Plné znění - 32010R0118

„XXXXXXX X

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx chromatografie (HPLC)

1.   Předmět

Tato xxxxxx popisuje stanovení xxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx jen „xxxxx“. Xxxxx škrobu xx xxxxxxx kvantitativní analýzou xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x jeho xxxxxxxxxxx produktů na xxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxxxxxxxx podle xxxx 7.2.1 xxxx xxxxxxx. Představuje xxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx škrobu/glukózy xxxxx xxxxxxxx v příloze XXX nařízení (XX) x. 1460/96 se xxxxxxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxx glukózy X&xxxx;x xxx je xxxxxxxxx v čl. 2 xxxx 1 tohoto xxxxxxxx.

Xxxxx škrobů (xxxx xxxxxxxx), jak je xxxxxxx xx xxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx XX xxxxxxxx Xxxxxx (XX) x. 1043/2005 (1), se xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx glukózy X, xxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xx. 2 xxxx 2.1 xxxxxxxx Xxxxxx (XX) x.&xxxx;904/2008 (2).

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx 1 xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxx xxxxx xxxx 7.2.2 xxxx xxxxxxx. Xx vyjádřena x&xxxx;% (xx). Odpovídá xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx škrob. Tato xxxxxxx X není x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

Xxxxxx xx homogenizují x rozpustí ve xxxx. Škrob a xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx cestou xxxxxxx xx xxxxxxx xx dvou krocích:

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx xx xxxxxx x přefiltrují.

Stanovení xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXXX.

Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXXX, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx a xxxxx materiály

Použijí xx xxxxxxx xxxxxx analytické xxxxx a xxxxxxxxxxx xxxx.

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx, xxx. 99&xxxx;%.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx, xxx. 99&xxxx;%.

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx, xxx. 99&xxxx;%.

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx monohydrát, xxx. 99&xxxx;%.

4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxxx, min. 99&xxxx;%.

4.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx-xxxxxxx (1,4-xxxx-X-xxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxx) s aktivitou xxx 31 000 U/ml (1X xxxxxx 1,0 mg maltózy xx xxxxxx xx 3 xxxxxx xxx xX 6,9 a xxxxxxx 20 °C). Tento xxxxx může obsahovat xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. glukózy xxxx xxxxxxxxx) x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx teplotě xxx 4&xxxx;°X. Xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxx zdroje xxxx-xxxxxxx, pokud xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

4.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxx (1,4-xxxx-X-xxxxxx-xxxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 120&xxxx;X/xx xxxx xxx 70&xxxx;X/xx (1X xxxxxx 1 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx minutu při xX 4,8 a xxxxxxx 60 °C). Tento xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx množství xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx) x jiných xxxxxxxx xxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx). Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx asi 4 °C. Xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxx amyloglukosidázy, xxxxx poskytne xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

4.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, x.x.

4.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X4[Xx(XX)]6.3X2X), extra xxxxx.

4.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxx xxxxxxx, x.x.

4.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, minimálně 96&xxxx;% (xxx.).

4.12&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx roztok xxxxxx xxxxxxx (0,2&xxxx;xxx/x). 16,4 xxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxx 4.10) xx naváží xx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1 000 ml. Dolije xx po xxxxxx xxxxx x pH xx xxxxxx na 4,7 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxxx xX xxxxx (xxx 5.7)). Xxxxx roztok xxx uchovávat při xxxxxxx 4&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxxxx 6 xxxxxx.

4.13&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx. Připraví xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (bod 4.7) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxx 4.12). Xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx ve xxxxxx (například xxxxxxxx xxx 600 U/ml xx xxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;0,5&xxxx;x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 120&xxxx;X/xx (xxx 4.7) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx 100 ml xx 1&xxxx;x xxxxxx xx xxxxxx). Xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxx.

4.14&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, fruktózy, sacharózy, xxxxxxx a laktózy, xxxxx se běžně xxxxxxxxx při xxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXXX.

4.15&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx x xxxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxx I). Xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 219,5 xxxxx xxxxxx zinečnatého (bod 4.8) ve xxxx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 1&xxxx;000&xxxx;xx x xxxxx xx 30 ml xxxxxxxx octové (4.11). Xxxxxxxx xx zamíchá x xxxxxx xx xxxxxx vodou. Xxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx po xxxx nejvýše 6 xxxxxx. X xxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx.

4.16&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx x xxxxxxxx (Xxxxxxxxx činidlo XX). Xx xxxxxxxx xxxxxxx xx rozpustí 106,0 xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (XX) (bod 4.9) xx xxxx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 1&xxxx;000&xxxx;xx. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx po značku xxxxx. Xxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx dobu xxxxxxx 6 xxxxxx. X vyčeření xxx xxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx Carrezovu xxxxxxx.

4.17&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx HPLC. Xxxxxxxx xx mobilní xxxx, která se xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx metodou XXXX. Xxx xxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxx xx např. xxxxxxxx xxxxxxx xxxx směs xxxx x xxxxxxxxxxxx (xxx XXXX).

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx x xxxxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxxx sklo.

5.2   Skládané xxxxxx, např. 185 mm.

5.3   Injekční xxxxxx 0,45&xxxx;μx, xxxxxx xxx vodné roztoky.

5.4   Vzorkovací xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX.

5.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100&xxxx;xx.

5.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx injekční xxxxxxxxx, 10&xxxx;xx.

5.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;xX metr.

5.8   Analytické xxxx.

5.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxx s termostatem s nastavitelnou xxxxxxxx 60&xxxx;°X x 90&xxxx;°X.

5.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx HPLC xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx xxxxx produktů

Produkt xx xxxxxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxx xx odhadne xxxxx xxxxx x přísadách x xxxxx podmínek xxxxxxx HPLC (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxx) x nepřesáhne:

Vzorek xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 0,1&xxxx;xx.

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx

Xxxxx zkouška xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxx 6.4) xxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx (xxx 7.2).

6.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

6.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx vzorků

Vzorek xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Zvolená zkušební xxxxx (xxx 6.2) xx naváží xx xxxxxxx xxxxx (bod 5.5) a xxxxx xx xxx 70&xxxx;xx xxxxx xxxx.

Xx rozpuštění xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx přidá 50 xxxxxxxxxx tepelně xxxxx xxxx-xxxxxxx (bod 4.6) x po xxxx 30 xxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxx 90&xxxx;°X xx xxxxx xxxxx (xxx 5.9). Xx vodní xxxxx xx co xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 60&xxxx;°X x xxxxx xx 5&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (xxx 4.13). X xxxxxx, které xx mohly xxxxxxxx xX xxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxxx xX x x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx na 4,6 xx 4,8. Xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx 60 xxxxx xxx teplotě 60&xxxx;°X. Xxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

6.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx

Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx tuku xx nutné vyčeřit xxxxxxxx 1 ml Xxxxxxxxx xxxxxxx X (xxx 4.15) xx xxxxxxx xxxxxx. Protřepe xx a xxxxx xx 1&xxxx;xx Xxxxxxxxx xxxxxxx XX (xxx 4.16). Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx.

6.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx pro xxxxxxx XXXX

Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx se xxxxx xx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx (xxx 5.2). Xxxxxxx xxxxxx xx xxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx (xxx 5.3) pomocí xxxxxxxx stříkačky (xxx 5.6) předem xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Filtráty xx xxxxxx xx xxxxxxxx (xxx 5.4).

6.5   Chromatografie

HPLC xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx analýzu cukrů. Xxxxxxxx XXXX xxxxxxx xxxxxxxx stopy maltózy, xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx x výsledkem xx xxxxxx nízká xxxxxxxxx xxx glukózu.

7.   Výpočet x xxxxxxxxx výsledků

7.1   Výpočet xxxxxxxx XXXX

Xxx výpočet xxxxxx škrobu jsou xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx HPLC, xx. xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx před enzymatickou xxxxxxx („xxxxx cukry“) x xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx). Xx xxxxx xxxxxxx x xxxxx stanovení, xxx bylo xxxxx xxxxxxx xxxxxx o xxxxx xxxxxxxx v enzymech.

Při xxxxxxx HPLC se xxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx s referenčními xxxxxxx (xxx 4.14). Xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx (x/100&xxxx;xx) xx enzymatické úpravě xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (x/100&xxxx;xx) xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx vypočte xxxxx xxxxx (x xxxxx/100&xxxx;x xxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx je:

7.2   Výpočet xxxxxx xxxxxx

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx „X“

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xx) xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx před enzymatickou xxxxxxx (F), znamená xx, že xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx fruktózu a xxxxxxx. Xx xxxxxxx, xx xx xxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx xxxxxxx (Xx – X).

X, xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;x/100&xxxx;x:

X = (Xx xxx) – (Xx – X)

7.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx

X, obsah „xxxxxx“ x&xxxx;x/100&xxxx;x:

X = [(Xx xxx) – (Xx – X)] × 0,9

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx

X&xxxx;xxxxx bodě xxxx uvedeny xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx týkající xx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx provedené xx 2 xxxxxxxx. Xxxxxxx požadavky xx xxxxxxxx metody xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (orientační)

Mezilaboratorní zkouška xxxx xxxxxxxxx x xxxx 2008 xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx Protocol xxx xxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx-xxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxx xxx koncepci, provádění x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx), W. Xxxxxxx, (xxxxxxxxx zpráva XXXXX), Pure &xxx; Xxxx. Chem., Xxx. 67, Xx 2, x.&xxxx;331–343, 1995.

Xxxxx o xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x tabulce.