Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední kontrolu xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x založení Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx xxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx uvedená xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx cílem xx xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx krmiv, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx odběru vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx směrnice Xxxxxx x. 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxx 1971 [2] a 71/393/XXX xx dne 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx na stav xxxxxxx provedených xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Článek 1
Členské xxxxx xxxxxxx, že analýzy xxx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxx xxx x obsahy xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, hrubých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx, volného x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x x aktivitu xxxxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx popsaných x xxxxxxx X xxxx směrnice.
Obecná ustanovení xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxx 1971, kterou se xxxxxxx analytické xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, se xxxxxxx xxx metody xxxxxxx x xxxxxxx X xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx úřední kontroly xxxxx, pokud xxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotik, xxxxx x o xxxxxx chlortetracyklinu, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, oleandomycinu, tylosinu x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XX xxxx směrnice.
Obecná xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxx 1971, s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a správní xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1973. Neprodleně x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
V Bruselu xxx 27. xxxxx 1972.
Xx Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Mansholt
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
PŘÍLOHA X
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx metoda
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx obsah xxxxxx a produktů xxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x krmivech, s xxxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx skrojky xxxx xxxxx, bramborovou xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx (xxxx. řízky x xxxxxx x xxxxxxxxxx) nebo xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx prvním xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx za tepla xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx čiření a xxxxxxxx xx polarimetricky xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx vzorek extrahuje 40 % xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxx filtrátu xxxxxxxxx chlorovodíkovou, xxxxxx x xxxxxxxx se xxxxx optická xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx při prvním xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx udává xxxxx xxxxxx xx vzorku.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) kyselina chlorovodíková, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) kyselina xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N x xx xxxxxxxxxxx 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (X/X) xxxxxxxx. 10 xx = 30,94 xx 0,1 X XxXX.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxx X: xxxxxxxxx xx vodě 21,9 x octanu xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Doplnit xxxxx xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx XX: xxxxxxxxx xx vodě 10,6 g xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, x: 0,948 při 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx s xxxxxxxxxxxxxx zábrusem x xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx sacharimetr.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x kulatými oky x průměru 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx rotace (X xxxx S) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Navážit 2,5 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx do odměrné xxxxx o xxxxxx 100 ml. Xxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx rozmístil x xxxxxx dalších 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Ponořit xxxxx do vroucí xxxxx xxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxxxx, xxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxx varu. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx x lázně xxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx 15 minutách xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxxx 30 ml xxxxxxx xxxx a xxxxx xxxxxxxx na 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) a xxxxx minutu protřepávat. Xxxx xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx roztoku XX (3.4) x xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx vodou, homogenizovat x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxx zcela xxxx (což xx xxxxxx), xxxxxxxx stanovení xx použití xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X a XX, xxxxxxxxx 10 ml.
Poté xxxxxx xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx optickou xxxxxx xxxxxxx v 200 xx trubici.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx rotace (X’ xxxx X’) látek xxxxxxxxxxx ve 4 % ethanolu
Navážit 5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx, xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx a xxxxxx xxx 80 ml xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Poté xxxxxx xxxxx stát xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x ethanolem. Xxxxxxx xx rysku ethanolem (3.5), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 ml, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x silně xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx chladič x ponořit xx xx vroucí xxxxx xxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx baňku x xxxxx lázně, xxxxxx xxxx obsah do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 ml, xxxxxxxxxxx chladnější xxxxx x poté zchladit xx 20 °C.
Poté xxxxxxx xx použití Xxxxxxxxx roztoku X (3.3) x XX (3.4), xxxxxxx xx xxxxx vodou, homogenizovat, xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx rotaci, xxx xx uvedeno x xxxx 5.2 xxxxxx x třetím xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Obsah xxxxxx (%) se vypočítá xxxxx:
6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - X’) / [α]X20°
xxx xx:
X = celková xxxxxxx xxxxxx, v xxxxxxxx xxxxxxxx.
X’ = optická xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx škrob
+ 195,4°: xxxxxxxxxx xxxxx
+ 184,6°: xxxxxxxxx škrob
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: ječný xxxxx
+ 181,3°: xxxxxx xxxxx
+ 184,0°: ostatní druhy xxxxxx a xxxxx xxxxxx x krmných xxxxxxx
6.2 Xxxxxx sacharimetrem
Procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]D20° · (2 X · 0,665) (X - X’) / [α]D20°
Kde xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx rotace, ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx xxxxxx látek xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, xx xxxxxxxx sacharimetru
N = xxxxxxxx sacharózy x xxxxxxx xx 100 xx xxxx, xxxxx xx při xxxxxxxx 200 mm xxxxxxxx xxxxxx 100 stupňů xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx mění podle xxxxxxxxxxxx:
16,29 x xxx xxxxxxxxxxx sacharimetry
26,00 g xxx německé sacharimetry
20,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = specifická xxxxxxx xxxxxx čistého xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx xxxxx překročit 0,4 absolutní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxx 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx než 6 % uhličitanů, xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx, uhličitany xxxx xxx před xxxxxxxxxx xxxxxxx rotace zničeny xx xxxxxxx příslušného xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 X případě xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx laktózy, jako xx sušené xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx přidání 80 xx ethanolu (3.5) xxxxx: Připojit xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx zpětný xxxxxxx, ponořit xx xx 30 xxxxx xx vodní lázně x xxxxxxx 50 °X. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodě 5.3.
2. STANOVENÍ XXXXXXX XXXXXXXX
1. Účel a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx stanovit xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx metody.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx mineralizuje xx mokra. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx v odměřeném xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx roztokem xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx p.a.
3.2 Katalyzátor: xxxx měďnatý XxX x.x. nebo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx XxXX4 · 5X2X x.x., xxxx xxxx xxxx xxxx rtuťnatý HgO x.x.
3.3 Granulovaný xxxxx x.x.
3.4 Xxxxxxxx sírová x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx sírová 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx sírová 0,5 X.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: rozpustit 300 xx methylčerveně ve 100 xx 95-96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.8 40 % (m/V) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,1 X.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x.x.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx pemza, xxxxxxx v kyselině xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x destilační xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1).
5. Postup
5.1 Mineralizace
Navážit 1 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx aparatury. Xxxxxx 10 x xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx množství katalyzátoru (3.2) (0,3 až 0,4 x xxxxx xxxxxxxxx nebo 0,9 xx 1,2 x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx nebo 0,6-0,7 x oxidu xxxxxxxxxx), 25 ml xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx xxxxx. Zahřívat xxxxx, xxxxxxx xxxxx x za občasného xxxxxxxxxxxx, dokud hmota xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx; poté xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx dokud xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx x přilnutí xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx je xxxxxx xxxx a xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx mědi), xxxxxxxx var xxxxx xxxxx hodinu, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Destilace
Opatrně x za xxxxxxx xxxxxxx přidat 250 xx 350 xx xxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx; xxxxxx xxxxxxxxxxx; xxxx xxxxxx xxxxxxx granulí xxxxx (3.3).
Přidat xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx odměřené xxxxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,5 X (3.6) x závislosti na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx baňku xx xxxxxxx destilační xxxxxxxxx x ponořit xxxxx xxxxxxxx xx kapaliny xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 1 xx (xxx xxxxxxxx 7.3). Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx do xxxxx 100 xx 40 % xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxx do xxxxx rovněž xxx 10 xx xxxxxxx xxxxxx sodného (3.11), xxxx 25 ml xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx baňku xxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xx 30 minut xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Po xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx lakmusového xxxxxxx. Pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx ukáže, xx xx destilát neutrální. Xxxxx xxxxxxxxx xxx xx xxxx promíchat xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx do xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx množství kyseliny xxxxxx 0,1 N (3.5) nebo 0,05 X (3.6).
5.3 Titrace
Ve xxxxxx baňce titrovat xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx zbarvení xxxxxxx xx xxxxxx žlutou.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx účelem xxxxxxxx, zda xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, se xxxxxxx xxxxx pokus (xxxxxxxxx x xxxxxxx), x xx bez xxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx. Za xxxxxx xxxxxxxx správnosti xxxxxx xx provede xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x titrace) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx p.a. (x.x. 114 °C; % X: 10,36) za xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 x acetanilidu xxxxxxxxxx 14,80 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kyseliny xxxxxx, 1 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx faktorem 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx procento vzorku.
Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení provedených x jednoho xxxxxx xxxxx překročit:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx hrubých xxxxxxxx xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 absolutní xxxxxxx pro obsah xxxxx xxx 40 %.
7. Poznámky
7.1 Je xxxxx použít xxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx xxxx mineralizací x destilací. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx provést xxxx xxxxx.
7.2 X xxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxx xxxxxx může xxx xxxxx kyseliny xxxxxx 0,1 N, xxxxx má xxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx baňky, snížen xx 10 xx 15 ml x xxxxxxx xxxxx xx 25 xx.
7.3 Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxx, přidat xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx a pomalu xxxxx kapalinu xx xxxxxxx baňky xxx, xxx se xxxxxxxxxx x xxxxxxxx kyseliny.
3. XXXXXXXXX HRUBÝCH XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx stanovených xxxxxxxx. Metoda je xxxxxxxxxx pro všechna xxxxxx.
2. Princip
Vzorek se xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx proteinů.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx chlorovodíková, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 N.
3.3 2,0 j/mg xxxxxxx; xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 4 této xxxxxxx x xxxx být xxxxxxxxxxxx x souladu x xxxxx xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxx 3 xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx odměrné xxxxx x xxxxxx 500 xx. Xxxxxx 450 ml xxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °X. Xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx. Xxxxxx, že je xX xxxxxxxx xxxxx xxx 1,7. Vložit xxxxx xx vodní xxxxx xxxx inkubátoru (4.1) x xxxxxx xx xxx 48 xxxxx. Protřepat xx 8, 24 x 32 xxxxxxxx. Xx 48 xxxxxxxx přidat 15 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.1), zchladit xx 20 °X, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx x filtrovat.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 ml xxxxxxxx x přesností xx 1 mg x xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx v xxxxxx xxx xxxxxxxxx hrubých xxxxxxxx, ve druhé xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xx xxxx. Xxxxx xx xxxxxxx pěna, xxxxxx xxxxxxx kapek xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx v silném xxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx ohřev x opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx.
Xxxx xx roztok xxxx x xxxxxxxx (světlezelený, xxxxx xx použije xxxxxxxxxxx na xxxx xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Destilace x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx v xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Xxxxx pokus
Provést xxxxx pokus xx xxxxxxx xxxxxxxx postupu, xxx xxx xxxxxx, xxxxx má být xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx kyseliny sírové xxxxxxxxxxxx xxxxx slepého xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. 1 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,4 absolutní xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 20 % x nižší xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Hodnoty xxxxxxx xxxxx xxxxxxx nemají xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx in vivo.
7.2 Xxxxxxx o xxxxxx xxxx vyšším než 10 % xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (b.v. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX AKTIVITY XXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje stanovit xxxxxxxx xxxxxxx použitého xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx ošetří xx stanovených podmínek xxxxxxxx x prostředí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx hustota xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx 750 xx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxx křivky.
Definice: Xxxxxxxx pepsinu je xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx uvolní xx xxxxxx takové xxxxxxxx hydroxyarylových xxxxxx, xxxxxxx zbarvení xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx má optickou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx jednoho μmolu xxxxxxxx zbarveného xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,2 N.
3.2 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,06 X.
3.3 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,025 N.
3.4 5 % xxxxxx (m/V) xxxxxxxx trichloroctové.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,5 X.
3.6 Činidlo Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxx 100 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 25 x xxxxxxxxxxx sodného (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 xx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx x normalizovaným xxxxxxxx. Přidat 50 xx kyseliny fosforečné (x: 1,71) x 100 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19), xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx varu x xxxxxxxx roztok x xxxxxx xxxx xx xxxx 10 xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zpětný chladič, xxxxxx 175 x xxxxxx xxxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 50 xx vody x 1 xx xxxxx. Xxxxx xx dobu 15 xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx přebytek xxxxx.
Xxxxxx vychladnout. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 x, doplnit xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx nazelenalé xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 1 objem xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx metody xxxxxxxxxxxxxx 354 xx dusíku [1] x xxx xx xxxxx x xxxxxx 200 xx x normalizovaným zábrusem. Xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx pumpou x xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxx zcela xxxxxxxxxx. Xxxxxxx vakuum x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx xx 100 xx. Připravit bezprostředně xxxx xxxxxxxx.
3.8 Standardní xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx 181,2 xx tyrosinu x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) x doplnit xx jednoho xxxxx xxxxxxx kyselinou (xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx xxxxxx xxxxxxx x rozředit kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx xxxxxx roztoku xxxxxxxx 0,2 μmol xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Vodní xxxxx xxxxxxxxx ultratermostatem xx 25 °C + 0,1 °C.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Stopky, xxxxxxxx: 1 xxxxxxx.
4.4 xX xxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (viz poznámky 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx a xxx ho xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml x doplnit xx xxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). xX xxxxxxxxxxxx xX metrem musí xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx xx vodní xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, zahřát xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 1,0 ml xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 x xxxxxxxxx asi xxxxxx xxxxxx xxx x zpět xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx konci. Nechat xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx 25 °X xxxxxx xx xxxx 10 minut, xxxxxxxx xx přidání xxxxxxx xxxxxxx (doba x teplota musí xxx xxxxxx xxxxxxxx). Xxxx xxxxxx 10,0 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxx zbarvení x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxx, xxx xx do Xxxxxxxxxxxxx baňky o xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Po 5 xx 10 xxxxxxxx stanovit optickou xxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 750 xx x xxxxxxxx o xxxxxxxx 1 xx x porovnání s xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx stanovení xxxxxxx xxxxx xxxxx pokus:
Odpipetovat 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx lázni (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxx trichloroctové (3.4) xxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx tyčinkou x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 10 xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx x filtrovat xxxx suchý xxxxx. Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx v xxxx 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, x 5,0 xx alikvotního xxxxxxxxxxxx roztoku tyrosinu, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx tyrosinu. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) na 5,0 xx. Přidat 10,0 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x xx stálého protřepávání 3,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xxxxxx optickou xxxxxxx xxx je xxxxxxx x poslední větě xxxx 5.3. Načrtnout xxxxxxxxxx křivku uvedením xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxxxxx, které xxxxxxxx optické hustotě xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx bylo xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxx x μxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx x za xxxxx xxxxxx xxx 25 °X se vypočítá xxxxx vzorce:
Jednotky xx xx (x/xx) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx podle bodu 5.2.
7. Poznámky
7.1 Množství xxxxxxx, xxxxx má xxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hustota 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx xx mg xxxxxxx xxxxx metodou xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx xxxxxxxx/xx min. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 xxxxxxxxxx xxxxxxxx/x (μxxxx tyrosinu/g za 10 xxx. xxx 35,5 °X).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX A XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx volný gossypolu, xxxxxxx gossypolu x xxxxxxxx příbuzné látky x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx je 20 xxx.
2. Princip
Gossypol xx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, x xx buď xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxx xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx přeměněn xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, jehož xxxxxxx xxxxxxx je xxxxxx při 440 xx.
3. Činidla
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx: xxxxxxx 60 objemových xxxxx xxxxxxxxxxxx x.x. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx x-xxxxxx.
3.2 Rozpouštědlo X: do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 x nalít xxx 500 ml xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a 50 xx vody. Doplnit xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx jeden xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx X: xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx x 10 xx xxxxxx xxxxxxxx octové. Zchladit xx pokojovou xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx N,N-dimethylformamidem. Trvanlivost xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx týden.
3.4 Xxxxxx x.x.: xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, destilovat xxxxxx xxxx zinkový xxxxx s vyloučením xxxxxxx x posledních xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Toto xxxxxxx xx skladuje x xxxxxxxxxx několik xxxxxx x zazátkované xxxxx x xxxxxxx xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx roztok gossypolu X: xx odměrné xxxxx x xxxxxx 250 xx dát 27,9 mg octanu xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 xx 50 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx rozpouštědlem X. Xxxxxxxxxxx gossypolu x xxxxx xxxxxxx xx 0,02 mg/ml. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx stát xx xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 ml xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Rozpustit x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Koncentrace xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,5 xx/xx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X a X xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxx trvanlivost xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx gossypolu xx xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxx x malým xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx velkou xxxxxxxxx částí xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx dostatečné množství xxxxxxxxx xxx přesné xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx pokrutinách xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 x; xxx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 5 x. Xx xxxxxxx případů je xxxxxxxxxx xxxxxxxxx část 10 ml xxxxxxxx; xxxx xx xxxxxxxxx 50 xx 100 μx gossypolu. Xxx xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx mělo xxx xxxx 0,5 x 5 g, xxx xxxxxxxxx část 2 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 40 xx 200 μx gossypolu.
Analýza xx xx xxxx provádět xxx pokojové teplotě xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx vzorek xx xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxx 250 ml, xxxxx xxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx střepy. Xxxxxx pipety přidat 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), zazátkovat xxxxx a xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Filtrovat přes xxxxx filtr a xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Pomocí xxxxxx xxxxxx do xxxx xxxxxxxxx baněk (X x X) x xxxxxx 25 xx xxxxxx alikvotní xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μg xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) xx 10 xx. Xxxx doplnit xx xxxxx baňku (X) xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx xxxx referenční xxxxxx xxx měření xxxxxxx xxx slepý xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 10 xx rozpouštědla X (3.2) do xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (C a X) x objemu 25 xx. Doplnit xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx referenční xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (D) a (X). Zahřívat 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx lázní, xxx xx xxxxxxxxx zbarvení. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx xxxxx hodinu.
Stanovit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 440 xx a ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 cm xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx slepý xxxxx (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x xxxxxxxx hustotu xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (A).
Odečíst xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xx xxxxxxx hustoty xxxxxxx xxxxxx (= upravená xxxxxxx xxxxxxx). X xxxx hodnoty vypočítat xxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx je uvedeno x bodě 6.
5.3 Xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 xx 5 xx gossypolu xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml x xxxxxx 10 xx rozpouštědla X (3.3). Xxxxxxxx připravit xxxxx xxxxx x xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx xxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml. Xxxxxxxx xxx xxxxx 30 xxxxx nad vroucí xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxx baňky xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x nechat stát 10 xx 15 xxxxx, xxxx filtrovat x xxxxxxxx filtráty x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx pipety xxxxxx 2 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x objemu 25 xx a 2 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx jiných xxxxxxxxx xxxxx x objemu 25 ml. Doplnit xx 25 ml xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx isopropanolu a xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4) xx xxxx xxxxxx baněk. Xxxxxxxx 30 minut xxx xxxxxx xxxxx lázní, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx 25 ml xxxxx isopropanolu a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx hodinu.
Stanovit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2. X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx celkového xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx může xxxxxxx buď na xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx (6.1), nebo xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx:
xxxxx xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: X 1% / 1xx = 600
Xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx se xxxxxxxx takto:
gossypol %: X · 1 250 / X1%1xx ·&xxxx; · x · x
xxx:
X = opravená xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xx uvedeno x xxxx 5.2
x = zkušební vzorek x x
x = xxxxxxxxx xxxx filtrátu x xx
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx křivky
6.2.1 Xxxxx gossypol
Připravit xxx xxxxx xx pěti xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 xx. X xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx rozpouštědlem X (3.2) xx 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxx slepého xxxxxx, směsí xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1) xx 25 ml.
Přidat xx každé xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx vroucí vodní xxxxx, aby se xxxxxxxxx zbarvení. Zchladit xx pokojovou teplotu, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x bodě 5.2 xxxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxxxx. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx proti xxxxxxxx gossypolu (x μx).
6.2.2 Celkový gossypol
Připravit 6 odměrných xxxxx x objemu 50 xx. Do xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx ostatních 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu X (3.6). Xxxxxxx xxxxx každé xxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx x promíchat.
Přidat xxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx x 6 xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx na 25 xx směsí x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) (referenční xxxxx).
Xxxxxx do xxxxx xxxxx xxxxx série 2 ml anilinu (3.4). Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), homogenizovat x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx (standardní série).
Za xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx porovnáním x odpovídajícími xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx optické xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.3 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxxx vzorku xxxxx překročit:
- 15 % xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx od 500 xx 750 ppm,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 750 xxx.
[1] Stanovit xxxxx xxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (teoretický xxxxx: 17,7 % xxxxxx).
XXXXXXX XX
1. XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxxx x premixech.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a kyseliny xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x porovnání x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx porovnáním xxxxxx xxxxxx Rf x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, x to xxx xxxxxxxxxxxx x XX světle (xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx), xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Monohydrát xxxxxxxx xxxxxxxxx p.a. |
10,256 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
7,45 x |
|
Xxxxxx x.x. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný KH2PO4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 g |
|
Destilovavná xxxx xx |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx I: xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx XX xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 98/2 objemově.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
3.7 Xxxxxxx, d: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx látky: Xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx, jejichž xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx ATCC x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x očkování xxxxxxxxxxxx média: xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxx 3.1. x 3.2. metody xxx xxxxxxxxx xxxxxx chlortetracyklinu, xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxx, xxx je popsána x části 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Kultivační xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx použitím upravit xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx chloridu x 5 % (x/X) xxxxxx glukosy.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx papírovou xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxx 25 xx). Schleich a Xxxxxxx xxxxx (2440B xxxx 2043X) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Inkubátor xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx stanovení fluorescence.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx xxx 20 x 30 xx pro xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) a xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.2 Referenční xxxxxxx xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx pufrem (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Referenční roztoky xxx stanovení xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx získat xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 5 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx antibiotika xxxxx xxx 10 xxx, xx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxx nejjemnější xxxxxx xxxxxxxxx proséváním, xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x této xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vzorek xx xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Sebrat xxxxxxxxxxx x použít ho xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 100 μx xx 1 ml (6.1) x 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Stanovení x xxxxxxxxxxxx
7.1 Chromatografie
Ponořit xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx, pH 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx přebytek xxxxxxxx vtlačením xxxxxx xxxx listy xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx 0,01 ml referenčních xxxxxxx (5.2 a 5.3) x extraktu (6.1 x 6.2). Xxx xxxxx oddělení xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx; xxxxx xx to xxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografií. Použít xxxxxx X (3.3) xxx xxxxxxxxx bioautografií x xxxxxx XX (3.4) pro xxxxxxxxx XX xxxxxxx. Když xxxx rozpouštědla xxxxxxx xxxxx 15 xx 20 cm (xxx 1 xxxxxx 30 xxxxx), přerušit xxxxxxxxxxxxxx x vysušit xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx UV xxxxxxx
Xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx než 1 μx/xx2, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx ozářením xxx XX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), xxxxx xx předem xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx xxxxxxxx xxxxx (4.5) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Po xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx na xxxxx xxxxxx x kultivačním xxxxx, xxx zůstane xxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx přes xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotika xx projeví světlými xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx.
X xxxxxx chromatogramu xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx hodnoty Xx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotik xxxx xxxxxxx xxx. Xxxx hodnoty se xxxxx mírně měnit xxxxx jakosti xxxxxx x xxxx xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (XX) |
0,40 |
|
Xxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "xxx" xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx sloučenin.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX
X. DIFÚZÍ XX AGARU
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx, koncentrátech x premixech. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Xxxxxx xxxxx xxx 5 xxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Princip
U xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx než 50 xxx se xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx formamidem. X xxxxxx vyšších xxx 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx CTC x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x XX.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxx antibiotická xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxxx XXX, XXX xxxx XX na xxxxxxxx xxxxx naočkovaném X. xxxxxx. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: X. cereus XXXX x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx kulturu v xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 dní xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx zkumavky xx šikmým xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx solného xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx baňky obsahující 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 až 30 °X, poté xxxx spóry 15 xx xxxxxxxx (4.6) xxxx, xx byla xxxxxxxxxxxxx ověřena sporulace, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxx skladovat xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x bazálním xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxxxx množství očkovací xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotiky xxxxxxxx xxxxx, ale ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,2 x 0,3 ml na 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx stanovení [2]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 ml |
|
Fosfátový xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx kyseliny xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx pufr, pH 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Fosfátový xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, pH 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.5 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx na pH 4,5 za xxxxxxx xxxxxxxx sírové xxx 2 N.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 objemově.
4.11 Xxxxxxxxxx látky: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x za použití xxxxxxxx chlorovodíkové (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μg chlortetracyklinu-HCL xx 1 ml. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx 0,01 % černě xxxxx [3].
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx roztoku, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml, xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 připravit xx xxxxxxx zásobního xxxxxxx, jehož koncentrace xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx, xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 1,0 μg tetracyklinu-HCL xx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Obsahy xxxxx xxxx nižní xxx 50 ppm
Do xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx formamid (4.8) x množstvích xxxxxxxxx x tabulce. Xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3) xxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxx získat xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxx překročit 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x cílem xxxxxx xxxx roztok. Xxxx připravit koncentrace X4, X2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x ppm |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Zkušební vzorek x g |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
ml formamidu (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx fosfátového xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
xxx. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
řeď. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx X8 v μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Obsahy xxxxx xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxxxxxxx obsahu antibiotika xx vzorku nebo xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx 2 xx 10 x 20xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx (4.9). Protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xX xxxxx xxx 3; pokud xx xx xxxxx, xxxxxxx xX xx 3 (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 10 % kyseliny xxxxxx). Odebrat xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx pH xx 5,5 xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 8,0 (4.4), za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxx xx xx xxxxx xx modrou). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 5,5, zředěného 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx koncentraci X8 (xxx 6.1).
Poté připravit xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx xx uvedeno x bodě 6.2.1 xxx, xx xx xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx spór (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x miskách xx xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, S1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, U4,U2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x agarovém xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.1), xxxxx se xx xxxxxx pro xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných desek x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx nebo plastovým xxxxxxxx o průměru 200 mm x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x závislosti xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxx xxxxxxxxx zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo k xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx této rovnice:
(U1 + X2 + X4 + U8 - S1 -S2 -X4 -X8) · 0,602 / U4 + X8 + X4 + X8 - U1 -X2 -X1 -X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x tetracyklin (XX) xxx koncentracích vyšších xxx 1 x/xx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx vzniknout xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx než xxxxxx na agaru.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a pro xxxxxxxxx xxxxxx XXX x XX směsí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx světelné xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média, xxxxx bylo naočkováno Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx závisí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx aureus X 14 [6]
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Staphylococcus xxxxxx do xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx z kultivačního xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx se přidá 1,5 až 3 % xxxxx (podle xxxxxxx). Xxxxxxxxx přes xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx šikmý xxxx. Zároveň připravit xxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
24 xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx subkulturou x xxxxxxxxx přes noc xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx kulturu xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx v asi 2 xx bazálního xxxxx (4.1) a xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx podmínek xx asi 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat xx xxxxx xxxxx xxx 37 °X xxxxx xxxx kmene xxxxxxxxx logaritmické xxxx (1x30 xx 2x).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx stanovení [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda ad |
1000 xx |
|
xX po xxxxxxxxxxx: 6,8 až 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.4 Xxxx čistého xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 objemově.
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (m/V) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Standardní látky: XXX, OTC, TC, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx v chlorovodíku.
5. Xxxxxxxxxx roztok
Na xxxxxxx xxxxxxxxxx látky (4.7) x xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (4.3) xxxxxxxxx zásobní roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 až 500 μx XXX-XXX, XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Tento xxxxxx xx skladuje x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 200 nebo 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx směsi (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Doplnit po xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx sérií x xxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) a xxxxxxx (6) fosfátovým xxxxxx, pH 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx xxxxx koncentrací. Xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, ne xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx dvou xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx kmene, které xx mohou xxxxx xxxxxxxxx od laboratoře. Xxxxxx xx postupuje xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx XXX-XXX xx 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx ředění xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx extrakt (6.1) za použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,12 μx CTC-HCL. Xxx 1 ml xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) xx dvou xxxxxx zkumavek. Doplnit xxxxx dvou xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.1.2 Oxytetracyklin a xxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní roztok (5) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,6 μg XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 7 ředění, xxxxx ředění xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx extrakt (6.2) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,48 μx OTC-HCL nebo XX-XXX na 1 xx. Xxx 1 xx tohoto roztoku xx dvou zkumavek x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx dvou jiných xxxxxxxx. Xxxxxxx objem xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx na xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x 5 cm xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 cm xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx xxxxx xxxxxxxx (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx musí xxx provedeno v xxxxxx, xxx xxxxxxxx xx sterilním xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx musí xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, jejíž teplota xx xxxxxxxx udržuje xx 37 °X + 0,1 °C. Xxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx (xxxxxx 2x30 xx 3x). Xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx roztoku xxxxxxxxxxxx (4.6) xx xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx xxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxxx při 590 xx, přičemž fotometr xx xxxxxxx na 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx nejvyššímu xxxxxx xxxxxxxxxxx). Z důvodu xxxxxx rozdílů x xxxxxxxx různých xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx použít xxxxxxx 2 cm x xxxxxx 5 xx xxxxxx.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx křivce xxxxxxx propustnosti extraktu. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxx překročit 10 % relativní xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech, x xx xxxxxxx x přítomnosti tetracyklinů. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Princip
Vzorek se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se stanoví xxxxxxx difúze xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx B. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx přítomnosti mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx, X 250 XX [8] (xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. cereus xx xxxxxxxx se xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) a přidat 100 μx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 ml. Xxxxxxxxx přes noc xxx asi 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx suspenze xxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx asi 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx do Rouxovy xxxxx obsahující 300 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), jehož koncentrace xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 až 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx byla xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx v xxxxxxxxxx skladovat nejméně 5 měsíců.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.2) určit xxxxxxxx očkovací látky, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx oleandomycinu největší xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx zóny. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,1 a 0,2 ml xx 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Glukosa |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
|
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 6,5. |
4.2 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [10]
Médium (4.1) xxxxxxxx xx xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (X/X) ethanol.
4.5 Xxxxx methanol
4.6 0,5 % (x/X) xxxxxx xxxx (hydroxymethyl) xxxxxxxxxxx x.x.
4.7 Xxxxxxxxx roztok
|
Čistý xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 x |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 μg/ml.
Na xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (4.6) standardní xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Poté připravit xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx ve xxxxxx přidat xx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx 2 xx 10 x 100 xx xxxxxxx (4.7) x protřepávat 30 xxxxx třepačkou.
Odstředit, xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,1 μg xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 a X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X suspenzí xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) a xxxx xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, U1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx koncentrace standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x takové xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx médiu xxxxxxx 8 děr x xxxxxxx 10 až 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx má xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxx hliníkovým nebo xxxxxxxxx kroužkem x xxxxxxx 200 xx x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 a 0,15 xx, x závislosti xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxxx 18 xxxxx asi xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx semilogaritmický papír xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x interferenci, xxx xxxxxx budou paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 - X1 - X2 - X4 - S8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- xxxxxx na xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x krmivech, koncentrátech x premixech. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se ošetří xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x pH 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx vytvořením xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx zón xx xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxx xx šikmým agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx pH 7,0. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx asi 35 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx měsíc xx xxxxx agar.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx zkumavky xx šikmým xxxxxx (3.1) za xxxxxxx 2 xx 3 xx fyziologického roztoku (4.4). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), xxxxxxx xx xX 7,0. Inkubovat 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.4). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x chladničce, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx s xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx xxx použité koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx ještě zřetelné xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx stanovení [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xx xxxxxx xxxxxxxxx rodičovského xxxxx x přípravy xxxxxxxxxxx suspenze upravit xX xx7,0 a xx xxxxxx xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 7
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda ad |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx.
4.6 40 % (V/V) xxxxxxxx.
4.7 Xxxx fosfátového xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Standardní xxxxx: xxxxxxx x xxxxx aktivitě.
5. Standardní xxxxxxx
Xxxxx standardní xxxxx (4.8) 3 hodiny xxx 60 °X xx xxxxxxx xxxxxxx (5 xx rtuti). Xxxxxxx 10 xx 50 xx do xxxxxxx baňky, xxxxxxxxx x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 7 (4.3) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx základního xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx tohoto zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx rozředěním xxxxx (4.7) standardní xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxx na 1 xx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx směsi (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Extrakce
Pro xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x zkušebního xxxxxx; xxx premixy x xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx na 80 °X, x homogenizovat 2 xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx (4.7) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, U2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.7).
Xxx obsahy xxxxx xxx 10 ppm xxxxxxx xxxxxxx do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 35 °X x rozpustit xxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) upravené xx xX 8 xxx 48 až 50 °X xxxxxxxx bakterií (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx použití xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx koncentrace standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx médiu xxxxxxx 8 děr o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx očkovaného xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx o xxxxxxxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných xxxxx x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm x x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx odměřená množství xxxxxxx antibiotika xxxx 0,10 a 0,15 xx, v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx 35 xx 37 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Zaznamenat xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zanesením logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx relativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx rovnice:
(U1 + X2 + X4 + X8 - X1 - X2 - S4 -X8) · 0,602 / X4 + U8 + S4 + X8 - U1 - U2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
5. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx na xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Xxxxx 80". Xx odstředění xxxx xxxxxxxx se xxxxxxx zředí a xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx vytvořením xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón je xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1). Inkubovat xxxx xxx xxx xxx 35 °C. Skladovat xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx bakterie xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat 24 xxxxx při 35 °X, poté xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Homogenizovat x zředit xxxx xxxxxxxx x cílem xxxxxx asi 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 nm. Xxxxx xx tato xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx zřetelné inhibiční xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Kultivační xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 6
|
Dihydrogenfosforečnan draselný XX2XX4 x.x. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx fyziologický roztok.
4.4 Xxxxx methanol.
4.5 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/čistý xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Xxxxx 80" (x/X).
4.7 Standardní látka: xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xx xxxxxxx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx připravit xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx pracovní roztok X8 xxxxxxxxxx 1 μx virginiamycinu xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1+) xx xxxxxxx xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Výrobky x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo nižším xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) a xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxxxxx 20 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Rozpustit reziduum xx 20 xx xxxx xxxx směsi (4.5) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 1 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x U1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx x obsahu xxxxxxxxxxxxxx vyšším xxx 50 ppm
Odebrat 1 xx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 ml xxxxxxx (4.6) a protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxx (4.5) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 1 μg virginiamycinu xx 1 ml (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 a X1, xxx xx uvedeno x bodě 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) xxx 48 xx 50 °C xxxxxxxx bakterií (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx provádí x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4, X2, X1).Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat misky x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx o průměru 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx asi 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx plastovým xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx difúzi xxxxxxx čtyřikrát s xxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxx 35 xx 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit průměr xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 -X1 - X2 - X4 - S8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % relativní xxxxxxx.
[1] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] Xxxx amido slouží x xxxxxxxx inhibičních xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxx).
[6] Tento xxxx xxxxxxxxx v Xxxxx podle XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx růst xxx X. xxxxxx XXXX 6538 X.
[7] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Xxxx izolovaný x Kielu xxxxx XXXX.
[9] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx a dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné výsledky.
[11] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[12] Může xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.