Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx a analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx kontrolu xxxxx [1], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx směrnice;
vzhledem x xxxx, že xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxxxx xxxxx je xxxxxx dodržování požadavků xxxxxxxxxxx právními x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x složení xxxxx, xx xxxxxxxxx podle xxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971 [2] x 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx xxxxxxxxx xxxx analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx s xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx provedených xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx třetí xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Členské státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx působením xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxx, se provádějí xxxxx xxxxx popsaných x xxxxxxx I xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx směrnice Komise x. 71/250/XXX xx xxx 15. června 1971, xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xx xxxxxxx xxx metody xxxxxxx v xxxxxxx X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx jde x stanovení x xxxxxxxxxxxx tetracyklinových antibiotik, xxxxx x o xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, oleandomycinu, tylosinu x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, se provádějí xxxxx metod xxxxxxxxx x příloze XX xxxx směrnice.
Obecná xxxxxxxxxx xxxxxxx v části 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxx 1971, s výjimkou xxxxx týkající xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, se xxxxxxx xxx metody xxxxxxx x xxxxxxx II xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. července 1973. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxxxx Komisi.
Článek 4
Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 27. xxxxx 1972.
Xx Xxxxxx
xxxxxxxx
X. L. Mansholt
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX X
1. STANOVENÍ XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
1. Účel x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx hmotnosti škrobu x xxxxxxxx, s xxxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx řepné xxxxx, xxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx skrojky xxxx listy, xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. xxxxx x moučka z xxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou. Xx xxxxxx a xxxxxxxx xx polarimetricky xxxxx optická xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx vzorek xxxxxxxxx 40 % xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxx filtrátu xxxxxxxxx chlorovodíkovou, xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx optická rotace xx stejných xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx dvěma xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx obsah xxxxxx ve xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) kyselina chlorovodíková, x: 1,126.
3.2 1,128 % (m/V) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X x xx přítomnosti 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (X/X) ethanolu. 10 ml = 30,94 xx 0,1 X XxXX.
3.3 Carrezův xxxxxx I: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x xxxxxx xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X a 3 x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx vodou xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx II: xxxxxxxxx ve xxxx 10,6 x hexakyanoželeznatanu xxxxxxxxxx [K4(Fe(CN)6].3H2O. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, x: 0,948 xxx 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x objemu 250 xx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx chladičem.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělnit xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxx xxxxx x kulatými xxx x průměru 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (P xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx odměrné xxxxx o objemu 100 xx. Xxxxxx 25 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx 25 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx do vroucí xxxxx xxxxx x xx xxxx prvních xxx xxxxx silně x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Množství xxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxx. Baňka xxxxx být xxxxxxx x xxxxx během xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxx, xxxxxx 30 xx xxxxxxx vody x xxxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) x xxxxx xxxxxx protřepávat. Xxxx xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx XX (3.4) x xxxx jednu minutu xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx po xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (což xx xxxxxx), opakovat stanovení xx xxxxxxx většího xxxxxxxx Carrezova xxxxxxx X a XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx polarimetrem xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x 200 xx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx rotace (X’ xxxx X’) xxxxx xxxxxxxxxxx ve 4 % ethanolu
Navážit 5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx, dát xx xx xxxxxxx baňky x objemu 100 xx a přidat xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (viz xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx této doby xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx se zkušební xxxxxx xxxxx smíchal x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (3.5), xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x vzorku) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx Erlenmeyerovu xxxxx zpětný xxxxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxxx vodní xxxxx. Xxxxxx po 15 minutách xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx xxxxx do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 ml, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vodou x xxxx xxxxxxxx xx 20 °C.
Poté xxxxxxx za xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) a XX (3.4), xxxxxxx po xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx rotaci, jak xx xxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Obsah škrobu (%) se xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Měření xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - X’) / [α]X20°
xxx xx:
X = celková xxxxxxx xxxxxx, v úhlových xxxxxxxx.
X’ = xxxxxxx xxxxxx látek xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx xxxxx
+ 195,4°: xxxxxxxxxx škrob
+ 184,6°: xxxxxxxxx xxxxx
+ 182,7°: pšeničný xxxxx
+ 181,5°: xxxxx xxxxx
+ 181,3°: ovesný škrob
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx x směsi xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Xxxxxx sacharimetrem
Procenta xxxxxx = 2 000 / [α]X20° · (2 N · 0,665) (X - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = celková xxxxxxx rotace, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx rotace látek xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx 100 xx xxxx, xxxxx xx při xxxxxxxx 200 mm optickou xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:
16,29 x xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 g xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
20,00 x xxx smíšené xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = specifická xxxxxxx rotace čistého xxxxxx (viz 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí překročit 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx škrobu xxxxx než 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx škrobu rovnajícího xx nebo xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 6 % uhličitanů, xxxxxxxxxxx xxxx uhličitan xxxxxxxx, xxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zničeny xx použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx zředěné xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 V xxxxxxx xxxxxxxx x vysokým xxxxxxx laktózy, xxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx mléko, postupovat xx xxxxxxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xx 30 xxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 50 °X. Xxxxxx vychladnout x pokračovat x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxx 5.3.
2. STANOVENÍ XXXXXXX XXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se mineralizuje xx xxxxx. Kyselý xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu sodného. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x odměřeném xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx p.a.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx xxxxxxx XxX x.x. xxxx xxxxx xxxxxxx pentahydrát XxXX4 · 5H2O x.x., xxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxx HgO x.x.
3.3 Granulovaný xxxxx x.x.
3.4 Kyselina sírová x.x., d: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx sírová 0,1 X.
3.6 Kyselina xxxxxx 0,5 X.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxxx ve 100 ml 95-96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného x.x.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1).
5. Postup
5.1 Mineralizace
Navážit 1 g vzorku x přesností na 1 xx x xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx aparatury. Xxxxxx 10 g xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 xx 0,4 g xxxxx xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 g xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxx 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx sírové (3.4) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx xxxxx. Zahřívat xxxxx, nejprve xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx kapalina xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx x přilnutí xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xx xxxxxx čirý x xxxxxxxx (světlezelený, xxxxx xx xxxxxxx katalyzátor xx xxxx mědi), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Destilace
Opatrně x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, aby xx xxxxxxx zcela xxxxxxxxxx; xxxxxx xxxxxxxxxxx; xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.3).
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxx destilační xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,5 X (3.6) x závislosti xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (xxx poznámky 7.2) x xxxxxx několik xxxxx indikátoru xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx destilační xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx sběrné baňce xx xxxxxxx xxxxxxx 1 xx (xxx xxxxxxxx 7.3). Přes xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx do xxxxx 100 xx 40 % xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx byl xxxxxx xxxxxxxxxxx xx bázi xxxxx, přidat xx xxxxx xxxxxx xxx 10 ml roztoku xxxxxx sodného (3.11), xxxx 25 ml xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xx 30 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxx této xxxx xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx lakmusového xxxxxxx. Pokud xx xxxxxx alkalická, xxxxxxxxxx x destilaci. Xxxxxxx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxxx xxxxxxx ukáže, xx xx destilát neutrální. Xxxxx xxxxxxxxx xxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx zbarvení. Xxxxx xxxxx ke xxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx přidat xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 N (3.9) xxxx 0,25 N (3.10) x závislosti xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxxxxx, zda činidla xxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxx a xxxxxxx), x xx bez xxxxxx, který xx xxx xxxxxxxxxx. Za xxxxxx kontroly správnosti xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx x.x. (x.x. 114 °C; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx dusíku. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx faktorem 6,25. Výsledek xxxxxxxx xxxx procento vzorku.
Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx než 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % x xxxxx než 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Poznámky
7.1 Je xxxxx použít některé xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx provést xxxx ztrát.
7.2 U xxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxx xxxxxx může xxx xxxxx kyseliny xxxxxx 0,1 N, xxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxx xxxxx, xxxxxx xx 10 xx 15 xx x xxxxxxx xxxxx xx 25 xx.
7.3 Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx hydroxid xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxx po xxxxxxx baňky xxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXX PEPSINEM X XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx frakci xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx za stanovených xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °C xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 x/xx xxxxxxx; xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 4 xxxx xxxxxxx x musí xxx xxxxxxxxxxxx x souladu x touto xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), čerstvě xxxxxxxxxx xxxxxx pepsinu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (např. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxx 3 xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx hrubých xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Mineralizační x xxxxxxxxxx aparatura xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx a xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 ml. Xxxxxx 450 xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °C. Xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxx, že xx xX xxxxxxxx nižší xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx do xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx (4.1) x nechat xx tam 48 xxxxx. Xxxxxxxxx po 8, 24 a 32 xxxxxxxx. Xx 48 xxxxxxxx přidat 15 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), zchladit xx 20 °X, xxxxxxx xx rysku xxxxx x xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx x přesností xx 1 xx x xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x xxxxxx xxx stanovení hrubých xxxxxxxx, ve xxxxx xxxx bodu 5.1. Xxxxxxxxxxxxx a uvést xx xxxx. Pokud xx xxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx kapek xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx v silném xxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx ohřev x opatrně odstranit xxxxxxxx stopy xxxx.
Xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx se použije xxxxxxxxxxx xx bázi xxxx), udržovat var xxxxx další xxxxxx. Xxxxxx vychladnout.
5.3 Destilace x titrace
Postupovat, jak xx uvedeno v xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 5.2 a 5.3.
5.4 Slepý xxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx postupu, xxx xxx vzorku, xxxxx xx být xxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx kyseliny xxxxxx xxxxxxxxxxxx během xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx dusíku xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx nesmí xxxxxxxxx:
- 0,4 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % a xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Hodnoty xxxxxxx xxxxx metodou xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx.
7.2 Xxxxxxx o xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 10 % xxxx xxx odtučněny extrakcí xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX AKTIVITY XXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx použitého xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxx x xxxxxxxxx chlorovodíkovou.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx ošetří xx xxxxxxxxxxx podmínek xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Nehydrolyzovaná xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx. Xx filtrátu xx xxxxx xxxxxxxx sodný x činidlo Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx hustota xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx 750 nm x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x kalibrační xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx metody xxxxxx xx xxxxxx takové xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx zbarvení xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx xx optickou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx stejným xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,06 X.
3.3 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,025 X.
3.4 5 % roztok (m/V) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.5 Roztok xxxxxxxxx sodného 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxx 100 x xxxxxxxxxx sodného (Xx2XX4 · 2X2X), 25 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2H2O) x 700 xx xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx kyseliny xxxxxxxxxx (x: 1,71) a 100 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19), xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx chladič, xxxxx xx xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxx 10 xxxxx. Nechat vychladnout, xxxxxxx zpětný chladič, xxxxxx 175 x xxxxxx xxxxxxxx (Xx2XX4 · 2H2O), 50 xx xxxx x 1 xx xxxxx. Xxxxx po xxxx 15 xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o objemu 1 x, xxxxxxx xx rysku xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Roztok hemoglobinu: Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 354 xx xxxxxx [1] a xxx xx baňky o xxxxxx 200 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx baňku x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxx zcela nerozpustí. Xxxxxxx vakuum a xx protřepávání doplnit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx na 100 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx 181,2 xx tyrosinu x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxxx litru xxxxxxx xxxxxxxxx (zásobní xxxxxx). Odebrat 20 xx tohoto roztoku x xxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx tohoto roztoku xxxxxxxx 0,2 μmol xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxx ultratermostatem xx 25 °C + 0,1 °C.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Stopky, přesnost: 1 sekunda.
4.4 xX xxxx.
5. Postup
5.1 Příprava xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Odpipetovat 2 xx xxxxxxx x xxx xx xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 50 xx x doplnit xx xxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.3). xX xxxxxxxxxxxx xX xxxxxx xxxx xxx 1,6+0,1. Ponořit xxxxx do vodní xxxxx (4.1).
5.2 Hydrolýza
Odpipetovat 5,0 xx roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx lázni (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.1 x promíchat asi xxxxxx xxxxxx xxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx při 25 °X xxxxxx po xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx x teplota xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx). Xxxx xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 25 °C, xxxxxxxxxxxxx a filtrovat xxxx suchý xxxxx.
5.3 Xxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx hustoty
Odpipetovat 5,0 xx filtrátu, xxx xx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx protřepávání 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Po 5 xx 10 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx spektrofotometrem xxx 750 xx x kyvetách o xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxx x xxxxx.
5.4 Slepý xxxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx slepý xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx trichloroctové (3.4) předehřáté na 25 °X, homogenizovat x poté přidat 1,0 xx roztoku xxxxxxx získaného podle xxxx 5.1. Promíchat xxxxxxxxx tyčinkou x xxxxxx zkumavku přesně 10 xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °C. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx suchý filtr. Xxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx křivka
Do Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, a 5,0 xx alikvotního xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μmolu xxxxxxxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxx referenčním roztokem xxx tyrosinu. Doplnit xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 5,0 xx. Přidat 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx Folin-Ciocalteu (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx větě xxxx 5.3. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx optické xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxx x μmolech xxxxxxxx xx 1 xx x xx jednu xxxxxx při 25 °X se xxxxxxxx xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx na xx (x/xx) = 0,32 x / x
xxx:
x = množství xxxxxxxx x μxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx bodu 5.2.
7. Poznámky
7.1 Množství xxxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx, xxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx měření xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Ansonovovým xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx tyrosinu/mg xxx. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 komerčních xxxxxxxx/x (μxxxx tyrosinu/g xx 10 min. při 35,5 °C).
5. STANOVENÍ XXXXXXX A XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx příbuzné xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx obsahují. Xxxxxx hranice pro xxxxxxxxx xxxxxx je 20 xxx.
2. Princip
Gossypol xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, x xx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxx. Gossypol xx xxxxxxxxxxxxxxx anilinu xxxxxxxx xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, jehož xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx 440 xx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu: xxxxxxx 60 objemových xxxxx xxxxxxxxxxxx p.a. xx 40 objemovými xxxxxx x-xxxxxx.
3.2 Rozpouštědlo X: xx odměrné xxxxx o objemu 1 l xxxxx xxx 500 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 50 xx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Trvanlivost xxxxxx xxxxxxx je jeden xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx X: xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 ml 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx x 10 ml xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx teplotu x doplnit po xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx činidla xx xxxxx xxxxx.
3.4 Anilin x.x.: pokud optická xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, destilovat xxxxxx přes zinkový xxxxx s vyloučením xxxxxxx x posledních xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx roztok gossypolu X: xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 ml dát 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx do odměrné xxxxx o objemu 250 ml 50 xx xxxxxx roztoku x doplnit po xxxxx xxxxxxxxxxxxx X. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,02 xx/xx. Před xxxxxxxx nechat xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Standardní roztok xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx rozpouštědlem B (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,5 mg/ml.
Pokud xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X a X xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 24 hodin.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (třepačka): xxxxxxxxx 35 ot./mim.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx zkušebního xxxxxx xxxxxx xx předpokládaném xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxxx měření. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x bavlníkových xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx pokrutinách by xxxxxxxx vzorek xxxxx xxxxxxxxx 1 x; xxx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 5 g. Xx xxxxxxx případů xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 10 xx xxxxxxxx; xxxx xx xxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx zkušebního xxxxxx mělo být xxxx 0,5 x 5 g, xxx xxxxxxxxx část 2 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 40 až 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xx měla xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx vzorek xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx hrdlem x xxxxxx 250 xx, xxxxx xxx xx xxxxxxx skleněnými střepy. Xxxxxx xxxxxx přidat 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), zazátkovat xxxxx x jednu xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Filtrovat přes xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx hrdlem. Xxxxx xxxxxxxx zakrýt xxxxxxx x xxxxxxxx hodinovým xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx xx dvou xxxxxxxxx xxxxx (X x B) o xxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Případně xxxxxxx xxxxx rozpouštědlem A (3.2) xx 10 xx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 10 ml xxxxxxxxxxxx X (3.2) do xxxx jiných xxxxxxxxx xxxxx (X x X) o xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xx xxxxx baňku (X) xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx měření xxxxxxx xxx slepý xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) do xxxxx (X) x (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx xxxxx, xxx xx vytvořilo xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx, doplnit xx xxxxx směsí isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx jednu xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 440 xx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 cm xxxxxxxx hustotu xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx (X) xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x xxxxxxxx hustotu xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx x referenčním xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (= upravená xxxxxxx xxxxxxx). X xxxx xxxxxxx vypočítat xxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx gossypolu
Dát xxxxxxxx vzorek obsahující 1 xx 5 xx gossypolu do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml x xxxxxx 10 xx rozpouštědla X (3.3). Xxxxxxxx připravit xxxxx pokus x xxx 10 ml xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx xxxx xxxxxxx xxxxx x objemu 50 xx. Xxxxxxxx xxx xxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx obě xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx 10 xx 15 xxxxx, xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx filtráty x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 2 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx dvou xxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 25 xx x 2 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx do xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 xx. Doplnit xx 25 xx xxxxx jedné baňky x xxxxx série xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4) xx dvou xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx, xxx se vytvořilo xxxxxxxx. Xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx 25 ml xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2. X této xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx celkového xxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x bodě 6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx může xxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (6.1), xxxx xx základě kalibrační xxxxxx (6.2).
6.1 Na xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx podmínek xx specifická xxxxxxx xxxxxxx xxxx:
xxxxx xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: X 1% / 1cm = 600
Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx takto:
gossypol %: X · 1 250 / X1%1xx · · p · x
xxx:
X = opravená xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x bodě 5.2
x = xxxxxxxx xxxxxx x x
x = xxxxxxxxx xxxx filtrátu x xx
6.2 Na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
6.2.1 Xxxxx gossypol
Připravit xxx xxxxx xx pěti xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 xx. X každé xxxxx xxxxxx pipetou 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) na 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx první xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx xxxxx baňky xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxxxx zbarvení. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx po xxxxx xxxxx isopropanolu a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xx podmínek xxxxxxxxx v xxxx 5.2 xxxxxxxx optickou xxxxxxx standardní xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx proti xxxxxxxx gossypolu (x μx).
6.2.2 Celkový xxxxxxxx
Xxxxxxxxx 6 xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Xx první xxxxx přidat pipetou 10 ml xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.6). Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xx 10 ml xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx rysku směsí xxxxxxxxxxxx a xxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxx pipetou 2 ml xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx o 6 xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx na 25 xx směsí x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx druhé xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát jednu xxxxxx (standardní série).
Za xxxxxxxx uvedených v xxxx 5.2 stanovit xxxxxxxx hustotu standardní xxxxx xxxxxxx porovnáním x odpovídajícími xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hustoty xxxxx xxxxxxxx gossypolu (x μx).
6.3 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah gossypolu xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx hodnoty pro xxxxx xx 500 xx 750 ppm,
- 10 % relativní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx obsah xxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxxxxxxxxxxx (teoretický obsah: 17,7 % xxxxxx).
XXXXXXX XX
1. STANOVENÍ X XXXXXXXXXXXX TETRACYKLINOVÝCH XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx antibiotika x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 ppm xxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
2. Princip
Vzorek xx extrahuje směsí xxxxxxxxx a kyseliny xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx papírové xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx porovnáním xxxxxx xxxxxx Xx x xxxxxxxxx standardních xxxxx, x xx xxx xxxxxxxxxxxx x XX světle (xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx), xxxx xxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx kyseliny xxxxxxxxx x.x. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X p.a. |
7,45 x |
|
Xxxxxx p.a. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 ml |
|
3.3 Xxxxxx I: směs xxxxxxx nitromethanu/čistého xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 objemově. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx XX xxxx xxxxxxx nitromethanu/čistého chroroformu/α-pikolinu: 20/10/3 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx methanolu/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 objemově.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, d: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Chlortetracyklin, xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx vyjádřena x chlorovodíku.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx ATCC x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, příprava suspenze xxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média: xxxxx xx pokyny xxxxx xxxx 3.1. a 3.2. metody xxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 5,8.
3.11 0,1 % (m/V) xxxxxx 2,3,5-triphenyltetrazolium chloridu x 5 % (x/X) roztok xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx papírovou chromatografii (xxxxx xxxxxx 25 xx). Schleich x Xxxxxxx papír (2440B xxxx 2043X) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Inkubátor xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 UV lampa xxx xxxxxxxxx fluorescence.
4.5 Xxxxxxxx desky xxx 20 x 30 xx xxx bioautografii.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) x xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.6) připravit xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL x xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx roztoky xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx roztoky (5.1) xxxxxxxxxx pufrem (3.2) x cílem xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx bioautografií
Zředit xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx roztoky, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 5 μx chlortetracyklinu-HCL, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx antibiotika nižší xxx 10 xxx, xx xxxxx xxxxxx xxx homogenizovaný vzorek, xxxx xxxxxxxxxxx frakci xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx ho xxxxx xxxx ho xxxxxxxx xxxxxx směsí (3.5) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 100 μg xx 1 ml (6.1) x 5 μx na 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxxxx xxxxxxx, pH 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx suchého xxxxxxxxxxx papíru. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx 0,01 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 a 5.3) a extraktu (6.1 x 6.2). Xxx xxxxx oddělení xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx; xxxxx xx to xxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx X (3.3) xxx xxxxxxxxx bioautografií x xxxxxx II (3.4) xxx stanovení XX xxxxxxx. Xxxx xxxx rozpouštědla dosáhne xxxxx 15 až 20 cm (xxx 1 hodina 30 xxxxx), xxxxxxxx chromatografii x vysušit xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx UV xxxxxxx
Xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx než 1 μx/xx2, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx XX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx bioautografií
Nalít xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), xxxxx xx xxxxxx naočkuje X. cereus (3.9), xx xxxxxxxx xxxxx (4.5) x položit xxxxx na kultivační xxxxxx. Xx pěti xxxxxxxx kontaktu xxxxxxxx xxxxx a položit xx xx jinou xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx, xxx zůstane xxxxx inkubační doby. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx tetracyklinového xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx zónami v xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx.
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xx inkubaci xxxxxx xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx Xx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotik xxxx uvedeny zde. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx jakosti xxxxxx x xxxx xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (TC) |
0,40 |
|
Oxytetracyklin (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "xxx" xxxxxxxxx xx menší xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, OXYTETRACYKLINU X XXXXXXXXXXXX
X. DIFÚZÍ XX XXXXX
1. Účel x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx xxxxxxxx chlortetracyklin (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Obsahy nižší xxx 5 xxx xxxxx být xxxxxx xxxxxxxxx interpolací.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx rovných nebo xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. X obsahů vyšších xxx 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové xxx xxxxxxxxx CTC x xxxxx methanolu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx OTC x TC.
Extrakty se xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxxx CTC, OTC xxxx XX xx xxxxxxxx xxxxx naočkovaném X. xxxxxx. Difúze xx projeví vytvořením xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: X. cereus XXXX x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. xxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx při xxx 30 °C. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx xx šikmý xxxx.
3.2 Xxxxxxxx suspenze xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx solného xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx baňky xxxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 až 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 dní xxx 28 xx 30 °C, xxxx xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.6) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x bazálním médiem xxx stanovení (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, které umožní xxxxxx xxx použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,2 x 0,3 xx xx 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 ml |
|
Fosfátový xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný KH2PO4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, pH 8,0
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Na2HPO4 · 2H2O x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xX 4,5 xx použití xxxxxxxx sírové asi 2 X.
4.9 Směs xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, jejichž xxxxxxxx je xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Chlortetracyklin
Na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 500 μg chlortetracyklinu-HCL xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x chladničce xxxxx xxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx standardní xxxxxxxx xxxxxx X8, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx chlortetracyklinu-HCL na 1 xx. Zředění xx xxxxxxx xx xxxxxxx fosfátového pufru, xX 5,5, zředěného 1/10 (4.3), xx xxxxxxx bylo přidáno 0,01 % černě xxxxx [3].
Xxxx připravit xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxx roztoku, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 ml, standardní xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 1,6 μg xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Tetracyklin
Postupem xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 1,0 μx tetracyklinu-HCL xx 1 ml x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx rovné xxxx nižní než 50 xxx
Xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (4.8) v množstvích xxxxxxxxx v xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Poté ihned xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3) podle xxxxxx x xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxxx roztok. Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, U2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x ppm |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Zkušební vzorek x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
řeď. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx X8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx vyšší xxx 50 ppm
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxxxxxxx obsahu antibiotika xx xxxxxx xxxx xx jeho výrobní xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx 2 xx 10 g 20xx xxxxxxx jeho xxxxxx xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx pH nižší xxx 3; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxxx xX na 3 (x minerálních xxxxxxxxx xx xxxxxxx 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Odebrat xxxxxxxxx xxxx extraktu x xxxxxxx xX na 5,5 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 8,0 (4.4), za xxxxxxxxxxx bromkresolové xxxxxx (xxxxxx xx xx xxxxx xx xxxxxx). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx koncentraci X8 (xxx 6.1).
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x tetracyklin
Postupovat xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.2.1 xxx, že xx xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, X2, X1) x xxxx koncentrací xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Xxxxx miska xxxx obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx misky x takové xxxxxxxxx, xxx bylo možné xxxxxx v agarovém xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx asi 2 xx. Upřednostňuje xx xxxxxxx misek xxxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x průměru 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxx.
X každého xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx misky xxxxx 18 hodin xxx při 28 xx 30 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx inhibičních xxx, přednostně projekcí. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx křivky standardního xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + U8 - S1 -X2 -X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + S8 - X1 -X2 -X1 -S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí překročit 10 % relativní xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (TC) xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 1 x/xx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, která xx xxxxxx vzniknout xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx metoda xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx na agaru.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx obsahu XXX se xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx x pro xxxxxxxxx obsahu XXX x XX xxxxx xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx účinek xx xxxxxxx měřením xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx kterého xxxx xxxxxxx antibiotikum. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx závisí xx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxxx x šikmým xxxxxx xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx se xxxxx 1,5 xx 3 % xxxxx (xxxxx xxxxxxx). Inkubovat xxxx xxx xxx 37 °X. Skladovat xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx na šikmý xxxx. Xxxxxxx připravit xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Příprava očkovací xxxxx
24 xxxxx xxxx xxxxxxxx přeočkovat šikmý xxxx subkulturou x xxxxxxxxx přes xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx celou kulturu xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x asi 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx sterilních xxxxxxxx xx xxx 100 xx stejného xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx 37 °X xxxxx růst kmene xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (1x30 xx 2x).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx sodný |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 g |
|
Dihydrogenfosforečnan draselný XX2XX4 p.a. |
1,32 g |
|
Hydrofosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
xX xx xxxxxxxxxxx: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx čistého xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Směs xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (x/X) roztoku xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, OTC, TC, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx látky (4.7) x za použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 xx 500 μx XXX-XXX, XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Tento xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 200 nebo 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx asi 100 xx xxxxx (4.4) x protřepávat 30 xxxxx třepačkou. Xxxxxxx xx xxxxx fosfátovým xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Homogenizovat x xxxxxx xxxx.
6.2 Oxytetracyklin x tetracyklin
Do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.5) a xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2), tak, aby xxxxxxx série xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx stanovení xx načrtne xxxxxxxxxx xxxxxx, ne xxxxx xx xxxxxxxx interpolace xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx se k xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx kmene, xxxxx xx mohou xxxxx xxxxxxxxx od laboratoře. Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Chlortetracyklin
Zředit xxxxxxxxxx xxxxxx (5) fosfátovým xxxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx CTC-HCL na 1 ml. Poté xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x ve xxxxxxxxxx určených pro xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx ředění xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Koncentrace XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Zředit extrakt (6.1) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,12 μx XXX-XXX. Xxx 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx dvou xxxxxxxx a 0,75 xx (= 0,09 μx) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx jiných xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.1.2 Oxytetracyklin x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx roztok (5) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 0,6 μx XXX-XXX xxxx TC-HCL na 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2), xxx je xxxxxxx xxxx x ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx extrakt (6.2) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,48 μx XXX-XXX nebo XX-XXX na 1 xx. Xxx 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx dvou zkumavek x 0,5 xx (= 0,24 μg) xx xxxx jiných xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx jiných xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.2 Xxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx propustnost x 5 cm xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 cm kyvetě xxx nastavení aparatury xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Očkování
Dát xx xxxxx zkumavky (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xxxxxxxx xx sterilním xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx mícháním xxxxxxx xx 37 °X + 0,1 °C. Xxxxxxxxx xxxx xx xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx xxxx možné xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx přesná xxxxxx (obecně 2x30 xx 3h). Poté xxxxxxxx další xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) xx xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx xxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxxx při 590 xx, přičemž fotometr xx xxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxx). X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx použít xxxxxxx 2 cm x raději 5 xx xxxxxx.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx propustností xxxxx koncentracím xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx křivce xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech, x xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx je 0,5 xxx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Po odstředění xx extrakt xxxxx x jeho antibiotická xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx přítomnosti mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus, X 250 XX [8] (xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx odebraným x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxxxx 100 μg oxytetracyklinu xx 5 xx. Xxxxxxxxx přes xxx xxx xxx 30 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx na šikmý xxxx.
3.2 Příprava xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx se šikmým xxxxxx (3.1) za xxxxxxx asi 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Naočkovat tuto xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxxxx koncentrace xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 až 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 ml xxxxxxxx (4.4) poté, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx může v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 měsíců.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) určit xxxxxxxx očkovací xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx xxx různé xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,1 x 0,2 xx xx 1000 ml. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx při 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Médium xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 g |
|
Agar, xxxxx jakosti |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
|
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 6,5. |
4.2 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [10]
Xxxxxx (4.1) xxxxxxxx na xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 20 % (V/V) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (x/X) roztok xxxx (hydroxymethyl) xxxxxxxxxxx x.x.
4.7 Xxxxxxxxx xxxxxx
|
Xxxxx xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 g |
4.8 Standardní xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx látku (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx roztokem (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 μx/xx.
Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 0,1 μg xxxxxxxxxxxxx na 1 xx. Xxxx připravit xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx předpokládaném xxxxxx oleandomycinu xx xxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx 2 až 10 g 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou.
Odstředit, xxxxxxx xxxxxxxxx část extraktu x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 ml (= X8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X suspenzí spór (3.2).
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx xx agaru xx xxxxxxx x xxxxxxx xx použití čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, S2, X1) a xxxx xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx a xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx o xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx médiu xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx očkovacího xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx získání stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx vzorku opakovat xxxxxx nejméně xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx každé xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx během 18 xxxxx xxx při 28 až 30 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit průměr xxxxxxxxxxx zón, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmu koncentrací xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + S4 + X8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl mezi xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
4. STANOVENÍ XXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx tylosin x xxxxxxxx, koncentrátech x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se ošetří xxxxxxxxxx pufračním roztokem x xX 8, xxxxxxxxxxx na 80 °X, x poté xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx se xxxxxxx zředí x xxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Difúze xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx xxxxx měsíc xx šikmý xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 až 3 xx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.4). Naočkovat xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx obsahující 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxxxxxx na xX 7,0. Inkubovat 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx xxxx bakterie xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxx získat 75 % xxxxxxxxx propustnost xxx 650 xx.
Xxxxx xx tato suspenze xxxxxxxx v chladničce, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožní získat xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Kvasnicový extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
Xx xxxxxx xxxxxxxxx rodičovského xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx7,0 x xx xxxxxx stanovení xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný K2HPO4 x.x. |
16,730 g |
Destilovaná voda xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Fosfátový pufr, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Směs fosfátového xxxxx (4.2)/xxxxx methanol: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °X xx xxxxxxx xxxxxxx (5 mm rtuti). Xxxxxxx 10 xx 50 mg do xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 7 (4.3) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx zásobního xxxxxxx připravit xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) standardní xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx tylosinu na 1 ml.
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.7) xxxx koncentrace:
|
S4 |
1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,5 |
μg/ml |
|
S1 |
0,25 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x xxxxxxxxxx vzorku; xxx xxxxxxx a xxxxxx 20 g xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx fosfátového xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx na 80 °X, x homogenizovat 2 minuty (xxxxxxxxx xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx část xxxxx (4.7) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx připravit koncentrace X4, U2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1) xx použití xxxxx (4.7).
Xxx obsahy xxxxx xxx 10 xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 35 °X x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 40 % methanolu (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) upravené xx xX 8 xxx 48 xx 50 °X suspenzí xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx v miskách xx použití xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Každá xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx médiu xxxxxxx 8 děr x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx očkovaného xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx o xxxxxxxx 2 xx. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 200 xx x x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 a 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx vzorku opakovat xxxxxx xxxxxxx čtyřikrát x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx každé xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx 35 xx 37 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zanesením logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx relativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx pomocí xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 - S2 - S4 -X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Xxxxx 80". Po odstředění xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1). Inkubovat xxxx xxx xxx xxx 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx každých 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2. Příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem (3.1) xx použití 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx solného xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx smýt xxxxxxxx xx xxxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Homogenizovat x xxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx. Xxxxx se tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx trvanlivost xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx médiem xxx stanovení (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxxxx koncentrace virginiamycinu xxxxxxxx xxxxx, ale xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 až 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium pro xxxxxxxxx [12]
|
Glukosa |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná voda xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx pH xx 6,5.
4.2 Fosfátový xxxx, xX 6
|
Dihydrogenfosforečnan draselný XX2XX4 x.x. |
8,0 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx voda xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/čistý xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Tween 80" (x/X).
4.7 Standardní xxxxx: xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztok standardní xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xx xxxxxxx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1+) xx xxxxxxx xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxx x xxxxxx virginiamycinu xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 ppm
Odebrat 10 až 20 x zkušebního xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxxxxx 20 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx reziduum xx 20 xx xxxx více xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx roztoku (4.6) x protřepávat 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxx (4.5) s xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x U1, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) při 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx provádí x xxxxxxx za xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, U4, X2, X1).Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx velikosti, xxx xxxx možné xxxxxx x agarovém xxxxx xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx se xx použít pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx asi 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití misek xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx misky xxxx xxx xxx 35 až 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx semilogaritmický papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 -X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - X1 - X2 - S1 - X2
Xxxxxxxx aktivita = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx nesmí překročit 10 % relativní xxxxxxx.
[1] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] Xxxx xxxxx slouží x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxx).
[6] Tento xxxx izolovaný x Xxxxx podle XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx růst xxx X. xxxxxx XXXX 6538 P.
[7] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční kultivační xxxxxx xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[8] Xxxx izolovaný x Xxxxx xxxxx XXXX.
[9] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Může xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[11] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx podobného složení x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx výsledky.