Plné znění - 31996L0045

Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx 96/45/XX

xx xxx 2. xxxxxxxx 1996

o metodách xxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx kosmetických xxxxxxxxxx

(Xxxx x významem xxx EHP)

KOMISE EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx na Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 76/768/XXX xx xxx 27. xxxxxxxx 1976 x sbližování xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx se kosmetických xxxxxxxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 95/34/XX [2], x xxxxxxx xx xx. 8 xxxx. 1 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxx, xx xx xx směrnici 76/768/XXX xxxxxxx úřední xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;

xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxxxxx xxxxxxxx metody analýzy xxxx být stanoveny xx xxxxxxxx; xx xxxxxxx metody xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx Komise 80/1335/XXX [3] xx xxxxx xxxxxxxx 87/143/EHS [4], xxxxxxxx Xxxxxx 82/434/XXX [5] ve xxxxx xxxxxxxx 90/207/XXX [6] x ve xxxxxxxxxx Xxxxxx 83/514/EHS [7], 85/490/XXX [8], 93/73/EHS [9] a 95/32/XX [10];

xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxx x xxxxxxxxx 2-xxxxxxxxxxxxxx, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, xxxxxx, ethyl, xxxxxx, xxxxx x xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx je sedmým xxxxxx;

xxxxxxxx k tomu, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 76/768/EHS technickému xxxxxxx,

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx státy xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx k xxxxxxxxx xxxx, xxx xx xxx úředním zkoušení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx důkaz x xxxxxxxxx 2-xxxxxxxxxxxxxx, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, xxxxxx, ethyl, xxxxxx, xxxxx x xxxxxx 4-hydroxybenzoátu prováděly xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx.

Článek 2

1. Členské xxxxx uvedou x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx předpisy xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. xxxx 1997. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.

2. Tato opatření xxxxxxx členskými státy xxxx xxxxxxxxx odkaz xx xxxx směrnici xxxx xxxx takový xxxxx být xxxxxx xxx jejich xxxxxxx xxxxxxxxx. Způsob odkazu xx xxxxxxx členské xxxxx.

3. Členské xxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx právních předpisů, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Tato xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx směrnice xx určena xxxxxxxx xxxxxx.

V Xxxxxxx xxx 2. xxxxxxxx 1996.

Za Xxxxxx

Xxxx Xxxxxx

xxxxxx Xxxxxx

[1] Úř. xxxx. X 262, 27.9.1976, x. 169.

[2] Úř. xxxx. X 167, 18.7.1995, x. 19.

[3] Úř. xxxx. X 383, 31.12.1980, x. 27.

[4] Úř. xxxx. X 57, 27.2.1987, x. 56.

[5] Xx. xxxx. X 185, 30.6.1982, x. 1.

[6] Xx. xxxx. X 108, 28.4.1990, x. 92.

[7] Xx. věst. X 291, 24.10.1983, x. 9.

[8] Xx. xxxx. X 295, 7.11.1985, x. 30.

[9] Xx. xxxx. X 231, 14.9.1993, x. 34.

[10] Xx. xxxx. X 178, 28.7.1995, x. 20.

PŘÍLOHA

DŮKAZ X XXXXXXXXX 2-XXXXXXXXXXXXXX, 1-FENOXYPROPAN-2-OLU, XXXXXX, XXXXX, XXXXXX, BUTYL X BENZYL 4-HYDROXYBENZOÁTU X XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX

X. XXXXX

1. Xxxxxx a xxxxxx xxxxxxx

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx chromatografie na xxxxx xxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx stanovení xxxxxxxx x oddílu X xxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxxxxxxx, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, xxxxxx 4-hydroxybenzoátu, xxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx, butyl 4-hydroxybenzoátu x xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx x kosmetických xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxxxxx přísady xx extrahují x xxxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Po xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx s xxxxx a mastné xxxxxxxx se v xxxxxxxxxx prostředí xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx směs aceton/voda xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Po xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx extrahují xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx část xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx nanese xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx vrstvou silikagelu. Xx vyvíjení se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x XX xxxxxx x zviditelní se xx použití Xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Reakční xxxxxxx

3.1 Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x.x. Musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.

3.2 Xxxxxx

3.3 Diethylether

3.4 n-Pentan

3.5 Xxxxxxxx

3.6 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx

3.7 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c(HCl) = 4 xxx/x

3.8 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, x(XXX) = 4 mol/l

3.9 Xxxxxxx vápenatý xxxxxxxx (XxXx₂ . 2X₂X)

3.10 Xxxxxxxx činidlo: Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxxxx) je komerčně xxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx 69820).

3.11 2-Xxxxxxxxxxxxx

3.12 1-Fenoxypropan-2-ol

3.13 Xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx)

3.14 Xxxxx 4-hydroxybenzoát (ethylparaben)

3.15 x-Xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (propylparaben)

3.16 x-Xxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (butylparaben)

3.17 Xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (benzylparaben)

3.18 Xxxxxxxxxx roztoky

Připraví xx 0,1 % (m/V) xxxxxxx každé x xxxxxxxxxxxx xxxxx 3.11, 3.12, 3.13, 3.14, 3.15, 3.16 x 3.17 x xxxxxxxxx.

3.19 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xx 88 xxxx xxxxxxxx (3.4) x 12 xxxx xxxxxx kyseliny xxxxxx (3.6).

4. Přístroje x pomůcky

Běžné laboratorní xxxxxxxx a xxxx:

4.1 Xxxxx lázeň xxxxxxxxxxxx xx teplotu 60 °X

4.2 Xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx papírem)

4.3 Xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, 254 xx

4.4 Xxxxxx xxxxx 20 xx × 20 xx, xxxxxx xxxxxxxx 0,25 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 60F254 (254 xx dolním indexem 60X) x koncentrační xxxxx (Xxxxx Xx 11798, Xxxxxxxxx, nebo xxxxxxxxxxxx)

4.5 Xxxxxxx nastavitelná xx teplotu xx xx 105 °X

4.6 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx vlasů

4.7 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx přibližně 10 xx, vnější xxxxxx přibližně 3,5 xx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxx být 2 xx 3 xx xxxxx. Podle xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx x xxxx 5.2.

4.8 Skleněné xxxxxxxx xx 50 xx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.9 Xxxxxxxxxx topná xxxxx x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx teploty: asi 80 °X. Topná xxxxx xx pokryje xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 20 cm × 20 xx x xxxxxxxx asi 6 xx, xxxx xx dosáhne xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

5. Postup

5.1 Xxxxxxxx vzorku

Do xxxxxxxx xxxxxxxx xx 50 xx se šroubovacím xxxxxxxx (4.8) xx xxxxxx xxxxxxxxx 1 x xxxxxx. Xxxxxxx xx čtyři xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.7) x 40 xx acetonu.

V xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kosmetických xxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxx 20 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx uzavře, xxxx se zlehka xxxxxxx na asi 60 °X, xxx xx xxxxxxxxx extrakce xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx, x 1 xxxxxx se xxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx papírkem xx xxxxx xX xxxxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxxx ≤ 3 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx 1 minutu xxxxx xxxxx.

Xxxxxx se xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx Erlenmeyerovy xxxxx. 20 xx xxxxxxxx se převede xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx 200 xx, xxxxx se 60 xx xxxx a xxxxxxxx. Hodnota xX xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.8) xxxxxxxxx xx 10 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 1 x chloridu xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.9) x xxxxx se xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx filtrační xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx 250 xx, xxxxx xxxxxxxx 75 xx xxxxxxxxxxxxx, x xxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx nechají xxxxxxx x vodná xxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 200 ml. Xxxxxxx xX xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na přibližně 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx nechají xxxxxxx x xxx 2 xx xxxx diethyletheru xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx na 5 xx.

5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx (XXX)

XXX xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.9). Xx startovní xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx TLC xxxxx xx xxxxxx 10 μl xxxxxxx x referenčních roztoků x 100 μl xxxxxxx xxxxxx (vzorků) (5.1).

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx odpaření xxxxxxxxxxxx xxxxxxx vzduchu. TLC xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx. Xxxxxxxx komora (4.2) xx naplní 100 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.19).

XXX deska xx ihned vloží xx nenasycené xxxxxx x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxxx xxx 15 xx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x vysuší x proudu xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx se xxxxxxxxx x UV xxxxxx (4.3) x xxxxxx skvrn xx xxxxxxx. Deska xx xxxxxxx 30 xxxxx x sušárně (4.5) xxx 100 °C, xxx xx odstranila xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.10) xxx, xx xx XXX xxxxx rovnoměrně xxxxxxx xxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx do xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxx rovněž xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kapky Xxxxxxxxx činidla xx xxxxxx xxxxxx označenou xxx XX xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx červené xxxxxx, 2-xxxxxxxxxxxxx x 1-xxxxxxxxxxxx-2-xx xxxx xxxxx xxxxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xx xx, xx xxxxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx sama x xxxx projeví jako xxxxxxx xxxxxx. Xxx 7.3 a 7.4.

6. Xxxxx

Xxx každou xxxxxx xx vypočte xxxxxxx Xx. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx vzorku xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxx o jejich xxxxxxx Xx, xxxxxx xxxxxxx x UV xxxxxx x barvu xx xxxxxxxxxxxx. Učiní xx xxxxxxxxx závěry x identitě xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxx se xxx, xx xxxx přítomny xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC) xxxxxxxx x xxxxxx B. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxx vrstvě (XXX) x xxxxxxxxxxxx kapalinové xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) se xxxxxxxxxx, aby se xxxxxxxxx přítomnost 2-xxxxxxxxxxxxxx, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx x xxxxxxxx.

7. Xxxxxxxx

7.1 Vzhledem k xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx aplikovat xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx způsobů. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

7.2 Xxxx sloučeniny xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxx x Millonovým xxxxxxxx xxxxxxxxxx zbarvení. Xxxxxxx xxxxx a xxxxxx Xx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx chromatografie xx xxxxx xxxxxx je xxxxxxx x xxxxx X. xx Xxxxxx, X. A. H. Xxxx, X. A. Xxxxxxx-Xxxxxxxxx x X. Xxxxxxxx (1987): Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx X: Xxxx-xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx procedure xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx products (X. Xxxxxxxxxxxxxx 410, 395-411).

7.3 Xxxxxxx Rf xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxx, které lze xxxxxx:

7.4 V xxxxxxx xxxxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x oddělení. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx HPLC xxxxxxxx x oddíle X x porovnáním retenčních xxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

X. XXXXXXXXX

1. Xxxxxx a xxxxxx xxxxxxx

X xxxx xxxxxx xx specifikován xxxxxx xxx stanovení 2-xxxxxxxxxxxxxx, 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx 4-hydroxybenzoátu, xxxxxx 4-hydroxybenzoátu, butyl 4-xxxxxxxxxxxxxxx x benzyl 4-xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxx xx suspenduje xx xxxxx ethanolu a xxxx. Xxxx se xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx fáze, xxx xx zajistila xxxxxxxxxxxxx extrakce, x xxxx se xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxxxx xxxx xx použití xxxxxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx xxxx vnitřního xxxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xxxxxxx

4.1 Xxxxxx

Xxxxxxx reakční činidla xxxx xxx čistoty x.x. x podle xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxx HPLC. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxx alespoň xxxxxx xxxxxxx.

4.2 Xxxxxxx, xxxxxxxxx

4.3 2-Xxxxxxxxxxxxx

4.4 1-Fenoxypropan-2-ol

4.5 Methyl 4-xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx)

4.6 Ethyl 4-xxxxxxxxxxxxxx (ethylparaben)

4.7 x-Xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (propylparaben)

4.8 Xxxxxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxxxx)

4.9 x-Xxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx)

4.10 Xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx)

4.11 Tetrahydrofuran

4.12 Xxxxxxxx

4.13 Xxxxxxxxxxx

4.14 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x(X₂XX₄) = 2 xxx/x

4.15 Xxxx xxxxxxx/xxxx

Xxxxxx xx xxxxx xxxx ethanolu (4.2) x jeden xxx xxxx.

4.16 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxx se xxxxxx přibližně 0,25 x isopropylparabenu (4.8), xxxxxxx se do xxxxxxx xxxxx xx 500 ml, rozpustí xx x xxxxxx xx xxxxx ethanol/voda (4.15) xx xxxxx.

4.17 Xxxxxxx xxxx: směs xxxxxxxxxxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx/xxxxxxxxxxx

Xxxxxx se 5 xxxx tetrahydrofuranu, 60 xxxx xxxx, 10 xxxx xxxxxxxxx x 25 dílů xxxxxxxxxxxx.

4.18 Xxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xx odměrné baňky xx 100 xx xx přesně xxxxxx xxxxxxxxx 0,2 g 2-xxxxxxxxxxxxxx, 0,2 x 1-xxxxxxxxxxxx-2-xxx, 0,05 x xxxxxxxxxxxxxx, 0,05 x xxxxxxxxxxxxx, 0,05 g xxxxxxxxxxxxxx, 0,05 g xxxxxxxxxxxxx x 0,025 x xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxx xxxxxxx/xxxx xx xxxxx.

Xxxxxx xx uchovává x ledničce x xx xxxxxxxx 1 xxxxx.

4.19 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xx xxxxxxxxx xxxxx xx 50 xx se xx xxxxxxxxx xxxxxxx (4.18) xxxxxxx 20,00 xx, 10,00 xx, 5,00 xx, 2,00 xx x 1,00 ml. Xx xxxxx xxxxx xx xxxxx 10,00 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.16) x 1,0 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.14) x xxxxxx xxxxx xxxxxxx/xxxx na objem. Xxxx roztoky se xxxxxxxxxx čerstvé.

5. Xxxxxxxxx x pomůcky

Běžné laboratorní xxxxxxxx, x xxxx:

5.1 Xxxxx lázeň xxxxxxxxxxxx xx teplotu 60 °X ± 1 °X.

5.2 XXXX xxxxxxxxxxxx x XX detektorem, xxxxxx délka 280 xx

5.3 Xxxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx xxxx, délka 25 xx, xxxxxxx xxxxxx 4,6 xx (nebo xxxxx 12,5 xx x xxxxxxx xxxxxx 4,6 xx), naplněná Xxxxxxxxxxx 5X18, xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxx 10.1).

5.4 Skleněné zkumavky xx 100 xx xx šroubovacím xxxxxxxx

5.5 Xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx 2 až 4 xx xxxx xxxxxxxxxxxx

6. Postup

6.1 Xxxxxxxx xxxxxx

6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx

Xx xxxxxxxx xx 100 xx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxx 1,0 x xxxxxx. Xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.14) x 50,0 xx xxxxx xxxxxxx/xxxx (4.15). Xxxxx xx xxxxxxxxx 1 g xxxxxxx xxxxxxx (5.5), xxxxxxxx se uzavře x xxxxx xx xxxxxxxx, dokud xxxxxxxxx xxxxxxxxx suspenze. Protřepává xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx na 5 xxxxx xx xxxxx xxxxx (5.1) o xxxxxxx 60 °C ± 1 °C, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx přísad xx ethanolové fáze.

Zkumavka xx ihned xxxxxxx xxx xxxxxxx studené xxxx a xxxxxxx xx xxxxx na xxxxx hodinu xx xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx filtrační xxxxx. Xxx 2 xx filtrátu xx xxxxxxxx xx 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xx ledničky x xxxxxxxxx metodou XXXX xx xxxxxxx xx 24 hodin.

6.1.2 Příprava xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx standardu

Do xxxxxxxx xxxxxxxx xx 100 xx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxxxx na xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 1,0 g ± 0,1 x vzorku.

Do xxxxxxxx se pipetou xxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 40,0 ml xxxxx xxxxxxx/xxxx. Přidá xx xxxxxxxxx 1 x xxxxxxx xxxxxxx (5.5) x xxxxxx 10,00 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx xx protřepe, xxxxx nevznikne homogenní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx minutu. Xxxxxxxx xx vloží xx 5 minut xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 60 °X ± 1 °X, xxx xx xxxxxxxxx extrakce xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx ethanolové xxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxx proudem xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxx xx jednu xxxxxx xx ledničky. Xxxxxxx xx zfiltruje xxxx xxxxxxxxx papír.

Asi 2 xx xxxxxxxx se xxxxxxxx xx 5 xx vzorkovací xxxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx XXXX xx xxxxxxx do 24 xxxxx.

6.2 Vysokoúčinná xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC)

6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

- Xxxxxxx xxxx: xxxx tetrahydrofuran/voda/methanol/acetonitril (4.17)

- Xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5 xx xx xxxxxx

- Xxxxxxxx xxxxxx délka: 280 xx

6.2.2 Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx 10 μl xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx konzervačních xxxxxx (4.19). Ze xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx roztoků konzervačních xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx přísadu xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx poměrů xx koncentraci standardních xxxxxxx.

6.2.3 Xxxxxxxxx

Xx chromatografu xx xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxx vzorku xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.1) x xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx 10 μx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.19) x xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxx-xx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku (6.1.1) xxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, jako xx retenční xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx), xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 10 μx xxxxxxx xxxxxx x vnitřním standardem (6.1.2). Chromatogram se xxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxx xxxx.

Xx-xx x chromatogramu roztoku xxxxxx rušivý xxx x xxxxxxxxx časem xxxxxxxxx stejným jako xxxxxxxx čas xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx by xxx xxxxxx xxxx vnitřní xxxxxxxx.

Xxxx-xx jedna z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxx přísadu použít xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xx poměry xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx konzervačních xxxxxx x výšce xxxx vnitřního standardu.

Je xxxxx xxxxxx, že xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx, zda xxxxxxxxxxxxx získané xxx xxxxxxxxxx roztok x xxxxxx vzorku xxxxxxx xxxxxxxxxxx požadavky:

- separace xxxx nejhůře xxxxxxxxxx xxxx je xxxxxxx 0,90. (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx 1.),

&xxxx;

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxx

Xxxx-xx xxxxxxxxxx separace xxxxxxxx, xxxx by xxx xxx použita xxxxxxxxx xxxxxx, xxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx, aby xxx xxxxxxxxx xxxxxx.

- xxxxxx xxxxxxxxx (As) všech xxxxxxxxx xxxx by xx xxx pohybovat xx 0,9 do 1,5. (Xxxxxxxx faktoru xxxxxxxxx xx uvedena xx obrázku 2.) Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx asymetrie je xxxxxxxxxx rychlost posuvu xxxxxx nejméně 2 xx xx minutu,

Obrázek 2: Xxxxxx xxxxxxxxx xxxx

- xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx.

7. Xxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx konzervačních xxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx křivka (6.2.2) x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx vnitřního xxxxxxxxx. Xxxxx (xx) 2-xxxxxxxxxxxxxx, 1-fenoxypropan-2-olu, methyl 4-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxx 4-xxxxxxxxxxxxxxx x hmotnostních xxxxxxxxxx (% x/x) xx xxxxxxx pomocí xxxxxx:

%x_x(x/x) = b_i / (200 × x)

xxx

xx = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přísady x xx xxxxxxxxx xxxxxxx (μx/xx) xxxxxxxx z xxxxxxxxxx křivky x

x = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx (g).

8. Opakovatelnost [1]

Xxx poznámka x xxxx 10.5.

9. Reprodukovatelnost [2]

Xxx xxxxxxxx x xxxx 10.5.

10. Xxxxxxxx

10.1 Xxxxxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxxxxxx HPLC výrazně xxxxxx xx typu, xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxx xxx kolonu použít xxx oddělení xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx přísad, lze xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx x bodu 6.2.3). Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx kolony byly xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxx XXX x Xxxxxx XXX.

Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx mobilní xxxx.

10.2 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx ukázala, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx stanovení.

Tento xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx během xxxxxxx xxxxxxx kontrolován.

10.3 Rušivé xxxxx

Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x této xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx sloučenin, xxxx xxxx xxxxx konzervační xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx. Retenční časy xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx XX směrnice Xxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx prostředků jsou xxxxxxx v práci X. xx Xxxxxx, X. X. H. Xxxx, X. X. Xxxxxxx-Xxxxxxxxx, A. Xxxxxxxx, (1989): Xxxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx II. High-performance xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (X. Xxxxxxxxxxxxxx, 469, 317-398).

10.4 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx vhodnou předkolonu.

10.5 Xxxxxx byla xxxxxxxx xxx okružním xxxxxx, xx xxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx analyzovány xxx xxxxxx. V xxxxxxxxxxx xxxxxxx jsou xxx xxxxx ze tří xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x % x/x (m), xxxxxxxxxxxxxxx (x) a xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (X) zjištěné xxx xxxxxxx, které byly xx xxxxxxxx xxxxxxxx:

[1] XXX 5725.

[2] XXX 5725.