Třetí Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Evropského xxxxxxxxxxxxx společenství,
s ohledem xx směrnici Rady xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx xxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx kontrolu xxxxx [1], a xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx směrnice;
vzhledem x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx stanoví, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx cílem xx xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx předpisy x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x složení krmiv, xx xxxxxxxxx podle xxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Komise x. 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxx 1971 [2] a 71/393/XXX xx dne 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx xxxxxxxxx xxxx analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že s xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx nutné xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, že xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, že xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, pokud jde x xxxxxx škrobu, xxxxxxx xxxxxxxx, hrubých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a kyseliny xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, jakož x o xxxxxxxx xxxxxxx, se xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení xxxxxxx v xxxxx 1 (úvod) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS ze xxx 15. xxxxxx 1971, xxxxxx xx xxxxxxx analytické metody Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx krmiv, se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx X této směrnice.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxxx, že xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, pokud jde x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx x x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, oxytetracyklinu, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, se xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XX xxxx směrnice.
Obecná xxxxxxxxxx xxxxxxx x části 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. června 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx II xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx nezbytné pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1973. Neprodleně x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 27. xxxxx 1972.
Za Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Mansholt
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
PŘÍLOHA X
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx stanovit xxxxx xxxxxx a produktů xxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx řepné xxxxx, xxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx skrojky xxxx listy, xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx bohaté xx xxxxxx (např. řízky x xxxxxx x xxxxxxxxxx) xxxx škvarky.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx x xxxxxxxx xx polarimetricky xxxxx optická rotace xxxxxxx.
Xxx druhém stanovení xx xxxxxx extrahuje 40 % xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxx filtrátu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, čiření x xxxxxxxx xx xxxxx optická rotace xx stejných xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx dvěma xxxxxxxx vynásobený známým xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx chlorovodíková, x: 1,126.
3.2 1,128 % (m/V) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx titrací xx xxxxxx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 N x xx přítomnosti 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx v 94 % (V/V) ethanolu. 10 xx = 30,94 xx 0,1 X NaOH.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxx X: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x octanu xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx roztok XX: xxxxxxxxx xx vodě 10,6 g hexakyanoželeznatanu xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, x: 0,948 xxx 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 ml x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xxxx prošel xxxxx x xxxxxxxx xxx x xxxxxxx 0,5 xx.
5.2 Stanovení xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X xxxx S) (viz xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x vzorku s xxxxxxxxx xx 1 xx a dát xx xx odměrné xxxxx o xxxxxx 100 xx. Xxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxx xxxxxx dobře rozmístil x xxxxxx xxxxxxx 25 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Ponořit xxxxx xx vroucí xxxxx lázně x xx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx silně x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx hrudek. Množství xxxx ve xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx x xx vložení xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxx varu. Xxxxx xxxxx být xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x lázně, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx x xxxxx zchladit na 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx roztoku X (3.3) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx 5 xx Carrezova roztoku XX (3.4) x xxxx xxxxx minutu xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, homogenizovat x xxxxxxxxx. Pokud xxxx filtrát xxxxx xxxx (což je xxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X a XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx polarimetrem nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v 200 xx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx rotace (X’ xxxx X’) xxxxx xxxxxxxxxxx xx 4 % ethanolu
Navážit 5 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx, xxx xx xx odměrné baňky x xxxxxx 100 xx x přidat xxx 80 ml xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx baňku xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě x xxxxx této doby xxxxxxxx silně protřepat, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx smíchal x xxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxx (3.5), xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 ml xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 ml, xxxxxx 2,1 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x silně protřepat. Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx zpětný xxxxxxx x xxxxxxx xx xx vroucí xxxxx xxxxx. Xxxxxx xx 15 minutách vyjmou Xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxx xxxxx, přelít xxxx obsah xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 ml, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vodou x poté zchladit xx 20 °C.
Poté xxxxxxx za použití Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) x II (3.4), doplnit po xxxxx xxxxx, homogenizovat, xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx (%) xx xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Měření xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - P’) / [α]X20°
xxx xx:
X = xxxxxxx optická xxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx.
X’ = optická xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : rýžový škrob
+ 195,4°: xxxxxxxxxx xxxxx
+ 184,6°: kukuřičný xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx škrob
+ 181,5°: xxxxx škrob
+ 181,3°: xxxxxx xxxxx
+ 184,0°: xxxxxxx druhy xxxxxx a xxxxx xxxxxx x krmných xxxxxxx
6.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx = 2 000 / [α]X20° · (2 N · 0,665) (S - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx sacharózy v xxxxxxx xx 100 xx xxxx, xxxxx xx při tloušťce 200 xx xxxxxxxx xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx mění podle xxxxxxxxxxxx:
16,29 x xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 g xxx xxxxxxx sacharimetry
20,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = specifická xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 0,4 absolutní xxxxxxx xxx obsah škrobu xxxxx xxx 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx více než 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, uhličitany xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx zředěné xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 V případě xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xx sušené xxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx mléko, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx 80 xx ethanolu (3.5) xxxxx: Připojit xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xx 30 xxxxx xx xxxxx lázně x teplotě 50 °X. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxx 5.3.
2. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX
1. Účel a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx základě xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx metody.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx mokra. Xxxxxx xxxxxx se alkalizuje xxxxxxxx xxxxxxxxx sodného. Xxxxxxxx amoniak xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx v xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx sírové, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Katalyzátor: xxxx xxxxxxx CuO x.x. xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx CuSO4 · 5X2X x.x., xxxx rtuť xxxx xxxx xxxxxxxx HgO x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx xxxxx x.x.
3.4 Kyselina sírová x.x., d: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Kyselina xxxxxx 0,5 X.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: rozpustit 300 xx xxxxxxxxxxxxx xx 100 xx 95-96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.8 40 % (m/V) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného x.x.
3.12 8 % (m/V) xxxxxx thiosíranu xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx v kyselině xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 g vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx xxxxx mineralizační xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 x xxxxxx draselného (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 až 0,4 x xxxxx xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 x xxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxx rtuti xxxx 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 ml xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x xxxxxxx granulí xxxxx (3.13), promíchat xxxxx baňky. Xxxxxxxx xxxxx, nejprve mírně x xx občasného xxxxxxxxxxxx, xxxxx hmota xxxxxxxxxxx x pěna xxxxxxx; xxxx zahřívat xxxxxxxxxxxx dokud xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Zabránit xxxxxxxx xxxx baňky x xxxxxxxx organických xxxxxx. Xxxx je xxxxxx čirý x xxxxxxxx (světlezelený, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx mědi), xxxxxxxx var xxxxx xxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 ml xxxx, aby se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx; xxxxxx vychladnout; poté xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.3).
Xxxxxx do xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx odměřené xxxxxxxx 25 xx xxxxxxxx sírové 0,1 X (3.5) nebo 0,5 X (3.6) x závislosti na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx dusíku (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx aparatury x xxxxxxx konec xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx sběrné xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 1 xx (viz xxxxxxxx 7.3). Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx do xxxxx 100 xx 40 % roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx byl xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx, přidat do xxxxx rovněž buď 10 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 ml xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xx 30 xxxxx xxxxxxxxxxxxx asi 150 xx xxxxxxxx. Po xxxxxxxx této doby xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xx xxxxxx alkalická, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Ukončit xxxxxxxxx, xxxxx lakmusový xxxxxxx xxxxx, xx xx destilát xxxxxxxxx. Xxxxx destilace xxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx baňky x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx do xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx 0,1 X (3.5) nebo 0,05 X (3.6).
5.3 Titrace
Ve xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx sírové xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 N (3.10) x závislosti xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, dokud xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx žlutou.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx dusík, xx xxxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxx a titrace), x xx xxx xxxxxx, který xx xxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 g xxxxxxxxxxx p.a. (x.x. 114 °X; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 g xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx sírové 0,5 X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X odpovídá 1,4 xx xxxxxx. Vynásobit xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx vyjádřit xxxx procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx než 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx mezi mineralizací x xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.
7.2 X xxxxxxxx x nízkým xxxxxxx dusíku xxxx xxx objem kyseliny xxxxxx 0,1 X, xxxxx xx být xxxxxxxx nalita xx xxxxxx baňky, xxxxxx xx 10 až 15 ml x xxxxxxx xxxxx na 25 ml.
7.3 Pokud xxxx baňka destilační xxxxxxxxx nálevku s xxxxxxxx, přidat hydroxid xxxxx bezprostředně před xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x pomalu xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx baňky xxx, xxx se xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX PROTEINŮ XXXXXXXXXXX PEPSINEM A XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx xx stanovených xxxxxxxx. Xxxxxx je xxxxxxxxxx pro všechna xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxx 48 hodin xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx filtruje x xxxxx dusíku xx xxxxxxxx se stanoví xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 x/xx xxxxxxx; xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x metodě xxxxxxx x části 4 této xxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x touto metodou.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), čerstvě xxxxxxxxxx xxxxxx pepsinu v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (např. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v xxxx 3 xxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Vodní xxxxx nebo inkubátor xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Mineralizační a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x xxxxxx s xxxxxxxxx na 1 xx x xxx xx xx odměrné xxxxx o xxxxxx 500 xx. Xxxxxx 450 xx roztoku xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °X. Xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx. Xxxxxx, že xx xX suspenze xxxxx xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx xx vodní xxxxx xxxx inkubátoru (4.1) a nechat xx xxx 48 xxxxx. Xxxxxxxxx po 8, 24 x 32 hodinách. Po 48 xxxxxxxx přidat 15 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxx xx 20 °X, xxxxxxx xx rysku xxxxx x filtrovat.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx nezbytná xxx xxxxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx druhé xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxx. Xxxxx xx vytvoří pěna, xxxxxx xxxxxxx kapek xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx, xxxxx se xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Snížit ohřev x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stopy vody.
Když xx roztok čirý x bezbarvý (světlezelený, xxxxx xx použije xxxxxxxxxxx xx bázi xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx další xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Destilace x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Slepý xxxxx
Xxxxxxx xxxxx pokus xx xxxxxxx stejného postupu, xxx bez xxxxxx, xxxxx má xxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx kyseliny sírové xxxxxxxxxxxx během slepého xxxxxx xx objemu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 mg xxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx dusíku xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx nesmí xxxxxxxxx:
- 0,4 absolutní hodnoty xxx xxxxx nižší xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xxx 20 % a xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx vyšší xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx souvislost xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx.
7.2 Xxxxxxx o xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 10 % xxxx xxx odtučněny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX AKTIVITY XXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pepsinem x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x prostředí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Nehydrolyzovaná xxxxxx proteinů xx xxxxxxx xxxxxxxxx trichloroctovou. Xx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx sodný x xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx tohoto xxxxxxx xx měří xxx 750 xx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx odečte x xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx pepsinu je xxxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx minutu xxxxxx xxxxxxxx hydroxyarylových xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx optické xxxxxxx xxxxxxx μmolu xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,025 X.
3.4 5 % roztok (m/V) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Folin-Ciocalteu. Xxx 100 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 25 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 xx xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx x kulatým xxxx x normalizovaným xxxxxxxx. Přidat 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) a 100 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19), xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx chladič, xxxxx xx varu x udržovat xxxxxx x xxxxxx xxxx xx dobu 10 xxxxx. Nechat xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxx 175 g xxxxxx xxxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 50 xx vody x 1 xx xxxxx. Xxxxx xx dobu 15 xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx přebytek xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Přelít xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 x, doplnit xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx a filtrovat. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Před xxxxxxxx xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 objemy xxxx.
3.7 Roztok xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx množství xxxxxxxxxxx, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 354 xx xxxxxx [1] x xxx xx baňky x xxxxxx 200 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx baňku x xxxxxxxx pumpou x xxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx xx 100 xx. Připravit bezprostředně xxxx použitím.
3.8 Standardní xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx 181,2 xx xxxxxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) ve 100 xx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μmol xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Vodní xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °X + 0,1 °C.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Stopky, xxxxxxxx: 1 xxxxxxx.
4.4 pH xxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx poznámky 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx ve 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx x xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.3). xX xxxxxxxxxxxx xX xxxxxx musí xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx do vodní xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx lázni (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx pohyby xxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zesílenou na xxxxxx konci. Xxxxxx xxxxxxxx ve vodní xxxxx xxx 25 °X xxxxxx xx xxxx 10 minut, xxxxxxxx xx přidání xxxxxxx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx xxxx xxx přesně xxxxxxxx). Xxxx přidat 10,0 xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 25 °C, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx suchý filtr.
5.3 Xxxxx zbarvení a xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxx, xxx xx do Xxxxxxxxxxxxx baňky o xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx zředěného xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 xx 10 xxxxxxxx stanovit optickou xxxxxxx roztoku spektrofotometrem xxx 750 xx x xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxx s xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxx provést xxxxx slepý xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx lázni (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřáté na 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x xxxx přidat 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 10 xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °C. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 5.3.
5.5 Kalibrační xxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, x 5,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx, xxxxx odpovídá 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.1) na 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx větě xxxx 5.3. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxxxxx, které xxxxxxxx optické xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxx x μxxxxxx xxxxxxxx xx 1 mg x za jednu xxxxxx xxx 25 °X xx vypočítá xxxxx vzorce:
Jednotky xx xx (x/xx) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μmol xxxxxxxx z kalibrační xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx v xx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Množství xxxxxxx, xxxxx xx xxx rozpuštěno, xxxx xxx xxxxxx, xxx xxxx xxx konečném xxxxxxxxxxxxx měření xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx xx xx xxxxxxx touto metodou xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx milijednotkám/mg (μxxxx tyrosinu/mg min. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 komerčních jednotek/g (μxxxx xxxxxxxx/x xx 10 xxx. xxx 35,5 °X).
5. STANOVENÍ XXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx volný xxxxxxxxx, xxxxxxx gossypolu x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx mouce a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx látky xxxxxxxx. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xxxxxx xx 20 xxx.
2. Princip
Gossypol xx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, x xx buď xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx dimethylformamidem xxx xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxx. Gossypol xx xxxxxxxxxxxxxxx anilinu přeměněn xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx je xxxxxx xxx 440 xx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx a hexanu: xxxxxxx 60 objemových xxxxx xxxxxxxxxxxx x.x. xx 40 objemovými xxxxxx n-hexanu.
3.2 Rozpouštědlo X: do xxxxxxx xxxxx x objemu 1 x nalít xxx 500 xx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 50 xx vody. Xxxxxxx xx rysku směsí xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Trvanlivost tohoto xxxxxxx je xxxxx xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx X: xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 xx 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx a 10 ml xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxx.
3.4 Anilin x.x.: xxxxx optická xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Toto xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx několik xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x hnědého xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx gossypolu X: do odměrné xxxxx x xxxxxx 250 ml dát 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Rozpustit a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx 50 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx rozpouštědlem X. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxx xx 0,02 mg/ml. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx dobu xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxx B: xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 ml xxx 27,9 mg xxxxxx gossypolu. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,5 mg/ml.
Pokud xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx A a X chráněny xxxx xxxxxxx, jejich xxxxxxxxxxx xx 24 hodin.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 ot./mim.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Zkušební xxxxxx
Xxxxxxxx zkušebního xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx. Je výhodné xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx zkušebního xxxxxx x relativně xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx filtrátu, xxx xxxx xxxxx xxxxxx dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxxx měření. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x bavlníkových xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 x; xxx xxxxx směsi xx může být 5 x. Xx xxxxxxx případů xx xxxxxxxxxx alikvotní xxxx 10 xx xxxxxxxx; xxxx by obsahovat 50 xx 100 μx gossypolu. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx mělo xxx xxxx 0,5 a 5 x, aby xxxxxxxxx xxxx 2 xx filtrátu obsahovala 40 až 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx by xx měla xxxxxxxx xxx pokojové teplotě xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 250 ml, xxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx pipety xxxxxx 50 ml rozpouštědla X (3.2), zazátkovat xxxxx a xxxxx xxxxxx promíchávat x xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxx filtr a xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx baňce se xxxxxxxxxx hrdlem. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Pomocí xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x X) x xxxxxx 25 ml xxxxxx alikvotní xxxxx xxxxxxxx obsahujícího 50 xx 100 μg xxxxxxxxx. Případně xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) xx 10 xx. Poté doplnit xx rysku baňku (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx pipety xxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2) do xxxx jiných odměrných xxxxx (X a X) x xxxxxx 25 xx. Doplnit xx xxxxx xxxxx (X) směsí isopropanolu x hexanu (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx referenční xxxxxx pro měření xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (X) a (X). Zahřívat 30 xxxxx nad vroucí xxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx, doplnit xx xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx xxxxx hodinu.
Stanovit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 440 xx a xx xxxxxxxxxx kyvetách x xxxxxxxx 1 cm xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (A).
Odečíst xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx od xxxxxxx hustoty xxxxxxx xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx). Z xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx volného xxxxxxxxx, xxx xx uvedeno x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 xx 5 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx x xxxxxx 10 xx rozpouštědla X (3.3). Xxxxxxxx připravit xxxxx xxxxx x xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx xxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Xxxxxxxx xxx xxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu x xxxxxxx xx xxxxx xxx baňky xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x nechat stát 10 až 15 xxxxx, xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx pipety xxxxxx 2 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx odměrných xxxxx x objemu 25 ml x 2 xx xxxxxxxx xxxxxxx pokusu xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 xx. Doplnit xx 25 xx xxxxx xxxxx xxxxx x každé série xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Tyto xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4) do dvou xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní lázní, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx hodinu.
Stanovit optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.2. X této hodnoty xxxxxxxxx xxxxx celkového xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx může xxxxxxx buď na xxxxxxx specifické xxxxxxx xxxxxxx (6.1), nebo xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx podmínek xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx tato:
volný xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: X 1% / 1xx = 600
Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx gossypolu xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1 250 / E1%1cm · · x · x
xxx:
X = opravená xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx je uvedeno x bodě 5.2
p = zkušební xxxxxx x x
x = xxxxxxxxx xxxx filtrátu x ml
6.2 Na xxxxxxx xxxxxxxxxx křivky
6.2.1 Xxxxx gossypol
Připravit dvě xxxxx po xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 xx. X xxxxx série xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) xx 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx po xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), homogenizovat x xxxxxx stát xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x bodě 5.2 stanovit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx série xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx referenční xxxxx. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (v μx).
6.2.2 Xxxxxxx gossypol
Připravit 6 xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Do xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx 10 ml xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.6). Xxxxxxx xxxxx xxxxx baňky xx 10 ml xxxxxxxxxxxxx B (3.3). Xxxxxxxx 30 minut xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx na xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx a hexanu x xxxxxxxxx.
Xxxxxx pipetou 2 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx o 6 xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 ml. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx na 25 ml xxxxx x xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1) (referenční xxxxx).
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx druhé série 2 xx xxxxxxx (3.4). Zchladit na xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx hustotu xxxxxxxxxx xxxxx roztoků xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx série. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx množství xxxxxxxxx (x μx).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % relativní hodnoty xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx než 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % relativní xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx: 17,7 % dusíku).
PŘÍLOHA XX
1. XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX TETRACYKLINOVÝCH XXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
2. Princip
Vzorek xx extrahuje xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx xxxxxxxx papírové xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx stanovena x identifikována porovnáním xxxxxx xxxxxx Xx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, a xx xxx fluorescencí x XX xxxxxx (xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx), xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx kyseliny xxxxxxxxx x.x. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X p.a. |
7,45 x |
|
Xxxxxx x.x. |
300 ml |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 ml |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X p.a. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx I: směs xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před použitím |
|
|
3.4 Xxxxxx XX xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 objemově. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx, jejichž xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus XXXX x. 11778
Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx suspenze xxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx: řídit xx xxxxxx xxxxx xxxx 3.1. a 3.2. xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx x tetracyklinu xxxxxx na xxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx přílohy.
3.10 Kultivační xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx upravit xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x 5 % (x/X) xxxxxx glukosy.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxx 25 xx). Xxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxx (2440X xxxx 2043X) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx stanovení xxxxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx xxx 20 x 30 xx xxx bioautografii.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) a xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.6) připravit xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx roztoky xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx získat xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.3 Referenční roztoky xxx stanovení xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 5 μx chlortetracyklinu-HCL, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx antibiotika nižší xxx 10 ppm, xx xxxxx xxxxxx xxx homogenizovaný xxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, neboť xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Sebrat xxxxxxxxxxx x použít ho xxxxx xxxx ho xxxxxxxx zředit směsí (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 100 μx xx 1 xx (6.1) x 5 μx na 1 xx (6.2).
7. Stanovení x identifikace
7.1 Chromatografie
Ponořit xxxxx xx pufračního xxxxxxx, xX 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx přebytek xxxxxxxx vtlačením xxxxxx xxxx xxxxx suchého xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx 0,01 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) x xxxxxxxx (6.1 x 6.2). Xxx dobré xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx; xxxxx xx xx nutné, xxxxxx trochu xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Použít xxxxxx X (3.3) xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx II (3.4) xxx stanovení XX světlem. Xxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxx xxxxx 15 xx 20 xx (xxx 1 xxxxxx 30 xxxxx), přerušit xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx UV světlem
Když xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 1 μx/xx2, je xxxxx xx xxxxxxxx chromatogramu xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx pod XX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), xxxxx xx předem xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx skleněné xxxxx (4.5) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx, kde xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx přes xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotika xx projeví xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx kultivačním xxxxx.
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (3.11) na xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx Xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx jakosti xxxxxx x jeho xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (XX) |
0,40 |
|
Xxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "xxx" sloučenin xx xxxxx než xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX CHLORTETRACYKLINU, OXYTETRACYKLINU X XXXXXXXXXXXX
X. DIFÚZÍ XX XXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx chlortetracyklin (XXX), oxytetracyklin (OTC) x xxxxxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Xxxxxx xxxxx xxx 5 xxx xxxxx xxx určeny xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx xxx 50 xxx se vzorek xxxxxxxxx xxxxxxxx formamidem. X obsahů vyšších xxx 50 xxx xx vzorek xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové xxx xxxxxxxxx CTC x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x XX.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx CTC, XXX xxxx TC xx xxxxxxxx médiu naočkovaném X. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat B. xxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx borité. Inkubovat xxxx xxx při xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem (3.1) xx použití 2 až 3 xx fyziologického solného xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx suspenzi xx Xxxxxxx baňky xxxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx borité, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx je 3 xx 4 %. Inkubovat 3 xx 5 dní xxx 28 až 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.6) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx sporulace, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx x chladničce skladovat xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x bazálním xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx pro použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxx xxxxxxxx je xxxxxxx 0,2 a 0,3 xx na 1000 ml. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média se xxxxxxx xxx 50 xx 60 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
"Tween 80" |
1 ml |
|
Fosfátový xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (m/V) xxxxxx kyseliny xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % ethanolový xxxxxx xxxxxxxxxxx modře |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx upravit xX na 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx pufr, pH 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2H2O x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Fosfátový xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Na2HPO4 · 2H2O x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) ethanol.
4.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: připravit čerstvý xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xx xX 4,5 za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx asi 2 X.
4.9 Směs xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx látky: XXX, XXX, XX, jejichž xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Chlortetracyklin
Na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx koncentrace odpovídá 500 μg chlortetracyklinu-HCL xx 1 ml. Xxxxx xxxxxx se xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx chlortetracyklinu-HCL xx 1 ml. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), do xxxxxxx xxxx xxxxxxx 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Xxxx připravit xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,05 |
μg/ml |
|
S1 |
0,025 |
μg/ml |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 1,6 μg xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx a tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Tetracyklin
Postupem xxxxx xxxx 5.1 připravit xx základě zásobního xxxxxxx, jehož koncentrace xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, standardní pracovní xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 1,0 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx xxxxx xxxx nižní xxx 50 xxx
Xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (4.8) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x tabulce. Xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxx ihned xxxxxx fosfátovým xxxxxx (4.3) xxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxx získat xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x tomto roztoku xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxxx roztok. Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Antibiotikum |
CTC |
OTC |
TC |
|||
|
Předpokládaný xxxxx x ppm |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Zkušební xxxxxx x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
xxx. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx U8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx nebo xx xxxx xxxxxxx xxxxxx přidat xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 až 10 x 20xx xxxxxxx jeho objemu xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx musí xxxxxx pH xxxxx xxx 3; xxxxx xx to xxxxx, xxxxxxx xX xx 3 (u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu x xxxxxxx xX xx 5,5 za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8,0 (4.4), za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně (xxxxxx xx ze xxxxx xx xxxxxx). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx koncentraci U8 (xxx 6.1).
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.2.1 xxx, že xx xxxx (4.9) nahradí xxxxx (4.10).
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx za xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, U4,U2, X1). Každá miska xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x takové velikosti, xxx xxxx xxxxx xxxxxx v agarovém xxxxx xxxxxxx 8 xxx x průměru 10 až 13 xx. Vypočítat množství xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.1), xxxxx xx xx použít pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstvy x xxxxxxxx xxx 2 xx. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx z xxxxxxxx skleněných desek x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxx.
X každého xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx misky xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo k xxxxxxxxxxxx, xxx křivky xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vypočítá xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + U8 - X1 -X2 -X4 -X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - X1 -X2 -X1 -X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx aktivita x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit chlortetracyklin (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (XX) xxx koncentracích xxxxxxx xxx 1 x/xx, xxxxx xxxxxxxxxx žádná xxxxx, xxxxx by xxxxxx vzniknout matným xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx na xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx stanovení xxxxxx XXX xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx obsahu OTC x XX xxxxx xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx poté xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx měřením světelné xxxxxxxxxxxx kultivačního xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx aureus x xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx xx xxxxx 1,5 až 3 % xxxxx (xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx na šikmý xxxx. Zároveň připravit xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx očkovací xxxxx
24 xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx šikmý xxxx subkulturou x xxxxxxxxx přes noc xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx celou xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxx 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) a xxxx přenést xxxxxxxx xx sterilních podmínek xx xxx 100 xx stejného xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xx vodní xxxxx xxx 37 °X xxxxx xxxx kmene xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx fáze (1x30 xx 2h).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Bazální médium xxx xxxxxxxxx [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 g |
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
xX xx sterilizaci: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.4 Xxxx xxxxxxx acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Asi 10 % (x/X) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, OTC, TC, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (4.3) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 až 500 μx CTC-HCL, OTC-HCL xxxx XX-XXX xx 1 xx. Tento xxxxxx xx xxxxxxxx x chladničce xxxxx xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 až 2 x xxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx o objemu 200 xxxx 250 xx dát 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 ml xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxx pufrem, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx série xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx kalibrační xxxxxx, ne xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx k xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx podle podmínek xxxxx xxxxx, které xx xxxxx lišit xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xx postupuje xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx CTC-HCL xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx je uvedeno xxxx a xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 6 ředění, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku |
ml xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx extrakt (6.1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,12 μx XXX-XXX. Dát 1 ml tohoto xxxxxxx do xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxx xxxx jiných xxxxxxxx xx 1 xx fosfátovým pufrem (4.2).
7.1.2 Oxytetracyklin x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,6 μx OTC-HCL xxxx XX-XXX na 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2), xxx je xxxxxxx xxxx x ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 7 ředění, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Zředit xxxxxxx (6.2) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,48 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX na 1 xx. Xxx 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,5 xx (= 0,24 μg) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxx xxxx xxxxxx zkumavek xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) s xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx při 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v 5 xx xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 cm kyvetě xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx nenaočkovaného xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx xxxxx xxxxxxxx (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 ml naočkovaného xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx prostředí.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx 37 °X + 0,1 °X. Xxxxxxxxx doba xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx možné xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx gradient xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx (obecně 2h30 xx 3h). Xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) xx xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx xxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx na 100 % propustnost xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx nejvyššímu obsahu xxxxxxxxxxx). Z xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx různých xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx použít xxxxxxx 2 xx x xxxxxx 5 xx xxxxxx.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx propustnosti xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
3. XXXXXXXXX OLEANDOMYCINU
- difúzí xx agaru -
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxx v krmivech, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx, x xx dokonce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx zředěným xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (hydroximethyl) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zředí x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se stanoví xxxxxxx difúze xxxxxxxxxxxxx xx agarovém xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx se projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx, X 250 TR [8] (xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Udržování rodičovského xxxxx
Xxxxxxxxx B. xxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxx agarem odebraným x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxxxx 100 μg oxytetracyklinu xx 5 xx. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx xxx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 xx kultivačního média (4.1), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 až 5 dní xxx 28 xx 30 °X, poté smýt xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx suspenze xx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nejméně 5 měsíců.
Předběžnými testy xx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) určit xxxxxxxx očkovací látky, xxxxx umožní xxxxxx xxx různé použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, ale ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,1 x 0,2 ml na 1000 ml. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 až 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
|
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,5. |
4.2 Xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení [10]
Xxxxxx (4.1) xxxxxxxx xx xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (m/V) xxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) aminometanu x.x.
4.7 Xxxxxxxxx xxxxxx
|
Xxxxx xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 x |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: oleandomycin x xxxxx aktivitě.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx látku (4.8) x 5 xx methanolu (4.5) x xxxxxx roztokem (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx oleandomycinu 100 μg/ml.
Na xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Extrakce
V xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx přidat do xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx 2 xx 10 x 100 xx roztoku (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou.
Odstředit, xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu x xxxxxx roztokem (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,1 μx oleandomycinu xx 1 ml (= U8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X xxxxxxxx spór (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx použití xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, S4, X2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, U1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx o xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx médiu xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx má xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x tloušťce xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx sestávajících xx x plochých xxxxxxxxxx xxxxx x dokonale xxxxxx hliníkovým xxxx xxxxxxxxx kroužkem x xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx do xxx xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 a 0,15 xx, v závislosti xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx čtyřikrát x každou xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx stanovení xxxxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx během 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Zaznamenat xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 - X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- difúzí na xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx ošetří xxxxxxxxxx pufračním xxxxxxxx x pH 8, xxxxxxxxxxx na 80 °X, a poté xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx odstředění se xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx stanoví měřením xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx médiu naočkovaném Xxxxxxx lutea. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx zón je xxxxx úměrný logaritmu xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx ATCC x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Sarcina xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx asi 35 °X. Skladovat xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx xxxxx měsíc xx šikmý agar.
3.2 Xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx ze zkumavky xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx použití 2 až 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Naočkovat xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 250 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxxxxxx xx xX 7,0. Inkubovat 24 xxxxx xxx 35 °X, poté xxxx bakterie za xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx suspenzi x xxxxx xxxxxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx trvanlivost xx xxxxx týden.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx použité koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx možné, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zóny. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 48 xx 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Bazální médium xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, podle jakosti |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
Xx xxxxxx udržování rodičovského xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx upravit xX na7,0 a xx xxxxxx xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxxx pufr, xX 7
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 60/40 objemově.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: tylosin x xxxxx xxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °C xx vakuové xxxxxxx (5 xx xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 xx xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxx fosfátovým xxxxxx, pH 7 (4.3) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx základního xxxxxxxx 1000 μg/ml.
Na xxxxxxx xxxxxx zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx tylosinu xx 1 xx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7) xxxx koncentrace:
|
S4 |
1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,5 |
μg/ml |
|
S1 |
0,25 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx; xxx xxxxxxx a xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx xxxxxxxxxxx pufru, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxxxxxxxxxxx 2 minuty (xxxxxxxxx xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxxxxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxx extrakt a xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx (4.7) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, U2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7).
Xxx xxxxxx xxxxx xxx 10 xxx xxxxxxx xxxxxxx do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 35 °X x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxxxxxxx na xX 8 xxx 48 xx 50 °X suspenzí xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx agaru se xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, S4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, X1). Každá xxxxx musí obsahovat xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu.
Za xxxxx účelem xxxxxx xxxxx x takové xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx udělat x xxxxxxxx médiu nejméně 8 xxx o xxxxxxx 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx má xxxxxx xxx získání stejnoměrné xxxxxx o xxxxxxxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx misek xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných desek x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x průměru 200 xx a x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx antibiotika mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx průměru děr.
U xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nejméně xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx 35 xx 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zanesením xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx zón. Xxxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx x extraktu. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx křivky budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vypočítá xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 - X1 - S2 - X4 -S8) · 0,602 / X4 + X8 + S4 + X8 - U1 - X2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
5. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx na xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx stanovení xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Tween 80". Po xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx virginiamycinu na xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Průměr xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx x xxxxxxxxxxxx média (4.1). Xxxxxxxxx xxxx xxx při xxx 35 °X. Skladovat xxxxxxx v xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každých 14 dní xx xxxxx xxxx.
3.2. Příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 ml xxxxxxxxxxxxxx solného xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx kultivačního média (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx smýt xxxxxxxx xx xxxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx asi 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx jeden xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx deskách x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, které umožní xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx zřetelné xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx provádí xxx 48 xx 50 °X.
4. Kultivační xxxxx x činidla
4.1 Xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx pH xx 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 p.a. |
8,0 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx voda xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 Xxxxx methanol.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Xxxxx 80" (x/X).
4.7 Standardní xxxxx: xxxxxxxxxxxxx x známé xxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μx virginiamycinu xx 1 xx. Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx směsí (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 1 μx virginiamycinu xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1+) xx xxxxxxx xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Extrakce
6.1 Výrobky x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 až 20 x zkušebního xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, odebrat 20 xx xxxxxx roztoku x odpařit xx xxxxx x rotačním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 xx xxxx více xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx předpokládanou koncentraci 1 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml (= U8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 g xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 ml xxxxxxx (4.6) x protřepávat 30 xxxxx třepačkou. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxx xxxxxx směsí (4.5) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μg virginiamycinu xx 1 xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1, xxx xx xxxxxxx x bodě 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat bazální xxxxxx pro stanovení (4.1) xxx 48 xx 50 °C xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx provádí x xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, U4, X2, X1).Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx o průměru 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx asi 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx přesně xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U každého xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx čtyřikrát x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx stanovení zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxx noc xxx 35 až 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit průměr xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx průměru inhibičních xxx. Načrtnout křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 -X1 - X2 - S4 - S8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[3] Xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxx).
[6] Xxxxx xxxx izolovaný x Xxxxx podle XXXX xxxxxxxx rychlejší xxxx xxx X. aureus XXXX 6538 X.
[7] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Xxxx izolovaný x Kielu podle XXXX.
[9] Může být xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[11] Xxxx být použito xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Může být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.