Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Rady xx dne 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx a analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx kontrolu xxxxx [1], x zejména xx článek 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx uvedená xxxxxxxx stanoví, že xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxxxx cílem xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx právními x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxx 1971 [2] a 71/393/XXX xx dne 18. listopadu 1971 [3] xxx stanovily xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx prací xx však nutné xxxxxxxx xxxxx sérii xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx jde x xxxxxx škrobu, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxx, se xxxxxxxxx xxxxx metod xxxxxxxxx x příloze I xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Komise x. 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxx 1971, xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx v příloze X této xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotik, xxxxx i o xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, oleandomycinu, tylosinu x virginiamycinu v xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx metod xxxxxxxxx x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení xxxxxxx v xxxxx 1 (úvod) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxx 1971, s xxxxxxxx xxxxx týkající xx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Členské xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. července 1973. Xxxxxxxxxx x xxxx informují Komisi.
Xxxxxx 4
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 27. xxxxx 1972.
Xx Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Xxxxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX X
1. STANOVENÍ XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx metoda
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx obsah xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x vysoké xxxxxxxxxxx hmotnosti xxxxxx x xxxxxxxx, x xxxxxxxx těch xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, bramborovou xxxxx, xxxxxx kvasnice, xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. řízky x xxxxxx z xxxxxxxxxx) nebo xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxx xxxxxxxxx je vzorek xxxxxxx za xxxxx xxxxxxxx kyselinou chlorovodíkovou. Xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx rotace xxxxxxx.
Xxx druhém xxxxxxxxx xx vzorek extrahuje 40 % xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou, xxxxxx x filtraci se xxxxx optická rotace xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx prvním xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx vynásobený xxxxxx xxxxxxxx udává obsah xxxxxx ve vzorku.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx chlorovodíková, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N x xx xxxxxxxxxxx 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx v 94 % (X/X) ethanolu. 10 ml = 30,94 ml 0,1 X NaOH.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxx X: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x octanu xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x ledové kyseliny xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx II: xxxxxxxxx xx vodě 10,6 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, d: 0,948 xxx 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Erlenmeyerova xxxxx x xxxxxx 250 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xxxx prošel sítem x xxxxxxxx xxx x průměru 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx rotace (X xxxx S) (viz xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx odměrné xxxxx o xxxxxx 100 ml. Přidat 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx xx zkušební xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x přidat xxxxxxx 25 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx xx vroucí xxxxx lázně x xx dobu xxxxxxx xxx xxxxx silně x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxxxx, xxx i xx vložení xxxxx xxxxxxx lázeň xx xxxx xxxx. Xxxxx xxxxx xxx vyjmuta x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx. Přesně po 15 minutách xxxxxxx xxxxx z xxxxx, xxxxxx 30 ml xxxxxxx xxxx a xxxxx xxxxxxxx na 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Carrezova roztoku X (3.3) x xxxxx minutu xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx XX (3.4) x xxxx jednu xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Pokud xxxx filtrát xxxxx xxxx (xxx je xxxxxx), opakovat xxxxxxxxx xx xxxxxxx většího xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X a XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx polarimetrem xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x 200 xx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (P’ xxxx X’) látek xxxxxxxxxxx ve 4 % ethanolu
Navážit 5 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx, dát xx xx odměrné xxxxx x xxxxxx 100 xx x přidat xxx 80 ml xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx silně xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x ethanolem. Xxxxxxx xx xxxxx ethanolem (3.5), xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) x xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx Erlenmeyerovu xxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxxx vodní xxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 100 ml, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vodou x xxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx xx použití Xxxxxxxxx roztoku I (3.3) x XX (3.4), xxxxxxx po xxxxx vodou, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx rotaci, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2 druhém x třetím odstavci.
6. Xxxxxxx výsledků
Obsah škrobu (%) xx vypočítá xxxxx:
6.1 Měření xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - X’) / [α]X20°
xxx xx:
X = xxxxxxx optická xxxxxx, v xxxxxxxx xxxxxxxx.
X’ = optická xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, x úhlových xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx xxxxx
+ 195,4°: xxxxxxxxxx xxxxx
+ 184,6°: xxxxxxxxx škrob
+ 182,7°: pšeničný xxxxx
+ 181,5°: ječný xxxxx
+ 181,3°: xxxxxx škrob
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx x směsi xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Měření xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]X20° · (2 N · 0,665) (X - X’) / [α]D20°
Kde xx:
X = celková xxxxxxx rotace, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % ethanolu, xx xxxxxxxx sacharimetru
N = xxxxxxxx sacharózy v xxxxxxx xx 100 xx xxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxx 200 mm optickou xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx podle xxxxxxxxxxxx:
16,29 x xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
20,00 x pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = specifická xxxxxxx rotace čistého xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx nesmí překročit 0,4 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxxx xxxxx než 40 % a 1 xxxxxxxxx hodnoty pro xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx vyššího xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx zředěné xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 V xxxxxxx xxxxxxxx x vysokým xxxxxxx laktózy, xxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx nebo sušené xxxxxxxxxx mléko, xxxxxxxxxx xx přidání 80 xx ethanolu (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx ji xx 30 xxxxx xx vodní lázně x xxxxxxx 50 °X. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx je xxxxxxx v xxxx 5.3.
2. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx mokra. Kyselý xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx amoniak xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx v xxxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Katalyzátor: xxxx xxxxxxx XxX x.x. nebo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx CuSO4 · 5X2X x.x., xxxx xxxx nebo xxxx xxxxxxxx HgO x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx xxxxx x.x.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Kyselina xxxxxx 0,5 X.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxxx xx 100 ml 95-96 % (X/X) ethanolu.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,1 X.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx roztok xxxxxx xxxxxxx x.x.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx pemza, xxxxxxx v kyselině xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x destilační xxxxxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx poznámky 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx x xxx ho do xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 x xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 xx 0,4 x xxxxx xxxxxxxxx nebo 0,9 xx 1,2 x xxxxxx měďnatého nebo xxxxx xxxxx nebo 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 ml xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x xxxxxxx granulí xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx xxxxx. Zahřívat xxxxx, nejprve xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, dokud hmota xxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxx; xxxx zahřívat xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Zabránit xxxxxxxx xxxx baňky x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Když je xxxxxx čirý a xxxxxxxx (světlezelený, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx mědi), xxxxxxxx var xxxxx xxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Destilace
Opatrně x xx stálého xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, aby se xxxxxxx xxxxx rozpustily; xxxxxx xxxxxxxxxxx; xxxx xxxxxx několik granulí xxxxx (3.3).
Přidat do xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxxx sírové 0,1 X (3.5) xxxx 0,5 X (3.6) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx několik xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx konec xxxxxxxx xx kapaliny xx sběrné xxxxx xx hloubky xxxxxxx 1 xx (viz xxxxxxxx 7.3). Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx nalít xx xxxxx 100 xx 40 % xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.8). Xxxxx byl použit xxxxxxxxxxx xx bázi xxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxxx buď 10 xx xxxxxxx xxxxxx sodného (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx takovým xxxxxxxx, aby se xx 30 minut xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxx této xxxx xxxxxxxxxxxx pH výsledného xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx lakmusový xxxxxxx ukáže, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx destilace xxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx sběrné xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx žluta, xxxxx xxxxxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N (3.5) nebo 0,05 X (3.6).
5.3 Titrace
Ve xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx sírové xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) x závislosti xx normalitě xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx nezmění xx xxxxxx xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx činidla xxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxx x titrace), x to xxx xxxxxx, xxxxx má xxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (mineralizace, xxxxxxxxx x titrace) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx x.x. (x.x. 114 °X; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 g xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx spotřebované kyseliny xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx faktorem 6,25. Xxxxxxxx vyjádřit xxxx procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx vyšší xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xx xxxxx xxxxxx některé xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x destilací. X xxxxxxx případě xx xxxxxxx musí provést xxxx ztrát.
7.2 U xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx kyseliny xxxxxx 0,1 X, xxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx, xxxxxx xx 10 až 15 xx a xxxxxxx vodou xx 25 ml.
7.3 Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxxxx baňky na xxxxxxx a xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx tak, xxx xx nesmíchala x roztokem kyseliny.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX CHLOROVODÍKOVOU
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx za stanovených xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx všechna xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Suspenze xx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx ve xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 x/xx xxxxxxx; xxxxxxxx pepsinu xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 4 xxxx xxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxx metodou.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x bodě 3 xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx nebo inkubátor xxxxxxxxx na 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2)
Navážit 2 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx a xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 ml. Přidat 450 xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °X. Xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxx, xx je xX xxxxxxxx xxxxx xxx 1,7. Vložit xxxxx do vodní xxxxx xxxx xxxxxxxxxx (4.1) a xxxxxx xx xxx 48 xxxxx. Xxxxxxxxx xx 8, 24 x 32 xxxxxxxx. Xx 48 xxxxxxxx přidat 15 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxx xx 20 °X, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx a xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 ml xxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 mg x dát xx xx xxxxx destilační xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx nezbytná xxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x metodě xxx stanovení hrubých xxxxxxxx, xx xxxxx xxxx bodu 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x uvést xx xxxx. Pokud xx xxxxxxx xxxx, xxxxxx několik xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx v xxxxxx xxxx, xxxxx xx xxxx téměř xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx.
Xxxx xx roztok čirý x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx se použije xxxxxxxxxxx xx bázi xxxx), udržovat xxx xxxxx xxxxx hodinu. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Destilace x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxxx pro stanovení xxxxxxx proteinů v xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Xxxxx pokus
Provést xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx vzorku, xxxxx xx být xxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx objemu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. 1 xx kyseliny xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 mg xxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah nižší xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % x nižší xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Hodnoty xxxxxxx xxxxx metodou xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx.
7.2 Xxxxxxx o obsahu xxxx xxxxxx než 10 % xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx ošetří xx stanovených xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové. Nehydrolyzovaná xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xx xxxxx hydroxid xxxxx x xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx tohoto xxxxxxx se xxxx xxx 750 xx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx jako množství xxxxxx, které za xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx hydroxyarylových xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx xx optickou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx μmolu xxxxxxxx zbarveného stejným xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,2 N.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,025 N.
3.4 5 % xxxxxx (x/X) xxxxxxxx trichloroctové.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Činidlo Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxx 100 g xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 25 x molybdenanu xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 ml xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxx xxxx x normalizovaným xxxxxxxx. Přidat 50 xx kyseliny xxxxxxxxxx (x: 1,71) x 100 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19), připojit xxxxx xx xxxxxx chladič, xxxxx xx xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx varu xx dobu 10 xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxx 175 x xxxxxx xxxxxxxx (Li2SO4 · 2H2O), 50 xx xxxx x 1 xx xxxxx. Xxxxx xx xxxx 15 minut, xxx xx xxxxxxxxx přebytek xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 x, doplnit xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 objemy xxxx.
3.7 Roztok xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxx hemoglobinu, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxx metody xxxxxxxxxxxxxx 354 mg xxxxxx [1] a dát xx baňky x xxxxxx 200 xx x normalizovaným xxxxxxxx. Xxxxxx několik xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx baňku s xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxx zcela xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx doplnit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx na 100 xx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx tyrosinu: xxxxxxxxx 181,2 xx tyrosinu x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) a xxxxxxx xx xxxxxxx litru xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx). Odebrat 20 xx tohoto roztoku x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 ml. 1 xx xxxxxx roztoku xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Vodní xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °X + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, xxxxxxxx: 1 xxxxxxx.
4.4 xX xxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxxx (xxx poznámky 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx x xxx xx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx x doplnit xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). xX kontrolované xX metrem xxxx xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx do xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx získaného xxxxx bodu 5.1 x xxxxxxxxx asi xxxxxx xxxxxx tam x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx 25 °X přesně po xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxx pepsinu (xxxx x teplota musí xxx přesně xxxxxxxx). Xxxx xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °C, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx filtrátu, xxx xx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 xx 10 xxxxxxxx stanovit optickou xxxxxxx xxxxxxx spektrofotometrem xxx 750 xx x kyvetách x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxx x xxxxx.
5.4 Slepý xxxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 ml roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, zahřát ve xxxxx lázni (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x xxxx přidat 1,0 ml roztoku xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx přesně 10 minut xx xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx v bodě 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, a 5,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μmolu xxxxxxxx tyrosinu. Xxxxxxx xxxxx referenčním roztokem xxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 5,0 xx. Přidat 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x xx stálého protřepávání 3,0 xx zředěného xxxxxxx Folin-Ciocalteu (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x poslední xxxx xxxx 5.3. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx proti xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx množství tyrosinu x μmolech, které xxxxxxxx xxxxxxx hustotě xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxxx opraveno xxxxxx pokusem.
Aktivita xxxxxxx x μxxxxxx xxxxxxxx xx 1 mg x za xxxxx xxxxxx při 25 °X se vypočítá xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx xx xx (x/xx) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx v μxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = množství xxxxxxx x xx xxxxxxx podle xxxx 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx má xxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx, aby xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hustota 0,35 + 0,035.
7.2 Dvě xxxxxxxx xx mg xxxxxxx touto metodou xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx milijednotkám/mg (μxxxx xxxxxxxx/xx min. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 xxxxxxxxxx jednotek/g (μxxxx tyrosinu/g xx 10 xxx. xxx 35,5 °C).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX X CELKOVÉHO XXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx příbuzné xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx pokrutinách a xxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu xx 20 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, x xx xxx směsí xxxxxxxxxxxx a hexanu xxx stanovení volného xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Gossypol je xxxxxxxxxxxxxxx anilinu přeměněn xx gossypol-dianilin, jehož xxxxxxx hustota je xxxxxx xxx 440 xx.
3. Xxxxxxx
3.1 Směs xxxxxxxxxxxx x hexanu: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx p.a. xx 40 objemovými xxxxxx n-hexanu.
3.2 Rozpouštědlo X: xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1 l xxxxx xxx 500 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), 2 xx 3-amino-1-propanolu, 8 xx ledové xxxxxxxx xxxxxx a 50 xx vody. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx B: xxxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx x 10 ml ledové xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxx.
3.4 Xxxxxx x.x.: pokud optická xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx přes xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Toto činidlo xx skladuje x xxxxxxxxxx několik xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 xx xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2). Xxxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 xx 50 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X. Xxxxxxxxxxx gossypolu x xxxxx xxxxxxx je 0,02 mg/ml. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx stát xx dobu jedné xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Rozpustit x xxxxxxx xx xxxxx rozpouštědlem X (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,5 mg/ml.
Pokud xxxx standardní roztoky xxxxxxxxx A a X chráněny před xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx zkušebního xxxxxx xxxxxx na předpokládaném xxxxxx gossypolu ve xxxxxx. Je výhodné xxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx zkušebního vzorku x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxxx xxx přesné xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 x; xxx xxxxx xxxxx xx může xxx 5 x. Xx xxxxxxx případů je xxxxxxxxxx xxxxxxxxx část 10 xx xxxxxxxx; xxxx xx xxxxxxxxx 50 xx 100 μx gossypolu. Xxx xxxxxxxxx celkového gossypolu xx xxxxxxxx zkušebního xxxxxx xxxx xxx xxxx 0,5 a 5 x, xxx xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx obsahovala 40 xx 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx by xx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxx baňky xx xxxxxxxxxx hrdlem o xxxxxx 250 xx, xxxxx xxx xx xxxxxxx skleněnými xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxx filtr x xxxxxxxx filtrát x xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx hrdlem. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx nálevku x kohoutem hodinovým xxxxxxxx. Xxxxxx pipety xxxxxx do dvou xxxxxxxxx baněk (A x B) x xxxxxx 25 ml xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx obsahujícího 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) na 10 xx. Xxxx xxxxxxx xx rysku xxxxx (X) směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx xxx slepý xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 10 xx rozpouštědla X (3.2) xx xxxx jiných xxxxxxxxx xxxxx (C a X) x objemu 25 xx. Doplnit xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro měření xxxxxxx xxx slepý xxxxx.
Xxxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (X) x (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx nad vroucí xxxxx lázní, xxx xx xxxxxxxxx zbarvení. Xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx po xxxxx xxxxx isopropanolu x hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 440 xx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx (X) xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx hustoty xxxxxxx xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx hustota). Z xxxx hodnoty vypočítat xxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 xx 5 xx gossypolu do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx x přidat 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3). Současně xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx B (3.3) xx xxxx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 ml. Xxxxxxxx xxx xxxxx 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx lázní. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx obě xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Homogenizovat x xxxxxx xxxx 10 xx 15 xxxxx, xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx pipety xxxxxx 2 xx xxxxxxxx ze xxxxxx xx dvou odměrných xxxxx x objemu 25 xx x 2 ml filtrátu xxxxxxx xxxxxx xx xxxx jiných odměrných xxxxx x objemu 25 xx. Xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxx série xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx se použijí xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxx 2 ml anilinu (3.4) do dvou xxxxxx baněk. Xxxxxxxx 30 minut nad xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx na xxxxxxxxx teplotu, doplnit xx 25 xx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx uvedeno x bodě 5.2. X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx obsah celkového xxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx v xxxx 6.
6. Výpočet výsledků
Výpočet xxxxxxxx se může xxxxxxx buď xx xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx (6.1), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx podmínek xx xxxxxxxxxx optická xxxxxxx tato:
volný gossypol: X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: X 1% / 1cm = 600
Xxxxx volného xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx takto:
gossypol %: X · 1&xxxx;250 / E1%1cm ·&xxxx; · p · x
xxx:
X = opravená xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2
p = zkušební xxxxxx x x
x = xxxxxxxxx část xxxxxxxx x xx
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx křivky
6.2.1 Xxxxx gossypol
Připravit dvě xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 ml. X xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.5). Doplnit xxxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) xx 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, směsí isopropanolu x xxxxxx (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx každé xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat stát xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx v bodě 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx porovnáním x xxxxxxxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx uvedením xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (v μx).
6.2.2 Celkový xxxxxxxx
Xxxxxxxxx 6 xxxxxxxxx xxxxx x objemu 50 xx. Xx první xxxxx xxxxxx pipetou 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.6). Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xx 10 ml xxxxxxxxxxxxx B (3.3). Xxxxxxxx 30 minut xxx xxxxxx vodní xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu x xxxxxxxxx.
Xxxxxx pipetou 2 ml xxxxxx xxxxxxx do xxxx xxxxx x 6 xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xx 25 xx xxxxx x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) (referenční xxxxx).
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx jednu xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x odpovídajícími xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.3 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 ppm xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 750 xxx.
[1] Stanovit xxxxx xxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (teoretický xxxxx: 17,7 % dusíku).
XXXXXXX II
1. STANOVENÍ X XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x porovnání x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x identifikována xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx Xx x xxxxxxxxx standardních xxxxx, x to xxx xxxxxxxxxxxx x XX xxxxxx (xxxxxx xxxxx antibiotik), nebo xxxxxxxxxxxxx xx agarovém xxxxx naočkovaném X. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Monohydrát kyseliny xxxxxxxxx p.a. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
7,45 x |
|
Xxxxxx p.a. |
300 ml |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Xx2XXX4.2X2X p.a. |
6,947 g |
|
Destilovavná xxxx ad |
1000 ml |
|
3.3 Xxxxxx I: směs xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx chroroformu/α-dichlorhydrinu: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím |
|
|
3.4 Xxxxxx XX xxxx xxxxxxx nitromethanu/čistého chroroformu/α-pikolinu: 20/10/3 xxxxxxxx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím |
|
3.5 Xxxx čistého methanolu/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus XXXX x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, příprava xxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx, xxx xx popsána x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 g |
|
Agar |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-triphenyltetrazolium xxxxxxxx x 5 % (x/X) roztok xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Zařízení xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx papíru 25 xx). Xxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxx (2440X xxxx 2043B) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 30 °X.
4.4 XX lampa xxx stanovení fluorescence.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx xxx 20 x 30 xx pro bioautografii.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) a xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, jejichž koncentrace xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Referenční roztoky xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x cílem xxxxxx xxxxxxx, jejichž xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Referenční xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) fosfátovým xxxxxx (3.2) x xxxxx získat xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 5 μg chlortetracyklinu-HCL, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx předpokládaný xxxxx xxxxxxxxxxx nižší xxx 10 ppm, xx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx proséváním, xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x této xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vzorek ve xxxxx (3.5) a xxxxxxxxx. Sebrat xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx nebo xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika xxx 100 μg xx 1 xx (6.1) a 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxxxx xxxxxxx, pH 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Poté xxxxxxx xx xxxxx 0,01 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) a extraktu (6.1 x 6.2). Xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx papír xxxxxxxx vlhkost; xxxxx xx xx nutné, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografií. Xxxxxx xxxxxx X (3.3) xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x eluent II (3.4) xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 15 xx 20 xx (asi 1 hodina 30 xxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x vysušit xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 1 μx/xx2, je možné xx ošetření chromatogramu xxxxxx amoniaku (3.7) xxxxxxxxx ozářením pod XX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), které xx předem xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx xxxxxxxx xxxxx (4.5) a xxxxxxx xxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxx. Po pěti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx jinou xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx, kde zůstane xxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx tetracyklinového antibiotika xx xxxxxxx světlými xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx kultivačním xxxxx.
X xxxxxx chromatogramu xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx Xx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotik xxxx uvedeny xxx. Xxxx hodnoty xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x jeho xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (XX) |
0,40 |
|
Xxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "xxx" sloučenin xx xxxxx než xxxxxxxx xxxxxxxxxx sloučenin.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX
X. XXXXXX XX AGARU
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (OTC) x xxxxxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Obsahy nižší xxx 5 xxx xxxxx být xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx než 50 xxx se xxxxxx xxxxxxxxx zředěným xxxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx extrahuje xxxxx acetonu, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx CTC x směsí methanolu x kyseliny chlorovodíkové xxx xxxxxxxxx XXX x XX.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX, OTC xxxx XX xx xxxxxxxx xxxxx naočkovaném X. xxxxxx. Difúze xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus XXXX x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. xxxxxx do zkumavky xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx z kultivačního xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx modře a xxxxxxxx borité. Inkubovat xxxx noc při xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx a přeočkovat xxxxxxx 14 dní xx šikmý xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx fyziologického solného xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx baňky xxxxxxxxxx 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx modře x xxxxxxxx xxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 až 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 xx ethanolu (4.6) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx ověřena xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx se xxxx x chladničce skladovat xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx největší xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,2 x 0,3 xx xx 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 50 xx 60 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx stanovení [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 xx |
|
Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx kyseliny xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % ethanolový xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4 · 2H2O x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Fosfátový xxxx, pH 8,0
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Na2HPO4 · 2X2X x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.8 70 % (V/V) xxxxxxxx: připravit xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx na xX 4,5 xx použití xxxxxxxx xxxxxx xxx 2 N.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: CTC, XXX, XX, jejichž xxxxxxxx xx vyjádřena x chlorovodíku.
5. Standardní xxxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx látek (4.11) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx. Xxxxx roztok xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx standardní pracovní xxxxxx X8, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 ml. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), do xxxxxxx bylo xxxxxxx 0,01 % černě xxxxx [3].
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 xxxxxxxxx na základě xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 μx oxytetracyklinu-HCL xx 1 ml, standardní xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx podle xxxx 5.1 připravit xx xxxxxxx zásobního xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, standardní xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 1,0 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml x xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,5 |
μg/ml |
|
S2 |
0,25 |
μg/ml |
|
S1 |
0,125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
6.1 Obsahy xxxxx xxxx xxxxx xxx 50 xxx
Xx zkušebního xxxxxx přidat formamid (4.8) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Poté xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3) xxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxx získat xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x tomto roztoku xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx dekantovat xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Antibiotikum |
CTC |
OTC |
TC |
|||
|
Předpokládaný xxxxx x ppm |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Zkušební vzorek x g |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
ml formamidu (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx fosfátového xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
xxx. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
řeď. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx U8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx vyšší xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxx xx vzorku nebo xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku o xxxxxxxxx 2 až 10 x 20xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxx extrakce musí xxxxxx xX nižší xxx 3; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxxx xX xx 3 (x minerálních xxxxxxxxx za použití 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xX xx 5,5 xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxx xx xx xxxxx xx modrou). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 5,5, zředěného 1/10 (4.3), s xxxxx xxxxxx koncentraci X8 (xxx 6.1).
Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1), za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx xx uvedeno x bodě 6.2.1 xxx, že xx xxxx (4.9) nahradí xxxxx (4.10).
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx koncentrací xxxxxxxx (X8, U4,U2, X1). Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx čtyři xxxxxxxxxxx standardního roztoku x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx x agarovém xxxxx xxxxxxx 8 xxx o průměru 10 xx 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.1), xxxxx se xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x závislosti xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx inhibičních xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zanesením xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxxxxxxxx zón. Xxxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - S1 -S2 -X4 -X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + S8 - X1 -X2 -X1 -S2
Skutečná aktivita = xxxxxxxxxxxxx aktivita x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx překročit 10 % relativní xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), oxytetracyklin (XXX) x xxxxxxxxxxx (XX) xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 1 g/kg, xxxxx nezasahuje xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx metoda xx rychlejší xxx xxxxxx na agaru.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx obsahu XXX xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxx OTC x TC xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx účinek xx xxxxxxx měřením světelné xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média, xxxxx bylo naočkováno Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xx kterého bylo xxxxxxx antibiotikum. Světelná xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x šikmým xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx xx xxxxx 1,5 xx 3 % xxxxx (xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °X. Skladovat kulturu x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx šikmý xxxx. Zároveň xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx očkovací xxxxx
24 xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx celou kulturu xxxxxxxxx xx zkumavce xxxxx x asi 2 ml xxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxx přenést suspenzi xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx asi 100 xx stejného xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xx vodní xxxxx xxx 37 °C xxxxx růst xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx fáze (1x30 xx 2h).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Bazální médium xxx stanovení [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
xX xx xxxxxxxxxxx: 6,8 až 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
13,6 g |
|
Destilovaná voda xx |
1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.4 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Asi 10 % (x/X) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx zásobní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 xx 500 μx XXX-XXX, XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx se skladuje x chladničce jeden xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Chlortetracyklin
Do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 200 nebo 250 ml dát 1 až 2 x xxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 200 nebo 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 ml xxxxx (4.5) a xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx fosfátovým pufrem, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx xxxxx koncentrací. Xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, ne které xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx kmene, xxxxx xx mohou xxxxx xxxxxxxxx xx laboratoře. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Chlortetracyklin
Zředit xxxxxxxxxx xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx CTC-HCL na 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx je xxxxxxx xxxx x ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx xxxxxx dvakrát.
|
ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku |
ml xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.1) xx použití xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,12 μx XXX-XXX. Dát 1 xx tohoto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) xx xxxx xxxxxx zkumavek. Xxxxxxx xxxxx xxxx jiných xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx roztok (5) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,6 μx OTC-HCL xxxx XX-XXX xx 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx je uvedeno xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx xxxxxx dvakrát.
|
ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.2) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxx 1 xx tohoto xxxxxxx xx xxxx zkumavek x 0,5 xx (= 0,24 μg) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx objem xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx získat xx xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x 5 xx xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx ve 2 cm xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx nenaočkovaného bazálního xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx každé xxxxxxxx (7.1.1 nebo 7.1.2) 9 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx, ale nezbytně xx sterilním prostředí.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx se musí xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, jejíž xxxxxxx xx mícháním xxxxxxx xx 37 °X + 0,1 °C. Xxxxxxxxx xxxx xx xxxxx takovým způsobem, xxx bylo xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx gradient xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx (xxxxxx 2x30 xx 3h). Xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) do xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Měření xxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, přičemž xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx). X důvodu xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxx zkumavek xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 2 cm x xxxxxx 5 xx xxxxxx.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx xx milimetrovém xxxxxx xxxxxxxxx fotometrických xxxxxxxxxxxx xxxxx koncentracím antibiotika. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx obsah antibiotika xx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
3. XXXXXXXXX OLEANDOMYCINU
- difúzí xx agaru -
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx, x to xxxxxxx x přítomnosti xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx tris (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Po xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x jeho antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx difúze xxxxxxxxxxxxx xx agarovém médiu xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx, X 250 TR [8] (xxxxxxxxxxx vůči xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem odebraným x xxxxxxxxxxxx média (4.1) x xxxxxx 100 μg xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx. Xxxxxxxxx přes noc xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx na xxxxx xxxx.
3.2 Příprava xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx (3.1) za xxxxxxx xxx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 až 5 dní xxx 28 xx 30 °X, poté smýt xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx sporulaci, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 měsíců.
Předběžnými testy xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxxxx umožní xxxxxx xxx různé xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,1 x 0,2 xx xx 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Médium xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná voda xx |
1000 xx |
|
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,5. |
4.2 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [10]
Xxxxxx (4.1) xxxxxxxx xx xX 8,8.
4.3 Sterilní xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 20 % (X/X) ethanol.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (x/X) xxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx x.x.
4.7 Extrakční roztok
|
Čistý xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (hydroxymethyl) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 g |
4.8 Standardní xxxxx: oleandomycin x xxxxx aktivitě.
5. Standardní xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) s xxxxx xxxxxx koncentraci oleandomycinu 100 μg/ml.
Na základě xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (4.6) standardní xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Poté připravit xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Extrakce
V xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx oleandomycinu xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 xx 10 g 100 xx xxxxxxx (4.7) x protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 0,1 μg xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.2) xxx 60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx xx agaru xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx účelem xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, aby bylo xxxxx udělat x xxxxxxxx médiu xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx očkovacího xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx má použít xxx získání stejnoměrné xxxxxx x tloušťce xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx do xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx antibiotika xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx vzorku opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx každé stanovení xxxxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx při 28 až 30 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx budou paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 - S1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx vzorku nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x krmivech, koncentrátech x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx pufračním xxxxxxxx x pH 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, a xxxx xx extrahuje methanolem. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx měřením xxxxxx tylosinu xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx lutea. Xxxxxx xx xxxxxxx vytvořením xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx přes noc xxx asi 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každý měsíc xx šikmý agar.
3.2 Xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.4). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 xxxxx při 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x zředit xxxx suspenzi x xxxxx xxxxxx 75 % světelnou xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx trvanlivost xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx možné, xxx ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Bazální médium xxx stanovení [11]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx upravit xX xx7,0 a xx účelem xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 7
|
Dihydrogenfosforečnan draselný XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
4.4 Sterilní fyziologický xxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx.
4.6 40 % (V/V) xxxxxxxx.
4.7 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx standardní xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °X xx xxxxxxx xxxxxxx (5 xx rtuti). Xxxxxxx 10 xx 50 xx xx xxxxxxx xxxxx, rozpustit x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 7 (4.3) x cílem xxxxxx koncentraci xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μg/ml.
Na xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx rozředěním xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx použít 10 x zkušebního xxxxxx; xxx premixy a xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx fosfátového xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxxxxxxxxxxx 2 xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 ml xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx alikvotní xxxx xxxxx (4.7) x xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx připravit koncentrace X4, X2 a X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7).
Xxx xxxxxx nižší xxx 10 xxx xxxxxxx xxxxxxx do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx při 35 °X x xxxxxxxxx xxxxxxxx ve 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xx xX 8 při 48 xx 50 °X suspenzí xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx v xxxxxxx xx použití xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx musí obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a extraktu.
Za xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx médiu xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx má xxxxxx xxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 2 xx. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm a x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx do xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx průměru xxx.
X xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx čtyřikrát x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx přes xxxx xxx 35 až 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zanesením logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, xxx křivky budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + U8 - X1 - X2 - S4 -X8) · 0,602 / X4 + U8 + S4 + X8 - X1 - U2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. STANOVENÍ XXXXXXXXXXXXXX
- difúzí na xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, koncentrátech x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxx roztokem "Tween 80". Po xxxxxxxxxx xxxx filtraci se xxxxxxx zředí x xxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx měřením xxxxxx virginiamycinu xx xxxxxxxx xxxxx naočkovaném Xxxxxxx lutea. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem x kultivačního média (4.1). Xxxxxxxxx přes xxx xxx xxx 35 °C. Skladovat xxxxxxx v xxxxxxxxxx x přeočkovat xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx agar.
3.2. Příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx použití 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Naočkovat xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat 24 xxxxx při 35 °X, poté xxxx xxxxxxxx za xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx x cílem xxxxxx asi 75 % xxxxxxxxx propustnost xxx 650 xx. Xxxxx se xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx týden.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx x bazálním xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, které umožní xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx možné, ale xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a činidla
4.1 Xxxxxxx médium pro xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar, xxxxx jakosti |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 ml |
Před xxxxxxxx xxxxxxx pH xx 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 6
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
8,0 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx ad 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 Xxxxx methanol.
4.5 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % methanolového xxxxxxx "Tween 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx látka: xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml. Xx základě tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 obsahující 1 μx xxxxxxxxxxxxxx na 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1+) xx xxxxxxx xxxxx (4.5) tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Extrakce
6.1 Xxxxxxx x xxxxxx virginiamycinu xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 ppm
Odebrat 10 xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) a xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx 20 xx xxxxxx roztoku x odpařit xx xxxxx x rotačním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 xx xxxx více xxxxx (4.5) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Poté xxxxxxxxx koncentrace U4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.5)
6.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 g xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x protřepávat 30 xxxxx třepačkou. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx předpokládanou koncentraci 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1, xxx je xxxxxxx x bodě 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro stanovení (4.1) při 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx na xxxxx se xxxxxxx x miskách xx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4, X2, U1).Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x průmětu 200 xx x xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx děr xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x závislosti xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx stanovení zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx při 35 až 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx semilogaritmický xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx budou paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 -X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / U4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Xxxx být xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[2] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] Xxxx xxxxx xxxxxx x označení xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxx).
[6] Xxxxx xxxx xxxxxxxxx v Xxxxx xxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx X. xxxxxx XXXX 6538 P.
[7] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Xxxx xxxxxxxxx x Xxxxx podle XXXX.
[9] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Může xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[11] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační xxxxxx podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.