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) x extraktu (6.1 x 6.2). Xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx; xxxxx xx xx nutné, xxxxxx trochu xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx X (3.3) xxx xxxxxxxxx bioautografií x xxxxxx XX (3.4) pro xxxxxxxxx XX xxxxxxx. Když xxxx xxxxxxxxxxxx dosáhne xxxxx 15 xx 20 xx (asi 1 hodina 30 xxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx UV xxxxxxx
Xxxx xx obsah antibiotika xxxxx xxx 1 μx/xx2, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx amoniaku (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx XX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx bioautografií
Nalít kultivační xxxxxx (3.10), které xx předem naočkuje X. xxxxxx (3.9), xx xxxxxxxx xxxxx (4.5) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Po pěti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x položit xx na xxxxx xxxxxx x kultivačním xxxxx, xxx zůstane xxxxx inkubační doby. Xxxxxxxxx přes xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx tetracyklinového xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx světlými xxxxxxxxxxx zónami x xxxxxx xxxxxxxxxxx médiu.
K xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxx odpaří xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Identifikace
Relativní hodnoty Xx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotik xxxx uvedeny xxx. Xxxx xxxxxxx se xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx jakosti xxxxxx x xxxx xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (XX) |
0,40 |
|
Xxxxxxxxxxxxxx (OTC) |
0,20 |
|
4-epi-CTC |
0,15 |
|
4-epi-TC |
0,13 |
|
4-epi-OTC |
0,10 |
Antibiotická xxxxxxxx "xxx" xxxxxxxxx xx menší xxx xxxxxxxx normálních xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX CHLORTETRACYKLINU, OXYTETRACYKLINU X TETRACYKLINU
A. XXXXXX XX AGARU
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), oxytetracyklin (XXX) x tetracyklin (XX) x krmivech, koncentrátech x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Obsahy xxxxx xxx 5 xxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx interpolací.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx než 50 xxx se vzorek xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. X obsahů xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx acetonu, vody x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx stanovení XXX x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x XX.
Xxxxxxxx xx xxxx zředí x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX, XXX xxxx TC xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx X. cereus. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Průměr xxxxxx xxx je xxxxx úměrný logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 30 °C. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x přeočkovat xxxxxxx 14 dní xx xxxxx agar.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 ml kultivačního xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx borité, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Inkubovat 3 xx 5 dní xxx 28 až 30 °C, poté xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.6) xxxx, xx byla xxxxxxxxxxxxx ověřena sporulace, x homogenizovat. Tato xxxxxxxx xx xxxx x chladničce xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx deskách x bazálním xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx použité xxxxxxxxxxx antibiotiky největší xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,2 a 0,3 ml xx 1000 ml. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 50 xx 60 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 xx |
|
Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx kyseliny xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda ad |
1000 xx |
Xxxx použitím xxxxxxx xX xx 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda ad |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: připravit xxxxxxx xxxx použitím a xxxxxxx xx pH 4,5 xx použití xxxxxxxx xxxxxx asi 2 N.
4.9 Směs xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Směs xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx je vyjádřena x chlorovodíku.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (4.7) xxxxxxxxx zásobní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml. Xxxxx roztok se xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml. Xxxxxxx xx provede xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx pufru (4.3) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,05 |
μg/ml |
|
S1 |
0,025 |
μg/ml |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx roztoku, jehož xxxxxxxxxxx odpovídá 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok S8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx x tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,0 μg xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx než 50 xxx
Xx xxxxxxxxxx xxxxxx přidat xxxxxxxx (4.8) v množstvích xxxxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxx fosfátovým xxxxxx (4.3) xxxxx odkazů x tabulce x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8. Koncentrace formamidu x tomto xxxxxxx xxxxx překročit 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxx roztok. Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxx |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Xxxxxxxx vzorek x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx xxxxxxxxxxx pufru (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
xxx. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx X8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx vyšší xxx 50 ppm
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxx xx vzorku xxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx 2 až 10 x 20ti xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx pH xxxxx xxx 3; pokud xx xx xxxxx, xxxxxxx xX xx 3 (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx 10 % kyseliny xxxxxx). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx pH xx 5,5 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, pH 8,0 (4.4), za xxxxxxxxxxx bromkresolové xxxxxx (xxxxxx xx xx xxxxx xx xxxxxx). Xxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 5,5, zředěného 1/10 (4.3), s xxxxx xxxxxx koncentraci U8 (xxx 6.1).
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x tetracyklin
Postupovat xxx je uvedeno x xxxx 6.2.1 xxx, xx xx xxxx (4.9) nahradí xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx provádí x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, X2, S1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Xxxxx miska xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x takové xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Vypočítat množství xxxxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstvy x xxxxxxxx asi 2 mm. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx plastovým xxxxxxxx o xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U každého xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxx stanovení zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx misky xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vypočítá xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 -X2 -X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - U1 -U2 -X1 -X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (XX) xxx koncentracích xxxxxxx xxx 1 g/kg, xxxxx nezasahuje žádná xxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx metoda xx rychlejší než xxxxxx na agaru.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx obsahu XXX xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx acetonu, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx obsahu OTC x XX xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xx kterého bylo xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Světelná xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx z kultivačního xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx xx přidá 1,5 až 3 % xxxxx (xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxx připravit xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
24 hodin xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx šikmý xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °C. Xxxxxxxxxxx celou kulturu xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxx 2 xx bazálního xxxxx (4.1) x xxxx přenést xxxxxxxx xx sterilních xxxxxxxx xx xxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx 37 °C xxxxx xxxx kmene xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx fáze (1x30 až 2h).
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx stanovení [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 g |
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 p.a. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
|
xX xx xxxxxxxxxxx: 6,8 až 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný KH2PO4 x.x. |
13,6 g |
|
Destilovaná voda xx |
1000 xx |
4.3 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx xxxxxxx acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxx methanolu/kyseliny chlorovodíkové (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (x/X) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx v chlorovodíku.
5. Xxxxxxxxxx roztok
Na základě xxxxxxxxxx látky (4.7) x za xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (4.3) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 400 xx 500 μx XXX-XXX, OTC-HCL xxxx TC-HCL na 1 ml. Tento xxxxxx xx skladuje x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
6. Extrakce
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 200 xxxx 250 xx dát 1 xx 2 x xxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x tetracyklin
Do odměrné xxxxx x objemu 200 xxxx 250 xx dát 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 ml xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx standardních sérií x xxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) fosfátovým xxxxxx, pH 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx série xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, ne xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx. Ředění xx xxxxxxx xxxxx podmínek xxxxx kmene, xxxxx xx mohou xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx standardní xxxxxxxx xxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx CTC-HCL xx 1 xx. Poté xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx uvedeno xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx xxxxxx dvakrát.
|
ml xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx extrakt (6.1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,12 μx XXX-XXX. Xxx 1 ml xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) xx dvou xxxxxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxx dvou xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,6 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX na 1 xx. Poté xxxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx pufru (4.2), xxx xx uvedeno xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 7 ředění, xxxxx ředění dvakrát.
|
ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku |
ml xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.2) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx OTC-HCL xxxx XX-XXX xx 1 xx. Dát 1 xx xxxxxx roztoku xx dvou zkumavek x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Doplnit objem xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.2 Xxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) s xxxxx získat xx xxxxxxxxx při 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x 5 xx xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxx xxx nastavení xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bazálního xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx každé zkumavky (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx v xxxxxx, xxx nezbytně xx sterilním xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx 37 °X + 0,1 °X. Xxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx gradient xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx (xxxxxx 2h30 xx 3x). Xxxx xxxxxxxx další růstu xxxxxxx vstříknutím 1 xx roztoku xxxxxxxxxxxx (4.6) xx každé xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx xxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, přičemž xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx). X důvodu xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 2 cm x xxxxxx 5 xx xxxxxx.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx křivku xx xxxxxxxxxxxx papíře xxxxxxxxx fotometrických xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu. Xxxxxxxx obsah antibiotika xx vzorku.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení provedených x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX OLEANDOMYCINU
- xxxxxx xx agaru -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx, x xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx zředěným methanolovým xxxxxxxx tris (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Po xxxxxxxxxx xx extrakt xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se stanoví xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx agarovém médiu xxxxxxxxxxx B. cereus. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx inhibičních xxx xx přítomnosti xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx přímo úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: B. cereus, X 250 XX [8] (xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) a xxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx. Xxxxxxxxx přes xxx xxx asi 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce a xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Příprava xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx asi 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Naočkovat tuto xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxxxxxxxxxx. Tato xxxxxxxx xx xxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nejméně 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx médiem pro xxxxxxxxx (4.2) určit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx různé xxxxxxx xxxxxxxxxxx oleandomycinu největší xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,1 a 0,2 xx xx 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 60 °X.
4. Kultivační média x xxxxxxx
4.1 Médium xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná voda xx |
1000 xx |
|
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,5. |
4.2 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [10]
Xxxxxx (4.1) xxxxxxxx na xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (x/X) roztok xxxx (hydroxymethyl) aminometanu x.x.
4.7 Xxxxxxxxx xxxxxx
|
Xxxxx xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda |
50 xx |
|
Xxxx (hydroxymethyl) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 g |
4.8 Standardní xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx látku (4.8) v 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx koncentraci xxxxxxxxxxxxx 100 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx zásobního roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok S8 xxxxxxxxxx 0,1 μg xxxxxxxxxxxxx na 1 xx. Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx roztoku (4.6) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,05 |
μg/ml |
|
S2 |
0,025 |
μg/ml |
|
S1 |
0,0125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx oleandomycinu xx xxxxxx přidat do xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 xx 10 x 100 xx xxxxxxx (4.7) x protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) s xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace U4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx v xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx standardního roztoku (X8, X4, X2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx očkovacího xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx o tloušťce xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx se x plochých xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x každou xxxxxxxxxxx, xxx každé xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx během 18 xxxxx xxx při 28 až 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx semilogaritmický papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx budou paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx pomocí této xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 - X2 - X4 - S8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
4. STANOVENÍ XXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit tylosin x krmivech, koncentrátech x premixech. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztokem x xX 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, a xxxx xx xxxxxxxxx methanolem. Xx odstředění se xxxxxxx xxxxx a xxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx stanoví měřením xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx lutea. Difúze xx xxxxxxx vytvořením xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea XXXX x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxx xxxxx xx zkumavky xx šikmým xxxxxx xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx asi 35 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx agar.
3.2 Xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx použití 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxxxxxx na xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx suspenzi x xxxxx xxxxxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx trvanlivost je xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx testy xx deskách s xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) určit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožní získat xxx použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx při 48 xx 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 ml |
Za xxxxxx udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze xxxxxxx xX na7,0 x xx xxxxxx xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Fosfátový xxxx, xX 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Fosfátový pufr, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.5 Xxxxx methanol.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 60/40 objemově.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx standardní xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °X xx vakuové sušárně (5 xx xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 xx do xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx roztok xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 7 (4.3) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx rozředěním xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxx na 1 ml.
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x zkušebního xxxxxx; xxx xxxxxxx x xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxxxxxxxxxxx 2 xxxxxx (kuchyňský xxxxx, Ultra-turrax xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxx extrakt x xxxxxx alikvotní xxxx xxxxx (4.7) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tylosinu 2 μx/xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx použití směsi (4.7).
Xxx obsahy nižší xxx 10 xxx xxxxxxx xxxxxxx do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx při 35 °X a rozpustit xxxxxxxx ve 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxxxxxxx xx xX 8 xxx 48 až 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Příprava misek
Difúze xx agaru se xxxxxxx x xxxxxxx xx použití čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, U1). Xxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx účelem xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, aby xxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx médiu xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 mm. Xxxxxxxxx xxxxxxxx očkovaného xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx použít xxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x dokonale rovným xxxxxxxxxx xxxx plastovým xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx odměřená xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx přes xxxx xxx 35 až 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx semilogaritmický xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx rovnice:
(U1 + X2 + U4 + X8 - X1 - X2 - X4 -X8) · 0,602 / X4 + U8 + S4 + X8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. STANOVENÍ XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxxx x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Xxxxx 80". Xx xxxxxxxxxx xxxx filtraci se xxxxxxx xxxxx x xxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Difúze xx projeví vytvořením xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xxxx xxx při asi 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx agar.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx solného roztoku (4.3). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx xx pomoci 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Homogenizovat x xxxxxx tuto xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx asi 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 nm. Xxxxx se xxxx xxxxxxxx skladuje x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx jeden xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x xxxxxxxx médiem xxx stanovení (4.1) xxxxx množství xxxxxxxx xxxxx, které umožní xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx použitím xxxxxxx pH xx 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 p.a. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx voda ad 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 Xxxxx methanol.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % methanolového xxxxxxx "Tween 80" (x/X).
4.7 Standardní látka: xxxxxxxxxxxxx x známé xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml. Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx pracovní roztok X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx na 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1+) xx xxxxxxx xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Extrakce
6.1 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 xx 20 x xxxxxxxxxx vzorku, xxxxxx 100 ml xxxxxxx (4.6) a xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, odebrat 20 xx čirého xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 xx xxxx xxxx xxxxx (4.5) s xxxxx xxxxxx předpokládanou koncentraci 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx x obsahu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx než 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 g xxxxxxxxxx vzorku, xxxxxx 100 ml xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx filtrovat, xxxx zředit xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx předpokládanou koncentraci 1 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml (= U8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1, xxx je uvedeno x bodě 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) při 48 xx 50 °X xxxxxxxx bakterií (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, S2, X1) x čtyř koncentrací xxxxxxxx (U8, U4, X2, U1).Každá xxxxx xxxx obsahovat čtyři xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x takové xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx xxxx plastovým xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm a xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x závislosti na xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx difúzi xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxx noc xxx 35 xx 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zaznamenat měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx inhibičních xxx. Načrtnout xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x interferenci, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 -S1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - X1 - X2 - S1 - S2
Skutečná aktivita = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[2] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[3] Xxxx amido slouží x označení xxxxxxxxxxx xxx standardních xxxxxxx (xxxxx xxxxx).
[6] Tento xxxx izolovaný v Xxxxx xxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx růst xxx S. xxxxxx XXXX 6538 P.
[7] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající stejné xxxxxxxx.
[8] Xxxx xxxxxxxxx x Kielu xxxxx XXXX.
[9] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[11] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného složení x dávající stejné xxxxxxxx.
[12] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx médium podobného xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx výsledky.