Xxxxxxxx Xxxxxx 98/64/XX
xx xxx 3. září 1998,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxxxxx, xxxx x olachindoxu x xxxxxxxx a xxxxxx se xxxx xxxxxxxx 71/393/XXX
(Xxxx s xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/EHS xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro úřední xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx pozměněnou Aktem x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxx a Švédska, x xxxxxxx na xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, zda xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx z právních x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx x složení, xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x analýzy xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxx 79/373/XXX xx xxx 2. xxxxx 1979 x xxxxxxx krmných xxxxx xx xxx [2], xxxxxxxxx pozměněná směrnicí Xxxxxx 97/47/XX [3], x xxxxxxxx Rady 93/74/XXX xx xxx 13. xxxx 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx xx zvláštním xxxxxx xxxxxx [4], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/XX [5], xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx směrnice Xxxx 70/524/XXX xx dne 23. listopadu 1970 x doplňkových látkách x xxxxxxxx [6], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 98/19/XX [7], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxx do xxxxxxx směsí;
vzhledem x xxxx, xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/393/EHS xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971, kterou xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství pro xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [8], naposledy pozměněná xxxxxxxx Xxxxxx 84/4/XXX [9], xxxxxxx metody xxxxxxx xxxx xxxx x pro xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx; že xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx upravit;
vzhledem k xxxx, xx xxxx xxx stanoveny xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx těchto xxxxx;
xxxxxxxx x tomu, že xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx v souladu xx stanoviskem Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX SMĚRNICI:
Xxxxxx 1
Členské státy xxxxxxx, xx analýzy xxx úřední xxxxxxxx xxxxxx aminokyselin, xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Článek 2
X xxxxxxx xxxxxxxx Komise 71/393/XXX xx xxx "4. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx" xxxxxxxxx částí X xxxxxxx xxxx směrnice.
Xxxxxx 3
1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx právní x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxxxx 1998. Xxxxxxx x nich xxxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx tyto předpisy xxxxxxxx xx 1. xxxxx 1999.
Tato opatření xxxxxxx členskými xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx musí xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx jejich xxxxxxx xxxxxxxxx. Způsob odkazu xx xxxxxxx členské xxxxx.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx znění xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x oblasti xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Článek 4
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x platnost xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských společenství.
Článek 5
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 3. xxxx 1998.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Fischler
člen Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. věst. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[3] Úř. věst. X 211, 5.8.1977, x. 45.
[4] Xx. věst. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[5] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
[6] Xx. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[7] Úř. xxxx. X 96, 28.3.1998, x. 39.
[8] Úř. xxxx. X 279, 2.12.1971, x. 7.
[9] Xx. xxxx. X 15, 18.1.1984, x. 28.
PŘÍLOHA
ČÁST X
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx) x xxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx x xxxxx) xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro xxxx xxxxxxxxxxxxx: cyst(e)in, xxxxxxxxx, xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, kyselinu xxxxxxxxxx, xxxxxx, histidin, isoleucin, xxxxxx, fenylalanin, xxxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxxx.
Xxxx metoda xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx aminokyselin x xxxxxx xxxx x aminokyselin xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx X x X. Xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
2. Princip
2.1 Xxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx extrahují xxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou. Současně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx makromolekuly xx xxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxxx a odstraňují xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx upraví xx xX 2,20. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 570 xx.
2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx proces xxxxxx xx stanovovaných xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxx(x)xx x methionin xxxx xxx před xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x hydrolyzátech neoxidovaných xxxxxx. Ostatní aminokyseliny xxxxxxx v xxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx v xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx vzorku.
Oxidace xx xxxxxxx xxx 0 xX směsí kyseliny xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx vzorek xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (x = 6 xxx/x) po 23 xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx na xX 2,20. Aminokyseliny xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx se xx reakci x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx detekcí xxx 570 xx (440 xx xxx xxxxxx).
3. Xxxxxxx
Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx voda xxxxxxx xxxxxxx (vodivost &xx; 10 μS).
3.1 xxxxxxx vodíku, x = 30 %
3.2 xxxxxxxx xxxxxxxx, x = 98–100 %
3.3 xxxxx
3.4 dvojsíran xxxxx
3.5 xxxxxxxx sodný
3.6 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx
3.7 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 1,18 g/ml
3.8 xxxxxxxx sodný, xxxxxxxx
3.9 2,2-xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx)
3.10 chlorid xxxxx
3.11 xxxxxxxxx
3.12 petrolether, xxx xxxx 40–60 °X
3.13 xxxxxxxxx xxxx xxxx sloučenina použitelná xxxx xxxxxxx standard
3.14 xxxxx – xxxx (&xx; 10 xxx xxxxxxx)
3.15 1-xxxxxxx
3.16 xxxxxxxxxxxxx
3.16.1 xxxxxxxxxx látky uvedené x xxxx 1; xxxxx sloučeniny xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodu. Xxxxxx xx ve xxxxx xxx X2X5 nebo X2XX4 xxxxx xxxx xxxxxxxx
3.16.2 xxxxxxxx xxxxxxxx
3.16.3 xxxxxxxxxxxxxxx
3.17 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 7,5 xxx/x:
300 g XxXX (3.5) se xxxxxxxx xx vodě x xxxxxx xx 1 litru.
3.18 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 1 mol/l:
40 x XxXX (3.5) xx xxxxxxxx xx xxxx a xxxxxx xx 1 xxxxx.
3.19 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx:
Xxxxxx se 889 x xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2) xx 111 g xxxx x xxxxx xx 4,73 g fenolu (3.3).
3.20 xxxxxxxxxxxx směs, x = 6 xxx XXx/x x xxxxxxxxx 1 x xxxxxx/x:
X 492 xx XXx (3.7) xx xxxxx 1 x xxxxxx (3.3) a xxxxxx xx xxxxx xx 1 xxxxx.
3.21 xxxxxxxxx směs, x = 6 mol XXx/x x přídavkem 2% thiodiglykolu:
8,2 xx XXx (3.7) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 900 xx vody, xxxxx xx 20 xx xxxxxxxxxxxxx (3.9) a xxxxxx xxxxx na 1 xxxx (3.7 x 3.9 xx xxxxx smíchat xxxxx).
3.22 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, β = 6 %:
60 x kyseliny 5-sulfosalicylové (3.6) se rozpustí xx vodě a xxxxxx vodou xx 1 xxxx.
3.23 oxidační xxxx (xxxxxxxx xxxxxxxxxxx – xxxxx):
X xxxx xxxxxxx xx xxxxxx 0,5 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.1) s 4,5 ml roztoku xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx (3.19); xxxxxxx xx v xxxxx 1 hodinu xxx 20–30 °X, xxx xx utvořila kyselina xxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxx xxxxx (15 minut).
Pozor:
Je xxxxx zamezit xxxxxxxx x xxxx x xxxxxxxx ochranný xxxx.
3.24 xxxxxxxxxxx tlumivý xxxxxx, x = 0,2 xxx Xx+/x, pH 2,20:
X přibližně 800 xx xxxx xx xxxxxxxx 19,61 x xxxxxxxxx xxxxxxx (3,8), 5 xx xxxxxxxxxxxxx (3.9), 1 g xxxxxx (3.3) a 16,50 ml XXx (3.7). xX xx xxxxxx na 2,20. Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxx 1 xxxxx.
3.25 eluční tlumivé xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (4.9)
3.26 xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx použitý xxxxxxxxxx (4.9)
3.27 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx xxx 5 °C.
3.27.1 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.16.1), x = 2,5 μxxx/xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx roztok xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.27.2 xxxxxxx xxxxxxxxxx základní xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx, c = 1,25 μxxx/xx
0,2115 g xxxxxxxx cysteové (3.16.2) x 0,2265 x xxxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí (3.16.3) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztoku (3.24) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx x doplní xx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztokem. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °X nejdéle 12 xxxxxx. Tento xxxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxxxx základní roztok (3.27.1) xxxxxxxx kyselinu xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx.
3.27.3 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx vnitřního standardu, xxxx. norleucinu, x = 20 μmol/ml
0,6560 x norleucinu (3.13) xx rozpustí x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztoku (3.24) v odměrné xxxxx na 250 xx a xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx pod 5 °X xxxxxxx 6 xxxxxx.
3.27.4 kalibrační xxxxxx xxxxxxxxxxxx aminokyselin pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxx, x = 5 xxxx/50 μx xxxxxxxx xxxxxxxx a methioninsulfonu x c = 10 xxxx/50 μl x xxxxxxxxx aminokyselin
Ve 100 ml xxxxxxx xx rozpustí 2,2 x xxxxxxxx sodného (3.10) v 30 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24). Přidají xx 4,00 ml xxxxxxxxx standardního základního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.27.1), 4,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx (3.27.2) x 0,50 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx základního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3), xxxxx xx používá. xX xx xxxxxx xx 2,20 xxxxxxxxxx xxxxxx (3.18).
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx převede xx 50 xx odměrné xxxxx, doplní xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx tlumivým xxxxxxxx (3.24) a xxxxxxx se.
Skladuje xx xxx xxxxxxx pod 5 °C nejdéle 3 xxxxxx.
Xxx xxxx xxxxxxxx 9.1.
3.27.5 xxxxxxxxxx xxxxxx standardních xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.3.1 a xxx xxxxxxxx (5.2). Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx 3.27.4 x vynecháním xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxx při teplotě xxx 5 °X xxxxxxx 3 xxxxxx.
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 xxxxx s xxxxxxx xxxx x obsahu 100 nebo 250 xx opatřená xxxxxxx xxxxxxxxx
4.2 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx skla x xxxxxx 100 xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx, Xxxxxx) xxx xxxxxxx v sušárně
4.3 xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxx xxx ±2 °X
4.4 xX xxxx (xxx xxxxxxxxx místa)
4.5 xxxxxxxxxx filtr (0,2 μx)
4.6 xxxxxxxxxxx
4.7 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.8 xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.9 xxxxxxxxxx aminokyselin xxxx xxxxxxxx HPLC x xxxxxxxxxxxxxx kolonou, xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx kolonovou xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, která xxxxxxxx vzájemné oddělení xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx ± 0,5 % xx xxxx zahrnující xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx analyzátory xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx hydrolyzát vykazuje xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x = 0,8 xxx/x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx separaci určitých xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx vysoké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxx případě xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx pH xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 xx. Xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx xx vakuu xxx xxxxxxx xxxxxxx 40 °C.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx x oky 0,5 xx. Vzorky s xxxxxxx vlhkostí se xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxx teplotě nepřesahující 50 °C xxxx xxx zmrazení. Xxxxxx x vysokým xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx petroletherem (3.12).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx x v xxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx příslušné xxxxxxxx (1–5 g) upraveného xxxxxx (5.1) s xxxxxxxxx na 0,2 xx x xxxxx xx 100,0 xx xxxxxxxxx směsi (3.21). Xxxxx xx xxxxx 60 minut xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.8). Xx xxxxxxx sedimentu se xxxxxxxxxx 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 100 xx.
Xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 50 xx roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxx xx magnetické míchačce xxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxxxxx se přefiltruje xxxx xxxxxxxx xxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 100 ml, xX xx xxxxxx xx 2,20 pomocí xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18), xxxxx xx roztok xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztoku (3.24) xx odměrné xxxxx xxxxxxxxx velikosti x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24).
Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx 1,00 xx xxxxxxxxx standardu (3.27.3) na xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx doplní po xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24).
Xxxx xx pokračuje xxxxx xxxx 5.4 – chromatografie.
Nejsou-li xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxx, xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx pod 5 °X.
5.3 Xxxxxxxxx celkových xxxxxxxxxxxx
5.3.1 xxxxxxx
0,1 xx 1 g xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) se xxxxxx s přesností 0,2 xx:
- xx xxxxx x xxxxxxx xxxx o obsahu 100 xx (4.1) xxx xxxxxxxxx hydrolýzu (5.3.2.3) xxxx
- xx xxxxx s kulatým xxxx x xxxxxx 250 xx (4.1), xxxxxxxx-xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx sodíku xxxx
- xx xxxxxx x xxxxxx 100 xx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.2) (xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx 5.3.2.4).
Xxxxxxxx část xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx dusíku xxx 10 xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 xx.
Xxxxx/xxxxxx xx xxxxxx do xxxxx x xxxxxxx xxxxx x ochladí xx xx 0 °X, xxxxx xx xxxxx 5 xx xxxxxxxx xxxxx (3.23) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx. Baňka/nádoba xx xxxxxx x xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x vloží xx i s xxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 0 °X x ponechá xx xxx 16 xxxxx. Xx 16 xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx činidlo xx xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 x dvojsíranu sodného (3.4).
Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1.
5.3.2 hydrolýza
5.3.2.1 xxxxxxxxx oxidovaných vzorků
K xxxxxxxxxxx xxxxxx připravenému xxxxx 5.3.1 xx xxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.20) xxx, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx. Podle xxxxxxxxx postupu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 nebo 5.3.2.4.
5.3.2.2 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxx x kulatým xxxx x xxxxxx 100 xx xxxx 250 xx (4.1) xxxx xx xxxxxx x xxxxxx100 ml xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.2) xx odváží 0,1 až 1 x xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) x xxxxxxxxx xx 0,2 mg. Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxx mít xxxxx xxxxxx asi 10 xx. Xxxxxxx xx xxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.20) a xxxxxx xx se xxxxxxx. Xxxx se postupuje xxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx xxxxx 5.3.2.4.
5.3.2.3 xxxxxxxx xxxxxxxxx
Xx směsi x baňce (xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2) se xxxxxxx 3 xxxxxxxx xxxxxxx x směs xx xxxxx xx mírného xxxx xxx zpětným xxxxxxxxx xx dobu 23 xxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 5 ml citronanového xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24). Xxxxx se odpojí x xxxxxxx xx x xxxxxx lázni. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3.
5.3.2.4 xxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx podle 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2 xx xxxxxx do sušárny (4.3) při 110 °X. Xxx xx xxxxx první xxxxxx xxxxxxxxx narůstání xxxxx (x důsledku vyvíjení xxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx. Po xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx zašroubuje x xxxxxxxx baňka xx xxxxxxx x sušárně (4.3) 23 xxxxx. Xx skončení xxxxxxxxx xx xxxxx vyjme xx sušárny, xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xx lázně s xxxxxxx xxxxx. Baňka xx nechá xxxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxxx postupu xxx xxxxxx pH (5.3.3) xx obsah xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztoku (3.24) xx kádinky x xxxxxx 250 xx xxxx xx xxxxx x kulatým xxxx o obsahu 250 xx.
Xxxx se xxxxxxxxx podle 5.3.3
5.3.3 xxxxxx xX
Xxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx analyzátor xxxxxxxxxxxx (4.9), xxxxxxxxxx xxx úpravě xX xxxxx 5.3.3.1 nebo 5.3.3.2.
5.3.3.1 pro chromatografické xxxxxxx (4.9), vyžadující xxxxxx koncentraci sodíku:
Pokud xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx vyžaduje xxxxxx koncentraci xxxxxx (xx-xx se xxxxxx xxxxx xxxxxxx), doporučuje xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.27.3).
X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx odpařováním xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 2,00 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.27.3).
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4. xx xxxxxxx 2 xxxxx 1-xxxxxxxx (3.15).
Na rotační xxxxxxx (4.7) xx xxxxx xxxxx xx 5-10 ml za xxxxx xxx 40 °X. Xxxxx xx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx 5 xx, hydrolyzát je xxxxx xxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxx xxxxx.
xX xx upraví xx 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18) x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.3.2 xxx xxxxxxx ostatní analyzátory xxxxxxxxxxxx (4.9)
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx opatrným přidáním 17 ml xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.17), xx stálého xxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx 40 °X.
xX xx xxxxxx xx 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.18) xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxx xx pokračuje xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.4 xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx (5.3.3.1 nebo 5.3.3.2) s xxxxxxxxx xX xx kvantitativně xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xx x xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24) xx xxxxxx po značku.
Nebyl-li xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx 2,00 ml vnitřního xxxxxxxxx (3.27.3) x xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx.
Xxxx xx přejde x xxxxxxxxxxxxxx (5.4)
Xxxxxx-xx roztoky xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxx, xxxxxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxx 5 °X.
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx musí mít xxxxxxx (5.2) x xxxxxxxxxx (5.3.4) xxxxxxxxx xxxxxxx. Směs xx xxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 0,2 μ (4.5). Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx aminokyselin (4.9).
Xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx důležité, xxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ± 0,5 % xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx vnitřního standardu. Xxxxxx xxxxx xxxxxx x aminokyselinám xx xxx být x xxxxxxxxxxxx roztocích x x xxxxxxxxx vzorků xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx stabilitě xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a analytického xxxxxxx. Xxxxxxxx nebo xxxxxx se ředí xxxxxxxxxxxx tlumivým roztokem (3.24) xxx, xxx xxxxxx píku xxxxxxxxx xxxxxxx 30 – 200 % xxxxxx xxxx xxx jednotlivé xxxxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx aminokyselin xx xxxxx liší v xxxxxxxxxx na xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx ionexu. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx separovat jednotlivé xxxxxxxxxxxxx od xxxx xxxxxxxx x od xxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivních xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxx působení xx xxx chromatografický xxxxxx xxxxxxxx reagovat xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, by xxxx xxx xxxxxxxx xxxx uvedené xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Tyto equimolární xxxxxxx xxxx obsahovat xxxxxxx 30 % xxxxxxxxxxx obsahu jednotlivých xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxx xxxxx přesně xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx aminokyselin (4.9).
Při xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx by poměr xxxxx sedla x xxxxxxx xxxx nižšího x xxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx neměl xxxxxxxxxx 2:10 (xxxxx se xxxxxxx xxxxx cyst(e)in, xxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxx, xx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nedostatečnou xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx). Xxx xxxxxxx ostatní xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx lepší xxx 1:10.
Xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx lysin bude xxxxxxxxx xx "xxxxxxxxxx xxxxxxxx" x xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxx x standardu se xxxx xxx každou xxxxxxxxxxx aminokyselinu x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x g xx xx vzorku.
g xxxxxxxxxxxxx xx kg xxxxxx = X × X × XX × F / X × X × 1 000
Xx-xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx: X / X
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx
X = plocha xxxx kalibračního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
X = xxxxxx xxxx interního standardu x xxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x kalibračním xxxxxxxxxxx roztoku
MV = xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v μxxx/xx
X = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (x) (korigovaná xx původní xxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx)
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx roztoku (5.3.4) x ml xxxx xxxxxxx xxxxx zředěného xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 6.1
Xxxxxx a cystein xx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx se xxxx xxxxxx (X6X12X2X4X2, XX 240,30) x xxxxxxxx MV 120,15 (= 0,5 x 240,30).
Xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx XX methioninu: 149,21.
Xxxxxxx volný xxxxxxxxx xx zjišťuje xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx výpočet xx xxxxxxx xxxxxx MV.
6.1 Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (X) xxx xxxxxxxxx volných xxxxxxxxxxxx (5.2) xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
X = 100 xx × (10 ml + 5 ml) / 10 ml × X&xxxx;xx / 10xx
X = xxxxx xxxxxxxxxx extraktu
7. Vyhodnocení xxxxxx
Xxxx xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx úrovni x xxxx 1990 xxx xxxxxxx čtyř xxxxxxx xxxxx (xxxxx xxxx xxx prasata, krmná xxxx pro broilery, xxxxxxxxxx koncentrát, premix). Xx xxxxxxxxx extrémů xxxx výsledky středních xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
xxxxxxx xxxxxxx x g/kg
|
Referenční xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxx |
6,94 x = 15 |
3,01 x = 17 |
3.27 x =.17 |
9,55 n = 13 |
|
Krmná xxxx xxx brojlery |
9,31 x = 16 |
3,92 x = 18 |
5,08 x = 18 |
13,93 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
22,32 x = 16 |
5,06 x = 17 |
12,01 x = 17 |
47,74 x = 15 |
|
Premix |
58,42 x = 16 |
- |
90,21 x = 16 |
98,03 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxx xxxxxxxxxxx tabulkou:
standardní xxxxxxxx (Xx) xxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx x g/kg
|
Referenční xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
0,13 x = 15 |
0,10 x = 17 |
0,11 x = 17 |
0,26 n = 13 |
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxxx |
0,20 x = 16 |
0,11 n = 18 |
0,16 x = 18 |
0,28 n = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,48 x = 16 |
0,13 x = 17 |
0,27 x = 17 |
0,99 n = 15 |
|
Premix |
1.30 n = 16 |
_ |
2,19 x = 16 |
2,06 n = 16 |
n = xxxxx xxxxxxxxxxxx laboratoří
Variační xxxxxxxxxx (%) vnitrlaboratorních xxxxxxxxxxxx odchylek (Xx)
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxx |
1,9 x = 15 |
3,3 x = 17 |
3,4 x =.17 |
2,8 x = 13 |
|
Krmná xxxx xxx xxxxxxxx |
2,1 x = 16 |
2,8 x = 18 |
3,1 x = 18 |
2,1 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
2,7 x = 16 |
2,6 x = 17 |
2,2 x = 17 |
2,4 x = 15 |
|
Xxxxxx |
2,2 x = 16 |
- |
2,4 x = 16 |
2,1 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx laboratoří
7.2 Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx standardních xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (XX) v g/kg
|
Referenční xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxx |
0,28 n = 15 |
0,30 x = 17 |
0,23 n = 17 |
0,30 x = 13 |
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxxx |
0,48 n = 16 |
0,34 x = 18 |
0,55 x = 18 |
0,75 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx koncentrát |
0,85 n = 16 |
0,62 x = 17 |
1,57 x = 17 |
1,24 n = 15 |
|
Xxxxxx |
2,49 x = 16 |
- |
6,20 x = 16 |
6,62 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx laboratoří
Variační xxxxxxxxxx (%) xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (XX)
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
4,1 x = 15 |
9,9 x = 17 |
7,0 x = 17 |
3,2 x = 13 |
|
Xxxxx směs pro xxxxxxxx |
5,2 x = 16 |
8,8 n = 18 |
10,9 n = 18 |
5,4 n = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
3,8 x = 16 |
12,3 x = 17 |
13,0 x = 17 |
3,0 x = 15 |
|
Xxxxxx |
4,3 x = 16 |
- |
6,9 x = 16 |
6,7 n = 16 |
n = xxxxx zúčastněných xxxxxxxxxx
8. Xxxxxxx referenčních xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx uvedené metody xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx certifikovaných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, jsou-li k xxxxxxxxx. Doporučuje xx xxxxxxxxx certifikovanými xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aminokyselin.
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxx k xxxxxxxx xxxx analyzátory xxxxxxxxxxxx xx se měly xxxxxxx xxxxxxxxxxx kalibračních xxxxxxx xxxxxxxxx aminokyselin (xxx 3.27.4 a 3.27.5) a xxxxxxx xxxxxx (5.3.4) xxxxxxxxx xx doporučené.
Lineární xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx všechny xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxx citronanovým tlumivým xxxxxxxx xxx, xxx xx xxxxxxx ploch xxxx uprostřed xxxxxx xxxxxxx.
9.2 Pokud xx x xxxxxxx hydrolyzátů xxxxxxx zařízení xxx xxxxxx účinnou kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx zkoušek xxxxxxxxxxxxxx x souladu x xxxxxxxxxxx výrobce.
9.3 Při xxxxxxx xxxx xxxxxx x krmiv xxxxxxxxxxxx xxxx než 1 % xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx) xxxx xxxxx x podhodnocení obsahu xxxxxxxxxx a xxxx xx proto xxxxxx xxxxxxxxx postup.
ČÁST X XXXXXXXXX TUKŮ
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx, jejichž zkoušení xx řídí podle xxxxxxxx Rady 136/66/XXX xx dne 22. xxxx 1996.
Podle druhu x xxxxxxx xxxxxx xx xxx analýzu xxxxxxx xxxxx ze xxxx následujících xxxxxxx:
1.1 Xxxxxx X – xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx rostlinného xxxxxx, s xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx X.
1.2 Postup X – xxxxxxx xxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a xxx všechny xxxxx xxxxx. Používá se xxx všechny xxxxxxxxx, x nichž není xxxxx tuk xxxxx xxxxxxxxxx xxx předchozí xxxxxxxxx (xxxx. xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx proteiny x xxxxxxx, které xxxx podrobeny xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx, vločkování x zahřívání).
1.3 Interpretace xxxxxxxx
Xx xxxxx případech, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx výsledku xxxxxxxx X, xxx postupem X, je xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx postupu X.
2. Xxxxxxx
2.1 Xxxxxx X
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Rozpouštědlo se xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx vysuší x xxxxx.
2.2 Postup X
Xxxxxx xx zahřívá x xxxxxxxxx chlorovdíkovou. Směs xx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxx zbytek xx xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx X.
3. Xxxxxxx
3.1 xxxxxxxxxxx x bodem xxxx mezi 40 x 50 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx menší xxx 1 a xxxxxx xx odpařování xxxxx xxx 2 xx/100 ml
3.2 xxxxx xxxxx, xxxxxxx
3.3 kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 3 xxx XXx/x
3.4 xxxxxxxxx prostředky, xxxx. xxxxxxxxx, Xxxxx-xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx (Xxxxxxxxx přístroj), refluxní xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx 10 xxxxx xx hodinu. X xxxx xxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx 10 xx xx xxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx látek xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx v xxxxxxx x požadavky xxxxx xxxx 4.1.
4.3 Xxxxxxx, buď xxxxxxx xxxxxxxx xx 75 °X ± 3 °X, xxxx horkovzdušná xxxxxxxx na 100 °X ± 3 °X.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxx X (xxx xxx 8.1)
Xx xxxxxxxxx xxxxxxx xx naváží 5 x vzorku s xxxxxxxxx xx 1 xx (4.2) x xxxxxxxxx smotkem xxxx xxx tuku.
Patrona xx xxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.1) x xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.1). Petroletherový xxxxxxx xx xxxx xx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx baňky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx [1].
Xxxxxxxxxxxx xx oddestiluje, xxxxxx x baňce xx xxxx 1,5 xxxxxx x xxxxxxx (4.3). Xxxxx xx xxxxxxxxxxx x exsikátoru x zváží. Suší xx xxxxxxx 30 xxxxx, aby se xxxxxxxx, xxx je xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx (xxxxxx hmotnosti xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx menší xxx 1 xx).
5.2 Xxxxxx X
Xx xxxxxxx x obsahu 400 xx xxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 300 xx xx odváží 2,5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx (viz xxx (8,2) a přidá xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.3) x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx se přikryje xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx refluxním xxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxx plameni xxxx xx topné xxxxx a xxxx xx po xxxx xxxxx hodiny. Xxxxx xxxx se xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxx x xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4), xxx xxx filtraci xxxxxxx xx xxxxxxx tuku. Xxxxxxxx se přes xxxxxxxxx xxxxxx filtrační xxxxx xxxxxxx tuku. Xxxxxx xx promývá xxxxxxxx xxxxx, xx xx získá neutrální xxxxxxx. Provede xx xxxxxxxx, xxx filtrát xxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xx vzorek xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx petroletherem podle xxxxxxx A.
Dvojitý xxxxxxxxx xxxxx xx zbytkem xx položí xx xxxxxxxx sklo x xxxx se půldruhé xxxxxx x horkovzdušné xxxxxxx (4.3) při xxxxxxx 100 °X ± 3 °X.
Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxx xx extrakční xxxxxxx (4.2) a xxxxxxxx xxxxxxx vaty xxx tuku. Xxxxxxx xx xxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.1) x xxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x třetího odstavce xxxx 5.1.
6. Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx zbytku se xxxxxxx xxxx procento xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xx výsledcích xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx:
- 0,2 % x absolutní xxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx nižším než 5 %,
- 4,0 % xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xx 5 xx 10 %,
- 0,4 % x xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxx xxx 10 %.
8. Xxxxxxxx
8.1 X xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx neumožňují odebrat xxxxxxxxxx homogenní vzorek, xx xxxxxxxxx následujícím xxxxxxxx:
Xxxxxx xx 20 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x smíchá xx x 10 xxxx i více xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx (3.1) xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxxx (3.1) x promíchá se. 50 ml xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx, obsahující xxxxxx pemzy [2].
Rozpouštědlo xx xxxxxxxxxxxx, baňka xx xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx odstavce xxxx 5.1.
Xxxxx tuku xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
(10 x + x) × 5
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxx xx první xxxxxxxx v xxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxxxxx)
x = xxxxxxxx zbytku xx xxxxx extrakci x gramech
8.2 U xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx obsah tuku xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx 5 g.
8.3 Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxx mají xxxxxx xxxxx vody, xx musí xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
8.4 X xxxx 5.2 se xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxx.
8.5 U xxxxxxxxx xxxxx se xxxx xxxxxxxxxx doba sušení xxx 1,5 hod. Xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx x nízkým xxxxxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx.
8.6 Xxx xxxxxx xxxx xxx 15 % xx doporučuje provést xxxx hydrolýzou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx A x následně extrakci xxxxx postupu B. Xxxxxx to xx xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx a xxxxx xxxx v xxxxxx.
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXXX
(2-[X-2-(xxxxxxxxxxxx)xxxxxxxxx]-3-xxxxxxxxxxxxxxxx-X1,X4-xxxxxx)
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx metodou se xxxxxxx xxxxx olachindoxu x krmivech. Dolní xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 5 mg/kg.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx olachindoxu xx xxxxxxxx xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xx xxxxxxxx xxxx xx použití UV xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 methanol
3.2 xxxxxxxx, xxx XXXX
3.3 xxxx, xxx XXXX
3.4 xxxxxxx xxxx pro XXXX:
Xxxx vody (3.3) x xxxxxxxxx (3.2), 900 + 100 (X + X)
3.5 xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx 2-[X-2-(xxxxxxxxxxxx)xxxxxxxxx]-3-xxxxxxxxxxxxxxxx-X1,X4-xxxxxx, X 851
3.5.1 zásobní xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxx, 250 μg/ml
Do xxxxxxx xxxxx x obsahu 200 xx se xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.5) s xxxxxxxxx na 0,1 xx x xxxxx xxx 190 xx xxxx. Baňka xx xxxxxxx xx 20 xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xx xxxxxxx z ultrazvukové xxxxx xx roztok xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, doplní vodou xx značku x xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x uschovává v xxxxxxxxxx. Tento roztok xx xxxx připravovat xxxxxxx xxxxx měsíc.
3.5.2 xxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxx, 25 μx/xx
10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.1) xx přenese do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx, xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.4) a xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.
3.5.3 xxxxxxxxxx roztoky
Do xxxx odměrných xxxxx x xxxxxx 50 xx xx xxxxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0 x 20,0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.2). Xxxxxx se xxxxxxx xxxx (3.4) po xxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xx obalí xxxxxxxxxx xxxxx. Tyto xxxxxxx xxxxxxxxxx 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 7,5 x 10,0 μx xxxxxxxxxxx xx xx.
Xxxx roztoky xx xxxx xxxxxxxxxxx denně xxxxxxx.
4. Přístroje a xxxxxxx
4.1 ultrazvuková xxxxx
4.2 xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.3 xxxxxxxx XXXX s proměnnou xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
4.3.1 xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, xxxxxxx C18, 10 μx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx
4.4 membránové xxxxxx x xxxx 0,45 μx
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx světlo. Xxxxxxx postupy xx xxxx provádět při xxxxxxxx světle xxxx x xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx se xxxx xxxxxx analyzovat xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx olachindox xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx látky.
5.1.2 Xxxxxxx na xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxx X xxxxxxxxxxx xx xxxxxx 50 xx/xx se odpipetuje 10,0 ml zásobního xxxxxxxxxxxx základního roztoku (3.5.1) xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx x xxxxxx xx xxxxxx xx xxx 0,5 xx. Xxxxx xx 50 g modelového xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx x xxxxx xx 10 xxxxx xxxxxx, přičemž xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xx přejde x xxxxxxxx (5.2).
Xxxxxxxx:
Xxx xxxxx této xxxxxx xx xxx modelové xxxxxx xxxxxxxxx typu xxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx obsahovat xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx 50 g xxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,01 g. Xxxxxxx se xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1000 xx, xxxxx xx 100 xx methanolu (3.1) x xxxxx xx xxxxxx xx pět xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Přidá xx 410 xx xxxx a xxxxxxx xx x ultrazvukové xxxxx dalších 15 xxxxx. Xxxxx xx xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx, dále xx xxxxx 30 xxxxx xx xxxxxxxx (4.2) x potom xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx filtrem. 10,0 ml filtrátu xx xxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 20 xx, xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxxxx část xx přefiltruje xxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) (xxx xxx 9. Poznámky). Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx HPLC (5.3).
5.3 Xxxxxxxxx XXXX
5.3.1 Xxxxxxxxx:
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx být použity xxxx podmínky, xx xxxxxxxxxxx, xx dávají xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3.1)
xxxxxxx xxxx (3,4): Xxxx xxxx (3.3) x xxxxxxxxx (3.2), 900 + 100 (X + X)
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxx
xxxxxxxx xxxxxx xxxxx: 380 xx
xxxxx xxxxxxxx: 20 μx–100 μx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxx, xx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx (3.5.3) obsahující 2,5 μx/xx, xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx píků a xxxxxxxxxx časů.
5.3.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx kalibrační xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx střední xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxx xxx každou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx hodnot xxxxx (xxxxx) xxxx kalibračních xxxxxxx jako xxxxxxx x příslušných koncentrací x μg/ml xxxx xxxxxxxxx.
5.3.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2) xxx použití xxxxxxxx xxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xx střední xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μx/xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (5.3.2).
Xxxxx olachindoxu ve xxxxxx x x xx/xx xx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = x × 1&xxxx;000 / x
xxx:
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx vzorku (5.2) x μx/xx
x = xxxxxxxx navážky vzorku x x (5.2)
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx může být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx stanovením x xxxxxxxxx (xx-xxxxxxxxxxxxxx) xxxxx využitím xxxxxxxxx x diodovým polem, xxxxxxx xx porovnávají xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.3), obsahujícího 5,0 μx/xx olachindoxu.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxx (co-chromatography)
Extrakt vzorku (5.2) xx xxxxxxx xxxxxxxxx přiměřeného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.3). Xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku.
S xxxxxxx na přidané xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxx ke xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Šířka xxxx x xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxx x rozmezí ±10 % xxxxxxx xxxxx xxxx olachindoxu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx diodového xxxx
Xxxxxxxx xx vyhodnocují xxxxx xxxxxxxxxxxxx kritérií:
a) xxx xxxxxx xxxxx maximální xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx musí být xxxxxx xxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx xxxx xx chromatogramu xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxxxx xxxxxxx. Pro xxxxxxxx x diodovým xxxxx xx xxxxx ±2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx mezi 220 x 400 xx xx nesmí záznam xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x standardu xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit xx xxxxxxxxx částí xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx dvěma xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx analytu;
b) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 a 350 xx se xxxxx xxxxxxxx vzestupu, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx kritéria xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx sledovaných xxxxxx xxxxxxxx xxxx spektry xxxxxxxxxxx nikde 15 % absorbance spektra xx xxxxxxx píku.
Není-li xxxxxxx x těchto xxxxxxxx splněno, přítomnost xxxxxxx xxxx potvrzena.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 20 mg/kg, xxxxx xxxxxxxxxx15 % xxxxxxx xxxxxxxx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx modelový xxxxxx xxxx xxx výtěžnost xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X xxxxx XX xxx xxxxxxxx kruhový xxxx, xxx němž až 13 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx krmiva xxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxx modelového vzorku. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x následující tabulce:
|
| xxxxxx 1 |
xxxxxx 2 |
xxxxxx 3 |
xxxxxx 4 |
|
|
L |
13 |
10 |
11 |
11 |
|
A |
40 |
40 |
44 |
44 |
|
střední (xx/xx) |
- |
14,6 |
48,0 |
95,4 |
|
(Xx) (xx/xx) |
- |
0,82 |
2,05 |
6,36 |
|
(XX) (xx/xx) |
- |
1,62 |
4,28 |
8,42 |
|
XXx (%) |
- |
5,6 |
4,3 |
6,7 |
|
XXX (%) |
- |
11,1 |
8,9 |
8,8 |
|
xxxxxxxxx xxxxx (xx/xx) |
- |
15 |
50 |
100 |
|
xxxxxxxxx (%) |
- |
97,3 |
96,0 |
95,4 |
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxx xxxxxxxxxx opakovatelnosti
CVR: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
9. Xxxxxxxx
Xxxxxxx tato xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx více xxx 100 xx/xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx uspokojivé xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx x/xxxx xxxxxxxx extraktu (5.2) xxx, xxx xx xxxxxxx koncentrace x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.3.2).
[1] Pokud xx xx tuk xxxxxxxx zkoušet xx xxxxxxx, xxxxxx se xxxxxx pemzy xx xxxxxxxx kuličky.
[2] Pokud xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx.