Plné znění - 31996L0045

Xxxxx Xxxxxxxx Komise 96/45/XX

xx xxx 2. xxxxxxxx 1996

x metodách xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx kosmetických xxxxxxxxxx

(Xxxx s xxxxxxxx xxx EHP)

KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx xx Xxxxxxx o založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 76/768/XXX ze xxx 27. července 1976 x xxxxxxxxxx právních xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 95/34/XX [2], x xxxxxxx xx xx. 8 odst. 1 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxx, že xx xx směrnici 76/768/XXX xxxxxxx xxxxxx zkoušení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx dodržení xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;

xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxxxxx xxxxxxxx metody analýzy xxxx xxx stanoveny xx xxxxxxxx; xx xxxxxxx xxxxxx již xxxx přijaty ve xxxxxxxx Komise 80/1335/XXX [3] xx xxxxx xxxxxxxx 87/143/XXX [4], xxxxxxxx Xxxxxx 82/434/XXX [5] xx xxxxx xxxxxxxx 90/207/XXX [6] x xx xxxxxxxxxx Xxxxxx 83/514/XXX [7], 85/490/XXX [8], 93/73/XXX [9] x 95/32/ES [10];

xxxxxxxx x xxxx, xx důkaz a xxxxxxxxx 2-xxxxxxxxxxxxxx, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, xxxxxx, ethyl, propyl, xxxxx x benzyl 4-xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx;

xxxxxxxx k xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 76/768/EHS xxxxxxxxxxx xxxxxxx,

XXXXXXX XXXX SMĚRNICI:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx státy xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x zajištění xxxx, xxx xx xxx úředním xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx 2-xxxxxxxxxxxxxx, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, xxxxxx, xxxxx, xxxxxx, butyl a xxxxxx 4-hydroxybenzoátu xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx uvedou x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x touto směrnicí xxxxxxxxxx xx 30. xxxx 1997. Xxxxxxxxxx x nich uvědomí Xxxxxx.

2. Xxxx opatření xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx tuto xxxxxxxx xxxx musí xxxxxx xxxxx xxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Způsob odkazu xx xxxxxxx členské xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Komisi xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx přijmou v xxxxxxx působnosti xxxx xxxxxxxx.

Článek 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx směrnice xx určena xxxxxxxx xxxxxx.

X Bruselu xxx 2. xxxxxxxx 1996.

Xx Xxxxxx

Xxxx Bonino

členka Xxxxxx

[1] Xx. xxxx. X 262, 27.9.1976, x. 169.

[2] Xx. xxxx. X 167, 18.7.1995, x. 19.

[3] Xx. věst. X 383, 31.12.1980, x. 27.

[4] Xx. věst. X 57, 27.2.1987, x. 56.

[5] Úř. xxxx. X 185, 30.6.1982, x. 1.

[6] Xx. xxxx. X 108, 28.4.1990, x. 92.

[7] Úř. věst. X 291, 24.10.1983, x. 9.

[8] Úř. xxxx. X 295, 7.11.1985, x. 30.

[9] Xx. xxxx. X 231, 14.9.1993, x. 34.

[10] Xx. xxxx. X 178, 28.7.1995, x. 20.

XXXXXXX

XXXXX X STANOVENÍ 2-XXXXXXXXXXXXXX, 1-XXXXXXXXXXXX-2-XXX, METHYL, XXXXX, PROPYL, BUTYL X BENZYL 4-XXXXXXXXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PROSTŘEDCÍCH

A. XXXXX

1. Rozsah x xxxxxx použití

V xxxx xxxxxx je specifikován xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx, který x kombinaci x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx X xxxxxx důkaz 2-fenoxyethanolu, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, methyl 4-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx, butyl 4-hydroxybenzoátu x xxxxxx 4-hydroxybenzoátu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxxx metody

Konzervační xxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx vápenaté soli. Xxxxxxxxx směs aceton/voda xx xxxxxxxxxxx diethyletherem, xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxx se konzervační xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx diethyletherového xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x UV xxxxxx x xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxx činidla

3.1 Xxxxxx

Xxxxxxx použitá xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxx p.a. Xxxx xxx xxxxxxx destilovaná xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.

3.2 Xxxxxx

3.3 Xxxxxxxxxxxx

3.4 x-Xxxxxx

3.5 Xxxxxxxx

3.6 Xxxxxx kyselina xxxxxx

3.7 Roztok kyseliny xxxxxxxxxxxxxx, c(HCl) = 4 xxx/x

3.8 Roztok xxxxxxxxx draselného, c(KOH) = 4 xxx/x

3.9 Xxxxxxx vápenatý dihydrát (XxXx₂ . 2X₂X)

3.10 Xxxxxxxx činidlo: Millonovo xxxxxxx

Xxxxxxxxx činidlo (xxxxxxxx xxxxxxxx) xx komerčně xxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx 69820).

3.11 2-Fenoxyethanol

3.12 1-Xxxxxxxxxxxx-2-xx

3.13 Xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx)

3.14 Xxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (ethylparaben)

3.15 x-Xxxxxx 4-hydroxybenzoát (propylparaben)

3.16 x-Xxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (butylparaben)

3.17 Xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (benzylparaben)

3.18 Xxxxxxxxxx roztoky

Připraví xx 0,1 % (x/X) xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx 3.11, 3.12, 3.13, 3.14, 3.15, 3.16 a 3.17 v xxxxxxxxx.

3.19 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx se 88 xxxx xxxxxxxx (3.4) x 12 xxxx xxxxxx kyseliny xxxxxx (3.6).

4. Xxxxxxxxx x pomůcky

Běžné laboratorní xxxxxxxx x xxxx:

4.1 Xxxxx lázeň xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx 60 °X

4.2 Xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx)

4.3 Xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, 254 nm

4.4 Hotové xxxxx 20 xx × 20 xx, xxxxxx potažené 0,25 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 60X254 (254 xx xxxxxx xxxxxxx 60X) x xxxxxxxxxxxx xxxxx (Xxxxx Xx 11798, Darmstadt, nebo xxxxxxxxxxxx)

4.5 Xxxxxxx nastavitelná xx teplotu xx xx 105 °X

4.6 Xxxxxxxxxxxx vysoušeč xxxxx

4.7 Xxxxxx malířský váleček x délce přibližně 10 xx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 3,5 xx. Xxxxxx xxxxxx xx měla xxx 2 až 3 xx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xx vlna xxxxxxxxx.

Xxx poznámka x xxxx 5.2.

4.8 Xxxxxxxx xxxxxxxx xx 50 xx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.9 Elektrická topná xxxxx s xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx: asi 80 °X. Xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx 20 cm × 20 cm x tloušťce xxx 6 xx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx tepla.

5. Xxxxxx

5.1 Xxxxxxxx xxxxxx

Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 50 xx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.8) xx xxxxxx přibližně 1 x xxxxxx. Přidají xx xxxxx kapky xxxxxxx kyseliny chlorovodíkové (3.7) x 40 xx xxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx xxxxx, se xxxxx 20 xxxxx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx uzavře, xxxx xx zlehka xxxxxxx na asi 60 °C, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx, a 1 xxxxxx xx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx papírkem xx xxxxx xX xxxxxxx x xxxxxx xx na xxxxxxx ≤ 3 xxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxx xx 1 xxxxxx xxxxx třepe.

Roztok xx xxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx x xxxxxxxxx xx přes xxxxxxxxx xxxxx xx Erlenmeyerovy xxxxx. 20 xx xxxxxxxx se xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 200 ml, xxxxx xx 60 xx vody a xxxxxxxx. Xxxxxxx xX xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.8) xxxxxxxxx xx 10 xx xxxxxxx indikátorového xxxxxxx.

Xxxxx se 1 x chloridu xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.9) a xxxxx se xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx filtrační xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx 250 xx, xxxxx obsahuje 75 xx xxxxxxxxxxxxx, a xxxxx xx jednu xxxxxx protřepává. Xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xx xxxxxxx do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx na 200 xx. Hodnota xX xxxxxxx se xxxxxx roztokem kyseliny xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx papírku. Poté xx xxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxx oddělit x asi 2 xx xxxx diethyletheru xx převede do xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 5 ml.

5.2 Chromatografie xx tenké xxxxxx (XXX)

XXX deska xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx desku (4.9). Xx xxxxxxxxx linii xxxxxxxxxxxx xxxx TLC xxxxx se nanese 10 μl xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx roztoků x 100 μx xxxxxxx xxxxxx (xxxxxx) (5.1).

Xxxxx potřeby xxx xxxxxxxx xxxxxxxx rozpouštědla xxxxxxx xxxxxxx. TLC xxxxx xx odstraní x xxxxx xxxxx x xxxxx se xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx komora (4.2) xx xxxxxx 100 ml vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.19).

XXX xxxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx se xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx čelo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 15 xx od základní xxxxx. Deska se x vyvíjecí xxxxxx xxxxx a vysuší x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxxxx x XX xxxxxx (4.3) x xxxxxx xxxxx se xxxxxxx. Deska se xxxxxxx 30 xxxxx x sušárně (4.5) xxx 100 °X, xxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx přísady v xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.10) xxx, xx xx XXX xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx válečkem (4.7) xxxxxxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxx rovněž zviditelnit xxxxxxxx xxxxxxxxx kapky Xxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx XX světlem.

Estery xxxxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx, 2-fenoxyethanol x 1-xxxxxxxxxxxx-2-xx xxxx xxxxx xxxxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxx pozor xx to, xx xxxxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx přítomná xx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx sama x xxxx projeví xxxx xxxxxxx xxxxxx. Viz 7.3 a 7.4.

6. Xxxxx

Xxx každou xxxxxx xx xxxxxxx hodnota Xx. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx vzorku xx xxxxxxxxx se xxxxxxxx získanými x xxxxxxxxxxxx roztoků, xxxxx xxx x jejich xxxxxxx Xx, xxxxxx xxxxxxx v XX xxxxxx x barvu xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx závěry x identitě xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxx se zdá, xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, provede xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC) xxxxxxxx x xxxxxx X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx vrstvě (XXX) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xx xxxxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx 2-xxxxxxxxxxxxxx, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx x xxxxxxxx.

7. Xxxxxxxx

7.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx aplikovat xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

7.2 Xxxx xxxxxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxx skupiny xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x Millonovým xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx x hodnot Xx získaných xxx xxxx xxxxxxxxxxxxx přísad xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx vrstvě xx xxxxxxx x xxxxx X. xx Xxxxxx, X. A. X. Xxxx, L. A. Xxxxxxx-Xxxxxxxxx x X. Xxxxxxxx (1987): Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx products I: Xxxx-xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx identification xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (X. Xxxxxxxxxxxxxx 410, 395-411).

7.3 Xxxxxxx Rf xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx:

7.4 X xxxxxxx xxxxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx nedochází x oddělení. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxx x xxxxxx X x xxxxxxxxxx retenčních xxxx xxxxxx s xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

X. XXXXXXXXX

1. Rozsah x xxxxxx použití

V této xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx 2-xxxxxxxxxxxxxx, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx 4-hydroxybenzoátu, xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx x kosmetických xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxxx

Xxxxxxxx konzervačních xxxxxx stanovená xxxxx xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx procentech.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx x poté xx suspenduje xx xxxxx xxxxxxxx x xxxx. Xxxx xx xxxxxxx zahřeje xx xxxxxxxxxx tukové xxxx, xxx xx zajistila xxxxxxxxxxxxx extrakce, x xxxx se zfiltruje.

Konzervační xxxxx ve xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografií (XXXX) x xxxxxxxxx fází xx použití xxxxxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

4. Reakční činidla

4.1 Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x.x. x xxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx pro HPLC. Xxxx xxx použita xxxxxxxxxxx voda xxxx xxxx alespoň stejné xxxxxxx.

4.2 Xxxxxxx, absolutní

4.3 2-Xxxxxxxxxxxxx

4.4 1-Xxxxxxxxxxxx-2-xx

4.5 Xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (methylparaben)

4.6 Xxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx)

4.7 n-Propyl 4-xxxxxxxxxxxxxx (propylparaben)

4.8 Isopropyl 4-xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxxxx)

4.9 x-Xxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx)

4.10 Xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (benzylparaben)

4.11 Xxxxxxxxxxxxxxx

4.12 Xxxxxxxx

4.13 Acetonitril

4.14 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx c(H₂SO₄) = 2 xxx/x

4.15 Xxxx xxxxxxx/xxxx

Xxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx (4.2) x xxxxx xxx xxxx.

4.16 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 0,25 x xxxxxxxxxxxxxxxxx (4.8), xxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xx 500 ml, xxxxxxxx xx x xxxxxx xx směsí ethanol/voda (4.15) xx objem.

4.17 Xxxxxxx xxxx: xxxx xxxxxxxxxxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx/xxxxxxxxxxx

Xxxxxx xx 5 xxxx tetrahydrofuranu, 60 xxxx xxxx, 10 xxxx xxxxxxxxx x 25 xxxx xxxxxxxxxxxx.

4.18 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xx odměrné xxxxx xx 100 xx xx přesně naváží xxxxxxxxx 0,2 x 2-xxxxxxxxxxxxxx, 0,2 g 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, 0,05 x xxxxxxxxxxxxxx, 0,05 g xxxxxxxxxxxxx, 0,05 g xxxxxxxxxxxxxx, 0,05 x xxxxxxxxxxxxx x 0,025 x benzylparabenu, xxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxx xxxxxxx/xxxx xx xxxxx.

Xxxxxx xx xxxxxxxx x ledničce x xx stabilní 1 xxxxx.

4.19 Standardní xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xx xxxxxxxxx xxxxx xx 50 xx xx ze xxxxxxxxx xxxxxxx (4.18) xxxxxxx 20,00 xx, 10,00 ml, 5,00 xx, 2,00 xx x 1,00 xx. Xx xxxxx xxxxx xx xxxxx 10,00 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.16) x 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx sírové (4.14) x xxxxxx xxxxx xxxxxxx/xxxx xx objem. Xxxx roztoky xx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. Přístroje x xxxxxxx

Xxxxx laboratorní xxxxxxxx, x xxxx:

5.1 Xxxxx xxxxx nastavitelná xx xxxxxxx 60 °X ± 1 °X.

5.2 HPLC xxxxxxxxxxxx x XX xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxx 280 xx

5.3 Xxxxxxxxxx kolona:

Korozivzdorná xxxx, délka 25 xx, xxxxxxx xxxxxx 4,6 xx (xxxx xxxxx 12,5 xx x xxxxxxx průměr 4,6 xx), xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx 5X18, xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxx 10.1).

5.4 Skleněné zkumavky xx 100 xx xx xxxxxxxxxxx uzávěrem

5.5 Xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx 2 xx 4 mm xxxx xxxxxxxxxxxx

6. Xxxxxx

6.1 Xxxxxxxx xxxxxx

6.1.1 Xxxxxxxx vzorku xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xx zkumavky na 100 xx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxx 1,0 x vzorku. Do xxxxxxxx xx pipetou xxxxx 1,0 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.14) x 50,0 xx xxxxx xxxxxxx/xxxx (4.15). Xxxxx se xxxxxxxxx 1 x xxxxxxx xxxxxxx (5.5), xxxxxxxx se uzavře x silně se xxxxxxxx, xxxxx nevznikne xxxxxxxxx xxxxxxxx. Protřepává xx alespoň xxxxx xxxxxx. Zkumavka se xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxxx xxxxx (5.1) x xxxxxxx 60 °X ± 1 °C, xxx xx podpořila xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx ethanolové fáze.

Zkumavka xx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx x extrakt xx xxxxx xx xxxxx hodinu do xxxxxxxx. Extrakt se xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Asi 2 xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx se uloží xx ledničky x xxxxxxxxx metodou XXXX xx provede do 24 xxxxx.

6.1.2 Příprava xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx standardu

Do xxxxxxxx xxxxxxxx xx 100 xx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxxxx na xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 1,0 x ± 0,1 g vzorku.

Do xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx sírové x 40,0 xx xxxxx xxxxxxx/xxxx. Přidá xx xxxxxxxxx 1 x varných kamínků (5.5) x xxxxxx 10,00 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx uzavře x xxxxx xx protřepe, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx minutu. Xxxxxxxx xx vloží xx 5 minut xx vodní xxxxx x xxxxxxx 60 °X ± 1 °X, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx konzervačních xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx se ihned xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx a xxxxxxx se uloží xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx papír.

Asi 2 xx filtrátu xx xxxxxxxx xx 5 xx vzorkovací lahvičky (xxxxxxxx xxxxxx). Extrakt xx xxxxx xx xxxxxxxx a stanovení xxxxxxx HPLC xx xxxxxxx xx 24 xxxxx.

6.2 Vysokoúčinná xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC)

6.2.1 Chromatografické xxxxxxxx

- Xxxxxxx xxxx: xxxx xxxxxxxxxxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx/xxxxxxxxxxx (4.17)

- Xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5 xx xx minutu

- Xxxxxxxx xxxxxx xxxxx: 280 xx

6.2.2 Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx 10 μx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx konzervačních xxxxxx (4.19). Ze získaných xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx píků xxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx sestrojí xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx koncentraci xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

6.2.3 Stanovení

Do xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxx xxxxxx xxx vnitřního xxxxxxxxx (6.1.1) x xxxxxxxxx xx chromatogram.

Nastříkne se 10 μx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxxxxx přísad (4.19) x xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx chromatogramy xx porovnají.

Není-li x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku (6.1.1) xxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx stejným xxxxxxxxx časem, jako xx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx), pokračuje xx xxxxxxxxxxxx 10 μx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx standardem (6.1.2). Xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx a xxxxx xx výšky xxxx.

Xx-xx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx rušivý pík x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx isopropylparabenu, xxx xx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx-xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx přísad x xxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx, lze xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx použít xxxx vnitřní xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxx vyšetřovaných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x výšce xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx ověřit, xx xx kalibrační xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

- xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx alespoň 0,90. (Definice xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xx obrázku 1.),

Obrázek 1: Separace píků

Není-li xxxxxxxxxx xxxxxxxx dosaženo, xxxx xx xxx xxx použita xxxxxxxxx xxxxxx, xxxx xx xxxx být složení xxxxxxx fáze xxxxxxxx xxx, aby xxx xxxxxxxxx xxxxxx.

- faktor xxxxxxxxx (As) xxxxx xxxxxxxxx píků xx xx xxx pohybovat xx 0,9 xx 1,5. (Xxxxxxxx faktoru xxxxxxxxx je xxxxxxx xx xxxxxxx 2.) Xxx zaznamenání xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx rychlost xxxxxx xxxxxx nejméně 2 xx xx xxxxxx,

&xxxx;

Xxxxxxx 2: Xxxxxx xxxxxxxxx xxxx

- základna xxxx xxx xxxxxxxx.

7. Xxxxxxx

Xxx xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxxxx xx použije xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2.2) x xxxxxxx poměrů xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx (wi) 2-xxxxxxxxxxxxxx, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx, ethyl 4-hydroxybenzoátu, xxxxxx 4-hydroxybenzoátu, butyl 4-xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (% m/m) xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx:

%x_x(x/x) = b_i / (200 × x)

xxx

xx = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přísady i xx xxxxxxxxx xxxxxxx (μx/xx) xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx x

x = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (x).

8. Xxxxxxxxxxxxxx [1]

Xxx poznámka x xxxx 10.5.

9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx [2]

Xxx xxxxxxxx x xxxx 10.5.

10. Xxxxxxxx

10.1 Xxxxxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxxxxxx HPLC výrazně xxxxxx xx xxxx, xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxx xxx kolonu xxxxxx xxx xxxxxxxx vyšetřovaných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx x xxxx 6.2.3). Xxxxx navrhovaného materiálu xxxxxx kolony xxxx xxxxxxxx vhodnými xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxx XXX x Zorbax XXX.

Xx xxxxxx xxxxxxxx požadovaného xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx složení mobilní xxxx.

10.2 Detekční xxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxxxxx popisované xxxxxx ukázala, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxx významný vliv xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx.

10.3 Rušivé xxxxx

Xx podmínek popsaných x xxxx metodě xx xxxxxxxx mnoho xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx množství xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx VI xxxxxxxx Xxxx týkající xx xxxxxxxxxxxx prostředků xxxx xxxxxxx v xxxxx X. xx Xxxxxx, X. X. X. Xxxx, L. X. Xxxxxxx-Xxxxxxxxx, A. Xxxxxxxx, (1989): Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx II. High-performance xxxxxx chromatographic xxxxxxxxxxxxxx (X. Chromatography, 469, 317-398).

10.4 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx vhodnou předkolonu.

10.5 Xxxxxx byla zkoušena xxx xxxxxxxx xxxxxx, xx xxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx pro xxxxx xx xxx xxxxxx uvedeny xxxxxxx xxxxxxx x % x/x (m), opakovatelnosti (x) x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (X) xxxxxxxx xxx xxxxxxx, které byly xx vzorcích obsaženy:

[1] XXX 5725.

[2] XXX 5725.