Směrnice Komise 98/64/XX
xx xxx 3. xxxx 1998,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx stanovení xxxxxxxxxxxx, xxxx a olachindoxu x xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx 71/393/XXX
(Xxxx s xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 70/373/EHS za xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxx x Xxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv za xxxxxx xxxxxxxx, zda xxxxxx xxxxxxx požadavky xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisů xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx, xx xxxxxxx za xxxxxxx xxxxx odběru xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xx Společenství;
vzhledem x xxxx, že xxxxxxxx Rady 79/373/XXX xx dne 2. xxxxx 1979 o xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxx [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxx směrnicí Xxxxxx 97/47/XX [3], x směrnice Rady 93/74/XXX xx xxx 13. xxxx 1993 x xxxxxxxx určených xx zvláštním účelům xxxxxx [4], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/XX [5], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx musí xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx Xxxx 70/524/XXX ze xxx 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx látkách x xxxxxxxx [6], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 98/19/ES [7], xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xx označení, xxxxx je tato xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx směsí;
vzhledem k xxxx, xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971, xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [8], naposledy pozměněná xxxxxxxx Xxxxxx 84/4/XXX [9], xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxx tuku; že xx vhodné uvedené xxxxxx xxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx této směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX SMĚRNICI:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx analýzy xxx úřední xxxxxxxx xxxxxx aminokyselin, xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x krmivech xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx uvedených x xxxxxxx této xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
X příloze xxxxxxxx Xxxxxx 71/393/XXX xx xxx "4. Xxxxxxxxx obsahu xxxx" xxxxxxxxx částí X xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Článek 3
1. Xxxxxxx xxxxx uvedou v xxxxxxxx právní x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxxxx 1998. Xxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. xxxxx 1999.
Tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx odkaz xx tuto xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx jejich úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx ustanovení vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx v oblasti xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Tato směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství.
Xxxxxx 5
Tato směrnice xx určena členským xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 3. xxxx 1998.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[3] Xx. xxxx. X 211, 5.8.1977, x. 45.
[4] Xx. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[5] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
[6] Xx. věst. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[7] Xx. věst. X 96, 28.3.1998, x. 39.
[8] Xx. xxxx. X 279, 2.12.1971, x. 7.
[9] Xx. věst. X 15, 18.1.1984, x. 28.
PŘÍLOHA
ČÁST A
Stanovení xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx slouží xx stanovení obsahu xxxxxxx (syntetických x xxxxxxxxxxx) x xxxxxxxx (xxxxxxx vázané a xxxxx) aminokyselin x xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx aminokyselin. Metoda xx xxxxxxxxxx pro xxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxx(x)xx, xxxxxxxxx, xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, arginin, xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, kyselinu xxxxxxxxxx, xxxxxx, histidin, xxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxxx.
Xxxx xxxxxx nerozlišuje xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx x aminokyselin xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx X x L. Xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx aminokyselin.
2. Xxxxxxx
2.1 Xxxxx aminokyseliny
Volné aminokyseliny xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Současně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx srážejí kyselinou xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxx xx pH 2,20. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx chromatografií a xxxxxxx se xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx detekcí xxx 570 xx.
2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxx(x)xx x methionin xxxx být před xxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx stanovovat x xxxxxxxxxxxxx neoxidovaných xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxxx nebo x xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx se xxxxxxx xxx 0 xX xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a fenolu. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx činidlo xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxx kyselinou chlorovodíkovou (x = 6 xxx/x) xx 23 xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xX 2,20. Aminokyseliny xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xx xxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 570 xx (440 xx pro xxxxxx).
3. Činidla
Musí xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo xxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx &xx; 10 μX).
3.1 xxxxxxx xxxxxx, x = 30 %
3.2 xxxxxxxx xxxxxxxx, x = 98–100 %
3.3 xxxxx
3.4 xxxxxxxxx xxxxx
3.5 xxxxxxxx xxxxx
3.6 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, dihydrát
3.7 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x hustotě xxxxxxxxx 1,18 x/xx
3.8 xxxxxxxx sodný, dihydrát
3.9 2,2-xxxxxxxxxxxxx (thiodiglykol)
3.10 chlorid xxxxx
3.11 xxxxxxxxx
3.12 xxxxxxxxxxx, xxx xxxx 40–60 °X
3.13 xxxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx
3.14 xxxxx – xxxx (&xx; 10 xxx xxxxxxx)
3.15 1-oktanol
3.16 aminokyseliny
3.16.1 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 1; xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xx xxxxx xxx X2X5 nebo X2XX4 xxxxx xxxx xxxxxxxx
3.16.2 xxxxxxxx cysteová
3.16.3 xxxxxxxxxxxxxxx
3.17 xxxxxxxx sodný, xxxxxx c = 7,5 xxx/x:
300 x XxXX (3.5) xx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxx xx 1 litru.
3.18 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 1 mol/l:
40 x XxXX (3.5) xx xxxxxxxx xx xxxx x doplní xx 1 xxxxx.
3.19 xxxxxx kyseliny xxxxxxxx x fenolu:
Smíchá se 889 x xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2) se 111 x vody x xxxxx xx 4,73 x fenolu (3.3).
3.20 xxxxxxxxxxxx xxxx, x = 6 xxx HCl/l s xxxxxxxxx 1 g xxxxxx/x:
X 492 ml XXx (3.7) xx xxxxx 1 g xxxxxx (3.3) x xxxxxx xx vodou xx 1 xxxxx.
3.21 xxxxxxxxx xxxx, x = 6 mol XXx/x s přídavkem 2% thiodiglykolu:
8,2 xx XXx (3.7) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 900 xx xxxx, xxxxx xx 20 xx xxxxxxxxxxxxx (3.9) a xxxxxx vodou xx 1 litr (3.7 x 3.9 xx xxxxx xxxxxxx xxxxx).
3.22 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, β = 6 %:
60 x xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx (3.6) xx rozpustí xx vodě x xxxxxx xxxxx xx 1 litr.
3.23 xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxx xxxxxxxxxxx – fenol):
V xxxx xxxxxxx xx smíchá 0,5 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.1) s 4,5 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx (3.19); ponechá xx v xxxxx 1 xxxxxx xxx 20–30 °C, xxx xx utvořila xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx přidáním xx vzorku xx xxxx xxxxxxx v xxxxx x xxxxxxx xxxxx (15 minut).
Pozor:
Je xxxxx zamezit xxxxxxxx x xxxx a xxxxxxxx ochranný xxxx.
3.24 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x = 0,2 xxx Na+/l, xX 2,20:
X přibližně 800 xx xxxx xx xxxxxxxx 19,61 x xxxxxxxxx xxxxxxx (3,8), 5 ml xxxxxxxxxxxxx (3.9), 1 x xxxxxx (3.3) x 16,50 xx XXx (3.7). pH xx xxxxxx na 2,20. Xxxxxx se xxxxx xx objem 1 xxxxx.
3.25 eluční xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (4.9)
3.26 xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxx (4.9)
3.27 Standardní xxxxxxx aminokyselin. Tyto xxxxxxx je nutno xxxxxxxxxx při xxxxxxx xxx 5 °X.
3.27.1 xxxxxxx xxxxxxxxxx základní xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.16.1), x = 2,5 μxxx/xx xxx každou xxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx roztok xxx xxxxxxx i xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.27.2 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx, x = 1,25 μxxx/xx
0,2115 g xxxxxxxx cysteové (3.16.2) x 0,2265 x xxxxxxxxxxxxxxxx se rozpustí (3.16.3) v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztoku (3.24) x litrové xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx se při xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 12 xxxxxx. Tento roztok xx nepoužívá, pokud xxxxxxxxxx základní roztok (3.27.1) xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x methioninsulfon.
3.27.3 xxxxxxx standardní xxxxxxxx xxxxxx vnitřního standardu, xxxx. xxxxxxxxxx, c = 20 μxxx/xx
0,6560 x xxxxxxxxxx (3.13) xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.24) x xxxxxxx xxxxx xx 250 xx a xxxxxx xx po značku xxxxxxxxxxxx tlumivým roztokem. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 6 xxxxxx.
3.27.4 xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxx, x = 5 xxxx/50 μl xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx x x = 10 xxxx/50 μx x ostatních aminokyselin
Ve 100 xx kádince xx rozpustí 2,2 x chloridu xxxxxxx (3.10) v 30 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24). Přidají xx 4,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx aminokyselin (3.27.1), 4,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx základního xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx (3.27.2) x 0,50 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3), xxxxx xx xxxxxxx. xX se upraví xx 2,20 hydroxidem xxxxxx (3.18).
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx převede xx 50 xx xxxxxxx xxxxx, doplní xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx tlumivým xxxxxxxx (3.24) a xxxxxxx xx.
Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 3 xxxxxx.
Xxx xxxx xxxxxxxx 9.1.
3.27.5 xxxxxxxxxx xxxxxx standardních xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx podle xxxx 5.3.3.1 x xxx xxxxxxxx (5.2). Xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx podle 3.27.4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 3 xxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 xxxxx x kulatým xxxx x obsahu 100 xxxx 250 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
4.2 xxxxxx z xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx 100 xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxx, Schott) xxx xxxxxxx v xxxxxxx
4.3 xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxx ±2 °X
4.4 xX xxxx (xxx desetinná xxxxx)
4.5 xxxxxxxxxx xxxxx (0,2 μx)
4.6 xxxxxxxxxxx
4.7 xxxxxxx xxxxxxx odparka
4.8 mechanická xxxxxxxx xxxx magnetická xxxxxxxx
4.9 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XXXX x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx kolonovou xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx detektorem.
Kolona xx naplní xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, která xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x separaci xx jiných ninhydrin xxxxxxxxxxx látek. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx průtoku ± 0,5 % xx xxxx zahrnující xxxxxxxxxx kalibraci x xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx v xxxxxxx, xx hydrolyzát xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sodíkových xxxxx x = 0,8 xxx/x x obsahuje xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx separaci xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx úpravou xX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxx 5 xx. Xxxxxxxx xx má xxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx 40 °C.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx tak, xxx prošel sítem x oky 0,5 xx. Xxxxxx s xxxxxxx vlhkostí se xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxx nepřesahující 50 °X xxxx xxx zmrazení. Xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.12).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x v xxxxxxxxx
Xx xxxxxxx baňky xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 g) upraveného xxxxxx (5.1) s xxxxxxxxx na 0,2 xx x xxxxx xx 100,0 xx xxxxxxxxx xxxxx (3.21). Xxxxx xx třepe 60 minut xx xxxxxxxxxx třepačce xxxx xxxxx xx magnetické xxxxxxxx (4.8). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxxxxxxx do xxxxxxx x xxxxxx 100 xx.
Xx xxxxxxx míchání xx xxxxx 50 xx roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx x pokračuje xx x xxxxxxx xx magnetické míchačce xxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx xx odstranila xxxxxxx xxxxxxxxx. 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx přenese xx xxxxxxx o obsahu 100 xx, xX xx upraví xx 2,20 pomocí xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx značku xxxxxxxx roztokem (3.24).
Xxxxxxx-xx xx interní xxxxxxxx, xxxxx xx 1,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3) xx každých 100 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24).
Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 – xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx-xx extrakty xxxxxxxxxx týž xxx, xxxxxxxxxxx se xxx xxxxxxx pod 5 °X.
5.3 Xxxxxxxxx celkových xxxxxxxxxxxx
5.3.1 oxidace
0,1 xx 1 g upraveného xxxxxx (5.1) se xxxxxx x xxxxxxxxx 0,2 xx:
- xx xxxxx x xxxxxxx xxxx o xxxxxx 100 xx (4.1) xxx xxxxxxxxx hydrolýzu (5.3.2.3) xxxx
- do xxxxx x kulatým xxxx x obsahu 250 xx (4.1), xxxxxxxx-xx se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx nebo
- xx xxxxxx o xxxxxx 100 xx xx xxxxxxxxxx uzávěrem (4.2) (xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx 5.3.2.4).
Odvážená část xxxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx 10 xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 xx.
Xxxxx/xxxxxx xx xxxxxx do xxxxx x xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx 0 °X, potom se xxxxx 5 ml xxxxxxxx xxxxx (3.23) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx lžící se xxxxxxxx xxxxxxx. Baňka/nádoba xx xxxxxx i xx lžící xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx xx i x xxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 0 °X x ponechá xx xxx 16 xxxxx. Xx 16 xxxxxxxx xx xxxxx z xxxxxxxxxx x přebytečné xxxxxxxx činidlo xx xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 x dvojsíranu xxxxxxx (3.4).
Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1.
5.3.2 hydrolýza
5.3.2.1 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků
K xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.3.1 xx xxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.20) xxx, aby neulpěl xxxxx vzorek xx xxxxxxx nádoby xxx xx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx pokračuje xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4.
5.3.2.2 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxx x xxxxxxx xxxx o xxxxxx 100 ml nebo 250 xx (4.1) xxxx xx xxxxxx x xxxxxx100 xx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.2) xx xxxxxx 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) s přesností xx 0,2 mg. Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx měla mít xxxxx dusíku asi 10 xx. Xxxxxxx xx přidá 25 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.20) x xxxxxx xx se xxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxxx xxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx xxxxx 5.3.2.4.
5.3.2.3 xxxxxxxx xxxxxxxxx
Xx xxxxx x xxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2) xx xxxxxxx 3 xxxxxxxx kuličky x xxxx xx xxxxx do xxxxxxx xxxx xxx zpětným xxxxxxxxx xx xxxx 23 xxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx promyje 5 xx citronanového xxxxxxxxx roztoku (3.24). Xxxxx xx odpojí x ochladí xx x ledové xxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3.
5.3.2.4 uzavřená xxxxxxxxx
Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxx podle 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2 xx xxxxxx do xxxxxxx (4.3) při 110 °X. Xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x důsledku vyvíjení xxxxxxxx xxxxx) a xxxxxxx x výbuchu, xxxxxx xx šroubovací xxxxxx xxxxx xx xxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxx. Po uplynutí xxxxx hodiny xx xxxxxx zašroubuje x xxxxxxxx baňka xx xxxxxxx x xxxxxxx (4.3) 23 xxxxx. Xx skončení hydrolýzy xx xxxxx xxxxx xx sušárny, opatrně xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx se xx lázně s xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxx xX (5.3.3) xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx tlumivého xxxxxxx (3.24) xx xxxxxxx x obsahu 250 xx xxxx do xxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxx 250 ml.
Dále xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3
5.3.3 xxxxxx xX
Xxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx k xxxxxx má analyzátor xxxxxxxxxxxx (4.9), xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xX xxxxx 5.3.3.1 xxxx 5.3.3.2.
5.3.3.1 xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.9), xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx sodíku:
Pokud xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xx-xx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx), xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.27.3).
X takovém xxxxxxx xx před odpařováním xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 2,00 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx standardního základního xxxxxxx (3.27.3).
Do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4. xx xxxxxxx 2 kapky 1-xxxxxxxx (3.15).
Xx xxxxxxx xxxxxxx (4.7) se xxxxx objem na 5-10 xx xx xxxxx xxx 40 °X. Pokud xx xx objem náhodou xxxxxx xxx 5 xx, hydrolyzát xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx analýzu xxxxx.
xX xx xxxxxx na 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18) a xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.3.2 xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9)
Hydrolyzáty xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 17 xx roztoku xxxxxxxxx sodného (3.17), xx xxxxxxx míchání x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx pod 40 °X.
xX se upraví xx 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18) xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.4 xxxxxx vzorků xxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx (5.3.3.1 nebo 5.3.3.2) x upraveným xX xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztoku (3.24) xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xx x tlumivým xxxxxxxx (3.24) xx xxxxxx xx xxxxxx.
Xxxxx-xx xxxxx xxxxxx vnitřní xxxxxxxx, xxxxxxx xx 2,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3) a xxxxx se xxxxxx xx značku citronanovým xxxxxxxx roztokem (3.24). Xxxxxxxx se xxxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx (5.4)
Xxxxxx-xx roztoky xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxx, xxxxxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxx 5 °C.
5.4 Chromatografie
Před xxxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx (5.2) x xxxxxxxxxx (5.3.4) xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx filtrem 0,2 μ (4.5). Xxxxxxxx xxxx roztok se xxxxxxx ionexové xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9).
Xxxxxxx lze provést xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx je xxxxxxxx, xxx se na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ± 0,5 % xxx xxx analýze xxxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx. Xxxxxx poměr xxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx vzorků xx xxxxx nejpodobnější.
Frekvence xxxxxxxxx závisí hlavně xx xxxxxxxxx ninhydrinového xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx nebo xxxxxx xx ředí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztokem (3.24) tak, xxx xxxxxx píku xxxxxxxxx xxxxxxx 30 – 200 % xxxxxx xxxx xxx jednotlivé xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx liší x xxxxxxxxxx na xxxx xxxxxxxxx analyzátoru x xxxxxxxxx ionexu. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx separovat jednotlivé xxxxxxxxxxxxx od xxxx xxxxxxxx i od xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxx působení xx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxx aminokyselin xxxxxxxxxxx na xxxxxxx.
Xxx xxxxxxx equimolárního roztok xxxxxxxxxx aminokyselin, by xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 30 % xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, které mohou xxx xxxxx přesně xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9).
Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx poměr xxxxx xxxxx x xxxxxxx píku xxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxxxx xx aminokyselin na xxxxxxxxxxxxx neměl xxxxxxxxxx 2:10 (xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx(x)xx, xxxxxxxxx, xxxxxxxx a xxxxx, je xxxxxxxxx xxxxxxxxxx ovlivněno xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx přilehlých píků). Xxx xxxxxxx ostatní xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxx 1:10.
Xxxxxx musí zaručit, xx xxxxx bude xxxxxxxxx xx "xxxxxxxxxx xxxxxxxx" a xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x x xx xx xxxxxx.
x xxxxxxxxxxxxx na kg xxxxxx = A × X × XX × F / B × X × 1 000
Xx-xx použit xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx: X / X
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx
X = plocha xxxx xxxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x hydrolyzátu xxxx x extraktu
D = xxxxxx xxxx interního xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
XX = xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v μmol/ml
V = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (x) (xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx je vzorek xxxxxxx nebo xxxxxxxx)
X = celkový xxxxx xxxxxxxxxx roztoku (5.3.4) x xx xxxx xxxxxxx objem zředěného xxxxxxxx xxxxxxxxxxx podle 6.1
Xxxxxx x cystein xx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku stanoví xxxx kyselina cysteová, xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx (X6X12X2X4X2, XX 240,30) x xxxxxxxx XX 120,15 (= 0,5 x 240,30).
Xxxxxxxxx xx v xxxxxxxxxxxxx oxidovaného vzorku xxxxxxx xxxx methioninsulfon, xxx vypočítává se xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxxxxxxx: 149,21.
Xxxxxxx xxxxx methionin xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx jako methionin, xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx MV.
6.1 Xxxxxxx objem xxxxxxxxx xxxxxxxx (X) při xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (5.2) xx vypočítá xxxxx xxxxxx xxxxxx:
X = 100 xx × (10 ml + 5 xx) / 10 ml × V ml / 10xx
X = xxxxx xxxxxxxxxx extraktu
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxx metoda xxxx xxxxxxxxxx porovnáním xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx 1990 xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxx xxxx xxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx koncentrát, premix). Xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxxx tabulce:
střední xxxxxxx x g/kg
|
Referenční materiál |
Aminokyselina |
|||
|
Threonin |
cyst(e)in |
Methionin |
lysin |
|
|
Krmná xxxx xxx xxxxxxx |
6,94 x = 15 |
3,01 x = 17 |
3.27 x =.17 |
9,55 n = 13 |
|
Krmná směs xxx xxxxxxxx |
9,31 x = 16 |
3,92 x = 18 |
5,08 x = 18 |
13,93 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx koncentrát |
22,32 x = 16 |
5,06 x = 17 |
12,01 x = 17 |
47,74 x = 15 |
|
Premix |
58,42 x = 16 |
- |
90,21 x = 16 |
98,03 x = 16 |
x = xxxxx zúčastněných xxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx standardní xxxxxxxx xx dána xxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
xxxxxxxxxx odchylka (Xx) xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x g/kg
|
Referenční xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs pro xxxxxxx |
0,13 n = 15 |
0,10 n = 17 |
0,11 n = 17 |
0,26 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
0,20 n = 16 |
0,11 n = 18 |
0,16 x = 18 |
0,28 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,48 n = 16 |
0,13 n = 17 |
0,27 x = 17 |
0,99 x = 15 |
|
Xxxxxx |
1.30 n = 16 |
_ |
2,19 n = 16 |
2,06 x = 16 |
n = xxxxx zúčastněných laboratoří
Variační xxxxxxxxxx (%) xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odchylek (Xx)
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxx |
1,9 x = 15 |
3,3 n = 17 |
3,4 n =.17 |
2,8 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx pro brojlery |
2,1 x = 16 |
2,8 x = 18 |
3,1 x = 18 |
2,1 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
2,7 x = 16 |
2,6 n = 17 |
2,2 x = 17 |
2,4 x = 15 |
|
Xxxxxx |
2,2 x = 16 |
- |
2,4 x = 16 |
2,1 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.2 Reprodukovatelnost
Výsledky xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx ze xxxxx xxxxxxxxx zkoušek xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx odchylka (XX) x x/xx
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxx |
0,28 n = 15 |
0,30 x = 17 |
0,23 x = 17 |
0,30 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
0,48 x = 16 |
0,34 n = 18 |
0,55 n = 18 |
0,75 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,85 x = 16 |
0,62 n = 17 |
1,57 x = 17 |
1,24 x = 15 |
|
Xxxxxx |
2,49 n = 16 |
- |
6,20 n = 16 |
6,62 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx (%) mezilaboratorních xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (SR)
|
Referenční xxxxxxx |
xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
4,1 x = 15 |
9,9 x = 17 |
7,0 x = 17 |
3,2 n = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
5,2 x = 16 |
8,8 n = 18 |
10,9 x = 18 |
5,4 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
3,8 x = 16 |
12,3 x = 17 |
13,0 x = 17 |
3,0 x = 15 |
|
Xxxxxx |
4,3 x = 16 |
- |
6,9 x = 16 |
6,7 n = 16 |
x = xxxxx zúčastněných laboratoří
8. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx materiálů
Správné xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx ověřuje xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx-xx k xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx se měly xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx standardů xxxxxxxxxxxx (xxx 3.27.4 x 3.27.5) x xxxxxxx xxxxxx (5.3.4) považovat xx doporučené.
Lineární xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx roztok xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx, aby xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx tohoto xxxxxxx.
9.2 Pokud se x analýze xxxxxxxxxxx xxxxxxx zařízení xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x souladu s xxxxxxxxxxx výrobce.
9.3 Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx 1 % xxxxxxxx (koncentráty, xxxxxxxxx krmiva, doplňková xxxxxx) může dojít x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx xx proto xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
XXXX B XXXXXXXXX TUKŮ
1. Xxxx x oblast xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx podle xxxxxxxx Rady 136/66/XXX xx xxx 22. xxxx 1996.
Podle druhu x složení xxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx ze xxxx následujících xxxxxxx:
1.1 Xxxxxx X – xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxx xx použitelná xxx krmiva rostlinného xxxxxx, s xxxxxxxx xxxx, které jsou xxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx X.
1.2 Xxxxxx X – celkový xxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro krmiva xxxxxxxxxxx původu x xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x nichž není xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxx. xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx proteiny x xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx vytlačování, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx).
1.3 Interpretace xxxxxxxx
Xx všech případech, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx výsledku xxxxxxxx X, než postupem X, xx třeba xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxxx X.
2. Xxxxxxx
2.1 Xxxxxx X
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxx a xxxxx.
2.2 Xxxxxx B
Vzorek xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Směs xx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxx se xxx zpracuje xxxxx xxxxxxx X.
3. Xxxxxxx
3.1 xxxxxxxxxxx s xxxxx xxxx xxxx 40 x 50 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxx čísla xxxx xxx xxxxx xxx 1 x xxxxxx po xxxxxxxxxx xxxxx než 2 xx/100 ml
3.2 xxxxx xxxxx, bezvodý
3.3 kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 3 mol XXx/x
3.4 xxxxxxxxx prostředky, xxxx. xxxxxxxxx, Xxxxx-xxxxxxxx.
4. Přístroje x pomůcky
4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxx, se sifonem (Xxxxxxxxx xxxxxxxx), refluxní xxxxxxxx by měla xxxxxxx xxx 10 xxxxx xx hodinu. X typu xxx xxxxxx by xxxx xxx refluxní rychlost xxx 10 xx xx xxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx x xxxxxxx x požadavky xxxxx bodu 4.1.
4.3 Xxxxxxx, buď vakuová xxxxxxxx xx 75 °X ± 3 °X, xxxx horkovzdušná xxxxxxxx xx 100 °X ± 3 °X.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxx X (xxx xxx 8.1)
Xx extrakční xxxxxxx xx naváží 5 x vzorku s xxxxxxxxx xx 1 xx (4.2) x xxxxxxxxx smotkem xxxx xxx tuku.
Patrona xx xxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.1) x xxxxxxxxxx xxxx hodin xxxxxxxxxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx úlomky pemzy [1].
Xxxxxxxxxxxx xx oddestiluje, xxxxxx x xxxxx xx xxxx 1,5 xxxxxx v sušárně (4.3). Nechá xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx. Xxxx xx dalších 30 xxxxx, xxx se xxxxxxxx, zda xx xxxxxxxx xxxx konstantní (xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx 1 xx).
5.2 Xxxxxx X
Xx xxxxxxx x xxxxxx 400 xx xxxx do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 300 ml xx xxxxxx 2,5 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx (viz bod (8,2) x xxxxx xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.3) x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxxx baňka xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx se xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxx na topné xxxxx x vaří xx po dobu xxxxx xxxxxx. Během xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx částeček xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4), xxx xxx xxxxxxxx nedošlo xx ztrátám xxxx. Xxxxxxxx xx přes xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, až xx získá xxxxxxxxx xxxxxxx. Provede xx xxxxxxxx, zda xxxxxxx xxxxxxxxxx žádný xxx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xx xxxxxx xxxx před hydrolýzou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X.
Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xx položí xx xxxxxxxx sklo x xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x horkovzdušné xxxxxxx (4.3) xxx xxxxxxx 100 °X ± 3 °X.
Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx do xxxxxxxxx xxxxxxx (4.2) a xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx. Patrona xx vloží xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.1) x xxxx xx xxxxxxxxx podle xxxxxxx x třetího xxxxxxxx xxxx 5.1.
6. Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx procento xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xx výsledcích xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx pracovníkem by xxxxx xxxxxxxxxx:
- 0,2 % x xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx obsahu xxxx nižším xxx 5 %,
- 4,0 % relativně x xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx xx 5 xx 10 %,
- 0,4 % x xxxxxxxxx hodnotě, xxx xxxxxx xxx 10 %.
8. Xxxxxxxx
8.1 X xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxx, xxxxx xx xxxxxxx drtí nebo xxxxx xxxxxxxxxx odebrat xxxxxxxxxx homogenní xxxxxx, xx postupuje xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxx xx 20 x vzorku x xxxxxxxxx na 1 xx x smíchá xx x 10 xxxx x xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxx xx petroletherem (3.1) xxxxx bodu 5.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx na 500 xx xxxxxxxxxxxxx (3.1) x promíchá xx. 50 xx xxxxxxx xx odpipetuje do xxxx suché, předem xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx [2].
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx vysuší x xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx odstavce xxxx 5.1.
Xxxxx tuku se xxxxxxxx xxxx procento xx vzorku pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
(10 a + b) × 5
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxx po první xxxxxxxx x gramech (xxxxxxx xxxx xxxxxxxx)
x = xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx extrakci x xxxxxxx
8.2 X xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxx xx 5 x.
8.3 Xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx, která xxxx xxxxxx xxxxx vody, xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx postupu B xxxxxxx s bezvodým xxxxxxx xxxxxx.
8.4 X xxxx 5.2 xx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx horká xxxx místo xxxx xxxxxxx.
8.5 X xxxxxxxxx xxxxx se xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx 1,5 xxx. Xx však třeba xxxxxxx přílišnému xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx x xxxxxx výsledkům. Xx xxxxx xxxxxx x mikrovlnnou troubu.
8.6 Xxx xxxxxx xxxx xxx 15 % xx doporučuje provést xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X x následně extrakci xxxxx xxxxxxx B. Xxxxxx xx xx xxxxx míry na xxxxx krmiva a xxxxx tuku x xxxxxx.
XXXX C
STANOVENÍ OLACHINDOXU
(2-[N-2-(hydroxyethyl)karbamoyl]-3-methylchinoxalin-N1,N4-dioxid)
1. Xxxx a oblast xxxxxxx
Xxxxx metodou se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Dolní xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx/xx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx směsí xxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografií (HPLC) xx xxxxxxxx fázi xx použití XX xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 xxxxxxxx
3.2 xxxxxxxx, xxx XXXX
3.3 xxxx, xxx HPLC
3.4 xxxxxxx xxxx xxx XXXX:
Xxxx xxxx (3.3) x xxxxxxxxx (3.2), 900 + 100 (X + X)
3.5 xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx 2-[N-2-(hydroxyethyl)karbomoyl]-3-methylchinoxalin-N1,N4-dioxid, X 851
3.5.1 xxxxxxx standardní xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, 250 μx/xx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xx se xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.5) s xxxxxxxxx xx 0,1 xx a přidá xxx 190 xx xxxx. Xxxxx xx xxxxxxx na 20 xxxxx do ultrazvukové xxxxx (4.1). Xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx roztok xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, doplní vodou xx xxxxxx x xxxxxxx. Baňka xx xxxxx xxxxxxxxxx fólií x xxxxxxxxx v xxxxxxxxxx. Tento xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx.
3.5.2 xxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxx, 25 μx/xx
10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.1) xx xxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx, xxxxxx se xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.4) x xxxxxxxx. Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxx připravovat denně xxxxxxx.
3.5.3 xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx xx xxxxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0 a 20,0 xx pracovního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.2). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx (3.4) xx xxxxxx x promíchá. Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx fólií. Tyto xxxxxxx odpovídají 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 7,5 x 10,0 μx xxxxxxxxxxx na xx.
Xxxx xxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 xxxxxxxxxxxx xxxxx
4.2 xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.3 xxxxxxxx XXXX x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
4.3.1 xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, xxxxxxx X18, 10 μx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx
4.4 membránové filtry x xxxx 0,45 μx
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxxxxx je xxxxxxx na xxxxxx. Xxxxxxx postupy se xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx nebo x nádobách x xxxxxxx xxxx.
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx analyzovat xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx interferující xxxxx.
5.1.2 Xxxxxxx na výtěžnost xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx obohaceného xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, které odpovídá xxxx xxxxxx xx xxxxxx K fortifikaci xx úroveň 50 xx/xx se odpipetuje 10,0 xx zásobního xxxxxxxxxxxx základního xxxxxxx (3.5.1) do kónické xxxxx x xxxxxx 250 ml x xxxxxx se xxxxxx xx xxx 0,5 xx. Přidá xx 50 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx x nechá xx 10 minut xxxxxx, přičemž xx xxxxx xxxxxxxxxx promíchá. Xxxx se přejde x extrakci (5.2).
Poznámka:
Pro xxxxx xxxx metody xx být modelové xxxxxx podobného typu xxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx obsahovat xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx 50 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,01 x. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 1000 xx, xxxxx se 100 xx methanolu (3.1) x xxxxx xx xxxxxx xx xxx xxxxx xx ultrazvukové xxxxx (4.1). Přidá xx 410 xx xxxx x xxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxx xxxxx dalších 15 xxxxx. Xxxxx se xxxxx x ultrazvukové xxxxx, xxxx xx xxxxx 30 xxxxx xx xxxxxxxx (4.2) x xxxxx se xxxxxxxxxxx složeným xxxxxxx. 10,0 ml xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 20 xx, xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx membránovým xxxxxxx (4.4) (xxx xxx 9. Poznámky). Xxxx xx pokračuje xxxxxxxxxx XXXX (5.3).
5.3 Xxxxxxxxx HPLC
5.3.1 Xxxxxxxxx:
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
xxxxxxxxxx kolona (4.3.1)
xxxxxxx fáze (3,4): Xxxx vody (3.3) x xxxxxxxxx (3.2), 900 + 100 (X + X)
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxx
xxxxxxxx xxxxxx xxxxx: 380 xx
xxxxx xxxxxxxx: 20 μx–100 μx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx zkontroluje xxx, že xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5.3) xxxxxxxxxx 2,5 μg/ml, xx xx xxxxxxx konstantních xxxxx xxxx a xxxxxxxxxx časů.
5.3.2 Kalibrační xxxx
Xxx každý xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx nástřiků a xxxxxx xx střední xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxx xxx každou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxx) xxxx kalibračních xxxxxxx xxxx ordinát x příslušných xxxxxxxxxxx x μx/xx jako xxxxxxxxx.
5.3.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxx xx několik nástřiků xxxxxxxx xxxxxx (5.2) xxx použití stejného xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx roztoků x xxxxxx se xxxxxxx xxxxx (plocha) xxxx xxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Ze xxxxxxx hodnoty výšky (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxx x roztoku vzorku xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μg/ml porovnáním x xxxxxxxxxxx xxxxxx (5.3.2).
Xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx w x xx/xx xx dán xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = x × 1 000 / x
xxx:
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (5.2) x μx/xx
x = xxxxxxxx xxxxxxx vzorku x g (5.2)
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x přídavkem (xx-xxxxxxxxxxxxxx) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x diodovým xxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx extraktu vzorku (5.2) a kalibračního xxxxxxx (3.5.3), xxxxxxxxxxxx 5,0 μg/ml xxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx stanovením x xxxxxxxxx (xx-xxxxxxxxxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxx (5.2) xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx odpovídat xxxxxxxx xxxxxxxxxxx nalezeného x xxxxxxxx xxxxxx.
X xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx mělo xxxxx xxx xx xxxxxxx výšky píku xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx jeho xxxxx xxxx xxx x rozmezí ±10 % původní šířky xxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx pole
Výsledky xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx kritérií:
a) při xxxxxx délce xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx musí xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x nepřesností xxxxx xxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x diodovým polem xx udává ±2 xx;
x) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 400 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x standardu xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou vykázána xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx odchylka xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) xxx vlnové xxxxx xxxx 220 x 350 nm xx xxxxx spektrum xxxxxxxx, xxxxxxx x sestupu xxxx zkoušeného xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x této xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % relativní absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx maxima x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx spektra xx vrcholu xxxx.
Xxxx-xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx potvrzena.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx souběžných xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na stejném xxxxxx při xxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 10 x 20 xx/xx, xxxxx xxxxxxxxxx15 % xxxxxxx výsledku.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx modelový xxxxxx xxxx být výtěžnost xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx kruhového xxxxx
X xxxxx XX byl xxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxx němž xx 13 xxxxxxxxxx analyzovalo xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx selata, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
| xxxxxx 1 |
vzorek 2 |
xxxxxx 3 |
xxxxxx 4 |
|
|
L |
13 |
10 |
11 |
11 |
|
A |
40 |
40 |
44 |
44 |
|
střední (xx/xx) |
- |
14,6 |
48,0 |
95,4 |
|
(Xx) (xx/xx) |
- |
0,82 |
2,05 |
6,36 |
|
(XX) (xx/xx) |
- |
1,62 |
4,28 |
8,42 |
|
XXx (%) |
- |
5,6 |
4,3 |
6,7 |
|
XXX (%) |
- |
11,1 |
8,9 |
8,8 |
|
xxxxxxxxx xxxxx (xx/xx) |
- |
15 |
50 |
100 |
|
xxxxxxxxx (%) |
- |
97,3 |
96,0 |
95,4 |
X: xxxxx laboratoří
n: xxxxx jednotlivých xxxxxx
Xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
SR: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxx koeficient opakovatelnosti
CVR: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
9. Xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx obsahující xxxx xxx 100 xx/xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx uspokojivé xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx x/xxxx xxxxxxxx extraktu (5.2) xxx, aby xx dosáhlo koncentrace x rozsahu xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.3.2).
[1] Pokud xx xx xxx xxxxxxxx zkoušet xx xxxxxxx, zamění xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx.
[2] Pokud xx má tuk xxxxxxxx zkoušet xx xxxxxxx, zamění xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx.