Xxxxx Směrnice Komise
ze xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Rady xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx metod odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], a zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisy x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx podle xxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971 [2] x 71/393/XXX ze xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx však xxxxx xxxxxxxx třetí xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem k xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, pokud xxx x obsahy škrobu, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxxxx gossypolu, xxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxx 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Komise x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx pro úřední xxxxxxxx xxxxx, se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx x o xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, tylosinu x xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx metod popsaných x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Komise x. 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx týkající xx xxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx popsané x xxxxxxx XX xxxx směrnice.
Článek 3
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v účinnost xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. července 1973. Neprodleně x xxxx informují Xxxxxx.
Článek 4
Xxxx xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 27. dubna 1972.
Za Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Mansholt
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX X
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx metoda
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx obsah xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx, s xxxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxx pulpu, xxxxxx řepné xxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. řízky x xxxxxx x xxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Při prvním xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx za xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx čiření a xxxxxxxx xx polarimetricky xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxx druhém xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 40 % xxxxxxxxx. Xx okyselení xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx stejných xxxxxxxx xxxx xxx prvním xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx vynásobený xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx ve xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) kyselina chlorovodíková, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) kyselina xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 N x xx xxxxxxxxxxx 0,1 % (m/V) xxxxxxxxxxxxx v 94 % (X/X) ethanolu. 10 ml = 30,94 xx 0,1 X XxXX.
3.3 Carrezův xxxxxx X: xxxxxxxxx xx vodě 21,9 x xxxxxx xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Doplnit xxxxx xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx roztok XX: xxxxxxxxx ve vodě 10,6 g hexakyanoželeznatanu xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Doplnit xxxxx na 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, x: 0,948 při 20 °X.
4. Přístroje
4.1 Erlenmeyerova xxxxx x xxxxxx 250 xx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx sacharimetr.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxx x průměru 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx rotace (P xxxx S) (viz xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx x dát xx do odměrné xxxxx o xxxxxx 100 xx. Xxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxx x xx xxxx prvních xxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx hrudek. Xxxxxxxx xxxx xx vodní xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx i xx vložení baňky xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxx. Xxxxx xxxxx být xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxxx 30 ml xxxxxxx xxxx a xxxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx roztoku X (3.3) a xxxxx xxxxxx protřepávat. Xxxx xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx roztoku XX (3.4) x xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx po xxxxx xxxxx, homogenizovat x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxx xx xxxxxx), xxxxxxxx stanovení xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Carrezova xxxxxxx X a XX, xxxxxxxxx 10 ml.
Poté xxxxxx polarimetrem xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v 200 xx xxxxxxx.
5.3 Stanovení xxxxxxx xxxxxx (X’ xxxx X’) látek xxxxxxxxxxx xx 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx, dát ho xx odměrné xxxxx x objemu 100 xx x xxxxxx xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Poté xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx hodinu při xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx této xxxx xxxxxxxx xxxxx protřepat, xxx xx zkušební xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx ethanolem (3.5), homogenizovat a xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x vzorku) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 250 ml, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x silně xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx zpětný xxxxxxx x xxxxxxx ji xx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xx 15 minutách xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx obsah do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxx zchladit xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx I (3.3) x XX (3.4), xxxxxxx po xxxxx vodou, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x změřit xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx uvedeno v xxxx 5.2 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Obsah xxxxxx (%) xx vypočítá xxxxx:
6.1 Měření xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - X’) / [α]X20°
xxx je:
P = celková xxxxxxx xxxxxx, v xxxxxxxx xxxxxxxx.
X’ = optická xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx xxxxx
+ 195,4°: xxxxxxxxxx xxxxx
+ 184,6°: xxxxxxxxx xxxxx
+ 182,7°: pšeničný xxxxx
+ 181,5°: xxxxx xxxxx
+ 181,3°: xxxxxx xxxxx
+ 184,0°: ostatní druhy xxxxxx x xxxxx xxxxxx x krmných xxxxxxx
6.2 Xxxxxx sacharimetrem
Procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]D20° · (2 N · 0,665) (X - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = celková xxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx rotace látek xxxxxxxxxxx ve 40 % xxxxxxxx, ve xxxxxxxx sacharimetru
N = xxxxxxxx sacharózy x xxxxxxx xx 100 xx xxxx, která xx xxx xxxxxxxx 200 mm optickou xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tato hmotnost xx xxxx podle xxxxxxxxxxxx:
16,29 g pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 g xxx německé xxxxxxxxxxxx
20,00 x pro smíšené xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (viz 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx překročit 0,4 absolutní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxx 40 % a 1 xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxx rovnajícího xx nebo xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx vzorek xxxxxxxx xxxx xxx 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, uhličitany xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx příslušného xxxxxxxx xxxxxxx kyseliny xxxxxx.
7.2 X xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx mléko, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxxxx baňku zpětný xxxxxxx, xxxxxxx xx xx 30 xxxxx xx xxxxx xxxxx x teplotě 50 °X. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x pokračovat v xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.3.
2. STANOVENÍ HRUBÝCH XXXXXXXX
1. Účel a xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxx stanovit xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx na základě xxxxxx xxxxxx stanoveného xxxxx Kjeldahlovy xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx mokra. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx sodného. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx roztokem xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx měďnatý XxX x.x. xxxx síran xxxxxxx xxxxxxxxxxx CuSO4 · 5X2X x.x., xxxx rtuť xxxx xxxx xxxxxxxx HgO x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx xxxxx x.x.
3.4 Kyselina xxxxxx x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx sírová 0,1 X.
3.6 Kyselina xxxxxx 0,5 N.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: rozpustit 300 xx methylčerveně xx 100 xx 95-96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx roztok xxxxxx xxxxxxx x.x.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 x xxxxxx x přesností na 1 mg a xxx xx xx xxxxx mineralizační xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 g xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx množství katalyzátoru (3.2) (0,3 až 0,4 x oxidu xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx rtuti xxxx 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx sírové (3.4) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx xxxxx. Zahřívat xxxxx, nejprve xxxxx x za xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, dokud hmota xxxxxxxxxxx a pěna xxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx nevře. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xx xxxxxx čirý x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx mědi), xxxxxxxx var xxxxx xxxxx hodinu, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxx přidat 250 xx 350 ml xxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx; xxxxxx vychladnout; xxxx xxxxxx několik granulí xxxxx (3.3).
Xxxxxx do xxxxxx xxxxx destilační xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxxx sírové 0,1 X (3.5) nebo 0,5 X (3.6) x závislosti xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx destilační xxxxxxxxx x ponořit xxxxx xxxxxxxx do kapaliny xx xxxxxx xxxxx xx hloubky xxxxxxx 1 xx (xxx xxxxxxxx 7.3). Přes xxxxxxx s kohoutem xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 100 ml 40 % roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx bázi xxxxx, přidat do xxxxx xxxxxx xxx 10 ml xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx sodného (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xx 30 minut xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxx této xxxx xxxxxxxxxxxx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx lakmusového xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx, pokud lakmusový xxxxxxx xxxxx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx destilace xxx xx xxxx promíchat xxxxx sběrné xxxxx x pozorovat zbarvení. Xxxxx dojde xx xxxxxxxx do xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Titrace
Ve xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx sírové xxxxxxxx hydroxidu sodného 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) x závislosti xx normalitě použité xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx účelem xxxxxxxx, xxx činidla xxxxxxxxxx dusík, se xxxxxxx slepý pokus (xxxxxxxxx a xxxxxxx), x xx xxx xxxxxx, který xx xxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxx kontroly xxxxxxxxxx xxxxxx xx provede xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, destilace x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx x.x. (x.x. 114 °X; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 g xxxxxxxxx bez xxxxxx; 1 x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx spotřebované xxxxxxxx xxxxxx, 1 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx vyjádřit xxxx procento vzorku.
Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx hrubých proteinů xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xx xxxxx použít xxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx xxxx mineralizací x xxxxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx provést xxxx xxxxx.
7.2 X xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X, xxxxx má xxx xxxxxxxx nalita xx xxxxxx xxxxx, snížen xx 10 xx 15 xx x xxxxxxx xxxxx xx 25 ml.
7.3 Pokud xxxx baňka xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, přidat xxxxxxxx xxxxx bezprostředně před xxxxxxxxxx baňky na xxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx tak, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXX PEPSINEM A XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx stanovených xxxxxxxx. Metoda xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx.
2. Princip
Vzorek se xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx filtruje x xxxxx xxxxxx ve xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 j/mg xxxxxxx; xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx v metodě xxxxxxx x části 4 této xxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxxx v xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx připravený xxxxxx pepsinu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (např. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x bodě 3 xxxxxx pro xxxxxxxxx obsahu hrubých xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 40 °X ± 1 °X.
4.2 Mineralizační a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx metody.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 500 xx. Xxxxxx 450 ml roztoku xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °X. Xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxx, xx xx xX xxxxxxxx nižší xxx 1,7. Vložit xxxxx do vodní xxxxx xxxx inkubátoru (4.1) x nechat xx xxx 48 xxxxx. Protřepat xx 8, 24 a 32 xxxxxxxx. Xx 48 hodinách xxxxxx 15 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), zchladit xx 20 °X, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 ml xxxxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx baňky xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx nezbytná xxx xxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx hrubých xxxxxxxx, xx xxxxx xxxx bodu 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxx. Xxxxx xx vytvoří xxxx, xxxxxx několik xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx v xxxxxx xxxx, dokud se xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxx stopy xxxx.
Xxxx xx xxxxxx čirý x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx další xxxxxx. Xxxxxx vychladnout.
5.3 Destilace x titrace
Postupovat, xxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Xxxxx pokus
Provést xxxxx xxxxx xx xxxxxxx stejného postupu, xxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx slepého xxxxxx od xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. 1 xx kyseliny xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Výsledek xxxxxxxx jako procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx:
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx než 20 % x nižší xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx in xxxx.
7.2 Xxxxxxx x obsahu xxxx vyšším xxx 10 % musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxx xxxxxxx použitého xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx podmínek xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx trichloroctovou. Xx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx hustota tohoto xxxxxxx xx xxxx xxx 750 xx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, které za xxxxxxxx metody xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx skupin, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx má optickou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx optické xxxxxxx jednoho μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,025 X.
3.4 5 % roztok (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Folin-Ciocalteu. Xxx 100 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 25 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2H2O) x 700 xx xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx a normalizovaným xxxxxxxx. Přidat 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) a 100 ml koncentrované xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19), připojit xxxxx xx xxxxxx chladič, xxxxx xx xxxx x xxxxxxxx roztok x xxxxxx varu xx xxxx 10 xxxxx. Nechat xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxx 175 g xxxxxx lithného (Xx2XX4 · 2X2X), 50 xx vody x 1 ml brómu. Xxxxx po xxxx 15 xxxxx, xxx xx odstranil xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx vychladnout. Přelít xxxxxx xx odměrné xxxxx x xxxxxx 1 x, xxxxxxx xx xxxxx vodou, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat. Xxxxx zůstat nazelenalé xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 objemy xxxx.
3.7 Roztok hemoglobinu: Xxxxxxx množství hemoglobinu, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 354 xx xxxxxx [1] a xxx xx xxxxx x xxxxxx 200 ml x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Xxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx na 100 xx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.8 Standardní xxxxxx xxxxxxxx: rozpustit 181,2 xx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxxx litru xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx xxxxxx roztoku xxxxxxxx 0,2 μmol xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Xxxxx xxxxx nastavená ultratermostatem xx 25 °C + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, xxxxxxxx: 1 xxxxxxx.
4.4 xX xxxx.
5. Postup
5.1 Příprava xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx xx 100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Odpipetovat 2 xx xxxxxxx x xxx ho xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml x xxxxxxx xx xxxxx kyselinou chlorovodíkovou (3.3). xX xxxxxxxxxxxx xX metrem xxxx xxx 1,6+0,1. Ponořit xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Hydrolýza
Odpipetovat 5,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, zahřát ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx pepsinu xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 x promíchat asi xxxxxx xxxxxx tam x zpět skleněnou xxxxxxxx zesílenou na xxxxxx xxxxx. Nechat xxxxxxxx ve xxxxx xxxxx xxx 25 °X xxxxxx po xxxx 10 minut, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pepsinu (xxxx x teplota xxxx xxx xxxxxx dodrženy). Xxxx přidat 10,0 xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx suchý filtr.
5.3 Xxxxx zbarvení x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxx, xxx xx do Xxxxxxxxxxxxx baňky o xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx hydroxidu sodného (3.5) x xx xxxxxxx protřepávání 3,0 xx zředěného činidla Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Po 5 až 10 xxxxxxxx xxxxxxxx optickou xxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 750 nm x kyvetách x xxxxxxxx 1 xx x porovnání x xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřáté na 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x xxxx přidat 1,0 xx roztoku xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1. Promíchat xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 10 xxxxx xx xxxxx lázni (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxx filtr. Xxxxxxxxxx v postupu xxxxxxxx x xxxx 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx křivka
Do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, x 5,0 ml alikvotního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μmolu xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx tyrosinu. Doplnit xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a xx stálého protřepávání 3,0 xx zředěného xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xx uvedeno x poslední větě xxxx 5.3. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hustotě xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx opraveno xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxx x μxxxxxx xxxxxxxx xx 1 mg x za xxxxx xxxxxx xxx 25 °X xx vypočítá xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx na xx (x/xx) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μmol xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx podle bodu 5.2.
7. Poznámky
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxx, které má xxx xxxxxxxxxx, musí xxx xxxxxx, xxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hustota 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx xx xx xxxxxxx touto xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx tyrosinu/mg xxx. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 xxxxxxxxxx jednotek/g (μxxxx tyrosinu/g za 10 min. xxx 35,5 °X).
5. STANOVENÍ XXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx gossypolu, xxxxxxx gossypolu x xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx pokrutinách a xxxxxxx směsích, xxxxx xxxx xxxxx obsahují. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xx 20 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, x xx xxx směsí xxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx dimethylformamidem xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Gossypol xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx přeměněn xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, jehož xxxxxxx hustota xx xxxxxx při 440 xx.
3. Činidla
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x.x. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx n-hexanu.
3.2 Rozpouštědlo X: do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 x xxxxx xxx 500 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx ledové xxxxxxxx xxxxxx a 50 xx vody. Doplnit xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx jeden xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx X: xxxxxxxxxxx xx odměrné xxxxx o xxxxxx 100 ml 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx a 10 ml xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu x xxxxxxx po xxxxx N,N-dimethylformamidem. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxx.
3.4 Anilin x.x.: xxxxx xxxxxxx xxxxxxx slepého xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx přes xxxxxxx xxxxx x vyloučením xxxxxxx x posledních xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Toto xxxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x zazátkované xxxxx x xxxxxxx xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 ml xxx 27,9 xx octanu xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx a xxxxxxx xx rysku xxxxxxxxxxxxx A (3.2). Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x objemu 250 xx 50 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx rozpouštědlem A. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,02 xx/xx. Před xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx jedné xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: do xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx xxx 27,9 mg xxxxxx xxxxxxxxx. Rozpustit x xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Koncentrace xxxxxxxxx x xxxxx roztoku xx 0,5 xx/xx.
Xxxxx xxxx standardní xxxxxxx xxxxxxxxx X x X xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 24 hodin.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Zkušební xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx předpokládaném xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx. Je xxxxxxx xxxxxxxx s malým xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx velkou xxxxxxxxx částí filtrátu, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxxx měření. Xxx xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx x bavlníkových xxxxxxxx, xxxxxxxxxx mouce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorek xxxxx xxxxxxxxx 1 g; xxx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 5 x. Xx xxxxxxx případů xx xxxxxxxxxx alikvotní část 10 xx filtrátu; xxxx xx xxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx celkového gossypolu xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxx 0,5 x 5 x, aby xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 40 xx 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx vzorek xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 250 ml, xxxxx xxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx pipety xxxxxx 50 xx rozpouštědla X (3.2), zazátkovat xxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxx filtr x xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx zakrýt xxxxxxx x kohoutem hodinovým xxxxxxxx. Pomocí xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (A x X) o xxxxxx 25 ml xxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μg xxxxxxxxx. Xxxxxxxx doplnit xxxxx rozpouštědlem X (3.2) na 10 xx. Xxxx doplnit xx rysku baňku (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 10 xx rozpouštědla X (3.2) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (X a X) o xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) směsí isopropanolu x hexanu (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx referenční xxxxxx pro měření xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (X) a (X). Zahřívat 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx xxxxx, aby xx vytvořilo xxxxxxxx. Xxxxxxxx na pokojovou xxxxxxx, doplnit po xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx jednu xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx při 440 xx x xx xxxxxxxxxx kyvetách x xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx hustotu xxxxxxx xxx slepý xxxxx (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx roztokem (C) x optickou hustotu xxxxxxx xxxxxx (B) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (A).
Odečíst xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx). X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx volného xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx obsahující 1 až 5 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 50 xx x přidat 10 xx rozpouštědla X (3.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx pokus a xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx xxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Zahřívat xxx baňky 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu x xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Homogenizovat x xxxxxx stát 10 xx 15 xxxxx, poté xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x baňce xx xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 2 xx xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x objemu 25 xx a 2 ml xxxxxxxx xxxxxxx pokusu do xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xx 25 xx xxxxx jedné baňky x každé série xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx referenční roztoky.
Přidat 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxx xxxxxx xxxxx. Zahřívat 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx 25 xx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat stát xxxxx hodinu.
Stanovit optickou xxxxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx xx xxxxxxx x bodě 5.2. X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx celkového xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxx 6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx může xxxxxxx buď xx xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx (6.1), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx podmínek xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx tato:
volný xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
celkový xxxxxxxx: X 1% / 1xx = 600
Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx vzorku xx xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1&xxxx;250 / E1%1cm ·&xxxx; · p · x
xxx:
X = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2
x = xxxxxxxx xxxxxx x x
x = xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx
6.2 Na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxx po xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 xx. X xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) na 10 xx.
Xxxxxxx baňky xxxxx xxxxx, xxxxxx slepého xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx každé baňky xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx 30 minut xxx vroucí vodní xxxxx, aby se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), homogenizovat x nechat xxxx xxxxx hodinu.
Za xxxxxxxx xxxxxxxxx x bodě 5.2 stanovit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx referenční xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hustoty xxxxx xxxxxxxx gossypolu (v μx).
6.2.2 Xxxxxxx gossypol
Připravit 6 xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Do xxxxx xxxxx xxxxxx pipetou 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu X (3.6). Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 minut xxx vroucí xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxx 2 xx těchto xxxxxxx xx dvou xxxxx x 6 xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx série na 25 ml xxxxx x xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1) (referenční xxxxx).
Xxxxxx xx každé xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx na xxxxxxxxx teplotu, doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xx xxxxxxxx uvedených v xxxx 5.2 stanovit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Načrtnout xxxxxxxxxx křivku uvedením xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx množství xxxxxxxxx (x μx).
6.3 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit:
- 15 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah gossypolu xxxxx než 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx od 500 xx 750 ppm,
- 10 % relativní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Stanovit xxxxx xxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx: 17,7 % xxxxxx).
XXXXXXX XX
1. STANOVENÍ X XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Účel a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v porovnání x referenčními xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx porovnáním xxxxxx xxxxxx Xx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, a xx xxx xxxxxxxxxxxx x XX xxxxxx (xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx), xxxx xxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx naočkovaném B. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Monohydrát xxxxxxxx xxxxxxxxx x.x. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Na2HPO4.2H2O p.a. |
7,45 x |
|
Xxxxxx x.x. |
300 ml |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 ml |
|
3.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X p.a. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx X: xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx XX směs xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx chroroformu/α-pikolinu: 20/10/3 xxxxxxxx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx, tetracyklin, jejichž xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
3.9 Mikroorganismus: X. xxxxxx XXXX x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, příprava suspenze xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média: xxxxx xx pokyny podle xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx agaru, xxx xx xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xxxx použitím xxxxxxx xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-triphenyltetrazolium xxxxxxxx x 5 % (x/X) xxxxxx glukosy.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Zařízení pro xxxxxxxxxx papírovou xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxx 25 xx). Xxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxx (2440X xxxx 2043X) nebo xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Inkubátor xxxxxxxxx na 30 °X.
4.4 XX lampa xxx stanovení fluorescence.
4.5 Xxxxxxxx desky asi 20 x 30 xx pro bioautografii.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) a xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.6) připravit xxxxxxx, jejichž xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Referenční xxxxxxx xxx stanovení XX xxxxxxx
Xxxxxx roztoky (5.1) xxxxxxxxxx pufrem (3.2) x cílem xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx roztoky xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx předpokládaný xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 xxx, xx xxxxx xxxxxx xxx homogenizovaný vzorek, xxxx nejjemnější frakci xxxxxxxxx proséváním, xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v této xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Xxxxxx supernatant x xxxxxx ho xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) s cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika xxx 100 μg xx 1 xx (6.1) x 5 μx na 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x identifikace
7.1 Chromatografie
Ponořit xxxxx xx pufračního xxxxxxx, pH 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx přebytek xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx listy xxxxxxx xxxxxxxxxxx papíru. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx 0,01 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) x extraktu (6.1 x 6.2). Xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx; pokud xx xx nutné, xxxxxx xxxxxx vyschnout.
Rozvinout xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Použít xxxxxx X (3.3) xxx xxxxxxxxx bioautografií x xxxxxx XX (3.4) xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx dosáhne xxxxx 15 xx 20 xx (xxx 1 xxxxxx 30 xxxxx), přerušit xxxxxxxxxxxxxx x vysušit papír.
7.2 Xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxx xx xxxxx antibiotika xxxxx xxx 1 μx/xx2, xx možné xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx ozářením xxx XX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), xxxxx xx předem naočkuje X. cereus (3.9), xx xxxxxxxx desky (4.5) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx odejmout xxxxx a položit xx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotika xx xxxxxxx světlými xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx kultivačním médiu.
K xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xx inkubaci xxxxxx xxxxxx (3.11) na xxxxxx.
7.4 Identifikace
Relativní xxxxxxx Xx tetracyklinových antibiotik xxxx xxxxxxx xxx. Xxxx hodnoty se xxxxx mírně xxxxx xxxxx xxxxxxx papíru x xxxx xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (XX) |
0,40 |
|
Xxxxxxxxxxxxxx (OTC) |
0,20 |
|
4-epi-CTC |
0,15 |
|
4-epi-TC |
0,13 |
|
4-epi-OTC |
0,10 |
Antibiotická xxxxxxxx "xxx" sloučenin xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, OXYTETRACYKLINU X TETRACYKLINU
A. XXXXXX XX XXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (TC) x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx je 5 xxx. Obsahy nižší xxx 5 xxx xxxxx být xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx rovných xxxx xxxxxxx xxx 50 xxx xx vzorek xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxxx xxx 50 ppm xx vzorek extrahuje xxxxx xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx OTC x XX.
Xxxxxxxx xx xxxx zředí x xxxxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX, OTC xxxx XX xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx xx projeví vytvořením xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus ATCC x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat X. xxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx borité. Xxxxxxxxx xxxx xxx při xxx 30 °C. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx a přeočkovat xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx agar.
3.2 Xxxxxxxx suspenze xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx fyziologického solného xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx suspenzi do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Inkubovat 3 xx 5 xxx xxx 28 až 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 xx ethanolu (4.6) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx sporulace, x homogenizovat. Xxxx xxxxxxxx se může x chladničce skladovat xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx deskách x bazálním xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotiky xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,2 x 0,3 ml xx 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx xxx 50 xx 60 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [2]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 xx |
|
Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % ethanolový xxxxxx methylenové xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný KH2PO4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4 · 2H2O x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, pH 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.5 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) ethanol.
4.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: připravit xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xX 4,5 za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx 2 X.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (d: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx látky: XXX, XXX, XX, jejichž xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx týden.
Na základě xxxxxx zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx. Xxxxxxx xx provede xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), xx xxxxxxx bylo xxxxxxx 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx roztoku, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx a tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, standardní xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 1,0 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,5 |
μg/ml |
|
S2 |
0,25 |
μg/ml |
|
S1 |
0,125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx než 50 ppm
Do xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (4.8) v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pufrem (4.3) xxxxx xxxxxx x xxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx formamidu x tomto xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x cílem xxxxxx čirý xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1) xx použití fosfátového xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x ppm |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Zkušební vzorek x g |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
ml xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
xxx. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx X8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 ppm
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xx jeho výrobní xxxxxx přidat xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 až 10 x 20xx xxxxxxx xxxx objemu xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xX xxxxx xxx 3; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxxx xX xx 3 (u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 10 % kyseliny xxxxxx). Odebrat xxxxxxxxx xxxx extraktu a xxxxxxx xX xx 5,5 za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxx xx xx xxxxx xx modrou). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx koncentraci U8 (xxx 6.1).
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, U2 x U1 postupným xxxxxxx (1 + 1), za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx xx uvedeno x xxxx 6.2.1 xxx, že se xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx za xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx roztoku (S8, X4, X2, X1) x čtyř koncentrací xxxxxxxx (X8, U4,U2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx misky x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx x agarovém xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx použít xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx asi 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx se z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 200 xx a xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 ml, x závislosti xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat misky xxxxx 18 hodin xxx xxx 28 xx 30 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxxxxxxxx zón. Xxxxxxxxx křivky standardního xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus relativní xxxxxxxx se vypočítá xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + U8 - X1 -X2 -X4 -S8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - U1 -U2 -X1 -X2
Xxxxxxxx aktivita = xxxxxxxxxxxxx aktivita x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), oxytetracyklin (OTC) x xxxxxxxxxxx (TC) xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 1 g/kg, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx metoda xx xxxxxxxxx než xxxxxx xx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx stanovení xxxxxx XXX xx xxxxxx xxxxxxxx směsí acetonu, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX x XX směsí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx světelné xxxxxxxxxxxx kultivačního média, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Světelná xxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx K 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx se xxxxx 1,5 až 3 % agaru (xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx xxxxx xxxx. Zároveň xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx očkovací xxxxx
24 hodin xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx kulturu xxxxxxxxx xx zkumavce xxxxx x asi 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) a xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx asi 100 xx xxxxxxxx bazálního xxxxx (4.1). Inkubovat xx xxxxx xxxxx xxx 37 °C xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx fáze (1x30 až 2h).
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [7]
|
Pepton |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx sodný |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda ad |
1000 xx |
|
xX po sterilizaci: 6,8 až 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
13,6 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 ml |
4.3 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx xxxxxxx acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 65/33/2 objemově.
4.5 Směs xxxxxxx methanolu/kyseliny chlorovodíkové (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Asi 10 % (x/X) roztoku xxxxxxxxxxxx.
4.7 Standardní xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x xx použití xxxxxxxx chlorovodíkové (4.3) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 xx 500 μx XXX-XXX, XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Tento xxxxxx xx skladuje x chladničce xxxxx xxxxx.
6. Extrakce
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Xxxxxxx xx xxxxx fosfátovým xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx stát.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 g xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 ml xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Doplnit po xxxxx xxxxxxxxxx pufrem, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x extraktu
Zředit standardní xxxxxx (5) a xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 4,5 (4.2), tak, xxx xxxxxxx xxxxx koncentrací. Xxx každé stanovení xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xx které xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx hodnot xxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx xxxxx podmínek xxxxx xxxxx, které xx xxxxx lišit xxxxxxxxx xx laboratoře. Xxxxxx xx postupuje xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx CTC-HCL xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,12 μx XXX-XXX. Xxx 1 xx tohoto xxxxxxx xx dvou xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) xx dvou xxxxxx zkumavek. Xxxxxxx xxxxx dvou jiných xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.1.2 Oxytetracyklin x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,6 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX na 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2), xxx je uvedeno xxxx a ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 7 ředění, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx pracovního roztoku |
ml xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.2) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx OTC-HCL nebo XX-XXX xx 1 xx. Dát 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx dvou jiných xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx kultivačního média
Naočkovat xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx (4.1) očkovací xxxxxx (3.2) s xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x 5 xx kyvetě xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 xx kyvetě xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx xxxxx zkumavky (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx v xxxxxx, ale nezbytně xx sterilním xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx mícháním udržuje xx 37 °C + 0,1 °X. Xxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx propustnosti, xxxxxxx gradient xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx (obecně 2x30 xx 3h). Xxxx xxxxxxxx xxxxx růstu xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) do xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Měření růstu
Změřit xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, přičemž xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxx). X důvodu xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 2 xx x raději 5 xx kyvety.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx papíře xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx křivce xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu. Xxxxxxxx xxxxx antibiotika xx vzorku.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX OLEANDOMYCINU
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxx v krmivech, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx, x xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx tetracyklinů. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Po xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx antibiotická xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx agarovém médiu xxxxxxxxxxx X. cereus. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx, X 250 TR [8] (xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx média (4.1) x xxxxxx 100 μg oxytetracyklinu xx 5 xx. Xxxxxxxxx přes noc xxx asi 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx na xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx suspenze xxxx
Xxxx bakterie xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) za xxxxxxx xxx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 dní xxx 28 xx 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Tato suspenze xx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nejméně 5 měsíců.
Předběžnými testy xx deskách xx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx různé xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx největší xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,1 x 0,2 xx na 1000 xx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx média x činidla
4.1 Xxxxxx xxx udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
|
Xxxx použitím xxxxxxx xX xx 6,5. |
4.2 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [10]
Xxxxxx (4.1) upravené xx xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (m/V) xxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx x.x.
4.7 Xxxxxxxxx xxxxxx
|
Xxxxx xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda |
50 xx |
|
Xxxx (hydroxymethyl) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 x |
4.8 Standardní xxxxx: oleandomycin x xxxxx aktivitě.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx standardní xxxxx (4.8) x 5 xx methanolu (4.5) x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx oleandomycinu 100 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx na 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx roztoku (4.6) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,05 |
μg/ml |
|
S2 |
0,025 |
μg/ml |
|
S1 |
0,0125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx na předpokládaném xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx přidat xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 xx 10 x 100 xx xxxxxxx (4.7) x protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx, odebrat xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x zředit xxxxxxxx (4.6) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,1 μg oleandomycinu xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X suspenzí xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx v xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (X8, X4, S2, X1) a xxxx xxxxxxxxxxx extraktu (U8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x extraktu.
Za xxxxx účelem vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 děr x xxxxxxx 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx očkovacího kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx má xxxxxx xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx kroužkem x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx odměřená xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx vzorku opakovat xxxxxx nejméně čtyřikrát x každou xxxxxxxxxxx, xxx každé stanovení xxxxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx asi při 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx zón, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx. Pokud nedošlo x interferenci, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx stanovit tylosin x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx stanovení xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x pH 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx odstředění se xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx tylosinu xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx projeví vytvořením xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) upraveného xx pH 7,0. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx xxx 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx (3.1) za xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 hodin při 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx suspenzi x xxxxx xxxxxx 75 % světelnou xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx je xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) určit xxxxxxxx očkovací látky, xxxxx umožní xxxxxx xxx xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx největší xxxxx, xxx xxxxx zřetelné xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Kvasnicový xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx7,0 x xx xxxxxx stanovení xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx KH2PO4 p.a. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
16,730 g |
Destilovaná xxxx xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx pufr, xX 7
|
Dihydrogenfosforečnan draselný XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.4 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Xxxxx methanol.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Xxxx fosfátového xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Standardní xxxxx: tylosin o xxxxx aktivitě.
5. Standardní xxxxxxx
Xxxxx standardní xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °C xx vakuové xxxxxxx (5 mm xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 xx xx xxxxxxx xxxxx, rozpustit x 5 ml xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 7 (4.3) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μg/ml.
Na xxxxxxx xxxxxx zásobního xxxxxxx připravit xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 2 μg xxxxxxxxxx tylosinu xx 1 xx.
Xxxx připravit xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Extrakce
Pro xxxxxxxxxxx použít 10 x xxxxxxxxxx vzorku; xxx xxxxxxx x xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx fosfátového xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, a homogenizovat 2 xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 minut, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxxxxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx alikvotní část xxxxx (4.7) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, U2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.7).
Xxx obsahy xxxxx xxx 10 xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx x rotačním xxxxxxxxxx při 35 °X x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 40 % methanolu (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxxxxxxx na xX 8 xxx 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx xxxxx se xxxxxxx x miskách xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) a xxxx xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx a xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, aby xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx médiu xxxxxxx 8 děr o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx o tloušťce 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx misek xxxxxxxxxxxxx xx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx o průměru 200 xx x x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx odměřená množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 a 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x každou koncentrací, xxx každé stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx přes xxxx xxx 35 xx 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx semilogaritmický xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxxxxxxxx zón. Načrtnout xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx relativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 - X2 - X4 -X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - X1 - U2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
5. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxxx x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztokem "Xxxxx 80". Xx xxxxxxxxxx xxxx filtraci se xxxxxxx zředí x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx virginiamycinu xx xxxxxxxx xxxxx naočkovaném Xxxxxxx lutea. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx média (4.1). Xxxxxxxxx přes xxx xxx asi 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2. Příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Homogenizovat x xxxxxx tuto xxxxxxxx x cílem xxxxxx xxx 75 % světelnou xxxxxxxxxxx xxx 650 xx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx skladuje v xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx médiem xxx stanovení (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, které umožní xxxxxx pro různé xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx kultivačního xxxxx xx provádí xxx 48 xx 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a činidla
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [12]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 6
|
Dihydrogenfosforečnan draselný XX2XX4 x.x. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx ad 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Směs xxxxxxxxxxx pufru (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % methanolového xxxxxxx "Xxxxx 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx látka: xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
Připravit xxxxxxxxxxx roztok standardní xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xx základě tohoto xxxxxxxxx roztoku připravit xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx na 1 xx. Poté xxxxxxxxx postupným xxxxxxx (1+) za použití xxxxx (4.5) tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Extrakce
6.1 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo nižším xxx 50 ppm
Odebrat 10 xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 ml xxxxxxx (4.6) a xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Odstředit xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx 20 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxx do xxxxx x rotačním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 ml xxxx více směsi (4.5) s cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a U1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx vyšším xxx 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 ml xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx zředit xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Poté xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1, xxx je uvedeno x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) při 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx provádí x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx roztoku (S8, X4, X2, S1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4, X2, X1).Xxxxx miska xxxx obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx standardního roztoku x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx x agarovém xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Vypočítat množství xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.1), xxxxx se xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x tloušťce xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx a xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 ml, x závislosti xx xxxxxxx xxx.
X každého xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx čtyřikrát x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxx xxx xxx 35 až 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Pokud nedošlo x interferenci, obě xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 -S1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / U4 + U8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Může xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] Xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxx).
[6] Xxxxx xxxx xxxxxxxxx v Xxxxx podle LUFA xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx X. xxxxxx XXXX 6538 P.
[7] Xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného složení x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[8] Kmen xxxxxxxxx x Xxxxx xxxxx XXXX.
[9] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[10] Xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[11] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.