Směrnice Komise 98/64/XX
xx xxx 3. xxxx 1998,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx stanovení aminokyselin, xxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxx se xxxx xxxxxxxx 71/393/EHS
(Text x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Evropského společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX za xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv [1], xxxxxxxxx pozměněnou Xxxxx x přistoupení Xxxxxxxx, Xxxxxx x Xxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx směrnice 70/373/EHS xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx kontroly, zda xxxxxx splňují požadavky xxxxxxxxxxx z xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisů xxxxxxxxxx xx jejich xxxxxxx x složení, xx xxxxxxx za xxxxxxx metod odběru xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx ve Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Rady 79/373/XXX xx dne 2. xxxxx 1979 x xxxxxxx krmných xxxxx xx xxx [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 97/47/XX [3], x xxxxxxxx Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. září 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx účelům xxxxxx [4], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/ES [5], xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx musí být xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx k tomu, xx xxxxxxxx Rady 70/524/XXX ze xxx 23. listopadu 1970 x xxxxxxxxxxx látkách x krmivech [6], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 98/19/ES [7], xxxxxxx, xx obsah xxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že druhá xxxxxxxx Komise 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu krmiv [8], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx Xxxxxx 84/4/XXX [9], xxxxxxx metody xxxxxxx xxxx jiné x pro xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx; xx xx vhodné xxxxxxx xxxxxx upravit;
vzhledem x xxxx, xx musí xxx xxxxxxxxx analytické xxxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxx látek;
vzhledem x tomu, že xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx v xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, že analýzy xxx úřední xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx uvedených v xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
X xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/393/XXX xx xxx "4. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx" xxxxxxxxx xxxxx B xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx dosažení xxxxxxx x touto směrnicí xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxxxx 1998. Uvědomí x nich neprodleně Xxxxxx.
Xxxxx xxxx předpisy xxxxxxxx od 1. xxxxx 1999.
Xxxx opatření xxxxxxx členskými státy xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx tuto směrnici xxxx musí být xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx stanoví členské xxxxx.
2. Členské xxxxx xxxxx Komisi xxxxx xxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx směrnice.
Článek 4
Tato směrnice xxxxxxxx v platnost xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství.
Xxxxxx 5
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu xxx 3. září 1998.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[3] Xx. xxxx. X 211, 5.8.1977, x. 45.
[4] Xx. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[5] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
[6] Xx. věst. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[7] Úř. xxxx. X 96, 28.3.1998, x. 39.
[8] Xx. xxxx. X 279, 2.12.1971, x. 7.
[9] Xx. xxxx. X 15, 18.1.1984, x. 28.
XXXXXXX
XXXX A
Stanovení aminokyselin
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx) x vázaných (xxxxxxx xxxxxx x xxxxx) xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxx(x)xx, xxxxxxxxx, lysin, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxx, kyselinu xxxxxxxxxxx, kyselinu glutamovou, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxx, tyrosin a xxxxx.
Xxxx metoda nerozlišuje xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx rozlišovat xxxx xxxxxxx X x X. Xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
2.1 Xxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx zředěnou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx makromolekuly xx xxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxx xx xX 2,20. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx chromatografií x xxxxxxx xx xx xxxxxx x ninhydrinem xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx při 570 xx.
2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx proces xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx aminokyselinách. Xxxx(x)xx x xxxxxxxxx xxxx xxx před xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx cysteovou x xx xxxxxxxxxxxxxxx. Tyrosin xx xxxx xxxxxxxxxx x hydrolyzátech xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x bodě 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx buď x xxxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xx xxxxxxx xxx 0 xX xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxx. Xxxxxxxxxx oxidační xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Oxidovaný xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (x = 6 xxx/x) xx 23 xxxxx. Hydrolyzát se xxxxxx xx xX 2,20. Aminokyseliny xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx chromatografií x xxxxxxxxx xx xx reakci x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 570 xx (440 xx xxx xxxxxx).
3. Xxxxxxx
Xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo voda xxxxxxx jakosti (xxxxxxxx &xx; 10 μS).
3.1 xxxxxxx xxxxxx, x = 30 %
3.2 xxxxxxxx xxxxxxxx, w = 98–100 %
3.3 xxxxx
3.4 xxxxxxxxx xxxxx
3.5 xxxxxxxx sodný
3.6 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx
3.7 kyselina xxxxxxxxxxxxxx o hustotě xxxxxxxxx 1,18 x/xx
3.8 xxxxxxxx xxxxx, dihydrát
3.9 2,2-xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx)
3.10 chlorid xxxxx
3.11 ninhydrin
3.12 xxxxxxxxxxx, xxx varu 40–60 °X
3.13 norleucin xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vnitřní xxxxxxxx
3.14 xxxxx – xxxx (&xx; 10 xxx xxxxxxx)
3.15 1-xxxxxxx
3.16 xxxxxxxxxxxxx
3.16.1 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 1; xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodu. Vysuší xx xx vakuu xxx P2O5 xxxx X2XX4 xxxxx xxxx xxxxxxxx
3.16.2 kyselina cysteová
3.16.3 xxxxxxxxxxxxxxx
3.17 xxxxxxxx sodný, xxxxxx c = 7,5 mol/l:
300 x XxXX (3.5) se xxxxxxxx ve vodě x doplní do 1 xxxxx.
3.18 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxx c = 1 mol/l:
40 x XxXX (3.5) xx rozpustí xx xxxx x doplní xx 1 litru.
3.19 xxxxxx kyseliny xxxxxxxx x xxxxxx:
Xxxxxx se 889 x kyseliny xxxxxxxx (3.2) se 111 x xxxx x xxxxx xx 4,73 x fenolu (3.3).
3.20 xxxxxxxxxxxx xxxx, x = 6 xxx HCl/l s xxxxxxxxx 1 g xxxxxx/x:
X 492 xx XXx (3.7) xx xxxxx 1 x xxxxxx (3.3) a xxxxxx xx xxxxx xx 1 litru.
3.21 xxxxxxxxx xxxx, x = 6 xxx XXx/x x xxxxxxxxx 2% xxxxxxxxxxxxx:
8,2 xx XXx (3.7) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 900 xx vody, xxxxx xx 20 ml xxxxxxxxxxxxx (3.9) x xxxxxx xxxxx xx 1 xxxx (3.7 x 3.9 xx xxxxx xxxxxxx xxxxx).
3.22 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, β = 6 %:
60 x xxxxxxxx 5-sulfosalicylové (3.6) se rozpustí xx vodě a xxxxxx vodou na 1 xxxx.
3.23 xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxx permravenčí – fenol):
V malé xxxxxxx xx xxxxxx 0,5 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.1) s 4,5 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx (3.19); ponechá xx x klidu 1 xxxxxx xxx 20–30 °C, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx přidáním xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxx s ledovou xxxxx (15 xxxxx).
Xxxxx:
Xx xxxxx xxxxxxx kontaktu x xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx.
3.24 xxxxxxxxxxx tlumivý xxxxxx, x = 0,2 xxx Xx+/x, xX 2,20:
X přibližně 800 xx vody xx xxxxxxxx 19,61 x xxxxxxxxx sodného (3,8), 5 ml xxxxxxxxxxxxx (3.9), 1 x xxxxxx (3.3) x 16,50 xx XXx (3.7). xX xx xxxxxx na 2,20. Xxxxxx xx vodou xx xxxxx 1 xxxxx.
3.25 xxxxxx tlumivé xxxxxxx xxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (4.9)
3.26 xxxxxxxxxxxx xxxxxxx připravované podle xxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxx (4.9)
3.27 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tyto xxxxxxx xx nutno xxxxxxxxxx při xxxxxxx xxx 5 °C.
3.27.1 xxxxxxx xxxxxxxxxx základní xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.16.1), x = 2,5 μxxx/xx xxx každou xxxxxxxxxxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.27.2 xxxxxxx xxxxxxxxxx základní roztok xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx, x = 1,25 μxxx/xx
0,2115 x xxxxxxxx xxxxxxxx (3.16.2) x 0,2265 g xxxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx (3.16.3) x citronanovém xxxxxxxx xxxxxxx (3.24) x litrové xxxxxxx xxxxx a doplní xx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx tlumivým roztokem. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx pod 5 °X xxxxxxx 12 xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (3.27.1) obsahuje kyselinu xxxxxxxxx x methioninsulfon.
3.27.3 xxxxxxx standardní xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxx, x = 20 μxxx/xx
0,6560 x norleucinu (3.13) xx rozpustí v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.24) x xxxxxxx xxxxx xx 250 xx x xxxxxx xx xx značku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx pod 5 °X xxxxxxx 6 xxxxxx.
3.27.4 kalibrační xxxxxx xxxxxxxxxxxx aminokyselin xxx xxxxxxx x hydrolyzáty, x = 5 xxxx/50 μx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx x x = 10 xxxx/50 μx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
Xx 100 xx kádince xx rozpustí 2,2 x xxxxxxxx xxxxxxx (3.10) v 30 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24). Přidají xx 4,00 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx základního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.27.1), 4,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx (3.27.2) x 0,50 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3), xxxxx se používá. xX xx xxxxxx xx 2,20 xxxxxxxxxx xxxxxx (3.18).
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx převede xx 50 ml xxxxxxx xxxxx, doplní xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx tlumivým xxxxxxxx (3.24) x xxxxxxx xx.
Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °C nejdéle 3 xxxxxx.
Xxx xxxx xxxxxxxx 9.1.
3.27.5 kalibrační xxxxxx standardních xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.3.1 x xxx extrakty (5.2). Xxxxxxxxxx roztok xx xxxxxxxxxx podle 3.27.4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxx při teplotě xxx 5 °X xxxxxxx 3 xxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 xxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxx 100 xxxx 250 xx xxxxxxxx zpětným xxxxxxxxx
4.2 nádoba x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx o xxxxxx 100 ml xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx těsněním (xxxx. Xxxxx, Schott) xxx xxxxxxx v sušárně
4.3 xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxx ±2 °X
4.4 xX xxxx (xxx xxxxxxxxx místa)
4.5 xxxxxxxxxx xxxxx (0,2 μx)
4.6 odstředivka
4.7 xxxxxxx xxxxxxx odparka
4.8 mechanická xxxxxxxx xxxx magnetická xxxxxxxx
4.9 analyzátor xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XXXX x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx detektorem.
Kolona xx naplní sulfonovanou xxxxxxxxxxxxxx pryskyřicí, která xxxxxxxx vzájemné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx jiných xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Průtok xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx zajišťují xxxxxxxx xx xxxxxxxx průtoku ± 0,5 % xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kalibraci x xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx je možno xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxxxxx vykazuje xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x = 0,8 xxx/x x xxxxxxxx xxxxxxxxx mravenčí xxxxxxxx x oxidačního xxxxx. Xxxx analyzátory xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx určitých xxxxxxxxxxxx, obsahuje-li hydrolyzát xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx kyseliny xxxx xxxxxxx xX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 xx. Xxxxxxxx se xx xxxxxxxx ve vakuu xxx xxxxxxx xxxxxxx 40 °X.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxx, xxx prošel xxxxx x xxx 0,5 xx. Xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx na xxxxxxx xxx teplotě xxxxxxxxxxxxx 50 °X nebo xxx zmrazení. Vzorky x xxxxxxx obsahem xxxx xx před xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.12).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx v krmivech x x xxxxxxxxx
Xx xxxxxxx baňky se xxxxxx příslušné xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) x xxxxxxxxx na 0,2 xx x přidá xx 100,0 xx xxxxxxxxx xxxxx (3.21). Xxxxx se třepe 60 minut xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.8). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xx kádinky x xxxxxx 100 xx.
Xx stálého míchání xx xxxxx 50 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx a pokračuje xx v xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx sraženina. 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 100 xx, xX xx xxxxxx na 2,20 pomocí roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztoku (3.24) xx odměrné baňky xxxxxxxxx velikosti x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx roztokem (3.24).
Použije-li xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se 1,00 xx xxxxxxxxx standardu (3.27.3) na xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xx doplní xx xxxxxx xxxxxxxx roztokem (3.24).
Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 – xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx-xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxx, xxxxxxxxxxx se xxx xxxxxxx pod 5 °X.
5.3 Xxxxxxxxx celkových xxxxxxxxxxxx
5.3.1 xxxxxxx
0,1 xx 1 g xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) se xxxxxx x přesností 0,2 xx:
- xx xxxxx x kulatým xxxx x xxxxxx 100 ml (4.1) xxx xxxxxxxxx hydrolýzu (5.3.2.3) xxxx
- xx xxxxx s kulatým xxxx x obsahu 250 xx (4.1), xxxxxxxx-xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx nebo
- xx xxxxxx x xxxxxx 100 xx xx šroubovací xxxxxxxx (4.2) (xxx uzavřenou xxxxxxxxx 5.3.2.4).
Xxxxxxxx xxxx xxxxxx by xxxx xxx obsah xxxxxx xxx 10 mg x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 xx.
Xxxxx/xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx s ledovou xxxxx a ochladí xx xx 0 °X, xxxxx xx xxxxx 5 ml xxxxxxxx xxxxx (3.23) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx lžící xx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx/xxxxxx xx xxxxxx x xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx xx x x xxxxx x xxxxxxx xxxxx xx chladničky xxx 0 °X x ponechá xx xxx 16 xxxxx. Xx 16 hodinách xx xxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.4).
Xxxx xx pokračuje xxxxx 5.3.2.1.
5.3.2 hydrolýza
5.3.2.1 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx
X xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.3.1 xx xxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.20) xxx, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx. Podle xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx podle 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4.
5.3.2.2 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxx 100 xx xxxx 250 xx (4.1) xxxx xx xxxxxx x xxxxxx100 ml xx šroubovacím xxxxxxxx (4.2) xx xxxxxx 0,1 xx 1 x upraveného xxxxxx (5.1) s přesností xx 0,2 xx. Xxxxxxxx část vzorku xx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx 10 xx. Xxxxxxx xx přidá 25 xx xxxxxxxxxxxx směsi (3.20) x xxxxxx xx xx xxxxxxx. Xxxx xx postupuje xxx podle 5.3.2.3 xxxx podle 5.3.2.4.
5.3.2.3 xxxxxxxx xxxxxxxxx
Xx xxxxx x xxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2) xx přidají 3 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx se xxxxx do xxxxxxx xxxx xxx zpětným xxxxxxxxx xx dobu 23 xxxxx. Xx xxxxxxxx hydrolýzy se xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 5 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24). Xxxxx xx odpojí x ochladí xx x xxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3.
5.3.2.4 uzavřená xxxxxxxxx
Xxxxx se směsí xxxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2 se xxxxxx do xxxxxxx (4.3) xxx 110 °X. Aby xx xxxxx první xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx volně na xxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx zašroubuje x xxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx (4.3) 23 hodin. Xx xxxxxxxx hydrolýzy xx xxxxx xxxxx xx sušárny, xxxxxxx xx odšroubuje xxxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxx x xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx nechá vychladnout.
Podle xxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxx pH (5.3.3) xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx tlumivého xxxxxxx (3.24) do xxxxxxx x obsahu 250 xx xxxx xx xxxxx x kulatým xxxx x xxxxxx 250 xx.
Xxxx xx xxxxxxxxx podle 5.3.3
5.3.3 xxxxxx xX
Xxxxx toho, xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9), xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xX xxxxx 5.3.3.1 xxxx 5.3.3.2.
5.3.3.1 pro xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.9), vyžadující xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:
Xxxxx xxxxxxxxxx aminokyselin xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xx-xx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx), xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.27.3).
X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 2,00 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.27.3).
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4. se xxxxxxx 2 kapky 1-xxxxxxxx (3.15).
Xx xxxxxxx xxxxxxx (4.7) xx xxxxx xxxxx xx 5-10 xx za xxxxx xxx 40 °X. Xxxxx by xx objem xxxxxxx xxxxxx pod 5 xx, hydrolyzát xx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxx xxxxx.
xX xx xxxxxx na 2,20 xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (3.18) a xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.3.2 xxx xxxxxxx xxxxxxx analyzátory xxxxxxxxxxxx (4.9)
Xxxxxxxxxxx připravené xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4 se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx přidáním 17 ml xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.17), xx xxxxxxx míchání x xxx zajištěné xxxxxxx xxx 40 °X.
xX xx xxxxxx xx 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18) xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.4 xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx (5.3.3.1 nebo 5.3.3.2) x xxxxxxxxx xX se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx citronanového xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx odměrné xxxxx x obsahu 200 xx x tlumivým xxxxxxxx (3.24) xx xxxxxx xx značku.
Nebyl-li xxxxx použit xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx 2,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3) x xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24). Xxxxxxxx xx promíchá.
Dále xx xxxxxx k xxxxxxxxxxxxxx (5.4)
Xxxxxx-xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxx, uschovávají xx xxx xxxxxxx pod 5 °X.
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx musí mít xxxxxxx (5.2) x xxxxxxxxxx (5.3.4) pokojovou xxxxxxx. Směs xx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 0,2 μ (4.5). Výsledný xxxx roztok xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9).
Xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx důležité, xxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx stejné xxxxxxxx xxxxxxx ± 0,5 % xxx xxx analýze standardů xxx xxxxxx s xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx sodíku x xxxxxxxxxxxxxx xx xxx být v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx ninhydrinového xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx nebo xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztokem (3.24) xxx, aby xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 30 – 200 % plochy xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx na xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx. Zvolený xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx separovat xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx sebe xxxxxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivních xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxx působení by xxx chromatografický systém xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx objemů aminokyselin xxxxxxxxxxx xx sloupec.
Při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxx být xxxxxxxx xxxx uvedené xxxxxx xxxxx x vrcholu xxxx. Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 30 % xxxxxxxxxxx obsahu jednotlivých xxxxxxxxxxxx, xxxxx mohou xxx ještě xxxxxx xxxxxxxxx xx použitém xxxxxxxxxxx aminokyselin (4.9).
Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx přesahovat 2:10 (xxxxx se xxxxxxx xxxxx cyst(e)in, xxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxx, je xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nedostatečnou xxxxxxxx přilehlých xxxx). Xxx všechny xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxx 1:10.
Xxxxxx musí xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx "lysinových xxxxxxxx" x ornithinu.
6. Xxxxxxx x vyjádření xxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxx xxx každou xxxxxxxxxxx aminokyselinu x xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x x xx kg vzorku.
g xxxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxx = X × X × XX × F / X × X × 1 000
Xx-xx použit xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx: D / X
X = xxxxxx xxxx hydrolyzátu xxxx xxxxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx nebo x xxxxxxxx
X = xxxxxx xxxx interního xxxxxxxxx v kalibračním xxxxxxxxxxx xxxxxxx
XX = xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x μxxx/xx
X = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (x) (xxxxxxxxxx xx původní xxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx)
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (5.3.4) x ml xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx podle 6.1
Xxxxxx a xxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx xxxx kyselina xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx (X6X12X2X4X2, XX 240,30) s xxxxxxxx XX 120,15 (= 0,5 x 240,30).
Xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxxxx, xxx vypočítává xx xxxx methionin s xxxxxxxx XX xxxxxxxxxx: 149,21.
Xxxxxxx volný xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx jako methionin, xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx XX.
6.1 Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (X) xxx xxxxxxxxx volných aminokyselin (5.2) se xxxxxxxx xxxxx tohoto xxxxxx:
X = 100 ml × (10 xx + 5 ml) / 10 xx × X&xxxx;xx / 10xx
X = xxxxx xxxxxxxxxx extraktu
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxx metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx 1990 xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxx xxxx xxx prasata, xxxxx xxxx xxx broilery, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, premix). Xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx výsledky xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
xxxxxxx xxxxxxx x x/xx
|
Xxxxxxxxxx materiál |
Aminokyselina |
|||
|
Threonin |
cyst(e)in |
Methionin |
lysin |
|
|
Krmná xxxx xxx xxxxxxx |
6,94 x = 15 |
3,01 x = 17 |
3.27 x =.17 |
9,55 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
9,31 x = 16 |
3,92 x = 18 |
5,08 n = 18 |
13,93 x = 16 |
|
Proteinový koncentrát |
22,32 x = 16 |
5,06 x = 17 |
12,01 x = 17 |
47,74 x = 15 |
|
Xxxxxx |
58,42 x = 16 |
- |
90,21 x = 16 |
98,03 x = 16 |
n = počet xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.1 Opakovatelnost
Opakovatelnost xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xx) xxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx x x/xx
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
0,13 x = 15 |
0,10 n = 17 |
0,11 x = 17 |
0,26 n = 13 |
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxxx |
0,20 n = 16 |
0,11 x = 18 |
0,16 n = 18 |
0,28 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,48 x = 16 |
0,13 x = 17 |
0,27 x = 17 |
0,99 x = 15 |
|
Xxxxxx |
1.30 x = 16 |
_ |
2,19 x = 16 |
2,06 x = 16 |
x = xxxxx zúčastněných xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx (%) xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xx)
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
1,9 a = 15 |
3,3 x = 17 |
3,4 x =.17 |
2,8 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
2,1 x = 16 |
2,8 x = 18 |
3,1 x = 18 |
2,1 x = 16 |
|
Proteinový xxxxxxxxxx |
2,7 n = 16 |
2,6 x = 17 |
2,2 x = 17 |
2,4 n = 15 |
|
Xxxxxx |
2,2 n = 16 |
- |
2,4 x = 16 |
2,1 x = 16 |
x = počet xxxxxxxxxxxx laboratoří
7.2 Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odchylek xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (XX) x x/xx
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
0,28 x = 15 |
0,30 x = 17 |
0,23 x = 17 |
0,30 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
0,48 x = 16 |
0,34 x = 18 |
0,55 x = 18 |
0,75 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx koncentrát |
0,85 x = 16 |
0,62 x = 17 |
1,57 x = 17 |
1,24 n = 15 |
|
Premix |
2,49 x = 16 |
- |
6,20 x = 16 |
6,62 x = 16 |
x = xxxxx zúčastněných xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx (%) xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odchylek (XX)
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
4,1 x = 15 |
9,9 x = 17 |
7,0 x = 17 |
3,2 n = 13 |
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxxx |
5,2 x = 16 |
8,8 x = 18 |
10,9 x = 18 |
5,4 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
3,8 n = 16 |
12,3 n = 17 |
13,0 x = 17 |
3,0 n = 15 |
|
Xxxxxx |
4,3 x = 16 |
- |
6,9 x = 16 |
6,7 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
8. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx uvedené xxxxxx xx xxxxxxx opakovaným xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx-xx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxx k xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx aminokyselin xx xx měly xxxxxxx koncentrace kalibračních xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxx 3.27.4 x 3.27.5) a roztoků xxxxxx (5.3.4) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx rozsah xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx pro všechny xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx roztok xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx, xxx xx dosáhlo xxxxx xxxx uprostřed xxxxxx xxxxxxx.
9.2 Pokud xx x analýze hydrolyzátů xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx zkoušek optimalizovány x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Při xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx 1 % xxxxxxxx (koncentráty, xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx) xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
XXXX X XXXXXXXXX XXXX
1. Účel x oblast xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx Rady 136/66/XXX xx dne 22. xxxx 1996.
Xxxxx druhu x xxxxxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxx jeden xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:
1.1 Xxxxxx X – xxxxx extrahovatelné xxxx
Xxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, s xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx do okruhu xxxxxxx B.
1.2 Xxxxxx X – celkový xxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro krmiva xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx se xxx xxxxxxx materiály, x xxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx předchozí xxxxxxxxx (např. lepky, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx proteiny x výrobky, které xxxx xxxxxxxxx zpracování, xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx).
1.3 Interpretace xxxxxxxx
Xx všech xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx výsledku postupem X, xxx xxxxxxxx X, xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxxx X.
2. Xxxxxxx
2.1 Xxxxxx X
Xxxxxx se extrahuje xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxx xx vysuší x xxxxx.
2.2 Xxxxxx X
Xxxxxx xx zahřívá s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Směs xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx. Promytý x xxxxxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X.
3. Xxxxxxx
3.1 xxxxxxxxxxx s xxxxx xxxx xxxx 40 x 50 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxx xxx 1 x xxxxxx xx odpařování xxxxx než 2 xx/100 xx
3.2 xxxxx xxxxx, xxxxxxx
3.3 kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 3 xxx XXx/x
3.4 xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx, Xxxxx-xxxxxxxx.
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxx), refluxní xxxxxxxx by měla xxxxxxx xxx 10 xxxxx xx hodinu. X xxxx xxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx rychlost xxx 10 xx xx minutu.
4.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx, bez látek xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxx bodu 4.1.
4.3 Xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx 75 °X ± 3 °X, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na 100 °X ± 3 °X.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxx X (xxx bod 8.1)
Xx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx 5 x xxxxxx s xxxxxxxxx na 1 xx (4.2) x xxxxxxxxx xxxxxxx vaty xxx xxxx.
Xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.1) a xxxxxxxxxx šest xxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxx xx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx baňky, která xxxxxxxx xxxxxx pemzy [1].
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxx xx suší 1,5 xxxxxx x sušárně (4.3). Nechá xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x zváží. Xxxx xx dalších 30 xxxxx, aby xx xxxxxxxx, xxx je xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx následujícími váženími xxxx být xxxxx xxx 1 mg).
5.2 Xxxxxx X
Xx kádinky x xxxxxx 400 xx nebo do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 300 xx xx xxxxxx 2,5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx (viz bod (8,2) x přidá xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.3) x úlomky pemzy. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx nebo xx xxxxxxx baňka xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx přivede xx xxxxxxx xxxx xx xxxxx plameni xxxx xx topné xxxxx x xxxx xx xx dobu xxxxx hodiny. Xxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx částeček xxxxxx xx stěnách xxxxxx.
Xxxx se xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4), xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xx přes xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxx se promývá xxxxxxxx xxxxx, až xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Provede se xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxx přítomnost ukazuje, xx xx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X.
Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xx položí xx xxxxxxxx xxxx x xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3) xxx xxxxxxx 100 °C ± 3 °X.
Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxx xx extrakční xxxxxxx (4.2) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx tuku. Xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx přístroje (4.1) x xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 5.1.
6. Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xx výsledcích xxxx xxxxxxxxxx stanovení prováděných xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxxx xxxxxxxxxx:
- 0,2 % x xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 5 %,
- 4,0 % xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx xx 5 xx 10 %,
- 0,4 % x xxxxxxxxx hodnotě, při xxxxxx xxx 10 %.
8. Xxxxxxxx
8.1 X xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx odebrat xxxxxxxxxx homogenní xxxxxx, xx postupuje následujícím xxxxxxxx:
Xxxxxx xx 20 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxxxxx xx s 10 xxxx x více xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxx xx petroletherem (3.1) xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxx extrakt xx xxxxxx xx 500 xx petroletherem (3.1) x xxxxxxxx se. 50 xx roztoku xx xxxxxxxxxx do xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx [2].
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, baňka xx xxxxxx x xxxxxxxxx xx podle xxxxxxxxxx odstavce xxxx 5.1.
Xxxxx tuku xx xxxxxxxx xxxx procento xx xxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
(10 x + x) × 5
xxx:
x = hmotnost xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx v gramech (xxxxxxx část xxxxxxxx)
x = xxxxxxxx zbytku xx xxxxx extrakci x gramech
8.2 X xxxxxxx, které mají xxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx zvýšit xx 5 x.
8.3 Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, která mají xxxxxx obsah xxxx, xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
8.4 X xxxx 5.2 xx xxxx na opláchnutí xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx horká xxxx xxxxx vody xxxxxxx.
8.5 U xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx 1,5 xxx. Xx však xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. Xx možno xxxxxx x mikrovlnnou troubu.
8.6 Xxx xxxxxx tuku xxx 15 % xx doporučuje provést xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. Xxxxxx xx xx xxxxx xxxx na xxxxx krmiva a xxxxx xxxx x xxxxxx.
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXXX
(2-[X-2-(xxxxxxxxxxxx)xxxxxxxxx]-3-xxxxxxxxxxxxxxxx-X1,X4-xxxxxx)
1. Xxxx x oblast xxxxxxx
Xxxxx metodou xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x krmivech. Dolní xxx stanovitelnosti xx 5 xx/xx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx směsí xxxx x methanolu. Xxxxx olachindoxu xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografií (HPLC) xx reverzní xxxx xx xxxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 xxxxxxxx
3.2 xxxxxxxx, xxx XXXX
3.3 xxxx, xxx XXXX
3.4 xxxxxxx xxxx pro XXXX:
Xxxx xxxx (3.3) x methanolu (3.2), 900 + 100 (X + V)
3.5 xxxxxxxxxx látka: čistý xxxxxxxxxx 2-[X-2-(xxxxxxxxxxxx)xxxxxxxxx]-3-xxxxxxxxxxxxxxxx-X1,X4-xxxxxx, E 851
3.5.1 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, 250 μg/ml
Do odměrné xxxxx x obsahu 200 xx se xxxxxx 50 mg xxxxxxxxxxx (3.5) s xxxxxxxxx xx 0,1 xx x xxxxx xxx 190 ml xxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xx 20 xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Po xxxxxxx z ultrazvukové xxxxx se xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx vodou xx značku x xxxxxxx. Xxxxx se xxxxx hliníkovou xxxxx x uschovává v xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxx připravovat xxxxxxx xxxxx xxxxx.
3.5.2 xxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxxx, 25 μx/xx
10,0 xx zásobního xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku (3.5.1) xx xxxxxxx do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 xx, xxxxxx xx po xxxxxx mobilní xxxx (3.4) x xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx. Xxxxx roztok xx xxxx xxxxxxxxxxx denně xxxxxxx.
3.5.3 xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxx odměrných xxxxx x xxxxxx 50 xx xx xxxxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0 x 20,0 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.2). Xxxxxx se xxxxxxx xxxx (3.4) xx xxxxxx x promíchá. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 7,5 x 10,0 μx xxxxxxxxxxx xx xx.
Xxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 xxxxxxxxxxxx lázeň
4.2 xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.3 zařízení XXXX x xxxxxxxxx xxxxxxx délkou ultrafialového xxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pole
4.3.1 xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, xxxxxxx X18, 10 μx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx
4.4 membránové xxxxxx x xxxx 0,45 μx
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx.
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xxxxxxx xx výtěžnost xx xxxxxxx analýzou xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx odpovídá xxxx xxxxxx xx xxxxxx K xxxxxxxxxxx xx xxxxxx 50 xx/xx se xxxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx základního xxxxxxx (3.5.1) do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx x xxxxxx se odpaří xx xxx 0,5 xx. Xxxxx se 50 x xxxxxxxxxx xxxxxx, řádně xx xxxxxxxx x nechá xx 10 xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx promíchá. Xxxx se xxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Xxxxxxxx:
Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xx být xxxxxxxx xxxxxx podobného xxxx xxxx zkoušený xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx 50 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,01 x. Xxxxxxx se do xxxxxxx baňky o xxxxxx 1000 xx, xxxxx se 100 xx xxxxxxxxx (3.1) x xxxxx se xxxxxx na pět xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Přidá xx 410 xx xxxx x xxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxx xxxxx dalších 15 xxxxx. Xxxxx se xxxxx x ultrazvukové xxxxx, dále xx xxxxx 30 xxxxx xx xxxxxxxx (4.2) x xxxxx xx xxxxxxxxxxx složeným filtrem. 10,0 xx xxxxxxxx xx přenese do xxxxxxx baňky x xxxxxx 20 xx, xxxxxx se xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxx část xx xxxxxxxxxxx membránovým xxxxxxx (4.4) (xxx xxx 9. Xxxxxxxx). Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXXX (5.3).
5.3 Xxxxxxxxx XXXX
5.3.1 Parametry:
Následující xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx dávají xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3.1)
xxxxxxx xxxx (3,4): Xxxx xxxx (3.3) x methanolu (3.2), 900 + 100 (X + V)
průtoková xxxxxxxx: 1,5–2 ml/min
detekční xxxxxx xxxxx: 380 xx
xxxxx nástřiku: 20 μx–100 μl
Stabilita xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxx, že xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5.3) xxxxxxxxxx 2,5 μx/xx, xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx píků a xxxxxxxxxx xxxx.
5.3.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx každý kalibrační xxxxxx xx provede xxxxxxx nástřiků a xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx výšky (plochy) xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxx za použití xxxxxxxxx xxxxxx výšek (xxxxx) xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x příslušných xxxxxxxxxxx x μg/ml xxxx xxxxxxxxx.
5.3.3 Roztok vzorku
Provede xx několik xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2) xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx roztoků a xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) píků xxxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx koncentrace x roztoku xxxxxx x μg/ml xxxxxxxxxx x kalibračním xxxxxx (5.3.2).
Xxxxx xxxxxxxxxxx ve xxxxxx x v xx/xx je xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = x × 1&xxxx;000 / x
xxx:
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (5.2) x μg/ml
m = xxxxxxxx navážky xxxxxx x g (5.2)
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (co-chromatography) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx porovnávají xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.3), xxxxxxxxxxxx 5,0 μg/ml olachindoxu.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (xx-xxxxxxxxxxxxxx)
Xxxxxxx vzorku (5.2) xx xxxxxxx xxxxxxxxx přiměřeného množství xxxxxxxxxxxx roztoku (3.5.3). Xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxxx xx mělo odpovídat xxxxxxxx xxxxxxxxxxx nalezeného x extraktu vzorku.
S xxxxxxx xx přidané xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxx jen xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx jeho xxxxx musí být x xxxxxxx ±10 % původní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx pole
Výsledky xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx zaznamenaný xx vrcholu píku xx xxxxxxxxxxxxx stejný x xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xx udává ±2 xx;
x) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 400 nm xx nesmí záznam xxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x standardu xxxxxxxxxxx xx vrcholu píku xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx částí xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx nikde xxxxxxxx xxxx xxxxx spektry xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx;
x) xxx xxxxxx délce xxxx 220 a 350 xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 10 xx 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, jestliže jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x jestliže ve xxxxx sledovaných xxxxxx xxxxxxxx xxxx spektry xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % absorbance spektra xx xxxxxxx xxxx.
Xxxx-xx xxxxxxx x těchto xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx není xxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 20 xx/xx, xxxxx přesáhnout15 % xxxxxxx xxxxxxxx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vzorek xxxx xxx výtěžnost xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X xxxxx XX xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxx němž xx 13 xxxxxxxxxx analyzovalo xxxxx xxxxxx krmiva xxx selata, včetně xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
| xxxxxx 1 |
xxxxxx 2 |
xxxxxx 3 |
xxxxxx 4 |
|
|
X |
13 |
10 |
11 |
11 |
|
X |
40 |
40 |
44 |
44 |
|
xxxxxxx (mg/kg) |
- |
14,6 |
48,0 |
95,4 |
|
(Sr) (xx/xx) |
- |
0,82 |
2,05 |
6,36 |
|
(XX) (mg/kg) |
- |
1,62 |
4,28 |
8,42 |
|
CVr (%) |
- |
5,6 |
4,3 |
6,7 |
|
XXX (%) |
- |
11,1 |
8,9 |
8,8 |
|
xxxxxxxxx xxxxx (xx/xx) |
- |
15 |
50 |
100 |
|
xxxxxxxxx (%) |
- |
97,3 |
96,0 |
95,4 |
X: počet xxxxxxxxxx
x: xxxxx jednotlivých xxxxxx
Xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
CVr: xxxxxxxx koeficient xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxx xxxxxxxxxx reprodukovatelnosti
9. Xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx ověřena xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 100 mg/kg xxxxxxxxxxx, xx možné xxxxxxx uspokojivé výsledky xxxxx navážkou vzorku x/xxxx zředěním xxxxxxxx (5.2) xxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx kalibračního xxxxx (5.3.2).
[1] Xxxxx xx má xxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx.
[2] Pokud xx xx tuk xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxx xxxxx za xxxxxxxx xxxxxxx.