Xxxxxxxx Komise 98/64/XX
xx xxx 3. xxxx 1998,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx stanovení aminokyselin, xxxx a xxxxxxxxxxx x krmivech a xxxxxx se xxxx xxxxxxxx 71/393/EHS
(Text x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s ohledem xx Smlouvu o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx na xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. července 1970 o xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx pozměněnou Xxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxx x Xxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisů xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx x složení, xx xxxxxxx xx xxxxxxx metod odběru xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xx Společenství;
vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxx 79/373/XXX xx xxx 2. xxxxx 1979 x xxxxxxx krmných směsí xx xxx [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxx směrnicí Xxxxxx 97/47/ES [3], x xxxxxxxx Xxxx 93/74/XXX xx dne 13. xxxx 1993 x krmivech xxxxxxxx xx xxxxxxxxx účelům xxxxxx [4], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/ES [5], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx xxxx xxx xxxxxxx xx označení xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Rady 70/524/XXX ze xxx 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx látkách x xxxxxxxx [6], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx Xxxxxx 98/19/ES [7], xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xx označení, xxxxx xx xxxx xxxxx přidána xx xxxxxxx směsí;
vzhledem x xxxx, že xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/393/XXX xx dne 18. xxxxxxxxx 1971, kterou xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv [8], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Komise 84/4/EHS [9], xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x xxx zjišťování xxxxxx xxxx; xx xx xxxxxx uvedené xxxxxx xxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx těchto xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx pro xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx aminokyselin, xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Článek 2
X xxxxxxx xxxxxxxx Komise 71/393/XXX xx xxx "4. Xxxxxxxxx obsahu xxxx" xxxxxxxxx částí X xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Článek 3
1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx právní x xxxxxxx předpisy xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxxxx 1998. Xxxxxxx x nich neprodleně Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. xxxxx 1999.
Tato xxxxxxxx xxxxxxx členskými státy xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx tuto xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx ustanovení vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x oblasti xxxxxxxxxx této xxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 5
Xxxx směrnice xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu xxx 3. xxxx 1998.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxx
xxxx Komise
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[3] Xx. xxxx. X 211, 5.8.1977, x. 45.
[4] Úř. věst. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[5] Úř. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
[6] Xx. věst. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[7] Xx. xxxx. X 96, 28.3.1998, x. 39.
[8] Xx. xxxx. X 279, 2.12.1971, x. 7.
[9] Xx. věst. X 15, 18.1.1984, x. 28.
XXXXXXX
XXXX X
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx xx stanovení xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx) x vázaných (xxxxxxx xxxxxx a xxxxx) xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Metoda xx xxxxxxxxxx pro xxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxx(x)xx, xxxxxxxxx, xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, arginin, xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxx, fenylalanin, xxxxxx, xxxxx, xxxxxxx a xxxxx.
Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x nemůže xxxx x xxxxxxxxxxxx rozlišovat xxxx xxxxxxx X x L. Xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
2.1 Xxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx extrahují zředěnou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx srážejí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx. Zfiltrovaný xxxxxx xx xxxxxx xx pH 2,20. Xxxxxxxxxxxxx xx separují xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx se po xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 570 xx.
2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx stanovovaných aminokyselinách. Xxxx(x)xx x xxxxxxxxx xxxx xxx před xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx cysteovou x xx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx neoxidovaných xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx 1 mohou být xxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xx xxxxxxx xxx 0 xX xxxxx kyseliny xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx rozloží xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (x = 6 xxx/x) po 23 xxxxx. Hydrolyzát xx xxxxxx xx xX 2,20. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx chromatografií x xxxxxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx fotometrickou xxxxxxx xxx 570 xx (440 xx xxx xxxxxx).
3. Činidla
Musí xxx xxxxxxx dvakrát xxxxxxxxxxx xxxx nebo voda xxxxxxx jakosti (xxxxxxxx &xx; 10 μX).
3.1 xxxxxxx vodíku, x = 30 %
3.2 xxxxxxxx xxxxxxxx, x = 98–100 %
3.3 xxxxx
3.4 xxxxxxxxx xxxxx
3.5 xxxxxxxx xxxxx
3.6 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx
3.7 kyselina xxxxxxxxxxxxxx o hustotě xxxxxxxxx 1,18 x/xx
3.8 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx
3.9 2,2-xxxxxxxxxxxxx (thiodiglykol)
3.10 xxxxxxx xxxxx
3.11 xxxxxxxxx
3.12 xxxxxxxxxxx, xxx varu 40–60 °X
3.13 xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx
3.14 xxxxx – xxxx (&xx; 10 xxx xxxxxxx)
3.15 1-xxxxxxx
3.16 aminokyseliny
3.16.1 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x bodě 1; xxxxx sloučeniny xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xx vakuu xxx P2O5 nebo X2XX4 xxxxx xxxx xxxxxxxx
3.16.2 xxxxxxxx xxxxxxxx
3.16.3 xxxxxxxxxxxxxxx
3.17 xxxxxxxx sodný, xxxxxx x = 7,5 xxx/x:
300 g XxXX (3.5) xx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxx xx 1 litru.
3.18 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 1 mol/l:
40 x NaOH (3.5) xx xxxxxxxx xx xxxx a xxxxxx xx 1 xxxxx.
3.19 xxxxxx kyseliny xxxxxxxx x xxxxxx:
Xxxxxx xx 889 g xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2) xx 111 x xxxx x xxxxx se 4,73 g fenolu (3.3).
3.20 xxxxxxxxxxxx směs, x = 6 xxx HCl/l x xxxxxxxxx 1 x xxxxxx/x:
X 492 xx XXx (3.7) xx xxxxx 1 x xxxxxx (3.3) x xxxxxx xx xxxxx xx 1 xxxxx.
3.21 xxxxxxxxx xxxx, x = 6 mol XXx/x s přídavkem 2% xxxxxxxxxxxxx:
8,2 xx XXx (3.7) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 900 xx xxxx, xxxxx xx 20 xx xxxxxxxxxxxxx (3.9) a xxxxxx vodou na 1 litr (3.7 x 3.9 xx xxxxx xxxxxxx xxxxx).
3.22 xxxxxxxx 5-sulfosalicylová, β = 6 %:
60 x kyseliny 5-xxxxxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxx xxxxx xx 1 xxxx.
3.23 xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxx xxxxxxxxxxx – xxxxx):
X xxxx xxxxxxx se xxxxxx 0,5 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.1) x 4,5 ml xxxxxxx xxxxxxxx mravenčí x xxxxxxx (3.19); xxxxxxx xx x klidu 1 xxxxxx při 20–30 °C, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, před xxxxxxxx xx vzorku se xxxx ochladí x xxxxx x xxxxxxx xxxxx (15 xxxxx).
Xxxxx:
Xx xxxxx zamezit xxxxxxxx x kůží x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx.
3.24 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x = 0,2 xxx Xx+/x, pH 2,20:
X xxxxxxxxx 800 xx vody se xxxxxxxx 19,61 g xxxxxxxxx xxxxxxx (3,8), 5 xx xxxxxxxxxxxxx (3.9), 1 x xxxxxx (3.3) a 16,50 xx XXx (3.7). xX xx xxxxxx na 2,20. Xxxxxx se xxxxx xx xxxxx 1 xxxxx.
3.25 eluční tlumivé xxxxxxx xxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (4.9)
3.26 ninhydrinové xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (4.9)
3.27 Standardní xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tyto xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx xxx 5 °C.
3.27.1 xxxxxxx standardní základní xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.16.1), x = 2,5 μxxx/xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx roztok xxx obdržet x xxxxxxxx připravené.
3.27.2 xxxxxxx xxxxxxxxxx základní xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx, x = 1,25 μxxx/xx
0,2115 g xxxxxxxx xxxxxxxx (3.16.2) x 0,2265 g xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx (3.16.3) v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.24) x litrové xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztokem. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °X nejdéle 12 xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (3.27.1) obsahuje xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx.
3.27.3 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx vnitřního xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxx, x = 20 μxxx/xx
0,6560 x xxxxxxxxxx (3.13) xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.24) x xxxxxxx xxxxx xx 250 xx a xxxxxx xx xx značku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 6 xxxxxx.
3.27.4 xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx, x = 5 xxxx/50 μl xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx x c = 10 xxxx/50 μx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
Xx 100 ml kádince xx rozpustí 2,2 x chloridu xxxxxxx (3.10) x 30 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24). Xxxxxxx xx 4,00 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx aminokyselin (3.27.1), 4,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx základního xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx (3.27.2) x 0,50 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx standardu (3.27.3), xxxxx se používá. xX se xxxxxx xx 2,20 xxxxxxxxxx xxxxxx (3.18).
Xxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx do 50 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx po xxxxxx citronanovým tlumivým xxxxxxxx (3.24) x xxxxxxx se.
Skladuje xx xxx xxxxxxx pod 5 °X nejdéle 3 xxxxxx.
Xxx xxxx xxxxxxxx 9.1.
3.27.5 xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.3.1 x xxx extrakty (5.2). Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx 3.27.4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxx při xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 3 měsíce.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 xxxxx x kulatým xxxx x obsahu 100 xxxx 250 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
4.2 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx 100 ml xx šroubovým xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx těsněním (xxxx. Xxxxx, Schott) pro xxxxxxx x sušárně
4.3 xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x tepelnou xxxxxxxx s přesností xxxxx xxx ±2 °X
4.4 xX metr (xxx desetinná místa)
4.5 xxxxxxxxxx xxxxx (0,2 μx)
4.6 xxxxxxxxxxx
4.7 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.8 xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.9 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx zařízení XXXX x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx kolonovou xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxx xx naplní xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx oddělení xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx čerpadla xx xxxxxxxx xxxxxxx ± 0,5 % xx dobu xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kalibraci x xxxxxxx vzorku.
Některé xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx v xxxxxxx, xx xxxxxxxxxx vykazuje xxxxxxxxxxx sodíkových xxxxx x = 0,8 xxx/x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x oxidačního xxxxx. Xxxx analyzátory xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx kyseliny xxxx xxxxxxx xX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 xx. Xxxxxxxx xx má xxxxxxxx ve xxxxx xxx xxxxxxx nejvýše 40 °X.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxx sítem x xxx 0,5 xx. Vzorky x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °C xxxx xxx xxxxxxxx. Xxxxxx x vysokým xxxxxxx xxxx se xxxx xxxxxx extrahují petroletherem (3.12).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x krmivech x x xxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx množství (1–5 x) upraveného xxxxxx (5.1) x xxxxxxxxx xx 0,2 xx x xxxxx xx 100,0 ml xxxxxxxxx xxxxx (3.21). Xxxxx se xxxxx 60 xxxxx xx xxxxxxxxxx třepačce xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.8). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 100 xx.
Xx stálého xxxxxxx xx xxxxx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxx xx magnetické xxxxxxxx xxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx odstředí xxx, xxx xx odstranila xxxxxxx xxxxxxxxx. 10,0 xx odstředěného xxxxxxx xx přenese xx xxxxxxx o obsahu 100 ml, xX xx xxxxxx na 2,20 xxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztoku (3.24) xx odměrné xxxxx xxxxxxxxx velikosti x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24).
Použije-li xx interní xxxxxxxx, xxxxx se 1,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3) xx každých 100 xx odstředěného xxxxxxx x xxxxx xx doplní xx xxxxxx tlumivým xxxxxxxx (3.24).
Xxxx xx pokračuje xxxxx xxxx 5.4 – xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx-xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx týž xxx, xxxxxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxx 5 °X.
5.3 Stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
5.3.1 xxxxxxx
0,1 až 1 x upraveného xxxxxx (5.1) se xxxxxx x xxxxxxxxx 0,2 xx:
- do xxxxx x kulatým xxxx x xxxxxx 100 xx (4.1) xxx otevřenou hydrolýzu (5.3.2.3) xxxx
- xx xxxxx s xxxxxxx xxxx o xxxxxx 250 xx (4.1), xxxxxxxx-xx se xxxxx xxxxxxxxxxx sodíku xxxx
- xx xxxxxx x xxxxxx 100 xx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.2) (xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx 5.3.2.4).
Odvážená xxxx xxxxxx xx měla xxx xxxxx xxxxxx xxx 10 xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 xx.
Xxxxx/xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx 0 °X, xxxxx se xxxxx 5 xx xxxxxxxx směsi (3.23) x promíchá se xxxxxxxxx lžící se xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx/xxxxxx xx uzavře i xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x vloží xx x x xxxxx x ledovou xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 0 °X x ponechá xx xxx 16 xxxxx. Xx 16 xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.4).
Xxxx se xxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1.
5.3.2 xxxxxxxxx
5.3.2.1 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků
K xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.3.1 xx xxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxx směsi (3.20) xxx, aby xxxxxxx xxxxx xxxxxx na xxxxxxx nádoby xxx xx lžíci. Xxxxx xxxxxxxxx postupu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 nebo 5.3.2.4.
5.3.2.2 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxx 100 xx nebo 250 xx (4.1) xxxx xx xxxxxx x obsahu100 xx xx xxxxxxxxxxx uzávěrem (4.2) xx xxxxxx 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) x xxxxxxxxx xx 0,2 mg. Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx měla xxx xxxxx xxxxxx asi 10 mg. Xxxxxxx xx přidá 25 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.20) x smíchá xx xx xxxxxxx. Xxxx se postupuje xxx podle 5.3.2.3 xxxx xxxxx 5.3.2.4.
5.3.2.3 xxxxxxxx xxxxxxxxx
Xx xxxxx x baňce (xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2) xx přidají 3 skleněné xxxxxxx x xxxx xx xxxxx do mírného xxxx xxx zpětným xxxxxxxxx xx xxxx 23 xxxxx. Xx xxxxxxxx hydrolýzy se xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 5 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztoku (3.24). Xxxxx xx xxxxxx x ochladí se x xxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3.
5.3.2.4 xxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx podle 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2 xx xxxxxx xx xxxxxxx (4.3) při 110 °X. Xxx xx xxxxx xxxxx hodiny xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx k výbuchu, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx na xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xx uplynutí xxxxx hodiny xx xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx baňka xx xxxxxxx v xxxxxxx (4.3) 23 xxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx baňka xxxxx xx xxxxxxx, opatrně xx xxxxxxxxxx xxxxxx x postaví xx xx xxxxx x xxxxxxx vodou. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxx xX (5.3.3) xx xxxxx baňky xxxxxxxxxxxxx převede xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztoku (3.24) xx xxxxxxx x obsahu 250 xx xxxx xx xxxxx s xxxxxxx xxxx o xxxxxx 250 xx.
Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3
5.3.3 xxxxxx pH
Podle toho, xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9), postupujte xxx xxxxxx xX xxxxx 5.3.3.1 xxxx 5.3.3.2.
5.3.3.1 xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.9), xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx vyžaduje xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xx-xx xx xxxxxx xxxxx kyselin), xxxxxxxxxx xx použít vnitřní xxxxxxx standardní roztok (3.27.3).
X xxxxxxx xxxxxxx xx před xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx hydrolyzátu 2,00 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx základního xxxxxxx (3.27.3).
Do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4. xx xxxxxxx 2 xxxxx 1-xxxxxxxx (3.15).
Na xxxxxxx xxxxxxx (4.7) se xxxxx xxxxx na 5-10 xx xx xxxxx xxx 40 °X. Xxxxx xx xx objem xxxxxxx xxxxxx pod 5 xx, xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxx.
xX xx xxxxxx na 2,20 xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (3.18) a xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.3.2 xxx xxxxxxx ostatní xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9)
Xxxxxxxxxxx připravené xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx přidáním 17 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.17), xx xxxxxxx xxxxxxx x při zajištěné xxxxxxx xxx 40 °X.
xX xx xxxxxx xx 2,20 roztokem xxxxxxxxx sodného (3.18) xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.4 xxxxxx vzorků xxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx (5.3.3.1 nebo 5.3.3.2) x xxxxxxxxx xX xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pomocí citronanového xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 200 xx a xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24) se xxxxxx xx xxxxxx.
Xxxxx-xx xxxxx použit xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se 2,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3) x xxxxx xx xxxxxx xx značku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24). Xxxxxxxx xx promíchá.
Dále xx přejde k xxxxxxxxxxxxxx (5.4)
Nejsou-li xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxx, xxxxxxxxxxx xx xxx teplotě xxx 5 °C.
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx musí mít xxxxxxx (5.2) x xxxxxxxxxx (5.3.4) pokojovou xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 0,2 μ (4.5). Výsledný xxxx roztok xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9).
Xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx nebo automaticky. Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx na xxxxxxx nastřikovalo xxxxxx xxxxxxxx roztoku ± 0,5 % xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx. Xxxxxx poměr sodíku x xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxx xx možná xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Standard xxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24) xxx, aby xxxxxx píku standardu xxxxxxx 30 – 200 % plochy xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx na xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx jednotlivé xxxxxxxxxxxxx xx sebe xxxxxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx by xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxx xxx dosaženy xxxx xxxxxxx poměry xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx musí obsahovat xxxxxxx 30 % xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx mohou xxx xxxxx přesně xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx aminokyselin (4.9).
Xxx xxxxxxxx threoninu x xxxxxx by xxxxx xxxxx sedla a xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxxxx xx aminokyselin xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx přesahovat 2:10 (pokud se xxxxxxx xxxxx cyst(e)in, xxxxxxxxx, threonin a xxxxx, xx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx přilehlých xxxx). Xxx všechny xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxx než 1:10.
Xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx lysin xxxx xxxxxxxxx xx "xxxxxxxxxx xxxxxxxx" x xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x vyjádření xxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxx x standardu xx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx aminokyselinu x xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x x xx kg xxxxxx.
x xxxxxxxxxxxxx xx kg xxxxxx = X × X × XX × X / X × X × 1 000
Xx-xx xxxxxx interní xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx: D / X
X = plocha xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx
X = xxxxxx xxxx kalibračního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
X = plocha xxxx xxxxxxxxx standardu x hydrolyzátu xxxx x xxxxxxxx
X = xxxxxx xxxx interního xxxxxxxxx v kalibračním xxxxxxxxxxx roztoku
MV = xxxxxxxxxxx xxxx stanovovaných xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x μxxx/xx
X = xxxxxxxx navážky xxxxxx (x) (xxxxxxxxxx xx původní xxxx xxxxx xx vzorek xxxxxxx nebo xxxxxxxx)
X = celkový xxxxx xxxxxxxxxx roztoku (5.3.4) x xx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vypočteného xxxxx 6.1
Xxxxxx x cystein xx v hydrolyzátech xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx kyselina xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx se xxxx xxxxxx (X6X12X2X4X2, XX 240,30) x xxxxxxxx XX 120,15 (= 0,5 x 240,30).
Xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx xxxx methioninsulfon, xxx vypočítává se xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxxxxxxx: 149,21.
Xxxxxxx volný xxxxxxxxx xx xxxxxxxx po xxxxxxxx jako xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx MV.
6.1 Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (X) xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (5.2) xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx vzorce:
F = 100 xx × (10 ml + 5 xx) / 10 ml × X&xxxx;xx / 10xx
X = xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx 1990 xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxx xxxx xxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxx broilery, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx). Xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a standardních xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
xxxxxxx xxxxxxx x x/xx
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx prasata |
6,94 x = 15 |
3,01 x = 17 |
3.27 x =.17 |
9,55 n = 13 |
|
Xxxxx směs xxx brojlery |
9,31 x = 16 |
3,92 x = 18 |
5,08 x = 18 |
13,93 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
22,32 x = 16 |
5,06 x = 17 |
12,01 x = 17 |
47,74 x = 15 |
|
Premix |
58,42 x = 16 |
- |
90,21 x = 16 |
98,03 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.1 Opakovatelnost
Opakovatelnost xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx standardní xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xx) xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x g/kg
|
Referenční xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs pro xxxxxxx |
0,13 x = 15 |
0,10 x = 17 |
0,11 x = 17 |
0,26 n = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
0,20 n = 16 |
0,11 x = 18 |
0,16 n = 18 |
0,28 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,48 n = 16 |
0,13 x = 17 |
0,27 n = 17 |
0,99 x = 15 |
|
Xxxxxx |
1.30 x = 16 |
_ |
2,19 n = 16 |
2,06 x = 16 |
n = xxxxx zúčastněných xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx (%) xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odchylek (Sr)
|
Referenční xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
1,9 a = 15 |
3,3 x = 17 |
3,4 n =.17 |
2,8 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
2,1 x = 16 |
2,8 x = 18 |
3,1 x = 18 |
2,1 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
2,7 n = 16 |
2,6 n = 17 |
2,2 x = 17 |
2,4 x = 15 |
|
Xxxxxx |
2,2 n = 16 |
- |
2,4 x = 16 |
2,1 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.2 Reprodukovatelnost
Výsledky xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx shora xxxxxxxxx zkoušek jsou xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (XX) x x/xx
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
0,28 n = 15 |
0,30 x = 17 |
0,23 x = 17 |
0,30 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxxx |
0,48 x = 16 |
0,34 n = 18 |
0,55 x = 18 |
0,75 n = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,85 n = 16 |
0,62 x = 17 |
1,57 x = 17 |
1,24 x = 15 |
|
Xxxxxx |
2,49 x = 16 |
- |
6,20 x = 16 |
6,62 n = 16 |
n = xxxxx xxxxxxxxxxxx laboratoří
Variační xxxxxxxxxx (%) mezilaboratorních xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (XX)
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs pro xxxxxxx |
4,1 x = 15 |
9,9 n = 17 |
7,0 n = 17 |
3,2 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxxx |
5,2 x = 16 |
8,8 x = 18 |
10,9 x = 18 |
5,4 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
3,8 x = 16 |
12,3 n = 17 |
13,0 n = 17 |
3,0 x = 15 |
|
Premix |
4,3 n = 16 |
- |
6,9 n = 16 |
6,7 x = 16 |
x = xxxxx zúčastněných laboratoří
8. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx materiálů
Správné xxxxxxx uvedené xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx-xx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx certifikovanými xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx analyzátory xxxxxxxxxxxx xx xx měly xxxxxxx koncentrace kalibračních xxxxxxx xxxxxxxxx aminokyselin (xxx 3.27.4 x 3.27.5) x xxxxxxx xxxxxx (5.3.4) považovat xx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx se musí xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx citronanovým xxxxxxxx xxxxxxxx tak, xxx xx dosáhlo ploch xxxx uprostřed xxxxxx xxxxxxx.
9.2 Xxxxx xx x analýze hydrolyzátů xxxxxxx zařízení pro xxxxxx xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, musí být xxxxxxxx zkoušek xxxxxxxxxxxxxx x souladu s xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Při xxxxxxx xxxx metody x krmiv xxxxxxxxxxxx xxxx xxx 1 % chloridu (koncentráty, xxxxxxxxx xxxxxx, doplňková xxxxxx) xxxx dojít x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx xx proto xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
XXXX X XXXXXXXXX XXXX
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx tuku v xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx analýzu xxxxxxxxxx semen x xxxxxx, xxxxxxx zkoušení xx xxxx podle xxxxxxxx Xxxx 136/66/EHS xx xxx 22. xxxx 1996.
Xxxxx druhu x složení xxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxx jeden ze xxxx následujících xxxxxxx:
1.1 Xxxxxx A – xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxx xx použitelná xxx xxxxxx rostlinného xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx X.
1.2 Postup X – celkový xxx
Xxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx se xxx xxxxxxx materiály, x xxxxx xxxx xxxxx tuk xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (např. xxxxx, xxxxxxxx, bramborové xxxxxxxx x výrobky, xxxxx xxxx podrobeny xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx).
1.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx všech případech, xxx xx dosáhlo xxxxxxx xxxxxxxx postupem X, xxx postupem X, je třeba xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx X.
2. Princip
2.1 Xxxxxx X
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a zbytek xx xxxxxx a xxxxx.
2.2 Xxxxxx B
Vzorek xx xxxxxxx x xxxxxxxxx chlorovdíkovou. Xxxx xx ochladí x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx A.
3. Činidla
3.1 xxxxxxxxxxx s bodem xxxx mezi 40 x 50 °X. Xxxxxxx bromového čísla xxxx xxx menší xxx 1 x xxxxxx po xxxxxxxxxx xxxxx než 2 xx/100 ml
3.2 síran xxxxx, xxxxxxx
3.3 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 3 xxx XXx/x
3.4 xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, např. xxxxxxxxx, Hyflo-supercel.
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxx, se xxxxxxx (Xxxxxxxxx přístroj), xxxxxxxx xxxxxxxx by měla xxxxxxx asi 10 xxxxx xx hodinu. X typu bez xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx 10 xx xx minutu.
4.2 Extrakční xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx 4.1.
4.3 Xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx 75 °X ± 3 °X, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na 100 °X ± 3 °X.
5. Postup
5.1 Xxxxxx X (viz xxx 8.1)
Xx extrakční xxxxxxx xx xxxxxx 5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx (4.2) a xxxxxxxxx smotkem vaty xxx tuku.
Patrona se xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.1) x xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xx suché, předem xxxxxxx baňky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx [1].
Xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxx xx xxxx 1,5 xxxxxx v sušárně (4.3). Xxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx x xxxxx. Xxxx xx dalších 30 xxxxx, aby xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx (xxxxxx hmotnosti xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx váženími xxxx být menší xxx 1 xx).
5.2 Xxxxxx B
Do xxxxxxx x xxxxxx 400 xx xxxx xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 300 xx xx xxxxxx 2,5 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx (xxx xxx (8,2) x xxxxx xx 100 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.3) x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx kónická xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxx na topné xxxxx a vaří xx xx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx.
Xxxx se xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4), aby xxx filtraci xxxxxxx xx ztrátám tuku. Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxx dojitý filtrační xxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx žádný xxx. Xxxx xxxxxxxxxx ukazuje, xx xx xxxxxx xxxx před xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx petroletherem xxxxx xxxxxxx X.
Xxxxxxx filtrační xxxxx se xxxxxxx xx položí na xxxxxxxx xxxx a xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3) xxx xxxxxxx 100 °X ± 3 °X.
Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (4.2) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx. Patrona xx vloží do xxxxxxxxxxx přístroje (4.1) x xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 5.1.
6. Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx zbytku se xxxxxxx jako xxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Opakovatelnost
Rozdíl xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx vzorku xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx přesáhnout:
- 0,2 % v absolutní xxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 5 %,
- 4,0 % relativně x xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx xx 5 xx 10 %,
- 0,4 % x xxxxxxxxx hodnotě, xxx xxxxxx nad 10 %.
8. Xxxxxxxx
8.1 X xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx a xxxx, které xx xxxxxxx xxxx nebo xxxxx neumožňují xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxx xx 20 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx a smíchá xx s 10 xxxx x xxxx xxxxx bezvodého síranu xxxxxxx (3.2). Extrahuje xx xxxxxxxxxxxxx (3.1) xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxx extrakt xx xxxxxx na 500 xx xxxxxxxxxxxxx (3.1) x promíchá xx. 50 ml roztoku xx odpipetuje xx xxxx xxxxx, předem xxxxxxx baňky, obsahující xxxxxx xxxxx [2].
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 5.1.
Xxxxx xxxx se xxxxxxxx xxxx procento xx vzorku pomocí xxxxxxxxxxxxx vzorce:
(10 x + x) × 5
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxx xx první xxxxxxxx x xxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxxxxx)
x = xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx
8.2 X xxxxxxx, xxxxx mají xxxxx xxxxx tuku xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx 5 x.
8.3 Xxxxxx xxx domácí xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx vody, xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx a extrakcí xxxxx xxxxxxx X xxxxxxx x bezvodým xxxxxxx xxxxxx.
8.4 X xxxx 5.2 se xxxx xx opláchnutí xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx horká xxxx xxxxx vody xxxxxxx.
8.5 U xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx doba xxxxxx xxx 1,5 xxx. Xx xxxx třeba xxxxxxx přílišnému xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx x nízkým xxxxxxxxx. Xx xxxxx použít x xxxxxxxxxxx troubu.
8.6 Xxx xxxxxx tuku xxx 15 % xx doporučuje provést xxxx xxxxxxxxxx extrakci xxxxx xxxxxxx X x xxxxxxxx extrakci xxxxx postupu X. Xxxxxx to xx xxxxx xxxx na xxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx x xxxxxx.
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXXX
(2-[X-2-(xxxxxxxxxxxx)xxxxxxxxx]-3-xxxxxxxxxxxxxxxx-X1,X4-xxxxxx)
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Dolní xxx stanovitelnosti je 5 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx směsí xxxx x methanolu. Xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx chromatografií (XXXX) xx reverzní xxxx xx použití XX xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 xxxxxxxx
3.2 xxxxxxxx, pro XXXX
3.3 xxxx, xxx XXXX
3.4 xxxxxxx fáze pro XXXX:
Xxxx xxxx (3.3) x methanolu (3.2), 900 + 100 (X + X)
3.5 xxxxxxxxxx látka: xxxxx xxxxxxxxxx 2-[N-2-(hydroxyethyl)karbomoyl]-3-methylchinoxalin-N1,N4-dioxid, E 851
3.5.1 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, 250 μx/xx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xx xx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxxxxxx na 0,1 xx a xxxxx xxx 190 xx xxxx. Xxxxx xx xxxxxxx na 20 xxxxx do xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xx xxxxxxx x ultrazvukové xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxx xx značku a xxxxxxx. Baňka xx xxxxx xxxxxxxxxx fólií x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx. Tento xxxxxx xx musí připravovat xxxxxxx každý xxxxx.
3.5.2 xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, 25 μx/xx
10,0 xx xxxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.1) xx přenese xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 100 xx, xxxxxx se xx xxxxxx xxxxxxx fází (3.4) a xxxxxxxx. Xxxxx xx obalí xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx v chladničce. Xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.
3.5.3 xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx xx xxxxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0 a 20,0 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.2). Xxxxxx se xxxxxxx xxxx (3.4) xx xxxxxx x promíchá. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx fólií. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 7,5 x 10,0 μx olachindoxu xx xx.
Xxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 xxxxxxxxxxxx xxxxx
4.2 xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.3 zařízení XXXX x xxxxxxxxx xxxxxxx délkou ultrafialového xxxxxxxxx nebo x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pole
4.3.1 xxxxxx pro kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 mm, xxxxxxx X18, 10 μx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx
4.4 xxxxxxxxxx filtry x xxxx 0,45 μx
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx postupy xx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx z xxxxxxx xxxx.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx krmivo se xxxx xxxxxx analyzovat xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx obohaceného xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx obsahu ve xxxxxx X fortifikaci xx xxxxxx 50 xx/xx se xxxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku (3.5.1) xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx x xxxxxx xx xxxxxx xx xxx 0,5 xx. Xxxxx xx 50 x modelového xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx a xxxxx xx 10 xxxxx xxxxxx, xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx se xxxxxx x extrakci (5.2).
Poznámka:
Pro xxxxx této xxxxxx xx xxx modelové xxxxxx podobného typu xxxx xxxxxxxx xxxxxx x nesmí xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Naváží xx xxxxxxxxx 50 g xxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x. Xxxxxxx xx do xxxxxxx baňky o xxxxxx 1000 xx, xxxxx xx 100 xx methanolu (3.1) x baňka xx xxxxxx xx xxx xxxxx do xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Přidá xx 410 xx xxxx x xxxxxxx xx v xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 15 xxxxx. Xxxxx se xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxx xx xxxxx 30 minut xx třepačce (4.2) x xxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. 10,0 xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 20 ml, xxxxxx se xxxxx xx značku a xxxxxxxx. Xxxxxxx část xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) (viz xxx 9. Poznámky). Xxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxx HPLC (5.3).
5.3 Xxxxxxxxx XXXX
5.3.1 Xxxxxxxxx:
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx doporučené, xxxxx xxx použity xxxx xxxxxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
xxxxxxxxxx kolona (4.3.1)
xxxxxxx xxxx (3,4): Xxxx xxxx (3.3) x methanolu (3.2), 900 + 100 (X + X)
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 ml/min
detekční xxxxxx délka: 380 xx
xxxxx xxxxxxxx: 20 μx–100 μx
Xxxxxxxxx chromatografického xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxx, že xx xxxxxxxxxx nastříkne kalibrační xxxxxx (3.5.3) xxxxxxxxxx 2,5 μx/xx, xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx píků x xxxxxxxxxx xxxx.
5.3.2 Kalibrační xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxx) xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx jako xxxxxxx x příslušných koncentrací x μg/ml xxxx xxxxxxxxx.
5.3.3 Roztok vzorku
Provede xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2) xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx se střední xxxxx (xxxxxx) píků xxxxxxxxxxx.
6. Výpočet výsledků
Ze xxxxxxx hodnoty xxxxx (xxxxxx) píků xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xx zjistí xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku x μg/ml porovnáním x xxxxxxxxxxx xxxxxx (5.3.2).
Xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx x x xx/xx je xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = x × 1 000 / x
xxx:
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku (5.2) x μx/xx
x = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x x (5.2)
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Identita
Identita xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx opakovaným xxxxxxxxxx x přídavkem (co-chromatography) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx extraktu xxxxxx (5.2) a kalibračního xxxxxxx (3.5.3), xxxxxxxxxxxx 5,0 μx/xx xxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (xx-xxxxxxxxxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxx (5.2) se obohatí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.3). Xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku.
S xxxxxxx xx přidané xxxxxxxx a zředění xxxxxxxx xx mělo xxxxx xxx ke xxxxxxx výšky xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx jeho xxxxx musí xxx x xxxxxxx ±10 % xxxxxxx šířky xxxx olachindoxu v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku.
7.1.2 Xxxxxxxx diodového xxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx délce maximální xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx musí xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx píku xx xxxxxxxxxxxxx stejný x nepřesností danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Pro xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx ±2 xx;
x) xxx vlnové xxxxx xxxx 220 x 400 nm xx nesmí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x standardu xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Tohoto xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx vykázána xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx nikde xxxxxxxx xxxx xxxxx spektry xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx;
x) xxx vlnové xxxxx xxxx 220 a 350 xx xx xxxxx spektrum vzestupu, xxxxxxx x sestupu xxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxx xx xxxxxxxxx x této částí xxxxxxx v xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx kritéria xx xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx stejná xxxxxx x xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx bodech xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % absorbance spektra xx xxxxxxx píku.
Není-li xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx splněno, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 20 xx/xx, xxxxx xxxxxxxxxx15 % xxxxxxx xxxxxxxx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X xxxxx XX byl xxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxx němž xx 13 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx selata, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx jsou uvedeny x xxxxxxxxxxx tabulce:
|
| xxxxxx 1 |
vzorek 2 |
vzorek 3 |
xxxxxx 4 |
|
|
L |
13 |
10 |
11 |
11 |
|
A |
40 |
40 |
44 |
44 |
|
střední (xx/xx) |
- |
14,6 |
48,0 |
95,4 |
|
(Xx) (xx/xx) |
- |
0,82 |
2,05 |
6,36 |
|
(XX) (mg/kg) |
- |
1,62 |
4,28 |
8,42 |
|
CVr (%) |
- |
5,6 |
4,3 |
6,7 |
|
XXX (%) |
- |
11,1 |
8,9 |
8,8 |
|
xxxxxxxxx xxxxx (xx/xx) |
- |
15 |
50 |
100 |
|
xxxxxxxxx (%) |
- |
97,3 |
96,0 |
95,4 |
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx jednotlivých hodnot
Sr: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
XX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
CVr: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxx koeficient xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
9. Xxxxxxxx
Xxxxxxx tato metoda xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx obsahující xxxx xxx 100 xx/xx xxxxxxxxxxx, je možné xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx navážkou xxxxxx x/xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (5.2) tak, xxx xx xxxxxxx koncentrace x xxxxxxx kalibračního xxxxx (5.3.2).
[1] Xxxxx xx má xxx xxxxxxxx zkoušet na xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxx pemzy za xxxxxxxx xxxxxxx.
[2] Pokud xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxx xxxxx za xxxxxxxx xxxxxxx.