Xxxxx směrnice Komise 95/32/XX
xx dne 7. xxxxxxxx 1995
x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
(Xxxx x významem xxx XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 76/768/XXX ze xxx 27. xxxxxxxx 1976 x xxxxxxxxxx právních xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 94/32/XX [2], a xxxxxxx na xx. 8 odst. 1 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xx xx xxxxxxxx 76/768/XXX xxxxxxx xxxxxx zkoušení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxxxxx xxxxxxxx metody analýzy xxxx být xxxxxxxxx xx nejdříve; xx xxxxxxx metody xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx 80/1335/XXX [3] xx znění xxxxxxxx 87/143/XXX [4], xxxxxxxx 82/434/EHS [5] xx znění směrnice 90/207/XXX [6] x xx xxxxxxxxxx 83/514/XXX [7], 85/490/XXX [8] x 93/73/XXX [9];
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxx x stanovení xxxxxxxx xxxxxxxx, kyseliny 4xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, hydrochinonmonomethyletheru, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, že xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 76/768/XXX xxxxxxxxxxx xxxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxx xxxxxxx nezbytné xxxxx k xxxxxxxxx xxxx, xxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx:
- důkaz x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx 4hydroxybenzoové, xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx popsanými x xxxxxxx.
Článek 2
1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. xxxx 1996. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx opatření xxxxxxx xxxxxxxxx státy musí xxxxxxxxx odkaz xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx odkaz xxx xxxxxx xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx této xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x platnost xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských společenství.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
V Bruselu dne 7. července 1995.
Za Xxxxxx
Xxxx Bonino
členka Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 262, 27.9.1976, x. 169.
[2] Xx. věst. X 181, 15.7.1994, x. 31.
[3] Xx. věst. X 383, 31.12.1980, x. 27.
[4] Xx. xxxx. X 57, 27.2.1987, x. 56.
[5] Úř. xxxx. X 185, 30.6.1982, x. 1.
[6] Úř. xxxx. X 108, 28.4.1990, x. 92.
[7] Úř. xxxx. X 291, 24.10.1983, x. 9.
[8] Xx. xxxx. X 295, 7.11.1985, x. 30.
[9] Úř. xxxx. X 231, 14.9.1993, x. 34.
XXXXXXX
X. XXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXXX 4XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXX XXXXXXX, XXXXXXXX SALICYLOVÉ X XXXXXXXX XXXXXXXXXX X KOSMETICKÝCH XXXXXXXXXXXX
1. Xxxxxx x oblast xxxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxxx kyseliny xxxxxxxx, xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx propionové x xxxxxxxxxxxx prostředcích. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx těchto xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx kyseliny 4xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx salicylové, xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx.
2. Xxxxxxxx
Xxxxxxxx kyseliny xxxxxxxx, kyseliny 4xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, kyseliny xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx se vyjádří x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx kyselin.
A. DŮKAZ
1. Xxxxxxxx metody
Po kyselé/zásadité xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx extrakt analyzuje xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx (XXX) x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ("derivatizace xx desce"). X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx důkaz xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx chromatografií (XX).
2. Xxxxxxx xxxxxxx
2.1 Xxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx p.a. Xxxx xxx použita xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxx alespoň ekvivalentní xxxxxxx.
2.2 Xxxxxx
2.3 Xxxxxxxxxxxx
2.4 Xxxxxxxxxxx
2.5 Xxxxxx
2.6 xXxxxx
2.7 Xxxxxxx, tekutý
2.8 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, 4 M
2.9 Xxxxxxxx xxxxxxxx, 4 X xxxxx xxxxxx
2.10 Xxxxxxx xxxxxxxx, CaCl2·2H2O
2.11 Xxxxxxxxx xxxxxx, Xx2XX3
2.12 2Xxxx2‘xxxxxxxxxxx
2.13 Xxxxxxxx 4hydroxybenzoová
2.14 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx
2.15 Kyselina xxxxxxxx
2.16 Kyselina sorbová
2.17 Xxxxxxxx propionová
2.18 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xx 0,1 % (m/V) xxxxxxx (100 xx/100 xx) xxxxx z pěti xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (2.13 xx 2.17) v xxxxxxxxxxxxx.
2.19 Derivatizační činidlo
0,5 % xxxxxx 2xxxx2‘xxxxxxxxxxxx (2.12) x xxxxxxxxxxxx (2.4) (50 mg/10 xx). Tento xxxxxx xx xxx být xxxxxxxxxxx každý xxxxx x uchováván x xxxxxxxx.
2.20 Xxxxxx xxxxxxxxxxxx
0,3 % (x/X) roztok xxxxxxxxxx lithného (2.11) xx xxxx (300 xx/100 ml). Xxxxx xxxxxx xx xxx xxx připravován xxxxxxx.
2.21 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
Xxxxxx (2.5)/xxxxxx (2.2) (20: 0,5, X/X)
2.22 Xxxxxx xxxxxxx (2.7)/xxxxxx (2.6) (1:2, X/X)
3. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
Xxxxx laboratorní vybavení
3.1 Xxxxx xxxxx nastavitelná xx xxxxxxx 60 °X
3.2 Vyvíjecí xxxxxx
3.3 Xxxxx ultrafialového xxxxxx 254 x 366 xx
3.4 Xxxxxx xxxxx xxx chromatografii na xxxxx xxxxxx, Silikagel 60, bez fluorescenčního xxxxxxxxxx, 20 × 20 cm, xxxxxxxx xxxxxx 0,25 mm x xxxxxxxxxxxx xxxxx 2,5 × 20 xx (Xxxx 11845 xxxx xxxxxxxxxxxx)
3.5 Xxxxxxxxxxxxxx xx 10 μx
3.6 Xxxxxxxxxxxxxx xx 25 μx
3.7 Xxxxxxx nastavitelná xx teplotu xx 105 °X
3.8 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx na 50 x 200 ml xx xxxxxxxxxxx zátkou
3.9 Xxxxxxxxx papír, xxxxxx 90 xx, Schleicher &xxx; Schüll, Xxxxxxxxx Xx. 5892, xxxx xxxxxxxxxxxx
3.10 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xX 1 – 11
3.11 Skleněné xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 5 xx
3.12 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (Rotavapor xxxx xxxxxxxxxxxx)
3.13 Xxxxx xxxxx
4. Postup
4.1 Příprava xxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx 50 xx xx zabroušenou xxxxxx (3.8) xx xxxxxx xxxxxxxxx 1 x xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx 4 X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (2.8) a 40 xx xxxxxxx (2.2). X silně xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx je xxxxxxxx xxxxx, xx xxxx xxx přidáno 20 xxxxx 4 X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (2.8). Xxxxxx indikátorového xxxxxxx (3.10) se xxxxxxxxxxx, xxx je xX přibližně 2. Xxxxxxxxxxxxx baňka xx xxxxxx x xx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx protřepává.
Jeli xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx fáze, směs xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxx 60 °X, xxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx filtrační xxxxx (3.9) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
20 xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 200 ml, xxxxx xx 20 xx vody x xxxxxxxx se. xX xxxxx se xxxxxx xxxxxxxxx na 10 xxxxxx 4 X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (2.9) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxx xx 1 x xxxxxxxx xxxxxxxxxx (2.10) x xxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.9) xx xxxxxx nálevky xx 250 ml xxxxxxxxxx 75 xx xxxxxxxxxxxxx (2.3) a xxxxx xx třepe xxxxx minutu. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx x vodná vrstva xx xxxxxxx do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 250 xx. Xxxxxxxx xxxxxx xx zlikviduje. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.10) xx xX xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx na přibližně 2 okyselením 4 X xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (2.8). Xxxxx xx 10 xx diethyletheru (2.3), xxxxx xx xxxxxxxxx x silně xxxxxxxxxx xxxxx minutu; xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xx rotační xxxxxxx (3.12). Vodná vrstva xx zlikviduje.
Etherová vrstva xx xxxxxx xxxxx xx xxxxx x xxxxxx se znovu xxxxxxxx x 1 xx diethyletheru (2.3). Xxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.11).
4.2 Chromatografie xx xxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxxxx xxxxx koncentrační xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx tenké xxxxxx (3.4) xx xx xxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx, které xxxx xxx analyzovány, xxxxxx xxxxxxxxxx (3.5) xx xxxxxxxx odstupech xxxx xx 3 μl xxxxxxxxxx xxxxxxxx (2.20) x xxxxxx xx x proudu xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx (3.13) xxxxxxxx xx 40 °X, xxx xx xxxxxx xxxxxxx co nejmenší. Xxxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx xx xxxxxxxxx linii xxxxx nanese xxxx 10 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (2.18) x xxxxxxx vzorku (4.1) přesně xx xxxx, kam xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xx opět přesně xx xxxx, xxx xxxx naneseny referenční xxxxxxx/xxxxxxx vzorku a xxxxxx uhličitanu xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx 15 μx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (2.19) (xxxxxx 2xxxx2‘xxxxxxxxxxxx).
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x sušárně (3.7) 45 minut při 80 °C. Xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx v komoře (3.2), xxxxx xxxx (xxx xxxxxxxx filtračním xxxxxxx) 15 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx rozpouštědlem 2.21 (xxxxxx/xxxxxx), xxxxx xxxx rozpouštědla nedosáhne xxxxxxxxxxx 15 cm (xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 80 minut).
Deska xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx vzduchu x získané skvrny xx vyhodnotí xxx XX xxxxxxx (3.3). Xxx zesílení fluorescence xxxxxxx xxxxx xxxx xxx chromatografická xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxx (2.22).
5. Důkaz
Pro xxxxxx skvrnu xx xxxxxxx xxxxxxx Xx.
Xxxxxxx Xx a chování xxxxxx xxx UV xxxxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx vzorků.
Učiní xx předběžné závěry x xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx X, xxxx xxxxxxx-xx xx, xx je xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx X. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx porovnají x xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx TLC x XXXX xxxx XX xx xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx přísad xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
X. STANOVENÍ XXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXXX 4XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXX XXXXXXX X XXXXXXXX SALICYLOVÉ
1. Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx xx xxxxxxxxx extrahuje xxxxx xxxxxxxx x xxxx. Xx filtraci xx xxxxxxxxxxx přísady xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (HPLC).
2. Reakční xxxxxxx
2.1 Xxxxxxx reakční xxxxxxx xxxx být xxxxxxx x.x. x xxxx xxx xxxxxx xxx HPLC. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
2.2 Xxxxxxx, absolutní
2.3 Xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx
2.4 Kyselina salicylová
2.5 Xxxxxxxx benzoová
2.6 Xxxxxxxx xxxxxxx
2.7 Xxxxx xxxxx, (XX3XXXXx·3X2X)
2.8 Xxxxxxxx xxxxxx, x420 = 1,05 x/xx
2.9 Xxxxxxxxxxx
2.10 Xxxxxxxx xxxxxx, 2 X
2.11 Xxxxxxxx xxxxxxxx, 0,2 X xxxxx xxxxxx
2.12 Xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxx
2.13 Směs xxxxxxx/xxxx
Xxxxx dílů ethanolu (2.2) se smíchá x jedním dílem xxxx (2:1)
2.14 Xxxxxx xxxxxxxxx standardu
Připraví xx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxx (2.12) x 500 xx xxxxx ethanol/voda (2.13).
2.15 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX
2.15.1 Xxxxxxxxx xxxx: xx 1 xxxxx xxxx se xxxxx 6,35 x xxxxxx sodného (2.7) x 20,0 xx xxxxxxxx xxxxxx (2.8) x xxxxxx xx.
2.15.2 Xxxxxxx fáze se xxxxxxxx smícháním xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru (2.15.1) x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx (2.9).
2.16 Xxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xx odměrné xxxxx xx 50 xx xx přesně naváží xxx 0,05 g xxxxxxxx 4hydroxybenzoové (2.3), 0,2 x xxxxxxxx xxxxxxxxxx (2.4), 0,2 x xxxxxxxx xxxxxxxx (2.5) x 0,05 x xxxxxxxx xxxxxxx (2.6) a objem xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx/xxxx (2.13). Xxxxxx xx uchovává v xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.
2.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxxxx xxxxx xx 20 ml xx xxxxxx 8,00, 4,00, 2,00, 1,00 x 0,50 ml xxxxxxxxx roztoku (2.16). Xx každé baňky xx xxxxx 10,00 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (2.14) a 0,5 xx 2 X xxxxxxxx xxxxxx (2.10). Xxxxx se xxxxxx xxxxx ethanol/voda (2.13). Tyto xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Přístroje x xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x dále:
3.1 Xxxxx xxxxx, nastavená xx 60 °X
3.2 Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x XX xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx délkou x 10μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxx kolona
Korozivzdorná xxxx, xxxxx 12,5 xx 25 xx, xxxxxxx xxxxxx 4,6 xx, xxxxxx Xxxxxxxxxxx 5X18 xxxx xxxxxxxxxxxx náplní.
3.4 Xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx: 90 xx, Xxxxxxxxxx xxx Schüll, Weissband Xx 5892 xxxx xxxxxxxxxxxx.
3.5 Erlenmeyerovy baňky xx 50 ml
3.6 Xxxxxxxx vzorkovací xxxxxxxx xx 5 xx
3.7 Xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx 2–4 mm, xxxx xxxxxxxxxxxx
4. Xxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
4.1.1 Příprava xxxxxx bez xxxxxxx xxxxxxxxx standardu
Do Erlenmeyerovy xxxxx na 50 xx (3.5) xx xxxxxx 1 x xxxxxx. Xx Erlenmeyerovy xxxxx se xxxxxxxxxx 10 xx 2 X kyseliny sírové (2.10) a 40 xx směsi xxxxxxx/xxxx (2.13). Přidá se xxxxxxxxx 1 g xxxxxxx kamínků (3.7), xxxxx xx xxxxxx x xxxxx se xxxxxxx jednu minutu xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx konzervačních xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx se Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx minut xx xxxxx xxxxx (3.1) xxx 60 °X.
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx ihned xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx na xxxxxx xxxxx xxx 5 °C.
Extrakt se xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.4). Xxx 2 xx extraktu xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.6). Xxxxxxx se xxxxxxxx xxx 5 °C x stanovení pomocí XXXX se xxxxxxx xx 24 xxxxx.
4.1.2 Xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx baňky na 50 xx (3.5) xx x xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 1 ± 0,1 x xxxxxx (a xxxxx). Xxxxxxx xx přidá 1,00 ml 2 X xxxxxxxx xxxxxx (2.10) x 30,0 xx xxxxx ethanol/voda (2.13). Přidá xx xxxxxxxxx 1 x xxxxxxx xxxxxxx (3.7) x 10 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx(2.14). Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx a xxxxx xx alespoň jednu xxxxxx xxxxxxxxxx, dokud xxxxxxxxx homogenní xxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx přísad do xxxxxxxxxx xxxx xx Xxxxxxxxxxxxx baňka xxxxxxx xxxxxx pět xxxxx xx xxxxx xxxxx (3.1) při 60 °X.
Xxxxxxxxxxxxx baňka xx xxxxx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx vody x extrakt xx xxxxx xx hodinu xxx 5 °X.
Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.4). Xxx 2 xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorkovací lahvičky (3.6). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxx 5 °X x xxxxxxxxx xxxxxx XXXX xx xxxxxxx xx 24 xxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxx kapalinová xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx fáze: xxxxxxxxxxx/xxxxxxxxx xxxx (2.15).
Xxxxxx mobilní xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx 2,0 ± 0,5 xx/xxx. Xxxxxx délka xxxxxxxxx xx nastaví na 240 xx.
4.2.1 Xxxxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxx xx 10 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx přísad (2.17). Xxx xxxxx xxxxxx se xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výšky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x výšce xxxx xxxxxxxxx standardu xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Pro xxxxxx xxxxxxxxxxx přísadu xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku.
Přesvědčete xx, xx xxx xxxxxxxxx xxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx odezva.
4.2.2 Xxxxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx chromatografu (3.2) xx nastříkne 10 μx xxxxxxxx xxxxxx (4.1.1) x xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. Nastříkne xx 10 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx konzervační xxxxxxx (2.17) x xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx chromatogramy xx xxxxxxxxx. Xxxx-xx x xxxxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx (4.1.1) xxxxx xxx x přibližně stejným xxxxxxxxx časem xxxx xxx xxxxxxxx 2methoxybenzoové (xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx), xxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (4.1.2) x xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.
Xx-xx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.1.1) xxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxx vnitřní standard. (Xxxx-xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx použít jako xxxxxxx xxxxxxxx.)
Xx xxxxx xxxxxx, zda chromatogramy xxxxxxx pro standardní xxxxxx a xxxxxx xxxxxx splňují následující xxxxxxxxx:
- separace píků xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx 0,90. (Xxxxxxxx separace xxxx xx uvedena xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxx
Xxxx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx dosaženo, xxxx xx být buď xxxxxxx xxxxxxxxx kolona xxxx xx mělo xxx složení xxxxxxx xxxx upraveno xxx, xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx.
- Xxxxxx xxxxxxxxx Xx všech xxxxxxxxx xxxx by xx xxx xxxxxxxxx xx 0,9 xx 1,5. (Xxxxxxxx faktoru xxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx 2.) Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx je doporučená xxxxxxxx xxxxxx papíru xxxxxxx 2 xx/xxx.
Xxxxxxx 2: Xxxxxx xxxxxxxxx xxxx
- Základna xxxx xxx stabilní.
5. Výpočet
Pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxxxx xx použijí xxxxxx xxxxx píků xxxxxxxxxxxxx konzervačních přísad x xxxxx xxxx xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxx (vnitřní xxxxxxxx) x xxxx xxxxxxxxxx graf. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, kyseliny 4xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx procentech (xx) xx vypočte pomocí xxxxxx
xx % (m/m) = (100x 20 x x) / (106 x&xxxx; x) = x / (500 x x)
xxx
x = hmotnost zkušebního xxxxxx (4.1.2) (g),
b = koncentrace konzervační xxxxxxx x extraktu xxxxxx (4.1.2) (μg/ml) xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx.
6. Opakovatelnost [1]
Xxx xxxxxx xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx 0,40 % xx xxxxxx absolutní xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx současně xx stejným vzorkem xxxxxxxxx 0,035 %.
Xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 0,50 % xx xxxxxx absolutní xxxxxxx xxxxxxx výsledků dvou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 0,050 %.
Při xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 0,50 % by xxxxxx xxxxxxxxx hodnota xxxxxxx výsledků xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 0,045 %.
Xxx xxxxxx kyseliny sorbové 0,60 % xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx současně xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 0,035 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx testování xxxxxxxxxxx metody xxxxxxx, xx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx rozhodující x xxxxxxxx zpracovávaného xxxxxx xx xxxx xxxx být x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
7.2 Je-li xx xxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
X. XXXXXXXXX KYSELINY XXXXXXXXXX
1. Rozsah a xxxxxx použití
Tato xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx prostředcích xx xx maximální xxxxxxxxxxx 2 % (x/x).
2. Definice
Koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx vyjádří x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (% x/x) xxxxxxx.
3. Xxxxxxxx metody
Po xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx z xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx plynovou xxxxxxxxxxxxxx xx použití kyseliny 2xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
4. Reakční xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxx x.x; xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxx ekvivalentní xxxxxxx.
4.1 Xxxxxxx, 96 % (X/X)
4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx
4.3 Kyselina 2xxxxxxxxxxxxxxxx
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx, 10 % (m/V)
4.5 Roztok xxxxxxxx propionové
Do xxxxxxx xxxxx na 50 xx xx xxxxxx xxxxxx 1 g (x xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xx xx objem xxxxxxxxx (4.1).
4.6 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xx odměrné xxxxx na 50 xx se xxxxxx xxxxxx 1 x (x xxxxx) xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xx na xxxxx xxxxxxxxx (4.1).
5. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
5.1 Xxxxx xxxxxxxxxxx vybavení x xxxx:
5.2 Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x plamenovým xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
5.3 Xxxxxxxx zkumavka (20 × 150 xx) se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
5.4 Vodní xxxxx xxxxxxxxx xx 60 °X
5.5 Xxxxxxxx injekční xxxxxxxxx na 10 xx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx (průměr xxxx 0,45 μx)
6. Postup
6.1 Xxxxxxxx xxxxxx
6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xxx vnitřního xxxxxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxxxxx (5.3) xx xxxxxx xxxxxxxxx 1 x xxxxxx. Xxxxx xx 0,5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (4.4) x 9,5 xx xxxxxxxx (4.1).
Xxxxxxxx se xxxxxx x silně xxxxxxxx. Xxxx to xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xx pět xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxx xx 60 °X (5.4), xxx xx xxxxx rozpustila xxxxxx fáze. Zkumavka xx xxxxxx zchladí xxx xxxxxxx vodou. Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx (5.5). Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxx.
6.1.2 Příprava xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xx xxxxxxxx zkumavky (5.3) xx s xxxxxxxxx xx 3 xxxxxxxxx místa xxxxxx 1 ± 0,1 x xxxxxx. Xxxxx xx 0,5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (4.4), 0,50 xx xxxxxxx xxxxxxxxx standardu (4.6)x 9 ml xxxxxxxx (4.1).
Xxxxxxxx se xxxxxx x silně protřepe. Xxxx xx xxxxxxxx, xxxxxx se zkumavka xx pět minut xx xxxxx xxxxx xxxxxxx xx 60 °X (5.4), xxx xx xxxxx rozpustila xxxxxx xxxx. Zkumavka xx xxxxxx zchladí xxx xxxxxxx xxxxx. Xxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxx membránový xxxxx (5.5). Chromatografie xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx.
6.2 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx provozní xxxxxxxx
Xxxxxx
Xxx: xxxxxxxxxxxxx ocel
Délka: 2 x
Xxxxxx: ⅛"
Xxxxx: 10 % SP™ 1000 (xxxx xxxxxxxxxxxx) + 1 % X3XX4 xx Xxxxxxxxxxx XXX 100–120 mesh
Teplota
Nástřik: 200 °X
Xxxxxx: 120 °X
Xxxxxxxx: 200 °X
Xxxxx xxxx: xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: 25 xx/xxx
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
6.3.1 Xxxxxxxxx
Xx řady xxxxxxxxx xxxxx xx 20 xx se xxxxxxxxxx 0,25, 0,50, 1,00, 2,00 a 4,00 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (4.5). Xx xxxxx xxxxxxx baňky xx odpipetuje 1,00 xx xxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx (4.6); xxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx (4.1) x xxxxxxx. Xxxxx připravené xxxxxxx xxxxxxxx kyselinu 2xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xx/xx (xx xxxxxxx 1 xx/xx, xx-xx e = 1,000) a kyselinu xxxxxxxxxxx v koncentraci x/4, x/2, x, 2x, 4p xx/xx (xx xxxxxxx 0,25, 0,50, 1,00, 2,00, 4,00 mg/ml, xx-xx x = 1,000).
Nastříkne xx 1 μx xxxxxx roztoků x xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx poměru xxxxxxxxx xxxxxxxx propionové x xxxxxxxx 2methylpropionové xx xxx x x poměru odpovídajících xxxxx xxxx xx xxx x.
Xxxxxxxxxx se 3 xxxxx z xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx píku.
6.3.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx 1 μx xxxxxxxx xxxxxx 6.1.1. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx s chromatogramem xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (6.3.1). Xx-xx xxx xxxxxxxxx stejný xxxxxxxx xxx xxxx xxx xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxxxxxx xxxxx rušivý xxxx, xxxxxxxxx xx 1 μx xxxxxxxx xxxxxx 6.1.2 x změří xx plochy píku xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx standardu.
Nastříknou xx 3 xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx.
7. Xxxxxxx
7.1 X xxxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxx xxxxx xxxx 6.3.1 xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx (X), xxxxx xxxxxxxx poměru xxxxx xxxx vypočtenému x xxxx 6.3.2.
7.2 X xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx se vypočte xxxxx xxxxxxxx propionové xx xxxxxx (x) x xxxxxxxxxxxx procentech xxxxxx vzorce
x % (x/x) = X (0,5 x 100 x x) / (50 x x) =X(x / x)
xxx
X = xxxxx xxxxxxxxx x bodu 7.1,
x = xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x gramech xxxxx xxxx 4.6,
x = xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx 6.1.2,
Výsledky xx xxxxxxxxxx xx jedno xxxxxxxxx xxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx [2]
Xxx xxxxxx kyseliny xxxxxxxxxx 2 % (x/x) by neměl xxxxxx výsledků xxxx xxxxxxxxx provedených xxxxxxxx xx xxxxxxx vzorkem xxxxxxxxx 0,12 %.
XX. XXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX, HYDROCHINONMONOMETHYLETHERU, HYDROCHINONMONOETHYLETHERU X XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX
X. DŮKAZ
1. Xxxxxx a xxxxxx xxxxxxx
X metodě xx xxxxxxx detekce x xxxxx hydrochinonu, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx.
2. Podstata xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxxxx a jeho xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx (TLC).
3. Xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx reakční xxxxxxx xxxx xxx čistoty x.x.
3.1 Xxxxxxx, 96 % (V/V)
3.2 Xxxxxxxxxx
3.3 Xxxxxxxxxxxx
3.4 Vyvíjecí rozpouštědlo:
Chloroform/diethylether, 66: 33 (X/X)
3.5 Xxxxxxx, 25 % (x/x) (x420 = 0,91 x/xx)
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxx
3.7 Xxxxxxxxxxx
3.8 Hydrochinonmonomethylether
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx
3.10 Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (monobenzon)
3.11 Xxxxxxxxxx roztoky
Následující xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xxxxxxxx xxxxx den.
3.11.1 Xx xxxxxx xxxxxxxx xx 10 xx xx naváží 0,05 x xxxxxxxxxxxx (3.7). Xxxxx xx 0,250 x xxxxxxxx xxxxxxxxx (3.6) x 5 xx xxxxxxxx (3.1). Xxxxxxx xx xxxxxxx (3.5), xxxxx není xxxxxxxx xX 10, x xxxxxx xx xxxxxxxxx na xxxxx 10 xx (3.1).
3.11.2 Xx xxxxxx xxxxxxxx xx 10 xx xx naváží 0,05 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.8). Xxxxx xx 0,250 x xxxxxxxx xxxxxxxxx (3.6) x 5 xx xxxxxxxx (3.1). Xxxxxxx xx amoniak (3.5), xxxxx xxxx xxxxxxxx xX 10, x xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx 10 xx (3.1).
3.11.3 Xx xxxxxx xxxxxxxx xx 10 xx xx naváží 0,05 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.9). Xxxxx xx 0,250 x kyseliny xxxxxxxxx (3.6) x 5 xx xxxxxxxx (3.1). Xxxxxxx xx xxxxxxx (3.5), xxxxx xxxx xxxxxxxx pH 10, x doplní se xxxxxxxxx xx objem 10 ml (3.1).
3.11.4 Xx xxxxxx xxxxxxxx xx 10 xx xx xxxxxx 0,05 x hydrochinonmonobenzyletheru (3.10). Xxxxx xx 0,250 x xxxxxxxx askorbové (3.6) x 5 xx xxxxxxxx (3.1). Xxxxxxx xx xxxxxxx (3.5), dokud xxxx xxxxxxxx xX 10, x doplní xx xxxxxxxxx xx objem 10 xx (3.1).
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxx
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx
3.14 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
3.15 Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
3.16 Xxxxxxxx činidla
3.16.1 Xx 5 % xxxxxxx roztoku (m/V) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxxxx amoniak (3.5), xxxxx xx xxxxxxx xx sraženina xxxx nerozpustí.
Upozornění:
Při xxxxxx xxxxx xx x xxxxxxx tvoří xxxxxxx xxxxxxxxxx x měl xx xxx po xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3.16.2 10 % (x/X) roztok xxxxxxxx dodekamolybdofosforečné (3.13) x ethanolu (3.1).
3.16.3 Xxxxxxxx xx 1 % (x/X) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.14) a 2 % (x/X) xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx železitého (3.15). Xxxxx xxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx díly xxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
Xxxxx laboratorní xxxxxxxx, x xxxx:
4.1 Běžné xxxxxxxx xxx chromatografii xx xxxxx xxxxxx
4.2 Xxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx na tenké xxxxxx: silikagel GHR/UV254 (254 je xxxxxx xxxxxxx XXX/XX); 20 × 20 cm (Xxxxxxx, Xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx). Tloušťka xxxxxx 0,25 mm.
4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxx
4.4 Xxxxxxxxxxx
4.5 UV xxxxx, 254 xx
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxxxxx na 10 xx xx xxxxxx 3 x xxxxxx. Xxxxx xx 0,250 x kyseliny xxxxxxxxx (3.6) x 5 xx xxxxxxxx (3.1). pH xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.5) na 10. Xxxxx se xxxxxx xxxxxxxxx (3.1) xx 10 xx. Xxxxxxxx xx xxxxxx zátkou x homogenizuje xx 10 xxxxx x xxxxxxxxxxxx lázni. Zfiltruje xx přes filtrační xxxxx xxxx se xxxxxxxx xxx 3000 xx./xxx.
5.2 Chromatografie xx xxxxx vrstvě (TLC)
5.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx komora xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.4).
5.2.2 Na xxxxx xx nanese xx 2 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.11) x 2 μx xxxxxxx xxxxxx (5.1). Xxxxxx xx ve tmě xxx teplotě okolí, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzdálenosti 15 xx xx startu.
5.2.3 Xxxxx se xxxxx, xxxxx se vyschnout xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Deska xx xxxxxxxx xxx UV xxxxxx při 254 xx a xxxxxx xxxxx xx xxxxxx.
5.3.2 Xxxxx xx xxxxxxxx
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.16.1), xxxx
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.16.2); zahřeje xx xx asi 120 °X, nebo
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx chloridu xxxxxxxxxx (3.16.3).
6. Xxxxx
Xxxxxxx se xxxxxxx Xx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx vzorku se xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxx, pokud jde x xxxxxx xxxxxxx Xx, barvu skvrn x XX xxxxxx x xxxxx skvrn xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx oddílu (X) a xxxxxxxxx xx retenční xxxx xxxxxxx pro xxx (xxxx) xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx píků xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx x XXX a XXXX xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx přítomnost xxxxxxxxxxxx xxxx jeho xxxxxx.
7. Xxxxxxxx
Xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx hodnoty Xx:
xxxxxxxxxxx: 0,32
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx: 0,53
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx: 0,55
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx: 0,58
X. XXXXXXXXX
1. Xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx
X xxxxxx je xxxxxxxxxxxx xxxxxx pro stanovení xxxxxxxxxxxx, hydrochinonmonomethyletheru, hydrochinonmonoethyletheru x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx prostředcích xxx xxxxxxxxxx xxxx.
2. Podstata xxxxxx
Xxxxxx xx extrahován xxxxx voda/methanol xx xxxxxxx zahřátí, xxxxxx xx xxxxxxxx tukový xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x obrácenou xxxx x XX xxxxxxx.
3. Reakční činidla
3.1 Xxxxxxx reakční xxxxxxx xxxx být xxxxxxx x.x. Musí být xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistoty.
3.2 Methanol
3.3 Xxxxxxxxxxx
3.4 Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx
3.5 Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx
3.6 Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
3.7 Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx XXXX
3.8 Xxxx voda/methanol 1:1 (X/X). Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxx x jeden xxx xxxxxxxxx (3.2)
3.9 Xxxxxxx xxxx: xxxx tetrahydrofuran/voda 45:55 (V/V). Smíchá xx 45 dílů xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7) x 55 dílů vody.
3.10 Xxxxxxxxxx roztok
Do odměrné xxxxx xx 50 xx xx xxxxxx 0,06 g xxxxxxxxxxxx (3.3), 0,08 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.4), 0,10 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 0,12 g xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xx x xxxxxx xx na objem xxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx 10 ml xxxxxx roztoku xx 50 xx xxxxx xxxx/xxxxxxxx (3.8). Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxx laboratorní xxxxxxxx x xxxx:
4.1 Xxxxx xxxxx nastavitelná na xxxxxxx 60 °C
4.2 Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x XX detektorem s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x 10μl nastřikovací xxxxxxx
4.3 Analytická xxxxxx:
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x korozivzdorné xxxxx, xxxxx 250 xx, xxxxxxx průměr 4,6 xx, xxxxxx Xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx na Xxxxxxx XXX, uzavřená xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxx 6 μx, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx, x výjimkou fenylové xxxxxx xxxx xxxxxx x ekvivalentní xxxxxx.
4.4 Xxxxxxxxx xxxxx, průměr 90 xx, Schleicher xxx Xxxüxx, Xxxxxxxxx Xx 5892 xxxx xxxxxxxxxxxx
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xx 50 ml xx x xxxxxxxxx xx xxx desetinná xxxxx xxxxxx 1 ± 0,1 x (x gramů) xxxxxx. Xxxxxx se rozptýlí xx 25 ml xxxxx xxxx/xxxxxxxx (3.8). Xxxxx xx uzavře x silně xxxxxxxx, xxxxx xx nevytvoří xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx na xxxxx xxxxx (4.1) nastavenou xx 60 °X, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx x xxxxxx xx na objem xxxxx voda/methanol (3.8). Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.4). Xxxxx XXXX xx xxxxxxx do 24 xxxxx xx xxxxxxxx extraktu.
5.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.2.1 Průtoková xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.9) xx upraví xx 1,0 xx/xxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx se nastaví xx 295 xx.
5.2.2 Xxxxxxxxx xx 10 μx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 x xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. Změří xx xxxxxx píků. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.2.3. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx x xxxxxxxxxx roztoky. Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxx a xxxxxxx odezvy (XX) xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.2.3.
5.2.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx se 10 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.10) x xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx, dokud není xxxxxx píku xxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xxxxxx odezvy XXx (x je xxxxxx xxxxxxx XX):
XXx = xx /xx
xxx
xx = plocha xxxx xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx, x
xx = koncentrace xxxxxxxxxxxx, hydrochinonmonomethyletheru, hydrochinonmonoethyletheru xxxx hydrochinonmonobenzyletheru x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.10) (x/50 ml).
Je xxxxx xxxxxx, xxx chromatogramy xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx splňují xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:
- separace xxxx xxxxxxx odděleného xxxx xx xxxxxxx 0,90. (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx 1.).
Obrázek 1: Xxxxxxxx xxxx
Xxxx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx dosaženo, xxxx xx být buď xxxxxxx xxxxxxxxx kolona xxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx.
- Faktor asymetrie Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xx se xxx xxxxxxxxx od 0,9 xx 1,5. (Xxxxxxxx faktoru xxxxxxxxx xx uvedena xx xxxxxxx 2.) Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx za xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx doporučená xxxxxxxx xxxxxx papíru xxxxxxx 2 cm/min.
Obrázek 2:Xxxxxx xxxxxxxxx xxxx
- Xxxxxxxx musí být xxxxxxxx.
6. Výpočet
Pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx) ve xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxx analytů. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x hmotnostních xxxxxxxxxx (xi) xx xxxxxxx xxxxxx vzorce
xi % (x/x) = (xx x 100) / (XXx x x)
xxx
x = hmotnost xxxxxx v gramech,
bi = xxxxxx píku xxxxxxx x ve xxxxxx.
7. Opakovatelnost [3]
7.1 Xxx obsahu hydrochinonu 2,0 % xx xxxxxx absolutní hodnota xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx současně xx stejným vzorkem xxxxxxxxx 0,13 %.
7.2 Xxx xxxxxx hydrochinonmonomethyletheru 1,0 % xx xxxxxx absolutní xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx provedených xxxxxxxx xx xxxxxxx vzorkem xxxxxxxxx 0,1 %.
7.3 Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 1,0 % by xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx stejným xxxxxxx xxxxxxxxx 0,11 %.
7.4 Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 1,0 % xx xxxxxx absolutní xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx současně xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 0,11 %.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx [4]
8.1 Při xxxxxx xxxxxxxxxxxx 2 % xx neměla xxxxxxxxx hodnota xxxxxxx xxxxxxxx xxxx stanovení xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx za různých xxxxxxxx (různé xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, různé xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx) xxxxxxxxx 0,37 %.
8.2 Při xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 1 % xx neměla xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx stanovení xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxx různá xxxx) xxxxxxxxx 0,21 %.
8.3 Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 1 % xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx provedených xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx podmínek (xxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx) xxxxxxxxx 0,19 %.
8.4 Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 1 % by neměla xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx laboratoře, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, různé xxxxxxxxx xxxx různá xxxx) xxxxxxxxx 0,11 %.
9. Poznámky
9.1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx vyšší xxx 2 % x xx požadován xxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xx být xxxxxxx vzorku (5.1) xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, jakou xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx 2 % xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx by xxxx xxx opakováno.
(U xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx vysokých xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ležet hodnota xxxxxxxxxx xxxx lineární xxxxxx xxxxxxxxx.)
9.2 Xxxxxx xxxxx
Xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxx x jednom xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx zajistí dostatečnou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, kterou xxxxx zajistit při xxxxxxx xxxxxx X18 x uvedenou xxxxxxx xxxx.
X xxxx metody xxxx snadno xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. X xxxxxxx případě xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx/xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxxx 2 x 3:
Xxxxxx: Xxxxxx XXX, 4,6 xx × 25 xx xxxx xxxxxxxxxxxx:
xxxxxxx: 36 °X
xxxxxx: 1,5 ml/min
mobilní xxxx:
xxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxx/xxxx 5/95 (X/X)
xxx hydrochinonmonomethylether: xxxxxxxx/xxxx 30/70 (V/V)
pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxx/xxxx 80/20 (V/V) [5].
Xxxxxx: Xxxxxxxxxx X5XXX xxxx xxxxxxxxxxxx:
xxxxxxx xxxx: xxxx/xxxxxxxx 90/10 (X/X)
xxxxxx: 1,5 ml/min
Tyto xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx [6].
[1] XXX 5725.
[2] XXX 5725.
[3] XXX 5725.
[4] XXX 5725.
[5] Xxxxxx-Xxxxxxxxx, X., Xxxxx X.-X., Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx x’xxxxxxxxxxxx et xx xxx éthers xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx cosmétiques xxxx xxxxxxxx la xxxx. Xxx. X. Xxxxxx. Xxx., 8-203-214 (1986).
[6] Xxxxx, X., Xxx X., Xxxxxxxxxxxxx xx hydroquinone xx xxxx toning xxxxxx, Xxxxxxx, (1986), 111, x. 129.