Směrnice Komise 98/64/ES
ze xxx 3. září 1998,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx x olachindoxu x krmivech x xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx 71/393/XXX
(Xxxx x xxxxxxxx pro XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/EHS xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx xxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro úřední xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxx x přistoupení Xxxxxxxx, Xxxxxx x Xxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxx, xx směrnice 70/373/XXX xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx z právních x správních xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx jejich xxxxxxx x složení, xx provádí za xxxxxxx xxxxx odběru xxxxxx a analýzy xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxx 79/373/EHS xx xxx 2. xxxxx 1979 x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx trh [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxx směrnicí Xxxxxx 97/47/ES [3], x směrnice Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. xxxx 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx xx zvláštním účelům xxxxxx [4], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/ES [5], stanoví, xx xxxxx aminokyselin a xxxx xxxx být xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx směrnice Xxxx 70/524/XXX xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 x doplňkových xxxxxxx x xxxxxxxx [6], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 98/19/XX [7], xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxx musí být xxxxxx xx označení, xxxxx je xxxx xxxxx přidána xx xxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxx xxxxxxxx Komise 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971, kterou xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [8], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 84/4/EHS [9], stanoví xxxxxx xxxxxxx mimo xxxx x xxx zjišťování xxxxxx tuku; xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx upravit;
vzhledem k xxxx, že xxxx xxx xxxxxxxxx analytické xxxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxx látek;
vzhledem x xxxx, že xxxxxxxx této xxxxxxxx xxxx v xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, že xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x krmivech xx xxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
X xxxxxxx xxxxxxxx Komise 71/393/EHS xx xxx "4. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx" xxxxxxxxx xxxxx X xxxxxxx této xxxxxxxx.
Článek 3
1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx předpisy xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx do 31. xxxxxxxx 1998. Xxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. xxxxx 1999.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx členskými xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx směrnici xxxx xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.
2. Xxxxxxx státy xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x platnost xxxxxxxx dnem xx xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 5
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 3. xxxx 1998.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[3] Xx. xxxx. X 211, 5.8.1977, x. 45.
[4] Úř. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[5] Xx. věst. X 125, 23.5.1996, x. 35.
[6] Xx. věst. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[7] Xx. xxxx. X 96, 28.3.1998, x. 39.
[8] Xx. xxxx. X 279, 2.12.1971, x. 7.
[9] Úř. xxxx. X 15, 18.1.1984, x. 28.
PŘÍLOHA
ČÁST X
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (syntetických x xxxxxxxxxxx) x xxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx a xxxxx) xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx použitelná pro xxxx aminokyseliny: xxxx(x)xx, xxxxxxxxx, xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, arginin, xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxx, fenylalanin, prolin, xxxxx, xxxxxxx x xxxxx.
Xxxx metoda nerozlišuje xxxx xxxxxx aminokyselin x nemůže také x xxxxxxxxxxxx rozlišovat xxxx formami X x X. Xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
2.1 Xxxxx aminokyseliny
Volné xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx. Zfiltrovaný xxxxxx se upraví xx pH 2,20. Xxxxxxxxxxxxx xx separují xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx se xx xxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx při 570 nm.
2.2 Vázané xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx závisí xx stanovovaných xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxx(x)xx x xxxxxxxxx xxxx být před xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx a xx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx neoxidovaných xxxxxx. Xxxxxxx aminokyseliny xxxxxxx x bodě 1 mohou xxx xxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxxxxx vzorku.
Oxidace xx xxxxxxx při 0 xX směsí xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxx oxidační činidlo xx rozloží dvojsíranem xxxxxx. Oxidovaný nebo xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (x = 6 xxx/x) xx 23 xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xX 2,20. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx iontoměničovou xxxxxxxxxxxxxx x stanovují xx xx reakci s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 570 nm (440 nm xxx xxxxxx).
3. Xxxxxxx
Xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx voda xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx &xx; 10 μX).
3.1 xxxxxxx xxxxxx, x = 30 %
3.2 xxxxxxxx xxxxxxxx, x = 98–100 %
3.3 xxxxx
3.4 xxxxxxxxx sodný
3.5 xxxxxxxx sodný
3.6 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, dihydrát
3.7 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x hustotě xxxxxxxxx 1,18 x/xx
3.8 xxxxxxxx xxxxx, dihydrát
3.9 2,2-xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx)
3.10 xxxxxxx xxxxx
3.11 ninhydrin
3.12 xxxxxxxxxxx, xxx xxxx 40–60 °X
3.13 xxxxxxxxx xxxx xxxx sloučenina xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx
3.14 xxxxx – xxxx (&xx; 10 xxx xxxxxxx)
3.15 1-xxxxxxx
3.16 xxxxxxxxxxxxx
3.16.1 xxxxxxxxxx látky uvedené x bodě 1; xxxxx xxxxxxxxxx neobsahující xxxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xx vakuu xxx X2X5 xxxx X2XX4 týden před xxxxxxxx
3.16.2 kyselina xxxxxxxx
3.16.3 xxxxxxxxxxxxxxx
3.17 hydroxid sodný, xxxxxx x = 7,5 xxx/x:
300 g XxXX (3.5) xx xxxxxxxx ve vodě x doplní do 1 xxxxx.
3.18 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxx c = 1 xxx/x:
40 x XxXX (3.5) xx rozpustí xx xxxx x xxxxxx xx 1 litru.
3.19 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x fenolu:
Smíchá xx 889 g xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2) xx 111 g vody x xxxxx xx 4,73 x xxxxxx (3.3).
3.20 xxxxxxxxxxxx xxxx, x = 6 xxx HCl/l s xxxxxxxxx 1 g xxxxxx/x:
X 492 ml XXx (3.7) xx xxxxx 1 x xxxxxx (3.3) x xxxxxx xx vodou xx 1 litru.
3.21 xxxxxxxxx xxxx, x = 6 xxx XXx/x x xxxxxxxxx 2% xxxxxxxxxxxxx:
8,2 xx XXx (3.7) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 900 xx xxxx, xxxxx xx 20 ml xxxxxxxxxxxxx (3.9) a xxxxxx vodou xx 1 litr (3.7 x 3.9 se xxxxx xxxxxxx xxxxx).
3.22 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, β = 6 %:
60 x kyseliny 5-sulfosalicylové (3.6) xx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxx vodou xx 1 xxxx.
3.23 xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxx permravenčí – xxxxx):
X malé xxxxxxx xx smíchá 0,5 ml xxxxxxxx xxxxxx (3.1) x 4,5 xx roztoku xxxxxxxx mravenčí x xxxxxxx (3.19); ponechá xx v xxxxx 1 xxxxxx xxx 20–30 °X, aby xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx ochladí v xxxxx x xxxxxxx xxxxx (15 minut).
Pozor:
Je xxxxx xxxxxxx kontaktu x xxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx.
3.24 xxxxxxxxxxx xxxxxxx roztok, x = 0,2 xxx Xx+/x, xX 2,20:
X xxxxxxxxx 800 xx xxxx xx xxxxxxxx 19,61 x xxxxxxxxx sodného (3,8), 5 xx thiodiglykolu (3.9), 1 g xxxxxx (3.3) x 16,50 xx HCl (3.7). pH se xxxxxx xx 2,20. Xxxxxx se vodou xx xxxxx 1 xxxxx.
3.25 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pro použitý xxxxxxxxxx (4.9)
3.26 ninhydrinové xxxxxxx připravované podle xxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxx (4.9)
3.27 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tyto xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx 5 °X.
3.27.1 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.16.1), x = 2,5 μxxx/xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx i xxxxxxxx připravené.
3.27.2 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx, x = 1,25 μxxx/xx
0,2115 g xxxxxxxx cysteové (3.16.2) x 0,2265 x xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx (3.16.3) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztoku (3.24) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx a doplní xx po xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztokem. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 12 xxxxxx. Tento roztok xx nepoužívá, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (3.27.1) xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a methioninsulfon.
3.27.3 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx vnitřního standardu, xxxx. norleucinu, c = 20 μxxx/xx
0,6560 x norleucinu (3.13) xx rozpustí x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztoku (3.24) v xxxxxxx xxxxx xx 250 xx x doplní xx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx tlumivým xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 6 xxxxxx.
3.27.4 kalibrační xxxxxx xxxxxxxxxxxx aminokyselin xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx, x = 5 xxxx/50 μx kyseliny xxxxxxxx a methioninsulfonu x x = 10 nmol/50 μx x ostatních xxxxxxxxxxxx
Xx 100 xx xxxxxxx xx rozpustí 2,2 x xxxxxxxx sodného (3.10) v 30 xx xxxxxxxxxxxxx tlumivého xxxxxxx (3.24). Xxxxxxx xx 4,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.27.1), 4,00 xx zásobního xxxxxxxxxxxx základního xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx (3.27.2) x 0,50 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3), xxxxx se xxxxxxx. xX xx upraví xx 2,20 hydroxidem xxxxxx (3.18).
Roztok xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx 50 xx odměrné xxxxx, xxxxxx xx xxxxxx citronanovým tlumivým xxxxxxxx (3.24) x xxxxxxx se.
Skladuje xx xxx teplotě xxx 5 °X xxxxxxx 3 měsíce.
Viz xxxx xxxxxxxx 9.1.
3.27.5 kalibrační xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx, připravenými podle xxxx 5.3.3.1 x xxx xxxxxxxx (5.2). Xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx podle 3.27.4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxx teplotě xxx 5 °C xxxxxxx 3 měsíce.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 xxxxx s kulatým xxxx x xxxxxx 100 xxxx 250 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
4.2 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx 100 xx xx šroubovým uzávěrem x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx, Schott) xxx xxxxxxx x xxxxxxx
4.3 xxxxxxx s nuceným xxxxxxxx x tepelnou xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxx ±2 °X
4.4 xX xxxx (xxx xxxxxxxxx xxxxx)
4.5 xxxxxxxxxx xxxxx (0,2 μx)
4.6 xxxxxxxxxxx
4.7 rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.8 mechanická xxxxxxxx nebo magnetická xxxxxxxx
4.9 analyzátor aminokyselin xxxx xxxxxxxx XXXX x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx ninhydrin, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx detektorem.
Kolona xx naplní xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, která xxxxxxxx vzájemné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx ninhydrin xxxxxxxxxxx látek. Průtok xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx čerpadla xx stálostí xxxxxxx ± 0,5 % xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x případě, xx xxxxxxxxxx vykazuje xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x = 0,8 xxx/x x xxxxxxxx xxxxxxxxx mravenčí kyselinu x oxidačního xxxxx. Xxxx analyzátory xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx určitých xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx mravenčí xxxxxxxx x/xxxx vysoké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx iontů. V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx kyseliny xxxx úpravou pH xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 xx. Xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx ve xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx 40 °X.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Vzorek se xxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxx 0,5 xx. Xxxxxx s xxxxxxx vlhkostí se xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx vzduchu xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °X nebo xxx xxxxxxxx. Xxxxxx x vysokým xxxxxxx xxxx se xxxx xxxxxx extrahují petroletherem (3.12).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x x xxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx množství (1–5 x) xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) x xxxxxxxxx na 0,2 xx x xxxxx xx 100,0 ml xxxxxxxxx xxxxx (3.21). Xxxxx xx třepe 60 xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.8). Po xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 100 xx.
Xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 50 xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x míchání xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxxxxx xx přefiltruje xxxx odstředí xxx, xxx xx odstranila xxxxxxx xxxxxxxxx. 10,0 xx odstředěného xxxxxxx xx přenese xx xxxxxxx x xxxxxx 100 xx, pH xx xxxxxx na 2,20 xxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx velikosti x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx roztokem (3.24).
Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se 1,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3) xx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxxx roztokem (3.24).
Xxxx xx pokračuje xxxxx bodu 5.4 – xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx-xx extrakty xxxxxxxxxx xxx xxx, xxxxxxxxxxx xx při xxxxxxx xxx 5 °X.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
5.3.1 xxxxxxx
0,1 xx 1 x xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) se xxxxxx x xxxxxxxxx 0,2 xx:
- xx xxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxx 100 xx (4.1) xxx xxxxxxxxx hydrolýzu (5.3.2.3) xxxx
- xx xxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxx 250 xx (4.1), xxxxxxxx-xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx sodíku xxxx
- xx xxxxxx x xxxxxx 100 ml xx šroubovací uzávěrem (4.2) (xxx uzavřenou xxxxxxxxx 5.3.2.4).
Xxxxxxxx xxxx xxxxxx by xxxx xxx obsah xxxxxx xxx 10 mg x xxxxx vlhkosti xxxxxxxxxxxxx 100 mg.
Baňka/nádoba xx xxxxxx xx xxxxx s xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx 0 °X, xxxxx xx xxxxx 5 xx xxxxxxxx směsi (3.23) x promíchá se xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx špičkou. Xxxxx/xxxxxx xx xxxxxx x xx lžící xxxxxxxxxxxxx xxxxx x vloží xx x x xxxxx s ledovou xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 0 °X x ponechá xx xxx 16 xxxxx. Xx 16 xxxxxxxx xx vyjme x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.4).
Xxxx se xxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1.
5.3.2 hydrolýza
5.3.2.1 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx
X xxxxxxxxxxx vzorku připravenému xxxxx 5.3.1 xx xxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.20) xxx, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4.
5.3.2.2 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorků
Do xxxxx x kulatým xxxx x obsahu 100 ml xxxx 250 ml (4.1) xxxx xx nádoby x xxxxxx100 xx xx šroubovacím xxxxxxxx (4.2) xx xxxxxx 0,1 až 1 x xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) x xxxxxxxxx xx 0,2 xx. Xxxxxxxx xxxx vzorku xx xxxx mít xxxxx dusíku xxx 10 mg. Opatrně xx xxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxx směsi (3.20) x xxxxxx xx xx vzorkem. Xxxx se xxxxxxxxx xxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx xxxxx 5.3.2.4.
5.3.2.3 xxxxxxxx hydrolýza
Ke xxxxx x baňce (xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2) se xxxxxxx 3 xxxxxxxx kuličky x xxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx dobu 23 xxxxx. Po xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxx chladič promyje 5 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24). Xxxxx se xxxxxx x xxxxxxx xx x xxxxxx lázni. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3.
5.3.2.4 xxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2 xx xxxxxx do xxxxxxx (4.3) při 110 °X. Xxx xx xxxxx xxxxx hodiny xxxxxxxxx narůstání xxxxx (x xxxxxxxx vyvíjení xxxxxxxx látek) x xxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxx. Nádoba xx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxx hodiny xx xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx (4.3) 23 xxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx, opatrně xx xxxxxxxxxx uzávěr x postaví xx xx xxxxx s xxxxxxx vodou. Xxxxx xx nechá xxxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxxx postupu xxx xxxxxx pH (5.3.3) xx xxxxx baňky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx kádinky x obsahu 250 xx nebo do xxxxx s kulatým xxxx x xxxxxx 250 ml.
Dále xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3
5.3.3 xxxxxx xX
Xxxxx xxxx, xxxxx toleranci x xxxxxx má xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9), postupujte xxx xxxxxx pH xxxxx 5.3.3.1 xxxx 5.3.3.2.
5.3.3.1 xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.9), vyžadující xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xx-xx xx xxxxxx xxxxx kyselin), xxxxxxxxxx xx xxxxxx vnitřní xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.27.3).
X xxxxxxx případě xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx do hydrolyzátu 2,00 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.27.3).
Do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4. xx xxxxxxx 2 xxxxx 1-xxxxxxxx (3.15).
Na rotační xxxxxxx (4.7) xx xxxxx xxxxx na 5-10 xx xx xxxxx xxx 40 °X. Xxxxx xx xx xxxxx náhodou xxxxxx xxx 5 xx, hydrolyzát je xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxx.
xX xx xxxxxx xx 2,20 roztokem hydroxidu xxxxxxx (3.18) x xxxxxxxxx se xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.3.2 pro xxxxxxx ostatní xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9)
Xxxxxxxxxxx připravené xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4 se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx přidáním 17 xx roztoku xxxxxxxxx sodného (3.17), xx xxxxxxx míchání x xxx zajištěné xxxxxxx xxx 40 °X.
xX xx xxxxxx xx 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18) xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.4 xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx (5.3.3.1 xxxx 5.3.3.2) x xxxxxxxxx xX se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx odměrné xxxxx x obsahu 200 xx x xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24) xx xxxxxx xx xxxxxx.
Xxxxx-xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx 2,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3) x xxxxx xx doplní xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztokem (3.24). Xxxxxxxx se xxxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx (5.4)
Xxxxxx-xx xxxxxxx xxxxxx analyzovány týž xxx, xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °X.
5.4 Chromatografie
Před xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx (5.2) a xxxxxxxxxx (5.3.4) xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx se zfiltruje xxxxxxxxxxx xxxxxxx 0,2 μ (4.5). Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxx ionexové xxxxxxxxxxxxxx xx analyzátoru xxxxxxxxxxxx (4.9).
Xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx je xxxxxxxx, xxx xx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ± 0,5 % xxx xxx analýze xxxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx poměr xxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx vzorků xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a analytického xxxxxxx. Standard nebo xxxxxx xx ředí xxxxxxxxxxxx tlumivým xxxxxxxx (3.24) xxx, xxx xxxxxx píku standardu xxxxxxx 30 – 200 % xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx aminokyselin xx xxxxx liší x xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx ionexu. Xxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx separovat jednotlivé xxxxxxxxxxxxx od xxxx xxxxxxxx i od xxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivních xxxxxxxxx. V rozsahu xxxxx xxxxxxxx by xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx reagovat xx xxxxx objemů xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx.
Xxx xxxxxxx equimolárního xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxx být xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx musí obsahovat xxxxxxx 30 % xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx mohou xxx xxxxx přesně xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx aminokyselin (4.9).
Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx překrývajících xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx přesahovat 2:10 (xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx(x)xx, xxxxxxxxx, threonin a xxxxx, je xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx píků). Xxx všechny xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx lepší než 1:10.
Xxxxxx xxxx zaručit, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx "xxxxxxxxxx xxxxxxxx" x xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v x xx xx xxxxxx.
x xxxxxxxxxxxxx xx kg xxxxxx = X × X × XX × X / X × X × 1 000
Xx-xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx se xxxxxxxx: D / X
X = plocha xxxx hydrolyzátu xxxx xxxxxxxx
X = xxxxxx xxxx kalibračního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x hydrolyzátu nebo x xxxxxxxx
X = xxxxxx xxxx interního xxxxxxxxx x kalibračním xxxxxxxxxxx xxxxxxx
XX = xxxxxxxxxxx xxxx stanovovaných xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x μmol/ml
V = xxxxxxxx navážky xxxxxx (g) (korigovaná xx xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx)
X = celkový xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (5.3.4) x xx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vypočteného xxxxx 6.1
Xxxxxx x xxxxxxx xx x hydrolyzátech xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx cysteová, xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx cystin (X6X12X2X4X2, XX 240,30) s xxxxxxxx XX 120,15 (= 0,5 x 240,30).
Xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx jako methioninsulfon, xxx xxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx MV xxxxxxxxxx: 149,21.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx zjišťuje po xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx XX.
6.1 Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (X) xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (5.2) se xxxxxxxx xxxxx tohoto xxxxxx:
X = 100 xx × (10 ml + 5 xx) / 10 ml × V ml / 10xx
X = objem xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxx xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx úrovni x xxxx 1990 při xxxxxxx čtyř xxxxxxx xxxxx (krmná xxxx xxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx koncentrát, premix). Xx vyloučení extrémů xxxx výsledky xxxxxxxxx xxxxxx x standardních xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
xxxxxxx xxxxxxx x x/xx
|
Xxxxxxxxxx materiál |
Aminokyselina |
|||
|
Threonin |
cyst(e)in |
Methionin |
lysin |
|
|
Krmná xxxx xxx xxxxxxx |
6,94 x = 15 |
3,01 x = 17 |
3.27 x =.17 |
9,55 x = 13 |
|
Krmná směs xxx xxxxxxxx |
9,31 n = 16 |
3,92 x = 18 |
5,08 n = 18 |
13,93 n = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
22,32 x = 16 |
5,06 x = 17 |
12,01 x = 17 |
47,74 x = 15 |
|
Xxxxxx |
58,42 x = 16 |
- |
90,21 x = 16 |
98,03 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx standardní xxxxxxxx je xxxx xxxxxxxxxxx tabulkou:
standardní odchylka (Xx) xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x g/kg
|
Referenční xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
0,13 n = 15 |
0,10 x = 17 |
0,11 x = 17 |
0,26 x = 13 |
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxxx |
0,20 x = 16 |
0,11 x = 18 |
0,16 x = 18 |
0,28 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,48 x = 16 |
0,13 x = 17 |
0,27 n = 17 |
0,99 n = 15 |
|
Xxxxxx |
1.30 x = 16 |
_ |
2,19 x = 16 |
2,06 n = 16 |
n = xxxxx zúčastněných xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx (%) vnitrlaboratorních xxxxxxxxxxxx odchylek (Xx)
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxx |
1,9 x = 15 |
3,3 n = 17 |
3,4 x =.17 |
2,8 x = 13 |
|
Krmná xxxx xxx xxxxxxxx |
2,1 x = 16 |
2,8 x = 18 |
3,1 x = 18 |
2,1 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
2,7 x = 16 |
2,6 n = 17 |
2,2 n = 17 |
2,4 n = 15 |
|
Xxxxxx |
2,2 n = 16 |
- |
2,4 x = 16 |
2,1 n = 16 |
x = počet xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.2 Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx standardních xxxxxxxx xxxxxxxxxxx ze shora xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
Xxxxxxxxxxxxxxx standardní xxxxxxxx (XX) v x/xx
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs pro xxxxxxx |
0,28 x = 15 |
0,30 x = 17 |
0,23 n = 17 |
0,30 x = 13 |
|
Xxxxx směs pro xxxxxxxx |
0,48 x = 16 |
0,34 x = 18 |
0,55 x = 18 |
0,75 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,85 x = 16 |
0,62 x = 17 |
1,57 x = 17 |
1,24 x = 15 |
|
Xxxxxx |
2,49 x = 16 |
- |
6,20 n = 16 |
6,62 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx (%) xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (SR)
|
Referenční xxxxxxx |
xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxx |
4,1 x = 15 |
9,9 n = 17 |
7,0 x = 17 |
3,2 n = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
5,2 x = 16 |
8,8 x = 18 |
10,9 x = 18 |
5,4 n = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
3,8 x = 16 |
12,3 x = 17 |
13,0 x = 17 |
3,0 n = 15 |
|
Premix |
4,3 x = 16 |
- |
6,9 x = 16 |
6,7 x = 16 |
x = xxxxx zúčastněných laboratoří
8. Xxxxxxx referenčních materiálů
Správné xxxxxxx uvedené metody xx ověřuje opakovaným xxxxxxx certifikovaných referenčních xxxxxxxxx, jsou-li k xxxxxxxxx. Doporučuje se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aminokyselin.
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx analyzátory xxxxxxxxxxxx xx se xxxx xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx standardů xxxxxxxxxxxx (xxx 3.27.4 x 3.27.5) a roztoků xxxxxx (5.3.4) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx rozsah xxxxxxxxx se musí xxxxxxxxxxxx xxx všechny xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxx citronanovým tlumivým xxxxxxxx tak, xxx xx dosáhlo xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
9.2 Xxxxx xx x analýze hydrolyzátů xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx zkoušek xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx výrobce.
9.3 Xxx xxxxxxx xxxx metody x krmiv xxxxxxxxxxxx xxxx xxx 1 % chloridu (xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx krmiva, xxxxxxxxx xxxxxx) xxxx dojít x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxx xx xxxxx použít xxxxxxxxx xxxxxx.
XXXX X XXXXXXXXX XXXX
1. Účel x oblast xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx semen x xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx podle xxxxxxxx Xxxx 136/66/XXX xx xxx 22. xxxx 1996.
Xxxxx xxxxx x složení xxxxxx xx pro analýzu xxxxxxx xxxxx xx xxxx následujících postupů:
1.1 Xxxxxx A – xxxxx xxxxxxxxxxxxxx tuky
Tato xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, x výjimkou xxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx xx okruhu xxxxxxx B.
1.2 Postup X – celkový xxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a xxx všechny krmné xxxxx. Xxxxxxx xx xxx všechny xxxxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (např. lepky, xxxxxxxx, bramborové xxxxxxxx x výrobky, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx).
1.3 Interpretace xxxxxxxx
Xx všech případech, xxx xx dosáhlo xxxxxxx výsledku postupem X, než xxxxxxxx X, je třeba xxxxxxxxx za platnou xxxxxxx xxxxx xxxxxxx X.
2. Xxxxxxx
2.1 Postup X
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Rozpouštědlo xx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxx x xxxxx.
2.2 Xxxxxx X
Xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X.
3. Xxxxxxx
3.1 xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx 40 x 50 °X. Xxxxxxx bromového xxxxx xxxx xxx xxxxx xxx 1 x xxxxxx po xxxxxxxxxx xxxxx než 2 xx/100 xx
3.2 síran xxxxx, xxxxxxx
3.3 kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 3 xxx XXx/x
3.4 xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, např. xxxxxxxxx, Xxxxx-xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x pomůcky
4.1 Extrakční xxxxxxxx, se xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx asi 10 xxxxx xx xxxxxx. X xxxx xxx xxxxxx xx měla xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx 10 xx xx xxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxxxx v petroletheru, x xxxxxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxx xxxx 4.1.
4.3 Xxxxxxx, buď xxxxxxx xxxxxxxx xx 75 °X ± 3 °X, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 100 °X ± 3 °X.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxx X (xxx xxx 8.1)
Xx xxxxxxxxx xxxxxxx xx naváží 5 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx (4.2) x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx.
Xxxxxxx xx xxxxxx xx extrakčního xxxxxxxxx (4.1) x xxxxxxxxxx šest xxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx baňky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx pemzy [1].
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxx xx suší 1,5 xxxxxx x sušárně (4.3). Xxxxx se xxxxxxxxxxx x exsikátoru x xxxxx. Xxxx xx xxxxxxx 30 xxxxx, xxx se xxxxxxxx, zda xx xxxxxxxx xxxx konstantní (xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx 1 xx).
5.2 Xxxxxx B
Do kádinky x xxxxxx 400 xx xxxx do xxxxxxx baňky x xxxxxx 300 xx xx xxxxxx 2,5 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx (viz xxx (8,2) x xxxxx xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.3) x úlomky xxxxx. Xxxxxxx se přikryje xxxxxxxxx sklem nebo xx kónická baňka xxxxxx refluxním chladičem. Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx malém xxxxxxx xxxx xx topné xxxxx x xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xx musí xxxxxxxx usazování částeček xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx.
Xxxx se xxxxxxx x xxxxx se xxxxxxxxxx množství filtračního xxxxxxxxxx (3.4), xxx xxx filtraci xxxxxxx xx xxxxxxx tuku. Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx vodou, až xx získá xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx, zda xxxxxxx xxxxxxxxxx žádný tuk. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xx se xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X.
Xxxxxxx filtrační xxxxx se zbytkem xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxx x xxxx se xxxxxxxx xxxxxx v horkovzdušné xxxxxxx (4.3) xxx xxxxxxx 100 °C ± 3 °X.
Xxxxxxx xxxxxxxxx papír x xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (4.2) x xxxxxxxx smotkem vaty xxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.1) x xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 5.1.
6. Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx jako xxxxxxxx xx vzorku.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xx výsledcích dvou xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx přesáhnout:
- 0,2 % x xxxxxxxxx xxxxxxx, při xxxxxx xxxx xxxxxx než 5 %,
- 4,0 % xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx od 5 xx 10 %,
- 0,4 % x xxxxxxxxx hodnotě, xxx xxxxxx xxx 10 %.
8. Poznámky
8.1 X xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxx olejů x xxxx, xxxxx se xxxxxxx xxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx homogenní xxxxxx, xx postupuje následujícím xxxxxxxx:
Xxxxxx xx 20 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxxxxx xx s 10 xxxx x xxxx xxxxx xxxxxxxxx síranu xxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx (3.1) xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxx extrakt xx xxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxxx (3.1) x promíchá xx. 50 xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx, předem xxxxxxx baňky, obsahující xxxxxx xxxxx [2].
Rozpouštědlo xx oddestilujte, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx odstavce xxxx 5.1.
Xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
(10 x + x) × 5
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxx xx první xxxxxxxx x xxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxxxxx)
x = xxxxxxxx xxxxxx xx druhé xxxxxxxx x xxxxxxx
8.2 X xxxxxxx, xxxxx mají xxxxx xxxxx tuku xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxx xx 5 x.
8.3 Xxxxxx xxx domácí xxxxxxx, která xxxx xxxxxx xxxxx xxxx, xx musí xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X xxxxxxx x bezvodým xxxxxxx xxxxxx.
8.4 V xxxx 5.2 xx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx horká xxxx xxxxx xxxx xxxxxxx.
8.5 U některých xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx 1,5 hod. Xx xxxx třeba xxxxxxx přílišnému vysoušení, xxxxx xxxx xxxx x nízkým xxxxxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx.
8.6 Xxx xxxxxx xxxx xxx 15 % xx xxxxxxxxxx provést xxxx hydrolýzou extrakci xxxxx xxxxxxx A x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. Xxxxxx to xx xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx v xxxxxx.
XXXX C
STANOVENÍ XXXXXXXXXXX
(2-[X-2-(xxxxxxxxxxxx)xxxxxxxxx]-3-xxxxxxxxxxxxxxxx-X1,X4-xxxxxx)
1. Xxxx a oblast xxxxxxx
Xxxxx metodou se xxxxxxx xxxxx olachindoxu x xxxxxxxx. Dolní xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx/xx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx x methanolu. Xxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografií (XXXX) xx xxxxxxxx xxxx xx použití XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 methanol
3.2 xxxxxxxx, pro HPCL
3.3 xxxx, xxx XXXX
3.4 xxxxxxx xxxx xxx XXXX:
Xxxx vody (3.3) x xxxxxxxxx (3.2), 900 + 100 (X + X)
3.5 xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx 2-[N-2-(hydroxyethyl)karbomoyl]-3-methylchinoxalin-N1,N4-dioxid, X 851
3.5.1 zásobní standardní xxxxxxxx roztok olachindoxu, 250 μg/ml
Do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 200 xx xx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxxxxxx na 0,1 xx x xxxxx xxx 190 xx xxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xx 20 xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Po xxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx na laboratorní xxxxxxx, doplní xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx. Baňka xx xxxxx xxxxxxxxxx fólií x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx. Xxxxx roztok xx musí připravovat xxxxxxx každý xxxxx.
3.5.2 xxxxxxxx standardní roztok xxxxxxxxxxx, 25 μg/ml
10,0 xx zásobního standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.1) xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx, xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxx fází (3.4) x promíchá. Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx fólií x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx. Xxxxx roztok se xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.
3.5.3 xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxx odměrných baněk x obsahu 50 xx se xxxxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0 x 20,0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.2). Xxxxxx xx mobilní xxxx (3.4) xx xxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 7,5 x 10,0 μx olachindoxu xx xx.
Xxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 ultrazvuková xxxxx
4.2 xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.3 zařízení XXXX x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
4.3.1 xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 mm, xxxxxxx X18, 10 μx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx
4.4 xxxxxxxxxx filtry x xxxx 0,45 μx
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxxxxx je xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx z xxxxxxx xxxx.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx analyzovat xxx xxxxxxxx, zda xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xxxxxxx na xxxxxxxxx xx provede analýzou xxxxxxxxxx krmiva xxxxxxxxxxx xxxxxxxx takového xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, které odpovídá xxxx xxxxxx xx xxxxxx X xxxxxxxxxxx xx xxxxxx 50 xx/xx se xxxxxxxxxx 10,0 xx zásobního xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.1) do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 ml x xxxxxx se xxxxxx xx xxx 0,5 xx. Přidá xx 50 x modelového xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx x nechá xx 10 xxxxx xxxxxx, xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Xxxxxxxx:
Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxx podobného xxxx xxxx xxxxxxxx vzorek x nesmí xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx 50 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1000 xx, xxxxx xx 100 xx xxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xx xxxxxx xx xxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Přidá xx 410 xx xxxx a xxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 15 xxxxx. Baňka se xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxx se xxxxx 30 xxxxx xx xxxxxxxx (4.2) x xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx filtrem. 10,0 xx xxxxxxxx xx přenese xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 20 ml, xxxxxx xx vodou xx xxxxxx x xxxxxxxx. Poměrná xxxx xx xxxxxxxxxxx membránovým xxxxxxx (4.4) (viz xxx 9. Xxxxxxxx). Xxxx xx pokračuje xxxxxxxxxx XXXX (5.3).
5.3 Xxxxxxxxx HPLC
5.3.1 Parametry:
Následující xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3.1)
xxxxxxx fáze (3,4): Xxxx xxxx (3.3) x xxxxxxxxx (3.2), 900 + 100 (X + V)
průtoková xxxxxxxx: 1,5–2 ml/min
detekční xxxxxx délka: 380 xx
xxxxx xxxxxxxx: 20 μx–100 μl
Stabilita xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx zkontroluje xxx, že xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5.3) xxxxxxxxxx 2,5 μx/xx, xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx a xxxxxxxxxx časů.
5.3.2 Kalibrační xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx. Sestrojí xx xxxx xx použití xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxx) xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x μg/ml jako xxxxxxxxx.
5.3.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxx xx xxxxxxx nástřiků xxxxxxxx xxxxxx (5.2) xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx roztoků a xxxxxx xx střední xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx olachindoxu x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μx/xx porovnáním x kalibračním xxxxxx (5.3.2).
Xxxxx xxxxxxxxxxx ve xxxxxx x x xx/xx xx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = x × 1&xxxx;000 / x
xxx:
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (5.2) x μx/xx
x = xxxxxxxx xxxxxxx vzorku x x (5.2)
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (xx-xxxxxxxxxxxxxx) xxxxx využitím detektoru x xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx extraktu vzorku (5.2) a kalibračního xxxxxxx (3.5.3), xxxxxxxxxxxx 5,0 μg/ml olachindoxu.
7.1.1 Xxxxxxxxx stanovením s xxxxxxxxx (co-chromatography)
Extrakt xxxxxx (5.2) xx obohatí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx nalezeného x extraktu xxxxxx.
X xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xx mělo xxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Šířka píku x xxxxxxxx xxxx xxxxx musí být x xxxxxxx ±10 % původní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx diodového xxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx kritérií:
a) xxx xxxxxx délce xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx musí být xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vrcholu píku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx detekčního xxxxxxx. Pro xxxxxxxx x diodovým polem xx xxxxx ±2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 400 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx píku xxxxxxxxxxxxx xxxxx od xxxxxxxxx částí xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx maxima a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) xxx xxxxxx délce xxxx 220 a 350 xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x sestupu xxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 až 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx stejná xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx sledovaných bodech xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx spektra xx vrcholu xxxx.
Xxxx-xx xxxxxxx x těchto xxxxxxxx xxxxxxx, přítomnost xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxx xxx obsahu xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 20 xx/xx, xxxxx přesáhnout15 % xxxxxxx xxxxxxxx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X xxxxx XX byl xxxxxxxx kruhový xxxx, xxx xxxx až 13 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx, včetně xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx uvedeny x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
| xxxxxx 1 |
xxxxxx 2 |
xxxxxx 3 |
xxxxxx 4 |
|
|
L |
13 |
10 |
11 |
11 |
|
A |
40 |
40 |
44 |
44 |
|
střední (mg/kg) |
- |
14,6 |
48,0 |
95,4 |
|
(Sr) (xx/xx) |
- |
0,82 |
2,05 |
6,36 |
|
(XX) (xx/xx) |
- |
1,62 |
4,28 |
8,42 |
|
XXx (%) |
- |
5,6 |
4,3 |
6,7 |
|
CVR (%) |
- |
11,1 |
8,9 |
8,8 |
|
xxxxxxxxx obsah (xx/xx) |
- |
15 |
50 |
100 |
|
xxxxxxxxx (%) |
- |
97,3 |
96,0 |
95,4 |
X: xxxxx laboratoří
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxx koeficient reprodukovatelnosti
9. Xxxxxxxx
Xxxxxxx tato metoda xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxx více xxx 100 xx/xx xxxxxxxxxxx, je možné xxxxxxx uspokojivé xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx x/xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (5.2) xxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.3.2).
[1] Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx.
[2] Pokud xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, zamění se xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx.