Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx se stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x založení Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství pro xxxxxx kontrolu xxxxx [1], a xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx směrnice;
vzhledem x xxxx, že xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxxxx cílem xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx právními a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx krmiv, xx xxxxxxxxx podle xxxxx odběru xxxxxx x analytických metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx směrnice Xxxxxx x. 71/250/XXX ze xxx 15. června 1971 [2] x 71/393/XXX ze dne 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx xxxxxxxxx xxxx analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx xx stav xxxxxxx xxxxxxxxxxx prací xx však nutné xxxxxxxx xxxxx sérii xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xxxxx jde x obsahy škrobu, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx gossypolu, jakož x x aktivitu xxxxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, xxxxxx se xxxxxxx analytické metody Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx krmiv, se xxxxxxx pro metody xxxxxxx x xxxxxxx X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx kontroly xxxxx, pokud jde x stanovení x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx i x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, oxytetracyklinu, xxxxxxxxxxxx, oleandomycinu, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx metod xxxxxxxxx x příloze II xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxx 1 (xxxx) přílohy xxxxx směrnice Komise x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, s xxxxxxxx xxxxx týkající se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx II xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Členské státy xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1973. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Článek 4
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
V Bruselu xxx 27. xxxxx 1972.
Za Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Mansholt
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX X
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx metoda
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x krmivech, x xxxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxx obsahují řepné xxxxx, xxxxxx xxxxx, xxxxxx řepné xxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx kvasnice, xxxxxxxx bohaté xx xxxxxx (xxxx. xxxxx x xxxxxx z xxxxxxxxxx) nebo xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx tepla xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx optická xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx stanovení xx xxxxxx extrahuje 40 % xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxx filtrátu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx optická rotace xx xxxxxxxx podmínek xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx dvěma xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx obsah xxxxxx ve xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,126.
3.2 1,128 % (m/V) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N x za xxxxxxxxxxx 0,1 % (m/V) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (X/X) xxxxxxxx. 10 xx = 30,94 xx 0,1 X NaOH.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxx I: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x xxxxxx xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x xxxxxx kyseliny xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx 100 ml.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx XX: xxxxxxxxx ve xxxx 10,6 g xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Doplnit xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, x: 0,948 xxx 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Erlenmeyerova xxxxx x xxxxxx 250 xx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Polarimetr xxxx sacharimetr.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělnit xxxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx oky x průměru 0,5 xx.
5.2 Stanovení xxxxxxx xxxxxxx rotace (X xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x vzorku x xxxxxxxxx na 1 xx x dát xx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 xx. Přidat 25 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx xx zkušební xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x přidat dalších 25 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx xx vroucí xxxxx xxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx x pravidelně xxxxxxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxx hrudek. Xxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxxxx, aby i xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxx varu. Xxxxx xxxxx být xxxxxxx x lázně xxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx 15 minutách xxxxxxx xxxxx x lázně, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx x xxxxx zchladit xx 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx 5 xx Carrezova xxxxxxx XX (3.4) x xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxx zcela xxxx (xxx je xxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx většího xxxxxxxx Carrezova xxxxxxx X a XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx polarimetrem nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v 200 xx xxxxxxx.
5.3 Stanovení xxxxxxx rotace (P’ xxxx S’) látek xxxxxxxxxxx xx 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx, xxx xx xx odměrné xxxxx x xxxxxx 100 xx a xxxxxx xxx 80 ml xxxxxxxx (3.5) (viz xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx doby xxxxxxxx silně protřepat, xxx se xxxxxxxx xxxxxx dobře smíchal x xxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx ethanolem (3.5), homogenizovat x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxx po 15 xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx obsah xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 ml, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxx xx 20 °C.
Poté xxxxxxx za xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) a XX (3.4), xxxxxxx po xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2 druhém x třetím xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx (%) se vypočítá xxxxx:
6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - X’) / [α]X20°
xxx je:
P = celková optická xxxxxx, v xxxxxxxx xxxxxxxx.
X’ = optická xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, v úhlových xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : rýžový xxxxx
+ 195,4°: xxxxxxxxxx xxxxx
+ 184,6°: xxxxxxxxx škrob
+ 182,7°: xxxxxxxx škrob
+ 181,5°: xxxxx škrob
+ 181,3°: xxxxxx škrob
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Xxxxxx sacharimetrem
Procenta xxxxxx = 2 000 / [α]X20° · (2 X · 0,665) (S - X’) / [α]D20°
Kde xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx rotace xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx ve 100 xx vody, která xx xxx xxxxxxxx 200 xx optickou xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:
16,29 x xxx xxxxxxxxxxx sacharimetry
26,00 x xxx xxxxxxx sacharimetry
20,00 x xxx smíšené xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx xxxxx překročit 0,4 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxx 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx škrobu xxxxxxxxxxx xx nebo vyššího xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx více xxx 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx stanovením xxxxxxx xxxxxx zničeny xx xxxxxxx příslušného xxxxxxxx zředěné kyseliny xxxxxx.
7.2 X xxxxxxx xxxxxxxx x vysokým xxxxxxx xxxxxxx, jako xx xxxxxx mléčné xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx mléko, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Připojit xx Xxxxxxxxxxxxx baňku xxxxxx xxxxxxx, ponořit xx xx 30 xxxxx xx vodní xxxxx x xxxxxxx 50 °X. Nechat xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.3.
2. STANOVENÍ XXXXXXX XXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda umožňuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx stanoveného xxxxx Kjeldahlovy xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx xx xxxxx. Kyselý xxxxxx xx alkalizuje xxxxxxxx xxxxxxxxx sodného. Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx v xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx xxxxxxx XxX x.x. xxxx síran xxxxxxx pentahydrát XxXX4 · 5X2X x.x., xxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxx XxX x.x.
3.3 Granulovaný zinek x.x.
3.4 Kyselina xxxxxx x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx sírová 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx methylčerveně xx 100 xx 95-96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.8 40 % (m/V) xxxxxx xxxxxxxxx sodného.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,1 X.
3.10 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného p.a.
3.12 8 % (m/V) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Granulovaná xxxxx, xxxxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx x zpopelněná.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x destilační xxxxxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 x xxxxxx x přesností xx 1 xx x xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 x xxxxxx draselného (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx katalyzátoru (3.2) (0,3 xx 0,4 g oxidu xxxxxxxxx nebo 0,9 xx 1,2 x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx rtuti nebo 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx sírové (3.4) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.13), promíchat xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx x xx občasného xxxxxxxxxxxx, dokud xxxxx xxxxxxxxxxx x pěna xxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx dokud xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Zabránit xxxxxxxx stěn xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x za xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx; xxxxxx xxxxxxxxxxx; poté xxxxxx xxxxxxx granulí xxxxx (3.3).
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxx destilační xxxxxxxxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,5 X (3.6) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx obsahu dusíku (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx destilační xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx hloubky xxxxxxx 1 xx (xxx xxxxxxxx 7.3). Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx do xxxxx 100 xx 40 % roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxx do xxxxx xxxxxx xxx 10 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 ml xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx xx xx 30 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxx této doby xxxxxxxxxxxx xX výsledného xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx je xxxxxx alkalická, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Ukončit xxxxxxxxx, xxxxx lakmusový xxxxxxx xxxxx, xx xx destilát xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx čas xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x pozorovat xxxxxxxx. Xxxxx dojde ke xxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx přidat xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Titrace
Ve xxxxxx baňce titrovat xxxxxxxx kyseliny xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N (3.9) xxxx 0,25 N (3.10) v xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx zbarvení xxxxxxx xx světle xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx metody
Za xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx dusík, xx xxxxxxx slepý xxxxx (xxxxxxxxx a titrace), x xx xxx xxxxxx, který xx xxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxx kontroly xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, destilace x titrace) 1,5 xx 2,0 g xxxxxxxxxxx x.x. (x.x. 114 °X; % X: 10,36) za xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 x acetanilidu xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx sírové 0,5 X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Výsledek xxxxxxxx xxxx procento vzorku.
Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx stanovení provedených x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx hrubých xxxxxxxx xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xx xxxxx použít některé xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx mineralizací x xxxxxxxxx. X xxxxxxx případě se xxxxxxx musí provést xxxx ztrát.
7.2 X xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X, xxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx baňky, xxxxxx xx 10 xx 15 ml x xxxxxxx vodou xx 25 ml.
7.3 Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxx, xxxxxx hydroxid xxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x xxxxxx xxxxx kapalinu xx xxxxxxx baňky xxx, xxx xx xxxxxxxxxx x roztokem xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX CHLOROVODÍKOVOU
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit frakci xxxxxxx proteinů xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx za stanovených xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Suspenze xx filtruje x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx stanovení xxxxxx hrubých xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 x/xx xxxxxxx; xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx v xxxxx 4 xxxx xxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x touto xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), čerstvě xxxxxxxxxx xxxxxx pepsinu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx činidla xxxxxxx x xxxx 3 xxxxxx pro xxxxxxxxx obsahu xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Vodní xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx aparatura xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx x dát xx xx odměrné xxxxx x objemu 500 xx. Xxxxxx 450 xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 40 °X. Xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx hrudek. Xxxxxx, xx xx xX xxxxxxxx xxxxx xxx 1,7. Vložit xxxxx do xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx (4.1) x xxxxxx xx xxx 48 xxxxx. Xxxxxxxxx xx 8, 24 a 32 hodinách. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxx 15 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.1), zchladit xx 20 °C, xxxxxxx po rysku xxxxx x xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 mg x dát xx xx baňky destilační xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx druhé xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxx. Xxxxx xx vytvoří xxxx, xxxxxx několik xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx, xxxxx xx xxxx téměř xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx.
Xxxx xx roztok čirý x xxxxxxxx (světlezelený, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), udržovat xxx xxxxx xxxxx hodinu. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx x titrace
Postupovat, jak xx xxxxxxx x xxxxxx xxx stanovení xxxxxxx proteinů x xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxxxxxx xxxxx pokus xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx.
6. Výpočet výsledků
Odečíst xxxxx xxxxxxxx sírové xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx objemu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorkem. 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx množství xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,4 absolutní hodnoty xxx xxxxx xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 20 % x nižší xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxx získané xxxxx metodou xxxxxx xxxxxx souvislost se xxxxxxxxxxxxxx in xxxx.
7.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 10 % musí xxx xxxxxxxxx extrakcí xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX PEPSINU
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxxxxx pepsinu použitého xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pepsinem x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx podmínek xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové. Nehydrolyzovaná xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx tohoto xxxxxxx se xxxx xxx 750 nm x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x kalibrační xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx pepsinu xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx za xxxxxxxx metody xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx má optickou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx jednoho μxxxx xxxxxxxx zbarveného xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,025 N.
3.4 5 % xxxxxx (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.5 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxx 100 x xxxxxxxxxx sodného (Na2WO4 · 2H2O), 25 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 xx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) x 100 ml koncentrované xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19), připojit baňku xx zpětný xxxxxxx, xxxxx xx xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x mírném xxxx xx xxxx 10 xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxx 175 x xxxxxx lithného (Li2SO4 · 2X2X), 50 xx xxxx x 1 xx xxxxx. Xxxxx po dobu 15 minut, xxx xx odstranil xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx vychladnout. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o objemu 1 x, doplnit xx rysku vodou, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx nazelenalé xxxxxxxx. Xxxx použitím xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxxxx odpovídajícího 354 xx xxxxxx [1] x xxx xx baňky o xxxxxx 200 xx x normalizovaným xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx pumpou a xxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx vakuum x xx xxxxxxxxxxxx doplnit xxxxxxxx chlorovodíkovou (3.2) xx xx 100 xx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.8 Standardní xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx 181,2 xx tyrosinu x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx kyselinou (zásobní xxxxxx). Odebrat 20 xx tohoto xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 ml. 1 xx tohoto xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxx ultratermostatem xx 25 °X + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, xxxxxxxx: 1 sekunda.
4.4 xX xxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx ve 100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx a xxx ho xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 50 xx x doplnit xx xxxxx kyselinou chlorovodíkovou (3.3). xX xxxxxxxxxxxx xX xxxxxx musí xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx xx vodní xxxxx (4.1).
5.2 Hydrolýza
Odpipetovat 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, zahřát ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx pohyby xxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxx xxx 25 °X přesně po xxxx 10 minut, xxxxxxxx od přidání xxxxxxx xxxxxxx (doba x xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx dodrženy). Xxxx xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxx filtr.
5.3 Xxxxx zbarvení a xxxxxx optické xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxx, xxx ho xx Xxxxxxxxxxxxx baňky o xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 xx 10 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 750 xx x xxxxxxxx o xxxxxxxx 1 cm x porovnání x xxxxx.
5.4 Slepý xxxxx
Xxx xxxxx stanovení xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx lázni (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x poté přidat 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 10 minut xx xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x bodě 5.3.
5.5 Kalibrační xxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx baňky o xxxxxx 50 ml xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, a 5,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 5,0 xx. Přidat 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 ml zředěného xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx je xxxxxxx x xxxxxxxx větě xxxx 5.3. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx hustot xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx optické xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxx x μmolech xxxxxxxx xx 1 xx x xx jednu xxxxxx při 25 °X xx vypočítá xxxxx vzorce:
Jednotky xx xx (x/xx) = 0,32 a / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μmol xxxxxxxx x kalibrační xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx x mg xxxxxxx podle bodu 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Množství xxxxxxx, xxxxx xx xxx rozpuštěno, musí xxx xxxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx xx xx xxxxxxx touto metodou xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx xxxxxxxx/xx min. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 xxxxxxxxxx xxxxxxxx/x (μxxxx xxxxxxxx/x xx 10 min. při 35,5 °X).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Účel a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx gossypolu x xxxxxxxx xxxxxxxx látky x bavlníkových xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx pokrutinách x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu je 20 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, x xx buď xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxx, nebo dimethylformamidem xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx je xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx 440 xx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x.x. xx 40 objemovými xxxxxx x-xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxxxx X: do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 x xxxxx xxx 500 xx xxxxx isopropanolu a xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 50 xx vody. Doplnit xx rysku směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Trvanlivost tohoto xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.3 Rozpouštědlo B: xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x objemu 100 ml 2 xx 3-amino-1-propanolu a 10 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.4 Anilin x.x.: pokud xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, destilovat xxxxxx přes xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxx měsíců x zazátkované xxxxx x xxxxxxx skla.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx dát 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx a xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx xx odměrné xxxxx x xxxxxx 250 ml 50 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxx xx xxxxx rozpouštědlem X. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx roztoku xx 0,02 xx/xx. Před xxxxxxxx nechat stát xx dobu xxxxx xxxxxx xxx pokojové xxxxxxx.
3.6 Standardní roztok xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx xxx 27,9 mg xxxxxx gossypolu. Xxxxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx roztoku xx 0,5 mg/ml.
Pokud xxxx standardní xxxxxxx xxxxxxxxx X x X xxxxxxxx před xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 ot./mim.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx zkušebního xxxxxx x relativně velkou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx semenech, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx pokrutinách by xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 x; xxx xxxxx směsi xx xxxx být 5 g. Xx xxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx alikvotní xxxx 10 xx filtrátu; xxxx by xxxxxxxxx 50 až 100 μx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxx xx xxxxxxxx zkušebního xxxxxx mělo xxx xxxx 0,5 x 5 x, aby xxxxxxxxx část 2 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 40 až 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xx měla xxxxxxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx vzorek xx xxxxxxx baňky xx xxxxxxxxxx hrdlem x xxxxxx 250 xx, xxxxx dno xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxx filtr x xxxxxxxx filtrát x xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x X) x xxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) na 10 xx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx pro slepý xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 10 xx rozpouštědla X (3.2) xx xxxx jiných xxxxxxxxx xxxxx (C x X) x objemu 25 ml. Xxxxxxx xx rysku baňku (X) xxxxx isopropanolu x hexanu (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx xxxx referenční xxxxxx pro měření xxxxxxx xxx slepý xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (X) x (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx lázní, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 440 xx x ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 cm xxxxxxxx hustotu xxxxxxx xxx slepý pokus (X) xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx roztokem (X) x optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx x referenčním xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx roztoku xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx). X xxxx hodnoty xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx je xxxxxxx x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx gossypolu
Dát xxxxxxxx vzorek obsahující 1 až 5 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx x přidat 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx a xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx jiné xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml. Zahřívat xxx xxxxx 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x doplnit xx xxxxx xxx xxxxx xxxxx isopropanolu a xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx 10 až 15 xxxxx, poté filtrovat x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 2 ml xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxx odměrných xxxxx o objemu 25 ml x 2 xx xxxxxxxx xxxxxxx pokusu do xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 ml. Doplnit xx 25 xx xxxxx jedné baňky x xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxx 2 xx anilinu (3.4) xx xxxx xxxxxx baněk. Xxxxxxxx 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zchladit na xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx 25 xx xxxxx isopropanolu a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx xxxxx hodinu.
Stanovit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx xx xxxxxxx x bodě 5.2. X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v bodě 6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx (6.1), nebo xx základě kalibrační xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx
Xx stanovených xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx optická xxxxxxx xxxx:
xxxxx xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
celkový xxxxxxxx: X 1% / 1cm = 600
Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx se xxxxxxxx takto:
gossypol %: X · 1 250 / E1%1cm ·&xxxx; · x · x
xxx:
X = opravená xxxxxxx xxxxxxx, stanovená xxx xx uvedeno x bodě 5.2
x = xxxxxxxx xxxxxx x x
x = xxxxxxxxx xxxx filtrátu x xx
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxx xx pěti xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 xx. X xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx X (3.5). Doplnit xxxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) xx 10 xx.
Xxxxxxx baňky první xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, směsí isopropanolu x xxxxxx (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx každé xxxxx xxxxx série 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat stát xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x bodě 5.2 xxxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hustoty xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.2.2 Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx 6 odměrných baněk x xxxxxx 50 xx. Xx xxxxx xxxxx přidat xxxxxxx 10 xx rozpouštědla X (3.3) a xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.6). Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx xx dvou xxxxx o 6 xxxxxxxxx baňkách o xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx obsah baněk xxxxx série na 25 ml xxxxx x isopropanolu x xxxxxx (3.1) (referenční xxxxx).
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), homogenizovat a xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx (standardní xxxxx).
Xx xxxxxxxx uvedených v xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx roztoků porovnáním x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx množství xxxxxxxxx (x μx).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit:
- 15 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxxxxxx xxxxx než 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx: 17,7 % xxxxxx).
XXXXXXX XX
1. STANOVENÍ X XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, která xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, v koncentrátech x premixech.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx směsí xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx stanovena x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hodnot Rf x xxxxxxxxx standardních xxxxx, x to xxx fluorescencí x XX světle (xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx), nebo xxxxxxxxxxxxx na agarovém xxxxx naočkovaném X. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Pufr, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x.x. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X p.a. |
7,45 x |
|
Xxxxxx p.a. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 g |
|
Destilovavná xxxx xx |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx I: xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx XX směs xxxxxxx nitromethanu/čistého xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 objemově. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx methanolu/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Chlortetracyklin, xxxxxxxxxxxxxx, tetracyklin, xxxxxxx xxxxxxxx xx vyjádřena x xxxxxxxxxxxx.
3.9 Mikroorganismus: X. xxxxxx XXXX x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, příprava suspenze xxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx: řídit xx pokyny xxxxx xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx x tetracyklinu xxxxxx xx xxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Kultivační xxxxxx [1]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (m/V) xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x 5 % (x/X) xxxxxx glukosy.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografii (xxxxx papíru 25 xx). Xxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxx (2440X xxxx 2043X) nebo xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx stanovení xxxxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx xxx 20 x 30 xx pro xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Zásobní xxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) x xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx UV xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, jejichž xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx stanovení bioautografií
Zředit xxxxxxx (5.1) fosfátovým xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace odpovídá 5 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx antibiotika nižší xxx 10 xxx, xx možné xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx vzorek, xxxx nejjemnější xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vzorek xx xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Sebrat xxxxxxxxxxx x xxxxxx ho xxxxx xxxx ho xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx koncentrace antibiotika xxx 100 μx xx 1 ml (6.1) a 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx
7.1 Chromatografie
Ponořit xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xX 3,5 (3.1). Odstranit přebytek xxxxxxxx vtlačením papíru xxxx listy xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxxxx na xxxxx 0,01 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) x extraktu (6.1 x 6.2). Xxx dobré xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx; xxxxx xx xx nutné, xxxxxx xxxxxx vyschnout.
Rozvinout xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Použít xxxxxx I (3.3) xxx stanovení xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx XX (3.4) xxx stanovení XX xxxxxxx. Když xxxx xxxxxxxxxxxx dosáhne xxxxx 15 xx 20 xx (xxx 1 xxxxxx 30 xxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx XX světlem
Když xx obsah xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 1 μx/xx2, je xxxxx xx xxxxxxxx chromatogramu xxxxxx amoniaku (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx XX xxxxxx žluté xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), které xx xxxxxx xxxxxxxx X. cereus (3.9), xx xxxxxxxx xxxxx (4.5) x položit xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx pěti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x položit xx na jinou xxxxxx v kultivačním xxxxx, kde zůstane xxxxx inkubační doby. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx tetracyklinového antibiotika xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx kultivačním médiu.
K xxxxxx chromatogramu xx xx inkubaci xxxxxx xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx Xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx zde. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (TC) |
0,40 |
|
Oxytetracyklin (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "xxx" sloučenin xx menší než xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X TETRACYKLINU
A. XXXXXX XX XXXXX
1. Účel x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit chlortetracyklin (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (OTC) x tetracyklin (TC) x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Xxxxxx xxxxx xxx 5 ppm xxxxx být určeny xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx 50 xxx se xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx formamidem. X xxxxxx xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx acetonu, xxxx x kyseliny chlorovodíkové xxx xxxxxxxxx XXX x směsí xxxxxxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové xxx stanovení XXX x XX.
Xxxxxxxx se xxxx xxxxx x xxxxxx antibiotická aktivita xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx CTC, XXX xxxx XX xx xxxxxxxx xxxxx naočkovaném X. xxxxxx. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. xxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxx. Inkubovat xxxx xxx xxx xxx 30 °C. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 dní xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem (3.1) xx použití 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5). Naočkovat xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 ml xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx borité, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx je 3 xx 4 %. Inkubovat 3 xx 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.6) xxxx, xx byla xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Tato xxxxxxxx se xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx množství očkovací xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx pro použité xxxxxxxxxxx antibiotiky xxxxxxxx xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx je xxxxxxx 0,2 x 0,3 xx xx 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx při 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [2]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 g |
|
Kvasnicový extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
"Tween 80" |
1 xx |
|
Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (m/V) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx modře |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 g |
|
Destilovaná voda xx |
1000 ml |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Na2HPO4 · 2X2X x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: připravit čerstvý xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xx xX 4,5 za xxxxxxx xxxxxxxx sírové xxx 2 N.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Směs čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: CTC, XXX, TC, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x chlorovodíku.
5. Standardní xxxxxxx
5.1 Chlortetracyklin
Na základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (4.7) xxxxxxxxx zásobní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx chlortetracyklinu-HCL na 1 xx. Zředění xx xxxxxxx za xxxxxxx fosfátového xxxxx, xX 5,5, zředěného 1/10 (4.3), xx xxxxxxx bylo přidáno 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx roztoku, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 ml, standardní xxxxxxxx roztok S8 xxxxxxxxxx 1,6 μg xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, standardní xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,0 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml x xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,5 |
μg/ml |
|
S2 |
0,25 |
μg/ml |
|
S1 |
0,125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
6.1 Obsahy rovné xxxx nižní xxx 50 xxx
Xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (4.8) v množstvích xxxxxxxxx x tabulce. Xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxx fosfátovým xxxxxx (4.3) xxxxx odkazů x xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8. Koncentrace xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxx roztok. Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, U2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x ppm |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Zkušební xxxxxx x g |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
ml xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
xxx. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
řeď. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx X8 v μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx antibiotika xx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx přidat xx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx 2 xx 10 g 20xx xxxxxxx jeho objemu xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xX xxxxx xxx 3; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxxx xX na 3 (u minerálních xxxxxxxxx xx xxxxxxx 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xX na 5,5 za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx bromkresolové zeleně (xxxxxx xx ze xxxxx na modrou). Xxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx pufru, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8 (xxx 6.1).
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.2.1 xxx, xx xx xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °C xxxxxxxx spór (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx x miskách xx xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, S1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, U4,U2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx v agarovém xxxxx nejméně 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx se xx xxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstvy x xxxxxxxx xxx 2 xx. Upřednostňuje xx použití misek xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných desek x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx plastovým xxxxxxxx o průměru 200 mm x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 ml, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat misky xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření na xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zanesením xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vypočítá xxxxxx xxxx rovnice:
(U1 + U2 + X4 + X8 - X1 -X2 -X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 -X2 -X1 -X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná aktivita x xxxxxxxxx aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % relativní xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), oxytetracyklin (XXX) x xxxxxxxxxxx (XX) xxx koncentracích xxxxxxx xxx 1 g/kg, xxxxx xxxxxxxxxx žádná xxxxx, která by xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx na xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX x XX směsí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx se xxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx světelné xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx bylo xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx aureus x xx kterého bylo xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx aureus X 14 [6]
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx xx xxxxx 1,5 xx 3 % xxxxx (xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxx xxx při 37 °X. Skladovat xxxxxxx x chladničce a xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx xx šikmý xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx laboratorní xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
24 xxxxx před xxxxxxxx xxxxxxxxxx šikmý xxxx subkulturou a xxxxxxxxx přes xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxx 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) a xxxx xxxxxxx suspenzi xx sterilních xxxxxxxx xx xxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat xx xxxxx xxxxx xxx 37 °X xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmické xxxx (1x30 až 2x).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx stanovení [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
xX xx xxxxxxxxxxx: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx čistého xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (x/X) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx aktivita xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx látky (4.7) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx xxxxxxx roztok, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 400 xx 500 μx XXX-XXX, XXX-XXX xxxx XX-XXX na 1 ml. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xxxx 250 ml xxx 1 xx 2 x zkušebního vzorku. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát.
6.2 Oxytetracyklin x xxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 g xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Doplnit po xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx standardních xxxxx x extraktu
Zředit standardní xxxxxx (5) a xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx xxxxx koncentrací. Xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xx které xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx kmene, které xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Chlortetracyklin
Zředit xxxxxxxxxx xxxxxx (5) fosfátovým xxxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx standardní xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx CTC-HCL xx 1 ml. Poté xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Zředit xxxxxxx (6.1) xx použití xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,12 μx XXX-XXX. Xxx 1 ml xxxxxx xxxxxxx do xxxx xxxxxxxx a 0,75 xx (= 0,09 μx) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxx pracovní roztok, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 0,6 μg XXX-XXX xxxx XX-XXX na 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx je xxxxxxx xxxx a ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Zředit extrakt (6.2) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX na 1 xx. Xxx 1 xx tohoto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx xxxx jiných xxxxxxxx. Xxxxxxx objem xxxx jiných xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx získat na xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v 5 xx kyvetě xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx ve 2 cm xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx každé zkumavky (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx v xxxxxx, ale xxxxxxxx xx sterilním xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx musí xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx mícháním xxxxxxx xx 37 °C + 0,1 °C. Xxxxxxxxx xxxx se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx propustnosti, xxxxxxx gradient xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx (obecně 2h30 xx 3x). Poté xxxxxxxx další xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) do každé xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx růstu
Změřit xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, xxxxxxx fotometr xx xxxxxxx na 100 % propustnost xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxx). Z xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 2 xx x xxxxxx 5 xx kyvety.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx propustností xxxxx xxxxxxxxxxxx antibiotika. Xxxxxxx na křivce xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu. Xxxxxxxx obsah xxxxxxxxxxx xx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho vzorku xxxxx překročit 10 % relativní xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx agaru -
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx a premixech, x xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx oleandomycinu xx agarovém médiu xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus, X 250 XX [8] (rezistentní xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx rodičovského xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx média (4.1) a přidat 100 μx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 ml. Xxxxxxxxx přes noc xxx asi 30 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx suspenze xxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx xxx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 až 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 ml xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx sporulaci, x xxxxxxxxxxxxx. Tato suspenze xx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 měsíců.
Předběžnými xxxxx xx deskách se xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) určit xxxxxxxx očkovací xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx různé použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx největší xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxx množství je xxxxxxx 0,1 x 0,2 xx na 1000 ml. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 60 °X.
4. Kultivační xxxxx x činidla
4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx pH xx 6,5. |
4.2 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [10]
Xxxxxx (4.1) xxxxxxxx na xX 8,8.
4.3 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (V/V) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx methanol
4.6 0,5 % (x/X) xxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx x.x.
4.7 Xxxxxxxxx roztok
|
Čistý xxxxxxxx |
50 ml |
|
Destilovaná xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (hydroxymethyl) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 x |
4.8 Standardní xxxxx: xxxxxxxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x zředit xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx zředěním s xxxxxxxx (4.6) standardní xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx na 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx přidat xx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx 2 až 10 x 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 0,1 μg xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat bazální xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.2) při 60 °X suspenzí xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx agaru xx xxxxxxx v miskách xx použití xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, S4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, U1). Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx a extraktu.
Za xxxxx účelem xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x tloušťce xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx sestávajících xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 200 xx x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 a 0,15 xx, x závislosti xx průměru xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx čtyřikrát x každou xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx během 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zaznamenat xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx pomocí xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 - X1 - X2 - X4 - S8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Účel x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, koncentrátech x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xX 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxx xx extrahuje xxxxxxxxxx. Xx odstředění xx xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx tylosinu xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx lutea. Difúze xx projeví vytvořením xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Průměr xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx do zkumavky xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx z kultivačního xxxxx (4.1) upraveného xx xX 7,0. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx (3.1) xx použití 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 xxxxx při 35 °X, xxxx xxxx bakterie xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x zředit xxxx xxxxxxxx x xxxxx získat 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x chladničce, xxxx xxxxxxxxxxx je xxxxx týden.
Předběžnými xxxxx xx deskách x xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) určit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zóny. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 48 xx 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Bazální médium xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
Za xxxxxx udržování rodičovského xxxxx a přípravy xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na7,0 a xx xxxxxx xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Fosfátový xxxx, xX 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
16,730 g |
Destilovaná xxxx xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Fosfátový pufr, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
5,5 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda ad |
1000 xx |
4.4 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx.
4.6 40 % (V/V) xxxxxxxx.
4.7 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Standardní xxxxx: xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx standardní xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °X xx xxxxxxx xxxxxxx (5 xx xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 xx xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxx xxxxxx fosfátovým xxxxxx, xX 7 (4.3) s cílem xxxxxx koncentraci xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx rozředěním xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.7) xxxx koncentrace:
|
S4 |
1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,5 |
μg/ml |
|
S1 |
0,25 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x xxxxxxxxxx vzorku; xxx xxxxxxx a xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx na 80 °X, x xxxxxxxxxxxxx 2 xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxx, Xxxxx-xxxxxx atd.).
Nechat xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxx extrakt x xxxxxx alikvotní xxxx xxxxx (4.7) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7).
Xxx xxxxxx nižší xxx 10 xxx xxxxxxx xxxxxxx do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx při 35 °X x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx na xX 8 xxx 48 až 50 °X suspenzí xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx xxxxx xx xxxxxxx v xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, X1). Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx účelem xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx udělat x xxxxxxxx médiu xxxxxxx 8 děr x xxxxxxx 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx o tloušťce 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x dokonale rovným xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 200 xx a x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx do děr xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 a 0,15 xx, v xxxxxxxxxx xx průměru xxx.
X xxxxxxx vzorku opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x každou xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx přes xxxx xxx 35 xx 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx zón. Xxxxxxxxx xxxxxx standardního roztoku x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx relativní aktivity xx xxxxxxxx pomocí xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + U8 - X1 - S2 - X4 -X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se extrahuje xxxxxxxxxxxx roztokem "Xxxxx 80". Po xxxxxxxxxx xxxx filtraci se xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx stanoví měřením xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx agarem x xxxxxxxxxxxx média (4.1). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každých 14 dní na xxxxx agar.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx bakterie xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoku (4.3). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx kultivačního média (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx smýt xxxxxxxx xx xxxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx x cílem xxxxxx asi 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx. Xxxxx se tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx jeden xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx deskách x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx množství očkovací xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx různé xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx možné, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx provádí xxx 48 xx 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 až 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
Před xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 p.a. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx voda ad 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Xxxxx 80" (x/X).
4.7 Standardní látka: xxxxxxxxxxxxx o známé xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
Připravit xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) obsahující 800 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx na 1 ml. Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1+) xx xxxxxxx xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Výrobky x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) a xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Odstředit xxxx xxxxxxxxx, odebrat 20 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx do xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 xx xxxx více xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a U1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx, přidat 100 xx xxxxxxx (4.6) a protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx zředit xxxxx (4.5) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace U4, X2 x U1, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 48 xx 50 °X xxxxxxxx bakterií (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, X2, S1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4, X2, U1).Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx čtyři xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu.
Za tímto xxxxxx xxxxxx misky x xxxxxx velikosti, xxx bylo xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x průměru 10 xx 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx pro xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x tloušťce xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných desek x dokonale rovným xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxx.
X každého xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat misky xxxx noc xxx 35 xx 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx roztoku a xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx budou paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx pomocí této xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 -S1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / U4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx aktivita x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí překročit 10 % relativní xxxxxxx.
[1] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[2] Může xxx použito jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] Xxxx xxxxx slouží x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxx).
[6] Xxxxx xxxx izolovaný x Xxxxx xxxxx XXXX xxxxxxxx rychlejší růst xxx X. xxxxxx XXXX 6538 X.
[7] Xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Kmen xxxxxxxxx x Kielu xxxxx XXXX.
[9] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační médium xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[11] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.