Třetí Směrnice Xxxxxx
xx xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx a analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], a xxxxxxx xx článek 2 xxxxxxx směrnice;
vzhledem x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x složení xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxx 1971 [2] x 71/393/XXX xx xxx 18. listopadu 1971 [3] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx xx stav xxxxxxx provedených prací xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxx xxx x obsahy xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, volného x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, jakož x x xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx I xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx směrnice Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. června 1971, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx X této xxxxxxxx.
Článek 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x stanovení x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx x o xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, oleandomycinu, tylosinu x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, se xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx II xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v části 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Komise x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, s xxxxxxxx xxxxx týkající xx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Článek 3
Xxxxxxx státy xxxxxx x účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx souladu s xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 1. července 1973. Neprodleně x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Článek 4
Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 27. dubna 1972.
Za Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Xxxxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX X
1. STANOVENÍ XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx metoda
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu x krmivech, x xxxxxxxx xxxx krmiv, xxxxx obsahují řepné xxxxx, xxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx kvasnice, xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx (např. xxxxx x xxxxxx z xxxxxxxxxx) nebo xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxx xx tepla xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx a xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx rotace xxxxxxx.
Xxx druhém xxxxxxxxx xx vzorek xxxxxxxxx 40 % xxxxxxxxx. Xx okyselení filtrátu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, čiření x filtraci se xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx podmínek xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx udává obsah xxxxxx xx xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X x xx přítomnosti 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (X/X) xxxxxxxx. 10 ml = 30,94 xx 0,1 X NaOH.
3.3 Carrezův xxxxxx X: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x xxxxxx xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x xxxxxx kyseliny xxxxxx. Doplnit vodou xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx II: xxxxxxxxx xx vodě 10,6 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [K4(Fe(CN)6].3H2O. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, x: 0,948 xxx 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o objemu 250 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx chladičem.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxx sítem x xxxxxxxx xxx x xxxxxxx 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx celkové xxxxxxx xxxxxx (X xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x vzorku s xxxxxxxxx na 1 xx x xxx xx do odměrné xxxxx x xxxxxx 100 ml. Xxxxxx 25 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2), protřepat, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxx lázně x xx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx silně x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Množství xxxx xx xxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxxxx, xxx i xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx lázeň xx xxxx varu. Baňka xxxxx být xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx 15 minutách vyjmout xxxxx x xxxxx, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx x xxxxx zchladit na 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) a xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxx přidat 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx XX (3.4) x xxxx jednu xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx filtrát xxxxx xxxx (což xx xxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxx xx použití xxxxxxx xxxxxxxx Carrezova roztoku X x XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x 200 xx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X’ xxxx S’) xxxxx xxxxxxxxxxx ve 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx, xxx ho xx odměrné xxxxx x objemu 100 xx a přidat xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Poté xxxxxx xxxxx stát xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx silně protřepat, xxx xx zkušební xxxxxx xxxxx smíchal x ethanolem. Xxxxxxx xx xxxxx ethanolem (3.5), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x vzorku) do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 ml, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x silně xxxxxxxxx. Xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x ponořit xx xx vroucí vodní xxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx vyjmou Xxxxxxxxxxxxx baňku z xxxxx xxxxx, přelít xxxx obsah do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vodou x xxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx za xxxxxxx Xxxxxxxxx roztoku X (3.3) a XX (3.4), xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx rotaci, xxx xx xxxxxxx v xxxx 5.2 xxxxxx x třetím xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx (%) se xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Měření xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - X’) / [α]D20°
kde je:
P = celková optická xxxxxx, x úhlových xxxxxxxx.
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx xxxxx
+ 195,4°: bramborový xxxxx
+ 184,6°: xxxxxxxxx xxxxx
+ 182,7°: pšeničný xxxxx
+ 181,5°: ječný škrob
+ 181,3°: ovesný škrob
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx a směsi xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Xxxxxx sacharimetrem
Procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]X20° · (2 N · 0,665) (X - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx rotace, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx rotace xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % ethanolu, ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx 100 xx xxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxx 200 mm optickou xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:
16,29 x xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 x xxx německé xxxxxxxxxxxx
20,00 x pro smíšené xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = specifická xxxxxxx rotace xxxxxxx xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 0,4 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx škrobu xxxxx xxx 40 % a 1 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx vyššího xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 6 % uhličitanů, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, uhličitany xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx rotace xxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx zředěné kyseliny xxxxxx.
7.2 X xxxxxxx xxxxxxxx x vysokým xxxxxxx laktózy, xxxx xx sušené xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx mléko, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, ponořit xx xx 30 xxxxx xx vodní xxxxx x xxxxxxx 50 °X. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v bodě 5.3.
2. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx dusíku xxxxxxxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx mokra. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu sodného. Xxxxxxxx amoniak se xxxxxxxxxxx x shromáždí xx x odměřeném xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx roztokem xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx p.a.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx měďnatý XxX x.x. nebo xxxxx xxxxxxx pentahydrát XxXX4 · 5X2X x.x., xxxx xxxx nebo xxxx xxxxxxxx HgO x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx xxxxx x.x.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx x.x., d: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxx 0,5 N.
3.7 Indikátor xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx methylčerveně ve 100 xx 95-96 % (V/V) ethanolu.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N.
3.10 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného x.x.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Granulovaná xxxxx, xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x zpopelněná.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x destilační xxxxxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1).
5. Postup
5.1 Mineralizace
Navážit 1 x xxxxxx x přesností na 1 xx x xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 x xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx katalyzátoru (3.2) (0,3 xx 0,4 x xxxxx xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxx 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx sírové (3.4) x xxxxxxx granulí xxxxx (3.13), promíchat xxxxx xxxxx. Zahřívat xxxxx, xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, dokud xxxxx xxxxxxxxxxx x pěna xxxxxxx; xxxx zahřívat xxxxxxxxxxxx dokud xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx stěn xxxxx x přilnutí xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx je xxxxxx čirý a xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxx katalyzátor xx bázi xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Destilace
Opatrně x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, aby xx xxxxxxx zcela rozpustily; xxxxxx xxxxxxxxxxx; poté xxxxxx xxxxxxx granulí xxxxx (3.3).
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxx destilační xxxxxxxxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,5 X (3.6) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (xxx poznámky 7.2) x xxxxxx xxxxxxx xxxxx indikátoru methylčerveně (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx baňce xx xxxxxxx xxxxxxx 1 xx (xxx xxxxxxxx 7.3). Xxxx xxxxxxx x kohoutem xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 100 xx 40 % roztoku xxxxxxxxx sodného (3.8). Xxxxx byl použit xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxxx buď 10 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 ml xxxxxxx thiosíranu xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xx 30 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Po xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx lakmusového xxxxxxx. Pokud je xxxxxx alkalická, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Ukončit xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xx xx xxxxxxxx neutrální. Xxxxx destilace xxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx sběrné xxxxx x pozorovat zbarvení. Xxxxx xxxxx ke xxxxxxxx do xxxxx, xxxxx xxxxxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 N (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx žlutou.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx slepý pokus (xxxxxxxxx x xxxxxxx), x xx bez xxxxxx, xxxxx xx xxx analyzován. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx provede xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx p.a. (b.t. 114 °X; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 x acetanilidu xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx sírové 0,5 X.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kyseliny xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx dusíku. Xxxxxxxxx xxxxxxxx dusíku xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx vyjádřit xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení provedených x jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx než 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 absolutní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx xxxx mineralizací x xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx provést xxxx ztrát.
7.2 X xxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxx dusíku xxxx xxx objem kyseliny xxxxxx 0,1 X, xxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx, snížen xx 10 až 15 xx a xxxxxxx xxxxx na 25 xx.
7.3 Xxxxx xxxx baňka xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, přidat hydroxid xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx baňky xxx, xxx xx nesmíchala x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXX PEPSINEM A XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx frakci xxxxxxx proteinů rozpustných xxxxxxxx a kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx za stanovených xxxxxxxx. Xxxxxx je xxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx hrubých proteinů.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina chlorovodíková, x: 1,125.
3.2 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 x/xx pepsinu; xxxxxxxx pepsinu xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x části 4 xxxx xxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pepsinu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 j/l.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (např. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x bodě 3 metody xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Vodní xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx aparatura podle Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx roztoku (xxx xxxxxxxx 7.2)
Navážit 2 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx a dát xx xx xxxxxxx xxxxx x objemu 500 xx. Xxxxxx 450 ml xxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °X. Xxxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx. Xxxxxx, xx je xX xxxxxxxx xxxxx xxx 1,7. Vložit xxxxx xx xxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxxx (4.1) a xxxxxx xx tam 48 xxxxx. Xxxxxxxxx xx 8, 24 a 32 hodinách. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxx 15 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxx xx 20 °X, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 mg x xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx nezbytná xxx xxxxxxxxxxxx, jak je xxxxxxx x metodě xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxx, ve druhé xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx x silném xxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Snížit xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx vody.
Když xx roztok čirý x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx na bázi xxxx), udržovat xxx xxxxx další xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Destilace x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, xxx xx uvedeno x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Xxxxx pokus
Provést xxxxx pokus za xxxxxxx xxxxxxxx postupu, xxx xxx xxxxxx, xxxxx má být xxxxxxxxxx.
6. Výpočet výsledků
Odečíst xxxxx kyseliny xxxxxx xxxxxxxxxxxx během slepého xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx zkušebním xxxxxxx. 1 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 mg xxxxxx.
Xxxxxxxxx množství dusíku xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx:
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % relativní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxx metodou xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx.
7.2 Xxxxxxx o xxxxxx xxxx xxxxxx než 10 % xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX PEPSINU
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pepsinu xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pepsinem x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx ošetří xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x prostředí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Nehydrolyzovaná xxxxxx proteinů xx xxxxxxx xxxxxxxxx trichloroctovou. Xx filtrátu xx xxxxx hydroxid xxxxx x xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se xxxx xxx 750 xx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx odečte x xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx pepsinu je xxxxxxxxxx jako množství xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx uvolní xx minutu takové xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx skupin, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx má xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,025 X.
3.4 5 % xxxxxx (m/V) xxxxxxxx trichloroctové.
3.5 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxx 100 g xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 25 x molybdenanu xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 xx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx x normalizovaným xxxxxxxx. Přidat 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) x 100 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19), xxxxxxxx baňku xx xxxxxx chladič, xxxxx do xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxx 10 xxxxx. Xxxxxx vychladnout, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxx 175 x xxxxxx xxxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 50 xx vody a 1 xx xxxxx. Xxxxx xx xxxx 15 xxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx vychladnout. Xxxxxx xxxxxx do odměrné xxxxx o xxxxxx 1 x, doplnit xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Roztok xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx množství xxxxxxxxxxx, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx substrátu xxxxx Xxxxxxxx xxxxxx odpovídajícího 354 xx dusíku [1] x xxx xx xxxxx x xxxxxx 200 xx x xxxxxxxxxxxxxx zábrusem. Xxxxxx xxxxxxx ml xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Xxxxxx baňku s xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx, dokud xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkovou (3.2) xx xx 100 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx 181,2 xx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) a xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx kyselinou (zásobní xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) ve 100 xx. 1 xx tohoto roztoku xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx nastavená xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °C + 0,1 °C.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, xxxxxxxx: 1 xxxxxxx.
4.4 pH xxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx poznámky 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx ve 100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Odpipetovat 2 xx xxxxxxx x xxx xx do xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.3). pH xxxxxxxxxxxx xX metrem xxxx xxx 1,6+0,1. Ponořit xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx pepsinu xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 x xxxxxxxxx asi xxxxxx xxxxxx tam x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx při 25 °X xxxxxx xx xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pepsinu (doba x xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx). Xxxx přidat 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 25 °C, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat xxxx xxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx hustoty
Odpipetovat 5,0 ml filtrátu, xxx xx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx hydroxidu sodného (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 xx 10 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 750 xx x xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x porovnání x xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx pokus:
Odpipetovat 5,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, zahřát xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxx na 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxx 1,0 ml xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx zkumavku xxxxxx 10 xxxxx ve xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx suchý xxxxx. Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx v xxxx 5.3.
5.5 Kalibrační xxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, a 5,0 ml xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tyrosinu, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μmolu xxxxxxxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx tyrosinu. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (3.5) x xx stálého xxxxxxxxxxxx 3,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx je xxxxxxx x xxxxxxxx větě xxxx 5.3. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x μmolech, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku a xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxx x μxxxxxx xxxxxxxx xx 1 mg x xx xxxxx xxxxxx xxx 25 °X xx xxxxxxxx xxxxx vzorce:
Jednotky xx xx (x/xx) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxx xxxxxxxx z kalibrační xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx v xx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx, musí xxx takové, xxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx xx mg xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx milijednotkám/mg (μxxxx xxxxxxxx/xx xxx. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 xxxxxxxxxx xxxxxxxx/x (μxxxx xxxxxxxx/x xx 10 xxx. xxx 35,5 °X).
5. STANOVENÍ XXXXXXX X CELKOVÉHO XXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxxxxxxx semenech, xxxxxxxxxx mouce a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xxxxxx xx 20 xxx.
2. Princip
Gossypol xx extrahován xx xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, a xx buď xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu xxx xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx, xxxx dimethylformamidem xxx stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx anilinu xxxxxxxx xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, jehož xxxxxxx hustota xx xxxxxx při 440 xx.
3. Činidla
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x.x. xx 40 objemovými xxxxxx n-hexanu.
3.2 Xxxxxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx x objemu 1 l xxxxx xxx 500 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-amino-1-propanolu, 8 xx ledové kyseliny xxxxxx x 50 xx xxxx. Xxxxxxx xx rysku směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx X: xxxxxxxxxxx do odměrné xxxxx o xxxxxx 100 xx 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx a 10 ml xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx N,N-dimethylformamidem. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.4 Xxxxxx x.x.: xxxxx xxxxxxx xxxxxxx slepého xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxx a posledních xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Toto činidlo xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx několik měsíců x xxxxxxxxxxx xxxxx x hnědého xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx gossypolu X: xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 ml xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2). Xxxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 ml 50 xx tohoto roztoku x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X. Xxxxxxxxxxx gossypolu x xxxxx xxxxxxx xx 0,02 xx/xx. Xxxx xxxxxxxx nechat xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Standardní roztok xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx xxx 27,9 xx xxxxxx gossypolu. Rozpustit x doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx roztoku xx 0,5 mg/ml.
Pokud xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X x X chráněny xxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 ot./mim.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx zkušebního vzorku xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx zkušebního xxxxxx x relativně xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx filtrátu, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxxx xxx přesné xxxxxxxxxxxx měření. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 g; xxx xxxxx xxxxx xx xxxx být 5 g. Xx xxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx alikvotní xxxx 10 xx xxxxxxxx; xxxx xx xxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx množství zkušebního xxxxxx mělo být xxxx 0,5 a 5 g, xxx xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx obsahovala 40 až 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 20 °C.
5.2 Xxxxxxxxx volného gossypolu
Dát xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxx baňky xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxx xxx je xxxxxxx skleněnými xxxxxx. Xxxxxx pipety přidat 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx a jednu xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Filtrovat xxxx xxxxx xxxxx a xxxxxxxx filtrát x xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx nálevku x kohoutem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx pipety xxxxxx do dvou xxxxxxxxx baněk (A x B) o xxxxxx 25 ml xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx doplnit xxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) xx 10 xx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) směsí isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx xxxx referenční xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx pro slepý xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 10 ml xxxxxxxxxxxx X (3.2) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (X a X) x xxxxxx 25 ml. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx měření xxxxxxx pro xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (D) x (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx lázní, aby xx xxxxxxxxx zbarvení. Xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 440 xx a xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx hustotu xxxxxxx xxx xxxxx pokus (X) porovnáním x xxxxxxxxxxx roztokem (C) x optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx x referenčním xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx roztoku pro xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (= upravená xxxxxxx hustota). X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx celkového gossypolu
Dát xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 xx 5 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx x xxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3). Současně xxxxxxxxx xxxxx pokus x xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx xxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Zahřívat xxx xxxxx 30 xxxxx nad vroucí xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx x doplnit po xxxxx xxx xxxxx xxxxx isopropanolu a xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x nechat stát 10 xx 15 xxxxx, poté filtrovat x zachytit xxxxxxxx x baňce xx xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 2 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx o objemu 25 xx a 2 ml xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx jiných odměrných xxxxx x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xx 25 ml xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx referenční xxxxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxx xxxxxx baněk. Zahřívat 30 minut nad xxxxxx vodní lázní, xxx xx vytvořilo xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx 25 xx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát xxxxx hodinu.
Stanovit optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.2. X této xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxx 6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx buď xx xxxxxxx specifické xxxxxxx xxxxxxx (6.1), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx specifická xxxxxxx xxxxxxx tato:
volný gossypol: X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: E 1% / 1xx = 600
Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx obsah xxxxxxxxx xx vzorku se xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1 250 / X1%1xx · · x · x
xxx:
X = opravená xxxxxxx xxxxxxx, stanovená xxx xx xxxxxxx x bodě 5.2
x = zkušební xxxxxx x x
x = xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
6.2.1 Xxxxx gossypol
Připravit xxx xxxxx xx pěti xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 xx. X xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.5). Doplnit xxxxxx rozpouštědlem A (3.2) na 10 xx.
Xxxxxxx baňky xxxxx xxxxx, včetně slepého xxxxxx, směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx 30 minut xxx xxxxxx vodní xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx, xxxxxxx po rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), homogenizovat x xxxxxx stát xxxxx xxxxxx.
Xx podmínek xxxxxxxxx x xxxx 5.2 stanovit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx série xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxx xxxxxxx hustoty xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.2.2 Celkový xxxxxxxx
Xxxxxxxxx 6 xxxxxxxxx baněk x objemu 50 xx. Do xxxxx xxxxx přidat xxxxxxx 10 ml rozpouštědla X (3.3) a xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.6). Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx B (3.3). Xxxxxxxx 30 minut xxx xxxxxx vodní xxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx x promíchat.
Přidat xxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx x 6 xxxxxxxxx baňkách o xxxxxx 25 ml. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xx 25 ml směsí x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx druhé xxxxx 2 ml anilinu (3.4). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx série).
Za xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx hustotu xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx optické hustoty xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.3 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % relativní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 ppm xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx obsah: 17,7 % dusíku).
XXXXXXX XX
1. XXXXXXXXX X IDENTIFIKACE TETRACYKLINOVÝCH XXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx antibiotika v xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 ppm xxxxxxxxxx, x koncentrátech x xxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx směsí xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx sestupné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx stanovena x xxxxxxxxxxxxxx porovnáním xxxxxx hodnot Xx x hodnotami xxxxxxxxxxxx xxxxx, x to xxx fluorescencí x XX xxxxxx (xxxxxx xxxxx antibiotik), nebo xxxxxxxxxxxxx xx agarovém xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Pufr, xX 3,5 |
|
|
Monohydrát xxxxxxxx xxxxxxxxx p.a. |
10,256 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Na2HPO4.2H2O p.a. |
7,45 x |
|
Xxxxxx x.x. |
300 ml |
|
Destilovaná xxxx ad |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Xx2XXX4.2X2X p.a. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
|
3.3 Xxxxxx X: směs xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před použitím |
|
|
3.4 Xxxxxx XX směs xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx, tetracyklin, jejichž xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x chlorovodíku.
3.9 Mikroorganismus: X. xxxxxx XXXX x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx suspenze xxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xx xxxxxx podle xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxx na agaru, xxx xx xxxxxxx x části 2 xxxx přílohy.
3.10 Kultivační xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 g |
|
Agar |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx chloridu x 5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx papíru 25 xx). Xxxxxxxx a Xxxxxxx xxxxx (2440X xxxx 2043X) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Odstředivka
4.3 Inkubátor xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 UV xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx xxx 20 x 30 xx pro xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) a xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.6) připravit xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx UV xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x cílem xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Referenční roztoky xxx stanovení xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) s xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace odpovídá 5 μg chlortetracyklinu-HCL, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 ppm, xx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx proséváním, neboť xxxxxxxxxxx se nacházejí xxxxxxxxx x xxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx (3.5) a xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x použít xx xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika xxx 100 μx xx 1 ml (6.1) x 5 μx na 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x identifikace
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xx pufračního xxxxxxx, xX 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx papíru xxxx listy xxxxxxx xxxxxxxxxxx papíru. Xxxx xxxxxxx xx papír 0,01 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) x xxxxxxxx (6.1 a 6.2). Xxx xxxxx oddělení xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografií. Xxxxxx xxxxxx I (3.3) xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx II (3.4) xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx. Xxxx xxxx rozpouštědla dosáhne xxxxx 15 xx 20 xx (xxx 1 xxxxxx 30 xxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx UV světlem
Když xx xxxxx antibiotika xxxxx xxx 1 μx/xx2, xx možné xx xxxxxxxx chromatogramu xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx pod XX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx bioautografií
Nalít xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), které xx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx xxxxxxxx xxxxx (4.5) x položit xxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx odejmout xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx, kde zůstane xxxxx inkubační xxxx. Xxxxxxxxx přes xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx projeví xxxxxxxx xxxxxxxxxxx zónami v xxxxxx xxxxxxxxxxx médiu.
K xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxx odpaří xxxxxx (3.11) na xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx hodnoty Xx tetracyklinových antibiotik xxxx uvedeny zde. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx papíru x xxxx xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (TC) |
0,40 |
|
Oxytetracyklin (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "xxx" xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx normálních xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX
X. XXXXXX XX XXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x tetracyklin (TC) x xxxxxxxx, koncentrátech x premixech. Spodní xxxxxxx xxx jejich xxxxxxxxx je 5 xxx. Xxxxxx xxxxx xxx 5 xxx xxxxx xxx určeny xxxxxxxxx interpolací.
2. Princip
U xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx zředěným xxxxxxxxxx. X xxxxxx vyšších xxx 50 ppm xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx acetonu, vody x xxxxxxxx chlorovodíkové xxx xxxxxxxxx CTC x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové xxx xxxxxxxxx XXX x TC.
Extrakty xx xxxx xxxxx a xxxxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX, XXX xxxx TC xx xxxxxxxx xxxxx naočkovaném X. xxxxxx. Difúze xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Mikroorganismus: X. cereus XXXX x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx do xxxxxxxx xx šikmým agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 30 °C. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx x přeočkovat xxxxxxx 14 dní xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx spór
Smýt xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 až 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx suspenzi xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 ml xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx modře x xxxxxxxx borité, jehož xxxxxxxxxxx agaru je 3 až 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.6) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx ověřena xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx může x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 měsíců.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx množství xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,2 x 0,3 xx na 1000 xx. Očkování xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx xxx 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 xx |
|
Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (m/V) xxxxxx kyseliny borité |
15 xx |
|
0,5 % ethanolový xxxxxx methylenové modře |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
Xxxx použitím upravit xX na 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Fosfátový xxxx, pH 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Xx2XXX4 · 2H2O p.a. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: xxxxxxxxx čerstvý xxxx použitím a xxxxxxx na xX 4,5 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx asi 2 X.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 objemově.
4.11 Xxxxxxxxxx látky: XXX, XXX, TC, xxxxxxx xxxxxxxx xx vyjádřena x chlorovodíku.
5. Standardní xxxxxxx
5.1 Chlortetracyklin
Na základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x za xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
Xx základě xxxxxx zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx. Xxxxxxx xx provede za xxxxxxx fosfátového pufru, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), xx xxxxxxx bylo přidáno 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx oxytetracyklinu-HCL na 1 xx, standardní xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,6 μg xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx x tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Tetracyklin
Postupem xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, standardní xxxxxxxx xxxxxx X8 obsahující 1,0 μx tetracyklinu-HCL xx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxx 50 xxx
Xx zkušebního xxxxxx přidat xxxxxxxx (4.8) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Poté xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pufrem (4.3) xxxxx odkazů x tabulce x xxxxx získat koncentraci X8. Koncentrace xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxx překročit 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx dekantovat xxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, U2 a X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Antibiotikum |
CTC |
OTC |
TC |
|||
|
Předpokládaný xxxxx x ppm |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Zkušební xxxxxx x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
xxx. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx X8 v μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx vzorku xxxx xx jeho xxxxxxx xxxxxx přidat do xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx 2 až 10 x 20xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Xxxxx xxxxxxxx musí xxxxxx pH xxxxx xxx 3; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxxx xX xx 3 (x minerálních xxxxxxxxx za xxxxxxx 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx alikvotní xxxx extraktu x xxxxxxx xX xx 5,5 za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxx se ze xxxxx xx xxxxxx). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, zředěného 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8 (xxx 6.1).
Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, U2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx je xxxxxxx x bodě 6.2.1 xxx, xx xx xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx xxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, U4,U2, X1). Každá miska xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního roztoku x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x agarovém xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x tloušťce xxx 2 mm. Upřednostňuje xx použití misek xxxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx xxx xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X každého xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxx xxxxxxxxx zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 hodin xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a extraktu. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx relativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + U8 - X1 -X2 -X4 -S8) · 0,602 / U4 + X8 + X4 + S8 - X1 -X2 -X1 -X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), oxytetracyklin (XXX) x xxxxxxxxxxx (XX) xxx xxxxxxxxxxxxx vyšších xxx 1 g/kg, xxxxx nezasahuje xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx rychlejší xxx xxxxxx na xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX xx vzorek xxxxxxxx směsí xxxxxxx, xxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx obsahu XXX x XX xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx poté xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxxx účinek xx xxxxxxx xxxxxxx světelné xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média, xxxxx bylo xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx kterého bylo xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx K 14 [6]
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), do xxxxxxx xx xxxxx 1,5 až 3 % xxxxx (xxxxx xxxxxxx). Inkubovat přes xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx šikmý xxxx. Zároveň xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Příprava xxxxxxxx xxxxx
24 xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx přes noc xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx kulturu xxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxx x xxx 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx 100 xx stejného xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xx xxxxx lázni xxx 37 °X xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (1x30 xx 2x).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx sodný |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
|
xX xx sterilizaci: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx čistého xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (m/V) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx látky: XXX, XXX, XX, xxxxxxx aktivita je xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztok
Na základě xxxxxxxxxx látky (4.7) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 až 500 μx XXX-XXX, OTC-HCL xxxx XX-XXX xx 1 ml. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx jeden xxxxx.
6. Extrakce
6.1 Chlortetracyklin
Do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 nebo 250 xx dát 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx směsi (4.4) x protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx rysku xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x objemu 200 nebo 250 xx dát 1 xx 2 x xxxxxxxxxx vzorku. Přidat xxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx fosfátovým pufrem, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx.
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x extraktu
Zředit standardní xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx série xxxxxxxxxxx. Xxx každé xxxxxxxxx xx načrtne xxxxxxxxxx xxxxxx, xx které xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx k xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx podmínek xxxxx kmene, které xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) fosfátovým xxxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx XXX-XXX xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx ředění dvakrát.
|
ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx extrakt (6.1) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,12 μx XXX-XXX. Xxx 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) xx dvou xxxxxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxx xxxx jiných xxxxxxxx xx 1 xx fosfátovým pufrem (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pracovní roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,6 μx OTC-HCL xxxx TC-HCL xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx je xxxxxxx xxxx x ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 7 ředění, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Zředit xxxxxxx (6.2) xx použití xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx OTC-HCL nebo XX-XXX na 1 xx. Dát 1 xx xxxxxx roztoku xx dvou xxxxxxxx x 0,5 xx (= 0,24 μg) xx xxxx jiných xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx kultivačního média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx na xxxxxxxxx při 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x 5 cm xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx propustnost xx 2 xx xxxxxx xxx nastavení xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx xxxxx zkumavky (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 xx naočkovaného xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx v xxxxxx, ale nezbytně xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxx teplota xx mícháním udržuje xx 37 °C + 0,1 °X. Xxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xxxx možné xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx (xxxxxx 2x30 xx 3h). Poté xxxxxxxx další růstu xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx roztoku xxxxxxxxxxxx (4.6) xx xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Měření xxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, přičemž xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx nejvyššímu xxxxxx xxxxxxxxxxx). X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx zkumavek xx doporučuje xxxxxx xxxxxxx 2 cm x xxxxxx 5 xx kyvety.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx milimetrovém papíře xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx antibiotika. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx obsah xxxxxxxxxxx xx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx stanovení provedených x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx a premixech, x to dokonce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx tris (hydroximethyl) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx B. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx těchto xxx xx přímo xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: B. xxxxxx, X 250 XX [8] (xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1) a přidat 100 μg xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx asi 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce a xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx na šikmý xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx xxx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Naočkovat xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), jehož xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 až 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 ml xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx byla mikroskopicky xxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nejméně 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx testy xx xxxxxxx xx xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.2) určit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx oleandomycinu xxxxxxxx xxxxx, ale ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,1 a 0,2 xx na 1000 ml. Očkování xxxxxxxxxxxx média se xxxxxxx při 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x činidla
4.1 Xxxxxx xxx udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
|
Před xxxxxxxx xxxxxxx pH na 6,5. |
4.2 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [10]
Xxxxxx (4.1) upravené xx xX 8,8.
4.3 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (x/X) roztok xxxx (xxxxxxxxxxxxx) aminometanu x.x.
4.7 Xxxxxxxxx xxxxxx
|
Xxxxx xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) aminometan x.x. |
0,5 x |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: oleandomycin o xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x zředit xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 μg/ml.
Na xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx roztoku (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx ve xxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 až 10 x 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx roztokem (4.6) x cílem xxxxxx předpokládanou koncentraci 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 ml (= X8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X suspenzí xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx v xxxxxxx xx použití xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, X1) a čtyř xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x takové xxxxxxxxx, aby xxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 děr x xxxxxxx 10 až 13 mm. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x plochých xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxx hliníkovým xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx do xxx xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx průměru xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx každé xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx asi při 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx logaritmu koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 - S1 - S2 - X4 - S8) · 0,602 / X4 + X8 + S4 + X8 - X1 - U2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x pH 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, a xxxx xx xxxxxxxxx methanolem. Xx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx tylosinu xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx lutea. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx je xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °X. Skladovat kulturu x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx agar.
3.2 Xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.4). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxxxxxx xx xX 7,0. Inkubovat 24 xxxxx xxx 35 °C, xxxx xxxx bakterie xx xxxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx 75 % světelnou propustnost xxx 650 nm.
Pokud xx tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx je xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx testy xx xxxxxxx x xxxxxxxx médiem pro xxxxxxxxx (4.1) určit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zóny. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx při 48 xx 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx stanovení [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 ml |
Za xxxxxx xxxxxxxxx rodičovského xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx7,0 x xx xxxxxx stanovení xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/čistý xxxxxxxx: 60/40 objemově.
4.8 Standardní xxxxx: tylosin o xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx standardní xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °X xx xxxxxxx xxxxxxx (5 mm xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 xx xx xxxxxxx baňky, xxxxxxxxx x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 7 (4.3) s xxxxx xxxxxx koncentraci základního xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx připravit rozředěním xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx tylosinu na 1 ml.
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.7) xxxx koncentrace:
|
S4 |
1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,5 |
μg/ml |
|
S1 |
0,25 |
μg/ml |
6. Extrakce
Pro xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx; xxx xxxxxxx x xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Přidat 60 xx xxxxxxxxxxx pufru, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxxxxxxxxxxx 2 xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxxxxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxx extrakt x xxxxxx alikvotní xxxx xxxxx (4.7) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, U2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7).
Xxx obsahy xxxxx xxx 10 ppm xxxxxxx xxxxxxx do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 35 °X x rozpustit xxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro stanovení (4.1) xxxxxxxx xx xX 8 při 48 xx 50 °X suspenzí xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx v xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx účelem xxxxxx xxxxx o xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx má xxxxxx xxx získání stejnoměrné xxxxxx o xxxxxxxx 2 mm. Upřednostňuje xx použití misek xxxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx skleněných desek x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx a x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx odměřená xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, v závislosti xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nejméně čtyřikrát x každou xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx 35 xx 37 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx semilogaritmický xxxxx xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx pomocí xxxx rovnice:
(U1 + X2 + U4 + X8 - X1 - X2 - X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
5. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit virginiamycin x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztokem "Xxxxx 80". Po xxxxxxxxxx xxxx filtraci xx xxxxxxx xxxxx a xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Difúze xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Průměr xxxxxx zón je xxxxx úměrný logaritmu xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea XXXX x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem x kultivačního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °X. Skladovat xxxxxxx x chladničce x přeočkovat každých 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2. Příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 250 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, poté xxxx xxxxxxxx za xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Homogenizovat x zředit tuto xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx asi 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 nm. Xxxxx se xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx trvanlivost xx jeden xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 48 až 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a činidla
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [12]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 až 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx pH xx 6,5.
4.2 Fosfátový xxxx, xX 6
|
Dihydrogenfosforečnan draselný XX2XX4 x.x. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx ad 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx fyziologický roztok.
4.4 Xxxxx methanol.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % methanolového xxxxxxx "Tween 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Standardní roztoky
Připravit xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μx virginiamycinu xx 1 ml. Xx xxxxxxx tohoto xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1+) xx xxxxxxx xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Extrakce
6.1 Výrobky x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) a xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx 20 xx čirého xxxxxxx x odpařit xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 ml xxxx xxxx směsi (4.5) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace U4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 g xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 ml xxxxxxx (4.6) a xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Xxxxxxxxx xxxx filtrovat, xxxx xxxxxx směsí (4.5) x cílem xxxxxx předpokládanou koncentraci 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1, xxx je xxxxxxx x bodě 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 48 xx 50 °C xxxxxxxx bakterií (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, S2, S1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, U4, X2, U1).Každá miska xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat misky x xxxxxx velikosti, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x průměru 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního média (7.1), xxxxx se xx xxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstvy x xxxxxxxx xxx 2 xx. Upřednostňuje xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx se z xxxxxxxx skleněných desek x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx a xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx difúzi xxxxxxx čtyřikrát x xxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxx 35 až 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + U4 + X8 -X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - S1 - X2
Xxxxxxxx aktivita = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx nesmí překročit 10 % relativní xxxxxxx.
[1] Může být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[3] Xxxx xxxxx xxxxxx x označení xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx kruhy).
[6] Tento xxxx xxxxxxxxx v Xxxxx xxxxx XXXX xxxxxxxx rychlejší růst xxx S. xxxxxx XXXX 6538 X.
[7] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční kultivační xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Kmen izolovaný x Xxxxx xxxxx XXXX.
[9] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení a xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[11] Xxxx být použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli komerční xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx a dávající xxxxxx xxxxxxxx.