Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv [1], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx uvedená xxxxxxxx stanoví, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisy x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x složení xxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx odběru vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx směrnice Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971 [2] a 71/393/XXX ze xxx 18. listopadu 1971 [3] již stanovily xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx však xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem k xxxx, xx xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, hrubých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx gossypolu, xxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx popsaných x příloze X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, kterou xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx X xxxx xxxxxxxx.
Článek 2
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx úřední kontroly xxxxx, pokud xxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotik, xxxxx i x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx x virginiamycinu x xxxxxxxx, se xxxxxxxxx xxxxx xxxxx popsaných x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxx 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS xx xxx 15. června 1971, x výjimkou xxxxx týkající xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x příloze II xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxxxxx státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. července 1973. Neprodleně x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 4
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
V Bruselu xxx 27. xxxxx 1972.
Xx Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Mansholt
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Úř. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX X
1. STANOVENÍ XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx metoda
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx, s xxxxxxxx těch xxxxx, xxxxx xxxxxxxx řepné xxxxx, řepnou xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx bohaté na xxxxxx (xxxx. řízky x xxxxxx x xxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Při prvním xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx za xxxxx xxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx stanovení xx vzorek extrahuje 40 % xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxx filtrátu xxxxxxxxx chlorovodíkovou, čiření x filtraci se xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx známým xxxxxxxx udává xxxxx xxxxxx xx vzorku.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx chlorovodíková, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) kyselina xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X x xx xxxxxxxxxxx 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (X/X) xxxxxxxx. 10 xx = 30,94 xx 0,1 X NaOH.
3.3 Carrezův xxxxxx X: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x octanu xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x xxxxxx kyseliny xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx XX: xxxxxxxxx ve xxxx 10,6 x hexakyanoželeznatanu xxxxxxxxxx [K4(Fe(CN)6].3H2O. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, d: 0,948 při 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Erlenmeyerova xxxxx o objemu 250 xx x xxxxxxxxxxxxxx zábrusem x xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Polarimetr xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx oky x xxxxxxx 0,5 xx.
5.2 Stanovení xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (P xxxx X) (viz xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x dát xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx. Xxxxxx 25 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx dalších 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Ponořit xxxxx do xxxxxx xxxxx lázně x xx dobu xxxxxxx xxx xxxxx silně x pravidelně xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx hrudek. Množství xxxx xx xxxxx xxxxx musí být xxxxxxxxxx, xxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx lázeň xx xxxx xxxx. Baňka xxxxx být xxxxxxx x xxxxx během xxxxxxxxxxxx. Přesně xx 15 minutách xxxxxxx xxxxx x lázně, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx xx 20 °C.
Přidat 5 xx Carrezova xxxxxxx X (3.3) x xxxxx xxxxxx protřepávat. Xxxx xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx roztoku XX (3.4) x xxxx jednu xxxxxx xxxxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx xxxxx, homogenizovat x xxxxxxxxx. Pokud xxxx filtrát zcela xxxx (xxx je xxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Carrezova xxxxxxx X x XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx polarimetrem xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx rotaci xxxxxxx x 200 xx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (P’ xxxx X’) xxxxx xxxxxxxxxxx xx 4 % ethanolu
Navážit 5 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx, xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x objemu 100 xx x přidat xxx 80 ml xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Poté xxxxxx baňku xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx této xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx zkušební xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxx (3.5), xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 ml xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) do Xxxxxxxxxxxxx baňky o xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) x xxxxx protřepat. Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xx vroucí xxxxx xxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx baňku x xxxxx xxxxx, přelít xxxx obsah xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 ml, xxxxxxxxxxx chladnější xxxxx x xxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx I (3.3) x II (3.4), doplnit xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx rotaci, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxx x třetím xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxx škrobu (%) xx xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Měření polarimetrem
procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - P’) / [α]X20°
xxx xx:
X = celková xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx.
X’ = optická xxxxxx látek xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, v úhlových xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx xxxxx
+ 195,4°: bramborový xxxxx
+ 184,6°: kukuřičný xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: xxxxx škrob
+ 181,3°: ovesný xxxxx
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx = 2 000 / [α]X20° · (2 N · 0,665) (X - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = celková xxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx ve 40 % ethanolu, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx 100 xx xxxx, xxxxx xx xxx tloušťce 200 xx xxxxxxxx xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:
16,29 g pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 g xxx německé xxxxxxxxxxxx
20,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = specifická xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah škrobu xxxxx xxx 40 % a 1 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx rovnajícího xx xxxx xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx více xxx 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxx před stanovením xxxxxxx rotace xxxxxxx xx xxxxxxx příslušného xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 X případě xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx laktózy, xxxx xx sušené xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx přidání 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xx 30 xxxxx xx vodní xxxxx x xxxxxxx 50 °X. Nechat xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxx, xxx je xxxxxxx v xxxx 5.3.
2. STANOVENÍ HRUBÝCH XXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx stanovit obsah xxxxxxx proteinů x xxxxxx xx základě xxxxxx dusíku xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx xx xxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx amoniak xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny sírové, xxxxx přebytek xx xxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Katalyzátor: xxxx xxxxxxx XxX x.x. nebo síran xxxxxxx xxxxxxxxxxx XxXX4 · 5X2X p.a., xxxx rtuť xxxx xxxx rtuťnatý XxX x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx zinek x.x.
3.4 Kyselina xxxxxx x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx sírová 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxx 0,5 N.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: rozpustit 300 xx xxxxxxxxxxxxx xx 100 xx 95-96 % (V/V) xxxxxxxx.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx hydroxidu xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X.
3.10 Roztok xxxxxxxxx sodného 0,25 X.
3.11 Nasycený xxxxxx xxxxxx sodného x.x.
3.12 8 % (m/V) xxxxxx thiosíranu xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1).
5. Postup
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 x vzorku x xxxxxxxxx na 1 mg a xxx xx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 g xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 xx 0,4 g xxxxx xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 g xxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx xxxx 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 ml xxxxxxxx sírové (3.4) x xxxxxxx granulí xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx x za občasného xxxxxxxxxxxx, dokud hmota xxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx kapalina xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx baňky x přilnutí organických xxxxxx. Xxxx je xxxxxx xxxx x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx bázi mědi), xxxxxxxx var xxxxx xxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Destilace
Opatrně x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, aby xx xxxxxxx xxxxx rozpustily; xxxxxx xxxxxxxxxxx; poté xxxxxx několik granulí xxxxx (3.3).
Xxxxxx do xxxxxx baňky destilační xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxxx sírové 0,1 X (3.5) xxxx 0,5 X (3.6) x závislosti xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx xxxxxxx xxxxx indikátoru xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx baňku xx xxxxxxx destilační xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx hloubky xxxxxxx 1 xx (xxx xxxxxxxx 7.3). Přes xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 100 xx 40 % roztoku xxxxxxxxx sodného (3.8). Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx na bázi xxxxx, xxxxxx do xxxxx xxxxxx xxx 10 ml xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx thiosíranu xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx baňku xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xx 30 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx kapaliny. Po xxxxxxxx této xxxx xxxxxxxxxxxx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x destilaci. Xxxxxxx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, že xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxx xx času promíchat xxxxx sběrné baňky x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx dojde ke xxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 N (3.10) v xxxxxxxxxx xx normalitě xxxxxxx xxxxxxxx sírové, xxxxx xx zbarvení xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx dusík, se xxxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxx x xxxxxxx), x xx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxxxxx správnosti xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x titrace) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx x.x. (x.x. 114 °C; % X: 10,36) za xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Xxxxxxx výsledků
Stanovit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, 1 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X odpovídá 1,4 xx dusíku. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx stanovení provedených x jednoho vzorku xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx hodnoty pro xxxxx hrubých proteinů xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx vyšší xxx 20 % a xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 absolutní xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 40 %.
7. Poznámky
7.1 Je xxxxx xxxxxx některé xxxxxxxxx, které vyžadují xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx musí xxxxxxx xxxx xxxxx.
7.2 X xxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X, xxxxx xx xxx xxxxxxxx nalita xx xxxxxx xxxxx, snížen xx 10 až 15 ml a xxxxxxx xxxxx xx 25 xx.
7.3 Pokud xxxx baňka xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nálevku s xxxxxxxx, přidat xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxxxx baňky na xxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx tak, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx kyseliny.
3. XXXXXXXXX HRUBÝCH XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX CHLOROVODÍKOVOU
1. Xxxx x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx proteinů rozpustných xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx za stanovených xxxxxxxx. Metoda xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 x/xx xxxxxxx; xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x metodě xxxxxxx x xxxxx 4 této xxxxxxx x xxxx být xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x touto xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), čerstvě xxxxxxxxxx xxxxxx pepsinu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (např. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx činidla xxxxxxx x bodě 3 metody xxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx metody.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2)
Navážit 2 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx. Xxxxxx 450 ml xxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °X. Xxxxxxxxx, aby se xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx. Xxxxxx, xx je xX suspenze nižší xxx 1,7. Vložit xxxxx do xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx (4.1) x nechat xx xxx 48 xxxxx. Xxxxxxxxx xx 8, 24 a 32 xxxxxxxx. Po 48 xxxxxxxx xxxxxx 15 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), zchladit xx 20 °X, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx x filtrovat.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 ml xxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 mg x xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Přidat xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx v metodě xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx druhé xxxx bodu 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x uvést xx xxxx. Xxxxx xx vytvoří xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx v silném xxxx, xxxxx se xxxx téměř xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx.
Xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx (světlezelený, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx vychladnout.
5.3 Xxxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 5.2 a 5.3.
5.4 Slepý pokus
Provést xxxxx xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx vzorku, xxxxx má být xxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx kyseliny sírové xxxxxxxxxxxx xxxxx slepého xxxxxx xx objemu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorkem. 1 ml kyseliny xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx dusíku xxxxxxxx 6,25. Výsledek xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx nesmí xxxxxxxxx:
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 20 % a xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx vyšší xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Hodnoty xxxxxxx xxxxx metodou xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx vivo.
7.2 Xxxxxxx o obsahu xxxx vyšším než 10 % xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxx xxxxxxx použitého xxx stanovení hrubých xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxx x xxxxxxxxx chlorovodíkovou.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx podmínek xxxxxxxx x prostředí xxxxxxxx chlorovodíkové. Nehydrolyzovaná xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx trichloroctovou. Xx xxxxxxxx xx xxxxx hydroxid xxxxx x činidlo Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx 750 xx x odpovídající množství xxxxxxxx xx odečte x xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx pepsinu xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx za xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx hydroxyarylových xxxxxx, xxxxxxx zbarvení xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx optické xxxxxxx xxxxxxx μmolu xxxxxxxx xxxxxxxxxx stejným xxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,025 N.
3.4 5 % xxxxxx (m/V) xxxxxxxx trichloroctové.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Folin-Ciocalteu. Xxx 100 g xxxxxxxxxx sodného (Na2WO4 · 2H2O), 25 x xxxxxxxxxxx sodného (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 ml xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx s kulatým xxxx x normalizovaným xxxxxxxx. Přidat 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) x 100 xx koncentrované xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19), xxxxxxxx baňku xx zpětný xxxxxxx, xxxxx xx xxxx x xxxxxxxx roztok x xxxxxx xxxx xx xxxx 10 xxxxx. Xxxxxx vychladnout, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxx 175 x xxxxxx xxxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 50 xx xxxx x 1 ml xxxxx. Xxxxx xx xxxx 15 minut, xxx xx xxxxxxxxx přebytek xxxxx.
Xxxxxx vychladnout. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 x, xxxxxxx xx rysku xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx zůstat xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx použitím xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Roztok xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxx hemoglobinu, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 354 xx dusíku [1] x xxx xx baňky x xxxxxx 200 xx x normalizovaným zábrusem. Xxxxxx několik ml xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx pumpou x xxxxxxxxxxx, dokud xx xxxxxxxxxx zcela nerozpustí. Xxxxxxx xxxxxx x xx protřepávání doplnit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx na 100 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx tyrosinu: xxxxxxxxx 181,2 mg xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx kyselinou (xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx tohoto roztoku x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx xxxxxx roztoku xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxx ultratermostatem xx 25 °X + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Stopky, xxxxxxxx: 1 xxxxxxx.
4.4 pH xxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxx xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx x xxx xx xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 ml x xxxxxxx xx xxxxx kyselinou chlorovodíkovou (3.3). xX xxxxxxxxxxxx xX metrem xxxx xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx xx vodní xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx x xxxx skleněnou xxxxxxxx zesílenou xx xxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx ve vodní xxxxx xxx 25 °X xxxxxx xx xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx x teplota xxxx xxx xxxxxx dodrženy). Xxxx xxxxxx 10,0 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx suchý xxxxx.
5.3 Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx hustoty
Odpipetovat 5,0 ml xxxxxxxx, xxx ho do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx zředěného xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 až 10 xxxxxxxx stanovit optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 750 xx x kyvetách o xxxxxxxx 1 xx x porovnání x xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx slepý xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxx na 25 °C, xxxxxxxxxxxxx x poté přidat 1,0 ml xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx přesně 10 xxxxx ve xxxxx lázni (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx suchý xxxxx. Xxxxxxxxxx v postupu xxxxxxxx x bodě 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx křivka
Do Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, a 5,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx odpovídá 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx referenčním xxxxxxxx xxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.1) xx 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (3.5) a xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 ml zředěného xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xxxxxx optickou xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx 5.3. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxx množství tyrosinu x μxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx pepsinu x μxxxxxx tyrosinu xx 1 xx x za xxxxx xxxxxx xxx 25 °X xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx xx xx (j/mg) = 0,32 x / x
xxx:
x = množství xxxxxxxx x μxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx bodu 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx má xxx xxxxxxxxxx, musí xxx takové, xxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx měření xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Dvě xxxxxxxx xx mg xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx milijednotkám/mg (μxxxx xxxxxxxx/xx min. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 komerčních jednotek/g (μxxxx xxxxxxxx/x xx 10 min. xxx 35,5 °X).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX A XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx příbuzné látky x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx je 20 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx extrahován xx xxxxxxxxxxx 3-amino-1-propanolu, x xx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx 440 xx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu: xxxxxxx 60 objemových xxxxx xxxxxxxxxxxx p.a. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx x-xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxxxx X: xx odměrné xxxxx x xxxxxx 1 x xxxxx xxx 500 ml xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx xxxxxx kyseliny xxxxxx x 50 xx vody. Xxxxxxx xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Trvanlivost xxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx B: xxxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 ml 2 xx 3-amino-1-propanolu a 10 xx ledové xxxxxxxx octové. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx činidla xx xxxxx xxxxx.
3.4 Xxxxxx x.x.: xxxxx optická xxxxxxx slepého xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Toto xxxxxxx xx skladuje v xxxxxxxxxx xxxxxxx měsíců x zazátkované lahvi x xxxxxxx skla.
3.5 Xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxx X: xx odměrné xxxxx x xxxxxx 250 xx xxx 27,9 xx octanu xxxxxxxxx. Rozpustit x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2). Xxxxxxxxxxx xx odměrné xxxxx x xxxxxx 250 xx 50 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxxxxx X. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,02 mg/ml. Xxxx xxxxxxxx nechat xxxx xx dobu xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Standardní xxxxxx xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx xxx 27,9 xx xxxxxx gossypolu. Rozpustit x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxxxxx gossypolu x xxxxx roztoku xx 0,5 xx/xx.
Xxxxx xxxx standardní xxxxxxx xxxxxxxxx X x X xxxxxxxx před xxxxxxx, jejich trvanlivost xx 24 hodin.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 ot./mim.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx zkušebního xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx. Je výhodné xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx velkou xxxxxxxxx xxxxx filtrátu, xxx xxxx možné xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx přesné xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx semenech, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 g; xxx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 5 x. Xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx alikvotní xxxx 10 xx xxxxxxxx; xxxx xx xxxxxxxxx 50 až 100 μx gossypolu. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxx 0,5 x 5 x, aby xxxxxxxxx část 2 xx xxxxxxxx obsahovala 40 xx 200 μx gossypolu.
Analýza by xx měla provádět xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx vzorek xx xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxx 250 xx, xxxxx dno xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 50 ml xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx xxxxxx promíchávat v xxxxxx. Filtrovat přes xxxxx filtr x xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx baňce xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Během xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x kohoutem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx do dvou xxxxxxxxx xxxxx (X x B) x xxxxxx 25 xx xxxxxx alikvotní xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx doplnit xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) xx 10 xx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx baňku (X) směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx slepý xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx přidat 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2) do xxxx jiných xxxxxxxxx xxxxx (X a X) x objemu 25 xx. Xxxxxxx xx xxxxx baňku (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (X) a (X). Zahřívat 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 440 xx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx pokus (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx roztokem (X) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx vzorku (X) xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (A).
Odečíst xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx hustoty roztoku xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx). Z xxxx hodnoty xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx xx xxxxxxx x bodě 6.
5.3 Xxxxxxxxx celkového gossypolu
Dát xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 xx 5 xx gossypolu do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx x xxxxxx 10 xx rozpouštědla B (3.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx pokus x xxx 10 ml xxxxxxxxxxxx B (3.3) xx jiné odměrné xxxxx o objemu 50 xx. Zahřívat xxx xxxxx 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx lázní. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu x xxxxxxx po xxxxx obě xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x nechat stát 10 xx 15 xxxxx, xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 2 xx xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 25 xx x 2 ml filtrátu xxxxxxx xxxxxx do xxxx jiných xxxxxxxxx xxxxx x objemu 25 xx. Xxxxxxx xx 25 xx xxxxx jedné xxxxx x každé série xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx referenční xxxxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxx xxxxxx baněk. Xxxxxxxx 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zchladit na xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx hodinu.
Stanovit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx uvedeno x bodě 5.2. X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx celkového xxxxxxxxx, jak je xxxxxxx x xxxx 6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (6.1), nebo xx xxxxxxx kalibrační xxxxxx (6.2).
6.1 Na xxxxxxx specifické xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx:
xxxxx gossypol: X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: E 1% / 1cm = 600
Xxxxx volného xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1&xxxx;250 / E1%1cm ·&xxxx; · x · x
xxx:
X = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2
x = xxxxxxxx vzorek x x
x = xxxxxxxxx xxxx filtrátu x ml
6.2 Na xxxxxxx kalibrační křivky
6.2.1 Xxxxx gossypol
Připravit xxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 xx. X každé xxxxx xxxxxx pipetou 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx rozpouštědlem A (3.2) na 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxx slepého xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx každé xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat stát xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 stanovit optickou xxxxxxx standardní xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx roztoky referenční xxxxx. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx hodnot xxxxxxx xxxxxxx proti xxxxxxxx gossypolu (x μx).
6.2.2 Celkový xxxxxxxx
Xxxxxxxxx 6 xxxxxxxxx xxxxx x objemu 50 xx. Xx xxxxx xxxxx xxxxxx pipetou 10 ml xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx X (3.6). Xxxxxxx xxxxx každé xxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx. Xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxx pipetou 2 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx o 6 xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xxxxx baněk xxxxx xxxxx xx 25 xx směsí x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx do xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4). Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx a hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx jednu xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 stanovit xxxxxxxx xxxxxxx standardní xxxxx xxxxxxx porovnáním x odpovídajícími xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx křivku xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx gossypolu (x μx).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah gossypolu xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % relativní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Stanovit xxxxx xxxxxx podle Kjeldahlovy xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx obsah: 17,7 % xxxxxx).
PŘÍLOHA XX
1. XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX TETRACYKLINOVÝCH XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx antibiotika x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 ppm xxxxxxxxxx, x koncentrátech x premixech.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx sestupné papírové xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxx x identifikována xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx Xx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, a to xxx fluorescencí v XX xxxxxx (xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx), xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx.
3. Činidla
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x.x. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Na2HPO4.2H2O p.a. |
7,45 x |
|
Xxxxxx p.a. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný KH2PO4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X p.a. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx X: směs xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 objemově. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx II xxxx xxxxxxx nitromethanu/čistého chroroformu/α-pikolinu: 20/10/3 objemově. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx methanolu/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 objemově.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
3.7 Xxxxxxx, d: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx látky: Chlortetracyklin, xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x chlorovodíku.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus XXXX x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx suspenze xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média: xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx agaru, xxx je xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx přílohy.
3.10 Kultivační xxxxxx [1]
|
Glukosa |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-triphenyltetrazolium xxxxxxxx x 5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografii (xxxxx xxxxxx 25 xx). Xxxxxxxx x Xxxxxxx papír (2440X xxxx 2043X) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Odstředivka
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx stanovení xxxxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx asi 20 x 30 xx pro xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) a xx použití kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, jejichž xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) s xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a tetracyklinu-HCL xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx antibiotika xxxxx xxx 10 xxx, xx možné xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxx nejjemnější xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, neboť xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx v této xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x použít ho xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika xxx 100 μg xx 1 xx (6.1) x 5 μx na 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx
7.1 Chromatografie
Ponořit xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xX 3,5 (3.1). Odstranit xxxxxxxx xxxxxxxx vtlačením xxxxxx xxxx xxxxx suchého xxxxxxxxxxx xxxxxx. Poté xxxxxxx xx xxxxx 0,01 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) x xxxxxxxx (6.1 x 6.2). Xxx xxxxx oddělení xxxx xxx papír xxxxxxxx xxxxxxx; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxx trochu xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx I (3.3) xxx xxxxxxxxx bioautografií x xxxxxx XX (3.4) pro stanovení XX xxxxxxx. Xxxx xxxx rozpouštědla dosáhne xxxxx 15 xx 20 cm (asi 1 hodina 30 xxxxx), přerušit chromatografii x xxxxxxx papír.
7.2 Xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxx xx obsah xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 1 μx/xx2, je možné xx xxxxxxxx chromatogramu xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx ozářením xxx XX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx X. cereus (3.9), xx xxxxxxxx desky (4.5) a položit xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx pěti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx tetracyklinového xxxxxxxxxxx xx projeví světlými xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx.
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xx inkubaci odpaří xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx Xx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotik xxxx xxxxxxx zde. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxx vlhkosti:
|
Chlortetracyklin (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (XX) |
0,40 |
|
Xxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "xxx" xxxxxxxxx xx menší než xxxxxxxx normálních xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X TETRACYKLINU
A. DIFÚZÍ XX XXXXX
1. Účel x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x tetracyklin (TC) x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Xxxxxx xxxxx xxx 5 ppm xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx rovných xxxx xxxxxxx xxx 50 xxx xx vzorek xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. X obsahů xxxxxxx xxx 50 ppm xx xxxxxx extrahuje xxxxx xxxxxxx, xxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x směsí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x TC.
Extrakty se xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx stanoví měřením xxxxxx CTC, XXX xxxx XX xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus ATCC x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx modře x xxxxxxxx xxxxxx. Inkubovat xxxx xxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx suspenze xxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxx agarem (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5). Naočkovat xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 ml xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx borité, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 xx 30 °C, xxxx xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.6) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx ověřena sporulace, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx se xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 měsíců.
Předběžnými xxxxx xx deskách x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,2 a 0,3 xx xx 1000 xx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 ml |
|
Fosfátový xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx borité |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx upravit xX na 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Fosfátový xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2H2O x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
4.5 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: xxxxxxxxx čerstvý xxxx použitím x xxxxxxx xx xX 4,5 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx 2 N.
4.9 Směs xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx xx vyjádřena x chlorovodíku.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Chlortetracyklin
Na základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x za xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (4.7) xxxxxxxxx zásobní roztok, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μx chlortetracyklinu-HCL xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx standardní xxxxxxxx xxxxxx X8, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx. Xxxxxxx xx xxxxxxx za xxxxxxx fosfátového xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx přidáno 0,01 % černě xxxxx [3].
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Oxytetracyklin
Postupem xxxxx bodu 5.1 xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxx roztoku, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,6 μg xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx a tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx zásobního xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx, xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,0 μg xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x tyto koncentrace:
|
S4 |
0,5 |
μg/ml |
|
S2 |
0,25 |
μg/ml |
|
S1 |
0,125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx xxxxx xxxx nižní než 50 xxx
Xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (4.8) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Poté xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3) xxxxx odkazů x xxxxxxx x xxxxx xxxxxx koncentraci X8. Xxxxxxxxxxx formamidu x tomto xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx dekantovat xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxx roztok. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, U2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx použití fosfátového xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxx |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Xxxxxxxx vzorek x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx fosfátového xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
řeď. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
řeď. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx U8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Obsahy xxxxx xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx vzorku nebo xx xxxx výrobní xxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxx vzorku o xxxxxxxxx 2 až 10 g 20ti xxxxxxx jeho objemu xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx pH xxxxx xxx 3; xxxxx xx xx nutné, xxxxxxx pH na 3 (x minerálních xxxxxxxxx za použití 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xX na 5,5 xx použití xxxxxxxxxxx pufru, pH 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně (xxxxxx se ze xxxxx na xxxxxx). Xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, pH 5,5, zředěného 1/10 (4.3), s cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx X8 (xxx 6.1).
Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1), xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx je xxxxxxx x xxxx 6.2.1 xxx, xx xx xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx na xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx za xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, X2, X1) x čtyř koncentrací xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Každá miska xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx tímto xxxxxx vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo možné xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.1), které xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x tloušťce xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx nebo plastovým xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x závislosti xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat difúzi xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a extraktu. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, obě křivky xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vypočítá xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 - S1 -X2 -X4 -S8) · 0,602 / U4 + U8 + X4 + S8 - X1 -X2 -X1 -S2
Skutečná xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx aktivita x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. TURBIDIMETRICKY
1. Účel x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx chlortetracyklin (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (OTC) x xxxxxxxxxxx (XX) xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 1 x/xx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, která xx xxxxxx vzniknout xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx než xxxxxx na xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx obsahu XXX se xxxxxx xxxxxxxx xxxxx acetonu, xxxx a kyseliny xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxx OTC x TC směsí xxxxxxxxx a kyseliny xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx poté xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx světelné xxxxxxxxxxxx kultivačního xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx aureus x xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx antibiotikum. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx závisí na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx aureus K 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x šikmým agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), do xxxxxxx se xxxxx 1,5 xx 3 % xxxxx (podle xxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx xx šikmý xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx laboratorní xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
24 xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °C. Xxxxxxxxxxx celou xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x asi 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxx přenést xxxxxxxx xx sterilních xxxxxxxx xx asi 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat xx xxxxx xxxxx xxx 37 °C xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmické xxxx (1x30 až 2x).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
1,5 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 g |
|
Chlorid sodný |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 g |
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 p.a. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
xX xx xxxxxxxxxxx: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 objemově.
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (x/X) roztoku xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, TC, xxxxxxx aktivita xx xxxxxxxxx v chlorovodíku.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 xx 500 μx XXX-XXX, XXX-XXX xxxx TC-HCL xx 1 ml. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x chladničce jeden xxxxx.
6. Extrakce
6.1 Chlortetracyklin
Do xxxxxxx baňky x xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 až 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx směsi (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
6.2 Oxytetracyklin x xxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 g xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
7. Metoda stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) fosfátovým xxxxxx, pH 4,5 (4.2), xxx, aby xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx stanovení xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxx xx znázorní xxxxxxxxxxx xxxxxxx dvou hodnot xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx podle xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Chlortetracyklin
Zředit standardní xxxxxx (5) fosfátovým xxxxxx (4.2) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx XXX-XXX xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx ředění xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku |
ml xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Zředit xxxxxxx (6.1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x cílem získat xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,12 μx CTC-HCL. Xxx 1 xx xxxxxx xxxxxxx do xxxx xxxxxxxx a 0,75 xx (= 0,09 μx) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx jiných xxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,6 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2), xxx xx uvedeno xxxx a xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Koncentrace XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Zředit xxxxxxx (6.2) za použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx XXX-XXX nebo XX-XXX xx 1 xx. Xxx 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,5 ml (= 0,24 μg) xx xxxx jiných xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.2 Xxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx (4.1) očkovací xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx na xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x 5 xx kyvetě xxxx 92 % xxxxxxxxx propustnost xx 2 xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx každé zkumavky (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx provedeno x xxxxxx, xxx nezbytně xx xxxxxxxxx prostředí.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx 37 °X + 0,1 °X. Xxxxxxxxx doba se xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx xxxx možné xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx pro přesná xxxxxx (xxxxxx 2x30 xx 3x). Xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx vstříknutím 1 xx roztoku xxxxxxxxxxxx (4.6) do xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx xxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, přičemž fotometr xx xxxxxxx na 100 % propustnost xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx). X důvodu xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx různých xxxxxxxx xx doporučuje použít xxxxxxx 2 xx x xxxxxx 5 xx kyvety.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx křivku xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx fotometrických xxxxxxxxxxxx xxxxx koncentracím antibiotika. Xxxxxxx xx křivce xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % relativní xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx a premixech, x xx xxxxxxx x přítomnosti xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Xx odstředění xx xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx B. cereus. Xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx přítomnosti mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx zón xx přímo xxxxxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus, X 250 TR [8] (xxxxxxxxxxx vůči xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx rodičovského xxxxx
Xxxxxxxxx B. cereus xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem odebraným x xxxxxxxxxxxx média (4.1) x přidat 100 μx oxytetracyklinu xx 5 xx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx asi 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx na xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx asi 3 xx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.3). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 xx kultivačního média (4.1), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, xxxx smýt xxxxx 15 ml xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx sporulaci, a xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx testy xx deskách xx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) určit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx získat xxx xxxxx použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,1 x 0,2 ml xx 1000 ml. Očkování xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx xxx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxx xxx udržování rodičovského xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 ml |
|
Před použitím xxxxxxx pH xx 6,5. |
4.2 Xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení [10]
Médium (4.1) xxxxxxxx na xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (V/V) ethanol.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (x/X) xxxxxx xxxx (hydroxymethyl) xxxxxxxxxxx x.x.
4.7 Xxxxxxxxx xxxxxx
|
Xxxxx xxxxxxxx |
50 ml |
|
Destilovaná xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 g |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) x 5 xx methanolu (4.5) x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x cílem xxxxxx koncentraci xxxxxxxxxxxxx 100 μg/ml.
Na základě xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx zředěním x xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Extrakce
V xxxxxxxxxx na předpokládaném xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 xx 10 x 100 xx roztoku (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou.
Odstředit, xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) s cílem xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x U1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) při 60 °X suspenzí xxxx (3.2).
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx xx agaru se xxxxxxx v xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, X1). Každá xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx účelem xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, aby xxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx médiu nejméně 8 děr x xxxxxxx 10 xx 13 mm. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx má xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx skleněných xxxxx s dokonale xxxxxx hliníkovým nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx antibiotika xxxx 0,10 a 0,15 xx, x závislosti xx průměru děr.
U xxxxxxx vzorku opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx každé xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 - X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + S4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- xxxxxx na xxxxx -
1. Účel x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit tylosin x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx pufračním xxxxxxxx x xX 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, a xxxx xx extrahuje xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx lutea XXXX x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxx xxxxx xx zkumavky xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx z kultivačního xxxxx (4.1) upraveného xx xX 7,0. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx asi 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx agar.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx použití 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), upravit na xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °C, xxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x zředit xxxx xxxxxxxx x xxxxx získat 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx testy xx xxxxxxx x xxxxxxxx médiem pro xxxxxxxxx (4.1) určit xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Bazální médium xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze upravit xX na7,0 a xx xxxxxx xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Fosfátový xxxx, xX 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný K2HPO4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxxx pufr, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Čistý methanol.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Směs fosfátového xxxxx (4.2)/xxxxx methanol: 60/40 objemově.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx x xxxxx aktivitě.
5. Standardní xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °C xx xxxxxxx sušárně (5 mm xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 mg xx xxxxxxx xxxxx, rozpustit x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxx roztok xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 7 (4.3) s cílem xxxxxx koncentraci xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx tylosinu xx 1 ml.
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7) xxxx koncentrace:
|
S4 |
1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,5 |
μg/ml |
|
S1 |
0,25 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx; xxx xxxxxxx x xxxxxx 20 g xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, a xxxxxxxxxxxxx 2 xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxx, Ultra-turrax xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 minut, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxx extrakt a xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx (4.7) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx připravit koncentrace X4, X2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7).
Xxx xxxxxx nižší xxx 10 xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 35 °X x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxxxxxxx xx xX 8 xxx 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx v xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, U1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx účelem vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx udělat x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 děr x xxxxxxx 10 až 13 mm. Xxxxxxxxx xxxxxxxx očkovaného kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx misek xxxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx skleněných desek x dokonale rovným xxxxxxxxxx xxxx plastovým xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx do xxx xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x závislosti xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x každou xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxx noci xxx 35 až 37 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Zaznamenat xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zanesením xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx proti průměru xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + U8 - X1 - X2 - S4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. STANOVENÍ XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Účel x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, koncentrátech x premixech. Spodní xxxxxxx pro stanovení xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Xxxxx 80". Po odstředění xxxx filtraci xx xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx lutea. Xxxxxx xx xxxxxxx vytvořením xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx je xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx xxxxx ATCC x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem x kultivačního média (4.1). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx v chladničce x xxxxxxxxxx každých 14 dní xx xxxxx xxxx.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx solného xxxxxxx (4.3). Naočkovat xxxx xxxxxxxx do Rouxovy xxxxx obsahující 250 xx kultivačního xxxxx (4.1). Inkubovat 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx za pomoci 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x zředit xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx jeden xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx možné, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Očkování kultivačního xxxxx se provádí xxx 48 xx 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 p.a. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % methanolového xxxxxxx "Xxxxx 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx látka: xxxxxxxxxxxxx x známé xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx standardní xxxxx (4.7) obsahující 800 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx připravit xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1+) xx použití xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxx x obsahu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx nižším xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Odstředit xxxx xxxxxxxxx, odebrat 20 xx xxxxxx xxxxxxx x odpařit do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 ml xxxx xxxx xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx x obsahu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 x xxxxxxxxxx vzorku, xxxxxx 100 ml xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxx xxxxxx směsí (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μg virginiamycinu xx 1 xx (= X8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1, xxx je xxxxxxx x bodě 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) při 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx x miskách xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, S2, X1) x xxxx koncentrací xxxxxxxx (U8, X4, X2, U1).Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx tímto xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx možné xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x průměru 10 xx 13 xx. Vypočítat množství xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx nebo plastovým xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxx 35 xx 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit průměr xxxxxxxxxxx zón, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx pomocí této xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 -X1 - X2 - S4 - S8) · 0,602 / U4 + X8 + X4 + S8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Xxxx být xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] Xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx roztoků (xxxxx xxxxx).
[6] Tento xxxx xxxxxxxxx v Xxxxx xxxxx LUFA xxxxxxxx rychlejší xxxx xxx X. aureus XXXX 6538 X.
[7] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Xxxx xxxxxxxxx x Xxxxx podle XXXX.
[9] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[11] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Může xxx xxxxxxx jakékoli komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx výsledky.