Plné znění - 32018R0150

Dodatek X

XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX FOSFATIDYLSERINU X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXX&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXXX

Xxxxxx: XXXX x&xxxx;xxxxxxxxxx fázemi

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX A XXXXXX XXXXXXX

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx kvantitativního stanovení xxxxxxxxxxxxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (SOM) x&xxxx;xx xxxxxx xxx zjišťování xxxxxx podmáslí v SOM.

2.   DEFINICE

Obsah XX + XX: xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx vyjadřuje x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xx 100&xxxx;x&xxxx;xxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx XX x&xxxx;XX xxxx derivátů x-xxxxxxxxxxxxxx (XXX) metodou XXXX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx obsahu PS x&xxxx;XX xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx množství XXXX.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX

Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx čistoty x.x. Xxxxx xxxx uvedeno xxxxx, používá xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx materiál: XXXX x čistotě xxxxxxx 99&xxxx;%

Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx – 18 °C.

4.2.   Chemikálie xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx

4.2.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX

4.2.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX

4.2.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx

4.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx x-xxxxxxxxxxxxxxxxxx derivátů

4.3.1.   Hydroxid xxxxx, 12 X xxxxx roztok

4.3.2.   Kyselina xxxxxx, 0,4 X xxxxx xxxxxx s hodnotou xX xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3.1) na 10,0

4.3.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;2-xxxxxxxxxxxxxxx

4.3.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;x-xxxxxxxxxxxxx (XXX)

4.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx rozpouštědla xxx XXXX

4.4.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx rozpouštědla xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx HPLC.

4.4.2.   Voda xxxxxxx xxx XXXX

4.4.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx

4.4.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx

4.4.5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx dihydrogenfosforečnan

4.4.6.   Octan xxxxx

4.4.7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx octová.

5.   PŘÍSTROJE A XXXXXXX

5.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx váhy x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xx 0,1 mg x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx po 1&xxxx;xx

5.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx o objemu 25 x&xxxx;100&xxxx;xx

5.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx 10&xxxx;xx

5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx dávkovat 0,2, 0,5 x&xxxx;5&xxxx;xx

5.6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx 10, 50 x&xxxx;100&xxxx;xx

5.7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 20 a 100 μx

5.8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx

5.9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx 27&xxxx;000 × g

5.10.   Skleněné xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx 5&xxxx;xx

5.11.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx 25&xxxx;xx

5.12.&xxxx;&xxxx;&xxxx;xX xxxx s přesností xx 0,1 xxxxxxxx xX

5.13.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx XXXX

5.13.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx čerpací xxxxxx schopný fungovat xxx xxxxxxx 1,0 xx/xxx při 200 xxxxxx

5.13.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorků x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

5.13.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx kolony xxxxxxx kolonu xxxxxxxx xx xxxxxxx 30&xxxx;°X ± 1 °C

5.13.4.   Fluorescenční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx délce 330&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxx vlnové xxxxx 440&xxxx;xx

5.13.5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx vybavení pro xxxxxxxxxx xxx schopné xxxxx xxxxxx xxxx

5.13.6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XxXxxxxxxxx® – 100 (250 ×&xxxx;4,6&xxxx;xx) nebo xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (X 18), velikost xxxxxx 5 μx

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXX XXXXXX

Xxxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx ISO 707.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX POSTUP

7.1.   Příprava xxxxxxx xxxxxxxxx standardu

7.1.1.   Navažte 30,0 ± 0,1 mg tryptaminhydrochloridu (4.2.3) xx odměrné xxxxx xx 100 ml (5.6) x&xxxx;xxxxxxx po xxxxxx methanolem (4.2.1).

7.1.2.   Pipetou (5.3) xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx baňky xx 10&xxxx;xx (5.6) x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxx methanolem (4.2.1) s cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 0,15 xX.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx

7.2.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 1,000 ± 0,001&xxxx;x&xxxx;xxxxxx XXX do xxxxxxx na 25&xxxx;xx (5.2). Pipetou (5.3) xxxxxxxx 10&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx 40&xxxx;°X ± 1 °C a po xxxx 30 xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx míchačkou (5.4), xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx (5.5) xxxxxxxx 0,2 ml xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx do xxxxxxx xxxxx xx 10&xxxx;xx (5.6), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (5.7) xxxxxxxx 100 μx 0,15 xX xxxxxxx xxxxxxxxxx (7.1) x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx (4.2.1). Převracením xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx 15 xxxxx xx xxxxxxxxxxxx lázně (5.8).

7.2.3.   Odstřeďujte (5.9) xxx 27&xxxx;000 ×&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx a supernatant odeberte xx skleněné xxxxxxx (5.10).

Xxxxxxxx: Xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX musí xxx roztok zkušebního xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

7.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx

7.3.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 55,4&xxxx;xx XXXX (4.1) xx xxxxxxx xxxxx xx 50&xxxx;xx (5.6) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (5.11) xxxxxxxx xxx 25&xxxx;xx xxxxxxxxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxxx baňku xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X ± 1&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxx xx XXXX nerozpustí. Xxxxx xxxxxxxx xx 20&xxxx;°X, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx (4.2.1) a promíchejte xxxxxxxxxxx.

7.3.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx (5.3) přeneste 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx 100&xxxx;xx (5.6) x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx (4.2.1). Xxxxxxx (5.3) xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxx roztoku xx xxxxxxx xxxxx xx 10&xxxx;xx (5.6), přidejte 100 μx (5.7) 0,15mM xxxxxxx tryptaminu (7.1) x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx (4.2.1). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °C.

7.4.   Příprava xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xx odměrné xxxxx xx 10&xxxx;xx (5.6) xxxxxxx 25,0 ± 0,1&xxxx;xx XXX (4.3.4), xxxxxxxx 0,5&xxxx;xx (5.5) xxxxxxxxx (4.2.1) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx XXX xxxxxxxxx. Doplňte xx xxxxxx roztokem xxxxxxxx xxxxxx (4.3.2) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (5.7) xxxxxxxx 20 μl 2-xxxxxxxxxxxxxxxx (4.3.3).

Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx nádobě xxx xxxxxxx 4 °C; xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxx.

7.5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx pomocí XXXX

7.5.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.4)

Xxxxxxxxxxxx X: Xxxxxx 0,3 xX xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3 mM xxxxxx xxxxxxx (s xxxxxxxx xX xxxxxxxxx na 6,5 ± 0,1 xxxxxxxxx xxxxxxx): xxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx =&xxxx;558: 440:2 (xxx.).

Xxxxxxxxxxxx X: Xxxxxxxx

7.5.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxx gradient:

Čas (min)	Rozpouštědlo X (%)	Xxxxxxxxxxxx B (%)	Xxxxxx (xx/xxx)
Xxxxxxxxx	40	60	0
0,1	40	60	0,1
5,0	40	60	0,1
6,0	40	60	1,0
6,5	40	60	1,0
9,0	36	64	1,0
10,0	20	80	1,0
11,5	16	84	1,0
12,0	16	84	1,0
16,0	10	90	1,0
19,0	0	100	1,0
20,0	0	100	1,0
21,0	40	60	1,0
29,0	40	60	1,0
30,0	40	60	0

Xxxxxxxx: Může xx stát, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx znázorněné xx obrázku 1.

Xxxxxxx xxxxxx: 30 °X.

7.5.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx: 50 μx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;50 μx xxxxxxx xxxxxx

7.5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxx každodenním xxxxxxxxx xxxxxx kolonu xxxxxxxxxx 100&xxxx;% rozpouštědlem B po xxxx 15 minut, xxxxx xxxxxxxxx xxxxx X:X =&xxxx;40:60 a provádějte xxxxxxxxxxx xx dobu 15 minut xxx xxxxxxx 1 xx/xxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx methanolu (4.2.1).

Poznámka: Xxxx xxxxxxxxxxx kolony xx xxxxx dobu xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 30 minut xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x xxxxxx 80:20 (xxx.).

7.5.5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx XX + XX xx xxxxxxxxx xxxxxx

7.5.6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx analýz xxx xxxxxxxxx stejných xxxxxxxx xxxxxxx xxxx jednotlivými xxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx časy. Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nastříkněte roztok xxxxxxxx xxxxxxxxx (7.3) xx xxxxxxx 5–10 xxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Poznámka: Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx 20–25 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 100&xxxx;% xxxxxxxxxxxxx X&xxxx;(7.5.1).

7.6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx

7.6.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx XXXX

XXXX xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx jediného píku. Xxxxxx píku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

7.6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx vymývá x&xxxx;xxxxxx jediného xxxx (xxxxxxx 1). Plochu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

7.6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XX x&xxxx;XX

Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (obrázek 1) xx XX xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx nerozlišených xxxx, před xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxx. XX xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx hlavních, částečně xxxxxxxxxxxxx píků. Celou xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nastavením xxxxxxxx linie xxx, xxx je xxxxxxxxxx xx xxxxxxx 1.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX X XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

Xxxxx XX + PE xx xxxxxxxxx vzorku xx xxxxxxx takto:

C =&xxxx;55,36 × ((A₂)/(A₁)) × ((X₁)/(X₂))

xxx:

X	=	xxxxx XX xxxx PE (v xx/100 x&xxxx;xxxxxx) xx xxxxxxxxx xxxxxx
X1	=	xxxxxx xxxx XXXX xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (7.3)
A2	=	plocha xxxx XX nebo PE xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (7.2)
X1	=	xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx srovnávacího xxxxxx (7.3)
X2	=	xxxxxx píku xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (7.2).

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxx opakovatelnost xxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxx XXX&xxxx;(*).

9.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, které x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx stejný xxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xx neměla překročit xxxxxxxxx 2&xxxx;%. Jestliže xx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx xxxx jejich xxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx než 6&xxxx;% xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxx pracovníci provedou x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx zkušebního vzorku x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx výsledky xx xxxxx xxx xxxxx xxx 11 % aritmetického xxxxxxx xxxxxxxx.

10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX

10.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx X., Xxxxxxxxxx X., Xxxxxxxxx X. A., Xxxxxx X., Rampilli X. „Xxxxxxxxx xx buttermilk solids xx skimmilk powder xx XXXX quantification xx xxxxxxxxxxxxxxxxxx.“ Xxx. Xxxx. Xxxx.-Xxx.&xxxx;39,395[1988].

Xxxxxxx 1

XXXX xxxxxxxxxxxx XXX-xxxxxxxx fosfatidylserinu (PS) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx sušeného xxxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxx integrační xxxxx xxx xxxx XX, XX x&xxxx;xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxx).

Xxxxxxx XX

XXXXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXX URČENÉM XXX XXXXXXX SKLADOVÁNÍ XX XXXXXXX STANOVENÍ KASEINOMAKROPEPTIDŮ XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX (XXXX)

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX X&xxxx;XXXXXX XXXXXXX

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx syřidlové xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx mléce xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxxx xxxxx XXX 707 – Xxxxx x mléčné xxxxxxx – Xxxxxxxx xxx odběr xxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX

Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx definován xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx obsahu xxxxxxxxxxxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXX

—	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, odstranění xxxx x&xxxx;xxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odstředěním xxxx xxxxxxxx;

—	Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografií (XXXX);

—	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx tvoří xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx bez xxxxxxxx známého procenta xxxxxx xxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX

Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x.x. Xxxxxxx xxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxx rovnocenné čistoty.

5.1.   Roztok xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx 240&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXx₃XXXX) xx xxxx a doplňte na 1&xxxx;000&xxxx;xx. Xxxxxx xx xxx xxx čirý x bezbarvý.

5.2.   Eluční xxxxxx, xX 6,0

Xxxxxxxxx 1,74&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (K₂HPO₄), 12,37&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (XX₂XX₄) x&xxxx;21,41&xxxx;x&xxxx;xxxxxx sodného (Xx₂XX₄) xxx v 700 ml xxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,0 xxxxxxxx kyseliny fosforečné xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;000 xx x homogenizujte.

Poznámka: Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx tak, aby xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx.

Xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx přefiltrujte xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 0,45 μm.

5.3.   Promývací xxxxxx

Xxxxxxxxx jeden xxxxx xxxxxxxxxxxx (XX₃XX) x&xxxx;xxxxxx xxxxxx vody. Xxxx xxxxxxxx směs xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx filtr x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 0,45 μx.

Xxxxxxxx: Lze xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx má xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx rozlišovací xxxxxxxx xxxxxx.

5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxx

5.4.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xx. [0]).

5.4.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 5&xxxx;% xx. xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (tj. [5]).

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXX X POMŮCKY

6.1.   Analytické xxxx

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx 2&xxxx;200&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx zátkou x&xxxx;xxxxxx xxx 50&xxxx;xx

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx

6.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx

6.5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx nálevky o průměru xxx 7&xxxx;xx

6.6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx 12,5&xxxx;xx

6.7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx filtrační xxxxxxxx s membránovým xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pórů 0,45 μx

6.8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10&xxxx;xx (XXX 648, třída X, xxxx XXX/X 835) xxxx dávkovací xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 10,0&xxxx;xx xx xxx xxxxxx

6.9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx schopný xxxxxxx 20,0&xxxx;xx xxxx xxx xxxxxxx xxx 50 °C

6.10.   Termostatická xxxxx lázeň xxxxxxxxx xx 25 ± 0,5&xxxx;°X

6.11.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx na HPLC, xxxxx tvoří:

6.11.1.

Čerpadlo

6.11.2.

Nástřikové zařízení – xxxxx nebo xxxxxxxxxxx – o objemu 15 xx 30 μx

6.11.3.

Xxx kolony XXX 2&xxxx;000-XX xx sebou (xxxxx 30 cm, xxxxxxx xxxxxx 0,75&xxxx;xx), xxxx xxxxxx s rovnocennou xxxxxxxxx (xxxx. jedna xxxxxx XXX 2 000-SWxl, xxxxx xxxxxx Agilent Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx XX 250) x&xxxx;xxxxx předkolona (3&xxxx;xx ×&xxxx;0,3&xxxx;xx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx X&xxxx;125 xxxx xxxxx xxxxxxxxxx s rovnocennou xxxxxxxxx

6.11.4.

Xxxxxxxxx xxxxxx nastavený na 35 ± 1 °C

6.11.5.

UV xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx 205 nm x&xxxx;xxxxxxxxxx 0,008 Å.

6.11.6.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx mezi xxxxx Xxxxxxxx: Xxx pracovat x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx při laboratorní xxxxxxx, avšak xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxxxx xx třeba, xxx výkyvy teploty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx analytického xxxxxx xxxx xxxxx xxx 5&xxxx;°X.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXX VZORKŮ

7.1.   Vzorky xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx ISO 707. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx používat xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xx předpokladu, že xxxx xxxxxx odpovídá xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx nebo xxxxx složení.

8.   PRACOVNÍ POSTUP

8.1.   Příprava xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx mléko xxxxxxxx do nádobky, xxxxx objem je xxx dvakrát větší xxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Sušené xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

8.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx

Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (6.2) nebo xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx 50&xxxx;xx navažte 2,000 ± 0,001&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx.

8.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx

8.3.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 20,0&xxxx;xx xxxxx (50 °C) xxxx. Prášek xxxxxxxxx xxxxxxxx xx dobu xxxx minut xx xxxxxxxxxx třepačce (6.3). Xxxxxxxx xxxxxx do xxxxx xxxxx (6.10), xxxxx xx její xxxxxxx neustálí xx 25&xxxx;°X.

8.3.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx dvou minut xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.4)&xxxx;10,0&xxxx;xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (5.1) x&xxxx;xxxxxxx xxx 25 °C. Zkumavku xxxxxx xx 60 minut xx xxxxx xxxxx (6.10).

8.3.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx (6.2) xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx 2&xxxx;200&xxxx;x, xxxx přefiltrujte xxxx xxxxx (6.6) x&xxxx;xxxxxxx 5 ml filtrátu xxxxxxx.

8.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx

8.4.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 15 xx 30 μx xxxxxx xxxxxxxxxx supernatantu xxxx xxxxxxxx (8.3.3) xx zařízení xx XXXX (6.11) s průtokem 1,0&xxxx;xx elučního xxxxxxx (5.2) za xxxxxx.

Xxxxxxxx 1. X&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 2. Při xxxxxx přerušení xxxxxxxx xxxxxx vodou. Nikdy x&xxxx;xxxx nenechávejte xxxxxx xxxxxx (5.2).

Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx více xxx 24 xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx a potom xx promývají xxxxxxxx&xxxx;(5.3) xxxxxxx xx dobu xxx hodin při xxxxxxx 0,2 ml za xxxxxx.

8.4.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx chromatografické xxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku [E] xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx, v němž xx xxxxx xxx xxxxx svým retenčním xxxxx XX xxxxx:

Xxx XX:	Xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx x XX asi 12,5 minuty
Pík III:	Třetí xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX x XX 15,5 xxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxx značně ovlivněny xxxxxxx xxxxxx (kolon).

Integrátor (6.11.6) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx A každého píku:

AII:	plocha xxxx XX
XXXX:	xxxxxx xxxx XXX

Xxxx kvantitativní xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx každého xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx zjištění xxxxxxxxxx anomálií xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx funkcí xxxxxxxx, xxxx xxxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorku.

V případě xxxxxxxxxxx xxxxxxx zopakujte.

8.5.   Kalibrace

8.5.1.   U srovnávacích xxxxxx (5.4) se xxxxxx xxxxxxx postup xxxxxxx v bodech 8.2 xx 8.4.2.

Xxxxxxxx čerstvě připravené xxxxxxx, xxxxxxx CMP xx x&xxxx;xxxxxxxxx 8&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xx xxx xxxxxxx 30 °C xxxxxxx xxxxxxx o 0,2 % xx hodinu.

8.5.2.   Před chromatografickým xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx opakovanými nástřiky xxxxxxx (8.5.1) srovnávacího xxxxxx (5.4.2), dokud xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

8.5.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxxxxxxxxxx stejného xxxxxx filtrátů (8.5.1), xxxxxx jste použili xxx xxxxxx.

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXX VÝSLEDKŮ

9.1.   Metoda xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx

9.1.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx odezvového xxxxxxx R:

Pík XX:

XXX = 100/(AII[0])

kde:

RII	=	odezvové xxxxxxx xxxx XX
XXX [0]	=	xxxxxx xxxx II xxxxxxxxxxxx xxxxxx [0] xxxxxxx x&xxxx;8.5.3

Xxx XXX:

XXXX = X/(XXXX[5] – XXXX[0])

xxx:

XXXX	=	xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXX
XXXX [0] xxx XXXX [5]	=	xxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx xxxxxx [0] x&xxxx;[5] získané x&xxxx;8.5.3
X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx xx srovnávacím xxxxxx [5], xx. 5

9.1.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx ve xxxxxx [X]

XXX[X] = XXX × AII[E]

SIII[E] = XXXX × AIII[E]

SIV[E] = XXX × XXX[X]

xxx:

XXX [X], XXXX [X], XXX [X]	=	xxxxxxxxx xxxxxx píků XX, XXX x&xxxx;XX xx xxxxxx [X]
XXX [E], XXXX [X]	=	xxxxxx píků XX x&xxxx;XXX ve xxxxxx [X] xxxxxxx x&xxxx;8.4.2
XXX, RIII	=	odezvové xxxxxxx xxxxxxxxx v 9.1.1

9.1.3.   Výpočet xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx píku XXX xx xxxxxx [X]:

XXXXXX[X] = (RTIII[E])/(RTIII[5])

kde:

RRTIII [X]	=	xxxxxxxxx retenční čas xxxx XXX xx xxxxxx [E]
RTIII [X]	=	xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx XXX ve vzorku [X] xxxxxxx v 8.4.2
RTIII [5]	=	xxxxxxxxx retenční čas xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx [5] získaný x&xxxx;8.5.3

9.1.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx ukazují, xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx píku III, xx. RRTIII [X] x&xxxx;xxxxxxxxx přidané xxxxxx xxxxxxxxx xx xx xxxxxxxx 10 % existuje xxxxxxxx xxxxx

—	xxx obsahu xxxxxxxxx &xx; 5&xxxx;% xx RRTIII [X] &xx;&xxxx;1,000;

—	xxx obsahu syrovátky ≤&xxxx;5&xxxx;% xx XXXXXX [X] ≥ 1,000.

Přípustná xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx XXXXXX xx ± 0,002.

Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXXXX [0] xxx málo xxxx xx 1,034. Podle xxxxx kolon se xxxx xxxxxxx xxxxxx 1,000, avšak vždy xxxx xxx xxxxx xxx 1,000.

9.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx procenta xxxxxx xxxxxxxxx syrovátky xxxxxxxx ve xxxxxx:

X = SIII[E] – [1, 3 + (XXXX[0] – 0, 9)]

xxx:

X	=	xxxxxxxxxx procento syřidlové xxxxxxxxx xx xxxxxx [X];
XXXX [E]	=	relativní xxxxxx xxxx III xxxxxxxxxx xxxxxx [E] získaná xxxxx 9.1.2;
1,3	=	xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
XXXX [0]	=	xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx XXX, xxxxx xx xxxxx XXXX&xxxx;×&xxxx;XXXX[0]. Xxxx hodnoty se xxxxxxx x&xxxx;9.1.1 x&xxxx;8.5.3;
(XXXX [0]&xxxx;–&xxxx;0,9)	=	xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx průměrné xxxxx 1,3, xxxxxxxx XXXX [0] xxxx xxxxx 0,9. Experimentálně xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;[0] xxxxx 0,9.

9.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

9.3.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx mezi xxxxxxxx dvou xxxxxxxxx, xxxxx u stejného xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxx 0,2&xxxx;% xx.

9.3.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a nezávislými xxxxxxxx xxxxxxxxx xx dvou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx u stejného xxxxxxxxxx xxxxxx by xxxxx xxxxxxxxx 0,4 % xx.

9.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx

9.4.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx předpokládat, xx xxxxxxxxx xxxx přítomna, xx-xx relativní xxxxxx xxxx III SIII [X] vyjádřena x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx, ≤ 2,0 + (XXXX[0] – 0,9)

xxx

2,0	xx maximální hodnota xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx XXX x přihlédnutím x xxxxxxxxx průměrné ploše xxxx XXX, tj. 1,3, k xxxxxxxxx x důvodu xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx mléka x x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (9.3.2);
(XXXX [0] – 0,9)	xx xxxxxx, xxxxx xxxx být provedena, xxxxxxxx xx plocha XXXX [0] xxxx xxx 0,9 (xxx xxx 9.2).

9.4.2.   Je-li relativní xxxxxx xxxx XXX XXXX [X] &xx; 2,0 + (XXXX[0] – 0,9) a relativní xxxxxx xxxx XX XXX [X]&xxxx;≤&xxxx;160, xxxxxxxx xxxxx syřidlové syrovátky xxxxx bodu 9.2.

9.4.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx-xx xxxxxxxxx plocha píku XXX XXXX [E] &xx; 2,0 + (XXXX[0] – 0,9) x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx II XXX [X]&xxxx;≤&xxxx;160, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (X %). Potom prostudujte xxxxx 1 a 2.

9.4.3.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vzorků nezfalšovaného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx mléka x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xx grafů 1 x&xxxx;2.

Xxxx přímka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx regresi, xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx nejmenších xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxx relativní xxxxxx xxxx XXX, a to x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxxx v 90 % xxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx 1 x 2 jsou:

SIII = 0,376 X % – 10,7	(xxxx 1)
XXXX = 0,0123 SII [X] + 0,93	(graf 2)

xxx:

XXXX	xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx bílkovin, nebo xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx XXX [X],
X&xxxx;%	xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx,
XXX [E]	je xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx 9.1.2.

Tyto xxxxxxx xxxx rovnocenné xxxxx 1,3 xxxxxxxxx x xxxx 9.2.

Xxxxxx (T1 x X2) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXXX [E] x xxxxxxxxx plochou XXXX xx xxx těmito xxxxxx: T1 = SIII[E] – [(0,376 P% – 10,7) + (XXXX[0] – 0,9)]T2 = XXXX[X] – [(0,0123 XXX[X] + 0,93) + (XXXX[0] – 0,9)].

Xxxx-xx T1 x/xxxx X2	xxxxx nule nebo xxxxx než xxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxx-xx T1 x T2	větší než xxxx, xx syřidlová xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxx: W = X2 + 0,91

xxx:

0,91 xx xxxxxxxxxx xx svislé ose xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx XXX

XXXXXXXXX XXXXXX XX XXXXXXXXX XXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX: XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXX XX SYŘIDLOVÉ XXXXXXXXX XX&xxxx;XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXX: MEZINÁRODNÍ XXXXX XXX 707

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX

Xxxxx xxxxxx xx syřidlové syrovátky xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx postupem xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXX

Xxxxxx xxxx analyzovány xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx A vysokoúčinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx fázemi (xxxxxxx XXXX). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx provádí xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx tvoří xxxxxx xxxxxxxxxx mléko xxx xxxxxxxx nebo x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxx 1&xxxx;% xx., xx přítomnost xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX

Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx čistoty x.x. Xxxxxxx voda xxxx xxx voda xxxxxxxxxxx xxxx xxxx nejméně xxxxxxxxxx čistoty. Xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx jakost xxxxxxx xxx HPLC.

5.1.   Roztok xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx 240&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (CCl₃COOH) xx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xx 1&xxxx;000&xxxx;xx. Xxxxxx xx xxx být xxxx x bezbarvý.

5.2.   Eluenty X&xxxx;x&xxxx;X

Xxxxxx X: Xxxxxx 150 xx xxxxxxxxxxxx (XX₃XX), 20 xx xxxxxxxxxxxx (XX₃XXXXXX₃) x 1,00 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXX, CF₃COOH) xx xxxxxxx baňky x xxxxxxx xx 1&xxxx;000 xx vodou.

Eluent X: Xxxxxx 550 xx xxxxxxxxxxxx, 20 xx xxxxxxxxxxxx x 1,00 xx XXX xx xxxxxxx baňky xx 1&xxxx;000 xx a xxxxxxx na 1&xxxx;000 xx xxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx membránový xxxxx o velikosti xxxx 0,45 μx.

5.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kolony

Po xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx B (xxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx acetonitrilem (xxxxxx xx dobu 30 minut). Kolona xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx.

5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxx

5.4.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx odstředěné xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx veřejné xxxxxxxxxx (xx. [0]).

5.4.2.   Totéž sušené xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 5&xxxx;% xx. xxxxxx syřidlové xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx složení (xx. [5]).

5.4.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx zfalšované přídavkem 50&xxxx;% xx. xxxxxx xxxxxxxxx syrovátky standardního xxxxxxx (tj. [50]).

6.   PŘÍSTROJE X POMŮCKY

6.1.   Analytické xxxx

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx síly 2 200 g a vybavená xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx 50&xxxx;xx

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx třepačka

6.4.   Magnetická xxxxxxxx

6.5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx o průměru xxx 7&xxxx;xx

6.6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx papíry xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx 12,5&xxxx;xx

6.7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx filtrační xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 0,45 μx

6.8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10&xxxx;xx (XXX 648, xxxxx A, xxxx XXX/X 835), xxxx xxxxxxxxx xxxxxx schopný xxxxxxx 10,0 ml xx xxx minuty

6.9.   Dávkovací systém xxxxxxx xxxxxxx 20,0 ml xxxx xxx xxxxxxx xxx 50&xxxx;°X

6.10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx 25 ± 0,5 °C

6.11.   Zařízení xx XXXX, které xxxxx:

6.11.1.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx gradientem

6.11.2.

Nástřikové xxxxxxxx – xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx 100 μl

6.11.3.

Kolona Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx 300 XX-X3 (délka 25&xxxx;xx, xxxxxxx průměr 0,46&xxxx;xx), xxxx xxxx rovnocenná xxxxxx pro xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx xxxx křemene

6.11.4.

Termostat xxxxxx xxxxxxxxx xx 35 ± 1&xxxx;°X

6.11.5.

XX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx vlnovou xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx 210&xxxx;xx (x nutných xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxx vlnové xxxxx až do 220&xxxx;xx) x&xxxx;xxxxxxxxxx 0,02 Å.

6.11.6.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx nastavení xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx Xxxxxxxx: Xxxxx x kolonami udržovanými xx teplotě místnosti xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx teplota xxxxxxxx více než x 1&xxxx;°X, xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx změnám retenčního xxxx XXXX.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXX VZORKŮ

7.1.   Vzorky xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx XXX 707. Xxxxxxx státy však xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx odběru xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx uvedené xxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxx takovým způsobem, xxx nemohlo dojít xx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX POSTUP

8.1.   Příprava xxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxx mléko xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxx xxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx uzavřete. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

8.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx

Xx odstředivkové xxxxxxxx (6.2) xxxx vhodné xxxxx se xxxxxx xx 50&xxxx;xx navažte 2,00 ± 0,001&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx: V případě xxxxx xxxxxxx takové množství xxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 2,00&xxxx;x.

8.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx

8.3.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx zkušební xxxxx přidejte 20,0&xxxx;xx xxxxx (50&xxxx;°X) vody. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx třepačce (6.3) xx prášek xxxxxxxx. Xxxxxxxx vložte xx xxxxx xxxxx (6.10), xxxxx se xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx 25&xxxx;°X.

8.3.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx míchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.4) xxxxxxxx 10,0&xxxx;xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx o teplotě xxx 25 °C (5.1). Xxxxxxxx vložte xx 60&xxxx;xxxxx xx xxxxx xxxxx (6.10).

8.3.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx (6.2) xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx 2 200 g, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx (6.6) a prvních 5 ml xxxxxxxx xxxxxxx.

8.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx

8.4.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XXXX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx falešně xxxxxxxxxxx výsledků xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

8.4.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxxx analýzy XXXX s obrácenými xxxxxx xx třeba optimalizovat xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx s mrtvým xxxxxxx xxx 6&xxxx;xx (xxxxx od xxxx, xxx se stékají xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx nástřikové xxxxxx včetně) je xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxx 26 xxxxx ± 2 minuty xxx XXXΑ. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx (např. 2&xxxx;xx) xx optimální xxxxxxxx xxx 22 xxxxx.

Xxxxxxx roztoky srovnávacích xxxxxx (5.4) s obsahem 50&xxxx;% syřidlové xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxx nebo filtrátu (8.3.3) xx xxxxxxxx xx XXXX, xxxxx xxxx fungovat xx xxxxxxxx referenčního xxxxxxxxx xxxxxxxxx v tabulce 1.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx gradientu xxx xxxxxxxxxxxx chromatografie

Čas (min)	Průtok (ml/min)	% X	% B	Křivka
Počátek	1,0	90	10	*
27	1,0	60	40	přímka
32	1,0	10	90	přímka
37	1,0	10	90	přímka
42	1,0	90	10	přímka

Porovnání xxxx xxxxxxxxxxxxx xx mělo xxxxxx xxxxxx xxxx XXXΑ.

Xxxxxxxxx xxxxxxx rozpouštědla, xxxxx je xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 8.4.3), xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx vzorce: % X = 10 – 2,5 + (13,5 + (XXxxxX – 26) / 6) * 30 / 27&xxxx;% B = 7,5 + (13,5 + (XXxxxX – 26) / 6) * 1,11

xxx

XXxxxX	:	xxxxxxxx xxx XXXΑ x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
10	:	xxxxxxxxx % X x referenčním xxxxxxxxx
2,5	:	% X ve xxxxxxxx bodu xxxxx xxxxxxxxx % B x normálním gradientu
13,5	:	čas xxxxxxxxxxxx střednímu bodu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
26	:	xxxxxxxxxx retenční xxx XXXΑ
6	:	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
30	:	% X x xxxxxxxxxx xxxx xxxxx % X xx 27 minutách v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
27	:	xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx gradientu

8.4.3.   Nástřik roztoků xxxxxxxxxx vzorků

Nastříkněte 100 μx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx filtrátu (8.3.3) do xxxxxxxx xx XXXX s průtokem 1,0&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxx (5.2) xx minutu.

Složení xxxxxxx na začátku xxxxxxx xx xxxxx x&xxxx;8.4.2. Xx normálních xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx A:B =&xxxx;76:24 (5.2). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, což xxxxxxx, že xxxxxxxx X xx za 27 xxxxx zvětší x 5&xxxx;%. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, kterým složení xxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxxx 90&xxxx;% X. Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx pěti xxxxx x xx jejím xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx gradientu xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx počáteční. X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxx proveden 15 xxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxx podmínek.

Poznámka 1. Xxxxxxxx xxx XXXX xx xxx xxx 26 ± 2 xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Rozdíl v % B mezi xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx ve xxxx 5&xxxx;% B.

Poznámka 2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xx xx xxxxxxxx xxxxx xxx xx, xxx gradientový xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx píku CMPA xxxx být xxxxx xxx 0,1 minuty (x =&xxxx;10).

Xxxxxxxx 3. Xx každých xxx xxxxxx xx třeba xxxxxxxxxxx referenční vzorek [5] x použít xxx pro xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx faktoru X (9.1.1).

8.4.4.   Výsledky chromatografických xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (X) xx získávají xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx, xx němž je xxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxxxxx časem xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx 26 xxxxx.

Xxxxx X&xxxx;xxxx CMPA xxxxxxxxxxx vypočítává xxxxxxxxxx (6.11.6). Polohu xxxxxxxx xxxxx je třeba xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Jestliže xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, analýzu xxxx xxxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Je-li xxx XXXX xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx píků, xxxx xx se xxxxxx xxxxxxxxx základní xxxxx mezi xxxxx. X xxxxxxx případě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xx xxx xxx x blízkosti xxxx CMPA (xxxx xx x čase x =&xxxx;0 xxx!). Xxx referenční xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx integrace x x společné xxxxxxxx linie xxxxxxxxxxxx, xxx je xx xxxxxx a referenčním xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxx kvantitativní xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzhled xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx za účelem xxxxxxxx případných xxxxxxxx xxxxxxxxxxx buď nesprávnou xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorku. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx analýzu xxxxxxxxx.

8.5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

8.5.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.4.1 až 5.4.2) xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.2 xx 8.4.4. Xxxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx XXX xx x&xxxx;xxxxxxxxx 8&xxxx;% xxxxxxxx trichloroctové xxxxxxxxx. Xxx teplotě 4&xxxx;°X xxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx 24 hodin. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx používat x&xxxx;xxxxxxxxxxxx nástřikovém zařízení xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx: Fáze 8.4.2 xxxx být vynechána, xxxxxxxx xx % X x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx známo z xxxxxxxxxxx analýz.

Chromatogram referenčního xxxxxx (5) xx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx znázorněnému xx xxxxxxx 1. Xx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxx píkem XXXX xxx xxxx xxxx. Xx nezbytně nutné xxxxxxxxx xxxxxxx separace.

8.5.2.   Před xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μl xxxxxxxxxxxx vzorku bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx [0] (5.4.1).

Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx v retenčním čase XXXX píku.

8.5.3.   Odezvové faktory X xxxxxxxx nastříknutím xxxxxxxx xxxxxx filtrátu (8.5.1), jakého bylo xxxxxxx xxx xxxxxx.

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXX XXXXXXXX

9.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx

9.1.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X:

Xxx XXXX: X = X/X

xxx

X	=	xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX
X	=	xxxxx xxxx CMPA
W	=	množství xxxxxxxxx xx srovnávacím xxxxxx [5]

9.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve vzorku

W(E) = X&xxxx;×&xxxx;X(X)

xxx

X(X)	=	xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx [X]
X	=	xxxxxxxx xxxxxx píku XXXX (9.1.1)
H(E)	=	výška xxxx XXXX vzorku (X)

Xxxxx xx X(X) vyšší xxx 1 % x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx vzorku [5] xxxxx xxx 0,2&xxxx;xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx sušiny xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx prokázána.

9.3.   Přesnost xxxxxx

9.3.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx, by xxxxx xxxxxxxxx 0,2&xxxx;% xx.

9.3.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx.

9.3.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xx 0&xxxx;% xx 16&xxxx;% syřidlové xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx vztah x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;&xx;&xxxx;0,99.

9.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx 1 % obsahuje xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Ni—4.6 standard

XXXXXXX XX

Xxxxxx analýzy xxxxx x xxxxxxxxx skladování

Parametr	Metoda
Tuk (6)	ISO 17189 nebo XXX 3727 xxxx&xxxx;3
Xxxx	XXX 3727 xxxx 1
Xxxxxxxxxx xxxxxx (x výjimkou soli)	ISO 3727 část 2
Xxx	XXX 15648

XXXXXXX VII

Metody xxxxxxx xxxxxxxx odstředěného mléka x soukromém xxxxxxxxxx

Xxxxxxxx	Xxxxxx
Xxx	XXX 1736
Xxxxxxxxx	XXX 8968 xxxx 1
Xxxx	XXX 5537

PŘÍLOHA XXXX

Xxxxxx xxxxxxx sýrů x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx

1.

Xx xxxxx xxxxxxx, že sýry xxxxxxxx výhradně z ovčího xxxxx, xxxxxx mléka xx buvolího xxxxx, xxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kasein x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xx xxxxx účelem xx xxxxxxx xxxxxx analýzy xxxxxxx v dodatku. Přítomnost xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxx, xxxxx obsah kaseinu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx je xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx 1&xxxx;% kravského xxxxx, xxxxx xx xxxxxx v dodatku.

2.

Metody ke xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1 xxxxx xxx xxxxxxxxx xx těchto xxxxxxxx: x) xxxxxx xxxxxxxx limit xxxx xxx xxxxxxx 0,5&xxxx;%; x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx; x) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxx xxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxx xx běžných xxxxxxxxxx xxxxxxxx docházet. Není-li xxxxx z výše xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx uvedené x&xxxx;xxxxxxx.

Xxxxxxx

XXXXXX PRO XXXXXXXXXX XXXXXXXXX MLÉKA A KASEINÁTŮ X&xxxx;XXXXXX X&xxxx;XXXXXX XXXXX, XXXXXX XXXXX XXXX XXXXXXXX XXXXX, NEBO XXXXX XXXXXX, XXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX MLÉKA

1.   PŘEDMĚT

Zjišťování kravského xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx mléka, xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx γ-kaseinů po xxxxxxxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXX POUŽITÍ

Metoda je xxxxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx mléka x&xxxx;xxxxxxxxx, též tepelně xxxxxxxxxx, v čerstvých x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx. Xxxx xxxxxx k odhalení xxxxxxxxx xxxxx a sýrů xxxxxxx ošetřenými bílkovinnými xxxxxxxxxxx z hovězí syrovátky.

3.   PODSTATA XXXXXX

3.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx ze xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx

3.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a proteolýza xxxxxxxxx (XX.3.4.21.7)

3.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx fokusace xxxxxxxxx ošetřených xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx močoviny x&xxxx;xxxxxxxxx bílkovin

3.4.   Vyhodnocení xxxxxxxxxxx xxxxxxx kaseinu γ3 x γ2 (xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxxx porovnání xxxxxxx xxxxxxxxx ze xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x téhož xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 0&xxxx;% x 1&xxxx;% xxxxxxxxx xxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX

Xxxx-xx xxxxxxxxx jinak, xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx čistoty x.x. Xxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxx rovnocenné xxxxxxx.

Xxxxxxxx: Následující xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s obsahem močoviny x&xxxx;xxxxxxxxx 265 × 125 ×&xxxx;0,25&xxxx;xx. Pokud xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxx, xxxx xxx xxxxx xxxxxxx podmínky separace.

Izoelektrická xxxxxxxx

4.1.   Chemikálie xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx gelů x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx

4.1.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx xxxx

Xx xxxx xxxxxxxxx:

4,85&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx

0,15 x X, X′-xxxxxxxx-xxx-xxxxxxxxxx (XXX)

48,05&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx

15,00&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx (87&xxxx;% xx.),

xxxxxxx xx 100 xx x uložte do xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx: Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx roztok akrylamidu x&xxxx;XXX.&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx 30&xxxx;% xx./xxx. akrylamidu x&xxxx;0,8&xxxx;% xx./xxx. BIS, xxx uvedená množství (4,85 x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;0,15 x&xxxx;XXX) xxxx xxx xxxxxxxxx komerčním xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 16,2&xxxx;xx. Xxxxxxx xxxxxx lze xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx vyšší xxx 5 μS, xx xxxxx provést xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx s 2 g Amberlitu XX-3 xx dobu 30 xxxxx a xxxx xxx přefiltrovat xxxx 0,45μx xxxxxxxx.

4.1.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx

Xxxxxxxxx roztok gelu xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;(*) xx zásobním xxxxxxxx xxxx (viz 4.1.1).

9,0&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxx

24&xxxx;xx β-xxxxxxx

500 μx xxxxxxxx pH 3,5–9,5

250 μl xxxxxxxx xX 5–7

250 μx xxxxxxxx pH 6–8

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx dobu xxxx xx tří minut x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx.

Xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxxx (viz 6.2).

4.1.3.   Roztoky xxxxxxxxxxxx

4.1.3.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;X, X, X′, X′-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx)

4.1.3.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;40&xxxx;% xx./xxx. xxxxxxx persíranu xxxxxxxx (XXX)

800 mg XXX xx xxxxxxxx ve xxxx x doplní xx xx 2 xx.

Xxxxxxxx: Vždy xxxxxxxxxx xxxxxxx připravený xxxxxx XXX.

4.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx

4.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxxx 5,77 g kyseliny xxxxxxxxxx (85&xxxx;% xx.) xx xxxx x xxxxxx xx 100 xx.

4.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxxx 2,00 x xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx xxxxx xx 100 xx.

Xxxxxxxx vzorku

4.5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx

4.5.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx octová (25,0 xx ledové xxxxxxxx xxxxxx doplněné xxxxx xx 100 xx).

4.5.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx

4.5.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx

4.6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx roztok pro xxxxxxxxxx bílkovin

Ve vodě xxxxxxxxx:

5,75&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx (87&xxxx;% xx.)

24,03&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx

250&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxxx

x xxxxxxx xx 50 xx vodou.

Poznámka: Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx; xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx týden.

4.7.   Chemikálie určené x&xxxx;xxxxxxxxxxxx štěpení kaseinů

4.7.1.   Tlumivý xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 xxx/x (1,58 x/100 xx xxxx) xxxxxxxxxx 0,05 xxx/x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX, 1,46 g/100 xx) roztokem xxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 mol/l (1,92 x/100 ml xxxx) xxxxxxxxxxxx 0,05 xxx/x EDTA xx xX 8.

4.7.2.   Hovězí xxxxxxx (XX. 3.4.21.7), s aktivitou xxxxxxx 5 U/ml.

4.7.3.   Roztok xxxxxxxx ε-xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx enzymu

Rozpusťte 2,&xxxx;624&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx ε-xxxxxxxxxxxxxx (6-amino-n-hexankyseliny) ve 100 xx 40&xxxx;% xxx. xxxxxxxx.

4.8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx standardy

4.8.1.   Certifikované xxxxxxxxxx standardy xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx vysráženého pomocí xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx 0&xxxx;% x&xxxx;1&xxxx;% xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx, X-2440, Xxxx, Xxxxxx.

4.8.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx laboratorních xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx buvolího xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx 0&xxxx;% x 1&xxxx;% xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X (2&xxxx;500&xxxx;x, 20 xxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx na 6 xx 8 °C xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx tuková xxxxxx. Xxx xxxxxxxx 1&xxxx;% xxxxxxxxx xxxxxxxx 5,00&xxxx;xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 495 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1 l. Xxxxxxx xX xxxxxxx xx 6,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (10 %, xx./xxx.). Teplotu upravte xx 35 °X, xxxxxxxx 100 μl xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxxx 1: 10&xxxx;000, xxx 3 000 X/xx) x&xxxx;xxxxxxxx xx dobu 1 xxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx hliníkovou xxxxx a nechte xxxxxx xxxx při xxxxxxx 35&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx pomocí syřidla xxxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 0&xxxx;% použijte xxxxxx xxxxxx u čistého odstředěného xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx – 20&xxxx;°X.

Xxxxxxxx: Xxxx xxxxxxxxx referenčních xxxxxxxxx xx doporučuje zkontrolovat xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx působení xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bílkovin

4.9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

Xxxxxxxxx 150&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě x&xxxx;xxxxxxx xx 1 000 ml.

4.10.   Odbarvovací xxxxxx

Xxxxxx 500 ml xxxxxxxxx x 200 ml xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx vodou xx 2&xxxx;000 xx.

Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx den xxxxxxx; xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 50&xxxx;% (xxx.) methanolu x xxxxxxxxx xxxxxxx 20 % (xxx.) xxxxxx kyseliny xxxxxx.

4.11.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx

4.11.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx roztok 1)

X 1&xxxx;000 xx 90&xxxx;% xxx. xxxxxxxxx rozpusťte xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 45 xxxxx) 3,0 x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx X-250 (X. X. 42655) a roztok xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx husté skládané xxxxxx.

4.11.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxx 2)

X&xxxx;1&xxxx;000&xxxx;xx 20&xxxx;% xxx. xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 5,0&xxxx;x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx.

4.11.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx roztok (xxxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxx xxxxxxxxx 125&xxxx;xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (4.11.1 x&xxxx;4.11.2).

Xxxxxxxx: Xxxxxxx roztok xx xxxxx použít x den přípravy.

5.   PŘÍSTROJE X XXXXXXX

5.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx (265 x 125 x 4 mm), xxxxxxx xxxxxxx (x xxxxx 15 xx), xxxxxxxxx xxxxxx.

5.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxx xxxx (265 × 125 mm)

5.3.   Krycí xxxxx (280 ×&xxxx;125&xxxx;xx). Xx každý xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx pásky (280 ×&xxxx;6 ×&xxxx;0,25&xxxx;xx) (xxx xxxxxxx 1).

5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxx komora x&xxxx;xxxxxxxx deskou (xxxx. 265 ×&xxxx;125&xxxx;xx) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxx (≥ 2,5&xxxx;xX) nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zařízení

5.5.   Cirkulační xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 12 ± 0,5&xxxx;°X

5.6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx nastavitelná na 3&xxxx;000&xxxx;x

5.7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx (x xxxxx ≥ 265&xxxx;xx)

5.8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx

5.9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxx (10 ×&xxxx;5&xxxx;xx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx filtračního xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx)

5.10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxx xx xxxxxxxx 280 ×&xxxx;150&xxxx;xx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxx

5.12.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx homogenizátor x&xxxx;xxxxxxxx xxxx 10 mm x&xxxx;xxxxxxxxx 8&xxxx;000 xx 20&xxxx;000 ot/min

5.13.   Magnetická xxxxxxxx

5.14.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx

5.15.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx

5.16.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xx 25 μx

5.17.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx

5.18.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx řízená xxxxx xxxxx, nastavitelná xx 35 a 40 ±&xxxx;1&xxxx;°X s třepačkou

5.19.   Densitometrické xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx λ =&xxxx;634&xxxx;xx

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXX

6.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx vzorku

6.1.1.   Izolace xxxxxxx

Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx 100 ml navažte xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx standardu xxxxxxxxxxxx 5&xxxx;x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxx 60&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx homogenizátorem (8&xxxx;000 xx 10&xxxx;000 xx/xxx). Xxxxxxx xX xx 4,6 zředěnou xxxxxxxxx octovou (4.5.1) x&xxxx;xxxxxxxxxxx (5 minut, 3&xxxx;000&xxxx;x). Xxxxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx a zbytek xxxxxxxxxxxxx xxx 20&xxxx;000 ot/min xx 40&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxx s hodnotou xX xxxxxxxxx xx 4,5 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (4.5.1). Přidejte 20 ml xxxxxxxxxxxxxx (4.5.2) a znovu xxxxxxxxxxxxx a odstřeďuje (5 xxxxx, 3 000 g). Špachtlí xxxxxxx xxxxxxxxxx vrstvu, xxxxx se nachází xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx (xxx xxxxxxx 2), a obě xxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxx homogenizuje xx 40 xx destilované xxxx (viz výše) x 20 xx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.2) x xxxxxxxx se. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx extrakční fáze xxxxxx bezbarvé (xxxxxxx xx třikrát). Xxxxxxxxxx xxxxxx homogenizujte x&xxxx;50&xxxx;xx xxxxxxx (4.5.3) a přefiltrujte xxxx xxxxxxx hustý xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx promyjte dvěma xxxxxxxxxxxx 25&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vysušit xx vzduchu xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx: Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx musí xxxxxxxxx xxx xxxxxxx – 20 °C.

6.1.2.   Přeměna β-xxxxxxx xx γ-kaseiny xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (6.1.1) x 0,5 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7.1) x směs 20 xxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx zahřejte xx 40&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 10 μx plasminu (4.7.2), promíchejte x&xxxx;xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxx 40&xxxx;°X za xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxx přidejte 20 μl xxxxxxx xxxxxxxx ε-xxxxxxxxxxxxxx (4.7.3). Xxxx přidejte 200&xxxx;xx xxxxx močoviny a 2 mg xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Xxx získání xxxxx xxxxxxxx fokusovaných xxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxxxxx po xxxxxxx xxxxxxxx ε-xxxxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxxx v 0,5 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx rozpouštění xxxxxxxx (4.6).

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx polyakrylamidových xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx

Xx xxxxxxxxx xxxxx (5.1) válečkem xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx (5.2) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx způsobem xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx (5.3) x&xxxx;xxxxxxxxxxx vložkami (0,25&xxxx;xx) xx xxxxx skleněnou xxxxx. Tuto xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx nivelační xxxxxx.

X xxxxxxxxxxxx odplyněnému roztoku xxxx (4.1.2) xxxxxxxx 10 μl Temedu (4.1.3.1), xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 10 μx xxxxxxx XXX (4.1.3.2); xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx nalijte xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx. Jeden xxxxx nosné xxxxx xxxx (xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx dolů) xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx s krycí fólií x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxx, xxx xx mezi xxxxxxx vytvořila xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx tenká xxxxxx xxxx xxx bublin (xxxxxxx 3). Xxxxxx xxxxx špachtle xxxxxx xxxxx gelu xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx a položte na xx tři xxxxx xxxxxxxx desky, aby xx xxxxxxxx. Po xxxxxxxx polymerace (asi xx 60 xxxxxxxx) xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx gelu xxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx. „Gelový xxxxxxx“ xxxxxxx do tenké xxxxx a uložte do xxxxxxxxxx (nejdéle xx xxxx xxxxx).

Xxxxxxxx: Krycí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx použít znovu. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx; xx xx vhodné x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vzorků xxxx x&xxxx;xxxxxxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 4,5 ×&xxxx;5&xxxx;xx).

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx na 12 °X. Zadní xxxxxx xxxxx xxxxx gelu xxxxxx kerosinem x&xxxx;xxxx xx střed chladicího xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (4.2). Xxxxxxx přiložte „gelový xxxxxxx“ nosnou xxxxx xxxxxxxx dolů, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx bubliny. Přebytečný xxxxxxx otřete x&xxxx;xxxxxxx xxxxx fólii. Elektrodové xxxxxxx xxxxxxxx elektrodovými xxxxxxx (4.3, 4.4), xxxxxxxxx na xxxxx xxxx a uložte xx xxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxx 9,5&xxxx;xx).

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

6.3.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx 265 ×&xxxx;125 ×&xxxx;0,25&xxxx;xx

Xxxx	Xxxx (xxx)	Xxxxxx (X)	Xxxxx (xX)	Xxxxxx (X)	Xxxxx/xxxxxx (Xx)
1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx	30	xxx. 2&xxxx;500	xxx. 15	xxxxxxxxxx 4	xxx 300
2. Xxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(7)	60	xxx. 2&xxxx;500	xxx. 15	xxxxxxxxxx 4	xxx 1&xxxx;000
3. Xxxxxxx xxxxxxxx	60	xxx. 2&xxxx;500	xxx. 5	xxx. 20	xxx 3&xxxx;000
	40	xxx. 2&xxxx;500	xxx. 6	xxx. 20	xxx 3&xxxx;000
	30	xxx. 2&xxxx;500	xxx. 7	xxx. 25	xxx 3&xxxx;000

Xxxxxxxx: Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx nebo šířka xxxx, xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxxx způsobem upraveny (xxxx. hodnoty proudu x&xxxx;xxxxxxx se xxxxxxxxxxx, xxxxxxx-xx xx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx 265 ×&xxxx;125 ×&xxxx;0,5&xxxx;xx).

6.3.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx zařízení (2 gely 5,0 ×&xxxx;4,5&xxxx;xx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx na xxx.

Xxxx	Xxxxxx	Xxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxx/xxxxxx
1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx	1&xxxx;000 V	10,0 xX	3,5 X	8 °X	85 Vh
2. Fokusace xxxxxx	250 X	5,0 mA	2,5 X	8 °C	30 Xx
3. Xxxxxxxx	1&xxxx;200 X	10,0 xX	3,5 X	8 °X	80 Xx
4. Xxxxxxxx	1&xxxx;500 V	5,0 xX	7,0 W	8 °X	570 Xx

Xxxxxxxxx xxxxxx ve xxxx 2 vložte xxx 0 Vh.

Aplikátor xxxxxx xx xxxx 2 odstraňte při 30 Vh.

6.4.   Barvení xxxxxxxx

6.4.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx po xxxxxxx xxxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxxx proužky a xxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx/xxxxxxxxxxx xxxxx naplněné 200 ml xxxxxxxx (4.9). Gel x xx xxxxxxxx 15 xxxxx za xxxxxxx xxxxxxx.

6.4.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxx xxxxxx dekantujte x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx po xxxx 30 xxxxxx vždy xx 100 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.10) Xxxxxxxxxxx xxxxxx dekantujte, xxxxx naplňte 250&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxx (4.11.3) x gel xxxxxx xx xxxxxxx třepání xx xxxx 45 xxxxx xxxxxxxxx.

6.4.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx gelové xxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx dvakrát xxxxxxxxxx po xxxx 30 xxxxxx vždy xx 100&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.10). Poté 15 xxxxx protřepávejte x&xxxx;200&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx; xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxx není xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx desku potom xxxxxxxx destilovanou xxxxx (2 ×&xxxx;2 xxxxxx) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx (2 xx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx vysoušečem vlasů (10 xx 15 xxxxx).

Xxxxxxxx 1: Xxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx teplotě 20&xxxx;°X. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx 2: Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx citlivější xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxx Xxxxxxxx Kit, Protein, Xxxxxxxxx Xxxxxxx, xxx x. 17-1150-01), xxxx xxx kaseinové xxxxxx xxxxxxxx plasminem xxxxxxx x xxxxxx 5 xx/xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXX

Xxxxxxxxx xx provádí xxxxxxxxxx proteinových xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx kravského xxxxx x sýrech xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxxx ze xxxxx ovčího, xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx prostřednictvím γ3- x γ2-xxxxxxx, xxxxxxx izoelektrické body xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xX 6,5 x pH 7,5 (xxxxxxx 4x, x, obrázek 5). Xxxxxxxx xxx xx xxxxx než 0,5 %.

7.1.   Vizuální xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx standardů s xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx, kozích x/xxxx xxxxxxxx γ2- x γ3-xxxxxxx (viz „γ2 X,X,X“ x „γ3 X,X,X“ xx xxxxxxxxx 4x, x x xxxxxxx 5) stejné xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx podmínek xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxx nebo xxxxx xxx 1&xxxx;% nebo xx xxxx 1&xxxx;%) x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx γ3- x&xxxx;γ2-xxxxxxx (viz „γ3 X“ x&xxxx;„γ2 X“ xx obrázcích 4 a, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx 5) s intenzitami xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 0&xxxx;% x&xxxx;1&xxxx;% (xxxxxx, xxxxxx), xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx standardech (xxxxxxxx).

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxx je xx xxxxx, použijte xxx stanovení poměru xxxx xxxxxxxx píků xxxxxxxx γ2- x&xxxx;γ3-xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx píků xxxxxx, xxxxxx x/xxxx xxxxxxxx γ2- x&xxxx;γ3-xxxxxxx (xxx xxxxxxx 5) xxxxxxxxxxxxx (5.19). Xxxx hodnotu xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx γ2- x γ3-kaseinů x 1&xxxx;% xxxxxxxxxxx standardu (xxxxx, kozím) nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx standardu (xxxxxxx) xxxxxxxxxxxxx u xxxxx xxxx.

Xxxxxxxx: Xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx signál obou xxxxxxxx γ2- x γ3-xxxxxxx x 1 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, avšak xxxxxx x 0&xxxx;% xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. V opačném xxxxxxx je nutné xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx.

Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže hodnoty xxxx hovězích γ2- x γ3-kaseinů nebo xxxxxxxxxxx poměrů ploch xxxx jsou stejné xxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 1 % xxxxxxxxxxxx standardu.

8.   LITERATURA

Addeo X., Xxxx L., Xxxxxxxx X., Stingo C., Xxxxxxx P., Berner X, Krause X., Xx Luccia X., Xxxxx A.: Xxx xx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx&xxxx;xx ovine xxx/xx xxxxxxx xxxxxx xx gel xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx γ2-xxxxxxx.&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx 45, 708–711 (1990).

Xxxxx X., Xxxxxxx X.X., Xxxxxxxx X., Xxxx X., Spagna Xxxxx X., Bocca X., Xxx Giovine X.: X xxxxxxx method xx detect bovine xxxx&xxxx;xx xxx and xxxxx xxxxxxx cheese xxxxx immunoblotting. Milchwissenschaft 50, 83–85 (1995).

Xxxxxx X., Xxxxxx X, Xxxxxxxxxxxx H.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxx&xxxx;xx xxx and xxxx xxxx&xxxx;xxx xxxxxx xx xxxxxxx ampholyte — xxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxxxxx xX gradient — xxxxxxxxxxx focusing xx γ-caseins xxxxx xxxxxxx as signal xxxxxxxxx. in: Xxxxxxxxxxxxxxx-Xxxxx 89 (X. X. Xxxxxx, xx.) xx 389-393, Bode-Verlag, Xüxxxxx (1989).

Xxxxxx Ι., Xxxxxx X.-X., Xxxxxx X.-X.: Xxxxxxxx xxx Kuhmilch xx Schaf xxx Xxxxxxxxxxx xxx. -xäxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx Fokussierung xx xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxx. X. Lebensm. Xxxxxx.&xxxx;Xxxxxx. 174, 195–199 (1982).

Xxxxxx X.X.: Xxxxxxxxx-xxxxx isoelectric xxxxxxxx xx 50-100&xxxx;μx xxxxxxxxxxxxxx xxxx on xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx films. Electrophoresis 1, 43–56 (1980).

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxxx vrstva xxxxxxxx mezi vodnou x&xxxx;xxxxxxxxxx fází po xxxxxxxxxx

Xxxxxxx 3

Xxxxxxxx technika xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx

x = xxxxxxxxx xxxxx (0,25&xxxx;xx); x = xxxxx xxxxx (5.3); x, x = xxxxxxxx xxxxx (5.1); d = xxxxxx roztok (4.1.2); x = xxxxx xxxxx xxxx (5.2).

Xxxxxxx 4x

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ze xxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx plasminem, s různým xxxxxxx xxxxxxxxx mléka

% XX = xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, X&xxxx;= xxxxxxx, E = xxxx, X&xxxx;= kozí

Na xxxxxxx xx znázorněna horní xxxxxxxx xxxx XXX.

Xxxxxxx 4x

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx vyrobených xx xxxxx ovčího, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx kravského xxxxx

% XX = procento xxxxxxxxx mléka; 1 + = xxxxxx x xxxxxxx 1 % xxxxxxxxx xxxxx x x přídavkem čistého xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. X&xxxx;= xxxxxxx, E = xxxx, X&xxxx;= xxxx, X&xxxx;= xxxxxx

Xx obrázku xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx gelu IEF.

Obrázek 5

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (STD) x&xxxx;xxxxxx xxxx vyrobeného xx xxxxx ovčího x&xxxx;xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

x, x = xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx 0 x 1&xxxx;% xxxxxxxxx mléka; c-g = vzorky xxxx xxxxxxxxxxxx 0, 1, 2, 3 x 7&xxxx;% kravského xxxxx; X&xxxx;= xxxxxxx, X&xxxx;= xxxx, X&xxxx;= xxxx.

Xxxx xxxxxxx horní xxxxxxxx xxxx XXX xxx λ =&xxxx;634&xxxx;xx.

XXXXXXX XX

Xxxxxxxxx xxxxxx

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx jakosti

Analýzy provádějí xxxxxxxxxx určené x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;12 xxxxxxxx (ES) x.&xxxx;882/2004&xxxx;(*) nebo xxxxxx xxxxxxxxxxx orgány xxxxxxxxx xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxx a námitky xxxxx výsledkům xxxxxxx

1.

Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx-xx žádná xxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx ustanovení xxxxxxx v normě XXX 707„Xxxxx x xxxxxx výrobky – Xxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx“,

2.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dostatečné xxxxx, které umožní xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx s dodatkem.

3.

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx v právních xxxxxxxxxx Xxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

4.

Xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nechat xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx produktu x xxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx orgánu. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx agentuře xxxxxx k provedení xxxxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx dnů xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Platební xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx 21 xxx od xxxxxxxx xxxxxxx.

5.

Xxxxxxxx opravného xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx konečný.

6.

Jestliže výrobce xx xxxx xxxxxxxxxx xxx po xxxxxx xxxxxx prokáže, xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx nebyl správný, xxxxx xxxxxx xx x&xxxx;xxxxx možností xxxxxxxx. Xxxxx odběr xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x ohledem xx xxxxx

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metody

V xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx intervence x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx postupy xxx xxxxx vzorků, dodržují xx xxxx xxxxxxx. Xx xxxxx ostatních xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 3 xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx náhodně xx xxxxx odevzdané xx xxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vzorek. Xxxxxxx xxxxxxxx xx porovná xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 95&xxxx;% xxxxxxxxx spolehlivosti xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx odchylky, xxx příslušná xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xx tom, 1) xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s hodnotami xxx σr x σX, nebo x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxx, 2) xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx nejistotě xxxxxx xxxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx

X&xxxx;xxxxx případě xxxx xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx σx x&xxxx;xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx σX&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx prokázat soulad x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristikami xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx aritmetický xxxxxx&xxxx; z xxxxx x opakovaných měření.

Vypočítá xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (x =&xxxx;2) z  xxxxx:

Xx-xx konečný xxxxxxxx xxxxxx x vypočítán xx vzorce xx xxxxx x = x ₁ + x ₂, x = y ₁ – x ₂, x = y ₁ · x ₂ nebo x = x ₁/x ₂, xxxx xx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx se xxxxxxxx xx nevyhovující xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX, jestliže

jinak xx má za xx, xx xxxxxxx XX xxxxxxxx.

Xxxxx se xxxxxxxx za nevyhovující xxxxx zákonem xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx LL, xxxxxxxx

xxxxx xx xx xx xx, xx xxxxxxx XX vyhovuje.

3.   Vnitrolaboratorní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx

X&xxxx;xxxxxxxxx, xxx jsou xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx nařízení, x&xxxx;xxx xxxxxx stanovena xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx validaci. Xxxxxxx σx x σ X xx xxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx X xxxxxx xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx vnitřní xxxxxxxxxxxxxxxxxxx si X .

Xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx stanovené mezní xxxxxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxx 1. Xxxxxxxx-xx xx xxxx xxxxx xx nesplňující zákonem xxxxxxxxxx mezní xxxxxxx, xxxxxx xx zopakují xxxxxx metody xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx a výsledek xx vyhodnotí x xxxxxxx x xxxxx 1.