Xxxxxxxx Komise 98/64/ES
ze xxx 3. xxxx 1998,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx metody Společenství xxx stanovení aminokyselin, xxxx a olachindoxu x krmivech a xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx 71/393/XXX
(Xxxx s xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 70/373/XXX za xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro úřední xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxx x Xxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv xx xxxxxx kontroly, xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisů xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Rady 79/373/XXX xx xxx 2. xxxxx 1979 o xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxx [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 97/47/XX [3], x směrnice Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. xxxx 1993 x krmivech určených xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx [4], naposledy xxxxxxxxx směrnicí 96/25/XX [5], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx xxxx být xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Rady 70/524/XXX ze dne 23. listopadu 1970 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx [6], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx Xxxxxx 98/19/ES [7], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx přidána xx xxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, že druhá xxxxxxxx Xxxxxx 71/393/XXX xx dne 18. xxxxxxxxx 1971, kterou xx xxxxxxx analytické xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv [8], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 84/4/EHS [9], stanoví xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x xxx zjišťování xxxxxx xxxx; xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx upravit;
vzhledem x xxxx, xx musí xxx stanoveny xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx úřední kontrolu xxxxxx aminokyselin, xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x krmivech xx xxxxxxxxx xx použití xxxxx uvedených x xxxxxxx xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
V xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/393/EHS xx xxx "4. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx" xxxxxxxxx xxxxx X xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
1. Xxxxxxx xxxxx uvedou x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx předpisy xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxxxx 1998. Uvědomí x xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx od 1. xxxxx 1999.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx tuto xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Způsob xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
2. Členské xxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx v oblasti xxxxxxxxxx této směrnice.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx dnem po xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 5
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 3. xxxx 1998.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. věst. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[3] Xx. věst. X 211, 5.8.1977, x. 45.
[4] Xx. věst. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[5] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
[6] Úř. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[7] Xx. xxxx. X 96, 28.3.1998, x. 39.
[8] Xx. xxxx. X 279, 2.12.1971, x. 7.
[9] Xx. věst. X 15, 18.1.1984, x. 28.
PŘÍLOHA
ČÁST X
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx metoda xxxxxx xx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx) x xxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx x xxxxx) xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx aminokyselin. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxx aminokyseliny: cyst(e)in, xxxxxxxxx, xxxxx, threonin, xxxxxx, arginin, kyselinu xxxxxxxxxxx, kyselinu xxxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxx, fenylalanin, xxxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxxx.
Xxxx metoda xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx aminokyselin x xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx formami X x X. Xxxx xxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
2. Princip
2.1 Xxxxx aminokyseliny
Volné xxxxxxxxxxxxx xx extrahují xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx makromolekuly xx srážejí kyselinou xxxxxxxxxxxxxxxx a odstraňují xx filtrací. Zfiltrovaný xxxxxx se xxxxxx xx pH 2,20. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx při 570 xx.
2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx stanovovaných xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxx(x)xx a methionin xxxx xxx před xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx cysteovou x xx methioninsulfon. Tyrosin xx musí xxxxxxxxxx x hydrolyzátech xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx v xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx se xxxxxxx xxx 0 xX xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Oxidovaný xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (x = 6 xxx/x) xx 23 xxxxx. Hydrolyzát xx xxxxxx xx pH 2,20. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx iontoměničovou xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 570 nm (440 xx pro xxxxxx).
3. Xxxxxxx
Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx destilovaná xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx (vodivost &xx; 10 μS).
3.1 xxxxxxx vodíku, w = 30 %
3.2 xxxxxxxx xxxxxxxx, w = 98–100 %
3.3 xxxxx
3.4 xxxxxxxxx xxxxx
3.5 xxxxxxxx xxxxx
3.6 kyselina 5-xxxxxxxxxxxxxxx, dihydrát
3.7 kyselina xxxxxxxxxxxxxx o xxxxxxx xxxxxxxxx 1,18 g/ml
3.8 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx
3.9 2,2-xxxxxxxxxxxxx (thiodiglykol)
3.10 xxxxxxx xxxxx
3.11 ninhydrin
3.12 xxxxxxxxxxx, xxx varu 40–60 °X
3.13 norleucin xxxx xxxx sloučenina xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx standard
3.14 xxxxx – plyn (&xx; 10 ppm xxxxxxx)
3.15 1-oktanol
3.16 xxxxxxxxxxxxx
3.16.1 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 1; xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodu. Xxxxxx xx xx xxxxx xxx X2X5 nebo X2XX4 týden xxxx xxxxxxxx
3.16.2 kyselina xxxxxxxx
3.16.3 xxxxxxxxxxxxxxx
3.17 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 7,5 mol/l:
300 g XxXX (3.5) xx xxxxxxxx ve vodě x doplní do 1 xxxxx.
3.18 xxxxxxxx xxxxx, roztok x = 1 xxx/x:
40 x NaOH (3.5) xx xxxxxxxx xx xxxx a xxxxxx xx 1 xxxxx.
3.19 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx:
Xxxxxx xx 889 x xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2) se 111 g xxxx x přidá se 4,73 g fenolu (3.3).
3.20 hydrolyzační xxxx, x = 6 xxx XXx/x x xxxxxxxxx 1 x xxxxxx/x:
X 492 ml XXx (3.7) xx xxxxx 1 g xxxxxx (3.3) a xxxxxx se vodou xx 1 xxxxx.
3.21 xxxxxxxxx směs, x = 6 xxx XXx/x s xxxxxxxxx 2% xxxxxxxxxxxxx:
8,2 xx XXx (3.7) se xxxxxxx xxxxxxxxx 900 xx vody, xxxxx xx 20 xx xxxxxxxxxxxxx (3.9) x xxxxxx xxxxx na 1 litr (3.7 x 3.9 xx xxxxx smíchat xxxxx).
3.22 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, β = 6 %:
60 x xxxxxxxx 5-sulfosalicylové (3.6) xx xxxxxxxx xx vodě x xxxxxx xxxxx xx 1 xxxx.
3.23 oxidační xxxx (xxxxxxxx permravenčí – xxxxx):
X malé xxxxxxx se xxxxxx 0,5 ml peroxidu xxxxxx (3.1) x 4,5 ml roztoku xxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx (3.19); ponechá xx x xxxxx 1 hodinu xxx 20–30 °X, aby xx utvořila xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx se xxxx xxxxxxx v xxxxx s ledovou xxxxx (15 xxxxx).
Xxxxx:
Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x kůží x xxxxxxxx ochranný xxxx.
3.24 xxxxxxxxxxx tlumivý roztok, x = 0,2 xxx Na+/l, xX 2,20:
X přibližně 800 xx vody xx xxxxxxxx 19,61 x xxxxxxxxx xxxxxxx (3,8), 5 xx thiodiglykolu (3.9), 1 g xxxxxx (3.3) a 16,50 xx XXx (3.7). xX xx xxxxxx xx 2,20. Xxxxxx xx vodou xx xxxxx 1 xxxxx.
3.25 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (4.9)
3.26 xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (4.9)
3.27 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx nutno xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx 5 °X.
3.27.1 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.16.1), x = 2,5 μxxx/xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxx obdržet x xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.27.2 zásobní xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx, c = 1,25 μxxx/xx
0,2115 x xxxxxxxx cysteové (3.16.2) x 0,2265 x xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx (3.16.3) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.24) x xxxxxxx odměrné xxxxx x doplní xx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx tlumivým roztokem. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 12 xxxxxx. Xxxxx roztok xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (3.27.1) xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx.
3.27.3 xxxxxxx standardní xxxxxxxx xxxxxx vnitřního xxxxxxxxx, xxxx. norleucinu, x = 20 μmol/ml
0,6560 x xxxxxxxxxx (3.13) xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.24) v odměrné xxxxx na 250 xx x xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx tlumivým xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 6 xxxxxx.
3.27.4 xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx s xxxxxxxxxxx, x = 5 xxxx/50 μx xxxxxxxx xxxxxxxx x methioninsulfonu x c = 10 xxxx/50 μx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
Xx 100 xx kádince xx rozpustí 2,2 x xxxxxxxx xxxxxxx (3.10) x 30 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24). Přidají xx 4,00 ml xxxxxxxxx standardního základního xxxxxxx aminokyselin (3.27.1), 4,00 xx zásobního xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx (3.27.2) x 0,50 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3), xxxxx se xxxxxxx. xX xx upraví xx 2,20 hydroxidem xxxxxx (3.18).
Xxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx 50 ml xxxxxxx xxxxx, doplní xx xxxxxx citronanovým tlumivým xxxxxxxx (3.24) x xxxxxxx se.
Skladuje se xxx teplotě xxx 5 °C nejdéle 3 xxxxxx.
Xxx xxxx xxxxxxxx 9.1.
3.27.5 xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx použití x xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.3.1 a xxx xxxxxxxx (5.2). Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx podle 3.27.4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxx při xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 3 měsíce.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 xxxxx x kulatým xxxx o xxxxxx 100 xxxx 250 xx xxxxxxxx zpětným xxxxxxxxx
4.2 nádoba z xxxxxxxxxxxxxxxx skla x xxxxxx 100 xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x gumovým xxxx xxxxxxxxxx těsněním (xxxx. Xxxxx, Schott) pro xxxxxxx x sušárně
4.3 xxxxxxx s nuceným xxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx než ±2 °X
4.4 xX xxxx (xxx xxxxxxxxx xxxxx)
4.5 xxxxxxxxxx filtr (0,2 μx)
4.6 xxxxxxxxxxx
4.7 rotační xxxxxxx odparka
4.8 mechanická xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.9 xxxxxxxxxx aminokyselin xxxx zařízení HPLC x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx ninhydrin, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x fotometrickým xxxxxxxxxx.
Xxxxxx xx naplní sulfonovanou xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx vzájemné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x separaci xx xxxxxx ninhydrin xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx roztoku a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx čerpadla xx stálostí xxxxxxx ± 0,5 % xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku.
Některé xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx je xxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx hydrolyzát xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sodíkových xxxxx x = 0,8 xxx/x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx určitých xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx mravenčí kyselinu x/xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx iontů. X xxxxxxx případě xx xxxxx objem kyseliny xxxx xxxxxxx xX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 xx. Xxxxxxxx se xx xxxxxxxx xx xxxxx xxx teplotě xxxxxxx 40 °C.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx mletím xxx, xxx xxxxxx sítem x xxx 0,5 xx. Xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxx mletím xxxxxxx xx vzduchu xxx xxxxxxx nepřesahující 50 °C xxxx xxx xxxxxxxx. Xxxxxx x vysokým xxxxxxx xxxx se před xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.12).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x krmivech x x premixech
Do xxxxxxx xxxxx se xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 g) upraveného xxxxxx (5.1) x xxxxxxxxx na 0,2 xx a xxxxx xx 100,0 ml xxxxxxxxx xxxxx (3.21). Xxxxx xx xxxxx 60 xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx magnetické xxxxxxxx (4.8). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 100 xx.
Xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 50 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x pokračuje xx v xxxxxxx xx magnetické xxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxxxxx se přefiltruje xxxx xxxxxxxx xxx, xxx se odstranila xxxxxxx xxxxxxxxx. 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 100 xx, xX xx upraví xx 2,20 pomocí xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18), xxxxx xx roztok xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx xxxxxxx baňky xxxxxxxxx velikosti x xxxxxx po značku xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24).
Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx standard, xxxxx xx 1,00 xx xxxxxxxxx standardu (3.27.3) xx xxxxxxx 100 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx doplní po xxxxxx xxxxxxxx roztokem (3.24).
Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 – xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx-xx extrakty xxxxxxxxxx xxx den, xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °X.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
5.3.1 xxxxxxx
0,1 xx 1 x xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) se xxxxxx x xxxxxxxxx 0,2 xx:
- do xxxxx s xxxxxxx xxxx x obsahu 100 xx (4.1) xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (5.3.2.3) nebo
- xx xxxxx s xxxxxxx xxxx x xxxxxx 250 xx (4.1), xxxxxxxx-xx se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx
- xx nádoby x xxxxxx 100 xx xx šroubovací uzávěrem (4.2) (xxx uzavřenou xxxxxxxxx 5.3.2.4).
Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx 10 xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 xx.
Xxxxx/xxxxxx xx umístí xx xxxxx x ledovou xxxxx x ochladí xx na 0 °X, potom se xxxxx 5 ml xxxxxxxx xxxxx (3.23) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx lžící xx xxxxxxxx špičkou. Xxxxx/xxxxxx xx uzavře x xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x vloží xx x x xxxxx x xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxxxx xxx 0 °X x ponechá xx xxx 16 xxxxx. Xx 16 xxxxxxxx xx vyjme x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx přidáním 0,84 x xxxxxxxxxx sodného (3.4).
Xxxx se xxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1.
5.3.2 hydrolýza
5.3.2.1 xxxxxxxxx oxidovaných xxxxxx
X xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.3.1 xx xxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.20) xxx, aby neulpěl xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx ani xx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx postupu hydrolýzy xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 nebo 5.3.2.4.
5.3.2.2 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxx s xxxxxxx xxxx x obsahu 100 ml nebo 250 xx (4.1) xxxx xx xxxxxx x xxxxxx100 ml xx xxxxxxxxxxx uzávěrem (4.2) se xxxxxx 0,1 až 1 x upraveného xxxxxx (5.1) x xxxxxxxxx xx 0,2 xx. Xxxxxxxx xxxx vzorku xx xxxx xxx xxxxx dusíku xxx 10 mg. Xxxxxxx xx přidá 25 xx xxxxxxxxxxxx směsi (3.20) x xxxxxx xx xx xxxxxxx. Xxxx xx postupuje xxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx podle 5.3.2.4.
5.3.2.3 xxxxxxxx xxxxxxxxx
Xx xxxxx x xxxxx (připravené xxxxx 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2) xx xxxxxxx 3 xxxxxxxx kuličky x xxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxx zpětným xxxxxxxxx xx xxxx 23 hodin. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx chladič xxxxxxx 5 ml citronanového xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24). Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xx x xxxxxx xxxxx. Xxxx se postupuje xxxxx 5.3.3.
5.3.2.4 xxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx se směsí xxxxxxxxxxx podle 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2 se xxxxxx xx xxxxxxx (4.3) xxx 110 °X. Xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x důsledku vyvíjení xxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx k xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx volně xx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xx uplynutí xxxxx hodiny xx xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x sušárně (4.3) 23 hodin. Xx skončení xxxxxxxxx xx baňka vyjme xx xxxxxxx, opatrně xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxx x xxxxxxx xxxxx. Baňka xx nechá xxxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxx xX (5.3.3) xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztoku (3.24) xx kádinky x obsahu 250 xx xxxx xx xxxxx s xxxxxxx xxxx o xxxxxx 250 ml.
Dále xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3
5.3.3 xxxxxx pH
Podle toho, xxxxx toleranci x xxxxxx xx analyzátor xxxxxxxxxxxx (4.9), postupujte xxx xxxxxx xX xxxxx 5.3.3.1 xxxx 5.3.3.2.
5.3.3.1 xxx chromatografické xxxxxxx (4.9), xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xx-xx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx), xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx roztok (3.27.3).
X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 2,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.27.3).
Do hydrolyzátu xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4. xx xxxxxxx 2 xxxxx 1-xxxxxxxx (3.15).
Xx rotační xxxxxxx (4.7) xx xxxxx xxxxx na 5-10 ml xx xxxxx xxx 40 °X. Xxxxx by xx objem náhodou xxxxxx xxx 5 xx, xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxx analýzu xxxxx.
xX xx xxxxxx na 2,20 roztokem xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18) a xxxxxxxxx se xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.3.2 pro xxxxxxx xxxxxxx analyzátory xxxxxxxxxxxx (4.9)
Xxxxxxxxxxx připravené xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 17 ml roztoku xxxxxxxxx sodného (3.17), xx stálého xxxxxxx x při xxxxxxxxx xxxxxxx xxx 40 °X.
xX se xxxxxx xx 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18) xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.3.4.
5.3.4 xxxxxx vzorků pro xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx (5.3.3.1 nebo 5.3.3.2) s xxxxxxxxx xX xx kvantitativně xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx odměrné xxxxx x xxxxxx 200 xx a xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24) xx xxxxxx xx xxxxxx.
Xxxxx-xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx 2,00 xx vnitřního xxxxxxxxx (3.27.3) a xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24). Xxxxxxxx se promíchá.
Dále xx přejde x xxxxxxxxxxxxxx (5.4)
Nejsou-li xxxxxxx xxxxxx analyzovány xxx xxx, xxxxxxxxxxx se xxx teplotě xxx 5 °X.
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx (5.2) x xxxxxxxxxx (5.3.4) xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx se zfiltruje xxxxxxxxxxx filtrem 0,2 μ (4.5). Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxx ionexové xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx aminokyselin (4.9).
Xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx důležité, xxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ± 0,5 % xxx xxx analýze standardů xxx xxxxxx s xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx poměr sodíku x xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx vzorků xx xxxxx nejpodobnější.
Frekvence xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx ninhydrinového xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztokem (3.24) xxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 30 – 200 % xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx aminokyselin xx xxxxx liší x xxxxxxxxxx na typu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx musí být xxxxxxx separovat xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx od xxxx xxxxxxxx i xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxx působení xx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na sloupec.
Při xxxxxxx equimolárního roztok xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx uvedené xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxx equimolární xxxxxxx musí xxxxxxxxx xxxxxxx 30 % xxxxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxx ještě xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx aminokyselin (4.9).
Při xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx píku xxxxxxx x xxxx překrývajících xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 2:10 (xxxxx xx xxxxxxx pouze xxxx(x)xx, xxxxxxxxx, threonin x xxxxx, xx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nedostatečnou xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx). Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx lepší xxx 1:10.
Xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxx bude xxxxxxxxx xx "xxxxxxxxxx xxxxxxxx" x xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxx x standardu se xxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx množství xxxxxxxxxxxxx x x xx xx xxxxxx.
x xxxxxxxxxxxxx xx kg xxxxxx = X × E × XX × F / X × X × 1 000
Xx-xx použit interní xxxxxxxx, xxxxxx se xxxxxxxx: X / X
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
X = xxxxxx xxxx interního standardu x hydrolyzátu nebo x xxxxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku
MV = xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v μxxx/xx
X = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (x) (korigovaná xx xxxxxxx váhu xxxxx xx vzorek xxxxxxx nebo xxxxxxxx)
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx roztoku (5.3.4) x xx xxxx xxxxxxx xxxxx zředěného xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 6.1
Xxxxxx a cystein xx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx cysteová, xxx xxxxxxxxxxxx se xxxx cystin (C6H12N2O4S2, XX 240,30) s xxxxxxxx XX 120,15 (= 0,5 x 240,30).
Xxxxxxxxx se v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx methioninsulfon, xxx vypočítává se xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx XX methioninu: 149,21.
Xxxxxxx volný xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx, xxx výpočet xx xxxxxxx stejná XX.
6.1 Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (F) xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (5.2) se xxxxxxxx xxxxx tohoto vzorce:
F = 100 xx × (10 ml + 5 xx) / 10 xx × X&xxxx;xx / 10xx
X = xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx porovnáním xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx 1990 xxx xxxxxxx čtyř různých xxxxx (xxxxx směs xxx prasata, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx). Xx vyloučení extrémů xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
xxxxxxx hodnoty x x/xx
|
Xxxxxxxxxx materiál |
Aminokyselina |
|||
|
Threonin |
cyst(e)in |
Methionin |
lysin |
|
|
Krmná xxxx xxx prasata |
6,94 x = 15 |
3,01 x = 17 |
3.27 x =.17 |
9,55 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
9,31 x = 16 |
3,92 n = 18 |
5,08 x = 18 |
13,93 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
22,32 x = 16 |
5,06 x = 17 |
12,01 x = 17 |
47,74 x = 15 |
|
Xxxxxx |
58,42 x = 16 |
- |
90,21 x = 16 |
98,03 x = 16 |
x = počet xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxx vyjádřená xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xx) xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx v x/xx
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxx |
0,13 x = 15 |
0,10 n = 17 |
0,11 x = 17 |
0,26 x = 13 |
|
Xxxxx směs pro xxxxxxxx |
0,20 x = 16 |
0,11 x = 18 |
0,16 n = 18 |
0,28 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,48 x = 16 |
0,13 x = 17 |
0,27 x = 17 |
0,99 x = 15 |
|
Xxxxxx |
1.30 x = 16 |
_ |
2,19 x = 16 |
2,06 x = 16 |
n = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx (%) xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xx)
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
1,9 x = 15 |
3,3 x = 17 |
3,4 n =.17 |
2,8 x = 13 |
|
Krmná xxxx xxx brojlery |
2,1 x = 16 |
2,8 x = 18 |
3,1 x = 18 |
2,1 x = 16 |
|
Proteinový xxxxxxxxxx |
2,7 x = 16 |
2,6 x = 17 |
2,2 x = 17 |
2,4 x = 15 |
|
Xxxxxx |
2,2 n = 16 |
- |
2,4 n = 16 |
2,1 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.2 Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx ze xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx odchylka (XX) v x/xx
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
0,28 x = 15 |
0,30 x = 17 |
0,23 x = 17 |
0,30 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
0,48 x = 16 |
0,34 x = 18 |
0,55 x = 18 |
0,75 n = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,85 n = 16 |
0,62 x = 17 |
1,57 x = 17 |
1,24 n = 15 |
|
Xxxxxx |
2,49 x = 16 |
- |
6,20 n = 16 |
6,62 n = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx (%) xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odchylek (XX)
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
4,1 x = 15 |
9,9 n = 17 |
7,0 n = 17 |
3,2 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxxx |
5,2 x = 16 |
8,8 n = 18 |
10,9 x = 18 |
5,4 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
3,8 n = 16 |
12,3 n = 17 |
13,0 n = 17 |
3,0 n = 15 |
|
Premix |
4,3 x = 16 |
- |
6,9 n = 16 |
6,7 n = 16 |
n = xxxxx xxxxxxxxxxxx laboratoří
8. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx materiálů
Správné xxxxxxx uvedené xxxxxx xx ověřuje xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, jsou-li x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxx k xxxxxxxx xxxx analyzátory xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx standardů xxxxxxxxxxxx (xxx 3.27.4 x 3.27.5) a xxxxxxx xxxxxx (5.3.4) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx musí xxxxxxxxxxxx xxx všechny xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx roztok xx xxxx xxxxxxxxxxxx tlumivým xxxxxxxx xxx, xxx xx dosáhlo xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
9.2 Xxxxx se x analýze xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Při xxxxxxx xxxx metody x xxxxx obsahujících xxxx xxx 1 % chloridu (koncentráty, xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx) xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x musí xx xxxxx použít xxxxxxxxx xxxxxx.
XXXX X XXXXXXXXX XXXX
1. Účel x xxxxxx použití
Touto xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx analýzu xxxxxxxxxx semen x xxxxxx, xxxxxxx zkoušení xx řídí xxxxx xxxxxxxx Xxxx 136/66/XXX xx xxx 22. xxxx 1996.
Podle xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx ze xxxx následujících xxxxxxx:
1.1 Xxxxxx X – xxxxx extrahovatelné xxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx rostlinného xxxxxx, s výjimkou xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx okruhu xxxxxxx X.
1.2 Xxxxxx X – celkový xxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx krmiva xxxxxxxxxxx xxxxxx a xxx všechny krmné xxxxx. Xxxxxxx se xxx všechny materiály, x nichž není xxxxx tuk xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxx. xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx, vločkování x xxxxxxxxx).
1.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxx xxxxxxxxx, xxx se dosáhlo xxxxxxx xxxxxxxx postupem X, xxx xxxxxxxx X, xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxxx X.
2. Princip
2.1 Xxxxxx X
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Rozpouštědlo xx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx vysuší x xxxxx.
2.2 Xxxxxx X
Xxxxxx xx xxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxx zbytek xx xxx zpracuje xxxxx xxxxxxx A.
3. Činidla
3.1 xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx 40 x 50 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxx čísla xxxx být xxxxx xxx 1 a xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxx 2 xx/100 xx
3.2 síran xxxxx, bezvodý
3.3 kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 3 xxx XXx/x
3.4 xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx, Xxxxx-xxxxxxxx.
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx sifonem (Xxxxxxxxx přístroj), xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx 10 xxxxx za hodinu. X xxxx xxx xxxxxx by měla xxx refluxní xxxxxxxx xxx 10 xx xx xxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx 4.1.
4.3 Xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx na 75 °X ± 3 °X, nebo horkovzdušná xxxxxxxx na 100 °X ± 3 °X.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxx X (viz bod 8.1)
Xx extrakční xxxxxxx xx naváží 5 x xxxxxx s xxxxxxxxx na 1 xx (4.2) x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx.
Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.1) a xxxxxxxxxx šest xxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xx xxxxx, předem xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx [1].
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxx xx suší 1,5 xxxxxx v xxxxxxx (4.3). Xxxxx xx xxxxxxxxxxx x exsikátoru x xxxxx. Xxxx xx xxxxxxx 30 xxxxx, aby xx xxxxxxxx, zda je xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx 1 xx).
5.2 Xxxxxx X
Xx xxxxxxx x xxxxxx 400 xx nebo do xxxxxxx baňky x xxxxxx 300 xx xx odváží 2,5 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx (xxx xxx (8,2) x xxxxx xx 100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.3) x úlomky xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx kónická xxxxx xxxxxx refluxním chladičem. Xxxx se přivede xx mírného xxxx xx malém xxxxxxx xxxx na topné xxxxx x vaří xx xx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xx musí xxxxxxxx usazování xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxx x xxxxx se xxxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4), xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx dojitý xxxxxxxxx xxxxx zbavený xxxx. Xxxxxx xx promývá xxxxxxxx xxxxx, až xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Provede xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxx přítomnost ukazuje, xx se xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxx A.
Dvojitý xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx sklo x xxxx xx půldruhé xxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3) xxx xxxxxxx 100 °X ± 3 °X.
Xxxxxxx xxxxxxxxx papír x xxxxxxxxx zbytkem xx xxxxx xx extrakční xxxxxxx (4.2) x xxxxxxxx xxxxxxx vaty xxx tuku. Xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx přístroje (4.1) x dále xx xxxxxxxxx podle druhého x třetího xxxxxxxx xxxx 5.1.
6. Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx zbytku xx xxxxxxx xxxx procento xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxxx xxxxxxxxxx:
- 0,2 % x xxxxxxxxx xxxxxxx, při xxxxxx xxxx nižším xxx 5 %,
- 4,0 % xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xx 5 xx 10 %,
- 0,4 % x xxxxxxxxx xxxxxxx, při xxxxxx nad 10 %.
8. Xxxxxxxx
8.1 U xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx olejů x xxxx, které xx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxx xx 20 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx x xxxxxx xx x 10 xxxx x více xxxxx bezvodého xxxxxx xxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxx xx petroletherem (3.1) xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxx extrakt se xxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxxxxx xx. 50 xx xxxxxxx xx odpipetuje do xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx [2].
Rozpouštědlo xx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx vysuší x xxxxxxxxx se podle xxxxxxxxxx xxxxxxxx bodu 5.1.
Xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
(10 x + x) × 5
xxx:
x = hmotnost xxxxxx po xxxxx xxxxxxxx x gramech (xxxxxxx xxxx xxxxxxxx)
x = xxxxxxxx zbytku xx druhé xxxxxxxx x gramech
8.2 X xxxxxxx, xxxxx mají xxxxx obsah xxxx xx může xxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxx xx 5 x.
8.3 Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, která xxxx xxxxxx xxxxx vody, xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx B xxxxxxx x bezvodým xxxxxxx xxxxxx.
8.4 X xxxx 5.2 xx xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxx po filtraci xxxxxxxx použít horká xxxx xxxxx xxxx xxxxxxx.
8.5 X xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx 1,5 hod. Xx však xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vysoušení, xxxxx xxxx xxxx x nízkým xxxxxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx troubu.
8.6 Xxx obsahu xxxx xxx 15 % xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. Xxxxxx xx xx xxxxx xxxx xx xxxxx krmiva x xxxxx tuku x xxxxxx.
XXXX C
STANOVENÍ XXXXXXXXXXX
(2-[X-2-(xxxxxxxxxxxx)xxxxxxxxx]-3-xxxxxxxxxxxxxxxx-X1,X4-xxxxxx)
1. Xxxx a oblast xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx olachindoxu x krmivech. Xxxxx xxx stanovitelnosti xx 5 xx/xx.
2. Princip
Vzorek xx extrahuje xxxxx xxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vysoce účinnou xxxxxxxxxxx chromatografií (XXXX) xx xxxxxxxx fázi xx xxxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 methanol
3.2 xxxxxxxx, xxx HPCL
3.3 xxxx, xxx XXXX
3.4 xxxxxxx xxxx xxx XXXX:
Xxxx xxxx (3.3) x xxxxxxxxx (3.2), 900 + 100 (X + X)
3.5 xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx 2-[X-2-(xxxxxxxxxxxx)xxxxxxxxx]-3-xxxxxxxxxxxxxxxx-X1,X4-xxxxxx, E 851
3.5.1 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxx, 250 μx/xx
Xx xxxxxxx xxxxx o obsahu 200 xx xx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxxxxxx xx 0,1 xx x xxxxx xxx 190 ml xxxx. Xxxxx se xxxxxxx xx 20 xxxxx do xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx se roztok xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, doplní xxxxx xx značku x xxxxxxx. Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx v xxxxxxxxxx. Tento xxxxxx xx musí připravovat xxxxxxx xxxxx měsíc.
3.5.2 xxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxxx, 25 μx/xx
10,0 xx xxxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.1) xx xxxxxxx xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 100 ml, xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.4) x promíchá. Xxxxx xx obalí xxxxxxxxxx fólií x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.
3.5.3 kalibrační xxxxxxx
Xx xxxx odměrných xxxxx x xxxxxx 50 xx se odpipetuje 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0 x 20,0 xx pracovního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.2). Xxxxxx se mobilní xxxx (3.4) xx xxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx fólií. Tyto xxxxxxx xxxxxxxxxx 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 7,5 a 10,0 μx xxxxxxxxxxx xx xx.
Xxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 ultrazvuková xxxxx
4.2 xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.3 xxxxxxxx XXXX x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
4.3.1 xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 xx, xxxxxxx X18, 10 μx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx
4.4 membránové xxxxxx x xxxx 0,45 μx
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxxxxx je xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx nebo x xxxxxxxx z xxxxxxx skla.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx kontrolu, zda xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx interferující látky.
5.1.2 Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx krmiva xxxxxxxxxxx xxxxxxxx takového xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx ve xxxxxx X xxxxxxxxxxx xx úroveň 50 xx/xx xx xxxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku (3.5.1) xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx a xxxxxx se xxxxxx xx xxx 0,5 xx. Xxxxx xx 50 x xxxxxxxxxx xxxxxx, řádně xx xxxxxxxx x xxxxx xx 10 minut xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx se xxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Poznámka:
Pro xxxxx xxxx xxxxxx xx xxx modelové xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx vzorek x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx 50 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1000 ml, xxxxx xx 100 xx xxxxxxxxx (3.1) x baňka xx xxxxxx na pět xxxxx do ultrazvukové xxxxx (4.1). Xxxxx xx 410 xx xxxx x xxxxxxx xx x ultrazvukové xxxxx xxxxxxx 15 xxxxx. Xxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx, dále xx xxxxx 30 minut xx xxxxxxxx (4.2) x potom xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. 10,0 xx filtrátu xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 20 ml, xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) (xxx xxx 9. Xxxxxxxx). Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXXX (5.3).
5.3 Xxxxxxxxx XXXX
5.3.1 Parametry:
Následující xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx být použity xxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, že dávají xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3.1)
xxxxxxx fáze (3,4): Xxxx xxxx (3.3) x xxxxxxxxx (3.2), 900 + 100 (X + X)
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 ml/min
detekční xxxxxx xxxxx: 380 xx
xxxxx nástřiku: 20 μx–100 μl
Stabilita chromatografického xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxx, xx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5.3) xxxxxxxxxx 2,5 μx/xx, xx xx xxxxxxx konstantních xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx časů.
5.3.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx nástřiků x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxx za xxxxxxx xxxxxxxxx hodnot xxxxx (xxxxx) xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx koncentrací x μx/xx xxxx xxxxxxxxx.
5.3.3 Xxxxxx vzorku
Provede xx několik nástřiků xxxxxxxx vzorku (5.2) xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx (plocha) xxxx xxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Ze xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx xx zjistí koncentrace x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx grafem (5.3.2).
Xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx x v xx/xx je xxx xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = x × 1&xxxx;000 / m
kde:
c = xxxxxxxxxxx olachindoxu x xxxxxxxx xxxxxx (5.2) x μg/ml
m = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x x (5.2)
7. Xxxxxxxxxxx výsledků
7.1 Identita
Identita xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx opakovaným xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (xx-xxxxxxxxxxxxxx) xxxxx využitím xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx se porovnávají xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.3), xxxxxxxxxxxx 5,0 μx/xx xxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx stanovením x xxxxxxxxx (co-chromatography)
Extrakt xxxxxx (5.2) se xxxxxxx xxxxxxxxx přiměřeného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.3). Xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x extraktu vzorku.
S xxxxxxx xx přidané xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxx ke xxxxxxx xxxxx píku xxxxxxxxxxx. Šířka xxxx x polovině jeho xxxxx musí xxx x xxxxxxx ±10 % xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku.
7.1.2 Xxxxxxxx diodového xxxx
Xxxxxxxx xx vyhodnocují xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx musí xxx xxxxxx spektra zaznamenaný xx xxxxxxx píku xx chromatogramu stejný x nepřesností danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx polem xx udává ±2 xx;
x) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 400 nm xx nesmí xxxxxx xxxxxxx zkoušeného vzorku x standardu zaznamenaný xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit xx xxxxxxxxx částí xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx nikde xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) xxx xxxxxx délce xxxx 220 x 350 nm xx xxxxx xxxxxxxx vzestupu, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx ostatních x xxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx maxima x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx.
Xxxx-xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx splněno, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx stanovení, xxxxxxxxxxx xx stejném xxxxxx při xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 20 xx/xx, xxxxx xxxxxxxxxx15 % xxxxxxx xxxxxxxx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X xxxxx XX xxx xxxxxxxx xxxxxxx test, xxx xxxx xx 13 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx, včetně xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
| xxxxxx 1 |
xxxxxx 2 |
xxxxxx 3 |
xxxxxx 4 |
|
|
X |
13 |
10 |
11 |
11 |
|
X |
40 |
40 |
44 |
44 |
|
xxxxxxx (xx/xx) |
- |
14,6 |
48,0 |
95,4 |
|
(Xx) (xx/xx) |
- |
0,82 |
2,05 |
6,36 |
|
(XX) (mg/kg) |
- |
1,62 |
4,28 |
8,42 |
|
CVr (%) |
- |
5,6 |
4,3 |
6,7 |
|
CVR (%) |
- |
11,1 |
8,9 |
8,8 |
|
xxxxxxxxx xxxxx (xx/xx) |
- |
15 |
50 |
100 |
|
xxxxxxxxx (%) |
- |
97,3 |
96,0 |
95,4 |
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot
Sr: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxx koeficient xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
9. Xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx obsahující xxxx xxx 100 xx/xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx výsledky xxxxx xxxxxxxx xxxxxx x/xxxx xxxxxxxx extraktu (5.2) xxx, aby xx dosáhlo xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.3.2).
[1] Pokud xx má xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxx xxxxx za xxxxxxxx kuličky.
[2] Xxxxx xx má xxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxx, zamění se xxxxxx pemzy xx xxxxxxxx xxxxxxx.