Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx úřední kontrolu xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Rady xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx metod odběru xxxxxx x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx směrnice;
vzhledem x xxxx, že uvedená xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx odběru xxxxxx x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS xx xxx 15. června 1971 [2] x 71/393/XXX ze xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [3] již xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx na xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx třetí xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Členské státy xxxxxxx, xx analýzy xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xxxxx jde x obsahy škrobu, xxxxxxx xxxxxxxx, hrubých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx, volného x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x x aktivitu xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze I xxxx směrnice.
Obecná xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, se xxxxxxx xxx metody xxxxxxx x xxxxxxx X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxxx, že analýzy xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx tetracyklinových xxxxxxxxxx, xxxxx x o xxxxxx chlortetracyklinu, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, tylosinu x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, se provádějí xxxxx xxxxx popsaných x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxx 1 (úvod) přílohy xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. června 1971, x xxxxxxxx xxxxx týkající xx xxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Článek 3
Xxxxxxx státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a správní xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1973. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxxxx Komisi.
Článek 4
Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 27. xxxxx 1972.
Xx Xxxxxx
xxxxxxxx
X. L. Xxxxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
PŘÍLOHA I
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx a produktů xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu x xxxxxxxx, s xxxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxx obsahují xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx listy, xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx kvasnice, xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. řízky x xxxxxx x xxxxxxxxxx) nebo xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx dvojité xxxxxxxxx. Při xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxx xx tepla xxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou. Xx čiření x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx optická xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx stanovení xx xxxxxx extrahuje 40 % xxxxxxxxx. Xx okyselení xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx stejných xxxxxxxx xxxx xxx prvním xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx dvěma xxxxxxxx xxxxxxxxxx známým xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) kyselina xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx titrací za xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X x xx xxxxxxxxxxx 0,1 % (m/V) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (X/X) xxxxxxxx. 10 xx = 30,94 ml 0,1 X NaOH.
3.3 Carrezův xxxxxx X: rozpustit xx xxxx 21,9 x xxxxxx xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x ledové xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx vodou xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx roztok XX: xxxxxxxxx xx xxxx 10,6 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Xxxxxxx xxxxx na 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, x: 0,948 při 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 ml x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx vzorek xxxxxxx způsobem, aby xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxx x xxxxxxx 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx celkové xxxxxxx xxxxxx (X xxxx S) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x vzorku s xxxxxxxxx na 1 xx x dát xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 ml. Přidat 25 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxx rozmístil x xxxxxx xxxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Ponořit xxxxx do xxxxxx xxxxx xxxxx x xx dobu xxxxxxx xxx minut xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx hrudek. Xxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxxxx, xxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx lázeň na xxxx xxxx. Baňka xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx během xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx vyjmout xxxxx x xxxxx, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) x xxxxx xxxxxx protřepávat. Xxxx xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx XX (3.4) x xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxx zcela xxxx (což je xxxxxx), opakovat stanovení xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X x XX, xxxxxxxxx 10 ml.
Poté xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx optickou rotaci xxxxxxx x 200 xx trubici.
5.3 Stanovení xxxxxxx rotace (P’ xxxx S’) xxxxx xxxxxxxxxxx xx 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x vzorku x xxxxxxxxx na 1 xx, dát xx xx xxxxxxx xxxxx x objemu 100 xx x xxxxxx xxx 80 ml xxxxxxxx (3.5) (viz xxxxxxxx 7.2). Poté xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx hodinu xxx xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxxx doby xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx dobře xxxxxxx x ethanolem. Xxxxxxx xx xxxxx ethanolem (3.5), xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 ml, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx protřepat. Xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx vyjmou Xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxx lázně, přelít xxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxx xx 20 °C.
Poté xxxxxxx xx xxxxxxx Xxxxxxxxx roztoku X (3.3) a II (3.4), doplnit po xxxxx vodou, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx rotaci, jak xx uvedeno x xxxx 5.2 druhém x třetím xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Obsah škrobu (%) xx vypočítá xxxxx:
6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - X’) / [α]D20°
kde xx:
X = celková xxxxxxx xxxxxx, v xxxxxxxx xxxxxxxx.
X’ = optická xxxxxx xxxxx rozpustných xx 40 % xxxxxxxx, v xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : rýžový škrob
+ 195,4°: bramborový xxxxx
+ 184,6°: xxxxxxxxx xxxxx
+ 182,7°: pšeničný škrob
+ 181,5°: xxxxx škrob
+ 181,3°: xxxxxx xxxxx
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx a směsi xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Xxxxxx sacharimetrem
Procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]X20° · (2 X · 0,665) (X - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx rotace, xx xxxxxxxx sacharimetru
S’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx ve 40 % ethanolu, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx sacharózy v xxxxxxx xx 100 xx xxxx, která xx xxx tloušťce 200 xx xxxxxxxx xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx mění xxxxx xxxxxxxxxxxx:
16,29 x xxx xxxxxxxxxxx sacharimetry
26,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
20,00 x pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = specifická xxxxxxx xxxxxx čistého xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 0,4 absolutní xxxxxxx xxx xxxxx škrobu xxxxx než 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx škrobu xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx více xxx 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx uhličitan xxxxxxxx, xxxxxxxxxx musí xxx xxxx stanovením xxxxxxx rotace zničeny xx xxxxxxx příslušného xxxxxxxx zředěné kyseliny xxxxxx.
7.2 X případě xxxxxxxx x vysokým xxxxxxx laktózy, jako xx xxxxxx mléčné xxxxx nebo sušené xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx přidání 80 xx ethanolu (3.5) xxxxx: Připojit xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xx 30 minut xx xxxxx lázně x xxxxxxx 50 °X. Nechat vychladnout x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, jak xx xxxxxxx v xxxx 5.3.
2. STANOVENÍ XXXXXXX XXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxx stanovit xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx dusíku xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx metody.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx mokra. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x shromáždí xx v odměřeném xxxxxxxx xxxxxxxx sírové, xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx p.a.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx xxxxxxx CuO x.x. xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx CuSO4 · 5X2X p.a., xxxx xxxx nebo xxxx xxxxxxxx XxX x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx xxxxx x.x.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx x.x., d: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx sírová 0,5 N.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: rozpustit 300 xx methylčerveně xx 100 ml 95-96 % (V/V) xxxxxxxx.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Nasycený xxxxxx xxxxxx sodného x.x.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx thiosíranu xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx pemza, xxxxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx x zpopelněná.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx poznámky 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Mineralizace
Navážit 1 x vzorku x xxxxxxxxx na 1 mg a xxx ho xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 g xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 až 0,4 x xxxxx xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxx 0,6-0,7 x oxidu xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx, nejprve xxxxx x za xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x pěna xxxxxxx; poté xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Zabránit xxxxxxxx xxxx xxxxx x přilnutí xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xx xxxxxx xxxx a xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx bázi xxxx), xxxxxxxx xxx ještě xxxxx xxxxxx, poté xxxxxx vychladnout.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx; xxxxxx xxxxxxxxxxx; xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.3).
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) nebo 0,5 X (3.6) x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x ponořit xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 1 xx (viz xxxxxxxx 7.3). Xxxx xxxxxxx x kohoutem xxxxxxxx nalít xx xxxxx 100 ml 40 % xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx byl xxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxx xxxxx, xxxxxx do xxxxx xxxxxx xxx 10 xx roztoku xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx thiosíranu xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xx 30 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxx této xxxx xxxxxxxxxxxx xX výsledného xxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx, pokračovat x destilaci. Xxxxxxx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxxx xxxxxxx ukáže, xx xx xxxxxxxx neutrální. Xxxxx xxxxxxxxx xxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x pozorovat zbarvení. Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Titrace
Ve xxxxxx baňce xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx použité xxxxxxxx xxxxxx, dokud xx zbarvení xxxxxxx xx světle xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx dusík, se xxxxxxx slepý pokus (xxxxxxxxx a titrace), x xx xxx xxxxxx, který má xxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxx kontroly xxxxxxxxxx xxxxxx se provede xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx x.x. (b.t. 114 °C; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Xxxxxxx výsledků
Stanovit xxxxxxxx spotřebované xxxxxxxx xxxxxx, 1 ml xxxxxxxx sírové 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx dusíku xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx vyjádřit xxxx xxxxxxxx vzorku.
Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx než 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % a xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 absolutní xxxxxxx xxx obsah xxxxx než 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x destilací. X xxxxxxx případě se xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx ztrát.
7.2 U xxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxx xxxxxx může xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X, xxxxx xx být xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx, xxxxxx xx 10 xx 15 xx x xxxxxxx xxxxx xx 25 xx.
7.3 Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nálevku s xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx baňky xxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX CHLOROVODÍKOVOU
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx za stanovených xxxxxxxx. Metoda xx xxxxxxxxxx xxx všechna xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Suspenze xx filtruje a xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx proteinů.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina chlorovodíková, x: 1,125.
3.2 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 x/xx xxxxxxx; xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx v xxxxx 4 xxxx xxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx připravený xxxxxx pepsinu v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 j/l.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (např. xxxxxxx).
3.6 Všechna xxxxxxx xxxxxxx v xxxx 3 xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx hrubých xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Xxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 40 °X ± 1 °X.
4.2 Mineralizační x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx metody.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx roztoku (viz xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x xxxxxx s xxxxxxxxx na 1 xx x dát xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx. Xxxxxx 450 xx xxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °X. Xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxx, xx xx xX xxxxxxxx xxxxx xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx inkubátoru (4.1) x nechat xx xxx 48 xxxxx. Xxxxxxxxx xx 8, 24 x 32 xxxxxxxx. Xx 48 hodinách přidat 15 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), zchladit xx 20 °X, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx a xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 ml xxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx baňky xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Přidat xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xx xxxx. Pokud xx xxxxxxx pěna, xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx v xxxxxx xxxx, xxxxx se xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx ohřev x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx vody.
Když xx xxxxxx xxxx x bezbarvý (xxxxxxxxxxxx, xxxxx se použije xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx další xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, xxx xx uvedeno x xxxxxx pro stanovení xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxxxxxx xxxxx pokus za xxxxxxx xxxxxxxx postupu, xxx bez vzorku, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx kyseliny xxxxxx xxxxxxxxxxxx během xxxxxxx xxxxxx od xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorkem. 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx překročit:
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah nižší xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx.
7.2 Xxxxxxx x obsahu xxxx xxxxxx xxx 10 % xxxx xxx odtučněny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (b.v. 40 xx 60 °C).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje stanovit xxxxxxxx pepsinu xxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pepsinem x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové. Nehydrolyzovaná xxxxxx proteinů xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx filtrátu se xxxxx xxxxxxxx sodný x xxxxxxx Folin-Ciocalteu. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx 750 nm x odpovídající xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx pepsinu xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx činidlem Xxxxx-Xxxxxxxxx má xxxxxxxx xxxxxxx odpovídající xxxxxxx xxxxxxx jednoho μxxxx xxxxxxxx zbarveného stejným xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,025 X.
3.4 5 % xxxxxx (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Činidlo Folin-Ciocalteu. Xxx 100 g xxxxxxxxxx sodného (Na2WO4 · 2H2O), 25 x molybdenanu sodného (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 xx xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxx xxxx a normalizovaným xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx xxxxxxxx fosforečné (x: 1,71) x 100 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19), xxxxxxxx baňku xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx varu xx xxxx 10 xxxxx. Nechat vychladnout, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxx 175 x xxxxxx xxxxxxxx (Xx2XX4 · 2H2O), 50 xx vody x 1 xx xxxxx. Xxxxx po dobu 15 minut, xxx xx xxxxxxxxx přebytek xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx odměrné xxxxx o xxxxxx 1 x, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Před použitím xxxxxxxx 1 objem xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Xxxxxx hemoglobinu: Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx substrátu podle Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 354 xx xxxxxx [1] x dát xx xxxxx x xxxxxx 200 ml x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx několik xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx vakuum a xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx xx 100 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx 181,2 mg tyrosinu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxxx litru xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx). Odebrat 20 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Vodní xxxxx nastavená ultratermostatem xx 25 °C + 0,1 °C.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Stopky, přesnost: 1 xxxxxxx.
4.4 pH xxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Odpipetovat 2 xx roztoku x xxx xx do xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 ml x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). xX xxxxxxxxxxxx xX xxxxxx musí xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx do xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Hydrolýza
Odpipetovat 5,0 xx roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx pepsinu získaného xxxxx xxxx 5.1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx pohyby xxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx 25 °X přesně xx xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pepsinu (xxxx x xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx). Xxxx xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat xxxx xxxxx filtr.
5.3 Xxxxx zbarvení x xxxxxx xxxxxxx hustoty
Odpipetovat 5,0 xx filtrátu, xxx xx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx zředěného xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 xx 10 xxxxxxxx stanovit optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 750 nm x xxxxxxxx o xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxx x xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx pokus:
Odpipetovat 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, zahřát ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxx na 25 °C, xxxxxxxxxxxxx x xxxx přidat 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx zkumavku přesně 10 xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx x postupu xxxxxxxx x xxxx 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, a 5,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tyrosinu, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μmolu xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx roztokem xxx tyrosinu. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx zředěného xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xxxxxx optickou xxxxxxx xxx je xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx 5.3. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx tyrosinu.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx hustotě xxxxxxxxxx roztoku x xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxx x μmolech xxxxxxxx xx 1 xx x xx xxxxx xxxxxx xxx 25 °X xx vypočítá xxxxx vzorce:
Jednotky xx xx (j/mg) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx podle bodu 5.2.
7. Poznámky
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx, musí xxx xxxxxx, xxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Dvě xxxxxxxx xx xx xxxxxxx touto xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Ansonovovým milijednotkám/mg (μxxxx tyrosinu/mg min. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 xxxxxxxxxx jednotek/g (μxxxx xxxxxxxx/x xx 10 xxx. při 35,5 °X).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx gossypolu x xxxxxxxx příbuzné xxxxx x xxxxxxxxxxxx semenech, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx směsích, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu xx 20 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 3-amino-1-propanolu, x xx buď xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx je xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx přeměněn xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx hustota je xxxxxx xxx 440 xx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx a hexanu: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx isopropanolu x.x. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx n-hexanu.
3.2 Xxxxxxxxxxxx X: xx odměrné xxxxx x xxxxxx 1 x xxxxx xxx 500 xx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx xxxxxx kyseliny xxxxxx x 50 xx xxxx. Xxxxxxx xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx X: xxxxxxxxxxx xx odměrné xxxxx o objemu 100 xx 2 xx 3-amino-1-propanolu a 10 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou teplotu x doplnit po xxxxx N,N-dimethylformamidem. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.4 Anilin x.x.: xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx přes xxxxxxx xxxxx x vyloučením xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx skladuje x xxxxxxxxxx několik měsíců x zazátkované xxxxx x hnědého xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 ml xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Rozpustit x xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x objemu 250 ml 50 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx roztoku xx 0,02 xx/xx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Standardní roztok xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Rozpustit x xxxxxxx xx xxxxx rozpouštědlem X (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x tomto xxxxxxx xx 0,5 mg/ml.
Pokud xxxx standardní xxxxxxx xxxxxxxxx X x X xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, jejich xxxxxxxxxxx xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx předpokládaném xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xx výhodné xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx zkušebního vzorku x relativně velkou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx bylo možné xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu x xxxxxxxxxxxx semenech, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 x; xxx xxxxx xxxxx xx xxxx být 5 x. Ve xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 10 xx filtrátu; xxxx xx obsahovat 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxx 0,5 a 5 x, xxx xxxxxxxxx část 2 xx xxxxxxxx obsahovala 40 xx 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu
Dát xxxxxxxx vzorek xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxx dno je xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx pipety přidat 50 xx rozpouštědla X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Filtrovat přes xxxxx xxxxx x xxxxxxxx filtrát x xxxx baňce se xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx zakrýt nálevku x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x X) x xxxxxx 25 ml xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Případně xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) na 10 xx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx baňku (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx pro slepý xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 10 ml xxxxxxxxxxxx X (3.2) xx xxxx xxxxxx odměrných xxxxx (X x X) x objemu 25 xx. Xxxxxxx xx xxxxx baňku (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro měření xxxxxxx xxx slepý xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (X) x (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx xxxxx hodinu.
Stanovit xxxxxxxxxxxxxxxxx při 440 xx a ve xxxxxxxxxx kyvetách x xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx hustotu xxxxxxx xxx slepý pokus (X) porovnáním s xxxxxxxxxxx roztokem (X) x optickou hustotu xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx optickou xxxxxxx roztoku xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx hustota). X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx vzorek xxxxxxxxxx 1 xx 5 xx gossypolu do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml x přidat 10 xx rozpouštědla X (3.3). Současně připravit xxxxx xxxxx x xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx xxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Zahřívat xxx xxxxx 30 xxxxx nad vroucí xxxxx lázní. Zchladit xx xxxxxxxxx teplotu x xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx 10 xx 15 xxxxx, poté filtrovat x xxxxxxxx filtráty x xxxxx xx xxxxxxxxxx hrdlem.
Pomocí xxxxxx xxxxxx 2 ml xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 25 xx a 2 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x objemu 25 xx. Doplnit xx 25 xx xxxxx jedné xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx referenční xxxxxxx.
Xxxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4) xx dvou xxxxxx baněk. Zahřívat 30 minut nad xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx vytvořilo xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2. X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, jak je xxxxxxx v xxxx 6.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (6.1), xxxx xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Na xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx podmínek xx specifická optická xxxxxxx tato:
volný xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
celkový xxxxxxxx: X 1% / 1xx = 600
Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx se xxxxxxxx takto:
gossypol %: X · 1&xxxx;250 / E1%1cm · · p · x
xxx:
X = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xx uvedeno x bodě 5.2
x = zkušební xxxxxx x x
x = xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
6.2.1 Xxxxx gossypol
Připravit dvě xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 xx. X xxxxx série xxxxxx pipetou 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) na 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, včetně slepého xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx xxxxx baňky xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx zbarvení. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xx podmínek xxxxxxxxx v bodě 5.2 stanovit optickou xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx porovnáním x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.2.2 Celkový gossypol
Připravit 6 odměrných xxxxx x xxxxxx 50 xx. Do první xxxxx xxxxxx pipetou 10 ml xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu X (3.6). Xxxxxxx xxxxx každé xxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx x promíchat.
Přidat xxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx o 6 xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 ml. Xxxxxxx xxxxx baněk xxxxx série xx 25 ml směsí x isopropanolu x xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), homogenizovat x xxxxxx stát xxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xx xxxxxxxx uvedených v xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx standardní xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x odpovídajícími xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx křivku uvedením xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μg).
6.3 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 ppm xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx než 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx obsah xxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx: 17,7 % xxxxxx).
PŘÍLOHA XX
1. XXXXXXXXX X IDENTIFIKACE XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 0,1 ppm xxxxxxxxxx, x koncentrátech x xxxxxxxxx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx směsí xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x porovnání x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx Xx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, x xx xxx xxxxxxxxxxxx x XX xxxxxx (vysoký xxxxx antibiotik), xxxx xxxxxxxxxxxxx xx agarovém xxxxx xxxxxxxxxxx B. xxxxxx.
3. Činidla
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx kyseliny xxxxxxxxx x.x. |
10,256 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Na2HPO4.2H2O x.x. |
7,45 x |
|
Xxxxxx p.a. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx pufr, pH 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx X: směs xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx XX xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx chroroformu/α-pikolinu: 20/10/3 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před použitím |
|
3.5 Xxxx čistého methanolu/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 98/2 objemově.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, d: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx, tetracyklin, jejichž xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
3.9 Mikroorganismus: X. xxxxxx ATCC x. 11778
Xxxxxxxxx rodičovských xxxxx, příprava xxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx x tetracyklinu xxxxxx xx xxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x 5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Zařízení xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxx 25 xx). Xxxxxxxx a Xxxxxxx papír (2440X xxxx 2043X) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Odstředivka
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 XX lampa xxx stanovení xxxxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx xxx 20 x 30 xx pro xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Zásobní xxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, jejichž xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Referenční roztoky xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx pufrem (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Referenční xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) fosfátovým xxxxxx (3.2) x xxxxx získat xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx antibiotika xxxxx xxx 10 ppm, xx xxxxx xxxxxx xxx homogenizovaný vzorek, xxxx xxxxxxxxxxx frakci xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xx nacházejí xxxxxxxxx v této xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x použít ho xxxxx xxxx ho xxxxxxxx xxxxxx směsí (3.5) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika xxx 100 μx xx 1 xx (6.1) a 5 μx na 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xx pufračního xxxxxxx, pH 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx suchého xxxxxxxxxxx xxxxxx. Poté xxxxxxx xx xxxxx 0,01 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) a extraktu (6.1 x 6.2). Xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx mít xxxxx xxxxxxxx vlhkost; pokud xx xx xxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Použít xxxxxx X (3.3) xxx stanovení bioautografií x xxxxxx II (3.4) pro xxxxxxxxx XX xxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx dosáhne xxxxx 15 až 20 cm (asi 1 xxxxxx 30 xxxxx), xxxxxxxx chromatografii x xxxxxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx UV xxxxxxx
Xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 1 μx/xx2, xx xxxxx xx ošetření xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx ozářením pod XX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), které xx předem xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx skleněné xxxxx (4.5) x xxxxxxx xxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxx kontaktu odejmout xxxxx x položit xx xx xxxxx xxxxxx x kultivačním xxxxx, kde zůstane xxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx světlými xxxxxxxxxxx zónami x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx.
X xxxxxx chromatogramu xx xx xxxxxxxx odpaří xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx Xx tetracyklinových antibiotik xxxx xxxxxxx xxx. Xxxx hodnoty xx xxxxx mírně xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (TC) |
0,40 |
|
Oxytetracyklin (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "xxx" xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx sloučenin.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX
X. DIFÚZÍ XX XXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx chlortetracyklin (XXX), oxytetracyklin (XXX) x tetracyklin (XX) x xxxxxxxx, koncentrátech x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx jejich xxxxxxxxx xx 5 xxx. Xxxxxx xxxxx xxx 5 ppm xxxxx xxx určeny xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Princip
U xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx 50 xxx se vzorek xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxxx xxx 50 ppm xx vzorek xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, vody x xxxxxxxx chlorovodíkové xxx stanovení CTC x xxxxx xxxxxxxxx x kyseliny chlorovodíkové xxx xxxxxxxxx XXX x XX.
Xxxxxxxx xx xxxx zředí x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxxx CTC, XXX xxxx XX xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. cereus. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus ATCC x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat B. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx modře a xxxxxxxx xxxxxx. Inkubovat xxxx xxx při xxx 30 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx xx šikmý agar.
3.2 Xxxxxxxx suspenze xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx fyziologického xxxxxxx xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx borité, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 xx ethanolu (4.6) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxx skladovat xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x bazálním xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, které xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotiky největší xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zóny. Xxxx xxxxxxxx je xxxxxxx 0,2 a 0,3 ml na 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 g |
|
Kvasnicový xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 ml |
|
Fosfátový pufr, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx kyseliny xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx methylenové xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx pufr, pH 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 g |
|
Destilovaná voda xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Fosfátový xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: připravit xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xX 4,5 xx xxxxxxx xxxxxxxx sírové xxx 2 X.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 98/2 objemově.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx xx vyjádřena x chlorovodíku.
5. Standardní xxxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx látek (4.11) x xx použití xxxxxxxx chlorovodíkové (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx. Xxxxx roztok xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx. Xxxxxxx xx xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), do xxxxxxx xxxx xxxxxxx 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Xxxx připravit xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, standardní xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx a xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,0 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,5 |
μg/ml |
|
S2 |
0,25 |
μg/ml |
|
S1 |
0,125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx xxxxx xxxx nižní xxx 50 xxx
Xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx formamid (4.8) v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Poté xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3) podle odkazů x tabulce x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8. Koncentrace formamidu x xxxxx roztoku xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx dekantovat xxxxxxx x cílem xxxxxx čirý roztok. Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, U2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx použití fosfátového xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxx |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Xxxxxxxx vzorek x g |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
ml xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx fosfátového xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
xxx. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx X8 v μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx 2 xx 10 x 20xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 minut třepačkou. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xX xxxxx xxx 3; pokud xx to xxxxx, xxxxxxx xX xx 3 (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx pH xx 5,5 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně (xxxxxx xx ze xxxxx na xxxxxx). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, pH 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), x cílem xxxxxx koncentraci X8 (xxx 6.1).
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx xx uvedeno x xxxx 6.2.1 xxx, xx se xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze na xxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x čtyř koncentrací xxxxxxxx (U8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx.
Xx tímto xxxxxx xxxxxx misky x xxxxxx velikosti, xxx bylo xxxxx xxxxxx x agarovém xxxxx xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx asi 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx o průměru 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 ml, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx čtyřikrát x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr inhibičních xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx zón. Xxxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx x extraktu. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx křivky xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx relativní xxxxxxxx se vypočítá xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - S1 -X2 -X4 -S8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + S8 - X1 -X2 -X1 -X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), oxytetracyklin (OTC) x tetracyklin (XX) xxx koncentracích vyšších xxx 1 g/kg, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx by xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx stanovení xxxxxx XXX xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx acetonu, xxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx xxxxxx OTC x TC xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx poté xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx účinek xx xxxxxxx měřením světelné xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx bylo xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx kterého xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx se přidá 1,5 až 3 % xxxxx (xxxxx xxxxxxx). Inkubovat xxxx xxx při 37 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx očkovací xxxxx
24 xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx přes xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx kulturu xxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxx v xxx 2 xx bazálního xxxxx (4.1) x xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx 100 xx stejného xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat xx vodní xxxxx xxx 37 °C xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx fáze (1x30 xx 2x).
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [7]
|
Pepton |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Chlorid sodný |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,32 g |
|
Hydrofosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
xX po xxxxxxxxxxx: 6,8 až 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný KH2PO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.4 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Asi 10 % (x/X) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx látky: XXX, XXX, XX, xxxxxxx aktivita xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztok
Na základě xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x za použití xxxxxxxx chlorovodíkové (4.3) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 400 xx 500 μx XXX-XXX, XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Tento xxxxxx xx skladuje x xxxxxxxxxx jeden xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 nebo 250 xx xxx 1 až 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 4,5 (4.2). Homogenizovat x xxxxxx stát.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 g xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx fosfátovým pufrem, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
7. Metoda stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x extraktu
Zředit standardní xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx každé stanovení xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, ne xxxxx xx xxxxxxxx interpolace xxxxxxx dvou xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, které xx mohou xxxxx xxxxxxxxx xx laboratoře. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx CTC-HCL na 1 ml. Poté xxxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx ředění xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.1) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,12 μx XXX-XXX. Dát 1 ml xxxxxx xxxxxxx do xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) xx dvou xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,6 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxxx určených pro xxxxxxxxx, 7 ředění, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx pracovního roztoku |
ml xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.2) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxx 1 xx tohoto roztoku xx xxxx xxxxxxxx x 0,5 ml (= 0,24 μx) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx jiných zkumavek xx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) očkovací xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx na xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx propustnost v 5 cm xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxx xxx nastavení xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bazálního xxxxx (4.1).
7.3 Očkování
Dát xx xxxxx xxxxxxxx (7.1.1 nebo 7.1.2) 9 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx, ale nezbytně xx xxxxxxxxx prostředí.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxx teplota xx xxxxxxxx xxxxxxx xx 37 °X + 0,1 °C. Xxxxxxxxx xxxx xx xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx gradient je xxxxxx xxx přesná xxxxxx (xxxxxx 2x30 xx 3h). Xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx xxxxxxx formaldehydu (4.6) xx xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx xxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, přičemž xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxx). Z xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx různých xxxxxxxx xx doporučuje xxxxxx xxxxxxx 2 cm x xxxxxx 5 xx kyvety.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kalibrační křivku xx milimetrovém papíře xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX OLEANDOMYCINU
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx, x xx xxxxxxx x přítomnosti xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Princip
Vzorek se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (hydroximethyl) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x jeho antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx difúze xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx B. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: B. cereus, X 250 XX [8] (xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. cereus xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx odebraným x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) x přidat 100 μx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx. Xxxxxxxxx přes xxx xxx xxx 30 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx na xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx xxx 3 xx fyziologického xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 až 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, poté smýt xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) poté, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx deskách xx xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.2) určit xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxxxx xxxxxx získat xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx největší xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční zóny. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,1 x 0,2 ml xx 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx při 60 °X.
4. Kultivační média x xxxxxxx
4.1 Xxxxxx xxx udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,5. |
4.2 Bazální xxxxxx xxx stanovení [10]
Médium (4.1) xxxxxxxx xx xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (X/X) ethanol.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (m/V) xxxxxx xxxx (hydroxymethyl) xxxxxxxxxxx x.x.
4.7 Extrakční xxxxxx
|
Xxxxx xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) aminometan x.x. |
0,5 x |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx látku (4.8) v 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x zředit roztokem (4.6) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 μx/xx.
Xx základě xxxxxx zásobního roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (4.6) standardní xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 0,1 μg xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx roztoku (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx na předpokládaném xxxxxx xxxxxxxxxxxxx ve xxxxxx přidat do xxxxxxxxxx vzorku o xxxxxxxxx 2 až 10 g 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou.
Odstředit, odebrat xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 ml (= X8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx roztoku (4.6).
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X suspenzí xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx extraktu (U8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x takové xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx udělat v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 děr x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x plochých skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx odměřená xxxxxxxx xxxxxxx antibiotika xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx průměru xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x každou koncentrací, xxx každé stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx během 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx pomocí xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 - X2 - X4 - S8) · 0,602 / X4 + X8 + S4 + X8 - X1 - U2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x krmivech, koncentrátech x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztokem x pH 8, xxxxxxxxxxx na 80 °X, x poté xx extrahuje xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx a xxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx naočkovaném Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Průměr xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx lutea XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Sarcina xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze
Smýt xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Naočkovat tuto xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxxxxxx xx xX 7,0. Inkubovat 24 xxxxx xxx 35 °X, poté xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxx získat 75 % xxxxxxxxx propustnost xxx 650 xx.
Xxxxx xx tato xxxxxxxx xxxxxxxx x chladničce, xxxx trvanlivost xx xxxxx týden.
Předběžnými xxxxx xx deskách x xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx média a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Kvasnicový xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 ml |
Za xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx7,0 a xx xxxxxx xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Xxxx fosfátového xxxxx (4.2)/čistý xxxxxxxx: 60/40 objemově.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx o xxxxx aktivitě.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) 3 hodiny xxx 60 °X xx xxxxxxx xxxxxxx (5 xx rtuti). Xxxxxxx 10 až 50 xx do xxxxxxx xxxxx, rozpustit x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxx xxxxxx fosfátovým xxxxxx, xX 7 (4.3) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx rozředěním xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok S8 xxxxxxxxxx 2 μg xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Extrakce
Pro xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x zkušebního vzorku; xxx premixy a xxxxxx 20 g xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxxxxxxxxxxx 2 xxxxxx (kuchyňský xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 minut, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx alikvotní xxxx xxxxx (4.7) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx použití xxxxx (4.7).
Xxx obsahy xxxxx xxx 10 xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 35 °X x xxxxxxxxx xxxxxxxx ve 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx na xX 8 xxx 48 až 50 °X suspenzí xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx v miskách xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx koncentrace standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx účelem xxxxxx xxxxx o takové xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx udělat x xxxxxxxx médiu nejméně 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx 2 mm. Upřednostňuje xx xxxxxxx misek xxxxxxxxxxxxx xx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx a x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx antibiotika xxxx 0,10 x 0,15 xx, v závislosti xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxx xxxx xxx 35 až 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx relativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 - S2 - X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + S4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
5. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, koncentrátech x premixech. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Xxxxx 80". Xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx a xxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx měřením xxxxxx virginiamycinu na xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón za xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx asi 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce x přeočkovat každých 14 xxx xx xxxxx agar.
3.2. Příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx obsahující 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx smýt xxxxxxxx xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Homogenizovat x zředit tuto xxxxxxxx s cílem xxxxxx xxx 75 % světelnou propustnost xxx 650 xx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, její xxxxxxxxxxx xx xxxxx týden.
Předběžnými xxxxx na xxxxxxx x bazálním médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx množství očkovací xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx pro různé xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx zřetelné inhibiční xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Kultivační xxxxx x činidla
4.1 Xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 ml |
Před použitím xxxxxxx pH na 6,5.
4.2 Fosfátový xxxx, xX 6
|
Dihydrogenfosforečnan draselný XX2XX4 p.a. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx voda xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.4 Xxxxx methanol.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2)/čistý xxxxxxxx: 80/20 objemově.
4.6 0,5 % methanolového xxxxxxx "Tween 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxx x známé xxxxxxxx.
5. Standardní roztoky
Připravit xxxxxxxxxxx xxxxxx standardní xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xx xxxxxxx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 obsahující 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml. Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1+) xx xxxxxxx xxxxx (4.5) tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Extrakce
6.1 Xxxxxxx x obsahu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 ppm
Odebrat 10 xx 20 x xxxxxxxxxx vzorku, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) a xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, odebrat 20 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 xx xxxx xxxx xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx x obsahu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 ppm
Odebrat 1 xx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx zředit směsí (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Poté xxxxxxxxx koncentrace U4, X2 x X1, xxx xx xxxxxxx x bodě 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxx 48 xx 50 °X xxxxxxxx bakterií (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, U4, X2, U1).Každá miska xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx tímto xxxxxx xxxxxx xxxxx x takové velikosti, xxx bylo xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx se xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x tloušťce xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx plastovým xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx difúzi xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxx xxxxxxxxx zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx misky xxxx noc xxx 35 až 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Zaznamenat měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmu koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 -S1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx aktivita x xxxxxxxxx aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] Xxxx amido xxxxxx x xxxxxxxx inhibičních xxx xxxxxxxxxxxx roztoků (xxxxx kruhy).
[6] Xxxxx xxxx xxxxxxxxx x Xxxxx xxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx S. xxxxxx XXXX 6538 X.
[7] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[8] Kmen xxxxxxxxx x Kielu xxxxx XXXX.
[9] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[11] Xxxx xxx použito xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Může být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.