Směrnice Xxxxxx 98/64/XX
xx xxx 3. xxxx 1998,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxxxxx aminokyselin, xxxx x olachindoxu x krmivech a xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx 71/393/XXX
(Xxxx s xxxxxxxx xxx EHP)
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu o xxxxxxxx Evropského společenství,
s xxxxxxx xx směrnici Xxxx 70/373/EHS xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx odběru xxxxxx x analytických metod Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxx x Švédska, x xxxxxxx na xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxx, xx směrnice 70/373/XXX xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx kontroly, xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x správních xxxxxxxx xxxxxxxxxx se jejich xxxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx ve Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, že xxxxxxxx Rady 79/373/XXX xx xxx 2. xxxxx 1979 x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxx [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxx směrnicí Xxxxxx 97/47/XX [3], x xxxxxxxx Rady 93/74/XXX ze xxx 13. září 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx xx zvláštním xxxxxx xxxxxx [4], naposledy xxxxxxxxx směrnicí 96/25/XX [5], xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxx musí xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Rady 70/524/XXX xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 x doplňkových látkách x xxxxxxxx [6], xxxxxxxxx pozměněná směrnicí Xxxxxx 98/19/XX [7], xxxxxxx, xx obsah xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx přidána xx xxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxx xxxxxxxx Komise 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971, xxxxxx xx xxxxxxx analytické xxxxxx Společenství xxx xxxxxx kontrolu krmiv [8], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxx Komise 84/4/EHS [9], stanoví xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx; xx xx xxxxxx uvedené xxxxxx upravit;
vzhledem x xxxx, xx musí xxx xxxxxxxxx analytické xxxxxx Společenství xxx xxxxxxxx těchto xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx pro xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx úřední kontrolu xxxxxx xxxxxxxxxxxx, tuku x xxxxxx olachindoxu x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx za použití xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
X příloze xxxxxxxx Komise 71/393/EHS xx xxx "4. Xxxxxxxxx obsahu tuku" xxxxxxxxx xxxxx X xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx právní x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx dosažení xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxxxx 1998. Xxxxxxx x nich xxxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. xxxxx 1999.
Tato opatření xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx odkaz xx tuto xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx členské xxxxx.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxx v oblasti xxxxxxxxxx xxxx směrnice.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství.
Xxxxxx 5
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 3. září 1998.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[3] Úř. xxxx. X 211, 5.8.1977, x. 45.
[4] Xx. věst. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[5] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
[6] Xx. věst. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[7] Xx. xxxx. X 96, 28.3.1998, x. 39.
[8] Xx. xxxx. X 279, 2.12.1971, x. 7.
[9] Úř. věst. X 15, 18.1.1984, x. 28.
PŘÍLOHA
ČÁST X
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx) a xxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx a xxxxx) aminokyselin v xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx aminokyselin. Xxxxxx xx použitelná xxx xxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxx(x)xx, xxxxxxxxx, xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, arginin, xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxx, prolin, xxxxx, tyrosin x xxxxx.
Xxxx metoda xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx také x aminokyselin xxxxxxxxxx xxxx formami X x X. Není xxxxxxxxxx pro stanovení xxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx aminokyselin.
2. Princip
2.1 Xxxxx aminokyseliny
Volné aminokyseliny xx extrahují xxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou. Současně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x odstraňují xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xx xX 2,20. Xxxxxxxxxxxxx xx separují xxxxxxxxxxxxxx chromatografií x xxxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 570 nm.
2.2 Vázané xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx aminokyselinách. Xxxx(x)xx a xxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx oxidovány xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xx methioninsulfon. Tyrosin xx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx v xxxxxxxxxx nebo x xxxxxxxxxxxx vzorku.
Oxidace xx xxxxxxx při 0 xX xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x fenolu. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx dvojsíranem xxxxxx. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (x = 6 xxx/x) xx 23 xxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxx xx xX 2,20. Aminokyseliny xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx se xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx detekcí xxx 570 nm (440 nm pro xxxxxx).
3. Xxxxxxx
Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx destilovaná xxxx nebo xxxx xxxxxxx xxxxxxx (vodivost &xx; 10 μX).
3.1 xxxxxxx vodíku, x = 30 %
3.2 xxxxxxxx xxxxxxxx, w = 98–100 %
3.3 xxxxx
3.4 dvojsíran xxxxx
3.5 xxxxxxxx sodný
3.6 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, dihydrát
3.7 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx o xxxxxxx xxxxxxxxx 1,18 x/xx
3.8 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx
3.9 2,2-xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx)
3.10 xxxxxxx xxxxx
3.11 xxxxxxxxx
3.12 petrolether, xxx varu 40–60 °X
3.13 xxxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx
3.14 xxxxx – xxxx (&xx; 10 xxx xxxxxxx)
3.15 1-oktanol
3.16 xxxxxxxxxxxxx
3.16.1 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 1; xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xx vakuu xxx X2X5 nebo X2XX4 týden xxxx xxxxxxxx
3.16.2 kyselina cysteová
3.16.3 xxxxxxxxxxxxxxx
3.17 xxxxxxxx sodný, xxxxxx c = 7,5 xxx/x:
300 x XxXX (3.5) xx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxx do 1 xxxxx.
3.18 hydroxid xxxxx, xxxxxx x = 1 xxx/x:
40 x XxXX (3.5) xx xxxxxxxx ve xxxx a doplní xx 1 xxxxx.
3.19 xxxxxx xxxxxxxx mravenčí x xxxxxx:
Xxxxxx xx 889 g kyseliny xxxxxxxx (3.2) xx 111 x xxxx x xxxxx se 4,73 x xxxxxx (3.3).
3.20 xxxxxxxxxxxx xxxx, x = 6 xxx XXx/x x xxxxxxxxx 1 g xxxxxx/x:
X 492 ml XXx (3.7) se xxxxx 1 x xxxxxx (3.3) x xxxxxx se xxxxx xx 1 xxxxx.
3.21 xxxxxxxxx xxxx, x = 6 xxx XXx/x x xxxxxxxxx 2% thiodiglykolu:
8,2 xx XXx (3.7) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 900 xx xxxx, xxxxx xx 20 xx xxxxxxxxxxxxx (3.9) a xxxxxx xxxxx na 1 xxxx (3.7 x 3.9 se xxxxx smíchat xxxxx).
3.22 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, β = 6 %:
60 x kyseliny 5-sulfosalicylové (3.6) se xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxx vodou na 1 litr.
3.23 xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxx xxxxxxxxxxx – xxxxx):
X xxxx xxxxxxx xx smíchá 0,5 xx peroxidu xxxxxx (3.1) x 4,5 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx (3.19); xxxxxxx xx x xxxxx 1 xxxxxx xxx 20–30 °C, aby xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, před přidáním xx xxxxxx se xxxx xxxxxxx v xxxxx s xxxxxxx xxxxx (15 xxxxx).
Xxxxx:
Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx x xxxxxxxx ochranný oděv.
3.24 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x = 0,2 xxx Na+/l, pH 2,20:
X přibližně 800 xx vody se xxxxxxxx 19,61 g xxxxxxxxx sodného (3,8), 5 ml xxxxxxxxxxxxx (3.9), 1 x xxxxxx (3.3) x 16,50 xx HCl (3.7). pH xx xxxxxx xx 2,20. Xxxxxx se xxxxx xx xxxxx 1 xxxxx.
3.25 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (4.9)
3.26 xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (4.9)
3.27 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx nutno xxxxxxxxxx při teplotě xxx 5 °X.
3.27.1 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.16.1), x = 2,5 μxxx/xx pro xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxx obdržet i xxxxxxxx připravené.
3.27.2 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx, x = 1,25 μxxx/xx
0,2115 x xxxxxxxx xxxxxxxx (3.16.2) x 0,2265 x xxxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx (3.16.3) v citronanovém xxxxxxxx xxxxxxx (3.24) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx a doplní xx xx značku xxxxxxxxxxxx tlumivým xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx xxx 5 °X nejdéle 12 xxxxxx. Tento xxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok (3.27.1) obsahuje xxxxxxxx xxxxxxxxx a methioninsulfon.
3.27.3 xxxxxxx standardní základní xxxxxx xxxxxxxxx standardu, xxxx. xxxxxxxxxx, c = 20 μxxx/xx
0,6560 x norleucinu (3.13) xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx tlumivém xxxxxxx (3.24) x xxxxxxx xxxxx xx 250 xx x xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx tlumivým xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °X nejdéle 6 xxxxxx.
3.27.4 xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x hydrolyzáty, x = 5 xxxx/50 μx xxxxxxxx xxxxxxxx x methioninsulfonu x x = 10 nmol/50 μx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
Xx 100 xx xxxxxxx xx rozpustí 2,2 x chloridu sodného (3.10) v 30 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24). Xxxxxxx xx 4,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.27.1), 4,00 xx zásobního xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx cysteové x xxxxxxxxxxxxxxxx (3.27.2) a 0,50 xx zásobního xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3), xxxxx xx xxxxxxx. xX xx upraví xx 2,20 xxxxxxxxxx xxxxxx (3.18).
Xxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx 50 ml odměrné xxxxx, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24) a xxxxxxx xx.
Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °X nejdéle 3 xxxxxx.
Xxx také xxxxxxxx 9.1.
3.27.5 xxxxxxxxxx xxxxxx standardních xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.3.1 x xxx xxxxxxxx (5.2). Xxxxxxxxxx roztok xx xxxxxxxxxx xxxxx 3.27.4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 3 měsíce.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 xxxxx s xxxxxxx xxxx x xxxxxx 100 nebo 250 xx opatřená xxxxxxx xxxxxxxxx
4.2 nádoba z xxxxxxxxxxxxxxxx skla x xxxxxx 100 xx xx šroubovým xxxxxxxx x gumovým xxxx xxxxxxxxxx těsněním (např. Xxxxx, Xxxxxx) pro xxxxxxx x xxxxxxx
4.3 xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x tepelnou xxxxxxxx s přesností xxxxx než ±2 °X
4.4 xX metr (xxx xxxxxxxxx místa)
4.5 xxxxxxxxxx xxxxx (0,2 μx)
4.6 odstředivka
4.7 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.8 mechanická xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.9 analyzátor xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XXXX x iontoměničovou xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x fotometrickým detektorem.
Kolona xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pryskyřicí, která xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx jiných xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx látek. Průtok xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stálostí průtoku ± 0,5 % xx xxxx zahrnující xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx je možno xxxxxx x xxxxxxx, xx hydrolyzát xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sodíkových iontů x = 0,8 xxx/x x xxxxxxxx xxxxxxxxx mravenčí xxxxxxxx x xxxxxxxxxx kroku. Xxxx xxxxxxxxxxx nezaručují xxxxxxxxxxx separaci xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, obsahuje-li hydrolyzát xxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselinu x/xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxx případě xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxx 5 xx. Xxxxxxxx se má xxxxxxxx xx vakuu xxx xxxxxxx xxxxxxx 40 °C.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx tak, xxx xxxxxx xxxxx x xxx 0,5 xx. Xxxxxx s xxxxxxx vlhkostí se xxxx před xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °C xxxx xxx xxxxxxxx. Xxxxxx x vysokým obsahem xxxx se xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.12).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx x x premixech
Do xxxxxxx baňky xx xxxxxx xxxxxxxxx množství (1–5 x) upraveného xxxxxx (5.1) s xxxxxxxxx na 0,2 xx a přidá xx 100,0 xx xxxxxxxxx směsi (3.21). Xxxxx xx xxxxx 60 minut na xxxxxxxxxx třepačce xxxx xxxxx xx magnetické xxxxxxxx (4.8). Xx xxxxxxx sedimentu se xxxxxxxxxx 10,0 ml xxxxxxxxxxxx do kádinky x obsahu 100 xx.
Xx xxxxxxx xxxxxxx xx přidá 50 xx roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x míchání xx magnetické míchačce xxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx sraženina. 10,0 xx odstředěného roztoku xx xxxxxxx xx xxxxxxx o obsahu 100 xx, xX xx upraví xx 2,20 xxxxxx roztoku xxxxxxxxx sodného (3.18), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx pomocí citronanového xxxxxxxxx roztoku (3.24) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx velikosti x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24).
Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx standard, xxxxx xx 1,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3) xx každých 100 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx tlumivým xxxxxxxx (3.24).
Xxxx xx pokračuje xxxxx bodu 5.4 – chromatografie.
Nejsou-li xxxxxxxx xxxxxxxxxx týž xxx, xxxxxxxxxxx xx při xxxxxxx pod 5 °X.
5.3 Stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
5.3.1 oxidace
0,1 až 1 x xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) se xxxxxx s xxxxxxxxx 0,2 xx:
- xx xxxxx x kulatým xxxx o xxxxxx 100 ml (4.1) xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (5.3.2.3) xxxx
- do xxxxx x kulatým xxxx o xxxxxx 250 xx (4.1), xxxxxxxx-xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx sodíku xxxx
- xx xxxxxx o xxxxxx 100 ml xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.2) (pro uzavřenou xxxxxxxxx 5.3.2.4).
Xxxxxxxx část xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx 10 xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 xx.
Xxxxx/xxxxxx xx xxxxxx do xxxxx x xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx 0 °X, xxxxx xx xxxxx 5 xx xxxxxxxx xxxxx (3.23) x promíchá xx xxxxxxxxx lžící xx xxxxxxxx špičkou. Xxxxx/xxxxxx xx xxxxxx x xx lžící vzduchotěsnou xxxxx a xxxxx xx i x xxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 0 °X x xxxxxxx xx xxx 16 xxxxx. Xx 16 hodinách xx xxxxx x xxxxxxxxxx x přebytečné xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx přidáním 0,84 x xxxxxxxxxx sodného (3.4).
Xxxx se xxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1.
5.3.2 xxxxxxxxx
5.3.2.1 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků
K xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.3.1 xx xxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxx směsi (3.20) xxx, aby xxxxxxx xxxxx vzorek xx xxxxxxx nádoby ani xx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx postupu hydrolýzy xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4.
5.3.2.2 xxxxxxxxx neoxidovaných xxxxxx
Xx xxxxx s xxxxxxx xxxx o obsahu 100 xx xxxx 250 xx (4.1) xxxx xx xxxxxx x xxxxxx100 ml xx šroubovacím xxxxxxxx (4.2) xx xxxxxx 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) x xxxxxxxxx xx 0,2 xx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx měla xxx xxxxx dusíku asi 10 xx. Opatrně xx xxxxx 25 xx hydrolyzační směsi (3.20) a xxxxxx xx xx vzorkem. Xxxx se xxxxxxxxx xxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx xxxxx 5.3.2.4.
5.3.2.3 xxxxxxxx xxxxxxxxx
Xx směsi x xxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2) se xxxxxxx 3 xxxxxxxx xxxxxxx x směs xx xxxxx xx xxxxxxx xxxx pod xxxxxxx xxxxxxxxx na dobu 23 hodin. Xx xxxxxxxx hydrolýzy xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 5 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztoku (3.24). Xxxxx xx odpojí x xxxxxxx xx x xxxxxx lázni. Xxxx xx postupuje xxxxx 5.3.3.
5.3.2.4 xxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxx podle 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2 xx xxxxxx do xxxxxxx (4.3) xxx 110 °X. Xxx xx xxxxx první hodiny xxxxxxxxx xxxxxxxxx tlaku (x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx) a xxxxxxx k výbuchu, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx. Po xxxxxxxx xxxxx hodiny se xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx baňka xx xxxxxxx x xxxxxxx (4.3) 23 xxxxx. Xx xxxxxxxx hydrolýzy xx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx, opatrně xx xxxxxxxxxx uzávěr x xxxxxxx se xx xxxxx x xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xX (5.3.3) xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx tlumivého xxxxxxx (3.24) xx xxxxxxx x xxxxxx 250 xx nebo do xxxxx s kulatým xxxx x xxxxxx 250 xx.
Xxxx se xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3
5.3.3 xxxxxx xX
Xxxxx xxxx, xxxxx toleranci k xxxxxx xx analyzátor xxxxxxxxxxxx (4.9), xxxxxxxxxx xxx úpravě pH xxxxx 5.3.3.1 xxxx 5.3.3.2.
5.3.3.1 xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.9), vyžadující xxxxxx xxxxxxxxxxx sodíku:
Pokud xxxxxxxxxx aminokyselin xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx sodíku (xx-xx xx xxxxxx xxxxx kyselin), doporučuje xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.27.3).
X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxx 2,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.27.3).
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4. se xxxxxxx 2 xxxxx 1-xxxxxxxx (3.15).
Xx rotační xxxxxxx (4.7) xx xxxxx xxxxx xx 5-10 xx xx xxxxx xxx 40 °X. Xxxxx xx xx objem xxxxxxx xxxxxx pod 5 xx, xxxxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx znovu.
pH xx xxxxxx xx 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18) a xxxxxxxxx se xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.3.2 pro xxxxxxx ostatní analyzátory xxxxxxxxxxxx (4.9)
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 nebo 5.3.2.4 xx částečně xxxxxxxxxxxxx opatrným xxxxxxxx 17 xx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.17), xx stálého xxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx 40 °X.
xX xx upraví xx 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.18) xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.4 xxxxxx vzorků pro xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx (5.3.3.1 nebo 5.3.3.2) x xxxxxxxxx xX se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztoku (3.24) xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xx x xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24) se xxxxxx xx značku.
Nebyl-li xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, přidají xx 2,00 xx vnitřního xxxxxxxxx (3.27.3) a xxxxx se xxxxxx xx značku citronanovým xxxxxxxx roztokem (3.24). Xxxxxxxx se xxxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxx k xxxxxxxxxxxxxx (5.4)
Xxxxxx-xx roztoky xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxx, xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °X.
5.4 Chromatografie
Před xxxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx (5.2) x xxxxxxxxxx (5.3.4) xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx filtrem 0,2 μ (4.5). Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxx ionexové chromatografii xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9).
Xxxxxxx lze provést xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx roztoku ± 0,5 % jak xxx analýze standardů xxx vzorků s xxxxxxxx, kdy je xxxxxxx xxxxxxxxx standardu. Xxxxxx xxxxx xxxxxx x aminokyselinám xx xxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxx xx možná nejpodobnější.
Frekvence xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx stabilitě xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx nebo xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx tlumivým xxxxxxxx (3.24) xxx, xxx xxxxxx píku xxxxxxxxx xxxxxxx 30 – 200 % xxxxxx xxxx xxx jednotlivé xxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx. Zvolený xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx od xxxx xxxxxxxx i xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. V rozsahu xxxxx xxxxxxxx xx xxx chromatografický xxxxxx xxxxxxxx reagovat na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx poměry xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxx equimolární xxxxxxx musí obsahovat xxxxxxx 30 % xxxxxxxxxxx obsahu jednotlivých xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxx ještě xxxxxx xxxxxxxxx xx použitém xxxxxxxxxxx aminokyselin (4.9).
Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx by xxxxx xxxxx sedla x xxxxxxx xxxx xxxxxxx x obou překrývajících xx xxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxx přesahovat 2:10 (xxxxx xx xxxxxxx pouze xxxx(x)xx, xxxxxxxxx, xxxxxxxx a xxxxx, je xxxxxxxxx xxxxxxxxxx ovlivněno xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx). Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx lepší než 1:10.
Xxxxxx musí zaručit, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx "xxxxxxxxxx xxxxxxxx" a xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxx píků xxxxxx x standardu se xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx se množství xxxxxxxxxxxxx x g xx xx xxxxxx.
x xxxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxx = X × X × XX × X / X × X × 1 000
Xx-xx xxxxxx interní xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx: X / X
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku
MV = xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x μmol/ml
V = hmotnost xxxxxxx xxxxxx (g) (xxxxxxxxxx xx původní xxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx)
X = xxxxxxx objem xxxxxxxxxx roztoku (5.3.4) x ml xxxx xxxxxxx objem xxxxxxxxx xxxxxxxx vypočteného xxxxx 6.1
Xxxxxx x xxxxxxx xx x hydrolyzátech xxxxxxxxxxx vzorku stanoví xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx vypočítávají xx xxxx xxxxxx (X6X12X2X4X2, XX 240,30) x xxxxxxxx MV 120,15 (= 0,5 x 240,30).
Xxxxxxxxx se v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxx vypočítává xx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxx XX methioninu: 149,21.
Xxxxxxx xxxxx methionin xx zjišťuje po xxxxxxxx xxxx methionin, xxx výpočet xx xxxxxxx stejná MV.
6.1 Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (X) při xxxxxxxxx xxxxxxx aminokyselin (5.2) xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
X = 100 xx × (10 xx + 5 xx) / 10 xx × X&xxxx;xx / 10xx
X = xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7. Vyhodnocení xxxxxx
Xxxx metoda xxxx xxxxxxxxxx porovnáním xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx 1990 xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx (krmná xxxx xxx prasata, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx). Xx xxxxxxxxx extrémů xxxx xxxxxxxx středních xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
xxxxxxx hodnoty x x/xx
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx pro prasata |
6,94 x = 15 |
3,01 x = 17 |
3.27 x =.17 |
9,55 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
9,31 n = 16 |
3,92 n = 18 |
5,08 x = 18 |
13,93 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
22,32 x = 16 |
5,06 x = 17 |
12,01 x = 17 |
47,74 x = 15 |
|
Xxxxxx |
58,42 x = 16 |
- |
90,21 x = 16 |
98,03 x = 16 |
x = počet xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxx vyjádřená xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx dána xxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xx) xxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx v x/xx
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs pro xxxxxxx |
0,13 x = 15 |
0,10 x = 17 |
0,11 x = 17 |
0,26 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
0,20 x = 16 |
0,11 x = 18 |
0,16 n = 18 |
0,28 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,48 x = 16 |
0,13 x = 17 |
0,27 n = 17 |
0,99 x = 15 |
|
Premix |
1.30 x = 16 |
_ |
2,19 x = 16 |
2,06 n = 16 |
n = xxxxx xxxxxxxxxxxx laboratoří
Variační xxxxxxxxxx (%) vnitrlaboratorních xxxxxxxxxxxx odchylek (Sr)
|
Referenční xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxx |
1,9 a = 15 |
3,3 n = 17 |
3,4 x =.17 |
2,8 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
2,1 x = 16 |
2,8 x = 18 |
3,1 x = 18 |
2,1 x = 16 |
|
Proteinový xxxxxxxxxx |
2,7 n = 16 |
2,6 x = 17 |
2,2 x = 17 |
2,4 n = 15 |
|
Xxxxxx |
2,2 x = 16 |
- |
2,4 x = 16 |
2,1 x = 16 |
x = počet xxxxxxxxxxxx laboratoří
7.2 Reprodukovatelnost
Výsledky xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (XX) v g/kg
|
Referenční xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxx |
0,28 n = 15 |
0,30 x = 17 |
0,23 x = 17 |
0,30 n = 13 |
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxxx |
0,48 x = 16 |
0,34 x = 18 |
0,55 x = 18 |
0,75 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,85 x = 16 |
0,62 n = 17 |
1,57 x = 17 |
1,24 n = 15 |
|
Xxxxxx |
2,49 x = 16 |
- |
6,20 x = 16 |
6,62 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx laboratoří
Variační xxxxxxxxxx (%) xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (SR)
|
Referenční xxxxxxx |
xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxx |
4,1 x = 15 |
9,9 n = 17 |
7,0 x = 17 |
3,2 x = 13 |
|
Xxxxx směs pro xxxxxxxx |
5,2 n = 16 |
8,8 n = 18 |
10,9 x = 18 |
5,4 n = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
3,8 x = 16 |
12,3 n = 17 |
13,0 x = 17 |
3,0 x = 15 |
|
Xxxxxx |
4,3 x = 16 |
- |
6,9 n = 16 |
6,7 n = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
8. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx materiálů
Správné xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx opakovaným xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, jsou-li k xxxxxxxxx. Doporučuje xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
9. Poznámky
9.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx aminokyselin xx se xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx kalibračních xxxxxxx standardů xxxxxxxxxxxx (xxx 3.27.4 a 3.27.5) x xxxxxxx xxxxxx (5.3.4) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx musí xxxxxxxxxxxx xxx všechny xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx citronanovým tlumivým xxxxxxxx xxx, xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx uprostřed xxxxxx xxxxxxx.
9.2 Pokud xx x analýze xxxxxxxxxxx xxxxxxx zařízení pro xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx zkoušek xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx výrobce.
9.3 Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx 1 % xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx) xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxx a xxxx xx xxxxx použít xxxxxxxxx xxxxxx.
XXXX X XXXXXXXXX XXXX
1. Účel x oblast xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxx. Metoda xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx, jejichž zkoušení xx řídí podle xxxxxxxx Xxxx 136/66/XXX xx xxx 22. xxxx 1996.
Xxxxx xxxxx x složení xxxxxx xx pro analýzu xxxxxxx xxxxx xx xxxx následujících postupů:
1.1 Xxxxxx X – xxxxx extrahovatelné tuky
Tato xxxxxx xx použitelná xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, které jsou xxxxxxxx xx okruhu xxxxxxx X.
1.2 Xxxxxx X – xxxxxxx xxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxx všechny xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxxx tuk xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxx. xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx podrobeny zpracování, xxxx xxxxxxxxxxx, vločkování x xxxxxxxxx).
1.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx dosáhlo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X, než postupem X, je xxxxx xxxxxxxxx xx platnou xxxxxxx xxxxx postupu X.
2. Xxxxxxx
2.1 Xxxxxx X
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x zbytek xx xxxxxx x xxxxx.
2.2 Postup X
Xxxxxx xx zahřívá x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx. Promytý a xxxxxxx xxxxxx se xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X.
3. Xxxxxxx
3.1 xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx 40 x 50 °X. Xxxxxxx bromového xxxxx xxxx být menší xxx 1 x xxxxxx po xxxxxxxxxx xxxxx xxx 2 xx/100 xx
3.2 xxxxx xxxxx, xxxxxxx
3.3 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 3 xxx XXx/x
3.4 xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx, Xxxxx-xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxx), refluxní xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx 10 xxxxx za hodinu. X typu xxx xxxxxx by měla xxx xxxxxxxx rychlost xxx 10 xx xx xxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx látek xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x porositou v xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx 4.1.
4.3 Xxxxxxx, xxx vakuová xxxxxxxx xx 75 °X ± 3 °X, nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na 100 °X ± 3 °X.
5. Xxxxxx
5.1 Postup X (xxx bod 8.1)
Xx extrakční xxxxxxx xx xxxxxx 5 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx (4.2) x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx tuku.
Patrona xx xxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.1) x xxxxxxxxxx šest hodin xxxxxxxxxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx jímá xx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx baňky, xxxxx xxxxxxxx úlomky xxxxx [1].
Xxxxxxxxxxxx xx oddestiluje, xxxxxx v xxxxx xx xxxx 1,5 xxxxxx x xxxxxxx (4.3). Nechá xx xxxxxxxxxxx x exsikátoru x xxxxx. Suší xx xxxxxxx 30 xxxxx, xxx xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxxx mezi xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx 1 mg).
5.2 Xxxxxx X
Xx xxxxxxx x xxxxxx 400 xx xxxx xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 300 ml xx xxxxxx 2,5 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx (xxx bod (8,2) a xxxxx xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.3) x úlomky xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx sklem xxxx xx kónická xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxx xx mírného varu xx xxxxx plameni xxxx na xxxxx xxxxx x vaří xx xx xxxx xxxxx xxxxxx. Během xxxx se xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx.
Xxxx se ochladí x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx filtračního xxxxxxxxxx (3.4), aby xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx ztrátám tuku. Xxxxxxxx xx přes xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx promývá xxxxxxxx xxxxx, xx xx získá xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx tuk. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xx vzorek xxxx xxxx hydrolýzou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X.
Xxxxxxx filtrační xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxx x xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x horkovzdušné xxxxxxx (4.3) xxx xxxxxxx 100 °X ± 3 °C.
Dvojitý xxxxxxxxx papír x xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (4.2) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx. Xxxxxxx xx vloží xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.1) x xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 5.1.
6. Vyjádření xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xx výsledcích xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxxx xxxxxxxxxx:
- 0,2 % v xxxxxxxxx xxxxxxx, při obsahu xxxx xxxxxx xxx 5 %,
- 4,0 % xxxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx xx 5 xx 10 %,
- 0,4 % v xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxx xxx 10 %.
8. Poznámky
8.1 U xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx a xxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx odebrat xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek, xx xxxxxxxxx následujícím xxxxxxxx:
Xxxxxx se 20 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx x smíchá xx x 10 xxxx i xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.2). Extrahuje xx xxxxxxxxxxxxx (3.1) xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx 500 xx petroletherem (3.1) x xxxxxxxx xx. 50 xx xxxxxxx xx odpipetuje xx xxxx xxxxx, předem xxxxxxx baňky, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx [2].
Rozpouštědlo xx xxxxxxxxxxxx, baňka xx vysuší x xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx odstavce xxxx 5.1.
Xxxxx tuku se xxxxxxxx jako xxxxxxxx xx vzorku xxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorce:
(10 x + b) × 5
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx (xxxxxxx část xxxxxxxx)
x = xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx
8.2 X xxxxxxx, xxxxx mají xxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx 5 g.
8.3 Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, která xxxx xxxxxx obsah xxxx, xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx postupu B xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxx sodným.
8.4 V xxxx 5.2 se xxxx xx opláchnutí xxxxxx xx filtraci xxxxxxxx použít xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxx.
8.5 X některých xxxxx xx musí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx 1,5 xxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxxx přílišnému vysoušení, xxxxx xxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. Xx možno xxxxxx x xxxxxxxxxxx troubu.
8.6 Xxx xxxxxx xxxx xxx 15 % xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx extrakci xxxxx postupu A x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx B. Xxxxxx xx xx xxxxx xxxx xx xxxxx krmiva x xxxxx xxxx v xxxxxx.
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXXX
(2-[X-2-(xxxxxxxxxxxx)xxxxxxxxx]-3-xxxxxxxxxxxxxxxx-X1,X4-xxxxxx)
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx obsah xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje směsí xxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx olachindoxu xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografií (HPLC) xx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 xxxxxxxx
3.2 xxxxxxxx, pro XXXX
3.3 xxxx, xxx XXXX
3.4 xxxxxxx xxxx xxx XXXX:
Xxxx xxxx (3.3) x xxxxxxxxx (3.2), 900 + 100 (X + V)
3.5 xxxxxxxxxx xxxxx: čistý xxxxxxxxxx 2-[N-2-(hydroxyethyl)karbomoyl]-3-methylchinoxalin-N1,N4-dioxid, X 851
3.5.1 zásobní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, 250 μx/xx
Xx odměrné xxxxx o xxxxxx 200 ml xx xxxxxx 50 mg xxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxxxxxx na 0,1 xx x přidá xxx 190 xx xxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xx 20 xxxxx xx ultrazvukové xxxxx (4.1). Po xxxxxxx x ultrazvukové xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx vodou xx xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx hliníkovou xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx.
3.5.2 xxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxx, 25 μg/ml
10,0 xx zásobního xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.1) xx xxxxxxx xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 100 ml, xxxxxx se xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.4) a xxxxxxxx. Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx fólií x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.
3.5.3 xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxx xxxxxxxxx baněk x obsahu 50 xx xx xxxxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0 x 20,0 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.2). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx (3.4) xx xxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx fólií. Xxxx xxxxxxx odpovídají 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 7,5 x 10,0 μx olachindoxu na xx.
Xxxx roztoky xx xxxx připravovat xxxxx xxxxxxx.
4. Přístroje a xxxxxxx
4.1 xxxxxxxxxxxx lázeň
4.2 xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.3 xxxxxxxx XXXX x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pole
4.3.1 xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 xx, xxxxxxx X18, 10 μx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx
4.4 membránové filtry x xxxx 0,45 μx
5. Postup
Poznámka:
Olachindox xx xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx provádět xxx xxxxxxxx xxxxxx nebo x xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx krmivo xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xxxxxxx xx výtěžnost xx xxxxxxx analýzou xxxxxxxxxx xxxxxx obohaceného xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxx X xxxxxxxxxxx xx úroveň 50 xx/xx xx xxxxxxxxxx 10,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.1) xx kónické xxxxx x xxxxxx 250 xx a xxxxxx xx xxxxxx xx cca 0,5 xx. Přidá xx 50 g modelového xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xx 10 xxxxx xxxxxx, přičemž se xxxxx několikrát xxxxxxxx. Xxxx se přejde x xxxxxxxx (5.2).
Xxxxxxxx:
Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxx podobného typu xxxx xxxxxxxx xxxxxx x nesmí obsahovat xxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Naváží xx xxxxxxxxx 50 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x. Xxxxxxx se xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1000 xx, xxxxx xx 100 xx methanolu (3.1) x xxxxx xx xxxxxx na xxx xxxxx do xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Přidá xx 410 xx xxxx x xxxxxxx xx v ultrazvukové xxxxx xxxxxxx 15 xxxxx. Xxxxx se xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxx se xxxxx 30 minut xx xxxxxxxx (4.2) x xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx filtrem. 10,0 xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 20 xx, xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) (xxx xxx 9. Poznámky). Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXXX (5.3).
5.3 Xxxxxxxxx HPLC
5.3.1 Xxxxxxxxx:
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxx podmínky, xx xxxxxxxxxxx, že dávají xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3.1)
xxxxxxx fáze (3,4): Xxxx xxxx (3.3) x xxxxxxxxx (3.2), 900 + 100 (X + X)
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 ml/min
detekční xxxxxx délka: 380 xx
xxxxx nástřiku: 20 μx–100 μx
Xxxxxxxxx chromatografického xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxx, že se xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5.3) xxxxxxxxxx 2,5 μg/ml, xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx píků x xxxxxxxxxx xxxx.
5.3.2 Kalibrační xxxx
Xxx xxxxx kalibrační xxxxxx xx provede xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx se střední xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxx) xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x μx/xx xxxx xxxxxxxxx.
5.3.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxx xx xxxxxxx nástřiků xxxxxxxx vzorku (5.2) xxx použití stejného xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Ze xxxxxxx hodnoty výšky (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μg/ml porovnáním x xxxxxxxxxxx xxxxxx (5.3.2).
Xxxxx olachindoxu ve xxxxxx w x xx/xx je xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = x × 1 000 / m
kde:
c = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx (5.2) x μx/xx
x = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x x (5.2)
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (co-chromatography) xxxxx využitím detektoru x diodovým xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vzorku (5.2) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.3), obsahujícího 5,0 μg/ml xxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (co-chromatography)
Extrakt vzorku (5.2) xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku.
S xxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx x zředění xxxxxxxx xx xxxx xxxxx jen xx xxxxxxx výšky píku xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxx xxxxx musí xxx x xxxxxxx ±10 % původní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx extraktu vzorku.
7.1.2 Xxxxxxxx diodového pole
Výsledky xx vyhodnocují podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx xxxxx maximální xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx xx xxxxxxxxxxxxx stejný x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxxxx xxxxxxx. Pro xxxxxxxx x diodovým xxxxx xx xxxxx ±2 xx;
x) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 400 xx xx nesmí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x standardu xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx spektra x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx maxima x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) xxx vlnové xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxxxx vzestupu, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx od xxxxxxxxx x této xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx spektry xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % absorbance xxxxxxx xx vrcholu xxxx.
Xxxx-xx xxxxxxx x těchto xxxxxxxx splněno, přítomnost xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx stanovení, xxxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxx xxx obsahu xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 20 xx/xx, xxxxx přesáhnout15 % xxxxxxx výsledku.
7.3 Výtěžnost
Pro xxxxxxxxx xxxxxxxx vzorek xxxx xxx výtěžnost xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx kruhového xxxxx
X xxxxx ES xxx xxxxxxxx kruhový test, xxx němž xx 13 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx selata, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx uvedeny x xxxxxxxxxxx tabulce:
|
| xxxxxx 1 |
vzorek 2 |
xxxxxx 3 |
xxxxxx 4 |
|
|
X |
13 |
10 |
11 |
11 |
|
X |
40 |
40 |
44 |
44 |
|
xxxxxxx (xx/xx) |
- |
14,6 |
48,0 |
95,4 |
|
(Xx) (xx/xx) |
- |
0,82 |
2,05 |
6,36 |
|
(XX) (xx/xx) |
- |
1,62 |
4,28 |
8,42 |
|
XXx (%) |
- |
5,6 |
4,3 |
6,7 |
|
XXX (%) |
- |
11,1 |
8,9 |
8,8 |
|
xxxxxxxxx xxxxx (mg/kg) |
- |
15 |
50 |
100 |
|
výtěžnost (%) |
- |
97,3 |
96,0 |
95,4 |
X: počet xxxxxxxxxx
x: xxxxx jednotlivých xxxxxx
Xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxx xxxxxxxxxx opakovatelnosti
CVR: xxxxxxxx koeficient reprodukovatelnosti
9. Xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx metoda xxxxxx ověřena xxx xxxxxx obsahující více xxx 100 xx/xx xxxxxxxxxxx, xx možné xxxxxxx uspokojivé xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx vzorku x/xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (5.2) xxx, xxx xx dosáhlo xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.3.2).
[1] Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx.
[2] Xxxxx xx xx tuk xxxxxxxx zkoušet xx xxxxxxx, zamění se xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx.