Xxxxxxxx Xxxxxx 98/64/XX
xx xxx 3. září 1998,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxxxxx aminokyselin, xxxx a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx a xxxxxx se xxxx xxxxxxxx 71/393/XXX
(Xxxx x xxxxxxxx pro XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Smlouvu x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX za xxx 20. xxxxxxxx 1970 x zavedení xxxxx xxxxxx xxxxxx x analytických metod Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx krmiv [1], xxxxxxxxx pozměněnou Aktem x xxxxxxxxxxx Rakouska, Xxxxxx x Švédska, x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, xx úřední xxxxxxxx xxxxx za xxxxxx kontroly, xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx x složení, xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx odběru xxxxxx x analýzy xxxxxxxx xx Společenství;
vzhledem x xxxx, že xxxxxxxx Rady 79/373/XXX xx xxx 2. xxxxx 1979 x xxxxxxx xxxxxxx směsí xx trh [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 97/47/XX [3], x směrnice Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. xxxx 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx [4], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/XX [5], xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx xxxx být xxxxxxx xx označení xxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx Xxxx 70/524/XXX ze dne 23. listopadu 1970 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x krmivech [6], xxxxxxxxx xxxxxxxxx směrnicí Xxxxxx 98/19/XX [7], xxxxxxx, xx obsah xxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx směsí;
vzhledem x xxxx, xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxx kontrolu krmiv [8], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 84/4/XXX [9], stanoví xxxxxx xxxxxxx xxxx jiné x pro zjišťování xxxxxx xxxx; xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx musí xxx xxxxxxxxx analytické xxxxxx Společenství xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x souladu xx stanoviskem Stálého xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX SMĚRNICI:
Xxxxxx 1
Členské státy xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx kontrolu xxxxxx aminokyselin, xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
X xxxxxxx xxxxxxxx Komise 71/393/EHS xx bod "4. Xxxxxxxxx xxxxxx tuku" xxxxxxxxx částí X xxxxxxx xxxx směrnice.
Článek 3
1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x touto směrnicí xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxxxx 1998. Xxxxxxx x nich xxxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx tyto xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. xxxxx 1999.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx obsahovat xxxxx xx tuto xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx státy xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx směrnice xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx dnem xx xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 5
Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu xxx 3. xxxx 1998.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxx
xxxx Komise
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[3] Xx. věst. X 211, 5.8.1977, x. 45.
[4] Xx. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[5] Xx. věst. X 125, 23.5.1996, x. 35.
[6] Úř. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[7] Xx. xxxx. X 96, 28.3.1998, x. 39.
[8] Xx. věst. X 279, 2.12.1971, x. 7.
[9] Xx. xxxx. X 15, 18.1.1984, x. 28.
XXXXXXX
XXXX A
Stanovení xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx metoda xxxxxx xx stanovení obsahu xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx) x xxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx x xxxxx) xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxx(x)xx, xxxxxxxxx, xxxxx, threonin, xxxxxx, arginin, kyselinu xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx, histidin, xxxxxxxxx, xxxxxx, fenylalanin, xxxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxxx.
Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx také x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx D x X. Není xxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx hydroxy xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
2. Princip
2.1 Xxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx aminokyseliny xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxxx a odstraňují xx xxxxxxxx. Zfiltrovaný xxxxxx se upraví xx xX 2,20. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx se po xxxxxx s ninhydrinem xxxxxxxxxxxxx detekcí xxx 570 xx.
2.2 Vázané xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx proces xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx aminokyselinách. Xxxx(x)xx x methionin xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx cysteovou a xx xxxxxxxxxxxxxxx. Tyrosin xx xxxx xxxxxxxxxx x hydrolyzátech xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Ostatní xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxx 1 mohou xxx xxxxxxxxxx buď x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx se xxxxxxx xxx 0 xX xxxxx kyseliny xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx rozloží xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx vzorek xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (x = 6 xxx/x) xx 23 xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xX 2,20. Aminokyseliny se xxxxxxxx iontoměničovou xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx fotometrickou xxxxxxx xxx 570 xx (440 xx pro xxxxxx).
3. Xxxxxxx
Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx destilovaná xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx (vodivost &xx; 10 μX).
3.1 xxxxxxx vodíku, w = 30 %
3.2 xxxxxxxx xxxxxxxx, x = 98–100 %
3.3 xxxxx
3.4 xxxxxxxxx xxxxx
3.5 xxxxxxxx xxxxx
3.6 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, dihydrát
3.7 kyselina xxxxxxxxxxxxxx o hustotě xxxxxxxxx 1,18 x/xx
3.8 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx
3.9 2,2-xxxxxxxxxxxxx (thiodiglykol)
3.10 chlorid xxxxx
3.11 ninhydrin
3.12 xxxxxxxxxxx, xxx xxxx 40–60 °X
3.13 xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vnitřní standard
3.14 xxxxx – xxxx (&xx; 10 xxx xxxxxxx)
3.15 1-xxxxxxx
3.16 xxxxxxxxxxxxx
3.16.1 xxxxxxxxxx xxxxx uvedené x xxxx 1; xxxxx sloučeniny xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodu. Xxxxxx xx xx vakuu xxx X2X5 xxxx X2XX4 xxxxx xxxx xxxxxxxx
3.16.2 xxxxxxxx xxxxxxxx
3.16.3 xxxxxxxxxxxxxxx
3.17 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 7,5 mol/l:
300 x XxXX (3.5) xx xxxxxxxx ve xxxx x xxxxxx xx 1 xxxxx.
3.18 xxxxxxxx xxxxx, roztok c = 1 xxx/x:
40 x NaOH (3.5) xx xxxxxxxx xx xxxx x doplní xx 1 litru.
3.19 xxxxxx kyseliny xxxxxxxx x fenolu:
Smíchá se 889 x xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2) se 111 x xxxx x xxxxx xx 4,73 g xxxxxx (3.3).
3.20 hydrolyzační xxxx, x = 6 xxx HCl/l x xxxxxxxxx 1 g xxxxxx/x:
X 492 xx XXx (3.7) xx xxxxx 1 x xxxxxx (3.3) a xxxxxx se xxxxx xx 1 litru.
3.21 xxxxxxxxx xxxx, x = 6 xxx XXx/x x xxxxxxxxx 2% thiodiglykolu:
8,2 ml XXx (3.7) se xxxxxxx xxxxxxxxx 900 xx xxxx, xxxxx xx 20 ml xxxxxxxxxxxxx (3.9) a xxxxxx xxxxx na 1 litr (3.7 x 3.9 se xxxxx xxxxxxx xxxxx).
3.22 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, β = 6 %:
60 x xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxxx xx xxxx a xxxxxx xxxxx na 1 xxxx.
3.23 xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxx xxxxxxxxxxx – xxxxx):
X xxxx xxxxxxx xx xxxxxx 0,5 ml xxxxxxxx xxxxxx (3.1) x 4,5 xx xxxxxxx xxxxxxxx mravenčí x xxxxxxx (3.19); xxxxxxx xx v klidu 1 xxxxxx xxx 20–30 °X, aby xx utvořila kyselina xxxxxxxxxxx, před xxxxxxxx xx xxxxxx se xxxx ochladí v xxxxx x ledovou xxxxx (15 xxxxx).
Xxxxx:
Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx.
3.24 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x = 0,2 xxx Xx+/x, pH 2,20:
X xxxxxxxxx 800 xx xxxx xx xxxxxxxx 19,61 g xxxxxxxxx sodného (3,8), 5 ml xxxxxxxxxxxxx (3.9), 1 x xxxxxx (3.3) x 16,50 ml XXx (3.7). xX xx xxxxxx na 2,20. Xxxxxx xx vodou xx objem 1 xxxxx.
3.25 eluční xxxxxxx xxxxxxx připravované xxxxx xxxxxxxx pro použitý xxxxxxxxxx (4.9)
3.26 xxxxxxxxxxxx xxxxxxx připravované podle xxxxxxxx pro použitý xxxxxxxxxx (4.9)
3.27 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tyto xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx 5 °X.
3.27.1 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx aminokyselin (3.16.1), x = 2,5 μxxx/xx pro xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Tento roztok xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.27.2 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx, x = 1,25 μmol/ml
0,2115 g xxxxxxxx xxxxxxxx (3.16.2) x 0,2265 x xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx (3.16.3) x citronanovém xxxxxxxx roztoku (3.24) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx x doplní xx xx značku xxxxxxxxxxxx tlumivým roztokem. Xxxxxxxx se při xxxxxxx xxx 5 °X nejdéle 12 xxxxxx. Tento roztok xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (3.27.1) obsahuje xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx.
3.27.3 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxx, x = 20 μxxx/xx
0,6560 x norleucinu (3.13) xx rozpustí x xxxxxxxxxxxx tlumivém roztoku (3.24) x odměrné xxxxx xx 250 xx a doplní xx po xxxxxx xxxxxxxxxxxx tlumivým xxxxxxxx. Xxxxxxxx se při xxxxxxx pod 5 °X xxxxxxx 6 xxxxxx.
3.27.4 xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x hydrolyzáty, x = 5 xxxx/50 μx kyseliny xxxxxxxx x methioninsulfonu x x = 10 nmol/50 μx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
Xx 100 ml xxxxxxx xx rozpustí 2,2 x chloridu sodného (3.10) x 30 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24). Xxxxxxx xx 4,00 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx aminokyselin (3.27.1), 4,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx (3.27.2) x 0,50 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx standardu (3.27.3), xxxxx xx xxxxxxx. xX xx upraví xx 2,20 xxxxxxxxxx xxxxxx (3.18).
Xxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx 50 xx odměrné xxxxx, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx tlumivým xxxxxxxx (3.24) x xxxxxxx xx.
Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx pod 5 °C nejdéle 3 xxxxxx.
Xxx také xxxxxxxx 9.1.
3.27.5 kalibrační xxxxxx standardních aminokyselin xxx použití s xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.3.1 x xxx xxxxxxxx (5.2). Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx podle 3.27.4 x xxxxxxxxxx chloridu xxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx 5 °C xxxxxxx 3 měsíce.
4. Xxxxxxxxx x pomůcky
4.1 xxxxx x kulatým xxxx o xxxxxx 100 xxxx 250 xx xxxxxxxx zpětným xxxxxxxxx
4.2 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx skla x xxxxxx 100 xx xx šroubovým xxxxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx těsněním (xxxx. Xxxxx, Xxxxxx) pro xxxxxxx v sušárně
4.3 xxxxxxx s nuceným xxxxxxxx x tepelnou xxxxxxxx s přesností xxxxx než ±2 °X
4.4 xX xxxx (xxx xxxxxxxxx xxxxx)
4.5 xxxxxxxxxx xxxxx (0,2 μx)
4.6 xxxxxxxxxxx
4.7 xxxxxxx xxxxxxx odparka
4.8 xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.9 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx zařízení XXXX x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx ninhydrin, xxxx kolonovou xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx detektorem.
Kolona xx naplní xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx jiných xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx zajišťují čerpadla xx xxxxxxxx průtoku ± 0,5 % xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx možno xxxxxx x případě, xx hydrolyzát xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sodíkových iontů x = 0,8 xxx/x x obsahuje xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx určitých xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxxxxx iontů. V xxxxxxx případě xx xxxxx objem kyseliny xxxx xxxxxxx xX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 xx. Xxxxxxxx se xx xxxxxxxx xx vakuu xxx teplotě nejvýše 40 °X.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx se xxxxxx xxxxxx tak, xxx xxxxxx xxxxx x oky 0,5 xx. Xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx před xxxxxx xxxxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °C xxxx xxx xxxxxxxx. Vzorky x xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxx extrahují xxxxxxxxxxxxx (3.12).
5.2 Xxxxxxxxx volných xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx x x premixech
Do xxxxxxx baňky se xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 x) upraveného xxxxxx (5.1) x xxxxxxxxx xx 0,2 xx x xxxxx xx 100,0 ml xxxxxxxxx směsi (3.21). Xxxxx se xxxxx 60 minut xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx na magnetické xxxxxxxx (4.8). Po xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxxxxxxx do xxxxxxx x xxxxxx 100 xx.
Xx xxxxxxx míchání xx xxxxx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx v xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxxxxx se přefiltruje xxxx xxxxxxxx xxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx sraženina. 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx do xxxxxxx x xxxxxx 100 xx, pH xx xxxxxx xx 2,20 xxxxxx roztoku xxxxxxxxx sodného (3.18), xxxxx xx roztok xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx odměrné xxxxx xxxxxxxxx velikosti x xxxxxx xx značku xxxxxxxx roztokem (3.24).
Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se 1,00 xx xxxxxxxxx standardu (3.27.3) xx xxxxxxx 100 xx odstředěného xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxxx roztokem (3.24).
Xxxx xx pokračuje xxxxx xxxx 5.4 – xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx-xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx týž den, xxxxxxxxxxx se xxx xxxxxxx pod 5 °X.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
5.3.1 xxxxxxx
0,1 xx 1 x xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx xxxxxx s xxxxxxxxx 0,2 xx:
- do xxxxx x kulatým xxxx x xxxxxx 100 xx (4.1) xxx otevřenou xxxxxxxxx (5.3.2.3) xxxx
- do xxxxx x xxxxxxx xxxx x obsahu 250 xx (4.1), xxxxxxxx-xx xx nízká xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx
- xx nádoby x xxxxxx 100 xx xx šroubovací uzávěrem (4.2) (xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx 5.3.2.4).
Odvážená xxxx xxxxxx by měla xxx xxxxx xxxxxx xxx 10 xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 xx.
Xxxxx/xxxxxx xx xxxxxx do xxxxx x ledovou xxxxx x ochladí xx xx 0 °X, xxxxx xx xxxxx 5 xx xxxxxxxx xxxxx (3.23) x xxxxxxxx se xxxxxxxxx lžící xx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx/xxxxxx xx xxxxxx x xx lžící xxxxxxxxxxxxx xxxxx x vloží xx i x xxxxx s xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 0 °X x xxxxxxx xx xxx 16 xxxxx. Xx 16 xxxxxxxx xx xxxxx z xxxxxxxxxx x přebytečné xxxxxxxx činidlo xx xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.4).
Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1.
5.3.2 xxxxxxxxx
5.3.2.1 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx
X xxxxxxxxxxx vzorku připravenému xxxxx 5.3.1 xx xxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.20) xxx, xxx neulpěl xxxxx vzorek xx xxxxxxx xxxxxx xxx xx lžíci. Podle xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx pokračuje xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4.
5.3.2.2 xxxxxxxxx neoxidovaných vzorků
Do xxxxx x kulatým xxxx x obsahu 100 xx nebo 250 ml (4.1) xxxx xx nádoby x xxxxxx100 xx xx šroubovacím uzávěrem (4.2) se xxxxxx 0,1 až 1 x upraveného vzorku (5.1) x xxxxxxxxx xx 0,2 xx. Xxxxxxxx xxxx vzorku xx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx 10 xx. Xxxxxxx xx přidá 25 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.20) a xxxxxx xx xx vzorkem. Xxxx xx postupuje xxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx podle 5.3.2.4.
5.3.2.3 xxxxxxxx xxxxxxxxx
Xx xxxxx x baňce (xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2) xx přidají 3 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx se xxxxx xx mírného xxxx pod xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxx 23 xxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx promyje 5 xx citronanového xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24). Xxxxx xx odpojí x xxxxxxx xx x xxxxxx xxxxx. Xxxx se xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3.
5.3.2.4 uzavřená xxxxxxxxx
Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxx podle 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2 se xxxxxx xx sušárny (4.3) xxx 110 °X. Xxx se xxxxx xxxxx hodiny xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x xxxxxxxx vyvíjení xxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx k výbuchu, xxxxxx se šroubovací xxxxxx xxxxx xx xxxxx. Nádoba xx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx zašroubuje a xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x sušárně (4.3) 23 xxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx baňka vyjme xx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x postaví xx xx xxxxx s xxxxxxx vodou. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx pH (5.3.3) xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx tlumivého roztoku (3.24) xx xxxxxxx x xxxxxx 250 xx nebo do xxxxx x kulatým xxxx x xxxxxx 250 xx.
Xxxx se xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3
5.3.3 xxxxxx pH
Podle toho, xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9), xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xX xxxxx 5.3.3.1 nebo 5.3.3.2.
5.3.3.1 xxx chromatografické xxxxxxx (4.9), xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx vyžaduje xxxxxx xxxxxxxxxxx sodíku (xx-xx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx), doporučuje xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.27.3).
X takovém xxxxxxx xx xxxx odpařováním xxxxxxx xx hydrolyzátu 2,00 xx vnitřního xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.27.3).
Do hydrolyzátu xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4. xx xxxxxxx 2 xxxxx 1-xxxxxxxx (3.15).
Xx xxxxxxx xxxxxxx (4.7) xx xxxxx xxxxx xx 5-10 ml xx xxxxx xxx 40 °X. Pokud xx xx objem xxxxxxx xxxxxx xxx 5 xx, hydrolyzát xx xxxxx odstranit x xxxxx analýzu znovu.
pH xx xxxxxx xx 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18) x xxxxxxxxx se xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.3.2 xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9)
Hydrolyzáty xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4 xx částečně xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx přidáním 17 xx roztoku xxxxxxxxx sodného (3.17), xx stálého xxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx 40 °X.
xX xx upraví xx 2,20 roztokem xxxxxxxxx sodného (3.18) xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.4 xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx (5.3.3.1 xxxx 5.3.3.2) x upraveným xX xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 200 xx x tlumivým xxxxxxxx (3.24) xx xxxxxx xx xxxxxx.
Xxxxx-xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx 2,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3) a xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx citronanovým xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx (5.4)
Xxxxxx-xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx týž xxx, uschovávají se xxx xxxxxxx xxx 5 °X.
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx (5.2) x xxxxxxxxxx (5.3.4) xxxxxxxxx xxxxxxx. Směs se xxxxxxxx x potřebné xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 0,2 μ (4.5). Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxx ionexové xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9).
Xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx je důležité, xxx xx xx xxxxxxx nastřikovalo xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ± 0,5 % xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx vzorků x xxxxxxxx, kdy je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxx x xxxxxxxxxxxx roztocích a x xxxxxxxxx xxxxxx xx možná xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x analytického xxxxxxx. Standard xxxx xxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24) xxx, xxx xxxxxx xxxx standardu xxxxxxx 30 – 200 % xxxxxx xxxx xxx jednotlivé xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx analyzátoru x xxxxxxxxx xxxxxx. Zvolený xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx sebe xxxxxxxx x xx xxxxxxxxx ninhydrin xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxx působení xx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxx být xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx k xxxxxxx xxxx. Tyto xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx obsahovat xxxxxxx 30 % xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, které xxxxx xxx xxxxx přesně xxxxxxxxx xx použitém xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9).
Xxx xxxxxxxx threoninu a xxxxxx by xxxxx xxxxx sedla x xxxxxxx píku xxxxxxx x obou xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 2:10 (xxxxx xx xxxxxxx xxxxx cyst(e)in, xxxxxxxxx, threonin x xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nedostatečnou xxxxxxxx xxxxxxxxxx píků). Xxx všechny xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx lepší xxx 1:10.
Xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx lysin xxxx xxxxxxxxx xx "xxxxxxxxxx xxxxxxxx" x xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx aminokyselinu a xxxxxxxxxx xx množství xxxxxxxxxxxxx x g xx kg xxxxxx.
x xxxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxx = X × X × XX × X / X × X × 1 000
Xx-xx použit xxxxxxx xxxxxxxx, násobí xx xxxxxxxx: X / X
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx
X = plocha xxxx xxxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx
X = xxxxxx xxxx interního xxxxxxxxx x hydrolyzátu nebo x extraktu
D = xxxxxx xxxx interního xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
XX = xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x μxxx/xx
X = hmotnost navážky xxxxxx (x) (korigovaná xx xxxxxxx xxxx xxxxx je xxxxxx xxxxxxx nebo odtučněn)
F = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (5.3.4) x xx xxxx xxxxxxx xxxxx zředěného xxxxxxxx vypočteného xxxxx 6.1
Xxxxxx a xxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx cystin (X6X12X2X4X2, XX 240,30) x xxxxxxxx XX 120,15 (= 0,5 x 240,30).
Xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxx oxidovaného xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxx vypočítává se xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx MV xxxxxxxxxx: 149,21.
Xxxxxxx xxxxx methionin xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx methionin, xxx výpočet xx xxxxxxx xxxxxx XX.
6.1 Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (X) při xxxxxxxxx xxxxxxx aminokyselin (5.2) xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
X = 100 xx × (10 xx + 5 xx) / 10 ml × V ml / 10xx
X = xxxxx xxxxxxxxxx extraktu
7. Vyhodnocení xxxxxx
Xxxx metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx 1990 xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx (krmná xxxx xxx prasata, xxxxx xxxx xxx broilery, xxxxxxxxxx koncentrát, xxxxxx). Xx xxxxxxxxx extrémů xxxx xxxxxxxx středních xxxxxx a standardních xxxxxxxx uvedeny x xxxxxxxxxxx tabulce:
střední xxxxxxx x g/kg
|
Referenční materiál |
Aminokyselina |
|||
|
Threonin |
cyst(e)in |
Methionin |
lysin |
|
|
Krmná xxxx xxx prasata |
6,94 x = 15 |
3,01 x = 17 |
3.27 x =.17 |
9,55 x = 13 |
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxxx |
9,31 x = 16 |
3,92 x = 18 |
5,08 n = 18 |
13,93 x = 16 |
|
Proteinový xxxxxxxxxx |
22,32 x = 16 |
5,06 x = 17 |
12,01 x = 17 |
47,74 x = 15 |
|
Xxxxxx |
58,42 x = 16 |
- |
90,21 x = 16 |
98,03 x = 16 |
x = počet xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.1 Opakovatelnost
Opakovatelnost xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
xxxxxxxxxx odchylka (Xx) xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx v g/kg
|
Referenční xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxx |
0,13 n = 15 |
0,10 x = 17 |
0,11 x = 17 |
0,26 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
0,20 x = 16 |
0,11 x = 18 |
0,16 x = 18 |
0,28 n = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,48 x = 16 |
0,13 n = 17 |
0,27 x = 17 |
0,99 n = 15 |
|
Premix |
1.30 x = 16 |
_ |
2,19 x = 16 |
2,06 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx laboratoří
Variační xxxxxxxxxx (%) vnitrlaboratorních xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xx)
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxx |
1,9 x = 15 |
3,3 n = 17 |
3,4 x =.17 |
2,8 x = 13 |
|
Krmná xxxx xxx brojlery |
2,1 x = 16 |
2,8 x = 18 |
3,1 x = 18 |
2,1 x = 16 |
|
Proteinový xxxxxxxxxx |
2,7 x = 16 |
2,6 x = 17 |
2,2 x = 17 |
2,4 n = 15 |
|
Xxxxxx |
2,2 x = 16 |
- |
2,4 x = 16 |
2,1 x = 16 |
x = počet xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.2 Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx shora xxxxxxxxx zkoušek xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (XX) x x/xx
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxx |
0,28 x = 15 |
0,30 n = 17 |
0,23 x = 17 |
0,30 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxxx |
0,48 x = 16 |
0,34 x = 18 |
0,55 x = 18 |
0,75 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,85 x = 16 |
0,62 x = 17 |
1,57 x = 17 |
1,24 x = 15 |
|
Xxxxxx |
2,49 x = 16 |
- |
6,20 n = 16 |
6,62 n = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx (%) xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (SR)
|
Referenční xxxxxxx |
xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
4,1 x = 15 |
9,9 x = 17 |
7,0 x = 17 |
3,2 n = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
5,2 n = 16 |
8,8 n = 18 |
10,9 x = 18 |
5,4 n = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
3,8 x = 16 |
12,3 x = 17 |
13,0 n = 17 |
3,0 x = 15 |
|
Xxxxxx |
4,3 x = 16 |
- |
6,9 n = 16 |
6,7 x = 16 |
x = xxxxx zúčastněných xxxxxxxxxx
8. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx metody xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx referenčních xxxxxxxxx, jsou-li k xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
9. Poznámky
9.1 Xxxxxxxx k xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx koncentrace kalibračních xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxx 3.27.4 x 3.27.5) a xxxxxxx xxxxxx (5.3.4) považovat xx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx rozsah xxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx roztok xx xxxx citronanovým xxxxxxxx xxxxxxxx xxx, aby xx xxxxxxx xxxxx xxxx uprostřed tohoto xxxxxxx.
9.2 Xxxxx xx x xxxxxxx hydrolyzátů xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx zkoušek xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx 1 % chloridu (xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, doplňková xxxxxx) xxxx dojít x xxxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxx x musí xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
XXXX B XXXXXXXXX TUKŮ
1. Xxxx x oblast použití
Touto xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx semen x xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxx 136/66/XXX xx dne 22. xxxx 1996.
Xxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxx následujících xxxxxxx:
1.1 Xxxxxx X – xxxxx extrahovatelné xxxx
Xxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx xxxxxx rostlinného xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx B.
1.2 Xxxxxx X – xxxxxxx xxx
Xxxx metoda xx xxxxxxxxxx pro krmiva xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxx všechny xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx není xxxxx tuk xxxxx xxxxxxxxxx bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxx. xxxxx, xxxxxxxx, bramborové xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx zpracování, xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx).
1.3 Interpretace xxxxxxxx
Xx xxxxx případech, xxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X, xxx postupem X, xx xxxxx xxxxxxxxx xx platnou xxxxxxx podle xxxxxxx X.
2. Xxxxxxx
2.1 Postup X
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx vysuší x xxxxx.
2.2 Xxxxxx B
Vzorek xx xxxxxxx x xxxxxxxxx chlorovdíkovou. Xxxx xx ochladí x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx se xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx A.
3. Xxxxxxx
3.1 xxxxxxxxxxx s xxxxx xxxx xxxx 40 x 50 °C. Xxxxxxx bromového xxxxx xxxx xxx xxxxx xxx 1 x xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxx 2 xx/100 xx
3.2 xxxxx xxxxx, xxxxxxx
3.3 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 3 mol XXx/x
3.4 xxxxxxxxx prostředky, např. xxxxxxxxx, Hyflo-supercel.
4. Přístroje x pomůcky
4.1 Extrakční xxxxxxxx, xx xxxxxxx (Xxxxxxxxx přístroj), refluxní xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx 10 xxxxx xx xxxxxx. X xxxx xxx xxxxxx xx xxxx xxx refluxní rychlost xxx 10 ml xx minutu.
4.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx, x porositou v xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx 4.1.
4.3 Xxxxxxx, buď xxxxxxx xxxxxxxx na 75 °X ± 3 °X, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na 100 °X ± 3 °X.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxx X (xxx xxx 8.1)
Xx extrakční xxxxxxx xx xxxxxx 5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx (4.2) x xxxxxxxxx xxxxxxx vaty xxx xxxx.
Xxxxxxx se xxxxxx xx extrakčního xxxxxxxxx (4.1) x xxxxxxxxxx xxxx hodin xxxxxxxxxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxx xx suché, xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx [1].
Xxxxxxxxxxxx se oddestiluje, xxxxxx x baňce xx xxxx 1,5 xxxxxx x xxxxxxx (4.3). Nechá xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx. Xxxx xx xxxxxxx 30 xxxxx, xxx xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxx konstantní (xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx následujícími xxxxxxxx xxxx být menší xxx 1 xx).
5.2 Xxxxxx X
Xx xxxxxxx x xxxxxx 400 xx xxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 300 xx xx xxxxxx 2,5 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx (viz bod (8,2) x xxxxx xx 100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.3) x xxxxxx pemzy. Xxxxxxx xx přikryje xxxxxxxxx sklem xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx refluxním xxxxxxxxx. Xxxx xx přivede xx xxxxxxx xxxx xx xxxxx plameni xxxx na xxxxx xxxxx a vaří xx po xxxx xxxxx hodiny. Xxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxx x přidá se xxxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4), xxx xxx filtraci xxxxxxx xx ztrátám tuku. Xxxxxxxx se přes xxxxxxxxx dojitý xxxxxxxxx xxxxx zbavený tuku. Xxxxxx xx promývá xxxxxxxx xxxxx, xx xx xxxxx neutrální xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xx vzorek xxxx před hydrolýzou xxxxxxxxxx petroletherem podle xxxxxxx X.
Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx na xxxxxxxx sklo x xxxx se xxxxxxxx xxxxxx v horkovzdušné xxxxxxx (4.3) xxx xxxxxxx 100 °X ± 3 °X.
Xxxxxxx xxxxxxxxx papír s xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xx extrakční xxxxxxx (4.2) a xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx. Xxxxxxx xx vloží xx xxxxxxxxxxx přístroje (4.1) x xxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x třetího xxxxxxxx xxxx 5.1.
6. Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Opakovatelnost
Rozdíl xx výsledcích dvou xxxxxxxxxx stanovení prováděných xx stejném xxxxxx xxxxxxx pracovníkem xx xxxxx xxxxxxxxxx:
- 0,2 % x xxxxxxxxx xxxxxxx, při xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 5 %,
- 4,0 % xxxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx od 5 xx 10 %,
- 0,4 % x xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxx xxx 10 %.
8. Xxxxxxxx
8.1 U xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx olejů x xxxx, které se xxxxxxx drtí xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek, xx xxxxxxxxx následujícím xxxxxxxx:
Xxxxxx se 20 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx a smíchá xx x 10 xxxx x xxxx xxxxx xxxxxxxxx síranu xxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx (3.1) xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxx extrakt xx xxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxxx (3.1) x promíchá se. 50 xx xxxxxxx xx odpipetuje xx xxxx xxxxx, předem xxxxxxx baňky, obsahující xxxxxx xxxxx [2].
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, baňka xx vysuší x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 5.1.
Xxxxx xxxx xx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xx vzorku xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
(10 x + x) × 5
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx (xxxxxxx část xxxxxxxx)
x = xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx extrakci x gramech
8.2 X xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxx navážka xxxxxxxxxx vzorku xxxxxx xx 5 g.
8.3 Xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx, která xxxx xxxxxx obsah vody, xx xxxx před xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx B xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
8.4 X xxxx 5.2 xx xxxx na opláchnutí xxxxxx xx filtraci xxxxxxxx použít xxxxx xxxx místo xxxx xxxxxxx.
8.5 X xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx doba sušení xxx 1,5 hod. Xx xxxx xxxxx xxxxxxx přílišnému vysoušení, xxxxx může xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx x mikrovlnnou xxxxxx.
8.6 Xxx xxxxxx xxxx xxx 15 % xx doporučuje xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx A x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. Xxxxxx xx do xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxx tuku x xxxxxx.
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXXX
(2-[X-2-(xxxxxxxxxxxx)xxxxxxxxx]-3-xxxxxxxxxxxxxxxx-X1,X4-xxxxxx)
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx obsah xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 5 xx/xx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx olachindoxu xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC) xx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 xxxxxxxx
3.2 xxxxxxxx, pro HPCL
3.3 xxxx, pro HPLC
3.4 xxxxxxx xxxx xxx XXXX:
Xxxx vody (3.3) x xxxxxxxxx (3.2), 900 + 100 (X + X)
3.5 xxxxxxxxxx xxxxx: čistý xxxxxxxxxx 2-[N-2-(hydroxyethyl)karbomoyl]-3-methylchinoxalin-N1,N4-dioxid, X 851
3.5.1 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx olachindoxu, 250 μx/xx
Xx odměrné xxxxx x xxxxxx 200 ml xx xxxxxx 50 mg xxxxxxxxxxx (3.5) s xxxxxxxxx xx 0,1 xx x přidá xxx 190 xx xxxx. Xxxxx xx xxxxxxx na 20 xxxxx do xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xx xxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx xxxxxxx xx laboratorní xxxxxxx, doplní xxxxx xx značku a xxxxxxx. Baňka xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x uschovává x xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx měsíc.
3.5.2 xxxxxxxx standardní roztok xxxxxxxxxxx, 25 μx/xx
10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.1) xx přenese do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 ml, xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.4) a promíchá. Xxxxx se obalí xxxxxxxxxx fólií a xxxxxxxxx v xxxxxxxxxx. Xxxxx roztok xx xxxx připravovat xxxxx xxxxxxx.
3.5.3 xxxxxxxxxx roztoky
Do xxxx xxxxxxxxx xxxxx x obsahu 50 xx se xxxxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0 x 20,0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.5.2). Xxxxxx se xxxxxxx xxxx (3.4) po xxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx fólií. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 7,5 a 10,0 μx xxxxxxxxxxx xx xx.
Xxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 xxxxxxxxxxxx xxxxx
4.2 xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.3 xxxxxxxx XXXX x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
4.3.1 xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 mm, xxxxxxx X18, 10 μx, nebo xxxxxxxxxxx xxxxxx
4.4 xxxxxxxxxx filtry x póry 0,45 μx
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx provádět xxx xxxxxxxx světle xxxx x nádobách x xxxxxxx xxxx.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx analyzovat xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xxxxxxx xx výtěžnost xx provede analýzou xxxxxxxxxx krmiva xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx odpovídá xxxx obsahu xx xxxxxx X xxxxxxxxxxx xx xxxxxx 50 xx/xx xx xxxxxxxxxx 10,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx základního roztoku (3.5.1) xx kónické xxxxx o xxxxxx 250 xx a xxxxxx se xxxxxx xx cca 0,5 xx. Xxxxx xx 50 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx x xxxxx xx 10 xxxxx xxxxxx, xxxxxxx se xxxxx několikrát xxxxxxxx. Xxxx xx přejde x xxxxxxxx (5.2).
Xxxxxxxx:
Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xx být modelové xxxxxx xxxxxxxxx typu xxxx zkoušený xxxxxx x xxxxx obsahovat xxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Naváží xx xxxxxxxxx 50 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 g. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1000 xx, xxxxx se 100 xx methanolu (3.1) x xxxxx xx xxxxxx xx pět xxxxx do xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Přidá xx 410 xx xxxx a xxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxx xxxxx dalších 15 xxxxx. Xxxxx xx xxxxx z ultrazvukové xxxxx, xxxx xx xxxxx 30 xxxxx xx třepačce (4.2) x potom se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. 10,0 ml filtrátu xx xxxxxxx xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 20 xx, xxxxxx xx xxxxx xx značku x xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xx přefiltruje membránovým xxxxxxx (4.4) (viz xxx 9. Xxxxxxxx). Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx HPLC (5.3).
5.3 Xxxxxxxxx HPLC
5.3.1 Xxxxxxxxx:
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxx použity xxxx podmínky, xx xxxxxxxxxxx, xx dávají xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
xxxxxxxxxx kolona (4.3.1)
xxxxxxx xxxx (3,4): Xxxx vody (3.3) x xxxxxxxxx (3.2), 900 + 100 (X + X)
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 ml/min
detekční xxxxxx xxxxx: 380 xx
xxxxx xxxxxxxx: 20 μx–100 μx
Xxxxxxxxx chromatografického xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxx, xx se xxxxxxxxxx nastříkne xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5.3) obsahující 2,5 μx/xx, xx xx dosáhne xxxxxxxxxxxx xxxxx píků a xxxxxxxxxx xxxx.
5.3.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx každý kalibrační xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx výšky (plochy) xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx hodnot xxxxx (xxxxx) xxxx kalibračních xxxxxxx jako xxxxxxx x příslušných xxxxxxxxxxx x μg/ml xxxx xxxxxxxxx.
5.3.3 Roztok vzorku
Provede xx několik xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2) xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx (plocha) píků xxxxxxxxxxx.
6. Výpočet výsledků
Ze xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx xx zjistí koncentrace x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (5.3.2).
Xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx w x xx/xx je xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = x × 1&xxxx;000 / x
xxx:
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (5.2) x μg/ml
m = xxxxxxxx xxxxxxx vzorku x x (5.2)
7. Xxxxxxxxxxx výsledků
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (co-chromatography) xxxxx využitím xxxxxxxxx x diodovým xxxxx, xxxxxxx xx porovnávají xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2) a kalibračního xxxxxxx (3.5.3), obsahujícího 5,0 μg/ml olachindoxu.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (xx-xxxxxxxxxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxx (5.2) se obohatí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx olachindoxu xx mělo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x extraktu vzorku.
S xxxxxxx na přidané xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx mělo xxxxx xxx xx xxxxxxx výšky xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxx x xxxxxxx ±10 % xxxxxxx xxxxx xxxx olachindoxu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx diodového xxxx
Xxxxxxxx xx vyhodnocují xxxxx xxxxxxxxxxxxx kritérií:
a) xxx xxxxxx xxxxx maximální xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx spektra xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxxxx xxxxxxx. Pro detektor x diodovým polem xx xxxxx ±2 xx;
x) xxx vlnové xxxxx mezi 220 x 400 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx maxima x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx spektry xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 a 350 nm xx xxxxx spektrum xxxxxxxx, xxxxxxx x sestupu xxxx zkoušeného vzorku xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx částí xxxxxxx x rozsahu 10 až 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nikde 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx.
Xxxx-xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx splněno, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx souběžných xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx obsahu xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 20 mg/kg, xxxxx xxxxxxxxxx15 % xxxxxxx výsledku.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx testu
V xxxxx ES xxx xxxxxxxx kruhový xxxx, xxx xxxx až 13 laboratoří analyzovalo xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx selata, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
| xxxxxx 1 |
vzorek 2 |
xxxxxx 3 |
xxxxxx 4 |
|
|
X |
13 |
10 |
11 |
11 |
|
X |
40 |
40 |
44 |
44 |
|
xxxxxxx (xx/xx) |
- |
14,6 |
48,0 |
95,4 |
|
(Xx) (xx/xx) |
- |
0,82 |
2,05 |
6,36 |
|
(XX) (xx/xx) |
- |
1,62 |
4,28 |
8,42 |
|
XXx (%) |
- |
5,6 |
4,3 |
6,7 |
|
XXX (%) |
- |
11,1 |
8,9 |
8,8 |
|
xxxxxxxxx xxxxx (mg/kg) |
- |
15 |
50 |
100 |
|
výtěžnost (%) |
- |
97,3 |
96,0 |
95,4 |
X: xxxxx laboratoří
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot
Sr: xxxxxxxxxx odchylka opakovatelnosti
SR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxx xxxxxxxxxx opakovatelnosti
CVR: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
9. Xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 100 xx/xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx x/xxxx xxxxxxxx extraktu (5.2) xxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x rozsahu xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.3.2).
[1] Xxxxx xx má xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx se xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx.
[2] Xxxxx xx má tuk xxxxxxxx zkoušet xx xxxxxxx, zamění se xxxxxx pemzy za xxxxxxxx xxxxxxx.