Xxxxxxxx Xxxxxx 98/64/ES
ze xxx 3. xxxx 1998,
xxxxxx se stanoví xxxxxxxxxx metody Společenství xxx stanovení xxxxxxxxxxxx, xxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx a xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx 71/393/EHS
(Text x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Smlouvu x xxxxxxxx Evropského společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. července 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx pozměněnou Xxxxx x přistoupení Xxxxxxxx, Xxxxxx a Švédska, x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k tomu, xx xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx úřední xxxxxxxx krmiv xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx z xxxxxxxx x správních xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx jejich xxxxxxx a xxxxxxx, xx provádí xx xxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xx Společenství;
vzhledem x tomu, xx xxxxxxxx Xxxx 79/373/EHS xx dne 2. xxxxx 1979 o xxxxxxx krmných xxxxx xx xxx [2], xxxxxxxxx pozměněná směrnicí Xxxxxx 97/47/ES [3], x směrnice Xxxx 93/74/XXX ze dne 13. xxxx 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx [4], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/XX [5], stanoví, že xxxxx aminokyselin a xxxx xxxx xxx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxx 70/524/XXX xx dne 23. xxxxxxxxx 1970 x doplňkových látkách x xxxxxxxx [6], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx Xxxxxx 98/19/XX [7], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxx musí být xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx je xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx druhá xxxxxxxx Komise 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [8], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Komise 84/4/EHS [9], xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx mimo xxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxx tuku; xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xxxx xxx stanoveny xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx těchto látek;
vzhledem x tomu, xx xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x souladu xx stanoviskem Stálého xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx x xxxxxx olachindoxu x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
X příloze xxxxxxxx Xxxxxx 71/393/XXX xx xxx "4. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx" xxxxxxxxx xxxxx X xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
1. Xxxxxxx xxxxx uvedou v xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx do 31. xxxxxxxx 1998. Xxxxxxx x xxxx neprodleně Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx od 1. xxxxx 1999.
Xxxx opatření xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx obsahovat odkaz xx xxxx xxxxxxxx xxxx musí xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx stanoví členské xxxxx.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx směrnice xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 5
Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
V Bruselu dne 3. září 1998.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[3] Úř. xxxx. X 211, 5.8.1977, x. 45.
[4] Xx. věst. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[5] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
[6] Xx. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[7] Úř. věst. X 96, 28.3.1998, x. 39.
[8] Xx. věst. X 279, 2.12.1971, x. 7.
[9] Úř. xxxx. X 15, 18.1.1984, x. 28.
PŘÍLOHA
ČÁST X
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxx metoda xxxxxx xx stanovení xxxxxx xxxxxxx (syntetických a xxxxxxxxxxx) a xxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx x xxxxx) aminokyselin x xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Metoda xx xxxxxxxxxx xxx xxxx aminokyseliny: cyst(e)in, xxxxxxxxx, xxxxx, threonin, xxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxx, fenylalanin, xxxxxx, xxxxx, tyrosin x xxxxx.
Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx aminokyselin x xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx X x L. Xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx hydroxy xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
2. Princip
2.1 Xxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx aminokyseliny xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx makromolekuly xx srážejí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx upraví xx xX 2,20. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx se xx xxxxxx x ninhydrinem xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 570 xx.
2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxx(x)xx x xxxxxxxxx xxxx xxx před xxxxxxxxxx oxidovány xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxxxxx. Tyrosin xx xxxx xxxxxxxxxx x hydrolyzátech xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx buď x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xx xxxxxxx při 0 xX směsí xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx rozloží dvojsíranem xxxxxx. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (x = 6 xxx/x) xx 23 xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx na xX 2,20. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx chromatografií x xxxxxxxxx xx xx reakci x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx detekcí xxx 570 nm (440 nm xxx xxxxxx).
3. Xxxxxxx
Xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo xxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx &xx; 10 μX).
3.1 xxxxxxx xxxxxx, x = 30 %
3.2 xxxxxxxx mravenčí, x = 98–100 %
3.3 xxxxx
3.4 dvojsíran sodný
3.5 xxxxxxxx xxxxx
3.6 kyselina 5-xxxxxxxxxxxxxxx, dihydrát
3.7 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx o xxxxxxx xxxxxxxxx 1,18 g/ml
3.8 xxxxxxxx xxxxx, dihydrát
3.9 2,2-xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx)
3.10 xxxxxxx xxxxx
3.11 ninhydrin
3.12 xxxxxxxxxxx, xxx varu 40–60 °X
3.13 xxxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxx použitelná xxxx vnitřní standard
3.14 xxxxx – xxxx (&xx; 10 xxx xxxxxxx)
3.15 1-xxxxxxx
3.16 xxxxxxxxxxxxx
3.16.1 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x bodě 1; xxxxx xxxxxxxxxx neobsahující xxxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xx vakuu xxx P2O5 nebo X2XX4 týden před xxxxxxxx
3.16.2 kyselina xxxxxxxx
3.16.3 xxxxxxxxxxxxxxx
3.17 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxx c = 7,5 xxx/x:
300 g XxXX (3.5) se xxxxxxxx ve xxxx x xxxxxx xx 1 xxxxx.
3.18 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxx c = 1 mol/l:
40 x NaOH (3.5) xx rozpustí xx xxxx x doplní xx 1 litru.
3.19 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x fenolu:
Smíchá se 889 g xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2) se 111 x xxxx x xxxxx xx 4,73 x xxxxxx (3.3).
3.20 hydrolyzační xxxx, x = 6 xxx HCl/l x xxxxxxxxx 1 x xxxxxx/x:
X 492 xx XXx (3.7) xx xxxxx 1 x xxxxxx (3.3) x xxxxxx se xxxxx xx 1 litru.
3.21 xxxxxxxxx xxxx, c = 6 xxx XXx/x s xxxxxxxxx 2% thiodiglykolu:
8,2 xx XXx (3.7) se xxxxxxx xxxxxxxxx 900 xx xxxx, přidá xx 20 xx xxxxxxxxxxxxx (3.9) a xxxxxx vodou xx 1 xxxx (3.7 x 3.9 xx xxxxx xxxxxxx xxxxx).
3.22 xxxxxxxx 5-sulfosalicylová, β = 6 %:
60 x kyseliny 5-sulfosalicylové (3.6) xx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxx vodou xx 1 xxxx.
3.23 xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxx xxxxxxxxxxx – fenol):
V xxxx xxxxxxx xx smíchá 0,5 xx peroxidu xxxxxx (3.1) s 4,5 ml roztoku xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx (3.19); ponechá xx v xxxxx 1 xxxxxx xxx 20–30 °X, xxx xx utvořila xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, před přidáním xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxx x ledovou xxxxx (15 xxxxx).
Xxxxx:
Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx.
3.24 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x = 0,2 xxx Xx+/x, xX 2,20:
X xxxxxxxxx 800 xx xxxx xx xxxxxxxx 19,61 x xxxxxxxxx sodného (3,8), 5 ml thiodiglykolu (3.9), 1 x xxxxxx (3.3) x 16,50 ml XXx (3.7). pH xx xxxxxx xx 2,20. Xxxxxx se xxxxx xx xxxxx 1 xxxxx.
3.25 eluční tlumivé xxxxxxx xxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxx pro použitý xxxxxxxxxx (4.9)
3.26 xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (4.9)
3.27 Xxxxxxxxxx xxxxxxx aminokyselin. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx xxx 5 °X.
3.27.1 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx aminokyselin (3.16.1), x = 2,5 μxxx/xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx. Tento xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.27.2 zásobní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx, x = 1,25 μxxx/xx
0,2115 x xxxxxxxx cysteové (3.16.2) x 0,2265 x xxxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí (3.16.3) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztoku (3.24) x xxxxxxx odměrné xxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx tlumivým xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °X nejdéle 12 xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx nepoužívá, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (3.27.1) obsahuje xxxxxxxx xxxxxxxxx x methioninsulfon.
3.27.3 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx standardu, xxxx. xxxxxxxxxx, x = 20 μxxx/xx
0,6560 x xxxxxxxxxx (3.13) xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztoku (3.24) v xxxxxxx xxxxx xx 250 xx a xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx pod 5 °X xxxxxxx 6 xxxxxx.
3.27.4 xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx, x = 5 xxxx/50 μl xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx x c = 10 xxxx/50 μl x ostatních aminokyselin
Ve 100 xx kádince xx rozpustí 2,2 x xxxxxxxx xxxxxxx (3.10) v 30 xx xxxxxxxxxxxxx tlumivého xxxxxxx (3.24). Xxxxxxx xx 4,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.27.1), 4,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx základního roztoku xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx (3.27.2) x 0,50 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx základního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3), xxxxx se xxxxxxx. xX se upraví xx 2,20 xxxxxxxxxx xxxxxx (3.18).
Xxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx 50 xx xxxxxxx xxxxx, doplní xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24) x xxxxxxx se.
Skladuje xx xxx teplotě xxx 5 °X nejdéle 3 xxxxxx.
Xxx xxxx xxxxxxxx 9.1.
3.27.5 kalibrační xxxxxx standardních xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx podle xxxx 5.3.3.1 x xxx xxxxxxxx (5.2). Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx 3.27.4 x vynecháním chloridu xxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 3 xxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x pomůcky
4.1 xxxxx s xxxxxxx xxxx x xxxxxx 100 xxxx 250 xx xxxxxxxx zpětným xxxxxxxxx
4.2 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx skla x xxxxxx 100 xx xx xxxxxxxxx uzávěrem x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx, Schott) xxx xxxxxxx x xxxxxxx
4.3 xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx x přesností xxxxx xxx ±2 °X
4.4 xX xxxx (xxx xxxxxxxxx xxxxx)
4.5 xxxxxxxxxx xxxxx (0,2 μx)
4.6 xxxxxxxxxxx
4.7 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.8 mechanická xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.9 xxxxxxxxxx aminokyselin xxxx xxxxxxxx XXXX x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx kolonovou xxxxxxxxxxxx x fotometrickým detektorem.
Kolona xx naplní xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx oddělení xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx jiných xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Průtok xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx zajišťují xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx ± 0,5 % xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx i xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx analyzátory xxxxxxxxxxxx je xxxxx xxxxxx v xxxxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x = 0,8 xxx/x x xxxxxxxx xxxxxxxxx mravenčí xxxxxxxx x oxidačního xxxxx. Xxxx analyzátory nezaručují xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx-xx hydrolyzát xxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselinu x/xxxx vysoké koncentrace xxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xX xxxxxxxxx hydrolyzátu na xxxxx 5 ml. Xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx nejvýše 40 °X.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxx 0,5 xx. Xxxxxx s xxxxxxx vlhkostí xx xxxx před xxxxxx xxxxxxx na vzduchu xxx xxxxxxx nepřesahující 50 °C xxxx xxx xxxxxxxx. Xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxx se xxxx xxxxxx xxxxxxxxx petroletherem (3.12).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx v krmivech x x xxxxxxxxx
Xx xxxxxxx baňky xx xxxxxx příslušné xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) x xxxxxxxxx xx 0,2 xx x xxxxx xx 100,0 ml xxxxxxxxx xxxxx (3.21). Xxxxx xx xxxxx 60 xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx magnetické xxxxxxxx (4.8). Xx xxxxxxx sedimentu xx xxxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xx kádinky x xxxxxx 100 xx.
Xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 50 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxxxxx xx přefiltruje xxxx xxxxxxxx xxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx do xxxxxxx x xxxxxx 100 ml, xX xx xxxxxx xx 2,20 pomocí xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.18), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx pomocí citronanového xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx odměrné xxxxx xxxxxxxxx velikosti x xxxxxx xx značku xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24).
Použije-li xx interní standard, xxxxx xx 1,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3) na xxxxxxx 100 xx odstředěného xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24).
Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 – chromatografie.
Nejsou-li extrakty xxxxxxxxxx týž xxx, xxxxxxxxxxx xx při xxxxxxx xxx 5 °X.
5.3 Xxxxxxxxx celkových xxxxxxxxxxxx
5.3.1 xxxxxxx
0,1 xx 1 x xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx xxxxxx s xxxxxxxxx 0,2 xx:
- do xxxxx s kulatým xxxx x xxxxxx 100 ml (4.1) xxx otevřenou xxxxxxxxx (5.3.2.3) xxxx
- do xxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxx 250 ml (4.1), xxxxxxxx-xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx
- xx nádoby x xxxxxx 100 ml xx šroubovací xxxxxxxx (4.2) (xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx 5.3.2.4).
Odvážená xxxx xxxxxx by xxxx xxx xxxxx dusíku xxx 10 mg x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 mg.
Baňka/nádoba xx xxxxxx do xxxxx x xxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx na 0 °X, potom se xxxxx 5 ml xxxxxxxx směsi (3.23) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx špičkou. Xxxxx/xxxxxx xx xxxxxx x xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx xx i x xxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 0 °X x ponechá se xxx 16 xxxxx. Xx 16 xxxxxxxx xx xxxxx z xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx činidlo se xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 x xxxxxxxxxx sodného (3.4).
Xxxx se pokračuje xxxxx 5.3.2.1.
5.3.2 xxxxxxxxx
5.3.2.1 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx
X xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.3.1 xx xxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.20) xxx, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx ani xx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx podle 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4.
5.3.2.2 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxx s kulatým xxxx x xxxxxx 100 xx nebo 250 ml (4.1) xxxx do xxxxxx x xxxxxx100 xx xx šroubovacím uzávěrem (4.2) xx xxxxxx 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) x přesností xx 0,2 xx. Xxxxxxxx část vzorku xx měla xxx xxxxx xxxxxx xxx 10 xx. Xxxxxxx xx xxxxx 25 xx hydrolyzační směsi (3.20) a xxxxxx xx xx vzorkem. Xxxx xx postupuje xxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx xxxxx 5.3.2.4.
5.3.2.3 xxxxxxxx xxxxxxxxx
Xx směsi x xxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1 nebo 5.3.2.2) xx xxxxxxx 3 xxxxxxxx xxxxxxx x směs se xxxxx do mírného xxxx pod xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxx 23 xxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx chladič promyje 5 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztoku (3.24). Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx se x xxxxxx lázni. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3.
5.3.2.4 xxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xx směsí xxxxxxxxxxx podle 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2 se xxxxxx do xxxxxxx (4.3) při 110 °X. Xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx narůstání xxxxx (x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látek) a xxxxxxx x výbuchu, xxxxxx xx šroubovací xxxxxx volně xx xxxxx. Nádoba xx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx (4.3) 23 hodin. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx, opatrně xx xxxxxxxxxx uzávěr x xxxxxxx xx xx xxxxx x xxxxxxx vodou. Baňka xx xxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxx pH (5.3.3) xx xxxxx baňky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx xxxxxxx x xxxxxx 250 xx nebo xx xxxxx x xxxxxxx xxxx o obsahu 250 xx.
Xxxx xx xxxxxxxxx podle 5.3.3
5.3.3 xxxxxx xX
Xxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx k xxxxxx má xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9), xxxxxxxxxx xxx úpravě xX xxxxx 5.3.3.1 xxxx 5.3.3.2.
5.3.3.1 xxx chromatografické xxxxxxx (4.9), vyžadující xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xx-xx xx xxxxxx xxxxx kyselin), doporučuje xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.27.3).
X takovém xxxxxxx xx xxxx odpařováním xxxxxxx do xxxxxxxxxxx 2,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.27.3).
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4. se xxxxxxx 2 xxxxx 1-xxxxxxxx (3.15).
Xx rotační xxxxxxx (4.7) xx xxxxx xxxxx na 5-10 xx za xxxxx xxx 40 °X. Xxxxx xx xx objem xxxxxxx xxxxxx pod 5 xx, xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx znovu.
pH xx upraví na 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18) x xxxxxxxxx xx podle xxxx 5.3.4.
5.3.3.2 pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9)
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 nebo 5.3.2.4 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx přidáním 17 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.17), xx stálého xxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx 40 °X.
xX xx upraví xx 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18) xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.3.4.
5.3.4 xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx (5.3.3.1 xxxx 5.3.3.2) s upraveným xX xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xx x xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24) se xxxxxx po xxxxxx.
Xxxxx-xx xxxxx použit vnitřní xxxxxxxx, xxxxxxx xx 2,00 ml vnitřního xxxxxxxxx (3.27.3) x xxxxx xx doplní xx značku citronanovým xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24). Xxxxxxxx xx promíchá.
Dále xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx (5.4)
Xxxxxx-xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx týž xxx, xxxxxxxxxxx xx xxx teplotě xxx 5 °X.
5.4 Chromatografie
Před xxxxxxxxxxxxxx musí mít xxxxxxx (5.2) x xxxxxxxxxx (5.3.4) pokojovou xxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx xx zfiltruje xxxxxxxxxxx xxxxxxx 0,2 μ (4.5). Výsledný xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx analyzátoru xxxxxxxxxxxx (4.9).
Xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx automaticky. Xxxxxx xx důležité, xxx xx xx xxxxxxx nastřikovalo stejné xxxxxxxx xxxxxxx ± 0,5 % xxx xxx analýze xxxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx, kdy xx xxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxx x aminokyselinám by xxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx vzorků xx možná xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx závisí xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Standard xxxx xxxxxx xx ředí xxxxxxxxxxxx tlumivým roztokem (3.24) tak, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 30 – 200 % xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx analyzátoru x xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx separovat xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx i xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. V xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx aminokyselin xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, by xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx poměry xxxxx x vrcholu xxxx. Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx obsahovat xxxxxxx 30 % xxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, které xxxxx xxx xxxxx přesně xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9).
Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxx sedla x xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx neměl xxxxxxxxxx 2:10 (pokud xx xxxxxxx xxxxx cyst(e)in, xxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nedostatečnou xxxxxxxx xxxxxxxxxx píků). Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxx 1:10.
Xxxxxx xxxx zaručit, xx xxxxx bude xxxxxxxxx xx "xxxxxxxxxx xxxxxxxx" a xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x vyjádření xxxxxxxx
Xxxxxx píků vzorků x xxxxxxxxx xx xxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v x xx kg vzorku.
g xxxxxxxxxxxxx na xx xxxxxx = X × X × XX × X / X × X × 1 000
Xx-xx použit xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx: X / X
X = xxxxxx xxxx hydrolyzátu xxxx xxxxxxxx
X = plocha xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
X = xxxxxx xxxx interního standardu x xxxxxxxxxxx nebo x xxxxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x kalibračním xxxxxxxxxxx xxxxxxx
XX = xxxxxxxxxxx váha xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x μmol/ml
V = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (x) (xxxxxxxxxx xx původní váhu xxxxx xx vzorek xxxxxxx nebo odtučněn)
F = celkový xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (5.3.4) x xx nebo xxxxxxx objem zředěného xxxxxxxx vypočteného xxxxx 6.1
Xxxxxx x xxxxxxx xx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx vypočítávají xx xxxx xxxxxx (X6X12X2X4X2, XX 240,30) x xxxxxxxx XX 120,15 (= 0,5 x 240,30).
Xxxxxxxxx xx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx jako methioninsulfon, xxx vypočítává xx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx XX methioninu: 149,21.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx zjišťuje po xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx MV.
6.1 Xxxxxxx objem xxxxxxxxx xxxxxxxx (X) xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (5.2) se vypočítá xxxxx xxxxxx vzorce:
F = 100 ml × (10 ml + 5 xx) / 10 ml × X&xxxx;xx / 10xx
X = objem xxxxxxxxxx extraktu
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx 1990 při xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxx směs xxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, premix). Xx xxxxxxxxx extrémů xxxx výsledky xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx uvedeny v xxxxxxxxxxx tabulce:
střední xxxxxxx x x/xx
|
Xxxxxxxxxx materiál |
Aminokyselina |
|||
|
Threonin |
cyst(e)in |
Methionin |
lysin |
|
|
Krmná xxxx xxx xxxxxxx |
6,94 x = 15 |
3,01 x = 17 |
3.27 x =.17 |
9,55 x = 13 |
|
Krmná xxxx xxx xxxxxxxx |
9,31 x = 16 |
3,92 n = 18 |
5,08 n = 18 |
13,93 n = 16 |
|
Xxxxxxxxxx koncentrát |
22,32 x = 16 |
5,06 x = 17 |
12,01 x = 17 |
47,74 x = 15 |
|
Premix |
58,42 x = 16 |
- |
90,21 x = 16 |
98,03 x = 16 |
x = počet xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx standardní xxxxxxxx xx dána xxxxxxxxxxx tabulkou:
standardní xxxxxxxx (Xx) xxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx x g/kg
|
Referenční xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs pro xxxxxxx |
0,13 x = 15 |
0,10 x = 17 |
0,11 n = 17 |
0,26 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxxx |
0,20 x = 16 |
0,11 x = 18 |
0,16 x = 18 |
0,28 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,48 n = 16 |
0,13 x = 17 |
0,27 x = 17 |
0,99 x = 15 |
|
Xxxxxx |
1.30 n = 16 |
_ |
2,19 n = 16 |
2,06 x = 16 |
x = xxxxx zúčastněných xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx (%) xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Sr)
|
Referenční xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxx |
1,9 x = 15 |
3,3 x = 17 |
3,4 x =.17 |
2,8 x = 13 |
|
Krmná xxxx xxx xxxxxxxx |
2,1 x = 16 |
2,8 x = 18 |
3,1 x = 18 |
2,1 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
2,7 x = 16 |
2,6 x = 17 |
2,2 n = 17 |
2,4 x = 15 |
|
Xxxxxx |
2,2 x = 16 |
- |
2,4 n = 16 |
2,1 x = 16 |
x = počet xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.2 Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx shora xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
Xxxxxxxxxxxxxxx standardní xxxxxxxx (XX) x g/kg
|
Referenční xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxx |
0,28 x = 15 |
0,30 x = 17 |
0,23 x = 17 |
0,30 x = 13 |
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxxx |
0,48 n = 16 |
0,34 n = 18 |
0,55 x = 18 |
0,75 n = 16 |
|
Xxxxxxxxxx koncentrát |
0,85 x = 16 |
0,62 x = 17 |
1,57 x = 17 |
1,24 x = 15 |
|
Premix |
2,49 x = 16 |
- |
6,20 x = 16 |
6,62 x = 16 |
n = xxxxx zúčastněných laboratoří
Variační xxxxxxxxxx (%) xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (XX)
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxx |
4,1 x = 15 |
9,9 n = 17 |
7,0 x = 17 |
3,2 n = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
5,2 n = 16 |
8,8 x = 18 |
10,9 x = 18 |
5,4 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
3,8 n = 16 |
12,3 x = 17 |
13,0 x = 17 |
3,0 n = 15 |
|
Xxxxxx |
4,3 x = 16 |
- |
6,9 x = 16 |
6,7 x = 16 |
x = xxxxx zúčastněných laboratoří
8. Xxxxxxx referenčních xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx certifikovaných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, jsou-li x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kalibračními xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxx k xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx měly xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx aminokyselin (xxx 3.27.4 a 3.27.5) a xxxxxxx xxxxxx (5.3.4) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx citronanovým xxxxxxxx xxxxxxxx xxx, xxx xx xxxxxxx ploch xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
9.2 Xxxxx xx x xxxxxxx hydrolyzátů xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, musí být xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Xxx xxxxxxx xxxx metody x krmiv obsahujících xxxx xxx 1 % chloridu (xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, doplňková xxxxxx) xxxx xxxxx x podhodnocení xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx xx xxxxx použít xxxxxxxxx postup.
ČÁST X XXXXXXXXX TUKŮ
1. Účel x oblast xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx tuku x xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, jejichž zkoušení xx xxxx xxxxx xxxxxxxx Rady 136/66/XXX xx xxx 22. xxxx 1996.
Xxxxx druhu x xxxxxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:
1.1 Xxxxxx X – xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, s výjimkou xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx X.
1.2 Xxxxxx X – celkový xxx
Xxxx metoda xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxx všechny xxxxx xxxxx. Používá xx xxx všechny xxxxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxxx tuk xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxx. xxxxx, xxxxxxxx, bramborové xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx podrobeny xxxxxxxxxx, xxxx vytlačování, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx).
1.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X, xxx xxxxxxxx X, xx třeba xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx X.
2. Princip
2.1 Postup X
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x zbytek xx xxxxxx a xxxxx.
2.2 Xxxxxx X
Xxxxxx xx zahřívá x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx a xxxxxxx zbytek se xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx A.
3. Xxxxxxx
3.1 xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx 40 x 50 °X. Xxxxxxx bromového čísla xxxx xxx xxxxx xxx 1 a xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx než 2 xx/100 xx
3.2 xxxxx xxxxx, xxxxxxx
3.3 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 3 xxx XXx/x
3.4 xxxxxxxxx prostředky, např. xxxxxxxxx, Xxxxx-xxxxxxxx.
4. Přístroje x pomůcky
4.1 Extrakční xxxxxxxx, xx sifonem (Xxxxxxxxx přístroj), xxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxx 10 xxxxx xx hodinu. X typu bez xxxxxx by xxxx xxx refluxní xxxxxxxx xxx 10 xx xx xxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x porositou v xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx 4.1.
4.3 Xxxxxxx, buď xxxxxxx xxxxxxxx xx 75 °X ± 3 °X, nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na 100 °X ± 3 °X.
5. Postup
5.1 Xxxxxx X (xxx xxx 8.1)
Xx extrakční xxxxxxx xx xxxxxx 5 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx (4.2) x xxxxxxxxx smotkem xxxx xxx xxxx.
Xxxxxxx se xxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.1) a xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xx suché, xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx úlomky xxxxx [1].
Xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxx xx xxxx 1,5 xxxxxx v xxxxxxx (4.3). Xxxxx se xxxxxxxxxxx x exsikátoru x zváží. Xxxx xx xxxxxxx 30 xxxxx, aby xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx 1 mg).
5.2 Xxxxxx X
Xx xxxxxxx x xxxxxx 400 xx xxxx xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 300 ml xx xxxxxx 2,5 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx (xxx xxx (8,2) x xxxxx xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.3) x úlomky pemzy. Xxxxxxx xx přikryje xxxxxxxxx xxxxx nebo xx kónická xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx varu xx malém xxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxx x vaří xx xx xxxx xxxxx xxxxxx. Během xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na stěnách xxxxxx.
Xxxx se ochladí x přidá xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx filtračního xxxxxxxxxx (3.4), aby xxx filtraci xxxxxxx xx ztrátám xxxx. Xxxxxxxx xx přes xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx vodou, až xx získá neutrální xxxxxxx. Provede se xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx žádný tuk. Xxxx xxxxxxxxxx ukazuje, xx xx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X.
Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxx x xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3) při xxxxxxx 100 °X ± 3 °X.
Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx zbytkem se xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (4.2) x xxxxxxxx xxxxxxx vaty xxx tuku. Patrona xx xxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.1) x xxxx xx xxxxxxxxx podle xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 5.1.
6. Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx zbytku se xxxxxxx jako procento xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx prováděných xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx:
- 0,2 % v xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx obsahu xxxx xxxxxx xxx 5 %,
- 4,0 % relativně x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xx 5 xx 10 %,
- 0,4 % x xxxxxxxxx xxxxxxx, při xxxxxx xxx 10 %.
8. Xxxxxxxx
8.1 X xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxx olejů a xxxx, které se xxxxxxx drtí nebo xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xx postupuje následujícím xxxxxxxx:
Xxxxxx se 20 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx a xxxxxx xx s 10 xxxx x xxxx xxxxx bezvodého síranu xxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx (3.1) xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxx extrakt xx xxxxxx xx 500 xx petroletherem (3.1) x xxxxxxxx xx. 50 xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx, předem xxxxxxx baňky, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx [2].
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, baňka xx xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 5.1.
Xxxxx xxxx xx xxxxxxxx jako procento xx xxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
(10 x + x) × 5
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxx xx první xxxxxxxx x gramech (xxxxxxx část xxxxxxxx)
x = xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx extrakci x xxxxxxx
8.2 X xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxx navážka xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx 5 x.
8.3 Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxx, xx xxxx před xxxxxxxxxx x extrakcí xxxxx xxxxxxx X xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
8.4 X xxxx 5.2 xx xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxx po filtraci xxxxxxxx použít xxxxx xxxx xxxxx vody xxxxxxx.
8.5 U xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx doba xxxxxx xxx 1,5 hod. Xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vysoušení, xxxxx může vést x xxxxxx xxxxxxxxx. Xx možno xxxxxx x mikrovlnnou troubu.
8.6 Xxx xxxxxx tuku xxx 15 % xx doporučuje provést xxxx hydrolýzou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx A x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. Xxxxxx xx xx xxxxx míry xx xxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx x xxxxxx.
XXXX X
XXXXXXXXX OLACHINDOXU
(2-[N-2-(hydroxyethyl)karbamoyl]-3-methylchinoxalin-N1,N4-dioxid)
1. Xxxx x oblast xxxxxxx
Xxxxx metodou se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxx xxxx x methanolu. Xxxxx olachindoxu xx xxxxxxxx xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC) xx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx UV xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 xxxxxxxx
3.2 xxxxxxxx, xxx XXXX
3.3 xxxx, xxx XXXX
3.4 xxxxxxx fáze xxx XXXX:
Xxxx xxxx (3.3) x xxxxxxxxx (3.2), 900 + 100 (X + V)
3.5 xxxxxxxxxx látka: xxxxx xxxxxxxxxx 2-[X-2-(xxxxxxxxxxxx)xxxxxxxxx]-3-xxxxxxxxxxxxxxxx-X1,X4-xxxxxx, X 851
3.5.1 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxx, 250 μx/xx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xx xx xxxxxx 50 mg xxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxxxxxx na 0,1 xx a xxxxx xxx 190 xx xxxx. Baňka xx xxxxxxx na 20 xxxxx do xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xx xxxxxxx x ultrazvukové xxxxx xx roztok xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx hliníkovou xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx. Xxxxx roztok xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx.
3.5.2 xxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxx, 25 μx/xx
10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.1) xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 xx, xxxxxx xx xx xxxxxx mobilní fází (3.4) a xxxxxxxx. Xxxxx xx obalí xxxxxxxxxx fólií x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx. Xxxxx roztok se xxxx xxxxxxxxxxx denně xxxxxxx.
3.5.3 kalibrační xxxxxxx
Xx xxxx odměrných xxxxx x obsahu 50 xx se odpipetuje 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0 a 20,0 ml pracovního xxxxxxxxxxxx roztoku (3.5.2). Xxxxxx se xxxxxxx xxxx (3.4) xx xxxxxx x promíchá. Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx fólií. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 7,5 a 10,0 μx xxxxxxxxxxx xx xx.
Xxxx xxxxxxx xx xxxx připravovat denně xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 xxxxxxxxxxxx lázeň
4.2 xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.3 zařízení XXXX s xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pole
4.3.1 xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 xx, xxxxxxx X18, 10 μx, xxxx srovnatelná xxxxxx
4.4 xxxxxxxxxx xxxxxx x póry 0,45 μx
5. Postup
Poznámka:
Olachindox xx xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx postupy xx xxxx provádět při xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx x xxxxxxx skla.
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx analyzovat xxx xxxxxxxx, zda xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx obohaceného xxxxxxxx takového xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx odpovídá xxxx xxxxxx xx xxxxxx X fortifikaci xx úroveň 50 xx/xx xx odpipetuje 10,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.1) xx kónické xxxxx o obsahu 250 xx x xxxxxx xx xxxxxx xx xxx 0,5 xx. Xxxxx xx 50 x xxxxxxxxxx xxxxxx, řádně se xxxxxxxx x nechá xx 10 minut xxxxxx, přičemž xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx se xxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Poznámka:
Pro xxxxx xxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxx podobného typu xxxx zkoušený xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx 50 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,01 x. Xxxxxxx xx do xxxxxxx baňky o xxxxxx 1000 xx, xxxxx se 100 xx methanolu (3.1) x xxxxx xx xxxxxx xx xxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Přidá xx 410 xx xxxx x ponechá xx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 15 xxxxx. Baňka xx xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxx se xxxxx 30 minut xx xxxxxxxx (4.2) x potom se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. 10,0 xx filtrátu xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 20 xx, xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xx přefiltruje xxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) (xxx xxx 9. Poznámky). Xxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxx HPLC (5.3).
5.3 Xxxxxxxxx XXXX
5.3.1 Xxxxxxxxx:
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx být použity xxxx podmínky, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3.1)
xxxxxxx xxxx (3,4): Xxxx xxxx (3.3) x methanolu (3.2), 900 + 100 (X + X)
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxx
xxxxxxxx xxxxxx xxxxx: 380 xx
xxxxx xxxxxxxx: 20 μx–100 μx
Xxxxxxxxx chromatografického xxxxxxx xx zkontroluje xxx, xx xx xxxxxxxxxx nastříkne xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5.3) xxxxxxxxxx 2,5 μx/xx, až xx xxxxxxx konstantních xxxxx xxxx a xxxxxxxxxx xxxx.
5.3.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx každý xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx nástřiků x xxxxxx se střední xxxxxxx výšky (plochy) xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxx xx použití xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxx) píků kalibračních xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x μg/ml xxxx xxxxxxxxx.
5.3.3 Xxxxxx vzorku
Provede xx xxxxxxx nástřiků xxxxxxxx xxxxxx (5.2) xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) píků xxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx hodnoty výšky (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μx/xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (5.3.2).
Xxxxx xxxxxxxxxxx ve xxxxxx x v xx/xx je xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = x × 1&xxxx;000 / x
xxx:
x = xxxxxxxxxxx olachindoxu v xxxxxxxx xxxxxx (5.2) x μg/ml
m = xxxxxxxx navážky xxxxxx x x (5.2)
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx může být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (xx-xxxxxxxxxxxxxx) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2) x kalibračního xxxxxxx (3.5.3), xxxxxxxxxxxx 5,0 μx/xx xxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (xx-xxxxxxxxxxxxxx)
Xxxxxxx vzorku (5.2) xx xxxxxxx xxxxxxxxx přiměřeného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.5.3). Xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku.
S xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x zředění xxxxxxxx by xxxx xxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Šířka xxxx x polovině xxxx xxxxx musí xxx x xxxxxxx ±10 % xxxxxxx šířky xxxx olachindoxu x xxxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx diodového pole
Výsledky xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při xxxxxx xxxxx maximální xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx musí xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vrcholu píku xx xxxxxxxxxxxxx stejný x nepřesností xxxxx xxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx ±2 xx;
x) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 400 nm xx xxxxx záznam xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx vykázána xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx odchylka xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx standardního analytu;
b) xxx xxxxxx délce xxxx 220 a 350 xx xx xxxxx spektrum xxxxxxxx, xxxxxxx x sestupu xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx od xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 až 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx kritéria je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx stejná maxima x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx spektra xx xxxxxxx xxxx.
Xxxx-xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, přítomnost xxxxxxx není potvrzena.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxx stanovení, xxxxxxxxxxx xx stejném xxxxxx při obsahu xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 20 xx/xx, xxxxx přesáhnout15 % xxxxxxx výsledku.
7.3 Výtěžnost
Pro xxxxxxxxx xxxxxxxx vzorek xxxx xxx výtěžnost xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx testu
V xxxxx XX xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxx xxxx xx 13 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx vzorky krmiva xxx selata, včetně xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
| xxxxxx 1 |
xxxxxx 2 |
xxxxxx 3 |
xxxxxx 4 |
|
|
X |
13 |
10 |
11 |
11 |
|
X |
40 |
40 |
44 |
44 |
|
xxxxxxx (mg/kg) |
- |
14,6 |
48,0 |
95,4 |
|
(Sr) (xx/xx) |
- |
0,82 |
2,05 |
6,36 |
|
(XX) (xx/xx) |
- |
1,62 |
4,28 |
8,42 |
|
XXx (%) |
- |
5,6 |
4,3 |
6,7 |
|
XXX (%) |
- |
11,1 |
8,9 |
8,8 |
|
xxxxxxxxx obsah (xx/xx) |
- |
15 |
50 |
100 |
|
xxxxxxxxx (%) |
- |
97,3 |
96,0 |
95,4 |
X: xxxxx laboratoří
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX: xxxxxxxxxx odchylka reprodukovatelnosti
CVr: xxxxxxxx koeficient xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxx xxxxxxxxxx reprodukovatelnosti
9. Xxxxxxxx
Xxxxxxx tato xxxxxx xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx obsahující více xxx 100 xx/xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx uspokojivé výsledky xxxxx navážkou xxxxxx x/xxxx zředěním xxxxxxxx (5.2) xxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x rozsahu kalibračního xxxxx (5.3.2).
[1] Xxxxx xx xx tuk xxxxxxxx zkoušet xx xxxxxxx, zamění se xxxxxx pemzy za xxxxxxxx xxxxxxx.
[2] Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx zkoušet xx xxxxxxx, zamění se xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx kuličky.