Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. dubna 1972,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxx kontrolu xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Smlouvu x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx metod odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství pro xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx směrnice;
vzhledem k xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx stanoví, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxx požadavků xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxx vzorků x analytických metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx směrnice Xxxxxx x. 71/250/EHS ze xxx 15. xxxxxx 1971 [2] a 71/393/XXX xx dne 18. listopadu 1971 [3] již xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx třetí xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské státy xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxx škrobu, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, volného x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, jakož x o aktivitu xxxxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx směrnice Komise x. 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxx 1971, kterou se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xx xxxxxxx pro metody xxxxxxx x xxxxxxx X xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx tetracyklinových xxxxxxxxxx, xxxxx x o xxxxxx chlortetracyklinu, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, oleandomycinu, tylosinu x virginiamycinu x xxxxxxxx, se provádějí xxxxx metod xxxxxxxxx x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení xxxxxxx x xxxxx 1 (úvod) přílohy xxxxx směrnice Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, s výjimkou xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, se použijí xxx xxxxxx xxxxxxx x příloze XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v účinnost xxxxxx x správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. července 1973. Neprodleně x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Článek 4
Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu xxx 27. dubna 1972.
Za Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Xxxxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Úř. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX X
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
1. Účel x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx stanovit xxxxx xxxxxx x produktů xxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu x xxxxxxxx, s xxxxxxxx těch xxxxx, xxxxx obsahují xxxxx xxxxx, řepnou xxxxx, xxxxxx řepné xxxxxxx xxxx xxxxx, bramborovou xxxxx, sušené kvasnice, xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx (xxxx. řízky x moučka x xxxxxxxxxx) xxxx škvarky.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx za tepla xxxxxxxx kyselinou chlorovodíkovou. Xx čiření a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx optická xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx vzorek xxxxxxxxx 40 % xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, čiření x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx stejných xxxxxxxx xxxx při prvním xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx udává obsah xxxxxx ve xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,126.
3.2 1,128 % (m/V) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X x za xxxxxxxxxxx 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (X/X) xxxxxxxx. 10 xx = 30,94 xx 0,1 X XxXX.
3.3 Carrezův xxxxxx X: rozpustit xx xxxx 21,9 x xxxxxx zinečnatého Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx vodou xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx XX: xxxxxxxxx ve xxxx 10,6 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Xxxxxxx xxxxx na 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, x: 0,948 xxx 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx chladičem.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx vzorek xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx oky x průměru 0,5 xx.
5.2 Stanovení celkové xxxxxxx xxxxxx (X xxxx S) (viz xxxxxxxx 7.1)
Navážit 2,5 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx do odměrné xxxxx x xxxxxx 100 xx. Přidat 25 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx se zkušební xxxxxx dobře rozmístil x xxxxxx xxxxxxx 25 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Ponořit xxxxx do xxxxxx xxxxx xxxxx a xx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx protřepávat, xxx xx zabránilo xxxxxx xxxxxx. Množství xxxx ve xxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxxxx, xxx i xx xxxxxxx baňky xxxxxxx xxxxx na xxxx varu. Baňka xxxxx být xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx. Přesně po 15 xxxxxxxx vyjmout xxxxx x xxxxx, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx na 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Carrezova roztoku X (3.3) a xxxxx minutu xxxxxxxxxxx. Xxxx přidat 5 xx Xxxxxxxxx roztoku XX (3.4) x xxxx xxxxx minutu xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, homogenizovat x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxx zcela xxxx (xxx xx xxxxxx), opakovat stanovení xx použití většího xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X x XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x 200 xx xxxxxxx.
5.3 Stanovení xxxxxxx xxxxxx (X’ xxxx X’) xxxxx xxxxxxxxxxx xx 4 % ethanolu
Navážit 5 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx, xxx ho xx xxxxxxx baňky x objemu 100 xx x xxxxxx xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Poté xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx této doby xxxxxxxx silně xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx smíchal x xxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxx (3.5), homogenizovat x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 ml xxxxxxxx (= 2,5 x vzorku) do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x silně xxxxxxxxx. Xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx ji xx xxxxxx vodní xxxxx. Xxxxxx po 15 xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx baňku x xxxxx lázně, přelít xxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 ml, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x poté xxxxxxxx xx 20 °C.
Poté xxxxxxx xx použití Xxxxxxxxx roztoku I (3.3) a II (3.4), xxxxxxx po xxxxx vodou, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, jak xx xxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Obsah škrobu (%) xx vypočítá xxxxx:
6.1 Měření xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2 000 (X - X’) / [α]D20°
kde xx:
X = celková optická xxxxxx, v xxxxxxxx xxxxxxxx.
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, x úhlových xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : rýžový xxxxx
+ 195,4°: xxxxxxxxxx xxxxx
+ 184,6°: xxxxxxxxx xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx škrob
+ 181,5°: ječný škrob
+ 181,3°: ovesný xxxxx
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx x směsi xxxxxx x krmných xxxxxxx
6.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx = 2 000 / [α]X20° · (2 X · 0,665) (S - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx sacharimetru
S’ = xxxxxxx rotace xxxxx xxxxxxxxxxx ve 40 % xxxxxxxx, ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx ve 100 xx xxxx, která xx xxx xxxxxxxx 200 mm xxxxxxxx xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tato xxxxxxxx xx xxxx podle xxxxxxxxxxxx:
16,29 x xxx xxxxxxxxxxx sacharimetry
26,00 x xxx xxxxxxx sacharimetry
20,00 x xxx smíšené xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx čistého xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí překročit 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah škrobu xxxxx xxx 40 % x 1 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, uhličitany xxxx xxx xxxx stanovením xxxxxxx xxxxxx zničeny xx použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx kyseliny xxxxxx.
7.2 X případě xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, jako xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx přidání 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx zpětný xxxxxxx, xxxxxxx xx xx 30 minut xx xxxxx lázně x xxxxxxx 50 °X. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x pokračovat x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.3.
2. XXXXXXXXX HRUBÝCH XXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxx xxxxxxxx obsah xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx stanoveného xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx mineralizuje xx xxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx x odměřeném xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx roztokem hydroxidu xxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Katalyzátor: xxxx xxxxxxx CuO x.x. xxxx síran xxxxxxx pentahydrát XxXX4 · 5H2O p.a., xxxx xxxx nebo xxxx xxxxxxxx XxX x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx xxxxx x.x.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx sírová 0,5 X.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxxx xx 100 xx 95-96 % (X/X) ethanolu.
3.8 40 % (m/V) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,25 X.
3.11 Nasycený roztok xxxxxx xxxxxxx x.x.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Granulovaná xxxxx, xxxxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x destilační xxxxxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxx (viz poznámky 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Mineralizace
Navážit 1 g vzorku x přesností xx 1 xx a xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 x xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 xx 0,4 x xxxxx xxxxxxxxx nebo 0,9 xx 1,2 g xxxxxx měďnatého nebo xxxxx xxxxx xxxx 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx sírové (3.4) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.13), promíchat xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx mírně x za xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx nevře. Xxxxxxxx xxxxxxxx stěn baňky x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Když xx xxxxxx xxxx a xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx použije xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx var xxxxx xxxxx hodinu, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x za xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, aby se xxxxxxx zcela rozpustily; xxxxxx vychladnout; xxxx xxxxxx xxxxxxx granulí xxxxx (3.3).
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx odměřené xxxxxxxx 25 ml xxxxxxxx sírové 0,1 X (3.5) nebo 0,5 X (3.6) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx obsahu xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx několik xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx destilační xxxxxxxxx x ponořit xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx sběrné xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 1 cm (viz xxxxxxxx 7.3). Xxxx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx do xxxxx 100 ml 40 % roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx byl xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxx do xxxxx rovněž buď 10 xx roztoku xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 ml xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xx 30 xxxxx xxxxxxxxxxxxx asi 150 xx xxxxxxxx. Po xxxxxxxx této doby xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud je xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Ukončit xxxxxxxxx, xxxxx lakmusový xxxxxxx xxxxx, xx xx destilát xxxxxxxxx. Xxxxx destilace xxx xx času xxxxxxxxx xxxxx sběrné baňky x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx dojde xx xxxxxxxx xx žluta, xxxxx xxxxxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Titrace
Ve xxxxxx baňce titrovat xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) v závislosti xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx světle žlutou.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx činidla xxxxxxxxxx dusík, xx xxxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxx x xxxxxxx), x to xxx xxxxxx, xxxxx má xxx analyzován. Za xxxxxx kontroly xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, destilace x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 g xxxxxxxxxxx x.x. (x.x. 114 °X; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 g xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kyseliny xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx sírové 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx hrubých proteinů xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Je xxxxx xxxxxx některé xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x destilací. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx musí xxxxxxx xxxx ztrát.
7.2 U xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N, xxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx, xxxxxx xx 10 xx 15 xx x xxxxxxx xxxxx na 25 xx.
7.3 Xxxxx xxxx xxxxx destilační xxxxxxxxx nálevku x xxxxxxxx, přidat hydroxid xxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx baňky tak, xxx xx xxxxxxxxxx x roztokem xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX HRUBÝCH XXXXXXXX XXXXXXXXXXX PEPSINEM A XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx proteinů xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx xx stanovených xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro všechna xxxxxx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °X xxxxxxxx pepsinu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 N.
3.3 2,0 x/xx pepsinu; xxxxxxxx pepsinu xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx v části 4 xxxx xxxxxxx x xxxx být xxxxxxxxxxxx v xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 j/l.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (např. xxxxxxx).
3.6 Všechna xxxxxxx xxxxxxx v xxxx 3 xxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu hrubých xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx aparatura xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx roztoku (xxx xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx a xxx xx xx odměrné xxxxx x xxxxxx 500 xx. Xxxxxx 450 xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °X. Xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx hrudek. Xxxxxx, xx xx xX suspenze nižší xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx (4.1) x xxxxxx xx xxx 48 xxxxx. Xxxxxxxxx po 8, 24 x 32 xxxxxxxx. Po 48 xxxxxxxx přidat 15 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxx xx 20 °C, xxxxxxx po rysku xxxxx x xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx x přesností xx 1 xx x dát xx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v metodě xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x uvést xx varu. Pokud xx xxxxxxx pěna, xxxxxx xxxxxxx kapek xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx v xxxxxx xxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx zcela xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxx stopy vody.
Když xx roztok xxxx x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx bázi xxxx), xxxxxxxx var xxxxx další hodinu. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx 5.2 a 5.3.
5.4 Slepý xxxxx
Xxxxxxx xxxxx pokus xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxxx, xxxxx má xxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx objemu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx množství dusíku xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx nesmí překročit:
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx vyšší xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Hodnoty získané xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx in xxxx.
7.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxx než 10 % xxxx xxx odtučněny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (b.v. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pepsinem x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx stanovených xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx proteinů xx xxxxxxx xxxxxxxxx trichloroctovou. Xx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx Folin-Ciocalteu. Xxxxxxx xxxxxxx tohoto xxxxxxx se xxxx xxx 750 xx x odpovídající xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxxx křivky.
Definice: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, které xx xxxxxxxx xxxxxx uvolní xx xxxxxx takové xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx skupin, xxxxxxx zbarvení xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx má xxxxxxxx xxxxxxx odpovídající xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx μxxxx xxxxxxxx zbarveného xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 N.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,06 X.
3.3 Kyselina chlorovodíková 0,025 X.
3.4 5 % roztok (m/V) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Folin-Ciocalteu. Xxx 100 g xxxxxxxxxx sodného (Xx2XX4 · 2X2X), 25 x molybdenanu xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 xx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx x kulatým xxxx x normalizovaným xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx kyseliny xxxxxxxxxx (x: 1,71) x 100 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19), xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx chladič, xxxxx do xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x mírném varu xx xxxx 10 xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zpětný xxxxxxx, xxxxxx 175 x xxxxxx xxxxxxxx (Li2SO4 · 2X2X), 50 xx xxxx x 1 xx xxxxx. Xxxxx po xxxx 15 xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx přebytek xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx do odměrné xxxxx x xxxxxx 1 x, doplnit xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx nazelenalé xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 1 objem xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Xxxxxx hemoglobinu: Xxxxxxx xxxxxxxx hemoglobinu, xxx 2 g xxxxxxxxxxxx substrátu xxxxx Xxxxxxxx xxxxxx odpovídajícího 354 xx dusíku [1] x xxx xx xxxxx o xxxxxx 200 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx několik ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx, dokud se xxxxxxxxxx zcela xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxxxxxx doplnit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx na 100 xx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx 181,2 mg tyrosinu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx). Odebrat 20 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx tohoto xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxx ultratermostatem xx 25 °X + 0,1 °C.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Stopky, xxxxxxxx: 1 sekunda.
4.4 xX xxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx poznámky 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx xx 100 xx kyseliny chlorovodíkové (3.2). Odpipetovat 2 xx xxxxxxx a xxx xx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). xX kontrolované xX xxxxxx xxxx xxx 1,6+0,1. Ponořit xxxxx xx vodní xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx tam x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx vodní xxxxx xxx 25 °X xxxxxx xx xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx xx přidání xxxxxxx xxxxxxx (xxxx x teplota xxxx xxx xxxxxx dodrženy). Xxxx xxxxxx 10,0 xx roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxx, xxx xx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx hydroxidu sodného (3.5) x xx xxxxxxx protřepávání 3,0 xx zředěného xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 xx 10 xxxxxxxx xxxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 750 xx x kyvetách o xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxx x xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx slepý xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx kyseliny trichloroctové (3.4) předehřáté xx 25 °C, homogenizovat x poté xxxxxx 1,0 xx roztoku xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx přesně 10 xxxxx xx xxxxx lázni (4.1) xxx 25 °C. Xxxxxxxxxxxxx x filtrovat xxxx xxxxx filtr. Xxxxxxxxxx x postupu xxxxxxxx x xxxx 5.3.
5.5 Kalibrační křivka
Do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, a 5,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx, xxxxx odpovídá 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx tyrosinu. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 5,0 xx. Přidat 10,0 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x xx stálého xxxxxxxxxxxx 3,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx Folin-Ciocalteu (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx hustotu xxx xx uvedeno x poslední xxxx xxxx 5.3. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx pokusem.
Aktivita xxxxxxx x μxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx x xx xxxxx xxxxxx při 25 °X xx vypočítá xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx xx xx (x/xx) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μmol xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = množství xxxxxxx x xx xxxxxxx podle xxxx 5.2.
7. Poznámky
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx má xxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx takové, aby xxxx při konečném xxxxxxxxxxxxx měření xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx xx xx xxxxxxx touto xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx xxxxxxxx/xx xxx. xxx 35,5 °C) xxxx
36400 xxxxxxxxxx jednotek/g (μxxxx xxxxxxxx/x xx 10 xxx. xxx 35,5 °X).
5. STANOVENÍ XXXXXXX X CELKOVÉHO XXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx gossypolu x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx pokrutinách x xxxxxxx směsích, které xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu xx 20 ppm.
2. Princip
Gossypol xx extrahován za xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, x xx buď xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, nebo xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx hustota xx xxxxxx xxx 440 xx.
3. Činidla
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx: xxxxxxx 60 objemových xxxxx xxxxxxxxxxxx p.a. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx n-hexanu.
3.2 Rozpouštědlo X: xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1 x xxxxx xxx 500 ml xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), 2 xx 3-amino-1-propanolu, 8 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 50 xx xxxx. Xxxxxxx xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.3 Rozpouštědlo X: xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx a 10 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Zchladit xx pokojovou xxxxxxx x doplnit xx xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx činidla xx xxxxx týden.
3.4 Xxxxxx x.x.: pokud optická xxxxxxx slepého xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x posledních xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Toto činidlo xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx několik xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx skla.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx o objemu 250 ml dát 27,9 xx octanu xxxxxxxxx. Rozpustit x xxxxxxx xx rysku xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx xx odměrné xxxxx x xxxxxx 250 xx 50 xx xxxxxx xxxxxxx x doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,02 xx/xx. Před xxxxxxxx nechat xxxx xx dobu xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Standardní roztok xxxxxxxxx B: do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx xxx 27,9 xx xxxxxx gossypolu. Rozpustit x xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,5 mg/ml.
Pokud xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx A x X chráněny xxxx xxxxxxx, xxxxxx trvanlivost xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Mixér (třepačka): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx zkušebního xxxxxx xxxxxx xx předpokládaném xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Je xxxxxxx xxxxxxxx x malým xxxxxxxxx zkušebního xxxxxx x relativně xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx filtrátu, xxx xxxx xxxxx xxxxxx dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x bavlníkových xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 x; xxx xxxxx směsi xx xxxx xxx 5 x. Ve xxxxxxx případů xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx část 10 xx xxxxxxxx; xxxx xx xxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx celkového gossypolu xx xxxxxxxx zkušebního xxxxxx xxxx být xxxx 0,5 x 5 x, aby xxxxxxxxx část 2 xx filtrátu xxxxxxxxxx 40 až 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxx 250 ml, xxxxx dno xx xxxxxxx xxxxxxxxxx střepy. Xxxxxx xxxxxx přidat 50 xx rozpouštědla X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx a jednu xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx filtrát x xxxx baňce xx xxxxxxxxxx hrdlem. Během xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx pipety xxxxxx xx dvou xxxxxxxxx baněk (A x X) x xxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μg xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx rozpouštědlem X (3.2) xx 10 xx. Xxxx xxxxxxx xx rysku xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx xxx slepý xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx přidat 10 ml xxxxxxxxxxxx X (3.2) do xxxx jiných xxxxxxxxx xxxxx (C x X) o xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro měření xxxxxxx pro xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (D) a (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx na pokojovou xxxxxxx, xxxxxxx po xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx hodinu.
Stanovit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 440 xx a ve xxxxxxxxxx kyvetách x xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx pokus (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx od xxxxxxx xxxxxxx roztoku xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx). Z xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx je xxxxxxx x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 až 5 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 ml x xxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxx 10 ml xxxxxxxxxxxx B (3.3) xx xxxx odměrné xxxxx o xxxxxx 50 ml. Zahřívat xxx xxxxx 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx lázní. Zchladit xx pokojovou xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx obě xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Homogenizovat x xxxxxx xxxx 10 xx 15 xxxxx, poté filtrovat x xxxxxxxx xxxxxxxx x baňce xx xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 2 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx dvou xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 ml a 2 ml filtrátu xxxxxxx xxxxxx xx xxxx jiných odměrných xxxxx x objemu 25 xx. Doplnit xx 25 xx xxxxx jedné baňky x každé série xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx se použijí xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4) do xxxx xxxxxx baněk. Xxxxxxxx 30 minut xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx hodinu.
Stanovit optickou xxxxxxx volného gossypolu, xxx xx uvedeno x xxxx 5.2. X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx celkového xxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx v bodě 6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx může xxxxxxx xxx xx xxxxxxx specifické xxxxxxx xxxxxxx (6.1), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx specifické optické xxxxxxx
Xx stanovených xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx tato:
volný xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
celkový xxxxxxxx: X 1% / 1xx = 600
Xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx gossypolu xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1&xxxx;250 / X1%1xx ·&xxxx; · p · x
xxx:
X = xxxxxxxx xxxxxxx hustota, stanovená xxx je xxxxxxx x xxxx 5.2
p = zkušební xxxxxx x g
a = xxxxxxxxx část filtrátu x xx
6.2 Na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx dvě xxxxx xx pěti xxxxxxxxx baňkách o xxxxxx 25 xx. X xxxxx série xxxxxx pipetou 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) xx 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxx slepého xxxxxx, směsí xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx každé baňky xxxxx xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx po rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxxxx. Načrtnout kalibrační xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx gossypolu (x μx).
6.2.2 Xxxxxxx gossypol
Připravit 6 xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu X (3.6). Doplnit xxxxx xxxxx xxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 minut xxx vroucí xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx na xxxxxxxxx teplotu, doplnit xx rysku směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxx pipetou 2 xx těchto xxxxxxx xx xxxx xxxxx x 6 xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xx 25 xx xxxxx x isopropanolu x xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), homogenizovat a xxxxxx stát jednu xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 stanovit xxxxxxxx xxxxxxx standardní xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku xxxxx překročit:
- 15 % relativní xxxxxxx xxx obsah xxxxxxxxx xxxxx než 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro obsah xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Stanovit obsah xxxxxx podle Kjeldahlovy xxxxxxxxxxxxxxx (teoretický xxxxx: 17,7 % dusíku).
XXXXXXX XX
1. XXXXXXXXX X IDENTIFIKACE TETRACYKLINOVÝCH XXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx a identifikovat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx roztoky. Xxxxxxxxxxx xxxx stanovena x xxxxxxxxxxxxxx porovnáním xxxxxx xxxxxx Xx x hodnotami standardních xxxxx, x xx xxx xxxxxxxxxxxx x XX světle (xxxxxx xxxxx antibiotik), xxxx xxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx B. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x.x. |
10,256 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X p.a. |
7,45 x |
|
Xxxxxx p.a. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan disodný Xx2XXX4.2X2X p.a. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx X: xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx chroroformu/α-dichlorhydrinu: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx XX směs xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 xxxxxxxx. Připravit xxxxxxxxxxxxx před použitím |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx látky: Xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
3.9 Mikroorganismus: X. xxxxxx ATCC x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx agaru, xxx xx popsána x části 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
Xxxx použitím xxxxxxx xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx chloridu x 5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografii (xxxxx xxxxxx 25 xx). Xxxxxxxx a Xxxxxxx xxxxx (2440B xxxx 2043B) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Odstředivka
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx stanovení fluorescence.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx xxx 20 x 30 xx xxx xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) x xx použití kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx UV xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx získat xxxxxxx, jejichž koncentrace xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Referenční roztoky xxx xxxxxxxxx bioautografií
Zředit xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x tetracyklinu-HCL xx 1 ml
6. Xxxxxxxx
Xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx nižší xxx 10 xxx, xx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx vzorek, xxxx nejjemnější xxxxxx xxxxxxxxx proséváním, xxxxx xxxxxxxxxxx xx nacházejí xxxxxxxxx x xxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Xxxxxx supernatant x xxxxxx ho xxxxx nebo xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 100 μx xx 1 xx (6.1) x 5 μx na 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx
7.1 Chromatografie
Ponořit xxxxx xx pufračního xxxxxxx, pH 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx přebytek xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx 0,01 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 a 5.3) x xxxxxxxx (6.1 x 6.2). Xxx dobré xxxxxxxx xxxx mít papír xxxxxxxx xxxxxxx; pokud xx xx nutné, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografií. Xxxxxx xxxxxx X (3.3) xxx stanovení bioautografií x eluent XX (3.4) xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx dosáhne xxxxx 15 xx 20 xx (xxx 1 xxxxxx 30 xxxxx), přerušit xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx papír.
7.2 Xxxxxxxxx XX světlem
Když xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 1 μx/xx2, xx xxxxx xx ošetření xxxxxxxxxxxxx xxxxxx amoniaku (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx XX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx bioautografií
Nalít xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), xxxxx xx xxxxxx naočkuje X. xxxxxx (3.9), xx xxxxxxxx desky (4.5) a xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Po pěti xxxxxxxx kontaktu odejmout xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx kultivačním xxxxx.
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xx inkubaci xxxxxx xxxxxx (3.11) na xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx Xx tetracyklinových antibiotik xxxx xxxxxxx xxx. Xxxx xxxxxxx se xxxxx mírně xxxxx xxxxx jakosti xxxxxx x jeho xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (TC) |
0,40 |
|
Oxytetracyklin (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "xxx" xxxxxxxxx xx xxxxx než xxxxxxxx normálních xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X TETRACYKLINU
A. XXXXXX XX AGARU
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x tetracyklin (TC) x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxx je 5 xxx. Xxxxxx xxxxx xxx 5 ppm xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx rovných nebo xxxxxxx xxx 50 xxx se xxxxxx xxxxxxxxx zředěným formamidem. X xxxxxx xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx extrahuje xxxxx xxxxxxx, xxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x xxxxx xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x XX.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx a xxxxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx měřením xxxxxx XXX, OTC xxxx TC na xxxxxxxx xxxxx naočkovaném X. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx zón je xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: X. xxxxxx XXXX x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. xxxxxx do zkumavky xx šikmým xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx a přeočkovat xxxxxxx 14 dní xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx spór
Smýt xxxxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx (3.1) za xxxxxxx 2 xx 3 xx fyziologického xxxxxxx xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx borité, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 až 4 %. Inkubovat 3 xx 5 dní xxx 28 xx 30 °C, xxxx xxxx xxxxx 15 xx ethanolu (4.6) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x homogenizovat. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxx skladovat xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxx množství je xxxxxxx 0,2 x 0,3 xx xx 1000 xx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx stanovení [2]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Kvasnicový xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 ml |
|
Fosfátový xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx borité |
15 xx |
|
0,5 % ethanolový xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda ad |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx upravit xX xx 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2H2O x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xX 4,5 xx použití xxxxxxxx sírové xxx 2 X.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, TC, jejichž xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Chlortetracyklin
Na základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x za použití xxxxxxxx chlorovodíkové (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x chladničce xxxxx xxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx chlortetracyklinu-HCL xx 1 xx. Xxxxxxx xx provede xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), xx xxxxxxx bylo přidáno 0,01 % černě xxxxx [3].
Xxxx připravit xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml, xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 připravit xx základě zásobního xxxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 obsahující 1,0 μx tetracyklinu-HCL xx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx xxxxx xxxx nižní xxx 50 ppm
Do xxxxxxxxxx xxxxxx přidat formamid (4.8) x množstvích xxxxxxxxx v xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Poté xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3) podle xxxxxx x tabulce x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx formamidu x xxxxx roztoku xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx dekantovat xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxx roztok. Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1) xx použití fosfátového xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x ppm |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Zkušební xxxxxx x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx formamidu (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
řeď. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx U8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Obsahy xxxxx xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx přidat do xxxxxxxxxx vzorku o xxxxxxxxx 2 xx 10 x 20xx xxxxxxx xxxx objemu xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 minut třepačkou. Xxxxx extrakce musí xxxxxx xX xxxxx xxx 3; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxxx pH na 3 (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu x xxxxxxx xX xx 5,5 za použití xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx bromkresolové xxxxxx (xxxxxx xx ze xxxxx xx xxxxxx). Xxxxxx za použití xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8 (xxx 6.1).
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x tetracyklin
Postupovat xxx je xxxxxxx x bodě 6.2.1 xxx, xx xx xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální médium xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx za xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x agarovém xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.1), které se xx použít pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx asi 2 xx. Upřednostňuje xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných desek x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo plastovým xxxxxxxx o xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx děr xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx čtyřikrát x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx misky xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zanesením xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx inhibičních zón. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a extraktu. Xxxxx nedošlo x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx rovnice:
(U1 + U2 + X4 + U8 - S1 -S2 -X4 -X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + S8 - X1 -X2 -X1 -S2
Skutečná xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % relativní xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx chlortetracyklin (XXX), oxytetracyklin (OTC) x xxxxxxxxxxx (TC) xxx koncentracích xxxxxxx xxx 1 x/xx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx vzniknout xxxxxx xxxxxxxxx. Tato xxxxxx xx xxxxxxxxx než xxxxxx xx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx obsahu XXX se xxxxxx xxxxxxxx směsí acetonu, xxxx a kyseliny xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx obsahu OTC x TC xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx se xxxx xxxxx a jejich xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx světelné xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média, xxxxx xxxx naočkováno Xxxxxxxxxxxxxx aureus x xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X 14 [6]
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxxx x šikmým agarem xxxxxxxxx z kultivačního xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx xx přidá 1,5 xx 3 % xxxxx (xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxxx přes xxx xxx 37 °X. Skladovat xxxxxxx x chladničce a xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx xx xxxxx xxxx. Zároveň připravit xxxxxxxxxx pro laboratorní xxxxxxx.
3.2 Příprava xxxxxxxx xxxxx
24 xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx šikmý xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx přes xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx zkumavce xxxxx x asi 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxx přenést xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx podmínek xx xxx 100 xx stejného xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xx xxxxx lázni xxx 37 °X xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (1x30 xx 2x).
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Bazální médium xxx xxxxxxxxx [7]
|
Pepton |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx sodný |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 g |
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
xX po xxxxxxxxxxx: 6,8 až 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx pufr, pH 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx xxxxxxx acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxx methanolu/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (x/X) roztoku xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, OTC, TC, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx látky (4.7) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx zásobní roztok, xxxxx koncentrace odpovídá 400 xx 500 μx XXX-XXX, OTC-HCL xxxx XX-XXX na 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx skladuje x chladničce jeden xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Chlortetracyklin
Do xxxxxxx baňky x xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx asi 100 xx xxxxx (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx fosfátovým xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx stát.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 nebo 250 xx dát 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx.
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx sérií x extraktu
Zředit standardní xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) fosfátovým xxxxxx, xX 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx série xxxxxxxxxxx. Xxx každé stanovení xx načrtne kalibrační xxxxxx, xx xxxxx xx znázorní xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx se k xxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx kmene, xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) fosfátovým xxxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx XXX-XXX xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2), xxx je xxxxxxx xxxx a ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Koncentrace XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.1) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,12 μx XXX-XXX. Xxx 1 xx tohoto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) xx xxxx xxxxxx zkumavek. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx roztok (5) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,6 μx OTC-HCL xxxx XX-XXX xx 1 ml. Poté xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2), xxx xx uvedeno xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku |
ml xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Koncentrace XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Zředit extrakt (6.2) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,48 μx XXX-XXX nebo XX-XXX na 1 xx. Xxx 1 xx tohoto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx dvou xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx objem xxxx xxxxxx zkumavek xx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) s xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x 5 cm xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx ve 2 cm xxxxxx xxx nastavení xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bazálního xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx každé xxxxxxxx (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 xx naočkovaného xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx, ale xxxxxxxx xx sterilním xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx musí xxxxxxx xx vodní xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx mícháním xxxxxxx xx 37 °X + 0,1 °X. Xxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx gradient xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx (obecně 2x30 xx 3x). Xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx vstříknutím 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) xx xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx růstu
Změřit xxxxxxxxxxx při 590 xx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 100 % propustnost xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx). X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 2 xx x xxxxxx 5 xx xxxxxx.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx xx milimetrovém papíře xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx antibiotika xx xxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení provedených x jednoho vzorku xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx, x to xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x jeho antibiotická xxxxxxxx se stanoví xxxxxxx difúze xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx inhibičních xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx přímo xxxxxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx, X 250 TR [8] (xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. cereus xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem odebraným x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) x přidat 100 μx oxytetracyklinu xx 5 xx. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx xxx 30 °X. Skladovat xxxxxxx x chladničce a xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx šikmý xxxx.
3.2 Příprava xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx asi 3 xx fyziologického roztoku (4.3). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx je 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 až 5 dní při 28 až 30 °X, poté smýt xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) poté, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx v xxxxxxxxxx skladovat xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) určit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx největší xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,1 a 0,2 ml xx 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 60 °X.
4. Kultivační xxxxx x xxxxxxx
4.1 Médium xxx udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,5. |
4.2 Bazální xxxxxx xxx stanovení [10]
Xxxxxx (4.1) xxxxxxxx na xX 8,8.
4.3 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (m/V) xxxxxx xxxx (hydroxymethyl) xxxxxxxxxxx x.x.
4.7 Extrakční xxxxxx
|
Xxxxx xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 g |
4.8 Standardní xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx aktivitě.
5. Standardní xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) v 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 μx/xx.
Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx předpokládaném xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 xx 10 x 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou.
Odstředit, odebrat xxxxxxxxx xxxx extraktu x zředit xxxxxxxx (4.6) s xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 0,1 μg xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (X8, X4, S2, X1) a xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, U1). Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx účelem vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx médiu xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx má xxxxxx xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx o xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx sestávajících xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx do xxx xxxxxx odměřená xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x každou xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit průměr xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 - S1 - S2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl mezi xxxxxxxx dvou paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- xxxxxx na xxxxx -
1. Účel x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx tylosin x xxxxxxxx, koncentrátech x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx pufračním roztokem x xX 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, a poté xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx odstředění xx xxxxxxx xxxxx a xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx měřením xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx médiu naočkovaném Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea XXXX x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Sarcina xxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx pH 7,0. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každý měsíc xx xxxxx agar.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze
Smýt xxxxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.4). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), upravit xx xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 hodin při 35 °X, poté xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx 75 % xxxxxxxxx propustnost xxx 650 xx.
Xxxxx xx tato xxxxxxxx xxxxxxxx x chladničce, xxxx trvanlivost xx xxxxx týden.
Předběžnými xxxxx xx deskách x xxxxxxxx médiem pro xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxxxx umožní získat xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [11]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, podle jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xx xxxxxx xxxxxxxxx rodičovského xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx upravit xX xx7,0 x xx účelem stanovení xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 8
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Fosfátový pufr, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
5,5 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.4 Sterilní fyziologický xxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx methanol: 60/40 objemově.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: tylosin x xxxxx xxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °X xx xxxxxxx sušárně (5 mm xxxxx). Xxxxxxx 10 až 50 xx xx xxxxxxx baňky, xxxxxxxxx x 5 ml xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 7 (4.3) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) standardní xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 2 μg xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 1 ml.
Poté připravit xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.7) xxxx koncentrace:
|
S4 |
1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,5 |
μg/ml |
|
S1 |
0,25 |
μg/ml |
6. Extrakce
Pro xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x xxxxxxxxxx vzorku; xxx xxxxxxx x xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, x homogenizovat 2 xxxxxx (kuchyňský xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 ml xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxx extrakt x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx (4.7) s xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tylosinu 2 μx/xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.7).
Xxx xxxxxx nižší xxx 10 xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 35 °X x rozpustit xxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxxxxxxx na xX 8 xxx 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx xxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, U1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x takové xxxxxxxxx, aby xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx očkovaného kultivačního xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 2 xx. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných desek x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x průměru 200 xx x x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx odměřená xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx vzorku opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x každou xxxxxxxxxxx, xxx každé xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx 35 až 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx projekcí. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu. Pokud xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx křivky xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx relativní aktivity xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx rovnice:
(U1 + X2 + X4 + U8 - X1 - X2 - S4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - U2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx dvou paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Účel x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Xxxxx 80". Po xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx a xxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx virginiamycinu xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea ATCC x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx přes xxx při asi 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce x přeočkovat xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx bakterie xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx za pomoci 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Homogenizovat x xxxxxx xxxx xxxxxxxx x cílem xxxxxx xxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx. Xxxxx se tato xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx týden.
Předběžnými xxxxx na xxxxxxx x bazálním xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx množství očkovací xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx různé xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, ale xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx kultivačního xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 g |
|
Agar, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx pH xx 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 6
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
8,0 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx ad 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Xxxxx 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx látka: xxxxxxxxxxxxx x známé xxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx standardní xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μg virginiamycinu xx 1 xx. Xx xxxxxxx tohoto xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx směsí (4.5) xxxxxxxxxx pracovní roztok X8 obsahující 1 μx virginiamycinu xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1+) xx xxxxxxx xxxxx (4.5) tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Extrakce
6.1 Výrobky x obsahu virginiamycinu xxxxxx xxxx nižším xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 xx 20 x xxxxxxxxxx vzorku, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Odstředit xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx 20 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 ml xxxx xxxx směsi (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx virginiamycinu xx 1 xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace U4, X2 a X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.5)
6.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx vyšším než 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x protřepávat 30 minut třepačkou. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Poté xxxxxxxxx koncentrace U4, X2 x X1, xxx je xxxxxxx x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) při 48 xx 50 °C xxxxxxxx bakterií (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze na xxxxx se provádí x miskách za xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4, X2, X1).Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat misky x takové xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x průměru 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx se xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx asi 2 mm. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx se z xxxxxxxx skleněných desek x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx plastovým xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm a xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr přesně xxxxxxxx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 ml, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxx xxx při 35 xx 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 -X1 - X2 - S4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - U1 - X2 - S1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % relativní xxxxxxx.
[1] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] Xxxx amido slouží x označení xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxx).
[6] Tento xxxx izolovaný x Xxxxx xxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx S. aureus XXXX 6538 P.
[7] Xxxx xxx použito xxxxxxxx komerční kultivační xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Kmen xxxxxxxxx x Xxxxx xxxxx XXXX.
[9] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[10] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[11] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.