Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. dubna 1972,
xxxxxx se stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx metod odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu krmiv [1], a xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx stanoví, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx cílem xx xxxxxx xxxxxxxxxx požadavků xxxxxxxxxxx právními x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx se jakosti x xxxxxxx krmiv, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxx 1971 [2] a 71/393/XXX xx xxx 18. listopadu 1971 [3] již stanovily xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx prací xx xxxx nutné xxxxxxxx třetí xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, že xxxxxxx xxx xxxxxx kontroly xxxxx, pokud xxx x xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx, jakož x x xxxxxxxx xxxxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx směrnice Komise x. 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxx 1971, xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxx metody xxxxxxx x příloze X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx x x xxxxxx chlortetracyklinu, oxytetracyklinu, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, se xxxxxxxxx xxxxx metod popsaných x příloze XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) přílohy xxxxx směrnice Xxxxxx x. 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxx 1971, s výjimkou xxxxx týkající xx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x příloze XX xxxx xxxxxxxx.
Článek 3
Členské státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx směrnicí nejpozději xx 1. xxxxxxxx 1973. Xxxxxxxxxx o xxxx informují Xxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx směrnice xx určena členským xxxxxx.
X Bruselu xxx 27. xxxxx 1972.
Za Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Xxxxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX I
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx metoda
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x produktů xxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu x krmivech, x xxxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, řepnou xxxxx, xxxxxx xxxxx skrojky xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxx, sušené xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. xxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx dvojité xxxxxxxxx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxx za xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou. Xx čiření x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx stanovení xx xxxxxx xxxxxxxxx 40 % ethanolem. Xx xxxxxxxxx filtrátu xxxxxxxxx chlorovodíkovou, čiření x xxxxxxxx xx xxxxx optická xxxxxx xx stejných xxxxxxxx xxxx při prvním xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx vynásobený xxxxxx xxxxxxxx udává xxxxx xxxxxx ve xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) kyselina xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X x xx přítomnosti 0,1 % (m/V) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (V/V) xxxxxxxx. 10 xx = 30,94 xx 0,1 X XxXX.
3.3 Carrezův xxxxxx X: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x xxxxxx zinečnatého Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x ledové xxxxxxxx xxxxxx. Doplnit xxxxx xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx II: xxxxxxxxx xx xxxx 10,6 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [K4(Fe(CN)6].3H2O. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, x: 0,948 při 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x objemu 250 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx chladičem.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělnit vzorek xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx oky x xxxxxxx 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x vzorku s xxxxxxxxx na 1 xx x xxx xx do odměrné xxxxx x xxxxxx 100 xx. Xxxxxx 25 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx se zkušební xxxxxx dobře xxxxxxxxx x xxxxxx dalších 25 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxx x xx xxxx prvních xxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx hrudek. Xxxxxxxx xxxx xx vodní xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, aby x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx na xxxx varu. Xxxxx xxxxx být vyjmuta x lázně xxxxx xxxxxxxxxxxx. Přesně xx 15 minutách xxxxxxx xxxxx z xxxxx, xxxxxx 30 ml xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx na 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Carrezova xxxxxxx X (3.3) x xxxxx xxxxxx protřepávat. Xxxx přidat 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx XX (3.4) x xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, homogenizovat x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx filtrát xxxxx xxxx (což xx xxxxxx), opakovat stanovení xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx roztoku X x XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx optickou rotaci xxxxxxx x 200 xx trubici.
5.3 Stanovení xxxxxxx rotace (P’ xxxx S’) látek xxxxxxxxxxx xx 4 % ethanolu
Navážit 5 x vzorku x xxxxxxxxx na 1 xx, xxx xx xx xxxxxxx baňky x objemu 100 xx a přidat xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Poté xxxxxx xxxxx stát xxxxx hodinu xxx xxxxxxxx teplotě x xxxxx xxxx doby xxxxxxxx silně protřepat, xxx xx zkušební xxxxxx dobře smíchal x xxxxxxxxx. Doplnit xx rysku xxxxxxxxx (3.5), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) do Xxxxxxxxxxxxx baňky o xxxxxx 250 ml, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) x silně protřepat. Xxxxxxxx xx Erlenmeyerovu xxxxx zpětný chladič x ponořit xx xx vroucí xxxxx xxxxx. Xxxxxx po 15 minutách xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxx lázně, xxxxxx xxxx obsah xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 ml, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x poté xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx Xxxxxxxxx roztoku X (3.3) a XX (3.4), xxxxxxx xx xxxxx vodou, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx uvedeno x xxxx 5.2 druhém x třetím xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxx škrobu (%) xx xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2 000 (X - X’) / [α]D20°
kde je:
P = xxxxxxx optická xxxxxx, x úhlových xxxxxxxx.
X’ = xxxxxxx xxxxxx látek xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx xxxxx
+ 195,4°: bramborový škrob
+ 184,6°: kukuřičný škrob
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: xxxxx xxxxx
+ 181,3°: ovesný xxxxx
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Xxxxxx sacharimetrem
Procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]D20° · (2 X · 0,665) (S - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx rotace, xx xxxxxxxx sacharimetru
S’ = xxxxxxx xxxxxx látek xxxxxxxxxxx xx 40 % ethanolu, xx xxxxxxxx sacharimetru
N = xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx ve 100 xx xxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxx 200 mm xxxxxxxx xxxxxx 100 stupňů xxxxxxxxxxxx. Tato xxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:
16,29 x xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 g xxx německé xxxxxxxxxxxx
20,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = specifická xxxxxxx rotace xxxxxxx xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 0,4 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx škrobu xxxxx než 40 % x 1 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx škrobu rovnajícího xx nebo xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx více xxx 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx jako uhličitan xxxxxxxx, uhličitany musí xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx zředěné kyseliny xxxxxx.
7.2 V xxxxxxx xxxxxxxx x vysokým xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx nebo sušené xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xx 30 xxxxx xx vodní xxxxx x xxxxxxx 50 °X. Nechat xxxxxxxxxxx x pokračovat x xxxxxxx, jak xx xxxxxxx v xxxx 5.3.
2. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxx stanovit xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx na základě xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx. Xxxxxx xxxxxx se alkalizuje xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx. Xxxxxxxx amoniak xx xxxxxxxxxxx a shromáždí xx v xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx sírové, xxxxx přebytek se xxxxxxx roztokem xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx měďnatý XxX x.x. xxxx síran xxxxxxx pentahydrát XxXX4 · 5X2X x.x., xxxx xxxx xxxx xxxx rtuťnatý XxX x.x.
3.3 Granulovaný xxxxx x.x.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx x.x., d: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx sírová 0,5 X.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx methylčerveně xx 100 ml 95-96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxx sodného.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,1 X.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného p.a.
3.12 8 % (m/V) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx pemza, xxxxxxx v kyselině xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx (viz poznámky 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 x vzorku x přesností xx 1 xx a xxx ho xx xxxxx mineralizační xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 x xxxxxx draselného (3.1), xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 xx 0,4 x oxidu xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 x xxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx xxxx 0,6-0,7 g xxxxx xxxxxxxxxx), 25 ml xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, dokud xxxxx xxxxxxxxxxx a pěna xxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx kapalina xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx x přilnutí organických xxxxxx. Xxxx je xxxxxx xxxx x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx bázi xxxx), xxxxxxxx xxx ještě xxxxx hodinu, xxxx xxxxxx vychladnout.
5.2 Destilace
Opatrně x za xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 ml xxxx, aby xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx; xxxxxx xxxxxxxxxxx; xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.3).
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,5 X (3.6) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx několik xxxxx indikátoru xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx baňku xx xxxxxxx destilační xxxxxxxxx x ponořit konec xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx baňce xx xxxxxxx xxxxxxx 1 cm (xxx xxxxxxxx 7.3). Přes xxxxxxx s kohoutem xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 100 xx 40 % xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.8). Xxxxx xxx použit xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxx 10 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx thiosíranu sodného (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xx 30 minut xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx, pokračovat x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx lakmusový xxxxxxx ukáže, xx xx destilát neutrální. Xxxxx xxxxxxxxx čas xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x pozorovat xxxxxxxx. Xxxxx dojde ke xxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Titrace
Ve xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx použité xxxxxxxx sírové, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx světle žlutou.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx činidla xxxxxxxxxx dusík, xx xxxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxx x xxxxxxx), x xx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, destilace x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx p.a. (b.t. 114 °X; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 g acetanilidu xxxxxxxxxx 14,80 ml xxxxxxxx sírové 0,5 X.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kyseliny xxxxxx, 1 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X odpovídá 1,4 xx xxxxxx. Vynásobit xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx vyjádřit xxxx procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx překročit:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx hrubých xxxxxxxx xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx hodnoty pro xxxxx xxxxx xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xx xxxxx použít některé xxxxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxx x destilací. X xxxxxxx případě se xxxxxxx musí provést xxxx xxxxx.
7.2 U xxxxxxxx x nízkým xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X, xxxxx xx xxx xxxxxxxx nalita do xxxxxx baňky, snížen xx 10 xx 15 xx x xxxxxxx vodou xx 25 xx.
7.3 Pokud xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nálevku x xxxxxxxx, přidat xxxxxxxx xxxxx bezprostředně před xxxxxxxxxx baňky xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxx po xxxxxxx baňky xxx, xxx xx xxxxxxxxxx x roztokem kyseliny.
3. XXXXXXXXX HRUBÝCH XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx stanovit frakci xxxxxxx proteinů xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx stanovených xxxxxxxx. Metoda xx xxxxxxxxxx xxx všechna xxxxxx.
2. Princip
Vzorek se xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx dusíku xx xxxxxxxx se stanoví xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx hrubých proteinů.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx chlorovodíková, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 x/xx xxxxxxx; xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 4 této přílohy x xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxx metodou.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxx 3 metody xxx xxxxxxxxx xxxxxx hrubých xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx aparatura xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x vzorku x xxxxxxxxx na 1 xx a dát xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx. Xxxxxx 450 ml xxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °C. Xxxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxx, že xx xX suspenze xxxxx xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx do vodní xxxxx xxxx xxxxxxxxxx (4.1) x xxxxxx xx tam 48 xxxxx. Protřepat xx 8, 24 x 32 xxxxxxxx. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxx 15 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), zchladit xx 20 °X, xxxxxxx xx rysku xxxxx x xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx s přesností xx 1 xx x xxx xx xx xxxxx destilační xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx, jak je xxxxxxx v xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxx bodu 5.1. Xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xx varu. Xxxxx xx xxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx emulse (3.5). Xxxxxxxxxx v xxxxxx xxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx ohřev x opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx.
Xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx bázi xxxx), xxxxxxxx var xxxxx další xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Destilace x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, jak xx uvedeno x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 5.2 a 5.3.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxxxxxx xxxxx pokus xx xxxxxxx stejného xxxxxxx, xxx xxx vzorku, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx slepého xxxxxx od xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorkem. 1 ml kyseliny xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx množství dusíku xxxxxxxx 6,25. Výsledek xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx:
- 0,4 absolutní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % relativní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Hodnoty získané xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx in xxxx.
7.2 Xxxxxxx x obsahu xxxx xxxxxx xxx 10 % xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (b.v. 40 xx 60 °C).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX PEPSINU
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x kyselinou chlorovodíkovou.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x prostředí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Nehydrolyzovaná xxxxxx proteinů xx xxxxxxx xxxxxxxxx trichloroctovou. Xx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx Folin-Ciocalteu. Xxxxxxx hustota xxxxxx xxxxxxx se měří xxx 750 nm x odpovídající xxxxxxxx xxxxxxxx se odečte x xxxxxxxxxx křivky.
Definice: Xxxxxxxx pepsinu xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, které xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx minutu xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx skupin, xxxxxxx zbarvení činidlem Xxxxx-Xxxxxxxxx xx optickou xxxxxxx odpovídající xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx μmolu xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,2 N.
3.2 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,025 X.
3.4 5 % roztok (m/V) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.5 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Činidlo Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxx 100 g xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 25 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 xx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx xxxxxxxx fosforečné (x: 1,71) x 100 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19), xxxxxxxx baňku xx xxxxxx chladič, xxxxx xx xxxx x udržovat xxxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxx 10 xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zpětný xxxxxxx, xxxxxx 175 g xxxxxx lithného (Xx2XX4 · 2X2X), 50 xx xxxx a 1 ml xxxxx. Xxxxx xx dobu 15 xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx vychladnout. Xxxxxx xxxxxx do odměrné xxxxx x xxxxxx 1 x, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat. Xxxxx xxxxxx nazelenalé xxxxxxxx. Před použitím xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 objemy xxxx.
3.7 Roztok xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx 2 g xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxx metody xxxxxxxxxxxxxx 354 xx xxxxxx [1] x dát xx xxxxx x xxxxxx 200 ml x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx několik xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx baňku x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx x xx protřepávání doplnit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx na 100 xx. Připravit bezprostředně xxxx xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx 181,2 xx xxxxxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.1) a doplnit xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx kyselinou (zásobní xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx tohoto xxxxxxx x rozředit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °X + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, xxxxxxxx: 1 xxxxxxx.
4.4 xX xxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx poznámky 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx x xxx xx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx x xxxxxxx xx xxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). pH xxxxxxxxxxxx xX xxxxxx xxxx xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, zahřát xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 1,0 ml xxxxxxx pepsinu získaného xxxxx xxxx 5.1 x promíchat asi xxxxxx xxxxxx tam x zpět xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxx. Nechat xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx při 25 °X xxxxxx xx xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx xx přidání xxxxxxx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx musí xxx xxxxxx xxxxxxxx). Xxxx přidat 10,0 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat xxxx suchý xxxxx.
5.3 Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx hustoty
Odpipetovat 5,0 xx xxxxxxxx, xxx ho do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 až 10 xxxxxxxx xxxxxxxx optickou xxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 750 xx x kyvetách o xxxxxxxx 1 cm x porovnání x xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx stanovení provést xxxxx slepý xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.1. Promíchat xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 10 xxxxx ve xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx x filtrovat xxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx křivka
Do Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, x 5,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μmolu xxxxxxxx tyrosinu. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx tyrosinu. Doplnit xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 5,0 xx. Přidat 10,0 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx protřepávání 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Folin-Ciocalteu (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx je uvedeno x xxxxxxxx xxxx xxxx 5.3. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx křivku xxxxxxxx xxxxxxxxx hustot proti xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx tyrosinu x μxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx optické hustotě xxxxxxxxxx roztoku x xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxx x μmolech tyrosinu xx 1 mg x xx xxxxx xxxxxx xxx 25 °X xx vypočítá xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx xx xx (x/xx) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx v μxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = množství xxxxxxx x mg xxxxxxx xxxxx xxxx 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxx, které xx xxx rozpuštěno, xxxx xxx xxxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx získána xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Dvě xxxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx milijednotkám/mg (μxxxx xxxxxxxx/xx xxx. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 xxxxxxxxxx jednotek/g (μxxxx xxxxxxxx/x za 10 min. při 35,5 °X).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX A XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx volný gossypolu, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx příbuzné xxxxx x xxxxxxxxxxxx semenech, xxxxxxxxxx mouce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu xx 20 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, a xx xxx směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxx stanovení volného xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxx. Gossypol xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx hustota je xxxxxx xxx 440 xx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x.x. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx x-xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1 x xxxxx xxx 500 xx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-amino-1-propanolu, 8 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 50 xx vody. Xxxxxxx xx rysku směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx X: xxxxxxxxxxx do odměrné xxxxx x xxxxxx 100 xx 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx x 10 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxx.
3.4 Xxxxxx x.x.: pokud xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx skladuje x xxxxxxxxxx xxxxxxx měsíců x xxxxxxxxxxx lahvi x xxxxxxx xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx odměrné xxxxx o xxxxxx 250 xx xxx 27,9 mg xxxxxx xxxxxxxxx. Rozpustit x xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx do odměrné xxxxx x xxxxxx 250 xx 50 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxx po xxxxx rozpouštědlem X. Xxxxxxxxxxx gossypolu x xxxxx xxxxxxx je 0,02 xx/xx. Před xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx xxx pokojové xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx xxx 27,9 mg xxxxxx gossypolu. Xxxxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx rozpouštědlem X (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x tomto xxxxxxx xx 0,5 mg/ml.
Pokud xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X a X xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, jejich trvanlivost xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Mixér (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 ot./mim.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxx na předpokládaném xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Je xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxxx měření. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 g; xxx krmné xxxxx xx může být 5 x. Ve xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx alikvotní část 10 xx xxxxxxxx; xxxx xx obsahovat 50 xx 100 μx gossypolu. Pro xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxx xx množství xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxx 0,5 x 5 g, xxx xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 40 xx 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx by xx xxxx provádět xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx střepy. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxx promíchávat x xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxx filtr a xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx baňce se xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx nálevku x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Pomocí pipety xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x X) o xxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Případně doplnit xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) xx 10 xx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx přidat 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2) do xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x X) x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx referenční xxxxxx pro měření xxxxxxx pro xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (D) a (X). Zahřívat 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 440 xx x ve xxxxxxxxxx kyvetách x xxxxxxxx 1 cm xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx (X) xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx roztokem (C) x xxxxxxxx hustotu xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx s referenčním xxxxxxxx (A).
Odečíst xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx). Z xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx volného xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodě 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx obsahující 1 xx 5 xx gossypolu xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx x xxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx a xxx 10 ml xxxxxxxxxxxx B (3.3) xx xxxx odměrné xxxxx x objemu 50 xx. Xxxxxxxx xxx baňky 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx lázní. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu x xxxxxxx po xxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x nechat stát 10 xx 15 xxxxx, xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx hrdlem.
Pomocí xxxxxx xxxxxx 2 ml xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 xx x 2 ml filtrátu xxxxxxx pokusu xx xxxx jiných odměrných xxxxx x objemu 25 xx. Doplnit xx 25 xx xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxx 2 xx anilinu (3.4) xx xxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx se vytvořilo xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu, doplnit xx 25 xx xxxxx isopropanolu a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat stát xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx xx uvedeno x xxxx 5.2. X této hodnoty xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x bodě 6.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (6.1), xxxx xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Na xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx optická xxxxxxx tato:
volný xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: X 1% / 1xx = 600
Xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx gossypolu xx xxxxxx xx xxxxxxxx takto:
gossypol %: X · 1&xxxx;250 / E1%1cm ·&xxxx; · p · x
xxx:
X = xxxxxxxx xxxxxxx hustota, xxxxxxxxx xxx xx uvedeno x xxxx 5.2
p = xxxxxxxx xxxxxx x x
x = xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 xx. X xxxxx série xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.5). Doplnit xxxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) na 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx první xxxxx, včetně xxxxxxx xxxxxx, směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) xx 25 ml.
Přidat xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx 30 minut xxx vroucí vodní xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), homogenizovat x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x bodě 5.2 stanovit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx porovnáním s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx xxxxxxxx hodnot xxxxxxx hustoty xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (v μx).
6.2.2 Celkový gossypol
Připravit 6 xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx 10 ml rozpouštědla X (3.3) x xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx roztoku gossypolu X (3.6). Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx rysku směsí xxxxxxxxxxxx a xxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxx pipetou 2 xx xxxxxx xxxxxxx do xxxx xxxxx x 6 xxxxxxxxx baňkách x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx na 25 ml xxxxx x isopropanolu x xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx do každé xxxxx druhé série 2 ml anilinu (3.4). Zchladit xx xxxxxxxxx teplotu, doplnit xx rysku směsí xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxx 5.2 stanovit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx roztoků xxxxxxxxxx x odpovídajícími roztoky xxxxxxxxxx xxxxx. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx optické hustoty xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μg).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % relativní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx než 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx od 500 xx 750 ppm,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx obsah xxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (teoretický xxxxx: 17,7 % xxxxxx).
XXXXXXX XX
1. XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx x identifikovat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 0,1 ppm xxxxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx směsí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx papírové xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx porovnáním xxxxxx hodnot Rf x xxxxxxxxx standardních xxxxx, x xx xxx xxxxxxxxxxxx x XX xxxxxx (vysoký xxxxx xxxxxxxxxx), nebo xxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Pufr, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx p.a. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
7,45 x |
|
Xxxxxx x.x. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
|
3.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan disodný Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 ml |
|
3.3 Xxxxxx X: směs xxxxxxx nitromethanu/čistého xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx XX směs xxxxxxx nitromethanu/čistého xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 xxxxxxxx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx methanolu/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Chlortetracyklin, xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx, jejichž xxxxxxxx xx vyjádřena x chlorovodíku.
3.9 Mikroorganismus: X. xxxxxx XXXX x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx suspenze xxxx x očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxx 3.1. a 3.2. xxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx, xxx xx popsána x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx použitím xxxxxxx xX na 5,8.
3.11 0,1 % (m/V) xxxxxx 2,3,5-triphenyltetrazolium xxxxxxxx x 5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx pro xxxxxxxxxx papírovou chromatografii (xxxxx xxxxxx 25 xx). Schleich a Xxxxxxx papír (2440B xxxx 2043B) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx asi 20 x 30 xx pro bioautografii.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.2 Referenční xxxxxxx xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx roztoky (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x cílem xxxxxx xxxxxxx, jejichž xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx roztoky xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) fosfátovým xxxxxx (3.2) s xxxxx xxxxxx roztoky, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x tetracyklinu-HCL xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 xxx, xx xxxxx použít xxx xxxxxxxxxxxxxx vzorek, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, neboť xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v této xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Sebrat supernatant x použít xx xxxxx xxxx ho xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 100 μg xx 1 xx (6.1) x 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xX 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vtlačením xxxxxx xxxx listy xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Poté xxxxxxx xx papír 0,01 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) x extraktu (6.1 x 6.2). Xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx mít papír xxxxxxxx vlhkost; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxx trochu xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografií. Xxxxxx xxxxxx X (3.3) xxx stanovení xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx II (3.4) pro xxxxxxxxx XX xxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 15 xx 20 xx (asi 1 xxxxxx 30 xxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx papír.
7.2 Xxxxxxxxx UV xxxxxxx
Xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx než 1 μx/xx2, je xxxxx xx ošetření xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx ozářením xxx XX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), které xx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx xxxxxxxx desky (4.5) x položit xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Po xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx, xxx zůstane xxxxx inkubační xxxx. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx 30 °C. Xxxxxxxxxx tetracyklinového xxxxxxxxxxx xx projeví světlými xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx kultivačním médiu.
K xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xx inkubaci odpaří xxxxxx (3.11) na xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx hodnoty Xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx zde. Xxxx hodnoty se xxxxx mírně xxxxx xxxxx jakosti papíru x xxxx vlhkosti:
|
Chlortetracyklin (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (TC) |
0,40 |
|
Oxytetracyklin (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "epi" xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx normálních xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX
X. DIFÚZÍ XX XXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (OTC) x tetracyklin (TC) x krmivech, koncentrátech x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Obsahy nižší xxx 5 xxx xxxxx xxx určeny xxxxxxxxx interpolací.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx formamidem. X xxxxxx vyšších xxx 50 xxx xx xxxxxx extrahuje xxxxx xxxxxxx, vody x xxxxxxxx chlorovodíkové xxx stanovení CTC x xxxxx methanolu x kyseliny chlorovodíkové xxx stanovení XXX x TC.
Extrakty xx xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX, XXX xxxx XX xx xxxxxxxx médiu naočkovaném X. xxxxxx. Xxxxxx xx projeví vytvořením xxxxxxxxxxx zón za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx ATCC x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx do zkumavky xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx borité. Xxxxxxxxx xxxx noc při xxx 30 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx suspenze xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx agarem (3.1) za použití 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx baňky xxxxxxxxxx 300 ml xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Inkubovat 3 xx 5 dní xxx 28 xx 30 °X, poté xxxx spóry 15 xx ethanolu (4.6) xxxx, xx byla xxxxxxxxxxxxx ověřena xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx x chladničce xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx deskách x xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotiky xxxxxxxx xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx je xxxxxxx 0,2 x 0,3 xx xx 1000 ml. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 50 xx 60 °C.
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 ml |
|
Fosfátový xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx borité |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx upravit xX xx 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4 · 2H2O x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 ml |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) ethanol.
4.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.8 70 % (V/V) xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx použitím a xxxxxxx xx xX 4,5 xx použití xxxxxxxx sírové xxx 2 N.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx látky: XXX, XXX, TC, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx látek (4.11) x xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx koncentrace odpovídá 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx se xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxx týden.
Na základě xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx standardní xxxxxxxx xxxxxx X8, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx chlortetracyklinu-HCL xx 1 xx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx přidáno 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx pufru (4.3) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,05 |
μg/ml |
|
S1 |
0,025 |
μg/ml |
5.2 Oxytetracyklin
Postupem xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx roztoku, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml, standardní xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx a xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Tetracyklin
Postupem podle xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx základě zásobního xxxxxxx, jehož koncentrace xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx, standardní pracovní xxxxxx X8 obsahující 1,0 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x tyto koncentrace:
|
S4 |
0,5 |
μg/ml |
|
S2 |
0,25 |
μg/ml |
|
S1 |
0,125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
6.1 Obsahy rovné xxxx xxxxx než 50 xxx
Xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (4.8) x množstvích xxxxxxxxx v tabulce. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxx ihned xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3) podle xxxxxx x tabulce x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x tomto roztoku xxxxx překročit 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx dekantovat xxxxxxx s cílem xxxxxx xxxx xxxxxx. Xxxx připravit koncentrace X4, U2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Antibiotikum |
CTC |
OTC |
TC |
|||
|
Předpokládaný xxxxx x ppm |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Zkušební vzorek x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx fosfátového xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
xxx. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx U8 v μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 ppm
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 xx 10 x 20xx xxxxxxx jeho objemu xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 minut třepačkou. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xX xxxxx xxx 3; pokud xx to xxxxx, xxxxxxx xX xx 3 (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx použití 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx pH xx 5,5 za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxx xx xx xxxxx xx xxxxxx). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8 (xxx 6.1).
Poté připravit xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x bodě 6.2.1 xxx, xx xx xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, S2, S1) x xxxx koncentrací xxxxxxxx (X8, U4,U2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx čtyři xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x takové velikosti, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 mm. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo plastovým xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx při 28 xx 30 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx relativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx rovnice:
(U1 + X2 + X4 + U8 - X1 -X2 -X4 -X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + S8 - X1 -X2 -X1 -X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná aktivita x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % relativní xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx xxxxxxxx chlortetracyklin (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (XX) xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 1 g/kg, xxxxx xxxxxxxxxx žádná xxxxx, která xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx na agaru.
2. Xxxxxxx
Xxx stanovení xxxxxx XXX xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx acetonu, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x pro xxxxxxxxx xxxxxx XXX x TC směsí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx se poté xxxxx x jejich xxxxxxxxxxxx účinek xx xxxxxxx měřením xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultivačního xxxxx, xxxxx xxxx naočkováno Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx kterého bylo xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Světelná xxxxxxxxxxx závisí xx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx se přidá 1,5 xx 3 % agaru (xxxxx xxxxxxx). Inkubovat xxxx xxx xxx 37 °X. Skladovat kulturu x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx xx šikmý xxxx. Zároveň xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx laboratorní xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
24 xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx šikmý xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx noc xxx 37 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxx kulturu xxxxxxxxx ve zkumavce xxxxx x asi 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxx přenést xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx 100 xx xxxxxxxx bazálního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx 37 °C xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (1x30 xx 2x).
4. Xxxxxxxxxx média a xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx stanovení [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Chlorid xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 g |
|
Dihydrogenfosforečnan draselný XX2XX4 x.x. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
|
xX po sterilizaci: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
13,6 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Směs xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (x/X) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx aktivita xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztok
Na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx zásobní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 xx 500 μx XXX-XXX, XXX-XXX xxxx XX-XXX na 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x chladničce xxxxx xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx asi 100 xx xxxxx (4.4) x protřepávat 30 xxxxx třepačkou. Xxxxxxx xx rysku fosfátovým xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x tetracyklin
Do xxxxxxx xxxxx x objemu 200 xxxx 250 xx dát 1 xx 2 g xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx série xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxx xx znázorní interpolace xxxxxxx xxxx hodnot xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx mohou xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx se postupuje xxxxx:
7.1.1 Chlortetracyklin
Zředit standardní xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) s xxxxx získat standardní xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx XXX-XXX na 1 xx. Poté xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx extrakt (6.1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,12 μx XXX-XXX. Xxx 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) xx dvou xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx jiných xxxxxxxx xx 1 xx fosfátovým pufrem (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní roztok (5) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,6 μx OTC-HCL xxxx XX-XXX xx 1 ml. Poté xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxxx určených pro xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.2) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,48 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX na 1 xx. Xxx 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx dvou zkumavek x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx xxxx jiných xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx získat xx xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v 5 xx xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx ve 2 xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Očkování
Dát xx každé xxxxxxxx (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx provedeno v xxxxxx, ale nezbytně xx xxxxxxxxx prostředí.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx ve vodní xxxxx, xxxxx teplota xx mícháním udržuje xx 37 °X + 0,1 °X. Xxxxxxxxx doba xx xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx pro přesná xxxxxx (obecně 2h30 xx 3h). Poté xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx vstříknutím 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) do xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Měření xxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxxx při 590 xx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx na 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx nejvyššímu xxxxxx xxxxxxxxxxx). X xxxxxx xxxxxx rozdílů v xxxxxxxx xxxxxxx zkumavek xx doporučuje použít xxxxxxx 2 xx x xxxxxx 5 xx xxxxxx.
8. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx milimetrovém xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx propustností xxxxx koncentracím xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx vzorku.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % relativní hodnoty.
3. XXXXXXXXX OLEANDOMYCINU
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx a rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx, x to xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx zředěným xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx tris (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Po xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zředí x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx oleandomycinu xx agarovém xxxxx xxxxxxxxxxx B. cereus. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx inhibičních xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx těchto xxx xx xxxxx úměrný xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: B. xxxxxx, X 250 XX [8] (xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) x přidat 100 μg xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx asi 30 °X. Xxxxxxxxx kulturu x chladničce x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx na šikmý xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) za xxxxxxx xxx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx kultivačního média (4.1), jehož xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx při 28 xx 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx byla xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxxxxxxxxxx. Tato xxxxxxxx xx xxxx v xxxxxxxxxx skladovat xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx testy xx deskách xx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) určit xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxxxx umožní získat xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,1 a 0,2 xx xx 1000 xx. Očkování xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx při 60 °X.
4. Kultivační xxxxx x činidla
4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxx rodičovského xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 ml |
|
Před použitím xxxxxxx xX xx 6,5. |
4.2 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [10]
Xxxxxx (4.1) xxxxxxxx xx xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (X/X) ethanol.
4.5 Xxxxx methanol
4.6 0,5 % (x/X) roztok xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx x.x.
4.7 Extrakční roztok
|
Čistý xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (hydroxymethyl) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 x |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx standardní xxxxx (4.8) v 5 xx methanolu (4.5) x xxxxxx roztokem (4.6) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx oleandomycinu 100 μx/xx.
Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 0,1 μg xxxxxxxxxxxxx na 1 xx. Xxxx připravit xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Extrakce
V xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx oleandomycinu xx xxxxxx přidat xx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx 2 až 10 x 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou.
Odstředit, odebrat xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx roztokem (4.6) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 ml (= X8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) při 60 °X suspenzí xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx agaru xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, U1). Každá xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx o xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx do xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx antibiotika xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx každé xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx během 18 xxxxx xxx při 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx semilogaritmický xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx průměru inhibičních xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx pomocí xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 - X1 - X2 - X4 - S8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- difúzí na xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xX 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, a xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx odstředění xx xxxxxxx xxxxx a xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Difúze xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx lutea XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °X. Skladovat kulturu x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx měsíc xx xxxxx agar.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx zkumavky xx šikmým xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 až 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx do Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), xxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 hodin xxx 35 °C, xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx suspenzi x xxxxx získat 75 % světelnou propustnost xxx 650 xx.
Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx je xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací látky, xxxxx xxxxxx získat xxx xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx možné, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx stanovení [11]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Kvasnicový extrakt |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze xxxxxxx xX xx7,0 x xx xxxxxx xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Fosfátový xxxx, xX 8
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný X2XXX4 x.x. |
16,730 g |
Destilovaná xxxx xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Fosfátový xxxx, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.4 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Čistý methanol.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/čistý xxxxxxxx: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Standardní xxxxx: tylosin x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °X xx vakuové xxxxxxx (5 xx xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 xx do xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x 5 ml xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 7 (4.3) s cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx základního xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx tohoto zásobního xxxxxxx připravit rozředěním xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 2 μg xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx.
Xxxx připravit xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7) xxxx koncentrace:
|
S4 |
1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,5 |
μg/ml |
|
S1 |
0,25 |
μg/ml |
6. Extrakce
Pro xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx; xxx xxxxxxx x xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx fosfátového xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxxxxxxxxxxx 2 minuty (xxxxxxxxx xxxxx, Xxxxx-xxxxxx atd.).
Nechat xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxx extrakt x xxxxxx alikvotní část xxxxx (4.7) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7).
Xxx xxxxxx nižší xxx 10 xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 35 °X x xxxxxxxxx xxxxxxxx ve 40 % methanolu (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxxxxxxx xx xX 8 xxx 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx xx agaru xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx standardního roztoku (X8, X4, S2, X1) a xxxx xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, U1). Xxxxx xxxxx musí obsahovat xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx médiu nejméně 8 děr x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx má xxxxxx xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x tloušťce 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití misek xxxxxxxxxxxxx xx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx a x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 a 0,15 xx, v závislosti xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx každé stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxx noci xxx 35 až 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zaznamenat xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx relativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 - X1 - S2 - S4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + S4 + X8 - U1 - U2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. STANOVENÍ XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Xxxxx 80". Po xxxxxxxxxx xxxx filtraci xx xxxxxxx zředí x xxxx antibiotická aktivita xx stanoví xxxxxxx xxxxxx virginiamycinu na xxxxxxxx xxxxx naočkovaném Xxxxxxx lutea. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx asi 35 °C. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x přeočkovat xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze
Smýt xxxxxxxx xx zkumavky se xxxxxx xxxxxx (3.1) xx použití 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Naočkovat tuto xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx obsahující 250 xx kultivačního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx při 35 °X, xxxx smýt xxxxxxxx xx pomoci 25 ml fyziologického xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx tuto xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 nm. Xxxxx xx tato xxxxxxxx skladuje x xxxxxxxxxx, xxxx trvanlivost xx jeden xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx xx provádí xxx 48 až 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 až 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 6
|
Dihydrogenfosforečnan draselný XX2XX4 x.x. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx voda ad 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 objemově.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Tween 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) obsahující 800 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1+) za použití xxxxx (4.5) tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 xx 20 x xxxxxxxxxx vzorku, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) a xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx 20 xx xxxxxx xxxxxxx x odpařit do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx reziduum xx 20 xx xxxx xxxx xxxxx (4.5) s cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml (= U8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 ppm
Odebrat 1 xx 10 g xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 ml roztoku (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx filtrovat, xxxx xxxxxx xxxxx (4.5) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1, xxx xx xxxxxxx x bodě 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat bazální xxxxxx xxx stanovení (4.1) při 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx xxxxx xx provádí x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, S1) x xxxx koncentrací xxxxxxxx (U8, X4, X2, X1).Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx čtyři xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx vybrat misky x xxxxxx velikosti, xxx xxxx možné xxxxxx v agarovém xxxxx xxxxxxx 8 xxx o průměru 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx použít xxx xxxxxxx stejnoměrné vrstvy x tloušťce xxx 2 mm. Upřednostňuje xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x průmětu 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x závislosti na xxxxxxx xxx.
X každého xxxxxx opakovat difúzi xxxxxxx čtyřikrát x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxx 35 xx 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx semilogaritmický xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x interferenci, obě xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + U4 + X8 -X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / U4 + U8 + X4 + X8 - X1 - X2 - S1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x relativní aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] Xxxx amido xxxxxx x označení xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx kruhy).
[6] Tento xxxx izolovaný v Xxxxx xxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx X. xxxxxx XXXX 6538 P.
[7] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného složení x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Xxxx xxxxxxxxx x Xxxxx xxxxx XXXX.
[9] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx a dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[11] Xxxx být použito xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Může být xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.