Třetí Směrnice Komise
ze xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Smlouvu x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx společenství,
s ohledem xx xxxxxxxx Rady xx dne 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxxxx cílem je xxxxxx xxxxxxxxxx požadavků xxxxxxxxxxx právními x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx krmiv, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971 [2] x 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx xxxxxxxxx xxxx analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx xx stav xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx však nutné xxxxxxxx třetí xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, že xxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxx škrobu, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx rozpustných působením xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, volného x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, jakož x x xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx metod xxxxxxxxx x příloze X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x části 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxx 1971, kterou xx xxxxxxx analytické xxxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x příloze X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, pokud xxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx tetracyklinových antibiotik, xxxxx x o xxxxxx chlortetracyklinu, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze II xxxx směrnice.
Obecná xxxxxxxxxx xxxxxxx x části 1 (úvod) přílohy xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x příloze XX xxxx směrnice.
Xxxxxx 3
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v účinnost xxxxxx a správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 1. xxxxxxxx 1973. Neprodleně x xxxx informují Xxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu dne 27. xxxxx 1972.
Za Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Mansholt
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Úř. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
PŘÍLOHA I
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx metoda
1. Účel x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx obsah xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx, x xxxxxxxx těch xxxxx, xxxxx xxxxxxxx řepné xxxxx, xxxxxx xxxxx, xxxxxx řepné xxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. xxxxx x xxxxxx z xxxxxxxxxx) nebo škvarky.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx dvojité xxxxxxxxx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxx je vzorek xxxxxxx xx tepla xxxxxxxx kyselinou chlorovodíkovou. Xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 40 % ethanolem. Xx xxxxxxxxx filtrátu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxx rotace xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx při xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx mezi xxxxx xxxxxxxx vynásobený xxxxxx xxxxxxxx udává obsah xxxxxx xx xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X x xx přítomnosti 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (V/V) ethanolu. 10 xx = 30,94 xx 0,1 X NaOH.
3.3 Carrezův xxxxxx I: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x xxxxxx zinečnatého Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x xxxxxx kyseliny xxxxxx. Xxxxxxx vodou xx 100 ml.
3.4 Xxxxxxxx roztok II: xxxxxxxxx xx xxxx 10,6 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) ethanol, x: 0,948 při 20 °X.
4. Přístroje
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x objemu 250 xx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx způsobem, aby xxxx prošel sítem x xxxxxxxx oky x xxxxxxx 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Navážit 2,5 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx. Xxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), protřepat, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx dobře xxxxxxxxx x přidat dalších 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxx x xx dobu prvních xxx xxxxx silně x xxxxxxxxxx protřepávat, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx ve xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx i xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx. Přesně xx 15 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxx, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx xx 20 °C.
Přidat 5 xx Carrezova xxxxxxx X (3.3) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxx přidat 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx XX (3.4) a xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx vodou, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat. Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxx xx xxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X x XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx optickou xxxxxx xxxxxxx x 200 xx trubici.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (P’ xxxx X’) xxxxx xxxxxxxxxxx xx 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx, dát xx xx xxxxxxx baňky x objemu 100 xx a přidat xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Poté xxxxxx baňku xxxx xxxxx hodinu xxx xxxxxxxx teplotě x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx protřepat, xxx xx zkušební xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (3.5), homogenizovat a xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 ml xxxxxxxx (= 2,5 x vzorku) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 250 ml, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) x xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx Erlenmeyerovu xxxxx xxxxxx chladič x xxxxxxx xx xx vroucí vodní xxxxx. Přesně xx 15 xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx lázně, xxxxxx xxxx obsah do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 ml, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxx zchladit xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx za xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx I (3.3) x II (3.4), xxxxxxx po xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx uvedeno v xxxx 5.2 druhém x třetím xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Obsah xxxxxx (%) se vypočítá xxxxx:
6.1 Měření xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - X’) / [α]D20°
kde xx:
X = xxxxxxx optická xxxxxx, x úhlových xxxxxxxx.
X’ = xxxxxxx xxxxxx látek rozpustných xx 40 % xxxxxxxx, v úhlových xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : rýžový škrob
+ 195,4°: bramborový xxxxx
+ 184,6°: xxxxxxxxx xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: ječný škrob
+ 181,3°: xxxxxx škrob
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Měření xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]X20° · (2 X · 0,665) (X - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = celková xxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx sacharimetru
S’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % ethanolu, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx 100 xx xxxx, která xx xxx xxxxxxxx 200 mm optickou xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tato xxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:
16,29 x xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 x xxx xxxxxxx sacharimetry
20,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = specifická xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx škrobu xxxxx než 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx vzorek xxxxxxxx xxxx xxx 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx uhličitan xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx kyseliny xxxxxx.
7.2 X případě xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, jako xx sušené xxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx mléko, xxxxxxxxxx xx přidání 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx ji xx 30 minut xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 50 °X. Nechat xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxx, jak je xxxxxxx x bodě 5.3.
2. XXXXXXXXX HRUBÝCH XXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx proteinů x xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx dusíku stanoveného xxxxx Xxxxxxxxxxx metody.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx xx mokra. Xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx sodného. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Síran xxxxxxxx p.a.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx xxxxxxx XxX x.x. xxxx xxxxx xxxxxxx pentahydrát XxXX4 · 5X2X x.x., xxxx rtuť xxxx xxxx rtuťnatý XxX x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx xxxxx x.x.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
3.7 Indikátor xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxxx ve 100 xx 95-96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxx sodného.
3.9 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 N.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx roztok xxxxxx sodného p.a.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx thiosíranu xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx pemza, xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a zpopelněná.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx a destilační xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 mg x xxx ho xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 x xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 xx 0,4 x xxxxx xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 x xxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx nebo 0,6-0,7 g oxidu xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx, nejprve xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx hmota xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx nevře. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xx xxxxxx čirý x xxxxxxxx (světlezelený, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx mědi), xxxxxxxx var xxxxx xxxxx xxxxxx, poté xxxxxx vychladnout.
5.2 Destilace
Opatrně x xx xxxxxxx xxxxxxx přidat 250 xx 350 ml xxxx, aby xx xxxxxxx zcela xxxxxxxxxx; xxxxxx xxxxxxxxxxx; poté xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.3).
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxx destilační xxxxxxxxx xxxxxx odměřené xxxxxxxx 25 xx xxxxxxxx sírové 0,1 X (3.5) xxxx 0,5 N (3.6) x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2) x přidat xxxxxxx xxxxx indikátoru xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx baňku xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 1 xx (viz xxxxxxxx 7.3). Přes xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxx nalít xx xxxxx 100 xx 40 % roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx byl použit xxxxxxxxxxx xx bázi xxxxx, přidat xx xxxxx xxxxxx xxx 10 xx roztoku xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 ml xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx baňku takovým xxxxxxxx, aby xx xx 30 minut xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx kapaliny. Xx xxxxxxxx této doby xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx je xxxxxx alkalická, pokračovat x destilaci. Xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xx xx xxxxxxxx neutrální. Xxxxx xxxxxxxxx xxx xx času xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx baňky x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx dojde xx xxxxxxxx do žluta, xxxxx xxxxxx přesně xxxxxxxx množství xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx xxxxx titrovat xxxxxxxx kyseliny xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N (3.9) xxxx 0,25 N (3.10) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx světle xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx metody
Za účelem xxxxxxxx, xxx činidla xxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx slepý xxxxx (xxxxxxxxx x xxxxxxx), x xx bez xxxxxx, xxxxx má xxx analyzován. Za xxxxxx kontroly xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, destilace x titrace) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx p.a. (x.x. 114 °X; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 g xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 g xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kyseliny xxxxxx, 1 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx dusíku. Vynásobit xxxxxxxx dusíku xxxxxxxx 6,25. Výsledek vyjádřit xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho vzorku xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx hrubých proteinů xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Je xxxxx použít xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx ztrát.
7.2 X xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx dusíku může xxx objem xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X, xxxxx xx xxx xxxxxxxx nalita do xxxxxx xxxxx, xxxxxx xx 10 xx 15 ml a xxxxxxx vodou na 25 ml.
7.3 Xxxxx xxxx xxxxx destilační xxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxx, přidat hydroxid xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx a xxxxxx xxxxx kapalinu po xxxxxxx xxxxx tak, xxx se xxxxxxxxxx x roztokem xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX PROTEINŮ XXXXXXXXXXX PEPSINEM X XXXXXXXXX CHLOROVODÍKOVOU
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx frakci xxxxxxx xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °X xxxxxxxx pepsinu v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx filtruje x xxxxx dusíku ve xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 j/mg pepsinu; xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx x metodě xxxxxxx x xxxxx 4 xxxx xxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxxx v xxxxxxx x xxxxx metodou.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx připravený xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 j/l.
3.5 Xxxxxxxxxx emulze (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxx 3 xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Vodní xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Mineralizační x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx metody.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x vzorku x xxxxxxxxx na 1 xx x xxx xx xx odměrné xxxxx o objemu 500 ml. Přidat 450 ml xxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °C. Xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx tvorbě hrudek. Xxxxxx, že xx xX xxxxxxxx nižší xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx (4.1) x nechat xx xxx 48 xxxxx. Xxxxxxxxx po 8, 24 x 32 xxxxxxxx. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxx 15 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), zchladit xx 20 °X, xxxxxxx po xxxxx xxxxx a filtrovat.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx x přesností xx 1 xx x xxx xx xx xxxxx destilační xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx v xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, ve druhé xxxx bodu 5.1. Xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xx varu. Xxxxx xx xxxxxxx xxxx, xxxxxx několik kapek xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx, xxxxx se xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx vody.
Když xx xxxxxx čirý x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx var xxxxx další xxxxxx. Xxxxxx vychladnout.
5.3 Destilace x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxxxx xxx stanovení xxxxxxx proteinů x xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Slepý xxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx od xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 mg xxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx:
- 0,4 absolutní hodnoty xxx xxxxx xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xxx 20 % a xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 absolutní hodnoty xxx obsah vyšší xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxx získané xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx souvislost xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx.
7.2 Xxxxxxx x obsahu xxxx xxxxxx než 10 % musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX PEPSINU
1. Xxxx a rozsah
Tato xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx použitého xxx stanovení hrubých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pepsinem x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx ošetří xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Nehydrolyzovaná xxxxxx proteinů se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx sodný x xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx 750 nm x xxxxxxxxxxxx množství xxxxxxxx xx xxxxxx x kalibrační křivky.
Definice: Xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx metody uvolní xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx hydroxyarylových xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx činidlem Xxxxx-Xxxxxxxxx má optickou xxxxxxx odpovídající optické xxxxxxx jednoho μmolu xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 N.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,06 X.
3.3 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,025 X.
3.4 5 % xxxxxx (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Činidlo Folin-Ciocalteu. Xxx 100 x xxxxxxxxxx sodného (Na2WO4 · 2X2X), 25 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 xx xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxx xxxx x normalizovaným xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) x 100 xx koncentrované xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19), xxxxxxxx baňku xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxx xx dobu 10 xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zpětný xxxxxxx, xxxxxx 175 x xxxxxx lithného (Xx2XX4 · 2X2X), 50 xx vody x 1 ml xxxxx. Xxxxx po xxxx 15 xxxxx, aby xx odstranil xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x objemu 1 l, xxxxxxx xx xxxxx vodou, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 objemy xxxx.
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx 2 g xxxxxxxxxxxx substrátu xxxxx Xxxxxxxx metody odpovídajícího 354 xx dusíku [1] a dát xx xxxxx x xxxxxx 200 ml x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx, dokud xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkovou (3.2) xx xx 100 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx tyrosinu: xxxxxxxxx 181,2 mg xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x doplnit xx jednoho xxxxx xxxxxxx kyselinou (zásobní xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx tohoto roztoku x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) ve 100 xx. 1 xx tohoto xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx nastavená xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °X + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, xxxxxxxx: 1 xxxxxxx.
4.4 xX xxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx poznámky 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxx xx 100 xx kyseliny chlorovodíkové (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx a xxx ho do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.3). xX xxxxxxxxxxxx xX xxxxxx xxxx xxx 1,6+0,1. Ponořit xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx lázni (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx pepsinu xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx pohyby xxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxx xxx 25 °X xxxxxx xx xxxx 10 minut, xxxxxxxx od přidání xxxxxxx pepsinu (xxxx x teplota xxxx xxx přesně xxxxxxxx). Xxxx přidat 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx filtr.
5.3 Xxxxx zbarvení x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxx, xxx xx do Xxxxxxxxxxxxx baňky o xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx protřepávání 3,0 xx zředěného xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 xx 10 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx spektrofotometrem xxx 750 xx x xxxxxxxx o xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxx x xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx slepý xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx lázni (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx trichloroctové (3.4) xxxxxxxxxx na 25 °C, homogenizovat x xxxx přidat 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1. Promíchat xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 10 minut ve xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °C. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx filtr. Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx v xxxx 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx křivka
Do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, a 5,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku tyrosinu, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μmolu xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx referenčním xxxxxxxx xxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) na 5,0 xx. Přidat 10,0 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x xx stálého protřepávání 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xxxxxx optickou hustotu xxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx 5.3. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx množství tyrosinu x μxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx hustotě xxxxxxxxxx roztoku x xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx pepsinu x μxxxxxx xxxxxxxx xx 1 mg x xx xxxxx xxxxxx xxx 25 °X xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx xx xx (j/mg) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μmol xxxxxxxx x kalibrační xxxxxx;
x = množství xxxxxxx x mg xxxxxxx xxxxx xxxx 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Množství xxxxxxx, které má xxx xxxxxxxxxx, musí xxx xxxxxx, aby xxxx xxx konečném xxxxxxxxxxxxx xxxxxx získána xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx xx mg xxxxxxx xxxxx metodou xxxxxxxxxx:
3,64 Ansonovovým milijednotkám/mg (μxxxx tyrosinu/mg min. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 komerčních xxxxxxxx/x (μxxxx xxxxxxxx/x xx 10 min. xxx 35,5 °X).
5. STANOVENÍ XXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx pokrutinách x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx látky obsahují. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xx 20 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx 3-amino-1-propanolu, x xx buď směsí xxxxxxxxxxxx x hexanu xxx stanovení volného xxxxxxxxx, xxxx dimethylformamidem xxx stanovení celkového xxxxxxxxx. Gossypol xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, jehož xxxxxxx hustota xx xxxxxx xxx 440 xx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx isopropanolu x.x. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx n-hexanu.
3.2 Xxxxxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 x xxxxx xxx 500 ml xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx xxxxxx kyseliny xxxxxx x 50 xx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx B: xxxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x objemu 100 xx 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx a 10 ml xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx x doplnit po xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Trvanlivost xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx týden.
3.4 Xxxxxx x.x.: xxxxx xxxxxxx xxxxxxx slepého pokusu xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx a posledních xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x zazátkované lahvi x hnědého skla.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx o objemu 250 ml xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx a xxxxxxx xx rysku xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx do odměrné xxxxx x objemu 250 xx 50 xx tohoto roztoku x xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxxxxx A. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxx xx 0,02 xx/xx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx stát xx xxxx jedné xxxxxx při pokojové xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx xxx 27,9 mg xxxxxx xxxxxxxxx. Rozpustit x xxxxxxx xx xxxxx rozpouštědlem B (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,5 xx/xx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X a X xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, jejich xxxxxxxxxxx xx 24 hodin.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Mixér (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x relativně xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx neměl xxxxxxxxx 1 x; xxx xxxxx směsi xx může xxx 5 x. Xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx část 10 xx xxxxxxxx; xxxx by obsahovat 50 až 100 μx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx gossypolu xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxx 0,5 x 5 x, xxx xxxxxxxxx část 2 xx filtrátu xxxxxxxxxx 40 xx 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxxx 20 °C.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu
Dát xxxxxxxx vzorek xx xxxxxxx baňky se xxxxxxxxxx hrdlem x xxxxxx 250 xx, xxxxx xxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx přidat 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxx přes xxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx zakrýt xxxxxxx x kohoutem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx do xxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x X) o xxxxxx 25 ml xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Případně xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) xx 10 xx. Xxxx doplnit xx rysku baňku (X) směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx přidat 10 ml xxxxxxxxxxxx X (3.2) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x X) x objemu 25 xx. Xxxxxxx xx rysku xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxx referenční xxxxxx pro měření xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (X) x (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx vytvořilo zbarvení. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx hodinu.
Stanovit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 440 xx a xx xxxxxxxxxx kyvetách o xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx xxxxxxx roztoku xxx xxxxx pokus (X) porovnáním x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x optickou hustotu xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx roztoku xxx xxxxx xxxxx od xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx hustota). X xxxx xxxxxxx vypočítat xxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx xx xxxxxxx x bodě 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 xx 5 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx x přidat 10 xx xxxxxxxxxxxx B (3.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx xxxx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx. Zahřívat xxx baňky 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou teplotu x xxxxxxx xx xxxxx xxx baňky xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx 10 xx 15 xxxxx, xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 2 xx xxxxxxxx xx vzorku xx xxxx odměrných xxxxx x xxxxxx 25 xx x 2 xx filtrátu xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx odměrných xxxxx o xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xx 25 xx xxxxx jedné baňky x xxxxx xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxx xxxxxx xxxxx. Zahřívat 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx 25 xx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx uvedeno x xxxx 5.2. X této xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v bodě 6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx buď xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (6.1), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx specifické xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx optická xxxxxxx xxxx:
xxxxx xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: X 1% / 1cm = 600
Xxxxx volného nebo xxxxxxx obsah xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx takto:
gossypol %: X · 1&xxxx;250 / X1%1xx ·&xxxx; · x · x
xxx:
X = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, stanovená xxx je uvedeno x xxxx 5.2
x = xxxxxxxx xxxxxx x x
x = xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx
6.2 Na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxx po xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 xx. X xxxxx xxxxx xxxxxx pipetou 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx rozpouštědlem A (3.2) xx 10 xx.
Xxxxxxx baňky xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, směsí isopropanolu x xxxxxx (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx série 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xx podmínek xxxxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx porovnáním x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx referenční xxxxx. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx gossypolu (x μx).
6.2.2 Celkový xxxxxxxx
Xxxxxxxxx 6 xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx 10 ml xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.6). Doplnit xxxxx xxxxx xxxxx xx 10 ml xxxxxxxxxxxxx B (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx a hexanu x promíchat.
Přidat pipetou 2 ml xxxxxx xxxxxxx xx dvou xxxxx x 6 xxxxxxxxx baňkách o xxxxxx 25 ml. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xx 25 xx xxxxx x isopropanolu x xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Zchladit na xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), homogenizovat x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx standardní xxxxx roztoků porovnáním x xxxxxxxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hustoty xxxxx množství xxxxxxxxx (x μg).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah gossypolu xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % relativní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx obsah xxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx: 17,7 % xxxxxx).
PŘÍLOHA II
1. XXXXXXXXX X IDENTIFIKACE TETRACYKLINOVÝCH XXXXXXXXXX
1. Účel a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx x premixech.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx směsí xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx stanovena x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hodnot Xx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, x to xxx fluorescencí x XX xxxxxx (xxxxxx xxxxx antibiotik), nebo xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx naočkovaném X. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x.x. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X p.a. |
7,45 x |
|
Xxxxxx x.x. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X p.a. |
6,947 g |
|
Destilovavná xxxx xx |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx I: směs xxxxxxx nitromethanu/čistého xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím |
|
|
3.4 Xxxxxx II xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, d: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx, tetracyklin, jejichž xxxxxxxx je xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
3.9 Mikroorganismus: X. cereus XXXX x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx suspenze xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média: xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx chloridu x 5 % (x/X) roztok xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografii (xxxxx xxxxxx 25 xx). Xxxxxxxx a Xxxxxxx xxxxx (2440X xxxx 2043X) nebo xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx stanovení xxxxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx asi 20 x 30 xx xxx xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) x xx použití kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Referenční roztoky xxx stanovení XX xxxxxxx
Xxxxxx roztoky (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x cílem xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.3 Referenční xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) s xxxxx získat xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 5 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx antibiotika xxxxx xxx 10 ppm, xx možné xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx proséváním, neboť xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx x této xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vzorek xx xxxxx (3.5) a xxxxxxxxx. Xxxxxx supernatant x použít ho xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 100 μx xx 1 xx (6.1) x 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Stanovení x xxxxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xX 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx přebytek xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx listy xxxxxxx xxxxxxxxxxx papíru. Xxxx xxxxxxx na xxxxx 0,01 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) a xxxxxxxx (6.1 a 6.2). Xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx vlhkost; xxxxx xx to nutné, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx X (3.3) xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x eluent XX (3.4) pro xxxxxxxxx XX xxxxxxx. Když xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 15 xx 20 xx (asi 1 xxxxxx 30 xxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x vysušit xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 1 μx/xx2, xx možné xx ošetření xxxxxxxxxxxxx xxxxxx amoniaku (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx XX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), které xx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx xxxxxxxx xxxxx (4.5) x položit xxxxx xx kultivační xxxxxx. Xx pěti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx, kde zůstane xxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx přes xxx xxx 30 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx světlými xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx médiu.
K xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xx inkubaci odpaří xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx hodnoty Xx tetracyklinových antibiotik xxxx xxxxxxx xxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx papíru x xxxx vlhkosti:
|
Chlortetracyklin (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (TC) |
0,40 |
|
Oxytetracyklin (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "epi" sloučenin xx xxxxx xxx xxxxxxxx normálních sloučenin.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, OXYTETRACYKLINU X TETRACYKLINU
A. DIFÚZÍ XX AGARU
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (XX) x krmivech, koncentrátech x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro jejich xxxxxxxxx xx 5 xxx. Obsahy xxxxx xxx 5 ppm xxxxx být xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx 50 xxx xx vzorek xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. X obsahů xxxxxxx xxx 50 xxx xx vzorek xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, vody x kyseliny chlorovodíkové xxx stanovení XXX x směsí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x TC.
Extrakty xx xxxx zředí x xxxxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx měřením xxxxxx XXX, XXX xxxx TC xx xxxxxxxx xxxxx naočkovaném X. cereus. Difúze xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx je xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Mikroorganismus: X. xxxxxx ATCC x. 11778
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat B. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx modře a xxxxxxxx xxxxxx. Inkubovat xxxx xxx při xxx 30 °X. Xxxxxxxxx kulturu v xxxxxxxxxx x přeočkovat xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) za xxxxxxx 2 až 3 xx fyziologického solného xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx baňky obsahující 300 ml xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx borité, xxxxx xxxxxxxxxxx agaru xx 3 až 4 %. Inkubovat 3 xx 5 xxx xxx 28 až 30 °C, xxxx xxxx xxxxx 15 xx ethanolu (4.6) xxxx, xx byla xxxxxxxxxxxxx ověřena xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx deskách x xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx množství xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční zóny. Xxxx xxxxxxxx je xxxxxxx 0,2 x 0,3 xx xx 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx při 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx média a xxxxxxx
4.1 Bazální médium xxx xxxxxxxxx [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 g |
|
Kvasnicový extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 ml |
|
Fosfátový xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx modře |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, pH 8,0
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx KH2PO4 p.a. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2H2O x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.8 70 % (V/V) xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx pH 4,5 za použití xxxxxxxx xxxxxx asi 2 X.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Směs xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 98/2 objemově.
4.11 Xxxxxxxxxx látky: CTC, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx látek (4.11) x xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx chlortetracyklinu-HCL xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8, jehož xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx chlortetracyklinu-HCL na 1 xx. Xxxxxxx xx provede xx xxxxxxx fosfátového pufru, xX 5,5, zředěného 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx přidáno 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx pufru (4.3) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,05 |
μg/ml |
|
S1 |
0,025 |
μg/ml |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, standardní xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx a xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Tetracyklin
Postupem xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx zásobního xxxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,0 μg tetracyklinu-HCL xx 1 ml x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Obsahy xxxxx xxxx nižní než 50 ppm
Do xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (4.8) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pufrem (4.3) podle odkazů x xxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x tomto roztoku xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx dekantovat xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, U2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx fosfátového xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx obsah x ppm |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Zkušební xxxxxx x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
řeď. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx X8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 ppm
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx vzorku xxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxx vzorku o xxxxxxxxx 2 xx 10 x 20xx xxxxxxx xxxx objemu xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx musí xxxxxx xX xxxxx xxx 3; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxxx xX na 3 (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx použití 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu a xxxxxxx xX na 5,5 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxx se ze xxxxx xx xxxxxx). Xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8 (xxx 6.1).
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x U1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx a tetracyklin
Postupovat xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.2.1 xxx, xx xx xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °C xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx na xxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, X2, S1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, U4,U2, X1). Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat misky x takové velikosti, xxx xxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx se z xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x průměru 200 mm a xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx množství roztoku xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 ml, x závislosti xx xxxxxxx děr.
U každého xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxxx 18 hodin xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zanesením xxxxxxxxx koncentrací proti xxxxxxx inhibičních zón. Xxxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo k xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx této rovnice:
(U1 + U2 + X4 + U8 - S1 -S2 -X4 -X8) · 0,602 / U4 + X8 + X4 + X8 - U1 -X2 -X1 -S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % relativní xxxxxxx.
X. TURBIDIMETRICKY
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx chlortetracyklin (XXX), oxytetracyklin (OTC) x xxxxxxxxxxx (TC) xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 1 x/xx, xxxxx xxxxxxxxxx žádná xxxxx, xxxxx xx xxxxxx vzniknout matným xxxxxxxxx. Xxxx metoda xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx obsahu XXX xx vzorek xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxx OTC x XX xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x jejich xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx naočkováno Xxxxxxxxxxxxxx aureus x xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx antibiotikum. Světelná xxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx K 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xx zkumavky x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx xx xxxxx 1,5 xx 3 % xxxxx (podle xxxxxxx). Inkubovat přes xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce a xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxx připravit xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Příprava xxxxxxxx xxxxx
24 xxxxx před xxxxxxxx přeočkovat šikmý xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx noc xxx 37 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxx x xxx 2 xx bazálního xxxxx (4.1) a xxxx přenést suspenzi xx sterilních xxxxxxxx xx xxx 100 xx stejného xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat xx xxxxx xxxxx xxx 37 °C xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmické fáze (1x30 xx 2h).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 g |
|
Dihydrogenfosforečnan draselný XX2XX4 p.a. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
|
xX xx xxxxxxxxxxx: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.4 Xxxx xxxxxxx acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (m/V) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztok
Na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x xx použití xxxxxxxx chlorovodíkové (4.3) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 až 500 μx CTC-HCL, XXX-XXX xxxx TC-HCL xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx skladuje x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Chlortetracyklin
Do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxx asi 100 xx xxxxx (4.4) x protřepávat 30 xxxxx třepačkou. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx.
6.2 Oxytetracyklin x tetracyklin
Do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 nebo 250 xx dát 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx fosfátovým pufrem, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x extraktu
Zředit xxxxxxxxxx xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 4,5 (4.2), tak, aby xxxxxxx xxxxx koncentrací. Xxx xxxxx stanovení xx načrtne xxxxxxxxxx xxxxxx, xx které xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx k xxxxxxxx. Ředění se xxxxxxx podle podmínek xxxxx kmene, které xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx laboratoře. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) fosfátovým xxxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx XXX-XXX xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx xxxxxx dvakrát.
|
ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.1) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,12 μx CTC-HCL. Xxx 1 xx tohoto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx jiných xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 0,6 μg OTC-HCL xxxx TC-HCL na 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxxx určených xxx xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku |
ml xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Koncentrace XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.2) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxx 1 xx tohoto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx objem xxxx jiných xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx (4.1) očkovací xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx při 590 xx 85 % xxxxxxxxx propustnost x 5 xx xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx ve 2 xx kyvetě xxx nastavení xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx nenaočkovaného xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Očkování
Dát xx každé xxxxxxxx (7.1.1 nebo 7.1.2) 9 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx zkumavek xxxx xxx xxxxxxxxx v xxxxxx, xxx xxxxxxxx xx sterilním xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xx vodní xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx 37 °C + 0,1 °C. Xxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx způsobem, xxx bylo možné xxxxxxxxx křivky propustnosti, xxxxxxx gradient je xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx (obecně 2x30 xx 3x). Poté xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) do xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx xxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, přičemž xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx nejvyššímu obsahu xxxxxxxxxxx). Z důvodu xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx různých xxxxxxxx xx doporučuje xxxxxx xxxxxxx 2 cm x xxxxxx 5 xx kyvety.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx papíře xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx propustností xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx křivce xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx vzorku.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx, x xx dokonce x xxxxxxxxxxx tetracyklinů. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (hydroximethyl) xxxxxxxxxxxx. Xx odstředění xx xxxxxxx zředí x jeho xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx oleandomycinu xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx inhibičních xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx těchto zón xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus, X 250 XX [8] (xxxxxxxxxxx vůči xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx rodičovského xxxxx
Xxxxxxxxx X. cereus xx zkumavky xx xxxxxx agarem odebraným x xxxxxxxxxxxx média (4.1) a xxxxxx 100 μg xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce a xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx xxx 3 xx fyziologického roztoku (4.3). Naočkovat xxxx xxxxxxxx do Rouxovy xxxxx obsahující 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxxxx koncentrace xxxxx je 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 až 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, xxxx smýt xxxxx 15 ml xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx byla mikroskopicky xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Tato xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxx skladovat xxxxxxx 5 měsíců.
Předběžnými testy xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx množství je xxxxxxx 0,1 x 0,2 ml xx 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x činidla
4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxx rodičovského xxxxx [9]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 až 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,5. |
4.2 Bazální médium xxx xxxxxxxxx [10]
Médium (4.1) xxxxxxxx na xX 8,8.
4.3 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (V/V) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx methanol
4.6 0,5 % (x/X) xxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) aminometanu x.x.
4.7 Xxxxxxxxx xxxxxx
|
Xxxxx xxxxxxxx |
50 ml |
|
Destilovaná xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) aminometan x.x. |
0,5 x |
4.8 Standardní xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) s xxxxx xxxxxx koncentraci xxxxxxxxxxxxx 100 μg/ml.
Na xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx zředěním x xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xxxx připravit xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,05 |
μg/ml |
|
S2 |
0,025 |
μg/ml |
|
S1 |
0,0125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx oleandomycinu xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 xx 10 x 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou.
Odstředit, xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x zředit xxxxxxxx (4.6) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,1 μg xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro stanovení (4.2) xxx 60 °X suspenzí xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx xxxxx se xxxxxxx x miskách xx použití xxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a extraktu.
Za xxxxx účelem xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, aby bylo xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 děr o xxxxxxx 10 xx 13 mm. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 a 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx asi při 28 xx 30 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit průměr xxxxxxxxxxx zón, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx budou paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + S4 + X8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se ošetří xxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztokem x xX 8, xxxxxxxxxxx na 80 °X, x xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx se xxxxxxx zředí x xxxx antibiotická xxxxxxxx xx stanoví měřením xxxxxx tylosinu xx xxxxxxxx xxxxx naočkovaném Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx vytvořením xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea XXXX x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx do zkumavky xx šikmým xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx přes xxx xxx xxx 35 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze
Smýt xxxxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 až 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx do Rouxovy xxxxx obsahující 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 xxxxx při 35 °C, xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxx získat 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx týden.
Předběžnými xxxxx xx deskách x xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxxxx xxxxxx získat xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx největší xxxxx, xxx xxxxx zřetelné xxxxxxxxx zóny. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx média a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 g |
|
Kvasnicový xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
Za xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na7,0 x xx xxxxxx stanovení xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný K2HPO4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 7
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Směs fosfátového xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 60/40 objemově.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: tylosin x xxxxx aktivitě.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx standardní xxxxx (4.8) 3 hodiny xxx 60 °C xx xxxxxxx xxxxxxx (5 mm xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 xx do xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxx fosfátovým xxxxxx, xX 7 (4.3) s cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μg/ml.
Na xxxxxxx xxxxxx zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 2 μg xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx.
Xxxx připravit xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx směsi (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx použít 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx; xxx xxxxxxx x xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Přidat 60 xx xxxxxxxxxxx pufru, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx na 80 °X, x xxxxxxxxxxxxx 2 xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxx, Ultra-turrax xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxxxxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx (4.7) x xxxxx získat předpokládanou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 a X1 postupným xxxxxxx (1 + 1) xx použití xxxxx (4.7).
Xxx obsahy xxxxx xxx 10 xxx xxxxxxx extrakt xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 35 °X x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 40 % methanolu (4.6).
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx na xX 8 při 48 xx 50 °X suspenzí bakterií (3.2).
7.2 Příprava misek
Difúze xx agaru xx xxxxxxx v xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx standardního roztoku (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx.
Xx xxxxx účelem vybrat xxxxx x takové xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx udělat x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 děr x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), které xx má xxxxxx xxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx 2 xx. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných desek x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm a x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx průměru xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx noci xxx 35 xx 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx projekcí. Xxxxxxxxxx xxxxxx na semilogaritmický xxxxx zanesením xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx průměru xxxxxxxxxxx zón. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx křivky xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 - X1 - S2 - S4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx dvou paralelních xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
5. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx stanovení xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Tween 80". Po xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx x xxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx naočkovaném Xxxxxxx xxxxx. Difúze xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Sarcina xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx přes xxx xxx xxx 35 °X. Skladovat xxxxxxx v chladničce x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 dní na xxxxx agar.
3.2. Příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx použití 2 xx 3 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx kultivačního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx při 35 °X, poté xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Homogenizovat x zředit xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 nm. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx skladuje x xxxxxxxxxx, xxxx trvanlivost xx jeden xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx deskách x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx xxx různé xxxxxxx xxxxxxxxxxx virginiamycinu xxxxxxxx xxxxx, ale xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx provádí xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 až 20 g |
|
Destilovaná voda xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 6,5.
4.2 Fosfátový xxxx, xX 6
|
Dihydrogenfosforečnan draselný XX2XX4 x.x. |
8,0 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx voda xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 Xxxxx methanol.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Xxxxx 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxx x známé xxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztok standardní xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xx xxxxxxx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx připravit xxxxxxxxxx směsí (4.5) xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1+) xx xxxxxxx xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Extrakce
6.1 Xxxxxxx x xxxxxx virginiamycinu xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, odebrat 20 xx čirého xxxxxxx x odpařit xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 xx xxxx xxxx směsi (4.5) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx virginiamycinu xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x U1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx vyšším xxx 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 g xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) a xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxx (4.5) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) při 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, S2, X1) x xxxx koncentrací xxxxxxxx (U8, U4, X2, U1).Každá xxxxx xxxx obsahovat čtyři xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x xxxxxx velikosti, xxx bylo xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Vypočítat množství xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx se xx xxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstvy x xxxxxxxx asi 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x dokonale rovným xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr přesně xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, aby xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat misky xxxx xxx při 35 xx 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zaznamenat xxxxxx xx semilogaritmický xxxxx xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx pomocí této xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 -X1 - X2 - X4 - S8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + S8 - X1 - X2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná aktivita x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % relativní xxxxxxx.
[1] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx a dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[3] Xxxx xxxxx slouží x označení inhibičních xxx standardních xxxxxxx (xxxxx kruhy).
[6] Tento xxxx izolovaný x Xxxxx podle XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx X. xxxxxx XXXX 6538 P.
[7] Xxxx xxx použito xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající stejné xxxxxxxx.
[8] Kmen izolovaný x Xxxxx podle XXXX.
[9] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[11] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.