Třetí Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. dubna 1972,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Rady xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx metod odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], a zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že uvedená xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx předpisy a xxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Komise x. 71/250/EHS ze xxx 15. xxxxxx 1971 [2] a 71/393/XXX ze dne 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx stanovily xxxx analytických metod Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx provedených xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x obsahy xxxxxx, xxxxxxx proteinů, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, volného x xxxxxxxxx gossypolu, xxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx popsaných x xxxxxxx I xxxx směrnice.
Obecná xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxx 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS ze xxx 15. xxxxxx 1971, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx krmiv, se xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx úřední kontroly xxxxx, xxxxx xxx x stanovení a xxxxxxxxxxxx tetracyklinových xxxxxxxxxx, xxxxx x x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, se xxxxxxxxx xxxxx xxxxx popsaných x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v části 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx směrnice Xxxxxx x. 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxx 1971, s výjimkou xxxxx týkající xx xxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx metody popsané x xxxxxxx II xxxx směrnice.
Xxxxxx 3
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1973. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu dne 27. xxxxx 1972.
Za Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Xxxxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Úř. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX X
1. STANOVENÍ XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx metoda
1. Xxxx x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx, x xxxxxxxx těch krmiv, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxx pulpu, xxxxxx řepné xxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxx, sušené kvasnice, xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. xxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx zahrnuje dvojité xxxxxxxxx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx vzorek xxxxxxx xx tepla xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx stanovení xx vzorek xxxxxxxxx 40 % xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx optická rotace xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx při xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx známým xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx ve vzorku.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx titrací xx xxxxxx roztoku hydroxidu xxxxxxx 0,1 X x za přítomnosti 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx v 94 % (V/V) xxxxxxxx. 10 ml = 30,94 xx 0,1 X XxXX.
3.3 Carrezův xxxxxx X: xxxxxxxxx xx vodě 21,9 x xxxxxx zinečnatého Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx XX: xxxxxxxxx ve xxxx 10,6 x hexakyanoželeznatanu xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Doplnit xxxxx na 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, x: 0,948 xxx 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Erlenmeyerova xxxxx x objemu 250 xx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Polarimetr xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx způsobem, aby xxxx prošel sítem x kulatými xxx x xxxxxxx 0,5 xx.
5.2 Stanovení xxxxxxx xxxxxxx rotace (X xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 xx. Xxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxx rozmístil x přidat xxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxx a xx dobu prvních xxx minut xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxxxx, xxx x xx vložení baňky xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxx. Baňka xxxxx být vyjmuta x xxxxx během xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx po 15 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxxx 30 ml xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx na 20 °C.
Přidat 5 xx Xxxxxxxxx roztoku X (3.3) a xxxxx minutu protřepávat. Xxxx xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx roztoku XX (3.4) x xxxx jednu xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx filtrát zcela xxxx (což xx xxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxx xx použití xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X x XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx optickou xxxxxx xxxxxxx v 200 xx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (P’ xxxx X’) xxxxx xxxxxxxxxxx xx 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x xxxxxx s xxxxxxxxx na 1 xx, xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x objemu 100 xx a xxxxxx xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (viz xxxxxxxx 7.2). Poté xxxxxx baňku xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě x xxxxx xxxx doby xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxx xxxxxx dobře smíchal x ethanolem. Xxxxxxx xx xxxxx ethanolem (3.5), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 ml, xxxxxx 2,1 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx Erlenmeyerovu xxxxx zpětný xxxxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxxx vodní xxxxx. Přesně xx 15 xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx baňku x xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx xxxxx do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vodou x xxxx xxxxxxxx xx 20 °C.
Poté xxxxxxx za xxxxxxx Xxxxxxxxx roztoku I (3.3) x XX (3.4), doplnit xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx a změřit xxxxxxxx rotaci, xxx xx uvedeno x xxxx 5.2 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Obsah xxxxxx (%) xx xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - X’) / [α]X20°
xxx xx:
X = xxxxxxx optická xxxxxx, v úhlových xxxxxxxx.
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, v xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx xxxxx
+ 195,4°: xxxxxxxxxx xxxxx
+ 184,6°: kukuřičný xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: xxxxx xxxxx
+ 181,3°: xxxxxx škrob
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx x směsi xxxxxx x krmných xxxxxxx
6.2 Xxxxxx sacharimetrem
Procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]D20° · (2 X · 0,665) (S - X’) / [α]D20°
Kde xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx sacharimetru
S’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx ve 40 % ethanolu, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx 100 xx xxxx, xxxxx xx při xxxxxxxx 200 xx xxxxxxxx xxxxxx 100 stupňů xxxxxxxxxxxx. Tato xxxxxxxx xx mění xxxxx xxxxxxxxxxxx:
16,29 g pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 g xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
20,00 x pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = xxxxxxxxxx xxxxxxx rotace xxxxxxx xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 0,4 absolutní hodnoty xxx xxxxx xxxxxx xxxxx než 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx vyššího xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx uhličitan xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx stanovením xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx příslušného xxxxxxxx xxxxxxx kyseliny xxxxxx.
7.2 X xxxxxxx xxxxxxxx x vysokým xxxxxxx xxxxxxx, jako xx sušené mléčné xxxxx nebo sušené xxxxxxxxxx xxxxx, postupovat xx xxxxxxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx baňku zpětný xxxxxxx, xxxxxxx xx xx 30 xxxxx xx vodní xxxxx x xxxxxxx 50 °X. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x pokračovat x xxxxxxx, jak xx xxxxxxx v xxxx 5.3.
2. STANOVENÍ HRUBÝCH XXXXXXXX
1. Účel a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx stanovit xxxxx xxxxxxx proteinů x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx dusíku stanoveného xxxxx Xxxxxxxxxxx metody.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx xx xxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx roztokem hydroxidu xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx měďnatý XxX x.x. xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx XxXX4 · 5X2X x.x., xxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxx HgO x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx xxxxx x.x.
3.4 Kyselina sírová x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx sírová 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
3.7 Indikátor xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx methylčerveně ve 100 ml 95-96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,1 N.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx p.a.
3.12 8 % (m/V) xxxxxx thiosíranu xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Granulovaná pemza, xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx ho xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx aparatury. Xxxxxx 10 x xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 xx 0,4 x oxidu xxxxxxxxx nebo 0,9 xx 1,2 x xxxxxx měďnatého nebo xxxxx rtuti nebo 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x xxxxxxx granulí xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx mírně x za občasného xxxxxxxxxxxx, dokud hmota xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx kapalina xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx stěn xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx je xxxxxx xxxx a xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxx katalyzátor xx xxxx mědi), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx hodinu, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Destilace
Opatrně x za xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, aby xx xxxxxxx zcela xxxxxxxxxx; xxxxxx xxxxxxxxxxx; poté xxxxxx několik xxxxxxx xxxxx (3.3).
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx odměřené xxxxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,5 N (3.6) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx několik xxxxx indikátoru xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx konec xxxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx baňce xx xxxxxxx nejméně 1 xx (xxx xxxxxxxx 7.3). Přes xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 100 xx 40 % xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx, přidat do xxxxx xxxxxx xxx 10 ml xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx thiosíranu sodného (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xx 30 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Po xxxxxxxx této xxxx xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x destilaci. Xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx destilace xxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx sběrné baňky x pozorovat xxxxxxxx. Xxxxx dojde xx xxxxxxxx do xxxxx, xxxxx přidat xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx baňce xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) v xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, se xxxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxx x titrace), x xx bez xxxxxx, xxxxx má xxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, destilace x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx x.x. (x.x. 114 °X; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx bez xxxxxx; 1 g acetanilidu xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx spotřebované xxxxxxxx xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx sírové 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx. Vynásobit xxxxxxxx xxxxxx faktorem 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit:
- 0,2 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx vyšší xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Je xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx mineralizací x destilací. V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.
7.2 X xxxxxxxx x nízkým xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx kyseliny xxxxxx 0,1 X, xxxxx xx být xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxx baňky, snížen xx 10 xx 15 xx x xxxxxxx xxxxx na 25 xx.
7.3 Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx hydroxid xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxx po xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xx nesmíchala x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX PROTEINŮ XXXXXXXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXX CHLOROVODÍKOVOU
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx.
2. Princip
Vzorek se xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxx xx filtruje a xxxxx xxxxxx ve xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx proteinů.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 j/mg xxxxxxx; xxxxxxxx pepsinu xx xxxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx v xxxxx 4 této xxxxxxx x musí být xxxxxxxxxxxx v xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 j/l.
3.5 Xxxxxxxxxx emulze (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x bodě 3 xxxxxx pro xxxxxxxxx obsahu xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Vodní xxxxx xxxx inkubátor xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx metody.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx roztoku (viz xxxxxxxx 7.2)
Navážit 2 x vzorku s xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx odměrné xxxxx o xxxxxx 500 xx. Xxxxxx 450 xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °C. Xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx hrudek. Xxxxxx, xx xx xX xxxxxxxx nižší xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx xx vodní xxxxx xxxx xxxxxxxxxx (4.1) x nechat xx xxx 48 xxxxx. Protřepat xx 8, 24 a 32 hodinách. Xx 48 xxxxxxxx přidat 15 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), zchladit xx 20 °X, xxxxxxx po rysku xxxxx x xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx baňky destilační xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx a uvést xx xxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx, xxxxx se xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Snížit xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx.
Xxxx xx roztok xxxx x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx bázi xxxx), xxxxxxxx var xxxxx další xxxxxx. Xxxxxx vychladnout.
5.3 Xxxxxxxxx x titrace
Postupovat, jak xx xxxxxxx x xxxxxx xxx stanovení xxxxxxx proteinů v xxxxxx 5.2 a 5.3.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx postupu, xxx bez vzorku, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx kyseliny xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorkem. 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx množství xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 absolutní hodnoty xxx xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Hodnoty xxxxxxx xxxxx metodou nemají xxxxxx souvislost xx xxxxxxxxxxxxxx in xxxx.
7.2 Xxxxxxx x obsahu xxxx vyšším xxx 10 % musí xxx xxxxxxxxx extrakcí xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °C).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX PEPSINU
1. Xxxx a rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx stanovených podmínek xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx filtrátu xx xxxxx hydroxid xxxxx x xxxxxxx Folin-Ciocalteu. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se xxxx xxx 750 xx x xxxxxxxxxxxx množství xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxx množství xxxxxx, které xx xxxxxxxx metody uvolní xx xxxxxx takové xxxxxxxx hydroxyarylových xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx činidlem Xxxxx-Xxxxxxxxx má xxxxxxxx xxxxxxx odpovídající xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx μxxxx xxxxxxxx zbarveného xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,025 X.
3.4 5 % roztok (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxx 100 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 25 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 ml xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx a xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx kyseliny xxxxxxxxxx (x: 1,71) a 100 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19), xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxx do varu x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxx 10 xxxxx. Nechat vychladnout, xxxxxxx zpětný xxxxxxx, xxxxxx 175 x xxxxxx lithného (Li2SO4 · 2H2O), 50 xx xxxx a 1 xx brómu. Xxxxx po xxxx 15 xxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Přelít xxxxxx xx odměrné xxxxx x objemu 1 x, doplnit xx rysku xxxxx, xxxxxxxxxxxxx a filtrovat. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 objemy xxxx.
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxx hemoglobinu, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 354 mg xxxxxx [1] x xxx xx xxxxx o xxxxxx 200 ml x normalizovaným xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx nerozpustí. Xxxxxxx vakuum x xx xxxxxxxxxxxx doplnit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx xx 100 xx. Xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx: rozpustit 181,2 xx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx jednoho xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx tohoto xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) ve 100 xx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μmol xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxx ultratermostatem xx 25 °X + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, xxxxxxxx: 1 xxxxxxx.
4.4 xX xxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx ve 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx x xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). pH kontrolované xX metrem xxxx xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Hydrolýza
Odpipetovat 5,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx lázni (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 x xxxxxxxxx asi xxxxxx xxxxxx tam x zpět xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx konci. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx 25 °X přesně xx xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (doba x xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx dodrženy). Xxxx přidat 10,0 xx roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxx zbarvení a xxxxxx optické xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxx, xxx xx do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 xx 10 xxxxxxxx stanovit optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 750 xx x kyvetách o xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxx x xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, zahřát ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřáté na 25 °C, xxxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxx 1,0 xx roztoku xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 10 xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx suchý xxxxx. Xxxxxxxxxx x postupu xxxxxxxx x xxxx 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx křivka
Do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, x 5,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx odpovídá 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx tyrosinu. Doplnit xxxxx xxxxxxxxxxx roztokem xxx tyrosinu. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx hustotu xxx xx uvedeno x xxxxxxxx xxxx xxxx 5.3. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx hustot xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxx x μmolech, které xxxxxxxx xxxxxxx hustotě xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx pepsinu x μxxxxxx xxxxxxxx xx 1 mg x xx xxxxx xxxxxx xxx 25 °X xx xxxxxxxx xxxxx vzorce:
Jednotky xx xx (x/xx) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx podle xxxx 5.2.
7. Poznámky
7.1 Množství xxxxxxx, které xx xxx rozpuštěno, xxxx xxx takové, xxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Dvě xxxxxxxx na mg xxxxxxx xxxxx metodou xxxxxxxxxx:
3,64 Ansonovovým xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx xxxxxxxx/xx xxx. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 komerčních xxxxxxxx/x (μxxxx xxxxxxxx/x xx 10 xxx. xxx 35,5 °X).
5. STANOVENÍ XXXXXXX A XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx gossypolu x xxxxxxxx příbuzné xxxxx x xxxxxxxxxxxx semenech, xxxxxxxxxx mouce a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx směsích, které xxxx látky obsahují. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xx 20 xxx.
2. Princip
Gossypol xx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx 3-amino-1-propanolu, a xx buď směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx stanovení celkového xxxxxxxxx. Gossypol xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx gossypol-dianilin, jehož xxxxxxx hustota xx xxxxxx xxx 440 xx.
3. Činidla
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu: xxxxxxx 60 objemových xxxxx xxxxxxxxxxxx p.a. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx x-xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxxxx X: xx odměrné xxxxx x objemu 1 x xxxxx xxx 500 ml xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), 2 xx 3-amino-1-propanolu, 8 xx ledové xxxxxxxx xxxxxx a 50 xx vody. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx X: xxxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx x 10 xx ledové xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu x xxxxxxx xx xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx činidla xx xxxxx týden.
3.4 Xxxxxx x.x.: pokud xxxxxxx xxxxxxx slepého xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx přes zinkový xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx dát 27,9 mg xxxxxx xxxxxxxxx. Rozpustit x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 ml 50 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx rozpouštědlem X. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx je 0,02 xx/xx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxx X: do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx xxx 27,9 xx xxxxxx gossypolu. Xxxxxxxxx x doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx B (3.3). Xxxxxxxxxxx gossypolu x tomto xxxxxxx xx 0,5 mg/ml.
Pokud xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X x X chráněny xxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (třepačka): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx zkušebního xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxx x malým xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxxx měření. Pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx semenech, xxxxxxxxxx mouce a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxxxxxx vzorek xxxxx xxxxxxxxx 1 g; xxx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 5 g. Xx xxxxxxx případů xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx část 10 xx xxxxxxxx; xxxx by xxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx celkového gossypolu xx množství xxxxxxxxxx xxxxxx mělo xxx xxxx 0,5 x 5 g, xxx xxxxxxxxx xxxx 2 xx filtrátu xxxxxxxxxx 40 xx 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xx měla provádět xxx xxxxxxxx teplotě xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxx dno xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx přidat 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), zazátkovat xxxxx x jednu xxxxxx promíchávat x xxxxxx. Xxxxxxxxx přes xxxxx xxxxx x xxxxxxxx filtrát x xxxx xxxxx se xxxxxxxxxx hrdlem. Xxxxx xxxxxxxx zakrýt xxxxxxx x kohoutem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Pomocí xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx baněk (X x B) x xxxxxx 25 ml xxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μg xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx rozpouštědlem X (3.2) xx 10 xx. Poté doplnit xx xxxxx xxxxx (X) směsí xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx přidat 10 xx rozpouštědla X (3.2) do xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (C x X) x xxxxxx 25 xx. Doplnit xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx měření xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (X) x (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx lázní, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx, doplnit po xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx xxxxx hodinu.
Stanovit xxxxxxxxxxxxxxxxx při 440 xx x ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx pokus (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (C) x xxxxxxxx hustotu xxxxxxx vzorku (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx roztoku pro xxxxx xxxxx xx xxxxxxx hustoty xxxxxxx xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx). X xxxx xxxxxxx vypočítat xxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx xx uvedeno x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx obsahující 1 xx 5 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 50 xx x xxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx a xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx xxxx xxxxxxx xxxxx x objemu 50 ml. Xxxxxxxx xxx xxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx lázní. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx obě xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx 10 až 15 xxxxx, xxxx filtrovat x xxxxxxxx xxxxxxxx x baňce se xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 2 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 ml x 2 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx do xxxx jiných xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 xx. Doplnit xx 25 xx xxxxx xxxxx baňky x xxxxx xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4) do xxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 30 minut nad xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx 25 ml xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat stát xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x bodě 5.2. X xxxx hodnoty xxxxxxxxx obsah celkového xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x bodě 6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx buď xx xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx (6.1), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx specifické xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx:
xxxxx gossypol: X 1% / 1xx = 625
celkový xxxxxxxx: E 1% / 1xx = 600
Xxxxx volného xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx vzorku xx xxxxxxxx takto:
gossypol %: X · 1&xxxx;250 / E1%1cm ·&xxxx; · x · x
xxx:
X = opravená xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xx uvedeno x bodě 5.2
p = zkušební xxxxxx x g
a = xxxxxxxxx část filtrátu x ml
6.2 Na xxxxxxx kalibrační křivky
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 ml. X každé xxxxx xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) na 10 xx.
Xxxxxxx baňky první xxxxx, včetně slepého xxxxxx, xxxxx isopropanolu x hexanu (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx každé baňky xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx po xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat stát xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx série xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx referenční xxxxx. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (v μx).
6.2.2 Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx 6 odměrných baněk x xxxxxx 50 xx. Do první xxxxx xxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu X (3.6). Doplnit xxxxx xxxxx xxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x hexanu x promíchat.
Přidat xxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx do xxxx xxxxx o 6 xxxxxxxxx baňkách x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx obsah baněk xxxxx série na 25 xx xxxxx x isopropanolu a xxxxxx (3.1) (referenční xxxxx).
Xxxxxx do každé xxxxx druhé série 2 ml xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), homogenizovat x xxxxxx xxxx jednu xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xx xxxxxxxx uvedených x xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx roztoků xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx optické hustoty xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.3 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % relativní xxxxxxx xxx obsah gossypolu xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xx 500 xx 750 ppm,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx obsah xxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxxxxxxxxxxx (teoretický xxxxx: 17,7 % dusíku).
PŘÍLOHA XX
1. STANOVENÍ X XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, která obsahují xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx x premixech.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx papírové xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x identifikována xxxxxxxxxx xxxxxx hodnot Xx x xxxxxxxxx standardních xxxxx, x xx xxx xxxxxxxxxxxx v XX světle (xxxxxx xxxxx antibiotik), nebo xxxxxxxxxxxxx na agarovém xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx.
3. Činidla
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Monohydrát xxxxxxxx xxxxxxxxx p.a. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
7,45 x |
|
Xxxxxx x.x. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 g |
|
Destilovavná xxxx xx |
1000 ml |
|
3.3 Xxxxxx I: xxxx xxxxxxx nitromethanu/čistého xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx II xxxx xxxxxxx nitromethanu/čistého xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 98/2 objemově.
3.6 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx látky: Chlortetracyklin, xxxxxxxxxxxxxx, tetracyklin, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
3.9 Mikroorganismus: X. xxxxxx XXXX x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx použitím xxxxxxx xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx chloridu x 5 % (x/X) roztok xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Zařízení pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografii (xxxxx xxxxxx 25 xx). Xxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxx (2440B xxxx 2043X) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx stanovení xxxxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx asi 20 x 30 xx xxx bioautografii.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
5.1 Zásobní xxxxxxx
Xx základě standardních xxxxx (3.8) a xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx stanovení XX xxxxxxx
Xxxxxx roztoky (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) s xxxxx získat xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μx chlortetracyklinu-HCL, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x tetracyklinu-HCL xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx antibiotika xxxxx xxx 10 xxx, xx xxxxx použít xxx homogenizovaný vzorek, xxxx nejjemnější xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx nebo xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika xxx 100 μx xx 1 xx (6.1) a 5 μx na 1 xx (6.2).
7. Stanovení x xxxxxxxxxxxx
7.1 Chromatografie
Ponořit xxxxx xx pufračního xxxxxxx, xX 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx 0,01 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) a xxxxxxxx (6.1 x 6.2). Xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx; pokud xx to xxxxx, xxxxxx trochu vyschnout.
Rozvinout xxxxxxxxx chromatografií. Xxxxxx xxxxxx X (3.3) xxx stanovení bioautografií x xxxxxx XX (3.4) xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx. Když xxxx xxxxxxxxxxxx dosáhne xxxxx 15 až 20 xx (asi 1 xxxxxx 30 xxxxx), přerušit xxxxxxxxxxxxxx x vysušit xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx UV světlem
Když xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 1 μx/xx2, je možné xx ošetření xxxxxxxxxxxxx xxxxxx amoniaku (3.7) xxxxxxxxx ozářením pod XX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), xxxxx xx předem xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx xxxxxxxx xxxxx (4.5) x položit xxxxx xx kultivační xxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx odejmout xxxxx x položit xx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx, kde xxxxxxx xxxxx inkubační xxxx. Xxxxxxxxx přes noc xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx tetracyklinového xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx médiu.
K xxxxxx chromatogramu xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Identifikace
Relativní xxxxxxx Xx tetracyklinových antibiotik xxxx uvedeny zde. Xxxx hodnoty xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx jakosti papíru x jeho xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (TC) |
0,40 |
|
Oxytetracyklin (OTC) |
0,20 |
|
4-epi-CTC |
0,15 |
|
4-epi-TC |
0,13 |
|
4-epi-OTC |
0,10 |
Antibiotická xxxxxxxx "xxx" xxxxxxxxx xx xxxxx než xxxxxxxx normálních sloučenin.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X TETRACYKLINU
A. XXXXXX XX AGARU
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (TC) x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Xxxxxx xxxxxxx xxx jejich xxxxxxxxx xx 5 xxx. Obsahy xxxxx xxx 5 ppm xxxxx xxx určeny xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx rovných xxxx xxxxxxx než 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx zředěným xxxxxxxxxx. X obsahů xxxxxxx xxx 50 ppm xx xxxxxx extrahuje xxxxx xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové xxx xxxxxxxxx XXX x xxxxx xxxxxxxxx x kyseliny chlorovodíkové xxx xxxxxxxxx XXX x XX.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx měřením xxxxxx CTC, OTC xxxx XX xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. cereus. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: X. xxxxxx XXXX x. 11778
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx zkumavky xx šikmým xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx modře x xxxxxxxx xxxxxx. Inkubovat xxxx xxx xxx xxx 30 °C. Xxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx xx šikmý xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) za použití 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx solného xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 až 4 %. Inkubovat 3 xx 5 dní xxx 28 xx 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.6) xxxx, co byla xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx sporulace, x xxxxxxxxxxxxx. Tato xxxxxxxx xx může x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotiky xxxxxxxx xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,2 a 0,3 xx xx 1000 ml. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 50 xx 60 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 g |
|
Kvasnicový xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 ml |
|
Fosfátový xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx modře |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 ml |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Xx2XXX4 · 2H2O p.a. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: xxxxxxxxx čerstvý xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xx xX 4,5 za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx 2 N.
4.9 Xxxx xxxxxxx acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Směs xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, TC, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx látek (4.11) x za xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μg chlortetracyklinu-HCL xx 1 xx. Xxxxx roztok xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx týden.
Na xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx standardní xxxxxxxx xxxxxx S8, jehož xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx. Zředění xx provede xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, zředěného 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx pufru (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx na základě xxxxxxxxx roztoku, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx x tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 připravit xx xxxxxxx zásobního xxxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, standardní pracovní xxxxxx X8 obsahující 1,0 μx tetracyklinu-HCL xx 1 xx x xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,5 |
μg/ml |
|
S2 |
0,25 |
μg/ml |
|
S1 |
0,125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx rovné xxxx nižní xxx 50 xxx
Xx xxxxxxxxxx xxxxxx přidat xxxxxxxx (4.8) x množstvích xxxxxxxxx x tabulce. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Poté xxxxx xxxxxx fosfátovým xxxxxx (4.3) xxxxx xxxxxx x xxxxxxx s xxxxx xxxxxx koncentraci X8. Koncentrace xxxxxxxxx x tomto roztoku xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx dekantovat xxxxxxx x cílem xxxxxx čirý xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, U2 a X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x ppm |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Zkušební xxxxxx x g |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
ml formamidu (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
xxx. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx X8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Obsahy vyšší xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxx xx vzorku xxxx xx xxxx výrobní xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx 2 xx 10 x 20xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Xxxxx xxxxxxxx musí xxxxxx xX xxxxx xxx 3; pokud xx xx nutné, xxxxxxx pH na 3 (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx 10 % kyseliny xxxxxx). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xX xx 5,5 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxx xx ze xxxxx xx modrou). Xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8 (xxx 6.1).
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x bodě 6.2.1 xxx, xx xx xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální médium xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, U4,U2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx čtyři xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx tímto xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx x agarovém xxxxx nejméně 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx pro xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo plastovým xxxxxxxx x průměru 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr inhibičních xxx, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx této rovnice:
(U1 + U2 + X4 + U8 - X1 -X2 -X4 -S8) · 0,602 / U4 + X8 + X4 + X8 - U1 -X2 -X1 -X2
Xxxxxxxx aktivita = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit chlortetracyklin (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (TC) xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 1 x/xx, xxxxx nezasahuje xxxxx xxxxx, xxxxx by xxxxxx vzniknout xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx než xxxxxx xx agaru.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx acetonu, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x pro xxxxxxxxx xxxxxx XXX x XX směsí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxxx účinek se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultivačního xxxxx, xxxxx xxxx naočkováno Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxx bylo xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Staphylococcus xxxxxx xx zkumavky x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1.), do xxxxxxx xx xxxxx 1,5 až 3 % xxxxx (podle xxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxx xxx při 37 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx xx xxxxx xxxx. Zároveň xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx laboratorní xxxxxxx.
3.2 Příprava xxxxxxxx xxxxx
24 hodin před xxxxxxxx přeočkovat xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxx x xxx 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx 100 xx xxxxxxxx bazálního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xx xxxxx lázni xxx 37 °C xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmické fáze (1x30 až 2x).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [7]
|
Pepton |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx sodný |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,32 g |
|
Hydrofosforečnan xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
xX xx sterilizaci: 6,8 až 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (m/V) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx látky: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x chlorovodíku.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 až 500 μx XXX-XXX, XXX-XXX xxxx TC-HCL xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x chladničce xxxxx xxxxx.
6. Extrakce
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx směsi (4.4) x protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx rysku xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 4,5 (4.2). Homogenizovat a xxxxxx stát.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 200 nebo 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxx xxx 100 ml xxxxx (4.5) a xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx série xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxxxx xx načrtne xxxxxxxxxx xxxxxx, ne xxxxx xx xxxxxxxx interpolace xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx. Ředění se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx kmene, xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx od xxxxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx XXX-XXX xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx je uvedeno xxxx a ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 6 ředění, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku |
ml xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx extrakt (6.1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem získat xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,12 μx CTC-HCL. Xxx 1 ml xxxxxx xxxxxxx xx dvou xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) do dvou xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,6 μx XXX-XXX xxxx TC-HCL na 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx uvedeno xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx ředění xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.2) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx XXX-XXX nebo XX-XXX na 1 xx. Dát 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx zkumavek x 0,5 xx (= 0,24 μg) xx dvou xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx objem xxxx xxxxxx zkumavek xx 1 xx xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx (4.1) očkovací xxxxxx (3.2) x xxxxx získat xx xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx propustnost v 5 cm kyvetě xxxx 92 % xxxxxxxxx propustnost xx 2 xx kyvetě xxx xxxxxxxxx aparatury xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx xxxxx xxxxxxxx (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx zkumavek musí xxx provedeno x xxxxxx, xxx nezbytně xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx ve vodní xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx 37 °X + 0,1 °X. Xxxxxxxxx doba xx xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx xxxx možné xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx (xxxxxx 2x30 xx 3x). Xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) xx xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Měření xxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx). X důvodu xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx zkumavek xx xxxxxxxxxx použít xxxxxxx 2 cm x raději 5 xx xxxxxx.
8. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx milimetrovém xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx propustností xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx křivce xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx obsah xxxxxxxxxxx xx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % relativní xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx agaru -
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx umožňuje stanovit xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx, x to xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx zředěným methanolovým xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Xx odstředění xx extrakt zředí x xxxx antibiotická xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxxx oleandomycinu xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx B. cereus. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx inhibičních zón xx přítomnosti xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus, X 250 XX [8] (xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. cereus xx xxxxxxxx se xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) a xxxxxx 100 μg xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 ml. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx asi 30 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Příprava suspenze xxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx xxx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxxxx koncentrace xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 až 30 °X, poté xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx byla xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx sporulaci, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx může x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nejméně 5 měsíců.
Předběžnými xxxxx xx deskách se xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxxxx xxxxxxxx očkovací látky, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx oleandomycinu xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx množství je xxxxxxx 0,1 a 0,2 xx xx 1000 ml. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x činidla
4.1 Xxxxxx xxx udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 g |
|
Agar, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 6,5. |
4.2 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [10]
Xxxxxx (4.1) xxxxxxxx xx xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (V/V) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (x/X) xxxxxx xxxx (hydroxymethyl) aminometanu x.x.
4.7 Xxxxxxxxx roztok
|
Čistý xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 x |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: oleandomycin o xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) v 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x zředit xxxxxxxx (4.6) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 μx/xx.
Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (4.6) standardní xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 0,1 μg xxxxxxxxxxxxx na 1 xx. Poté připravit xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx roztoku (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx předpokládaném xxxxxx oleandomycinu ve xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 xx 10 x 100 xx roztoku (4.7) x protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,1 μg oleandomycinu xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a U1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.2) při 60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x miskách xx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, S4, X2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, U1). Xxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx o xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx se x plochých skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 200 xx x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx antibiotika mezi 0,10 a 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x každou koncentrací, xxx každé stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx během 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx. Pokud nedošlo x xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - U2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- xxxxxx na xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx tylosin x xxxxxxxx, koncentrátech x premixech. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx pufračním xxxxxxxx x xX 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx se xxxxxxx zředí a xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea ATCC x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Sarcina xxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx přes xxx xxx xxx 35 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každý xxxxx xx šikmý xxxx.
3.2 Xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx fyziologického xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx obsahující 250 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.4). Xxxxxxxxxxxxx a zředit xxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx 75 % xxxxxxxxx propustnost xxx 650 nm.
Pokud xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) určit xxxxxxxx očkovací xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx xxx xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx největší xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média se xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [11]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xx xxxxxx udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx upravit xX xx7,0 x xx xxxxxx xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Fosfátový xxxx, xX 7
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Xxxxx methanol.
4.6 40 % (V/V) xxxxxxxx.
4.7 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx methanol: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Standardní xxxxx: xxxxxxx o xxxxx aktivitě.
5. Standardní xxxxxxx
Xxxxx standardní xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °C xx xxxxxxx xxxxxxx (5 xx xxxxx). Xxxxxxx 10 až 50 mg do xxxxxxx baňky, xxxxxxxxx x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxx fosfátovým xxxxxx, xX 7 (4.3) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx základního xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxx na 1 xx.
Xxxx připravit xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx použít 10 x xxxxxxxxxx vzorku; xxx xxxxxxx a xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Přidat 60 xx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx na 80 °X, x xxxxxxxxxxxxx 2 xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxxxxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx alikvotní xxxx xxxxx (4.7) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, U2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7).
Xxx xxxxxx xxxxx xxx 10 xxx xxxxxxx extrakt xx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxx při 35 °X a xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx stanovení (4.1) upravené na xX 8 při 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx v xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (X8, S4, S2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x takové xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx médiu nejméně 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 mm. Xxxxxxxxx xxxxxxxx očkovaného xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných desek x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx nebo plastovým xxxxxxxx x průměru 200 mm x x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx antibiotika xxxx 0,10 a 0,15 xx, x závislosti xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx každé stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx 35 xx 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx na semilogaritmický xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx průměru xxxxxxxxxxx zón. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx pomocí xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + U8 - X1 - X2 - X4 -X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx vzorku nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Spodní xxxxxxx pro stanovení xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztokem "Tween 80". Xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx a xxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx stanoví měřením xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Difúze xx xxxxxxx vytvořením xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °C. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každých 14 xxx xx xxxxx agar.
3.2. Příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoku (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, poté xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 xx fyziologického xxxxxxx (4.3). Homogenizovat x xxxxxx xxxx xxxxxxxx x cílem xxxxxx asi 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 nm. Xxxxx se xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx xxx různé xxxxxxx xxxxxxxxxxx virginiamycinu xxxxxxxx možné, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx provádí xxx 48 až 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium pro xxxxxxxxx [12]
|
Glukosa |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx pH xx 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
8,0 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx voda ad 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Xxxxx 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml. Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx připravit xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx postupným ředěním (1+) za xxxxxxx xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Výrobky x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxxxxx 20 xx čirého roztoku x xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Rozpustit reziduum xx 20 xx xxxx více směsi (4.5) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml (= X8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.5)
6.2 Xxxxxxx x obsahu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx, přidat 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxx zředit směsí (4.5) s cílem xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx xxxxx xx xxxxxxx x miskách xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, X2, X1) x xxxx koncentrací xxxxxxxx (X8, X4, X2, U1).Každá miska xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x průmětu 200 xx x xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx děr xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxx xxxxxxxxx zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxx noc xxx 35 xx 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx. Pokud nedošlo x xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 -X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % relativní xxxxxxx.
[1] Může xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] Xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx inhibičních xxx xxxxxxxxxxxx roztoků (xxxxx xxxxx).
[6] Tento xxxx xxxxxxxxx x Xxxxx xxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx X. xxxxxx XXXX 6538 P.
[7] Xxxx být použito xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační xxxxxx podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Xxxx xxxxxxxxx x Xxxxx podle XXXX.
[9] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[11] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.