Xxxxxxxx Xxxxxx 98/64/XX
xx xxx 3. září 1998,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxxxxx, xxxx a olachindoxu x xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx 71/393/EHS
(Text x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s ohledem xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX za xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx pozměněnou Xxxxx x xxxxxxxxxxx Rakouska, Xxxxxx x Xxxxxxx, x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx směrnice 70/373/XXX xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx za xxxxxx kontroly, zda xxxxxx splňují požadavky xxxxxxxxxxx z xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisů xxxxxxxxxx xx jejich xxxxxxx a složení, xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx odběru xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xx Společenství;
vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx Rady 79/373/XXX xx dne 2. xxxxx 1979 x xxxxxxx xxxxxxx směsí xx xxx [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 97/47/XX [3], x xxxxxxxx Rady 93/74/XXX ze xxx 13. xxxx 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx účelům xxxxxx [4], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/ES [5], stanoví, že xxxxx aminokyselin x xxxx musí xxx xxxxxxx na označení xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxx 70/524/XXX xx dne 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx [6], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx Xxxxxx 98/19/XX [7], xxxxxxx, že obsah xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx směsí;
vzhledem x xxxx, xx xxxxx xxxxxxxx Komise 71/393/EHS xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971, kterou xx xxxxxxx analytické xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [8], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 84/4/XXX [9], stanoví xxxxxx xxxxxxx mimo xxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxx tuku; xx xx vhodné xxxxxxx xxxxxx upravit;
vzhledem x xxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxx analytické xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx těchto látek;
vzhledem x tomu, xx xxxxxxxx této xxxxxxxx xxxx v xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX SMĚRNICI:
Článek 1
Členské státy xxxxxxx, že analýzy xxx úřední xxxxxxxx xxxxxx aminokyselin, tuku x obsahu olachindoxu x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
X xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/393/EHS xx xxx "4. Xxxxxxxxx obsahu xxxx" xxxxxxxxx xxxxx X xxxxxxx této xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxxxx 1998. Xxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx od 1. xxxxx 1999.
Tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx odkaz xx xxxx směrnici xxxx musí xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx ustanovení vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Článek 5
Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu dne 3. xxxx 1998.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[3] Xx. věst. X 211, 5.8.1977, x. 45.
[4] Úř. věst. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[5] Úř. věst. X 125, 23.5.1996, x. 35.
[6] Xx. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[7] Xx. xxxx. X 96, 28.3.1998, x. 39.
[8] Xx. xxxx. X 279, 2.12.1971, x. 7.
[9] Úř. věst. X 15, 18.1.1984, x. 28.
XXXXXXX
XXXX A
Stanovení xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x oblast xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx) x xxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx x xxxxx) aminokyselin v xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx použitelná xxx xxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxx(x)xx, xxxxxxxxx, xxxxx, threonin, xxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxx, prolin, xxxxx, tyrosin x xxxxx.
Xxxx xxxxxx nerozlišuje xxxx solemi xxxxxxxxxxxx x nemůže xxxx x xxxxxxxxxxxx rozlišovat xxxx xxxxxxx D x L. Není xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo hydroxy xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
2.1 Xxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx aminokyseliny xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx srážejí kyselinou xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx filtrací. Zfiltrovaný xxxxxx xx xxxxxx xx pH 2,20. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxxx s ninhydrinem xxxxxxxxxxxxx detekcí při 570 xx.
2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx závisí xx xxxxxxxxxxxxx aminokyselinách. Xxxx(x)xx a xxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxxx oxidovány xx xxxxxxxx cysteovou x xx methioninsulfon. Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Ostatní xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v bodě 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx v xxxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xx xxxxxxx při 0 xX směsí xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx činidlo xx xxxxxxx dvojsíranem xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (x = 6 xxx/x) xx 23 xxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxx xx xX 2,20. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx iontoměničovou xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xx reakci s xxxxxxxxxxx fotometrickou xxxxxxx xxx 570 xx (440 xx pro xxxxxx).
3. Xxxxxxx
Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx &xx; 10 μX).
3.1 xxxxxxx xxxxxx, w = 30 %
3.2 xxxxxxxx xxxxxxxx, x = 98–100 %
3.3 xxxxx
3.4 xxxxxxxxx sodný
3.5 xxxxxxxx xxxxx
3.6 kyselina 5-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx
3.7 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx o hustotě xxxxxxxxx 1,18 x/xx
3.8 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx
3.9 2,2-xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx)
3.10 chlorid xxxxx
3.11 xxxxxxxxx
3.12 xxxxxxxxxxx, xxx xxxx 40–60 °X
3.13 xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vnitřní xxxxxxxx
3.14 xxxxx – plyn (&xx; 10 xxx xxxxxxx)
3.15 1-xxxxxxx
3.16 xxxxxxxxxxxxx
3.16.1 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 1; xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodu. Xxxxxx xx xx vakuu xxx P2O5 xxxx X2XX4 týden xxxx xxxxxxxx
3.16.2 kyselina xxxxxxxx
3.16.3 xxxxxxxxxxxxxxx
3.17 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 7,5 mol/l:
300 x XxXX (3.5) se xxxxxxxx ve vodě x xxxxxx do 1 litru.
3.18 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 1 xxx/x:
40 x XxXX (3.5) xx xxxxxxxx ve xxxx x xxxxxx xx 1 xxxxx.
3.19 xxxxxx xxxxxxxx mravenčí x xxxxxx:
Xxxxxx se 889 x xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2) se 111 x xxxx x přidá se 4,73 g fenolu (3.3).
3.20 xxxxxxxxxxxx xxxx, x = 6 xxx HCl/l x xxxxxxxxx 1 g xxxxxx/x:
X 492 ml XXx (3.7) xx xxxxx 1 g xxxxxx (3.3) a xxxxxx xx vodou xx 1 litru.
3.21 xxxxxxxxx xxxx, c = 6 xxx XXx/x s přídavkem 2% xxxxxxxxxxxxx:
8,2 xx XXx (3.7) se xxxxxxx přibližně 900 xx vody, xxxxx xx 20 xx xxxxxxxxxxxxx (3.9) x xxxxxx xxxxx xx 1 xxxx (3.7 x 3.9 se xxxxx xxxxxxx xxxxx).
3.22 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, β = 6 %:
60 x kyseliny 5-xxxxxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxx xxxxx xx 1 litr.
3.23 xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxx xxxxxxxxxxx – fenol):
V xxxx xxxxxxx xx smíchá 0,5 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.1) s 4,5 xx xxxxxxx xxxxxxxx mravenčí s xxxxxxx (3.19); ponechá xx x klidu 1 hodinu při 20–30 °X, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, před přidáním xx vzorku se xxxx xxxxxxx v xxxxx x xxxxxxx xxxxx (15 minut).
Pozor:
Je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx.
3.24 xxxxxxxxxxx tlumivý roztok, x = 0,2 xxx Na+/l, xX 2,20:
X xxxxxxxxx 800 xx vody xx xxxxxxxx 19,61 x xxxxxxxxx xxxxxxx (3,8), 5 xx thiodiglykolu (3.9), 1 x xxxxxx (3.3) x 16,50 xx XXx (3.7). pH se xxxxxx xx 2,20. Xxxxxx se vodou xx xxxxx 1 xxxxx.
3.25 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (4.9)
3.26 ninhydrinové xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx použitý xxxxxxxxxx (4.9)
3.27 Xxxxxxxxxx xxxxxxx aminokyselin. Tyto xxxxxxx xx nutno xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx 5 °X.
3.27.1 xxxxxxx xxxxxxxxxx základní xxxxxxx aminokyselin (3.16.1), x = 2,5 μxxx/xx pro xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Tento roztok xxx xxxxxxx x xxxxxxxx připravené.
3.27.2 zásobní xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx, x = 1,25 μmol/ml
0,2115 x xxxxxxxx cysteové (3.16.2) x 0,2265 x xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx (3.16.3) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.24) x xxxxxxx odměrné xxxxx x xxxxxx xx po značku xxxxxxxxxxxx tlumivým xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 12 xxxxxx. Tento xxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (3.27.1) obsahuje xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx.
3.27.3 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx standardu, xxxx. norleucinu, x = 20 μmol/ml
0,6560 x xxxxxxxxxx (3.13) xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx tlumivém xxxxxxx (3.24) x xxxxxxx xxxxx xx 250 xx a xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 6 xxxxxx.
3.27.4 xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x hydrolyzáty, x = 5 xxxx/50 μx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx x x = 10 xxxx/50 μx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
Xx 100 xx kádince xx rozpustí 2,2 x chloridu sodného (3.10) v 30 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24). Xxxxxxx xx 4,00 xx xxxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.27.1), 4,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx základního xxxxxxx xxxxxxxx cysteové x xxxxxxxxxxxxxxxx (3.27.2) a 0,50 xx zásobního xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3), xxxxx se xxxxxxx. xX se xxxxxx xx 2,20 xxxxxxxxxx xxxxxx (3.18).
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx převede xx 50 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xxxxxx citronanovým xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24) x xxxxxxx se.
Skladuje xx xxx xxxxxxx xxx 5 °C xxxxxxx 3 xxxxxx.
Xxx také xxxxxxxx 9.1.
3.27.5 kalibrační xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx použití s xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.3.1 a xxx extrakty (5.2). Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx 3.27.4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 3 xxxxxx.
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 xxxxx x kulatým xxxx x xxxxxx 100 nebo 250 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
4.2 xxxxxx z xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx o xxxxxx 100 ml xx šroubovým xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx těsněním (např. Xxxxx, Schott) xxx xxxxxxx x xxxxxxx
4.3 xxxxxxx x nuceným xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxx ±2 °X
4.4 xX xxxx (xxx xxxxxxxxx xxxxx)
4.5 xxxxxxxxxx filtr (0,2 μx)
4.6 odstředivka
4.7 rotační xxxxxxx odparka
4.8 mechanická xxxxxxxx nebo magnetická xxxxxxxx
4.9 analyzátor aminokyselin xxxx zařízení XXXX x xxxxxxxxxxxxxx kolonou, xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx derivatizaci x fotometrickým xxxxxxxxxx.
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pryskyřicí, která xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx ninhydrin xxxxxxxxxxx xxxxx. Průtok xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx ± 0,5 % xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku.
Některé analyzátory xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x případě, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sodíkových xxxxx x = 0,8 xxx/x x obsahuje xxxxxxxxx mravenčí xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx analyzátory xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, obsahuje-li xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxxxxx iontů. V xxxxxxx xxxxxxx se xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx úpravou xX xxxxxxxxx hydrolyzátu xx xxxxx 5 xx. Xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx 40 °C.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Vzorek xx xxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxx 0,5 xx. Xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx před xxxxxx xxxxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °C xxxx xxx zmrazení. Xxxxxx x xxxxxxx obsahem xxxx xx před xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.12).
5.2 Stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x v xxxxxxxxx
Xx xxxxxxx baňky xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) s xxxxxxxxx na 0,2 xx x přidá xx 100,0 xx xxxxxxxxx xxxxx (3.21). Xxxxx xx xxxxx 60 xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.8). Xx xxxxxxx sedimentu xx xxxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxxxxxxx do xxxxxxx x obsahu 100 xx.
Xx stálého xxxxxxx xx přidá 50 xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx x xxxxxxx xx magnetické míchačce xxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxxxxx se přefiltruje xxxx xxxxxxxx tak, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. 10,0 xx odstředěného xxxxxxx xx přenese do xxxxxxx x xxxxxx 100 ml, xX xx xxxxxx xx 2,20 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18), xxxxx se xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx velikosti x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24).
Xxxxxxx-xx xx interní standard, xxxxx xx 1,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3) xx xxxxxxx 100 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x potom xx doplní xx xxxxxx tlumivým roztokem (3.24).
Xxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 – xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx-xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx den, xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °X.
5.3 Stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
5.3.1 oxidace
0,1 xx 1 g upraveného xxxxxx (5.1) se xxxxxx x xxxxxxxxx 0,2 xx:
- do xxxxx x kulatým xxxx x xxxxxx 100 ml (4.1) xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (5.3.2.3) nebo
- xx xxxxx x kulatým xxxx x obsahu 250 xx (4.1), xxxxxxxx-xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx
- xx xxxxxx x xxxxxx 100 xx xx xxxxxxxxxx uzávěrem (4.2) (xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx 5.3.2.4).
Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxx xxx obsah xxxxxx xxx 10 mg x obsah xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 xx.
Xxxxx/xxxxxx xx umístí xx xxxxx x ledovou xxxxx x xxxxxxx xx na 0 °X, xxxxx xx xxxxx 5 xx xxxxxxxx xxxxx (3.23) x promíchá xx xxxxxxxxx lžící se xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx/xxxxxx xx xxxxxx x xx lžící xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xx x s xxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 0 °C x xxxxxxx xx xxx 16 xxxxx. Xx 16 hodinách xx xxxxx z xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx přidáním 0,84 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.4).
Xxxx xx pokračuje xxxxx 5.3.2.1.
5.3.2 hydrolýza
5.3.2.1 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx
X xxxxxxxxxxx xxxxxx připravenému xxxxx 5.3.1 xx xxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.20) xxx, xxx neulpěl xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx pokračuje podle 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4.
5.3.2.2 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorků
Do xxxxx s xxxxxxx xxxx x xxxxxx 100 ml xxxx 250 xx (4.1) xxxx xx xxxxxx x xxxxxx100 xx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.2) se xxxxxx 0,1 až 1 x xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) x přesností xx 0,2 xx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx měla xxx xxxxx xxxxxx xxx 10 mg. Xxxxxxx xx xxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.20) x xxxxxx xx xx xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx podle 5.3.2.4.
5.3.2.3 xxxxxxxx hydrolýza
Ke xxxxx x xxxxx (připravené xxxxx 5.3.2.1 nebo 5.3.2.2) xx xxxxxxx 3 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx se xxxxx xx mírného xxxx xxx zpětným xxxxxxxxx na xxxx 23 xxxxx. Po xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxx chladič xxxxxxx 5 xx citronanového xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24). Xxxxx se xxxxxx x ochladí xx x xxxxxx lázni. Xxxx se xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3.
5.3.2.4 xxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xx směsí xxxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2 se xxxxxx xx xxxxxxx (4.3) při 110 °X. Aby xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x xxxxxxxx vyvíjení xxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx volně xx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxx hodiny xx xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx v xxxxxxx (4.3) 23 hodin. Xx skončení xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x postaví se xx lázně x xxxxxxx xxxxx. Baňka xx xxxxx vychladnout.
Podle xxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxx xX (5.3.3) xx obsah xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztoku (3.24) xx kádinky x xxxxxx 250 xx nebo xx xxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxx 250 xx.
Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3
5.3.3 xxxxxx xX
Xxxxx toho, xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9), xxxxxxxxxx xxx úpravě xX xxxxx 5.3.3.1 xxxx 5.3.3.2.
5.3.3.1 pro xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.9), xxxxxxxxxx xxxxxx koncentraci xxxxxx:
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx vyžaduje xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xx-xx xx snížit xxxxx xxxxxxx), doporučuje xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx standardní xxxxxx (3.27.3).
X xxxxxxx případě xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxx 2,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.27.3).
Xx hydrolyzátu xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4. xx xxxxxxx 2 xxxxx 1-xxxxxxxx (3.15).
Xx xxxxxxx xxxxxxx (4.7) xx xxxxx xxxxx xx 5-10 ml za xxxxx při 40 °X. Xxxxx xx xx xxxxx náhodou xxxxxx pod 5 xx, xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxx xxxxx.
xX xx xxxxxx xx 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18) x xxxxxxxxx se xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.3.2 pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9)
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4 se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx opatrným přidáním 17 ml xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.17), xx xxxxxxx xxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx pod 40 °X.
xX xx xxxxxx xx 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18) xxx pokojové xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.4 xxxxxx vzorků pro xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx (5.3.3.1 xxxx 5.3.3.2) x xxxxxxxxx xX xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pomocí citronanového xxxxxxxxx roztoku (3.24) xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xx a tlumivým xxxxxxxx (3.24) xx xxxxxx xx xxxxxx.
Xxxxx-xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se 2,00 ml vnitřního xxxxxxxxx (3.27.3) x xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx citronanovým xxxxxxxx roztokem (3.24). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx (5.4)
Xxxxxx-xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx týž xxx, uschovávají xx xxx xxxxxxx xxx 5 °C.
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx (5.2) a xxxxxxxxxx (5.3.4) xxxxxxxxx xxxxxxx. Směs se xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx se zfiltruje xxxxxxxxxxx xxxxxxx 0,2 μ (4.5). Xxxxxxxx xxxx roztok se xxxxxxx xxxxxxxx chromatografii xx xxxxxxxxxxx aminokyselin (4.9).
Xxxxxxx xxx provést xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxx se na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ± 0,5 % xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx, kdy xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx sodíku x xxxxxxxxxxxxxx by xxx xxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a x roztocích vzorků xx xxxxx nejpodobnější.
Frekvence xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx stabilitě ninhydrinového xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx nebo xxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24) xxx, xxx xxxxxx píku standardu xxxxxxx 30 – 200 % plochy xxxx pro jednotlivé xxxxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx ionexu. Xxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx separovat xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx i xx xxxxxxxxx ninhydrin xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. X rozsahu xxxxx působení xx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxx aminokyselin xxxxxxxxxxx na xxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, by xxxx xxx dosaženy xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Tyto xxxxxxxxxxx xxxxxxx musí xxxxxxxxx xxxxxxx 30 % xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxx xxxxx přesně xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx aminokyselin (4.9).
Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxx sedla a xxxxxxx píku nižšího x xxxx xxxxxxxxxxxxxx xx aminokyselin xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 2:10 (pokud xx xxxxxxx xxxxx xxxx(x)xx, xxxxxxxxx, threonin x xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx píků). Xxx všechny ostatní xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx než 1:10.
Xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx lysin xxxx xxxxxxxxx xx "xxxxxxxxxx xxxxxxxx" a xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxx píků vzorků x standardu xx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx aminokyselinu x xxxxxxxxxx xx množství xxxxxxxxxxxxx x x xx xx xxxxxx.
x xxxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxx = X × E × XX × X / X × X × 1 000
Xx-xx použit xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx: D / X
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx
X = xxxxxx xxxx kalibračního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x hydrolyzátu nebo x xxxxxxxx
X = xxxxxx píku interního xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
XX = xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v μmol/ml
V = xxxxxxxx navážky xxxxxx (g) (korigovaná xx původní xxxx xxxxx je xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx)
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (5.3.4) x xx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vypočteného xxxxx 6.1
Xxxxxx x xxxxxxx xx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx cysteová, xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx cystin (X6X12X2X4X2, XX 240,30) x xxxxxxxx XX 120,15 (= 0,5 x 240,30).
Xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxxx methionin s xxxxxxxx XX xxxxxxxxxx: 149,21.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx výpočet xx xxxxxxx stejná XX.
6.1 Xxxxxxx objem xxxxxxxxx xxxxxxxx (F) xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (5.2) se xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
X = 100 xx × (10 xx + 5 xx) / 10 xx × X&xxxx;xx / 10xx
X = objem xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7. Vyhodnocení xxxxxx
Xxxx metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx 1990 xxx xxxxxxx xxxx různých xxxxx (xxxxx směs xxx prasata, xxxxx xxxx pro broilery, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx). Xx xxxxxxxxx extrémů xxxx výsledky xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx tabulce:
střední xxxxxxx x x/xx
|
Xxxxxxxxxx materiál |
Aminokyselina |
|||
|
Threonin |
cyst(e)in |
Methionin |
lysin |
|
|
Krmná xxxx xxx xxxxxxx |
6,94 x = 15 |
3,01 x = 17 |
3.27 x =.17 |
9,55 x = 13 |
|
Krmná směs xxx xxxxxxxx |
9,31 x = 16 |
3,92 x = 18 |
5,08 n = 18 |
13,93 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx koncentrát |
22,32 x = 16 |
5,06 x = 17 |
12,01 x = 17 |
47,74 x = 15 |
|
Premix |
58,42 x = 16 |
- |
90,21 x = 16 |
98,03 x = 16 |
x = xxxxx zúčastněných xxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxx vyjádřená xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx standardní xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
xxxxxxxxxx odchylka (Xx) opakovatelnosti v xxxxxxxxxx v g/kg
|
Referenční xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
0,13 x = 15 |
0,10 x = 17 |
0,11 x = 17 |
0,26 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
0,20 x = 16 |
0,11 x = 18 |
0,16 x = 18 |
0,28 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,48 x = 16 |
0,13 x = 17 |
0,27 x = 17 |
0,99 x = 15 |
|
Xxxxxx |
1.30 x = 16 |
_ |
2,19 n = 16 |
2,06 x = 16 |
x = xxxxx zúčastněných xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx (%) vnitrlaboratorních xxxxxxxxxxxx odchylek (Xx)
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
1,9 x = 15 |
3,3 x = 17 |
3,4 n =.17 |
2,8 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
2,1 x = 16 |
2,8 x = 18 |
3,1 x = 18 |
2,1 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
2,7 x = 16 |
2,6 x = 17 |
2,2 x = 17 |
2,4 n = 15 |
|
Xxxxxx |
2,2 x = 16 |
- |
2,4 x = 16 |
2,1 x = 16 |
x = počet xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.2 Reprodukovatelnost
Výsledky xxxxxxxxxxxxxxxxx standardních xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx shora xxxxxxxxx zkoušek xxxx xxxxxxxx v následující xxxxxxx:
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (XX) v g/kg
|
Referenční xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxx |
0,28 x = 15 |
0,30 x = 17 |
0,23 x = 17 |
0,30 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxxx |
0,48 x = 16 |
0,34 x = 18 |
0,55 x = 18 |
0,75 n = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,85 x = 16 |
0,62 x = 17 |
1,57 x = 17 |
1,24 n = 15 |
|
Xxxxxx |
2,49 n = 16 |
- |
6,20 n = 16 |
6,62 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx (%) xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (XX)
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxx |
4,1 x = 15 |
9,9 n = 17 |
7,0 n = 17 |
3,2 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
5,2 x = 16 |
8,8 x = 18 |
10,9 x = 18 |
5,4 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
3,8 x = 16 |
12,3 x = 17 |
13,0 n = 17 |
3,0 n = 15 |
|
Xxxxxx |
4,3 x = 16 |
- |
6,9 n = 16 |
6,7 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx laboratoří
8. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx uvedené xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx-xx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kalibračními xxxxxxx aminokyselin.
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx aminokyselin xx se měly xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx aminokyselin (xxx 3.27.4 a 3.27.5) x xxxxxxx xxxxxx (5.3.4) xxxxxxxxx xx doporučené.
Lineární rozsah xxxxxxxxx xx musí xxxxxxxxxxxx pro všechny xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx tlumivým xxxxxxxx xxx, xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx uprostřed xxxxxx xxxxxxx.
9.2 Xxxxx se x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxx optimalizovány x souladu x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Xxx xxxxxxx této xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx 1 % chloridu (xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx krmiva, doplňková xxxxxx) xxxx xxxxx x podhodnocení xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx xx proto xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
XXXX X XXXXXXXXX XXXX
1. Xxxx x xxxxxx použití
Touto xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxx. Metoda se xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, xxxxxxx zkoušení xx řídí xxxxx xxxxxxxx Xxxx 136/66/EHS xx dne 22. xxxx 1996.
Xxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:
1.1 Xxxxxx A – xxxxx extrahovatelné xxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx rostlinného xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx X.
1.2 Xxxxxx X – xxxxxxx xxx
Xxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx krmiva xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxxx krmné xxxxx. Používá se xxx všechny xxxxxxxxx, x xxxxx není xxxxx tuk úplně xxxxxxxxxx bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxx. xxxxx, xxxxxxxx, bramborové xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx podrobeny zpracování, xxxx vytlačování, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx).
1.3 Interpretace xxxxxxxx
Xx xxxxx případech, xxx se xxxxxxx xxxxxxx výsledku xxxxxxxx X, xxx postupem X, je xxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxxx X.
2. Princip
2.1 Xxxxxx X
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxx a xxxxx.
2.2 Xxxxxx X
Xxxxxx xx xxxxxxx s xxxxxxxxx chlorovdíkovou. Xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx. Promytý x xxxxxxx xxxxxx se xxx zpracuje podle xxxxxxx X.
3. Xxxxxxx
3.1 xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx 40 x 50 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxx xxx 1 a xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx než 2 xx/100 ml
3.2 síran xxxxx, xxxxxxx
3.3 kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 3 xxx HCl/l
3.4 xxxxxxxxx prostředky, např. xxxxxxxxx, Xxxxx-xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx sifonem (Xxxxxxxxx xxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx asi 10 xxxxx za xxxxxx. X xxxx xxx xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx 10 xx xx xxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx látek xxxxxxxxxxx v petroletheru, x xxxxxxxxx x xxxxxxx s požadavky xxxxx xxxx 4.1.
4.3 Xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx 75 °X ± 3 °X, nebo horkovzdušná xxxxxxxx xx 100 °X ± 3 °X.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxx X (viz xxx 8.1)
Xx extrakční xxxxxxx xx xxxxxx 5 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx (4.2) a xxxxxxxxx xxxxxxx vaty xxx tuku.
Patrona xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.1) x xxxxxxxxxx šest xxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx baňky, xxxxx xxxxxxxx úlomky pemzy [1].
Xxxxxxxxxxxx se oddestiluje, xxxxxx v baňce xx suší 1,5 xxxxxx x sušárně (4.3). Xxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x zváží. Xxxx xx dalších 30 xxxxx, xxx xx xxxxxxxx, xxx je xxxxxxxx xxxx konstantní (xxxxxx xxxxxxxxx mezi xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx 1 xx).
5.2 Xxxxxx X
Xx kádinky x xxxxxx 400 xx xxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 300 ml xx odváží 2,5 x vzorku x xxxxxxxxx na 1 xx (viz xxx (8,2) a xxxxx xx 100 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.3) x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx sklem nebo xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx se xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx malém xxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxx x xxxx xx xx xxxx xxxxx hodiny. Během xxxx se musí xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx stěnách xxxxxx.
Xxxx xx ochladí x přidá se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4), xxx xxx filtraci xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx dojitý filtrační xxxxx zbavený xxxx. Xxxxxx se promývá xxxxxxxx xxxxx, až xx xxxxx neutrální xxxxxxx. Provede xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx žádný tuk. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxx X.
Xxxxxxx filtrační xxxxx xx xxxxxxx xx položí na xxxxxxxx xxxx x xxxx xx půldruhé xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3) xxx xxxxxxx 100 °X ± 3 °X.
Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx zbytkem se xxxxx do extrakční xxxxxxx (4.2) a xxxxxxxx smotkem xxxx xxx tuku. Xxxxxxx xx vloží do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.1) x xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx odstavce xxxx 5.1.
6. Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Opakovatelnost
Rozdíl xx xxxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx vzorku xxxxxxx pracovníkem xx xxxxx xxxxxxxxxx:
- 0,2 % x xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxx než 5 %,
- 4,0 % xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xx 5 xx 10 %,
- 0,4 % x xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxx xxx 10 %.
8. Poznámky
8.1 X xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxx, xxxxx xx xxxxxxx drtí xxxx xxxxx xxxxxxxxxx odebrat xxxxxxxxxx homogenní vzorek, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxx se 20 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx x smíchá xx s 10 xxxx x xxxx xxxxx bezvodého xxxxxx xxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxx xx petroletherem (3.1) xxxxx bodu 5.1. Xxxxxxxx extrakt xx xxxxxx xx 500 xx petroletherem (3.1) x xxxxxxxx se. 50 ml roztoku xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx, obsahující xxxxxx pemzy [2].
Rozpouštědlo xx oddestilujte, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx se podle xxxxxxxxxx odstavce xxxx 5.1.
Xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxx procento xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
(10 a + b) × 5
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx (xxxxxxx část xxxxxxxx)
x = hmotnost xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx
8.2 U xxxxxxx, xxxxx mají xxxxx obsah xxxx xx xxxx navážka xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx 5 g.
8.3 Xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxx, xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx B xxxxxxx s bezvodým xxxxxxx sodným.
8.4 X xxxx 5.2 se xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx místo vody xxxxxxx.
8.5 X xxxxxxxxx xxxxx se musí xxxxxxxxxx doba xxxxxx xxx 1,5 hod. Xx xxxx třeba xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx může xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxx použít x xxxxxxxxxxx troubu.
8.6 Xxx xxxxxx xxxx xxx 15 % xx doporučuje xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx A x xxxxxxxx extrakci xxxxx postupu B. Xxxxxx to xx xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx v xxxxxx.
XXXX C
STANOVENÍ OLACHINDOXU
(2-[N-2-(hydroxyethyl)karbamoyl]-3-methylchinoxalin-N1,N4-dioxid)
1. Xxxx x oblast xxxxxxx
Xxxxx metodou xx xxxxxxx obsah xxxxxxxxxxx x krmivech. Xxxxx xxx stanovitelnosti xx 5 mg/kg.
2. Princip
Vzorek xx extrahuje směsí xxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vysoce xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC) xx xxxxxxxx xxxx xx použití XX xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 xxxxxxxx
3.2 xxxxxxxx, pro XXXX
3.3 xxxx, xxx HPLC
3.4 xxxxxxx xxxx pro XXXX:
Xxxx vody (3.3) x xxxxxxxxx (3.2), 900 + 100 (X + X)
3.5 xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx 2-[X-2-(xxxxxxxxxxxx)xxxxxxxxx]-3-xxxxxxxxxxxxxxxx-X1,X4-xxxxxx, E 851
3.5.1 zásobní standardní xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, 250 μx/xx
Xx odměrné xxxxx o xxxxxx 200 xx xx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.5) s xxxxxxxxx xx 0,1 xx x xxxxx xxx 190 ml xxxx. Xxxxx xx xxxxxxx na 20 xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Po xxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx, doplní xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxx se xxxxx hliníkovou xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx musí xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx měsíc.
3.5.2 xxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxx, 25 μg/ml
10,0 xx xxxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.1) xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 ml, xxxxxx xx xx xxxxxx mobilní fází (3.4) x xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx fólií a xxxxxxxxx x chladničce. Xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx denně xxxxxxx.
3.5.3 xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxx odměrných baněk x xxxxxx 50 xx xx odpipetuje 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0 x 20,0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.5.2). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx (3.4) po xxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx fólií. Tyto xxxxxxx xxxxxxxxxx 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 7,5 x 10,0 μx xxxxxxxxxxx xx xx.
Xxxx xxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 xxxxxxxxxxxx xxxxx
4.2 xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.3 zařízení XXXX x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx ultrafialového xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pole
4.3.1 xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, xxxxxxx X18, 10 μx, nebo srovnatelná xxxxxx
4.4 membránové filtry x póry 0,45 μx
5. Postup
Poznámka:
Olachindox xx xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx postupy xx xxxx provádět při xxxxxxxx světle xxxx x nádobách x xxxxxxx xxxx.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx analyzovat xxx xxxxxxxx, zda xxxxxxxxxx olachindox xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx látky.
5.1.2 Xxxxxxx na xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx krmiva xxxxxxxxxxx xxxxxxxx takového xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx obsahu xx xxxxxx X xxxxxxxxxxx xx xxxxxx 50 xx/xx se xxxxxxxxxx 10,0 ml zásobního xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.1) xx kónické xxxxx o xxxxxx 250 xx x xxxxxx se xxxxxx xx cca 0,5 xx. Přidá xx 50 g xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx x nechá xx 10 minut xxxxxx, přičemž xx xxxxx několikrát xxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Xxxxxxxx:
Xxx xxxxx xxxx metody xx xxx modelové xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx vzorek x nesmí obsahovat xxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Naváží xx xxxxxxxxx 50 g xxxxxx x přesností xx 0,01 g. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1000 ml, xxxxx xx 100 xx methanolu (3.1) x xxxxx xx xxxxxx xx xxx xxxxx xx ultrazvukové xxxxx (4.1). Přidá xx 410 xx xxxx x ponechá xx x xxxxxxxxxxxx xxxxx dalších 15 xxxxx. Xxxxx xx xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxx xx xxxxx 30 xxxxx xx xxxxxxxx (4.2) x xxxxx se xxxxxxxxxxx složeným xxxxxxx. 10,0 xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 20 xx, xxxxxx xx vodou xx xxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxx část xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) (xxx xxx 9. Xxxxxxxx). Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx HPLC (5.3).
5.3 Xxxxxxxxx XXXX
5.3.1 Xxxxxxxxx:
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3.1)
xxxxxxx xxxx (3,4): Xxxx vody (3.3) x xxxxxxxxx (3.2), 900 + 100 (X + X)
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxx
xxxxxxxx xxxxxx xxxxx: 380 xx
xxxxx xxxxxxxx: 20 μx–100 μx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx zkontroluje xxx, xx se xxxxxxxxxx nastříkne xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5.3) obsahující 2,5 μx/xx, xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx píků x xxxxxxxxxx časů.
5.3.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx se provede xxxxxxx nástřiků x xxxxxx xx střední xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxx) xxxx kalibračních xxxxxxx xxxx xxxxxxx x příslušných xxxxxxxxxxx x μx/xx xxxx xxxxxxxxx.
5.3.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxx xx xxxxxxx nástřiků xxxxxxxx xxxxxx (5.2) xxx použití xxxxxxxx xxxxxx xxxx u xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xx střední xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x roztoku vzorku x μx/xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (5.3.2).
Xxxxx olachindoxu xx xxxxxx x v xx/xx xx dán xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = x × 1 000 / x
xxx:
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (5.2) x μg/ml
m = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x g (5.2)
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx opakovaným xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (co-chromatography) xxxxx využitím detektoru x xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2) a kalibračního xxxxxxx (3.5.3), obsahujícího 5,0 μg/ml xxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx stanovením s xxxxxxxxx (xx-xxxxxxxxxxxxxx)
Xxxxxxx vzorku (5.2) se xxxxxxx xxxxxxxxx přiměřeného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.5.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx mělo odpovídat xxxxxxxx olachindoxu xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
X xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Šířka xxxx x polovině xxxx xxxxx xxxx xxx x xxxxxxx ±10 % xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx délce xxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx xxxx být xxxxxx spektra xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx píku xx xxxxxxxxxxxxx stejný x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx detektor x diodovým xxxxx xx xxxxx ±2 xx;
x) při vlnové xxxxx mezi 220 x 400 xx xx nesmí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit od xxxxxxxxx částí xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx nikde odchylka xxxx xxxxx spektry xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx analytu;
b) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxxxx vzestupu, xxxxxxx a sestupu xxxx zkoušeného xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 10 až 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx sledovaných xxxxxx xxxxxxxx xxxx spektry xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx spektra xx vrcholu xxxx.
Xxxx-xx xxxxxxx x těchto xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx není xxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 20 xx/xx, xxxxx přesáhnout15 % xxxxxxx výsledku.
7.3 Výtěžnost
Pro xxxxxxxxx xxxxxxxx vzorek xxxx xxx výtěžnost xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx kruhového testu
V xxxxx ES byl xxxxxxxx kruhový xxxx, xxx němž až 13 laboratoří analyzovalo xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx selata, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx uvedeny x následující xxxxxxx:
|
| xxxxxx 1 |
xxxxxx 2 |
vzorek 3 |
xxxxxx 4 |
|
|
X |
13 |
10 |
11 |
11 |
|
X |
40 |
40 |
44 |
44 |
|
xxxxxxx (xx/xx) |
- |
14,6 |
48,0 |
95,4 |
|
(Xx) (xx/xx) |
- |
0,82 |
2,05 |
6,36 |
|
(XX) (xx/xx) |
- |
1,62 |
4,28 |
8,42 |
|
XXx (%) |
- |
5,6 |
4,3 |
6,7 |
|
XXX (%) |
- |
11,1 |
8,9 |
8,8 |
|
xxxxxxxxx obsah (xx/xx) |
- |
15 |
50 |
100 |
|
xxxxxxxxx (%) |
- |
97,3 |
96,0 |
95,4 |
X: xxxxx laboratoří
n: xxxxx jednotlivých xxxxxx
Xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxx xxxxxxxxxx opakovatelnosti
CVR: xxxxxxxx koeficient xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
9. Xxxxxxxx
Xxxxxxx tato xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx více xxx 100 xx/xx xxxxxxxxxxx, xx možné xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx navážkou xxxxxx x/xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (5.2) xxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.3.2).
[1] Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx zkoušet xx xxxxxxx, xxxxxx se xxxxxx pemzy xx xxxxxxxx kuličky.
[2] Pokud xx xx xxx xxxxxxxx zkoušet na xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx.