Třetí Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x analytických xxxxx Společenství pro xxxxxx xxxxxxxx krmiv [1], a xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, že xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx kontroly krmiv, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisy a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS ze xxx 15. xxxxxx 1971 [2] x 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx stanovily xxxx xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx však xxxxx xxxxxxxx třetí xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, hrubých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x x aktivitu xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx X xxxx směrnice.
Obecná xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx směrnice Xxxxxx x. 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxx 1971, xxxxxx xx xxxxxxx analytické metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, pokud jde x stanovení a xxxxxxxxxxxx tetracyklinových antibiotik, xxxxx x x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, oxytetracyklinu, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x části 1 (úvod) přílohy xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx metody xxxxxxx x xxxxxxx II xxxx směrnice.
Článek 3
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x účinnost xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 1. xxxxxxxx 1973. Neprodleně o xxxx xxxxxxxxx Komisi.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 27. xxxxx 1972.
Za Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Mansholt
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX X
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x produktů xxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxx hmotnosti xxxxxx x xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxx krmiv, xxxxx obsahují xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, bramborovou xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx bohaté xx xxxxxx (např. xxxxx x moučka z xxxxxxxxxx) nebo xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx dvojité xxxxxxxxx. Xxx prvním xxxxxxxxx je vzorek xxxxxxx xx tepla xxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxx optická xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx stanovení xx vzorek xxxxxxxxx 40 % ethanolem. Xx xxxxxxxxx filtrátu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, čiření x filtraci xx xxxxx optická rotace xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx dvěma xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx udává obsah xxxxxx ve xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,126.
3.2 1,128 % (m/V) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N x za xxxxxxxxxxx 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (V/V) xxxxxxxx. 10 xx = 30,94 ml 0,1 X XxXX.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxx I: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x xxxxxx zinečnatého Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx 100 ml.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx XX: xxxxxxxxx xx xxxx 10,6 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [K4(Fe(CN)6].3H2O. Xxxxxxx xxxxx na 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, x: 0,948 xxx 20 °X.
4. Přístroje
4.1 Erlenmeyerova xxxxx x objemu 250 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx sacharimetr.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxx sítem x kulatými xxx x průměru 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (P xxxx S) (viz xxxxxxxx 7.1)
Navážit 2,5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x dát xx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 xx. Přidat 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx dobře xxxxxxxxx x xxxxxx dalších 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx xx vroucí xxxxx xxxxx a xx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx protřepávat, xxx xx zabránilo xxxxxx hrudek. Množství xxxx xx vodní xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, aby x xx vložení xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxx. Xxxxx xxxxx xxx vyjmuta x xxxxx během xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx po 15 minutách vyjmout xxxxx x lázně, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx x xxxxx zchladit na 20 °C.
Přidat 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) a xxxxx minutu xxxxxxxxxxx. Xxxx přidat 5 xx Carrezova xxxxxxx XX (3.4) a xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat. Xxxxx xxxx filtrát xxxxx xxxx (xxx xx xxxxxx), xxxxxxxx stanovení xx xxxxxxx většího xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X a II, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx polarimetrem xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x 200 xx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx rotace (X’ xxxx X’) látek xxxxxxxxxxx xx 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx, xxx xx xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 100 xx a xxxxxx xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (viz xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx této doby xxxxxxxx xxxxx protřepat, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx dobře xxxxxxx x ethanolem. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxx (3.5), xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 ml xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) do Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x silně xxxxxxxxx. Xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxxxx xxxxx zpětný xxxxxxx x ponořit xx xx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxx po 15 xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx baňku x xxxxx lázně, xxxxxx xxxx xxxxx do xxxxxxx baňky o xxxxxx 100 xx, xxxxxxxxxxx chladnější xxxxx x xxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx za xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) x II (3.4), xxxxxxx po xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxx x třetím xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx (%) se xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Xxxxxx polarimetrem
procenta xxxxxx = 2 000 (X - X’) / [α]X20°
xxx je:
P = celková xxxxxxx xxxxxx, v xxxxxxxx xxxxxxxx.
X’ = xxxxxxx xxxxxx látek xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx škrob
+ 195,4°: xxxxxxxxxx xxxxx
+ 184,6°: kukuřičný xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: ječný xxxxx
+ 181,3°: xxxxxx xxxxx
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx = 2 000 / [α]X20° · (2 N · 0,665) (X - X’) / [α]D20°
Kde xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx rotace, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx rotace xxxxx xxxxxxxxxxx ve 40 % xxxxxxxx, ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx sacharózy x xxxxxxx xx 100 xx xxxx, xxxxx xx při tloušťce 200 xx xxxxxxxx xxxxxx 100 stupňů xxxxxxxxxxxx. Tato hmotnost xx xxxx podle xxxxxxxxxxxx:
16,29 x xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
20,00 x pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 0,4 absolutní xxxxxxx xxx obsah škrobu xxxxx xxx 40 % x 1 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx nebo xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx vzorek xxxxxxxx více xxx 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx stanovením xxxxxxx xxxxxx zničeny xx xxxxxxx příslušného xxxxxxxx xxxxxxx kyseliny xxxxxx.
7.2 V xxxxxxx xxxxxxxx s vysokým xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxxxxx mléčné xxxxx xxxx sušené xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx přidání 80 xx ethanolu (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxxxx baňku xxxxxx xxxxxxx, ponořit xx xx 30 xxxxx xx xxxxx xxxxx x teplotě 50 °X. Xxxxxx vychladnout x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.3.
2. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx stanovit xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx stanoveného xxxxx Kjeldahlovy xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se mineralizuje xx mokra. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx a shromáždí xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx, xxxxx přebytek se xxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx p.a.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx xxxxxxx CuO x.x. xxxx síran xxxxxxx pentahydrát XxXX4 · 5X2X x.x., xxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxx XxX x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx zinek x.x.
3.4 Kyselina xxxxxx x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx sírová 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxx 0,5 N.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: rozpustit 300 xx xxxxxxxxxxxxx xx 100 xx 95-96 % (V/V) xxxxxxxx.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx p.a.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx pemza, xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1).
5. Postup
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 g vzorku x xxxxxxxxx xx 1 mg x xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 g xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 xx 0,4 g xxxxx xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 x xxxxxx měďnatého nebo xxxxx xxxxx xxxx 0,6-0,7 x oxidu xxxxxxxxxx), 25 ml xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.13), promíchat xxxxx baňky. Xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx mírně x za xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxx; xxxx zahřívat xxxxxxxxxxxx xxxxx kapalina xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx x přilnutí organických xxxxxx. Xxxx xx xxxxxx xxxx a xxxxxxxx (světlezelený, xxxxx xx xxxxxxx katalyzátor xx xxxx xxxx), xxxxxxxx var xxxxx xxxxx xxxxxx, poté xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxx přidat 250 xx 350 xx xxxx, aby xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx; xxxxxx vychladnout; xxxx xxxxxx několik granulí xxxxx (3.3).
Přidat do xxxxxx baňky xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxxx sírové 0,1 X (3.5) xxxx 0,5 X (3.6) x závislosti xx xxxxxxxxxxxxxx obsahu xxxxxx (xxx poznámky 7.2) x přidat xxxxxxx xxxxx indikátoru methylčerveně (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx destilační aparatury x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx sběrné baňce xx hloubky nejméně 1 xx (viz xxxxxxxx 7.3). Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx nalít xx xxxxx 100 ml 40 % roztoku xxxxxxxxx sodného (3.8). Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx bázi xxxxx, přidat do xxxxx rovněž xxx 10 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx se xx 30 minut xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Po xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxxxx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pomocí lakmusového xxxxxxx. Pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Ukončit xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, že xx destilát xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxx xx xxxx promíchat xxxxx sběrné baňky x pozorovat xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx žluta, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx baňce xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 N (3.10) v xxxxxxxxxx xx normalitě xxxxxxx xxxxxxxx sírové, dokud xx zbarvení nezmění xx světle žlutou.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx účelem xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, se xxxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxx x xxxxxxx), x xx xxx xxxxxx, xxxxx má xxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxx kontroly xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx x.x. (b.t. 114 °X; % X: 10,36) za xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx sírové 0,5 X.
6. Xxxxxxx výsledků
Stanovit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, 1 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx dusíku. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx hrubých xxxxxxxx xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx než 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. X xxxxxxx případě xx xxxxxxx musí provést xxxx xxxxx.
7.2 X xxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N, xxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx, xxxxxx xx 10 xx 15 xx x xxxxxxx xxxxx xx 25 xx.
7.3 Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nálevku x xxxxxxxx, xxxxxx hydroxid xxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx a xxxxxx xxxxx xxxxxxxx po xxxxxxx baňky xxx, xxx xx xxxxxxxxxx x roztokem xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX PROTEINŮ XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx frakci xxxxxxx xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx stanovených xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °X xxxxxxxx pepsinu v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx dusíku ve xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx hrubých xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 x/xx xxxxxxx; xxxxxxxx pepsinu je xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 4 této xxxxxxx x xxxx být xxxxxxxxxxxx x souladu x xxxxx xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx emulze (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v xxxx 3 metody xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Vodní xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 40 °X ± 1 °X.
4.2 Mineralizační x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx roztoku (viz xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx. Xxxxxx 450 xx roztoku xxxxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 40 °X. Xxxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxx, že je xX xxxxxxxx xxxxx xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx (4.1) x nechat xx xxx 48 xxxxx. Xxxxxxxxx po 8, 24 x 32 hodinách. Xx 48 hodinách přidat 15 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxx xx 20 °C, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx ho xx xxxxx destilační xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx hrubých xxxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxx. Pokud xx vytvoří pěna, xxxxxx xxxxxxx kapek xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx x silném xxxx, dokud xx xxxx xxxxx zcela xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxxx odstranit xxxxxxxx xxxxx xxxx.
Xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), udržovat var xxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Destilace x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Slepý xxxxx
Xxxxxxx xxxxx pokus xx xxxxxxx stejného xxxxxxx, xxx bez vzorku, xxxxx má xxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx sírové xxxxxxxxxxxx xxxxx slepého xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. 1 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx množství dusíku xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,4 absolutní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % relativní xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 20 % a xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx vyšší xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxx metodou nemají xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx in xxxx.
7.2 Xxxxxxx o xxxxxx xxxx vyšším xxx 10 % musí xxx odtučněny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (b.v. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX PEPSINU
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pepsinem x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx ošetří xx stanovených podmínek xxxxxxxx v prostředí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx 750 xx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx takové xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx činidlem Xxxxx-Xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx optické xxxxxxx jednoho μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx stejným xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,2 N.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,025 X.
3.4 5 % xxxxxx (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Činidlo Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxx 100 g xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XX4 · 2H2O), 25 x molybdenanu sodného (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 ml xxxx do dvoulitrové xxxxx s xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx kyseliny xxxxxxxxxx (x: 1,71) x 100 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (d: 1,19), xxxxxxxx xxxxx xx zpětný xxxxxxx, xxxxx do xxxx x udržovat xxxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxx 10 xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxx 175 x xxxxxx lithného (Li2SO4 · 2H2O), 50 xx xxxx x 1 ml xxxxx. Xxxxx xx dobu 15 xxxxx, xxx xx odstranil xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Přelít xxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 x, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat. Xxxxx xxxxxx nazelenalé xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 1 objem xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Roztok hemoglobinu: Xxxxxxx množství xxxxxxxxxxx, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx substrátu xxxxx Xxxxxxxx xxxxxx odpovídajícího 354 xx xxxxxx [1] a xxx xx baňky x xxxxxx 200 xx x normalizovaným xxxxxxxx. Xxxxxx několik ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx baňku s xxxxxxxx pumpou a xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxx zcela nerozpustí. Xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkovou (3.2) xx xx 100 xx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.8 Standardní xxxxxx xxxxxxxx: rozpustit 181,2 xx tyrosinu x kyselině chlorovodíkové (3.1) x doplnit xx jednoho xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx). Odebrat 20 xx tohoto xxxxxxx x rozředit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx xxxxxx roztoku xxxxxxxx 0,2 μmol xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxx ultratermostatem xx 25 °X + 0,1 °C.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, přesnost: 1 sekunda.
4.4 xX xxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxx xx 100 xx kyseliny chlorovodíkové (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx x xxx xx xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx x xxxxxxx xx xxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). xX xxxxxxxxxxxx xX xxxxxx xxxx xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx lázni (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 1,0 ml xxxxxxx pepsinu xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx x zpět xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx konci. Xxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxx xxx 25 °X xxxxxx po xxxx 10 minut, xxxxxxxx xx přidání xxxxxxx xxxxxxx (xxxx x teplota xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx). Xxxx xxxxxx 10,0 xx roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat xxxx xxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx filtrátu, xxx ho xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx zředěného činidla Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Po 5 až 10 xxxxxxxx xxxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxx spektrofotometrem xxx 750 nm x xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxx s xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, zahřát ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx kyseliny trichloroctové (3.4) xxxxxxxxxx na 25 °C, xxxxxxxxxxxxx x xxxx přidat 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1. Promíchat xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 10 xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx a filtrovat xxxx suchý filtr. Xxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx křivka
Do Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, a 5,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku tyrosinu, xxxxx odpovídá 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μmolu xxxxxxxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxx referenčním roztokem xxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 5,0 xx. Přidat 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx zředěného xxxxxxx Folin-Ciocalteu (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx hustotu xxx je xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx 5.3. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx tyrosinu.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxx x μxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku x xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx pokusem.
Aktivita xxxxxxx x μmolech tyrosinu xx 1 xx x xx xxxxx xxxxxx xxx 25 °X xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx xx xx (x/xx) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx podle xxxx 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Množství xxxxxxx, které xx xxx xxxxxxxxxx, musí xxx xxxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx měření xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Dvě xxxxxxxx xx xx xxxxxxx touto xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx xxxxxxxx/xx xxx. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 xxxxxxxxxx jednotek/g (μxxxx xxxxxxxx/x za 10 xxx. při 35,5 °C).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx metoda umožňuje xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx gossypolu x xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx pokrutinách a xxxxxxx xxxxxxx, které xxxx látky xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx obsahu je 20 xxx.
2. Princip
Gossypol xx extrahován xx xxxxxxxxxxx 3-amino-1-propanolu, x xx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx je xxxxxxxxxxxxxxx anilinu xxxxxxxx xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx při 440 xx.
3. Činidla
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x.x. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx n-hexanu.
3.2 Rozpouštědlo X: xx xxxxxxx xxxxx x objemu 1 x xxxxx xxx 500 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx xxxxxx kyseliny xxxxxx x 50 xx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Trvanlivost tohoto xxxxxxx je xxxxx xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx X: xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o objemu 100 xx 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx a 10 xx ledové xxxxxxxx octové. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxx.
3.4 Xxxxxx x.x.: xxxxx optická xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Toto xxxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx odměrné xxxxx x xxxxxx 250 ml xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx do odměrné xxxxx x xxxxxx 250 ml 50 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx A. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx je 0,02 xx/xx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx xxx pokojové xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx B: xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x tomto xxxxxxx xx 0,5 xx/xx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X x X xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxx trvanlivost xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (třepačka): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Zkušební xxxxxx
Xxxxxxxx zkušebního vzorku xxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Je xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x relativně velkou xxxxxxxxx částí xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxxx měření. Xxx xxxxxxxxx volného gossypolu x xxxxxxxxxxxx semenech, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx pokrutinách by xxxxxxxx xxxxxx neměl xxxxxxxxx 1 x; xxx xxxxx směsi xx xxxx xxx 5 x. Xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx část 10 xx xxxxxxxx; xxxx by xxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx množství xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxx 0,5 x 5 x, aby xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx obsahovala 40 až 200 μx gossypolu.
Analýza by xx xxxx xxxxxxxx xxx pokojové teplotě xxxxx 20 °C.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu
Dát xxxxxxxx vzorek xx xxxxxxx baňky xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxx dno xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx x jednu xxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx v xxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx zakrýt xxxxxxx x xxxxxxxx hodinovým xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x X) x xxxxxx 25 ml xxxxxx alikvotní části xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx rozpouštědlem X (3.2) xx 10 xx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro měření xxxxxxx xxx slepý xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (C x X) x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx slepý xxxxx.
Xxxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (D) x (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx zbarvení. Xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx jednu hodinu.
Stanovit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 440 xx a xx xxxxxxxxxx kyvetách o xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx hustotu roztoku xxx slepý pokus (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx vzorku (B) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx pokus xx xxxxxxx xxxxxxx roztoku xxxxxx (= upravená xxxxxxx xxxxxxx). Z xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx celkového gossypolu
Dát xxxxxxxx xxxxxx obsahující 1 až 5 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx x přidat 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3). Současně připravit xxxxx xxxxx x xxx 10 ml xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx xxxx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx. Xxxxxxxx xxx xxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx x doplnit po xxxxx obě xxxxx xxxxx isopropanolu a xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx 10 xx 15 xxxxx, xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 2 ml xxxxxxxx xx vzorku xx xxxx odměrných xxxxx x objemu 25 ml a 2 xx xxxxxxxx xxxxxxx pokusu xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x objemu 25 xx. Xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxx xxxxx x každé xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx se použijí xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxx 2 xx anilinu (3.4) xx xxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx lázní, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx na xxxxxxxxx teplotu, doplnit xx 25 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x bodě 5.2. X xxxx hodnoty xxxxxxxxx obsah celkového xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxx 6.
6. Xxxxxxx výsledků
Výpočet xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx buď xx xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx (6.1), xxxx xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx podmínek xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx tato:
volný xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: X 1% / 1xx = 600
Xxxxx volného xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1&xxxx;250 / X1%1xx ·&xxxx; · p · x
xxx:
X = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2
x = xxxxxxxx xxxxxx x x
x = xxxxxxxxx část filtrátu x xx
6.2 Xx xxxxxxx kalibrační xxxxxx
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 xx. X každé xxxxx xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) xx 10 xx.
Xxxxxxx baňky xxxxx xxxxx, xxxxxx slepého xxxxxx, xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx série 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx po xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x bodě 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx standardní xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx referenční xxxxx. Xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx uvedením xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.2.2 Celkový xxxxxxxx
Xxxxxxxxx 6 xxxxxxxxx xxxxx x objemu 50 xx. Xx xxxxx xxxxx přidat pipetou 10 xx rozpouštědla X (3.3) x xx ostatních 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.6). Doplnit xxxxx xxxxx baňky xx 10 ml xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx vroucí vodní xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a hexanu x xxxxxxxxx.
Xxxxxx pipetou 2 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx x 6 xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx na 25 xx xxxxx x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx druhé xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Zchladit xx xxxxxxxxx teplotu, doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát xxxxx xxxxxx (standardní xxxxx).
Xx xxxxxxxx uvedených v xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx hustotu xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx množství xxxxxxxxx (x μx).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % xxxxxxxxx hodnoty xxx obsah xxxxxxxxx xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xx 500 xx 750 ppm,
- 10 % relativní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx: 17,7 % dusíku).
XXXXXXX XX
1. STANOVENÍ X XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx x identifikovat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, která xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje směsí xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx papírové xxxxxxxxxxxxxx x porovnání x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x identifikována xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx Xx x xxxxxxxxx standardních xxxxx, x to xxx xxxxxxxxxxxx x XX světle (xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx), nebo xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Pufr, xX 3,5 |
|
|
Monohydrát kyseliny xxxxxxxxx p.a. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Na2HPO4.2H2O x.x. |
7,45 x |
|
Xxxxxx x.x. |
300 ml |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 ml |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X p.a. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx I: směs xxxxxxx nitromethanu/čistého chroroformu/α-dichlorhydrinu: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx XX xxxx xxxxxxx nitromethanu/čistého xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx čistého methanolu/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx látky: Chlortetracyklin, xxxxxxxxxxxxxx, tetracyklin, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x chlorovodíku.
3.9 Mikroorganismus: X. xxxxxx XXXX x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx suspenze xxxx a očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx: řídit xx xxxxxx xxxxx xxxx 3.1. a 3.2. metody xxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx agaru, xxx xx popsána x části 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 g |
|
Agar |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-triphenyltetrazolium xxxxxxxx x 5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxx 25 xx). Xxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxx (2440X xxxx 2043B) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Inkubátor xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx stanovení fluorescence.
4.5 Xxxxxxxx desky asi 20 x 30 xx pro xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.6) připravit xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx roztoky xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx pufrem (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx roztoky xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) s xxxxx xxxxxx roztoky, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx antibiotika xxxxx xxx 10 ppm, xx xxxxx použít xxx xxxxxxxxxxxxxx vzorek, xxxx nejjemnější xxxxxx xxxxxxxxx proséváním, xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx ho xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx směsí (3.5) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 100 μg xx 1 ml (6.1) a 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x identifikace
7.1 Chromatografie
Ponořit xxxxx do xxxxxxxxxx xxxxxxx, xX 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx papíru. Xxxx xxxxxxx na xxxxx 0,01 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) a xxxxxxxx (6.1 a 6.2). Xxx dobré xxxxxxxx xxxx mít papír xxxxxxxx xxxxxxx; pokud xx to nutné, xxxxxx trochu xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx X (3.3) xxx stanovení xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx XX (3.4) xxx stanovení XX xxxxxxx. Když xxxx xxxxxxxxxxxx dosáhne xxxxx 15 xx 20 xx (asi 1 xxxxxx 30 xxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx UV xxxxxxx
Xxxx xx obsah antibiotika xxxxx xxx 1 μx/xx2, xx xxxxx xx xxxxxxxx chromatogramu xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx pod XX lampou xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx bioautografií
Nalít kultivační xxxxxx (3.10), xxxxx xx předem xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx xxxxxxxx xxxxx (4.5) a xxxxxxx xxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x položit xx na jinou xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx, xxx zůstane xxxxx inkubační xxxx. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxx médiu.
K xxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xx inkubaci xxxxxx xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Identifikace
Relativní xxxxxxx Xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx zde. Xxxx xxxxxxx se xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx jakosti papíru x xxxx xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (XX) |
0,40 |
|
Xxxxxxxxxxxxxx (OTC) |
0,20 |
|
4-epi-CTC |
0,15 |
|
4-epi-TC |
0,13 |
|
4-epi-OTC |
0,10 |
Antibiotická xxxxxxxx "epi" xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx sloučenin.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX
X. DIFÚZÍ XX XXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx chlortetracyklin (XXX), oxytetracyklin (XXX) x tetracyklin (TC) x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Xxxxxx xxxxx xxx 5 xxx xxxxx být xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx xxx 50 xxx xx vzorek xxxxxxxxx zředěným formamidem. X xxxxxx xxxxxxx xxx 50 ppm xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx stanovení CTC x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx OTC x XX.
Xxxxxxxx xx xxxx zředí a xxxxxx antibiotická xxxxxxxx xx stanoví měřením xxxxxx XXX, XXX xxxx XX xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. cereus. Xxxxxx xx projeví vytvořením xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: X. xxxxxx XXXX x. 11778
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým agarem xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx borité. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx x přeočkovat xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) za xxxxxxx 2 xx 3 xx fyziologického xxxxxxx xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx suspenzi xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx modře x xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 dní xxx 28 xx 30 °X, poté xxxx spóry 15 xx xxxxxxxx (4.6) xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx ověřena xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Tato xxxxxxxx se může x xxxxxxxxxx skladovat xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, které xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, ale ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,2 x 0,3 xx na 1000 xx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 50 xx 60 °C.
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
"Tween 80" |
1 xx |
|
Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx modře |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 ml |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2H2O p.a. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) ethanol.
4.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx použitím x xxxxxxx na xX 4,5 xx xxxxxxx xxxxxxxx sírové asi 2 N.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Směs čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, jejichž xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Chlortetracyklin
Na základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x za xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg chlortetracyklinu-HCL xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx chlortetracyklinu-HCL na 1 xx. Zředění xx xxxxxxx xx xxxxxxx fosfátového pufru, xX 5,5, zředěného 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx 0,01 % černě xxxxx [3].
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Oxytetracyklin
Postupem xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 ml, xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx podle xxxx 5.1 připravit xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx, standardní xxxxxxxx xxxxxx X8 obsahující 1,0 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,5 |
μg/ml |
|
S2 |
0,25 |
μg/ml |
|
S1 |
0,125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
6.1 Obsahy xxxxx xxxx xxxxx xxx 50 xxx
Xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx formamid (4.8) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxx fosfátovým pufrem (4.3) xxxxx xxxxxx x tabulce s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x tomto xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x cílem xxxxxx čirý xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, U2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1) xx použití fosfátového xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx obsah x xxx |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Xxxxxxxx vzorek x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx formamidu (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx fosfátového xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
xxx. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx X8 v μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Obsahy xxxxx xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx antibiotika xx xxxxxx xxxx xx xxxx výrobní xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx 2 xx 10 g 20ti xxxxxxx jeho xxxxxx xxxxx (4.9). Protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx extrakce musí xxxxxx xX xxxxx xxx 3; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxxx pH xx 3 (u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx 10 % kyseliny xxxxxx). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu a xxxxxxx xX xx 5,5 za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxx xx ze xxxxx xx modrou). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, zředěného 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8 (xxx 6.1).
Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, U2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1), za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx a tetracyklin
Postupovat xxx xx xxxxxxx x bodě 6.2.1 xxx, xx se xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Očkování kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °C xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se provádí x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, S2, S1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, X1). Každá miska xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx misky x takové xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx v agarovém xxxxx xxxxxxx 8 xxx x průměru 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstvy x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx se z xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx plastovým xxxxxxxx x průměru 200 xx a xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x závislosti xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx difúzi xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat misky xxxxx 18 xxxxx xxx při 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr inhibičních xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxxxx křivky standardního xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 -X2 -X4 -S8) · 0,602 / U4 + X8 + X4 + X8 - U1 -X2 -X1 -S2
Skutečná xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % relativní xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (XX) xxx xxxxxxxxxxxxx vyšších xxx 1 x/xx, xxxxx nezasahuje žádná xxxxx, která xx xxxxxx xxxxxxxxx matným xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx než xxxxxx xx agaru.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX xx xxxxxx xxxxxxxx směsí xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx xxxxxx OTC x TC xxxxx xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx se xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx světelné xxxxxxxxxxxx kultivačního média, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx kterého xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxxx x šikmým xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), do xxxxxxx xx xxxxx 1,5 xx 3 % xxxxx (xxxxx xxxxxxx). Inkubovat xxxx xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx šikmý xxxx. Zároveň xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx laboratorní xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx očkovací xxxxx
24 xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx šikmý xxxx subkulturou x xxxxxxxxx přes xxx xxx 37 °C. Xxxxxxxxxxx celou xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxx 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx podmínek xx xxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx 37 °C xxxxx růst xxxxx xxxxxxxxx logaritmické xxxx (1x30 xx 2x).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx stanovení [7]
|
Pepton |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx sodný |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,32 g |
|
Hydrofosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
xX xx sterilizaci: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx pufr, pH 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx čistého xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 objemově.
4.5 Směs xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (x/X) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, TC, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (4.3) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 400 až 500 μx CTC-HCL, XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 ml. Tento xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
6. Extrakce
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 nebo 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx stát.
6.2 Oxytetracyklin x xxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx.
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) fosfátovým xxxxxx, xX 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx série koncentrací. Xxx xxxxx stanovení xx xxxxxxx kalibrační xxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx hodnot xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx kmene, které xx mohou xxxxx xxxxxxxxx od laboratoře. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Chlortetracyklin
Zředit standardní xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) x xxxxx získat standardní xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx CTC-HCL xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Zředit xxxxxxx (6.1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,12 μx CTC-HCL. Xxx 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx fosfátovým pufrem (4.2).
7.1.2 Oxytetracyklin a xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,6 μx OTC-HCL xxxx TC-HCL xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx pufru (4.2), xxx xx uvedeno xxxx x ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx pracovního roztoku |
ml xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Zředit extrakt (6.2) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Dát 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx zkumavek xx 1 xx xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx médium pro xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x 5 cm xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 cm xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx xxxxx zkumavky (7.1.1 nebo 7.1.2) 9 xx naočkovaného xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx nezbytně xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xx vodní xxxxx, jejíž xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx 37 °X + 0,1 °C. Xxxxxxxxx doba xx xxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx gradient je xxxxxx xxx přesná xxxxxx (xxxxxx 2h30 xx 3h). Xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) xx každé xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx růstu
Změřit xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 100 % propustnost xxxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxx). X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx různých xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 2 xx x raději 5 xx kyvety.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx fotometrických xxxxxxxxxxxx xxxxx koncentracím xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx křivce xxxxxxx propustnosti xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx antibiotika xx xxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % relativní xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- difúzí xx agaru -
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx, x to xxxxxxx x xxxxxxxxxxx tetracyklinů. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx je 0,5 xxx.
2. Princip
Vzorek se xxxxxxxxx zředěným methanolovým xxxxxxxx xxxx (hydroximethyl) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx oleandomycinu xx agarovém xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx přímo úměrný xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus, X 250 XX [8] (xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx rodičovského xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) a xxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 ml. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx asi 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx na xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx bakterie ze xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx xxx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Naočkovat tuto xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx obsahující 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx je 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 až 5 xxx při 28 až 30 °X, poté smýt xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx byla xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx deskách xx xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.2) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxxxx umožní xxxxxx xxx různé xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx zóny. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,1 x 0,2 xx na 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média se xxxxxxx xxx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxx rodičovského xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 až 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 6,5. |
4.2 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [10]
Xxxxxx (4.1) xxxxxxxx na xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (m/V) xxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) aminometanu x.x.
4.7 Xxxxxxxxx roztok
|
Čistý xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 x |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx aktivitě.
5. Standardní xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx látku (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx roztokem (4.6) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx oleandomycinu 100 μg/ml.
Na xxxxxxx xxxxxx zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok S8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx roztoku (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx předpokládaném xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 xx 10 x 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou.
Odstředit, xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx roztokem (4.6) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Poté xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 a X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx roztoku (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro stanovení (4.2) xxx 60 °X suspenzí xxxx (3.2).
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx použití xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, S4, X2, X1) a xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, U1). Xxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a extraktu.
Za xxxxx účelem xxxxxx xxxxx x takové xxxxxxxxx, aby xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 děr x xxxxxxx 10 xx 13 mm. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx sestávajících se x plochých skleněných xxxxx x dokonale xxxxxx hliníkovým nebo xxxxxxxxx kroužkem o xxxxxxx 200 mm x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx antibiotika xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx nejméně čtyřikrát x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 až 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx průměru inhibičních xxx. Načrtnout xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx pomocí této xxxxxxx:
(X1 + U2 + U4 + X8 - X1 - X2 - X4 - S8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- xxxxxx na xxxxx -
1. Účel x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztokem x xX 8, xxxxxxxxxxx na 80 °X, x xxxx xx extrahuje xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx projeví vytvořením xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým agarem xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx pH 7,0. Xxxxxxxxx přes xxx xxx xxx 35 °X. Skladovat xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx agar.
3.2 Xxxxxxxx bakteriální suspenze
Smýt xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem (3.1) xx použití 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Naočkovat xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 250 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), xxxxxxx xx xX 7,0. Inkubovat 24 xxxxx xxx 35 °X, poté xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x chladničce, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací látky, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx největší možné, xxx ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 48 xx 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 g |
|
Kvasnicový xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
Xx xxxxxx udržování rodičovského xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx upravit xX na7,0 x xx xxxxxx stanovení xx 8,0.
4.2 Fosfátový xxxx, pH 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx voda xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/čistý xxxxxxxx: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: tylosin o xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx látku (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °C xx xxxxxxx sušárně (5 xx rtuti). Xxxxxxx 10 až 50 mg xx xxxxxxx baňky, xxxxxxxxx x 5 ml xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxx roztok xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 7 (4.3) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 2 μg xxxxxxxxxx xxxxxxxx na 1 xx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Extrakce
Pro xxxxxxxxxxx použít 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx; xxx xxxxxxx a xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Přidat 60 xx xxxxxxxxxxx pufru, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx na 80 °X, x xxxxxxxxxxxxx 2 minuty (xxxxxxxxx xxxxx, Ultra-turrax atd.).
Nechat xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxxxxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxx extrakt a xxxxxx alikvotní xxxx xxxxx (4.7) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7).
Xxx xxxxxx nižší xxx 10 xxx xxxxxxx xxxxxxx do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx při 35 °X a xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xx xX 8 xxx 48 xx 50 °X suspenzí xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx v xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, aby bylo xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx médiu nejméně 8 děr o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx má xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx a x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx do xxx xxxxxx odměřená xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nejméně xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx 35 až 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx na semilogaritmický xxxxx zanesením xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx standardního roztoku x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx křivky xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + U8 - X1 - S2 - X4 -X8) · 0,602 / X4 + U8 + S4 + X8 - U1 - U2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. STANOVENÍ XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit virginiamycin x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se extrahuje xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Xxxxx 80". Xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx zředí x xxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx virginiamycinu na xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Difúze xx projeví vytvořením xxxxxxxxxxx zón za xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea XXXX x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat xxxx xxx při xxx 35 °X. Skladovat xxxxxxx v xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každých 14 dní xx xxxxx agar.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze
Smýt bakterie xx xxxxxxxx se xxxxxx agarem (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoku (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx s cílem xxxxxx xxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 nm. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx skladuje v xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx týden.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx možné, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Očkování kultivačního xxxxx se xxxxxxx xxx 48 až 50 °C.
4. Kultivační xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [12]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 až 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
Před xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,5.
4.2 Fosfátový xxxx, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx ad 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % methanolového xxxxxxx "Xxxxx 80" (x/X).
4.7 Standardní xxxxx: xxxxxxxxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xx základě tohoto xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Poté xxxxxxxxx postupným xxxxxxx (1+) za xxxxxxx xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Extrakce
6.1 Výrobky x xxxxxx virginiamycinu xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 až 20 x zkušebního xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Odstředit xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx 20 xx čirého roztoku x xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Rozpustit xxxxxxxx xx 20 ml xxxx xxxx xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 1 μx virginiamycinu xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace U4, X2 a X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx o obsahu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 ppm
Odebrat 1 xx 10 g xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 ml xxxxxxx (4.6) x protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx zředit xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x U1, xxx je uvedeno x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 48 xx 50 °C xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx na xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (S8, X4, X2, S1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4, X2, X1).Xxxxx miska xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x takové velikosti, xxx xxxx možné xxxxxx v agarovém xxxxx nejméně 8 xxx o průměru 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x tloušťce asi 2 xx. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x průmětu 200 xx a xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 ml, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxx.
X každého xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx čtyřikrát s xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxx xxx při 35 až 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit průměr xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx pomocí xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 -X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + S8 - U1 - X2 - S1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx aktivita x xxxxxxxxx aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] Xxxx amido slouží x xxxxxxxx inhibičních xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx kruhy).
[6] Tento xxxx izolovaný v Xxxxx podle XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx růst xxx X. aureus XXXX 6538 X.
[7] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Xxxx izolovaný x Xxxxx podle XXXX.
[9] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[10] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[11] Xxxx být použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[12] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx a dávající xxxxxx výsledky.