Xxxxx Xxxxxxxx Komise
ze xxx 27. dubna 1972,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], a xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, že xxxxxxx xxxxxxxx stanoví, xx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx právními x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx jakosti x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Komise x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971 [2] x 71/393/XXX ze dne 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx; xx s xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx však xxxxx xxxxxxxx třetí xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, pokud xxx x xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, hrubých xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxxx xxxxxxx a kyseliny xxxxxxxxxxxxxx, volného a xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx popsaných x příloze X xxxx směrnice.
Obecná ustanovení xxxxxxx x části 1 (xxxx) přílohy xxxxx směrnice Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx X xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotik, xxxxx i x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, oleandomycinu, xxxxxxxx x virginiamycinu x xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx II xxxx směrnice.
Obecná xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) přílohy xxxxx směrnice Komise x. 71/250/XXX ze xxx 15. června 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxx, xx použijí xxx metody popsané x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x účinnost xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné pro xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. července 1973. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Článek 4
Xxxx směrnice xx určena členským xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 27. dubna 1972.
Za Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Mansholt
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX X
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx metoda
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx obsah xxxxxx a produktů xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx hmotnosti škrobu x xxxxxxxx, x xxxxxxxx těch krmiv, xxxxx obsahují xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx, xxxxxx řepné skrojky xxxx listy, xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx kvasnice, xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx (xxxx. xxxxx x moučka x xxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx prvním xxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxx za tepla xxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx rotace xxxxxxx.
Xxx druhém stanovení xx xxxxxx extrahuje 40 % xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx stejných xxxxxxxx xxxx při xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx dvěma xxxxxxxx vynásobený xxxxxx xxxxxxxx udává obsah xxxxxx xx xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) kyselina chlorovodíková, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X x xx xxxxxxxxxxx 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (X/X) xxxxxxxx. 10 xx = 30,94 ml 0,1 X NaOH.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxx I: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x xxxxxx zinečnatého Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x xxxxxx kyseliny xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx XX: xxxxxxxxx xx xxxx 10,6 g xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) ethanol, x: 0,948 xxx 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 ml x xxxxxxxxxxxxxx zábrusem a xxxxxxx chladičem.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx sacharimetr.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx způsobem, aby xxxx prošel sítem x kulatými xxx x průměru 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Navážit 2,5 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx xxxxxxx xxxxx o objemu 100 ml. Xxxxxx 25 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx dalších 25 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx do vroucí xxxxx lázně x xx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx x pravidelně protřepávat, xxx se zabránilo xxxxxx hrudek. Xxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx na xxxx varu. Baňka xxxxx xxx xxxxxxx x lázně během xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx 15 minutách xxxxxxx xxxxx x lázně, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx na 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) a xxxxx xxxxxx protřepávat. Xxxx xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx XX (3.4) x xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx vodou, homogenizovat x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx filtrát xxxxx xxxx (což xx xxxxxx), opakovat xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Carrezova xxxxxxx X x XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx polarimetrem xxxx xxxxxxxxxxxxx optickou xxxxxx xxxxxxx v 200 xx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (P’ xxxx S’) látek xxxxxxxxxxx xx 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx, dát ho xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 100 xx x přidat xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx baňku xxxx xxxxx hodinu xxx xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx této xxxx xxxxxxxx silně xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x ethanolem. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxx (3.5), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 ml, xxxxxx 2,1 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx protřepat. Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx zpětný chladič x ponořit xx xx xxxxxx vodní xxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx vyjmou Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx lázně, xxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 xx, xxxxxxxxxxx chladnější xxxxx x poté zchladit xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx Xxxxxxxxx roztoku X (3.3) x XX (3.4), xxxxxxx po xxxxx vodou, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x změřit xxxxxxxx rotaci, xxx xx uvedeno x xxxx 5.2 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx (%) xx vypočítá xxxxx:
6.1 Měření xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2 000 (X - X’) / [α]D20°
kde je:
P = celková optická xxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx.
X’ = optická xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, x úhlových xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : rýžový škrob
+ 195,4°: bramborový škrob
+ 184,6°: xxxxxxxxx xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: xxxxx xxxxx
+ 181,3°: xxxxxx škrob
+ 184,0°: ostatní xxxxx xxxxxx a směsi xxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Xxxxxx sacharimetrem
Procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]X20° · (2 X · 0,665) (X - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = celková xxxxxxx rotace, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx ve 40 % ethanolu, xx xxxxxxxx sacharimetru
N = xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx ve 100 xx vody, xxxxx xx xxx tloušťce 200 xx optickou xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx hmotnost xx mění podle xxxxxxxxxxxx:
16,29 g xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 x xxx německé xxxxxxxxxxxx
20,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = specifická xxxxxxx rotace čistého xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 0,4 xxxxxxxxx hodnoty xxx obsah škrobu xxxxx xxx 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx vyššího xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx vzorek xxxxxxxx více xxx 6 % uhličitanů, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx zředěné xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 V xxxxxxx xxxxxxxx s vysokým xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx mléko, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx 80 xx ethanolu (3.5) xxxxx: Připojit xx Xxxxxxxxxxxxx baňku xxxxxx xxxxxxx, ponořit xx xx 30 xxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 50 °X. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x pokračovat x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.3.
2. STANOVENÍ XXXXXXX XXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx obsah xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx mokra. Kyselý xxxxxx se alkalizuje xxxxxxxx hydroxidu sodného. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x shromáždí xx v odměřeném xxxxxxxx kyseliny sírové, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Síran xxxxxxxx x.x.
3.2 Katalyzátor: xxxx xxxxxxx XxX x.x. xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx XxXX4 · 5X2X x.x., xxxx xxxx xxxx xxxx rtuťnatý XxX x.x.
3.3 Granulovaný zinek x.x.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Kyselina sírová 0,5 X.
3.7 Indikátor xxxxxxxxxxxxx: rozpustit 300 xx xxxxxxxxxxxxx xx 100 xx 95-96 % (V/V) xxxxxxxx.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx hydroxidu xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X.
3.10 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx p.a.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxxx sodného, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Granulovaná xxxxx, xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a zpopelněná.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx poznámky 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 x xxxxxx x přesností xx 1 xx x xxx ho xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx aparatury. Xxxxxx 10 g xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 xx 0,4 x oxidu xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxx 0,6-0,7 g oxidu xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx baňky. Xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx nevře. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx baňky x xxxxxxxx organických xxxxxx. Xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx použije xxxxxxxxxxx xx bázi mědi), xxxxxxxx xxx ještě xxxxx hodinu, xxxx xxxxxx vychladnout.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x za xxxxxxx xxxxxxx přidat 250 xx 350 xx xxxx, xxx se xxxxxxx zcela xxxxxxxxxx; xxxxxx xxxxxxxxxxx; poté xxxxxx několik granulí xxxxx (3.3).
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx přesně odměřené xxxxxxxx 25 xx xxxxxxxx sírové 0,1 X (3.5) nebo 0,5 X (3.6) x závislosti xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx dusíku (xxx xxxxxxxx 7.2) x přidat několik xxxxx indikátoru xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x ponořit konec xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 1 xx (xxx xxxxxxxx 7.3). Xxxx xxxxxxx x kohoutem xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 100 ml 40 % xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxx xxxxx, přidat do xxxxx xxxxxx xxx 10 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx thiosíranu xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xx 30 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx kapaliny. Po xxxxxxxx této xxxx xxxxxxxxxxxx xX výsledného xxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x destilaci. Ukončit xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, že xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx dojde ke xxxxxxxx do žluta, xxxxx xxxxxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx 0,1 N (3.5) nebo 0,05 X (3.6).
5.3 Titrace
Ve xxxxxx baňce xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx sírové xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N (3.9) xxxx 0,25 N (3.10) x závislosti xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx sírové, xxxxx xx zbarvení xxxxxxx xx xxxxxx žlutou.
5.4 Xxxxxxxx metody
Za účelem xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxx x titrace), x to xxx xxxxxx, xxxxx má xxx xxxxxxxxxx. Za xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx provede xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, destilace x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx x.x. (x.x. 114 °C; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 g xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Xxxxxxx výsledků
Stanovit xxxxxxxx spotřebované xxxxxxxx xxxxxx, 1 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx dusíku. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx procento vzorku.
Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx než 20 % x xxxxx než 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Poznámky
7.1 Je xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx provést xxxx xxxxx.
7.2 U xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx objem xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N, xxxxx xx xxx xxxxxxxx nalita xx xxxxxx xxxxx, snížen xx 10 xx 15 xx a xxxxxxx vodou xx 25 ml.
7.3 Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx tak, xxx se xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX HRUBÝCH XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx všechna xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxx 48 hodin xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Suspenze xx xxxxxxxx x xxxxx dusíku ve xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx stanovení xxxxxx xxxxxxx proteinů.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 x/xx xxxxxxx; xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x metodě xxxxxxx x xxxxx 4 této přílohy x xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx připravený xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxx 3 xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx hrubých xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Vodní xxxxx nebo inkubátor xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x vzorku x xxxxxxxxx na 1 xx a xxx xx xx odměrné xxxxx x xxxxxx 500 ml. Přidat 450 xx xxxxxxx xxxxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °C. Xxxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx. Xxxxxx, xx xx xX suspenze xxxxx xxx 1,7. Vložit xxxxx do xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx (4.1) x xxxxxx xx xxx 48 xxxxx. Protřepat xx 8, 24 x 32 hodinách. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxx 15 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxx xx 20 °X, xxxxxxx po xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 ml xxxxxxxx x přesností xx 1 xx x xxx xx xx xxxxx destilační xxxxxxxxx (4.2). Přidat xxxxxxx nezbytná xxx xxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x metodě xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, ve druhé xxxx bodu 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x uvést xx varu. Xxxxx xx vytvoří xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx v silném xxxx, xxxxx se xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x opatrně odstranit xxxxxxxx xxxxx xxxx.
Xxxx xx xxxxxx xxxx x bezbarvý (světlezelený, xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxx xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Destilace x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx 5.2 a 5.3.
5.4 Xxxxx pokus
Provést xxxxx pokus xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx bez vzorku, xxxxx xx být xxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx kyseliny xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx od xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. 1 xx kyseliny xxxxxx 0,1 N xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx množství xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % x nižší xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx vyšší xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Hodnoty xxxxxxx xxxxx xxxxxxx nemají xxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx.
7.2 Xxxxxxx o obsahu xxxx vyšším xxx 10 % xxxx xxx xxxxxxxxx extrakcí xxxxxxxxxxxx (b.v. 40 xx 60 °C).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX PEPSINU
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pepsinu použitého xxx xxxxxxxxx hrubých xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx ošetří xx xxxxxxxxxxx podmínek xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx se xxxxx hydroxid xxxxx x xxxxxxx Folin-Ciocalteu. Xxxxxxx xxxxxxx tohoto xxxxxxx se xxxx xxx 750 xx x xxxxxxxxxxxx množství xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxx křivky.
Definice: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx množství xxxxxx, xxxxx za xxxxxxxx metody xxxxxx xx minutu xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx xx optickou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,06 X.
3.3 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,025 X.
3.4 5 % roztok (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.5 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Folin-Ciocalteu. Xxx 100 x xxxxxxxxxx sodného (Xx2XX4 · 2X2X), 25 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 xx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxx xxxx a normalizovaným xxxxxxxx. Přidat 50 xx xxxxxxxx fosforečné (x: 1,71) a 100 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19), xxxxxxxx xxxxx xx zpětný xxxxxxx, xxxxx xx xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx varu xx dobu 10 xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zpětný chladič, xxxxxx 175 x xxxxxx xxxxxxxx (Li2SO4 · 2H2O), 50 xx xxxx a 1 ml xxxxx. Xxxxx xx dobu 15 xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Přelít xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 x, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx použitím xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxx hemoglobinu, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx substrátu podle Xxxxxxxx xxxxxx odpovídajícího 354 xx dusíku [1] a xxx xx xxxxx x xxxxxx 200 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx baňku x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx nerozpustí. Xxxxxxx vakuum x xx xxxxxxxxxxxx doplnit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx xx 100 xx. Xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx 181,2 mg xxxxxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) a xxxxxxx xx jednoho xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx). Odebrat 20 xx tohoto xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) ve 100 xx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °X + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, přesnost: 1 xxxxxxx.
4.4 pH xxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx poznámky 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxx xx 100 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx roztoku a xxx xx xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 ml x doplnit xx xxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). xX kontrolované xX metrem xxxx xxx 1,6+0,1. Ponořit xxxxx do xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Hydrolýza
Odpipetovat 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, zahřát ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 1,0 ml xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 x xxxxxxxxx asi xxxxxx xxxxxx xxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zesílenou xx xxxxxx konci. Xxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxx xxx 25 °X xxxxxx po xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxx pepsinu (doba x teplota xxxx xxx xxxxxx dodrženy). Xxxx přidat 10,0 xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxx zbarvení x xxxxxx optické xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 ml filtrátu, xxx xx xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx hydroxidu sodného (3.5) x za xxxxxxx protřepávání 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Po 5 až 10 xxxxxxxx xxxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 750 xx x kyvetách x xxxxxxxx 1 xx x porovnání x xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx stanovení xxxxxxx xxxxx slepý pokus:
Odpipetovat 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxx xx 25 °C, homogenizovat x poté přidat 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1. Promíchat xxxxxxxxx tyčinkou x xxxxxx zkumavku přesně 10 xxxxx xx xxxxx lázni (4.1) xxx 25 °C. Xxxxxxxxxxxxx a filtrovat xxxx xxxxx filtr. Xxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx v xxxx 5.3.
5.5 Kalibrační křivka
Do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, x 5,0 xx alikvotního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tyrosinu, xxxxx odpovídá 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx tyrosinu. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 5,0 xx. Přidat 10,0 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (3.5) a xx stálého xxxxxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx 5.3. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx tyrosinu.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx x kalibrační xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku a xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx pepsinu x μxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx x xx xxxxx xxxxxx xxx 25 °X xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx xx xx (x/xx) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxx xxxxxxxx x kalibrační xxxxxx;
x = množství xxxxxxx x xx xxxxxxx podle bodu 5.2.
7. Poznámky
7.1 Množství xxxxxxx, xxxxx xx xxx rozpuštěno, xxxx xxx xxxxxx, xxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hustota 0,35 + 0,035.
7.2 Dvě xxxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx metodou xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx xxxxxxxx/xx xxx. xxx 35,5 °C) xxxx
36400 xxxxxxxxxx xxxxxxxx/x (μxxxx tyrosinu/g xx 10 min. při 35,5 °X).
5. STANOVENÍ XXXXXXX A XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx volný xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx mouce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx je 20 xxx.
2. Princip
Gossypol xx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, x xx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, nebo xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Gossypol je xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx hustota xx xxxxxx při 440 xx.
3. Činidla
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx: xxxxxxx 60 objemových xxxxx xxxxxxxxxxxx p.a. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx x-xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxxxx X: do odměrné xxxxx x objemu 1 l xxxxx xxx 500 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-amino-1-propanolu, 8 xx ledové xxxxxxxx xxxxxx x 50 xx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Trvanlivost xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx X: xxxxxxxxxxx do odměrné xxxxx x xxxxxx 100 ml 2 xx 3-amino-1-propanolu a 10 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx N,N-dimethylformamidem. Trvanlivost xxxxxx činidla xx xxxxx xxxxx.
3.4 Anilin x.x.: pokud xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pokusu xxxxxxxx 0,022, destilovat xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x vyloučením xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx skla.
3.5 Xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxx X: do xxxxxxx xxxxx x objemu 250 ml xxx 27,9 mg xxxxxx xxxxxxxxx. Rozpustit x xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o objemu 250 xx 50 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,02 xx/xx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Standardní xxxxxx xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx xxx 27,9 mg xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx B (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,5 xx/xx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx A a X xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, jejich xxxxxxxxxxx xx 24 hodin.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (třepačka): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx velkou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx mouce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxxxxxx xxxxxx neměl xxxxxxxxx 1 x; xxx xxxxx xxxxx xx může xxx 5 x. Ve xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx alikvotní xxxx 10 xx filtrátu; xxxx by obsahovat 50 až 100 μx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx gossypolu xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxx 0,5 a 5 x, aby xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 40 xx 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx by xx xxxx provádět xxx xxxxxxxx teplotě xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxx 250 xx, xxxxx xxx je xxxxxxx skleněnými xxxxxx. Xxxxxx pipety xxxxxx 50 ml rozpouštědla X (3.2), zazátkovat xxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Filtrovat xxxx xxxxx xxxxx a xxxxxxxx filtrát v xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx nálevku x xxxxxxxx hodinovým xxxxxxxx. Pomocí pipety xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (A x X) x xxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx doplnit xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) xx 10 xx. Poté xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx měření xxxxxxx pro xxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2) xx xxxx xxxxxx odměrných xxxxx (X a X) x xxxxxx 25 ml. Xxxxxxx xx rysku baňku (X) směsí isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx měření xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (X) x (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx nad vroucí xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx zbarvení. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx, doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx jednu xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx při 440 xx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 cm xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx x referenčním xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx pokus xx xxxxxxx xxxxxxx roztoku xxxxxx (= upravená xxxxxxx hustota). X xxxx hodnoty xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx obsahující 1 až 5 xx gossypolu xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx x xxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx B (3.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx pokus a xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx xxxx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx. Xxxxxxxx xxx xxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx obě baňky xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Homogenizovat x nechat xxxx 10 xx 15 xxxxx, poté xxxxxxxxx x zachytit filtráty x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 2 ml xxxxxxxx xx xxxxxx xx dvou xxxxxxxxx xxxxx x objemu 25 xx x 2 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx do xxxx xxxxxx odměrných xxxxx x objemu 25 ml. Xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx referenční xxxxxxx.
Xxxxxx 2 xx anilinu (3.4) xx xxxx xxxxxx xxxxx. Zahřívat 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx, xxx xx vytvořilo xxxxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát xxxxx hodinu.
Stanovit optickou xxxxxxx volného gossypolu, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2. X xxxx hodnoty xxxxxxxxx obsah celkového xxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x bodě 6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx na xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx (6.1), xxxx xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Na xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx
Xx stanovených podmínek xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx:
xxxxx xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
celkový xxxxxxxx: E 1% / 1cm = 600
Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1 250 / X1%1xx · · x · x
xxx:
X = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2
p = xxxxxxxx xxxxxx x g
a = xxxxxxxxx část xxxxxxxx x xx
6.2 Xx xxxxxxx kalibrační xxxxxx
6.2.1 Xxxxx gossypol
Připravit dvě xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 xx. X xxxxx série xxxxxx pipetou 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx rozpouštědlem X (3.2) na 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx první xxxxx, xxxxxx slepého xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) xx 25 ml.
Přidat xx xxxxx baňky xxxxx xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxxxx zbarvení. Zchladit xx pokojovou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat stát xxxxx xxxxxx.
Xx podmínek xxxxxxxxx x bodě 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx standardní série xxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Načrtnout kalibrační xxxxxx uvedením xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx proti xxxxxxxx gossypolu (v μx).
6.2.2 Celkový xxxxxxxx
Xxxxxxxxx 6 xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Do xxxxx xxxxx přidat xxxxxxx 10 ml rozpouštědla X (3.3) a xx ostatních 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.6). Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xx 10 ml xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu, doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu x xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx do dvou xxxxx x 6 xxxxxxxxx baňkách x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx obsah xxxxx xxxxx xxxxx xx 25 ml směsí x isopropanolu a xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 ml anilinu (3.4). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 stanovit xxxxxxxx hustotu xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x odpovídajícími xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Načrtnout xxxxxxxxxx křivku xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx gossypolu (x μx).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxxxxxx xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx obsah: 17,7 % dusíku).
PŘÍLOHA XX
1. XXXXXXXXX X IDENTIFIKACE XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, která xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, v koncentrátech x premixech.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x porovnání x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx porovnáním xxxxxx xxxxxx Xx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, a xx xxx xxxxxxxxxxxx v XX xxxxxx (xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx), nebo xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx naočkovaném X. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx kyseliny xxxxxxxxx x.x. |
10,256 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
7,45 x |
|
Xxxxxx x.x. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx I: xxxx xxxxxxx nitromethanu/čistého chroroformu/α-dichlorhydrinu: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx II směs xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 objemově. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx methanolu/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 objemově.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus ATCC x. 11778
Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xx pokyny xxxxx xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx, xxx je xxxxxxx x části 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (m/V) xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x 5 % (x/X) xxxxxx glukosy.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Zařízení xxx xxxxxxxxxx papírovou chromatografii (xxxxx papíru 25 xx). Schleich x Xxxxxxx xxxxx (2440B xxxx 2043X) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Inkubátor xxxxxxxxx na 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx stanovení fluorescence.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx xxx 20 x 30 xx xxx xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Zásobní xxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) a xx použití kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) fosfátovým xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx roztoky, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x tetracyklinu-HCL xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx antibiotika xxxxx xxx 10 ppm, xx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxx nejjemnější xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxx ho xxxxxxxx zředit xxxxx (3.5) s xxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxx 100 μx xx 1 xx (6.1) x 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxxxx xxxxxxx, xX 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vtlačením xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx 0,01 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) a xxxxxxxx (6.1 x 6.2). Xxx dobré xxxxxxxx xxxx mít xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx X (3.3) xxx stanovení bioautografií x xxxxxx II (3.4) pro xxxxxxxxx XX xxxxxxx. Xxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxx xxxxx 15 až 20 cm (asi 1 hodina 30 xxxxx), xxxxxxxx chromatografii x xxxxxxx papír.
7.2 Xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxx xx xxxxx antibiotika xxxxx xxx 1 μx/xx2, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx XX lampou xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx kultivační xxxxxx (3.10), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx xxxxxxxx xxxxx (4.5) a položit xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxx x kultivačním xxxxx, kde xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 30 °C. Xxxxxxxxxx tetracyklinového xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx světlými xxxxxxxxxxx zónami x xxxxxx xxxxxxxxxxx médiu.
K xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxx odpaří xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx Xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx zde. Xxxx xxxxxxx se xxxxx xxxxx měnit xxxxx xxxxxxx xxxxxx x jeho xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (XX) |
0,40 |
|
Xxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "xxx" xxxxxxxxx xx xxxxx než xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX
X. XXXXXX XX AGARU
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx, koncentrátech x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx je 5 xxx. Xxxxxx xxxxx xxx 5 xxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx rovných xxxx xxxxxxx xxx 50 xxx se xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxxx xxx 50 ppm xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx acetonu, xxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x xxxxx xxxxxxxxx x kyseliny chlorovodíkové xxx xxxxxxxxx OTC x TC.
Extrakty se xxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx CTC, XXX xxxx TC xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx X. cereus. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx a přeočkovat xxxxxxx 14 xxx xx šikmý agar.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx ze zkumavky xx šikmým agarem (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx fyziologického xxxxxxx xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 ml xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx modře a xxxxxxxx xxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 až 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, poté xxxx spóry 15 xx ethanolu (4.6) xxxx, xx byla xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx se může x chladničce xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,2 x 0,3 ml xx 1000 ml. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx stanovení [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 xx |
|
Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xxxx použitím upravit xX na 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx pufr, pH 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2H2O p.a. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
4.5 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx pH 4,5 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx 2 X.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, jejichž xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μg chlortetracyklinu-HCL xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx chlortetracyklinu-HCL na 1 ml. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 5,5, zředěného 1/10 (4.3), xx xxxxxxx bylo přidáno 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Xxxx připravit xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx pufru (4.3) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,05 |
μg/ml |
|
S1 |
0,025 |
μg/ml |
5.2 Oxytetracyklin
Postupem xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, standardní xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx a xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Tetracyklin
Postupem xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx zásobního xxxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8 obsahující 1,0 μg xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x tyto koncentrace:
|
S4 |
0,5 |
μg/ml |
|
S2 |
0,25 |
μg/ml |
|
S1 |
0,125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
6.1 Obsahy xxxxx xxxx nižní než 50 xxx
Xx zkušebního xxxxxx přidat formamid (4.8) v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Poté xxxxx xxxxxx fosfátovým xxxxxx (4.3) xxxxx xxxxxx x tabulce x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx formamidu x xxxxx roztoku xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx nebo dekantovat xxxxxxx x cílem xxxxxx xxxx xxxxxx. Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 postupným xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x ppm |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Zkušební vzorek x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx xxxxxxxxxxx pufru (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
řeď. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
řeď. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx U8 v μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxx xx xxxxxx nebo xx jeho xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku o xxxxxxxxx 2 xx 10 x 20xx xxxxxxx xxxx objemu xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxx extrakce musí xxxxxx xX nižší xxx 3; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxxx pH na 3 (u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 10 % kyseliny xxxxxx). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xX xx 5,5 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx bromkresolové xxxxxx (xxxxxx xx xx xxxxx na xxxxxx). Xxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, zředěného 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx koncentraci X8 (xxx 6.1).
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, U2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx xx uvedeno x bodě 6.2.1 xxx, xx xx xxxx (4.9) nahradí xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální médium xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx na xxxxx xx provádí x xxxxxxx za xxxxxxx čtyř koncentrací xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, S1) x xxxx koncentrací xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního roztoku x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x takové xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx v agarovém xxxxx nejméně 8 xxx x průměru 10 xx 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstvy x xxxxxxxx xxx 2 mm. Upřednostňuje xx použití misek xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx xxxx plastovým xxxxxxxx x průměru 200 mm a xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zanesením xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, obě křivky xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vypočítá xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 - S1 -X2 -X4 -X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - X1 -X2 -X1 -X2
Xxxxxxxx aktivita = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (TC) xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 1 g/kg, xxxxx nezasahuje xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx vzniknout matným xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx na xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx obsahu XXX se xxxxxx xxxxxxxx směsí xxxxxxx, xxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxx OTC x XX směsí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxxx účinek xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx naočkováno Xxxxxxxxxxxxxx aureus a xx kterého bylo xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx aureus K 14 [6]
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xx zkumavky x šikmým xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), do xxxxxxx se přidá 1,5 xx 3 % xxxxx (xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx laboratorní xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx očkovací xxxxx
24 xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx přes xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx kulturu xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxx 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxx přenést xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx asi 100 xx stejného xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat xx xxxxx xxxxx xxx 37 °C xxxxx růst xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (1x30 až 2x).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Chlorid xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
xX xx xxxxxxxxxxx: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
13,6 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 objemově.
4.5 Xxxx xxxxxxx methanolu/kyseliny chlorovodíkové (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Asi 10 % (x/X) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Standardní látky: XXX, XXX, TC, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x chlorovodíku.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (4.3) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 xx 500 μx XXX-XXX, XXX-XXX xxxx TC-HCL xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x chladničce jeden xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xxxx 250 xx dát 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx směsi (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx fosfátovým xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
6.2 Oxytetracyklin x xxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 nebo 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Přidat xxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
7. Metoda stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x extraktu
Zředit standardní xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2), tak, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx stanovení xx xxxxxxx kalibrační xxxxxx, ne xxxxx xx xxxxxxxx interpolace xxxxxxx dvou xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx mohou lišit xxxxxxxxx od laboratoře. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, jehož xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx CTC-HCL xx 1 xx. Poté xxxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx uvedeno xxxx x xx xxxxxxxxxx určených xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx xxxxxx dvakrát.
|
ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku |
ml xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Koncentrace XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx extrakt (6.1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x cílem získat xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,12 μx CTC-HCL. Dát 1 ml xxxxxx xxxxxxx xx dvou xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) do xxxx xxxxxx zkumavek. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,6 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx, 7 ředění, xxxxx ředění xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Koncentrace XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.2) za použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX na 1 xx. Dát 1 xx tohoto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxx xxxx jiných xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) očkovací xxxxxx (3.2) s xxxxx získat na xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v 5 xx kyvetě xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx ve 2 xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx aparatury xx 100 % xxxxxxxxxxx nenaočkovaného xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx xxxxx xxxxxxxx (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx v xxxxxx, xxx nezbytně xx sterilním xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xx vodní xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx mícháním udržuje xx 37 °C + 0,1 °X. Xxxxxxxxx xxxx se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx možné xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx (xxxxxx 2h30 xx 3x). Xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx roztoku formaldehydu (4.6) xx xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx růstu
Změřit xxxxxxxxxxx při 590 xx, xxxxxxx fotometr xx nastaví xx 100 % propustnost xxxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx nejvyššímu xxxxxx xxxxxxxxxxx). X xxxxxx xxxxxx rozdílů v xxxxxxxx xxxxxxx zkumavek xx doporučuje xxxxxx xxxxxxx 2 cm x xxxxxx 5 xx xxxxxx.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kalibrační křivku xx xxxxxxxxxxxx papíře xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx, x to dokonce x přítomnosti xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx je 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx tris (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x jeho xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx agarovém médiu xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx inhibičních xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx přímo xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus, X 250 TR [8] (xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx odebraným x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) a xxxxxx 100 μx oxytetracyklinu xx 5 xx. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx xxx 30 °X. Skladovat xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx xx šikmý xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) za xxxxxxx xxx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Naočkovat xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 až 30 °X, xxxx smýt xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx suspenze xx může v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nejméně 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx deskách xx xxxxxxxx médiem pro xxxxxxxxx (4.2) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx největší xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,1 x 0,2 xx na 1000 ml. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx média x činidla
4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 až 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,5. |
4.2 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [10]
Xxxxxx (4.1) xxxxxxxx na xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 20 % (V/V) ethanol.
4.5 Xxxxx methanol
4.6 0,5 % (m/V) roztok xxxx (hydroxymethyl) aminometanu x.x.
4.7 Extrakční xxxxxx
|
Xxxxx xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda |
50 xx |
|
Xxxx (hydroxymethyl) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 x |
4.8 Standardní xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx aktivitě.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx standardní látku (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx oleandomycinu 100 μx/xx.
Xx základě xxxxxx zásobního roztoku xxxxxxxxx zředěním x xxxxxxxx (4.6) standardní xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 0,1 μg xxxxxxxxxxxxx na 1 xx. Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx roztoku (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Extrakce
V xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx ve xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 xx 10 g 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 ml (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.2) při 60 °X suspenzí spór (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx agaru xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, S2, X1) a xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, U1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, aby bylo xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx o xxxxxxx 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx použít xxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx do xxx xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx každé stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 až 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 - S1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx vzorku nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- xxxxxx na xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxx x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx stanovení xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xX 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxx xx extrahuje xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zředí x xxxx antibiotická aktivita xx stanoví měřením xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx naočkovaném Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx projeví vytvořením xxxxxxxxxxx zón za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx zón xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea ATCC x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Sarcina xxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) upraveného xx xX 7,0. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx měsíc xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) za použití 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 hodin při 35 °X, poté xxxx bakterie xx xxxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx týden.
Předběžnými testy xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 48 xx 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [11]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
Za xxxxxx xxxxxxxxx rodičovského xxxxx x přípravy xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx7,0 x xx xxxxxx stanovení xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
16,730 g |
Destilovaná voda xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Fosfátový xxxx, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Čistý xxxxxxxx.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
Xxxxx standardní xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °C xx vakuové xxxxxxx (5 mm rtuti). Xxxxxxx 10 xx 50 xx xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxx xxxxxx fosfátovým xxxxxx, xX 7 (4.3) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx zásobního xxxxxxx připravit xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx; xxx xxxxxxx x xxxxxx 20 g xxxxxxxxxx. Přidat 60 xx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxxxxxxxxxxx 2 minuty (xxxxxxxxx xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx (4.7) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= U8). Xxxx připravit koncentrace X4, X2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7).
Xxx obsahy nižší xxx 10 xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxx při 35 °X a xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat bazální xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxxxxxxx xx xX 8 při 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx v xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, S4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, U1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx 2 xx. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo plastovým xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx průměru děr.
U xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x každou xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxx xxxx xxx 35 až 37 °C.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx pomocí xxxx rovnice:
(U1 + X2 + U4 + X8 - X1 - S2 - X4 -X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených u xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. STANOVENÍ XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Účel x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, koncentrátech x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Xxxxx 80". Po xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx zředí a xxxx antibiotická aktivita xx stanoví xxxxxxx xxxxxx virginiamycinu xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx agarem x kultivačního média (4.1). Xxxxxxxxx přes xxx při xxx 35 °X. Skladovat xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 dní xx xxxxx agar.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx bakterie xx zkumavky se xxxxxx agarem (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx solného xxxxxxx (4.3). Naočkovat tuto xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1). Inkubovat 24 xxxxx při 35 °X, poté smýt xxxxxxxx xx xxxxxx 25 ml fyziologického xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x zředit xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxx 75 % světelnou xxxxxxxxxxx xxx 650 xx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx skladuje v xxxxxxxxxx, její xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x bazálním xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxxxx množství očkovací xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx různé xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx možné, ale xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx provádí xxx 48 až 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 g |
|
Agar, xxxxx xxxxxxx |
10 až 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx pH xx 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 6
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx ad 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 Xxxxx methanol.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Tween 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx látka: xxxxxxxxxxxxx x známé xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml. Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1+) xx použití xxxxx (4.5) tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Výrobky x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Odstředit nebo xxxxxxxxx, odebrat 20 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxx xx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 xx xxxx xxxx xxxxx (4.5) x cílem xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x U1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 g xxxxxxxxxx vzorku, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxx směsí (4.5) x xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x U1, xxx xx uvedeno x bodě 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) při 48 xx 50 °X xxxxxxxx bakterií (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx na xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, S2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4, X2, X1).Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu.
Za tímto xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx možné xxxxxx x agarovém xxxxx nejméně 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít xxx xxxxxxx stejnoměrné vrstvy x xxxxxxxx xxx 2 xx. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx o průmětu 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx množství roztoku xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x závislosti xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx difúzi xxxxxxx čtyřikrát s xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx misky xxxx xxx xxx 35 až 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx budou paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx aktivity se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 -S1 - X2 - S4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx aktivita = předpokládaná xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Může xxx xxxxxxx jakékoli komerční xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx stejné výsledky.
[3] Xxxx amido xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx roztoků (xxxxx xxxxx).
[6] Tento xxxx xxxxxxxxx v Xxxxx xxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx X. xxxxxx XXXX 6538 P.
[7] Xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační xxxxxx podobného xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Xxxx xxxxxxxxx x Kielu xxxxx XXXX.
[9] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x dávající xxxxxx výsledky.
[10] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[11] Xxxx být použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx médium podobného xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.