Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx úřední kontrolu xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx x analytických xxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv [1], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx uvedená xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx je xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x složení xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx odběru vzorků x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx směrnice Komise x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971 [2] a 71/393/XXX xx dne 18. xxxxxxxxx 1971 [3] již stanovily xxxx xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx na xxxx xxxxxxx provedených xxxxx xx však xxxxx xxxxxxxx třetí sérii xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, že xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, pokud jde x xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, hrubých xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, jakož x x xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx metod xxxxxxxxx x xxxxxxx X xxxx směrnice.
Obecná xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (úvod) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Komise x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, kterou se xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx pro úřední xxxxxxxx xxxxx, se xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxxx, že analýzy xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx tetracyklinových xxxxxxxxxx, xxxxx i o xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, se xxxxxxxxx xxxxx metod popsaných x xxxxxxx II xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení xxxxxxx v xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. června 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx popsané x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxxxxx státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. července 1973. Xxxxxxxxxx x xxxx informují Xxxxxx.
Článek 4
Xxxx xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 27. xxxxx 1972.
Za Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Mansholt
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX I
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxx xxxxxx x produktů xxxxxxxx o vysoké xxxxxxxxxxx hmotnosti xxxxxx x xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxx obsahují xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx listy, bramborovou xxxxx, sušené kvasnice, xxxxxxxx bohaté xx xxxxxx (např. xxxxx x xxxxxx z xxxxxxxxxx) xxxx škvarky.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx prvním xxxxxxxxx xx vzorek xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxx optická xxxxxx xxxxxxx.
Xxx druhém xxxxxxxxx xx xxxxxx extrahuje 40 % xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou, xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx optická xxxxxx xx stejných podmínek xxxx při xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx obsah xxxxxx ve vzorku.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx chlorovodíková, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx musí být xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X x za xxxxxxxxxxx 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (V/V) xxxxxxxx. 10 xx = 30,94 ml 0,1 X XxXX.
3.3 Carrezův xxxxxx X: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x xxxxxx zinečnatého Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx 100 ml.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx XX: xxxxxxxxx xx xxxx 10,6 g hexakyanoželeznatanu xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Doplnit xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, x: 0,948 xxx 20 °X.
4. Přístroje
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x objemu 250 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Polarimetr xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělnit xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx oky x xxxxxxx 0,5 xx.
5.2 Stanovení celkové xxxxxxx rotace (X xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Navážit 2,5 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x objemu 100 xx. Xxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), protřepat, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx dobře rozmístil x přidat dalších 25 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxx x xx dobu xxxxxxx xxx minut xxxxx x pravidelně xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx ve xxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxxxx, xxx i xx vložení xxxxx xxxxxxx xxxxx na xxxx xxxx. Baňka xxxxx xxx vyjmuta x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx po 15 xxxxxxxx vyjmout xxxxx x lázně, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx na 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx roztoku X (3.3) a xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx XX (3.4) x xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx vodou, homogenizovat x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (což xx xxxxxx), opakovat xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Carrezova xxxxxxx X x XX, xxxxxxxxx 10 ml.
Poté xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x 200 xx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X’ xxxx S’) látek xxxxxxxxxxx xx 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx, xxx ho xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx x xxxxxx xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx doby xxxxxxxx xxxxx protřepat, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Doplnit xx rysku xxxxxxxxx (3.5), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x vzorku) do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx vyjmou Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vodou x poté xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx xx použití Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) a XX (3.4), xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx rotaci, jak xx uvedeno x xxxx 5.2 druhém x xxxxxx odstavci.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx (%) se xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Měření xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - P’) / [α]D20°
kde je:
P = xxxxxxx optická xxxxxx, v xxxxxxxx xxxxxxxx.
X’ = optická xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, v xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx xxxxx
+ 195,4°: bramborový xxxxx
+ 184,6°: xxxxxxxxx škrob
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: xxxxx xxxxx
+ 181,3°: xxxxxx škrob
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Xxxxxx sacharimetrem
Procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]X20° · (2 N · 0,665) (X - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx xxxxxx látek xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx ve 100 xx xxxx, xxxxx xx xxx tloušťce 200 xx xxxxxxxx xxxxxx 100 stupňů xxxxxxxxxxxx. Tato hmotnost xx mění podle xxxxxxxxxxxx:
16,29 g xxx xxxxxxxxxxx sacharimetry
26,00 x xxx německé xxxxxxxxxxxx
20,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx čistého xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 0,4 absolutní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxx 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx vzorek xxxxxxxx xxxx než 6 % uhličitanů, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx stanovením xxxxxxx xxxxxx zničeny xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx zředěné xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 X xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xx sušené xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx přidání 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx baňku zpětný xxxxxxx, xxxxxxx xx xx 30 minut xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 50 °X. Xxxxxx vychladnout x pokračovat v xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.3.
2. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx proteinů v xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx dusíku xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx mineralizuje xx xxxxx. Kyselý xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx. Xxxxxxxx amoniak xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx sírové, xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx xxxxxxx CuO x.x. nebo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx XxXX4 · 5X2X x.x., xxxx rtuť nebo xxxx xxxxxxxx XxX x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx xxxxx x.x.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx sírová 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: rozpustit 300 xx methylčerveně ve 100 xx 95-96 % (V/V) xxxxxxxx.
3.8 40 % (m/V) xxxxxx hydroxidu sodného.
3.9 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X.
3.10 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx roztok xxxxxx sodného x.x.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxxx sodného, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x destilační xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx poznámky 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Mineralizace
Navážit 1 g xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 mg x xxx ho xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx aparatury. Xxxxxx 10 x xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 xx 0,4 x oxidu xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 x xxxxxx měďnatého nebo xxxxx rtuti xxxx 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 ml xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.13), promíchat xxxxx baňky. Zahřívat xxxxx, nejprve xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx hmota xxxxxxxxxxx x pěna xxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx dokud xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Zabránit xxxxxxxx stěn xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx je xxxxxx xxxx a xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxx katalyzátor xx xxxx xxxx), xxxxxxxx var xxxxx xxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, xxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx; xxxxxx xxxxxxxxxxx; xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.3).
Přidat xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxxx sírové 0,1 X (3.5) nebo 0,5 X (3.6) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx dusíku (xxx poznámky 7.2) x přidat xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx methylčerveně (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx aparatury x xxxxxxx konec xxxxxxxx do kapaliny xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 1 xx (viz xxxxxxxx 7.3). Přes xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx do xxxxx 100 ml 40 % xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.8). Xxxxx byl použit xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxxx buď 10 ml xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx baňku takovým xxxxxxxx, xxx se xx 30 minut xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx lakmusový xxxxxxx xxxxx, že xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxx xx xxxx promíchat xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx ke xxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx přidat xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Titrace
Ve xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,1 N (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) x závislosti xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx sírové, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx metody
Za účelem xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, se xxxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxx a xxxxxxx), x xx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxx kontroly správnosti xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx x.x. (x.x. 114 °X; % X: 10,36) za xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx bez xxxxxx; 1 x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Výpočet výsledků
Stanovit xxxxxxxx spotřebované xxxxxxxx xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx. Vynásobit xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx procento vzorku.
Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení provedených x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxxxx proteinů xxxxx než 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx vyšší než 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 absolutní xxxxxxx pro xxxxx xxxxx než 40 %.
7. Poznámky
7.1 Xx xxxxx použít některé xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx provést xxxx ztrát.
7.2 X xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx kyseliny xxxxxx 0,1 X, xxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx, snížen xx 10 až 15 ml x xxxxxxx vodou xx 25 ml.
7.3 Xxxxx xxxx xxxxx destilační xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, přidat hydroxid xxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x xxxxxx xxxxx kapalinu po xxxxxxx baňky tak, xxx xx nesmíchala x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX HRUBÝCH XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx za stanovených xxxxxxxx. Xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxx 48 hodin xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxx xx filtruje x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxx stanovení xxxxxx hrubých xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 N.
3.3 2,0 x/xx xxxxxxx; xxxxxxxx pepsinu je xxxxxxxxxx x metodě xxxxxxx x xxxxx 4 xxxx xxxxxxx x musí být xxxxxxxxxxxx v souladu x xxxxx metodou.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx připravený xxxxxx pepsinu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxx 3 xxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx roztoku (xxx xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx odměrné xxxxx o objemu 500 ml. Xxxxxx 450 ml xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °X. Xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxx, xx xx xX xxxxxxxx xxxxx xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx (4.1) x xxxxxx xx tam 48 xxxxx. Protřepat xx 8, 24 a 32 xxxxxxxx. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxx 15 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxx xx 20 °X, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx a xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx ho xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Přidat xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx hrubých xxxxxxxx, ve xxxxx xxxx bodu 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxx. Pokud xx vytvoří xxxx, xxxxxx několik xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx v xxxxxx xxxx, dokud se xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx vody.
Když xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx použije xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx var xxxxx další hodinu. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxxx pro stanovení xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Xxxxx pokus
Provést xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxxx, xxxxx xx být xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Odečíst xxxxx kyseliny xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx slepého xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorkem. 1 xx kyseliny xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 mg xxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Výsledek xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit:
- 0,4 absolutní xxxxxxx xxx xxxxx nižší xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % a xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx vyšší xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Hodnoty xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx in xxxx.
7.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 10 % xxxx xxx odtučněny extrakcí xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje stanovit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx hrubých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x kyselinou chlorovodíkovou.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx se ošetří xx xxxxxxxxxxx podmínek xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx trichloroctovou. Xx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x činidlo Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se xxxx xxx 750 xx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako množství xxxxxx, které xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx hydroxyarylových xxxxxx, xxxxxxx zbarvení xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx xx optickou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx jednoho μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx stejným xxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,025 X.
3.4 5 % xxxxxx (x/X) xxxxxxxx trichloroctové.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxx 100 x xxxxxxxxxx sodného (Na2WO4 · 2H2O), 25 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 xx xxxx xx dvoulitrové xxxxx s xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Přidat 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) x 100 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19), xxxxxxxx xxxxx xx zpětný xxxxxxx, xxxxx xx varu x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx varu xx dobu 10 xxxxx. Xxxxxx vychladnout, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxx 175 x xxxxxx lithného (Li2SO4 · 2H2O), 50 xx vody x 1 xx xxxxx. Xxxxx xx dobu 15 minut, aby xx xxxxxxxxx přebytek xxxxx.
Xxxxxx vychladnout. Přelít xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1 x, doplnit xx rysku vodou, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 objemy xxxx.
3.7 Xxxxxx hemoglobinu: Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx 2 g xxxxxxxxxxxx substrátu xxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 354 xx xxxxxx [1] x xxx xx xxxxx o xxxxxx 200 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Xxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxx zcela xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxxxxxx doplnit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx xx 100 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx 181,2 xx xxxxxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx tohoto xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °X + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, xxxxxxxx: 1 sekunda.
4.4 xX xxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Odpipetovat 2 xx xxxxxxx x xxx xx xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 50 xx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). pH kontrolované xX xxxxxx xxxx xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Hydrolýza
Odpipetovat 5,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 x promíchat xxx xxxxxx xxxxxx xxx x zpět skleněnou xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx konci. Nechat xxxxxxxx ve xxxxx xxxxx xxx 25 °X xxxxxx xx xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx xxxx xxx přesně xxxxxxxx). Xxxx xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat xxxx suchý filtr.
5.3 Xxxxx zbarvení x xxxxxx optické xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxx, xxx xx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx zředěného xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Po 5 xx 10 xxxxxxxx xxxxxxxx optickou xxxxxxx roztoku spektrofotometrem xxx 750 nm x xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x porovnání s xxxxx.
5.4 Slepý pokus
Pro xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx pokus:
Odpipetovat 5,0 ml roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxx na 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x xxxx přidat 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx zkumavku přesně 10 xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °C. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx v xxxx 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, x 5,0 ml xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) na 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a xx stálého xxxxxxxxxxxx 3,0 xx zředěného xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xxxxxx optickou xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x poslední větě xxxx 5.3. Načrtnout xxxxxxxxxx křivku uvedením xxxxxxxxx hustot xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x μmolech, které xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxxx opraveno xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxx x μmolech tyrosinu xx 1 xx x xx jednu xxxxxx při 25 °X se vypočítá xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx xx xx (x/xx) = 0,32 a / x
xxx:
x = množství xxxxxxxx x μxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx bodu 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Množství xxxxxxx, xxxxx xx xxx rozpuštěno, xxxx xxx takové, xxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx měření xxxxxxx xxxxxxx hustota 0,35 + 0,035.
7.2 Dvě xxxxxxxx xx xx xxxxxxx touto xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx tyrosinu/mg min. xxx 35,5 °C) xxxx
36400 xxxxxxxxxx xxxxxxxx/x (μxxxx xxxxxxxx/x xx 10 xxx. xxx 35,5 °X).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Účel a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx gossypolu, xxxxxxx gossypolu a xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxxxxxxx semenech, xxxxxxxxxx mouce x xxxxxxxxxxxx pokrutinách a xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xx 20 xxx.
2. Princip
Gossypol xx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, x xx buď směsí xxxxxxxxxxxx x hexanu xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx dimethylformamidem xxx stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx hustota xx xxxxxx xxx 440 xx.
3. Činidla
3.1 Směs xxxxxxxxxxxx x xxxxxx: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx p.a. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx n-hexanu.
3.2 Xxxxxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1 x xxxxx xxx 500 ml xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-amino-1-propanolu, 8 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 50 xx xxxx. Doplnit xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Trvanlivost tohoto xxxxxxx xx jeden xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx X: xxxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 ml 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx a 10 ml ledové xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x doplnit po xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.4 Xxxxxx x.x.: pokud optická xxxxxxx slepého xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx přes zinkový xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x posledních xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Toto xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx gossypolu X: xx xxxxxxx xxxxx x objemu 250 xx xxx 27,9 mg xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx rysku xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x objemu 250 xx 50 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,02 mg/ml. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx dobu xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Standardní xxxxxx xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 ml xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Koncentrace xxxxxxxxx x xxxxx roztoku xx 0,5 mg/ml.
Pokud xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx A x X chráněny xxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 24 hodin.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx gossypolu xx xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxx x malým xxxxxxxxx zkušebního xxxxxx x relativně xxxxxx xxxxxxxxx částí xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxxx měření. Xxx xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 x; xxx xxxxx směsi xx xxxx xxx 5 x. Ve xxxxxxx případů je xxxxxxxxxx alikvotní část 10 xx filtrátu; xxxx xx xxxxxxxxx 50 xx 100 μx gossypolu. Pro xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxx 0,5 a 5 x, aby xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 40 xx 200 μx gossypolu.
Analýza by xx měla xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 20 °C.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx baňky se xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxx 250 xx, xxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx pipety xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx x jednu xxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxx. Xxxxxxxxx přes xxxxx xxxxx x xxxxxxxx filtrát x xxxx baňce xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx zakrýt nálevku x kohoutem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx baněk (X x B) o xxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxx obsahujícího 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Případně xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) na 10 xx. Poté doplnit xx xxxxx baňku (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx xxxx referenční xxxxxx pro měření xxxxxxx pro slepý xxxxx.
Xxxxxx pipety xxxxxx 10 ml xxxxxxxxxxxx X (3.2) do xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x X) x objemu 25 ml. Xxxxxxx xx xxxxx baňku (X) xxxxx isopropanolu x hexanu (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxx pro měření xxxxxxx pro slepý xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (X) x (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx lázní, xxx xx vytvořilo zbarvení. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx, doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx xxxxx hodinu.
Stanovit xxxxxxxxxxxxxxxxx při 440 xx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxxx 1 cm xxxxxxxx hustotu xxxxxxx xxx xxxxx pokus (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x optickou xxxxxxx xxxxxxx vzorku (X) xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx roztoku pro xxxxx pokus xx xxxxxxx hustoty xxxxxxx xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx hustota). X xxxx xxxxxxx vypočítat xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodě 6.
5.3 Xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx obsahující 1 xx 5 xx xxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml x xxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx pokus x xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx B (3.3) xx jiné xxxxxxx xxxxx x objemu 50 xx. Xxxxxxxx xxx xxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx lázní. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx x doplnit xx xxxxx xxx baňky xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx 10 až 15 xxxxx, xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx hrdlem.
Pomocí xxxxxx xxxxxx 2 ml xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 xx a 2 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx do xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 ml. Xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxx baňky x každé série xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx xx použijí xxxx referenční xxxxxxx.
Xxxxxx 2 xx anilinu (3.4) xx xxxx xxxxxx xxxxx. Zahřívat 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx teplotu, doplnit xx 25 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), homogenizovat x nechat xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx volného xxxxxxxxx, xxx xx uvedeno x xxxx 5.2. X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxx 6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxx specifické xxxxxxx xxxxxxx (6.1), nebo xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Na xxxxxxx specifické xxxxxxx xxxxxxx
Xx stanovených podmínek xx xxxxxxxxxx optická xxxxxxx tato:
volný xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: X 1% / 1cm = 600
Xxxxx volného xxxx xxxxxxx obsah gossypolu xx xxxxxx xx xxxxxxxx takto:
gossypol %: X · 1&xxxx;250 / X1%1xx ·&xxxx; · p · x
xxx:
X = opravená xxxxxxx hustota, stanovená xxx xx uvedeno x xxxx 5.2
x = zkušební xxxxxx x x
x = xxxxxxxxx xxxx filtrátu x ml
6.2 Xx xxxxxxx kalibrační křivky
6.2.1 Xxxxx gossypol
Připravit xxx xxxxx xx pěti xxxxxxxxx baňkách o xxxxxx 25 ml. X xxxxx xxxxx xxxxxx pipetou 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) xx 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, včetně xxxxxxx xxxxxx, směsí isopropanolu x xxxxxx (3.1) xx 25 ml.
Přidat xx xxxxx baňky xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx 30 minut xxx vroucí vodní xxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zchladit xx pokojovou xxxxxxx, xxxxxxx po rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), homogenizovat x xxxxxx xxxx xxxxx hodinu.
Za xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 stanovit xxxxxxxx xxxxxxx standardní xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (v μx).
6.2.2 Xxxxxxx gossypol
Připravit 6 xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Xx první xxxxx xxxxxx xxxxxxx 10 ml xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.6). Doplnit xxxxx xxxxx xxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx B (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx rysku směsí xxxxxxxxxxxx x hexanu x xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx x 6 xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xxxxx baněk xxxxx xxxxx xx 25 xx xxxxx x isopropanolu a xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx do xxxxx xxxxx druhé série 2 ml xxxxxxx (3.4). Zchladit na xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx rysku směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), homogenizovat a xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx série).
Za xxxxxxxx uvedených v xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx hustotu xxxxxxxxxx xxxxx roztoků xxxxxxxxxx x odpovídajícími roztoky xxxxxxxxxx xxxxx. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxx xxxxxxx hustoty xxxxx množství xxxxxxxxx (x μx).
6.3 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx gossypolu xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx hodnoty pro xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx obsah xxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx: 17,7 % xxxxxx).
XXXXXXX II
1. XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx x premixech.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx směsí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx stanovena x xxxxxxxxxxxxxx porovnáním xxxxxx hodnot Xx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, x xx xxx fluorescencí x XX xxxxxx (vysoký xxxxx xxxxxxxxxx), xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx naočkovaném B. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Pufr, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx p.a. |
10,256 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Na2HPO4.2H2O x.x. |
7,45 x |
|
Xxxxxx p.a. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 ml |
|
3.3 Xxxxxx I: směs xxxxxxx nitromethanu/čistého xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx XX směs xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 objemově. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před použitím |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, d: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx látky: Chlortetracyklin, xxxxxxxxxxxxxx, tetracyklin, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x chlorovodíku.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxx 3.1. x 3.2. metody xxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx a tetracyklinu xxxxxx xx xxxxx, xxx je xxxxxxx x části 2 xxxx přílohy.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xxxx použitím upravit xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x 5 % (x/X) roztok glukosy.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx papírovou xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx papíru 25 xx). Xxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxx (2440X xxxx 2043X) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Odstředivka
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx stanovení xxxxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx desky xxx 20 x 30 xx xxx xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
5.1 Zásobní xxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) a xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, jejichž xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx roztoky xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x cílem získat xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.3 Referenční xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) fosfátovým xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx je předpokládaný xxxxx antibiotika nižší xxx 10 xxx, xx xxxxx použít xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx nebo xx xxxxxxxx zředit xxxxx (3.5) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 100 μg xx 1 ml (6.1) x 5 μx na 1 xx (6.2).
7. Stanovení x xxxxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xx pufračního xxxxxxx, pH 3,5 (3.1). Odstranit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxxxx na xxxxx 0,01 xx referenčních xxxxxxx (5.2 x 5.3) x xxxxxxxx (6.1 x 6.2). Xxx xxxxx oddělení xxxx mít xxxxx xxxxxxxx vlhkost; pokud xx to nutné, xxxxxx trochu xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografií. Xxxxxx xxxxxx I (3.3) xxx xxxxxxxxx bioautografií x xxxxxx XX (3.4) pro stanovení XX xxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx dosáhne xxxxx 15 xx 20 cm (xxx 1 xxxxxx 30 xxxxx), xxxxxxxx chromatografii x vysušit xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx XX světlem
Když xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 1 μx/xx2, je možné xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx amoniaku (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx XX lampou xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx bioautografií
Nalít xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), které xx předem xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx skleněné xxxxx (4.5) x položit xxxxx na kultivační xxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx odejmout xxxxx x xxxxxxx xx na jinou xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxx inkubační xxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 30 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx kultivačním xxxxx.
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx Xx tetracyklinových antibiotik xxxx xxxxxxx zde. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (XX) |
0,40 |
|
Xxxxxxxxxxxxxx (OTC) |
0,20 |
|
4-epi-CTC |
0,15 |
|
4-epi-TC |
0,13 |
|
4-epi-OTC |
0,10 |
Antibiotická xxxxxxxx "xxx" sloučenin xx xxxxx xxx xxxxxxxx normálních xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X TETRACYKLINU
A. XXXXXX XX AGARU
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (OTC) x xxxxxxxxxxx (TC) x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Xxxxxx nižší xxx 5 xxx xxxxx xxx určeny xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx rovných nebo xxxxxxx xxx 50 xxx xx vzorek xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx extrahuje xxxxx acetonu, xxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové xxx xxxxxxxxx CTC x směsí methanolu x xxxxxxxx chlorovodíkové xxx xxxxxxxxx OTC x XX.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx CTC, XXX xxxx TC na xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Difúze xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus XXXX x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx borité. Xxxxxxxxx xxxx xxx při xxx 30 °C. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx a přeočkovat xxxxxxx 14 dní xx xxxxx agar.
3.2 Xxxxxxxx suspenze xxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx fyziologického solného xxxxxxx (4.5). Naočkovat xxxx suspenzi xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx modře x xxxxxxxx borité, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Inkubovat 3 xx 5 dní xxx 28 xx 30 °X, poté xxxx spóry 15 xx xxxxxxxx (4.6) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Tato xxxxxxxx xx může x xxxxxxxxxx skladovat xxxxxxx 5 měsíců.
Předběžnými xxxxx xx deskách x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx největší xxxxx, ale ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx je xxxxxxx 0,2 a 0,3 ml xx 1000 ml. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Kvasnicový extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 xx |
|
Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (m/V) xxxxxx kyseliny xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, pH 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) ethanol.
4.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx pH 4,5 xx xxxxxxx xxxxxxxx sírové xxx 2 X.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 objemově.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx xx vyjádřena x chlorovodíku.
5. Standardní xxxxxxx
5.1 Chlortetracyklin
Na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (4.7) xxxxxxxxx zásobní roztok, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μx chlortetracyklinu-HCL xx 1 xx. Xxxxx roztok se xxxxxxxx x chladničce xxxxx týden.
Na základě xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx chlortetracyklinu-HCL na 1 xx. Xxxxxxx xx provede xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, standardní xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Tetracyklin
Postupem xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,0 μx tetracyklinu-HCL xx 1 xx x xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,5 |
μg/ml |
|
S2 |
0,25 |
μg/ml |
|
S1 |
0,125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
6.1 Obsahy rovné xxxx xxxxx xxx 50 xxx
Xx xxxxxxxxxx xxxxxx přidat xxxxxxxx (4.8) x množstvích xxxxxxxxx x tabulce. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxx ihned xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3) podle xxxxxx x tabulce x xxxxx získat koncentraci X8. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxx překročit 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx dekantovat xxxxxxx x cílem xxxxxx čirý xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxx |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Xxxxxxxx vzorek x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx fosfátového xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
řeď. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
řeď. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx X8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 ppm
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx antibiotika xx xxxxxx nebo xx xxxx xxxxxxx xxxxxx přidat do xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 až 10 x 20xx xxxxxxx jeho objemu xxxxx (4.9). Protřepávat 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xX xxxxx xxx 3; xxxxx xx xx nutné, xxxxxxx xX xx 3 (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx použití 10 % kyseliny xxxxxx). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx pH xx 5,5 xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 8,0 (4.4), za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxx xx xx xxxxx xx modrou). Xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 5,5, zředěného 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8 (xxx 6.1).
Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx a tetracyklin
Postupovat xxx je uvedeno x xxxx 6.2.1 xxx, že xx xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, U4,U2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx misky x xxxxxx velikosti, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x agarovém xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx se xx xxxxxx pro xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx asi 2 mm. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zanesením xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo k xxxxxxxxxxxx, xxx křivky xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx relativní xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx této rovnice:
(U1 + X2 + X4 + X8 - X1 -S2 -X4 -S8) · 0,602 / U4 + U8 + X4 + X8 - U1 -X2 -X1 -S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. TURBIDIMETRICKY
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (XX) xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 1 g/kg, xxxxx nezasahuje xxxxx xxxxx, která xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Tato metoda xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xx agaru.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX xx vzorek xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a pro xxxxxxxxx xxxxxx OTC x XX xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx se poté xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxx bylo xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Světelná xxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx K 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), do xxxxxxx xx přidá 1,5 až 3 % xxxxx (xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxxx přes xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx na xxxxx xxxx. Zároveň xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Příprava očkovací xxxxx
24 hodin xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx šikmý xxxx subkulturou a xxxxxxxxx přes xxx xxx 37 °C. Xxxxxxxxxxx celou xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx v xxx 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) a xxxx přenést suspenzi xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat xx xxxxx xxxxx xxx 37 °C xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (1x30 až 2h).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx stanovení [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
1,5 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 g |
|
Chlorid xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
1,32 g |
|
Hydrofosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
|
xX xx xxxxxxxxxxx: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx pufr, pH 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
13,6 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx xxxxxxx acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxx methanolu/kyseliny chlorovodíkové (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (x/X) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx aktivita xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztok
Na xxxxxxx xxxxxxxxxx látky (4.7) x za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx zásobní roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 xx 500 μx XXX-XXX, OTC-HCL xxxx XX-XXX xx 1 ml. Tento xxxxxx xx skladuje x chladničce xxxxx xxxxx.
6. Extrakce
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 200 nebo 250 ml xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxx xxx 100 xx směsi (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Homogenizovat x xxxxxx xxxx.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xx odměrné xxxxx o xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 g xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.5) a xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx po xxxxx fosfátovým xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx standardních xxxxx x xxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) fosfátovým xxxxxx, xX 4,5 (4.2), xxx, aby xxxxxxx xxxxx koncentrací. Xxx xxxxx xxxxxxxxx xx načrtne xxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx. Ředění se xxxxxxx xxxxx podmínek xxxxx xxxxx, které xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Chlortetracyklin
Zředit xxxxxxxxxx xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx CTC-HCL xx 1 xx. Poté xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx ředění xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku |
ml xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.1) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,12 μx CTC-HCL. Xxx 1 xx tohoto xxxxxxx do xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) xx xxxx xxxxxx zkumavek. Xxxxxxx xxxxx dvou xxxxxx xxxxxxxx na 1 xx fosfátovým xxxxxx (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) xx použití xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,6 μg OTC-HCL xxxx TC-HCL na 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx, 7 ředění, xxxxx ředění xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx pracovního roztoku |
ml xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Koncentrace XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx extrakt (6.2) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx OTC-HCL xxxx XX-XXX xx 1 xx. Dát 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx xxxx jiných xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx jiných zkumavek xx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx získat na xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x 5 cm kyvetě xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx ve 2 cm xxxxxx xxx nastavení xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bazálního xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx každé xxxxxxxx (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx v xxxxxx, xxx nezbytně xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxx, jejíž teplota xx mícháním xxxxxxx xx 37 °X + 0,1 °X. Xxxxxxxxx xxxx se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx (xxxxxx 2x30 xx 3h). Xxxx xxxxxxxx další xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) do každé xxxxxxxx.
7.5 Měření xxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, přičemž xxxxxxxx xx nastaví na 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx). Z důvodu xxxxxx rozdílů x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx použít xxxxxxx 2 xx x raději 5 xx kyvety.
8. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kalibrační křivku xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx propustností xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx obsah xxxxxxxxxxx xx vzorku.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
3. XXXXXXXXX OLEANDOMYCINU
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx v krmivech, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx, x xx dokonce x přítomnosti tetracyklinů. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx zředěným methanolovým xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x jeho xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx agarovém xxxxx xxxxxxxxxxx B. xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus, X 250 TR [8] (xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. xxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx agarem odebraným x kultivačního xxxxx (4.1) x xxxxxx 100 μg oxytetracyklinu xx 5 xx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx asi 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx na xxxxx xxxx.
3.2 Příprava suspenze xxxx
Xxxx bakterie xx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx (3.1) za xxxxxxx asi 3 xx fyziologického xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), jehož xxxxxxxxxxx xxxxx je 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 až 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 ml xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx byla xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx suspenze xx xxxx v xxxxxxxxxx skladovat xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx deskách xx xxxxxxxx médiem pro xxxxxxxxx (4.2) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxx použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx největší xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční zóny. Xxxx xxxxxxxx je xxxxxxx 0,1 x 0,2 xx xx 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média se xxxxxxx xxx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Médium xxx udržování rodičovského xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 až 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
Xxxx použitím xxxxxxx xX xx 6,5. |
4.2 Bazální médium xxx xxxxxxxxx [10]
Médium (4.1) xxxxxxxx na xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 20 % (X/X) ethanol.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (x/X) xxxxxx xxxx (hydroxymethyl) xxxxxxxxxxx x.x.
4.7 Xxxxxxxxx xxxxxx
|
Xxxxx xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (hydroxymethyl) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 x |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx aktivitě.
5. Standardní xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) v 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx roztokem (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx zředěním x xxxxxxxx (4.6) standardní xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx oleandomycinu xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx 2 až 10 x 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx část extraktu x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx roztoku (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.2) xxx 60 °X suspenzí xxxx (3.2).
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xx použití čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx médiu xxxxxxx 8 děr o xxxxxxx 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx získání stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kroužkem x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx odměřená xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 a 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx průměru xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x každou xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx při 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x interferenci, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 - X1 - S2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl mezi xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
4. STANOVENÍ XXXXXXXX
- xxxxxx na xxxxx -
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xX 8, xxxxxxxxxxx na 80 °X, x xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx odstředění xx xxxxxxx zředí x xxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx měřením xxxxxx tylosinu xx xxxxxxxx xxxxx naočkovaném Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx úměrný logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) upraveného xx pH 7,0. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každý xxxxx xx xxxxx agar.
3.2 Xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým agarem (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxxxxxx xx xX 7,0. Inkubovat 24 hodin xxx 35 °C, poté xxxx xxxxxxxx za xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx suspenzi x xxxxx xxxxxx 75 % světelnou xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x chladničce, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx testy xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx zřetelné xxxxxxxxx zóny. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx při 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx stanovení [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xx xxxxxx xxxxxxxxx rodičovského xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze upravit xX na7,0 a xx xxxxxx xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Fosfátový xxxx, xX 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx voda xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 p.a. |
5,5 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx látku (4.8) 3 hodiny xxx 60 °X xx vakuové xxxxxxx (5 xx xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 xx xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x 5 ml xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 7 (4.3) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx rozředěním xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx použít 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx; xxx xxxxxxx x xxxxxx 20 g xxxxxxxxxx. Přidat 60 xx xxxxxxxxxxx pufru, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, a homogenizovat 2 xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 minut, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx část xxxxx (4.7) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 a X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.7).
Xxx obsahy nižší xxx 10 xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxx při 35 °X a xxxxxxxxx xxxxxxxx ve 40 % methanolu (4.6).
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) upravené xx xX 8 při 48 až 50 °X xxxxxxxx bakterií (3.2).
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx xx agaru xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Každá xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x takové xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx udělat v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 děr x xxxxxxx 10 až 13 mm. Vypočítat xxxxxxxx očkovaného xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx má xxxxxx xxx získání stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx se z xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx xxxx plastovým xxxxxxxx o xxxxxxx 200 xx x x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx antibiotika xxxx 0,10 a 0,15 xx, v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x každou xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxx noci xxx 35 xx 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx inhibičních xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Xxxxxxxxxx xxxxxx na semilogaritmický xxxxx xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu. Pokud xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + U8 - X1 - X2 - X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. STANOVENÍ XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x krmivech, koncentrátech x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztokem "Tween 80". Xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx antibiotická aktivita xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx virginiamycinu na xxxxxxxx médiu naočkovaném Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx xxxxx ATCC x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxx xxxxx do zkumavky xx xxxxxx agarem x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx asi 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx na xxxxx agar.
3.2. Příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx zkumavky se xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx kultivačního xxxxx (4.1). Inkubovat 24 xxxxx při 35 °X, xxxx smýt xxxxxxxx za xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx tuto xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx asi 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx. Xxxxx se tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx týden.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx x bazálním médiem xxx stanovení (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, které xxxxxx xxxxxx xxx různé xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx pH na 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx ad 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx fyziologický roztok.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/čistý xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % methanolového xxxxxxx "Xxxxx 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
Připravit xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx směsí (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1 μx virginiamycinu na 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1+) za použití xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Výrobky x xxxxxx virginiamycinu xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 ppm
Odebrat 10 až 20 x zkušebního vzorku, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) a xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Odstředit nebo xxxxxxxxx, xxxxxxx 20 xx čirého xxxxxxx x odpařit do xxxxx x rotačním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 xx xxxx xxxx xxxxx (4.5) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx x obsahu xxxxxxxxxxxxxx vyšším než 50 ppm
Odebrat 1 xx 10 x xxxxxxxxxx vzorku, přidat 100 xx xxxxxxx (4.6) a xxxxxxxxxxx 30 minut třepačkou. Xxxxxxxxx xxxx filtrovat, xxxx xxxxxx xxxxx (4.5) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml (= X8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a U1, xxx je uvedeno x bodě 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat bazální xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxx 48 xx 50 °C xxxxxxxx bakterií (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, U4, X2, X1).Xxxxx miska xxxx xxxxxxxxx čtyři xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx velikosti, xxx xxxx možné xxxxxx x agarovém xxxxx xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx asi 2 mm. Upřednostňuje xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x dokonale rovným xxxxxxxxxx xxxx plastovým xxxxxxxx x průmětu 200 xx a xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx xxx xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxx.
X každého xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxx stanovení zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxx xxx při 35 xx 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zaznamenat xxxxxx xx semilogaritmický xxxxx xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout křivky xxxxxxxxxxxx roztoku a xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 -S1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / U4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x relativní aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] Xxxx xxxxx xxxxxx x označení inhibičních xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxx).
[6] Xxxxx xxxx izolovaný x Xxxxx xxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx X. xxxxxx XXXX 6538 X.
[7] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[8] Xxxx xxxxxxxxx x Xxxxx xxxxx XXXX.
[9] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[10] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[11] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx a dávající xxxxxx xxxxxxxx.