Třetí Směrnice Komise
ze xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední kontrolu xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx a analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv [1], a xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx směrnice;
vzhledem x xxxx, že xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx je xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisy x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x složení xxxxx, xx provádějí podle xxxxx xxxxxx vzorků x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx směrnice Xxxxxx x. 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxx 1971 [2] x 71/393/XXX xx dne 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx třetí xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx opatření xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého výboru xxx krmiva,
PŘIJALA TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x o xxxxxxxx xxxxxxx, se xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze I xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení xxxxxxx x xxxxx 1 (úvod) přílohy xxxxx směrnice Komise x. 71/250/XXX xx xxx 15. června 1971, xxxxxx xx xxxxxxx analytické xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx krmiv, xx xxxxxxx xxx metody xxxxxxx x xxxxxxx X xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
Členské státy xxxxxxx, že analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, pokud jde x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx tetracyklinových xxxxxxxxxx, xxxxx x o xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx II xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení xxxxxxx v xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxx 1971, s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, se xxxxxxx xxx xxxxxx popsané x xxxxxxx II xxxx směrnice.
Článek 3
Členské státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1973. Xxxxxxxxxx o xxxx informují Xxxxxx.
Xxxxxx 4
Tato směrnice xx xxxxxx členským xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 27. xxxxx 1972.
Xx Xxxxxx
xxxxxxxx
X. L. Xxxxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX I
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx hmotnosti xxxxxx x xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx, xxxxxx řepné skrojky xxxx listy, bramborovou xxxxx, xxxxxx kvasnice, xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx (např. řízky x moučka z xxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx prvním xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx optická xxxxxx xxxxxxx.
Xxx druhém stanovení xx vzorek extrahuje 40 % xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou, xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx stejných xxxxxxxx xxxx při prvním xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx dvěma xxxxxxxx vynásobený xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx ve vzorku.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx chlorovodíková, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) kyselina xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx titrací xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X x xx přítomnosti 0,1 % (m/V) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (X/X) ethanolu. 10 xx = 30,94 xx 0,1 X XxXX.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxx I: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x xxxxxx xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx vodou xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx XX: xxxxxxxxx ve vodě 10,6 g hexakyanoželeznatanu xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Doplnit xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, x: 0,948 při 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 ml x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx chladičem.
4.2 Polarimetr xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxx sítem x xxxxxxxx oky x průměru 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx celkové xxxxxxx xxxxxx (P xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Navážit 2,5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx a xxx xx xx odměrné xxxxx x xxxxxx 100 xx. Xxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx xx zkušební xxxxxx dobře xxxxxxxxx x xxxxxx dalších 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxx a xx dobu prvních xxx xxxxx silně x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxx xxxxxx. Množství xxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, aby i xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxx varu. Xxxxx xxxxx xxx vyjmuta x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx vyjmout xxxxx x lázně, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx a xxxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Carrezova xxxxxxx X (3.3) x xxxxx xxxxxx protřepávat. Xxxx xxxxxx 5 xx Carrezova xxxxxxx XX (3.4) a xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, homogenizovat x xxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxx xx xxxxxx), opakovat xxxxxxxxx xx použití xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X x XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx polarimetrem nebo xxxxxxxxxxxxx optickou xxxxxx xxxxxxx x 200 xx xxxxxxx.
5.3 Stanovení xxxxxxx xxxxxx (X’ xxxx X’) látek xxxxxxxxxxx xx 4 % ethanolu
Navážit 5 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx, xxx xx xx odměrné baňky x objemu 100 xx x přidat xxx 80 ml xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx baňku stát xxxxx hodinu při xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx silně xxxxxxxxx, xxx xx zkušební xxxxxx dobře xxxxxxx x xxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxx (3.5), homogenizovat x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x silně xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx Erlenmeyerovu xxxxx zpětný chladič x xxxxxxx xx xx xxxxxx xxxxx xxxxx. Přesně xx 15 xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx lázně, xxxxxx xxxx obsah xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx, xxxxxxxxxxx chladnější xxxxx x xxxx xxxxxxxx xx 20 °C.
Poté xxxxxxx xx použití Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) x II (3.4), xxxxxxx po xxxxx vodou, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxx 5.2 xxxxxx x xxxxxx odstavci.
6. Xxxxxxx výsledků
Obsah xxxxxx (%) xx xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Xxxxxx polarimetrem
procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - X’) / [α]X20°
xxx xx:
X = xxxxxxx optická xxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx.
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx xxxxx
+ 195,4°: bramborový xxxxx
+ 184,6°: kukuřičný škrob
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: xxxxx xxxxx
+ 181,3°: xxxxxx škrob
+ 184,0°: ostatní druhy xxxxxx x směsi xxxxxx x krmných xxxxxxx
6.2 Xxxxxx sacharimetrem
Procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]D20° · (2 X · 0,665) (S - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = celková xxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx sacharimetru
S’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx ve 100 xx xxxx, xxxxx xx xxx tloušťce 200 mm xxxxxxxx xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx mění podle xxxxxxxxxxxx:
16,29 g pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 x xxx německé sacharimetry
20,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = specifická xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 0,4 absolutní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx než 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx vyššího xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, uhličitany xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx rotace zničeny xx xxxxxxx příslušného xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 X případě xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx laktózy, xxxx xx xxxxxx mléčné xxxxx xxxx sušené xxxxxxxxxx xxxxx, postupovat xx přidání 80 xx ethanolu (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx baňku zpětný xxxxxxx, xxxxxxx xx xx 30 minut xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 50 °X. Xxxxxx vychladnout x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x bodě 5.3.
2. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx alkalizuje xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx v odměřeném xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Katalyzátor: xxxx měďnatý XxX x.x. xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx XxXX4 · 5X2X x.x., xxxx rtuť xxxx xxxx rtuťnatý XxX x.x.
3.3 Granulovaný xxxxx x.x.
3.4 Xxxxxxxx sírová x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxx 0,5 N.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxxx xx 100 xx 95-96 % (V/V) ethanolu.
3.8 40 % (m/V) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 N.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,25 X.
3.11 Nasycený xxxxxx xxxxxx sodného p.a.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxxx sodného, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Granulovaná xxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a zpopelněná.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx a destilační xxxxxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx ho xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx aparatury. Xxxxxx 10 x xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 až 0,4 g oxidu xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 g xxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx nebo 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx sírové (3.4) x xxxxxxx granulí xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx xxxxx. Zahřívat xxxxx, nejprve xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxx; poté xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx nevře. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx baňky x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xx xxxxxx xxxx a xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx katalyzátor xx bázi mědi), xxxxxxxx var xxxxx xxxxx hodinu, xxxx xxxxxx vychladnout.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, aby se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx; xxxxxx xxxxxxxxxxx; xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.3).
Přidat do xxxxxx xxxxx destilační xxxxxxxxx xxxxxx odměřené xxxxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,5 X (3.6) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx dusíku (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx xxxxxxx xxxxx indikátoru xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx baňku xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 1 xx (viz xxxxxxxx 7.3). Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 100 ml 40 % xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.8). Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxx do xxxxx rovněž buď 10 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx takovým xxxxxxxx, aby xx xx 30 minut xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxxxx xX výsledného xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx je xxxxxx alkalická, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Ukončit xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx čas xx času xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx baňky x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx ke xxxxxxxx do žluta, xxxxx přidat přesně xxxxxxxx množství kyseliny xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx xxxxx titrovat xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx sírové, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx světle žlutou.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxxx pokus (xxxxxxxxx a xxxxxxx), x to xxx xxxxxx, který xx xxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxxxxx správnosti xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (mineralizace, xxxxxxxxx x titrace) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx p.a. (b.t. 114 °X; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx bez xxxxxx; 1 x acetanilidu xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Xxxxxxx výsledků
Stanovit xxxxxxxx spotřebované xxxxxxxx xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X odpovídá 1,4 xx dusíku. Xxxxxxxxx xxxxxxxx dusíku faktorem 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku.
Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx hodnoty pro xxxxx xxxxx než 20 % a xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. V xxxxxxx případě xx xxxxxxx xxxx provést xxxx xxxxx.
7.2 X xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx dusíku xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N, xxxxx xx být xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx baňky, snížen xx 10 až 15 xx x xxxxxxx vodou xx 25 xx.
7.3 Pokud xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx hydroxid xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx baňky na xxxxxxx x pomalu xxxxx kapalinu xx xxxxxxx xxxxx tak, xxx xx xxxxxxxxxx x roztokem kyseliny.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx.
2. Princip
Vzorek se xxxxxxxx 48 hodin xxx 40 °C xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Suspenze xx filtruje x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx hrubých proteinů.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,075 N.
3.3 2,0 x/xx xxxxxxx; xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 4 této xxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxx metodou.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pepsinu x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxx 3 xxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Vodní xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx metody.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx odměrné xxxxx o xxxxxx 500 ml. Přidat 450 ml xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 40 °C. Xxxxxxxxx, aby se xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx. Xxxxxx, že je xX suspenze nižší xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx (4.1) x nechat xx tam 48 xxxxx. Protřepat xx 8, 24 x 32 xxxxxxxx. Po 48 xxxxxxxx přidat 15 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxx xx 20 °C, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx x filtrovat.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 ml xxxxxxxx s přesností xx 1 xx x xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx hrubých xxxxxxxx, xx druhé xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xx xxxx. Pokud xx xxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx x silném xxxx, xxxxx se xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Snížit xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx.
Xxxx xx roztok xxxx x xxxxxxxx (světlezelený, xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx další xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Destilace x titrace
Postupovat, jak xx uvedeno x xxxxxx pro stanovení xxxxxxx proteinů v xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxxxxxx xxxxx pokus za xxxxxxx xxxxxxxx postupu, xxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Odečíst xxxxx kyseliny sírové xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorkem. 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 mg xxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx dusíku xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx:
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 20 % a xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Hodnoty xxxxxxx xxxxx metodou nemají xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx.
7.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 10 % musí xxx xxxxxxxxx extrakcí xxxxxxxxxxxx (b.v. 40 xx 60 °C).
4. XXXXXXXXX AKTIVITY XXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pepsinu xxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxx rozpustných pepsinem x xxxxxxxxx chlorovodíkovou.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v prostředí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Nehydrolyzovaná xxxxxx proteinů xx xxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx sodný x činidlo Folin-Ciocalteu. Xxxxxxx hustota tohoto xxxxxxx se xxxx xxx 750 xx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, které za xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx hydroxyarylových xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx činidlem Xxxxx-Xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx odpovídající optické xxxxxxx xxxxxxx μmolu xxxxxxxx zbarveného xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,025 X.
3.4 5 % xxxxxx (x/X) xxxxxxxx trichloroctové.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxx 100 x xxxxxxxxxx sodného (Xx2XX4 · 2X2X), 25 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 ml xxxx xx dvoulitrové xxxxx s kulatým xxxx a xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx xxxxxxxx fosforečné (x: 1,71) x 100 xx koncentrované xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19), xxxxxxxx baňku xx zpětný xxxxxxx, xxxxx xx xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x mírném xxxx xx xxxx 10 xxxxx. Nechat xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxx 175 x xxxxxx xxxxxxxx (Xx2XX4 · 2H2O), 50 xx xxxx a 1 xx brómu. Xxxxx po dobu 15 xxxxx, aby xx xxxxxxxxx přebytek xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx do xxxxxxx xxxxx o objemu 1 x, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx zůstat nazelenalé xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx množství xxxxxxxxxxx, xxx 2 g xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx metody xxxxxxxxxxxxxx 354 xx xxxxxx [1] a xxx xx xxxxx x xxxxxx 200 ml x xxxxxxxxxxxxxx zábrusem. Xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx xxxxx s xxxxxxxx pumpou x xxxxxxxxxxx, dokud xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx vakuum x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkovou (3.2) xx xx 100 xx. Xxxxxxxxx bezprostředně xxxx použitím.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx tyrosinu: xxxxxxxxx 181,2 mg xxxxxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) x xxxxxxx xx jednoho xxxxx xxxxxxx kyselinou (zásobní xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx tohoto xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Vodní xxxxx xxxxxxxxx ultratermostatem xx 25 °X + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Stopky, xxxxxxxx: 1 xxxxxxx.
4.4 xX xxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx poznámky 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxx ve 100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx a xxx xx xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 50 xx x doplnit xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). xX kontrolované xX xxxxxx xxxx xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx tam x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx konci. Nechat xxxxxxxx xx vodní xxxxx xxx 25 °X xxxxxx xx xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (doba x xxxxxxx musí xxx xxxxxx xxxxxxxx). Xxxx přidat 10,0 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx a filtrovat xxxx xxxxx filtr.
5.3 Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxx, xxx xx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxx činidla Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 až 10 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx spektrofotometrem xxx 750 xx x xxxxxxxx o xxxxxxxx 1 xx x porovnání x xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxx trichloroctové (3.4) xxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x xxxx přidat 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx přesně 10 xxxxx ve xxxxx lázni (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx x filtrovat xxxx suchý xxxxx. Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx křivka
Do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, x 5,0 xx alikvotního xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx, xxxxx odpovídá 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μmolu xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx je uvedeno x xxxxxxxx větě xxxx 5.3. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx křivku xxxxxxxx xxxxxxxxx hustot proti xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx x kalibrační xxxxxx xxxxxxxx tyrosinu x μmolech, které xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx pepsinu x μxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx x xx jednu xxxxxx xxx 25 °X xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx xx xx (x/xx) = 0,32 a / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxx xxxxxxxx x kalibrační xxxxxx;
x = množství xxxxxxx x xx xxxxxxx podle bodu 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Množství xxxxxxx, xxxxx xx xxx rozpuštěno, musí xxx xxxxxx, aby xxxx xxx konečném xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Dvě xxxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx metodou xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx tyrosinu/mg xxx. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 komerčních jednotek/g (μxxxx xxxxxxxx/x za 10 xxx. xxx 35,5 °X).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX X CELKOVÉHO XXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx gossypolu x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx mouce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxx směsích, xxxxx xxxx látky xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xx 20 xxx.
2. Princip
Gossypol xx extrahován xx xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, x xx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx je xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx hustota xx xxxxxx xxx 440 xx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx: xxxxxxx 60 objemových xxxxx xxxxxxxxxxxx x.x. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx n-hexanu.
3.2 Xxxxxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1 x xxxxx xxx 500 xx xxxxx isopropanolu a xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx xxxxxx kyseliny xxxxxx x 50 xx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx X: xxxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 xx 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx x 10 xx ledové xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou teplotu x xxxxxxx po xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Trvanlivost xxxxxx činidla xx xxxxx xxxxx.
3.4 Xxxxxx x.x.: xxxxx optická xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, destilovat xxxxxx přes zinkový xxxxx x vyloučením xxxxxxx a posledních xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx skla.
3.5 Xxxxxxxxxx roztok gossypolu X: do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx xxx 27,9 mg xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2). Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x objemu 250 xx 50 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,02 xx/xx. Před xxxxxxxx xxxxxx stát xx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Standardní roztok xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x doplnit xx xxxxx rozpouštědlem X (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,5 xx/xx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X x X xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxx trvanlivost xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Mixér (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Zkušební xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx gossypolu ve xxxxxx. Je xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx zkušebního vzorku x relativně xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxxxxxx vzorek neměl xxxxxxxxx 1 g; xxx krmné směsi xx xxxx být 5 x. Ve xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx část 10 ml xxxxxxxx; xxxx by obsahovat 50 až 100 μx gossypolu. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx zkušebního xxxxxx xxxx xxx xxxx 0,5 x 5 x, aby xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 40 xx 200 μx gossypolu.
Analýza by xx měla provádět xxx pokojové teplotě xxxxx 20 °C.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx vzorek do xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx hrdlem x xxxxxx 250 xx, xxxxx xxx je xxxxxxx skleněnými xxxxxx. Xxxxxx pipety xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), zazátkovat xxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxx. Xxxxxxxxx přes xxxxx filtr a xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx hodinovým xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x X) o xxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx rozpouštědlem A (3.2) na 10 xx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro měření xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx přidat 10 ml rozpouštědla X (3.2) do xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x X) o xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xx rysku xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro měření xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) do xxxxx (X) x (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx na pokojovou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx při 440 xx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx (X) xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x optickou hustotu xxxxxxx vzorku (X) xxxxxxxxxx x referenčním xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx pokus xx xxxxxxx hustoty xxxxxxx xxxxxx (= upravená xxxxxxx xxxxxxx). X xxxx xxxxxxx vypočítat xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodě 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx vzorek obsahující 1 xx 5 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml x přidat 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx připravit xxxxx xxxxx a xxx 10 ml xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx xxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml. Zahřívat xxx xxxxx 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx obě baňky xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx 10 xx 15 xxxxx, xxxx filtrovat x zachytit filtráty x xxxxx xx xxxxxxxxxx hrdlem.
Pomocí pipety xxxxxx 2 ml xxxxxxxx ze vzorku xx dvou xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 xx x 2 xx filtrátu xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx odměrných xxxxx o xxxxxx 25 xx. Doplnit xx 25 xx xxxxx jedné xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx referenční roztoky.
Přidat 2 ml xxxxxxx (3.4) do xxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), homogenizovat x nechat xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx xx uvedeno x xxxx 5.2. X této xxxxxxx xxxxxxxxx obsah celkového xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v bodě 6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx buď xx xxxxxxx specifické xxxxxxx xxxxxxx (6.1), nebo xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Na xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx
Xx stanovených podmínek xx specifická optická xxxxxxx xxxx:
xxxxx xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
celkový xxxxxxxx: X 1% / 1xx = 600
Xxxxx volného xxxx xxxxxxx xxxxx gossypolu xx xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1&xxxx;250 / E1%1cm ·&xxxx; · x · x
xxx:
X = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx je xxxxxxx x xxxx 5.2
p = zkušební vzorek x g
a = xxxxxxxxx část xxxxxxxx x ml
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
6.2.1 Xxxxx gossypol
Připravit xxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 xx. X xxxxx xxxxx xxxxxx pipetou 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) xx 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, včetně slepého xxxxxx, xxxxx isopropanolu x hexanu (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx každé xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx po xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat stát xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x bodě 5.2 xxxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx referenční xxxxx. Načrtnout kalibrační xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.2.2 Xxxxxxx gossypol
Připravit 6 odměrných xxxxx x objemu 50 xx. Xx xxxxx xxxxx přidat pipetou 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) a xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx roztoku gossypolu X (3.6). Doplnit xxxxx xxxxx xxxxx xx 10 ml xxxxxxxxxxxxx B (3.3). Xxxxxxxx 30 minut xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Zchladit na xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a hexanu x promíchat.
Přidat pipetou 2 xx xxxxxx xxxxxxx xx dvou xxxxx x 6 xxxxxxxxx baňkách x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xx 25 xx xxxxx x xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1) (referenční xxxxx).
Xxxxxx do každé xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx jednu xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xx xxxxxxxx uvedených x xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx standardní xxxxx xxxxxxx porovnáním x odpovídajícími xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx křivku xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hustoty xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit:
- 15 % relativní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xx 500 xx 750 ppm,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx obsah xxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (teoretický xxxxx: 17,7 % xxxxxx).
PŘÍLOHA II
1. STANOVENÍ X XXXXXXXXXXXX TETRACYKLINOVÝCH XXXXXXXXXX
1. Účel a xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx antibiotika v xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx x premixech.
2. Princip
Vzorek xx extrahuje směsí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx sestupné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx porovnáním xxxxxx xxxxxx Xx x xxxxxxxxx standardních xxxxx, a to xxx fluorescencí x XX xxxxxx (xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx), xxxx xxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx.
3. Činidla
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x.x. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Na2HPO4.2H2O p.a. |
7,45 x |
|
Xxxxxx p.a. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx X: xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx XX směs xxxxxxx nitromethanu/čistého xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx methanolu/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 objemově.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, d: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx, jejichž xxxxxxxx je vyjádřena x xxxxxxxxxxxx.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus XXXX x. 11778
Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xx xxxxxx podle xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx na agaru, xxx xx xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx přílohy.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 g |
|
Masový extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx chloridu x 5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx papírovou xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxx 25 xx). Xxxxxxxx a Xxxxxxx xxxxx (2440X xxxx 2043X) nebo xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 UV xxxxx xxx stanovení fluorescence.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx asi 20 x 30 xx pro bioautografii.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Zásobní xxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) x xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx stanovení XX xxxxxxx
Xxxxxx roztoky (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.3 Referenční xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) fosfátovým xxxxxx (3.2) s xxxxx xxxxxx roztoky, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μx chlortetracyklinu-HCL, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx antibiotika nižší xxx 10 xxx, xx xxxxx xxxxxx xxx homogenizovaný xxxxxx, xxxx nejjemnější frakci xxxxxxxxx proséváním, xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx ho xxxxx xxxx ho xxxxxxxx zředit směsí (3.5) s xxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxx 100 μg xx 1 ml (6.1) x 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Stanovení x identifikace
7.1 Chromatografie
Ponořit xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx, pH 3,5 (3.1). Odstranit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx papíru xxxx xxxxx suchého xxxxxxxxxxx papíru. Xxxx xxxxxxx na papír 0,01 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) a xxxxxxxx (6.1 x 6.2). Xxx xxxxx oddělení xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx; xxxxx xx to xxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Použít xxxxxx X (3.3) xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx XX (3.4) xxx xxxxxxxxx XX světlem. Xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 15 až 20 cm (xxx 1 xxxxxx 30 xxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxx xx obsah xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 1 μx/xx2, je xxxxx xx xxxxxxxx chromatogramu xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx ozářením pod XX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx xxxxxxxx xxxxx (4.5) a položit xxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxx kontaktu xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx na jinou xxxxxx x kultivačním xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx tetracyklinového antibiotika xx projeví xxxxxxxx xxxxxxxxxxx zónami x xxxxxx kultivačním xxxxx.
X xxxxxx chromatogramu xx xx inkubaci odpaří xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx hodnoty Xx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotik xxxx xxxxxxx zde. Xxxx hodnoty xx xxxxx mírně xxxxx xxxxx jakosti xxxxxx x xxxx xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (XX) |
0,40 |
|
Xxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "epi" sloučenin xx xxxxx xxx xxxxxxxx normálních xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX
X. DIFÚZÍ XX XXXXX
1. Účel x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), oxytetracyklin (OTC) x xxxxxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx, koncentrátech x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxx je 5 xxx. Obsahy xxxxx xxx 5 xxx xxxxx být xxxxxx xxxxxxxxx interpolací.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx rovných xxxx xxxxxxx než 50 xxx xx vzorek xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxx vyšších xxx 50 ppm xx xxxxxx extrahuje xxxxx acetonu, xxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx CTC x směsí xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x XX.
Xxxxxxxx se xxxx xxxxx x xxxxxx antibiotická xxxxxxxx xx stanoví měřením xxxxxx XXX, XXX xxxx TC xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. cereus. Difúze xx projeví vytvořením xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx zón je xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus XXXX x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx borité. Xxxxxxxxx xxxx xxx při xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x přeočkovat xxxxxxx 14 xxx xx šikmý xxxx.
3.2 Xxxxxxxx suspenze xxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx šikmým agarem (3.1) xx použití 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx baňky obsahující 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx je 3 až 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 dní xxx 28 xx 30 °X, poté xxxx spóry 15 xx ethanolu (4.6) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x homogenizovat. Xxxx xxxxxxxx se xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 měsíců.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx x bazálním médiem xxx stanovení (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx je xxxxxxx 0,2 x 0,3 ml na 1000 xx. Očkování xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx xxx 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx média a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Kvasnicový extrakt |
3 x |
|
Xxxx, podle jakosti |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 xx |
|
Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx modře |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný KH2PO4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Na2HPO4 · 2X2X x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.5 Sterilní fyziologický xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.8 70 % (V/V) xxxxxxxx: připravit xxxxxxx xxxx použitím x xxxxxxx xx xX 4,5 za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx 2 N.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx látky: XXX, XXX, XX, jejichž xxxxxxxx xx vyjádřena x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx látek (4.11) x xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx roztok, xxxxx koncentrace odpovídá 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 ml. Xxxxxxx xx xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx 0,01 % černě xxxxx [3].
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Oxytetracyklin
Postupem xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxx roztoku, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok S8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx x tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 obsahující 1,0 μx tetracyklinu-HCL xx 1 xx x xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,5 |
μg/ml |
|
S2 |
0,25 |
μg/ml |
|
S1 |
0,125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx rovné xxxx nižní než 50 xxx
Xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (4.8) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3) podle xxxxxx x tabulce s xxxxx xxxxxx koncentraci X8. Koncentrace xxxxxxxxx x xxxxx roztoku xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx dekantovat xxxxxxx x xxxxx xxxxxx čirý roztok. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, U2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx použití fosfátového xxxxx (4.3).
|
Antibiotikum |
CTC |
OTC |
TC |
|||
|
Předpokládaný obsah x xxx |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Xxxxxxxx xxxxxx x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
xxx. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx X8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 ppm
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X závislosti na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx nebo xx xxxx výrobní xxxxxx přidat xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 xx 10 g 20xx xxxxxxx xxxx objemu xxxxx (4.9). Protřepávat 30 minut třepačkou. Xxxxx xxxxxxxx musí xxxxxx xX xxxxx xxx 3; pokud xx xx nutné, xxxxxxx xX xx 3 (u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Odebrat alikvotní xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xX na 5,5 za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx bromkresolové zeleně (xxxxxx se ze xxxxx na modrou). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, zředěného 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8 (xxx 6.1).
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx je uvedeno x bodě 6.2.1 xxx, že xx xxxx (4.9) nahradí xxxxx (4.10).
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °C xxxxxxxx spór (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx na xxxxx se xxxxxxx x miskách xx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, U4,U2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx misky x takové velikosti, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx pro xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx asi 2 mm. Upřednostňuje xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x průměru 200 xx a xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx xxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx čtyřikrát x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 hodin xxx při 28 xx 30 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxxxxxxx, obě křivky xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se vypočítá xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 -X2 -X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + S8 - U1 -U2 -X1 -S2
Skutečná xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (OTC) x tetracyklin (XX) xxx xxxxxxxxxxxxx vyšších xxx 1 x/xx, xxxxx nezasahuje xxxxx xxxxx, která by xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx než xxxxxx xx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx stanovení xxxxxx XXX xx xxxxxx xxxxxxxx směsí xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx obsahu XXX x XX xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx poté xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultivačního xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx kterého xxxx xxxxxxx antibiotikum. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx aureus X 14 [6]
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Staphylococcus xxxxxx do zkumavky x šikmým xxxxxx xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx xx xxxxx 1,5 až 3 % xxxxx (podle xxxxxxx). Inkubovat přes xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx na xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro laboratorní xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
24 xxxxx před xxxxxxxx xxxxxxxxxx šikmý xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx kulturu xxxxxxxxx xx zkumavce xxxxx v xxx 2 ml bazálního xxxxx (4.1) x xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx sterilních xxxxxxxx xx asi 100 xx xxxxxxxx bazálního xxxxx (4.1). Inkubovat xx xxxxx xxxxx xxx 37 °C xxxxx růst xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (1x30 xx 2h).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení [7]
|
Pepton |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
xX po sterilizaci: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.3 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.4 Xxxx xxxxxxx acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Směs xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (x/X) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztok
Na základě xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx zásobní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 xx 500 μx CTC-HCL, XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 ml. Tento xxxxxx xx skladuje x chladničce jeden xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 x zkušebního vzorku. Xxxxxx xxx 100 xx směsi (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx stát.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx sérií x xxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) a xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx série xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxx xx znázorní xxxxxxxxxxx xxxxxxx dvou hodnot xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx mohou lišit xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) fosfátovým xxxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx XXX-XXX xx 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx je uvedeno xxxx a ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Zředit xxxxxxx (6.1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,12 μx XXX-XXX. Xxx 1 xx xxxxxx xxxxxxx do xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) xx xxxx xxxxxx zkumavek. Doplnit xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,6 μg OTC-HCL xxxx TC-HCL na 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxxx určených xxx xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx ředění xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Zředit xxxxxxx (6.2) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX na 1 xx. Dát 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,5 xx (= 0,24 μg) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx objem xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx při 590 xx 85 % xxxxxxxxx propustnost x 5 xx kyvetě xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 cm xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bazálního xxxxx (4.1).
7.3 Očkování
Dát xx xxxxx zkumavky (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx zkumavek musí xxx provedeno v xxxxxx, xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx prostředí.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx musí xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx 37 °C + 0,1 °X. Xxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx propustnosti, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx (xxxxxx 2h30 xx 3x). Xxxx xxxxxxxx xxxxx růstu xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) do xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx růstu
Změřit xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx). X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx doporučuje xxxxxx xxxxxxx 2 xx x xxxxxx 5 xx xxxxxx.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kalibrační křivku xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx antibiotika. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx obsah xxxxxxxxxxx xx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx překročit 10 % relativní xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX OLEANDOMYCINU
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx a rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx, x xx xxxxxxx x přítomnosti xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx zředěným methanolovým xxxxxxxx tris (hydroximethyl) xxxxxxxxxxxx. Po xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zředí x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx těchto xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus, X 250 XX [8] (xxxxxxxxxxx vůči xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. cereus xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxxxx 100 μx oxytetracyklinu xx 5 xx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 30 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx bakterie ze xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx asi 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), jehož koncentrace xxxxx je 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 až 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, xxxx smýt xxxxx 15 ml xxxxxxxx (4.4) poté, xx byla mikroskopicky xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx je xxxxxxx 0,1 x 0,2 xx xx 1000 ml. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Médium xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 ml |
|
Před xxxxxxxx xxxxxxx xX na 6,5. |
4.2 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [10]
Xxxxxx (4.1) upravené xx xX 8,8.
4.3 Sterilní xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 20 % (X/X) ethanol.
4.5 Xxxxx methanol
4.6 0,5 % (x/X) roztok xxxx (xxxxxxxxxxxxx) aminometanu x.x.
4.7 Xxxxxxxxx roztok
|
Čistý xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 x |
4.8 Standardní xxxxx: xxxxxxxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx látku (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x zředit xxxxxxxx (4.6) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx oleandomycinu 100 μx/xx.
Xx základě xxxxxx zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (4.6) standardní xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx předpokládaném xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx 2 až 10 g 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx, odebrat xxxxxxxxx xxxx extraktu x zředit xxxxxxxx (4.6) s xxxxx xxxxxx předpokládanou koncentraci 0,1 μg xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a U1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx roztoku (4.6).
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X suspenzí xxxx (3.2).
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx xx agaru xx xxxxxxx v miskách xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, S4, X2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, U1). Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x tloušťce xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx sestávajících se x xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx antibiotika xxxx 0,10 a 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx průměru xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nejméně čtyřikrát x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx každé stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx během 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx pomocí xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 - S1 - X2 - X4 - S8) · 0,602 / X4 + U8 + S4 + X8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
4. STANOVENÍ XXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx stanovení xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se ošetří xxxxxxxxxx pufračním roztokem x xX 8, xxxxxxxxxxx na 80 °X, a xxxx xx extrahuje methanolem. Xx xxxxxxxxxx se xxxxxxx zředí x xxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx naočkovaném Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx asi 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx každý xxxxx xx šikmý agar.
3.2 Xxxxxxxx bakteriální suspenze
Smýt xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem (3.1) za použití 2 xx 3 xx fyziologického xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx do Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), upravit xx xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx xxxx bakterie xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx s xxxxx získat 75 % xxxxxxxxx propustnost xxx 650 nm.
Pokud xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx týden.
Předběžnými testy xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx xxx použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxx největší možné, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zóny. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 48 xx 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na7,0 a xx xxxxxx stanovení xx 8,0.
4.2 Fosfátový xxxx, xX 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx voda xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Fosfátový pufr, xX 7
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx methanol: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
Xxxxx standardní látku (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °X xx xxxxxxx sušárně (5 xx rtuti). Xxxxxxx 10 xx 50 xx xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx roztok xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 7 (4.3) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx základního xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx připravit xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) standardní xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 1 ml.
Poté připravit xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx; xxx premixy x xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx xxxxxxxxxxx pufru, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, a xxxxxxxxxxxxx 2 xxxxxx (kuchyňský xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 ml xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxxxxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx (4.7) s xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx tylosinu 2 μx/xx (= U8). Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.7).
Xxx xxxxxx nižší xxx 10 xxx xxxxxxx xxxxxxx do xxxxx x rotačním xxxxxxxxxx při 35 °X x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 40 % methanolu (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx na xX 8 xxx 48 xx 50 °X suspenzí bakterií (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx agaru xx xxxxxxx v miskách xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, S4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, U1). Xxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx.
Xx xxxxx účelem xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 děr x xxxxxxx 10 až 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx očkovaného xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx má xxxxxx xxx získání stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx 2 mm. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx odměřená množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx průměru xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx 35 až 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zanesením xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx průměru xxxxxxxxxxx zón. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vypočítá pomocí xxxx rovnice:
(U1 + X2 + X4 + U8 - X1 - X2 - X4 -X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
- difúzí na xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Xxxxx 80". Xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx zředí a xxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx lutea. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx zón je xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem x xxxxxxxxxxxx média (4.1). Inkubovat přes xxx xxx asi 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Naočkovat xxxx xxxxxxxx do Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Homogenizovat x xxxxxx xxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxx 75 % xxxxxxxxx propustnost xxx 650 xx. Xxxxx se xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx trvanlivost xx xxxxx týden.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx x bazálním xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx množství xxxxxxxx xxxxx, které xxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx možné, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx kultivačního xxxxx se xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 až 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx pH xx 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 p.a. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.4 Xxxxx methanol.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % methanolového xxxxxxx "Xxxxx 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx látka: xxxxxxxxxxxxx o známé xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
Připravit xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μx virginiamycinu xx 1 xx. Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx na 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1+) za xxxxxxx xxxxx (4.5) tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Extrakce
6.1 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx nižším xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Odstředit xxxx xxxxxxxxx, odebrat 20 xx čirého xxxxxxx x odpařit xx xxxxx v rotačním xxxxxxxxxx. Rozpustit reziduum xx 20 xx xxxx více směsi (4.5) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx x obsahu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 ppm
Odebrat 1 xx 10 g xxxxxxxxxx vzorku, přidat 100 xx xxxxxxx (4.6) x protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx nebo filtrovat, xxxx xxxxxx xxxxx (4.5) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1, xxx je xxxxxxx x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 48 xx 50 °C xxxxxxxx bakterií (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx provádí x xxxxxxx za xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, X2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4, X2, U1).Každá xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x takové xxxxxxxxx, xxx xxxx možné xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx o xxxxxxx 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), které se xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstvy x xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr přesně xxxxxxxx množství roztoku xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x závislosti xx xxxxxxx děr.
U každého xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx noc xxx 35 až 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zaznamenat xxxxxx xx semilogaritmický xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku a xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx pomocí xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 -S1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + S8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx aktivita = předpokládaná aktivita x xxxxxxxxx aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx xxxxx překročit 10 % relativní xxxxxxx.
[1] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium podobného xxxxxxx x dávající xxxxxx výsledky.
[2] Může xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[3] Xxxx amido xxxxxx x xxxxxxxx inhibičních xxx xxxxxxxxxxxx roztoků (xxxxx xxxxx).
[6] Xxxxx xxxx izolovaný v Xxxxx podle XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx růst xxx X. xxxxxx XXXX 6538 P.
[7] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[8] Kmen xxxxxxxxx x Xxxxx podle XXXX.
[9] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[11] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.