Plné znění - 31996L0045

Xxxxx Směrnice Komise 96/45/XX

xx dne 2. xxxxxxxx 1996

o metodách xxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx složení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx

(Xxxx x xxxxxxxx xxx EHP)

KOMISE EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,

x ohledem na Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x ohledem xx xxxxxxxx Rady 76/768/XXX ze dne 27. xxxxxxxx 1976 x xxxxxxxxxx právních xxxxxxxx xxxxxxxxx států xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 95/34/XX [2], x xxxxxxx na xx. 8 odst. 1 xxxxxxx směrnice,

vzhledem x xxxx, xx xx xx xxxxxxxx 76/768/XXX xxxxxxx úřední xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx prostředků x xxxxx xxxxxxxx dodržení xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxx složení kosmetických xxxxxxxxxx;

xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx analýzy xxxx být stanoveny xx nejdříve; xx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxx přijaty ve xxxxxxxx Komise 80/1335/XXX [3] xx xxxxx xxxxxxxx 87/143/EHS [4], xxxxxxxx Komise 82/434/EHS [5] xx znění xxxxxxxx 90/207/EHS [6] x ve xxxxxxxxxx Xxxxxx 83/514/EHS [7], 85/490/XXX [8], 93/73/XXX [9] x 95/32/XX [10];

xxxxxxxx k xxxx, xx důkaz x xxxxxxxxx 2-xxxxxxxxxxxxxx, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, xxxxxx, xxxxx, xxxxxx, xxxxx x benzyl 4-xxxxxxxxxxxxxxx x kosmetických xxxxxxxxxxxx xx sedmým xxxxxx;

xxxxxxxx k tomu, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 76/768/EHS technickému xxxxxxx,

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Článek 1

Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx k xxxxxxxxx xxxx, xxx se xxx úředním xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx prostředků důkaz x xxxxxxxxx 2-fenoxyethanolu, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, methyl, xxxxx, xxxxxx, butyl a xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx.

Článek 2

1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx právní x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x touto xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. xxxx 1997. Neprodleně x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.

2. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx tuto xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Způsob odkazu xx stanoví xxxxxxx xxxxx.

3. Členské xxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx právních xxxxxxxx, xxxxx přijmou x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Tato xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx dnem xx xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Bruselu xxx 2. xxxxxxxx 1996.

Xx Xxxxxx

Xxxx Xxxxxx

xxxxxx Xxxxxx

[1] Xx. xxxx. X 262, 27.9.1976, x. 169.

[2] Úř. xxxx. X 167, 18.7.1995, x. 19.

[3] Xx. xxxx. X 383, 31.12.1980, x. 27.

[4] Xx. xxxx. X 57, 27.2.1987, x. 56.

[5] Xx. věst. X 185, 30.6.1982, x. 1.

[6] Xx. xxxx. X 108, 28.4.1990, x. 92.

[7] Úř. xxxx. X 291, 24.10.1983, x. 9.

[8] Úř. xxxx. X 295, 7.11.1985, x. 30.

[9] Úř. xxxx. X 231, 14.9.1993, x. 34.

[10] Úř. věst. X 178, 28.7.1995, x. 20.

XXXXXXX

XXXXX A STANOVENÍ 2-XXXXXXXXXXXXXX, 1-XXXXXXXXXXXX-2-XXX, XXXXXX, XXXXX, XXXXXX, XXXXX X BENZYL 4-XXXXXXXXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PROSTŘEDCÍCH

A. XXXXX

1. Xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx

X této xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxx xxxxxx, xxxxx x kombinaci x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx X xxxxxx důkaz 2-xxxxxxxxxxxxxx, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, methyl 4-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx 4-hydroxybenzoátu, xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx 4-hydroxybenzoátu x benzyl 4-xxxxxxxxxxxxxxx x kosmetických xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxxx metody

Konzervační přísady xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx acetonem. Xx xxxxxxxx xx acetonový xxxxxx xxxxxx s xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx se x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx vápenaté soli. Xxxxxxxxx xxxx aceton/voda xx xxxxxxxxxxx diethyletherem, xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Po xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx diethyletherového xxxxxxxx xx nanese xx desku xxxxxxxx xxxxxx vrstvou xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pozoruje x XX xxxxxx x xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx Millonova xxxxxxx.

3. Reakční xxxxxxx

3.1 Xxxxxx

Xxxxxxx použitá xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x.x. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx voda xxxxxxx xxxxxx čistoty.

3.2 Xxxxxx

3.3 Xxxxxxxxxxxx

3.4 x-Xxxxxx

3.5 Xxxxxxxx

3.6 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx

3.7 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c(HCl) = 4 mol/l

3.8 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, x(XXX) = 4 xxx/x

3.9 Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XxXx₂ . 2H₂O)

3.10 Xxxxxxxx činidlo: Millonovo xxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxxxxx roztok (Xxxxx 69820).

3.11 2-Xxxxxxxxxxxxx

3.12 1-Xxxxxxxxxxxx-2-xx

3.13 Xxxxxx 4-hydroxybenzoát (methylparaben)

3.14 Xxxxx 4-hydroxybenzoát (xxxxxxxxxxxx)

3.15 x-Xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx)

3.16 x-Xxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (butylparaben)

3.17 Xxxxxx 4-hydroxybenzoát (xxxxxxxxxxxxx)

3.18 Xxxxxxxxxx roztoky

Připraví se 0,1 % (x/X) xxxxxxx každé x xxxxxxxxxxxx xxxxx 3.11, 3.12, 3.13, 3.14, 3.15, 3.16 x 3.17 x xxxxxxxxx.

3.19 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx se 88 dílů xxxxxxxx (3.4) x 12 xxxx xxxxxx kyseliny xxxxxx (3.6).

4. Přístroje x pomůcky

Běžné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx:

4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx 60 °X

4.2 Xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx papírem)

4.3 Xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, 254 nm

4.4 Hotové xxxxx 20 xx × 20 cm, xxxxxx potažené 0,25 xx xxxxxx vrstvou xxxxxxxxxx 60X254 (254 xx xxxxxx xxxxxxx 60X) x xxxxxxxxxxxx xxxxx (Xxxxx Xx 11798, Xxxxxxxxx, nebo xxxxxxxxxxxx)

4.5 Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx teplotu xx xx 105 °C

4.6 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx

4.7 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x délce xxxxxxxxx 10 xx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 3,5 xx. Xxxxxx xxxxxx xx měla xxx 2 až 3 xx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx x xxxx 5.2.

4.8 Xxxxxxxx xxxxxxxx na 50 xx xx šroubovacími xxxxxxx.

4.9 Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx: xxx 80 °X. Xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx 20 xx × 20 xx x xxxxxxxx xxx 6 xx, xxxx xx dosáhne xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx tepla.

5. Postup

5.1 Xxxxxxxx xxxxxx

Xx skleněné xxxxxxxx na 50 xx xx šroubovacím xxxxxxxx (4.8) xx xxxxxx xxxxxxxxx 1 x vzorku. Přidají xx čtyři kapky xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.7) x 40 xx xxxxxxx.

X případě xxxxx xxxxxxxxxx kosmetických xxxxxxxxxx, jako xx xxxxxxxx xxxxx, se xxxxx 20 xxxxx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxx se xxxxxx xxxxxxx na xxx 60 °X, xxx xx xxxxxxxxx extrakce xxxxxxxxxxxxx látek xx xxxxxxxxx fáze, a 1 xxxxxx xx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx papírkem xx xxxxx xX xxxxxxx x upraví xx xx hodnotu ≤ 3 xxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové. Znovu xx 1 xxxxxx xxxxx třepe.

Roztok xx xxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. 20 ml xxxxxxxx xx xxxxxxx xx Erlenmeyerovy xxxxx xx 200 xx, xxxxx xx 60 xx xxxx a xxxxxxxx. Hodnota pH xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx draselným (3.8) xxxxxxxxx xx 10 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 1 x xxxxxxxx vápenatého xxxxxxxxx (3.9) x xxxxx se protřepe. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx 250 xx, xxxxx xxxxxxxx 75 xx xxxxxxxxxxxxx, a xxxxx xx jednu xxxxxx protřepává. Fáze xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xx vypustí do Xxxxxxxxxxxxx baňky xx 200 xx. Xxxxxxx xX xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 2 za použití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xx xxxxx xxxxxx protřepává. Xxxx xx xxxxxxx oddělit x xxx 2 xx fáze xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxxxxx na 5 xx.

5.2 Chromatografie xx xxxxx vrstvě (XXX)

XXX xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx desku (4.9). Xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx TLC xxxxx xx nanese 10 μx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x 100 μl xxxxxxx vzorku (xxxxxx) (5.1).

Xxxxx potřeby xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. XXX xxxxx xx odstraní x xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx. Vyvíjecí komora (4.2) xx xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.19).

XXX deska xx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx se xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx asi 15 xx xx xxxxxxxx xxxxx. Deska xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx x proudu xxxxxxx xxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vlasů.

Deska se xxxxxxxxx v XX xxxxxx (4.3) a xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx 30 xxxxx x xxxxxxx (4.5) xxx 100 °C, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xx zviditelní Xxxxxxxxxx činidlem (3.10) xxx, xx xx XXX deska xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx do xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx činidla xx xxxxxx skvrnu xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxx 4-hydroxybenzoové se xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx, 2-fenoxyethanol x 1-xxxxxxxxxxxx-2-xx jako žluté xxxxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxx pozor xx xx, xx xxxxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxxxxx látka nebo xxxxxxx rozkladu xxxxxxxx, xx xxxx x xxxx projeví jako xxxxxxx xxxxxx. Xxx 7.3 a 7.4.

6. Xxxxx

Xxx každou skvrnu xx vypočte xxxxxxx Xx. Xxxxxx získané x xxxxxxx vzorku xx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxx x xxxxxx xxxxxxx Xx, jejich xxxxxxx x UV xxxxxx x xxxxx xx zviditelnění. Xxxxx xx předběžné xxxxxx x identitě xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxx se xxx, xx xxxx přítomny xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) popsanou x xxxxxx X. Xxxxxxxx chromatografie xx xxxxx xxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxxx kapalinové xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xx xxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx 2-fenoxyethanolu, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx x xxxxxxxx.

7. Xxxxxxxx

7.1 Vzhledem k xxxxxxxx Millonova xxxxxxx xx nejvhodnější aplikovat xxxx činidlo jedním x popsaných způsobů. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

7.2 Xxxx sloučeniny xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx mohou xxxxxx xxx xxxxxx x Millonovým činidlem xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx a xxxxxx Xx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx chromatografie xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx x práci X. xx Xxxxxx, X. X. X. Xxxx, L. X. Xxxxxxx-Xxxxxxxxx x A. Xxxxxxxx (1987): Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx products X: Xxxx-xxxxx chromatographic procedure xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (J. Xxxxxxxxxxxxxx 410, 395-411).

7.3 Xxxxxxx Rf xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jako ukazatele xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx:

7.4 V xxxxxxx xxxxxxxx 4-hydroxybenzoové x xxxxxxxxxxxxxx ani x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx nedochází x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx sloučenin xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx XXXX popsanou x oddíle X x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx standardů.

B. XXXXXXXXX

1. Xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx

X této xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx 2-xxxxxxxxxxxxxx, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, methyl 4-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx 4-hydroxybenzoátu, butyl 4-xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx x kosmetických xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxxx

Xxxxxxxx konzervačních xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx vyjádří x xxxxxxxxxxxx procentech.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx x xxxx. Xxxx se xxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxx tukové xxxx, xxx xx zajistila xxxxxxxxxxxxx extrakce, x xxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxx xx filtrátu xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografií (HPLC) x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xxxxxxx

4.1 Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x.x. x xxxxx xxxxxxx musí být xxxxxx pro XXXX. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx voda xxxx xxxx alespoň stejné xxxxxxx.

4.2 Ethanol, xxxxxxxxx

4.3 2-Xxxxxxxxxxxxx

4.4 1-Xxxxxxxxxxxx-2-xx

4.5 Xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx)

4.6 Ethyl 4-xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx)

4.7 n-Propyl 4-xxxxxxxxxxxxxx (propylparaben)

4.8 Xxxxxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxxxx)

4.9 n-Butyl 4-xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx)

4.10 Benzyl 4-xxxxxxxxxxxxxx (benzylparaben)

4.11 Tetrahydrofuran

4.12 Xxxxxxxx

4.13 Acetonitril

4.14 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x(X₂XX₄) = 2 xxx/x

4.15 Xxxx ethanol/voda

Smíchá xx xxxxx xxxx xxxxxxxx (4.2) a xxxxx xxx vody.

4.16 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxx se xxxxxx přibližně 0,25 x xxxxxxxxxxxxxxxxx (4.8), xxxxxxx se do xxxxxxx baňky xx 500 xx, rozpustí xx a xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx/xxxx (4.15) xx xxxxx.

4.17 Xxxxxxx fáze: směs xxxxxxxxxxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx/xxxxxxxxxxx

Xxxxxx xx 5 xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx, 60 xxxx xxxx, 10 xxxx methanolu x 25 xxxx xxxxxxxxxxxx.

4.18 Xxxxxxx roztok konzervačních xxxxxx

Xx xxxxxxx xxxxx xx 100 xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 0,2 x 2-xxxxxxxxxxxxxx, 0,2 x 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, 0,05 x xxxxxxxxxxxxxx, 0,05 x xxxxxxxxxxxxx, 0,05 g xxxxxxxxxxxxxx, 0,05 x xxxxxxxxxxxxx a 0,025 x xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x doplní xxxxx xxxxxxx/xxxx xx xxxxx.

Xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxx x xx xxxxxxxx 1 xxxxx.

4.19 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xx xxxxxxxxx xxxxx na 50 xx xx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (4.18) xxxxxxx 20,00 ml, 10,00 xx, 5,00 xx, 2,00 xx x 1,00 xx. Xx xxxxx baňky xx přidá 10,00 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.16) x 1,0 ml roztoku xxxxxxxx sírové (4.14) x doplní směsí xxxxxxx/xxxx na xxxxx. Xxxx roztoky xx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. Xxxxxxxxx x pomůcky

Běžné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxx:

5.1 Xxxxx lázeň nastavitelná xx teplotu 60 °X ± 1 °X.

5.2 XXXX xxxxxxxxxxxx x XX xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxx 280 xx

5.3 Xxxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx 25 xx, xxxxxxx průměr 4,6 xx (nebo xxxxx 12,5 cm x xxxxxxx průměr 4,6 xx), xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx 5X18, nebo xxxxxxxxxxxxx sorbentem (xxx 10.1).

5.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx xx 100 xx xx šroubovacím uzávěrem

5.5 Xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx 2 xx 4 xx xxxx xxxxxxxxxxxx

6. Xxxxxx

6.1 Xxxxxxxx xxxxxx

6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xxx přidání xxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xx xxxxxxxx xx 100 xx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx asi 1,0 x xxxxxx. Xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx 1,0 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.14) x 50,0 xx xxxxx xxxxxxx/xxxx (4.15). Xxxxx se xxxxxxxxx 1 x xxxxxxx kamínků (5.5), xxxxxxxx se uzavře x xxxxx xx xxxxxxxx, dokud xxxxxxxxx xxxxxxxxx suspenze. Protřepává xx alespoň xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxxxx do xxxxx xxxxx (5.1) x xxxxxxx 60 °X ± 1 °C, xxx se podpořila xxxxxxxx konzervačních přísad xx ethanolové xxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx studené xxxx x xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx. Extrakt se xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Asi 2 xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx do 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx XXXX xx provede xx 24 xxxxx.

6.1.2 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx přidání xxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xx xxxxxxxx xxxxxxxx na 100 xx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxxxx na xxx xxxxxxxxx místa xxxxxx 1,0 x ± 0,1 x xxxxxx.

Xx xxxxxxxx xx pipetou xxxxx 1,0 ml xxxxxxx kyseliny xxxxxx x 40,0 xx xxxxx ethanol/voda. Xxxxx xx xxxxxxxxx 1 x varných xxxxxxx (5.5) x xxxxxx 10,00 xx roztoku xxxxxxxxx standardu. Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx homogenní xxxxxxxx. Protřepává xx xxxxxxx jednu minutu. Xxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 60 °X ± 1 °X, aby xx xxxxxxxxx extrakce xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx ethanolové xxxx.

Xxxxxxxx se ihned xxxxxxx pod proudem xxxxxxx vody a xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx papír.

Asi 2 xx xxxxxxxx se xxxxxxxx xx 5 xx vzorkovací lahvičky (xxxxxxxx roztok). Xxxxxxx xx uloží xx xxxxxxxx a stanovení xxxxxxx HPLC xx xxxxxxx xx 24 xxxxx.

6.2 Xxxxxxxxxxxx kapalinová xxxxxxxxxxxxxx (XXXX)

6.2.1 Chromatografické xxxxxxxx

- Xxxxxxx xxxx: xxxx tetrahydrofuran/voda/methanol/acetonitril (4.17)

- Xxxxxxxxx rychlost: 1,5 xx za xxxxxx

- Xxxxxxxx xxxxxx xxxxx: 280 xx

6.2.2 Kalibrace

Nastříkne xx 10 μl xxxxxxx ze standardních xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.19). Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se stanoví xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx přísadu xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

6.2.3 Xxxxxxxxx

Xx chromatografu xx xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxx vzorku xxx vnitřního standardu (6.1.1) a xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx 10 μl xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.19) x xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx porovnají.

Není-li v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (6.1.1) přítomen xxx x xxxxxxxxx stejným xxxxxxxxx časem, xxxx xx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (doporučený xxxxxxx xxxxxxxx), xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 10 μx xxxxxxx xxxxxx x vnitřním standardem (6.1.2). Xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx x změří xx výšky xxxx.

Xx-xx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx rušivý xxx x retenčním xxxxx xxxxxxxxx stejným jako xxxxxxxx xxx isopropylparabenu, xxx by xxx xxxxxx xxxx vnitřní xxxxxxxx.

Xxxx-xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x chromatogramu xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx výšek xxxx vyšetřovaných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x výšce xxxx vnitřního xxxxxxxxx.

Xx xxxxx ověřit, že xx kalibrační xxxxxx xxxxxxxxx standardu xxxxxxxx.

Xx xxxxx ověřit, xxx xxxxxxxxxxxxx získané pro xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx vzorku xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

- xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx 0,90. (Xxxxxxxx separace xxxx xx uvedena xx obrázku 1.),

Obrázek 1: Xxxxxxxx xxxx

Xxxx-xx xxxxxxxxxx separace xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxx použita xxxxxxxxx xxxxxx, xxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx fáze xxxxxxxx xxx, xxx xxx xxxxxxxxx splněn.

- xxxxxx xxxxxxxxx (Xx) xxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xx xxx xxxxxxxxx xx 0,9 xx 1,5. (Definice xxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxx xx xxxxxxx 2.) Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx účelem stanovení xxxxxxx asymetrie je xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx nejméně 2 xx za xxxxxx,

&xxxx;

Xxxxxxx 2: Xxxxxx xxxxxxxxx xxxx

- xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx.

7. Výpočet

Pro xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2.2) x xxxxxxx xxxxxx xxxxx píků xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx přísad x xxxxx píku xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx (wi) 2-xxxxxxxxxxxxxx, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, methyl 4-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx 4-hydroxybenzoátu, xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx x hmotnostních xxxxxxxxxx (% x/x) xx vypočte xxxxxx xxxxxx:

%x_x(x/x) = x_x / (200 × x)

xxx

xx = koncentrace xxxxxxxxxxx přísady x xx zkušebním xxxxxxx (μx/xx) odečtená x xxxxxxxxxx xxxxxx a

a = hmotnost xxxxxxxxxx xxxxxx (x).

8. Opakovatelnost [1]

Xxx xxxxxxxx v xxxx 10.5.

9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx [2]

Xxx xxxxxxxx v xxxx 10.5.

10. Poznámky

10.1 Xxxxxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx chování xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XXXX xxxxxxx xxxxxx na typu, xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Zda xxx xxxxxx použít xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx standardní xxxxxxx (xxx xxxxxxxx x bodu 6.2.3). Xxxxx navrhovaného materiálu xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxx XXX x Zorbax ODS.

Za xxxxxx dosažení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx.

10.2 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx detekční xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx vliv xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx.

10.3 Xxxxxx xxxxx

Xx podmínek popsaných x této xxxxxx xx eluováno mnoho xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxx xxxxx konzervační xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxx. Retenční xxxx xxxxxxx množství konzervačních xxxxxx uvedených v xxxxxxx XX xxxxxxxx Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x práci X. xx Xxxxxx, X. X. X. Xxxx, X. X. Xxxxxxx-Xxxxxxxxx, X. Xxxxxxxx, (1989): Determination xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx XX. High-performance xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (X. Chromatography, 469, 317-398).

10.4 Xxx ochranu xxxxxxxxxx kolony xxx xxxxxx vhodnou předkolonu.

10.5 Xxxxxx xxxx zkoušena xxx xxxxxxxx xxxxxx, xx němž se xxxxxxxx xxxxx laboratoří. Xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx. X následující xxxxxxx jsou xxx xxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x % x/x (x), xxxxxxxxxxxxxxx (x) a xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (X) xxxxxxxx xxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx:

[1] XXX 5725.

[2] XXX 5725.