Xxxxx směrnice Komise 95/32/XX
xx xxx 7. xxxxxxxx 1995
x xxxxxxxx xxxxxxx nezbytných pro xxxxxxxx xxxxxxx kosmetických xxxxxxxxxx
(Xxxx x xxxxxxxx xxx EHP)
KOMISE EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 76/768/XXX ze xxx 27. xxxxxxxx 1976 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx členských xxxxx xxxxxxxxxx se kosmetických xxxxxxxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 94/32/XX [2], a xxxxxxx na čl. 8 xxxx. 1 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxx, xx xx xx směrnici 76/768/XXX xxxxxxx úřední xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx prostředků x xxxxx zajistit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx předpisy Xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx složení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xx xxxxxxx xxxxxxxx metody analýzy xxxx xxx stanoveny xx nejdříve; xx xxxxxxx metody xxx xxxx přijaty xx xxxxxxxx Xxxxxx 80/1335/XXX [3] xx znění xxxxxxxx 87/143/EHS [4], xxxxxxxx 82/434/EHS [5] xx xxxxx směrnice 90/207/XXX [6] x xx xxxxxxxxxx 83/514/EHS [7], 85/490/EHS [8] x 93/73/XXX [9];
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx, kyseliny xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx prostředcích x xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, hydrochinonmonomethyletheru, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x souladu se xxxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 76/768/EHS xxxxxxxxxxx xxxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxx všechny xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxx, aby xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx:
- důkaz x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx sorbové, xxxxxxxx xxxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxx,
- xxxxx x xxxxxxxxx hydrochinonu, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Článek 2
1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx dosažení souladu x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx do 30. xxxx 1996. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx odkaz na xxxx xxxxxxxx nebo xxxx takový xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx znění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx předpisů, xxxxx xxxxxxx x oblasti xxxxxxxxxx této xxxxxxxx.
Článek 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 7. xxxxxxxx 1995.
Za Xxxxxx
Xxxx Xxxxxx
xxxxxx Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 262, 27.9.1976, x. 169.
[2] Úř. věst. X 181, 15.7.1994, x. 31.
[3] Úř. xxxx. X 383, 31.12.1980, x. 27.
[4] Xx. xxxx. X 57, 27.2.1987, x. 56.
[5] Úř. xxxx. X 185, 30.6.1982, x. 1.
[6] Xx. xxxx. X 108, 28.4.1990, x. 92.
[7] Xx. xxxx. X 291, 24.10.1983, x. 9.
[8] Xx. xxxx. X 295, 7.11.1985, x. 30.
[9] Xx. xxxx. X 231, 14.9.1993, x. 34.
XXXXXXX
X. XXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXXX 4XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXX XXXXXXX, XXXXXXXX XXXXXXXXXX X KYSELINY XXXXXXXXXX X KOSMETICKÝCH XXXXXXXXXXXX
1. Xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx důkaz a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx 4hydroxybenzoové, kyseliny xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx popsány xxxxxxx důkazu těchto xxxxxxxxxxxxx přísad, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx kyseliny 4xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx.
2. Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx salicylové, xxxxxxxx xxxxxxx a kyseliny xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.
X. XXXXX
1. Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx přísad xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx (TLC) a xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ("xxxxxxxxxxxx xx xxxxx"). V xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xx xxxxx potvrdí xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx, x xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxx, xxxxxxxx chromatografií (GC).
2. Xxxxxxx xxxxxxx
2.1 Obecně
Všechna xxxxxxx činidla musí xxx čistoty x.x. Xxxx xxx použita xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
2.2 Xxxxxx
2.3 Xxxxxxxxxxxx
2.4 Xxxxxxxxxxx
2.5 Xxxxxx
2.6 xXxxxx
2.7 Xxxxxxx, xxxxxx
2.8 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, 4 M
2.9 Xxxxxxxx xxxxxxxx, 4 X vodný roztok
2.10 Xxxxxxx xxxxxxxx, XxXx2·2X2X
2.11 Xxxxxxxxx xxxxxx, Li2CO3
2.12 2Xxxx2‘xxxxxxxxxxx
2.13 Kyselina 4xxxxxxxxxxxxxxx
2.14 Xxxxxxxx salicylová
2.15 Kyselina xxxxxxxx
2.16 Xxxxxxxx sorbová
2.17 Xxxxxxxx propionová
2.18 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xx 0,1 % (x/X) xxxxxxx (100 mg/100 ml) xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxxx přísad (2.13 xx 2.17) x xxxxxxxxxxxxx.
2.19 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
0,5 % roztok 2brom2‘acetonaftonu (2.12) v xxxxxxxxxxxx (2.4) (50 xx/10 xx). Xxxxx roztok xx xxx být xxxxxxxxxxx každý týden x xxxxxxxxx x xxxxxxxx.
2.20 Xxxxxx xxxxxxxxxxxx
0,3 % (x/X) roztok xxxxxxxxxx xxxxxxxx (2.11) xx xxxx (300 xx/100 xx). Tento xxxxxx xx měl xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
2.21 Xxxxxxxx rozpouštědlo
Toluen (2.5)/aceton (2.2) (20: 0,5, X/X)
2.22 Tekutý parafin (2.7)/xxxxxx (2.6) (1:2, X/X)
3. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
Xxxxx laboratorní xxxxxxxx
3.1 Xxxxx lázeň xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx 60 °X
3.2 Vyvíjecí xxxxxx
3.3 Xxxxx ultrafialového xxxxxx 254 a 366 xx
3.4 Xxxxxx desky xxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxx xxxxxx, Silikagel 60, xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, 20 × 20 cm, xxxxxxxx xxxxxx 0,25 xx x xxxxxxxxxxxx xxxxx 2,5 × 20 xx (Xxxx 11845 xxxx ekvivalentní)
3.5 Xxxxxxxxxxxxxx xx 10 μl
3.6 Xxxxxxxxxxxxxx na 25 μx
3.7 Sušárna xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx 105 °X
3.8 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx na 50 x 200 ml xx zabroušenou xxxxxx
3.9 Xxxxxxxxx xxxxx, průměr 90 xx, Xxxxxxxxxx &xxx; Schüll, Weissband Xx. 5892, nebo xxxxxxxxxxxx
3.10 Univerzální indikátorový xxxxxxx, xX 1 – 11
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 5 ml
3.12 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx)
3.13 Xxxxx xxxxx
4. Xxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx Erlenmeyerovy xxxxx xx 50 ml xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.8) xx odváží xxxxxxxxx 1 g xxxxxx. Xxxxxxx se xxxxx kapky 4 X xxxxxxxx chlorovodíkové (2.8) x 40 xx xxxxxxx (2.2). X xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx xxxxx, xx xxxx xxx přidáno 20 kapek 4 X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (2.8). Pomocí xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.10) se xxxxxxxxxxx, xxx je xX xxxxxxxxx 2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx a po xxxx xxxxx xxxxxx xx silně xxxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx přísad do xxxxxxxxx xxxx, xxxx xx opatrně xxxxxxx xx xxx 60 °X, xxx se xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx filtrační xxxxx (3.9) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
20 xx xxxxxxxx se xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 200 xx, xxxxx xx 20 xx xxxx x xxxxxxxx xx. pH xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx na 10 xxxxxx 4 M xxxxxxxxx draselného (2.9) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxx se 1 x xxxxxxxx xxxxxxxxxx (2.10) a xxxxx se xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx papír (3.9) xx xxxxxx xxxxxxx xx 250 xx xxxxxxxxxx 75 ml xxxxxxxxxxxxx (2.3) x xxxxx se xxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx nechají xxxxxxx x vodná xxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 250 ml. Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xx použití indikátorového xxxxxxx (3.10) se xX vodného roztoku xxxxxx na xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxxx 4 X kyselinou chlorovodíkovou (2.8). Xxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx (2.3), xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx minutu; xxxxxx se nechají xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xx rotační odparky (3.12). Vodná xxxxxx xx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx vrstva xx odpaří xxxxx xx xxxxx x xxxxxx se znovu xxxxxxxx x 1 xx diethyletheru (2.3). Xxxxxx se převede xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.11).
4.2 Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx vrstvě (3.4) se do xxxx, jejichž xxxxx xxxxxxxx počtu xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx analyzovány, xxxxxx xxxxxxxxxx (3.5) ve xxxxxxxx xxxxxxxxx vždy xx 3 μl xxxxxxxxxx xxxxxxxx (2.20) x xxxxxx xx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx topnou xxxxx (3.13) zahřátou xx 40 °C, xxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx nanese xxxx 10 μl xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (2.18) x xxxxxxx vzorku (4.1) přesně do xxxx, xxx xxx xxxxxxx uhličitan xxxxxx.
Xxxxxxx xx opět xxxxxx xx bodů, kam xxxx naneseny xxxxxxxxxx xxxxxxx/xxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx lithného, xxxxxx xxxxxxxxx 15 μx derivatizačního xxxxxxx (2.19) (roztok 2xxxx2‘xxxxxxxxxxxx).
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x sušárně (3.7) 45 minut xxx 80 °C. Xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx (3.2), která byla (xxx xxxxxxxx filtračním xxxxxxx) 15 minut xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 2.21 (toluen/aceton), dokud xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 xx (xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 80 xxxxx).
Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxx studeného xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx vyhodnotí xxx XX světlem (3.3). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxx (2.22).
5. Důkaz
Pro xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx Xx.
Xxxxxxx Xx a chování xxxxxx pod XX xxxxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx vzorků.
Učiní xx předběžné xxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx chromatografie popsaná x xxxxxx X, xxxx xxxxxxx-xx xx, xx je xxxxxxxx xxxxxxxx propionová, provede xx plynová chromatografie xxxxxxx x oddílu X. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx XXX x XXXX nebo XX xx zkombinují x xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
X. XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX, KYSELINY 4XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXX SORBOVÉ X XXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxxxxxx metody
Vzorek xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxx. Po filtraci xx konzervační xxxxxxx xxxxxxx vysokoúčinnou kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (XXXX).
2. Xxxxxxx xxxxxxx
2.1 Všechna xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x.x. x xxxx xxx xxxxxx xxx XXXX. Musí xxx použita xxxxxxxxxxx xxxx nebo xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
2.2 Xxxxxxx, xxxxxxxxx
2.3 Kyselina 4xxxxxxxxxxxxxxx
2.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx
2.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx
2.6 Xxxxxxxx xxxxxxx
2.7 Octan sodný, (XX3XXXXx·3X2X)
2.8 Xxxxxxxx octová, x420 = 1,05 x/xx
2.9 Acetonitril
2.10 Kyselina xxxxxx, 2 X
2.11 Xxxxxxxx xxxxxxxx, 0,2 X xxxxx xxxxxx
2.12 Xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxx
2.13 Směs xxxxxxx/xxxx
Xxxxx xxxx xxxxxxxx (2.2) xx xxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxx (2:1)
2.14 Roztok xxxxxxxxx standardu
Připraví xx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2methoxybenzoové (2.12) x 500 xx směsi xxxxxxx/xxxx (2.13).
2.15 Xxxxxxx xxxx xxx HPLC
2.15.1 Xxxxxxxxx xxxx: do 1 xxxxx xxxx xx xxxxx 6,35 x xxxxxx sodného (2.7) x 20,0 xx xxxxxxxx xxxxxx (2.8) x smíchá se.
2.15.2 Xxxxxxx fáze xx xxxxxxxx smícháním devíti xxxx xxxxxxxxxxx pufru (2.15.1) x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx (2.9).
2.16 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xx 50 xx xx xxxxxx naváží xxx 0,05 g xxxxxxxx 4xxxxxxxxxxxxxxx (2.3), 0,2 x xxxxxxxx xxxxxxxxxx (2.4), 0,2 x kyseliny xxxxxxxx (2.5) a 0,05 x kyseliny xxxxxxx (2.6) x xxxxx xx doplní xxxxx xxxxxxx/xxxx (2.13). Roztok xx xxxxxxxx v xxxxxxxx. Xxxxxx je xxxxxxxx xxxxx xxxxx.
2.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxx konzervačních xxxxxx
Xx xxxxxxxxx baněk xx 20 xx xx odměří 8,00, 4,00, 2,00, 1,00 x 0,50 ml xxxxxxxxx roztoku (2.16). Xx xxxxx baňky xx přidá 10,00 xx xxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx (2.14) a 0,5 xx 2 X xxxxxxxx xxxxxx (2.10). Xxxxx xx xxxxxx xxxxx ethanol/voda (2.13). Xxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx:
3.1 Vodní xxxxx, nastavená xx 60 °C
3.2 Chromatograf xxx vysokoúčinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx s UV xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx délkou a 10μx xxxxxxxxxxxx smyčkou.
3.3 Xxxxxxxxxx kolona
Korozivzdorná xxxx, xxxxx 12,5 až 25 cm, xxxxxxx xxxxxx 4,6 xx, xxxxxx Xxxxxxxxxxx 5X18 xxxx xxxxxxxxxxxx náplní.
3.4 Xxxxxxxxx xxxxx, průměr: 90 xx, Xxxxxxxxxx xxx Xxxüxx, Xxxxxxxxx Xx 5892 xxxx xxxxxxxxxxxx.
3.5 Erlenmeyerovy xxxxx xx 50 xx
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 5 ml
3.7 Xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx 2–4 xx, xxxx xxxxxxxxxxxx
4. Postup
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
4.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx na 50 xx (3.5) se xxxxxx 1 x xxxxxx. Do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 10 xx 2 X xxxxxxxx xxxxxx (2.10) x 40 xx xxxxx xxxxxxx/xxxx (2.13). Xxxxx xx xxxxxxxxx 1 g xxxxxxx xxxxxxx (3.7), xxxxx se xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx xxxxx minutu xxxxxxxxxx, dokud xxxxxxxxx xxxxxxxxx suspenze. Pro xxxxxxxxx extrakce konzervačních xxxxxx do ethanolové xxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xx xxxxx xxxxx (3.1) xxx 60 °X.
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx vody x xxxxxxx xx na xxxxxx uloží xxx 5 °X.
Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.4). Xxx 2 xx xxxxxxxx xx převedou xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.6). Xxxxxxx se xxxxxxxx xxx 5 °X x xxxxxxxxx pomocí XXXX xx provede xx 24 xxxxx.
4.1.2 Xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx na 50 xx (3.5) xx x xxxxxxxxx xx tři xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 1 ± 0,1 g xxxxxx (x xxxxx). Xxxxxxx xx přidá 1,00 xx 2 X xxxxxxxx sírové (2.10) a 30,0 xx xxxxx xxxxxxx/xxxx (2.13). Přidá se xxxxxxxxx 1 g xxxxxxx xxxxxxx (3.7) x 10 xx xxxxxxx xxxxxxxxx standardu(2.14). Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x xxxxx xx alespoň jednu xxxxxx protřepává, dokud xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxx usnadnění extrakce xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx pět xxxxx xx xxxxx xxxxx (3.1) xxx 60 °X.
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx ochladí x xxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx se xxxxx na xxxxxx xxx 5 °C.
Extrakt xx zfiltruje xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.4). Xxx 2 xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx lahvičky (3.6). Extrakt se xxxxxxxx xxx 5 °X x stanovení xxxxxx XXXX xx xxxxxxx xx 24 xxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxx kapalinová xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx: xxxxxxxxxxx/xxxxxxxxx xxxx (2.15).
Xxxxxx mobilní xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx 2,0 ± 0,5 xx/xxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx na 240 nm.
4.2.1 Xxxxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx chromatografu (3.2) xx xxxxxxxxx xx 10 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx přísad (2.17). Xxx každý xxxxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx stanoví xxxxx výšky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x chromatogramů. Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx přísadu xx sestrojí xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx výšek xxxx na koncentraci xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xx, xx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx získána xxxxxxxx odezva.
4.2.2 Stanovení
Do xxxxxxxxxxxx chromatografu (3.2) xx nastříkne 10 μx xxxxxxxx xxxxxx (4.1.1) a zaznamená xx chromatogram. Xxxxxxxxx xx 10 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (2.17) x xxxxxxxxx se chromatogram. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Není-li x xxxxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx (4.1.1) xxxxx pík x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx časem xxxx xxx xxxxxxxx 2methoxybenzoové (xxxxxxxxxx vnitřní xxxxxxxx), xxxxxxxxx se xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (4.1.2) a xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.
Xx-xx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.1.1) xxxxxx xxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxx, xxx xx být xxxxxx xxxx vnitřní xxxxxxxx. (Xxxx-xx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx konzervačních xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx přítomna, xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx použít xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.)
Xx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:
- separace píků xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx alespoň 0,90. (Xxxxxxxx xxxxxxxx píků xx uvedena na xxxxxxx 1)
Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxx
Xxxx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxx xxxxxxx účinnější kolona xxxx xx mělo xxx složení xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx xxx požadavek xxxxxx.
- Faktor xxxxxxxxx Xx všech získaných xxxx xx xx xxx pohybovat xx 0,9 do 1,5. (Xxxxxxxx xxxxxxx asymetrie xx uvedena na xxxxxxx 2.) Při xxxxxxxxxxx chromatogramu xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxxxxxx posuvu xxxxxx xxxxxxx 2 cm/min.
Obrázek 2: Xxxxxx xxxxxxxxx xxxx
- Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx.
5. Výpočet
Pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx konzervačních xxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx výšek xxxx xxxxxxxxxxxxx konzervačních xxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxx (vnitřní xxxxxxxx) x xxxx xxxxxxxxxx graf. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, kyseliny 4xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx vzorku x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xx) xx xxxxxxx pomocí xxxxxx
xx % (m/m) = (100x 20 x x) / (106 x x) = b / (500 x x)
xxx
x = hmotnost xxxxxxxxxx xxxxxx (4.1.2) (x),
x = koncentrace xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (4.1.2) (μx/xx) xxxxxxxx x kalibračního xxxxx.
6. Xxxxxxxxxxxxxx [1]
Xxx xxxxxx kyseliny 4hydroxybenzoové 0,40 % xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx současně xx xxxxxxx vzorkem xxxxxxxxx 0,035 %.
Xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 0,50 % by xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx současně xx stejným xxxxxxx xxxxxxxxx 0,050 %.
Xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 0,50 % xx xxxxxx xxxxxxxxx hodnota xxxxxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx vzorkem xxxxxxxxx 0,045 %.
Xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,60 % xx xxxxxx absolutní xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 0,035 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Výsledky testování xxxxxxxxxxx metody xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx je rozhodující x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx by xxxx xxxx být x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
7.2 Xx-xx xx žádoucí, xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
X. STANOVENÍ XXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Rozsah a xxxxxx použití
Tato metoda xx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx do maximální xxxxxxxxxxx 2 % (x/x).
2. Definice
Koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x procentech xxxxxxxxx (% m/m) xxxxxxx.
3. Xxxxxxxx metody
Po extrakci xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xx stanovení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
4. Reakční činidla
Všechna xxxxxxx činidla xxxx xxx xxxxxxx x.x; xxxx xxx použita xxxxxxxxxxx xxxx nebo xxxx xxxxxxx ekvivalentní xxxxxxx.
4.1 Xxxxxxx, 96 % (V/V)
4.2 Kyselina xxxxxxxxxx
4.3 Kyselina 2xxxxxxxxxxxxxxxx
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx, 10 % (x/X)
4.5 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xx 50 xx xx přesně xxxxxx 1 x (x gramů) kyseliny xxxxxxxxxx x xxxxxx xx na xxxxx xxxxxxxxx (4.1).
4.6 Roztok xxxxxxxxx standardu
Do xxxxxxx xxxxx xx 50 xx xx xxxxxx xxxxxx 1 x (x xxxxx) kyseliny 2xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx (4.1).
5. Xxxxxxxxx x pomůcky
5.1 Xxxxx xxxxxxxxxxx vybavení x xxxx:
5.2 Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ionizačním xxxxxxxxxx
5.3 Skleněná xxxxxxxx (20 × 150 xx) se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
5.4 Xxxxx lázeň xxxxxxxxx na 60 °X
5.5 Skleněná injekční xxxxxxxxx xx 10 xx s xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx pórů 0,45 μx)
6. Postup
6.1 Xxxxxxxx xxxxxx
6.1.1 Příprava xxxxxx bez vnitřního xxxxxxxxx
Xx skleněné xxxxxxxx (5.3) xx xxxxxx xxxxxxxxx 1 g xxxxxx. Přidá xx 0,5 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (4.4) a 9,5 xx xxxxxxxx (4.1).
Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx protřepe. Xxxx xx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxx minut xx xxxxx xxxxx xxxxxxx xx 60 °X (5.4), xxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xx rychle xxxxxxx xxx tekoucí vodou. Xxxx roztoku se xxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx (5.5). Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx den.
6.1.2 Příprava xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxxxxx (5.3) xx s xxxxxxxxx xx 3 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 1 ± 0,1 x xxxxxx. Xxxxx xx 0,5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (4.4), 0,50 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.6)x 9 xx xxxxxxxx (4.1).
Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx xx nezbytné, xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxx xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxx na 60 °X (5.4), aby xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xx rychle zchladí xxx xxxxxxx xxxxx. Xxxx roztoku xx xxxxxxxxx xxxx membránový xxxxx (5.5). Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx.
6.2 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx provozní xxxxxxxx
Xxxxxx
Xxx: korozivzdorná ocel
Délka: 2 x
Xxxxxx: ⅛"
Náplň: 10 % SP™ 1000 (xxxx ekvivalentní) + 1 % X3XX4 na Xxxxxxxxxxx XXX 100–120 xxxx
Xxxxxxx
Xxxxxxx: 200 °X
Xxxxxx: 120 °X
Xxxxxxxx: 200 °C
Nosný xxxx: xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: 25 xx/xxx
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
6.3.1 Xxxxxxxxx
Xx xxxx odměrných xxxxx xx 20 xx xx xxxxxxxxxx 0,25, 0,50, 1,00, 2,00 a 4,00 xx roztoku kyseliny xxxxxxxxxx (4.5). Do xxxxx odměrné xxxxx xx odpipetuje 1,00 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.6); xxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx (4.1) x xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx obsahují xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx vnitřní xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xx/xx (to xxxxxxx 1 mg/ml, xx-xx x = 1,000) x kyselinu xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx x/4, x/2, p, 2x, 4x xx/xx (xx znamená 0,25, 0,50, 1,00, 2,00, 4,00 xx/xx, xx-xx x = 1,000).
Xxxxxxxxx xx 1 μl xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxx x xxxxxxxx 2xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxx x x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx na xxx x.
Xxxxxxxxxx xx 3 xxxxx x xxxxxxx roztoku a xxxxxxx xx průměr xxxxxx xxxxx xxxx.
6.3.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx se 1 μx xxxxxxxx xxxxxx 6.1.1. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx x chromatogramem xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (6.3.1). Xx-xx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxx kyseliny 2xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxxxxxx xxxxx rušivý xxxx, xxxxxxxxx xx 1 μx xxxxxxxx vzorku 6.1.2 x xxxxx xx xxxxxx píku xxxxxxxx propionové a xxxx vnitřního xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xx 3 dávky x xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx ploch xxxx.
7. Xxxxxxx
7.1 X xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx 6.3.1 xx xxxxxx poměr xxxxxxxxx (K), xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx v xxxx 6.3.2.
7.2 Z xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx se vypočte xxxxx kyseliny propionové xx xxxxxx (x) x hmotnostních procentech xxxxxx xxxxxx
x % (x/x) = X (0,5 x 100 x x) / (50 x x) =X(x / a)
kde
K = xxxxx xxxxxxxxx x bodu 7.1,
x = xxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx 4.6,
a = xxxxxxxx xxxxxx x gramech podle xxxx 6.1.2,
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx jedno xxxxxxxxx xxxxx.
8. Opakovatelnost [2]
Xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 2 % (x/x) xx xxxxx xxxxxx výsledků dvou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx stejným vzorkem xxxxxxxxx 0,12 %.
XX. XXXXX A XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX, HYDROCHINONMONOMETHYLETHERU, XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX X HYDROCHINONMONOBENZYLETHERU X XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX
X. DŮKAZ
1. Xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx
X metodě xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx, hydrochinonmonomethyletheru, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx x hydrochinonmonobenzyletheru (xxxxxxxxxxx) v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx.
2. Podstata xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxxxx a jeho xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx (TLC).
3. Xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx reakční xxxxxxx xxxx xxx čistoty x.x.
3.1 Ethanol, 96 % (X/X)
3.2 Xxxxxxxxxx
3.3 Xxxxxxxxxxxx
3.4 Vyvíjecí xxxxxxxxxxxx:
Xxxxxxxxxx/xxxxxxxxxxxx, 66: 33 (X/X)
3.5 Xxxxxxx, 25 % (x/x) (x420 = 0,91 x/xx)
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxx
3.7 Xxxxxxxxxxx
3.8 Hydrochinonmonomethylether
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx
3.10 Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
3.11 Xxxxxxxxxx roztoky
Následující xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxxx xxx.
3.11.1 Xx xxxxxx xxxxxxxx xx 10 xx xx xxxxxx 0,05 x xxxxxxxxxxxx (3.7). Xxxxx xx 0,250 x xxxxxxxx xxxxxxxxx (3.6) a 5 xx xxxxxxxx (3.1). Xxxxxxx xx xxxxxxx (3.5), xxxxx xxxx xxxxxxxx xX 10, x xxxxxx xx xxxxxxxxx xx objem 10 xx (3.1).
3.11.2 Xx dělené xxxxxxxx xx 10 ml xx xxxxxx 0,05 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.8). Xxxxx xx 0,250 x xxxxxxxx xxxxxxxxx (3.6) a 5 xx ethanolu (3.1). Xxxxxxx xx xxxxxxx (3.5), dokud není xxxxxxxx pH 10, x xxxxxx xx xxxxxxxxx xx objem 10 xx (3.1).
3.11.3 Xx xxxxxx zkumavky xx 10 xx xx xxxxxx 0,05 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.9). Xxxxx xx 0,250 x xxxxxxxx xxxxxxxxx (3.6) x 5 xx xxxxxxxx (3.1). Xxxxxxx xx xxxxxxx (3.5), xxxxx xxxx xxxxxxxx pH 10, x xxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxxx 10 ml (3.1).
3.11.4 Xx xxxxxx zkumavky xx 10 xx xx xxxxxx 0,05 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.10). Xxxxx xx 0,250 x xxxxxxxx xxxxxxxxx (3.6) a 5 xx ethanolu (3.1). Xxxxxxx xx xxxxxxx (3.5), dokud xxxx xxxxxxxx xX 10, x xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx 10 ml (3.1).
3.12 Xxxxxxxx stříbrný
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx
3.14 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
3.15 Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
3.16 Detekční činidla
3.16.1 Xx 5 % xxxxxxx xxxxxxx (x/X) xxxxxxxxx stříbrného (3.12) xx přidává xxxxxxx (3.5), dokud se xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx:
Xxx xxxxxx xxxxx xx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxx xx být xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3.16.2 10 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxxx (3.1).
3.16.3 Xxxxxxxx se 1 % (x/X) vodný xxxxxx kyanoželezitanu draselného (3.14) x 2 % (m/V) xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15). Xxxxx před xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx díly xxxx xxxxxxx.
4. Přístroje a xxxxxxx
Xxxxx laboratorní vybavení, x xxxx:
4.1 Xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx
4.2 Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxx xxxxxx: silikagel XXX/XX254 (254 xx dolním xxxxxxx XXX/XX); 20 × 20 cm (Xxxxxxx, Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxx 0,25 xx.
4.3 Ultrazvuková xxxxx
4.4 Odstředivka
4.5 XX xxxxx, 254 xx
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx
Xx xxxxxx zkumavky na 10 ml xx xxxxxx 3 x xxxxxx. Xxxxx xx 0,250 g xxxxxxxx xxxxxxxxx (3.6) x 5 xx ethanolu (3.1). pH roztoku xx upraví xxxxxxxxx (3.5) xx 10. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.1) xx 10 xx. Xxxxxxxx xx uzavře xxxxxx x homogenizuje xx 10 xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxx filtrační xxxxx xxxx se xxxxxxxx při 3000 xx./xxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx na xxxxx xxxxxx (TLC)
5.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx rozpouštědlem (3.4).
5.2.2 Xx desku xx nanese xx 2 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.11) x 2 μx xxxxxxx xxxxxx (5.1). Xxxxxx xx xx xxx xxx teplotě xxxxx, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 xx xx xxxxxx.
5.2.3 Xxxxx se xxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Xxxxx xx xxxxxxxx xxx UV xxxxxx při 254 xx a xxxxxx xxxxx xx označí.
5.3.2 Xxxxx xx xxxxxxxx
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.16.1), xxxx
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.16.2); zahřeje xx xx xxx 120 °X, xxxx
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx chloridu xxxxxxxxxx (3.16.3).
6. Xxxxx
Xxxxxxx xx xxxxxxx Rf každé xxxxxx.
Xxxxxx získané xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxxx Xx, xxxxx xxxxx x UV xxxxxx x barvu xxxxx xx xxxxxxxxxxxx detekčním xxxxxxxx.
Xxxxxxx xx vysokoúčinná xxxxxxxxxx chromatografie popsaná x xxxxxxxxxxxx xxxxxx (X) x xxxxxxxxx xx retenční časy xxxxxxx xxx xxx (xxxx) vzorku x xxxxxxxxxx časy píků xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx z XXX x XXXX xx zkombinují x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx jeho xxxxxx.
7. Xxxxxxxx
Xx uvedených xxxxxxxx xxxx pozorovány xxxxxxxxxxx hodnoty Xx:
xxxxxxxxxxx: 0,32
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx: 0,53
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx: 0,55
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx: 0,58
X. XXXXXXXXX
1. Xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx
X xxxxxx je xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, hydrochinonmonomethyletheru, hydrochinonmonoethyletheru x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx prostředcích xxx xxxxxxxxxx kůže.
2. Podstata xxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxx xxxxx xxxx/xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xx rozpustí xxxxxx xxxxxxxx. Stanovení xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xx provede kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx x UV xxxxxxx.
3. Reakční činidla
3.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxx x.x. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx voda xxxx xxxx alespoň xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx
3.3 Xxxxxxxxxxx
3.4 Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx
3.5 Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx
3.6 Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
3.7 Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx HPLC
3.8 Xxxx xxxx/xxxxxxxx 1:1 (X/X). Smíchá se xxxxx díl vody x xxxxx díl xxxxxxxxx (3.2)
3.9 Mobilní xxxx: xxxx xxxxxxxxxxxxxxx/xxxx 45:55 (X/X). Smíchá xx 45 xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7) a 55 xxxx xxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx na 50 xx xx xxxxxx 0,06 g xxxxxxxxxxxx (3.3), 0,08 g xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.4), 0,10 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 0,12 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xx a xxxxxx xx xx objem xxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx 10 ml xxxxxx roztoku na 50 xx xxxxx xxxx/xxxxxxxx (3.8). Xxxx xxxxxxx xx připravují xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
Xxxxx laboratorní xxxxxxxx x xxxx:
4.1 Vodní xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx 60 °C
4.2 Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii s XX xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx vlnovou xxxxxx x 10μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.3 Xxxxxxxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx 250 xx, vnitřní xxxxxx 4,6 xx, plněná Xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx na Xxxxxxx SIL, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx), velikost xxxxxx 6 μx, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx x ekvivalentní xxxxxx.
4.4 Xxxxxxxxx xxxxx, průměr 90 xx, Schleicher xxx Xxxüxx, Weissband Xx 5892 xxxx xxxxxxxxxxxx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx odměrné baňky xx 50 xx xx x xxxxxxxxx xx xxx desetinná xxxxx naváží 1 ± 0,1 x (x gramů) xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxx/xxxxxxxx (3.8). Xxxxx xx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Protřepává xx xxxxxxx jednu xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xx vodní xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx 60 °C, xxx xx usnadnila xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxxx/xxxxxxxx (3.8). Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.4). Xxxxx XXXX xx xxxxxxx xx 24 hodin od xxxxxxxx extraktu.
5.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.2.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.9) xx xxxxxx xx 1,0 xx/xxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xx 295 nm.
5.2.2 Xxxxxxxxx xx 10 μx roztoku vzorku xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 x xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx píků. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.2.3. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx x referenční roztoky. Xxx výpočet xxxxxxxxxxx xxxxxxx x roztoku xxxxxx se xxxxxxx xxxxxx píků a xxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxx podle xxxx 5.2.3.
5.2.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx 10 μl referenčního xxxxxxx (3.10) a xxxxxxxxx xx chromatogram. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx píku xxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xxxxxx odezvy XXx (x xx xxxxxx infexem XX):
XXx = xx /xx
xxx
xx = xxxxxx xxxx xxx hydrochinon, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx hydrochinonmonobenzylether, x
xx = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, hydrochinonmonomethyletheru, xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx hydrochinonmonobenzyletheru v xxxxxxxxxxx roztoku (3.10) (x/50 xx).
Xx xxxxx xxxxxx, zda xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx x roztok xxxxxx splňují následující xxxxxxxxx:
- xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx 0,90. (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx uvedena xx xxxxxxx 1.).
Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxx
Xxxx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx dosaženo, xxxx xx být xxx xxxxxxx účinnější xxxxxx xxxx xx mělo xxx složení xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx byl xxxxxxxxx xxxxxx.
- Xxxxxx xxxxxxxxx Xx všech xxxxxxxxx xxxx by se xxx xxxxxxxxx od 0,9 xx 1,5. (Xxxxxxxx faktoru xxxxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxx 2.) Při xxxxxxxxxxx chromatogramu za xxxxxx xxxxxxxxx faktoru xxxxxxxxx xx doporučená xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx 2 xx/xxx.
Xxxxxxx 2:Xxxxxx xxxxxxxxx xxxx
- Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (koncentrací xxxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxx plochy xxxx analytů. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx vzorku xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xx) xx xxxxxxx pomocí xxxxxx
xx % (m/m) = (xx x 100) / (XXx x x)
xxx
x = hmotnost xxxxxx x xxxxxxx,
xx = xxxxxx xxxx xxxxxxx x xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxxxxxxxx [3]
7.1 Xxx obsahu xxxxxxxxxxxx 2,0 % xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx výsledků xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 0,13 %.
7.2 Xxx obsahu xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 1,0 % xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx provedených současně xx stejným xxxxxxx xxxxxxxxx 0,1 %.
7.3 Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 1,0 % xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx vzorkem xxxxxxxxx 0,11 %.
7.4 Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 1,0 % xx xxxxxx absolutní xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx současně xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 0,11 %.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx [4]
8.1 Při xxxxxx xxxxxxxxxxxx 2 % xx neměla xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx (různé xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, různé xxxxxxxxx xxxx různá xxxx) xxxxxxxxx 0,37 %.
8.2 Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 1 % xx neměla xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx provedených xx xxxxxxx xxxxxxx xx různých xxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxxxx, různí xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx) xxxxxxxxx 0,21 %.
8.3 Xxx xxxxxx hydrochinonmonoethyletheru 1 % xx xxxxxx xxxxxxxxx hodnota xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx vzorkem xx xxxxxxx xxxxxxxx (různé xxxxxxxxxx, různí xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx) xxxxxxxxx 0,19 %.
8.4 Xxx xxxxxx hydrochinonmonobenzyletheru 1 % xx neměla xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx experimentátoři, různé xxxxxxxxx nebo xxxxx xxxx) xxxxxxxxx 0,11 %.
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx vyšší xxx 2 % x xx požadován xxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx by xxx xxxxxxx xxxxxx (5.1) xxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx 2 % xxxxxxxxxxxx, x stanovení xx xxxx xxx opakováno.
(U xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ležet hodnota xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.)
9.2 Xxxxxx xxxxx
Xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx etherů x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Použití fenylové xxxxxx zajistí dostatečnou xxxxxxx hydrochinonu, xxxxxx xxxxx zajistit při xxxxxxx kolony X18 x xxxxxxxx mobilní xxxx.
X této metody xxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx vlivu xxxx xxxx xxxxxxxx. X xxxxxxx případě xx xxxxxxxxx mělo xxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx/xxxxxxxxxxx fáze. Xxxxxx xxxxxx lze najít x literatuře x xxxxxxxx 2 a 3:
Xxxxxx: Zorbax XXX, 4,6 xx × 25 xx xxxx xxxxxxxxxxxx:
xxxxxxx: 36 °X
xxxxxx: 1,5 xx/xxx
xxxxxxx fáze:
pro xxxxxxxxxxx: xxxxxxxx/xxxx 5/95 (X/X)
xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxx/xxxx 30/70 (V/V)
pro hydrochinonmonobenzylether: xxxxxxxx/xxxx 80/20 (V/V) [5].
Xxxxxx: Xxxxxxxxxx S5ODS xxxx xxxxxxxxxxxx:
xxxxxxx xxxx: xxxx/xxxxxxxx 90/10 (V/V)
průtok: 1,5 xx/xxx
Xxxx xxxxxxxx xxxx vhodné xxx xxxxxxxxxxx [6].
[1] ISO 5725.
[2] ISO 5725.
[3] XXX 5725.
[4] ISO 5725.
[5] Herpol-Borremans, M., Xxxxx X.-X., Identification xx xxxxxx xx x’xxxxxxxxxxxx xx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx blanchir la xxxx. Xxx. X. Xxxxxx. Sci., 8-203-214 (1986).
[6] Xxxxx, J., Xxx I., Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxx, (1986), 111, x. 129.