Třetí Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. dubna 1972,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Rady xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu krmiv [1], x zejména xx článek 2 xxxxxxx směrnice;
vzhledem x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Komise x. 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxx 1971 [2] a 71/393/XXX xx xxx 18. listopadu 1971 [3] xxx stanovily xxxx analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx xx stav xxxxxxx provedených prací xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA TUTO XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx analýzy xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, pokud xxx x obsahy škrobu, xxxxxxx proteinů, hrubých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx gossypolu, xxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx X xxxx směrnice.
Obecná xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (úvod) xxxxxxx xxxxx směrnice Komise x. 71/250/EHS ze xxx 15. června 1971, kterou xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx X xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxxx, že xxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, pokud jde x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx x x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, oxytetracyklinu, xxxxxxxxxxxx, oleandomycinu, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, se xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx II xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x části 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Komise x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx XX xxxx směrnice.
Článek 3
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 1. xxxxxxxx 1973. Neprodleně o xxxx informují Komisi.
Xxxxxx 4
Xxxx směrnice xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu dne 27. xxxxx 1972.
Xx Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Mansholt
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX X
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
1. Účel x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x krmivech, x xxxxxxxx těch krmiv, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, řepnou xxxxx, xxxxxx řepné skrojky xxxx xxxxx, bramborovou xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx bohaté xx xxxxxx (např. xxxxx x moučka x xxxxxxxxxx) xxxx škvarky.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx zahrnuje dvojité xxxxxxxxx. Při xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxx za xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 40 % ethanolem. Xx xxxxxxxxx filtrátu xxxxxxxxx chlorovodíkovou, xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx rotace xx xxxxxxxx podmínek xxxx xxx prvním xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,126.
3.2 1,128 % (m/V) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N x xx xxxxxxxxxxx 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (V/V) xxxxxxxx. 10 ml = 30,94 xx 0,1 X XxXX.
3.3 Carrezův xxxxxx X: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x octanu xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X a 3 x ledové xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx 100 ml.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx II: xxxxxxxxx ve vodě 10,6 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Xxxxxxx xxxxx na 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, x: 0,948 xxx 20 °X.
4. Přístroje
4.1 Erlenmeyerova xxxxx x xxxxxx 250 ml s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx chladičem.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx sacharimetr.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělnit xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx prošel xxxxx x xxxxxxxx xxx x průměru 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx rotace (P xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x xxxxxx s xxxxxxxxx na 1 xx x xxx xx do xxxxxxx xxxxx o objemu 100 xx. Xxxxxx 25 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx xx zkušební xxxxxx dobře rozmístil x xxxxxx xxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxx x xx xxxx prvních xxx minut silně x pravidelně protřepávat, xxx xx zabránilo xxxxxx hrudek. Množství xxxx ve vodní xxxxx musí xxx xxxxxxxxxx, xxx x xx vložení xxxxx xxxxxxx lázeň xx xxxx xxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx po 15 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx x xxxxx zchladit na 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx 5 xx Carrezova roztoku XX (3.4) x xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (což xx xxxxxx), opakovat xxxxxxxxx xx použití xxxxxxx xxxxxxxx Carrezova roztoku X x II, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx rotaci xxxxxxx x 200 xx trubici.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X’ xxxx S’) xxxxx xxxxxxxxxxx ve 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x vzorku x xxxxxxxxx na 1 xx, xxx xx xx odměrné baňky x xxxxxx 100 xx x xxxxxx xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Poté xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx této xxxx xxxxxxxx silně xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxx smíchal x xxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxx (3.5), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx protřepat. Xxxxxxxx xx Erlenmeyerovu xxxxx zpětný xxxxxxx x xxxxxxx ji xx xxxxxx vodní xxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx vyjmou Xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 100 ml, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x poté zchladit xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx I (3.3) x XX (3.4), xxxxxxx po xxxxx vodou, homogenizovat, xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxx 5.2 druhém x xxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Obsah škrobu (%) se xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Xxxxxx polarimetrem
procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - X’) / [α]X20°
xxx xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, v xxxxxxxx xxxxxxxx.
X’ = optická xxxxxx látek xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, x úhlových xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx škrob
+ 195,4°: xxxxxxxxxx škrob
+ 184,6°: xxxxxxxxx xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: ječný xxxxx
+ 181,3°: ovesný xxxxx
+ 184,0°: ostatní xxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx x krmných xxxxxxx
6.2 Měření xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]X20° · (2 X · 0,665) (S - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx rotace, ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx rotace xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % ethanolu, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx sacharózy x xxxxxxx xx 100 xx xxxx, která xx xxx xxxxxxxx 200 xx xxxxxxxx xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx mění xxxxx xxxxxxxxxxxx:
16,29 g xxx xxxxxxxxxxx sacharimetry
26,00 g xxx xxxxxxx sacharimetry
20,00 x pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (viz 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 0,4 absolutní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx než 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx rovnajícího xx nebo xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx vzorek xxxxxxxx xxxx než 6 % uhličitanů, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 V případě xxxxxxxx x vysokým xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx přidání 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxxxx baňku zpětný xxxxxxx, ponořit ji xx 30 xxxxx xx vodní xxxxx x xxxxxxx 50 °X. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v bodě 5.3.
2. XXXXXXXXX HRUBÝCH XXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx obsah xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx základě xxxxxx xxxxxx stanoveného xxxxx Xxxxxxxxxxx metody.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx mineralizuje xx xxxxx. Kyselý xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx v xxxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx p.a.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx xxxxxxx XxX x.x. nebo síran xxxxxxx pentahydrát XxXX4 · 5H2O x.x., xxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxx XxX x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx zinek x.x.
3.4 Kyselina xxxxxx x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx sírová 0,5 X.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxxx xx 100 xx 95-96 % (X/X) ethanolu.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X.
3.10 Roztok xxxxxxxxx sodného 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx roztok xxxxxx sodného p.a.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxxx sodného, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx pemza, xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x destilační xxxxxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 g xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 mg a xxx ho xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx aparatury. Xxxxxx 10 x xxxxxx draselného (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx katalyzátoru (3.2) (0,3 až 0,4 x xxxxx xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 g xxxxxx měďnatého xxxx xxxxx xxxxx xxxx 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x několik xxxxxxx xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx hmota xxxxxxxxxxx x pěna xxxxxxx; xxxx zahřívat xxxxxxxxxxxx dokud xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Zabránit xxxxxxxx xxxx baňky x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Když je xxxxxx xxxx x xxxxxxxx (světlezelený, pokud xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx bázi mědi), xxxxxxxx xxx ještě xxxxx hodinu, poté xxxxxx vychladnout.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x xx stálého xxxxxxx přidat 250 xx 350 ml xxxx, aby xx xxxxxxx zcela xxxxxxxxxx; xxxxxx vychladnout; xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.3).
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxx destilační xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,5 X (3.6) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx dusíku (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx baňce xx xxxxxxx xxxxxxx 1 xx (viz xxxxxxxx 7.3). Přes xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxx nalít do xxxxx 100 xx 40 % roztoku xxxxxxxxx sodného (3.8). Xxxxx xxx použit xxxxxxxxxxx xx bázi xxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxxx buď 10 xx roztoku xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 ml xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx takovým xxxxxxxx, aby se xx 30 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Po xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx alkalická, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Ukončit xxxxxxxxx, pokud lakmusový xxxxxxx ukáže, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx destilace xxx xx času xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x pozorovat xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxx přesně xxxxxxxx množství kyseliny xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Titrace
Ve xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx sírové xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) v xxxxxxxxxx xx normalitě xxxxxxx xxxxxxxx sírové, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx světle žlutou.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx účelem xxxxxxxx, xxx činidla xxxxxxxxxx dusík, xx xxxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxx a xxxxxxx), x xx xxx xxxxxx, který xx xxx analyzován. Za xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx (mineralizace, destilace x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx p.a. (b.t. 114 °X; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx bez xxxxxx; 1 x acetanilidu xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx sírové 0,5 X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kyseliny xxxxxx, 1 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X odpovídá 1,4 xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Výsledek xxxxxxxx xxxx procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx hrubých xxxxxxxx xxxxx než 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx vyšší než 20 % a xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 40 %.
7. Poznámky
7.1 Xx xxxxx xxxxxx některé xxxxxxxxx, xxxxx vyžadují xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x destilací. X xxxxxxx případě xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.
7.2 X xxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X, xxxxx xx být xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxx baňky, xxxxxx xx 10 xx 15 xx x xxxxxxx xxxxx na 25 ml.
7.3 Xxxxx xxxx xxxxx destilační xxxxxxxxx nálevku x xxxxxxxx, přidat xxxxxxxx xxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxxxx baňky xx xxxxxxx x pomalu xxxxx xxxxxxxx po xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX PROTEINŮ XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX CHLOROVODÍKOVOU
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxx 48 hodin xxx 40 °C xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx dusíku xx xxxxxxxx se stanoví xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx proteinů.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 N.
3.3 2,0 x/xx xxxxxxx; xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx v xxxxx 4 xxxx xxxxxxx x musí xxx xxxxxxxxxxxx x souladu x touto metodou.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx připravený xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Všechna xxxxxxx xxxxxxx x xxxx 3 xxxxxx pro xxxxxxxxx obsahu xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx aparatura xxxxx Xxxxxxxxxxx metody.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx roztoku (xxx xxxxxxxx 7.2)
Navážit 2 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 ml. Xxxxxx 450 ml xxxxxxx xxxxxxx v kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 40 °X. Xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx. Xxxxxx, že je xX xxxxxxxx nižší xxx 1,7. Vložit xxxxx xx vodní xxxxx xxxx xxxxxxxxxx (4.1) x xxxxxx xx xxx 48 xxxxx. Protřepat xx 8, 24 a 32 hodinách. Po 48 xxxxxxxx xxxxxx 15 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), zchladit xx 20 °C, xxxxxxx po xxxxx xxxxx a xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 mg x xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx nezbytná pro xxxxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx v metodě xxx xxxxxxxxx hrubých xxxxxxxx, ve druhé xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx a uvést xx varu. Xxxxx xx vytvoří xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx x silném xxxx, dokud se xxxx xxxxx zcela xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx vody.
Když xx xxxxxx čirý x xxxxxxxx (světlezelený, xxxxx xx použije xxxxxxxxxxx na bázi xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Destilace x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxx za xxxxxxx stejného xxxxxxx, xxx xxx vzorku, xxxxx xx být xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx během xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx zkušebním xxxxxxx. 1 xx kyseliny xxxxxx 0,1 N xxxxxxxx 1,4 mg xxxxxx.
Xxxxxxxxx množství xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx jako procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx nesmí překročit:
- 0,4 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx nižší xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % x nižší xxx 40 %,
- 0,8 absolutní xxxxxxx xxx obsah vyšší xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Hodnoty získané xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx souvislost xx xxxxxxxxxxxxxx in xxxx.
7.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 10 % xxxx xxx xxxxxxxxx extrakcí xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxxxxx pepsinu xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx proteinů xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx filtrátu xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x činidlo Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx tohoto xxxxxxx se xxxx xxx 750 xx x odpovídající xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx x kalibrační xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx pepsinu xx xxxxxxxxxx xxxx množství xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx takové xxxxxxxx hydroxyarylových xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx odpovídající xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx μmolu xxxxxxxx zbarveného xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,025 N.
3.4 5 % xxxxxx (m/V) xxxxxxxx trichloroctové.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxx 100 x xxxxxxxxxx sodného (Xx2XX4 · 2H2O), 25 x xxxxxxxxxxx sodného (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 xx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx a normalizovaným xxxxxxxx. Přidat 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) x 100 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19), xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx varu x xxxxxxxx roztok x xxxxxx varu xx xxxx 10 xxxxx. Xxxxxx vychladnout, xxxxxxx zpětný xxxxxxx, xxxxxx 175 g xxxxxx xxxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 50 xx xxxx x 1 xx brómu. Xxxxx xx xxxx 15 xxxxx, xxx xx odstranil xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Přelít xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 l, xxxxxxx xx xxxxx vodou, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx použitím xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 objemy xxxx.
3.7 Roztok xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx substrátu podle Xxxxxxxx xxxxxx odpovídajícího 354 mg dusíku [1] x xxx xx xxxxx x xxxxxx 200 ml x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx několik xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx xxxxx s xxxxxxxx pumpou a xxxxxxxxxxx, dokud xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx vakuum x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx na 100 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím.
3.8 Standardní xxxxxx xxxxxxxx: rozpustit 181,2 xx xxxxxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.1) a doplnit xx jednoho xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (zásobní xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx xxxxxx roztoku xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx nastavená xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °X + 0,1 °C.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Stopky, xxxxxxxx: 1 xxxxxxx.
4.4 xX xxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx xx 100 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx x xxx ho do xxxxxxx baňky o xxxxxx 50 ml x xxxxxxx po xxxxx kyselinou chlorovodíkovou (3.3). pH xxxxxxxxxxxx xX xxxxxx xxxx xxx 1,6+0,1. Ponořit xxxxx do xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, zahřát xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 1,0 ml xxxxxxx pepsinu xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx tam x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zesílenou xx xxxxxx konci. Nechat xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx 25 °X xxxxxx xx xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (doba x xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx dodrženy). Xxxx xxxxxx 10,0 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx a filtrovat xxxx xxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxx zbarvení x xxxxxx optické xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxx, xxx ho xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.5) a xx xxxxxxx protřepávání 3,0 xx xxxxxxxxx činidla Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 xx 10 xxxxxxxx xxxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxx spektrofotometrem xxx 750 xx x kyvetách x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxx x xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx stanovení xxxxxxx xxxxx xxxxx pokus:
Odpipetovat 5,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxx na 25 °X, homogenizovat x poté přidat 1,0 ml roztoku xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 10 xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx x postupu xxxxxxxx v xxxx 5.3.
5.5 Kalibrační xxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, a 5,0 xx alikvotního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tyrosinu, xxxxx odpovídá 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx tyrosinu. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.1) xx 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (3.5) a xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Folin-Ciocalteu (3.6). Xxxxxx optickou xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx 5.3. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx x kalibrační xxxxxx množství xxxxxxxx x μmolech, které xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxxx opraveno xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxx x μxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx x za jednu xxxxxx xxx 25 °X se xxxxxxxx xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx xx xx (x/xx) = 0,32 x / x
xxx:
x = množství xxxxxxxx x μxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx x mg xxxxxxx podle xxxx 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx, musí xxx xxxxxx, aby xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx měření získána xxxxxxx hustota 0,35 + 0,035.
7.2 Dvě xxxxxxxx na xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx xxxxxxxx/xx min. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 komerčních xxxxxxxx/x (μxxxx xxxxxxxx/x xx 10 xxx. xxx 35,5 °X).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX A XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx příbuzné látky x bavlníkových xxxxxxxx, xxxxxxxxxx mouce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx látky xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx je 20 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, x xx xxx směsí xxxxxxxxxxxx a hexanu xxx xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx, nebo xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx anilinu xxxxxxxx xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx při 440 xx.
3. Xxxxxxx
3.1 Směs xxxxxxxxxxxx x hexanu: xxxxxxx 60 objemových xxxxx xxxxxxxxxxxx x.x. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx n-hexanu.
3.2 Rozpouštědlo X: do odměrné xxxxx x objemu 1 x nalít xxx 500 ml xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx xxxxxx kyseliny xxxxxx x 50 xx vody. Doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a hexanu (3.1). Trvanlivost xxxxxx xxxxxxx je jeden xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx B: xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx a 10 xx ledové xxxxxxxx xxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx teplotu x xxxxxxx xx xxxxx N,N-dimethylformamidem. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.4 Xxxxxx x.x.: xxxxx optická xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x vyloučením xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx měsíců x xxxxxxxxxxx xxxxx x hnědého skla.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx gossypolu X: xx xxxxxxx xxxxx x objemu 250 ml dát 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2). Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 xx 50 xx tohoto xxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxxxxx A. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,02 xx/xx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx dobu jedné xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: do xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 ml xxx 27,9 mg xxxxxx gossypolu. Xxxxxxxxx x doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx B (3.3). Koncentrace xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,5 xx/xx.
Xxxxx xxxx standardní xxxxxxx xxxxxxxxx X x X chráněny xxxx xxxxxxx, jejich xxxxxxxxxxx xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx zkušebního xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Je výhodné xxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx velkou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx semenech, xxxxxxxxxx mouce x xxxxxxxxxxxx pokrutinách by xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 x; xxx xxxxx xxxxx xx může být 5 x. Ve xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx část 10 ml xxxxxxxx; xxxx xx xxxxxxxxx 50 až 100 μx xxxxxxxxx. Pro xxxxxxxxx celkového gossypolu xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx mělo xxx xxxx 0,5 a 5 x, xxx xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 40 xx 200 μx gossypolu.
Analýza xx xx xxxx provádět xxx pokojové teplotě xxxxx 20 °C.
5.2 Xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 250 ml, xxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), zazátkovat xxxxx x jednu xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxx přes xxxxx filtr x xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx baňce xx xxxxxxxxxx hrdlem. Během xxxxxxxx zakrýt xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx xx dvou xxxxxxxxx baněk (X x X) o xxxxxx 25 ml xxxxxx alikvotní xxxxx xxxxxxxx obsahujícího 50 xx 100 μg xxxxxxxxx. Případně xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) xx 10 xx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx měření xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx přidat 10 ml xxxxxxxxxxxx X (3.2) xx xxxx xxxxxx odměrných xxxxx (C a X) x objemu 25 xx. Xxxxxxx xx rysku xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxx referenční xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (X) a (X). Zahřívat 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 440 xx a xx xxxxxxxxxx kyvetách o xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx hustotu xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx roztoku pro xxxxx pokus xx xxxxxxx xxxxxxx roztoku xxxxxx (= upravená xxxxxxx hustota). X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx volného xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodě 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx vzorek xxxxxxxxxx 1 až 5 xx gossypolu xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx x xxxxxx 10 xx rozpouštědla X (3.3). Současně připravit xxxxx pokus a xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx xxxx xxxxxxx xxxxx x objemu 50 xx. Xxxxxxxx xxx xxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx x doplnit xx xxxxx obě xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Homogenizovat x xxxxxx xxxx 10 xx 15 xxxxx, xxxx xxxxxxxxx x zachytit filtráty x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx pipety xxxxxx 2 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx odměrných xxxxx x objemu 25 ml a 2 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 25 ml. Doplnit xx 25 xx xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxx série xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Tyto xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4) xx xxxx xxxxxx baněk. Zahřívat 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát xxxxx hodinu.
Stanovit optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.2. X této xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxx 6.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx buď xx xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx (6.1), xxxx xx xxxxxxx kalibrační xxxxxx (6.2).
6.1 Na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xx stanovených xxxxxxxx xx specifická xxxxxxx xxxxxxx xxxx:
xxxxx xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: E 1% / 1cm = 600
Xxxxx volného xxxx xxxxxxx obsah gossypolu xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1&xxxx;250 / X1%1xx ·&xxxx; · x · x
xxx:
X = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2
p = zkušební xxxxxx x g
a = xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx dvě xxxxx xx pěti xxxxxxxxx baňkách o xxxxxx 25 xx. X každé xxxxx xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.5). Doplnit xxxxxx rozpouštědlem A (3.2) na 10 xx.
Xxxxxxx baňky xxxxx xxxxx, včetně slepého xxxxxx, xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx xxxxx baňky xxxxx série 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx 30 minut xxx xxxxxx vodní xxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), homogenizovat x xxxxxx stát xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x bodě 5.2 xxxxxxxx optickou xxxxxxx standardní série xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (v μx).
6.2.2 Xxxxxxx gossypol
Připravit 6 xxxxxxxxx xxxxx x objemu 50 xx. Xx xxxxx xxxxx přidat pipetou 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) a xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx roztoku gossypolu X (3.6). Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx x promíchat.
Přidat pipetou 2 xx těchto xxxxxxx xx xxxx xxxxx o 6 xxxxxxxxx baňkách x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xx 25 xx směsí x isopropanolu x xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx do xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx rysku směsí xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx (standardní xxxxx).
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx standardní xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hustoty xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μg).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 ppm xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx od 500 xx 750 ppm,
- 10 % relativní xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Stanovit xxxxx xxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx: 17,7 % xxxxxx).
XXXXXXX XX
1. XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, x koncentrátech x premixech.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx je xxxxxxxx sestupné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx roztoky. Xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxx x identifikována xxxxxxxxxx xxxxxx hodnot Rf x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, a xx xxx fluorescencí x XX světle (vysoký xxxxx antibiotik), xxxx xxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx naočkovaném X. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x.x. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Na2HPO4.2H2O x.x. |
7,45 x |
|
Xxxxxx x.x. |
300 ml |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 ml |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx I: směs xxxxxxx nitromethanu/čistého xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx II směs xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx methanolu/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Chlortetracyklin, xxxxxxxxxxxxxx, tetracyklin, jejichž xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x chlorovodíku.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx ATCC x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, příprava xxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média: xxxxx xx pokyny xxxxx xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx x tetracyklinu xxxxxx xx agaru, xxx xx xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx použitím xxxxxxx xX na 5,8.
3.11 0,1 % (m/V) xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x 5 % (x/X) xxxxxx glukosy.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Zařízení xxx xxxxxxxxxx papírovou xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxx 25 xx). Schleich a Xxxxxxx xxxxx (2440X xxxx 2043X) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 30 °X.
4.4 UV xxxxx xxx stanovení fluorescence.
4.5 Xxxxxxxx desky xxx 20 x 30 xx xxx bioautografii.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
5.1 Zásobní xxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) x xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, jejichž xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL a xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx roztoky xxx stanovení bioautografií
Zředit xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) s xxxxx získat xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 5 μg chlortetracyklinu-HCL, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx nižší xxx 10 xxx, xx možné xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxx nejjemnější xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x této xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vzorek ve xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Sebrat supernatant x xxxxxx xx xxxxx xxxx xx xxxxxxxx zředit směsí (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 100 μx xx 1 ml (6.1) x 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x identifikace
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx do pufračního xxxxxxx, xX 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vtlačením xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Poté xxxxxxx na papír 0,01 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 a 5.3) x xxxxxxxx (6.1 a 6.2). Xxx dobré oddělení xxxx mít xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxx xxxxxx vyschnout.
Rozvinout xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Použít xxxxxx X (3.3) xxx stanovení xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx II (3.4) pro xxxxxxxxx XX xxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 15 xx 20 cm (xxx 1 hodina 30 xxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx papír.
7.2 Xxxxxxxxx XX světlem
Když xx xxxxx antibiotika xxxxx xxx 1 μx/xx2, xx xxxxx xx xxxxxxxx chromatogramu xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx pod XX lampou žluté xxxxxxxxxxxxx skvrny (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), xxxxx xx xxxxxx naočkuje X. cereus (3.9), xx xxxxxxxx desky (4.5) x xxxxxxx xxxxx xx kultivační xxxxxx. Po xxxx xxxxxxxx kontaktu odejmout xxxxx x xxxxxxx xx xx jinou xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx, xxx zůstane xxxxx xxxxxxxxx doby. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx projeví xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx.
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxx odpaří xxxxxx (3.11) na xxxxxx.
7.4 Identifikace
Relativní xxxxxxx Xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx uvedeny xxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx mírně xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (TC) |
0,40 |
|
Oxytetracyklin (OTC) |
0,20 |
|
4-epi-CTC |
0,15 |
|
4-epi-TC |
0,13 |
|
4-epi-OTC |
0,10 |
Antibiotická xxxxxxxx "xxx" sloučenin xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X TETRACYKLINU
A. XXXXXX XX XXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), oxytetracyklin (OTC) x xxxxxxxxxxx (TC) x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Xxxxxx nižší xxx 5 xxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx interpolací.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx xxx 50 xxx se xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx formamidem. X obsahů xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx acetonu, vody x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx stanovení XXX x XX.
Xxxxxxxx xx xxxx zředí x xxxxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx CTC, XXX xxxx TC xx xxxxxxxx xxxxx naočkovaném X. cereus. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus XXXX x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. xxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxx. Inkubovat xxxx xxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x přeočkovat xxxxxxx 14 dní xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx suspenze xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx zkumavky xx šikmým xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx solného xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx suspenzi xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx borité, xxxxx xxxxxxxxxxx agaru xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 xx 30 °C, poté xxxx xxxxx 15 xx ethanolu (4.6) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x homogenizovat. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxx skladovat xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, které xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, ale xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,2 x 0,3 xx xx 1000 xx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx při 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx stanovení [2]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 g |
|
Kvasnicový xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 xx |
|
Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx kyseliny xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx methylenové modře |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx upravit xX na 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, pH 8,0
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) ethanol.
4.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: připravit xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xX 4,5 xx xxxxxxx xxxxxxxx sírové asi 2 X.
4.9 Xxxx xxxxxxx acetonu/vody/kyseliny chlorovodíkové (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx látky: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Chlortetracyklin
Na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx týden.
Na xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx. Xxxxxxx xx provede xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Oxytetracyklin
Postupem xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxx roztoku, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 ml, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,6 μg xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx podle xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 1,0 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxx 50 xxx
Xx zkušebního xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (4.8) v množstvích xxxxxxxxx x tabulce. Xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxx ihned xxxxxx fosfátovým xxxxxx (4.3) xxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx roztoku xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx čirý roztok. Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx obsah x xxx |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Xxxxxxxx xxxxxx x g |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
ml xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
xxx. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
řeď. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx U8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx vyšší xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X závislosti na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx nebo xx jeho xxxxxxx xxxxxx přidat xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 xx 10 g 20xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx extrakce xxxx xxxxxx pH nižší xxx 3; pokud xx to xxxxx, xxxxxxx pH xx 3 (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 10 % kyseliny xxxxxx). Odebrat alikvotní xxxx extraktu x xxxxxxx xX xx 5,5 za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8,0 (4.4), za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxx xx ze xxxxx xx xxxxxx). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8 (xxx 6.1).
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1), za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.2.1 xxx, že xx xxxx (4.9) nahradí xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální médium xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x miskách xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, U4,U2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx čtyři xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu.
Za tímto xxxxxx xxxxxx xxxxx x takové xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x tloušťce asi 2 mm. Upřednostňuje xx xxxxxxx misek xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm a xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx xxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 ml, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx misky xxxxx 18 xxxxx xxx při 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx inhibičních xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx zón. Xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu. Xxxxx nedošlo x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus relativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 -X2 -X4 -S8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + S8 - X1 -X2 -X1 -X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná aktivita x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (XX) xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 1 g/kg, xxxxx nezasahuje žádná xxxxx, která by xxxxxx xxxxxxxxx matným xxxxxxxxx. Tato xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xx agaru.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX se xxxxxx xxxxxxxx směsí acetonu, xxxx a kyseliny xxxxxxxxxxxxxx x pro xxxxxxxxx obsahu OTC x XX směsí xxxxxxxxx a kyseliny xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx se poté xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx světelné xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx bylo xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx aureus a xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx K 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Staphylococcus xxxxxx do zkumavky x xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), do xxxxxxx se přidá 1,5 až 3 % xxxxx (xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxxx přes xxx při 37 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx na xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Příprava xxxxxxxx xxxxx
24 xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx šikmý xxxx subkulturou x xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxx 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxx přenést xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx podmínek xx asi 100 xx xxxxxxxx bazálního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xx vodní xxxxx xxx 37 °X xxxxx růst kmene xxxxxxxxx logaritmické xxxx (1x30 xx 2x).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [7]
|
Pepton |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 g |
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 p.a. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
xX po xxxxxxxxxxx: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.4 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 65/33/2 objemově.
4.5 Xxxx xxxxxxx methanolu/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (m/V) roztoku xxxxxxxxxxxx.
4.7 Standardní látky: XXX, XXX, XX, xxxxxxx aktivita je xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx zásobní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 až 500 μx XXX-XXX, XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 ml. Xxxxx xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Chlortetracyklin
Do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 nebo 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx asi 100 xx xxxxx (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x tetracyklin
Do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xxxx 250 xx dát 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.5) a xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx.
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx standardních sérií x xxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) a xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx xxxxx koncentrací. Xxx xxxxx stanovení xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, ne xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx od laboratoře. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) s xxxxx získat standardní xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx XXX-XXX xx 1 ml. Poté xxxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx a ve xxxxxxxxxx určených xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Koncentrace XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.1) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,12 μx XXX-XXX. Xxx 1 xx tohoto xxxxxxx xx dvou xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) xx dvou xxxxxx zkumavek. Xxxxxxx xxxxx xxxx jiných xxxxxxxx xx 1 xx fosfátovým xxxxxx (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,6 μx XXX-XXX xxxx TC-HCL na 1 xx. Poté xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2), xxx je xxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku |
ml xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx extrakt (6.2) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx XXX-XXX nebo XX-XXX na 1 xx. Xxx 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx dvou zkumavek x 0,5 ml (= 0,24 μx) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Doplnit objem xxxx jiných xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.2 Xxxxxxxx kultivačního média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx získat na xxxxxxxxx při 590 xx 85 % xxxxxxxxx propustnost v 5 cm xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx propustnost xx 2 xx xxxxxx xxx nastavení xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Očkování
Dát xx xxxxx zkumavky (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 xx naočkovaného xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx provedeno v xxxxxx, xxx xxxxxxxx xx sterilním prostředí.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx musí xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx udržuje xx 37 °X + 0,1 °C. Xxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx (xxxxxx 2x30 xx 3h). Poté xxxxxxxx další růstu xxxxxxx vstříknutím 1 xx roztoku xxxxxxxxxxxx (4.6) xx xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx xxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, xxxxxxx xxxxxxxx xx nastaví na 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx). X důvodu xxxxxx rozdílů v xxxxxxxx různých xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx použít xxxxxxx 2 xx x xxxxxx 5 xx xxxxxx.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx propustností xxxxx xxxxxxxxxxxx antibiotika. Xxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení provedených x jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx agaru -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx, x xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx tetracyklinů. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zředí x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx oleandomycinu xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx B. cereus. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx inhibičních xxx xx přítomnosti mikroorganismu. Xxxxxx těchto xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: B. xxxxxx, X 250 XX [8] (xxxxxxxxxxx vůči xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx odebraným x kultivačního média (4.1) a xxxxxx 100 μx oxytetracyklinu xx 5 xx. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx xxx 30 °X. Skladovat kulturu x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Příprava xxxxxxxx xxxx
Xxxx bakterie xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx xxx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 až 5 xxx při 28 xx 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Tato suspenze xx xxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx deskách se xxxxxxxx médiem pro xxxxxxxxx (4.2) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx získat xxx různé použité xxxxxxxxxxx oleandomycinu největší xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx zóny. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,1 a 0,2 xx na 1000 ml. Očkování xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx xxx 60 °X.
4. Kultivační xxxxx x činidla
4.1 Médium xxx udržování rodičovského xxxxx [9]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 g |
|
Agar, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
|
Xxxx použitím xxxxxxx xX na 6,5. |
4.2 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [10]
Médium (4.1) xxxxxxxx na xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx methanol
4.6 0,5 % (x/X) xxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) aminometanu x.x.
4.7 Xxxxxxxxx roztok
|
Čistý xxxxxxxx |
50 ml |
|
Destilovaná xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 g |
4.8 Standardní xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) s cílem xxxxxx koncentraci oleandomycinu 100 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Poté připravit xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx na předpokládaném xxxxxx oleandomycinu xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 až 10 x 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,1 μg xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X suspenzí xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx agaru xx xxxxxxx v xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, U1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx účelem xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx udělat x xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 děr x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx má použít xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx sestávajících xx x plochých skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kroužkem o xxxxxxx 200 mm x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx do děr xxxxxx odměřená množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx nejméně xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx během 18 xxxxx xxx při 28 až 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, přednostně xxxxxxxx. Zaznamenat měření xx semilogaritmický xxxxx xxxxxxxxx logaritmu koncentrací xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 - X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + U8 + S4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených u xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxx x xxxxxxxx, koncentrátech x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztokem x xX 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx naočkovaném Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx projeví vytvořením xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea XXXX x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Sarcina xxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx asi 35 °X. Skladovat xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx každý xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx fyziologického xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), upravit na xX 7,0. Inkubovat 24 xxxxx xxx 35 °X, poté xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x zředit xxxx xxxxxxxx s xxxxx získat 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 nm.
Pokud xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) určit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx získat xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zóny. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Kvasnicový extrakt |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xx xxxxxx udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx a přípravy xxxxxxxxxxx xxxxxxxx upravit xX xx7,0 x xx účelem xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný K2HPO4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx voda xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda ad |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Xxxx fosfátového xxxxx (4.2)/xxxxx methanol: 60/40 objemově.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) 3 hodiny xxx 60 °X xx xxxxxxx xxxxxxx (5 xx xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 mg xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x 5 ml xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 7 (4.3) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx základního xxxxxxxx 1000 μg/ml.
Na xxxxxxx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx připravit xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxx na 1 xx.
Xxxx připravit xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx směsi (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx; xxx xxxxxxx x xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Přidat 60 xx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxxxxxxxxxxx 2 xxxxxx (kuchyňský xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 minut, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxxxxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxx extrakt a xxxxxx xxxxxxxxx část xxxxx (4.7) x xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx tylosinu 2 μx/xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.7).
Xxx obsahy xxxxx xxx 10 xxx xxxxxxx extrakt do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx při 35 °X x rozpustit xxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xx xX 8 při 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x miskách xx použití čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, S2, X1) a xxxx xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx získání stejnoměrné xxxxxx o xxxxxxxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo plastovým xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx a x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx do xxx xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 a 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx každé xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx noci xxx 35 až 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx inhibičních zón, xxxxxxxxxx projekcí. Zaznamenat xxxxxx na xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zanesením xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout xxxxxx standardního roztoku x xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx rovnice:
(U1 + X2 + U4 + X8 - X1 - X2 - S4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx virginiamycin x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Tween 80". Po xxxxxxxxxx xxxx filtraci xx xxxxxxx xxxxx a xxxx antibiotická xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxx médiu naočkovaném Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx vytvořením xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Průměr xxxxxx zón xx xxxxx úměrný logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx přes xxx při xxx 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x přeočkovat xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2. Příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem (3.1) xx použití 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx při 35 °X, poté xxxx xxxxxxxx za xxxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Homogenizovat x zředit xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxx 75 % xxxxxxxxx propustnost xxx 650 xx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx množství očkovací xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, ale xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxxxxxx kultivačního xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx pH na 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 p.a. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Tween 80" (x/X).
4.7 Standardní látka: xxxxxxxxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Standardní roztoky
Připravit xxxxxxxxxxx xxxxxx standardní xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml. Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx směsí (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1+) xx xxxxxxx xxxxx (4.5) tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxx x xxxxxx virginiamycinu xxxxxx xxxx nižším xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Odstředit xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx 20 xx čirého roztoku x xxxxxxx xx xxxxx x rotačním xxxxxxxxxx. Rozpustit xxxxxxxx xx 20 xx xxxx více xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 1 μx virginiamycinu xx 1 xx (= X8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.5)
6.2 Xxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx, přidat 100 ml roztoku (4.6) x protřepávat 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxx směsí (4.5) x cílem xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Poté xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1, xxx je uvedeno x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro stanovení (4.1) xxx 48 xx 50 °C xxxxxxxx bakterií (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx na xxxxx xx xxxxxxx x miskách xx xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4, X2, X1).Xxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx misky x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo možné xxxxxx x agarovém xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Vypočítat množství xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), které se xx xxxxxx xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 ml, x závislosti na xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx opakovat difúzi xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx při 35 xx 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx budou paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 -S1 - X2 - S4 - X8) · 0,602 / U4 + U8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Může být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Může xxx použito jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[3] Xxxx amido xxxxxx x označení xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxx).
[6] Tento xxxx xxxxxxxxx v Xxxxx podle LUFA xxxxxxxx rychlejší růst xxx X. xxxxxx XXXX 6538 X.
[7] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Kmen xxxxxxxxx x Kielu podle XXXX.
[9] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[10] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[11] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx složení x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.