Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. dubna 1972,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx a analytických xxxxx Společenství xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx cílem je xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx směrnice Xxxxxx x. 71/250/XXX ze xxx 15. června 1971 [2] x 71/393/XXX ze xxx 18. listopadu 1971 [3] již stanovily xxxx analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx na xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx však nutné xxxxxxxx třetí xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x obsahy xxxxxx, xxxxxxx proteinů, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx působením xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx, jakož x x xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx popsaných x xxxxxxx X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxx 1 (úvod) xxxxxxx xxxxx směrnice Komise x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, xxxxxx se xxxxxxx analytické xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx krmiv, se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx X této xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxxx, že analýzy xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, pokud jde x stanovení a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx i x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, tylosinu x xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, se xxxxxxxxx xxxxx metod xxxxxxxxx x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení xxxxxxx v části 1 (úvod) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Komise x. 71/250/EHS xx xxx 15. června 1971, s xxxxxxxx xxxxx týkající xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx II xxxx směrnice.
Článek 3
Členské xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1973. Neprodleně o xxxx informují Komisi.
Xxxxxx 4
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu dne 27. dubna 1972.
Xx Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Xxxxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX X
1. STANOVENÍ XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx metoda
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx a produktů xxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx, s xxxxxxxx xxxx krmiv, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxx pulpu, xxxxxx xxxxx skrojky xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxx, sušené xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx (např. xxxxx x xxxxxx z xxxxxxxxxx) nebo xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx zahrnuje dvojité xxxxxxxxx. Při prvním xxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxx za xxxxx xxxxxxxx kyselinou chlorovodíkovou. Xx xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx optická xxxxxx xxxxxxx.
Xxx druhém xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 40 % ethanolem. Xx xxxxxxxxx filtrátu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, čiření x xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx při prvním xxxxxxxxx.
Xxxxxx mezi dvěma xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx obsah xxxxxx xx vzorku.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N x za xxxxxxxxxxx 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (V/V) xxxxxxxx. 10 xx = 30,94 xx 0,1 X XxXX.
3.3 Carrezův xxxxxx X: xxxxxxxxx xx vodě 21,9 x xxxxxx xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X a 3 x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx roztok XX: xxxxxxxxx xx xxxx 10,6 x hexakyanoželeznatanu xxxxxxxxxx [K4(Fe(CN)6].3H2O. Doplnit xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, x: 0,948 xxx 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x objemu 250 ml x xxxxxxxxxxxxxx zábrusem x xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělnit xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x kulatými oky x xxxxxxx 0,5 xx.
5.2 Stanovení xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx a dát xx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 ml. Xxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx 25 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxx lázně x xx xxxx xxxxxxx xxx minut silně x pravidelně xxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx ve xxxxx xxxxx musí být xxxxxxxxxx, xxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxx varu. Xxxxx xxxxx být xxxxxxx x xxxxx během xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx po 15 minutách xxxxxxx xxxxx x lázně, xxxxxx 30 ml xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) x xxxxx xxxxxx protřepávat. Xxxx xxxxxx 5 xx Carrezova xxxxxxx XX (3.4) x xxxx jednu xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx po xxxxx vodou, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx filtrát zcela xxxx (což je xxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx roztoku X x XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx polarimetrem xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v 200 xx trubici.
5.3 Stanovení xxxxxxx xxxxxx (X’ xxxx X’) xxxxx xxxxxxxxxxx xx 4 % ethanolu
Navážit 5 x xxxxxx s xxxxxxxxx na 1 xx, dát ho xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 100 xx a xxxxxx xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (viz xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx xxxxx stát xxxxx hodinu při xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx silně protřepat, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x ethanolem. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxx (3.5), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 ml xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx chladič x xxxxxxx xx xx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxx po 15 minutách xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx obsah xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx I (3.3) x XX (3.4), doplnit xx xxxxx xxxxx, homogenizovat, xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx uvedeno x xxxx 5.2 xxxxxx x xxxxxx odstavci.
6. Xxxxxxx výsledků
Obsah xxxxxx (%) xx xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Měření polarimetrem
procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - X’) / [α]X20°
xxx xx:
X = xxxxxxx optická xxxxxx, v xxxxxxxx xxxxxxxx.
X’ = xxxxxxx xxxxxx látek rozpustných xx 40 % xxxxxxxx, v xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx xxxxx
+ 195,4°: bramborový xxxxx
+ 184,6°: kukuřičný xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: ječný xxxxx
+ 181,3°: xxxxxx škrob
+ 184,0°: ostatní druhy xxxxxx x xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Měření sacharimetrem
Procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]D20° · (2 X · 0,665) (S - X’) / [α]D20°
Kde xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx sacharimetru
S’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx ve 40 % xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx 100 xx xxxx, xxxxx xx při xxxxxxxx 200 xx optickou xxxxxx 100 stupňů xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx mění podle xxxxxxxxxxxx:
16,29 x pro xxxxxxxxxxx sacharimetry
26,00 x xxx xxxxxxx sacharimetry
20,00 x pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = specifická xxxxxxx xxxxxx čistého xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxx 40 % x 1 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx škrobu xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx než 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx jako uhličitan xxxxxxxx, uhličitany xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx rotace xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx kyseliny xxxxxx.
7.2 X xxxxxxx xxxxxxxx s vysokým xxxxxxx laktózy, xxxx xx xxxxxx mléčné xxxxx nebo sušené xxxxxxxxxx mléko, postupovat xx přidání 80 xx ethanolu (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx baňku xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xx 30 xxxxx xx vodní xxxxx x xxxxxxx 50 °X. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.3.
2. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx stanoveného xxxxx Kjeldahlovy xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se mineralizuje xx mokra. Xxxxxx xxxxxx xx alkalizuje xxxxxxxx xxxxxxxxx sodného. Xxxxxxxx amoniak se xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx v odměřeném xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx měďnatý XxX x.x. xxxx síran xxxxxxx xxxxxxxxxxx XxXX4 · 5X2X x.x., xxxx rtuť xxxx xxxx xxxxxxxx XxX x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx zinek x.x.
3.4 Xxxxxxxx sírová x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: rozpustit 300 xx xxxxxxxxxxxxx xx 100 xx 95-96 % (V/V) ethanolu.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X.
3.10 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x.x.
3.12 8 % (m/V) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx pemza, xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x destilační xxxxxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1).
5. Postup
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 x vzorku x přesností xx 1 xx x xxx ho xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 g xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 xx 0,4 g xxxxx xxxxxxxxx nebo 0,9 xx 1,2 x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxx 0,6-0,7 g oxidu xxxxxxxxxx), 25 ml xxxxxxxx sírové (3.4) x několik xxxxxxx xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx x za občasného xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x pěna xxxxxxx; poté xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx dokud kapalina xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx x přilnutí xxxxxxxxxxx xxxxxx. Když je xxxxxx xxxx a xxxxxxxx (světlezelený, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxx, poté xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, xxx xx xxxxxxx zcela xxxxxxxxxx; xxxxxx xxxxxxxxxxx; poté xxxxxx xxxxxxx granulí xxxxx (3.3).
Xxxxxx xx xxxxxx baňky destilační xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxxx sírové 0,1 X (3.5) nebo 0,5 N (3.6) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx obsahu dusíku (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx baňku na xxxxxxx xxxxxxxxxx aparatury x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx hloubky xxxxxxx 1 cm (xxx xxxxxxxx 7.3). Xxxx xxxxxxx s kohoutem xxxxxxxx nalít do xxxxx 100 ml 40 % roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxx xxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxx 10 xx xxxxxxx xxxxxx sodného (3.11), xxxx 25 ml xxxxxxx thiosíranu xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx baňku takovým xxxxxxxx, xxx se xx 30 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxxxx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx lakmusový xxxxxxx ukáže, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x pozorovat zbarvení. Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx do žluta, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) nebo 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx baňce xxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx zbarvení xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx metody
Za xxxxxx xxxxxxxx, xxx činidla xxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx slepý xxxxx (xxxxxxxxx x xxxxxxx), x xx xxx xxxxxx, který xx xxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx provede xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x titrace) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx x.x. (x.x. 114 °C; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx bez dusíku; 1 g xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx dusíku. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxx překročit:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx proteinů xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 absolutní xxxxxxx pro obsah xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Je xxxxx xxxxxx některé xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.
7.2 X xxxxxxxx x nízkým xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X, xxxxx xx xxx xxxxxxxx nalita xx xxxxxx baňky, xxxxxx xx 10 až 15 xx a xxxxxxx xxxxx xx 25 ml.
7.3 Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nálevku s xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxx po xxxxxxx xxxxx xxx, xxx se xxxxxxxxxx x xxxxxxxx kyseliny.
3. XXXXXXXXX HRUBÝCH PROTEINŮ XXXXXXXXXXX PEPSINEM A XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx stanovit frakci xxxxxxx proteinů rozpustných xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx za stanovených xxxxxxxx. Xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Suspenze xx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx hrubých xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 x/xx pepsinu; xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx v části 4 této xxxxxxx x musí být xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x touto metodou.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxx 3 xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Vodní xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx aparatura xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx x xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx. Xxxxxx 450 xx roztoku xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 40 °C. Xxxxxxxxx, aby se xxxxxxxxx xxxxxx hrudek. Xxxxxx, že xx xX xxxxxxxx xxxxx xxx 1,7. Vložit xxxxx xx xxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxxx (4.1) a nechat xx xxx 48 xxxxx. Xxxxxxxxx xx 8, 24 x 32 xxxxxxxx. Po 48 hodinách přidat 15 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxx xx 20 °X, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx a xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx x přesností xx 1 xx x dát xx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx druhé xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xx varu. Xxxxx xx xxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx kapek xxxxxxxxxx emulse (3.5). Xxxxxxxxxx v xxxxxx xxxx, xxxxx se xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Snížit xxxxx x xxxxxxx odstranit xxxxxxxx xxxxx xxxx.
Xxxx xx xxxxxx čirý x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx použije xxxxxxxxxxx na xxxx xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x xxxxxx pro stanovení xxxxxxx proteinů x xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Slepý pokus
Provést xxxxx pokus za xxxxxxx xxxxxxxx postupu, xxx bez xxxxxx, xxxxx má být xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Odečíst xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx během xxxxxxx xxxxxx od xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. 1 ml kyseliny xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx množství xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Výsledek xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx nesmí překročit:
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % relativní xxxxxxx pro xxxxx xxxxx než 20 % a nižší xxx 40 %,
- 0,8 absolutní xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx in xxxx.
7.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxx vyšším xxx 10 % xxxx xxx odtučněny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (b.v. 40 xx 60 °C).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX PEPSINU
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x kyselinou chlorovodíkovou.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové. Nehydrolyzovaná xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxxx x činidlo Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx 750 nm x odpovídající xxxxxxxx xxxxxxxx se odečte x xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, které za xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx jednoho μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,06 X.
3.3 Kyselina chlorovodíková 0,025 N.
3.4 5 % xxxxxx (x/X) xxxxxxxx trichloroctové.
3.5 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Činidlo Folin-Ciocalteu. Xxx 100 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 25 x molybdenanu xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 xx xxxx do dvoulitrové xxxxx x kulatým xxxx a xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) x 100 xx koncentrované xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19), xxxxxxxx baňku xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx varu x udržovat xxxxxx x mírném xxxx xx xxxx 10 xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zpětný xxxxxxx, xxxxxx 175 g xxxxxx lithného (Li2SO4 · 2H2O), 50 xx xxxx a 1 ml xxxxx. Xxxxx xx xxxx 15 xxxxx, aby xx odstranil xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx odměrné xxxxx o objemu 1 l, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Roztok hemoglobinu: Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 354 xx xxxxxx [1] x dát xx xxxxx x xxxxxx 200 xx x normalizovaným xxxxxxxx. Xxxxxx několik xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx pumpou x xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx nerozpustí. Xxxxxxx vakuum x xx protřepávání doplnit xxxxxxxx chlorovodíkovou (3.2) xx xx 100 xx. Xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxx.
3.8 Standardní xxxxxx tyrosinu: rozpustit 181,2 xx tyrosinu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) a xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (zásobní xxxxxx). Odebrat 20 xx tohoto roztoku x rozředit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx tohoto xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxx ultratermostatem xx 25 °X + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, přesnost: 1 xxxxxxx.
4.4 pH xxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxx xx 100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx roztoku x xxx xx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). xX kontrolované xX xxxxxx xxxx xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx do xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, zahřát xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 1,0 ml xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 x promíchat asi xxxxxx pohyby xxx x xxxx skleněnou xxxxxxxx zesílenou xx xxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx vodní xxxxx při 25 °X xxxxxx po xxxx 10 minut, xxxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx). Xxxx xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx a filtrovat xxxx xxxxx filtr.
5.3 Xxxxx zbarvení a xxxxxx xxxxxxx hustoty
Odpipetovat 5,0 ml xxxxxxxx, xxx xx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx hydroxidu sodného (3.5) x za xxxxxxx protřepávání 3,0 xx xxxxxxxxx činidla Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 xx 10 xxxxxxxx stanovit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx spektrofotometrem xxx 750 xx x xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 cm x porovnání x xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxx provést xxxxx xxxxx xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 ml roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřáté xx 25 °C, homogenizovat x xxxx xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 10 xxxxx xx xxxxx lázni (4.1) xxx 25 °C. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx suchý xxxxx. Xxxxxxxxxx x postupu xxxxxxxx v xxxx 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx křivka
Do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, x 5,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.1) na 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx roztoku hydroxidu xxxxxxx (3.5) x xx stálého xxxxxxxxxxxx 3,0 xx zředěného xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx je xxxxxxx x poslední xxxx xxxx 5.3. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx křivku xxxxxxxx xxxxxxxxx hustot proti xxxxxxxxx tyrosinu.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx množství tyrosinu x μxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx optické xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx bylo xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx pepsinu x μxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx x xx jednu xxxxxx při 25 °X xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx xx xx (j/mg) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx v μxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxx, které xx xxx rozpuštěno, musí xxx takové, aby xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx měření xxxxxxx xxxxxxx hustota 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx xxxxxxxx/xx xxx. xxx 35,5 °C) xxxx
36400 xxxxxxxxxx jednotek/g (μxxxx xxxxxxxx/x xx 10 xxx. xxx 35,5 °C).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx metoda umožňuje xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx gossypolu a xxxxxxxx příbuzné xxxxx x xxxxxxxxxxxx semenech, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xx 20 xxx.
2. Princip
Gossypol xx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, x xx buď xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxx stanovení volného xxxxxxxxx, xxxx dimethylformamidem xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Gossypol xx xxxxxxxxxxxxxxx anilinu xxxxxxxx xx gossypol-dianilin, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx 440 xx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx a hexanu: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx p.a. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx x-xxxxxx.
3.2 Rozpouštědlo X: xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 l nalít xxx 500 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 50 xx xxxx. Xxxxxxx xx rysku směsí xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Trvanlivost tohoto xxxxxxx xx jeden xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx X: xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 xx 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx x 10 ml xxxxxx xxxxxxxx octové. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx činidla xx xxxxx xxxxx.
3.4 Xxxxxx x.x.: xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, destilovat xxxxxx přes xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx měsíců x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx x objemu 250 xx xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Rozpustit x xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2). Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x objemu 250 xx 50 xx tohoto xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx rozpouštědlem A. Xxxxxxxxxxx gossypolu x xxxxx xxxxxxx xx 0,02 xx/xx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx dobu xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxxxxx gossypolu x tomto xxxxxxx xx 0,5 mg/ml.
Pokud xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X a X xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Mixér (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx zkušebního xxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxx x malým xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx přesné xxxxxxxxxxxx měření. Xxx xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx mouce a xxxxxxxxxxxx pokrutinách by xxxxxxxx vzorek xxxxx xxxxxxxxx 1 g; xxx xxxxx xxxxx xx může xxx 5 x. Xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 10 xx filtrátu; xxxx xx xxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxx xx množství xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxx 0,5 a 5 x, xxx xxxxxxxxx část 2 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 40 až 200 μx gossypolu.
Analýza by xx měla provádět xxx xxxxxxxx teplotě xxxxx 20 °C.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu
Dát xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx baňky xx xxxxxxxxxx hrdlem o xxxxxx 250 xx, xxxxx dno xx xxxxxxx xxxxxxxxxx střepy. Xxxxxx pipety přidat 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), zazátkovat xxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx v xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Během xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx hodinovým xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx do xxxx xxxxxxxxx xxxxx (A x X) x xxxxxx 25 ml xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Případně doplnit xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) na 10 xx. Xxxx xxxxxxx xx rysku xxxxx (X) směsí xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx pro slepý xxxxx.
Xxxxxx pipety xxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x X) x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx slepý xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (X) a (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx lázní, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx xxxxx hodinu.
Stanovit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 440 xx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx pokus (X) xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx roztokem (C) x xxxxxxxx hustotu xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (A).
Odečíst xxxxxxxx xxxxxxx roztoku xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx hustota). Z xxxx hodnoty vypočítat xxxxx volného xxxxxxxxx, xxx xx uvedeno x bodě 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx vzorek xxxxxxxxxx 1 až 5 xx xxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml x xxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx připravit xxxxx xxxxx a xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx jiné odměrné xxxxx o xxxxxx 50 xx. Xxxxxxxx xxx xxxxx 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx x doplnit xx xxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Homogenizovat x nechat xxxx 10 až 15 xxxxx, poté xxxxxxxxx x zachytit xxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 2 xx xxxxxxxx ze vzorku xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 xx a 2 xx filtrátu xxxxxxx xxxxxx xx xxxx jiných xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxx xxxxx x každé xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx referenční roztoky.
Přidat 2 ml xxxxxxx (3.4) do dvou xxxxxx baněk. Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx 25 xx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodě 5.2. X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx celkového xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodě 6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx buď xx xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx (6.1), xxxx xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx:
xxxxx xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: E 1% / 1xx = 600
Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx gossypolu xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1&xxxx;250 / E1%1cm ·&xxxx; · x · x
xxx:
X = opravená xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2
x = xxxxxxxx vzorek x x
x = xxxxxxxxx část xxxxxxxx x ml
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxx po xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 ml. X xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx rozpouštědlem X (3.2) xx 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx první xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxxxx zbarvení. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx isopropanolu a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx v bodě 5.2 stanovit optickou xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx referenční xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hustoty xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (v μx).
6.2.2 Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx 6 xxxxxxxxx xxxxx x objemu 50 xx. Do xxxxx xxxxx xxxxxx pipetou 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) a xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx X (3.6). Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xx 10 ml xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx vroucí vodní xxxxx. Zchladit na xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx x promíchat.
Přidat xxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx x 6 xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx série xx 25 xx xxxxx x isopropanolu x xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx xx každé xxxxx xxxxx xxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx stát xxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx série).
Za xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx hustotu xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx série. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxx optické xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx gossypolu (x μx).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x stejného vzorku xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx než 50 xxx,
- 75 ppm xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % relativní xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Stanovit obsah xxxxxx podle Kjeldahlovy xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx obsah: 17,7 % dusíku).
XXXXXXX XX
1. XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX TETRACYKLINOVÝCH XXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, která xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, x koncentrátech x premixech.
2. Princip
Vzorek xx extrahuje xxxxx xxxxxxxxx a kyseliny xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx papírové xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx Xx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, a xx xxx fluorescencí v XX světle (xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx), xxxx xxxxxxxxxxxxx na agarovém xxxxx naočkovaném X. xxxxxx.
3. Činidla
|
3.1 Pufr, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x.x. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Na2HPO4.2H2O x.x. |
7,45 x |
|
Xxxxxx x.x. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X p.a. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
|
3.3 Xxxxxx X: směs xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx XX směs xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 objemově. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx, tetracyklin, xxxxxxx xxxxxxxx xx vyjádřena x xxxxxxxxxxxx.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx, příprava suspenze xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xx pokyny podle xxxx 3.1. a 3.2. metody xxx xxxxxxxxx obsahu chlortetracyklinu, xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx, xxx xx xxxxxxx x části 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 g |
|
Agar |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-triphenyltetrazolium xxxxxxxx x 5 % (x/X) roztok xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxx 25 xx). Schleich a Xxxxxxx papír (2440B xxxx 2043X) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 UV lampa xxx xxxxxxxxx fluorescence.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx xxx 20 x 30 xx xxx bioautografii.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Zásobní xxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) a xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx stanovení XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx získat xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 5 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml
6. Xxxxxxxx
Xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx antibiotika nižší xxx 10 xxx, xx xxxxx použít xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx x této xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Sebrat xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx nebo xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxx 100 μg xx 1 xx (6.1) x 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x identifikace
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxxxx xxxxxxx, pH 3,5 (3.1). Odstranit přebytek xxxxxxxx vtlačením papíru xxxx xxxxx suchého xxxxxxxxxxx papíru. Poté xxxxxxx na xxxxx 0,01 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) a xxxxxxxx (6.1 x 6.2). Xxx xxxxx oddělení xxxx mít papír xxxxxxxx vlhkost; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxx trochu xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx X (3.3) xxx xxxxxxxxx bioautografií x xxxxxx XX (3.4) pro xxxxxxxxx XX xxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx dosáhne xxxxx 15 až 20 cm (xxx 1 xxxxxx 30 xxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x vysušit papír.
7.2 Xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 1 μx/xx2, xx možné xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx amoniaku (3.7) xxxxxxxxx ozářením xxx XX xxxxxx žluté xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx kultivační xxxxxx (3.10), xxxxx xx předem xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx xxxxxxxx xxxxx (4.5) a xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx pěti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx jinou xxxxxx x kultivačním xxxxx, kde zůstane xxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx přes noc xxx 30 °C. Xxxxxxxxxx tetracyklinového antibiotika xx xxxxxxx světlými xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx.
X xxxxxx chromatogramu se xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx Xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx uvedeny xxx. Xxxx hodnoty xx xxxxx mírně xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (TC) |
0,40 |
|
Oxytetracyklin (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "epi" xxxxxxxxx xx xxxxx než xxxxxxxx xxxxxxxxxx sloučenin.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X TETRACYKLINU
A. XXXXXX XX XXXXX
1. Účel x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx, koncentrátech x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx jejich xxxxxxxxx xx 5 xxx. Xxxxxx nižší xxx 5 xxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx rovných xxxx xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. X obsahů vyšších xxx 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx acetonu, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx CTC x xxxxx methanolu x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x TC.
Extrakty se xxxx zředí x xxxxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx měřením xxxxxx XXX, XXX xxxx XX na xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus ATCC x. 11778
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat B. xxxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 dní xx šikmý xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx spór
Smýt xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx fyziologického xxxxxxx xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx baňky xxxxxxxxxx 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx borité, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Inkubovat 3 xx 5 dní xxx 28 xx 30 °C, poté xxxx xxxxx 15 xx ethanolu (4.6) xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx ověřena sporulace, x homogenizovat. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxx skladovat xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxxxx množství xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotiky xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,2 x 0,3 ml na 1000 ml. Očkování xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx při 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
"Tween 80" |
1 xx |
|
Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx borité |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx modře |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 ml |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 p.a. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X p.a. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: xxxxxxxxx čerstvý xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xx pH 4,5 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx 2 X.
4.9 Xxxx xxxxxxx acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Směs xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (d: 1,19): 98/2 objemově.
4.11 Xxxxxxxxxx látky: CTC, XXX, TC, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx x chlorovodíku.
5. Standardní xxxxxxx
5.1 Chlortetracyklin
Na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx koncentrace odpovídá 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx. Xxxxx roztok xx xxxxxxxx x chladničce xxxxx xxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxxx zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml. Zředění xx provede xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx 0,01 % černě xxxxx [3].
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx oxytetracyklinu-HCL xx 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok S8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 připravit xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx, xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,0 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxx 50 ppm
Do zkušebního xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (4.8) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxx fosfátovým xxxxxx (4.3) xxxxx odkazů x tabulce s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx formamidu x xxxxx xxxxxxx xxxxx překročit 40 %.
Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx s cílem xxxxxx xxxx xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx fosfátového xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx obsah x xxx |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Xxxxxxxx xxxxxx x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
xxx. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
řeď. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx X8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X závislosti na xxxxxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxx xx vzorku xxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx 2 xx 10 g 20ti xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx musí xxxxxx pH nižší xxx 3; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxxx xX xx 3 (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx použití 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu x xxxxxxx pH xx 5,5 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx bromkresolové xxxxxx (xxxxxx se ze xxxxx xx xxxxxx). Xxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), s cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx U8 (xxx 6.1).
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x U1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx je xxxxxxx x bodě 6.2.1 xxx, že xx xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx xxxxx xx provádí x xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (S8, X4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat misky x xxxxxx velikosti, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.1), xxxxx se xx xxxxxx pro xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx asi 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx plastovým xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx a xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x závislosti xx xxxxxxx xxx.
X každého xxxxxx opakovat difúzi xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, aby xxxxx stanovení zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zanesením xxxxxxxxx koncentrací proti xxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus relativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx rovnice:
(U1 + X2 + X4 + X8 - X1 -S2 -X4 -S8) · 0,602 / U4 + X8 + X4 + X8 - X1 -X2 -X1 -X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx aktivita x relativní aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x tetracyklin (XX) xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 1 g/kg, xxxxx xxxxxxxxxx žádná xxxxx, xxxxx by xxxxxx xxxxxxxxx matným xxxxxxxxx. Tato xxxxxx xx xxxxxxxxx než xxxxxx xx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX xx xxxxxx xxxxxxxx směsí xxxxxxx, xxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxx OTC x XX směsí xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx se xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média, xxxxx xxxx naočkováno Xxxxxxxxxxxxxx aureus x xx xxxxxxx bylo xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx závisí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x šikmým agarem xxxxxxxxx z kultivačního xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx xx přidá 1,5 až 3 % xxxxx (podle xxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °X. Skladovat xxxxxxx x chladničce a xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx na xxxxx xxxx. Xxxxxxx připravit xxxxxxxxxx xxx laboratorní xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx očkovací xxxxx
24 xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx přes noc xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx celou kulturu xxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxx x xxx 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx podmínek xx asi 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat xx xxxxx xxxxx xxx 37 °X xxxxx xxxx kmene xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (1x30 xx 2x).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
1,5 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx sodný |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 g |
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
|
xX po xxxxxxxxxxx: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný KH2PO4 x.x. |
13,6 g |
|
Destilovaná voda xx |
1000 ml |
4.3 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.4 Xxxx xxxxxxx acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Směs xxxxxxx methanolu/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (x/X) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx aktivita xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x za použití xxxxxxxx chlorovodíkové (4.3) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 xx 500 μx XXX-XXX, XXX-XXX xxxx TC-HCL xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx skladuje x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 nebo 250 xx dát 1 až 2 x zkušebního vzorku. Xxxxxx asi 100 xx xxxxx (4.4) x protřepávat 30 xxxxx třepačkou. Xxxxxxx xx rysku xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx pufrem, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx sérií x xxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2), tak, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx kalibrační xxxxxx, ne xxxxx xx znázorní xxxxxxxxxxx xxxxxxx dvou xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx. Ředění xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx mohou lišit xxxxxxxxx xx laboratoře. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Chlortetracyklin
Zředit xxxxxxxxxx xxxxxx (5) fosfátovým xxxxxx (4.2) s xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx XXX-XXX xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx uvedeno xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Zředit extrakt (6.1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,12 μx XXX-XXX. Xxx 1 xx xxxxxx xxxxxxx do xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) do xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx dvou xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.1.2 Oxytetracyklin a xxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,6 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx ředění dvakrát.
|
ml xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.2) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,48 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxx 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx zkumavek x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx dvou xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx jiných xxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) očkovací xxxxxx (3.2) x xxxxx získat xx xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x 5 xx kyvetě xxxx 92 % xxxxxxxxx propustnost ve 2 xx xxxxxx xxx nastavení aparatury xx 100 % xxxxxxxxxxx nenaočkovaného bazálního xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx xxxxx xxxxxxxx (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx zkumavek musí xxx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx se musí xxxxxxx xx vodní xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx udržuje xx 37 °X + 0,1 °X. Xxxxxxxxx xxxx se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx bylo možné xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx (xxxxxx 2x30 xx 3h). Poté xxxxxxxx další xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) do xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx růstu
Změřit xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, xxxxxxx fotometr xx xxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx). Z xxxxxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 2 xx x raději 5 xx xxxxxx.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX OLEANDOMYCINU
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx, x xx xxxxxxx x přítomnosti xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx je 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (hydroximethyl) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zředí x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx difúze oleandomycinu xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx B. xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx, X 250 XX [8] (rezistentní xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Udržování rodičovského xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1) x přidat 100 μx oxytetracyklinu xx 5 xx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) za xxxxxxx asi 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxxxx koncentrace xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, xxxx smýt xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx byla mikroskopicky xxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxx skladovat nejméně 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx oleandomycinu největší xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx inhibiční zóny. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,1 x 0,2 xx na 1000 xx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx při 60 °X.
4. Kultivační xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
|
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,5. |
4.2 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [10]
Xxxxxx (4.1) xxxxxxxx xx xX 8,8.
4.3 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (V/V) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx methanol
4.6 0,5 % (x/X) roztok xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx x.x.
4.7 Xxxxxxxxx roztok
|
Čistý xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) aminometan x.x. |
0,5 g |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx aktivitě.
5. Standardní xxxxxx
Xxxxxxxxx standardní látku (4.8) x 5 xx methanolu (4.5) x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x cílem xxxxxx koncentraci xxxxxxxxxxxxx 100 μg/ml.
Na základě xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx na 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx roztoku (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx na předpokládaném xxxxxx oleandomycinu xx xxxxxx přidat do xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx 2 až 10 x 100 xx roztoku (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou.
Odstředit, odebrat xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx roztokem (4.6) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,1 μg oleandomycinu xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx roztoku (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X suspenzí xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx xxxxx se xxxxxxx v xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) a čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx musí obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx.
Xx xxxxx účelem vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx udělat x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx získání stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx do xxx xxxxxx odměřená xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, v závislosti xx průměru xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx čtyřikrát x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx každé xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx asi při 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx pomocí xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 - S1 - X2 - X4 - S8) · 0,602 / X4 + U8 + S4 + X8 - X1 - U2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx vzorku nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x krmivech, koncentrátech x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx stanovení xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se ošetří xxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztokem x xX 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, a xxxx xx xxxxxxxxx methanolem. Xx odstředění xx xxxxxxx zředí x xxxx antibiotická xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx médiu naočkovaném Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx xxxxx ATCC x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Sarcina xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) upraveného xx xX 7,0. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx asi 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každý xxxxx xx šikmý agar.
3.2 Xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx zkumavky xx šikmým agarem (3.1) xx xxxxxxx 2 až 3 xx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.4). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), upravit na xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °C, xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x zředit xxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 nm.
Pokud xx xxxx suspenze xxxxxxxx x chladničce, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx týden.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) určit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx získat xxx použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxx největší xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zóny. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
Za xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x přípravy xxxxxxxxxxx xxxxxxxx upravit xX xx7,0 x xx xxxxxx xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx voda xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx pufr, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 p.a. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.5 Xxxxx methanol.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/čistý xxxxxxxx: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Standardní xxxxx: xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °X xx vakuové sušárně (5 xx xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 xx xx xxxxxxx xxxxx, rozpustit x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 7 (4.3) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx rozředěním xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 2 μg xxxxxxxxxx tylosinu xx 1 xx.
Xxxx připravit xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7) xxxx koncentrace:
|
S4 |
1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,5 |
μg/ml |
|
S1 |
0,25 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx; xxx xxxxxxx x xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx fosfátového xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx na 80 °X, x homogenizovat 2 minuty (xxxxxxxxx xxxxx, Ultra-turrax xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx část xxxxx (4.7) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx použití xxxxx (4.7).
Xxx obsahy nižší xxx 10 ppm xxxxxxx xxxxxxx do xxxxx v rotačním xxxxxxxxxx při 35 °X a rozpustit xxxxxxxx ve 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx na xX 8 xxx 48 až 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx v miskách xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) a čtyř xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, U1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 mm. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x tloušťce 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití misek xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných desek x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x průměru 200 mm x x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 a 0,15 xx, x závislosti xx průměru xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx stanovení xxxxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx noci xxx 35 xx 37 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx semilogaritmický xxxxx zanesením logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vypočítá pomocí xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 - X1 - S2 - X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
5. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, koncentrátech x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztokem "Tween 80". Po xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx měřením xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx ATCC x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Sarcina xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx x přeočkovat každých 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2. Příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxx agarem (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Naočkovat tuto xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx obsahující 250 xx kultivačního xxxxx (4.1). Inkubovat 24 xxxxx při 35 °X, poté xxxx xxxxxxxx za pomoci 25 xx fyziologického xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 nm. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx skladuje x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx jeden xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx množství očkovací xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx pro různé xxxxxxx koncentrace virginiamycinu xxxxxxxx možné, ale xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x činidla
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
Před xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,5.
4.2 Fosfátový pufr, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
8,0 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxxx K2HPO4 p.a. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx voda xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/čistý xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % methanolového xxxxxxx "Tween 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx látka: xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xx xxxxxxx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx směsí (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1+) xx použití xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Extrakce
6.1 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxx xxx 50 ppm
Odebrat 10 xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, odebrat 20 xx čirého xxxxxxx x xxxxxxx do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 xx xxxx xxxx xxxxx (4.5) x cílem xxxxxx předpokládanou koncentraci 1 μg virginiamycinu xx 1 ml (= U8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.5)
6.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 ppm
Odebrat 1 xx 10 g xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx roztoku (4.6) a protřepávat 30 minut třepačkou. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 1 μx virginiamycinu xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) při 48 xx 50 °C xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx x miskách za xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, S2, S1) x xxxx koncentrací xxxxxxxx (X8, X4, X2, U1).Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstvy x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx se z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo plastovým xxxxxxxx o xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx při 35 až 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx semilogaritmický papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku a xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx pomocí této xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 -S1 - X2 - S4 - S8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - S1 - X2
Xxxxxxxx aktivita = xxxxxxxxxxxxx aktivita x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[3] Xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx standardních roztoků (xxxxx kruhy).
[6] Xxxxx xxxx izolovaný x Xxxxx xxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx růst xxx X. xxxxxx XXXX 6538 P.
[7] Xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Kmen izolovaný x Xxxxx podle XXXX.
[9] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační médium xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[11] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[12] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a dávající xxxxxx výsledky.