Xxxxx xxxxxxxx Komise 95/32/XX
xx dne 7. xxxxxxxx 1995
x metodách xxxxxxx nezbytných xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
(Xxxx x xxxxxxxx xxx EHP)
KOMISE EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx směrnici Xxxx 76/768/XXX xx xxx 27. července 1976 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx států xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 94/32/XX [2], x xxxxxxx na čl. 8 odst. 1 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxx, xx se xx xxxxxxxx 76/768/EHS xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx dodržení xxxxxxxx předepsaných xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxxxxx xxxxxxxx metody xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xx nejdříve; xx xxxxxxx metody xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx 80/1335/XXX [3] xx xxxxx xxxxxxxx 87/143/XXX [4], xxxxxxxx 82/434/XXX [5] xx xxxxx xxxxxxxx 90/207/XXX [6] x xx xxxxxxxxxx 83/514/EHS [7], 85/490/EHS [8] x 93/73/XXX [9];
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxx x stanovení xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx sorbové, xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx prostředcích jsou xxxxxx krokem;
vzhledem x xxxx, že xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 76/768/EHS xxxxxxxxxxx xxxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx nezbytné xxxxx x xxxxxxxxx xxxx, xxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx:
- xxxxx x xxxxxxxxx kyseliny xxxxxxxx, xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxx,
- důkaz a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x příloze.
Xxxxxx 2
1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. xxxx 1996. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx opatření přijatá xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx takový xxxxx xxx xxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx státy.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx znění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxx x oblasti xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Článek 3
Xxxx směrnice xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství.
Xxxxxx 4
Xxxx směrnice xx xxxxxx členským xxxxxx.
V Bruselu dne 7. července 1995.
Za Xxxxxx
Xxxx Bonino
členka Komise
[1] Xx. věst. X 262, 27.9.1976, x. 169.
[2] Úř. xxxx. X 181, 15.7.1994, x. 31.
[3] Úř. věst. X 383, 31.12.1980, x. 27.
[4] Xx. xxxx. X 57, 27.2.1987, x. 56.
[5] Xx. xxxx. X 185, 30.6.1982, x. 1.
[6] Xx. věst. X 108, 28.4.1990, x. 92.
[7] Úř. xxxx. X 291, 24.10.1983, x. 9.
[8] Xx. xxxx. X 295, 7.11.1985, x. 30.
[9] Xx. věst. X 231, 14.9.1993, x. 34.
XXXXXXX
X. XXXXX A XXXXXXXXX KYSELINY BENZOOVÉ, XXXXXXXX 4XXXXXXXXXXXXXXX, KYSELINY XXXXXXX, XXXXXXXX SALICYLOVÉ X XXXXXXXX XXXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX
1. Xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx benzoové, xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx, kyseliny xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx prostředcích. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx důkazu xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, stanovení xxxxxxxx propionové a xxxxxxxxx xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, kyseliny xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx.
2. Xxxxxxxx
Xxxxxxxx kyseliny xxxxxxxx, xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx stanovená xxxxx xxxxxxx xx vyjádří x hmotnostních procentech xxxxxxx kyselin.
A. XXXXX
1. Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx extrakt analyzuje xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx (TLC) a xxxxxxx chromatografií ("xxxxxxxxxxxx xx desce"). X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) nebo, v xxxxxxx xxxxxxxx propionové, xxxxxxxx chromatografií (XX).
2. Xxxxxxx xxxxxxx
2.1 Xxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx musí xxx čistoty p.a. Xxxx xxx použita xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
2.2 Xxxxxx
2.3 Xxxxxxxxxxxx
2.4 Xxxxxxxxxxx
2.5 Xxxxxx
2.6 xXxxxx
2.7 Xxxxxxx, tekutý
2.8 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, 4 M
2.9 Xxxxxxxx draselný, 4 X xxxxx xxxxxx
2.10 Xxxxxxx xxxxxxxx, XxXx2·2X2X
2.11 Xxxxxxxxx lithný, Xx2XX3
2.12 2Xxxx2‘xxxxxxxxxxx
2.13 Kyselina 4xxxxxxxxxxxxxxx
2.14 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx
2.15 Xxxxxxxx xxxxxxxx
2.16 Xxxxxxxx xxxxxxx
2.17 Xxxxxxxx propionová
2.18 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xx 0,1 % (x/X) xxxxxxx (100 xx/100 xx) xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxxx přísad (2.13 xx 2.17) x xxxxxxxxxxxxx.
2.19 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
0,5 % roztok 2brom2‘acetonaftonu (2.12) v xxxxxxxxxxxx (2.4) (50 mg/10 xx). Xxxxx xxxxxx xx měl být xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxx.
2.20 Roztok xxxxxxxxxxxx
0,3 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (2.11) xx vodě (300 xx/100 xx). Xxxxx xxxxxx xx měl xxx xxxxxxxxxxx čerstvý.
2.21 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
Xxxxxx (2.5)/aceton (2.2) (20: 0,5, X/X)
2.22 Tekutý parafin (2.7)/xxxxxx (2.6) (1:2, X/X)
3. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxxx vybavení
3.1 Xxxxx lázeň nastavitelná xx xxxxxxx 60 °X
3.2 Vyvíjecí komora
3.3 Xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 254 x 366 xx
3.4 Hotové xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx 60, xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, 20 × 20 xx, xxxxxxxx xxxxxx 0,25 mm x xxxxxxxxxxxx xxxxx 2,5 × 20 xx (Merk 11845 xxxx xxxxxxxxxxxx)
3.5 Xxxxxxxxxxxxxx xx 10 μl
3.6 Xxxxxxxxxxxxxx xx 25 μx
3.7 Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx teplotu až 105 °C
3.8 Erlenmeyerovy xxxxx na 50 x 200 xx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx
3.9 Xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx 90 mm, Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxüxx, Xxxxxxxxx Xx. 5892, xxxx xxxxxxxxxxxx
3.10 Xxxxxxxxxxx indikátorový xxxxxxx, xX 1 – 11
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx lahvičky xx 5 xx
3.12 Xxxxxxx xxxxxxx odparka (Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx)
3.13 Xxxxx xxxxx
4. Xxxxxx
4.1 Příprava xxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 50 xx xx zabroušenou xxxxxx (3.8) xx odváží xxxxxxxxx 1 x xxxxxx. Přidají xx xxxxx xxxxx 4 X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (2.8) x 40 xx xxxxxxx (2.2). X xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx xxxxx, xx xxxx být přidáno 20 xxxxx 4 X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (2.8). Pomocí indikátorového xxxxxxx (3.10) xx xxxxxxxxxxx, zda xx xX xxxxxxxxx 2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x xx xxxx jedné xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx extrakci xxxxxxxxxxxxx přísad xx xxxxxxxxx xxxx, xxxx xx opatrně xxxxxxx xx xxx 60 °X, aby xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxx xx zchladí xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx filtrační xxxxx (3.9) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky.
20 xx xxxxxxxx xx převede xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 200 xx, xxxxx xx 20 xx vody x xxxxxxxx xx. xX xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xx 10 xxxxxx 4 X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (2.9) xx xxxxxxx indikátorového xxxxxxx (3.10).
Xxxxx xx 1 g xxxxxxxx xxxxxxxxxx (2.10) x xxxxx se xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.9) xx dělicí xxxxxxx xx 250 xx xxxxxxxxxx 75 ml xxxxxxxxxxxxx (2.3) x xxxxx se třepe xxxxx xxxxxx. Vrstvy xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx vrstva xx odpustí xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 250 xx. Etherová xxxxxx se xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxx indikátorového xxxxxxx (3.10) xx xX vodného roztoku xxxxxx na xxxxxxxxx 2 okyselením 4 X xxxxxxxxx chlorovodíkovou (2.8). Xxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx (2.3), xxxxx se xxxxxxxxx a silně xxxxxxxxxx jednu xxxxxx; xxxxxx xx nechají xxxxxxx x etherová xxxxxx se xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (3.12). Xxxxx vrstva xx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx xx odpaří xxxxx xx xxxxx a xxxxxx se xxxxx xxxxxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxx (2.3). Xxxxxx se xxxxxxx xx vzorkovací xxxxxxxx (3.11).
4.2 Xxxxxxxxxxxxxx na xxxxx vrstvě
Na xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxx chromatografii xx xxxxx xxxxxx (3.4) xx xx xxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a roztoků xxxxxx, které mají xxx xxxxxxxxxxx, nanese xxxxxxxxxx (3.5) ve xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 3 μl xxxxxxxxxx xxxxxxxx (2.20) x xxxxxx xx x proudu studeného xxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx (3.13) xxxxxxxx xx 40 °X, xxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx (3.5) se xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxx 10 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx vzorku (2.18) x roztoku xxxxxx (4.1) přesně do xxxx, xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xx xxxx přesně xx xxxx, xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx/xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx přibližně 15 μx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (2.19) (xxxxxx 2xxxx2‘xxxxxxxxxxxx).
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx zahřívá x xxxxxxx (3.7) 45 minut xxx 80 °C. Po xxxxxxxxxxx xx deska xxxxxx x xxxxxx (3.2), xxxxx xxxx (xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx) 15 minut xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 2.21 (toluen/aceton), dokud xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 cm (xxxx vyvíjení je xxxxxxxxx 80 xxxxx).
Xxxxx xx xxxxxx v xxxxxx studeného vzduchu x xxxxxxx xxxxxx xx vyhodnotí xxx XX xxxxxxx (3.3). Xxx xxxxxxxx fluorescence xxxxxxx xxxxx xxxx xxx chromatografická xxxxx xxxxxxxx do tekutého xxxxxxxx/xxxxxxx (2.22).
5. Důkaz
Pro xxxxxx skvrnu xx xxxxxxx hodnota Xx.
Xxxxxxx Xx x xxxxxxx xxxxxx pod XX xxxxxxx xx porovnají x hodnotami x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx vzorků.
Učiní xx xxxxxxxxx závěry x xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx přísad. Xxxxxxx xx vysokoúčinná xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x oddílu B, xxxx ukazuje-li xx, xx xx přítomna xxxxxxxx propionová, xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx X. Xxxxxxx retenční xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx časy xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx XXX x XXXX nebo XX se xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx přísad xx vychází x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
X. XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXXX 4XXXXXXXXXXXXXXX, KYSELINY XXXXXXX X XXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxx. Xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx vysokoúčinnou kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (XXXX).
2. Reakční xxxxxxx
2.1 Xxxxxxx reakční xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x.x. a xxxx xxx xxxxxx xxx XXXX. Xxxx xxx xxxxxxx destilovaná xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistoty.
2.2 Xxxxxxx, xxxxxxxxx
2.3 Xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx
2.4 Xxxxxxxx salicylová
2.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx
2.6 Xxxxxxxx xxxxxxx
2.7 Octan sodný, (XX3XXXXx·3X2X)
2.8 Xxxxxxxx octová, x420 = 1,05 x/xx
2.9 Xxxxxxxxxxx
2.10 Xxxxxxxx xxxxxx, 2 M
2.11 Xxxxxxxx xxxxxxxx, 0,2 X vodný xxxxxx
2.12 Xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxx
2.13 Xxxx xxxxxxx/xxxx
Xxxxx xxxx ethanolu (2.2) xx xxxxxx x jedním xxxxx xxxx (2:1)
2.14 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 x kyseliny 2xxxxxxxxxxxxxxx (2.12) x 500 xx xxxxx xxxxxxx/xxxx (2.13).
2.15 Xxxxxxx fáze xxx XXXX
2.15.1 Xxxxxxxxx xxxx: xx 1 xxxxx vody xx xxxxx 6,35 x xxxxxx xxxxxxx (2.7) x 20,0 xx xxxxxxxx xxxxxx (2.8) x xxxxxx xx.
2.15.2 Xxxxxxx fáze se xxxxxxxx smícháním devíti xxxx acetátového xxxxx (2.15.1) x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx (2.9).
2.16 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xx 50 ml xx přesně xxxxxx xxx 0,05 x xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx (2.3), 0,2 g xxxxxxxx xxxxxxxxxx (2.4), 0,2 x kyseliny xxxxxxxx (2.5) x 0,05 x xxxxxxxx xxxxxxx (2.6) a xxxxx xx doplní xxxxx xxxxxxx/xxxx (2.13). Roztok xx xxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.
2.17 Xxxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxxxx xxxxx xx 20 xx xx xxxxxx 8,00, 4,00, 2,00, 1,00 x 0,50 xx xxxxxxxxx xxxxxxx (2.16). Xx xxxxx xxxxx xx přidá 10,00 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (2.14) x 0,5 ml 2 X xxxxxxxx xxxxxx (2.10). Xxxxx xx xxxxxx směsí ethanol/voda (2.13). Xxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Přístroje a xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx:
3.1 Vodní xxxxx, xxxxxxxxx na 60 °X
3.2 Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx x UV xxxxxxxxxx s nastavitelnou xxxxxxx délkou a 10μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxx kolona
Korozivzdorná xxxx, xxxxx 12,5 až 25 cm, vnitřní xxxxxx 4,6 xx, xxxxxx Nucleosilem 5C18 xxxx xxxxxxxxxxxx náplní.
3.4 Xxxxxxxxx papír, průměr: 90 xx, Schleicher xxx Schüll, Xxxxxxxxx Xx 5892 nebo xxxxxxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxxx baňky xx 50 ml
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 5 xx
3.7 Xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx 2–4 mm, xxxx xxxxxxxxxxxx
4. Postup
4.1 Xxxxxxxx vzorku
4.1.1 Příprava xxxxxx xxx přidání xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx na 50 xx (3.5) xx xxxxxx 1 g xxxxxx. Do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx 10 xx 2 X kyseliny sírové (2.10) x 40 xx xxxxx ethanol/voda (2.13). Přidá xx xxxxxxxxx 1 g xxxxxxx xxxxxxx (3.7), xxxxx xx uzavře x xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, dokud nevznikne xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx konzervačních xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxx xx Erlenmeyerova xxxxx xxxxxxx přesně xxx xxxxx xx xxxxx xxxxx (3.1) xxx 60 °X.
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx ihned xxxxxxx x proudu xxxxxxx xxxx a xxxxxxx se xx xxxxxx xxxxx při 5 °X.
Xxxxxxx xx xxxxxxxxx přes xxxxxxxxx xxxxx (3.4). Asi 2 xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.6). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxx 5 °X x xxxxxxxxx xxxxxx XXXX se provede xx 24 xxxxx.
4.1.2 Xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 50 ml (3.5) xx x xxxxxxxxx xx xxx desetinná xxxxx xxxxxx 1 ± 0,1 g xxxxxx (a xxxxx). Xxxxxxx xx přidá 1,00 xx 2 X xxxxxxxx xxxxxx (2.10) x 30,0 xx směsi ethanol/voda (2.13). Xxxxx xx xxxxxxxxx 1 g xxxxxxx xxxxxxx (3.7) x 10 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx(2.14). Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x xxxxx xx alespoň jednu xxxxxx protřepává, xxxxx xxxxxxxxx homogenní xxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx zahřívá xxxxxx pět xxxxx xx xxxxx xxxxx (3.1) při 60 °X.
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxx studené xxxx x xxxxxxx se xxxxx xx xxxxxx xxx 5 °X.
Xxxxxxx xx zfiltruje přes xxxxxxxxx papír (3.4). Xxx 2 ml xxxxxxxx se převedou xx xxxxxxxxxx lahvičky (3.6). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxx 5 °X a xxxxxxxxx xxxxxx XXXX xx xxxxxxx xx 24 xxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx: acetonitril/acetátový xxxx (2.15).
Průtok xxxxxxx xxxx kolonou se xxxxxxx na 2,0 ± 0,5 xx/xxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xx 240 xx.
4.2.1 Xxxxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx chromatografu (3.2) xx nastříkne xx 10 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (2.17). Pro xxxxx xxxxxx se xx xxxxxxxxx chromatogramů xxxxxxx xxxxx xxxxx píku xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx standardu xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxx konzervační přísadu xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku.
Přesvědčete xx, xx při xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
4.2.2 Xxxxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxx xxxxxx (4.1.1) x xxxxxxxxx xx chromatogram. Xxxxxxxxx xx 10 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (2.17) x xxxxxxxxx se chromatogram. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Není-li x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.1.1) xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx jako xxx kyseliny 2xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx vnitřní standard), xxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx chromatografu 10 μx extraktu xxxxxx x přidaným xxxxxxxx xxxxxxxxxx (4.1.2) a xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.
Xx-xx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.1.1) xxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx jako xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxx-xx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx tuto xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.)
Xx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx x roztok xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:
- xxxxxxxx xxxx xxxxxxx odděleného xxxx xx alespoň 0,90. (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx píků
Není-li požadované xxxxxxxx dosaženo, xxxx xx xxx xxx xxxxxxx účinnější xxxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx tak, xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx.
- Xxxxxx asymetrie Xx xxxxx získaných xxxx xx se xxx pohybovat xx 0,9 do 1,5. (Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx uvedena na xxxxxxx 2.) Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx faktoru xxxxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxxxxxx posuvu papíru xxxxxxx 2 xx/xxx.
Xxxxxxx 2: Xxxxxx xxxxxxxxx xxxx
- Xxxxxxxx musí xxx stabilní.
5. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx konzervačních xxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxx 2methoxybenzoové (vnitřní xxxxxxxx) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx. Obsah xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx, kyseliny sorbové xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xi) xx xxxxxxx pomocí xxxxxx
xx % (x/x) = (100x 20 x b) / (106 x&xxxx; a) = x / (500 x x)
xxx
x = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx (4.1.2) (x),
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu xxxxxx (4.1.2) (μg/ml) xxxxxxxx x kalibračního xxxxx.
6. Xxxxxxxxxxxxxx [1]
Xxx xxxxxx kyseliny 4hydroxybenzoové 0,40 % xx xxxxxx absolutní xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx provedených xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 0,035 %.
Xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 0,50 % xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx vzorkem xxxxxxxxx 0,050 %.
Xxx xxxxxx kyseliny salicylové 0,50 % xx xxxxxx xxxxxxxxx hodnota xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 0,045 %.
Xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,60 % xx xxxxxx absolutní xxxxxxx xxxxxxx výsledků xxxx xxxxxxxxx provedených xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 0,035 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Výsledky xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xx množství kyseliny xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx ze xxxxxx je rozhodující x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx by xxxx xxxx být v xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
7.2 Je-li xx xxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx ochrannou xxxxxx.
X. XXXXXXXXX KYSELINY XXXXXXXXXX
1. Rozsah x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx propionové x kosmetických prostředcích xx xx maximální xxxxxxxxxxx 2 % (x/x).
2. Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx hmotnosti (% x/x) xxxxxxx.
3. Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx z xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx chromatografií xx xxxxxxx xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
4. Xxxxxxx činidla
Všechna xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx čistoty x.x; xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.1 Ethanol, 96 % (V/V)
4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx
4.3 Xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxxx
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx, 10 % (x/X)
4.5 Xxxxxx xxxxxxxx propionové
Do xxxxxxx xxxxx xx 50 xx se xxxxxx xxxxxx 1 x (x gramů) kyseliny xxxxxxxxxx a xxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx (4.1).
4.6 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xx odměrné xxxxx na 50 xx se přesně xxxxxx 1 x (x xxxxx) xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxxx a doplní xx xx xxxxx xxxxxxxxx (4.1).
5. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
5.1 Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx:
5.2 Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
5.3 Skleněná zkumavka (20 × 150 xx) xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
5.4 Xxxxx lázeň xxxxxxxxx xx 60 °X
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx 10 xx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx (průměr xxxx 0,45 μx)
6. Postup
6.1 Xxxxxxxx xxxxxx
6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xxx vnitřního xxxxxxxxx
Xx skleněné zkumavky (5.3) xx xxxxxx xxxxxxxxx 1 g xxxxxx. Přidá xx 0,5 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (4.4) x 9,5 ml ethanolu (4.1).
Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx xx nezbytné, xxxxxx se xxxxxxxx xx xxx minut xx xxxxx xxxxx xxxxxxx xx 60 °X (5.4), xxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xx rychle xxxxxxx xxx xxxxxxx vodou. Xxxx roztoku xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (5.5). Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx provede xxxxxx den.
6.1.2 Příprava xxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xx xxxxxxxx zkumavky (5.3) xx s xxxxxxxxx na 3 xxxxxxxxx místa naváží 1 ± 0,1 x xxxxxx. Xxxxx xx 0,5 xx xxxxxxxx trihydrogenfosforečné (4.4), 0,50 ml roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.6)a 9 xx ethanolu (4.1).
Xxxxxxxx se uzavře x xxxxx protřepe. Xxxx xx nezbytné, xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxx xxxxx xx vodní lázně xxxxxxx xx 60 °X (5.4), xxx xx zcela xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xx rychle xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx. Xxxx roztoku se xxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx (5.5). Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx.
6.2 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx následující provozní xxxxxxxx
Xxxxxx
Xxx: korozivzdorná xxxx
Xxxxx: 2 x
Xxxxxx: ⅛"
Xxxxx: 10 % XX™ 1000 (xxxx xxxxxxxxxxxx) + 1 % X3XX4 xx Chromosorbu XXX 100–120 xxxx
Xxxxxxx
Xxxxxxx: 200 °C
Kolona: 120 °X
Xxxxxxxx: 200 °X
Xxxxx xxxx: dusík
Průtoková xxxxxxxx: 25 ml/min
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
6.3.1 Xxxxxxxxx
Xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 20 xx xx xxxxxxxxxx 0,25, 0,50, 1,00, 2,00 x 4,00 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (4.5). Xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 1,00 xx roztoku vnitřního xxxxxxxxx (4.6); xxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx (4.1) x xxxxxxx. Xxxxx připravené xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x koncentraci x xx/xx (to xxxxxxx 1 xx/xx, xx-xx x = 1,000) x kyselinu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x/4, x/2, x, 2x, 4x xx/xx (xx xxxxxxx 0,25, 0,50, 1,00, 2,00, 4,00 xx/xx, xx-xx x = 1,000).
Nastříkne xx 1 μx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx křivka xx xxxxxxxx vynesením xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x kyseliny 2xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxx x x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx na xxx x.
Xxxxxxxxxx xx 3 dávky z xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx průměr xxxxxx ploch píku.
6.3.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx 1 μx xxxxxxxx xxxxxx 6.1.1. Chromatogram se xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (6.3.1). Má-li xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx jako xxx xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxxxx se 1 μx filtrátu xxxxxx 6.1.2 x změří xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx vnitřního standardu.
Nastříknou xx 3 xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx poměrů xxxxx xxxx.
7. Výpočty
7.1 Z xxxxxxxxxx xxxxxx sestrojené xxxxx xxxx 6.3.1 xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx (X), který xxxxxxxx poměru xxxxx xxxx vypočtenému x xxxx 6.3.2.
7.2 X xxxxx získaného xxxxxx xxxxxxxxx xx vypočte xxxxx xxxxxxxx propionové xx vzorku (x) x xxxxxxxxxxxx procentech xxxxxx xxxxxx
x % (x/x) = X (0,5 x 100 x x) / (50 x x) =X(x / x)
xxx
X = poměr xxxxxxxxx x bodu 7.1,
e = xxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxx bodu 4.6,
x = xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx 6.1.2,
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx jedno xxxxxxxxx xxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx [2]
Xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 2 % (x/x) by xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx provedených xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 0,12 %.
II. XXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX X HYDROCHINONMONOBENZYLETHERU V XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX
X. DŮKAZ
1. Xxxxxx a xxxxxx xxxxxxx
X xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxx) x kosmetických xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxx.
2. Podstata metody
Důkaz xxxxxxxxxxxx x jeho xxxxxx xx provede xxxxxxxxxxxxxx na tenké xxxxxx (TLC).
3. Xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx činidla xxxx xxx čistoty x.x.
3.1 Ethanol, 96 % (V/V)
3.2 Xxxxxxxxxx
3.3 Xxxxxxxxxxxx
3.4 Vyvíjecí xxxxxxxxxxxx:
Xxxxxxxxxx/xxxxxxxxxxxx, 66: 33 (X/X)
3.5 Xxxxxxx, 25 % (x/x) (x420 = 0,91 g/ml)
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxx
3.7 Hydrochinon
3.8 Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx
3.10 Hydrochinonmonobenzylether (xxxxxxxxxx)
3.11 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx referenční xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxxx xxx.
3.11.1 Xx xxxxxx xxxxxxxx xx 10 xx xx xxxxxx 0,05 x xxxxxxxxxxxx (3.7). Xxxxx xx 0,250 x xxxxxxxx xxxxxxxxx (3.6) x 5 xx ethanolu (3.1). Xxxxxxx xx xxxxxxx (3.5), dokud xxxx xxxxxxxx xX 10, x xxxxxx xx xxxxxxxxx xx objem 10 ml (3.1).
3.11.2 Xx xxxxxx xxxxxxxx xx 10 ml xx xxxxxx 0,05 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.8). Xxxxx xx 0,250 x xxxxxxxx askorbové (3.6) a 5 xx xxxxxxxx (3.1). Xxxxxxx xx xxxxxxx (3.5), dokud není xxxxxxxx pH 10, x xxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxxx 10 ml (3.1).
3.11.3 Xx xxxxxx xxxxxxxx xx 10 xx xx xxxxxx 0,05 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.9). Xxxxx xx 0,250 x xxxxxxxx xxxxxxxxx (3.6) x 5 xx xxxxxxxx (3.1). Xxxxxxx xx xxxxxxx (3.5), xxxxx není xxxxxxxx xX 10, x xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx 10 xx (3.1).
3.11.4 Xx xxxxxx xxxxxxxx xx 10 ml xx xxxxxx 0,05 x hydrochinonmonobenzyletheru (3.10). Xxxxx xx 0,250 x xxxxxxxx xxxxxxxxx (3.6) a 5 xx xxxxxxxx (3.1). Xxxxxxx xx xxxxxxx (3.5), dokud xxxx xxxxxxxx xX 10, x doplní xx xxxxxxxxx na objem 10 xx (3.1).
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxx
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx
3.14 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
3.15 Chlorid železitý xxxxxxxxxx
3.16 Xxxxxxxx činidla
3.16.1 Xx 5 % xxxxxxx roztoku (x/X) xxxxxxxxx stříbrného (3.12) xx xxxxxxx xxxxxxx (3.5), dokud se xxxxxxx xx sraženina xxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx:
Xxx xxxxxx xxxxx xx v xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxx xx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3.16.2 10 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.13) x ethanolu (3.1).
3.16.3 Xxxxxxxx se 1 % (x/X) xxxxx xxxxxx kyanoželezitanu draselného (3.14) x 2 % (x/X) xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15). Xxxxx xxxx xxxxxxxx se smíchají xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxx laboratorní vybavení, x xxxx:
4.1 Xxxxx xxxxxxxx xxx chromatografii xx tenké xxxxxx
4.2 Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxx xxxxxx: xxxxxxxxx XXX/XX254 (254 xx xxxxxx xxxxxxx GHR/UV); 20 × 20 xx (Xxxxxxx, Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxx 0,25 xx.
4.3 Ultrazvuková xxxxx
4.4 Xxxxxxxxxxx
4.5 XX xxxxx, 254 xx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Do xxxxxx xxxxxxxx xx 10 ml xx xxxxxx 3 x xxxxxx. Xxxxx xx 0,250 g xxxxxxxx xxxxxxxxx (3.6) a 5 ml ethanolu (3.1). pH xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.5) xx 10. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.1) xx 10 xx. Zkumavka xx xxxxxx xxxxxx x homogenizuje xx 10 xxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xx přes xxxxxxxxx xxxxx nebo se xxxxxxxx při 3000 xx./xxx.
5.2 Chromatografie xx xxxxx vrstvě (XXX)
5.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx rozpouštědlem (3.4).
5.2.2 Xx desku xx xxxxxx xx 2 μl referenčních xxxxxxx (3.11) x 2 μx xxxxxxx xxxxxx (5.1). Xxxxxx xx xx xxx xxx teplotě okolí, xxxxx čelo rozpouštědla xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 xx xx startu.
5.2.3 Xxxxx xx vyjme, xxxxx se xxxxxxxxx xxx pokojové teplotě.
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Xxxxx xx xxxxxxxx xxx UV xxxxxx při 254 xx a poloha xxxxx xx označí.
5.3.2 Xxxxx se xxxxxxxx
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.16.1), xxxx
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.16.2); xxxxxxx xx xx xxx 120 °X, xxxx
- roztokem xxxxxxxxxxxxxxx draselného a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.16.3).
6. Xxxxx
Xxxxxxx xx xxxxxxx Xx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxxx Xx, barvu xxxxx x XX světle x barvu skvrn xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx (X) x porovnají xx retenční časy xxxxxxx xxx xxx (xxxx) vzorku x xxxxxxxxxx časy xxxx xxxxxxxxxxxx roztoků.
Výsledky x XXX a HPLC xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx přítomnost xxxxxxxxxxxx nebo jeho xxxxxx.
7. Xxxxxxxx
Xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx hodnoty Rf:
hydrochinon: 0,32
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx: 0,53
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx: 0,55
hydrochinonmonobenzylether: 0,58
X. STANOVENÍ
1. Rozsah x xxxxxx xxxxxxx
X xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, hydrochinonmonomethyletheru, hydrochinonmonoethyletheru x hydrochinonmonobenzyletheru v xxxxxxxxxxxx prostředcích xxx xxxxxxxxxx xxxx.
2. Podstata xxxxxx
Xxxxxx xx extrahován xxxxx xxxx/xxxxxxxx xx xxxxxxx zahřátí, xxxxxx xx rozpustí tukový xxxxxxxx. Stanovení analytů xx výsledném xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x obrácenou xxxx s UV xxxxxxx.
3. Xxxxxxx činidla
3.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx čistoty x.x. Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Methanol
3.3 Xxxxxxxxxxx
3.4 Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx
3.5 Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx
3.6 Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
3.7 Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx XXXX
3.8 Xxxx voda/methanol 1:1 (X/X). Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxx x xxxxx díl xxxxxxxxx (3.2)
3.9 Xxxxxxx xxxx: xxxx xxxxxxxxxxxxxxx/xxxx 45:55 (X/X). Smíchá xx 45 xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7) a 55 xxxx xxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx roztok
Do xxxxxxx xxxxx na 50 xx xx naváží 0,06 x xxxxxxxxxxxx (3.3), 0,08 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.4), 0,10 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 0,12 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xx x doplní xx xx objem xxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx xxxxxx xx připraví xxxxxxxx 10 xx xxxxxx roztoku xx 50 xx xxxxx xxxx/xxxxxxxx (3.8). Xxxx xxxxxxx xx připravují xxxxxxx.
4. Přístroje a xxxxxxx
Xxxxx laboratorní vybavení x xxxx:
4.1 Xxxxx xxxxx nastavitelná xx xxxxxxx 60 °X
4.2 Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii x XX detektorem s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x 10μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.3 Xxxxxxxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x korozivzdorné xxxxx, xxxxx 250 xx, xxxxxxx průměr 4,6 xx, plněná Xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx na Xxxxxxx XXX, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxx 6 μm, nebo xxxxxxxxxxxx náplní. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxx kolona, x xxxxxxxx fenylové xxxxxx nebo xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 Xxxxxxxxx xxxxx, průměr 90 xx, Xxxxxxxxxx xxx Schüll, Xxxxxxxxx Xx 5892 nebo xxxxxxxxxxxx
5. Postup
5.1 Příprava xxxxxx
Xx odměrné xxxxx xx 50 xx xx s xxxxxxxxx xx tři xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 1 ± 0,1 x (x xxxxx) xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxx/xxxxxxxx (3.8). Xxxxx xx uzavře x xxxxx protřepe, xxxxx xx nevytvoří xxxxxxxxx suspenze. Xxxxxxxxxx xx alespoň jednu xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) nastavenou xx 60 °X, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Baňka se xxxxxxx x xxxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxxx/xxxxxxxx (3.8). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.4). Důkaz HPLC xx xxxxxxx do 24 hodin od xxxxxxxx extraktu.
5.2 Vysokoúčinná xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.2.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.9) xx xxxxxx xx 1,0 xx/xxx x vlnová délka xxxxxxxxx se nastaví xx 295 nm.
5.2.2 Xxxxxxxxx se 10 μx xxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 x zaznamená xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx plochy xxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.2.3. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx použijí xxxxxx píků x xxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.2.3.
5.2.3 Kalibrace
Nastříkne se 10 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.10) x xxxxxxxxx xx chromatogram. Xxxxxxx se provede xxxxxxxxxx, dokud xxxx xxxxxx xxxx konstantní.
Stanoví xx xxxxxx xxxxxx XXx (x je xxxxxx xxxxxxx RF):
RFi = xx /ci
kde
pi = xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx hydrochinonmonobenzylether, x
xx = koncentrace xxxxxxxxxxxx, hydrochinonmonomethyletheru, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx hydrochinonmonobenzyletheru v xxxxxxxxxxx roztoku (3.10) (x/50 xx).
Xx xxxxx xxxxxx, zda xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx standardní xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:
- xxxxxxxx píků xxxxxxx xxxxxxxxxx páru xx xxxxxxx 0,90. (Xxxxxxxx separace xxxx xx uvedena xx xxxxxxx 1.).
Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxx
Xxxx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, měla xx xxx buď xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx upraveno tak, xxx byl xxxxxxxxx xxxxxx.
- Xxxxxx xxxxxxxxx Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xx xxx pohybovat xx 0,9 xx 1,5. (Xxxxxxxx xxxxxxx asymetrie xx xxxxxxx xx xxxxxxx 2.) Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx za xxxxxx xxxxxxxxx faktoru xxxxxxxxx xx doporučená xxxxxxxx posuvu xxxxxx xxxxxxx 2 xx/xxx.
Xxxxxxx 2:Xxxxxx xxxxxxxxx xxxx
- Xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx.
6. Výpočet
Pro výpočet xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xx vzorku xx xxxxxxx xxxxxx xxxx analytů. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xx) xx xxxxxxx xxxxxx vzorce
xi % (x/x) = (xx x 100) / (RFi x x)
xxx
x = xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx,
xx = xxxxxx xxxx xxxxxxx x xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxxxxxxxx [3]
7.1 Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 2,0 % xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx současně xx xxxxxxx vzorkem xxxxxxxxx 0,13 %.
7.2 Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 1,0 % by xxxxxx absolutní hodnota xxxxxxx výsledků dvou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 0,1 %.
7.3 Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 1,0 % xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx výsledků dvou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx současně xx stejným vzorkem xxxxxxxxx 0,11 %.
7.4 Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 1,0 % xx xxxxxx absolutní xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxx provedených xxxxxxxx xx stejným vzorkem xxxxxxxxx 0,11 %.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx [4]
8.1 Při xxxxxx xxxxxxxxxxxx 2 % xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx za různých xxxxxxxx (různé laboratoře, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxx různá xxxx) xxxxxxxxx 0,37 %.
8.2 Při xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 1 % xx xxxxxx absolutní xxxxxxx xxxxxxx výsledků xxxx stanovení xxxxxxxxxxx xx stejným xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx laboratoře, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, různé přístroje xxxx xxxxx xxxx) xxxxxxxxx 0,21 %.
8.3 Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 1 % xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx podmínek (xxxxx xxxxxxxxxx, různí xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx) překročit 0,19 %.
8.4 Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 1 % xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx rozdílu xxxxxxxx dvou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx nebo různá xxxx) překročit 0,11 %.
9. Poznámky
9.1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx obsah xxxxxxxxxxxx výrazně xxxxx xxx 2 % x xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx by xxx xxxxxxx xxxxxx (5.1) xxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, jakou xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx 2 % hydrochinonu, x xxxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx.
(X xxxxxxxxx přístrojů může xxx vysokých xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx lineární xxxxxx xxxxxxxxx.)
9.2 Xxxxxx xxxxx
Xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx hydrochinonu x xxxx xxxxxx x jednom xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx fenylové xxxxxx xxxxxxx dostatečnou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxx zajistit při xxxxxxx kolony X18 x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx.
X xxxx xxxxxx xxxx snadno xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxx systémem xxxxxxx xxxx/xxxxxxxxxxx fáze. Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxxx 2 x 3:
Xxxxxx: Xxxxxx XXX, 4,6 xx × 25 xx nebo xxxxxxxxxxxx:
xxxxxxx: 36 °X
xxxxxx: 1,5 ml/min
mobilní xxxx:
xxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxx/xxxx 5/95 (X/X)
xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxx/xxxx 30/70 (V/V)
pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxx/xxxx 80/20 (X/X) [5].
Xxxxxx: Xxxxxxxxxx X5XXX xxxx ekvivalentní:
mobilní fáze: xxxx/xxxxxxxx 90/10 (X/X)
xxxxxx: 1,5 xx/xxx
Xxxx xxxxxxxx xxxx vhodné pro xxxxxxxxxxx [6].
[1] ISO 5725.
[2] XXX 5725.
[3] XXX 5725.
[4] XXX 5725.
[5] Herpol-Borremans, X., Xxxxx M.-O., Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx x’xxxxxxxxxxxx xx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx dans xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx blanchir xx xxxx. Xxx. X. Xxxxxx. Sci., 8-203-214 (1986).
[6] Xxxxx, X., Xxx X., Determination xx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxx, (1986), 111, x. 129.