Plné znění - 31996L0045

Xxxxx Směrnice Xxxxxx 96/45/XX

xx xxx 2. xxxxxxxx 1996

x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx

(Xxxx x xxxxxxxx xxx EHP)

KOMISE EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,

x ohledem na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,

s ohledem xx xxxxxxxx Rady 76/768/XXX xx xxx 27. xxxxxxxx 1976 x sbližování právních xxxxxxxx xxxxxxxxx států xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx směrnicí Xxxxxx 95/34/XX [2], x xxxxxxx na xx. 8 odst. 1 xxxxxxx směrnice,

vzhledem x xxxx, že se xx xxxxxxxx 76/768/EHS xxxxxxx xxxxxx zkoušení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx dodržení xxxxxxxx předepsaných xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, které se xxxxxx xxxxxxx kosmetických xxxxxxxxxx;

xxxxxxxx k xxxx, xx by xxxxxxx xxxxxxxx metody xxxxxxx xxxx xxx stanoveny xx nejdříve; xx xxxxxxx metody xxx xxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx Xxxxxx 80/1335/EHS [3] ve xxxxx xxxxxxxx 87/143/XXX [4], xxxxxxxx Xxxxxx 82/434/XXX [5] xx xxxxx xxxxxxxx 90/207/XXX [6] x xx xxxxxxxxxx Xxxxxx 83/514/XXX [7], 85/490/XXX [8], 93/73/XXX [9] a 95/32/XX [10];

xxxxxxxx k tomu, xx xxxxx a xxxxxxxxx 2-xxxxxxxxxxxxxx, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, xxxxxx, ethyl, xxxxxx, xxxxx x benzyl 4-xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx sedmým xxxxxx;

xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou v xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxx xxx přizpůsobení xxxxxxxx 76/768/EHS xxxxxxxxxxx xxxxxxx,

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Článek 1

Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx nezbytné xxxxx k xxxxxxxxx xxxx, aby se xxx úředním xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx 2-xxxxxxxxxxxxxx, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, xxxxxx, xxxxx, xxxxxx, butyl x xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx právní x xxxxxxx předpisy nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. xxxx 1997. Xxxxxxxxxx x xxxx uvědomí Xxxxxx.

2. Tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx odkaz xx xxxx směrnici xxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx stanoví členské xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Komisi xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.

Článek 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.

V Xxxxxxx xxx 2. xxxxxxxx 1996.

Xx Xxxxxx

Xxxx Bonino

členka Komise

[1] Xx. věst. X 262, 27.9.1976, x. 169.

[2] Xx. věst. X 167, 18.7.1995, x. 19.

[3] Xx. věst. X 383, 31.12.1980, x. 27.

[4] Xx. věst. X 57, 27.2.1987, x. 56.

[5] Úř. xxxx. X 185, 30.6.1982, x. 1.

[6] Úř. věst. X 108, 28.4.1990, x. 92.

[7] Xx. xxxx. X 291, 24.10.1983, x. 9.

[8] Xx. xxxx. X 295, 7.11.1985, x. 30.

[9] Úř. xxxx. X 231, 14.9.1993, x. 34.

[10] Xx. xxxx. X 178, 28.7.1995, x. 20.

XXXXXXX

XXXXX X XXXXXXXXX 2-XXXXXXXXXXXXXX, 1-FENOXYPROPAN-2-OLU, XXXXXX, XXXXX, PROPYL, BUTYL X BENZYL 4-HYDROXYBENZOÁTU X KOSMETICKÝCH XXXXXXXXXXXX

X. XXXXX

1. Rozsah x xxxxxx použití

V této xxxxxx je specifikován xxxxxx chromatografie na xxxxx xxxxxx, xxxxx x kombinaci s xxxxxxx stanovení xxxxxxxx x xxxxxx X xxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxxxxxxx, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, xxxxxx 4-hydroxybenzoátu, xxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx, propyl 4-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx x kosmetických prostředcích.

2. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx extrahují x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx acetonem. Xx xxxxxxxx xx acetonový xxxxxx smíchá s xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx prostředí xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx/xxxx xx extrahována xxxxxxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Po xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx diethyletherem. Xxxxxxxxx xxxx diethyletherového xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x XX světle x xxxxxxxxxx xx xx použití Xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Reakční činidla

3.1 Xxxxxx

Xxxxxxx použitá xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxx x.x. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx voda xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.

3.2 Xxxxxx

3.3 Xxxxxxxxxxxx

3.4 n-Pentan

3.5 Xxxxxxxx

3.6 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx

3.7 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x(XXx) = 4 xxx/x

3.8 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, x(XXX) = 4 xxx/x

3.9 Xxxxxxx xxxxxxxx dihydrát (XxXx₂ . 2X₂X)

3.10 Xxxxxxxx xxxxxxx: Millonovo xxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (Fluka 69820).

3.11 2-Fenoxyethanol

3.12 1-Xxxxxxxxxxxx-2-xx

3.13 Xxxxxx 4-hydroxybenzoát (xxxxxxxxxxxxx)

3.14 Xxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx)

3.15 x-Xxxxxx 4-hydroxybenzoát (xxxxxxxxxxxxx)

3.16 x-Xxxxx 4-hydroxybenzoát (xxxxxxxxxxxx)

3.17 Xxxxxx 4-hydroxybenzoát (xxxxxxxxxxxxx)

3.18 Xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 0,1 % (x/X) xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx 3.11, 3.12, 3.13, 3.14, 3.15, 3.16 x 3.17 v methanolu.

3.19 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xx 88 xxxx xxxxxxxx (3.4) x 12 xxxx ledové xxxxxxxx xxxxxx (3.6).

4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x dále:

4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx teplotu 60 °X

4.2 Xxxxxxxx komora (xxxxxxxxxx filtračním xxxxxxx)

4.3 Xxxxx ultrafialového xxxxxx, 254 xx

4.4 Hotové xxxxx 20 cm × 20 cm, xxxxxx potažené 0,25 xx tenkou xxxxxxx xxxxxxxxxx 60X254 (254 xx dolním xxxxxxx 60X) x koncentrační xxxxx (Merck Xx 11798, Darmstadt, xxxx xxxxxxxxxxxx)

4.5 Xxxxxxx nastavitelná xx teplotu až xx 105 °X

4.6 Xxxxxxxxxxxx vysoušeč xxxxx

4.7 Xxxxxx malířský váleček x délce přibližně 10 cm, xxxxxx xxxxxx přibližně 3,5 xx. Xxxxxx vrstva xx xxxx být 2 až 3 xx xxxxx. Podle xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx x xxxx 5.2.

4.8 Xxxxxxxx xxxxxxxx na 50 xx xx šroubovacími xxxxxxx.

4.9 Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx: xxx 80 °X. Xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 20 xx × 20 cm x tloušťce xxx 6 mm, xxxx xx xxxxxxx rovnoměrného xxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxx

5.1 Xxxxxxxx vzorku

Do skleněné xxxxxxxx xx 50 xx se šroubovacím xxxxxxxx (4.8) xx xxxxxx xxxxxxxxx 1 x vzorku. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.7) a 40 xx xxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kosmetických xxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxx 20 xxxxx xxxxxxx kyseliny chlorovodíkové. Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxx xx zlehka xxxxxxx xx xxx 60 °X, aby xx usnadnila xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx do xxxxxxxxx xxxx, x 1 minutu xx xxxxx třepe.

Indikátorovým xxxxxxxx xx změří xX xxxxxxx x xxxxxx xx xx hodnotu ≤ 3 roztokem xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx 1 xxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx do Erlenmeyerovy xxxxx. 20 xx xxxxxxxx xx převede xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx 200 ml, xxxxx xx 60 xx vody a xxxxxxxx. Xxxxxxx pH xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.8) xxxxxxxxx na 10 xx použití indikátorového xxxxxxx.

Xxxxx se 1 x xxxxxxxx vápenatého xxxxxxxxx (3.9) a xxxxx se xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx filtrační xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx 250 xx, xxxxx xxxxxxxx 75 xx xxxxxxxxxxxxx, a xxxxx xx xxxxx xxxxxx protřepává. Fáze xx xxxxxxx oddělit x xxxxx xxxx xx xxxxxxx do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx na 200 ml. Xxxxxxx xX xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx přibližně 2 za použití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Poté xx xxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx se xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx nechají xxxxxxx x xxx 2 xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx převede do xxxxxxxxxx lahvičky xx 5 xx.

5.2 Chromatografie xx tenké xxxxxx (XXX)

XXX xxxxx xx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.9). Xx startovní linii xxxxxxxxxxxx xxxx TLC xxxxx xx xxxxxx 10 μl xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx roztoků x 100 μx xxxxxxx xxxxxx (xxxxxx) (5.1).

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx odpaření rozpouštědla xxxxxxx vzduchu. XXX xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx x xxxxx se xxxxxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx. Vyvíjecí xxxxxx (4.2) xx xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.19).

XXX xxxxx xx xxxxx xxxxx xx nenasycené xxxxxx x xxxxxx xx xxx pokojové teplotě, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxxx xxx 15 xx xx základní xxxxx. Xxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x vysuší x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxxxx x XX xxxxxx (4.3) x xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx 30 minut x xxxxxxx (4.5) xxx 100 °X, xxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kyselina octová. Xxxxxxxxxxx přísady x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx činidlem (3.10) xxx, že se XXX deska xxxxxxxxxx xxxxxxx válečkem (4.7) xxxxxxxxx xx činidla.

Poznámka:

Skvrny xxx rovněž zviditelnit xxxxxxxx nanesením kapky Xxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxx 4-hydroxybenzoové se xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx, 2-xxxxxxxxxxxxx x 1-xxxxxxxxxxxx-2-xx jako xxxxx xxxxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xx to, xx xxxxxxxx 4-hydroxybenzoová, která xxxx xxx přítomná xx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxx o xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxx 7.3 a 7.4.

6. Xxxxx

Xxx xxxxxx skvrnu xx xxxxxxx hodnota Xx. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx vzorku xx xxxxxxxxx se xxxxxxxx získanými z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxx o xxxxxx xxxxxxx Xx, xxxxxx xxxxxxx v XX xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx konzervačních xxxxxx.

Xxxxx se zdá, xx xxxx přítomny xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (HPLC) xxxxxxxx x oddíle X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx (XXX) x vysokoúčinné xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) se xxxxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx 2-fenoxyethanolu, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx x xxxxxxxx.

7. Xxxxxxxx

7.1 Vzhledem x xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx se nedoporučuje.

7.2 Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx skupiny xxxxx xxxxxx při xxxxxx x Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx a xxxxxx Xx xxxxxxxxx xxx xxxx konzervačních xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx x práci X. xx Xxxxxx, X. A. X. Xxxx, X. A. Xxxxxxx-Xxxxxxxxx x X. Xxxxxxxx (1987): Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx in xxxxxxxx xxxxxxxx X: Xxxx-xxxxx chromatographic procedure xxx xxx identification xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx products (J. Xxxxxxxxxxxxxx 410, 395-411).

7.3 Xxxxxxx Xx xxxxxxx x následující xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx:

7.4 X xxxxxxx xxxxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx x methylparabenu xxx x případě benzylparabenu x ethylparabenu nedochází x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxx x oddíle B x porovnáním retenčních xxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

X. XXXXXXXXX

1. Rozsah x xxxxxx xxxxxxx

X této xxxxxx je xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx stanovení 2-xxxxxxxxxxxxxx, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx, ethyl 4-hydroxybenzoátu, xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx, butyl 4-xxxxxxxxxxxxxxx x benzyl 4-xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxxx

Xxxxxxxx konzervačních xxxxxx stanovená xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx procentech.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxx x xxxx. Xxxx xx xxxxxxx zahřeje do xxxxxxxxxx xxxxxx fáze, xxx xx zajistila xxxxxxxxxxxxx extrakce, x xxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxx xx filtrátu xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xxxxxxx

4.1 Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxx x.x. x xxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxx HPLC. Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.

4.2 Xxxxxxx, xxxxxxxxx

4.3 2-Xxxxxxxxxxxxx

4.4 1-Xxxxxxxxxxxx-2-xx

4.5 Methyl 4-xxxxxxxxxxxxxx (methylparaben)

4.6 Ethyl 4-xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx)

4.7 n-Propyl 4-xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx)

4.8 Xxxxxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxxxx)

4.9 n-Butyl 4-xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx)

4.10 Xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (benzylparaben)

4.11 Xxxxxxxxxxxxxxx

4.12 Xxxxxxxx

4.13 Xxxxxxxxxxx

4.14 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx c(H₂SO₄) = 2 xxx/x

4.15 Xxxx xxxxxxx/xxxx

Xxxxxx se xxxxx dílů ethanolu (4.2) a xxxxx xxx xxxx.

4.16 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxx 0,25 x isopropylparabenu (4.8), xxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xx 500 ml, rozpustí xx a xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx/xxxx (4.15) xx objem.

4.17 Xxxxxxx xxxx: xxxx xxxxxxxxxxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx/xxxxxxxxxxx

Xxxxxx xx 5 xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx, 60 xxxx xxxx, 10 xxxx xxxxxxxxx x 25 xxxx acetonitrilu.

4.18 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xx xxxxxxx xxxxx xx 100 ml xx xxxxxx naváží xxxxxxxxx 0,2 x 2-xxxxxxxxxxxxxx, 0,2 g 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, 0,05 x xxxxxxxxxxxxxx, 0,05 x xxxxxxxxxxxxx, 0,05 x xxxxxxxxxxxxxx, 0,05 x xxxxxxxxxxxxx x 0,025 x xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x doplní xxxxx ethanol/voda na xxxxx.

Xxxxxx xx xxxxxxxx x ledničce x xx xxxxxxxx 1 xxxxx.

4.19 Standardní xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xx xxxxxxxxx xxxxx xx 50 xx se xx xxxxxxxxx xxxxxxx (4.18) xxxxxxx 20,00 xx, 10,00 ml, 5,00 xx, 2,00 xx x 1,00 xx. Xx xxxxx xxxxx xx přidá 10,00 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.16) x 1,0 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.14) x xxxxxx xxxxx xxxxxxx/xxxx na objem. Xxxx roztoky xx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. Přístroje x pomůcky

Běžné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxx:

5.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx 60 °X ± 1 °X.

5.2 XXXX chromatograf x XX xxxxxxxxxx, xxxxxx délka 280 xx

5.3 Xxxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx xxxx, délka 25 xx, xxxxxxx xxxxxx 4,6 mm (xxxx xxxxx 12,5 cm x vnitřní xxxxxx 4,6 mm), naplněná Xxxxxxxxxxx 5X18, nebo xxxxxxxxxxxxx sorbentem (xxx 10.1).

5.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx xx 100 xx xx šroubovacím xxxxxxxx

5.5 Xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx 2 xx 4 xx nebo xxxxxxxxxxxx

6. Xxxxxx

6.1 Příprava xxxxxx

6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx

Xx xxxxxxxx xx 100 ml se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxx 1,0 x xxxxxx. Xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx 1,0 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.14) x 50,0 xx směsi ethanol/voda (4.15). Přidá xx xxxxxxxxx 1 g xxxxxxx xxxxxxx (5.5), xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx se xxxxxxxx, dokud xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxxx xxxxx (5.1) x xxxxxxx 60 °X ± 1 °X, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx ethanolové xxxx.

Xxxxxxxx xx ihned xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx a extrakt xx xxxxx xx xxxxx hodinu xx xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx přes xxxxxxxxx xxxxx. Xxx 2 xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx se uloží xx ledničky x xxxxxxxxx xxxxxxx HPLC xx provede xx 24 hodin.

6.1.2 Příprava xxxxxx xxxxxx přidání xxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xx skleněné xxxxxxxx xx 100 xx xx šroubovacím xxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 1,0 x ± 0,1 g xxxxxx.

Xx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx 1,0 xx xxxxxxx kyseliny sírové x 40,0 xx xxxxx ethanol/voda. Přidá xx xxxxxxxxx 1 x varných kamínků (5.5) x xxxxxx 10,00 ml xxxxxxx xxxxxxxxx standardu. Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx se xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxxx lázně x xxxxxxx 60 °X ± 1 °X, aby se xxxxxxxxx extrakce konzervačních xxxxxx xx ethanolové xxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx vody x xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxx xx ledničky. Xxxxxxx xx zfiltruje xxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxx 2 xx xxxxxxxx se xxxxxxxx do 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx roztok). Xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx XXXX xx xxxxxxx xx 24 xxxxx.

6.2 Vysokoúčinná kapalinová xxxxxxxxxxxxxx (HPLC)

6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

- Xxxxxxx xxxx: xxxx tetrahydrofuran/voda/methanol/acetonitril (4.17)

- Xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5 xx za minutu

- Xxxxxxxx xxxxxx xxxxx: 280 nm

6.2.2 Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx 10 μl xxxxxxx ze standardních xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx přísad (4.19). Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx standardu. Pro xxxxxx xxxxxxxxxxx přísadu xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx koncentraci standardních xxxxxxx.

6.2.3 Xxxxxxxxx

Xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxx vzorku xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.1) a zaznamená xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx se 10 μl jednoho xx xxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxxxxx přísad (4.19) x xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx chromatogramy xx xxxxxxxxx.

Xxxx-xx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku (6.1.1) xxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, jako xx retenční xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx standard), pokračuje xx xxxxxxxxxxxx 10 μx roztoku xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx (6.1.2). Chromatogram xx xxxxxxxxx a xxxxx xx xxxxx píků.

Je-li x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx pík x xxxxxxxxx časem xxxxxxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx-xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx konzervačních xxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx standardu.

Je xxxxx xxxxxx, xx xx xxxxxxxxxx křivka xxxxxxxxx standardu xxxxxxxx.

Xx xxxxx ověřit, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

- separace xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx alespoň 0,90. (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx 1.),

&xxxx;

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxx

Xxxx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxx xxxxxxx účinnější xxxxxx, xxxx xx xxxx být složení xxxxxxx xxxx upraveno xxx, xxx byl xxxxxxxxx xxxxxx.

- xxxxxx xxxxxxxxx (Xx) všech xxxxxxxxx xxxx by xx xxx xxxxxxxxx xx 0,9 xx 1,5. (Xxxxxxxx faktoru xxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx 2.) Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx účelem xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx 2 xx za xxxxxx,

&xxxx;

Xxxxxxx 2: Faktor xxxxxxxxx xxxx

- xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx.

7. Výpočet

Pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx konzervačních xxxxxx v xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx křivka (6.2.2) x xxxxxxx xxxxxx xxxxx píků xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxx píku xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Obsah (xx) 2-xxxxxxxxxxxxxx, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx 4-hydroxybenzoátu, xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx x benzyl 4-xxxxxxxxxxxxxxx x hmotnostních xxxxxxxxxx (% x/x) xx xxxxxxx pomocí xxxxxx:

%x_x(x/x) = x_x / (200 × x)

xxx

xx = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xx zkušebním roztoku (μx/xx) xxxxxxxx x xxxxxxxxxx křivky x

x = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx (x).

8. Xxxxxxxxxxxxxx [1]

Xxx xxxxxxxx v xxxx 10.5.

9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx [2]

Xxx xxxxxxxx v xxxx 10.5.

10. Poznámky

10.1 Xxxxxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx chování xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxxxxxx HPLC xxxxxxx xxxxxx na typu, xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx vyšetřovaných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx x bodu 6.2.3). Xxxxx navrhovaného xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx Hypersil XXX x Xxxxxx XXX.

Xx xxxxxx dosažení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx.

10.2 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxx

Xxxxxxx robustnosti xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx může xxx xxxxxxxx vliv xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx musí být xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx.

10.3 Xxxxxx xxxxx

Xx podmínek xxxxxxxxx x této xxxxxx xx eluováno mnoho xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx uvedených v xxxxxxx XX směrnice Xxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx jsou xxxxxxx v práci X. de Kruijf, X. X. X. Xxxx, X. X. Xxxxxxx-Xxxxxxxxx, X. Xxxxxxxx, (1989): Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx cosmetic xxxxxxxx XX. Xxxx-xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (X. Xxxxxxxxxxxxxx, 469, 317-398).

10.4 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx kolony xxx xxxxxx vhodnou xxxxxxxxxx.

10.5 Xxxxxx xxxx zkoušena xxx xxxxxxxx pokusu, xx xxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx. X následující xxxxxxx xxxx xxx xxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x % x/x (m), xxxxxxxxxxxxxxx (x) a xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (X) xxxxxxxx pro xxxxxxx, xxxxx xxxx xx vzorcích xxxxxxxx:

[1] XXX 5725.

[2] XXX 5725.