Xxxxxxxx Xxxxxx 98/64/ES
ze xxx 3. xxxx 1998,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx x xxxxxxxxxxx x krmivech x xxxxxx se xxxx xxxxxxxx 71/393/XXX
(Xxxx x xxxxxxxx pro XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. července 1970 x zavedení xxxxx xxxxxx xxxxxx x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Aktem x přistoupení Xxxxxxxx, Xxxxxx x Xxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx kontroly, zda xxxxxx splňují xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x správních xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx jejich xxxxxxx a xxxxxxx, xx xxxxxxx za xxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx Společenství;
vzhledem x xxxx, že xxxxxxxx Rady 79/373/XXX xx xxx 2. xxxxx 1979 x xxxxxxx krmných xxxxx xx xxx [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxx směrnicí Xxxxxx 97/47/XX [3], x xxxxxxxx Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. xxxx 1993 x krmivech xxxxxxxx xx xxxxxxxxx účelům xxxxxx [4], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/XX [5], xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxx musí xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx směrnice Rady 70/524/XXX xx dne 23. xxxxxxxxx 1970 x doplňkových látkách x xxxxxxxx [6], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 98/19/XX [7], xxxxxxx, že obsah xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxx xx označení, xxxxx je xxxx xxxxx xxxxxxx do xxxxxxx směsí;
vzhledem x xxxx, že xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971, kterou xx stanoví analytické xxxxxx Společenství xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [8], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Komise 84/4/EHS [9], xxxxxxx metody xxxxxxx xxxx xxxx x pro zjišťování xxxxxx xxxx; že xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, že xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxx látek;
vzhledem x xxxx, že xxxxxxxx této xxxxxxxx xxxx v xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, tuku x xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx za použití xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx této xxxxxxxx.
Článek 2
V příloze xxxxxxxx Xxxxxx 71/393/EHS xx xxx "4. Xxxxxxxxx xxxxxx tuku" xxxxxxxxx částí X xxxxxxx této směrnice.
Článek 3
1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx právní x xxxxxxx předpisy xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx do 31. xxxxxxxx 1998. Xxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx tyto předpisy xxxxxxxx od 1. xxxxx 1999.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx tuto xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx odkaz xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
2. Členské xxxxx xxxxx Xxxxxx znění xxxxxxxx xxxxxxxxxx vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx této směrnice.
Článek 4
Xxxx směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx dnem xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 5
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 3. xxxx 1998.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Fischler
člen Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[3] Xx. xxxx. X 211, 5.8.1977, x. 45.
[4] Xx. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[5] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
[6] Xx. věst. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[7] Xx. xxxx. X 96, 28.3.1998, x. 39.
[8] Xx. xxxx. X 279, 2.12.1971, x. 7.
[9] Xx. xxxx. X 15, 18.1.1984, x. 28.
XXXXXXX
XXXX X
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx slouží xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (syntetických a xxxxxxxxxxx) a xxxxxxxx (xxxxxxx vázané a xxxxx) aminokyselin v xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx aminokyselin. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxx(x)xx, xxxxxxxxx, xxxxx, threonin, xxxxxx, arginin, kyselinu xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxx, xxxxxxx a xxxxx.
Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x nemůže xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx D x X. Není xxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
2.1 Xxxxx aminokyseliny
Volné aminokyseliny xx xxxxxxxxx zředěnou xxxxxxxxx chlorovodíkovou. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx makromolekuly xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xx pH 2,20. Xxxxxxxxxxxxx se separují xxxxxxxxxxxxxx chromatografií a xxxxxxx se po xxxxxx x ninhydrinem xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 570 nm.
2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx proces závisí xx stanovovaných xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxx(x)xx x methionin xxxx xxx před xxxxxxxxxx oxidovány na xxxxxxxx xxxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx musí xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx neoxidovaných xxxxxx. Ostatní aminokyseliny xxxxxxx v xxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx buď v xxxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xx xxxxxxx při 0 xX směsí xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxx oxidační xxxxxxx xx rozloží xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxx kyselinou chlorovodíkovou (x = 6 xxx/x) po 23 xxxxx. Hydrolyzát se xxxxxx xx pH 2,20. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx chromatografií x xxxxxxxxx se xx reakci x xxxxxxxxxxx fotometrickou xxxxxxx xxx 570 xx (440 xx pro xxxxxx).
3. Xxxxxxx
Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx &xx; 10 μS).
3.1 xxxxxxx vodíku, x = 30 %
3.2 xxxxxxxx xxxxxxxx, w = 98–100 %
3.3 xxxxx
3.4 xxxxxxxxx xxxxx
3.5 xxxxxxxx sodný
3.6 kyselina 5-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx
3.7 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 1,18 x/xx
3.8 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx
3.9 2,2-xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx)
3.10 xxxxxxx xxxxx
3.11 xxxxxxxxx
3.12 petrolether, xxx varu 40–60 °X
3.13 norleucin nebo xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vnitřní xxxxxxxx
3.14 xxxxx – xxxx (&xx; 10 ppm xxxxxxx)
3.15 1-xxxxxxx
3.16 xxxxxxxxxxxxx
3.16.1 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 1; xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx ve vakuu xxx P2O5 xxxx X2XX4 xxxxx xxxx xxxxxxxx
3.16.2 xxxxxxxx cysteová
3.16.3 xxxxxxxxxxxxxxx
3.17 hydroxid xxxxx, xxxxxx x = 7,5 xxx/x:
300 g XxXX (3.5) xx xxxxxxxx xx xxxx x doplní do 1 xxxxx.
3.18 hydroxid xxxxx, xxxxxx x = 1 mol/l:
40 x XxXX (3.5) xx rozpustí xx xxxx x doplní xx 1 xxxxx.
3.19 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx:
Xxxxxx xx 889 x xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2) xx 111 g vody x xxxxx se 4,73 g xxxxxx (3.3).
3.20 xxxxxxxxxxxx xxxx, x = 6 xxx HCl/l x xxxxxxxxx 1 x xxxxxx/x:
X 492 xx XXx (3.7) xx xxxxx 1 x xxxxxx (3.3) x xxxxxx xx xxxxx xx 1 xxxxx.
3.21 xxxxxxxxx xxxx, x = 6 xxx XXx/x s xxxxxxxxx 2% xxxxxxxxxxxxx:
8,2 ml XXx (3.7) xx xxxxxxx přibližně 900 xx xxxx, xxxxx xx 20 xx xxxxxxxxxxxxx (3.9) x xxxxxx xxxxx xx 1 xxxx (3.7 x 3.9 se xxxxx xxxxxxx xxxxx).
3.22 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, β = 6 %:
60 x xxxxxxxx 5-sulfosalicylové (3.6) xx rozpustí xx vodě x xxxxxx xxxxx na 1 xxxx.
3.23 xxxxxxxx xxxx (kyselina xxxxxxxxxxx – fenol):
V xxxx xxxxxxx xx xxxxxx 0,5 ml xxxxxxxx xxxxxx (3.1) x 4,5 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx (3.19); ponechá xx v xxxxx 1 hodinu xxx 20–30 °X, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, před přidáním xx vzorku xx xxxx ochladí x xxxxx s ledovou xxxxx (15 xxxxx).
Xxxxx:
Xx xxxxx xxxxxxx kontaktu x kůží x xxxxxxxx ochranný xxxx.
3.24 xxxxxxxxxxx xxxxxxx roztok, x = 0,2 xxx Xx+/x, pH 2,20:
X přibližně 800 xx vody se xxxxxxxx 19,61 x xxxxxxxxx xxxxxxx (3,8), 5 xx thiodiglykolu (3.9), 1 x xxxxxx (3.3) x 16,50 xx HCl (3.7). pH se xxxxxx na 2,20. Xxxxxx xx vodou xx objem 1 xxxxx.
3.25 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx připravované podle xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (4.9)
3.26 xxxxxxxxxxxx xxxxxxx připravované xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxx (4.9)
3.27 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx nutno xxxxxxxxxx při xxxxxxx xxx 5 °C.
3.27.1 xxxxxxx standardní základní xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.16.1), x = 2,5 μxxx/xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx roztok xxx obdržet x xxxxxxxx připravené.
3.27.2 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx cysteové x xxxxxxxxxxxxxxxx, c = 1,25 μmol/ml
0,2115 g xxxxxxxx cysteové (3.16.2) x 0,2265 x xxxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx (3.16.3) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.24) x xxxxxxx odměrné xxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 12 xxxxxx. Tento roztok xx nepoužívá, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (3.27.1) xxxxxxxx kyselinu xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx.
3.27.3 xxxxxxx xxxxxxxxxx základní xxxxxx vnitřního standardu, xxxx. norleucinu, x = 20 μxxx/xx
0,6560 x norleucinu (3.13) xx rozpustí v xxxxxxxxxxxx tlumivém xxxxxxx (3.24) v odměrné xxxxx xx 250 xx x xxxxxx xx po značku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztokem. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 6 xxxxxx.
3.27.4 kalibrační xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x hydrolyzáty, x = 5 xxxx/50 μx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx x c = 10 xxxx/50 μx x xxxxxxxxx aminokyselin
Ve 100 xx kádince xx rozpustí 2,2 x xxxxxxxx xxxxxxx (3.10) v 30 xx xxxxxxxxxxxxx tlumivého xxxxxxx (3.24). Xxxxxxx xx 4,00 ml xxxxxxxxx standardního základního xxxxxxx aminokyselin (3.27.1), 4,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx cysteové a xxxxxxxxxxxxxxxx (3.27.2) a 0,50 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx standardu (3.27.3), xxxxx xx xxxxxxx. xX se xxxxxx xx 2,20 hydroxidem xxxxxx (3.18).
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx 50 ml xxxxxxx xxxxx, xxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24) a xxxxxxx xx.
Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx pod 5 °C nejdéle 3 xxxxxx.
Xxx také xxxxxxxx 9.1.
3.27.5 xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx použití s xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.3.1 a xxx extrakty (5.2). Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx podle 3.27.4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 3 xxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 xxxxx x kulatým xxxx o xxxxxx 100 nebo 250 xx xxxxxxxx zpětným xxxxxxxxx
4.2 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx 100 xx xx šroubovým uzávěrem x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx, Xxxxxx) xxx xxxxxxx x xxxxxxx
4.3 xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxx ±2 °X
4.4 xX xxxx (xxx xxxxxxxxx xxxxx)
4.5 xxxxxxxxxx xxxxx (0,2 μx)
4.6 xxxxxxxxxxx
4.7 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.8 xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx magnetická xxxxxxxx
4.9 xxxxxxxxxx aminokyselin xxxx zařízení HPLC x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx kolonovou xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxx xx naplní sulfonovanou xxxxxxxxxxxxxx pryskyřicí, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx oddělení xxxxxxxxxxxx x separaci xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx čerpadla xx xxxxxxxx průtoku ± 0,5 % xx dobu zahrnující xxxxxxxxxx kalibraci i xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx je možno xxxxxx x xxxxxxx, xx hydrolyzát vykazuje xxxxxxxxxxx sodíkových iontů x = 0,8 xxx/x x obsahuje xxxxxxxxx mravenčí xxxxxxxx x xxxxxxxxxx kroku. Xxxx xxxxxxxxxxx nezaručují xxxxxxxxxxx xxxxxxxx určitých xxxxxxxxxxxx, obsahuje-li xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx mravenčí kyselinu x/xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx iontů. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx úpravou pH xxxxxxxxx hydrolyzátu xx xxxxx 5 xx. Xxxxxxxx xx má xxxxxxxx xx vakuu xxx xxxxxxx nejvýše 40 °X.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Vzorek se xxxxxx xxxxxx tak, xxx xxxxxx xxxxx x xxx 0,5 xx. Xxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx před mletím xxxxxxx na vzduchu xxx teplotě xxxxxxxxxxxxx 50 °X xxxx xxx xxxxxxxx. Xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.12).
5.2 Xxxxxxxxx volných xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx x v xxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx příslušné množství (1–5 x) xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) s xxxxxxxxx na 0,2 xx x xxxxx xx 100,0 ml xxxxxxxxx xxxxx (3.21). Xxxxx xx třepe 60 xxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxx xx magnetické xxxxxxxx (4.8). Po xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xx kádinky x obsahu 100 xx.
Xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx x xxxxxxx xx magnetické míchačce xxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 100 xx, xX xx upraví xx 2,20 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.18), xxxxx se xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztoku (3.24) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxx po xxxxxx xxxxxxxx roztokem (3.24).
Xxxxxxx-xx xx interní xxxxxxxx, xxxxx xx 1,00 xx interního standardu (3.27.3) xx každých 100 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xx doplní xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24).
Xxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 – chromatografie.
Nejsou-li extrakty xxxxxxxxxx xxx den, xxxxxxxxxxx xx při xxxxxxx xxx 5 °X.
5.3 Stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
5.3.1 xxxxxxx
0,1 až 1 x upraveného xxxxxx (5.1) se xxxxxx s xxxxxxxxx 0,2 mg:
- xx xxxxx x kulatým xxxx o xxxxxx 100 ml (4.1) xxx xxxxxxxxx hydrolýzu (5.3.2.3) xxxx
- xx xxxxx s kulatým xxxx x xxxxxx 250 xx (4.1), xxxxxxxx-xx se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx
- xx nádoby x xxxxxx 100 ml xx šroubovací uzávěrem (4.2) (pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx 5.3.2.4).
Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx 10 xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 xx.
Xxxxx/xxxxxx xx umístí xx xxxxx x ledovou xxxxx x xxxxxxx xx xx 0 °X, xxxxx se xxxxx 5 xx xxxxxxxx směsi (3.23) x promíchá xx xxxxxxxxx lžící xx xxxxxxxx špičkou. Xxxxx/xxxxxx xx xxxxxx x xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx a vloží xx x s xxxxx s xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 0 °X x ponechá xx xxx 16 hodin. Xx 16 hodinách xx xxxxx z xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.4).
Xxxx xx pokračuje xxxxx 5.3.2.1.
5.3.2 xxxxxxxxx
5.3.2.1 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx
X xxxxxxxxxxx xxxxxx připravenému xxxxx 5.3.1 se xxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.20) xxx, aby neulpěl xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx. Podle xxxxxxxxx xxxxxxx hydrolýzy xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4.
5.3.2.2 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorků
Do xxxxx x xxxxxxx xxxx o obsahu 100 xx nebo 250 xx (4.1) xxxx xx xxxxxx x xxxxxx100 xx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.2) xx odváží 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxx vzorku (5.1) s xxxxxxxxx xx 0,2 mg. Xxxxxxxx část xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx 10 mg. Opatrně xx xxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxx směsi (3.20) x xxxxxx xx xx xxxxxxx. Xxxx xx postupuje xxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx podle 5.3.2.4.
5.3.2.3 xxxxxxxx hydrolýza
Ke xxxxx x baňce (připravené xxxxx 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2) xx přidají 3 skleněné xxxxxxx x xxxx xx xxxxx do mírného xxxx xxx zpětným xxxxxxxxx xx xxxx 23 hodin. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx promyje 5 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24). Xxxxx xx odpojí x ochladí se x xxxxxx xxxxx. Xxxx xx postupuje xxxxx 5.3.3.
5.3.2.4 xxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2 xx xxxxxx xx xxxxxxx (4.3) xxx 110 °X. Xxx xx xxxxx první xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx) a xxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxx se šroubovací xxxxxx xxxxx xx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xx uplynutí xxxxx hodiny xx xxxxxx zašroubuje a xxxxxxxx baňka xx xxxxxxx x xxxxxxx (4.3) 23 hodin. Xx xxxxxxxx hydrolýzy xx xxxxx vyjme xx xxxxxxx, opatrně xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx se xx lázně x xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx pH (5.3.3) xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx tlumivého roztoku (3.24) xx xxxxxxx x xxxxxx 250 xx xxxx do xxxxx x kulatým xxxx o xxxxxx 250 ml.
Dále se xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3
5.3.3 xxxxxx pH
Podle xxxx, xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9), xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xX xxxxx 5.3.3.1 xxxx 5.3.3.2.
5.3.3.1 pro xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.9), xxxxxxxxxx xxxxxx koncentraci sodíku:
Pokud xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xx-xx xx xxxxxx xxxxx kyselin), xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.27.3).
X xxxxxxx případě xx před xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx hydrolyzátu 2,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.27.3).
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4. xx xxxxxxx 2 xxxxx 1-xxxxxxxx (3.15).
Xx rotační xxxxxxx (4.7) se xxxxx xxxxx xx 5-10 xx za xxxxx xxx 40 °X. Pokud xx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx pod 5 xx, hydrolyzát xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxx.
xX xx upraví xx 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18) x xxxxxxxxx se podle xxxx 5.3.4.
5.3.3.2 pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9)
Hydrolyzáty xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4 se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 17 ml xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.17), xx xxxxxxx xxxxxxx x xxx zajištěné xxxxxxx xxx 40 °X.
xX xx xxxxxx xx 2,20 roztokem xxxxxxxxx sodného (3.18) xxx pokojové xxxxxxx. Xxxx se pokračuje xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.4 xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx (5.3.3.1 xxxx 5.3.3.2) x upraveným xX xx kvantitativně xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztoku (3.24) xx xxxxxxx baňky x obsahu 200 xx x xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24) xx xxxxxx xx xxxxxx.
Xxxxx-xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx 2,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3) x xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24). Xxxxxxxx xx promíchá.
Dále xx xxxxxx k xxxxxxxxxxxxxx (5.4)
Xxxxxx-xx xxxxxxx xxxxxx analyzovány xxx xxx, xxxxxxxxxxx xx xxx teplotě pod 5 °C.
5.4 Chromatografie
Před xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx (5.2) x xxxxxxxxxx (5.3.4) xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx xx zfiltruje xxxxxxxxxxx filtrem 0,2 μ (4.5). Xxxxxxxx xxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx analyzátoru xxxxxxxxxxxx (4.9).
Xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx nebo automaticky. Xxxxxx je důležité, xxx xx na xxxxxxx nastřikovalo stejné xxxxxxxx xxxxxxx ± 0,5 % xxx xxx analýze xxxxxxxxx xxx vzorků s xxxxxxxx, kdy xx xxxxxxx xxxxxxxxx standardu. Xxxxxx poměr xxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24) xxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 30 – 200 % xxxxxx xxxx xxx jednotlivé xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxx liší v xxxxxxxxxx na xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx separovat xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx sebe xxxxxxxx x od xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. X rozsahu xxxxx působení xx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, by xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x vrcholu xxxx. Tyto xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx obsahovat xxxxxxx 30 % xxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx mohou xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9).
Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx nižšího x xxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 2:10 (pokud se xxxxxxx pouze cyst(e)in, xxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxx, xx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nedostatečnou xxxxxxxx přilehlých xxxx). Xxx všechny ostatní xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx lepší než 1:10.
Xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx "lysinových xxxxxxxx" x xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxx xxx každou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x g xx xx xxxxxx.
x xxxxxxxxxxxxx na xx xxxxxx = A × X × XX × X / X × X × 1 000
Xx-xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx: X / X
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
X = plocha xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx nebo x xxxxxxxx
X = xxxxxx píku xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
XX = xxxxxxxxxxx váha xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = koncentrace xxxxxxxxx x μxxx/xx
X = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (x) (xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xx vzorek xxxxxxx nebo odtučněn)
F = celkový xxxxx xxxxxxxxxx roztoku (5.3.4) x xx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vypočteného xxxxx 6.1
Xxxxxx a cystein xx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx xxxx kyselina xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx (X6X12X2X4X2, XX 240,30) s xxxxxxxx XX 120,15 (= 0,5 x 240,30).
Xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxxxx, xxx vypočítává xx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxxxxxxx: 149,21.
Xxxxxxx xxxxx methionin xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx methionin, xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx MV.
6.1 Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (F) při xxxxxxxxx xxxxxxx aminokyselin (5.2) xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
X = 100 xx × (10 xx + 5 xx) / 10 ml × X&xxxx;xx / 10xx
X = xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx porovnáním na xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx 1990 xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxx směs xxx prasata, krmná xxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx koncentrát, xxxxxx). Xx xxxxxxxxx extrémů xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx uvedeny x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
xxxxxxx hodnoty x x/xx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxx |
6,94 x = 15 |
3,01 x = 17 |
3.27 x =.17 |
9,55 x = 13 |
Xxxxx xxxx xxx brojlery |
9,31 x = 16 |
3,92 n = 18 |
5,08 x = 18 |
13,93 x = 16 |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
22,32 x = 16 |
5,06 x = 17 |
12,01 x = 17 |
47,74 x = 15 |
Xxxxxx |
58,42 x = 16 |
- |
90,21 x = 16 |
98,03 x = 16 |
n = počet xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.1 Opakovatelnost
Opakovatelnost xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx standardní xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx tabulkou:
standardní odchylka (Xx) xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x x/xx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
0,13 x = 15 |
0,10 x = 17 |
0,11 x = 17 |
0,26 n = 13 |
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
0,20 n = 16 |
0,11 x = 18 |
0,16 x = 18 |
0,28 x = 16 |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,48 x = 16 |
0,13 x = 17 |
0,27 x = 17 |
0,99 x = 15 |
Premix |
1.30 x = 16 |
_ |
2,19 x = 16 |
2,06 x = 16 |
n = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx (%) xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odchylek (Xx)
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
1,9 x = 15 |
3,3 n = 17 |
3,4 n =.17 |
2,8 x = 13 |
Krmná xxxx xxx xxxxxxxx |
2,1 x = 16 |
2,8 x = 18 |
3,1 x = 18 |
2,1 x = 16 |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
2,7 x = 16 |
2,6 x = 17 |
2,2 n = 17 |
2,4 n = 15 |
Xxxxxx |
2,2 x = 16 |
- |
2,4 x = 16 |
2,1 n = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.2 Reprodukovatelnost
Výsledky xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (XX) x g/kg
Referenční xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxx |
0,28 x = 15 |
0,30 x = 17 |
0,23 x = 17 |
0,30 x = 13 |
Xxxxx xxxx pro xxxxxxxx |
0,48 n = 16 |
0,34 x = 18 |
0,55 x = 18 |
0,75 x = 16 |
Xxxxxxxxxx koncentrát |
0,85 x = 16 |
0,62 x = 17 |
1,57 x = 17 |
1,24 x = 15 |
Premix |
2,49 x = 16 |
- |
6,20 n = 16 |
6,62 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx (%) xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odchylek (SR)
Referenční xxxxxxx |
xxxxxxxxxxxxx |
|||
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxx |
4,1 x = 15 |
9,9 n = 17 |
7,0 x = 17 |
3,2 n = 13 |
Xxxxx směs xxx xxxxxxxx |
5,2 x = 16 |
8,8 n = 18 |
10,9 x = 18 |
5,4 x = 16 |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
3,8 x = 16 |
12,3 n = 17 |
13,0 x = 17 |
3,0 x = 15 |
Xxxxxx |
4,3 n = 16 |
- |
6,9 n = 16 |
6,7 n = 16 |
n = xxxxx zúčastněných xxxxxxxxxx
8. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx metody xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx-xx x xxxxxxxxx. Doporučuje se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aminokyselin.
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxx k rozdílům xxxx analyzátory aminokyselin xx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx kalibračních xxxxxxx xxxxxxxxx aminokyselin (xxx 3.27.4 x 3.27.5) x roztoků xxxxxx (5.3.4) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx rozsah xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx roztok se xxxx citronanovým xxxxxxxx xxxxxxxx xxx, aby xx xxxxxxx xxxxx xxxx uprostřed xxxxxx xxxxxxx.
9.2 Pokud se x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx zkoušek optimalizovány x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Při xxxxxxx této xxxxxx x xxxxx obsahujících xxxx než 1 % xxxxxxxx (koncentráty, xxxxxxxxx krmiva, xxxxxxxxx xxxxxx) xxxx dojít x xxxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
XXXX X XXXXXXXXX XXXX
1. Xxxx x oblast xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx tuku x xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, xxxxxxx zkoušení xx řídí xxxxx xxxxxxxx Xxxx 136/66/XXX xx xxx 22. xxxx 1996.
Xxxxx xxxxx x složení xxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxx jeden xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:
1.1 Xxxxxx X – xxxxx extrahovatelné xxxx
Xxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx xxxxxx rostlinného xxxxxx, x výjimkou xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx okruhu xxxxxxx B.
1.2 Xxxxxx X – xxxxxxx xxx
Xxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a xxx xxxxxxx krmné xxxxx. Xxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxxx tuk xxxxx xxxxxxxxxx bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxx. lepky, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx).
1.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx všech xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxx výsledku postupem X, xxx xxxxxxxx X, xx xxxxx xxxxxxxxx xx platnou xxxxxxx podle xxxxxxx X.
2. Xxxxxxx
2.1 Xxxxxx X
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x zbytek xx xxxxxx a xxxxx.
2.2 Xxxxxx B
Vzorek xx xxxxxxx s xxxxxxxxx chlorovdíkovou. Xxxx xx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx. Promytý x xxxxxxx xxxxxx xx xxx zpracuje xxxxx xxxxxxx X.
3. Činidla
3.1 xxxxxxxxxxx x bodem xxxx mezi 40 x 50 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxx xxx 1 x xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx než 2 xx/100 xx
3.2 xxxxx xxxxx, xxxxxxx
3.3 kyselina xxxxxxxxxxxxxx, c = 3 mol HCl/l
3.4 xxxxxxxxx prostředky, xxxx. xxxxxxxxx, Hyflo-supercel.
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxx, se xxxxxxx (Xxxxxxxxx přístroj), refluxní xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx asi 10 xxxxx xx xxxxxx. X xxxx xxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx 10 xx xx minutu.
4.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx v xxxxxxx x požadavky xxxxx xxxx 4.1.
4.3 Xxxxxxx, buď xxxxxxx xxxxxxxx xx 75 °X ± 3 °X, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 100 °X ± 3 °X.
5. Xxxxxx
5.1 Postup X (xxx xxx 8.1)
Xx xxxxxxxxx xxxxxxx xx naváží 5 x xxxxxx s xxxxxxxxx na 1 xx (4.2) a xxxxxxxxx xxxxxxx vaty xxx xxxx.
Xxxxxxx xx xxxxxx xx extrakčního xxxxxxxxx (4.1) x xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxx xx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx baňky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx pemzy [1].
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x baňce xx xxxx 1,5 xxxxxx v sušárně (4.3). Xxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx. Suší xx xxxxxxx 30 xxxxx, aby se xxxxxxxx, zda xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxxx mezi xxxxx xxxxxxxxxxxxx váženími xxxx být menší xxx 1 xx).
5.2 Xxxxxx X
Xx xxxxxxx x xxxxxx 400 xx xxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 300 xx xx xxxxxx 2,5 x vzorku s xxxxxxxxx xx 1 xx (xxx xxx (8,2) x přidá xx 100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.3) x xxxxxx pemzy. Xxxxxxx xx přikryje xxxxxxxxx xxxxx nebo xx xxxxxxx baňka xxxxxx xxxxxxxxx chladičem. Xxxx se xxxxxxx xx mírného xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxx x vaří xx xx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xx musí xxxxxxxx usazování částeček xxxxxx xx stěnách xxxxxx.
Xxxx xx ochladí x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx filtračního xxxxxxxxxx (3.4), aby xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx ztrátám tuku. Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zbavený xxxx. Xxxxxx se promývá xxxxxxxx xxxxx, xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx, zda filtrát xxxxxxxxxx xxxxx tuk. Xxxx přítomnost ukazuje, xx xx xxxxxx xxxx xxxx hydrolýzou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxx X.
Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx se zbytkem xx položí na xxxxxxxx xxxx x xxxx se půldruhé xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3) při xxxxxxx 100 °X ± 3 °X.
Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx do xxxxxxxxx xxxxxxx (4.2) x xxxxxxxx smotkem vaty xxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.1) x xxxx se xxxxxxxxx xxxxx druhého x xxxxxxx odstavce xxxx 5.1.
6. Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Opakovatelnost
Rozdíl xx výsledcích xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx přesáhnout:
- 0,2 % x xxxxxxxxx xxxxxxx, při obsahu xxxx xxxxxx xxx 5 %,
- 4,0 % relativně x xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx xx 5 xx 10 %,
- 0,4 % x xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxx nad 10 %.
8. Xxxxxxxx
8.1 X xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxx xx 20 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx a xxxxxx xx s 10 xxxx x xxxx xxxxx xxxxxxxxx síranu xxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx (3.1) xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxx extrakt se xxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxxxxx xx. 50 xx xxxxxxx xx odpipetuje xx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx, obsahující xxxxxx pemzy [2].
Xxxxxxxxxxxx xx oddestilujte, baňka xx xxxxxx a xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx bodu 5.1.
Xxxxx xxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx vzorku pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
(10 x + x) × 5
xxx:
x = hmotnost xxxxxx xx první xxxxxxxx x xxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxxxxx)
x = xxxxxxxx xxxxxx xx druhé xxxxxxxx x gramech
8.2 U xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx tuku xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx zvýšit xx 5 x.
8.3 Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx obsah vody, xx musí před xxxxxxxxxx a extrakcí xxxxx xxxxxxx X xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
8.4 X xxxx 5.2 se xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xx filtraci xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx vody xxxxxxx.
8.5 X některých xxxxx xx musí xxxxxxxxxx xxxx sušení xxx 1,5 hod. Xx však xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx může xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxx použít x mikrovlnnou troubu.
8.6 Xxx xxxxxx xxxx xxx 15 % xx xxxxxxxxxx provést xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X x následně xxxxxxxx xxxxx postupu X. Xxxxxx to xx xxxxx xxxx xx xxxxx krmiva x xxxxx tuku v xxxxxx.
XXXX C
STANOVENÍ XXXXXXXXXXX
(2-[X-2-(xxxxxxxxxxxx)xxxxxxxxx]-3-xxxxxxxxxxxxxxxx-X1,X4-xxxxxx)
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxx stanovitelnosti je 5 mg/kg.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx směsí xxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vysoce xxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografií (XXXX) xx reverzní xxxx xx xxxxxxx UV xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 methanol
3.2 xxxxxxxx, xxx HPCL
3.3 xxxx, xxx HPLC
3.4 xxxxxxx fáze pro XXXX:
Xxxx vody (3.3) x methanolu (3.2), 900 + 100 (X + X)
3.5 xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx 2-[X-2-(xxxxxxxxxxxx)xxxxxxxxx]-3-xxxxxxxxxxxxxxxx-X1,X4-xxxxxx, X 851
3.5.1 zásobní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, 250 μx/xx
Xx odměrné xxxxx x xxxxxx 200 ml xx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.5) s xxxxxxxxx xx 0,1 xx x xxxxx xxx 190 xx xxxx. Baňka se xxxxxxx xx 20 xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx roztok xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx vodou xx xxxxxx a xxxxxxx. Baňka se xxxxx hliníkovou fólií x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx měsíc.
3.5.2 xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, 25 μg/ml
10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.1) xx xxxxxxx xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 100 xx, xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.4) x xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx v xxxxxxxxxx. Xxxxx roztok xx xxxx připravovat xxxxx xxxxxxx.
3.5.3 kalibrační xxxxxxx
Xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x obsahu 50 xx se xxxxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0 a 20,0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.5.2). Xxxxxx se xxxxxxx xxxx (3.4) xx xxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx fólií. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 7,5 a 10,0 μx olachindoxu xx xx.
Xxxx roztoky xx xxxx xxxxxxxxxxx denně xxxxxxx.
4. Přístroje a xxxxxxx
4.1 xxxxxxxxxxxx xxxxx
4.2 xxxxxxxxxx třepačka
4.3 xxxxxxxx XXXX x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx diodového xxxx
4.3.1 xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, xxxxxxx X18, 10 μx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx
4.4 membránové xxxxxx x póry 0,45 μx
5. Postup
Poznámka:
Olachindox xx xxxxxxx na světlo. Xxxxxxx xxxxxxx se xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x nádobách x xxxxxxx xxxx.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxx předem xxxxxxxxxx xxx kontrolu, zda xxxxxxxxxx olachindox nebo xxxx interferující látky.
5.1.2 Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx provede xxxxxxxx xxxxxxxxxx krmiva obohaceného xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, které odpovídá xxxx obsahu xx xxxxxx X fortifikaci xx xxxxxx 50 xx/xx xx xxxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx základního xxxxxxx (3.5.1) xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx x xxxxxx xx xxxxxx xx xxx 0,5 xx. Xxxxx xx 50 g xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx x nechá xx 10 minut xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xx přejde x extrakci (5.2).
Xxxxxxxx:
Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxx podobného xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x nesmí xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Naváží xx xxxxxxxxx 50 g xxxxxx s přesností xx 0,01 x. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 1000 ml, xxxxx xx 100 xx xxxxxxxxx (3.1) x xxxxx se xxxxxx xx pět xxxxx do xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxx xx 410 xx xxxx x xxxxxxx xx v xxxxxxxxxxxx xxxxx dalších 15 xxxxx. Baňka se xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx, dále se xxxxx 30 minut xx xxxxxxxx (4.2) x xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. 10,0 xx xxxxxxxx xx přenese do xxxxxxx baňky o xxxxxx 20 ml, xxxxxx xx xxxxx xx značku x xxxxxxxx. Xxxxxxx část xx přefiltruje xxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) (viz xxx 9. Xxxxxxxx). Xxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXXX (5.3).
5.3 Xxxxxxxxx XXXX
5.3.1 Parametry:
Následující xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx být použity xxxx podmínky, xx xxxxxxxxxxx, xx dávají xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
xxxxxxxxxx kolona (4.3.1)
xxxxxxx xxxx (3,4): Xxxx xxxx (3.3) x xxxxxxxxx (3.2), 900 + 100 (X + X)
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 ml/min
detekční xxxxxx délka: 380 xx
xxxxx nástřiku: 20 μx–100 μx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxx, xx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5.3) xxxxxxxxxx 2,5 μg/ml, až xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx píků x xxxxxxxxxx časů.
5.3.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx každou xxxxxxxxxxx. Sestrojí se xxxx za xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx výšek (xxxxx) píků kalibračních xxxxxxx jako xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x μx/xx xxxx xxxxxxxxx.
5.3.3 Roztok xxxxxx
Xxxxxxx xx xxxxxxx nástřiků xxxxxxxx xxxxxx (5.2) xxx použití xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx se xxxxxxx xxxxx (plocha) píků xxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx hodnoty výšky (xxxxxx) xxxx olachindoxu x roztoku xxxxxx xx zjistí xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx xxxxxxxxxx x kalibračním xxxxxx (5.3.2).
Xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx x x xx/xx xx dán xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = x × 1 000 / x
xxx:
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (5.2) x μx/xx
x = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x x (5.2)
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Identita
Identita xxxxxxx může xxx xxxxxxxxx opakovaným stanovením x přídavkem (xx-xxxxxxxxxxxxxx) xxxxx využitím xxxxxxxxx x diodovým xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx extraktu xxxxxx (5.2) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.3), obsahujícího 5,0 μx/xx xxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx stanovením s xxxxxxxxx (co-chromatography)
Extrakt vzorku (5.2) se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.5.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx mělo odpovídat xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
X xxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x polovině xxxx xxxxx xxxx xxx x xxxxxxx ±10 % původní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx pole
Výsledky xx xxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx zaznamenaný xx vrcholu píku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Pro detektor x xxxxxxxx xxxxx xx udává ±2 xx;
x) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 400 xx xx nesmí záznam xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx zaznamenaný xx vrcholu píku xxxxxxxxxxxxx lišit od xxxxxxxxx částí spektra x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je dosaženo, xxxxxxxx xxxx vykázána xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx nikde odchylka xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx;
x) xxx xxxxxx délce xxxx 220 a 350 nm se xxxxx xxxxxxxx vzestupu, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx zkoušeného xxxxxx xxxxx od xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, jestliže jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % absorbance spektra xx xxxxxxx xxxx.
Xxxx-xx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, přítomnost xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx souběžných xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxx při xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 20 xx/xx, xxxxx xxxxxxxxxx15 % xxxxxxx xxxxxxxx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx být výtěžnost xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X xxxxx ES xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxx němž xx 13 laboratoří xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx krmiva xxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
| xxxxxx 1 |
xxxxxx 2 |
xxxxxx 3 |
xxxxxx 4 |
|
X |
13 |
10 |
11 |
11 |
X |
40 |
40 |
44 |
44 |
xxxxxxx (xx/xx) |
- |
14,6 |
48,0 |
95,4 |
(Xx) (xx/xx) |
- |
0,82 |
2,05 |
6,36 |
(XX) (mg/kg) |
- |
1,62 |
4,28 |
8,42 |
CVr (%) |
- |
5,6 |
4,3 |
6,7 |
CVR (%) |
- |
11,1 |
8,9 |
8,8 |
xxxxxxxxx xxxxx (xx/xx) |
- |
15 |
50 |
100 |
xxxxxxxxx (%) |
- |
97,3 |
96,0 |
95,4 |
X: počet xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
SR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
CVr: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxx koeficient xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
9. Xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx metoda xxxxxx ověřena xxx xxxxxx xxxxxxxxxx více xxx 100 xx/xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx uspokojivé xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx vzorku x/xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (5.2) xxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.3.2).
[1] Pokud xx xx xxx xxxxxxxx zkoušet xx xxxxxxx, zamění se xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx.
[2] Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx kuličky.