Šestá směrnice Komise 95/32/XX
xx xxx 7. xxxxxxxx 1995
o metodách xxxxxxx nezbytných pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
(Xxxx x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x ohledem na Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx směrnici Xxxx 76/768/XXX xx dne 27. xxxxxxxx 1976 x sbližování xxxxxxxx xxxxxxxx členských xxxxx xxxxxxxxxx se kosmetických xxxxxxxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Komise 94/32/XX [2], a xxxxxxx xx čl. 8 xxxx. 1 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, že xx xx směrnici 76/768/XXX xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx předepsaných xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx by všechny xxxxxxxx xxxxxx analýzy xxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx; že xxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx 80/1335/XXX [3] xx xxxxx xxxxxxxx 87/143/XXX [4], xxxxxxxx 82/434/XXX [5] xx xxxxx xxxxxxxx 90/207/XXX [6] x xx xxxxxxxxxx 83/514/XXX [7], 85/490/XXX [8] x 93/73/XXX [9];
vzhledem x tomu, xx xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx benzoové, xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx salicylové x xxxxxxxx propionové x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx x hydrochinonmonobenzyletheru v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxx pro xxxxxxxxxxxx směrnice 76/768/XXX xxxxxxxxxxx pokroku,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské státy xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxx, xxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx:
- důkaz x stanovení kyseliny xxxxxxxx, xxxxxxxx 4hydroxybenzoové, xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxx,
- xxxxx a xxxxxxxxx hydrochinonu, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx metodami popsanými x příloze.
Xxxxxx 2
1. Xxxxxxx xxxxx uvedou x xxxxxxxx právní x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx dosažení souladu x touto xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. xxxx 1996. Xxxxxxxxxx x nich xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx opatření xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx xxxxx na xxxx směrnici nebo xxxx xxxxxx xxxxx xxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx vyhlášení. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx této směrnice.
Xxxxxx 3
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx směrnice xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu dne 7. července 1995.
Xx Xxxxxx
Xxxx Xxxxxx
xxxxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 262, 27.9.1976, x. 169.
[2] Xx. xxxx. X 181, 15.7.1994, x. 31.
[3] Xx. xxxx. X 383, 31.12.1980, x. 27.
[4] Xx. xxxx. X 57, 27.2.1987, x. 56.
[5] Xx. xxxx. X 185, 30.6.1982, x. 1.
[6] Úř. xxxx. X 108, 28.4.1990, x. 92.
[7] Xx. věst. X 291, 24.10.1983, x. 9.
[8] Xx. věst. X 295, 7.11.1985, x. 30.
[9] Xx. věst. X 231, 14.9.1993, x. 34.
PŘÍLOHA
I. XXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXXX 4HYDROXYBENZOOVÉ, XXXXXXXX XXXXXXX, XXXXXXXX XXXXXXXXXX X XXXXXXXX XXXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX
1. Xxxxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx použitelná xxx xxxxx x xxxxxxxxx kyseliny xxxxxxxx, xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx, kyseliny xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx popsány xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx propionové x xxxxxxxxx xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, kyseliny xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx.
2. Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, kyseliny 4hydroxybenzoové, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx procentech xxxxxxx kyselin.
A. XXXXX
1. Xxxxxxxx metody
Po kyselé/zásadité xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx přísad xx extrakt xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx tenké xxxxxx (XXX) x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ("derivatizace xx xxxxx"). X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxx potvrdí xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) nebo, x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX).
2. Xxxxxxx činidla
2.1 Xxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx činidla musí xxx xxxxxxx x.x. Xxxx xxx použita xxxxxxxxxxx voda nebo xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
2.2 Xxxxxx
2.3 Xxxxxxxxxxxx
2.4 Xxxxxxxxxxx
2.5 Toluen
2.6 xXxxxx
2.7 Xxxxxxx, tekutý
2.8 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, 4 X
2.9 Xxxxxxxx draselný, 4 X vodný xxxxxx
2.10 Xxxxxxx xxxxxxxx, CaCl2·2H2O
2.11 Xxxxxxxxx xxxxxx, Xx2XX3
2.12 2Xxxx2‘xxxxxxxxxxx
2.13 Xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx
2.14 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx
2.15 Xxxxxxxx xxxxxxxx
2.16 Xxxxxxxx xxxxxxx
2.17 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx
2.18 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xx 0,1 % (x/X) roztoky (100 xx/100 ml) xxxxx x pěti xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (2.13 xx 2.17) v xxxxxxxxxxxxx.
2.19 Derivatizační xxxxxxx
0,5 % roztok 2xxxx2‘xxxxxxxxxxxx (2.12) x xxxxxxxxxxxx (2.4) (50 xx/10 xx). Xxxxx xxxxxx xx měl být xxxxxxxxxxx každý xxxxx x uchováván x xxxxxxxx.
2.20 Xxxxxx xxxxxxxxxxxx
0,3 % (m/V) roztok xxxxxxxxxx xxxxxxxx (2.11) xx xxxx (300 xx/100 xx). Tento xxxxxx xx xxx xxx xxxxxxxxxxx čerstvý.
2.21 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
Xxxxxx (2.5)/xxxxxx (2.2) (20: 0,5, X/X)
2.22 Xxxxxx xxxxxxx (2.7)/xxxxxx (2.6) (1:2, X/X)
3. Přístroje a xxxxxxx
Xxxxx laboratorní xxxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx 60 °X
3.2 Vyvíjecí komora
3.3 Xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 254 x 366 xx
3.4 Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx 60, bez xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, 20 × 20 xx, tloušťka xxxxxx 0,25 mm x xxxxxxxxxxxx zónou 2,5 × 20 xx (Merk 11845 xxxx xxxxxxxxxxxx)
3.5 Xxxxxxxxxxxxxx xx 10 μl
3.6 Xxxxxxxxxxxxxx na 25 μx
3.7 Sušárna xxxxxxxxxxxx xx teplotu xx 105 °C
3.8 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 50 x 200 xx xx zabroušenou xxxxxx
3.9 Xxxxxxxxx papír, xxxxxx 90 xx, Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxüxx, Weissband Xx. 5892, xxxx xxxxxxxxxxxx
3.10 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xX 1 – 11
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx lahvičky xx 5 xx
3.12 Rotační xxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx)
3.13 Xxxxx xxxxx
4. Xxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx Erlenmeyerovy baňky xx 50 xx xx zabroušenou xxxxxx (3.8) xx odváží xxxxxxxxx 1 g xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx 4 X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (2.8) x 40 xx xxxxxxx (2.2). X xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx xxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxx 20 xxxxx 4 X kyseliny chlorovodíkové (2.8). Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.10) se xxxxxxxxxxx, zda xx xX xxxxxxxxx 2. Xxxxxxxxxxxxx baňka xx xxxxxx x po xxxx xxxxx minuty xx silně xxxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx usnadnit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx přísad xx xxxxxxxxx xxxx, směs xx opatrně xxxxxxx xx xxx 60 °X, xxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxx xx zchladí xx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.9) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
20 xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 200 xx, xxxxx se 20 xx vody x xxxxxxxx xx. xX xxxxx se upraví xxxxxxxxx xx 10 xxxxxx 4 M xxxxxxxxx draselného (2.9) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxx xx 1 g xxxxxxxx xxxxxxxxxx (2.10) x xxxxx se protřepe. Xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx papír (3.9) xx xxxxxx nálevky xx 250 xx xxxxxxxxxx 75 xx xxxxxxxxxxxxx (2.3) x xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx 250 xx. Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xx použití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.10) xx xX xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx na přibližně 2 okyselením 4 X xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (2.8). Xxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx (2.3), xxxxx se xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx; xxxxxx xx nechají xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xx převede xx rotační xxxxxxx (3.12). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx xxxxx a xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxx (2.3). Xxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.11).
4.2 Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx
Xx startovní xxxxx koncentrační zóny xxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx xx tenké vrstvě (3.4) xx xx xxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx analyzovány, xxxxxx xxxxxxxxxx (3.5) xx xxxxxxxx odstupech xxxx xx 3 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (2.20) x xxxxxx xx x proudu xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xx topnou xxxxx (3.13) xxxxxxxx xx 40 °C, xxx xx xxxxxx xxxxxxx co xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx xx startovní xxxxx xxxxx xxxxxx xxxx 10 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx vzorku (2.18) x roztoku vzorku (4.1) xxxxxx xx xxxx, xxx byl xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xx xxxx přesně xx xxxx, kam xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx/xxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx 15 μx derivatizačního činidla (2.19) (xxxxxx 2brom2‘acetonaftonu).
Chromatografická xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx (3.7) 45 minut při 80 °C. Xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x komoře (3.2), která xxxx (xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx) 15 xxxxx xxxxxx vyvíjecím xxxxxxxxxxxxx 2.21 (toluen/aceton), dokud xxxx rozpouštědla nedosáhne xxxxxxxxxxx 15 cm (xxxx vyvíjení xx xxxxxxxxx 80 minut).
Deska xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x získané xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx (3.3). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx může xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxx (2.22).
5. Xxxxx
Xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx hodnota Xx.
Xxxxxxx Xx x xxxxxxx xxxxxx xxx UV xxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxx referenčních vzorků.
Učiní xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx vysokoúčinná xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x oddílu X, xxxx xxxxxxx-xx xx, xx je xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, provede xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x oddílu X. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx XXX x HPLC xxxx XX xx xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
X. XXXXXXXXX XXXXXXXX BENZOOVÉ, KYSELINY 4XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXX XXXXXXX X XXXXXXXX SALICYLOVÉ
1. Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx se xx okyselení extrahuje xxxxx xxxxxxxx x xxxx. Xx filtraci xx xxxxxxxxxxx přísady xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX).
2. Reakční xxxxxxx
2.1 Xxxxxxx reakční xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx p.a. x xxxx xxx vhodná xxx XXXX. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxx ekvivalentní čistoty.
2.2 Xxxxxxx, absolutní
2.3 Xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx
2.4 Kyselina salicylová
2.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx
2.6 Kyselina xxxxxxx
2.7 Octan xxxxx, (XX3XXXXx·3X2X)
2.8 Xxxxxxxx xxxxxx, x420 = 1,05 x/xx
2.9 Xxxxxxxxxxx
2.10 Xxxxxxxx xxxxxx, 2 X
2.11 Xxxxxxxx xxxxxxxx, 0,2 X xxxxx xxxxxx
2.12 Xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxx
2.13 Xxxx xxxxxxx/xxxx
Xxxxx xxxx xxxxxxxx (2.2) xx xxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxx (2:1)
2.14 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxx (2.12) x 500 xx xxxxx ethanol/voda (2.13).
2.15 Mobilní fáze xxx XXXX
2.15.1 Xxxxxxxxx xxxx: xx 1 xxxxx vody xx xxxxx 6,35 x xxxxxx sodného (2.7) x 20,0 xx xxxxxxxx octové (2.8) x smíchá se.
2.15.2 Xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx smícháním xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru (2.15.1) x xxxxxxx xxxx acetonitrilu (2.9).
2.16 Xxxxxxx xxxxxx konzervačních xxxxxx
Xx xxxxxxx baňky xx 50 xx xx přesně xxxxxx xxx 0,05 g xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx (2.3), 0,2 x xxxxxxxx xxxxxxxxxx (2.4), 0,2 x xxxxxxxx xxxxxxxx (2.5) a 0,05 x kyseliny sorbové (2.6) x xxxxx xx xxxxxx směsí xxxxxxx/xxxx (2.13). Roztok xx xxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx týden.
2.17 Xxxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxxxx xxxxx xx 20 xx xx odměří 8,00, 4,00, 2,00, 1,00 x 0,50 ml xxxxxxxxx roztoku (2.16). Xx xxxxx xxxxx xx xxxxx 10,00 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (2.14) x 0,5 xx 2 X xxxxxxxx sírové (2.10). Xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx/xxxx (2.13). Xxxx roztoky xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx:
3.1 Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xx 60 °X
3.2 Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx x XX xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx a 10μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxx kolona
Korozivzdorná xxxx, xxxxx 12,5 xx 25 cm, xxxxxxx xxxxxx 4,6 xx, xxxxxx Xxxxxxxxxxx 5X18 xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
3.4 Xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx: 90 xx, Schleicher xxx Xxxüxx, Xxxxxxxxx Xx 5892 xxxx xxxxxxxxxxxx.
3.5 Erlenmeyerovy xxxxx xx 50 xx
3.6 Xxxxxxxx vzorkovací lahvičky xx 5 ml
3.7 Xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx 2–4 xx, xxxx ekvivalentní
4. Xxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
4.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xxx přidání xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 50 xx (3.5) xx xxxxxx 1 x xxxxxx. Do Erlenmeyerovy xxxxx se odpipetuje 10 xx 2 X kyseliny xxxxxx (2.10) x 40 xx xxxxx xxxxxxx/xxxx (2.13). Xxxxx se xxxxxxxxx 1 x xxxxxxx kamínků (3.7), xxxxx xx uzavře x silně se xxxxxxx jednu xxxxxx xxxxxxxxxx, dokud nevznikne xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx zahřívá xxxxxx xxx xxxxx xx xxxxx lázni (3.1) xxx 60 °X.
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xx xxxxxx uloží xxx 5 °C.
Extrakt xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.4). Xxx 2 ml xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.6). Xxxxxxx xx uchovává xxx 5 °X x xxxxxxxxx pomocí XXXX xx provede xx 24 hodin.
4.1.2 Xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 50 ml (3.5) xx s přesností xx xxx xxxxxxxxx xxxxx naváží 1 ± 0,1 x xxxxxx (a gramů). Xxxxxxx xx přidá 1,00 xx 2 X kyseliny sírové (2.10) a 30,0 xx xxxxx xxxxxxx/xxxx (2.13). Přidá xx xxxxxxxxx 1 g xxxxxxx kamínků (3.7) x 10 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx(2.14). Xxxxxxxxxxxxx baňka xx xxxxxx x silně xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxx usnadnění extrakce xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xx Xxxxxxxxxxxxx baňka xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xx xxxxx xxxxx (3.1) při 60 °X.
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx xxxx x extrakt se xxxxx xx xxxxxx xxx 5 °C.
Extrakt xx zfiltruje xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.4). Xxx 2 xx xxxxxxxx xx převedou xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.6). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxx 5 °X x xxxxxxxxx xxxxxx XXXX xx xxxxxxx do 24 xxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx fáze: acetonitril/acetátový xxxx (2.15).
Xxxxxx mobilní xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx na 2,0 ± 0,5 xx/xxx. Xxxxxx xxxxx detektoru xx xxxxxxx xx 240 xx.
4.2.1 Xxxxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxx po 10 μl standardních xxxxxxx konzervačních xxxxxx (2.17). Xxx xxxxx xxxxxx xx xx xxxxxxxxx chromatogramů xxxxxxx xxxxx výšky píku xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xx, xx xxx xxxxxxxxx xxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
4.2.2 Xxxxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.2) xx nastříkne 10 μx xxxxxxxx xxxxxx (4.1.1) x xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx 10 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (2.17) x xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx chromatogramy xx xxxxxxxxx. Xxxx-xx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.1.1) xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx časem xxxx xxx xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx standard), xxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxx xxxxxx x přidaným xxxxxxxx xxxxxxxxxx (4.1.2) x xxxxxxxxx xx chromatogram.
Je-li x xxxxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx (4.1.1) rušivý xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx 2methoxybenzoová, měl xx xxx vybrán xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxx-xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx přísad x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx použít xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.)
Xx xxxxx xxxxxx, xxx chromatogramy xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx x roztok xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:
- separace xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx páru xx xxxxxxx 0,90. (Xxxxxxxx separace xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxx
Xxxx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, měla xx být xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx byl xxxxxxxxx xxxxxx.
- Xxxxxx xxxxxxxxx Xx xxxxx získaných xxxx by xx xxx pohybovat xx 0,9 xx 1,5. (Xxxxxxxx xxxxxxx asymetrie xx xxxxxxx na xxxxxxx 2.) Xxx xxxxxxxxxxx chromatogramu xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx doporučená xxxxxxxx posuvu xxxxxx xxxxxxx 2 xx/xxx.
Xxxxxxx 2: Xxxxxx asymetrie xxxx
- Základna xxxx xxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx píků xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx píku xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxx (vnitřní xxxxxxxx) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, kyseliny 4xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx kyseliny salicylové xx vzorku x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xi) xx vypočte xxxxxx xxxxxx
xx % (x/x) = (100x 20 x x) / (106 x x) = b / (500 x a)
kde
a = hmotnost zkušebního xxxxxx (4.1.2) (x),
x = xxxxxxxxxxx konzervační xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (4.1.2) (μx/xx) xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx.
6. Xxxxxxxxxxxxxx [1]
Xxx xxxxxx xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx 0,40 % by xxxxxx absolutní hodnota xxxxxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxx provedených současně xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 0,035 %.
Xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 0,50 % by xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx vzorkem xxxxxxxxx 0,050 %.
Xxx xxxxxx xxxxxxxx salicylové 0,50 % xx xxxxxx absolutní hodnota xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx vzorkem xxxxxxxxx 0,045 %.
Při xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,60 % xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx provedených současně xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 0,035 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Výsledky xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx metody xxxxxxx, xx množství xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx je rozhodující x xxxxxxxx zpracovávaného xxxxxx xx tedy xxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
7.2 Xx-xx xx xxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx ochrannou xxxxxx.
X. STANOVENÍ KYSELINY XXXXXXXXXX
1. Rozsah x xxxxxx použití
Tato metoda xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x kosmetických xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 2 % (x/x).
2. Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (% x/x) xxxxxxx.
3. Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx použití kyseliny 2xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
4. Xxxxxxx činidla
Všechna xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx p.a; xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.1 Xxxxxxx, 96 % (X/X)
4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx
4.3 Xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxxx
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx, 10 % (m/V)
4.5 Roztok xxxxxxxx propionové
Do xxxxxxx xxxxx xx 50 xx xx přesně xxxxxx 1 x (x xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx x doplní xx na xxxxx xxxxxxxxx (4.1).
4.6 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xx 50 xx se xxxxxx xxxxxx 1 x (x xxxxx) xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xx objem xxxxxxxxx (4.1).
5. Xxxxxxxxx x pomůcky
5.1 Běžné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx:
5.2 Plynový xxxxxxxxxxxx x plamenovým ionizačním xxxxxxxxxx
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx (20 × 150 xx) xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
5.4 Vodní xxxxx xxxxxxxxx xx 60 °X
5.5 Skleněná injekční xxxxxxxxx xx 10 xx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxx 0,45 μx)
6. Xxxxxx
6.1 Xxxxxxxx xxxxxx
6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxxxxx (5.3) xx xxxxxx xxxxxxxxx 1 x xxxxxx. Xxxxx xx 0,5 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (4.4) a 9,5 xx xxxxxxxx (4.1).
Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx protřepe. Xxxx xx nezbytné, xxxxxx se xxxxxxxx xx pět xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxx xx 60 °X (5.4), xxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx. Zkumavka xx xxxxxx xxxxxxx xxx tekoucí xxxxx. Xxxx roztoku xx xxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx (5.5). Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx provede xxxxxx den.
6.1.2 Xxxxxxxx xxxxxx x vnitřním xxxxxxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxxxxx (5.3) se s xxxxxxxxx xx 3 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 1 ± 0,1 x xxxxxx. Přidá xx 0,5 ml xxxxxxxx trihydrogenfosforečné (4.4), 0,50 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.6)x 9 xx ethanolu (4.1).
Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx protřepe. Xxxx xx xxxxxxxx, xxxxxx xx zkumavka xx xxx xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxx xx 60 °X (5.4), xxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (5.5). Chromatografie xxxxxxxx xx provede xxxxxx xxx.
6.2 Podmínky xxx plynovou xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx následující provozní xxxxxxxx
Xxxxxx
Xxx: xxxxxxxxxxxxx xxxx
Xxxxx: 2 x
Xxxxxx: ⅛"
Xxxxx: 10 % SP™ 1000 (nebo xxxxxxxxxxxx) + 1 % X3XX4 na Xxxxxxxxxxx XXX 100–120 mesh
Teplota
Nástřik: 200 °X
Xxxxxx: 120 °X
Xxxxxxxx: 200 °C
Nosný xxxx: xxxxx
Xxxxxxxxx rychlost: 25 ml/min
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
6.3.1 Xxxxxxxxx
Xx xxxx odměrných xxxxx xx 20 xx se odpipetuje 0,25, 0,50, 1,00, 2,00 x 4,00 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (4.5). Xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 1,00 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.6); xxxxxx xx na objem xxxxxxxxx (4.1) x xxxxxxx. Takto xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kyselinu 2xxxxxxxxxxxxxxxxx jako xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxx x xx/xx (xx xxxxxxx 1 mg/ml, xx-xx e = 1,000) a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x/4, p/2, p, 2x, 4x mg/ml (xx xxxxxxx 0,25, 0,50, 1,00, 2,00, 4,00 mg/ml, xx-xx x = 1,000).
Xxxxxxxxx xx 1 μx xxxxxx roztoků x xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxx x xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxx x x xxxxxx odpovídajících xxxxx píků xx xxx y.
Nastříknou xx 3 xxxxx z xxxxxxx roztoku a xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx.
6.3.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx se 1 μx xxxxxxxx xxxxxx 6.1.1. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x chromatogramem xxxxxxx ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (6.3.1). Xx-xx xxx přibližně stejný xxxxxxxx xxx jako xxx xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx. Není-li xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxxxx se 1 μx xxxxxxxx xxxxxx 6.1.2 x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xx 3 xxxxx x každého roztoku x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx ploch xxxx.
7. Xxxxxxx
7.1 X xxxxxxxxxx xxxxxx sestrojené xxxxx xxxx 6.3.1 xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx (K), který xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx 6.3.2.
7.2 X xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx (x) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx
x % (x/x) = K (0,5 x 100 x x) / (50 x x) =X(x / x)
xxx
X = xxxxx vypočtený x bodu 7.1,
x = xxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx 4.6,
x = xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx podle xxxx 6.1.2,
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx jedno xxxxxxxxx místo.
8. Opakovatelnost [2]
Xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 2 % (x/x) xx neměl xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx současně xx stejným xxxxxxx xxxxxxxxx 0,12 %.
XX. XXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX, HYDROCHINONMONOMETHYLETHERU, XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX X HYDROCHINONMONOBENZYLETHERU V XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX
X. XXXXX
1. Xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx
X metodě xx xxxxxxx detekce x xxxxx hydrochinonu, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx.
2. Podstata xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxxxx x jeho xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx (XXX).
3. Xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x.x.
3.1 Xxxxxxx, 96 % (V/V)
3.2 Chloroform
3.3 Xxxxxxxxxxxx
3.4 Vyvíjecí xxxxxxxxxxxx:
Xxxxxxxxxx/xxxxxxxxxxxx, 66: 33 (X/X)
3.5 Xxxxxxx, 25 % (x/x) (d420 = 0,91 x/xx)
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxx
3.7 Xxxxxxxxxxx
3.8 Hydrochinonmonomethylether
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx
3.10 Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
3.11 Xxxxxxxxxx roztoky
Následující xxxxxxxxxx xxxxxxx xx připravují xxxxxxx a jsou xxxxxxxx xxxxx xxx.
3.11.1 Xx xxxxxx xxxxxxxx xx 10 xx xx xxxxxx 0,05 x hydrochinonu (3.7). Xxxxx xx 0,250 x kyseliny xxxxxxxxx (3.6) x 5 xx ethanolu (3.1). Xxxxxxx xx amoniak (3.5), xxxxx xxxx xxxxxxxx xX 10, x xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx 10 ml (3.1).
3.11.2 Xx xxxxxx xxxxxxxx xx 10 xx xx xxxxxx 0,05 x hydrochinonmonomethyletheru (3.8). Xxxxx xx 0,250 x kyseliny xxxxxxxxx (3.6) x 5 xx xxxxxxxx (3.1). Xxxxxxx xx amoniak (3.5), xxxxx xxxx xxxxxxxx xX 10, x xxxxxx xx xxxxxxxxx na xxxxx 10 ml (3.1).
3.11.3 Xx dělené zkumavky xx 10 xx xx xxxxxx 0,05 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.9). Xxxxx xx 0,250 x kyseliny askorbové (3.6) a 5 xx xxxxxxxx (3.1). Xxxxxxx xx xxxxxxx (3.5), dokud xxxx xxxxxxxx xX 10, x xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx 10 ml (3.1).
3.11.4 Xx xxxxxx zkumavky xx 10 ml xx naváží 0,05 x hydrochinonmonobenzyletheru (3.10). Xxxxx xx 0,250 x xxxxxxxx xxxxxxxxx (3.6) x 5 xx ethanolu (3.1). Xxxxxxx xx xxxxxxx (3.5), xxxxx není xxxxxxxx xX 10, x doplní xx xxxxxxxxx na xxxxx 10 xx (3.1).
3.12 Xxxxxxxx stříbrný
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx
3.14 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
3.15 Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
3.16 Detekční činidla
3.16.1 Xx 5 % xxxxxxx roztoku (x/X) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.12) xx přidává xxxxxxx (3.5), dokud xx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxx nerozpustí.
Upozornění:
Při xxxxxx xxxxx xx v xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxx xx xxx po xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3.16.2 10 % (x/X) roztok xxxxxxxx dodekamolybdofosforečné (3.13) x xxxxxxxx (3.1).
3.16.3 Xxxxxxxx xx 1 % (x/X) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.14) a 2 % (m/V) xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15). Xxxxx před xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx díly xxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxxx vybavení, x xxxx:
4.1 Běžné xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx tenké vrstvě
4.2 Xxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx: xxxxxxxxx XXX/XX254 (254 xx dolním xxxxxxx XXX/XX); 20 × 20 xx (Xxxxxxx, Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxxx vrstvy 0,25 xx.
4.3 Ultrazvuková xxxxx
4.4 Xxxxxxxxxxx
4.5 UV xxxxx, 254 nm
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxxxxx xx 10 xx xx xxxxxx 3 x xxxxxx. Xxxxx xx 0,250 x xxxxxxxx xxxxxxxxx (3.6) x 5 ml ethanolu (3.1). xX roztoku xx xxxxxx amoniakem (3.5) xx 10. Xxxxx xx doplní xxxxxxxxx (3.1) xx 10 xx. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx se 10 minut x xxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx nebo se xxxxxxxx při 3000 xx./xxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx (TLC)
5.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx komora se xxxxxx xxxxxxxxx rozpouštědlem (3.4).
5.2.2 Xx desku xx xxxxxx po 2 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.11) x 2 μl xxxxxxx xxxxxx (5.1). Xxxxxx xx xx xxx xxx teplotě xxxxx, xxxxx čelo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 xx xx xxxxxx.
5.2.3 Xxxxx se xxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Deska se xxxxxxxx xxx UV xxxxxx při 254 xx x poloha xxxxx se označí.
5.3.2 Xxxxx se xxxxxxxx
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.16.1), xxxx
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.16.2); xxxxxxx se xx xxx 120 °X, xxxx
- roztokem xxxxxxxxxxxxxxx draselného x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.16.3).
6. Xxxxx
Xxxxxxx xx xxxxxxx Rf xxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxx x jejich xxxxxxx Xx, barvu skvrn x UV xxxxxx x barvu xxxxx xx zviditelnění xxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx (X) x porovnají xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx pro xxx (xxxx) vzorku x xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx x XXX x HPLC xx xxxxxxxxxx s xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx nebo jeho xxxxxx.
7. Poznámky
Za xxxxxxxxx xxxxxxxx byly pozorovány xxxxxxxxxxx xxxxxxx Rf:
hydrochinon: 0,32
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx: 0,53
hydrochinonmonoethylether: 0,55
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx: 0,58
X. XXXXXXXXX
1. Xxxxxx x xxxxxx použití
V xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx pro stanovení xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx, hydrochinonmonoethyletheru x hydrochinonmonobenzyletheru v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx.
2. Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxx xxxxx voda/methanol xx xxxxxxx zahřátí, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx analytů xx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx x obrácenou xxxx s UV xxxxxxx.
3. Xxxxxxx činidla
3.1 Xxxxxxx xxxxxxx činidla xxxx být čistoty x.x. Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxxx voda xxxx xxxx alespoň xxxxxxxxxxxx čistoty.
3.2 Xxxxxxxx
3.3 Xxxxxxxxxxx
3.4 Hydrochinonmonomethylether
3.5 Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx
3.6 Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
3.7 Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx pro XXXX
3.8 Xxxx xxxx/xxxxxxxx 1:1 (X/X). Xxxxxx se xxxxx díl xxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx (3.2)
3.9 Xxxxxxx xxxx: směs xxxxxxxxxxxxxxx/xxxx 45:55 (X/X). Xxxxxx xx 45 dílů xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7) x 55 xxxx xxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xx 50 xx se xxxxxx 0,06 x xxxxxxxxxxxx (3.3), 0,08 g xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.4), 0,10 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 0,12 g xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.6). Rozpustí xx x doplní xx xx xxxxx xxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx xxxxxx se připraví xxxxxxxx 10 xx xxxxxx xxxxxxx xx 50 xx směsí xxxx/xxxxxxxx (3.8). Xxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx:
4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx 60 °X
4.2 Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x XX xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x 10μl nastřikovací xxxxxxx
4.3 Analytická xxxxxx:
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx 250 xx, xxxxxxx průměr 4,6 xx, xxxxxx Xxxxxx xxxxxxx (chemicky xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx XXX, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxx 6 μx, nebo xxxxxxxxxxxx náplní. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx, x výjimkou xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx x ekvivalentní xxxxxx.
4.4 Xxxxxxxxx papír, průměr 90 mm, Xxxxxxxxxx xxx Xxxüxx, Weissband Xx 5892 xxxx xxxxxxxxxxxx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xx 50 ml xx s přesností xx xxx desetinná xxxxx naváží 1 ± 0,1 g (x xxxxx) vzorku. Xxxxxx xx xxxxxxxx xx 25 ml xxxxx xxxx/xxxxxxxx (3.8). Xxxxx se xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx suspenze. Protřepává xx xxxxxxx jednu xxxxxx. Baňka se xxxxxx xx vodní xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx 60 °C, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Baňka xx xxxxxxx a xxxxxx xx xx objem xxxxx voda/methanol (3.8). Xxxxxxx xx zfiltruje xxxx xxxxxxxxx papír (4.4). Xxxxx XXXX xx xxxxxxx xx 24 xxxxx xx xxxxxxxx extraktu.
5.2 Vysokoúčinná xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.2.1 Průtoková xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.9) se upraví xx 1,0 xx/xxx x xxxxxx délka xxxxxxxxx se nastaví xx 295 nm.
5.2.2 Xxxxxxxxx se 10 μx roztoku xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.1 x xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. Změří xx plochy píků. Xxxxxxx se kalibrace xxxxx bodu 5.2.3. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx vzorek x referenční roztoky. Xxx výpočet koncentrace xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx použijí xxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx (RF) xxxxxxxxx podle bodu 5.2.3.
5.2.3 Kalibrace
Nastříkne xx 10 μl referenčního xxxxxxx (3.10) x xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx není xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx faktor odezvy XXx (x xx xxxxxx xxxxxxx RF):
RFi = xx /ci
kde
pi = xxxxxx píku xxx hydrochinon, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx, x
xx = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx, hydrochinonmonoethyletheru xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx roztoku (3.10) (x/50 ml).
Je xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:
- separace xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx páru xx xxxxxxx 0,90. (Xxxxxxxx separace xxxx xx xxxxxxx na xxxxxxx 1.).
Obrázek 1: Xxxxxxxx xxxx
Xxxx-xx požadované xxxxxxxx dosaženo, xxxx xx xxx buď xxxxxxx xxxxxxxxx kolona xxxx xx mělo xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx byl xxxxxxxxx xxxxxx.
- Faktor xxxxxxxxx Xx všech xxxxxxxxx xxxx by xx xxx xxxxxxxxx xx 0,9 do 1,5. (Xxxxxxxx xxxxxxx asymetrie xx uvedena xx xxxxxxx 2.) Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx za xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx 2 xx/xxx.
Xxxxxxx 2:Xxxxxx asymetrie xxxx
- Xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx.
6. Výpočet
Pro výpočet xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xx vzorku xx xxxxxxx xxxxxx xxxx analytů. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx vzorku xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xx) se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx
xx % (m/m) = (xx x 100) / (RFi x x)
xxx
x = hmotnost xxxxxx x xxxxxxx,
xx = plocha xxxx xxxxxxx x xx xxxxxx.
7. Opakovatelnost [3]
7.1 Xxx obsahu hydrochinonu 2,0 % xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx současně xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 0,13 %.
7.2 Xxx obsahu xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 1,0 % xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 0,1 %.
7.3 Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 1,0 % xx xxxxxx xxxxxxxxx hodnota xxxxxxx výsledků dvou xxxxxxxxx provedených xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 0,11 %.
7.4 Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 1,0 % by xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx vzorkem xxxxxxxxx 0,11 %.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx [4]
8.1 Xxx xxxxxx hydrochinonu 2 % xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx laboratoře, xxxxx experimentátoři, různé xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx) xxxxxxxxx 0,37 %.
8.2 Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 1 % xx neměla xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx výsledků xxxx stanovení provedených xx xxxxxxx vzorkem xx různých xxxxxxxx (xxxxx laboratoře, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxx různá xxxx) xxxxxxxxx 0,21 %.
8.3 Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 1 % xx xxxxxx absolutní xxxxxxx xxxxxxx výsledků xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx (různé xxxxxxxxxx, různí experimentátoři, xxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxx xxxx) překročit 0,19 %.
8.4 Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 1 % by xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx rozdílu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx stejným xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx laboratoře, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxx různá xxxx) xxxxxxxxx 0,11 %.
9. Poznámky
9.1 Xxxxxxxx xx zjištěn xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 2 % x xx požadován xxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xx být xxxxxxx xxxxxx (5.1) xxxxxx na podobnou xxxxxxxxxxx, xxxxx by xxx xxxxxx obsahující 2 % hydrochinonu, x stanovení xx xxxx xxx opakováno.
(U xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx mimo xxxxxxxx xxxxxx detektoru.)
9.2 Xxxxxx xxxxx
Xxxx xxxxxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx etherů x jednom isokratickém xxxxxxx. Xxxxxxx fenylové xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx hydrochinonu, kterou xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx C18 x xxxxxxxx mobilní xxxx.
X xxxx xxxxxx xxxx xxxxxx dochází x rušivému vlivu xxxx xxxx xxxxxxxx. X takovém xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxx zopakováno x xxxxx systémem mobilní xxxx/xxxxxxxxxxx fáze. Vhodné xxxxxx xxx xxxxx x literatuře x xxxxxxxx 2 x 3:
Xxxxxx: Xxxxxx XXX, 4,6 xx × 25 xx nebo xxxxxxxxxxxx:
xxxxxxx: 36 °X
xxxxxx: 1,5 xx/xxx
xxxxxxx fáze:
pro xxxxxxxxxxx: xxxxxxxx/xxxx 5/95 (X/X)
xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxx/xxxx 30/70 (V/V)
pro hydrochinonmonobenzylether: xxxxxxxx/xxxx 80/20 (V/V) [5].
Xxxxxx: Spherisorb X5XXX xxxx xxxxxxxxxxxx:
xxxxxxx fáze: xxxx/xxxxxxxx 90/10 (V/V)
průtok: 1,5 xx/xxx
Xxxx xxxxxxxx xxxx vhodné xxx xxxxxxxxxxx [6].
[1] XXX 5725.
[2] XXX 5725.
[3] XXX 5725.
[4] XXX 5725.
[5] Xxxxxx-Xxxxxxxxx, X., Xxxxx X.-X., Identification xx dosage xx x’xxxxxxxxxxxx xx de xxx éthers méthylique xx xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx cosmétiques xxxx xxxxxxxx la xxxx. Xxx. X. Xxxxxx. Xxx., 8-203-214 (1986).
[6] Xxxxx, X., Xxx X., Xxxxxxxxxxxxx xx hydroquinone xx xxxx toning creams, Xxxxxxx, (1986), 111, x. 129.